ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОМБИНАЦИЙ ИНГИБИТОРОВ ERK И RAF Российский патент 2020 года по МПК A61K31/395 A61K39/395 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет патентной заявки США с серийным № 61/919347, зарегистрированной 20 декабря 2013 года, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0002] Настоящее изобретение, в числе прочего, относится к способам, наборам и фармацевтическим композициям для лечения или смягчение действия злокачественной опухоли у индивидуума с применением (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1, такой как дабрафениб или его фармацевтически приемлемая соль, для лечения или смягчение действия злокачественной опухоли.

ВКЛЮЧЕНИЕ СПИСКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

[0003] Настоящая заявка содержит ссылки на последовательности аминокислот и/или нуклеиновых кислот, которые поданы одновременно с ней в виде текстового файла со списком последовательностей "0375604.txt", размером файла 255 KB, датой создания 19 декабря 2014 года. Таким образом, указанный выше список последовательностей полностью включен посредством ссылки в соответствии с 37 C.F.R. 1.52(e)(5).

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ

[0004] Ингибиторы лекарственных средств, которые нацелены на компоненты пути передачи сигнала митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK), демонстрируют клиническую эффективность для ряда злокачественных опухолей, в частности, злокачественных опухолей, несущих мутации в протеинкиназе BRAF. Ингибиторы киназ RAF и MEK одобрены для применения в качестве единственного средства при метастатической меланоме с мутантной BRAF на поздней стадии, и комбинация дабрафениба и траметиниба в настоящее время проходит рассмотрение для этого показания в управлении по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA). Отдельно или в комбинации, ингибиторы BRAF и MEK демонстрируют вариабельную активность при других злокачественных опухолях с возможной эффективностью при раке щитовидной железы и легких с мутантной BRAF, а также возможной маргинальной активностью при колоректальном раке с мутантной BRAF.

[0005] При применении ингибиторов BRAF и MEK наблюдают различные профили клинической эффективности. Степень и проявление исходной регрессии опухоли, а также длительность ответа перед прогрессированием заболевания уникальным образом варьируют в зависимости от каждого класса лекарственных средств при введении отдельно или при введении при любой из стратегий комбинирования с последовательным или одновременным введением. В настоящее время предпочтительным вмешательством при обусловленной мутантной BRAF меланоме, по-видимому, является одновременное комбинированное лечение дабрафенибом и траметинибом.

[0006] Как и для других лечебных средств направленного действия, на профили реакции заболевания на ингибиторы RAF и MEK по-видимому, влияет генетическая гетерогенность, существующая в злокачественных опухолях, при которых используют лекарственные средства. Например, показано, что при определенных генетических альтерациях, включая PTEN и другие изменения, которые активируют сигналы роста клеток, обусловленные PI3K, при обусловленной мутантной BRAF меланоме, подвергаемой лечению ингибитором RAF вемурафенибом, можно прогнозировать плохой исходный ответ и/или относительно быстрое прогрессирование. Подобным образом, в опухолях, которые прогрессируют после лечения лекарственными средствами против BRAF, MEK или комбинированными лекарственными средствами, по-видимому, возникают прямые мутации в локусах гена MEK. Несколько дополнительных примеров, основанных на мутациях амплификации и сплайсинга генов RAS и RAF, позволяют предположить, что когда онкогенная плейотропность сталкивается с селективным давлением лечения лекарственными средствами направленного действия, вырабатывается приобретенная устойчивость к лекарственным средствам.

[0007] Таким образом, новые средства направленного действия теоретически могли бы ингибировать различные узловые точки онкогенных метаболических путей, а также являться эффективными в комбинациях, увеличивая силу селективного давления, которое превзошло бы адаптивную способность различных злокачественных геномов. Настоящая заявка, в числе прочего, направлена на удовлетворении постребности в новых средствах направленного действия.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли.

[0009] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) BVD-523 или его фармацевтически приемлемой соли, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли.

[0010] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уничтожения злокачественной клетки. Этот способ включает приведение злокачественной клетки в контакт с эффективным количеством (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль.

[0011] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой набор для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот набор содержит эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, упакованные вместе с инструкциями по их применению.

[0012] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтическая композиция для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Эта фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0013] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF (Liu et al., 2007), CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли.

[0014] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уничтожения злокачественной клетки. Этот способ включает приведение злокачественной клетки в контакт с эффективным количеством (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

[0015] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой набор для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот набор содержит эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, упакованных вместе с инструкциями по их применению.

[0016] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Эта фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0017] Материалы патента или заявки содержат по меньшей мере один чертеж, выполненный в цвете. Копии этого патента или публикации патентной заявки с цветным чертежом(ами) предоставляются агентством при запросе и оплате необходимых отчислений.

[0018] На фиг. 1A-C представлен ход исследования с увеличением дозы на линии клеток злокачественной меланомы человека (клетки A375) в течение месяца 1. Различные лечебные средства (траметиниб (ингибитор MEK типа 2), дабрафениб (ингибитор BRAF) и BVD-523 (ингибитор ERK1/2)) являются такими, как обозначено.

[0019] На фиг. 2A-H представлены результаты анализа пролиферации, в котором отслеживаются изменения в чувствительности на увеличиваемые дозы средств(а) в течение месяца 1. Различные лечебные средства (траметиниб, дабрафениб, BVD-523 и паклитаксел) являются такими, как обозначено вверху диаграммы. Подпись справа от диаграммы демонстрирует различные типы клеток, получаемые при исследовании с увеличением дозы. Например, "дабрафениб" относится к клеткам, которые обрабатывали наибольшей дозой дабрафениба, начиная с месяца 1 исследования с увеличением дозы. Первичный относится к контрольным клеткам, которые не обрабатывали лекарственными средствами. Фиг. 2A-2C и 2G нормализованы на контроль, тогда как на фиг. 2D-2F и 2H представлены необработанные данные.

[0020] На фиг. 3A-3D представлен ход исследования с увеличением дозы в клетках A375 в течение месяца 2. Различные лекарственные средства (траметиниб, дабрафениб и BVD-523) являются такими, как обозначено.

[0021] На фиг. 4A-H представлены результаты анализа пролиферации, в котором отслеживаются изменения в чувствительности на увеличиваемые дозы средств(а) в течение месяца 2. Различные лечебные средства (траметиниб, дабрафениб, BVD-523 и паклитаксел) являются такими, как обозначено вверху диаграммы. Подпись справа от диаграммы демонстрирует различные типы клеток, получаемые при исследовании с увеличением дозы. Например, "дабрафениб" относится к клеткам, которые обрабатывали наибольшей дозой дабрафениба, начиная с месяца 2 исследования с увеличением дозы. Исходные относится к контрольным клеткам, которые не обрабатывали лекарственными средствами. Фиг. 4A-4C и 4G нормализованы на контроль, тогда как фиг. 4D-4F и 4H демонстрируют необработанные данные.

[0022] На фиг. 5A-H представлены данные только для исходной линии клеток и линии клеток BVD-523 с ФИГ. 4. Различные лечебные средства (траметиниб, дабрафениб, BVD-523 и паклитаксел) являются такими, как обозначено. Фиг. 5A-5C и 5G нормализованы на контроль, тогда как фиг. 5D-5F и 5H демонстрируют необработанные данные.

[0023] На фиг. 6A-D представлен ход исследования с увеличением дозы на линии злокачественных клеток человека (клетки A375) в течение месяца 3. Различные лечебные средства (траметиниб, дабрафениб, и BVD-523) являются такими, как обозначено.

[0024] Фиг. 7 представляет собой гистограмму, демонстрирующую результаты анализа пролиферации в применении к клеткам, выращиваемым в лунках с контролем DMSO, при анализе с увеличением дозы.

[0025] Фиг. 8A-D представляют собой группу линейных графиков, демонстрирующую анализы пролиферации в течение месяца 3 исследования. Различные лечебные средства (траметиниб, дабрафениб, BVD-523 и паклитаксел) являются такими, как обозначено вверху диаграммы. Подпись справа от диаграммы демонстрирует различные типы клеток, получаемых при исследовании с увеличением дозы. Например, "дабрафениб" относится к клеткам, которые обрабатывали наибольшей дозой дабрафениба, начиная с месяца 3 исследования с увеличением дозы. Исходные относится к контрольным клеткам, которые не обрабатывали лекарственными средствами.

[0026] На фиг. 9A-D представлены только данные для исходной линии клеток, линии клеток дабрафениба и линии клеток BVD-523 с ФИГ. 8.

[0027] Фиг. 10A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации траметиниба/дабрафениба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 10B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации траметиниба/дабрафениба. Фиг. 1°C и 10D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 10E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом и траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0028] Фиг. 11A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации траметиниба/дабрафениба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. Фиг. 11B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации траметиниба/дабрафениба. Фиг. 11C и 11D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. На фиг. 11E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом и траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo.

[0029] Фиг. 12A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации BVD-523/дабрафениба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 12B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации BVD-523/дабрафениба. Фиг. 12C и 12D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 12E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом и BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0030] Фиг. 13A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации BVD-523/дабрафениба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. Фиг. 13B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации BVD-523/дабрафениба. Фиг. 13C и 13D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. На фиг. 13E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом и BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo.

[0031] Фиг. 14A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации траметиниба/BVD-523 в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 14B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации траметиниба/BVD-523. Фиг. 14C и 14D демонстрируют % жизнеспособности при обработке BVD-523 и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 14E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке BVD-523 и траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0032] Фиг. 15A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации траметиниба/BVD-523 в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. Фиг. 15B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации траметиниба/BVD-523. Фиг. 15C и 15D демонстрируют % жизнеспособности при обработке BVD-523 и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo. На фиг. 15E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке BVD-523 и траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток CellTiter-Glo.

[0033] Фиг. 16A-D представляют собой группу изображений, демонстрирующих анализ вестерн-блоттинга передачи сигналов MAPK в клетках A375 через 4 часа обработки различными концентрациями (в нМ) BVD-523, дабрафениба (Даб) и траметиниба (Трам). На каждую дорожку, за исключением тех, где указано иначе, внесено всего по 40 мкг белка. В этом эксперименте собирали дублированные образцы. Фиг. 16A и 16B демонстрируют результаты, полученные на дублированных образцах. Подобным образом, на фиг. 16C и 16D также представлены результаты, полученные на дублированных образцах. На фиг. 16A и 16B у pRSK1 выявлен относительно слабый сигнал в клетках A375 по сравнению с другими маркерами. Тестировали другое антитело к pRSK1-S380 из Cell Signaling (кат. № 11989) тестировали, но детектируемого сигнала не получили (данные не показаны). На фиг. 16C и 16D pCRAF-338 давала минимальный сигнал.

[0034] Фиг. 17A-D представляют собой группу изображений, демонстрирующий анализ вестерн-блоттинга передачи сигналов MAPK в линии клеток колоректальной карциномы человека (клетки HCT116) через 4 часа после обработки различными концентрациями (в нМ) BVD-523, дабрафениба (Даб) и траметиниба (Трам). На каждую дорожку, за исключением тех, где указано иначе, внесено всего по 40 мкг белка. В этом эксперименте собирали дублированные образцы. Фиг. 17A и 17B демонстрируют результаты, полученные на дублированных образцах. Подобным образом, на фиг. 17C и 17D также представлены результаты, полученные на дублированных образцах. На фиг. 17A-17B, уровни pRSK1 в клетках HCT116 выглядят очень низкими, а на фиг. 17C и 17D, сигнал pCRAF-338 также был очень слабым.

[0035] Фиг. 18A-D представляют собой группу изображений, демонстрирующих анализ вестерн-блоттинга белков клеточного цикла и апоптоз в клетках меланомы A375 через 24 часа после обработки различными концентрациями (в нМ) BVD-523 ("BVD523"), траметиниба ("трам") и/или дабрафениба ("Даб"), как обозначено. На каждую дорожку, за исключением тех, где указано иначе, внесено всего по 50 мкг белка. В этом эксперименте собирали дублированные образцы. Фиг. 18A и 18B демонстрируют результаты, полученные на дублированных образцах. Подобным образом, на фиг. 18C и 18D также представлены результаты, полученные на дублированных образцах. На фиг. 18A и 18B не видно ни одной полосы размера, соответствующего расщепленной PARP (89 кДа).

[0036] Фиг. 19 представляет собой гистограмму, демонстрирующую жизнеспособность клеток A375 через 96 часов инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 30 нМ AZ628 (ингибитор RAF) или 3 нМ дабрафенибом. Показатели по Блиссу представлены в желтых рамках.

[0037] Фиг. 20 представляет собой гистограмму, демонстрирующую каспазную активность в клетках A375 через 24 часа инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 30 нМ AZ628 или 3 нМ дабрафенибом.

[0038] Фиг. 21 представляет собой гистограмму, демонстрирующую каспазную активность в клетках A375 через 48 часов инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 30 нМ AZ628 или 3 нМ дабрафенибом.

[0039] Фиг. 22 представляет собой гистограмму, демонстрирующую жизнеспособность клеток HCT116 через 96 часов инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 3 мкМ ABT-263. Показатели по Блиссу представлены в желтых рамках.

[0040] Фиг. 23 представляет собой гистограмму, демонстрирующую каспазную активность в клетках HCT116 через 24 часа инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 3 мкМ ABT-263.

[0041] Фиг. 24 представляет собой гистограмму, демонстрирующую каспазную активность в клетках HCT116 через 48 часов инкубации с различными количествами BVD-523 или BVD-523 в комбинации с 3 мкМ ABT-263.

[0042] Фиг. 25 представляет собой блок-схему, демонстрирующую протокол увеличения дозы, используемый в настоящем документе.

[0043] На фиг. 26 представлены индивидуальные временные интервалы до конечных точек для мышей в исследовании.

[0044] На фиг. 27 представлен средний рост опухоли (фиг. 27A) и диаграмма Каплана-Мейера (фиг. 27B) для исследования.

[0045] На фиг. 28A-28D представлен средний рост опухоли в различных группах мышей, которым вводили комбинации дабрафениба/BVD-523, по сравнению с монотерапией.

[0046] На фиг. 29 представлен процент изменения средней массы тела, начиная с суток 1, в исследовании in vivo.

[0047] На фиг. 30 схематически представлены сигнальный путь митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK).

[0048] Фиг. 31A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации AZ628/траметиниба в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 31B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации AZ628/траметиниба. Фиг. 31C и 31D демонстрируют % жизнеспособности при обработке AZ628 и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 31E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке AZ628/траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0049] Фиг. 32A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации AZ628/BVD-523 в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 32B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации AZ628/BVD-523. Фиг. 32C и 32D демонстрируют % жизнеспособности при обработке AZ628 и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 32E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке AZ628/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0050] Фиг. 33A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации сорафениба/траметиниба в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 33B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации сорафениба/траметиниба. Фиг. 33C и 33D демонстрируют % жизнеспособности при обработке сорафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 33E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке сорафенибом/траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0051] Фиг. 34A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации сорафениба/BVD-523 в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 34B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации сорафениба/BVD-523. Фиг. 34C и 34D демонстрируют % жизнеспособности при обработке сорафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 34E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке сорафенибом/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0052] Фиг. 35A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/траметиниба в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 35B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/траметиниба. Фиг. 35C и 35D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 35E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом/траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0053] Фиг. 36A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/BVD-523 в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 36B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 36C и 36D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 36E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках HCT116 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0054] Фиг. 37A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации AZ628/BVD-523 в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 37B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации AZ628/BVD-523. Фиг. 37C и 37D демонстрируют % жизнеспособности при обработке AZ628 и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 37E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке AZ628/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0055] Фиг. 38A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации сорафениба/траметиниба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 38B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации сорафениба/траметиниба. Фиг. 38C и 38D демонстрируют % жизнеспособности при обработке сорафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 38E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке сорафенибом/траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0056] Фиг. 39A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации сорафениба/BVD-523 в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 39B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации сорафениба/BVD-523. Фиг. 39C и 39D демонстрируют % жизнеспособности при обработке сорафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 39E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке сорафенибом/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0057] Фиг. 40A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/траметиниба в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 40B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/траметиниба. Фиг. 4°C и 40D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и траметинибом в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 40E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом/траметинибом относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0058] Фиг. 41A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/BVD-523 в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. Фиг. 41B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 41C и 41D демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue. На фиг. 41E представлен % жизнеспособности при комбинированной обработке дабрафенибом/BVD-523 относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375 с использованием анализа жизнеспособности клеток с Alamar Blue.

[0059] На фиг. 42 представлены результаты анализов пролиферации с единственным средством в клетках A375 (фиг. 42A - ФИГ. 42F) и G-361 (фиг. 42G - ФИГ. 42L). Результаты пролиферации представлены для обработки дабрафенибом (фиг. 42A и ФИГ. 42G), вемурафенибом (фиг. 42B и ФИГ. 42H), TAK-632 (фиг. 42C и ФИГ. 42I), BVD-523 (фиг. 42D и ФИГ. 42J), SCH772984 (фиг. 42E и ФИГ. 42K) и паклитакселом (фиг. 42F и ФИГ. 42L).

[0060] Фиг. 43A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/BVD-523 в клетках A375. Фиг. 43B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 43C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 43D и 43E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0061] Фиг. 44A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/SCH772984 в клетках A375. Фиг. 43B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации дабрафениба/SCH772984. Фиг. 43C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/SCH772984. Фиг. 43D и 43E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0062] Фиг. 45A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации вемурафениба/BVD-523 в клетках A375. Фиг. 45B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации вемурафениба/BVD-523. Фиг. 45C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации вемурафениба/BVD-523. Фиг. 45D и 45E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке вемурафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0063] Фиг. 46A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации вемурафениба/SCH772984 в клетках A375. Фиг. 46B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации вемурафениба/SCH772984. Фиг. 46C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации вемурафениба/SCH772984. Фиг. 46D и 46E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке вемурафенибом и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0064] Фиг. 47A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации TAK-632/BVD-523 в клетках A375. Фиг. 47B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации TAK-632/BVD-523. Фиг. 47C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации TAK-632/BVD-523. Фиг. 47D и 47E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке TAK-632 и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0065] Фиг. 48A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации TAK-632/SCH772984 в клетках A375. Фиг. 48B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации TAK-632/SCH772984. Фиг. 48C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации TAK-632/SCH772984. Фиг. 48D и 48E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке TAK-632 и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках A375.

[0066] Фиг. 49A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/BVD-523 в клетках G-361. Фиг. 49B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 49C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/BVD-523. Фиг. 49D и 49E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0067] Фиг. 50A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации дабрафениба/SCH772984 в клетках G-361. Фиг. 50B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации дабрафениба/SCH772984. Фиг. 5°C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации дабрафениба/SCH772984. Фиг. 50D и 50E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке дабрафенибом и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0068] Фиг. 51A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации вемурафениба/BVD-523 в клетках G-361. Фиг. 51B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации вемурафениба/BVD-523. Фиг. 51C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации вемурафениба/BVD-523. Фиг. 51D и 51E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке вемурафенибом и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0069] Фиг. 52A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации вемурафениба/SCH772984 в клетках G-361. Фиг. 52B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации вемурафениба/SCH772984. Фиг. 52C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации вемурафениба/SCH772984. Фиг. 52D и 52E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке вемурафенибом и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0070] Фиг. 53A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации TAK-632/BVD-523 в клетках G-361. Фиг. 53B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации TAK-632/BVD-523. Фиг. 53C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации TAK-632/BVD-523. Фиг. 53D и 53E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке TAK-632 и BVD-523 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0071] Фиг. 54A представляет собой матрицу доз, демонстрирующую % ингибирования комбинации TAK-632/SCH772984 в клетках G-361. Фиг. 54B представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Леве для комбинации TAK-632/SCH772984. Фиг. 54C представляет собой матрицу доз, демонстрирующую приращение по Блиссу для комбинации TAK-632/SCH772984. Фиг. 54D и 54E, соответственно, демонстрируют % жизнеспособности при обработке TAK-632 и SCH772984 в качестве единственного средства относительно контролей, обработанных только DMSO, в клетках G-361.

[0072] На фиг. 55A представлены показатели синергии для тестируемых комбинаций в клетках A375 и G-361. На фиг. 55B представлена диаграмма значений, представленных на фиг. 55A.

[0073] На фиг. 56A представлены объемы по Леве для тестируемых комбинаций в клетках A375 и G-361. На фиг. 56B представлена диаграмма значений, представленных на фиг. 56A.

[0074] На фиг. 57A представлены объемы по Блиссу для тестируемых комбинаций в клетках A375 и G-361. На фиг. 57B представлена диаграмма значений, представленных на фиг. 57A.

[0075] На фиг. 58 представлены результаты для комбинации BVD-523 и SCH772984. На фиг. 58A представлена матрица доз, демонстрирующая ингибирование (%) для комбинации в клетках A375. ФИГ. 58B - ФИГ. 58C демонстрируют результаты анализов пролиферации с единственным средством для комбинации в 58A. На фиг. 58D представлено приращение по Леве для комбинации в 58A, и на фиг. 58E представлено приращение по Блиссу для комбинации в 58A.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0076] Один из вариантов осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли.

[0077] Как используют в настоящем документе, термины "лечить", "лечение", "лечебное средство" и их грамматические варианты означают обеспечение индивидуума протоколом, схемой лечения, способом или лекарственным средством, при которых у этого индивидуума, например, пациента, желательно получить физиологический ответ или результат. В частности, способы и композиции по настоящему изобретению можно использовать для замедления развития симптомов заболевания или задержки начала заболевания или патологического состояния, или остановки прогрессирования развития заболевания. Однако так как не каждый подвергаемый лечению индивидуум может отвечать на конкретные протокол лечения, схему лечения, способ или лекарственное средство, лечение не требует, чтобы желаемый физиологический ответ или результат достигался у каждого индивидуума или группы индивидуумов, например, группы пациентов. Таким образом, данные индивидуум или группа индивидуумов, например, группа пациентов, могут не отвечать или неадекватно отвечать на лечебное средство.

[0078] Как используют в настоящем документе, термины "улучшить состояние", "улучшение состояния" и их грамматические варианты означают снижение тяжести симптомов заболевания у индивидуума.

[0079] Как используют в настоящем документе, "индивидуум" представляет собой млекопитающее, предпочтительно, человека. В дополнение к людям, категории млекопитающих в объеме настоящего изобретения включают, например, сельскохозяйственных животных, домашних животных, лабораторных животных и т.д. Некоторые примеры сельскохозяйственных животных включают коров, свиней, лошадей, коз и т.д. Некоторые примеры домашних животных включают собак, кошек и т.д. Некоторые примеры лабораторных животных включают приматов, крыс, мышей, кроликов, морских свинок и т.д.

[0080] По настоящему изобретению BVD-523 представляет собой соединение формулы (I):

и его фармацевтически приемлемые соли. BVD-523 можно синтезировать способами, описанными, например, в патенте США № 7354939. Энантиомеры и рацемические смеси обоих энантиомеров BVD-523 также включены в объем настоящего изобретения. BVD-523 представляет собой ингибитор ERK1/2 с механизмом действия, который, по предположениям, является, например, уникальным и отличным от некоторых других ингибиторов ERK1/2, таких как SCH772984. Например, другие ингибиторы ERK1/2, такие как SCH772984, ингибируют аутофосфорилирование ERK (Morris et al., 2013), тога как BVD-523 допускает аутофосфорилирование ERK, при этом все еще ингибируя ERK (фиг. 18).

[0081] Как используют в настоящем документе, "ингибитор RAF" означает вещества, которые (i) непосредственно взаимодействуют с RAF, например, связываясь с RAF и (ii) снижают экспрессию или активность RAF. ингибиторы RAF можно классифицировать на два типа соответственно их способам связывания. Как используют в настоящем документе, ингибиторы RAF "типа 1" представляют собой ингибиторы, которые направлены к участкам связывания АТФ киназой в ее активной конформации. ингибиторы RAF "2 типа" представляют собой ингибиторы, которые преимущественно связываются с неактивной конформацией киназы. Неограничивающие примеры ингибиторов RAF типа 1 включают:

соединение 7 (Li et al., 2010),

соединение 9 (там же.),

соединение 10 (там же),

соединение 13 (там же),

соединение 14 (там же), дабрафениб (GlaxoSmithKline), GDC-0879 (Genentech), L-779450 B-Raf (Merck), PLX3202 (Plexxikon), PLX4720 (Plexxikon), SB-590885 (GlaxoSmithKline), SB-699393 (GlaxoSmithKline), вемурафениб (Plexxikon), их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания. Предпочтительно, ингибитор RAF типа 1 представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

[0082] В одном из аспектов этого варианта осуществления индивидуум со злокачественной опухолью несет соматическую мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK. Предпочтительно индивидуум устойчив к лечению ингибитором сигнального пути, не являющимся ERK MAPK.

[0083] Как используют в настоящем документе, "соматическая мутация" означает изменение, происходящее в любой клетке, не предопределенной стать половой клеткой. Мутация может представлять собой, например, замену, делецию, вставку или слияние. В таблице 1 ниже представлен обзор распределения мутаций BRAF, как представлено в базе данных центра Сэнгера.

Таблица 1
Обзор распределения мутаций BRAF Тип мутации Мутантные образцы Процент Нонсенс-замена 23 0,07 Миссенс-замена 32955 99,07 Синонимичная замена 80 0,24 Вставка в рамку 25 0,08 Вставка со сдвигом рамки 1 0,00 Делеция в рамке 13 0,04 Делеция со сдвигом рамки 5 0,02 Комплексная 39 0,12 Другие 172 0,52 Всего 33263 100

[0084] Мутации BRAF выявляют приблизительно в 66% меланом (Davies et al., 2002; Brose et al., 2002; Hocket et al., 2007) и в относительно меньшем проценте других злокачественных опухолей, в 36% опухолей щитовидной железы и 10% рака толстого кишечника (Xu et al., 2003; Fransen et al., 2004). Наиболее преобладающая мутация BRAF происходит по аминокислоте 600 протеинкиназы дикого типа (SEQ ID NO:2) с заменой валина глутаминовой кислотой, что приводит к мутантной B-RafV600E, что составляет приблизительно 80% мутаций BRAF (Davies et al., 2002; Hocker et al., 2007). Киназный домен B-RafV600E обладает в 500 раз более высокой киназной активностью по сравнению с базальной активностью B-Raf дикого типа (Wan et al., 2004). Из других мутаций BRAF, идентифицированных при меланоме, частыми также являются V600K и V600D/R, и они составляют 16% и 3% от всех мутаций BRAF, соответственно (Long et al., 2011). Кроме меланомы, мутации BRAF часто возникают во многих других злокачественных опухолях, включая папиллярную карциному щитовидной железы, карциному яичника и колоректальную карциному. (Wellbrock et al., 2004). В одном из исследований, варианты сплайсинга BRAF (с вырезанием экзонов 14 и 15) выявлены в 5/24 (21%) линий клеток колоректального рака (Seth et al., 2009).

[0085] В таблице 2 ниже из базы данных центра Сэнгера представлено распределение и частота мутаций BRAF в опухолях человека.

Таблица 2 Первичная ткань Индивидуальные мутантные образцы Всего индивидуальных образцов % мутантных NS 1071 1788 59,90 Надпочечник 3 155 1,94 Автономные ганглии 3 703 0,43 Желчевыводящие пути 36 684 5,26 Кость 5 284 1,76 Молочная железа 27 2297 1,18 Центральная нервная система 206 3297 6,25 Шейка матки 6 473 1,27 Эндометрий 40 2510 1,59 Глаз 70 732 9,56 Фаллопиева труба 0 2 0 Желудочно-кишечный тракт (неопределенной локализации) 5 514 0,97 Половые пути 4 54 7,41 Гематопоэтическая и лимфоидная ткань 507 5388 9,41 Почка 34 959 3,55 Толстый кишечник 8301 67530 12,29 Печень 18 618 2,91 Легкое 293 11249 2,60 Оболочки головного мозга 0 74 0 Пищевод 5 927 0,54 Яичник 312 3922 7,96 Поджелудочная железа 16 1089 1,47 Паращитовидная железа 0 20 0 Половой член 0 28 0 Брюшина 0 37 0 Гипофиз 1 115 0,87 Плацента 0 2 0 Плевра 3 148 2,03 Предстательная железа 25 1483 1,69 Слюнная железа 1 131 0,76 Кожа 7245 16943 42,76 Тонкий кишечник 12 251 4,78 Мягкие ткани 45 2160 2,08 Желудок 11 1473 0,75 Семенник 7 251 2,79 Тимус 0 50 0 Щитовидная железа 14929 38002 39,28 Верхние отделы желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей 14 1352 1,04 Мочевыводящие пути 8 612 1,31 Влагалище 0 1 0 Женские наружные половые органы 0 3 0 Всего 33263 168311 19,76

[0086] В таблице 3 ниже продемонстрированы выбранные последовательности нуклеиновых кислот и аминокислот BRAF. Эти последовательности можно использовать в способах идентификации индивидуумов с мутантным генотипом BRAF (так, как в приведенных ниже способах).

Таблица 3 SEQ ID NO Нуклеиновая кислота или полипептид Организм Другая информация 1 Нуклеиновая кислота Человек 2 Полипептид Человек 3 Нуклеиновая кислота Крыса (Rattus norvegicus) 4 Полипептид Крыса (Rattus norvegicus) 5 Нуклеиновая кислота Мышь, Mus musculus 6 Полипептид Мышь, Mus musculus 7 Нуклеиновая кислота Кролик, Oryctolagus cuniculus 8 Полипептид Кролик, Oryctolagus cuniculus 9 Нуклеиновая кислота Морская свинка, Cavia porcellus 10 Полипептид Морская свинка, Cavia porcellus 11 Нуклеиновая кислота Собака, Canis lupus familiaris вариант x1 12 Полипептид Собака, Canis lupus familiaris вариант x1 13 Нуклеиновая кислота Собака, Canis lupus familiaris вариант x2 14 Полипептид Собака, Canis lupus familiaris вариант x2 15 Нуклеиновая кислота Кошка, Felis catus 16 Полипептид Кошка, Felis catus 17 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X1 18 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X1 19 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X2 20 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X2 21 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X3 22 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X3 23 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X4 24 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X4 25 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X5 26 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X5 27 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X6 28 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X6 29 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X7 30 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X7 31 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X8 32 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X8 33 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X9 34 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X9 35 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X10 36 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X10 37 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант X11 38 Полипептид Корова, Bos taurus вариант X11 39 Нуклеиновая кислота Корова, Bos taurus вариант 2 40 Полипептид Корова, Bos taurus вариант 2 41 Нуклеиновая кислота Лошадь, Equus caballus 42 Полипептид Лошадь, Equus caballus 43 Нуклеиновая кислота Курица, Gallus gallus 44 Полипептид Курица, Gallus gallus

[0087] Способы идентификации мутаций в нуклеиновых кислотах, таких как указанные выше гены BRAF, известны в данной области. Нуклеиновые кислоты можно получать из биологических образцов. По настоящему изобретению биологические образцы в качестве неограничивающих примеров включают кровь, плазму, мочу, кожу, слюну и биопсию. Биологические образцы получают у индивидуума стандартными способами и способами, известными в данной области.

[0088] Неограничивающие примеры способов идентификации мутаций включают анализы ПЦР, секвенирование, захват гибридов, захват в растворе, инвертируемые молекулярные зонды, флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) и их сочетания.

[0089] В данной области известно множество способов секвенирования. Они в качестве неограничивающих примеров включают секвенирование по Сэнгеру (также обозначаемое как секвенирование с дидезоксинуклеотидами) и различные способы секвенирования посредством синтеза (SBS), как описано, например, в Metzker 2005, секвенирования посредством гибридизации, посредством лигирования (например, WO 2005021786), посредством разрушения (например, патенты США №№ 5622824 и 6140053) и секвенирование через нанопоры (которое коммерчески доступно в Oxford Nanopore Technologies, UK). В способах глубокого секвенирования данный нуклеотид в последовательности в процессе секвенирования считывается более одного раза. Способы глубокого секвенирования описаны например, в патентной публикации США № 20120264632 и международной патентной публикации № WO2012125848.

[0090] Способы детекции мутаций на основе ПЦР известны в данной области, и в них применяют ПЦР-амплификацию, когда для каждой последовательности-мишени в образце существует соответствующая пара уникальных, специфичных для этой последовательности праймеров. Например, способ полимеразной цепной реакции-полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) обеспечивает быструю детекцию мутаций после амплификации геномных последовательностей посредством ПЦР. Мутацию выявляют посредством расщепления специфическими рестрикционными эндонуклеазами и идентифицируют посредством электрофореза. См., например, Ota et al., 2007. Мутации также можно детектировать с применениям ПЦР с детекцией в реальном времени. См., например, публикацию международной заявки № WO2012046981.

[0091] Способы захвата гибридов известны в данной области и описаны, например, в патентной публикации США № 20130203632 и патентах США №№ 8389219 и 8288520. Эти способы основаны на селективной гибридизации геномных областей-мишеней со сконструированными исследователем олигонуклеотидами. Гибридизацию можно проводить с олигонуклеотидами, иммобилизованными на микропанели с высокой или низкой плотностью (захват на чипе), или она может представлять собой гибридизацию в жидкой фазе с олигонуклеотидами, модифицированными лигандом (например, биотином), который затем можно иммобилизовать на твердой поверхности, такой как гранула (захват в растворе).

[0092] Способы с инвертируемыми молекулярными зондами (MIP) известны в данной области и описаны, например, в Absalan et al., 2008. В таких способах используют молекулы MIP, которые представляют собой особые "замыкающиеся в кольцо" зонды (Nilsson et al., 1994) для генотипирования. Молекула MIP представляет собой линейный олигонуклеотид, который содержит особые области, универсальные последовательности, участки рестрикции и последовательность-метку (индекс) (16-22 п.н.). В таких способах гибридизуется MIP непосредственно вокруг исследуемого генетического маркера/SNP. В способе с MIP также можно использовать ряд наборов "замыкающихся в кольцо" зондов, которые гибридизуются с геномной ДНК параллельно (Hardenbol et al., 2003). В случае точного совпадения гомологичные геномные области подвергаются лигированию, проходя инверсию конфигурации (как свидетельствует название способа) и формируя циклическую молекулу. После первой рестрикции все молекулы амплифицируют с универсальными праймерами. Ампликоны снова рестрицируют с получением коротких фрагментов для гибридизации на микропанели. Полученные короткие фрагменты метят и посредством последовательности-метки гибридизуют с cTag (комплементарная цепь для индекса) на панели. После формирования дуплекса метка-cTag детектируют сигнал.

[0093] Как используют в настоящем документе, быть "устойчивым" к лечению ингибитором сигнального пути MAPK означает, что эффективность одного или нескольких ингибиторов сигнального пути MAPK при лечении злокачественной опухоли снижена.

[0094] Как используют в настоящем документе, "ингибитор сигнального пути митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK)" представляют собой любое вещество, которое снижает активность, экспрессию или фосфорилирование белков в сигнальном пути MAPK, что приводит к уменьшению клеточного роста или увеличению гибели клеток.

[0095] Обзор каскадов MAPK млекопитающих представлен на фиг. 30. Подробности сигнальных путей MAPK рассмотрены, например, в Akinleye et al., 2013. В кратком изложении, в отношении модуля ERK1/2 на фиг. 30 (светло-фиолетовая рамка), сигнальный каскад MAPK 1/2 активируется связыванием лиганда с рецепторными тирозинкиназами (RTK). Активированные рецепторы рекрутируют и фосфорилируют адаптерные белки Grb2 и SOS, которые затем взаимодействуют с мембраносвязанной ГТФазой Ras и вызывают ее активацию. В своей активированной ГТФ-связанной форме, Ras рекрутирует и активирует киназы Raf (A-Raf, B-Raf и C-Raf/RaF-1). Активированные киназы Raf активируют MAPK 1/2 (MKK1/2), которые в свою очередь катализируют фосфорилирование треониновых и тирозиновых остатков в активируемой последовательности Thr-Glu-Tyr ERK1/2. В отношении модуля JNK/p38 (желтая рамка на фиг. 30), расположенные выше по каскаду киназы, MAP3K, такие как MEKK1/4, ASK1/2 и MLK1/2/3, активируют MAP2K3/6 (MKK3/6), MAP2K4 (MKK4) и MAP2K7 (MKK7). Эти MAP2K затем активируют протеинкиназы JNK, включая JNK1, JNK2 и JNK3, а также p38 α/β/γ/δ. Для осуществления их функций JNK активируют несколько факторов транскрипции, включая c-Jun, ATF-2, NF-ATc1, HSF-1 и STAT3. В отношении модуля ERK5 (синяя рамка на фиг. 30), киназы выше MAP2K5 (MKK5) представляют собой MEKK2 и MEKK3. Наиболее охарактеризованной расположенной ниже по каскаду целью MEK5 является ERK5, также известная как большая MAP-киназа 1 (BMK1) ввиду того, что ее размер вдвое превышает другие MAPK.

[0096] Неограничивающие примеры ингибиторов сигнального пути MAPK включают ингибиторы RAS, RAF ингибиторы, ингибиторы MEK, ингибиторы ERK1/2, их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания.

[0097] Как используют в настоящем документе, a "ингибитор RAS" означает вещества, которые (i) непосредственно взаимодействуют с RAS, например, связываясь с RAS, и (ii) снижают экспрессию или активность RAS. Неограничивающие иллюстративные ингибиторы RAS в качестве неограничивающих примеров включают ингибиторы фарнезилтрансферазы (например, такие как типифарниб и лонафарниб), содержащие фарнезильную группу низкомолекулярные соединения (например, такие как салирасиб и TLN-4601), DCAI, как описано в Maurer (Maurer et al., 2012), Kobe0065 и Kobe2602, как описано в Shima (Shima et al., 2013), HBS 3 (Patgiri et al., 2011) и AIK-4 (Allinky).

[0098] Как используют в настоящем документе, "ингибитор RAF" означает вещества, которые (i) непосредственно взаимодействуют с RAF, например, связываясь с RAF, и (ii) снижают экспрессию или активность RAF, например, таких как A-RAF, B-RAF и C-RAF (Raf-1). Неограничивающие иллюстративные ингибиторы RAF включают:

соединение 7

(Li et al., 2010),

соединение 9

(там же),

соединение 10

(там же),

соединение 13

(там же),

соединение 14

(там же),

соединение 15

(там же),

соединение 16

(там же),

соединение 18

(там же),

соединение 19

(там же),

соединение 20

(там же),

соединение 21

(там же),

соединение 22

(там же),

соединение 23

(там же),

соединение 24

(там же),

соединение 25

(там же),

соединение 26

(там же),

соединение 27

(там же),

соединение 28

(там же),

соединение 30

(там же),

соединение 31

(там же),

соединение 32

(там же),

соединение 33

(там же),

соединение 34

(там же),

соединение 35

(там же),

соединение 36

(там же),

соединение 37

(там же),

соединение 38

(там же),

соединение 39

(там же),

соединение 40

(там же),

AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитор b-raf (Sareum), ингибитор киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 523 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF (Liu et al., 2007), CTT239065 (Institute of Cancer Research), дабрафениб (GSK2118436), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GDC-0879 (Genentech), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), L779450 (Merck), LBT613 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LGX-818 (Novartis), пазопаниб (GlaxoSmithKline), PLX3202 (Plexxikon), PLX4720 (Plexxikon), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениб (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), SB-590885 (GlaxoSmithKline), SB699393 (GlaxoSmithKline), сорафениб (Onyx Pharmaceuticals), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), вемурафениб (RG7204 или PLX4032) (Daiichi Sankyo), XL-281 (Exelixis), ZM-336372 (AstraZeneca), их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания.

