Настоящее изобретение относится к вариантам полипептидов, расщепляющих фузариотоксины, к содержащей их добавке и к применению вариантов полипептидов и/или добавки, а также к способу расщепления фузариотоксинов посредством вариантов полипептидов и/или добавки, содержащей варианты полипептидов.
Микотоксины очень часто встречаются в сельскохозяйственных и растительных продуктах и наносят в зависимости от типа и концентрации микотоксина экономически значимый вред, в частности, пищевым продуктам или кормам, произведенным из сельскохозяйственной продукции, а также животным, поедающим такого рода корма, или людям, потребляющим такие пищевые продукты, причем такого рода вред является крайне разнообразным. Ранее было разработано множество способов, которыми пытались обезвреживать микотоксины, в частности детоксифицировать или расщеплять их, чтобы в возможно большей степени сдерживать проявления вреда, вызываемого микотоксинами, в области кормления животных, человеческого питания, разведения животных, переработки кормов и пищевых продуктов и т.п.
Заметную группу микотоксинов представляют собой фузариотоксины, причем термины "фузариотоксин" или "фузариотоксины" являются равнозначными и каждое из них относится по меньшей мере к одному или нескольким фумонизинам или совокупности фумонизинов, продуцируемых плесневыми грибками рода Fusarium sp., а также к их производным соединениям и продуктам разложения, предпочтительно к фумонизинам A1-2 (FA1-2), фумонизинам B1-4 (FB1-4), фумонизинам C1, 2, 4 (FC1, FC2, FC4) и HFC1, и к частично гидролизованным фумонизинам FA1-2, FB1-4, FC1-2, FC4 и HFC1. Частично гидролизованные фумонизины имеют только один радикал трикарбаллиловой кислоты, тогда как FA1-2, FB1-4, FC1-2, FC4 и HFC1 содержат два радикала трикарбаллиловой кислоты. В их число входят также структурно похожие токсины Alternaria alternata lycopersici (AAL) из группы фузариотоксинов, причем токсины AAL подразделяются на группы AAL-TA1 (CAS № 79367-52-5), AAL-TA2 (CAS № 79367-51-4), AAL-TB1 (CAS № 176590-32-2) и AAL-TB2 (CAS № 176705-51-4). FA1-2, FB1-4, FC1-2, FC4 и HFC1 имеют следующую структурную формулу:
FB1 представляет собой наиболее часто встречающийся токсин из группы фузариотоксинов, при этом известны многочисленные производные соединения и родственные молекулы, которые также оказывают токсическое действие на людей и животных. Заболевания, которые вызывает прием микотоксинов человеком или животными, называют микотоксикозами, а в случае фузариотоксинов также фузариотоксикозами. Так, например, известно, что фузариотоксины препятствуют сфинголипидному обмену веществ за счет взаимодействия с ферментом церамидсинтазы. Сфинголипиды являются не только компонентом клеточных мембран, но также играют важную роль в качестве сигнальных и информационных молекул во многим элементарных клеточных процессах, таких как рост клеток, миграция клеток и присоединение клеток, в воспалительных процессах или во внутриклеточных процессах транспорта. Вследствие препятствия сфинголипидному обмену веществ фузариотоксины считают ответственными за токсическое действие на человека и самые разные виды животных. Удалось обнаружить, что фузариотоксины оказывают иммунодепрессивное и в случае грызунов канцерогенное действие, при этом на основании эпидемиологических данных в случае человека установлена корреляция с раком пищевода и дефектом нервной трубки. В случае различных видов животных, таких как, например, свиньи, их считают ответственными за типичные токсикозы вследствие отека легких. Примеры фузариотоксикозов представляют собой нейротоксические заболевания, такие как лейкоэнцефалопатия лошадей или отек легких, вызываемый у свиней отравлением фумонизином. Так как загрязнение фузариотоксинами зерна самых разных видов, в частности, кукурузы, орехов и овощей, является почти повсеместным, то их сильным отрицательным действием на здоровье человека и животных невозможно пренебрегать.
В EP-A 1860954 описано бактериальное разложение фумонизинов, согласно которому для детоксикации фумонизинов и производных фумонизинов используют микроорганизмы и в случае которого детоксифицирующие бактерии или дрожжи, выбранные из точно определенных штаммов, для детоксикации фумонизинов прибавляют к корму.
Также описаны пути катаболического обмена веществ для биологического разложения фумонизинов и гены и ферменты, ответственные за такое действие. Так, например, в EP-A 0988383 описаны композиции и способ для детоксикации фумонизина, причем применяемые ферменты, разлагающие фумонизин, в первую очередь продуцируются трансгенными растениями, при этом детоксикация фумонизинов осуществляется посредством аминооксидазы, которая для своей ферментативной активности требует молекулярный кислород.
Далее, в WO 2004/085624 описаны трансаминазы, дезаминазы и аминомутазы и способ ферментативной детоксикации аминированных токсинов, например фумонизинов. При этом для детоксикации применяют полипептиды, обладающие активностью дезаминазы.
Указанные ранее продукты или способы имеют недостаток, состоящий в том, что для детоксикации микотоксинов требуется молекулярный кислород, а также в случае необходимости требуются кофакторы, причем, в частности, указанные ранее аминооксидазы не оказывают действия в бескислородных условиях реакции.
EP-A 2326713 относится к добавке, а также к способу ее производства, в случае которых удается расщеплять фумонизины ферментативной реакцией, не зависящей от наличия кислорода и протекающей в отсутствие кофакторов. Однако термическая стабильность описанного там фермента, отвечающего за детоксикацию и представляющего собой карбоксилэстеразу, является незначительной, так что добавка или карбоксилэстераза с SEQ ID № 46 является неприемлемой для применения при повышенной температуре.
При производстве пищевых продуктов и кормов тепловая обработка для получения стерилизованных продуктов, в которых уменьшено бактериальное загрязнение, имеет большое значение. При этом, в частности, гранулирование кормов по множеству оснований, таких как, например, улучшение свойств осыпания, уменьшение пылеобразования, уменьшение бактериального загрязнения, в частности сальмонеллами, является широко распространенным и представляет собой стандартизованный процесс. Во время процесса гранулирования сырье, как правило, увлажняют перегретым паром, нагревают и затем выдавливают под давлением через матрицу. Применение полипептидов или ферментов в качестве добавок к гранулируемым пищевым продуктам или кормам ставит техническую проблему, так как ферменты или полипептиды, как правило, являются чувствительными к повышенной температуре. Тепловая обработка ферментов или полипептидов может проявляться в уменьшении их удельной активности и/или в необратимой денатурации. Возможность противодействовать этим проявлениям дает капсулирование или покрытие белков, например, аналогично описанию в WO 92/12645. Благодаря этому удается защитить белки от термического воздействия, однако этот порядок действий опасен тем, что белки в тракте "рот-желудок-кишечник" высвобождаются недостаточно быстро и, таким образом, их действие может проявляться недостаточно быстро или совсем не проявляться. Известные до настоящего времени полипептиды для детоксикации фузариотоксинов вследствие своей низкой термической стабильности не могут быть прибавлены к гранулируемым кормам или пищевым продуктам без предварительного капсулирования или покрытия.
Технологические процессы, в случае которых важна детоксикация фузариотоксинов при повышенной температуре, представляют собой, например, производство макаронных изделий и других продуктов из кукурузы, таких как каши, воздушная кукуруза, кукурузные хлопья, кукурузный хлеб или кукурузные лепешки, а также процессы ожижения крахмала, процессы осахаривания или процессы ферментации, такие как, например, процесс затирания или брожения, в частности, при производстве биоэтанола. При этом важно обеспечивать, чтобы пищевые продукты или корма, полученные в этих процессах, не содержали фузариотоксины во вредном количестве. Известные до настоящего времени полипептиды не могут быть использованы в этих процессах вследствие своей слишком низкой активности или отсутствия активности при соответствующих температурах процессов.
Таким образом, существует потребность в ферментах или полипептидах для специфического, надежного и устойчивого расщепления, в частности, для детоксикации фузариотоксинов, в случае которого ферментативная реакция не требует ни кислорода, ни кофактора, а фермент или полипептид, кроме того, обладает достаточной термической стабильностью, а также достаточной температурной активностью, так что фермент или полипептид может быть использован в технологических процессах при повышенной температуре.
Целью настоящего изобретения является разработка вариантов расщепляющих фузариотоксины полипептидов фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 46, в случае которых удается по меньшей мере один фузариотоксин независимо от наличия кислорода и в отсутствие кофакторов расщеплять в нетоксичные или малотоксичные продукты, причем варианты полипептидов обладают повышенной термической стабильностью или повышенной температурной активностью по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 46.
