СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ПРОГЕСТЕРОНУ Российский патент 2023 года по МПК G01N33/74 A61B8/00 

Изобретение относится к медицине и может быть применено в области акушерства и гинекологии и клинической лабораторной диагностики.

Предлагается способ диагностики резистентности к прогестерону.

Диагностика резистентности к прогестерону важна для подбора адекватной терапии женщин к гормонально-зависимыми заболеваниями, например, эндометриозом, так как у 1/3 женщин в следствие резистентности к прогестерону терапия прогестинами может оказаться не эффективной (Р. Vercellini, L. Buggio, N. Berlanda, Е. Somigliana, etal. Estrogen-progestins and progestins for the management of endometriosis. FertilSteril Article in press 2016).

В настоящее время известны способы диагностики заболеваний путем обработки жидких биологических средств воздействием энергии акустического поля ультразвука с целью кавитационной дезинтеграции иммунных комплексов, для получения свободных антител и антигенов, которые в дальнейшем используются для проведения иммунноферментального анализа (далее - ИФА).

Известен способ раннего выявления специфических антигенов и антител с помощью ИФА - патент РФ на изобретение №2185659, опубл. 20.07.2002 г. Способ обеспечивает повышение точности диагностики ранних поражений нервной системы при туберкулезе, а именно, определяют антитела к основному белку миелина в сыворотке крови с помощью ИФА по оптической плотности и при их содержании больше 0,199 оптических единиц, диагностируя туберкулезное поражение нервной системы на ранних стадиях.

Наиболее близким по своей технической сущности к предполагаемому изобретению является способ обработки плазмы крови путем воздействия энергией акустического поля ультразвука с целью кавитационной дезинтеграции циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), состоящих из антигенов и связанных с ними антител. (Патент РФ на изобретение №2702011 «Способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний», опубл. 03.10.2019, бюл. №28).

В основе способа диагностики лежит ультразвуковое воздействие на плазму крови, при котором происходит диссоциация ЦИК, сопровождающаяся высвобождением свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности.

Известный способ предназначен только для диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний.

Задачей предлагаемого изобретения является расширение функциональных возможностей способа ранней и экспертной диагностики проблемы резистентности к прогестерону и подбора адекватной терапии женщин с гормонально-зависимыми заболеваниями, например эндометриозом.

Основная задача решается с помощью ультразвукового воздействия на плазму крови, при котором происходит диссоциация циркуляции иммунных комплексов, состоящих из антигенов и связанных с ними антител, сопровождающаяся высвобождением свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности.

В отличие от прототипа в предлагаемом способе анализ уровня прогестерона проводят до и после ультразвукового воздействия на плазму крови и по среднему значению уровня прогестерона определяют в сыворотке крови у всех пациентов резистентность к прогестерону, при этом среднее значение уровня прогестерона до и после ультразвукового воздействия у пациентов с эндометриозом и хронической тазовой болью составляют: 4,088±5,366 (m=±1,200) и 7,095±8,582 (m=±1,919), а у пациентов без эндометриоза и хронической тазовой боли составляют 5,139±2,257 (m=±0,728) и 5,091±3,216 (m=±0,719), где m - среднее арифметическое разностей показателей до и после ультразвукового воздействия на плазму крови.

Сущность предлагаемого способа диагностики резистентности к прогестерону заключается в том, чтобы после анализа уровня прогестерона до и после ультразвукового воздействия на плазму крови правильно подобрать терапию.

Терапия эндометриоза состоит из нескольких этапов, включающих в себя диагностику, хирургическое и медикаментозное лечение.

В качестве гормональной терапии применяют препараты первой линии - прогестины, комбинированные оральные контрацептивы (КОК), нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) и препараты второй линии - агонисты гонадотропин-рилизинг-гормона (аГнРГ), при курсе более 6 месяцев в сочетании со средствами для заместительной гормональной терапии, левоноргестрел - высвобождающую внутриматочную терапевтическую систему.

Оптимальным выбором при легкой и умеренной тазовой боли, предположительно вызванной гетеротопиями, могут служить КОК и прогестины (Адомян Л.В., Арсланян К.Н., Харченко Э.И., Логинова О.Н. Современные направления в медикаментозном лечении эндометриоза. Проблемы репродукции. 2019; 26 (6): 58-66).

