ПРИМЕНЕНИЕ КОМБИНАЦИИ АНТИТЕЛА К PD-1 И ИНГИБИТОРА VEGFR В ИЗГОТОВЛЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 2021 года по МПК A61K39/395 A61P35/00 C07K16/28 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к применению комбинации антитела к белку 1 программируемой (клеточной) смерти (PD-1) и ингибитора рецептора сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGFR) для изготовления лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Антитело к PD-1 специфически распознает PD-1 и связывается с ним на поверхности лимфоцитов, что приводит к блокированию опосредованного PD-1/PD- L1 (лиганд PD-1) сигнального пути и в свою очередь активирует связанную с

иммунитетом цитотоксичность T-клеток в отношении опухолей и модулирует иммунную систему организма с целью устранения раковых клеток in vivo. В WO201508584 описывается новое антитело к PD-1, которое в настоящее время проходит клинические испытания, и при его применении продемонстрирован определенный противоопухолевый эффект.

Апатиниб представляет собой первое в мире пероральное антиангиогенное лекарственное средство для лечения распространенного рака желудка, которое является высоко селективным в отношении VEGFR-2 и обладает сильным антиангиогенным действием. Результаты, полученные в фазе III многоцентрового рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого клинического исследования апатиниба на пациентах с метастазирующим раком желудка/гастроэзофагеального перехода после применения терапии второй линии, показали, что по сравнению в плацебо отдельно вводимый апатиниб может продлить медиану общей выживаемости на 1,8 месяца, медиану выживаемости без прогрессирования заболевания на 0,8 месяца, при поддающихся регулированию неблагоприятных эффектов (Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Phase III Trial of apatinib in Patients With Chemotherapy-Refractory Advanced or Metastatic Adenocarcinoma of the Stomach or Gastroesophageal Junction. J. Clin. Oncol., 2016, Feb 16). Структурная формула апатиниба является такой, какой она показана в формуле (I).

В CN101676267A описывается ряд солей апатиниба, таких как мезилат, гидрехлорид и тому подобное. Доклинические эксперименты на животных, описанные в CN101675930A, также показывают, что апатиниб в комбинации с цитотоксическими лекарственными средствами, такими как оксалиплатин, 5-фторурацил (5-FU), доцетаксел и доксорубицин, может значительно улучшить терапевтический эффект.

К настоящему времени никакого применения комбинации антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR не одобрено для продвижения на рынок, многие антитела к PD- 1 (от других компаний) и ингибиторы VEGFR (такие как сунитиниб, сорафениб и т.д.) находятся в фазе II/III клинического исследования, и показаниями для них являются злокачественный рак печени (сорафениб в комбинации с антителом к PD-1) и метастазирующая почечно-клеточная карцинома (сунитиниб в комбинации с антителом к PD-1). Предварительные результаты показывают, что обе эти комбинации лекарственных средств являются эффективными и действуют лучше, чем отдельное лекарственное средство.

В WO 2015119930 описывается применение антитела к PD-1 в комбинации с акситинибом, а в W02015088847 описывается применение антитела к PD-1 в комбинации с пазопанибом. Однако механизм действия таких ингибиторов VEGFR, как сорафениб, сунитиниб, акситиниб и пазопаниб, отличается от такового для апатиниба. Апатиниб оказывает наиболее сильный ингибирующий эффект на VEGFR-2, но оказывает незначительное ингибирующее действие или не оказывает никакого ингибирующего действия на другие киназы, то есть апатиниб обладает высокой селективностью в отношении VEGFR-2. Следовательно, заболевание, которое лечат апатинибом, также отличается от заболеваний, которые лечат упомянутыми выше лекарственными средствами, и вопрос о том, может ли апатиниб действовать синергично с антителом к PD-1 и повышать его эффективность, требует дальнейшего изучения. Помимо этого, согласно настоящему клиническому исследованию антитела к PD-1, вводимому отдельно (Phase I study of the anti-PD-1 antibody SHR-1210 in patients with advanced solid tumors. (2017): e15572-e15572), число случаев капиллярной гемангиомы достигало 79,3%, число случаев гипотиреоза составляло 29,3%, число случаев зуда составляло 19,0%, и число случаев диареи составляло 10,3%, в случае лечения только антителом к PD-1. Такая высокая частота неблагоприятных эффектов несомненно создает нагрузку для психического здоровья и качества жизни пациентов с раком; поэтому очень важно уменьшить количество неблагоприятных эффектов, связанных с введением лекарственного средства.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно настоящему изобретению предложено применение комбинации антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR для изготовления лекарственного средства для лечения рака.

