Вещество 4-амино-1-{ 2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси] этил} -пиридиний хлорид, обладающее свойствами биологически активного агента, влияющими на естественно текущие процессы свертываемости крови млекопитающих, антикоагулянт на его основе и способ его получения путем химического синтеза Российский патент 2019 года по МПК C07D213/64 A61K31/44 A61P7/02 

Описание патента на изобретение RU2685261C1

Группа изобретений относится к области синтетических химических веществ, являющихся антикоагулянтами и предназначенных для использования в медицине и фармакологии в качестве исходного компонента для лекарственных средств, предотвращающих нежелательную свертываемость крови.

Сердечно-сосудистые заболевания в настоящее время вносят существенный вклад в общую структуру заболеваемости и смертности в мире и в Российской Федерации. Значительный их процент связан с тромбоэмболическими осложнениями, такими как тромбоз глубоких вен, тромбоэмболия легочной артерии и др. Поэтому антикоагулянты - препараты, влияющие на систему гемостаза, входят в число наиболее востребованных лекарственных препаратов в различных областях клинической медицины для профилактики и терапии артериальных или венозных тромбозов.

Существует два типа антикоагулянтов - прямые и непрямые. Традиционно используемые непрямые антикоагулянты обладают рядом недостатков: узкая терапевтическая широта, зависимость от активности антитромбина III, их применение провоцирует появление различных побочных эффектов, таких как, например, остеопороз или тромбоцитопения. К прямым ингибиторам тромбина для парентерального введения относятся ингибиторы, взаимодействующие только с активным центром протеазы IIа - аргатробан, дебигатран, и ингибиторы, взаимодействующие как с активным центром, так и с фибриноген - связывающим экзосайтом I протеазы IIа - рекомбинантные гирудины (лепирудин, десирудин, бивалирудин). Известны фармацевтически активные вещества, из которых производят прямые антикоагулянты, которые могут применяться (вводиться в организм больного] не парентерально, но per os (перорально). Пероральное применение значительно облегчает ведение курса антитромботической терапии за счет перевода пациента на домашнее лечение и последующую длительную, иногда пожизненную антитромботическую профилактику.

Преимущества подобных антикоагулянтов перед известными ингибиторами, актуальность проблемы тромбозов различного генеза, и необходимость упрощения ведения терапии послужили началом для многочисленных научных исследований и развития данной области, а также для усовершенствования существующих и производства новых фармацевтических препаратов-ингибиторов тромбина.

Известно вещество, представляющее собой быстрорастворимый в воде порошок кристаллического химического соединения (C6H12O6)2⋅NaCl⋅H2O и применяющееся в качестве фармацевтической субстанции. Данное вещество легко расфасовывается, подходит для приготовления раствора, а также для внутривенного введения с целью восполнения потерянного объема циркулирующей крови, его легко хранить и транспортировать. Подобный состав может применяться в области медицины и ветеринарии как плазмозаменяющее средство на основе глюкозы и хлорида натрия. [RU 2546286, дата публикации: 20.01.2015, МПК: А61K 9/14].

Недостатком данного вещества является относительно узкая область его применения, что не позволяет использовать его при производстве готовых лекарственных форм для лечения и профилактики тромбозов различного генеза.

Известен антитромботический препарат, синтезируемый из моноклональных антител и применяемый для лечения заболеваний сердечнососудистой системы. Данный препарат содержит F(ab')2 фрагменты антитела FraMon к гликопротеидам IIb IIIа тромбоцитов человека, растворитель, а также F(ab')]2 фрагменты антитела FraMon в определенной концентрации. [RU 2205027, дата публикации: 27.05.2003, МПК: A61K 39/395].

Недостатками этого препарата являются сложность и многостадийность процесса получения препарата, которые обусловлены тем, что основной его компонент синтезируют из биологического материала посредством селекции, клонирования, ферментации, очистки и вирусной инактивации.

В качестве прототипа выбрана фармацевтическая субстанция 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]}-пиридина иодид, которая по сообщению авторов может применяться для лечения тромбоэмболических осложнений и профилактики возникновения гиперкоагуляционных состояний. [RU 2353619, дата публикации: 27.04.2009, МПК: C07D 213/64].

Недостатком известной фармацевтической субстанции является многостадийный синтез, включающий применение дорогостоящих и небезопасных реагентов, а также наличие в молекуле аниона иода, что большой вероятностью может вызвать териотоксичность лекарственного средства и делает саму молекулу непригодной для создания на ее основе лекарственного средства.

Технической проблемой, на решение которой направлена группа изобретений, является расширение арсенала антикоагулянтов перорального пути введения для профилактики и лечения тромбозов

Техническим результатом, на достижение которого направлена группа изобретений, является обеспечение возможности перорального введения биологически активного вещества - ингибитора тромбина и при этом сохранение его специфической фармацевтической активности как антикоагулянта.

Сущность группы изобретений заключается в следующем.

