ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной патентной заявки США № 62/555110, поданной 7 сентября 2017 года, и предварительной патентной заявки США № 62/566824, поданной 2 октября 2017 года, полное содержание которых, таким образом, включенно в качестве ссылки в полном объеме для всех целей.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит список последовательностей, который был подан в электронном виде в формате ASCII, и включен, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 6 сентября 2018 года, называется DFY-038WO_SL.txt и имеет размер 321395 байт.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к мультиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с NKG2D, CD16 и опухолеассоциированным антигеном.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Злокачественная опухоль продолжает оставаться серьезной проблемой для здоровья, несмотря на значительные исследовательские усилия и научные достижения, описанные в литературе по лечению этого заболевания. Некоторые из наиболее часто диагностируемых злокачественных опухолей включают рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легких и колоректальный рак. Рак предстательной железы является наиболее распространенной формой злокачественной опухоли у мужчин. Рак молочной железы остается основной причиной смерти у женщин. Злокачественные опухоли крови и костного мозга, включая множественные миеломы, лейкоз и лимфомы, также являются часто диагностируемыми типами злокачественных опухолей. Существующие варианты лечения этих злокачественных опухолей эффективны не для всех пациентов и/или могут иметь существенные побочные эффекты. Другие типы злокачественных опухолей также остаются сложными для лечения с использованием существующих терапевтических вариантов.

Желательна иммунотерапия злокачественных опухолей, потому что она высокоспецифична и может способствовать разрушению злокачественных клеток с помощью собственной иммунной системы пациента. Слитые белки, такие как биспецифические привлекающие Т-клетки активаторы представляют собой иммунотерапию злокачественных опухолей, описанную в литературе, которая связывается с опухолевыми клетками и Т-клетками для облегчения разрушения опухолевых клеток. Антитела, которые связывают определенные опухолеассоциированные антигены и определенные иммунные клетки, были описаны в литературе. См., например WO 2016/134371 и WO 2015/095412.

Клетки-естественные киллеры (НК) являются компонентом врожденной иммунной системы и составляют примерно 15% циркулирующих лимфоцитов. NK-клетки проникают практически во все ткани и первоначально характеризовались своей способностью эффективно убивать опухолевые клетки без необходимости предварительной сенсибилизации. Активированные NK-клетки убивают клетки-мишени с помощью цитотоксических Т-клеток, т.е. через цитолитические гранулы, которые содержат перфорин и гранзимы, а также через пути рецептора смерти. Активированные NK-клетки также секретируют воспалительные цитокины, такие как IFN-гамма, и хемокины, которые способствуют привлечению других лейкоцитов к ткани-мишени.

NK-клетки отвечают на сигналы через ряд активирующих и ингибирующих рецепторов на их поверхности. Например, когда NK-клетки встречают здоровые клетки собственного организма, их активность ингибируется за счет активации иммуноглобулиноподобных рецепторов клеток-киллеров (KIR). Альтернативно, когда NK-клетки сталкиваются с чужеродными или злокачественными клетками, они активируются через свои активирующие рецепторы (например, член D группы 2 естественных киллеров (NKG2D), NCR, DNAM1). NK-клетки также активируются константной областью некоторых иммуноглобулинов через рецепторы CD16 на их поверхности. Общая чувствительность НК-клеток к активации зависит от суммы стимулирующих и ингибиторных сигналов.

Молекула адгезии эпителиальных клеток (EpCAM) представляет собой трансмембранный гликопротеин, опосредующий Ca²⁺-независимую гомотипическую межклеточную адгезию в эпителии. EpCAM также участвует в передаче клеточных сигналов, миграцию, пролиферацию и дифференцировку. Кроме того, EpCAM обладает онкогенным потенциалом из-за способности активировать c-myc, e-fabp и циклины A и E. Поскольку EpCAM экспрессируется исключительно в эпителии и неоплазиях эпителиального происхождения, EpCAM можно использовать в качестве диагностического маркера для различных злокачественных опухолей, таких как рак головы и шеи, рак яичников, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак желудка, рак печени, рак пищевода и рак легких. По-видимому, он играет роль в образовании опухоли и метастазировании карцином, поэтому он также может выступать в качестве потенциального прогностического маркера и в качестве потенциальной мишени для стратегий иммунотерапии.

CA125, также известный как муцин 16, является членом муцинового семейства гликопротеинов. CA-125 нашел применение в качестве опухолевого маркера или биомаркера, который может повышаться в крови некоторых пациентов с определенными типами злокачественных опухолей, включая рак яичников, злокачественную опухоль эндометрия и рак поджелудочной железы. Было показано, что CA-125 играет роль в развитии образования опухоли и опухолевой пролиферации с помощью нескольких различных механизмов, включая подавление ответа клеток-естественных киллеров и, тем самым, защищая злокачественные клетки от иммунного ответа; и путем роста клеток и стимулирования клеточной подвижности.

Натрий-зависимый фосфат-транспортный белок 2b (NaPi2b) участвует в активной транспортировке фосфата в клетки посредством совместного транспорта с Na⁺. Например, он является основным белком транспорта фосфатов в мембране щеточной каймы кишечника и играет роль в синтезе поверхностно-активного вещества в легочных альвеолах. NaPi2b также является антигеном, экспрессируемым в ряде злокачественных опухолей, таких как рак легких, рак яичников и рак щитовидной железы.

Нектин 4 является членом семейства нектинов, которое представляет собой семейство клеточных молекул адгезии, участвующих в Ca²⁺-зависимой клеточной адгезии. Нектины повсеместно экспрессируются и играют адгезивную роль в широком спектре тканей, такую как адгезивное соединение эпителия или химический синапс нейрональной ткани. Это также ассоциированный с опухолью антиген, экспрессирующийся в злокачественных опухолях, таких как рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак яичников, рак поджелудочной железы, колоректальный рак и рак легких.

Ганглиозиды вовлечены во многие физиологические процессы, включая рост, дифференцировку, миграцию и апоптоз посредством модуляции как клеточных сигнальных процессов, так и межклеточных взаимодействий и взаимодействий клетка-матрикс. GM1 представляет собой ганглиозид, фукозил-GM1 представляет собой ганглиозид с уникальной структурой, в которой терминальная галактоза является α-1,2-фукозилированной на невосстанавливающемся конце. Он экспрессируется в очень немногих нормальных тканях, но встречается в ряде злокачественных опухолей, таких как мелкоклеточный рак легких, нейробластома, рак печени. Таким образом, фукозил-GM1 рассматривается в качестве кандидатного опухолевого маркера и целевого антигена в иммунотерапии антителами для мелкоклеточного рака легких, нейробластомы, рака печени.

Белки ADAM (дезинтегрин и металлопротеиназа) играют доминирующую роль в отщеплении белкового эктодомена мембраносвязанных молекул. Они стали известны как важнейшие регуляторы межклеточной передачи сигналов во время развития и гомеостаза, и, как полагают, способствуют патологиям, таким как злокачественная опухоль, где их регуляция изменена. ADAM8, член семейства ADAM, сверхэкспрессирован в раке поджелудочной железы, раке молочной железы, раке легких и злокачественной опухоли почки. Было показано, что ADAM9 расщепляет и высвобождает ряд молекул с важными ролями в образовании опухоли и ангиогенезе, например, EGF, FGFR2IIIb, Tie-2, Flk-1, EphB4, CD40, VCAM-1 и VE-кадгерин. ADAM9 сверхэкспрессирован в злокачественной опухоли почки, раке молочной железы, раке легких, раке печени, раке поджелудочной железы, меланоме, раке матки, раке предстательной железы, остеосаркоме и злокачественной опухоли головного мозга.

SLC44A4, также известный как CTL4, является членом семейства растворимых белков-переносчиков, известных как белки, подобные транспортеру холина (CTL1-5). Было показано, что SLC44A4 не участвует в транспорте холина, но он связан с синтезом и транспортом ацетилхолина, а также с поглощением тиамина пирофосфата, фосфорилированной формы витамина B1. SLC44A4 обычно экспрессируется на апикальной поверхности секреторных эпителиальных клеток, но он заметно активируется в ряде эпителиальных опухолей, в частности, раке поджелудочной железы, раке предстательной железы и раке желудка.

CA19-9 является общим термином для сиалированного углеводного антигена системы Льюис. Он сверхэкспрессирован в злокачественных опухолях органов пищеварения, таких как рак поджелудочной железы, колоректальный рак, холангиокарцинома и рак печени. Таким образом, это наиболее часто применяемый сывороточный опухолевый маркер для диагностики вышеупомянутых злокачественных опухолей.

СУЩНОСТЬ

Изобретение относится к мультиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с опухолеассоциированным антигеном (выбранным из любого из антигенов, представленных в таблице 11) и с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-естественных киллерах. Такие белки могут задействовать более одного вида рецепторов, активирующих NK-клетки, и могут блокировать связывание природных лигандов с NKG2D. В определенных вариантах осуществления белки могут быть агонистами NK-клеток у людей и у других видов, таких как грызуны и яванские макаки. Различные аспекты и варианты осуществления изобретения более подробно описаны ниже.

Таким образом, один из аспектов изобретения относится к белку, который включает первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D; второй антигенсвязывающий участок, который связывается с антигеном, выбранным из EpCAM, антигена злокачественной опухоли 125 (CA125), натрий-фосфатного котранспортера 2B (NaPi2b), молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), фукозил-GM1 (моносиалотетрагексозилганглиозид), белка 8, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8), белка 9, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9), члена 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4) и сиалилированного антигена Льюиса (CA19-9); и Fc-домен антитела, его часть, достаточную для связывания CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывает CD16. Каждый антигенсвязывающий участок может включать в себя вариабельный домен тяжелой цепи антитела и вариабельный домен легкой цепи антитела (например, расположенные как в антителе или слитые вместе из scFv), или один или более антигенсвязывающих участков могут быть однодоменным антителом, таким как антитело VHH, как антитело верблюда, или антитело VNAR, подобное тем, которые содержатся в хрящевой рыбе.

Изобретение относится к мультиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D, CD16 и антигеном, выбранным из EpCAM, антигена злокачественной опухоли 125 (CA125), натрий-фосфатного котранспортера 2B (NaPi2b), молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), фукозил-GM1 (моносиалотетрагексозилганглиозид), белка 8, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8), белка 9, содержащего домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9), члена 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4) и сиалилированного антигена Льюиса (CA19-9).

Некоторые белки по настоящему изобретению включают Fab-фрагмент, связанный с Fc-доменом антитела или его частью, достаточной для связывания CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают Fab-фрагмент, где часть тяжелой цепи Fab-фрагмента содержит вариабельный домен тяжелой цепи и домен CH1, и где вариабельный домен тяжелой цепи связан с доменом CH1.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают Fab-фрагмент, связанный с Fc-доменом антитела.

В одном из аспектов, изобретение относится к белку, включающему (а) первый антигенсвязывающий участок, содержащий Fab-фрагмент, который связывается с NKG2D; (b) второй антигенсвязывающий участок, содержащий одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который связывается с EpCAM; и (c) Fc-домен антитела или его часть, достаточную для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16. Настоящее изобретение относится к белку, в котором первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D, представляет собой Fab-фрагмент, а второй антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном, EpCAM представляет собой scFv.

Конкретные белки, описанные в настоящем изобретении, включают в себя scFv, нацеленный на EpCAM и включающий вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи, связанные с Fc-доменом антитела или его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком, который связывается с CD16, посредством шарнира, содержащего Ala-Ser или Gly-Ala-Ser. Некоторые белки по настоящему изобретению включают в себя scFv, нацеленный на EpCAM и связанный с Fc-доменом антитела. Некоторые белки по настоящему изобретению включают вариабельный домен тяжелой цепи scFv, нацеленного на EpCAM, образующий дисульфидный мостик с вариабельным доменом легкой цепи scFv.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают an scFv, нацеленный на EpCAM, в котором дисульфидный мостик образуется между C44 из вариабельного домена тяжелой цепи и C100 из вариабельного домена легкой цепи.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают scFv, нацеленный на EpCAM и связанный с Fc-доменом антитела, в котором вариабельный домен легкой цепи scFv расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv и связан с вариабельным доменом тяжелой цепи scFv через гибкий линкер (GlyGlyGlyGlySer)₄ (G4S)₄) (SEQ ID NO:206), и Fab-фрагмент, который связывается с NKG2D, связанный с Fc-доменом антитела.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают scFv, нацеленный на EpCAM, в котором вариабельный домен тяжелой цепи расположен у N-конца или C-конца вариабельного домена легкой цепи scFv.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают scFv, нацеленный на EpCAM, в котором вариабельный домен легкой цепи scFv расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv.

Один из аспектов изобретения относится к белку, включающему (a) первый антигенсвязывающий участок, содержащий одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который связывается с NKG2D; (b) второй антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM; и (c) Fc-домен антитела или его часть, достаточную для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, который связывается с CD16. В определенных вариантах осуществления белок по настоящему изобретению дополнительно содержит дополнительный антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM. В определенных вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок белка, описанного в настоящем изобретении, представляет собой Fab-фрагмент который связывается с EpCAM. В определенных вариантах осуществления второй и дополнительный антигенсвязывающие участки белка, описанные в настоящем изобретении, представляют собой Fab-фрагменты, которые связываются с EpCAM.

В определенных вариантах осуществления второй и дополнительный антигенсвязывающие участки белка, описанного в настоящем изобретении, представляют собой scFv, которые связываются с EpCAM. В определенных вариантах осуществления вариабельный домен тяжелой цепи scFv, который связывается с NKG2D, расположен у N-конца или C-конца вариабельного домена легкой цепи scFv. В определенных вариантах осуществления вариабельный домен легкой цепи расположен у N-конца вариабельного домена тяжелой цепи scFv, который связывается с NKG2D.

В определенных вариантах осуществления scFv, который связывается с NKG2D, связан с Fc-доменом антитела или или его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком который связывается с CD16. В определенных вариантах осуществления scFv, который связывается с NKG2D, связан с Fc-доменом антитела или или его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком который связывается с CD16, посредством шарнира, включающего Ala-Ser (например, в TriNKET, который содержит дополнительный антигенсвязывающий участок, который связывается с EpCAM, CA125, NaPi2b, Nectin4, Fucosyl-GM1, ADAM8, ADAM9, SLC44A4, или CA19-9) или Gly-Ala-Ser (например, в TriNKET, который не содержит дополнительного антигенсвязывающего участка, который связывается с EpCAM, CA125, NaPi2b, Nectin4, Fucosyl-GM1, ADAM8, ADAM9, SLC44A4, или CA19-9). В определенных вариантах осуществления scFv, который связывается с NKG2D, связан с C-концом Fc-домена антитела или его частью, достаточной для связывания с CD16, или с третьим антигенсвязывающим участком который связывается с CD16, посредством гибкого линкера, включающего G4S. В определенных вариантах осуществления C-конец Fc-домена антитела связан с N-концом вариабельного домена легкой цепи scFv, который связывается с NKG2D.

В определенных вариантах осуществления, в scFv, который связывается с NKG2D, образуется дисульфидный мостик между вариабельным доменом тяжелой цепи scFv и вариабельным доменом легкой цепи scFv. В определенных вариантах осуществления дисульфидный мостик образуется между C44 из вариабельного домена тяжелой цепи и C100 из вариабельного домена легкой цепи.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают последовательность, выбранную из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают scFv, связанный с Fc-доменом антитела, где scFv, связанный с Fc-доменом антитела представлен последовательностью, выбранной из SEQ ID NO:208 и SEQ ID NO:209.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают последовательность SEQ ID NO:205 и SEQ ID NO:213.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают последовательность, по меньшей мере, на 99% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают аминокислотную последовательность SEQ ID NO:203 и SEQ ID NO:204.

Некоторые белки по настоящему изобретению включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203. Некоторые белки по настоящему изобретению включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203. Некоторые белки по настоящему изобретению включают аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:203.

Первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D, в некоторых вариантах осуществления может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:1, такой как домен с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичной SEQ ID NO:1, и/или включающий аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:105), CDR2 (SEQ ID NO:106), и CDR3 (SEQ ID NO:107) из SEQ ID NO:1. Вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:1 можно соединять с рядом вариабельных доменов легких цепей для образования участка связывания NKG2D. Например, первый антигенсвязывающий участок, который включает вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:1, может дополнительно включать вариабельный домен легкой цепи, выбранный из любой из последовательностей, относящихся к SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 и 40. Например, первый антигенсвязывающий участок включает вариабельный домен тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными SEQ ID NO:1, и вариабельный домен легкой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 и 40.

Альтернативно, первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:41, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:42. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:41, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:43), CDR2 (SEQ ID NO:44), и CDR3 (SEQ ID NO:45) из SEQ ID NO:41. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:42, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:46), CDR2 (SEQ ID NO:47), и CDR3 (SEQ ID NO:48) из SEQ ID NO:42.

В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:49, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:50. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:49, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:51), CDR2 (SEQ ID NO:52), и CDR3 (SEQ ID NO:53) из SEQ ID NO:49. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:50, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:54), CDR2 (SEQ ID NO:55), и CDR3 (SEQ ID NO:56) из SEQ ID NO:50.

Альтернативно, первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:57, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:58, такие как с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными SEQ ID NO:57, и, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными SEQ ID NO:58, соответственно.

В другом варианте осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:59, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:60, Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:59, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:109), CDR2 (SEQ ID NO:110), и CDR3 (SEQ ID NO:111) из SEQ ID NO:59. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:60, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:112), CDR2 (SEQ ID NO:113), и CDR3 (SEQ ID NO:114) из SEQ ID NO:60.

Первый антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D, в некоторых вариантах осуществления может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:61, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:62. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:61, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:63), CDR2 (SEQ ID NO:64), и CDR3 (SEQ ID NO:65) из SEQ ID NO:61. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:62, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:66), CDR2 (SEQ ID NO:67), и CDR3 (SEQ ID NO:68) из SEQ ID NO:62.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:69, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:70. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:69, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:71), CDR2 (SEQ ID NO:72), и CDR3 (SEQ ID NO:73) из SEQ ID NO:69. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:70, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:74), CDR2 (SEQ ID NO:75), и CDR3 (SEQ ID NO:76) из SEQ ID NO:70.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:77, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:78. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:77, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:79), CDR2 (SEQ ID NO:80), и CDR3 (SEQ ID NO:81) из SEQ ID NO:77. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:78, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:82), CDR2 (SEQ ID NO:83), и CDR3 (SEQ ID NO:84) из SEQ ID NO:78.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:85, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:86. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:85, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:87), CDR2 (SEQ ID NO:88), и CDR3 (SEQ ID NO:89) из SEQ ID NO:85. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:86, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:90), CDR2 (SEQ ID NO:91), и CDR3 (SEQ ID NO:92) из SEQ ID NO:86.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:93, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:94. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:93, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:95), CDR2 (SEQ ID NO:96), и CDR3 (SEQ ID NO:97) из SEQ ID NO:93. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:94, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:98), CDR2 (SEQ ID NO:99), и CDR3 (SEQ ID NO:100) из SEQ ID NO:94.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:101, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:102, такие как с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичные SEQ ID NO:101, и, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичные SEQ ID NO:102, соответственно.

В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий участок может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:103, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:104, такие как с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными SEQ ID NO:103, и, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичными SEQ ID NO:104, соответственно.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с EpCAM и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:115, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:119. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:115, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:116), CDR2 (SEQ ID NO:117), и CDR3 (SEQ ID NO:118) из SEQ ID NO:115. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:119, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:120), CDR2 (SEQ ID NO:121), и CDR3 (SEQ ID NO:122) из SEQ ID NO:119.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с EpCAM и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:123, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:127. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:123, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:124), CDR2 (SEQ ID NO:125), и CDR3 (SEQ ID NO:126) из SEQ ID NO:123. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:127, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:128), CDR2 (SEQ ID NO:129), и CDR3 (SEQ ID NO:130) из SEQ ID NO:127.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с EpCAM и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:131, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:135. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:131, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:132), CDR2 (SEQ ID NO:133), и CDR3 (SEQ ID NO:134) из SEQ ID NO:131. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:135, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:136), CDR2 (SEQ ID NO:137), и CDR3 (SEQ ID NO:138) из SEQ ID NO:135.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с EpCAM и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:139, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:143. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:139, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:140), CDR2 (SEQ ID NO:141), и CDR3 (SEQ ID NO:142) из SEQ ID NO:139. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:143, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:144), CDR2 (SEQ ID NO:145), и CDR3 (SEQ ID NO:146) из SEQ ID NO:143.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с CA125 и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:155, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:159. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:155, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:156), CDR2 (SEQ ID NO:157), и CDR3 (SEQ ID NO:158) из SEQ ID NO:155. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:159, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:160), CDR2 (SEQ ID NO:161), и CDR3 (SEQ ID NO:162) из SEQ ID NO:159.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с CA125 и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:163, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:167. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:163, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:164), CDR2 (SEQ ID NO:165), и CDR3 (SEQ ID NO:166) из SEQ ID NO:163. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:167, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:168), CDR2 (SEQ ID NO:169), и CDR3 (SEQ ID NO:170) из SEQ ID NO:167.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с NaPi2b и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:171, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:175. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:171, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:172), CDR2 (SEQ ID NO:173), и CDR3 (SEQ ID NO:174) из SEQ ID NO:171. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:175, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:176), CDR2 (SEQ ID NO:177), и CDR3 (SEQ ID NO:178) из SEQ ID NO:175.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с нектином-4 и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:179, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:183. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:179, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:180), CDR2 (SEQ ID NO:181), и CDR3 (SEQ ID NO:182) из SEQ ID NO:179. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:183, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:184), CDR2 (SEQ ID NO:185), и CDR3 (SEQ ID NO:186) из SEQ ID NO:183.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с фукозил-GM1 и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:187, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:191. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:187, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:188), CDR2 (SEQ ID NO:189), и CDR3 (SEQ ID NO:190) из SEQ ID NO:187. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:191, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:192), CDR2 (SEQ ID NO:193), и CDR3 (SEQ ID NO:194) из SEQ ID NO:191.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок может связываться с SLC44A4 и может включать вариабельный домен тяжелой цепи, относящийся к SEQ ID NO:195, и вариабельный домен легкой цепи, относящийся к SEQ ID NO:199. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:195, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:196), CDR2 (SEQ ID NO:197), и CDR3 (SEQ ID NO:198) из SEQ ID NO:195. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100%) идентичен SEQ ID NO:199, и/или включать аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO:200), CDR2 (SEQ ID NO:201), и CDR3 (SEQ ID NO:202) из SEQ ID NO:199.

В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий участок включает вариабельный домен легкой цепи, с аминокислотной последовательностью, идентичной аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи, присутствующей в первом антигенсвязывающем участке.

В некоторых вариантах осуществления белок включает часть Fc-домена антитела, достаточную для связывания CD16, где Fc-домен антитела содержит домены шарнира и CH2, и/или аминокислотные последовательности, по меньшей мере, на 90% идентичные аминокислотной последовательности 234-332 человеческого антитела IgG.

Некоторые белки по настоящему изобретению связываются с NKG2D с K_D 10 нМ или с более слабой аффинностью.

Также предлагаются составы, содержащие один из этих белков; клетки, содержащие одну или более нуклеиновых кислот, экспрессирующих эти белки, и способы усиления гибели опухолевых клеток с использованием этих белков.

Другой аспект изобретения относится к способу лечения злокачественной опухоли у пациента. Способ включает введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультиспецифического связывающего белка, описываемого в настоящем документе. Примеры злокачественных опухолей для лечения с использованием мультиспецифических связывающих белков включают, например, рак головы и шеи, рак яичников, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак желудка, рак печени, рак пищевода, и рак легких.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

ФИГ. 1 представляет гетеродимерное, мультиспецифическое антитело (триспецифичный связывающий белок (TriNKET)). Каждое плечо может представлять либо NKG2D-связывающий домен, либо связывающий домен для опухолеассоциированного антигена. В некоторых вариантах осуществления связывающие домены для NKG2D и опухолеассоциированного антигена могут иметь общую легкую цепь.

ФИГ. 2 представляет гетеродимерное, мультиспецифическое антитело. Или NKG2D-связывающий домен или связывающий домен для опухолеассоциированного антигена могут принимать формат scFv (правое плечо).

ФИГ. 3 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с человеческим рекомбинантным NKG2D в анализе ELISA.

ФИГ. 4 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с обезьяньим рекомбинантным NKG2D в анализе ELISA.

ФИГ. 5 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с мышиным рекомбинантным NKG2D в анализе ELISA.

ФИГ. 6 представляет собой линейчатые диаграммы, демонстрирующие связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с клетками EL4, экспрессирующими человеческий NKG2D при помощи проточной цитометрии и показывающие кратность средней интенсивность флуоресценции (MFI) по сравнению с фоном (FOB).

ФИГ. 7 представляет собой линейчатые диаграммы, демонстрирующие связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с клетками EL4, экспрессирующими мышиный NKG2D при помощи проточной цитометрии и показывающие кратность средней интенсивность флуоресценции (MFI) по сравнению с фоном (FOB).

ФИГ. 8 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом ULBP-6.

ФИГ. 9 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом MICA.

ФИГ. 10 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом Rae-1 дельта.

ФИГ. 11 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию человеческого NKG2D при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) путем количественной оценки процента TNF-α-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки человеческого NKG2D-CD3 зета.

ФИГ. 12 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию мышиного NKG2D при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) путем количественной оценки процента TNF-α-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки мышиного NKG2D-CD3 зета.

ФИГ. 13 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны).

ФИГ. 14 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны).

ФИГ. 15 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны).

ФИГ. 16 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток при помощи NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны).

ФИГ. 17 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие цитотоксический эффект NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны) на опухолевые клетки.

ФИГ. 18 представляет собой линейчатые диаграммы, показывающие температуру плавления NKG2D-связывающих доменов (перечисленных как клоны), измеренную путем дифференциальной сканирующей флуорометрии.

ФИГ. 19A-19C представляют собой линейчатые диаграммы синергетической активации NK-клеток с использованием CD16- и NKG2D-связывания. ФИГ. 19А демонстрирует уровни CD107a; ФИГ. 19B демонстрирует уровни IFN-γ; ФИГ. 19C демонстрирует уровни CD107a и IFN-γ. Графики показывают среднее (n=2)±SD. Данные представляют собой выборку пяти независимых экспериментов с использованием пяти разных здоровых доноров.

ФИГ. 20 представляет триспецифический связывающий белок (TriNKET) в форме Triomab, который представляет собой трифункциональное биспецифическое антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух полу-антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят из двух родительских антител. Форма Triomab может быть гетеродимерной конструкцией, содержащей 1/2 крысиного антитела и 1/2 мышиного антитела.

ФИГ. 21 представляет TriNKET в форме KiH с общей легкой цепью, в которой используется технология выступы-во-впадины (KIH). KiH представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. TriNKET в формате KiH может быть гетеродимерной конструкцией с двумя Fab-фрагментами, связывающимися с мишенью 1 и мишенью 2, и с двумя разными тяжелыми цепями и общей легкой цепью, которая соединяется с обеими тяжелыми цепями.

ФИГ. 22 представляет TriNKET в форме иммуноглобулина с двойным вариабельным доменом (DVD-Ig™), которая объединяет мишень-связывающие домены двух моноклональных антител с помощью гибких природных линкеров и дает четырехвалентную IgG-подобную молекулу. DVD-Ig™ представляет собой гомодимерную конструкцию, в которой вариабельный домен, нацеленный на антиген 2, слит с N-концом вариабельного домена Fab-фрагмента, нацеленного на антиген 1. Форма DVD-Ig™ содержит нормальный Fc.

ФИГ. 23 представляет TriNKET в форме Fab с ортогональной зоной контакта (Ortho-Fab), которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, включающую два фрагмента Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2 и слитых с Fc. Спаривание легкая цепь (LC)-тяжелая цепь (HC) обеспечивается ортогональной зоной контакта. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.

ФИГ. 24 представляет TriNKET в формате Ig 2-в-1.

ФИГ. 25 представляет TriNKET в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, включающую два различных фрагмента Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2 и слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями для электростатического взаимодействия в Fc.

ФИГ. 26 представляет TriNKET в форме Fab-фрагмента с обменом плечами: антитела, которые обмениваются плечами Fab путем обмена тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекула) на пару тяжелая-легкая цепи от другой молекулы, что приводит к получению биспецифических антител. Форма Fab Arm Exchange (cFae) представляет собой гетеродимер, включающий два фрагмента Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.

ФИГ. 27 представляет TriNKET в форме SEED Body, которая представляет собой гетеродимер, включающий два фрагмента Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.

ФИГ. 28 представляет TriNKET в форме LuZ-Y, в которой используют лейциновую молнию для индуцирования гетеродимеризации двух различных HC. Форма LuZ-Y представляет собой гетеродимер, включающий два различных scFab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2 и слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мотивами лейциновой молнии, слитыми с C-концом Fc.

ФИГ. 29 представляет TriNKET в форме Cov-X-Body.

ФИГ. 30A и 30B представляют TriNKET в формах κλ-Body, которые представляют собой гетеродимерные конструкции с двумя различными Fab-фрагментами, слитыми с Fc, стабилизированным мутациями гетеродимеризации: один Fab-фрагмент, нацеленный на антиген 1, содержит LC каппа, и второй Fab-фрагмент, нацеленный на антиген 2, содержит LC лямбда. ФИГ. 30A представляет пример одной из форм κλ-Body; ФИГ. 30B представляет пример другого κλ-Body.

ФИГ. 31 представляет гетеродимерную конструкцию Oasc-Fab, которая включает Fab-фрагмент, связывающийся с мишенью 1 и scFab, связывающийся с мишенью 1, оба слиты с Fc-доменом. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc-домене.

ФИГ. 32 представляет DuetMab, которое является гетеродимерной конструкцией с двумя различными Fab-фрагментами, связывающимися с мишенями 1 и 2, и Fc, стабилизированным мутациями гетеродимеризации. Fab-фрагменты 1 и 2 содержат различные мостики S-S, которые обеспечивают правильное спаривание легкой цепи и тяжелой цепи.

ФИГ. 33 представляет CrossmAb, которое является гетеродимерной конструкцией с двумя различными Fab-фрагментами, связывающимися с мишенями 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. Домены CL и CH1, и домены VH и VL меняют местами, например, CH1 слит в линию с VL, в то время как CL слит в линию с VH.

ФИГ. 34 представляет Fit-Ig, который представляет собой гомодимерную конструкцию, Fab-фрагмент, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab-фрагмента, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа.

ФИГ. 35 иллюстрирует триспецифическое антитело (TriNKET), которое содержит scFv, связывающий опухолеассоциированный антиген, Fab, нацеленный на NKG2D, и гетеродимеризованную константную область антитела/домен («CD-домен») который связывается с CD16 (формат scFv-Fab). Формат антитела указан в настоящем документе как F3'-TriNKET.

ФИГ. 36 иллюстрирует пример триспецифичных антител (TriNKET), который включает первый антигенсвязывающий участок scFv, который связывается с NKG2D, второй антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном (например, EpCAM), дополнительный антигенсвязывающий участок, который связывается с опухолеассоциированным антигеном (например, EpCAM) и гетеродимеризованная константная область антитела, которая связывается с CD16. Эти форматы антител указаны в настоящем документе как F4-TriNKET.

ФИГ. 37 представляет собой линейные графики, демонстрирующие, что TriNKET и мАТ связываются с EPCAM, который экспрессируется на человеческих клетках колоректального рака H747.

ФИГ. 38 представляет собой линейные графики, демонстрирующие, что TriNKET и мАТ связываются с EPCAM, который экспрессируется на человеческих клетках рака легкого HCC827.

ФИГ. 39 представляет собой линейные графики, демонстрирующие, что TriNKET и мАТ связываются с EPCAM, который экспрессируется на человеческих клетках колоректального рака HCT116.

ФИГ. 40A и ФИГ. 40B представляют собой линейные графики, показывающие TriNKET-опосредованный лизис клеток H747 при помощи покоящихся человеческих NK-клеток от двух различных доноров. Соотношение эффектор-мишень составляло 10:1.

ФИГ. 41A и ФИГ. 41B представляют собой линейные графики, показывающие TriNKET-опосредованный лизис клеток HCC827 при помощи покоящихся человеческих NK-клеток от двух различных доноров. Соотношение эффектор-мишень составляло 10:1.

ФИГ. 42A и ФИГ. 42B представляют собой линейные графики, показывающие TriNKET-опосредованный лизис клеток MCF7 при помощи покоящихся человеческих NK-клеток от двух различных доноров. Соотношение эффектор-мишень составляло 10:1.

ФИГ 43A и ФИГ. 43B представляют собой линейные графики, показывающие TriNKET-опосредованный лизис клеток HCT116 при помощи покоящихся человеческих NK-клеток от двух различных доноров. Соотношение эффектор-мишень составляло 10:1.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Изобретение относится к мультиспецифичным связывающим белкам, которые связываются с EPCAM на злокачественной клетке и с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-естественных киллерах, чтобы активировать клетки-естественные киллеры, к фармацевтическим композициям, содержащим такие мультиспецифичные связывающие белки, и к терапевтическим способам с использованием таких мультиспецифичных белков и фармацевтических композиций, в том числе для лечения злокачественной опухоли. Различные аспекты изобретения изложены ниже в разделах; однако аспекты изобретения, описанные в одном конкретном разделе, не ограничиваются каким-либо конкретным разделом.

Чтобы облегчить понимание настоящего изобретения, ряд терминов и фраз определены ниже.

Термины «a» и «an», как применяют в настоящем документе, означают «один или более» и включают множественное число до тех пор, пока подходит контекст.

Как применяют в настоящем документе, термин «антигенсвязывающий участок» относится к той части молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена. В антителах человека антигенсвязывающий участок образован аминокислотными остатками N-концевых вариабельных ("V") областей тяжелой ("H") и легкой ("L") цепей. Три высоко дивергентных участка в пределах V-областей тяжелых и легких цепей обозначены как «гипервариабельные области», которые расположены между более консервативными фланкирующими участками, известными как «каркасные области» или «FR». Таким образом, термин «FR» относится к аминокислотным последовательностям, которые естественным образом обнаруживаются между и рядом с гипервариабельными областями в иммуноглобулинах. В молекуле антитела человека три гипервариабельные области легкой цепи и три гипервариабельные области тяжелой цепи расположены друг относительно друга в трехмерном пространстве с образованием антигенсвязывающей поверхности. Антигенсвязывающая поверхность комплементарна трехмерной поверхности связанного антигена, и три гипервариабельные области каждой из тяжелых и легких цепей, обозначают как «определяющие комплементарность области» или «CDR». У некоторых животных, таких как верблюд и хрящевые рыбы, антигенсвязывающий участок образован одной цепью антитела, образуя «однодоменное антитело». Антигенсвязывающие участки могут существовать в интактном антителе, в антигенсвязывающем фрагменте антитела, который сохраняет антигенсвязывающую поверхность, или в рекомбинантном полипептиде, таком как scFv, при помощи пептидного линкера для соединения вариабельного домена тяжелой цепи с вариабельным доменом свободных цепей в одном полипептиде.

Как применяют в настоящем документе термин «опухолеассоцированный антиген» означает любой антиген, включая в качестве неограничивающих примеров белок, гликопротеин, ганглиозид, углевод, липид, которые связаны с злокачественной опухолью. Такой антиген можно экспрессировать на злокачественных клетках или в микроокружении опухоли, таком как кровеносные сосуды, связанные с опухолью, внеклеточный матрикс, мезенхимальная строма или иммунные инфильтраты.

Как применяют в настоящем документе, термины «индивидуум» и «пациент» относятся к организму, который будут лечить способами и составами, описываемыми в настоящем документе. Такие организмы предпочтительно в качестве неограничивающих примеров включают, млекопитающих (например, мышей, обезьян, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, собак, кошек и т. д.).

Как применяют в настоящем документе, термин «эффективное количество» относится к количеству соединения (например, соединения по настоящему изобретению), достаточному для достижения полезных или желаемых результатов. Эффективное количество можно вводить в одном или более введениях, применениях или дозировках, и оно не ограничено конкретным составом или способом введения. Как применяют в настоящем документе, термин «лечение» включает любой эффект, например, уменьшение, снижение, модуляцию, улучшение или устранение, которое приводит к улучшению состояния, заболевания, нарушения и т.п., или ослаблению его симптома.

Как применяют в настоящем документе, термин «фармацевтическая композиция» относится к комбинации активного средства с носителем, инертным или активным, делающим композицию особенно подходящей для диагностического или терапевтического применения in vivo или ex vivo.

Как применяют в настоящем документе, термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому из стандартных фармацевтических носителей, такому как раствор фосфатно-солевого буфера, вода, эмульсии (например, такие как эмульсии масло/вода или вода/масло), и к различным типам увлажнителей. Композиции могут также включать стабилизаторы и консерванты. Для примеров носителей, стабилизаторов и адъювантов, см. например, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975].

Как применяют в настоящем документе, термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к любой фармацевтически приемлемой соли (например, кислоты или основания) соединения по настоящему изобретению, которая при введении индивидууму способна обеспечить соединение по настоящему изобретению или его активный метаболит или его остаток. Как известно специалистам в данной области, «соли» соединений по настоящему изобретению могут быть получены из неорганических или органических кислот и оснований. Примеры кислот в качестве неограничивающих примеров включают соляную, бромистоводородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, этансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую, бензолсульфоновую кислоту, и т.п. Другие кислоты, так как щавелевая, хотя сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы для получения солей, полезных в качестве промежуточных соединений при получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот.

Примеры оснований в качестве неограничивающих примеров включают в себя гидроксиды щелочных металлов (например, натрия), гидроксиды щелочноземельных металлов (например, магния), аммиак и соединения формулы NW₄⁺, где W представляет собой C_1-4 алкил и т.п.

Примеры солей в качестве неограничивающих примеров включают в себя ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфаты, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, флюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гидрохлорид, гидробромид, йодогидрат, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и т.п. Другие примеры солей включают анионы соединений по настоящему изобретению, соединенные с подходящим катионом, таким как Na⁺, NH₄⁺, и NW₄⁺ (где W представляет собой C_1-4 алкильную группу) и т.п.

Для использования в терапевтических целях соли соединений по настоящему изобретению рассматриваются как фармацевтически приемлемые. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут найти применение, например, для получения или очистки фармацевтически приемлемого соединения.

На всем протяжении описания, где композиции описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные компоненты, или где процессы и способы описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные этапы, предполагается, что, дополнительно, существуют композиции по настоящему изобретению, которые состоят по существу из, или состоят из перечисленных компонентов, и что существуют процессы и способы по настоящему изобретению, которые состоят по существу или состоят из перечисленных этапов обработки.

Как правило, в композициях указан процент по массе, если не указано иное. Дополнительно, если переменная не сопровождается определением, тогда имеет преимущество предыдущее определение переменной.

I.БЕЛКИ

Изобретение относится к мультиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-естественных киллерах, и с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из любого антигена из представленных в таблице 11. Мультиспецифические связывающие белки подходят для фармацевтических композиций и терапевтических способов, описываемых в настоящем документе. Связывание мультиспецифических связывающих белков с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-естественных киллерах повышает активность клетки-естественного киллера относительно разрушения опухолевых клеток, экспрессирующих опухолеассоциированный антиген, выбранный из любого антигена из представленных в таблице 11. Связывание мультиспецифических связывающих белков с клетками, экспрессирующими опухолеассоциированный антиген, приводит к сближению злокачественных клеток с клеткой-естественным киллером, что облегчает прямое и непрямое разрушение злокачественных клеток клеткой-естественным киллером. Дополнительное описание некотоорых примеров мультиспецифических связывающих белков приведено далее.

Первый компонент мультиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими рецептор NKG2D, которые могут в качестве неограничивающих примеров включать NK-клетки, γδ T-клетки и CD8+αβ T-клетки. При связывании NKG2D мультиспецифические связывающие белки могут блокировать связывание природных лигандов, таких как ULBP6 (связывающий белок 6 для UL16) и MICA (белок A, родственный цепи главного комплекса гистосовместимости класса I), с NKG2D и активацию рецепторов NKG2D.

Второй компонент мультиспецифических связывающих белков связывается с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из любого антигена из представленных в таблице 11. Клетки, экспрессирующие опухолеассоциированный антиген, обнаруживаются при лейкозах, таких как, например, острый миелолейкоз и T-клеточный лейкоз.

Третий компонент мультиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими CD16, рецептор Fc на поврехности лейкоцитов, включая клетки-естественные киллеры, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, тучные клетки, и фолликулярные дендритные клетки.

Мультиспецифические связывающие белки, описываемые в настоящем документе, могут принимать различные форматы. Например, один из форматов представляет собой гетеродимерное мультиспецифическое антитело, включающий первую тяжелую цепь иммуноглобулина, первую легкую цепь иммуноглобулина, вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и вторую легкую цепь иммуноглобулина (рис. 1). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), первый вариабельный домен тяжелой цепи и необязательно первый CH1-домен тяжелой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина включает в себя первый вариабельный домен и константный домен легкой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина вместе с первой тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий участок, который связывается с NKG2D. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и необязательно второй CH1-домен тяжелой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина включает в себя второй вариабельный домен легкой цепи и второй константный домен легкой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина вместе со второй тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий участок, который связывается с опухольассоциированным антигеном, выбранным из любого из антигенов, представленных в таблице 11. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (фиг. 1). В некоторых вариантах осуществления первая легкая цепь иммуноглобулина идентична второй легкой цепи иммуноглобулина.

Другой пример формата включает гетеродимерное мультиспецифическое антитело, включающее первую тяжелую цепь иммуноглобулина, вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина (фиг. 2). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), слитый или через линкер, или через шарнир антитела с одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), состоящим из вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи, которые спариваются и связываются с NKG2D, или связываются с опухолеассоциированным антигеном, выбраным из любого из антигенов, представленных в таблице 11. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина включает второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и необязательно CH1-домен тяжелой цепи. Легкая цепь иммуноглобулина включает вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина соединяется с легкой цепью иммуноглобулина и связывается с NKG2D или связывается с опухолеассоциированным антигеном, выбраным из любого из антигенов, представленных в таблице 11. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (рис. 2).