Предпочтительно, ингибитором VEGFR является ингибитор VEGFR-2.

Предпочтительным ингибитором VEGFR по настоящему изобретению является ингибитор VEGFR, который имеет IC₅₀ (концентрацию, вызывающую 50%-ное ингибирование) меньше 100 нМ для VEGFR киназы и не обладает никакой ингибирующей активностью в отношении рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), рецептора эпидермального фактора роста человека 2 типа (HER2), рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) (IC₅₀ >10000 нМ) согласно тест- методу, описанному в CN101676267A. Особенно предпочтительным ингибитором VEGFR является ингибитор VEGFR-2, имеющий IC₅₀ меньше 50 нМ для VEGFR-2 киназы, предпочтительно меньше 20 нМ, более предпочтительно меньше 10 нМ и наиболее предпочтительно меньше 5 нМ, и его ингибирующее влияние на VEGFR-1 или VEGFR-3 является слабым, например, его IC₅₀ превышает 20 нМ, предпочтительно превышает 50 нМ.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения ингибитором VEGFR-2 является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль.

Антитело к PD-1 является известным антителом, и предпочтительно вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно.

Вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно.

При этом описанные выше последовательности CDR показаны в приведенной ниже таблице.

Предпочтительно, антитело к PD-1 представляет собой гуманизированное антитело.

Предпочтительной последовательностью легкой цепи гуманизированного антитела является последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 8, или ее вариант; данный вариант предпочтительно имеет 0-10 аминокислотных замен в вариабельной области легкой цепи; более предпочтительно, имеет аминокислотную замену A43S.

Последовательностью тяжелой цепи гуманизированного антитела является последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 7, или ее вариант; данный вариант предпочтительно имеет 0-10 аминокислотных замен в вариабельной области тяжелой цепи; более предпочтительно, имеет аминокислотную замену G44R.

Особенно предпочтительно, последовательностью легкой цепи гуманизированного антитела является последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 8, а последовательностью тяжелой цепи является последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 7.

Последовательности тяжелой и легкой цепей вышеупомянутого гуманизированного антитела приведены ниже:

тяжелая цепь

легкая цепь

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения ингибитор VEGFR также может быть выбран из группы, состоящей из MP-0250, DE-120, ALN- VSP, афлиберцепта, анекортава, BI-695502, бевацизумаба, PF-06439535, карбоксиамидотриазола, вануцизумаба, RG-7716, аналога бевацизумаба, навициксизумаба, ранибизумаба, аналога ранибизумаба, конберцепта, IBI-302, BI- 836880, ARQ-736, RPI-4610, LMG-324, PTC-299, ABT-165, AG-13958, бролуцизумаба, PAN-90806, ваталаниба, ODM-203, алтиратиниба, TG-100572, OPT-302, TG-100801, CEP-7055, TAS-115, илоразертиба (ilorasertib), форетениба (ilorasertib), JNJ-26483327, метатиниба, R-1530, тафетиниба, вороланиба, донафениба, субутиниба subutinib), регорафениба, VGX-100, ENMD-2076, анлотиниба, нингетиниба (ningetinib), тезеватиниба (tesevatinib), танибирумаба (tanibirumab), луцитаниба (lucitanib) цедираниба, чиаураниба (chiauranib), IMC-3C5, глесатиниба (glesatinib) KRN-633, икруцумаба, PF-337210, RAF265, пуквитиниба (puquitinib), SU-014813, тивозаниба, фруквинтиниба, ситраватиниба, пегаптаниба, пазопаниба, вандетаниба, акситиниба, сульфатиниба, рамуцирумаба, плитедепсина, орантиниба, алацизумаба пегола, телатиниба, понатиниба, кабозантиниба, ленватиниба, бриваниба аланината, линифаниба.