[0099] Как используют в настоящем документе, "ингибитор MEK" означает вещества, которые (i) непосредственно взаимодействуют с MEK, например, связываясь с MEK и (ii) снижают экспрессию или активность MEK. Таким образом, ингибиторы, которые действуют выше MEK, такие как ингибиторы RAS и ингибиторы RAF, не являются ингибиторами MEF по настоящему изобретению. Неограничивающие примеры ингибиторов MEK включают токсин сибирской язвы, антрохинолол (Golden Biotechnology), ARRY-142886 (6-(4-бром-2-хлорфениламино)-7-фтор-3-метил-3H-бензоимидазол-5-карбоновую кислоту (2-гидроксиэтокси)амид) (Array BioPharma), ARRY-438162 (Array BioPharma), AS-1940477 (Astellas), AS-703988 (Merck KGaA), бентамапимод (Merck KGaA), BI-847325 (Boehringer Ingelheim), E-6201 (Eisai), GDC-0623 (Hoffmann-La Roche), GDC-0973 (кобиметиниб) (Hoffmann-La Roche), L783277 (Merck), часть фактора летальности токсина сибирской язвы, MEK162 (Array BioPharma), PD 098059 (2-(2'-амино-3'-метоксифенил)-оксанафталин-4-он) (Pfizer), PD 184352 (CI-1040) (Pfizer), PD-0325901 (Pfizer), пимасертиб (Santhera Pharmaceuticals), RDEA119 (Ardea Biosciences/Bayer), рефаметиниб (AstraZeneca), RG422 (Chugai Pharmaceutical Co.), RO092210 (Roche), RO4987655 (Hoffmann-La Roche), RO5126766 (Hoffmann-La Roche), селуметиниб (AZD6244) (AstraZeneca), SL327 (Sigma), TAK-733 (Takeda), траметиниб (Japan Tobacco), U0126 (1,4-диамино-2,3-дициано-1,4-бис(2-аминофенилтио)бутадиен) (Sigma), WX-554 (Wilex), полипептид YopJ (Mittal et al., 2010), их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания.

[0100] Как используют в настоящем документе, "ингибитор ERK1/2" означает вещества, которые (i) непосредственно взаимодействуют с ERK1 и/или ERK2, например, связываясь с ERK1/2 и (ii) снижают экспрессию или активность протеинкиназ ERK1 и/или ERK2. Таким образом, ингибиторы, которые действуют выше ERK1/2, такие как ингибиторы MEK и ингибиторы RAF, не являются ингибиторами ERK1/2 по настоящему изобретению. Неограничивающие примеры ингибиторов ERK1/2 включают AEZS-131 (Aeterna Zentaris), AEZS-136 (Aeterna Zentaris), BVD-523, SCH-722984 (Merck & Co.), SCH-772984 (Merck & Co.), SCH-900353 (MK-8353) (Merck & Co.), их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания.

[0101] В другом аспекте этого варианта осуществления способ дополнительно включает введение индивидууму по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, эффективного для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли. Дополнительное терапевтическое средство можно выбирать из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

[0102] Как используют в настоящем документе, "антитело" включает природные иммуноглобулины, а также неприродные иммуноглобулины, включая, например, одноцепочечные антитела, химерные антитела (например, гуманизированные антитела мыши) и гетероконъюгированные антитела (например, биспецифические антитела). Фрагменты антител включают фрагменты, которые связывают антигены (например, Fab', F(ab')2, Fab, Fv и rIgG). Также см., например, Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York (1998). Термин антитело также включает двухвалентные или биспецифические молекулы, диатела, триотела и тетратела. Кроме того, термин "антитело" включает поликлональные и моноклональные антитела.

[0103] Примеры терапевтических антител, которые можно использовать по настоящему изобретению включают ритуксимаб (ритуксан), цетуксимаб (эрбитукс), бевацизумаб (авастин) и ибритумомаб (зевалин).

[0104] Цитотоксические средства по настоящему изобретению включают повреждающие ДНК средства, антиметаболиты, средства против микротрубочек, антибиотические средства и т.д. Повреждающие ДНК средства включают алкилирующие средства, средства на основе платины, интеркаляторы и ингибиторы репликации ДНК. Неограничивающие примеры алкилирующих ДНК средств включают циклофосфамид, мехлоретамин, урамустин, мелфалан, хлорамбуцил, ифосфамид, кармустин, ломустин, стрептозоцин, бусульфан, темозоломид, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания. Неограничивающие примеры средств на основе платины включают цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, недаплатин, сатраплатин, тетранитрат триплатина, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания. Неограничивающие примеры интеркаляторов включают доксорубицин, даунорубицин, идарубицин, митоксантрон, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания. Неограничивающие примеры ингибиторов репликации ДНК включают иринотекан, топотекан, амсакрин, этопозид, фосфат этопозида, тенипозид, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания. Антиметаболиты включают антагонисты фолатов, такие как метотрексат и пеметрексед, антагонисты пуринов, такие как 6-меркаптопурин, дакарбазин и флударабин, и антагонисты пиримидинов, такие как 5-фторурацил, арабинозилцитозин, капецитабин, гемцитабин, децитабин, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания. Средства против микротрубочек в качестве неограничивающих примеров включают алкалоиды барвинка, паклитаксел (таксол®), доцетаксел (таксотер®) и иксабепилон (иксемпра®). Антибиотические средства в качестве неограничивающих примеров включают актиномицин, антрациклины, валрубицин, эпирубицин, блеомицин, пликамицин, митомицин, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания.

[0105] Цитотоксические средства по настоящему изобретению также включают ингибитор сигнального пути PI3K/Akt. Неограничивающие примеры ингибиторов сигнального пути PI3K/Akt включают A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319 (Amgen, Thousand Oaks, CA), AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-дион), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-дион), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-дион), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряд бензимидазолов, Genentech (Roche Holdings Inc., South San Francisco, CA), BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120 (Gilead Sciences, Foster City, CA), CAL-129 (Gilead Sciences), CAL-130 (Gilead Sciences), CAL-253 (Gilead Sciences), CAL-263 (Gilead Sciences), CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432 (Chroma Therapeutics, Ltd., Abingdon, UK), FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101) (Gilead Sciences), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Honokiol, IC87114 (Gilead Science), IPI-145 (Intellikine Inc.), KAR-4139 (Karus Therapeutics, Chilworth, UK), KAR-4141 (Karus Therapeutics), KIN-1 (Karus Therapeutics), KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Miltefosine, дигидрохлорид MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорид налтриндола, OXY-111A (NormOxys Inc., Brighton, MA), перифосин, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), ингибитор киназы PI3 дельта, Merck KGaA (Merck & Co., Whitehouse Station, NJ), ингибиторы киназы PI3 дельта, Genentech (Roche Holdings Inc.), ингибиторы киназы PI3 дельта, Incozen (Incozen Therapeutics, Pvt. Ltd., Hydrabad, India), ингибиторы киназы PI3 дельта-2, Incozen (Incozen Therapeutics), ингибитор киназы PI3, Roche-4 (Roche Holdings Inc.), ингибиторы киназы PI3, Roche (Roche Holdings Inc.), ингибиторы киназы PI3, Roche-5 (Roche Holdings Inc.), ингибиторы PI3-альфа/дельта, Pathway Therapeutics (Pathway Therapeutics Ltd., South San Francisco, CA), ингибиторы PI3 дельта, Cellzome (Cellzome AG, Heidelberg, Germany), ингибиторы PI3 дельта, Intellikine (Intellikine Inc., La Jolla, CA), ингибиторы PI3 дельта, Pathway Therapeutics-1 (Pathway Therapeutics Ltd.), ингибиторы PI3 дельта, Pathway Therapeutics-2 (Pathway Therapeutics Ltd.), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Cellzome (Cellzome AG), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Cellzome (Cellzome AG), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Intellikine (Intellikine Inc.), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Intellikine (Intellikine Inc.), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Pathway Therapeutics (Pathway Therapeutics Ltd.), ингибиторы PI3 дельта/гамма, Pathway Therapeutics (Pathway Therapeutics Ltd.), ингибитор PI3 гамма Evotec (Evotec), ингибитор PI3 гамма, Cellzome (Cellzome AG), ингибиторы PI3 гамма, Pathway Therapeutics (Pathway Therapeutics Ltd.), ингибиторы PI3K дельта/гамма, Intellikine-1 (Intellikine Inc.), ингибиторы PI3K дельта/гамма, Intellikine-1 (Intellikine Inc.), пиктилисиб (Roche Holdings Inc.), PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980 (Pfizer, New York, NY), SF-1126 (Semafore Pharmaceuticals, Indianapolis, IN), SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумин, TG100-115 (Targegen Inc., San Diego, CA), трицирибин, X-339 (Xcovery, West Palm Beach, FL), XL-499 (Evotech, Hamburg, Germany), их фармацевтически приемлемые соли и их сочетания.

[0106] По настоящему изобретению термин "токсин" означает антигенное отравляющее вещество или яд растительного или животного происхождения. Примером является дифтерийный токсин или его части.

[0107] По настоящему изобретению термин "радионуклид" означает радиоактивное вещество, вводимое пациенту, например, внутривенно или перорально, после чего оно посредством нормального метаболизма пациента проникает в орган- или ткань-мишень, где оно производит локальное облучение в течение короткого периода времени. Примеры радионуклидов в качестве неограничивающих примеров включают I-125, At-211, Lu-177, Cu-67, I-131, Sm-153, Re-186, P-32, Re-188, In-114m и Y-90.

[0108] По настоящему изобретению термин "иммуномодулятор" означает вещество, которое изменяет иммунный ответ посредством повышения или снижения способности иммунной системы продуцировать антитела или сенсибилизировать клетки, которые распознают и реагируют с антигеном, который инициировал их продукцию. Иммуномодуляторы могут быть рекомбинантными, синтетическими или природными препаратами и включают цитокины, кортикостероиды, цитотоксические средства, тимозин и иммуноглобулины. Некоторые иммуномодуляторы присутствуют в организме в природе, и некоторые из них доступны в фармакологических препаратах. Примеры иммуномодуляторов в качестве неограничивающих примеров включают гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), интерфероны, имиквимод и фракции клеточных мембран бактерий, IL-2, IL-7, IL-12, CCL3, CCL26, CXCL7 и синтетический цитозинфосфогуанозин (CpG).

[0109] По настоящему изобретению термин "фотоактивное терапевтическое средство" означает соединения и композиции, которые активируются при воздействии света. Определенные примеры фотоактивных терапевтических средств описаны, например, в патентной заявке США с серийным № 2011/0152230 A1, "Photoactive Metal Nitrosyls For Blood Pressure Regulation And Cancer Therapy".

[0110] По настоящему изобретению термин "радиосенсибилизирующее средство" означает соединение, которое делает опухолевые клетки более чувствительными к лучевой терапии. Примеры радиосенсибилизирующих средств включают мисонидазол, метронидазол, тирапазамин и транс-кроцетинат натрия.

[0111] По настоящему изобретению термин "гормон" означает вещество, высвобождаемое клетками в одном отделе организма, которое действует на клетки в другом отделе организма. Примеры гормонов в качестве неограничивающих примеров включают простагландины, лейкотриены, простациклин, тромбоксан, амилин, антимюллеров гормон, адипонектин, адренокортикотропный гормон, ангиотензиноген, ангиотензин, вазопрессин, атриопептин, натрийуретический пептид головного мозга, кальцитонин, холецистокинин, кортикотропин-высвобождающий гормон, энкефалин, эндотелин, эритропоэтин, фолликулостимулирующий гормон, галанин, гастрин, грелин, глюкагон, гонадотропин-высвобождающий гормон, гормон высвобождения гормона роста, хорионический гонадотропин человека, плацентарный лактоген человека, гормон роста, ингибин, инсулин, соматомедин, лептин, липотропин, лютеинизирующий гормон, меланоцит-стимулирующий гормон, мотилин, орексин, окситоцин, панкреатический полипептид, паратиреоидный гормон, пролактин, пролактин-высвобождающий гормон, релаксин, ренин, секретин, соматостатин, тромбопоэтин, стимулирующий щитовидную железу гормон, тестостерон, дегидроэпиандростерон, андростендион, дигидротестостерон, альдостерон, эстрадиол, эстрон, эстриол, кортизол, прогестерон, кальцитриол и кальцидиол.

[0112] Определенные соединения препятствуют активности определенных гормонов или останавливают продукцию определенных гормонов. Эти препятствующие гормонам соединения в качестве неограничивающих примеров включают тамоксифен (нолвадекс®), анастрозол (аримидекс®), летрозол (фемару®) и фулвестрант (фаслодекс®). Такие соединения также входят в понятие гормон по настоящему изобретению.

[0113] Как используют в настоящем документе, средство "против ангиогенеза" означает вещество, которое снижает или ингибирует рост новых кровеносных сосудов, например, такое как ингибитор фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и ингибитор миграции клеток эндотелия. Средства против ангиогенеза в качестве неограничивающих примеров включают 2-метоксиэстрадиол, ангиостатин, бевацизумаб, получаемый из хряща фактор ингибирования ангиогенеза, эндостатин, IFN-α, IL-12, итраконазол, линомид, тромбоцитарный фактор-4, пролактин, SU5416, сурамин, тасквинимод, текогалан, тетратиомолибдат, талидомид, тромбоспондин, тромбоспондин, TNP-470, зив-афлиберцепт, их фармацевтически приемлемые соли, пролекарственные средства и сочетания.

[0114] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно. Как используют в настоящем документе, "синергическое" означает большее, чем аддитивное. Синергическое действие можно определять посредством различных анализов, известных в данной области, включая в качестве неограничивающих примеров анализы, описываемые в настоящем документе, такие как анализ приращения по Блиссу.

[0115] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) BVD-523 или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли.

[0116] Подходящие и предпочтительные индивидуумы являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления способы можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные выше. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0117] В одном из аспектов этого варианта осуществления BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль вводят в форме фармацевтической композиции, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

[0118] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль вводят в форме фармацевтической композиции, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

[0119] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления способ дополнительно включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, предпочтительно ингибитора сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0120] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0121] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уничтожения злокачественной клетки. Этот способ включает приведение злокачественной клетки в контакт с эффективным количеством (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль.

[0122] Подходящие и предпочтительные ингибиторы RAF типа 1 являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления уничтожение злокачественной клетки можно проводить у злокачественных клеток с различным мутантным происхождением и/или у клеток, которые характеризуются, как описано выше. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0123] В одном из аспектов этого варианта осуществления способы можно проводить in vitro или in vivo, и можно использовать для уничтожения злокачественных клеток, например, посредством цитолиза злокачественных клеток в клетках типов злокачественных опухолей, описываемых в настоящем документе.

[0124] В другом аспекте этого варианта осуществления злокачественная клетка представляет собой злокачественную клетку млекопитающего. Предпочтительно, злокачественную клетку млекопитающего получают у млекопитающего, выбранного из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных. Более предпочтительно, злокачественная клетка млекопитающего представляет собой злокачественную клетку человека.

[0125] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления приведение злокачественной клетки в контакт с первым и вторым средствами против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с приведением злокачественной клетки в контакт с любым из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0126] В другом аспекте этого варианта осуществления способ дополнительно включает приведение злокачественной клетки в контакт по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством, предпочтительно ингибитором сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0127] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления приведение злокачественной клетки в контакт с первым и вторым средствами против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с приведением злокачественной клетки в контакт с любым из этих средств против злокачественных опухолей отдельно. В этом варианте осуществления "приведение в контакт" означает приведение BVD-523 и ингибиторов RAF типа 1 и, необязательно, одного или нескольких дополнительных терапевтических средств в непосредственную близость со злокачественными клетками. Это можно проводить общепринятыми способами доставки лекарственных средств млекопитающим или в условиях in vitro, например, помещая BVD-523 и ингибиторы RAF типа 1 и, необязательно, другие терапевтические средства в среды для культивирования, в которых находятся злокачественные клетки.

[0128] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой набор для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот набор содержит эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, упакованные вместе с инструкциями по их применению.

[0129] Наборы также могут включать подходящие контейнеры для хранения, например, ампулы, флаконы, пробирки и т.д., для каждого средства против злокачественной опухоли по настоящему изобретению (которое может, например, находиться в форме фармацевтических композиций) и других реагентов, например, буферов, буферных солевых растворов и т.д., для применения при введении средства против злокачественных опухолей индивидуумам. Средства против злокачественных опухолей по изобретению и другие реагенты можно предоставлять в наборах в любой удобной форме, например, такой как в форме раствора или в форме порошка. Дополнительно наборы могут содержать упаковочный контейнер, необязательно с одним или несколькими отделениями для содержания фармацевтической композиции и других необязательных реагентов.

[0130] Подходящие и предпочтительные индивидуумы и ингибиторы RAF типа 1 являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления набор можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные в настоящем документе. Способы идентификации таких мутаций являются такими, как указано выше.

[0131] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления набор дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, предпочтительно ингибитор сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0132] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0133] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Эта фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно. Дополнительно эта фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

[0134] Подходящие и предпочтительные индивидуумы и ингибиторы RAF типа 1 являются такими, как описано в настоящем документе. Фармацевтические композиции по изобретению можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные в настоящем документе. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0135] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, предпочтительно ингибитор сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0136] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот способ включает введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли. Предпочтительно, второе средство против злокачественной опухоли представляет собой регорафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

[0137] В этом варианте осуществления подходящие и предпочтительные индивидуумы являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления способы можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные выше. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0138] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления способ дополнительно включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, предпочтительно ингибитора сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0139] В другом аспекте этого варианта осуществления введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0140] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ уничтожения злокачественной клетки. Этот способ включает приведение злокачественной клетки в контакт с эффективным количеством (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний. Предпочтительно, второе средство против злокачественной опухоли представляет собой регорафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

[0141] Подходящие и предпочтительные злокачественные клетки являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления уничтожение злокачественных клеток можно проводить у злокачественных клеток с различным мутантных происхождением и/или у злокачественных клеток, характеризуемых так, как описано выше. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0142] Способы этого варианта осуществления, который можно проводить in vitro или in vivo, можно использовать для уничтожения злокачественных клеток, например, посредством цитолиза злокачественных клеток в клетках типов злокачественных опухолей, описываемых в настоящем документе.

[0143] В одном из аспектов этого варианта осуществления злокачественная клетка представляет собой злокачественную клетку млекопитающего. Предпочтительно, злокачественную клетку млекопитающего получают у млекопитающего, выбранного из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных. Более предпочтительно, злокачественная клетка млекопитающего представляет собой злокачественную клетку человека.

[0144] В другом аспекте этого варианта осуществления способ дополнительно включает введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, предпочтительно ингибитора сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0145] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления приведение злокачественной клетки в контакт с первым и вторым средствами против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с приведением злокачественной клетки в контакт с любым из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0146] В этом варианте осуществления "приведение в контакт" означает приведение BVD-523 и ингибиторов RAF и, необязательно, одного или нескольких дополнительных терапевтических средств в непосредственную близость со злокачественными клетками. Это можно проводить общепринятыми способами доставки лекарственных средств млекопитающим или в условиях in vitro, например, помещая BVD-523 и ингибиторы RAF и, необязательно, другие терапевтические средства в среды для культивирования, в которых находятся злокачественные клетки.

[0147] Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой набор для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Этот набор содержит эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, упакованные вместе с инструкциями по их применению. Предпочтительно, второе средство против злокачественной опухоли представляет собой регорафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

[0148] В этом варианте осуществления подходящие и предпочтительные индивидуумы являются такими, как описано в настоящем документе. В этом варианте осуществления набор можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные в настоящем документе. Способы идентификации таких мутаций являются такими, как указано выше.

[0149] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления набор дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, предпочтительно ингибитор сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0150] В другом аспекте этого варианта осуществления введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0151] Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию для лечения или смягчения действия злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Эта фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF, выбранный из группы, состоящей из AAL881 (Novartis); AB-024 (Ambit Biosciences), ARQ-736 (ArQule), ARQ-761 (ArQule), AZ628 (Axon Medchem BV), BeiGene-283 (BeiGene), BIIB-024 (MLN 2480) (Sunesis & Takeda), ингибитора b-raf (Sareum), ингибитора киназы BRAF (Selexagen Therapeutics), миРНК 313 (tacaccagcaagctagatgca) и 253 (cctatcgttagagtcttcctg) BRAF, CTT239065 (Institute of Cancer Research), DP-4978 (Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573 (Hanmi), GW-5074 (Sigma Aldrich), ISIS 5132 (Novartis), LErafAON (NeoPharm, Inc.), LBT613 (Novartis), LGX-818 (Novartis), пазопаниба (GlaxoSmithKline), PLX5568 (Plexxikon), RAF-265 (Novartis), RAF-365 (Novartis), регорафениба (Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766 (Hoffmann-La Roche), TAK 632 (Takeda), TL-241 (Teligene), XL-281 (Exelixis), их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

[0152] В этом варианте осуществления подходящие и предпочтительные индивидуумы являются такими, как описано в настоящем документе. Фармацевтические композиции по изобретению можно использовать для лечения злокачественных опухолей, описанных выше, включая злокачественные опухоли с мутантным происхождением, определенные в настоящем документе. Способы идентификации таких мутаций также являются такими, как указано выше.

[0153] В дополнительном аспекте этого варианта осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, предпочтительно ингибитор сигнального пути PI3K/Akt, как описано в настоящем документе.

[0154] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут находиться в стандартной дозированной форме, содержащей оба средства против злокачественной опухоли. В другом аспекте этого варианта осуществления первое средство против злокачественной опухоли находится в первой стандартной дозированной форме, а второе средство против злокачественной опухоли находится во второй стандартной дозированной форме, отдельной от первой.

[0155] Первое и второе средства против злокачественных опухолей можно вводить индивидууму, одновременно или в различные моменты времени по назначению лечащего врача. Если первое и второе средства против злокачественных опухолей вводят в различные моменты времени, например, посредством последовательного введения, первое средство против злокачественной опухоли можно вводить индивидууму перед вторым средством против злокачественной опухоли. Альтернативно, второе средство против злокачественной опухоли можно вводить индивидууму перед первым средством против злокачественной опухоли.

[0156] По настоящему изобретению "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" средства против злокачественной опухоли по изобретению, включая содержащие его фармацевтические композиции, которые описаны в настоящем документе, представляет собой количество такого средства или композиции, которого при введении индивидууму достаточно для получения полезных или желаемых результатов, как описано в настоящем документе. Эффективные дозированные формы, способы введения и величины доз можно определять эмпирически, и получение таких определений известно специалистам в данной области. Специалистам в данной области понятно, что величина дозы варьирует в зависимости от маршрута введения, скорости выведения, длительности лечения, характеристик любых других вводимых лекарственных средств, возраста, размеров и вида млекопитающего, например, человека, и подобных факторов, хорошо известных в областях медицины и ветеринарной медицины. Как правило, подходящей дозой средства или композиции по изобретению является такое количество средства или композиции, которое представляет собой наименьшую дозу эффективную для обеспечения желаемого действия. Эффективную дозу средства или композиции по настоящему изобретению можно вводить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более поддоз, вводимых раздельно с подходящими интервалами на протяжении суток.

[0157] Подходящим неограничивающим примером дозировки BVD-523, ингибитора RAF или другого средства против злокачественной опухоли по настоящему изобретению является приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 2400 мг/кг в сутки, например, приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 1200 мг/кг в сутки, от 75 мг/кг в сутки до приблизительно 300 мг/кг в сутки, включая приблизительно от 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг в сутки. Другие типичные дозировки таких средств включают приблизительно 1 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35 мг/кг, 40 мг/кг, 45 мг/кг, 50 мг/кг, 60 мг/кг, 70 мг/кг, 75 мг/кг, 80 мг/кг, 90 мг/кг, 100 мг/кг, 125 мг/кг, 150 мг/кг, 175 мг/кг, 200 мг/кг, 250 мг/кг, 300 мг/кг, 400 мг/кг, 500 мг/кг, 600 мг/кг, 700 мг/кг, 800 мг/кг, 900 мг/кг, 1000 мг/кг, 1100 мг/кг, 1200 мг/кг, 1300 мг/кг, 1400 мг/кг, 1500 мг/кг, 1600 мг/кг, 1700 мг/кг, 1800 мг/кг, 1900 мг/кг, 2000 мг/кг, 2100 мг/кг, 2200 мг/кг, и 2300 мг/кг в сутки. Эффективную дозу BVD-523, ингибиторов RAF или других средств против злокачественных опухолей, описываемых в настоящем документе, можно вводить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более поддоз, вводимых раздельно с подходящими интервалами на протяжении суток.

[0158] BVD-523, ингибиторы RAF или другие средства против злокачественных опухолей или содержащие их фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить любым желаемым и эффективным способом: для перорального введения, или в виде мази или капель для местного введения в глаза, или для парентерального или другого введения любым подходящим способом, таким как интраперитонеальное, подкожное, топическое, интрадермальное, ингаляция, внутрилегочное, ректальное, вагинальное, сублингвальное, внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, интратекальное или внутрилимфатическое. Кроме того, BVD-523, ингибиторы RAF или другие средства против злокачественных опухолей или содержащие их фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить в сочетании с другими лечебными средствами. При желании BVD-523, ингибиторы RAF или другие средства против злокачественных опухолей или содержащие их фармацевтические композиции можно инкапсулировать или иным образом защищать от желудочного или других секретов.

[0159] Фармацевтические композиции по изобретению содержат один или несколько активных ингредиентов, например, средств против злокачественных опухолей, в смеси с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями и, необязательно, с одним или несколькими другими соединениями, лекарственными средствами, ингредиентами и/или веществами. Вне зависимости от выбранного маршрута введения средства/соединения по настоящему изобретению формулируют в фармацевтически приемлемые дозированные формы общепринятыми способами, известными специалистам в данной области. См., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy (21^st Edition, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA.).

[0160] Фармацевтически приемлемые разбавители или носители хорошо известны в данной области (см., например, Remington, The Science and Practice of Pharmacy (21^st Edition, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA.) и The National Formulary (American Pharmaceutical Association, Washington, D.C.)) и включают сахара (например, лактозу, сахарозу, маннит и сорбит), крахмалы, препараты целлюлозы, фосфаты кальция (например, дифосфат кальция, трифосфат кальция и гидрофосфат кальция), цитрат натрия, воду, водные растворы (например, солевое раствор, инъекционный хлорид натрия, раствор Рингера, декстрозу для инъекций, декстрозу и хлорид натрия для инъекций инъекция, раствор Рингера с лактатом для инъекций), спирты (например, этиловый спирт, пропиловый спирт и бензиловый спирт), полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль), сложные органические эфиры (например, этилолеат и триглицериды), биоразлагаемые полимеры (например, полилактид-полигликолид, сложные поли(полиортоэфиры) и поли(ангидриды)), эластомерные матриксы, липосомы, микросферы, масла (например, кукурузное, зародышей пшеницы, оливковое, касторовое, кунжутное, хлопковое и арахисовое), масло какао, воска (например, воска для суппозиториев), парафины, соединения кремния, тальк, силикат и т.д. Каждый фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, используемый в фармацевтической композиции по изобретению, должен быть "приемлемым" в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и отсутствия вреда индивидууму. Разбавители или носители, подходящие для выбранной дозированной формы и назначенного пути введения, хорошо известны в данной области, и специалист в данной области может определить приемлемые разбавители или носители для выбранных дозированной формы и способа введения.

[0161] Фармацевтическая композиции по изобретению необязательно может содержать дополнительные ингредиенты и/или вещества широко используемые в фармацевтических композициях. Эти ингредиенты и вещества хорошо известны в данной области и включают (1) наполнители или средства увеличения объема, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; (2) связывающие средства, такие как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза, сахароза и гуммиарабик; (3) увлажнители, такие как глицерин; (4) дезинтегрирующие средства, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные силикаты, крахмалгликолят натрия, сшитые карбоксиметилцеллюлоза натрия и карбонат натрия; (5) замедляющие растворение средства, такие как парафин; (6) ускорители всасывания, такие как четвертичные аммонийные соединения; (7) средства для смачивания, такие как цетиловый спирт и моностеарат глицерина; (8) абсорбенты, такие как каолин и бентонитовая глина; (9) смазочные средства, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли и лаурилсульфат натрия; (10) суспендирующие средства, такие как этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сорбитановые сложные эфиры, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант; (11) буферные средства; (12) эксципиенты, такие как лактоза, молочные сахара, полиэтиленгликоли, животные и растительные жиры, масла, воска, парафины, масло какао, крахмалы, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоль, соединения кремния, бентониты, кремниевая кислота, тальк, салицилат, оксид цинка, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидный порошок; (13) инертные разбавители, такие как вода или другие растворители; (14) консерванты; (15) поверхностно-активные средства; (16) диспергирующие средства; (17) средства, контролирующие высвобождение или замедляющие всасывание, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза, другие полимерные матриксы, биоразлагаемые полимеры, липосомы, микросферы, моностеарат алюминия, желатин и воска; (18) средства, снижающие прозрачность; (19) адъюванты; (20) средства для смачивания; (21) эмульгирующие и суспендирующие средства; (22) солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, проростков пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот сорбитана; (23) пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан; (24) антиоксиданты; (25) средства обеспечения изотоничности состава с кровью назначенного реципиента, такие как сахара и хлорид натрия; (26) загустители; (27) покрытия, такие как лецитин; и (28) подсластители, вкусо-ароматические добавки, красители, отдушки и консерванты. Каждый такой ингредиент или вещество должны быть "приемлемыми" в смысле совместимости с другими ингредиентами состава и отсутствия вреда индивидууму. Ингредиенты и вещества, подходящие для выбранной дозированной формы и назначенного пути введения, хорошо известны в данной области, и специалист в данной области может определить приемлемые ингредиенты и вещества для выбранных дозированной формы и способа введения.

[0162] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, подходящие для перорального введение, могут находиться в форме капсул, крахмальных капсул, пилюль, таблеток, порошков, гранул, растворов или суспендирования в водной или неводной жидкости, жидкой эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле, эликсире или сиропе, пастилки, болюсов, электуария или пасты. Эти составы можно получать известными в данной области способами, например, посредством общепринятых способов дражирования, смешивания, гранулирования или лиофилизации.

[0163] Твердые лекарственные формы для перорального введения (капсулы, таблетки, пилюли, драже, порошки, гранулы и т.п.) можно получать, например, смешивая активный ингредиент(ы) с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями и, необязательно, одним или несколькими наполнителями, увеличителями объема, связывающими средствами, увлажнителями, дезинтегрирующими средствами, средствами замедления растворения, ускорителями всасывания, средствами для смачивания, абсорбентами, смазочными средствами и/или красителями. Твердые композиции сходного типа можно использовать в качестве наполнителей в мягких и твердых наполняемых желатиновых капсулах с использованием подходящего эксципиента. Таблетки можно получать посредством прессования или формовки, необязательно с одним или несколькими дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки можно получать с использованием подходящего связывающего средства, смазочного средства, инертного разбавителя, консерванта, дезинтегранта, поверхностно активного или диспергирующего средства. Формованные таблетки можно получать посредством формования в подходящем устройстве. Таблетки и другие твердые дозированные формы, такие как драже, капсулы, пилюли и гранулы, необязательно могут быть шероховатыми или полученными с использованием покрытий и оболочек, таких как растворяющиеся в кишечнике покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области формулирования фармацевтических средств. Также их можно формулировать так, чтобы обеспечивать замедленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента. Их можно стерилизовать, например, посредством фильтрования через удерживающий бактерии фильтр. Также эти композиции необязательно могут содержать средства, снижающие прозрачность и могут представлять собой композиции, которые высвобождают активный ингредиент только, или предпочтительно, в определенном отделе желудочно-кишечного тракта, необязательно, в замедленном режиме. Также активный ингредиент может находиться в микроинкапсулированной форме.

[0164] Жидкие дозированные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Жидкие дозированные формы могут содержать подходящие инертные разбавители, широко используемые в данной области. Кроме инертных разбавителей пероральные композиции также могут содержать вспомогательные средства, такие как средства для смачивания, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители, вкусо-ароматические добавки, красители, отдушки и консерванты. Суспензии могут содержать суспендирующие средства.

[0165] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению для ректального или вагинального введения могут быть представлены в виде суппозиториев, которые можно получать, смешивая один или несколько активных ингредиентов с одним или несколькими подходящими нераздражающими разбавителями или носителями, которые являются твердыми при комнатной температуре, но жидкими при температуре тела и, таким образом, плавятся в полости прямой кишки или влагалища и высвобождают активное соединение. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, которые подходят для вагинального введения, также включают пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пенные или спрейные составы, содержащие такие фармацевтически приемлемые разбавители или носители, для которых в данной области известно, что они являются приемлемыми.

[0166] Дозированные формы для топического или трансдермального введения включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри, капли и ингаляторы. Активное средство(а)/соединение(я) можно смешивать в стерильных условиях с подходящим фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Мази, пасты, кремы и гели могут содержать эксципиенты. Порошки и спреи могут содержать эксципиенты и пропелленты.

[0167] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, подходящие для парентерального введения, могут содержать одно или несколько средств/соединений в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми стерильными изотоническими водными или неводными растворами, дисперсиями, суспензиями или эмульсиями или со стерильными порошками, которые можно восстанавливать в стерильных инъецируемых растворах или дисперсиях непосредственно перед применением, которые могут содержать подходящие антиоксиданты, буферы, растворители, которые делают состав изотоническим с кровью назначенного реципиента, или суспендирующие средства или загустители. Должную текучесть можно поддерживать, например, с использованием материалов покрытий, поддерживая требуемый размер частиц в случае дисперсий, и используя поверхностно-активные вещества. Эти фармацевтические композиции также могут содержать подходящие вспомогательные средства, такие как средства для смачивания, эмульгаторы и диспергирующие средства. Желательным также может являться включение средств придания изотоничности. Кроме того, посредством включения средств, задерживающих всасывание, можно обеспечивать пролонгированное всасывание инъецируемой фармацевтической формы.

[0168] В некоторых случаях, для продления действия лекарственного средства (например, фармацевтического состава), желательно замедлить его всасывание после подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно обеспечивать, используя жидкую суспензию кристаллического или аморфного материала с плохой растворимостью в воде.

[0169] Тогда скорость всасывания активного средства/лекарственного средства зависит от его скорости растворения, которая в свою очередь может зависеть от размеров кристаллов и формы кристаллов. Альтернативно, задержанное всасывание парентерально вводимого средства/лекарственного средства можно обеспечивать, растворяя или суспендируя активное средство/лекарственное средство в масляном носителе. Можно получать формы инъецируемых депо, формируя микроинкапсулированные матриксы активного ингредиента в биоразлагаемых полимерах. Скорость высвобождения активного ингредиента можно контролировать как функцию отношения активного ингредиента к полимеру и характера конкретного используемого полимера. Составы инъецируемых депо также получают, заключая лекарственное средство в липосомы или микроэмульсии, которые совместимы с тканями организма. Инъецируемые материалы можно стерилизовать, например, посредством фильтрации через удерживающий бактерии фильтр.

[0170] Составы можно предоставлять в однодозовых или многодозовых герметизированных контейнерах, например, ампулах и флаконах, и можно хранить в лиофилизированном состоянии, требующем только добавления непосредственно перед применением стерильного жидкого разбавителя или носителя, например, воды для инъекций. Получаемые для немедленной инъекции растворы и суспензии можно получать из стерильных порошков, гранул и таблеток описанных выше типов.

[0171] Настоящее изобретение относится к комбинациям, для которых показано, что они усиливают действие ингибиторов ERK. В настоящем документе заявители также продемонстрировали, что подобным образом синергичны комбинации различных ингибиторов ERK. Таким образом, предусмотрено, что действие комбинаций, описываемых в настоящем документе, можно дополнительно улучшать, используя один или несколько дополнительных ингибиторов ERK. Таким образом, определенные варианты осуществления настоящего изобретения включают один или несколько дополнительных ингибиторов ERK.

[0172] Для дальнейшей иллюстрации способов по настоящему изобретению предоставлены приводимые ниже примеры. Эти примеры являются исключительно иллюстративными и никоим образом не предназначены для ограничения объема изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

[0173] Линии злокачественных клеток поддерживали в культуре клеток в условиях со стандартными средами и сыворотками. Для исследований с увеличением дозы клетки A375 разделяли, выращивали приблизительно до 40-60% конфлуэнтности, а затем обрабатывали исходной дозой указанного лекарственного средства. В таблице 4 представлен список обработок лекарственными средствами с увеличением дозы.

Таблица 4
Список обработок с увеличением дозы Обработка Ингибитор 1 Траметиниб (MEKi) 2 Дабрафениб (BRAFi) 3 BVD-523 (ERKi) 4 Дабрафениб (BRAFi)+Траметиниб (MEKi) 5 Дабрафениб (BRAFi)+BVD-523 (ERKi) 6 Траметиниб (MEKi)+BVD-523 (ERKi)

[0174] Увеличение дозы с единственным применяемым средством проводили на основе Little et al., 2011, и это описано на фиг. 25. Затем клеткам позволяли расти до 70-90% конфлуэнтности и разделяли. Коэффициенты разделения соблюдали настолько "нормальными" насколько возможно и обоснованно согласовывали с лечебными средствами (например, минимум 50% нормального коэффициента разделения родителей). Среду обновляли каждые 3-4 суток. Когда клетки снова достигали приблизительно 40-60% конфлуэнтности, дозу увеличивали. В случае, когда окно 40-60% пропускали, клетки снова разделяли и дозировали после того, как они достигали 40-60% конфлуэнтности. Среду снова обновляли каждые 3-4 суток. Процесс повторяли столько, сколько было необходимо (фиг. 25).

[0175] Для обработок одним средством начальные концентрации и увеличение доз проводили, начиная приблизительно от IC₅₀, проводя увеличение с небольшими приращениями или осторожно для первых 4-5 доз, удваивая дозу, увеличивая с таким же приращением для следующих 4 доз, затем переходя на 1,5-кратное увеличение концентрации для последующих доз.

[0176] Для комбинированных обработок начальные концентрации и увеличение доз проводили, начиная с половины приблизительно IC₅₀ каждого соединения (анализ комбинаций свидетельствовал о том, что это приводит приблизительно к интервалу ингибирования 40-70%), проводя увеличение в соответствии с анализом одного средства (т.е. проводя начальное удвоение, а затем увеличивая с тем же приращением в течение 4 доз, затем переходя на 1,5-кратное увеличение концентрации). В таблице 5 представлено проектируемое увеличение доз с использованием этих схем.

Таблица 5
Проектируемое увеличение доз - месяц 1 Даб/Трам Даб/523 Трам/523 Доза Трам (нМ) Даб (нМ) BVD-523 (мкМ) Даб (нМ) Трам (нМ) Даб (нМ) 523 (мкМ) Трам (нМ) 523 (мкМ) 1 1 5 0,16 2,5 0,5 2,5 0,08 0,5 0,08 2 2 10 0,32 5 1 5 0,16 1 0,16 3 3 15 0,48 7,5 1,5 7,5 0,24 1,5 0,24 4 4 20 0,64 10 2 10 0,32 2 0,32 5 5 25 0,80 12,5 2,5 12,5 0,40 2,5 0,40 6 8 38 1,2 19 4 19 0,6 4 0,6 7 11 56 1,8 28 6 28 0,9 6 0,9 8 17 84 2,7 42 8 42 1,4 8 1,4 9 25 127 4,1 63 13 63 2,0 13 2,0 10 38 190 6,1 95 19 95 3,0 19 3,0 11 57 285 9,1 142 28 142 4,6 28 4,6 12 85 427 13,7 214 43 214 6,8 43 6,8 13 128 641 20,5 320 64 320 10,3 64 10,3 14 192 961 30,8 481 96 481 15,4 96 15,4 15 288 1442 46,1 721 144 721 23,1 144 23,1 16 432 2162 69,2 1081 216 1081 34,6 216 34,6 17 649 3244 103,8 1622 324 1622 51,9 324 51,9 18 973 4865 155,7 2433 487 2433 77,8 487 77,8 19 1460 7298 233,5 3649 730 3649 116,8 730 116,8 20 2189 10947 350,3 5474 1095 5474 175,2 1095 175,2

[0177] Клональные популяции устойчивых клеток получали из популяций устойчивых клеток посредством лимитирующих разведений.