4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорид, имеющий структурную формулу

и химическую формулу соединения C20H21ClN2O4S

является продуктом замещения аминопиридина; ранее не было известно его применение в медицине и фармакологии. Эмпирическим путем было выявлено, что данное вещество химически и метаболически стабильно, обладает достаточной липофильностью и гидрофильностью, а также угнетает активность свертывающей системы крови, что обусловлено его свойством ингибировать активизированный тромбин путем встраивания в его активный сайт.

Для исследования антикоагулянтной эффективности 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]}-пиридина был проведен анализ специфической антитромботической активности на моделях артериального, венозного тромбозов и хвостового кровотечения животных, при этом вещество вводилось животным per os (перорально). Также определены длительность и сила антикоагулянтного эффекта посредством измерения различных параметров свертываемости крови.

Антикоагулянтный эффект при артериальном тромбообразовании оценивали на модели артериального тромбоза сонной артерии крыс, вызванного индуцированием поверхностной аппликации хлорида железа (III). После этого производили анализ пяти моделей, оценивая массу тромба до введения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси] этил}-пиридиний хлорида в концентрации 100 мг/кг и после его введения.

В результате исследования было выявлено, что при введении животным per os 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида произошло снижение массы тромба у всех пяти образцов крови животных, при этом средняя масса тромба уменьшилась с 0,74 до 0,56 мг. Следовательно, можно сделать вывод о том, что 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорид способствует предотвращению артериального тромбоза, замедляя купирование кровотечения за счет снижения массы тромба. Результаты данного исследования приведены в Таблице 1.

Оценку антикоагулянтного действия 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорида на модели венозного тромбоза производили с помощью фиксации параметров тромба, а именно массы, формы и размера тромба для пяти образцов крови до и после введения животным per os 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил]-пиридиний хлорида.

Результаты опыта показали, что средняя масса тромба для пяти образцов после введения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорида уменьшилась с 18,20 мг до 0,73 мг, форма тромба в среднем после введения вещества снизилась с четырех баллов до одного, а показатель размера тромба упал с 167996 Pes до 21885 Pes. Очевидно, что после введения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида пероральным методом наблюдается значительное уменьшение венозных тромбов по всем параметрам. Результаты исследования приведены в Таблице 2.

Исследование специфической антитромбической активности на модели хвостового кровотечения крыс производили путем измерения продолжительности и объема хвостового кровотечения для пяти подопытных животных до и после введения им per os 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида.

Результаты исследования показали, что продолжительность кровотечения после перорального введения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида в среднем увеличилась с 445,2 секунд до 929 секунд при одновременном увеличении объема кровотечения с 0,0252 мл до 0,0946 мл. Полученные результаты обусловлены тем, что 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси}фенокси]этил}-пиридиний хлорид ингибирует образование тромбов при хвостовом кровотечении крыс, угнетая при этом свертываемость крови. Результаты исследования представлены в Таблице 3.

Также проводили исследование на изменение эхитоксового, тромбинового времени на фоне перорального введения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорида.

Результаты исследования свидетельствуют о том, что пероральное введение 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида обуславливает двукратное увеличение эхитоксового времени, при одновременном увеличении тромбинового времени и активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ]. В совокупности, удлинение временных промежутков, характеризующих протекание процессов свертываемости крови, свидетельствует о дезактивации процесса свертывания и предотвращении образования тромбов. Результаты исследования приведены в Таблице 4.

Оценку длительности и силы антикоагулянтного эффекта 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорида производили гемокоагулографическим методом регистрации продолжительности свертываемости цельной нестабилизированной крови крыс на определенных интервалах времени. При этом продолжительность свертываемости измеряли сначала для пяти образцов крови у контрольной группы животных без введения per os 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорида, а затем для пяти образцов крови опытной группы животных с введением per os в организмы животных различных концентраций заявляемого вещества.

Из полученной зависимости видно, что кровь животного, в организм которого не был введен 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорид в каждой контрольной точке свертывается примерно в течение одного и того же времени, в пределах 63-95 секунд. Анализ продолжительности свертываемости крови животного, в организм которого был введен 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорид в различных концентрациях показал, что заявляемое вещество проявляет антикоагуляционные свойства во всем диапазоне исследуемых концентраций, однако, скачок антикоагуляционных свойств проявляется в начале исследования, а именно, в период от 1 до 5 часов. На этом интервале кровь животных, в организм которых был введен 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорид сворачивается в 2,5 раза медленнее, чем кровь контрольной группы животных, в организм которых не был введен 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорид. Результаты данного исследования представлены на Фиг. 1.

Результаты проведенных исследований показали, что 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорид, вводимый животным перорально, обладает свойствами биологически активного агента, влияющими на естественно текущие процессы свертываемости крови млекопитающих. Это вещество предотвращает полимеризацию фибрина активированным тромбином, образование тромбов и последующую закупорку сосудов, что обеспечивает достижение технического результата, заключающегося в обеспечение возможности перорального введения биологически активного вещества и при этом сохранение его специфической фармацевтической активности как антикоагулянта.