В случае применения настоящего изобретения рак предпочтительно представляет собой рак, экспрессирующий PD-L1; более предпочтительно представляет собой рак молочной железы, рак легкого, рак желудка, рак кишечника, рак почки, рак печени, меланому, немелкоклеточный рак легкого; наиболее предпочтительно представляет собой немелкоклеточный рак легкого, меланому и рак почки, рак кишечника, и рак кишечника включает рак толстой кишки, колоректальный рак и тому подобное. При назначении апатиниб предпочтительно вводят в форме фармацевтически приемлемой соли, при этом фармацевтически приемлемая соль может быть выбрана из группы, состоящей из мезилата и гидрохлорида.

В частности, при назначении антитело к PD-1 может быть введено в дозе 0,5-30 мг/кг, предпочтительно 2-10 мг/кг, более предпочтительно 2-6 мг/кг и наиболее предпочтительно 3 мг/кг; его можно вводить один раз каждые 1-3 недели, предпочтительно один раз каждые 2 недели. Для взрослых людей также можно использовать фиксированную дозу, например, 100-1000 мг за один раз, предпочтительно 200-600 мг. Доза ингибитора VEGFR может составлять 3-200 мг/кг. Для взрослых людей также можно использовать фиксированную дозу, например, 100-1000 мг, 250-1000 мг, предпочтительно 400-850 мг, 100-500 мг, ее можно вводить один раз в сутки.

В настоящем изобретении термин “комбинация” относится к способу введения, включающему различные ситуации, в которых два лекарственных средства вводят последовательно или одновременно. Так называемое “одновременное” введение в данном описании относится к введению антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR в течение одного и того же цикла введения, например, введение этих двух лекарственных средств в течение 2-х суток или в течение 1-х суток. Так называемое “последовательное” введение включает в себя введение антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR в различных циклах введения, соответственно. Все эти способы введения относятся к комбинированному введению, описанному в настоящем изобретении.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения антитело к PD-1 вводят посредством инъекции, например, подкожно или внутривенно, и композицию на основе антитела к PD-1 изготавливают в инъецируемой форме перед инъекцией. Особенно предпочтительная инъецируемая форма антитела к PD-1 представляет собой порошок для инъекций или лиофилизированный порошок, содержащие антитело к PD-1, буфер, стабилизатор и возможно содержащие поверхностно-активное вещество. Буфер может быть выбран как минимум из одного более чем одного из следующего: ацетатного, цитратного, сукцинатного и фосфатного буфера. Стабилизатор может быть выбран из сахаров или аминокислот, предпочтительно дисахаридов, таких как сахароза, лактоза, трегалоза и мальтоза. Поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полиоксиэтиленированного гидрогенизированного касторового масла, сложного эфира глицерина и жирной кислоты, сложного эфира полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты; предпочтительно, чтобы сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и жирной кислоты представлял собой полисорбат 20, 40, 60 или 80, наиболее предпочтительно полисорбат 20. Наиболее предпочтительная инъецируемая форма антитела к PD-1 содержит антитело к PD-1, ацетатный буфер, трегалозу и полисорбат 20.

Согласно настоящему изобретению предложено антитело к PD-1, которое описано выше, в комбинации с ингибитором VEGFR, который описан выше, в качестве лекарственного средства для лечения опухолей.

Согласно настоящему изобретению предложено антитело к PD-1, которое описано выше, в комбинации с ингибитором VEGFR, который описан выше, в качестве лекарственного средства для ослабления неблагоприятного эффекта лекарственных средств. Предпочтительно, данный неблагоприятный эффект лекарственных средств выбран из эффекта, вызываемого антителом к PD-1 или ингибитором VEGFR.

Согласно настоящему изобретению предложено антитело к PD-1, которое описано выше, в комбинации с ингибитором VEGFR, который описан выше, в качестве лекарственного средства для снижения дозы антитела к PD-1, вводимой отдельно, и/или дозы ингибитора VEGFR, вводимой отдельно.

Согласно настоящему изобретению предложен способ лечения опухоли/рака, включающий введение пациенту антитела к PD-1, которое описано выше, и ингибитора VEGFR, который описан выше.

Согласно настоящему изобретению предложен способ снижения дозы либо антитела к PD-1, либо ингибитора VEGFR, вводимых по отдельности, включающий введение пациенту антитела к PD-1, которое описано выше, в комбинации с ингибитором VEGFR, который описан выше.