Один или более дополнительных мотивов связывания могут быть слиты с C-концом константной области CH3-домена, необязательно через линкерную последовательность. В определенных вариантах осуществления антигенсвязывающий мотив представляет собой одноцепочечную или дисульфид-стабилизированную вариабельную область (scFv), образуя четырехвалентную или трехвалентную молекулу.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме Triomab, которая представляет собой трифункциональное биспецифическое антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух полу-антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят из двух родительских антител.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме KiH с общей легкой цепью (LC), которая включает технологию выступы-во-впадины (KIH). KIH включает сконструированные CH3-домены для создания либо «выступа», либо «впадины» в каждой тяжелой цепи для содействия гетеродимеризации. Концепция технологии «Выступы-во-впадины (KiH)» заключалась в том, чтобы ввести «выступ» в одном домене CH3 (CH3A) путем замены небольшого остатка на громоздкий (например, T366W_CH3A в нумерации ЕС). Для размещения «выступа» была создана дополнительная поверхность «впадины» на другом домене CH3 (CH3B) путем замены ближайших соседних остатков к выступу более мелкими (например, T366S/L368A/Y407V_CH3B). Мутация «впадины» была оптимизирована с помощью структурно-направленного скрининга фаговой библиотеки (Atwell S, Ridgway JB, Wells JA, Carter P., Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library, J. Mol. Biol. (1997) 270(1):26-35). Рентгеновская кристаллическая структура вариантов KiH Fc (Elliott JM, Ultsch M, Lee J, Tong R, Takeda K, Spiess C, et al., Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylated half-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3 hydrophobic interaction. J. Mol. Biol. (2014) 426(9):1947-57; Mimoto F, Kadono S, Katada H, Igawa T, Kamikawa T, Hattori K. Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant with improved affinity for FcγRs. Mol. Immunol. (2014) 58(1):132-8) показала, что гетеродимеризация термодинамически поддерживается гидрофобными взаимодействиями, обусловленными стерической комплементарностью на внутренней границе раздела между CH3-доменами, тогда как границы выступ-выступ и впадина-впадина не способствуют гомодимеризации вследствие стерического препятствия и нарушения благоприятных взаимодействий, соответственно.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме иммуноглобулина с двойным вариабельным доменом (DVD-Ig™), которая сочетает мишень-связывающие домены двух моноклональных антител с помощью гибких природных линкеров и дает четырехвалентную IgG-подобную молекулу.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме Fab с ортогональной зоной контакта (Ortho-Fab). В подходе орто-Fab IgG (Lewis SM, Wu X, Pustilnik A, Sereno A, Huang F, Rick HL, et al., Generation of bispecific IgG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface. Nat. Biotechnol. (2014) 32(2):191-8), дизайн областей на основе структуры вводит комплементарные мутации в зону контакта LC и HC_VH-CH1только в одном Fab-фрагменте, без каких-либо изменений в другом Fab-фрагменте.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в формате Ig 2-в-1. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, включающую два различных Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2 и слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями для электростатического взаимодействия в Fc.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме κλ-Body, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию с двумя различными Fab-фрагментами, слитыми с Fc, стабилизированным мутациями гетеродимеризации: Fab-фрагмент, нацеленный на антиген 1, содержит LC каппа, в то время как второй Fab-фрагмент, нацеленный на антиген 2, содержит LC лямбда. ФИГ. 30A представляет пример одной из форм κλ-Body; ФИГ. 30B представляет пример другого κλ-Body.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме Fab-фрагмента с обменом плечами (антитела, которые обмениваются плечами Fab путем обмена тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекула) на пару тяжелая-легкая цепи от другой молекулы, что приводит к получению биспецифических антител).

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме SEED Body. Платформа для конструирования доменов с обменом цепями (SEED) была разработана для создания асимметричных и биспецифических антитело-подобных молекул, которые расширяют терапевтическое применение природных антител. Эта платформа для конструирования белков основана на обмене структурно связанных последовательностей иммуноглобулина в консервативных CH3-доменах. Конструкция SEED позволяет эффективно генерировать гетеродимеры AG/GA, при этом препятствуя гомодимеризации AG и GA CH3-доменов SEED. (Muda M. et al., Protein Eng. Des. Sel. (2011, 24 (5): 447-54))

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме LuZ-Y, в которой используют лейциновую молнию для индуцирования гетеродимеризации двух различных HC. (Wranik, BJ. et al., J. Biol. Chem. (2012), 287:43331-9).

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме Cov-X-Body. В биспецифических CovX- Body, два разных пептида соединяют вместе с помощью разветвленного азетидинонового линкера и сливают с каркасом антитела в мягких условиях сайт-специфическим образом. В то время как фармакофоры отвечают за функциональную активность, каркас антитела обеспечивает длительное полувыведение и Ig-подобное распределение. Фармакофоры могут быть химически оптимизированы или заменены другими фармакофорами для получения оптимизированных или уникальных биспецифических антител. (Doppalapudi VR et al., PNAS (2010), 107(52);22611-22616).

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в гетеродимерной форме Oasc-Fab, которая включает Fab-фрагмент, связывающийся с мишенью 1, и scFab, связывающийся с мишенью 1, слитые с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме DuetMab, которая является гетеродимерной конструкцией с двумя различными Fab-фрагментами, связывающимися с антигенами 1 и 2, и Fc, стабилизированным мутациями гетеродимеризации. Fab-фрагменты 1 и 2 содержат различные мостики S-S, которые обеспечивают правильное спаривание легкой цепи и тяжелой цепи.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме CrossmAb, которая является гетеродимерной конструкцией с двумя различными Fab-фрагментами, связывающимися с мишенями 1 и 2, слитыми с Fc, стабилизированным мутациями гетеродимеризации. Домены CL и CH1, и домены VH и VL меняют местами, например, CH1 слит в линию с VL, в то время как CL слит в линию с VH.

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифический связывающий белок находится в форме Fit-Ig, которая представляет собой гомодимерную конструкцию, где Fab-фрагмент, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab-фрагмента, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа

В таблице 1 перечислены пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелых цепей цепочек и вариабельных доменов легких цепей, которые в комбинации могут связываться с NKG2D. NKG2D-связывающие домены могут различаться по своей аффинности связывания с NKG2D, однако все они активируют человеческий NKG2D и NK-клетки.

Таблица 1

Клон Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи ADI-27705 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:1)
CDR1 (SEQ ID NO:105) - GSFSGYYWS
CDR2 (SEQ ID NO:106) -
EIDHSGSTNYNPSLKS
CDR3 (SEQ ID NO:107) -
ARARGPWSFDP DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:2) ADI-27724 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:3) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:4) ADI-27740
(A40) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:5) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFYTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:6) ADI-27741 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:7) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSNSYYTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:8) ADI-27743 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:9) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:10) ADI-28153 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWGFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:11) ELQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYCQQSYDIPYTFGQGTKLEIK
(SEQ ID NO:12) ADI-28226
(C26) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:13) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:14) ADI-28154 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:15) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK
(SEQ ID NO:16) ADI-29399 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:17) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:18) ADI-29401 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:19) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDIYPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:20) ADI-29403 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:21) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSYPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:22) ADI-29405 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:23) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:24) ADI-29407 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:25) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSFPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:26) ADI-29419 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:27) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSFSTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:28) ADI-29421 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:29) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESYSTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:30) ADI-29424 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:31) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSFITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:32) ADI-29425 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:33) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSYPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:34) ADI-29426 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:35) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:36) ADI-29429 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:37) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYELYSYTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:38) ADI-29447
(F47) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:39) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDTFITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:40) ADI-27727 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDSSIRHAYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO:41)
CDR1 (SEQ ID NO:43) -
GTFSSYAIS
CDR2 (SEQ ID NO:44) -
GIIPIFGTANYAQKFQG
CDR3 (SEQ ID NO:45) -
ARGDSSIRHAYYYYGMDV DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPITFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:42)
CDR1 (SEQ ID NO:46) -
KSSQSVLYSSNNKNYLA
CDR2 (SEQ ID NO:47) -
WASTRES
CDR3 (SEQ ID NO:48) -
QQYYSTPIT ADI-29443
(F43) QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSDRFHPYFDYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:49)
CDR1 (SEQ ID NO:51) -
GSISSSSYYWG
CDR2 (SEQ ID NO:52) -
SIYYSGSTYYNPSLKS
CDR3 (SEQ ID NO:53) -
ARGSDRFHPYFDY EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQFDTWPPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:50)
CDR1 (SEQ ID NO:54) -
RASQSVSRYLA
CDR2 (SEQ ID NO:55) -
DASNRAT
CDR3 (SEQ ID NO:56) -
QQFDTWPPT ADI-29404
(F04) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:57) DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCEQYDSYPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:58) ADI-28200 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGRKASGSFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO:59)
CDR1 (SEQ ID NO:109) - GTFSSYAIS
CDR2 (SEQ ID NO:110) - GIIPIFGTANYAQKFQG
CDR3 (SEQ ID NO:111) - ARRGRKASGSFYYYYGMDV DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKPLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIK
(SEQ ID NO:60)
CDR1 (SEQ ID NO:112) - ESSQSLLNSGNQKNYLT
CDR2 (SEQ ID NO:113) - WASTRES
CDR3 (SEQ ID NO:114) - QNDYSYPYT ADI-29379
(E79) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAPNYGDTTHDYYYMDVWGKGTTVTVSS
(SEQ ID NO:61)
CDR1 (SEQ ID NO:63) - YTFTSYYMH
CDR2 (SEQ ID NO:64) - IINPSGGSTSYAQKFQG
CDR3 (SEQ ID NO:65) - ARGAPNYGDTTHDYYYMDV EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDDWPFTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:62)
CDR1 (SEQ ID NO:66) - RASQSVSSNLA
CDR2 (SEQ ID NO:67) - GASTRAT
CDR3 (SEQ ID NO:68) - QQYDDWPFT ADI-29463
(F63) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTGEYYDTDDHGMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO:69)
CDR1 (SEQ ID NO:71) - YTFTGYYMH
CDR2 (SEQ ID NO:72) - WINPNSGGTNYAQKFQG
CDR3 (SEQ ID NO:73) - ARDTGEYYDTDDHGMDV EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDDYWPPTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:70)
CDR1 (SEQ ID NO:74) - RASQSVSSNLA
CDR2 (SEQ ID NO:75) - GASTRAT
CDR3 (SEQ ID NO:76) - QQDDYWPPT ADI-27744
(A44) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGYYDSGAGDYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:77)
CDR1 (SEQ ID NO:79) - FTFSSYAMS
CDR2 (SEQ ID NO:80) - AISGSGGSTYYADSVKG
CDR3 (SEQ ID NO:81) - AKDGGYYDSGAGDY DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSYPRTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:78)
CDR1 (SEQ ID NO:82) - RASQGIDSWLA
CDR2 (SEQ ID NO:83) - AASSLQS
CDR3 (SEQ ID NO:84) - QQGVSYPRT ADI-27749
(A49) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:85)
CDR1 (SEQ ID NO:87) - FTFSSYSMN
CDR2 (SEQ ID NO:88) - SISSSSSYIYYADSVKG
CDR3 (SEQ ID NO:89) - ARGAPMGAAAGWFDP DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:86)
CDR1 (SEQ ID NO:90) - RASQGISSWLA
CDR2 (SEQ ID NO:91) - AASSLQS
CDR3 (SEQ ID NO:92) - QQGVSFPRT ADI-29378
(E78) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGAGFAYGMDYYYMDVWGKGTTVTVSS
(SEQ ID NO:93)
CDR1 (SEQ ID NO:95) - YTFTSYYMH
CDR2 (SEQ ID NO:96) - IINPSGGSTSYAQKFQG
CDR3 (SEQ ID NO:97) - AREGAGFAYGMDYYYMDV EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSDNWPFTFGGGTKVEIK
(SEQ ID NO:94)
CDR1 (SEQ ID NO:98) - RASQSVSSYLA
CDR2 (SEQ ID NO:99) - DASNRAT
CDR3 (SEQ ID NO:100) - QQSDNWPFT

Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO:101, можно соединять с вариабельным доменом легкой цепи, представленным SEQ ID NO:102, для образования антигенсвязывающего участка, который может связываться с NKG2D, как показано в US 9273136.

SEQ ID NO:101

QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIRYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRGLGDGTYFDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:102

QSALTQPASVSGSPGQSITISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGKAPKLLIYYDDLLPSGVSDRFSGSKSGTSAFLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVL

Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO:103, можно соединять с вариабельным доменом легкой цепи, представленным SEQ ID NO:104, для образования антигенсвязывающего участка, который может связываться с NKG2D, как показано в US 7879985.

SEQ ID NO:103

QVHLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSDDSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGHISYSGSANYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCANWDDAFNIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:104

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK

Таблица 2 перечисляет пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелых цепей и вариабельных доменов легких цепей которые, в комбинации, можгут связываться с EpCAM.

Таблица 2 Клоны Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи Опортузумаб EVQLVQSGPGLVQPGGSVRISCAASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLEWMGWINTYTGESTYADSFKGRFTFSLDTSASAAYLQINSLRAEDTAVYYCARFAIKGDYWGQGTLLTVSSE
(SEQ ID NO:115)
CDR1 (SEQ ID NO:116) - GYTFTNY
CDR2 (SEQ ID NO:117) - NTYTGE
CDR3 (SEQ ID NO:118) - FAIKGDY DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHSNGITYLYWYQQKPGKAPKLLIYQMSNLASGVPSRFSSSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQNLEIPRTFGQGTKVELKR
(SEQ ID NO:119)
CDR1(SEQ ID NO:120) - KSLLHSNGITYLY
CDR2 (SEQ ID NO:121) - QMSNLAS
CDR3 (SEQ ID NO:122) - AQNLEIPRT Адекатумумаб EVQLLESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDMGWGSGWRPYYYYGMDVWGQGTTVTVSSA
(SEQ ID NO:123)
CDR1 (SEQ ID NO:124) - GFTFSSY
CDR2 (SEQ ID NO:125) - SYDGSN
CDR3 (SEQ ID NO:126) - DMGWGSGWRPYYYYGMDV ELQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYCQQSYDIPYTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:127)
CDR1 (SEQ ID NO:128) - QSISSYLN
CDR2 (SEQ ID NO:129) - WASTRES
CDR3 (SEQ ID NO:130) - QQSYDIPYT Цитатузумаб EVQLVQSGPGLVQPGGSVRISCAASGYTFTNYGMNWVKQAPGKGLEWMGWINTYTGESTYADSFKGRFTFSLDTSASAAYLQINSLRAEDTAVYYCARFAIKGDYWGQGTLLTVSSA (SEQ ID NO:131)
CDR1 (SEQ ID NO:132) - GYTFTNY
CDR2 (SEQ ID NO:133) - NTYTGE
CDR3 (SEQ ID NO:134) - FAIKGDY DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSTKSLLHSNGITYLYWYQQKPGKAPKLLIYQMSNLASGVPSRFSSSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCAQNLEIPRTFGQGTKVELKR (SEQ ID NO:135)
CDR1 (SEQ ID NO:136) - KSLLHSNGITYLY
CDR2 (SEQ ID NO:137) - QMSNLAS
CDR3 (SEQ ID NO:138) - AQNLEIPRT Солитомаб
(MT110) EVQLLEQSGAELVRPGTSVKISCKASGYAFTNYWLGWVKQRPGHGLEWIGDIFPGSGNIHYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTFEDSAVYFCARLRNWDEPMDYWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO:139)
CDR1 (SEQ ID NO:140) - GYAFTNY
CDR2 (SEQ ID NO:141) - FPGSGN
CDR3 (SEQ ID NO:142) - LRNWDEPMDY ELVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLEIKG
(SEQ ID NO:143)
CDR1 (SEQ ID NO:144) - QSLLNSGNQKNYLT
CDR2 (SEQ ID NO:145) - WASTRES
CDR3 (SEQ ID NO:146) - QNDYSYPLT

Альтернативно, новые антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с EpCAM, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:147.

SEQ ID NO:147

MAPPQVLAFGLLLAAATATFAAAQEECVCENYKLAVNCFVNNNRQCQCTSVGAQNTVICSKLAAKCLVMKAEMNGSKLGRRAKPEGALQNNDGLYDPDCDESGLFKAKQCNGTSMCWCVNTAGVRRTDKDTEITCSERVRTYWIIIELKHKAREKPYDSKSLRTALQKEITTRYQLDPKFITSILYENNVITIDLVQNSSQKTQNDVDIADVAYYFEKDVKGESLFHSKKMDLTVNGEQLDLDPGQTLIYYVDEKAPEFSMQGLKAGVIAVIVVVVIAVVAGIVVLVISRKKRMAKYEKAEIKEMGEMHRELNA

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с антигеном CA125, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:148.

SEQ ID NO:148

MLKPSGLPGSSSPTRSLMTGSRSTKATPEMDSGLTGATLSPKTSTGAIVVTEHTLPFTSPDKTLASPTSSVVGRTTQSLGVMSSALPESTSRGMTHSEQRTSPSLSPQVNGTPSRNYPATSMVSGLSSPRTRTSSTEGNFTKEASTYTLTVETTSGPVTEKYTVPTETSTTEGDSTETPWDTRYIPVKITSPMKTFADSTASKENAPVSMTPAETTVTDSHTPGRTNPSFGTLYSSFLDLSPKGTPNSRGETSLELILSTTGYPFSSPEPGSAGHSRISTSAPLSSSASVLDNKISETSIFSGQSLTSPLSPGVPEARASTMPNSAIPFSMTLSNAETSAERVRSTISSLGTPSISTKQTAETILTFHAFAETMDIPSTHIAKTLASEWLGSPGTLGGTSTSALTTTSPSTTLVSEETNTHHSTSGKETEGTLNTSMTPLETSAPGEESEMTATLVPTLGFTTLDSKIRSPSQVSSSHPTRELRTTGSTSGRQSSSTAAHGSSDILRATTSSTSKASSWTSESTAQQFSEPQHTQWVETSPSMKTERPPASTSVAAPITTSVPSVVSGFTTLKTSSTKGIWLEETSADTLIGESTAGPTTHQFAVPTGISMTGGSSTRGSQGTTHLLTRATASSETSADLTLATNGVPVSVSPAVSKTAAGSSPPGGTKPSYTMVSSVIPETSSLQSSAFREGTSLGLTPLNTRHPFSSPEPDSAGHTKISTSIPLLSSASVLEDKVSATSTFSHHKATSSITTGTPEISTKTKPSSAVLSSMTLSNAATSPERVRNATSPLTHPSPSGEETAGSVLTLSTSAETTDSPNIHPTGTLTSESSESPSTLSLPSVSGVKTTFSSSTPSTHLFTSGEETEETSNPSVSQPETSVSRVRTTLASTSVPTPVFPTMDTWPTRSAQFSSSHLVSELRATSSTSVTNSTGSALPKISHLTGTATMSQTNRDTFNDSAAPQSTTWPETSPRFKTGLPSATTTVSTSATSLSATVMVSKFTSPATSSMEATSIREPSTTILTTETTNGPGSMAVASTNIPIGKGYITEGRLDTSHLPIGTTASSETSMDFTMAKESVSMSVSPSQSMDAAGSSTPGRTSQFVDTFSDDVYHLTSREITIPRDGTSSALTPQMTATHPPSPDPGSARSTWLGILSSSPSSPTPKVTMSSTFSTQRVTTSMIMDTVETSRWNMPNLPSTTSLTPSNIPTSGAIGKSTLVPLDTPSPATSLEASEGGLPTLSTYPESTNTPSIHLGAHASSESPSTIKLTMASVVKPGSYTPLTFPSIETHIHVSTARMAYSSGSSPEMTAPGETNTGSTWDPTTYITTTDPKDTSSAQVSTPHSVRTLRTTENHPKTESATPAAYSGSPKISSSPNLTSPATKAWTITDTTEHSTQLHYTKLAEKSSGFETQSAPGPVSVVIPTSPTIGSSTLELTSDVPGEPLVLAPSEQTTITLPMATWLSTSLTEEMASTDLDISSPSSPMSTFAIFPPMSTPSHELSKSEADTSAIRNTDSTTLDQHLGIRSLGRTGDLTTVPITPLTTTWTSVIEHSTQAQDTLSATMSPTHVTQSLKDQTSIPASASPSHLTEVYPELGTQGRSSSEATTFWKPSTDTLSREIETGPTNIQSTPPMDNTTTGSSSSGVTLGIAHLPIGTSSPAETSTNMALERRSSTATVSMAGTMGLLVTSAPGRSISQSLGRVSSVLSESTTEGVTDSSKGSSPRLNTQGNTALSSSLEPSYAEGSQMSTSIPLTSSPTTPDVEFIGGSTFWTKEVTTVMTSDISKSSARTESSSATLMSTALGSTENTGKEKLRTASMDLPSPTPSMEVTPWISLTLSNAPNTTDSLDLSHGVHTSSAGTLATDRSLNTGVTRASRLENGSDTSSKSLSMGNSTHTSMTYTEKSEVSSSIHPRPETSAPGAETTLTSTPGNRAISLTLPFSSIPVEEVISTGITSGPDINSAPMTHSPITPPTIVWTSTGTIEQSTQPLHAVSSEKVSVQTQSTPYVNSVAVSASPTHENSVSSGSSTSSPYSSASLESLDSTISРРНКITSWLWDLTTSLPTTTWPSTSLSEALSSGHSGVSNPSSTTTEFPLFSAASTSAAKQRNPETETHGPQNTAASTLNTDASSVTGLSETPVGASISSEVPLPMAITSRSDVSGLTSESTANPSLGTASSAGTKLTRTISLPTSESLVSFRMNKDPWTVSIPLGSHPTTNTETSIPVNSAGPPGLSTVASDVIDTPSDGAESIPTVSFSPSPDTEVTTISHFPEKTTHSFRTISSLTHELTSRVTPIPGDWMSSAMSTKPTGASPSITLGERRTITSAAPTTSPIVLTASFTETSTVSLDNETTVKTSDILDARKTNELPSDSSSSSDLINTSIASSTMDVTKTASISPTSISGMTASSSPSLFSSDRPQVPTSTTETNTATSPSVSSNTYSLDGGSNVGGTPSTLPPFTITHPVETSSALLAWSRPVRTFSTMVSTDTASGENPTSSNSVVTSVPAPGTWTSVGSTTDLPAMGFLKTSPAGEAHSLLASTIEPATAFTPHLSAAVVTGSSATSEASLLTTSESKAIHSSPQTPTTPTSGANWETSATPESLLVVTETSDTTLTSKILVTDTILFSTVSTPPSKFPSTGTLSGASFPTLLPDTPAIPLTATEPTSSLATSFDSTPLVTIASDSLGTVPETTLTMSETSNGDALVLKTVSNPDRSIPGITIQGVTESPLHPSSTSPSKIVAPRNTTYEGSITVALSTLPAGTTGSLVFSQSSENSETTALVDSSAGLERASVMPLTTGSQGMASSGGIRSGSTHSTGTKTFSSLPLTMNPGEVTAMSEITTNRLTATQSTAPKGIPVKPTSAESGLLTPVSASSSPSKAFASLTTAPPTWGIPQSTLTFEFSEVPSLDTKSASLPTPGQSLNTIPDSDASTASSSLSKSPEKNPRARMMTSTKAISASSFQSTGFTETPEGSASPSMAGHEPRVPTSGTGDPRYASESMSYPDPSKASSAMTSTSLASKLTTLFSTGQAARSGSSSSPISLSTEKETSFLSPTASTSRKTSLFLGPSMARQPNILVHLQTSALTLSPTSTLNMSQEEPPELTSSQTIAEEEGTTAETQTLTFTPSETPTSLLPVSSPTEPTARRKSSPETWASSISVPAKTSLVETTDGTLVTTIKMSSQAAQGNSTWPAPAEETGSSPAGTSPGSPEMSTTLKIMSSKEPSISPEIRSTVRNSPWKTPETTVPMETTVEPVTLQSTALGSGSTSISHLPTGTTSPTKSPTENMLATERVSLSPSPPEAWTNLYSGTPGGTRQSLATMSSVSLESPTARSITGTGQQSSPELVSKTTGMEFSMWHGSTGGTTGDTHVSLSTSSNILEDPVTSPNSVSSLTDKSKHKTETWVSTTAIPSTVLNNKIMAAEQQTSRSVDEAYSSTSSWSDQTSGSDITLGASPDVTNTLYITSTAQTTSLVSLPSGDQGITSLTNPSGGKTSSASSVTSPSIGLETLRANVSAVKSDIAPTAGHLSQTSSPAEVSILDVTTAPTPGISTTITTMGTNSISTTTPNPEVGMSTMDSTPATERRTTSTEHPSTWSSTAASDSWTVTDMTSNLKVARSPGTISTMHTTSFLASSTELDSMSTPHGRITVIGTSLVTPSSDASAVKTETSTSERTLSPSDTTASTPISTFSRVQRMSISVPDILSTSWTPSSTEAEDVPVSMVSTDHASTKTDPNTPLSTFLFDSLSTLDWDTGRSLSSATATTSAPQGATTPQELTLETMISPATSQLPFSIGHITSAVTPAAMARSSGVTFSRPDPTSKKAEQTSTQLPTTTSAHPGQVPRSAATTLDVIPHTAKTPDATFQRQGQTALTTEARATSDSWNEKEKSTPSAPWITEMMNSVSEDTIKEVTSSSSVLRTLNTLDINLESGTTSSPSWKSSPYERIAPSESTTDKEAIHPSTNTVETTGWVTSSEHASHSTIPAHSASSKLTSPVVTTSTREQAIVSMSTTTWPESTRARTEPNSFLTIELRDVSPYMDTSSTTQTSIISSPGSTAITKGPRTEITSSKRISSSFLAQSMRSSDSPSEAITRLSNFPAMTESGGMILAMQTSPPGATSLSAPTLDTSATASWTGTPLATTQRFTYSEKTTLFSKGPEDTSQPSPPSVEETSSSSSLVPIHATTSPSNILLTSQGHSPSSTPPVTSVFLSETSGLGKTTDMSRISLEPGTSLPPNLSSTAGEALSTYEASRDTKAIHHSADTAVTNMEATSSEYSPIPGHTKPSKATSPLVTSHIMGDITSSTSVFGSSETTEIETVSSVNQGLQERSTSQVASSATETSTVITHVSSGDATTHVTKTQATFSSGTSISSPHQFITSTNTFTDVSTNPSTSLIMTESSGVTITTQTGPTGAATQGPYLLDTSTMPYLTETPLAVTPDFMQSEKTTLISKGPKDVSWTSPPSVAETSYPSSLTPFLVTTIPPATSTLQGQHTSSPVSATSVLTSGLVKTTDMLNTSMEPVTNSPQNLNNPSNEILATLAATTDIETIHPSINKAVTNMGTASSAHVLHSTLPVSSEPSTATSPMVPASSMGDALASISIPGSETTDIEGEPTSSLTAGRKENSTLQEMNSTTESNIILSNVSVGAITEATKMEVPSFDATFIPTPAQSTKFPDIFSVASSRLSNSPPMTISTHMTTTQTGSSGATSKIPLALDTSTLETSAGTPSVVTEGFAHSKITTAMNNDVKDVSQTNPPFQDEASSPSSQAPVLVTTLPSSVAFTPQWHSTSSPVSMSSVLTSSLVKTAGKVDTSLETVTSSPQSMSNTLDDISVTSAATTDIETTHPSINTVVTNVGTTGSAFESHSTVSAYPEPSKVTSPNVTTSTMEDTTISRSIPKSSKTTRTETETTSSLTPKLRETSISQEITSSTETSTVPYKELTGATTEVSRTDVTSSSSTSFPGPDQSTVSLDISTETNTRLSTSPIMTESAEITITTQTGPHGATSQDTFTMDPSNTTPQAGIHSAMTHGFSQLDVTTLMSRIPQDVSWTSPPSVDKTSSPSSFLSSPAMTTPSLISSTLPEDKLSSPMTSLLTSGLVKITDILRTRLEPVTSSLPNFSSTSDKILATSKDSKDTKEIFPSINTEETNVKANNSGHESHSPALADSETPKATTQMVITTTVGDPAPSTSMPVHGSSETTNIKREPTYFLTPRLRETSTSQESSFPTDTSFLLSKVPTGTITEVSSTGVNSSSKISTPDHDKSTVPPDTFTGEIPRVFTSSIKTKSAEMTITTQASPPESASHSTLPLDTSTTLSQGGTHSTVTQGFPYSEVTTLMGMGPGNVSWMTTPPVEETSSVSSLMSSPAMTSPSPVSSTSPQSIPSSPLPVTALPTSVLVTTTDVLGTTSPESVTSSPPNLSSITHERPATYKDTAHTEAAMHHSTNTAVTNVGTSGSGHKSQSSVLADSETSKATPLMSTTSTLGDTSVSTSTPNISQTNQIQTEPTASLSPRLRESSTSEKTSSTTETNTAFSYVPTGAITQASRTEISSSRTSISDLDRPTIAPDISTGMITRLFTSPIMTKSAEMTVTTQTTTPGATSQGILPWDTSTTLFQGGTHSTVSQGFPHSEITTLRSRTPGDVSWMTTPPVEETSSGFSLMSPSMTSPSPVSSTSPESIPSSPLPVTALLTSVLVTTTNVLGTTSPEPVTSSPPNLSSPTQERLTTYKDTAHTEAMHASMHTNTAVANVGTSISGHESQSSVPADSHTSKATSPMGITFAMGDTSVSTSTPAFFETRIQTESTSSLIPGLRDTRTSEEINTVTETSTVLSEVPTTTTTEVSRTEVITSSRTTISGPDHSKMSPYISTETITRLSTFPFVTGSTEMAITNQTGPIGTISQATLTLDTSSTASWEGTHSPVTQRFPHSEETTTMSRSTKGVSWQSPPSVEETSSPSSPVPLPAITSHSSLYSAVSGSSPTSALPVTSLLTSGRRKTIDMLDTHSELVTSSLPSASSFSGEILTSEASTNTETIHFSENTAETNMGTTNSMHKLHSSVSIHSQPSGHTPPKVTGSMMEDAIVSTSTPGSPETKNVDRDSTSPLTPELKEDSTALVMNSTTESNTVFSSVSLDAATEVSRAEVTYYDPTFMPASAQSTKSPDISPEASSSHSNSPPLTISTHKTIATQTGPSGVTSLGQLTLDTSTIATSAGTPSARTQDFVDSETTSVMNNDLNDVLKTSPFSAEEANSLSSQAPLLVTTSPSPVTSTLQEHSTSSLVSVTSVPTPTLAKITDMDTNLEPVTRSPQNLRNTLATSEATTDTHTMHPSINTAVANVGTTSSPNEFYFTVSPDSDPYKATSAVVITSTSGDSIVSTSMPRSSAMKKIESETTFSLIFRLRETSTSQKIGSSSDTSTVFDKAFTAATTEVSRTELTSSSRTSIQGTEKPTMSPDTSTRSVTMLSTFAGLTKSEERTIATQTGPHRATSQGTLTWDTSITTSQAGTHSAMTHGFSQLDLSTLTSRVPEYISGTSPPSVEKTSSSSSLLSLPAITSPSPVPTTLPESRPSSPVHLTSLPTSGLVKTTDMLASVASLPPNLGSTSHKIPTTSEDIKDTEKMYPSTNIAVTNVGTTTSEKESYSSVPAYSEPPKVTSPMVTSFNIRDTIVSTSMPGSSEITRIEMESTFSLAHGLKGTSTSQDPIVSTEKSAVLHKLTTGATETSRTEVASSRRTSIPGPDHSTESPDISTEVIPSLPISLGITESSNMTIITRTGPPLGSTSQGTFTLDTPTTSSRAGTHSMATQEFPHSEMTTVMNKDPEILSWTIPPSIEKTSFSSSLMPSPAMTSPPVSSTLPKTIHTTPSPMTSLLTPSLVMTTDTLGTSPEPTTSSPPNLSSTSHEILTTDEDTTAIEAMHPSTSTAATNVETTSSGHGSQSSVLADSEKTKATAPMDTTSTMGHTTVSTSMSVSSETTKIKRESTYSLTPGLRETSISQNASFSTDTSIVLSEVPTGTTAEVSRTEVTSSGRTSIPGPSQSTVLPEISTRTMTRLFASPTMTESAEMTIPTQTGPSGSTSQDTLTLDTSTTKSQAKTHSTLTQRFPHSEMTTLMSRGPGDMSWQSSPSLENPSSLPSLLSLPATTSPPPISSTLPVTISSSPLPVTSLLTSSPVTTTDMLHTSPELVTSSPPKLSHTSDERLTTGKDTTNTEAVHPSTNTAASNVEIPSSGHESPSSALADSETSKATSPMFITSTQEDTTVAISTPHFLETSRIQKESISSLSPKLRETGSSVETSSAIETSAVLSEVSIGATTEISRTEVTSSSRTSISGSAESTMLPEISTTRKIIKFPTSPILAESSEMTIKTQTSPPGSTSESTFTLDTSTTPSLVITHSTMTQRLPHSEITTLVSRGAGDVPRPSSLPVEETSPPSSQLSLSAMISPSPVSSTLPASSHSSSASVTSLLTPGQVKTTEVLDASAEPETSSPPSLSSTSVEILATSEVTTDTEKIHPFSNTAVTKVGTSSSGHESPSSVLPDSETTKATSAMGTISIMGDTSVSTLTPALSNTRKIQSEPASSLTTRLRETSTSEETSLATEANTVLSKVSTGATTEVSRTEAISFSRTSMSGPEQSTMSQDISIGTIPRISASSVLTESAKMTITTQTGPSESTLESTLNLNTATTPSWVETHSIVIQGFPHPEMTTSMGRGPGGVSWPSPPFVKETSPPSSPLSLPAVTSPHPVSTTFLAHIPPSPLPVTSLLTSGPATTTDILGTSTEPGTSSSSSLSTTSHERLTTYKDTAHTEAVHPSTNTGGTNVATTSSGYKSQSSVLADSSPMCTTSTMGDTSVLTSTPAFLETRRIQTELASSLTPGLRESSGSEGTSSGTKMSTVLSKVPTGATTEISKEDVTSIPGPAQSTISPDISTRTVSWFSTSPVMTESAEITMNTHTSPLGATTQGTSTLDTSSTTSLTMTHSTISQGFSHSQMSTLMRRGPEDVSWMSPPLLEKTRPSFSLMSSPATTSPSPVSSTLPESISSSPLPVTSLLTSGLAKTTDMLHKSSEPVTNSPANLSSTSVEILATSEVTTDTEKTHPSSNRTVTDVGTSSSGHESTSFVLADSQTSKVTSPMVITSTMEDTSVSTSTPGFFETSRIQTEPTSSLTLGLRKTSSSEGTSLATEMSTVLSGVPTGATAEVSRTEVTSSSRTSISGFAQLTVSPETSTETITRLPTSSIMTESAEMMIKTQTDPPGSTPESTHTVDISTTPNWVETHSTVTQRFSHSEMTTLVSRSPGDMLWPSQSSVEETSSASSLLSLPATTSPSPVSSTLVEDFPSASLPVTSLLNPGLVITTDRMGISREPGTSSTSNLSSTSHERLTTLEDTVDTEDMQPSTHTAVTNVRTSISGHESQSSVLSDSETPKATSPMGTTYTMGETSVSISTSDFFETSRIQIEPTSSLTSGLRETSSSERISSATEGSTVLSEVPSGATTEVSRTEVISSRGTSMSGPDQFTISPDISTEAITRLSTSPIMTESAESAITIETGSPGATSEGTLTLDTSTTTFWSGTHSTASPGFSHSEMTTLMSRTPGDVPWPSLPSVEEASSVSSSLSSPAMTSTSFFSTLPESISSSPHPVTALLTLGPVKTTDMLRTSSEPETSSPPNLSSTSAEILATSEVTKDREKIHPSSNTPVVNVGTVIYKHLSPSSVLADLVTTKPTSPMATTSTLGNTSVSTSTPAFPETMMTQPTSSLTSGLREISTSQETSSATERSASLSGMPTGATTKVSRTEALSLGRTSTPGPAQSTISPEISTETITRISTPLTTTGSAEMTITPKTGHSGASSQGTFTLDTSSRASWPGTHSAATHRSPHSGMTTPMSRGPEDVSWPSRPSVEKTSPPSSLVSLSAVTSPSPLYSTPSESSHSSPLRVTSLFTPVMMKTTDMLDTSLEPVTTSPPSMNITSDESLATSKATMETEAIQLSENTAVTQMGTISARQEFYSSYPGLPEPSKVTSPVVTSSTIKDIVSTTIPASSEITRIEMESTSTLTPTPRETSTSQEIHSATKPSTVPYKALTSATIEDSMTQVMSSSRGPSPDQSTMSQDISTEVITRLSTSPIKTESTEMTITTQTGSPGATSRGTLTLDTSTTFMSGTHSTASQGFSHSQMTALMSRTPGDVPWLSHPSVEEASSASFSLSSPVMTSSSPVSSTLPDSIHSSSLPVTSLLTSGLVKTTELLGTSSEPETSSPPNLSSTSAEILAITEVTTDTEKLEMTNVVTSGYTHESPSSVLADSVTTKATSSMGITYPTGDTNVLTSTPAFSDTSRIQTKSKLSLTPGLMETSISEETSSATEKSTVLSSVPTGATTEVSRTEAISSSRTSIPGPAQSTMSSDTSMETITRISTPLTRKESTDMAITPKTGPSGATSQGTFTLDSSSTASWPGTHSATTQRFPQSVVTTPMSRGPEDVSWPSPLSVEKNSPPSSLVSSSSVTSPSPLYSTPSGSSHSSPVPVTSLFTSIMMKATDMLDASLEPETTSAPNMNITSDESLAASKATTETEAIHVFENTAASHVETTSATEELYSSSPGFSEPTKVISPVVTSSSIRDNMVSTTMPGSSGITRIEIESMSSLTPGLRETRTSQDITSSTETSTVLYKMPSGATPEVSRTEVMPSSRTSIPGPAQSTMSLDISDEVVTRLSTSPIMTESAEITITTQTGYSLATSQVTLPLGTSMTFLSGTHSTMSQGLSHSEMTNLMSRGPESLSWTSPRFVETTRSSSSLTSLPLTTSLSPVSSTLLDSSPSSPLPVTSLILPGLVKTTEVLDTSSEPKTSSSPNLSSTSVEIPATSEIMTDTEKIHPSSNTAVAKVRTSSSVHESHSSVLADSETTITIPSMGITSAVDDTTVFTSNPAFSETRRIPTEPTFSLTPGFRETSTSEETTSITETSAVLYGVPTSATTEVSMTEIMSSNRIHIPDSDQSTMSPDIITEVITRLSSSSMMSESTQMTITTQKSSPGATAQSTLTLATTTAPLARTHSTVPPRFLHSEMTTLMSRSPENPSWKSSLFVEKTSSSSSLLSLPVTTSPSVSSTLPQSIPSSSFSVTSLLTPGMVKTTDTSTEPGTSLSPNLSGTSVEILAASEVTTDTEKIHPSSSMAVTNVGTTSSGHELYSSVSIHSEPSKATYPVGTPSSMAETSISTSMPANFETTGFEAEPFSHLTSGFRKTNMSLDTSSVTPTNTPSSPGSTHLLQSSKTDFTSSAKTSSPDWPPASQYTEIPVDIITPFNASPSITESTGITSFPESRFTMSVTESTHHLSTDLLPSAETISTGTVMPSLSEAMTSFATTGVPRAISGSGSPFSRTESGPGDATLSTIAESLPSSTPVPFSSSTFTTTDSSTIPALHEITSSSATPYRVDTSLGTESSTTEGRLVMVSTLDTSSQPGRTSSSPILDTRMTESVELGTVTSAYQVPSLSTRLTRTDGIMEHITKIPNEAAHRGTIRPVKGPQTSTSPASPKGLHTGGTKRMETTTTALKTTTTALKTTSRATLTTSVYTPTLGTLTPLNASMQMASTIPTEMMITTPYVFPDVPETTSSLATSLGAETSTALPRTTPSVFNRESETTASLVSRSGAERSPVIQTLDVSSSEPDTTASWVIHPAETIPTVSKTTPNFFHSELDTVSSTATSHGADVSSAIPTNISPSELDALTPLVTISGTDTSTTFPTLTKSPHETETRTTWLTHPAETSSTIPRTIPNFSHHESDATPSIATSPGAETSSAIPIMTVSPGAEDLVTSQVTSSGTDRNMTIPTLTLSPGEPKTIASLVTHPEAQTSSAIPTSTISPAVSRLVTSMVTSLAAKTSTTNRALTNSPGEPATTVSLVTHPAQTSPTVPWTTSIFFHSKSDTTPSMTTSHGAESSSAVPTPTVSTEVPGVVTPLVTSSRAVISTTIPILTLSPGEPETTPSMATSHGEEASSAIPTPTVSPGVPGVVTSLVTSSRAVTSTTIPILTFSLGEPETTPSMATSHGTEAGSAVPTVLPEVPGMVTSLVASSRAVTSTTLPTLTLSPGEPETTPSMATSHGAEASSTVPTVSPEVPGVVTSLVTSSSGVNSTSIPTLILSPGELETTPSMATSHGAEASSAVPTPTVSPGVSGVVTPLVTSSRAVTSTTIPILTLSSSEPETTPSMATSHGVEASSAVLTVSPEVPGMVTSLVTSSRAVTSTTIPTLTISSDEPETTTSLVTHSEAKMISAIPTLAVSPTVQGLVTSLVTSSGSETSAFSNLTVASSQPETIDSWVAHPGTEASSVVPTLTVSTGEPFTNISLVTHPAESSSTLPRTTSRFSHSELDTMPSTVTSPEAESSSAISTTISPGIPGVLTSLVTSSGRDISATFPTVPESPHESEATASWVTHPAVTSTTVPRTTPNYSHSEPDTTPSIATSPGAEATSDFPTITVSPDVPDMVTSQVTSSGTDTSITIPTLTLSSGEPETTTSFITYSETHTSSAIPTLPVSPGASKMLTSLVISSGTDSTTTFPTLTETPYEPETTAIQLIHPAETNTMVPRTTPKFSHSKSDTTLPVAITSPGPEASSAVSTTTISPDMSDLVTSLVPSSGTDTSTTFPTLSETPYEPETTATWLTHPAETSTTVSGTIPNFSHRGSDTAPSMVTSPGVDTRSGVPTTTIPPSIPGVVTSQVTSSATDTSTAIPTLTPSPGEPETTASSATHPGTQTGFTVPIRTVPSSEPDTMASWVTHPPQTSTPVSRTTSSFSHSSPDATPVMATSPRTEASSAVLTTISPGAPEMVTSQITSSGAATSTTVPTLTHSPGMPETTALLSTHPRTETSKTFPASTVFPQVSETTASLTIRPGAETSTALPTQTTSSLFTLLVTGTSRVDLSPTASPGVSAKTAPLSTHPGTETSTMIPTSTLSLGLLETTGLLATSSSAETSTSTLTLTVSPAVSGLSSASITTDKPQTVTSWNTETSPSVTSVGPPEFSRTVTGTTMTLIPSEMPTPPKTSHGEGVSPTTILRTTMVEATNLATTGSSPTVAKTTTTFNTLAGSLFTPLTTPGMSTLASESVTSRTSYNHRSWISTTSSYNRRYWTPATSTPVTSTFSPGISTSSIPSSTAATVPFMVPFTLNFTITNLQYEEDMRHPGSRKFNATERELQGLLKPLFRNSSLEYLYSGCRLASLRPEKDSSATAVDAICTHRPDPEDLGLDRERLYWELSNLTNGIQELGPYTLDRNSLYVNGFTHRSSMPTTSTPGTSTVDVGTSGTPSSSPSPTTAGPLLMPFTLNFTITNLQYEEDMRRTGSRKFNTMESVLQGLLKPLFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGLNREQLYWELSKLTNDIEELGPYTLDRNSLYVNGFTHQSSVSTTSTPGTSTVDLRTSGTPSSLSSPTIMAAGPLLVPFTLNFTITNLQYGEDMGHPGSRKFNTTERVLQGLLGPIFKNTSVGPLYSGCRLTSLRSEKDGAATGVDAICIHHLDPKSPGLNRERLYWELSQLTNGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHRTSVPTSSTPGTSTVDLGTSGTPFSLPSPATAGPLLVLFTLNFTITNLKYEEDMHRPGSRKFNTTERVLQTLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRSEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGVDREQLYWELSQLTNGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHWIPVPTSSTPGTSTVDLGSGTPSSLPSPTTAGPLLVPFTLNFTITNLKYEEDMHCPGSRKFNTTERVLQSLLGPMFKNTSVGPLYSGCRLTLLRSEKDGAATGVDAICTHRLDPKSPGVDREQLYWELSQLTNGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHQTSAPNTSTPGTSTVDLGTSGTPSSLPSPTSAGPLLVPFTLNFTITNLQYEEDMHHPGSRKFNTTERVLQGLLGPMFKNTSVGLLYSGCRLTLLRPEKNGAATGMDAICSHRLDPKSPGLNREQLYWELSQLTHGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHRSSVAPTSTPGTSTVDLGTSGTPSSLPSPTTAVPLLVPFTLNFTITNLQYGEDMRHPGSRKFNTTERVLQGLLGPLFKNSSVGPLYSGCRLISLRSEKDGAATGVDAICTHHLNPQSPGLDREQLYWQLSQMTNGIKELGPYTLDRNSLYVNGFTHRSSGLTTSTPWTSTVDLGTSGTPSPVPSPTTTGPLLVPFTLNFTITNLQYEENMGHPGSRKFNITESVLQGLLKPLFKSTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGVATRVDAICTHRPDPKIPGLDRQQLYWELSQLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTQRSSVPTTSTPGTFTVQPETSETPSSLPGPTATGPVLLPFTLNFTITNLQYEEDMRRPGSRKFNTTERVLQGLLMPLFKNTSVSSLYSGCRLTLLRPEKDGAATRVDAVCTHRPDPKSPGLDRERLYWKLSQLTHGITELGPYTLDRHSLYVNGFTHQSSMTTTRTPDTSTMHLATSRTPASLSGPMTASPLLVLFTINFTITNLRYEENMHHPGSRKFNTTERVLQGLLRPVFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPKKDGAATKVDAICTYRPDPKSPGLDREQLYWELSQLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTQRSSVPTTSIPGTPTVDLGTSGTPVSKPGPSAASPLLVLFTLNFTITNLRYEENMQHPGSRKFNTTERVLQGLLRSLFKSTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGTATGVDAICTHHPDPKSPRLDREQLYWELSQLTHNITELGPYALDNDSLFVNGFTHRSSVSTTSTPGTPTVYLGASKTPASIFGPSAASHLLILFTLNFTITNLRYEENMWPGSRKFNTTERVLQGLLRPLFKNTSVGPLYSGCRLTLLRPEKDGEATGVDAICTHRPDPTGPGLDREQLYLELSQLTHSITELGPYTLDRDSLYVNGFTHRSSVPTTSTGVVSEEPFTLNFTINNLRYMADMGQPGSLKFNITDNVMQHLLSPLFQRSSLGARYTGCRVIALRSVKNGAETRVDLLCTYLQPLSGPGLPIKQVFHELSQQTHGITRLGPYSLDKDSLYLNGYNEPGPDEPPTTPKPATTFLPPLSEATTAMGYHLKTLTLNFTISNLQYSPDMGKGSATFNSTEGVLQHLLRPLFQKSSMGPFYLGCQLISLRPEKDGAATGVDTTCTYHPDPVGPGLDIQQLYWELSQLTHGVTQLGFYVLDRDSLFINGYAPQNLSIRGEYQINFHIVNWNLSNPDPTSSEYITLLRDIQDKVTTLYKGSQLHDTFRFCLVTNLTMDSVLVTVKALFSSNLDPSLVEQVFLDKTLNASFHWLGSTYQLVDIHVTEMESSVYQPTSSSSTQHFYLNFTITNLPYSQDKAQPGTTNYQRNKRNIEDALNQLFRNSSIKSYFSDCQVSTFRSVPNRHHTGVDSLCNFSPLARRVDRVAIYEEFLRMTRNGTQLQNFTLDRSSVLVDGYSPNRNEPLTGNSDLPFWAVILIGLAGLLGVITCLICGVLVTTRRRKKEGEYNVQQQCPGYYQSHLDLEDLQ

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном NaPi2b, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:149.