В ходе экспериментов in vitro также было доказано, что 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорид действует именно как ингибитор тромбина.

Для определения антитромбиновой или анти-П-активности (alia] в ходе экспериментов использовали диагностическую тест-систему Ренапарин-тест (НПО «Ренам»). Для оценки alia использовали метод, используемый для определения активности низкомолекулярного гепарина. К образцу 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридина хлорида, или к калибровочной пробе, содержащей низкомолекулярный гепарин в необходимой концентрации, добавляли избыток антитромбина III и раствор тромбина и инкубировали при 37 оС, что приводило к ингибированию фактора На пропорционально концентрации низкомолекулярного гепарина (калибровочные пробы) или концентрации исследуемого препарата. После этого добавляли раствор хромогенного субстрата, и оставшееся активным количество фактора На катализировало отщепление пара-нитроанилина от хромогенного субстрата. Адсорбцию свободного пара-нитроанилина определяли при 405 нм с помощью многоканального спектрофотометра Titertek Multiskan® MCC («Labsystems», Финляндия). Для расчета alia активности использовали калибровочную кривую, построенную с использованием стандарта низкоомлекулярного гепарина, имеющегося в наборе. По калибровочной кривой определяли уравнение зависимости активности от значения оптической плотности, после чего производили расчет исследуемой активности препарата по значениям оптической плотности его проб. 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорид исследовали в концентрациях 50 и 100 нМ в виде раствора в 1% ДМСО. Для расчета анти-IIа-активности использовали калибровочную кривую, построенную с использованием стандарта низкомолекулярного гепарина, имеющегося в наборе. Уравнение зависимости активности от значения оптической плотности, полученное по калибровочной кривой, имело следующий вид: Y=0,4238e-8,363x, где X - оптическая плотность, Y - анти-IIа-активность. Активность 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорида в концентрации 100 нМ составила 0,0078±0,0005 МЕ/мл, в концентрации 50 нМ 0,0066±0,0006 МЕ/мл.

Таким образом, 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорид обладает антитромбиновой активностью.

Для определения анти-Х-активности (активностью против фактора крови Ха или аХа) использовали диагностическую тест-систему Ренапарин-тест (НПО «Ренам»). Для оценки аХа использовали метод, используемый для определения активности низкомолекулярного гепарина. К образцу 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорида, или к калибровочной пробе, содержащей низкомолекулярный гепарин в необходимой концентрации, добавляли избыток антитромбина III и раствор фактора Ха и инкубировали при 37 оС, что приводило к ингибированию фактора Ха пропорционально концентрации низкомолекулярного гепарина (калибровочные пробы) или концентрации исследуемого препарата. После этого добавляли раствор хромогенного субстрата, и оставшееся активным количество фактора Ха катализировало отщепление паранитроанилина от хромогенного субстрата. Адсорбцию свободного паранитроанилина определяли при 405 им с помощью многоканального спектрофотометра Titertek Multiskan® MCC («Labsystems», Финляндия). Для расчета аХа активности использовали калибровочную кривую, построенную с использованием стандарта низкомолекулярного гепарина, имеющегося в наборе. По калибровочной кривой определяли уравнение зависимости активности от значения оптической плотности, после чего производили расчет исследуемой активности препарата по значениям оптической плотности его проб. 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорид исследовали в концентрации 100 нМ в виде раствора в 1% ДМСО. Для расчета аХа активности использовали калибровочную кривую, построенную с использованием стандарта нефракционированного гепарина, имеющегося в наборе. Уравнение зависимости активности от значения оптической плотности, полученное по калибровочной кривой, имело следующий вид: Y=l,0726e-7,353x, где X - оптическая плотность, Y - анти-Ха-активность. Активность 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорида в концентрации 100 нМ составила 0,0016±0,0001 МЕ/мл, что соответствовало амидолитической активности контрольной холостой пробы. Таким образом, 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорид не проявляет анти-Ха-активности.

Также авторами было проведено исследование специфической антикоагулянтной активности лекарственных форм, составленных на основе 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорида, обозначенных как фармацевтические композиции ФК №1-3, ФК №2 и ФК №3, было проведено исследование их антикоагулянтной активности в сравнении с АФС и препаратом сравнения дабигатрана этексилатом. Исследование ex vivo проводили на 50 интактных беспородных крысах-самцах сток CD массой 250-250 г. Данные эксперимента приведены в Таблице 5.

Примечание. * - р<0,05 по сравнению со значениями у крыс контрольной группы

Результат эксперимента показал, что биологически активное вещество 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорид, будучи применен в специально составленной лекарственной форме, может быть применен в качестве антикоагулянта для лечения и профилактики гиперкоагуляционных событий и состояний.

Способ получения 4-Амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридина хлорида состоит из трех стадий.