Предпочтительно, в случае введения в комбинации с антителом к PD-1 ингибитор VEGFR вводят в дозе 10%-100%, предпочтительно 10%-75%, более предпочтительно 75%, 50%, 25%, 12,5% от дозы, вводимой отдельно.

Предпочтительно, в случае введения в комбинации с ингибитором VEGFR антитело к PD-1 вводят в дозе 10%-100%, предпочтительно 10%-50% от дозы, вводимой отдельно.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения, в том случае, когда антитело к PD-1 вводят в комбинации с ингибитором VEGFR, данный неблагоприятный эффект лекарственных средств, опосредованный антителом к PD-1 и/или иммунной системой, может быть ослаблен; предпочтительно, данный неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из связанного с сосудистой системой неблагоприятного эффекта, гипофункции желез, связанного с кожей неблагоприятного эффекта, связанного с дыхательной системой неблагоприятного эффекта, связанного с печенью неблагоприятного эффекта, связанного с эндокринной системой неблагоприятного эффекта, связанного с пищеварительной системой неблагоприятного эффекта, связанного с почками неблагоприятного эффекта и утомляемости, повышенной температуры; предпочтительный связанный с сосудистой системой неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из гемангиомы, васкулита, лимфангиомы; гипофункция желез выбрана из группы, состоящей из гипотиреоза, гипопаратиреоза, гипофункции поджелудочной железы, гипофункции предстательной железы; связанный с кожей неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из зуда, крапивницы, сыпи, токсического эпидермального некроза; связанный с дыхательной системой неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из пневмонии, бронхита, хронической обструктивной болезни легких, фиброза легких; связанный с печенью неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из гепатита и нарушения функции печени; связанный с эндокринной системой неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из диабета I типа, диабета II типа, гипогликемии; связанный с почками неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из нефрита и почечной недостаточности; связанный с пищеварительной системой неблагоприятный эффект выбран из группы, состоящей из диареи, тошноты, рвоты, энтерита, засорения желудка; более предпочтительно, неблагоприятный эффект лекарственных средств выбран из группы, состоящей из гемангиомы, гипотиреоза, гипопаратиреоза, зуда, пневмонии, гепатита, нарушения функции печени, диабета I типа, нефрита, почечной недостаточности.

Согласно настоящему изобретению предложены фармацевтический набор или фармацевтическая упаковка, которые содержат ингибитор VEGFR и антитело к PD-1, описанные выше.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1. Влияние введения антитела и соединения на относительный объем ксенотрансплантата MC38 (PD-L1) у опухоленесущих мышей.

Фиг. 2. Влияние введения антитела и соединения на массу тела опухоленесущих мышей с ксенотрансплантатом MC38 (PD-L1), при этом * указывает на то, что p<0,05, по сравнению с получавшей холостую пробу контрольной группой.

Фиг. 3. Влияние введения антитела и соединения на ксенотрансплантат MC38 (PD-L1) у опухоленесущих мышей - на массу опухоли.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение дополнительно описывается ниже в совокупности с примерами, при этом подразумевается, что данные примеры не ограничивают объем настоящего изобретения.

Пример 1. Влияние антитела к PD-1 и апатиниба мезилата, вводимых по отдельности или в комбинации, на имеющих ген PD-1 человека трансгенных C57 мышей, которые несут ксенотрансплантат мышиных клеток линии MC-38 (PD-L1) рака толстой кишки с введенным туда геном PD-L1

1. Цели исследования

В качестве тестируемых животных использовали имеющих ген PD-1 человека трансгенных мышей и оценивали влияние антитела к PD-1 в комбинации с апатинибом на имеющих ген PD-1 человека трансгенных C57 мышах, при этом указанные трансгенные мыши несут ксенотрансплантат мышиных клеток MC-38 (PD-L1) рака толстой кишки, куда был введен ген PD-L1.

2. Тестируемые антитела и соединения

Антитело к PD-1 получали согласно способу, описанному в заявке WO2015085847, в которой данное антитело имеет соответствующий код H005-1, и последовательности тяжелой и легкой цепи показаны в настоящем изобретении в SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8. Номер партии: P1512, 200 мг/флакон, приготовленное в концентрации 20 мг/мл перед применением.

Апатиниба мезилат получали согласно способу, описанному в CN101676267A, номер партии: 668160401; молекулярная масса: 493,58; чистота: 99,60%.

