СТАБИЛЬНЫЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ АНТИТЕЛА К PD-1 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ Российский патент 2020 года по МПК A61K39/395 A61K9/08 A61K9/19 A61K47/12 A61K47/26 C07K16/28 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтическому препарату, содержащему антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, способу приготовления данного препарата и применению этого препарата.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Существует чрезвычайно сложная взаимосвязь между механизмом ускользания от иммунного надзора опухолями и иммунным ответом организма на опухоли. На ранней стадии иммунотерапии рака опухолеспецифичные киллерные Т-клетки обладают биологической активностью, но утрачивают способность к цитолизу на поздней стадии роста опухоли. Чтобы повысить ответ собственной иммунной системы пациента на опухоль до максимального, ключом иммунотерапии опухолей является не только активация существующего ответа иммунной системы, но также поддержание продолжительности и интенсивности ответа иммунной системы.

Белок-1 программируемой смерти (PD-1), открытый в 1992 г., представляет собой белковый рецептор, экспрессируемый на поверхности Т-клеток и вовлеченный в апоптоз клеток. PD-1 принадлежит семейству CD28 (кластер дифференцировки 28), демонстрирует 23% гомологии по аминокислотной последовательности при сравнении с цитотоксическим Т-лимфоцитарным антигеном 4 (CTLA-4); в отличие от CTLA4, PD-1 в основном экспрессируется в активированных Т-клетках, В-клетках и миелоидных клетках. PD-1 имеет два лиганда, PD-L1 и PD-L2, соответственно. В недавно проведенных исследованиях обнаружен высокий уровень экспрессии белка PD-L1 в опухолевых тканях человека, например, при раке молочной железы, раке легкого, раке желудка, раке кишечника, раке почки, меланоме, и уровень экспрессии PD-L1 тесно связан с клиническим ответом и прогнозом для пациента. Поскольку PD-L1 ингибирует пролиферацию Т-клеток по второму сигнальному пути, PD-L1 становится очень перспективной новой мишенью в области иммунотерапии рака посредством блокирования связывания PD-1 с PD-L1.

В WO 2015/085847 описывается новое антитело к PD-1, которое характеризуется высокой аффинностью и длительным полупериодом существования, и ожидается, что оно будет оказывать улучшенное терапевтическое воздействие на вышеупомянутые заболевания. Однако, такие новые антитела к PD-1 являются чрезвычайно нестабильными, и приготовление на их основе формы клинически приемлемого препарата вызывает затруднение. Не существует ни одной заявки РСТ (Договор о патентной кооперации), описывающей способ их приготовления. Поэтому существует необходимость в проведении углубленного исследования этих антител с целью приготовления на их основе композиции для стабильного и удобного клинического применения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящим изобретением решается задача разработки стабильной композиции на основе антитела к PD-1.

Стабильная фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент и буфер. Фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор и возможно поверхностно-активное вещество.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит какую-либо одну или несколько последовательностей участков CDR (определяющих комплементарность участков), выбранных из приведенных ниже последовательностей или аминокислотных последовательностей, имеющих по меньшей мере 85% идентичности с приведенными ниже последовательностями:

последовательностью CDR из вариабельной области тяжелой цепи (HCDR) антитела: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3; и

последовательностью CDR из вариабельной области легкой цепи (LCDR) антитела: SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6.

Аминокислотные последовательности показаны в приведенной ниже таблице:

VH означает вариабельную область тяжелой цепи.

VL означает вариабельную область легкой цепи.

Данные гомологичные последовательности можно получить, применяя традиционные методы улучшения аффинности, или иммуногенности, или стабильности антитела либо других традиционных физических и химических свойств или биологической активности.

Другое предпочтительное антитело к PD-1 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность легкой цепи с SEQ ID NO: 8.

SEQ ID NO: 7

SEQ ID NO: 8

Концентрация антитела к PD-1 по настоящему изобретению может составлять от 1 мг/мл до 60 мг/мл, предпочтительно 20-50 мг/мл, более предпочтительно 35-45 мг/мл, наиболее предпочтительно 40 мг/мл.

Буфер по настоящему изобретению представляет собой один или более буферов, выбранных из группы, состоящей из буферов на основе ацетата, цитрата, сукцината и фосфата, при этом фосфат выбран из группы, состоящей из дигидрофосфата натрия и д и гидрофосфата калия; предпочтительным буфером является ацетатный, и его количество конкретно не ограничено в воплощении по настоящему изобретению, например, 1-50 мМ, предпочтительно 2-20 мМ, более предпочтительно 5-15 мМ и наиболее предпочтительно 10 мМ.

Значение рН композиции в настоящем изобретении может изменяться в диапазоне от 4,5 до 6,0, предпочтительно от 4,8 до 5,6, наиболее предпочтительно составлять рН 5,2.

По меньшей мере один стабилизатор по настоящему изобретению выбран из сахарида или аминокислоты, при этом сахарид предпочтительно представляет собой дисахарид, выбранный из группы, состоящей из сахарозы, молочной кислоты, трегалозы и мальтозы, предпочтительно трегалозы, наиболее предпочтительно, из дигидрата α,α-трегалозы. Количество используемого дисахарида конкретно не ограничено в воплощении по настоящему изобретению, например, составляет 30-120 мг/мл, предпочтительно 60-100 мг/мл, более предпочтительно 85-95 мг/мл, наиболее предпочтительно 90 мг/мл.