С целью решения этой задачи настоящее изобретение по существу отличается тем, что варианты расщепляющих фузариотоксины полипептидов фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 46, отличаются тем, что варианты полипептидов на N-концевом участке содержат аминокислотную последовательность, укороченную на 47 аминокислот, причем аминокислотные последовательности характеризуются последовательностью, а именно SEQ ID № 1, по меньшей мере на 70%, предпочтительно на 80% и более предпочтительно на 100% идентичной участку 48-540 аминокислотной последовательности SEQ ID № 46, термическая стабильность T(50%) полипептида с SEQ ID № 46 определена равной 42°C, термическая стабильность T(50%) варианта полипептида SEQ ID № 1 определена равной 45°C или модификации SEQ ID № 1 обладают относительным превышением T(50%) по сравнению с исходным ферментом SEQ ID № 1, причем по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличаются аминокислотной заменой в качестве модификации, а аминокислотные замены в положениях 10 и 456 выбирают из Q, E, N, H, K и R, в положениях 33, 107, 293 и 332 выбирают из E, Q, D, K, R и N, в положениях 66, 463 и 478 выбирают из D, E, K, N, Q и R, в положениях 140 и 490 выбирают из P, A, S и N, в положениях 144 и 367 выбирают из I, L, M и V, в положениях 149, 270, 312, 329 и 372 выбирают из F, Y, W и H, в положениях 151 и 453 выбирают из D, E, K и R, в положениях 157 и 462 выбирают из F, H, W и Y, в положениях 199, 302, 365 и 464 выбирают из I, L, M и V, в положениях 266 и 455 выбирают из A, S и T, в положениях 267, 394 и 429 выбирают из A, N, P и S, в положении 272 выбирают из H, N, Q и S, в положении 275 выбирают из A, D, E, G, K, N, Q, R и S, в положении 280 выбирают из A, D, E, K, N, P, Q, R и S, в положении 284 выбирают из A, N, P, S, T и V, в положении 286 выбирают из A, D, E, K, N, P, R и S, в положениях 360, 377, 391, 419 и 427 выбирают из A, I, L, S, T и V, в положениях 363, 443 и 457 выбирают из A, S, T и V, в положении 364 выбирают из H, I, L, M, N, Q, S и V, в положении 371 выбирают из A, I, L, M, S, T и V, в положении 389 выбирают из I, L, M и V, в положениях 418, 430, 447 и 473 выбирают из A, G и S, в положении 424 выбирают из A, D, E, G, K, R и S, в положении 436 выбирают из A, G, S и T, в положении 440 выбирают из A, G, S и T, в положении 465 выбирают из A, G, H, N, Q, S и T, в положении 469 выбирают из D, E, K и R и/или в положении 487 выбирают из N, D, Q, H и S. Неожиданно оказалось, что аминокислотная последовательность, укороченная на 47 аминокислот сравнительно с SEQ ID № 46, по сравнению с этой последовательностью является значительно более активной и по сравнению с этой последовательностью обладает также повышенной термической стабильностью. Благодаря этому образуются варианты полипептидов с SEQ ID № 1, в частности варианты полипептидов, которые содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную последовательности SEQ ID № 1 и по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличающуюся аминокислотной заменой, и достигается термическая стабильность, повышенная по меньшей мере на 4% по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1. Благодаря применению таких вариантов полипептидов, которые обладают свойством расщеплять фузариотоксины, удается детоксифицировать фузариотоксины, например, во время технологических процессов с повышенной температурой. Такой результат становится возможным, в частности, благодаря повышенной температурной активности дополнительно к термической стабильности. В частности, благодаря этому может быть обеспечено сохранение ферментативной активности вариантов полипептидов также при повышенной тепловой нагрузке, что может иметь место, например, во время транспортировки в контейнерах.
Согласно настоящему изобретению особенно высокая термическая стабильность достигается благодаря тому‚ что аминокислотные замены в положениях 10 и 456 выбирают из Q, E, N, H, K и R, в положениях 33, 107, 293 и 332 выбирают из E, Q, D, K, R и N, в положениях 66, 463 и 478 выбирают из D, E, K, N, Q и R, в положениях 140 и 490 выбирают из P, A, S и N, в положениях 144 и 367 выбирают из I, L, M и V, в положениях 149, 270, 312, 329 и 372 выбирают из F, Y, W и H, в положениях 151 и 453 выбирают из D, E, K и R, в положениях 157 и 462 выбирают из F, H, W и Y, в положениях 199, 302, 365 и 464 выбирают из I, L, M и V, в положениях 266 и 455 выбирают из A, S и T, в положениях 267, 394 и 429 выбирают из A, N, P и S, в положении 272 выбирают из H, N, Q и S, в положении 275 выбирают из A, D, E, G, K, N, Q, R и S, в положении 280 выбирают из A, D, E, K, N, P, Q, R и S, в положении 284 выбирают из A, N, P, S, T и V, в положении 286 выбирают из A, D, E, K, N, P, R и S, в положениях 360, 377, 391, 419 и 427 выбирают из A, I, L, S, T и V, в положениях 363, 443 и 457 выбирают из A, S, T и V, в положении 364 выбирают из H, I, L, M, N, Q, S и V, в положении 371 выбирают из A, I, L, M, S, T и V, в положении 389 выбирают из I, L, M и V, в положениях 418, 430, 447 и 473 выбирают из A, G и S, в положении 424 выбирают из A, D, E, G, K, R и S, в положении 436 выбирают из A, G, S и T, в положении 440 выбирают из A, G, S и T, в положении 465 выбирают из A, G, H, N, Q, S и T, в положении 469 выбирают из D, E, K и R и/или в положении 487 выбирают из N, D, Q, H и S, причем заменяются аминокислоты, первоначально находившиеся на указанных местах.
Термин "карбоксилэстераза" относится к любым ферментам, полипептидам или вариантам полипептидов, которые посредством воды могут расщеплять сложные эфиры карбоновых кислот на соответствующие спирты и карбоновые кислоты. Термин "фузариотоксинкарбоксилэстераза" относится к любым ферментам, полипептидам или вариантам полипептидов, которые могут гидролизовать по меньшей мере один фузариотоксин благодаря тому‚ что от него гидролитически отщепляется по меньшей мере одна трикарбаллиловая кислота (пропан-1,2,3-трикарбоновая кислота). Термин "свойство расщеплять фузариотоксин" относится к способности гидролитически отщеплять по меньшей мере один радикал трикарбаллиловой кислоты по меньшей мере от одного фузариотоксина, предпочтительно от FA1-2, FB1-4, FC1-2, FC4, HFC1, AAL-TA1-2 и AAL-TB1-2 или их производных соединений или продуктов разложения.
Используемые далее термины относятся к профессиональному языку и соответственно, если не указано иное, используются в традиционном значении. Так, например, термин "полинуклеотид" относится к любым видам генетического материала любых длин и последовательностей, таким как, например, одинарная спираль и двойная спираль молекул ДНК и РНК, включая регуляторные элементы, структурные элементы, группы генов, плазмиды, полные геномы и их фрагменты. Термин "полипептид" охватывает белки, такие как, например, ферменты, антитела, а также полипептиды, содержащие до 500 аминокислот, такие, как, например, пептидные ингибиторы, белковые домены, а также короткие полипептиды с малыми длинами последовательностей, например меньше 10 аминокислот, такие, как рецепторы, лиганды, пептидные гормоны, метки и т.п. Термин "положение" в полинуклеотиде или полипептиде относится к отдельному, специфическому основанию или аминокислоте в последовательности полинуклеотида или полипептида. Названия аминокислот сокращены до однобуквенных или трехбуквенных кодов, традиционно применяемых специалистами в данной области техники.
Термин "единица" или "ед." относится к мере каталитической активности фермента, полипептида или варианта полипептида и определяется как число микромолей (мкмоль) субстрата, в данном случае фумонизина B1, который превращается или расщепляется в течение одной минуты в заданных условиях. Например, если в течение 15 мин от 60 мкмоль FB1 отщепляется по меньшей мере один радикал трикарбаллиловой кислоты, то это соответствует каталитической активности в 4 единицы. Для расщепления FB1 принимают следующие условия реакции: реакцию превращения осуществляют в 20 мМ буферном растворе Tris-HCl (pH=8,0), содержащем 0,1 мг/мл сывороточного альбумина крупного рогатого скота, при температуре 30°C в течение 30 мин. Концентрация субстрата во время реакции составляет 100 мкM FB1.
В качестве "каталитической активности", "каталитической ферментативной активности" или "активности" раствора фермента или полипептида или раствора варианта полипептида понимают концентрацию фермента в растворе фермента или полипептида или в растворе варианта полипептида, выраженную в единицах на миллилитр раствора.
Термин "удельная активность" понимают как каталитическую активность на миллиграмм фермента, полипептида или варианта полипептида и рассчитывают из соотношения каталитической активности раствора фермента и массовой концентрации (отношение массы к единице объема) фермента в этом растворе. Если раствор фермента имеет, например, каталитическую активность, равную 50 ед./мл, и массовую концентрацию, равную 1 мг/мл, то удельная активность составляет 50 ед./мг.
Термин "термическая стабильность" относится к свойству ферментов, полипептидов или вариантов полипептидов сохранять свою каталитическую активность после ограниченной во времени выдержки при повышенной температуре (предварительная инкубация). Термическую стабильность определяют, определяя активность раствора фермента или полипептида или раствора варианта полипептида после 5-минутной тепловой обработки и без тепловой обработки в одинаковых и заданных условиях и сравнивая их. Таким образом, термическая стабильность представляет собой меру сопротивляемости ферментов тепловому воздействию в течение ограниченного промежутка времени. Температура, при которой остаточная активность фермента, обработанного теплом, составляет 50% по сравнению с не обработанной теплом контрольной пробой, принятой за 100%, представляет собой меру термической стабильности и сокращенно обозначается как T(50%). Например, если активность раствора фермента без предварительной инкубации составляет 50 ед./мл, а после 5-минутной предварительной инкубации при 50°C составляет 25 ед./мл, то термическая стабильность фермента составляет 50°C или фермент до 50°C является термически стабильным. Превышение T(50%) в случае вариантов полипептидов по сравнению с исходным полипептидом с SEQ ID № 1, принятое в качестве меры повышенной термической стабильности, может быть указано как относительная величина в виде процентного значения или как абсолютная величина в градусах Цельсия.
Термин "температурная активность" понимают как температуру, при которой фермент, полипептид или вариант полипептида обладает наиболее высокой активностью, причем каталитическую активность измеряют в течение 30 мин.
Термины "вариант полипептида" или "вариант" предпочтительно относятся к полипептидным последовательностям, которые по сравнению с SEQ ID № 46 отличаются по меньшей мере одной аминокислотной заменой, причем ферментативная функция, т.е. свойство расщеплять фузариотоксин, сохраняется. При этом "вариант полипептида" дополнительно может отличаться аминокислотными инсерциями или делециями, в частности C-концевой или N-концевой удлиненной или укороченной последовательностью, относительно полипептидной последовательности SEQ ID № 46. Ферментативная функция по существу сохраняется тогда, когда механизм ферментативной реакции остается неизмененным, т.е. фузариотоксин гидролизуется благодаря одному и тому же сайту, а удельная активность варианта составляет по меньшей мере 10%, предпочтительно по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно > 100% в расчете на первоначальный, исходный полипептид с SEQ ID № 46.