3. Экспериментальные животные

Трансгенные C57 мыши, несущие ген PD-1 человека, беспатогенные (SPF), с разной массой тела, 50% самцов и 50% самок, приобретенные у IsisInnovation Limited, UK.

4. Подготовка лекарственных средств

Антитело к PD-1 (3 мг/кг): концентрацию исходного раствора антитела к PD-1 (20 мг/мл) подводили до значения 0,3 мг/мл, используя забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), и объем внутрибрюшинной (в.б.) инъекции составлял 0,2 мл/мышь.

Апатиниб (200 мг/кг): 400 мг апатиниба растворяли в 20 мл 0,5%-ного раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (NaCMC), концентрацию подводили до 20 мг/мл и вводили из расчета по 0,2 мл на одну мышь через желудочный зонд.

В качестве наполнителя для растворителя использовали иммуноглобулин G человека (HIgG) (3 мг/кг), который растворяли в 0,5%-ном растворе CMC, концентрацию подводили до 0,3 мг/мл, и объем для внутрибрюшинной инъекции составлял 0,2 мл/мышь.

5. Метод тестирования

5.1. Адаптацию C57 мышей к лабораторным условиям выполняли в течение более 5 суток.

5.2. Трансплантация опухолевых клеток

Подготовку кожи у трансгенных C57 мышей, несущих ген PD-1 человека, выполняли за сутки до эксперимента, клетки линии MC38 (PD-L1) (5×106/мышь) инокулировали 12 июня подкожно в правый бок, и опухоли развивались в течение 8 суток. Когда размер опухолей достигал 142,17±13,30 мм³, животных случайным образом распределяли на 4 группы (в 0-е сут) по 8 мышей в каждой группе (в каждой группе по четыре самца мыши и четыре самки мыши).

5.3. Доза и способ введения

Антитело к PD-1 вводили внутрибрюшинной инъекцией, Q2D*7 (один раз каждые 2 суток, в целом 7 раз), апатиниб, желудочный зонд, QD*14 (один раз в сутки в течение 14 суток). Конкретная схема введения лекарственного средства показана в Таблице 1.

5.4. Определение объема ксенотрансплантата и массы тела мышей

Объем опухоли и массу тела измеряли два раза в неделю и данные регистрировали.

5.5. Статистика

Использовали программное обеспечение для статистического анализа Excel 2003: среднее значение рассчитывали с использованием функции avg; стандартное отклонение (SD) рассчитывали с использованием функции STDEV; стандартную ошибку среднего (SEM) рассчитывали с использованием функции STDEV/SQRT; значение P, показывающее разницу между группами, рассчитывают с использованием функции TTEST.

Формула для расчета объема опухоли (V): V = 1/2 × Llong × Lshort².

Относительный объем опухоли (RTV) = V_T/V₀.

Степень ингибирования роста опухоли (%) = (C_RTV - T_RTV)/C_RTV (%).

При этом V₀ и V_T представляют собой объем опухоли в начале эксперимента и в конце эксперимента, соответственно. C_RTV и T_RTV представляют собой относительные объемы опухоли для получавшей холостую пробу контрольной группы и экспериментальной группы в конце эксперимента, соответственно.

6. Результаты тестирования

Результаты этого эксперимента показаны для случая, когда антитело к PD-1 вводили внутрибрюшинной инъекцией, Q2D*7. Соединение апатиниб вводили через желудочный зонд, QD*14. На 21-е сутки степень ингибирования роста опухоли в случае антитела к PD-1 (3 мг/кг) составляла 20,40%, а степень ингибирования роста опухоли в случае группы, которой вводили только апатиниб (200 мг/кг), составляла 35,67%; степень ингибирования роста опухоли в случае комбинации антитела к PD-1 (3 мг/кг) и апатиниба (200 мг/кг) составляла 63,07% (значительно отличаясь от таковой в контрольной группе, получавшей HIgG), и не было никаких существенных различий между группами с другим режимом введения (с введением только одного агента) по сравнению с получавшей HIgG контрольной группой. Исходя из результатов эксперимента, эффективность в группе, получавшей комбинацию антитела к PD-1 (3 мг/кг) + апатиниба (200 мг/кг), превосходит эффективность антитела к PD-1, вводимого отдельно, и эффективность апатиниба, вводимого отдельно. Масса тела мышей в каждой группе была обычной, и это указывает на то, что данное лекарственное средство не оказывало никаких явных побочных эффектов. Конкретные данные показаны в Таблице 1 и на Фиг. 1-3.