[0178] Для отслеживания изменении в чувствительности к увеличиваемым дозам средств(а) использовали анализы пролиферации через подходящие временные интервалы (например, каждый месяц, хотя выбор интервалов зависит от достаточных количеств доступных клеток). Для анализов пролиферации клетки высевали в 96-луночные планшеты в количестве 3000 клеток на лунку в среду DMEM, не содержащую лекарственного средства, содержащую 10% FBS, и позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением соединений или контроля носителя. Соединения получали из исходных растворов в DMSO с получением диапазона конечных концентраций, как представлено на фиг. 2A-H. Конечная концентрация DMSO являлось постоянной, составляя 0,1%. Тестируемые соединения инкубировали с клетками в течение 96 часов при 37°C и 5% CO₂ в увлажненной атмосфере. Затем добавляли 10% Alamar Blue (об./об.) и инкубировали в течение 4 часов и детектировали флуоресцентный продукт с использованием планшетного спектрофотометра FLUOstar BMG. Вычитали средние фоновые значения для сред, не содержащих тестируемых соединений, и данные анализировали с использованием 4-параметрического логистического уравнения в GraphPad Prism. В качестве положительного контроля использовали паклитаксел.

[0179] Анализы пролиферации в течение месяца 1 начинали на сутки 28 с использованием клеток, растущих в концентрациях каждого средства, указанных в таблице 6.

Таблица 6
Исходные концентрации лекарственных средств, используемых в анализах пролиферации - месяц 1 Линия Даб Трам BVD-523 Исходная - - - Трам - 2 нМ - Даб 15 нМ - - BVD-523 - - 0,48 мкМ Трам+Даб 5 нМ 1 нМ - Даб+BVD-523 7,5 нМ - 0,24 мкМ Трам+BVD-523 - 1 нМ 0,16 мкМ

[0180] Анализы пролиферации в течение месяца 2 начинали на сутки 56 с использованием клеток, растущих в концентрациях каждого средства, указанных в таблице 7.

Таблица 7
Исходные концентрации лекарственных средств, используемых в анализах пролиферации - месяц 2 Линия Даб Трам BVD-523 Исходная - - - Трам - 8 нМ - Даб 127 нМ - - BVD-523 - - 0,8 мкМ Трам+Даб 10 нМ 2 нМ - Даб+BVD-523 12,5 нМ - 0,4 мкМ Трам+BVD-523 - 2 нМ 0,32 мкМ

[0181] В конце месяца 3 периода увеличения дозы культуры поддерживали при наибольшей концентрации в течение 2 недель с последующим конечным циклом анализов пролиферации и потенциальным клонированием единичных клеток. Так как анализы пролиферации/клонирования единичных клеток требовали активно пролиферирующих клеток, для обработок, где клетки при наибольшей концентрации пролиферировали очень медленно или для которых только недавно поднимали дозу, также поддерживали запасную культуру при наименьшей концентрации (таблица 8). Для обработки BVD-523, где клетки по наблюдением почти полностью останавливали рост и при наибольшей концентрации (1,8 мкМ) выглядели особенно неустойчивыми, культуры в течение периода 2 недель поддерживали при наименьшей концентрации.

Таблица 8
Подробности обработок при культивировании при фиксированной концентрации в течение 2 недель Обработка Ингибитор Культура 1 Запасная культура 1 Трам 160 нМ 80 нМ 2 Даб 3,2 мкМ - 3 BVD-523 1,2 мкМ 0,8 мкМ 4 Даб+Трам D: 160 нМ T: 30 нМ D: 80 нМ T: 16 нМ 5 Даб+BVD-523 D: 42 нМ 523: 1,4 мкМ D: 28 нМ 523: 0,9 мкМ 6 Трам+BVD-523 T: 4 нМ 523: 0,6 мкМ T: 2,5 нМ 523: 0,4 мкМ

[0182] В анализах пролиферации в течение месяца 3 использовали клетки, растущие в концентрациях каждого средства, указанных в таблице 9.

Таблица 9
Исходные концентрации лекарственных средств, используемых в анализах пролиферации - месяц 3 Линия Даб Трам BVD-523 Исходная - - - Трам - 160 нМ - Даб 3,2 мкМ - - BVD-523 - - 1,2 мкМ Трам+Даб 80 нМ 16 нМ - Даб+BVD-523 28 нМ - 0,9 мкМ Трам+BVD-523 - 2,5 нМ 0,4 мкМ

[0183] Для исследований комбинаций клетки A375 (ATCC) высевали в трех повторениях в 96-луночные планшеты при плотности клеток 3000 клеток/лунку в DMEM, дополненную 10% FBS, и позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением тестируемого соединения или контроля носителя. Комбинации тестировали с использованием матрицы доз 10×8 с конечной концентрацией DMSO 0,2%. Далее проводили анализирующий период инкубации в течение 96 час с последующим добавлением 10% Alamar Blue (об./об.) и 4 часами инкубации с последующим считыванием на флуоресцентном планшетном спектрофотометре. После считывания показателей Alamar Blue смесь среды/Alamar Blue удаляли и добавляли 100 мкл CellTiter-Glo/PBS (1:1) и планшеты обрабатывали по инструкциям производителя (Promega). Перед анализом данных вычитали средние фоновые значения для сред, не содержащих тестируемых соединений. Затем использовали аддитивную модель Блисса.

[0184] В кратком изложении, для комбинированного ингибирования теоретически рассчитывали значения парциального ингибирования с использованием уравнения C_bliss=A+B - (A×B), где A и B представляют собой парциальные ингибирования, получаемые отдельно для лекарственного средства A или отдельно для лекарственного средства B при указанных концентрациях. C_bliss представляет собой парциальное ингибирование, которое можно ожидать, если комбинация двух лекарственных средств была бы точно аддитивной. Значения C_bliss вычитают из экспериментально наблюдаемых значений парциального ингибирования с получением значения "приращения по Блиссу". Значения приращения по Блиссу, большие 0, указывают на синергию, тогда как значения, меньшие 0, указывают на антагонизм. Значения приращений по Блиссу графически изображают в виде тепловых карт ± SD.

[0185] Данные для единственных средств и комбинаций также представляют в виде кривых зависимостей "доза-эффект", получаемых в GraphPad Prism (изображаемых с использованием % жизнеспособности относительно контролей, обработанных только DMSO,).

[0186] Для сфокусированных исследований комбинаций анализы жизнеспособности с Alamar Blue проводили, как описано выше для исследований комбинаций. Кроме того, проводили анализы с каспазой-Glo 3/7. В кратком изложении, клетки HCT116 высевали в трех повторениях в 96-луночные белые планшеты при плотности клеток 5000 клеток/лунку в среду McCoy 5A с 10% FBS. Клетки A375 высевали при плотности 5000 клеток/лунку в среду DMEM с 10% FBS. Клеткам позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением указанного количества тестируемого соединения или контроля носителя. Конечная концентрация DMSO составляла 0,2%, а в качестве положительного контроля добавляли 800 нМ стауроспорин. Использовали анализирующие периоды инкубации 24 и 48 часов. Затем добавляли каспазу-Glo® 3/7 50% (об./об.), планшеты перемешивали в течение 5 минут на круговой качалке и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с последующим считыванием на люминесцентном планшетном спектрофотометре. Перед анализом данных вычитали средние фоновые значения для сред, не содержащих тестируемых соединений.

Пример 2

Увеличение дозы и анализы пролиферации - месяц 1

Ход увеличения дозы - месяц 1

[0187] У клеток A375 проводили увеличение дозы с использованием BVD-523, дабрафениба и траметиниба в качестве единственных средств или в комбинации. В течение первого месяца дозы увеличивали с небольшими приращениями. За исключением заметного снижения скорости роста, клетки в основном хорошо переносили увеличение дозы и в течение месяца 2 дозы планировали увеличивать более агрессивно с использованием больших приращений. На фиг. 1A-C представлен ход исследований с увеличением дозы в течение месяца 1.

Результаты анализов пролиферации - месяц 1

[0188] Анализы пролиферации проводили для оценки ответа линий клеток, для которых проводили увеличение дозы, на обработку BVD-523, дабрафенибом и траметинибом по сравнению с исходной линией клеток.

[0189] На фиг. 2A-H представлены нормализованные и необработанные результаты анализов пролиферации, полученные во время исследований в течение месяца 1. Следует отметить, что различия в максимальных сигналах в контролях DMSO при различных обработках (фиг. 2D-F, 2H) свидетельствуют о различных скоростях роста при различных обработках. Эти различия в анализах пролиферации могут влиять на ответ линий на ингибиторы.

[0190] В таблице 10 представлены данные IC₅₀, полученные в течение месяца 1 исследований.

Таблица 10
Данные IC₅₀ - месяц 1 Соединение Линия клеток, относительные IC₅₀ (нМ) Исх* Трам Даб BVD-523 Даб/Трам Даб/523 Трам/523 Дабрафениб 6 29 Прибли-зительно 161 8 58 68 11 Траметиниб 0,5 2,2 2,5 0,7 3,9 3,1 2,5 BVD-523 189 335 350 268 300 412 263 Паклитаксел 2,2 3,0 3,3 3,4 3,5 3,4 3,4 *Исх=Исходная линия клеток

[0191] Ранее существовали признаки того, что клетки, растущие в присутствии увеличиваемых доз дабрафениба или траметиниба, в качестве единственных средств или в комбинациях, в анализах пролиферации демонстрировали сниженные ответы на эти два средства.

[0192] На ранних этапах месяца 2 скорость роста клеток при обработке только дабрафенибом значительно возрастала относительно ранних этапов месяца 1. Это обеспечивало увеличенную скорость прогрессирования и свидетельствовало о том, что выявляли устойчивость.

Пример 3

Увеличение дозы и анализы пролиферации - месяц 2

Ход увеличения дозы - Месяц 2

[0193] На втором месяце исследований изучали переход большинства обработок на этап, когда дозы увеличивали с большим приращением (в 1,5 раза) по сравнению с исходной фазой небольшого увеличения. Увеличение дозы единственных средств дабрафениба и траметиниба было наибыстрейшим с клетками, растущими в концентрациях, эквивалентных 100×IC₅₀ для исходных клеток (фиг. 3A,B). Увеличение дозы единственного средства BVD-523 по сравнению с дабрафенибом и траметинибом проходило медленнее (фиг. 3C). См. фиг. 3D для сравнения увеличения дозы единственных средств. Клетки с увеличиваемой дозой BVD-523 по сравнению с популяциями с увеличиваемыми дозами дабрафениба и траметиниба выглядели более "неустойчивыми" и наблюдали большее количество плавающих клеток.

[0194] Увеличение доз комбинированных средств проходило медленнее, чем обработки единственным средством. Комбинация BVD-523/траметиниб для предотвращения развития клеток была особенно эффективной.

Результаты анализа пролиферации - месяц 2

[0195] Анализы пролиферации у популяций клеток с увеличиваемыми дозами единственных средств дабрафениба и траметиниба выявили умеренные сдвиги кривых доза-ответ, что свидетельствует о том, что дополнительный период увеличения дозы мог быть благоприятным для дальнейшего обогащения устойчивыми клетками. Что интересно, при анализах пролиферации появились основания, позволяющие предполагать, что клетки, подвергаемые действию BVD-523, при отмене ингибитора росли хуже, возможно указывая на уровень привыкания.

[0196] На фиг. 4A-H представлены нормализованные и необработанные результаты анализов пролиферации, полученные в течение месяца 2 исследований. Следует отметить, что различия в максимальных сигналах в контролях DMSO при различных обработках (фиг. 4D-F, 4H) свидетельствуют о различных скоростях роста при различных обработках. Эти различия в анализах пролиферации могут влиять на ответ линий на ингибиторы.

[0197] На фиг. 5A-H представлены нормализованные и необработанные результаты анализов пролиферации, полученные в течение месяца 2 исследований, с фокусом только на данных об исходной линии и линии BVD-523.

[0198] В таблице 11 представлены данные IC₅₀, полученные в течение месяца 2 исследований. Относительные IC₅₀ определяли на основе подбора кривых по 4 параметрам в Prism.

Таблица 11
Данные IC₅₀ - месяц 2 Соединение Линия клеток, относительные IC₅₀ (нМ) Исх* Тра Даб BVD-523 Даб/Трам Даб/523 Трам/523 Дабрафениб 4,1 6,2 11,5 697 256 218 68 Траметиниб 0,4 0,7 1,1 24,3 12,6 6,2 4,6 BVD-523 187 252 284 1706 561 678 435 Паклитаксел 3,7 8,9 1,9 6,5 4,7 4,2 8,9 *Исх=Исходная линия клеток

Пример 4

Увеличение дозы и анализы пролиферации - месяц 3

Ход увеличения дозы - месяц 3

[0199] На фиг. 6A-C представлено увеличение дозы для единственных средств и комбинации средств для месяца 3 исследований. На фиг. 6D представлено сравнение увеличений дозы для единственных средств.

Результаты анализа пролиферации - месяц 3

[0200] На фиг. 7 представлена оценка роста в анализе пролиферации в лунках с контролем DMSO. На фиг. 8A-D представлены результаты, полученные в течение месяца 3 исследований. На фиг. 9A-D представлены результаты, полученные в течение месяца 3 исследований с фокусом на линиях клеток с единственными лечебными средствами.

[0201] В таблице 12 представлены данные IC₅₀, полученные в течение месяца 3 исследований. Относительные IC₅₀ определяли на основе подбора кривых по 4 параметрам в Prism. Значения IC₅₀ не определяли в линии клеток, для которой увеличение дозы проводили с использованием траметиниба вследствие отсутствия роста при анализе (н.п.: не проводили).

Таблица 12
Данные IC₅₀ - месяц 3 Соединение Линия клеток, относительные IC₅₀ (нМ) Исх* Трам Даб BVD-523 Даб/Трам Даб/523 Трам/523 Дабрафениб 2,1 ND 2,5 18,4 17,9 337 73 Траметиниб 0,2 ND 0,4 1,7 2,7 90 11,2 BVD-523 129 ND 198 433 323 1151 296 Паклитаксел 1,9 ND 1,9 6,5 4,7 4,2 8,9 *Исх=Исходная линия клеток

Пример 5

Результаты исследований комбинаций

[0202] Как и ожидалось, клетки A375, которые несут мутацию BRAF (V600E), были чувствительны к дабрафенибу. Значения IC₅₀ для единственных средств, рассчитанные с использованием Alamar Blue (фиг. 10, 12, 14), для дабрафениба и BVD-523 как правило, были немного меньше по сравнению со значениями, полученными с использованием CellTiter-Glo (фиг. 11, 13, 15). Опубликованные значения IC₅₀ для дабрафениба и траметиниба в анализе CellTiter-Glo в течение 72 часов составляли 28±16 нМ и 5±3 нМ, соответственно (Greger et al., 2012; King et al., 2013) -результаты для единственных средств, приводимые в настоящем документе соответствуют этим значениям. Существовали определенные свидетельства об окне синергии при всех обработках. Отклонения между тремя повторениями были низкими, однако существовали определенные свидетельства пограничных эффектов, которые правдоподобно объясняют видимый усиленный рост, наблюдаемый при некоторых лечебных средствах по сравнению с контролем без лекарственного средства (например, в частности наблюдаемый при комбинации траметиниб/BVD-523). Это делает интерпретацию анализа по Блиссу более сложной, так как для некоторых лечебных средств он может приводить к ложному увеличению уровня синергии.

[0203] Анализы комбинаций повторяли для клеток A375. Кроме того, в контрольном анализе комбинаций использовали клетки HCT116. Результаты этих экспериментов представлены на фиг. 31-41. Активность единственных средств BVD-523, траметиниба и дабрафениба согласовывалась с активностью, описанной в предыдущих исследованиях.

[0204] Клетки HCT116 представляют собой клетки колоректального рака человека с мутациями в KRAS. Дабрафениб и траметиниб являлись антагонистами при рассматриваемых действенных концентрациях. В отличие от этого, траметиниб в широком диапазоне комбинаций с AZ628 и с высокими концентрациями сорафениба демонстрировал синергию. BVD-523 демонстрировал окно синергии и с AZ628, и с сорафенибом.

[0205] В клетках A375 траметиниб демонстрировал сегменты синергии при низких концентрациях дабрафениба и AZ628. BVD-523 демонстрировал окно синергии с низкими концентрациями сорафениба.

Пример 6

BVD-523 изменял маркеры активности и эффекторной функции MAPK-киназ

[0206] Для исследований вестерн-блоттингом клетки HCT116 (5×10⁶) высевали в 10 см чашки в среду McCoy 5A с 10% FBS. Клетки A375 (2,5×10⁶) высевали в 10 см чашки в среду DMEM с 10% FBS. Клеткам позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением указанного количества тестируемого соединения (BVD-523) или контроля носителя. Клетки обрабатывали в течение 4 или 24 часов с последующим выделением цельноклеточных лизатов белков, как указано ниже. Клетки собирали посредством трипсинизации, осаждали и быстро замораживали. Лизаты получали с использованием буфера для RIPA (радиоиммунопреципитационный анализ), очищали посредством центрифугирования и количественно определяли посредством анализа с бицинхониновой кислотой (BCA). 20-50 мкг белка разрешали посредством электрофореза в SDS-PAGE, переносили на мембрану PVDF и исследовали с использованием антител, указанных в таблице 13 (для обработки в течение 4 часов) и в таблице 14 (для обработки в течение 24 часов) ниже.

Таблица 13
Подробное описание антител Антиген Размер (кДа) Поставщик Каталожный № Разве-дение Условия инкубации/
блокировки Вторичные антитела pRSK1/2 pS380 90 Cell Signaling 9335 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRSK1/2 pS380 90 Cell Signaling 11989 1:2000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRSK-T359/S363 90 Millipore 04-419 1:40000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика Тотальный RSK 90 Cell Signaling 9333 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pErk 1/2 42/44 Cell Signaling 9106S 1:500 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши Тотальный ERK 42/44 Cell Signaling 9102 1:2000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика pMEK1/2 45 Cell Signaling 9154 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика Тотальный MEK 45 Cell Signaling 9126 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pS6-pS235 32 Cell Signaling 2211S 1:3000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика Тотальный S6 32 Cell Signaling 2217 1:2000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика DUSP6 48 Cell Signaling 3058S 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика Тотальный CRAF 73 BD Bio-sciences 610152 1:2000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши pCRAF-Ser338 73 Cell Signaling 9427 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRB (Ser780) 105 Cell Signaling 9307 1:2000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика β-актин 42 Sigma A5441 1:500000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши

Таблица 14
Подробное описание антител Антиген Размер (кДа) Поставщик Каталожный № Разве-дение Условия инкубации/
блокировки Вторичные антитела pRB (Ser780) 105 Cell Signaling 9307 1:2000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика CCND1 34 Abcam ab6152 1:500 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши Bim-EL 23 Millipore AB17003 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика Bim-EL 23 Cell Signaling 2933 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика BCL-xL 30 Cell Signaling 2762 1:2000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика PARP 116/89 Cell Signaling 9542 1:1000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика Расщеп-ленная каспаза 3 17,19 Cell Signaling 9664X 1:1000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика DUSP6 48 Cell Signaling 3058S 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRSK1/2 pS380 90 Cell Signaling 9335 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRSK1/2 pS380 90 Cell Signaling 11989 1:2000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pRSK-T359/S363 90 Millipore 04-419 1:40000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика Тотальный RSK 90 Cell Signaling 9333 1:1000 4°C 5% BSA в течение ночи антитела к антителам кролика pErk 1/2 42/44 Cell Signaling 9106S 1:500 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши Тотальный ERK 42/44 Cell Signaling 9102 1:2000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам кролика β-актин 42 Sigma A5441 1:500000 4°C 5% молоко в течение ночи антитела к антителам мыши

[0207] На фиг. 16-18 представлены анализы вестерн-блоттингом клеток, обработанных BVD-523 в различных концентрациях, для следующего: 1) компоненты передачи сигналов MAPK в клетках A375 через 4 часа; 2) передача сигналов клеточного цикла и апоптоза в клетках A375 через 24 часа обработки различными количествами BVD-523 и 3) передача сигналов MAPK в клетках HCT-116, обработанных в течение 4 часов. Результаты демонстрируют, что кратковременная и длительная обработка BVD-523 мутантных по RAF и RAS злокачественных клеток in vitro действовала на фосфорилирование субстрата и цели эффекторов киназ ERK. Концентрации BVD-523, необходимые для индукции этих изменений, как правило, находятся в низком микромолярном диапазоне.

[0208] Изменения некоторых маркеров специфической активности заслуживают внимания. Во-первых, после обработки BVD-523 увеличивается относительное содержание медленно мигрирующих изоформ киназы ERK; можно наблюдать незначительные изменения при кратковременной обработке и увеличение после длительной обработки. Хотя это может указывать на увеличение ферментативно активных, фосфорилированных форм ERK, остается заслуживающим внимания, что после обработки BVD-523 несколько белков, являющихся мишенью прямого и непрямого регулирования ERK, остаются "в неактивном состоянии". Во-первых, у белков RSK1/2 выявляют сниженное фосфорилирование по остаткам, которые в отношении модификации белков строго зависят от ERK (T359/S363). Во-вторых, обработка BVD-523 индуцирует комплексные изменения в обратной фосфатазе MAPK, DUSP6: после кратковременной обработки снижены уровни медленно мигрирующих изоформ белков, при этом после длительной обработки BVD-523 значительно снижены уровни тотального белка. Оба этих результата согласуются со сниженной активностью киназ ERK, которые контролируют функцию DUSP6 посредством посттрансляционных и транскрипционных механизмов. В общем, несмотря на возрастание клеточных форм ERK, которые, как правило, считают активными, по-видимому вероятно, что после кратковременной или длительной обработки BVD-523 активность клеточных ферментов ERK полностью ингибирована.

[0209] В соответствии с этими наблюдениями после обработки BVD-523 изменены эффекторные гены, которым необходим сигнальный путь MAPK. Передача сигналов MAPK на посттрансляционном и транскрипционном уровне регулирует аппарат клеточного цикла G1/S, и уровни белка циклина D1 после длительной обработки BVD-523 значительно снижены. Подобным образом, экспрессия генов и относительное содержание белков эффекторов апоптоза часто требует интактной передачи сигналов MAPK, и после длительной обработки BVD-523 возрастают общие уровни Bim-EL. Однако, как указано выше, в исходных клетках A375 расщепление белка PARP и увеличение апоптоза не наблюдали; это позволяет предположить, что на трансляцию изменений в передаче сигнала зависимым от BVD-523/ERK эффекторам в определенные события, такие как гибель клеток и арест клеточного цикла, могут влиять дополнительные факторы.

[0210] В соответствии с клеточной активностью BVD-523, анализ маркеров позволяет предположить, что ингибирование ERK изменяет ряд событий молекулярной передачи сигналов в злокачественных клетках, делая их предрасположенными к сниженной клеточной пролиферации и жизнеспособности.

[0211] В итоге на фиг. 16-18 представлено, что BVD-523 ингибирует путь передачи сигналов MAPK и в этих условиях может быть более предпочтительным, чем ингибирование RAF или MEK.

[0212] В результате свойства BVD-523 могут делать его предпочтительным средством для применения в качестве ингибитора ERK по сравнению с другими средствами со сходной активностью. Известно, что ингибирующие киназу лекарственные средства демонстрируют уникальные и специфические взаимодействия с их ферментами-мишенями, и что эффективность лекарственных средств сильно зависит от способа прямого ингибирования, а также от предрасположенности к адаптивным изменениям, которые происходят после лечения. Например, ингибиторы киназ ABL, KIT, EGFR и ALK эффективны только когда узнаваемые ими мишени находятся в активных или неактивных конфигурациях. Подобным образом, некоторые из этих ингибиторов уникальным образом чувствительны к вторичным генетическим мутациям или посттрансляционным адаптивным изменениям белков-мишеней. Наконец, ингибиторы RAF демонстрируют дифференциальную активность в отношении киназ RAF, присутствующих в определенных белковых комплексах и/или в определенных субклеточных локализациях. В итоге, так как подобным образом известно, что киназы ERK существуют в различных, переменных и комплексных биохимических состояниях, по видимому, вероятно, что BVD-523 может взаимодействовать с этими мишенями и ингибировать их таким способом, который явно и очень предпочтителен по сравнению с другими средствами.

Пример 7

Анализ in vivo

Мыши

[0213] На сутки исследования 1 самки бестимусных голых мышей (Crl:NU(Ncr)-Foxn/^nu, Charles River) находились в возрасте девяти недель с диапазоном массы тела (BW) от 17,5 до 26,2 грамм. Животных содержали в условиях неограниченной доступности воды (обратный осмос, 1 м.д. Cl) и питания NIH 31 Modified and Irradiated Lab Diet®, состоящего из 18,0% общего белка, 5,0% общего жира и 5,0% общих волокон. Мышей содержали на облучаемой подстилке Enrich-o'cobsTM Laboratory Animal Bedding в статических микроизоляторах с 12-часовым световым циклом при 20-22°C (68-72°F) и 40-60% влажности. В отношении содержания, ухода, хирургических процедур, кормления и регулирования жидкости и ветеринарной помощи выполнялись рекомендации руководства по содержанию и использованию лабораторных животных Guide for Care and Use of Laboratory Animals.

Имплантация и рост опухоли in vivo

[0214] Опухолевые ксенотрансплантаты вводили с использованием клеток меланомы человека A375 посредством серийной подкожной трансплантации бестимусным голым мышам. На сутки имплантации опухоли каждая тестируемая мышь получала 1 мм³ фрагмента A375, имплантированного подкожно в левый бок, и рост опухоли наблюдали в виде среднего размера, достигающего запланированного диапазона от 80 до 120 мм³. Опухоли измеряли в двух измерениях с использованием штангенциркуля, и объем рассчитывали по формуле:

Объем опухоли (мм³) =w²×l/2

где w=ширина и l=длина опухоли в мм. Массу опухоли можно рассчитать в предположении, что 1 мм³ объема опухоли эквивалентен 1 мг.

[0215] Через десять суток после имплантации опухоли, обозначаемых как сутки 1 исследования, животных сортировали по девяти группам (группы 1-9), где каждая состояла из пятнадцати мышей, и одной группе (группа 10), состоящей из десяти мыши. Индивидуальные объемы опухолей находились в диапазоне от 75 до 144 мм³ и средние групповые объемы опухолей составляли 110 или 111 мм³.

Терапевтические средства

[0216] BVD-523 и дабрафениб получали в виде сухих порошков и хранили при комнатной температуре с защитой от света.

[0217] Дозы BVD-523 получали, суспендируя требуемое количество порошка BVD-523 в 1% карбоксиметилцеллюлозе в деионизированной воде ("1% CMC"). Получали исходное разведение BVD-523 10 мг/мл и использовали для дозирования в группе 100 мг/кг BVD-523. Аликвоты исходного разведения разбавляли носителем до концентрации 5,0 мг/мл с получением дозы 50 мг/кг BVD-523 в объеме дозирования 10 мл/кг. Дозы BVD-523 хранили при 4°C с защитой от света в течение периода до одной недели.

[0218] Сухой порошок дабрафениба состоял из 84,5% активного соединения, которые определяли при получении доз. Дабрафениб формулировали в 1% CMC с концентрациями 11,834 и 5,917 мг/мл с получением дозировок 100 и 50 мг/кг активного соединения, соответственно, в объеме дозирования 10 мл/кг. Дозы дабрафениба хранили с защитой от света при 4°C в течение периода до одной недели.

[0219] Для дозирования контрольной группы использовали 1% носитель CMC ("носитель").

[0220] Дозы темозоломида (темодар (Temodar®), Schering Corporation, номер партии 2RSA013) получали, суспендируя содержимое требуемого количества 100 мг капсул темодара (Temodar®) в деионизированной воде в концентрации 15 мг/мл, что обеспечивало дозировку 150 мг/кг в объеме дозирования 10 мл/кг. Темозоломид хранили с защитой от света при 4°C в течение периода дозирования 5 суток.

Обработка

[0221] На сутки 1 исследования мышей сортировали по девяти группам (группа 1-9), где каждая состояла из пятнадцати мышей, и одной группе (группа 10), состоящей из десяти мышей, и начинали дозирование по плану обработки, приведенному в таблице 15 ниже. Каждую дозу вводили посредством перорального принудительного кормления (п/о) в объеме дозирования 10 мл/кг (0,2 мл на 20 грамм массы тела), в соответствии с массой тела каждого отдельного животного. Дозы носителя и дабрафениба были предназначены для введения раз в сутки до конца исследования (раз в сутки до конца), тогда как дозы BVD-523 были предназначены для введения дважды в сутки до конца исследования(дважды в сутки до конца). При дозировании дважды в сутки дозирование начинали в полдень на сутки 1 так, чтобы на первые сутки ввести одну дозу ("1 доза на первые сутки").

Таблица 15
Схема протокола для исследования A375 in vivo Группа n Схема обработки Средство мг/кг Маршрут Схема 1 15 Носитель - п/о раз в сутки до конца 2 15 Дабрафениб
BVD-523 50
50 п/о
п/о раз в сутки до конца
дважды в сутки до конца 3 15 Дабрафениб
BVD-523 50
100 п/о
п/о раз в сутки до конца
дважды в сутки до конца 4 15 Дабрафениб
BVD-523 100
50 п/о
п/о раз в сутки до конца
дважды в сутки до конца 5 15 Дабрафениб
BVD-523 100
100 п/о
п/о раз в сутки до конца
дважды в сутки до конца 6 15 Дабрафениб 50 п/о раз в сутки до конца 7 15 Дабрафениб 100 п/о раз в сутки до конца 8 15 BVD-523 50 п/о дважды в сутки до конца 9 15 BVD-523 100 п/о дважды в сутки до конца 10 10 Темозоломид 150 п/о раз в сутки x 5

Носитель=1% карбоксиметилцеллюлоза (CMC) в DI воде

При дозировании дважды в сутки одну дозу вводили в полдень на первые сутки и одну дозу вводили утром на последние сутки.

[0222] Дозирования в группах с комбинациями в течение исследования модифицировали как описано ниже.

[0223] Группа 1 получала 1% носителя CMC и служила в качестве контрольной группы для расчета % TGD. Группа 10 получала темозоломид на уровне 150 мг/кг раз в сутки в течение пяти суток (раз в сутки × 5) и служила в качестве эталонной группы.

Обработка посредством монотерапии

[0224] Группы 6 и 7 получали 50 и 100 мг/кг дабрафениба, соответственно. Группы 8 и 9 получали 50 и 100 мг/кг BVD-523, соответственно.

Комбинированные обработки

[0225] Группы 2 и 3 получали комбинации 50 мг/кг дабрафениба с 50 или 100 мг/кг BVD-523, соответственно. Группы 4 и 5 получали комбинации 100 мг/кг дабрафениба с 50 или 100 мг/кг BVD-523, соответственно. Вследствие выраженного ответа на комбинированное лечение дозирование в группах 2-5 останавливали на сутки 20 для контроля повторного роста опухоли. Когда средний размер опухоли достигал 1000 мм³, дозирование в группе начинали снова. На сутки 42 ни в одной группе с комбинацией опухоли среднего размера 1000 мм³ не достигали. Дозирование начинали повторно для обеспечения получения образцов дозы в сыворотке и опухолей после завершения для фармакокинетических анализов. Начиная с суток 42, группы 2-5 получали дабрафениб раз в сутки в течение четырех суток и BVD-523 дважды в сутки в течение трех суток с последующей одной дозой BVD-523 утром на сутки 45. Конечные схемы дозирования приведены ниже в таблице 16.

Таблица 16
Итоговые результаты в исследовании A375 in vivo Груп-па К-во Схема обработки Сред-нее TTE T-C %
TGD Статистическая значимость MTV (n) D45 Анализ регресса Сред-няя BW,
Низ-ший пре-дел Гибель Средство мг/кг Марш-рут Схема по сравне-нию с G1 по сравне-нию с G2 по сравне-нию с G3 по сравне-нию с G4 по сравне-нию с G5 PR CR TFS TR NTR 1 14 Носитель - п/о раз в сутки до конца 9,2 --- --- --- --- --- --- --- --- 0 0 0 --- 0 1 Дабра-фениб 50 п/о раз в сутки × 20/21 сутки остановка/
раз в сутки × 4 2 15 BVD-523 50 п/о дважды в сутки × 19/21 сутки остановка/
дважды в сутки × 3, затем раз в сутки × 1 45,0 35,8 389 *** --- --- --- --- 0 (10) 3 8 7 --- 0 0 Дабрафениб 50 п/о раз в сутки × 20/21 сутки остановка/
раз в сутки × 4 3 14 BVD-523 100 п/о дважды в сутки × 19/21 сутки остановка/
дважды в сутки × 3, затем раз в сутки × 1 45,0 35,8 389 *** --- --- --- --- 0 (14) 0 14 14 --- 0 1 Дабра-фениб 100 п/о раз в сутки × 20/21 сутки остановка/
раз в сутки × 4 4 15 BVD-523 50 п/о дважды в сутки × 19/21 сутки остановка/
дважды в сутки × 3, затем раз в сутки × 1 45,0 35,8 389 *** --- --- --- --- 0 (15) 1 14 14 --- 0 0 Дабра-фениб 100 п/о раз в сутки × 20/21 сутки остановка/
раз в сутки × 4 5 15 BVD-523 100 п/о дважды в сутки × 19/21 сутки остановка/
дважды в сутки × 3, затем раз в сутки × 1 45,0 35,8 389 *** --- --- --- --- 0 (15) 0 15 15 --- 0 0 6 15 Дабра-фениб 50 п/о раз в сутки до конца 16,1 6,9 75 *** *** *** ___ ___ --- 0 0 0 --- 0 0 7 15 Дабра-фениб 100 п/о раз в сутки до конца 28,5 19,3 210 *** --- --- *** *** 282 (2) 1 0 0 --- 0 0 8 15 BVD-523 50 п/о дважды в сутки до конца 8,6 -0,6 -7 н.з. *** --- *** --- 0(1) 0 1 1 -0,1% Сутки 2 0 0 9 15 BVD-523 100 п/о дважды в сутки до конца 18,5 9,3 101 *** --- *** --- *** 2 (2) 0 2 2 --- 0 0 10 10 Темозо-ломид 150 п/о раз в сутки × 5 10,5 1,3 14 н.з. --- 0 0 0 -1,6% Сутки 5 0 0 n=количество животных в группе, не погибших по случайным или неизвестным причинам; Носитель=1% карбоксиметилцеллюлоза (CMC) в DI воде. При дозировании дважды в сутки × 19 и дважды в сутки до конца одну дозу вводили в полдень на первые сутки и одну дозу вводили утром на последние сутки. Максимальная T-C в этом исследовании составляла 35,8 суток (389%) по сравнению с группой 1. Статистическая значимость (логранговый критерий): н.о.=не оценивали, н.з.=не значимо, *=p < 0,05, **=p < 0,01, ***=p < 0,001 по сравнению с указанной группой. MTV (n)=медианный объем опухоли (непосредственно) для количества животных на сутки анализа TGD (исключая животных, достигших конечного объема опухоли). PR=частичная регрессия; CR=общее количество случаев полной регрессии; TFS=выжившие без опухоли, т.е., CR в конце исследования; Средняя BW, низший предел=наименьшая средняя групповая масса тела в виде % изменения, начиная от суток 1; --- означает отсутствие наблюдаемого снижения средней массы тела; TR=связанная с обработкой гибель; NTR=не связанная с обработкой гибель

Конечная точка и анализ задержки роста опухоли (TGD)

[0226] Опухоли измеряли с использованием штангенциркуля дважды в неделю и каждое животное подвергали эвтаназии, когда его опухоль достигала предопределенной конечной точки с объемом опухоли 2000 мм³ или в последние сутки, в зависимости от того, что достигалось раньше. Животных, которых убирали из исследования вследствие достижения конечной точки по объему опухоли регистрировали как подвергнутых эвтаназии вследствие прогрессирования опухоли (TP) с датой эвтаназии. Время до конечной точки (TTE) для анализа рассчитывали для каждой мыши по следующему уравнению:

TTE=log₀ (конечный объем) - b

m

где TTE выражена в сутках, конечный объем выражен в мм³, b представляет собой пересечение, и m представляет собой угол наклона прямой, получаемой посредством линейной регрессии лог-трансформированного набора данных о росте опухоли. Набор данных состоит из первого наблюдения, которое превосходило конечный объем, используемый в анализе, и трех последовательных наблюдений, которые непосредственно предшествовали достижению этого конечного объема. Расчетное TTE, как правило, являлось меньше, чем дата TP: сутки, на которые животного подвергали эвтаназии вследствие размера опухоли. Животным с опухолями, которые не достигали конечного объема, присваивали значение TTE, равное последним суткам исследования. Любых животных, классифицируемых как погибших вследствие NTR (не связанных с обработкой) причин вследствие случайности (NTRa) или вследствие неизвестных причин (NTRu), исключали из расчетов TTE (и всех последующих анализов). Животным, классифицируемым как погибшим по причине TR (связанной с обработкой) гибели или NTRm (не связанной с обработкой гибели вследствие метастазирования), присваивали значение TTE, равное суткам гибели.

[0227] Исход обработки оценивали на основании задержки роста опухоли (TGD), определяемой как увеличение медианного времени до конечной точки (TTE) в обрабатываемой группе по сравнению с контрольной группой:

TGD=T - C,

выражаемой в сутках или в виде процента от медианного TTE контрольной группы:

%TGD=T-C×100

C

где:

T=медианное TTE в обрабатываемой группе, и

C=медианное TTE в назначенной контрольной группе.

Критерии для ответов в виде регрессии

[0228] Эффективность обработки можно определять на основе частоты и размеров ответов в виде регрессии, наблюдаемых в течение исследования. Обработка может вызывать частичную регрессию (PR) или полную регрессию (CR) опухоли у животного. При ответе в виде PR объем опухоли составлял 50% или менее от ее объема на сутки 1 в течение трех последовательных измерений в течение исследования, и составлял 135 мм³ или более при одном или нескольких из этих трех измерений. При ответе в виде CR объем опухоли составлял менее 135 мм³ при трех последовательных измерениях в течение исследования. Животных с ответом в виде CR в конце исследования дополнительно классифицировали как выживших без опухоли (TFS). У животных контролировали ответы в виде регрессии.

Токсичность

[0229] Животных ежедневно взвешивали на сутки 1-5, затем дважды в неделю до завершения исследования. Мышей часто наблюдали на открытые признаки любых вредных связанных с обработкой (TR) побочных эффектов и при наличии клинические признаки регистрировали. Индивидуальную потерю массы тела контролировали в соответствии с протоколом, и любое животное, превзошедшее пределы приемлемой потери массы тела, подвергали эвтаназии. В соответствии с протоколом также контролировали потерю средней групповой массы тела. Дозирование прекращали, если любая группа превосходила приемлемые потери средней массы тела. Если средняя масса тела восстанавливалась, дозирование в этой группе возобновляли, но с меньшей дозой или со схемой дозирования с меньшей частотой.