На первой стадии (стадии алкилирования) в качестве исходного реагента используют орцин, либо его производные, которые могут быть представлены его гидратами, а также прекурсорами, содержащими на гидроксигруппе лабильные защитные группы, такие как бензил, ацетил, метоксиметил, силил, тетрагидропиранил. Применение данных веществ обуславливает увеличение скорости реакции на первой стадии синтеза, а также позволяет увеличить выход 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола. Эту стадию проводят следующим образом.

В 3,5 л этанола растворяют от 30 до 70 г натрия и от 100 до 600 г орцингидрата (в зависимости от растворимости реагентов), добавляют от 300 до 450 г хлорбромэтана (в зависимости от количества растворенных реагентов) и кипятят не более 24 часов. Затем в реакционную смесь добавляют раствор от 20 до 30 г натрия в 0,4 л этанола и 200 г бромхлорэтана и кипятят не более 24 часов. После этого смесь упаривают до объема ~1,5-2,0 л, добавляют к ней 2 л 10% раствора соляной кислоты и экстрагируют диэтиловым эфиром в объеме 1 л, затем в объеме 0,75 л. Экстракты промывают водой, после чего разбавляют 1 л петролейного эфира и фильтруют через целлит на мелкопористом фильтре. Фильтрат экстрагируют 10% раствором гидроксида натрия до тех пор, пока коричнево-черный органический слой не станет желтого цвета (от 2 до 3 л 10% раствора гидроксида натрия). Органический слой отбрасывают (либо из него извлекают продукт двойного алкилирования орцина), щелочные экстракты подкисляют соляной или серной или фосфорной кислотой до рН 1-2 и экстрагируют 2 л смеси петролейного эфира и хлороформа с плотностью 1,05-1,15 кг/л, при этом плотность смеси должна быть чуть выше плотности водной фазы, слои должны разделяться. Экстракты объединяют, доводят петролейным эфиром до объема 2,5 л, сушат безводным сульфатом натрия и фильтруют через силикагель. Фильтрат упаривают. Получают от 100 до 150 г масла темно-янтарного цвета, в основном представляющего собой целевой полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенол с примесями орцина. Водный слой после экстракции хлороформ-петролейной смесью экстрагируют эфиром или этилацетатом 1,5 л, доводят петролейным эфиром до объема 2,5 л, сушат безводным сульфатом натрия и фильтруют через силикагель, после чего упаривают. Получают 150 - 200 г темно-коричневого масла, которое содержит в основном орцин и при стоянии кристаллизуется. Его используют в качестве исходного вещества для последующих синтезов. Реагенты и условия первой стадии могут варьироваться

В качестве алкилирующего агента первой стадии, необходимого для получения 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола, также может быть применен хлорбромэтан, либо различные производные 2-хлорэтанола, такие как, метансульфонат (мезилат), трифторметансульфонат (трифлат], бензолсульфонат или толуолсульфонат.

В качестве оснований, применяемых для первичной промывки полупродуктов реакций, используют соединения натрия и калия, которые могут быть представлены, как в виде гидроксидов, так и в виде этилатов, алкоголятов, карбонатов, гидридов.

Растворители, используемые для удаления различного рода примесей, возникающих в процессе синтеза, а также для повышения чистоты конечного продукта, выбирают в зависимости от участвующих в реакции алкилирующих агентов и оснований таким образом, чтобы растворитель был устойчив по отношению к выбранным агентам и основаниям. В качестве растворителя, как правило, используют спирты, однако, растворителями могут быть ацетонитрил, диметилформамид, ди-метилацетамид, тетрагидрофуран или диоксан.

На второй стадии (стадии бензосульфонилирования) из 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола получают полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфениловый эфир бензолсульфоновой кислоты. Эту стадию проводят следующим образом.

120-150 г 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола, полученного на предыдущей стадии, растворяют в тетрагидрофуране, добавляют раствор от 100 до 150 г карбоната натрия в 1 л воды и 40 мл триэтиламина. При интенсивном перемешивании порциями, не допуская сильного вспенивания реакционной смеси, добавляют от 140 до 180 г безолсульфонилхлорида до исчезновения окисляемого водным раствором KМnO4 пятна 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола, видимого при проведении тонкослойной хроматогрофии (ТСХ). После исчезновения исходного вещества в реакционной смеси отделяют органический слой, водный экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты промывают смесью, состоящей из 300 мл гидроксида натрия с добавкой 100 мл раствора аммиака, затем промывают водой, затем промывают в 200 мл 10% соляной кислоты и затем промывают в 200 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Экстракты сушат безводным сульфатом натрия и упаривают сначала на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса, далее выдерживают несколько часов в вакууме при давлении ~2 мм рт.ст. Получают от 200 до 250 г желтого очень вязкого масла, представляющего в основном промежуточный полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфениловый эфир бензолсульфоновой кислоты.

