МУЛЬТИВАЛЕНТНЫЕ PD-L1-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 2024 года по МПК C07K14/705 C07K14/75 C07K19/00 A61K38/00 A61P35/00 

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Область техники

[0002] Настоящее изобретение относится к способам и материалам для лечения злокачественных новообразований. Изобретение относится к способам и материалам для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. Настоящее изобретение также относится к способам и материалам для экспрессии полипептидов PD-1 в клетках млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование. В частности, изобретение относится к композициям, содержащим полипептиды PD-1, полипептиды PD-1 могут находиться в форме одного или более мультивалентных соединений, связывающих лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1). В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать два или более полипептида белка программируемой гибели 1 (PD-1) (и/или их фрагменты, обладающие способностью связываться с PD-L1). Композиции, содержащие PD-L1-связывающие соединения, вводят млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование, в количестве, эффективном для лечения злокачественного новообразования, и, необязательно, вводят в комбинации с одним или более способами терапии злокачественных новообразований.

[0003] PD-L1, также называемый B7-H1, является белком иммунной контрольной точки, регулирующим иммунную систему посредством связывания с рецептором PD-1. В микроокружении опухоли гиперэкспрессия PD-L1 на опухолевых клетках способствует супрессии противоопухолевого иммунитета (Dong et al., Nat Med. 8:793-800, (2002); Hamanishi et al., Int. J. Clin. Oncol. 21:462-473 (2016); Dong et al., Nat. Med. 5:1365-1369 (1999); Chen et al., J. Clin. Invest. 125:3384-3391 (2015); He et al., Sci. Rep. 5:13110 (2015); Chen et al., Clin. Cancer Res. 18:6580-6587 (2012); Ohaegbulam et al., Trends Mol. Med. 21:24-33 (2015); и Postow et al., J. Clin. Oncol. 33:1974-1982 (2015)).

[0004] Антигенпрезентирующие клетки (АПК) захватывают антигены, высвобождаемые злокачественными клетками, и презентируют их T-клеткам. Злокачественные клетки также могут презентировать антигены активированным T-клеткам в контексте главного комплекса гистосовместимости. После активации T-клеток рецепторы PD-1 экспрессируются на T-клетках и ингибируют иммунные ответы посредством вовлечения лигандов PD-L1 и PD-L2 на АПК и PD-L1 на злокачественных клетках. Таким образом, опосредованная моноклональным антителом (mAb) специфическая блокада пути PD-1/PD-L1/PD-L2 может повышать противоопухолевый иммунитет. В дополнение к T-клеткам и АПК, PD-1 и PD-L1 можно индуцировать на других иммунных клетках.

[0005] В состоянии злокачественного заболевания взаимодействие PD-L1, присутствующего на PD-L1-положительной злокачественной клетке, с PD-1, присутствующим на T-клетке, может снижать функциональные сигналы T-клеток, предотвращая атаку иммунной системы на PD-L1-положительную злокачественную клетку. Растворимый PD-1 (sPD-1) может действовать в качестве ловушки посредством связывания с PD-L1, присутствующим на PD-L1-положительных злокачественных клетках. Например, если sPD-1 связан с PD-L1, присутствующим на PD-L1-положительной злокачественной клетке, PD-L1 не может взаимодействовать с PD-1, присутствующим на T-клетке, таким образом, позволяя T-клетке функционировать посредством атаки PD-L1-положительной злокачественной клетки.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] Настоящее изобретение относится к способам и материалам для получения одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим PD-L1-связывающие соединения, содержащие полипептиды PD-1, полипептиды PD-1 могут находиться в форме одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. PD-L1-связывающие соединения могут действовать в качестве ловушки посредством связывания с PD-L1, присутствующим на PD-L1-положительных злокачественных клетках.

[0007] Настоящее изобретение относится к способам и материалам, содержащим полипептиды PD-1, полипептиды PD-1 могут находиться в форме одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, вводимых млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование, для лечения млекопитающего. В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение включает два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение включает два или более полипептида PD-1 (или их фрагменты, обладающие способностью связываться с PD-L1) таким образом, что соединение может связываться с двумя или более полипептидами PD-L1. Настоящее изобретение также относится к способам получения PD-L1-связывающих соединений и композициям, содержащим рекомбинантные Ad, содержащие по меньшей мере один аминокислотный сегмент, содержащий полипептид PD-1, образующий PD-L1-связывающее соединение или мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании.

[0008] В варианте осуществления полипептиды PD-1 мыши и/или полипептиды PD-1 человека, слитые с каркасным полипептидом, могут образовывать полипептидный конъюгат (например, полипептидный конъюгат, включающий множество (например, два или более) ассоциированных аминокислотных цепей) таким образом, что, если каркасный полипептид, слитый с одним или более полипептидами PD-1, является полипептидным конъюгатом, полипептидный конъюгат может образовывать мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, включающее два или более полипептида PD-1.

[0009] В варианте осуществления полипептидный конъюгат может включать три аминокислотные цепи, где каркасный полипептид может являться полипептидом сигма-1, полученным из ортореовируса млекопитающих 3, и где полипептидный конъюгат может включать три полипептида PD-1.

[00010] В варианте осуществления полипептидный конъюгат может включать четыре аминокислотных цепи, где каркасный полипептид может являться полипептидом стрептавидина, и где полипептидный конъюгат может включать четыре полипептида PD-1.

[00011] Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим рекомбинантные Ad, содержащие нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды PD-1, связывающиеся с PD-L1. В варианте осуществления полипептид PD-1 мыши и/или полипептид PD-1 человека слит с витамин K-зависимым гамма-карбоксиглутаминовым доменом одноцепочечного полипептида антитела против фактора X (доменом GLA или GLA-EGF полипептида FX) и присутствует на аденовирусных гексоновых полипептидах таким образом, что, если полипептид присутствует на двух или более вирусных гексоновых полипептидах, присутствующих на капсиде вирусной частицы, вирусная частица может образовывать мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, включающее от приблизительно 240 до приблизительно 720 полипептидов PD-1.

[00012] Настоящее изобретение относится к способам и материалам для лечения злокачественных новообразований посредством введения одного или более рекомбинантных аденовирусов (Ad), экспрессирующих белок PD-1 и/или аминокислотные сегменты, связывающиеся с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). Рекомбинантные Ad, экспрессирующие PD-1, можно вводить в комбинации с противоопухолевой иммунотерапией по терапевтической схеме лечения.

[00013] Используя мультивалентные PD-L1-связывающие соединения (например, по сравнению с мономерными полипептидами PD-1), можно повышать эффективность PD-1 для нейтрализации PD-L1, присутствующего на PD-L1-положительных злокачественных клетках, можно предотвращать избегание PD-L1-положительными злокачественными клетками иммунного надзора и/или можно позволить противоопухолевым средствам (например, противоопухолевым иммунотерапевтическим средства) эффективнее направлено воздействовать на PD-L1-положительные злокачественные клетки. В некоторых случаях презентирование аденовирусом полипептидов PD-1 можно использовать для перенацеливания терапевтических Ad на PD-L1 на клетке для доставки нуклеиновых кислот или уничтожения PD-L1-экспрессирующих клеток посредством онколитической гибели клеток.

[00014] В варианте осуществления PD-L1-связывающее соединение также может включать нацеливающую молекулу. Нацеливающая молекула и молекула слияния клеток может являться вирусным полипептидом, таким как полипептид гемагглютинина (H) вируса кори (MV), полипептид слияния (F) MV или полипептид гликопротеина (G) вируса везикулярного стоматита (VSV).

[00015] PD-L1-связывающее соединение также может включать один или более терапевтических полипептидов. Терапевтический полипептид выбран из полипептида лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептида лиганда OX40 (OX40L), полипептида лиганда CD40 (CD40L) или полипептида гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ). Терапевтический полипептид также может являться полипептидом, активирующим передачу сигнала глюкокортикоид-индуцируемого, родственного рецептору фактора некроза опухоли (TNFR) белка (GITR).

[00016] PD-L1-связывающее соединение также может включать детектируемый полипептид. Детектируемый полипептид может являться зеленым флуоресцентным белком (GFP) или люциферазным полипептидом.

[00017] Настоящее изобретение относится к рекомбинантным векторам для экспрессии PD-L1-связывающих соединений, содержащих нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды PD-1, полипептиды PD-1 можно экспрессировать с одним или более нацеливающими полипептидами и/или одним или более терапевтическими полипептидами и/или белками (например, коллагеном, эластином, ламинином и фибриногеном). Полипептиды PD-1 можно экспрессировать в виде слитых белков с гетерологичными полипептидами. Нуклеиновые кислоты, кодирующие полипептиды PD-1, а также нуклеиновые кислоты, кодирующие нацеливающие полипептиды, терапевтические полипептиды и белки, могут содержаться в экспрессирующих векторах, необязательно, содержащих экспрессирующие кассеты, делающие возможной экспрессию полипептидов в прокариотических или эукариотических клетках. Вектор может являться вирусным вектором. Вирусный вектор может являться Ad, аденоассоциированным вирусом (AAV) или лентивирусом. Вирусный вектор может являться Ad, выбранным из Ad657, Ad6/57/6 и их вариантов. Ad может являться условно-репликативным Ad (CRAd). Вирусный вектор может являться онколитическим вирусным вектором.

[00018] В другом аспекте настоящее изобретение относится к вирусным векторам для экспрессии PD-L1-связывающих соединения, содержащим нуклеиновые кислоты, кодирующие аминокислотную цепь, включая полипептид PD-1 и каркасный полипептид, как представлено в настоящем описании (например, полипептидный конъюгат, который может включать множество аминокислотных цепей, где каждая аминокислотная цепь включает полипептид PD-1 и каркасный полипептид; и где множество аминокислотных цепей может образовывать полипептидный конъюгат).

[00019] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование. Способы могут включать или состоять, по существу, из введения композиции, содержащей PD-L1-связывающее соединение, млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование.

[00020] Способ по изобретению включает введение эффективного количества композиций, содержащих PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании. В варианте осуществления PD-L1-связывающие соединения вводят млекопитающему в комбинации с одним или более противоопухолевыми терапевтическими средствами, таким образом, снижая количество злокачественных клеток, присутствующих у млекопитающего. Одно или более противоопухолевых терапевтических средств могут включать иммунотерапевтическое средство, нацеленное на PD-1 или PD-L1. Иммунотерапевтическое средство может быть выбрано из ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, авелумаба, цемиплимаба и дурвалумаба.

[00021] В другом аспекте изобретение относится к способам лечения млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование, включающим или состоящим, по существу, из введения композиции, содержащей мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование. Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может содержать полипептидный конъюгат, представленный в настоящем описании (например, полипептидный конъюгат, включающий множество аминокислотных цепей, где каждая аминокислотная цепь включает полипептид PD-1 и каркасный полипептид). Злокачественное новообразование может являться раком предстательной железы, раком молочной железы, раком яичников, раком легких (например, немелкоклеточным раком легких), печеночноклеточной карциномой, раком поджелудочной железы, раком почки, меланомы, злокачественным новообразованием головного мозга, раком толстого кишечника, лимфомой, миеломой, лимфоцитарным лейкозом или миелогенным лейкозом. Введение может включать системное или локальное введение (например, внутривенное, внутриопухолевое, внутримышечное, внутриорганное введение и введение в лимфоузел).

[00022] Один из аспектов изобретения относится к мультивалентным соединениям, связывающим лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), содержащим множество аминокислотных цепей, где каждая аминокислотная цепь содержит по меньшей мере один полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1).

[00023] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является полипептидным конъюгатом, содержащим каркасный полипептид, выбранный из полипептидов Ig, полипептидов сигма-1 и полипептидов стрептавидина.

[00024] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является полипептидным конъюгатом, содержащим более одного каркасного полипептида.

[00025] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где полипептид PD-1 является PD-1 человека или PD-1 мыши.

[00026] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где множество аминокислотных цепей содержат терапевтический полипептид, нацеливающий полипептид или антигенный полипептид.

[00027] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где нацеливающий полипептид выбран из полипептида гемагглютинина вируса кори (MVH), полипептида слияния вируса кори (MVF) и полипептида гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSVG).

[00028] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где терапевтический полипептид выбран из полипептида лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептида лиганда OX40 (OX40L), полипептида лиганда CD40 (CD40L), полипептида гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) и агониста GITR.

[00029] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где каждая аминокислотная цепь, содержащая по меньшей мере один полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1), связана с рекомбинантным аденовирусом (Ad), и множество аминокислотных цепей присутствует на полипептиде оболочки рекомбинантного Ad.

[00030] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где рекомбинантный Ad содержит гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 и по меньшей мере один полипептид гипервариабельной области (HVR) гексона капсида Ad штамма Ad57.

[00031] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 содержат полипептиды HVR 1-7 из Ad штамма Ad57.

[00032] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 содержат полипептиды HVR 2-6 из Ad штамма Ad57.

[00033] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1) является PD-1 человека.

[00034] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где полипептид PD-1 слит с витамин K-зависимым гамма-карбоксиглутаминовым доменом одноцепочечного полипептида антитела против фактора X (доменом GLA полипептида FX).

[00035] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где каждая аминокислотная цепь содержит нацеливающую молекулу, выбранную из полипептида гемагглютинина вируса кори (MVH), полипептида слияния вируса кори (MVF) и полипептида гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSVG).

[00036] Дополнительный аспект изобретения относится к такому мультивалентному PD-L1-связывающему соединению, где каждая аминокислотная цепь содержит один или более терапевтических полипептидов, выбранных из полипептида лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептида лиганда OX40 (OX40L), полипептида лиганда CD40 (CD40L) и полипептида гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ).

[00037] Дополнительный аспект изобретения относится к такой фармацевтической композиции, содержащей мультивалентное PD-L1-связывающее соединение и фармацевтически приемлемый носитель.

[00038] Дополнительный аспект изобретения относится к способу лечения злокачественного новообразования у нуждающегося в этом индивидуума, включающему введение мультивалентного PD-L1-связывающего соединения.

[00039] Дополнительный аспект изобретения относится к такому способу, дополнительно включающему введение млекопитающему одного или более противоопухолевых терапевтических средств.

[00040] Дополнительный аспект изобретения относится к такому способу, где противоопухолевое терапевтическое средство является иммунотерапевтическим средством, нацеленным на PD-1.

[00041] Дополнительный аспект изобретения относится к такому способу, где иммунотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, авелумаба, цемиплимаба и дурвалумаба.

[00042] Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, обладают значением, общепринято понятным специалисту в области, к которой принадлежит изобретение. Хотя в практическом осуществлении настоящего изобретения можно использовать способы и материалы, схожие или эквивалентные представленным в настоящем описании, подходящие способы и материалы описаны ниже. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем описании, в полном объеме включены в него в качестве ссылки. В случае конфликта настоящее описание, включая определения, будет обладать приоритетом. Кроме того, материалы, способы и примеры являются исключительно иллюстративными, и не предназначены для ограничения.

[00043] Подробности одного или более вариантов осуществления изобретения приведены на сопутствующих чертежах и в описании ниже. Другие признаки, объекты и преимущества по изобретению будут очевидны из описания и чертежей, а также формулы изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[00044] На фигуре 1A показана схема примеров сконструированных мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, содержащее полипептид PD-1, слитый с полипептидом Ig, являющееся димерным полипептидным конъюгатом, включает две аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1. Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, являющееся тримерным полипептидным конъюгатом, содержит три аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с полипептидом сигма. Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, являющееся тетрамерным полипептидным конъюгатом, содержит четыре аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с полипептидом стрептавидина.

[00045] Аминокислотная цепь включает один полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX. Слитые белки можно конструировать с любым веществом на N-конце или C-конце. Слитый белок, связанный с поверхностью аденовирусной частицы, образует мультивалентное PD-L1-связывающее соединение.

[00046] На фигуре 1B показаны сконструированные PD-L1-связывающие соединения в результате встраивания мотивов PD-1 в природные биополимеры, подобные коллагену, ламинину, фибронектину или эластину. Слияние PD-1 с белковыми мономерами и экспрессия в клетках делают возможной их сборку в мультивалентные полимеры, экспонирующие множество PD-L1-связывающих мотивов.

[00047] На фигуре 2A показаны векторы нуклеиновой кислоты, которые могут кодировать аминокислотные цепи, которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. На фигуре 2A показана схема вектора нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую один полипептид PD-1 мыши (mPD-1), слитый с полипептидом IgG (сверху слева), вектора нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую один полипептид PD-1 человека (hPD-1), слитый с полипептид IgG (сверху справа), и пример стратегии клонирования (внизу) для замены нуклеиновой кислоты, кодирующей IgG, нуклеиновой кислотой, кодирующей домен GLA полипептида FX для получения вектора нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX, или для замены нуклеиновой кислоты, кодирующей IgG, нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид сигма-1, для получения вектора нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую полипептид PD-1, слитый с полипептидом сигма-1.

[00048] Фигура 2B включает изображения гелей, где показана экспрессия аминокислотной цепи, содержащей полипептид PD-1. Дорожка 1: Маркер молекулярной массы (пар оснований; п.н.); дорожка 2: полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX; дорожка 3: маркер молекулярной массы (п.н.); дорожка 4: аминокислотная цепь, включающая полипептид PD-1, слитый с полипептидом сигма-1.

[00049] На фигуре 3 показана схема вектора нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую полипептид hPD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX (сверху слева), вектор нуклеиновой кислоты, который может кодировать аминокислотную цепь, включающую полипептид hPD-1, слитый с полипептидом сигма-1 (сверху справа), и пример стратегии клонирования (внизу) для замены нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид hPD-1, нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид mPD-1.

[00050] На фигуре 4 показана схема примеров векторов нуклеиновых кислот, которые могут кодировать аминокислотные цепи, которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений.

[00051] На фигуре 5 показана схема примеров аденовирусных (Ad) векторов, которые могут кодировать аминокислотные цепи, которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений.

[00052] На фигуре 6 показана схема генома Ad, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид иммунной контрольной точки, который может активировать T-клетки (4-1BBL), нуклеиновую кислоту, кодирующую один или более полипептидов PD-1 (PD-1-X, где X является димерным, тримерным, тетрамерным или полимерным связывающим каркасом), и нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген, такой как антиген злокачественной опухоли или антиген инфекционного заболевания (эпитоп HPV). Также показана карта участков рестрикции генома Ad.

[00053] На фигуре 7 показано выравнивание Ad5, 6 и 57, где показаны вариации в гексоне и областях E3. (A) Выравнивание Pustell ДНК геномов Ad6 и Ad57. Рамками указаны гексон и области E3, где вариабельность является наибольшей среди двух вирусов. (B) Выравнивание ClustalW аминокислот гипервариабельной области в гексоновых белках из Ad5, Ad6 и Ad57.

[00054] На фигуре 8 показана конструкция Ad657 в результате замены HVR Ad6 на HVR Ad57. Сокращение: HVR, гипервариабельные области.

[00055] Фигура 9 является схемой репликационно-компетентного Ad (RC-Ad), где экспрессию E1 контролируют с помощью нативного промотора E1; вариант CRAd-пробазин-E1A (Ad-PB), где экспрессию E1 контролируют с помощью простатспецифического промотора пробазина; CRAd-dl1101, где абляции подвергают связывание пути p300, восприимчивого к пути ИФН в нормальных клетках; CRAd-dl1107, где абляция связывания pRB позволяет вирусу уничтожать злокачественные клетки с нарушениями пути RB, но он репрессирован в RB⁺ нормальных клетках; CRAd-dl1101/07, где абляции подвергают путь p300, восприимчивый к пути ИФН, абляция связывания RB позволяет вирусу уничтожать злокачественные клетки абляция связывания pRB позволяет вирусу уничтожать RB, но он репрессирован в RB⁺ нормальных клетках.

[00056] На фигуре 10 показаны аминокислотные последовательности N-концевой части полипептида E1A дикого типа и N-конца E1A вариантов CRAd, dl1101, dl1107 и dl1101/1107.

[00057] На фигуре 11 показана схема разных генов E3 избегания иммунного надзора в Ad вида C экземпляра Ad6 и Ad вида D экземпляра Ad26. Оба Ad экспрессируют варианты с разными размерами и последовательностями генов E3 12,5K, 6,7K, 19K, 10,4K (RIDα), 14,5K (RIDβ) и 14,7K, а также изображение функций этих кодируемых белков E3.

[00058] На фигуре 12 показаны участки на HVR Ad, которые можно модифицировать, например, посредством пегилирования или "бапилирования" с помощью биотин-акцепторных пептидов (BAP).

[00059] Фигура 13 является схемой, на которой показаны терапевтические циклы Ad. A) Схема переключения серотипа Ad. B) Схема примера терапевтического цикла, где Ad6 и Ad657 можно использовать для множества раундов лечения посредством переключения серотипа в комбинации с ковалентной конъюгацией полимера.

[00060] На фигуре 14 показана конъюгация полиэтиленгликоля (PEG) с Ad657-HVR1-C. A) Электрофорез в ПААГ с SDS белков Ad в пегилированием и без него. Стрелками показаны увеличения размера из-за химического присоединения PEG к гексону. B) Эффекты направленного пегилирования с помощью малеимид-PEG и ненацеливающего NHS-PEG в отношении инфекции вируса.

[00061] На фигуре 15 показаны химерные конструкции HVR, в которых комбинируют разные HVR из разных серотипов Ad для модуляции природных взаимодействий с клетками и факторами крови, что улучшает фармакологию, в комбинации с инсерцией клеточно-связывающих и клеточно-ненацеливающих пептидов в разных HVR для изменения проникновения в клетку и избегания клеток. В этом примере одну аминокислоту цистеин встраивают в HVR1 и HVR5 Ad657 для модуляции фармакологии и направленной конъюгации полимеров, подобных полиэтиленгликолю или других веществ, подобных средствам для визуализации, подобных флуорофорам.

[00062] На фигуре 16 показаны карты плазмид для типичных CRAd и комбинаций пептидов. Показаны гексоны, а также инсерции клеточно-нацеливающих пептидов в отдельные HVR.

[00063] На фигуре 17 показаны карты плазмид для типичных CRAd и комбинаций пептидов. Показаны гексоны, а также инсерции клеточно-нацеливающих пептидов в отдельные HVR.

[00064] На фигуре 18 показаны карты плазмид для типичных CRAd и комбинаций пептидов. Показаны гексоны, а также инсерции клеточно-нацеливающих пептидов в отдельные HVR.

[00065] Фигура 19. Анализ блокады PD-1/PD-L1 - Слитый белок очищали из клеток, инфицированных pAd6/57/6-dl1107-DE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I, на колонке с протеином A. Этот белок титровали параллельно положительному контролю, моноклональному антителу против PD-1 от Promega (Madison, WI, USA).

[00066] Фигура 20. Оценка роста опухоли - клетки меланомы B16-CAR инъецировали подкожно мышам C57BL/6 и в опухоли инъецировали 3e11 вирусных частиц указанных векторов. Ловушка CRAd+PD-L1 представляет собой pAd6/57/6-dl1107-ΔE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I. Ловушка CRAd+PD-L1+иммуностимулятор соответствует опухолям, в которые совместно инъецировали pAd6/57/6-dl1107-ΔE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I и второй аденовирус, экспрессирующий 4-1BBL.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[00067] Настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения злокачественных новообразований, содержащим полипептиды PD-1. Полипептиды PD-1 могут находиться в форме мультивалентных PD-L1-связывающих соединений.

[00068] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение содержит два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). Например, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, включающее два или более полипептида PD-1 (и/или их фрагменты обладающие способностью связываться с PD-L1), может связываться с двумя или более полипептидами PD-L1. В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать одну аминокислотную цепь, включающую два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1.

[00069] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать полипептидный конъюгат, включающий множество (например, две или более) аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1. Например, аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1, может являться слитым полипептидом, включающим один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, который может образовывать полипептидный конъюгат с одним или более другими полипептидами, включающими один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептидный конъюгат, включающий множество связанных аминокислотных цепей). Если каркасный полипептид, слитый с одним или более полипептидами PD-1, находится в полипептидном конъюгате, полипептидный конъюгат может включать два или более полипептида PD-1.

[00070] В варианте осуществления вирусная частица, содержащая полипептид PD-1, может находиться в форме мультивалентного PD-L1-связывающего соединения, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1.

[00071] В варианте осуществления PD-L1-связывающее соединение содержит рекомбинантный вирус, генетически модифицированный для экспрессии полипептида PD-1, где полипептид PD-1 экспонируется на оболочке вируса. В дополнительном варианте осуществления рекомбинантный вирус генетически модифицирован для экспрессии полипептида PD-1 в комбинации с одним или более полипептидами, гетерологичными в отношении остова рекомбинантного вируса, например, терапевтическими полипептидами, нацеливающими молекулами/полипептидами и антигенными полипептидами.

[00072] В варианте осуществления PD-L1-связывающее соединение содержит рекомбинантный Ad (т.е. Ad657, Ad6/57/6 и их варианты), модифицированный в одной или более гипервариабельных областей (HVR) гексона белка капсида вируса, содержащий по меньшей мере один полипептид PD-1. В варианте осуществления рекомбинантный Ad дополнительно модифицирован так, чтобы содержать гетерологичные полипептиды, такие как нацеливающие полипептиды, терапевтические полипептиды и/или антигены. Полипептиды PD-1, а также гетерологичные полипептиды, экспрессируются после вирусной репликации. После сборки вируса, экспрессирующиеся полипептиды могут экспонироваться на поверхности вируса в качестве компонента структуры капсида вируса.

[00073] В дополнительном варианте осуществления PD-L1-связывающее соединение содержит рекомбинантный Ad, генетически модифицированный для экспрессии полипептида PD-1 в виде слитого белка с одним или более гетерологичными полипептидами, где слитый белок экспонируется на капсиде вирусной частицы. Гетерологичные полипептиды могут включать домен GLA из полипептида FX, полипептиды CAR, полипептиды CD46, десмоглеиновые полипептиды, интегриновые полипептиды, одноцепочечные полипептиды антитела, полипептиды антитела Верблюжьих, полипептиды капсида и полипептиды, связывающиеся с оболочкой.

[00074] В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может являться слитым полипептидом, включающим один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки. В варианте осуществления слитый белок PD-1 и гетерологичного полипептида можно экспрессировать в клетке-хозяине, очищать и смешивать с Ad таким образом, что слитый белок связан с поверхностью Ad посредством ковалентного присоединения гетерологичного полипептида к Ad. Если первый слитый полипептид, включающий один или более полипептидов PD-1, слитые с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, связан с первым вирусным полипептидом оболочки на вирусной частице, и второй слитый полипептид, включающий один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, связан со вторым вирусным полипептидом оболочки на этой вирусной частице, вирусная частица будет включать два или более полипептида PD-1.

[00075] В некоторых случаях PD-L1-связывающее соединение может включать вирусную частицу, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). Полипептиды PD-1 могут экспрессироваться во время репликации вируса и собираться и экспонироваться на оболочке вируса. В варианте осуществления Ad (т.е. Ad657, Ad6/57/6 и их варианты) модифицирован в области HVR для экспрессии полипептида PD-1 в комбинации с одним или более гетерологичными полипептидами, выбранными из терапевтических полипептидов, нацеливающих полипептидов и антигенных полипептидов. Полипептид PD-1 можно экспрессировать в виде слитого белка с одним или более гетерологичными полипептидами. Например, вирусная частица генетически модифицирована для экспрессии двух или более аминокислотных цепей, каждая из которых включает по меньшей мере один полипептид PD-1 и гетерологичный полипептид, где аминокислотные цепи экспонируются на поверхности вирусной частицы в качестве компонента капсида вируса, таким образом, образуя мультивалентное PD-L1-связывающее соединение. В некоторых случаях вирусная частица генетически модифицирована для экспрессии двух или более аминокислотных цепей, каждая из которых включает полипептид PD-1, и модифицирована для экспрессии одной или более аминокислотных цепей, содержащих гетерологичный полипептид, где аминокислотные цепи экспонируются на поверхности вирусной частицы в качестве компонента капсида вируса, таким образом, образуя мультивалентное PD-L1-связывающее соединение. В некоторых случаях аминокислотная цепь включает два или более полипептида PD-1 и гетерологичный полипептид, экспонирующиеся на поверхности вирусной частицы.

[00076] В варианте осуществления аминокислотная цепь, содержащая один или более полипептидов PD-1, может являться слитым белком, содержащим один или более полипептидов PD-1, слитых с гетерологичным полипептидом. Гетерологичный полипептид может связываться с поверхностью Ad с оболочкой вирусной частицы. В варианте осуществления слитые белки экспрессируют в клетке-хозяине, очищают и смешивают с Ad таким образом, что слитый белок покрывает поверхность вирусной частицы Ad, таким образом, образуя мультивалентное PD-L1-связывающее соединение.

[00077] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, может иметь повышенную аффинность к PD-L1 (например, по сравнению с мономерным полипептидом PD-1). В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, может иметь повышенную авидность к PD-L1 (например, по сравнению с мономерным полипептидом PD-1).

[00078] Настоящее изобретение относится к способам и материалам для получения композиций, содержащих полипептиды PD-1 и мультивалентные PD-L1-связывающие соединения, а также способам и материалам для получения рекомбинантных вирусов, содержащих молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании.

[00079] Мультивалентные PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании (например, слитый полипептид, включающий один, или два, или более полипептидов PD-1, или полипептидный конъюгат, включающий две или более аминокислотных цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусная частица, где вирусные белки оболочки содержат одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусная частица, где один или более полипептидов PD-1 связаны с поверхностью вирусной частицы), могут включать любое подходящее количество аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты, которые могут связываться с PD-L1).

[00080] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, может включать два или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 240, 720, или более) аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1. В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, может включать от приблизительно двух до приблизительно 720 аминокислотные сегментов, которые могут связываться с PD-L1. Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, является одной аминокислотной цепью, включающей два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 полипептидов PD-1 (или их фрагментов, связывающихся с PD-L1). Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, является полипептидным конъюгатом, включающим множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать приблизительно 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 полипептидов PD-1 (или их фрагментов, связывающихся с PD-L1).

[00081] Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, является вирусной частицей, где два или более вирусных полипептида оболочки (например, полипептиды капсида) модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать приблизительно от 240 полипептиды PD-1 до приблизительно 720 полипептидов PD-1 (или их фрагменты связывающиеся с PD-L1). В случаях, когда мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включает два аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1 (или вирусную частицу, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1), мультивалентное PD-L1-связывающее соединение можно обозначать как димерное или бивалентное PD-L1-связывающее соединение. В случаях, когда мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включает три аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение можно обозначать как тримерное или тривалентное PD-L1-связывающее соединение. В случаях, когда мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включает четыре аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-L1, мультивалентное PD-L1-связывающее соединение можно обозначать как тетрамерное или тетравалентное PD-L1-связывающее соединение.

[00082] Мультивалентные PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании, могут включать любые подходящие аминокислотные сегменты, которые могут связываться с PD-L1.

[00083] В варианте осуществления аминокислотный сегмент, который может связываться с PD-L1, может включать полипептид PD-1. В некоторых случаях аминокислотный сегмент, который может связываться с PD-L1, может включать любой фрагмент полипептида PD-1 при условии, что фрагмент сохраняет способность связываться с PD-L1. В некоторых случаях полипептид PD-1 может являться полипептидом sPD-1. Полипептид PD-1 можно получать из любого подходящего животного. В некоторых случаях полипептид PD-1 можно получать из млекопитающего. Например, полипептид PD-1 может являться полипептидом hPD-1. Например, полипептид PD-1 может являться полипептидом mPD-1. Полипептид PD-1 может включать любую подходящую последовательность полипептида PD-1. В некоторых случаях полипептид PD-1 можно модифицировать (например, для более высокоаффинного взаимодействия с PD-L1). Примеры последовательностей полипептидов PD-1 (и нуклеиновых кислот, кодирующих такие полипептиды) могут быть такими, как указано в базах данных National Center for Biotechnology Information (NCBI), например, с регистрационным номером AI928135 (версия AI928135.1), регистрационным номером AY238517 (версия AY238517.1) и регистрационным номером CR988122 (версия CR988122.1), регистрационным номером U64863 (версия U64863.1), регистрационным номером NM_008798 (версия NM_008798.2) и регистрационным номером NP_032824 (версия NP_032824.1). В некоторых случаях полипептид PD-1 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5. В некоторых случаях полипептид PD-1 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6.

[00084] В некоторых случаях аминокислотный сегмент, который может связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), может иметь последовательность, отличающуюся от последовательности полипептида PD-1 дикого типа (например, полипептида PD-1 дикого типа, имеющего аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6), иногда обозначаемую как вариант последовательности. Например, последовательность полипептида PD-1 (и/или его фрагмента, обладающего способностью связываться с PD-L1) может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления аминокислотный сегмент, который может связываться с PD-L1, может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности, 90% идентичности последовательности, 95% идентичности последовательности или по меньшей мере 99% идентичности последовательности в отношении SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 6. Процент идентичности последовательности вычисляют посредством определения количества совпадающих положений в выровненных полипептидных последовательностях, разделяя количество совпадающих положений на общее количество выровненных аминокислот соответствующим образом и умножая на 100. Термин "совпадающее положение" относится к положению, в котором идентичные аминокислоты встречаются в одном и том же положении в выровненных последовательностях. Термин "общее количество выровненных аминокислот" относится к минимальному количеству аминокислот в полипептиде PD-1, необходимому для выравнивания второй последовательности, и не включает выравнивание (например, принудительное выравнивание) с непринадлежащими PD-1 последовательностями, такими как последовательности, слитые с полипептидом PD-1 (например, аминокислотами из полипептида IgG, полипептида стрептавидина, сигма-1 или домена GLA полипептида FX, слитых с полипептидом PD-1). Общее количество выровненных аминокислот может соответствовать целой последовательности PD-1 или может соответствовать фрагментам полноразмерной последовательности PD-1. Последовательности можно выравнивать с использованием алгоритма, описанного Altschulet al. (Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)) и включенного в программы BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), доступные в ncbi.nlm.nih.gov в сети интернет. Поиски или выравнивания BLAST можно осуществлять для определения процента идентичности последовательности между полипептидом PD-1 и любой другой последовательностью или ее частью с использованием алгоритма Altschul et al. BLASTN является программой, используемой для выравнивания и сравнения идентичности между последовательностями нуклеиновой кислоты, в то время как BLASTP является программой, используемой для выравнивания и сравнения идентичности между аминокислотными последовательностями. При использовании программ BLAST для вычисления процента идентичности между последовательностью PD-1 и другой последовательностью используют параметры по умолчанию соответствующих программ.

[00085] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать полипептидный конъюгат, включающий множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). В рамках изобретения термин "множество аминокислотных цепей", каждая из которых включает один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, относится к двум или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) аминокислотным цепям, каждая из которых включает один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1. Например, аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1, может являться слитым полипептидом, включающим один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, которые могут образовывать полипептидный конъюгат с одним или более другими полипептидами, включающими один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептидный конъюгат, включающий множество связанных аминокислотных цепей). Если каркасный полипептид, слитый с одним или более полипептидами PD-1, находится в полипептидном конъюгате, полипептидный конъюгат может включать два или более полипептида PD-1. В некоторых случаях полипептидный конъюгат, включающий множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, может являться гомомерным полипептидом PD-1 (например, может включать две или более одинаковых аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1). В некоторых случаях полипептидный конъюгат, включающий множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, может являться гетеромерным полипептидом PD-1 (например, может включать две или более разных аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1).

[00086] Аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), присутствующая в полипептидном конъюгате, представленном в настоящем описании (например, полипептидном конъюгате, включающем множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1), может включать один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, слитым с любым подходящим каркасным полипептидом. Например, аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1, присутствующая в полипептидном конъюгате, представленном в настоящем описании, может являться слитым полипептидом, включающим один или более полипептидов PD-1, слитых с любым подходящим каркасным полипептидом. В некоторых случаях каркасный полипептид может обладать способностью образовывать полипептидный конъюгат (например, полипептидный конъюгат, включающий множество связанных аминокислотных цепей). Например, две или более аминокислотных цепи, включающие один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, могут образовывать полипептидный конъюгат, включающий два или более полипептида PD-1. Если две или более аминокислотных цепи, включающие один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, образуют полипептидный конъюгат, две или более аминокислотные цепи могут быть связаны (например, посредством ковалентной связи или ионной связи). Каркасный полипептид может являться любым подходящим полипептидом, который может образовывать полипептидный конъюгат с другим полипептидом. Каркасный полипептид может естественным образом образовывать полипептидный конъюгат, или его можно конструировать так, чтобы он образовывал полипептидный конъюгат. Неограничивающие примеры каркасных полипептидов, которые могут образовывать полипептидный конъюгат, могут включать полипептиды Ig (например, полипептиды IgG, такие как полипептиды IgG2), полипептиды сигма-1 и полипептиды стрептавидина.

[00087] Аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), которая может присутствовать в полипептидном конъюгате, представленном в настоящем описании (например, полипептидном конъюгате, включающем множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1), может включать любую подходящую аминокислотную последовательность. Например, аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, может включать любую подходящую аминокислотную последовательность. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1 и каркасный полипептид, включают аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 25, 26 или 27. В некоторых случаях аминокислотная последовательность аминокислотной цепи, включающей один или более полипептидов PD-1 и каркасный полипептид, может иметь последовательность, отличающуюся от одной из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 7, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 25, 26 или 27, иногда обозначаемых как вариант последовательности. Например, аминокислотная последовательность слитого полипептида, содержащего один или более полипептидов PD-1 и каркасный полипептид, может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности в отношении любой из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 7, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 25, 26 или 27. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность слитого полипептида, содержащего один или более полипептидов PD-1 и каркасный полипептид, может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности, 90% идентичности последовательности, 95% идентичности последовательности или по меньшей мере 99% идентичности последовательности в отношении любой из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 7, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 25, 26 или 27. Процент идентичности последовательности вычисляют посредством определения количества совпадающих положений в выровненных полипептидных последовательностях, разделяя количество совпадающих положений на общее количество выровненных аминокислот соответствующим образом и умножая на 100. Термин "совпадающее положение" относится к положению, в котором идентичные аминокислоты встречаются в одном и том же положении в выровненных последовательностях. Последовательности можно выравнивать с использованием алгоритма, описанного Altschul et al. (Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)) и включенного в программы BLAST (Basic Local Alignment Search Tool), доступные в ncbi.nlm.nih.gov в сети интернет. Поиски или выравнивания BLAST можно осуществлять для определения процента идентичности последовательности между полипептидом и любой другой последовательностью или ее частью с использованием алгоритма Altschul et al. BLASTN является программой, используемой для выравнивания и сравнения идентичности между последовательностями нуклеиновой кислоты, в то время как BLASTP является программой, используемой для выравнивания и сравнения идентичности между аминокислотными последовательностями. При использовании программ BLAST для вычисления процента идентичности между полипептидной последовательностью и другой последовательностью используют параметры по умолчанию соответствующих программ. В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1, которая может присутствовать в полипептидном конъюгате, представленном в настоящем описании (например, полипептидном конъюгате, включающем множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1), может быть такой, как указано в примере 7.

[00088] В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), может быть слита с каркасным полипептидом, который может образовывать полипептидный конъюгат, включающий две связанные аминокислотные цепи (например, полипептид IgG, такой как полипептид IgG2). Например, две аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с полипептидом IgG2, могут образовывать полипептидный конъюгат, включающий два полипептида PD-1. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей аминокислотных цепей, включающих один полипептид PD-1, слитый с полипептидом IgG2, включают аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 21.

[00089] В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), может быть слита с каркасным полипептидом, который может образовывать полипептидный конъюгат, включающий три связанные аминокислотные цепи (например, полипептид сигма-1). Например, три аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с полипептидом сигма-1, может образовывать полипептидный конъюгат, включающий три полипептида PD-1. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей аминокислотных цепей, включающих один полипептид PD-1, слитый с полипептидом сигма-1, включают аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 24.

[00090] В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), может быть слита с каркасным полипептидом, который может образовывать полипептидный конъюгат, включающий четыре связанные аминокислотные цепи (например, полипептид стрептавидина). Например, четыре аминокислотные цепи, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с полипептидом стрептавидина, может образовывать полипептидный конъюгат, включающий четыре полипептида PD-1. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей аминокислотных цепей, включающих один полипептид PD-1, слитый с полипептидом стрептавидина, включают аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 17.

[00091] В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать вирусную частицу, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты). Например, вирусную частицу можно модифицировать посредством покрывания вирусной частицы двумя или более аминокислотными цепями, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки. Аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), которые можно использовать для покрывания вирусной частицы для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения (например, вирусной частицы, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1), может включать один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, слитым с любым подходящим полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки. В некоторых случаях полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, можно ковалентно связывать с одним или более вирусными полипептидами оболочки. В некоторых случаях полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может связываться с вирусным полипептидом оболочки с высокой аффинностью (например, от приблизительно 0,25 мкМ до приблизительно 100 мкМ). Полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может естественным образом связываться с вирусным полипептидом оболочки или сконструирован для связывания с вирусным полипептидом оболочки. Полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может связываться с любым подходящим вирусным полипептидом оболочки.

[00092] Неограничивающие примеры вирусных полипептидов оболочки включают полипептиды капсида (например, гексоновые полипептиды, полипептиды волокна, полипептиды пентона) и полипептиды аденовируса IX. Полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может связываться с вирусным полипептидом оболочки, присутствующим на любом подходящем типе вирусной частицы. Вирусная частица может являться репликационно-компетентной (RC) вирусной частицей (например, хелпер-зависимыми (HD) вирусными частицами и одноцикловыми (SC) вирусными частицами), вирусная частица может являться репликационно-дефектной (RD) вирусной частицей, или вирус может являться условно-репликативной вирусной частицей (CRAd). В некоторых случаях вирусная частица может являться онколитической вирусной частицей.

[00093] В некоторых случаях вирусная частица может являться вирусным вектором. Неограничивающие примеры вирусных частиц, которые можно покрывать одной или более аминокислотными цепями, включающими один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, включают Ad, аденоассоциированные вирусы (AAV), лентивирусы, энтеровирусы, реовирусы, поксвирусы, вирус кори и вирусы герпеса.

[00094] Неограничивающие примеры полипептидов, которые могут присутствовать в вирусном полипептиде оболочки, включают полипептид домена GLA (например, домен GLA из полипептида FX), полипептиды CAR, полипептиды CD46, десмоглеиновые полипептиды, интегриновые полипептиды, одноцепочечные полипептиды антитела, полипептиды антитела Верблюжьих, полипептиды капсида и полипептиды, связывающиеся с оболочкой.

[00095] Аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), которые можно использовать для покрывания вирусной частицы для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения (например, вирусной частицей, где один, или два, или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1), может включать любую подходящую аминокислотную последовательность. Например, вирусную частицу можно приводить в контакт с композицией, содержащей две или более аминокислотных цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может ковалентно связываться с вирусным полипептидом оболочки, таким образом, что аминокислотными цепями покрывают вирусную частицу. В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может являться слитым полипептидом, включающим один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки. Аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может включать любую подходящую аминокислотную последовательность. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, включают аминокислотные последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 8, 9, 14, 15, 22 или 23. В некоторых случаях аминокислотная последовательность аминокислотной цепи, включающая один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может иметь последовательность, отличающуюся от одной из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 8, 9, 14, 15, 22 или 23, иногда обозначаемую как вариант последовательности. Например, аминокислотная последовательность слитого полипептида, содержащего один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности в отношении любой из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 8, 9, 14, 15, 22 или 23. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность слитого полипептида, содержащего один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности, 90% идентичности последовательности, 95% идентичности последовательности или по меньшей мере 99% идентичности последовательности в отношении любой из аминокислотных последовательностей, приведенных в SEQ ID NO: 8, 9, 14, 15, 22 или 23. Процент идентичности последовательности вычисляют посредством определения количества совпадающих положений в выровненных полипептидных последовательностях, разделяя количество совпадающих положений на общее количество выровненных аминокислот соответствующим образом и умножая на 100. Термин "совпадающее положение" относится к положению, в котором идентичные аминокислоты встречаются в одном и том же положении в выровненных последовательностях. Последовательности можно выравнивать с использованием алгоритма, описанного Altschul et al. (Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)) и включенного в программы BLAST (Basic Local Alignment Search Tool). В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, может являться такой, как указано в примерах.

[00096] В некоторых случаях аминокислотная цепь, включающая один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1 (например, полипептиды PD-1 и/или их фрагменты), слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки (например, доменом GLA полипептида FX), можно использовать для покрывания (например, для модификации одного или более вирусных полипептидов оболочки) вирусной частицы для получения покрытой вирусной частицы, имеющей две или более аминокислотных цепей, включающих один или более аминокислотных сегментов, которые могут связываться с PD-L1, связанные с одним или более вирусными полипептидами оболочки, присутствующими на поверхности вирусной частицы.

[00097] Например, одна или более аминокислотных цепей, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX, могут быть связаны с двумя или более вирусными гексоновыми полипептидами и/или другими вирусными белками оболочки для покрывания вирусной частицы двумя или более аминокислотными цепями, каждая из которых включает один полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX. Если вирусная частица является Ad, 240 гексоновых полипептидных гомотримеров (например, полипептидных конъюгатов, включающих три гексоновых полипептида) могут присутствовать на вирусной частице (см., например, Chen et al., Human gene therapy, 21:739-749 (2010)). В некоторых случаях слитый полипептид, включающий один полипептид PD-1 и домен GLA полипептида FX, можно использовать для покрывания частицы Ad для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения, включающего приблизительно 240 полипептидов PD-1. Например, если слитый полипептид, включающий один полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX, связан с каждым гексоновым полипептидным тримером на вирусной частице Ad, вирусная частица будет включать 240 полипептидов PD-1. В некоторых случаях слитый полипептид, включающий один полипептид PD-1 и домен GLA полипептида FX, можно использовать для покрывания частицы Ad для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения, которое может включать приблизительно от 240 полипептидов PD-1 до приблизительно 720 полипептидов PD-1. Например, если слитый полипептид, включающий один полипептид PD-1, слитый с доменом GLA полипептида FX, связан с каждым гексоновым полипептидом на вирусной частице Ad, вирусная частица будет включать 720 полипептидов PD-1.

[00098] В некоторых случаях мультивалентные PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании (например, слитый полипептид, включающий два или более полипептида PD-1, или полипептидный конъюгат, включающий одну, или две, или более аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусная частица, где два или более вирусных полипептида оболочки включают одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусная частица, где один или более вирусных полипептидов оболочки включают одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более полипептида PD-1) также может включать одну или более дополнительных молекул/полипептидов.

[00099] Неограничивающие примеры молекул, которые можно включать в мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включают нацеливающие молекулы (например, нацеливающие полипептиды и нацеливающие последовательности нуклеиновой кислоты), антигены, терапевтические молекулы и детектируемые полипептиды. В некоторых случаях, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является полипептидным конъюгатом, включающим множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1, и полипептидный конъюгат включает одну или более дополнительных молекул, одну или более дополнительных молекул можно включать в по меньшей мере одну (например, 1, 2, 3, 4 или более) аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1, присутствующих в полипептидном конъюгате. Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является полипептидным конъюгатом, включающим множество аминокислотных цепей, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1, и полипептидный конъюгат включает одну или более дополнительных молекул, одну или более дополнительных молекул можно включать в каждую аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1, присутствующих в полипептидном конъюгате. В некоторых случаях, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является вирусной частицей, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1 (или вирусной частицей, где один или более вирусных полипептидов оболочки включают одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более аминокислотных сегмента, включающих один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1), одну или более дополнительных молекул можно включать в по меньшей мере одну (например, 1, 2, 3, 4 или более) аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, используемых для модификации вирусного полипептида оболочки на вирусной частице. Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение является вирусной частицей, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1 (или вирусной частицей, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более аминокислотных сегмента, включающих один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, обладающих способностью связываться с PD-L1), одну или более дополнительных молекул можно включать в каждую аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и/или полипептидных фрагментов PD-1, используемых для модификации вирусного полипептида оболочки на вирусной частице.

[000100] Если PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании, также включают одну или более нацеливающих молекул (например, нацеливающих полипептидов и нацеливающих последовательностей нуклеиновой кислоты), нацеливающая молекула может являться любой подходящей нацеливающей молекулой. В некоторых случаях нацеливающая молекула может являться полипептидом (например, нацеливающим полипептидом). В некоторых случаях нацеливающая молекула может являться последовательностью нуклеиновой кислоты (например, нацеливающей последовательностью нуклеиновой кислоты). В некоторых случаях нацеливающая молекула может привлекать T-клетку к PD-L1-положительной клетке (например, PD-L1-положительной злокачественной клетке). Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, включающее нацеливающую молекулу, связано с PD-L1 на PD-L1-положительной клетке, нацеливающая молекула на мультивалентном PD-L1-связывающем соединении может привлекать T-клетки к PD-L1-положительной клетке. Например, если мультивалентное PD-L1-связывающее соединение включает нацеливающую молекулу, нацеливающая молекула на мультивалентном PD-L1-связывающем соединении может направлять мультивалентное PD-L1-связывающее соединение в целевую локацию (например, целевую ткань) в организме млекопитающего. Примеры нацеливающих молекул, которые можно включать в мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включают вирусные полипептиды, антигены (например, пептидные антигены), нацеливающие последовательности мкРНК (например, тканеспецифические нацеливающие последовательности мкРНК), антитела, факторы роста и углеводы. Если нацеливающий полипептид является вирусным полипептидом, вирусный полипептид можно получать из любого подходящего вируса (например, вируса кори (MV), вируса собачьего бешенства (CDV), вируса везикулярного стоматита (VSV), вируса лейкоза гиббонов (GALV), вируса Зика, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и эндогенного ретровируса человека (HERV)). Если нацеливающий полипептид является вирусным полипептидом, вирусный полипептид может являться любым подходящим вирусным полипептидом (например, полипептидом гемагглютинина (H), таким как нецелевой полипептид H, полипептидом слияния (F), вирусным полипептидом гликопротеина (G), полипептидом оболочки (env; например, env HERV), синцитином-1 и синцитином-2). В некоторых случаях вирусный полипептид может являться полипептидом H MV. В некоторых случаях вирусный полипептид может являться полипептидом F MV. В некоторых случаях вирусный полипептид может являться полипептидом G VSV.

[000101] Если PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании, также включают одну или более терапевтических молекул, терапевтическая молекула может являться любой подходящей терапевтической молекулой. В некоторых случаях терапевтическая молекула может являться терапевтическим полипептидом. В некоторых случаях терапевтическая молекула может снижать или устранять инактивацию PD-L1 одной или более T-клеток. В некоторых случаях терапевтическая молекула может активировать и/или приводить к накоплению одного или более фармацевтических средств (например, противоопухолевых лекарственных средств). Примеры терапевтических молекул, которые можно включать в мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, включают полипептид лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептид лиганда OX40 (OX40L), полипептид гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ), антитела против PD-1, нуклеиновую кислоту, кодирующую антитела против PD-1, тимидинкиназу, цитозиндезаминазу и йодный симпортер. В некоторых случаях терапевтическая молекула может являться терапевтическим антителом. Терапевтическое антитело может являться агонистическим антителом, нацеленным на GITR. Передача сигнала через GITR повышает пролиферацию T-клеток и эффекторные функции и защищает T-клетки от индуцируемой активацией гибели клеток, что, в свою очередь, повышает долю T-клеток памяти. Комбинирование агонистов GITR с PD-L1-связывающими соединениями по изобретению может проявлять выраженный синергический эффект.

[000102] Если PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании, также включают один или более детектируемых полипептидов, детектируемый полипептид может являться любым подходящим детектируемым полипептидом. В некоторых случаях детектируемый полипептид можно определять (например, клиницист может определять) для определения локализации одного или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании. В некоторых случаях детектируемый полипептид можно определять (например, клиницист может определять) для мониторинга персистирования одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании. Примеры детектируемых полипептидов, которые можно включать в PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, выбраны из флуоресцентных полипептидов (например, зеленого флуоресцентного белка (GFP)), люциферазных полипептидов, пептидных меток и натрий-йодного симпортера.

[000103] В настоящем описании также представлены нуклеиновые кислоты (например, векторы нуклеиновых кислот), которые могут кодировать аминокислотные цепи, представленные в настоящем описании (например, аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, или аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки), которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании (например, слитого полипептида, включающего два или более полипептида PD-1, или полипептидного конъюгата, включающего две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где один, или два, или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более полипептида PD-1). В некоторых случаях нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения полипептидного конъюгата, включающего две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1. Например, нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и каркасный полипептид. В некоторых случаях нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения вирусной частицы, где один или более вирусных полипептидов оболочки содержат одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1. Например, нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1 и полипептид, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки.

[000104] Нуклеиновая кислота (например, векторы нуклеиновых кислот), кодирующая аминокислотные цепи, представленные в настоящем описании (например, аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, или аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки), которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, может являться нуклеиновой кислотой, выбранной из ДНК (например, конструкции ДНК), РНК (например, мРНК) или их комбинации. В некоторых случаях нуклеиновая кислота, кодирующая аминокислотную цепь, представленную в настоящем описании, может являться вектором (например, экспрессирующим вектором или вирусным вектором). Вектор может являться вектором RC (например, векторами HD и векторами SC), или вектор может являться вектором RD. Если вектор является вирусным вектором, вирусный вектор можно получать из любого подходящего типа вируса. В некоторых случаях вирусный вектор можно получать из онколитического вируса. Неограничивающие примеры вирусов, из которых можно получать вирусные векторы, включают Ad, аденоассоциированные вирусы (AAV), лентивирусы, энтеровирусы, реовирусы, поксвирусы, вирус кори и вирусы герпеса.

[000105] В некоторых случаях нуклеиновая кислота, кодирующая аминокислотную цепь, представленную в настоящем описании, также может включать один или более регуляторных элементов (например, для регуляции экспрессии аминокислотной цепи). Неограничивающие примеры регуляторных элементов, которые можно включать в нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, представленную в настоящем описании, включают промоторы (например, конститутивные промоторы, ткане-/клеточно-специфические промоторы и индуцибельные промоторы, такие как химически активируемые промоторы и активируемые светом промоторы), энхансеры, последовательности нуклеиновой кислоты (например, "суицидальные" гены), экспрессия которых может вызывать апоптоз, некроз и другие формы гибели клеток.

[000106] В некоторых случаях нуклеиновые кислоты (например, векторы нуклеиновых кислот), кодирующие аминокислотные цепи, представленные в настоящем описании (например, аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, или аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки), которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании (например, слитого полипептида, включающего два или более полипептида PD-1, или полипептидного конъюгата, включающего две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более полипептида PD-1), могут приводить к продукции двух или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) аминокислотных цепей, представленных в настоящем описании.

[000107] В некоторых случаях нуклеиновые кислоты (например, векторы нуклеиновых кислот), кодирующие аминокислотные цепи, представленные в настоящем описании (например, аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, или аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки), которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании (например, слитого полипептида, включающего два или более полипептида PD-1, или полипептидного конъюгата, включающего две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более полипептида PD-1), могут приводить к непрерывной продукции одной или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) аминокислотных цепей, представленных в настоящем описании.

[000108] В некоторых случаях нуклеиновые кислоты (например, векторы нуклеиновых кислот), кодирующие аминокислотные цепи, представленные в настоящем описании (например, аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, или аминокислотную цепь, включающую один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки), которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании (например, слитого полипептида, включающего два или более полипептида PD-1, или полипептидного конъюгата, включающего две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где два или более вирусных полипептида оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, или вирусной частицы, где один или более вирусных полипептидов оболочки модифицированы так, чтобы включать одну или более аминокислотных цепей, включающих два или более полипептида PD-1), могут приводить к продукции одной или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) аминокислотных цепей, представленных в настоящем описании, во время персистирования нуклеиновой кислоты (например, пока нуклеиновая кислота не деградирует).

[000109] В некоторых случаях аминокислотные цепи, кодируемые нуклеиновой кислотой, представленной в настоящем описании, можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании. Например, две или более аминокислотные цепи, включающие один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, могут собираться (например, самособираться) в полипептидный конъюгат, включающий две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, для получения полипептидного конъюгата, представленного в настоящем описании. Если две или более аминокислотные цепи, включающие один или более полипептидов PD-1, слитых с каркасным полипептидом, собираются в полипептидный конъюгат, включающий две или более аминокислотные цепи, каждая из которых включает один или более полипептидов PD-1, для получения полипептидного конъюгата, аминокислотные цепи могут собираться in vivo или in vitro. Например, одна или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, могут связываться с двумя или более вирусными полипептидами оболочки, присутствующими на поверхности вирусной частицы, для покрывания с целью получения покрытой вирусной частицы, представленной в настоящем описании. Если одной или более аминокислотными цепями, включающими один или более полипептидов PD-1, слитых с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, покрывают вирусную частицу для получения покрытой вирусной частицы, вирусную частицу можно покрывать in vivo или in vitro.

[000110] В некоторых случаях мультивалентные PD-L1-связывающие соединения, представленные в настоящем описании, можно очищать. Термин "очищенный" полипептид, белок или нуклеиновая кислота относится к полипептиду или нуклеиновой кислоте, являющейся основным компонентом в смеси компонентов, например, 30% или более, 40% или более, 50% или более, 60% или более, 70% или более, 80% или более, 90% или более, 95% или более или 99% или более по массе. Например, очищенное мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может составлять приблизительно 30% или более по массе композиции, содержащей один или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений. Полипептиды можно очищать способами, включающими, в качестве неограничивающих примеров, аффинную хроматографию и иммуносорбентную аффинную колонку. Например, очищенная нуклеиновая кислота, кодирующая аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения, представленного в настоящем описании, может составлять приблизительно 30% или более по массе композиции, содержащей одну или более аминокислотных цепей, которые можно использовать для получения мультивалентного PD-L1-связывающего соединения, представленного в настоящем описании. Нуклеиновую кислоту можно очищать способами, включающими, в качестве неограничивающих примеров, экстракцию фенол-хлороформом и очистку на колонках (например, очистку на миниколонках).

[000111] Альтернативно, изобретение также относится к мультивалентным PD-1-связывающим соединениям, включающим два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-1 (например, полипептиды PD-L1 и/или их фрагменты), а также способам получения и применения мультивалентных PD-1-связывающих соединений, включающих два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-1 (например, полипептиды PD-L1 и/или их фрагменты). В некоторых случаях мультивалентное PD-1-связывающее соединение может включать два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-1 (например, полипептиды PD-L1 и/или их фрагменты). Например, мультивалентное PD-1-связывающее соединение, включающее два или более полипептида PD-L1 (и/или их фрагменты обладающие способностью связываться с PD-1), может связываться с двумя или более полипептидами PD-1. В некоторых случаях мультивалентное PD-1-связывающее соединение может включать одну аминокислотную цепь, включающую два или более аминокислотных сегмента, которые могут связываться с PD-1.

[000112] Настоящее изобретение также относится к способам и материалам для лечения злокачественных новообразований, например, введению композиции, содержащей одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании. Одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений можно вводить индивидууму в комбинации с терапевтическими полипептидами. В варианте осуществления мультивалентное PD-L1-связывающее соединение содержит терапевтический полипептид, вводимый индивидууму для лечения злокачественных новообразований. В другом варианте осуществления мультивалентное PD-L1-связывающее соединение вводят индивидууму совместно с Ad, экспрессирующим терапевтический полипептид, для лечения злокачественных новообразований.

[000113] Настоящее изобретение относится к вирусным частицам, где два или более вирусных полипептида оболочки содержат одну или более аминокислотных цепей, включающих один или более полипептидов PD-1. Вирусная частица может являться рекомбинантной вирусной частицей, содержащей полипептиды PD-1, включая PD-1-слитые белки, в белке капсида вирусной частицы. Вирусная частица может являться вирусной частицей, покрытой полипептидами PD-1, например, PD-1-слитыми белками.

[000114] В варианте осуществления, где PD-L1-связывающее соединение содержит рекомбинантный вирус, вирус является рекомбинантным Ad, например, Ad штамма Ad657 или Ad штамма Ad6/57/6 и их вариантами. Рекомбинантный Ad можно модифицировать так, чтобы он был условно-репликативным Ad (CRAd). Такие рекомбинантные Ad описаны в патентной заявке США № 16/690733, описание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

[000115] В варианте осуществления настоящее изобретение относится к рекомбинантной, условно-репликативной вирусной частице Ad, содержащей одну или более аминокислотных цепей, каждая из которых включает один, или два, или более полипептидов PD-1, или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотные цепи, которые можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений.

[000116] В некоторых случаях рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании (например, рекомбинантный Ad, имеющий онколитическую противоопухолевую активность, такой как рекомбинантный Ad657), может включать геном Ad, содержащий одну или более делеций нуклеиновых кислот. Делеция нуклеиновой кислоты может являться полной делецией (например, делецией нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид) или частичной делецией (например, делецией одного или более нуклеотидов в нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид). Делеция нуклеиновой кислоты может снижать или устранять транскрипцию и трансляцию полипептида, кодируемого делетированной нуклеиновой кислотой. В некоторых случаях делеции можно подвергать нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, ассоциированный с продукцией инфекционного потомства. Примеры нуклеиновых кислот, которые можно подвергать делеции и/или модифицировать в рекомбинантном Ad, представленном в настоящем описании, могут кодировать E1 (например, E1A и E1B), E2, E3, E4, pIIIA, волокно, E1B и включать вирусные энхансеры и промоторы. Например, рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании (например, рекомбинантный Ad, имеющий онколитическую противоопухолевую активность, такой как рекомбинантный Ad657) может включать геном Ad, содержащий делецию одного или более нуклеотидов в нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид E1. В некоторых случаях рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании, может включать одну или более замен в нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид E1.

[0001117] В конкретных вариантах осуществления рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании, модифицирован так, чтобы содержать промотор пробазина, содержащий, например, нуклеиновую кислоту SEQ ID NO: 41, модифицирован так, чтобы содержать делецию dl1101 в нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид E1; рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании модифицирован так, чтобы содержать делецию dl1107 в нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид E1; рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании, модифицирован так, чтобы содержать делецию dl1101 и делецию dl1107. Модификация dl1101 в E1a предотвращает связывание с p300 и делает вирус восприимчивым к репрессии интерферона (ИФН). Мутация dl1107 в E1a предотвращает его связывание с pRB для блокирования репликации вируса в клетках с интактными путями pRB. См. N-концевые аминокислотные последовательности полипептида E1A, например, E1A Ad дикого типа, и варианты CRAd-657-dl1101, CRAd-657-dl1107 и CRAd-657-dl1101/1107 на фигуре 10.

[000118] Схема мутаций в Ad6, Ad657 и их вариантах, включающих мутации в белке E1 для превращения вируса в условно-репликативный Ad (CRAd) показана на фигуре 9 и фигуре 10. Они включают dl1101 и/или dl1107, блокирующие связывание с p300 и pRB, соответственно.

[000119] На фигуре 10 показаны N-концевые аминокислотные последовательности E1A в Ad дикого типа, а также вариантах Ad E1Adl1101, E1A dl1107 и E1A dl1101/1107.

[000120] Также показана замена промотора E1 Ad последовательностью ДНК простатспецифического промотора пробазина-E1 (SEQ ID NO: 41) для получения CRAd, Ad-PB (фигура 9). Промотор пробазина является андроген-зависимым, таким образом, он будет работать в андроген-чувствительных опухолях, подобных LNCaP, но не андроген-резистентных опухолях, подобных DU145.

[000121] Репликационно-компетентные Ad, а также CRAd, по изобретению генетически модифицированы способами, известными специалистам в этой области, для экспрессии одного или более терапевтических полипептидов. Терапевтические полипептиды могут являться иммуностимуляторными полипептидами, например, CD40L, 4-1BBL, OX40, ГМ-КСФ и их комбинациями.

[000122] Кроме того, в варианте осуществления репликационно-компетентные Ad, а также CRAd по изобретению генетически модифицированы способами, известными специалистам в этой области, для экспрессии обоих полипептидов PD-1 и одного или более терапевтических полипептидов в виде слитых белков.

[000123] Репликационно-компетентные Ad, а также CRAd по изобретению можно генетически модифицировать способами, известными специалистам в этой области, так, чтобы они содержали модифицированные белки волокна/выступа капсида. Белок волокна Ad представляет собой комплекс из трех, по-видимому, идентичных субъединиц, опосредующих стадию начального прикрепления. Нативный белок волокна Ad6 (SEQ ID NO: 35) связывается с CAR.

[000124] В дополнительном аспекте изобретения получали рекомбинантные Ad с модифицированным волокном, содержащие разные белки волокна или модификации в белках волокна/выступа, не являющиеся нативными для родительского Ad. Получали рекомбинантные Ad, включая CRAd, содержащие белки капсида разных штаммов Ad и гетерологичные белки волокно/выступа, например, рекомбинантные Ad, содержащие гетерологичный полипептид волокна Ad35 или полипептид волокна C68 шимпанзе, +/- пептид K7.

[000125] Химерный Ad, химера волокна AdF35, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, является более коротким, чем белки волокна Ad5 и Ad6 и перенацеливает вирус на CD46.

[000126] Рекомбинантный Ad с модифицированным волокном содержит волокно K7, имеющее последовательность SEQ ID NO: 37, нацеливающее вирус на гепаринсульфат протеогликаны и отрицательные заряды на клетках.

[000127] Рекомбинантный химерный Ad, волокно 6/FC68, содержащий последовательность SEQ ID NO: 38, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем Ad5 или Ad6 белки волокна и связывается с CAR.

[000128] Рекомбинантный, химерный Ad, волокно 6/FC68-K7, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем белки волокна Ad5 или Ad6. Волокно 6/FC68-K7 связывается с CAR и перенацеливается на гепаринсульфат и отрицательные заряды.

[000129] Рекомбинантный, химерный Ad, волокно 6/FC68-HI-K7, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем белки волокна Ad5 или Ad6. Волокно 6/FC68-HI-K7 связывается с CAR и перенацеливается на гепаринсульфат и отрицательные заряды.

[000130] В некоторых случаях рекомбинантный Ad, представленный в настоящем описании (например, рекомбинантный Ad, имеющий онколитическую противоопухолевую активность, такой как рекомбинантный Ad657), может включать геном Ad, содержащий одну или более инсерций нуклеиновых кислот. Например, инсерция нуклеиновой кислоты может включать нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, например, терапевтический полипептид. Нуклеиновую кислоту можно встраивать в любую подходящую локацию в геноме рекомбинантного Ad, представленного в настоящем описании. В некоторых случаях нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, можно встраивать в HVR (например, петлю 5 HVR) генома рекомбинантного Ad, представленного в настоящем описании. Например, если нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, встраивают в HVR генома рекомбинантного Ad, представленного в настоящем описании, нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, может экспрессировать один или более полипептидов, и экспрессируемые полипептиды можно встраивать в капсид рекомбинантного Ad. В случаях, когда нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, встраивают в область HVR генома рекомбинантного Ad, представленного в настоящем описании, рекомбинантный Ad может презентировать от приблизительно 1 до приблизительно 720 полипептидов, кодируемых встроенной нуклеиновой кислотой, на своей поверхности. Инсерция нуклеиновой кислоты может являться нуклеиновой кислотой, кодирующей любой подходящий полипептид. В некоторых случаях инсерция нуклеиновой кислоты может кодировать терапевтический полипептид, полипептидный антиген или цитокин.

[000131] В целом, Ad можно модифицировать так, чтобы они включали модификации CRAd, представленные в настоящем описании.

[000132] В варианте осуществления рекомбинантный Ad является условно-репликативным Ad с модификацией dl1101 в E1a, предотвращающей связывание с p300 и делающей вирус восприимчивым к репрессии ИФН, и мутацией dl1107 в E1a для предотвращения его связывания с pRB для блокирования репликации вируса в клетках с интактными путями pRB, и делецией E3A. CRAd экспрессирует PD-1 человека, слитый с иммуноглобулином человека.

[000133] В варианте осуществления рекомбинантный Ad (например, Ad657) является условно-репликативным Ad с модификацией dl1101 в E1a, предотвращающей связывание с p300 и делающей вирус восприимчивым к репрессии ИФН, и делецией E3A. CRAd экспрессирует PD-1 человека, слитый с фактором X человека (GLA) на поверхности вирусной частицы, где CRAd перенацелен на клетки, экспрессирующие PD-L1 на своей поверхности.

[000134] В варианте осуществления рекомбинантный Ad является условно-репликативным Ad (например, Ad657) с модификацией dl1101 в E1a, предотвращающей связывание с p300 и делающей вирус восприимчивым к репрессии ИФН, и мутацией dl1107 в E1a, предотвращающей его связывание с pRB для блокирования репликации вируса в клетках с интактными путями pRB, и делецией E3A. CRAd экспрессирует PD-1 человека, слитый с фактором X человека (GLA) на поверхности вирусной частицы, где CRAd перенацелен на клетки, экспрессирующие PD-L1 на своей поверхности.

[000135] Вирусные частицы, содержащие полипептиды PD-1, связанные на поверхности вирусной частицы, можно использовать для лечения млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование (например, злокачественное новообразование, включающее одну или более PD-L1-положительных злокачественных клеток). Вирусные частицы можно вводить индивидууму в количестве, эффективном для лечения злокачественного новообразования, и, необязательно, их можно вводить в комбинации с противоопухолевыми терапевтическими средствами, включая иммунотерапевтические средства и химиотерапевтические средства.

[000136] В одном из аспектов изобретения композицию, содержащую одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании и, необязательно, одно или более противоопухолевых терапевтических средств, можно вводить млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование, для лечения млекопитающего. Мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, может связываться с PD-L1 на PD-L1-положительных злокачественных клетках. Связывание полипептидов PD-1 может нейтрализовать функцию PD-L1 и, таким образом, может предотвращать избегание PD-L1-положительными клетками (например, PD-L1-положительными злокачественными клетками) иммунного надзора и/или может позволять противоопухолевым средствам (например, противоопухолевым иммунотерапевтическим средствам) эффективнее направленно воздействовать на PD-L1-положительные клетки. В случаях, когда нуклеиновая кислота, кодирующая мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, является вектором онколитического Ad, кодирующим мультивалентное PD-L1-связывающее соединение, представленное в настоящем описании, онколитический Ad может инфицировать клетку и может регулировать T-клеточные ответы, направленные на инфицированную клетку. Онколитический Ad может инфицировать любой подходящий тип клеток. В некоторых случаях онколитический Ad может инфицировать PD-L1-положительную клетку (например, PD-L1-положительную злокачественную клетку). В некоторых случаях онколитический Ad может инфицировать неделящиеся клетки (например, клетки почки).

[000137] В некоторых случаях композицию, содержащую или состоящую, по существу, из одного или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно использовать для лечения млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование (например, злокачественное новообразование, включающее одну или более PD-L1-положительных злокачественных клеток). Например, композицию, содержащую одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений и, необязательно, одно или более противоопухолевых терапевтических средств, можно вводить млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование, для лечения млекопитающего.

[000138] Альтернативно, способы и материалы, представленные в настоящем описании, можно использовать для лечения других заболеваний или нарушений, ассоциированных с PD-L1-положительными клетками. В некоторых случаях композицию, содержащую одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно использовать для лечения млекопитающего, имеющего инфекционное заболевание (например, инфекционное заболевание, включающее один или более PD-L1-положительных макрофагов, таких как инфильтрирующие опухоль макрофаги). Неограничивающие примеры инфекционных заболеваний, которые могут включать одну или более PD-L1-положительных клеток включают ВИЧ, гепатит и малярию. В некоторых случаях композицию, содержащую одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно использовать для лечения млекопитающего, имеющего аутоиммунное заболевание (например, аутоиммунное заболевание, включающее один или более PD-L1-положительных макрофагов, таких как инфильтрирующие опухоль макрофаги).

[000139] Любое подходящее млекопитающее, имеющее злокачественное новообразование, можно лечить, как представлено в настоящем описании. Например, людей и других приматов, таких как мартышки, имеющих злокачественное новообразование, можно лечить с помощью композиции, содержащей одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, и, необязательно, в комбинации с одним или более способами лечения злокачественных новообразований для снижения тяжести злокачественного новообразования, снижения симптома злокачественного новообразования и/или снижения количества злокачественных клеток, присутствующих в организме млекопитающего, человека или другого примата. В некоторых случаях собак, кошек, лошадей, коров, свиней, овец, мышей и крыс, имеющих злокачественное новообразование, можно лечить с помощью композиции, содержащей одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, вирусов, содержащих PD-L1-связывающие соединения, или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, и, необязательно, с помощью одного или более способов лечения злокачественных новообразований, представленных в настоящем описании.

[000140] При лечении млекопитающего (например, человека), имеющего злокачественное новообразование, как представлено в настоящем описании, злокачественное новообразование может являться любым подходящим злокачественным новообразованием. Злокачественное новообразование может включать одну или более PD-L1-положительных злокачественных клеток. Злокачественное новообразование может включать одну или более солидных опухолей. Злокачественное новообразование может являться гемобластозом. Неограничивающие примеры злокачественных новообразований, которые можно лечить, как представлено в настоящем описании, включают рак молочной железы, колоректальный рак, рак почки, рак легких (например, немелкоклеточный рак легких), рак яичников, меланому, злокачественное новообразование головного мозга, саркому, рак предстательной железы, рак поджелудочной железы, рак головы и шеи, рак печени, ретинобластому, лимфому и лейкоз.

[000141] В некоторых случаях млекопитающее можно идентифицировать как имеющего злокачественное новообразование (например, злокачественное новообразование, включающее одну или более PD-L1-положительных злокачественных клеток). Для идентификации млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование, можно использовать любой подходящий способ. Например, для идентификации млекопитающих (например, людей), имеющих злокачественное новообразование, можно использовать способы визуализации и способы биопсии.

[000142] После идентификации млекопитающего как имеющего злокачественное новообразование, ему можно вводить композицию, содержащую один или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, и, необязательно, можно лечить его одним или более противоопухолевыми терапевтическими средствами и/или средствами для лечения злокачественных новообразований. Одно или более противоопухолевых терапевтических средств может включать любое подходящее средство для лечения злокачественных новообразований. В некоторых случаях лечение злокачественных новообразований может включать хирургическое вмешательство. В некоторых случаях лечение злокачественных новообразований может включать лучевую терапию. В некоторых случаях лечение злокачественных новообразований может включать проведение фармакотерапии, такой как химиотерапия, гормональная терапия, направленная терапия и/или цитотоксическая терапия. Неограничивающие примеры лечения злокачественных новообразований включают введение одного или более ингибиторов рецепторных тирозинкиназ (например, эрлотиниба), введение одного или более ингибиторов PD1/PD-L1 (например, ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, авелумаба, цемиплимаба и дурвалумаба), введение одного или более иммунотерапевтических средств, таких как иммунотерапевтические средства, которые могут направленно воздействовать на PD1/PD-L1 (например, ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб, авелумаб, цемиплимаб, дурвалумаб, алемтузумаб, ипилимумаб, офатумумаб и ритуксимаб), введение одного или более антител против GITR, введение одного или более соединений платины (например, цисплатина или карбоплатина), введение одного или более таксанов (например, паклитаксела, доцетаксела или альбумин-связанного паклитаксела, такого как наб-паклитаксел), введение алтретамина, введение капецитабина, введение циклофосфамида, введение этопозида (vp-16), введение гемцитабина, введение ифосфамида, введение иринотекана (cpt-11), введение липосомального доксорубицина, введение мелфалана, введение пеметрекседа, введение топотекана, введение винорелбина, введение одного или более агонистов рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона (LHRH) (таких как гозерелин и лейпролид), введение одного или более антиэстрогеновых терапевтических средств (таких как тамоксифен), введение одного или более ингибиторов ароматазы (таких как летрозол, анастрозол и экземестан), введение одного или более ингибиторов ангиогенеза (таких как бевацизумаб), введение одного или более ингибиторов поли(АДФ)-рибозополимеразы (PARP) (таких как олапариб, рукапариб и нирапариб), проведение наружной дистанционной лучевой терапии, проведение брахитерапии, введение радиоактивного фосфора и введение любой их комбинации. В случаях, когда млекопитающего, имеющего злокачественное новообразование, лечат композицией, содержащей одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, и лечат с помощью одного или более способов лечения злокачественных новообразований, композицию, содержащую одно или более средств для лечения злокачественных новообразований, можно вводить одновременно или независимо. Например, композицию, содержащую одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно вводить первой, и одно или более средств для лечения злокачественных новообразований можно вводить вторыми, или наоборот.

[000143] В некоторых случаях композицию, содержащую одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно составлять в фармацевтически приемлемой композиции для введения млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование. Например, терапевтически эффективное количество одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно составлять вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями (добавками) и/или дилюентами. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать терапевтический полипептид и/или рекомбинантный вирус, генетически модифицированный для экспрессии терапевтического полипептида. Фармацевтическую композицию, содержащую или состоящую, по существу, из мультивалентного PD-L1-связывающего соединения и, необязательно, терапевтического полипептида, можно составлять для введения в твердой или жидкой форме, включая, в качестве неограничивающих примеров, стерильные растворы, суспензии, составы с замедленным высвобождением, таблетки, капсулы, пилюли, порошки, наночастицы и гранулы. Фармацевтически приемлемые носители и наполнители, которые можно использовать в фармацевтической композиции, представленной в настоящем описании, включают, в качестве неограничивающих примеров, ионные обменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смеси неполного глицерида насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамин сульфат, гидрофосфат натрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилен-полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин.

[000144] Фармацевтическую композицию, содержащую или состоящую, по существу, из одного или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, как представлено в настоящем описании, и, необязательно, терапевтического полипептида, составляют для перорального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутриопухолевое и интрадермальное) введения.

[000145] При пероральном введении фармацевтическая композиция, содержащая одно или более PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, может находиться в форме пилюли, таблетки или капсулы.

[000146] Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные, стерильные, инъецируемые растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и растворенные вещества, делающие состав изотоническим относительно крови предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие средства и загустители. Составы могут находиться в контейнерах для однократных доз или многодозовых контейнерах, например, запаянных ампулах и флаконах, и их можно хранить в лиофилизированном состоянии, требующем лишь добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед использованием. Экстемпоральные инъекционные растворы и суспензии можно получать из стерильных порошков, гранул и таблеток. Такие инъекционные растворы могут находиться в форме, например, стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Эту суспензию можно составлять с использованием, например, подходящих диспергирующих средств или увлажнителей (таких как, например, Tween 80) и суспендирующих средств. Стерильный инъецируемый препарат может являться стерильным инъецируемым раствором или суспензией в нетоксичном, парентерально приемлемом дилюенте или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиола. Неограничивающие примеры приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, включают маннит, воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, можно использовать стерильные жирные масла в качестве растворителя или суспендирующей среде. В некоторых случаях можно использовать легкое жирное масло, такое как синтетические моно- или ди-глицериды. Для получения инъецируемых средств можно использовать жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, включая масла в своих полиоксиэтилированных версиях. В некоторых случаях эти масляные растворы или суспензии могут содержать длинноцепочечный спиртовой дилюент или дисперсант.

[000147] Конкретные варианты осуществления, представленные в настоящем описании, могут быть дополнительно ограничены в формуле изобретения с использованием выражений "состоящий из" или "состоящий, по существу, из". При использовании в формуле изобретения, поданной или добавленной в качестве изменений, переходный термин "состоящий из" исключает любой элемент, стадию или ингредиент, не определенный в формуле изобретения. Переходный термин "состоящий, по существу, из" ограничивает объем пункта формулы определенными материалами или стадиями, а также материалами или стадиями, не влияющими существенно на основные и новые характеристики.

[000148] В некоторых случаях фармацевтически приемлемую композицию, содержащую одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно вводить локально или системно. Например, композицию, содержащую соединение, ингибирующее функцию внутриклеточного домена PD-L1, можно вводить локально посредством инъекции в злокачественное новообразование (например, опухоль) или вблизи него у млекопитающего (например, человека). Например, композицию, содержащую соединение, ингибирующее функцию внутриклеточного домена PD-L1, можно вводить системно посредством перорального введения или посредством инъекции (например, подкожной, внутримышечной, внутривенной, внутриопухолевой и интрадермальной инъекции) млекопитающему (например, человеку).

[000149] Эффективные дозы могут варьироваться в зависимости от тяжести злокачественного новообразования, пути введения, возраста и общего состояния здоровья индивидуума, использования эксципиентов, возможности совместного использования с другими терапевтическими средствами, такими как использование других средств, и решения лечащего врача.

[000150] Эффективное количество композиции, содержащей одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, может являться любым количеством, которое может снижать тяжесть злокачественного новообразования, уменьшать симптом злокачественного новообразования и/или снижать количество злокачественных клеток, присутствующих в организме млекопитающего, не вызывая значительной токсичности для млекопитающего. Эффективное количество может оставаться постоянным, или его можно корректировать в виде скользящей шкалы или переменной дозы, зависящей от ответа млекопитающего на лечение. Различные факторы могут влиять на точное эффективное количество, используемое для конкретного показания. Например, частота введения, длительность лечения, использование множества лекарственных средств, путь введения и тяжесть состояния (например, злокачественного новообразования) могут требовать повышения или снижения точного вводимого эффективного количества.

[000151] Частота введения может являться любой частотой, приводящей к сенсибилизации злокачественных клеток млекопитающего к одному или более средствам для лечения злокачественных новообразований (например, одному или более противоопухолевым иммунотерапевтическим средствам), не вызывая значительной токсичности для млекопитающего. Например, частота введения может составлять от приблизительно раза в неделю до приблизительно трех раз в сутки, или от приблизительно двух раз в месяц до приблизительно шести раз в сутки, или от приблизительно двух раз в неделю до приблизительно раза в сутки. Частота введения может оставаться постоянной или переменной в течение лечения. Курс лечения с использованием композиции, содержащей одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, может включать периоды покоя. Например, композицию, содержащую одно или более мультивалентных PD-L1-связывающих соединений или нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную цепь, которую можно использовать для получения мультивалентных PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, можно вводить ежедневно в течение двухнедельного периода с последующим двухнедельным периодом покоя, и такую схему лечения можно повторять множество раз. Как и в случае эффективного количества, различные факторы могут влиять на точную частоту введения, используемую для конкретного показания. Например, эффективное количество, длительность лечения, использование множества лекарственных средств, путь введения и тяжесть состояния (например, злокачественного новообразования) может требовать повышения или снижения частоты введения.

[000152] Эффективной длительностью введения композиции, содержащей одно или более PD-L1-связывающих соединений, представленных в настоящем описании, может являться любая длительность, которая может приводить к снижению тяжести злокачественного новообразования, уменьшению симптома злокачественного новообразования и/или снижению количества злокачественных клеток, присутствующих в организме млекопитающего, не вызывая значительной токсичности для млекопитающего. Таким образом, эффективная длительность может варьироваться от нескольких дней до нескольких недель, месяцев или лет. В основном, эффективная длительность лечения злокачественного новообразования может находиться в диапазоне от шести месяцев до одного года. Множество факторов может влиять на точную эффективную длительность конкретного лечения. Например, эффективная длительность может варьироваться в зависимости от частоты введения, эффективного количества, использования множества лекарственных средств, пути введения и тяжести состояния, подвергаемого лечению.

[000153] В некоторых случаях можно осуществлять мониторинг курса лечения и тяжести одного или более симптомов, связанных с состоянием, подвергаемым лечению (например, злокачественного новообразования). Для определения того, повышается ли чувствительность злокачественных клеток у млекопитающего к одному или более средствам для лечения злокачественных новообразований (например, одного или более противоопухолевых иммунотерапевтических средств), можно использовать любой подходящий способ. Например, отвечаемость злокачественного новообразования (например, с учетом размера и/или количества опухолей) можно оценивать с использованием способов визуализации Office в разные моменты времени.

[000154] Настоящее изобретение далее будет описано в следующих примерах, не ограничивающих объем изобретения, описанный в формуле изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Конструирование рекомбинантных аденовирусов: инсерция отдельных HVR из разных серотипов Ad с инсерцией клеточно-нацеливающих/ненацеливающих пептидов или новых аминокислот.

[000155] Рекомбинантные аденовирусы конструировали с помощью технологии рекомбинантных ДНК способами, известными специалистам в этой области. Рекомбинантный Ad (Ad657) получают из первого Ad штамма Ad6 (например, может включать геном первого штамма Ad), и он может включать HVR гексона капсида из второго штамма Ad, Ad57, см. фигуру 8. Эти варианты осуществления используют, как правило, в контексте Ad, в которых комбинируют разные HVR гексона капсида из разных Ad (т.е. осуществляют перестановку HVR). На фигуре 7 показано выравнивание Ad5, Ad6 и Ad57, где показаны изменения в областях гексона. Например, HVR1 Ad штамма Ad6 с HVR 2-7 Ad штамма Ad57 или HVR1 и 7 Ad штамма Ad6 с HVR 2-6 Ad штамма Ad57. В дополнительном варианте осуществления вирус Ad6/56/6 содержит HVR 1 и 7 из Ad штамма Ad6 и HVR 2-6 из Ad штамма Ad657.

[000156] В одном из аспектов изобретения получали химерные Ad, содержащие HVR1 Ad6 и HVR 2-7 Ad57, химера, обозначаемая как химера HVR Ad6/57, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.

[000157] В еще одном аспекте изобретения получали химерные Ad, содержащие HVR1 и 7 Ad6 и HVR 2-6 Ad57, химера, обозначаемая как химера HVR Ad6/57/6, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29.

[000158] Для получения рекомбинантного Ad штамма Ad657 синтезировали нуклеиновую кислоту, кодирующую HVR 1-7 Ad57, и встраивали в гексон Ad6 в плазмиде с кассетой FRT-Zeocin®-FRT между pVI и гексоном. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения Ad657 и его вариантов. Аминокислотная последовательность гексона Ad657 приведена в SEQ ID NO: 30.

[000159] В контексте вариантов Ad657 последовательность HVR Ad57 синтезировали с HVR1, модифицированной с помощью цистеина, аминокислот, придающих гибкость, и участков рестрикции, чтобы сделать возможной инсерции других пептидов. Ее встраивали в гексон Ad6 в плазмиде с кассетой FRT-Zeocin®-FRT между pVI и гексоном. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 с цистеином в HVR1, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR1-XXA, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42.

[000160] В контексте вариантов Ad657 последовательность HVR Ad57 синтезировали с HVR5, модифицированной с помощью цистеина, аминокислот, придающих гибкость, и участков рестрикции, чтобы сделать возможной инсерции других пептидов. Ее встраивали в гексон Ad6 в плазмиде с кассетой FRT-Zeocin®-FRT между pVI и гексоном. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 с цистеином в HVR5, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR5-XXA, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.

[000161] В контексте вариантов Ad657, последовательность HVR Ad57 синтезировали с HVR1, модифицированной с помощью цистеина, аминокислот, придающих гибкость, и участков рестрикции, чтобы сделать возможной инсерции других пептидов. Ее встраивали в гексон Ad6 в плазмиде с кассетой FRT-Zeocin®-FRT между pVI и гексоном. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 без цистеина в HVR1, но с участками рестрикции, делающими возможными инсерции пептидов в HVR1, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR1-XA, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44.

[000162] В контексте вариантов Ad657 последовательность HVR Ad57 синтезировали с HVR5, модифицированной с помощью цистеина, аминокислот, придающих гибкость, и участков рестрикции, чтобы сделать возможной инсерции других пептидов. Ее встраивали в гексон Ad6 в плазмиде с кассетой FRT-Zeocin®-FRT между pVI и гексоном. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 без цистеина в HVR5, но с участками рестрикции, делающими возможными инсерции пептидов в HVR5, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR5-XA, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45.

[000163] В контексте вариантов Ad657 последовательность HVR1-XA Ad657 модифицировали посредством инсерции пептида акцептора биотина в HVR1. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 с BAP в HVR1, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR1-PSTCD, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46.

[000164] Инсерция пептида акцептора биотина приводит к ненацеливанию вариантов вируса из печени, позволяя перенацеливать вирус с помощью авидина или стрептавидина и биотинилированных лигандов и очищать вирус на колонках с мономерным авидином или стрептавидином.

[000165] В контексте вариантов Ad657 последовательность Ad657 HVR1-XA модифицировали посредством инсерции пептида акцептора биотина (BAP) в HVR1. Ее рекомбинировали в различные плазмиды pAd6 для получения вариантов Ad657 с BAP в HVR1, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR5-PSTCD, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47.

[000166] В контексте вариантов Ad657 последовательность Ad657 HVR5-XA модифицировали посредством инсерции синтетической петли V1/V2 из оболочки ВИЧ в HVR5, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR5-V1/V2, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48.

[000167] Инсерция синтетической петли V1/V2 из оболочки ВИЧ позволяет экспонировать этот антиген, чтобы он служил в качестве вакцины, а также делает возможным перенацеливание посредством связывания с белками, взаимодействующими с оболочкой ВИЧ.

[000168] В контексте вариантов Ad657 последовательность Ad657 HVR5-XA модифицировали посредством инсерции синтетических пептидов из вируса папилломы человека (HPV) в HVR5, вариант, обозначаемый как Ad657-HVR5-HPV, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49.

[000169] Инсерция синтетических пептидов из вируса папилломы человека позволяет экспонировать пептиды HPV в качестве антигенов с целью вакцинации, а также для перенацеливания посредством связывания с белками, взаимодействующими с пептидами HPV.

[000170] В другом аспекте изобретения получали химерные Ad, содержащие HVR1 Ad6 и HVR 2-7 Ad57, химера, обозначаемая как химера HVR Ad6/57, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.

[000171] В еще одном аспекте изобретения получали химерные Ad, содержащие HVR1 и 7 Ad6 и HVR 2-6 Ad57, химера, обозначаемая как химера HVR Ad6/57/6, содержит гексон, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51.

[000172] На картах плазмид на фигурах 16-18 показана комбинация инсерций отдельных HVR из разных серотипов Ad с инсерцией клеточно-нацеливающие/ненацеливающие пептиды, терапевтические полипептиды или новые аминокислоты, такие как цистеин, в гексон для направленной химической модификации и экранирования.

[000173] В некоторых вариантах осуществления связывающие клетки пептиды встраивают в HVR 1 или HVR 5, при этом варианты осуществления служат в качестве примеров встраивания этих и других пептидов в любых из HVR Ad.

Пример 2. Направленная химическая конъюгация цистеин-модифицированного, гексон-модифицированного Ad657-HVR5C.

[000174] Фигура 13 представляет собой изображение вариантов Ad, где показана комбинация инсерции отдельных HVR из разных серотипов Ad с инсерцией новых аминокислот, таких как цистеин, в гексон для направленной химической модификации и экранирования.

[000175] В этом примере показана возможность нацеливания полимера и других химических модификаций на цистеины, встроенные в гексон Ad (фигура 15). Ненацеленный PEG инактивирует вирусную инфекцию, в то время как цистеин-направленное пегилирование приводит к сохранению функций вируса.

[000176] В одном из аспектов изобретения предусмотрено использование полимеров или встроенных пептидов/белков для ненацеливания, перенацеливания и экранирования от антител, белков, клеток. На фигурах 12 и 14 показаны участки HVR Ad, которые можно модифицировать, например, посредством пегилирования или "бапилирования". В другом примере показана инсерция пептида акцептора биотина (BAP) в эти HVR, позволяющая перенацеливать вектор с помощью авидина или стрептавидина и биотинилированных лигандов или с помощью авидин- или стрептавидин-слитых белков. Инсерция BAP также позволяет очищать вирусы очищенная на колонках с мономерным авидином или стрептавидином для получения вектора. Аналогично, Ad57-HVR1-XXA и XA представляют собой пример инсерции цистеина в этот участок для направленной химической модификации с помощью малеимида или других реагирующих с цистеином средств.

[000177] В варианте осуществления разные серотипы и/или варианты Ad включают полимерное экранирование, чтобы сделать возможным многократное введение вариантов Ad6 и Ad657. Показан пример терапевтического цикла, где Ad6 и Ad657 можно использовать для множества раундов лечения посредством переключения серотипа в комбинации с ковалентной конъюгацией полимера (фигура 13).

[000178] Ad657-HVR1C, экспрессирующий GFP-люциферазу, продуцировался клетками, и его очищали с помощью градиентов CsCl. Вирус ковалентно модифицировали с помощью полиэтиленгликоля (PEG) 5 кДа. Вирус обрабатывали NHS-PEG, случайным образом реагирующим с аминами/лизинами на вирусных белках, или малеимид-PEG, специфически реагирующим с цистеином, который встраивали в HVR1 с использованием челночной плазмиды XXA. Затем эти немодифицированные или модифицированные вирусы очищали с помощью последнего центрифугирования с CsCl, а затем обессоливали. Указанный вирус разделяли на гелях ПААГ с SDS, окрашивали SyproRuby и визуализировали (фигура 14). Это свидетельствует о том, что NHS-пегилирование приводит к случайной модификации многих вирусных белков, о чем свидетельствует повышение кажущейся массы белков (показаны стрелками). В отличие от этого, направленная реакция малеимид-PEG с цистеином в HVR1 приводит к модификации только гексона и не повреждает другие вирусные белки капсомера. Оценивают эффекты пегилирования в отношении функции вируса.

Пример 3. Условно-репликативные Ad (CRAd).

[000179] Схема мутаций в Ad6, Ad657 и их вариантах, включающих мутации в белке E1 для превращения вируса в условно-репликативный Ad (CRAd), показана на фигуре 9, фигуре 10 и фигуре 11. Они включают dl1101 и/или dl1107, блокирующие связывание с p300 и pRB, соответственно.

[000180] На фигуре 10 показаны N-концевые аминокислотные последовательности E1A в Ad дикого типа, а также вариантах Ad E1Adl1101, E1A dl1107 и E1A dl1101/1107.

[000181] Также показана замена промотора E1 Ad простатспецифическим промотором пробазина и последовательностью ДНК E1 SEQ ID NO: 31 для получения CRAd, Ad-PB (фигура 9). Промотор пробазина является андроген-зависимым, таким образом, он будет действовать в андроген-чувствительных опухолях, подобных LNCaP, но не в андроген-резистентных опухолях, подобных DU145.

[000182] В варианте осуществления конструируют условно-репликативный вирус Ad657, имеющий модификацию dl1101 в E1, и мутацию dl1107 в E1a, и делецию E3A, для экспрессии PD-1 человека, слитый с иммуноглобулином человека в качестве белка-ловушки для PD-L1. Вирус также экспрессирует GFP-люциферазу с промотором CMV. Такой условно-репликативный вариант вируса Ad657 обозначают как CrAd6d1101/1107DE3ADP-hPD-1-Ig-GL.

Пример 4. Перенацеленный и ненацеленный рекомбинантный аденовирус.

[000183] Ad in vitro связывают и проникают в клетки посредством комбинированных взаимодействий его белков волокна и основания пентона с рецепторами поверхности клетки. Тримерное волокно связывается коксаки-аденовирусного рецептора (CAR), и клетки, в которых отсутствует CAR, являются относительно резистентными к инфекции, если они также не экспрессируют интегрины α_v, которые могут быть связанными мотивом RGD на основании пентона.

[000184] Белок волокна Ad представляет собой комплекс из трех, по-видимому, идентичных субъединиц, опосредующих стадию исходного присоединения. Нативный белок волокна Ad6 содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 35, и связывается с CAR.

[000185] В дополнительном аспекте изобретения получали рекомбинантные Ad с модифицированным волокном, содержащие разные белки волокна, не нативные для родительского Ad. Получали рекомбинантные Ad, включая CRAd, содержащие белки капсида из разных штаммов Ad, например, рекомбинантные Ad, содержащие гетерологичный полипептид волокна Ad35 или полипептид волокна C68 шимпанзе, +/- пептид K7.

[000186] Химерный Ad, химера волокна AdF35, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, является более коротким, чем белки волокна Ad5 и Ad6 и перенацеливает вирус на CD46.

[000187] Рекомбинантный Ad с модифицированным волокном, содержит волокно K7, имеющее последовательность SEQ ID NO: 37, нацеливающее вирус на гепаринсульфат протеогликаны и отрицательные заряды на клетках.

[000188] Рекомбинантный, химерный Ad, волокно 6/FC68, содержащий последовательность SEQ ID NO: 38, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем белки волокна Ad5 или Ad6 и связывается CAR.

[000189] Рекомбинантный, химерный Ad, волокно 6/FC68-K7, содержащий последовательность SEQ ID NO: 39, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем белки волокна Ad5 или Ad6. Волокно 6/FC68-K7 связывается с CAR и перенацеливает на гепаринсульфат и отрицательные заряды.

[000190] Рекомбинантный, химерный Ad, волокно 6/FC68-HI-K7, содержащий последовательность SEQ ID NO: 40, является химерным Ad, содержащим белок волокна из аденовируса шимпанзе C68. Белок волокна является более коротким, чем белки волокна Ad5 или Ad6. Волокно 6/FC68-HI-K7 связывается с CAR и перенацеливает на гепаринсульфат и отрицательные заряды.

[000191] Фактор свертывания крови X (FX) связывается с наномолярной аффинностью с гексонами аденовируса вида C и, таким образом, позволяет аденовирусу вида C эффективно трансдуцировать гепатоциты после инъекции IV.

[000192] После конструирования вирусов CRAd, экспрессирующих фактор X (GLA) человека, слитый с PD-1 человека. Домены PD-1 мыши и человека дикого типа и высокоаффинные домены PD-1 мыши и человека подвергали слиянию с N- или C-концами человек домена GLA FX-EGF и их экспрессию регулировали с помощью промотора RSV или CMV. В некоторых случаях эти экспрессирующие кассеты слитого белка встраивали в домен E3 указанных вирусов. В других случаях их встраивали между генами волокна и E4 вирусов.

[000193] Условно-репликативный Ad657 имел модификацию dl1101 в E1a, предотвращающую его связывание с p300 и делающую его восприимчивым к ИФН, делецию E3A, экспрессирующую кассету RSV, встроенную в делецию E3. Этот вирус экспрессирует фактор X (GLA) человека, слитый с PD-1 человека, и белок, перенацеливающий аденовирус на PD-L1⁺ клетки (т.е. CrAd657d1101DE3ADP*hPD1-GLA-GL-L).

[000194] Условно-репликативный Ad657 имеет модификацию dl1101 в E1a, предотвращающую его связывание с p300 и делающую вирус восприимчивым к репрессии ИФН, и мутацию dl1107 в E1a, предотвращающую его связывание с pRB для блокирования репликации вируса в клетках с интактными путями pRB, делецию E3 и содержит экспрессирующую кассету RSV, встроенную в делецию E3. Этот вирус экспрессирует фактор X (GLA) человека, слитый с PD-1 человека (т.е. CrAd657*1101/1107DE3BSTRSVhPD1-GLA*IgIZI). Во время репликации вируса PD-1 будет экспрессироваться в клетке в виде мономера, способного связываться с PD-L1 при высвобождении из клетки. PD-1 также может быть связан с поверхностью Ad для перенацеливания Ad на PD-L1-экспрессирующие клетки.

[000195] Условно-репликативный Ad6/57/6 с мутацией dl1107 в E1a и делецией E3A со встроенной экспрессирующей кассетой RSV, встроенной в делецию E3, конструируют для экспрессии PD-1 человека, слитого с иммуноглобулином человека, в качестве белка-ловушки PD-L1 (т.е. pAd/57/6-dl1107-ΔE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I). См. фигуру 16.

[000196] Слитый белок очищали из клеток, инфицированных pAd6/57/6-dl1107-DE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I, на колонке с протеином A. Этот белок титровали параллельно моноклональному антителу против PD-1 положительного контроля в анализе блокады PD-1/PD-L1 от Promega (Madison, WI, USA). Высокоаффинный слитый белок hPD-1-HA-Ig человека ингибирует PD-L1. См. фигуру 19.

Пример 5. Конструирование рекомбинантных Ad для экспрессии PD-L1-связывающих соединений в комбинации с гетерологичными полипептидами.

[000197] Условно-репликативный вирус Ad (CRAd657 или CRAd6/57/6) модифицируют для экспрессии полипептидов PD-1 в комбинации с одним или более гетерологичными полипептидами (например, терапевтическими полипептидами и/или нацеливающими полипептидами). В одном из вариантов осуществления слитую кассету RSV-PD-1 встраивают в делецию E3 вируса и терапевтические трансгены встраивают в виде экспрессирующих кассет CMV, или MCMV, или RSV между генами волокна и E4 способами, известными специалистам в этой области. См. фигуру 17 и фигуру 18.

Пример 6. Оценка роста опухоли в случае CRAd, экспрессирующего высокоаффинный слитый белок hPD-1-HA-Ig человека в отдельности или в комбинации с иммунотерапевтической нагрузкой.

[000198] Клетки меланома B16-CAR подкожно инъецировали мышам C57BL/6 и в полученные опухоли инъецировали 3e11 вирусных частиц мультивалентных PD-L1-связывающих соединений по изобретению. Ловушка CRAd+PD-L1 представляет собой pAd6/57/6-dl1107-ΔE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I. Ловушку CRAd+PD-L1+иммуностимулятор совместно инъецируют в опухоли, используя pAd6/57/6-dl1107-ΔE3-RSV-hPD-1-HA-Ig-I и второй аденовирус, экспрессирующий 4-1BBL. CRAd, экспрессирующий высокоаффинный слитый белок hPD-1-HA-Ig человека, задерживает рост опухоли сам по себе или в комбинации с иммунотерапевтической нагрузкой. См. фигуру 20.

[000199] В варианте осуществления CRAd657 или CRAd6/57/6 модифицируют для экспрессии полипептидов PD-1 в комбинации с одним или более терапевтическими полипептидами. Терапевтический полипептид можно выбирать из ГМ-КСФ, 4-1BBL, CD40L, OX40 и их комбинаций. В одном из аспектов полипептид PD-1 экспрессируется с терапевтическим полипептидом в виде слитого белка. В дополнительном аспекте слитую кассету RSV-PD-1 встраивают в делецию E3 вируса и терапевтические трансгены встраивают в виде экспрессирующих кассет CMV, или MCMV, или RSV между генами волокна и E4 вируса. См. фигуры 17 и 18.

Пример 7. Конструирование мультивалентных PD-L1-связывающих соединений.

[000200] Слитые белки, включающие полипептид PD-1 и либо каркасный полипептид, либо домен GLA полипептида FX, получают из генов, подвергаемых клонированию с помощью ПЦР с использованием мутаций и слитых соединений из генов дикого типа, мутантных генов или синтетических генов способами, известными специалистам в этой области. Слитые белки собирают посредством клонирования в экспрессирующие векторы, культивирования в условиях, делающего возможной экспрессию и сборку белков, и, необязательно, очистки белков из клеточных сред.

[000201] Слитые белки можно получать посредством трансфекции плазмид или инфицирования клетки с помощью векторов, экспрессирующих полипептиды PD-1 и/или их фрагменты, слитые с полипептидом, который может связываться с вирусным полипептидом оболочки, с последующей очисткой с помощью PD-1 или партнера по слиянию на колонках с антителами, или колонках с PD-L1, или колонках с биотином.

[000202] В варианте осуществления Ad можно приводить в контакт с очищенными слитыми белки PD-1 в условиях, позволяющих покрывать поверхность Ad слитым белком. Например, домен GLA полипептида FX связывается с поверхностью Ad таким образом, что PD-1 экспонирован на поверхности Ad для связывания с PD-L1 на поверхности клетки. Аденовирус, в котором партнер по слиянию связан с поверхностью Ad, и PD-1 может связываться с PD-L1 на клетке, представляет собой мультимерное PD-L1-связывающее соединение.

[000203] В варианте осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие слитые белки, встраивают в плазмиды или вирусные векторы или встраивают в продуцирующие векторы мРНК и ими трансфицируют или инфицируют культуры клеток in vitro или инфицируют животных in vivo. Образцы анализируют на экспрессию белка с помощью антител против PD-1 и/или слитых белковых партнеров.

[000204] Нуклеиновую кислоту (например, ДНК, мРНК и вирусные векторы), кодирующую слитые белки, вводят нормальным или несущим опухоли животным и анализируют изменения в клетках периферической крови, клетках лимфоузлов, клетках селезенки и популяциях опухолевых клеток посредством окрашивания на CD3, CD4, CD8, PD-1, PD-L1 и маркеры активации T-клеток.

[000205] Нуклеиновую кислоту (например, ДНК, мРНК) или вирусные векторы, кодирующие слитые белки, вводят несущим опухоли животным и оценивают эффекты в отношении размера опухоли, метастазов, диссеминирования и выживаемости.

Другие варианты осуществления.

[000206] Следует понимать, что, хотя изобретение описано в комбинации с подробным описанием, представленное выше описание приведено в иллюстративных целях, а не для ограничения объема изобретения, определяемого объемом формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации входят в объем формулы изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> MAYO FOUNDATION FOR MEDICAL EDUCATION AND RESEARCH

<120> МУЛЬТИВАЛЕНТНЫЕ PD-L1-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

<130> ADZE 2 PCT SEQ

<150> US 62/839,916

<151> 2019-04-29

<160> 51

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 465

<212> БЕЛОК

<213> Аденовирус человека 6

<400> 1

Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp

1 5 10 15

Glu Gln Asn Glu Thr Ala Gln Val Asp Ala Gln Glu Leu Asp Glu Glu

20 25 30

Glu Asn Glu Ala Asn Glu Ala Gln Ala Arg Glu Gln Glu Gln Ala Lys

35 40 45

Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Leu Ser Gly Ile Lys Ile Thr

50 55 60

Lys Glu Gly Leu Gln Ile Gly Thr Ala Asp Ala Thr Val Ala Gly Ala

65 70 75 80

Gly Lys Glu Ile Phe Ala Asp Lys Thr Phe Gln Pro Glu Pro Gln Val

85 90 95

Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Asp Ala Thr Ala Ala Gly Gly Arg

100 105 110

Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala

115 120 125

Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val Leu Trp Leu Thr Asn

130 135 140

Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe Phe Ser Thr Ser Thr

145 150 155 160

Asn Ala Thr Asn Glu Val Asn Asn Ile Gln Pro Thr Val Val Leu Tyr

165 170 175

Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys

180 185 190

Pro Lys Met Gly Asp Lys Asn Ala Lys Val Ser Leu Gly Gln Gln Ala

195 200 205

Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly

210 215 220

Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln

225 230 235 240

Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu

245 250 255

Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr

260 265 270

Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg

275 280 285

Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe

290 295 300

Pro Leu Gly Gly Ile Gly Ile Thr Asp Thr Phe Gln Ala Val Lys Thr

305 310 315 320

Thr Ala Ala Asn Gly Asp Gln Gly Asn Thr Thr Trp Gln Lys Asp Ser

325 330 335

Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met

340 345 350

Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn

355 360 365

Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val

370 375 380

Asp Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp His Met Lys Arg Val Val

385 390 395 400

Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser

405 410 415

Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala

420 425 430

Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro

435 440 445

Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu

450 455 460

Leu

465

<210> 2

<211> 959

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 2

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro

275 280 285

Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr

290 295 300

His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met

305 310 315 320

Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg

325 330 335

Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly

340 345 350

Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln

355 360 365

Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly

370 375 380

Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu

405 410 415

Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr

420 425 430

Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala

435 440 445

Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn

450 455 460

Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu

465 470 475 480

Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro

485 490 495

Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn

500 505 510

Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly

515 520 525

Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His

530 535 540

His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly

545 550 555 560

Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile

565 570 575

Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe

580 585 590

Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu

595 600 605

Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala

610 615 620

Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met

625 630 635 640

Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala

645 650 655

Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile

660 665 670

Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr

675 680 685

Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro

690 695 700

Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr

705 710 715 720

Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val

725 730 735

Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile

740 745 750

Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met

755 760 765

Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly

770 775 780

Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser

785 790 795 800

Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr

805 810 815

Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn

820 825 830

Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala

835 840 845

Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp

850 855 860

Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile

865 870 875 880

Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly

885 890 895

Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe

900 905 910

Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu

915 920 925

Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu

930 935 940

Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 3

<211> 959

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 3

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro

275 280 285

Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr

290 295 300

His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met

305 310 315 320

Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg

325 330 335

Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly

340 345 350

Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln

355 360 365

Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly

370 375 380

Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu

405 410 415

Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr

420 425 430

Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala

435 440 445

Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn

450 455 460

Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu

465 470 475 480

Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro

485 490 495

Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn

500 505 510

Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly

515 520 525

Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His

530 535 540

His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly

545 550 555 560

Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile

565 570 575

Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe

580 585 590

Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu

595 600 605

Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala

610 615 620

Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met

625 630 635 640

Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala

645 650 655

Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile

660 665 670

Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr

675 680 685

Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro

690 695 700

Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr

705 710 715 720

Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val

725 730 735

Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile

740 745 750

Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met

755 760 765

Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly

770 775 780

Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser

785 790 795 800

Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr

805 810 815

Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn

820 825 830

Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala

835 840 845

Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp

850 855 860

Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile

865 870 875 880

Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly

885 890 895

Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe

900 905 910

Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu

915 920 925

Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu

930 935 940

Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 4

<211> 962

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 4

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Glu Gln Asn Glu Thr Ala Gln Val Asp

130 135 140

Ala Gln Glu Leu Asp Glu Glu Glu Asn Glu Ala Asn Glu Ala Gln Ala

145 150 155 160

Arg Glu Gln Glu Gln Ala Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro

165 170 175

Leu Ser Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn

180 185 190

Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr

195 200 205

Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser

210 215 220

Ser Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro

225 230 235 240

Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly

245 250 255

Val Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln

260 265 270

Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln

275 280 285

Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp

290 295 300

Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala

305 310 315 320

Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe

325 330 335

Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met

340 345 350

Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu

355 360 365

Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile

370 375 380

Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser

385 390 395 400

Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu

405 410 415

Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Ile Thr Asp Thr

420 425 430

Phe Gln Ala Val Lys Thr Thr Ala Ala Asn Gly Asp Gln Gly Asn Thr

435 440 445

Thr Trp Gln Lys Asp Ser Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val

450 455 460

Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg

465 470 475 480

Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys

485 490 495

Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp

500 505 510

Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile

515 520 525

Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro

530 535 540

Phe Asn His Pro Arg His Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu

545 550 555 560

Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe

565 570 575

Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu

580 585 590

Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly

595 600 605

Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys

610 615 620

Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu

625 630 635 640

Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr

645 650 655

Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn

660 665 670

Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp

675 680 685

Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly

690 695 700

Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly

705 710 715 720

Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp

725 730 735

Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu

740 745 750

Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln

755 760 765

Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr

770 775 780

Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg

785 790 795 800

Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val

805 810 815

Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln

820 825 830

His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu

835 840 845

Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr

850 855 860

Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu

865 870 875 880

Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr

885 890 895

Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp

900 905 910

Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val

915 920 925

Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly

930 935 940

Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala

945 950 955 960

Thr Thr

<210> 5

<211> 288

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 5

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 6

<211> 288

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 6

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Phe Gln Gly Met Val Ile Gly Ile Met Ser Ala

165 170 175

Leu Val Gly Ile Pro Val Leu Leu Leu Leu Ala Trp Ala Leu Ala Val

180 185 190

Phe Cys Ser Thr Ser Met Ser Glu Ala Arg Gly Ala Gly Ser Lys Asp

195 200 205

Asp Thr Leu Lys Glu Glu Pro Ser Ala Ala Pro Val Pro Ser Val Ala

210 215 220

Tyr Glu Glu Leu Asp Phe Gln Gly Arg Glu Lys Thr Pro Glu Leu Pro

225 230 235 240

Thr Ala Cys Val His Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Thr Glu Gly

245 250 255

Leu Gly Ala Ser Ala Met Gly Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Leu Gln

260 265 270

Gly Pro Arg Pro Pro Arg His Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 7

<211> 390

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок PD-1

<400> 7

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

165 170 175

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

180 185 190

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

195 200 205

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

210 215 220

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

225 230 235 240

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp

245 250 255

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

260 265 270

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu

275 280 285

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

290 295 300

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

305 310 315 320

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

325 330 335

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

340 345 350

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

355 360 365

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

370 375 380

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

385 390

<210> 8

<211> 273

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок PD-1

<400> 8

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

165 170 175

Pro Val Ala Gly Gly Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys

180 185 190

Gly His Leu Glu Arg Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu

195 200 205

Ala Arg Glu Val Phe Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn

210 215 220

Lys Tyr Lys Asp Gly Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln

225 230 235 240

Gly Lys Cys Lys Asp Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu

245 250 255

Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly

260 265 270

Ser

<210> 9

<211> 252

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок PD-1

<400> 9

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys Gly His Leu Glu Arg

20 25 30

Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe

35 40 45

Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly

50 55 60

Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp

65 70 75 80

Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys

85 90 95

Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly Ser Gly Trp Leu Leu

100 105 110

Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp

115 120 125

Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser

130 135 140

Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser

145 150 155 160

Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro

165 170 175

Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp

180 185 190

Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr

195 200 205

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser

210 215 220

Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr

225 230 235 240

Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly Arg

245 250

<210> 10

<211> 310

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок PD-1

<400> 10

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

165 170 175

Pro Val Ala Gly Ser Lys Gly Leu Glu Ser Arg Val Ser Ala Leu Glu

180 185 190

Lys Thr Ser Gln Ile His Ser Asp Thr Ile Leu Arg Ile Thr Gln Gly

195 200 205

Leu Asp Asp Ala Asn Lys Arg Ile Ile Ala Leu Glu Gln Ser Arg Asp

210 215 220

Asp Leu Val Ala Ser Val Ser Asp Ala Gln Leu Ala Ile Ser Arg Leu

225 230 235 240

Glu Ser Ser Ile Gly Ala Leu Gln Thr Val Val Asn Gly Leu Asp Ser

245 250 255

Ser Val Thr Gln Leu Gly Ala Arg Val Gly Gln Leu Glu Thr Gly Leu

260 265 270

Ala Glu Leu Arg Val Asp His Asp Asn Leu Val Ala Arg Val Asp Thr

275 280 285

Ala Glu Arg Asn Ile Gly Ser Leu Thr Thr Glu Leu Ser Thr Leu Thr

290 295 300

Leu Arg Val Thr Ser Ile

305 310

<210> 11

<211> 599

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 11

Met Trp Val Arg Gln Val Pro Trp Ser Phe Thr Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Ser Trp Gln Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp

20 25 30

Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met

50 55 60

Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala

65 70 75 80

Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln

85 90 95

Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp

100 105 110

Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val

130 135 140

Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Lys Pro Glu Gly Arg Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro

165 170 175

Trp Arg Ser Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly

180 185 190

Ala Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu

195 200 205

Met Leu Asn Trp Asn Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln

210 215 220

Ala Ala Phe Cys Asn Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe

225 230 235 240

Gln Ile Ile Gln Leu Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu

245 250 255

Asp Thr Arg Arg Asn Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser

260 265 270

Leu His Pro Lys Ala Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val

275 280 285

Val Thr Glu Arg Ile Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser

290 295 300

Pro Lys Pro Glu Gly Arg Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala

305 310 315 320

Pro Pro Val Ala Gly Thr Met Gly Gly Ala Ala Gly Ser Gly Ala Ala

325 330 335

Glu Ala Gly Ile Thr Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Leu Gly Ser Thr Phe

340 345 350

Ile Val Thr Ala Gly Ala Asp Gly Ala Leu Thr Gly Thr Tyr Glu Ser

355 360 365

Ala Val Gly Asn Ala Glu Ser Arg Tyr Val Leu Thr Gly Arg Tyr Glu

370 375 380

Ser Ala Pro Ala Thr Asp Gly Ser Gly Thr Ala Leu Gly Trp Thr Val

385 390 395 400

Ala Trp Lys Asn Asn Tyr Arg Asn Ala His Ser Ala Thr Thr Trp Ser

405 410 415

Gly Gln Tyr Val Gly Gly Ala Glu Ala Arg Ile Asn Thr Gln Trp Leu

420 425 430

Leu Thr Ser Gly Thr Thr Glu Ala Asn Ala Trp Lys Ser Thr Leu Val

435 440 445

Gly His Asp Thr Phe Thr Lys Val Lys Pro Ser Ala Ala Ser Gly Ser

450 455 460

Ala Ala Gly Ser Gly Ala Ala Glu Ala Gly Ile Thr Gly Thr Trp Tyr

465 470 475 480

Asn Gln Leu Gly Ser Thr Phe Ile Val Thr Ala Gly Ala Asp Gly Ala

485 490 495

Leu Thr Gly Thr Tyr Glu Ser Ala Val Gly Asn Ala Glu Ser Arg Tyr

500 505 510

Val Leu Thr Gly Arg Tyr Glu Ser Ala Pro Ala Thr Asp Gly Ser Gly

515 520 525

Thr Ala Leu Gly Trp Thr Val Ala Trp Lys Asn Asn Tyr Arg Asn Ala

530 535 540

His Ser Ala Thr Thr Trp Ser Gly Gln Tyr Val Gly Gly Ala Glu Ala

545 550 555 560

Arg Ile Asn Thr Gln Trp Leu Leu Thr Ser Gly Thr Thr Glu Ala Asn

565 570 575

Ala Trp Lys Ser Thr Leu Val Gly His Asp Thr Phe Thr Lys Val Lys

580 585 590

Pro Ser Ala Ala Ser Gly Ser

595

<210> 12

<211> 765

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 12

Met Ser Pro Gln Arg Asp Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro

1 5 10 15

His Pro Lys Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile

20 25 30

Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser

35 40 45

Leu Ile Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala

50 55 60

Ile Tyr Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val

65 70 75 80

Thr Asn Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr

100 105 110

Asp Leu Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp

115 120 125

Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu

130 135 140

Arg Ile Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu

145 150 155 160

Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr

165 170 175

Thr Asn Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr

180 185 190

Thr Ile Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser

210 215 220

Gln Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser

225 230 235 240

Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu

245 250 255

Val Gly Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met

260 265 270

Thr Asn Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met

275 280 285

Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp

290 295 300

Ser Ile Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln

305 310 315 320

Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp

325 330 335

Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser

340 345 350

Ser His Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro

355 360 365

Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln

370 375 380

Ala Cys Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala

385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp

405 410 415

Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly

420 425 430

Pro Leu Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His

435 440 445

Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu

450 455 460

Gly Val Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro

465 470 475 480

Ala Leu Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala

485 490 495

Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser

500 505 510

Asn Leu Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr

515 520 525

Tyr Asp Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser

530 535 540

Pro Ser Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys

565 570 575

Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly

580 585 590

His Ile Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val

595 600 605

Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ile Glu Gly Arg Pro Gly Trp Phe Leu

610 615 620

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

625 630 635 640

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

645 650 655

Asn Thr Ser Glu Ser Phe His Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro Ser

660 665 670

Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

675 680 685

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

690 695 700

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

705 710 715 720

Val Cys Gly Val Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu Ser

725 730 735

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

740 745 750

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His His His

755 760 765

<210> 13

<211> 385

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 13

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro

165 170 175

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

180 185 190

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

195 200 205

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

210 215 220

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val

225 230 235 240

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

245 250 255

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

260 265 270

Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

275 280 285

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

290 295 300

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

305 310 315 320

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu

325 330 335

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

340 345 350

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

355 360 365

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

370 375 380

Lys

385

<210> 14

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 14

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly

165 170 175

Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys Gly His Leu Glu Arg

180 185 190

Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe

195 200 205

Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly

210 215 220

Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp

225 230 235 240

Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys

245 250 255

Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly Ser

260 265

<210> 15

<211> 248

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 15

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys Gly His Leu Glu Arg

20 25 30

Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe

35 40 45

Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly

50 55 60

Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp

65 70 75 80

Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys

85 90 95

Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe

100 105 110

Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala

115 120 125

Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe

130 135 140

Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro

145 150 155 160

Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln

165 170 175

Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg

180 185 190

Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr

195 200 205

Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu

210 215 220

Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro

225 230 235 240

Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

245

<210> 16

<211> 305

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 16

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Ser

165 170 175

Lys Gly Leu Glu Ser Arg Val Ser Ala Leu Glu Lys Thr Ser Gln Ile

180 185 190

His Ser Asp Thr Ile Leu Arg Ile Thr Gln Gly Leu Asp Asp Ala Asn

195 200 205

Lys Arg Ile Ile Ala Leu Glu Gln Ser Arg Asp Asp Leu Val Ala Ser

210 215 220

Val Ser Asp Ala Gln Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu Ser Ser Ile Gly

225 230 235 240

Ala Leu Gln Thr Val Val Asn Gly Leu Asp Ser Ser Val Thr Gln Leu

245 250 255

Gly Ala Arg Val Gly Gln Leu Glu Thr Gly Leu Ala Glu Leu Arg Val

260 265 270

Asp His Asp Asn Leu Val Ala Arg Val Asp Thr Ala Glu Arg Asn Ile

275 280 285

Gly Ser Leu Thr Thr Glu Leu Ser Thr Leu Thr Leu Arg Val Thr Ser

290 295 300

Ile

305

<210> 17

<211> 594

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 17

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Ser Gly Trp Leu Leu Glu Val Pro Asn Gly Pro Trp Arg Ser Leu Thr

165 170 175

Phe Tyr Pro Ala Trp Leu Thr Val Ser Glu Gly Ala Asn Ala Thr Phe

180 185 190

Thr Cys Ser Leu Ser Asn Trp Ser Glu Asp Leu Met Leu Asn Trp Asn

195 200 205

Arg Leu Ser Pro Ser Asn Gln Thr Glu Lys Gln Ala Ala Phe Cys Asn

210 215 220

Gly Leu Ser Gln Pro Val Gln Asp Ala Arg Phe Gln Ile Ile Gln Leu

225 230 235 240

Pro Asn Arg His Asp Phe His Met Asn Ile Leu Asp Thr Arg Arg Asn

245 250 255

Asp Ser Gly Ile Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu His Pro Lys Ala

260 265 270

Lys Ile Glu Glu Ser Pro Gly Ala Glu Leu Val Val Thr Glu Arg Ile

275 280 285

Leu Glu Thr Ser Thr Arg Tyr Pro Ser Pro Ser Pro Lys Pro Glu Gly

290 295 300

Arg Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly

305 310 315 320

Thr Met Gly Gly Ala Ala Gly Ser Gly Ala Ala Glu Ala Gly Ile Thr

325 330 335

Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Leu Gly Ser Thr Phe Ile Val Thr Ala Gly

340 345 350

Ala Asp Gly Ala Leu Thr Gly Thr Tyr Glu Ser Ala Val Gly Asn Ala

355 360 365

Glu Ser Arg Tyr Val Leu Thr Gly Arg Tyr Glu Ser Ala Pro Ala Thr

370 375 380

Asp Gly Ser Gly Thr Ala Leu Gly Trp Thr Val Ala Trp Lys Asn Asn

385 390 395 400

Tyr Arg Asn Ala His Ser Ala Thr Thr Trp Ser Gly Gln Tyr Val Gly

405 410 415

Gly Ala Glu Ala Arg Ile Asn Thr Gln Trp Leu Leu Thr Ser Gly Thr

420 425 430

Thr Glu Ala Asn Ala Trp Lys Ser Thr Leu Val Gly His Asp Thr Phe

435 440 445

Thr Lys Val Lys Pro Ser Ala Ala Ser Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly

450 455 460

Ala Ala Glu Ala Gly Ile Thr Gly Thr Trp Tyr Asn Gln Leu Gly Ser

465 470 475 480

Thr Phe Ile Val Thr Ala Gly Ala Asp Gly Ala Leu Thr Gly Thr Tyr

485 490 495

Glu Ser Ala Val Gly Asn Ala Glu Ser Arg Tyr Val Leu Thr Gly Arg

500 505 510

Tyr Glu Ser Ala Pro Ala Thr Asp Gly Ser Gly Thr Ala Leu Gly Trp

515 520 525

Thr Val Ala Trp Lys Asn Asn Tyr Arg Asn Ala His Ser Ala Thr Thr

530 535 540

Trp Ser Gly Gln Tyr Val Gly Gly Ala Glu Ala Arg Ile Asn Thr Gln

545 550 555 560

Trp Leu Leu Thr Ser Gly Thr Thr Glu Ala Asn Ala Trp Lys Ser Thr

565 570 575

Leu Val Gly His Asp Thr Phe Thr Lys Val Lys Pro Ser Ala Ala Ser

580 585 590

Gly Ser

<210> 18

<211> 765

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 18

Met Ser Pro Gln Arg Asp Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro

1 5 10 15

His Pro Lys Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile

20 25 30

Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser

35 40 45

Leu Ile Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala

50 55 60

Ile Tyr Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val

65 70 75 80

Thr Asn Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr

100 105 110

Asp Leu Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp

115 120 125

Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu

130 135 140

Arg Ile Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu

145 150 155 160

Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr

165 170 175

Thr Asn Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr

180 185 190

Thr Ile Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser

210 215 220

Gln Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser

225 230 235 240

Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu

245 250 255

Val Gly Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met

260 265 270

Thr Asn Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met

275 280 285

Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp

290 295 300

Ser Ile Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln

305 310 315 320

Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp

325 330 335

Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser

340 345 350

Ser His Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro

355 360 365

Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln

370 375 380

Ala Cys Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala

385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp

405 410 415

Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly

420 425 430

Pro Leu Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His

435 440 445

Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu

450 455 460

Gly Val Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro

465 470 475 480

Ala Leu Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala

485 490 495

Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser

500 505 510

Asn Leu Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr

515 520 525

Tyr Asp Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser

530 535 540

Pro Ser Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys

565 570 575

Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly

580 585 590

His Ile Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val

595 600 605

Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ile Glu Gly Arg Pro Gly Trp Phe Leu

610 615 620

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

625 630 635 640

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

645 650 655

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

660 665 670

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

675 680 685

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

690 695 700

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

705 710 715 720

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

725 730 735

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

740 745 750

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His His His

755 760 765

<210> 19

<211> 765

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 19

Met Ser Pro Gln Arg Asp Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro

1 5 10 15

His Pro Lys Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile

20 25 30

Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser

35 40 45

Leu Ile Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala

50 55 60

Ile Tyr Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val

65 70 75 80

Thr Asn Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr

100 105 110

Asp Leu Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp

115 120 125

Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu

130 135 140

Arg Ile Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu

145 150 155 160

Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr

165 170 175

Thr Asn Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr

180 185 190

Thr Ile Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser

210 215 220

Gln Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser

225 230 235 240

Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu

245 250 255

Val Gly Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met

260 265 270

Thr Asn Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met

275 280 285

Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp

290 295 300

Ser Ile Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln

305 310 315 320

Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp

325 330 335

Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser

340 345 350

Ser His Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro

355 360 365

Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln

370 375 380

Ala Cys Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala

385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp

405 410 415

Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly

420 425 430

Pro Leu Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His

435 440 445

Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu

450 455 460

Gly Val Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro

465 470 475 480

Ala Leu Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala

485 490 495

Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser

500 505 510

Asn Leu Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr

515 520 525

Tyr Asp Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser

530 535 540

Pro Ser Arg Leu Ser Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys

565 570 575

Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly

580 585 590

His Ile Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val

595 600 605

Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ile Glu Gly Arg Pro Gly Trp Phe Leu

610 615 620

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

625 630 635 640

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

645 650 655

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

660 665 670

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

675 680 685

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

690 695 700

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

705 710 715 720

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

725 730 735

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

740 745 750

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His His His

755 760 765

<210> 20

<211> 754

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 20

Met Leu Pro Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala

1 5 10 15

Arg Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Gly His Gly Gly

20 25 30

Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly

35 40 45

Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser

50 55 60

Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys

65 70 75 80

Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn

100 105 110

Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn

115 120 125

Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser

130 135 140

Thr Val Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Glu Ser Ile Gly Ile Arg

145 150 155 160

Lys Ala Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser

165 170 175

Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro His Arg Cys Ser Gly Ala Thr

180 185 190

Thr Ser Val Gly Lys Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser

195 200 205

Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Val Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser

210 215 220

Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Asp Ile Glu

225 230 235 240

Arg Glu Phe Asp Thr Arg Glu Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile

245 250 255

Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met

260 265 270

Val Leu Pro Lys Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly

275 280 285

Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Glu Glu Ser Thr Val Leu Leu

290 295 300

Tyr His Asp Ser Ser Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu

305 310 315 320

Gly Ile Phe Trp Ala Thr Pro Met Asp His Ile Glu Glu Val Ile Pro

325 330 335

Val Ala His Pro Ser Met Lys Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly

340 345 350

Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Ala Ser

355 360 365

Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Gly Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg

370 375 380

Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Ala Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly

385 390 395 400

Arg Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Ala Ser

405 410 415

Val Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu

420 425 430

Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asn Ser Gly

435 440 445

Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asp Gly Thr Ile Ser Gly Leu Ile Asn

450 455 460

Lys Ala Gly Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Leu Pro His Val Leu Thr

465 470 475 480

Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr

485 490 495

Ser Gln Ile Arg Asp Arg Asp Val Leu Ile Glu Ser Asn Ile Val Val

500 505 510

Leu Pro Thr Gln Ser Ile Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser

515 520 525

Arg Ser Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr

530 535 540

Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp

545 550 555 560

Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asn Leu Trp Cys His

565 570 575

Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Ala Asn Ser Thr Thr Ser Val

580 585 590

Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ile Glu Gly Arg

595 600 605

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

610 615 620

Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

625 630 635 640

Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr

645 650 655

Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu

660 665 670

Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

675 680 685

Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

690 695 700

Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala

705 710 715 720

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

725 730 735

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His

740 745 750

His His

<210> 21

<211> 385

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 21

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe His

50 55 60

Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro Ser Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Val Cys Gly Val Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro

165 170 175

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

180 185 190

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

195 200 205

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

210 215 220

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val

225 230 235 240

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

245 250 255

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

260 265 270

Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

275 280 285

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

290 295 300

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

305 310 315 320

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu

325 330 335

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

340 345 350

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

355 360 365

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

370 375 380

Lys

385

<210> 22

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 22

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe His

50 55 60

Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro Ser Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Val Cys Gly Val Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly

165 170 175

Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys Gly His Leu Glu Arg

180 185 190

Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe

195 200 205

Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly

210 215 220

Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp

225 230 235 240

Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys

245 250 255

Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly Ser

260 265

<210> 23

<211> 248

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 23

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ala Asn Ser Phe Leu Glu Glu Met Lys Lys Gly His Leu Glu Arg

20 25 30

Glu Cys Met Glu Glu Thr Cys Ser Tyr Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe

35 40 45

Glu Asp Ser Asp Lys Thr Asn Glu Phe Trp Asn Lys Tyr Lys Asp Gly

50 55 60

Asp Gln Cys Glu Thr Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Lys Cys Lys Asp

65 70 75 80

Gly Leu Gly Glu Tyr Thr Cys Thr Cys Leu Glu Gly Phe Glu Gly Lys

85 90 95

Asn Cys Glu Leu Pro Val Gly Tyr Arg Gly Gly Ser Pro Gly Trp Phe

100 105 110

Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala

115 120 125

Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe

130 135 140

Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe His Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro

145 150 155 160

Ser Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln

165 170 175

Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg

180 185 190

Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr

195 200 205

Tyr Val Cys Gly Val Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu

210 215 220

Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro

225 230 235 240

Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

245

<210> 24

<211> 305

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 24

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe His

50 55 60

Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro Ser Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Val Cys Gly Val Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Ser

165 170 175

Lys Gly Leu Glu Ser Arg Val Ser Ala Leu Glu Lys Thr Ser Gln Ile

180 185 190

His Ser Asp Thr Ile Leu Arg Ile Thr Gln Gly Leu Asp Asp Ala Asn

195 200 205

Lys Arg Ile Ile Ala Leu Glu Gln Ser Arg Asp Asp Leu Val Ala Ser

210 215 220

Val Ser Asp Ala Gln Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu Ser Ser Ile Gly

225 230 235 240

Ala Leu Gln Thr Val Val Asn Gly Leu Asp Ser Ser Val Thr Gln Leu

245 250 255

Gly Ala Arg Val Gly Gln Leu Glu Thr Gly Leu Ala Glu Leu Arg Val

260 265 270

Asp His Asp Asn Leu Val Ala Arg Val Asp Thr Ala Glu Arg Asn Ile

275 280 285

Gly Ser Leu Thr Thr Glu Leu Ser Thr Leu Thr Leu Arg Val Thr Ser

290 295 300

Ile

305

<210> 25

<211> 765

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 25

Met Ser Pro Gln Arg Asp Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro

1 5 10 15

His Pro Lys Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile

20 25 30

Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser

35 40 45

Leu Ile Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala

50 55 60

Ile Tyr Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val

65 70 75 80

Thr Asn Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr

100 105 110

Asp Leu Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp

115 120 125

Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu

130 135 140

Arg Ile Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu

145 150 155 160

Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr

165 170 175

Thr Asn Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr

180 185 190

Thr Ile Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser

210 215 220

Gln Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser

225 230 235 240

Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu

245 250 255

Val Gly Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met

260 265 270

Thr Asn Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met

275 280 285

Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp

290 295 300

Ser Ile Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln

305 310 315 320

Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp

325 330 335

Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser

340 345 350

Ser His Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro

355 360 365

Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln

370 375 380

Ala Cys Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala

385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp

405 410 415

Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly

420 425 430

Pro Leu Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His

435 440 445

Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu

450 455 460

Gly Val Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro

465 470 475 480

Ala Leu Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala

485 490 495

Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser

500 505 510

Asn Leu Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr

515 520 525

Tyr Asp Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser

530 535 540

Pro Ser Arg Ser Phe Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys

565 570 575

Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly

580 585 590

His Ile Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val

595 600 605

Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ile Glu Gly Arg Pro Gly Trp Phe Leu

610 615 620

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

625 630 635 640

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

645 650 655

Asn Thr Ser Glu Ser Phe His Val Ile Trp His Arg Glu Ser Pro Ser

660 665 670

Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

675 680 685

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

690 695 700

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

705 710 715 720

Val Cys Gly Val Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ile Gln Ile Lys Glu Ser

725 730 735

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

740 745 750

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His His His

755 760 765

<210> 26

<211> 765

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 26

Met Ser Pro Gln Arg Asp Arg Ile Asn Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Pro

1 5 10 15

His Pro Lys Gly Ser Arg Ile Val Ile Asn Arg Glu His Leu Met Ile

20 25 30

Asp Arg Pro Tyr Val Leu Leu Ala Val Leu Phe Val Met Phe Leu Ser

35 40 45

Leu Ile Gly Leu Leu Ala Ile Ala Gly Ile Arg Leu His Arg Ala Ala

50 55 60

Ile Tyr Thr Ala Glu Ile His Lys Ser Leu Ser Thr Asn Leu Asp Val

65 70 75 80

Thr Asn Ser Ile Glu His Gln Val Lys Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Val Gly Leu Arg Thr Pro Gln Arg Phe Thr

100 105 110

Asp Leu Val Lys Phe Ile Ser Asp Lys Ile Lys Phe Leu Asn Pro Asp

115 120 125

Arg Glu Tyr Asp Phe Arg Asp Leu Thr Trp Cys Ile Asn Pro Pro Glu

130 135 140

Arg Ile Lys Leu Asp Tyr Asp Gln Tyr Cys Ala Asp Val Ala Ala Glu

145 150 155 160

Glu Leu Met Asn Ala Leu Val Asn Ser Thr Leu Leu Glu Thr Arg Thr

165 170 175

Thr Asn Gln Phe Leu Ala Val Ser Lys Gly Asn Cys Ser Gly Pro Thr

180 185 190

Thr Ile Arg Gly Gln Phe Ser Asn Met Ser Leu Ser Leu Leu Asp Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Arg Gly Tyr Asn Val Ser Ser Ile Val Thr Met Thr Ser

210 215 220

Gln Gly Met Tyr Gly Gly Thr Tyr Leu Val Glu Lys Pro Asn Leu Ser

225 230 235 240

Ser Lys Arg Ser Glu Leu Ser Gln Leu Ser Met Tyr Arg Val Phe Glu

245 250 255

Val Gly Val Ile Arg Asn Pro Gly Leu Gly Ala Pro Val Phe His Met

260 265 270

Thr Asn Tyr Leu Glu Gln Pro Val Ser Asn Asp Leu Ser Asn Cys Met

275 280 285

Val Ala Leu Gly Glu Leu Lys Leu Ala Ala Leu Cys His Gly Glu Asp

290 295 300

Ser Ile Thr Ile Pro Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Gly Val Ser Phe Gln

305 310 315 320

Leu Val Lys Leu Gly Val Trp Lys Ser Pro Thr Asp Met Gln Ser Trp

325 330 335

Val Pro Leu Ser Thr Asp Asp Pro Val Ile Asp Arg Leu Tyr Leu Ser

340 345 350

Ser His Arg Gly Val Ile Ala Asp Asn Gln Ala Lys Trp Ala Val Pro

355 360 365

Thr Thr Arg Thr Asp Asp Lys Leu Arg Met Glu Thr Cys Phe Gln Gln

370 375 380

Ala Cys Lys Gly Lys Ile Gln Ala Leu Cys Glu Asn Pro Glu Trp Ala

385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asn Arg Ile Pro Ser Tyr Gly Val Leu Ser Val Asp

405 410 415

Leu Ser Leu Thr Val Glu Leu Lys Ile Lys Ile Ala Ser Gly Phe Gly

420 425 430

Pro Leu Ile Thr His Gly Ser Gly Met Asp Leu Tyr Lys Ser Asn His

435 440 445

Asn Asn Val Tyr Trp Leu Thr Ile Pro Pro Met Lys Asn Leu Ala Leu

450 455 460

Gly Val Ile Asn Thr Leu Glu Trp Ile Pro Arg Phe Lys Val Ser Pro

465 470 475 480

Ala Leu Phe Asn Val Pro Ile Lys Glu Ala Gly Gly Asp Cys His Ala

485 490 495

Pro Thr Tyr Leu Pro Ala Glu Val Asp Gly Asp Val Lys Leu Ser Ser

500 505 510

Asn Leu Val Ile Leu Pro Gly Gln Asp Leu Gln Tyr Val Leu Ala Thr

515 520 525

Tyr Asp Thr Ser Ala Val Glu His Ala Val Val Tyr Tyr Val Tyr Ser

530 535 540

Pro Ser Arg Leu Ser Ser Tyr Phe Tyr Pro Phe Arg Leu Pro Ile Lys

545 550 555 560

Gly Val Pro Ile Glu Leu Gln Val Glu Cys Phe Thr Trp Asp Gln Lys

565 570 575

Leu Trp Cys Arg His Phe Cys Val Leu Ala Asp Ser Glu Ser Gly Gly

580 585 590

His Ile Thr His Ser Gly Met Val Gly Met Gly Val Ser Cys Thr Val

595 600 605

Thr Arg Glu Asp Gly Thr Asn Ile Glu Gly Arg Pro Gly Trp Phe Leu

610 615 620

Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu

625 630 635 640

Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser

645 650 655

Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser

660 665 670

Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro

675 680 685

Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp

690 695 700

Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr

705 710 715 720

Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser

725 730 735

Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr

740 745 750

Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His His His

755 760 765

<210> 27

<211> 754

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый полипептид PD-1

<400> 27

Met Leu Pro Tyr Gln Asp Lys Val Gly Ala Phe Tyr Lys Asp Asn Ala

1 5 10 15

Arg Ala Asn Ser Thr Lys Leu Ser Leu Val Thr Glu Gly His Gly Gly

20 25 30

Arg Arg Pro Pro Tyr Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Gly

35 40 45

Ile Leu Ala Leu Leu Ala Ile Thr Gly Val Arg Phe His Gln Val Ser

50 55 60

Thr Ser Asn Met Glu Phe Ser Arg Leu Leu Lys Glu Asp Met Glu Lys

65 70 75 80

Ser Glu Ala Val His His Gln Val Ile Asp Val Leu Thr Pro Leu Phe

85 90 95

Lys Ile Ile Gly Asp Glu Ile Gly Leu Arg Leu Pro Gln Lys Leu Asn

100 105 110

Glu Ile Lys Gln Phe Ile Leu Gln Lys Thr Asn Phe Phe Asn Pro Asn

115 120 125

Arg Glu Phe Asp Phe Arg Asp Leu His Trp Cys Ile Asn Pro Pro Ser

130 135 140

Thr Val Lys Val Asn Phe Thr Asn Tyr Cys Glu Ser Ile Gly Ile Arg

145 150 155 160

Lys Ala Ile Ala Ser Ala Ala Asn Pro Ile Leu Leu Ser Ala Leu Ser

165 170 175

Gly Gly Arg Gly Asp Ile Phe Pro Pro His Arg Cys Ser Gly Ala Thr

180 185 190

Thr Ser Val Gly Lys Val Phe Pro Leu Ser Val Ser Leu Ser Met Ser

195 200 205

Leu Ile Ser Arg Thr Ser Glu Val Ile Asn Met Leu Thr Ala Ile Ser

210 215 220

Asp Gly Val Tyr Gly Lys Thr Tyr Leu Leu Val Pro Asp Asp Ile Glu

225 230 235 240

Arg Glu Phe Asp Thr Arg Glu Ile Arg Val Phe Glu Ile Gly Phe Ile

245 250 255

Lys Arg Trp Leu Asn Asp Met Pro Leu Leu Gln Thr Thr Asn Tyr Met

260 265 270

Val Leu Pro Lys Asn Ser Lys Ala Lys Val Cys Thr Ile Ala Val Gly

275 280 285

Glu Leu Thr Leu Ala Ser Leu Cys Val Glu Glu Ser Thr Val Leu Leu

290 295 300

Tyr His Asp Ser Ser Gly Ser Gln Asp Gly Ile Leu Val Val Thr Leu

305 310 315 320

Gly Ile Phe Trp Ala Thr Pro Met Asp His Ile Glu Glu Val Ile Pro

325 330 335

Val Ala His Pro Ser Met Lys Lys Ile His Ile Thr Asn His Arg Gly

340 345 350

Phe Ile Lys Asp Ser Ile Ala Thr Trp Met Val Pro Ala Leu Ala Ser

355 360 365

Glu Lys Gln Glu Glu Gln Lys Gly Cys Leu Glu Ser Ala Cys Gln Arg

370 375 380

Lys Thr Tyr Pro Met Cys Asn Gln Ala Ser Trp Glu Pro Phe Gly Gly

385 390 395 400

Arg Gln Leu Pro Ser Tyr Gly Arg Leu Thr Leu Pro Leu Asp Ala Ser

405 410 415

Val Asp Leu Gln Leu Asn Ile Ser Phe Thr Tyr Gly Pro Val Ile Leu

420 425 430

Asn Gly Asp Gly Met Asp Tyr Tyr Glu Ser Pro Leu Leu Asn Ser Gly

435 440 445

Trp Leu Thr Ile Pro Pro Lys Asp Gly Thr Ile Ser Gly Leu Ile Asn

450 455 460

Lys Ala Gly Arg Gly Asp Gln Phe Thr Val Leu Pro His Val Leu Thr

465 470 475 480

Phe Ala Pro Arg Glu Ser Ser Gly Asn Cys Tyr Leu Pro Ile Gln Thr

485 490 495

Ser Gln Ile Arg Asp Arg Asp Val Leu Ile Glu Ser Asn Ile Val Val

500 505 510

Leu Pro Thr Gln Ser Ile Arg Tyr Val Ile Ala Thr Tyr Asp Ile Ser

515 520 525

Arg Ser Asp His Ala Ile Val Tyr Tyr Val Tyr Asp Pro Ile Arg Thr

530 535 540

Ile Ser Tyr Thr His Pro Phe Arg Leu Thr Thr Lys Gly Arg Pro Asp

545 550 555 560

Phe Leu Arg Ile Glu Cys Phe Val Trp Asp Asp Asn Leu Trp Cys His

565 570 575

Gln Phe Tyr Arg Phe Glu Ala Asp Ile Ala Asn Ser Thr Thr Ser Val

580 585 590

Glu Asn Leu Val Arg Ile Arg Phe Ser Cys Asn Arg Ile Glu Gly Arg

595 600 605

Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr

610 615 620

Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe

625 630 635 640

Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe His Val Ile Trp His

645 650 655

Arg Glu Ser Pro Ser Gly Gln Thr Asp Thr Leu Ala Ala Phe Pro Glu

660 665 670

Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu

675 680 685

Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn

690 695 700

Asp Ser Gly Thr Tyr Val Cys Gly Val Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ile

705 710 715 720

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

725 730 735

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro His His His His

740 745 750

His His

<210> 28

<211> 959

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 28

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro

275 280 285

Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr

290 295 300

His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met

305 310 315 320

Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg

325 330 335

Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly

340 345 350

Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln

355 360 365

Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly

370 375 380

Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu

405 410 415

Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr

420 425 430

Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala

435 440 445

Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn

450 455 460

Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu

465 470 475 480

Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro

485 490 495

Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn

500 505 510

Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly

515 520 525

Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His

530 535 540

His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly

545 550 555 560

Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile

565 570 575

Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe

580 585 590

Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu

595 600 605

Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala

610 615 620

Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met

625 630 635 640

Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala

645 650 655

Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile

660 665 670

Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr

675 680 685

Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro

690 695 700

Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr

705 710 715 720

Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val

725 730 735

Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile

740 745 750

Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met

755 760 765

Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly

770 775 780

Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser

785 790 795 800

Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr

805 810 815

Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn

820 825 830

Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala

835 840 845

Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp

850 855 860

Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile

865 870 875 880

Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly

885 890 895

Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe

900 905 910

Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu

915 920 925

Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu

930 935 940

Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 29

<211> 962

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 29

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Glu Gln Asn Glu Thr Ala Gln Val Asp

130 135 140

Ala Gln Glu Leu Asp Glu Glu Glu Asn Glu Ala Asn Glu Ala Gln Ala

145 150 155 160

Arg Glu Gln Glu Gln Ala Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro

165 170 175

Leu Ser Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn

180 185 190

Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr

195 200 205

Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser

210 215 220

Ser Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro

225 230 235 240

Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly

245 250 255

Val Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln

260 265 270

Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln

275 280 285

Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp

290 295 300

Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala

305 310 315 320

Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe

325 330 335

Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met

340 345 350

Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu

355 360 365

Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile

370 375 380

Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser

385 390 395 400

Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu

405 410 415

Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Ile Thr Asp Thr

420 425 430

Phe Gln Ala Val Lys Thr Thr Ala Ala Asn Gly Asp Gln Gly Asn Thr

435 440 445

Thr Trp Gln Lys Asp Ser Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val

450 455 460

Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg

465 470 475 480

Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys

485 490 495

Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp

500 505 510

Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile

515 520 525

Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro

530 535 540

Phe Asn His Pro Arg His Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu

545 550 555 560

Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe

565 570 575

Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu

580 585 590

Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly

595 600 605

Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys

610 615 620

Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu

625 630 635 640

Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr

645 650 655

Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn

660 665 670

Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp

675 680 685

Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly

690 695 700

Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly

705 710 715 720

Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp

725 730 735

Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu

740 745 750

Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln

755 760 765

Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr

770 775 780

Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg

785 790 795 800

Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val

805 810 815

Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln

820 825 830

His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu

835 840 845

Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr

850 855 860

Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu

865 870 875 880

Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr

885 890 895

Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp

900 905 910

Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val

915 920 925

Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly

930 935 940

Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala

945 950 955 960

Thr Thr

<210> 30

<211> 959

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 30

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro

275 280 285

Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr

290 295 300

His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met

305 310 315 320

Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg

325 330 335

Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly

340 345 350

Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln

355 360 365

Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly

370 375 380

Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu

405 410 415

Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr

420 425 430

Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala

435 440 445

Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn

450 455 460

Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu

465 470 475 480

Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro

485 490 495

Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn

500 505 510

Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly

515 520 525

Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His

530 535 540

His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly

545 550 555 560

Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile

565 570 575

Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe

580 585 590

Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu

595 600 605

Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala

610 615 620

Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met

625 630 635 640

Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala

645 650 655

Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile

660 665 670

Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr

675 680 685

Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro

690 695 700

Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr

705 710 715 720

Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val

725 730 735

Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile

740 745 750

Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met

755 760 765

Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly

770 775 780

Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser

785 790 795 800

Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr

805 810 815

Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn

820 825 830

Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala

835 840 845

Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp

850 855 860

Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile

865 870 875 880

Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly

885 890 895

Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe

900 905 910

Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu

915 920 925

Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu

930 935 940

Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 31

<211> 132

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> N-концевой полипептид E1A аденовируса

<400> 31

Met Arg His Ile Ile Cys His Gly Gly Val Ile Thr Glu Glu Met Ala

1 5 10 15

Ala Ser Leu Leu Asp Gln Leu Ile Glu Glu Val Leu Ala Asp Asn Leu

20 25 30

Pro Pro Pro Ser His Phe Glu Pro Pro Thr Leu His Glu Leu Tyr Asp

35 40 45

Leu Asp Val Thr Ala Pro Glu Asp Pro Asn Glu Glu Ala Val Ser Gln

50 55 60

Ile Phe Pro Glu Ser Val Met Leu Ala Val Gln Glu Gly Ile Asp Leu

65 70 75 80

Phe Thr Phe Pro Pro Ala Pro Gly Ser Pro Glu Pro Pro His Leu Ser

85 90 95

Arg Gln Pro Glu Gln Pro Glu Gln Arg Ala Leu Gly Pro Val Ser Met

100 105 110

Pro Asn Leu Val Pro Glu Val Ile Asp Leu Thr Cys His Glu Ala Gly

115 120 125

Phe Pro Pro Ser

130

<210> 32

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> N-концевой полипептид E1A

<400> 32

Met Arg His Ile Glu Glu Val Leu Ala Asp Asn Leu Pro Pro Pro Ser

1 5 10 15

His Phe Glu Pro Pro Thr Leu His Glu Leu Tyr Asp Leu Asp Val Thr

20 25 30

Ala Pro Glu Asp Pro Asn Glu Glu Ala Val Ser Gln Ile Phe Pro Glu

35 40 45

Ser Val Met Leu Ala Val Gln Glu Gly Ile Asp Leu Phe Thr Phe Pro

50 55 60

Pro Ala Pro Gly Ser Pro Glu Pro Pro His Leu Ser Arg Gln Pro Glu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Gln Arg Ala Leu Gly Pro Val Ser Met Pro Asn Leu Val

85 90 95

Pro Glu Val Ile Asp Leu Thr Cys His Glu Ala Gly Phe Pro Pro Ser

100 105 110

<210> 33

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> N-концевой полипептид E1A

<400> 33

Met Arg His Ile Ile Cys His Gly Gly Val Ile Thr Glu Glu Met Ala

1 5 10 15

Ala Ser Leu Leu Asp Gln Leu Ile Glu Glu Val Leu Ala Asp Asn Leu

20 25 30

Pro Pro Pro Ser His Phe Glu Pro Pro Thr Leu His Glu Leu Tyr Asp

35 40 45

Leu Asp Val Thr Ala Pro Glu Asp Pro Asn Glu Glu Ala Val Ser Gln

50 55 60

Ile Phe Pro Glu Ser Val Met Leu Ala Val Gln Glu Gly Ile Asp Leu

65 70 75 80

Phe Thr Phe Pro Pro Ala Pro Gly Ser Pro Glu Pro Pro His Leu Ser

85 90 95

Arg Gln Pro Glu Gln Pro Glu Gln Arg Ala Leu Gly Pro Val Cys His

100 105 110

Glu Ala Gly Phe Pro Pro Ser

115

<210> 34

<211> 99

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> N-концевой полипептид E1A

<400> 34

Met Arg His Ile Glu Glu Val Leu Ala Asp Asn Leu Pro Pro Pro Ser

1 5 10 15

His Phe Glu Pro Pro Thr Leu His Glu Leu Tyr Asp Leu Asp Val Thr

20 25 30

Ala Pro Glu Asp Pro Asn Glu Glu Ala Val Ser Gln Ile Phe Pro Glu

35 40 45

Ser Val Met Leu Ala Val Gln Glu Gly Ile Asp Leu Phe Thr Phe Pro

50 55 60

Pro Ala Pro Gly Ser Pro Glu Pro Pro His Leu Ser Arg Gln Pro Glu

65 70 75 80

Gln Pro Glu Gln Arg Ala Leu Gly Pro Val Cys His Glu Ala Gly Phe

85 90 95

Pro Pro Ser

<210> 35

<211> 528

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 35

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Ser

35 40 45

Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Ser His Gly Met Leu Ala Leu

50 55 60

Lys Met Gly Ser Gly Leu Ser Leu Asp Gln Ala Gly Asn Leu Thr Ser

65 70 75 80

Asn Thr Ile Thr Val Ser Gln Pro Leu Lys Lys Thr Lys Ser Asn Ile

85 90 95

Thr Leu Glu Thr Ser Ala Pro Leu Thr Val Ser Ser Gly Ala Leu Thr

100 105 110

Met Ala Thr Thr Ser Pro Leu Val Val Ser Asp Asn Thr Leu Thr Met

115 120 125

Gln Ser Gln Ala Pro Leu Thr Val Gln Asp Ser Lys Leu Ser Ile Ala

130 135 140

Thr Lys Glu Pro Leu Thr Val Leu Asp Gly Lys Leu Ala Leu Gln Thr

145 150 155 160

Ser Ala Pro Leu Ser Ala Thr Asp Asn Asn Ala Leu Thr Ile Thr Ala

165 170 175

Ser Pro Pro Leu Thr Thr Ala Asn Gly Ser Leu Ala Val Thr Met Glu

180 185 190

Asn Pro Leu Tyr Asn Asn Asn Gly Lys Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly

195 200 205

Pro Leu Gln Val Ala Thr Asp Ser His Ala Leu Thr Leu Gly Thr Gly

210 215 220

Gln Gly Val Ala Val His Asn Asn Leu Leu His Thr Lys Val Thr Gly

225 230 235 240

Ala Ile Gly Phe Asp Thr Ser Gly Asn Met Glu Leu Lys Thr Gly Asp

245 250 255

Gly Leu Tyr Val Asp Ser Ala Gly Pro Asn Gln Lys Leu His Ile Asn

260 265 270

Leu Asn Thr Thr Lys Gly Leu Ala Phe Asp Asn Thr Ala Ile Thr Ile

275 280 285

Asn Ala Gly Lys Gly Leu Glu Phe Glu Thr Asp Ser Ser Asn Gly Asn

290 295 300

Pro Ile Lys Thr Lys Ile Gly Ser Gly Ile Gln Tyr Asn Thr Asn Gly

305 310 315 320

Ala Met Val Ala Lys Leu Gly Thr Gly Leu Ser Phe Asp Ser Ser Gly

325 330 335

Ala Ile Thr Met Gly Ser Ile Asn Asn Asp Arg Leu Thr Leu Trp Thr

340 345 350

Thr Pro Asp Pro Ser Pro Asn Cys Arg Ile Ala Ser Asp Lys Asp Cys

355 360 365

Lys Leu Thr Leu Ala Leu Thr Lys Cys Gly Ser Gln Ile Leu Gly Thr

370 375 380

Val Ser Ala Leu Ala Val Ser Gly Asn Met Ala Ser Ile Asn Gly Thr

385 390 395 400

Leu Ser Ser Val Asn Leu Val Leu Arg Phe Asp Asp Asn Gly Val Leu

405 410 415

Met Ser Asn Ser Ser Leu Asp Lys Gln Tyr Trp Asn Phe Arg Asn Gly

420 425 430

Asp Ser Thr Asn Gly Gln Pro Tyr Thr Tyr Ala Val Gly Phe Met Pro

435 440 445

Asn Leu Lys Ala Tyr Pro Lys Thr Gln Ser Lys Thr Ala Lys Ser Asn

450 455 460

Ile Val Ser Gln Val Tyr Leu Asn Gly Asp Lys Ser Lys Pro Leu His

465 470 475 480

Phe Thr Ile Thr Leu Asn Gly Thr Asp Glu Thr Asn Gln Val Ser Lys

485 490 495

Tyr Ser Ile Ser Phe Ser Trp Ser Trp Asn Ser Gly Gln Tyr Thr Asn

500 505 510

Asp Lys Phe Ala Thr Asn Ser Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu

515 520 525

<210> 36

<211> 324

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 36

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Thr

35 40 45

Leu Lys Cys Leu Thr Pro Leu Thr Thr Thr Gly Gly Ser Leu Gln Leu

50 55 60

Lys Val Gly Gly Gly Leu Thr Val Asp Asp Thr Asp Gly Thr Leu Gln

65 70 75 80

Glu Asn Ile Arg Ala Thr Ala Pro Ile Thr Lys Asn Asn His Ser Val

85 90 95

Glu Leu Ser Ile Gly Asn Gly Leu Glu Thr Gln Asn Asn Lys Leu Cys

100 105 110

Ala Lys Leu Gly Asn Gly Leu Lys Phe Asn Asn Gly Asp Ile Cys Ile

115 120 125

Lys Asp Ser Ile Asn Thr Leu Trp Thr Gly Ile Asn Pro Pro Pro Asn

130 135 140

Cys Gln Ile Val Glu Asn Thr Asn Thr Asn Asp Gly Lys Leu Thr Leu

145 150 155 160

Val Leu Val Lys Asn Gly Gly Leu Val Asn Gly Tyr Val Ser Leu Val

165 170 175

Gly Val Ser Asp Thr Val Asn Gln Met Phe Thr Gln Lys Thr Ala Asn

180 185 190

Ile Gln Leu Arg Leu Tyr Phe Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Thr Asp

195 200 205

Glu Ser Asp Leu Lys Ile Pro Leu Lys Asn Lys Ser Ser Thr Ala Thr

210 215 220

Ser Glu Thr Val Ala Ser Ser Lys Ala Phe Met Pro Ser Thr Thr Ala

225 230 235 240

Tyr Pro Phe Asn Thr Thr Thr Arg Asp Ser Glu Asn Tyr Ile His Gly

245 250 255

Ile Cys Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Asp Arg Ser Leu Phe Pro Leu Asn

260 265 270

Ile Ser Ile Met Leu Asn Ser Arg Met Ile Ser Ser Asn Val Ala Tyr

275 280 285

Ala Ile Gln Phe Glu Trp Asn Leu Asn Ala Ser Glu Ser Pro Glu Ser

290 295 300

Asn Ile Ala Thr Leu Thr Thr Ser Pro Phe Phe Phe Ser Tyr Ile Thr

305 310 315 320

Glu Asp Asp Asn

<210> 37

<211> 534

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 37

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Ser

35 40 45

Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Ser His Gly Met Leu Ala Leu

50 55 60

Lys Met Gly Ser Gly Leu Ser Leu Asp Gln Ala Gly Asn Leu Thr Ser

65 70 75 80

Asn Thr Ile Thr Val Ser Gln Pro Leu Lys Lys Thr Lys Ser Asn Ile

85 90 95

Thr Leu Glu Thr Ser Ala Pro Leu Thr Val Ser Ser Gly Ala Leu Thr

100 105 110

Met Ala Thr Thr Ser Pro Leu Val Val Ser Asp Asn Thr Leu Thr Met

115 120 125

Gln Ser Gln Ala Pro Leu Thr Val Gln Asp Ser Lys Leu Ser Ile Ala

130 135 140

Thr Lys Glu Pro Leu Thr Val Leu Asp Gly Lys Leu Ala Leu Gln Thr

145 150 155 160

Ser Ala Pro Leu Ser Ala Thr Asp Asn Asn Ala Leu Thr Ile Thr Ala

165 170 175

Ser Pro Pro Leu Thr Thr Ala Asn Gly Ser Leu Ala Val Thr Met Glu

180 185 190

Asn Pro Leu Tyr Asn Asn Asn Gly Lys Leu Gly Leu Lys Ile Gly Gly

195 200 205

Pro Leu Gln Val Ala Thr Asp Ser His Ala Leu Thr Leu Gly Thr Gly

210 215 220

Gln Gly Val Ala Val His Asn Asn Leu Leu His Thr Lys Val Thr Gly

225 230 235 240

Ala Ile Gly Phe Asp Thr Ser Gly Asn Met Glu Leu Lys Thr Gly Asp

245 250 255

Gly Leu Tyr Val Asp Ser Ala Gly Pro Asn Gln Lys Leu His Ile Asn

260 265 270

Leu Asn Thr Thr Lys Gly Leu Ala Phe Asp Asn Thr Ala Ile Thr Ile

275 280 285

Asn Ala Gly Lys Gly Leu Glu Phe Glu Thr Asp Ser Ser Asn Gly Asn

290 295 300

Pro Ile Lys Thr Lys Ile Gly Ser Gly Ile Gln Tyr Asn Thr Asn Gly

305 310 315 320

Ala Met Val Ala Lys Leu Gly Thr Gly Leu Ser Phe Asp Ser Ser Gly

325 330 335

Ala Ile Thr Met Gly Ser Ile Asn Asn Asp Arg Leu Thr Leu Trp Thr

340 345 350

Thr Pro Asp Pro Ser Pro Asn Cys Arg Ile Ala Ser Asp Lys Asp Cys

355 360 365

Lys Leu Thr Leu Ala Leu Thr Lys Cys Gly Ser Gln Ile Leu Gly Thr

370 375 380

Val Ser Ala Leu Ala Val Ser Gly Asn Met Ala Ser Ile Asn Gly Thr

385 390 395 400

Leu Ser Ser Val Asn Leu Val Leu Arg Phe Asp Asp Asn Gly Val Leu

405 410 415

Met Ser Asn Ser Ser Leu Asp Lys Gln Tyr Trp Asn Phe Arg Asn Gly

420 425 430

Asp Ser Thr Asn Gly Gln Pro Tyr Thr Tyr Ala Val Gly Phe Met Pro

435 440 445

Asn Leu Lys Ala Tyr Pro Lys Thr Gln Ser Lys Thr Ala Lys Ser Asn

450 455 460

Ile Val Ser Gln Val Tyr Leu Asn Gly Asp Lys Ser Lys Pro Leu His

465 470 475 480

Phe Thr Ile Thr Leu Asn Gly Thr Asp Glu Thr Asn Gln Val Ser Lys

485 490 495

Tyr Ser Ile Ser Phe Ser Trp Ser Trp Asn Ser Gly Gln Tyr Thr Asn

500 505 510

Asp Lys Phe Ala Thr Asn Ser Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu

515 520 525

Lys Lys Lys Lys Lys Lys

530

<210> 38

<211> 425

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 38

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Ser

35 40 45

Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Lys Asn Gly Glu Ile Thr Leu

50 55 60

Lys Leu Gly Glu Gly Val Asp Leu Asp Ser Ser Gly Lys Leu Ile Ser

65 70 75 80

Asn Thr Ala Thr Lys Ala Ala Ala Pro Leu Ser Phe Ser Asn Asn Thr

85 90 95

Ile Ser Leu Asn Met Asp His Pro Phe Tyr Thr Lys Asp Gly Lys Leu

100 105 110

Ser Leu Gln Val Ser Pro Pro Leu Asn Ile Leu Arg Thr Ser Ile Leu

115 120 125

Asn Thr Leu Ala Leu Gly Phe Gly Ser Gly Leu Gly Leu Arg Gly Ser

130 135 140

Ala Leu Ala Val Gln Leu Val Ser Pro Leu Thr Phe Asp Thr Asp Gly

145 150 155 160

Asn Ile Lys Leu Thr Leu Asp Arg Gly Leu His Val Thr Thr Gly Asp

165 170 175

Ala Ile Glu Ser Asn Ile Ser Trp Ala Lys Gly Leu Lys Phe Glu Asp

180 185 190

Gly Ala Ile Ala Thr Asn Ile Gly Asn Gly Leu Glu Phe Gly Ser Ser

195 200 205

Ser Thr Glu Thr Gly Val Asp Asp Ala Tyr Pro Ile Gln Val Lys Leu

210 215 220

Gly Ser Gly Leu Ser Phe Asp Ser Thr Gly Ala Ile Met Ala Gly Asn

225 230 235 240

Lys Glu Asp Asp Lys Leu Thr Leu Trp Thr Thr Pro Asp Pro Ser Pro

245 250 255

Asn Cys Gln Ile Leu Ala Glu Asn Asp Ala Lys Leu Thr Leu Cys Leu

260 265 270

Thr Lys Cys Gly Ser Gln Ile Leu Ala Thr Val Ser Val Leu Val Val

275 280 285

Gly Ser Gly Asn Leu Asn Pro Ile Thr Gly Thr Val Ser Ser Ala Gln

290 295 300

Val Phe Leu Arg Phe Asp Ala Asn Gly Val Leu Leu Thr Glu His Ser

305 310 315 320

Thr Leu Lys Lys Tyr Trp Gly Tyr Arg Gln Gly Asp Ser Ile Asp Gly

325 330 335

Thr Pro Tyr Thr Asn Ala Val Gly Phe Met Pro Asn Leu Lys Ala Tyr

340 345 350

Pro Lys Ser Gln Ser Ser Thr Thr Lys Asn Asn Ile Val Gly Gln Val

355 360 365

Tyr Met Asn Gly Asp Val Ser Lys Pro Met Leu Leu Thr Ile Thr Leu

370 375 380

Asn Gly Thr Asp Asp Ser Asn Ser Thr Tyr Ser Met Ser Phe Ser Tyr

385 390 395 400

Thr Trp Thr Asn Gly Ser Tyr Val Gly Ala Thr Phe Gly Ala Asn Ser

405 410 415

Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu

420 425

<210> 39

<211> 432

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 39

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Ser

35 40 45

Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Lys Asn Gly Glu Ile Thr Leu

50 55 60

Lys Leu Gly Glu Gly Val Asp Leu Asp Ser Ser Gly Lys Leu Ile Ser

65 70 75 80

Asn Thr Ala Thr Lys Ala Ala Ala Pro Leu Ser Phe Ser Asn Asn Thr

85 90 95

Ile Ser Leu Asn Met Asp His Pro Phe Tyr Thr Lys Asp Gly Lys Leu

100 105 110

Ser Leu Gln Val Ser Pro Pro Leu Asn Ile Leu Arg Thr Ser Ile Leu

115 120 125

Asn Thr Leu Ala Leu Gly Phe Gly Ser Gly Leu Gly Leu Arg Gly Ser

130 135 140

Ala Leu Ala Val Gln Leu Val Ser Pro Leu Thr Phe Asp Thr Asp Gly

145 150 155 160

Asn Ile Lys Leu Thr Leu Asp Arg Gly Leu His Val Thr Thr Gly Asp

165 170 175

Ala Ile Glu Ser Asn Ile Ser Trp Ala Lys Gly Leu Lys Phe Glu Asp

180 185 190

Gly Ala Ile Ala Thr Asn Ile Gly Asn Gly Leu Glu Phe Gly Ser Ser

195 200 205

Ser Thr Glu Thr Gly Val Asp Asp Ala Tyr Pro Ile Gln Val Lys Leu

210 215 220

Gly Ser Gly Leu Ser Phe Asp Ser Thr Gly Ala Ile Met Ala Gly Asn

225 230 235 240

Lys Glu Asp Asp Lys Leu Thr Leu Trp Thr Thr Pro Asp Pro Ser Pro

245 250 255

Asn Cys Gln Ile Leu Ala Glu Asn Asp Ala Lys Leu Thr Leu Cys Leu

260 265 270

Thr Lys Cys Gly Ser Gln Ile Leu Ala Thr Val Ser Val Leu Val Val

275 280 285

Gly Ser Gly Asn Leu Asn Pro Ile Thr Gly Thr Val Ser Ser Ala Gln

290 295 300

Val Phe Leu Arg Phe Asp Ala Asn Gly Val Leu Leu Thr Glu His Ser

305 310 315 320

Thr Leu Lys Lys Tyr Trp Gly Tyr Arg Gln Gly Asp Ser Ile Asp Gly

325 330 335

Thr Pro Tyr Thr Asn Ala Val Gly Phe Met Pro Asn Leu Lys Ala Tyr

340 345 350

Pro Lys Ser Gln Ser Ser Thr Thr Lys Asn Asn Ile Val Gly Gln Val

355 360 365

Tyr Met Asn Gly Asp Val Ser Lys Pro Met Leu Leu Thr Ile Thr Leu

370 375 380

Asn Gly Thr Asp Asp Ser Asn Ser Thr Tyr Ser Met Ser Phe Ser Tyr

385 390 395 400

Thr Trp Thr Asn Gly Ser Tyr Val Gly Ala Thr Phe Gly Ala Asn Ser

405 410 415

Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys

420 425 430

<210> 40

<211> 441

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полипептид волокна

<400> 40

Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro Val Tyr Pro

1 5 10 15

Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu Thr Pro Pro

20 25 30

Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly Val Leu Ser

35 40 45

Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Lys Asn Gly Glu Ile Thr Leu

50 55 60

Lys Leu Gly Glu Gly Val Asp Leu Asp Ser Ser Gly Lys Leu Ile Ser

65 70 75 80

Asn Thr Ala Thr Lys Ala Ala Ala Pro Leu Ser Phe Ser Asn Asn Thr

85 90 95

Ile Ser Leu Asn Met Asp His Pro Phe Tyr Thr Lys Asp Gly Lys Leu

100 105 110

Ser Leu Gln Val Ser Pro Pro Leu Asn Ile Leu Arg Thr Ser Ile Leu

115 120 125

Asn Thr Leu Ala Leu Gly Phe Gly Ser Gly Leu Gly Leu Arg Gly Ser

130 135 140

Ala Leu Ala Val Gln Leu Val Ser Pro Leu Thr Phe Asp Thr Asp Gly

145 150 155 160

Asn Ile Lys Leu Thr Leu Asp Arg Gly Leu His Val Thr Thr Gly Asp

165 170 175

Ala Ile Glu Ser Asn Ile Ser Trp Ala Lys Gly Leu Lys Phe Glu Asp

180 185 190

Gly Ala Ile Ala Thr Asn Ile Gly Asn Gly Leu Glu Phe Gly Ser Ser

195 200 205

Ser Thr Glu Thr Gly Val Asp Asp Ala Tyr Pro Ile Gln Val Lys Leu

210 215 220

Gly Ser Gly Leu Ser Phe Asp Ser Thr Gly Ala Ile Met Ala Gly Asn

225 230 235 240

Lys Glu Asp Asp Lys Leu Thr Leu Trp Thr Thr Pro Asp Pro Ser Pro

245 250 255

Asn Cys Gln Ile Leu Ala Glu Asn Asp Ala Lys Leu Thr Leu Cys Leu

260 265 270

Thr Lys Cys Gly Ser Gln Ile Leu Ala Thr Val Ser Val Leu Val Val

275 280 285

Gly Ser Gly Asn Leu Asn Pro Ile Thr Gly Thr Val Ser Ser Ala Gln

290 295 300

Val Phe Leu Arg Phe Asp Ala Asn Gly Val Leu Leu Thr Glu His Ser

305 310 315 320

Thr Leu Lys Lys Tyr Trp Gly Tyr Arg Gln Gly Asp Ser Ile Asp Gly

325 330 335

Thr Pro Tyr Thr Asn Ala Val Gly Phe Met Pro Asn Leu Lys Ala Tyr

340 345 350

Pro Lys Ser Gln Ser Ser Thr Thr Lys Asn Asn Ile Val Gly Gln Val

355 360 365

Tyr Met Asn Gly Asp Val Ser Lys Pro Met Leu Leu Thr Ile Thr Leu

370 375 380

Asn Gly Thr Asp Asp Ser Gly Gly Ser Ser Gly Lys Lys Lys Lys Lys

385 390 395 400

Lys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Ser Thr Tyr Ser Met Ser Phe Ser Tyr

405 410 415

Thr Trp Thr Asn Gly Ser Tyr Val Gly Ala Thr Phe Gly Ala Asn Ser

420 425 430

Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu

435 440

<210> 41

<211> 1608

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пробазин-E1

<400> 41

tcgagcgacg gtatcgataa gcttggagct tatgatagca tcttgttctt agtctttttc

60

ttaataggga cataaagccc acaaataaaa atatgcctga agaatgggac aggcattggg

120

cattgtccat gcctagtaaa gtactccaag aacctatttg tatactagat gacacaatgt

180

tctagccaag cttggtagtc atcatgttta aacatctacc attccagtta agaaaatatg

240

atagcatctt gttcttagtc tttttcttaa tagggacata aagcccacaa ataaaaatat

300

gcctgaagaa tgggacaggc attgggcatt gtccatgcct agtaaagtac tccaagaacc

360

tatttgtata ctagatgaca caatgtcaat gtctgtgtac aactgccaac tgggatgcaa

420

gacactgccc atgccaatca tcctgaaaag cagctataaa aagcaggaag ctactctgca

480

ccttgtcagt gaggtccaga tacctccctc gagcggccgc gacgcgcagt gtatttatac

540

ccggtgagtt cctcaagagg ccactcttga gtgccagcga gtagagtttt ctcctccgag

600

ccgctccgac accgggactg aaaatgagac atattatctg ccacggaggt gttattaccg

660

aagaaatggc cgccagtctt ttggaccagc tgatcgaaga ggtactggct gataatcttc

720

cacctcctag ccattttgaa ccacctaccc ttcacgaact gtatgattta gacgtgacgg

780

cccccgaaga tcccaacgag gaggcggttt cgcagatttt tcccgagtct gtaatgttgg

840

cggtgcagga agggattgac ttattcactt ttccgccggc gcccggttct ccggagccgc

900

ctcacctttc ccggcagccc gagcagccgg agcagagagc cttgggtccg gtttctatgc

960

caaaccttgt gccggaggtg atcgatctta cctgccacga ggctggcttt ccacccagtg

1020

acgacgagga tgaagagggt gaggagtttg tgttagatta tgtggagcac cccgggcacg

1080

gttgcaggtc ttgtcattat caccggagga atacggggga cccagatatt atgtgttcgc

1140

tttgctatat gaggacctgt ggcatgtttg tctacagtaa gtgaaaatta tgggcagtcg

1200

gtgatagagt ggtgggtttg gtgtggtaat ttttttttaa tttttacagt tttgtggttt

1260

aaagaatttt gtattgtgat tttttaaaag gtcctgtgtc tgaacctgag cctgagcccg

1320

agccagaacc ggagcctgca agacctaccc ggcgtcctaa attggtgcct gctatcctga

1380

gacgcccgac atcacctgtg tctagagaat gcaatagtag tacggatagc tgtgactccg

1440

gtccttctaa cacacctcct gagatacacc cggtggtccc gctgtgcccc attaaaccag

1500

ttgccgtgag agttggtggg cgtcgccagg ctgtggaatg tatcgaggac ttgcttaacg

1560

agtctgggca acctttggac ttgagctgta aacgccccag gccataag

1608

<210> 42

<211> 967

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 42

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Ser Ser Cys Ser Ser Gly Gly

145 150 155 160

Thr Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr

165 170 175

His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn

180 185 190

Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu

195 200 205

Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser

210 215 220

Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys

225 230 235 240

Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr

245 250 255

Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu

260 265 270

Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met

275 280 285

Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp

290 295 300

Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys

305 310 315 320

Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn

325 330 335

Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr

340 345 350

Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln

355 360 365

Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr

370 375 380

Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met

385 390 395 400

Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu

405 410 415

Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly

420 425 430

Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly

435 440 445

Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg

450 455 460

Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn

465 470 475 480

Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu

485 490 495

Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn

500 505 510

Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu

515 520 525

Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met

530 535 540

Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr

545 550 555 560

Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln

565 570 575

Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly

580 585 590

Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu

595 600 605

Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys

610 615 620

Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn

625 630 635 640

Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln

645 650 655

Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro

660 665 670

Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala

675 680 685

Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro

690 695 700

Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile

705 710 715 720

Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val

725 730 735

Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu

740 745 750

Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly

755 760 765

Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln

770 775 780

Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu

785 790 795 800

Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met

805 810 815

Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val

820 825 830

Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala

835 840 845

Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro

850 855 860

Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu

865 870 875 880

Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser

885 890 895

Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser

900 905 910

Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro

915 920 925

Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His

930 935 940

Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe

945 950 955 960

Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

965

<210> 43

<211> 955

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 43

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Ser Cys Ser Ser Gly Gly Thr Pro Lys Leu Val Leu

275 280 285

Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr

290 295 300

Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln

305 310 315 320

Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile

325 330 335

Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly

340 345 350

Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr

355 360 365

Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg

370 375 380

Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val

385 390 395 400

Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys

405 410 415

Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys

420 425 430

Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr

435 440 445

Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu

450 455 460

Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile

465 470 475 480

Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu

485 490 495

Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val

500 505 510

Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser

515 520 525

Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala

530 535 540

Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro

545 550 555 560

Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu

565 570 575

Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val

580 585 590

Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly

595 600 605

Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro

610 615 620

Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp

625 630 635 640

Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu

645 650 655

Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser

660 665 670

Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr

675 680 685

Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr

690 695 700

Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr

705 710 715 720

Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly

725 730 735

Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val

740 745 750

Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp

755 760 765

Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe

770 775 780

Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn

785 790 795 800

Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp

805 810 815

Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val

820 825 830

Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn

835 840 845

Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln

850 855 860

Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser

865 870 875 880

Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu

885 890 895

Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro

900 905 910

Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val

915 920 925

Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu

930 935 940

Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 44

<211> 964

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 44

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Ser Ser Gly Gly Thr Glu Glu

145 150 155 160

Glu Glu Gln Leu Pro Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr

165 170 175

Ala Gln Ala Pro Phe Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln

180 185 190

Ile Gly Thr Asn Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala

195 200 205

Asp Lys Thr Tyr Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn

210 215 220

Glu Ala Glu Ser Ser Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr

225 230 235 240

Pro Met Lys Pro Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn

245 250 255

Gly Gly Gln Gly Val Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln

260 265 270

Val Glu Met Gln Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala

275 280 285

Asn Ala Ile Gln Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met

290 295 300

Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp

305 310 315 320

Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn

325 330 335

Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser

340 345 350

Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala

355 360 365

Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu

370 375 380

Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln

385 390 395 400

Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly

405 410 415

Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly

420 425 430

Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly

435 440 445

Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile

450 455 460

Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu

465 470 475 480

Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys

485 490 495

Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr

500 505 510

Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys

515 520 525

Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val

530 535 540

Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met

545 550 555 560

Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln

565 570 575

Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr

580 585 590

Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser

595 600 605

Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser

610 615 620

Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser

625 630 635 640

Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn

645 650 655

Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala

660 665 670

Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg

675 680 685

Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly

690 695 700

Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu

705 710 715 720

Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr

725 730 735

Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro

740 745 750

Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val

755 760 765

Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala

770 775 780

Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys

785 790 795 800

Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln

805 810 815

Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile

820 825 830

His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met

835 840 845

Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly

850 855 860

Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg

865 870 875 880

Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala

885 890 895

Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala

900 905 910

Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu

915 920 925

Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His

930 935 940

Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly

945 950 955 960

Asn Ala Thr Thr

<210> 45

<211> 952

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 45

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Ser Gly Gly Thr Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu

275 280 285

Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly

290 295 300

Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro

305 310 315 320

Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met

325 330 335

Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser

340 345 350

Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser

355 360 365

Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser

370 375 380

Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile

385 390 395 400

Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu

405 410 415

Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn

420 425 430

Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu

435 440 445

Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu

450 455 460

Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr

465 470 475 480

Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp

485 490 495

Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly

500 505 510

Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr

515 520 525

Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala Gly Leu Arg

530 535 540

Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile

545 550 555 560

Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro

565 570 575

Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val

580 585 590

Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile

595 600 605

Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His

610 615 620

Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp

625 630 635 640

Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile

645 650 655

Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp

660 665 670

Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr

675 680 685

Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser

690 695 700

Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys

705 710 715 720

Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg

725 730 735

Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu

740 745 750

Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val

755 760 765

Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro

770 775 780

Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro

785 790 795 800

Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln

805 810 815

Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu

820 825 830

Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr

835 840 845

Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe

850 855 860

Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met

865 870 875 880

Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn

885 890 895

Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu

900 905 910

Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val

915 920 925

His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro

930 935 940

Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950

<210> 46

<211> 1033

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 46

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Ser Thr Gly Glu Ile Pro Ala

145 150 155 160

Pro Leu Ala Gly Thr Val Ser Lys Ile Leu Val Lys Glu Gly Asp Thr

165 170 175

Val Lys Ala Gly Gln Thr Val Leu Val Leu Glu Ala Met Lys Met Glu

180 185 190

Thr Glu Ile Asn Ala Pro Thr Asp Gly Lys Val Glu Lys Val Leu Val

195 200 205

Lys Glu Arg Asp Ala Val Gln Gly Gly Gln Gly Leu Ile Lys Ile Gly

210 215 220

Gly Gly Thr Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro Gln Gln Arg Asn Gly Lys

225 230 235 240

Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe Ala Gly Glu Ala Ile Asn

245 250 255

Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn

260 265 270

Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly

275 280 285

Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser Val Ala Gly Gly Arg Val

290 295 300

Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg

305 310 315 320

Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val Met Val Glu Gln Asn Gly

325 330 335

Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn

340 345 350

Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser

355 360 365

Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro

370 375 380

Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln Ser Met

385 390 395 400

Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu

405 410 415

Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala

420 425 430

Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu

435 440 445

Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe

450 455 460

Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile

465 470 475 480

Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro

485 490 495

Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Ala Thr

500 505 510

Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr Phe Ala

515 520 525

Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn

530 535 540

Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu

545 550 555 560

Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser

565 570 575

Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro

580 585 590

Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp

595 600 605

Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala Gly Leu

610 615 620

Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His

625 630 635 640

Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu

645 650 655

Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met

660 665 670

Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser

675 680 685

Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala

690 695 700

His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn

705 710 715 720

Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro

725 730 735

Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn

740 745 750

Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu

755 760 765

Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly

770 775 780

Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys

785 790 795 800

Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp

805 810 815

Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly

820 825 830

Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu

835 840 845

Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile

850 855 860

Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln

865 870 875 880

Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln

885 890 895

Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr

900 905 910

Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro

915 920 925

Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys

930 935 940

Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe

945 950 955 960

Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala

965 970 975

Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp

980 985 990

Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg

995 1000 1005

Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg

1010 1015 1020

Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

1025 1030

<210> 47

<211> 1021

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 47

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Thr Gly Glu Ile Pro Ala Pro Leu Ala Gly Thr Val

275 280 285

Ser Lys Ile Leu Val Lys Glu Gly Asp Thr Val Lys Ala Gly Gln Thr

290 295 300

Val Leu Val Leu Glu Ala Met Lys Met Glu Thr Glu Ile Asn Ala Pro

305 310 315 320

Thr Asp Gly Lys Val Glu Lys Val Leu Val Lys Glu Arg Asp Ala Val

325 330 335

Gln Gly Gly Gln Gly Leu Ile Lys Ile Gly Gly Gly Thr Pro Lys Leu

340 345 350

Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu

355 360 365

Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly

370 375 380

Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn

385 390 395 400

Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu

405 410 415

Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg

420 425 430

Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg

435 440 445

Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro

450 455 460

Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn

465 470 475 480

Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala

485 490 495

Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp

500 505 510

Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala

515 520 525

Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser

530 535 540

Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn

545 550 555 560

Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg

565 570 575

Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg

580 585 590

Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg

595 600 605

Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr

610 615 620

Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn

625 630 635 640

Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys

645 650 655

Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val

660 665 670

Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe

675 680 685

Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg

690 695 700

Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn

705 710 715 720

Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile

725 730 735

Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu

740 745 750

Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr

755 760 765

Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn

770 775 780

His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp

785 790 795 800

Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg

805 810 815

Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys

820 825 830

Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln

835 840 845

Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe

850 855 860

Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr

865 870 875 880

Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly

885 890 895

Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro

900 905 910

Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile

915 920 925

Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe

930 935 940

Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn

945 950 955 960

Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val

965 970 975

Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe

980 985 990

Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val

995 1000 1005

Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

1010 1015 1020

<210> 48

<211> 1015

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 48

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Ser Ser Asn Phe Thr Arg Glu Gly Asn Val Thr Tyr

275 280 285

Lys Glu Glu Met Asp Lys Val Lys Asn Cys Ser Phe Asn Val Thr Thr

290 295 300

Gly Ile Arg Asp Lys Lys Gln Lys Val Asn Ala Leu Phe Tyr Arg Leu

305 310 315 320

Asp Ile Thr Pro Leu Asp Glu Asn Asn Asn Asn Ser Ser Glu Tyr Arg

325 330 335

Leu Ile Asn Ser Gly Gly Thr Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp

340 345 350

Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys

355 360 365

Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn

370 375 380

Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr

385 390 395 400

Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln

405 410 415

Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr

420 425 430

Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met

435 440 445

Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu

450 455 460

Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly

465 470 475 480

Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly

485 490 495

Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg

500 505 510

Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn

515 520 525

Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu

530 535 540

Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn

545 550 555 560

Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu

565 570 575

Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met

580 585 590

Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr

595 600 605

Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln

610 615 620

Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly

625 630 635 640

Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu

645 650 655

Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys

660 665 670

Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn

675 680 685

Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln

690 695 700

Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro

705 710 715 720

Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala

725 730 735

Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro

740 745 750

Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile

755 760 765

Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val

770 775 780

Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu

785 790 795 800

Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly

805 810 815

Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln

820 825 830

Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu

835 840 845

Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met

850 855 860

Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val

865 870 875 880

Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala

885 890 895

Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro

900 905 910

Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu

915 920 925

Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser

930 935 940

Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser

945 950 955 960

Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro

965 970 975

Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His

980 985 990

Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe

995 1000 1005

Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

1010 1015

<210> 49

<211> 987

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 49

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Ser Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile

275 280 285

Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Gln Leu Leu Arg Arg Glu Val Tyr

290 295 300

Asp Phe Ala Phe Arg Asp Leu Ser Gly Gly Thr Pro Lys Leu Val Leu

305 310 315 320

Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr His Leu Ser Tyr

325 330 335

Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met Leu Gly Gln Gln

340 345 350

Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg Asp Asn Phe Ile

355 360 365

Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly

370 375 380

Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln Asp Arg Asn Thr

385 390 395 400

Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly Asp Arg Thr Arg

405 410 415

Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr Asp Pro Asp Val

420 425 430

Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu Pro Asn Tyr Cys

435 440 445

Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr Gln Ala Ile Lys

450 455 460

Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala Gln Asp Asn Thr

465 470 475 480

Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu

485 490 495

Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile

500 505 510

Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu

515 520 525

Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn Lys Arg Val Val

530 535 540

Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser

545 550 555 560

Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His His Arg Asn Ala

565 570 575

Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro

580 585 590

Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu

595 600 605

Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val

610 615 620

Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly

625 630 635 640

Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro

645 650 655

Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp

660 665 670

Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu

675 680 685

Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser

690 695 700

Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr

705 710 715 720

Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr

725 730 735

Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr

740 745 750

Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly

755 760 765

Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val

770 775 780

Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp

785 790 795 800

Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe

805 810 815

Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn

820 825 830

Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp

835 840 845

Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn Ser Gly Phe Val

850 855 860

Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn

865 870 875 880

Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln

885 890 895

Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser

900 905 910

Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu

915 920 925

Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro

930 935 940

Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu Val Phe Asp Val

945 950 955 960

Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu

965 970 975

Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

980 985

<210> 50

<211> 959

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 50

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Asp Glu Asp Asp Thr Gln Val Gln Val

130 135 140

Ala Ala Glu Asp Asp Gln Asp Asp Asp Glu Glu Glu Glu Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Gln Arg Asn Gly Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro Phe

165 170 175

Ala Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn Gly

180 185 190

Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr Gln

195 200 205

Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser Ser

210 215 220

Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro Cys

225 230 235 240

Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly Val

245 250 255

Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln Phe

260 265 270

Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln Pro

275 280 285

Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp Thr

290 295 300

His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala Met

305 310 315 320

Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe Arg

325 330 335

Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly

340 345 350

Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu Gln

355 360 365

Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile Gly

370 375 380

Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser Tyr

385 390 395 400

Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu Leu

405 410 415

Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Val Thr Asp Thr Tyr

420 425 430

Gln Ala Ile Lys Ala Thr Asn Gly Asn Gly Gly Ala Thr Thr Trp Ala

435 440 445

Gln Asp Asn Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val Gly Asn Asn

450 455 460

Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg Asn Phe Leu

465 470 475 480

Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys Tyr Asn Pro

485 490 495

Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp Tyr Met Asn

500 505 510

Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile Asn Leu Gly

515 520 525

Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro Phe Asn His

530 535 540

His Arg Asn Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu Gly Asn Gly

545 550 555 560

Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe Phe Ala Ile

565 570 575

Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu Trp Asn Phe

580 585 590

Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly Asn Asp Leu

595 600 605

Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys Leu Tyr Ala

610 615 620

Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu Glu Ala Met

625 630 635 640

Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu Ser Ala

645 650 655

Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn Val Pro Ile

660 665 670

Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp Ala Phe Thr

675 680 685

Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly Tyr Asp Pro

690 695 700

Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly Thr Phe Tyr

705 710 715 720

Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp Ser Ser Val

725 730 735

Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile

740 745 750

Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln Cys Asn Met

755 760 765

Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr Asn Ile Gly

770 775 780

Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg Met Tyr Ser

785 790 795 800

Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val Asp Asp Thr

805 810 815

Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln His Asn Asn

820 825 830

Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu Gly Gln Ala

835 840 845

Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr Ala Val Asp

850 855 860

Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu Trp Arg Ile

865 870 875 880

Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr Asp Leu Gly

885 890 895

Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe

900 905 910

Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val Leu Phe Glu

915 920 925

Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly Val Ile Glu

930 935 940

Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala Thr Thr

945 950 955

<210> 51

<211> 962

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гексоновый полипептид

<400> 51

Met Ala Thr Pro Ser Met Met Pro Gln Trp Ser Tyr Met His Ile Ser

1 5 10 15

Gly Gln Asp Ala Ser Glu Tyr Leu Ser Pro Gly Leu Val Gln Phe Ala

20 25 30

Arg Ala Thr Glu Thr Tyr Phe Ser Leu Asn Asn Lys Phe Arg Asn Pro

35 40 45

Thr Val Ala Pro Thr His Asp Val Thr Thr Asp Arg Ser Gln Arg Leu

50 55 60

Thr Leu Arg Phe Ile Pro Val Asp Arg Glu Asp Thr Ala Tyr Ser Tyr

65 70 75 80

Lys Ala Arg Phe Thr Leu Ala Val Gly Asp Asn Arg Val Leu Asp Met

85 90 95

Ala Ser Thr Tyr Phe Asp Ile Arg Gly Val Leu Asp Arg Gly Pro Thr

100 105 110

Phe Lys Pro Tyr Ser Gly Thr Ala Tyr Asn Ala Leu Ala Pro Lys Gly

115 120 125

Ala Pro Asn Ser Cys Glu Trp Glu Gln Asn Glu Thr Ala Gln Val Asp

130 135 140

Ala Gln Glu Leu Asp Glu Glu Glu Asn Glu Ala Asn Glu Ala Gln Ala

145 150 155 160

Arg Glu Gln Glu Gln Ala Lys Lys Thr His Val Tyr Ala Gln Ala Pro

165 170 175

Leu Ser Gly Glu Ala Ile Asn Lys Asn Gly Leu Gln Ile Gly Thr Asn

180 185 190

Gly Ala Ala Thr Glu Gly Asn Lys Glu Ile Tyr Ala Asp Lys Thr Tyr

195 200 205

Gln Pro Glu Pro Gln Ile Gly Glu Ser Gln Trp Asn Glu Ala Glu Ser

210 215 220

Ser Val Ala Gly Gly Arg Val Leu Lys Lys Thr Thr Pro Met Lys Pro

225 230 235 240

Cys Tyr Gly Ser Tyr Ala Arg Pro Thr Asn Ser Asn Gly Gly Gln Gly

245 250 255

Val Met Val Glu Gln Asn Gly Lys Leu Glu Ser Gln Val Glu Met Gln

260 265 270

Phe Phe Ser Thr Ser Val Asn Ala Met Asn Glu Ala Asn Ala Ile Gln

275 280 285

Pro Lys Leu Val Leu Tyr Ser Glu Asp Val Asn Met Glu Thr Pro Asp

290 295 300

Thr His Leu Ser Tyr Lys Pro Gly Lys Ser Asp Asp Asn Ser Lys Ala

305 310 315 320

Met Leu Gly Gln Gln Ser Met Pro Asn Arg Pro Asn Tyr Ile Ala Phe

325 330 335

Arg Asp Asn Phe Ile Gly Leu Met Tyr Tyr Asn Ser Thr Gly Asn Met

340 345 350

Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser Gln Leu Asn Ala Val Val Asp Leu

355 360 365

Gln Asp Arg Asn Thr Glu Leu Ser Tyr Gln Leu Leu Leu Asp Ser Ile

370 375 380

Gly Asp Arg Thr Arg Tyr Phe Ser Met Trp Asn Gln Ala Val Asp Ser

385 390 395 400

Tyr Asp Pro Asp Val Arg Ile Ile Glu Asn His Gly Thr Glu Asp Glu

405 410 415

Leu Pro Asn Tyr Cys Phe Pro Leu Gly Gly Ile Gly Ile Thr Asp Thr

420 425 430

Phe Gln Ala Val Lys Thr Thr Ala Ala Asn Gly Asp Gln Gly Asn Thr

435 440 445

Thr Trp Gln Lys Asp Ser Thr Phe Ala Glu Arg Asn Glu Ile Gly Val

450 455 460

Gly Asn Asn Phe Ala Met Glu Ile Asn Leu Asn Ala Asn Leu Trp Arg

465 470 475 480

Asn Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu Lys

485 490 495

Tyr Asn Pro Thr Asn Val Glu Ile Ser Asp Asn Pro Asn Thr Tyr Asp

500 505 510

Tyr Met Asn Lys Arg Val Val Ala Pro Gly Leu Val Asp Cys Tyr Ile

515 520 525

Asn Leu Gly Ala Arg Trp Ser Leu Asp Tyr Met Asp Asn Val Asn Pro

530 535 540

Phe Asn His Pro Arg His Ala Gly Leu Arg Tyr Arg Ser Met Leu Leu

545 550 555 560

Gly Asn Gly Arg Tyr Val Pro Phe His Ile Gln Val Pro Gln Lys Phe

565 570 575

Phe Ala Ile Lys Asn Leu Leu Leu Leu Pro Gly Ser Tyr Thr Tyr Glu

580 585 590

Trp Asn Phe Arg Lys Asp Val Asn Met Val Leu Gln Ser Ser Leu Gly

595 600 605

Asn Asp Leu Arg Val Asp Gly Ala Ser Ile Lys Phe Asp Ser Ile Cys

610 615 620

Leu Tyr Ala Thr Phe Phe Pro Met Ala His Asn Thr Ala Ser Thr Leu

625 630 635 640

Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr

645 650 655

Leu Ser Ala Ala Asn Met Leu Tyr Pro Ile Pro Ala Asn Ala Thr Asn

660 665 670

Val Pro Ile Ser Ile Pro Ser Arg Asn Trp Ala Ala Phe Arg Gly Trp

675 680 685

Ala Phe Thr Arg Leu Lys Thr Lys Glu Thr Pro Ser Leu Gly Ser Gly

690 695 700

Tyr Asp Pro Tyr Tyr Thr Tyr Ser Gly Ser Ile Pro Tyr Leu Asp Gly

705 710 715 720

Thr Phe Tyr Leu Asn His Thr Phe Lys Lys Val Ala Ile Thr Phe Asp

725 730 735

Ser Ser Val Ser Trp Pro Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu

740 745 750

Phe Glu Ile Lys Arg Ser Val Asp Gly Glu Gly Tyr Asn Val Ala Gln

755 760 765

Cys Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn Tyr

770 775 780

Asn Ile Gly Tyr Gln Gly Phe Tyr Ile Pro Glu Ser Tyr Lys Asp Arg

785 790 795 800

Met Tyr Ser Phe Phe Arg Asn Phe Gln Pro Met Ser Arg Gln Val Val

805 810 815

Asp Asp Thr Lys Tyr Lys Asp Tyr Gln Gln Val Gly Ile Ile His Gln

820 825 830

His Asn Asn Ser Gly Phe Val Gly Tyr Leu Ala Pro Thr Met Arg Glu

835 840 845

Gly Gln Ala Tyr Pro Ala Asn Val Pro Tyr Pro Leu Ile Gly Lys Thr

850 855 860

Ala Val Asp Ser Ile Thr Gln Lys Lys Phe Leu Cys Asp Arg Thr Leu

865 870 875 880

Trp Arg Ile Pro Phe Ser Ser Asn Phe Met Ser Met Gly Ala Leu Thr

885 890 895

Asp Leu Gly Gln Asn Leu Leu Tyr Ala Asn Ser Ala His Ala Leu Asp

900 905 910

Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp Glu Pro Thr Leu Leu Tyr Val

915 920 925

Leu Phe Glu Val Phe Asp Val Val Arg Val His Gln Pro His Arg Gly

930 935 940

Val Ile Glu Thr Val Tyr Leu Arg Thr Pro Phe Ser Ala Gly Asn Ala

945 950 955 960

Thr Thr

<---

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к мультивалентным соединениям, связывающим лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), которые вводят млекопитающему, имеющему злокачественное новообразование, для лечения млекопитающего. В некоторых случаях мультивалентное PD-L1-связывающее соединение может включать два или более полипептида белка программируемой гибели 1 (PD-1) (и/или их фрагмента, обладающих способностью связываться с PD-L1). Изобретение позволяет повышать эффективность PD-1 для нейтрализации PD-L1, присутствующего на PD-L1-положительных злокачественных клетках, в терапии злокачественных новообразований. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 20 ил., 7 пр.

1. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), содержащее множество аминокислотных цепей, где каждая аминокислотная цепь содержит по меньшей мере один полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1), где каждая аминокислотная цепь, содержащая по меньшей мере один полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1), связана с рекомбинантным аденовирусом (Ad) и множество аминокислотных цепей находится на полипептиде оболочки рекомбинантного Ad и где рекомбинантный Ad содержит гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 и по меньшей мере один полипептид гипервариабельной области (HVR) гексона капсида из Ad штамма Ad57.

2. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 содержат полипептиды HVR 1-7 из Ad штамма Ad57.

3. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где гексоновые полипептиды капсида Ad штамма Ad6 содержат полипептиды HVR 2-6 из Ad штамма Ad57.

4. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где полипептид белка программируемой гибели 1 (PD-1) является PD-1 человека или PD-1 мыши.

5. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где рекомбинантный Ad дополнительно модифицирован так, чтобы содержать гетерологичные полипептиды, выбранные из нацеливающих полипептидов, терапевтических полипептидов и антигенов.

6. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.5, где нацеливающий полипептид выбран из полипептида гемагглютинина вируса кори (MVH), полипептида слияния вируса кори (MVF) и полипептида гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSVG).

7. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.5, где терапевтический полипептид выбран из полипептида лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептида лиганда OX40 (OX40L), полипептида лиганда CD40 (CD40L) и полипептида гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ).

8. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где полипептид PD-1 слит с витамин K-зависимым гамма-карбоксиглутаминовым доменом одноцепочечного полипептида антитела против фактора X (доменом GLA полипептида FX).

9. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где каждая аминокислотная цепь содержит нацеливающую молекулу, выбранную из полипептида гемагглютинина вируса кори (MVH), полипептида слияния вируса кори (MVF) и полипептида гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSVG).

10. Мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1, где каждая аминокислотная цепь содержит один или более терапевтических полипептидов, выбранных из полипептида лиганда 4-1BB (4-1BBL), полипептида лиганда OX40 (OX40L), полипептида лиганда CD40 (CD40L) и полипептида гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ).

11. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения злокачественных новообразований, которые являются положительными в отношении экспрессии PD-L1, содержащая мультивалентное соединение, связывающее лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

12. Применение мультивалентного соединения, связывающего лиганд белка программируемой гибели 1 (PD-L1), по любому из пп.1-10 в получении лекарственного средства для применения в лечении злокачественного новообразования у нуждающегося в этом индивидуума, где злокачественные клетки указанного злокачественного новообразования являются положительными в отношении экспрессии PD-L1.