Замены аминокислот в заданных положениях описываются согласно следующей номенклатуре: первоначальная аминокислота; положение; новая аминокислота. Например, если пролин в положении 134 заменен на глицин, то это показывают как Pro134Gly или P134G. Множественные мутации разделяют знаком "плюс" или косой чертой. Например, если пролин в положении 134 заменен на глицин, а аргинин в положении 136 заменен на лизин, то это показывают как Pro134Gly+Arg136Lys или Pro134Gly/Arg136Lys, или P134G+R136K или P134G/R136K. Если аминокислота в некотором положении заменена на две или несколько альтернативных аминокислот, то альтернативные аминокислоты разделяют запятой или косой чертой. Например, если пролин в положении 134 заменен не только на глицин, а также на серин, валин и метионин, то это показывают как Pro134Gly,Ser,Val,Met или Pro134Gly/Ser/Val/Met, или P134G,S,V,M, или P134G/S/V/M. Если замена или обмен аминокислоты в заданном положении не указаны более подробно, то это следует интерпретировать так, что эта аминокислота может быть заменена на любые другие аминокислоты. Например, если замена пролина в положении 134 не указана более подробно, то пролин может быть заменен на одну из следующих аминокислот A, R, N, D, C, Q, E, G, H, I, L, K, M, F, S, T, W, Y или V.
Термин "идентичность последовательности" относится к процентной идентичности последовательности. Для аминокислотных и нуклеотидных последовательностей идентичность последовательности может быть определена визуально, но предпочтительно ее рассчитывают посредством компьютерной программы. В качестве исходной последовательности принимают аминокислотную последовательность с последовательностью ID № 1. Сравнение последовательностей осуществляют также внутри участков последовательностей, причем в качестве участка следует понимать непрерывную последовательность исходной последовательности. Длина участков последовательностей в случае нуклеотидных последовательностей, как правило, составляет от 18 до 600, предпочтительно от 45 до 200 и более предпочтительно от 100 до 150 нуклеотидов. Длина участков последовательностей в случае пептидных последовательностей, как правило, составляет от 3 до 200, предпочтительно от 15 до 65 и более предпочтительно от 30 до 50 аминокислот. Имеется большое число коммерческих или бесплатных биоинформационных программ, которые могут быть использованы для определения гомологии и которые непрерывно совершенствуются. Примерами этих программ являются программы "GCG Wisconsin Bestfit package" (Devereux et al., 1984), "BLAST" (Altschul et al., 1990) или "BLAST 2" (Tatusova and Madden, 1999). Вследствие разных возможностей установки начальных параметров этих алгоритмов существует возможность того, что они при одинаковых исходных последовательностях приведут к различным результатам. Поэтому необходимо задавать первичные установки алгоритма поиска и относящиеся к ним начальные параметры. В данном случае идентичность последовательностей определяли, используя программу "NCBI BLAST" (Basic Local Alignment Search Tool), предпочтительно используя программу "BLASTP" в случае полипептидов и используя программу "BLASTN" в случае полинуклеотидов, причем эти программы доступны для использования на интернет-странице "National Center for Biotechnology Information" (NCBI; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Таким образом, можно сравнивать две или несколько последовательностей друг с другом по алгоритму, описанному в "Altschul et al., Nucleic Acids Res., 1997, 25:3389-3402". При этом использовали программу в версии от 12 августа 2014 года. В качестве начальных параметров программы были приняты базовые параметры и, в частности, для выравнивания аминокислотных последовательностей: "max target sequence" (максимальное число целевых последовательностей)=100; "expected threshold" (ожидаемый порог)=10; "word size" (длина слова)=3; "matrix" (матрица)=BLOSOM62; "gap costs" (штрафы за разрыв)="Existence (существование): 11; "Extention" (продолжение): 1"; "computational adjustment" (вычислительная корректировка)="Conditional compositional score matrix adjustment" (условная композиционная корректировка матрицы счета); а также при выравнивании нуклеотидных последовательностей "Word Size" (длина слова): 11; "Expect value" (ожидаемая значимость): 10; "Gap costs" (штрафы за разрыв): "Existence" (существование)=5, "Extension" (продолжение)=2; "Filter" (фильтр)="low complexity activated" (активирована сложность низкого уровня); "Match/Mismatch Scores" (счет соответствий/несоответствий): 2, -3; "Filter String" (строка фильтра): L; m.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения аминокислотную замену выбирают из группы 10Q, 33E, 66D, 107E, 140P, 144M, 149F, 151R, 157Y, 199I, 266S, 267P, 270F, 272H, 275E, 275A, 280D, 280P, 284T, 284P, 286P, 286R, 293E, 302I, 312F, 329F, 332E, 360V, 363T, 364H, 364L, 365I, 367H, 371V, 371M, 372F, 377V, 389L, 391V, 394P, 418A, 419V, 424A, 424K, 427V, 429P, 430A, 436A, 436S, 440G, 440S, 443T, 447A, 453R, 455S, 456Q, 457T, 462Y, 463D, 464I, 465H, 465S, 465G, 469K, 473A, 478D, 487N и 490P. Благодаря тому‚ что варианты полипептидов отличаются по меньшей мере одной заменой такого рода, термическая стабильность или температурная активность может быть целенаправленно повышена в еще большей степени, причем дополнительно также могут быть улучшены другие параметры фермента, такие как удельная активность, pH-зависимая стабильность или pH-зависимая активность, значения которых, однако, соответствуют по меньшей мере значениям фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 1.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения варианты полипептидов отличаются аминокислотной заменой по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 66, 199, 302, 377, 394, 424, 430 и 463, и обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 6% по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1. Посредством таких вариантов полипептидов можно расщеплять фузариотоксины во время технологических процессов с повышенной температурой, таких как, например, производство макаронных изделий и других продуктов из кукурузы, таких как каши, воздушная кукуруза, кукурузные хлопья, кукурузный хлеб или кукурузные лепешки, а также процессы ожижения крахмала, процессы осахаривания или процессы ферментации, такие как, например, процесс затирания или брожения, в частности, при производстве биоэтанола.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения аминокислотную замену выбирают из группы 66D, 199I, 302I, 377V, 394P, 424A, 430A и 463D. Посредством замены такого рода может быть повышена термическая стабильность, а также температурная активность вариантов полипептидов по меньшей мере на 3°C по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения варианты полипептидов по меньшей мере в двух и предпочтительно в трех положениях аминокислотной последовательности, выбранных из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличаются аминокислотными заменами, причем аминокислотные замены выбирают из группы 10Q, 66D, 144M, 151R, 199I, 266S, 267P, 272H, 275E, 275A, 280D, 284T, 286P, 286R, 293E, 302I, 360V, 363T, 364H, 364L, 365I, 367H, 371V, 371M, 372F, 377V, 389L, 391V, 394P, 418A, 419V, 424A, 424K, 427V, 429P, 430A, 436A, 436S, 440G, 440S, 443T, 447A, 453R, 455S, 456Q, 457T, 462Y, 463D, 464I, 465H, 465S, 465G, 469K, 473A, 478D, 487N и 490P, и обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 15% по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1. При замене нескольких аминокислот неожиданно обнаружилось, что их положительное действие на термическую стабильность практически суммируется, причем благодаря вставке по меньшей мере трех аминокислот, отличающихся от аминокислот, первоначально содержащихся в последовательности, термическая стабильность повышается больше чем на 7°C. Такое повышение является достаточным для того, чтобы применять ферменты, например, в период покоя затора приблизительно при 55°C при производстве биоэтанола или при гранулировании кормов при умеренных температурах приблизительно от 65 до 70°C.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения аминокислотная последовательность вариантов полипептидов отличается комбинациями из нескольких аминокислотных замен, причем комбинации положений выбирают из группы 66/199/302/394/424/430, 66/199/302/377/394/424/430, 66/199/302/377/394/424/430/463, 66/144/199/302/360/372/377/394/424/430/443/463, 199/302/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394, 66/199/302/364/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/440/463, 66/199/302/377/394/424/430/447/463, 66/199/302/377/394/418/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/436/430/463, 66/199/302/364/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/490, 66/199/302/377/394/424/430/463/469, 66/199/302/377/389/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/463/464, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/440/463, 66/199/302/377/394/424/430/457/463, 66/199/302/377/394/424/430/436/463, 66/199/302/363/371/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/447/453/463, 66/199/302/377/394/424/430/456/462/463, 66/199/302/377/394/419/424/427/430/463, 66/199/302/365/377/394/424/430/463/487 и 66/199/302/371/377/394/424/430/463/487. Такие варианты замещенных полипептидов обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 25% по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1. Благодаря таким комбинациям замен можно повышать в еще большей степени не только термическую стабильность, но также и температурную активность вариантов полипептидов.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения аминокислотные последовательности вариантов полипептидов выбирают из группы SEQ ID от № 2 до № 29. Такие варианты полипептидов по сравнению с ферментом с SEQ ID № 1 обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 11°C, предпочтительно по меньшей мере на 13°C и более предпочтительно по меньшей мере на 15°C, вследствие чего обеспечивается активность соответствующего полипептида и благодаря чему детоксикация фузариотоксинов во время или после технологических процессов с повышенной тепловой нагрузкой, таких как, например, период покоя затора при 65°C при производстве биоэтанола или гранулирование при температуре 75-80°C.