Пример 2. Клиническое исследование антитела к PD-1 в комбинации с апатиниба мезилатом в случае лечения распространенной злокачественной опухоли

Критерии включения: (1) наличие распространенной злокачественной опухоли; (2) неудачный результат химиотерапии с использованием средств первой линии, второй линии или выше; (3) наличие поддающихся измерению поражений; (4) балл по шкале ECOG (Восточная объединенная онкологическая группа) составляет 0-1.

Тестируемые лекарственные средства: имеющийся в продаже апатиниба мезилат в виде таблетки; антитело к PD-1 из примера 1.

Способ введения: до 20 сентября 2017 г. было обследовано в общей сложности 31 субъекта, 30 субъектов зачислены для прохождения исследования (14 субъектов отказались от лечения, а 16 субъектов по-прежнему оставались в группе, подлежащей введению).

В качестве способа введения для субъектов с №№ 001-005 применяли внутривенную инфузию антитела к PD-1, 3 мг/кг, один раз каждые 2 недели; апатиниб вводили перорально (п.о.), 500 мг, один раз в сутки; в качестве способа введения для субъектов с №№ 006-010 применяли внутривенную инфузию антитела к PD-1, 200 мг/кг, один раз каждые 2 недели; апатиниб вводили перорально, 125 мг, один раз в сутки; в качестве способа введения для субъектов с №№ 011-031 применяли внутривенную инфузию антитела к PD-1, 200 мг, один раз каждые 2 недели; апатиниб вводили перорально, 250 мг, один раз в сутки.

Клинические результаты: с точки зрения эффективности: на 6^ой неделе имели 24 поддающихся оценке результата для оценки эффективности, с частотой контроля заболевания (DCR) 83,3% (20/24); на 12^ой неделе имели 19 поддающихся оценке результатов для оценки эффективности, с DCR 63,2% (12/19); на 18^ой неделе имели 10 поддающихся оценке результатов для оценки эффективности, с DCR 70% (7/10); на 24^ой неделе имели 5 поддающихся оценке результатов для оценки эффективности, с DCR 80% (4/5); на текущий момент имелись 2 субъекта с гепатоклеточной карциномой с эффектом через 24 недели в виде PR (частичный ответ) и выживаемостью без прогрессирования заболевания (PFS) в течение более 6 месяцев. Среди 24 поддающихся оценке результатов фиксировали 4 случая, демонстрирующих оптимальную эффективность с PR, 15 случаев стабилизации заболевания (SD) и 5 случаев прогрессирования заболевания (PD). Несмотря на то, что ORR (частота объективных ответов) составляла только 16,7%, DCR достигала 79%, то есть частота контроля заболевания была высокой, и некоторые субъекты имели PFS в течение более 6 месяцев. Конкретные результаты показаны в Таблице 2, Таблице 3 и Таблице 4. Помимо этого, доза только апатиниба при лечении солидной опухоли (такой как рак желудка, аденокарцинома гастроэзофагеального перехода, рак печени и т.д.) обычно составляет до 850 мг/сутки включительно (см. инструкции по применению апатиниба). Однако, в воплощениях данного изобретения применение комбинации апатиниба и антитела к PD-1 позволяет снизить дозу апатиниба до 125 мг/сутки и обеспечивает улучшенную эффективность и более высокую степень безопасности по сравнению со случаем введения одного только апатиниба. С точки зрения безопасности, до 20 сентября сообщалось об 11 случаях серьезных нежелательных событий (SAE) у 8 субъектов, и число случаев SAE составляло 26,7% (8/30). 7 SAE наблюдали у субъектов с №№ 01-005 (доза апатиниба для первоначального тестирования была высокой, 500 мг), на которых приходилась большая часть серьезных нежелательных событий. Однако, в результате изменения схемы приема путем корректировки дозы было обнаружено, что может сохраняться хороший противоопухолевый эффект, и кроме того, этот неблагоприятный эффект, обусловленный высокой дозой апатиниба, может быть значительно ослаблен. Помимо этого, в данном клиническом исследовании неожиданно было обнаружено, что при использовании комбинации апатиниба и антитела к PD-1 практически не наблюдалось никакого гемангиома-ассоциированного неблагоприятного эффекта при лечении злокачественных опухолей по сравнению со случаем применения одного только антитела к PD-1. Гемангиому обнаруживали только у одного субъекта, которому вводили только антитело к PD-1, вследствие непереносимости комбинированной терапии.

