Средство, обладающее противосудорожной активностью Российский патент 2020 года по МПК A61K36/45 A61P25/08 A61P25/10 A61P25/12 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано в качестве противосудорожного средства в терапии судорожных состояний.

Эпилепсия является одним из наиболее распространенных по всему миру хронических неинфекционных заболеваний нервной системы, которое распространено среди детей и подростков, взрослых и пожилых, мужчин и женщин [1]. По аналитическим данным ВОЗ, эпилепсией страдают около 50 млн человек. В 2001 году эксперты ВОЗ указали, что ежегодно по всему миру врачи диагностируют примерно 2,5 млн новых случаев [2]. Несмотря на достижения в терапии судорожных состояний за последние годы, не менее 30-40% больных не добиваются полного прекращения приступов на фоне лечения противоэпилептическими средствами [3].

Известен широкий спектр синтетических противосудорожных препаратов (вальпроевая кислота, карбамазепин, барбитураты). Вальпроевая кислота является наиболее используемым противоэпилептическим средством [4]. Одним из значительных побочных эффектов антиконвульсантов считается нейротоксичность. Ведущая гипотеза объясняет нейротоксические эффекты данной группы препаратов апоптозом нейронов и дисфункцией выживших нейроклеток. Также установлено, что все антиконвульсанты обладают тератогенным действием, в той или иной степени [5]. Это делает актуальным поиск новых средств, обладающих противосудорожной активностью, но не вызывающих серьезных побочных эффектов. Препараты растительного происхождения могут сыграть важную роль в решении данной проблемы.

Наиболее близким по техническому результату (базовым) является карбамазепин, обладающий противосудорожной активностью, но данный препарат является синтетическим и оказывает ряд побочных эффектов. [5]

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противосудорожной активностью, из природного сырья, которые в силу своей относительной безопасности могли бы применяться, в том числе, и в педиатрии.

Поставленная задача решается применением ацетоновой фракции из побегов Empetrum nigrum L. в качестве противосудорожного средства.

Впервые показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. оказывает противосудорожное действие. В проанализированной литературе сведений о противосудорожном действии ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. не обнаружено.

Противосудорожное действие ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и не является очевидным для специалиста. Экспериментально установлено новое свойство и возможность использования ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. в качестве средства, обладающего противосудорожной активностью.

Таким образом, предлагаемое изобретение соответствует критериям патентоспособности «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».

Изобретение будет понятно из следующего описания.

Ацетоновую фракцию из побегов Empetrum nigrum L. получают:

Измельченное воздушно-сухое сырье Empetrum nigrum L. двукратно экстрагировали кипящим хлороформом в круглодонной колбе с обратным холодильником при соотношении сырье : экстрагент - 1:10. Полученные экстракты горячими фильтровали через тканевой фильтр. Объединенные хлороформные экстракты упаривали досуха в ротационном испарителе при 30С° и скорости вращения 60 rpm. Сухой хлороформный экстракт трехкратно обрабатывали ацетоном при постоянном перемешивании при комнатной температуре. Соотношение экстракт : экстрагент - 1:10. Полученные ацетоновые извлечения из хлороформного экстракта фильтровали под вакуумом в системе Бунзена-Бюхнера, объединяли и упаривали в ротационном испарителе до 1/3 объема при 30С° и скорости вращения 60 rpm. Полученное ацетоновое извлечение высушивали методом конвективной сушки. Выход ацетонового извлечения в пересчете на воздушно-сухое сырье составляет 8-10%.

Исследование противосудорожной активности ацетоновой фракции, полученной из Empetrum nigrum L. выполнены на аутбредных мышах-самцах линии CD1 массой 25-27 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986). Эвтаназию производили, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденных МЗ России.

Исследования проводили в соответствии с "Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств". Препаратом сравнения являлся карбамазепин [6].

Ацетоновая фракция, полученная по вышеописанной методике, в дозе 150 мг/кг и препарат сравнения карбамазепин в дозе 100 мг/кг вводили животным курсом ежедневно в течение пяти дней однократно через зонд в желудок в виде эмульсии и суспензии (карбамазепин) в воде очищенной за 2 часа до тестирования. Животные в группе контроля получали эквивалентное количество воды очищенной. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t критерия Стьюдента и непараметрического U критерия Вилкоксона-Манна-Уитни с помощью пакета программ Statistica 6.0. Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu0,05.

Пример 1. Определение противосудорожной активности на модели стрихниновых судорог

Определяли противосудорожное действие на модели судорог, вызванных стрихнином при его подкожном введении в область шейного отдела спины в дозе 1,5 мг/кг. Животные наблюдались в течение 30 минут после инъекции стрихнина. В качестве критерия оценки противосудорожного действия вещества использовали его способность увеличивать продолжительность жизни опытных животных, а также процент выживаемости экспериментальных животных [6].

В результате проведенного исследования было показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. проявляет выраженное противосудорожное действие, при этом увеличивая продолжительность жизни животных на 54% по сравнению с контролем. Выживаемость животных составила 20% (табл. 1).

Пример 2. Определение противосудорожной активности на модели коразоловых судорог Определяли противосудорожное действие на модели судорог, вызванных коразолом при его подкожном введении в область шейного отдела спины в дозе 150 мг/кг. Регистрацию судорог осуществляли в течение 30 минут. Критерием оценки противосудорожного действия вещества использовали его способность увеличивать продолжительность жизни опытных животных [6].

В результате проведенного исследования было показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. проявляет выраженное противосудорожное действие, при этом увеличивая продолжительность жизни животных на 85% по сравнению с контролем. Выживаемость животных составила 20% (табл. 2).

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания

1. Авакян Г.Г. и др. Новые подходы в лечении эпилепсии // Анналы клинической и экспериментальной неврологии. - 2017. - Т. 11. - №. 3. С.15-22.

2. Kwan P., Brodie М. J. Refractory epilepsy: mechanisms and solutions // Expert review of neurotherapeutics. - 2006. - T. 6. - №. 3. - C. 397-406.

3. Вельдяксова E.Д., Якунина А.В., Писарь А.А. Современные возможности персонализированного назначения противоэпилептических препаратов // Здоровье и образование в XXI веке. - 2017. - Т. 19. - №. 4. С. 56-61.

4. Постников С.С. и др. Нейротоксичность лекарств // Качественная клиническая практика. - 2017. - №. 4. С. 68-72.

5. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. - М, 2012. - Часть первая. - 944 с. 235-240.

Изобретение относится к медицине и фармацевтике. Предложено применение ацетоновой фракции сухого хлороформного экстракта из побегов Empetrum nigrum L. в качестве противосудорожного средства. Получение ацетоновой фракции осуществляется путем двукратной экстракции кипящим хлороформом в круглодонной колбе с обратным холодильником при соотношении сырье : экстрагент - 1:10. Объединенные экстракты упаривают досуха в ротационном испарителе. Трехкратно экстрагируют сухой хлороформный экстракт ацетоном при комнатной температуре и постоянном перемешивании в соотношении экстракт : экстрагент - 1:10. Объединенный ацетоновый экстракт упаривают в ротационном испарителе до 1/3 объема и сушат конвекционно. Технический результат: выраженная противосудорожная активность средства, сравнимая с карбамазепином, при этом увеличивая продолжительность жизни экспериментальных животных на моделях стрихниновых и коразоловых судорог на 54% и 85% соответственно, выживаемость экспериментальных животных составила 20% в обоих экспериментах. 2 табл., 2 пр.

Применение ацетоновой фракции сухого хлороформного экстракта из побегов Empetrum nigrum L. в качестве противосудорожного средства.