[0230] Приемлемую токсичность для максимально переносимой дозы (MTD) определяли как потерю в течение исследования средней групповой массы тела менее 20% и не более 10% связанной с обработкой (TR) гибели. Гибель классифицировали как TR, если можно было отнести к связанным с обработкой побочным эффектам, о чем свидетельствовали клинические признаки и/или некроскопия, или также классифицировали как TR, если она происходила вследствие неизвестных причин в течение периода дозирования или в пределах 14 суток после последней дозы. Гибель классифицировали как не связанную с обработкой (NTR), если не было свидетельств того, что гибель связана с побочными эффектами после обработки. NTR гибель дополнительно характеризовали на основе причины гибели. Гибель классифицировали как NTRa, если она являлась результатом несчастного случая или ошибки человека. Гибель классифицировали как NTRm, если некроскопия свидетельствовала, что она могла быть результатом диссеминации опухоли посредством инвазии и/или метастазирования. Гибель классифицировали как NTRu, если причина гибели являлась неизвестной и не было доступно свидетельств гибели, связанной с побочными эффектами после обработки, метастазирования, несчастного случая или ошибки человека, хотя гибель вследствие побочных эффектов после обработки исключать было нельзя.

Получение образцов

[0231] При доступности пять мышей на группу подвергали эвтаназии посредством конечной сердечной пункции с анестезией диоксидом углерода через 3, 6 и 12 часов после конечной дозы, и собирали весь объем крови каждого животного. Отделяли сыворотку и хранили в замороженном состоянии при -80°C до транспортировки. Кроме того, опухоли этих мышей собирали и разделяли на две части. Одну часть быстро замораживали и хранили при -80°C. Другую часть фиксировали в течение 16-24 часов в 10% нейтральном буферизованном формалине, а затем переносили в 70% этанол. Для групп с мышами, у которых не детектировали опухоли, у трех мышей на группу собирали участок имплантата, включая всю толщину кожи и мышц.

Статистический и графический анализы

[0232] Для графических представлений и статистических анализов использовали Prism (GraphPad) для Windows 3.03.

[0233] Для анализа значимости различий значений TTE в двух группах использовали логранговый критерий, который оценивает общее выживание. Логранговый анализ включает данные всех животных в группе за исключением тех, у кого определили NTR гибель. Проводили двусторонние статистические анализы на уровне значимости p=0,05. Статистические тесты не корректировали на множественные сравнения. Prism представляет результаты тестирования как незначимые (н.з.) при p>0,05, значимые (помечаемые "*") при 0,01<p<0,05, очень значимые ("**") при 0,001<p<0,01 и экстремально значимые ("***") при p<0,001. Так как тесты на статистическую значимость не предоставляют оценки величины различий между группами, все уровни значимости в тексте данного описания описывали или как значимые, или как незначимые.

[0234] Для демонстрации значений TTE для отдельных мышей по группам строили диаграмму рассеяния. Средние групповые объемы опухолей наносили на диаграмму в виде функции от времени. Когда животных удаляли из исследования вследствие размера опухоли, вместе с данными, используемыми для расчета среднего объема в последующие моменты времени, включали конечный объем опухоли, зарегистрированный у животного. Величины ошибок (когда присутствуют) означают стандартную ошибку среднего (SEM). Диаграммы Каплана-Мейера демонстрируют процент животных в каждой группе, оставшихся в исследовании в зависимости от времени. В диаграммах Каплана-Мейера и логранговом критерии использовали одни и те же наборы данных TTE. Для каждой группы для каждых суток измерения массы тела рассчитывали процент изменений средней массы тела, начиная с суток 1, и наносили на график в виде функции от времени. Графики рост опухоли и массы тела исключали данные для NTR гибели, и их обрезали после удаления из исследования 50% доступных животных в группах.

Результаты

[0235] Группы в исследовании A375 in vivo обрабатывали в соответствии с модифицированным протоколом, как описано в таблице 15. Эксперимент заканчивали на сутки 45. В таблице 16 представлены результаты ответов на обработки для каждой группы. Фиг. 26 представляет собой диаграмму рассеяния, демонстрирующую индивидуальные TTE для каждой группы. Фиг. 27 представляет собой графики среднего роста опухоли (фиг. 27A) и выживания Каплана-Мейера (фиг. 27B) для каждой группы в исследовании. Фиг. 28A-D представляют собой графики среднего роста опухоли для четырех комбинации по сравнению с соответствующей им монотерапией. Фиг. 29 представляют собой графики процента изменений средней массы тела, начиная с суток 1, для каждой группы.

Эффективность - Рост клеток меланомы человека A375 у контрольных мышей (группа 1)

[0236] В группе 1 одна контрольная мышь погибла без некропсии на сутки 4, и гибель оценили как NTRu. Другие четырнадцать контрольных опухолей быстро и равномерно прогрессировали до конечной точки 2000 мм³ с медианным TTE 9,2 суток, составляя максимально возможную TGD 35,8 суток (389%) для 45-суточного исследования (таблица 15). На диаграмме рассеяния можно наблюдать кластер контрольных TTE (фиг. 26). График среднего роста опухоли для группы 1 иллюстрировал быстрый рост контрольной опухоли (фиг. 27A и фиг. 28A-D).

Эффективность - Ответ на дабрафениб в качестве монотерапии (группы 6 и 7)

[0237] Группы 6 и 7 получали дабрафениб в качестве монотерапии в концентрациях 50 и 100 мг/кг, соответственно, п/о, раз в сутки до конца. Медианные TTE для групп 6 и 7 составляли 16,1 и 28,5 суток, соответственно, что соответствует зависимым от дозы TGD 6,9 суток (75%) и 19,3 суток (210%) со значимым различием в выживаемости для каждой по сравнению с контролем (группа 1 по сравнению с 6 или 7, p<0,001). В группе со 100 мг/кг дабрафениба зарегистрирован один PR (таблица 16). Все опухоли в группе 6 достигали конечного объема опухоли 2000 мм³, тогда как в группе 7 конечной точки достигали 13/15 опухолей, и две на сутки 45 оставались с MTV 282 мм³ (таблица 16). Графики среднего роста опухоли для групп 6 и 7 иллюстрировали зависимые от дозы задержки, хотя опухоли в обеих группах в течение обработки прогрессировали (фиг. 27A).

Эффективность - Ответ на BVD-523 в качестве монотерапии (группы 8 и 9)

[0238] Группы 8 и 9 получали BVD-523 в качестве монотерапии в концентрации 50 и 100 мг/кг, соответственно, п/о дважды в сутки до конца. Медианные TTE для групп 8 и 9 составляли 8,6 и 18,5 суток, соответственно, что соответствовало отсутствию TGD для группы 50 мг/кг BVD-523 и TGD 9,3 суток (101%) для группы 100 мг/кг BVD-523 (таблица 16). Логранговые анализы детектировали значимое отличие в выживаемости по сравнению с контролями только для 100 мг/кг BVD-523 (группа 1 по сравнению с 8, p>0,05; группа 1 по сравнению с 9, p<0,001). В группе 8 наблюдали один CR, который, оставался TFS на сутки 45, тогда как в группе 9 наблюдали два CR/TFS, и все другие опухоли в этих двух группах достигали конечного объема опухоли 2000 мм³ (таблица 16). График среднего роста опухоли для группы 50 мг/кг BVD-523 был сравним с графиком среднего роста опухоли для контролей, тогда как группа 100 мг/кг BVD-523 продемонстрировала несущественную задержку у опухолей, которые прогрессировали в течение обработки (фиг. 27A).

Эффективность - Ответ на обработку комбинациями дабрафениба и BVD-523 (группы 2-5)

[0239] Группы 2 и 3 получали 50 мг/кг дабрафениба с 50 или 100 мг/кг BVD-523, соответственно, тогда как группы 4 и 5 получали 100 мг/кг дабрафениба с 50 или 100 мг/кг BVD-523, соответственно. Как указано в таблице 16, схемы обработки комбинациями модифицировали так, что дозирование заканчивалось после суток 20, а затем повторно начиналось на сутки 42 (таблица 16).

[0240] Каждая из медианных TTE для групп 2-5 составляла 45,0 суток, соответствуя максимально возможной TGD для исследования (35,8 суток, 389%) и значимому общему положительному действию на выживаемость по сравнению с контролями (группа 1 по сравнению с 2-5, p<0,001).

[0241] Пять опухолей в группе 2 достигали конечного объема 2000 мм³, тогда как в группах 3-5 опухолей, которые достигали конечного объема, не было. В группе 2 наблюдали три PR и восемь CR с семью мышами, которые оставались TFS на сутки 45 (таблица 16). В группе 3 выявлена одна гибель NTRu на сутки 31, а у остальных четырнадцати мышей наблюдали CR и они оставались TFS в конце исследования. В группе 4 выявлен один PR и четырнадцать CR, которые оставались TFS, тогда как в группе 5 наблюдали 100% TFS.

[0242] Средние массы опухолей в группах 2-5 на сутки 20, когда дозирование останавливали, не детектировали (фиг. 27A). Средний рост опухоли возобновлялся только в группе с наименьшей дозировкой комбинации (группа 2) и оставался недетектируемым до конца исследования в других трех группах с комбинациями (фиг. 27Al). График роста опухоли для каждой группы с комбинацией демонстрировал заметную активность по сравнению с соответствующей им монотерапией (фиг. 28A-D).

Эффективность - Ответ на обработку темозоломидом (группа 10)

[0243] Обработка эталонным темозоломидом приводила к медианному TTE 10,5 суток, что соответствует незначительному TGD (1,3 суток, 14%) с отсутствием регрессии (таблица 16). Логранговые анализы не детектировали значимого различия в выживаемости для группы с темозоломидом по сравнению с контролями (группа 1 по сравнению с 10, p=0,052). График среднего роста опухоли для этой группы демонстрировал незначительную задержку по сравнению с графиком для контрольной группы 1 (фиг. 27A).

Побочные эффекты

[0244] В таблице 16 предоставлена итоговая информация о максимальных потерях средней BW, TR и NTR гибели. Фиг. 29 представляет собой диаграммы процента изменений средней BW, начиная с суток 1, для каждой группы.

[0245] В исследовании не регистрировали TR гибели, но два случая гибели оценивали как NTRu (таблица 16). Одну гибель NTRu зарегистрировали в группе 1 на сутки 4, а вторую гибель NTRu зарегистрировали в группе 3 на сутки 31. Животное в группа 1 найдено мертвым без некропсии без предварительного клинического обследования, тогда как мышь в группе 3 непосредственно перед гибелью была истощенной, сутулой и сонной, и некропсия выявила массу белых узелков на печени, что означает, что возможной причиной гибели было метастатическое заболевание. В группах в исследовании потери средней BW были незначительными или их не наблюдали (таблица 16 и фиг. 29), и в группах с моно- и комбинированной обработкой BVD-523 и дабрафенибом не наблюдали заметных признаков связанных с обработкой побочных эффектов.

Общие результаты

[0246] В исследовании in vivo оценивали комбинации BVD-523 с дабрафенибом на эффективность в модели с ксенотрансплантатом меланомы человека A375 на голых мышах. BVD-523 вводили перорально в концентрациях 50 или 100 мг/кг со схемой дозирования дважды в сутки, а дабрафениб вводили перорально в концентрациях 50 или 100 мг/кг со схемой раз в сутки, отдельно и в комбинации. Вследствие выраженного ответа на комбинированное лечение дозирование в группах с комбинациями останавливали на сутки 20 для наблюдения за повторным ростом опухоли и повторно начинали на сутки 42 для сбора образцов в конце исследования на сутки 45.

[0247] Контрольные опухоли A375 быстро и равномерно прогрессировали до конечного объема опухоли. Медианные TTE для контролей составляли 9,2 суток, составляя максимально возможную TGD 35,8 суток (389%) для 45-суточного исследования. Узкий диапазон контрольных TTE, который отражал равномерный рост контрольных опухолей, обеспечивал возможность детекции логранговым критерием небольших различий между контрольными и обработанными мышами. Обработка эталонным темозоломидом приводила к незначительной TGD (1,3 суток, 14%) и отсутствию регрессий в соответствии с предыдущими результаты для темозоломида в этой модели опухоли.

[0248] Монотерапия 50 и 100 мг/кг дабрафениба приводила к зависимой от дозы эффективности с TGD 6,9 суток (75%) и 19,3 суток (210%), соответственно, и одним PR в группе со 100 мг/кг дабрафениба. Монотерапия 50 мг/кг BVD-523 была неактивна, не приводя к TGD и к значимому отличию в выживаемости от контролей (p>0,05). Единственное TFS в этой группе могло являться результатом обработки или спонтанного регресса. Монотерапия 100 мг/кг BVD-523 была незначительно активной, приводя к TGD 9,3 суток (101%), значимому отличию в выживаемости по сравнению с контролем (p<0,001) и двум TFS, которые могли являться результатом обработки или спонтанного регресса.

[0249] Каждая из четырех тестируемых в этом исследовании комбинаций дабрафениба с BVD-523 была высокоактивна, обеспечивая максимальную возможную TGD, заметные ответы в виде регрессии, и статистически значимо превосходили общую выживаемость по сравнению с соответствующей им монотерапией (p<0,001). Группа с комбинацией в наименьших дозах (группа 2) приводила к получению заметных 7/15 TFS. При трех комбинациях с наибольшими дозами (группы 3-5) достигли 43/44 выживших без опухоли в конце исследования, включая 15/15 TFS в группе с комбинацией в наибольших дозах (группа 5). Заслуживает внимание, что учитывая среднее время удвоения контрольных опухолей менее 3 суток, у 43/44 мышей в группах 3-5 в течение перерыва в дозировании в течение суток 21-42, что являлось периодом времени, соответствующим приблизительно 7 удвоениям опухоли, повторного роста опухоли не наблюдали. Эти результаты соответствуют лечебной или близкой к лечебной активности.

[0250] В итоге, каждый из дабрафениба и BVD-523 обеспечивал незначительную зависимую от дозы эффективность в виде монотерапии, но заметную активность в комбинации. Комбинации дабрафениба с BVD-523, тестируемые в этом исследовании, обеспечивали заметную выживаемость без опухоли, и превосходную эффективность по сравнению с любым из этих средств, вводимых отдельно.

[0251] Авторы демонстрируют, что ингибирование киназы ERK, проиллюстрированное на примере с использованием BVD-523, эффективно в комбинации с ингибитором RAF дабрафенибом в модели обусловленной мутантным BRAF меланомы. В клетках, комбинированная обработка BVD-523 и дабрафенибом индуцирует окна синергического ингибирования клеточной пролиферации. При совместном дозировании в модели с ксенотрансплантатом, комбинированное лечение вызывает заметный и длительный регресс опухоли по сравнению с терапией единственным средством.

[0252] Кроме того, когда клетки A375 индуцированы к проявлению приобретенной устойчивости к лекарственным средствам после длительного воздействия ингибиторов каскада MAPK, ингибирование ERK с использованием BVD-523 демонстрирует привлекательные свойства. В течение недели после обработки дабрафенибом или траметинибом, можно выделять клетки A375, которые быстро растут в концентрациях, более чем в 10 раз превосходящих соответствующие ингибирующие рост концентрации IC₅₀ соединений. Через 2 месяца клетки, подвергаемые действию только BVD-523, росли плохо и могли переносить обработку только менее чем 10-кратным увеличением воздействия лекарственного средства более IC₅₀. Подобным образом, клетки, обрабатываемые комбинацией BVD-523 и дабрафенибом, демонстрируют плохой рост, и их можно культивировать только при незначительно увеличенных уровнях дабрафениба в комбинации.

[0253] В заключение BVD-523 тестировали в модели меланомы с ксенотрансплантатам, происходящими из биопсий, получаемых у пациентов с выявленным прогрессированием заболевания после исходного ответа на вемурафениб. Представляет интерес, что в этой модели in vivo выявили приобретенную перекрестную устойчивость, продемонстрировав нечувствительность к дабрафенибу и траметинибу. Однако BVD-523 являлся эффективным в этой модели и индуцировал эффективный противоопухолевый ответ отдельно или в комбинации с дабрафенибом.

[0254] В целом эти результаты свидетельствуют, что комбинированная обработка ингибиторами ERK и RAF является эффективной в условиях обусловленной мутантным BRAF меланомы. BVD-523 обладает новым способом лекарственного действия и, возможно, демонстрирует увеличенную продолжительность действия в моделях, которые демонстрируют существенную чувствительность или приобретенную устойчивость к ингибиторам BRAF или MEK. Комбинация ингибиторов RAF и ERK для мутантных по BRAF злокачественных опухолей ингибирует онкогенный сигнальный путь в двух контрольных точках, что в свою очередь, по-видимому, создает труднопреодолимый барьер против разрушения и приобретенной устойчивости к лекарственным средствам.

[0255] Эти результаты указывают на то, что терапия комбинацией ингибиторами ERK и RAF может быть эффективна при ряде злокачественных опухолей, в частности опухолей, несущих онкогенные изменения в BRAF, включая меланому, рак щитовидной железы, легких и толстого кишечника.

Пример 8

Дополнительные исследования комбинаций

Анализ пролиферации при единственном средстве

[0256] Клетки высевали в 96-луночные планшеты с плотностями и условиями сред, указанными в таблице 17 и позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением соединений или контрольных носителей. Соединения получали из исходных разведений в DMSO с получением желаемых конечных концентраций. Конечная концентрация DMSO являлась постоянной на уровне 0,1%. Тестируемые соединения инкубировали с клетки в течение 72 часов при 37°C, 5% CO₂ в увлажненной атмосфере. Добавляли реагент CellTiter-Glo® (Promega, Madison, WI) по инструкциям производителя и люминесценцию детектировали с использованием планшетного спектрофотометра FLUOstar BMG (BMG Labtech, Ortenberg, Germany). Вычитали средние фоновые значения для сред, не содержащих тестируемых соединений, и данные анализировали с использованием 4-параметрического логистического уравнения в GraphPad Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA).

Анализ пролиферации при комбинациях

[0257] Клетки высевали в трех повторениях в 96-луночные планшеты с плотностями и условиями сред, указанными в таблице 17 и позволяли прикрепляться в течение ночи с последующим добавлением соединений или контрольных носителей. Соединения получали из исходных разведений DMSO с получением желаемых конечных концентраций. Конечная концентрация DMSO являлась постоянной на уровне 0,2%. Комбинации тестировали с использованием матрицы доз 10×8. Тестируемые соединения инкубировали с клетками в течение 72 часов при 37°C, 5% CO₂ в увлажненной атмосфере. Добавляли реагент CellTiter-Glo® (Promega, Madison, WI) по инструкциям производителя и люминесценцию детектировали с использованием планшетного спектрофотометра FLUOstar BMG (BMG Labtech, Ortenberg, Germany). Вычитали средние фоновые значения для сред, не содержащих тестируемых соединений, и данные анализировали

[0258] Для анализов комбинаций в формате 10×8 в матрице доз определяли комбинационные взаимодействия по моделям аддитивности Леве и независимости Блисса с использованием программного анализа комбинаций Chalice™ (Horizon Discovery Group, Cambridge, MA), как описано в руководстве пользователя (доступном по адресу chalice.horizondiscovery.com/chalice-portal/documentation/analyzer/home.jsp). Синергию определяют, комбинируя экспериментально наблюдаемый уровень ингибирования для каждой точки с комбинацией со значением, ожидаемым для аддитивности, которое получают на основе ответов на единственные средство по граням матрицы. Потенциальные синергические взаимодействия идентифицируют, посредством отображения рассчитанного избыточного ингибирования по сравнению с теоретически рассчитанным в качестве аддтитивного в матрице доз в виде тепловой карты, и выводя количественный "источник синергии" на основе модели Леве. Данные по единственным средствам, получаемые на основе анализа планшетов с комбинациями представляли в виде кривых зависимостей "доза-эффект", получаемых в GraphPad Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA) (наносимых на график с использованием процента жизнеспособности относительно контролей, обработанных только DMSO).

Таблица 17
Плотность посевов линий клеток и среды для выращивания Линия клеток Плотность посева (клеток/лунку) Среды A375 2500 DMEM+10% FBS G-361 5000 McCoy's 5A+10% FBS

Результаты

[0259] Целью этого исследования являлась оценка действия комбинирования ингибиторов ERK с ингибиторами RAF типа 1. Один новый ингибитор ERK BVD-523 с двумя ингибиторами RAF типа I, дабрафенибом (GSK2118436) и вемурафенибом (PLX4032), и ингибитором типа II TAK-632, в двух линиях клеток меланомы с мутацией V600E BRAF, A375 и G-361. Также в комбинациях с дабрафенибом (GSK2118436) и вемурафенибом (PLX4032) тестировали второй ингибитор ERK (SCH772984) с отличающимся механизмом действия.

[0260] Сначала проводили анализы пролиферации с единственным средством для выбора подходящего диапазона концентраций для исследования комбинаций. Хотя обе линии клеток обладают сходным уровнем чувствительности к паклитакселу, клетки G-361 по-видимому в 4-6 раз мене чувствительны к ингибированию ERK и RAF по сравнению с клетками A375 (фиг. 42). Результаты для IC₅₀ обобщены в таблице 18.

Таблица 18
Значения IC₅₀ единственных средств для тестируемых соединений Соединение Линия клеток A375 G-361 Дабрафениб* ~0,0007 ~0,0014 Вемурафениб 0,047 0,248 TAK-632 0,026 0,164 BVD-523 0,087 0,344 SCH772984 0,032 0,180 Паклитаксел 0,005 0,007 *Значения для дабрафениба следует рассматривать как приблизительные, так как верхние части кривых в тестируемых диапазонах доз были определены не точно.

[0261] Комбинационные взаимодействия между двумя соединениями оценивали в матрице концентраций 8×10 с использованием моделей аддитивности Леве и независимости Блисса с использованием биоинформатического программного обеспечения Chalice™ (Horizon Discovery Group, Cambridge, MA). Chalice™ обеспечивает идентификацию потенциальных синергических взаимодействий отображая рассчитанное избыточное ингибирование по сравнению с теоретически рассчитанным в качестве аддитивного в матрице доз в виде тепловой карты, и выводя количественный "источник синергии" на основе модели Леве.

[0262] В клетках A375 (фиг. 43 - фиг. 48) анализ с использованием модели Леви показал, что комбинации с BVD-523 в основном являлись аддитивными. Результаты с использованием способа Блисса были сходными, хотя этот способ позволил предположить наличие области слабого антагонизма при высоких концентрациях для каждой из комбинаций. В отличие от этого, в клетках G-361 (фиг. 49 - фиг. 54), при том, что большинство взаимодействий в матрице доз также были аддитивными, обе модели в анализе также выявили небольшие области умеренной синергии при средних концентрациях. Подобные результаты получали со вторым ингибитором ERK (SCH772984) с отличающимся механизмом действия. Это поддерживает точку зрения, что синергия, наблюдаемая для G-361, вероятно специфически связана с ингибированием ERK, а не с побочными эффектами.

[0263] В итоге, эти результаты позволяют предположить, что взаимодействия между BVD-523 и ингибиторами RAF типа I и типа II в линиях клеток меланомы, несущих мутацию BRAF V600E, являются по меньшей мере аддитивными и, в некоторых случаях, синергическими.

[0264] Синергические взаимодействия оценивали двумя способами (фиг. 55 - фиг. 57). Избыточную активность по сравнению с теоретически рассчитанной, в случае если бы комбинация была аддитивной, можно рассчитывать с использованием простой объемной оценкой, которая рассчитывает объем между измеряемой и теоретически рассчитанной поверхностью ответа. Эта объемная оценка демонстрирует, является ли общий ответ на комбинацию синергическим (положительные значения), антагонистическим (отрицательные значения) или аддитивным (значения ~ 0). Кроме того, "источник синергии" представляет собой положительный благоприятствующий ингибированию объем, больший аддитивности по Леве. Это обеспечивает дополнительное упорядочивание, благоприятствующее комбинациям, синергия у которых происходит на высоких уровнях действия, игнорируя антагонистические части поверхности ответа.

Пример 9

Комбинационные взаимодействия между ингибиторами ERK

[0265] Мутантную по RAF линия клеток меланомы A375 культивировали в DMEM с 10% FBS и в трех повторениях высевали в 96-луночные планшеты с исходной плотностью 2000 клеток на лунку. Комбинационные взаимодействия между ингибиторами ERK BVD-523 и SCH772984 анализировали через 72 часа, как описано выше в примере 8. Жизнеспособность определяли с использованием реагента CellTiter-Glo® (Promega, Madison, WI) по инструкциям производителя, а люминесценцию детектировали с использованием планшетного спектрофотометра FLUOstar BMG (BMG Labtech, Ortenberg, Germany).

[0266] Визуализация тепловых карт с "избытком ингибирования" Леве и Блисса позволяли предполагать, что комбинация BVD-523 и SCH772984 была в основном аддитивной с окнами потенциальной синергии в диапазоне средних доз (фиг. 58).

[0267] В итоге, эти результаты позволяют предполагать, что взаимодействия между BVD-523 и SCH772984 являются по меньшей мере аддитивными, а в некоторых случаях синергическими.

Документы

AVRUCH, J.; et al. Ras activation of the Raf kinase: tyrosine kinase recruitment of the MAP kinase cascade. Recent Prog. Horm. Res., 2001, 127-155.

BROSE, et al. BRAF and RAS mutations in human lung cancer and melanoma. Cancer Res., 2002, 62, 6997-7000.

DAVIES et al., Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature, 2002, 417, 949-954.

FRANSEN et al., Mutation analysis of the BRAF, ARAF and RAF-1 genes in human colorectal adenocarcinomas. Carcinogenesis, 2004, 25, 527-533.

GARNETT, M.J.; et al. Wildtype and mutant B-RAF activate C-RAF through distinct mechanisms involving heterodimerization. Mol. Cell, 2005, 20, 963-969.

GREGER, James G., et al. "Combinations of BRAF, MEK, and PI3K/mTOR inhibitors overcome acquired resistance to the BRAF inhibitor GSK2118436 dabrafenib, mediated by NRAS or MEK mutations". Molecular cancer therapeutics 11.4 (2012): 909-920.

HOCKER et al., Ultraviolet radiation and melanoma: A systematic review and analysis of reported sequence variants. Hum. Mutat., 2007, 28, 578-588.

KING, Alastair J., et al. "Dabrafenib; preclinical characterization, increased efficacy when combined with trametinib, while BRAF/MEK tool combination reduced skin lesions". PloS one 8.7 (2013): e67583.

LI et al., Recent advances in the research and development of B-Raf Inhibitors. Current Medicinal Chemistry, 2010, 17:1618-1634.

LIU, Dingxie, et al. "BRAF V600E maintains proliferation, transformation, and tumorigenicity of BRAF-mutant papillary thyroid cancer cells". Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism 92.6 (2007): 2264-2271.

LITTLE, A.S., et al., Amplification of the Driving Oncogene, KRAS or BRAF, Underpins Acquired Resistance to MEK1/2 Inhibitors in Colorectal Cancer Cells. Sci. Signal. 4, ra17 (2011).

LONG GV, Menzies AM, Nagrial AM, et al. Prognostic and Clinicopathologic Associations of Oncogenic BRAF in Metastatic Melanoma. J Clin Oncol. 2011

MANANDHAR SP, Hildebrandt ER, Schmidt WK. Small-molecule inhibitors of the Rce1p CaaX protease. J Biomol Screen. 2007;12(7):983-993.

MAURER, T, Garrenton, LS, Oh, A, Pitts, K, Anderson, DJ, Skelton, NJ, Fauber, BP, Pan, B, Malek, S, Stokoe, D, Ludlam, MJC, Bowman, KK, Wu, J, Giannetti, AM, Starovasnik, MA, Mellman, I, Jackson, PK, Rudolph, J, Wang, W, Fang, G. Small-molecule ligands bind to a distinct pocket in Ras and inhibit SOS-mediated nucleotide exchange activity. PNAS. 2012;109(14):5299-304.

MITTAL, Rohit et al. "The acetyltransferase activity of the bacterial toxin YopJ of Yersinia is activated by eukaryotic host cell inositol hexakisphosphate". Journal of Biological Chemistry 285.26 (2010): 19927-19934.

PATGIRI, A, Yadav, KK, Arora, PS, Bar-Sagi, D. An orthosteric inhibitor of the Ras-Sos interaction. Nat Chem Biol. 2011;7:585-587.

PORTER SB, Hildebrandt ER, Breevoort SR, Mokry DZ, Dore TM, Schmidt WK. Inhibition of the CaaX proteases Rce1p and Ste24p by peptidyl (acyloxy)methyl ketones. Biochim Biophys Acta.2007;1773(6):853-862.

RUSHWORTH, L.K.; et al. Regulation and role of Raf-1/B-Raf heterodimerization. Mol. Cell Biol., 2006, 26, 2262-2272.

SETH et al., Concomitant mutations and splice variants in KRAS and BRAF demonstrate complex perturbation of the Ras/Raf signalling pathway in advanced colorectal cancer, Gut 2009;58:1234-1241

SHIMA, F, Yoshikawa, Y, Ye, M, Araki, M, Matsumoto, S, Liao, J, Hu, L, Sugimoto, T, Ijiri, Y, Takeda, A, Nishiyama, Y, Sato, C, Muraoka, S, Tamura, A, Osoda, T, Tsuda, K-I, Miyakawa, T, Fukunishi, H, Shimada, J, Kumasaka, Yamamoto, M, Kataoka, T. In silico discovery of small-molecule Ras inhibitors that display antitumor activity by blocking the Ras-effector interaction. PNAS. 2013;110(20):8182-7.

WAN, et al., Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF. Cell, 2004, 116, 855- 867.

WEBER, C.K.; et al. Active Ras induces heterodimerization of cRaf and BRaf. Cancer Res., 2001, 61, 3595-3598.

Wellbrock et al. The RAF proteins take centre stage. Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2004, 5, 875-885.

XU et al., High prevalence of BRAF gene mutation in papillary thyroid carcinomas and thyroid tumor cell lines. Cancer Res., 2003, 63, 4561-4567.

[0268] Все документы, цитируемые в этой заявке, таким образом, включены посредством ссылки так, как если бы они были полностью изложены в настоящем документе.

[0269] Хотя в настоящем документе описаны иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения, следует понимать, что изобретение не ограничено описанными вариантами, и что специалист в данной области может осуществлять другие различные изменения или модификации без отклонения от объема или сущности изобретения.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SAHA, Saurabh

<120> ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОМБИНАЦИЙ

ИНГИБИТОРОВ ERK И RAF

<130> C065272/0375604

<140> US61/919,347

<141> 2013-12-20

<160> 45

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5898

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

cgcctccctt ccccctcccc gcccgacagc ggccgctcgg gccccggctc tcggttataa 60

gatggcggcg ctgagcggtg gcggtggtgg cggcgcggag ccgggccagg ctctgttcaa 120

cggggacatg gagcccgagg ccggcgccgg cgccggcgcc gcggcctctt cggctgcgga 180

ccctgccatt ccggaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga cacaggaaca 240

tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa tatatctgga 300

ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgcactccaa caaagagaac aacagttatt 360

ggaatctctg gggaacggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa tggataccgt 420

tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctaccttca tctctttcag tttttcaaaa 480

tcccacagat gtggcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg ttagagtctt 540

cctgcccaac aaacagagga cagtggtacc tgcaaggtgt ggagttacag tccgagacag 600

tctaaagaaa gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg tttacagaat 660

tcaggatgga gagaagaaac caattggttg ggacactgat atttcctggc ttactggaga 720

agaattgcat gtggaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact ttgtacgaaa 780

aacgtttttc accttagcat tttgtgactt ttgtcgaaag ctgcttttcc agggtttccg 840

ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaagttc cactgatgtg 900

tgttaattat gaccaacttg atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac accacccaat 960

accacaggaa gaggcgtcct tagcagagac tgccctaaca tctggatcat ccccttccgc 1020

acccgcctcg gactctattg ggccccaaat tctcaccagt ccgtctcctt caaaatccat 1080

tccaattcca cagcccttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcaat ttgggcaacg 1140

agaccgatcc tcatcagctc ccaatgtgca tataaacaca atagaacctg tcaatattga 1200

tgacttgatt agagaccaag gatttcgtgg tgatggagga tcaaccacag gtttgtctgc 1260

taccccccct gcctcattac ctggctcact aactaacgtg aaagccttac agaaatctcc 1320

aggacctcag cgagaaagga agtcatcttc atcctcagaa gacaggaatc gaatgaaaac 1380

acttggtaga cgggactcga gtgatgattg ggagattcct gatgggcaga ttacagtggg 1440

acaaagaatt ggatctggat catttggaac agtctacaag ggaaagtggc atggtgatgt 1500

ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc tacacctcag cagttacaag ccttcaaaaa 1560

tgaagtagga gtactcagga aaacacgaca tgtgaatatc ctactcttca tgggctattc 1620

cacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagct tgtatcacca 1680

tctccatatc attgagacca aatttgagat gatcaaactt atagatattg cacgacagac 1740

tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc tcaagagtaa 1800

taatatattt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc tagctacagt 1860

gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca ttttgtggat 1920

ggcaccagaa gtcatcagaa tgcaagataa aaatccatac agctttcagt cagatgtata 1980

tgcatttgga attgttctgt atgaattgat gactggacag ttaccttatt caaacatcaa 2040

caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatac ctgtctccag atctcagtaa 2100

ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc tcaaaaagaa 2160

aagagatgag agaccactct ttccccaaat tctcgcctct attgagctgc tggcccgctc 2220

attgccaaaa attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg gtttccaaac 2280

agaggatttt agtctatatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccatccagg cagggggata 2340

tggtgcgttt cctgtccact gaaacaaatg agtgagagag ttcaggagag tagcaacaaa 2400

aggaaaataa atgaacatat gtttgcttat atgttaaatt gaataaaata ctctcttttt 2460

ttttaaggtg aaccaaagaa cacttgtgtg gttaaagact agatataatt tttccccaaa 2520

ctaaaattta tacttaacat tggattttta acatccaagg gttaaaatac atagacattg 2580

ctaaaaattg gcagagcctc ttctagaggc tttactttct gttccgggtt tgtatcattc 2640

acttggttat tttaagtagt aaacttcagt ttctcatgca acttttgttg ccagctatca 2700

catgtccact agggactcca gaagaagacc ctacctatgc ctgtgtttgc aggtgagaag 2760

ttggcagtcg gttagcctgg gttagataag gcaaactgaa cagatctaat ttaggaagtc 2820

agtagaattt aataattcta ttattattct taataatttt tctataacta tttcttttta 2880

taacaatttg gaaaatgtgg atgtctttta tttccttgaa gcaataaact aagtttcttt 2940

ttataaaaac gcctcccttc cccctccccg cccgacagcg gccgctcggg ccccggctct 3000

cggttataag atggcggcgc tgagcggtgg cggtggtggc ggcgcggagc cgggccaggc 3060

tctgttcaac ggggacatgg agcccgaggc cggcgccggc gccggcgccg cggcctcttc 3120

ggctgcggac cctgccattc cggaggaggt gtggaatatc aaacaaatga ttaagttgac 3180

acaggaacat atagaggccc tattggacaa atttggtggg gagcataatc caccatcaat 3240

atatctggag gcctatgaag aatacaccag caagctagat gcactccaac aaagagaaca 3300

acagttattg gaatctctgg ggaacggaac tgatttttct gtttctagct ctgcatcaat 3360

ggataccgtt acatcttctt cctcttctag cctttcagtg ctaccttcat ctctttcagt 3420

ttttcaaaat cccacagatg tggcacggag caaccccaag tcaccacaaa aacctatcgt 3480

tagagtcttc ctgcccaaca aacagaggac agtggtacct gcaaggtgtg gagttacagt 3540

ccgagacagt ctaaagaaag cactgatgat gagaggtcta atcccagagt gctgtgctgt 3600

ttacagaatt caggatggag agaagaaacc aattggttgg gacactgata tttcctggct 3660

tactggagaa gaattgcatg tggaagtgtt ggagaatgtt ccacttacaa cacacaactt 3720

tgtacgaaaa acgtttttca ccttagcatt ttgtgacttt tgtcgaaagc tgcttttcca 3780

gggtttccgc tgtcaaacat gtggttataa atttcaccag cgttgtagta cagaagttcc 3840

actgatgtgt gttaattatg accaacttga tttgctgttt gtctccaagt tctttgaaca 3900

ccacccaata ccacaggaag aggcgtcctt agcagagact gccctaacat ctggatcatc 3960

cccttccgca cccgcctcgg actctattgg gccccaaatt ctcaccagtc cgtctccttc 4020

aaaatccatt ccaattccac agcccttccg accagcagat gaagatcatc gaaatcaatt 4080

tgggcaacga gaccgatcct catcagctcc caatgtgcat ataaacacaa tagaacctgt 4140

caatattgat gacttgatta gagaccaagg atttcgtggt gatggaggat caaccacagg 4200

tttgtctgct accccccctg cctcattacc tggctcacta actaacgtga aagccttaca 4260

gaaatctcca ggacctcagc gagaaaggaa gtcatcttca tcctcagaag acaggaatcg 4320

aatgaaaaca cttggtagac gggactcgag tgatgattgg gagattcctg atgggcagat 4380

tacagtggga caaagaattg gatctggatc atttggaaca gtctacaagg gaaagtggca 4440

tggtgatgtg gcagtgaaaa tgttgaatgt gacagcacct acacctcagc agttacaagc 4500

cttcaaaaat gaagtaggag tactcaggaa aacacgacat gtgaatatcc tactcttcat 4560

gggctattcc acaaagccac aactggctat tgttacccag tggtgtgagg gctccagctt 4620

gtatcaccat ctccatatca ttgagaccaa atttgagatg atcaaactta tagatattgc 4680

acgacagact gcacagggca tggattactt acacgccaag tcaatcatcc acagagacct 4740

caagagtaat aatatatttc ttcatgaaga cctcacagta aaaataggtg attttggtct 4800

agctacagtg aaatctcgat ggagtgggtc ccatcagttt gaacagttgt ctggatccat 4860

tttgtggatg gcaccagaag tcatcagaat gcaagataaa aatccataca gctttcagtc 4920

agatgtatat gcatttggaa ttgttctgta tgaattgatg actggacagt taccttattc 4980

aaacatcaac aacagggacc agataatttt tatggtggga cgaggatacc tgtctccaga 5040

tctcagtaag gtacggagta actgtccaaa agccatgaag agattaatgg cagagtgcct 5100

caaaaagaaa agagatgaga gaccactctt tccccaaatt ctcgcctcta ttgagctgct 5160

ggcccgctca ttgccaaaaa ttcaccgcag tgcatcagaa ccctccttga atcgggctgg 5220

tttccaaaca gaggatttta gtctatatgc ttgtgcttct ccaaaaacac ccatccaggc 5280

agggggatat ggtgcgtttc ctgtccactg aaacaaatga gtgagagagt tcaggagagt 5340

agcaacaaaa ggaaaataaa tgaacatatg tttgcttata tgttaaattg aataaaatac 5400

tctctttttt tttaaggtga accaaagaac acttgtgtgg ttaaagacta gatataattt 5460

ttccccaaac taaaatttat acttaacatt ggatttttaa catccaaggg ttaaaataca 5520

tagacattgc taaaaattgg cagagcctct tctagaggct ttactttctg ttccgggttt 5580

gtatcattca cttggttatt ttaagtagta aacttcagtt tctcatgcaa cttttgttgc 5640

cagctatcac atgtccacta gggactccag aagaagaccc tacctatgcc tgtgtttgca 5700

ggtgagaagt tggcagtcgg ttagcctggg ttagataagg caaactgaac agatctaatt 5760

taggaagtca gtagaattta ataattctat tattattctt aataattttt ctataactat 5820

ttctttttat aacaatttgg aaaatgtgga tgtcttttat ttccttgaag caataaacta 5880

agtttctttt tataaaaa 5898

<210> 2

<211> 765

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu Pro Gly Gln Ala

1 5 10 15

Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Met Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ala

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Ala Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Ala Ser Asp Ser Ile Gly Pro Gln Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Gly Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu

705 710 715 720

Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly

725 730 735

Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr

740 745 750

Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Ala Phe Pro Val His

755 760 765

<210> 3

<211> 3906

<212> ДНК

<213> Rattus norvegicus

<400> 3

atggcggcgc tgagtggcgg cggtggcagc agcagcggtg gcggtggcgg cggcggcggc 60

ggcggtggtg gcggcggcgg cggcggcgcc gaacagggac aggctctgtt caatggcgac 120

atggagccgg aggccggcgc tggcgccgcg gcctcttcgg ccgcggaccc ggccattcct 180

gaagaggtgt ggaatatcaa gcaaatgatt aagttgacac aggaacatat agaggcccta 240

ttggacaagt ttggtgggga gcataaccca ccgtcaatat acctggaggc ctatgaagag 300

tacaccagca agctagatgc ccttcagcag agagagcagc agctgttgga atccctggtt 360

tttcaaactc ccacagatgt atcacggaac aaccccaagt caccacagaa acctatcgtt 420

cgtgtcttcc tgcccaacaa acagaggaca gtggtgcccg caagatgtgg tgtaacggtc 480

cgagacagtc taaagaaagc actaatgatg aggggtctca tcccagagtg ctgtgctgtt 540

tacagaattc aggacggaga gaagaaacca attggctggg acactgacat ttcctggctt 600

actggagagg agctacatgt tgaagtacta gagaatgttc ctctgacaac ccacaacttc 660

gtacggaaaa cttttttcac cttagcattt tgtgactttt gccgaaagct gcttttccag 720

ggtttccgct gtcaaacatg tggttataag tttcaccagc gttgtagtac agaggttcca 780

ctgatgtgtg ttaattatga ccaacttgat ttgctgtttg tctccaagtt ctttgagcat 840

cacccagtac cacaggagga ggccttctca gcagagacta cccttccatc tggatgctct 900

tccgcacccc cctcagactc tattgggccc caaatcctca ccagtccatc tccttcaaaa 960

tccattccaa ttccacagcc cttccggcca gcagatgaag atcatcgcaa tcagtttggg 1020

caacgagacc gctcctcctc cgctcccaat gttcatataa acacaatcga acctgtcaat 1080

attgatgaaa aattcccaga agtggaatta caggatcaaa gggatttgat tagagaccag 1140

gggtttcgtg gggatggagc ccctttgaac cagctgatgc gctgtcttcg gaaataccaa 1200

tcccggactc ccagccccct cctccattct gtccccagtg aaatagtgtt tgattttgag 1260

cctggcccag tgttcagagg gtcaaccaca ggcttgtcgg ccaccccacc tgcctcatta 1320

cctggctcac tcactaacgt gaaagcctta cagaaatctc caggacctca gcgggaaagg 1380

aagtcctcct cctcctcctc ctccacggaa gacagaagtc ggatgaaaac acttggtaga 1440

agagattcaa gtgatgattg ggagattcct gatggacaga ttacagtggg acagagaatt 1500

ggatctgggt cctttggaac tgtctacaag ggaaagtggc atggcgacgt ggcagtgaaa 1560

atgctgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg ccttcaaaaa cgaagtcgga 1620

gtactcagga aaactcgaca tgtgaacatc ctccttttca tgggctattc tacaaagcca 1680

cagctggcta ttgttacaca gtggtgtgaa ggctccagct tatatcacca tctccacatc 1740

attgagacca aatttgagat gatcaaactt atagatattg cacggcagac tgcacagggc 1800

atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc tcaagagtaa taatatattt 1860

cttcatgaag acctcacggt aaaaataggt gactttggtt tagccacagt gaagtcccga 1920

tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcta ttttgtggat ggcacccgaa 1980

gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt cagacgtgta tgcatttggg 2040

attgttctgt atgaactgat gactggtcag ctaccttatt caaacatcaa caacagggat 2100

cagataattt ttatggtggg acgaggatac ctatctccag atctcagtaa ggtacggagt 2160

aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc tcaaaaagaa aagagacgag 2220

agaccactct ttccccaaat tctcgcctct attgagctgc tggcccgctc attgccaaaa 2280

attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg gtttccaaac agaagatttt 2340

agtctgtatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccatccaag cagggggata tggagaattt 2400

gcagccttca agtagccact ccatcatggc agcatctact ctttatttct taagtcttgt 2460

gttcatacaa tttgttaaca tcaaaacaca gttctgttcc tcaaattttt tttaaagata 2520

caaaattttc aatgcataag ctcgtgtgga acagaatgga atttcctatt caacaaaaga 2580

gggaagaatg ttttaggaac cagaattctc tgctgcccgt gtttcttctt caacacaaat 2640

atcatgtgca tacaactctg cccattccca agaagaaaga ggagagaccc cgaattctgc 2700

ccttttggtg gtcaggcatg atggaaagaa tttgctgctg cagcttggga aaaattgcta 2760

tggaaagtct gccagtcaac tttgcccttc taaccaccag atccatttgt ggctggtcat 2820

ctgatggggc gatttcaatc accaagcatc gttcttgcct gttgtgggat tatgtcgtgg 2880

agcactttcc ctatccacca ccgttaattt ccgagggatg gagtaaatgc agcataccct 2940

ttgtgtagca cctgtccagt cctcaaccaa tgctatcaca gtgaagctct ttaaatttaa 3000

gtggtgggtg agtgttgagg agagactgcc ttgggggcag agaaaagggg atgctgcatc 3060

ttcttcctca cctccagctc tctcacctcg ggttgccttg cacactgggc tccgcctaac 3120

cactcgggct gggcagtgct ggcacacatt gccgcctttt ctcattgggt ccagcaattg 3180

agcagagggt tgggggattg tttcctccac aatgtagcaa attctcagga aaatacagtc 3240

catatcttcc tctcagctct tccagtcacc aaatacttac gtggctcctt tgtccaggac 3300

ataaaacacc gtggacaaca cctaattaaa agcctacaaa actgcttact gacagttttg 3360

aatgtgagac atttgtgtaa tttaaatgta aggtacaggt cttaatttct tctattaagt 3420

ttcttctatt tttatttaaa cgaagaaaat aattttcagg tttaattgga ataaacgaat 3480

acttcccaaa agactatata ccctgaaaat tatatttttg ttaattgtaa acaactttta 3540

aaaaatggtt attatccttt tctctaccta aaattatggg aaatcttagc ataatgacaa 3600

ttatttatac tttttaaata aatggtactt gctggatcca cactaacatc tttgctaaca 3660

ttcccattgt ttcttccaac ttcactccta cactacatcc tccatcctct ttctagtctt 3720

ttatctataa tatgcaacct aaaataaaag tggtggtgtc tccattcatt cttcttcttc 3780

cttttttccc caagcctggt cttcaaaagg ttgggtaatt tagtagctga gttccctagg 3840

tagaaataga actattaggg acattggggt tgtaggaaag cgtgaggcct gtcaccagtt 3900

gttctt 3906

<210> 4

<211> 804

<212> PRT

<213> Rattus norvegicus

<400> 4

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu Gln

20 25 30

Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala Gly

35 40 45

Ala Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp

50 55 60

Asn Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu

65 70 75 80

Leu Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu

85 90 95

Ala Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu

100 105 110

Gln Gln Leu Leu Glu Ser Leu Val Phe Gln Thr Pro Thr Asp Val Ser

115 120 125

Arg Asn Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

130 135 140

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

145 150 155 160

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

165 170 175

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

180 185 190

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

195 200 205

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

210 215 220

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

225 230 235 240

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

245 250 255

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

260 265 270

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Val Pro Gln Glu Glu Ala

275 280 285

Phe Ser Ala Glu Thr Thr Leu Pro Ser Gly Cys Ser Ser Ala Pro Pro

290 295 300

Ser Asp Ser Ile Gly Pro Gln Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys

305 310 315 320

Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg

325 330 335

Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His

340 345 350

Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Glu Lys Phe Pro Glu Val

355 360 365

Glu Leu Gln Asp Gln Arg Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg Gly

370 375 380

Asp Gly Ala Pro Leu Asn Gln Leu Met Arg Cys Leu Arg Lys Tyr Gln

385 390 395 400

Ser Arg Thr Pro Ser Pro Leu Leu His Ser Val Pro Ser Glu Ile Val

405 410 415

Phe Asp Phe Glu Pro Gly Pro Val Phe Arg Gly Ser Thr Thr Gly Leu

420 425 430

Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys

435 440 445

Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser

450 455 460

Ser Ser Ser Ser Thr Glu Asp Arg Ser Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg

465 470 475 480

Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val

485 490 495

Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys

500 505 510

Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr

515 520 525

Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys

530 535 540

Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro

545 550 555 560

Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His

565 570 575

His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp

580 585 590

Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser

595 600 605

Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp

610 615 620

Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg

625 630 635 640

Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp

645 650 655

Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe

660 665 670

Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr

675 680 685

Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe

690 695 700

Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser

705 710 715 720

Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys

725 730 735

Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu

740 745 750

Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro

755 760 765

Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala

770 775 780

Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Glu Phe

785 790 795 800

Ala Ala Phe Lys

<210> 5

<211> 9728

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 5

ccctcaggct cggctgcgcc ggggccgccg gcgggttcca gaggtggcct ccgccccggc 60

cgctccgccc acgccccccg cgcctccgcg cccgcctccg cccgccctgc gcctcccttc 120

cccctccccg ccccgcggcg gccgctcggc ccggctcgcg cttcgaagat ggcggcgctg 180

agtggcggcg gtggcagcag cagcggtggc ggcggcggcg gtggcggcgg cggtggcggt 240

ggcgacggcg gcggcggcgc cgagcagggc caggctctgt tcaatggcga catggagccg 300

gaggccggcg ctggcgccgc ggcctcttcg gctgcggacc cggccattcc tgaagaggta 360

tggaatatca agcaaatgat taagttgaca caggaacata tagaggccct attggacaaa 420

tttggtggag agcataaccc accatcaata tacctggagg cctatgaaga gtacaccagc 480

aagctagatg cccttcagca aagagaacag cagcttttgg aatccctggt ttttcaaact 540

cccacagatg catcacggaa caaccccaag tcaccacaga aacctatcgt tagagtcttc 600

ctgcccaaca aacagaggac agtggtaccc gcaagatgtg gtgttacagt tcgagacagt 660

ctaaagaaag cactgatgat gagaggtctc atcccagaat gctgtgctgt ttacagaatt 720

caggatggag agaagaaacc aattggctgg gacacggaca tttcctggct tactggagag 780

gagttacatg ttgaagtact ggagaatgtc ccacttacaa cacacaactt tgtacggaaa 840

acttttttca ccttagcatt ttgtgacttt tgccgaaagc tgcttttcca gggtttccgt 900

tgtcaaacat gtggttataa atttcaccag cgttgtagta cagaggttcc actgatgtgt 960

gtaaattatg accaacttga tttgctgttt gtctccaagt tctttgagca tcacccagta 1020

ccacaggagg aggcctcctt cccagagact gcccttccat ctggatcctc ttccgcaccc 1080

ccctcagact ctactgggcc ccaaatcctc accagtccat ctccttcaaa atccattcca 1140

attccacagc ccttccgacc agcagatgaa gatcatcgca atcagtttgg gcaacgagac 1200

cggtcctcct cagctcccaa tgttcatata aacacaattg agcctgtgaa tatcgatgaa 1260

aaattcccag aagtggaatt acaggatcaa agggatttga ttagagacca ggggtttcgt 1320

ggtgatggag cccccttgaa ccaactgatg cgctgtcttc ggaaatacca atcccggact 1380

cccagccccc tcctccattc tgtccccagt gaaatagtgt ttgattttga gcctggccca 1440

gtgttcagag ggtcaaccac aggcttgtcc gccaccccgc ctgcctcatt acctggctca 1500

ctcactaacg tgaaagcctt acagaaatct ccaggtcctc agcgggaaag gaagtcatct 1560

tcttcctcat cctcggagga cagaagtcgg atgaaaacac ttggtagaag agattcaagt 1620

gatgactggg agattcctga tggacagatt acagtgggac agagaattgg atctgggtca 1680

tttggaactg tctacaaggg aaagtggcat ggtgatgtgg cagtgaaaat gttgaatgtg 1740

acagcaccca cacctcaaca gctacaggcc ttcaaaaatg aagtaggagt gctcaggaaa 1800

actcgacatg tgaatatcct ccttttcatg ggctattcta caaagccaca actggcaatt 1860

gttacacagt ggtgtgaggg ctccagctta tatcaccatc tccacatcat tgagaccaaa 1920

tttgagatga tcaaacttat agatattgct cggcagactg cacagggcat ggattactta 1980

cacgccaagt caatcatcca cagagacctc aagagtaata atatatttct tcatgaagac 2040

ctcacggtaa aaataggtga ctttggtcta gccacagtga aatctcggtg gagtgggtcc 2100

catcagtttg aacagttgtc tggatctatt ttgtggatgg caccagaagt aatcagaatg 2160

caagataaaa acccgtatag ctttcagtca gacgtgtatg cgtttgggat tgttctgtac 2220

gaactgatga ccggccagct accttattca aacatcaaca acagggatca gataattttt 2280

atggtgggac gaggatacct atctccagat ctcagtaagg tacggagtaa ctgtccaaaa 2340

gccatgaaga gattaatggc agagtgcctc aaaaagaaaa gagacgagag accactcttt 2400

ccccaaattc tcgcctccat tgagctgctg gcccgctcat tgccaaaaat tcaccgcagt 2460

gcatcagaac cttccttgaa tcgggctggt ttccaaacag aagattttag tctgtatgct 2520

tgtgcttctc cgaaaacacc catccaagca gggggatatg gagaatttgc agccttcaag 2580

tagccagtcc atcatggcag catctactct ttatttctta agtcttgtgt tcatacagtt 2640

tgttaacatc aaaacacagt tctgttcctc aaaaaatttt ttaaagatac aaaattttca 2700

atgcataagt tcatgtggaa cagaatggaa tttcctattc aacaaaagag ggaagaatgt 2760

tttaggaacc agaattctct gctgcccgtg tttcttcttc aacataacta tcacgtgcat 2820

acaagtctgc ccattcccaa gaagaaagag gagagaccct gaattctgcc cttttggtgg 2880

tcaggcatga tggaaagaat ttgctgctgc agcttgggaa aattgctatg gaaagtctgc 2940

cagtcgactt tgcccttcta accaccagat cagcctgtgg ctggtcatct gatggggcga 3000

tttccatcac caagcatcgt tcttgcctat tctgggatta tgttgtggag cactttccct 3060

gtccagcacc gttcatttct gagggatgga gtaaatgcag cattcccttg tgtagcgcct 3120

gttcagtcct cagcagctgc tgtcacagcg aagcttttta cagttaagtg gtgggggaga 3180

gttgaggaga gcctgcctcg gggcagagaa aagggggtgc tgcatcttct tcctcacctc 3240

cagctctctc acctcgggtt gccttgctca ctgggctccg cctaaccact caggctgctc 3300

agtgctggca cacattgcct tcttttctca ttgggtccag caattgagga gagggttggg 3360

ggattgtttc ctcctcaatg tagcaaattc tcaggaaaat acagtccata tcttcctctc 3420

agctcttcca gtcaccaaat acttacgtgg ctcctttgtc caggacataa aacaccgtgg 3480

acaacaccta attaaaagcc tacaaaactg cttactgaca gttttgaatg tgagacactt 3540

gtgtaattta aatgtaaggt acaggtttta atttctgagt ttcttctatt tttatttaaa 3600

agaagaaaat aattttcagt tttaattgga ataaatgagt acttcccaca agactatata 3660

ccctgaaaat tatatttttg ttaattgtaa acaactttta aagaataatt attatccttt 3720

tctctaccta aaaattatgg ggaatcttag cataatgaca attatttata ctttttaaat 3780

aaatggtact tgctggatcc acactaacat ctttgctaac aatcccattg tttcttccaa 3840

cttaactcct acactacatc ctacatcctc tttctagtct tttatctata atatgcaacc 3900

taaaataaac gtggtggcgt ctccattcat tctccctctt cctgttttcc ccaagcctgg 3960

tcttcaaaag gttgggtaat cggtccctga gctccctagc tggcaatgca actattaggg 4020

acattggagt tgcaggagag caggaagcct gtccccagct gttcttctag aaccctaaat 4080

cttatctttg cacagatcaa aagtatcacc tcgtcacagt tctccttagc ctttacttac 4140

aggtaatata aataaaaatc accatagtag taaagaaaac aactggatgg attgatgacc 4200

agtacctctc agagccagga atcttgaatc tccaggattt atacgtgcaa atttaaggag 4260

atgtacttag caacttcaag ccaagaactt ccaaaatact agcgaatcta aaataaaatg 4320

gaattttgag ttatttttaa agttcaaatt ataattgata ccactatgta tttaagccta 4380

ctcacagcaa gttagatgga ttttgctaaa ctcattgcca gactgtggtg gtggtggtgg 4440

tagtgtgcac ctttaatcca agcaactcag caatcagaat gaggtaaatc tctgtgaata 4500

caaggcctgc ctagtctgca gcgctagttc caggatagcc agggctacac acacaaaaac 4560

cctctctcaa aaaaaacaaa attaattagt tgataataaa aaataactaa agtatcatca 4620

aaggaaggcc tactggaagt tttatatatt cccagtaaat tgaaaaatat tctgaagtta 4680

ttaaccagtt agcaacaatg tgtttttaag tcttacataa acagagcaaa gtcttcaaat 4740

gtttcagagc tgagaagata attgtgcttg atatgaaaaa tagcctctcc atatgatgtg 4800

ccacattgaa aggcgtcatt acccttttaa atacttctta atgtggcttt gttcccttta 4860

cccaggatta gctagaaaga gctaggtagg cttcggccac agttgcacat ttcgggcctg 4920

ctgaagaatg ggagctttga aggctggcct tggtggagga gcccctcagt gctggagggt 4980

ggggcgtgta cgcagcatgg aagtggtcta gacagagtgc aaagggacag acttctttct 5040

cattttagta tagggtgatg tctcacttga aatgagaaag tagagttgat attaaacgaa 5100

gctgtgccca gaaaccaggc tcagggtatt gtgagatttt ctttttaaat agagaatata 5160

aaagatagaa ataaatattt aaaccttcct tcttattttc tatcaaatag atttttttta 5220

tcatttgcaa acaacataaa aaaaggtttc ttttgtgggg ttttctttcc ttcttttttt 5280

tttttttttt tttttaagac tgcagataat cttgttgagc tcctcggaaa atacaaggaa 5340

gtccgtgttt gtgcagagcg ctttatgagt aactgtatag acagtgtggc tgcttcactc 5400

atcccagagg gctgcagctg tcggcccatg aagtggctgc agtgcctcgt gagatctgct 5460

ttgttttgtt tggagtgaag tctttgaaag gtttgagtgc aactatatag gactgttttt 5520

aaataagtag tattcctcat gaactttctc attgttaagc tacaggaccc aaactctacc 5580

actaagatat tattaacctc aaaatgtagt ttatagaagg aatttgcaaa tagaatatcc 5640

agttcgtact tatatgcatc ttcaacaaag attctctgtg acttgttgga tttggttcct 5700

gaacagccca tttctgtatt tgaggttagg agggcataat gaggcatcct aaaagacaat 5760

ctgatataaa ctgtatgcta gatgtatgct ggtaggggag aaagcattct gtaaagacat 5820

gatttaagac ttcagctctg tcaaccagaa accttgtaaa tacttcctgt cttggtgcag 5880

ccccgcccct ttgatcacac gatgttgtct tgtgcttgtc agacactgtc agagctgctg 5940

ttcgtccctc tgcagatctc acctgtcccc actgcacacc cacctcctgc ctcttgcaga 6000

cctcagcatc tagctttagt tggaaacagt tcagggttca ggtgacttct taaaaaaaaa 6060

aaaaaaccct acctcctcag aatgaggtaa tgaatagtta tttatttaaa gtatgaagag 6120

tcaggagcgc tcgaacatga aggtgattta agatggttcc tttcgtgtgt attgtagctg 6180

agcacttgtt tttgtcctaa agggcattat acatttaagc agtgattctg tttaaagatg 6240

tttttcttta aaggtgtagc tcagagtatc tgttgttgga attggtgcca gagtctgctt 6300

aatagatttc agaatcctaa gcttaagtca gtcgcatgaa gttaagtagt tatggtaaca 6360

ctttgctagc catgatataa ttctactttt taggagtagg tttggcaaaa ctgtatgcct 6420

tcaaagtgag ttggccacag ctttgtcaca tgcacagata ctcatctgaa gagactgccc 6480

agctaagagg gcggaaggat accctttttt cctacgattc gcttctttgt ccacgttggc 6540

attgttagta ctagtttatc agcaccttga ccagcagatg tcaaccaata agctattttt 6600

aaaaccatag ccagagatgg agaggtcact gtgagtagaa acagcaggac gcttacagga 6660

gtgaaatggt gtagggaggc tctagaaaaa tatcttgaca atttgccaaa tgatcttact 6720

gtgccttcat gatgcaataa aaaagctaac attttagcag aaatcagtga tttacgaaga 6780

gagtggccag tctggtttaa ctcagctggg ataatatttt tagagtgcaa tttagactgc 6840

gaagataaat gcactaaaga gtttatagcc aattcacatt tgaaaaataa gaaaatggta 6900

aattttcagt gaaatatttt tttaaagcac ataatcccta gtgtagccag aaatatttac 6960

cacatagagc agctaggctg agatacagtc cagtgacatt tctagagaaa ccttttctac 7020

tcccacgggc tcctcaaagc atggaaattt tatacaaaat gtttgacatt ttaagatact 7080

gctgtagttt agttttgaaa tagtatgtgc tgagcagcaa tcatgtacta actcagagag 7140

agaaaacaac aacaaattgt gcatctgatt tgttttcaga gaaatgctgc caacttagat 7200

actgagttct cagagcttca agtgtaaact tgcctcccaa gtcctgtttg caaatgaagt 7260

tggctagtgc tactgactgc tccagcacat gatggaaggc agggggctgt ctctgaagtg 7320

tcttctataa agggacaata gaatagtgag agacctggtc agtgtgtgtc agctggacac 7380

tccatgctat gggacttgca tcttctgtcc tcaccatccc caagacattg tgctttcctc 7440

agttgtcctc tagctgtttc actcagacac caagatgaat tactgatgcc agaaggggcc 7500

aaaatggcca gtgtgttttg ggggttgtat cagttgactg gacaataact ttaatagttt 7560

cagatcattt atttttactt ccattttgac agacatttaa atggaaattt agtcctaact 7620

tttgtcattt gaaaggaaaa attaacagtt cctataagat acttttgagg tggaatctga 7680

catcctaatt ttttttcttt tcagtgggtt tgcagcgagg gtcttgtatg cactaggcaa 7740

gggttctacc actaagccac atttcccagg aaataaaatg ttaacagtta aaacatacac 7800

acaaatacac aaacacctta ttaccacttt agtaaagtga gagatgtgcg tcctttgtct 7860

cagtctccac gatttcagct gccccttgta tgaataactc agtctcgcta aactgtttac 7920

ttttatttac ctggtttgac tagttgcagc tatataacca gttgtgcatg aggacaacag 7980

ccagtgtgtt tgttttgttt ttggtttttt gtggtacatt ttttgtaaag aattctgtag 8040

attgaagtgc tctttgaaaa cagaactgag atatatttat tcttgttagc atcaaaaaac 8100

attttgtgca aatgatttgc ttttcctggc aggctgagta ccatatccag cgcccacaat 8160

tgcgggttcc catctaccat gtccacaggg gagacagacg ggaagcacat gaggggtgtg 8220

tttacagagt tgtaggagtt atgtagttct cttgttgcct tggaaatcac tgttgtttta 8280

agactgttga acccgtgtgt ttggctgggc tgtgagttac atgaagaaac tgcaaactag 8340

catatgcaga caaagctcac agactaggcg taaatggagg aaaatggacc aaaataaggc 8400

agggtgacac ataaaccttg ggcttcggag aaaactaagg gtggagatga actataatca 8460

cctgaataca atgtaagagt gcaataagtg tgcttattct aagctgtgaa cttcttttaa 8520

atcattcctt tctaatacat ttatgtatgt tccattgctg actaaaacca gctatgagaa 8580

catatgcctt tttattcatg ttaactacca gtttaagtgg ctaaccttaa tgtcttattt 8640

atcttcattt tgtattagtt tacataccag gtatgtgtgt gtgctgtact cttcttccct 8700

ttatttgaaa acacttttca ctgggtcatc tccttggcca ttccacaaca caactttggt 8760

ttggctttca atgtcacctt atttgatggc ctgtgtccca gtagcagaat ttatggtatt 8820

cccattgctg gctgctcttc cgaccctttg cttctacagc acttgtctct cctaagatag 8880

tcagaaacta actgatcagg ggatggactt caccattcat cgtgtctctt caattctatt 8940

aaatagacca ctcttgggct ttagaccagg aaaaaggaga cagctctagc catctaccaa 9000

gcctcaccct aaaaggtcac ccgtacttct tggtctgagg acaagtctcc actccagtaa 9060

gggagagggg aggaaatgct tcctgtttga aatgcagtga attcctatgg ctcctgtttc 9120

accacccgca cctatggcaa cccatataca ttcctcttgt ctgtaactgc caaaggttgg 9180

gtttatgtca cttcagttcc actcaagcat tgaaaaggtt ctcatggagt ctggggtgtg 9240

cccagtgaaa agatggggac tttttcatta tccacagacc tctctatacc tgctttgcaa 9300

aaattataat ggagtaacta tttttaaagc ttatttttca attcataaga aaaagacatt 9360

tattttcaat caaatggatg atgtctctta tcccttatcc ctcaatgttt gcttgaattt 9420

tgtttgttcc ctatacctac tccctaattc tttagttcct tcctgctcag gtcccttcat 9480

ttgtactttg gagtttttct catgtaaatt tgtataatgg aaaatattgt tcagtttgga 9540

tagaaagcat ggagaaataa ataaaaaaag atagctgaaa atcaaattga agaaatttat 9600

ttctgtgtaa agttatttaa aaactctgta ttatatttaa agaaaaaagc ccaacccccc 9660

aaaaagtgct atgtaattga tgtgaatatg cgaatactgc tataataaag attgactgca 9720

tggagaaa 9728

<210> 6

<211> 804

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 6

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Asp Gly Gly Gly Gly Ala Glu

20 25 30

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

35 40 45

Gly Ala Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val

50 55 60

Trp Asn Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala

65 70 75 80

Leu Leu Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu

85 90 95

Glu Ala Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg

100 105 110

Glu Gln Gln Leu Leu Glu Ser Leu Val Phe Gln Thr Pro Thr Asp Ala

115 120 125

Ser Arg Asn Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe

130 135 140

Leu Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr

145 150 155 160

Val Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro

165 170 175

Glu Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile

180 185 190

Gly Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val

195 200 205

Glu Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys

210 215 220

Thr Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe

225 230 235 240

Gln Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys

245 250 255

Ser Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu

260 265 270

Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Val Pro Gln Glu Glu

275 280 285

Ala Ser Phe Pro Glu Thr Ala Leu Pro Ser Gly Ser Ser Ser Ala Pro

290 295 300

Pro Ser Asp Ser Thr Gly Pro Gln Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

305 310 315 320

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

325 330 335

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

340 345 350

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Glu Lys Phe Pro Glu

355 360 365

Val Glu Leu Gln Asp Gln Arg Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg

370 375 380

Gly Asp Gly Ala Pro Leu Asn Gln Leu Met Arg Cys Leu Arg Lys Tyr

385 390 395 400

Gln Ser Arg Thr Pro Ser Pro Leu Leu His Ser Val Pro Ser Glu Ile

405 410 415

Val Phe Asp Phe Glu Pro Gly Pro Val Phe Arg Gly Ser Thr Thr Gly

420 425 430

Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val

435 440 445

Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser

450 455 460

Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Ser Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg

465 470 475 480

Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val

485 490 495

Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys

500 505 510

Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr

515 520 525

Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys

530 535 540

Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro

545 550 555 560

Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His

565 570 575

His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp

580 585 590

Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser

595 600 605

Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp

610 615 620

Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg

625 630 635 640

Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp

645 650 655

Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe

660 665 670

Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr

675 680 685

Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe

690 695 700

Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser

705 710 715 720

Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys

725 730 735

Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu

740 745 750

Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro

755 760 765

Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala

770 775 780

Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Glu Phe

785 790 795 800

Ala Ala Phe Lys

<210> 7

<211> 2232

<212> ДНК

<213> Oryctolagus cuniculus

<400> 7

atggggaatg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga cacaggagca tatagaggcc 60

ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa tatatctgga ggcctacgaa 120

gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac agcagttatt ggaatcccta 180

gtttttcaaa atcccacaga tgtgtcacgg agcaacccca agtcaccaca aaaacctatt 240

gttagagtct tcctgcccaa caaacagagg acagtggtac ctgcaagatg tggagttacg 300

gttcgagaca gtctaaagaa agcgctgatg atgagaggtc tgatcccaga atgctgtgct 360

gtttacagaa ttcaggatgg agagaagaag ccaattggct gggacactga tatttcctgg 420

ctcactggag aagagctgca tgtggaagtg ttagagaatg tcccactcac cacacataac 480

tttgtacgga aaactttttt caccttagca ttttgtgact tctgtagaaa gctgcttttc 540

cagggtttcc gctgtcaaac atgtggctac aaatttcacc agcgttgtag tacggaagtt 600

ccactgatgt gtgttaatta tgaccaactt gatttgctgt ttgtctccaa gttctttgaa 660

caccacccag taccacagga ggaggcctcc ttagcagaga ctgccctcac atctgggtca 720

tcgccttccg cacctccctc agactctatt gggcaccaaa ttctcaccag tccgtcccct 780

tcaaaatcca ttccgattcc acagtccttc cgaccagcag atgaagatca tcgaaatcag 840

tttgggcaac gagaccggtc ttcatcagcg cctaatgttc acattaacac aatagaacct 900

gtcaatattg atgaaaaatt cccagaagtg gaattacagg atcaaaggga cttgattaga 960

gaccaagggt ttcgtggtga tggagcccct ttgaaccagc tgatgcgctg tcttcggaaa 1020

taccaatccc ggactcccag tcccctccta ccttctgtcc ccagtgacat agtgtttgat 1080

tttgagcctg gcccagtgtt cagaggatcg accacgggtt tgtctgccac tccccctgcc 1140

tcattacctg gctcactcac tagtgtgaaa gctgtacaga gatccccagg acctcagcga 1200

gagaggaagt cgtcttcctc ctcagaagac aggaatcgaa tgaaaactct tggtagacgg 1260

gattcaagtg atgattggga gattcctgat gggcagatca ccgtgggaca gagaattgga 1320

tctggatcat ttggaaccgt ctacaaggga aaatggcacg gtgatgtggc agtaaaaatg 1380

ttgaatgtga cagcacctac acctcagcag ttacaggcct tcaaaaatga agtaggagta 1440

ctcaggaaaa cacgacatgt gaatatccta cttttcatgg gctattccac aaagccacag 1500

ctggctattg ttacccagtg gtgtgagggc tccagtttat atcaccatct ccacatcatt 1560

gagaccaaat tcgagatgat caaacttata gatattgcac ggcagactgc acagggcatg 1620

gattacttac acgccaagtc aatcatccac agagacctca agagtaataa tatatttctt 1680

catgaagacc tcacagtaaa aataggtgat tttggtctag ccacagtgaa atctcgatgg 1740

agtgggtccc atcagtttga acaattgtct ggatccattt tgtggatggc accagaagta 1800

atcagaatgc aagacaaaaa cccatatagc tttcagtcag atgtatatgc atttgggatt 1860

gttctgtatg aattgatgac tgggcagtta ccttactcaa acatcaacaa cagggaccag 1920

atcattttta tggtgggacg tggctacctg tctccagacc tcagtaaggt acggagtaac 1980

tgtccgaaag ccatgaagag attaatggca gagtgcctca aaaagaaaag agatgagaga 2040

ccactctttc cccaaattct cgcctccatt gagctgctgg cccgctcatt gccaaaaatc 2100

caccgcagtg catcagaacc ctccttgaat cgggctggtt tccagacaga ggattttagt 2160

ctatatgctt gtgcttctcc aaaaacaccc atccaggcag ggggatatgg agaatttgca 2220

gccttcaagt ag 2232

<210> 8

<211> 743

<212> PRT

<213> Oryctolagus cuniculus

<400> 8

Met Gly Asn Val Trp Asn Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu

1 5 10 15

His Ile Glu Ala Leu Leu Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro

20 25 30

Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala

35 40 45

Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln Leu Leu Glu Ser Leu Val Phe Gln Asn

50 55 60

Pro Thr Asp Val Ser Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile

65 70 75 80

Val Arg Val Phe Leu Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg

85 90 95

Cys Gly Val Thr Val Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg

100 105 110

Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu

115 120 125

Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu

130 135 140

Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn

145 150 155 160

Phe Val Arg Lys Thr Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg

165 170 175

Lys Leu Leu Phe Gln Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe

180 185 190

His Gln Arg Cys Ser Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp

195 200 205

Gln Leu Asp Leu Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Val

210 215 220

Pro Gln Glu Glu Ala Ser Leu Ala Glu Thr Ala Leu Thr Ser Gly Ser

225 230 235 240

Ser Pro Ser Ala Pro Pro Ser Asp Ser Ile Gly His Gln Ile Leu Thr

245 250 255

Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Ser Phe Arg Pro

260 265 270

Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser

275 280 285

Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp

290 295 300

Glu Lys Phe Pro Glu Val Glu Leu Gln Asp Gln Arg Asp Leu Ile Arg

305 310 315 320

Asp Gln Gly Phe Arg Gly Asp Gly Ala Pro Leu Asn Gln Leu Met Arg

325 330 335

Cys Leu Arg Lys Tyr Gln Ser Arg Thr Pro Ser Pro Leu Leu Pro Ser

340 345 350

Val Pro Ser Asp Ile Val Phe Asp Phe Glu Pro Gly Pro Val Phe Arg

355 360 365

Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly

370 375 380

Ser Leu Thr Ser Val Lys Ala Val Gln Arg Ser Pro Gly Pro Gln Arg

385 390 395 400

Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr

405 410 415

Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln

420 425 430

Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr

435 440 445

Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr

450 455 460

Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val

465 470 475 480

Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser

485 490 495

Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser

500 505 510

Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys

515 520 525

Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His

530 535 540

Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu

545 550 555 560

His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val

565 570 575

Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser

580 585 590

Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro

595 600 605

Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu

610 615 620

Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln

625 630 635 640

Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys

645 650 655

Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys

660 665 670

Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala

675 680 685

Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala

690 695 700

Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser

705 710 715 720

Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr

725 730 735

Gly Glu Phe Ala Ala Phe Lys

740

<210> 9

<211> 2186

<212> ДНК

<213> Cavia porcellus

<400> 9

atggcggcgc tcagcggcgg cggtggcgcg gagcagggcc aggctctgtt caacggggac 60

atggagctcg aggccggcgc cggcgccgca gcctcttcgg ctgcagaccc tgccattccc 120

gaggaggtat ggaatatcaa acaaatgatt aagttgacgc aggaacacat agaggcccta 180

ttggacaaat ttggtggaga gcataatcca ccatcaatat acctggaggc ctatgaagaa 240

tacaccagca aactagatgc cctccaacaa agagaacagc agttactgga atccctcggg 300

aatggaactg atttttctgt ttctagctct gcatcactgg acaccgttac atcttcttct 360

tcttctagcc tttcagtact accttcatct ctttcagttt ttcaaaatcc tacagatgtg 420

tcacggagca accccaaatc accacaaaaa cctattgtta gagtcttcct gcccaacaaa 480

cagaggacag tggtacctgc aaggtgtgga gttacagtcc gagacagtct gaagaaagca 540

ctcatgatga gaggtcttat cccagagtgc tgtgctgtgt acagaattca ggatggagaa 600

aagaaaccaa ttggctggga cactgacatt tcctggctta ctggggaaga attacatgta 660

gaagtattgg agaatgttcc acttacaaca cacaattttg tatgtatctt tatatttttt 720

ttgctgtttg tctccaagtt ctttgaacac cacccaatac cacaggagga ggcttcctta 780

gcagagacca cccttacatc tggatcatcc ccttctgcac ccccctcaga gtccattggg 840

cccccaattc tcaccagccc atctccttca aaatccattc caattccaca gcctttccgg 900

ccaggagagg aagatcatcg aaatcaattt gggcagcgag accggtcctc atctgctccc 960

aatgtgcata taaacacaat agaacctgtc aatattgatg atttgattag agaccaaggg 1020

tttcgtagtg atggaggatc aactacaggt ttgtctgcca ccccacctgc ctcattacct 1080

ggctcactca ctaatgtgaa agccttacag aaatctccag gacctcagcg agaaaggaag 1140

tcatcttcat cctcagaaga cagaaatcga atgaaaacgc ttggtagacg ggactcaagt 1200

gatgattggg agattcctga tgggcagatt acagtgggac aaagaattgg atctgggtca 1260

tttggaacag tctacaaggg gaagtggcat ggtgacgtgg cagtgaaaat gttgaatgtg 1320

acagcaccca cacctcaaca gttacaggcc ttcaaaaatg aagtaggagt actcaggaaa 1380

acacgacatg tgaatatcct actcttcatg ggctattcca caaagccaca gctagctatt 1440

gttacccagt ggtgtgaggg ctccagctta taccaccatc tccacatcat cgagaccaaa 1500

tttgagatga tcaaacttat agatattgca cgacagactg cccagggcat ggattactta 1560

cacgccaagt caatcatcca cagagacctc aagagtaata atatatttct tcacgaagac 1620

ctcacggtta aaataggtga ttttggtcta gccacagtga aatctcgatg gagtgggtcc 1680

catcagtttg aacagttgtc tggatccatt ttgtggatgg caccagaagt aatcagaatg 1740

cgagataaaa acccatacag ttttcagtcc gatgtatatg catttgggat tgttctatat 1800

gaattgatga ctgggcagtt accctattca aatatcaaca acagggacca gataattttt 1860

atggtgggac gaggatatct atctccagat ctcagcaagg tacggagtaa ctgtccaaaa 1920

gccatgaaga ggttaatggc ggagtgcctc aaaaagaaaa gagatgagag accactcttt 1980

ccccaaattc tcgcctctat tgagctgctg gcccgctcat tgccaaaaat tcaccgcagt 2040

gcatcagaac cctccttgaa tcgggctggt ttccaaacag aggattttag tctctatgct 2100

tgtgcttctc caaaaacacc catccaggca gggggatatg gtgcgtttcc tgtccactga 2160

tgcaaattaa atgagtgaga aataaa 2186

<210> 10

<211> 719

<212> PRT

<213> Cavia porcellus

<400> 10

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ala Glu Gln Gly Gln Ala Leu

1 5 10 15

Phe Asn Gly Asp Met Glu Leu Glu Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ser