SEQ ID NO:149

MAPWPELGDAQPNPDKYLEGAAGQQPTAPDKSKETNKTDNTEAPVTKIELLPSYSTATLIDEPTEVDDPWNLPTLQDSGIKWSERDTKGKILCFFQGIGRLILLLGFLYFFVCSLDILSSAFQLVGGKMAGQFFSNSSIMSNPLLGLVIGVLVTVLVQSSSTSTSIVVSMVSSSLLTVRAAIPIIMGANIGTSITNTIVALMQVGDRSEFRRAFAGATVHDFFNWLSVLVLLPVEVATHYLEIITQLIVESFHFKNGEDAPDLLKVITKPFTKLIVQLDKKVISQIAMNDEKAKNKSLVKIWCKTFTNKTQINVTVPSTANCTSPSLCWTDGIQNWTMKNVTYKENIAKCQHIFVNFHLPDLAVGTILLILSLLVLCGCLIMIVKILGSVLKGQVATVIKKTINTDFPFPFAWLTGYLAILVGAGMTFIVQSSSVFTSALTPLIGIGVITIERAYPLTLGSNIGTTTTAILAALASPGNALRSSLQIALCHFFFNISGILLWYPIPFTRLPIRMAKGLGNISAKYRWFAVFYLIIFFFLIPLTVFGLSLAGWRVLVGVGVPVVFIIILVLCLRLLQSRCPRVLPKKLQNWNFLPLWMRSLKPWDAVVSKFTGCFQMRCCCCCRVCCRACCLLCDCPKCCRCSKCCEDLEEAQEGQDVPVKAPETFDNITISREAQGEVPASDSKTECTAL

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном нектин-4, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:150.

SEQ ID NO:150

MPLSLGAEMWGPEAWLLLLLLLASFTGRCPAGELETSDVVTVVLGQDAKLPCFYRGDSGEQVGQVAWARVDAGEGAQELALLHSKYGLHVSPAYEGRVEQPPPPRNPLDGSVLLRNAVQADEGEYECRVSTFPAGSFQARLRLRVLVPPLPSLNPGPALEEGQGLTLAASCTAEGSPAPSVTWDTEVKGTTSSRSFKHSRSAAVTSEFHLVPSRSMNGQPLTCVVSHPGLLQDQRITHILHVSFLAEASVRGLEDQNLWHIGREGAMLKCLSEGQPPPSYNWTRLDGPLPSGVRVDGDTLGFPPLTTEHSGIYVCHVSNEFSSRDSQVTVDVLDPQEDSGKQVDLVSASVVVVGVIAALLFCLLVVVVVLMSRYHRRKAQQMTQKYEEELTLTRENSIRRLHSHHTDPRSQPEESVGLRAEGHPDSLKDNSSCSVMSEEPEGRSYSTLTTVREIETQTELLSPGSGRAEEEEDQDEGIKQAMNHFVQENGTLRAKPTGNGIYINGRGHLV

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном Fucosyl-GM1, можно выявлять путем скрининга по связыванию с моносиалотетрагексозилганглиозидом.

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном ADAM8, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:151.

SEQ ID NO:151

LGATGHNFTLHLRKNRDLLGSGYTETYTAANGSEVTEQPRGQDHCFYQGHVEGYPDSAASLSTCAGLRGFFQVGSDLHLIEPLDEGGEGGRHAVYQAEHLLQTAGTCGVSDDSLGSLLGPRTAAVFRPRPGDSLPSRETRYVELYVVVDNAEFQMLGSEAAVRHRVLEVVNHVDKLYQKLNFRVVLVGLEIWNSQDRFHVSPDPSVTLENLLTWQARQRTRRHLHDNVQLITGVDFTGTTVGFARVSAMCSHSSGAVNQDHSKNPVGVACTMAHEMGHNLGMDHDENVQGCRCQERFEAGRCIMAGSIGSSFPRMFSDCSQAYLESFLERPQSVCLANAPDLSHLVGGPVCGNLFVERGEQCDCGPPEDCRNRCCNSTTCQLAEGAQCAHGTCCQECKVKPAGELCRPKKDMCDLEEFCDGRHPECPEDAFQENGTPCSGGYCYNGACPTLAQQCQAFWGPGGQAAEESCFSYDILPGCKASRYRADMCGVLQCKGGQQPLGRAICIVDVCHALTTEDGTAYEPVPEGTRCGPEKVCWKGRCQDLHVYRSSNCSAQCHNHGVCNHKQECHCHAGWAPPHCAKLLTEVHAASGSLPVFVVVVLVLLAVVLVTLAGIIVYRKARSRILSRNVAPKTTMGRSNPLFHQAASRVPAKGGAPAPSRGPQELVPTTHPGQPARHPASSVALKRPPPAPPVTVSSPPFPVPVYTRQAPKQVIKPTFAPPVPPVKPGAGAANPGPAEGAVGPKVALKPPIQRKQGAGAPTAP

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном ADAM9, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:152.

SEQ ID NO:152

MGSGARFPSGTLRVRWLLLLGLVGPVLGAARPGFQQTSHLSSYEIITPWRLTRERREAPRPYSKQVSYVIQAEGKEHIIHLERNKDLLPEDFVVYTYNKEGTLITDHPNIQNHCHYRGYVEGVHNSSIALSDCFGLRGLLHLENASYGIEPLQNSSHFEHIIYRMDDVYKEPLKCGVSNKDIEKETAKDEEEEPPSMTQLLRRRRAVLPQTRYVELFIVVDKERYDMMGRNQTAVREEMILLANYLDSMYIMLNIRIVLVGLEIWTNGNLINIVGGAGDVLGNFVQWREKFLITRRRHDSAQLVLKKGFGGTAGMAFVGTVCSRSHAGGINVFGQITVETFASIVAHELGHNLGMNHDDGRDCSCGAKSCIMNSGASGSRNFSSCSAEDFEKLTLNKGGNCLLNIPKPDEAYSAPSCGNKLVDAGEECDCGTPKECELDPCCEGSTCKLKSFAECAYGDCCKDCRFLPGGTLCRGKTSECDVPEYCNGSSQFCQPDVFIQNGYPCQNNKAYCYNGMCQYYDAQCQVIFGSKAKAAPKDCFIEVNSKGDRFGNCGFSGNEYKKCATGNALCGKLQCENVQEIPVFGIVPAIIQTPSRGTKCWGVDFQLGSDVPDPGMVNEGTKCGAGKICRNFQCVDASVLNYDCDVQKKCHGHGVCNSNKNCHCENGWAPPNCETKGYGGSVDSGPTYNEMNTALRDGLLVFFFLIVPLIVCAIFIFIKRDQLWRSYFRKKRSQTYESDGKNQANPSRQPGSVPRHVSPVTPPREVPIYANRFAVPTYAAKQPQQFPSRPPPPQPKVSSQGNLIPARPAPAPPLYSSLT

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном SLC44A4, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:153.

SEQ ID NO:153

MGGKQRDEDDEAYGKPVKYDPSFRGPIKNRSCTDVICCVLFLLFILGYIVVGIVAWLYGDPRQVLYPRNSTGAYCGMGENKDKPYLLYFNIFSCILSSNIISVAENGLQCPTPQVCVSSCPEDPWTVGKNEFSQTVGEVFYTKNRNFCLPGVPWNMTVITSLQQELCPSFLLPSAPALGRCFPWTNVTPPALPGITNDTTIQQGISGLIDSLNARDISVKIFEDFAQSWYWILVALGVALVLSLLFILLLRLVAGPLVLVLILGVLGVLAYGIYYCWEEYRVLRDKGASISQLGFTTNLSAYQSVQETWLAALIVLAVLEAILLLMLIFLRQRIRIAIALLKEASKAVGQMMSTMFYPLVTFVLLLICIAYWAMTALYLATSGQPQYVLWASNISSPGCEKVPINTSCNPTAHLVNSSCPGLMCVFQGYSSKGLIQRSVFNLQIYGVLGLFWTLNWVLALGQCVLAGAFASFYWAFHKPQDIPTFPLISAFIRTLRYHTGSLAFGALILTLVQIARVILEYIDHKLRGVQNPVARCIMCCFKCCLWCLEKFIKFLNRNAYIMIAIYGKNFCVSAKNAFMLLMRNIVRVVVLDKVTDLLLFFGKLLVVGGVGVLSFFFFSGRIPGLGKDFKSPHLNYYWLPIMTSILGAYVIASGFFSVFGMCVDTLFLCFLEDLERNNGSLDRPYYMSKSLLKILGKKNEAPPDNKKRKK

Антигенсвязывающие участки, которые могут связываться с опухолеассоциированным антигеном CA19-9, можно выявлять путем скрининга по связыванию с аминокислотной последовательностью, определяемой SEQ ID NO:154.

SEQ ID NO:154

MACSRPPSQCEPTSLPPGPPAGRRHLPLSRRRREMSSNKEQRSAVFVILFALITILILYS

SNSANEVFHYGSLRGRSRRPVNLKKWSITDGYVPILGNKTLPSRCHQCVIVSSSSHLLGTKLGPEIERAECTIRMNDAPTTGYSADVGNKTTYRVVAHSSVFRVLRRPQEFVNRTPETVFIFWGPPSKMQKPQGSLVRVIQRAGLVFPNMEAYAVSPGRMRQFDDLFRGETGKDREKSHSWLSTGWFTMVIAVELCDHVHVYGMVPPNYCSQRPRLQRMPYHYYEPKGPDECVTYIQNEHSRKGNHHRFITEKRVFSSWAQLYGITFSHPSWT

Альтернативно, Таблица 3 перечисляет пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелых цепей и вариабельных доменов легких цепей, которые, в комбинации, могут связываться с CA125 (абаговомаб, софитузумаб), NaPi2b (лифастузумаб), нектином-4 (энфортумаб), фукозил-GM1 (описанные в публикации патентной заявки США №20130142789, конкретные последовательности включены посредством ссылки в настоящий документ), или SLC44A4 (описанные в публикации международной заявки № WO2010111018, конкретные последовательности включены посредством ссылки в настоящий документ).

Таблица 3 Клоны Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи абаговомаб QVKLQESGAELARPGASVKLSCKASGYTFTNYWMQWVKQRPGQGLDWIGAIYPGDGNTRYTHKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSGVYYCARGEGNYAWFAYWGQGTTVTVSSA
(SEQ ID NO:155)
CDR1 (SEQ ID NO:156) - GYTFTNY
CDR2 (SEQ ID NO:157) - YPGDGN
CDR3 (SEQ ID NO:158) - GEGNYAWFAY DIELTQSPASLSASVGETVTITCQASENIYSYLAWHQQKQGKSPQLLVYNAKTLAGGVSSRFSGSGSGTHFSLKIKSLQPEDFGIYYCQHHYGILPTFGGGTKLEIKR
(SEQ ID NO:159)
CDR1(SEQ ID NO:160) - ENIYSYLA
CDR2 (SEQ ID NO:161) - NAKTLAG
CDR3 (SEQ ID NO:162) - QHHYGILPT софитузумаб EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSITNDYAWNWVRQAPGKGLEWVGYISYSGYTTYNPSLKSRFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARWTSGLDYWGQGTLVTVSSA
(SEQ ID NO:163)
CDR1 (SEQ ID NO:164) - GYSITNDY
CDR2 (SEQ ID NO:165) - SYSGY
CDR3 (SEQ ID NO:166) - WTSGLDY DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASDLIHNWLAWYQQKPGKAPKLLIYGATSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYWTTPFTFGQGTKVEIKR
(SEQ ID NO:167)
CDR1 (SEQ ID NO:168) - DLIHNWLA
CDR2 (SEQ ID NO:169) - GATSLET
CDR3 (SEQ ID NO:170) - QQYWTTPFT лифастузумаб EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSDFAMSWVRQAPGKGLEWVATIGRVAFHTYYPDSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHRGFDVGHFDFWGQGTLVTVSSA
(SEQ ID NO:171)
CDR1 (SEQ ID NO:172) - GFSFSDF
CDR2 (SEQ ID NO:173) - GRVAFH
CDR3 (SEQ ID NO:174) - HRGFDVGHFDF DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSETLVHSSGNTYLEWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSFNPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:175)
CDR1 (SEQ ID NO:176) - ETLVHSSGNTYLE
CDR2 (SEQ ID NO:177) - RVSNRFS
CDR3 (SEQ ID NO:178) - FQGSFNPLT энфортумаб EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSSA
(SEQ ID NO:179)
CDR1 (SEQ ID NO:180) - GFTFSSY
CDR2 (SEQ ID NO:181) - SSSSST
CDR3 (SEQ ID NO:182) - AYYYGMDV DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKR
(SEQ ID NO:183)
CDR1(SEQ ID NO:184) - QGISGWLA
CDR2 (SEQ ID NO:185) - AASTLQS
CDR3 (SEQ ID NO:186) - QQANSFPPT Антитело к фукозил-GM1 EVQLVESGGGSVQPGESLRLSCVASGFTFSRYKMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSGRDIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAGTVTTYYYDFGMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO:187)
CDR1 (SEQ ID NO:188) - GFTFSRY
CDR2 (SEQ ID NO:189) - SRSGRD
CDR3 (SEQ ID NO:190) - TVTTYYYDFGMDV DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:191)
CDR1 (SEQ ID NO:192) - QGISSWLA
CDR2 (SEQ ID NO:193) - AASSLQS
CDR3 (SEQ ID NO:194) - QQYNSYPPT Антитело к SLC44A4 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVMSYDGSKKFYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGGDYVRYHYYGMDVWGQGTTVTVSSA
(SEQ ID NO:195)
CDR1 (SEQ ID NO:196) - GFTFSSY
CDR2 (SEQ ID NO:197) - SYDGSK
CDR3 (SEQ ID NO:198) - DGGDYVRYHYYGMDV DIQMTQSPSTLSASIGDRVTITCRASQGISYYLAWYQQKPGKIPKLLIYDTSSLQSGVPSRFSGSRSGTDLSLTISSLQPEDVATYYCQRYDSAPLTFGGGTKVEIKR
(SEQ ID NO:199)
CDR1 (SEQ ID NO:200) - QGISYYLA
CDR2 (SEQ ID NO:201) - DTSSLQS
CDR3 (SEQ ID NO:202) - QRYDSAPLT

Ниже перечислены примеры scFv, связанного с константной областью антитела, который также включает мутации, которые обеспечивают гетеродимеризацию двух полипептидных цепей. ScFv, содержащий вариабельный домен тяжелых цепей (V_H) и вариабельный домен легких цепей (V_L) из антитела к NKG2D, используют для получения мультиспецифического белка по настоящему изобретению. Каждая последовательность представляет собой V_L-(G4S)₄-V_H-шарнир (AS или GAS)-Fc, содержащий мутации для гетеродимеризации (подчеркнуто). V_L и V_H содержат S-S мостик 100V_L-44V_H (подчеркнут), и могут быть из любого антитела, нацеленного на опухоль или связывающегося с NKG2D. Ala-Ser (AS, выделено жирным шрифтом и подчеркнуто) включены в последовательность изгиба шарнира для баланса между гибкостью и оптимальной геометрией. В определенных вариантах осуществления можно добавить дополнительный Gly к N-концу последовательности AS, создавая шарнир с последовательностью Gly-Ala-Ser (GAS, выделено жирным шрифтом и подчеркнуто). В определенных вариантах осуществления к последовательности AS в шарнире можно добавлять дополнительную последовательность Thr-Lys-Gly. Линкер (G4S)₄ подчеркнут в последовательностях, перечисленных в абзаце ниже.

TriNKET по настоящему изобретению представляет собой NKG2D-связывающий-F4-TriNKET-EpCAM, включающий первый полипептид с последовательностью SEQ ID NO:203 (F4-EpCAMFc-AJцепьB-NKG2D-связывающий scFv), и второй полипептид с последовательностью SEQ ID NO:204 (анти-EpCAM HC-шарнир-Fc). NKG2D-связывающий-F4-TriNKET-EpCAM также содержит две легкие цепи, нацеленные на EpCAM, каждая из которых содержит анти-EpCAM V_L-Константный домен, включающий последовательность SEQ ID NO:214. Например, в структуре на ФИГ. 36, когда Fab-фрагменты нацелены на EpCAM, NKG2D-связывающий-F4-TriNKET-EpCAM содержит SEQ ID NO:203 и SEQ ID NO:214, образующие одно плечо TriNKET, и SEQ ID NO:204 и SEQ ID NO:214, образующие второе плечо TriNKET.

Каждое из плеч содержит Fab-фрагмент, связывающий EpCAM, который содержит часть тяжелой цепи, содержащую вариабельный домен тяжелой цепи и CH1-домен, в которой вариабельный домен тяжелой цепи соединен с CH1-доменом; и часть легкой цепи, содержащую вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи, (SEQ ID NO: 214). В первом плече (например, в F4-EpCAMFc-AJцепьB-NKG2D-связывающем scFv) CH1-домен связан с доменом Fc, который связан с scFv, нацеленным на NKG2D, образуя полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 203. Во втором плече домен CH1-домен связан с доменом Fc, образуя полипептид, содержащий последовательность SEQ ID NO: 204.

Например, F4-EpCAMFc-AJцепьB-NKG2D-связывающий scFv (SEQ ID NO:203) содержит вариабельный домен тяжелой цепи, нацеленный на EpCAM (V_H) (SEQ ID NO:139) и CH1-домен, соединенный с Fc-доменом (шарнир-CH2-CH3), который C-концом связан с одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv) который связывается с NKG2D. Fc-домен в SEQ ID NO:203 содержит замену S354C, которая образует дисульфидную связь с заменой Y349C в другом Fc-домене (SEQ ID NO:204, описан ниже). Fc-домен в SEQ ID NO:203 сожержит замены Q347R, D399V, и F405T. scFv, который связывается с NKG2D, представлен аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:205, и включает вариабельный домен легкой цепи (V_L) связанный с вариабельным доменом тяжелой цепи (V_H) через линкер (G4S)₄ линкер, GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:206). V_L и V_H внутри SEQ ID NO:205 соединены V_L-(G4S)₄-V_H; V_L и V_H содержат 100V_L-44V_H мостик S-S (полученный путем замен G100C и G44C, соответственно) (цистеиновые остатки выделены жирным курсивом и подчеркнуты). Как представлено в SEQ ID NO:203, C-конец Fc-домена связан с N-концом scFv (SEQ ID NO:205) через короткий линкер SGSGGGGS (SEQ ID NO:207).

NKG2D-связывающий scFv

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKCLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:205)

F4-EpCAMFc-AJцепьB-NKG2D-связывающий scFv

Анти-EpCAM HC-шарнир-Fc (SEQ ID NO:204) содержит вариабельный домен тяжелой цепи, нацеленный на EpCAM, и CH1-домен, соединенный с Fc-доменом (шарнир-CH2-CH3). Fc-домен в SEQ ID NO:204 содержит замену Y349C, которая образует дисульфидную связь с заменой S354C в CH3-домене Fc, связанного с NKG2D-связывающим scFv (SEQ ID NO:203). В SEQ ID NO:204, Fc-домен также содержит замены K360E и K409W.

Анти-EpCAM V_H-CH1-Fc

Анти-EpCAM V_L-константный домен (SEQ ID NO:214) содержит часть легкой цепи, нацеленную на EpCAM и включающую вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи.

Анти-EpCAM V_L-Константный домен

ELVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPLTFGAGTKLEIKGRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:214)

В иллюстративном варианте осуществления, Fc-домен связанный с NKG2D-связывающим scFv-фрагментом, содержит мутации K360E и K409W, а Fc-домен, связанный с EPCAM Fab-фрагментом, содержит комплементарные мутации Q347R, D399V и F405T для образования гетеродимера.

В иллюстративном варианте осуществления, Fc-домен связанный с NKG2D-связывающим scFv-фрагментом, содержит замену Y349C в CH3-домене, которая образует дисульфидную связь с заменой S354C в Fc-домене, не связанном с NKG2D-связывающим scFv.

Другой TriNKET по настоящему изобретению представляет собой NKG2D-связывающий-F3'-TriNKET-EPCAM, последовательности которого описаны ниже (CDR (нумерация по Kabat) подчеркнуты).

Некоторые TriNKET по настоящему изобретению находятся в форме A49-F3'-TriNKET-EPCAM, последовательности которой представлены ниже (CDR (нумерация по Kabat) подчеркнуты).

A49-F3'-TriNKET-EPCAM включает одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), который связывается с EPCAM (SEQ ID NO:208 и 209 представляют собой примеры последовательностей таких EPCAM-связывающих scFv полипептидов), связанный с Fc-доменом через шарнир, включающий Gly-Ala-Ser (например, в SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211); и NKG2D-связывающий Fab-фрагмент («A49»), включающий часть тяжелой цепи с вариабельным доменом тяжелой цепи (SEQ ID NO:85) и CH1-доменом, и часть легкой цепи с вариабельным доменом легкой цепи (SEQ ID NO:86) и константным доменом легкой цепи, где вариабельный домен тяжелой цепи соединен с CH1-доменом, и CH1-домен динен с Fc-доменом. Fc-домен, связанный с Fab, нацеленным на EpCAM, содержит замены Q347R, D399V, и F405T для образования гетеродимера с Fab, содержащим замены K360E и K409W (см., например, SEQ ID NO:212, описанную ниже).

EPCAM-связывающий scFv по настоящему изобретению может включать вариабельный домен тяжелой цепи, соединенный с вариабельным доменом легкой цепи при помощи линкера (G4S)₄ (представлен как V_L(G4S)₄V_H или LH, где V_L расположен N-концом к V_H, и представлен как V_H(G4S)₄V_L или HL, где V_H расположен N-концом к V_L). SEQ ID NO:208 и 209 представляют собой примеры последовательностей таких EPCAM-связывающих scFv полипептидов. V_L и V_H,содержащиеся в scFv (SEQ ID NO:208 или 209), включают S-S мостик 100V_L-44V_H (полученный из замен G100C и G44C, соответственно) (цистеиновые остатки выделены жирным курсивом и подчеркнуты в последовательностях ниже below). (G4S)₄ представляет собой выделенную жирным и подчеркнутую последовательность GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:206) в SEQ ID NO:208 и SEQ ID NO:209.

EPCAM (MT110LH) scFv

EPCAM (MT100HL) scFv

SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211 представляют две последовательности EPCAM-связывающего scFv, который может быть связан с Fc-доменом через шарнир, содержащий (выделенажирным и подчернута). Fc-домен, связанный с scFv, содержит замены Q347R, D399V, и F405T.

EPCAM (MT110LH) scFv-Fc

EPCAM (MT110HL) scFv-Fc

SEQ ID NO:212 представляет часть тяжелой цепи Fab-фрагмента, которая содержит вариабельный домен тяжелой цепи (SEQ ID NO:85) из участка связывания NKG2D и CH1-домен, соединенный с Fc-доменом. Fc-домен в SEQ ID NO:212 содержит замену Y349C в CH3-домене, которая образует дисульфидную связь с заменой S354C в Fc, связанном с EpCAM-связывающим scFv (например, SEQ ID NO:210 и SEQ ID NO:211). В SEQ ID NO:212, Fc-домен также содержит замены K360E и K409W.

A49-V_H

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:85)

A49 V_H-CH1-Fc

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTENQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSWLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:212)

SEQ ID NO:213 представляет часть легкой цепи Fab-фрагмента, содержащую вариабельный домен легкой цепи (SEQ ID NO:86) из участка связывания NKG2D и константный домен легкой цепи.

A49 - V_L

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:86)

A49 LC V_L- Константный домен

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK RTVAAPSPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:213)

В иллюстративном варианте осуществления, Fc-домен, связанный с NKG2D-связывающим Fab-фрагментом, содержит мутации Q347R, D399V, и F405T, и Fc-домен, связанный с EPCAM scFv, содержит комплементарные мутации K360E и K409W для образования гетеродимера. В иллюстративном варианте осуществления, Fc-домен, связанный с NKG2D-связывающим Fab-фрагментом, содержит замену S354C в CH3-домене, которая образует дисульфидную связь с заменой Y349C в Fc, связанном с EPCAM-связывающим scFv.

В Fc-домене, связывание CD16 опосредуется шарнирной областью и CH2 доменом. Например, в человеческом IgG1, взаимодействие с CD16 исходно сфокусировано на аминокислотных остатках Asp 265-Glu 269, Asn 297-Thr 299, Ala 327-Ile 332, Leu 234-Ser 239, и углеводном остатке N-ацетил-D-глюкозамине CH2-домене (см., Sondermann et al., Nature, 406 (6793):267-273). Основываясь на известных доменах, можно выбрать мутации для улучшения или уменьшения аффинности связывания с CD16, например, с помощью библиотеки фагового дисплея или библиотеки кDНК на поврехности дрожжей, или их можно разработать на основе известной трехмерной структуры взаимодействия.

Сборка тяжелых цепей гетеродимерного антитела может быть выполнена путем экспрессии тяжелых цепей двух разных антител в одной и той же клетке, что может привести к сборке гомодимеров ктяжелой цепи каждого антитела, а также сборки гетеродимеров. Преимущественной сборки гетеродимеров можно достичь путем включения различных мутаций в CH3-домен константной области тяжелой цепи каждого антитела, как показано в US13/494870, US16/028850, US11/533709, US12/875015, US13/289934, US14/773418, US12/811207, US13/866756, US14/647480, и US14/830336. Например, мутации могут быть произведены в CH-домене на основе человека IgG1 и включать различные пары замен аминокислот в первом полипептиде и втором полипептиде, которые позволяют этим двум цепям селективно образовывать гетеродимеры друг с другом. Положения аминокислотных замен, показанные ниже, пронумерованы в соответствии с индексом ЕС, как в Кабат.

В одном сценарии замена аминокислот в первом полипептиде заменяет исходную аминокислоту более крупной аминокислотой, выбранной из аргинина (R), фенилаланина (F), тирозина (Y) или триптофана (W), и, по меньшей мере, одна замена аминокислот во втором полипептиде заменяет исходные аминокислоты на аминокислоты меньшего размера, выбранные из аланина (A), серина (S), треонина (T) или валина (V), так что замена на большие аминокислоты (выпуклость) вписывается в замены на меньшую аминокислоту (полость). Например, один полипептид может включать замену T366W, а другой может включать три замены, включая T366S, L368A и Y407V.

Вариабельный домен тяжелой цепи антитела по изобретению необязательно может быть соединен с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 90% идентичной константной области антитела, такой как константная область IgG, включая шарнир, CH2- и CH3-домены с наличием или отсутствием CH1-домена. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области антитела человека, такой как константная область IgG1, константная область IgG2, константная область IgG3, или константная область IgG4 человека. В некоторых других вариантах осуществления, аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области антитела от другого млекопитающего, такого как кролик, собака, кошка, мышь, или лошадь. Одна или более мутаций могут быть включены в константную область по сравнению с константной областью человеческого IgG1, например at Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 и/или K439. Примеры замен включают, например, Q347E, Q347R, Y349S, Y349K, Y349T, Y349D, Y349E, Y349C, T350V, L351K, L351D, L351Y, S354C, E356K, E357Q, E357L, E357W, K360E, K360W, Q362E, S364K, S364E, S364H, S364D, T366V, T366I, T366L, T366M, T366K, T366W, T366S, L368E, L368A, L368D, K370S, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, T394W, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I, Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D, и K439E.

В определенных вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в CH1 константной области человеческого IgG1, могут быть по аминокислоте V125, F126, P127, T135, T139, A140, F170, P171 и/или V173. В определенных вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в Cκ константной области человеческого IgG1, могут быть по аминокислоте E123, F116, S176, V163, S174 и/или T164.

Альтернативно, замены аминокислот могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в таблице 4.

Таблица 4 Первый Полипептид Второй Полипептид Набор 1 S364E/F405A Y349K/T394F Набор 2 S364H/D401K Y349T/T411E Набор 3 S364H/T394F Y349T/F405A Набор 4 S364E/T394F Y349K/F405A Набор 5 S364E/T411E Y349K/D401K Набор 6 S364D/T394F Y349K/F405A Набор 7 S364H/F405A Y349T/T394F Набор 8 S364K/E357Q L368D/K370S Набор 9 L368D/K370S S364K Набор 10 L368E/K370S S364K Набор 11 K360E/Q362E D401K Набор 12 L368D/K370S S364K/E357L Набор 13 K370S S364K/E357Q Набор 14 F405L K409R Набор 15 K409R F405L

Альтернативно, замены аминокислот могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в таблице 5.

Таблица 5 Первый Полипептид Второй Полипептид Набор 1 K409W D399V/F405T Набор 2 Y349S E357W Набор 3 K360E Q347R Набор 4 K360E/K409W Q347R/D399V/F405T Набор 5 Q347E/K360E/K409W Q347R/D399V/F405T Набор 6 Y349S/K409W E357W/D399V/F405T

Альтернативно, замены аминокислот могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в таблице 6.

Таблица 6 Первый Полипептид Второй Полипептид Набор 1 T366K/L351K L351D/L368E Набор 2 T366K/L351K L351D/Y349E Набор 3 T366K/L351K L351D/Y349D Набор 4 T366K/L351K L351D/Y349E/L368E Набор 5 T366K/L351K L351D/Y349D/L368E Набор 6 E356K/D399K K392D/K409D

Альтернативно, по меньшей мере, одна замена аминокислоты в каждой полипептидной цепи может быть выбрана из таблицы 7.

Таблица 7 Первый Полипептид Второй Полипептид L351Y, D399R, D399K, S400K, S400R, Y407A, Y407I, Y407V T366V, T366I, T366L, T366M, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и T411E

Альтернативно, по меньшей мере, одна замена аминокислоты может быть выбрана из следующих наборов замен в таблице 8, где положение/положения, указанные в колонке первого полипептида замещены любой известной отрицательно заряженной аминокислотой, и положение/положения, указанные в колонке второго полипептида замещены любой известной положительно заряженной аминокислотой.

Таблица 8 Первый Полипептид Второй Полипептид K392, K370, K409, или K439 D399, E356, или E357

Альтернативно, по меньшей мере, одна замена аминокислоты может быть выбрана из следующих наборов замен в таблице 9, где положение/положения, указанные в колонке первого полипептида замещены любой известной положительно заряженной аминокислотой, и положение/положения, указанные в колонке второго полипептида замещены любой известной отрицательно заряженной аминокислотой.

Таблица 9 Первый Полипептид Второй Полипептид D399, E356, или E357 K409, K439, K370, или K392

Альтернативно, замены аминокислот могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в таблице 10.

Таблица 10 Первый Полипептид Второй Полипептид T350V, L351Y, F405A, и Y407V T350V, T366L, K392L и T394W

Альтернативно, или кроме того, структурную стабильность гетеромультимерного белка можно повысить путем введения S354C на любой из первой или второй полипептидных цепей, и Y349C на противоположных полипептидных цепях, которые образуют искусственный дисульфидный мостик в зоне контакта двух полипептидов.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по положению T366, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из T366, L368 и Y407.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из T366, L368 и Y407, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по положению T366.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405, и T411, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405, и T411.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Q347, Y349, K360, и K409, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Y349, K360, Q347 и K409.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из D356, E357 и D399.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из D356, E357 и D399, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене S354C, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене Y349C.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене Y349C, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене S354C.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам K360E и K409W, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам O347R, D399V и F405T.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам O347R, D399V и F405T, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам K360E и K409W.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене T366W, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T366S, T368A, и Y407V.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T366S, T368A, и Y407V, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по замене T366W.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T350V, L351Y, F405A, и Y407V, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T350V, T366L, K392L, и T394W.

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной из полипептидных цепей константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T350V, T366L, K392L, и T394W, и аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 по заменам T350V, L351Y, F405A, и Y407V.

Мультиспецифические белки, описанные выше, можно получать с использованием технологии рекомбинантных ДНК, хорошо известной специалисту в данной области. Например, первую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую первую тяжелую цепь иммуноглобулина, можно клонировать в первый экспрессирующий вектор; вторую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую вторую тяжелую цепь иммуноглобулина, можно клонировать во второй экспрессирующий вектор; третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь иммуноглобулина, можно клонировать в третий экспрессирующий вектор; и первые, и вторые, и третьи экспрессирующие молекулы могут вместе стабильно трансфицировать клетки-хозяева для получения мультимерных белков.

Для достижения максимального выхода мультиспецифического белка можно исследовать различные соотношения первого, второго и третьего экспрессирующих векторов, чтобы определить оптимальное соотношение для трансфекции клеток-хозяев. После трансфекции отдельные клоны можно выделять для генерации банка клеток с использованием известных в данной области способов, таких как лимитирующее разведение, ELISA, FACS, микроскопия или Clonepix.

Клоны можно культивировать в условиях, подходящих для биореактора промышленного масштаба и поддерживать экспрессию мультиспецифического белка. Мультиспецифические белки можно выделять и очищать с использованием известных в данной области способов, включая центрифугирование, глубокую фильтрацию, лизис клеток, гомогенизацию, замораживание-оттаивание, аффинную очистку, гель-фильтрацию, ионообменную хроматографию, гидрофобное взаимодействие, ионообменную хроматографию и смешанную хроматографию.

II. Характеристики мультиспецифических белков

Мультиспецифические белки, описываемые в настоящем документе включают участок связывания NKG2D, участок связывания CD16, и участок связывания опухолеассоциированного антигена, выбранного из любого из антигенов, представленных в таблице 11. В некоторых вариантах осуществления мультиспецифические белки одновременно связываются с клетками, экспрессирующими NKG2D и/или CD16, такими как NK-клетки, и с опухолевыми клетками, экспрессирующими опухолеассоциированный антиген, выбранный из любого из антигенов, представленных в таблице 11. Связывание мультиспецифических белков с NK-клетками может повышать активность NK-клеток относительно разрушения опухолевых клеток.

Таблица 11

Тип антигена Биологическое название Трансмембранный гликопротеин, опосредующий Ca²⁺-независимую гомотипическую межклеточную адгезию в эпителии Молекула адгезии эпителиальных клеток (EpCAM) Гликопротеины семейства муцинов Антиген злокачественной опухоли 125 (CA125) Транспортный белок для фосфатов, участвующий в транспорте фосфатов в клетки посредством совместного транспорта с Na⁺ Натрий-фосфатный ко-транспортер 2B (NaPi2b) Молекулы клеточной адгезии, участвующие вCa2+-независимой клеточной адгезии Молекула клеточной адгезии нектин-4 (Nectin4) Ганглиозиды Фукозил-GM1 (моносиалотетрагексозилганглиозид) Белок ADAM (дизинтегрин и металлопротеиназа) Белок 8, содержащий домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8) Белок ADAM (дизинтегрин и металлопротеиназа) Белок 9, содержащий домен дезинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9) Растворимые белки-переносчики, известные как белки, подобные транспортеру холина (CTL1-5) Член 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4) Углеводный сиалированный антиген системы Льюиса сиалированный антиген Льюиса(CA19-9)

В некоторых вариантах осуществления мультиспецифические белки связываются с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из любого из антигенов, представленных в таблице 11, с аффинностью, аналогичной афинности соответствующего моноклонального антитела (т.е., моноклонального антитела с участком, связывающим такой же опухолеассоциированный антиген, как и участок, включенный в мультиспецифические белки (антиген, выбранный из любого из антигенов, представленных в таблице 11)). В некоторых вариантах осуществления мультиспецифические белки являются более эффективными, чем соответствующие моноклональные антитела, в уничтожении опухолевых клеток, экспрессирующих опухолеассоциированный антиген, выбранный из любого из антигенов, представленных в таблице 11.

В определенных вариантах осуществления мультиспецифические белки, описываемые в настоящем документе, которые включают участок связывания для NKG2D и участок связывания для опухолеассоциированного антигена, выбранного из любого из антигенов, представленных в таблице 11, активируют первичные NK-клетки человека, когда совместно культивируются с клетками, экспрессирующими опухолеассоциированный антиген. Активация NK-клеток отмечена повышением дегрануляции CD107a и выработки цитокина IFN-γ. Кроме того, по сравнению с соответствующим моноклональным антителом для опухолеассоциированного антигена, выбранного из любого из антигенов, представленных в таблице 11, мультиспецифические белки могут показывать превосходящую активацию NK-клеток человека в присутствии клеток, экспрессирующих опухолеассоциированный антиген.

В определенных вариантах осуществления мультиспецифические белки, описываемые в настоящем документе, которые включают участок связывания для NKG2D и участок связывания для опухолеассоциированного антигена, выбранного из любого из антигенов, представленных в таблице 11, повышают активность покоящихся и IL-2-активированных NK-клеток человека, которые совместно культивируются с клетками, экспрессирующими опухолеассоциированный антиген.

В определенных вариантах осуществления по сравнению с соответствующим моноклональным антителом, которое связывается с опухолеассоциированным антигеном, выбранным из любого из антигенов, представленных в таблице 11, мультиспецифические белки предлагают преимущество в нацеливании на опухолевые клетки, которые экспрессируют опухолеассоциированный антиген. Мультиспецифические связывающие белки, описываемые в настоящем документе, могут быть более эффективным для уменьшения роста опухоли и уничтожения злокачественных клеток.

В определенных вариантах осуществления EpCAM-нацеленный F4-TriNKET (например, NKG2D-связывающий-F4-TriNKET-EpCAM) уничтожает клетки-мишени более эффективно, чем родительское мАТ, нацеленное на EpCAM. В определенных вариантах осуществления F4-TriNKET также уничтожает клетки-мишени более эффективно, чем F3'-TriNKET (например, NKG2D-связывающий-F3'-TriNKET-EpCAM), что может быть отражением более сильного связывания F4-TriNKET с клетками-мишенями.

III. Терапевтические применения

Изобретение относится к способам лечения злокачественной опухоли с использованием мультиспецифического связывающего белка, описываемого в настоящем документе, и/или фармацевтической композиции, описываемой в настоящем документе. Способы можно использовать для лечения ряда злокачественных опухолей, которые экспрессируют EPCAM, путем введения нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества мультиспецифического связывающего белка, описываемого в настоящем документе.

Терапевтический способ можно охарактеризовать в зависимости от злокачественной опухоли, подлежащей лечению. Например, в определенных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой острый миелолейкоз, множественную миелому, диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому, тимому, аденокистозную карциному, злокачественную опухоль желудочно-кишечного тракта, злокачественную опухоль почки, рак молочной железы, глиобластому, рак легких, рак яичников, злокачественную опухоль головного мозга, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы или меланому.