Поверхностно-активное вещество по настоящему изобретению может быть выбрано из полиоксиэтилен-гидрогенизированного касторового масла, сложных эфиров глицерина и жирных кислот, сложных эфиров полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот, при этом сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты может быть выбран из полисорбата 20, 40, 60 или 80. Количество используемого поверхностно-активного вещества конкретно не ограничено в воплощении по настоящему изобретению, например, составляет 0,01-1 мг/мл, предпочтительно 0,05-0,5 мг/мл, более предпочтительно 0,1-0,4 мг/мл, наиболее предпочтительно 0,2 мг/мл.

Стабильная фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой инъекционную фармацевтическую композицию.

В одном из воплощений настоящего изобретения в состав стабилизированной фармацевтической композиции входит антитело к PD-1, буфер, дисахарид и поверхностно-активное вещество, возможно с включением воды.

В одном из воплощений настоящего изобретения стабилизированная фармацевтическая композиция содержит:

антитело к PD-1, при этом человеческое антитело содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность легкой цепи с SEQ ID: 8; и

(1) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2; или

(2) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2; или

(3) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 20 мМ ацетатный буфер при рН 5,4; или

(4) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 20 мМ ацетатный буфер при рН 5,0; или

(5) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,1 мг/мл и 20 мМ ацетатный буфер при рН 5,2; или

(6) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2; или

(7) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 4,8; или

(8) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 30 мМ ацетатный буфер при рН 5,2; или

(9) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,6.

Инъекционная фармацевтическая композиция может быть в форме инъекции, или эту форму обрабатывают далее с получением лиофилизированной формы. Лиофилизированный порошок может быть приготовлен традиционными в данной области техники методами.

Согласно настоящему изобретению также предложена инъекционая форма, которую готовят путем разведения лиофилизированного порошка и которую можно использовать непосредственно для инъекций.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению может эффективно подавляться агрегация и дезамидирование антитела, в результате чего предотвращаться деградация продукта на основе антитела, при этом получается стабильная инъекционная композиция, которую можно хранить в течение 6 месяцев при 25°С и которая может быть стабильной в течение 12 месяцев при 2-8°С. Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению обладает защитным действием в отношении окислительной деградации белка, может соответствовать требованиям работы с контейнерами из стекла и нержавеющей стали и быть устойчивой при нахождении в этих контейнерах.

Фармацевтическую композиция по настоящему изобретению применяют для профилактики или лечения PD-1-опосредуемых заболеваний или расстройств, при этом такое заболевание или расстройство предпочтительно представляет собой рак; более предпочтительно рак, экспрессирующий PD-L1; наиболее предпочтительно рак, выбранный из рака молочной железы, рака легкого, рака желудка, рака кишечника, рака почки, меланомы; наиболее предпочтительно немелкоклеточного рака легкого, меланомы и рака почки.

Предложено применение фармацевтической композиции по настоящему изобретению в приготовлении лекарственного средства для профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, при этом такое заболевание или расстройство предпочтительно представляет собой рак; более предпочтительно рак, экспрессирующий PD-L1; при этом данный рак наиболее предпочтительно представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, меланому; наиболее предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки.

Предложен способ предупреждения или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, при этом такое заболевание или расстройство предпочтительно представляет собой рак; более предпочтительно рак, экспрессирующий PD-L1; при этом данный рак наиболее предпочтительно представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, меланому; наиболее предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки, причем данный способ включает введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

ТЕРМИНЫ

Настоящее изобретение относится к стабильной фармацевтической жидкой композиции, содержащей антитело к PD-1 в высокой концентрации.

Использованный в данном описании термин "антитело" относится к иммуноглобулину, состоящей из четырех пептидный цепей структуре, образованной двумя идентичными тяжелыми цепями и двумя идентичными легкими цепями, соединенными вместе дисульфидными связями.

Антитела по изобретению включают мышиное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело, предпочтительно гуманизированное антитело.

Термин "антигенсвязывающий фрагмент" антитела (или просто "фрагмент антитела") относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связываться с антигеном (например, PD-1). Показано, что антигенсвязывающая функция антитела может быть реализована посредством фрагментов полноразмерного антитела. Антигенсвязывающие участки могут быть получены методами рекомбинантной ДНК или путем ферментативного или химического расщепления интактных иммуноглобулинов.

Термин "CDR" относится к одному из шести гипервариабельных участков в пределах вариабельных доменов антитела, которые вносят основной вклад в связывание с антигеном. Одно из наиболее часто используемых определений для этих шести CDR предложено в Kabat Е. A. et al., (1991) Sequences of proteins of immunological interest. NIH Publication, 91-3242). Как использовано в данном описании, определение CDR по Kabat применяется только к LCDR1, LCDR2 и LCDR3 вариабельного домена легкой цепи, равно как и к HCDR1, HCDR2 и HCDR3 вариабельного домена тяжелой цепи.

В настоящем изобретении помимо вариабельной области легкой цепи антитело, упомянутое в данном описании, дополнительно содержит константную область легкой цепи, которая представляет собой κ-, λ-цепь иммуноглобулина человека или мыши или их вариант.

В настоящем изобретении помимо вариабельной области тяжелой цепи антитело, упомянутое в данном описании, дополнительно содержит константную область тяжелой цепи, которая относится к IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 человека или мыши или их варианту.

