Способ прогнозирования риска прогрессирования люминального рака молочной железы Российский патент 2025 года по МПК G01N33/574 C07K16/30 

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и может быть использован при обследовании пациентов с люминальным раком молочной железы при размере первичной опухоли не более 3 см.

Люминальный рак молочной железы (РМЖ) составляет до 70% всех случаев злокачественных опухолей этой локализации.

Существующие на сегодняшний день методики прогнозирования риска прогрессирования у пациентов раком молочной железы, в том числе и люминального подтипа, не позволяют корректно оценивать эффективность предполагаемого лечения, следствием чего, чаще всего, является либо избыточное назначение лекарственной терапии там, где этот вид лечения не может позитивно повлиять на выживаемость пациента, либо отказ, например, от адьювантного лечения, следствием чего может быть развитие отдаленного метастазирования. Поэтому поиск новых маркеров прогноза прогрессирования люминального РМЖ является актуальной задачей современной клинической онкологии.

Известен способ выявления предикторов рецидивирования/ прогрессирования первично операбельного люминального РМЖ. Исследовались биоптаты опухолей молочной железы пациенток (n=158) с люминальным HER2-негативным РМЖ стадии T1-2N0-1M0, а также анамнестические данные пациенток. Изучались макроскопические характеристики опухоли, степень злокачественности, суммарный балл злокачественности, Ноттингемский прогностический индекс, Ki-67, экспрессия рецепторов эстрогена и прогестерона и их влияние на возникновение рецидива. Установлена прогностическая значимость соотношений уровней экспрессии онкогенных и онкосупрессорных миРНК- 21/миРНК-155 и миРНК-21/миРНК-205, а также роль миРНК-20а в возникновении рецидива РМЖ в сочетании с Ki-67, стадией заболевания, размером первичной опухоли. На основе полученных данных разработана прогностическая модель определения рецидива первично операбельного люминального HER2-негативного РМЖ. («Прогностическая модель возникновения рецидива у пациенток с люминальным her2-негативным раком молочной железы» М.Х. Торосян и др. Ульяновский медико-биологический журнал. № 4, 2020, с. 61-69).

Недостатком этого способа является возможность его использования только у пациенток в постменопаузе, у которых не применялась неоадьювантная (предоперационная) лекарственная терапия, включение большого числа низко информативных клинико-морфологических параметров опухоли, оценка уровня экспрессии микроРНК без учета локации изучаемого участка опухоли - внутренний участок, инвазивный край, исключение из анализа показателей инфильтрации опухоли иммунекомпетентными клетками.

Известен способ прогноза рака молочной железы (Патент РФ 2697709, МПК G01N 33/574, публ. 2019), который включает микроскопическое исследование гистологического препарата, изготовленного из отобранной у пациента ткани опухоли, в ходе которого идентифицируют по меньшей мере один вид инфильтрующих опухоль Т-лимфоцитов. Идентифицируют CD4 Т-лимфоциты в строме опухоли путем проведения специфичной для CD4 антигенов реакции с использованием вызывающего их окрашивание биомаркера. Подсчитывают отношение количества окрашенных клеток в строме опухоли к общему количеству клеток в строме опухоли, используют полученное отношение для прогностической оценки. При значении указанного отношения менее или равного 50% прогноз оценивают, как благоприятный, при этом в качестве благоприятного прогноза оценивается выживаемость пациента, которая составляет 10 и более лет.

Недостатком этого способа является анализ инфильтрации только одной субпопуляции иммунокомпетентных клеток в отрыве от данных о молекулярном подтипе РМЖ и локации изучаемого участка опухоли.

Наиболее близким является способ многофакторного прогноза рака молочной железы (Патент РФ 2763839, МПК G01N 33/574, публ. 2022), в ходе которого в образцах опухоли, отобранных у пациентов с диагнозом рак молочной железы, определяют комплекс прогностических факторов, включающий уровень экспрессии белков СК14, E-cadherin, р53, EGFR, осуществляют оценку каждого из прогностических факторов и используют полученные данные для формирования прогноза рака молочной железы, при этом у пациента дополнительно определяют стадию заболевания, степень дифференцировки опухоли, уровень экспрессии белка FOXP3, уровень экспрессии рецепторов HER-2, количество Т-лимфоцитов CD8+, количество Т-лимфоцитов CD4+, каждому фактору присваивают количество баллов в соответствии с предварительно полученной 100-бальной прогностической шкалой, суммируют полученные баллы и используют суммарное значение баллов в качестве прогностического параметра, при сумме баллов менее 40 прогноз расценивают как благоприятный, причем благоприятным считают прогноз со сроком выживаемости пациентов не менее 10 лет.

Недостатком этого способа являются использование большого количества низко - информативных параметров, заметно усложняющих реализацию способа, субъективизм при назначении бальной оценки тем или иным клинико морфологическим и иммунным параметрам, не включение в оценочною шкалу данных о принадлежности опухоли к конкретному подтипу РМЖ, игнорирование данных об уровне и локации инфильтрирующих опухоль М2 макрофагах (CD163), использование способа у пациентов с размеров первичной опухоли, превышающим 3 см.

Задачей настоящего способа является устранение указанных недостатков, повышение точности прогнозирования, возможность осуществления прогнозирования на ранних стадиях заболевания строго определенного молекулярного подтипа РМЖ за счет анализа показателей предложенного комплекса опухоль-ассоциированных маркеров с оценкой значений основных субпопуляций инфильтрирующих Т-лимфоцитов и уровня инфильтрирующих опухоль М2 макрофагов.

Для решения поставленной задачи прогнозирования риска прогрессирования люминального рака молочной железы диаметром не более 3 см, включающего проведение иммуногистохимического исследования гистологических препаратов, приготовленных из образцов опухоли пациентов с определением количества Т-лимфоцитов CD8+, количества Т-лимфоцитов CD4+ и количества М2 макрофагов CD163, предложено в клетках инвазивного края первичной опухоли определять экспрессию CD4+, CD8+ и CD 163. Если экспрессия CD163 меньше 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, прогнозируют низкий риск прогрессирования; если CD163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, то прогнозируют средний риск прогрессирования; если CD 163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 более или равна 15%, прогнозируют высокий риск прогрессирования.

То, что в рамках настоящего способа прогнозирование осуществляется только при люминальном подтипе РМЖ резко повышает корректность его результатов, т.к. при разных молекулярных подтипах РМЖ характер и уровень инфильтрации иммунокомпетентными клетками имеет диаметрально противоположное прогностическое значение. Прогностическую значимость высокого уровня М2 макрофагов при люминальном раке, но только в сочетании с установленным уровнем Т лимфоцитов, подтверждает так же факт более низкой дифференцировки РМЖ у пациентов с высокой инфильтрацией М2 макрофагами. То, что при осуществлении способа анализ инфильтрации проводится именно винвазивном крае опухоли, являющемся источником циркулирующих опухолевых клеток в крови, обеспечивает наиболее эффективное прогнозирование риска прогрессирования при люминальном РМЖ.

Способ осуществляется следующим образом.

Больным, у которых выполнен хирургический этап лечения РМЖ и выявлена опухоль, диаметр которой составляет ≤3 см, проводят определение молекулярного подтипа опухоли на основании наличия рецепторов эстрогена (ER) и прогестерона (PR), HER2new и Ki-67. После того, как результаты исследования позволяли идентифицировать подтип РМЖ как люминальный, осуществляют иммуногистохимическое окрашивание с целью установления уровня инфильтрации М2 макрофагами, Т-лимфоцитами- хелперами и Т лимфацитами -киллерами (CD8) инвазивного края опухоли - периферической части опухоли на границе со здоровой тканью: операционный материал, содержащий инвазивный край первичной опухоли молочной железы, фиксируют в 10% забуференном растворе формалина, затем заливают в парафин и готовят серийные срезы толщиной 3 мкм. Для анализа уровня субпопуляций иммунокомпетентных клеток используют антитела CD4 -Т-лимфоцитов хелперов, CD8 -Т-лимфоцитов киллеров и CD 163 - М2 макрофагов и иммуностейнер закрытого типа Ventana Bench Mark Ultra. По результатам проведенного анализа полученных данных делают прогноз о степени риска прогрессирования заболевания.

Пример 1

Пациентка Ш, 62 года. Выполнена радикальная резекция опухоли молочной железы правой молочной железы. При морфологическом исследовании операционного материала установлено, что опухоль диаметром 2,5 см, относится к люминальному подтипу инвазивного рака молочной железы. Исследование регионарных лимфоузлов не установило признаков их метастатического поражения.

Изучение инфильтрации иммунокомпетентными клетками инвазивного каря первичной опухоли установило, что уровень экспрессии CD 163 составляет 6%, а сумма экспрессии уровней CD4+CD8 составляет 11%.

Полученные результаты стали основанием для прогнозирования низкого риска прогрессирования. Принято решение отказаться от проведения адьювантной химиотерапии. Назначен тамоксифен в стандартной схеме, прием которого должен осуществляться 3 года.

Пациентка регулярно наблюдается у онколога. Через 4,5 лет после выполнения хирургического вмешательства признаков местного и отдаленного прогрессирования не установлено.

Пример 2

Пациентка К, 58 лет. Выполнена мастэктомия справа по поводу РМЖ. При морфологическом исследовании операционного материала установлено, что опухоль, диаметром 3,0 см, относится к люминальному подтипу инвазивного рака молочной железы. Исследование регионарных лимфоузлов не установило признаков их метастатического поражения.

Изучение инфильтрации инвазивного каря первичной опухоли иммунокомпетентными клетками установило, что уровень экспрессии CD 163 составляет 20%, а сумма экспрессии уровней CD4+CD8 составляет 11%. Полученные результаты стали основанием для прогнозирования среднего риска прогрессирования.

Принято решение отказаться от проведения адьювантной химиотерапии. Назначен тамоксифен в стандартной дозе. Пациентка регулярно наблюдается у онколога.

Через 4 года после выполнения хирургического вмешательства признаков местного и отдаленного прогрессирования не установлено.

Пример 3

Пациентка А, 68 лет. Выполнена мастэктомия слева по поводу РМЖ. При морфологическом исследовании операционного материала установлено, что опухоль, диаметром 2 см, относится к люминальному подтипу инвазивного рака молочной железы.

Изучение инфильтрации инвазивного каря первичной опухоли иммунокомпетентными клетками установило, что уровень экспрессии CD 163 составляет 60%, а сумма экспрессии уровней CD4+CD8 составляет 12%. Полученные результаты стали основанием для прогнозирования среднего риска прогрессирования. По итогам принято решение о назначении тамоксифена в стандартной дозе на срок 3 года.

Обследование пациентки через 3 года после выполнения хирургического вмешательства не выявил признаков местного и отдаленного прогрессирования.

Пример 4

Пациентка А, 55 лет. Выполнена мастэктомия слева по поводу РМЖ. При морфологическом исследовании операционного материала установлено, что опухоль, диаметром 1,8 см, относится к люминальному подтипу инвазивного рака молочной железы.

Изучение инфильтрации инвазивного каря первичной опухоли иммунокомпетентными клетками установило, что уровень экспрессии CD 163 составляет 60%, а сумма экспрессии уровней CD4+CD8 составляет 15%.

Полученные результаты стали основанием для прогнозирования высокого риска прогрессирования.

Пациентка получала ингибиторы ароматазы.

Через 3,5 года после операции диагностировано прогрессирование в виде метастатического поражения легких.

Пример 5

Пациентка З, 59 лет. Выполнена радикальная резекция слева по поводу РМЖ. При морфологическом исследовании операционного материала установлено, что опухоль, диаметром 2,8 см, относится к люминальному подтипу инвазивного рака молочной железы.

Изучение инфильтрации инвазивного каря первичной опухоли иммунокомпетентными клетками установило, что уровень экспрессии CD 163 составляет 40%, а сумма экспрессии уровней CD4+CD8 составляет 35%.

Полученные результаты стали основанием для прогнозирования высокого риска прогрессирования.

Пациентка получала ингибиторы ароматазы. Через 5 года после операции диагностировано прогрессирование в виде метастатического поражения лимфоузлов парастернальной области на стороне поражения.

По предлагаемому способу проведено исследование 32 пациенткам в возрасте от 51 до 72 лет с диагнозом люминальный рак молочной железы Т1, Т2 с диаметром опухоли меньше и равным 3 см. У 14 пациенток был установлен низкий риск прогрессирования заболевания, у 8 пациенток - средний, у 10 пациенток - высокий риск. Все пациентки находились под наблюдением в течение не менее 2,5 года. У 22 пациенток с низким и средним риском прогрессирования рецидив/прогрессирование не обнаружено. Среди 10 пациенток с высоким риском прогрессирование выявлено у 3 через 3,5 и 5 лет после выполнения хирургического вмешательства.

Предлагаемый способ существенно повышает точность прогноза риска прогрессирования за счет использования объективных иммуно-морфологических параметров опухоли, отображающих активность процесса метастазирования на его начальном этапе - проникновения метастатической клетки из первичной опухоли в кровь. Оценка риска прогрессирования с использованием предлагаемого способа представляет возможность корректно устанавливать риск прогрессирования на самых ранних этапах развития рака молочной железы, что неизбежно повысит их выживаемость и обеспечит оптимизацию расходования медицинских ресурсов и средств в рамках организации специальной и высокотехнологичной помощи этой категории пациентов.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования риска прогрессирования люминального рака молочной железы диаметром не более 3 см. Осуществляют проведение иммуногистохимического исследования гистологических препаратов, приготовленных из образцов опухоли пациентов с определением количества Т-лимфоцитов CD8+, количества Т-лимфоцитов CD4+ и количества М2 макрофагов CD163. В клетках инвазивного края первичной опухоли определяют экспрессию CD4+, CD8+ и CD163. Если экспрессия CD163 меньше 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, прогнозируют низкий риск прогрессирования. Если CD163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, прогнозируют средний риск прогрессирования. Если CD163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 более или равна 15%, прогнозируют высокий риск прогрессирования. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования, возможность осуществления прогнозирования на ранних стадиях заболевания строго определенного молекулярного подтипа РМЖ за счет анализа показателей предложенного комплекса опухоль-ассоциированных маркеров с оценкой значений основных субпопуляций инфильтрирующих Т-лимфоцитов и уровня инфильтрирующих опухоль М2 макрофагов. 5 пр.

Способ прогнозирования риска прогрессирования люминального рака молочной железы диаметром не более 3 см, включающий проведение иммуногистохимического исследования гистологических препаратов, приготовленных из образцов опухоли пациентов с определением количества Т-лимфоцитов CD8+, количества Т-лимфоцитов CD4+ и количества М2 макрофагов CD163, характеризующийся тем, что в клетках инвазивного края первичной опухоли определяют экспрессию CD4+, CD8+ и CD163 и, если экспрессия CD163 меньше 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, прогнозируют низкий риск прогрессирования; если CD163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 меньше 15%, прогнозируют средний риск прогрессирования; если CD163 более или равна 20%, а сумма экспрессии CD4 и CD8 более или равна 15%, прогнозируют высокий риск прогрессирования.