20 25 30

Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn Ile Lys Gln

35 40 45

Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu Asp Lys Phe

50 55 60

Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr Glu Glu

65 70 75 80

Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln Leu Leu

85 90 95

Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser Ser Ala Ser

100 105 110

Leu Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser Val Leu Pro

115 120 125

Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser Arg Ser Asn

130 135 140

Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu Pro Asn Lys

145 150 155 160

Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg Asp Ser

165 170 175

Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala

180 185 190

Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr

195 200 205

Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu

210 215 220

Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Cys Ile Phe Ile Phe Phe

225 230 235 240

Leu Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu

245 250 255

Glu Ala Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser

260 265 270

Ala Pro Pro Ser Glu Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser

275 280 285

Pro Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Gly Glu Glu

290 295 300

Asp His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro

305 310 315 320

Asn Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile

325 330 335

Arg Asp Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser

340 345 350

Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala

355 360 365

Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser

370 375 380

Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser

385 390 395 400

Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile

405 410 415

Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp

420 425 430

Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu

435 440 445

Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val

450 455 460

Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile

465 470 475 480

Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile

485 490 495

Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln

500 505 510

Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg

515 520 525

Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys

530 535 540

Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser

545 550 555 560

His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu

565 570 575

Val Ile Arg Met Arg Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val

580 585 590

Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro

595 600 605

Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg

610 615 620

Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys

625 630 635 640

Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu

645 650 655

Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg

660 665 670

Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg

675 680 685

Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro

690 695 700

Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Ala Phe Pro Val His

705 710 715

<210> 11

<211> 3229

<212> ДНК

<213> Canis lupus

<400> 11

gtaatgctgg attttcatgg aataagtttg acctgtgctg cagtggcctc cagcaaggta 60

cccgcaagat gtggagttac agtccgggac agtctaaaga aagctctgat gatgagaggt 120

ctaatcccag agtgctgtgc tgtttacaga attcaggatg gagagaagaa accgattggc 180

tgggacactg atatttcctg gctcactgga gaggaattgc atgtagaagt gttggaaaat 240

gttccgctta ccacacacaa ctttgtacgg aaaacttttt tcaccttagc attttgtgac 300

ttttgtcgaa agctgctttt ccagggtttt cgctgtcaaa catgtggtta taaatttcac 360

cagcgttgta gtacagaggt tccactgatg tgtgttaatt atgaccaact tgatttgctg 420

tttgtctcca agttctttga acaccaccca ataccacagg aggaggcctc catagcagag 480

actgccctta cgtctggatc atccccttct gctcccccct ccgattctcc tgggccccca 540

attctgacca gtccgtctcc ttcaaaatcc attccaattc cacagccttt ccgaccagca 600

gatgaagatc atcgaaatca gtttggacaa cgagaccggt cctcatcagc tccaaatgtg 660

catataaaca caatagaacc cgtcaacatt gatgacttga ttagagacca agggtttcgt 720

agtgatggag gatcaaccac aggtttgtct gccacccccc ctgcctcatt gcctggctca 780

ctcactaatg taaaagcatt acagaaatct ccaggacctc agcgggaaag aaaatcatct 840

tcatcctcag aagataggaa tcgaatgaaa acacttggta gacgggattc aagtgatgat 900

tgggagatac ctgatgggca gatcacagtg ggacagagaa ttggatccgg gtcatttggg 960

acagtctaca agggaaagtg gcatggtgac gtggcagtga aaatgttgaa tgtgacagca 1020

cccacacctc agcagttaca ggccttcaaa aatgaagtag gagtactcag gaaaactcga 1080

catgtgaata tcctactctt tatgggctat tcaacaaagc cccaactggc tattgttacc 1140

cagtggtgtg agggctccag cttatatcac catctccaca tcattgagac caaatttgag 1200

atgataaagc ttatagatat tgcacggcag actgcacagg gcatggatta cttacacgcc 1260

aagtcaatca tccacagaga cctcaagagt aataatattt ttcttcatga agacctcaca 1320

gtaaaaatag gtgattttgg tctagccaca gtgaaatctc gatggagtgg gtcccatcag 1380

tttgaacagt tgtctggatc cattttgtgg atggcaccag aagtgatccg aatgcaagac 1440

aaaaacccat atagcttcca gtcagatgta tacgcatttg ggattgttct atatgaattg 1500

atgacagggc agttacctta ttcaaacatc aacaacaggg accagataat ttttatggtg 1560

ggacgaggat atctttctcc agatctcagt aaggtacgga gtaactgtcc aaaagccatg 1620

aagagattga tggcagagtg cctaaaaaag aaaagagatg agaggccact ctttccccaa 1680

attctcgcct ctattgagct gctggcccgc tcattgccaa aaattcaccg cagtgcatca 1740

gaaccctcct tgaatcgggc tggcttccaa acagaggatt ttagtctcta tgcttgcgct 1800

tctccaaaaa cacccatcca ggcaggggga tacggagaat ttgcagcctt caagtagcca 1860

caccatcatg gcaacaacta ctcttatttc ttaagtcttg tgttcgtaca atttgttaac 1920

atcaaaacac agttctgttc ctcaaatctt tttttaaaga tacagaattt tcaatgcata 1980

agctggtgtg gaacagaatg gaatttccca tccaacaaaa gagggaagaa tgttttagga 2040

accagaattc tctgctgcca gtgtttcttc ttcaacacaa ataccacgtg catacaagtc 2100

tgcccactcc caggaaggaa gaggagagcc tgagttctga ccttttgatg gtcaggcatg 2160

atggaaagaa actgctgcta cagcttggga gattggctgt ggagagcctg cccgtcagct 2220

ctgcccttct aaccgccaga tgagtgtgtg gctggtcacc tgacagggca gctgcaatcg 2280

ccaagcatcg ttctctttcc tgtcctggga ttttgtcgtg gagctctttc cccctagtca 2340

ccaccggttc atttctgagg gatggaacaa aaatgcagca tggcctttct gtgtggtgca 2400

tgtccggtct ttgacaaatt tttatcaagt gaagctcttg tatttaaatg gagaatgaga 2460

ggcgaggggg ggggatcacg ttttggtgta ggggcaaagg gaatgctgca tctttttcct 2520

gacccactgg gtttctggcc tttgtttcct tgctcactga gggtgtctgc ctataaccac 2580

gcaggctgga aagtgctggc acacattgcc ttctcttctc actgggtcca gcaatgaaga 2640

caagtgttgg ggattttttt ttttgccctc cacaatgtag caagttctca ggaaaataca 2700

gttaatatct tcctcctaag ctcttccagt catcaagtac ttatgtggct actttgtcca 2760

gggcacaaaa tgccatggcg gtatccaatt aaaagcctac aaaactgctt gataacagtt 2820

ttgaatgtgt gagacattta tgtaatttaa atgtaaggta caagttttaa tttctgagtt 2880

tctctattat atttttatta aaaagaaaat aattttcaga tttaattgaa ttggaataaa 2940

ataatacttc ccaccagaat tatatatcct ggaaaattgt atttttgtta tataaacaac 3000

ttttaaagaa agatcattat ccttttctct acctaaatat ggggagtctt agcataatga 3060

cagatattta taatttttaa attaatggta cttgctggat ccacactaac atctttgcta 3120

atatctcatg ttttcctcca acttactcct acactacatc ctccatcctc tttccagtct 3180

tttatctaga atatgcaacc taaaataaaa atggtggtgt ctccattca 3229

<210> 12

<211> 617

<212> PRT

<213> Canis lupus

<400> 12

Met Leu Asp Phe His Gly Ile Ser Leu Thr Cys Ala Ala Val Ala Ser

1 5 10 15

Ser Lys Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg Asp Ser Leu Lys

20 25 30

Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala Val Tyr

35 40 45

Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr Asp Ile

50 55 60

Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu Asn Val

65 70 75 80

Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe Phe Thr Leu Ala

85 90 95

Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly Phe Arg Cys Gln

100 105 110

Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr Glu Val Pro Leu

115 120 125

Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe Val Ser Lys Phe

130 135 140

Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala Ser Ile Ala Glu Thr

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro Ser Asp Ser Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile Pro Ile

180 185 190

Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln Phe Gly

195 200 205

Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn Thr Ile

210 215 220

Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg Ser

225 230 235 240

Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu

245 250 255

Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro

260 265 270

Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met

275 280 285

Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp

290 295 300

Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr

305 310 315 320

Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn

325 330 335

Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val

340 345 350

Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly

355 360 365

Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly

370 375 380

Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met

385 390 395 400

Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr

405 410 415

Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile

420 425 430

Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala

435 440 445

Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser

450 455 460

Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys

465 470 475 480

Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu

485 490 495

Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg

500 505 510

Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu

515 520 525

Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala

530 535 540

Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile

545 550 555 560

Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg

565 570 575

Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp

580 585 590

Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly

595 600 605

Gly Tyr Gly Glu Phe Ala Ala Phe Lys

610 615

<210> 13

<211> 1889

<212> ДНК

<213> Canis lupus

<400> 13

ggaatatcaa acaaatgatt aagttgacac aggaacatat agaagcccta ttggacaagt 60

ttggtgggga gcataatcca ccatcaatat atctggaggc ctatgaagaa tacaccagca 120

aactagatgc cctccaacag cgagaacaac agttattgga atccctgggg aatggaactg 180

atttttctgt ttctagctct gcatcaacgg acaccgttac atcttcttcc tcttctagcc 240

tttcagtgct accttcatct ctttcagttt ttcaaaatcc cacagatata tcacggagca 300

atcccaagtc accacaaaaa cctatcgtta gagtcttcct gcccaataaa cagaggacgg 360

tggtacccgc aagatgtgga gttacagtcc gggacagtct aaagaaagct ctgatgatga 420

gaggtctaat cccagagtgc tgtgctgttt acagaattca ggatggagag aagaaaccga 480

ttggctggga cactgatatt tcctggctca ctggagagga attgcatgta gaagtgttgg 540

aaaatgttcc gcttaccaca cacaactttg tacggaaaac ttttttcacc ttagcatttt 600

gtgacttttg tcgaaagctg cttttccagg gttttcgctg tcaaacatgt ggttataaat 660

ttcaccagcg ttgtagtaca gaggttccac tgatgtgtgt taattatgac caacttgatt 720

tgctgtttgt ctccaagttc tttgaacacc acccaatacc acaggaggag gcctccatag 780

cagagactgc ccttacgtct ggatcatccc cttctgctcc cccctccgat tctcctgggc 840

ccccaattct gaccagtccg tctccttcaa aatccattcc aattccacag cctttccgac 900

cagcagatga agatcatcga aatcagtttg gacaacgaga ccggtcctca tcagctccaa 960

atgtgcatat aaacacaata gaacccgtca acattgatga cttgattaga gaccaagggt 1020

ttcgtagtga tggaggatca accacaggtt tgtctgccac cccccctgcc tcattgcctg 1080

gctcactcac taatgtaaaa gcattacaga aatctccagg acctcagcgg gaaagaaaat 1140

catcttcatc ctcagaagat aggaatcgaa tgaaaacact tggtagacgg gattcaagtg 1200

atgattggga gatacctgat gggcagatca cagtgggaca gagaattgga tccgggtcat 1260

ttgggacagt ctacaaggga aagtggcatg gtgacgtggc agtgaaaatg ttgaatgtga 1320

cagcacccac acctcagcag ttacaggcct tcaaaaatga agtaggagta ctcaggaaaa 1380

ctcgacatgt gaatatccta ctctttatgg gctattcaac aaagccccaa ctggctattg 1440

ttacccagtg gtgtgagggc tccagcttat atcaccatct ccacatcatt gagaccaaat 1500

ttgagatgat aaagcttata gatattgcac ggcagactgc acagggcatg gattacttac 1560

acgccaagtc aatcatccac agagacctca agagtaataa tatttttctt catgaagacc 1620

tcacagtaaa aataggtgat tttggtctag ccacagtgaa atctcgatgg agtgggtccc 1680

atcagtttga acagttgtct ggatccattt tgtggatggc accagaagtg atccgaatgc 1740

aagacaaaaa cccatatagc ttccagtcag atgtatacgc atttgggatt gttctatatg 1800

aattgatgac agggcagtta ccttattcaa acatcaacaa cagggaccag ctcagatcat 1860

gatcacggtg tcatgagatc aagccccac 1889

<210> 14

<211> 615

<212> PRT

<213> Canis lupus

<400> 14

Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu Asp Lys Phe

1 5 10 15

Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr Glu Glu

20 25 30

Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln Leu Leu

35 40 45

Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser Ser Ala Ser

50 55 60

Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser Val Leu Pro

65 70 75 80

Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Ile Ser Arg Ser Asn

85 90 95

Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu Pro Asn Lys

100 105 110

Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg Asp Ser

115 120 125

Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala

130 135 140

Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr

145 150 155 160

Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu

165 170 175

Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe Phe Thr

180 185 190

Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly Phe Arg

195 200 205

Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr Glu Val

210 215 220

Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe Val Ser

225 230 235 240

Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala Ser Ile Ala

245 250 255

Glu Thr Ala Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro Ser Asp

260 265 270

Ser Pro Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile

275 280 285

Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln

290 295 300

Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn

305 310 315 320

Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe

325 330 335

Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala

340 345 350

Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro

355 360 365

Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn

370 375 380

Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile

385 390 395 400

Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe

405 410 415

Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met

420 425 430

Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn

435 440 445

Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe

450 455 460

Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys

465 470 475 480

Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe

485 490 495

Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met

500 505 510

Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn

515 520 525

Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly

530 535 540

Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln

545 550 555 560

Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln

565 570 575

Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile

580 585 590

Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn

595 600 605

Asn Arg Asp Gln Leu Arg Ser

610 615

<210> 15

<211> 3521

<212> ДНК

<213> Felis catus

<220>

<221> misc_feature

<222> (630)..(649)

<223> n представляет собой a, c, g, или t

<400> 15

atgcctaacc tcagtctctg ccaccacggc caatttgctc atgtgcccac tgtgtcggca 60

ctgggatatt ttgtgatttg ccttggccat tgtccactgt ccttgacatt gcctgaagga 120

gaaccactga tgctaatgtt gaaggtgacc tttgcaggct ctccactact cataccaaag 180

atgcggcccc ctgataatcc cagagccact gtctgcacat gggcaaaaca ggctacattc 240

tgtgcagact ggggagaaag gttccaagaa cacagtgcca tagttttggg cagagagttt 300

caacacagca tagtgtctat ggcagtatct ggatttggcc gggggaagtg cccaagagga 360

gacagtcagg ctgtgtccta cggccaagga cctgcactta tttttgcatg cagtggttta 420

gcacagggaa gagaacgaag taggaaatcg gagccatgga aacggcagag cggaggaaac 480

gtgcacgcgc gagggtgggc acgaaaggaa agaaccctcc ccagaagact gcgcgagggc 540

gctcctagga ttacgtcacg caccccgcga aaactgaaat gtactgtgtg tggtctttta 600

attgaactat cttccttatg tgcacttaan nnnnnnnnnn nnnnnnnnng cggcggcggc 660

ggtggcgcgg agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga agccggcgcc 720

gcggcctctt cggctgcgga ccctgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg 780

attaagttga cacaggaaca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat 840

ccaccatcaa tatatctaga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa 900

cagagagaac aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc 960

tctgcatcaa cagacaccgt tacatcttcc tcctcttcta gcctttcagt gctaccttca 1020

tctctttcag tttttcaaaa ccccacagat gtgtcacgga gcaatcccaa gtcaccacag 1080

aaacctatcg ttagagtctt cctgcctaat aaacagagga cagtggtacc tgcaagatgt 1140

ggagttacag tccgggacag tctaaagaaa gctctgatga tgagaggtct aatccctgag 1200

tgctgtgctg tttacagaat tcaggatgga gagaagaaac caattggctg ggacactgat 1260

atctcctggc tcaccggaga ggaattgcat gtagaagtgt tggaaaatgt tccacttaca 1320

actcacaact ttgtatgtac ggaaaacgtt ttcaccttag cattttgtga cttttgtcga 1380

aagctgcttt tccaaggttt tcgctgtcaa acgtgtggtt ataaatttca ccagcgttgt 1440

agtacagagg ttccactgat gtgtgttaat tatgaccaac ttgatttgct gtttgtctcc 1500

aagttctttg aacaccaccc aataccacag gaggaggcct ccatagcaga gactgcccta 1560

acgtctggat cgtccccttc tgcccccccc tccgattcta ctgggcccca aattctcacc 1620

agtccgtctc cttcaaaatc cattccaatt ccacagcctt tccgaccagc agatgaagat 1680

catcgaaatc aatttggaca gcgagaccgg tcctcatcag ctccaaatgt gcatataaat 1740

acaatagaac ctgtcaatat tgatgacttg attagagacc aggggtttcg tagtgatgga 1800

ggatcaacca caggcttgtc tgccaccccc cctgcctcat tgccgggctc tctcactaat 1860

gtaaaagcat tacagaaatc tccagggcct cagcgggaaa ggaaatcttc ttcatcctca 1920

gaagatagga atcgaatgaa aacacttggt agaagggatt caagtgatga ttgggagatt 1980

cctgatgggc agatcacagt gggacagaga attggatccg ggtcatttgg gacagtctac 2040

aagggaaagt ggcatggtga tgtggcagtg aaaatgttga atgtgacagc acccacacct 2100

cagcagttac aggccttcaa aaatgaagta ggagtactca ggaaaactcg gcatgtgaac 2160

atcctgctct tcatgggcta ttcaacaaag ccccagctgg ctattgtcac ccagtggtgt 2220

gagggctcca gcttatacca ccatctccac atcatcgaga ccaaattcga gatgatcaag 2280

ctgatagata ttgctcggca gactgcgcag ggcatggatt acttacacgc caagtcaatc 2340

atccacagag acctcaagag taataatatt tttcttcacg aagacctcac agtaaaaata 2400

ggtgattttg gtctagccac agtgaaatct cgatggagtg ggtcccatca gtttgaacag 2460

ttgtctggat ccattttgtg gatggcacca gaagtaattc gaatgcaaga taaaaaccca 2520

tatagctttc agtcagatgt atatgcattt gggattgttc tatatgaatt gatgactgga 2580

cagttacctt attcaaacat caacaacagg gaccagataa tttttatggt gggacgagga 2640

tatctttctc cagatctcag taaggtacga agtaactgtc caaaagccat gaagagattg 2700

atggcagagt gcctaaaaaa gaaaagagat gagaggccac tgtttcccca aattcttgcc 2760

tctattgagc tgctggcccg ctcattgcca aaaattcacc gcagtgcatc agaaccctcc 2820

ttgaatcggg ctggcttcca gacagaggat tttagtctct atgcttgtgc ttctccaaaa 2880

acacccatcc aggcaggggg atatggtgcg tttcccgtcc actgagataa gttagatgag 2940

tgcgcgagtg cagggggccg gggccaagga ggtggaaatg tgcgtgcttc tgtactaagt 3000

tggatagcat cttctttttt aaaaaaagat gaaccaaaga atgtgtatgt ttttaaagac 3060

tagatataat tatttcctga tctaaaatgt atacttagct ttggattttc aatatccaag 3120

ggttttcaaa atgcacagac attgctgaac atttgcagta cctcttctgg aggctttact 3180

tcctgttaca aattggtttt gtttactggc ttatcctaat tattaaactt caattaaact 3240

tttctcctgc accttttgtt atgagctatc acatgtccct tagggactcg caagagcagt 3300

actgcccccg tgtacgggct tgcaggtaga aaggggatga cgggttttaa cacctgtgtg 3360

aggcaaggca gtccgaacag atctcattta ggaagccacg agagttgaat aagttatttt 3420

tattcttagt attttttctg taactacttt ttattataac ttggaaaata tggatgtcct 3480

ttatacacct tagcaataga ctgaatttct ttttataaat t 3521

<210> 16

<211> 974

<212> PRT

<213> Felis catus

<220>

<221> misc_feature

<222> (210)..(217)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 16

Met Pro Asn Leu Ser Leu Cys His His Gly Gln Phe Ala His Val Pro

1 5 10 15

Thr Val Ser Ala Leu Gly Tyr Phe Val Ile Cys Leu Gly His Cys Pro

20 25 30

Leu Ser Leu Thr Leu Pro Glu Gly Glu Pro Leu Met Leu Met Leu Lys

35 40 45

Val Thr Phe Ala Gly Ser Pro Leu Leu Ile Pro Lys Met Arg Pro Pro

50 55 60

Asp Asn Pro Arg Ala Thr Val Cys Thr Trp Ala Lys Gln Ala Thr Phe

65 70 75 80

Cys Ala Asp Trp Gly Glu Arg Phe Gln Glu His Ser Ala Ile Val Leu

85 90 95

Gly Arg Glu Phe Gln His Ser Ile Val Ser Met Ala Val Ser Gly Phe

100 105 110

Gly Arg Gly Lys Cys Pro Arg Gly Asp Ser Gln Ala Val Ser Tyr Gly

115 120 125

Gln Gly Pro Ala Leu Ile Phe Ala Cys Ser Gly Leu Ala Gln Gly Arg

130 135 140

Glu Arg Ser Arg Lys Ser Glu Pro Trp Lys Arg Gln Ser Gly Gly Asn

145 150 155 160

Val His Ala Arg Gly Trp Ala Arg Lys Glu Arg Thr Leu Pro Arg Arg

165 170 175

Leu Arg Glu Gly Ala Pro Arg Ile Thr Ser Arg Thr Pro Arg Lys Leu

180 185 190

Lys Cys Thr Val Cys Gly Leu Leu Ile Glu Leu Ser Ser Leu Cys Ala

195 200 205

Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

210 215 220

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

225 230 235 240

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

245 250 255

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

260 265 270

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

275 280 285

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

290 295 300

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

305 310 315 320

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

325 330 335

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

340 345 350

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

355 360 365

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

370 375 380

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

385 390 395 400

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

405 410 415

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

420 425 430

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Cys Thr Glu

435 440 445

Asn Val Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe

450 455 460

Gln Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys

465 470 475 480

Ser Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu

485 490 495

Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu

500 505 510

Ala Ser Ile Ala Glu Thr Ala Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ala

515 520 525

Pro Pro Ser Asp Ser Thr Gly Pro Gln Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro

530 535 540

Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp

545 550 555 560

His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn

565 570 575

Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg

580 585 590

Asp Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala

595 600 605

Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu

610 615 620

Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser

625 630 635 640

Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp

645 650 655

Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly

660 665 670

Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val

675 680 685

Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln

690 695 700

Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn

705 710 715 720

Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val

725 730 735

Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile

740 745 750

Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr

755 760 765

Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp

770 775 780

Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile

785 790 795 800

Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His

805 810 815

Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val

820 825 830

Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr

835 840 845

Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr

850 855 860

Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly

865 870 875 880

Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala

885 890 895

Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg

900 905 910

Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser

915 920 925

Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala

930 935 940

Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys

945 950 955 960

Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Ala Phe Pro Val His

965 970

<210> 17

<211> 3853

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 17

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaaat tctcgcctct attgagctgc 2340

tggcccgctc attgccaaaa attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg 2400

gcttccaaac agaggatttt agtctatatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccattcagg 2460

cagggggata tggtacgttt cctgttcact gaaacaaacc gagtgagtga cagcatgtag 2520

gagggtaggg acaaaagaaa gtgaacaaat gtttgcttat atatttgtta aattgaatag 2580

gattttcttt ttctttaaag gtgaacaaga gaacatgtgt gtttttaaag tttggatata 2640

gttttcttcc cagtctaaaa cccatagtta gcattacatt ttcaacatcg aatttttttt 2700

taattcatag acattgctga aaatttataa taccttttcc agaggcttta cttcccattc 2760

caagtttgtt ttgtttactt ggttagtcta atcattaaac tttaaacttt ccccacctac 2820

cttttgctgt tagctatccc gcatccatta ggggctccaa gaacagcact gtctgcgtgt 2880

gtgtgttggc aggtgggaag ctgatggtaa gttaggctgt gttagtgaag gtaaactgac 2940

caggtctaat taggagtcac tagaattgaa taagcttatt tttattaata ttttttctta 3000

taactatttc tttttgtaat aatttagaaa atataattgt tctttattcc cttacagcag 3060

tataaattat tggtgcaggt aaccaaagat attactgagg agtggcatgt ttgacatgag 3120

tgacatggtt taactttgga tttttagtta atatttcttt atatattaag gatgtcttac 3180

acattataga agtcaaattt actgacaaag gtattgcctc ctcttcctcc ccaaaaacac 3240

agcaaaattc tctgggaact cgtagcattg ttggttttct tttggatgac tatggttgcc 3300

aaacaaccaa gtaattgatt ttttttaaat tattattgct ttagattata ctcacctctc 3360

atgatgcctg ttagcaatca cctttatcca tgtgtcttgt aaaatatctt tcctccttat 3420

attctttgcc caacaagagt ctacttgtta tgaatgagta ctattttctt tttttgattc 3480

cccagtataa ttagtatgtt tagtgctttc taggacttcc actttcttat gttaaaaaaa 3540

aaaacaaact aatgtggcag tcagtatatt cttactgtga atcagagtct ttactgggaa 3600

tcaaagtgaa agaagcagct gttctgactt cagagtcagc ctagggacca aaaccagcct 3660

cttaaataca ccttcattta ttcagtttgg atttgtgatg attttcatta tagctgacag 3720

ttcaaggtta ttcagtggca cacagatagc atctgcataa atgcctttct tcttgaaaat 3780

aaaggagaaa attgggaaga ctttacacca atagtttagt ctttaagtac cacagataac 3840

acacaccata aat 3853

<210> 18

<211> 764

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 18

Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu Gln

1 5 10 15

Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala Ala

20 25 30

Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn Ile

35 40 45

Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu Asp

50 55 60

Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr

65 70 75 80

Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln

85 90 95

Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser Ser

100 105 110

Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser Val

115 120 125

Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser Arg

130 135 140

Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu Pro

145 150 155 160

Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg

165 170 175

Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys

180 185 190

Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp

195 200 205

Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val

210 215 220

Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe

225 230 235 240

Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly

245 250 255

Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr

260 265 270

Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe

275 280 285

Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala Ser

290 295 300

Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys

325 330 335

Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg

340 345 350

Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His

355 360 365

Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln

370 375 380

Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro

385 390 395 400

Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys

405 410 415

Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp

420 425 430

Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp

435 440 445

Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly

450 455 460

Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val

465 470 475 480

Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe

485 490 495

Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu

500 505 510

Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln

515 520 525

Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr

530 535 540

Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln

545 550 555 560

Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys

565 570 575

Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp

580 585 590

Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe

595 600 605

Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg

610 615 620

Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe

625 630 635 640

Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn

645 650 655

Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu

660 665 670

Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys

675 680 685

Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu

690 695 700

Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro

705 710 715 720

Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe

725 730 735

Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro

740 745 750

Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Thr Phe Pro Val His

755 760

<210> 19

<211> 4936

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 19

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaagt aggaaagact ctcctaagca 2340

agagacaaaa ttcagaagtt atcagggaaa aagataagca gattctcgcc tctattgagc 2400

tgctggcccg ctcattgcca aaaattcacc gcagtgcatc agaaccctcc ttgaatcggg 2460

ctggcttcca aacagaggat tttagtctat atgcttgtgc ttctccaaaa acacccattc 2520

aggcaggggg atatgaagca gatttggctc ttacatcaaa taaaaataga gtagaagttg 2580

ggatttagag atttcctgac atgcaagaag gaataagcaa gaaaaaaagg tttgttttcc 2640

ccaaatcata tctattgtct tttacttcta ttttttctta aattttttgt gatttcagag 2700

acatgtagag ttttattgat acctaaacta tgagttcttt tttttttttt tttttcatta 2760

ttttgatttt tttggccaag aggcatatgg gatcttagct tgagaaagca acaattttct 2820

tgatgtcatt ttgggtgagg gcacatattg ctgtgaacag tgtggtgata gccaccaggg 2880

accaaactca cacccgctgc attgaaaggt gaagtcttaa acactggacc agcagagaaa 2940

ttcctactct atgagttctt tttgtcatcc cctccccgca ccctccaccc ccaacctaaa 3000

gtctgatgat gaaatcaaca actattccat tagaagcagt agattctggt agcatgatct 3060

ttagtttgtt agtaagattt tgtgctttgt ggggttgtgt cgttttaagg ctaatattta 3120

agtttgtcaa atagaatgct gttcagattg taaaaatgag taataaacat ctgaagtttt 3180

ttttaagtta tttttaacat ggtatataca gttgagctta gagtttatca ttttctgata 3240

ttctcttact tagtagatga attctagcca ttttttataa agatttctgt taagcaaatc 3300

ctgttttcac atgggcttcc tttaagggat tttagattct gctggatatg gtgactgctc 3360

ataagactgt tgaaaattac ttttaagatg tattagaata cttctgaaaa aaaatagcaa 3420

ccttaaaacc ataagcaaaa gtagtaaggg tgtttataca tttctagagt ccctgtttag 3480

gtaatagcct cctatgattg tactttaaat gttttgctct ccaaggtttt agtaacttgg 3540

ctttttttct aatcagtgcc aaactccccc agttttttta actttaaata tgaggtaata 3600

aatcttttac ccttccttga tcttttgact tataatacct tggtcagttg tttcttaaaa 3660

ggaatcctta aatggaaaga gacaatatca ctgtctgcag ttctgattag tagttttatt 3720

cagaatggaa aaacagatta ttcatttttg aaaattgttc aggggtatgt tcattgttag 3780

gaccttggac tttggagtca gtgcctagct atgcattcca ggtctgccat tttctggctg 3840

tgaaattttg gacaagttac ttaaccactt taaaccccag ctttaagaag taaattaacc 3900

ccagtaaatt aagaagtaat agcagccact tcgtagagtt gttatgaggc tcagatgcag 3960

tgcaaatgtg tataaagtat tcagggagtc acctggtata ctataataga cactagaata 4020

gttgccaata ttatcagcat acaatctgag gattctgtca gccaatcatt agcaatctgt 4080

tgtttgttgg gacatgccag tgttctccag ttgaaatcag tagcaatcta aaaatggata 4140

gattattcct catttaaata gtgtgttcat ataagtgatt gcttggatcc ttatcagaag 4200

ttgctgttac tgaaaaatga taaggctgac taaattgtga tagttgtcag ttactaacca 4260

actcccagaa atgaataaga ggaacctatc tctagttcct agtagaaggt atggacaaaa 4320

tagtaggtga aaaataatgt cttgaacccc caaattaagt aagctttaaa gagtacaata 4380

cctcaaaggg tctttgcggt ttaaaatttg tatgctgaga atgatgttca ttgacatgtg 4440

cctatatgta attttttgat agtttaaaag gtgaaatgaa ctacagatgg gagaggtctg 4500

aattttcttg ccttcagtca aatgtgtaat gtggacatat tatttgacct gtgaatttta 4560

tcttttaaaa aagattaatt cctgcttctt ccttcctaat agttgcatta taataatgaa 4620

aatgagttga taatttgggg ggaaagtatt ctacaaatca accttattat tttaccattg 4680

gtttctgaga aattttgttc atttgaaccg tttatagctt gattagaatc atagcatgta 4740

aaacccaact gagggattat ctgcagactt aatgtagtat tatgtaagtt gtcttctttc 4800

atttcgacct tttttgcttt tgttgttgct agatctgtag tatgtagcta gtcacctttc 4860

agcgaggttt cagcgaggct tttctgtgtc tctaggttat ttgagataac ttttttaaaa 4920

ttagctcttg tcctcc 4936

<210> 20

<211> 797

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 20

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Val Gly Lys Thr Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser

705 710 715 720

Glu Val Ile Arg Glu Lys Asp Lys Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu

725 730 735

Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser

740 745 750

Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys

755 760 765

Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Glu Ala Asp Leu

770 775 780

Ala Leu Thr Ser Asn Lys Asn Arg Val Glu Val Gly Ile

785 790 795

<210> 21

<211> 4154

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 21

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaagt aggaaagact ctcctaagca 2340

agagacaaaa ttcagaagtt atcagggaaa aagataagca gattctcgcc tctattgagc 2400

tgctggcccg ctcattgcca aaaattcacc gcagtgcatc agaaccctcc ttgaatcggg 2460

ctggcttcca aacagaggat tttagtctat atgcttgtgc ttctccaaaa acacccattc 2520

aggcaggggg atatggctga gcacattgtc catcacccac aagtggctgg ttctcatcgc 2580

agaatctacg tagggaatcg ggcgtgaaat tcacttaaga gatagagcag aggaagtgtt 2640

ctgtttacag gaatggagat gagagttatg agtaagttgc ttagtcagtt ggctttgttt 2700

tgaaaattat tgtgttatat ttgtgttaac ctacttgtgt tttgacagta tatgtcacat 2760

aggaagaaac ctcagactag cataataaca aagctcagac taggcacaga tgtacacaga 2820

atggaccaaa atgggatggg ggaaggtatg ggaataagtc taggggtagg gaaaaattga 2880

tgtgagggtg ggaaataaac tgtaattacc tgaaataaaa tgtaagagtg caataagtgt 2940

gctttttatt ctaagctgtg aatgggtttt ttaaaaaaag cattccttcc caatgcattt 3000

gcctatgttc catagctgat taaaaccagc tatataaaca tatgcctttt tattcatgtt 3060

aattaccaat ataaatggct aacctttacg tcttatttat cttcatgtta tgttagttta 3120

catacaggga tgtgtgtgtg tgtgtatgct ataaattttc cctccttcgt ttaaaaacgc 3180

gtttgttgga tcctctctgt ttccttaggc catgccacag ctcatagtct cagcttggcc 3240

ttcctgtcac ctgatctgaa ggactatcac agtgacgtag ctcgttcatt ggttgtacac 3300

actctaaccc ttttccttgc tcagcaatta ctgtgtcttc taaaacagga gtgtacaacc 3360

atgagattgc aattaattgt ttgacatatg tccctttgaa ttctatttat tagttatgat 3420

tgattgctct ttggtttgga ccaagaaaaa cgaaatccca cctccccacc ttttcactta 3480

tttcttactt tgaggacaat tctgtaagag agaggaaagg gaactccttc atgttttaac 3540

tgcagcaagt taatggccct ggtttacacc aaacattatg gtgattcaca ttcacattcc 3600

tctcctctct tgctgccaga ggtttgggtt ttgttcagtt ctgctcaagc actgaaaaag 3660

ttttcatgga gtctggagag tgcccagtga aaagatggtt tttaattgtc cacagacctt 3720

tctgttcctg ctttgcaaaa attacaaagg agtaactatt tttaaagctt atttttcaat 3780

tcataaaaaa gacatttatt ttcagtcaga tgatgtctcc ttgtccctta atcctcaatg 3840

tttgcttgaa tctttttttt ttttctgatt ttctcccatc cccacttctt gatacttctt 3900

gagttctctt tcctgctcag gtcctttcat ttgtactttg gagttttttc tcatgtaaat 3960

ttgtacaatg gaaaatattg ttcagtttgg atagaacgca tggagaatta aataaaaaag 4020

atagctgaaa ttcagattga aatttatttg tgtaaagtta tttaaaaact ctgtactata 4080

taaaaggcaa aaaaagttct atgtacttga tgtgaatatg cgaatactgc tataataaag 4140

attgactgca tgga 4154

<210> 22

<211> 781

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 22

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Val Gly Lys Thr Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser

705 710 715 720

Glu Val Ile Arg Glu Lys Asp Lys Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu

725 730 735

Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser

740 745 750

Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys

755 760 765

Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly

770 775 780

<210> 23

<211> 7914

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 23

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaaat tctcgcctct attgagctgc 2340

tggcccgctc attgccaaaa attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg 2400

gcttccaaac agaggatttt agtctatatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccattcagg 2460