В других конкретных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой солидную опухоль. В других конкретных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой рак толстого кишечника, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, злокачественную опухоль эндометрия, рак пищевода, лейкоз, рак печени, злокачественную опухоль прямой кишки, рак желудка, рак яичка, или рак матки. Еще в одних вариантах осуществления, злокачественная опухоль представляет собой васкуляризированную опухоль, плоскоклеточную карциному, аденокарциному, мелкоклеточную карциному, меланому, глиому, нейробластому, саркому (например, ангиосаркому или хондросаркому), злокачественную опухоль глотки, злокачественную опухоль околоушных желез, злокачественную опухоль желчевыводящих путей, рак щитовидной железы, акральную лентигинозную меланому, актинические кератозы, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелолейкоз, аденокистозную карциному, аденомы, аденосаркому, аденосквамозную карциному, злокачественную опухоль анального канала, злокачественную опухоль заднего прохода, анально-ректальную злокачественную опухоль, астроцитарную опухоль, карциному бартолиниевых желез, базально-клеточную карциному, злокачественную опухоль желчного пузыря, злокачественную опухоль кости, злокачественную опухоль костного мозга, злокачественную опухоль бронхов, карциному бронхиальных лимфатических узлов, карциноид, холангиокарциному, хондросаркому, папиллому/карциному сосудистого сплетения, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелолейкоз, светлоклеточную карциному, злокачественную опухоль соединительной ткани, цистаденому, злокачественную опухоль пищеварительной системы, злокачественную опухоль двенадцатиперстной кишки, злокачественную опухоль эндокринной системы, опухоль эндодермального синуса, гиперплазию эндометрия, саркома стромы эндометрия, аденокарциному эндометриоида, злокачественную опухоль эндотелиальных клеток, эпендимальную злокачественную опухоль, злокачественную опухоль эпителиальных клеток, саркому Юинга, злокачественную опухоль глаза и орбиты, злокачественную опухоль женских половых органов, узловую фокальную гиперплазию, рак желчного пузыря, злокачественную опухоль привратника желудка, злокачественную опухоль луковицы желудка, гастриному, глиобластому, глюкагоному, злокачественную опухоль сердца, гемангиобластомы, гемангиоэндотелиому, гемангиомы, аденому печени, печеночный аденоматоз, гепатобилиарную злокачественную опухоль, печеночноклеточную карциному, болезнь Ходжкина, злокачественную опухоль тонкой кишки, инсулинoму, интраэпителиальную неоплазию, межэпителиальную плоскоклеточную неоплазию, злокачественную опухоль внутрипеченочного желчного протока, инвазивную плоскоклеточную карциному, злокачественную опухоль тощей кишки, злокачественную опухоль сустава, саркому Капоши, злокачественную опухоль таза, крупноклеточную карциному, злокачественную опухоль толстой кишки, лейомиосаркому, меланомы типа злокачественного лентиго, лимфому, злокачественную опухоль мужских половых органов, злокачественную меланому, злокачественные мезотелиальные опухоли, медуллобластому, медуллоэпителиому, злокачественную опухоль менингеальной оболочки, злокачественную опухоль мезотелия, метастатическую карциному, злокачественную опухоль ротовой полости, мукоэпидермоидную карциному, множественную миелому, злокачественную опухоль мышечной ткани, злокачественную опухоль назального тракта, злокачественную опухоль нервной системы, нейроэпителиальную аденокарциному, узловую меланому, неэпителиальный рак кожи, неходжкинскую лимфому, овсяноклеточную карциному, злокачественную опухоль олигодендроглии, злокачественную опухоль пероральной полость, остеосаркому, папиллярную серозную аденокарциному, злокачественную опухоль пениса, злокачественную опухоль гортани, опухоли гипофиза, плазмоцитому, псевдосаркому, легочную бластому, злокачественную опухоль прямой кишки, почечноклеточную карциному, злокачественную опухоль дыхательной системы, ретинобластому, рабдомиосаркому, саркому, серозную карциному, злокачественную опухоль синуса, рак кожи, мелкоклеточную карциному, злокачественную опухоль тонкого кишечника, злокачественную опухоль гладкой мышечной ткани, злокачественную опухоль мягких тканей, соматостатин-секретирующую опухоль, злокачественную опухоль позвоночника, плоскоклеточную карциному, злокачественную опухоль поперечнополосатой мышечной ткани, злокачественную опухоль субмезотелия, поврехностную распространяющуюся меланому, T-клеточный лейкоз, злокачественную опухоль языка, недифференцированную карциному, злокачественную опухоль мочеточника, злокачественную опухоль уретры, рак мочевого пузыря, злокачественную опухоль мочеиспускательной системы, злокачественную опухоль шейки матки, злокачественную опухоль тела матки, увеальную меланому, злокачественную опухоль влагалища, веррукозную карциному, ВИПому, злокачественную опухоль, хорошо дифференцированную карциному, или опухоль Вильмса.

В других конкретных вариантах осуществления злокачественная опухоль представляет собой неходжкинскую лимфому, такую как B-клеточная лимфома или T-клеточная лимфома. В определенных вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой B-клеточную лимфому, такую как диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома, первичная медиастинальная B-клеточная лимфома, фолликулярная лимфома, мелкоклеточная лимфома, лимфома мантийных клеток, B-клеточная лимфома маргинальной зоны, экстраузловая B-клеточная лимфома маргинальной зоны, узловая B-клеточная лимфома маргинальной зоны, B-клеточная лимфома маргинальной зоны селезенки, лимфома Беркитта, лимфоплазмоцитарная лимфома, волосатоклеточный лейкоз, или первичная лимфома центральной нервной системы (ЦНС). В других конкретных вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой Т-клеточную лимфому, такую как лимфома предшественников T-лимфобластов, лимфома периферических T-клеток, лимфома T-клеток кожи, ангиоиммунобластная T-клеточная лимфома, экстраузловая лимфома естественных киллеров киллер/T-клеток, T-клеточная лимфома энтеропатического типа, подкожная панникулитоподобная Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома, или лимфома периферических T-клеток.

Злокачественную опухоль, подлежащую лечению, можно охарактеризовать по наличию определенного антигена, экспрессируемого на поверхности злокачественной клетки. В определенных вариантах осуществления злокачественная клетка может экспрессировать один или более следующих антигенов в дополнение к EpCAM: CD2, CD19, CD20, CD30, CD38, CD40, CD52, CD70, EGFR/ERBB1, IGF1R, HER3/ERBB3, HER4/ERBB4, MUC1, TROP2, cMET, SLAMF7, PSCA, MICA, MICB, TRAILR1, TRAILR2, MAGE-A3, B7.1, B7.2, CTLA4, и PD1.

В некоторых других вариантах осуществления, когда второй участок связывания связывает EpCAM, злокачественная опухоль для лечения выбрана из рака головы и шеи, рака яичников, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, рака предстательной железы, рака желудка, рака печени, рака пищевода, и рака легких. В некоторых других вариантах осуществления, когда второй участок связывания связывает антиген, выбранный из антигена злокачественной опухоли 125 (CA125), натрий-фосфатного котранспортера 2B (NaPi2b), молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), фукозил-GM1 (моносиалтетрагексозилганглиозида), белка 8, содержащего домен дизинтегрина и металлопротеиназы (ADAM8), белка 9, содержащего домен дизинтегрина и металлопротеиназы (ADAM9), члена 4 семейства 44 растворимых переносчиков (SLC44A4), и сиалированного антигена Льюиса (CA19-9), злокачественная опухоль для лечения выбрана из рака яичников, злокачественной опухоли эндометрия, рака поджелудочной железы, рака легких, рака щитовидной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, мелкоклеточного рака легких, нейробластомы, рака печени, злокачественной опухоли почки, меланомы, рака шейки матки, рака предстательной железы, остеосаркомы, злокачественной опухоли головного мозга, рака желудка, холангиокарциномы.

IV. Комбинированное лечение

Другой аспект изобретения относится к комбинированному лечению. Мультиспецифический связывающий белок, описываемый в настоящем документе, можно использовать в комбинации с дополнительными терапевтическими средствами для лечения злокачественной опухоли.

Примеры терапевтических средств, которые можно использовать в качестве части комбинированного лечения для лечения злокачественной опухоли, включают, например, облучение, митомицин, третиноин, рибомустин, гемцитабин, винкристин, этопозид, кладрибин, митобронитол, метотрексат, доксорубицин, карбоквон, пентостатин, нитракрин, зиностатин, цетрореликс, летрозол, ралтитрексед, даунорубицин, фадрозол, фотемустин, тималфазин, собузоксан, недаплатин, цитарабин, бикалутамид, винорелбин, веснаринон, амиглютетимид, амсакрин, проглюмид, эллиптиния ацетат, кетансерин, доксифлуридин, этретинат, изотретиноин, стрептозоцин, нимустин, виндезин, флутамид, дрогенил, бутоцин, кармофур, разоксан, сизофилан, карбоплатин, митолактол, тегафур, ифосфамид, преднимустин, пицибанил, левамизол, тенипозид, импросульфан, эноцитабин, лизурид, оксиметолон, тамоксифен, прогестерон, мепитиостан, эпитиостанол, форместан, интерферон-альфа, интерферон-2 альфа, интерферон-бета, интерферон-гамма (ИФН-γ), колониестимулирующий фактор-1, колониестимулирующий фактор-2, денилейкин дифтитокс, интерлейкин-2, высвобождающий фактор лютеинизирующего гормона, и вариации указанных выше веществ, которые могут проявлять дифференциальное связывание с их родственным рецептором, а также увеличивать или уменьшать время полувыведения из сыворотки.

Дополнительным классом веществ, которые можно использовать как часть комбинированной терапии при лечении рака, являются ингибиторы контрольных точек иммунного ответа. Типичные ингибиторы контрольных точек иммунного ответа включают вещества, которые ингибируют один или более из (i) цитотоксического T-лимфоцит-ассоциированного антигена 4 (CTLA4), (ii) белка 1 программируемой гибели клеток (PD1), (iii) PDL1, (iv) LAG3, (v ) B7-H3, (vi) B7-H4 и (vii) TIM3. Ингибитор CTLA4 ипилимумаб был одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США для лечения меланомы.

Другими агентами, которые можно использовать в качестве части комбинированной терапии при лечении рака, являются моноклональные антитела, которые нацелены на мишени, не связанные с контрольными точками (например, герцептин) и нецитотоксические средства (например, ингибиторы тирозинкиназы).

Другие категории противораковых средств включают, например: (i) ингибитор, выбранный из ингибитора ALK, ингибитора ATR, антагониста A2A, ингибитора эксцизионной репарации оснований, ингибитора Bcr-Abl тирозинкиназы, ингибитора тирозинкиназы Брутона, ингибитора CDC7, ингибитора CHK1, ингибитора циклин-зависимой киназы, ингибитора ДНК-протеинкиназы, ингибитора и ДНК-ПК и mTOR, ингибитора DNMT1, ингибитора DNMT1 плюс 2-хлор-дезоксиаденозина, ингибитора HDAC, ингибитора пути передачи сигнала Hedgehog, ингибитора IDO, ингибитора JAK, ингибитора mTOR, ингибитора MEK, ингибитора MELK, ингибитора MTH1, ингибитора PARP, ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, ингибитора и PARP1, и DHODH, ингибитора протеасомы, ингибитора топоизомеразы-II, ингибитора тирозинкиназы, ингибитора VEGFR, и ингибитора WEE1; (ii) агонист OX40, CD137, CD40, GITR, CD27, HVEM, TNFRSF25, или ICOS; и (iii) цитокин, выбранный из IL-12, IL-15, GM-CSF, и G-CSF.

Белки по изобретению также можно использовать в качестве дополнения к хирургическому удалению первичного поражения.

Можно выбирать количество мультиспецифического связывающего белка и дополнительного терапевтического средства и относительное время введения для достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта. Например, при введении комбинированного лечения пациенту, нуждающемуся в таком введении, терапевтические средства в комбинации, или фармацевтическая композиция или композиции, содержащие терапевтические средства, можно вводить в любом порядке, таком как, например, последовательно, параллельно, вместе, одновременно и т. п. Кроме того, например, мультиспецифический связывающий белок можно вводить в то время, когда дополнительное терапевтическое средство (средства) оказывает свое профилактическое или терапевтическое действие, или наоборот.

V. Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат терапевтически эффективное количество белка, описываемого в настоящем документе. Композицию можно формулировать для применения в ряде систем доставки лекарственных средств. Один или более физиологически приемлемых эксципиентов или носителей также могут быть включены в композицию для надлежащего состава. Подходящие составы для применения в настоящем изобретении можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Па., 17th ed., 1985. Для краткого обзора способов доставки лекарственных средств, см., например, Langer (Science 249:1527-1533, 1990).

Фармацевтические композиции могут содержать терапевтически эффективное количество мультиспецифического связывающего белка, содержащего сайт для антигенов (перечислены в таблице 11).

Состав для внутривенной доставки лекарственного средства по настоящему изобретению может содержаться в пакете, ручке или шприце. В определенных вариантах осуществления пакет может быть соединен с каналом, содержащим трубку и/или иглу. В определенных вариантах осуществления состав может быть лиофилизированным составом или жидким составом. В определенных вариантах осуществления состав может быть высушен замораживанием (лиофилизирован) и содержится примерно в 12-60 флаконах В определенных вариантах осуществления состав может быть лиофилизирован, и 45 мг лиофилизированного состава может содержаться в одном флаконе. В одном флаконе может содержаться 100 мг лиофилизированного состава. В определенных вариантах разрешения лиофилизированный состав из 12, 27 или 45 флаконов объединяют для получения терапевтической дозы белка в составе для внутривенного введения лекарственного средства. В определенных вариантах осуществления состав может быть жидким составом и храниться как приблизительно от 250 мг/флакон до приблизительно 1000 мг/флакон. В определенных вариантах осуществления состав может быть жидким составом и храниться в виде приблизительно 600 мг/флакон. В определенных вариантах осуществления состав может представлять собой жидкий состав и храниться в виде приблизительно 250 мг/флакон.

Белок может существовать в жидком водном фармацевтическом составе, включая терапевтически эффективное количество белка в буферном растворе, образующем состав.

Эти композиции можно стерилизовать общепринятыми способами стерилизации или можно стерильно фильтровать. Полученные водные растворы могут быть упакованы можно упаковывать для применения «как есть» или лиофилизировать. Лиофилизированнный препарат комбинируют со стерильным водным носителем до введения. рН препаратов, как правило, будет между 3 и 11, более предпочтительно между 5 и 9 или между 6 и 8, и наиболее предпочтительно между 7 и 8, такой как от 7 до 7,5. Полученные композиции в твердой форме можно упаковывать в упаковки с множеством единиц однократной дозы, каждая из которых содержит фиксированное количество указанного выше агента или агентов. Композиция в твердой форме также может быть упакована в контейнер для гибкого количества.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к составу с увеличенным сроком годности, включающему белок по настоящему изобретению в комбинации с маннитом, моногидратом лимонной кислоты, цитратом натрия, дифосфат натрия дигидратом, натрий дигидроген фосфат дигидратом, хлоридом натрия, полисорбатом 80, водой, и гидроксидом натрия.

В определенных вариантах осуществления получают водный состав, включающий белок по настоящему изобретению в pH-забуференном растворе. Буфер по настоящему изобретению может иметь pH в диапазоне приблизительно от 4 до приблизительно 8, например, приблизительно от 4,5 до приблизительно 6,0, или приблизительно от 4,8 до приблизительно 5,5, или может иметь pH приблизительно от 5,0 до приблизительно 5,2. Диапазоны, промежуточные по отношению к указанным выше значениям pH, также должны быть частью этого изобретения. Например, диапазоны значений, использующие комбинацию любого из приведенных выше значений в качестве верхнего и/или нижнего пределов, должны быть включены. Примеры буферов, которые будут контролировать pH в пределах этого диапазона, включают ацетат (например, ацетат натрия), сукцинат (такой как сукцинат натрия), глюконат, гистидин, цитрат и другие буферы на основе органических кислот.

В определенных вариантах осуществления состав включает буферную систему, которая содержит цитрат и фосфат для поддержания pH в диапазоне приблизительно от 4 до приблизительно 8. В определенных вариантах осуществления диапазон pH может составлять приблизительно от 4,5 до 6,0 или приблизительно от рН 4,8 до приблизительно 5,5, или в диапазоне рН приблизительно от 5,0 до приблизительно 5,2. В определенных вариантах осуществления буферная система включает моногидрат лимонной кислоты, цитрат натрия, дифосфат натрия дигидрат и/или натрий дигидроген фосфат дигидрат. В определенных вариантах осуществления буферная система включает приблизительно 1,3 мг/мл лимонной кислоты (например, 1,305 мг/мл), приблизительно 0,3 мг/мл цитрата натрия (например, 0,305 мг/мл), приблизительно 1,5 мг/мл дифосфат натрия дигидрата (например, 1,53 мг/мл), приблизительно 0,9 мг/мл натрия дигидроген фосфат дигидрата (например, 0,86) и приблизительно 6,2 мг/мл хлорида натрия (например , 6,165 мг/мл). В определенных вариантах осуществления буферная система включает 1-1,5 мг/мл лимонной кислоты, от 0,25 до 0,5 мг/мл цитрат натрия, от 1,25 до 1,75 мг/мл дифосфат натрия дигидрата и от 7 до 1,1 мг/мл натрий дигидроген фосфат дигидрата и от 6,0 до 6,4 мг/мл хлорид натрия. В определенных условиях рН состава корректируют с помощью гидроксида натрия.

Полиол, который действует как средство для тоничности и может стабилизировать антитело, также можно включать в состав. Полиол добавляют в состав в количестве, которое может варьироваться в зависимости от желаемой изотоничности состава. В определенных вариантах разрешения водный состав может быть изотоническим. Количество добавляемого полиола также может быть изменено относительно молекулярной массы полиола. Например, меньшее количество моносахаридов (например, маннит) можно добавлять по сравнению с дисахаридами (такими как трегалоза). В определенных вариантах осуществления полиол, который можно использовать в составе как средство придания тоничности, представляет собой маннит. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может быть примерно от 5 до примерно 20 мг/мл. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно от 7,5 до 15 мг/мл. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно 10-14 мг/мл. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно 12 мг/мл. В определенных вариантах осуществления в состав можно включать полиол сорбит.

В состав также можно добавлять детергент или поверхностно-активное вещество. Типичные детергенты включают неионные детергенты, такие как полисорбаты (например, полисорбаты 20, 80 и т.д.) или полоксамеры (например, полоксамер 188). Количество добавленного детергента таково, что оно уменьшает агрегацию сформулированного антитела и/или сводит к минимуму образование частиц в составе и/или уменьшает адсорбцию В определенных вариантах осуществления состав может включать входить поверхностно-активное вещество, такое какполисорбат. В определенных вариантах осуществления состав может содержать детергент полисорбат 80 или Твин 80. Твин 80 представляет собой термин, используемый для описания полиоксиэтилен (20) сорбитанмоноолеата (см. Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th ed., 1996). В определенных вариантах осуществления состав может содержать приблизительно от 0,1 мг/мл и приблизительно до 10 мг/мл полисорбата 80 или приблизительно от 0,5 мг/мл и приблизительно до 5 мг мл. В определенных вариантах осуществления в состав можно добавлять приблизительно 0,1% полисорбата 80.

В вариантах осуществления, белковый продукт по настоящему изобретению формулируют в виде жидкого состава. Жидкий состав может быть представлен в концентрации 10 мг/мл в флаконе USP/Ph Eur типа I 50R, закрытом резиновой пробкой и герметизированным алюминиевым обжимным уплотнением. Пробка может быть изготовлена из эластомера, соответствующего USP и Ph Eur. В определенных вариантах осуществления флаконы могут быть заполнены 61,2 мл раствора белкового продукта, чтобы обеспечить извлекаемый объем 60 мл. В определенных вариантах осуществления жидкость может быть разбавлена 0,9% физиологическим раствором.

В определенных вариантах осуществления жидкий состав по изобретению можно получать в виде раствора с концентрацией 10 мг/мл в комбинации с сахаром в стабилизирующих уровнях. В определенных вариантах осуществления жидкий состав можно получать в водном носителе. В определенных вариантах осуществления стабилизатор можно добавлять в количестве, не большем того, которое может привести к нежелательной вязкости или непригодности для внутривенного введения. В определенных вариантах осуществления сахар может быть дисахаридами, например, сахарозой. В определенных вариантах осуществления жидкий состав также может включать один или более из буферного средства, поверхностно-активного вещества и консерванта.

В определенных вариантах осуществления pH жидкого состава можно устанавливать, добавляя фармацевтически приемлемую кислоту и/или основание. В определенных вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может быть соляной кислотой. В определенных вариантах осуществления основание может быть гидроксидом натрия.

В дополнение к агрегации, дезамидирование является распространенным вариантом продукта пептидов и белков, которое может происходить во время ферментации, сбора/очищения клеток, очистки, хранения лекарственного вещества/лекарственного продукта и во время анализа образца. Дезамидирование представляет собой потерю NH3 из белка, образующего сукцинимидное промежуточное соединение, которое может подвергаться гидролизу. Сукцинимидное промежуточное соединение приводит к снижению массы родительского пептида на 17 дальтон. Последующий гидролиз приводит к увеличению массы на 18 Дальтон. Выделение сукцинимидного промежуточного соединения затруднено из-за нестабильности в водных условиях. Таким образом, дезамидирование, как правило, определяют как увеличение массы на 1 дальтон. Дезамидирование аспарагина приводит либо к аспарагиновой, либо к изоаспарагиновой кислоте. Параметры, влияющие на скорость дезамидирования, включают pH, температуру, диэлектрическую проницаемость растворителя, ионную силу, первичную последовательность, локальную полипептидную конформацию и третичную структуру. Аминокислотные остатки, соседствующие с Asn в пептидной цепи, влияют на показатели дезамидирования. Gly и Ser, следующие за Asn в последовательностях белков, приводят к более высокой восприимчивости к дезамидированию.

В определенных вариантах осуществления жидкий состав по настоящему изобретению можно хранить в условиях pH и влажности, предотвращающих дезаминирование белкового продукта.

Водный носитель, представляющий интерес, в настоящем документе является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и пригодным для получения жидкого состава. Примеры носителей включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), pH-забуференный раствор (например, фосфатно-солевой буфер), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

Консервант можно необязательно добавлять в составы в настоящем документе, чтобы уменьшить бактериальное действие. Добавление консерванта может, например, облегчить производство многоразового (с многократной дозой) состава.

Составы для внутривенного (в/в) введения могут быть предпочтительным способом введения, в частности, в случаях, когда пациент находится в госпитале после трансплантации, получая все лекарственные средства через в/в введение. В определенных вариантах осуществления жидкий состав разбавляют 0,9% хлоридом натрия раствор перед введением. В определенных вариантах осуществления разведенный лекарственный продукт для инъекции является изотоническим и подходит для введения путем внутривенного вливания.

В определенных вариантах осуществления солевые или буферные компоненты можно добавлять в количестве 10 мМ-200 мМ. Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различныхизвестных кислот (неорганических и органических) с «основаниеобразующими» металлами или аминами. В определенных вариантах осуществления буфер может быть фосфатным буфером. В определенных вариантах осуществления буфер может быть глицинатом, карбонатом, цитратом, в этом случае, ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.

Консервант можно необязательно добавлять в составы в настоящем документе, чтобы уменьшить бактериальное действие. Добавление консерванта может, например, облегчить производство многоразового (с многократной дозой) состава.

Водный носитель, представляющий интерес, в настоящем документе является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и пригодным для получения жидкого состава. Примеры носителей включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), pH-забуференный раствор (например, фосфатно-солевой буфер), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

Белок по настоящему изобретению может существовать в виде лиофилизированного состава, включающего белки и лиопротектор. Липротектор может быть сахаром, например, дисахаридами. В определенных вариантах осуществления лиопротектор может быть сахарозой или мальтозой. Лиофилизированный состав также может включать один или более из буферного средства, поверхностно-активного вещества и консерванта.

Количество сахарозы или мальтозы, подходящее для стабилизации лиофилизированного лекарственного продукта может находиться в массовом отношении, по меньшей мере, 1:2 белка к сахарозе или мальтозе. В определенных вариантах осуществления массовое отношение белка к сахарозе или мальтозе может составлять от 1:2 до 1:5.

В определенных вариантах осуществления pH состава перед лиофилизацией можно устанавливать, добавляя фармацевтически приемлемую кислоту и/или основание. В определенных вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может быть соляной кислотой. В определенных вариантах осуществления основание может быть гидроксидом натрия.

Перед лиофилизацией, pH раствора, содержащего белок по настоящему изобретению, можно корректировать от 6 до 8. В определенных вариантах осуществления диапазон pH для лиофилизированного лекарственного продукта может быть от 7 до 8.

В определенных вариантах осуществления солевые или буферные компоненты можно добавлять в количестве 10 мМ-200 мМ. Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различныхизвестных кислот (неорганических и органических) с «основаниеобразующими» металлами или аминами. В определенных вариантах осуществления буфер может быть фосфатным буфером. В определенных вариантах осуществления буфер может быть глицинатом, карбонатом, цитратом, в этом случае, ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.

В определенных вариантах осуществления можно добавлять «наполнитель» можно добавлять. «Наполнитель» представляет собой соединение, которое добавляет массу лиофилизированной смеси и вносит вклад в физическую структуру лиофилизированной массы (например, облегчает производство по существу однородной лиофилизированной массы, которая сохраняет открытопористую структуру). Примеры наполнителей включают маннит, глицин, полиэтиленгликоль и сорбит. Лиофилизированные составы по настоящему изобретению могут содержать такие наполнители.

Консервант можно необязательно добавлять в составы в настоящем документе, чтобы уменьшить бактериальное действие. Добавление консерванта может, например, облегчить производство многоразового (с многократной дозой) состава.

В определенных вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт можно восстанавливать водным носителем. Водный носитель, представляющий интерес, в настоящем документе является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и пригодным для получения жидкого состава. Примеры носителей включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), pH-забуференный раствор (например, фосфатно-солевой буфер), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

В определенных вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт восстанавливают или стерильной водой для инъекций, USP (SWFI) или 0,9% хлоридом натрия для инъекций, USP. После восстановления лиофилизированный порошок растворяют в растворе.

В определенных вариантах осуществления лиофилизированный белковый продукт по настоящему изобретению востанавливают приблизительно до 4,5 мл водой для инъекций и разводят 0,9% физиологическим раствором (раствором хлорида натрия).

Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях по настоящему изобретению могут варьироваться для получения количества активного ингредиента, которое эффективно для достижения желаемого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения, без токсичности для пациента.

Конкретная доза может представлять собой унифицированную дозу для каждого пациента, например, 50-5000 мг белка. Альтернативно, доза пациента может быть адаптирована к приблизительной массе тела или площади поверхности пациента. Другие факторы, определяющие подходящую дозировку, могут включать заболевание или состояние, подлежащее лечению или профилактике, тяжесть заболевания, способ введения, возраст, пол и медицинское состояние пациента. Специалисты в данной области регулярно проводят дальнейшие уточнения расчетов, необходимых для определения подходящей дозировки для лечения, особенно в свете информации о дозировке и анализах описываемой в в настоящем документе. Доза также может быть определена путем использования известных анализов для определения доз, используемых в сочетании с соответствующими данными доза-ответ. Доза для индивидуального пациента может быть скорректирована по мере мониторинга прогрессирования заболевания. Уровни нацеленной конструкции или комплекса в крови пациента для того, чтобы увидеть есть ли необходимость скорректировать дозу для достижения или поддержания эффективной концентрации. Можно использовать фармакогеномику для определения того, какие нацеленные конструкции и/или комплексы и их дозы наиболее вероятно будут эффективны для данного индивидуума (Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimer et al., Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001).

В основном, дозировки, основанные на массе тела, составляют приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 100 мг на кг массы тела, так как приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 100 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 50 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 10 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 1 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,01 мкг до приблизительно 0,1 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 100 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 10 мкг/кг массы тела, приблизительно от 0,1 мкг до приблизительно 1 мкг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 100 мкг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 50 мкг/кг массы тела, приблизительно от 1 мкг до приблизительно 10 мкг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 100 мкг/кг массы тела, приблизительно от 10 мкг до приблизительно 50 мкг/кг массы тела, приблизительно от 50 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 50 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 50 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 50 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 50 мкг до приблизительно 100 мкг/кг массы тела, приблизительно от 100 мкг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 100 мкг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 100 мкг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 100 мкг до приблизительно 1 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 1 мг до приблизительно 10 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мг до приблизительно 100 мг/кг массы тела, приблизительно от 10 мг до приблизительно 50 мг/кг массы тела, приблизительно от 50 мг до приблизительно 100 мг/кг массы тела.

Дозы можно вводить один или более раз в день, еженедельно, ежемесячно или ежегодно или даже один раз каждые 2-20 лет. Специалисты в данной области могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основе измеренной продолжительности обработки и концентраций наводящейся на мишень конструкции или комплекса в телесных жидкостях или тканях. Введение по настоящему изобретению может быть внутривенным, внутриартериальным, интраперитонеальным, внутримышечным, подкожным, интраплевральным, интратекальным, внутриполостным, путем перфузии через катетер или путем прямой внутриочаговой инъекции. Можно вводить один или более раз в день, один или более раз в неделю, один или более раз в месяц и один или более раз ежегодно.

Вышеприведенное описание описывает множество аспектов и вариантов осуществления изобретения. Патентная заявка специально рассматривает все комбинации и сочетания аспектов и вариантов осуществления.

ПРИМЕРЫ

Изобретение, которое к настоящему моменту, в основном, описано, будет более понятно со ссылкой на следующие примеры примеры, которые включены только в целях иллюстрации определенных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения и не предназначены для ограничения изобретения.

Пример 1 - NKG2D-связывающие домены связываются с NKG2D

NKG2D-связывающие домены связываются с очищенным рекомбинантным NKG2D

Последовательности нуклеиновой кислоты эктодоменов NKG2D человека, мыши или макаки сливали с последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующей Fc-домены человеческого IgG1 и вводили в клетки млекопитающих для экспрессии. После очистки слитые белки NKG2D-Fc адсорбировали в лунках микропланшетов. После блокирования лунок бычьим сывороточным альбумином для предотвращения неспецифического связывания, NKG2D-связывающие домены титровали и добавляли в лунки, предварительно покрытые слитыми белками NKG2D-Fc. Связывание первичного антитела определяли с использованием вторичного антитела, которое конъюгировано с пероксидазой хрена и специфически распознает легкую цепь каппа человека, чтобы избежать перекрестной реактивности Fc. 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (TMB), субстрат для пероксидазы хрена, добавляли в лунки для визуализации сигнала связывания, оптическую плотность которого измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. Клон NKG2D-связывающего домена, контроль изотипа или положительный контроль (включающий вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104, или клоны к мышиному NKG2D MI-6 и CX-5, доступные в eBioscience) добавляли в каждую лунку.

Контроль изотипа показал минимальное связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc, в то время как положительный контроль наиболее сильно связывался с рекомбинантными антигенами. NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, демонстрировали связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc человека, мыши и макаки, хотя с разными аффиностями от клона к клону. Как правило, каждый анти-NKG2D-клон, связавшийся с рекомбинантным NKG2D-Fc человека (фиг. 3) и макаки (фиг. 4), имеет сходную аффинность, но более низкую аффинность к рекомбинантному NKG2D-Fc мыши (фиг. 5).

NKG2D-связывающие домены связываются с клетками, экспрессирующими NKG2D

Линии клеток мышиной лимфомы EL4 были сконструированы для экспрессии рецепторов химерного антигена NKG2D-сигнальный домен зета CD3 человека или мыши. NKG2D-связывающий клон, контроль изотипа или положительный контроль использовали в концентрации 100 нМ для окрашивания внеклеточного NKG2D, экспрессированного на клетках EL4. Связывание антител определяли с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии и рассчитывали кратность по отношению к фоновым значениям (FOB) с использованием средней интенсивности флуоресценции (MFI) NKG2D-экспрессирующих клеток по сравнению с родительскими клетками EL4.

NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, связались с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D человека и мыши. Антитела положительного контроля (содержащие вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104 или антимышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные в eBioscience) дали наилучшую FOB сигнала связывания. Аффинность связывания NKG2D- для каждого клона была сходной между клетками, экспрессирующими человеческий NKG2D (фигура 6) и мышиный (фигура 7) NKG2D.

Пример 2 - NKG2D-связывающие домены блокируют связывание природного лиганда с NKG2D

Конкуренция с ULBP-6

Рекомбинантные человеческие белки NKG2D-Fc адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для уменьшения неспецифического связывания. Насыщающую концентрацию ULBP-6-His-биотина добавляли в лунки с последующим добавлением клонов домена, связывающего NKG2D. После двухчасовой инкубации лунки промывали, и детектировали ULBP-6-His-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми NKG2D-Fc, с помощью стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена и субстратом TMB. Оптическую плотность измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона рассчитывали специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc по проценту ULBP-6-His-биотина, который блокировался от связывания с белками NKG2D-Fc в лунках. Антитело положительного контроля (содержащее вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание ULBP-6 с NKG2D, в то время как контроль изотипа показал незначительную конкуренцию с ULBP-6 (фиг. 8).

Последовательность ULBP-6 представлена SEQ ID NO:108

MAAAAIPALLLCLPLLFLLFGWSRARRDDPHSLCYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTMAWKAQNPVLREVVDILTEQLLDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSIDGQTFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKDVAMSFHYISMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAPLAMSSGTTQLRATATTLILCCLLIILPCFILPGI (SEQ ID NO:108)

Конкуренция с MICA

Рекомбинантные человеческие белки MICA-Fc адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для уменьшения неспецифического связывания. NKG2D-Fc-биотин добавляли к лункам, а затем NKG2D-связывающие домены. После инкубации и промывания, NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с MICA-Fc, покрывающим лунки, детектировали с использованием стрептавидина-HRP и субстрата TMB. Оптическую плотность измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона рассчитывали специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc по проценту NKG2D-Fc-биотина, который был блокирован от связывания с MICA-Fc, покрывающим лунки. Антитело положительного контроля (содержащее вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание MICA с NKG2D, в то время как контроль изотипа показал незначительную конкуренцию с MICA (фиг. 9).

Конкуренция с Rae-1 дельта

Рекомбинантный мышиный Rae-1delta-Fc (приобретенный у R&D Systems) адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для уменьшения неспецифического связывания. Мышиный NKG2D-Fc-биотин добавляли к лункам, а затем NKG2D-связывающие домены. После инкубации и промывания, NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с Rae-1delta-Fc, покрывающим лунки, детектировали с использованием стрептавидина-HRP и субстрата TMB. Оптическую плотность измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона рассчитывали специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc по проценту NKG2D-Fc-биотина, который был блокирован от связывания с Rae-1delta-Fc, покрывающим лунки. Положительный контроль (содержащий вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104, или клоны против мышиного NKG2D MI-6 и CX-5, доступные у eBioscience) и различные клоны доменов, связывающих NKG2D, блокировали связывание Rae-1delta с мышиным NKG2D, в то время как контрольное изотипическое антитело показало незначительную конкуренцию с Rae-1delta (фиг. 10).

Пример 3 - Клоны доменов, связывающих NKG2D, активируют NKG2D

Последовательности нуклеиновой кислоты человеческого и мышиного NKG2D сливали с последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующей сигнальный домен CD3 зета для получения конструкций химерного рецептора антигена (CAR). Конструкции NKG2D-CAR затем клонировали в ретровирусный вектор с использованием сборки Гибсона и трансфицировали клетки expi293 для продукции ретровирусов. Клетки EL4 инфицировали вирусами, содержащими NKG2D-CAR, вместе с 8 мкг/мл полибрена. Через 24 часа после заражения, анализировали уровни экспрессии NKG2D-CAR в клетках EL4 путем проточной цитометрии, и выбирали клоны, которые экспрессировали высокие уровни NKG2D-CAR на клеточной поверхности.

Чтобы определить, активируют ли NKG2D-связывающие домены NKG2D, их адсорбировали в лунки микропланшета, а клетки NKG2D-CAR EL4 культивировали на лунках с покрытием из фрагмента антитела в течение 4 часов в присутствии брефелдина-A и монензина. Внутриклеточный TNF-α, показатель активации NKG2D, анализировали проточной цитометрией. Процент TNF-α-положительных клеток нормализовали по клеткам, обработанным положительным контролем. Все NKG2D-связывающие домены активировали и человеческий NKG2D (рис. 11), и мышиный NKG2D (рис. 12).

Пример 4 - NKG2D-связывающие домены активируют NK-клетки

Первичные человеческие NK-клетки

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкоцитарного слоя периферической крови человека с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки (CD3^-CD56⁺) выделяли из PBMC с использованием отрицательного отбора с помощью магнитных шариков, и чистота выделенных NK-клеток обычно составляла >95%. Затем выделенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл IL-2, в течение 24-48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированное с флуорофором анти-CD107a антитело, брефелдин-А и монензин. После культивирования NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител против CD3, CD56 и IFN-γ, конъюгированных с флуорофором. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3^-CD56⁺ для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества двойных положительных клеток CD107a/IFN-γ свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет вовлечения двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (например, вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO: 101 или SEQ ID NO: 103, и вариабельный домен легкой цепи, представленный SEQ ID NO: 102 или SEQ ID NO: 104), показали более высокий процент NK-клеток, становящихся CD107a⁺ и IFN-γ⁺, чем контроль изотипа (фиг. 13 и фиг. 14 представляют данные из двух независимых экспериментов, каждый из которых использует PBMC другого донора для получения NK-клеток).

Первичные мышиные NK-клетки

Селезенки получали от мышей C57Bl/6 и измельчали через сито с ячейками 70 мкм для получения суспензии отдельных клеток. Клетки осаждали и ресуспендировали в лизирующем буфере ACK (приобретенном у Thermo Fisher Scientific #A1049201; 155 мМ хлорида аммония, 10 мМ бикарбоната калия, 0,01 мМ EDTA) для удаления эритроцитов. Оставшиеся клетки культивировали с 100 нг/мл hIL-2 в течение 72 часов, а затем собирали и готовили для выделения NK-клеток. Затем NK-клетки (CD3^-NK1.1⁺) выделяли из клеток селезенки с использованием способа отрицательного истощения с использованием магнитных шариков, как правило, с чистотой >90%. Очищенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг мл mIL-15, в течение 48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированное с флуорофором анти-CD107a антитело, брефелдин-А и монензин. После культивирования в лунках, покрытых NKG2D-связывающими доменами, NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител против CD3, NK1.1 и IFN-γ, конъюгированных с флуорофором. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3^-NK1.1⁺ для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества двойных положительных клеток CD107a/IFN-γ свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет вовлечения двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (выбранный из клонов против мышиного NKG2D MI-6 и CX-5, доступных в eBioscience) показали более высокий процент клеток NK, становящихся CD107a⁺ и IFN-γ⁺, чем контроль изотипа (фиг. 15 и фиг.16 представляют данные из двух независимых экспериментов, в каждом из которых использовались различные мыши для приготовления NK-клеток).

Пример 5 - NKG2D-связывающие домены дают возможность цитотоксичности опухолевых клеток-мишеней

Анализы активации первичных NK-клеток человека и мыши продемонстрировали повышенные маркеры цитотоксичности для NK-клеток после инкубации с NKG2D-связывающими доменами. Чтобы определить, приводит ли это к усилению лизиса опухолевых клеток, был использован клеточный анализ, в котором каждый NKG2D-связывающий домен превращали в моноспецифическое антитело. Область Fc была использована в качестве одного нацеливающего плеча, тогда как области Fab-фрагмента (NKG2D-связывающий домен) действовали в качестве другого нацеливающего плеча для активации NK-клеток. Клетки THP-1, которые имеют человеческое происхождение и экспрессируют высокие уровни Fc-рецепторов, использовали в качестве опухолевой мишени и использовали набор для цитотоксичности Perkin Elmer DELFIA. Клетки THP-1 метили реагентом BATDA и ресуспендировали по 10⁵/мл в культуральной среде. Меченые клетки THP-1 затем объединяли с антителами NKG2D и выделенными мышиными NK-клетками в лунках планшета для микротитрования при 37°С в течение 3 часов. После инкубации удаляли 20 мкл супернатанта культуры, смешивали с 200 мкл раствора европия и инкубировали при встряхивании в течение 15 минут в темноте. Флуоресценцию измеряли с течением времени с помощью спектрофотометра для чтения планшетов PheraStar, оборудованного модулем флуоресценции с разрешением по времени (возбуждение 337 нМ, излучение 620 нМ), и специфический лизис рассчитывали в соответствии с инструкциями к набору.

Положительный контроль, ULBP-6, естественный лиганд для NKG2D, конъюгированный с Fc, показал повышенный специфический лизис клеток-мишеней THP-1 мышиными NK-клетками. Антитела к NKG2D также усиливали специфический лизис клеток-мишеней THP-1, тогда как контрольное изотипическое антитело показало снижение специфического лизиса. Пунктирная линия указывает на специфический лизис клеток THP-1 мышиными NK-клетками без добавления антител (фигура 17).

Пример 6 - Антитела к NKG2D показывают высокую термостабильность

Температуру плавления NKG2D-связывающие доменов анализировали с помощью дифференциальной сканирующей флуориметрии. Экстраполированная кажущаяся температура плавления была высокой по сравнению с типичными антителами IgG1 (рис. 18).

Пример 7 - Синергетическая активация человеческих NK-клеток за счет перекрестного сшивания NKG2D и CD16

Анализ активации первичных NK-клеток человека

Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкоцитарного слоя периферической крови человека с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки очищали от РВМС с использованием отрицательных магнитных шариков (StemCell #17955). NK-клетки были >90% CD³-CD56⁺, как определено проточной цитометрией. Затем клетки размножали 48 часов в среде, содержащей 100 нг/мл hIL-2 (Peprotech #200-02), перед использованием в анализах активации. Антитела наносили на 96-луночный планшет с плоским дном в концентрации 2 мкг/мл (анти-CD16, Biolegend # 302013) и 5 мкг/мл (анти-NKG2D, R & D # MAB139) в 100 мкл стерильного PBS на ночь при 4°С с последующим тщательным промыванием лунок для удаления избытка антител. Для оценки дегрануляции IL-2-активированные NK-клетки ресуспендировали при 5×10⁵ клеток/мл в культуральной среде, дополненной 100 нг/мл человеческого IL-2 (hIL2) и 1 мкг/мл APC-конъюгированного анти-CD107a мАТ ( Biolegend # 328619). Затем на чашки, покрытые антителами, добавляли 1×10⁵ клеток/лунку. Ингибиторы транспорта белка Брефелдин А (BFA, Biolegend # 420601) и Монензин (Biolegend # 420701) добавляли в конечном разведении 1:1000 и 1:270, соответственно. Клетки на планшетах инкубировали в течение 4 часов при 37°С в 5% СО2. Для внутриклеточного окрашивания IFN-γ NK-клетки метили анти-CD3 (Biolegend # 300452) и анти-CD56 мАТ (Biolegend # 318328), а затем фиксировали, пермеабилизировали и метили анти-IFN-γ мАТ (Biolegend # 506507). NK-клетки анализировали на экспрессию CD107a и IFN-γ методом проточной цитометрии после отбора на живых CD56⁺ CD3^-клетках.

Чтобы исследовать относительную активность комбинации рецепторов, проводили перекрестное сшивание NKG2D или CD16 и совместное перекрестное сшивание обоих рецепторов посредством стимуляции, связанной с пластиной. Как показано на фигуре 19 (фигуры 19A-19C), комбинированная стимуляция CD16 и NKG2D приводила к сильно повышенным уровням CD107a (дегрануляция) (фигура 19A) и/или продукции IFN-γ (фигура 19B). Пунктирные линии представляют аддитивный эффект отдельных стимуляций каждого рецептора.

Уровни CD107a и внутриклеточную продукцию IFN-γ активированными IL-2 NK-клетками анализировали после 4 часов стимуляции, связанной с пластиной, с анти-CD16, анти-NKG2D или комбинацией обоих моноклональных антител. Графики показывают среднее (n=2) ± Sd. ФИГ. 19A демонстрирует уровни CD107a; ФИГ. 19B демонстрирует уровни IFN-γ; ФИГ. 19C демонстрирует уровни CD107a и IFN-γ. Данные, показанные на фиг. 19А-19С, представляют пять независимых экспериментов с использованием пяти различных здоровых доноров.

Пример 8 - Опосредованная триспецифическим связывающим белком (TriNKET) повышенная цитотоксичность клеток-мишеней

Оценка связывания TriNKET или мАТ с клеткой, экспрессирующей человеческие антигены злокачественных опухолей

Линии раковых клеток человека, экспрессирующие EPCAM, использовали для оценки связывания опухолевого антигена при помощи TriNKET, полученных из клона MT110, нацеленного на EPCAM, в форматах F4 и F3'. Линии клеток человека H747, HCC827 и HCT116 были использованы для оценки связывания TriNKET и мАТ с клеткой, экспрессирующей EPCAM. TriNKET или мАТ разбавляли и инкубировали с соответствующими клетками. Связывание детектировали с использованием вторичного антитела против человеческого IgG, конъюгированного с флуорофором. Клетки анализировали проточной цитометрией, связывание MFI с клетками, экспрессирующими EPCAM, нормализовали по окрашенным контролям с человеческим рекомбинантным IgG1, для получения кратности по сравнению с фоновыми значениями.