Реагенты и условия второй стадии бензосульфонилирования могут варьироваться в зависимости от формулы и качества продукта, полученного на предыдущей стадии. В качестве растворителя может использоваться любой растворитель, устойчивый к действию бензолсульфонилхлорида и оснований, как органические, так и неорганические, в частности, диэтиловый эфир, метилтретбутиловый эфир, тетра-гидрофуран, диоксан, толуол, дихлорметан, сверхкритический диоксид углерода, либо их смеси; вода, гомогенные смеси воды и тетрагидрофурана, воды и диоксана, воды и ацетонитрила, воды и диметилформамида и т.п.; двухфазные смеси - вода и дихлорметан, вода и эфир, вода и толуол и т.п. В качестве межфазного переносчика могут использоваться основные третичные амины, такие как триэтиламин, диизо-пропилэтиламин, пиридин, и т.п., либо их соли. В качестве основания могут использоваться гидроксиды, карбонаты и гидрокарбонаты натрия, калия, кальция, основные третичные амины - триэтиламин, пиридин и т.п.

На третьей заключительной стадии схемы химического синтеза заявленного вещества из промежуточного полупродукта 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты и 4-аминопиридина получают конечный продукт синтеза 4-амино-1-(2-{3-метил-5-[(фенилсульфонил)окси]фенокси}этил)пиридиний хлорид.

От 200 до 250 г 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты (в зависимости от выхода второй стадии) и расчетное количество 4-аминопиридина (от 50 до 70 г), а также каталитическое количество бромида натрия растворяют в ацетонитриле (ацетонитрил должен быть предварительно перегнан над Р2O5) и кипятят в течении 48 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром, переносят в колбу и кипятят в 1 л ацетонитрила в течение 6 часов для удаления окрашенных примесей. После этого смеси дают остыть до комнатной температуры в течение 6-8 часов, отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром или дихлорметаном и сушат до постоянной массы. Получают от 130 до 180 г 4-амино-1-(2-{3-метил-5-[(фенилсульфонил)окси]фенокси}этил)пиридиний хлорида.

Реагенты и условия третьей стадии могут варьироваться в зависимости от формулы и качества продукта, полученного на предыдущей стадии. В качестве растворителя может использоваться любой органический растворитель, устойчивый к действию алкилирующих агентов, такой как ацетонитрил, сульфолан, диметилформамид, диметилацетамид и т.п., либо их смеси. В зависимости от используемого растворителя реакция может проводиться как в присутствии катализатора (низкокипящие растворители - ацетонитрил), так и без него (диметилацетамидбисульфолан). В качестве катализатора могут использоваться бромиды и иодиды натрия, калия и тетраалкиламмонийных солей, или основные третичные амины, такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин, пиридин, и т.п., либо их соли. Условия выделения конечного продукта - 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси] этил}-пиридиний хлорида - могут варьироваться в зависимости от используемого растворителя и включать, либо не включать, такие этапы, как фильтрование и водная обработка (отмывка от растворителя).

При этом в схеме синтеза заявленного вещества стадии алкилирования и бензосульфонилирования могут менять свою последовательность, так что первой может идти стадия бензосульфонилирования, а следующей может идти стадия алкилирования.

Группа изобретений характеризуется ранее неизвестными из уровня техники существенными признаками, заключающимися в том, что неизвестное ранее вещество 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил)-пиридиний хлорид обладает свойствами ингибировать тромбин, может быть использовано для создания лекарственного средства - антикоагулянта, а способ его получения включает последовательный трехстадийный синтез, позволяющий эффективно получать заявляемое вещество, что обеспечивает достижение технического результата, расширяя арсенал перорально вводимых антикоагулянтов для профилактики и остановки тромбических реакций.

Вышеуказанное свидетельствует о соответствии группы изобретений критерию патентоспособности «новизна» и «изобретательский уровень».

Группа изобретений может быть реализована при помощи известных средств, материалов и технологий, что свидетельствует о его соответствии критерию патентоспособности «промышленная применимость».

Для иллюстрации возможности реализации и более полного понимания сути изобретения ниже представлен один из вариантов его осуществления, который может быть любым образом изменен или дополнен, при этом настоящая группа изобретений ни в коем случае не ограничивается представленным вариантом.

На первой стадии 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенол получали из орцина следующим образом.

