ПОЛУЧЕНИЕ ЛАТАНОПРОСТИНА БУНОДА НЕОБХОДИМОГО ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ЗАДАННОГО КАЧЕСТВА ПОСРЕДСТВОМ ХРОМАТОГРАФИИ С ГРАВИТАЦИОННЫМ ЭЛЮИРОВАНИЕМ Российский патент 2020 года по МПК C07C405/00 B01D15/08 

Настоящее изобретение относится к получению латанопростина бунода формулы (I) со степенью чистоты более 95%, а также к получению нового латанопростина бунода высокой чистоты (>99,2%).

Глаукома представляет собой повреждение зрительного нерва вследствие повышенного глазного давления, которое вызывает нарушение зрения или, при отсутствии лечения, необратимую слепоту. Распространенность заболевания является высокой и увеличивается с возрастом. Согласно оценкам, по всему миру приблизительно 60,5 миллиона человек были поражены первичной открытоугольной глаукомой или первичной закрытоугольной глаукомой в 2013. Количество людей, страдающих от глаукомы, будет значительно увеличиваться с возрастанием среднего возраста. (Ophtalmology, 2014, 121, 2081-2090).

Лечение глаукомы можно осуществлять путем снижения продуцирования водянистой влаги (с помощью блокаторов бета-рецепторов, агонистов альфа-2-рецепторов, местных блокаторов карбоангидразы) или путем увеличения увеосклерального оттока с помощью глазных капель, содержащих активный ингредиент - простагландин.

Латанопрост был первым производным простагландина, применяемым в лечении глаукомы (Stjernschantz J, Resul B. Phenyl substituted prostaglandin analogs for glaucoma treatment Drugs Future. 1992; 17, 691-704), после которого последовали другие производные PGF2-альфа (травопрост, биматопрост, тафлупрост, унопростон), (Az Egészségügyi Minisztérium szakmai protokollja: A glaukóma kezeléséről /Protocol of the Ministry of Health of Hungary: About the treatment of glaucoma/; Süveges, Ildikó: Szemészet, Medicina Könyvkiadó, 2010: A glaukóma típusai és kezelésük/Süveges, Ildikó, в книге Ophtalmology, Medicina Publisher, 2010: Types of glaucoma and their treatment/, http://www.tankonyvtar.hu/hu/tartalom/tamop425/2011_0001_524_szemeszet/ch10s04.html; Lee, David A., Higginbotham, Eve J.: Glaucoma and its treatment: A review, Am. J. Health_Syst Pharm., 2005, 62, 691-699, дата загрузки: 15.10.2015.).

Однако традиционная регуляция глазного давления не осуществляется посредством пути, на который целенаправленно воздействуют антиглаукоматозные средства, но посредством регуляции оттока водянистой влаги через трабекулярную сеть и канал Шлемма. При физиологических условиях обычно важная клеточная сигнальная молекула - эндогенный монооксид азота - также принимает участие в процессе регуляции глазного давления. (Недавний обзор: Megan E. Cavet, Jason L. Vittitow, Francesco Impagnatiello, Ennio Ongini and Elena Bastia, Nitric Oxide (NO): An emerging target for the treatment of glaucoma. Invest. Ophtalmol. Vis. Sci., 2014, 55, 5005-5015. http://www.iovs.org/content/55/8/5005.short, дата загрузки: 15.10.2015.

Традиционный путь регуляции глазного давления (трабекулярный отток внутриглазной жидкости) и механизм действия антиглаукоматозных средств, воздействующих на PGF2-альфа (увеосклеральный отток внутриглазной жидкости) объединяют с применением нитрооксипроизводных простагландина, описанных в описании к патенту WO 2005068421.

Выбранная молекула представляет собой производное кислоты латанопроста формулы I:

обозначаемое в описании как NCX-116, название INN: латанопростина бунод, который в организме гидролизуется до кислоты латанопроста и монооксида азота.

В описании к патенту WO 2005068421 в разделе Примеры описано получение молекулы формулы I (NCX-116) в мг-ом масштабе, но в нем не упоминается качество продукта и стратегия очистки.