На фиг. 37 показано связывание триспецифических связывающих белков (TriNKET) по настоящему изобретению (A49-F4-TriNKET-MT110 и A49-F3'-TriNKET-MT110) и родительского моноклонального антитела (мАТ) с клетками колоректального рака человека H747, экспрессирующими EpCAM. ФИГ. 38 показывает связывание триспецифических связывающих белков (TriNKET) по настоящему изобретению (A49-F4-TriNKET-MT110 и A49-F3'-TriNKET-MT110) и родительского моноклонального антитела (мАТ) с клетками рака легких человека HCC827, экспрессирующими EpCAM. ФИГ. 39 показывает связывание триспецифических связывающих белков (TriNKET) по настоящему изобретению (A49-F4-TriNKET-MT110 и A49-F3'-TriNKET-MT110) и родительского моноклонального антитела (мАТ) с клетками колоректального рака человека HCT116, экспрессирующими EpCAM. Общее связывание было более сильным с F4-TriNKET по сравнению с F3'-TriNKET, который включает EPCAM-связывающее MT110.

Анализ цитотоксичности первичных NK-клеток человека

РВМС выделяли из лейкоцитарного слоя периферической крови человека с использованием центрифугирования в градиенте плотности. Выделенные РВМС отмывали и готовили для выделения NK-клеток. NK-клетки выделяли, используя метод отрицательного отбора с магнитными шариками. Достигнутая чистота выделенных NK-клеток обычно превышала 90% CD3^-CD56⁺. Выделенные NK-клетки инкубировали в течение ночи без цитокина и использовали на следующий день в анализах на цитотоксичность.

Анализ цитотоксичности DELFIA

Линии раковых клеток человека, экспрессирующие представляющую интерес мишень, собирали из культуры, промывали HBS и ресуспендировали в ростовой среде по 10⁶ клеток/мл для мечения реагентом BATDA (Perkin Elmer, AD0116). Следовали инструкциям производителя по мечению клеток-мишеней. После мечения клетки промывали 3 раза HBS и ресуспендировали по 0,5×10⁵ клеток/мл в культуральной среде. Для приготовления фоновых лунок аликвоту меченых клеток откладывали в сторону, и клетки извлекали из среды. 100 мкл среды аккуратно добавляли в лунки в трех повторах, чтобы не повредить осажденные клетки. 100 мкл BATDA-меченных клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета. Лунки были сохранены для спонтанного высвобождения из клеток-мишеней и подготовлены для лизиса клеток-мишеней путем добавления 1% Тритона-Х. Моноклональные антитела или TriNKET против интересующей опухолевой мишени разводили в культуральной среде, и 50 мкл разведенного мАТ или TriNKET добавляли в каждую лунку. Покоящиеся NK-клетки собирали из культуры, промывали и ресуспендировали при 1,0×10⁵-2,0×10⁶ клеток/мл в культуральной среде в зависимости от требуемого соотношения эффектор к клетке-мишени. 50 мкл NK-клеток добавляли в каждую лунку планшета для обеспечения общего объема культуры 200 мкл. Планшет инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 2-4 часов перед проведением анализа.

После культивирования в течение 2-3 часов планшет извлекали из инкубатора и клетки осаждали центрифугированием при 200×g в течение 5 минут. 20 мкл культурального супернатанта переносили в чистый микропланшет, предоставленный производителем, и 200 мкл раствора европия при комнатной температуре добавляли в каждую лунку. Планшет защищали от света и инкубировали на шейкере при 250 об/мин в течение 15 минут. Планшет считывали, используя прибор SpectraMax® i3X (Molecular Devices), и рассчитывали процент специфического лизиса (% специфического лизиса = (Экспериментальное высвобождение - спонтанное высвобождение)/(Максимальное высвобождение - спонтанное высвобождение))×100).

ФИГ. 40А и ФИГ. 40B TriNKET-опосредованная цитотоксичность покоящихся человеческих NK-клеток от двух разных здоровых доноров против раковых клеток H747 человека. ФИГ. 41А и ФИГ. 41B TriNKET-опосредованная цитотоксичность покоящихся человеческих NK-клеток от двух разных здоровых доноров против раковых клеток HCC827 человека. ФИГ. 42А и ФИГ. 42B TriNKET-опосредованная цитотоксичность покоящихся человеческих NK-клеток от двух разных здоровых доноров против раковых клеток человека MCF7. ФИГ. 43А и ФИГ. 43B TriNKET-опосредованная цитотоксичность покоящихся человеческих NK-клеток от двух разных здоровых доноров против раковых клеток HCT116 человека. F4-TriNKET, нацеленный на EPCAM, убивал клетки-мишени более эффективно, чем родительское мАТ, нацеленное на EPCAM. F4-TriNKET также убивал клетки-мишени более активно, чем F3'-TriNKET, что может быть отражением более сильного связывания F4-TriNKET с клетками-мишенями.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПУТЕМ ССЫЛКИ

Полное содержание каждого из патентных документов и научных статей, упомянутых в настоящем документе, включено в качестве ссылки для любых целей.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

Изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отступления от сущности изобретения или его существенных характеристик. Указанн выше варианты осуществления, таким образом, должны рассматриваться во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие изобретение, описываемое в настоящем документе. Таким образом, объем изобретения указан в прилагаемой формуле изобретения, а не в указанном выше описании, и все изменения, которые находятся в пределах значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения, должны быть включены в нее.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> DRAGONFLY THERAPEUTICS, INC.

<120> БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ NKG2D, CD16 И ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫЙ

АНТИГЕН

<130> DFY-038WO

<150> 62/566,824

<151> 2017-10-02

<150> 62/555,110

<151> 2017-09-07

<160> 214

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 3

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 5

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 9

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 11

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 12

Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ile Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 13

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 15

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 17

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 18

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 19

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 19

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 20

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ile Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 21

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 21

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 22

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 23

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 23

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 25

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 26

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 27

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 28

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Phe Ser Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 29

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 29

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 30

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 30

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 31

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 32

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Phe Ile Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 33

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 33

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 34

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 34

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 35

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 35

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 36

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 37

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 37

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 38

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 38

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Leu Tyr Ser Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 39

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 40

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 42

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 42

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 43

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 43

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 44

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 44

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 45

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 45

Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

1 5 10 15

Asp Val

<210> 46

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 46

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 47

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 47

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 48

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 48

Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 49

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 49

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 50

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 50

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 51

Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly

1 5 10

<210> 52

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 52

Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 53

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 53

Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 54

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 54

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 55

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 55

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 56

Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 57

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 57

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 58

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 58

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 59

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 60

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 60

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 61

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 62

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 62

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 63

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 64

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 64

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 65

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 65

Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 66

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 66

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 67

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 67

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 68

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 68

Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 69

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 70

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 70

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 71

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 71

Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 72

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 72

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 73

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 73

Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 74

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 74

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 75

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 75

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 76

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 76

Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 77

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 78

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 79

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 80

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 80

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 81

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 81

Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr

1 5 10

<210> 82

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 82

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 83

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 83

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 84

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 84

Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg Thr

1 5

<210> 85

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 86

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 86

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 87

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 87

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 88

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 88

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 89

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 89

Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 90

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 90

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 91

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 91

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 92

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 92

Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr

1 5

<210> 93

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 94

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 94

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 95

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 95

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 96

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 96

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 97

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 97

Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met

1 5 10 15

Asp Val

<210> 98

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 98

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 99

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 99

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 100

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 100

Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 101

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 102

<211> 110

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 102

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 103

<211> 115

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 103

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Asn Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 104

<211> 108

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 104

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 105

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 105

Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 106

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 106

Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 107

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 107

Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 108

<211> 246

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 108

Met Ala Ala Ala Ala Ile Pro Ala Leu Leu Leu Cys Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Phe Leu Leu Phe Gly Trp Ser Arg Ala Arg Arg Asp Asp Pro His Ser

20 25 30

Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg

35 40 45

Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr

50 55 60

Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys

65 70 75 80

Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu

85 90 95

Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn

100 105 110

Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu

115 120 125

Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp

130 135 140

Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr

145 150 155 160

Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys

165 170 175

Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly

180 185 190

Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser

195 200 205

Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser Gly Thr Thr Gln Leu Arg Ala

210 215 220

Thr Ala Thr Thr Leu Ile Leu Cys Cys Leu Leu Ile Ile Leu Pro Cys

225 230 235 240

Phe Ile Leu Pro Gly Ile

245

<210> 109

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 109

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 110

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 110

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 111

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 111

Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 112

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 112

Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 113

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 113

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 114

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 114

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 115

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 115

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Asp Ser Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Ala Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Phe Ala Ile Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Glu

115

<210> 116

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 116

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 117

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 117

Asn Thr Tyr Thr Gly Glu

1 5

<210> 118

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 118

Phe Ala Ile Lys Gly Asp Tyr

1 5

<210> 119

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 119

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys

100 105 110

Arg

<210> 120

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 120

Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 121

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 121

Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 122

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 122

Ala Gln Asn Leu Glu Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 123

<211> 128

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 123

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Met Gly Trp Gly Ser Gly Trp Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120 125

<210> 124

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 124

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 125

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 125

Ser Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 126

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 126

Asp Met Gly Trp Gly Ser Gly Trp Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

1 5 10 15

Asp Val

<210> 127

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 127

Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ile Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 128

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 128

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1 5

<210> 129

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 129

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 130

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 130

Gln Gln Ser Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 131

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 131

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Asp Ser Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Ala Ser Ala Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Phe Ala Ile Lys Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala

115

<210> 132

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 132

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 133

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 133

Asn Thr Tyr Thr Gly Glu

1 5

<210> 134

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 134

Phe Ala Ile Lys Gly Asp Tyr

1 5

<210> 135

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 135

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Thr Lys Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys

100 105 110

Arg

<210> 136

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 136

Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 137

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 137

Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 138

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 138

Ala Gln Asn Leu Glu Ile Pro Arg Thr

1 5

<210> 139

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 139

Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly

1 5 10 15

Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn

20 25 30

Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys

50 55 60

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 140

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 140

Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 141

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 141

Phe Pro Gly Ser Gly Asn

1 5

<210> 142

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 142

Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 143

<211> 114

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 143

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Gly

<210> 144

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 144

Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr

1 5 10

<210> 145

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 145

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 146

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 146

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 147

<211> 314

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 147

Met Ala Pro Pro Gln Val Leu Ala Phe Gly Leu Leu Leu Ala Ala Ala

1 5 10 15

Thr Ala Thr Phe Ala Ala Ala Gln Glu Glu Cys Val Cys Glu Asn Tyr

20 25 30

Lys Leu Ala Val Asn Cys Phe Val Asn Asn Asn Arg Gln Cys Gln Cys

35 40 45

Thr Ser Val Gly Ala Gln Asn Thr Val Ile Cys Ser Lys Leu Ala Ala

50 55 60

Lys Cys Leu Val Met Lys Ala Glu Met Asn Gly Ser Lys Leu Gly Arg

65 70 75 80

Arg Ala Lys Pro Glu Gly Ala Leu Gln Asn Asn Asp Gly Leu Tyr Asp

85 90 95

Pro Asp Cys Asp Glu Ser Gly Leu Phe Lys Ala Lys Gln Cys Asn Gly

100 105 110

Thr Ser Met Cys Trp Cys Val Asn Thr Ala Gly Val Arg Arg Thr Asp

115 120 125

Lys Asp Thr Glu Ile Thr Cys Ser Glu Arg Val Arg Thr Tyr Trp Ile

130 135 140

Ile Ile Glu Leu Lys His Lys Ala Arg Glu Lys Pro Tyr Asp Ser Lys

145 150 155 160

Ser Leu Arg Thr Ala Leu Gln Lys Glu Ile Thr Thr Arg Tyr Gln Leu

165 170 175

Asp Pro Lys Phe Ile Thr Ser Ile Leu Tyr Glu Asn Asn Val Ile Thr

180 185 190

Ile Asp Leu Val Gln Asn Ser Ser Gln Lys Thr Gln Asn Asp Val Asp

195 200 205

Ile Ala Asp Val Ala Tyr Tyr Phe Glu Lys Asp Val Lys Gly Glu Ser

210 215 220

Leu Phe His Ser Lys Lys Met Asp Leu Thr Val Asn Gly Glu Gln Leu

225 230 235 240

Asp Leu Asp Pro Gly Gln Thr Leu Ile Tyr Tyr Val Asp Glu Lys Ala

245 250 255

Pro Glu Phe Ser Met Gln Gly Leu Lys Ala Gly Val Ile Ala Val Ile

260 265 270

Val Val Val Val Ile Ala Val Val Ala Gly Ile Val Val Leu Val Ile

275 280 285

Ser Arg Lys Lys Arg Met Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Glu Ile Lys Glu

290 295 300

Met Gly Glu Met His Arg Glu Leu Asn Ala

305 310

<210> 148

<211> 14507

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 148

Met Leu Lys Pro Ser Gly Leu Pro Gly Ser Ser Ser Pro Thr Arg Ser

1 5 10 15

Leu Met Thr Gly Ser Arg Ser Thr Lys Ala Thr Pro Glu Met Asp Ser

20 25 30

Gly Leu Thr Gly Ala Thr Leu Ser Pro Lys Thr Ser Thr Gly Ala Ile

35 40 45

Val Val Thr Glu His Thr Leu Pro Phe Thr Ser Pro Asp Lys Thr Leu

50 55 60

Ala Ser Pro Thr Ser Ser Val Val Gly Arg Thr Thr Gln Ser Leu Gly

65 70 75 80

Val Met Ser Ser Ala Leu Pro Glu Ser Thr Ser Arg Gly Met Thr His

85 90 95

Ser Glu Gln Arg Thr Ser Pro Ser Leu Ser Pro Gln Val Asn Gly Thr

100 105 110

Pro Ser Arg Asn Tyr Pro Ala Thr Ser Met Val Ser Gly Leu Ser Ser

115 120 125

Pro Arg Thr Arg Thr Ser Ser Thr Glu Gly Asn Phe Thr Lys Glu Ala

130 135 140

Ser Thr Tyr Thr Leu Thr Val Glu Thr Thr Ser Gly Pro Val Thr Glu

145 150 155 160

Lys Tyr Thr Val Pro Thr Glu Thr Ser Thr Thr Glu Gly Asp Ser Thr

165 170 175

Glu Thr Pro Trp Asp Thr Arg Tyr Ile Pro Val Lys Ile Thr Ser Pro

180 185 190

Met Lys Thr Phe Ala Asp Ser Thr Ala Ser Lys Glu Asn Ala Pro Val

195 200 205

Ser Met Thr Pro Ala Glu Thr Thr Val Thr Asp Ser His Thr Pro Gly

210 215 220

Arg Thr Asn Pro Ser Phe Gly Thr Leu Tyr Ser Ser Phe Leu Asp Leu

225 230 235 240

Ser Pro Lys Gly Thr Pro Asn Ser Arg Gly Glu Thr Ser Leu Glu Leu

245 250 255

Ile Leu Ser Thr Thr Gly Tyr Pro Phe Ser Ser Pro Glu Pro Gly Ser

260 265 270

Ala Gly His Ser Arg Ile Ser Thr Ser Ala Pro Leu Ser Ser Ser Ala

275 280 285

Ser Val Leu Asp Asn Lys Ile Ser Glu Thr Ser Ile Phe Ser Gly Gln

290 295 300

Ser Leu Thr Ser Pro Leu Ser Pro Gly Val Pro Glu Ala Arg Ala Ser

305 310 315 320

Thr Met Pro Asn Ser Ala Ile Pro Phe Ser Met Thr Leu Ser Asn Ala

325 330 335

Glu Thr Ser Ala Glu Arg Val Arg Ser Thr Ile Ser Ser Leu Gly Thr

340 345 350

Pro Ser Ile Ser Thr Lys Gln Thr Ala Glu Thr Ile Leu Thr Phe His

355 360 365

Ala Phe Ala Glu Thr Met Asp Ile Pro Ser Thr His Ile Ala Lys Thr

370 375 380

Leu Ala Ser Glu Trp Leu Gly Ser Pro Gly Thr Leu Gly Gly Thr Ser

385 390 395 400

Thr Ser Ala Leu Thr Thr Thr Ser Pro Ser Thr Thr Leu Val Ser Glu

405 410 415

Glu Thr Asn Thr His His Ser Thr Ser Gly Lys Glu Thr Glu Gly Thr

420 425 430

Leu Asn Thr Ser Met Thr Pro Leu Glu Thr Ser Ala Pro Gly Glu Glu

435 440 445

Ser Glu Met Thr Ala Thr Leu Val Pro Thr Leu Gly Phe Thr Thr Leu

450 455 460

Asp Ser Lys Ile Arg Ser Pro Ser Gln Val Ser Ser Ser His Pro Thr

465 470 475 480

Arg Glu Leu Arg Thr Thr Gly Ser Thr Ser Gly Arg Gln Ser Ser Ser

485 490 495

Thr Ala Ala His Gly Ser Ser Asp Ile Leu Arg Ala Thr Thr Ser Ser

500 505 510

Thr Ser Lys Ala Ser Ser Trp Thr Ser Glu Ser Thr Ala Gln Gln Phe

515 520 525

Ser Glu Pro Gln His Thr Gln Trp Val Glu Thr Ser Pro Ser Met Lys

530 535 540

Thr Glu Arg Pro Pro Ala Ser Thr Ser Val Ala Ala Pro Ile Thr Thr

545 550 555 560

Ser Val Pro Ser Val Val Ser Gly Phe Thr Thr Leu Lys Thr Ser Ser

565 570 575

Thr Lys Gly Ile Trp Leu Glu Glu Thr Ser Ala Asp Thr Leu Ile Gly

580 585 590

Glu Ser Thr Ala Gly Pro Thr Thr His Gln Phe Ala Val Pro Thr Gly

595 600 605

Ile Ser Met Thr Gly Gly Ser Ser Thr Arg Gly Ser Gln Gly Thr Thr

610 615 620

His Leu Leu Thr Arg Ala Thr Ala Ser Ser Glu Thr Ser Ala Asp Leu

625 630 635 640

Thr Leu Ala Thr Asn Gly Val Pro Val Ser Val Ser Pro Ala Val Ser

645 650 655

Lys Thr Ala Ala Gly Ser Ser Pro Pro Gly Gly Thr Lys Pro Ser Tyr

660 665 670

Thr Met Val Ser Ser Val Ile Pro Glu Thr Ser Ser Leu Gln Ser Ser

675 680 685

Ala Phe Arg Glu Gly Thr Ser Leu Gly Leu Thr Pro Leu Asn Thr Arg

690 695 700

His Pro Phe Ser Ser Pro Glu Pro Asp Ser Ala Gly His Thr Lys Ile

705 710 715 720

Ser Thr Ser Ile Pro Leu Leu Ser Ser Ala Ser Val Leu Glu Asp Lys

725 730 735

Val Ser Ala Thr Ser Thr Phe Ser His His Lys Ala Thr Ser Ser Ile

740 745 750

Thr Thr Gly Thr Pro Glu Ile Ser Thr Lys Thr Lys Pro Ser Ser Ala

755 760 765

Val Leu Ser Ser Met Thr Leu Ser Asn Ala Ala Thr Ser Pro Glu Arg

770 775 780

Val Arg Asn Ala Thr Ser Pro Leu Thr His Pro Ser Pro Ser Gly Glu

785 790 795 800

Glu Thr Ala Gly Ser Val Leu Thr Leu Ser Thr Ser Ala Glu Thr Thr

805 810 815

Asp Ser Pro Asn Ile His Pro Thr Gly Thr Leu Thr Ser Glu Ser Ser

820 825 830

Glu Ser Pro Ser Thr Leu Ser Leu Pro Ser Val Ser Gly Val Lys Thr

835 840 845

Thr Phe Ser Ser Ser Thr Pro Ser Thr His Leu Phe Thr Ser Gly Glu

850 855 860

Glu Thr Glu Glu Thr Ser Asn Pro Ser Val Ser Gln Pro Glu Thr Ser

865 870 875 880

Val Ser Arg Val Arg Thr Thr Leu Ala Ser Thr Ser Val Pro Thr Pro

885 890 895

Val Phe Pro Thr Met Asp Thr Trp Pro Thr Arg Ser Ala Gln Phe Ser

900 905 910

Ser Ser His Leu Val Ser Glu Leu Arg Ala Thr Ser Ser Thr Ser Val

915 920 925

Thr Asn Ser Thr Gly Ser Ala Leu Pro Lys Ile Ser His Leu Thr Gly

930 935 940

Thr Ala Thr Met Ser Gln Thr Asn Arg Asp Thr Phe Asn Asp Ser Ala

945 950 955 960

Ala Pro Gln Ser Thr Thr Trp Pro Glu Thr Ser Pro Arg Phe Lys Thr

965 970 975

Gly Leu Pro Ser Ala Thr Thr Thr Val Ser Thr Ser Ala Thr Ser Leu

980 985 990

Ser Ala Thr Val Met Val Ser Lys Phe Thr Ser Pro Ala Thr Ser Ser

995 1000 1005

Met Glu Ala Thr Ser Ile Arg Glu Pro Ser Thr Thr Ile Leu Thr

1010 1015 1020

Thr Glu Thr Thr Asn Gly Pro Gly Ser Met Ala Val Ala Ser Thr

1025 1030 1035

Asn Ile Pro Ile Gly Lys Gly Tyr Ile Thr Glu Gly Arg Leu Asp

1040 1045 1050

Thr Ser His Leu Pro Ile Gly Thr Thr Ala Ser Ser Glu Thr Ser

1055 1060 1065

Met Asp Phe Thr Met Ala Lys Glu Ser Val Ser Met Ser Val Ser

1070 1075 1080

Pro Ser Gln Ser Met Asp Ala Ala Gly Ser Ser Thr Pro Gly Arg

1085 1090 1095

Thr Ser Gln Phe Val Asp Thr Phe Ser Asp Asp Val Tyr His Leu

1100 1105 1110

Thr Ser Arg Glu Ile Thr Ile Pro Arg Asp Gly Thr Ser Ser Ala

1115 1120 1125

Leu Thr Pro Gln Met Thr Ala Thr His Pro Pro Ser Pro Asp Pro

1130 1135 1140

Gly Ser Ala Arg Ser Thr Trp Leu Gly Ile Leu Ser Ser Ser Pro

1145 1150 1155

Ser Ser Pro Thr Pro Lys Val Thr Met Ser Ser Thr Phe Ser Thr

1160 1165 1170

Gln Arg Val Thr Thr Ser Met Ile Met Asp Thr Val Glu Thr Ser

1175 1180 1185

Arg Trp Asn Met Pro Asn Leu Pro Ser Thr Thr Ser Leu Thr Pro

1190 1195 1200

Ser Asn Ile Pro Thr Ser Gly Ala Ile Gly Lys Ser Thr Leu Val

1205 1210 1215

Pro Leu Asp Thr Pro Ser Pro Ala Thr Ser Leu Glu Ala Ser Glu

1220 1225 1230

Gly Gly Leu Pro Thr Leu Ser Thr Tyr Pro Glu Ser Thr Asn Thr

1235 1240 1245

Pro Ser Ile His Leu Gly Ala His Ala Ser Ser Glu Ser Pro Ser

1250 1255 1260

Thr Ile Lys Leu Thr Met Ala Ser Val Val Lys Pro Gly Ser Tyr

1265 1270 1275

Thr Pro Leu Thr Phe Pro Ser Ile Glu Thr His Ile His Val Ser

1280 1285 1290

Thr Ala Arg Met Ala Tyr Ser Ser Gly Ser Ser Pro Glu Met Thr

1295 1300 1305

Ala Pro Gly Glu Thr Asn Thr Gly Ser Thr Trp Asp Pro Thr Thr

1310 1315 1320

Tyr Ile Thr Thr Thr Asp Pro Lys Asp Thr Ser Ser Ala Gln Val

1325 1330 1335

Ser Thr Pro His Ser Val Arg Thr Leu Arg Thr Thr Glu Asn His

1340 1345 1350

Pro Lys Thr Glu Ser Ala Thr Pro Ala Ala Tyr Ser Gly Ser Pro

1355 1360 1365

Lys Ile Ser Ser Ser Pro Asn Leu Thr Ser Pro Ala Thr Lys Ala

1370 1375 1380

Trp Thr Ile Thr Asp Thr Thr Glu His Ser Thr Gln Leu His Tyr

1385 1390 1395

Thr Lys Leu Ala Glu Lys Ser Ser Gly Phe Glu Thr Gln Ser Ala

1400 1405 1410

Pro Gly Pro Val Ser Val Val Ile Pro Thr Ser Pro Thr Ile Gly

1415 1420 1425

Ser Ser Thr Leu Glu Leu Thr Ser Asp Val Pro Gly Glu Pro Leu

1430 1435 1440

Val Leu Ala Pro Ser Glu Gln Thr Thr Ile Thr Leu Pro Met Ala

1445 1450 1455

Thr Trp Leu Ser Thr Ser Leu Thr Glu Glu Met Ala Ser Thr Asp

1460 1465 1470

Leu Asp Ile Ser Ser Pro Ser Ser Pro Met Ser Thr Phe Ala Ile

1475 1480 1485

Phe Pro Pro Met Ser Thr Pro Ser His Glu Leu Ser Lys Ser Glu

1490 1495 1500

Ala Asp Thr Ser Ala Ile Arg Asn Thr Asp Ser Thr Thr Leu Asp

1505 1510 1515

Gln His Leu Gly Ile Arg Ser Leu Gly Arg Thr Gly Asp Leu Thr

1520 1525 1530

Thr Val Pro Ile Thr Pro Leu Thr Thr Thr Trp Thr Ser Val Ile

1535 1540 1545

Glu His Ser Thr Gln Ala Gln Asp Thr Leu Ser Ala Thr Met Ser

1550 1555 1560

Pro Thr His Val Thr Gln Ser Leu Lys Asp Gln Thr Ser Ile Pro

1565 1570 1575

Ala Ser Ala Ser Pro Ser His Leu Thr Glu Val Tyr Pro Glu Leu

1580 1585 1590

Gly Thr Gln Gly Arg Ser Ser Ser Glu Ala Thr Thr Phe Trp Lys

1595 1600 1605

Pro Ser Thr Asp Thr Leu Ser Arg Glu Ile Glu Thr Gly Pro Thr

1610 1615 1620

Asn Ile Gln Ser Thr Pro Pro Met Asp Asn Thr Thr Thr Gly Ser

1625 1630 1635

Ser Ser Ser Gly Val Thr Leu Gly Ile Ala His Leu Pro Ile Gly

1640 1645 1650

Thr Ser Ser Pro Ala Glu Thr Ser Thr Asn Met Ala Leu Glu Arg

1655 1660 1665

Arg Ser Ser Thr Ala Thr Val Ser Met Ala Gly Thr Met Gly Leu

1670 1675 1680

Leu Val Thr Ser Ala Pro Gly Arg Ser Ile Ser Gln Ser Leu Gly

1685 1690 1695

Arg Val Ser Ser Val Leu Ser Glu Ser Thr Thr Glu Gly Val Thr

1700 1705 1710

Asp Ser Ser Lys Gly Ser Ser Pro Arg Leu Asn Thr Gln Gly Asn

1715 1720 1725

Thr Ala Leu Ser Ser Ser Leu Glu Pro Ser Tyr Ala Glu Gly Ser

1730 1735 1740

Gln Met Ser Thr Ser Ile Pro Leu Thr Ser Ser Pro Thr Thr Pro

1745 1750 1755

Asp Val Glu Phe Ile Gly Gly Ser Thr Phe Trp Thr Lys Glu Val

1760 1765 1770

Thr Thr Val Met Thr Ser Asp Ile Ser Lys Ser Ser Ala Arg Thr

1775 1780 1785

Glu Ser Ser Ser Ala Thr Leu Met Ser Thr Ala Leu Gly Ser Thr

1790 1795 1800

Glu Asn Thr Gly Lys Glu Lys Leu Arg Thr Ala Ser Met Asp Leu

1805 1810 1815

Pro Ser Pro Thr Pro Ser Met Glu Val Thr Pro Trp Ile Ser Leu

1820 1825 1830

Thr Leu Ser Asn Ala Pro Asn Thr Thr Asp Ser Leu Asp Leu Ser

1835 1840 1845

His Gly Val His Thr Ser Ser Ala Gly Thr Leu Ala Thr Asp Arg

1850 1855 1860

Ser Leu Asn Thr Gly Val Thr Arg Ala Ser Arg Leu Glu Asn Gly

1865 1870 1875

Ser Asp Thr Ser Ser Lys Ser Leu Ser Met Gly Asn Ser Thr His

1880 1885 1890

Thr Ser Met Thr Tyr Thr Glu Lys Ser Glu Val Ser Ser Ser Ile

1895 1900 1905

His Pro Arg Pro Glu Thr Ser Ala Pro Gly Ala Glu Thr Thr Leu

1910 1915 1920

Thr Ser Thr Pro Gly Asn Arg Ala Ile Ser Leu Thr Leu Pro Phe

1925 1930 1935

Ser Ser Ile Pro Val Glu Glu Val Ile Ser Thr Gly Ile Thr Ser

1940 1945 1950

Gly Pro Asp Ile Asn Ser Ala Pro Met Thr His Ser Pro Ile Thr

1955 1960 1965

Pro Pro Thr Ile Val Trp Thr Ser Thr Gly Thr Ile Glu Gln Ser

1970 1975 1980

Thr Gln Pro Leu His Ala Val Ser Ser Glu Lys Val Ser Val Gln

1985 1990 1995

Thr Gln Ser Thr Pro Tyr Val Asn Ser Val Ala Val Ser Ala Ser

2000 2005 2010

Pro Thr His Glu Asn Ser Val Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ser Ser

2015 2020 2025

Pro Tyr Ser Ser Ala Ser Leu Glu Ser Leu Asp Ser Thr Ile Ser

2030 2035 2040

Arg Arg Asn Ala Ile Thr Ser Trp Leu Trp Asp Leu Thr Thr Ser

2045 2050 2055

Leu Pro Thr Thr Thr Trp Pro Ser Thr Ser Leu Ser Glu Ala Leu

2060 2065 2070

Ser Ser Gly His Ser Gly Val Ser Asn Pro Ser Ser Thr Thr Thr

2075 2080 2085

Glu Phe Pro Leu Phe Ser Ala Ala Ser Thr Ser Ala Ala Lys Gln

2090 2095 2100

Arg Asn Pro Glu Thr Glu Thr His Gly Pro Gln Asn Thr Ala Ala

2105 2110 2115

Ser Thr Leu Asn Thr Asp Ala Ser Ser Val Thr Gly Leu Ser Glu

2120 2125 2130

Thr Pro Val Gly Ala Ser Ile Ser Ser Glu Val Pro Leu Pro Met

2135 2140 2145

Ala Ile Thr Ser Arg Ser Asp Val Ser Gly Leu Thr Ser Glu Ser

2150 2155 2160

Thr Ala Asn Pro Ser Leu Gly Thr Ala Ser Ser Ala Gly Thr Lys

2165 2170 2175

Leu Thr Arg Thr Ile Ser Leu Pro Thr Ser Glu Ser Leu Val Ser

2180 2185 2190

Phe Arg Met Asn Lys Asp Pro Trp Thr Val Ser Ile Pro Leu Gly

2195 2200 2205

Ser His Pro Thr Thr Asn Thr Glu Thr Ser Ile Pro Val Asn Ser

2210 2215 2220

Ala Gly Pro Pro Gly Leu Ser Thr Val Ala Ser Asp Val Ile Asp

2225 2230 2235

Thr Pro Ser Asp Gly Ala Glu Ser Ile Pro Thr Val Ser Phe Ser

2240 2245 2250

Pro Ser Pro Asp Thr Glu Val Thr Thr Ile Ser His Phe Pro Glu

2255 2260 2265

Lys Thr Thr His Ser Phe Arg Thr Ile Ser Ser Leu Thr His Glu

2270 2275 2280

Leu Thr Ser Arg Val Thr Pro Ile Pro Gly Asp Trp Met Ser Ser

2285 2290 2295

Ala Met Ser Thr Lys Pro Thr Gly Ala Ser Pro Ser Ile Thr Leu

2300 2305 2310

Gly Glu Arg Arg Thr Ile Thr Ser Ala Ala Pro Thr Thr Ser Pro

2315 2320 2325

Ile Val Leu Thr Ala Ser Phe Thr Glu Thr Ser Thr Val Ser Leu

2330 2335 2340

Asp Asn Glu Thr Thr Val Lys Thr Ser Asp Ile Leu Asp Ala Arg

2345 2350 2355

Lys Thr Asn Glu Leu Pro Ser Asp Ser Ser Ser Ser Ser Asp Leu

2360 2365 2370

Ile Asn Thr Ser Ile Ala Ser Ser Thr Met Asp Val Thr Lys Thr

2375 2380 2385

Ala Ser Ile Ser Pro Thr Ser Ile Ser Gly Met Thr Ala Ser Ser

2390 2395 2400

Ser Pro Ser Leu Phe Ser Ser Asp Arg Pro Gln Val Pro Thr Ser

2405 2410 2415

Thr Thr Glu Thr Asn Thr Ala Thr Ser Pro Ser Val Ser Ser Asn

2420 2425 2430

Thr Tyr Ser Leu Asp Gly Gly Ser Asn Val Gly Gly Thr Pro Ser

2435 2440 2445

Thr Leu Pro Pro Phe Thr Ile Thr His Pro Val Glu Thr Ser Ser

2450 2455 2460

Ala Leu Leu Ala Trp Ser Arg Pro Val Arg Thr Phe Ser Thr Met

2465 2470 2475

Val Ser Thr Asp Thr Ala Ser Gly Glu Asn Pro Thr Ser Ser Asn

2480 2485 2490

Ser Val Val Thr Ser Val Pro Ala Pro Gly Thr Trp Thr Ser Val

2495 2500 2505

Gly Ser Thr Thr Asp Leu Pro Ala Met Gly Phe Leu Lys Thr Ser

2510 2515 2520

Pro Ala Gly Glu Ala His Ser Leu Leu Ala Ser Thr Ile Glu Pro

2525 2530 2535

Ala Thr Ala Phe Thr Pro His Leu Ser Ala Ala Val Val Thr Gly

2540 2545 2550

Ser Ser Ala Thr Ser Glu Ala Ser Leu Leu Thr Thr Ser Glu Ser

2555 2560 2565

Lys Ala Ile His Ser Ser Pro Gln Thr Pro Thr Thr Pro Thr Ser

2570 2575 2580

Gly Ala Asn Trp Glu Thr Ser Ala Thr Pro Glu Ser Leu Leu Val

2585 2590 2595

Val Thr Glu Thr Ser Asp Thr Thr Leu Thr Ser Lys Ile Leu Val

2600 2605 2610

Thr Asp Thr Ile Leu Phe Ser Thr Val Ser Thr Pro Pro Ser Lys

2615 2620 2625

Phe Pro Ser Thr Gly Thr Leu Ser Gly Ala Ser Phe Pro Thr Leu

2630 2635 2640

Leu Pro Asp Thr Pro Ala Ile Pro Leu Thr Ala Thr Glu Pro Thr

2645 2650 2655

Ser Ser Leu Ala Thr Ser Phe Asp Ser Thr Pro Leu Val Thr Ile

2660 2665 2670

Ala Ser Asp Ser Leu Gly Thr Val Pro Glu Thr Thr Leu Thr Met

2675 2680 2685

Ser Glu Thr Ser Asn Gly Asp Ala Leu Val Leu Lys Thr Val Ser

2690 2695 2700

Asn Pro Asp Arg Ser Ile Pro Gly Ile Thr Ile Gln Gly Val Thr

2705 2710 2715

Glu Ser Pro Leu His Pro Ser Ser Thr Ser Pro Ser Lys Ile Val

2720 2725 2730

Ala Pro Arg Asn Thr Thr Tyr Glu Gly Ser Ile Thr Val Ala Leu

2735 2740 2745

Ser Thr Leu Pro Ala Gly Thr Thr Gly Ser Leu Val Phe Ser Gln

2750 2755 2760

Ser Ser Glu Asn Ser Glu Thr Thr Ala Leu Val Asp Ser Ser Ala

2765 2770 2775

Gly Leu Glu Arg Ala Ser Val Met Pro Leu Thr Thr Gly Ser Gln

2780 2785 2790

Gly Met Ala Ser Ser Gly Gly Ile Arg Ser Gly Ser Thr His Ser

2795 2800 2805

Thr Gly Thr Lys Thr Phe Ser Ser Leu Pro Leu Thr Met Asn Pro

2810 2815 2820

Gly Glu Val Thr Ala Met Ser Glu Ile Thr Thr Asn Arg Leu Thr

2825 2830 2835

Ala Thr Gln Ser Thr Ala Pro Lys Gly Ile Pro Val Lys Pro Thr

2840 2845 2850

Ser Ala Glu Ser Gly Leu Leu Thr Pro Val Ser Ala Ser Ser Ser

2855 2860 2865

Pro Ser Lys Ala Phe Ala Ser Leu Thr Thr Ala Pro Pro Thr Trp

2870 2875 2880

Gly Ile Pro Gln Ser Thr Leu Thr Phe Glu Phe Ser Glu Val Pro

2885 2890 2895

Ser Leu Asp Thr Lys Ser Ala Ser Leu Pro Thr Pro Gly Gln Ser

2900 2905 2910

Leu Asn Thr Ile Pro Asp Ser Asp Ala Ser Thr Ala Ser Ser Ser

2915 2920 2925

Leu Ser Lys Ser Pro Glu Lys Asn Pro Arg Ala Arg Met Met Thr

2930 2935 2940

Ser Thr Lys Ala Ile Ser Ala Ser Ser Phe Gln Ser Thr Gly Phe

2945 2950 2955

Thr Glu Thr Pro Glu Gly Ser Ala Ser Pro Ser Met Ala Gly His

2960 2965 2970

Glu Pro Arg Val Pro Thr Ser Gly Thr Gly Asp Pro Arg Tyr Ala

2975 2980 2985

Ser Glu Ser Met Ser Tyr Pro Asp Pro Ser Lys Ala Ser Ser Ala

2990 2995 3000

Met Thr Ser Thr Ser Leu Ala Ser Lys Leu Thr Thr Leu Phe Ser

3005 3010 3015

Thr Gly Gln Ala Ala Arg Ser Gly Ser Ser Ser Ser Pro Ile Ser

3020 3025 3030

Leu Ser Thr Glu Lys Glu Thr Ser Phe Leu Ser Pro Thr Ala Ser

3035 3040 3045

Thr Ser Arg Lys Thr Ser Leu Phe Leu Gly Pro Ser Met Ala Arg

3050 3055 3060

Gln Pro Asn Ile Leu Val His Leu Gln Thr Ser Ala Leu Thr Leu

3065 3070 3075

Ser Pro Thr Ser Thr Leu Asn Met Ser Gln Glu Glu Pro Pro Glu

3080 3085 3090

Leu Thr Ser Ser Gln Thr Ile Ala Glu Glu Glu Gly Thr Thr Ala

3095 3100 3105

Glu Thr Gln Thr Leu Thr Phe Thr Pro Ser Glu Thr Pro Thr Ser

3110 3115 3120

Leu Leu Pro Val Ser Ser Pro Thr Glu Pro Thr Ala Arg Arg Lys

3125 3130 3135

Ser Ser Pro Glu Thr Trp Ala Ser Ser Ile Ser Val Pro Ala Lys

3140 3145 3150

Thr Ser Leu Val Glu Thr Thr Asp Gly Thr Leu Val Thr Thr Ile

3155 3160 3165

Lys Met Ser Ser Gln Ala Ala Gln Gly Asn Ser Thr Trp Pro Ala

3170 3175 3180

Pro Ala Glu Glu Thr Gly Ser Ser Pro Ala Gly Thr Ser Pro Gly

3185 3190 3195

Ser Pro Glu Met Ser Thr Thr Leu Lys Ile Met Ser Ser Lys Glu

3200 3205 3210

Pro Ser Ile Ser Pro Glu Ile Arg Ser Thr Val Arg Asn Ser Pro

3215 3220 3225

Trp Lys Thr Pro Glu Thr Thr Val Pro Met Glu Thr Thr Val Glu

3230 3235 3240

Pro Val Thr Leu Gln Ser Thr Ala Leu Gly Ser Gly Ser Thr Ser

3245 3250 3255

Ile Ser His Leu Pro Thr Gly Thr Thr Ser Pro Thr Lys Ser Pro

3260 3265 3270

Thr Glu Asn Met Leu Ala Thr Glu Arg Val Ser Leu Ser Pro Ser

3275 3280 3285

Pro Pro Glu Ala Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Gly Thr Pro Gly Gly

3290 3295 3300

Thr Arg Gln Ser Leu Ala Thr Met Ser Ser Val Ser Leu Glu Ser

3305 3310 3315

Pro Thr Ala Arg Ser Ile Thr Gly Thr Gly Gln Gln Ser Ser Pro

3320 3325 3330

Glu Leu Val Ser Lys Thr Thr Gly Met Glu Phe Ser Met Trp His

3335 3340 3345

Gly Ser Thr Gly Gly Thr Thr Gly Asp Thr His Val Ser Leu Ser

3350 3355 3360

Thr Ser Ser Asn Ile Leu Glu Asp Pro Val Thr Ser Pro Asn Ser

3365 3370 3375

Val Ser Ser Leu Thr Asp Lys Ser Lys His Lys Thr Glu Thr Trp

3380 3385 3390

Val Ser Thr Thr Ala Ile Pro Ser Thr Val Leu Asn Asn Lys Ile

3395 3400 3405

Met Ala Ala Glu Gln Gln Thr Ser Arg Ser Val Asp Glu Ala Tyr

3410 3415 3420

Ser Ser Thr Ser Ser Trp Ser Asp Gln Thr Ser Gly Ser Asp Ile

3425 3430 3435

Thr Leu Gly Ala Ser Pro Asp Val Thr Asn Thr Leu Tyr Ile Thr

3440 3445 3450

Ser Thr Ala Gln Thr Thr Ser Leu Val Ser Leu Pro Ser Gly Asp

3455 3460 3465

Gln Gly Ile Thr Ser Leu Thr Asn Pro Ser Gly Gly Lys Thr Ser

3470 3475 3480

Ser Ala Ser Ser Val Thr Ser Pro Ser Ile Gly Leu Glu Thr Leu

3485 3490 3495

Arg Ala Asn Val Ser Ala Val Lys Ser Asp Ile Ala Pro Thr Ala

3500 3505 3510

Gly His Leu Ser Gln Thr Ser Ser Pro Ala Glu Val Ser Ile Leu

3515 3520 3525

Asp Val Thr Thr Ala Pro Thr Pro Gly Ile Ser Thr Thr Ile Thr

3530 3535 3540

Thr Met Gly Thr Asn Ser Ile Ser Thr Thr Thr Pro Asn Pro Glu

3545 3550 3555

Val Gly Met Ser Thr Met Asp Ser Thr Pro Ala Thr Glu Arg Arg

3560 3565 3570

Thr Thr Ser Thr Glu His Pro Ser Thr Trp Ser Ser Thr Ala Ala

3575 3580 3585

Ser Asp Ser Trp Thr Val Thr Asp Met Thr Ser Asn Leu Lys Val

3590 3595 3600

Ala Arg Ser Pro Gly Thr Ile Ser Thr Met His Thr Thr Ser Phe

3605 3610 3615

Leu Ala Ser Ser Thr Glu Leu Asp Ser Met Ser Thr Pro His Gly

3620 3625 3630

Arg Ile Thr Val Ile Gly Thr Ser Leu Val Thr Pro Ser Ser Asp

3635 3640 3645

Ala Ser Ala Val Lys Thr Glu Thr Ser Thr Ser Glu Arg Thr Leu

3650 3655 3660

Ser Pro Ser Asp Thr Thr Ala Ser Thr Pro Ile Ser Thr Phe Ser

3665 3670 3675

Arg Val Gln Arg Met Ser Ile Ser Val Pro Asp Ile Leu Ser Thr

3680 3685 3690

Ser Trp Thr Pro Ser Ser Thr Glu Ala Glu Asp Val Pro Val Ser

3695 3700 3705

Met Val Ser Thr Asp His Ala Ser Thr Lys Thr Asp Pro Asn Thr

3710 3715 3720

Pro Leu Ser Thr Phe Leu Phe Asp Ser Leu Ser Thr Leu Asp Trp

3725 3730 3735

Asp Thr Gly Arg Ser Leu Ser Ser Ala Thr Ala Thr Thr Ser Ala

3740 3745 3750

Pro Gln Gly Ala Thr Thr Pro Gln Glu Leu Thr Leu Glu Thr Met

3755 3760 3765

Ile Ser Pro Ala Thr Ser Gln Leu Pro Phe Ser Ile Gly His Ile

3770 3775 3780

Thr Ser Ala Val Thr Pro Ala Ala Met Ala Arg Ser Ser Gly Val

3785 3790 3795

Thr Phe Ser Arg Pro Asp Pro Thr Ser Lys Lys Ala Glu Gln Thr

3800 3805 3810

Ser Thr Gln Leu Pro Thr Thr Thr Ser Ala His Pro Gly Gln Val

3815 3820 3825

Pro Arg Ser Ala Ala Thr Thr Leu Asp Val Ile Pro His Thr Ala

3830 3835 3840

Lys Thr Pro Asp Ala Thr Phe Gln Arg Gln Gly Gln Thr Ala Leu

3845 3850 3855

Thr Thr Glu Ala Arg Ala Thr Ser Asp Ser Trp Asn Glu Lys Glu

3860 3865 3870

Lys Ser Thr Pro Ser Ala Pro Trp Ile Thr Glu Met Met Asn Ser

3875 3880 3885

Val Ser Glu Asp Thr Ile Lys Glu Val Thr Ser Ser Ser Ser Val

3890 3895 3900

Leu Arg Thr Leu Asn Thr Leu Asp Ile Asn Leu Glu Ser Gly Thr

3905 3910 3915

Thr Ser Ser Pro Ser Trp Lys Ser Ser Pro Tyr Glu Arg Ile Ala

3920 3925 3930

Pro Ser Glu Ser Thr Thr Asp Lys Glu Ala Ile His Pro Ser Thr

3935 3940 3945

Asn Thr Val Glu Thr Thr Gly Trp Val Thr Ser Ser Glu His Ala

3950 3955 3960

Ser His Ser Thr Ile Pro Ala His Ser Ala Ser Ser Lys Leu Thr

3965 3970 3975

Ser Pro Val Val Thr Thr Ser Thr Arg Glu Gln Ala Ile Val Ser

3980 3985 3990

Met Ser Thr Thr Thr Trp Pro Glu Ser Thr Arg Ala Arg Thr Glu

3995 4000 4005

Pro Asn Ser Phe Leu Thr Ile Glu Leu Arg Asp Val Ser Pro Tyr

4010 4015 4020

Met Asp Thr Ser Ser Thr Thr Gln Thr Ser Ile Ile Ser Ser Pro

4025 4030 4035

Gly Ser Thr Ala Ile Thr Lys Gly Pro Arg Thr Glu Ile Thr Ser

4040 4045 4050

Ser Lys Arg Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Gln Ser Met Arg Ser