Термин "химерное антитело" относится к антителу, которое образуется посредством слияния вариабельной области мышиного антитела с константной областью человеческого антитела, такое химерное антитело может смягчать иммунный ответ, индуцированный мышиным антителом. Чтобы создать химерное антитело, сначала создают гибридому, секретирующую специфичное мышиное моноклональное антитело, из этой мышиной гибридомы клонируют ген вариабельной области, затем согласно требованиям клонируют ген константной области желаемого человеческого антитела, ген вариабельной области мышиного антитела соединяют с геном константной области антитела человека с образованием химерного гена, который может быть встроен в экспрессирующий носитель, и, наконец, молекулу такого химерного антитела экспрессируют в эукариотической или прокариотической системе.

Термин "гуманизированное антитело", также известное как CDR-привитое антитело, относится к антителу, созданному с использованием последовательностей CDR мышиного антитела, привитых к каркасу на основе вариабельной области человеческого антитела, содержащему разные типы последовательностей каркаса на основе антитела зародышевой линии человека. Гуманизированное антитело не допускает протекания аллогенной реакции, индуцируемой химерным антителом, несущим большое количество компонентов мышиного антитела. Такие каркасные последовательности могут быть получены из общедоступной базы данных по ДНК, содержащей последовательности генов антитела зародышевой линии, или получены из опубликованных ссылок.

Термин "фармацевтическая композиция/препарат" относится к препаратам, которые находятся в такой форме, которая явно обеспечивает эффективную биологическую активность активных ингредиентов, и не содержат никаких дополнительных компонентов, являющихся токсичными для субъектов, которым такую композицию вводят.

Термин "жидкость", использованный в данном описании применительно к композиции по изобретению, означает композицию, которая представляет собой жидкость при температуре по меньшей мере от примерно 2°С до примерно 8°С при атмосферном давлении.

Термин "стабилизатор" означает фармацевтически приемлемый эксципиент, который защищает активный фармацевтический ингредиент и/или фармацевтическую композицию от химической и/или физической деградации в процессе приготовления, хранения и применения. Обзор путей химической и физической деградации белковых фармацевтических средств приведен в Cleland, J.L, М.F. Powell, et al. (1993). "The development of stable protein formulations: a close look at protein aggregation, deamidation, and oxidation". Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 10(4): 307-77; Wang, W. (1999). "Instability, stabilization, and formulation of liquid protein pharmaceuticals". Int. J. Pharm., 185(2): 129-88; Wang, W. (2000). "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals". Int. J. Pharm., 203(1-2): 1-60; и Chi, E.Y, S. Krishnan, et al. (2003). "Physical stability of proteins in aqueous solution: mechanism and driving forces in nonnative protein aggregation". Pharm. Res., 20(9): 1325-36. Стабилизаторы включают, но не ограничиваются этим, сахарид, аминокислоты, полиолы, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты, циклодекстрины, полиэтиленгликоли (например, ПЭГ 3000, 3350, 4000, 6000), альбумин (например, сывороточный альбумин человека (HSA), бычий сывороточный альбумин (BSA)), соли (например, хлорид натрия, хлорид магния, хлорид кальция), хелаторы (например, EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота)), которые определены далее. Стабилизатор, конкретно использованный в настоящем изобретении, выбран из сахарида. Более конкретно, стабилизатор выбран из группы, состоящей из сахарозы, трегалозы и сорбита. Стабилизатор может присутствовать в композиции в количестве от 30 мг/мл до 100 мг/мл, предпочтительно от 60 мг/мл до 90 мг/мл. Более конкретно, сахарозу или трегалозу использовали в качестве стабилизатора в количестве 90 мг/мл.

"Стабильная" композиция представляет собой композицию, в которой находящийся в ее составе белок, например антитело, по существу сохраняет при хранении свою физическую и химическую стабильность и, следовательно, свою биологическую активность.

"Стабильная жидкая фармацевтическая композиция на основе антитела" представляет собой жидкую композицию на основе антитела без каких-либо существенных изменений, наблюдаемых при температуре холодильника (2-8°С) в течение по меньшей мере 12 месяцев, в частности, 2 лет и более конкретно 3 лет. Критерием стабильности является следующее положение: расщеплению подвержено не более 10%, в частности 5%, мономера антитела, что оценивают посредством гель-проникающей высокоэффективной жидкостной хроматографии (SEC-HPLC). Кроме того, раствор является бесцветным или прозрачным до слегка опалесцирующего по результатам визуального анализа. Концентрация белка в композиции должна изменяться не более чем на +/-10%. Агрегации подвержено не более 10%, в частности 5%. Стабильность оценивают методами, известными в данной области техники, такими как ультрафиолетовая (УФ) спектроскопия, гель-проникающая хроматография (SEC-HPLC), ионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография (IE-HPLC), турбидиметрия и визуальное обследование.

Термины "белок программируемой смерти 1", "белок программируемой клеточной смерти 1", "белок PD-1", "PD-1", "PD1", "PDCD1", "hPD-1" и "hPD-F" используются взаимозаменяемо и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого PD-1 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с PD-1. Полную последовательность PD-1 можно найти по номеру ссылочной последовательности согласно NCBI (Национальный центр биотехнологической информации): NM_005018.1.

Термины "анти-PD-1 антитело", "антитело против PD-1" и "антитело к PD-1" относятся к антителу, которое способно связываться с PD-1 с достаточной аффинностью, в результате чего данное антитело оказывается полезным в качестве диагностического и/или терапевтического агента для направленного воздействия на PD-1. Термин "связывание с PD-1", использованный в данном описании, означает связывание антитела с PD-1 либо в анализе с применением BIAcore (Pharmacia Biosensor АВ, Uppsala, Sweden), либо в ELISA (иммуноферментный твердофазный анализ), при этом очищенные PD-1 или PD-1-экспрессирующие СНО(клетки яичников китайского хомячка)-трансфектанты нанесены в виде покрытия на титрационные микропланшеты.

