УЛУЧШЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ПЕПТИДА L2 ВПЧ Российский патент 2021 года по МПК C07K14/05 

В соответствии с настоящим изобретением предложен иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам 20-50 полипептида L2 HPV16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ. Настоящее изобретение также относится к указанному иммуногенному полипептиду для применения в медицине и для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ. Помимо этого, в соответствии с настоящим изобретением предложен полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид, и клетка-хозяин, содержащая указанный полинуклеотид. Помимо этого, настоящее изобретение относится к наборам, способам и применению, относящимся к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению.

Рак шейки матки является вторым по частоте типом рака у женщин во всем мире. Клинические и молекулярные исследования показали, что этиологическими агентами этого заболевания являются определенные типы вируса папилломы человека (ВПЧ), называемые типами с высоким риском. Недавно две вакцины против ВПЧ для профилактики рака шейки матки были лицензированы компаниями Merck (Gardasil™) и GlaxoSmithKline (Cervarix™) (Schmiedeskamp et al, (2006), Ann Pharmacother, 40: 1344-1352). Обе вакцины основаны на основном белке капсида L1 в форме вирусоподобных частиц (VLP) в качестве антигена (Roden et al., (2006), Nat Rev Cancer, 6: 753-763); они защищают от типов ВПЧ, из которых были получены L1-VLP, но в целом неэффективны против всех типов ВПЧ, за исключением наиболее близкородственных к нему. Два наиболее известных типа ВПЧ с высоким риском, 16 и 18, являются основными мишенями обеих вакцин, несмотря на то, что существуют доказательства частичной перекрестной защиты против типов ВПЧ 31 и 45 (рассмотрено в Muller and Gissmann, (2007), Dis Markers, 23: 331-336; Huh and Roden, (2008), Gynecol Oncol, 109: S48-56). Ограниченная способность к перекрестной защите вакцин на основе L1, которая является основной причиной продолжающихся попыток разработать улучшенные стратегии вакцинации, вероятно, отражает специфичность нейтрализующих эпитопов L1 для конкретного типа ВПЧ (Giroglou et al., (2001), Vaccine, 19: 1783-1793).

Антитела против минорного капсидного белка L2 также нейтрализуют инфекцию ВПЧ и часто способны перекрестно нейтрализовать различные некогнатные вирионы, но с различной эффективностью (Kondo et al. (2007), Virology, 358: 266-272; Gambhira, R., (2007), J Virol, 81: 13927-13931). N-концевая область L2 взаимодействует с еще не идентифицированным вторичным рецептором на поверхности клеток-мишеней (Yang et al. (2003), J Virol, 77: 3531-3541), и такое взаимодействие может блокироваться антителами к L2. Точная идентичность области L2, участвующей во взаимодействии ВПЧ с поверхностью клетки, все еще остается предметом дискуссий. Первоначально было предложено, что эта область состоит из аминокислот (а.к.) 108-120, и антитела, нацеленные на эту конкретную область L2, как было показано, действительно блокируют вирусную инфекцию в условиях in vitro, хоть и при низких титрах (Kawana et al. (2001), Vaccine, 19: 1496-1502; Kawana et al. (2001b), J Virol, 75: 2331-2336). Последующие эксперименты выявили дополнительные нейтрализующие эпитопы в области аминокислот 1-88 (Pastrana et al. (2005), Virology, 337: 365-372), а также в более протяженных N- концевых областях, состоящих из аминокислот 11-200 и 18-144 (Kondo, там же). Возможно, наиболее известным из этих N-концевых эпитопов является эпитоп, который расположен между аминокислотами 17-36. Он был идентифицирован в качестве мишени для нейтрализующего и защитного моноклонального антитела к ВПЧ16 (RG-1), а также в качестве основной детерминанты нейтрализующей активности, обнаруженной в сыворотке крови кроликов и людей, иммунизированных протяженными вариантами L2 (аминокислоты 1-88, 11-200 или полноразмерный белок) (Gambhira, 2007, там же). Поскольку было обнаружено, что мутация аминокислот 18 и 19 или аминокислот 20 и 21 в L2 нарушает как связывание L2 с поверхностью клетки, так и заражение вирусом (Yang, R., et al. (2003), J. Virol. 77: 3531-3541), был сделан вывод, что эпитоп, распознаваемый антителом RG-1, перекрывает мотив связывания с поверхностью L2 ВПЧ16.

Помимо отсутствия точных данных о наиболее значимом (перекрестном) нейтрализующем (их) эпитопе (ах), основной проблемой при применении L2 в качестве инструмента для профилактики ВПЧ является низкая иммуногенность белка L2 и его пептидов по сравнению с L1-VLP. Недавно сообщалось о значительном повышении иммуногенности за счет химического связывания пептида L2 ВПЧ16 (17-36) с широко известным эпитопом T-хелперов и с лигандом Toll-подобного рецептора, дипальмитоил- S-глицерилцистеином (Alphs et al. (2008), Proc Natl Acad Sci U S A, 105: 5850-5855). Согласно другому варианту пептиды L2 были гибридизованы с поверхностными белками аденовируса (WO 2008/140474) или с другими белками ВПЧ для повышения иммуногенности (WO 2002/070004, de Jong et al. (2002), Vaccine, 20(29-30): 3456-3464). Также применяли мультимерные L2-вакцины, содержащие пептиды из разных генотипов (Jagu et al. (2013), PLOS One 8(1): e55538).

Разработанная недавно альтернативная стратегия повышения иммуногенности пептида основывается на применении тиоредоксина (Trx) в качестве каркасного белка, способного удерживать структуру однокопийных, а также мультимерных (тандемно повторяющихся) пептидных эпитопов, встроенных в его петлю активного центра, экспонированную на поверхности (Moretto et al. (2007), J Biol Chem, 282, 11436-11445). Эту стратегию также применяли для презентации пептидов L2 ВПЧ для иммунизации (WO 2010/070052). При применении тиоредоксина в качестве каркасного белка было обнаружено, что индукция антител хозяина к тиоредоксин-содержащим антителам может быть значительно снижена при применении вариантов Trx из архебактерий (Canali et al. (2014), Scientific Reports 4, Art. No 4729:1).

Таким образом, полипептид L1 является высокоиммуногенным, и антитела против него проявляют лишь ограниченную способность к перекрестной защите, тогда как антитела против полипептида L2 способны к перекрестной нейтрализации различных генотипов ВПЧ. Однако полипептид L2 обладает лишь ограниченной иммуногенностью.

Соответственно, крайне необходимы иммуногенные полипептиды, которые являются высокоиммуногенными и обеспечивают перекрестную нейтрализацию различных генотипов ВПЧ без недостатков, указанных выше. Техническая проблема, лежащая в основе настоящего изобретения, может рассматриваться как обеспечение средств и способов для удовлетворения вышеупомянутых потребностей. Техническая проблема решается с помощью вариантов реализации, описанных ниже в формуле изобретения и в настоящей заявке.

Соответственно, в настоящем изобретении предложен иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам с 20 по 50 полипептида L2 ВПЧ16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ.

В настоящей заявке термины «иметь», «содержать» или «включать», или любые их произвольные грамматические варианты используются неисключительным образом. Соответственно, эти термины могут относиться как к ситуации, при которой, помимо признака, представленного этими терминами, в объекте, описанном в данном контексте, отсутствуют дополнительные признаки, так и к ситуации, при которой присутствует один или более дополнительных признаков. Например, выражения «A имеет B», «A содержит B» и «A включает B» могут относиться к ситуации, при которой, помимо B, в А отсутствует другой элемент (т. е. к ситуации, при которой A состоит только и исключительно из B), и к ситуации, при которой, кроме B, в объекте A присутствует один или более дополнительных элементов, таких как элемент C, элементы C и D или даже дополнительные элементы.

Помимо этого, в настоящей заявке термины «предпочтительно», «более предпочтительно», «наиболее предпочтительно», «в частности», «конкретнее», «конкретно», «более конкретно» или подобные термины используются в сочетании с необязательными признаками, не ограничивая дополнительные возможности. Соответственно, признаки, представленные этими терминами, являются необязательными признаками и не предназначены для ограничения объема формулы изобретения каким- либо образом. Специалист в данной области техники поймет, что настоящее изобретение может быть осуществлено с использованием альтернативных признаков. Аналогичным образом, признаки, введенные выражениями «в варианте реализации настоящего изобретения» или аналогичными выражениями, предназначены для использования в качестве необязательных признаков, без какого-либо ограничения в отношении других вариантов реализации настоящего изобретения, без каких-либо ограничений в отношении объема настоящего изобретения и без какого-либо ограничения в отношении возможности комбинирования признаков, введенных таким образом, с другими необязательными или обязательными признаками настоящего изобретения. Помимо этого, если не указано иное, термин «приблизительно» относится к указанному значению с общепринятой технической точностью в соответствующей области, предпочтительно относится к указанному значению ±20%, более предпочтительно ±10%, более предпочтительно ±5%.

В настоящей заявке термин «иммуногенный полипептид» относится к предпочтительно неприродному полипептиду, содержащему множество N-концевых последовательностей L2, указанных в настоящей заявке. Иммуногенный полипептид, упоминаемый в настоящей заявке, содержит по меньшей мере множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), указанных в настоящей заявке. Как указано в настоящей заявке ниже, иммуногенный полипептид может содержать дополнительные домены, такие как предпочтительно каркасные полипептиды, например, тиоредоксин, усилители иммунитета, домены олигомеризации и тому подобное. Предпочтительно указанные домены соединены нековалентными связями и имеют константу диссоциации не более 10-6 моль/л, более предпочтительно не более 10-7 моль/л, наиболее предпочтительно не более 10-8 моль/л. Более предпочтительно по меньшей мере два домена ковалентным образом соединены, предпочтительно пептидной связью. Наиболее предпочтительно все домены иммуногенного полипептида ковалентным образом соединены, предпочтительно пептидными связями; т. е. предпочтительно иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, имеющий непрерывную цепь аминокислот. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид кодируется одной открытой рамкой считывания. Предпочтительно иммуногенный полипептид имеет биологическую функцию иммуногенного полипептида, индуцирующего гуморальный и/или клеточный иммунный ответ у субъекта, более предпочтительно индуцирующего гуморальный иммунный ответ у субъекта. Наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид обладает биологической функцией, которая заключается в индукции иммунитета по меньшей мере к одному, более предпочтительно по меньшей мере к трем, еще более предпочтительно по меньшей мере к восьми, наиболее предпочтительно по меньшей мере к десяти генотипам ВПЧ.

Предпочтительно термин «иммуногенный полипептид» включает варианты конкретных иммуногенных полипептидов, описанных в настоящей заявке. В настоящей заявке термин «вариант полипептида» относится к любой химической молекуле, содержащей по меньшей мере полипептиды, указанные в настоящей заявке, имеющие указанную активность, но отличающиеся по структуре от указанного полипептида, определенного в настоящей заявке. Предпочтительно вариант полипептида содержит пептид, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности от 25 до 500, более предпочтительно от 30 до 300, наиболее предпочтительно от 35 до 150 последовательных аминокислот, содержащихся в полипептиде, указанном в настоящей заявке. Помимо этого, в объем настоящего изобретения также включены другие полипептидные варианты вышеупомянутых полипептидов. Такие варианты полипептидов имеют по меньшей мере близкую существенную биологическую активность, как и конкретные полипептиды. Помимо этого, следует понимать, что вариант полипептида, который упоминается в соответствии с настоящим изобретением, должен иметь аминокислотную последовательность, которая отличается вследствие по меньшей мере одной замены, делеции и/или добавления аминокислоты, причем аминокислотная последовательность варианта все еще, предпочтительно по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% или 99%, идентична аминокислотной последовательности конкретного полипептида. Степень идентичности между двумя аминокислотными последовательностями можно определить с помощью алгоритмов, хорошо известных в данной области техники. Предпочтительно степень идентичности должна быть определена путем сравнения двух оптимально выравненных последовательностей в окне сравнения, где фрагмент аминокислотной последовательности в окне сравнения может содержать вставки или делеции (например, пробелы или выступы) по сравнению с последовательностью, с которой его сравнивают для оптимального выравнивания. Процент рассчитывают путем определения, предпочтительно по всей длине пептида, количества положений, в которых идентичный аминокислотный остаток встречается в обеих последовательностях, чтобы получить количество совпадающих положений, с последующим делением количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения и умножения результата на 100, чтобы получить процент идентичности последовательностей. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения может быть проведено с помощью алгоритма поиска локальной гомологии Smith and Waterman (1981), алгоритма выравнивания для оценки гомологии Needleman и Wunsch (1970), путем поиска сходства по методу Pearson and Lipman (1988), с помощью компьютеризированных внедрений этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA и TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group (GCG), 575 Саенс-драйв, Мэдисон, Висконсин, США) или с помощью визуальной проверки. При условии, что две последовательности были идентифицированы для сравнения, предпочтительно применяют GAP и BESTFIT для определения их оптимального выравнивания и, соответственно, степени идентичности. Предпочтительно применяют значения по умолчанию 5,00 для штрафа за открытие пробела и 0,30 для штрафа за увеличение длины пробела. Упомянутые выше варианты полипептидов могут происходить из аллельных вариантов или любых других видоспецифичных гомологов, паралогов или ортологов. Помимо этого, варианты полипептидов, упомянутые в настоящей заявке, включают фрагменты конкретных полипептидов или вышеупомянутые типы вариантов полипептидов, если эти фрагменты и/или варианты имеют биологическую активность, как указано выше. Такие фрагменты могут происходить или происходят, например, из продуктов распада или вариантов сплайсинга полипептидов. Также в объем настоящего изобретения включены варианты, которые отличаются посттрансляционными модификациями, такими как фосфорилирование, гликозилирование, убиквитинилирование, сумоилирование или миристилирование, включение неприродных аминокислот, и/или которые являются пептидомиметиками. Помимо этого, варианты иммуногенного полипептида согласно настоящему изобретению предпочтительно включают варианты, в которых по меньшей мере один домен представляет собой вариант домена, описанного в настоящей заявке.

В настоящей заявке термин «вирус папилломы» (ВП) относится к ДНК-вирусу из семейства вирусов Papillomaviridae, который инфицирует кожу и слизистые оболочки млекопитающих, предпочтительно домашнего скота, более предпочтительно крупного рогатого скота и лошадей, наиболее предпочтительно человека. Для ВП человека (ВПЧ) было описано более 110 генотипов ВПЧ (de Villiers, E. M., C. Fauquet, T. R. Broker, H. U. Bernard, and H. zur Hausen. 2004. Classification of papillomaviruses. Virology 324:17-27). Известно, что слизистую оболочку инфицируют приблизительно 50 генотипов ВПЧ. Такие специфичные для слизистой генотипы подразделяются на три различные группы на основании их эпидемиологической связи с раком: папилломавирусы человека с «низким риском» (НР-ВПЧ), папилломавирусы человека с «высоким риском» (ВР-ВПЧ) и папилломавирусы человека «с предполагаемым высоким риском» (пВР-ВПЧ). Также известно, что ВР-ВПЧ могут вызывать рак вульвы, рак анального канала, рак влагалища, рак полового члена и рак ротоглотки, а также вагинальную интраэпителиальную неоплазию, анальную интраэпителиальную неоплазию, вульварную интраэпителиальную неоплазию и интраэпителиальную неоплазию полового члена. Предпочтительно ВПЧ представляют собой ВПЧ слизистой оболочки; более предпочтительно ВПЧ согласно настоящему изобретению представляют собой генотипы ВПЧ с высоким риском (ВР- ВПЧ), которые являются основной причиной развития рака шейки матки. Предпочтительно ВПЧ представляют собой ВПЧ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 и 82, более предпочтительно ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82, наиболее предпочтительно ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.

Термин «N-концевой пептид L2» относится к пептиду, имеющему аминокислотную последовательность пептида, встречающегося на N-конце полипептида L2 ВПЧ. Полипептиды L2 ВПЧ известны в данной области техники. Полноразмерный полипептид L2 является одним из двух капсидных белков папилломавирусов и также называется минорным капсидным белком. Вместе с основным капсидным белком L1 полноразмерный полипептид L2 образует вирусные капсиды. N-концевой пептид L2, применительно к настоящему изобретению, соответствует аминокислотам с 20 по 50, предпочтительно аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ. Специалист в данной области техники поймет, что полипептиды L2 различных генотипов ВПЧ не обязательно являются точно коллинеарными из-за изменчивости последовательности, хотя предпочтительные иммуногенные эпитопы имеют сходную последовательность. Соответственно, для нумерации аминокислот часто делают ссылку на положения аминокислот, соотносящиеся с положениями соответствующих аминокислот в аминокислотной последовательности L2 ВПЧ16. Соответственно, предпочтительно N-концевой пептид L2, применительно к настоящему изобретению, соответствует аминокислотам с 20 по 50, предпочтительно аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16. Предпочтительные N-концевые пептиды L2, соответствующие аминокислотам с 20 по 50 полипептида L2 ВПЧ16, представляют собой полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (ВПЧ 16), SEQ ID NO: 2 (ВПЧ 18), SEQ ID NO: 3 (ВПЧ 45), SEQ ID NO: 4 (ВПЧ 31), SEQ ID NO: 5 (ВПЧ 33), SEQ ID NO: 6 (ВПЧ 35), SEQ ID NO: 7 (ВПЧ 59), SEQ ID NO: 8 (ВПЧ 56), SEQ ID NO: 9 (ВПЧ 51), SEQ ID NO: 10 (ВПЧ 39), SEQ ID NO: 11 (ВПЧ 82) или SEQ ID NO: 12 (ВПЧ 6). Предпочтительные N-концевые пептиды L2, соответствующие аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16, представляют собой пептиды, имеющие последовательность SEQ ID NO: 1 (ВПЧ 16), SEQ ID NO: 14 (ВПЧ 18), SEQ ID NO: 15 (ВПЧ 45), SEQ ID NO: 16 (ВПЧ 31), SEQ ID NO: 17 (ВПЧ 33), SEQ ID NO: 18 (ВПЧ 35), SEQ ID NO: 19 (ВПЧ 59), SEQ ID NO: 20 (ВПЧ 56), SEQ ID NO: 21 (ВПЧ 51), SEQ ID NO: 22 (ВПЧ 39), SEQ ID NO: 23 (ВПЧ 82) или SEQ ID NO: 24 (ВПЧ 6).

Предпочтительно термин N-концевой пептид L2 включает варианты конкретных N-концевых пептидов, указанных в настоящей заявке выше. Более предпочтительно варианты N-концевых пептидов представляют собой варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной делеции, вставки и/или замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно варианты N-концевых пептидов представляют собой варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты, предпочтительно консервативной замены, на один N- концевой пептид L2 ВПЧ.

Термин «множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ» относится к количеству, составляющему по меньшей мере 3, предпочтительно по меньшей мере 5, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, еще более предпочтительно 7, 8 или 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ. Предпочтительно указанное множество представляет собой количество, составляющее от 3 до 11, предпочтительно от 5 до 10, более предпочтительно от 7 до 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит три копии, более предпочтительно две копии, наиболее предпочтительно одну копию каждого из указанных N-концевых пептидов L2 ВПЧ.

Предпочтительно по меньшей мере два, более предпочтительно по меньшей мере пять, наиболее предпочтительно по меньшей мере восемь N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащихся в указанном иммуногенном полипептиде, не являются идентичными. Соответственно, предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух, более предпочтительно по меньшей мере пяти, еще более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 различных генотипов ВПЧ. Предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82. Также предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в указанном иммуногенном полипептиде содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.

Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или представляет собой вариант указанного полипептида, содержащий множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащих не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. В настоящей заявке термин «иммуногенный полипептид, содержащий исключительно» конкретные N-концевые пептиды L2, относится к иммуногенному полипептиду, содержащему указанные N-концевые пептиды L2, но не содержащему дополнительные, не указанные N-концевые пептиды L2; следует понимать, что термин, соответственно, не исключает того, что указанный иммуногенный полипептид содержит дополнительные элементы, отличные от N-концевых пептидов L2, предпочтительно полипептидные домены. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид, содержащий исключительно N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, может содержать любое количество N-концевых пептидов L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, но не содержит N-концевые пептиды L2 других генотипов ВПЧ. Еще более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82. Еще более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82, более предпочтительно содержит N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит одну копию пептида, содержащего одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82; наиболее предпочтительно иммуногенный полипептид содержит одну копию пептида, содержащего одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59. Предпочтительно иммуногенный полипептид не содержит N-концевой пептид L2 генотипа (ов) ВПЧ 39, 45, 56 и/или 82.

Предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержатся в иммуногенном полипептиде в полностью непрерывной последовательности, т. е. не содержащей промежуточные аминокислоты. Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в иммуногенном полипептиде отделены одной или более линкерными последовательностями, причем указанные линкерные последовательности могут быть идентичными или могут отличаться для соответствующих N-концевых пептидов L2, которые они отделяют. Предпочтительно линкер состоит из 5, 3 или 2 аминокислот, состоящих из остатков пролина (Р) и глицина (G). Более предпочтительно N-концевые пептиды L2 ВПЧ в иммуногенном полипептиде отделены линкерными последовательностями GGP и/или GGGP.

Предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержит аминокислотную последовательность, более предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25; или представляет собой вариант указанной последовательности, содержащий не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ. Более предпочтительно множество N- концевых пептидов L2 ВПЧ содержит аминокислотную последовательность, более предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25, или представляет собой вариант указанной последовательности. Более предпочтительно иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26, предпочтительно SEQ ID NO: 25.

Предпочтительно иммуногенный полипептид дополнительно содержит домен олигомеризации. Термин «домен олигомеризации» используется в его общепринятом значении и относится к полипептиду, который склонен к агрегации при включении в него указанного домена. Предпочтительно константа диссоциации для домена олигомеризации в виде отдельной молекулы составляет не более 10-4 моль/л, более предпочтительно не более 10-5 моль/л, наиболее предпочтительно по меньшей мере 10-6 моль/л. Следует понимать, что количество агрегирующих молекул будет, в частности, зависеть от типа выбранного домена олигомеризации. Подходящие домены олигомеризации известны в данной области техники. Предпочтительно иммуногенный полипептид содержит по меньшей мере один домен олигомеризации из (i) домена олигомеризации С4- связывающего белка, предпочтительно С4-связывающего белка млекопитающего, более предпочтительно С4-связывающего белка человека или мыши, наиболее предпочтительно С4-связывающего белка мыши; (ii) полипептида инкапсулина, предпочтительно полипептида инкапсулина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида инкапсулина Pyrococcus furiosus; (iii) полипептида ферритина, предпочтительно полипептида ферритина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида ферритина Pyrococcus furiosus; а также (iv) гибридного полипептида двух разных куриных С4-связывающих белков, предпочтительно полипептида IMX313 или его варианта, в частности, описанного в WO 2007/062819 A2, наиболее предпочтительно полипептида IMX313T (SEQ ID NO: 60, предпочтительно кодируемого SEQ ID NO: 61). Предпочтительно домен олигомеризации содержит последовательность SEQ ID NO: 55 (инкапсулин P. furiosus); или содержит последовательность SEQ ID NO: 56 (ферритин P. furiosus).

Также предпочтительно иммуногенный полипептид дополнительно содержит усилитель иммуногенности, предпочтительно на N-конце и/или на C-конце указанного иммуногенного полипептида. Пептидные последовательности, функционирующие в качестве усилителей иммуногенности, по существу известны в данной области техники. Предпочтительно усилитель иммуногенности представляет собой эпитоп CD4+ Т-хелперов, предпочтительно эпитоп, содержащий по меньшей мере одно из (i) р25 из карбоксильной области белка спорозоита Plasmodium vivax; (ii) пептида p2 из столбнячного токсина; (iii) пептида р30 из столбнячного токсина; и (iv) универсального HLA-DR-реактивного эпитопа (PADRE). Более предпочтительно усилитель иммуногенности содержит, предпочтительно состоит из него, пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 (PADRE), SEQ ID NO: 58 (p30) и/или SEQ IS NO: 59 (p25). Также предпочтительно усилитель иммуногенности представляет собой пептид, содержащий аминокислотную последовательность RGD, которая, как известно, является мотивом, связывающимся с интегринами.

Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения множество N-концевых пептидов L2 содержится в полипептиде тиоредоксина. Полипептиды тиоредоксина, подходящие для включения N-концевых пептидов L2, известны в данной области техники из WO 2010/070052. Предпочтительно тиоредоксин является тиоредоксином млекопитающего, более предпочтительно тиоредоксином человека, бактерии или архебактерии. Более предпочтительно тиоредоксин представляет собой тиоредоксин архебактерии, предпочтительно из термофильной архебактерии, предпочтительно Pyrococcus furiosus или Methanosaeta thermophila. Соответственно, тиоредоксин предпочтительно имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 (тиоредоксин человека), предпочтительно кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 50 или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47 (тиоредоксин мыши), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 48, или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45 (тиоредоксин E. coli), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 46, или представляет собой ее вариант. Более предпочтительно тиоредоксин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53 (тиоредоксин P. furiosus), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 54, или представляет собой ее вариант; или имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51 (тиоредоксин M. thermophila), предпочтительно кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 52, или представляет собой ее вариант. Специалист в данной области техники поймет, что тиоредоксины согласно настоящему изобретению обладают биологической активностью в качестве каркаса для N-концевых пептидов L2, при этом окислительно-восстановительная активность не требуется. Соответственно, согласно настоящему изобретению, варианты тиоредоксинов, последовательность которых по меньшей мере на 50% идентична последовательности одного из вышеупомянутых тиоредоксинов, являются подходящими для применения в иммуногенном полипептиде. Предпочтительно множество N-концевых пептидов L2 вставлено в сайт дисплея тиоредоксина, как подробно описано в WO 2010/070052.

Предпочтительно аминокислотная последовательность тиоредоксина и/или домена олигомеризации, и/или усилителя иммуногенности менее чем на 50%, более предпочтительно менее чем на 35%, еще более предпочтительно менее чем на 25%, наиболее предпочтительно менее чем на 20% идентична последовательности полипептида человека, предпочтительно любого полипептида человека, указанного в сборке генома человека GRCh38.p7. Более предпочтительно аминокислотная последовательность тиоредоксина и/или домена олигомеризации менее чем на 50%, более предпочтительно менее чем на 35%, еще более предпочтительно менее чем на 25%, наиболее предпочтительно менее чем на 20% идентична последовательности полипептида человека, предпочтительно любого полипептида человека, указанного в сборке генома человека GRCh38.p7. Также предпочтительно тиоредоксин и/или домен олигомеризации, и/или усилитель иммуногенности представляют собой полипептиды, происходящие из полипептидов архебактерий. Более предпочтительно тиоредоксин и/или домен олигомеризации представляют собой полипептиды, происходящие из полипептидов. архебактерий

Следует понимать, что вышеупомянутые домены также можно комбинировать по существу произвольным образом. Предпочтительными комбинациями являются следующие:

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 28.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 30.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 32.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 35.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 37.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 40.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 42.

- Иммуногенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43, предпочтительно кодируемую полинуклеотидом, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 44.

В настоящей заявке термин «субъект» относится к животному, предпочтительно позвоночному животному, более предпочтительно млекопитающему, в частности, к домашнему скоту, такому как крупный рогатый скот, лошадь, свинья, овца и коза, или к лабораторному животному, такому как крыса, мышь и морская свинка. Наиболее предпочтительно субъект представляет собой человека.

В рамках работы, лежащей в основе настоящего изобретения, было неожиданно обнаружено, что полипептиды, содержащие множество неидентичных N-концевых пептидов L2 ВПЧ, индуцируют улучшенный иммунитет к ВПЧ и, в частности, обеспечивают улучшенный перекрестный иммунитет. Этот эффект был особенно выражен для полипептидов, содержащих пептиды из 8-11 генотипов ВПЧ, при этом полипептиды, содержащие пептиды из восьми генотипов, неожиданно обладали наилучшей эффективностью.

Определения, приведенные выше, применимы с необходимыми изменениями к следующему ниже. Дополнительные определения и пояснения, приведенные ниже, также применимы ко всем вариантам реализации, раскрытым в настоящем описании, с необходимыми изменениями.

Настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению для применения в медицине. Настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду согласно настоящему изобретению для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ.

В настоящей заявке термин «вакцинация против инфекции ВПЧ» предпочтительно относится к введению соединений, указанных в настоящей заявке, чтобы вызвать иммунный ответ против различных генотипов ВПЧ. Соответственно, вакцинация стимулирует иммунную систему и создает или улучшает иммунитет к инфекции различными генотипами ВПЧ. Предпочтительно вакцинация согласно настоящему изобретению позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции генотипами вируса папилломы человека 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59. Предпочтительно вакцина согласно настоящему изобретению также позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции по меньшей мере генотипами вируса папилломы человека 5, 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51 и 59. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вакцинация в соответствии с настоящим изобретением позволяет создать или улучшить иммунитет к инфекции генотипами вируса папилломы человека 31, 35 и 51. Следует понимать, что вакцина согласно настоящему изобретению может содержать дополнительные компоненты, в частности, как указано в настоящей заявке в другом месте. Специалист поймет, что вакцинация может не вызывать значительный иммунный ответ у всех вакцинированных субъектов. Также следует понимать, что вакцинация может быть неэффективной для предотвращения инфекции у всех вакцинированных субъектов. Однако термин предусматривает, что, предпочтительно статистически значимая, часть субъектов когорты или популяции эффективно вакцинирована. Специалист в данной области техники сможет определить без излишних экспериментов, является ли часть статистически значимой, используя различные хорошо известные инструменты статистической оценки, например, определение доверительных интервалов, определение значения p, t-критерий Стьюдента, критерий Манна-Уитни и т. д. Предпочтительные доверительные интервалы составляют по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% и по меньшей мере 99%. Значения р предпочтительно составляют 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 или 0,0001. Предпочтительно лечение должно быть эффективным для по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% субъектов данной когорты или популяции.

Предпочтительно вакцинация дополнительно включает введение адъюванта, предпочтительно одновременно с введением иммуногенного полипептида. Более предпочтительно иммуногенный полипептид и адъювант содержатся в общей смеси при введении. Соответственно, предпочтительно иммуногенный полипептид и адъювант смешивают перед введением. Предпочтительно адъювант содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.

Предпочтительно вакцинация против инфекции ВПЧ согласно настоящему изобретению индуцирует гуморальный иммунный ответ у субъекта, т. е. предпочтительно индуцирует выработку антител, распознающих, предпочтительно специфически распознающих, полипептид L2 ВПЧ. Под термином «специфически распознающий» специалист в данной области техники понимает свойство связывающего агента, например, антитела, специфически связываться с конкретным типом молекулы, тогда как другие молекулы из этого же химического класса молекул, например, белки, не распознаются или распознаются в значительно меньшей степени. Предпочтительно константа связывания антитела, специфически распознающего полипептид L2 ВПЧ, в отношении полипептида L2 ВПЧ ниже на по меньшей мере коэффициент 100, более предпочтительно на по меньшей мере коэффициент 1000, наиболее предпочтительно на по меньшей мере коэффициент 10000, чем величина в отношении любого полипептида, не являющегося L2 ВПЧ. Предпочтительно антитела, специфически распознающие полипептид L2 ВПЧ, представляют собой антитела, специфически распознающие капсид ВПЧ. Предпочтительно антитела, специфически распознающие полипептид L2 ВПЧ, представляют собой антитела, нейтрализующие капсид ВПЧ. Предпочтительно вакцинация против инфекции ВПЧ вызывает у субъекта гуморальный и клеточный иммунный ответ.

Соответственно, настоящее изобретение также относится к иммуногенному полипептиду в соответствии с настоящим изобретением для применения при создании антител, специфически распознающих полипептид L2 ВПЧ.

Настоящее изобретение также относится к полинуклеотиду, кодирующему иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением.

В настоящей заявке термин «полинуклеотид» предпочтительно включает варианты конкретно указанных полинуклеотидов. Более предпочтительно термин полинуклеотид относится к указанным конкретным полинуклеотидам. В настоящей заявке термин «вариант полинуклеотида» относится к варианту полинуклеотида, относящемуся к настоящему изобретению, содержащему последовательность нуклеиновой кислоты, которая характеризуется тем, что последовательность может быть получена из указанной выше конкретной последовательности нуклеиновой кислоты с помощью по меньшей мере одной замены, добавления и/или делеции нуклеотида, причем вариант полинуклеотида должен иметь активность, указанную для конкретного полинуклеотида. Помимо этого следует понимать, что вариант полинуклеотида, на который ссылаются в соответствии с настоящим изобретением, должен иметь последовательность нуклеиновой кислоты, которая отличается за счет по меньшей мере одной замены, делеции и/или добавления нуклеотида. Предпочтительно указанный вариант полинуклеотида представляет собой ортолог, паралог или другой гомолог конкретного полинуклеотида. Также предпочтительно указанный вариант полинуклеотида представляет собой природный аллель конкретного полинуклеотида. Варианты полинуклеотидов также включены в полинуклеотиды, содержащие последовательность нуклеиновой кислоты, которая способна гибридизоваться с вышеупомянутыми конкретными полинуклеотидами, предпочтительно в жестких условиях гибридизации. Такие строгие условия известны специалисту и могут быть найдены в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Предпочтительным примером жестких условий гибридизации являются условия гибридизации в 6× хлориде натрия/цитрате натрия (=SSC) при приблизительно 45°C с последующим одним или более этапами промывки в 0,2× SSC, 0,1% ДСН при 50-65°C. Специалист осведомлен, что такие условия гибридизации различаются в зависимости от типа нуклеиновой кислоты и, например, в присутствии органических растворителей, в отношении температуры и концентрации буфера. Например, в «стандартных условиях гибридизации» в зависимости от типа нуклеиновой кислоты температура различается от 42 до 58°C в водном буфере, при этом концентрация SSC составляет от 0,1× до 5× (рН=7,2). Если в вышеуказанном буфере присутствует органический растворитель, например, 50% формамид, температура в стандартных условиях составляет приблизительно 42°C. Условия гибридизации для гибридов ДНК:ДНК предпочтительно составляют, например, 0,1× SSC и от 20 до 45°C, предпочтительно от 30 до 45°C. Условия гибридизации для гибридов ДНК:РНК предпочтительно составляют, например, 0,1× SSC и от 30 до 55°C, предпочтительно от 45 до 55°C. Вышеупомянутые значения температуры гибридизации определены, например, для нуклеиновой кислоты длиной приблизительно 100 п.о. (=пары оснований) и содержанием G+C 50% в отсутствие формамида. Специалист осведомлен о том, как определить требуемые условия гибридизации, обращаясь к руководствам, таким как упомянутое выше руководство, или следующие руководства: Sambrook et al., «Molecular Cloning», Cold Spring Harbor Laboratory, 1989; Hames and Higgins (Ed.) 1985, «Nucleic Acids Hybridization: A Practical Approach», IRL Press at Oxford University Press, Oxford; Brown (Ed.) 1991, «Essential Molecular Biology: A Practical Approach», IRL Press at Oxford University Press, Oxford. Альтернативно, варианты полинуклеотидов можно получить с помощью методик на основе ПЦР, таких как амплификация ДНК на основе смешанных олигонуклеотидных праймеров, т. е. с использованием вырожденных праймеров против консервативных доменов полипептида согласно настоящему изобретению. Консервативные домены полипептида могут быть идентифицированы путем сравнения последовательности нуклеиновой кислоты полинуклеотида или аминокислотной последовательности полипептида согласно настоящему изобретению с последовательностями других организмов. В качестве матрицы можно использовать ДНК или кДНК из бактерий, грибков, растений или предпочтительно из животных. Помимо этого варианты включают полинуклеотиды, содержащие последовательности нуклеиновых кислот, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны конкретно указанным последовательностям нуклеиновых кислот. Помимо этого в объем настоящего изобретения также включены полинуклеотиды, которые содержат последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны конкретно указанным аминокислотным последовательностям. Значения процента идентичности предпочтительно рассчитывают по всей области аминокислотной последовательности или последовательности нуклеиновой кислоты. Для сравнения различных последовательностей квалифицированному специалисту доступен ряд программ, основанных на различных алгоритмах. В данном случае алгоритмы Нидлмана и Вунша или Смита и Уотермана обеспечивают особенно надежные результаты. Чтобы выполнить выравнивание последовательностей следует применять программу PileUp (J. Mol. Evolution., 25, 351-360, 1987, Higgins et al., CABIOS, 5 1989: 151-153) или программы Gap и BestFit [Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48; 443-453 (1970)) и Smith and Waterman (Adv. Appl. Math. 2; 482-489 (1981))], которые являются частью пакета программного обеспечения GCG (Genetics Computer Group, 575 Саенс-драйв, Мэдисон, Висконсин, США 53711 (1991)). Значения идентичности последовательности, указанные выше в процентах (%), должны быть определены предпочтительно с помощью программы GAP по всей области последовательности со следующими настройками: штраф за открытие пробела: 50, штраф за удлинение пробела: 3, среднее совпадение: 10000 и среднее несовпадение: 0,000, которые, если не указано иное, всегда должны применяться в качестве стандартных настроек для выравнивания последовательностей.

Полинуклеотид, содержащий фрагмент любой из конкретно указанных последовательностей нуклеиновых кислот, также включен в качестве варианта полинуклеотида согласно настоящему изобретению. Фрагмент должен по-прежнему кодировать иммуногенный полипептид, который сохраняет указанную активность. Соответственно, кодируемый иммуногенный полипептид может содержать или состоять из доменов иммуногенного полипептида согласно настоящему изобретению, придающих указанную биологическую активность. Фрагмент, как подразумевается в настоящей заявке, предпочтительно содержит по меньшей мере 50, по меньшей мере 100, по меньшей мере 250 или по меньшей мере 500 последовательных нуклеотидов любой из конкретных последовательностей нуклеиновых кислот или кодирует аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 50, по меньшей мере 80, по меньшей мере 100 или по меньшей мере 150 последовательных аминокислот любой из конкретных аминокислотных последовательностей.

Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению состоят, по существу состоят из них или содержат вышеупомянутые последовательности нуклеиновых кислот. Соответственно, они также могут содержать дополнительные последовательности нуклеиновых кислот. В частности, полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут кодировать гибридные белки, в которых один из партнеров гибридного белка представляет собой иммуногенный полипептид, кодируемый последовательностью нуклеиновой кислоты, указанной выше. Такие гибридные белки могут содержать в качестве дополнительной части полипептиды для мониторинга экспрессии (например, зеленые, желтые, синие или красные флуоресцентные белки, щелочную фосфатазу и тому подобное) или так называемые «метки», которые могут служить в качестве детектируемого маркера или в качестве вспомогательной меры для целей очистки. Метки для различных целей хорошо известны в данной области техники и описаны в настоящей заявке в другом месте.

Полинуклеотид согласно настоящему изобретению должен быть обеспечен предпочтительно в виде выделенного полинуклеотида (т. е. выделенного из его естественного окружения) или в генетически модифицированной форме. Полинуклеотид предпочтительно представляет собой ДНК, включая кДНК, или представляет собой РНК. Термин включает как одноцепочечные, так и двухцепочечные полинуклеотиды. Помимо этого в объем настоящего изобретения также предпочтительно включены химически модифицированные полинуклеотиды, включая природные модифицированные полинуклеотиды, такие как гликозилированные или метилированные полинуклеотиды, или искусственно модифицированные, такие как биотинилированные полинуклеотиды.

Помимо этого настоящее изобретение относится к вектору, содержащему полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением.

Термин «вектор» предпочтительно включает фаговые, плазмидные, вирусные или ретровирусные векторы, а также искусственные хромосомы, такие как бактериальные или дрожжевые искусственные хромосомы. Помимо этого термин также относится к нацеливающим конструкциям, которые обеспечивают случайное или сайт-направленное встраивание нацеливающей конструкции в геномную ДНК. Такие нацеливающие конструкции предпочтительно содержат ДНК достаточной длины для гомологичной или гетерологичной рекомбинации, как подробно описано ниже. Вектор, содержащий полинуклеотид согласно настоящему изобретению, предпочтительно дополнительно содержит селективные маркеры для размножения и/или отбора у хозяина. Вектор может быть включен в клетку-хозяина с помощью различных методик, хорошо известных в данной области техники. Например, плазмидный вектор может быть введен в осадок, такой как осадок фосфата кальция или осадок хлорида рубидия, или в комплекс с заряженным липидом или в кластеры на основе углерода, такие как фуллерены. Согласно другому варианту плазмидный вектор может быть введен с помощью методик теплового шока или электропорации. Если вектор представляет собой вирус, он может быть упакован в условиях in vitro с использованием подходящей упаковывающей клеточной линии до применения к клеткам хозяина. Ретровирусные векторы могут быть компетентными по репликации или дефектными по репликации. В последнем случае размножение вируса обычно будет происходить только в дополняющих хозяевах/клетках. Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор, предпочтительно имеющий точку начала репликации p15A и/или несущий ген устойчивости к канамицину.

Более предпочтительно полинуклеотид в векторе согласно настоящему изобретению функционально соединен с последовательностями, контролирующими экспрессию, которые обеспечивают экспрессию в прокариотических или эукариотических клетках или их выделенных фракциях. Экспрессия указанного полинуклеотида включает транскрипцию полинуклеотида, предпочтительно в транслируемую иРНК. Регуляторные элементы, обеспечивающие экспрессию в эукариотических клетках, предпочтительно клетках млекопитающих, хорошо известны в данной области техники. Они предпочтительно содержат регуляторные последовательности, обеспечивающие инициацию транскрипции, и необязательно полиА-сигналы, обеспечивающие прекращение транскрипции и стабилизацию транскрипта. Дополнительные регуляторные элементы могут включать как транскрипционные, так и трансляционные энхансеры. Возможные регуляторные элементы, обеспечивающие экспрессию в прокариотических клетках-хозяевах, включают, например, промотор lac, trp или tac в E. coli, и примеры регуляторных элементов, обеспечивающих экспрессию в эукариотических клетках-хозяевах, включают промотор AOX1 или GAL1 в дрожжах или промотор ЦМВ, SV40, RSV (вирус саркомы Рауса), энхансер ЦМВ, энхансер SV40 или интрон глобина в клетках млекопитающих и других животных. Помимо этого в векторе экспрессии, включенном в объем настоящего изобретения, можно применять индуцибельные последовательности, контролирующие экспрессию. Такие индуцибельные векторы могут содержать последовательности операторов tet или lac или последовательности, индуцируемые тепловым шоком или другими факторами окружающей среды. Подходящие последовательности, контролирующие экспрессию, хорошо известны в данной области техники. Помимо элементов, которые отвечают за инициацию транскрипции, такие регуляторные элементы также могут содержать сигналы терминации транскрипции, такие как сайт SV40-полиA или сайт tk-полиA, расположенные в 3ʹ-направлении от полинуклеотида. В данном случае подходящие векторы экспрессии известны в данной области техники, такие как вектор экспрессии кДНК Окаямы-Берга pcDV1 (Pharmacia), pBluescript (Stratagene), pCDM8, pRc/CMV, pcDNA1, pcDNA3 (InVitrogene) или pSPORT1 (GIBCO BRL). Предпочтительно указанный вектор представляет собой вектор экспрессии и вектор переноса гена или нацеливающий вектор. Векторы экспрессии, происходящие из вирусов, таких как ретровирусы, вирус осповакцины, аденоассоциированный вирус, вирусы герпеса или вирус бычьей папилломы, можно применять для доставки полинуклеотидов или вектора согласно настоящему изобретению в целевую клеточную популяцию. Для конструирования рекомбинантных вирусных векторов можно применять способы, которые хорошо известны специалистам в данной области техники; см., например, методики, описанные в Sambrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N.Y. и Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1994). Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор экспрессии, несущий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую иммуногенный полипептид под контролем tac-промотора; более предпочтительно указанный вектор дополнительно несет ген, кодирующий экспрессируемый ген, кодирующий функциональный ингибитор lac.

Соответственно, согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бактериальный вектор экспрессии, предпочтительно имеющий точку начала репликации р15А, несущий ген устойчивости к канамицину, ген, кодирующий экспрессируемый ген, кодирующий функциональный ингибитор lac, и кодирующий иммуногенный полипептид под контролем tac-промотора. Более предпочтительно вектор представляет собой вектор, содержащий последовательность SEQ ID NO: 82.

Настоящее изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей полинуклеотид согласно настоящему изобретению и/или вектор согласно настоящему изобретению.

В настоящей заявке термин «клетка-хозяин» относится к любой клетке, способной получать и предпочтительно сохранять полинуклеотид и/или вектор согласно настоящему изобретению. Более предпочтительно клетка-хозяин способна экспрессировать иммуногенный полипептид согласно настоящему изобретению, кодируемый указанным полинуклеотидом и/или вектором. Предпочтительно клетка представляет собой бактериальную клетку, более предпочтительно клетку обычного лабораторного бактериального штамма, известного в данной области техники, наиболее предпочтительно штамма Escherichia, в частности, штамма E. coli. Также предпочтительно клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно дрожжевую клетку, например, клетку штамма пекарских дрожжей, или представляет собой клетку животного. Более предпочтительно клетка-хозяин представляет собой клетку насекомого или клетку млекопитающего, в частности, клетку мыши или крысы. Наиболее предпочтительно клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотид в соответствии с настоящим изобретением, вектор в соответствии с настоящим изобретением и/или клетку-хозяина в соответствии с настоящим изобретением; и фармацевтически приемлемый носитель.

В настоящей заявке термин «фармацевтическая композиция» относится к композиции, содержащей соединение или соединения согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемой форме и фармацевтически приемлемый носитель. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены в виде фармацевтически приемлемых солей. Приемлемые соли включают ацетат, сложный эфир метила, HCl, сульфат, хлорид и тому подобное. Фармацевтические композиции предпочтительно вводят местно или системно. Подходящие способы введения, обычно применяемые для введения лекарственного препарата, включают пероральное, внутривенное или парентеральное введение, а также ингаляцию. Предпочтительно фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению вводят парентеральным путем, предпочтительно подкожно, внутримышечно или внутрибрюшинно. В том случае, если субъектом является человек, введение предпочтительно является внутримышечным. Однако полинуклеотидные соединения также можно вводить в рамках подхода генной терапии с применением вирусных векторов, вирусов или липосом и также можно вводить местно, например, в виде мази. Помимо этого соединения можно вводить в комбинации с другими лекарственными препаратами как в общей фармацевтической композиции, так и в виде отдельных фармацевтических композиций, где указанные отдельные фармацевтические композиции могут быть обеспечены в форме набора частей. В частности, предусмотрено совместное введение адъювантов, как указано в настоящей заявке в другом месте. Предпочтительно иммуногенный полипептид, полинуклеотид и фармацевтическая композиция обеспечены в лиофилизированной форме.

Соединения предпочтительно вводят в обычных лекарственных формах, полученных путем комбинирования лекарственных препаратов со стандартными фармацевтическими носителями в соответствии с общепринятыми процедурами. Эти процедуры могут включать смешивание, гранулирование и прессование или растворение ингредиентов соответствующим образом для желательного препарата. Следует понимать, что форма и характер фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя определяется количеством активного ингредиента, с которым его необходимо комбинировать, путем введения и другими хорошо известными переменными.

Носитель (и) должен (должны) быть приемлемым (и) в том смысле, что он (и) совместим (ы) с другими ингредиентами состава и не является (являются) вредным (и) для его реципиента. Применяемый фармацевтический носитель может представлять собой, например, твердое вещество, гель или жидкость. Примеры твердых носителей включают лактозу, каолин, сахарозу, тальк, желатин, агар, пектин, камедь, стеарат магния, стеариновую кислоту и тому подобное. Примеры жидких носителей включают забуференный фосфатом физиологический раствор, сироп, масло, такое как арахисовое масло и оливковое масло, воду, эмульсии, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и тому подобное. Аналогичным образом, носитель или разбавитель может включать материал, задерживающий высвобождение, хорошо известный в данной области техники, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, по отдельности или с воском. Указанные подходящие носители включают носители, упомянутые выше, и другие, хорошо известные в данной области техники, см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.

Разбавитель (и) предпочтительно выбирают так, чтобы он (они) не влиял (и) на биологическую активность иммуногенного полипептида, полинуклеотида, вектора или клетки-хозяина и потенциальных дополнительных фармацевтически активных ингредиентов. Примерами таких разбавителей являются дистиллированная вода, физиологический раствор, растворы Рингера, раствор декстрозы и раствор Хэнка. Помимо этого фармацевтическая композиция или состав также может содержать другие носители, адъюванты или нетоксичные, нетерапевтические, неиммуногенные стабилизаторы и тому подобное.

Терапевтически эффективная доза относится к количеству соединений, которые будут применять в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, которое предотвращает, облегчает или лечит состояние, указанное в настоящей заявке. Терапевтическая эффективность и токсичность соединений могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических процедур в культуре клеток или у экспериментальных животных, например, путем определения ЭД50 (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции) и/или ЛД50 (дозы, летальной у 50% популяции). Соотношение доз для терапевтических и токсических эффектов представляет собой терапевтический индекс, и его можно выразить как соотношение ЛД50/ЭД50.

Схема дозирования будет определена лечащим врачом, предпочтительно с учетом соответствующих клинических факторов и предпочтительно в соответствии с любым из способов, описанных в настоящей заявке в другом месте. Как хорошо известно в области медицины, доза для любого пациента может зависеть от многих факторов, включая размер пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное соединение, которое будет введено, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные препараты, вводимые одновременно. Прогресс можно контролировать с помощью периодической оценки. Обычная доза может быть в пределах диапазона, например, от 1 мкг до 10000 мкг предпочтительно в сутки; однако предусмотрены дозы, которые ниже или выше этого примерного диапазона, особенно с учетом вышеупомянутых факторов. Обычно схема, как регулярное введение фармацевтической композиции, должна быть в пределах диапазона от 1 мкг до 10 мг в сутки. Если схема лечения представляет собой непрерывную инфузию, она также должна быть в пределах диапазона от 1 мкг до 10 мг единиц на килограмм массы тела в час, соответственно. Однако в зависимости от субъекта и способа введения количество вводимого вещества может варьироваться в широких пределах, чтобы обеспечить предпочтительно от приблизительно 0,01 мг на кг массы тела до приблизительно 10 мг на кг массы тела. Фармацевтические композиции и составы, упомянутые в настоящей заявке, вводят по меньшей мере один раз для лечения или предотвращения заболевания или состояния, указанного в настоящей заявке. Однако указанные фармацевтические композиции можно вводить более одного раза, например, от одного до четырех раз в сутки в течение неограниченного количества суток.

Конкретные фармацевтические композиции получают способом, хорошо известным в области фармацевтики, и они содержат по меньшей мере иммуногенный полипептид, полинуклеотид, вектор или клетку-хозяина в качестве активного соединения в смеси или иным образом связанных с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Для изготовления этих конкретных фармацевтических композиций активное (ые) соединение (я) обычно смешивают с носителем или разбавителем либо заключают или инкапсулируют в капсулу, саше, крахмальную капсулу, бумагу или другие подходящие контейнеры или среды. Полученные составы должны быть адаптированы к способу введения, т. е. в форме таблеток, капсул, суппозиториев, растворов, суспензий или тому подобного. Рекомендации по дозам должны быть указаны в рецепте или инструкциях для пользователя, чтобы спрогнозировать корректировку дозы в зависимости от рассматриваемого реципиента.

Настоящее изобретение также относится к набору, содержащему иммуногенный полипептид в соответствии с настоящим изобретением и адъювант.

Помимо этого настоящее изобретение относится к способу вакцинации субъекта против инфекции ВПЧ, включающему:

(a) приведение указанного субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотидом в соответствии с настоящим изобретением, вектором в соответствии с настоящим изобретением и/или клеткой-хозяином в соответствии с настоящим изобретением; и

(b) вакцинацию тем самым указанного субъекта против инфекции ВПЧ.

Способ вакцинации согласно настоящему изобретению предпочтительно представляет собой способ в условиях in vivo. Помимо этого он может включать дополнительные этапы помимо тех, которые явно упомянуты выше. Например, дополнительные этапы могут относиться, например, к приведению указанного субъекта в контакт с адъювантом, как указано в настоящей заявке в другом месте, и/или к повторению указанного контакта с соединением согласно настоящему изобретению для усиления иммунного ответа. В способе вакцинации субъект предпочтительно представляет собой млекопитающее, более предпочтительно представляет собой человека.

Помимо этого настоящее изобретение относится к способу получения антител против полипептида L2 ВПЧ, включающему:

(а) приведение субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом в соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотидом в соответствии с настоящим изобретением, вектором в соответствии с настоящим изобретением и/или клеткой-хозяином в соответствии с настоящим изобретением; и

(б) сбор антител, которые вырабатываются у указанного субъекта, из жидкости организма указанного субъекта и/или сбор клеток, вырабатывающих указанные антитела, у указанного субъекта.

Способ получения антител согласно настоящему изобретению предпочтительно представляет собой способ в условиях in vivo, который выполняют у субъекта, предпочтительно отличного от человека. Предпочтительно субъекта, отличного от человека, умерщвляют после выполнения способа. Помимо этого способ может включать дополнительные этапы помимо тех, которые явно упомянуты выше. Например, дополнительные этапы могут относиться, например, к очистке собранных антител или слиянию собранных клеток для получения клеточных линий, вырабатывающих моноклональные антитела, в соответствии с хорошо известными способами. Также один или более этапов способа могут быть выполнены с помощью автоматического оборудования.

С учетом изложенного выше предпочтительными являются следующие варианты реализации:

1) Иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам 20-50 полипептида L2 ВПЧ16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ.

2) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 1, который характеризуется тем, что указанное множество представляет собой количество, составляющее по меньшей мере 3, предпочтительно по меньшей мере 5, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, еще более предпочтительно 7, 8 или 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ.

3) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 1 или 2, который характеризуется тем, что указанное множество представляет собой количество, составляющее от 3 до 11, предпочтительно от 5 до 10, более предпочтительно от 7 до 9, наиболее предпочтительно 8 N-концевых пептидов L2 ВПЧ.

4) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-3, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой пептиды, соответствующие аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16.

5) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-4, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере четырех, предпочтительно по меньшей мере пяти, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 разных генотипов ВПЧ; или представляют собой их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

6) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-5, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере четырех, предпочтительно по меньшей мере пяти, более предпочтительно 7, 8, 9, 10, 11 или 12, наиболее предпочтительно из 8 разных генотипов ВПЧ.

7) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-6, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ; причем предпочтительно указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

8) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-7, который характеризуется тем, что указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82; причем предпочтительно указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ содержат N-концевые пептиды L2 генотипов ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.

9) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-8, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит три копии, более предпочтительно две копии, наиболее предпочтительно одну копию каждого из указанных N-концевых пептидов L2 ВПЧ.

10) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-9, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82 или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

11) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-10, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из них, N-концевые пептиды L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59 и 82.

12) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-11, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, или представляет собой вариант указанного полипептида, содержащий множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ, содержащих не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

13) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-12, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит исключительно, предпочтительно состоит из нее, одну копию каждого из N-концевых пептидов L2 ВПЧ генотипов 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59.

14) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-13, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82, более предпочтительно в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59, предпочтительно в полностью непрерывной последовательности, более предпочтительно отделенной линкером из 5, 3 или 2 аминокислот.

15) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-14, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов ВПЧ L2 содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 25 или 26, или представляет собой вариант указанного иммуногенного полипептида, содержащего не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

16) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-15, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит, предпочтительно состоит из нее, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 или 26.

17) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-16, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид не содержит N-концевой пептид L2 генотипа (ов) ВПЧ 39, 45, 56 и/или 82.

18) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-17, дополнительно содержащий домен олигомеризации, причем предпочтительно указанный домен олигомеризации представляет собой по меньшей мере один из:

i) домена олигомеризации С4-связывающего белка, предпочтительно С4-связывающего белка млекопитающего, более предпочтительно С4-связывающего белка человека или мыши, наиболее предпочтительно С4-связывающего белка мыши;

ii) полипептида инкапсулина, предпочтительно полипептида инкапсулина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида инкапсулина Pyrococcus furiosus;

iii) полипептида ферритина, предпочтительно полипептида ферритина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида ферритина Pyrococcus furiosus; и

iv) гибридного полипептида двух различных куриных С4-связывающих белков, предпочтительно полипептида IMX313T.

19) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-18, который характеризуется тем, что указанный домен олигомеризации содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 55 или 56.

20) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-19, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид дополнительно содержит усилитель иммуногенности, предпочтительно на N-конце и/или на С-конце указанного иммуногенного полипептида.

21) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 20, который характеризуется тем, что указанный усилитель иммуногенности представляет собой эпитоп CD4+ T-хелперов или представляет собой пептид, содержащий аминокислотную

последовательность RGD.

22) Иммуногенный полипептид согласно варианту реализации 21, который характеризуется тем, что указанный эпитоп CD4+ T-хелперов содержит по меньшей мере одно из:

i) р25 из карбоксильной области белка спорозоита Plasmodium vivax;

ii) пептид p2 из столбнячного токсина;

iii) пептид р30 из столбнячного токсина; и

iv) универсальный HLA-DR реактивный эпитоп (PADRE).

23) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 21 или 22, который характеризуется тем, что указанный эпитоп CD4+ T-хелперов содержит, предпочтительно состоит из нее, SEQ ID NO: 57.

24) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-23, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержится в полипептиде тиоредоксина.

25) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-24, который характеризуется тем, что указанный тиоредоксин представляет собой тиоредоксин человека, бактерии или архебактерии.

26) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-25, который характеризуется тем, что указанный тиоредоксин представляет собой тиоредоксин термофильной архебактерии, предпочтительно Pyrococcus furiosus, предпочтительно имеющий последовательность SEQ ID NO: 53.

27) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-26, который характеризуется тем, что указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержится в сайте дисплея указанного тиоредоксина.

28) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-27, который характеризуется тем, что указанный иммуногенный полипептид представляет собой гибридный полипептид, при этом предпочтительно элементы указанного иммуногенного полипептида являются смежными по аминокислотной последовательности.

29) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения в медицине.

30) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ.

31) Иммуногенный полипептид для применения согласно варианту реализации 27, который характеризуется тем, что указанная вакцинация представляет собой вакцинацию против инфекции по меньшей мере генотипом ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51 и 59, предпочтительно представляет собой вакцинацию против инфекции по меньшей мере генотипом ВПЧ 5, 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51 и 59.

32) Иммуногенный полипептид для применения согласно варианту реализации 30 или 31, который характеризуется тем, что указанная вакцинация представляет собой вакцинацию против инфекции генотипом ВПЧ 31, 35 и 51.

33) Иммуногенный полипептид для применения согласно любому из вариантов реализации 30-32, который характеризуется тем, что указанная вакцинация дополнительно включает введение адъюванта, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA)); и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.

34) Иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 для применения при создании антител, специфически узнающих полипептид L2 ВПЧ.

35) Полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28.

36) Вектор, содержащий полинуклеотид согласно варианту реализации 35.

37) Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид согласно варианту реализации 35 и/или вектор согласно варианту реализации 36.

38) Фармацевтическая композиция, содержащая иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотид согласно варианту реализации 35, вектор согласно варианту реализации 36 и/или клетку-хозяина согласно варианту реализации 37; и фармацевтически приемлемый носитель.

39) Набор, содержащий иммуногенный полипептид согласно любому из вариантов реализации 1-28 и адъювант, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.

40) Способ вакцинации субъекта против инфекции ВПЧ, включающий:

(a) приведение указанного субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотидом согласно варианту реализации 35, вектором согласно варианту реализации 36 и/или клеткой-хозяином согласно варианту реализации 37; и

(b) вакцинацию тем самым указанного субъекта против инфекции ВПЧ.

41) Способ вакцинации субъекта согласно варианту реализации 40, дополнительно включающий введение адъюванта, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в- воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.

42) Способ получения антител против полипептида L2 ВПЧ, включающий:

(a) приведение субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом согласно любому из вариантов реализации 1-28, полинуклеотидом согласно варианту реализации 35, вектором согласно варианту реализации 36 и/или клеткой-хозяином согласно варианту реализации 37; и

(b) сбор антител, которые вырабатываются у указанного субъекта, из жидкости организма указанного субъекта и/или сбор клеток, вырабатывающих указанные антитела, у указанного субъекта.

Все литературные ссылки, процитированные в данном описании, включены в него посредством ссылки в отношении полного содержания их раскрытия и содержания раскрытия, конкретно упомянутого в данном описании.

Подписи к чертежам

Фиг. 1: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности PADRE, у мышей; конструкции гетеромерных PfTrx-8-мер и PfTrx-11-мер сравнивали со смесью гомотримеров PfTrx (смесь 16/18/51). На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ45, E) ВПЧ33, F) ВПЧ51, G) ВПЧ35, H) ВПЧ52 и I) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.

Фиг. 2: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности IMX, у мышей; гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 использовали в качестве IMX-гибрида, в качестве PfTrx-гибрида или в качестве гибридного белка, содержащего как IMX, так и PfTrx. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18 и C) ВПЧ45; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.

Фиг. 3: Сравнение адъювантов. PfTrx, содержащий гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 и дополнительно содержащий IMX или не содержащий его, применяли в качестве антигена (Trx-L2-IMX, pfTrx-L2-IMX и Trx-L2), A) и B. Помимо этого конструкции сравнивали со смешанными 8-мерными и 11-мерными конструкциями, C)-G). На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у 9-10 мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18; C) ВПЧ16, D) ВПЧ18, E) ВПЧ33, F) ВПЧ51 и G) ВПЧ58. A/M: Alum/MPLA; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.

Фиг. 4: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, содержащих последовательности IMX, у мышей; гомотримерный N-концевой пептид L2 ВПЧ16 сравнивали с гетеромерными конструкциями PfTrx-8-мер и PfTrx-11-мер. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ33, E) ВПЧ35, F) ВПЧ39, G) ВПЧ45, H) ВПЧ51, I) ВПЧ52 и K) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.

Фиг. 5: Индукция титров нейтрализующих антител с помощью различных иммуногенных полипептидов, как указано. На панелях показаны титры нейтрализующих антител, измеренные у мышей, против A) ВПЧ16, B) ВПЧ18, C) ВПЧ31, D) ВПЧ33, E) ВПЧ35, F) ВПЧ39, G) ВПЧ45, H) ВПЧ51, I) ВПЧ52 и K) ВПЧ58; каждое указанное значение представляет одну мышь, горизонтальные линии указывают средние значения.

Фиг. 6: Аминокислотные последовательности иммуногенных полипептидов согласно настоящему изобретению: A) 11-мерный гетеромерный полипептид (SEQ ID NO: 25), B) 8-мерный гетеромерный полипептид (SEQ ID NO: 26), C) 11-мерный гетеромерный полипептид, содержащийся в тиоредоксине P. furiosus (SEQ ID NO: 27), D) 11-мерный гетеромерный полипептид, содержащийся в тиоредоксине P. furiosus (SEQ ID NO: 29).

Фиг. 7: Нейтрализующие титры сывороток от мышей (N = 10; А) и морских свинок (N=2; В) в количественном исследовании нейтрализации на основе псевдовириона (PBNA); использованный антиген представлял собой PfTrx-8-мер-IMX3T3 (SEQ ID NO:43); каждая точка представляет значение, полученное для сыворотки от одного животного.

Фиг. 8: Нейтрализующие титры сывороток от мышей (N = 10; A) и морских свинок (N=2; B) в L2-усиленном количественном исследовании нейтрализации на основе псевдовириона (L2-PBNA); использованный антиген представлял собой PfTrx-8-мер- IMX3T3 (SEQ ID NO:43); каждая точка представляет значение, полученное для сыворотки от одного животного.

Следующие примеры представлены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения. Они не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения.

Пример 1: Получение иммуногенов и иммунизация

В экспериментах использовали различные конструкции: PfTrx8-мер представлял собой тиоредоксин P. furiosus с N-концевыми пептидами L2 ВПЧ, соответствующими аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16 в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59; PfTrx11-мер представлял собой тиоредоксин P. furiosus с N-концевыми пептидами L2 ВПЧ, соответствующими аминокислотам с 20 по 38 полипептида L2 ВПЧ16 в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82. Термин «смесь 16/31/51» относился к смеси тиоредоксинов P. furiosus, содержащей три N-концевых идентичных пептида L2 ВПЧ16, соответствующих аминокислотам 20-38 полипептида L2 ВПЧ16, происходящих из ВПЧ16, ВПЧ31 и ВПЧ51, соответственно. Иммуногены, содержащие обозначение «PADRE», содержали дополнительную последовательность PADRE, иммуногены, содержащие обозначение «imx», содержали дополнительный домен imx. Для сравнения использовали соответствующие конструкции, содержащие гомотримерные или мономерные N-концевые пептиды L2 ВПЧ16 (SEQ ID NO: 62-81).

Указанные конструкции получали с помощью стандартных методик рекомбинантной ДНК и молекулярного клонирования в соответствии со способами, известными из руководств, с последующей наработкой в E. coli и очисткой, как описано в настоящей заявке ниже. Иммуногенные полипептиды получали по существу как описано ранее (WO 2010/070052), и как описано в настоящей заявке ниже.

Самок мышей BALB/c в возрасте 6-8 недель приобретали в Charles River Laboratories и содержали в помещении для животных в определенных стерильных условиях. Мышей иммунизировали внутримышечно четыре раза с интервалами в две недели антигенами, смешанными с адъювантами. Для эксперимента с Alum/MPLA 20 мкг антигена дополняли 50 мкг гидроксида алюминия (Brenntag) и 10 мкг синтетического монофосфориллипида А (MPLA, AvantiLipids) в качестве адъювантов. В случае Montanide ISA720 (Seppic, France) и AddavaxTM (InvivoGen) 20 мкг антигена смешивали с 50% (об./об.) адъюванта. Морских свинок иммунизировали в соответствии со стандартными протоколами.

Пример 2: Количественные исследования нейтрализации на основе псевдовириона

Количественные исследования нейтрализации на основе псевдовириона (PBNA) по существу выполняли, как описано в WO 2011/151335. В общих чертах, 50 мкл разбавленной сыворотки комбинировали с 50 мкл разбавленного псевдовириона и инкубировали при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем 50 мкл Т-клеток HeLa (2,5×105 клеток/мл) добавляли к смеси псевдовирион-антитело и инкубировали в течение 48 ч при температуре 37°C в увлажненном инкубаторе. Количество секретированной люциферазы Gaussia определяли в 10 мкл среды для культивирования клеток с использованием набора Gaussia glow juice (PJK, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Испускание света образцов измеряли через 15 минут после внесения субстрата.

Для L2-усиленного количественного исследования нейтрализации на основе псевдовириона (L2-PBNA), которое обладает по существу аналогичной чувствительностью к антителам к L1, но значительно повышенной чувствительностью к антителам к L2, PBNA модифицировали по существу, как описано в Day et al. (2012), Clinical and Vaccine Immunology 19(7):1075. В общих чертах, в L2-PBNA псевдовирионы ВПЧ связывали с внеклеточным матриксом и обрабатывали фурином, что вызывало более эффективное воздействие L2. Фактический PBNA выполняли лишь после такой обработки. Результаты L2-PBNA с сыворотками мыши и морской свинки показаны на Фиг. 8.

Пример 3. Получение и очистка вакцины IMX-Trx-L2(20-38)8-мер

Для трансформации бактерий и IPTG-опосредуемой индукции экспрессии рекомбинантного антигена (в течение ночи при 30°C) использовали стандартные процедуры. После лизиса бактериальных клеток с помощью обработки ультразвуком, выделения растворимой фракции с помощью центрифугирования (10000×g, 15 мин), одного цикла замораживания/оттаивания, примененного к супернатанту, и дополнительного этапа центрифугирования, как указано выше, солюбилизированный бактериальный лизат загружали на колонку для аффинной хроматографии, содержащую в качестве сорбента гепарин (Hi-Trap Heparin, GE Healthcare), уравновешенную в 25 мМ Трис-HCl, pH=7,5, 100 мМ NaCl, при скорости потока 1,0 мл/мин. При обычном среднемасштабном получении 50 мл растворимого лизата, полученного из 500 мл бактериальной культуры, вносили в колонку с гепарином Hi-Trap объемом 1 мл и элюировали 30 мл линейного градиента 0,1 М-2,0 М NaCl в исходном буфере. Результаты исследования элюированного белка методом электрофореза в ДСН-ПААГ (нативная мол. масса: 248339; мол. масса субъединицы: 35477) выявили, что аффинное фракционирование с использованием гепарина обеспечивало почти 90% очистку антигена за один этап. При необходимости дальнейшая очистка (практически до гомогенности, уровень 100%) была достигнута с помощью гель-фильтрационной хроматографии на колонке Superdex 200 (24 мл; GE Healthcare), уравновешенной и проанализированной в 25 мМ Трис/HCl-150 мМ NaCl при скорости потока 0,7 мл/мин.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ДОЙЧЕС КРЕБСФОРШУНГСЦЕНТРУМ

<120> УЛУЧШЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ПЕПТИДА ВПЧ L2

<130> DK13729EP

<150> EP 16173313.4

<151> 2016-06-07

<160> 82

<170> PatentIn версия 3.3

<210> 1

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 1

Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Lys Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Gln Tyr Gly Ser

20 25 30

<210> 2

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 2

Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Ser

20 25 30

<210> 3

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 3

Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Ser

20 25 30

<210> 4

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 4

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile

1 5 10 15

Glu His Thr Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Arg Tyr Gly Ser

20 25 30

<210> 5

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 5

Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Ser Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Lys Tyr Gly Ser

20 25 30

<210> 6

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 6

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Asn Thr Val Ala Asp Gln Ile Leu Lys Tyr Gly Ser

20 25 30

<210> 7

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 7

Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Thr Thr Leu Ala Gly Lys Ile Leu Gln Trp Thr Ser

20 25 30

<210> 8

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 8

Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile

1 5 10 15

Glu Gln Lys Thr Trp Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Gly Ser

20 25 30

<210> 9

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 9

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Gly

20 25 30

<210> 10

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 10

Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val

1 5 10 15

Glu Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Thr Ser

20 25 30

<210> 11

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 11

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val

1 5 10 15

Lys Gly Thr Thr Leu Ala Asp Lys Ile Leu Gln Trp Ser Gly

20 25 30

<210> 12

<211> 30

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 12

Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val

1 5 10 15

Glu His Asn Thr Ile Ala Asp Gln Ile Leu Lys Trp Gly Ser

20 25 30

<210> 13

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 13

Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 14

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 14

Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 15

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 15

Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 16

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 16

Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Ile Glu His

<210> 17

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 17

Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 18

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 18

Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 19

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 19

Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 20

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 20

Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys

1 5 10 15

Ile Glu Gln

<210> 21

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 21

Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 22

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 22

Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 23

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 23

Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 24

<211> 19

<212> БЕЛОК

<213> Папилломавирус человека

<400> 24

Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu His

<210> 25

<211> 240

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> пептиды различных типов ВПЧ 11-мер

<400> 25

Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro

20 25 30

Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys

35 40 45

Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly

50 55 60

Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile

65 70 75 80

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

85 90 95

Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr

100 105 110

Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu

115 120 125

Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp

130 135 140

Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala

145 150 155 160

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

165 170 175

Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys

180 185 190

Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro

195 200 205

Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys

210 215 220

Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly

225 230 235 240

<210> 26

<211> 174

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> пептиды различных типов ВПЧ 8-мер

<400> 26

Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys

1 5 10 15

Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro

20 25 30

Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys

35 40 45

Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly

50 55 60

Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile

65 70 75 80

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

85 90 95

Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

100 105 110

Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu

115 120 125

His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp

130 135 140

Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala

145 150 155 160

Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly

165 170

<210> 27

<211> 342

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 11-мер

<400> 27

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys

85 90 95

Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly

100 105 110

Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val

115 120 125

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg

145 150 155 160

Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val

165 170 175

Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro

180 185 190

Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu

195 200 205

Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly

210 215 220

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn

225 230 235 240

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

245 250 255

Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu

260 265 270

Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln

275 280 285

Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe

290 295 300

Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu

305 310 315 320

Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys

325 330 335

Leu Lys Glu Leu Gln Glu

340

<210> 28

<211> 1029

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 11-мер, кодирующая

<400> 28

atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt 60

agcattccgg gatgcggtcc gaagacgtgc aaacaagcgg gcacctgtcc gcccgatatt 120

atcccgaaag tcgagggtgg tgggccgaaa acgtgcaaac agtctggaac atgcccgccg 180

gatgtggtgc cgaaagtgga aggaggaggt ccgcaaacgt gcaaagcagc agggacctgt 240

ccgtcagatg tgattccgaa gattgaacat ggtgggccac agacctgtaa agccaccggc 300

acgtgtccgc cagacgtaat ccctaaagtc gaaggtggtg gccctcgtac gtgcaaagct 360

gcgggcacat gccctccgga tgttattccg aaagtagaag gcggcggccc acgcacttgc 420

aaacagagtg gtacctgccc gccggacgtc gtggataaag ttgaaggcgg tggtcctcgc 480

acgtgcaagc aaagcggcac atgcccaccc gacgtaatca ataaggtcga aggcggtggg 540

ccatcgactt gtaaggcggc cgggacttgt ccgccagatg tggttaacaa agtggaaggc 600

ggcggaccta aaacttgcaa actgagtgga acctgtccgg aggatgtagt caacaaaatc 660

gaacagggcg gcccgaaaac ctgtaaacaa gcaggcacct gtccatcgga tgtgattaac 720

aaagttgaag gtggtggtcc gagcacgtgt aaagccgctg gtacatgccc tcccgatgtt 780

atccccaaag ttaaaggcgg cggtccgtgt cgtctggttg aacgcttcat gaccgaactg 840

agcgagtatt ttgaggatat ccaaattgtc catatcaatg ccggcaaatg gaaaaacatc 900

gtagacaaat tcaatattct gaacgtgccg accctggtat atctgaaaga tggccgtgag 960

gttggacgcc aaaacctgat tcgttctaaa gaagagattc tgaaaaaact gaaagagctg 1020

caggagtaa 1029

<210> 29

<211> 276

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 8-мер

<400> 29

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys

85 90 95

Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly

100 105 110

Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val

115 120 125

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu His Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val

165 170 175

Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser

180 185 190

Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu

195 200 205

Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val

210 215 220

His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile

225 230 235 240

Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly

245 250 255

Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys

260 265 270

Glu Leu Gln Glu

275

<210> 30

<211> 831

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 8-мер, кодирующая

<400> 30

atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt 60

agcattccgg gatgcggtcc gaagacctgt aaacaggccg ggacttgccc accggatatt 120

attccaaagg tagaaggtgg tggacccaaa acgtgcaaac aaagcgggac gtgcccacca 180

gacgtggtgc ccaaagttga aggcggcggg ccgcaaacgt gtaaggccgc tggtacgtgc 240

ccgagtgatg ttattccgaa aattgaacat ggtggtccac agacctgtaa agcgaccggc 300

acatgcccgc cggatgtgat tcctaaagtg gaaggtggag gccctcgtac atgcaaggcg 360

gctggtacat gcccgcctga tgtcatcccg aaagtcgaag gtggcgggcc gcagacgtgc 420

aagttgaccg gcacctgtcc gccggatgtt atcccgaaag ttgagcatgg cggcccgtct 480

acgtgcaaag cagcagggac ctgtccgcct gatgtcgtaa acaaagtcga gggtggcggt 540

cccaaaacct gtaaacaagc gggaacttgt ccgtcagacg tcatcaacaa agtagaaggc 600

ggcggtccgt gtcgtctggt tgaacgcttc atgaccgaac tgagcgagta ttttgaggat 660

atccaaattg tccatatcaa tgccggcaaa tggaaaaaca tcgtagacaa attcaatatt 720

ctgaacgtgc cgaccctggt atatctgaaa gatggccgtg aggttggacg ccaaaacctg 780

attcgttcta aagaagagat tctgaaaaaa ctgaaagagc tgcaggagta a 831

<210> 31

<211> 387

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx 11-мер

<400> 31

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp

115 120 125

Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala

130 135 140

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

145 150 155 160

Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys

165 170 175

Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys

195 200 205

Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly

210 215 220

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val

225 230 235 240

Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

245 250 255

Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr

260 265 270

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys

275 280 285

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

290 295 300

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

305 310 315 320

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

325 330 335

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

340 345 350

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

355 360 365

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

370 375 380

Arg Gly Asp

385

<210> 32

<211> 1164

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx 11-мер, кодирующая

<400> 32

atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct 60

ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta 120

ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacgtgca aacaagcggg cacctgtccg 180

cccgatatta tcccgaaagt cgagggtggt gggccgaaaa cgtgcaaaca gtctggaaca 240

tgcccgccgg atgtggtgcc gaaagtggaa ggaggaggtc cgcaaacgtg caaagcagca 300

gggacctgtc cgtcagatgt gattccgaag attgaacatg gtgggccaca gacctgtaaa 360

gccaccggca cgtgtccgcc agacgtaatc cctaaagtcg aaggtggtgg ccctcgtacg 420

tgcaaagctg cgggcacatg ccctccggat gttattccga aagtagaagg cggcggccca 480

cgcacttgca aacagagtgg tacctgcccg ccggacgtcg tggataaagt tgaaggcggt 540

ggtcctcgca cgtgcaagca aagcggcaca tgcccacccg acgtaatcaa taaggtcgaa 600

ggcggtgggc catcgacttg taaggcggcc gggacttgtc cgccagatgt ggttaacaaa 660

gtggaaggcg gcggacctaa aacttgcaaa ctgagtggaa cctgtccgga ggatgtagtc 720

aacaaaatcg aacagggcgg cccgaaaacc tgtaaacaag caggcacctg tccatcggat 780

gtgattaaca aagttgaagg tggtggtccg agcacgtgta aagccgctgg tacatgccct 840

cccgatgtta tccccaaagt taaaggcggc ggtccgtgtc gtctggttga acgcttcatg 900

accgaactga gcgagtattt tgaggatatc caaattgtcc atatcaatgc cggcaaatgg 960

aaaaacatcg tagacaaatt caatattctg aacgtgccga ccctggtata tctgaaagat 1020

ggccgtgagg ttggacgcca aaacctgatt cgttctaaag aagagattct gaaaaaactg 1080

aaagagctgc aggagggtcc gggtccaggg gcgaagtttg tggccgcttg gacgttaaaa 1140

gccgctgcgg ggcgtgggga ctaa 1164

<210> 33

<211> 387

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx 11-мер

<400> 33

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp

115 120 125

Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala

130 135 140

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

145 150 155 160

Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys

165 170 175

Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys

195 200 205

Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly

210 215 220

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val

225 230 235 240

Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

245 250 255

Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr

260 265 270

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys

275 280 285

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

290 295 300

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

305 310 315 320

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

325 330 335

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

340 345 350

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

355 360 365

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

370 375 380

Arg Gly Asp

385

<210> 34

<211> 321

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx 8-мер

<400> 34

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp

115 120 125

Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala

130 135 140

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

145 150 155 160

Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

165 170 175

Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

195 200 205

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly

210 215 220

Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr

225 230 235 240

Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn

245 250 255

Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu

260 265 270

Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu

275 280 285

Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly

290 295 300

Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Arg Gly

305 310 315 320

Asp

<210> 35

<211> 966

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx 8-мер, кодирующая

<400> 35

atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct 60

ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta 120

ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca 180

ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg 240

tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct 300

ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa 360

gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca 420

tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg 480

cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc 540

ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag 600

ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa 660

gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat 720

tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa 780

ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc 840

caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggagggt 900

ccgggtccag gggcgaagtt tgtggccgct tggacgttaa aagccgctgc ggggcgtggg 960

gactaa 966

<210> 36

<211> 356

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-IMX

<400> 36

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp

115 120 125

Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala

130 135 140

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

145 150 155 160

Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

165 170 175

Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

195 200 205

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly

210 215 220

Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr

225 230 235 240

Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn

245 250 255

Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu

260 265 270

Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu

275 280 285

Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Asp Gly Ser Lys Lys Gln

290 295 300

Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val

305 310 315 320

Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile

325 330 335

Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg

340 345 350

Arg Arg Arg Ser

355

<210> 37

<211> 1074

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-IMX, кодирующая

<400> 37

atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct 60

ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta 120

ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca 180

ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg 240

tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct 300

ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa 360

gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca 420

tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg 480

cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc 540

ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag 600

ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa 660

gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat 720

tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa 780

ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc 840

caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggacgga 900

tccaagaaac agggcgatgc cgatgtatgc ggagaagtgg cgtatatcca gtctgtggtc 960

agtgattgcc atgtgccgac agcggaatta cgcactcttc tggaaattcg caaactgttt 1020

ctggaaattc agaaactgaa ggtagagggt cgtcgtcgtc gccgttcata ataa 1074

<210> 38

<211> 320

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx 8-мер

<400> 38

Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala

1 5 10 15

Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp

20 25 30

Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys

85 90 95

Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His

100 105 110

Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val

115 120 125

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln

145 150 155 160

Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val

165 170 175

Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro

180 185 190

Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly

210 215 220

Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe

225 230 235 240

Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile

245 250 255

Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys

260 265 270

Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu

275 280 285

Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Ala

290 295 300

Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Arg Gly Asp

305 310 315 320

<210> 39

<211> 374

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-PADRE-IMX

<400> 39

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp

115 120 125

Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala

130 135 140

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

145 150 155 160

Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys

165 170 175

Val Glu His Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

195 200 205

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly

210 215 220

Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr

225 230 235 240

Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn

245 250 255

Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu

260 265 270

Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu

275 280 285

Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Asp Gly Ser Gly Pro Gly

290 295 300

Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Lys

305 310 315 320

Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser

325 330 335

Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu

340 345 350

Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly

355 360 365

Arg Arg Arg Arg Arg Ser

370

<210> 40

<211> 1128

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> RGD-PADRE-PfTrx(8-мер)-PADRE-IMX, кодирующая

<400> 40

atgcgcggcg atggcgccaa attcgttgcg gcatggaccc tgaaagcggc agcaggccct 60

ggaccgggta tgattatcga gtatgacggc gaaatcgact tcaccaaagg tcgtgttgta 120

ctgtggttta gcattccggg atgcggtccg aagacctgta aacaggccgg gacttgccca 180

ccggatatta ttccaaaggt agaaggtggt ggacccaaaa cgtgcaaaca aagcgggacg 240

tgcccaccag acgtggtgcc caaagttgaa ggcggcgggc cgcaaacgtg taaggccgct 300

ggtacgtgcc cgagtgatgt tattccgaaa attgaacatg gtggtccaca gacctgtaaa 360

gcgaccggca catgcccgcc ggatgtgatt cctaaagtgg aaggtggagg ccctcgtaca 420

tgcaaggcgg ctggtacatg cccgcctgat gtcatcccga aagtcgaagg tggcgggccg 480

cagacgtgca agttgaccgg cacctgtccg ccggatgtta tcccgaaagt tgagcatggc 540

ggcccgtcta cgtgcaaagc agcagggacc tgtccgcctg atgtcgtaaa caaagtcgag 600

ggtggcggtc ccaaaacctg taaacaagcg ggaacttgtc cgtcagacgt catcaacaaa 660

gtagaaggcg gcggtccgtg tcgtctggtt gaacgcttca tgaccgaact gagcgagtat 720

tttgaggata tccaaattgt ccatatcaat gccggcaaat ggaaaaacat cgtagacaaa 780

ttcaatattc tgaacgtgcc gaccctggta tatctgaaag atggccgtga ggttggacgc 840

caaaacctga ttcgttctaa agaagagatt ctgaaaaaac tgaaagagct gcaggacgga 900

tccggtccag gggcgaagtt tgtggccgct tggacgttaa aagccgctgc cggatccaag 960

aaacagggcg atgccgatgt atgcggagaa gtggcgtata tccagtctgt ggtcagtgat 1020

tgccatgtgc cgacagcgga attacgcact cttctggaaa ttcgcaaact gtttctggaa 1080

attcagaaac tgaaggtaga gggtcgtcgt cgtcgccgtt cataataa 1128

<210> 41

<211> 399

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 11-мер-IMX313T

<400> 41

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys

85 90 95

Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly

100 105 110

Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val

115 120 125

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Gln Ser Gly

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asp Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Arg

145 150 155 160

Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Asn Lys Val

165 170 175

Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro

180 185 190

Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Leu

195 200 205

Ser Gly Thr Cys Pro Glu Asp Val Val Asn Lys Ile Glu Gln Gly Gly

210 215 220

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Asn

225 230 235 240

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

245 250 255

Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Lys Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu

260 265 270

Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln

275 280 285

Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe

290 295 300

Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu

305 310 315 320

Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys

325 330 335

Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val

340 345 350

Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val

355 360 365

Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu

370 375 380

Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser

385 390 395

<210> 42

<211> 1203

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 11-мер-IMX313T, кодирующая

<400> 42

atgattatcg agtatgatgg cgagattgac ttcaccaaag gtcgcgtcgt actgtggttt 60

agcattcccg gttgcggtcc gaagacgtgc aaacaagcgg gcacctgtcc gcccgatatt 120

atcccgaaag tcgagggtgg tgggccgaaa acgtgcaaac agtctggaac atgcccgccg 180

gatgtggtgc cgaaagtgga aggaggaggt ccgcaaacgt gcaaagcagc agggacctgt 240

ccgtcagatg tgattccgaa gattgaacat ggtgggccac agacctgtaa agccaccggc 300

acgtgtccgc cagacgtaat ccctaaagtc gaaggtggtg gccctcgtac gtgcaaagct 360

gcgggcacat gccctccgga tgttattccg aaagtagaag gcggcggccc acgcacttgc 420

aaacagagtg gtacctgccc gccggacgtc gtggataaag ttgaaggcgg tggtcctcgc 480

acgtgcaagc aaagcggcac atgcccaccc gacgtaatca ataaggtcga aggcggtggg 540

ccatcgactt gtaaggcggc cgggacttgt ccgccagatg tggttaacaa agtggaaggc 600

ggcggaccta aaacttgcaa actgagtgga acctgtccgg aggatgtagt caacaaaatc 660

gaacagggcg gcccgaaaac ctgtaaacaa gcaggcacct gtccatcgga tgtgattaac 720

aaagttgaag gtggtggtcc gagcacgtgt aaagccgctg gtacatgccc tcccgatgtt 780

atccccaaag ttaaaggcgg cggtccgtgc cgtcttgtgg aacggtttat gaccgagtta 840

tccgaatact tcgaggacat tcagatcgtg cacattaatg cgggcaaatg gaagaacatc 900

gttgacaaat tcaacatcct caatgtccct accctggttt acctcaaaga tggtcgcgaa 960

gttgggcgcc agaacttgat tcgcagcaaa gaagagattc tgaagaaact gaaagaattg 1020

caagaaggct cgaagaaaca gggcgatgcc gatgtatgcg gagaagtggc gtatatccag 1080

tctgtggtca gtgattgcca tgtgccgaca gcggaattac gcactcttct ggaaattcgc 1140

\aaactgtttc tggaaattca gaaactgaag gtagagggtc gtcgtcgtcg ccgttcataa 1200

taa 1203

<210> 43

<211> 333

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 8-мер-IMX313T

<400> 43

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ser Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys

85 90 95

Lys Ala Thr Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu Gly

100 105 110

Gly Gly Pro Arg Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val

115 120 125

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Leu Thr Gly

130 135 140

Thr Cys Pro Pro Asp Val Ile Pro Lys Val Glu His Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val

165 170 175

Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Ser

180 185 190

Asp Val Ile Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu

195 200 205

Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val

210 215 220

His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile

225 230 235 240

Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly

245 250 255

Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys

260 265 270

Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly

275 280 285

Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr

290 295 300

Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile

305 310 315 320

Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser

325 330

<210> 44

<211> 1005

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx 8-мер-IMX313T, кодирующая

<400> 44

atgattatcg agtatgatgg cgagattgac ttcaccaaag gtcgcgtcgt actgtggttt 60

agcattcccg gttgcggtcc gaagacctgt aaacaggccg ggacttgccc accggatatt 120

attccaaagg tagaaggtgg tggacccaaa acgtgcaaac aaagcgggac gtgcccacca 180

gacgtggtgc ccaaagttga aggcggcggg ccgcaaacgt gtaaggccgc tggtacgtgc 240

ccgagtgatg ttattccgaa aattgaacat ggtggtccac agacctgtaa agcgaccggc 300

acatgcccgc cggatgtgat tcctaaagtg gaaggtggag gccctcgtac atgcaaggcg 360

gctggtacat gcccgcctga tgtcatcccg aaagtcgaag gtggcgggcc gcagacgtgc 420

aagttgaccg gcacctgtcc gccggatgtt atcccgaaag ttgagcatgg cggcccgtct 480

acgtgcaaag cagcagggac ctgtccgcct gatgtcgtaa acaaagtcga gggtggcggt 540

cccaaaacct gtaaacaagc gggaacttgt ccgtcagacg tcatcaacaa agtagaaggc 600

ggcggtccgt gccgtcttgt ggaacggttt atgaccgagt tatccgaata cttcgaggac 660

attcagatcg tgcacattaa tgcgggcaaa tggaagaaca tcgttgacaa attcaacatc 720

ctcaatgtcc ctaccctggt ttacctcaaa gatggtcgcg aagttgggcg ccagaacttg 780

attcgcagca aagaagagat tctgaagaaa ctgaaagaat tgcaagaagg ctcgaagaaa 840

cagggcgatg ccgatgtatg cggagaagtg gcgtatatcc agtctgtggt cagtgattgc 900

catgtgccga cagcggaatt acgcactctt ctggaaattc gcaaactgtt tctggaaatt 960

cagaaactga aggtagaggg tcgtcgtcgt cgccgttcat aataa 1005

<210> 45

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Escherichia coli

<400> 45

Met Gly Asp Lys Ile Ile His Leu Thr Asp Asp Ser Phe Asp Thr Asp

1 5 10 15

Val Leu Lys Ala Asp Gly Ala Ile Leu Val Asp Phe Trp Ala Glu Trp

20 25 30

Cys Gly Pro Cys Lys Met Ile Ala Pro Ile Leu Asp Glu Ile Ala Asp

35 40 45

Glu Tyr Gln Gly Lys Leu Thr Val Ala Lys Leu Asn Ile Asp Gln Asn

50 55 60

Pro Gly Thr Ala Pro Lys Tyr Gly Ile Arg Gly Ile Pro Thr Leu Leu

65 70 75 80

Leu Phe Lys Asn Gly Glu Val Ala Ala Thr Lys Val Gly Ala Leu Ser

85 90 95

Lys Gly Gln Leu Lys Glu Phe Leu Asp Ala Asn Leu Ala

100 105

<210> 46

<211> 330

<213> ДНК

<213> Escherichia coli

<400> 46

atgggcgata aaattattca cctgactgac gacagttttg acacggatgt actcaaagcg 60

gacggggcga tcctcgtcga tttctgggca gagtggtgcg gtccgtgcaa aatgatcgcc 120

ccgattctgg atgaaatcgc tgacgaatat cagggcaaac tgaccgttgc aaaactgaac 180

atcgatcaaa accctggcac tgcgccgaaa tatggcatcc gtggtatccc gactctgctg 240

ctgttcaaaa acggtgaagt ggcggcaacc aaagtgggtg cactgtctaa aggtcagttg 300

aaagagttcc tcgacgctaa cctggcgtga 330

<210> 47

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 47

Met Val Lys Leu Ile Glu Ser Lys Glu Ala Phe Gln Glu Ala Leu Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Asp Lys Leu Val Val Val Asp Phe Ser Ala Thr Trp Cys

20 25 30

Gly Pro Cys Lys Met Ile Lys Pro Phe Phe His Ser Leu Cys Asp Lys

35 40 45

Tyr Ser Asn Val Val Phe Leu Glu Val Asp Val Asp Asp Cys Gln Asp

50 55 60

Val Ala Ala Asp Cys Glu Val Lys Cys Met Pro Thr Phe Gln Phe Tyr

65 70 75 80

Lys Lys Gly Gln Lys Val Gly Glu Phe Ser Gly Ala Asn Lys Glu Lys

85 90 95

Leu Glu Ala Ser Ile Thr Glu Tyr Ala

100 105

<210> 48

<211> 318

<213> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 48

atggtgaagc tgatcgagag caaggaagct tttcaggagg ccctggccgc cgcgggagac 60

aagcttgtcg tggtggactt ctctgctacg tggtgcggtc cgtgcaaaat gatcaagccc 120

ttcttccatt ccctctgtga caagtattcc aatgtggtgt tccttgaagt ggatgtggat 180

gactgccagg atgttgctgc agactgtgaa gtcaaatgca tgccgacctt ccagttttat 240

aaaaagggtc aaaaggtggg ggagttctcc ggtgctaaca aggaaaagct tgaagcctct 300

attactgaat atgcctaa 318

<210> 49

<211> 105

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 49

Met Val Lys Gln Ile Glu Ser Lys Thr Ala Phe Gln Glu Ala Leu Asp

1 5 10 15

Ala Ala Gly Asp Lys Leu Val Val Val Asp Phe Ser Ala Thr Trp Cys

20 25 30

Gly Pro Cys Lys Met Ile Lys Pro Phe Phe His Ser Leu Ser Glu Lys

35 40 45

Tyr Ser Asn Val Ile Phe Leu Glu Val Asp Val Asp Asp Cys Gln Asp

50 55 60

Val Ala Ser Glu Cys Glu Val Lys Cys Met Pro Thr Phe Gln Phe Phe

65 70 75 80

Lys Lys Gly Gln Lys Val Gly Glu Phe Ser Gly Ala Asn Lys Glu Lys

85 90 95

Leu Glu Ala Thr Ile Asn Glu Leu Val

100 105

<210> 50

<211> 318

<213> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 50

atggtgaagc agatcgagag caagactgct tttcaggaag ccttggacgc tgcaggtgat 60

aaacttgtag tagttgactt ctcagccacg tggtgtgggc cttgcaaaat gatcaagcct 120

ttctttcatt ccctctctga aaagtattcc aacgtgatat tccttgaagt agatgtggat 180

gactgtcagg atgttgcttc agagtgtgaa gtcaaatgca tgccaacatt ccagtttttt 240

aagaagggac aaaaggtggg tgaattttct ggagccaata aggaaaagct tgaagccacc 300

attaatgaat tagtctaa 318

<210> 51

<211> 138

<212> БЕЛОК

<213> Methanosaeta thermophila

<400> 51

Met Asp Glu Leu Asp Glu Ile Arg Arg Lys Lys Leu Glu Glu Leu Lys

1 5 10 15

Arg Glu Leu Ala Ala Arg Ser Gln Gly Thr Pro Thr Ile Glu Tyr Pro

20 25 30

Asp Arg Pro Val Leu Val Thr Asp Ser Ser Ile Asp Ala Gly Ile Arg

35 40 45

Gln Tyr Pro Val Phe Val Val Asp Cys Trp Ala Glu Trp Cys Gly Pro

50 55 60

Cys Arg Ala Ile Ala Pro Val Ile Asp Glu Met Ala Arg Glu Leu Lys

65 70 75 80

Gly Arg Val Val Phe Gly Lys Leu Asn Val Asp Gln Asn Pro Leu Thr

85 90 95

Ser Arg Lys Tyr Gly Ile Thr Ala Ile Pro Thr Leu Leu Val Phe Arg

100 105 110

Asn Gly Arg Leu Val Asp Arg Leu Val Gly Ala Tyr Pro Lys Gln Ile

115 120 125

Leu Met Ser Arg Val Arg Lys Tyr Leu Asp

130 135

<210> 52

<211> 417

<213> ДНК

<213> Methanosaeta thermophila

<400> 52

atggacgagc tggacgaaat ccgccgtaaa aaactggaag aactgaaacg tgaactggct 60

gcccgtagtc aaggaacacc gacgatcgag tatcctgacc gccctgtact ggttactgat 120

tctagcattg atgccgggat ccgccaatat cctgtctttg tggtggactg ttgggctgaa 180

tggtgcggtc cgtgtcgtgc tattgctccg gtgatcgatg aaatggcccg tgagctgaaa 240

ggacgtgtgg tattcgggaa actgaacgtg gaccaaaatc cgctgacgag tcgtaaatat 300

ggcattaccg ccatccctac actgctggtt ttccgtaacg gtcgtctggt tgatcgcctg 360

gttggtgctt atccgaaaca aattctgatg tctcgtgtcc gtaaatatct ggactag 417

<210> 53

<211> 100

<212> БЕЛОК

<213> Pyrococcus furiosus

<400> 53

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu

20 25 30

Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val

35 40 45

His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile

50 55 60

Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly

65 70 75 80

Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys

85 90 95

Glu Leu Gln Glu

100

<210> 54

<211> 303

<213> ДНК

<213> Pyrococcus furiosus

<400> 54

atgattatcg agtatgacgg cgaaatcgac ttcaccaaag gtcgtgttgt actgtggttt 60

agcattccgg gatgcggtcc gtgtcgtctg gttgaacgct tcatgaccga actgagcgag 120

tattttgagg atatccaaat tgtccatatc aatgccggca aatggaaaaa catcgtagac 180

aaattcaata ttctgaacgt gccgaccctg gtatatctga aagatggccg tgaggttgga 240

cgccaaaacc tgattcgttc taaagaagag attctgaaaa aactgaaaga gctgcaggag 300

taa 303

<210> 55

<211> 259

<212> БЕЛОК

<213> Pyrococcus furiosus

<400> 55

Met Arg Lys Ser Lys Glu Leu Thr Gly Ile Glu Ala His Ile Asn Asp

1 5 10 15

Asn Lys Lys Glu Glu Ser Asn Val Glu Tyr Phe Glu Lys Leu Arg Ser

20 25 30

Ala Leu Leu Asp Gly Val Asn Lys Gly Arg Ser Leu Leu Lys His Leu

35 40 45

Pro Val Thr Arg Ile Glu Gly Gln Ser Phe Arg Val Asp Ile Ile Lys

50 55 60

Phe Glu Asp Gly Val Arg Val Val Lys Gln Glu Tyr Lys Pro Ile Pro

65 70 75 80

Leu Leu Lys Lys Lys Phe Tyr Val Gly Ile Arg Glu Leu Asn Asp Gly

85 90 95

Thr Tyr Asp Val Ser Ile Ala Thr Lys Ala Gly Glu Leu Leu Val Lys

100 105 110

Asp Glu Glu Ser Leu Val Ile Arg Glu Ile Leu Ser Thr Glu Gly Ile

115 120 125

Lys Lys Met Lys Leu Ser Ser Trp Asp Asn Pro Glu Glu Ala Leu Asn

130 135 140

Asp Leu Met Asn Ala Leu Gln Glu Ala Ser Asn Ala Ser Ala Gly Pro

145 150 155 160

Phe Gly Leu Ile Ile Asn Pro Lys Arg Tyr Ala Lys Leu Leu Lys Ile

165 170 175

Tyr Glu Lys Ser Gly Lys Met Leu Val Glu Val Leu Lys Glu Ile Phe

180 185 190

Arg Gly Gly Ile Ile Val Thr Leu Asn Ile Asp Glu Asn Lys Val Ile

195 200 205

Ile Phe Ala Asn Thr Pro Ala Val Leu Asp Val Val Val Gly Gln Asp

210 215 220

Val Thr Leu Gln Glu Leu Gly Pro Glu Gly Asp Asp Val Ala Phe Leu

225 230 235 240

Val Ser Glu Ala Ile Gly Ile Arg Ile Lys Asn Pro Glu Ala Ile Val

245 250 255

Val Leu Glu

<210> 56

<211> 174

<212> БЕЛОК

<213> Pyrococcus furiosus

<400> 56

Met Leu Ser Glu Arg Met Leu Lys Ala Leu Asn Asp Gln Leu Asn Arg

1 5 10 15

Glu Leu Tyr Ser Ala Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Ala Ala Tyr Phe Glu

20 25 30

Asp Leu Gly Leu Glu Gly Phe Ala Asn Trp Met Lys Ala Gln Ala Glu

35 40 45

Glu Glu Ile Gly His Ala Leu Arg Phe Tyr Asn Tyr Ile Tyr Asp Arg

50 55 60

Asn Gly Arg Val Glu Leu Asp Glu Ile Pro Lys Pro Pro Lys Glu Trp

65 70 75 80

Glu Ser Pro Leu Lys Ala Phe Glu Ala Ala Tyr Glu His Glu Lys Phe

85 90 95

Ile Ser Lys Ser Ile Tyr Glu Leu Ala Ala Leu Ala Glu Glu Glu Lys

100 105 110

Asp Tyr Ser Thr Arg Ala Phe Leu Glu Trp Phe Ile Asn Glu Gln Val

115 120 125

Glu Glu Glu Ala Ser Val Lys Lys Ile Leu Asp Lys Leu Lys Phe Ala

130 135 140

Lys Asp Ser Pro Gln Ile Leu Phe Met Leu Asp Lys Glu Leu Ser Ala

145 150 155 160

Arg Ala Pro Lys Leu Pro Gly Leu Leu Met Gln Gly Gly Glu

165 170

<210> 57

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> универсальный HLA-DR-реактивный эпитоп (PADRE)

<400> 57

Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala

1 5 10

<210> 58

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p2p30

<400> 58

Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu

1 5 10 15

<210> 59

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p25

<400> 59

Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn Cys Thr Lys Ala Glu

1 5 10 15

Leu

<210> 60

<211> 55

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> последовательность олигомеризации

<400> 60

Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln

1 5 10 15

Ser Val Val Ser Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu

20 25 30

Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu

35 40 45

Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser

50 55

<210> 61

<211> 165

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Последовательность, кодирующая полипептид олигомеризации IMX313T

<400> 61

aagaaacagg gcgatgccga tgtatgcgga gaagtggcgt atatccagtc tgtggtcagt 60

gattgccatg tgccgacagc ggaattacgc actcttctgg aaattcgcaa actgtttctg 120

gaaattcaga aactgaaggt agagggtcgt cgtcgtcgcc gttca 165

<210> 62

<211> 189

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 62

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr

85 90 95

Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu

180 185

<210> 63

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 63

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr

85 90 95

Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 64

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_p2p30)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 64

Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly

1 5 10 15

Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp

20 25 30

Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro

35 40 45

Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg

50 55 60

Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

115 120 125

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg

130 135 140

Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile

145 150 155 160

Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys

165 170 175

Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg

180 185 190

Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys

195 200 205

Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu

210 215

<210> 65

<211> 263

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_p2p30)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 65

Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly

1 5 10 15

Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp

20 25 30

Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro

35 40 45

Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg

50 55 60

Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

115 120 125

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg

130 135 140

Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile

145 150 155 160

Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys

165 170 175

Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg

180 185 190

Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys

195 200 205

Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Gln Tyr Ile Lys

210 215 220

Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn

225 230 235 240

Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser

245 250 255

His Leu Glu Gly Arg Gly Asp

260

<210> 66

<211> 193

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_p25)1x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 66

Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn

1 5 10 15

Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr

20 25 30

Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser

35 40 45

Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro

50 55 60

Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met

115 120 125

Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn

130 135 140

Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val

145 150 155 160

Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn

165 170 175

Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln

180 185 190

Glu

<210> 67

<211> 218

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_p25)2x_PfTrx_ВПЧ16_L2(20-38)3

<400> 67

Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn Cys

1 5 10 15

Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp

20 25 30

Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile

35 40 45

Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro

50 55 60

Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

65 70 75 80

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

85 90 95

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro

100 105 110

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr

115 120 125

Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala

130 135 140

Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro

145 150 155 160

Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu

165 170 175

Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu

180 185 190

Gly Pro Gly Pro Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn

195 200 205

Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Arg Gly Asp

210 215

<210> 68

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ51_L2(20-38)3

<400> 68

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val

50 55 60

Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 69

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> (RGD_PADRE)2x_PfTrx_ВПЧ31_L2(20-38)3

<400> 69

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile

50 55 60

Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 70

<211> 175

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> EcTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 70

Met Gly Asp Lys Ile Ile His Leu Thr Asp Asp Ser Phe Asp Thr Asp

1 5 10 15

Val Leu Lys Ala Asp Gly Ala Ile Leu Val Asp Phe Trp Ala Glu Trp

20 25 30

Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile

35 40 45

Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly

50 55 60

Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys

65 70 75 80

Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val

85 90 95

Glu Gly Gly Gly Pro Cys Lys Met Ile Ala Pro Ile Leu Asp Glu Ile

100 105 110

Ala Asp Glu Tyr Gln Gly Lys Leu Thr Val Ala Lys Leu Asn Ile Asp

115 120 125

Gln Asn Pro Gly Thr Ala Pro Lys Tyr Gly Ile Arg Gly Ile Pro Thr

130 135 140

Leu Leu Leu Phe Lys Asn Gly Glu Val Ala Ala Thr Lys Val Gly Ala

145 150 155 160

Leu Ser Lys Gly Gln Leu Lys Glu Phe Leu Asp Ala Asn Leu Ala

165 170 175

<210> 71

<211> 189

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE1x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 71

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr

85 90 95

Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu

180 185

<210> 72

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 72

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

50 55 60

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr

85 90 95

Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 73

<211> 215

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p2p301x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 73

Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly

1 5 10 15

Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp

20 25 30

Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro

35 40 45

Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg

50 55 60

Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

115 120 125

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg

130 135 140

Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile

145 150 155 160

Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys

165 170 175

Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg

180 185 190

Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys

195 200 205

Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu

210 215

<210> 74

<211> 263

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p2p302x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 74

Met Arg Gly Asp Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly

1 5 10 15

Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp

20 25 30

Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser His Leu Glu Gly Pro Gly Pro

35 40 45

Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg

50 55 60

Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr

115 120 125

Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg

130 135 140

Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile

145 150 155 160

Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys

165 170 175

Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg

180 185 190

Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys

195 200 205

Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly Pro Gly Gln Tyr Ile Lys

210 215 220

Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Pro Gly Phe Asn

225 230 235 240

Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser Ala Ser

245 250 255

His Leu Glu Gly Arg Gly Asp

260

<210> 75

<211> 193

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p251x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 75

Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn

1 5 10 15

Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr

20 25 30

Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser

35 40 45

Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro

50 55 60

Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met

115 120 125

Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn

130 135 140

Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val

145 150 155 160

Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn

165 170 175

Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln

180 185 190

Glu

<210> 76

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> p252x PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3

<400> 76

Met Arg Gly Asp Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu Asn

1 5 10 15

Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr

20 25 30

Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser

35 40 45

Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro

50 55 60

Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys

65 70 75 80

Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly

85 90 95

Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile

100 105 110

Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met

115 120 125

Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn

130 135 140

Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val

145 150 155 160

Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn

165 170 175

Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln

180 185 190

Glu Gly Pro Gly Pro Gly Lys Leu Ile Pro Asn Ala Ser Leu Ile Glu

195 200 205

Asn Cys Thr Lys Ala Glu Leu Gly Arg Gly Asp

210 215

<210> 77

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ31 L2(20-38)3

<400> 77

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile

50 55 60

Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu His Gly Gly Pro Gln Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Ser Asp Val Ile Pro Lys Ile Glu

100 105 110

His Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 78

<211> 211

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PADRE2x PfTrx ВПЧ51 L2(20-38)3

<400> 78

Met Arg Gly Asp Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala

1 5 10 15

Ala Ala Gly Pro Gly Pro Gly Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile

20 25 30

Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys

35 40 45

Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val

50 55 60

Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr Cys Lys Ala Ala Gly Thr

65 70 75 80

Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Ser Thr

85 90 95

Cys Lys Ala Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Val Val Asn Lys Val Glu

100 105 110

Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser

115 120 125

Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp

130 135 140

Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val

145 150 155 160

Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser

165 170 175

Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Pro Gly

180 185 190

Pro Gly Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly

195 200 205

Arg Gly Asp

210

<210> 79

<211> 223

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)3-IMX313T

<400> 79

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro

50 55 60

Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys

65 70 75 80

Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Cys Arg Leu

85 90 95

Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe Glu Asp Ile Gln

100 105 110

Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile Val Asp Lys Phe

115 120 125

Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys Asp Gly Arg Glu

130 135 140

Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu Ile Leu Lys Lys

145 150 155 160

Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val

165 170 175

Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val

180 185 190

Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu

195 200 205

Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser

210 215 220

<210> 80

<211> 179

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> PfTrx ВПЧ16 L2(20-38)1-IMX313T

<400> 80

Met Ile Ile Glu Tyr Asp Gly Glu Ile Asp Phe Thr Lys Gly Arg Val

1 5 10 15

Val Leu Trp Phe Ser Ile Pro Gly Cys Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln

20 25 30

Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly

35 40 45

Pro Cys Arg Leu Val Glu Arg Phe Met Thr Glu Leu Ser Glu Tyr Phe

50 55 60

Glu Asp Ile Gln Ile Val His Ile Asn Ala Gly Lys Trp Lys Asn Ile

65 70 75 80

Val Asp Lys Phe Asn Ile Leu Asn Val Pro Thr Leu Val Tyr Leu Lys

85 90 95

Asp Gly Arg Glu Val Gly Arg Gln Asn Leu Ile Arg Ser Lys Glu Glu

100 105 110

Ile Leu Lys Lys Leu Lys Glu Leu Gln Glu Gly Ser Lys Lys Gln Gly

115 120 125

Asp Ala Asp Val Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser

130 135 140

Asp Cys His Val Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg

145 150 155 160

Lys Leu Phe Leu Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg

165 170 175

Arg Arg Ser

<210> 81

<211> 127

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

<220>

<223> ВПЧ16 L2(20-38)3-IMX313T

<400> 81

Met Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp

1 5 10 15

Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro Lys Thr Cys Lys Gln Ala

20 25 30

Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys Val Glu Gly Gly Gly Pro

35 40 45

Lys Thr Cys Lys Gln Ala Gly Thr Cys Pro Pro Asp Ile Ile Pro Lys

50 55 60

Val Glu Gly Gly Gly Pro Gly Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ala Asp Val

65 70 75 80

Cys Gly Glu Val Ala Tyr Ile Gln Ser Val Val Ser Asp Cys His Val

85 90 95

Pro Thr Ala Glu Leu Arg Thr Leu Leu Glu Ile Arg Lys Leu Phe Leu

100 105 110

Glu Ile Gln Lys Leu Lys Val Glu Gly Arg Arg Arg Arg Arg Ser

115 120 125

<210> 82

<211> 5196

<213> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> экспрессионный вектор для TfTrx8-мер-IMX3T3

<400> 82

cgctgttttg gcggatgaga gaagattttc agcctgatac agattaaatc agaacgcaga 60

agcggtctga taaaacagaa tttgcctggc ggcagtagcg cggtggtccc acctgacccc 120

atgccgaact cagaagtgaa acgccgtagc gccgatggta gtgtggggtc tccccatgcg 180

agagtaggga actgccaggc atcaaataaa acgaaaggct cagtcgaaag actgggcctt 240

tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt aggacaaatc cgccgggagc 300

ggatttgaac gttgcgaagc aacggcccgg agggtggcgg gcaggacgcc cgccataaac 360

tgccaggcat caaattaagc agaaggccat cctgacggat ggcctttttg cgtttctaca 420

aactcttact agttacgtag atcgtaatct aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 480

tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 540

ataatctcat gaccaaacga tcgccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc 600

ccttaataag atgatcttct tgagatcgtt ttggtctgcg cgtaatctct tgctctgaaa 660

acgaaaaaac cgccttgcag ggcggttttt cgaaggttct ctgagctacc aactctttga 720

accgaggtaa ctggcttgga ggagcgcagt caccaaaact tgtcctttca gtttagcctt 780

aaccggcgca tgacttcaag actaactcct ctaaatcaat taccagtggc tgctgccagt 840

ggtgcttttg catgtctttc cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag 900

cggtcggact gaacgggggg ttcgtgcata cagtccagct tggagcgaac tgcctacccg 960

gaactgagtg tcaggcgtgg aatgagacaa acgcggccat aacagcggaa tgacaccggt 1020

aaaccgaaag gcaggaacag gagagcgcac gagggagccg ccagggggaa acgcctggta 1080

tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacca ctgatttgag cgtcagattt cgtgatgctt 1140

gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgg ctttgccgcg gccctctcac ttccctgtta 1200

agtatcttcc tggcatcttc caggaaatct ccgccccgtt cgtaagccat ttccgctcgc 1260

cgcagtcgaa cgaccgagcg tagcgagtca gtgagcgagg aagcggaata tatcctgtat 1320

cacatattct gctgacgcac cggtgcagcc ttttttctcc tgccacatga agcacttcac 1380

tgacaccctc atcagtgcca acatagtaag ccagtataca ctccgctagc gctgaggtct 1440

gcctcgtgaa gaaggtgttg ctgactcata ccaggcctga atcgcccggg catcatccag 1500

ccagaaagtg agggagccac ggttgatgag agctttgttg taggtggacc agttggtgat 1560

tttgaacttt tgctttgcca cggaacggtc tgcgttgtcg ggaagatgcc ggcgccatag 1620

tggcgcgtga tctgatcctt caactcagca aaagttcgat ttattcaaca aagccacgtt 1680

gtgtctcaaa atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata 1740

aaactgtctg cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa 1800

acgtcttgca gcaggccgcg attaaattcc aacatggatg ctgatttata tgggtataaa 1860

tgggctcgcg ataatgtcgg gcaatcaggt gcgacaatct atcgattgta tgggaagccc 1920

gatgcgccag agttgtttct gaaacatggc aaaggtagcg ttgccaatga tgttacagat 1980

gagatggtca gactaaactg gctgacggaa tttatgcctc ttccgaccat caagcatttt 2040

atccgtactc ctgatgatgc atggttactc accactgcga tcccagggaa aacagcattc 2100

caggtattag aagaatatcc ggattcaggt gaaaatattg ttgatgcgct ggcagtgttc 2160

ctgcgccggt tgcattcgat tcctgtttgt aattgtcctt ttaactctga tcgcgtattt 2220

cgtctcgctc aggcgcaatc acgaatgaat aacggtttgg ttgatgcgag tgattttgat 2280

gacgagcgta atggctggcc tgttgaacaa gtctggaaag aaatgcataa acttttgcca 2340

ttctcaccgg attcagtcgt cactcatggt gatttctcac ttgataacct tatttttgac 2400

gaggggaaat taataggttg tattgatgtt ggacgagtcg gaatcgcaga ccgataccag 2460

gatcttgcca tcctatggaa ctgcctcggt gagttttctc cttcattaca gaaacggctt 2520

tttcaaaaat atggtattga taatcctgat atgaataaat tgcagtttca tttgatgctc 2580

gatgagtttt tctaatcaga attggttaat tggttgtaac actggcagag cattacgctg 2640

acttgacggg acggccatag tggcctttgt tgaataaata aagcctgggg tgcctaatga 2700

gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc gggaaacctg 2760

tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg 2820

cgccagggtg gtttttcttt tcaccagtga gacgggcaac agctgattgc ccttcaccgc 2880

ctggccctga gagagttgca gcaagcggtc cacgctggtt tgccccagca ggcgaaaatc 2940

ctgtttgatg gtggttaacg gcgggatata acatgagctg tcttcggtat cgtcgtatcc 3000

cactaccgag atatccgcac caacgcgcag cccggactcg gtaatggcgc gcattgcgcc 3060

cagcgccatc tgatcgttgg caaccagcat cgcagtggga acgatgccct cattcagcat 3120

ttgcatggtt tgttgaaaac cggacatggc actccagtcg ccttcccgtt ccgctatcgg 3180

ctgaatttga ttgcgagtga gatatttatg ccagccagcc agacgcagac gcgccgagac 3240

agaacttaat gggcccgcta acagcgcgat ttgctggtga cccaatgcga ccagatgctc 3300

cacgcccagt cgcgtaccgt cttcatggga gaaaataata ctgttgatgg gtgtctggtc 3360

agagacatca agaaataacg ccggaacatt agtgcaggca gcttccacag caatggcatc 3420

ctggtcatcc agcggatagt taatgatcag cccactgacg cgttgcgcga gaagattgtg 3480

caccgccgct ttacaggctt cgacgccgct tcgttctacc atcgacacca ccacgctggc 3540

acccagttga tcggcgcgag atttaatcgc cgcgacaatt tgcgacggcg cgtgcagggc 3600

cagactggag gtggcaacgc caatcagcaa cgactgtttg cccgccagtt gttgtgccac 3660

gcggttggga atgtaattca gctccgccat cgccgcttcc actttttccc gcgttttcgc 3720

agaaacgtgg ctggcctggt tcaccacgcg ggaaacggtc tgataagaga caccggcata 3780

ctctgcgaca tcgtataacg ttactggttt cacattcacc accctgaatt gactctcttc 3840

cgggcgctat catgccatac cgcgaaaggt tttgcgccat tcgatggtgt caacgtaaat 3900

gcatgccgct tcgccttccg gccaccagaa tagcctgcga ttcaacccct tcttcgatct 3960

gttttgctac ccgttgtagc ggaattcggt acctgtacaa gggcctcgtg atacgcctcg 4020

agatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtctgc gccgacatca 4080

taacggttct ggcaaatatt ctgaaatgag ctgttgacaa ttaatcatcg gctcgtataa 4140

tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaga tatcatatga ttattgagta 4200

cgatggcgag attgacttta ccaagggccg tgtggtgctg tggtttagca ttccgggttg 4260

cggtccgaag acctgcaaac aggcgggtac ctgcccgccg gacatcattc cgaaagtgga 4320

aggtggcggt ccgaagacct gcaaacaaag cggtacctgc ccgccggatg ttgttccgaa 4380

agtggagggc ggtggcccgc aaacctgcaa ggcggcgggt acctgcccga gcgacgttat 4440

cccgaagatt gaacatggtg gcccgcagac ctgcaaggcg accggcacct gcccgccgga 4500

cgtgatcccg aaggttgagg gtggcggtcc gcgtacctgc aaagcggcgg gcacctgccc 4560

gccggatgtg attccgaagg ttgaaggcgg tggccctcag acttgcaaac tgactggcac 4620

ttgcccgccg gacgttattc cgaaggttga gcatggtggc ccgagcacct gcaaagctgc 4680

tggaacttgc ccgccggatg tggttaacaa ggttgaaggt ggcggtccga aaacctgcaa 4740

gcaagcgggc acctgcccga gcgatgtgat taacaaagtt gaaggcggtg gcccgtgccg 4800

tctggttgag cgtttcatga ccgagctgag cgaatacttt gaggacatcc aaattgtgca 4860

catcaacgcg ggcaagtgga aaaacatcgt tgacaagttc aacattctga acgtgccgac 4920

cctggtttat ctgaaagatg gtcgtgaggt gggtcgtcag aacctgatcc gtagcaaaga 4980

ggagattctg aagaaactga aagaactgca ggaaggtagc aagaagcaag gcgacgcgga 5040

tgtgtgcggt gaagttgcgt acatccaaag cgtggttagc gattgccacg ttccgaccgc 5100

ggaactgcgt accctgctgg agattcgtaa gctgttcctg gaaatccaaa aactgaaggt 5160

tgaaggtcgt cgtcgtcgtc gtagctaata aggatc 5196

<---

Изобретение относится к области биотехнологии. В настоящем изобретении предложен иммуногенный полипептид, содержащий множество N-концевых пептидов L2 вируса папилломы человека (ВПЧ), соответствующих аминокислотам 20-50 полипептида L2 ВПЧ16, причем указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ представляют собой N-концевые пептиды L2 из по меньшей мере двух разных генотипов ВПЧ. В настоящем изобретении также предложен указанный иммуногенный полипептид для применения в медицине и для применения при вакцинации против инфекции ВПЧ. Помимо этого в настоящем изобретении предложен полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид, и клетка-хозяин, содержащая указанный полинуклеотид. Помимо этого в настоящем изобретении предложены наборы, способы и применения, связанные с иммуногенным полипептидом согласно настоящему изобретению. 8 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 пр.

1. Иммуногенный полипептид для индукции иммунного ответа против вируса папилломы человека (ВПЧ), содержащий множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ, соответствующих аминокислотам 20-38 полипептида L2 ВПЧ16, при этом указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ включает пептиды, которые соответствуют аминокислотам 20-38 полипептида L2 ВПЧ16 из ВПЧ 6, 16, 18, 31, 33, 35, 51, 59 или из ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 59, 82; или их варианты, содержащие не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

2. Иммуногенный полипептид по п. 1, отличающийся тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит одну копию каждого из указанных N-концевых пептидов L2 ВПЧ.

3. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-6-51-59, предпочтительно в полностью непрерывной последовательности, более предпочтительно отделенной линкером из 5, 3 или 2 аминокислот.

4. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный иммуногенный полипептид содержит указанные N-концевые пептиды L2 ВПЧ в последовательности ВПЧ 16-18-31-33-35-39-45-51-56-59-82, предпочтительно в полностью непрерывной последовательности, более предпочтительно отделенной линкером из 5, 3 или 2 аминокислот.

5. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанное множество N-концевых пептидов ВПЧ L2 содержит, предпочтительно состоит из SEQ ID NO: 25 или 26, или представляет собой вариант указанного иммуногенного полипептида, содержащий не более двух, предпочтительно не более одной замены аминокислоты на один N-концевой пептид L2 ВПЧ.

6. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащий домен олигомеризации, причем предпочтительно указанный домен олигомеризации представляет собой по меньшей мере один из:

i. домена олигомеризации С4-связывающего белка, предпочтительно С4-связывающего белка млекопитающего, более предпочтительно С4-связывающего белка человека или мыши, наиболее предпочтительно С4-связывающего белка мыши;

ii. полипептида инкапсулина, предпочтительно полипептида инкапсулина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида инкапсулина Pyrococcus furiosus;

iii. полипептида ферритина, предпочтительно полипептида ферритина из термофильной архебактерии, более предпочтительно полипептида ферритина Pyrococcus furiosus; и

iv. гибридного полипептида из двух разных С4-связывающих белков курицы, предпочтительно полипептида IMX313T.

7. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанный иммуногенный полипептид дополнительно содержит усилитель иммуногенности, предпочтительно на N-конце и/или на С-конце указанного иммуногенного полипептида.

8. Иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанное множество N-концевых пептидов L2 ВПЧ содержится в полипептиде тиоредоксина.

9. Применение иммуногенного полипептида по любому из пп. 1-7 для предотвращения или лечения инфекции ВПЧ.

10. Применение по п. 9, отличающееся тем, что иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-7 применяют при вакцинации против инфекции ВПЧ.

11. Полинуклеотид, кодирующий иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-7.

12. Вектор для экспрессии иммуногенного полипептида по любому из пп. 1-7, содержащий полинуклеотид по п. 11.

13. Клетка-хозяин для экспрессии иммуногенного полипептида по любому из пп. 1-7, содержащая полинуклеотид по п. 11 и/или вектор по п. 12.

14. Набор для индукции иммунного ответа против ВПЧ, содержащий иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-7 и адъювант, причем указанный адъювант предпочтительно содержит (i) квасцы и антагонист Toll-подобного рецептора 4 (TLR4), предпочтительно синтетический монофосфориллипид A (MPLA), и/или (ii) наноэмульсию типа «масло-в-воде» на основе сквалена, предпочтительно AddaVax™.

15. Способ получения антител против полипептида L2 ВПЧ, включающий:

(a) приведение субъекта в контакт с иммуногенным полипептидом по любому из пп. 1-7, полинуклеотидом по п. 11, вектором по п. 12 и/или клеткой-хозяином по п. 13; и

(b) получение антител, которые вырабатываются у указанного субъекта, из жидкости организма указанного субъекта и/или получение клеток, вырабатывающих указанные антитела, от указанного субъекта.

16. Фармацевтическая композиция для индукции иммунного ответа против по меньшей мере одного генотипа ВПЧ, содержащая иммуногенный полипептид по любому из пп. 1-9, полинуклеотид по п. 11, вектор по п. 12 и/или клетку-хозяина по п. 13; и фармацевтически приемлемый носитель.