Настоящее изобретение относится к способу инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, в частности, инактивации ксеноантигенов в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей, предназначенных для использования в клинической практике лечения человека и животных.
В частности, изобретение относится к способу обеспечения инактивации ксеноантигенов в соединительных тканях, являющихся родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, в частности, эпитопа Gal-alpha, в тканях сердечно-сосудистой системы посредством использования биологической активности, обнаруженной в фенольных соединениях, полифенольных соединениях и их производных.
В настоящее время рынок изготовления биопротезных заменителей значительно расширяется. Клиническое усовершенствование хирургических процедур, снижение количества осложнений, возникающих после проведения хирургической операции, разработка и управление новыми иммуномодулирующими препаратами в сочетании с более глубоким знанием механизмов взаимодействия между трансплантатом и хозяином способствуют, при наличии возможности, использованию биологических протезов, образованных тканью животных или гомологичными тканями. В этом смысле одной из областей хирургии, являющейся образцовой, но не единственной, является сердечно-сосудистая хирургия, особенно с точки зрения влияния на общество и здоровье, которое может вызвать установленная практика замены клапана сердца.
Биомедицинскую технологию можно разрабатывать и применять при хирургическом лечении в целях замены протезов клапанов, которые могут имитировать функцию открытия и закрытия нефункционирующих родных клапанов.
Идеальные протезы клапанов должны обеспечивать возможность течения жидкости через клапан, который может перекрывать аналогичный оригинальный здоровый клапан, обеспечивать длительный срок службы и не должны оказывать гемолитического или тромбогенного воздействия.
Наиболее часто используемыми заменителями клапанов являются биологические протезы, получаемые из ксеногенных тканей, в частности, из клапанов свиней или клапанов, изготовляемых с использованием перикарда крупного рогатого скота или лошадей.
Такие протезы и заменители клапанов имеют следующий недостаток: они сталкиваются с дегенеративными процессами дистрофии, связанной с отложением кальциевых солей, и/или ухудшением створок, сопровождаемым разрушением, демонстрируя большую чувствительность к возникновению инфекций эндокарда. С целью улучшения их механических характеристик, понижения их собственной антигенности и обеспечения их сохранения, их обычно обрабатывают перекрестно-сшивающими агентами/стерилизующими химическими веществами, такими как, в целях приведения примера: глутаровый альдегид, хотя им перечень не исчерпывается. Кроме того, они могут подвергаться обработке согласно протоколам о декальцинации или детоксикации.
Термин «ксеногенная ткань» означает ткань, принадлежащую организму другого вида, за исключением человека; такие материалы имеют специфические поверхностные антигены, переносимые внутри исходных видов, но несовместимые при имплантировании людям, у которых, если их не лечить надлежащим образом, они способны инициировать активацию каскада реакций комплемента и агрегацию тромбоцитов, создавая ситуацию, аналогичную ситуации, происходящей в случае несовместимости групп крови.
Такое явление известно под термином «сверхострое отторжение». Основной причиной возникновения такого механизма является наличие ксеноантигена альфа- Gal. Данный эпитоп представляет собой дигалактозид (галактоза-альфа-1,3-галактоза), присутствующий на гликопротеинах и гликолипидах мембран (в основном состоящих из эндотелиальных клеток), а также на разных типах клеток, таких как: моноциты, гранулоциты и эритроциты и в важных участках тканей таких как: области миокарда и кости. Такой крестообразный антиген конститутивно экспрессируется у всех млекопитающих, за исключением высших приматов и людей.
В организме человека с рождения экспрессируются антитела, направленные против такого эпитопа, в результате непрерывной стимуляции бактериальной флорой кишечника.
В наше время биологическую совместимость ксеногенных тканей, предназначенных для использования при изготовлении биопротезов, получают посредством обработки вышеупомянутым глутаровым альдегидом.
Несмотря на такую процедуру, было показано, что эпитоп Gal-alpha остается чувствительным в продаваемых в настоящее время заменителях клапанов сердца, вызывая после проведения имплантации повышение количества анти- α-Gal-антител, циркулирующих как у пациентов детского возраста, так и у взрослых.
Так же образующийся комплекс антиген-антитело, по-видимому, принимает непосредственное участие в содействии отложению солей кальция, благоприятствуя образованию эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.
Целью настоящего изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, который способен преодолеть ограничения традиционных способов лечения.
В рамках данной цели задачей изобретения является создание способа, который может быть применен к соединительным тканям, которые являются родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей для использования в клинической практике лечения человека и животных.
Еще одной задачей изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, адаптированного под обеспечение инактивации эпитопа Gal-alpha в тканях сердечно-сосудистой системы.
Дополнительной задачей изобретения является создание способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, с помощью которого можно инактивировать эпитопы, упомянутые выше, обеспечивая тем самым эффективное лечение, а также способа, который может быть применен ко всевозможным различным типам биопротезных заменителей, присутствующих в настоящее время на рынке.
Еще одной задачей изобретения является создание способа, не способствующего увеличению количества циркулирующих анти- α-Gal-антител после проведения имплантации.
Дополнительной задачей изобретения является создание способа, не содействующего отложению солей кальция, таким образом ограничивающего образование эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.
Еще одной задачей изобретения является создание способа, который может быть реализован с использованием обычных устройств и машин. Эта цель, а также эти и другие задачи, которые станут более очевидными в дальнейшем, достигаются с помощью способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, особенно в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей и/или в биопротезных заменителях, которые уже изготовлены и предназначены для использования в клинической практике лечения человека и животных, отличающегося тем, что он включает в себя следующие этапы:
- создание раствора на основе фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из упомянутых тканей;
- инкубирование образцов, подлежащих обработке в различных растворах на основе фенолов/полифенолов, в контролируемых условиях;
- подвергание обработанных тканей ряду промываний.
Изобретение также относится к соединительной ткани, полученной с помощью способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, отличающемуся тем, что в ткани содержится по меньшей мере некоторая часть компонента антигена в неактивной форме.
Изобретение также относится к применению соединительной ткани, полученной с помощью способа инактации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, для использования в клинической практике лечения человека и животных.
Изобретение также относится к набору для реализации способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях согласно изобретению, как описано выше, отличающемуся тем, что в нем содержится по меньшей мере:
- один или несколько контейнеров, содержащих буфер, в котором должна быть растворена наиболее подходящая доза фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных;
- один или несколько контейнеров, содержащих дозу фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных в виде порошка, подлежащего добавлению в буфер;
- один или несколько контейнеров, содержащих промывочные буферные растворы;
- брошюра-инструкция, в которой содержится описание сроков и способов применения процедуры.
Дополнительные характеристики и преимущества изобретения станут более очевидными из подробного описания, которое следует из предпочтительного, но не исчерпывающего, варианта осуществления способа инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением.
В прилагаемых чертежах:
- Фигура 1 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с первым вариантом осуществления изобретения;
- Фигура 2 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии со вторым вариантом осуществления изобретения;
- Фигура 3 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с третьим вариантом осуществления изобретения;
- Фигура 4 представляет собой обзор результатов применения способа в процентном соотношении в соответствии с четвертым вариантом осуществления изобретения.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Термин «фенольные соединения» относится к молекулам, характеризующимся, по меньшей мере в их части, присутствием ароматического ядра (бензольного кольца), связанного с одной или несколькими гидроксильными функциональными группами. Вышеупомянутые соединения включают в себя в качестве неисключающего примера: простые фенолы (молекулы с одним бензольным кольцом и содержащие только гидроксильные группы в качестве заместителей, например: фенол и гидрохинон), фенолоальдегиды (содержащие как фенольную группу, так и альдегидную группу, например, ванильный альдегид), фенольные кислоты (например, коричные кислоты), фениламины (амфотерные молекулы, содержащие слабокислотную группу и сильнокислотную группу, например фенилаланин), фенольные соединения (фенольное кольцо, связанное с другим бензольным кольцом или с другими гетероциклическими соединениями, имеющими гидроксильные/лактоновые/кетоновые функциональные группы, например: кумарины и ксантоны), флавоноиды (состоящие из двух бензольных колец, соединенных цепью с тремя атомами углерода, которая представляет собой оксигенированное гетероциклическое кольцо, например катехины, флавононы, флавоны, хальконы, флаванонолы, флаванолы, лейкоантоцианидин, антоцианидин), фенилпропаноиды (характеризующиеся наличием ароматического кольца с алифатической боковой цепью с тремя атомами углерода, например: гидроксикоричные кислоты) и таннины. В настоящем изобретении термины «фенолы» и «полифенолы» могут иметь одинаковое значение и могут использоваться вместе или заменять друг друга для реализации поставленных целей.
Термин «ксеноантиген» относится к молекулам животного происхождения, которые могут быть распознаны иммунитетом и могут вызывать антитело-опосредованную/иммуно-опосредованную воспалительную реакцию в организме человека-хозяина. В настоящем изобретении термины «ксеноантиген», «антиген», «ксеногенный антиген», «эпитоп» и «крестообразный антиген» могут иметь одинаковое значение и могут использоваться вместе или заменять друг друга.
Термин «соединительная ткань» включает в себя, среди прочего: сосуды, сердечные клапаны, сухожилия, связки, перикард, мышечную фасцию, твердую мозговую оболочку, барабанную перепонку, подслизистую оболочку кишечника, хрящ, жировую ткань и костную ткань.
Термин «зафиксированные» ткани включает в себя ткани, подверженные действию химических или биологических веществ, таких как, в целях приведения неограничивающего примера: глутаровый альдегид, формальдегид и кверцетин.
Термин «зафиксированные» ткани включает в себя ткани, подверженные действию химических или биологических веществ, развивающие перекрестные связи внутри ткани с функцией стабилизации белковых, липидных и клеточных структур, а также снижающие потенциальное антигенное действие хозяина. В описании настоящего изобретения термины «зафиксированный» и «перекрестно-сшитый» могут описывать один и тот же тип лечения и/или иметь одинаковое значение, а также могут использоваться вместе или заменять друг друга.
Термин «чужеродные» ткани означает ткани нечеловеческого происхождения. Такие ткани могут быть представлены для применения в клинической практике как родные или необработанные, вместо того, чтобы быть подвергнутыми обработке, повышающей их регенерирующие свойства (такие как, в целях приведения примера в качестве иллюстрации: процедуры децеллюляции или процедуры покрытия/всасывания веществ с прорегенеративным/сохраняющим действием для компонента клетки). В описании изобретения термин «чужеродный» может иметь такое же значение, что и «ксеногенный», и их можно использовать вместе или заменять друг другом.
Термин «гомологичные» ткани означает ткани человеческого происхождения. Такие ткани могут быть представлены для применения в клинической практике как родные или необработанные, вместо того, чтобы быть подвергнутыми защитной обработке (такой как: в целях приведения примера в качестве иллюстрации: криоконсервирование) или обработке, повышающей их регенерирующие свойства (такие как, в целях приведения примера в качестве иллюстрации: процедуры децеллюляции или процедуры покрытия/всасывания веществ с прорегенеративным/сохраняющим действием для компонента клетки).
Термин «процедуры децеллюляции» означает все индивидуальные или комплексные способы лечения, в которых используются, в качестве неограничивающих примеров, солевые растворы (гипер-, изо- или гипотонические), растворы детергента (ионные, неионные или цвиттер-ионные) и ферменты и целью которых является частичное, селективное или полное удаление компонента клетки, присутствующего в исходной ткани.
Термин «биопротезные заменители» означает биологические устройства, приспособленные для замены недостающей части организма (конечности, органа или ткани) или для присоединения к поврежденной части, предназначенные для использования в клинической практике лечения человека и животных. В описании настоящего изобретения термины «биопротезные заменители», «биопротезы», «биологические протезы» или «устройства» могут иметь одинаковое значение, а также могут использоваться вместе или заменять друг друга.
Термин «животное с выключенным геном к антигену альфа-Gal» означает животное, в котором ген, кодирующий фермент альфа-галактозилтрансферазы, был выключен. Такой фермент отвечает за атаку эпитопа Gal-alpha гликопротеинами и липопротеинами мембран. Его отсутствие приводит к изготовлению тканей, в которых полностью отсутствует рассматриваемый эпитоп и которые, в связи с этим, полностью сопоставимы с тканями организма человека. В настоящем изобретении ткани кровеносных сосудов животных с выключенным геном к антигену альфа-Gal использовали в качестве абсолютного отрицательного контроля.
Ниже представлены несколько неограничивающих примеров применения способа в соответствии с изобретением.
Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением, особенно для тканей, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей и/или биопротезных заменителей, которые уже приготовлены и предназначены для использования в клинической практике лечения человека и животных, включает в себя следующие этапы:
- создание раствора на основе фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из таких тканей;
- инкубирование образцов, подлежащих обработке в различных растворах на основе фенолов/полифенолов, в контролируемых условиях;
- подвергание обработанных тканей ряду промываний.
В способе также содержится следующая процедура оценки эффективной инактивации эпитопа Gal-alpha посредством сравнения обработанных/необработанных тканей и тканей свиней с выключенным геном фермента альфа-галактозилтрансферазы.
Такая процедура может быть предоставлена, например, как описано в итальянском патенте №0001409783 и в ЕР2626701.
Биологические ткани представляют собой соединительные ткани, которые могут быть родными, родными и зафиксированными или зафиксированными.
Биологические ткани могут быть чужеродными или гомологичными.
Эпитоп антигена образован антигеном альфа-Gal.
Контролируемые условия этапа инкубации включают в себя по меньшей мере одну обработку при температуре 40±2°С. Фенольные соединения, полифенольные соединения или их производные для инактивации по меньшей мере части ксеногенных эпитопов из таких тканей образованы из производных коричной кислоты, таннина и олеуропеина.
В частности, и в качестве примера, производные коричной кислоты образованы из кофейной кислоты.
В частности, и в качестве примера, производные таннина образованы из дубильной кислоты.
В частности, и в качестве примера, производные олеуропеина образованы из гидрокситирозола.
В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное коричной кислоты образовано из кофейной кислоты.
В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное таннина образовано из дубильной кислоты.
В частности, и в качестве примера, по меньшей мере одно фенильное производное олеуропеина образовано из гидрокситирозола.
Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях в соответствии с изобретением, то есть в тканях, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей, применяется, в качестве неограничивающего примера изобретения, к инактивации эпитопа Gal-alpha в тканях, составляющих следующие модели биопротезных заменителей:
- Сердечный клапан свиньи Хэнкок II™ (модель Т510, компания «Медтроник Инк.», Миннеаполис, США) указанный в фигурах как «ХЭНК»;
- Корень аорты сердечного клапана Фристайл® (модель 995, компания «Медтроник Инк.», Миннеаполис, США) указанный в фигурах как «ФРИ»;
- Карпентьер-Эдвардс С.А.В. (модель 6650, Компания «Эдварде Лайфсайенсиз ЛЛС, Калифорния, США) указанная в фигурах как «САВ»;
- Карпентьер-Эдвардс Перимаунт Плас (модель 6900Р, Компания «Эдварде Лайфсайенсиз ЛЛС, Калифорния, США) указанная в фигурах как «ПЕРИ»;
- Заплатка из сердечной ткани и сосудов КардиоСел (модель С0404, компания «Адмедус Реген Пти Лтд», Perth, Australia) указана в фигурах как «KC».
Способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях и, в частности, инактивации эпитопов Gal-alpha в образцах биопротезных заменителей описан ниже в подробной информации о варианте осуществления изобретения.
Образцы ткани берут из биопротезных заменителей в соответствии с вышеупомянутыми моделями, доступными на рынке в настоящее время. Такие образцы взвешивают влажными после легкого промокания фильтровальной бумагой (30-50 мг) и разрезают на мелкие кусочки для увеличения их поверхности.
Для каждого биопротезного заменителя готовят 4 разных набора образцов (n=8 для каждого набора). Каждый набор будут подвергать разному способу.
4 разных раствора готовят на основании производных фенола, соответствующим 4 разным применимым вариантам осуществления способа в соответствии с изобретением, которыми образцы будут обрабатываться в конечном объеме 5 мл, в частности:
- способ Т1: кофейная кислота с концентрацией, составляющей 5 мМ и 50 мМ (в изобретении была принята концентрация 20 мМ)/буфер фосфата натрия с 600±50 Ед/мл тирозиназы в соотношении [1:20];
- способ Т2: кофейная кислота с концентрацией, составляющей 5 мМ - 50 мМ (в изобретении была принята концентрация 20 мМ) в 0,2±0,1 М NaOH;
- способ Т3: дубильная кислота с концентрацией, составляющей 0,1 М - 1,5 М (в изобретении была принята концентрация 1 М) в натрий-фосфатном буфере;
- способ Т4: гидрокситирозол с концентрацией, составляющей 0,3 мМ - 10 мМ (в изобретении была принята концентрация 6 мМ) в0,2±0,1 М NaOH.
Данные растворы оставляют действовать при умеренном, но постоянном перемешивании в течение 12±2 часов при температуре 40±2°С.
В конце инкубации образцы подвергают двум промываниям изотоническим раствором продолжительностью 15 минут каждое, и третьему промыванию в строго стационарном буфере (трис-фосфатном) продолжительностью 15 минут.
Оценка присутствия каких-либо эпитопов, все еще активных на поверхности обработанных образцов, основана на модификации иллюстрированного способа изобретателями и описана в итальянском патенте №0001409783 и в ЕР2626701.
Вкратце, обработанные и промытые образцы тканей помещают в пробирки, к которым прибавляют трис-фосфатный буфер до конечного объема, составляющего 1000 мкл - 1500 мкл.
Затем прибавляют моноклональное мышиное антитело, направленное против эпитопа Gal-alpha (в данном примере это клон IgM, называемый М86), с предпочтительной концентрацией [1:50] о/о и все инкубируют в течение 120±10 минут при температуре 37±2°С при постоянном, но умеренном перемешивании.
В конце образцы подвергают центрифугированию при 14 750 × г в течение 30±5 минут при температуре окружающей среды.
Во время инкубации с антителом М86 готовят 96-луночный планшет, в котором нижнюю часть лунок наполняют в линию 100 мкл alpha-Gal/ сывороточного альбумина с концентрацией 5 мкг/мл в фосфатном буфере на ячейку. Планшет, подготовленный таким образом, инкубируют в течение 60±10 минут при температуре, составляющей 30°С - 40°С, хотя предпочтительнее стабилизировать все при температуре 37°С. Затем проводят 3 промывания с 300 мкл/лунку фосфатного буфера при температуре окружающей среды.
После первого промывания оставляют действовать в течении 5 минут, после двух последующих промываний - в течение 3 минут.
Блокирование проводят с помощью 300 мкл/на лунку сывороточного альбумина с последующей инкубацией в течение 60±10 минут при температуре окружающей среды в темноте. Далее промывают 3 раза как указано выше.
В каждую отдельную лунку прибавляют 100 мкл надосадочной жидкости, взятой после центрифугирования от каждого обработанного образца.
Образцы погружают в планшет, каждый тип образца занимает лунки всей колонки. Далее следует инкубация планшета в течение 120±10 минут при температуре 30°С - 40°С, хотя предпочтительно стабилизировать все при температуре 37°С.
Затем промывают 3 раза, как указано выше, и прибавляют 100 мкл/на лунку раствора вторичного антитела (кроличьего поликлонального антимышиного), конъюгированного с ферментом пероксидазы (идеальные растворы такого антитела [1:1000], [1:500] и [1:100], в предпочтительном варианте осуществления изобретения был принят промежуточный раствор (1:500).
Затем планшет инкубируют снова в течение 60±10 минут при температуре 30°С - 40°С, хотя предпочтительно стабилизировать все при температуре 37°С.
После этого делают 3 промывания как указано выше. К ферменту пероксидазы прибавляют 100 мкл/на лунку проявляющего раствора и затем планшет инкубируют в течение 5±1 минут в темноте.
Затем в каждую лунку прибавляют 50 мкл останавливающего раствора, состоящего из 2М H2SO4 и затем планшет считывают в планшет-ридере при 450 нм.
Инактивация рассматриваемого эпитопа в процентном соотношении может быть определена посредством сравнения количества полученных эпитопов: в контрольной ткани, образованной тканью кровеносных сосудов животных с выключенным геном к антигену альфа-Gal, в необработанных биопротезных тканях и в тканях, подвергнутых различным видам обработки, как описано выше.
Из фигуры 1 видно, что способ Т1 в своей вариации демонстрирует заметную изменчивость воздействия в зависимости от всевозможных различных обработанных тканей биопротезов.
Способ Т1 показал значительно более низкую эффективность, чем другие исследованные протоколы, продемонстрировав в качестве наилучшего результата инактивацию, ограниченную примерно 43% эпитопов.
На фигуре 2 можно увидеть, что способ применения Т2 в своей вариации с производными коричной кислоты только демонстрирует превосходное инактивирующее действие против антигена, причем процент инактивации составляет от 90 до 98%, аналогично результату, показанному в вариации Т3 (фигура 3, процент инактивации составлял от 80% до 100%) и вариации Т4 (фигура 4, процент инактивации составлял от 89% до 95%).
Изобретение также относится к соединительной ткани, полученной способом, описанным выше.
Такая соединительная ткань характеризуется тем, что в ней содержится по меньшей мере некоторое количество компонента антигена в неактивной форме.
Изобретение также относится к применению соединительной ткани как описано выше, для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, для использования в клинической практике лечения человека и животных.
Изобретение также относится к набору для реализации способа инактивирования ксеноантигенов в биологических тканях, как описано выше.
В таком наборе содержится в себе по меньшей мере следующее:
- один или несколько контейнеров, содержащих буфер, в котором должна быть растворена наиболее подходящая доза фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных;
- один или несколько контейнеров, содержащих дозу фенольных соединений, полифенольных соединений или их производных в виде порошка, подлежащего добавлению в буфер;
- один или несколько контейнеров, содержащих промывочные буферные растворы;
- брошюра-инструкция, в которой содержится описание сроков и способов применения процедуры.
Предполагаемое использование набора направлено на автономную обработку биопротезных заменителей, которые уже приготовлены с использованием способа согласно изобретению, как описано выше, полезных для медицинских учреждений, таких как: клиники и больницы.
На практике было обнаружено, что изобретение полностью достигает поставленной цели и задач.
В частности, вместе с изобретением был разработан способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях и, в частности, эпитопа Gal-alpha в тканях, предназначенных для изготовления биопротезных заменителей для применения в клинической и/или ветеринарной практике.
Более того, вместе с изобретением был разработан способ инактивации атигенов, упомянутых выше, таким образом обеспечивая эффективное лечение, которое может быть применено ко всевозможным различным типам биопротезов тканей, присутствующих в настоящее время на рынке.
Таким образом, вместе с изобретением был разработан способ, который потенциально не способен вызывать увеличение количества циркулирующих анти- α-Gal-антител после имплантации ткани, обработанной таким способом.
Кроме того, вместе с изобретением был разработан способ, который способен ограничивать отложение солей кальция, таким образом не способствуя образованию эпизодов дистрофии клапана, связанной с отложением кальциевых солей.
И последнее, но не менее важное: вместе с изобретением разработан способ, который может быть реализован с использованием обычных устройств и машин.
Изобретение, предложенное таким образом, допускает многочисленные изменения и вариации, все из которых подпадают под прилагаемую формулу изобретения. Более того, все элементы могут быть заменены другими технически эквивалентными элементами.
На практике используемые компоненты и материалы, при условии, что они совместимы с конкретным использованием, а также с размерами и формами, зависимыми от других факторов, могут быть любыми в соответствии с требованиями и состоянием техники.
Раскрытия в заявке на патент Италии №102015000078236 (UB 2015A006019), из которой данная заявка испрашивает приоритет, включены в настоящий документ посредством ссылки.
ССЫЛКИ
- В.Т. Нкомо и др. Бремя пороков клапанов сердца: популяционное исследование. Журнал «Ланцет» 2006 г.; выпуск 368: страницы 1005-1011.
- Л.У. Цзэн и др. Быстрый метод количественного анализа альфа-гал на неповрежденной поверхности клеток свиньи. Журнал Сычуаньского университета. Издание о медицинской науке. 2005 г.; выпуск 36(3): страницы 419-421.
- Ю. Галили и др. Чувствительный тест для измерения экспрессии эпитопа Gal-alpha на клетках моноклональным антителом анти-Gal. Журнал «Трансплантация» 1998 г.; выпуск 65: страницы 1129-1132.
- Р.Х. Чен и др. Альфа-Gal и бета-Gal предпочтительно экспрессируются на микрососудистом эндотелии сердца свиньи. Журнал «Материалы о трансплантации» 2000 г.; выпуск 32: страницы 877-878.
- В Фен и др. Распределение эпитопа Gal-alpha на костной ткани взрослых свиней. Журнал «Материалы о трансплантации» 2006 г.; выпуск 38: страницы 2247-2251.
- Ю. Галили Эпитоп Gal-alpha и антитело анти-Gal в ксенотрансплантации и в иммунотерапии рака. Журнал «Иммунология и клеточная биология» 2005 г.; выпуск 83: страницы 674-686.
- К.З. Конакси и др. Альфа-Gal на биопротезах: иммунная реакция на ксенотрансплантат в кардиохирургии. «Европейский журнал о клиническом исследовании» 2005 г.; выпуск 35(1): страницы 17-23.
- К.С. Парк и др. Иммунная реакция на анти альфа-Gal после имплантации биопротеза у детей. «»Журнал о заболевании клапана сердца» 2010 г.; выпуск 19(1): страницы 124-30.
- Н. Лила и др. Перикард свиней с выключенным геном Gal: новый источник материала для биопротезов клапана сердца. «Журнал о трансплантации сердца и легкого» 2010 г.; выпуск 29(5): страницы 538-43.
- Ф. Насо и др. Первый количественный анализ альфа-Gal в мягких тканях: наличие и распределение эпитопа до и после удаления клеток из ксеногенных клапанов сердца. Журнал «Акта Биоматериалиа» 2011 г.; выпуск 7(4): страницы 1728-1734.
- Ф. Насо и др. Первая количественная оценка эпитопа Gal-alpha в современных биопротезах клапана сердца, зафиксированными глутаровым альдегидом. Журнал «Ксенотрансплантация» 2013 г.; выпуск 20(4): страницы 252-261.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
КСЕНОГЕННЫЕ ИМПЛАНТАТЫ МЯГКИХ ТКАНЕЙ И СПОСОБЫ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ | 2013 |
|
RU2665366C2 |
ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА | 2016 |
|
RU2720984C2 |
СПОСОБЫ ИНДУЦИРОВАНИЯ Т-КЛЕТОЧНОЙ ТОЛЕРАНТНОСТИ К ТКАНЕВОМУ ИЛИ ОРГАННОМУ ТРАНСПЛАНТАТУ | 1995 |
|
RU2169009C2 |
СПОСОБ ВАКЦИНОТЕРАПИИ ОНКОЗАБОЛЕВАНИЙ | 2000 |
|
RU2192883C2 |
СПОСОБЫ И РЕАГЕНТЫ ДЛЯ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И/ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИИ | 2015 |
|
RU2698099C2 |
ВАКЦИНА ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ИММУНИТЕТА | 2000 |
|
RU2192884C2 |
Способ ферментативной обработки тканевых продуктов | 2012 |
|
RU2639477C2 |
ГЛИКОЛИПИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЛЕЧЕНИИ ОПУХОЛЕЙ | 2015 |
|
RU2719486C2 |
АНТИТЕЛА, НАЦЕЛЕННЫЕ НА О-АНТИГЕН НА ОСНОВЕ ГАЛАКТАНА ИЗ К.PNEUMONIAE | 2015 |
|
RU2759950C2 |
ФОТОАКТИВИРУЕМОЕ ХИМИЧЕСКОЕ ОБЕСЦВЕЧИВАНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ | 2012 |
|
RU2623880C2 |
Группа изобретений относится к инактивации ксеноантигенов в биологических тканях. Способ инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях содержит в себе следующие этапы: создание раствора на основе кофейной кислоты, дубильной кислоты и/или гидрокситирозола для инактивации по меньшей мере части антигена альфа-Gal из упомянутых тканей; инкубирование упомянутых тканей в растворе, созданном на вышеуказанной стадии, при перемешивании и при температуре 40±2°C; подвергание обработанных тканей по меньшей мере одному промыванию. Также раскрывается соединительная ткань, в которой инактивирован антиген альфа-Gal, использование соединительной ткани для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, набор для реализации способа инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях. Группа изобретений обеспечивает способ инактивации ксеноантигенов в биологических тканях, который может быть применен к соединительным тканям, которые являются родными и/или зафиксированными, чужеродными или гомологичными, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей для использования в клинической практике лечения человека и животных. 4 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил.
1. Способ инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях, отличающийся тем, что он содержит в себе следующие этапы:
- создание раствора на основе кофейной кислоты, дубильной кислоты и/или гидрокситирозола для инактивации по меньшей мере части антигена альфа-Gal из упомянутых тканей;
- инкубирование упомянутых тканей в растворе, созданном на вышеуказанной стадии, при перемешивании и при температуре 40±2°C;
- подвергание обработанных тканей по меньшей мере одному промыванию.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что упомянутые биологические ткани состоят из родных, родных и зафиксированных или зафиксированных соединительных тканей.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что упомянутые биологические ткани являются чужеродными или гомологичными.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что биологические ткани представляют собой ткани, которые могут быть использованы для изготовления биопротезных заменителей, и/или биопротезные заменители, которые уже приготовлены и предназначены для использования в клинической практике лечения человека и животных.
5. Соединительная ткань, в которой инактивирован антиген альфа-Gal способом по п. 1, отличающаяся тем, что в ней содержится по меньшей мере часть антигена альфа-Gal в неактивной форме.
6. Использование соединительной ткани по п. 5 для изготовления биопротезных заменителей и/или частей биопротезных заменителей, которые уже приготовлены, для использования в клинической практике лечения человека и животных.
7. Набор для реализации способа инактивации антигена альфа-Gal в биологических тканях по п. 1, отличающийся тем, что он содержит в себе по меньшей мере:
- один или более контейнеров, содержащий буфер, в котором должна быть растворена кофейная кислота, дубильная кислота и/или гидрокситирозол;
- один или более контейнеров, содержащий кофейную кислоту, дубильную кислоту и/или гидрокситирозол в виде порошка, подлежащего добавлению в буфер;
- один или более контейнеров, содержащий промывочные буферные растворы;
- брошюра-инструкция, в которой содержится описание сроков и способов применения процедуры.
Авторы
Даты
2021-08-30—Публикация
2016-11-25—Подача