Концентрация антитела к PD-1, содержащегося в фармацевтической композиции, находится в диапазоне от 1 мг/мл до 60 мг/мл, в частности, в диапазоне от 20 мг/мл до 50 мг/мл, наиболее конкретно, составляет 40 мг/мл.

Термин "поверхностно-активное вещество", использованный в данном описании, означает фармацевтически приемлемый эксципиент, который используют для защиты белковых композиций от механических напряжений, таких как перемешивание и сдвиг. Примеры фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ включают сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот (твин), полиоксиэтиленалкиловые простые эфиры (например, имеющиеся в продаже с торговой маркой Brij™) и сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена (полоксамер, плуроник). Примерами сложных эфиров полиоксиэтиленсорбитана и жирных кислот являются полисорбат 20 (имеющийся в продаже с торговой маркой Tween 20™) и полисорбат 80 (имеющийся в продаже с торговой маркой Tween 80™).

Термин "буфер", использованный в данном описании, означает фармацевтически приемлемый эксципиент, который стабилизирует рН фармацевтической композиции. Подходящие буферы хорошо известны в данной области техники и могут быть найдены в литературе. Предпочтительные фармацевтически приемлемые буферы содержат, но не ограничиваются этим, буферы на основе гистидина, буферы на основе цитрата, буферы на основе сукцината, буферы на основе ацетата, буферы на основе аргинина, буферы на основе фосфата или их смеси. Представляющие особый интерес буферы выбраны из буфера на основе цитрата или буфера на основе ацетата, при этом значение его рН подводили кислотой или основанием, известными в данной области техники. Вышеупомянутые буферы обычно используют в количестве от примерно 1 мМ до 50 мМ, предпочтительно от примерно 10 мМ до 30 мМ и более предпочтительно примерно 10 мМ. Независимо от используемого буфера значение рН может быть подведено до величины, лежащей в диапазоне от 4,5 до 6,0, и в частности, до величины, лежащей в диапазоне от 4,8 до 5,6, и наиболее конкретно до рН 5,2, с использованием кислоты или основания, известных в данной области техники, например, соляной кислоты, уксусной кислоты, фосфорной кислоты, серной кислоты и лимонной кислоты, гидроксида натрия и гидроксида калия.

В некоторых воплощениях стабильная фармацевтическая композиция на основе антитела к PD-1 по настоящему изобретению содержит антиоксидант в качестве второго стабилизатора. "Антиоксидантом" является фармацевтически приемлемый эксципиент, который предотвращает окисление активного фармацевтического ингредиента. Антиоксиданты включают, но не ограничиваются этим, хелатирующие агенты, такие как EDTA, лимонную кислоту, аскорбиновую кислоту, бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), бутилированный гидроксианизол (ВНА), сульфит натрия, лара-аминобензойную кислоту, глутатион, пропилгаллат, цистеин, метионин, этанол, бензиловый спирт и н-ацетилцистеин.

Термин "сахарид", использованный в данном описании, означает моносахарид или олигосахарид. Моносахарид представляет собой мономерный углевод, который не гидролизуется под действием кислот, включая простой сахарид и его производные, например, аминосахарид. Примеры моносахаридов включают глюкозу, фруктозу, галактозу, маннозу, сорбозу, рибозу, дезоксирибозу, нейраминовую кислоту. Олигосахарид представляет собой углевод, состоящий из более чем одной мономерной сахаридной единицы, при этом данные мономерные сахаридные единицы соединены гликозидной(ыми) связью(ями), олигосахарид может иметь либо разветвленную, либо линейную цепь. Мономерные сахаридные единицы в составе олигосахарида могут быть идентичными или разными. В зависимости от числа мономерных сахаридных единиц олигосахарид представляет собой ди-, три-, тетра-, пентасахарид и так далее. В противоположность полисахаридам моносахариды и олигосахариды являются водорастворимыми. Примеры олигосахаридов включают сахарозу, трегалозу, лактозу, мальтозу и раффинозу. В частности, сахариды выбраны из сахарозы и трегалозы.

Термин "аминокислота", использованный в данном описании, означает фармацевтически приемлемую органическую молекулу, обладающую аминогруппировкой, локализованной в α-положении карбоксильной группы. Примеры аминокислот включают аргинин, глицин, орнитин, лизин, гистидин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, изолейцин, лейцин, аланин, фенилаланин, тирозин, триптофан, метионин, серии, пролин. Аминокислоты обычно используют в количестве примерно 5-500 мМ, в частности, в количестве от примерно 5 до примерно 200 мМ и более конкретно в количестве от примерно 100 до примерно 150 мМ.