В 3,5 л этанола растворяют от 30 до 70 г натрия, и от 100 до 600 г орцингидрата добавляют от 300 до 450 г хлорбромэтана и кипятят не более 24 часов. Затем в реакционную смесь добавляют раствор от 20 до 30 г натрия в 0,4 л этанола и 200 г бромхлорэтана и кипятят еще не более 24 часов. После этого смесь упаривают до объема ~1,5-2,0 л, добавляют к ней 2 л 10% раствора соляной кислоты и экстрагируют диэтиловым эфиром в объеме 1 л, затем в объеме 0,75 л. Экстракты промывают 1 л воды, после чего разбавляют 1 л петролейного эфира и фильтруют через целлит на мелкопористом фильтре. Фильтрат экстрагируют 10% раствором гидроксида натрия до тех пор, пока коричнево-черный органический слой не станет желтого цвета (от 2 до 3 л 10% раствора гидроксида натрия). Органический слой отбрасывают (либо из него извлекают продукт двойного алкилирования орцина), щелочные экстракты подкисляют соляной, серной или разбавленной фосфорной кислотой до рН 1-2 и экстрагируют 2 л смеси петролейного эфира и хлороформа с плотностью 1,05-1,15 кг/л, при этом плотность смеси должна быть чуть выше плотности водной фазы, поскольку слои должны разделяться. Экстракты объединяют, доводят петролейным эфиром до объема 2,5 л, сушат безводным сульфатом натрия и фильтруют через силикагель. Фильтрат упаривают. Получают 120-150 г масла темно-янтарного цвета, в основном представляющего собой целевой полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенол с примесями орцина. Водный слой после экстракции хлороформ-петролейной смесью экстрагируют эфиром или этилацетатом 1,5 л, доводят петролейным эфиром до объема 2,5 л, сушат безводным сульфатом натрия и фильтруют через силикагель, после чего упаривают. Получают 150-200 г темно-коричневого масла, которое содержит в основном орцин и при стоянии кристаллизуется. Его используют в качестве исходного вещества для последующих синтезов.

На второй стадии синтеза из 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола получали 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфениловый эфир бензолсульфоновой кислоты следующим образом.

120-150 г 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола, полученного на предыдущей стадии, растворяют в тетрагидрофуране, добавляют раствор 106 г карбоната натрия в 1 л воды и 40 мл триэтиламина. При интенсивном перемешивании порциями, не допуская сильного вспенивания реакционной смеси, добавляют от 140 до 180 г безолсульфонилхлорида до исчезновения окисляемого водным раствором KMnO4 пятна 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола, видимого при проведении тонкослойной хроматогрофии (ТСХ). После исчезновения исходного вещества в реакционной смеси отделяют органический слой, водный экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты промывают 400 мл смеси, состоящей из 300 мл 10% гидроксида натрия с добавкой 100 мл 25% раствора аммиака, затем промывают в 400 мл воды, затем в 200 мл 10% соляной кислоты и, затем, в 200 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Экстракты сушат безводным сульфатом натрия и упаривают сначала на роторном испарителе в вакууме водоструйного насоса, далее выдерживают несколько часов в вакууме при давлении ~ 2 мм рт.ст. Получают 220-240 г желтого очень вязкого масла, представляющего в основном полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты.

На третьей заключительной стадии синтеза получали 4-амино-1-(2-{3-метил-5-[(фенилсульфонил)окси]фенокси}этил)пиридиний хлорид из 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты и 4-аминопиридина.

От 220 до 240 г 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты и расчетное количество 4-аминопиридина (от 50 до 70 г), а также каталитическое количество бромида натрия растворяют в ацетонитриле (ацетонитрил должен быть предварительно перегнан над Р2О5) и кипятят в течение 48 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром, переносят в колбу и кипятят в 1 л ацетонитрила в течение 6 часов для удаления окрашенных примесей. После этого смеси дают остыть до комнатной температуры в течение 6-8 часов, отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром или дихлорметаном и сушат до постоянной массы. При этом получают от 130 до 180 г 4-амино-1-(2-{3-метил-5-[(фенилсульфонил)окси]фенокси}этил)пиридиний хлорида.