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения каждая аминокислотная последовательность вариантов полипептидов отличается комбинациями из нескольких аминокислотных замен, причем комбинации положений выбирают из группы 66/99/302/364/377/389/394/419/424/427/430/447/463/465/469, 66/199/302/377/389/394/419/424/427/430/447/463/465/469, 66/199/302/363/364/371/377/389/394/419/424/427/430/447/463/464/465/469, 66/199/302/363/371/377/389/394/419/424/427/430/447/463/464/465/469, 66/199/302/364/367/371/377/389/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463/464/465/469/490, 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463/464/465/469/490, 66/199/302/363/367/371/377/394/424/430/463/490, 66/199/302/377/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463, 66/199/302/377/389/394/424/430/457/463/464/465/469, 66/199/302/363/371/377/389/394/419/424/427/430/440/447/457/463/464/469/490, 66/199/302/377/394/424/430/463/447/490/469/465, 66/199/302/377/394/424/430/463/490/469/465/419/427/371/487, 66/199/302/371/377/394/419/424/427/430/447/453/463/465/469/487/490, 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/429/430/436/440/447/457/463/464/465/469/490, 66/199/302/371/377/389/394/419/424/427/430/436/447/453/456/462/463/465/469/490/487 и 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/429/430/436/440/447/453/456/457/462/463/464/465/469/487/490. Эти варианты полипептидов по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1 обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 40%, а также повышенной температурной активностью, вследствие чего они являются приемлемыми для применения в большом числе способов, требующих более высоких температур.
Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения аминокислотные последовательности вариантов полипептидов выбирают из группы SEQ ID от № 30 до № 45. Такие варианты полипептидов по сравнению с ферментом с SEQ ID № 1 обладают термической стабильностью, повышенной по меньшей мере на 18°C, предпочтительно по меньшей мере на 22°C и более предпочтительно по меньшей мере на 27°C, вследствие чего обеспечивается активность полипептида и благодаря чему происходит детоксикация фузариотоксинов во время или после технологических процессов с повышенной тепловой нагрузкой, таких как, например, гранулирование при температуре выше 80°C и предпочтительно выше 85-90°C. Гранулирование при высоких температурах около 90°C имеет, в частности, большое значение в птицеводстве для обеспечения уменьшения в достаточной степени зараженности корма сальмонеллами.
Выражение "консервативная мутация" относится к замене аминокислот другими аминокислотами, которые считаются специалистами в данной области техники консервативными, то есть обладающими похожими специфическими свойствами или сохраняющими свойствами аминокислоты, то есть остающимися консервативными. Специфические свойства аминокислот представляют собой, например, их размеры, полярность, гидрофобность, заряд или константа pKs. Аминокислоты на основе своих свойств могут быть подразделены на группы, а группы могут быть представлены на диаграмме Венна. Аминокислоты из одной и той же группы и предпочтительно из одной и той же подгруппы могут быть взаимозаменяемыми. Классификация аминокислот на группы и подгруппы в зависимости от свойств гидрофобности, полярности и размеров представлена W.R. Taylor (1986). Под консервативной мутацией понимают, например, замену одной аминокислоты с кислой реакцией другой аминокислотой с кислой реакцией, одной аминокислоты с щелочной реакцией другой аминокислотой с щелочной реакцией, одной аминокислоты с полярным характером другой аминокислотой с полярным характером и тому подобное. Варианты полипептидов предпочтительно могут дополнительно отличаться по меньшей мере одной консервативной аминокислотной заменой по меньшей мере в одном положении, причем консервативную аминокислотную замену выбирают из группы замен: G на A, A на G/S, V на I/L/A/T/S, I на V/L/M, L на I/M/V, M на L/I/V, P на A/S/N, F на Y/W/H, Y на F/W/H, W на Y/F/H, R на K/E/D, K на R/E/D, H на Q/N/S, D на N/E/K/R/Q, E на Q/D/K/R/N, S на T/A, T на S/V/A, C на S/T/A, N на D/Q/H/S и Q на E/N/H/K/R.
Если замена в варианте полипептида по настоящему изобретению в заданном положении ведет к тому, что, например, аминокислота с полярным характером, такая как Asp, заменяется гидрофобной аминокислотой, такой как Ala, то под консервативными мутациями понимают также любые мутации, в случае которых в этом положении будут находиться другие гидрофобные аминокислоты (например, глицин, лейцин, фенилаланин, валин). Эти другие варианты полипептидов, в которых имеет место альтернативная консервативная мутация, также относятся к указанному здесь случаю.
Целью настоящего изобретения является также разработка полинуклеотидов, которые кодируют вариант расщепляющего фузариотоксин полипептида фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 1, в случае которого удается по меньшей мере один фузариотоксин независимо от наличия кислорода и в отсутствие кофакторов расщеплять в нетоксичные или малотоксичные продукты, и который обладает термической стабильностью, повышенной по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 1.
С целью решения этой задачи настоящее изобретение отличается тем, что полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует вариант расщепляющего фузариотоксин полипептида фузариотоксинкарбоксилэстеразы с аминокислотной последовательностью SEQ ID № 1, причем варианты полипептидов содержат аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 70% идентичную аминокислотной последовательности с SEQ ID № 1, а варианты полипептидов по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличаются аминокислотной заменой и при этом предпочтительно отличаются заменами 10Q, 33E, 66D, 107E, 140P, 144M, 149F, 151R, 157Y, 199I, 266S, 267P, 270F, 272H, 275E, 275A, 280D, 280P, 284T, 284P, 286P, 286R, 293E, 302I, 312F, 329F, 332E, 360V, 363T, 364H, 364L, 365I, 367H, 371V, 371M, 372F, 377V, 389L, 391V, 394P, 418A, 419V, 424A, 424K, 427V, 429P, 430A, 436A, 436S, 440G, 440S, 443T, 447A, 453R, 455S, 456Q, 457T, 462Y, 463D, 464I, 465H, 465S, 465G, 469K, 473A, 478D, 487N и 490P или их комбинациями. С таким выделенным полинуклеотидом посредством экспрессирующего вектора может быть получена трансгенная клетка-хозяин для продуцирования вариантов полипептидов по настоящему изобретению.
Термин "экспрессирующий вектор" относится к конструкту ДНК, который может экспрессировать ген in vivo или in vitro. В частности, под конструктами ДНК понимают конструкты, которые являются приемлемыми для переноса нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, в клетку-хозяин с целью интеграции ее в геном или свободного нахождения в экстрахромосомальном пространстве, для внутриклеточной экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, и при необходимости для вывода полипептида из клетки.
Термин "клетка-хозяин" относится к любым клеткам, которые содержат сверхэкспрессирующую нуклеотидную последовательность или экспрессирующий вектор и могут продуцировать фермент или полипептид по настоящему изобретению. В частности, под ними понимают прокариотические и/или эукариотические клетки и предпочтительно P. pastoris, E. coli, Bacillus subtilis, Streptomyces, Hansenula, Trichoderma, Lactobacillus, Aspergillus, Pflanzenzellen и/или споры Bacillus, Trichoderma или Aspergillus. Использованное в данном месте название Pichia pastoris является синонимом названия Komagataella pastoris, причем Pichia pastoris является более старым названием, а Komagataella pastoris является более новым систематическим названием (Yamada et al., 1995).
Целью настоящего изобретения является также разработка добавки, расщепляющей фузариотоксин, которая содержит по меньшей мере один вариант расщепляющего фузариотоксин полипептида фузариотоксинкарбоксилэстеразы с аминокислотной последовательностью SEQ ID № 46, причем соответствующий вариант полипептида расщепляет по меньшей мере один фузариотоксин независимо от наличия кислорода и в отсутствие кофакторов в нетоксичные или малотоксичные продукты и обладает термической стабильностью, повышенной по сравнению с фузариотоксинкарбоксилэстеразой с SEQ ID № 46.
С целью решения этой задачи настоящее изобретение отличается тем, что добавка, расщепляющая фузариотоксин, содержит по меньшей мере один вариант полипептида фузариотоксинкарбоксилэстеразы по настоящему изобретению и в случае необходимости по меньшей мере одно вспомогательное вещество. Благодаря прибавлению добавки такого типа к корму, загрязненному фузариотоксином, удается детоксифицировать фузариотоксины, что может быть определено по значительному уменьшению соотношения между сфинганином и сфингозином в плазме и/или в почках, и/или в легких, и/или в печени субъекта, потреблявшего корм с добавкой.
Соотношение между сфинганином и сфингозином в различных органах, а также в плазме животных является общепринятым и чувствительным биомаркером токсического действия фузариотоксинов, в частности FB1. Вызываемые фузариотоксинами расстройства сфинголипидного обмена веществ связывают также с заболеванием головного мозга у лошадей или с отеком легких у свиней. Приемлемость соотношения между сфинганином и сфингозином в качестве биомаркера, а также его аналитическое определение описаны в "Grenier et al. Biochem. Pharmaceuticals Vol. 83 (2012) p. 1465-1473", а также в "EFSA Journal, 2014; 12(5):3667".
Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения добавку компонуют так, что вспомогательное вещество выбирают из группы инертных носителей, витаминов, минеральных веществ, веществ растительного происхождения, ферментов и других компонентов для детоксикации микотоксинов, таких как ферменты, разлагающие микотоксины, предпочтительно афлатоксиноксидазы, эрготамингидролазы, эрготаминамидазы, зеараленонэстеразы, зеараленонлактоназы, зеараленонгидролазы, охратоксинамидазы, фумонизинаминотрансферазы, аминополиоламинооксидазы, дезоксиниваленолэпоксидгидролазы, дезоксиниваленолдегидрогеназы, дезоксиниваленолоксидазы, трихотецендегидрогеназы, трихотеценоксидазы, микроорганизмы, разлагающие микотоксины, и вещества, связывающие микотоксины, например бактериальные клеточные стенки или неорганические материалы, такие как бентонит. Благодаря применению добавки такого рода, например, в кормах или пищевых продуктах может быть обеспечено безопасное расщепление и, в частности, детоксикация возможно содержащегося количества фузариотоксинов, так что на организм субъекта, употребляющего этот корм или пищевой продукт, вредное действие не оказывается.