Термин "стабилизатор" также включает лиопротекторы. Термин "лиопротектор" означает фармацевтический приемлемый эксципиент, который защищает лабильный активный ингредиент (например, белок) от дестабилизирующих условий в ходе осуществления процесса лиофилизации, последующего хранения и повторного разведения. Лиопротекторы содержат, но не ограничиваются этим, группу, состоящую из сахаридов, полиолов (таких как, например, сахарные спирты) и аминокислот. В частности, лиопротекторы могут быть выбраны из группы, состоящей из сахаридов, таких как сахароза, трегалоза, лактоза, глюкоза, манноза, мальтоза, галактоза, фруктоза, сорбоза, раффиноза, нейраминовая кислота, аминосахаридов, таких как глюкозамин, галактозамин, N-метилглюкозамин ("меглумин"), полиолов, таких как маннит и сорбит, и аминокислот, таких как аргинин и глицин, или их смеси. Криопротектор предпочтительно представляет собой дисахарид. Авторы настоящего изобретения неожиданным образом обнаружили, что дисахариды демонстрируют более сильное влияние на стабильность композиций по сравнению с моносахаридами, полиолами и аминокислотами.

Фармацевтическая композиция также может содержать вещества, регулирующие тоничность. Термин "вещество, регулирующее тоничность", использованный в данном описании, означает фармацевтически приемлемые вещества, регулирующие тоничность, которые используют для модулирования тоничности композиции. Композиция может быть гипотонической, изотонической или гипертонической. В общем случае изотоничность относится к относительному осмотическому давлению раствора, обычно по сравнению с таковым сыворотки крови человека. Композиция по изобретению может быть гипотонической, изотонической или гипертонической, но предпочтительно будет изотонической. Изотоническая композиция представляет собой жидкость или жидкость, приготовленную путем разведения из твердой формы (например, из лиофилизированной формы), и означает раствор, имеющий ту же тоничность, что и тоничность другого раствора, с которым его сравнивают, такого как физиологический солевой раствор и сыворотка крови. Подходящие вещества, регулирующие тоничность, включают, но не ограничиваются этим, хлорид натрия, хлорид калия, глицерин и любой компонент, выбранный из группы, состоящей из аминокислот, сахаридов, в частности, глюкозы. Вещества, регулирующие тоничность, обычно используют в количестве от примерно 5 мМ до примерно 500 мМ. Как и в случае стабилизаторов и веществ, регулирующих тоничность, существует группа соединений, которые одновременно могут служить в качестве и стабилизатора, и вещества, регулирующего тоничность. Их примеры можно найти в группе сахаридов, аминокислот, полиолов, циклодекстринов, полиэтиленгликолей и солей. Примером сахарида, который может служить в качестве и стабилизатора, и вещества, регулирующего тоничность, является трегалоза.

Фармацевтическая композиция также может содержать такие адъюванты, как консерванты, увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты и диспергирующие агенты. Предупреждение присутствия микроорганизмов может быть обеспечено как посредством использования методик стерилизации, так и посредством введения различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабена, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и тому подобного. Консерванты обычно используют в количестве от примерно 0,001 до примерно 2% (масс./об.). Консерванты включают, но не ограничиваются этим, этанол, бензиловый спирт, фенол, мета-крезол, пара-хлор-мета-крезол, метил- или пропилпарабены, бензалконийхлорид.

Стабильную фармацевтическую композиция на основе антитела к PD-1 по настоящему изобретению можно использовать для профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, при этом такое заболевание или расстройство предпочтительно представляет собой рак; более предпочтительно PD-L1-экспрессирующий рак; причем такое заболевание или расстройство наиболее предпочтительно представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, меланому; наиболее предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки.

Стабильную фармацевтическую композицию на основе антитела к PD-1 по изобретению можно вводить внутривенным (в.в.), подкожным (п.к.) или любым другим способом парентерального введения, таким как способ, известный в фармацевтической области.

Ввиду ее высокой стабильности фармацевтическую композицию по изобретению можно вводить в.в. без необходимости использования встроенного фильтра и, следовательно, она гораздо удобнее в обращении, чем традиционные композиции, которые необходимо вводить с использованием встроенного фильтра. Встроенные фильтры, такие как Sterifix®, должны быть установлены в инфузионной системе для в.в. лекарственных средств с целью предотвращения попадания любых частиц, воздуха или микроорганизмов, которые могут присутствовать во в.в. растворе или системе. Частицы размером 5-20 микрон и больше обладают способностью препятствовать прохождению крови через легочные капилляры, что может приводить к таким осложнениям, как эмболия легких. Чужеродные частицы также могут быть причиной флебита в месте инъекции, и фильтры могут помочь в снижении заболеваемости флебитом.

Стабильные композиции, используемые для введения in vivo, должны быть стерильными. Это легко осуществить фильтрованием через мембраны для стерильной фильтрации.

Стабильная фармацевтическая композиция на основе антитела к PD-1 по изобретению может быть приготовлена способами, известными в данной области техники, например, с использованием ультрафильтрации-диафильтрации, диализа, добавления и смешивания, лиофилизации, повторного разведения и их комбинаций. Примеры приготовления композиций по изобретению можно найти в данном описании далее.

Кроме того, стабильная фармацевтическая композиция на основе антитела к PD-1 по изобретению может быть в лиофилизированной форме или в жидкой форме, полученной разведением из лиофилизированной формы. "Лиофилизированную форму" готовят с использованием метода лиофилизации, известного в данной области техники. Обычно лиофилизат имеет содержание остаточной влаги примерно от 0,1 до 5% (масс./масс.) и присутствует в виде порошка или физически стабильного осадка. "Приготовленная разведением форма" может быть получена из лиофилизата путем быстрого растворения после добавления среды для разведения. Подходящие среды для разведения включают, но не ограничиваются этим, воду для инъекций (WFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), растворы хлорида натрия (например, 0,9%-ный (масс./об.) раствор NaCl), растворы глюкозы (например, 5%-ные (масс./об.) растворы глюкозы), растворы, содержащие поверхностно-активное вещество (например, 0,01%-ный (масс./об.) раствор полисорбата 20) и поддерживающие рН забуференные растворы (например, забуференные фосфатом растворы).

