СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ РАДИОСЕНСИБИЛИЗИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2022 года по МПК A61K31/375 A61K31/66 C07D307/62 A61N5/10 A61P35/00 

Изобретение относится к области медицинской химии и онкологии, а именно к средствам, обладающим радиосенсибилизирующей активностью, и может быть использовано для лучевой терапии в лечении онкозаболеваний.

В настоящее время лучевая терапия является важным разделом терапии онкозаболеваний и предусматривает селективное облучение опухоли с минимальным воздействием на окружающие нормальные ткани. Перспективным подходом к повышению эффективности и уменьшению побочных эффектов лучевой терапии опухолей является повышение радиочувствительности злокачественных клеток с помощью новых радиосенсибилизаторов.

Известно применение моно-β-(2'-метил-5'-нитромидазолил-1')-этилового эфира янтарной кислоты в качестве средства, обладающего радиосенсибилизирующим действием на гипоксические клетки опухоли при лучевой терапии злокачественных заболеваний [RU 2052991 C1, МПК 6 A61K 31/41, 31/415, опубл. 27.01.1996].

Известно применение проксифеина в качестве радиосенсибилизирующего средства для комбинированного лечения онкологических заболеваний [SU 1826184 A1, МПК A61K 31/52 (1998.06), A61P 35/00 (1998.06), опубл. 1998.06.27].

Известно применение аскорбата лития в качестве радиосенсибилизирующего средства [RU 2720455 C1, МПК A61K 31/375 (2006.01), A61K 41/00 (2006.01), A61P 35/00 (2006.01), опубл. 30.04.2020].

Техническим результатом заявленного изобретения является расширение арсенала средств, обладающих радиосенсибилизирующими свойствами.

Технический результат достигается применением трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты с общей формулой Li₃C₆H₆O₉P в качестве радиосенсибилизирующего средства.

Трилитиевая соль фосфо-аскорбиновой кислоты является водорастворимым соединением.

На фиг. 1 показана схема этапов получения заявленного соединения

На фиг. 2 представлены результаты оценки радиосенсибилизирующих свойств трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1. Способ получения заявляемого соединения.

1 г аскорбиновой кислоты сушили в вакууме в течение 30 минут, колбу заполнили азотом, добавили 8 мл диоксана и 2,9 мл 2,2-диметоксипропана. Затем добавили 10 мкл трифторуксусной кислоты. Подключили обратный холодильник и кипятили в течение 2 часов. Реакционную массу охладили, добавили 15 мл петролейного эфира, отфильтровали полученный осадок и промыли петролейным эфиром. Получили белый порошок 4,6-ацетонида аскорбиновой кислоты, который поместили в круглодонную колбу объемом 100 мл. Заполнили колбу азотом, добавили 2 мл пиридина и 8,8 мл дистиллированной воды, перемешали. Полученную смесь охладили до -5°C, добавили 1 мл 10 М раствора KOH. Проверили рН полученного раствора (должен быть равен 13-14). Добавляли по каплям в течение 30 мин 0,6 мл свежеперегнанной хлорокиси фосфора (POCl₃). При прибавлении каждые 5 минут проверяли рН раствора. При отклонении рН ниже 12 добавляли 10 М раствора KOH до достижения рН 13-14. По окончании прибавления всего объема хлорокиси фосфора, раствор перемешивали в течение10 минут, затем добавили 5 мл воды и катионит КУ-2-8 до рН 1-2. Полученный раствор отфильтровали от катионита. Катионит промыли 200 мл воды. К полученному раствору добавили оксид магния MgO до рН 8, перемешивали в течение 30 мин, затем отфильтровали и промыли осадок 150 мл воды. Водный раствор упарили под вакуумом, добавили 30 мл этилового спирта. Выпавший осадок отфильтровали, промыли 20 мл спирта, сушили на воздухе в течение 2 часов, затем растворили в 30 мл воды, добавили катионит КУ-2-8 до рН 1, отфильтровали от катионита, катионит промыли 50 мл воды. Добавили 1М раствор гидроксида лития в воде до рН 7, после чего упарили воду. К остатку добавили 30 мл этилового спирта, выпавший осадок отфильтровали и высушили на воздухе.

Выход трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты составил 0,866 г (68%).

Элементный анализ показал состав C - 23.214, H - 2.699 2.770, что соответствует моногидрату трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты. Для соединения получен ИК спектр (KBr), ν_max, см^-1: 2800-3800 (ш), 1729, 1586, 1405, 1117, 996. ЯМР ¹H спектр (400 MHz, D₂O, δ, ppm): 3.66 (м, 2H), 3.98 (дд, 1H, J 3.5, J 9.6 Гц), 4.45 (с, 1H). ЯМР ¹³C спектр (101 MHz, D₂O, d, ppm): 63.4, 70.4, 79.3, 113.3, 113.4, 178.4.

Пример 2. Оценка радиосенсибилизирующей активности заявляемого соединения.

Исследование радиосенсибилизирующих свойств трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты проводили до и после лучевого воздействия по уровню жизнеспособности опухолевой клеточной культуры.

Готовили рабочий раствор препарата, для чего растворили 22 мг трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты в 5 мл физиологического раствора. В качестве тестовой клеточной линии использовали культуру клеток Jurkat (суспензионная опухолевая линия Т-лимфобластной лейкемии человека) в среде RPMI 1640, с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиков. Суспензию клеток в концентрации 500 тыс. кл/мл разливали в стерильные пробирки Эппендорфа (1,5 мл) по 975 мкл. Далее добавляли 25 мкл раствора трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты в физиологическом растворе, получая конечную концентрацию препарата в среде 1,2 ммоль/л, что соответствует установленной терапевтической концентрации лития. В контрольные образцы вносили 25 мкл физиологического раствора. Клетки выдерживали 60 минут в СО₂ инкубаторе при 37°С в среде 5% углекислого газа. Далее проводили облучение на рентгеновской установке с интенсивностью 20 мГр/сек в суммарной дозе 5 Гр. После чего клетки переносили в 96-луночный планшет и инкубировали в течение 48 часов при 37°С в среде 5% углекислого газа. Для учета результатов проводили определение уровня жизнеспособных клеток и мертвых клеток перед облучением и через 24 и 48 часов после облучения.

Состояние клеток учитывали методом проточной цитофлуориметрии, оценивая количество жизнеспособных клеток, погибших клеток и апоптотических клеток с использованием набора флуоресцентных красителей, набор Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit, (Abcam, Великобритания) на цитометре «CytoFlex» (Beckman Coulter, США). Для этого клетки извлекали из планшета, осаждали центрифугированием (5 мин, 200g) и ресуспендировали в красящем буфере, содержащем смесь аннексин V - FITC и пропидий иодид. Далее цитофлуометрически подсчитывали живые клетки и мертвые или погибающие клетки в состоянии апоптоза.

Результаты определения уровня жизнеспособности культуры клеток Jurkat через 24 и 48 часов после лучевого воздействия в дозе 5 Гр с применением и без применения трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты представлены на фиг. 2. Процент жизнеспособных клеток после лучевого воздействия в дозе 5 Гр при инкубации с 1,2 ммоль/л трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты был менее 3% уже через 24 часа и менее 1% через 48 часов, что статистически значимо ниже по сравнению с облучением без заявляемого соединения, где выживаемость была 36% популяции (p<0,001).

Изобретение относится к применению трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты с формулой Li₃C₆H₆O₉P в качестве радиосенсибилизирующего средства, которое может быть использовано в лечении онкозаболеваний лучевой терапией для повышения радиочувствительности злокачественных клеток. Технический результат: расширение арсенала средств, обладающих радиосенсибилизирующей активностью. 2 ил., 2 пр.

Применение трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты с общей формулой Li₃C₆H₆O₉P в качестве радиосенсибилизирующего средства.