cagggggata tggagaattt gcagccttca agtagccaca ccatcatgac agcatctact 2520

cttatttctt aagtcttgtg ttcgtacaat ttgttaacat caaaacacag ttctgttcct 2580

caactctttt taaagttaaa atttttcagt gcataagctg gtgtggaaca gaaggaaatt 2640

tcccatccaa caaaagaggg aagaatgttt taggaaccag aattctctgc tgccagtgtt 2700

tcttcttcaa cacaaatatc acaagtctgc ccactcccag gaagaaagag gagagaccct 2760

gagttctgac cttttgatgg tcaggcatga tggaaagaaa ctgctgctac agcttgggag 2820

atttgctctg ggaagtctgc cagtcaactt tgcccttcta accaccagat caatatgtgg 2880

ctgatcatct gatggggcag ttgcaatcac caagccttgt tctctttcct gttctgggat 2940

tgtgttgtgg aacccttttc cctagccacc accagttcat ttctgaggga tggaacaaaa 3000

atgcagcatg cccttcctgt gtggtgcatg ttcagtcctt gacaaatttt taccaaaatg 3060

aagctacttt atttaaaagg agggtgagag gtgaggaggt cactttgggt gtggcggaaa 3120

gggaatgctg catctttttc ctgggctgct ggggctctgg ccttggcttg ccagccggaa 3180

gcgctggcac gcatcgcctt cttttcccat tgggtccagc aatgaagacg agtgtttggg 3240

gttttttttt tctccaccat gtagcaagtt ctcaggaaaa tacaattgat atcttcctcc 3300

taagctcttc caatcagtca ccaagtactt atgtggttac tttgtccagg gcacaaaatg 3360

cctgtatcta attaaaagcc tacaaaactg cttgataaca gttttgaatg tgagacattt 3420

atgtaattta aatgtaaggt acaagtttta atttctgagt ttcttctatt atatttttat 3480

taaaaaaaga aaataatttt cagattgaat tggagtaaaa taatattact tcccactaga 3540

attatatatc ctggaaaatt gtatttttgt tacataagca gcttttaaag aaagatcatt 3600

acccttttct ctacataaat atatggggag tcttagccta atgacaaata tttataattt 3660

ttaaattaat ggtacttgct ggatccatac taacatcttt actaatacct cattgtttct 3720

tccaacttac tcctacacta catcctacat cttcttccta gtcttttatc tagaatatgc 3780

aacctcaaat aaaaatggtg gtgtcctcat tcattctcct ccttcctttt ttcccaagcc 3840

tgatcttcaa aaggttggtt aatttggcag ctgagttcct ccccaggcag agaatagacc 3900

aattttaggt gtattgggac tgagggagga tgtgtaaaga ttaacatcag taaagaaccg 3960

ctgtggagta attaagaact ttgttcttta taactggaga atataaccta accctaacat 4020

ccctcagcct ttactaaagt gtggcgtaaa tcacagtagt agcaaagaaa gtgactctgg 4080

atgtgttcct ggccagtacc tcccttatca tgaatgtaga ctctctcatc aagatttagg 4140

aatataaatc aaatcaaatg tgcccagcca agctatgtag taagggactt gaacaatatt 4200

aggcagaacc tataaaataa atcagggaat tagaaattat ttaaagtttt caaattgtaa 4260

attgccccgg tgtctttcag cctactgcca ttatttttgc tacaatacct acatttcaga 4320

ggagggccta ctgaaaattc catgcaagtg gaaaataatc ctcaagttat taatgagttt 4380

gaaaagcaat gagttcttaa gtctttgtga gtagagcaag atcctacaaa attcagaaat 4440

agtaaaaatg gattcatgct gatttgaaga gcatctgtgt gcataatata atgctgcatc 4500

tcttttaaaa gcagtctatt tttcttttta aatttgtccc catagatgct tttgaacatg 4560

aacatgctta tgttaccttt tccgaggttg ggaagagcca ggagctctca ggcagggccc 4620

cctccctcag ctgggcagga gctgctcagg aggagctagt tatagaggaa gcttagcgtt 4680

ggcattttca aaattcaagg tgataacgct ttcttcttcc tttctgtttt agaatagatt 4740

gctgtctgat ttgaaaaagg gaaatagatt tgatctcaaa tgaatctgtg cccagaagcc 4800

aggctcaggg tattcagaga tttgtatagt gccctcaaaa aataacaaaa ttttagcttt 4860

ccttttttct tcttttctcc atcaaattct tttttctcta gtttacaaat gacatggaaa 4920

aggaatttcc cctgagtttt gtatgccttt ttttttttgg cttagactat agataggcgt 4980

gttgagctcc taagaaaata caaggaggaa ctctttgttg tgcagagcac tttatgagta 5040

gtttgtgtgg ataatatgtg actgcttccc tgacgagctt gtgaggctgt acttatgtct 5100

ttcctgtaag gcagcttcag tgccttctgt agtgtatata aggaaagatt acgccttctg 5160

aaaaatctca gagcaaccat aagattattt taaaatatgt agtatgactg atggactttt 5220

tcatcattaa attagtctag catctaaact tttaccactg aaataatatt gaccaaaaag 5280

caatttataa aaggtatttg tgaatagaaa atacaatgtg atcatttgta cttatgtgca 5340

ccttaaaaga ggaattctgt ctagctgtca aattctggtt ccttaacatc cagtccttga 5400

ttgtgattga gatctggtag gacgtgctgg ggcacgctag cagataaaat cccgtatact 5460

ttaggataga tgttacattt atgtcagtgt tggcaaagag cattgtgtag taataaagaa 5520

ttcaagactt cagcaatgtc aacctgaaac tttgtaaata tttcctagat tgttatttga 5580

tgcagtcaca gctctttatc acacaatgtt gtctttccct catcaggcaa ttttagaact 5640

gctgcacacc cctcctcaga tctcacctgc ccctcctgta cattcacctc tccagccttg 5700

tgcacacctc atttagcttt agtttgaaac acattgcagg gttcaggtga cctcttcaaa 5760

aactacctcc tcagaatgag gtaatgaata gttatttatt ttaaaatatg aaaagtcagg 5820

agctctagaa tatgaagatg atctaagatt ttaactttta tgtatacttg ttgagcactc 5880

tccttttgtc ctaaagggca ttatacattt aagcagtaat actgaaaaat gtagctcaga 5940

gtaactgaat gttgttgaaa gtggtgccag aatctgtttt aggggtacgt atcagaatct 6000

taatcttaaa tcggttacat gaaattaaat agttaatggt aacacttgac taacagatat 6060

aattttaatt ttcggtaggc ttttagcaag acagtaagta catcttcata atgagttagc 6120

cacagcttca tcacatgcac agattttcct gttgagagac tgcccagtta agagggtaga 6180

atgatgaacc atttttcagg attctcttct ttgtccaaac tggcattgtg agtgctagaa 6240

tatcagcact ttcaaactag tgattccaac tattaggcta ttaaaaagca aaacaaacca 6300

aacaaaccat agccagacat gggaagttta ctatgagtat aaacagcaaa tagcttacag 6360

gtcatacatt gaaatggtgt aggtaaggcg ttagaaaaat accttgacaa tttgccaaat 6420

gatcttactg tgccttcatg atgcaataaa aaaaaaaaaa atttagcata aatcagtgat 6480

ttgtgaagag agcagccacc ctggtctaac tcagctgtgt taatattttt tagcgtgcaa 6540

tttagactgc aaagataaat gcactaaaga gtttatagcc aaaatcacat ttaaaaaatg 6600

agagaaaaca caggtaaatt ttcagtgaac aaaattattt ttttaaagta cataatccct 6660

agtatagtca gatatattta tcacatagag caaataggtt gaaatcacaa ttcagtgaca 6720

tttctagaga aactttttct actcccatag gttcttcaaa gcatggaact tttatataac 6780

agaaatgtgt gacggtcatt ttaaattgct gtagtttggg gctgaagtac tgtgtgctgg 6840

gcagcaatca catgtattaa ctagtgagaa aggagaaatt aagatatagg acagaatttg 6900

attttcttgt tcccagatta ctgctgccaa cctagacact gagtttccag aggctgaaac 6960

gtaaacttgc agctcagcaa ctgttttgca aagttagtgg gactgtcctg cttatgctgt 7020

tcaaaaatgc tctgagggcc aggtggggcc tccaggggct cctctctgag gggacatcag 7080

actagctaac gacctggcgg gcggatgtga accggacaca ctccatggtg tgcttcttgt 7140

atcggtccct cgccaccctc aagaaaggct tcagcgggtt ctctagacgt ctccactaag 7200

gtgtgttact aacagccatg ggttgttgag cacccgagga gtgcaatagc atctctgcat 7260

gattgtatat tggcccgaag agaatgaagt ggccagtgta ctcatgttcc atgttgctag 7320

ctctggtaaa ctgaaaatac tggtaagatt tttgttttat cagtacacta gagagtaagc 7380

tttgttttgt tgtttttaga taatgttttc acttccattt ggaaagacat ttaaattgag 7440

tttcagtcct aaattttgcc agtcatggta attagcagtt tctatcaggt atttttaagg 7500

tagaagagga tagaaacata agttctaaaa gcttaaggta accgtggttt attttaaaat 7560

gtttaggggt ggttagtctc tacctcaaaa aaagtgagtg aatcttttat ttcagcattc 7620

acaagttcgg ctgttgtttt tgtaatacat ttttttttta accttttgac ccccctttac 7680

ctaagtgtca atgtagtttt attaattact aagtcagttt cattaaaatg tttatttagc 7740

agttttgact aattgcaatg attaatatag ccagttgtgc atgaggacac agccagtgag 7800

tatatctggg ttttttttgt gatgcttttt ttcttaagac ttctgtagat ttatgaagta 7860

ctcattgaaa acaactaaaa tacgtttatt cgtgttaata tggaaaaaaa aaaa 7914

<210> 24

<211> 766

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 24

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu

705 710 715 720

Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly

725 730 735

Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr

740 745 750

Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Glu Phe Ala Ala Phe Lys

755 760 765

<210> 25

<211> 4670

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 25

ggtgtgtcat agtgcagcag attgaatgca gaagatatga aaattcagat gtcttctgtt 60

aaggtgtgga atatcaaaca aatgattaag ttgacacagg agcatataga ggccctattg 120

gacaaatttg gtggggagca taatccacca tcaatatatc tggaggccta tgaagaatac 180

accagcaagc tagatgccct ccaacaaaga gaacaacagt tattggaatc cctggggaat 240

ggaactgatt tttctgtttc tagctctgca tcaacggaca ccgttacatc ttcttcctct 300

tctagccttt cagtgctgcc ttcatctctt tcagtttttc aaaatcccac agatgtgtca 360

cggagcaacc ccaagtcacc acaaaaacct atcgttagag tcttcctgcc caataaacag 420

aggacagtgg tacctgcacg gtgtggagtc acagtccggg acagcctgaa gaaggcactg 480

atgatgagag gtctaatccc agagtgctgt gctgtttaca gaattcagga tggggagaag 540

aaaccaattg gctgggacac tgatatttcc tggcttactg gagaggagtt gcatgtagaa 600

gtgttggaga atgttccact tacaacacac aactttgtac ggaaaacttt tttcacctta 660

gcattttgtg acttctgtag aaagctgctt ttccagggat tccgctgtca aacatgtggt 720

tataaatttc accagcgttg tagtacagag gttccactga tgtgtgttaa ttatgaccaa 780

ctagatttgc tgtttgtctc caagttcttt gaacaccacc caataccaca ggaggaggcc 840

tccttagcag agactaccct tccatgtggc tcatcccctt ctgcaccccc ctccgattct 900

attgggcccc caattctcac cagtccatct ccttcaaaat ccattccaat tccacagcct 960

ttccgaccag cagatgaaga tcatcgaaat cagtttggac aacgagaccg gtcctcatca 1020

gctccaaatg tgcatataaa cacaatagaa cccgtcaata ttgatgactt gattagagac 1080

caagggtttc gtagtgatgg aggatcaacc acaggtttat ccgccacacc ccctgcctca 1140

ttacctggct cactctctaa tgtgaaagca ttgcagaaat ctccaggacc tcagcgagaa 1200

agaaagtcct cttcatcctc agaagacagg aatcgaatga aaacgcttgg tagacgggat 1260

tcaagtgacg attgggagat tcctgatgga cagatcacag tgggacaaag aattggatca 1320

gggtcatttg ggacagtcta caagggaaag tggcatggtg atgtggcagt gaaaatgttg 1380

aatgtgacag cacccacacc tcagcagtta caggccttca aaaatgaagt aggagtactc 1440

aggaaaacgc gacatgtgaa tatcctcctc ttcatgggtt attcaacaaa gccacaactg 1500

gctattgtta cccagtggtg tgagggctcc agtttatatc atcatctcca catcattgag 1560

accaaattcg agatgatcaa acttatagat attgcacggc agactgcaca gggcatggat 1620

tacttacacg ccaagtcaat catccacaga gacctcaaga gtaataatat ttttcttcat 1680

gaagacctca cagtaaaaat aggtgatttt ggtctagcca cagtgaaatc tcgatggagt 1740

gggtcccatc agtttgaaca gttgtctgga tccattttgt ggatggcacc agaagtaatc 1800

agaatgcaag ataaaaaccc atatagcttt cagtcagatg tatatgcatt tgggattgtt 1860

ctgtatgaat tgatgaccgg acagttacct tattcaaata tcaacaacag ggaccagata 1920

atttttatgg tgggacgagg atatctgtct ccagatctca gtaaggtacg gagtaactgt 1980

ccaaaagcca tgaagagatt aatggcagag tgcctaaaaa agaaaagaga tgaaagacca 2040

ctctttcccc aagtaggaaa gactctccta agcaagagac aaaattcaga agttatcagg 2100

gaaaaagata agcagattct cgcctctatt gagctgctgg cccgctcatt gccaaaaatt 2160

caccgcagtg catcagaacc ctccttgaat cgggctggct tccaaacaga ggattttagt 2220

ctatatgctt gtgcttctcc aaaaacaccc attcaggcag ggggatatga agcagatttg 2280

gctcttacat caaataaaaa tagagtagaa gttgggattt agagatttcc tgacatgcaa 2340

gaaggaataa gcaagaaaaa aaggtttgtt ttccccaaat catatctatt gtcttttact 2400

tctatttttt cttaaatttt ttgtgatttc agagacatgt agagttttat tgatacctaa 2460

actatgagtt cttttttttt tttttttttc attattttga tttttttggc caagaggcat 2520

atgggatctt agcttgagaa agcaacaatt ttcttgatgt cattttgggt gagggcacat 2580

attgctgtga acagtgtggt gatagccacc agggaccaaa ctcacacccg ctgcattgaa 2640

aggtgaagtc ttaaacactg gaccagcaga gaaattccta ctctatgagt tctttttgtc 2700

atcccctccc cgcaccctcc acccccaacc taaagtctga tgatgaaatc aacaactatt 2760

ccattagaag cagtagattc tggtagcatg atctttagtt tgttagtaag attttgtgct 2820

ttgtggggtt gtgtcgtttt aaggctaata tttaagtttg tcaaatagaa tgctgttcag 2880

attgtaaaaa tgagtaataa acatctgaag ttttttttaa gttattttta acatggtata 2940

tacagttgag cttagagttt atcattttct gatattctct tacttagtag atgaattcta 3000

gccatttttt ataaagattt ctgttaagca aatcctgttt tcacatgggc ttcctttaag 3060

ggattttaga ttctgctgga tatggtgact gctcataaga ctgttgaaaa ttacttttaa 3120

gatgtattag aatacttctg aaaaaaaata gcaaccttaa aaccataagc aaaagtagta 3180

agggtgttta tacatttcta gagtccctgt ttaggtaata gcctcctatg attgtacttt 3240

aaatgttttg ctctccaagg ttttagtaac ttggcttttt ttctaatcag tgccaaactc 3300

ccccagtttt tttaacttta aatatgaggt aataaatctt ttacccttcc ttgatctttt 3360

gacttataat accttggtca gttgtttctt aaaaggaatc cttaaatgga aagagacaat 3420

atcactgtct gcagttctga ttagtagttt tattcagaat ggaaaaacag attattcatt 3480

tttgaaaatt gttcaggggt atgttcattg ttaggacctt ggactttgga gtcagtgcct 3540

agctatgcat tccaggtctg ccattttctg gctgtgaaat tttggacaag ttacttaacc 3600

actttaaacc ccagctttaa gaagtaaatt aaccccagta aattaagaag taatagcagc 3660

cacttcgtag agttgttatg aggctcagat gcagtgcaaa tgtgtataaa gtattcaggg 3720

agtcacctgg tatactataa tagacactag aatagttgcc aatattatca gcatacaatc 3780

tgaggattct gtcagccaat cattagcaat ctgttgtttg ttgggacatg ccagtgttct 3840

ccagttgaaa tcagtagcaa tctaaaaatg gatagattat tcctcattta aatagtgtgt 3900

tcatataagt gattgcttgg atccttatca gaagttgctg ttactgaaaa atgataaggc 3960

tgactaaatt gtgatagttg tcagttacta accaactccc agaaatgaat aagaggaacc 4020

tatctctagt tcctagtaga aggtatggac aaaatagtag gtgaaaaata atgtcttgaa 4080

cccccaaatt aagtaagctt taaagagtac aatacctcaa agggtctttg cggtttaaaa 4140

tttgtatgct gagaatgatg ttcattgaca tgtgcctata tgtaattttt tgatagttta 4200

aaaggtgaaa tgaactacag atgggagagg tctgaatttt cttgccttca gtcaaatgtg 4260

taatgtggac atattatttg acctgtgaat tttatctttt aaaaaagatt aattcctgct 4320

tcttccttcc taatagttgc attataataa tgaaaatgag ttgataattt ggggggaaag 4380

tattctacaa atcaacctta ttattttacc attggtttct gagaaatttt gttcatttga 4440

accgtttata gcttgattag aatcatagca tgtaaaaccc aactgaggga ttatctgcag 4500

acttaatgta gtattatgta agttgtcttc tttcatttcg accttttttg cttttgttgt 4560

tgctagatct gtagtatgta gctagtcacc tttcagcgag gtttcagcga ggcttttctg 4620

tgtctctagg ttatttgaga taactttttt aaaattagct cttgtcctcc 4670

<210> 26

<211> 761

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 26

Met Lys Ile Gln Met Ser Ser Val Lys Val Trp Asn Ile Lys Gln Met

1 5 10 15

Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu Asp Lys Phe Gly

20 25 30

Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr Glu Glu Tyr

35 40 45

Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln Leu Leu Glu

50 55 60

Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser Ser Ala Ser Thr

65 70 75 80

Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser Val Leu Pro Ser

85 90 95

Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser Arg Ser Asn Pro

100 105 110

Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu Pro Asn Lys Gln

115 120 125

Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg Asp Ser Leu

130 135 140

Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala Val

145 150 155 160

Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr Asp

165 170 175

Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu Asn

180 185 190

Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe Phe Thr Leu

195 200 205

Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly Phe Arg Cys

210 215 220

Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr Glu Val Pro

225 230 235 240

Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe Val Ser Lys

245 250 255

Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala Ser Leu Ala Glu

260 265 270

Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro Ser Asp Ser

275 280 285

Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile Pro

290 295 300

Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln Phe

305 310 315 320

Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn Thr

325 330 335

Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg

340 345 350

Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser

355 360 365

Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly

370 375 380

Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg

385 390 395 400

Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro

405 410 415

Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly

420 425 430

Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu

435 440 445

Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu

450 455 460

Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met

465 470 475 480

Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu

485 490 495

Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu

500 505 510

Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp

515 520 525

Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn

530 535 540

Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu

545 550 555 560

Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu

565 570 575

Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp

580 585 590

Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val

595 600 605

Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn

610 615 620

Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp

625 630 635 640

Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met

645 650 655

Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln

660 665 670

Val Gly Lys Thr Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser Glu Val Ile Arg

675 680 685

Glu Lys Asp Lys Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser

690 695 700

Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala

705 710 715 720

Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys

725 730 735

Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Glu Ala Asp Leu Ala Leu Thr Ser

740 745 750

Asn Lys Asn Arg Val Glu Val Gly Ile

755 760

<210> 27

<211> 4816

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 27

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag agcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1080

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1140

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1200

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1260

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1320

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1380

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1440

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1500

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1560

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1620

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1680

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1740

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1800

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1860

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 1920

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 1980

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2040

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2100

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2160

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaagt aggaaagact ctcctaagca 2220

agagacaaaa ttcagaagtt atcagggaaa aagataagca gattctcgcc tctattgagc 2280

tgctggcccg ctcattgcca aaaattcacc gcagtgcatc agaaccctcc ttgaatcggg 2340

ctggcttcca aacagaggat tttagtctat atgcttgtgc ttctccaaaa acacccattc 2400

aggcaggggg atatgaagca gatttggctc ttacatcaaa taaaaataga gtagaagttg 2460

ggatttagag atttcctgac atgcaagaag gaataagcaa gaaaaaaagg tttgttttcc 2520

ccaaatcata tctattgtct tttacttcta ttttttctta aattttttgt gatttcagag 2580

acatgtagag ttttattgat acctaaacta tgagttcttt tttttttttt tttttcatta 2640

ttttgatttt tttggccaag aggcatatgg gatcttagct tgagaaagca acaattttct 2700

tgatgtcatt ttgggtgagg gcacatattg ctgtgaacag tgtggtgata gccaccaggg 2760

accaaactca cacccgctgc attgaaaggt gaagtcttaa acactggacc agcagagaaa 2820

ttcctactct atgagttctt tttgtcatcc cctccccgca ccctccaccc ccaacctaaa 2880

gtctgatgat gaaatcaaca actattccat tagaagcagt agattctggt agcatgatct 2940

ttagtttgtt agtaagattt tgtgctttgt ggggttgtgt cgttttaagg ctaatattta 3000

agtttgtcaa atagaatgct gttcagattg taaaaatgag taataaacat ctgaagtttt 3060

ttttaagtta tttttaacat ggtatataca gttgagctta gagtttatca ttttctgata 3120

ttctcttact tagtagatga attctagcca ttttttataa agatttctgt taagcaaatc 3180

ctgttttcac atgggcttcc tttaagggat tttagattct gctggatatg gtgactgctc 3240

ataagactgt tgaaaattac ttttaagatg tattagaata cttctgaaaa aaaatagcaa 3300

ccttaaaacc ataagcaaaa gtagtaaggg tgtttataca tttctagagt ccctgtttag 3360

gtaatagcct cctatgattg tactttaaat gttttgctct ccaaggtttt agtaacttgg 3420

ctttttttct aatcagtgcc aaactccccc agttttttta actttaaata tgaggtaata 3480

aatcttttac ccttccttga tcttttgact tataatacct tggtcagttg tttcttaaaa 3540

ggaatcctta aatggaaaga gacaatatca ctgtctgcag ttctgattag tagttttatt 3600

cagaatggaa aaacagatta ttcatttttg aaaattgttc aggggtatgt tcattgttag 3660

gaccttggac tttggagtca gtgcctagct atgcattcca ggtctgccat tttctggctg 3720

tgaaattttg gacaagttac ttaaccactt taaaccccag ctttaagaag taaattaacc 3780

ccagtaaatt aagaagtaat agcagccact tcgtagagtt gttatgaggc tcagatgcag 3840

tgcaaatgtg tataaagtat tcagggagtc acctggtata ctataataga cactagaata 3900

gttgccaata ttatcagcat acaatctgag gattctgtca gccaatcatt agcaatctgt 3960

tgtttgttgg gacatgccag tgttctccag ttgaaatcag tagcaatcta aaaatggata 4020

gattattcct catttaaata gtgtgttcat ataagtgatt gcttggatcc ttatcagaag 4080

ttgctgttac tgaaaaatga taaggctgac taaattgtga tagttgtcag ttactaacca 4140

actcccagaa atgaataaga ggaacctatc tctagttcct agtagaaggt atggacaaaa 4200

tagtaggtga aaaataatgt cttgaacccc caaattaagt aagctttaaa gagtacaata 4260

cctcaaaggg tctttgcggt ttaaaatttg tatgctgaga atgatgttca ttgacatgtg 4320

cctatatgta attttttgat agtttaaaag gtgaaatgaa ctacagatgg gagaggtctg 4380

aattttcttg ccttcagtca aatgtgtaat gtggacatat tatttgacct gtgaatttta 4440

tcttttaaaa aagattaatt cctgcttctt ccttcctaat agttgcatta taataatgaa 4500

aatgagttga taatttgggg ggaaagtatt ctacaaatca accttattat tttaccattg 4560

gtttctgaga aattttgttc atttgaaccg tttatagctt gattagaatc atagcatgta 4620

aaacccaact gagggattat ctgcagactt aatgtagtat tatgtaagtt gtcttctttc 4680

atttcgacct tttttgcttt tgttgttgct agatctgtag tatgtagcta gtcacctttc 4740

agcgaggttt cagcgaggct tttctgtgtc tctaggttat ttgagataac ttttttaaaa 4800

ttagctcttg tcctcc 4816

<210> 28

<211> 757

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 28

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Glu Pro Pro

275 280 285

Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro

290 295 300

Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp

305 310 315 320

Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val

325 330 335

Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly

340 345 350

Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser

355 360 365

Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu

370 375 380

Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu

385 390 395 400

Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile

405 410 415

Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys

420 425 430

Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala

435 440 445

Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu

450 455 460

Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr

465 470 475 480

Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu

485 490 495

Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu

500 505 510

Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala

515 520 525

Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His

530 535 540

Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys

545 550 555 560

Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile

565 570 575

Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr

580 585 590

Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu

595 600 605

Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile

610 615 620

Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val

625 630 635 640

Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu

645 650 655

Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Val Gly Lys Thr

660 665 670

Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser Glu Val Ile Arg Glu Lys Asp Lys

675 680 685

Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile

690 695 700

His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr

705 710 715 720

Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln

725 730 735

Ala Gly Gly Tyr Glu Ala Asp Leu Ala Leu Thr Ser Asn Lys Asn Arg

740 745 750

Val Glu Val Gly Ile

755

<210> 29

<211> 2499

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 29

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaagt aggaaagact ctcctaagca 2340

agagacaaaa ttcagaagtt atcagggaaa aagataagca ggaaaagtat gtttctttag 2400

tacattccag gcatttggga ttacagtaaa aacaatattc tcgcctctat tgagctgctg 2460

gcccgctcat tgccaaaaat tcaccgcagt gcatcagaa 2499

<210> 30

<211> 744

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 30

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Val Gly Lys Thr Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser

705 710 715 720

Glu Val Ile Arg Glu Lys Asp Lys Gln Glu Lys Tyr Val Ser Leu Val

725 730 735

His Ser Arg His Leu Gly Leu Gln

740

<210> 31

<211> 2404

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 31

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatat ctgtctccag 2220

atctcagtaa ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc 2280

taaaaaagaa aagagatgaa agaccactct ttccccaaga tctctcttcc caccatagac 2340

acaaaaattt cagatggcta caggtttaca tgtaaaaaac agaattataa caaatgattt 2400

ttat 2404

<210> 32

<211> 726

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 32

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr

660 665 670

Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met

675 680 685

Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro

690 695 700

Leu Phe Pro Gln Asp Leu Ser Ser His His Arg His Lys Asn Phe Arg

705 710 715 720

Trp Leu Gln Val Tyr Met

725

<210> 33

<211> 2331

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 33

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac caggtgcttt gtcctccatg ggagtgtaat aaatgctgtg 2220

caagggctta cttcccatga gagaagtgag tgaccaacag aaggataatt tttatggtgg 2280

gacgaggata tctgtctcca gatctcagta aggtacggag taactgtcca a 2331

<210> 34

<211> 681

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 34

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Val Leu Cys Pro Pro Trp Glu Cys Asn

660 665 670

Lys Cys Cys Ala Arg Ala Tyr Phe Pro

675 680

<210> 35

<211> 2319

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 35

ctcagctgcg ccgggtctca caagacggtt cccgaggtgg cccaggcgcc gtcccaccgc 60

cgacgccgcc cgggccgccc gggccgtccc tccccgctgc cccccgtcct ccgcctccgc 120

ctccccccgc cctcagcctc ccttccccct ccccgcccag cagcggtcgc tcgggcccgg 180

ctctcggtta taagatggcg gcgctgagtg gcggcggcgg cggcggcggc ggtggcgcgg 240

agcagggcca ggctctgttc aacggggaca tggagcccga ggccggcgcc gcggcctctt 300

cggctgcgga ccccgccatt cccgaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga 360

cacaggagca tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa 420

tatatctgga ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgccctccaa caaagagaac 480

aacagttatt ggaatccctg gggaatggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa 540

cggacaccgt tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctgccttca tctctttcag 600

tttttcaaaa tcccacagat gtgtcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg 660

ttagagtctt cctgcccaat aaacagagga cagtggtacc tgcacggtgt ggagtcacag 720

tccgggacag cctgaagaag gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg 780

tttacagaat tcaggatggg gagaagaaac caattggctg ggacactgat atttcctggc 840

ttactggaga ggagttgcat gtagaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact 900

ttgtacggaa aacttttttc accttagcat tttgtgactt ctgtagaaag ctgcttttcc 960

agggattccg ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaggttc 1020

cactgatgtg tgttaattat gaccaactag atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac 1080

accacccaat accacaggag gaggcctcct tagcagagac tacccttcca tgtggctcat 1140

ccccttctgc acccccctcc gattctattg ggcccccaat tctcaccagt ccatctcctt 1200

caaaatccat tccaattcca cagcctttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcagt 1260

ttggacaacg agaccggtcc tcatcagctc caaatgtgca tataaacaca atagaacccg 1320

tcaatattga tgacttgatt agagaccaag ggtttcgtag tgatggagga tcaaccacag 1380

gtttatccgc cacaccccct gcctcattac ctggctcact ctctaatgtg aaagcattgc 1440

agaaatctcc aggacctcag cgagaaagaa agtcctcttc atcctcagaa gacaggaatc 1500

gaatgaaaac gcttggtaga cgggattcaa gtgacgattg ggagattcct gatggacaga 1560

tcacagtggg acaaagaatt ggatcagggt catttgggac agtctacaag ggaaagtggc 1620

atggtgatgt ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc cacacctcag cagttacagg 1680

ccttcaaaaa tgaagtagga gtactcagga aaacgcgaca tgtgaatatc ctcctcttca 1740

tgggttattc aacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagtt 1800

tatatcatca tctccacatc attgagacca aattcgagat gatcaaactt atagatattg 1860

cacggcagac tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc 1920

tcaagagtaa taatattttt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc 1980

tagccacagt gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca 2040

ttttgtggat ggcaccagaa gtaatcagaa tgcaagataa aaacccatat agctttcagt 2100

cagatgtata tgcatttggg attgttctgt atgaattgat gaccggacag ttaccttatt 2160

caaatatcaa caacagggac caggtgcttt gtcctccatg ggagtgtaat aaatgctgtg 2220

caagggctta cttcccatga gagaagtgag tgaccaacag aaggtctgtg caaggaaaag 2280

agacaaagcc acggatcaga agcacatggc cataactga 2319

<210> 36

<211> 681

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 36

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Val Leu Cys Pro Pro Trp Glu Cys Asn

660 665 670

Lys Cys Cys Ala Arg Ala Tyr Phe Pro

675 680

<210> 37

<211> 2661

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 37

tcagctgcgc cgggtctcac aagacggttc ccgaggtggc ccaggcgccg tcccaccgcc 60

gacgccgccc gggccgcccg ggccgtccct ccccgctgcc ccccgtcctc cgcctccgcc 120

tccccccgcc ctcagcctcc cttccccctc cccgcccagc agcggtcgct cgggcccggc 180

tctcggttat aagatggcgg cgctgagtgg cggcggcggc ggcggcggcg gtggcgcgga 240

gcagggccag gctctgttca acggggacat ggagcccgag gccggcgccg cggcctcttc 300

ggctgcggac cccgccattc ccgaggaggt gtggaatatc aaacaaatga ttaagttgac 360

acaggagcat atagaggccc tattggacaa atttggtggg gagcataatc caccatcaat 420

atatctggag gcctatgaag aatacaccag caagctagat gccctccaac aaagagaaca 480

acagttattg gaatccctgg ggaatggaac tgatttttct gtttctagct ctgcatcaac 540

ggacaccgtt acatcttctt cctcttctag cctttcagtg ctgccttcat ctctttcagt 600

ttttcaaaat cccacagatg tgtcacggag caaccccaag tcaccacaaa aacctatcgt 660

tagagtcttc ctgcccaata aacagaggac agtggtacct gcacggtgtg gagtcacagt 720

ccgggacagc ctgaagaagg cactgatgat gagaggtcta atcccagagt gctgtgctgt 780

ttacagaatt caggatgggg agaagaaacc aattggctgg gacactgata tttcctggct 840

tactggagag gagttgcatg tagaagtgtt ggagaatgtt ccacttacaa cacacaactt 900

tgtacggaaa acttttttca ccttagcatt ttgtgacttc tgtagaaagc tgcttttcca 960

gggattccgc tgtcaaacat gtggttataa atttcaccag cgttgtagta cagaggttcc 1020

actgatgtgt gttaattatg accaactaga tttgctgttt gtctccaagt tctttgaaca 1080

ccacccaata ccacaggagg aggcctcctt agcagagact acccttccat gtggctcatc 1140

cccttctgca cccccctccg attctattgg gcccccaatt ctcaccagtc catctccttc 1200

aaaatccatt ccaattccac agcctttccg accagcagat gaagatcatc gaaatcagtt 1260

tggacaacga gaccggtcct catcagctcc aaatgtgcat ataaacacaa tagaacccgt 1320

caatattgat gacttgatta gagaccaagg gtttcgtagt gatggaggat caaccacagg 1380

tttatccgcc acaccccctg cctcattacc tggctcactc tctaatgtga aagcattgca 1440

gaaatctcca ggacctcagc gagaaagaaa gtcctcttca tcctcagaag acaggaatcg 1500

aatgaaaacg cttggtagac gggattcaag tgacgattgg gagattcctg atggacagat 1560

cacagtggga caaagaattg gatcagggtc atttgggaca gtctacaagg gaaagtggca 1620

tggtgatgtg gcagtgaaaa tgttgaatgt gacagcaccc acacctcagc agttacaggc 1680

cttcaaaaat gaagtaggag tactcaggaa aacgcgacat gtgaatatcc tcctcttcat 1740

gggttattca acaaagccac aactggctat tgttacccag tggtgtgagg gctccagttt 1800

atatcatcat ctccacatca ttgagaccaa attcgagatg atcaaactta tagatattgc 1860

acggcagact gcacagggca tggattactt acacgccaag tcaatcatcc acagagacct 1920

caagagtaat aatatttttc ttcatgaaga cctcacagta aaaataggtg attttggtct 1980

agccacagtg aaatctcgat ggagtgggtc ccatcagttt gaacagttgt ctggatccat 2040

tttgtggatg gcaccagaag taatcagaat gcaagataaa aacccatata gctttcagtc 2100

agatgtatat gcatttggga ttgttctgta tgaattgatg accggacagt taccttattc 2160

aaatatcaac aacagggacc agtctgtgca aggaaaagag acaaagccac ggatcagaag 2220

cacatggcca taactgaaga ttttgtgaac tctcacaagg aaaaaatttg ctctttgaac 2280

aataagaagg aactcactaa aatgtaactg agaactgttc aacaggttga aagctgaaag 2340

atgccattgg aactgacaaa atgtttctta aacataaatg atgaaacagt gaaactacat 2400

aatatctcct ctggctgaaa cattcaagaa gtttaaaatg cttaagttaa aaataaaatc 2460

ctagtaaaca atggacttac tgtgcaacat agagaatatc ttacgataac ctgtaatgga 2520

aaagaatctg aaaaagaatg tatataactg aatcactttg ctgtaaacta gaatctgaca 2580

caacactgta aatcactaca cttttctgtt gcatgccaaa gattatttaa taacgtcatt 2640

aaaaaattat tttaataatt a 2661

<210> 38

<211> 679

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 38

Met Ala Ala Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu

1 5 10 15

Gln Gly Gln Ala Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Ala Gly Ala

20 25 30

Ala Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn

35 40 45

Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu

50 55 60

Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala

65 70 75 80

Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln

85 90 95

Gln Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser

115 120 125

Val Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser

130 135 140

Arg Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu

145 150 155 160

Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu

180 185 190

Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly

195 200 205

Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu

210 215 220

Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr

225 230 235 240

Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln

245 250 255

Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser

260 265 270

Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro

305 310 315 320

Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser

325 330 335

Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His

340 345 350

Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val

355 360 365

His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp

370 375 380

Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr

385 390 395 400

Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln

405 410 415

Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu

420 425 430

Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp

435 440 445

Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser

450 455 460

Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala

465 470 475 480

Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala

485 490 495

Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile

500 505 510

Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr

515 520 525

Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu

530 535 540

Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala

545 550 555 560

Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu

565 570 575

Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly

580 585 590

Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln

595 600 605

Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile

610 615 620

Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala

625 630 635 640

Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser

645 650 655

Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ser Val Gln Gly Lys Glu Thr Lys Pro

660 665 670

Arg Ile Arg Ser Thr Trp Pro

675

<210> 39

<211> 7434

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 39

acaccgttac atcttcttcc tcttctagcc tttcagtgct gccttcatct ctttcagttt 60

ttcaaaatcc cacagatgtg tcacggagca accccaagtc accacaaaaa cctatcgtta 120

gagtcttcct gcccaataaa cagaggacag tggtacctgc acggtgtgga gtcacagtcc 180

gggacagcct gaagaaggca ctgatgatga gaggtctaat cccagagtgc tgtgctgttt 240

acagaattca ggatggggag aagaaaccaa ttggctggga cactgatatt tcctggctta 300

ctggagagga gttgcatgta gaagtgttgg agaatgttcc acttacaaca cacaactttg 360

tacggaaaac ttttttcacc ttagcatttt gtgacttctg tagaaagctg cttttccagg 420

gattccgctg tcaaacatgt ggttataaat ttcaccagcg ttgtagtaca gaggttccac 480

tgatgtgtgt taattatgac caactagatt tgctgtttgt ctccaagttc tttgaacacc 540

acccaatacc acaggaggag gcctccttag cagagactac ccttccatgt ggctcatccc 600

cttctgcacc cccctccgat tctattgggc ccccaattct caccagtcca tctccttcaa 660

aatccattcc aattccacag cctttccgac cagcagatga agatcatcga aatcagtttg 720

gacaacgaga ccggtcctca tcagctccaa atgtgcatat aaacacaata gaacccgtca 780

atattgatga cttgattaga gaccaagggt ttcgtagtga tggaggatca accacaggtt 840

tatccgccac accccctgcc tcattacctg gctcactctc taatgtgaaa gcattgcaga 900

aatctccagg acctcagcga gaaagaaagt cctcttcatc ctcagaagac aggaatcgaa 960

tgaaaacgct tggtagacgg gattcaagtg acgattggga gattcctgat ggacagatca 1020

cagtgggaca aagaattgga tcagggtcat ttgggacagt ctacaaggga aagtggcatg 1080

gtgatgtggc agtgaaaatg ttgaatgtga cagcacccac acctcagcag ttacaggcct 1140

tcaaaaatga agtaggagta ctcaggaaaa cgcgacatgt gaatatcctc ctcttcatgg 1200

gttattcaac aaagccacaa ctggctattg ttacccagtg gtgtgagggc tccagtttat 1260

atcatcatct ccacatcatt gagaccaaat tcgagatgat caaacttata gatattgcac 1320

ggcagactgc acagggcatg gattacttac acgccaagtc aatcatccac agagacctca 1380

agagtaataa tatttttctt catgaagacc tcacagtaaa aataggtgat tttggtctag 1440

ccacagtgaa atctcgatgg agtgggtccc atcagtttga acagttgtct ggatccattt 1500

tgtggatggc accagaagta atcagaatgc aagataaaaa cccatatagc tttcagtcag 1560

atgtatatgc atttgggatt gttctgtatg aattgatgac cggacagtta ccttattcaa 1620

atatcaacaa cagggaccag ataattttta tggtgggacg aggatatctg tctccagatc 1680

tcagtaaggt acggagtaac tgtccaaaag ccatgaagag attaatggca gagtgcctaa 1740

aaaagaaaag agatgaaaga ccactctttc cccaagtagg aaagactctc ctaagcaaga 1800

gacaaaattc agaagttatc agggaaaaag ataagcagat tctcgcctct attgagctgc 1860

tggcccgctc attgccaaaa attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg 1920

gcttccaaac agaggatttt agtctatatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccattcagg 1980

cagggggata tggagaattt gcagccttca agtagccaca ccatcatgac agcatctact 2040

cttatttctt aagtcttgtg ttcgtacaat ttgttaacat caaaacacag ttctgttcct 2100

caactctttt taaagttaaa atttttcagt gcataagctg gtgtggaaca gaaggaaatt 2160

tcccatccaa caaaagaggg aagaatgttt taggaaccag aattctctgc tgccagtgtt 2220

tcttcttcaa cacaaatatc acaagtctgc ccactcccag gaagaaagag gagagaccct 2280

gagttctgac cttttgatgg tcaggcatga tggaaagaaa ctgctgctac agcttgggag 2340

atttgctctg ggaagtctgc cagtcaactt tgcccttcta accaccagat caatatgtgg 2400

ctgatcatct gatggggcag ttgcaatcac caagccttgt tctctttcct gttctgggat 2460

tgtgttgtgg aacccttttc cctagccacc accagttcat ttctgaggga tggaacaaaa 2520

atgcagcatg cccttcctgt gtggtgcatg ttcagtcctt gacaaatttt taccaaaatg 2580

aagctacttt atttaaaagg agggtgagag gtgaggaggt cactttgggt gtggcggaaa 2640

gggaatgctg catctttttc ctgggctgct ggggctctgg ccttggcttg ccagccggaa 2700

gcgctggcac gcatcgcctt cttttcccat tgggtccagc aatgaagacg agtgtttggg 2760

gttttttttt tctccaccat gtagcaagtt ctcaggaaaa tacaattgat atcttcctcc 2820

taagctcttc caatcagtca ccaagtactt atgtggttac tttgtccagg gcacaaaatg 2880

cctgtatcta attaaaagcc tacaaaactg cttgataaca gttttgaatg tgagacattt 2940

atgtaattta aatgtaaggt acaagtttta atttctgagt ttcttctatt atatttttat 3000

taaaaaaaga aaataatttt cagattgaat tggagtaaaa taatattact tcccactaga 3060

attatatatc ctggaaaatt gtatttttgt tacataagca gcttttaaag aaagatcatt 3120

acccttttct ctacataaat atatggggag tcttagccta atgacaaata tttataattt 3180

ttaaattaat ggtacttgct ggatccatac taacatcttt actaatacct cattgtttct 3240

tccaacttac tcctacacta catcctacat cttcttccta gtcttttatc tagaatatgc 3300

aacctcaaat aaaaatggtg gtgtcctcat tcattctcct ccttcctttt ttcccaagcc 3360

tgatcttcaa aaggttggtt aatttggcag ctgagttcct ccccaggcag agaatagacc 3420

aattttaggt gtattgggac tgagggagga tgtgtaaaga ttaacatcag taaagaaccg 3480

ctgtggagta attaagaact ttgttcttta taactggaga atataaccta accctaacat 3540

ccctcagcct ttactaaagt gtggcgtaaa tcacagtagt agcaaagaaa gtgactctgg 3600

atgtgttcct ggccagtacc tcccttatca tgaatgtaga ctctctcatc aagatttagg 3660

aatataaatc aaatcaaatg tgcccagcca agctatgtag taagggactt gaacaatatt 3720

aggcagaacc tataaaataa atcagggaat tagaaattat ttaaagtttt caaattgtaa 3780

attgccccgg tgtctttcag cctactgcca ttatttttgc tacaatacct acatttcaga 3840

ggagggccta ctgaaaattc catgcaagtg gaaaataatc ctcaagttat taatgagttt 3900

gaaaagcaat gagttcttaa gtctttgtga gtagagcaag atcctacaaa attcagaaat 3960

agtaaaaatg gattcatgct gatttgaaga gcatctgtgt gcataatata atgctgcatc 4020

tcttttaaaa gcagtctatt tttcttttta aatttgtccc catagatgct tttgaacatg 4080

aacatgctta tgttaccttt tccgaggttg ggaagagcca ggagctctca ggcagggccc 4140

cctccctcag ctgggcagga gctgctcagg aggagctagt tatagaggaa gcttagcgtt 4200

ggcattttca aaattcaagg tgataacgct ttcttcttcc tttctgtttt agaatagatt 4260

gctgtctgat ttgaaaaagg gaaatagatt tgatctcaaa tgaatctgtg cccagaagcc 4320

aggctcaggg tattcagaga tttgtatagt gccctcaaaa aataacaaaa ttttagcttt 4380

ccttttttct tcttttctcc atcaaattct tttttctcta gtttacaaat gacatggaaa 4440

aggaatttcc cctgagtttt gtatgccttt ttttttttgg cttagactat agataggcgt 4500

gttgagctcc taagaaaata caaggaggaa ctctttgttg tgcagagcac tttatgagta 4560

gtttgtgtgg ataatatgtg actgcttccc tgacgagctt gtgaggctgt acttatgtct 4620

ttcctgtaag gcagcttcag tgccttctgt agtgtatata aggaaagatt acgccttctg 4680

aaaaatctca gagcaaccat aagattattt taaaatatgt agtatgactg atggactttt 4740

tcatcattaa attagtctag catctaaact tttaccactg aaataatatt gaccaaaaag 4800

caatttataa aaggtatttg tgaatagaaa atacaatgtg atcatttgta cttatgtgca 4860

ccttaaaaga ggaattctgt ctagctgtca aattctggtt ccttaacatc cagtccttga 4920

ttgtgattga gatctggtag gacgtgctgg ggcacgctag cagataaaat cccgtatact 4980

ttaggataga tgttacattt atgtcagtgt tggcaaagag cattgtgtag taataaagaa 5040

ttcaagactt cagcaatgtc aacctgaaac tttgtaaata tttcctagat tgttatttga 5100

tgcagtcaca gctctttatc acacaatgtt gtctttccct catcaggcaa ttttagaact 5160

gctgcacacc cctcctcaga tctcacctgc ccctcctgta cattcacctc tccagccttg 5220

tgcacacctc atttagcttt agtttgaaac acattgcagg gttcaggtga cctcttcaaa 5280

aactacctcc tcagaatgag gtaatgaata gttatttatt ttaaaatatg aaaagtcagg 5340

agctctagaa tatgaagatg atctaagatt ttaactttta tgtatacttg ttgagcactc 5400

tccttttgtc ctaaagggca ttatacattt aagcagtaat actgaaaaat gtagctcaga 5460

gtaactgaat gttgttgaaa gtggtgccag aatctgtttt aggggtacgt atcagaatct 5520

taatcttaaa tcggttacat gaaattaaat agttaatggt aacacttgac taacagatat 5580

aattttaatt ttcggtaggc ttttagcaag acagtaagta catcttcata atgagttagc 5640

cacagcttca tcacatgcac agattttcct gttgagagac tgcccagtta agagggtaga 5700

atgatgaacc atttttcagg attctcttct ttgtccaaac tggcattgtg agtgctagaa 5760

tatcagcact ttcaaactag tgattccaac tattaggcta ttaaaaagca aaacaaacca 5820

aacaaaccat agccagacat gggaagttta ctatgagtat aaacagcaaa tagcttacag 5880

gtcatacatt gaaatggtgt aggtaaggcg ttagaaaaat accttgacaa tttgccaaat 5940

gatcttactg tgccttcatg atgcaataaa aaaaaaaaaa atttagcata aatcagtgat 6000

ttgtgaagag agcagccacc ctggtctaac tcagctgtgt taatattttt tagcgtgcaa 6060

tttagactgc aaagataaat gcactaaaga gtttatagcc aaaatcacat ttaaaaaatg 6120

agagaaaaca caggtaaatt ttcagtgaac aaaattattt ttttaaagta cataatccct 6180

agtatagtca gatatattta tcacatagag caaataggtt gaaatcacaa ttcagtgaca 6240

tttctagaga aactttttct actcccatag gttcttcaaa gcatggaact tttatataac 6300

agaaatgtgt gacggtcatt ttaaattgct gtagtttggg gctgaagtac tgtgtgctgg 6360

gcagcaatca catgtattaa ctagtgagaa aggagaaatt aagatatagg acagaatttg 6420

attttcttgt tcccagatta ctgctgccaa cctagacact gagtttccag aggctgaaac 6480

gtaaacttgc agctcagcaa ctgttttgca aagttagtgg gactgtcctg cttatgctgt 6540

tcaaaaatgc tctgagggcc aggtggggcc tccaggggct cctctctgag gggacatcag 6600

actagctaac gacctggcgg gcggatgtga accggacaca ctccatggtg tgcttcttgt 6660

atcggtccct cgccaccctc aagaaaggct tcagcgggtt ctctagacgt ctccactaag 6720

gtgtgttact aacagccatg ggttgttgag cacccgagga gtgcaatagc atctctgcat 6780

gattgtatat tggcccgaag agaatgaagt ggccagtgta ctcatgttcc atgttgctag 6840

ctctggtaaa ctgaaaatac tggtaagatt tttgttttat cagtacacta gagagtaagc 6900

tttgttttgt tgtttttaga taatgttttc acttccattt ggaaagacat ttaaattgag 6960

tttcagtcct aaattttgcc agtcatggta attagcagtt tctatcaggt atttttaagg 7020

tagaagagga tagaaacata agttctaaaa gcttaaggta accgtggttt attttaaaat 7080

gtttaggggt ggttagtctc tacctcaaaa aaagtgagtg aatcttttat ttcagcattc 7140

acaagttcgg ctgttgtttt tgtaatacat ttttttttta accttttgac ccccctttac 7200

ctaagtgtca atgtagtttt attaattact aagtcagttt cattaaaatg tttatttagc 7260

agttttgact aattgcaatg attaatatag ccagttgtgc atgaggacac agccagtgag 7320

tatatctggg ttttttttgt gatgcttttt ttcttaagac ttctgtagat ttatgaagta 7380

ctcattgaaa acaactaaaa tacgtttatt cgtgttaata tggaaaaaaa aaaa 7434

<210> 40

<211> 603

<212> PRT

<213> Bos taurus

<400> 40

Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln

1 5 10 15

Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu

20 25 30

Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr

35 40 45

Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp

50 55 60

Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly

65 70 75 80

Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val

85 90 95

Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His

100 105 110

His Pro Ile Pro Gln Glu Glu Ala Ser Leu Ala Glu Thr Thr Leu Pro

115 120 125

Cys Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro Ser Asp Ser Ile Gly Pro Pro