4055 4060 4065

Ser Asp Ser Pro Ser Glu Ala Ile Thr Arg Leu Ser Asn Phe Pro

4070 4075 4080

Ala Met Thr Glu Ser Gly Gly Met Ile Leu Ala Met Gln Thr Ser

4085 4090 4095

Pro Pro Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Pro Thr Leu Asp Thr Ser

4100 4105 4110

Ala Thr Ala Ser Trp Thr Gly Thr Pro Leu Ala Thr Thr Gln Arg

4115 4120 4125

Phe Thr Tyr Ser Glu Lys Thr Thr Leu Phe Ser Lys Gly Pro Glu

4130 4135 4140

Asp Thr Ser Gln Pro Ser Pro Pro Ser Val Glu Glu Thr Ser Ser

4145 4150 4155

Ser Ser Ser Leu Val Pro Ile His Ala Thr Thr Ser Pro Ser Asn

4160 4165 4170

Ile Leu Leu Thr Ser Gln Gly His Ser Pro Ser Ser Thr Pro Pro

4175 4180 4185

Val Thr Ser Val Phe Leu Ser Glu Thr Ser Gly Leu Gly Lys Thr

4190 4195 4200

Thr Asp Met Ser Arg Ile Ser Leu Glu Pro Gly Thr Ser Leu Pro

4205 4210 4215

Pro Asn Leu Ser Ser Thr Ala Gly Glu Ala Leu Ser Thr Tyr Glu

4220 4225 4230

Ala Ser Arg Asp Thr Lys Ala Ile His His Ser Ala Asp Thr Ala

4235 4240 4245

Val Thr Asn Met Glu Ala Thr Ser Ser Glu Tyr Ser Pro Ile Pro

4250 4255 4260

Gly His Thr Lys Pro Ser Lys Ala Thr Ser Pro Leu Val Thr Ser

4265 4270 4275

His Ile Met Gly Asp Ile Thr Ser Ser Thr Ser Val Phe Gly Ser

4280 4285 4290

Ser Glu Thr Thr Glu Ile Glu Thr Val Ser Ser Val Asn Gln Gly

4295 4300 4305

Leu Gln Glu Arg Ser Thr Ser Gln Val Ala Ser Ser Ala Thr Glu

4310 4315 4320

Thr Ser Thr Val Ile Thr His Val Ser Ser Gly Asp Ala Thr Thr

4325 4330 4335

His Val Thr Lys Thr Gln Ala Thr Phe Ser Ser Gly Thr Ser Ile

4340 4345 4350

Ser Ser Pro His Gln Phe Ile Thr Ser Thr Asn Thr Phe Thr Asp

4355 4360 4365

Val Ser Thr Asn Pro Ser Thr Ser Leu Ile Met Thr Glu Ser Ser

4370 4375 4380

Gly Val Thr Ile Thr Thr Gln Thr Gly Pro Thr Gly Ala Ala Thr

4385 4390 4395

Gln Gly Pro Tyr Leu Leu Asp Thr Ser Thr Met Pro Tyr Leu Thr

4400 4405 4410

Glu Thr Pro Leu Ala Val Thr Pro Asp Phe Met Gln Ser Glu Lys

4415 4420 4425

Thr Thr Leu Ile Ser Lys Gly Pro Lys Asp Val Ser Trp Thr Ser

4430 4435 4440

Pro Pro Ser Val Ala Glu Thr Ser Tyr Pro Ser Ser Leu Thr Pro

4445 4450 4455

Phe Leu Val Thr Thr Ile Pro Pro Ala Thr Ser Thr Leu Gln Gly

4460 4465 4470

Gln His Thr Ser Ser Pro Val Ser Ala Thr Ser Val Leu Thr Ser

4475 4480 4485

Gly Leu Val Lys Thr Thr Asp Met Leu Asn Thr Ser Met Glu Pro

4490 4495 4500

Val Thr Asn Ser Pro Gln Asn Leu Asn Asn Pro Ser Asn Glu Ile

4505 4510 4515

Leu Ala Thr Leu Ala Ala Thr Thr Asp Ile Glu Thr Ile His Pro

4520 4525 4530

Ser Ile Asn Lys Ala Val Thr Asn Met Gly Thr Ala Ser Ser Ala

4535 4540 4545

His Val Leu His Ser Thr Leu Pro Val Ser Ser Glu Pro Ser Thr

4550 4555 4560

Ala Thr Ser Pro Met Val Pro Ala Ser Ser Met Gly Asp Ala Leu

4565 4570 4575

Ala Ser Ile Ser Ile Pro Gly Ser Glu Thr Thr Asp Ile Glu Gly

4580 4585 4590

Glu Pro Thr Ser Ser Leu Thr Ala Gly Arg Lys Glu Asn Ser Thr

4595 4600 4605

Leu Gln Glu Met Asn Ser Thr Thr Glu Ser Asn Ile Ile Leu Ser

4610 4615 4620

Asn Val Ser Val Gly Ala Ile Thr Glu Ala Thr Lys Met Glu Val

4625 4630 4635

Pro Ser Phe Asp Ala Thr Phe Ile Pro Thr Pro Ala Gln Ser Thr

4640 4645 4650

Lys Phe Pro Asp Ile Phe Ser Val Ala Ser Ser Arg Leu Ser Asn

4655 4660 4665

Ser Pro Pro Met Thr Ile Ser Thr His Met Thr Thr Thr Gln Thr

4670 4675 4680

Gly Ser Ser Gly Ala Thr Ser Lys Ile Pro Leu Ala Leu Asp Thr

4685 4690 4695

Ser Thr Leu Glu Thr Ser Ala Gly Thr Pro Ser Val Val Thr Glu

4700 4705 4710

Gly Phe Ala His Ser Lys Ile Thr Thr Ala Met Asn Asn Asp Val

4715 4720 4725

Lys Asp Val Ser Gln Thr Asn Pro Pro Phe Gln Asp Glu Ala Ser

4730 4735 4740

Ser Pro Ser Ser Gln Ala Pro Val Leu Val Thr Thr Leu Pro Ser

4745 4750 4755

Ser Val Ala Phe Thr Pro Gln Trp His Ser Thr Ser Ser Pro Val

4760 4765 4770

Ser Met Ser Ser Val Leu Thr Ser Ser Leu Val Lys Thr Ala Gly

4775 4780 4785

Lys Val Asp Thr Ser Leu Glu Thr Val Thr Ser Ser Pro Gln Ser

4790 4795 4800

Met Ser Asn Thr Leu Asp Asp Ile Ser Val Thr Ser Ala Ala Thr

4805 4810 4815

Thr Asp Ile Glu Thr Thr His Pro Ser Ile Asn Thr Val Val Thr

4820 4825 4830

Asn Val Gly Thr Thr Gly Ser Ala Phe Glu Ser His Ser Thr Val

4835 4840 4845

Ser Ala Tyr Pro Glu Pro Ser Lys Val Thr Ser Pro Asn Val Thr

4850 4855 4860

Thr Ser Thr Met Glu Asp Thr Thr Ile Ser Arg Ser Ile Pro Lys

4865 4870 4875

Ser Ser Lys Thr Thr Arg Thr Glu Thr Glu Thr Thr Ser Ser Leu

4880 4885 4890

Thr Pro Lys Leu Arg Glu Thr Ser Ile Ser Gln Glu Ile Thr Ser

4895 4900 4905

Ser Thr Glu Thr Ser Thr Val Pro Tyr Lys Glu Leu Thr Gly Ala

4910 4915 4920

Thr Thr Glu Val Ser Arg Thr Asp Val Thr Ser Ser Ser Ser Thr

4925 4930 4935

Ser Phe Pro Gly Pro Asp Gln Ser Thr Val Ser Leu Asp Ile Ser

4940 4945 4950

Thr Glu Thr Asn Thr Arg Leu Ser Thr Ser Pro Ile Met Thr Glu

4955 4960 4965

Ser Ala Glu Ile Thr Ile Thr Thr Gln Thr Gly Pro His Gly Ala

4970 4975 4980

Thr Ser Gln Asp Thr Phe Thr Met Asp Pro Ser Asn Thr Thr Pro

4985 4990 4995

Gln Ala Gly Ile His Ser Ala Met Thr His Gly Phe Ser Gln Leu

5000 5005 5010

Asp Val Thr Thr Leu Met Ser Arg Ile Pro Gln Asp Val Ser Trp

5015 5020 5025

Thr Ser Pro Pro Ser Val Asp Lys Thr Ser Ser Pro Ser Ser Phe

5030 5035 5040

Leu Ser Ser Pro Ala Met Thr Thr Pro Ser Leu Ile Ser Ser Thr

5045 5050 5055

Leu Pro Glu Asp Lys Leu Ser Ser Pro Met Thr Ser Leu Leu Thr

5060 5065 5070

Ser Gly Leu Val Lys Ile Thr Asp Ile Leu Arg Thr Arg Leu Glu

5075 5080 5085

Pro Val Thr Ser Ser Leu Pro Asn Phe Ser Ser Thr Ser Asp Lys

5090 5095 5100

Ile Leu Ala Thr Ser Lys Asp Ser Lys Asp Thr Lys Glu Ile Phe

5105 5110 5115

Pro Ser Ile Asn Thr Glu Glu Thr Asn Val Lys Ala Asn Asn Ser

5120 5125 5130

Gly His Glu Ser His Ser Pro Ala Leu Ala Asp Ser Glu Thr Pro

5135 5140 5145

Lys Ala Thr Thr Gln Met Val Ile Thr Thr Thr Val Gly Asp Pro

5150 5155 5160

Ala Pro Ser Thr Ser Met Pro Val His Gly Ser Ser Glu Thr Thr

5165 5170 5175

Asn Ile Lys Arg Glu Pro Thr Tyr Phe Leu Thr Pro Arg Leu Arg

5180 5185 5190

Glu Thr Ser Thr Ser Gln Glu Ser Ser Phe Pro Thr Asp Thr Ser

5195 5200 5205

Phe Leu Leu Ser Lys Val Pro Thr Gly Thr Ile Thr Glu Val Ser

5210 5215 5220

Ser Thr Gly Val Asn Ser Ser Ser Lys Ile Ser Thr Pro Asp His

5225 5230 5235

Asp Lys Ser Thr Val Pro Pro Asp Thr Phe Thr Gly Glu Ile Pro

5240 5245 5250

Arg Val Phe Thr Ser Ser Ile Lys Thr Lys Ser Ala Glu Met Thr

5255 5260 5265

Ile Thr Thr Gln Ala Ser Pro Pro Glu Ser Ala Ser His Ser Thr

5270 5275 5280

Leu Pro Leu Asp Thr Ser Thr Thr Leu Ser Gln Gly Gly Thr His

5285 5290 5295

Ser Thr Val Thr Gln Gly Phe Pro Tyr Ser Glu Val Thr Thr Leu

5300 5305 5310

Met Gly Met Gly Pro Gly Asn Val Ser Trp Met Thr Thr Pro Pro

5315 5320 5325

Val Glu Glu Thr Ser Ser Val Ser Ser Leu Met Ser Ser Pro Ala

5330 5335 5340

Met Thr Ser Pro Ser Pro Val Ser Ser Thr Ser Pro Gln Ser Ile

5345 5350 5355

Pro Ser Ser Pro Leu Pro Val Thr Ala Leu Pro Thr Ser Val Leu

5360 5365 5370

Val Thr Thr Thr Asp Val Leu Gly Thr Thr Ser Pro Glu Ser Val

5375 5380 5385

Thr Ser Ser Pro Pro Asn Leu Ser Ser Ile Thr His Glu Arg Pro

5390 5395 5400

Ala Thr Tyr Lys Asp Thr Ala His Thr Glu Ala Ala Met His His

5405 5410 5415

Ser Thr Asn Thr Ala Val Thr Asn Val Gly Thr Ser Gly Ser Gly

5420 5425 5430

His Lys Ser Gln Ser Ser Val Leu Ala Asp Ser Glu Thr Ser Lys

5435 5440 5445

Ala Thr Pro Leu Met Ser Thr Thr Ser Thr Leu Gly Asp Thr Ser

5450 5455 5460

Val Ser Thr Ser Thr Pro Asn Ile Ser Gln Thr Asn Gln Ile Gln

5465 5470 5475

Thr Glu Pro Thr Ala Ser Leu Ser Pro Arg Leu Arg Glu Ser Ser

5480 5485 5490

Thr Ser Glu Lys Thr Ser Ser Thr Thr Glu Thr Asn Thr Ala Phe

5495 5500 5505

Ser Tyr Val Pro Thr Gly Ala Ile Thr Gln Ala Ser Arg Thr Glu

5510 5515 5520

Ile Ser Ser Ser Arg Thr Ser Ile Ser Asp Leu Asp Arg Pro Thr

5525 5530 5535

Ile Ala Pro Asp Ile Ser Thr Gly Met Ile Thr Arg Leu Phe Thr

5540 5545 5550

Ser Pro Ile Met Thr Lys Ser Ala Glu Met Thr Val Thr Thr Gln

5555 5560 5565

Thr Thr Thr Pro Gly Ala Thr Ser Gln Gly Ile Leu Pro Trp Asp

5570 5575 5580

Thr Ser Thr Thr Leu Phe Gln Gly Gly Thr His Ser Thr Val Ser

5585 5590 5595

Gln Gly Phe Pro His Ser Glu Ile Thr Thr Leu Arg Ser Arg Thr

5600 5605 5610

Pro Gly Asp Val Ser Trp Met Thr Thr Pro Pro Val Glu Glu Thr

5615 5620 5625

Ser Ser Gly Phe Ser Leu Met Ser Pro Ser Met Thr Ser Pro Ser

5630 5635 5640

Pro Val Ser Ser Thr Ser Pro Glu Ser Ile Pro Ser Ser Pro Leu

5645 5650 5655

Pro Val Thr Ala Leu Leu Thr Ser Val Leu Val Thr Thr Thr Asn

5660 5665 5670

Val Leu Gly Thr Thr Ser Pro Glu Pro Val Thr Ser Ser Pro Pro

5675 5680 5685

Asn Leu Ser Ser Pro Thr Gln Glu Arg Leu Thr Thr Tyr Lys Asp

5690 5695 5700

Thr Ala His Thr Glu Ala Met His Ala Ser Met His Thr Asn Thr

5705 5710 5715

Ala Val Ala Asn Val Gly Thr Ser Ile Ser Gly His Glu Ser Gln

5720 5725 5730

Ser Ser Val Pro Ala Asp Ser His Thr Ser Lys Ala Thr Ser Pro

5735 5740 5745

Met Gly Ile Thr Phe Ala Met Gly Asp Thr Ser Val Ser Thr Ser

5750 5755 5760

Thr Pro Ala Phe Phe Glu Thr Arg Ile Gln Thr Glu Ser Thr Ser

5765 5770 5775

Ser Leu Ile Pro Gly Leu Arg Asp Thr Arg Thr Ser Glu Glu Ile

5780 5785 5790

Asn Thr Val Thr Glu Thr Ser Thr Val Leu Ser Glu Val Pro Thr

5795 5800 5805

Thr Thr Thr Thr Glu Val Ser Arg Thr Glu Val Ile Thr Ser Ser

5810 5815 5820

Arg Thr Thr Ile Ser Gly Pro Asp His Ser Lys Met Ser Pro Tyr

5825 5830 5835

Ile Ser Thr Glu Thr Ile Thr Arg Leu Ser Thr Phe Pro Phe Val

5840 5845 5850

Thr Gly Ser Thr Glu Met Ala Ile Thr Asn Gln Thr Gly Pro Ile

5855 5860 5865

Gly Thr Ile Ser Gln Ala Thr Leu Thr Leu Asp Thr Ser Ser Thr

5870 5875 5880

Ala Ser Trp Glu Gly Thr His Ser Pro Val Thr Gln Arg Phe Pro

5885 5890 5895

His Ser Glu Glu Thr Thr Thr Met Ser Arg Ser Thr Lys Gly Val

5900 5905 5910

Ser Trp Gln Ser Pro Pro Ser Val Glu Glu Thr Ser Ser Pro Ser

5915 5920 5925

Ser Pro Val Pro Leu Pro Ala Ile Thr Ser His Ser Ser Leu Tyr

5930 5935 5940

Ser Ala Val Ser Gly Ser Ser Pro Thr Ser Ala Leu Pro Val Thr

5945 5950 5955

Ser Leu Leu Thr Ser Gly Arg Arg Lys Thr Ile Asp Met Leu Asp

5960 5965 5970

Thr His Ser Glu Leu Val Thr Ser Ser Leu Pro Ser Ala Ser Ser

5975 5980 5985

Phe Ser Gly Glu Ile Leu Thr Ser Glu Ala Ser Thr Asn Thr Glu

5990 5995 6000

Thr Ile His Phe Ser Glu Asn Thr Ala Glu Thr Asn Met Gly Thr

6005 6010 6015

Thr Asn Ser Met His Lys Leu His Ser Ser Val Ser Ile His Ser

6020 6025 6030

Gln Pro Ser Gly His Thr Pro Pro Lys Val Thr Gly Ser Met Met

6035 6040 6045

Glu Asp Ala Ile Val Ser Thr Ser Thr Pro Gly Ser Pro Glu Thr

6050 6055 6060

Lys Asn Val Asp Arg Asp Ser Thr Ser Pro Leu Thr Pro Glu Leu

6065 6070 6075

Lys Glu Asp Ser Thr Ala Leu Val Met Asn Ser Thr Thr Glu Ser

6080 6085 6090

Asn Thr Val Phe Ser Ser Val Ser Leu Asp Ala Ala Thr Glu Val

6095 6100 6105

Ser Arg Ala Glu Val Thr Tyr Tyr Asp Pro Thr Phe Met Pro Ala

6110 6115 6120

Ser Ala Gln Ser Thr Lys Ser Pro Asp Ile Ser Pro Glu Ala Ser

6125 6130 6135

Ser Ser His Ser Asn Ser Pro Pro Leu Thr Ile Ser Thr His Lys

6140 6145 6150

Thr Ile Ala Thr Gln Thr Gly Pro Ser Gly Val Thr Ser Leu Gly

6155 6160 6165

Gln Leu Thr Leu Asp Thr Ser Thr Ile Ala Thr Ser Ala Gly Thr

6170 6175 6180

Pro Ser Ala Arg Thr Gln Asp Phe Val Asp Ser Glu Thr Thr Ser

6185 6190 6195

Val Met Asn Asn Asp Leu Asn Asp Val Leu Lys Thr Ser Pro Phe

6200 6205 6210

Ser Ala Glu Glu Ala Asn Ser Leu Ser Ser Gln Ala Pro Leu Leu

6215 6220 6225

Val Thr Thr Ser Pro Ser Pro Val Thr Ser Thr Leu Gln Glu His

6230 6235 6240

Ser Thr Ser Ser Leu Val Ser Val Thr Ser Val Pro Thr Pro Thr

6245 6250 6255

Leu Ala Lys Ile Thr Asp Met Asp Thr Asn Leu Glu Pro Val Thr

6260 6265 6270

Arg Ser Pro Gln Asn Leu Arg Asn Thr Leu Ala Thr Ser Glu Ala

6275 6280 6285

Thr Thr Asp Thr His Thr Met His Pro Ser Ile Asn Thr Ala Val

6290 6295 6300

Ala Asn Val Gly Thr Thr Ser Ser Pro Asn Glu Phe Tyr Phe Thr

6305 6310 6315

Val Ser Pro Asp Ser Asp Pro Tyr Lys Ala Thr Ser Ala Val Val

6320 6325 6330

Ile Thr Ser Thr Ser Gly Asp Ser Ile Val Ser Thr Ser Met Pro

6335 6340 6345

Arg Ser Ser Ala Met Lys Lys Ile Glu Ser Glu Thr Thr Phe Ser

6350 6355 6360

Leu Ile Phe Arg Leu Arg Glu Thr Ser Thr Ser Gln Lys Ile Gly

6365 6370 6375

Ser Ser Ser Asp Thr Ser Thr Val Phe Asp Lys Ala Phe Thr Ala

6380 6385 6390

Ala Thr Thr Glu Val Ser Arg Thr Glu Leu Thr Ser Ser Ser Arg

6395 6400 6405

Thr Ser Ile Gln Gly Thr Glu Lys Pro Thr Met Ser Pro Asp Thr

6410 6415 6420

Ser Thr Arg Ser Val Thr Met Leu Ser Thr Phe Ala Gly Leu Thr

6425 6430 6435

Lys Ser Glu Glu Arg Thr Ile Ala Thr Gln Thr Gly Pro His Arg

6440 6445 6450

Ala Thr Ser Gln Gly Thr Leu Thr Trp Asp Thr Ser Ile Thr Thr

6455 6460 6465

Ser Gln Ala Gly Thr His Ser Ala Met Thr His Gly Phe Ser Gln

6470 6475 6480

Leu Asp Leu Ser Thr Leu Thr Ser Arg Val Pro Glu Tyr Ile Ser

6485 6490 6495

Gly Thr Ser Pro Pro Ser Val Glu Lys Thr Ser Ser Ser Ser Ser

6500 6505 6510

Leu Leu Ser Leu Pro Ala Ile Thr Ser Pro Ser Pro Val Pro Thr

6515 6520 6525

Thr Leu Pro Glu Ser Arg Pro Ser Ser Pro Val His Leu Thr Ser

6530 6535 6540

Leu Pro Thr Ser Gly Leu Val Lys Thr Thr Asp Met Leu Ala Ser

6545 6550 6555

Val Ala Ser Leu Pro Pro Asn Leu Gly Ser Thr Ser His Lys Ile

6560 6565 6570

Pro Thr Thr Ser Glu Asp Ile Lys Asp Thr Glu Lys Met Tyr Pro

6575 6580 6585

Ser Thr Asn Ile Ala Val Thr Asn Val Gly Thr Thr Thr Ser Glu

6590 6595 6600

Lys Glu Ser Tyr Ser Ser Val Pro Ala Tyr Ser Glu Pro Pro Lys

6605 6610 6615

Val Thr Ser Pro Met Val Thr Ser Phe Asn Ile Arg Asp Thr Ile

6620 6625 6630

Val Ser Thr Ser Met Pro Gly Ser Ser Glu Ile Thr Arg Ile Glu

6635 6640 6645

Met Glu Ser Thr Phe Ser Leu Ala His Gly Leu Lys Gly Thr Ser

6650 6655 6660

Thr Ser Gln Asp Pro Ile Val Ser Thr Glu Lys Ser Ala Val Leu

6665 6670 6675

His Lys Leu Thr Thr Gly Ala Thr Glu Thr Ser Arg Thr Glu Val

6680 6685 6690

Ala Ser Ser Arg Arg Thr Ser Ile Pro Gly Pro Asp His Ser Thr

6695 6700 6705

Glu Ser Pro Asp Ile Ser Thr Glu Val Ile Pro Ser Leu Pro Ile

6710 6715 6720

Ser Leu Gly Ile Thr Glu Ser Ser Asn Met Thr Ile Ile Thr Arg

6725 6730 6735

Thr Gly Pro Pro Leu Gly Ser Thr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Leu

6740 6745 6750

Asp Thr Pro Thr Thr Ser Ser Arg Ala Gly Thr His Ser Met Ala

6755 6760 6765

Thr Gln Glu Phe Pro His Ser Glu Met Thr Thr Val Met Asn Lys

6770 6775 6780

Asp Pro Glu Ile Leu Ser Trp Thr Ile Pro Pro Ser Ile Glu Lys

6785 6790 6795

Thr Ser Phe Ser Ser Ser Leu Met Pro Ser Pro Ala Met Thr Ser

6800 6805 6810

Pro Pro Val Ser Ser Thr Leu Pro Lys Thr Ile His Thr Thr Pro

6815 6820 6825

Ser Pro Met Thr Ser Leu Leu Thr Pro Ser Leu Val Met Thr Thr

6830 6835 6840

Asp Thr Leu Gly Thr Ser Pro Glu Pro Thr Thr Ser Ser Pro Pro

6845 6850 6855

Asn Leu Ser Ser Thr Ser His Glu Ile Leu Thr Thr Asp Glu Asp

6860 6865 6870

Thr Thr Ala Ile Glu Ala Met His Pro Ser Thr Ser Thr Ala Ala

6875 6880 6885

Thr Asn Val Glu Thr Thr Ser Ser Gly His Gly Ser Gln Ser Ser

6890 6895 6900

Val Leu Ala Asp Ser Glu Lys Thr Lys Ala Thr Ala Pro Met Asp

6905 6910 6915

Thr Thr Ser Thr Met Gly His Thr Thr Val Ser Thr Ser Met Ser

6920 6925 6930

Val Ser Ser Glu Thr Thr Lys Ile Lys Arg Glu Ser Thr Tyr Ser

6935 6940 6945

Leu Thr Pro Gly Leu Arg Glu Thr Ser Ile Ser Gln Asn Ala Ser

6950 6955 6960

Phe Ser Thr Asp Thr Ser Ile Val Leu Ser Glu Val Pro Thr Gly

6965 6970 6975

Thr Thr Ala Glu Val Ser Arg Thr Glu Val Thr Ser Ser Gly Arg

6980 6985 6990

Thr Ser Ile Pro Gly Pro Ser Gln Ser Thr Val Leu Pro Glu Ile

6995 7000 7005

Ser Thr Arg Thr Met Thr Arg Leu Phe Ala Ser Pro Thr Met Thr

7010 7015 7020

Glu Ser Ala Glu Met Thr Ile Pro Thr Gln Thr Gly Pro Ser Gly

7025 7030 7035

Ser Thr Ser Gln Asp Thr Leu Thr Leu Asp Thr Ser Thr Thr Lys

7040 7045 7050

Ser Gln Ala Lys Thr His Ser Thr Leu Thr Gln Arg Phe Pro His

7055 7060 7065

Ser Glu Met Thr Thr Leu Met Ser Arg Gly Pro Gly Asp Met Ser

7070 7075 7080

Trp Gln Ser Ser Pro Ser Leu Glu Asn Pro Ser Ser Leu Pro Ser

7085 7090 7095

Leu Leu Ser Leu Pro Ala Thr Thr Ser Pro Pro Pro Ile Ser Ser

7100 7105 7110

Thr Leu Pro Val Thr Ile Ser Ser Ser Pro Leu Pro Val Thr Ser

7115 7120 7125

Leu Leu Thr Ser Ser Pro Val Thr Thr Thr Asp Met Leu His Thr

7130 7135 7140

Ser Pro Glu Leu Val Thr Ser Ser Pro Pro Lys Leu Ser His Thr

7145 7150 7155

Ser Asp Glu Arg Leu Thr Thr Gly Lys Asp Thr Thr Asn Thr Glu

7160 7165 7170

Ala Val His Pro Ser Thr Asn Thr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ile

7175 7180 7185

Pro Ser Ser Gly His Glu Ser Pro Ser Ser Ala Leu Ala Asp Ser

7190 7195 7200

Glu Thr Ser Lys Ala Thr Ser Pro Met Phe Ile Thr Ser Thr Gln

7205 7210 7215

Glu Asp Thr Thr Val Ala Ile Ser Thr Pro His Phe Leu Glu Thr

7220 7225 7230

Ser Arg Ile Gln Lys Glu Ser Ile Ser Ser Leu Ser Pro Lys Leu

7235 7240 7245

Arg Glu Thr Gly Ser Ser Val Glu Thr Ser Ser Ala Ile Glu Thr

7250 7255 7260

Ser Ala Val Leu Ser Glu Val Ser Ile Gly Ala Thr Thr Glu Ile

7265 7270 7275

Ser Arg Thr Glu Val Thr Ser Ser Ser Arg Thr Ser Ile Ser Gly

7280 7285 7290

Ser Ala Glu Ser Thr Met Leu Pro Glu Ile Ser Thr Thr Arg Lys

7295 7300 7305

Ile Ile Lys Phe Pro Thr Ser Pro Ile Leu Ala Glu Ser Ser Glu

7310 7315 7320

Met Thr Ile Lys Thr Gln Thr Ser Pro Pro Gly Ser Thr Ser Glu

7325 7330 7335

Ser Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Thr Thr Pro Ser Leu Val Ile

7340 7345 7350

Thr His Ser Thr Met Thr Gln Arg Leu Pro His Ser Glu Ile Thr

7355 7360 7365

Thr Leu Val Ser Arg Gly Ala Gly Asp Val Pro Arg Pro Ser Ser

7370 7375 7380

Leu Pro Val Glu Glu Thr Ser Pro Pro Ser Ser Gln Leu Ser Leu

7385 7390 7395

Ser Ala Met Ile Ser Pro Ser Pro Val Ser Ser Thr Leu Pro Ala

7400 7405 7410

Ser Ser His Ser Ser Ser Ala Ser Val Thr Ser Leu Leu Thr Pro

7415 7420 7425

Gly Gln Val Lys Thr Thr Glu Val Leu Asp Ala Ser Ala Glu Pro

7430 7435 7440

Glu Thr Ser Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ser Thr Ser Val Glu Ile

7445 7450 7455

Leu Ala Thr Ser Glu Val Thr Thr Asp Thr Glu Lys Ile His Pro

7460 7465 7470

Phe Ser Asn Thr Ala Val Thr Lys Val Gly Thr Ser Ser Ser Gly

7475 7480 7485

His Glu Ser Pro Ser Ser Val Leu Pro Asp Ser Glu Thr Thr Lys

7490 7495 7500

Ala Thr Ser Ala Met Gly Thr Ile Ser Ile Met Gly Asp Thr Ser

7505 7510 7515

Val Ser Thr Leu Thr Pro Ala Leu Ser Asn Thr Arg Lys Ile Gln

7520 7525 7530

Ser Glu Pro Ala Ser Ser Leu Thr Thr Arg Leu Arg Glu Thr Ser

7535 7540 7545

Thr Ser Glu Glu Thr Ser Leu Ala Thr Glu Ala Asn Thr Val Leu

7550 7555 7560

Ser Lys Val Ser Thr Gly Ala Thr Thr Glu Val Ser Arg Thr Glu

7565 7570 7575

Ala Ile Ser Phe Ser Arg Thr Ser Met Ser Gly Pro Glu Gln Ser

7580 7585 7590

Thr Met Ser Gln Asp Ile Ser Ile Gly Thr Ile Pro Arg Ile Ser

7595 7600 7605

Ala Ser Ser Val Leu Thr Glu Ser Ala Lys Met Thr Ile Thr Thr

7610 7615 7620

Gln Thr Gly Pro Ser Glu Ser Thr Leu Glu Ser Thr Leu Asn Leu

7625 7630 7635

Asn Thr Ala Thr Thr Pro Ser Trp Val Glu Thr His Ser Ile Val

7640 7645 7650

Ile Gln Gly Phe Pro His Pro Glu Met Thr Thr Ser Met Gly Arg

7655 7660 7665

Gly Pro Gly Gly Val Ser Trp Pro Ser Pro Pro Phe Val Lys Glu

7670 7675 7680

Thr Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Ser Leu Pro Ala Val Thr Ser

7685 7690 7695

Pro His Pro Val Ser Thr Thr Phe Leu Ala His Ile Pro Pro Ser

7700 7705 7710

Pro Leu Pro Val Thr Ser Leu Leu Thr Ser Gly Pro Ala Thr Thr

7715 7720 7725

Thr Asp Ile Leu Gly Thr Ser Thr Glu Pro Gly Thr Ser Ser Ser

7730 7735 7740

Ser Ser Leu Ser Thr Thr Ser His Glu Arg Leu Thr Thr Tyr Lys

7745 7750 7755

Asp Thr Ala His Thr Glu Ala Val His Pro Ser Thr Asn Thr Gly

7760 7765 7770

Gly Thr Asn Val Ala Thr Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Ser Gln Ser

7775 7780 7785

Ser Val Leu Ala Asp Ser Ser Pro Met Cys Thr Thr Ser Thr Met

7790 7795 7800

Gly Asp Thr Ser Val Leu Thr Ser Thr Pro Ala Phe Leu Glu Thr

7805 7810 7815

Arg Arg Ile Gln Thr Glu Leu Ala Ser Ser Leu Thr Pro Gly Leu

7820 7825 7830

Arg Glu Ser Ser Gly Ser Glu Gly Thr Ser Ser Gly Thr Lys Met

7835 7840 7845

Ser Thr Val Leu Ser Lys Val Pro Thr Gly Ala Thr Thr Glu Ile

7850 7855 7860

Ser Lys Glu Asp Val Thr Ser Ile Pro Gly Pro Ala Gln Ser Thr

7865 7870 7875

Ile Ser Pro Asp Ile Ser Thr Arg Thr Val Ser Trp Phe Ser Thr

7880 7885 7890

Ser Pro Val Met Thr Glu Ser Ala Glu Ile Thr Met Asn Thr His

7895 7900 7905

Thr Ser Pro Leu Gly Ala Thr Thr Gln Gly Thr Ser Thr Leu Asp

7910 7915 7920

Thr Ser Ser Thr Thr Ser Leu Thr Met Thr His Ser Thr Ile Ser

7925 7930 7935

Gln Gly Phe Ser His Ser Gln Met Ser Thr Leu Met Arg Arg Gly

7940 7945 7950

Pro Glu Asp Val Ser Trp Met Ser Pro Pro Leu Leu Glu Lys Thr

7955 7960 7965

Arg Pro Ser Phe Ser Leu Met Ser Ser Pro Ala Thr Thr Ser Pro

7970 7975 7980

Ser Pro Val Ser Ser Thr Leu Pro Glu Ser Ile Ser Ser Ser Pro

7985 7990 7995

Leu Pro Val Thr Ser Leu Leu Thr Ser Gly Leu Ala Lys Thr Thr

8000 8005 8010

Asp Met Leu His Lys Ser Ser Glu Pro Val Thr Asn Ser Pro Ala

8015 8020 8025

Asn Leu Ser Ser Thr Ser Val Glu Ile Leu Ala Thr Ser Glu Val

8030 8035 8040

Thr Thr Asp Thr Glu Lys Thr His Pro Ser Ser Asn Arg Thr Val

8045 8050 8055

Thr Asp Val Gly Thr Ser Ser Ser Gly His Glu Ser Thr Ser Phe

8060 8065 8070

Val Leu Ala Asp Ser Gln Thr Ser Lys Val Thr Ser Pro Met Val

8075 8080 8085

Ile Thr Ser Thr Met Glu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ser Thr Pro

8090 8095 8100

Gly Phe Phe Glu Thr Ser Arg Ile Gln Thr Glu Pro Thr Ser Ser

8105 8110 8115

Leu Thr Leu Gly Leu Arg Lys Thr Ser Ser Ser Glu Gly Thr Ser

8120 8125 8130

Leu Ala Thr Glu Met Ser Thr Val Leu Ser Gly Val Pro Thr Gly

8135 8140 8145

Ala Thr Ala Glu Val Ser Arg Thr Glu Val Thr Ser Ser Ser Arg

8150 8155 8160

Thr Ser Ile Ser Gly Phe Ala Gln Leu Thr Val Ser Pro Glu Thr

8165 8170 8175

Ser Thr Glu Thr Ile Thr Arg Leu Pro Thr Ser Ser Ile Met Thr

8180 8185 8190

Glu Ser Ala Glu Met Met Ile Lys Thr Gln Thr Asp Pro Pro Gly

8195 8200 8205

Ser Thr Pro Glu Ser Thr His Thr Val Asp Ile Ser Thr Thr Pro

8210 8215 8220

Asn Trp Val Glu Thr His Ser Thr Val Thr Gln Arg Phe Ser His

8225 8230 8235

Ser Glu Met Thr Thr Leu Val Ser Arg Ser Pro Gly Asp Met Leu

8240 8245 8250

Trp Pro Ser Gln Ser Ser Val Glu Glu Thr Ser Ser Ala Ser Ser

8255 8260 8265

Leu Leu Ser Leu Pro Ala Thr Thr Ser Pro Ser Pro Val Ser Ser

8270 8275 8280

Thr Leu Val Glu Asp Phe Pro Ser Ala Ser Leu Pro Val Thr Ser

8285 8290 8295

Leu Leu Asn Pro Gly Leu Val Ile Thr Thr Asp Arg Met Gly Ile

8300 8305 8310

Ser Arg Glu Pro Gly Thr Ser Ser Thr Ser Asn Leu Ser Ser Thr

8315 8320 8325

Ser His Glu Arg Leu Thr Thr Leu Glu Asp Thr Val Asp Thr Glu

8330 8335 8340

Asp Met Gln Pro Ser Thr His Thr Ala Val Thr Asn Val Arg Thr

8345 8350 8355

Ser Ile Ser Gly His Glu Ser Gln Ser Ser Val Leu Ser Asp Ser

8360 8365 8370

Glu Thr Pro Lys Ala Thr Ser Pro Met Gly Thr Thr Tyr Thr Met

8375 8380 8385

Gly Glu Thr Ser Val Ser Ile Ser Thr Ser Asp Phe Phe Glu Thr

8390 8395 8400

Ser Arg Ile Gln Ile Glu Pro Thr Ser Ser Leu Thr Ser Gly Leu

8405 8410 8415

Arg Glu Thr Ser Ser Ser Glu Arg Ile Ser Ser Ala Thr Glu Gly

8420 8425 8430

Ser Thr Val Leu Ser Glu Val Pro Ser Gly Ala Thr Thr Glu Val

8435 8440 8445

Ser Arg Thr Glu Val Ile Ser Ser Arg Gly Thr Ser Met Ser Gly

8450 8455 8460

Pro Asp Gln Phe Thr Ile Ser Pro Asp Ile Ser Thr Glu Ala Ile

8465 8470 8475

Thr Arg Leu Ser Thr Ser Pro Ile Met Thr Glu Ser Ala Glu Ser

8480 8485 8490

Ala Ile Thr Ile Glu Thr Gly Ser Pro Gly Ala Thr Ser Glu Gly

8495 8500 8505

Thr Leu Thr Leu Asp Thr Ser Thr Thr Thr Phe Trp Ser Gly Thr

8510 8515 8520

His Ser Thr Ala Ser Pro Gly Phe Ser His Ser Glu Met Thr Thr

8525 8530 8535

Leu Met Ser Arg Thr Pro Gly Asp Val Pro Trp Pro Ser Leu Pro

8540 8545 8550

Ser Val Glu Glu Ala Ser Ser Val Ser Ser Ser Leu Ser Ser Pro

8555 8560 8565

Ala Met Thr Ser Thr Ser Phe Phe Ser Thr Leu Pro Glu Ser Ile

8570 8575 8580

Ser Ser Ser Pro His Pro Val Thr Ala Leu Leu Thr Leu Gly Pro

8585 8590 8595

Val Lys Thr Thr Asp Met Leu Arg Thr Ser Ser Glu Pro Glu Thr

8600 8605 8610

Ser Ser Pro Pro Asn Leu Ser Ser Thr Ser Ala Glu Ile Leu Ala

8615 8620 8625

Thr Ser Glu Val Thr Lys Asp Arg Glu Lys Ile His Pro Ser Ser

8630 8635 8640

Asn Thr Pro Val Val Asn Val Gly Thr Val Ile Tyr Lys His Leu

8645 8650 8655

Ser Pro Ser Ser Val Leu Ala Asp Leu Val Thr Thr Lys Pro Thr

8660 8665 8670

Ser Pro Met Ala Thr Thr Ser Thr Leu Gly Asn Thr Ser Val Ser

8675 8680 8685

Thr Ser Thr Pro Ala Phe Pro Glu Thr Met Met Thr Gln Pro Thr

8690 8695 8700

Ser Ser Leu Thr Ser Gly Leu Arg Glu Ile Ser Thr Ser Gln Glu

8705 8710 8715

Thr Ser Ser Ala Thr Glu Arg Ser Ala Ser Leu Ser Gly Met Pro

8720 8725 8730

Thr Gly Ala Thr Thr Lys Val Ser Arg Thr Glu Ala Leu Ser Leu

8735 8740 8745

Gly Arg Thr Ser Thr Pro Gly Pro Ala Gln Ser Thr Ile Ser Pro

8750 8755 8760

Glu Ile Ser Thr Glu Thr Ile Thr Arg Ile Ser Thr Pro Leu Thr

8765 8770 8775

Thr Thr Gly Ser Ala Glu Met Thr Ile Thr Pro Lys Thr Gly His

8780 8785 8790

Ser Gly Ala Ser Ser Gln Gly Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Ser