В качестве прогестинов зачастую используются препараты, с действующим веществом Диеногест (2 мг/сут) и действующим веществом Дидрогестерон (30 мг/сут). Однако, рассматривая терапию с точки зрения резистентности к прогестерону, стоит отметить различие в молекулярном строении молекул Дидрогестерона и Диеногеста. Образуясь, антитела к природному прогестерону дают перекрестную реакцию с молекулами, похожими по строению с собственным прогестероном. Молекула Дидрогестерона имеет стехиометрическое отличие (выгнутая форма) от остальных аналогов природного прогестерона, имеющих циклопентанпергидрофенантреновую основу, на которую подвешены радикалы в той или иной степени комплаентности. Благодаря своему строению, к молекуле Дидрогестерона негомогенны молекулы, образовавшиеся к природному прогестерону и антитела не соединяются. Молекула Дидрогестерона имеет сродство к рецепторам прогестерона, модифицируя их под себя, тем самым, не давая присоединяться к рецепторам собственного прогестерона, что предотвращает фагоцитоз.

Предлагаемый способ диагностики резистентности к прогестерону осуществляется следующим образом: в исследование входили фертильные женщины возраста от 18 до 45 лет с эндометриозом, диагностированным на основании жалоб, клинического обследования, УЗИ (МРТ) органов малого таза и подтвержденным интраоперационно и гистологически. Забор крови у всех пациентов осуществлялся за 7 дней до предполагаемой менструации, утром, натощак, после ночного периода голодания 8-10 часов. Накануне исследования всем пациентам рекомендовано было избегать повышенных физических и психоэмоциональных нагрузок, приема алкоголя, сексуальных контактов и курения за 1-3 часа до исследования.

При помощи воздействия акустического поля ультразвука в течение 5 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт при температуре 25° - 38°С выполнено обследование плазмы крови 20 пациентов с подтвержденным эндометриозом и хронической тазовой болью с целью определения наличия резистентности к прогестерону и 20 пациентов без эндометриоза и хронической тазовой боли.

Среднее значение признака до эксперимента составляет 4,088±5,366 (m=±1,200). Среднее значение признака после эксперимента составляет 7,095±8,582 (m=±1,919).

Число степеней свободы (f) равно 19.

Парный t-критерий Стьюдента равен 3,855. Критическое значение t-критерия Стьюдента при данном числе степеней свободы составляет 2,093. Критическое значение t-критерия Стьюдента зависит от уровня значимости и числа степеней свободы. Если модуль наблюдаемого значения больше критического значения, то теория о незначимости коэффициентов модели регрессии отвергается.

t_набл (наблюдаемое значение t-критерия) >t_крит (критическое значение t-критерия), изменения признака статически значимы.

t_набл>t_крит, изменения признака статически значимы (р=0,001)

Среднее значение признака до эксперимента составляет 5,139±3,257 (m=±0,728). Среднее значение признака после эксперимента составляет 5,091±3,216(m=±0,719).

Число степеней свободы (f) равно 19.

Парный t-критерий Стьюдента равен - 1,799. Критическое значение t-критерия Стьюдента при данном числе степеней свободы составляет 2,093.

t_набл>t_крит, изменения признака статически не значимы (р=0,088)

Результаты исследования показали, что у 100% пациентов с эндометриозом и хронической тазовой болью выявлена резистентность к прогестерону. У пациентов без эндометриоза и хронической тазовой боли резистентность к прогестерону не выявлена в 100% случаев.

Результаты, полученные при диагностике резистентности к прогестерону позволили подобрать индивидуальную терапию для женщин с гормонально-зависимыми заболеваниями, например, эндометриозом.

Конкретные примеры осуществления предлагаемого способа.

Проведено комплексное обследование и лечение 120 пациентов с эндометриозом и хронической тазовой болью. Анкетирование и хирургическое лечение в условиях гинекологического стационара.

Все пациенты распределены по группам, назначено лечение:

1 группа пациенток (n=25) с резистентностью к прогестерону, хронической тазовой болью, обусловленной эндометриозом, получивших хирургическое лечение и затем в течение 6 месяцев получавших гормональную терапию препаратом с действующим веществом Диеногест 2 мг/сут.

2 группа пациенток (n=25) с резистентностью к прогестерону, хронической тазовой болью, обусловленной эндометриозом, получивших хирургическое лечение и затем в течение 6 месяцев получавших гормональную терапию препаратом с действующим веществом Дидрогестерон 30 мг/сут.

3 группа пациенток (n=25) без резистентности к прогестерону, с хронической тазовой болью, обусловленной эндометриозом, получивших хирургическое лечение и затем в течение 6 месяцев получавших гормональную терапию препаратом с действующим веществом Диеногест 2 мг/сут.

4 группа пациенток (n=25) без резистентности к прогестерону, хронической тазовой болью, обусловленной эндометриозом, получивших хирургическое лечение и затем в течение 6 месяцев получавших гормональную терапию препаратом с действующим веществом Дидрогестерон 30 мг/сут.

Контрольная группа пациенток (n=20) с хронической тазовой болью, обусловленной спаечным процессом органов малого таза, получивших хирургическое лечение.

Проведено анкетирование 120 пациентов, проходивших хирургическое и последующее медикаментозное лечение в течение 6 месяцев с последующим анализом полученных результатов.

Проведен статистический анализ полученных результатов. Доказана значимость длительной гормональной терапии в послеоперационном периоде, в отношении снижения интенсивности эндометриоз-ассоциированной боли, улучшения качества жизни, преодоления бесплодия.

В 1 группе пациентов из 25 женщин у 12 (48%) женщин отмечалось снижение интенсивности тазовой боли в течение 6 месяцев после операции.

Во 2 группе пациентов из 25 женщин лишь у 1 (4%) пациентки отмечалось возобновление тазовой боли в течение 6 месяцев, а у 24 (96%) пациенток отмечалась положительная динамика и отсутствие тазовой боли.

В 3 группе пациентов из 25 женщин отмечается исчезновение боли и улучшение качества жизни после операции у 23 (92%) женщин.

В 4 группе пациентов из 25 женщин 22 (88%) пациентки отмечают уменьшение интенсивности тазовой боли в течение 6 месяцев после операции.

По результатам исследования, наилучшим вариантом послеоперационного лечения у пациентов с резистентностью к прогестерону является препарат с действующим веществом Дидрогестерон 30 мг/сут. Для пациентов без резистентности к прогестерону подходит как терапия препаратом, содержащим Диеногест, так и препаратом, содержащим Дидрогестерон.

Проведенное исследование доказывает необходимость определения уровня прогестерона в сыворотке крови у всех пациентов с эндометриозом и хронической тазовой болью перед оперативным лечением.

Проведенное исследование, сравнивающее терапию препаратами, содержащими Дидрогестерон (30 мг/сут) и Диеногест (2 мг/сут) показывает, что препаратом выбора для больных с резистентностью к прогестерону является Дидрогестерон (30 мг/сут), за счет стехиометрического отличия от остальных аналогов природного прогестерона.

Таким образом, поставленная задача расширение функциональных возможностей за счет проведения ранней и экспертной диагностики резистентности к прогестерону для подбора адекватной терапии женщин с гормонально-зависимыми заболеваниями, например эндометриозом, решена.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, гинекологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики резистентности к прогестерону. Проводят определение уровня прогестерона в плазме крови с осуществлением ультразвукового воздействия на плазму крови. Анализ уровня прогестерона проводят до ультразвукового воздействия на плазму крови и после ультразвукового воздействия на плазму крови. При этом ультразвуковое воздействие проводят в течение 5 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт, при температуре 25° - 38°С. При увеличении уровня прогестерона после ультразвукового воздействия на плазму крови на 0,27 нмоль/л и более диагностируют резистентность к прогестерону. Способ обеспечивает расширение функциональных возможностей ранней и экспертной диагностики проблемы резистентности к прогестерону и подбора адекватной терапии женщин с гормонально-зависимыми заболеваниями, например, эндометриозом, за счет ультразвукового воздействия на плазму крови, при котором происходит диссоциация циркуляции иммунных комплексов, состоящих из антигенов и связанных с ними антител, сопровождающаяся высвобождением свободных антигенов и антител без нарушения их биологической активности. 2 табл.

Способ диагностики резистентности к прогестерону, включающий определение уровня прогестерона в плазме крови с осуществлением ультразвукового воздействия на плазму крови, отличающийся тем, что анализ уровня прогестерона проводят до ультразвукового воздействия на плазму крови и после ультразвукового воздействия на плазму крови, при этом ультразвуковое воздействие проводят в течение 5 минут, частотой 22 кГц, мощностью 400 Вт, при температуре 25° - 38°С, и при увеличении уровня прогестерона после ультразвукового воздействия на плазму крови на 0,27 нмоль/л и более диагностируют резистентность к прогестерону.