Получение латанопростина бунода согласно WO 2005068421:

получение боковой цепи:

алкилирование кислоты латанопроста:

кислота латанопроста получена посредством щелочного гидролиза латанопроста:

В уровне техники активный ингредиент можно получать с необходимой степенью чистоты путем применения современных хроматографических методик. Однако увеличение степени чистоты продуктов значительно увеличивает производственные затраты. Наиболее эффективной очистки можно достичь посредством применения способов препаративной жидкостной хроматографии с нормальной и обратной фазами под высоким давлением. Однако данный высокоэффективный способ очистки имеет ряд недостатков. Наиболее важным фактором является стоимость, при этом цена продуктов, очищенных с помощью данного способа, значительно увеличивается. Для технологии с применением высокого давления необходимо дорогостоящее герметичное оборудование, дорогой силикагель с размером частиц 5-10 микрон (неподвижная фаза) и дорогие фильтрованные и/или дистиллированные растворители высокой степени чистоты (подвижная фаза).

Дополнительным недостатком является необходимость времени. Хотя время прогона цикла отделения является коротким, 1-2 часа, производство в промышленном масштабе может требовать нескольких десятков или сотен прогонов, каждый из которых значительно продлевает время, необходимое для отделения.

Дополнительной задачей может быть обеспечение того, чтобы уже очищенный, зачастую химически чувствительный продукт, который находится в растворе объединенных основных фракций прогонов, не подвергался последующему распаду во время процесса.

Цель авторов настоящего изобретения заключалась в разработке способа хроматографической очистки неочищенного продукта формулы I, полученного с помощью способа, описанного в описании к патенту WO 2005068421, который является экономичным, надежным, масштабируемым и обеспечивает то, чтобы полученный в результате очищенный продукт не содержал более высокие уровни изомерных и технологических примесей, чем разрешено нормативами.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что посредством очистки неочищенного продукта, содержащего латанопростина бунод, с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с гравитационным элюированием цель авторов может быть достигнута, поскольку данный процесс очистки обеспечивает уменьшение затрат, является надежным и легкомасштабируемым. Применяя данный способ, количество изомерных и технологических примесей в продукте можно уменьшить до необходимого уровня. Дополнительное преимущество способа заключается в том, что он не требует дорогостоящего оборудования, дорогого силикагеля и высоких количеств очищенных растворителей.

На основе своих хроматографических экспериментов авторы настоящего изобретения обнаружили, что имеет место следующее.

Неочищенный продукт, содержащий латанопростина бунод, не содержит кислоты латанопроста.

Примеси, представляющие собой x-1 (RRT=0,33) и латанопрост (RRT=0,81), можно удалять на колонках, заполненных любым из двух типов силикагеля, путем применения любой из исследуемых смесей элюентов.

Для примеси, представляющей собой 15S-латанопростина бунод, значительного снижения количества можно достичь только путем применения элюентов, которые содержат ацетон. Хороший выход (примерно 74%) можно достичь только на колонках, заполненных более дорогим силикагелем с частицами сферической формы.

Количество примеси, представляющей собой 5,6-транс-латанопростина бунод, можно значительно уменьшить (96%) на колонке, заполненной силикагелем с частицами сферической формы, с применением смеси элюентов гексан:ацетон=2:1, выход: примерно 74%.

Примесь x-2 (RRT=1,46) можно полностью удалить с хорошим выходом (>83%) на колонках, заполненных наиболее экономным силикагелем с частицами неправильной формы, но его количество также значительно уменьшается (95%) путем применения смеси элюентов гексан:ацетон=2:1 на колонках, заполненных силикагелем с частицами сферической формы, выход примерно 74%.

Все другие неидентифицированные, не определенные примеси можно удалить из неочищенного продукта с хорошим выходом путем применения смеси элюентов гексан:этанол на колонке, заполненной силикагелем с частицами неправильной формы, или путем применения смеси элюентов гексан:ацетон=2:1 на колонке, заполненной силикагелем с частицами сферической формы.

На основе вышеуказанных результатов путем выбора соответствующих силикагеля и смеси элюентов можно получить продукт, содержащий латанопростина бунод, необходимого предварительно заданного качества с помощью экономичной колоночной хроматографии с гравитационным элюированием.