К другим областям применения настоящего изобретения относятся добавки, которые наряду по меньшей мере с одним вариантом полипептида по настоящему изобретению дополнительно содержат по меньшей мере один фермент, который, например, участвует в разложении протеинов, такой как, например, протеазы, или участвует в метаболизме крахмала или волокон, или жиров, или гликогена, такой как, например, амилаза, целлюлаза или глюканаза, а также, например, гидролазы, липолитические ферменты, маннозидазы, оксидазы, оксидоредуктазы, фитазы или ксиланазы.
Настоящее изобретение относится также к применению добавки по настоящему изобретению для расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина в пищевых продуктах или кормах, предпочтительно гранулированных, предпочтительно для свиней, домашней птицы, крупного рогатого скота, лошадей, рыбы или аквакультуры. В качестве пищевого продукта или корма могут выступать любые пищевые продукты или корма, приемлемые для питания человека или кормления животных, предпочтительно домашних животных, овец или коз, в частности высушенная барда.
Настоящее изобретение относится также к применению добавки по настоящему изобретению для расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина в процессе, в частности, при температуре, равной по меньшей мере 50°C, производства или переработки пищевых продуктов или кормов. При таком применении добавки детоксикация фузариотоксинов обеспечивается, например, во время технологических процессов производства пищевых продуктов, в случае которых важна обработка при повышенной температуре, таких как, например, переработка кукурузы или зерна, процессы ожижения крахмала, процессы осахаривания или процессы ферментации, такие как, например, процесс затирания или брожения, в частности, при производстве биоэтанола. Благодаря этому может быть обеспечен такой эффект, что ни в одном из продуктов, получаемых способами такого типа, таких как, например, гранулированные корма, макаронные изделия, каши, воздушная кукуруза, кукурузные хлопья, кукурузный хлеб, кукурузные лепешки, высушенная барда или крахмал, не остаются в непереработанном виде фузариотоксины в существенном, в частности вредном для здоровья, количестве.
Настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного варианта полипептида по настоящему изобретению или по меньшей мере одной добавки по настоящему изобретению для производства препарата для профилактики и/или лечения фузариотоксикозов. При таком применении варианта полипептида или добавки в случае профилактики можно поддерживать состояние здоровья человека или животных, несмотря на пероральный прием фузариотоксинов, по существу на уровне, который соответствует отсутствию перорального приема фузариотоксинов или их приему в уменьшенном количестве. В случае лечения фузариотоксикозов могут быть смягчены симптомы такого заболевания и, в частности, значительно улучшено соотношение между сфинганином и сфингозином в органах и/или плазме. При таком применении можно также улучшить продуктивность сельскохозяйственных животных, в частности использование корма и прирост массы тела, и понизить смертность.
Целью настоящего изобретения является также разработка способа ферментативного расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина, в случае которого по меньшей мере один фузариотоксин может быть гидролитически расщеплен полипептидом независимо от наличия кислорода, специфически, надежно и устойчиво в нетоксичные или малотоксичные продукты, причем гидролитическое расщепление происходит во время или после термической обработки.
С целью решения этой задачи способ осуществляют так, что благодаря варианту полипептида по настоящему изобретению или добавки по настоящему изобретению от фузариотоксина гидролитически отщепляется по меньшей мере одна трикарбаллиловая кислота. При этом по меньшей мере один фузариотоксин смешивают по меньшей мере с одним вариантом полипептида по настоящему изобретению или по меньшей мере с одной добавкой по настоящему изобретению, причем по меньшей мере один вариант полипептида по меньшей мере от одного фузариотоксина гидролитически отщепляет по меньшей мере одну трикарбаллиловую кислоту, вследствие чего фузариотоксин детоксифицируется, причем смесь из соответствующего варианта полипептида и фузариотоксина подвергается термической обработке по меньшей мере при 50°C и предпочтительно по меньшей мере при 70°C, а гидролитическое расщепление происходит во время или после термической обработки.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения способ осуществляют так, что вариант полипептида или добавку смешивают с кормом или пищевым продуктом, загрязненным по меньшей мере одним фузариотоксином, и осуществляют термическую обработку в случае необходимости в процессе гранулирования. Благодаря этому обеспечивается такой эффект, что фузариотоксины, содержащиеся в загрязненном и при необходимости гранулированном корме или пищевом продукте, расщепляются, как только смесь из варианта полипептида и фузариотоксина приводится в контакт с влагой. В случае влажных кормов или пищевых продуктов, таких, как пульпы или кашицы, гидролиз фузариотоксинов происходит во влажном корме или пищевом продукте перед пероральным приемом. Благодаря этому достигается эффект того, что вредное действие фузариотоксинов на человека и животное в значительной степени устраняется или по меньшей мере уменьшается. При этом в качестве влаги понимают присутствие воды или водосодержащих жидкостей, причем в их число входят также, например, слюна или другие жидкости, имеющиеся в пищеварительном тракте. В качестве пищеварительного тракта понимают полость рта, глотку (зев), пищевод и желудочно-кишечный тракт или их эквиваленты, причем в случае животных могут использоваться разные термины или в пищеварительном тракте животных могут отсутствовать отдельные компоненты.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения способ осуществляют так, что вариант полипептида прибавляют в количестве от 5 до 500 ед., предпочтительно от 10 до 300 ед. и более предпочтительно от 15 до 100 ед. на килограмм корма или пищевого продукта. Благодаря прибавлению варианта полипептида в этих количествах удается в зависимости от концентрации фузариотоксинов расщеплять их в пищевом продукте или корме, в частности в высушенной барде, и благодаря этому детоксифицировать их, так что расщепляются по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80% и более предпочтительно по меньшей мере 90% по меньшей мере одного фузариотоксина.
Если ясно не указано иное, то указания в единственном числе, такие как, например, "одно", "один", "одна", "это", "этот" или "эта", следует понимать в порядке приведения примера и относить к большему числу возможностей. Если употребляют, например, термины "ген", "фермент" или "клетка" в единственном числе, то всегда подразумевают и множественное число.
В дальнейшем описании настоящее изобретение более подробно поясняется примерами.
Варианты полипептидов
Пример 1. Модификация, клонирование и экспрессия полинуклеотидов, кодирующих полипептиды, расщепляющие фузариотоксин
Замены, инсерции или делеции аминокислот осуществляли мутацией нуклеотидных последовательностей посредством ПЦР с применением набора "Quick-change Site-directed Mutagenesis Kits" (компания "Stratagene") согласно инструкции. С этой целью альтернативно синтетическим путем были получены также полные нуклеотидные последовательности (компания "GeneArt"). Нуклеотидные последовательности, генерированные посредством мутагенеза с использованием ПЦР или полученные от компании "GeneArt", стандартными способами были интегрированы в экспрессирующие векторы для экспрессии в E. coli или P. pastoris, трансформированы в E. coli или P. pastoris, а также экспрессированы в E. coli или P. pastoris (J.M. Cregg, Pichia Protocols, second Edition, ISBN-10: 1588294293, 2007; J. Sambrook et al. 2012, Molecular Cloning, A Laboratory Manual 4th Edition, Cold Spring Harbor), причем для этой задачи может быть использована также любая другая приемлемая клетка-хозяин.
Термин "экспрессирующий вектор" относится к конструкту ДНК, который может экспрессировать ген in vivo или in vitro. В частности, под конструктами ДНК понимают также конструкты, которые являются приемлемыми для переноса нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, в клетку-хозяин с целью интеграции ее в геном или свободного нахождения в экстрахромосомальном пространстве, для внутриклеточной экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, и при необходимости для вывода полипептида из клетки. Термин "клетка-хозяин" относится к любым клеткам, которые содержат сверхэкспрессирующую нуклеотидную последовательность или экспрессирующий вектор и могут продуцировать фермент или полипептид по настоящему изобретению. В частности, под прокариотическими и/или эукариотическими клетками предпочтительно понимают P. pastoris, E. coli, Bacillus subtilis, Streptomyces, Hansenula, Trichoderma, Lactobacillus, Aspergillus, клетки растений и/или споры Bacillus, Trichoderma или Aspergillus. Для определения каталитических свойств вариантов полипептидов использовали растворимый клеточный лизат в случае E. coli или надосадочную жидкость культуры в случае P. pastoris.
Пример 2. Определение каталитической активности и удельной активности полипептидов, расщепляющих фузариотоксин
Соответствующие гены, кодирующие варианты полипептидов, расщепляющих фузариотоксин, стандартными способами клонировали в Escherichia coli, внутриклеточно экспрессировали, затем высвобождали ультразвуком и центрифугировали. Прозрачную надосадочную жидкость разбавляли 20 мМ буферным раствором Tris-HCl (pH=8,0), содержащим 0,1 мг/мл сывороточного альбумина крупного рогатого скота, (приблизительно от 10-3 до 10-5) и вводили в смесь для расщепления FB1, так что благодаря полипептиду количество FB1, содержащегося в смеси для расщепления, уменьшалось на величину от 10 до 90%.
Для определения каталитический ферментативной активности осуществляли испытания по гидролитическому расщеплению фумонизина B1 (FB1) в экспериментальной смеси в 20 мМ буферном растворе Tris-HCl (pH=8,0), содержащем 0,1 мг/мл сывороточного альбумина крупного рогатого скота, при температуре 30°C в течение 30 мин. Дополнительно исходная смесь содержала FB1 с концентрацией по субстрату 100 мкM (компания "Biopure Referenzsubstanzen GmbH", Тульн, Австрия, BRM 001007) и один из испытуемых полипептидов. После инкубации в течение 30 мин исходную смесь инактивировали нагреванием при 99°C в течение 5 мин для остановки реакции.
Для определения ферментативной активности в пробах корма варианты полипептидов, трансформирующих фузариотоксин, перед испытанием следует экстрагировать из проб корма. С этой целью 10 г корма растворяли в 100 мл 20 мМ буферного раствора Tris-HCl (pH=8,0), содержащего 0,1 мг/мл сывороточного альбумина крупного рогатого скота, и встряхивали в течение 1 ч при 20°C с частотой 150 об/мин. Затем пробы центрифугировали при 4000 g в течение 15 мин, прозрачную надосадочную жидкость в случае необходимости разбавляли (от 10-2 до 10-3) и вводили в смесь, содержащую FB1.
Количественное определение FB1 осуществляли способом ЖХ-МС (жидкостная хроматография - масс-спектрометрия) по методике, описанной в "Heini et al. J. of Biotechnology, 2010, 145, p. 120-129, 2.6.3. Liquid chromatography-mass spectrometry". С этой целью осуществляли градуировку со стандартами FB1, которые дополнительно содержали внутренний стандарт FB1, полностью меченный атомами 13C (компания "Biopure Referenzsubstanzen GmbH", Тульн, Австрия). Для определения каталитической ферментативной активности применяемых растворов полипептидов в отличие от методики Хайни и соавт. (2010) определяли только разложение FB1. Каталитическая ферментативная активность применяемых растворов полипептидов указывается в единицах на мл, причем термин "единица" определяется в испытании как уменьшение мкмоль FB1 в минуту в приведенных ранее условиях реакции.
Для определения значений удельной активности концентрации ферментов определяли количественным вестерн-блоттингом или способом ELISA. Удельную ферментативную активность рассчитывали, относя активность (в единицах) к применяемому количеству фермента и указывая в единицах на мг.
Пример 3. Термическая стабильность полипептидов, расщепляющих фузариотоксин
Экспрессию и количественное определение полипептидов, расщепляющих фузариотоксин, осуществляли соответственно описанию примеров 1 и 2. Перед определением активности клеточный сольват разделяли на несколько частей (приблизительно по 60 мкл). От 2 до 10 частей в течение 5 мин подвергали тепловой обработке в стандартном реакторе для ПЦР (например, в "Eppendorf Mastercycler Gradient"), причем каждую часть инкубировали при разных температурах. Другую часть клеточного сольвата, представлявшую контрольную пробу, принятую за 100%, в то же самое время инкубировали на льду. По завершении тепловой обработки все пробы/экспериментальные смеси инкубировали в течение минуты при 10°C для выравнивания температур. В пробах, обработанных теплом, а также в контрольной пробе, принятой за 100%, определяли ферментативную активность соответственно описанию примера 2. Активность, остающуюся после тепловой обработки, принимают за остаточную активность. Температура, при которой остаточная активность составляет 50% по сравнению с не обработанной теплом контрольной пробой, принятой за 100%, сокращенно обозначается как T(50%) и представляет собой меру термической стабильности полипептида.
Превышение T(50%), указанное в градусах Цельсия, в случае вариантов полипептидов по сравнению с полипептидом с SEQ ID № 46 или SEQ ID № 1 представляет собой меру повышенной термической стабильности. Превышение T(50%) может быть указано в °C, а также как процентное значение относительно значения T(50%) исходного полипептида. Для наглядности далее рассмотрен пример. Если бы исходный фермент после 5-минутной инкубации на льду обладал бы каталитической активностью, равной 50 ед./мл, а каталитической активностью, равной 25 ед./мл, обладал бы после 5-минутной инкубации при 48°C, то значение T(50%) было бы равно 48°C. Если бы для варианта полипептида значение T(50%) было бы равно 51°C, то относительное превышение термической стабильности T(50%) составило бы 6,25. Это следует из разности двух значений T(50%), равной 3°C, разделенной на значение T(50%) исходного фермента, равное 48°C, и умноженной на 100.
Для определения термической стабильности вместо каталитической активности может быть использована также удельная активность.
Определение термической стабильности может быть осуществлено также посредством альтернативного ферментативного испытания и даже без необходимости определять каталитическую активность превращения FB1. При этом важно, чтобы в исходных смесях были использованы равные количества полипептида, обработанного теплом, и была использована контрольная проба, принятая за 100%; это возможно, например, благодаря применению равных объемов клеточного сольвата.
Для определения термической стабильности вместо каталитической активности могут быть использованы также сигналы, измеренные в экспериментах по ферментативному расщеплению (например, МС-сигнал, поглощение и т.п.). Если измеренный сигнал прямо пропорционален ферментативной активности (например, площадь пика превращенного FB1), то значение T(50%) для полипептида представляет собой температуру, при которой значение измеренного сигнала для полипептида, обработанного теплом, составляет 50% от значения сигнала, измеренного для контрольной пробы полипептида, принятой за 100%.
Термическая стабильность T(50%) полипептида с SEQ ID № 46 была определена равной 42°C, а в случае полипептида с SEQ ID № 1 составила 45°C. Таким образом, относительное превышение термической стабильности, которого удалось достигнуть укорачиванием N-концевого участка последовательности, составляет приблизительно 7%. При этом также удалось выявить повышенную ферментативную активность полипептида с SEQ ID № 1 по сравнению с исходным полипептидом с SEQ ID № 46.
Термическая стабильность полипептида с SEQ ID № 1 может быть повышена в еще большей степени благодаря целенаправленной замене отдельных аминокислот. Значения относительного превышения термической стабильности этих вариантов полипептидов по сравнению с исходным полипептидом с SEQ ID № 1 представлены в таблице 1.
Таблица 1. Модификации вариантов полипептидов и значения их относительного превышения термической стабильности в процентах по сравнению с исходным ферментом с SEQ ID № 1
Пример 4. Температурно-зависимая активность (температурная активность) полипептидов, расщепляющих фузариотоксин
Варианты расщепляющих фузариотоксин полипептидов, подлежавших испытанию в отношении их температурно-зависимой активности, очищали перед проведением экспериментов. С этой целью варианты полипептидов из ферментационной жидкости очищали в двухстадийном процессе анионообменной хроматографией и последующей эксклюзионной хроматографией. Варианты полипептидов разбавляли до концентрации 1 мг/мл и вводили в реакционную смесь с разбавлением 10-5-10-6 в реакционном объеме, равном 1 мл. Определение активности осуществляли соответственно испытаниям, описанным в примере 3, после гидролиза FB1 и последующего количественного определения FB1 способом ЖХ-МС, причем испытание осуществляли при различных температурах. Инкубацию осуществляли с двумя нагревательными блоками ("Eppendorf", "ThermoMixer") при температурах 10, 20, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 и 70°C. Через 30 мин после начала теплового воздействия отбирали по 100 мкл реакционной смеси и инактивировали нагреванием в течение 5 мин при 99°C. При этом испытание, которое осуществляли в нагревательном блоке при 30°C, служило в качестве контрольного испытания, принятого за 100%. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Температурно-зависимая активность полипептидов, расщепляющих фузариотоксин
Результаты, обозначенные идентификатором "< LOQ", находятся ниже предела обнаружения (предел количественного обнаружения: < 0,15 ед./л в экспериментальной смеси)
Пример 5. Определение стабильности расщепляющих фузариотоксин полипептидов при гранулировании
Выбранные варианты полипептидов стандартными способами клонировали в Pichia pastoris, экспрессировали в контролируемых аэробных условиях в биореакторе и внеклеточно секретировали. Прозрачную надосадочную жидкость отделяли от биомассы, прибавляли носитель (мальтодекстрин) и на установке распылительной сушки перерабатывали в порошок, приемлемый для гранулирования. Варианты расщепляющих фузариотоксин полипептидов, находящихся в виде порошка, в одной и той же концентрации, равной 100 ед./кг, прибавляли к корму для вскармливания молодняка свиней и контролируемым образом перерабатывали в гранулированный корм. Во время процесса гранулирования корм отдельными партиями при точно заданных температурах (75-95°C с шагом 5°C) увлажняли и нагревали перегретым паром. После этой стадии подготовки осуществляли собственно процесс гранулирования. Остаточную активность вариантов расщепляющих фузариотоксин полипептидов, содержащихся в гранулах, определяли соответственно описанию примера 2, причем в качестве контрольной пробы, принятой за 100%, использовали негранулированный корм с соответствующими вариантами полипептидов, расщепляющих фузариотоксин. При этом за остаточную активность принимали найденную ферментативную активность, оставшуюся после процесса гранулирования. Результаты приведены в таблице 3.
