Способ морфометрической оценки прогноза течения нодулярного склероза лимфомы Ходшкина по индексу доли CD163+ и CD68+ макрофагов в лимфатических узлах Российский патент 2020 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения нодулярного склероза лимфомы Ходжкина (ЛХ) путем морфометрического подсчета в гистологических срезах лимфоузлов относительного содержания CD163+ и CD68+ макрофагов после иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания лимфоузлов и последующего расчета индекса доли (ИД) CD 163+ и CD68+ клеток.

Цель изобретения - разработка способа морфометрической оценки прогноза течения нодулярного склероза ЛХ по ИД CD 163+ и CD68+ макрофагов в лимфатических узлах.

Заболеваемость ЛХ в России составляет 2,1 случая на 100000 населения в год, 2,2 - в странах Европейского союза и 2,8 - в США. Возникает в любом возрасте, преимущественно в интервале 16-35 лет, что обусловливает высокую социальную значимость (Поддубная И.В., Савченко В.Г. Лимфома Ходжкина. В кн.: Российские рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний. М.: Буки Веди, 2018; 11-28).

Современные методы лечения позволяют достичь 5-летнюю общую выживаемость более, чем в 95% случаев даже при распространенных стадиях заболевания. Тем не менее у 15-25% пациентов отсутствует ответ на первичную терапию (рефрактерность) или возникают ранние рецидивы после ее проведения. В таких ситуациях методом выбора становится интенсификация лечения, в том числе и высокодозная химиотерапия с трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (Мочкин Н.Е., Саржевский В.О., Дубинина Ю.Н. и др. Результаты лечения классической лимфомы Ходжкина, включающего высокодозную химиотерапию с трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток, в НМХЦ им. Н.И. Пирогова; Клиническая онкогематология;2018; 11 (3):234-240).

Близким техническим решением к предполагаемому изобретению является исследование клеток, экспрессирующих CD 163 и CD68 в лимфоузлах при ЛХ, выполненное исследователями из Южной Кореи (Yoon DH, Koh YW, Kim S, et al, CD68 and CD163 as prognostic factor for Korean patients with Hodgkin lymphoma; Eur J Haematol., 2012;88(4):292-305. doi: 10.1111/j. 1600-0609.2011.01731.x.). Данный метод позволяет выявить CD 163 и CD68 позитивные элементы на всех стадиях лимфомы Ходжкина. Основными отличиями аналога являются, во-первых, то, что анализ проводился у больных ЛХ без учета конкретного варианта заболевания; во-вторых, не выполнялся морфометрический подсчет процентного числа CD 163+ и CD68+ макрофагов; в-третьих, не проводился расчет индекса доли исследуемых клеток. Следовательно, существующий метод не позволяет количественно оценить содержание и соотношение макрофагальных элементов в лимфатическом узле.

Способа морфометрической оценки прогноза течения нодулярного склероза лимфомы Ходжкина по индексу доли CD 163+ и CD68+ макрофагов в гистологических срезах лимфоузлов не существует.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предполагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории патоморфологии ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в соответствии с планом научно-исследовательской работы.

Способ осуществляется следующим образом

После лимфаденэктомии у больных нодулярным склерозом ЛХ выполняли гистологическую проводку послеоперационного материала по общепринятому способу. На срезах толщиной 3-5 мкм, приготовленных из парафиновых блоков лимфоузла, проводили гистологическое исследование. Для идентификации и визуализации CD 163+ и CD68+ позитивных клеток в исследуемом материале использовали ИГХ метод окрашивания. Иммунореактивность первичных антител CD 163 (клон MRQ-26, «Cell Marque», США), CD68 (клон PG-M1, «Dako», Дания) выявляли с помощью вторичных антител конъюгированных с пероксидазой, входящей в набор реактивов EnVISION+ («Dako»). Постановку реакции осуществляли по стандартной методике в соответствии с протоколом систем визуализаций «Dako». Морфометрическую оценку относительного числа CD 163+ и CD68+ макрофагов выполняли на световом микроскопе «Leica DM 1000» Германия, со встроенной фото- и видеокамерой с помощью программного обеспечения анализа изображений ImageScope Color, версии М, с окулярами ×10, при объективе ×100. Исследования проводили в 10 полях зрения для каждого образца. Среднее относительное содержание CD 163+ и CD68+ клеток в лимфатическом узле вычисляли по формуле:

S₁=D₁/n×100%,

где:

S₁ - доля CD 163+ клеток в лимфатическом узле, %

D₁ - относительное количество CD 163+ клеток в 10 полях зрения

n - общее количество клеток в 10 полях зрения

S₂=D₂/n×100%,

где:

S₂ - доля CD68+ клеток в лимфатическом узле, %

D₂ - относительное количество CD68+ клеток в 10 полях зрения

n - общее количество клеток в 10 полях зрения

Индекс доли (ИД) у каждого пациента определяли по формуле:

ИД=(S₁+ ₂)/2

Исследования выполнены на гистологических срезах лимфатических узлов от 31 пациента с нодулярным склерозом ЛХ в возрасте от 20 до 73 лет (16 - мужского пола и 15 - женского). При оценке индекса доли CD 163+ и CD68+ клеток благоприятное течение заболевание установлено у 20 обследованных. У остальных 11 больных определен неблагоприятный прогноз.

Результаты исследований представлены в примерах, подтверждающих возможность заявляемого способа прогнозировать течение нодулярного склероза ЛХ после лимфаденэктомии по индексу доли CD 163+ и CD68+ макрофагов в гистологических срезах лимфатических узлов.

Пример 1.

Больная Д., 26 лет, поступила в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в 09.07.2017 года. Диагноз при поступлении: ЛХ, нодулярный склероз. Клиническая характеристика: поражение шейных, медиастинальных лимфоузлов, средостения, одышка при нагрузке, периодическая субфебрильная температура. Через два дня (11.07.2017 г. ) была выполнена лимфаденэктомия шейного лимфоузла, без осложнений. Проведено ИГХ исследование гистологических срезов шейного лимфатического узла по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования определена доля CD 163+ и CD68+ клеток (Si и S₂ соответственно) и рассчитан индекс доли (ИД) CD 163+ и CD68+ макрофагов. Установленная величина S₁ получена в ходе следующего расчета: S₁=128/1904 × 100%. S₁=6,7%. Величина S₂ рассчитана по формуле: S₂=195/1386 × 100%. S₂=14,l%. Индекс доли (ИД) составил: (6,7%+14,1%)/2=10,5%.

Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа определено, что у больной нодулярным склерозом ЛХ благоприятный прогноз заболевания.

В ходе динамического наблюдения за пациенткой выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Так, после лимфаденэктомии было проведено 6 циклов химиотерапии по схеме ВЕАСОРР-14 (Блеомицин, Этопозид, Доксорубицин, Циклофосфамид, Винкристин, Прокарбозин, Преднизолон). Лечение окончено в ноябре 2017 года. Достигнута ПЭТ-негативная ремиссия, которая сохраняется по настоящее время.

Пример 2.

Больная К., 34 года, поступила в гематологическое отделение ФГБУН КНИИГ и ПК ФМБА России в 09.11.2016 года. Диагноз при поступлении: ЛХ, нодулярный склероз. Клиническая характеристика: поражение шейных лимфоузлов, средостения, скелета, слабость, частые вирусные инфекции. Через 2 дня (11.11.2016 г.) была выполнена лимфаденэктомия шейного лимфоузла, без осложнений. Проведено ИГХ исследование гистологических срезов шейного лимфатического узла по стандартной методике. С помощью морфометрического исследования выполнен расчет относительного содержания CD 163+ и CD68+ клеток (S₁ и S₂ соответственно) и рассчитан индекс доли (ИД) CD 163+ и CD68+ макрофагов. Величина S₁ получена в ходе следующего подсчета: S₁=199/959 × 100%. S₁=20,7%. Величина S₂ рассчитана по формуле: S₂=195/2216 × 100%. S₂=8,8%. Индекс доли (ИД) составил: (20,7+8,8)/2=14,8%.

Заключение: по результатам ИГХ и морфометрического анализа определено, что у больной нодулярным склерозом ЛХ неблагоприятный прогноз заболевания. В ходе динамического наблюдения за пациенткой выявленные данные были подтверждены проведенной оценкой результатов лечения. Так, после лимфаденэктомии было проведено 4 цикла химиотерапии по схеме ВЕАСОРР-14 (Блеомицин, Этопозид, Доксирубицин, Циклофосфамид, Винкристин, Прокарбозин, Преднизолон). В связи с небольшой редукцией опухолевой массы назначено 2 курса второй линии терапии по схеме GDP (Гемцитабин, Дексаметазон, Карбоплатин). В связи с отсутствием ремиссии 22.05.2017 года была проведена аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток. В настоящее время больная находится под динамическим наблюдением гематологов.

Заявляемое изобретение дает при использовании положительный результат, заключающийся в возможности по индексу доли CD163+ и CD68+ макрофагов в лимфатическом узле прогнозировать течение нодулярного склероза ЛХ после лимфаденэктомии. При значении ИД менее или равном 12,0% констатируют благоприятное течение болезни, а при более 12,0% устанавливают неблагоприятное течение заболевания.

Предлагаемый способ информативен, может быть использован в гематологических и патологоанатомических отделениях,

патоморфологических лабораториях в качестве дополнительного критерия при прогнозировании течения нодулярного склероза ЛХ после лимфаденэктомии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, и предназначено для прогнозирования течения нодулярного склероза лимфомы Ходжкина (ЛХ). После лимфаденэктомии в гистологических срезах лимфоидного органа проводят иммуногистохимическое окрашивание и морфометрически подсчитывают относительное количество CD163+ и CD68+ макрофагов в лимфатических узлах по формулам S₁=D₁/n × 100% и S₂=D₂/n × 100%. Определяют индекс доли (ИД) этих клеток по формуле ИД=(S₁+S₂)/2. При значениях ИД, менее или равных 12,0%, констатируют благоприятное течение нодулярного склероза ЛХ, а при более 12,0% устанавливают неблагоприятное течение заболевания. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование течения нодулярного склероза ЛХ после лимфаденэктомии. 2 пр.

Способ прогнозирования течения нодулярного склероза лимфомы Ходжкина (ЛХ), характеризующийся тем, что после лимфаденэктомии в гистологических срезах лимфоидного органа проводят иммуногистохимическое окрашивание и морфометрически подсчитывают относительное количество CD163+ и CD68+ макрофагов в лимфатических узлах по формуле S₁=D₁/n × 100%, где S₁ - доля CD163+ клеток в лимфатическом узле (%), D₁ - относительное количество CD 163+ клеток в 10 полях зрения, n - общее количество клеток в 10 полях зрения; S₂=D₂/n × 100%, где S₂ - доля CD68+ клеток в лимфатическом узле (%), D₂ - относительное количество CD68+ элементов в 10 полях зрения, n - общее количество клеток в 10 полях зрения, определяют индекс доли (ИД) этих клеток по формуле ИД=(S₁+S₂)/2, при значениях ИД, менее или равных 12,0%, констатируют благоприятное течение нодулярного склероза ЛХ, а при более 12,0% устанавливают неблагоприятное течение заболевания.