Для латанопростина бунода не были установлены технические требования USP. Авторы настоящего изобретения предполагают на хороших основаниях, что профиль содержания примесей в продукте, содержащем латанопростина бунод, должен совпадать или аналогичным образом соответствовать техническим требованиям USP в отношении наиболее широко применяемого антиглаукоматозного активного вещества на основе простагландина - латанопроста.

Латанопрост (USP)* Латанопростина бунод Родственные примеси (HPLC) Родственные примеси (HPLC) - 15S-Латанопрост
- 5,6-Транс-латанопрост
- Кислота латанопроста
- Неидентифицированные примеси по отдельности
- Неидентифицированные примеси, всего
- Сумма примесей ≤ 0,50%
≤ 3,5%
≤ 0,10%
≤ 0,10%
≤ 0,30%
≤ 5,0% - 15S-Латанопростина бунод
- 5,6-транс-Латанопростина бунод
- Латанопрост
- Кислота латанопроста
- Неидентифицированные примеси по отдельности
- Неидентифицированные примеси, всего
Сумма примесей ≤ 0,50%
≤ 3,5%
≤ 0,50%
≤ 0,50%
≤ 0,10%
≤ 0,30%
≤ 5,0%

Для достижения аналогичного качества самой большой трудностью было удаление примеси RRT=1,46 (x-2) из латанопростина бунода.

В данном случае, в качестве неподвижной фазы авторы настоящего изобретения выбрали наиболее экономичный и промышленно применимый силикагель с частицами неправильной формы с диаметром пор 60 ангстрем, размером частиц 63-200 микрон.

В качестве подвижной фазы были выбраны двухкомпонентные смеси неполярных и полярных растворителей с различным составом.

В качестве неполярного растворителя были выбраны двухкомпонентные смеси углеводородов, галогенированные углеводороды или растворители эфирного типа, такие как пентан, гексан, гептан, циклогексан, дихлорметан или диизопропиловый эфир.

В качестве полярного растворителя авторы настоящего изобретения применяли растворитель спиртового, сложноэфирного или кетонного типа, содержащий алкильную группу с неразветвленной или разветвленной цепью.

Примесь RRT=1,46 хорошо очищали в исследуемых растворителях в зависимости от количества силикагеля. Также рассматривая выходы, градиентные смеси гексан:этанол оказались наиболее предпочтительными.

В ходе увеличения масштаба с применением смесей элюентов с составами гексан:этанол 6:1, 8:1 выход очистительной хроматографии составлял 85-92%.

С целью удаления примесей, возникающих из-за растворителей, выпаренную основную фракцию из очистительной хроматографии фильтровали на силикагеле. Данную операцию называют фильтрационной хроматографией.

В качестве неподвижной фазы снова был выбран силикагель с частицами неправильной формы с диаметром пор 60 ангстрем и размером частиц 63-200 микрон.

В качестве подвижной фазы снова были выбраны градиентные смеси дихлорметан:этилацетат. Выход фильтрационной хроматографии в ходе увеличения масштаба составлял 91-95%.

Разработанный таким образом способ очистки затем увеличивали в масштабе до 100 г масштаба.

Степень чистоты согласно HPLC партий латанопростина бунода, полученных в результате данного способа очистки, соответствовала предварительно заданным техническим требованиям.

Латанопростина бунод Технические требования Результаты Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,50% 0,18% 0,15% 0,16% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 3,5% 2,6 2,4 2,3 Латанопрост ≤ 0,50% 0,00 0,00 0,00 Кислота латанопроста ≤ 0,50% 0,00 0,00 0,00 Неидентифицированные примеси по отдельности
RRT=1,46 ≤ 0,10% 0,09 0,07 0,09 Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% 0,17 0,07 0,09 Сумма примесей ≤ 5,0% 2,9% 2,6% 2,6%

Эти экспериментальные данные подтверждают, что способ хроматографии с гравитационным элюированием также является подходящим для получения латанопростина бунода высокой степени чистоты.

