СПОСОБ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 2019 года по МПК A61K31/45 A61K33/18 A61K39/40 A61K47/10 A61P31/04 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для лечения некробактериоза сельскохозяйственных животных.

Известен способ изготовления вакцины против некробактериоза животных, включающий выращивание штамма возбудителя некробактериоза, инактивацию выросшей культуры, разделение ее на биомассу и культуральную жидкость, ресуспендирование отделенной биомассы, экстракцию антигена, содержащего эндотоксин, многократным замораживанием и оттаиванием полученной суспензии, центрифугированием и отделением антигена из супернатанта, параллельное извлечение экзотоксина из культуральной жидкости, инактивацию полученных экзотоксина и эндотоксина, их объединение с последующим добавлением адъюванта на основе минерального масла и ланолина и получением целевого продукта, причем из штаммов выращивают производственный штамм Bacteroides necrophorum (ВИЭВ), отделенную биомассу ресуспендируют в физиологическом растворе до концентрации 100-120 млрд кл./мл, выделяют эндотоксин с концентрацией белка 2,5-3,0 мг/мл, а извлечение экзотоксина осуществляют ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 1,3-1,7 КДа до содержания белка в экзотоксине 5,5-6,0 мг/мл, смешивают экзотоксин и эндотоксин в равных объемных соотношениях (Патент RU 2109519, А61К 39/02, Опубликовано 27.04.1998, Бюл. №21).

Однако известная вакцина недостаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.

Известен также способ изготовления вакцины, который включает культивирование штамма B.necrophorum «0-1» ВИЭВ на питательной среде, инактивирование формалином, отделение биомассы от культуральной жидкости центрифугированием, отделение центрифугата и концентрирование экзотоксина ультрафильтрацией до содержания белка 5,5-6,0 мг/мл (по Лоури). Получают экзотоксин B.necrophorum с молекулярной массой 18000-20000 Д. Добавляют к нему раствор формалина до конечной концентрации 0,4%. Инактивируют в течение 15 суток и смешивают инактивированный формалином экзотоксин с масляным адъювантом при следующем содержании компонентов (в мас. %): инактивированный формалином экзотоксин B.necrophorum - 60,0-67,0, масляный адювант - 33,0-40,0. Затем гомогенизируют полученную суспензию и расфасовывают готовую вакцину. Вакцину животным вводят внутрикожно одно-, двукратно в дозе 0,2-0,4 мл. Изобретение позволяет упростить способ изготовления высокоэффективной вакцины, получить вакцину с низкой реактогенностью, а также снизить прививочную дозу вакцины и повысить удобство ее введения (Патент RU 2329828, A61K 39/02, опубл. 27.07.2008, бюл. №21).

Однако известная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против некробактериоза.

Известен СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НЕКРОБАКТЕРИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ (патент RU 2255755, опубликовано: 10.07.2005), в котором лечение осуществляется следующим образом.

1. Хирургическая обработка некротических язв, удаление омертвевших тканей.

2. Промывание очищенных ран 3%-ным раствором перманганата калия.

3. На обработанный участок кожи или копыта накладывается тампон, смоченный "Тодикамп-идеалом", сверху накладывается пергамент. Компресс нужно держать 2-3 часа. После снятия компресса обработать пораженный участок горчино-тыквенным маслом "Волгоградское" во избежание ожога и ускорения заживления. Компресс повторяется ежедневно 3-4 дня.

4. Одновременно с первого дня лечения в порционную дозу жидкости (молозива, обрата или воды, 5 л) добавляли 7-8 мл "Тодикамп-идеала" 2 раза в день для усиления иммунной системы больного животного, а также для предотвращения попадания инфекции в ротовую полость и во внутренние органы или для ее уничтожения. Продолжительность лечения от 2 до 6 дней или до выздоровления.

Данная методика не обеспечивает создание достаточного иммунитета против некробактериоза.

Наиболее близким аналогом является гипериммунная сыворотка против некробактериоза (RU 2195318, опубликовано: 27.12.2002.) сельскохозяйственных животных, отличающаяся тем, что содержит антитела к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 (в РА) и получена гипериммуннизацией волов-продуцентов инактивированным формалином лейкоцидин-экзотоксином, представляющим собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кД и выделенный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ.

