Способ прогноза рака молочной железы Российский патент 2021 года по МПК G01N33/574 

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения прогноза рака молочной железы (сокращенно РМЖ) на ранних стадиях заболевания (стадии Т1, Т2, N0).

В данном изобретении под прогнозом рака молочной железы понимается вероятностная оценка исхода заболевания у больных раком молочной железы, в том числе ожидаемая общая выживаемость.

В настоящее время активно ведутся исследования новых биологических маркеров РМЖ, с целью их использования в качестве прогностических факторов в способах прогноза РМЖ.

Одним из таких маркеров является белок FOXA1, относящийся к транскрипционным факторам семейства вилочных головок, прогностическая значимость которого в отношении РМЖ отмечается в целом ряде исследований [см., например, Vtorushin S.V. et at. / Journal of Siberian Medical Sciences 4 (2019), p. 62-74; - ж. Опухоли женской репродуктивной системы, том 15, №2 (2019), с. 1-29].

В этой связи актуальным является разработка способов прогнозирования РМЖ, основанных на определении уровня экспрессии белка FOXA1 в опухолевых клетках у больных с диагнозом РМЖ.

Так, известен способ прогнозирования выживаемости больных с раком молочной железы [US 2010068717], выбранный авторами в качестве ближайшего аналога.

Данный способ включает определение уровня экспрессии белка FOXA1 в ядрах опухолевых клетках с последующим использованием полученных данных для прогностической оценки выживаемости больных с диагнозом РМЖ. При этом уровень экспрессии белка FOXA1 определяют, в частности, путем иммуноцитохимического исследования гистологического препарата, изготовленного из отобранной у пациента ткани опухоли, в ходе которого проводят специфичную для указанного белка реакцию с антителом, вызывающим его окрашивание, затем осуществляют оценку уровня экспрессии белка FOXA1 с использованием системы оценки, учитывающей количество окрашенных клеток и интенсивность их окраски.

В указанной системе процент ядерного окрашивания клеток классифицируют как «0», если окрашивание не наблюдается, «1» для 1 - 10% опухолевых клеток, «2» для 11-20% и так далее до максимальной оценки «10». Интенсивность окрашивания оценивают как «1+», «2+» и «3+» для слабого, умеренного и сильного окрашивания, соответственно. Процент (Р) и интенсивность (I) ядерной экспрессии умножают для получения числовой оценки (S=Р×I).

При значении указанного параметра менее 3, опухоль расценивают как негативную в отношении FOXA1, а при значении более 3, опухоль расценивают как позитивную в отношении указанного фактора.

Для больных с FOXA1 позитивным типом опухоли прогноз считается благоприятным.

Применение данного способа прогноза РМЖ ограничено кругом больных с гормонозависимым типом опухоли.

Проблемой, решаемой заявляемым изобретением, является расширение арсенала способов прогноза рака молочной железы.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе прогноза рака молочной железы, включающем иммуноцитохимическое исследование гистологического препарата, изготовленного из отобранной у пациента ткани опухоли, в ходе которого определяют уровень экспрессии белка FOXA1 в опухолевых клетках путем проведения специфичной для указанного белка реакции с вызывающим его окрашивание антителом, осуществляют оценку уровня экспрессии белка FOXA1 с применением системы оценки, учитывающей количество клеток с окрашенными ядрами и интенсивность их окраски, и используют значение полученного параметра для прогностической оценки, согласно изобретению в качестве системы оценки уровня экспрессии белка FOXA1 используют бальную шкалу Allred и при значении определяемого параметра от 4 до 8 баллов прогноз оценивают как благоприятный, при этом благоприятным прогнозом считают выживаемость пациента 10 и более лет.

В заявляемом способе для выявления уровня экспрессии белка FOXA1 использован иммуноцитохимический анализ, зарекомендовавший себя высокоинформативным и обеспечивающим корректное определение факторов прогноза.

В качестве прогностического параметра предлагается использовать уровень экспрессии белка FOXA1, определенный с применением бальной шкалы Allred.

Шкала Allred (Олреда) [Modem Pathology. 1998. Vol. 11, no. 2. P. 155-168], предназначена, преимущественно, для оценки уровня экспрессии стероидных гормонов с целью выработки рекомендаций по тактике лечения больных с диагнозом РМЖ.

В указанной системе оценки определяются два балла: балл, характеризующий долю клеток с окрашенными ядрами (процент позитивных клеток) и балл, характеризующий интенсивность их окрашивания. Затем определяется суммарный балл, который используется в качестве оценочного параметра. По шкале Allred процент позитивных клеток оценивается от 0 до 5 баллов, а интенсивность окрашивания оценивается от 0 до 3 баллов.

Указанная шкала широко используется в онкологии для иммуноцитохимических исследований с применением современных автоматизированных системах анализа цитологических препаратов, что позволило успешно адаптировать указанные системы и необходимые для их работы прикладные программы без существенной их доработки для определения уровня экспрессии белка FOXA1 в заявляемом способе.

На основании долгосрочных исследований многочисленной когорты больных и статистической обработки полученных результатов было установлено, что при значении уровня экспрессии белка FOXA1 в диапазоне от 4 до 8 баллов по шкале Allred. прогноз является благоприятным, при котором выживаемость пациентов составляет 10 и более лет.

Как показали исследования, предлагаемый критерий применим на ранних стадиях заболевания (стадии Т1, Т2, N0) для всех молекулярных подтипов рака молочной железы, в том числе и для гормононезависимых видов опухолей.

Высокая вероятность правильности прогноза по заявляемому способу была подтверждена с помощью исследования выживаемости пациентов по методу Каплана - Мейера [http.://ru.wikipedia.org/wiki].

Реализация способа основана на использовании автоматизированных приемов обработки и анализа цифровых изображений исследуемых гистологических препаратов с использованием компьютерных программ. При этом не требуется осуществления сложных трудоемких манипуляций с исследуемым материалом и использования дорогостоящих препаратов и специального оборудования.

Процедура определения прогностического параметра является практически оператор независимой, что повышает точность и объективность способа.

Таким образом, техническим результатом заявляемого изобретения является возможность осуществления прогнозирования рака молочной железы.

Способ осуществляют следующим образом.

Проводят микроскопическое исследование гистологических препаратов, приготовленных из образцов опухоли, отобранных у пациентов с диагнозом рак молочной железы.

Образцами опухоли могут быть биопсия опухоли или материал ее хирургической резекции.

В способе предпочтительно используют гистологические препараты, приготовленные в виде тонких срезов (3-4 мкм) из фиксированных в парафине образцов опухолевой ткани (парафиновый блок) и окрашенных гематоксилином и эозином, но могут быть использованы и другие виды препаратов, приготовленные по известным в области гистологии методикам.

Обрабатывают исследуемый препарат сывороткой, содержащей антитела к белку FOXA1, в частности, используют кроличьи моноклональные антитела (клон ЕР277) в разведении 1:100.

Определяют прогностический параметр с использование бальной шкалы Allred.

При значении указанного параметра от 4 до 8 прогноз оценивают как благоприятный.

Для осуществления способа используют аппаратуру, способную обеспечить получение цифрового (виртуального) микроскопического изображения гистологического препарата, обработку и анализ изображения, снабженную пакетом программ, обеспечивающих подсчет количества клеток с окрашенными ядрами, оценку интенсивности их окраски и подсчет суммарного балла.

В частности, может быть использована система Pannoramic 250 (3DHISTECH) [www.3dhistech.com], снабженная пакетом программ Pannoramic Viewer.

Полученное значение используют в качестве прогностического параметра.

В случае, когда значение прогностического параметра составляет величину от 4 до 8 баллов, прогноз расценивают как благоприятный, при котором выживаемость пациента составляет 10 и более лет.

Возможность формирования прогноза рака молочной железы с использованием заявляемого способа подтверждена следующими исследованиями.

Возможность формирования прогноза рака молочной железы с использованием заявляемого способа подтверждена следующими исследованиями.

Осуществляли наблюдение за 394 больными с диагнозом рак молочной железы гормонозависимого типа (стадии T1, Т2, N0). После оперативного лечения осуществляли исследование гистологических препаратов, приготовленных из образцов опухоли, полученных при ее хирургической резекции. В результате гистологического исследования для каждого больного осуществляли оценку уровня экспрессии белка FOXA1 в опухолевых клетках - определяли значение прогностического параметра с использованием шкалы Allred.

Среди исследуемых больных у 296 человек указанный параметр имел значение от 4 до 8.3а 10 лет общая выживаемость больных в указанной группе составила 93%, что при раке молочной железы указанного молекулярного типа (стадии T1, Т2, N0) считается статистически благоприятной группой.

Осуществляли аналогичное исследование в отношении группы из 257 больных с диагнозом рак молочной железы гормононезависимого типа (стадии Т1, Т2, N0).

Среди исследуемых больных у 211 человек указанный параметр имел значение от 4 до 8. За 10 лет общая выживаемость больных в указанной группе составила 92%, что при раке молочной железы указанного типа (стадии T1, Т2, N0) считается статистически благоприятной группой.

Указанные результаты свидетельствуют о высокой вероятности прогноза рака молочной железы по заявляемому способу.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения прогноза рака молочной железы на ранних стадиях заболевания (стадии Т1, Т2, N0). Способ прогноза рака молочной железы включает иммуноцитохимическое исследование гистологического препарата, изготовленного из отобранной у пациента ткани опухоли, в ходе которого определяют уровень экспрессии белка FOXA1 в опухолевых клетках путем проведения специфичной для указанного белка реакции с вызывающим его окрашивание антителом, определяют количество клеток с окрашенными ядрами и оценивают его в баллах по шкале Allred из диапазона значений от 0 до 5 баллов, определяют интенсивность окраски клеток и оценивают ее в баллах по шкале Allred из диапазона значений от 0 до 3 баллов, затем определяют суммарный балл, значение которого используется в качестве параметра для прогностической оценки, причем для определения параметра прогностической оценки используют аппаратуру, способную обеспечить получение цифрового (виртуального) микроскопического изображения гистологического препарата, обработку и анализ изображения, снабженную пакетом программ, обеспечивающих подсчет количества клеток с окрашенными ядрами, оценку интенсивности их окраски и подсчет суммарного балла, и при значении указанного параметра от 4 до 8 баллов прогноз оценивают как благоприятный, при этом благоприятным прогнозом считают выживаемость пациента 10 и более лет. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов прогноза рака молочной железы.

Способ прогноза рака молочной железы, включающий иммуноцитохимическое исследование гистологического препарата, изготовленного из отобранной у пациента ткани опухоли, в ходе которого определяют уровень экспрессии белка FOXA1 в опухолевых клетках путем проведения специфичной для указанного белка реакции с вызывающим его окрашивание антителом, осуществляют оценку уровня экспрессии белка FOXA1 с применением системы оценки, учитывающей количество клеток с окрашенными ядрами и интенсивность их окраски, и используют значение полученного параметра для прогностической оценки, отличающийся тем, что определяют количество клеток с окрашенными ядрами и оценивают его в баллах по шкале Allred из диапазона значений от 0 до 5 баллов, определяют интенсивность окраски клеток и оценивают ее в баллах по шкале Allred из диапазона значений от 0 до 3 баллов, затем определяют суммарный балл, значение которого используется в качестве параметра для прогностической оценки, причем для определения параметра прогностической оценки используют аппаратуру, способную обеспечить получение цифрового (виртуального) микроскопического изображения гистологического препарата, обработку и анализ изображения, снабженную пакетом программ, обеспечивающих подсчет количества клеток с окрашенными ядрами, оценку интенсивности их окраски и подсчет суммарного балла, и при значении указанного параметра от 4 до 8 баллов прогноз оценивают как благоприятный, при этом благоприятным прогнозом считают выживаемость пациента 10 и более лет.