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 показано влияние буферной системы на термостабильность антитела к PD-1.

На Фиг. 2 показано влияние сахарида на термостабильность антитела к PD-1.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее настоящее изобретение дополнительно подробно описано со ссылкой на следующие примеры; однако, эти примеры приведены только в целях иллюстрации и не предназначены для ограничения объема данного изобретения.

В примерах настоящего изобретения, если не описаны конкретные условия, то в общем случае эксперименты выполняют в традиционных условиях или в условиях, предложенных производителями материалов или продуктов. Если источник реагентов конкретно не указан, то реагенты представляют собой имеющиеся в продаже традиционные реагенты.

ПРИМЕРЫ

Способ приготовления по настоящему изобретению приведен ниже.

Стадия 1: отбирали образцы для определения концентрации антитела по белку в промежуточном контроле (middle control), после чего фильтровали концентрированный раствор антитела к PD-1. После пропускания промежуточного контроля, через фильтр из PVDF (поливинилидендифторид) (0,22 мкм) пропускали данный концентрированный раствор и фильтрат собирали. Антитело к PD-1 имеет аминокислотную последовательность тяжелой цепи, показанную в виде SEQ ID NO: 7, и аминокислотную последовательность легкой цепи, показанную в виде SEQ ID NO: 8, которые получают в соответствии со способом, описанным в WO 2015/085847.

Стадия 2: после подведения загрузочного объема до 5,3 мл фильтратом заполняли флакон емкостью 20 мл с пробкой для укупоривания наполовину (half stopper), разницу в загрузке определяли, отбирая образцы в начале, середине и конце заполнения, соответственно.

Стадия 3: содержащие раствор флаконы с пробкой помещали в камеру для лиофильной сушки и проводили лиофилизацию в соответствии с приведенным ниже способом лиофилизации. После завершения процедуры лиофилизации лиофилизированный порошок отключали от вакуума.

Стадия 4: открывали закаточную машину, добавляли алюминиевый колпачок и выполняли обжим колпачка.

Стадия 5: проводили визуальное обследование для подверждения отсутствия повреждений продукта, точности загрузочного объема и отсутствия других дефектов. Необходимо: напечатать и приклеить этикетку на флакон; напечатать этикетку для картонной коробки и сложить картонную коробку, выполнить упаковывание и маркировку.

Концентрацию белка в ходе промежуточного контроля измеряли с использованием спектрофотометра, работающего в ультрафиолетовой области (Thermo: Nanodrop 2000), и пик поглощения измеряли при 280 нм.

В качестве PVDF фильтра (0,22 мкм) используют фильтр Millipak-100 от Millipore.

В качестве машины для розлива используют линейную машину для розлива KGS8/2-X2 от Chutian Technology.

Разницу в загрузочных объемах определяли посредством взвешивания на электронных весах (производитель: Sartorius, модель BSA423S).

Для лиофилизации использовали вакуумную сублимационную сушилку Tofflon Lyo-B (SIP.CIP).

В качестве закаточной машины использовали автоматическую закаточную машину ножевого (knife) типа DZG-130 от Shandong Penglai.

Для визуального обследования внешнего вида использовали детектор прозрачности (clarity detector) YB-2A от Tianjin Jingtuo.

Измерения с применением HPLC (SEC и IEC (ионообменная хроматография)) в примерах выполняли, используя жидкостной хроматограф высокого давления Agilent 1200DAD (колонка TSK gel SuperSW mAb HR, 300×7,8 мм, и колонка ProPac™ WCX-10 BioLC™, 250×4 мм).

Температуру термоденатурации (Tm) белка измеряли, используя капиллярный дифференциальный сканирующий калориметр (DSC) MicroCal VP от GE.

Средний размер частиц по данным DLS (динамическое рассеяние света) измеряли, используя потенциометр для измерения размера наночастиц Zetasizer Nano ZS от Malvern.

Пример 1

На основе антитела к PD-1 готовили препарат при рН 4,8-5,6, содержащий 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл, соответственно. Концентрация антитела по белку составляла 40 мг/мл. Каждую композицию фильтровали и ею заполняли флакон емкостью 20 мл из нейтрального боросиликатного стекла для использования вместе со шприцем в количестве 5 мл/флакон для лиофилизации, стеклянный флакон закрывали применяемой для инъекций пробкой из галогенированного бутилкаучука и после лиофилизации получали стерильный порошок. Лиофилизированный продукт хранили при 25°С и 40°С для анализа стабильности. Эти результаты показали, что антитело к PD-1 было очень стабильным при рН 4,8-5,6.

Пример 2

Композицию на основе антитела к PD-1 в концентрации по белку 1 мг/мл готовили в следующих буферных растворах:

1) буфер 1: 10 мМ ацетат (натрия), рН 5,0;

2) буфер 2: 10 мМ гидрофосфат динатрия (лимонная кислота), рН 5,0;

3) буфер 3: 10 мМ сукцинат (натрия), рН 5,0;

4) буфер 4: 10 мМ цитрат (натрия), рН 5,0.