Пример 3. Фаза II клинического исследования антитела к PD-1 в комбинации с апатиниба мезилатом в случае лечения распространенного немелкоклеточного рака легкого

Критерии включения: (1) наличие распространенного немелкоклеточного рака легкого; (2) неудачный результат химиотерапии с использованием средств первой линии, второй линии или выше; (3) наличие поддающихся измерению поражений; (4) балл по шкале ECOG составляет 0-1.

Тестируемые лекарственные средства: имеющийся в продаже апатиниба мезилат в виде таблетки; антитело к PD-1 из примера 1.

Способ введения: антитело к PD-1, один раз каждые 2 недели, внутривенная инфузия, каждый раз по 200 мг; апатиниба мезилат перорально, один раз в сутки, каждый раз 250 мг, или 375 мг, или 500 мг.

Клинические результаты: до 28 июля в целом скринингу подвергали 15 субъектов, из которых 12 были зачислены для прохождения исследования. В общей сложности для 12 субъектов был выполнен по меньшей мере 1 цикл наблюдения за результатами введения, 10 пациентов (10/12) имели заболевание, характеризующееся как стабильное, и у 1 пациента наблюдали частичную ремиссию. Для получения более подробной информации см. Таблицу 5. Помимо этого, в ходе применения комбинации апатиниба мезилата и антитела к PD-1 неожиданно было обнаружено, что комбинация апатиниба мезилата и антитела к PD-1 повышала эффективность и ослабляла неблагоприятные эффекты по сравнению со случаем введения одного только антитела к PD-1. В этом исследовании общие неблагоприятные эффекты обычно имели степень I-II, число случаев ассоциированных с антителом к PD-1 или иммуноопосредованных неблагоприятных эффектов (таких как капиллярная гемангиома) составляло только 8% (1 случай), и число случаев гипотиреоза составляло только 8% (1 случай), при этом связанных с пищеварительной системой неблагоприятных эффектов (таких как диарея) и связанного с кожей неблагоприятного эффекта (такого как зуд) не наблюдали. Согласно отчету Американского общества клинических онкологов (ASCO), опубликованному в 2017 г., в случае антитела к PD-1, вводимого отдельно для лечения солидных опухолей в фазе I клинического исследования (Phase I study of the anti-PD-1 antibody SHR-1210 in patients with advanced solid tumors. (2017): e15572-e15572), продемонстрировано, что число случаев капиллярной гемангиомы достигало 79,3%, число случаев гипотиреоза составляло 29,3%, число случаев зуда составляло 19,0%, число случаев диареи составляло 10,3%. Таким образом, комбинация апатиниба мезилата и антитела к PD-1 может не только уменьшать или регулировать пролиферацию опухолевых клеток немелкоклеточного рака легкого (в случаях, когда наблюдали неудачный результат химиотерапии), но также ослаблять ассоциированные с антителом к PD-1 или иммуноопосредованные неблагоприятные эффекты и улучшать качество жизни пациентов.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> СУЧЖОУ САНКАДИЯ БИОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ КО., ЛТД.

ЦЗЯНСУ ХЭНЖУЙ МЕДИЦИН КО., ЛТД.

<120> ПРИМЕНЕНИЕ КОМБИНАЦИИ АНТИТЕЛА К PD-1 И ИНГИБИТОРА VEGFR В

ИЗГОТОВЛЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ

НОВООБРАЗОВАНИЙ

<130> 360249CG

<160> 8

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 1 ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ

<400> 1

Ser Tyr Met Met Ser

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 2 ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ

<400> 2

Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 3 ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ

<400> 3

Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 1 ЛЕГКОЙ ЦЕПИ

<400> 4

Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 2 ЛЕГКОЙ ЦЕПИ

<400> 5

Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ГИПЕРВАРИАБЕЛЬНОГО УЧАСТКА 3 ЛЕГКОЙ ЦЕПИ