8795 8800 8805

Arg Ala Ser Trp Pro Gly Thr His Ser Ala Ala Thr His Arg Ser

8810 8815 8820

Pro His Ser Gly Met Thr Thr Pro Met Ser Arg Gly Pro Glu Asp

8825 8830 8835

Val Ser Trp Pro Ser Arg Pro Ser Val Glu Lys Thr Ser Pro Pro

8840 8845 8850

Ser Ser Leu Val Ser Leu Ser Ala Val Thr Ser Pro Ser Pro Leu

8855 8860 8865

Tyr Ser Thr Pro Ser Glu Ser Ser His Ser Ser Pro Leu Arg Val

8870 8875 8880

Thr Ser Leu Phe Thr Pro Val Met Met Lys Thr Thr Asp Met Leu

8885 8890 8895

Asp Thr Ser Leu Glu Pro Val Thr Thr Ser Pro Pro Ser Met Asn

8900 8905 8910

Ile Thr Ser Asp Glu Ser Leu Ala Thr Ser Lys Ala Thr Met Glu

8915 8920 8925

Thr Glu Ala Ile Gln Leu Ser Glu Asn Thr Ala Val Thr Gln Met

8930 8935 8940

Gly Thr Ile Ser Ala Arg Gln Glu Phe Tyr Ser Ser Tyr Pro Gly

8945 8950 8955

Leu Pro Glu Pro Ser Lys Val Thr Ser Pro Val Val Thr Ser Ser

8960 8965 8970

Thr Ile Lys Asp Ile Val Ser Thr Thr Ile Pro Ala Ser Ser Glu

8975 8980 8985

Ile Thr Arg Ile Glu Met Glu Ser Thr Ser Thr Leu Thr Pro Thr

8990 8995 9000

Pro Arg Glu Thr Ser Thr Ser Gln Glu Ile His Ser Ala Thr Lys

9005 9010 9015

Pro Ser Thr Val Pro Tyr Lys Ala Leu Thr Ser Ala Thr Ile Glu

9020 9025 9030

Asp Ser Met Thr Gln Val Met Ser Ser Ser Arg Gly Pro Ser Pro

9035 9040 9045

Asp Gln Ser Thr Met Ser Gln Asp Ile Ser Thr Glu Val Ile Thr

9050 9055 9060

Arg Leu Ser Thr Ser Pro Ile Lys Thr Glu Ser Thr Glu Met Thr

9065 9070 9075

Ile Thr Thr Gln Thr Gly Ser Pro Gly Ala Thr Ser Arg Gly Thr

9080 9085 9090

Leu Thr Leu Asp Thr Ser Thr Thr Phe Met Ser Gly Thr His Ser

9095 9100 9105

Thr Ala Ser Gln Gly Phe Ser His Ser Gln Met Thr Ala Leu Met

9110 9115 9120

Ser Arg Thr Pro Gly Asp Val Pro Trp Leu Ser His Pro Ser Val

9125 9130 9135

Glu Glu Ala Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Ser Ser Pro Val Met

9140 9145 9150

Thr Ser Ser Ser Pro Val Ser Ser Thr Leu Pro Asp Ser Ile His

9155 9160 9165

Ser Ser Ser Leu Pro Val Thr Ser Leu Leu Thr Ser Gly Leu Val

9170 9175 9180

Lys Thr Thr Glu Leu Leu Gly Thr Ser Ser Glu Pro Glu Thr Ser

9185 9190 9195

Ser Pro Pro Asn Leu Ser Ser Thr Ser Ala Glu Ile Leu Ala Ile

9200 9205 9210

Thr Glu Val Thr Thr Asp Thr Glu Lys Leu Glu Met Thr Asn Val

9215 9220 9225

Val Thr Ser Gly Tyr Thr His Glu Ser Pro Ser Ser Val Leu Ala

9230 9235 9240

Asp Ser Val Thr Thr Lys Ala Thr Ser Ser Met Gly Ile Thr Tyr

9245 9250 9255

Pro Thr Gly Asp Thr Asn Val Leu Thr Ser Thr Pro Ala Phe Ser

9260 9265 9270

Asp Thr Ser Arg Ile Gln Thr Lys Ser Lys Leu Ser Leu Thr Pro

9275 9280 9285

Gly Leu Met Glu Thr Ser Ile Ser Glu Glu Thr Ser Ser Ala Thr

9290 9295 9300

Glu Lys Ser Thr Val Leu Ser Ser Val Pro Thr Gly Ala Thr Thr

9305 9310 9315

Glu Val Ser Arg Thr Glu Ala Ile Ser Ser Ser Arg Thr Ser Ile

9320 9325 9330

Pro Gly Pro Ala Gln Ser Thr Met Ser Ser Asp Thr Ser Met Glu

9335 9340 9345

Thr Ile Thr Arg Ile Ser Thr Pro Leu Thr Arg Lys Glu Ser Thr

9350 9355 9360

Asp Met Ala Ile Thr Pro Lys Thr Gly Pro Ser Gly Ala Thr Ser

9365 9370 9375

Gln Gly Thr Phe Thr Leu Asp Ser Ser Ser Thr Ala Ser Trp Pro

9380 9385 9390

Gly Thr His Ser Ala Thr Thr Gln Arg Phe Pro Gln Ser Val Val

9395 9400 9405

Thr Thr Pro Met Ser Arg Gly Pro Glu Asp Val Ser Trp Pro Ser

9410 9415 9420

Pro Leu Ser Val Glu Lys Asn Ser Pro Pro Ser Ser Leu Val Ser

9425 9430 9435

Ser Ser Ser Val Thr Ser Pro Ser Pro Leu Tyr Ser Thr Pro Ser

9440 9445 9450

Gly Ser Ser His Ser Ser Pro Val Pro Val Thr Ser Leu Phe Thr

9455 9460 9465

Ser Ile Met Met Lys Ala Thr Asp Met Leu Asp Ala Ser Leu Glu

9470 9475 9480

Pro Glu Thr Thr Ser Ala Pro Asn Met Asn Ile Thr Ser Asp Glu

9485 9490 9495

Ser Leu Ala Ala Ser Lys Ala Thr Thr Glu Thr Glu Ala Ile His

9500 9505 9510

Val Phe Glu Asn Thr Ala Ala Ser His Val Glu Thr Thr Ser Ala

9515 9520 9525

Thr Glu Glu Leu Tyr Ser Ser Ser Pro Gly Phe Ser Glu Pro Thr

9530 9535 9540

Lys Val Ile Ser Pro Val Val Thr Ser Ser Ser Ile Arg Asp Asn

9545 9550 9555

Met Val Ser Thr Thr Met Pro Gly Ser Ser Gly Ile Thr Arg Ile

9560 9565 9570

Glu Ile Glu Ser Met Ser Ser Leu Thr Pro Gly Leu Arg Glu Thr

9575 9580 9585

Arg Thr Ser Gln Asp Ile Thr Ser Ser Thr Glu Thr Ser Thr Val

9590 9595 9600

Leu Tyr Lys Met Pro Ser Gly Ala Thr Pro Glu Val Ser Arg Thr

9605 9610 9615

Glu Val Met Pro Ser Ser Arg Thr Ser Ile Pro Gly Pro Ala Gln

9620 9625 9630

Ser Thr Met Ser Leu Asp Ile Ser Asp Glu Val Val Thr Arg Leu

9635 9640 9645

Ser Thr Ser Pro Ile Met Thr Glu Ser Ala Glu Ile Thr Ile Thr

9650 9655 9660

Thr Gln Thr Gly Tyr Ser Leu Ala Thr Ser Gln Val Thr Leu Pro

9665 9670 9675

Leu Gly Thr Ser Met Thr Phe Leu Ser Gly Thr His Ser Thr Met

9680 9685 9690

Ser Gln Gly Leu Ser His Ser Glu Met Thr Asn Leu Met Ser Arg

9695 9700 9705

Gly Pro Glu Ser Leu Ser Trp Thr Ser Pro Arg Phe Val Glu Thr

9710 9715 9720

Thr Arg Ser Ser Ser Ser Leu Thr Ser Leu Pro Leu Thr Thr Ser

9725 9730 9735

Leu Ser Pro Val Ser Ser Thr Leu Leu Asp Ser Ser Pro Ser Ser

9740 9745 9750

Pro Leu Pro Val Thr Ser Leu Ile Leu Pro Gly Leu Val Lys Thr

9755 9760 9765

Thr Glu Val Leu Asp Thr Ser Ser Glu Pro Lys Thr Ser Ser Ser

9770 9775 9780

Pro Asn Leu Ser Ser Thr Ser Val Glu Ile Pro Ala Thr Ser Glu

9785 9790 9795

Ile Met Thr Asp Thr Glu Lys Ile His Pro Ser Ser Asn Thr Ala

9800 9805 9810

Val Ala Lys Val Arg Thr Ser Ser Ser Val His Glu Ser His Ser

9815 9820 9825

Ser Val Leu Ala Asp Ser Glu Thr Thr Ile Thr Ile Pro Ser Met

9830 9835 9840

Gly Ile Thr Ser Ala Val Asp Asp Thr Thr Val Phe Thr Ser Asn

9845 9850 9855

Pro Ala Phe Ser Glu Thr Arg Arg Ile Pro Thr Glu Pro Thr Phe

9860 9865 9870

Ser Leu Thr Pro Gly Phe Arg Glu Thr Ser Thr Ser Glu Glu Thr

9875 9880 9885

Thr Ser Ile Thr Glu Thr Ser Ala Val Leu Tyr Gly Val Pro Thr

9890 9895 9900

Ser Ala Thr Thr Glu Val Ser Met Thr Glu Ile Met Ser Ser Asn

9905 9910 9915

Arg Ile His Ile Pro Asp Ser Asp Gln Ser Thr Met Ser Pro Asp

9920 9925 9930

Ile Ile Thr Glu Val Ile Thr Arg Leu Ser Ser Ser Ser Met Met

9935 9940 9945

Ser Glu Ser Thr Gln Met Thr Ile Thr Thr Gln Lys Ser Ser Pro

9950 9955 9960

Gly Ala Thr Ala Gln Ser Thr Leu Thr Leu Ala Thr Thr Thr Ala

9965 9970 9975

Pro Leu Ala Arg Thr His Ser Thr Val Pro Pro Arg Phe Leu His

9980 9985 9990

Ser Glu Met Thr Thr Leu Met Ser Arg Ser Pro Glu Asn Pro Ser

9995 10000 10005

Trp Lys Ser Ser Leu Phe Val Glu Lys Thr Ser Ser Ser Ser Ser

10010 10015 10020

Leu Leu Ser Leu Pro Val Thr Thr Ser Pro Ser Val Ser Ser Thr

10025 10030 10035

Leu Pro Gln Ser Ile Pro Ser Ser Ser Phe Ser Val Thr Ser Leu

10040 10045 10050

Leu Thr Pro Gly Met Val Lys Thr Thr Asp Thr Ser Thr Glu Pro

10055 10060 10065

Gly Thr Ser Leu Ser Pro Asn Leu Ser Gly Thr Ser Val Glu Ile

10070 10075 10080

Leu Ala Ala Ser Glu Val Thr Thr Asp Thr Glu Lys Ile His Pro

10085 10090 10095

Ser Ser Ser Met Ala Val Thr Asn Val Gly Thr Thr Ser Ser Gly

10100 10105 10110

His Glu Leu Tyr Ser Ser Val Ser Ile His Ser Glu Pro Ser Lys

10115 10120 10125

Ala Thr Tyr Pro Val Gly Thr Pro Ser Ser Met Ala Glu Thr Ser

10130 10135 10140

Ile Ser Thr Ser Met Pro Ala Asn Phe Glu Thr Thr Gly Phe Glu

10145 10150 10155

Ala Glu Pro Phe Ser His Leu Thr Ser Gly Phe Arg Lys Thr Asn

10160 10165 10170

Met Ser Leu Asp Thr Ser Ser Val Thr Pro Thr Asn Thr Pro Ser

10175 10180 10185

Ser Pro Gly Ser Thr His Leu Leu Gln Ser Ser Lys Thr Asp Phe

10190 10195 10200

Thr Ser Ser Ala Lys Thr Ser Ser Pro Asp Trp Pro Pro Ala Ser

10205 10210 10215

Gln Tyr Thr Glu Ile Pro Val Asp Ile Ile Thr Pro Phe Asn Ala

10220 10225 10230

Ser Pro Ser Ile Thr Glu Ser Thr Gly Ile Thr Ser Phe Pro Glu

10235 10240 10245

Ser Arg Phe Thr Met Ser Val Thr Glu Ser Thr His His Leu Ser

10250 10255 10260

Thr Asp Leu Leu Pro Ser Ala Glu Thr Ile Ser Thr Gly Thr Val

10265 10270 10275

Met Pro Ser Leu Ser Glu Ala Met Thr Ser Phe Ala Thr Thr Gly

10280 10285 10290

Val Pro Arg Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Pro Phe Ser Arg Thr

10295 10300 10305

Glu Ser Gly Pro Gly Asp Ala Thr Leu Ser Thr Ile Ala Glu Ser

10310 10315 10320

Leu Pro Ser Ser Thr Pro Val Pro Phe Ser Ser Ser Thr Phe Thr

10325 10330 10335

Thr Thr Asp Ser Ser Thr Ile Pro Ala Leu His Glu Ile Thr Ser

10340 10345 10350

Ser Ser Ala Thr Pro Tyr Arg Val Asp Thr Ser Leu Gly Thr Glu

10355 10360 10365

Ser Ser Thr Thr Glu Gly Arg Leu Val Met Val Ser Thr Leu Asp

10370 10375 10380

Thr Ser Ser Gln Pro Gly Arg Thr Ser Ser Ser Pro Ile Leu Asp

10385 10390 10395

Thr Arg Met Thr Glu Ser Val Glu Leu Gly Thr Val Thr Ser Ala

10400 10405 10410

Tyr Gln Val Pro Ser Leu Ser Thr Arg Leu Thr Arg Thr Asp Gly

10415 10420 10425

Ile Met Glu His Ile Thr Lys Ile Pro Asn Glu Ala Ala His Arg

10430 10435 10440

Gly Thr Ile Arg Pro Val Lys Gly Pro Gln Thr Ser Thr Ser Pro

10445 10450 10455

Ala Ser Pro Lys Gly Leu His Thr Gly Gly Thr Lys Arg Met Glu

10460 10465 10470

Thr Thr Thr Thr Ala Leu Lys Thr Thr Thr Thr Ala Leu Lys Thr

10475 10480 10485

Thr Ser Arg Ala Thr Leu Thr Thr Ser Val Tyr Thr Pro Thr Leu

10490 10495 10500

Gly Thr Leu Thr Pro Leu Asn Ala Ser Met Gln Met Ala Ser Thr

10505 10510 10515

Ile Pro Thr Glu Met Met Ile Thr Thr Pro Tyr Val Phe Pro Asp

10520 10525 10530

Val Pro Glu Thr Thr Ser Ser Leu Ala Thr Ser Leu Gly Ala Glu

10535 10540 10545

Thr Ser Thr Ala Leu Pro Arg Thr Thr Pro Ser Val Phe Asn Arg

10550 10555 10560

Glu Ser Glu Thr Thr Ala Ser Leu Val Ser Arg Ser Gly Ala Glu

10565 10570 10575

Arg Ser Pro Val Ile Gln Thr Leu Asp Val Ser Ser Ser Glu Pro

10580 10585 10590

Asp Thr Thr Ala Ser Trp Val Ile His Pro Ala Glu Thr Ile Pro

10595 10600 10605

Thr Val Ser Lys Thr Thr Pro Asn Phe Phe His Ser Glu Leu Asp

10610 10615 10620

Thr Val Ser Ser Thr Ala Thr Ser His Gly Ala Asp Val Ser Ser

10625 10630 10635

Ala Ile Pro Thr Asn Ile Ser Pro Ser Glu Leu Asp Ala Leu Thr

10640 10645 10650

Pro Leu Val Thr Ile Ser Gly Thr Asp Thr Ser Thr Thr Phe Pro

10655 10660 10665

Thr Leu Thr Lys Ser Pro His Glu Thr Glu Thr Arg Thr Thr Trp

10670 10675 10680

Leu Thr His Pro Ala Glu Thr Ser Ser Thr Ile Pro Arg Thr Ile

10685 10690 10695

Pro Asn Phe Ser His His Glu Ser Asp Ala Thr Pro Ser Ile Ala

10700 10705 10710

Thr Ser Pro Gly Ala Glu Thr Ser Ser Ala Ile Pro Ile Met Thr

10715 10720 10725

Val Ser Pro Gly Ala Glu Asp Leu Val Thr Ser Gln Val Thr Ser

10730 10735 10740

Ser Gly Thr Asp Arg Asn Met Thr Ile Pro Thr Leu Thr Leu Ser

10745 10750 10755

Pro Gly Glu Pro Lys Thr Ile Ala Ser Leu Val Thr His Pro Glu

10760 10765 10770

Ala Gln Thr Ser Ser Ala Ile Pro Thr Ser Thr Ile Ser Pro Ala

10775 10780 10785

Val Ser Arg Leu Val Thr Ser Met Val Thr Ser Leu Ala Ala Lys

10790 10795 10800

Thr Ser Thr Thr Asn Arg Ala Leu Thr Asn Ser Pro Gly Glu Pro

10805 10810 10815

Ala Thr Thr Val Ser Leu Val Thr His Pro Ala Gln Thr Ser Pro

10820 10825 10830

Thr Val Pro Trp Thr Thr Ser Ile Phe Phe His Ser Lys Ser Asp

10835 10840 10845

Thr Thr Pro Ser Met Thr Thr Ser His Gly Ala Glu Ser Ser Ser

10850 10855 10860

Ala Val Pro Thr Pro Thr Val Ser Thr Glu Val Pro Gly Val Val

10865 10870 10875

Thr Pro Leu Val Thr Ser Ser Arg Ala Val Ile Ser Thr Thr Ile

10880 10885 10890

Pro Ile Leu Thr Leu Ser Pro Gly Glu Pro Glu Thr Thr Pro Ser

10895 10900 10905

Met Ala Thr Ser His Gly Glu Glu Ala Ser Ser Ala Ile Pro Thr

10910 10915 10920

Pro Thr Val Ser Pro Gly Val Pro Gly Val Val Thr Ser Leu Val

10925 10930 10935

Thr Ser Ser Arg Ala Val Thr Ser Thr Thr Ile Pro Ile Leu Thr

10940 10945 10950

Phe Ser Leu Gly Glu Pro Glu Thr Thr Pro Ser Met Ala Thr Ser

10955 10960 10965

His Gly Thr Glu Ala Gly Ser Ala Val Pro Thr Val Leu Pro Glu

10970 10975 10980

Val Pro Gly Met Val Thr Ser Leu Val Ala Ser Ser Arg Ala Val

10985 10990 10995

Thr Ser Thr Thr Leu Pro Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly Glu Pro

11000 11005 11010

Glu Thr Thr Pro Ser Met Ala Thr Ser His Gly Ala Glu Ala Ser

11015 11020 11025

Ser Thr Val Pro Thr Val Ser Pro Glu Val Pro Gly Val Val Thr

11030 11035 11040

Ser Leu Val Thr Ser Ser Ser Gly Val Asn Ser Thr Ser Ile Pro

11045 11050 11055

Thr Leu Ile Leu Ser Pro Gly Glu Leu Glu Thr Thr Pro Ser Met

11060 11065 11070

Ala Thr Ser His Gly Ala Glu Ala Ser Ser Ala Val Pro Thr Pro

11075 11080 11085

Thr Val Ser Pro Gly Val Ser Gly Val Val Thr Pro Leu Val Thr

11090 11095 11100

Ser Ser Arg Ala Val Thr Ser Thr Thr Ile Pro Ile Leu Thr Leu

11105 11110 11115

Ser Ser Ser Glu Pro Glu Thr Thr Pro Ser Met Ala Thr Ser His

11120 11125 11130

Gly Val Glu Ala Ser Ser Ala Val Leu Thr Val Ser Pro Glu Val

11135 11140 11145

Pro Gly Met Val Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Arg Ala Val Thr

11150 11155 11160

Ser Thr Thr Ile Pro Thr Leu Thr Ile Ser Ser Asp Glu Pro Glu

11165 11170 11175

Thr Thr Thr Ser Leu Val Thr His Ser Glu Ala Lys Met Ile Ser

11180 11185 11190

Ala Ile Pro Thr Leu Ala Val Ser Pro Thr Val Gln Gly Leu Val

11195 11200 11205

Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Gly Ser Glu Thr Ser Ala Phe Ser

11210 11215 11220

Asn Leu Thr Val Ala Ser Ser Gln Pro Glu Thr Ile Asp Ser Trp

11225 11230 11235

Val Ala His Pro Gly Thr Glu Ala Ser Ser Val Val Pro Thr Leu

11240 11245 11250

Thr Val Ser Thr Gly Glu Pro Phe Thr Asn Ile Ser Leu Val Thr

11255 11260 11265

His Pro Ala Glu Ser Ser Ser Thr Leu Pro Arg Thr Thr Ser Arg

11270 11275 11280

Phe Ser His Ser Glu Leu Asp Thr Met Pro Ser Thr Val Thr Ser

11285 11290 11295

Pro Glu Ala Glu Ser Ser Ser Ala Ile Ser Thr Thr Ile Ser Pro

11300 11305 11310

Gly Ile Pro Gly Val Leu Thr Ser Leu Val Thr Ser Ser Gly Arg

11315 11320 11325

Asp Ile Ser Ala Thr Phe Pro Thr Val Pro Glu Ser Pro His Glu

11330 11335 11340

Ser Glu Ala Thr Ala Ser Trp Val Thr His Pro Ala Val Thr Ser

11345 11350 11355

Thr Thr Val Pro Arg Thr Thr Pro Asn Tyr Ser His Ser Glu Pro

11360 11365 11370

Asp Thr Thr Pro Ser Ile Ala Thr Ser Pro Gly Ala Glu Ala Thr

11375 11380 11385

Ser Asp Phe Pro Thr Ile Thr Val Ser Pro Asp Val Pro Asp Met

11390 11395 11400

Val Thr Ser Gln Val Thr Ser Ser Gly Thr Asp Thr Ser Ile Thr

11405 11410 11415

Ile Pro Thr Leu Thr Leu Ser Ser Gly Glu Pro Glu Thr Thr Thr

11420 11425 11430

Ser Phe Ile Thr Tyr Ser Glu Thr His Thr Ser Ser Ala Ile Pro

11435 11440 11445

Thr Leu Pro Val Ser Pro Gly Ala Ser Lys Met Leu Thr Ser Leu

11450 11455 11460

Val Ile Ser Ser Gly Thr Asp Ser Thr Thr Thr Phe Pro Thr Leu

11465 11470 11475

Thr Glu Thr Pro Tyr Glu Pro Glu Thr Thr Ala Ile Gln Leu Ile

11480 11485 11490

His Pro Ala Glu Thr Asn Thr Met Val Pro Arg Thr Thr Pro Lys

11495 11500 11505

Phe Ser His Ser Lys Ser Asp Thr Thr Leu Pro Val Ala Ile Thr

11510 11515 11520

Ser Pro Gly Pro Glu Ala Ser Ser Ala Val Ser Thr Thr Thr Ile

11525 11530 11535

Ser Pro Asp Met Ser Asp Leu Val Thr Ser Leu Val Pro Ser Ser

11540 11545 11550

Gly Thr Asp Thr Ser Thr Thr Phe Pro Thr Leu Ser Glu Thr Pro

11555 11560 11565

Tyr Glu Pro Glu Thr Thr Ala Thr Trp Leu Thr His Pro Ala Glu

11570 11575 11580

Thr Ser Thr Thr Val Ser Gly Thr Ile Pro Asn Phe Ser His Arg

11585 11590 11595

Gly Ser Asp Thr Ala Pro Ser Met Val Thr Ser Pro Gly Val Asp

11600 11605 11610

Thr Arg Ser Gly Val Pro Thr Thr Thr Ile Pro Pro Ser Ile Pro

11615 11620 11625

Gly Val Val Thr Ser Gln Val Thr Ser Ser Ala Thr Asp Thr Ser

11630 11635 11640

Thr Ala Ile Pro Thr Leu Thr Pro Ser Pro Gly Glu Pro Glu Thr

11645 11650 11655

Thr Ala Ser Ser Ala Thr His Pro Gly Thr Gln Thr Gly Phe Thr

11660 11665 11670

Val Pro Ile Arg Thr Val Pro Ser Ser Glu Pro Asp Thr Met Ala

11675 11680 11685

Ser Trp Val Thr His Pro Pro Gln Thr Ser Thr Pro Val Ser Arg

11690 11695 11700

Thr Thr Ser Ser Phe Ser His Ser Ser Pro Asp Ala Thr Pro Val

11705 11710 11715

Met Ala Thr Ser Pro Arg Thr Glu Ala Ser Ser Ala Val Leu Thr

11720 11725 11730

Thr Ile Ser Pro Gly Ala Pro Glu Met Val Thr Ser Gln Ile Thr

11735 11740 11745

Ser Ser Gly Ala Ala Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Leu Thr His

11750 11755 11760

Ser Pro Gly Met Pro Glu Thr Thr Ala Leu Leu Ser Thr His Pro

11765 11770 11775

Arg Thr Glu Thr Ser Lys Thr Phe Pro Ala Ser Thr Val Phe Pro

11780 11785 11790

Gln Val Ser Glu Thr Thr Ala Ser Leu Thr Ile Arg Pro Gly Ala

11795 11800 11805

Glu Thr Ser Thr Ala Leu Pro Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Phe

11810 11815 11820

Thr Leu Leu Val Thr Gly Thr Ser Arg Val Asp Leu Ser Pro Thr

11825 11830 11835

Ala Ser Pro Gly Val Ser Ala Lys Thr Ala Pro Leu Ser Thr His

11840 11845 11850

Pro Gly Thr Glu Thr Ser Thr Met Ile Pro Thr Ser Thr Leu Ser

11855 11860 11865

Leu Gly Leu Leu Glu Thr Thr Gly Leu Leu Ala Thr Ser Ser Ser

11870 11875 11880

Ala Glu Thr Ser Thr Ser Thr Leu Thr Leu Thr Val Ser Pro Ala

11885 11890 11895

Val Ser Gly Leu Ser Ser Ala Ser Ile Thr Thr Asp Lys Pro Gln

11900 11905 11910

Thr Val Thr Ser Trp Asn Thr Glu Thr Ser Pro Ser Val Thr Ser

11915 11920 11925

Val Gly Pro Pro Glu Phe Ser Arg Thr Val Thr Gly Thr Thr Met

11930 11935 11940

Thr Leu Ile Pro Ser Glu Met Pro Thr Pro Pro Lys Thr Ser His

11945 11950 11955

Gly Glu Gly Val Ser Pro Thr Thr Ile Leu Arg Thr Thr Met Val

11960 11965 11970

Glu Ala Thr Asn Leu Ala Thr Thr Gly Ser Ser Pro Thr Val Ala

11975 11980 11985

Lys Thr Thr Thr Thr Phe Asn Thr Leu Ala Gly Ser Leu Phe Thr

11990 11995 12000

Pro Leu Thr Thr Pro Gly Met Ser Thr Leu Ala Ser Glu Ser Val

12005 12010 12015

Thr Ser Arg Thr Ser Tyr Asn His Arg Ser Trp Ile Ser Thr Thr

12020 12025 12030

Ser Ser Tyr Asn Arg Arg Tyr Trp Thr Pro Ala Thr Ser Thr Pro

12035 12040 12045

Val Thr Ser Thr Phe Ser Pro Gly Ile Ser Thr Ser Ser Ile Pro

12050 12055 12060

Ser Ser Thr Ala Ala Thr Val Pro Phe Met Val Pro Phe Thr Leu

12065 12070 12075

Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu Asp Met Arg His

12080 12085 12090

Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Ala Thr Glu Arg Glu Leu Gln Gly

12095 12100 12105

Leu Leu Lys Pro Leu Phe Arg Asn Ser Ser Leu Glu Tyr Leu Tyr

12110 12115 12120

Ser Gly Cys Arg Leu Ala Ser Leu Arg Pro Glu Lys Asp Ser Ser

12125 12130 12135

Ala Thr Ala Val Asp Ala Ile Cys Thr His Arg Pro Asp Pro Glu

12140 12145 12150

Asp Leu Gly Leu Asp Arg Glu Arg Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Asn

12155 12160 12165

Leu Thr Asn Gly Ile Gln Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg

12170 12175 12180

Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Met Pro

12185 12190 12195

Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Val Gly Thr Ser

12200 12205 12210

Gly Thr Pro Ser Ser Ser Pro Ser Pro Thr Thr Ala Gly Pro Leu

12215 12220 12225

Leu Met Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr

12230 12235 12240

Glu Glu Asp Met Arg Arg Thr Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Met

12245 12250 12255

Glu Ser Val Leu Gln Gly Leu Leu Lys Pro Leu Phe Lys Asn Thr

12260 12265 12270

Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg

12275 12280 12285

Pro Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr

12290 12295 12300

His Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asn Arg Glu Gln Leu

12305 12310 12315

Tyr Trp Glu Leu Ser Lys Leu Thr Asn Asp Ile Glu Glu Leu Gly

12320 12325 12330

Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr

12335 12340 12345

His Gln Ser Ser Val Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr

12350 12355 12360

Val Asp Leu Arg Thr Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Ser Ser Pro

12365 12370 12375

Thr Ile Met Ala Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn

12380 12385 12390

Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Gly Glu Asp Met Gly His Pro

12395 12400 12405

Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu

12410 12415 12420

Leu Gly Pro Ile Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser

12425 12430 12435

Gly Cys Arg Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala

12440 12445 12450

Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Ile His His Leu Asp Pro Lys Ser

12455 12460 12465

Pro Gly Leu Asn Arg Glu Arg Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu

12470 12475 12480

Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn

12485 12490 12495

Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Thr Ser Val Pro Thr

12500 12505 12510

Ser Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly

12515 12520 12525

Thr Pro Phe Ser Leu Pro Ser Pro Ala Thr Ala Gly Pro Leu Leu

12530 12535 12540

Val Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Lys Tyr Glu

12545 12550 12555

Glu Asp Met His Arg Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu

12560 12565 12570

Arg Val Leu Gln Thr Leu Leu Gly Pro Met Phe Lys Asn Thr Ser

12575 12580 12585

Val Gly Leu Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Ser

12590 12595 12600

Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr His

12605 12610 12615

Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Val Asp Arg Glu Gln Leu Tyr

12620 12625 12630

Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro

12635 12640 12645

Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His

12650 12655 12660

Trp Ile Pro Val Pro Thr Ser Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val

12665 12670 12675

Asp Leu Gly Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Pro Ser Pro Thr Thr

12680 12685 12690

Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr

12695 12700 12705

Asn Leu Lys Tyr Glu Glu Asp Met His Cys Pro Gly Ser Arg Lys

12710 12715 12720

Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Ser Leu Leu Gly Pro Met

12725 12730 12735

Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu

12740 12745 12750

Thr Leu Leu Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp

12755 12760 12765

Ala Ile Cys Thr His Arg Leu Asp Pro Lys Ser Pro Gly Val Asp

12770 12775 12780

Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr Asn Gly Ile

12785 12790 12795

Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val

12800 12805 12810

Asn Gly Phe Thr His Gln Thr Ser Ala Pro Asn Thr Ser Thr Pro

12815 12820 12825

Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Ser Ser

12830 12835 12840

Leu Pro Ser Pro Thr Ser Ala Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr

12845 12850 12855

Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu Asp Met His

12860 12865 12870

His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln

12875 12880 12885

Gly Leu Leu Gly Pro Met Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Leu Leu

12890 12895 12900

Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asn Gly

12905 12910 12915

Ala Ala Thr Gly Met Asp Ala Ile Cys Ser His Arg Leu Asp Pro

12920 12925 12930

Lys Ser Pro Gly Leu Asn Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser

12935 12940 12945

Gln Leu Thr His Gly Ile Lys Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp

12950 12955 12960

Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Val

12965 12970 12975

Ala Pro Thr Ser Thr Pro Gly Thr Ser Thr Val Asp Leu Gly Thr

12980 12985 12990

Ser Gly Thr Pro Ser Ser Leu Pro Ser Pro Thr Thr Ala Val Pro

12995 13000 13005

Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln

13010 13015 13020

Tyr Gly Glu Asp Met Arg His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr

13025 13030 13035

Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Gly Pro Leu Phe Lys Asn

13040 13045 13050

Ser Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Ile Ser Leu

13055 13060 13065

Arg Ser Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys

13070 13075 13080

Thr His His Leu Asn Pro Gln Ser Pro Gly Leu Asp Arg Glu Gln

13085 13090 13095

Leu Tyr Trp Gln Leu Ser Gln Met Thr Asn Gly Ile Lys Glu Leu

13100 13105 13110

Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asn Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe

13115 13120 13125

Thr His Arg Ser Ser Gly Leu Thr Thr Ser Thr Pro Trp Thr Ser

13130 13135 13140

Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Ser Pro Val Pro Ser

13145 13150 13155

Pro Thr Thr Thr Gly Pro Leu Leu Val Pro Phe Thr Leu Asn Phe

13160 13165 13170

Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu Asn Met Gly His Pro Gly

13175 13180 13185

Ser Arg Lys Phe Asn Ile Thr Glu Ser Val Leu Gln Gly Leu Leu

13190 13195 13200

Lys Pro Leu Phe Lys Ser Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly

13205 13210 13215

Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asp Gly Val Ala Thr

13220 13225 13230

Arg Val Asp Ala Ile Cys Thr His Arg Pro Asp Pro Lys Ile Pro

13235 13240 13245

Gly Leu Asp Arg Gln Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr

13250 13255 13260

His Ser Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser

13265 13270 13275

Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr

13280 13285 13290

Ser Thr Pro Gly Thr Phe Thr Val Gln Pro Glu Thr Ser Glu Thr

13295 13300 13305

Pro Ser Ser Leu Pro Gly Pro Thr Ala Thr Gly Pro Val Leu Leu

13310 13315 13320

Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Gln Tyr Glu Glu

13325 13330 13335

Asp Met Arg Arg Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg

13340 13345 13350

Val Leu Gln Gly Leu Leu Met Pro Leu Phe Lys Asn Thr Ser Val

13355 13360 13365

Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu

13370 13375 13380

Lys Asp Gly Ala Ala Thr Arg Val Asp Ala Val Cys Thr His Arg

13385 13390 13395

Pro Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asp Arg Glu Arg Leu Tyr Trp

13400 13405 13410

Lys Leu Ser Gln Leu Thr His Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr

13415 13420 13425

Thr Leu Asp Arg His Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Gln

13430 13435 13440

Ser Ser Met Thr Thr Thr Arg Thr Pro Asp Thr Ser Thr Met His

13445 13450 13455

Leu Ala Thr Ser Arg Thr Pro Ala Ser Leu Ser Gly Pro Met Thr

13460 13465 13470

Ala Ser Pro Leu Leu Val Leu Phe Thr Ile Asn Phe Thr Ile Thr

13475 13480 13485

Asn Leu Arg Tyr Glu Glu Asn Met His His Pro Gly Ser Arg Lys

13490 13495 13500

Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Val

13505 13510 13515

Phe Lys Asn Thr Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu

13520 13525 13530

Thr Leu Leu Arg Pro Lys Lys Asp Gly Ala Ala Thr Lys Val Asp

13535 13540 13545

Ala Ile Cys Thr Tyr Arg Pro Asp Pro Lys Ser Pro Gly Leu Asp

13550 13555 13560

Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Ser Ile

13565 13570 13575

Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser Leu Tyr Val

13580 13585 13590

Asn Gly Phe Thr Gln Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr Ser Ile Pro

13595 13600 13605

Gly Thr Pro Thr Val Asp Leu Gly Thr Ser Gly Thr Pro Val Ser

13610 13615 13620

Lys Pro Gly Pro Ser Ala Ala Ser Pro Leu Leu Val Leu Phe Thr

13625 13630 13635

Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Arg Tyr Glu Glu Asn Met Gln

13640 13645 13650

His Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr Glu Arg Val Leu Gln

13655 13660 13665

Gly Leu Leu Arg Ser Leu Phe Lys Ser Thr Ser Val Gly Pro Leu

13670 13675 13680

Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu Lys Asp Gly

13685 13690 13695

Thr Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr His His Pro Asp Pro

13700 13705 13710

Lys Ser Pro Arg Leu Asp Arg Glu Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser

13715 13720 13725

Gln Leu Thr His Asn Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Ala Leu Asp

13730 13735 13740

Asn Asp Ser Leu Phe Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Val

13745 13750 13755

Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Pro Thr Val Tyr Leu Gly Ala

13760 13765 13770

Ser Lys Thr Pro Ala Ser Ile Phe Gly Pro Ser Ala Ala Ser His

13775 13780 13785

Leu Leu Ile Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu Arg

13790 13795 13800

Tyr Glu Glu Asn Met Trp Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr

13805 13810 13815

Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Leu Phe Lys Asn Thr

13820 13825 13830

Ser Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg

13835 13840 13845

Pro Glu Lys Asp Gly Glu Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr

13850 13855 13860

His Arg Pro Asp Pro Thr Gly Pro Gly Leu Asp Arg Glu Gln Leu

13865 13870 13875

Tyr Leu Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Ser Ile Thr Glu Leu Gly

13880 13885 13890

Pro Tyr Thr Leu Asp Arg Asp Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr

13895 13900 13905

His Arg Ser Ser Val Pro Thr Thr Ser Thr Gly Val Val Ser Glu

13910 13915 13920

Glu Pro Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Asn Asn Leu Arg Tyr Met

13925 13930 13935

Ala Asp Met Gly Gln Pro Gly Ser Leu Lys Phe Asn Ile Thr Asp

13940 13945 13950

Asn Val Met Gln His Leu Leu Ser Pro Leu Phe Gln Arg Ser Ser

13955 13960 13965

Leu Gly Ala Arg Tyr Thr Gly Cys Arg Val Ile Ala Leu Arg Ser

13970 13975 13980

Val Lys Asn Gly Ala Glu Thr Arg Val Asp Leu Leu Cys Thr Tyr

13985 13990 13995

Leu Gln Pro Leu Ser Gly Pro Gly Leu Pro Ile Lys Gln Val Phe

14000 14005 14010

His Glu Leu Ser Gln Gln Thr His Gly Ile Thr Arg Leu Gly Pro

14015 14020 14025

Tyr Ser Leu Asp Lys Asp Ser Leu Tyr Leu Asn Gly Tyr Asn Glu

14030 14035 14040

Pro Gly Pro Asp Glu Pro Pro Thr Thr Pro Lys Pro Ala Thr Thr

14045 14050 14055

Phe Leu Pro Pro Leu Ser Glu Ala Thr Thr Ala Met Gly Tyr His

14060 14065 14070

Leu Lys Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Ile Ser Asn Leu Gln Tyr

14075 14080 14085

Ser Pro Asp Met Gly Lys Gly Ser Ala Thr Phe Asn Ser Thr Glu

14090 14095 14100

Gly Val Leu Gln His Leu Leu Arg Pro Leu Phe Gln Lys Ser Ser

14105 14110 14115

Met Gly Pro Phe Tyr Leu Gly Cys Gln Leu Ile Ser Leu Arg Pro

14120 14125 14130

Glu Lys Asp Gly Ala Ala Thr Gly Val Asp Thr Thr Cys Thr Tyr

14135 14140 14145

His Pro Asp Pro Val Gly Pro Gly Leu Asp Ile Gln Gln Leu Tyr

14150 14155 14160

Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr His Gly Val Thr Gln Leu Gly Phe

14165 14170 14175

Tyr Val Leu Asp Arg Asp Ser Leu Phe Ile Asn Gly Tyr Ala Pro

14180 14185 14190

Gln Asn Leu Ser Ile Arg Gly Glu Tyr Gln Ile Asn Phe His Ile

14195 14200 14205

Val Asn Trp Asn Leu Ser Asn Pro Asp Pro Thr Ser Ser Glu Tyr

14210 14215 14220

Ile Thr Leu Leu Arg Asp Ile Gln Asp Lys Val Thr Thr Leu Tyr

14225 14230 14235

Lys Gly Ser Gln Leu His Asp Thr Phe Arg Phe Cys Leu Val Thr

14240 14245 14250

Asn Leu Thr Met Asp Ser Val Leu Val Thr Val Lys Ala Leu Phe

14255 14260 14265

Ser Ser Asn Leu Asp Pro Ser Leu Val Glu Gln Val Phe Leu Asp

14270 14275 14280

Lys Thr Leu Asn Ala Ser Phe His Trp Leu Gly Ser Thr Tyr Gln

14285 14290 14295

Leu Val Asp Ile His Val Thr Glu Met Glu Ser Ser Val Tyr Gln

14300 14305 14310

Pro Thr Ser Ser Ser Ser Thr Gln His Phe Tyr Leu Asn Phe Thr

14315 14320 14325

Ile Thr Asn Leu Pro Tyr Ser Gln Asp Lys Ala Gln Pro Gly Thr

14330 14335 14340

Thr Asn Tyr Gln Arg Asn Lys Arg Asn Ile Glu Asp Ala Leu Asn

14345 14350 14355

Gln Leu Phe Arg Asn Ser Ser Ile Lys Ser Tyr Phe Ser Asp Cys

14360 14365 14370

Gln Val Ser Thr Phe Arg Ser Val Pro Asn Arg His His Thr Gly

14375 14380 14385

Val Asp Ser Leu Cys Asn Phe Ser Pro Leu Ala Arg Arg Val Asp

14390 14395 14400

Arg Val Ala Ile Tyr Glu Glu Phe Leu Arg Met Thr Arg Asn Gly

14405 14410 14415

Thr Gln Leu Gln Asn Phe Thr Leu Asp Arg Ser Ser Val Leu Val

14420 14425 14430

Asp Gly Tyr Ser Pro Asn Arg Asn Glu Pro Leu Thr Gly Asn Ser

14435 14440 14445

Asp Leu Pro Phe Trp Ala Val Ile Leu Ile Gly Leu Ala Gly Leu

14450 14455 14460

Leu Gly Val Ile Thr Cys Leu Ile Cys Gly Val Leu Val Thr Thr

14465 14470 14475

Arg Arg Arg Lys Lys Glu Gly Glu Tyr Asn Val Gln Gln Gln Cys

14480 14485 14490

Pro Gly Tyr Tyr Gln Ser His Leu Asp Leu Glu Asp Leu Gln

14495 14500 14505

<210> 149

<211> 690

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 149

Met Ala Pro Trp Pro Glu Leu Gly Asp Ala Gln Pro Asn Pro Asp Lys

1 5 10 15

Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Gly Gln Gln Pro Thr Ala Pro Asp Lys Ser