Для достижения качества в отношении высокой степени чистоты не только уровень содержания неидентифицированных примесей необходимо уменьшить до менее 0,1%, но также количество известных, химически подобных и, следовательно, трудно удаляемых изомерных примесей, т. е. 15S-латанопростина бунод и 5,6-транс-латанопростина бунод, необходимо значительно уменьшить.

Для получения латанопростина бунода высокой степени чистоты неочищенный латанопростина бунод очищали на колонке, заполненной силикагелем с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон или более дорогим силикагелем с частицами сферической формы с размером частиц 50-150 микрон.

В качестве элюента применяли двухкомпонентные смеси неполярных и полярных растворителей в различных композициях. В качестве неполярного растворителя применяли двухкомпонентные смеси углеводородов, галогенированные алифатические углеводороды или растворители эфирного типа, такие как пентан, гексан, гептан, циклогексан и дихлорметан или диизопропиловый эфир.

В качестве полярного растворителя применяли растворители спиртового, сложноэфирного или кетонного типа, содержащие алкильную группу с неразветвленной или разветвленной цепью.

Количество примеси, представляющей собой 15S-латанопростина бунод, уменьшалось только в тех смесях элюентов, которые содержали растворитель кетонного типа.

Количество примеси, представляющей собой 5,6-транс-латанопростина бунод, хорошо уменьшалось при хроматографии с применением смесей элюентов гексан:ацетон, диизопропиловый эфир:ацетон. Выход хроматографии был удовлетворительным, однако только если применяли более дорогой силикагель с частицами сферической формы.

При применении колонки, заполненной силикагелем с частицами сферической формы, смесь элюентов гексан:этанол также являлась подходящей для отделения транс-изомера.

Относительно суммы примесей для получения латанопростина бунода высокой степени чистоты неочищенный продукт необходимо подвергать хроматографии на колонке, заполненной силикагелем с частицами сферической формы, и применять смесь элюентов гексан:ацетон=2:1.

Выход очистительной хроматографии составляет 72-76%. На основе вышеуказанных экспериментальных результатов существует возможность получить латанопростина бунод высокой степени чистоты со следующими характеристиками.

Латанопростина бунод Технические требования Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,15% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 0,50% Латанопрост ≤ 0,10% Кислота латанопроста ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси по отдельности ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% Сумма примесей ≤ 0,80%

В данном случае также основную фракцию из очистительной хроматографии необходимо фильтровать на силикагеле с целью удаления органических летучих примесей из элюентов, применяемых для очистительной хроматографии. Условия фильтрационной хроматографии являются такими же, как приведено выше. Неподвижная фаза представляет собой силикагель с частицами неправильной формы с диаметром пор 60 ангстрем и размером частиц 63-200 микрон.

В качестве подвижной фазы применяли градиентные смеси элюентов дихлорметан:этилацетат.

Выход фильтрационной хроматографии составляет 91-95%.

Авторы настоящего изобретения разработали способ получения активного вещества - латанопростина бунода различного качества посредством очистки с помощью хроматографии с гравитационным элюированием.

Способ является подходящим для получения латанопростина бунода с уровнями содержания примесей, которые совпадают с таковыми для латанопроста с качеством согласно USP, путем применения экономичного силикагеля с частицами неправильной формы Kieselgel 60 с размером частиц 63-200 микрон.

Способ также является подходящим для получения латанопростина бунода высокой степени чистоты (сумма примесей ≤0,80%), в таком случае необходимо применять более дорогой силикагель с частицами сферической формы для неподвижной фазы.

В соответствии с вышеописанным настоящее изобретение относится к получению латанопростина бунода формулы (I) со степенью чистоты более 95%,

I.

характеризующемуся тем, что неочищенный латанопростина бунод формулы (I) очищают посредством хроматографии путем применения колоночной хроматографии на силикагеле с нормальной фазой с гравитационным элюированием

с применением в качестве силикагеля

a.) силикагеля для нормальной фазы с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон или

b.) силикагеля для нормальной фазы с частицами сферической формы с размером частиц 50-150 микрон и

в качестве элюента - смеси элюентов, содержащей неполярный и полярный растворители,

и при необходимости примеси, возникающие из-за элюентов, которые применяют для очистительной хроматографии соединения формулы, удаляют посредством фильтрационной хроматографии на силикагеле.