Похожие патенты RU2685261C1

название год авторы номер документа
НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩИЕ ФУНКЦИЕЙ АНТИКОАГУЛЯНТОВ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТРОМБОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ И ПЛАЗМОЗАМЕЩАЮЩИЙ РАСТВОР ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГИПЕРКОАГУЛЯЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ГЕМОДИЛЮЦИИ 2007
  • Синауридзе Елена Ивановна
  • Атауллаханов Фазоил Иноятович
  • Бутылин Андрей Александрович
  • Сулимов Владимир Борисович
  • Романов Алексей Николаевич
  • Боголюбов Алексей Алексеевич
  • Кузнецов Юрий Владимирович
  • Грибкова Ирина Владимировна
  • Горбатенко Александр Сергеевич
  • Кондакова Ольга Анатольевна
RU2353619C2
4-АМИНОПИРИДИНЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ 1994
  • Вольфганг Фон Дер Зааль
  • Райнхард Хек
  • Херберт Лайнерт
  • Томас Полл
  • Карлхайнц Штегмайер
  • Хельмут Михель
RU2126388C1
НОВОЕ ПРОИЗВОДНОЕ АРИЛАМИДИНА, ЕГО СОЛЬ И СОДЕРЖАЩИЙ ИХ ПРОТИВОГРИБКОВЫЙ АГЕНТ 2006
  • Хаяси Казуя
RU2415839C2
ИНГИБИТОРЫ ТИРОЗИНКИНАЗЫ БРУТОНА 2014
  • Доминик Ромир
  • Кон Норман
  • Лоу Ян
  • Лопез-Тапиа Франсиско Хавьер
  • Со Сун-Сау
RU2653500C2
НОВОЕ АРИЛАМИДИНОВОЕ ПРОИЗВОДНОЕ, ЕГО СОЛЬ И ПРОТИВОГРИБКОВОЕ СРЕДСТВО, СОДЕРЖАЩЕЕ ТАКИЕ СОЕДИНЕНИЯ 2005
  • Хаяси Казуя
  • Кунитани Казуто
  • Уехара Саюри
  • Морита Тейити
RU2359959C2
ПРОИЗВОДНЫЕ КАРБАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ 1999
  • Франсиско Хавьер Лопес-Тапиа
  • Александер Виктор Мьюдорф
  • Канди Оуян
  • Даньел Ли Севиранс
RU2179969C2
ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНО(ТИО)ЭФИРОВ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ 1995
  • Хеннинг Беттхер
  • Ральф Девант
  • Хартмут Грайнер
  • Герд Бартошик
  • Жан-Жак Бертелон
  • Марк Ноблэ
  • Жан-Жак Зейле
  • Мишель Брюнэ
RU2155753C2
ЧАСТИЦЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ 2010
  • Диора Джитен Одхавджи
  • Сметс Джохан
  • Сквантес Тодд Арлин
RU2566753C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЯМОГО ИНГИБИТОРА ФАКТОРА Ха 2016
  • Балазовский Марк Борисович
  • Игнатенко Олег Александрович
RU2698202C2
ЧАСТИЦЫ ДЛЯ ДОСТАВКИ 2010
  • Диора Джитен Одхавджи
  • Сметс Джохан
  • Сквантес Тодд Арлин
  • Сэндс Пегги Дороти
RU2616638C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 685 261 C1

Реферат патента 2019 года Вещество 4-амино-1-{ 2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси] этил} -пиридиний хлорид, обладающее свойствами биологически активного агента, влияющими на естественно текущие процессы свертываемости крови млекопитающих, антикоагулянт на его основе и способ его получения путем химического синтеза

Группа изобретений относится к 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлориду, имеющему структурную формулу

который является прямым ингибитором тромбина, а также к способу его получения и применению. Технический результат - обеспечение возможности перорального введения биологически активного вещества - ингибитора тромбина - и при этом сохранения его специфической фармакологической активности как антикоагулянта. 4 н.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл.

Формула изобретения RU 2 685 261 C1

1. Вещество 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси]фенокси]этил}-пиридиний хлорид, имеющее структурную формулу

,

отличающееся тем, что оно обладает свойствами биологически активного агента, влияющими на естественно текущие процессы свертываемости крови млекопитающих.

2. Способ ингибирования тромбина, заключающийся во введении млекопитающему 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида или фармацевтической композиции, содержащей указанное вещество, в дозировке от 10 до 500 мг на 1 кг веса.

3. Применение 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида в составе лекарственных средств для лечения и профилактики гиперкоагуляционных событий и состояний.

4. Способ получения 4-амино-1-{2-[3-метил-5-(бензолсульфонилокси)фенокси]этил}-пиридиний хлорида путем химического синтеза, состоящего из трех стадий, а именно алкилирования, бензосульфонилирования и финишной аминопиридиниевой стадии (в схеме синтеза заявленного вещества стадии алкилирования и бензосульфонилирования могут менять свою последовательность, так что первой может идти стадия бензосульфонилирования, а следующей может идти стадия алкилирования),

при этом на стадии алкилирования получают полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенол из орцина или любого другого прекурсора 3,5-дигидрокситолуола, содержащего лабильные защитные группы на гидроксигруппе, как примеры: бензил, ацетил, метоксиметил, силил, тетрагидропиранил, в качестве алкилирующих агентов могут использоваться хлорбромэтан, или производные 2-хлорэтанола (хлоргидрина): метансульфонат (мезилат), трифторметансульфонат (трифлат), сульфат, бензолсульфонат, толуолсульфонат и т.д., в качестве растворителей для проведения реакции могут использоваться спирты, ацетонитрил, диметилформамид или диметилацетамид, тетрагидрофуран, диоксан, вода или их смеси в зависимости от используемых оснований и алкилирующих агентов, в качестве основания могут использоваться этилат натрия, алкоголяты натрия и калия, карбонаты натрия, калия или кальция, гидроксиды натрия, калия или кальция, или их гидриды, затем на стадии бензосульфонилирования из 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенола получают полупродукт 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфениловый эфир бензолсульфоновой кислоты, при его получении в качестве растворителя могут использоваться любые растворители, устойчивые к действию бензолсульфонилхлорида и оснований, как органические, так и неорганические, в частности диэтиловый эфир, метилтретбутиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан, толуол, дихлорметан, сверхкритический диоксид углерода, либо их смеси; вода, гомогенные смеси воды и тетрагидрофурана, воды и диоксана, воды и ацетонитрила, воды и диметилформамида и т.п., двухфазные смеси - вода и дихлорметан, вода и эфир, вода и толуол и т.п., а также в качестве межфазного переносчика могут использоваться основные третичные амины, такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин, пиридин, и т.п., либо их соли, и в качестве основания на этой стадии могут использоваться гидроксиды, карбонаты и гидрокарбонаты натрия, калия, кальция, основные третичные амины - триэтиламин, пиридин и т.п.,

