ПРОИЗВОДНЫЕ РЕТИНОИДА С ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2021 года по МПК C07C259/06 A61K31/201 A61P35/00 C07C229/34 C07C235/42 C07C251/40 C07C251/48 C07C251/60 C07C271/20 C07C271/22 C07C279/14 C07C279/24 C07C323/41 C07C403/20 C07C59/72 C07C59/74 C07C59/90 C07D215/12 C07D215/28 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических соединений, в частности производных ретиноида.

Уровень техники изобретения

Витамин А и его биологически активные производные, ретиналь и ретиноевая кислота, играют важную роль в зрении, необходимы в репродуктивной системе, действуют как морфогенетические агенты во время эмбрионального роста и регулируют рост и дифференцировку широкого спектра типов клеток в основе роста организма (M.Sporn, A.Roberts, D.Goodman, The Retinoids, Raven Press, New York 1994). Биологическое действие ретиноевой кислоты и ее производных опосредовано взаимодействием с ядерными рецепторами, принадлежащими двум семействам: первое называется RAR (рецептор ретиноевой кислоты) и второе называется RXR (ретиноидный X рецептор) (M.A. Asson-Batres, C. Rochette-Egly, The Biochemistry of Retinoic Acid Receptors I: Structure, Activation, and Function at the Molecular Level, Springer, Dordrecht, 2014).

Каждое семейство разделено на 3 подтипа (α, β, γ), которые кодируются тремя разными генами. Полностью транс-ретиноевая кислота (ATRA) связывается с RAR и RXR, тогда как 9-цис-RA связывается только с RXR.

Ретиноиды, будь то природные или синтетические аналоги витамина А, оказывают большое влияние на клеточную пролиферацию, дифференцировку и апоптоз: эти свойства широко используются для контроля опухолевой и дерматологической патологий (B.C. Das et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry 22 (2014) 673-683).

Хорошо известно, что росту первичной опухоли способствует хорошая васкуляризация опухолевой ткани. Достаточный запас кислорода и питательных веществ способствует быстрому росту самой опухоли.

Было продемонстрировано, что степень ангиогенеза может быть крайне негативным фактором в прогнозе новообразований (J.A. van der Zee et al., Eur. J. Cancer, 47 (2011) 2576 -2584).

Также в области новообразований известно, что важной стадией в биологии опухолевой клетки является приобретение метастазирующей способности.

Опухолевые клетки, которые метастазируют, могут утрачивать прилипание к окружающим структурам, проникать в кровеносные и лимфатические сосуды и колонизировать другие ткани на расстоянии, где они могут продолжать воспроизводить себя.

Метастазирование также является критическим событием в истории заболевания, являясь основной причиной смерти от рака. Оно тесно связано с наличием сосудистой ткани в месте опухоли или прилегающих областях и способствует этому.

Миграция опухолевых клеток через окружающие структуры позволяет клеткам достигать интратуморальных кровеносных сосудов, как ранее существовавших, так и образованных в результате неоангиогенеза, и, таким образом, достигать кровотока (Ray JM., Stetler-Stevenson WG; Eur. Respir. J., 7(11):2062-72, 1994; Stetler-Stevenson WG, Liotta LA, Kleiner DE Jr; FASEB J., 7(15):1434-41, 1993; Sun Y, Ma, L. Trends in Pharmacological Sciences, 36, 349-359, 2015).

Ретиноиды, полезные для лечения рака, уже известны. Острый промиелоцитарный лейкоз (APL) может быть эффективно искоренен сигнальным путем ретиноида в сочетании с химиотерапией, и, следовательно, образует прототип для лечения на основе ретиноидов.

Различные виды рака, кроме APL, уже лечат с помощью терапии, основаной на ретиноидах, и некоторые из них проходят клиническую оценку. Для нескольких неопластических заболеваний проводится оценка более одного ретиноида, и в настоящее время проводится множество клинических исследований для оценки их эффективности.

В клинических испытаниях только ATRA и другие ретиноиды показали ограниченный терапевтический успех (Connolly RM, Nguyen NK, Sukumar S. Cancer Res 2013;19:1651-9), что может быть отчасти связано с частым эпигенетическим молчанием рецептора ретиноевой кислоты (RAR)-β (Tang X.H. et al. Annu. Rev. Pathol 2011;6:345-645). Было показано, что ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC) вызывают ре-экспрессию RAR-β и сенсибилизируют клетки к лечению (Sirchia SM, et al. Oncogene 2000;19:1556-63). Поэтому была исследована комбинация ретиноидов с ингибиторами HDAC (Pili R, et al. Br. J. Cancer 2012;106:77-84; Raffoux E. et al. Oncotarget 2010;1:34-4.)

В последнее время большой интерес был уделен атипичным ретиноидам или ретиноид-связанным молекулам (RRM), название, которое отражает тот факт, что они проявляют свою противораковую активность независимо от трансактивации ретиноидных рецепторов (RAR, подтипы α, β и γ; и RXR, подтипы α, β, и γ). RAR и RXR являются членами суперсемейства ядерных гормональных рецепторов лиганд-чувствительных факторов транскрипции, которые опосредуют разнообразные действия природных и синтетических ретиноидов у эмбрионов и в течение всей жизни.

Однако известно, что некоторые соединения этого класса, включающие адамантильную группу, называемые адамантил ретиноидами (Wanka et al. Chem. Rev. 2013, 113, 3516-3604), связываются с RAR, таким как (6-[(3-адамант-1-ил)-4-гидрокси-фенил]-2-нафтойная кислота, CD437, также называемый AHPN), который является агонистом RARγ. Другие аналоги CD437, такие как адаротен (AHPC), который также связывает RARγ и является апоптогенным агентом, более сильным, чем CD437, 5-Cl-AHPN и 3-Cl-AHPC, не обладают RAR трансактивирующей активностью при сохранении индукции задержки роста и апоптотической активности в различных раковых клеточных линиях (Dawson et al. J. Med. Chem. 2004, 47, 3518). Кроме того, 3-Cl-AHPC связывает короткий гетеродимерный партнер (SHP) ядерного гормонального рецептора и модулирует SHP взаимодействие с репрессором Sin3A (Farhana et al., Mol. Cancer Ther. 2009, 8, 1625). Хотя пока еще неясно, механизм RRM-опосредованной гибели клеток, в частности, апоптоз, вызванный CD437, по-видимому, в значительной степени зависит от типа клеток. Данные для каспаза-зависимых и независимых механизмов через внутренние и внешние пути были предоставлены для этих соединений (Lopez-Hernandez et al., Cell Death Differ. 2004, 11, 154- 164. Ингибирование IGF-1R и Wnt/β-катенин сигнальных путей также вовлечено (L. Farhana et al. J. of Oncology, 2012, 796729).

Атипичные ретиноидные соединения, используемые в качестве проапоптотических средств, также были раскрыты в Cincinelli et al. Bioorg. Med. Chem. 2007, 15, 4863; Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 4931-4946; и Zebin et al., Analogues of Orphan Nuclear Receptor Small Heterodimer Partner Ligand and Apoptosis Inducer (E)-4-[3-(1-адамантил)-4-hydroxyphenyl]-3-chlorocinnamic Acid. 2. Impact of 3-Chloro Group Replacement on Inhibition of Proliferation and Induction of Apoptosis of Leukemia and Cancer Cell Lines, J. Med. Chem., 2012, 55 (1), pp 233-249.

В WO9703682 раскрыто применение вышеупомянутого соединения AHPN для лечения рака.

В WO9801132, WO2015026990 и WO0156563 раскрыты адамантилсодержащие ретиноидные соединения.

В WO2010072727, WO2007000383, WO2003048101 и WO0311808 раскрыты производные ретиноида с цитотоксическими и/или противоопухолевыми свойствами. В WO2010106135 раскрыты производные ретиноида для лечения рака яичника. В WO2008077772 раскрыта комбинация, включающая атипичный ретиноид и платиновое противораковое средство, для ингибирования роста опухоли и миграции опухоли.

Несмотря на прогресс, достигнутый в последние годы, фармакологические исследования, касающиеся открытия новых лекарственных средств для лечения опухолевых заболеваний, по-прежнему являются одним из наиболее активных направлений.

Действительно, все еще существует острая потребность в новых соединениях, способных блокировать или препятствовать опухолевым заболеваниям.

Сущность изобретения

В настоящее время было обнаружено, что новые соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут быть успешно использованы при лечении рака и других заболеваний, связанных с измененным ангиогенезом.

Объектом настоящего изобретения является соединение, имеющее следующую формулу (I):

Формула (I)

где:

A выбран из группы, состоящей из: алкилена, алкенилена, алкинилена, СОалкилена или отсутствует,

R₁ выбран из группы, состоящей из: CONHOH, CH₂OH, CH₂SH, CH₂SCOCH₃, CH₂NHOH, COOH, COO-алкила, COCF₃, CONHOалкила, CONHO-оксациклоалкила, CONHNH₂, CONH-арила, где указанный арил необязательно замещен OH и/или NH₂, CONHалкил-S-S-алкила, CONHалкил-S-S-алкил-NH₂, CONHалкил-S-S-алкил-NHCO-C(=NOH)алкиларила, где указанный арил необязательно замещен OH и/или галогеном, COалкилCONHалкил-S-S-алкил-NHCO-C(=NOH)алкиларила, где указанный арил необязательно замещен OH и/или галогеном,

R₂ выбран из группы, состоящей из: H, алкила, OH, O-алкила, O-алкенила, галогена, CN, CHO, COалкила, COOH, COOалкила и CONH₂,

R₃ выбран из группы, состоящей из: H, алкила, алкенила, оксоалкенила, гидроксииминоалкенила, OH, алкокси, циклоалкилокси, арилалкокси, гетероциклоалкокси, карбоксиалкокси, CH₂R₆, COR₇, CN, CH=NOH, CH=NOалкилCOOH, CH=NOарила и CH=NOалкиларила,

где R₆ выбран из группы, состоящей из: OH, алкокси, NH₂, NH-алкила, N-диалкила, NHCOOалкила, NHCOалкила, арила, гетероциклоалкила, гуанидино, необязательно замещенного алкилом или СООалкильной группой, бигуанидо, необязательно замещенного алкилом или арилалкильной группой, и NH-SO₂-арила,

и где R₇ выбран из группы, состоящей из: H, OH, O-алкила, NH₂, NHOH, NHарила, NHалкила, необязательно замещенного на концах NH₂ или CONHOH,

R₄ выбран из группы, состоящей из: OH, O-алкила, NH₂, NHарила, NHалкила, Nдиалкила, NHOH, NHNH₂ и CF₃, и

R₅ выбран из группы, состоящей из: H, алкила, циклоалкила, азациклоалкила, оксациклоалкила, арила, гетероарила, алкиламинометила, арилалкиламинометила, гетероарилалкиламинометила, где каждая из указанных групп может быть необязательно замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из OH, алкила, Oалкила, галогена, NO₂, NH₂, NHалкила, Nдиалкила, пирролидина, пиперидина и морфолина,

при условии, что когда R₅ представляет собой H, R₁ представляет собой CONHOH,

R₈ и R₉ представляют собой Н или вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют конденсированное пяти- или шестичленное ароматическое или гетероароматическое кольцо,

где алкил представляет собой C₁-C₂₀ линейную или разветвленную алкильную группу,

алкенил представляет собой C₂-C₂₀ линейную или разветвленную алкильную группу,

циклоалкил представляет собой насыщенную или частично ненасыщенную C₃-C₁₀ карбоциклическую группу, включающую одно или несколько конденсированных колец,

арил представляет собой ароматическую группу, включающую одно или несколько конденсированных ароматических колец,

гетероциклоалкил и гетероарил представляют собой указанные циклоалкильные или арильные кольца, включающие один или несколько гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S,

указанный циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, ароматическое или гетероароматическое кольцо необязательно замещен в любом положении кольца одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, алкила, линейного или разветвленного, O-алкила, линейного или разветвленного, амино, циклоалкила, гетероциклоалкила, карбоксила, NO₂, NH₂ и OH,

амино представляет собой группу NR'R'', где каждый из R' и R'' может независимо представлять собой H или алкил,

энантиомеры, диастереоизомеры и их смеси,

или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват.

Также было обнаружено, что комбинация соединений формулы (I) с известными химиотерапевтическими средствами может оказывать синергетическое противоопухолевое действие.

Кроме того, соединения формулы (I) эффективны в опухолевых клетках, устойчивых к другим известным химиотерапевтическим лекарственным средствам, таким как, например, адаротен.

Способ получения соединения формулы (I), как будет четко определено ниже, также является целью настоящего изобретения.

Еще одной целью изобретения является фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного ингредиента соединение формулы (I) и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент. Такая композиция также может включать одно или несколько дополнительных химиотерапевтических лекарственных средств.

Также целью изобретения является соединение формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства.

Еще одной целью настоящего изобретения является соединение формулы (I) для применения при лечении заболевания, связанного с измененным ангиогенезом. В предпочтительном варианте осуществления указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из патологии, относящейся к артриту, опухоли, метастазирования, диабетической ретинопатии, псориаза и хронического воспалительного заболевания.

Подробное описание изобретения

Определения

Термин «алкил» относится к линейным или разветвленным алкильным группам, имеющим от 1 до 20 атомов углерода, предпочтительно, имеющим от 1 до 12 атомов углерода.

Термин «алкилен» относится к двухвалентной алкильной группе, имеющей две точки присоединения в соединении по изобретению. Предпочтительно он включает от 1 до 20 атомов углерода.

Термин «циклоалкил» относится к насыщенной или частично ненасыщенной карбоциклической группе с 3-10 атомами углерода. Ароматическая группа не предполагается. Циклоалкильная группа может содержать одно кольцо или несколько конденсированных колец. Примеры ʺC₃-C₁₀-циклоалкилаʺ включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, норборнил, адамантил и тому подобное.

Термин «азациклоалкил» относится к соединениям, в которых один или несколько атомов азота замещают атомы углерода в «циклоалкильной» группе.

Термин «оксациклоалкил» относится к соединениям, в которых один или несколько атомов кислорода замещают атомы углерода в «циклоалкильной» группе. Предпочтительный оксациклоалкил представляет собой тетрагидропиран.

Термины «гетероциклоалкил» и «гетероцикл» относятся к насыщенному или частично ненасыщенному (но не ароматическому) циклоалкильному кольцу, предпочтительно, пяти-, шести- или семичленному кольцу, включающему один или несколько атомов азота, кислорода или серы; кольца могут быть замещены одной или несколькими группами, выбранными, например, из алкила, гидроксила и карбоксила. Предпочтительный гетероциклоалкил включает пирролидин, пиперидин, пиперазин, морфолин и тетрагидропиран.

Термин «арил» относится к ароматическим кольцам, например, фенилу, нафтилу, антраценилу, необязательно замещенным галогеном, алкилом, линейным или разветвленным, O-алкилом, линейным или разветвленным, амино, циклоалкилом, гетероциклоалкилом, карбоксилом, NO₂, NH₂ и/или ОН.

Термин «гетероарил» относится к гетероароматическим кольцам, например, фурану, тиофену, пиридину, пиримидину, хинолину, хиназолину, необязательно замещенным галогеном, алкилом, линейным или разветвленным, O-алкилом, линейным или разветвленным, амино, циклоалкилом, гетероциклоалкилом, карбоксилом, NO₂, NH₂ и/или OH.

Термин «амино» относится к группе NRR', где каждый из R и R' может независимо представлять собой Н или алкил.

Термин «аминокарбонилалкил» относится к алкильной группе, замещенной аминокарбонильной группой.

Термин «аминокарбонил» относится к группе формулы - NR'R''CO-, где каждый из R' и R'' может независимо представлять собой H или алкил.

Фигуры

Фиг. 1. Эффективность соединения 2 (RC1375) на ортотопической модели глиобластомы человека. Мышам (n=5) вводили внутрибрюшинно соединение или носитель только.

Алкильной группой может быть, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил. Она может быть линейной или разветвленной.

Алкиленовая группа предпочтительно представляет собой метилен, этилен, триметилен, пропилен, тетраметилен или диметилэтилен.

Галоген выбран из группы, состоящей из: фтора (F), хлора (Cl), брома (Br) и йода (I).

Любая азотная группа может быть защищена. Защитная группа предпочтительно выбрана из трет-бутоксикарбонила, бензилоксикарбонила и 9-флуоренилметилоксикарбонила.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения соединение формулы (I) имеет циклоалкил как R₅, более предпочтительно оно имеет адамантильную группу как R₅.

В другом предпочтительном варианте осуществления R₄ представляет собой OH или O-алкил.

В предпочтительном варианте осуществления R₁ представляет собой CONHOH.

В предпочтительных вариантах осуществления R₂ представляет собой H.

В предпочтительных вариантах осуществления R₃ представляет собой H.

В еще более предпочтительных вариантах осуществления оба R₂ и R₃ представляют собой H.

В более предпочтительном варианте осуществления А представляет собой алкилен, предпочтительно C₁-C₄алкилен, более предпочтительно метилен, и R₁ представляет собой CONHOH. Еще более предпочтительно, в этом варианте осуществления R₄ представляет собой ОН и R₅ представляет собой адамантил.

Предпочтительно, R₃ выбран из группы, состоящей из: H, алкила, алкенила, оксоалкенила, гидроксииминоалкенила, OH, алкокси, CH₂R₆, COR₇, CN, CH=NOH, CH=NOалкилCOOH, CH=NOарила и CH=NOалкиларила.

Предпочтительно, R₄ выбран из группы, состоящей из: OH, O-алкила, NH₂, NHOH, NHNH₂ и CF₃.

Фармацевтически приемлемые соли соединения формулы (I) включены в объем изобретения.

Фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые сохраняют биологическую активность основания и получены из таких известных фармакологически приемлемых кислот, как, например, хлористоводородная, бромистоводородная, серная, фосфорная, азотная, фумаровая, янтарная, щавелевая, яблочная, винная, малеиновая, лимонная, метансульфоновая или бензойная кислота и другие, обычно используемые в данной области. Предпочтительной солью является соль трифторуксусной кислоты.

Также фармацевтически приемлемые гидраты или сольваты соединения формулы (I) включены в объем настоящего изобретения. В частности, они могут представлять собой любые гидраты или сольваты, обычно используемые в данной области.

Предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются:

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-гидроксикарбамоил-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (1) (RC 1315)

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (2) (RC 1375)

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(7-гидроксикарбамоил-гептилокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (3) (RC 1268)

2-(2-{4-[3-адамантан-1-ил-4'-(2-карбокси-винил)-бифенил-4-илокси]-бутириламино}-этилдисульфанил)-этил-аммоний; трифторацетат (4) (RC 1363)

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (5) (RC 1338)

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропионилокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (6) (AB 514)

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-карбокси-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (7) (RC 1401)

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметоксибифенил-4-ил)-акриловая кислота (8) (MIR002)

3-{3'-адамантан-1-ил-4'[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (9) (BIO 49)

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (10) (GEM 66)

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (11) (GEM 57)

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-гидроксикарбамоил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (12) (GEM 60)

6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-фенил}-нафталин-2-карбоновая кислота (13) (GEM 59)

6-(3-адамантан-1-ил-4-гидроксикарбамоилметокси-фенил)-нафталин-2-карбоновая кислота (14) (GEM 61)

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(гидроксил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (15) (BIO4)

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксиаминометокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (16) (GEM 95)

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидразинокарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (17) (GEM 93)

3-(4'-Гидроксикарбамоилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (18) (GEM 103)

3-[3'-(1,5-Диазабицикло[3.3.1]нон-9-ил)-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (19)

3-[4'-(4-Гидроксикарбамоил-бутокси)-3'-(1,3,5,7-тетрааза-трицикло[3.3.1.13,7]дец-2-ил)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (20)

3-[4'-(4-Гидроксикарбамоил-бутокси)-3'-(1-метил-циклогексил)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (21)

3-Фенил-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (22)

3-(4'-(4-Гидроксикарбамоил-бутокси)-3'-{[(нафталин-2-илметил)-амино]-метил}-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (23)

3-(4'-(4-Гидроксикарбамоил-бутокси)-3'-{[(хинолин-7-илметил)-амино]-метил}-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (24)

3-(4'-(4-Гидроксикарбамоил-бутокси)-3'-{[(8-гидрокси-5-нитро-хинолин-7-илметил)-амино]-метил}-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (25)

Формулы вышеуказанных соединений представлены в следующей таблице:

Способ получения соединения формулы (I) также входит в объем настоящего изобретения.

Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы многими способами, доступными специалистам в области органической химии. Общие схемы синтеза для получения соединений по настоящему изобретению описаны ниже. Эти схемы являются иллюстративными и не предназначены для ограничения возможных методик, которые специалист в данной области может использовать для получения соединений, раскрытых в настоящем документе. Специалистам в данной области техники будут очевидны различные способы получения соединений по настоящему изобретению. Кроме того, различные стадии синтеза могут быть выполнены в альтернативной последовательности с получением желаемого соединения или соединений.

Примеры соединений по настоящему изобретению, полученных способами, описанными в общих схемах, приведены в разделе промежуточных соединений и примеров, изложенном ниже.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены рядом способов, известных специалисту в области органического синтеза. Соединения по настоящему изобретению могут быть синтезированы с использованием способов, описанных ниже, вместе с методами синтеза, известными в области синтетической органической химии, или с помощью их вариантов, как принято специалистами в данной области. Предпочтительные способы включают, но не ограничиваются ими, способы, описанные ниже. Реакции проводят в растворителе или смеси растворителей, подходящих для используемых реагентов и материалов и подходящем для проводимых превращений. Специалистам в области органического синтеза будет понятно, что функциональность, присутствующая в молекуле, должна соответствовать предлагаемым преобразованиям. Это иногда требует решения для изменения порядка стадий синтеза или для выбора одной конкретной схемы процесса относительно другой для получения желаемого соединения по изобретению.

Также следует признать, что другим важным соображением при планировании любого пути синтеза в этой области является разумный выбор защитной группы, используемой для защиты реакционноспособных функциональных групп, присутствующих в соединениях, описанных в настоящем изобретении. Авторитетный обзор, описывающий многие альтернативные способы для квалифицированного специалиста, представлен в Greene et al. (Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Edition, Wiley- Interscience (2006)).

Кроме того, специалист в данной области может легко изменить реагенты и условия реакции, приведенные в схемах ниже, чтобы включить любую комбинацию заместителей, как определено выше. Также, специалист в данной области может легко использовать взаимозаменяемые стадии для каждого процесса синтеза и включать стадии выделения и/или очистки, если это будет сочтено необходимым.

Исходные вещества, пригодные для получения соединений по изобретению и их промежуточных соединений, являются коммерчески доступными или могут быть получены хорошо известными способами синтеза.

Конечные вещества, полученные синтезом, описанным ниже, могут быть очищены с использованием способов, обычно известных специалисту в данной области, таких как препаративная хроматография, тонкослойная хроматография, ВЭЖХ или кристаллизация.

Примерные способы синтеза соединений по изобретению описаны в настоящем документе.

Соединения формулы (I), где R₅ представляет собой 1-адамантил, могут быть получены, например, с помощью реакции Сузуки-Мияуры (Miyaura, N.; Suzuki, A. Chem. Rev. (1995), 95, 2457; Mora, M. et al. Curr. Org. Chemistry (2012),16,1128-1150; Heravi, M. et al. Tetrahedron (2012), 68, 9145-9178; Alonso, F. et al. Tetrahedron (2008), 64, 3047-3101) между 2-адамантан-1-ил-4-бромфенолом (А) (Charpentier, B. et al. J. Med. Chem. (1995), 38, 4993-5006) или эфиром (Tribulovich, V. G. et al., Russian J. Gen. Chem. 80(4), 868-869; 2010) или его силилпроизводным с подходящим боронатом (B), где R₄ представляет собой O-алкил, в присутствии Pd-тетракис(трифенилфосфин) и 2M карбоната натрия или калия, или дихлор(дифенилфосфиноферроцен)палладий-дихлорметана и ацетата калия, или подобного Pd катализатора с аналогичным основанием, в растворителе таком как диметоксиэтан и этанол, при температуре от 25°С до 80°С (схема 1).

Сложные эфиры (B) могут быть получены из соответствующего галогенида и бис(пинаколато)диборона в присутствии PdCl₂(dppf) и KOAc. (Giroux, A. et al. Tetrahedron Letters, (1997), 41, 3841-3844).

Альтернативно, соответствующие бороновые кислоты могут быть получены с помощью реакции обмена металл-галоген соответствующего галогенида, гашением триалкоксиборатным реагентом и водной обработкой с получением бороновых кислот (Miyaura, N. et al., Chem. Rev., (1995),95, 2457).

Полученные таким образом сложные эфиры (C) могут быть гидролизованы, например, LiOH.H₂O в THF/H₂O, с получением соответствующих кислот или взаимодействовать с подходящими реагентами (например, NH₂OH или O-алкилгидроксиламинами или аминами), с получением соединений, содержащих желаемую группу COR₄, где R₄ имеет значения, определенные выше, в соответствии с хорошо известными процедурами органического синтеза.

Защитная группа (например, трет-бутоксикарбонил), если она присутствует, может быть удалена обычными процедурами, известными в данной области. Например, ее можно удалить с помощью обработки трифторуксусной кислотой в дихлорметане при температуре от 0°С до комнатной температуры.

Схема 1

Такие же или аналогичные условия реакции имеют место для соединений структуры «А» схемы 1, где R₅ представляет собой алкил, циклоалкил, азациклоалкил, оксациклоалкил, арил, гетероарил.

Соединения общей формулы «A», где R₂ отличается от H, могут быть получены, например, путем алкилирования (Cincinelli et al. Bioorg. Med. Chem. 2007, 15, 4863) соединений D (Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 4931-4946), с последующим взаимодействием с бис(пинаколато)дибороном в присутствии PdCl₂(dppf) и KOAc. (Giroux, A. et al. Tetrahedron Letters, (1997), 41, 3841-3844) (схема 2).

Схема 2

Такие же или аналогичные условия реакции имеют место для соединений структуры «D» схемы 2, где R₅ представляет собой алкил, циклоалкил, азациклоалкил, оксациклоалкил, арил, гетероарил.

Соединения, имеющие дополнительные значения R₂ в соответствии с настоящим изобретением, могут быть легко получены специалистом в данной области на основании описанных выше примеров процедур в соответствии со стандартными способами органического синтеза и обычными известными знаниями в данной области.

Соединения общей формулы «B» могут быть получены, например, путем формилирования (Bhatt, S. et al. Tetrahedron Letters, 50(42), 5823-5826; 2009) или амидоалкилирования (Cincinelli et al. Bioorg. Med. Chem. 2007, 15, 4863) или с помощью других хорошо известных способов органического синтеза, коммерчески доступного п-бромфенола, с последующей реакцией сочетания Хека с подходящим акрилатом (Heck, R.F. Organic Reactions, Vol. 27, 1982). Полученные 3-замещенные-4-гидроксициннаминовые эфиры могут быть превращены в соответствующие трифлаты (B) стандартными способами (например, Cincinelli, R.et al Eur. J. Med. Chem., 79, 251-259; 2014; Dallavalle, S. et al. J. Med. Chem. (2005), 48, 4931-4946) (путь a, схема 3).

Альтернативно, соединения общей формулы «B», где R₃ представляет собой, например, гетероциклоалкил, могут быть получены реакцией Манниха подходящих 4-гидроксициннаматов с параформальдегидом и аминами (Nakano, H. J. Med. Chem., (2012), 55, 5151-5164), с последующим превращением в соответствующие трифлаты (B) стандартными способами (путь b, схема 3).

Схема 3

Соединения формулы (I), где R₃ представляет собой формильную группу, могут быть превращены в соответствующие оксимы или алкилоксимы (Cullen, M. et al. J. Med. Chem. (2007), 50, 4854-4867), спирты (Kostikov, A. P. et al. J. Org. Chem. (2007), 72, 9190-9194), амиды (Xu, J. E. J. Org. Chem. (2004), 15, 3244-3253), алкены в соответствии со стандартными способами органического синтеза.

Соединения, имеющие дополнительные значения R₃ в соответствии с настоящим изобретением, могут быть легко получены специалистом в данной области на основании описанных выше примеров процедур в соответствии со стандартными способами органического синтеза и обычными известными знаниями в данной области.

Эта схема реакции может быть применена не только к сложным эфирам, но также и к другим соединениям, где R₄ отличается от O-алкила.

Соединения общей формулы (I) могут быть превращены в другие соединения общей формулы (I) с помощью подходящих превращений.

Например, соединения формулы C, где R₁ представляет собой ОН, могут быть превращены в соединения, где R₁ имеет значения, определенные выше, посредством реакций алкилирования с последующими дальнейшими превращениями в соответствии с общими способами органического синтеза.

Например, соединения формулы (I), где R₁ представляет собой CONHOH, COOH, COO-алкил, CONHOалкила, CONHNH₂, CONH-арил, R₂ и R₃ представляют собой H и R₈ и R₉ представляют собой H, могут быть получены путем превращения кислоты F (Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 4931-4946) в подходящий сложный эфир G (например, трет-бутиловый эфир, Giannini, G. et al. Bioorg. Med. Chem. (2012), 20(7),2405-2415), с последующим алкилированием подходящими алкилбромалкилкарбоксилатами (Naik, Ravi et al. J. Med. Chem. (2012), 55, 10564-10571) с получением O-замещенных промежуточных соединений H. Полученные таким образом сложные эфиры (Н) могут быть гидролизованы с помощью LiOH.H₂O в THF/H₂O с получением соответствующих кислот. Реакция с подходящими реагентами (например, NH₂OH или O-алкилгидроксиламины или амины) с последующей обработкой TFA дает соединения, включающие желаемую группу COR₄, где R₄ имеет значения, определенные выше. (Схема 4).

Соединения формулы (I), где R₁ представляет собой CONHO-оксациклоалкил, можно получить, следуя вышеописанной процедуре, путем превращения кислоты F в подходящий сложный эфир G (например, метиловый эфир) с последующим алкилированием с O-оксациклоалкилгидроксиламином с получением O-замещенных промежуточных соединений H. Полученные таким образом сложные эфиры (Н) могут быть гидролизованы с помощью LiOH.H₂O в THF/H₂O с получением желаемой группы COR₄, где R₄ имеет значения, определенные выше.

Соединения формулы (I), где R₁ представляет собой CH₂OH или COCF₃, R₂ и R₃ представляют собой H и R₈ и R₉ представляют собой H, могут быть получены путем превращения кислоты F (Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 4931-4946) в подходящий сложный эфир G (например, метиловый эфир, Giannini, G. et al. Bioorg. Med. Chem. (2012), 20(7),2405-2415), с последующим алкилированием бромалкилацетатами или бром-1,1,1-трифторалкил-2-онами с получением O-замещенных промежуточных соединений H. Полученные таким образом сложные эфиры (Н) могут быть гидролизованы с помощью LiOH.H₂O в THF/H₂O с получением соединений, включающих желаемую группу COR₄, где R₄ имеет значения, определенные выше. (Схема 4).

Соединения формулы (I), где R₁ представляет собой CH₂SCOCH₃ или CH₂NHOH, R₂ и R₃ представляют собой H и R₈ и R₉ представляют собой H, могут быть получены путем превращения кислоты F (Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2005, 48, 4931-4946) в подходящий сложный эфир G (например, трет-бутиловый эфир, Giannini, G. et al. Bioorg. Med. Chem. (2012), 20(7),2405-2415), алкилирования дибромалкилами, взаимодействия с тиоацетатом калия или метантиолатом калия или N, O-диBocгидроксиламином с последующей обработкой TFA. (Схема 4). Соединения формулы (I), где R₁ представляет собой CH₂SH, могут быть получены в соответствии с описанной выше процедурой путем окончательной обработки промежуточного соединения H с R₁=CH₂SCOCH₃ с LiOH.H₂O в THF/H₂O.

Схема 4

Такие же или аналогичные условия реакции имеют место для соединений структуры «F» схемы 4, где R₅ представляет собой алкил, циклоалкил, азациклоалкил, оксациклоалкил, арил, гетероарил.

Соединения, имеющие дополнительные значения R₁ или A-R₁ в соответствии с настоящим изобретением, могут быть легко получены специалистом в данной области на основе описанных выше примеров процедур и в соответствии со стандартными способами органического синтеза и обычными известными знаниями в данной области.

Соединения формулы (M), где R₂ и R₃ представляют собой H и R₅ представляет собой алкиламинометил, арилакиламинометил, гетероарилалкиламинометил, могут быть получены, начиная со сложных эфиров J (Dallavalle S. et al. Eur. J. Med. Chem. (2009), 44(5),1900-1912) по реакции Манниха с формальдегидом и аминами BNH₂, где B представляет собой алкил, арилакил или гетероарилалкил, необязательно замещенный OH, Oалкилом, галогеном, NO₂ и/или NH₂ в зависимости от желаемого R₅, как описано, например, Sosič et al. J. Med. Chem. 2013, 56, 521-533. (Схема 5 )

Схема 5

Эти сложные эфиры могут быть превращены в сложные эфиры L, затем в соединения м, следуя процедурам, описанным на схеме 4. В этих превращениях NH-группа BNHCH₂ может быть защищена и снята защита в соответствии с данными способами органического синтеза.

Во всех вышеупомянутых превращениях, каждая возможная интерферирующая группа может быть защищена и затем снята защита в соответствии со стандартными способами органической химии, как описано, например, в P.G.M. Wuts and T.W. Greene ʺGreene's Protective Groups in Organic Synthesisʺ, J. Wiley & Sons, Inc., 4rd Ed., 2006.

Все описанные выше превращения являются только примерными способами синтеза, уже известными в органической химии и хорошо известными специалистам в данной области.

Любой вариант или комбинация заместителей соединений формулы (I), который входит в объем настоящего изобретения и явно не показан или не описан в вышеупомянутых способах, может быть легко получен, начиная с описанных выше примерных способов с подходящими модификациями, например, в исходных соединениях или реагентах, которые хорошо известны специалистам в области органической химии. Ссылка может быть сделана, например, на руководство ʺMarch's Advanced Organic Chemistry, Reactions, Mechanism and structures.ʺ, Michael B. Smith, Jerry March, last edition.

Было обнаружено, что соединения формулы (I) обладают антипролиферативной активностью и способны уменьшить опухолевую массу. Поэтому их можно с пользой применять при лечении многих раковых заболеваний.

Также было обнаружено, что соединения по изобретению могут обладать противоопухолевой активностью также в отношении опухоли, устойчивой к известным химиотерапевтическим лекарственным средствам, таким как адаротен.

Кроме того, во многих опухолях сверхэкспрессия P-гликопротеина (PGP) резко уменьшает возможность после перорального введения абсорбции нескольких химиотерапевтических средств (то есть паклитаксела, доксорубицина и т.п.). Было обнаружено, что соединения по изобретению не являются субстратами PGP, поэтому их можно преимущественно вводить пациентам пероральным путем.

Еще одна цель настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I) в качестве лекарственного средства, в частности, для лечения опухолей. Когда оно используется для лечения опухолей, противоопухолевая активность может иметь цитотоксическую природу и/или апоптотическую природу, и/или антиангиогенную природу.

В предпочтительном варианте осуществления, пухоль выбрана из группы, состоящей из саркомы, карциномы, карциноида, мезотелиомы, лимфомы, опухоли костей, нейроэндокринной опухоли, лимфоидного лейкоза, миелоидного лейкоза, моноцитарного лейкоза, мегакариоцитарного лейкоза, острого промиелоцитарного лейкоза, болезни Ходжкина, опухоли легкого, гепатомы, мезотелиомы и интракраниальной опухоли, такой как глиома.

Еще одной целью настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) для профилактики и лечения метастазирования опухоли.

В следующем варианте осуществления изобретения соединение формулы (I) можно использовать для лечения заболевания, связанного с измененным ангиогенезом.

Специалист в данной области, например врач, может определить и распознать, связано ли заболевание с измененным ангиогенезом, на основании его общих знаний в данной области.

В частности, соединение формулы (I) можно использовать для лечения следующих заболеваний: патологии, относящейся к артриту, диабетической ретинопатии, псориаза и хронического воспалительного заболевания.

Другой целью настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая, по меньшей мере, одно соединение формулы (I) в качестве активного ингредиента, предпочтительно в таком количестве, чтобы обеспечить значительный терапевтический эффект, вместе с фармацевтически приемлемым носителем и/или эксципиентами.

Такие фармацевтические композиции могут быть получены обычными способами и способами, которые являются обычной практикой в фармацевтической промышленности, такими как, например, те, которые проиллюстрированы в Remington's Pharmaceutical Science Handbook, Mack Pub. N.Y. -last edition.

Композиции по настоящему изобретению включают, вместе с активным ингредиентом, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Это могут быть особенно полезные вспомогательные вещества для состава, например, солюбилизирующие агенты, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты и эмульгирующие агенты.

Фармацевтические композиции по изобретению также могут включать один или несколько дополнительных активных ингредиентов, в частности, химиотерапевтические средства. Такими средствами могут быть любые молекулы, которые обычно используются при лечении опухолей. Химиотерапевтическое средство может быть выбрано среди известных средств в соответствии с общими знаниями специалиста в данной области. Например, указанное химиотерапевтическое средство может быть выбрано из группы, состоящей из цитотоксических средств, ингибиторов протеасом, иммуномодулирующих препаратов, ингибиторов топоизомеразы, ингибиторов киназы и моноклональных антител, в частности, направленных на экспрессируемые на высоком уровне опухолевые специфические антигены. Особенно предпочтительной является композиция, включающая соединение формулы (I) и химиотерапевтическое средство на основе платины, в частности, цисплатин. Действительно, было обнаружено, что такая комбинация обладает синергетической противоопухолевой активностью.

В соответствии с выбранным путем введения композиции будут находиться в твердой или жидкой форме, подходящей для перорального, парентерального или местного введения.

Обычно соединения по настоящему изобретению вводят в «терапевтически эффективном количестве». Количество фактически вводимого соединения обычно определяется врачом с учетом соответствующих обстоятельств, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение, комбинацию лекарственных средств, возраст, массу тела и реакцию отдельного пациента, серьезность симптомов пациента и тому подобное. Для любого соединения терапевтически эффективная доза может быть первоначально оценена либо в анализах на клеточных культурах, либо на животных моделях, обычно на мышах, крысах, морских свинках, кроликах, собаках или свиньях. Животная модель также может быть использована для определения подходящего диапазона концентраций и пути введения. Такая информация может затем использоваться для определения полезных доз и путей введения человеку. При расчете эквивалентной дозы для человека (HED) рекомендуется использовать таблицу пересчета, приведенную в Guidance for Industry and Reviewers document (2002, U.S. Food and Drug Administration, Rockville, Maryland, USA).

Обычно эффективная доза будет составлять от 0,01 мг/кг до 100 мг/кг, предпочтительно от 0,05 мг/кг до 50 мг/кг. Для любого соединения терапевтически эффективная доза может быть первоначально оценена либо в анализах на клеточных культурах, либо на животных моделях, обычно на мышах, крысах, морских свинках, кроликах, собаках или свиньях. Точная эффективная доза для человека будет зависеть от тяжести состояния заболевания, общего состояния здоровья субъекта, возраста, массы и пола субъекта, питания, времени и частоты приема, комбинации(ий) лекарственного средства, аллергической реакции и переносимости/ответа на терапию. Это количество может быть определено путем проведения рутинных экспериментов и находится на усмотрении врача.

Композиции могут вводиться индивидуально пациенту или могут вводиться в комбинации с другими агентами, лекарственными средствами или гормонами. Например, их можно использовать в комбинации с другими активными ингредиентами, такими как, например, противораковые лекарственные средства.

Лекарственное средство также может включать фармацевтически приемлемый носитель для введения терапевтического средства. Такие носители включают антитела и другие полипептиды, гены и другие терапевтические средства, такие как липосомы, при условии, что носитель не индуцирует продукцию антител, опасных для индивидуума, получающего композицию, и которые можно вводить без излишней токсичности.

Подходящими носителями могут быть крупные, медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, аминокислотные сополимеры и неактивные вирусные частицы.

Подробное обсуждение фармацевтически приемлемых носителей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N.J. 1991).

Фармацевтически приемлемые носители в терапевтических композициях могут дополнительно содержать жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и этанол.

Кроме того, в таких композициях могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты, рН-буферные вещества и тому подобное. Такие носители позволяют составлять фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и тому подобного для приема внутрь пациентом.

После составления композиции по изобретению можно вводить непосредственно субъекту. Субъектами, подлежащими лечению, могут быть животные; в частности, можно лечить людей.

Лекарственное средство по настоящему изобретению можно вводить любым количеством способов, включая, но не ограничиваясь ими, пероральное, внутривенное, внутримышечное, внутриартериальное, интрамедуллярное, интратекальное, интравентрикулярное, трансдермальное или чрескожное применение, подкожным, внутрибрюшинным, интраназальным, энтеральным, местным, сублингвальнаым, интравагинальным или ректальным путем.

Композиции для перорального введения могут быть в форме нерасфасованных жидких растворов или суспензий или нерасфасованных порошков. Однако чаще всего композиции представлены в стандартных лекарственных формах для облегчения точного дозирования. Термин «стандартные лекарственные формы» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве стандартных доз для человека и других млекопитающих, причем каждая единица содержит заранее определенное количество активного вещества, вычиленное для достижения желаемого терапевтического эффекта, в комбинации с подходящим фармацевтическим эксципиентом. Типичные стандартные лекарственные формы включают наполненные, предварительно отмеренные ампулы или шприцы жидких композиций или пилюли, таблетки, капсулы или тому подобное в случае твердых композиций. В таких композициях соединение по изобретению обычно является второстепенным компонентом (от примерно 0,1 до примерно 50% мас. или предпочтительно от примерно 1 до примерно 40% мас.), а остальное составляет различные носители или наполнители и вспомогательноые вещества, используемое в производственном процессе, полезные для формирования желаемой лекарственной формы. Дозировка лечения может быть схемой введения однократной дозы или схемой введения многократных доз.

Еще одной целью изобретения является способ получения фармацевтических композиций, характеризующихся смешением одного или нескольких соединений формулы (I) с подходящими эксципиентами, стабилизаторами и/или фармацевтически приемлемыми разбавителями.

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение.

Примеры

Пример 1

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-гидроксикарбамоил-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (1).

Стадия 1. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-этоксикарбонил-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Смесь 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (50 мг, 0,115 ммоль), этилбромбутаноата (36 мг, 0,17 ммоль), K₂CO₃ (48 мг, 0,345 ммоль) в 1,4 мл DMF нагревали при 60-80°C в течение 2 ч, добавляли 12 мг этилбромбутаноата и снова нагревали в течение 6 ч. Выпаривание, поглощение EtOAc, промывание водой, сушка, выпаривание и хроматография смесью гексан/EtOAc 9:1 давало 67 мг продукта, т.пл. 148°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, CHCl₃-d): 7,79-7,46 (6H, м), 7,41 (1H, дд, J=1,8, 8,2 Гц), 6,94 (1H, д, J=8,2 Гц), 6,40 (1H, д, J=15,9 Гц), 4,28-4,01 (4H, м), 2,64 (2H, т, J=7,6 Гц), 2,30-2,03 (11H, м), 1,87-1,70 (6H, м), 1,56 (с, 9H), 1,30 (3H, т, J=7,3).

Стадия 2. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-карбокси-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Вышеуказанный сложный эфир (59 мг, 0,11 ммоль), растворяли в 3,4 мл водн. 50% THF, добавляли 14 мг (0,32 ммоль) LiOH. H₂O, и смесь оставляли на ночь в темноте. Выпаривание растворителя, поглощение EtOAc, промывание 1 н H₂SO₄ (10 мл), сушка и выпаривание давало 43 мг (87%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. >280°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,37 /1H, д, J=16,2 Гц), 7,33-7,26 84H, м), 7,24 (1H, д, J=2,1 Гц), 7,17 81H, дд, 2,1, 8,2 Гц), 6,69 (1H, д, J=8,2 Гц), 6,15 (1H, д J=16,2 Гц), 3,87 (2H, т, J=6,1 Гц), 2,47 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,06-1,95 (2H, м), 1,94-1,83 (9H, м), 1,59-1,49 (6H, м) 1,31 (9H, с).

Стадия 3. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-пропокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Смесь вышеуказанного сложного эфира (48 мг, 0,093 ммоль), HOBt (26 мг, 0,19 ммоль) и WSC (37 мг, 0,19 ммоль) в 1 мл сухого DMF оставляли на 5 часов при комнатной температуре, затем добавляли 23 мг (0,19 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламина, и оставляли на ночь. Выпаривание и хроматография гексаном/EtOAc 6:4 давало 153 мг продукта, который использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,97 (1H, шир.с), 7,38 (1H, д, J=16,2 Гц), 7,34-7,28 (4H, м), 7,24 (1H, д, J=1,8 Гц), 7,17 (1H, дд, J=1,8, 8,2 Гц), 6,69 (1H, д, J=8,24 Гц), 6,14 (1H, д, J=16,2 Гц), 4,78-4,66 (1H, м), 3,86 (2H, т, J=5,8 Гц), 3,73-3,60 (1H, м), 3,43-3,30 (1H, м), 2,27-2,12 (2H, м), 2,09-1,97 (2H, м), 1,96-1,82 (9H, м), 1,67- 1,48 (10H, м), 1,45-1,27 (11H, м)

Стадия 4. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-гидроксикарбамоил-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота. В охлажденный льдом раствор вышеуказанного сложного эфира (41 мг, 0,07 ммоль) в 1,4 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (0,7 мл). Смесь оставляли на 2 часа при 0°C, затем выпаривали, с получением 42 мг желтого твердого вещества, которое хроматографировали с CH₂Cl₂:CH₃OH:H₂O 18:2:0,2 с получением 14 мг (44%) продукта в виде белого твердого вещества т.пл. 242°C (с разл.). ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 10,47 (1H, с), 8,75 (1H, шир.с), 7,76-7,54 (5H, м), 7,51 (1H, дд, J=1,8, 8,5 Гц), 7,43 (1H, д, J=1,8 Гц), 7,03 (1H, д, J=8,5 Гц), 6,53 (1H, д, J=16,2 Гц), 4,03 (2H, т, J=7,0 Гц), 2,68-2,55 (2H, м), 2,29-2,17 (2H, м), 2,16-1,95 (9H, м), 1,82-1,66 (6H, м).

Пример 2

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (2).

Стадия 1. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-этоксикарбонил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (200 мг, 0,46 ммоль) и этил 5-бромвалерата (194 мг, 0,92 ммоль) в 8 мл DMF добавляли K₂CO₃ (257 мг, 1,86 ммоль) и нагревали 3,5 ч при 80°С в темноте. Выпаривание и хроматография гексаном/EtOAc 9:1 дало 197 мг (76%) продукта, т.пл. 127°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,62 (1H, д, J=15,8), 7,58-7,53 (4H, м), 7,48 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,41 (1H, дд, J=2,2, 8,4 Гц), 6,93 (1H, д, J=8,4), 6,38 (1H, д, J=15,8 Гц), 4,16 (2H, д, j=7,2), 4,08-4,00 (2H, м), 2,47-2,38 (2H, м), 2,24-2,06 (9H, м), 1,99-1,88 (4H, м), 1,84-1,74 (6H, м), 1,55 (9H, с), 1,27 (3H, т, J=7,2 Гц)

Стадия 2. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-карбокси-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. К раствору вышеуказанного сложного эфира (170 мг, 0,3 ммоль) в 9,6 мл водн. 50% THF добавляли 38 мг (0,31 ммоль) LiOH.H₂O и оставляли на 3 ч. Выпаривание, поглощение EtOAc, промывание 20 мл 1н KHSO₄, экстракция EtOAc, сушка экстракта Na₂SO₄, фильтрация и выпаривание дали 136 мг (84%) продукта, т.пл. 169°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 12,06 (1H, шир.с), 7,76-7,61 84H, м) 7,57 (1H, д, J=15,9 Гц), 7,51 (1H, д, J=2,3, 8,6 Гц), 7,43 (1H, д, J=2,3 Гц), 7,05 (1H, д, J=8,6 Гц), 6,53 (1H, д, J=15,9 Гц), 4,03 (2H, т, J=5,9 Гц), 2,32 (2H, т, J=6,6 Гц), 2,17-1,99 (9H, м), 1,88-1,68 (10H, м), 1,49 (9H, с).

Стадия 3. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[4-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-бутокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Смесь указанного выше сложного эфира (130 мг, 0,245 ммоль), HOBt (68 мг, 0,49 ммоль) и WSC (37 мг, 0,19 ммоль) в 1 мл сухого DMF оставляли на 3 часа при комнатной температуре, снова добавляли 1 мл DMF и 24 мг WSC, оставили на ночь, затем добавляли 85 мг (1,22 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламина HCl, и 123 (1,22 ммоль) триэтиламина и оставляли на 3 ч в атмосфере азота и в темноте. Выпаривание DMF, поглощение 3 мл воды, фильтрация и хроматография с CH₂Cl₂:CH₃OH 195:5, и вторая хроматография с CH₂Cl₂:CH₃OH 190:10 дало 60 мг (45%) продукта в виде белого твердого вещества. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 10,39 (1H, с), 8,71 (1H, с), 7,77-7,61 (4H, м), 7,58 (1H, д, J=16,0 Гц), 7,51 (1H, дд, J=2,2, 8,7 Гц), 7,43 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,05 (1H, д, J=8,7 Гц), 6,53 (1H, д, J=16,0 Гц), 4,07-3,97 (2H, м), 2,18-1,98 ()H, м), 1,86-1,66 (10H, м) 1,49 (9H, с).

Стадия 4. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота. В охлажденный льдом раствор вышеуказанного сложного эфира (52 мг, 0,095 ммоль) в 1,9 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (0,95 мл). Смесь оставляли на 3 ч при 0°C, в атмосфере азота и в темноте, затем выпаривали, с получением 42 мг, 89%) продукта в виде белого твердого вещества т.пл. 224°C (с разл.). ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 13,38 (1h, шир.с), 7,78-7,55 (5H, м), 7,51 (1H, дд, J=2,2, 8,3 Гц), 7,43 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,05 (1H, д, J=8,3 Гц), 6,54 (1H, д, J=15,7 Гц), 4,07-3,97 (2H, м), 2,22-1,98 (11H, м), 1,91-1,62 (10H, м).

ПРИМЕР 3

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(7-гидроксикарбамоил-гептилокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (3)

Стадия 1. Трет-бутил 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[7-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-гептилокси]-бифенил-4-ил}-акрилат. Смесь трет-бутил 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акрилата (150 мг, 0,35 ммоль), 8-бром-октановая кислота (тетрагидро-пиран-2-илокси)-амида (146 мг, 0,45 ммоль), и K₂CO₃ (137 мг, 0,99 ммоль) в 6 мл сухого ацетонитрила кипятили с обратным холодильником 12 часов, затем добавляли 1 мл сухого DMF и 80 мг K₂CO₃ и снова кипятили с обратным холодильником 5 часов. Выпаривание, фильтрация и сушка дали неочищенный продукт, который очищали с помощью хроматографии с гексаном/AcOEt 1:1 с получением 100 мг белого твердого вещества, т.пл. 154-156°C, ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 8,16 (1H, шир. с), 7,45-7,67 (6H, м), 7,42, 1H, дд, J=8,24 и J=2,14 Гц), 6,34 (1H, д, J=8,24 Гц), 6,33 (1H, м, J=16,2 Гц), 4,96 (1H, шир. с), 3,89-4,07 (3H, м), 3,60-3,70 (1H, м), 2,07-2,24 (11H, м), 1,75-1,96 (12H, м), 1,51-1,74 (15H, м), 1,36-1,48 (4H, м).

Стадия 2. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(7-гидроксикарбамоил-гептилокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (23)

Раствор трет-бутил 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[7-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-гептилокси]-бифенил-4-ил}-акрилата (88 мг, 0,13 ммоль) в 2,6 мл CH₂Cl₂ охлаждали на ледяной бане, обрабатывали по каплям 1,3 мл TFA и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Выпаривание и поглощение эфиром дало белое твердое вещество, которое промывали гексаном с получением 70 мг продукта, т.пл. 177°C (с разл.), ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 12,3 (1H, шир. с), 10,3 (1H, с), 8,66 (1H, шир.с), 7,56-7,77 (5H, м), 7,51, 1H, д, J=8,24 Гц), 7,43 (1H, с), 7,04 (1H, д, J=8,24 Гц), 6,53 (1H, м, J=16,2 Гц), 4,02 (2H, т, J=5,19 Гц), 2,01-2,18 (9H, м), 1,94 (2H, т, J=7,93 Гц), 1,67-1,87 (8H, м), 1,43- 1,60 (4h, м), 1,19-1,42 (4H, м).

ПРИМЕР 4

2-(2-{4-[3-адамантан-1-ил-4'-(2-карбокси-винил)-бифенил-4-илокси]-бутириламино}-этилдисульфанил)-этил-аммоний; трифторацетат (4) (RC 1363)

Стадия 1. 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-{2-[2-трет-бутоксикарбониламино-этилдисульфанил]-этилкарбамоил}-пропокси)-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Смесь 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-карбокси-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (80 мг, 0,155 ммоль), HOBt (43 мг, 0,31 ммоль), и WSC (61 мг, 0,31 ммоль) в 0,84 мл DMF перемешивали в течение 5 ч (образовался осадок), затем добавляли [2-(2-амино-этилдисульфанил)-этил]-карбаминовая кислота трет-бутиловый эфир (Biochem. Biophys, Res. Comm. 331, 1, 351-356) (осадок растворился) и оставляли на ночь. Выпаривание и хроматография гексаном/EtOAc 4:6 дали 99 мг (85%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 79°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,62 (1H, д, J=16,0), 7,61-7,51 (4H, м), 7,48 (1H, д, J=2,3), 7,40 (1H, дд, J=2,3, 8,3), 6,93 (1H, д, J=8,3), 6,38 (1H, д, J=16,0), 6,42 (1H, шир.с), 4,94 (1H, шир.с), 4,08 (2H, т, J=6,1), 3,65-3,55 (2H, м), 3,49-3,38 (2H, м), 2,85 (2H, т, J=6,2), 2,76 (2H, т, J=6,9), 2,52 (2H, т, J=7,2), 2,32-2,20 (2H, м), 2,18-2,06 (9H, м), 1,85-1,74 (6H, м), 1,61- 1,52 (9H, с), 1,45 (9H, с).

Стадия 2. 2-(2-{4-[3-адамантан-1-ил-4'-(2-карбокси-винил)-бифенил-4-илокси]-бутириламино}-этилдисульфанил)-этил-аммоний; трифторацетат.

Раствор вышеуказанного сложного эфира (81 мг, 0,11 ммоль) в 8,2 мл дихлорметана охлаждали льдом, затем добавляли по каплям 2 мл TFA, и оставляли при 0°C в атмосфере азота, в течение 4 ч. Выпаривание дало 76 мг (100%) продукта, в виде желтого твердого вещества, т.пл. 140°C. ¹H-ЯМР (300 МГц, CH₃OH-d₄): 7,77 (6H, м), 7,51-7,40 (2H, м), 7,01 (1H, д J=8,5), 6,49 (1H, д, J 0 15,9), 4,09 (2H, т, J=6,2), 3,54 (2H, т, J=6,7), 3,28 (2H, т, J=6,7), 2,97 (2H, т, J=6,7), 2,87 (2H, т, J=6,7), 2,51 (2H, т, J=7,0), 2,26-2,14 (9H, м), 2,13-2,03 (2H, м), 1,89-1,77 (6H, м).

ПРИМЕР 5

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота. (RC 1338)

Стадия 1. (2-{2-[3-(3-Бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этил)-карбаминовая кислота трет-бутиловый эфир. К раствору 3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропионовой кислоты (1,54 г, 5,62 ммоль) в 34 мл DMF добавляли DCC (1,74 г, 8,43 ммоль) и N.гидроксисукцинимид (0,99 г, 8,43 ммоль) и оставляли при комнатной температуре в течение 3 ч, затем добавляли [2-(2-амино-этилдисульфанил)-этил]-карбаминовая кислота трет-бутиловый эфир, и оставляли на ночь при комнатной температуре. Выпаривание, охлаждение, добавление дихлорметана, фильтрация, выпаривание и хроматография CH₂Cl₂:CH₃OH 95,5 давали 984 мг продукта, который использовали без дальнейшей очистки. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,47 (1H, д, J=1,8), 7,22 (1H, дд, J 0 1,8, 8,5), 6,89 (1H, д J=8,5 Гц), 5,10 (1H, шир.с), 5,91 (1H, шир.с), 3,88 (2H, с), 3,71-3,57 (2H, м), 3,50-3,35 (2H, м), 2,93-2,68 (4H, м), 1,46 (9H, с).

Стадия 2. 2-{2-[3-(3-Бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этил-аммоний; трифторацетат. К раствору вышеуказанного соединения (0,97 г, 1,9 ммоль) в 61 мл дихлорметана, в атмосфере азота, добавляли 3,7 мл TFA, и оставляли на 2 ч при комнатной температуре. Выпаривание и хроматография CH₂Cl₂:CH₃OH 90:10, затем CH₂Cl₂:CH₃OH 85:15, давали 938 мг продукта. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 8,12 (1H, т, J=5,2 Гц), 7,28 (1H, д, J=1,8 Гц), 7,01 (1H, дд, J=1,8, 8,2 Гц), 6,83 (1H, д, J=8,2 Гц), 3,69 (2H, с), 3,49-3,39 (2H, м), 2,97 (2H, т, J=6,4 Гц), 2,87-2,78 (4H, м).

Стадия 3. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. Смесь 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-карбокси-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (65 мг, 0,126 ммоль), HOBt (35 мг, 0,25 ммоль), и WSC (49 мг, 0,25 ммоль) в 1 мл DMF перемешивали в течение 3 ч (образуется белый осадок), добавляли раствор 98 мг (0,19 ммоль) 2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этил-аммоний; трифторацетата в 0,9 мл сухого DMF, и оставляли при комнатной температуре в атмосфере азота, в течение 72 ч. Выпаривание и хроматография CH₂Cl₂:CH₃OH 20:0,4 давали 71 мг продукта, в виде смеси син и анти-оксим. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 9,34 (1H, шир.с), 7,61 (1H, д, J=16,1 Гц), 7,56-7,51 (4H, м), 7,49-7,43 (2H, м), 7,37 (1H, дд, J=1,9, 8,2 Гц), 7,24-7,16 (2h, м), 6,90-6,84 (2h, м), 6,38 (1H, д, J=16,1), 6,2 (1H, т, J=5,9 Гц), 5,59 (1H, шир.с), 4,06 (2H, т, J=5,9), 3,86 (2H, с), 3,66-3,53 (4H, м), 2,87-2,76 (4H, м), 2,54 (2H, т, J=7,3), 2,32-2,20 (2H, м), 2,19-2,04 (9H, м), 1,86-1,70 (6H, м), 1,55 (9H, с).

Стадия 4. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота. Раствор вышеуказанного сложного эфира (61 мг, 0,07 ммоль) в 9 мл дихлорметана охлаждали на льду, затем добавляли по каплям 1,5 мл TFA, и оставляли при комнатной температуре в течение 4 ч. Выпаривание, и кристаллизация из дихлорметана/эфира давали 46 мг продукта, т.пл. 169°C (с разл.). ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,32 (1H, шир.с), 11,84 (1H, с), 10,02 (1H, с), 8,15-7,99 (1H, м), 7,77-7,55 (5H, м), 7,49 81H, дд, J=1,7, 8,3), 7,42 (1H, д, J=1,7), 7,26 (1H, с), 7,07-6,94 (2H, м), 6,81 (1H, д, J=8,3), 6,51 (1H, д, J=16,1), 4,07-3,96 (2H, м), 3,66 (2H, с), 3,52-3,37 (4H, м), 2,85-2,72 (4H, м), 2,33 (2H, т, J=7,3), 2,18-1,99 (11H, м), 1,78-1,66 (6H, м).

ПРИМЕР 6

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропионилокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (6) (AB 514)

Стадия 1. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропионилокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир. (AB513) К раствору янтарной кислоты моно-[3-адамантан-1-ил-4'-(2-трет-бутоксикарбонил-винил)-бифенил-4-ил] эфира (70 мг) в 2 мл DMF добавляли 35 мг WSC и 22 мг HOBt, и оставляли на ночь при комнатной температуре в атмосфере азота. Выпаривание и хроматография CH₂Cl₂:CH₃OH 20:1 давали 90 мг указанного в заголовке продукта, ¹H NMR (300 МГц, CDCl₃): 7,61 (1H, д, J=15,9 Гц), 7,57-7,52 (5H, м), 7,44 (1H, д, J=2,5 Гц), 7,41-7,35 (1H, м), 7,18 (1H, дд, J=2,5, 8,7 Гц), 7,04 (1H, д, J=8,3 Гц), 6,86 (1H, д, J=8,3 Гц), 6,39 (1H, д, J=15,9 Гц), 3,85 (2H, с), 3,63-3,48 (4H, м), 3,05-2,96 (2H, м), 2,84-2,74 (4H, м), 2,72-2,60 (2H, м), 2,13-1,99 (9H, м), 1,84-1,69 (6H, м), 1,55 (9H, с).

Стадия 2. 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропионилокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота. (AB514) Раствор 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[3-(2-{2-[3-(3-бром-4-гидрокси-фенил)-2-гидроксиимино-пропиониламино]-этилдисульфанил}-этилкарбамоил)-пропионилокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (75 мг) в 10 мл сухого дихлорметана охлаждали при 0°C, добавляли по каплям 1,5 мл TFA и перемешивали 3 ч. Концентрация и хроматография CH₂Cl₂:CH₃OH 20:1, затем CH₂Cl₂:CH₃OH 10:1, давало неочищенный продукт, который растворяли в смеси дихлорметана и метанола, затем добавляли этиловый эфир, с получением осадка, который фильтровали, с получением 50 мг указанного в заголовке продукта, т.пл. 198-199°C (с разл.),

¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 11,92 (1H, шир.с), 9,63 (1H, шир.с), 8,19 (1H, т, J=5,8 Гц), 8,10 (1H, т, J=5,8 Гц), 7,17-7-47 (5H, м), 7,43-7,22 (3H, м), 7,08 (1H, д, J=8,5 Гц), 7,00 (1H, д, J=8,8 Гц), 6,90-6,81 (1H, м), 6,54-6,41 (1H, м), 3,68 (2H, с), 2,91-2,70 (6H, м), 2,58-2,52 (2H, м), 2,19 - -1,92 (9H, м), 1,82-1,67 86H, м).

ПРИМЕР 7

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-карбокси-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (7)

TFA (0,77 мл) по каплям добавляли в раствор 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-карбокси-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (40 мг, 0,077 ммоль) (в CH₂Cl₂ (2,44 мл) при 0°C (см. пример 22, Стадия 2). Полученный желтый раствор перемешивали 3 ч при 0°C. Выпаривание с последующей кристаллизацией из CH₂Cl₂ давало указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества, т.пл. 274°C; выход 95%; R_f 0,10 (MeOH, RP). ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 12,05 (1H, шир.с); 7,75-7,60 (4H, м); 7,59 ( 1H д, J= 15,8 Гц); 7,49 (1H, дд, J= 8,6 Гц, J= 2,1 Гц); 7,41 (1H, д, J= 2,1 Гц); 7,03 (1H, д, J= 8,6 Гц); 6,52 (1H, д, J= 15,8 Гц); 4,01 (2H, т, J= 5,5 Гц), 2,30 (2H, т, J= 6,9 Гц); 2,15-1,99 (9H, м); 1,87-1,66 (10H, м).

ПРИМЕР 8

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметоксибифенил-4-ил)-акриловая кислота (MIR002) (8)

Стадия 1: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-этоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксибифенил-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (250 мг, 0,581 ммоль) и K₂CO₃ (321 мг, 2,32 ммоль) в безводном DMF (10 мл), добавляли этилбромацетат (200 мг, 1,16 ммоль). Раствор перемешивали при 80°C в атмосфере азота в течение 2ч. Фильтрация карбоната калия с последующим выпариванием и очисткой флэш-хроматографией с ETP/AcOEt 90:10 давала 224 мг указанного в заголовке соединения. Выход 75%. R_f 0,31 (ETP/AcOEt 9:1). ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,61 (1H, д, J=16,1 Гц); 7,57-7,54 (4H, м); 7,50 (1H, д, J=2,4 Гц); 7,39 (1H, дд, J=2,4, 8,4 Гц); 6,80 (1H, д, J=8,4 Гц); 6,38 (1H, д, J= 16,1 Гц); 4,67 (2H, с); 4,31 (2H, кв, J=7,1 Гц); 2,26-2,05 (9H, м); 1,80 (6H, с); 1,54(9H, м); 1,32 (3H, т, J=7,1 Гц).

Стадия 2: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К суспензии 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-этоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (191 мг, 0,370 ммоль) в THF/H₂O 1:1 (11,4 мл) добавляли LiOH.H₂O (77,6 мг, 1,85 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Выпаривание, добавление этилацетата, промывание KHSO₄ 1 н, сушка и выпаривание давала 181 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 100%, R_f 0,23 (CH₂Cl₂:MeOH 19:1), ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,78-7,37 (7H, м); 6,93 (1H, д, J=8,6 Гц); 6,50 (1H, д, J= 16,1 Гц); 4,71 (2H, с); 2,18-1,95 (9H, м); 1,73 (6H, с); 1,48 (9H, м).

Стадия 3: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметокси-бифенил-4-ил)акриловая кислота трет-бутиловый эфир

Раствор 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметоксибифенил-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (153 мг, 0,313 ммоль), WSC (92 мг, 0,470 ммоль), N-гидроксисукцинимида (55,2 мг, 0,470 ммоль) в безводном DMF (3,30 моль) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем добавляли гидроксиламин гидрохлорид (109 мг, 1,57 ммоль) и TEA (159 мг, 1,57 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 12 ч, растворитель выпаривали и добавляли воду (5 мл). Фильтрация и очистка хроматографией (CH₂Cl₂/MeOH 19:1) дала 84 мг указанного в заголовке соединения. Выход 53%.

R_f 0,54 (CH₂Cl₂:MeOH 19:1)^{. 1}H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 10,73 (1H,с); 9,02 (1H, с); 7,82-7,37 (7H, м); 6,98 (1H, д, J=8,8 Гц); 6,51 (1H, д, J= 16,1 Гц); 4,47 (2H, с); 2,18-1,95 (9H, м); 1,73 (6H, с); 1,48 (9H, м).

Стадия 4: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметоксибифенил-4-ил)-акриловая кислота

К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметокси-бифенил-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (61 мг, 0,121 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (3,81 мл) добавляли TFA (1,21 мл) и перемешивали при 0°C в течение 2 ч в атмосфере азота. Растворитель выпаривали, добавляли толуол (2×3 мл) и растворитель удаляли азеотропной перегонкой. Кристаллизация из CH₂Cl₂ дала 46 мг указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 265°C; выход 85%; R_f 0,10 (CH₂Cl₂:MeOH 18:2). ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 12,34 (1H, с); 10,77 (1H,с); 9,05 (1H, с); 7,81-7,31 (7H, м); 7,06-6,90 (1H, м); 6,52 (1H, д, J= 16,5 Гц); 4,45 (2H, с); 2,22-1,99 (9H, м); 1,72 (6H, с).

ПРИМЕР 9

3-{3'-адамантан-1-ил-4'[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (9, BIO 49)

Стадия 1: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-трет-бутоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота метиловый эфир (GEM 63). Смесь 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты метилового эфира (Cincinelli R. et al. J. Med. Chem. 2003, 46, 909-912) (250 мг, 0,64 ммоль), трет-бутил бромацетата (252 мг, 1,29 ммоль), K₂CO₃ (357 мг, 2,58 ммоль) в 4,86 мл DMF нагревали при 80°C в течение 1 ч. K₂CO₃ отфильтровали, DMF выпаривали и остаток растворяли в воде. Осажденное твердое вещество отфильтровывали и кристаллизовали из диэтилового эфира с получением 187 мг (71%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 182°C, R_f (Гексан/EtOAc 80:20) 0,53. ¹H-ЯМР (300 МГц, CHCl₃-d): 7,72 (1H, д, J=16,3 Гц), 7,61-7,53 (4H, м), 7,50 (1H, д, J=2,62 Гц), 7,38 (1H, дд, J=8,56, 2,62 Гц), 6,77 (1H, д, J=8,56 Гц), 6,46 (1H, д, J=16,3 Гц), 4,57 (2H, с), 3,82 (3H, с), 2,25-2,06 (9H, м), 1,87-1,73 (6H, м), 1,51 (9H, с).

Стадия 2: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота метиловый эфир (BIO 47, GEM85). В охлажденный льдом раствор 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-трет-бутоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты метилового эфира (158 мг, 0,314 ммоль) в 2,94 мл CH2Cl2 по каплям добавляли TFA (0,980 мл). Смесь оставляли на 3 ч при комнатной температуре, затем выпаривали с получением 109 мг (78%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 218°C, Rf (CH2Cl2/MeOH 18:2) 0,40. 1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 7,79-7,62 (5H, м), 7,49 (1H, дд, J=8,80, 2,10 Гц), 7,43 (1H, д, J=2,10 Гц), 6,93 (1H, д, J=8,80 Гц), 6,65 (1H, д, J=16,6 Гц), 4,71 (2H, с), 3,72 (3H, с), 2,20-1,97 (9H, м), 1,84-1,64 (6H, м).

Стадия 3: 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота метиловый эфир (BIO 48, GEM87). В охлажденную льдом суспензию 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты метилового эфира (87 мг, 0,195 ммоль) в 2 мл сухого DMF, в атмосфере азота, добавляли HBTU (74 мг, 0,195 ммоль) и DIPEA (75,6 мг, 0,585 ммоль). Через две минуты добавляли 24 мг (0,195 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламина и смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. DMF выпаривали, остаток растворяли в воде и белое твердое вещество отфильтровывали. Очистка с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с петролейным эфиром/EtOAc 60:40 дала 21 мг (88%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 121°C, Rf (гексан/EtOAc 17:3) 0,18. 1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 11,3, 7,80-7,62 (5H, м), 7,50 (1H, дд, J=8,50, 2,20 Гц), 7,43 (1H, д, J=2,20 Гц), 6,95 (1H, д, J=8,50 Гц), 6,64 (1H, д, J=16,2 Гц), 4,91-4,84 (1H, м), 4,51 (2H, с), 4,00-3,88 (1H, м), 3,72 (3H, с), 3,57-4,46 (1H, м), 2,16-1,99 (9H, м), 1,81-1,45 (12H, м).

Стадия 4: 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (9, BIO 49). К раствору 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты метилового эфира (20 мг, 0,037 ммоль) в 1,0 мл водн. 50% THF добавляли 8 мг (0,185 ммоль) LiOH.H2O и оставляли на ночь при комнатной температуре. После выпаривания THF оставшуюся водную фазу подкисляли KHSO4 1M. Осажденное белое твердое вещество отфильтровывали и сушили с получением 14 мг (69%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. с разл. 284°C, Rf (CH₂Cl₂/MeOH 19:1) 0,30. 1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,3 (1H, шир.с), 11,4 (1H, с), 7,75-7,56 (5H, м), 7,49 (1H, дд, J=8,57, 2,05 Гц), 7,42 (1H, д, J=2,05 Гц), 6,95 (1H, д, J=8,57 Гц), 6,52 (1H, д, J=15,8 Гц), 4,91-4,85 (1H, м), 4,51 (2H, с), 4,01-3,87 (1H, м), 3,57-3,46 (1H, м), 2,20-1,98 (9H, м), 1,82-1,44 (12 H, м).

ПРИМЕР 10

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (10)

Стадия 1: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (10, GEM 66))

К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (Пример 8, Стадия 2) 114 мг (0,233 ммоль) в сухом дихлорметане (7,34 мл) добавляли TFA (2,33 мл) и перемешивали при 0°C в течение 2 ч. Выпаривание растворителя дало 79 мг (79%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. > 290°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH 18:2) 0,21. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,6 (1H, шир.с); 7,76-7,63 (4H, м); 7,60 (1H, д, J=15,9 Гц); 7,48 (1H, дд, J=8,50, 2,12 Гц); 7,43 (1H, д, J=2,12 Гц); 6,93 (1H, д, J=8,50 Гц); 6,52 (1H, д, J=15,9 Гц); 4,71 (2H, с); 2,20-2,00 (9H, м); 1,83-1,66 (6H, м).

ПРИМЕР 11

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (11, GEM 57)

Стадия 1: 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-трет-бутоксикарбонил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота метиловый эфир (GEM 37). К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты метилового эфира (615 мг, 1,58 ммоль) в трет-бутил акрилате (22 мл) добавляли Na (18 мг, 0,79 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь нагревали при 110°C в течение 8 ч. После охлаждения до комнатной температуре, Полученную смесь гасили насыщенным раствором NaCl и экстрагировали CH2Cl2. Объединенные органические экстракты сушили над безводным Na2SO4 и выпаривали в вакууме, с получением сырого продукта, который очищали колоночной хроматографией на силикагеле (гексан/этилацетат 85:15) с получением 365 мг (45%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 166°C, R_f (гексан/AcOEt 85:15) 0,26. 1H-ЯМР (600 МГц, CHCl₃-d): 7,76 (1H, д, J=16,0 Гц), 7,69-7,55 (м, 4H), 7,50 (1H, д, J=2,23 Гц), 7,47 (1H, дд, J=8,45, 2,23 Гц), 6,95 (1H, д, J=8,45 Гц), 6,48 (1H, д, J=16,0 Гц), 4,31 (2H, т, J=5,72 Гц), 3,81 (3H, с), 2,80 (2H, т, J=5,72 Гц), 2,18-2,07 (9H, м), 1,84-1,78 (6H, м), 1,50 (9H, с), 1,48-1,43 (2H, м).

Стадия 2: 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-карбокси-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота метиловый эфир (GEM40). В охлажденный льдом раствор 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-трет-бутоксикарбонил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты метилового эфира (365 мг, 0,706 ммоль) в 12,2 мл CH₂Cl₂, в атмосфере азота, по каплям добавляли TFA (6,12 мл). Смесь оставляли на 3 ч при 0°C затем растворитель выпаривали с получением 293 мг твердого вещества, которое очищали флэш-хроматографией на силикагеле (CH₂Cl₂/CH₃OH 15:5) с получением 166 мг (51%) продукта в виде белого твердого вещества т.пл. 230°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH 195:5) 0,45. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,4 (1H, шир. с), 7,78-7,62 (5H, м), 7,50 (1H, дд, J=8,45, 2,30 Гц), 7,41 (1H, д, J=2,30 Гц), 7,04 (1H, д, J=8,45 Гц), 6,64 (1H, д, J=16,0 Гц), 4,21 (2H, т, J=5,73 Гц), 3,71 (3H, с), 2,75 (2H, т, J=5,73 Гц), 2,18-1,96 (9H, м), 1,82-1,69 (6H, м).

Стадия 3: 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота метиловый эфир (GEM42). В охлажденную льдом суспензию 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-карбокси-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты метилового эфира (146 мг, 0,317 ммоль) в 3,22 мл сухого DMF, в атмосфере азота, добавляли HBTU (120 мг, 0,317 ммоль) и DIPEA (123 мг, 0,951 ммоль). Через две минуты добавляли 39 мг (0,317 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламина и смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. DMF выпаривали, остаток растворяли в 5 мл воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем белое твердое вещество отфильтровывали и очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (гексан/EtOAc 40:60) с получением 165 мг (93%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 169°C, R_f (гексан/EtOAc 40:60) 0,34. 1H-ЯМР (300 МГц, ацетон-d6): 10,28 (1H, шир. с), 7,77-7,67 (5H, м), 7,54-7,50 (2H, м), 7,10 (1H, д, J=8,73 Гц), 6,57 (1H, д, J=16,0 Гц), 4,96-4,90 (1H, м), 4,45-4,30 (2H, м), 4,02-3,92 (1H, м), 3,78 (3H, с), 3,57-3,46 (1H, м), 2,72 (2H, т, J=5,90 Гц), 2,21-2,15 (9H, м), 1,91-1,69 (8H, м), 1,65-1,50 (4H, м).

Стадия 4: 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота (11, GEM 57). К раствору 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты метилового эфира (132 мг, 0,236 ммоль) в 7,34 мл водн. 50% THF добавляли 49,5 мг (1,18 ммоль) LiOH.H₂O и оставляли на ночь при комнатной температуре. После выпаривания THF оставшуюся водную фазу подкисляли HCl 1M (1,2 мл). Осажденное белое твердое вещество отфильтровывали и сушили с получением 100 мг (78%) продукта, т.пл. 150°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH 19:1) 0,19. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,35 (1H, шир. с), 11,14 (1H, с), 7,74-7,62 (4H, м), 7,60 (1H, д, J=16,1 Гц), 7,49 (1H, дд, J=8,51, 2,30 Гц), 7,41 (1H, д, J=2,30 Гц), 7,05 (1H, д, J=8,51 Гц), 6,52 (1H, д, J=16,1Гц), 4,80-4,76 (1H, м), 4,30-4,14 (1H, м), 3,96-3,85 (1H, м), 2,56 (2H, т, J=5,55 Гц), 2,10-1,96 (9H, м), 1,81-1,58 (10 H, м), 1,54-1,43 (2H, м).

ПРИМЕР 12

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-гидроксикарбамоил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота(12, GEM 60)

Стадия 1: 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-гидроксикарбамоил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (12, GEM 60). К раствору 3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты (Пример 11, Стадия 4) (85 мг, 0,156 ммоль) в диоксане (1 мл) при 0°C в атмосфере азота добавляли 3,54 мл HCl 4M раствора в диоксане. Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч. После выпаривания остаток растворителя очищали с помощью флэш-хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 18,5:1,5:0,2) с получением 43 мг (60%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 242°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 18,5:1,5:0,2) 0,35. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆): 12,38 (1H, шир. с), 10,58 (1H, с), 8,78 (1H, шир. с), 7,74-7,62 (4H, м), 7,59 (1H, д, J=16,1 Гц), 7,49 (1H, дд, J=8,50, 2,05 Гц), 7,41 (1H, д, J=2,05 Гц), 7,05 (1H, д, J=8,50 Гц), 6,51 (1H, д, J=16,1 Гц), 4,21 (2H, т, J=5,87 Гц), отсутствует один сигнал из-за перекрытия с сигналом растворителя, 2,13-1,95 (9H, м), 1,83-1,62 (6H, м).

ПРИМЕР 13

6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-фенил}-нафталин-2-карбоновая кислота (13, GEM 59)

Стадия 1: (2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-уксусная кислота метиловый эфир (GEM 48). К раствору 2-адамантан-1-ил-4-бромфенола (500 мг, 1,63 ммоль) и этилбромацетата (561 мг, 3,62 ммоль) в 12,3 мл DMF добавляли K₂CO₃ (901 мг, 6,52 ммоль) и нагревали 1 ч при 80°С. DMF выпаривали и остаток выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Органические экстракты промывали последовательно водой, насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (гексан/этилацетат 95:5) с получением 400 мг (62%) желаемого соединения в виде желтого твердого вещества, т.пл. 98°C, R_f (Гексан/этилацетат 95:5) 0,39.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,33 (1H, д, J=2,54 Гц), 7,24 (1H, дд, J=8,65, 2,54 Гц), 6,58 (1H, д, J=8,65 Гц), 4,59 (2H, с), 4,28 (2H, кв, J=7,15 Гц), 2,15-2,04 (9H, м), 1,84-1,71 (6H, м), 1,30 (3H, т, J=7,15 Гц).

Стадия 2: (2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-уксусная кислота (GEM50). К раствору (2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-уксусная кислота метилового эфира (223 мг, 0,567 ммоль) в 17,6 мл водн. 50% THF добавляли LiOH.H₂O (119 мг, 2,84 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. После выпаривания THF, добавляли HCl 2M (3 мл) и выпавшее в осадок белое твердое вещество отфильтровывали и сушили с получением 195 мг (94%) желаемого соединения, т.пл. 208°C, R_f (Гексан/этилацетат 50:50) 0,20. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO) δ: 7,30 (1H, дд, J=8,82, 2,58 Гц), 7,18 (1H, д, J=2,58 Гц), 6,81 (1H, д, J=8,82 Гц), 4,64 (2H, с), 2,09-1,95 (9H, м), 1,79-1,63 (6H, м).

Стадия 3: 2-(2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-N-(тетрагидропиран-2-илокси)-ацетамид (GEM 51). В охлажденную льдом суспензию (2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-уксусной кислоты (175 мг, 0,479 ммоль) в 4,87 мл сухого DMF, в атмосфере азота, добавляли HBTU (182 мг, 0,479 ммоль) и DIPEA (186 мг, 1,44 ммоль). Через две минуты добавляли 58,4 мг (0,0,479 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламин и смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. DMF выпаривали, остаток растворяли в 5 мл воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем белое твердое вещество отфильтровывали и очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (гексан/EtOAc 70:30) с получением 176 мг (79%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 134°C, R_f (гексан/этилацетат 70:30) 0,37. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 9,03 (1H, с), 7,35 (1H, д, J=2,52 Гц), 7,29 (1H, дд, J=8,72, 2,52 Гц), 6,70 (1H, д, J=8,72 Гц), 5,05-4,99 (1H, м), 4,60 (2H, с), 3,98-3,87 (1H, м), 3,66-3,57 (1H, м), 2,15-2,01 (9H, м), 1,94-1,70 (12H, м).

Стадия 4: 6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]фенил}-нафталин-2-карбоновая кислота метиловый эфир (GEM58, GEM54). К дегазированной смси 3,5:1 диметоксиэтана и воды (2 мл), 2-(2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-N-(тетрагидропиран-2-илокси)-ацетамид (104 мг, 0,224 ммоль), (6-(метоксикарбонил)нафталин-2-бороновой кислоты сложный пинаколовый эфир (91 мг, 0,291 ммоль), PdCl₂(dppf) CH₂Cl₂ (8,20 мг, 0,0112 ммоль) и бикарбоната натрия (56,5 мг, 0,672 ммоль) добавляли в атмосфере азота. Смесь нагревали в течение 1 ч при 100°C, добавляли воду и смесь экстрагировали CH₂Cl₂ (3×20 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали. Очистка флэш-хроматографией (гексан/этилацетат 60:40) дала 112 мг (88%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 183°C, R_f (гексан/этилацетат 60:40) 0,19. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 11,42 (1H, с), 8,62 (1H, д, J=1,79 Гц), 8,23 (1H, д, J=1,49 Гц), 8,17 (1H, д, J=8,73 Гц), 8,09 (1H, д, J=8,73 Гц), 7,97 (1H, дд, J=8,73, 1,49 Гц), 7,90 (1H, дд, J=8,73, 1,79 Гц), 7,63 (1H, дд, J=8,57, 2,20 Гц), 7,58 (1H, д, J=2,20 Гц), 7,01 (1H, д, J=8,57 Гц), 4,91-4,87 (1H, м), 4,53 (2H, с), 4,01-3,92 (1H, м), 3,90 (3H, с), 3,56-3,47 (1H, м), 2,21-2,00 (9H, м), 1,82-1,46 (12H, м).

Стадия 5: 6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-фенил}-нафталин-2-карбоновая кислота (13, GEM59). Суспензию 130 мг (0,228 ммоль) 6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]фенил}-нафталин-2-карбоновой кислоты метилового эфира в 9,12 мл 1М раствора NaOH в метаноле кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Растворитель выпаривали и к остатку добавляли воду, затем медленно добавляли HCl 3M. Образовавшееся твердое вещество отфильтровывали и сушили с получением 100 мг (79%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 279°C, R_f (гексан/этилацетат 70:30) 0,24. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 11,45 (1H, шир. с), 8,35 (1H, д, J=1,56 Гц), 8,05 (1H, д, J=1,83 Гц), 8,01 (1H, дд, J=8,71, 1,83 Гц), 7,95 (1H, д, J=8,71 Гц), 7,82 (1H, д, J=8,71 Гц), 7,71 (1H, дд, J=8,71, 1,83 Гц), 7,58-7,50 (2H, м), 7,01 (1H, д, J=8,45 Гц), 4,92-4,85 (1H, м), 4,50 (2H, с), 4,02-3,89 (1H, м), 3,56-3,44 (1H, м), 2,21-2,00 (9H, м), 1,82-1,44 (12H, м).

ПРИМЕР 14

6-(3-адамантан-1-ил-4-гидроксикарбамоилметокси-фенил)-нафталин-2-карбоновая кислота (14, GEM 61)

Стадия 1: 6-(3-адамантан-1-ил-4-гидроксикарбамоилметокси-фенил)-нафталин-2-карбоновая кислота (14, GEM 61). В охлажденный льдом раствор 6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-фенил}-нафталин-2-карбоновой кислоты (пример 13, стадия 5) (75 мг, 0,135 ммоль) в 4,25 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (1,35 мл). Смесь оставляли на 3 ч при 0°C, в атмосфере азота, затем выпаривали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 18,5:1,5:0,2) с получением 32 мг (50%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. >280°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 18,5:1,5:0,2) 0,20. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 13,03 (1H, шир. с), 10,79 (1H, с), 9,07 (1H, с), 8,58 (1H, д, J=1,72 Гц), 8,21 (1H, д, J=1,72 Гц), 8,14 (1H, д, J=8,50 Гц), 8,06 (1H, д, J =8,70 Гц), 7,96 (1H, дд, J=8,50, 1,72 Гц), 7,88 (1H, дд, J=8,70, 1,72 Гц), 7,63 (1H, дд, J=8,47, 2,25 Гц), 7,57 (1H, д, J=2,25 Гц), 7,03 (1H, д, J=8,47 Гц), 4,49 (2H, с), 2,20-2,00 (9H, м), 1,84-1,67 (6H, м).

ПРИМЕР 15

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(гидроксил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (15)

Стадия 1: 3-[4'-(4-ацетокси-бутокси)-3'-адамантан-1-ил-бифенил-4-ил]-акриловая кислота метиловый эфир (BIO3). Смесь 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты метилового эфира (Пример 9, Стадия 1) (100 мг, 0,26 ммоль), 4-бромбутилацетата (67,4 мг, 0,34 ммоль), K₂CO₃ (102 мг, 0,74 ммоль) в 4,50 мл DMF нагревали при 80°C в течение 2 ч. K₂CO₃ отфильтровывали, DMF выпаривали и остаток растворяли в воде. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали 1 М HCl, водой и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу сушили и растворитель выпаривали. Очистка с помощью флэш-хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 80:20) дала 98 мг (75%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 157°C, R_f (петролейный эфир/EtOAc 80:20) 0,50. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,76-7,60 (4H, м); 7,56 (1H, д, J =16,5 Гц); 7,48 (1H, дд, J=8,50, 2,14 Гц); 7,43 (1H, д, J=2,14 Гц); 6,95 (1H, д, J=8,50 Гц); 6,51 (1H, д, J=16,5 Гц); 4,84 (2H, с); 3,73 (3H, с); 4H отсутствует из-за перекрытия с сигналом растворителя; 2,20-1,98 (9H, м); 1,84-1,65 (6H, м); 1,47 (7H, с).

Стадия 2: 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(гидроксил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота (15, BIO 5). Вышеуказанный сложный эфир (30 мг, 0,06 ммоль) суспендировали в 3 мл раствора 0,7 н. NaOH в метаноле и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 10 ч. После выпаривания метанола, остаток обрабатывали водой, подкисляли 1М HCl и осадок отфильтровывали. Кристаллизация из изопропилового эфира дала 10 мг (37%) чистого продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 208°C, R_f (петролейный эфир/EtOAc 50:50) 0,15. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,74-7,61 (4H, м); 7,59 (1H, д, J=16,5 Гц); 7,49 (1H, дд, J=8,80, 2,11 Гц); 7,41 (1H, д, J=2,11 Гц); 7,03 (1H, д, J=8,80 Гц); 6,51 (1H, д, J=16,5 Гц); 4,49 (1H, шир.с); 4,02 (2H, т, J=6,38 Гц); 3,48 (2H, т, J=6,38 Гц); 2,16-2,20 (9H, м); 1,90-1,78 (2H, м); 1,77-1,59 (8H, м).

ПРИМЕР 16

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксиаминометокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (16, GEM 95)

Стадия 1: 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-бром-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксибифенил-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (470 мг, 1,09 ммоль) и 1,2-дибромэтана (410 мг, 2,18 ммоль) в 2,20 мл сухого ацетона добавляли K₂CO₃ (301 мг, 2,18 ммоль) и нагревали 15 ч с обратным холодильником. K₂CO₃ отфильтровывали и растворитель выпаривали. Остаток выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Органические экстракты сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали помощью флэш-хроматографии (гексан/этилацетат 90:10) с получением 104 мг (18%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 177°C, R_f (Гексан/этилацетат 90:10) 0,16. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,76-7,60 (4H, м); 7,55 (1H, д, J=16,1 Гц); 7,50 (1H, дд, J=8,50, 2,14 Гц); 7,44 (1H, д, J=2,14 Гц); 7,02 (1H, д, J=8,50 Гц); 6,51 (1H, д, J=16,1 Гц); 4,42-4,35 (2H, м); 3,93-3,86 (2H, м); 2,21-2,00 (9H, м); 1,84-1,67 (6H, м); 1,47 (9H, с).

Стадия 2: Трет-бутил 3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-(2-((трет-бутоксикарбонил)((-трет-бутоксикарбонил)окси)амино)этокси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)-акрилат. К суспензии гидрида натрия (60% в минеральном масле, 10 мг, 0,250 ммоль) в 0,5 мл DMF, добавляли N,O-diBoc-гидроксиламин (55,6 мг, 0,230 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30' при 0°C, затем медленно добавляли раствор 3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-бром-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (103 мг, 0,192 ммоль) в 2 мл DMF. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи, DMF выпаривали, остаток выливали в насыщенный раствор NH₄Cl и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу сушили и выпаривали. Очистка с помощью флэш-хроматографии (гексан/этилацетат 90:10) дала 109 мг (81%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества; т.пл. 165°C, R_f (Гексан/этилацетат 90:10) 0,26. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ:7,61 (1H, д, J=16,1 Гц); 7,57,7,50 (4H, м); 7,47 (1H, д, J=2,21 Гц); 7,39 (1H, дд, J=8,46, 2,21 Гц); 6,93 (1H, д, J=8,46 Гц); 6,38 (1H, д, J=16,1 Гц); 4,27-4,17 (2H, м); 4,16-4,01 (2H, м); 2,22-2,02 (9H, м), 1,86-1,70 (6H, м), 1,54 (9H, с); 1,52 (9H, с); 1,49 (9H, с).

Стадия 3: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксиаминометокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (16, GEM 95). В охлажденный льдом раствор вышеуказанного сложного эфира (84 мг, 0,122 ммоль) в 1,14 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (0,381 мл). Смесь оставляли на 2 ч при 0°C, в атмосфере азота, затем выпаривали. Кристаллизация из диэтилового эфира дала 56 мг (84%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 224°C, ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 10,4 (2H, шир.с); 8,84 (1H, шир.с); 7,76-7,62 (4H, м); 7,60 (1H, д, J=16,2 Гц); 7,52 (1H, дд, J=8,60, 2,01 Гц); 7,43 (1H, д, J=2,01 Гц); 7,07 (1H, д, J=8,60 Гц); 6,52 (1H, д, J=16,2 Гц); 4,21 (2H, т, J=5,61 Гц); 3,42-3,31 (2H, м); 2,18-1,99 (9H, м); 1,79-1,67 (6H, м).

ПРИМЕР 17

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидразинокарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (17, GEM 93)

Стадия 1: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидразинокарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота метиловый эфир (GEM 92). Раствор 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-карбоксиметоксибифенил-4-ил)акриловой кислоты метилового эфира (Пример 9, Стадия 2) (257 мг, 0,576 ммоль), WSC (169 мг, 0,864 ммоль), N-гидроксисукцинимида (102 мг, 0,864 ммоль) в безводном DMF (5,58 моль) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и в течение этого времени образовалось белое нерастворимое твердое вещество. Эту суспензию переносили, в атмосфере азота, в колбу, содержащую NH₂NH₂.H₂O (59 мг, 1,15 ммоль), циклогексан (15 мкл) и CH₃CN (3 мл) при 0°C. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем растворители выпаривали и белый остаток промывали водой. Очистка с помощью флэш-хроматографии (CH₂Cl₂/MeOH 196:4) дала 223 мг (84%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 195°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH 196:4 0,21. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 9,17 (1H, с); 7,79-7,61 (5H, м); 7,50 (1H, дд, J=8,49, 2,06 Гц); 7,43 (1H, д, J=2,06 Гц), 6,96 (1H, д, J=8,49 Гц); 6,64 (1H, д, J=16,2 Гц); 4,52 (2H, с); 4,36 (2H, д, J=3,62 Гц); 3,71 (3H, с); 2,20-1,96 (9H, м); 1,82-1,63 (6H, м).

Стадия 2: 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидразинокарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трифторацетат (17, GEM 93). В охлажденный льдом раствор выешуказанного метилового эфира (GEM 92) (106 мг, 0,211 ммоль) в 6,65 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (2,11 мл). Смесь оставляли на 2 ч при 0°C в атмосфере азота. Выпаривание растворителя дало 116 мг (98%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. >290°C, ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,76-7,63 (4H, м); 7,60 (1H, д, J=16,1 Гц); 7,51 (1H, дд, J=8,43, 1,34 Гц); 7,44 (1H, д, J=1,34 Гц); 6,96 (1H, д, J=8,43 Гц), 6,53 (1H, д, J=16,1 Гц); 4,72 (2H, с); 2,21-1,97 (9H, м); 1,83-1,63 (6H, м).

ПРИМЕР 18

3-(4'-Гидроксикарбамоилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота (18) (GEM 103)

Стадия 1: 3-(4'-этоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир (GEM 96). К раствору 3-(4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (Giannini, G. et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry (2012), 20(7), 2405-2415) (500 мг, 1,69 ммоль) и этилбромацетата (582 мг, 3,38 ммоль) в 10 мл DMF добавляли K₂CO₃ (934 мг, 6,76 ммоль) и нагревали 2 ч при 80°С. DMF выпаривали и остаток выливали в воду. После перемешивания в течение 15 минут белое твердое вещество отфильтровывали и сушили. Кристаллизация из этилового эфира дала 475 мг (74%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 137°C, R_f (Гексан/этилацетат 90:10) 0,19.

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,63 (1H, д, J=16,3 Гц); 7,60-7,53 (6H, м); 7,01 (2H, д, J=8,63 Гц); 6,41 (1H, д, J=16,3 Гц); 4,68 (2H, с); 4,31 (2H, кв, J=7,29 Гц); 1,57 (9H, с); 1,33 (3H, т, J=7,29 Гц).

Стадия 2: 3-(4'-Карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир (GEM 99). К раствору вышеуказанного сложного эфира (440 мг, 1,15 ммоль) в 35,6 мл водн. 50% THF добавляли LiOH.H₂O (241 мг, 5,75 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. После выпаривания THF, добавляли KHSO₄ 1M (45 мл) и выпавшее в осадок белое твердое вещество отфильтровывали. Кристаллизация из диэтилового эфира дала 357 мг (88%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. > 290°C, R_f (CH₂Cl₂/MeOH 18:2) 0,15. ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO) δ: 12,9 (1H, шир.с); 7,79-7,63 (6H, м); 7,58 (1H, д, J=16,3 Гц); 7,01 (2H, д, J=8,78 Гц); 6,54 (1H, д, J=16,3 Гц); 4,73 (2H, с); 1,50 (9H, с).

Стадия 3: 3-{4'-[Тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир (GEM 100). В охлажденную льдом суспензию вышеуказанного эфира (200 мг, 0,564 ммоль) в 5,73 мл сухого DMF, в атмосфере азота, добавляли HBTU (214 мг, 0,564 ммоль) и DIPEA (218 мг, 1,69 ммоль). Через две минуты добавляли 69 мг (0,564 ммоль) O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламина и смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. DMF выпаривали, остаток растворяли в 5 мл воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Затем белое твердое вещество отфильтровывали и очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (гексан/EtOAc 55:45) с получением 161 мг (52%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 148°C, R_f (гексан/этилацетат 70:30) 0,24. ¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 9,12 (1H, с); 7,61 (1H, д, J=16,3 Гц); 7,57-7,53 (6H, м); 7,00 (2H, д, J=8,41 Гц); 6,39 (1H, д, J=16,3 Гц); 5,05-5,00 (1H, м); 4,63 (2H, с); 4,06-3,95 (1H, м); 3,70-3,61 (1H, м); 1,92-1,78 (3H, м); 1,66-1,56 (3H, м); 1,54 (9H, с).

Стадия 4: 3-(4'-Гидроксикарбамоилметокси-бифенил-4-ил)-уксусная кислота (18, GEM 103)

В охлажденный льдом раствор 3-{4'-[Тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (127 мг, 0,280 ммоль) в 2,62 мл CH₂Cl₂ по каплям добавляли TFA (0,874 мл). Смесь оставляли на 2 ч при 0°C в атмосфере азота и за это время сформировалось розовое твердое вещество. Твердое вещество отфильтровывали, промывали холодным CH₂Cl₂ и сушили с получением 85 мг (97%) продукта в виде белого твердого вещества, т.пл. 239°C, ¹H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ: 12,3 (1H, шир. с); 10,8 (1H, с); 8,95 (1H, шир. с); 7,79-7,66 (6H, м); 7,62 (1H, д, J=16,3 Гц); 7,06 (2H, д, J=8,88 Гц); 6,55 (1H, д, J=16,3 Гц); 4,52 (2H, с).

ПРИМЕРЫ 19-23

Оценка биологической активности

Клеточные линии

NCI-H460 NSCLC человека, H460-R9A (адаротен-резистентный NCI-H460) NSCLC, рак яичника A2780 и A2780-Dx (резистентный ко многим лекарственным препаратам), рак молочной железы MDA-MB436, MM288, MM317, MM404, MM473 и эпителиоидная мезотелиома MM481, MM487 и MM491 двухфазная мезотелиома, MM432 и MM472 саркоматоидная мезотелиома, MM487Luc (люцифераза-экспрессирующая) двухфазная мезотелиома, глиома U87MG-Luc, U937 гистиоцитарная лимфома, RAJI, DG-75, и RAMOS лимфома Беркитта, JECO-1, MAVER-2, MINO, REC-1, и Z-138 мантийноклеточная лимфома, KM-H2 и L-428 лимфома Ходжкина, OCI-LY3 и U-2932 диффузная В-крупноклеточная лимфома, NB4 промиелоцитарный лейкоз(APL).

Клеточные культуры

Клетки NCI-H460, H460-R9A, A2780, A2780-Dx, NB4, U937, RAJI, REC-1, DG-75, U-2932, KM-H2, L-428 культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и сульфатом гентамицина. Клетки MDA-MB436 культивировали в среде DMEM, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и гентамицином сульфата. Клетки MM288, MM317, MM404, MM473, MM481, MM487, MM491, MM432, MM472 культивировали в питательной смеси Хэма F-10, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и сульфатом гентамицина, клетки MM487Luc культивировали в питательной смеси Хэма F-10, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и G418 антибиотиком. Клетки U87MG-Luc культивировали в среде EMEM, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и гентамицином сульфата. Клетки RAMOS, OCI-LY3, JECO-1, MAVER-2, MINO культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 20% FBS, 2 мM L-глутамина и гентамицином сульфата. Клетки Z-138 культивировали в среде IMDM, дополненной 10% FBS, L-глутамином и гентамицином сульфата.

Клетки поддерживали в инкубаторе при 37°С с насыщенной влажностью и атмосферой 95% воздуха и 5% СО2 и субкультивировали каждые 2-3 дня.

Схема эксперимента

Антипролиферативную активность ряда новых атипичных ретиноидов (AR) оценивали на различных линиях клеток человека от солидного и гематологического рака.

С этой целью клетки в логарифмической фазе роста высевали в 96-луночные пластиковые планшеты, инкубировали на протяжении ночи в культуральной среде и обрабатывали скалярными концентрациями соединений в течение 24 часов с последующим восстановлением в течение 48 часов в среде без лекарственного средства, или 72 ч. Наконец, выживаемость клеток оценивали с помощью теста SRB (сульфатредуцирующие бактерии) или МТТ и значения IC50 (концентрация лекарственного средства, ингибирующая 50% роста клеток), рассчитывали по программе ALLFIT.

Результаты

В следующих таблицах 1-7 приведены примеры антипролиферативной активности отдельных соединений.

ПРИМЕР 19

Опухолевые клетки подвергали воздействию новых атипичных ретиноидов (AR) в течение 24 часов, и антипролиферативную активность оценивали после восстановления в течение 48 часов в среде без лекарственного средства с помощью анализа SRB. Результаты представлены в следующей таблице 1.

Таблица 1. NCI-H460 NSCLC человека, подвергнутые воздействию новых атипичных ретиноидов

Соединение IC₅₀ ± SD (мкM) 8 (MIR002) ≤0,5

ПРИМЕР 20

Опухолевые клетки длительно обрабатывали различными атипичными ретиноидами и антипролиферативную активность оценивали через 72 часа с помощью анализа SRB. Результаты представлены в следующей таблице 2.

Таблица 2. NCI-H460 NSCLC человека, длительно подверженные воздействию новых атипичных ретиноидов

ПРИМЕР 21

Опухолевые клетки подвергали воздействию новых атипичных ретиноидов (AR) в течение 24 ч и антипролиферативную активность оценивали после восстановления в течение 48 часов в среде без лекарственного средства с помощью анализа SRB. RI=индекс резистентности (соотношение между значениями IC50 резистентных и чувствительных клеток). Результаты представлены в следующей таблице 3.

Таблица 3. Адаротен-резистентные NSCLC NCI-H460 (R9A) человека, мезотелиома MM487-Luc, родительские A2780 и A2780-Dx клеточные линии рака яичника с множественной лекарственной резистентностью, клетки глиобластомы U87MG, подвергшиеся воздействию новых атипичных ретиноидов.

Как описано Zuco V. et al in Neoplasia, 2005 Jul;7(7):667-77, H460-R9A примерно в 70 раз устойчивее по отношению к родительскому H460 к адаротену. Неожиданно, но новые производные ретиноидов показали значительное увеличение цитотоксической активности в отношении этой клеточной линии по сравнению с адаротеном. Рак яичника A2780 и его клон производное A2780DX (доксорубицин устойчивый), которые сверхэкспрессируют P-гликопротеин (PGP), использовали для оценки возможности абсорбции этих новых молекул на кишечном уровне. Фактически, сверхэкспрессия PGP, как хорошо известно, резко уменьшает возможность после перорального введения абсорбции нескольких химиотерапевтических средств (то есть паклитаксела, доксорубицина и т.п.). Поскольку IC50 тестируемых соединений в A2780 и A2780DX имеют сходные значения, авторы изобретения заключили, что они не являются субстратами PGP и их можно вводить пациентам пероральным путем. Более того, противоопухолевая активность 2 и 8 на опухолевых клетках глиобластомы (U87MG) предполагает использование этого класса соединений при внутричерепных опухолях, включая глиому.

ПРИМЕР 22

Опухолевые клетки подвергали воздействию новых атипичных ретиноидов (AR) в течение 24 часов, и антипролиферативную активность оценивали после восстановления в течение 48 часов в среде без лекарственного средства с помощью анализа MTT. Результаты представлены в следующей таблице 4.

Таблица 4. Клеточные линии гематологической злокачественной опухоли человека, подвергшиеся воздействию новых атипичных ретиноидов.

Клеточные линии IC₅₀ ± SD (мкM)
8 (MIR002) Z-138 мантийно-клеточная лимфома 0,074 ± 0,02 NB4 (про-миелоцитарный. лейкоз) 0,18 ± 0,04

ПРИМЕР 23

Оценка противоопухолевой активности соединений 2 (RC1375) и 8 (MIR002) на модели ксенотрансплантата у мыши

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Животные

Мышей CD-1 ʺголыеʺ и NOG, самки в возрасте 4-5 недель, содержали в условиях без специфических патогенов в индивидуальных вентилируемых клетках. Этической одобрение было получено от Министерства здравоохранения Италии, и все эксперименты были в соответствии с европейскими рекомендациями по уходу и использованию лабораторных животных.

Клеточные культуры и опухолевые имплантаты

Клетки культивировали в соответствующих средах и размножали в инкубаторе при 37°С с насыщенной влажностью и атмосферой 95% воздуха и 5% СО₂ и субкультивировали каждые 2-3 дня. Перед инъекцией мышам клетки проверяли с помощью набора для обнаружения микоплазмы MycoAlert® (Lonza), чтобы исключить загрязнение микоплазмой, подсчитанное по исключению трипанового синего красителя, оценивали на жизнеспособность клеток (> 95%).

Клетки рака легкого H-460-R9A суспендировали в концентрации 25×106/мл. 5×10⁶ опухолевых клеток суспендировали в 0,2 мл M199, затем инокулировали подкожно в правый бок каждого животного.

Ортотопическая модель мезотелиомы

(MM473-Luc) ресуспендировали в концентрации 1×10⁶ клеток/40 мкл среды M199, затем вводили внутрибрюшинно ортотопически с инфузией 1 мкл/мин (с помощью шприца Гамильтона).

Ортотопическая мышиная модель глиомы. 1×10⁶ биолюминесцентных клеток глиобластомы головного мозга (U-87 MG) вводили интракраниально и рост опухоли оценивали с помощью системы визуализации IVIS.

Реагенты и терапии in vivo

Различные концентрации соединения 2 (RC1375) разбавляли в 10% 1:1 абсолютном растворе этанол-кремофор в солевом растворе. Соединение и носитель вводили внутрибрюшинно (IP) в объеме 5 мл/кг. MIR002 растворяли до концентрации 3,3 мг/мл в 10% DMSO, 5% этаноле, 20% Kolliphor® EL и 65% Na2CO3 10 мМ pH 11 и вводили через зонд; Цисплатин растворяли до концентрации 0,8 мг/мл в стерильном физиологическом растворе и вводили внутривенно.

Измерения и визуализация in vivo

. Через четыре дня после инокуляции опухолевые массы H460-R9A измеряли по длине и ширине с помощью штангенциркуля Mitutoyo, мышей сортировали по объему опухоли (TV) и начинали лечение. Объем опухоли рассчитывали следующим образом: TV (мм3)= (Длина (мм)×Ширина (мм)2)/2. Рост опухоли сопровождали измерениями каждые две недели. Ингибирование роста опухоли (TGI) для каждой группы рассчитывали следующим образом: TGI (%)=100 - (среднее TVлеченные/среднее TVконтроль × 100). Мышей взвешивали два раза в неделю. Приживление опухоли in vivo опухолей, экспрессирующих люциферазу, сопровождалось двухнедельными измерениями излучения (BLI) с использованием IVIS Spectrum (Perkin Elmer) через 30 минут после внутрибрюшинного введения D-люциферина в дозе 15 мг/кг. Через 12 дней после инокуляции клеток животных сортировали на основе BLI и начинали лечение. За ростом опухоли следовали еженедельные измерения BLI. TGI был рассчитан как для испытания H460.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с помощью U-теста (Graphpad Prism 6). Выбросы были удалены с помощью теста Rout (Q=10%, Graphpad Prism 6).

Результаты

Активность соединения 2 (RC1375) оценивали на мышиных моделях ксенотрансплантата глиомы. Биолюминесцентные клетки глиобластомы головного мозга (U-87 MG) вводили интракраниально, и рост опухоли оценивали с помощью системы визуализации IVIS. После недели инъекции мышам внутрибрюшинно вводили 2 (RC1375) (100 мг/кг) (один раз в деньx5×4нед). Как показано на фиг. 1, лечение соединением 2 (RC1375) определяет значительное уменьшение опухоли с TGI 72%.

Все результаты обобщены в таблице 5 ниже.

Противоопухолевую активность соединения MIR002 (8) оценивали на модели опухоли мезотелиомы MM473 и NSCLC H460. В обеих моделях соединение вводили перорально, используя схему и дозы, указанные в таблицах 6 и 7. В обеих моделях MIR002 значительно снижал рост опухоли, оцениваемый как TGI.

Интересно, что комбинация MIR002 с цисплатином в резистентной клеточной линии H460-R9A значительно снижала рост опухоли по сравнению с лекарственными средствами, вводимыми отдельно.

Таблица 6. MIR002 (8) значительно уменьшал рост опухоли плевральной эпителиоидной мезотелиомы MM473 человека, ортотопически ксенотрансплантированной у ʺголыхʺ мышей

Вводимое соединение Путь введения Доза/объем режим BWL
день +35 (%) TGI
день +35 (%) носитель перорально - 2 раза в день, один раз в деньx5/недx3нед 0 - MIR002 (8) перорально 50 мг/кг 2 раза в день, один раз в деньx5/недx4нед 0 77

Таблица 7. Соединение 8 (MIR002) проявляло сильную противоопухолевую активность in vivo на ретиноид резистентные клетки H460-R9A, которая была сопоставима и синергетична активности цисплатина, не влияя на массу тела. Напротив, адаротен (ST1926) не является активным, хотя и вводится в фармакологически активной дозе.

Вводимое соединение(я) Путь введения Доза Режим BWL
день +35 (%) TGI
день +35 (%) носитель перорально+внутривенно - 2 раза в день, один раз в деньx5/нx4н один раз в 7 днейx4н 0 - адаротен (ST1926) перорально 15 мг/кг один раз в 7 днейx5×4н 12 - Цисплатин внутривенно 4 мг/кг один раз в 7 днейx4н 2,4 34 MIR002 (8) перорально 50 мг/кг 2 раза в день, один раз в деньx5/нx4н 0 38 MIR002 (8)+Цисплатин перорально+внутривенно 50 мг/кг
4 мг/кг 2 раза в день, один раз в деньx5/нx4н один раз в 7 днейx4н 0 78

Взятые вместе, результаты экспериментов in vitro и in vivo показывают, что этот новый класс синтетических ретиноидов, включая соединения 2 (RC1375) и 8 (MIR002), обладает очень большим спектром противоопухолевой активности в отношении нескольких опухолевых гистотипов, что предполагает их терапевтическое применение для лечения различных видов рака человека.

Более того, введение этих соединений отдельно или в комбинации с цисплатином не оказывало отрицательного влияния на массу тела мышей, что свидетельствует о высокой переносимости.

Пример 24

синтез MIR002, GEM144, BIO146

Синтез (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-(2-(гидроксиамино)-2-оксоэтокси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловой кислоты (MIR002)

A) 3-(3'-Адамантан-1-ил-4'-этоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир.

Смесь 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (2,00 г, 4,64 ммоль), этилбромацетата (1,58 г, 9,28 ммоль), K2CO3 (2,57 г, 18,6 ммоль) в 40 мл DMF нагревали при 80°С в течение 1 ч. K₂CO₃ отфильтровывали, DMF выпаривали и остаток растворяли в воде. Выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывали и кристаллизовали из диэтилового эфира с получением 2,09 г (97%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 175°C, Rf (петролейный эфир/этилацетат 90:10) 0,31. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃)δ: 7,61 (1H, д, J= 15,9 Гц), 7,58-7,53 (4H, м), 7,50 (1H, д, J= 2,35 Гц), 7,39 (1H, дд, J= 8,39 Гц, J= 2,35 Гц), 6,79 (1H, д, J= 8,39 Гц), 6,38 (1H, д, J= 15,9 Гц), 4,67 (2H, с), 4,31 (2H, кв, J= 7,16 Гц), 2,23-2,07 (9H, м), 1,88-1,74 (6H, м), 1,54 (9H, с), 1,32 (3H, т, J= 7,16 Гц), 13C-ЯМР (75 МГц, CDCl₃) δ: 168,7, 166,4, 156,7, 143,2, 142,9, 139,2, 133,2, 132,9, 128,4 (× 2C), 127,1 (× 2C), 126,0, 125,2, 119,6, 112,2, 80,4, 65,4, 61,3, 40,5 (× 3C), 37,2, 37,0 (× 3C), 29,1 (× 3C), 28,2 (× 3C), 14,2.

B) 3-(3'-Адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутиловый эфир.

К раствору 3-(3'-Адамантан-1-ил-4'-этоксикарбонилметокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (2,08 г, 4,02 ммоль) в 125 мл водн. 50% THF добавляли 843 мг (20,1 ммоль) LiOH.H2O и оставляли на ночь при комнатной температуре. Выпаривание, поглощение EtOAc, промывание 60 мл 1 н. KHSO4, экстракция EtOAc, сушка экстрактов Na₂SO₄, фильтрация и выпаривание дало 1,92 г (98%) продукта, белое твердое вещество, т.пл.> 300°C, Rf (CH₂Cl₂/MeOH 19:1) 0,23. 1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ: 7,75-7,60 (4H, м), 7,56 (1H, д, J= 15,8 Гц), 7,48 (1H, дд, J= 8,51 Гц, J= 2,36 Гц), 7,43 (1H, д, J= 2,36 Гц), 6,93 (1H, д, J= 8,51 Гц), 6,51 (1H, д, J= 15,8 Гц), 4,70 (2H, с), 2,19-1,98 (9H, м), 1,83-1,66 (6H, м), 1,48 (9H, с), 13C-ЯМР (75 МГц, DMSO-d6) δ: 170,4, 166,1, 157,2,143,7, 142,5, 138,6, 132,9, 132,1, 129,3 (× 2C), 127,0 (× 2C), 125,5, 125,2, 119,7, 113,5, 80,3, 65,3, некоторые сигналы отсутствуют из-за перекрытия с растворителем, 37,1, 37,9, 28,9 (× 3C), 28,3 (× 3C).

C) 3-{3'-адаманан-1-ил-4'-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир.

В охлажденную льдом суспензию 3-(3'-Адамантан-1-ил-4'-карбоксиметокси-бифенил-4-ил)-акриловой кислоты трет-бутилового эфира (1,25 г, 2,56 ммоль) в 26 мл сухого DMF, в атмосфере азота, добавляли HBTU (0,971 г, 2,56 ммоль) и DIPEA (0,993 г, 7,68 ммоль). Через две минуты добавляли 0,312 г (2,56 ммоль) O- (тетрагидропиран-2-ил)-гидроксиламина и смесь оставляли на ночь при комнатной температуре. DMF выпаривали, остаток растворяли в воде и белое твердое вещество отфильтровывали. Очистка с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с петролейным эфиром/EtOAc 7:3 дало 1,23 г продукта, белое твердое вещество, т.пл. 193°C, Rf (AcOEt/петролейный эфир 3:7) 0,31. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 9,13 (1H, с), 7,61 (1H, д, J= 16,0 Гц), 7,58-7,54 (4H, м), 7,51 (1H, д, J= 2,24 Гц), 7,43 (1H, дд, J= 8,53 Гц, J= 2,24 Гц), 6,91 (1H, д, J= 8,53 Гц), 6,39 (1H, д, J= 16,0 Гц), 5,07-5,02 (1H, м), 4,68 (2H, с), 4,00-3,90 (1H, м), 3,67-3,57 (1H, м), 2,18-2,11 (9H, м), 1,92-1,78 (8H, м), 1,70-1,58 (4H, м), 1,54 (9H, с). 13C-ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ: 166,4, 165,1, 156,1, 143,1, 142,5, 138,8, 134,2, 133,2, 128,4 (× 2C), 127,1 (× 2C), 126,2, 125,6, 119,8, 113,4, 102,8, 80,5, 67,6, 62,5, 41,1 (× 3C), 37,1, 37,0 (× 3C), 28,9 (× 3C), 28,2 (× 3C), 27,9, 24,9, 18,5.

D) (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-(2-(гидроксиамино)-2-оксоэтокси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота

3-{3'-Адамантан-1-ил-4'-[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота трет-бутиловый эфир (250 мг, 0,425 ммоль) добавляли порциями к 3,5 мл TFA при 0°C в атмосфере азота и смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Розовую суспензию фильтровали, твердое вещество промывали водой до нейтрального рН, получая 175 мг (92%) желаемого соединения в виде белого твердого вещества, т.пл. 265°C, Rf (CH₂Cl₂/ MeOH 18:2) 0,49. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃ +TFA) δ: 7,91 (1H, д, J=16,0 Гц), 7,67-7,59 (4H, м), 7,55 (1H, д, J=2,22 Гц), 7,47 (1H, дд, J= 8,30 Гц, J= 2,22 Гц), 6,90 (1H, д, J= 8,30 Гц), 6,49 (1H, д, J= 16,0 Гц), 4,78 (2H, с), 2,20-2,10 (9H, м), 1,91-1,72 (6H, м). 13C-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ: 168,1, 164,8, 157,7, 144,0, 142,5, 138,8, 133,0, 132,3, 129,2 (×2C), 127,1 (×2C), 125,6, 125,2, 119,1, 114,0, 66,4, (5C отсутствует из-за перекрытия с сигналом растворителя), 37,1, 36,9, 28,9 (×3C).

Синтез (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-(гидроксиамино)-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловой кислоты (GEM144)

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-этокси-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К раствору 3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидрокси-бифенил-4-ил)-акриловая кислота трет-бутилового эфира (500 мг, 1,16 ммоль) в сухом ацетоне (7 мл), K₂CO₃ (641 мг, 4,64 ммоль), KI (13 мг, 0,08 ммоль) и этиловый эфир 2-бромпропионовой кислоты (180 мкл, 1,39 ммоль) добавляли в атмосфере азота. Смесь нагревали 5 ч при температуре кипения с обратным холодильником. K₂CO₃ отфильтровывали и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество растирали с гексаном:диэтиловым эфиром 5:1, осадок отфильтровывали с получением 340 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 55%. т.пл. 88°C, Rf (петролейный эфир/этилацетат 92,5:7,5) 0,30.

1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ: 7,61 (1H, д, J=15,7 Гц), 7,57-7,52 (4H, м), 7,49 (1H, д, J=2,3 Гц), 7,35 (1H, дд, J=2,3, 8,4 Гц), 6,71 (1H, д, J=8,4 Гц), 6,38 (1H, д, J=15,7 Гц), 4,88 (1H, кв, J=6,6 Гц), 4,22 (2H, кв, J=7,1 Гц), 2,31-2,14 (6H, м), 2,13-2,04 (3H, м), 1,84-1,74 (6H, м), 1,71 (3H, д, J=6,6 Гц), 1,54 (9H, с), 1,25 (3H, т, J=7,1 Гц).

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-(1-карбоксиэтокси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К раствору (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-этокси-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (500 мг, 0,94 ммоль) в водн. 50% THF (30 мл), добавляли LiOH.H₂O (198 мг, 4,71 ммоль). Раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель выпаривали, неочищенное вещество разбавляли в 1 н. KHSO₄ и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме, с получением 462 мг (98%) указанного в заголовке соединения (белое твердое вещество), т.пл. 206°C, Rf (CH2Cl2/ MeOH 193:7) 0,23. 1H-ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ: 7,76-7,60 (м, 4H), 7,56 (д, 1H, J=15,9 Гц), 7,47 (дд, 1H, J=2,0, 8,4 Гц), 7,43 (д, 1H, J=2,0 Гц), 6,80 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,51 (д, 1H, J=15,9 Гц), 4,91 (кв, 1H, J=6,5 Гц), 2,24-2,00 (м, 9H), 1,79-1,66 (м, 6H), 1,57 (д, 3H, J=6,5 Гц), 1,47 (9H, с).

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-оксо-1-(((тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)амино)пропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота трет-бутиловый эфир

К раствору (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-(1-карбоксиэтокси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловой кислоты трет-бутилового эфира (400 мг, 0,79 ммоль) в сухом DMF (6 мл), добавляли HBTU (302 мг, 0,79 ммоль) и DIPEA (423 мкл, 2,38 ммоль) при 0°C в атмосфере азота. Раствор перемешивали 30 мин при 0°C, затем добавляли O-(тетрагидропиран-2-ил)-гидроксиламин (93 мг, 079 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растирали с водой и фильтровали. Неочищенное вещество очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии в смеси гексан:этилацетат 3:1, с получением 400 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 84%, Rf (гексан:этилацетат 7:3) 0,32. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: смесь стереоизомеров 8,98 (1H, с), 8,87 (1H, с), 7,61 (2H, д, J=15,8 Гц), 7,57-7,53 (8H, м), 7,51 (2H, д, J=2,3 Гц), 7,45-7,35 (2H, м), 6,91-6,83 (2H, м), 6,38 (2H, д, J=15,9 Гц), 5,03-4,81 (4H, м), 3,90-3,76 (2H, м), 3,64-3,54 (1H, м), 3,50-3,38 (1H, м), 2,26-2,07 (18H, м), 1,84-1,76 (12H, м), 1,69-1,74 (6H, м), 1,54 (18H, с).

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-(гидроксиамино)-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота

К раствору (E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-оксо-1-(((тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)амино)пропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота трет-бутилового эфира (1,35 г, 2,20 ммоль) в сухом CH2Cl2 (22 мл) при 0°C, добавляли по каплям TFA (22 мл) в атмосфере азота. Раствор перемешивали при 0°С в течение 4 ч. Смесь выпаривали и обрабатывали толуолом для удаления TFA, полученное твердое вещество растирали в CH₂Cl₂ и фильтровали с получением 646 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 64%., Rf (CH₂Cl₂/MeOH/H₂O 18:2:0,2) 0,35. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl3+TFA) δ: 7,92 (1H, д, J=15,9 Гц), 7,68-7,59 (4H, м), 7,57 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,44 (1H, дд, J=2,2 Гц, 8,3 Гц), 6,80 (1H, д, J=8,3 Гц), 6,49 (1H, д, J=15,9 Гц), 5,10-4,95 (1H, м), 2,28-2,03 (9H, м), 1,91-1,68 (9H, м).

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-(гидроксиамино)-2-метил-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота (BIO 146)

2-(2-Адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-2-метилпропионовая кислота.

К раствору 2-адамантан-1-ил-4-бромфенола (100 мг, 0,32 ммоль) в метилэтилкетоне (1 мл), добавляли NaOH (65 мг, 1,62 ммоль, 5 экв.). Смесь нагревали до 50°C и перемешивали при 50°C в течение 2 часов. К суспензии добавляли раствор α-бромизомасляной кислоты (98 мг, 0,58 ммоль, 1,8 экв.) в метилэтилкетоне (0,3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение дополнительных 3 ч. Растворитель удаляли в вакууме, неочищенное вещество растирали с диэтиловым эфиром и полученное твердое вещество отфильтровывали. Затем его суспендировали в 1 н. HCl, промывали водой и фильтровали с получением 123 мг указанного в заголовке соединения. Соединение использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

2-(2-адамантан-1-ил-4-бромофенокси)-2-метил-N-(тетрагидропиран-2-илокси)пропионамид.

К раствору 2-(2-адамантан-1-ил-4-бромфенокси)-2-метилпропионовой кислоты (80 мг, 0,20 ммоль) в сухом DMF (1,5 мл), добавляли HBTU (77 мг, 0,20 ммоль) и DIPEA (108 мкл, 0,61 ммоль) при 0°C в атмосфере азота. Раствор перемешивали 30 мин при 0°C, затем добавляли O-(тетрагидро-пиран-2-ил)-гидроксиламин (24 мг, 0,20 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, неочищенное вещество разбавляли водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии в смеси петролейный эфир:этилацетат 3:1 с получением 77 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 77%, 1H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃)δ: 8,86 (1H, с), 7,34 (1H, д, J=2,2 Гц), 7,20 (1H, дд, J=2,2Гц, 8,6 Гц), 6,61 (1H, д, J=8,6 Гц), 4,98-4,94 (1H, м), 3,95-3,89 (1H, м), 3,57-3,53 (1H, м), 2,13-2,04 (9H, м), 1,87-1,73 (10H, м), 1,70-1,50 (2H, м), 1,71 (3H, с), 1,63 (3H, с).

3-{3'-Адамантан-1-ил-4'-[1-метил-1-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловая кислота метиловый эфир.

К раствору 2-(2-адамантан-1-ил-4-бромофенокси)-2-метил-N-(тетрагидропиран-2-илокси)пропионамида (50 мг, 0,10 ммоль) в диметоксиэтане:воде 3,5:1 (2 мл, перед использованием тщательно дегазировали в атмосфере азота), 3-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-акриловая кислота метиловый эфир (38 мг, 0,13 ммоль), PdCl2(dppf)·CH₂Cl₂ (4 мг, 0,005 ммоль) и бикарбонат натрия (25 мг, 0,30 ммоль) добавляли в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 4 ч. Затем смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Комбинированные органические слои сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и выпаривали. Очистка с помощью флэш-хроматографии (петролейный эфир/этилацетат 80:20) дала 41 мг (71%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, Rf (гексан/этилацетат 80:20) 0,13. 1H-ЯМР (600 МГц, CDCl₃): 8,93 (1H, с), 7,73 (1H, д, J=15,9 Гц), 7,53-7,59 (4H, м), 7,50 (1H, д, J=2,0 Гц), 7,35 (1H, дд, J=8,4 Гц, J=2,0 Гц), 6,82 (1H, д, J=8,4 Гц), 6,46 (1H, д, J=15,9 Гц), 5,07-4,98 (1H, м), 3,95-3,87 (1H, м), 3,82 (3H, с), 3,58-3,52 (1H, м), 2,17-2,14 (6H, м), 2,14-2,08 (3H, м), 1,86-1,75 (10H, м), 1,70-1,58 (2H, м), 1,74 (3H, с), 1,70 (3H, с).

(E)-3-(3'-адамантан-1-ил)-4'-((1-(гидроксиамино)-2-метил-1-оксопропан-2-ил)окси)-[1,1'-бифенил]-4-ил)акриловая кислота (BIO 146)

К раствору вышеуказанного соединения (34 мг, 0,06 ммоль) в водн. 50% THF (2 мл), добавляли LiOH.H₂O (13 мг, 0,30 ммоль). Раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель выпаривали, неочищенное вещество разбавляли в охлажденном льдом 1 н. KHSO₄ и осадок фильтровали с получением 23 мг (70%) кислоты (белое твердое вещество), Rf (CH₂Cl₂/ MeOH 95:5) 0,38.

К раствору вышеуказанной кислоты (23 мг, 0,04 ммоль) в сухом CH₂Cl₂ (1 мл) при 0°C, добавляли по каплям TFA (1 мл) в атмосфере азота. Раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Смесь выпаривали и обрабатывали толуолом для удаления TFA, полученное твердое вещество растирали в CH₂Cl₂ и фильтровали с получением 13 мг указанного в заголовке соединения. Выход: 68%. Rf (CH₂Cl₂/ MeOH) 0,15. 1H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃+TFA) δ: 7,91 (1H, д, J=16,3 Гц), 7,68-7,58 (4H, м), 7,56 (1H, д, J=2,4 Гц), 7,38 (1H, дд, J=2,4 Гц, 8,4 Гц), 6,66 (1H, д, J=8,4 Гц), 6,49 (1H, д, J=16,3 Гц), 2,21-2,08 (9H, м), 1,88-1,69 (12H, м).

Клеточные линии

NCI-H460 и H460-R9A человека (атипичный, ретиноид-резистентный NCI-H460) NSCLC; A2780 и A2780-Dx (резистентный ко многим лекарственным препаратам) рак яичника; MM432-Luc, MM473-Luc и MM487Luc мезотелиома; MDA-MB231 и MDA-MB436 рак молочной железы; U87MG-Luc глиома; Z-138 мантийноклеточная лимфома и U-2932 диффузная В-крупноклеточная лимфома; NB4 промиелоцитарный лейкоз и THP-1 моноцитарный лейкоз; мышиная B16-Luc меланома.

Клеточные культуры

Клетки NCI-H460, H460-R9A, A2780, A2780-Dx, NB4, B16-Luc культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и сульфатом гентамицина. MDA-MB231, MDA-MB436, Z-138, U-2932, THP-1 культивировали в среде DMEM, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и сульфатом гентамицина. U87MG-Luc культивировали в среде EMEM, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина и сульфатом гентамицина. MM432-Luc, MM473-Luc и MM487Luc культивировали в в питательной смеси Хэма F-10, дополненной 10% FBS, 2 мM L-глутамина, 0,05 мг/мл сульфатом гентамицина и 0,4 мг/мл G418 антибиотиком.

Клетки поддерживали в инкубаторе при 37°С с насыщенной влажностью и атмосферой 95% воздуха и 5% СО2 и субкультивировали каждые 2-3 дня.

Схема эксперимента

Антипролиферативную активность двойных ингибиторов POLA1/HDAC MIR002 и GEM144 оценивали на различных линиях клеток человека от солидного и гематологического рака.

Для этого клетки в логарифмической фазе роста высевали в 96-луночные пластиковые планшеты, инкубировали в течение ночи в культуральной среде и обрабатывали в течение 72 часов скалярными концентрациями (серии 2-кратных разведений) соединений. Наконец, выживаемость клеток оценивали с помощью теста SRB (солидные опухоли) или MTT (кровяная опухоль) и значения IC50 (концентрация лекарственного средства, ингибирующая 50% роста клеток), рассчитывали с помощью программы ALLFIT.

Таблица 8 человеческие родительские NCI-H460 и ST1926-резистентные H460 (H460-R9A) NSCLC и родительские A2780 и A2780-Dx линии рака яичника с множественной лекарственной устойчивостью, подвергшиеся воздействию POLA1/HDAC

Опухолевые клетки человека обрабатывали двойными ингибиторами POLA1/HDAC и выживаемость клеток оценивали через 72 часа с помощью анализа SRB. HDAC=гистондеацетилаза. POLA1=ДНК-полимераза альфа 1. RI=индекс резистентности.

Таблица 9. Линии клеток мезотелиомы человека, подвергнутые воздействию двойных ингибиторов POLA1/HDAC

Опухолевые клетки подвергали воздействию двойных ингибиторов POLA1/HDAC, и их антипролиферативную активность оценивали через 72 часа с помощью анализа SRB. HDAC=гистондеацетилаза. POLA1=ДНК-полимераза альфа 1. n.e.=не оцененные.

Таблица 10. Клеточные линии солидного рака, подвергнутые воздействию двойных ингибиторов POLA1/HDAC

Опухолевые клетки подвергали воздействию двойных ингибиторов POLA1/HDAC, и антипролиферативную активность оценивали через 72 часа с помощью анализа SRB. HDAC=гистондеацетилаза. POLA1=ДНК-полимераза альфа 1. N.e.=не оцененные.

Таблица 11. Линии гематологических опухолевых клеток человека, подвергнутые воздействию двойных ингибиторов POLA1/HDAC

Опухолевые клетки обрабатывали двойными ингибиторами POLA1/HDAC и выживаемость клеток оценивали через 72 часа с помощью анализа МТТ. HDAC=гистондеацетилаза. POLA1=ДНК-полимераза альфа 1.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и к фармацевтическим композициям, их содержащим:

где значения заместителей указаны в формуле изобретения. Такие соединения для применения при лечении рака и других заболеваний, связанных с измененным ангиогенезом, таких как патология, относящаяся к артриту, диабетическая ретинопатия, псориаз и хроническое воспалительное заболевание, также входят в объем настоящего изобретения. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 11 табл., 1 ил., 23 пр.

1. Соединение, имеющее следующую формулу (I):

Формула (I),

где A представляет собой алкилен,

R₁ выбран из группы, состоящей из CONHOH и CONHO-оксациклоалкила,

R₂ представляет собой H,

R₃ представляет собой H,

R₄ представляет собой OH и

R₅ представляет собой адамантил,

R₈ и R₉ представляют собой Н или вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют фенильное кольцо,

где алкил представляет собой C₁-C₂₀ линейную или разветвленную алкильную группу,

циклоалкил представляет собой насыщенную или частично ненасыщенную C₃-C₁₀ карбоциклическую группу,

энантиомеры и их смеси,

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где R₁ представляет собой CONHOH.

3. Соединение по п. 1, где A представляет собой C₁-C₄-алкилен, предпочтительно метилен.

4. Соединение по любому из предшествующих пунктов, которое выбрано из группы, состоящей из:

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(3-гидроксикарбамоил-пропокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты (1) (RC 1315),

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(4-гидроксикарбамоил-бутокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты (2) (RC 1375),

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(7-гидроксикарбамоил-гептилокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты (3) (RC 1268),

3-(3'-адамантан-1-ил-4'-гидроксикарбамоилметоксибифенил-4-ил)-акриловой кислоты (MIR002) (8),

3-{3'-адамантан-1-ил-4'[(тетрагидропиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты (9) (BIO 49),

3-{3'-адамантан-1-ил-4'-[2-(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-этокси]-бифенил-4-ил}-акриловой кислоты (11) (GEM 57),

3-[3'-адамантан-1-ил-4'-(2-гидроксикарбамоил-этокси)-бифенил-4-ил]-акриловой кислоты (12) (GEM 60),

6-{3-адамантан-1-ил-4-[(тетрагидро-пиран-2-илоксикарбамоил)-метокси]-фенил}-нафталин-2-карбоновой кислоты (13) (GEM 59),

6-(3-адамантан-1-ил-4-гидроксикарбамоилметокси-фенил)-нафталин-2-карбоновой кислоты (14) (GEM 61).

5. Соединение по любому из пп.1-4 для применения при лечении заболевания, связанного с измененным ангиогенезом.

6. Соединение по любому из пп. 1-4 для применения при лечении заболевания, выбранного из группы, состоящей из патологии, относящейся к артриту, опухоли, метастазирования, диабетической ретинопатии, псориаза и хронического воспалительного заболевания.

7. Соединение для применения по п. 6, где указанная опухоль выбрана из группы, состоящей из саркомы, карциномы, карциноида, мезотелиомы, лимфомы, опухоли костей, нейроэндокринной опухоли, лимфоидного лейкоза, миелоидного лейкоза, моноцитарного лейкоза, мегакариоцитарного лейкоза, острого промиелоцитарного лейкоза, болезни Ходжкина, опухоли легкого, гепатомы, мезотелиомы, интракраниальной опухоли и глиомы.

8. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения заболевания, связанного с измененным ангиогенезом, выбранного из группы, состоящей из патологии, относящейся к артриту, опухоли, метастазирования, диабетической ретинопатии, псориаза и хронического воспалительного заболевания, включающая в качестве активного ингредиента соединение по любому из пп. 1-4 в терапевтически эффективном количестве и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, дополнительно включающая одно или несколько химиотерапевтических средств.

10. Фармацевтическая композиция по п. 9, где указанное дополнительное химиотерапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство на основе платины.