20 25 30

Lys Glu Thr Asn Lys Thr Asp Asn Thr Glu Ala Pro Val Thr Lys Ile

35 40 45

Glu Leu Leu Pro Ser Tyr Ser Thr Ala Thr Leu Ile Asp Glu Pro Thr

50 55 60

Glu Val Asp Asp Pro Trp Asn Leu Pro Thr Leu Gln Asp Ser Gly Ile

65 70 75 80

Lys Trp Ser Glu Arg Asp Thr Lys Gly Lys Ile Leu Cys Phe Phe Gln

85 90 95

Gly Ile Gly Arg Leu Ile Leu Leu Leu Gly Phe Leu Tyr Phe Phe Val

100 105 110

Cys Ser Leu Asp Ile Leu Ser Ser Ala Phe Gln Leu Val Gly Gly Lys

115 120 125

Met Ala Gly Gln Phe Phe Ser Asn Ser Ser Ile Met Ser Asn Pro Leu

130 135 140

Leu Gly Leu Val Ile Gly Val Leu Val Thr Val Leu Val Gln Ser Ser

145 150 155 160

Ser Thr Ser Thr Ser Ile Val Val Ser Met Val Ser Ser Ser Leu Leu

165 170 175

Thr Val Arg Ala Ala Ile Pro Ile Ile Met Gly Ala Asn Ile Gly Thr

180 185 190

Ser Ile Thr Asn Thr Ile Val Ala Leu Met Gln Val Gly Asp Arg Ser

195 200 205

Glu Phe Arg Arg Ala Phe Ala Gly Ala Thr Val His Asp Phe Phe Asn

210 215 220

Trp Leu Ser Val Leu Val Leu Leu Pro Val Glu Val Ala Thr His Tyr

225 230 235 240

Leu Glu Ile Ile Thr Gln Leu Ile Val Glu Ser Phe His Phe Lys Asn

245 250 255

Gly Glu Asp Ala Pro Asp Leu Leu Lys Val Ile Thr Lys Pro Phe Thr

260 265 270

Lys Leu Ile Val Gln Leu Asp Lys Lys Val Ile Ser Gln Ile Ala Met

275 280 285

Asn Asp Glu Lys Ala Lys Asn Lys Ser Leu Val Lys Ile Trp Cys Lys

290 295 300

Thr Phe Thr Asn Lys Thr Gln Ile Asn Val Thr Val Pro Ser Thr Ala

305 310 315 320

Asn Cys Thr Ser Pro Ser Leu Cys Trp Thr Asp Gly Ile Gln Asn Trp

325 330 335

Thr Met Lys Asn Val Thr Tyr Lys Glu Asn Ile Ala Lys Cys Gln His

340 345 350

Ile Phe Val Asn Phe His Leu Pro Asp Leu Ala Val Gly Thr Ile Leu

355 360 365

Leu Ile Leu Ser Leu Leu Val Leu Cys Gly Cys Leu Ile Met Ile Val

370 375 380

Lys Ile Leu Gly Ser Val Leu Lys Gly Gln Val Ala Thr Val Ile Lys

385 390 395 400

Lys Thr Ile Asn Thr Asp Phe Pro Phe Pro Phe Ala Trp Leu Thr Gly

405 410 415

Tyr Leu Ala Ile Leu Val Gly Ala Gly Met Thr Phe Ile Val Gln Ser

420 425 430

Ser Ser Val Phe Thr Ser Ala Leu Thr Pro Leu Ile Gly Ile Gly Val

435 440 445

Ile Thr Ile Glu Arg Ala Tyr Pro Leu Thr Leu Gly Ser Asn Ile Gly

450 455 460

Thr Thr Thr Thr Ala Ile Leu Ala Ala Leu Ala Ser Pro Gly Asn Ala

465 470 475 480

Leu Arg Ser Ser Leu Gln Ile Ala Leu Cys His Phe Phe Phe Asn Ile

485 490 495

Ser Gly Ile Leu Leu Trp Tyr Pro Ile Pro Phe Thr Arg Leu Pro Ile

500 505 510

Arg Met Ala Lys Gly Leu Gly Asn Ile Ser Ala Lys Tyr Arg Trp Phe

515 520 525

Ala Val Phe Tyr Leu Ile Ile Phe Phe Phe Leu Ile Pro Leu Thr Val

530 535 540

Phe Gly Leu Ser Leu Ala Gly Trp Arg Val Leu Val Gly Val Gly Val

545 550 555 560

Pro Val Val Phe Ile Ile Ile Leu Val Leu Cys Leu Arg Leu Leu Gln

565 570 575

Ser Arg Cys Pro Arg Val Leu Pro Lys Lys Leu Gln Asn Trp Asn Phe

580 585 590

Leu Pro Leu Trp Met Arg Ser Leu Lys Pro Trp Asp Ala Val Val Ser

595 600 605

Lys Phe Thr Gly Cys Phe Gln Met Arg Cys Cys Cys Cys Cys Arg Val

610 615 620

Cys Cys Arg Ala Cys Cys Leu Leu Cys Asp Cys Pro Lys Cys Cys Arg

625 630 635 640

Cys Ser Lys Cys Cys Glu Asp Leu Glu Glu Ala Gln Glu Gly Gln Asp

645 650 655

Val Pro Val Lys Ala Pro Glu Thr Phe Asp Asn Ile Thr Ile Ser Arg

660 665 670

Glu Ala Gln Gly Glu Val Pro Ala Ser Asp Ser Lys Thr Glu Cys Thr

675 680 685

Ala Leu

690

<210> 150

<211> 510

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 150

Met Pro Leu Ser Leu Gly Ala Glu Met Trp Gly Pro Glu Ala Trp Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Phe Thr Gly Arg Cys Pro Ala Gly

20 25 30

Glu Leu Glu Thr Ser Asp Val Val Thr Val Val Leu Gly Gln Asp Ala

35 40 45

Lys Leu Pro Cys Phe Tyr Arg Gly Asp Ser Gly Glu Gln Val Gly Gln

50 55 60

Val Ala Trp Ala Arg Val Asp Ala Gly Glu Gly Ala Gln Glu Leu Ala

65 70 75 80

Leu Leu His Ser Lys Tyr Gly Leu His Val Ser Pro Ala Tyr Glu Gly

85 90 95

Arg Val Glu Gln Pro Pro Pro Pro Arg Asn Pro Leu Asp Gly Ser Val

100 105 110

Leu Leu Arg Asn Ala Val Gln Ala Asp Glu Gly Glu Tyr Glu Cys Arg

115 120 125

Val Ser Thr Phe Pro Ala Gly Ser Phe Gln Ala Arg Leu Arg Leu Arg

130 135 140

Val Leu Val Pro Pro Leu Pro Ser Leu Asn Pro Gly Pro Ala Leu Glu

145 150 155 160

Glu Gly Gln Gly Leu Thr Leu Ala Ala Ser Cys Thr Ala Glu Gly Ser

165 170 175

Pro Ala Pro Ser Val Thr Trp Asp Thr Glu Val Lys Gly Thr Thr Ser

180 185 190

Ser Arg Ser Phe Lys His Ser Arg Ser Ala Ala Val Thr Ser Glu Phe

195 200 205

His Leu Val Pro Ser Arg Ser Met Asn Gly Gln Pro Leu Thr Cys Val

210 215 220

Val Ser His Pro Gly Leu Leu Gln Asp Gln Arg Ile Thr His Ile Leu

225 230 235 240

His Val Ser Phe Leu Ala Glu Ala Ser Val Arg Gly Leu Glu Asp Gln

245 250 255

Asn Leu Trp His Ile Gly Arg Glu Gly Ala Met Leu Lys Cys Leu Ser

260 265 270

Glu Gly Gln Pro Pro Pro Ser Tyr Asn Trp Thr Arg Leu Asp Gly Pro

275 280 285

Leu Pro Ser Gly Val Arg Val Asp Gly Asp Thr Leu Gly Phe Pro Pro

290 295 300

Leu Thr Thr Glu His Ser Gly Ile Tyr Val Cys His Val Ser Asn Glu

305 310 315 320

Phe Ser Ser Arg Asp Ser Gln Val Thr Val Asp Val Leu Asp Pro Gln

325 330 335

Glu Asp Ser Gly Lys Gln Val Asp Leu Val Ser Ala Ser Val Val Val

340 345 350

Val Gly Val Ile Ala Ala Leu Leu Phe Cys Leu Leu Val Val Val Val

355 360 365

Val Leu Met Ser Arg Tyr His Arg Arg Lys Ala Gln Gln Met Thr Gln

370 375 380

Lys Tyr Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Arg Glu Asn Ser Ile Arg Arg

385 390 395 400

Leu His Ser His His Thr Asp Pro Arg Ser Gln Pro Glu Glu Ser Val

405 410 415

Gly Leu Arg Ala Glu Gly His Pro Asp Ser Leu Lys Asp Asn Ser Ser

420 425 430

Cys Ser Val Met Ser Glu Glu Pro Glu Gly Arg Ser Tyr Ser Thr Leu

435 440 445

Thr Thr Val Arg Glu Ile Glu Thr Gln Thr Glu Leu Leu Ser Pro Gly

450 455 460

Ser Gly Arg Ala Glu Glu Glu Glu Asp Gln Asp Glu Gly Ile Lys Gln

465 470 475 480

Ala Met Asn His Phe Val Gln Glu Asn Gly Thr Leu Arg Ala Lys Pro

485 490 495

Thr Gly Asn Gly Ile Tyr Ile Asn Gly Arg Gly His Leu Val

500 505 510

<210> 151

<211> 764

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 151

Leu Gly Ala Thr Gly His Asn Phe Thr Leu His Leu Arg Lys Asn Arg

1 5 10 15

Asp Leu Leu Gly Ser Gly Tyr Thr Glu Thr Tyr Thr Ala Ala Asn Gly

20 25 30

Ser Glu Val Thr Glu Gln Pro Arg Gly Gln Asp His Cys Phe Tyr Gln

35 40 45

Gly His Val Glu Gly Tyr Pro Asp Ser Ala Ala Ser Leu Ser Thr Cys

50 55 60

Ala Gly Leu Arg Gly Phe Phe Gln Val Gly Ser Asp Leu His Leu Ile

65 70 75 80

Glu Pro Leu Asp Glu Gly Gly Glu Gly Gly Arg His Ala Val Tyr Gln

85 90 95

Ala Glu His Leu Leu Gln Thr Ala Gly Thr Cys Gly Val Ser Asp Asp

100 105 110

Ser Leu Gly Ser Leu Leu Gly Pro Arg Thr Ala Ala Val Phe Arg Pro

115 120 125

Arg Pro Gly Asp Ser Leu Pro Ser Arg Glu Thr Arg Tyr Val Glu Leu

130 135 140

Tyr Val Val Val Asp Asn Ala Glu Phe Gln Met Leu Gly Ser Glu Ala

145 150 155 160

Ala Val Arg His Arg Val Leu Glu Val Val Asn His Val Asp Lys Leu

165 170 175

Tyr Gln Lys Leu Asn Phe Arg Val Val Leu Val Gly Leu Glu Ile Trp

180 185 190

Asn Ser Gln Asp Arg Phe His Val Ser Pro Asp Pro Ser Val Thr Leu

195 200 205

Glu Asn Leu Leu Thr Trp Gln Ala Arg Gln Arg Thr Arg Arg His Leu

210 215 220

His Asp Asn Val Gln Leu Ile Thr Gly Val Asp Phe Thr Gly Thr Thr

225 230 235 240

Val Gly Phe Ala Arg Val Ser Ala Met Cys Ser His Ser Ser Gly Ala

245 250 255

Val Asn Gln Asp His Ser Lys Asn Pro Val Gly Val Ala Cys Thr Met

260 265 270

Ala His Glu Met Gly His Asn Leu Gly Met Asp His Asp Glu Asn Val

275 280 285

Gln Gly Cys Arg Cys Gln Glu Arg Phe Glu Ala Gly Arg Cys Ile Met

290 295 300

Ala Gly Ser Ile Gly Ser Ser Phe Pro Arg Met Phe Ser Asp Cys Ser

305 310 315 320

Gln Ala Tyr Leu Glu Ser Phe Leu Glu Arg Pro Gln Ser Val Cys Leu

325 330 335

Ala Asn Ala Pro Asp Leu Ser His Leu Val Gly Gly Pro Val Cys Gly

340 345 350

Asn Leu Phe Val Glu Arg Gly Glu Gln Cys Asp Cys Gly Pro Pro Glu

355 360 365

Asp Cys Arg Asn Arg Cys Cys Asn Ser Thr Thr Cys Gln Leu Ala Glu

370 375 380

Gly Ala Gln Cys Ala His Gly Thr Cys Cys Gln Glu Cys Lys Val Lys

385 390 395 400

Pro Ala Gly Glu Leu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Met Cys Asp Leu Glu

405 410 415

Glu Phe Cys Asp Gly Arg His Pro Glu Cys Pro Glu Asp Ala Phe Gln

420 425 430

Glu Asn Gly Thr Pro Cys Ser Gly Gly Tyr Cys Tyr Asn Gly Ala Cys

435 440 445

Pro Thr Leu Ala Gln Gln Cys Gln Ala Phe Trp Gly Pro Gly Gly Gln

450 455 460

Ala Ala Glu Glu Ser Cys Phe Ser Tyr Asp Ile Leu Pro Gly Cys Lys

465 470 475 480

Ala Ser Arg Tyr Arg Ala Asp Met Cys Gly Val Leu Gln Cys Lys Gly

485 490 495

Gly Gln Gln Pro Leu Gly Arg Ala Ile Cys Ile Val Asp Val Cys His

500 505 510

Ala Leu Thr Thr Glu Asp Gly Thr Ala Tyr Glu Pro Val Pro Glu Gly

515 520 525

Thr Arg Cys Gly Pro Glu Lys Val Cys Trp Lys Gly Arg Cys Gln Asp

530 535 540

Leu His Val Tyr Arg Ser Ser Asn Cys Ser Ala Gln Cys His Asn His

545 550 555 560

Gly Val Cys Asn His Lys Gln Glu Cys His Cys His Ala Gly Trp Ala

565 570 575

Pro Pro His Cys Ala Lys Leu Leu Thr Glu Val His Ala Ala Ser Gly

580 585 590

Ser Leu Pro Val Phe Val Val Val Val Leu Val Leu Leu Ala Val Val

595 600 605

Leu Val Thr Leu Ala Gly Ile Ile Val Tyr Arg Lys Ala Arg Ser Arg

610 615 620

Ile Leu Ser Arg Asn Val Ala Pro Lys Thr Thr Met Gly Arg Ser Asn

625 630 635 640

Pro Leu Phe His Gln Ala Ala Ser Arg Val Pro Ala Lys Gly Gly Ala

645 650 655

Pro Ala Pro Ser Arg Gly Pro Gln Glu Leu Val Pro Thr Thr His Pro

660 665 670

Gly Gln Pro Ala Arg His Pro Ala Ser Ser Val Ala Leu Lys Arg Pro

675 680 685

Pro Pro Ala Pro Pro Val Thr Val Ser Ser Pro Pro Phe Pro Val Pro

690 695 700

Val Tyr Thr Arg Gln Ala Pro Lys Gln Val Ile Lys Pro Thr Phe Ala

705 710 715 720

Pro Pro Val Pro Pro Val Lys Pro Gly Ala Gly Ala Ala Asn Pro Gly

725 730 735

Pro Ala Glu Gly Ala Val Gly Pro Lys Val Ala Leu Lys Pro Pro Ile

740 745 750

Gln Arg Lys Gln Gly Ala Gly Ala Pro Thr Ala Pro

755 760

<210> 152

<211> 819

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 152

Met Gly Ser Gly Ala Arg Phe Pro Ser Gly Thr Leu Arg Val Arg Trp

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val Gly Pro Val Leu Gly Ala Ala Arg Pro

20 25 30

Gly Phe Gln Gln Thr Ser His Leu Ser Ser Tyr Glu Ile Ile Thr Pro

35 40 45

Trp Arg Leu Thr Arg Glu Arg Arg Glu Ala Pro Arg Pro Tyr Ser Lys

50 55 60

Gln Val Ser Tyr Val Ile Gln Ala Glu Gly Lys Glu His Ile Ile His

65 70 75 80

Leu Glu Arg Asn Lys Asp Leu Leu Pro Glu Asp Phe Val Val Tyr Thr

85 90 95

Tyr Asn Lys Glu Gly Thr Leu Ile Thr Asp His Pro Asn Ile Gln Asn

100 105 110

His Cys His Tyr Arg Gly Tyr Val Glu Gly Val His Asn Ser Ser Ile

115 120 125

Ala Leu Ser Asp Cys Phe Gly Leu Arg Gly Leu Leu His Leu Glu Asn

130 135 140

Ala Ser Tyr Gly Ile Glu Pro Leu Gln Asn Ser Ser His Phe Glu His

145 150 155 160

Ile Ile Tyr Arg Met Asp Asp Val Tyr Lys Glu Pro Leu Lys Cys Gly

165 170 175

Val Ser Asn Lys Asp Ile Glu Lys Glu Thr Ala Lys Asp Glu Glu Glu

180 185 190

Glu Pro Pro Ser Met Thr Gln Leu Leu Arg Arg Arg Arg Ala Val Leu

195 200 205

Pro Gln Thr Arg Tyr Val Glu Leu Phe Ile Val Val Asp Lys Glu Arg

210 215 220

Tyr Asp Met Met Gly Arg Asn Gln Thr Ala Val Arg Glu Glu Met Ile

225 230 235 240

Leu Leu Ala Asn Tyr Leu Asp Ser Met Tyr Ile Met Leu Asn Ile Arg

245 250 255

Ile Val Leu Val Gly Leu Glu Ile Trp Thr Asn Gly Asn Leu Ile Asn

260 265 270

Ile Val Gly Gly Ala Gly Asp Val Leu Gly Asn Phe Val Gln Trp Arg

275 280 285

Glu Lys Phe Leu Ile Thr Arg Arg Arg His Asp Ser Ala Gln Leu Val

290 295 300

Leu Lys Lys Gly Phe Gly Gly Thr Ala Gly Met Ala Phe Val Gly Thr

305 310 315 320

Val Cys Ser Arg Ser His Ala Gly Gly Ile Asn Val Phe Gly Gln Ile

325 330 335

Thr Val Glu Thr Phe Ala Ser Ile Val Ala His Glu Leu Gly His Asn

340 345 350

Leu Gly Met Asn His Asp Asp Gly Arg Asp Cys Ser Cys Gly Ala Lys

355 360 365

Ser Cys Ile Met Asn Ser Gly Ala Ser Gly Ser Arg Asn Phe Ser Ser

370 375 380

Cys Ser Ala Glu Asp Phe Glu Lys Leu Thr Leu Asn Lys Gly Gly Asn

385 390 395 400

Cys Leu Leu Asn Ile Pro Lys Pro Asp Glu Ala Tyr Ser Ala Pro Ser

405 410 415

Cys Gly Asn Lys Leu Val Asp Ala Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Thr

420 425 430

Pro Lys Glu Cys Glu Leu Asp Pro Cys Cys Glu Gly Ser Thr Cys Lys

435 440 445

Leu Lys Ser Phe Ala Glu Cys Ala Tyr Gly Asp Cys Cys Lys Asp Cys

450 455 460

Arg Phe Leu Pro Gly Gly Thr Leu Cys Arg Gly Lys Thr Ser Glu Cys

465 470 475 480

Asp Val Pro Glu Tyr Cys Asn Gly Ser Ser Gln Phe Cys Gln Pro Asp

485 490 495

Val Phe Ile Gln Asn Gly Tyr Pro Cys Gln Asn Asn Lys Ala Tyr Cys

500 505 510

Tyr Asn Gly Met Cys Gln Tyr Tyr Asp Ala Gln Cys Gln Val Ile Phe

515 520 525

Gly Ser Lys Ala Lys Ala Ala Pro Lys Asp Cys Phe Ile Glu Val Asn

530 535 540

Ser Lys Gly Asp Arg Phe Gly Asn Cys Gly Phe Ser Gly Asn Glu Tyr

545 550 555 560

Lys Lys Cys Ala Thr Gly Asn Ala Leu Cys Gly Lys Leu Gln Cys Glu

565 570 575

Asn Val Gln Glu Ile Pro Val Phe Gly Ile Val Pro Ala Ile Ile Gln

580 585 590

Thr Pro Ser Arg Gly Thr Lys Cys Trp Gly Val Asp Phe Gln Leu Gly

595 600 605

Ser Asp Val Pro Asp Pro Gly Met Val Asn Glu Gly Thr Lys Cys Gly

610 615 620

Ala Gly Lys Ile Cys Arg Asn Phe Gln Cys Val Asp Ala Ser Val Leu

625 630 635 640

Asn Tyr Asp Cys Asp Val Gln Lys Lys Cys His Gly His Gly Val Cys

645 650 655

Asn Ser Asn Lys Asn Cys His Cys Glu Asn Gly Trp Ala Pro Pro Asn

660 665 670

Cys Glu Thr Lys Gly Tyr Gly Gly Ser Val Asp Ser Gly Pro Thr Tyr

675 680 685

Asn Glu Met Asn Thr Ala Leu Arg Asp Gly Leu Leu Val Phe Phe Phe

690 695 700

Leu Ile Val Pro Leu Ile Val Cys Ala Ile Phe Ile Phe Ile Lys Arg

705 710 715 720

Asp Gln Leu Trp Arg Ser Tyr Phe Arg Lys Lys Arg Ser Gln Thr Tyr

725 730 735

Glu Ser Asp Gly Lys Asn Gln Ala Asn Pro Ser Arg Gln Pro Gly Ser

740 745 750

Val Pro Arg His Val Ser Pro Val Thr Pro Pro Arg Glu Val Pro Ile

755 760 765

Tyr Ala Asn Arg Phe Ala Val Pro Thr Tyr Ala Ala Lys Gln Pro Gln

770 775 780

Gln Phe Pro Ser Arg Pro Pro Pro Pro Gln Pro Lys Val Ser Ser Gln

785 790 795 800

Gly Asn Leu Ile Pro Ala Arg Pro Ala Pro Ala Pro Pro Leu Tyr Ser

805 810 815

Ser Leu Thr

<210> 153

<211> 710

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 153

Met Gly Gly Lys Gln Arg Asp Glu Asp Asp Glu Ala Tyr Gly Lys Pro

1 5 10 15

Val Lys Tyr Asp Pro Ser Phe Arg Gly Pro Ile Lys Asn Arg Ser Cys

20 25 30

Thr Asp Val Ile Cys Cys Val Leu Phe Leu Leu Phe Ile Leu Gly Tyr

35 40 45

Ile Val Val Gly Ile Val Ala Trp Leu Tyr Gly Asp Pro Arg Gln Val

50 55 60

Leu Tyr Pro Arg Asn Ser Thr Gly Ala Tyr Cys Gly Met Gly Glu Asn

65 70 75 80

Lys Asp Lys Pro Tyr Leu Leu Tyr Phe Asn Ile Phe Ser Cys Ile Leu

85 90 95

Ser Ser Asn Ile Ile Ser Val Ala Glu Asn Gly Leu Gln Cys Pro Thr

100 105 110

Pro Gln Val Cys Val Ser Ser Cys Pro Glu Asp Pro Trp Thr Val Gly

115 120 125

Lys Asn Glu Phe Ser Gln Thr Val Gly Glu Val Phe Tyr Thr Lys Asn

130 135 140

Arg Asn Phe Cys Leu Pro Gly Val Pro Trp Asn Met Thr Val Ile Thr

145 150 155 160

Ser Leu Gln Gln Glu Leu Cys Pro Ser Phe Leu Leu Pro Ser Ala Pro

165 170 175

Ala Leu Gly Arg Cys Phe Pro Trp Thr Asn Val Thr Pro Pro Ala Leu

180 185 190

Pro Gly Ile Thr Asn Asp Thr Thr Ile Gln Gln Gly Ile Ser Gly Leu

195 200 205

Ile Asp Ser Leu Asn Ala Arg Asp Ile Ser Val Lys Ile Phe Glu Asp

210 215 220

Phe Ala Gln Ser Trp Tyr Trp Ile Leu Val Ala Leu Gly Val Ala Leu

225 230 235 240

Val Leu Ser Leu Leu Phe Ile Leu Leu Leu Arg Leu Val Ala Gly Pro

245 250 255

Leu Val Leu Val Leu Ile Leu Gly Val Leu Gly Val Leu Ala Tyr Gly

260 265 270

Ile Tyr Tyr Cys Trp Glu Glu Tyr Arg Val Leu Arg Asp Lys Gly Ala

275 280 285

Ser Ile Ser Gln Leu Gly Phe Thr Thr Asn Leu Ser Ala Tyr Gln Ser

290 295 300

Val Gln Glu Thr Trp Leu Ala Ala Leu Ile Val Leu Ala Val Leu Glu

305 310 315 320

Ala Ile Leu Leu Leu Met Leu Ile Phe Leu Arg Gln Arg Ile Arg Ile

325 330 335

Ala Ile Ala Leu Leu Lys Glu Ala Ser Lys Ala Val Gly Gln Met Met

340 345 350

Ser Thr Met Phe Tyr Pro Leu Val Thr Phe Val Leu Leu Leu Ile Cys

355 360 365

Ile Ala Tyr Trp Ala Met Thr Ala Leu Tyr Leu Ala Thr Ser Gly Gln

370 375 380

Pro Gln Tyr Val Leu Trp Ala Ser Asn Ile Ser Ser Pro Gly Cys Glu

385 390 395 400

Lys Val Pro Ile Asn Thr Ser Cys Asn Pro Thr Ala His Leu Val Asn

405 410 415

Ser Ser Cys Pro Gly Leu Met Cys Val Phe Gln Gly Tyr Ser Ser Lys

420 425 430

Gly Leu Ile Gln Arg Ser Val Phe Asn Leu Gln Ile Tyr Gly Val Leu

435 440 445

Gly Leu Phe Trp Thr Leu Asn Trp Val Leu Ala Leu Gly Gln Cys Val

450 455 460

Leu Ala Gly Ala Phe Ala Ser Phe Tyr Trp Ala Phe His Lys Pro Gln

465 470 475 480

Asp Ile Pro Thr Phe Pro Leu Ile Ser Ala Phe Ile Arg Thr Leu Arg

485 490 495

Tyr His Thr Gly Ser Leu Ala Phe Gly Ala Leu Ile Leu Thr Leu Val

500 505 510

Gln Ile Ala Arg Val Ile Leu Glu Tyr Ile Asp His Lys Leu Arg Gly

515 520 525

Val Gln Asn Pro Val Ala Arg Cys Ile Met Cys Cys Phe Lys Cys Cys

530 535 540

Leu Trp Cys Leu Glu Lys Phe Ile Lys Phe Leu Asn Arg Asn Ala Tyr

545 550 555 560

Ile Met Ile Ala Ile Tyr Gly Lys Asn Phe Cys Val Ser Ala Lys Asn

565 570 575

Ala Phe Met Leu Leu Met Arg Asn Ile Val Arg Val Val Val Leu Asp

580 585 590

Lys Val Thr Asp Leu Leu Leu Phe Phe Gly Lys Leu Leu Val Val Gly

595 600 605

Gly Val Gly Val Leu Ser Phe Phe Phe Phe Ser Gly Arg Ile Pro Gly

610 615 620

Leu Gly Lys Asp Phe Lys Ser Pro His Leu Asn Tyr Tyr Trp Leu Pro

625 630 635 640

Ile Met Thr Ser Ile Leu Gly Ala Tyr Val Ile Ala Ser Gly Phe Phe

645 650 655

Ser Val Phe Gly Met Cys Val Asp Thr Leu Phe Leu Cys Phe Leu Glu

660 665 670

Asp Leu Glu Arg Asn Asn Gly Ser Leu Asp Arg Pro Tyr Tyr Met Ser

675 680 685

Lys Ser Leu Leu Lys Ile Leu Gly Lys Lys Asn Glu Ala Pro Pro Asp

690 695 700

Asn Lys Lys Arg Lys Lys

705 710

<210> 154

<211> 333

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 154

Met Ala Cys Ser Arg Pro Pro Ser Gln Cys Glu Pro Thr Ser Leu Pro

1 5 10 15

Pro Gly Pro Pro Ala Gly Arg Arg His Leu Pro Leu Ser Arg Arg Arg

20 25 30

Arg Glu Met Ser Ser Asn Lys Glu Gln Arg Ser Ala Val Phe Val Ile

35 40 45

Leu Phe Ala Leu Ile Thr Ile Leu Ile Leu Tyr Ser Ser Asn Ser Ala

50 55 60

Asn Glu Val Phe His Tyr Gly Ser Leu Arg Gly Arg Ser Arg Arg Pro

65 70 75 80

Val Asn Leu Lys Lys Trp Ser Ile Thr Asp Gly Tyr Val Pro Ile Leu

85 90 95

Gly Asn Lys Thr Leu Pro Ser Arg Cys His Gln Cys Val Ile Val Ser

100 105 110

Ser Ser Ser His Leu Leu Gly Thr Lys Leu Gly Pro Glu Ile Glu Arg

115 120 125

Ala Glu Cys Thr Ile Arg Met Asn Asp Ala Pro Thr Thr Gly Tyr Ser

130 135 140

Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Thr Tyr Arg Val Val Ala His Ser Ser

145 150 155 160

Val Phe Arg Val Leu Arg Arg Pro Gln Glu Phe Val Asn Arg Thr Pro

165 170 175

Glu Thr Val Phe Ile Phe Trp Gly Pro Pro Ser Lys Met Gln Lys Pro

180 185 190

Gln Gly Ser Leu Val Arg Val Ile Gln Arg Ala Gly Leu Val Phe Pro

195 200 205

Asn Met Glu Ala Tyr Ala Val Ser Pro Gly Arg Met Arg Gln Phe Asp

210 215 220

Asp Leu Phe Arg Gly Glu Thr Gly Lys Asp Arg Glu Lys Ser His Ser

225 230 235 240

Trp Leu Ser Thr Gly Trp Phe Thr Met Val Ile Ala Val Glu Leu Cys

245 250 255

Asp His Val His Val Tyr Gly Met Val Pro Pro Asn Tyr Cys Ser Gln

260 265 270

Arg Pro Arg Leu Gln Arg Met Pro Tyr His Tyr Tyr Glu Pro Lys Gly

275 280 285

Pro Asp Glu Cys Val Thr Tyr Ile Gln Asn Glu His Ser Arg Lys Gly

290 295 300

Asn His His Arg Phe Ile Thr Glu Lys Arg Val Phe Ser Ser Trp Ala

305 310 315 320

Gln Leu Tyr Gly Ile Thr Phe Ser His Pro Ser Trp Thr

325 330

<210> 155

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 155

Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Arg Tyr Thr His Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Gly Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Glu Gly Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 156

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 156

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 157

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 157

Tyr Pro Gly Asp Gly Asn

1 5

<210> 158

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 158

Gly Glu Gly Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 159

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 159

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Gly Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Ser Leu Lys Ile Lys Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Leu Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 160

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 160

Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala

1 5

<210> 161

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 161

Asn Ala Lys Thr Leu Ala Gly

1 5

<210> 162

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 162

Gln His His Tyr Gly Ile Leu Pro Thr

1 5

<210> 163

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 163

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Thr Ser Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala

115

<210> 164

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 164

Gly Tyr Ser Ile Thr Asn Asp Tyr

1 5

<210> 165

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 165

Ser Tyr Ser Gly Tyr

1 5

<210> 166

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 166

Trp Thr Ser Gly Leu Asp Tyr

1 5

<210> 167

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 167

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp Leu Ile His Asn Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 168

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 168

Asp Leu Ile His Asn Trp Leu Ala

1 5

<210> 169

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 169

Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr

1 5

<210> 170

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 170

Gln Gln Tyr Trp Thr Thr Pro Phe Thr

1 5

<210> 171

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 171

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Gly Arg Val Ala Phe His Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Met

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 172

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 172

Gly Phe Ser Phe Ser Asp Phe

1 5

<210> 173

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 173

Gly Arg Val Ala Phe His

1 5

<210> 174

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 174

His Arg Gly Phe Asp Val Gly His Phe Asp Phe

1 5 10

<210> 175

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 175

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Glu Thr Leu Val His Ser

20 25 30

Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser Phe Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 176

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 176

Glu Thr Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10

<210> 177

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 177

Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 178

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 178

Phe Gln Gly Ser Phe Asn Pro Leu Thr

1 5

<210> 179

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 179

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala

115

<210> 180

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 180

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 181

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 181

Ser Ser Ser Ser Ser Thr

1 5

<210> 182

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 182

Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 183

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 183

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gly Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 184

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 184

Gln Gly Ile Ser Gly Trp Leu Ala

1 5

<210> 185

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 185

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 186

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 186

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 187

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 187

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Lys Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Gly Arg Asp Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Thr Val Thr Thr Tyr Tyr Tyr Asp Phe Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 188

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 188

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

1 5

<210> 189

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 189

Ser Arg Ser Gly Arg Asp

1 5

<210> 190

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 190

Thr Val Thr Thr Tyr Tyr Tyr Asp Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 191

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 191

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 192

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 192

Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5

<210> 193

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 193

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 194

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 194

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 195

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 195

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Met Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Phe Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Gly Asp Tyr Val Arg Tyr His Tyr Tyr Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120 125

<210> 196

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 196

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 197

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 197

Ser Tyr Asp Gly Ser Lys

1 5

<210> 198

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 198

Asp Gly Gly Asp Tyr Val Arg Tyr His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 199

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 199

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Tyr Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ile Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Leu Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 200

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 200

Gln Gly Ile Ser Tyr Tyr Leu Ala

1 5

<210> 201

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 201

Asp Thr Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 202

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 202

Gln Arg Tyr Asp Ser Ala Pro Leu Thr

1 5

<210> 203

<211> 706

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 203

Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly

1 5 10 15

Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn

20 25 30

Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys

50 55 60

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Arg Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Val Ser Asp Gly Ser Phe Thr Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser

450 455 460

Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

465 470 475 480

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

485 490 495

Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln

500 505 510

Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

515 520 525

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr

530 535 540

Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys

545 550 555 560

Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

565 570 575

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly

580 585 590

Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala

595 600 605

Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala

610 615 620

Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser

625 630 635 640

Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg

645 650 655

Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala

660 665 670

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala

675 680 685

Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

690 695 700

Ser Ser

705

<210> 204

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 204

Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly

1 5 10 15

Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn

20 25 30

Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys

50 55 60

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Glu Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Trp Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly

<210> 205

<211> 249

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 205

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

115 120 125

Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser

130 135 140

Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser

145 150 155 160

Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser

165 170 175

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

180 185 190

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

195 200 205

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

210 215 220

Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

245

<210> 206

<211> 20

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 206

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 207

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности:синтетический пептид

<400> 207

Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 208

<211> 253

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 208

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu

130 135 140

Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly

145 150 155 160

Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly

165 170 175

His Cys Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile

180 185 190

His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys

195 200 205

Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp

210 215 220

Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met

225 230 235 240

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

245 250

<210> 209

<211> 253

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 209

Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly

1 5 10 15

Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn

20 25 30

Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Cys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys

50 55 60

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Val Met

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val Thr

145 150 155 160

Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys

165 170 175

Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

180 185 190

Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

195 200 205

Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val

210 215 220

Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr

225 230 235 240

Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

245 250

<210> 210

<211> 482

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 210

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu

130 135 140

Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly

145 150 155 160

Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly

165 170 175

His Cys Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile

180 185 190

His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys

195 200 205

Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp

210 215 220

Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met

225 230 235 240

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ala Ser

245 250 255

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

260 265 270

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

275 280 285

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

290 295 300

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

305 310 315 320

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

325 330 335

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

340 345 350

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

355 360 365

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Arg Val

370 375 380

Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

385 390 395 400

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

405 410 415

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

420 425 430

Val Leu Val Ser Asp Gly Ser Phe Thr Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

435 440 445

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

450 455 460

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

465 470 475 480

Pro Gly

<210> 211

<211> 482

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 211

Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly

1 5 10 15

Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn

20 25 30

Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Cys Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys

50 55 60

Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Leu Val Met

130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly Glu Lys Val Thr

145 150 155 160

Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys

165 170 175

Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu

180 185 190

Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

195 200 205

Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val

210 215 220

Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr

225 230 235 240

Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ala Ser

245 250 255

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

260 265 270

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

275 280 285

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

290 295 300

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

305 310 315 320

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

325 330 335

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

340 345 350

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

355 360 365

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Arg Val

370 375 380

Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

385 390 395 400

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

405 410 415

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

420 425 430

Val Leu Val Ser Asp Gly Ser Phe Thr Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

435 440 445

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

450 455 460

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

465 470 475 480

Pro Gly

<210> 212

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 212

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Glu Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Trp Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly

450

<210> 213

<211> 210

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 213

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val

115 120 125

Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp

130 135 140

Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr

145 150 155 160

Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr

165 170 175

Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val

180 185 190

Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly

195 200 205

Glu Cys

210

<210> 214

<211> 221

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: синтетический

полипептид

<400> 214

Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser

115 120 125

Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn

130 135 140

Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala

145 150 155 160

Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys

165 170 175

Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp

180 185 190

Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu

195 200 205

Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<---

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новым мультиспецифическим связывающим антителам, и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает белок, молекула которого содержит домены, специфическим образом связывающиеся с рецептором NKG2D, с CD16 и с опухолеассоциированным антигеном нектином-4. Изобретение может быть использовано при иммунотерапии злокачественных опухолей, клетки которых экспрессируют нектин-4 на своей поверхности. 6 н. и 22 з.п. ф-лы, 8 пр., 11 табл., 43 ил.

1. Триспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, нектин-4 и CD16, содержащий:

(a) первый антигенсвязывающий участок, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела против члена D группы 2 естественных киллеров (NKG2D), который связывается с NKG2D;

(b) второй антигенсвязывающий участок, содержащий домен VH и домен VL антитела против молекулы клеточной адгезии нектина-4 (Nectin4), который связывается с опухолеассоциированным антигеном нектином-4; и

(c) Fc-домен антитела IgG1 человека или его часть, достаточная для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий участок, содержащий домен VH и домен VL анти-CD16 антитела, который связывается с CD16,

где каждый из антигенсвязывающих участков содержит часть молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена.

2. Триспецифический связывающий белок по п. 1, где первый антигенсвязывающий участок связывается с NKG2D у людей, не являющихся человеком приматов и грызунов.

3. Триспецифический связывающий белок по п. 1, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи присутствуют в одном полипептиде.

4. Триспецифический связывающий белок по п. 1, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего участка присутствуют в одном полипептиде.

5. Триспецифический связывающий белок по п. 4, где вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего участка имеет аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи второго антигенсвязывающего участка.

6. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59 и SEQ ID NO: 85.

7. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 41, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 42.

8. Триспецифический связывающий белок по любому из пп.1-5 или 7, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43, последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44, последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45, последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46, последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47, и последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48.

9. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 49, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 50.

10. Триспецифический связывающий белок по любому из пп.1-5 или 9, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 51, последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52, последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53, последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54, последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55, и последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56.

11. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 57, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 58.

12. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 59, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 60.

13. Триспецифический связывающий белок по любому из пп.1-5 или 12, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 109, последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 110, последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 111, последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 112, последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 113, и последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 114.

14. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 101, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 102.

15. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 103, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 104.

16. Триспецифический связывающий белок по любому из пп.1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 105, последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 106, последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 107.

17. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-5, где первый антигенсвязывающий участок содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 85, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 86.

18. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1 или 6-16, где второй антигенсвязывающий участок связывает нектин-4 и содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 179, и аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 183.

19. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1, 6-16 или 18, где второй антигенсвязывающий сайт включает:

CDR1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180;

CDR2 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 181;

CDR3 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182;

CDR1 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184;

CDR2 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 185; и

CDR3 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 186.

20. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-19, где Fc-домен антитела содержит шарнир и CH2-домены человеческого антитела IgG1.

21. Триспецифический связывающий белок по п. 20, где Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотам 234-332 человеческого антитела IgG1.

22. Триспецифический связывающий белок по п. 21, где Fc-домен содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную Fc-домену человеческого IgG1, и отличается по одному или более положениям, выбранным из группы, состоящей из Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 и K439.

23. Триспецифический связывающий белок по любому из пп. 1-22, где белок связывается с NKG2D с K_D 10 нМ или более слабой аффинностью.

24. Фармацевтический состав для лечения злокачественной опухоли, содержащий эффективное количество триспецифического белка по любому из пп. 1-23 и фармацевтически приемлемый носитель.

25. Клетка-хозяин для экспрессии белка по любому из пп. 1-23, содержащая один или более экспрессионных векторов, обеспечивающих продукцию/получение белка по любому из пп. 1-23.

26. Способ прямого или косвенного усиления гибели экспрессирующей нектин-4 опухолевой клетки, включающий воздействие триспецифического белка по любому из пп. 1-23 нa опухолевую клетку и клетки-естественные киллеры.

27. Способ лечения злокачественной опухоли, где способ включает введение пациенту триспецифического белка по любому из пп. 1-23 или состава по п. 24, где подлежащая лечению злокачественная опухоль выбрана из группы, состоящей из рака яичников, злокачественной опухоли эндометрия, рака поджелудочной железы, рака легких, рака щитовидной железы, рака мочевого пузыря, рака молочной железы, колоректального рака, мелкоклеточного рака легких, нейробластомы, рака печени, злокачественной опухоли почки, меланомы, рака шейки матки, рака предстательной железы, остеосаркомы, злокачественной опухоли головного мозга, рака желудка и холангиокарциномы.

28. Способ прямого или косвенного усиления гибели опухолевой клетки, включающий воздействие триспецифического белка по любому из пп. 1-23 нa экспрессирующую нектин-4 опухолевую клетку и клетку-естественного киллера in vitro или ex vivo.

название	год	авторы	номер документа
БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНОМ	2018	Чан, Грегори П. Чэунг, Энн Ф. Хани, Уилльям Ланд, Бредли М. Принц, Бьянка	RU2788531C2
ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА NKG2D, CD16 И TROP2	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Гутьеррес, Ева Хани, Уилльям Лунде, Брэдли, М. Принц, Бьянка	RU2820629C2
ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА CAIX, ANO1, МЕЗОТЕЛИН, TROP2, СEA ИЛИ КЛАУДИН-18.2	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Гутьеррес, Ева Хани, Уилльям Лунде, Брэдли, М. Принц, Бьянка	RU2792671C2
БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНОМ	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Хани, Уилльям Лунде, Брэдли, М. Принц, Бьянка	RU2826991C2
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ НЕПРИРОДНЫЕ ЛИГАНДЫ NKG2D, КОТОРЫЕ ИЗБИРАТЕЛЬНО ДОСТАВЛЯЮТ ПРИСОЕДИНЕННЫЕ ГЕТЕРОЛОГИЧНЫЕ МОЛЕКУЛЫ К НЕПРИРОДНЫМ РЕЦЕПТОРАМ NKG2D НА CAR-КЛЕТКАХ	2020	Ким, Каман Кайлин, Найджел Херциг, Эйтан Грин, Уорнер	RU2823728C2
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ДОМЕНЫ α1-α2 НЕПРИРОДНЫХ ЛИГАНДОВ NKG2D, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С НЕПРИРОДНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ NKG2D	2019	Ким, Каман К. Лэндграф, Кайл И.	RU2815278C2
БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ВСМА, NKG2D И CD16	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Хани, Уилльям Лунде, Брэдли, М. Принц, Бьянка	RU2805254C2
БЕЛКИ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ CD33, NKG2D И CD16	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Хани, Уилльям Лунде, Брэдли, М. Принц, Бьянка	RU2820603C2
ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ДЛЯ АКТИВАЦИИ КЛЕТОК-НАТУРАЛЬНЫХ КИЛЛЕРОВ И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ	2018	Чан, Грегори, П. Чеунг, Энн, Ф. Хани, Уилльям Гринберг, Ася	RU2809125C2
МОЛЕКУЛЫ, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ADAM9, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ	2017	Лу, Дерик, Т. Скрайбнер, Джунипер, А. Барат, Бхасвати Дидрич, Гундо Джонсон, Лесли, С. Бонвини, Эзио	RU2783619C2

US 20150056206 A1, 26.02.2015
US 20170029529 A1, 02.02.2017
WO 2017081190 A1, 18.05.2017
US 20140112926 A1, 24.04.2014
AHMAD Z.A
et al.: "scFv antibody: principles and clinical application", Clin
Dev
Immunol., 2012, v
Изложница с суживающимся книзу сечением и с вертикально перемещающимся днищем	1924	Волынский С.В.	SU2012A1
US 20120269723 A1, 25.10.2012
WO 2016134371 A2, 25.08.2016
RU 2015143457 A1, 19.04.2017.

Белки, связывающие NKG2D, CD16 и опухолеассоциированный антиген Российский патент 2024 года по МПК C07K16/28 C07K16/30 C12N5/783

Описание патента на изобретение RU2816716C2

Похожие патенты RU2816716C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 816 716 C2

Реферат патента 2024 года Белки, связывающие NKG2D, CD16 и опухолеассоциированный антиген

Формула изобретения RU 2 816 716 C2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2024 года RU2816716C2

RU 2 816 716 C2