Перед применением сыворотки производят расчистку и обрезку копыт, туалет раневой поверхности, удаляют омертвевшие ткани. Всем животным на раневую поверхность накладывают ватно-марлевый тампон, пропитанный сывороткой и фиксируют его поддерживающей повязкой. Одновременно с наложением повязки каждому животному в круп вводят по 150 мл гипериммунной сыворотки.

Технической проблемой прототипа является ограниченное использование для производства сыворотки штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, что не позволяет эффективно обеспечивать защиту при заражении от штаммов Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам.

Также, предложенный способ лечения в прототипе не является комплексным. В прототипе лечебный эффект кратковременный, влияние местного лечения в виде тампона, пропитанного сывороткой, не достаточно активно.

Задачей изобретения является устранение технических проблем прототипа.

Техническим результатом изобретения является более эффективное и быстрое лечение.

Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ лечения некробактериоза крупного рогатого скота, заключающийся в расчистке пораженных участком копыт рогатого скота с последующим удалением некротизированных тканей, последующим введение гипериммунной сыворотки, полученной на основе штамма Fusobacterium necrophorum, с содержанием антител к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА), отличающийся тем, что после расчистки проводят промывку 6% раствором перекиси, и последующую фиксацию марлевого тампона смоченного композицией, в которой соотношение компонентов, % мас:

- спирт этиловый 95%-55,6%

- глицерин - 33,3%

- йода раствор спиртовой 5%-11,1%

накладыванием тугой повязки на пораженную конечность с курсом лечения при стандартной форме течения некробактериоза в течение 2 недель при соблюдении норм кормления и содержания рогатого скота с учетом потребностей и физиологического состояния; в качестве гипериммунной сыворотки используют сыворотку, полученную из крови клинически здоровых продуцентов, гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами Fusobacterium necrophorum, и законсервированную раствором фенола до концентрации не более 0,5%; за животными осуществляют строгий контроль содержания, обеспечивая сухую глубокую подстилку и полноценное кормление по возрастным нормам и с учетом физиологического состояния больных животных. Сыворотку получают из крови клинически здоровых волов-продуцентов, коров и лошадей гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, а также с использованием штаммов Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей.

Композицию для смачивания марлевого тампона готовят вливанием 250 мл спирта этилового 95% в 500 мл флакон для инфузий, куда затем добавляют 150 мл глицерина, затем интенсивно перемешивают при закрытой резиновой пробке, после чего добавляют 50 мл йода раствора спиртового 5%.

Осуществление изобретения

Способ лечения некробактериоза крупного рогатого скота заключается в расчистке пораженных участком копыт рогатого скота с последующим удалением некротизированных тканей, последующим введение гипериммунной сыворотки, полученной на основе штамма Fusobacterium necrophorum, с содержанием антител к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА).

Новым является то, что после расчистки проводят промывку 6% раствором перекиси, и последующую фиксацию марлевого тампона смоченного композицией, в которой соотношение компонентов, % мас.:

- спирт этиловый 95%-55,6%

- глицерин - 33,3%

- йода раствор спиртовой 5%-11,1%

накладыванием тугой повязки на пораженную конечность с курсом лечения при стандартной форме течения некробактериоза в течение 2 недель при соблюдении норм кормления и содержания рогатого скота с учетом потребностей и физиологического состояния; в качестве гипериммунной сыворотки используют сыворотку, полученную из крови клинически здоровых продуцентов, гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами Fusobacterium necrophorum, и законсервированную раствором фенола до концентрации не более 0,5%; за животными осуществляют строгий контроль содержания, обеспечивая сухую глубокую подстилку и полноценное кормление по возрастным нормам и с учетом физиологического состояния больных животных.

Предложенный вариант лечения отличается тем, что он является комплексным: лечение как введением лечебной сыворотки, так и местное, плюс изменение условий содержания (глубокая подстилка) и применение премиксов и витаминов.

Учитывая, что способ получения гипериммунных сывороток идентичен при всех видах заболевания, заявленный способ отличается более широким наличием штаммов: сыворотку получают из крови клинически здоровых волов-продуцентов, коров и лошадей гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, а также с использованием штаммов Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей.

В местном лечении применяются галогеносодержащий раствор, в который входит спирт, глицерин и йод. Так как возбудитель подвержен влиянию галогенов, а глицерин позволяет дольше сохранить лечебный эффект, то его местное влияние достаточно активно, а в комплексе с сывороткой позволяет добиться быстрого излечения и стойкого эффекта. Способ лечения заключается в расчистке пораженных участком копыт рогатого скота с последующим удалением некротизированных тканей, промывкой 6% раствором перекиси, фиксацией марлевого тампона смоченного йода раствором спиртовым на глицерине с закреплением тугой повязки на пораженную конечность с курсом лечения при стандартной форме течения некробактериоза в течение 2 недель при соблюдении норм кормления и содержания рогатого скота с учетом потребностей и физиологического состояния. Параллельно вводится сыворотка против некробактериоза в соответствии с рекомендациями инструкции.

Объект лечения: крупный рогатый скот и мелкий рогатый скот с клиническими признаками поражения копыт некробактериозом, вызванным возбудителем Fusobacterium necrophorum.

Последовательность лечения: применение лечебной сыворотки против некробактериоза; применение местного лечения - примочка-компресс и перевязка с препаратом, содержащим йода раствор спиртовой, спирт этиловый 95% и глицерин; строгий контроль содержания (сухая глубокая подстилка) и кормления (полноценное кормления по возрастным нормам и с учетом физиологического состояния) больных животных.

Способ лечения состоит из этапов:

- наложение компресса на пораженную конечность(ти) йода раствора спиртового на глицерине.

- закрепление тугой повязки на пораженную конечность.

- курс лечения: в зависимости от степени поражения, стандартный - через день в течение 2 недель.

Сыворотку получают из крови клинически здоровых волов-продуцентов, коров и лошадей гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, а также с использованием штаммов Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей.

Сыворотка консервирована раствором фенола до концентрации не более 0,5%.

По внешнему виду сыворотка представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость светло-желтого цвета, иногда с красноватым оттенком. Допускается жироподобная пленка, незначительный осадок серо-белого цвета легко разбивающийся при встряхивании в равномерную взвесь.

Сыворотка фасуется по 100 см³ в стерильные стеклянные или полимерные флаконы соответствующей вместимости, герметично укупоренными резиновыми пробками и укрепленными алюминиевыми колпачками.

Сыворотку хранят и транспортируют в защищенном от света месте при температуре от 2°С до 15°С. Допускается транспортировка сыворотки в упаковке организации-производителя: ящики из гофрированного картона при температуре до 20°С не более 5 суток, и ящики из пенополистирола с хладоэлементами при температуре 35°С 3 суток.

Сыворотка, введенная парентерально, вызывает образование у животных пассивного иммунитета к F. necrophorum продолжительностью 10-14 суток.

При повторном введении через 14 суток и в более поздние сроки может возникнуть анафилаксия.

Каждая доза сыворотки содержит антитела к F. necrophorum в титре не ниже 1:128 (в РА). Сыворотка предназначена для лечения и профилактики некробактериоза крупного рогатого скота и северных оленей.

Перед применением флаконы с сывороткой тщательно встряхивают, подогревают в водяной бане до температуры 36°С-37°С. При введении сыворотки соблюдают правила асептики и антисептики. Место инъекции дезинфицируют 70% спиртом или другим дезинфицирующим раствором.

Сыворотку вводят внутримышечно в области крупа или нижней трети шеи перед лопаткой.

Сыворотку применяют с профилактической и лечебной целью крупному рогатому скоту и северным оленям независимо от возраста в дозах указанных ниже:

Симптомов проявления некробактериоза или других патологических признаков при передозировке сыворотки не было установлено.

Особенностей лекарственных реакции при первичной и последующих иммунизациях сывороткой не было установлено.

При применении сыворотки беременным животным, а так же у потомства животных, побочных действий и осложнений не наблюдалось.

Следует избегать нарушений схемы иммунизации сывороткой, поскольку это может привести к снижению профилактического и терапевтического эффекта. В случае пропуска очередного введения сыворотки необходимо провести иммунизацию как можно скорее. У отдельных животных возможно проявление аллергических реакций в форме саливации синюшности слизистых оболочек, повышения температуры тела. В этом случае применяют антигистаминные препараты.

Композицию для смачивания марлевого тампона готовят при соотношении компонентов, %мас:

спирт этиловый 95%-55,6%

глицерин - 33,3%

йода раствор спиртовой 5%-11,1%

Композицию готовят, например, следующим образом.

Берут флакон стеклянный объемом 500 мл со шкалой делений по 50 мл. Далее готовят рабочий раствор йода спиртового на глицерине, для чего вливают 250 мл спирта этилового 95% в 500 мл флакон (для инфузий), куда затем добавляют 150 мл глицерина.

Полученное интенсивно перемешивают при закрытой резиновой пробке и затем добавляют 50 мл йода раствора спиртового 5%.

В процессе лечения животное фиксируют в станке (для крововзятия), промывают пораженные участки кожи и межпальцевое пространство больной конечности вола под струей воды. Затем проводят обрезку и расчистку копытцев. Далее промывают пораженный участок конечности перекисью водорода 3%-6%.

Марлевый тампон готовят по размеру пораженного участка копытца с захватом 1-2 см здоровой чистой (неповрежденной) поверхности и смачивают приготовленным раствором в объеме 30-50 мл (в зависимости от размера поражения копытцев).

Тампон, смоченный приготовленным раствором, закрепляют при помощи повязки в виде бинта или фрагмента марли необходимой длинны (около 1,0-2,0 м).

Процедуру повторяют ежедневно или через день до исчезновения клинического проявления воспаления в течение 7-10 суток.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ лечения некробактериоза крупного рогатого скота, заключающийся в расчистке пораженных участков копыт рогатого скота с последующим удалением некротизированных тканей, последующим введением гипериммунной сыворотки, полученной на основе штамма Fusobacterium necrophorum, с содержанием антител к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА), отличающийся тем, что после расчистки проводят промывку 6% раствором перекиси, и последующую фиксацию марлевого тампона, смоченного композицией, в которой соотношение компонентов, % мас.: спирт этиловый 95%-55,6%, глицерин - 33,3%, йода раствор спиртовой 5%-11,1%, накладыванием тугой повязки на пораженную конечность с курсом лечения при стандартной форме течения некробактериоза в течение 2 недель при соблюдении норм кормления и содержания рогатого скота с учетом потребностей и физиологического состояния; в качестве гипериммунной сыворотки используют сыворотку, полученную из крови клинически здоровых продуцентов, гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами Fusobacterium necrophorum, и законсервированную раствором фенола до концентрации не более 0,5%; за животными осуществляют строгий контроль содержания, обеспечивая сухую глубокую подстилку и полноценное кормление по возрастным нормам и с учетом физиологического состояния больных животных. Может быть использовано для лечения некробактериоза сельскохозяйственных животных. Использование заявленного изобретения обеспечивает более эффективное и быстрое лечение некробактериоза крупного рогатого скота. 2 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Способ лечения некробактериоза крупного рогатого скота, заключающийся в расчистке пораженных участков копыт рогатого скота с последующим удалением некротизированных тканей, последующим введение гипериммунной сыворотки, полученной на основе штамма Fusobacterium necrophorum, с содержанием антител к Fusobacterium necrophorum в титре не ниже 1:128 в реакции агглютинации (в РА), отличающийся тем, что после расчистки проводят промывку 6% раствором перекиси, и последующую фиксацию марлевого тампона, смоченного композицией, в которой соотношение компонентов, % мас.:

- спирт этиловый 95%-55,6%

- глицерин - 33,3%

- йода раствор спиртовой 5%-11,1%

накладыванием тугой повязки на пораженную конечность с курсом лечения при стандартной форме течения некробактериоза в течение 2 недель при соблюдении норм кормления и содержания рогатого скота с учетом потребностей и физиологического состояния; в качестве гипериммунной сыворотки используют сыворотку, полученную из крови клинически здоровых продуцентов, гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами Fusobacterium necrophorum, и законсервированную раствором фенола до концентрации не более 0,5%; за животными осуществляют строгий контроль содержания, обеспечивая сухую глубокую подстилку и полноценное кормление по возрастным нормам и с учетом физиологического состояния больных животных.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сыворотку получают из крови клинически здоровых волов-продуцентов, коров и лошадей, гипериммунизированных инактивированными некробактериозными антигенами штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, а также с использованием штаммов Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что композицию для смачивания марлевого тампона готовят вливанием 250 мл спирта этилового 95% в 500 мл флакон для инфузий, куда затем добавляют 150 мл глицерина, затем интенсивно перемешивают при закрытой резиновой пробке, после чего добавляют 50 мл йода раствора спиртового 5%.