Способ оценки содержания меди в печени овец Российский патент 2022 года по МПК G01N33/53 

Предлагаемое изобретение относится к животноводству, экологии, ветеринарии и может быть использовано в качестве теста на степень концентрации меди в печени овец.

Медь является жизненно важным микроэлементом, играет роль в регуляции окислительно-восстановительных, нейроэндокринных процессах, перекисном окислении липидов, а также в формировании соединительной ткани и кроветворении. Также медь выступает в качестве простетического элемента, необратимо связанного с определенными белками. В организме должно быть достаточно данного микроэлемента в связи с его включением в специфические апоферменты для обеспечения синтеза этих белков.

Дефицит меди встречается при нефротическом синдроме, нарушении всасывания в тонком отделе кишечника, состояниях, сопровождающихся повышенной экскрецией или сниженным синтезом церулоплазмина. Дефицит меди отрицательно сказывается на кроветворении, вызывая анемию, и лейкопению. При высокой концентрации меди происходит угнетение активности цитохромоксидазы и аминоксидазы (Авцын П.А. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология / П.А. Авцын, А.А Жаворонков, М.А Риш, Л.С. Строчкова. - М.: Медицина, 1991. - 96 с).

Необходимо определять и контролировать уровень меди в организме животных, так как ее дисбаланс приводит к нарушению гомеостаза организма, что в свою очередь будет сказываться на качестве получаемой продукции.

Известно, что определить содержание меди в мышечной ткани рыбы можно по уровню Си и/или Мп в чешуе (Патент на изобретение RU 2555518 С1. 10.07.2015. Заявка №2014131162/15 от 28.07.2014).

Для крупного рогатого скота и свиней разработаны методы прижизненного определения тяжелых металлов в органах и тканях с использованием волоса (Патент на изобретение RU 2426119 С1. 10.08.2011). Также установлено, что по содержанию Mn в копытном роге свиней можно прижизненно определить концентрацию Cd в почках, мышечной ткани, печени (патент РФ №2342659). А по содержанию Pb и Cd в щетине можно определить уровень Pb в печени (патент РФ №2285990).

Наличие меди в печени овец можно определить путем установления концентрации тестостерона или эстрадиола в сыворотке крови методом ИФА и последующего расчета уравнения регрессии:

у=0,361х+1,05, где

у - концентрация меди в печени (мг/кг),

х - содержание тестостерона в сыворотке крови (нмоль/л), или

у=0,230х+0,79, где

у - концентрация меди в печени (мг/кг),

х - содержание эстрадиола в сыворотке крови (пмоль/л).

Заявленным способом оценивается уровень аккумуляции меди в печени овец романовской породы. Поставленная задача достигается с помощью определения тестостерона или эстрадиола в сыворотке крови с последующим расчетом уравнения регрессии.

Предложенный способ отличается от ранее существующих тем, что концентрация Си в печени овец можно определить прижизненно, а не посмертно, используя в качестве биомаркера уровень тестостерона или эстрадиола в сыворотке крови. При этом обеспечивается точность и простота выполнения метода, а также малая инвазивность.

Эстрадиол и тестостерон определяют методом ИФА. В соответствующие лунки вносилось по 25-50 мкл калибровочной пробы, контрольной сыворотки и исследуемых проб. Во все лунки вносилось по 100-150 мкл конъюгата. Планшет инкубировался в течение 90-120 минут при температуре +37°С (500-800 об/мин). Затем осуществлялась промывка лунок 4-5 раз по 250-300 мкл отмывочного раствора. Во все лунки вносилось 100 мкл раствора ТМБ на 2-3 минуты. Планшет инкубировался в темноте при +37°С 10-20 минут. В конце исследования во все лунки вносилось по 100 мкл стоп-реагент и проводилось измерение оптической плотности в течение 15 минут при длине волны 450 нм.

Пробы печени были взяты у баранчиков романовской породы в возрасте 6-9 мес.

Данные содержании гормонов в сыворотке крови и меди в печени представлены в табл. 1.

Тестостерон играет роль в репродуктивной функции, а также оказывает анаболическое действие, т.е. стимулирует синтез белка. Кроме того, тестостерон может усиливать образование эритроцитов под действием эритропоэтина, чем объясняется большее количество эритроцитов в крови у самцов. Андрогенная активность тестостерона обеспечивает рост и функцию акцессорных органов репродуктивной системы - полового члена, мошонки, простаты и семенных пузырьков. Эстрогены, в т.ч. эстрадиол, влияют на обмен углеводов, белков и пуринов, активизируют дезоксирибонуклеазу, стимулируют остеобласты, улучшают реакции цикла лимонной кислоты. Они существенно изменяют функцию размножения, способствуют развитию молочной железы, понижают активность гипофиза (Д.Ю. Клинский, А.С. Сулайманов и др.). Под влиянием женского полового гормона у животных осуществляется регуляция полового цикла.

В табл. 2 показано, что между изученными показателями имеются средние положительные корреляции. Следовательно, при наличии связей между уровнями гормонов в сыворотке крови и концентрацией меди в печени, можно рассчитать уравнения регрессии. Это позволит прогнозировать в печени содержание меди, установив концентрацию одного из двух гормонов в сыворотке крови на выбор.

Таким образом, предложенные уравнения регрессии позволяют провести прижизненную оценку овец по содержанию меди в печени, используя при этом только пробы сыворотки крови, в которой определяют содержание гормонов тестостерона или эстрадиола.

Изобретение относится к областям животноводства, ветеринарии и экологии и может быть использовано в качестве прижизненного неинвазивного теста оценки степени содержания меди в печени овец. Способ определения концентрации меди в печени овец включает анализ субстрата в виде сыворотки крови. При этом в сыворотке крови определяют концентрацию гормона тестостерона или эстрадиола. Далее рассчитывают уравнения регрессии: у=0,361х+1,05, где у - содержание Cu, мг/кг, в печени, x - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л, или у=0,230х+0,79, где у - содержание Cu (мг/кг) в печени, х - содержание эстрадиола в сыворотке крови, пмоль/л. Изобретение обеспечивает достаточную точность прижизненного определения меди в печени овец. 2 табл.

Способ оценки содержания меди в печени овец, включающий анализ биосубстрата в виде сыворотки крови, отличающийся тем, что определяют в сыворотке крови концентрацию гормонов на выбор, тестостерона или эстрадиола методом ИФА, затем рассчитывают уравнение регрессии и определяют уровень меди в печени:

у=0,361х+1,05, где

у - содержание Cu, мг/кг, в печени,

х - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л, или

у=0,230х+0,79, где

у - содержание Cu, мг/кг, в печени,

х - содержание эстрадиола в сыворотке крови, пмоль/л.