Таблица 3. Температуры гранулирования и остаточная активность полипептидов, расщепляющих фузариотоксин
Результаты, обозначенные идентификатором "< LOQ", находятся ниже предела обнаружения (предел количественного обнаружения: < 0,15 ед./л в экспериментальной смеси)
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Эрбер Акциенгезелльшафт
<120> ВАРИАНТЫ ПОЛИПЕПТИДОВ, РАСЩЕПЛЯЮЩИХ ФУЗАРИОТОКСИНЫ,
СОДЕРЖАЩАЯ ИХ ДОБАВКА, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ И СПОСОБ РАСЩЕПЛЕНИЯ
ФУЗАРИОТОКСИНОВ
<130> P05368PCT
<160> 46
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Модифицировано из SEQ ID № 46
<400> 1
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asn Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Leu Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Leu Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Ala Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Ala Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Glu Gly Gly Ala Gly Ala Ser Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Glu Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 2
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 2
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Ala Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Glu Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 3
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 3
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Glu Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 4
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 4
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 5
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 5
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Met
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Val Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Phe Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Thr Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 6
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 6
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asn Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 7
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 7
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Glu Gly Gly Ala Gly Ala Ser Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Glu Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 8
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 8
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser His Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 9
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 9
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
His Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 10
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 10
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Gly Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 11
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 11
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 12
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 12
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 13
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 13
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 14
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 14
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Leu Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 15
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 15
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 16
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 16
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 17
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 17
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 18
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 18
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 19
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 19
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 20
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 20
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Gly Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 21
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 21
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 22
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 22
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Thr His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 23
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 23
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ser Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 24
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 24
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Thr Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 25
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 25
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Arg Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 26
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 26
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Gln Ser His Trp Pro Arg Tyr Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 27
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 27
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 28
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 28
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Ile Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 29
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 29
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Met Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 30
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 30
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Leu Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 31
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 31
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 32
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 32
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Thr Leu Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 33
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 33
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Thr Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 34
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 34
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Leu Phe Asn His Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 35
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 35
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn His Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 36
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 36
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Thr Gln Phe Asn His Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 37
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 37
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 38
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 38
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Thr His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
485 490
<210> 39
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 39
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Thr Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Thr His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Arg Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 40
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 40
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Met Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 41
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 41
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Met Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 42
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 42
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Met Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Arg Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 43
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 43
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn His Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Pro Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Thr His Trp Pro Arg Phe Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 44
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 44
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly
355 360 365
Ile Glu Met Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ser Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Ala Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Arg Gly Thr Gln Ser His Trp Pro Arg Tyr Asp Arg
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 45
<211> 493
<212> ПРТ
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант полипептида SEQ ID № 1
<400> 45
Gln Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Glu Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala
20 25 30
Ala Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg
35 40 45
Ala Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile
50 55 60
Gly Asp Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu
65 70 75 80
Asp Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly
115 120 125
Val Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu
130 135 140
Ala His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn
165 170 175
Ile Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu
180 185 190
Ser Ala Gly Ala Ser Ala Ile Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser
195 200 205
Glu Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg
210 215 220
Pro Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly
225 230 235 240
Ala Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys
245 250 255
Ile Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Pro Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val
275 280 285
Asp Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Ile Val Gly
290 295 300
Gly Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys
305 310 315 320
Thr Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu
325 330 335
Ala Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val
340 345 350
Pro Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn His Gly
355 360 365
Ile Glu Val Leu Ser Ala Ala Phe Val Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp
370 375 380
Arg Tyr Arg Phe Leu Gly Ile Pro Gly Pro Gly Arg Arg Pro Ala Thr
385 390 395 400
His Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser
405 410 415
Val Ala Val Phe Gly Ser Leu Ala Gly Gly Val Gly Pro Ala Asp Ile
420 425 430
Lys Leu Ala Ala Glu Met Ser Ser Ala Trp Val Ser Phe Ala Ala His
435 440 445
Gly Val Pro Asp Arg Gly Thr Gln Thr His Trp Pro Arg Tyr Asp Ile
450 455 460
Ser Gly Glu Ile Lys Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly
465 470 475 480
Leu Gly Val Ser Pro Ser Asn Ala Cys Pro Pro Ser Lys
485 490
<210> 46
<211> 540
<212> ПРТ
<213> Sphingopyxis sp.
<400> 46
Val Lys Glu His Gln Cys Arg Gly Gly Arg Ala Ser Pro Ala Ala Pro
1 5 10 15
Ala Thr Trp Leu Ala Arg Ile Ser Val Ser Arg Gly Ala Ser Ala Ile
20 25 30
Ala Trp Thr Phe Met Leu Gly Ala Thr Ala Ile Pro Val Ala Ala Gln
35 40 45
Thr Asp Asp Pro Lys Leu Val Arg His Thr Gln Ser Gly Ala Val Glu
50 55 60
Gly Val Glu Gly Asp Val Glu Thr Phe Leu Gly Ile Pro Phe Ala Ala
65 70 75 80
Pro Pro Val Gly Asp Leu Arg Trp Arg Pro Pro Ala Pro Pro Arg Ala
85 90 95
Trp Ala Gly Thr Arg Asp Gly Arg Arg Phe Ala Pro Asp Cys Ile Gly
100 105 110
Asn Glu Arg Leu Arg Glu Gly Ser Arg Ala Ala Gly Thr Ser Glu Asp
115 120 125
Cys Leu Tyr Leu Asn Ile Trp Ser Pro Lys Gln Val Gly Lys Gly Gly
130 135 140
Leu Pro Val Met Ile Trp Val Tyr Gly Gly Gly Phe Ser Gly Gly Ser
145 150 155 160
Gly Ala Val Pro Tyr Tyr Asp Gly Ser Ala Leu Ala Gln Lys Gly Val
165 170 175
Val Val Val Thr Phe Asn Tyr Arg Ala Gly Ile Leu Gly Phe Leu Ala
180 185 190
His Pro Ala Leu Ser Lys Glu Ser Pro Asn Gly Val Ser Gly Asn Tyr
195 200 205
Gly Leu Leu Asp Met Leu Ala Ala Phe Lys Trp Val Gln Asn Asn Ile
210 215 220
Arg Glu Phe Gly Gly Asp Pro Asn Arg Val Thr Val Phe Gly Glu Ser
225 230 235 240
Ala Gly Ala Ser Ala Leu Gly Leu Leu Leu Thr Ser Pro Leu Ser Glu
245 250 255
Ser Ala Phe Asn Gln Ala Ile Leu Gln Ser Pro Gly Leu Ala Arg Pro
260 265 270
Leu Ala Thr Leu Ser Glu Ser Glu Ala Asn Gly Leu Glu Leu Gly Ala
275 280 285
Asp Ile Ser Ala Leu Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Leu Thr Lys Ile
290 295 300
Ala Gln Ser Arg Ile Pro Met Ser Arg Gln Phe Thr Lys Pro Arg Pro
305 310 315 320
Met Gly Pro Ile Leu Asp Gly Tyr Val Leu Arg Thr Leu Asp Val Asp
325 330 335
Ala Phe Ala Lys Gly Ala Phe Arg Lys Ile Pro Val Leu Val Gly Gly
340 345 350
Asn Ala Asp Glu Gly Arg Ala Phe Thr Asp Arg Leu Pro Val Lys Thr
355 360 365
Val Leu Glu Tyr Arg Ala Tyr Leu Thr Glu Gln Phe Gly Asp Glu Ala
370 375 380
Asp Ala Trp Glu Arg Cys Tyr Pro Ala Asn Ser Asp Ala Asp Val Pro
385 390 395 400
Ala Ala Val Ala Arg Leu Phe Gly Asp Ser Gln Phe Asn Asn Gly Ile
405 410 415
Glu Leu Leu Ser Ala Ala Phe Ala Lys Trp Arg Thr Pro Leu Trp Arg
420 425 430
Tyr Arg Phe Thr Gly Ile Pro Gly Ala Gly Arg Arg Pro Ala Thr His
435 440 445
Gly Asp Glu Ile Pro Tyr Val Phe Ala Asn Leu Gly Pro Ser Ser Val
450 455 460
Ser Met Phe Gly Ser Leu Glu Gly Gly Ala Gly Ala Ser Asp Ile Lys
465 470 475 480
Leu Ala Thr Glu Met Ser Ala Ala Trp Val Ser Phe Ala Val His Gly
485 490 495
Val Pro Asp Gln Gly Thr Lys Ser His Trp Pro Arg Phe Glu Arg Arg
500 505 510
Gly Glu Ile Met Thr Phe Gly Ser Gln Val Gly Ser Gly Glu Gly Leu
515 520 525
Gly Val Ser Pro Ser Lys Ala Cys Gln Pro Ser Lys
530 535 540
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| КОНСТРУКЦИИ СЛИТОГО БЕЛКА ДЛЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, СВЯЗАННОГО С КОМПЛЕМЕНТОМ | 2019 |
|
RU2824402C2 |
| МОЛЕКУЛА РЕЦЕПТОРА IL4/IL13 ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2795591C2 |
| МУТАНТЫ БЕЛКА F RSV | 2016 |
|
RU2788403C2 |
| МУТАНТЫ БЕЛКА F RSV | 2016 |
|
RU2723039C2 |
| Композиции для получения глюкозных сиропов | 2015 |
|
RU2706297C2 |
| СЛИТЫЕ СЕРПИНОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2728861C1 |
| ПОЛИВАЛЕТНЫЕ И ПОЛИСПЕЦИФИЧНЫЕ GITR-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ | 2016 |
|
RU2753439C2 |
| МУЛЬТИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ НА ОСНОВЕ ПСЕВДО-FAB | 2019 |
|
RU2820254C2 |
| СЛИТЫЕ СЕРПИНОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2015 |
|
RU2746550C2 |
| СЛИТЫЕ СЕРПИНОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2012 |
|
RU2698655C2 |
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой варианты расщепляющих фузариотоксины полипептидов фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 46, причем варианты полипептидов на N-концевом участке содержат аминокислотную последовательность, укороченную на 47 аминокислот. Изобретение относится также к расщепляющей фузариотоксин добавке, содержащей по меньшей мере один вариант полипептида и в случае необходимости по меньшей мере одно вспомогательное вещество; к применению вариантов полипептидов или добавки в пищевых продуктах и к способу гидролитического расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 пр.
1. Вариант расщепляющего фузариотоксины полипептида фузариотоксинкарбоксилэстеразы с SEQ ID № 46, отличающийся тем, что вариант полипептида на N-концевом участке содержит аминокислотную последовательность, укороченную на 47 аминокислот, причем аминокислотная последовательность характеризуется последовательностью по меньшей мере на 70%, предпочтительно на 80% и более предпочтительно на 100% идентичной участку 48-540 аминокислотной последовательности SEQ ID № 46, причем термическая стабильность T(50%) полипептида с SEQ ID № 46 составляет 42°С, а термическая стабильность T(50%) варианта полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID № 46, укороченной на 47 аминокислот на N-концевом участке составляет 45°С и модификации аминокислотной последовательности SEQ ID № 46, укороченной на 47 аминокислот на N-концевом участке обладают относительным превышением T(50%) по сравнению с исходным ферментом с аминокислотной последовательностью SEQ ID № 46, укороченной на 47 аминокислот на N-концевом участке, причем по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличаются аминокислотной заменой в качестве модификации, а аминокислотные замены в положениях 10 и 456 выбирают из Q, E, N, H, K и R, в положениях 33, 107, 293 и 332 выбирают из E, Q, D, K, R и N, в положениях 66, 463 и 478 выбирают из D, E, K, N, Q и R, в положениях 140 и 490 выбирают из P, A, S и N, в положениях 144 и 367 выбирают из I, L, M и V, в положениях 149, 270, 312, 329 и 372 выбирают из F, Y, W и H, в положениях 151 и 453 выбирают из D, E, K и R, в положениях 157 и 462 выбирают из F, H, W и Y, в положениях 199, 302, 365 и 464 выбирают из I, L, M и V, в положениях 266 и 455 выбирают из A, S и T, в положениях 267, 394 и 429 выбирают из A, N, P и S, в положении 272 выбирают из H, N, Q и S, в положении 275 выбирают из A, D, E, G, K, N, Q, R и S, в положении 280 выбирают из A, D, E, K, N, P, Q, R и S, в положении 284 выбирают из A, N, P, S, T и V, в положении 286 выбирают из A, D, E, K, N, P, R и S, в положениях 360, 377, 391, 419 и 427 выбирают из A, I, L, S, T и V, в положениях 363, 443 и 457 выбирают из A, S, T и V, в положении 364 выбирают из H, I, L, M, N, Q, S и V, в положении 371 выбирают из A, I, L, M, S, T и V, в положении 389 выбирают из I, L, M и V, в положениях 418, 430, 447 и 473 выбирают из A, G и S, в положении 424 выбирают из A, D, E, G, K, R и S, в положении 436 выбирают из A, G, S и T, в положении 440 выбирают из A, G, S и T, в положении 465 выбирают из A, G, H, N, Q, S и T, в положении 469 выбирают из D, E, K и R и/или в положении 487 выбирают из N, D, Q, H и S.
