СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ РАДИОСЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2025 года по МПК A61K31/555 A61P35/00 

Изобретение относится к области онкологии, в частности к радиотерапии и касается веществ, обладающих радиосенсибилизирующими свойствами, которые могут быть использованы для сочетанной терапии опухолей.

Одним из подходов к повышению эффективности и минимизации побочных реакций лучевой терапии является повышение радиочувствительности опухолей, в частности за счет фармакологического усиления терапевтического воздействия ионизирующего излучения.

Известно применение трилитиевой соли фосфо-аскорбиновой кислоты с общей формулой Li₃C₆H₆O₉P в качестве радиосенсибилизирующего средства [RU 2763884 C1, МПК (2006.01) A61K 31/375, A61K 31/66, C07D 307/62, A61N 5/10, A61P 35/00, опубл. 11.01.2022].

Известно радиосенсибилизирующее средство [RU 2720455 С1, МПК (2006.01) А61K 31/375, А61K 41/00, А61Р 35/00, опубл. 30.04.2020], которое представляет собой аскорбат лития с формулой LiС₆Н₇О₆.

Однако, данное средство быстро окисляется в водных растворах, что значительно снижает эффективность радиосенсибилизации.

Техническим результатом заявленного изобретения является расширение арсенала радиосенсибилизирующих средств.

Технический результат достигается применением бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида в качестве средства, обладающего радиосенсибилизирующей активностью.

Бисимидазол-(1,10)-фенатролин меди (II) дихлорид содержит во внутренней сфере две молекулы имидазола (Im) и бидентатно-связанную молекулу 1,10-фенатролина (Phen) во внешней - Сl₂. Данное вещество получают путем взаимодействия CuCl₂ в спиртовом растворе с 1,10-фенатролином и имидазолом при мольном соотношении компонентов 1:1:2.

Бисимидазол-(1,10)-фенатролин меди (II) дихлорид хорошо растворим в воде, обладает антибактериальной и антибластической активностью [RU 2190616 C1, МПК (2000.01) C07F 1/08, A61K 31/4745, A61P 35/00, опубл. 10.10.2002], а также наличием иммунодепрессивной активности [RU 2448696 C1, МПК (2006.01) A61K 31/30, A61K 31/4178, A61K 31/473, A61P 37/06, опубл. 27.04.2012].

Новое свойство бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида было выявлено при дополнительных исследованиях.

На фиг. 1 показаны результаты оценки радиосенсибилизирующей активности бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида на клетках линии рака яичника SKOV-3 через 72 часа после рентгеновского облучения в поглощенной дозе 3 Гр.

На фиг. 2 показаны результаты оценки радиосенсибилизирующей активности бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида на клетках линии колоректального рака HCT-116 через 72 часа после рентгеновского облучения в поглощенной дозе 3 Гр.

Исследование радиосенсибилизирующих свойств бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида оценивали до и после лучевого воздействия по уровню жизнеспособности стандартизированных опухолевых клеточных культур рака яичника линии SKOV-3 и колоректального рака линии HCT-116. Жизнеспособность клеток определяли с помощью стандартного МТТ-теста.

Пример 1.

Готовили рабочий раствор (0,2 мг/мл) для чего растворили 2,0 мг бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида в 10 мл физиологического раствора. В качестве объекта воздействия использовали клетки линии рака яичника SKOV-3 в среде DMEM, с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиков (пенициллин-стрептомицин). Суспензию клеток в концентрации 50 тыс. кл/мл вносили в лунки 96-луночного планшета по 100 мкл в лунку. Далее инкубировали 24 часа в СО₂-инкубаторе при 37°С в среде 5% углекислого газа. Приготовленный рабочий раствор вносили по 5,0 мкл или 0,5 мкл в лунку, получая конечную концентрацию заявленного соединения в среде 0,01 или 0,001 мг/мл соответственно. В контрольные образцы вносили соответствующие объемы физиологического раствора. Клетки выдерживали 60 минут в инкубаторе при 37°С в 5% СО₂. Далее экспериментальные планшеты с клетками облучали на рентгеновской установке с интенсивностью 20 мГр/сек в суммарной поглощенной дозе 3 Гр. После облучения все планшеты, включая контрольные, инкубировали в течение 72 часов при 37°С в среде 5% углекислого газа. Для учета результатов проводили определение уровня жизнеспособности культуры через 72 часа после облучения с помощью МТТ-теста. Для этого среду из планшетов удаляли и в лунки вносили раствор МТТ 0,45 мг/мл, далее инкубировали при 37°С, в 5% СО₂ в течение 4 часов. Затем среду аспирировали и в лунки вносили 100 мкл диметилсульфоксида (ДМСО). Далее измеряли оптическую плотность образцов при длине волны 570 нм на спектрофотометре Multiscan FS (ThermoFisher). По полученным значениям оптической плотности рассчитывали жизнеспособность в процентах от контрольной группы без облучения и использования заявленного средства (взятого за 100%).

Процент жизнеспособных клеток через 72 часа после рентгеновского облучения в поглощенной дозе 3 Гр составил 83±5% от контрольной группы, при этом применение заявленного средства привело к снижению жизнеспособных клеток до 11±2% и 36±5% для концентраций 0,01 и 0,001 мг/мл соответственно (фиг. 1) Воздействие заявленного средства в сочетании с облучением статистически значимо уменьшило выживаемость опухолевых клеток (p<0,001).

Пример 2.

Готовили рабочий раствор аналогично примеру 1. В качестве объекта воздействия использовали клетки линии колоректального рака HCT-116 в среде DMEM, с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиков (пенициллин-стрептомицин). Суспензию клеток в концентрации 50 тыс. кл/мл вносили в лунки 96-луночного планшета по 100 мкл в лунку. Далее инкубировали 24 часа в СО₂-инкубаторе при 37°С в среде 5% углекислого газа. После чего вносили заявленное средство из рабочего раствора по 5,0 мкл или 0,5 мкл в лунку, получая конечную концентрацию в среде 0,01 или 0,001 мг/мл соответственно. В контрольные образцы вносили соответствующие объемы физиологического раствора. Клетки обрабатывали аналогично примеру 1. Для учета результатов через 72 часа после облучения проводили МТТ-тест по процедуре аналогичной примеру 1.

Процент жизнеспособных клеток после лучевого воздействия в дозе 3 Гр при инкубации с 0,01-0,001 мг/мл бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида составил 7±2% и 21±5% (фиг. 2), что статистически значимо ниже параметров жизнеспособности группы облучения без заявленного средства и контрольной группы (p<0,001).

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, а именно к применению бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида, указанной ниже формулы, в качестве средства, обладающего радиосенсибилизирующей активностью. Технический результат изобретения заключается в расширении арсенала средств, обладающих радиосенсибилизирующей активностью. 2 ил., 2 пр.

Применение бисимидазол-(1,10)-фенантролин меди (II) дихлорида формулы

в качестве средства, обладающего радиосенсибилизирующей активностью.