и на финишной аминопиридиниевой стадии из промежуточного полупродукта 3-(2-хлорэтокси)-5-метилфенилового эфира бензолсульфоновой кислоты и вводимого в синтез 4-аминопиридина получают 4-амино-1-(2-{3-метил-5-[(фенилсульфонил)окси]фенокси}этил)пиридиний хлорид, при этом в качестве растворителя можно использовать любой органический растворитель, устойчивый к действию алкилирующих агентов, такой как ацетонитрил, сульфолан, диметилформамид, диметилацетамид и т.п., либо их смеси, при этом в зависимости от используемого растворителя реакция может проводиться как в присутствии катализатора, так и без него, а в качестве катализатора могут использоваться бромиды и иодиды натрия, калия и тетраалкиламмонийных солей, или основные третичные амины, такие как триэтиламин, диизопропилэтиламин, пиридин и т.п., либо их соли, и условия выделения конечного продукта могут варьироваться в зависимости от используемого растворителя и включать, либо не включать, такие этапы, как фильтрование и водная обработка (отмывка от растворителя), при этом в схеме синтеза заявленного вещества стадии алкилирования и бензосульфонилирования могут менять свою последовательность, так что первой может идти стадия бензосульфонилирования, а следующей может идти стадия алкилирования.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2685261C1

НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩИЕ ФУНКЦИЕЙ АНТИКОАГУЛЯНТОВ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТРОМБОТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ И ПЛАЗМОЗАМЕЩАЮЩИЙ РАСТВОР ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ГИПЕРКОАГУЛЯЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ГЕМОДИЛЮЦИИ 2007
  • Синауридзе Елена Ивановна
  • Атауллаханов Фазоил Иноятович
  • Бутылин Андрей Александрович
  • Сулимов Владимир Борисович
  • Романов Алексей Николаевич
  • Боголюбов Алексей Алексеевич
  • Кузнецов Юрий Владимирович
  • Грибкова Ирина Владимировна
  • Горбатенко Александр Сергеевич
  • Кондакова Ольга Анатольевна
RU2353619C2
НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩИЕ ФУНКЦИЕЙ ИНГИБИТОРОВ ТРОМБИНА, И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ НА ИХ ОСНОВЕ 2007
  • Синауридзе Елена Ивановна
  • Атауллаханов Фазоил Иноятович
  • Бутылин Андрей Александрович
  • Сулимов Владимир Борисович
  • Романов Алексей Николаевич
  • Боголюбов Алексей Алексеевич
  • Кузнецов Юрий Владимирович
  • Грибкова Ирина Владимировна
  • Горбатенко Александр Сергеевич
  • Кондакова Ольга Анатольевна
RU2354647C2
4-АМИНОПИРИДИНЫ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ 1994
  • Вольфганг Фон Дер Зааль
  • Райнхард Хек
  • Херберт Лайнерт
  • Томас Полл
  • Карлхайнц Штегмайер
  • Хельмут Михель
RU2126388C1
Steinmetzer, T., Hauptmann, J., & Stürzebecher, J
Перекатываемый затвор для водоемов 1922
  • Гебель В.Г.
SU2001A1
Advances in the development of thrombin inhibitors
Expert Opinion on Investigational Drugs, 10(5), 845-864
Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами 1921
  • Богач В.И.
SU10A1
Shafer J.A
"Cardiovascular chemotherapy: anticoagulants", Curr
Opin
Chem
Biol., 1998, no.2: pp.458-465
Sinauridze, E.I., Romanov, A.N., Gribkova, I.V., Kondakova, O.A., Surov, S.S., Gorbatenko, A
S
Ataullakhanov, F.I
Способ приготовления лака 1924
  • Петров Г.С.
SU2011A1
New Synthetic Thrombin Inhibitors: Molecular Design and Experimental Verification
PLoS ONE, 6(5), e19969
Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами 1921
  • Богач В.И.
SU10A1

RU 2 685 261 C1

Авторы

Плотников Марк Борисович

Заварзин Игорь Викторович

Назаров Андрей Константинович

Кузнецов Юрий Владимирович

Качанов Олег Юрьевич

Даты

2019-04-17Публикация

2018-04-05Подача