2. Вариант полипептида по п. 1, отличающийся тем, что аминокислотные замены выбирают из группы 10Q, 33E, 66D, 107E, 140P, 144M, 149F, 151R, 157Y, 199I, 266S, 267P, 270F, 272H, 275E, 275A, 280D, 280P, 284T, 284P, 286P, 286R, 293E, 302I, 312F, 329F, 332E, 360V, 363T, 364H, 364L, 365I, 367H, 371V, 371M, 372F, 377V, 389L, 391V, 394P, 418A, 419V, 424A, 424K, 427V, 429P, 430A, 436A, 436S, 440G, 440S, 443T, 447A, 453R, 455S, 456Q, 457T, 462Y, 463D, 464I, 465H, 465S, 465G, 469K, 473A, 478D, 487N и 490P.
3. Вариант полипептида по п. 1 или 2, отличающийся тем, что они по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, которую составляют положения 66, 199, 302, 377, 394, 424, 430 и 463, отличаются аминокислотной заменой.
4. Вариант полипептида по любому из пп. 1, 2 или 3, отличающийся тем, что аминокислотную замену выбирают из группы 66D, 199I, 302I, 377V, 394P, 424A, 430A и 463D.
5. Вариант полипептида по п. 1, отличающийся тем, что вариант полипептида по меньшей мере в двух и предпочтительно в трех положениях аминокислотной последовательности, выбранных из группы, которую составляют положения 10, 33, 66, 107, 140, 144, 149, 151, 157, 199, 266, 267, 270, 272, 275, 280, 284, 286, 293, 302, 312, 329, 332, 360, 363, 364, 365, 367, 371, 372, 377, 389, 391, 394, 418, 419, 424, 427, 429, 430, 436, 440, 443, 447, 453, 455, 456, 457, 462, 463, 464, 465, 469, 473, 478, 487 и 490, отличаются аминокислотными заменами, причем аминокислотные замены выбирают из группы 10Q, 66D, 144M, 151R, 199I, 266S, 267P, 272H, 275E, 275A, 280D, 284T, 286P, 286R, 293E, 302I, 360V, 363T, 364H, 364L, 365I, 367H, 371V, 371M, 372F, 377V, 389L, 391V, 394P, 418A, 419V, 424A, 424K, 427V, 429P, 430A, 436A, 436S, 440G, 440S, 443T, 447A, 453R, 455S, 456Q, 457T, 462Y, 463D, 464I, 465H, 465S, 465G, 469K, 473A, 478D, 487N и 490P.
6. Вариант полипептида по п.1 или 2, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность вариантов полипептида отличается комбинациями из нескольких аминокислотных замен, причем комбинации положений выбирают из группы 66/199/302/394/424/430, 66/199/302/377/394/424/430, 66/199/302/377/394/424/430/463, 66/144/199/302/360/372/377/394/424/430/443/463, 199/302/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394, 66/199/302/364/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/440/463, 66/199/302/377/394/424/430/447/463, 66/199/302/377/394/418/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/436/430/463, 66/199/302/364/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/490, 66/199/302/377/394/424/430/463/469, 66/199/302/377/389/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/463/464, 66/199/302/377/394/424/430/463/465, 66/199/302/377/394/424/430/440/463, 66/199/302/377/394/424/430/457/463, 66/199/302/377/394/424/430/436/463, 66/199/302/363/371/377/394/424/430/463, 66/199/302/377/394/424/430/447/453/463, 66/199/302/377/394/424/430/456/462/463, 66/199/302/377/394/419/424/427/430/463, 66/199/302/365/377/394/424/430/463/487 и 66/199/302/371/377/394/424/430/463/487.
7. Вариант полипептида по п. 6, отличающийся тем, что аминокислотные последовательности варианта полипептида выбирают из группы SEQ ID от № 2 до № 29.
8. Вариант полипептида по п. 1 или 2, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность варианта полипептида отличается комбинациями из нескольких аминокислотных замен, причем комбинации положений выбирают из группы 66/99/302/364/377/389/394/419/424/427/430/447/463/465/469, 66/199/302/377/389/394/419/424/427/430/447/463/465/469, 66/199/302/363/364/371/377/389/394/419/424/427/430/447/463/464/465/469, 66/199/302/363/371/377/389/394/419/424/427/430/447/463/464/465/469, 66/199/302/364/367/371/377/389/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463/464/465/469/490, 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463/464/465/469/490, 66/199/302/363/367/371/377/394/424/430/463/490, 66/199/302/377/394/418/419/424/427/430/436/440/447/463, 66/199/302/377/389/394/424/430/457/463/464/465/469, 66/199/302/363/371/377/389/394/419/424/427/430/440/447/457/463/464/469/490, 66/199/302/377/394/424/430/463/447/490/469/465, 66/199/302/377/394/424/430/463/490/469/465/419/427/371/487, 66/199/302/371/377/394/419/424/427/430/447/453/463/465/469/487/490, 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/429/430/436/440/447/457/463/464/465/469/490, 66/199/302/371/377/389/394/419/424/427/430/436/447/453/456/462/463/465/469/490/487 и 66/199/302/367/371/377/389/394/418/419/424/427/429/430/436/440/447/453/456/457/462/463/464/465/469/487/490.
9. Вариант полипептида по п. 8, отличающийся тем, что аминокислотные последовательности варианта полипептида выбирают из группы SEQ ID от № 30 до № 45.
10. Выделенный полинуклеотид, отличающийся тем, что полинуклеотид содержит нуклеотидные последовательности, кодирующие вариант полипептида по любому из пп. 1-9.
11. Расщепляющая фузариотоксин добавка, отличающаяся тем, что добавка содержит по меньшей мере один вариант полипептида по любому из пп. 1-9 и по меньшей мере одно вспомогательное вещество.
12. Добавка по п. 11, отличающаяся тем, что вспомогательное вещество выбирают из группы инертных носителей, витаминов, минеральных веществ, веществ растительного происхождения, ферментов и других компонентов для детоксикации микотоксинов, таких как ферменты, разлагающие микотоксины, предпочтительно афлатоксиноксидазы, эрготамингидролазы, эрготаминамидазы, зеараленонэстеразы, зеараленонлактоназы, зеараленонгидролазы, охратоксинамидазы, фумонизинаминотрансферазы, аминополиоламинооксидазы, дезоксиниваленолэпоксидгидролазы, дезоксиниваленолдегидрогеназы, дезоксиниваленолоксидазы, трихотецендегидрогеназы, трихотеценоксидазы, микроорганизмы, разлагающие микотоксины, и вещества, связывающие микотоксины, например бактериальные клеточные стенки или неорганические материалы, такие как бентонит.
13. Применение добавки по п. 11 или 12 для расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина в пищевых продуктах или кормах, предпочтительно гранулированных, предпочтительно для свиней, домашней птицы, крупного рогатого скота, лошадей, рыбы или аквакультуры.
14. Применение добавки по п. 11 или 12 для расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина в технологическом процессе, в частности, при температуре, равной по меньшей мере 50°С и предпочтительно по меньшей мере 70°С, для производства или переработки пищевых продуктов или кормов.
15. Вариант полипептида по любому из пп. 1-9 для применения в препарате для профилактики и/или лечения фузариотоксикозов.
16. Способ гидролитического расщепления по меньшей мере одного фузариотоксина, отличающийся тем, что по меньшей мере один фузариотоксин приводят в контакт по меньшей мере с одним вариантом полипептида по любому из пп. 1-9 или по меньшей мере с одной добавкой по п. 11 или 12, при этом смесь из варианта полипептида и фузариотоксина подвергают термической обработке по меньшей мере при 50°С и предпочтительно по меньшей мере при 70°С и во время или после термической обработки приводят в контакт с влагой в количестве, достаточном для гидролитического расщепления.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что вариант полипептида или добавку смешивают с кормом или пищевым продуктом, загрязненным по меньшей мере одним фузариотоксином, и в случае необходимости осуществляют термическую обработку в процессе гранулирования.
18. Способ по п. 16 или 17, отличающийся тем, что вариант полипептида прибавляют в количестве от 5 до 500 ед., предпочтительно от 10 до 300 ед. и более предпочтительно от 15 до 100 ед. на килограмм корма или пищевого продукта.
| Приспособление для суммирования отрезков прямых линий | 1923 |
|
SU2010A1 |
| WO 00/04158 А1, 27.01.2000 | |||
| ГРУШКО Г.В., и др | |||
| "Биохимические и токсикологические особенности микотоксинов, продуцируемых грибами-патогенами озимой пшеницы", Успехи современного естествознания | |||
| Способ обработки целлюлозных материалов, с целью тонкого измельчения или переведения в коллоидальный раствор | 1923 |
|
SU2005A1 |