В способе согласно настоящему изобретению можно получать продукт, содержащий латанопростина бунод, который соответствует следующим техническим требованиям по качеству:

Латанопростина бунод Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод
5,6-транс-Латанопростина бунод
Латанопрост
Кислота латанопроста
Неидентифицированные примеси по отдельности
Неидентифицированные примеси, всего
Сумма примесей ≤ 0,50%
≤ 3,5%
≤ 0,50%
≤ 0,0%
≤ 0,10%
≤ 0,30%
≤ 5,0%

В качестве неполярного растворителя смесь элюентов содержит алифатические углеводороды с неразветвленной или разветвленной цепью, циклические или ароматические углеводороды, галогенированные алифатические углеводороды или растворители эфирного типа, предпочтительно пентан, гексан, гептан, циклогексан, дихлорметан или диизопропиловый эфир, предпочтительно гексан.

В качестве полярного растворителя можно применять растворители спиртового, сложноэфирного или кетонного типа, содержащие алкильную группу с неразветвленной или разветвленной цепью, такие как C1-5спирт, предпочтительно этиловый спирт или изопропиловый спирт.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения в качестве силикагеля применяют силикагель для нормальной фазы с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, при этом элюент содержит градиентные смеси гексана и этилового спирта в объемных соотношениях 6:1-8:1.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения для удаления 5,6-транс-латанопростина бунода в качестве полярного растворителя предпочтительно применяют растворитель кетонного типа, предпочтительно ацетон. Согласно наиболее предпочтительному варианту осуществления применяют силикагель с частицами сферической формы с размером частиц 75 микрон в качестве силикагеля и смесь гексан:ацетон с объемным соотношением 2:1 в качестве элюента.

В таком случае качество очищенного соединения формулы I. соответствует следующим техническим требованиям по качеству:

Латанопростина бунод Техническое требование Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,15% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 0,50% Латанопрост ≤ 0,10% Кислота латанопроста ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси по отдельности ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% Сумма примесей ≤ 0,80%

При необходимости примеси, возникающие из-за элюентов, которые применяют для очистительной хроматографии соединения формулы, удаляют посредством фильтрационной хроматографии на силикагеле. Смесь элюентов для фильтрационной хроматографии состоит из полярного и неполярного растворителей.

В качестве неполярного растворителя применяют необязательно галогензамещенный алифатический углеводород с неразветвленной или разветвленной открытой цепью, или циклический углеводород, или ароматический углеводород, тогда как в качестве полярного растворителя применяют растворитель спиртового, эфирного, сложноэфирного или кетонного типа, содержащего неразветвленную, или разветвленную с открытой цепью, или циклическую алкильную или циклоалкильную группу. В предпочтительном варианте осуществления смесь элюентов содержит дихлорметан и этилацетат в объемном соотношении 2:1.

Перед осуществлением фильтрационной хроматографии растворители, применяемые в качестве элюентов, подвергали дистилляции таким образом, что для хроматографии применяли примерно 80% растворителей после отбора примерно 10% в качестве предварительной фракции, и оставляя примерно 10% в качестве остатка.

Качество приобретенных растворителей перед дистилляцией:

дихлорметан: степень чистоты согласно GC ≥ 99,0%;

этилацетат: степень чистоты согласно GC ≥ 99,5%.

Преимущества способа очистки согласно настоящему изобретению по сравнению с препаративными способами и/или способами флэш-хроматографии:

• он обеспечивает уменьшение затрат и легко осуществляется в промышленности;

• высокоэффективный способ очистки осуществляют с помощью хроматографии с гравитационным элюированием, который является способом хроматографии, обеспечивающим наибольшее уменьшение затрат, поскольку:

o для него нет необходимости в дорогом герметичном оборудовании, таком как системы для жидкостной хроматографии под средним и высоким давлением,

o силикагель, применяемый в качестве неподвижной фазы в хроматографии с гравитационным элюированием, является более дешевым, чем силикагель, применяемый в системах для хроматографии под средним и высоким давлением,

o на колонке для гравитационного элюирования очистку можно осуществлять за один прогон, что сокращает время получения.

Дополнительные подробности настоящего изобретения продемонстрированы в примерах без ограничения настоящего изобретения данными примерами.

Примеры

1. Пример

Очистка латанопростина бунода

4-Нитрооксибутил-(Z)-7-[(1R,2R,3R,5S)-3,5-дигидрокси-2-[(3R)-3-гидрокси-5-фенилпентил]циклопентил]гепт-5-еноат

Растворяли 461,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100-кратным количеством (рассчитанным относительно неочищенного продукта) силикагеля с частицами неправильной формы с диаметром пор 60 ангстрем, размером частиц 63-200 микрон с применением смеси элюентов гексан:этанол=8:1-6:1. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 401,1 г (87%). Примеси в продукте, возникающие из-за элюентов, применяемых в очистительной хроматографии, удаляли посредством фильтрационной хроматографии. Для растворения применяли смесь дихлорметан:этилацетат. Раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 10-кратным количеством (рассчитанным относительно выпаренного продукта) силикагеля с частицами неправильной формы с диаметром пор 60 ангстрем, размером частиц 63-200 микрон с применением смеси элюентов дихлорметан:этилацетат=2:1. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 364,9 г (91%).

Улучшение качества латанопростина бунода в ходе очистки (площадь по HPLC, %)

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очиститель-ная хромато-графия Фильтра-ционная хромато-графия RRT=0,33 23,31% 0,11% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,08% 0,00% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,14% 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,08% 0,08% Латанопростина бунод 72,69% 96,65% 97,52% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,25% 2,27% RRT=1,46 1,30% 0,07% 0,09% Другие примеси, всего 0,34% 0,84% 0,04%

2. Пример

Растворяли 50,0 г неочищенного латанопростина бунода в толуоле. Добавляли смесь гексан:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 5000 г силикагеля с частицами сферической формы YMC с размером частиц 75 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:ацетон=2:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 38,0 г (76%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,09% Латанопростина бунод 72,88% 99,70% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,13% RRT=1,46 1,24% 0,08% Другие примеси, всего 0,34% 0,00%

3. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь диизопропиловый эфир:метанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 25 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей диизопропиловый эфир:метанол в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,704 г (70%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 1,09% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,16% Латанопростина бунод 72,88% 95,69% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,82% RRT=1,46 1,24% 0,16% Другие примеси, всего 0,34% 0,08%

4. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в толуоле. Добавляли смесь гексан:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 50 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:ацетон=2:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,55 г (55%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,43% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,13% Латанопростина бунод 72,88% 97,42% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 1,06% RRT=1,46 1,24% 0,86% Другие примеси, всего 0,34% 0,10%

5. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в толуоле. Добавляли смесь гексан:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:ацетон=2:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,51 г (51%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,17% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,13% Латанопростина бунод 72,88% 98,47% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,61% RRT=1,46 1,24% 0,52% Другие примеси, всего 0,34% 0,10%

6. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в толуоле. Добавляли смесь гексан:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами сферической формы YMC с размером частиц 75 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:ацетон=2:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,74 г (74%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,08% Латанопростина бунод 72,88% 99,71% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,12% RRT=1,46 1,24% 0,09% Другие примеси, всего 0,34% 0,00%

7. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в толуоле. Добавляли смесь гексан:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами сферической формы YMC с размером частиц 75 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:ацетон=3:2 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,61 г (61%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,12% Латанопростина бунод 72,88% 99,40% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,29% RRT=1,46 1,24% 0,19% Другие примеси, всего 0,34% 0,00%

8. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь диизопропиловый эфир:ацетон, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей диизопропиловый эфир:ацетон в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,47 г (47%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,13% Латанопростина бунод 72,88% 98,57% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,70% RRT=1,46 1,24% 0,49% Другие примеси, всего 0,34% 0,11%

9. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:изопропанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:изопропанол=5:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,56 г (56%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,15% Латанопростина бунод 72,88% 96,64% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,73% RRT=1,46 1,24% 0,40% Другие примеси, всего 0,34% 0,08%

10. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:этанол=8:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,52 г (52%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,12% Латанопростина бунод 72,88% 98,99% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,66% RRT=1,46 1,24% 0,12% Другие примеси, всего 0,34% 0,11%

11. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами сферической формы YMC с размером частиц 75 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:этанол=6:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,57 г (57%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,12% Латанопростина бунод 72,88% 99,30% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,33% RRT=1,46 1,24% 0,25% Другие примеси, всего 0,34% 0,00%

12. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 25 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей гексан:этанол в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,64 г (64%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 1,12% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,17% Латанопростина бунод 72,88% 95,45% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,80% RRT=1,46 1,24% 0,36% Другие примеси, всего 0,34% 0,10%

13. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 50 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентной смеси гексан:этанол в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,75 г (75%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,17% Латанопростина бунод 72,88% 96,67% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,87% RRT=1,46 1,24% 0,21% Другие примеси, всего 0,34% 0,08%

14. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей гексан:этанол в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,92 г (92%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,16% Латанопростина бунод 72,88% 96,88% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,80% RRT=1,46 1,24% 0,08% Другие примеси, всего 0,34% 0,08%

15. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей гексан:этанол в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,83 г (83%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,17% Латанопростина бунод 72,88% 97,23% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,53% RRT=1,46 1,24% 0,00% Другие примеси, всего 0,34% 0,07%

16. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Добавляли смесь гексан:этанол, и раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 100 г силикагеля с частицами сферической формы YMC с размером частиц 75 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением смеси гексан:этанол=6:1 в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,48 г (48%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,12% Латанопростина бунод 72,88% 99,34% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 0,47% RRT=1,46 1,24% 0,06% Другие примеси, всего 0,34% 0,01%

17. Пример

Растворяли 1,0 г неочищенного латанопростина бунода в дихлорметане. Раствор очищали посредством хроматографии с гравитационным элюированием на колонке, заполненной 10 г силикагеля с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон, диаметром пор 60 ангстрем с применением градиентных смесей дихлорметан:этилацетат в качестве элюента. Фракции соответствующей степени чистоты объединяли и выпаривали. Выход: 0,75 г (75%).

Примеси (площадь по HPLC, %) Неочищенный продукт Очистительная хроматография RRT=0,33 23,31% 0,00% RRT=0,70 (латанопрост) 0,09% 0,00% RRT=0,81 (кислота латанопроста) 0,00% 0,00% 15S-Латанопростина бунод 0,11% 0,17% Латанопростина бунод 72,88% 96,36% 5,6-транс-Латанопростина бунод 2,03% 2,73% RRT=1,46 1,24% 0,65% Другие примеси, всего 0,34% 0,09%

Процедура HPLC, применяемая во всех вышеуказанных примерах, представляет собой способ анализа HPLC в изократическом режиме с нормальной фазой на определение стабильности, который также позволяет количественно определить родственные вещества латанопростина бунода в лекарственном веществе. Условия измерения являлись следующими.

Анализ (HPLC) Приборы Прибор: система HPLC в изократическом режиме, оснащенная UV-детектором или детектором на диодной матрице, электронная система управления данными и автодозатор Колонка: Kromasil 60 5SIL; 250×4,6 мм, 5 мкм или эквивалент Хроматографические условия Элюент: н-гексан: этанол: изопропанол: уксусная кислота=930: 35: 35:1 Детекция: 210 нм Скорость потока: 2 мл/мин. Вводимое количество: 10 мкл Температура колонки: 35°С Время прогона: 25 мин.

Настоящее изобретение относится к способу получения латанопростина бунода формулы (I)

заключающемуся в том, неочищенный латанопростина бунод формулы (I) очищают посредством хроматографии путем применения колоночной хроматографии на силикагеле с нормальной фазой с гравитационным элюированием с применением в качестве силикагеля: a.) силикагеля для нормальной фазы с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон или b.) силикагеля для нормальной фазы с частицами сферической формы с размером частиц 50-150 микрон, и в качестве элюента - смеси элюентов, состоящей из неполярного и полярного растворителей, и при необходимости примеси, возникающие из-за элюентов, которые применяют для очистительной хроматографии соединения формулы (I), удаляют посредством фильтрационной хроматографии на силикагеле. Получаемый латанопростина бунод соответствует следующим техническим требованиям по качеству:

Латанопростина бунод Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,50% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 3,5% Латанопрост ≤ 0,50% Кислота латанопроста ≤ 0,50% Неидентифицированные примеси по отдельности ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% Сумма примесей ≤ 5,0%

12 з.п. ф-лы, 23 табл., 17 пр.

1. Способ получения латанопростина бунода формулы (I)

соответствующего следующим техническим требованиям по качеству:

Латанопростина бунод Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,50% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 3,5% Латанопрост ≤ 0,50% Кислота латанопроста ≤ 0,50% Неидентифицированные примеси по отдельности ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% Сумма примесей ≤ 5,0%

отличающийся тем, что неочищенный латанопростина бунод формулы (I) очищают посредством хроматографии путем применения колоночной хроматографии на силикагеле с нормальной фазой с гравитационным элюированием

с применением в качестве силикагеля

a.) силикагеля для нормальной фазы с частицами неправильной формы с размером частиц 63-200 микрон или

b.) силикагеля для нормальной фазы с частицами сферической формы с размером частиц 50-150 микрон и

в качестве элюента - смеси элюентов, состоящей из неполярного и полярного растворителей,

и при необходимости примеси, возникающие из-за элюентов, которые применяют для очистительной хроматографии соединения формулы (I), удаляют посредством фильтрационной хроматографии на силикагеле.

2. Способ a.) или b.) по п. 1, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит в качестве неполярного растворителя алифатические углеводороды с неразветвленной или разветвленной цепью, циклические или ароматические углеводороды, галогенированные алифатические углеводороды или растворители эфирного типа.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве неполярного растворителя применяют пентан, гексан, гептан, циклогексан, дихлорметан или диизопропиловый эфир, предпочтительно гексан.

4. Способ a.) или b.) по п. 1, отличающийся тем, что в качестве полярного растворителя применяют растворитель спиртового, сложноэфирного или кетонного типа, содержащий алкильную группу с неразветвленной или разветвленной цепью.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве полярного растворителя применяют C1-5спирт, предпочтительно этиловый спирт или изопропиловый спирт.

6. Способ по любому из пп. 3 и 5, отличающийся тем, что смесь элюентов представляет собой градиентную смесь, содержащую гексан и этиловый спирт в объемных соотношениях 6:1-8:1.

7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что в качестве полярного растворителя применяют растворитель кетонного типа, предпочтительно ацетон.

8. Способ по любому из пп. 3 и 7, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит гексан и ацетон в объемном соотношении 2:1.

9. Способ по п. 1 с применением фильтрационной хроматографии, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит неполярный и полярный растворители.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит в качестве неполярного растворителя необязательно галогензамещенный неразветвленный, или разветвленный с открытой цепью, или циклический, или ароматический углеводород.

11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит в качестве полярного растворителя растворитель спиртового, эфирного, сложноэфирного или кетонного типа, содержащий неразветвленную, или разветвленную c открытой цепью, или циклическую алкильную или циклоалкильную группу.

12. Способ по любому из пп. 11 и 12, отличающийся тем, что смесь элюентов содержит дихлорметан и этилацетат в объемном соотношении 2:1.

13. Способ по п.8, отличающийся тем, что качестве силикагеля используется силикагель для нормальной фазы с частицами сферической формы с размером частиц 50-150 микрон, и полученный латанопростина бунод формулы (I) имеет высокую степень чистоты, и он соответствует следующим техническим требованиям по качеству:

Латанопростина бунод Родственные примеси (HPLC) 15S-Латанопростина бунод ≤ 0,15% 5,6-транс-Латанопростина бунод ≤ 0,50% Латанопрост ≤ 0,10% Кислота латанопроста ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси по отдельности ≤ 0,10% Неидентифицированные примеси, всего ≤ 0,30% Сумма примесей ≤ 0,80%