130 135 140

Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro

145 150 155 160

Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp

165 170 175

Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val

180 185 190

Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly

195 200 205

Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser

210 215 220

Leu Ser Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu

225 230 235 240

Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu

245 250 255

Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile

260 265 270

Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys

275 280 285

Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr Ala

290 295 300

Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val Leu

305 310 315 320

Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr

325 330 335

Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu

340 345 350

Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu

355 360 365

Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His Ala

370 375 380

Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu His

385 390 395 400

Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile

420 425 430

Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr

435 440 445

Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu

450 455 460

Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile

465 470 475 480

Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val

485 490 495

Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu

500 505 510

Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Val Gly Lys Thr

515 520 525

Leu Leu Ser Lys Arg Gln Asn Ser Glu Val Ile Arg Glu Lys Asp Lys

530 535 540

Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile

545 550 555 560

His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr

565 570 575

Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln

580 585 590

Ala Gly Gly Tyr Gly Glu Phe Ala Ala Phe Lys

595 600

<210> 41

<211> 2295

<212> ДНК

<213> Equus caballus

<220>

<221> misc_feature

<222> (79)..(79)

<223> n представляет собой a, c, g, или t

<400> 41

atgaagacgc tgagcggcgg cggcggcggc gcggagcagg gccaggctct gttcaacggg 60

gacatggaac ccggaggcnc cgcgccggcg cccgcggcct cgtcggccgc ggaccctgcc 120

attcccgagg aggtatggaa tatcaaacaa atgattaaat tgacacagga acatatagag 180

gccctattgg acaaatttgg tggggagcat aatccaccat caatatatct ggaggcctat 240

gaagaataca ccagcaagct agatgccctc caacaaagag aacaacagtt attggaatcc 300

ctggggaatg gaactgattt ttctgtttct agttctgcat caacggacac cgttacatct 360

tcttcctctt ctagcctttc agtgctacct tcatctcttt cagtttttca aaatcccaca 420

gatgtgtcac ggagcaaccc taagtcacca caaaaaccta tcgttagagt cttcctgccc 480

aacaaacaga ggacagtggt acctgcaagg tgtggcgtta cagtccggga cagtctaaag 540

aaagcactga tgatgagagg tctaatccca gagtgctgtg ctgtttacag aattcaggat 600

ggagagaaga aaccaattgg ctgggacact gatatttcct ggctcactgg agaggaattg 660

catgtagaag tgttggagaa tgttccactt acaacacaca actttgtacg gaaaactttt 720

ttcaccttag cattttgtga cttttgtcga aagctgcttt tccagggttt ccgctgtcaa 780

acatgtggtt ataaatttca ccagcgttgt agtacagagg ttccactgat gtgtgttaat 840

tatgaccaac ttgatttgct gtttgtctcc aagttctttg aacaccaccc agtatcacag 900

gaggaggcct ccttagcaga gactgccctt acatctggat catccccttc tgcacccccc 960

tccgattcca ttgggcccca aattctcacc agtccatctc cttcaaaatc cattccaatt 1020

ccacagcctt tccgaccagc agatgaagat catcgaaatc agtttggaca acgagaccgg 1080

tcctcatcag ctccaaatgt acatataaac acaatagaac ctgtcaatat tgatgacttg 1140

attagagacc aagggtttcg tagtgatgga ggatcaacca caggtttatc tgccaccccc 1200

cctgcctcat tacctggctc actcactaat gtgaaggcat tacagaaatc tccaggacct 1260

caacgggaaa ggaaatcatc ttcatcctca gaagacagga atcgaatgaa aactcttggt 1320

agacgggatt caagtgacga ttgggagatt cctgatgggc agatcacagt gggacaaaga 1380

attggatctg ggtcatttgg gacagtctac aagggaaagt ggcatggtga tgtggcagtg 1440

aaaatgttga atgtgacagc acccacacct cagcagttac aggccttcaa aaatgaagta 1500

ggagtactca ggaaaactcg acatgtgaat atcctactct tcatgggcta ttcaacaaag 1560

ccacaactgg ctattgttac ccagtggtgt gagggctcca gcttatatca ccatctccac 1620

atcattgaga ccaaatttga gatgatcaaa cttatagata ttgctcggca aactgcacag 1680

ggcatggatt acttacacgc caagtcaatc atccacagag acctcaagag taataatatt 1740

tttcttcatg aagacctcac agtaaaaata ggtgattttg gtctagccac agtgaaatct 1800

cgatggagtg ggtcccatca gtttgaacag ttgtctggat ccattttgtg gatggcacca 1860

gaagtaatca gaatgcaaga taaaaacccg tatagctttc aatcagatgt atatgccttt 1920

gggattgttc tgtatgaatt gatgactgga cagttacctt attcaaacat caacaacagg 1980

gaccagataa tttttatggt gggaagagga tatctatctc cagatctcag taaggtacgg 2040

agtaactgtc caaaagccat gaagagatta atggcagagt gcctaaaaaa gaaaagagac 2100

gagagaccac tcttccccca aattctcgcc tctattgagc tgctggcccg ctcattgcca 2160

aaaattcacc gcagtgcatc agagccctcc ttgaatcggg ctggcttcca gacagaggat 2220

tttagtctat atgcttgtgc ttctccgaaa acacccatcc aggcaggggg atatggtgcg 2280

tttcctgtcc actga 2295

<210> 42

<211> 764

<212> PRT

<213> Equus caballus

<220>

<221> misc_feature

<222> (27)..(27)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 42

Met Lys Thr Leu Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ala Glu Gln Gly Gln Ala

1 5 10 15

Leu Phe Asn Gly Asp Met Glu Pro Gly Gly Xaa Ala Pro Ala Pro Ala

20 25 30

Ala Ser Ser Ala Ala Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp Asn Ile

35 40 45

Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu Leu Asp

50 55 60

Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu Ala Tyr

65 70 75 80

Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu Gln Gln

85 90 95

Leu Leu Glu Ser Leu Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser Ser Ser

100 105 110

Ala Ser Thr Asp Thr Val Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ser Val

115 120 125

Leu Pro Ser Ser Leu Ser Val Phe Gln Asn Pro Thr Asp Val Ser Arg

130 135 140

Ser Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe Leu Pro

145 150 155 160

Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr Val Arg

165 170 175

Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro Glu Cys

180 185 190

Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile Gly Trp

195 200 205

Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val Glu Val

210 215 220

Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys Thr Phe

225 230 235 240

Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe Gln Gly

245 250 255

Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys Ser Thr

260 265 270

Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu Leu Phe

275 280 285

Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Val Ser Gln Glu Glu Ala Ser

290 295 300

Leu Ala Glu Thr Ala Leu Thr Ser Gly Ser Ser Pro Ser Ala Pro Pro

305 310 315 320

Ser Asp Ser Ile Gly Pro Gln Ile Leu Thr Ser Pro Ser Pro Ser Lys

325 330 335

Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp His Arg

340 345 350

Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn Val His

355 360 365

Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg Asp Gln

370 375 380

Gly Phe Arg Ser Asp Gly Gly Ser Thr Thr Gly Leu Ser Ala Thr Pro

385 390 395 400

Pro Ala Ser Leu Pro Gly Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys

405 410 415

Ser Pro Gly Pro Gln Arg Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp

420 425 430

Arg Asn Arg Met Lys Thr Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp

435 440 445

Glu Ile Pro Asp Gly Gln Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly

450 455 460

Ser Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val

465 470 475 480

Lys Met Leu Asn Val Thr Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe

485 490 495

Lys Asn Glu Val Gly Val Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu

500 505 510

Leu Phe Met Gly Tyr Ser Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln

515 520 525

Trp Cys Glu Gly Ser Ser Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr

530 535 540

Lys Phe Glu Met Ile Lys Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln

545 550 555 560

Gly Met Asp Tyr Leu His Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys

565 570 575

Ser Asn Asn Ile Phe Leu His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp

580 585 590

Phe Gly Leu Ala Thr Val Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe

595 600 605

Glu Gln Leu Ser Gly Ser Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg

610 615 620

Met Gln Asp Lys Asn Pro Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe

625 630 635 640

Gly Ile Val Leu Tyr Glu Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn

645 650 655

Ile Asn Asn Arg Asp Gln Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu

660 665 670

Ser Pro Asp Leu Ser Lys Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys

675 680 685

Arg Leu Met Ala Glu Cys Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu

690 695 700

Phe Pro Gln Ile Leu Ala Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro

705 710 715 720

Lys Ile His Arg Ser Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe

725 730 735

Gln Thr Glu Asp Phe Ser Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro

740 745 750

Ile Gln Ala Gly Gly Tyr Gly Ala Phe Pro Val His

755 760

<210> 43

<211> 2678

<212> ДНК

<213> Gallus gallus

<400> 43

tccccctccc tcgccccagc gcttcgatcc aagatggcgg cgctgagcag cggcagcagc 60

gccgaggggg cctcgctctt caacggggac atggagcccg agccgccgcc gcccgtgctg 120

ggcgcctgct acgccgggag cggcggcggc gacccggcca tcccggagga ggtgtggaat 180

atcaaacaga tgattaaatt aacacaagaa catatagaag cgctgttaga caagtttgga 240

ggagagcata acccaccatc aatatattta gaggcctatg aggagtacac cagcaaacta 300

gatgctctac agcagagaga acagcagtta ttggaatcca tgggaaatgg aactgatttc 360

tctgtttcca gttcagcttc aacggacaca gttgcatcat cttcctcctc tagcctctct 420

gtagcacctt catccctttc agtttatcaa aatcctactg atatgtcgcg gaataaccct 480

aagtctccac agaagcctat tgttagagtc ttcctgccca acaagcaaag gactgtggtt 540

ccggcaagat gtggggtgac agtccgagac agcctgaaga aagctctgat gatgagaggt 600

cttattccag aatgctgtgc tgtttacaga atacaggatg gagagaagaa gccaattggc 660

tgggacactg acatttcctg gctaaccgga gaggagttac acgtggaggt cttggagaat 720

gtgccactca caacacacaa ttttgtacga aaaacattct tcacgttagc gttctgcgac 780

ttctgtcgaa agctgctttt ccagggattc cgatgccaga catgtggcta caaatttcac 840

cagcgctgta gcacagaagt gccactgatg tgtgttaact acgaccaact cgatttgctg 900

tttgtctcca agttctttga acatcacccc atatcgcagg aggagaccac cttaggagag 960

accaccccgg catcgggatc gtacccctca gtgcccccat cagattctgt tggaccacca 1020

attctcccta gtccttctcc ttcaaaatcc attccaatcc cacagccctt ccgaccagca 1080

gatgaagacc atcggaatca gtttgggcaa cgcgaccgat cctcttcagc tcccaatgtt 1140

cacatcaata caattgagcc agtcaatatt gatgacttga ttagagacca gggtgtacga 1200

ggagagggag cccctttgaa ccagctgatg cgctgtcttc ggaaatacca atcccggact 1260

cccagtcccc tccttcattc tgtccccagt gaaatagtgt ttgattttga gcctggccca 1320

gtgttcagag gttcaactgc aggtttgtct gcaacacctc ctgcatcttt gcctgggtca 1380

cttaccaatg tgaaagcatt acagaaatca ccaggccccc aacgggaaag gaaatcatcc 1440

tcatcctcag aagacagaaa taggatgaaa acccttggtc gacgagattc aagtgatgat 1500

tgggaaatac cagatgggca gatcacagtt ggacaaagga taggatctgg atcatttgga 1560

acagtctaca aaggaaagtg gcatggtgac gtggcagtga aaatgttgaa tgttacagca 1620

cccacacctc aacagttaca ggctttcaaa aatgaagtag gagtgctcag gaaaacacgg 1680

catgtgaata tcctactttt tatgggttat tcaacaaaac ctcagttggc tattgttaca 1740

cagtggtgtg aggggtccag cttatatcac catctgcaca taattgagac caagtttgaa 1800

atgatcaaac taattgatat tgcacgacag actgcacaag gcatggatta tttgcatgcc 1860

aagtcaatca tccacagaga cctcaagagt aataatattt ttcttcatga agacctcaca 1920

gtaaaaatag gtgacttcgg tctggctaca gtgaaatcac gatggagtgg atctcatcaa 1980

tttgaacagt tatctggatc aattctatgg atggcaccgg aagtgatcag gatgcaagac 2040

aaaaacccat atagctttca gtcagatgtg tatgcattcg ggattgtgct ttatgaactg 2100

atgactggac agttaccata ctcaaacatc aacaacaggg accagataat ttttatggtg 2160

ggacgaggat atctatctcc agacctcagt aaagtaagaa gtaactgtcc aaaagctatg 2220

aagagactaa tggcagaatg cttgaaaaag aaaagagatg agagacctct ttttccacag 2280

attcttgcct ccattgagct tctggcccgg tcgttgccaa aaattcaccg cagtgcatct 2340

gagccgtcac taaaccgggc tggcttccag accgaggatt tcagtctgta tgcttgtgct 2400

tctccaaaaa cgcccatcca agcaggggga tacggtgggt ttccagtaca ctgaaaagaa 2460

atgtgaaagc gtgtgcctgt ttgctcatgt gctggtgtgt tcctgtgtgt gcaacgcata 2520

cgtacgttct cagttcctac cagcgacttt ttaaggttta ctgagggaat gaagactcat 2580

ttcctaacat ggggcattga acgtcctgag cacaagtcag tgctggtaag gaatgtcttg 2640

ggaacagctg gcaagaagaa ttagaaggta cttaaagg 2678

<210> 44

<211> 806

<212> PRT

<213> Gallus gallus

<400> 44

Met Ala Ala Leu Ser Ser Gly Ser Ser Ala Glu Gly Ala Ser Leu Phe

1 5 10 15

Asn Gly Asp Met Glu Pro Glu Pro Pro Pro Pro Val Leu Gly Ala Cys

20 25 30

Tyr Ala Gly Ser Gly Gly Gly Asp Pro Ala Ile Pro Glu Glu Val Trp

35 40 45

Asn Ile Lys Gln Met Ile Lys Leu Thr Gln Glu His Ile Glu Ala Leu

50 55 60

Leu Asp Lys Phe Gly Gly Glu His Asn Pro Pro Ser Ile Tyr Leu Glu

65 70 75 80

Ala Tyr Glu Glu Tyr Thr Ser Lys Leu Asp Ala Leu Gln Gln Arg Glu

85 90 95

Gln Gln Leu Leu Glu Ser Met Gly Asn Gly Thr Asp Phe Ser Val Ser

100 105 110

Ser Ser Ala Ser Thr Asp Thr Val Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu

115 120 125

Ser Val Ala Pro Ser Ser Leu Ser Val Tyr Gln Asn Pro Thr Asp Met

130 135 140

Ser Arg Asn Asn Pro Lys Ser Pro Gln Lys Pro Ile Val Arg Val Phe

145 150 155 160

Leu Pro Asn Lys Gln Arg Thr Val Val Pro Ala Arg Cys Gly Val Thr

165 170 175

Val Arg Asp Ser Leu Lys Lys Ala Leu Met Met Arg Gly Leu Ile Pro

180 185 190

Glu Cys Cys Ala Val Tyr Arg Ile Gln Asp Gly Glu Lys Lys Pro Ile

195 200 205

Gly Trp Asp Thr Asp Ile Ser Trp Leu Thr Gly Glu Glu Leu His Val

210 215 220

Glu Val Leu Glu Asn Val Pro Leu Thr Thr His Asn Phe Val Arg Lys

225 230 235 240

Thr Phe Phe Thr Leu Ala Phe Cys Asp Phe Cys Arg Lys Leu Leu Phe

245 250 255

Gln Gly Phe Arg Cys Gln Thr Cys Gly Tyr Lys Phe His Gln Arg Cys

260 265 270

Ser Thr Glu Val Pro Leu Met Cys Val Asn Tyr Asp Gln Leu Asp Leu

275 280 285

Leu Phe Val Ser Lys Phe Phe Glu His His Pro Ile Ser Gln Glu Glu

290 295 300

Thr Thr Leu Gly Glu Thr Thr Pro Ala Ser Gly Ser Tyr Pro Ser Val

305 310 315 320

Pro Pro Ser Asp Ser Val Gly Pro Pro Ile Leu Pro Ser Pro Ser Pro

325 330 335

Ser Lys Ser Ile Pro Ile Pro Gln Pro Phe Arg Pro Ala Asp Glu Asp

340 345 350

His Arg Asn Gln Phe Gly Gln Arg Asp Arg Ser Ser Ser Ala Pro Asn

355 360 365

Val His Ile Asn Thr Ile Glu Pro Val Asn Ile Asp Asp Leu Ile Arg

370 375 380

Asp Gln Gly Val Arg Gly Glu Gly Ala Pro Leu Asn Gln Leu Met Arg

385 390 395 400

Cys Leu Arg Lys Tyr Gln Ser Arg Thr Pro Ser Pro Leu Leu His Ser

405 410 415

Val Pro Ser Glu Ile Val Phe Asp Phe Glu Pro Gly Pro Val Phe Arg

420 425 430

Gly Ser Thr Ala Gly Leu Ser Ala Thr Pro Pro Ala Ser Leu Pro Gly

435 440 445

Ser Leu Thr Asn Val Lys Ala Leu Gln Lys Ser Pro Gly Pro Gln Arg

450 455 460

Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Arg Asn Arg Met Lys Thr

465 470 475 480

Leu Gly Arg Arg Asp Ser Ser Asp Asp Trp Glu Ile Pro Asp Gly Gln

485 490 495

Ile Thr Val Gly Gln Arg Ile Gly Ser Gly Ser Phe Gly Thr Val Tyr

500 505 510

Lys Gly Lys Trp His Gly Asp Val Ala Val Lys Met Leu Asn Val Thr

515 520 525

Ala Pro Thr Pro Gln Gln Leu Gln Ala Phe Lys Asn Glu Val Gly Val

530 535 540

Leu Arg Lys Thr Arg His Val Asn Ile Leu Leu Phe Met Gly Tyr Ser

545 550 555 560

Thr Lys Pro Gln Leu Ala Ile Val Thr Gln Trp Cys Glu Gly Ser Ser

565 570 575

Leu Tyr His His Leu His Ile Ile Glu Thr Lys Phe Glu Met Ile Lys

580 585 590

Leu Ile Asp Ile Ala Arg Gln Thr Ala Gln Gly Met Asp Tyr Leu His

595 600 605

Ala Lys Ser Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Ser Asn Asn Ile Phe Leu

610 615 620

His Glu Asp Leu Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Thr Val

625 630 635 640

Lys Ser Arg Trp Ser Gly Ser His Gln Phe Glu Gln Leu Ser Gly Ser

645 650 655

Ile Leu Trp Met Ala Pro Glu Val Ile Arg Met Gln Asp Lys Asn Pro

660 665 670

Tyr Ser Phe Gln Ser Asp Val Tyr Ala Phe Gly Ile Val Leu Tyr Glu

675 680 685

Leu Met Thr Gly Gln Leu Pro Tyr Ser Asn Ile Asn Asn Arg Asp Gln

690 695 700

Ile Ile Phe Met Val Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Pro Asp Leu Ser Lys

705 710 715 720

Val Arg Ser Asn Cys Pro Lys Ala Met Lys Arg Leu Met Ala Glu Cys

725 730 735

Leu Lys Lys Lys Arg Asp Glu Arg Pro Leu Phe Pro Gln Ile Leu Ala

740 745 750

Ser Ile Glu Leu Leu Ala Arg Ser Leu Pro Lys Ile His Arg Ser Ala

755 760 765

Ser Glu Pro Ser Leu Asn Arg Ala Gly Phe Gln Thr Glu Asp Phe Ser

770 775 780

Leu Tyr Ala Cys Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Gln Ala Gly Gly Tyr

785 790 795 800

Gly Gly Phe Pro Val His

805

<210> 45

<211> 2949

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 45

cgcctccctt ccccctcccc gcccgacagc ggccgctcgg gccccggctc tcggttataa 60

gatggcggcg ctgagcggtg gcggtggtgg cggcgcggag ccgggccagg ctctgttcaa 120

cggggacatg gagcccgagg ccggcgccgg cgccggcgcc gcggcctctt cggctgcgga 180

ccctgccatt ccggaggagg tgtggaatat caaacaaatg attaagttga cacaggaaca 240

tatagaggcc ctattggaca aatttggtgg ggagcataat ccaccatcaa tatatctgga 300

ggcctatgaa gaatacacca gcaagctaga tgcactccaa caaagagaac aacagttatt 360

ggaatctctg gggaacggaa ctgatttttc tgtttctagc tctgcatcaa tggataccgt 420

tacatcttct tcctcttcta gcctttcagt gctaccttca tctctttcag tttttcaaaa 480

tcccacagat gtggcacgga gcaaccccaa gtcaccacaa aaacctatcg ttagagtctt 540

cctgcccaac aaacagagga cagtggtacc tgcaaggtgt ggagttacag tccgagacag 600

tctaaagaaa gcactgatga tgagaggtct aatcccagag tgctgtgctg tttacagaat 660

tcaggatgga gagaagaaac caattggttg ggacactgat atttcctggc ttactggaga 720

agaattgcat gtggaagtgt tggagaatgt tccacttaca acacacaact ttgtacgaaa 780

aacgtttttc accttagcat tttgtgactt ttgtcgaaag ctgcttttcc agggtttccg 840

ctgtcaaaca tgtggttata aatttcacca gcgttgtagt acagaagttc cactgatgtg 900

tgttaattat gaccaacttg atttgctgtt tgtctccaag ttctttgaac accacccaat 960

accacaggaa gaggcgtcct tagcagagac tgccctaaca tctggatcat ccccttccgc 1020

acccgcctcg gactctattg ggccccaaat tctcaccagt ccgtctcctt caaaatccat 1080

tccaattcca cagcccttcc gaccagcaga tgaagatcat cgaaatcaat ttgggcaacg 1140

agaccgatcc tcatcagctc ccaatgtgca tataaacaca atagaacctg tcaatattga 1200

tgacttgatt agagaccaag gatttcgtgg tgatggagga tcaaccacag gtttgtctgc 1260

taccccccct gcctcattac ctggctcact aactaacgtg aaagccttac agaaatctcc 1320

aggacctcag cgagaaagga agtcatcttc atcctcagaa gacaggaatc gaatgaaaac 1380

acttggtaga cgggactcga gtgatgattg ggagattcct gatgggcaga ttacagtggg 1440

acaaagaatt ggatctggat catttggaac agtctacaag ggaaagtggc atggtgatgt 1500

ggcagtgaaa atgttgaatg tgacagcacc tacacctcag cagttacaag ccttcaaaaa 1560

tgaagtagga gtactcagga aaacacgaca tgtgaatatc ctactcttca tgggctattc 1620

cacaaagcca caactggcta ttgttaccca gtggtgtgag ggctccagct tgtatcacca 1680

tctccatatc attgagacca aatttgagat gatcaaactt atagatattg cacgacagac 1740

tgcacagggc atggattact tacacgccaa gtcaatcatc cacagagacc tcaagagtaa 1800

taatatattt cttcatgaag acctcacagt aaaaataggt gattttggtc tagctacaga 1860

gaaatctcga tggagtgggt cccatcagtt tgaacagttg tctggatcca ttttgtggat 1920

ggcaccagaa gtcatcagaa tgcaagataa aaatccatac agctttcagt cagatgtata 1980

tgcatttgga attgttctgt atgaattgat gactggacag ttaccttatt caaacatcaa 2040

caacagggac cagataattt ttatggtggg acgaggatac ctgtctccag atctcagtaa 2100

ggtacggagt aactgtccaa aagccatgaa gagattaatg gcagagtgcc tcaaaaagaa 2160

aagagatgag agaccactct ttccccaaat tctcgcctct attgagctgc tggcccgctc 2220

attgccaaaa attcaccgca gtgcatcaga accctccttg aatcgggctg gtttccaaac 2280

agaggatttt agtctatatg cttgtgcttc tccaaaaaca cccatccagg cagggggata 2340

tggtgcgttt cctgtccact gaaacaaatg agtgagagag ttcaggagag tagcaacaaa 2400

aggaaaataa atgaacatat gtttgcttat atgttaaatt gaataaaata ctctcttttt 2460

ttttaaggtg aaccaaagaa cacttgtgtg gttaaagact agatataatt tttccccaaa 2520

ctaaaattta tacttaacat tggattttta acatccaagg gttaaaatac atagacattg 2580

ctaaaaattg gcagagcctc ttctagaggc tttactttct gttccgggtt tgtatcattc 2640

acttggttat tttaagtagt aaacttcagt ttctcatgca acttttgttg ccagctatca 2700

catgtccact agggactcca gaagaagacc ctacctatgc ctgtgtttgc aggtgagaag 2760

ttggcagtcg gttagcctgg gttagataag gcaaactgaa cagatctaat ttaggaagtc 2820

agtagaattt aataattcta ttattattct taataatttt tctataacta tttcttttta 2880

taacaatttg gaaaatgtgg atgtctttta tttccttgaa gcaataaact aagtttcttt 2940

ttataaaaa 2949

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума. Для этого индивидууму вводят эффективное количество BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль и ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль. При этом ингибитор RAF типа 1 выбран из группы, состоящей из дабрафениба, TAK 632, вемурафениба, их фармацевтически приемлемых солей. Введение указанных средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против опухолей отдельно. Также предложены способы, фармацевтические композиции и наборы для лечения опухоли. Группа изобретений обеспечивает лечение опухолей у индивидуума за счет синергического действия указанных средств. 8 н. и 47 з.п. ф-лы, 18 табл., 9 пр., 58 ил.

1. Способ лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения злокачественной опухоли,

где ингибитор RAF типа 1 выбран из группы, состоящей из дабрафениба, TAK 632, вемурафениба, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, и

где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

2. Способ по п. 1, где индивидуум представляет собой млекопитающее.

3. Способ по п. 2, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных.

4. Способ по п. 2, где млекопитающее представляет собой человека.

5. Способ по п. 1, где ингибитор RAF типа 1 представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

6. Способ по п. 1, где индивидуум со злокачественной опухолью несет соматическую мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK.

7. Способ по п. 1, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, выбранного из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

8. Способ по п. 7, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор сигнального пути PI3K/Akt.

9. Способ по п. 8, где ингибитор сигнального пути PI3K/Akt выбран из группы, состоящей из A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319, AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-диона), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-диона), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-диона), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряда бензимидазолов, BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120, CAL-129, CAL-130, CAL-253, CAL-263, CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432, FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Хонокиола, IC87114, IPI-145, KAR-4139, KAR-4141, KIN-1, KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Милтефозина, дигидрохлорида MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорида налтриндола, OXY-111A, перифосина, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), пиктилисиба, PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980, SF-1126, SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумина, TG100-115, трицирибина, X-339, XL-499, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

10. Способ лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемой соли и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль, для лечения злокачественной опухоли, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

11. Способ по п. 10, где индивидуум представляет собой млекопитающее.

12. Способ по п. 11, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных.

13. Способ по п. 11, где млекопитающее представляет собой человека.

14. Способ по п. 10, где BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль вводят в форме фармацевтической композиции, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

15. Способ по п. 10, где дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль вводят в форме фармацевтической композиции, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

16. Способ по п. 10, где индивидуум со злокачественной опухолью несет мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK.

17. Способ по п. 10, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, выбранного из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

18. Способ по п. 17, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор сигнального пути PI3K/Akt.

19. Способ по п. 18, где ингибитор сигнального пути PI3K/Akt выбран из группы, состоящей из A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319, AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-диона), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-диона), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-диона), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряда бензимидазолов, BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120, CAL-129, CAL-130, CAL-253, CAL-263, CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432, FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Хонокиола, IC87114, IPI-145, KAR-4139, KAR-4141, KIN-1, KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Милтефозина, дигидрохлорида MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорида налтриндола, OXY-111A, перифосина, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), пиктилисиба, PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980, SF-1126, SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумина, TG100-115, трицирибина, X-339, XL-499, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

20. Способ уничтожения злокачественной клетки, включающий приведение злокачественной клетки в контакт с эффективным количеством (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль,

где ингибитор RAF типа 1 выбран из группы, состоящей из дабрафениба, TAK 632, вемурафениба, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, и

где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

21. Способ по п. 20, где злокачественная клетка представляет собой злокачественную клетку млекопитающего.

22. Способ по п. 21, где злокачественную клетку млекопитающего получают у млекопитающего, выбранного из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных.

23. Способ по п. 21, где злокачественная клетка млекопитающего представляет собой злокачественную клетку человека.

24. Способ по п. 20, где ингибитор RAF типа 1 представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

25. Способ по п. 20, где индивидуум со злокачественной опухолью несет соматическую мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK.

26. Способ по п. 20, дополнительно включающий введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, выбранного из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

27. Способ по п. 26, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор сигнального пути PI3K/Akt.

28. Способ по п. 27, где ингибитор сигнального пути PI3K/Akt выбран из группы, состоящей из A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319, AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-диона), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-диона), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-диона), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряда бензимидазолов, BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120, CAL-129, CAL-130, CAL-253, CAL-263, CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432, FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Хонокиола, IC87114, IPI-145, KAR-4139, KAR-4141, KIN-1, KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Милтефозина, дигидрохлорида MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорида налтриндола, OXY-111A, перифосина, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), пиктилисиба, PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980, SF-1126, SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумина, TG100-115, трицирибина, X-339, XL-499, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

29. Набор для лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, содержащий эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, упакованные вместе с инструкциями по их применению,

где ингибитор RAF типа 1 выбран из группы, состоящей из дабрафениба, TAK 632, вемурафениба, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, и

где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

30. Набор по п. 29, где индивидуум представляет собой млекопитающее.

31. Набор по п. 30, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных.

32. Набор по п. 30, где млекопитающее представляет собой человека.

33. Набор по п. 29, где ингибитор RAF типа 1 представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

34. Набор по п. 29, где индивидуум со злокачественной опухолью несет соматическую мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK.

35. Набор по п. 29, дополнительно содержащий по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

36. Набор по п. 35, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор сигнального пути PI3K/Akt.

37. Набор по п. 36, где ингибитор сигнального пути PI3K/Akt выбран из группы, состоящей из A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319, AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-диона), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-диона), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-диона), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряда бензимидазолов, BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120, CAL-129, CAL-130, CAL-253, CAL-263, CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432, FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Хонокиола, IC87114, IPI-145, KAR-4139, KAR-4141, KIN-1, KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Милтефозина, дигидрохлорида MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорида налтриндола, OXY-111A, перифосина, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), пиктилисиба, PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980, SF-1126, SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумина, TG100-115, трицирибина, X-339, XL-499, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

38. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, где фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой ингибитор RAF типа 1 или его фармацевтически приемлемую соль, где ингибитор RAF типа 1 выбран из группы, состоящей из дабрафениба, TAK 632, вемурафениба, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний, и где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

39. Фармацевтическая композиция по п. 38, где индивидуум представляет собой млекопитающее.

40. Фармацевтическая композиция по п. 39, где млекопитающее выбрано из группы, состоящей из людей, приматов, сельскохозяйственных животных и домашних животных.

41. Фармацевтическая композиция по п. 39, где млекопитающее представляет собой человека.

42. Фармацевтическая композиция по п. 38, где ингибитор RAF типа 1 представляет собой дабрафениб или его фармацевтически приемлемую соль.

43. Фармацевтическая композиция по п. 38, где индивидуум со злокачественной опухолью несет соматическую мутацию BRAF или устойчив к лечению ингибитором сигнального пути MAPK.

44. Фармацевтическая композиция по п. 38, дополнительно содержащая по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство, выбранное из группы, состоящей из антитела или его фрагмента, цитотоксического средства, токсина, радионуклида, иммуномодулятора, фотоактивного терапевтического средства, радиосенсибилизирующего средства, гормона, средства против ангиогенеза и их сочетаний.

45. Фармацевтическая композиция по п. 44, где дополнительное терапевтическое средство представляет собой ингибитор сигнального пути PI3K/Akt.

46. Фармацевтическая композиция по п. 45, где ингибитор сигнального пути PI3K/Akt выбран из группы, состоящей из A-674563 (CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319, AS-041164 (5-бензо[1,3]диоксол-5-илметилентиазолидин-2,4-диона), AS-604850 (5-(2,2-дифтор-бензо[1,3]диоксол-5-илметилен)тиазолидин-2,4-диона), AS-605240 (5-хиноксилин-6-метилен-1,3-тиазолидин-2,4-диона), AT7867 (CAS # 857531-00-1), ряда бензимидазолов, BML-257 (CAS # 32387-96-5), CAL-120, CAL-129, CAL-130, CAL-253, CAL-263, CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930 (CAS # 885499-61-6), CH5132799 (CAS # 1007207-67-1), CHR-4432, FPA 124 (CAS # 902779-59-3), GS-1101 (CAL-101), GSK 690693 (CAS # 937174-76-0), H-89 (CAS # 127243-85-0), Хонокиола, IC87114, IPI-145, KAR-4139, KAR-4141, KIN-1, KT 5720 (CAS # 108068-98-0), Милтефозина, дигидрохлорида MK-2206 (CAS # 1032350-13-2), ML-9 (CAS # 105637-50-1), гидрохлорида налтриндола, OXY-111A, перифосина, PHT-427 (CAS # 1191951-57-1), пиктилисиба, PIK-90 (CAS # 677338-12-4), SC-103980, SF-1126, SH-5, SH-6, тетрагидрокуркумина, TG100-115, трицирибина, X-339, XL-499, их фармацевтически приемлемых солей и их сочетаний.

47. Фармацевтическая композиция по п. 38, которая находится в стандартной дозированной форме, содержащей оба средства против злокачественных опухолей.

48. Фармацевтическая композиция по п. 38, в которой первое средство против злокачественной опухоли находится в первой стандартной дозированной форме, а второе средство против злокачественной опухоли находится во второй стандартной дозированной форме, отдельно от первой.

49. Фармацевтическая композиция по п. 38, где первое и второе средства против злокачественных опухолей вводят индивидууму совместно.

50. Фармацевтическая композиция по п. 38, где первое и второе средства против злокачественных опухолей вводят индивидууму последовательно.

51. Фармацевтическая композиция по п. 50, где первое средство против злокачественной опухоли вводят индивидууму перед вторым средством против злокачественной опухоли.

52. Фармацевтическая композиция по п. 50, где второе средство против злокачественной опухоли вводят индивидууму перед первым средством против злокачественной опухоли.

53. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, где фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель и эффективное количество (i) первого средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой BVD-523 или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) второго средства против злокачественной опухоли, которое представляет собой вемурафениб или его фармацевтически приемлемую соль, где введение первого и второго средств против злокачественных опухолей обеспечивает синергическое действие по сравнению с введением любого из этих средств против злокачественных опухолей отдельно.

54. Способ лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму эффективного количества фармацевтической композиции по п. 53 для лечения злокачественной опухоли.

55. Набор для лечения злокачественной опухоли у нуждающегося в этом индивидуума, где набор содержит эффективное количество фармацевтической композиции по п. 53.