Термостабильность антител к PD-1 в каждой композиции определяли посредством дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC). Анализ средней температуры термоденатурации (Tm) лекарственного средства показал, что стабильность антитела к PD-1 в солевой системе на основе ацетатного буфера с очевидностью превосходит таковую в буферной системе на основе сукцината, цитрата, гидрофосфата динатрия. Результат показан на Фиг. 1.

Пример 3

Используя технологию DSC, проводили скрининг композиций на основе антитела к PD-1, содержащих белок в концентрации 1 мг/мл и разные сахариды в различных концентрациях:

1) буфер 1: 10 мМ ацетат (натрия), сахароза в концентрации 90 мг/мл, рН 5,2;

2) буфер 2: 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, рН 5,2;

3) буфер 3: 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, рН 5,2;

4) буфер 4: 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, рН 5,2.

Согласно Фиг. 2, Tm показывает, что антитело к PD-1 обладает наилучшей термостабильностью, когда концентрация α,α-трегалозы дигидрата достигает 90 мг/мл.

Пример 4

Композиции на основе антитела к PD-1, содержащие антитело к PD-1 в концентрации по белку 40 мг/мл, 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл и имеющие рН 5,2, готовили в следующих буферных растворах, содержащих поверхностно-активное вещество в разных концентрациях:

1) без поверхностно-активного вещества;

2) полисорбат 20 в концентрации 0,1 мг/мл;

3) полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл;

4) полисорбат 20 в концентрации 0,3 мг/мл;

5) полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл;

6) полисорбат 80 в концентрации 0,2 мг/мл.

Флаконы емкостью 20 мл заполняли каждой композицией в количестве 5 мл/флакон и флаконы герметично закрывали, используя пластиковую пленку. Лекарственное средство помещали на 25°С в термостатируемый шейкер и встряхивали при 500 об./мин. Результаты по стабилизации показали, что полисорбат 20 в концентрации 0,1-0,4 мг/мл эффективно предотвращал агрегацию антитела к PD-1 и образование больших частиц.

N/A означает "данные отсутствуют".

Пример 5

Антитело к PD-1 готовили в концентрации 40 мг/мл в растворе, содержащем 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл при рН 5,2. Флакон емкостью 20 мл заполняли композицией в количестве 5 мл/флакон, осуществляли лиофилизацию и флакон герметично закрывали пробкой для лиофилизации. Лиофилизированные образцы помещали на 10 суток в условия светового облучения с освещенностью 4500±500 люкс (Lx), или помещали на 10 суток при 40±2°С, или подвергали 3 раза циклу низкой температуры 4°С~40°С либо 3 раза циклу замораживания-оттаивания при температурах от -20°С до 40°С. Стабильность лекарственных средств оценивали посредством анализа содержания, чистоты и активности белка, и эти результаты показали, что антитело к PD-1 было стабильным в этом отношении и могло по-прежнему удовлетворять требованиям даже после воздействия сильного освещения, воздействия высокой температуры или низкой температуры и циклов замораживания-оттаивания.

CE-SDS означает капиллярный электрофорез в присутствии додецилсульфата натрия.

Пример 6

Антитело к PD-1 готовили в концентрации 40 мг/мл в растворе, содержащем 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл при рН 5,2. Стеклянные бутылки и чаны из нержавеющей стали марки 316L соразмерно заполняли композицией и оставляли на 24 часа при комнатной температуре. Анализ содержания и чистоты белка показал, что антитело к PD-1 оставалось стабильным в течение 24 часов. Данный препарат соответствует требованиям работы с чаном из нержавеющей стали марки 316L.

Пример 7

Антитело к PD-1 готовили в концентрации 40 мг/мл в растворе, содержащем 10 мМ ацетат (натрия), α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл при рН 5,2. Флакон емкостью 20 мл заполняли композицией в количестве 5 мл/флакон, осуществляли лиофилизацию при температуре первичной сушки -15°С, -10°С и -5°С, соответственно, и флакон герметично закрывали пробкой для лиофилизации. Лиофилизированный продукт хранили при 25°С и анализировали его стабильность. Результаты показывают, что температура в диапазоне от -10°С до -5°С представляет собой самую лучшую температуру первичной сушки для процесса лиофилизации.

Пример 8

Другие композиции

Согласно настоящему изобретению предложена стабильная фармацевтическая композиция, содержащая: комбинацию антитела к PD-1 (аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность легкой цепи с SEQ ID NO: 8) и стабилизирующий буфер, возможно выбранный из следующего далее:

(1) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 90 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при рН 5,2;

(2) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 90 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при рН 5,2;

(3) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 90 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при рН 5,4;

(4) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 60 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при рН 5,0;

(5) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 60 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,1 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при рН 5,2;

(6) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 60 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при рН 5,2;

(7) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 30 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при рН 4,8;

(8) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 30 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 30 мМ ацетатного буфера при рН 5,2; или

(9) α,α-трегалозы дигидрата в концентрации 30 мг/мл, полисорбата 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при рН 5,6.

