СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ, АЛЛЕРГИЧЕСКИХ, АУТОИММУННЫХ И ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 2019 года по МПК G01N33/53 

Описание патента на изобретение RU2702011C1

Изобретение относится к медицине и может быть применено в области клинической лабораторной диагностики.

Предлагается способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний путем обработки жидких биологических сред воздействием энергии акустического поля ультразвука с целью кавитационной дезинтеграции иммунных комплексов, для получения свободных антител и антигенов, которые в дальнейшем используются для проведения иммуноферментного анализа (далее - ИФА).

Известен способ раннего выявления специфических антигенов и антител с помощью ИФА (патент РФ на изобретение №2185629, опубл. 20.07.2002). Способ обеспечивает повышение точности диагностики ранних поражений нервной системы при туберкулезе, а именно определяют антитела к основному белку миелина в сыворотке крови с помощью ИФА по оптической плотности и при их содержании больше 0,199 оптических единиц, диагностируя туберкулезное поражение нервной системы на ранних стадиях.

Ранняя диагностика, например ВИЧ-инфекции, одинаково важна как для здоровья зараженного пациента, так и для всего общества. Чем раньше будет определен ВИЧ-статус пациента, тем более эффективной может быть терапия, тем раньше можно будет ограничить дальнейшее распространение инфекции.

В настоящее время для клинической лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, широко используются различные способы обнаружения ВИЧ, основанные на выявлении антигенов вируса и антител к ВИЧ, а также генетического материала вируса иммунодефицита. Все эти способы обладают различной эффективностью, требуют различного оборудования и разного уровня профессиональной подготовки персонала, а результаты исследований - грамотной интерпретации.

Наиболее близким по своей технической сущности к предполагаемому изобретению, выбранный в качестве прототипа, является способ диагностика ВИЧ-инфекции с помощью обнаружения антигенов и антител к ВИЧ-инфекции методом ИФА (Руководство для врачей «Вирус Иммунодефицита Человека - медицина», Н.А. Беляков, А.Г. Рахманов и др. Санкт-Петербург, 2011 г.).

Этот способ включает:

- этап иммунной реакции: получение иммунохимического комплекса в результате поэтапного или одномоментного добавления иммунных реагентов, один из которых содержит ферментную метку;

- этап промывки, целью которой является удаление не связавшихся компонентов;

- этап проведения ферментативной реакции за счет добавления субстрата (или субстрата и хромогена) с последующим внесением стоп-реагента для остановки реакции;

- этап учета и интерпретации результатов анализа.

При обследовании пациента на ВИЧ-инфекцию методом ИФА возможно получение ложноотрицательных результатов. Это может иметь место в период «серологического окна», когда инфицирование произошло относительно недавно, уровень антител в крови пациента еще очень низкий и чувствительность тест-систем недостаточна для их выявления. Ложноотрицательные результаты могут наблюдаться и в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса образования антител.

Недостатком этого способа является то, что ИФА выявляет свободные антитела и антигены, находящиеся в жидкой биологической среде, но циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), состоящие из связанных между собой антигенов и антител в результате этого анализа не выявляются, тем самым, не могут быть использованы для диагностики различных заболеваний.

Задачей предлагаемого изобретения является решение проблемы ранней и экспертной диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний.

Для решения поставленной задачи предлагается способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний, который, как и наиболее близкий, выбранный в качестве прототипа, включает ИФА жидких биологических сред, содержащих ЦИК, состоящие из антигенов и связанных с ними антител.

В отличие от прототипа, в предлагаемом способе перед ИФА жидких биологических сред дополнительно проводят воздействие ультразвука на жидкую биологическую среду, при котором происходит высвобождение свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности в течение 3-10 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт при температуре 25°-38°С.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что с помощью ультразвукового воздействия на жидкую биологическую среду происходит диссоциация ЦИК, сопровождающаяся высвобождением свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности.

Границы частоты ультразвукового воздействия 22 кГц и его мощности 400 Вт обусловлены необходимостью получения эффекта кавитации в жидких биологических средах, содержащих биологические объекты белковой и липопротеидной природы - антитела и антигены, активации химических реакций, в том числе с разрывом иммунохимических связей между биомолекулами ЦИК.

При ультразвуковом воздействии на жидкую биологическую среду с частотой большей, чем 22 кГц происходят конформационные изменения биомолекул и иммунных комплексов, и, как следствие, потеря иммунной активности входящих в них антител и антигенов.

Диапазон температур обусловлен теми же причинами - необходимостью сохранения антителами и антигенами, входящих в состав ЦИК, биологической активности.

Заявленный способ осуществляют следующим образом.

Пластиковую пробирку с 1,0 мл жидкой биологической среды, например, сыворотки крови, помещают в устройство, позволяющее производить ультразвуковой воздействие на ЦИК сыворотки крови. Под действием ультразвука на сыворотку крови в течение 3-10 мин, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт при температуре 25°-38°С из ЦИК сыворотки крови происходит высвобождение свободных, сохраняющих биологическую активность антигенов и антител и их наличие выявляется далее методом ИФА или иммунного блотинга (далее - ИБ).

С помощью ИБ выявляют различные антитела, например, специфические к ВИЧ антигенам. Эти антитела относятся к классу Ig G. Например, выявлены Ig G специфические антитела к gp 41 антигенам ВИЧ.

При аллергических заболеваниях выявляют антитела двух основных классов Ig G и Ig Е. Ig Е специфические антитела выявляют к аллергенам (их более 1000).

В таблице 1 проиллюстрирована возможность достижения технического результата - выявление свободных Ig G специфических антител к ВИЧ во всем заявленном интервале значений.

По результатам экспериментов выявили, что при указанных условиях возможно выявление Ig G специфических антител к ВИЧ с возрастанием их диагностического титра после ультразвукового воздействия. За диагностический титр принимали значение максимального разведения сыворотки крови, в котором методом ИФА выявлялись Ig G специфические антитела к ВИЧ.

Было произведено обследование 7 больных ВИЧ-инфекцией, у которых ранее в сыворотке крови методами ИФА и ИБ были выявлены свободные специфические антитела к ВИЧ класса Ig G в диагностических титрах 1:1000 и 1:2000.

Для выделения из состава ЦИК свободных Ig G специфических антител к ВИЧ было проведено ультразвуковое воздействие на сыворотку крови с помощью источника ультразвука частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт на активной нагрузке в течение 10 мин при температуре 25°С - 38°С.

Как видно из таблицы 1 после воздействия ультразвука на сыворотку крови в течение 3-10 минут диагностический титр специфических антител к ВИЧ вырос во всех подвергнутых ультразвуковому воздействию пробах. Это является свидетельством того, что возросла концентрация свободных специфических антител к ВИЧ класса Ig G. Рост диагностического титра находится в пределах от 4 раз (пробы №№2, 3, 4, 6) до 8 раз (проба №7).

При воздействии ультразвука на сыворотку крови диагностический титр специфических антител к ВИЧ достиг максимальных значений на 5 минуте, при дальнейшем воздействии от 6 до 10 минут достигнутые максимальные значения не менялись.

При повышении температуры от 26°С до 38°С результаты диагностических титров были так же неизменны. Биологическая иммунная активность специфических антител к ВИЧ класса Ig G, выделенных из ЦИК, была подтверждена в исследованиях методом ИФА.

Итак, предлагаемое изобретение решает поставленную задачу, а именно, решает проблему ранней и экспертной диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний.

Похожие патенты RU2702011C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ПРОГЕСТЕРОНУ 2022
  • Пастушенков Владимир Леонидович
  • Беженарь Виталий Федорович
  • Молчанов Олег Леонидович
  • Констанденкова Алина Сергеевна
  • Круглов Святослав Юрьевич
  • Краевой Сергей Александрович
RU2809774C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАНДАРТНОЙ ПОЛОЖИТЕЛЬНОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК КРОВИ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ВИРУСНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ИНФЕКЦИЯМ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ОРГАНИЗМА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 2008
  • Матвеева Ирина Николаевна
  • Кочиш Иван Иванович
  • Бондарева Наталья Анатольевна
  • Кузнецова Светлана Владимировна
  • Еремец Наталья Киреевна
  • Люлькова Лариса Сергеевна
  • Бараковский Иван Александрович
  • Салов Дмитрий Александрович
  • Рахманина Екатерина Владимировна
RU2392331C2
СПОСОБ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ КОЖНЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ПРОБ С ИНФЕКЦИОННЫМИ ИЛИ НЕИНФЕКЦИОННЫМИ АЛЛЕРГЕНАМИ 2021
  • Пастушенков Владимир Леонидович
  • Митин Юрий Алексеевич
RU2775582C1
КОМПЛЕКСНЫЙ АНТИГЕН ВИРУСА КОРИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КОРИ 2010
  • Пьянков Степан Александрович
  • Агафонов Александр Петрович
  • Лебедев Леонид Рудольфович
  • Шиков Андрей Николаевич
  • Демина Ольга Константиновна
  • Дроздов Илья Геннадиевич
RU2441666C1
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВНУТРИУТРОБНЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ДЕТЕЙ 2006
  • Аксенов Олег Алексеевич
  • Осипова Зинаида Алексеевна
  • Закина Анна Анатольевна
  • Тихомирова Ольга Вячеславовна
RU2310851C1
Штамм "Шевченко-2014" вируса геморрагической болезни кроликов для изготовления вакцинных, диагностических и лечебных препаратов 2015
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Черных Олег Юрьевич
  • Шевченко Людмила Васильевна
  • Зеркалев Дмитрий Юрьевич
RU2631925C2
ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СПЕКТРА АНТИТЕЛ К ВИЧ 1 И 2 ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА ВИЧ 1 (p24) "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1 И 2, ВИЧ 1 ГРУППЫ О-СПЕКТР+АГ p24 ВИЧ 1" 2005
  • Бурков Анатолий Николаевич
  • Уланова Татьяна Ивановна
  • Обрядина Анна Петровна
  • Баранова Елена Николаевна
  • Шарипова Ирина Николаевна
RU2283497C1
СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ЭКСПРЕСС ДИАГНОСТИКИ ДОКЛИНИЧЕСКИХ И КЛИНИЧЕСКИ ВЫРАЖЕННЫХ ФОРМ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПО ГЕВОНДЯН 2000
  • Гевондян В.С.
  • Гевондян Н.М.
  • Гевондян М.В.
RU2196333C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АВИДНОСТИ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G К ВИРУСУ ГЕРПЕСА 6 ТИПА 2015
  • Мурина Елена Александровна
  • Голева Ольга Владимировна
  • Осипова Зинаида Алексеевна
RU2596794C1
Способ диагностики вируса простого герпеса 2018
  • Алимов Александр Викторович
  • Собенин Вячеслав Михайлович
  • Барыбин Александр Сергеевич
  • Дёмин Александр Михайлович
  • Краснов Виктор Павлович
  • Григорьева Юлия Витальевна
  • Мальчиков Игорь Александрович
RU2702000C2

Реферат патента 2019 года СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ, АЛЛЕРГИЧЕСКИХ, АУТОИММУННЫХ И ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и позволяет проводить диагностику инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний. Для этого проводят иммуноферментный анализ жидких биологических сред, содержащих циркулирующие иммунные комплексы, состоящие из антигенов и связанных с ними антител. Перед иммуноферментным анализом дополнительно проводят воздействие ультразвука на жидкую биологическую среду в течение 3-10 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт при температуре 25-38°С, при воздействии которого происходит высвобождение свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности. Изобретение позволяет решать проблему ранней диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 702 011 C1

Способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний, включающий иммуноферментный анализ жидких биологических сред, содержащих циркулирующие иммунные комплексы, состоящие из антигенов и связанных с ними антител, отличающийся тем, что перед иммуноферментным анализом дополнительно проводят воздействие ультразвука на жидкую биологическую среду, при котором происходит высвобождение свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности в течение 3-10 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт при температуре 25-38°С.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2702011C1

УЛУЧШЕННЫЕ СПОСОБЫ ИММУНОАНАЛИЗА 2010
  • Робертсон Джон Форсит Расселл
  • Барнс Тони
  • Мюррей Андреа
  • Чепмэн Кэролайн
RU2662555C2
DE 4033741 C2, 31.03.1994
БЕЛЯКОВ Н
А
и др
Вирус иммунодефицита человека-медицина, 2011
АКОПЯН В
Б., Ершов Ю
А
Основы взаимодействия ультразвука с биологическими объектами //М.: МГТУ им
НЭ Баумана, 2005, Т
Фотореле для аппарата, служащего для передачи на расстояние изображений 1920
  • Тамбовцев Д.Г.
SU224A1
CHEN R
et al
Ultrasound-accelerated immunoassay, as exemplified by enzyme immunoassay of choriogonadotropin //Clinical chemistry, 1984, Т
Способ обработки медных солей нафтеновых кислот 1923
  • Потоловский М.С.
SU30A1
Разборный с внутренней печью кипятильник 1922
  • Петухов Г.Г.
SU9A1
ОДНОКОЛЕСНЫЙ ЭКИПАЖ 1923
  • Семов В.В.
SU1446A1

RU 2 702 011 C1

Авторы

Пастушенков Владимир Леонидович

Митин Юрий Алексеевич

Дудников Сергей Юрьевич

Даты

2019-10-03Публикация

2018-11-26Подача