<400> 6

Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 443

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125

Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190

Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205

Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

245 250 255

Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn

260 265 270

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

275 280 285

Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

290 295 300

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

305 310 315 320

Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

325 330 335

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

340 345 350

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

355 360 365

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

370 375 380

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

385 390 395 400

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

405 410 415

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

420 425 430

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 8

<211> 214

<212> ПРТ

<213> ИСКУССТВЕННАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ

<220>

<223> PD-1 ФОРМА ЛЁГКОЙ ЦЕПИ

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<---

Предложено применение комбинации антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR для изготовления лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, где ингибитором VEGFR является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль. При этом вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно, а вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно. Также предложены способ ослабления неблагоприятного эффекта, вызываемого антителом к PD-1 и ингибитором VEGFR, и способ снижения дозы антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR, вводимых по отдельности. Также предложен фармацевтический набор для лечения опухоли/рака, содержащий вышеуказанные ингибитор VEGFR и антитело к PD-1. Изобретения эффективны в лечении злокачественного новообразования, а также снижают возникновение гемангиома-ассоциированного неблагоприятного эффекта при лечении злокачественных опухолей. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 5 табл., 3 пр.

1. Применение комбинации антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR для изготовления лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, где ингибитором VEGFR является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль и где вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно, а вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит гипервариабельный участок 1 тяжелой цепи (HCDR1), HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно.

2. Применение по п. 1, где антитело к PD-1 представляет собой гуманизированное антитело.

3. Применение по п. 2, где последовательность легкой цепи гуманизированного антитела представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 8.

4. Применение по п. 2, где последовательность легкой цепи гуманизированного антитела представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 8,

с аминокислотной заменой A43S.

5. Применение по п. 2, где последовательность тяжелой цепи гуманизированного антитела представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 7.

6. Применение по п. 2, где последовательность тяжелой цепи гуманизированного антитела представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 7,

с аминокислотной заменой G44R.

7. Применение по п. 2, где последовательность легкой цепи гуманизированного антитела представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 8,

а последовательность тяжелой цепи представляет собой последовательность, которая показана в SEQ ID NO: 7.

8. Применение по п. 1, где злокачественное новообразование представляет собой рак, экспрессирующий PD-L1 (лиганд PD-1); предпочтительно выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака легкого, рака печени, рака желудка, рака кишечника, рака почки, меланомы, немелкоклеточного рака легкого; наиболее предпочтительно выбран из группы, состоящей из немелкоклеточного рака легкого, меланомы, рака печени и рака почки.

9. Способ ослабления неблагоприятного эффекта, вызываемого антителом к PD-1 и ингибитором VEGFR, включающий введение пациенту ингибитора VEGFR в комбинации с антителом к PD-1, где ингибитор VEGFR вводят в дозе от 100 мг до 500 мг, предпочтительно от 100 мг до 400 мг, где ингибитором VEGFR является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль, и где вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно, а вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно.

10. Способ снижения дозы антитела к PD-1 и ингибитора VEGFR, вводимых по отдельности, включающий введение пациенту ингибитора VEGFR в комбинации с антителом к PD-1, где антитело к PD-1 вводят в дозе от 100 мг до 1000 мг, и ингибитор VEGFR вводят в дозе от 100 мг до 500 мг, предпочтительно от 100 мг до 400 мг; где ингибитором VEGFR является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль, и где вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно, а вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно.

11. Применение по п. 1, где фармацевтически приемлемая соль апатиниба выбрана из группы, состоящей из мезилата и гидрохлорида.

12. Применение по п. 1, где антитело к PD-1 вводят в дозе от 100 мг до 1000 мг за один раз, предпочтительно от 200 мг до 600 мг.

13. Применение по п. 1, где ингибитор VEGFR вводят в дозе от 100 мг до 500 мг, предпочтительно от 100 мг до 400 мг.

14. Фармацевтический набор для лечения опухоли/рака, содержащий ингибитор VEGFR и антитело к PD-1, где ингибитором VEGFR является апатиниб или его фармацевтически приемлемая соль и где вариабельная область легкой цепи антитела к PD-1 содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, которые показаны в SEQ ID NO:4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6, соответственно, а вариабельная область тяжелой цепи антитела к PD-1 содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, которые показаны в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, соответственно.

15. Применение по п. 1, где ингибитор VEGFR вводят в дозе от 125 мг до 375 мг, предпочтительно в дозе 125 мг, 250 мг или 375 мг.