В приведенных выше примерах концентрация антитела к PD-1 находилась в диапазоне от 1 мг/мл до 60 мг/мл, предпочтительно составляла 20-50 мг/мл, более предпочтительно 35-45 мг/мл и наиболее предпочтительно 40 мг/мл. Воплощение, которое может быть осуществлено, может быть выбрано, без ограничения, из следующих комбинаций:

(1) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(2) антитело к PD-1 в концентрации 1 мг/мл, α,α -трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 4,5;

(3) антитело к PD-1 в концентрации 20 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 1 мМ ацетатный буфер при рН 4,8;

(4) антитело к PD-1 в концентрации 35 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 85 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 2 мМ ацетатный буфер при рН 5,6;

(5) антитело к PD-1 в концентрации 45 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 95 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 5 мМ ацетатный буфер при рН 6,0;

(6) антитело к PD-1 в концентрации 50 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 100 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 15 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(7) антитело к PD-1 в концентрации 60 мг/мл, сахароза в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 40 в концентрации 0,2 мг/мл и 30 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(8) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, лактоза в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 60 в концентрации 0,2 мг/мл и 50 мМ ацетатный буфер при рН 4,5;

(9) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, трегалоза в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 80 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(10) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, мальтоза в концентрации 90 мг/мл, полиоксиэтилен-гидрогенизированное касторовое масло в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(11) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, сложный эфир глицерина и жирной кислоты в концентрации 0,01 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(12) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,05 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(13) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(14) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,5 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2;

(15) антитело к PD-1 в концентрации 40 мг/мл, α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 1 мг/мл и 10 мМ ацетатный буфер при рН 5,2.

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине, в частности к стабильному фармацевтическому препарату антитела к PD-1 и его применению. Предложен стабильный фармацевтический препарат антитела к PD-1, содержащий от 1 мг/мл до 60 мг/мл антитела к PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента, от 30 мг/мл до 120 мг/мл α,α-трегалозы дигидрата, от 0,01 мг/мл до 1 мг/мл полисорбата 20, от 2 мМ до 30 мМ ацетатного буфера. pH препарата находится в диапазоне от 4,5 до 6,0. Антитело к PD-1 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность легкой цепи с SEQ ID NO: 8. Также предложен лиофилизированный порошок, приготовленный путем лиофилизации фармацевтического препарата при температуре сушки от -10°C до -5°C. Полученный препарат применим в способе профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства. Изобретения обеспечивают эффективное подавление агрегации и дезамидирования антитела к PD-1, в результате чего предотвращается деградация антитела, при этом получается стабильный фармацевтический препарат для инъекций. Антитело к PD-1 остается стабильным даже после повторного растворения после лиофилизации. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 8 пр.

1. Стабильный фармацевтический препарат антитела к PD-1 для профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, содержащий:

от 1 мг/мл до 60 мг/мл антитела к PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента,

от 30 мг/мл до 120 мг/мл α,α-трегалозы дигидрата,

от 0,01 мг/мл до 1 мг/мл полисорбата 20 и

от 2 мМ до 30 мМ ацетатного буфера,

где pH препарата находится в диапазоне от 4,5 до 6,0,

где антитело к PD-1 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи с SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность легкой цепи с SEQ ID NO: 8.

2. Фармацевтический препарат по п. 1, где концентрация антитела к PD-1 или его антигенсвязывающего фрагмента находится в диапазоне от 20 мг/мл до 50 мг/мл, более предпочтительно от 35 мг/мл до 45 мг/мл, наиболее предпочтительно составляет 40 мг/мл.

3. Фармацевтический препарат по п. 1, где концентрация буфера составляет от 5 мМ до15 мМ, предпочтительно 10 мМ.

4. Фармацевтический препарат по п. 1, где pH препарата находится в диапазоне от 4,8 до 5,6, предпочтительно составляет pH 5,2.

5. Фармацевтический препарат по п. 1, где концентрация α,α-трегалозы дигидрата составляет от 30 мг/мл до 90 мг/мл, предпочтительно 90 мг/мл.

6. Фармацевтический препарат по п. 1, где концентрация полисорбата 20 составляет от 0,1 мг/мл до 0,4 мг/мл, предпочтительно 0,2 мг/мл.

7. Фармацевтический препарат по п. 1, содержащий антитело к PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент и

(1) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при pH 5,2; или

(2) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 90 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при pH 5,4; или

(3) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при pH 5,0; или

(4) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,1 мг/мл и 20 мМ ацетатного буфера при pH 5,2; или

(5) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 60 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при pH 5,2; или

(6) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при pH 4,8; или

(7) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,2 мг/мл и 30 мМ ацетатного буфера при pH 5,2; или

(8) α,α-трегалозы дигидрат в концентрации 30 мг/мл, полисорбат 20 в концентрации 0,4 мг/мл и 10 мМ ацетатного буфера при pH 5,6.

8. Стабильный фармацевтический препарат антитела к PD-1 по любому из пп. 1-7, где фармацевтический препарат представляет собой инъекционный фармацевтический препарат.

9. Лиофилизированный порошок для профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, приготовленный путем лиофилизации фармацевтического препарата по п.1.

10. Способ получения лиофилизированного порошка по п. 9, при котором лиофилизируют фармацевтический препарат по п.1 при температуре сушки для процесса лиофилизации от -10°C до -5°C.

11. Применение фармацевтического препарата по любому из пп. 1-8 для приготовления лекарственного средства для профилактики или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства.

12. Применение по п.11, где указанное PD-1-опосредуемое заболевание или расстройство представляет собой рак, более предпочтительно рак, экспрессирующий PD-L1, наиболее предпочтительно такой рак представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, меланому, наиболее предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки.

13. Способ предупреждения или лечения PD-1-опосредуемого заболевания или расстройства, включающий введение фармацевтического препарата по любому из пп. 1-8.

14. Способ по п.13, где указанное заболевание или расстройство представляет собой рак, более предпочтительно рак, экспрессирующий PD-L1, наиболее предпочтительно такой рак представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, меланому, наиболее предпочтительно немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки.