Перекрестные ссылки на родственные заявки
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США No 62/265168, поданной 9 декабря 2015, Runyon et al., под названием ʺImproved Apelin Receptor (APJ) Agonists and Uses Thereofʺ и предварительной заявки на патент США No 62/265177, поданной 9 декабря 2015, Runyon et al., под названием ʺDifluoro Apelin Receptor (APJ) Agonists and Uses Thereofʺ, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
1. Область
[0002] Настоящее изобретение относится в целом к раскрытию агонистов апелинового рецептора (APJ) и применению таких агонистов.
2. Уровень техники
2.1. Введение: Апелин и апелиновый рецептор (APJ)
[0003] Апелиновый рецептор (APJ) был клонирован в 1993 году как орфановый G-белок сопряженный рецептор (GPCR). Ген APJ человека расположен на длинном плече хромосомы 11 и кодирует рецептор, связанный с G-белком, из 377 аминокислот. Ген для APJ обозначался как рецептор ангиотензина 1 (AGTRL1) из-за сходства последовательностей между двумя рецепторами. Carpene et al., J Physiol Biochem. 2007; 63(4):359-373. Однако ни один из известных пептидергических лигандов для рецепторов ангиотензина, включая ангиотензин, не активирует APJ. APJ оставался орфановым GPCR до 1998 года, когда пептид апелина был идентифицирован как его эндогенный лиганд. Lee et al., J Neurochem. 2000; 74(1):34-41; Habata et al., Biochim Biophys Acta. 1999; 1452(1):25-35.
[0004] За эти годы апелин и APJ стали важным регулятором различных физиологических процессов. Оба апелин и APJ экспрессируются в центральной нервной системе (ЦНС) и периферически в ряде тканей. Экспрессия APJ отмечена в сосудистой сети некоторых органов и является мощным регулятором связанных процессов, включая ангиогенез и вазоконстрикцию. Cobellis et al. сообщают об увеличении уровней экспрессии как апелина, так и рецептора APJ при беременностях, осложненных преэклампсией. Cobellis et al., Histol Histopathol. 2007; 22(1):1-8. APJ также экспрессируются в аваскулярных типах клеток в сердце, печени и ЦНС, где его основная роль в настоящее время изучается. Medhurst et al., J Neurochem. 2003; 84(5):1162-1172. Апелин и APJ часто совместно локализуются внутри одного органа, что предполагает аутокринную регуляцию рецептора его лигандом. Однако, апелин с тех пор был обнаружен в крови, из чего можно сделать вывод, что также возможна одновременная паракринная регуляция рецептора. Считается, что система апелин-APJ является регулятором различных физиологических функций и, как полагают, играет важную роль в терморегуляции, иммунитете, метаболизме глюкозы, ангиогенезе, гомеостаза жидкости, сердечной деятельностиь, функции печени и функции почек. Ladeiras-Lopes et al., Arq Bras Cardiol. 2008; 90(5):343-349. APJ также действует как корецептор при ВИЧ-инфекции. O'Donnell et al., J Neurochem. 2007; 102(6):1905-1917; Zou et al., FEBS Lett. 2000; 473(1):15-18.
[0005] Экспрессия апелина и APJ либо активируется, либо подавляется в различных патофизиологических условиях. В частности, APJ, по-видимому, является новой мишенью для лечения сердечно-сосудистой недостаточности, фиброза печени, рака, ангиопатий, панкреатита и в качестве профилактики ВИЧ-инфекции. В 2011 Andersen et al. рассмотрел апелин и APJ в качестве перспективы для терапевтического применения при легочной гипертензии и легочной артериальной гипертензии (PAH). Andersen et al. Pulm. Circ. 2011; 1(3) 334-346.
[0006] К сожалению, низкомолекулярные лиганды APJ, обладающие подходящими фармакологическими свойствами, отсутствуют. Сообщается, что на сегодняшний день известно несколько систем непептидных лигандов. Iturrioz et al. сообщают о соединениях, которые содержат полициклические флуорофоры, такие как лиссамин, что делает их непригодными для фармацевтического использования. Iturrioz et al., FASEB J. 2010; 24:1506-1517; EP 1903052 (Llorens-Cortes et al.). В публикации патентной заявки США 2014/0094450 (Hachtel et al.) описаны производные амида бензоимидазол-карбоновой кислоты в качестве модуляторов рецептора APJ.
[0007] Соответственно, существует потребность в низкомолекулярных агонистах APJ.
3. Сущность изобретения
[0008] Настоящее изобретение предоставляет соединение, представленное формулой I:
или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство или соль пролекарства,
где R1 представлен формулой:
где 
представляет собой моноциклическую арильную или гетероарильную группу; каждый А независимо представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкокси, C1-8 алкоксиарил, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -CF3, -(CH2)xNR7R8, -CN, -CONR7R8, -COR7, -CO2(CH2)xNR7R8, -CO2R7, галоген, гидроксил, -N3, -NHCOR7, -NHSO2C1-8 алкил, -NHCO2C1-8 алкил, -NO2, -NR7R8, -O(CH2)xNR7R8, -O(CH2)xCO2R7, -OCOC1-8 алкил, -OCO(CH2)xNR7R8, -SF5, -SO2NR7R8, -SO(1-3)R7, -SR7, или тетразолон; R7 и R8 независимо представляют собой C1-8 алкокси, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилтетразол-5-он, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCONHR9, -(CH2)xCOR9, -(CH2)xCO2R9, H, или гетероарил; или R7 и R8 вместе образуют 3-9-членное кольцо, которое может содержать один или несколько гетероатомов; или R7 и R8 вместе образуют 5-8-членное азотсодержащее кольцо с одной или несколькими карбонильными группами; n равен 1, 2, 3, 4 или 5; R2 представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил, гетероарил или замещенный арил; R4, R5 и R6 независимо представляют собой адамантанил, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил)-CO2R7, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C2-4 алкилгетероциклоалкил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, C3-8 циклоалкил-CO2R7, -(CH2)xNR7R8, -(CH2)xOR7, -(CH2)xNR9COR7, -(CH2)xNR9SO2R7, -(CH2)xN R9CO2R7, -(CH2)xNHCOR7, -(CH2)xNHSO2R7, -(CH2)xNHCO2R7, -(CH2)xCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yCO2R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yR9, -(CH2)xCOR7, -(CH2)xCO2R7, -(CH2)xSO2NR7(CH2)yR9, -CHR7COR9, -CHR7CONHCHR8COR9, -CONR7R8, -CONR7(CH2)xCO2R8, -CONR7CHR8CO2R9, -CO2R9, H или -NHCO2R7, -(CH2)x SO2NR7R8; -SF5; или R4 и R5 вместе образуют 4-8-членное кольцо, которое может быть замещено одним или несколькими гетероатомами; или R4 и R5 вместе образуют 5-8-членное азотсодержащее кольцо с одной или несколькими карбонильными группами; где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора; R9 представляет собой арил, C1-8 алкокси, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, H, гетероарил или гидроксил; каждый х независимо равен 0-8; и каждый y независимо равен 1-8.
[0009] Изобретение также предоставляет соединение, представленное формулой II:
или его фармацевтически приемлемую соль, пролекарство или соль пролекарства,
где R1 представлен формулой: 
где 
представляет собой моноциклическую гетероарильную группу; каждый А независимо представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкокси, C1-8 алкоксиарил, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -CF3, -(CH2)xNR7R8, -CN, -CONR7R8, -COR7, -CO2(CH2)xNR7R8, -CO2R7, галоген, гидроксил, -N3, -NHCOR7, -NHSO2C1-8 алкил, -NHCO2C1-8 алкил, -NO2, -NR7R8, -O(CH2)xNR7R8, -O(CH2)xCO2R7, -OCOC1-8 алкил, -OCO(CH2)xNR7R8, -SF5, -SO2NR7R8, -SO(1-3)R7 или -SR7; каждый R7 и R8 независимо представляют собой C1-8 алкокси, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCONHR9, -(CH2)xCOR9, -(CH2)xCO2R9, H, или гетероарил; или R7 и R8 вместе образуют 3-9-членную циклоалкильную или гетероциклоалкильную группу; n равен 1, 2, 3, 4 или 5; каждый х независимо равен 0-8;
R2 присутствует или отсутствует, и если присутствует, представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил, гетероарил или замещенный арил;
R3 присутствует или отсутствует, отсутствует, если R2 присутствует, и если присутствует представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил или замещенный арил;
R4, R5, и R6 независимо представляют собой адамантанил, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил)-CO2R7, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C2-4 алкил C6 гетероциклоалкил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), C3-8 алкинил, C3-9 циклоалкил, C3-8 циклоалкил-CO2R7, -(CH2)xNR7R8, -(CH2)xOR7, -(CH2)xNHCOR7, -(CH2)xNHSO2R7, -(CH2)xNHCO2R7, -(CH2)xCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yCO2R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yCONR8R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yR9, -(CH2)xCONR7(CH2)ySO2R9, -(CH2)xCOR7, -(CH2)xCO2R7, -(CH2)xSO2NR7(CH2)yR9,-CHR7COR9, -CHR7CONHCHR8COR9, -CONR7R8, -CONR7(CH2)xCO2R8, -CONR7CHR8CO2R9, -CO2R9, H, -NHCO2R7, -SF5, -SO2NR7R8, или R4 и R5 вместе образуют 4-9-членную циклоалкильную или гетероциклоалкильную группу; где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора; R9 представляет собой арил, C1-8 алкокси, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, H, гетероарил или гидроксил;
и каждый y независимо равен 1-8.
[0010] Кроме того, изобретение предоставляет соединение по пар. [0008], представленное формулой III
где n равен 1, 2 или 3; каждый А представляет собой независимо C1-C5 алкокси, C1-C5 алкил, C3-8 циклоалкил, галоген или -SF5; R2 представляет собой C3-C6 алкил, C1-3 алкил (C3-6 циклоалкил) или C3-C7 циклоалкил;
R4 представляет собой арил, C1-4 алкил, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилгетероарил, C2-4 алкил C6 гетероциклоалкил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), или гетероарил; где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора; и
R10 представляет собой арил, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C3-8 циклоалкил, или гетероарил.
[0011] Изобретение предоставляет соединение по любому из пар.[0008]-[0010], где каждый А представляет собой независимо C1-C3 алкокси, C1-C3 алкил, хлор или фтор. В одном варианте осуществления, каждый А представляет собой независимо фторзамещенный C1-C3 алкокси или фторзамещенный C1-C3 алкил.
[0012] Изобретение предоставляет соединение по любому из пар. [0008]-[0011], где R2 представляет собой -C4H9, -C5H11, -cC4H8 или -cC5H10.
[0013] Изобретение предоставляет соединение по любому из пар. [0008]-[0012], где группа R4 содержит азот и два или несколько атомов фтора.
[0014] Изобретение предоставляет соединение по любому из пар. [0008]-[0013], где R4 представляет собой C1-8 алкил(арил), C1-4 алкилциклоалкил, C1-8 алкилгетероарил, C1-4 алкилгетероциклоалкил, C2-8 алкенил(арил), или C2-8 алкенил(гетероарил). Циклоалкильная группа в C1-4 алкилциклоалкиле может быть бициклоалкильной или спироалкильной группой, или гетероциклоалкильная группа в C1-4 алкилциклоалкиле может быть гетеробициклоалкильной или гетероспироалкильной группой. Более конкретно, R4 может представлять собой C1-8 алкил(дифторарил), C1-4 алкилдифторциклоалкил, C1-8 алкилдифторгетероарил, C1-4 алкилдифторгетероциклоалкил, C2-8 алкенил(дифторарил) или C2-8 алкенил(дифторгетероарил).
[0015] Изобретение также предоставляет соединение по любому из пар. [0008]-[0014], где R8 представляет собой гетероарил. В частности, R8 может представлять собой оксадиазол, оксазол, н-метилтиазол, тетразол, тиазол или триазол.
[0016] Также предлагаются фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество соединения по любому из пар. [0008]-[0014]. Терапевтически эффективным количеством может быть количество, эффективное для снижения артериального давления. Альтернативно, терапевтически эффективное количество представляет собой количество, эффективное для лечения астмы, кардиомиопатии, диабета, дислипидемии, гипертензии, воспаления, заболевания печени, метаболического заболевания, нейродегенеративного заболевания, ожирения, преэклампсии или почечной дисфункции.
[0017] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению в лечении заболевания, связанного с рецептором апелина (APJ), соединения формулы I:
или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства или соли пролекарства, где R1 представлен формулой:
где 
представляет собой моноциклическую арильную или гетероарильную группу; каждый А независимо представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкокси, C1-8 алкоксиарил, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -CF3, -(CH2)xNR7R8, -CN, -CONR7R8, -COR7, -CO2(CH2)xNR7R8, -CO2R7, галоген, гидроксил, -N3, -NHCOR7, -NHSO2C1-8 алкил, -NHCO2C1-8 алкил, -NO2, -NR7R8, -O(CH2)xNR7R8, -O(CH2)xCO2R7, -OCOC1-8 алкил, -OCO(CH2)xNR7R8, -SF5, -SO2NR7R8, -SO(1-3)R7, -SR7, или тетразолон; R7 и R8 независимо представляют собой C1-8 алкокси, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилтетразол-5-он, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCONHR9, -(CH2)xCOR9, -(CH2)xCO2R9, H или гетероарил; или R7 и R8 вместе образуют 3-9-членное кольцо, которое может содержать один или несколько гетероатомов; или R7 и R8 вместе образуют 5-8-членное азотсодержащее кольцо с одной или несколькими карбонильными группами; n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
R2 представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил, гетероарил или замещенный арил;
R4, R5 и R6 независимо представляют собой адамантанил, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил)-CO2R7, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C2-4 алкилгетероциклоалкил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, C3-8 циклоалкил-CO2R7, -(CH2)xNR7R8, -(CH2)xOR7, -(CH2)xNR9COR7, -(CH2)xNR9SO2R7, -(CH2)xN R9CO2R7, -(CH2)xNHCOR7, -(CH2)xNHSO2R7, -(CH2)xNHCO2R7, -(CH2)xCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yCO2R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yR9, -(CH2)xCOR7, -(CH2)xCO2R7, -(CH2)xSO2NR7(CH2)yR9,-CHR7COR9, -CHR7CONHCHR8COR9, -CONR7R8, -CONR7(CH2)xCO2R8, -CONR7CHR8CO2R9, -CO2R9, H или -NHCO2R7, -(CH2)x SO2NR7R8; -SF5; или R4 и R5 вместе образуют 4-8-членное кольцо, которое может быть замещено одним или несколькими гетероатомами; или R4 и R5 вместе образуют 5-8-членное азотсодержащее кольцо с одной или несколькими карбонильными группами;
где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора;
R9 представляет собой арил, C1-8 алкокси, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, H, гетероарил или гидроксил;
каждый х независимо равен 0-8; и каждый y независимо равен 1-8.
[0018] В еще одном варианте осуществления изобретение относится к применению в лечении заболевания, связанного с рецептором апелина (APJ), соединения, представленного формулой II:
или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства или соли пролекарства,
где R1 представлен формулой: 
где 
представляет собой моноциклическую гетероарильную группу;
каждый А независимо представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкокси, C1-8 алкоксиарил, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -CF3, -(CH2)xNR7R8, -CN, -CONR7R8, -COR7, -CO2(CH2)xNR7R8, -CO2R7, галоген, гидроксил, -N3, -NHCOR7, -NHSO2C1-8 алкил, -NHCO2C1-8 алкил, -NO2, -NR7R8, -O(CH2)xNR7R8, -O(CH2)xCO2R7, -OCOC1-8 алкил, -OCO(CH2)xNR7R8, -SF5, -SO2NR7R8, -SO(1-3)R7 или -SR7; каждый R7 и R8 независимо представляют собой C1-8 алкокси, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCONHR9, -(CH2)xCOR9, -(CH2)xCO2R9, H или гетероарил; или R7 и R8 вместе образуют 3-9-членную циклоалкильную или гетероциклоалкильную группу; n равен 1, 2, 3, 4 или 5; каждый х независимо равен 0-8;
R2 присутствует или отсутствует, и если присутствует, представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил, гетероарил или замещенный арил;
R3 присутствует или отсутствует, отсутствует, если R2 присутствует, и если присутствует представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C3-8 циклоалкил или замещенный арил;
R4, R5, и R6 независимо представляют собой адамантанил, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил)-CO2R7, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C2-4 алкил C6 гетероциклоалкил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), C3-8 алкинил, C3-9 циклоалкил, C3-8 циклоалкил-CO2R7, -(CH2)xNR7R8, -(CH2)xOR7, -(CH2)xNHCOR7, -(CH2)xNHSO2R7, -(CH2)xNHCO2R7, -(CH2)xCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yCO2R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yCONR8R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yR9, -(CH2)xCONR7(CH2)ySO2R9, -(CH2)xCOR7, -(CH2)xCO2R7, -(CH2)xSO2NR7(CH2)yR9,-CHR7COR9, -CHR7CONHCHR8COR9, -CONR7R8, -CONR7(CH2)xCO2R8, -CONR7CHR8CO2R9, -CO2R9, H, -NHCO2R7, -SF5, -SO2NR7R8, или R4 и R5 вместе образуют 4-9-членную циклоалкильную или гетероциклоалкильную группу;
где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора;
R9 представляет собой арил, C1-8 алкокси, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, H, гетероарил или гидроксил; и каждый y независимо равен 1-8.
[0019] Применение в лечении заболевания, связанного с рецептором апелина (APJ), соединения, представленного формулой III
где n равен 1, 2 или 3; каждый А представляет собой независимо C1-C5 алкокси, C1-C5 алкил, C3-8 циклоалкил, галоген или -SF5;
R2 представляет собой C3-C6 алкил, C1-3 алкил (C3-6 циклоалкил) или C3-C7 циклоалкил;
R4 представляет собой арил, C1-4 алкил, C2-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилгетероарил, C2-4 алкил C6 гетероциклоалкил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), или гетероарил;
где группа R4 замещена одним или несколькими атомами фтора; и
R10 представляет собой арил, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C3-8 циклоалкил, или гетероарил.
[0020] В другом варианте осуществления изобретение относится к применению по любому из пар. [0017]-[0019], где заболевание, связанное с рецептором апелина (APJ), представляет собой астму, кардиомиопатию, диабет, дислипидемию, гипертензию, воспаление, заболевание печени, метаболическое заболевание, нейродегенеративное заболевание, ожирение, преэклампсию или почечную дисфункцию.
[0021] В одном варианте осуществления, изобретение относится к использованию пар. [0020], дополнительно содержащему α-блокатор, ингибитор ангиотензинпревращающего фермента (ACE), блокатор ангиотензинового рецептора (ARB), β-блокатор, блокатор кальциевых каналов или диуретик для лечения заболевания, связанного с рецептором апелина (APJ).
[0022] В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой IV:
или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарству или соли пролекарства, где R1 представлен формулой:
где представляет собой моноциклическую гетероарильную группу; каждый А представляет собой независимо C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -CF3, -(CH2)xNR7R8, -CN, -CONR7R8, -COR7, -CO2(CH2)xNR7R8, -CO2R7, галоген, гидроксил, -N3, -NHCOR7, -NHSO2C1-8 алкил, -NHCO2C1-8 алкил, -NO2, -NR7R8, -O(CH2)xNR7R8, -O(CH2)xCO2R7, -OCOC1-8 алкил, -OCO(CH2)xNR7R8, -SF5, -SO2NR7R8, -SO(1-3)R7, -SR7, или тетразалон; R7 и R8 независимо представляют собой алкокси, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилимидазолил, C1-8 алкилиндолил, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCONHR9, -(CH2)xCOR9, -(CH2)xCO2R9, H, или гетероарил;
или R7 и R8 вместе образуют 3-8-членное кольцо, которое может быть замещено одним или несколькими гетероатомами;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
каждый х независимо равен 0-8;
R2 присутствует или отсутствует, и если присутствует, представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C2-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, гетероарил или замещенный арил;
R3 присутствует или отсутствует, отсутствует, если R2 присутствует, и если присутствует представляет собой C1-8 алкил, C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C2-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил или замещенный арил; при условии, что если n равно двум, оба A не являются хлором;
R4, R5, и R6 независимо представляют собой адамантанил, арил, C1-8 алкил, C1-8 алкиловый спирт, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C1-8 алкил(арил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил (C3-8 циклоалкил)-CO2R7, C1-8 алкил гуанидинил, C1-8 алкилгетероарил, C1-8 алкилимидазолил, C1-8 алкилиндолил, C1-8 алкилтетразол-5-он, C1-8 алкилтиоэфир, C1-8 алкилтиол, C2-8 алкенил, C2-8 алкенил(арил), C2-8 алкенил(гетероарил), C3-8 алкинил, C3-8 циклоалкил, C3-8 циклоалкил-CO2R7, -(CH2)xNR7R8, -(CH2)xOR7, -(CH2)xNHCOR7, -(CH2)xNHSO2R7, -(CH2)xNHCO2R7, -(CH2)xCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yCO2R9, -(CH2)xCONR7(CH2)yCONR7R8, -(CH2)xCONR7(CH2)yR9, -(CH2)xCOR7, -(CH2)xCO2R7, -(CH2)xSO2NR7(CH2)yR9, -CHR7COR9, -CHR7CONHCHR8COR9, -CONR7R8, -CONR7(CH2)xCO2R8, -CONR7CHR8CO2R9, -CO2R9, H или -NHCO2R7, -SF5, -SO2NR7R8; или R4 и R5 вместе образуют 4-8-членное кольцо, которое может быть замещено одним или несколькими гетероатомами; R9 представляет собой арил, C1-8 алкокси, C1-8 алкил, C1-8 алкил(арил), C3-8 циклоалкил, H, гетероарил или гидроксил;
каждый y независимо равен 1-8;
и Z представляет собой H2 или =O.
[0023] Композиция пар. [0022] формулы IV может включать модификации, как описано в пар. [0011]-[0015] для формул I-III. В дополнение, соединения формулы IV могут быть получены в фармацевтических композициях, как описано в пар. [0016]. Кроме того, изобретение относится к применению в лечении заболеваний, связанных с рецептором апелина (APJ), как раскрыто в настоящем описании, соединения, представленного формулой IV.
[0024] В предпочтительном варианте осуществления композиций или применений по любому из пар. [0008]-[0023], представляет собой фенил или 2- или 3-пиридил, n равен 1, группа А находится в орто-положении и представляет собой -CF3, -CF2CH3, -CH2CH3, Cl, -cC3H5, -OCF2H или -OCF3. Альтернативно, n равен 2 и A1 представляет собой -OCH3 и A2 представляет собой -OCH3 или F. Более конкретно, представляет собой
[0025] В другом предпочтительном варианте осуществления композиций или применений по любому из пар. [0008]-[0023], R2 представляет собой -CH2cC3H5, -C(CH3)2cC3H5,-cC4H7, -cC4H6(CH3)2, -CH2cC4H7, -cC5H9, -cC5H8F, -cC5H8(CH3), -cC5H7(CH3)2, -CH2cC5H9, -CH2cC5H9, -cC6H11, -CH2CH2CH3, -CH2CH(CH3)2, или -C(CH3)CH(CH3)2. В частности, R2 может представлять собой
[0026] В другом предпочтительном варианте осуществления композиций или применений по любому из пар. [0008]-[0024], R4 может представлять собой
[0027] В дополнительном предпочтительном варианте осуществления, R4 может представлять собой
[0028] Если в группе нет атомов фтора, скелеты R4 групп в пар. [0026]-[0027] могут быть модифицированы, чтобы содержать один или несколько атомов фтора путем замены одного или нескольких атомов водорода. В качестве альтернативы, если группы R4 в пар. [0026]-[0027] содержат атомы фтора, скелет может быть модифицирован для включения дополнительных фторсодержащих заместителей путем замены алифатических или ароматических водородов.
[0029] В еще одном предпочтительном варианте осуществления, R5 или R10 может представлять собой
[0030] В предпочтительных вариантах осуществления две группы в совокупности R1, R2, R4, R5 и R10 выбраны из групп, показанных в пар. [0024]-[0029]. В других предпочтительных вариантах осуществления три группы в совокупности R1, R2, R4, R5 и R10 выбраны из групп в пар. [0024]-[0029]. В еще одном варианте осуществления четыре группы в совокупности R1, R2, R4, R5 и R10 выбраны из групп в пар. [0024]-[0029].
[0031] Для соединений и применений, описанных выше, изобретение также включает биоизостеры, такие как тетразолоны и пентафторсульфанил. В частности, -CF3, -CH3, -O-CH3, или -O-CF3 или арил -CF3, -CH3, -O-CH3, или -O-CF3 могут быть заменены -SF5 или арил-SF5, соответственно. См. Alvarez et al. 2015 ACS Med Chem Let 6 1225-1230. Альтернативно, -CO2H может быть заменено тетразолоном. См. Duncton et al. 2016 Org Biomol Chem 14 9338-9342.
4. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
4.1. Определения
[0032] «Алкенил» относится к ненасыщенной разветвленной, линейной или циклической алкильной группе, имеющей по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь, полученной удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкена. Группа может находиться в Z- и E-формах (или цис- или транс-конформации) вокруг двойной(ых) связи(ей). Типичные алкенильные группы включают, но не ограничиваются ими, этенил; пропенилы, такие как проп-1-ен-1-ил, проп-1-ен-2-ил, проп-2-ен-1-ил (аллил), проп-2-ен-2-ил, циклопроп-1-ен-1-ил; циклопроп-2-ен-1-ил; бутенилы, такие как бут-1-ен-1-ил, бут-1-ен-2-ил, 2-метил-проп-1-ен-1-ил, бут-2-ен-1-ил, бут-2-ен-1-ил, бут-2-ен-2-ил, бута-1,3-диен-1-ил, бута-1,3-диен-2-ил, циклобут-1-ен-1-ил, циклобут-1-ен-3-ил, циклобута-1,3-диен-1-ил; и тому подобное. Алкенильная группа может быть замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах осуществления алкенильная группа имеет от 2 до 20 атомов углерода и в других вариантах осуществления от 2 до 8 атомов углерода.
[0033] «Алкокси» относится к радикалу -OR, где R представляет собой алкильную, циклоалкильную, арильную или гетероарильную группу, как определено в настоящем описании. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклогексилокси и тому подобное. Алкоксигруппа может быть замещенной или незамещенной.
[0034] «Алкил» относится к насыщенной, разветвленной или неразветвленной моновалентной углеводородной группе, полученной удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкана. Типичные алкильные группы включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, пропилы, такие как пропан-1-ил, пропан-2-ил и циклопропан-1-ил, бутилы, такие как бутан-1-ил, бутан-2-ил, 2-метил-пропан-1-ил, 2-метил-пропан-2-ил, циклобутан-1-ил, трет-бутил и тому подобное. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной; например, с метилом или галогеном (ами), таким как дифтор или трифтор. Алкильная группа может быть замещенной или незамещенной; например, метилом или галогеном(ами), таким как дифтор или трифтор. В некоторых вариантах осуществления алкильная группа содержит от 1 до 20 атомов углерода. Альтернативно, алкильная группа может содержать от 1 до 8 атомов углерода.
[0035] «Алкил(арил)» относится к ациклической алкильной группе, в которой один из атомов водорода, связанный с атомом углерода, обычно концевым или sp3-атомом углерода, замещен арильной группой. Типичные алкил(арил) группы включают, но не ограничиваются ими, бензил, 2-фенилэтан-1-ил, 2-фенилэтен-1-ил, нафтилметил, 2-нафтилэтан-1-ил, 2-нафтилэтен-1-ил, нафтобензил, 2-нафтофенилэтан-1-ил и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления алкил(арил) группа может представлять собой (C6-20) алкил(арил), например, алкильная группа может представлять собой (C1-10) и арильный фрагмент может представлять собой (C5-10). Алкил(арил) группа может быть замещенной или незамещенной.
[0036] «Алкинил» относится к ненасыщенной разветвленной или неразветвленной группе, имеющей по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь, полученной удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходного алкина. Типичные алкинильные группы включают, но не ограничиваются ими, этинил, пропинил, бутенил, 2-пентинил, 3-пентинил, 2-гексинил, 3-гексинил и тому подобное. Алкинильная группа может быть замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах осуществления алкинильная группа имеет от 3 до 20 атомов углерода и в других вариантах осуществления от 3 до 8 атомов углерода.
[0037] «Арил» относится к моновалентной ароматической углеводородной группе, полученной удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходной ароматической кольцевой системы. Арил включает 5- и 6-членные карбоциклические ароматические кольца, например, бензол или циклопентадиен; бициклические кольцевые системы, где по меньшей мере одно кольцо является карбоциклическим и ароматическим, например, нафталин, индан; или две ароматические кольцевые системы, например, бензилфенил, бифенил, дифенилэтан, дифенилметан. Арильная группа может быть замещенной или незамещенной, например, галогеном, таким как фтор.
[0038] "Циклоалкил" относится к насыщенной или ненасыщенной циклической алкильной группе. Где предполагается определенный уровень насыщенности, используется номенклатура «циклоалканил» или «циклоалкенил». Типичные циклоалкильные группы включают, но не ограничиваются ими, группы, производные от циклопропана, циклобутана, циклопентана, циклогексана и тому подобного. Циклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах осуществления циклоалкильная группа может представлять собой C3-10 циклоалкил, такой как, например, C6 циклоалкил или cC6H12. Циклоалкильная группа также может быть мостиковой бициклической циклоалкильной группой, конденсированной циклоалкильной группой или спироциклоалкильной группой. Неограничивающими примерами мостиковых бициклических циклоалкильных групп являются бицикло[2.2.1]гептан, бицикло[2.2.1]гексан, бицикло[2.2.2]октан. Примером конденсированной циклоалкильной группы является бицикло[4.4.0]декан или декалин. Неограничивающими примерами спироциклоалкильных групп являются спиро[3.3]гептан, спиро[4.3]октан или спиро[5.4]декан.
[0039] «Заболевание» относится к любому заболеванию, нарушению, состоянию, симптому или показанию.
[0040] «Галоген» относится к фтору, хлору, брому или йоду.
[0041] «Гетероарил» относится к одновалентной гетероароматической группе, полученной удалением одного атома водорода от одного атома исходной гетероароматической кольцевой системы. Гетероарил включает: 5-7-членные ароматические моноциклические кольца, содержащие один или несколько, например, от 1 до 4 или в некоторых вариантах от 1 до 3, гетероатомов, выбранных из N, О и S, а остальные атомы кольца являются атомами углерода; и полициклические гетероциклоалкильные кольца, содержащие один или несколько, например, от 1 до 4 или в некоторых вариантах от 1 до 3, гетероатомов, выбранных из N, О и S, где остальными атомами кольца являются атомы углерода и где по меньшей мере один гетероатом присутствует в ароматическом кольце. Гетероарильная группа может быть замещенной или незамещенной.
[0042] Например, гетероарил включает 5-7-членное гетероароматическое кольцо, конденсированное с 5-7-членным циклоалкильным кольцом и 5-7-членное гетероароматическое кольцо, конденсированное с 5-7-членным гетероциклоалкильным кольцом. Для таких конденсированных бициклических гетероарильных систем колец, где только одно из колец содержит один или более гетероатомов, точка присоединения может находиться на гетероароматическом кольце или на циклоалкильном кольце. Когда общее число атомов S и О в гетероарильной группе превышает 1, то эти гетероатомы не расположены рядом друг с другом. В некоторых вариантах общее число атомов S и О в гетероарильной группе не превышает 2. В некоторых вариантах общее число атомов S и О в ароматическом гетероцикле не превышает 1. Типичные гетероарильные группы включают, не ограничиваясь ими, группы, полученные из акридина, арсиндола, карбазола, β-карболина, хромана, хромена, циннолина, фурана, имидазола, индазола, индола, индолина, индолизина, изобензофурана, изохромена, изоиндола, изоиндолина, изохинолина, изотиазола, изоксазола, нафтиридина, оксадиазола, оксазола, перимидина, фенантридина, фенантролина, феназина, фталазина, пиперидина, птеридина, пурина, пирана, пиразина, пиразола, пиридазина, пиридина, пиримидина, пиррола, пирролизина, хиназолина, хинолина, хинолизина, хиноксалина, тетразола, тиадиазола, тиазола, тиофена, триазола, ксантена и тому подобных. В некоторых вариантах осуществления гетероарильной группой может являться 5-20 членный гетероарил, такой как, например, 5-10-членный гетероарил. В некоторых вариантах осуществления гетероарильными группами могут быть группы, полученные из тиофена, пиррола, бензотиофена, бензофурана, индола, пиридина, хинолина, имидазола, оксазола и пиразина.
[0043] «Гетероциклоалкил» относится к неароматическому моноциклическому кольцу или конденсированным неароматическим полициклическим кольцам с одним или несколькими гетероатомом(ами), независимо выбранными из N, S и O, а остальные атомы кольца являются атомами углерода и где по меньшей мере один гетероатом присутствует в каждом неароматическом кольце. Гетероциклическая группа может быть трехчленным кольцом, четырехчленным кольцом, пятичленным кольцом, шестичленным кольцом или семичленным кольцом. В некоторых вариантах осуществления гетероциклоалкильная группа представляет собой 1,4-диоксан, 1,3-диоксолан, 1,4-дитиан, имидазолидин, морфолин, пиперидин, пиперидон, пиперазин, пиролидон, пирролидин или 1,3,5-тритиан. Она может содержать имид. Гетероциклоалкильная группа может быть бициклической, такой как гетероспирогруппа, например, гетероспиро[3.3]гептанил, гетероспиро[3.4]октанил или гетероспиро[5.5]ундеканил. Гетероциклоалкильная группа может быть замещенной или незамещенной. Таким образом, гетероциклоалкильная группа включает гетероциклоалкильные группы, замещенные одним или несколькими галогенами, такие как 3,3-дифторпиперидин или 4,4-дифторпиперидин. В дополнение, гетероциклоалкильная группа может быть замещена C1-C4 алкильной или C1-C4 галогеналкильной группой, такой как -CF3 группа.
[0044] «Фармацевтически приемлемый» относится к общепризнанным для использования у животных и, более конкретно, у человека.
[0045] «Фармацевтически приемлемая соль» относится к соли соединения, которая является фармацевтически приемлемой и которая обладает требуемой фармакологической активностью исходного соединения. Такие соли включают (1) кислотно-аддитивные соли, образованные неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобные; или образованные органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гексановая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, и тому подобные; или (2) соли, образованные при замене кислотного протона, присутствующего в исходном соединении, ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; или при помощи координационной связи с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, N-метилглюкамин, дициклогексиламин и тому подобные.
[0046] «Фармацевтически приемлемый эксципиент», «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемый адъювант» относятся, соответственно, к эксципиенту, носителю или адъюванту, с которым вводят по меньшей мере одно соединение по настоящему изобретению. «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому из разбавителя, адъюванта, эксципиента или наполнителя, с которым вводят по меньшей мере одно соединение настоящего изобретения.
[0047] «Пролекарство» относится к предшественнику или производной форме фармацевтически активного вещества, которое является менее биологически активным по сравнению с исходным лекарственным средством и может быть ферментативно активироваться или превращаться в более активную исходную форму. Пролекарственные формы соединений, описанных в настоящем документе, могут быть предназначены для улучшения биодоступности или стабильности или снижения токсичности. Например, соединения по изобретению, имеющие свободные амино, амидо, карбоксильные, гидроксильные или тиольные группы, можно превратить в пролекарства. См. Rautio et al., 2008 Nat Rev Drug Dis 7 255-270. Например, свободные карбоксильные группы могут быть дериватизированы в виде амидов, карбаматов, сложных эфиров или N-оснований Манниха. Свободные гидроксигруппы могут быть дериватизированы с использованием групп, включающих, но не ограничиваясь ими, карбонаты, диметиламиноацетаты, простые эфиры, гемисукцинаты, сложные фосфатные эфиры и фосфорилоксиметилоксикарбонилы, как описано в Fleisher et al., 1996 Advanced Drug Delivery Reviews 19, 115-130. Также включены карбаматные пролекарства гидроксильных и аминогрупп, как и карбонатные пролекарства, сульфонатные сложные эфиры и сульфатные сложные эфиры гидроксильных групп. Также включена дериватизация гидроксильных групп, таких как (ацилокси)метильные и (ацилокси)этильные эфиры, где ацильная группа может быть алкиловым эфиром, необязательно замещенным группами, включающими, но не ограниченными ими, функциональные эфирные, аминные группы и группы карбоновых кислот, или где ацильная группа представляет собой сложный эфир аминокислоты, как описано выше. Пролекарства этого типа описаны в Robinson et al., 1996 J Med Chem 39 10-18. Свободные амины также могут быть дериватизированы в виде амидов, карбаматов, иминов, N-оснований Манниха, оксимов, фосфонамидов или сульфонамидов. Карбонилы могут быть дериватизированы в иминовые или оксимовые пролекарства. Тиолы могут быть дериватизированы в виде сложных эфиров или простых эфиров. Пролекарства могут также включать соединения, где аминокислотный остаток или полипептидная цепь из двух или более (например, двух, трех или четырех) аминокислотных остатков ковалентно связаны через амидную или сложноэфирную связь со свободной амино, гидроксильной группой или группой карбоновой кислоты соединений по настоящему изобретению. Аминокислотные остатки включают, но не ограничены ими, 20 встречающихся в природе аминокислот, обычно обозначаемых трехбуквенными символами, и также включают бета-аланин, цитруллин, демозин, гамма-аминомасляную кислоту, гомоцистеин, гомосерин, 4-гидроксипролин, гидроксилизин, изодемозин, 3-метилгистидин, норвалин, метионинсульфон и орнитин.
[0048] «Стереоизомер» относится к изомеру, который отличается расположением атомов в пространстве. Стереоизомеры, которые являются зеркальными изображениями друг друга и оптически активными, называются «энантиомерами», а стереоизомеры, которые не являются зеркальными изображениями друг друга и являются оптически активными, называются «диастереоизомерами».
[0049] «Субъект» включает млекопитающих и человека. Термины «человек» и «субъект» используются в настоящем описании взаимозаменяемо.
[0050] «Замещенный» относится к группе, в которой один или несколько атомов водорода каждый независимо замещены одинаковым или разными заместителем(ями). Типичные заместители включают, но не ограничиваются ими, CO2H, циано, дифтор, дифторметил, галоген, гидроксил, кето, метил, -N3, -NH2, -SO(1-3)H, -SH или трифторметил.
[0051] «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству соединения, которое при введении субъекту для лечения заболевания, или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания, или нарушения, является достаточным для осуществления такого лечения заболевания, нарушения или симптома. «Терапевтически эффективное количество» может варьироваться в зависимости от соединения, заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, тяжести заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, возраста субъекта, подлежащего лечению, и/или массы субъекта, подлежащего лечению. Соответствующее количество в любом конкретном случае может быть очевидно специалистам в данной области или может быть определено путем рутинного экспериментирования.
[0052] «Лечение» или «терапия» любого заболевания или нарушения относится к остановке или ослаблению заболевания, нарушения или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания или нарушения, снижению риска приобретения заболевания, нарушения или по меньшей мере одного клинического симптома заболевания или нарушения, уменьшению развития заболевания, нарушения или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания или нарушения, или снижению риска развития заболевания или нарушения или по меньшей мере одного из клинических симптомов заболевания или нарушения. «Лечение» или «терапия» также относится к ингибированию заболевания или нарушения, либо физически (например, стабилизации явного симптома), либо физиологически (например, стабилизации физического параметра), или обоим, или ингибированию по меньшей мере одного физического параметра, который может быть незаметным для субъекта. Кроме того, «лечение» или «терапия» относится к задержке начала заболевания или нарушения или по меньшей мере его симптомов у субъекта, который может быть подвержен или предрасположен к заболеванию или нарушению, даже если этот субъект еще не испытывает или не проявляет симптомов заболевания или нарушения.
[0053] Пары функциональных групп, определенных здесь, могут быть объединены химически рациональным образом. Например, C1-C8 алкиламино означает функциональную группу C1-C8 алкил, например, -nC5H11, объединяют с функциональной группой, амино, например, -NH2 с образованием в этом примере -nC5H10NH2. Аналогично, C1-C8 алкиловый спирт будет означать группу, например, nC3H6OH. Подобным образом, C1-C8 алкоксиарил означает функциональную группу C1-C8 алкокси, например, -CH2CH2OCH2CH3 или -OCH2CH3, объединенную с арильной группой, например, -C6H5F, с образованием -CH2CH2OCH2CH2-C6H5F или -OCH2CH3-C6H5F, соответственно.
[0054] Как используется в настоящем описании заместители R4, R5, R6, R7, или R8 могут независимо представлять собой отдельные α, β, γ, δ аминокислоты, или их соответствующие боковые цепи, такие как двадцать встречающихся в природе аминокислот, например, аланин (Ala/A); аргинин (Arg/R); аспарагин (Asn/N); аспарагиновая кислота (Asp/D); цистеин (Cys/C); глутаминовая кислота (Glu/E); глутамин (Gln/Q); глицин (Gly/G); гистидин (His/H); изолейцин (Ile/I); лейцин (Leu/L); лизин (Lys/K); метионин (Met/M); фенилаланин (Phe/F); пролин (Pro/P); серин (Ser/S); треонин (Thr/T); триптофан (Trp/W); тирозин (Tyr/Y); и валин (Val/V). Отдельные аминокислоты могут иметь или R, или S хиральность. Альтернативно, R4, R5, R6, R7 или R8 независимо могут быть двумя или тремя аминокислотами, связанными пептидной связью. R4, R5, R6, R7, или R8 независимо могут быть дипептидами или трипептидами (Hobbs et al., Proc Nat Acad Sci USA. 1993, 90, 6909-6913); Патент США No. 6075121 (Bartlett et al.) peptoids; or vinylogous polypeptides (Hagihara et al., J Amer Chem Soc. 1992, 114, 6568), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. R4, R5, R6, R7 или R8 независимо могут быть частью удлиненных неприродных аминокислот, например, Xie and Schultz, Nat Rev Mol Cell Biol. 2006, 7(10):775-82 or Wang et al., Chem Biol. 2009, 16(3):323-36, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
4.2. Дейтерированные и другие изотопные варианты
[0055] Изобретение также включает все подходящие изотопные вариации соединения по изобретению. Изотопная вариация соединения по изобретению определяется как таковая, в которой по меньшей мере один атом замещен атомом, имеющим тот же самый атомный номер, но отличающийся атомной массой от атомной массы обычной или преобладающей в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединение по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора, брома и йода, такие как 2H (дейтерий), 3H (тритий), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I и 131I, соответственно. Определенные изотопные вариации соединения по изобретению, например, такие, в которые включены один или несколько радиоактивных изотопов, таких как 3H или 14C, полезны в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в тканях. Тритированные и углерод-14, т.е., 14С, изотопы особенно предпочтительны из-за их легкого получения и обнаруживаемости. Замещение позитрон-излучающими изотопами, такими как 11C, 18F, 15O и 13N, может быть полезным в исследованиях эмиссионной позитронной томографии (PET).
[0056] Кроме того, замещение изотопами, такими как дейтерий, может давать определенные терапевтические преимущества, приводя к большей метаболической стабильности, например, увеличение периода полувыведения in vivo или уменьшение требуемой дозировки и, следовательно, может быть предпочтительной в некоторых случаях. Изотопные вариации соединения по изобретению, как правило, могут быть получены обычными способами, известными специалисту в данной области, такими как иллюстративные способы или получения, описанные в примерах ниже, с использованием соответствующих изотопных вариаций подходящих реагентов. В другом варианте осуществления меченые изотопом соединения содержат изотопы дейтерий (2Н), тритий (3Н) или 14С. Меченые изотопом соединения по настоящему изобретению могут быть получены общепринятыми способами, хорошо известными специалистам в данной области техники.
[0057] Такие меченые изотопом соединения могут быть легко получены путем осуществления способов, описанных в примерах, раскрытых в настоящем описании, и схемах, путем замещения немеченого реагента легко доступным меченым изотопами реагентом. В некоторых случаях соединения могут быть обработаны мечеными изотопами реагентами для замены нормального атома на его изотоп, например, водород на дейтерий может быть заменен путем воздействия дейтериевой кислоты, такой как D2SO4/D2O. Альтернативно, дейтерий может быть также включен в соединение, с использованием способов, таких как восстановление, например, с использованием LiAlD4 или NaBD3, каталитическое гидрирование или кислотного или основного изотопного обмена с использованием соответствующих дейтерированных реагентов, таких как дейтериды, D2 и D2O. В дополнение к вышесказанному, публикации РСТ, WO2014/169280; WO2015/058067; Патент США No. 8354557; 8704001 и и публикация патентной заявки США No.; 2010/0331540; 2014/0081019; 2014/0341994; 2015/0299166, способы включены в настоящий документ с помощью ссылки.
4.3. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ
[0058] Изобретение также предоставляет фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения формулы I (например, любая из приведенных в настоящем описании формул и/или структур) или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения; и фармацевтически приемлемый носитель.
[0059] Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и носители, которые могут быть использованы в фармацевтических композициях настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, неполные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамина сульфат, динатрия гидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленовые блок-полимеры, полиэтиленгликоль и ланолин. Если необходимо, растворимость и биодоступность соединений по настоящему изобретению в фармацевтических композициях могут быть повышены с помощью способов, хорошо известных в данной области. Один из методов включает использование липидных эксципиентов в составе. См. "Oral Lipid-Based Formulations: Enhancing the Bioavailability of Poorly Water-Soluble Drugs (Drugs and the Pharmaceutical Sciences)," David J. Hauss, ed. Informa Healthcare, 2007; и "Role of Lipid Excipients in Modifying Oral and Parenteral Drug Delivery: Basic Principles and Biological Examples," Kishor M. Wasan, ed. Wiley-Interscience, 2006.
[0060] Другим известным способом повышения биодоступности является использование аморфной формы соединения по настоящему изобретению, необязательно составленной с полоксамером, таким как LUTROL™ и PLURONIC™ (BASF Corporation), или блок-сополимерами этиленоксида и пропиленоксида. См. Патент США No. 7014866 (Infeld et al.); и публикации патента США 20060094744 (Maryanoff et al.) и 20060079502 (Lang).
[0061] Фармацевтические композиции по изобретению включают те, которые подходят для перорального, ректального, назального, местного (включая буккальное и сублингвальное), легочного, вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введение. В некоторых вариантах осуществления соединение формул настоящего описания вводится трансдермально (например, с использованием трансдермального пластыря или ионтофоретических методов). Другие составы могут быть удобно представлены в стандартной лекарственной форме, например, таблетках, капсулах с замедленным высвобождением, и в липосомах, и могут быть получены любыми способами, хорошо известными в фармации. См., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA (17th ed. 1985).
[0062] Такие способы получения включают стадию приведения в контакт молекулы, которую необходимо ввести, с ингредиентами, таких как носитель, который составляет один или несколько дополнительных ингредиентов. В общем, композиции получают путем равномерного и тщательного введения в действие активных ингредиентов с жидкими носителями, липосомами или тонкоизмельченными твердыми носителями, или обоими, а затем, при необходимости, формованием продукта. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят перорально. Композиции по настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде отдельных единиц, таких как капсулы, саше или таблетки, каждая из которых содержит заданное количество активного ингредиента; порошок или гранулы; раствор или суспензию в водной жидкости или неводной жидкости; жидкая эмульсия типа масло-в-воде; жидкая эмульсия типа вода-в-масле; упакованные в липосомы; или в виде болюса и т.п. Мягкие желатиновые капсулы могут быть полезны для содержания таких суспензий, которые могут выгодно увеличить скорость абсорбции соединения.
[0063] В случае таблеток для перорального применения, носители, которые обычно используются, включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсулы полезные разбавители включают лактозу и сушеный кукурузный крахмал. Когда водные суспензии вводят перорально, активный ингредиент объединяют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При желании могут быть добавлены определенные подсластители и/или ароматизаторы и/или красители.
[0064] Композиции, подходящие для перорального введения, включают пастилки для рассасывания, содержащие ингредиенты в ароматизированной основе, обычно сахароза и аравийская камедь или трагакант; и пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и аравийская камедь.
[0065] Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые придают композиции изотоничность с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие вещества и загустители. Препаративные формы могут быть представлены в контейнерах на одну или несколько доз, например, в герметичных ампулах или пузырьках, и могут храниться в высушенном вымораживанием (лиофилизованном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекции, непосредственно перед использованием. Экстемпоральные инъекционные растворы и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток ранее описанного вида.
[0066] Такие инъекционные растворы могут быть в форме, например, стерильной инъекционной водной или масляной суспензии. Эту суспензию можно получить в соответствии со способами, известными в данной области, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов (таких как, например, Tween 80) и суспендирующих агентов. Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например, как раствор в 1,3-бутандиоле. Приемлемыми носителями и растворителями, которые могут быть использованы, являются маннит, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя обычно используют стерильные нелетучие масла или суспендирующие среды. Для этого может быть использовано любое не раздражающее нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, применимы в получении инъецируемых препаратов, как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно их полиоксиэтилированные варианты. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечные спиртовые разбавители или диспергаторы.
[0067] Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть представлены в форме суппозиториев для ректального введения. Эти композиции могут быть получены путем смешивания соединения настоящего изобретения с подходящим не раздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением активных компонентов. Такие материалы включают, но не ограничиваются ими, масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.
[0068] Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены в виде назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции получают в соответствии с методиками, хорошо известными в области изготовления фармацевтических препаратов, и могут быть приготовлены в виде растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, промоторов абсорбции для повышения биодоступности, фторуглеродов и/или других солюбилизирующих или диспергирующих агентов, известных в данной области. См., например, патент США No. 6803031 (Rabinowitz & Zaffaroni).
[0069] Местное применение фармацевтических композиций настоящего изобретения особенно полезно, когда желаемое лечение должно осуществляться в отношении участков или органов, легко доступных для местного применения. Для местного применения на кожу фармацевтическая композиция должна быть приготовлена в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в носителе. Носители для местного введения соединений настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, минеральное масло, жидкие нефтепродукты, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен или соединения полиоксипропилена, эмульгирующий воск и воду. Кроме того, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активное соединение, суспендированное или растворенное в носителе. Подходящие носители включают, но не ограничиваются ими, минеральное масло, моностеарат сорбитана, полисорбат 60, цетиловые эфиры воска, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть также использованы для местного применения в нижней части кишечника путем ректального суппозитория или в подходящем составе клизмы. Местные трансдермальные пластыри и ионофоретическое введение также включены в настоящее изобретение.
[0070] Применение терапевтических средств может быть локальным, таким образом, чтобы его вводить в интересующее место. Различные способы могут быть использованы для обеспечения введения композиций в интересующее место, такие как инъекция, использование катетеров, троакаров, частиц, плюроновых гелей, стентов, полимеров с замедленным высвобождением лекарственного средства или других устройств, которые обеспечивают доступ лекарства внутрь. Таким образом, согласно еще одному варианту осуществления соединения настоящего изобретения могут быть включены в композиции для покрытия имплантируемого медицинского устройства, такого как протезы, искусственные клапаны, сосудистые трансплантаты, стенты или катетеры. Подходящие покрытия и общее получение покрытых оболочкой имплантируемых устройств известны в данной области и приведены в патенте США. No 6099562 (Ding & Helmus); 5886026 (Hunter et al.); и 5304121 (Sahatjian). Покрытия обычно представляют собой биосовместимые полимерные материалы, такие как гидрогелевый полимер, полиметилдисилоксан, поликапролактон, полиэтиленгликоль, полимолочную кислоту, этиленвинилацетат и их смеси. Покрытия могут быть дополнительно покрыты подходящим верхним слоем фторсиликона, полисахаридов, полиэтиленгликоля, фосфолипидов или их комбинаций для придания композиции свойств контролируемого высвобождения. Покрытия для инвазивных устройств должны быть включены в определение фармацевтически приемлемого носителя, адъюванта или носителя, поскольку эти термины используются в настоящем описании.
[0071] В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение предоставляет способ покрытия имплантируемого медицинского устройства, включающий стадию контактирования указанного устройства с композицией покрытия, описанной выше. Специалисту в данной области будет очевидно, что нанесение покрытия на устройство будет осуществляться перед его имплантацией млекопитающему.
[0072] В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение предоставляет способ импрегнирования имплантируемого устройства для высвобождения лекарственного средства, включающий стадию контактирования устройства для высвобождения лекарственного средства с соединением или композицией настоящего изобретения. Имплантируемые устройства для высвобождения лекарственного средства включают, но не ограничиваются ими, биодеградируемые полимерные капсулы или ядра, не подвергающиеся разложению, способные диффундировать полимерные капсулы и биоразлагаемые полимерные вафельные материалы.
[0073] В соответствии с еще одним вариантом осуществления изобретение предоставляет имплантируемое медицинское устройство, покрытое соединением или композицией, содержащей соединение по настоящему изобретению, таким образом, что указанное соединение является терапевтически активным.
[0074] В соответствии с другим вариантом осуществления изобретение предоставляет имплантируемое устройство для высвобождения лекарственного средства, импрегнированное соединением или содержащее соединение или композицию, содержащую соединение настоящего изобретения, так что указанное соединение высвобождается из указанного устройства и является терапевтически активным. Когда орган или ткань является доступным(ой) ввиду удаления из субъекта, такой орган или такая ткань может промываться в среде, содержащей композицию по настоящему изобретению, причем композиция по изобретению может окрашиваться на органе, или композиция согласно изобретению может применяться любым другим удобным способом.
[0075] В одном варианте осуществления, настоящее изобретение предоставляет композицию, содержащую соединение формулы I или более специфические соединения, раскрытые в настоящем описании, для лечения или профилактики астмы, атеросклероза, рака, кардиомиопатии, диабета, дислипидемии, ВИЧ нейродегенерации, гипертензии, воспаления, заболевания печени, метаболического заболевания, нейродегенеративного заболевания, ожирения, или преэклампсии. В другом варианте осуществления изобретение предоставляет композицию, содержащую соединение формулы I, или более специфические соединения, раскрытые в настоящем описании, для лечения или профилактики рака, пролиферации клеток, диабета, гомеостаза жидкости, заболеваний сердца (например, гипертензия и сердечная недостаточность, такая как застойная сердечная недостаточность), ВИЧ-инфекции, иммунной функции, ожирения, миграции стволовых клеток, метастатического рака или заболевания, связанного с венами, такого как ангиома, венозная недостаточность, стаз или тромбоз.
[0076] В другом варианте осуществления композиция по настоящему изобретению дополнительно содержит второе терапевтическое средство. В одном варианте осуществления, второе терапевтическое средство представляет собой одно или несколько дополнительных соединений по изобретению. В другом варианте осуществления второе терапевтическое средство может быть выбрано из любого соединения или терапевтического средства, которое, как известно, обладает полезными свойствами или демонстрирует полезные свойства при введении с соединением, обладающим таким же механизмом действия, что и APJ рецепторное соединение формулы I.
[0077] В конкретном варианте осуществления второй терапевтический агент является агентом, полезным для лечения или профилактики заболевания или состояния, выбранного из острой декомпенсированной сердечной недостаточности (ADHF), амиотрофического бокового склероза, аритмии, астмы, атеросклероза, атеросклероза, фибрилляции предсердий, синдрома Бругады, ожоги (включая солнечные ожоги), рак, фиброз миокарда, кардиомиопатия, инсульты, хроническая сердечная недостаточность, диабет (включая гестационный диабет), дислипидемии, ВИЧ нейродегенерации, гипертензии, воспаления, ишемических болезней сердца, заболевания печени, метаболического заболевания, нейродегенеративного заболевания, ожирения, заболевания периферических артерий, преэклампсии, легочной гипертензии, рестеноза, транзиторной ишемической атаки, травматического повреждения головного мозга, желудочковой тахикардии, или задержки жидкости в организме. В другом варианте осуществления второе терапевтическое средство является средством, полезным для лечения или профилактики заболевания или состояния, выбранного из рака, пролиферации клеток, диабета, гомеостаза жидкости, заболеваний сердца (например, гипертензия и сердечная недостаточность, такая как застойная сердечная недостаточность), ВИЧ-инфекции, иммунной функции, ожирения, миграции стволовых клеток или метастатического рака.
[0078] Например, когда заболеванием или состоянием является застойная сердечная недостаточность, второе терапевтическое средство может быть выбрано из: ингибиторов ACE, бета-блокаторов, вазодилататоров, блокаторов кальциевых каналов, петлевых диуретиков, антагонистов альдостерона и блокаторов ангиотензиновых рецепторов.
[0079] Когда заболевание или состояние, подвергаемое лечению, представляет собой гипертензию, второе терапевтическое средство может быть выбрано из: α-блокаторов, β-блокаторов, блокаторов кальциевых каналов, диуретиков, натрийуретиков, салуретиков, антигипертензивных средств центрального действия, ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (ACE), двойных ингибиторов ACE и нейтральной эндопептидазы (NEP), блокаторов ангиотензиновых рецепторов (ARB), ингибиторов альдостеронсинтазы, антагонистов альдостероновых рецепторов или антагонистов рецепторов эндотелина.
[0080] Неограничивающие примеры α-блокаторов включают доксазозин, празозин, тамсулозин и теразозин.
[0081] Неограничивающие примеры β-блокаторов для комбинированной терапии выбраны из ацебутолола, ацетутолола, атенолола, бисопрола, бупранолола, картеолола, карведилола, целипролола, эсмолола, мепиндолола, метопролола, надолола, окспренолола, пенбутолола, пиндолола, пропанолола, талипролола и их фармацевтически приемлемых солей.
[0082] Неограничивающие примеры блокаторов кальциевых каналов включают дигидропиридины (DHP) и не-DHP. Предпочтительные DHP выбраны из группы, состоящей из амлодипина, фелодипина, исрадипина, лацидипина, никардипина, нифедипина, нигулпидина, нилудипина, нимодифина, нисолдипина, нитрендипина, нивальдипина, риозидина и их фармацевтически приемлемых солей. Не-DHP выбраны из анипамила, дилтиазема, фендилина, флунаризина, галлопамила, мибефрадила, прениламина, тиапамила и верампимила и их фармацевтически приемлемых солей.
[0083] Неограничивающие примеры тиазидное производное включает амилорид, хлорталидон, хлортиазид, гидрохлоротиазид и метилхлоротиазид.
[0084] Неограничивающие примеры антигипертензивных средств центрального действия включают клонидин, гуанабенз, гуанфацин и метилдопа.
[0085] Неограничивающие примеры ингибиторов ACE включают алацеприл, беназеприл, беназаприлат, каптоприл, церонаприл, цилазаприл, делаприл, эналаприл, эналаприлат, фозиноприл, лизиноприл, моэксипирил, мовелтоприл, периндоприл, хинаприл, хинаприлат, рамиприл, рамиприлат, спираприл, темокаприл, трандолаприл, и зофеноприл. Предпочтительные ингибиторы ACE представляют собой беназеприл, эналаприл, лизиноприл и рамиприл.
[0086] Неограничивающими примерами двойных ингибиторов ACE/NEP являются, например, омапатрилат, фазидотрил и фазидотрилат.
[0087] Неограничивающие примеры предпочтительных ARB включают кандесартан, эпросартан, ирбесартан, лозартан, олмесартан, тазосартан, телмисартан и валсартан.
[0088] Неограничивающими примерами предпочтительных ингибиторов альдостеронсинтазы являются анастрозол, фадрозол и экземестан.
[0089] Неограничивающими примерами предпочтительных антагонистов альдостероновых рецепторов являются спиронолактон и эплеренон.
[0090] Неограничивающие примеры предпочтительного антагониста эндотелина включают, например, босентан, энрасентан, атрасентан, дарусентан, ситаксентан и тезосентан и их фармацевтически приемлемые соли.
[0091] В одном варианте осуществления, изобретение предоставляет отдельные лекарственные формы соединения по настоящему изобретению и одного или несколько из любого из вышеописанных вторых терапевтических средств, где соединение и второе терапевтическое средство взаимодействуют друг с другом. Термин «связанные друг с другом», как используется в настоящем описании, означает, что указанные отдельные дозированные формы упакованы вместе или каким-либо другим образом соединены одна с другой, так что очевидно, что эти отдельные дозированные формы должны продаваться и вводиться совместно (с интервалом между ними меньше 24 часов, последовательно или одновременно).
[0092] В фармацевтических композициях по настоящему изобретению соединение по настоящему изобретению присутствует в эффективном количестве. Термин «эффективное количество», как используется в настоящем описании, относится к количеству, которое при введении в режиме надлежащего дозирования является достаточным для лечения (терапевтически или профилактически) целевого нарушения. Например, и эффективное количество является достаточным для уменьшения или облегчения тяжести, продолжительности или прогрессирования нарушения, подвергаемого лечению, предотвращения развития нарушения, подвергаемого лечению, для вызывания регрессии нарушения, подвергаемого лечению, или для усиления или улучшения профилактического или терапевтического эффекта(ов) другой терапии. Предпочтительно соединение присутствует в композиции в количестве от 0,1 до 50% масс., более предпочтительно от 1 до 30% масс., наиболее предпочтительно от 5 до 20% масс.
[0093] Взаимосвязь дозировок для животных и людей (в миллиграммах на квадратный метр поверхности тела) описана в Freireich et al., (1966) Cancer Chemother. Rep 50: 219. Площадь поверхности тела может быть приблизительно определена по росту и массе субъекта. См., например, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., 1970,537.
[0094] Для фармацевтических композиций, которые содержат второе терапевтическое средство, эффективное количество второго терапевтического средства составляет от около 20% до 100% дозировки, обычно используемой в случае монотерапии с использованием только этот средства. Предпочтительно эффективное количество составляет приблизительно от 70% до 100% от обычной дозировки при монотерапии. Обычные дозировки вторых терапевтических средств при монотерапии хорошо известны в данной области техники. См., например, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000), каждая из которых полностью включена в настоящий документ в качестве ссылки.
[0095] Соединения для использования в способе по изобретению могут быть составлены в виде стандартной лекарственной формы. Термин «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичной дозы для субъектов, подвергающихся лечению, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного соединения, рассчитано для получения желаемого терапевтического эффекта, необязательно в сочетании с подходящим фармацевтическим носителем. Стандартная лекарственная форма может быть для однократной суточной дозы обработки или многократных ежедневных доз обработки (например, от 1 до 4 или более раз в день). При использовании многократных ежедневных доз обработки стандартная лекарственная форма может быть одинаковой или различной для каждой дозы.
4.4. СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ
[0096] Изобретение также включает способы лечения заболеваний, нарушений или патологических состояний, где модуляции рецептора APJ обеспечивает пользу, включающие введение эффективного количества APJ рецепторного соединения по изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. Заболевания и состояния, которые могут быть извлечь пользу при модуляции (ингибировании или активации) APJ-рецептора, включают, но не ограничиваются ими, острую декомпенсированную сердечную недостаточность (ADHF), амиотрофический боковой склероз, аритмию, астму, атеросклероз, атеросклероз, фибрилляцию предсердий, синдром Бругады, ожоги (включая солнечный ожог), рак, фиброз миокарда, кардиомиопатию, инсульты, хроническую сердечную недостаточность, диабет (включая гестационный диабет), дислипидемию, ВИЧ нейродегенерацию, гипертензию, воспаление, ишемические болезни сердца, заболевания печени, метаболическое заболевание, нейродегенеративное заболевание, ожирение, заболевание периферических артерий, преэклампсию, легочную гипертензию, рестеноз, транзиторную ишемическую атаку, травматическое повреждение головного мозга, желудочковую тахикардию, или задержку жидкости в организме. Более конкретно, гипертензия может представлять собой легочную артериальную гипертензию. Заболевание печени может представлять собой алкогольную болезнь печени, токсикант-индуцированное заболевание печени или вирус-индуцированное заболевание печени, и почечной дисфункции может быть поликистозная болезнь почек. Апелиновая рецепторная система участвует в заболеваниях, связанных с венами. См., например, Lathen et al., ʺERG-APLNR Axis Controls Pulmonary Venule Endothelial Proliferation in Pulmonary Veno-Occlusive Diseaseʺ 2014 Circulation 130: 1179-1191. Апелиновая рецепторная система также участвует в сердечной недостаточности. См., например, Sheikh et al., ʺIn vivo genetic profiling and cellular localization of apelin reveals a hypoxia-sensitive, endothelial-centered pathway activated in ischemic heart failureʺ 2007 Am J Physiol Heart Circ Physiol 294:H88-H98. Содержания обоих Lathen et al. и Sheikh et al. включены таким образом в качестве ссылки во всей их полноте в настоящее описание.
[0097] В одном неограничивающем варианте осуществления изобретение предоставляет способ лечения нарушения, связанного с апелиновым рецептором (APJ), у субъекта, который включает введение субъекту соединения по варианту осуществления 1. Нарушение, связанное с апелиновым рецептором (APJ), может представлять собой астму, атеросклероз, рак, кардиомиопатию, диабет, дислипидемию, гипертензию, воспаление, заболевание печени, метаболическое заболевание, нейродегенеративное заболевание, ожирение, или преэклампсию. Изобретение предоставляет способы, дополнительно включающие лечение субъекта с помощью α-блокатора, ингибитора ангиотензинпревращающего фермента (ACE), блокатора ангиотензинового рецептора (ARB), β-блокатора, блокатора кальциевых каналов или диуретика. Альтернативно, изобретение предоставляет способ лечения или профилактики заболевания, связанного с венами, такого как ангиома, венозная недостаточность, стаз или тромбоз.
[0098] Кроме того, изобретение предоставляет способ профилактики нейродегенерации ВИЧ у субъекта, который включает введение субъекту соединения по варианту 1.
[0099] В одном варианте осуществления, эффективное количество соединения по настоящему изобретению может составлять диапазон от примерно 0,005 мг до примерно 5000 мг на курс лечения. В более конкретных вариантах осуществления диапазон составляет от примерно 0,05 мг до примерно 1000 мг или от примерно 0,5 мг до примерно 500 мг или от примерно 5 до примерно 50 мг. Терапию можно осуществлять один или несколько раз в день (например, один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день и т.п.). Когда используется комплексное лечение, количество может быть одинаковым или различным. Понятно, что лечение можно осуществлять каждый день, один раз в два дня, каждые 2 дня, каждые 3 дня, каждые 4 дня, каждые 5 дней и т.п. Например, при введении один раз в два дня, лечение дозой может быть начато в понедельник с первым последующим лечением, назначенным на среду, вторым последующим лечением, назначенным на пятницу и т.п. Лечение обычно осуществляют от одного до двух раз в день. Эффективные дозы также будут различаться, как это признано специалистами в данной области, в зависимости от лечения заболеваний, тяжести заболевания, способа введения, пола, возраста и общего состояния здоровья субъекта, использования эксципиента, возможности совместного использования с другими терапевтическими воздействиями, такими как использование других средств, и суждения лечащего врача.
[0100] Альтернативно, эффективное количество соединения по изобретению составляет от примерно 0,01 мг/кг/день до примерно 1000 мг/кг/день, от примерно 0,1 мг/кг/день до примерно 100 мг/кг/день, от примерно 0,5 мг/кг/день до примерно 50 мг/кг/день или от примерно 1 мг/кг/день до 10 мг/кг/день.
[00101] В другом варианте осуществления любой из вышеуказанных способов лечения включает дополнительную стадию совместного введения указанному субъекту одного или нескольких вторых терапевтических средств. Выбор второго терапевтического средства может быть сделан из любого второго терапевтического средства, которое, как известно, может быть использовано для совместного введения с соединением, которое модулирует APJ-рецептор. Выбор второго терапевтического средства также зависит от конкретного заболевания или состояния, подлежащего лечению. Примерами вторых терапевтических средств, которые могут использоваться в способах по настоящему изобретению, включают терапевтические средства, перечисленные выше для использования в комбинированных композициях, содержащих соединение по настоящему изобретению и второе терапевтическое средство.
[00102] Термин «совместно вводимый», как используется в настоящем описании, означает, что второе терапевтическое средство можно вводить вместе с соединением по настоящему изобретению как часть единичной лекарственной формы (такой как композиция по настоящему изобретению, содержащая соединение по настоящему изобретению и второе терапевтическое средство, как описано выше) или в виде отдельных множественных дозированных форм. Альтернативно, дополнительное средство можно вводить до, последовательно или после введения соединения по настоящему изобретению. При такой комбинированной терапии как соединения по настоящему изобретению так и второе терапевтическое средство(а) вводят обычными способами.
Введение композиции по настоящему изобретению, содержащей и соединение изобретения и второе терапевтическое средство, субъекту не исключает возможности раздельного введения того же терапевтического средства, любого другого второго терапевтического средства или любого соединения по настоящему изобретению указанному субъекту в другое время в течение курса лечения.
[00103] В еще одном варианте осуществления изобретения, где второе терапевтическое средство вводится субъекту, эффективное количество соединения по настоящему изобретению меньше его эффективного количества без введения второго терапевтического средства. В другом варианте осуществления изобретения эффективное количество второго терапевтического средства меньше его эффективного количества без введения соединения по настоящему изобретению. В этом случае нежелательные побочные эффекты, связанные с высокими дозами любого средства, могут быть снижены до минимума. Другие возможные преимущества (включая, но без ограничения, улучшенные режимы дозирования и/или снижение стоимости лекарственного средства) будут понятны специалисту в данной области техники.
4.5. Наборы
[00104] Настоящее изобретение также предоставляет наборы для использования для лечения целевого заболевания, нарушения или состояния. Эти наборы содержат (а) фармацевтическую композицию, содержащую соединение формулы I или его соль, где указанная фармацевтическая композиция находится в контейнере; и (b) инструкции, описывающие способ использования фармацевтической композиции для лечения целевого заболевания, нарушения или состояния.
[00105] Контейнер может представлять собой любой сосуд или другое герметичное или плотно закрывающееся устройство, где может находиться указанная фармацевтическая композиция. Примеры включают бутылки, ампулы, разделенные или многокамерные держатели ампул, где каждое отделение или камера включает единичную дозу указанной композиции, разделенную фольгой упаковку, где каждое отделение включает единичную дозу указанной композиции, или дозатор, который высвобождает единичные дозы указанной композиции. Контейнер может иметь любую обычную форму или форму, известную в данной области техники, которая изготовлена из фармацевтически приемлемого материала, например, в форме бумажной или картонной коробки, стеклянной или пластиковой бутыли или банки, повторно герметизируемого пакета (например, удерживать «сменный блок» таблеток для внесения их в другой контейнер) или в форме блистерной упаковки с индивидуальными дозами для выдавленя из упаковки в соответствии с терапевтическим графиком. Вид используемого контейнера может зависеть от конкретной дозированной формы, например, традиционная картонная коробка не должна использоваться для содержания жидкой суспензии. Допустимо применение в одной упаковке более одного контейнера для продажи единичной дозированной формы. Например, таблетки могут находиться в бутыли, которая, в свою очередь, размещена в коробке. В одном варианте осуществления изобретения контейнер представляет собой блистерную упаковку.
[00106] Наборы согласно настоящему изобретению могут включать устройство для введения или для дозирования единичной дозы фармацевтической композиции. Такое устройство может включать ингалятор, если указанная композиция представляет собой композицию, которая может вводиться ингаляцией; шприц и иглу, если указанная композиция представляет собой композицию для инъекций; шприц, ложку, нагнетающее устройство или емкость с маркировкой объема или без маркировки объема, если указанная композиция представляет собой жидкую композицию для перорального введения; или любое другое отмеряющее или доставляющее устройство, подходящее для дозированной формы композиции, присутствующей в наборе.
[00107] В некоторых вариантах осуществления наборы по настоящему изобретению могут включать отдельную емкость контейнера фармацевтической композиции, содержащей второе терапевтическое средство, такой как одно из перечисленных выше, для использования для совместного введения с соединением по настоящему изобретению.
[00108] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Артикль единственного числа используется в настоящем описании для обозначения одного или нескольких (то есть, по меньшей мере, одного) грамматического объекта(ов) артикля. В качестве примера «элемент» означает один или несколько элементов.
[00109] По всему описанию слово «содержать» или вариации, такие как «содержит» или «содержащий», будут поняты таким образом, чтобы подразумевать включениеуказанного элемента, целого числа или стадии, или группы элементов, целых чисел или стадий, но не исключение любого другого элемента, целого числа илистадии, или группы элементов, целых чисел или стадий. Настоящее изобретение может надлежащим образом «содержать», «состоять из» или «состоять в основном из», стадий, элементов и/или реагентов, описанных в формуле изобретения.
[00110] Далее, следует отметить, что пункты формулы изобретения могут быть составлены с исключением любого факультативного элемента. Таким образом, данное утверждение предназначено для использования в качестве предшествующей основы для использования такой исключающей терминологии, как «исключительно», «только» и т.п., в перечислением элементов пункта формулы изобретения или с использованием «отрицательного» ограничения.
[00111] Там, где предоставляется диапазон значений, следует понимать, что каждое промежуточное значение между верхним и нижним пределами этого диапазона, до десятой доли единицы нижнего предела, если контекст ясно не указывает иное, также конкретно раскрыто. Каждый меньший диапазон между любым указанным значением или промежуточным значением в указанном диапазоне и любым другим указанным или промежуточным значением в этом указанном диапазоне охвачен изобретением. Верхний и нижний пределы этих меньших диапазонов независимо могут быть включены или исключены в диапазон, и каждый диапазон либо один из его пределов, либо ни один из пределов, либо оба предела, включенные в меньшие диапазоны, также охвачены изобретением, подчинены любому конкретному исключенному пределу в указанном диапазоне. Если заданный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие либо один, либо оба этих включенных предела, также включены в изобретение.
[00112] Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение и не предназначены для ограничения объема изобретение. В частности, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами осуществления, поскольку они, естественно, могут изменяться. Следует также понимать, что используемая в настоящем описании терминология предназначена только для целей описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего раскрытия ограничивается только прилагаемой формулой изобретения.
5. Примеры
5.1. Репрезентативные соединения
Таблица 1
5.2. СПОСОБ И ПОЛУЧЕНИЕ РЕПРЕЗЕНТАТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
[00113] Схема 2. Получение 5-замещенных пиразолов
[00114] Реагенты и условия: (a) натрий диэтил оксалоацетат, AcOH, EtOH, кипячение с обратным холодильником; 24 ч; (b) POBr3, ACN, кипячение с обратным холодильником; 18 ч; (c) Ar-B(OH)2, Pd(PPh3)4, 2 M Na2CO3, THF, кипячение с обратным холодильником; 18 ч (d) LiOH, THF, MeOH, H2O, комнатная температура, 18 ч
[00115] Промежуточные соединения 1-циклопентил-5-фенил-1H-пиразол-3-карбоновых кислот синтезировали, как описано на схеме 2. Этил 1-циклопентил-5-гидрокси-1H-пиразол-3-карбоксилат получали путем взаимодействия циклопентилгидразин-TFA соли и натрий диэтил оксалоацетата в присутствии уксусной кислоты. Обработка этил-1-циклопентил-5-гидрокси-1Н-пиразол-3-карбоксилата с помощью оксибромида фосфора обеспечивала этил 5-бром-1-циклопентил-1Н-пиразол-3-карбоксилат с выходом 51%. Сочетание Сузуки этил 5-бром-1-циклопентил-1Н-пиразол-3-карбоксилата с соответствующими арилбороновыми кислотами обеспечивало промежуточные соединения с разным 5-замещенным пиразоловым эфиром, которые затем подвергали основному гидролизу с получением промежуточных соединений карбоновой кислоты.
[00116] Этил 5-гидрокси-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилат: К раствору соли циклопентил гидразина дитрифторуксусной кислоты (85 г, 251 ммоль) в 500 мл EtOH добавляли AcOH (14,4 мл, 251 ммоль). Натрий диэтил оксалоацетат (48 г, 228 ммоль) добавляли порциями при перемешивании и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток разделяли между EtOAc (500 мл) и 0,5 н HCl (750 мл) и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали EtOAc (200 мл×2) и органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (300 мл), сушили с использованием Na2SO4 и концентрировали с получением неочищенного масла. Неочищенное масло разбавляли 30 мл EtOAc и затем MTBE (200 мл) добавляли для получения белого кристаллического осадка, который фильтровали и сушили с получением 32,6 г этил 5-гидрокси-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде белого твердого вещества. TLC Rf=0,50 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,22-1,30 (т, 3H, CH3), 1,58-1,68 (м, 2H, CH2), 1,82-2,10 (м, 6H, CH2× 3), 4,22-4,32 (кв, 2H, CH2), 4,80-4,90 (м, 1H, CH), 6,90 (с, 1H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C11H16N2O3 [M+H+]: 225, Найдено: 225,2.
[00117] Этил 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилат: К суспензии этил 5-гидрокси-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилата (32,6 г, 145 ммоль) в CH3CN (360 мл) добавляли POBr3 (209 г, 725 ммоль) по частям и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и медленно добавляли к насыщ. Na2CO3 (1000 мл) при 0°C. Продукт экстрагировали с использованием EtOAc (500 мл×3) и органическую фазу сушили с использованием Na2SO4, добавляли силикагель (60 г), и растворитель выпаривали в вакууме с получением слоя силикагеля. Очистку осуществляли с помощью флэш-хроматографии с использованием Combiflash® Rf (0-10% EtOAc в гексанах) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали для получения 21 г этил 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде коричневого масла. TLC Rf=0,80 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,22-1,30 (т, 3H, CH3), 1,58-1,68 (м, 2H, CH2), 1,82-2,10 (м, 6H, CH2× 3), 4,22-4,32 (кв, 2H, CH2), 4,80-4,90 (м, 1H, CH), 6,90 (с, 1H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C11H15BrN2O2 [M+, Br79]: 287, Найдено: 287,3; m/z, рассчитано для C11H15BrN2O2 [M+, Br81]: 289, Найдено: 289,2.
[00118] Общая методика синтеза этил 1-циклопентил-5-арил-1H-пиразол-3-карбоксилатов: К раствору этил 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилата (1 эквив.) в THF в атмосфере азота добавляли Pd(PPh3)4 (2 или 5% моль) и соответствующую арилбороновую кислоту (1,2 или 2,0 эквив.), затем 2 M Na2CO3 (3 эквив.). Смесь нагревали до кипения с обратным холодильником до тех пор, пока TLC/LCMS показал, что нет дальнейшего использования реагента 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилата. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем гасили водой (2 мл) и экстрагировали EtOAc (2 мл×2). Органические фазы объединяли, сушили с использованием Na2SO4, добавляли силикагель (200 мг) и растворитель выпаривали в вакууме с получением слоя силикагеля. Очистку осуществляли с помощью флэш-хроматографии с использованием Combiflash® Rf (0-10% EtOAc в гексанах) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали для получения этил 1-циклопентил-5-арил-1H-пиразол-3-карбоксилатов.
[00119] Примеры
[00120] Этил 1-циклопентил-5-(2-(трифторметокси)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксилат: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилатом (200 мг, 0,70 ммоль) и 2-трифторметоксифенил-бороновой кислотой (172,2 мг, 0,84 ммоль) в присутствии Pd(PPh3)4 (16 мг, 0,014 ммоль) и 2 M Na2CO3 (1,04 мл, 2,1 ммоль) в THF (5 мл) в течение 18 ч дает 204 мг (80%) этил 1-циклопентил-5-(2-(трифторметокси)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,85 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,30-1,40 (т, 3H, CH3), 1,42-1,60 (м, 2H, CH2), 1,80-2,25 (м, 6H, CH2× 3), 4,20-4,45 (м, 3H, CH и CH2), 6,85 (с, 1H, Ar), 7,20-7,50 (м, 4H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C18H19F3N2O3+ H [M+H+]: 369, Найдено: 369,1.
[00121] Этил 1-циклопентил-5-(2-этилфенил)-1H-пиразол-3-карбоксилат: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилатом (200 мг, 0,7 ммоль) и 2-этилфенил-бороновой кислотой (125,4 мг, 0,84 ммоль) в присутствии Pd(PPh3)4 (16 мг, 0,014 ммоль) и 2 M Na2CO3 (1,04 мл, 2,1 ммоль) в THF (5 мл) в течение 18 ч дает 180 мг (83%) этил 1-циклопентил-5-(2-этилфенил)-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,76 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,00-1,15 (т, 3H, CH3), 1,25-1,40 (т, 3H, CH3), 1,40-1,60 (м, 2H, CH2), 1,80-2,30 (м, 6H, CH2× 3), 2,40-2,55 (кв, 2H, CH2), 4,15-4,25 (м, 1H, CH), 4,25-4,35 (кв, 2H, CH2), 6,60 (с, 1H, Ar), 7,05-7,40 (м, 4H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C19H24N2O2 [M+H+]: 313, Найдено: 313,2.
[00122] Этил 1-циклопентил-5-(2-фтор-6-метоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксилат: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилатом (150 мг, 0,52 ммоль) и 2-метокси, 6-фторфенил-бороновой кислотой (178 мг, 1,04 ммоль) в присутствии Pd(PPh3)4 (21 мг, 0,026 ммоль) и 2 M Na2CO3 (0,78 мл, 1,56 ммоль) в THF (5 мл) в течение 18 ч давало 80 мг (46%) этил 1-циклопентил-5-(2-фтор-6-метоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,75 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,30-1,40 (т, 3H, CH3), 1,40-1,60 (м, 2H, CH2), 1,80-2,25 (м, 6H, CH2× 3), 3,80 (с, 3H, CH3), 4,20-4,40 (м, 3H, CH и CH2), 6,70-6,85 (м, 3H, Ar), 7,30-7,40 (м, 1H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C18H21FN2O3 [M+H+]: 333, Найдено: 333,4.
[00123] Этил 1-циклопентил-5-(тиазол-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоксилат: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между 5-бром-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксилатом (150 мг, 0,52 ммоль) и тиазол-4-ил бороновой кислотой (135 мг, 1,04 ммоль) в присутствии Pd(PPh3)4 (21 мг, 0,026 ммоль) и 2 M Na2CO3(0,78 мл, 1,56 ммоль) в THF (5 мл) в течение 24 ч дает 15 мг (10%) этил 1-циклопентил-5-(тиазол-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоксилата в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,72 (гексан/EtOAc, 3:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,20-1,30 (т, 3H, CH3), 1,80-2,25 (м, 8H, CH2 × 4), 4,65-4,80 (м, 2H, CH2), 5,20-5,40 (м, 1H, CH), 6,75 (с, 1H, Ar), 7,40 (с, 1H, Ar), 8,90 (с, 1H, Ar), 1H ЯМР чистота: 85-90%. LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C14H17N3O2S [M+H+]: 292, Найдено: 292,2.
[00124] Общая методика синтеза 1-циклопентил-5-арил-1H-пиразол-3-карбоновых кислот:
[00125] К раствору соответствующего этилового эфира 1-циклопентил-5-арил-1H-пиразол-3-карбоксилата (1 эквив.) в THF (1 мл), MeOH (2 мл) и H2O (1 мл) добавляли LiOH⋅H2O (5 эквив.) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель выпаривали в вакууме и реакционную смесь подкисляли до pH=4,0 с использованием 1 н HCl и экстрагировали EtOAc (3 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (3 мл), сушили с использованием Na2SO4, и растворитель выпаривали в вакууме с получением промежуточных соединений 1-циклопентил-5-арил-1H-пиразол-3-карбоновых кислот.
[00126] 1-циклопентил-5-(2-(трифторметокси)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между этил 1-циклопентил-5-(2-(трифторметокси)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксилатом (120 мг, 0,33 ммоль) и LiOH⋅H2O (68,4 мг, 1,65 ммоль) давало 103 мг (93%) 1-циклопентил-5-(2-(трифторметокси)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества. TLC Rf=0,45 (CHCl3/MeOH, 10:1); 1H ЯМР (200 МГц, DMSO-d6):δ=1,40-1,60 (м, 2H, CH2), 1,70-2,00 (м, 6H, CH2× 3), 4,25-4,40 (м, 1H, CH), 6,70 (с, 1H, Ar), 7,50-7,70 (м, 4H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C16H15F3N2O3 [M+H+]: 341, Найдено: 341,1.
[00127] 1-циклопентил-5-(2-этилфенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между этил 1-циклопентил-5-(2-этилфенил)-1H-пиразол-3-карбоксилатом (120 мг, 0,38 ммоль) и LiOH⋅H2O (80,7 мг, 1,90 ммоль) давало 109 мг (99%) 1-циклопентил-5-(2-этилфенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества. TLC Rf=0,50 (CHCl3/MeOH,10:1); 1H ЯМР (200 МГц, DMSO-d6):δ=0,95-1,05 (т, 3H, CH3), 1,40-1,60 (м, 2H, CH2), 1,65-1,95 (м, 6H, CH2× 3), 2,30-2,40 (кв, 2H, CH2), 4,15-4,30 (м, 1H, CH), 6,60 (с, 1H, Ar), 7,15-7,45 (м, 4H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C17H20N2O2 [M+H+]: 285, Найдено: 285,2.
[00128] 1-циклопентил-5-(2-фтор-6-метоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между этил 1-циклопентил-5-(2-фтор-6-метоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксилатом (80 мг, 0,24 ммоль) и LiOH⋅H2O (50,5 мг, 1,20 ммоль) давало 80 мг (93% чистоты, 99%) 1-циклопентил-5-(2-фтор-6-метоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества. TLC Rf=0,35 (CHCl3/MeOH, 10:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40-1,60 (м, 2H, CH2), 1,80-2,25 (м, 6H, CH2× 3), 3,80 (с, 3H, CH3), 4,25-4,40 (м, 1H, CH), 6,70-6,85 (м, 3H, Ar), 7,30-7,50 (м, 1H, Ar). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C16H17FN2O3 [M+H+]: 305, Найдено: 305,2.
[00129] 1-циклопентил-5-(тиазол-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота: При использовании общей процедуры, описанной выше, взаимодействие между этил 1-циклопентил-5-(тиазол-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоксилатом (15 мг, 0,05 ммоль) и LiOH⋅H2O (10,8 мг, 0,25 ммоль) давало 13 мг (96%) 1-циклопентил-5-(тиазол-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества. TLC Rf=0,35 (CHCl3/MeOH, 10:1); ЯМР, LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C12H13N3O2S [M+H+]: 264, Найдено: 264,0.
[00130] Схема 3. Синтез (R,E)-N-(5-(циклобутиламино)-1-(4-фторфенил)-5-оксо-пент-1-ен-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00131] Реагенты и условия: (a) o-NO2Ph-SeCN, PBu3, THF, комнатная температура, 3 ч; (b) 0,8 M NaIO4, THF, MeOH, 0°C до комнатной температуры, 4 ч; (c) 4-фторфенил бромид, Pd(OAc)2, P(o-толил)3, K2CO3, DMF, 110°C, 20 ч; (d) TFA, DCM, комнатная температура, 2 ч; (e) циклобутиламин, TBTU, NEt3, CH3CN, комнатная температура, 18 ч.
[00132] (R)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пент-4-еноат: К перемешиваемому раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксипентаноата (1,07 г, 22 ммоль) и o-нитрофенилселеноцианата (1 г, 44 ммоль) в THF (30 мл) при 0°C добавляли трибутилфосфин (1,1 мл, 44 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли силикагель (4 г) и растворитель удаляли при пониженном давлении. Реакционную смесь очищали с использованием Combiflash® Rf (0-40% EtOAc в гексанах) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 1,38 г (93%) o-нитрофенилселенидного производного в виде красновато-коричневого твердого вещества. TLC Rf=0,40 (гексаны/EtOAc, 2:1); LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C32H40N4O7Se+H+ [M+H+]: 673; Найдено: 673,2.
[00133] К перемешиваемому раствору o-нитрофенилселенидного производного (1,38 г, 20 ммоль) в THF (6 мл) и MeOH (40 мл) добавляли 0,8 M вод. раствора NaIO4 (8 мл, 60 ммоль) по каплям при 0°C. Реакционную смесь доводили до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли эфир и смесь промывали насыщенным раствором NaHCO3, насыщенным солевым раствором и сушили над Na2SO4. Добавляли силикагель (3 г) и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением слоя силикагеля, который очищали с использованием Combiflash® Rf (0-5% EtOAc в гексанах). Фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 940 мг (97%) (R)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пент-4-еноата в виде красного полутвердого вещества. TLC Rf=0,50 (гексаны/EtOAc, 2:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,45 (с, 9H, CH3 × 3), 1,50-1,60 (м, 2H, CH2), 1,80-2,10 (м, 6H, CH2× 3),2,60-2,70 (д, 2H, CH2), 3,70 (с, 6H, CH3 × 2), 4,20-4,35 (м, 1H, CH), 4,95-5,10 (м, 1H, CH), 5,15-5,20 (м, 1H, CH), 5,25-5,35 (м, 1H, CH), 5,85-6,05 (м, 1H, CH), 6,55-6,70 (м, 3H, Ar), 7,30-7,40 (т, 1H, Ar), 7,45-7,55 (д, 1H, NH). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C26H37N3O5 [M+H+]: 470; Найдено: 470,2.
[00134] (R,E)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еноат: К раствору (R)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пент-4-еноата (185 мг, 0,40 ммоль) в безводном DMF (4 мл) добавляли 4-фторфенил бромид (0,08 мл, 0,80 ммоль) и дегазировали в течение 5 мин. В атмосфере аргона, добавляли Pd(OAc)2 (8,5 мг, 0,04 ммоль), P(o-толил)3 (23,5 мг, 0,08 ммоль) и K2CO3 (204 мг, 1,60 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 110°C в течение 20 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли H2O (10 мл) и экстрагировали EtOAc (10 мл×2). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Na2SO4. Добавляли силикагель (300 мг) и растворитель удаляли в вакууме с получением слоя силикагеля, который очищали с использованием Combiflash® Rf (0-30% EtOAc в гексанах). Фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 160 мг (72%) (R,E)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еноата в виде красного масла. TLC Rf=0,55 (гексаны/EtOAc, 2:1);1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40 (с, 9H, CH3 × 3), 1,50-1,60 (м, 2H, CH2), 1,75-2,10 (м, 6H, CH2× 3),2,70-2,80 (д, 2H, CH2), 2,80 (с, 1,2H, DMF ʺCH3ʺ), 2,90 (с, 1,2H, DMF ʺCH3ʺ), 3,70 (с, 6H, CH3 × 2), 4,20-4,35 (м, 1H, CH), 5,10-5,20 (м, 1H, CH), 6,20-6,30 (м, 1H, CH), 6,55-6,70 (м, 4H, Ar и CH), 6,90-7,05 (м, 2H, Ar), 7,30-7,40 (м, 3H, Ar), 7,45-7,55 (д, 1H, NH), 8,00 (с, 0,4H, DMF ʺCHOʺ). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C32H38FN3O5+ H+ [M+H+]: 564; Найдено: 564,0.
[00135] (R,E)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еновая кислота: К раствору (R,E)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еноата (40 мг, 0,07 ммоль) в DCM (1 мл) добавляли TFA (0,25 мл, 3,5 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли в вакууме и разбавляли CHCl3. Растворитель удаляли с получением 45 мг (99%) (R,E)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еновой кислоты в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,25 (CHCl3/MeOH, 10:1); LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C28H30FN3O5 [M+H+]: 508, Найдено: 508,0.
[00136] (R,E)-N-(5-(циклобутиламино)-1-(4-фторфенил)-5-оксопент-1-ен-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (R,E)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еновой кислоты (45 мг, 0,08 ммоль) и циклобутиламина (16 мг, 0,2 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли безводный NEt3 (0,12 мл, 0,8 ммоль), затем TBTU (64 мг, 0,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (3 мл), и промывали насыщ. NaHCO3 (2 мл). Органическую фазу экстрагировали, добавляли силикагель (100 мг) и очищали с помощью Combiflash® Rf (0-60% EtOAc в гексанах) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 35 мг (86%) (R,E)-N-(5-(циклобутиламино)-1-(4-фторфенил)-5-оксо-пент-1-ен-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида в виде белого липкого твердого вещества. TLC Rf=0,45 (гексаны/EtOAc, 2:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ =1,45-2,05 (м, 12H, CH2 × 6), 2,20-2,40 (м, 2H, CH2), 2,70-2,85 (м, 2H, CH2), 3,70 (с, 6H, CH3 × 2), 4,20-4,45 (м, 3H, CH × 3), 5,00-5,10 (м, 1H, CH),6,25-6,50 (м, 2H, CH и NH), 6,50-6,60 (м, 1H, Ar), 6,60-6,70 (м, 2H, Ar), 6,90-7,00 (м, 2H, Ar), 7,25-7,40 (м, 3H, Ar), 7,45-7,60 (д, 1H, NH). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C32H37FN4O4 [M+H+]: 561; Найдено: 561,2.
[00137] Схема 4. Синтез (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(4-фторфенил)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00138] Реагенты и условия: (a) 10% Pd/C, H2 (баллон), EtOAc, комнатная температура, 18 ч; (b) TFA, DCM, комнатная температура, 2 ч; (c) циклобутиламин, TBTU, NEt3, ACN, комнатная температура, 18 ч
[00139] (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентаноат: К раствору (R,E)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пент-4-еноата (120 мг, 0,2 ммоль) в EtOAc (5 мл) добавляли 10% Pd/C (23 мг, 0,02 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода (баллон) в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывали EtOAc (15 мл), концентрировали и сушили с получением 120 мг (99% (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентаноата в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,50 (гексаны/EtOAc, 2:1); LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C32H40FN3O5 [M+H+]: 566, Найдено: 566,1.
[00140] (S)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентановая кислота: К раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентаноата (115 мг, 0,2 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли TFA (0,50 мл, 7 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли в вакууме и разбавляли CHCl3. Растворитель удаляли с получением 98 мг (95%) (S)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентановой кислоты в виде бесцветного масла. TLC Rf=0,25 (CHCl3/MeOH, 10:1); LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C28H32FN3O5 [M+H+]: 510, Найдено: 510,2.
[00141] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(4-фторфенил)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(4-фторфенил)пентановой кислоты (50 мг, 0,1 ммоль) и циклобутиламина (16 мг, 0,2 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли безводный Et3N (0,12 мл, 0,8 ммоль), затем TBTU (64 мг, 0,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (3 мл), и промывали насыщ. NaHCO3 (2 мл). Органическую фазу экстрагировали, добавляли силикагель (100 мг) и очищали с помощью Combiflash® Rf (0-60% EtOAc в гексанах) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 30 мг (54%) (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(4-фторфенил)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида в виде белого липкого твердого вещества. TLC Rf=0,25 (гексаны/EtOAc, 2:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,45-2,10 (м, 14H, CH2 × 7), 2,10-2,25 (м, 2H, CH2), 2,45-2,60 (м, 2H, CH2), 2,60-2,80 (м, 2H, CH2), 3,70 (с, 6H, CH3 × 2), 4,20-4,45 (м, 3H, CH × 3), 6,50-6,70 (м, 4H, Ar и NH), 6,85-7,00 (м, 2H, Ar), 7,05-7,40 (м, 4H, Ar и NH). LCMS (ESI): m/z, рассчитано для C32H39FN4O4 [M+H+]: 563; Найдено: 563,1.
[00142] Схема 5: Получение гетероциклов
[00143] Реагенты и условия: (a) оксалилхлорид, DMF (1 капля), DCM, (S)-трет-бутил 3-амино-5-(пиперидин-1-ил)пентаноат, Et3N, комнатная температура, 2 ч; (b) TFA, DCM, комнатная температура; MeOH, H2SO4, комнатная температура, 15 ч; (c) NH2NH2.H2O, EtOH, 80°C, 3 ч; (d) CH(OMe)3, PTSA.H2O, 85°C, 2 ч
[00144] (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноат: К раствору 1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (0,31 г, 0,98 ммоль) в DCM (6 мл) добавляли DMF (1 капля) и оксалилхлорид (0,11 мл, 1,28 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, концентрировали досуха и растворяли в DCM (3 мл). Раствор DCM добавляли по каплям к раствору (S)-трет-бутил 3-амино-5-(пиперидин-1-ил)пентаноата (0,23 г, 0,90 ммоль) и Et3N (0,42 мл, 2,7 ммоль) в DCM (5 мл) при комнатной температуре, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь промывали NaHCO3 (насыщ., 10 мл), сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-3% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноата (0,30 г) в виде белой пены. TLC Rf=0,35 (DCM: MeOH 10:1); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ =1,45 (с, 3H), 1,50-1,70 (м, 6H), 1,70-2,20 (м, 10H), 2,30-2,80 (м, 8H), 3,71 и 3,73 (с и с, всего 6 H), 4,15-4,40 (м, 1H), 4,30-4,60 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,4 Гц); 6,66 (с, 1H), 7,36 (т, 1H J=8,5 Гц), 7,66 (д, 1H, J=8,4 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C31H47N4O5 [M+H+]: 555, Найдено: 555,3.
[00145] (S)-метил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноат: К раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноата (1,73 г, 5,5 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (2 мл, 28 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли с получением неочищенной (S)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентановой кислоты в виде желтого твердого вещества (2,1 г), которую использовали как есть для следующей реакции без дополнительной очистки; LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H39N4O5 [M+H+]: 499, Найдено: 499,5. К раствору кислоты (120 мг, 0,24 ммоль) в MeOH (2 мл) добавляли серную кислоту (конц., 0,20 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Раствор гасили NaHCO3 (насыщ., 20 мл), экстрагировали EtOAc (10 мл), сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением неочищенного (S)-метил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноата (0,11 г) в виде бесцветного масла, который использовали как есть для следующего без дополнительной очистки; LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H41N6O4 [M+H+]: 513, Найдено: 513,1.
[00146] (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(1-гидразинил-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-метил 3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентаноата (0,11 г), NH2NH2.H2O (1,0 мл) и EtOH (3,0 мл) нагревали при 80°C в течение 3 ч. Раствор охлаждали до комнатной температуры, концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(1-гидразинил-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (50 мг) в виде бесцветного вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40-2,20 (м, 18H), 2,20-2,80 (м, 6H), 3,73 (с, 6 H), 3,89 (шир. с, 2 H), 4,15-4,30 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,4 Гц), 6,66 (с, 1H), 7,37 (т, 1H J=8,4 Гц), 8,06 (д, 1H, J=7,4 Гц), 8,37 (шир. с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C28H41N4O5 [M+H+]: 513, Найдено: 513,1
[00147] (S)-N-(1-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(1-гидразинил-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (50 мг, 0,10 ммоль) в CH(OMe)3 добавляли PTSA.H2O (25 мг, 0,13 ммоль). Смесь нагревали при 85°C в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (10 мл) и промывали NaHCO3 (насыщ., 10 мл). Раствор EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-N-(1-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (30 мг) в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ =1,40-2,20 (м, 18H), 2,20-2,80 (м, 4H), 3,15-3,50 (м, 2H), 3,73 (с, 6 H), 4,15-4,30 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,0 Гц), 6,65 (с, 1H), 7,37 (т, 1H J=8,4 Гц), 7,90 (д, 1H, J=8,4 Гц), 8,36 (с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C28H40N7O3 [M+H+]: 523, Найдено: 523,2
[00148] Реагенты и условия: (a) карбонат аммония, Boc2O, пиридин, диоксан, 12 ч; (b) DMF-DMA, 120°C, 2 ч; NH2NH2.H2O, HOAc, 90°C, 2 ч
[00149] (S)-N-(1-амино-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(пиперидин-1-ил)пентановой кислоты (1,0 г, 1,8 ммоль) в пиридине (20 мл) и диоксане (20 мл) добавляли карбонат аммония (0,21 г, 2,7 ммоль), затем Boc2O (0,47 г, 2,16 ммоль). Ход реакции контролировали с помощью LC-MS. Добавляли дополнительное количество карбоната аммония и Boc2O (2 экв. каждый) через 1 час. Перемешивание продолжали в течение 12 ч, и добавляли дополнительное количество карбоната аммония и Boc2O (2 экв. каждый). После дополнительного перемешивания в течение 1 ч, LC-MS показала завершение реакции. Смесь концентрировали досуха, гасили NaHCO3 (насыщ., 20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл). Раствор EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-N-(1-амино-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (0,64 г) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,50-2,20 (м, 16H), 2,20-2,80 (м, 8H), 3,15-3,50 (м, 2H), 3,72 (с, 6 H), 4,15-4,30 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 5,37 (шир. с, 1 H), 6,62 (д, 2H, J=8,4 Гц), 6,65 (с, 1H), 7,18 (шир. с, 1 H), 7,20-7,40 (м, 2H), 7,64 (т, 1H, J=7,0 Гц), 8,13 (д, 1H, J=8,4 Гц), 8,61 (д, 1H, J=4,0 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H40N5O4 [M+H+]: 498, Найдено: 498,3
[00150] (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Раствор (S)-N-(1-амино-1-оксо-5-(пиперидин-1-ил)пентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (40 мг, 0,80 ммоль) в DMF-DMA (1 мл) нагревали при 120°C в течение 2 ч. Раствор концентрировали досуха и остаток растворяли в HOAc (1,0 мл), затем добавляли NH2NH2.H2O (0,10 мл). Полученный раствор нагревали при 90°C в течение 2 ч, охлаждали до комнатной температуры, гасили NaHCO3 (насыщ., 20 мл), и экстрагировали EtOAc (10 мл). Раствор EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (24 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 16H), 2,30-2,80 (м, 6H), 3,20-3,40 (м, 2H), 3,72 (с, 6 H), 4,15-4,30 (м, 1H), 4,50-4,70 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,6 Гц), 6,68 (с, 1H), 7,35 (т, 1H, J=7,5 Гц), 7,91 (с, 1H), 8,20 (д, 1H, J=8,6 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C28H39N7O3 [M+H+]: 522, Найдено: 522,3.
[00151] Реагенты и условия: (a) трифторуксусный ангидрид, Et3N, DCM, комнатная температура, 15 ч; (b) Me3SnN3, толуол, 100°C, 20 ч; (c) P2S5, EtOH, 80°C, 17 ч; этил 2-бром-ацетат, уксусная кислота, 60-80°C, 3 ч
[00152] (S)-N-(1-циано-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (50 мг, 0,10 ммоль) в DCM (1 мл) при комнатной температуре добавляли Et3N (56 мкл, 0,40 ммоль) и трифторуксусный ангидрид (56 мкл, 0,40 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Анализ LC-MS показал завершение реакции. Смесь гасили NaHCO3 (насыщ., 10 мл) и экстрагировали DCM (10 мл). Экстракт сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% MeOH в DCM с получением указанного в заголовке продукта (S)-N-(1-циано-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (13 мг) в виде желтого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ =1,40-2,20 (м, 24H), 2,79 (д, 2H, J=6,1 Гц) 3,74 и 3,75 (с и с, всего 6 H), 4,20-4,30 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 6,63 (д, 2H, J=8,2 Гц); 6,67 (с, 1H), 7,38 (т, 1H, J=8,4 Гц), 7,98 (шир. с, 1 H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H38N5O3 [M+H+]: 480, Найдено: 479,9.
[00153] (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(1H-тетразол-5-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-N-(1-циано-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (50 мг) и Me3SnN3 (71 мг) в толуоле (1 мл) нагревали при 100°C в течение 20 ч. Смесь концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(1H-тетразол-5-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (42 мг) в виде оранжевой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ =1,40-2,20 (м, 24H), 3,29 (д, 2H, J=4,6 Гц) 3,73 и 3,74 (с и с, всего 6 H), 4,20-4,40 (м, 1H), 4,50-4,70 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,4 Гц); 6,67 (с, 1H), 7,37 (т, 2H, J=8,4 Гц), 9,68 (с, 1 H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H39N8O3 [M+H+]: 523, Найдено: 522,9.
[00154] (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(тиазол-2-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-N-(1-циано-4-(пиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (96 мг, 0,20 ммоль), P2S5 (90 мг, 0,40 ммоль) и EtOH (2 мл) нагревали при 80°C в течение 17 ч. Смесь концентрировали досуха с получением желтого твердого вещества. Твердое вещество растирали с DCM и фильтровали через тонкий слой целита. Фильтрат концентрировали и обрабатывали этил 2-бром-ацетатом (90 мкл, 0,60 ммоль) в уксусной кислоте (2 мл) при 60°C в течение 1 ч, 70°C в течение 1 ч и 80°C в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, и разбавляли EtOAc (20 мл), промывали NaHCO3 (20 мл×2), сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением (S)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-N-(4-(пиперидин-1-ил)-1-(тиазол-2-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (20 мг) в виде желтого масла; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,00 (м, 14H), 2,30-2,60 (м, 6H), 3,30-3,50 (м, 2H), 3,40-3,70 (м, 2 H), 3,73 (с, 6 H), 4,20-4,35 (м, 1H), 4,50-4,70 (м, 1H), 6,62 (д, 2H, J=8,4 Гц); 6,67 (с, 1H), 7,22 (д, 1 H, J =3,2 Гц), 7,36 (т, 1H, J=8,4 Гц), 7,70 (д, 1 H, J =3,4 Гц), 7,99 (д, 1 H, J=5,8 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H40N5O3S [M+H+]: 538, Найдено: 537,8.
[00155] Реагенты и условия: (a) MeOH, H2SO4, 75°C, 18 ч; (b) гидразин моногидрат, EtOH, 85°C, 8 ч; (c) амидин.HCl, KOtBu (1,0 M в THF), BuOH, 120°C, 4 ч; (d) карбонат аммония, Boc2O, пиридин, диоксан, 12 ч; (e) POCl3, имидазол, пиридин, 5°C, 1 ч; (f) P2S5, EtOH, 85°C, комнатная температура, 17 ч; (g) трифторацетил гидразид, толуол, 110°C, 4 ч; 1,2-дихлорбензол, 160°C, 17 ч.
[00156] (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: К раствору (S)-3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановая кислота гидрохлорида (0,50 г) в MeOH (10 мл) добавляли серную кислоту (конц., 0,30 мл). Раствор нагревали при 50°C в течение 1 ч и 75°C в течение 18 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали NaHCO3. Слой EtOAc сушили (Na2SO4), и концентрировали с получением неочищенного (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (0,41 г) в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 14H), 2,30-2,80 (м, 8H), 3,67 (с, 3 H), 4,20-4,40 (м, 1H), 4,40-4,60 (м, 1H), 6,68 (с, 1H), 7,20-7,60 (м, 5H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C26H34F2ClN4O3 [M+H+]: 523 и 525, Найдено: 523,1 и 525,2.
[00157] (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-гидразинил-1-оксопентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (0,40 г), гидразин моногидрата (1,0 мл) и EtOH (5 мл) нагревали с обратным холодильником при 85°C в течение 4 ч. Добавляли дополнительное количество гидразин моногидрата (2,0 мл), и нагревали с обратным холодильником при 90°C в течение 4 ч. LC-MS показала завершение реакции. Смесь концентрировали досуха, и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-гидразинил-1-оксопентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (0,35 г) в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 14H), 2,30-2,80 (м, 8H), 4,20-4,50 (м, 2H), 6,72 (с, 1H), 7,20-7,60 (м, 4H), 7,65 (с, 1H), 7,72 (д, 1H, J=8,4 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H34ClN6O2 [M+H+]: 523 и 525, Найдено: 522,7 и 524,9.
[00158] (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-(5-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К суспензии (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-гидразинил-1-оксопентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (104 мг, 0,20 ммоль), амидин.HCl (58 мг, 0,60 ммоль) в BuOH (20 мл) добавляли KOtBu (0,60 мл, 1,0M в THF, 0,60 ммоль). Смесь нагревали при 120°C в течение 4 ч, охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали EA (10 мл). Экстракт сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-(5-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (90 мг) в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 14H), 2,41 (с, 3 H), 2,42-2,80 (м, 6H), 3,05-3,20 (м, 2H), 4,20-4,40 (м, 1H), 4,50-4,70 (м, 1H), 6,73 (с, 1H), 7,26-7,60 (м, 4H), 7,80-7,95 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H35ClF2N7O [M+H+]: 546 и 548, Найдено: 545,7 и 547,9.
[00159] (S)-N-(1-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксопентан-3-ил)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановая кислота гидрохлорида (1,6 г, 2,76 ммоль) в пиридине (40 мл) и диоксане (40 мл) добавляли Boc2O (0,60 г, 2,76 ммоль), затем карбонат аммония (0,22 г, 2,76 ммоль). Ход реакции контролировали с помощью LC-MS. Добавляли дополнительное количество карбоната аммония и Boc2O (2 экв. каждый) через 1 ч. Перемешивание продолжали в течение 12 ч, и добавляли дополнительное количество карбоната аммония и Boc2O (2 экв. каждый). После дополнительного перемешивания в течение 1 ч, LC-MS показала завершение реакции. Смесь концентрировали досуха, гасили NaHCO3 (насыщ., 40 мл) и экстрагировали EtOAc (40 мл). Раствор EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-15% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-N-(1-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксопентан-3-ил)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамида (1,30 г) в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 14H), 2,30-2,80 (м, 8H), 4,20-4,60 (м, 2H), 5,33 (шир. с, 1H), 6,50 (шир. с, 1H), 6,72 (с, 1H), 7,20-7,60 (м, 4H), 7,71 (д, 1H, J=9,0 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H33ClN5O2 [M+H+]: 508 и 510, Найдено: 508,0 и 510,1.
[00160] (S)-5-(2-хлорфенил)-N-(1-циано-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамид: К смеси (S)-N-(1-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксопентан-3-ил)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамида (0,80 г, 1,6 ммоль) и имидазола (109 мг, 1,6 ммоль) в пиридине (15 мл) при 5°C добавляли по каплям POCl3 (0,30 мл, 3,2 ммоль). После добавления, смесь продолжали перемешивать при 5°C в течение 1 ч, прежде чем ее гасили NaHCO3, и экстрагировали EtOAc. Раствор EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (S)-5-(2-хлорфенил)-N-(1-циано-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамида (0,80 г) в виде коричневого масла (загрязненный пиридином); 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,70-2,20 (м, 14H), 2,40-2,80 (м, 6H), 2,86 (д, 2H, J=5,0 Гц), 4,20-4,50 (м, 2H), 6,74 (с, 1H), 7,20-7,60 (м, 5H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H31ClF2N5O [M+H+]: 490 и 492, Найдено: 489,9 и 492,2.
[00161] (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентанимидотиоат: Смесь (S)-5-(2-хлорфенил)-N-(1-циано-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)бутан-2-ил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамида (0,80 г, 1,5 ммоль), P2S5 (1,0 г, 4,5 ммоль) и EtOH (15 мл) нагревали при 85°C в течение 17 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали NaHCO3. Слой EtOAc сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением желтой пены.
[00162] К смеси вышеуказанной желтой пены (0,53 г, примерно 1,0 ммоль), K2CO3 (0,55g, 4,0 ммоль) и ацетона (10 мл) добавляли MeI (0,25 мл, 4,0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч перед гашением водой и EA. Слой EtOAc отделяли, сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением неочищенного (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентанимидотиоата (0,53 г) в виде коричневого масла.
[00163] (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-(5-(трифторметил)-4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-метил 3-(5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентанимидотиоата (0,12 г, 0,24 ммоль), трифторацетил гидразида (30 мг, 0,24 ммоль) и толуола (3 мл) нагревали при 110°C в течение 4 ч. LC-MS показала небольшой прогресс. Затем добавляли 1,2-дихлорбензол и смесь нагревали при 160°C в течение 17 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали досуха и очищали с получением (S)-5-(2-хлорфенил)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-(5-(трифторметил)-4H-1,2,4-триазол-3-ил)бутан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (20 мг) в виде не совсем белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 14H), 2,30-2,80 (м, 6H), 3,10-3,40 (м, 2H), 4,20-4,40 (м, 2H), 4,60-4,80 (м, 1H), 6,75 (с, 1H), 7,20-7,60 (м, 4H), 7,72 (д, 1H, J=8,4 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H32ClF5N7O [M+H+]: 600 и 602, Найдено: 599,9 и 602,0.
[00164] Схема 6: Получение (S)-трет-бутил 3-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата и (S)-трет-бутил 3-амино-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата
[00165] Общая методика синтеза (S)-трет-бутил 3-амино-5-(дифторпиперидин-1-ил)пентаноатов
[00166] Стадия 1: К раствору дифторпиперидин.HCl (1 экв.) в воде (1 мл/ммоль пиперидина) добавляли Na2CO3 (1 экв.), и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Добавляли THF (2 мл/ммоль пиперидина) и смесь охлаждали до -15°C. Добавляли DBU (1%), затем акролеин (90%, 1 экв.). После добавления смесь перемешивали при -15°C в течение 30 мин, и соединение 3-(дифторпиперидин-1-ил)пропанал в THF и воду использовали как есть на следующей стадии.
[00167] Стадия 2: К раствору т-бутил диэтилфосфоноацетата (1,2 экв дифторпиперидина) в THF (1 мл/ммоль фосфоноацетата) при комнатной температуре добавляли KOtBu (1,2 экв до 1 экв дифторпиперидина). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и затем охлаждали до 5°C. Затем, добавляли раствор 3-(дифторпиперидин-1-ил)пропанала, и полученную смесь медленно нагревали до комнатной температуры. Перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 2 ч перед тем, как смесь гасили водой, экстрагированной гексанами/EtOAc. Экстракт сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали, используя 0-10% EtOAc в гексанах с получением соединения (E)-трет-бутил 5-(дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноата.
[00168] Стадия 3: К раствору (S)-(N)-бензил-1-фенилэтиламина (1,5 экв.) в THF (2 мл/ммоль амина) при -75°C медленно добавляли n-BuLi (1,5 экв.). Перемешивание продолжали при -75°C в течение 30 мин перед добавлением по каплям раствора (E)-трет-бутил 5-(дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноата (1 экв.) в THF (1 мл/ммоль амина). После добавления, смесь продолжали перемешивать при -75°C в течение 3 ч, гасили лимонной кислотой и экстрагировали гексанами. Экстракт сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% EtOAc в гексанах с получением (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(дифторпиперидин-1-ил)пентаноата.
[00169] Стадия 4: Смесь (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (1 экв.), Pd/C (10% на угле, 0,3 экв. по массе) и MeOH (50 мл/г амина) гидрогенизировали в атмосфере H2 (50 фунт/кв.дюйм) с использованием Parr-Shaker при комнатной температуре в течение 3 дней до завершения реакции, контролируемой с помощью анализа LC-MS. Затем смесь гасили с помощью целита и фильтровали через тонкий слой целита, концентрировали с получением неочищенного (S)-трет-бутил 3-амино-5-(дифторпиперидин-1-ил)пентаноата.
[00170] (E)-трет-бутил 5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноат: При использовании общей процедуры (стадия 1 и 2), описанной выше, 3,3-дифторпипиридин.HCl(4,36 г, 27,7 ммоль) использовали для получения (E)-трет-бутил 5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноата (1,96 г) в виде бесцветного масла после колоночной очистки с использованием 0-10% EtOAc в гексанах; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,57 (с,9H), 1,60-2,00 (м, 4H), 2,30-2,80 (м, 8H), 5,78 (м, 1H), 6,82 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C14H26NO2 [M+H+]: 240, Найдено: 240,1.
[00171] (E)-трет-бутил 5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноат: При использовании общей процедуры (стадия 1 и 2), описанной выше, 4,4-дифторпипиридин.HCl (5,0 г, 31,7 ммоль) использовали для получения (E)-трет-бутил 5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноата (3,59 г) в виде белого твердого вещества после колоночной очистки с использованием 0-10% EtOAc в гексанах;1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,50 (с,9H),1,80-2,20 (м, 4H), 2,30-2,60 (м, 8H), 5,78 (м, 1H), 6,82 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C14H24F2NO2 [M+H+]: 276, Найдено: 275,8.
[00172] (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: При использовании общей процедуры (стадия 3), описанной выше, (E)-трет-бутил 5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноат (1,96 г, 7,1 ммоль) использовали для получения (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (1,87 г) в виде белого твердого вещества после колоночной очистки с использованием 0-10% EtOAc в гексанах. 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,35 (д, 3H, J=7,4 Гц), 1,45 (с, 9H), 1,50-2,00 (м,8H),2,30-2,80 (м, 6H), 3,30-3,40 (м, 1H), 3,48 (д, 1H, J=15,0 Гц), 3,70-3,90 (м, 2H), 7,15-7,45 (м, 10H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H41F2N2O2 [M+H+]: 487, Найдено: 486,7.
[00173] (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: При использовании общей процедуры (стадия 3), описанной выше, (E)-трет-бутил 5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пент-2-еноат (4,0 г, 19,1 ммоль) использовали для получения (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (3,78 г) в виде бесцветного масла после колоночной очистки с использованием 0-10% EtOAc в гексанах, 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,34 (д, 3H, J=7,0 Гц), 1,42 (с, 9H), 1,40-1,60 (м, 2H), 1,80-2,10 (м,6H), 2,30-2,70 (м, 6H), 3,30-3,40 (м, 1H), 3,48 (д, 1H, J=15,0 Гц), 3,70-3,90 (м, 2H), 7,15-7,45 (м, 10H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H41F2N2O2 [M+H+]: 487, Найдено: 486,6
[00174] (S)-трет-бутил 3-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: При использовании общей процедуры (стадия 4), описанной выше, (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат (1,9 г, 3,9 ммоль) использовали для получения неочищенного (S)-трет-бутил 3-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (1,29 г) в виде белой пены, 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,43 (с, 9H), 1,70-2,40 (м,8H), 2,60-3,20 (м, 7H), 3,60-3,80 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C14H28F2N2O2 [M+H+]: 293, Найдено: 292,8.
[00175] (S)-трет-бутил 3-амино-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: При использовании общей процедуры (стадия 4), описанной выше, (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат (9,3 г, 19,1 ммоль) использовали для получения неочищенного (S)-трет-бутил 3-амино-5-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (5,5 г) в виде белого твердого вещества; δ 1,45 (с, 9H), 1,70-2,40 (м,8H), 2,50-3,20 (м, 7H), 3,60-3,80 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C14H28F2N2O2 [M+H+]: 293, Найдено: 292,8.
[00176] Схема 7: (S)-1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-(тиазол-2-иламино)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид
[00177] Реагенты и условия: (a) TBTU, Et3N, MeCN, комнатная температура, 15 ч; (b) TFA, DCM,комнатная температура, 2 ч; (c) 2-аминотиозол, TBTU, Et3N, DMF, комнатная температура, 15 ч
[00178] (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: Смесь 1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (70 мг, 0,24 ммоль), (S)-трет-бутил 3-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (58 мг, 0,20 ммоль), Et3N (81 мкл, 0,80 ммоль) и TBTU (96 мг, 0,30 ммоль) в MeCN (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием EtOAc/Hex с получением (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (50 мг) в виде бесцветного масла; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,44 (с, 9H), 1,60-2,20 (м, 15H), 2,10-2,80 (м, 10H), 4,00-4,20 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 6,67 (с, 1H), 7,19 (д, 1H, J=6,2 Гц), 7,30-7,60 (м, 3H), 7,60-7,80 (м, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C31H43F4N4O3 [M+H+]: 595, Найдено: 594,9
[00179] (S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановая кислота: К раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат (50 мг, 0,096 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли TFA (0,5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли в вакууме и разбавляли CHCl3. Растворитель удаляли с получением (S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановой кислоты (38 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 18H), 2,40-2,80 (м, 7H), 4,00-4,20 (м, 1H), 4,30-4,50 (м, 1H), 6,67 (с, 1H), 7,19 (д, 1H, J=7,6 Гц), 7,40-7,80 (м, 3H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C27H35F4N4O3 [M+H+]: 539, Найдено: 538,7.
[00180] (S)-1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-(тиазол-2-иламино)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановой кислоты (35 мг, 0,065 ммоль), 2-аминотиазола (13 мг, 0,13 ммоль), Et3N (36 мкл, 0,26 ммоль) и TBTU (42 мг, 0,13 ммоль) в DMF (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой. Органический слой сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-100% EtOAc в гексанах с получением желаемого продукта (S)-1-циклопентил-5-(2-(1,1-дифторэтил)фенил)-N-(5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксо-1-(тиазол-2-иламино)пентан-3-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (18 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,20 (м, 18H), 2,40-2,80 (м, 7H), 4,00-4,20 (м, 1H), 4,40-4,60 (м, 1H), 6,70 (с, 1H), 6,97 (д, 1H, J=3,8 Гц), 7,19 (д, 1H, J=6,6 Гц), 7,40-7,60 (м, 3H), 7,67 (д, 1H, J=6,6 Гц), 7,81 (д, 1H, J=8,0 Гц), 11,5 (шир. с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C30H37F4N6O2S [M+H+]: 621, Найдено: 620,9.
[00181] Схема 8: Получение (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(циклопентил(метил)амино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00182] Реагенты и условия: (a) циклобутиламина, EtOH, 90°C, 24 ч; (b) Реагент Десс-Мартина, DCM, комнатная температура, 0,5 ч; (c) N-метилциклопентанамин, цианоборгидрид натрия, MeOH, комнатная температура, 3 ч
[00183] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-гидрокси-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксипентаноата (0,15 г), циклобутиламина (0,50 мл) и EtOH (1 мл) нагревали в запаянной трубке при 90°C в течение 24 ч. Смесь концентрировали и очищали с использованием EtOAc в гексанах (0-25%) с получением (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-гидрокси-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (97 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 0,80-0,95 (м, 2H), 1,40-2,70 (м, 16H), 3,60-3,80 (м, 2H), 4,04-4,20 (м, 1H), 4,20-4,45 (м, 1H), 4,50-4,70 (м, 1H), 6,18 (шир. с, 1H), 6,73 (с, 1H), 7,25-7,40 (м, 1H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,90 (м,1 H), 7,98 (шир. с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H32F3N4O3 [M+H+]: 493, Найдено: 493,1.
[00184] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-1,5-диоксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-гидрокси-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (90 мг, 0,18 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли реагент Десс-Мартина (153 мг, 0,36 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, прежде чем ее гасили тиосульфатом натрия (10%) и NaHCO3. Смесь экстрагировали DCM и экстракт сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием EtOAc в гексанах (0-20%) с получением (S)-N-(1-(циклобутиламино)-1,5-диоксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (32 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,29 (т, 2H,J=7,0 Гц), 1,40-2,70 (м, 15H), 2,90-3,10 (м, 1H), 4,04-4,20 (м, 1H), 4,50-4,6 (м, 1H), 4,65-4,90 (м, 1H), 5,28 (шир. с, 1H), 6,73 (с, 1H), 6,84 (д, 1H, J=7,8 Гц), 7,25-7,40 (м, 1H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,85 (м,1 H), 9,81 (с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H30F3N4O3 [M+H+]: 491, Найдено: 490,6.
[00185] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(циклопентил(метил)амино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид
[00186] К смеси неочищенного альдегида, (S)-N-(1-(циклобутиламино)-1,5-диоксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (74 мг, 0,150 ммоль) и N-метилциклопентанамина (30 мг, 0,300 ммоль) в MeOH (4 мл) добавляли цианоборгидрид натрия (19 мг, 0,300 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1-3 ч до завершения реакции согласно анализу LC-MS. Затем смесь концентрировали и очищали с использованием MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(циклопентил(метил)амино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (23 мг) в виде бесцветного масла; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,90 (м, 31H), 4,04-4,20 (м, 1H), 4,20-4,50 (м, 2H), 6,74 (с, 1H), 7,03 (шир. с, 1H), 7,14 (шир. с, 1 H), 7,25-7,40 (м, 1H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,90 (м,1 H), 8,56 (шир. с, 1H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C31H43F3N5O2 [M+H+]: 574, Найдено: 573,9.
[00187] Схема 9: Получение (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(оксетан-3-карбоксамидо)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид
[00188] Реагенты и условия: (a) Zn(N3)2.Py2, PPh3, толуол, DIAD, комнатная температура, 20 ч; (b) TFA, DCM, комнатная температура, 2 ч; циклобутиламина, CH3CN, Et3N, TBTU, комнатная температура, 18 ч; (c) H2, 10% Pd/C, EtOH, комнатная температура, 17 ч; (d) 3-оксетанкарбоновая кислота, CH3CN, Et3N,TBTU, комнатная температура, 18 ч
[00189] Получение Zn(N3)2.Py2: К раствору Zn(NO3)2 (3,57 г, 12 ммоль) в воде (6 мл) добавляли раствор азида натрия (0,78 г, 12,0 ммоль) в воде (6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и нагревали до 50°C, с последующим добавлением по каплям пиридина (2,0 мл, 24,7 ммоль). После добавления масляную баню удаляли, и перемешивание продолжали в течение 1 ч с получением мутной смеси. Суспензию фильтровали, промывали холодной водой (5 мл) и сушили на воздухе с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г) в виде белого твердого вещества.
[00190] (S)-трет-бутил 5-азидо-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентаноат: К смеси (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксипентаноата (2,5 г, 5,0 ммоль), Zn(N3)2.Py2 (1,15 г, 3,75 ммоль), PPh3 (2,62 г, 10,0 ммоль) и толуола (50 мл) добавляли по каплям DIAD (2,0 мл, 10 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь фильтровали, промывали EtOAc, и фильтрат концентрировали и очищали с использованием EtOAc в гексанах (0-40%) с получением (S)-трет-бутил 5-азидо-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентаноата (2,04 г) в виде белого полутвердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,46 (с, 9H), 1,50-1,60 (м, 2H), 1,80-2,10 (м, 8H), 2,55-2,65(м, 2H), 3,45 (т, 2H, J=7,1 Гц), 4,40-4,60 (м, 1H), 4,85-5,05 (м, 1H), 6,31 (шир. с, 1H), 6,76 (с, 1H), 7,28-7,40 (м, 2H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,90 (м,1 H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H32F3N6O3 [M+H+]: 521, Найдено: 520,9.
[00191] (S)-N-(5-азидо-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-трет-бутил 5-азидо-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентаноата (99 мг, 0,190 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли TFA (0,15 мл, 1,90 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли с получением неочищенной (S)-5-азидо-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентановой кислоты (100 мг) в виде желтого масла, которую использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
[00192] К раствору (S)-5-азидо-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентановой кислоты (100 мг, 0,215 ммоль) и циклобутиламина (30 мг, 0,430 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли безводный NEt3 (0,090 мл, 0,645 ммоль), затем TBTU (138 мг, 0,430 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (10 мл) и промывали насыщ. NaHCO3 (5 мл). Органическую фазу экстрагировали, добавляли силикагель (100 мг) и очищали с помощью Combiflash® Rf (EtOAc/гексаны) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением 35 мг (S)-N-(5-азидо-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида в виде белой пены; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,40 (м, 16H), 2,55-2,65 (м, 2H), 3,44 (т, 2H, J=7,6 Гц), 4,10-4,50 (м, 3H), 6,64 (шир. с, 1H), 6,75 (с, 1H), 7,28-7,40 (м, 2H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,90 (м,1 H); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H30F3N7O2 [M+H+]: 518, Найдено: 518,2.
[00193] (S)-N-(5-амино-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-N-(5-азидо-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (35 мг) Pd/C (10%, 7 мг) и EtOH (3 мл) перемешивали под баллоном водорода в течение 17 ч. LC-MS показала завершение восстановления. Затем смесь фильтровали через тонкий слой целита, и фильтрат концентрировали с получением неочищенного (S)-N-(5-амино-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида в виде бесцветного масла (30 мг); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H33F3N5O2 [M+H+]: 492, Найдено: 492,2.
[00194] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(оксетан-3-карбоксамидо)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К раствору (S)-N-(5-амино-1-(циклобутиламино)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (30 мг, 0,061 ммоль) и 3-оксетанкарбоновой кислоты (13 мг, 0,122 ммоль) в ACN (2 мл) добавляли безводный NEt3 (0,018 мл, 0,183 ммоль), затем TBTU (39 мг, 0,122 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (10 мл) и промывали насыщ. NaHCO3 (5 мл). Органическую фазу экстрагировали, добавляли силикагель (100 мг) и очищали с помощью Combiflash® Rf (EtOAc/гексаны) и фракции, содержащие продукт (TLC), объединяли и выпаривали с получением (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(оксетан-3-карбоксамидо)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида (6 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 1,40-2,80 (м, 19H), 3,60-3,90 (м, 2H), 4,10-4,50 (м, 3H), 4,70-5,00 (м, 4H). 6,32 (шир. с, 1H), 6,71 (с, 1H), 7,18 (шир. с, 1H), 7,28-7,40 (м, 1H), 7,50-7,70 (м, 2H), 7,70-7,90 (м, 1H), 8,15 (д, 1H, J=8,8 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H37F3N5O4 [M+H+]: 576, Найдено: 576,2.
[00195] Схема 10: Получение (S)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксо-1-сульфамоилбутан-2-ил)-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00196] Реагенты и условия: (a) изобутилхлорформиат, N-метилморфолин, DME, -15°C, 1 ч; NaBH4, H2O; (b) йод, PPh3, имидазол, DCM, 0°C до комнатной температуры, 18 ч; (c) Тиоацетат калия, DMF, комнатная температура, 15 ч; (d) 30% масс/масс H2O2 раствор, муравьиная кислота, комнатная температура, 18 ч; (e) SOCl2, DMF (3 капли), комнатная температура, 3 дня, 40°C, 1,5 ч; (f) раствор гидроксида аммония, THF, 2 мин; (g) AcOH, 100°C, 15 ч; (h) HATU, HOAt, 3,3-дифторпиперидин гидрохлорид, i-PrNEt2, DMF, 0°C, комнатная температура, 3 дня; (i) Et2NH, CH3CN, комнатная температура, 1,5 ч; HATU, HOAt, i-PrNEt2, DMF, комнатная температура, 2 ч
[00197]
[00198] 
[00199]
[00200] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-гидроксибутаноат:
[00201] N-метилморфолин (4,46 мл, 40,6 ммоль, 1,00 эквив.) добавляли к раствору (S)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-метокси-4-оксобутановой кислоты в DME (81 мл) при -15°C. Затем добавляли по каплям изобутилхлорформиат (5,27 мл, 40,6 ммоль, 1,00 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при той же температуре в течение 1 ч. Раствор фильтровали на фритте и фильтрат охлаждали до -15°C. Добавляли раствор боргидрида натрия (2,30 г, 60,9 ммоль, 1,50 эквив.) в воде (20 мл). Сразу после этого добавления, добавляли 800 мл воды (образуется белый осадок). Раствор фильтровали, твердое вещество измельчали до мелкого порошка и сушили при пониженном давлении с получением 9,13 г (63%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, смешанного с некоторым соответствующим лактонизированным продуктом. m/z (M+H)+=356,1; RT=1,51 мин; чистота=65%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00202] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-иодбутаноат: Йод (5,46 г, 21,5 ммоль, 1,00 эквив.) добавляли к раствору трифенилфосфина (5,65 г, 21,5 ммоль, 1,00 эквив.) и имидазола (1,76 г, 25,8 ммоль, 1,20 эквив.) в DCM (86 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при той же температуре и добавляли спирт. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Добавляли водный насыщенный раствор Na2S2O3 и смесь перемешивали в течение 10 мин и экстрагировали этилацетатом (2x). Объединенные органические слои сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (сухое заполнение), используя раствор этилацетата в гексане (5-30%) с получением 1,27 г (13%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества и 4,0 г смеси указанного в заголовке соединения и примеси (Отношение LCMS=58:42). Чистое соединение: m/z (M+H)+=466,0; RT=1,86 мин; чистота=94%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: ацетонитрил, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,57-2,53 (м, 1H), 2,64 (дд, J=15,8, 5,3 Гц, 1H), 3,27 (дд, J=10,0, 6,9 Гц, 1H), 3,37 (дд, J=10,1, 5,2 Гц, 1H), 3,58 (с, 3H), 3,90-3,81 (м, 1H), 4,23 (т, J=6,9 Гц, 1H), 4,37-4,27 (м, 2H), 7,33 (тд, J=7,5, 1,1 Гц, 2H), 7,42 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,58 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,70 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00203] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(ацетилтио)бутаноат: Тиоацетат калия (393 мг, 3,44 ммоль, 2,00 эквив.) добавляли к раствору (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-иодбутаноата в DMF (6,9 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч. Добавляли водный насыщенный раствор бикарбоната натрия, затем этилацетат. Фазы разделяли и органический слой промывали 2x насыщ. водн. NaHCO3, сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексане (5-40%) с получением 555 мг (78%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. m/z (M+H)+=414,1; RT=1,76 мин; чистота=99,3%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B:ацетонитрил, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,32 (с, 3H), 2,54-2,52 (м, 2H), 2,90 (дд, J=13,5, 7,7 Гц, 1H), 3,10 (дд, J=13,5, 5,5 Гц, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,96-3,89 (м, 1H), 4,21 (т, J=7,0 Гц, 1H), 4,32-4,27 (м, 2H), 7,33 (тд, J=7,4, 1,1 Гц, 2H), 7,45-7,39 (м, 3H), 7,67 (д, J=7,4 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00204] (S)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-метокси-4-оксобутан-1-сульфоновая кислота:
[00205] 30% мас./мас. раствора пероксида водорода в воде (1,3 мл) добавляли к муравьиной кислоте (5,0 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. Добавляли суспензию (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(ацетилтио)бутаноата в муравьиной кислоте (4,0 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 18. Растворитель выпаривали и затем неочищенный продукт выпаривали совместно с толуолом и смесью DCM/толуол с получением 554 мг (98%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества. m/z (M+H)+=420,1; RT=1,31 мин; чистота=87,7%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B:ацетонитрил, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,54-2,51 (м, 1H), 2,65-2,59 (м, 1H),2,71-2,65 (м, 1H), 3,06 (дд, J=15,8, 5,0 Гц, 1H), 3,55 (с, 3H),4,13-4,08 (м, 1H), 4,28-4,18 (м, 3H), 7,19-7,12 (м, 1H), 7,27-7,22 (м, 1H), 7,32 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,41 (дд, J=7,4, 6,5 Гц, 2H), 7,66 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,88 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00206] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(хлорсульфонил)бутаноат:
[00207] Тионилхлорид (1,4 мл, 20 ммоль, 15 эквив.), содержащий три капли DMF, добавляли к (S)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-метокси-4-оксобутан-1-сульфоновой кислоте (554 мг, 1,32 ммоль, 1,00 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней и нагревали при 40°C в течение 1,5 ч. Летучие вещества испаряли и смесь выпаривали совместно 2x с DCM с получением 550 мг (95%) указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества темно-оранжевого цвета. m/z (M+H)+=438,1; RT=1,77 мин; чистота=94,8%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B:ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,68 (дд, J=13,4, 4,5 Гц, 1H), 2,54-2,48 (м, J=7,7 Гц, 1H), 2,62 (дд, J=13,8, 7,8 Гц, 1H), 3,06 (дд, J=15,7, 5,0 Гц, 1H), 3,55 (с, 3H), 4,15-4,07 (м, 1H), 4,27-4,18 (м, 3H), 7,26 (д, J=7,9 Гц, 1H), 7,32 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,41 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,66 (д, J=7,0 Гц, 2H), 7,88 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00208] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-сульфамоилбутаноат: Концентрированный водный раствор гидроксида аммония (0,22 мл, 3,1 ммоль, 5,0 эквив.) добавляли к раствору (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(хлорсульфонил)бутаноата (275 мг, 0,628 ммоль, 1,00 эквив.) в THF (3,1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 мин и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексанах (5-60%), с получением 140 мг (53%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества. m/z (M+H)+=419,1; RT=1,52 мин; чистота=>95%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B:ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,64-2,58 (м, 1H), 2,80 (дд, J=15,8, 4,7 Гц, 1H), 3,18 (дд, J=14,0, 6,9 Гц, 1H), 3,25 (дд, J=14,0, 6,0 Гц, 1H), 3,58 (с, 3H), 4,31-4,19 (м, 4H), 6,92 (с, 2H), 7,32 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,42 (т, J=7,3 Гц, 2H), 7,49 (д, J=8,2 Гц, 1H), 7,67 (д, J=7,4 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00209] (S)-3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-сульфамоилбутановая кислота: HCl (конц., 1,1 мл) добавляли к раствору (I)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-сульфамоилбутаноата (140 мг, 0,335 ммоль, 1,00 эквив.) в AcOH (11 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 15 ч. Реакционную смесь выливали в 70 мл воды и добавляли этилацетат. Фазы разделяли и органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенную смесь выпаривали совместно с диоксаном и DCM с получением 122 мг (90%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества. m/z (M+H)+=405,2; RT=1,45 мин; чистота=96,6%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00210] (S)-(9H-флуорен-9-ил)метил (4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксо-1-сульфамоилбутан-2-ил)карбамат: HATU (126 мг, 0,332 ммоль, 1,10 эквив.) добавляли к раствору (I)-3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-сульфамоилбутановой кислоты (122 мг, 0,302 ммоль, 1,00 эквив.), HOAt (41 мг, 0,30 ммоль, 1,0 эквив.), 3,3-дифторпиперидин гидрохлорида (95 мг, 0,60 ммоль, 2,0 эквив.) и диизопропилэтиламина (0,16 мл, 0,91 ммоль, 3,0 эквив.) в DMF (1,2 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавляли воду, затем этилацетат. Фазы разделяли и органический слой промывали насыщ. водн. NaHCO3 (3x), сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле с использованием раствора MeOH в DCM (0-5%) с получением 136 мг (89%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества. m/z (M+H)+=508,2; RT=1,65 мин; чистота=97,2%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,62-1,53 (м, 1H), 1,70-1,63 (м, 1H), 2,09-1,98 (м, 3H), 2,09-1,98 (м, 3H), 2,77-2,70 (м, 1H), 3,30-3,18 (м, J=7,1 Гц, 3H), 3,46-3,42 (м, 1H), 3,82 -3,71 (м, 2H), 4,24-4,18 (м, 1H), 4,32-4,26 (м, 3H), 6,88 (д, J=5,5 Гц, 2H), 7,35-7,30 (м, 3H), 7,41 (т, J=7,2 Гц, 2H), 7,68 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,5 Гц, 2H),.
[00211] (S)-1-циклопентил-N-(4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксо-1-сульфамоилбутан-2-ил)-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Диэтиламин (0,28 мл, 2,7 ммоль, 10 эквив.) добавляли к раствору (S)-(9H-флуорен-9-ил)метил (4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксо-1-сульфамоилбутан-2-ил)карбамата (135 мг, 0,266 ммоль, 1,00 эквив.) в ацетонитриле (2,7 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Растворитель выпаривали и неочищенную смесь выпаривали совместно 2x с DCM с получением 118 мг неочищенного амина (64% масс./масс. с учетом гипотетического количественного выхода), который использовали как есть. HATU (16 мг, 0,041 ммоль, 1,1 эквив.) добавляли к раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (12 мг, 0,037 ммоль), HOAt (5,0 мг, 0,037 ммоль, 1,0 эквив.) и диизопропилэтиламина (19 мкл, 0,11 ммоль, 3,0 эквив.) в DMF (0,2 мл). Добавляли суспензию неочищенного амина (16 мг, 0,037 ммоль, 1,0 эквив., 64% масс./масс.) в DMF (0,17 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь помещали наверх колонки С-18 и очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой с использованием раствора MeCN в воде (содержащий 10 мМ формиата аммония, pH=3,8) (5-65%). Фракции объединяли и лиофилизировали с получением 10 мг указанного в заголовке соединения, которое далее очищали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ-МС (колонка X-Bridge 30×50) с использованием раствора MeCN в воде (содержащий 10 мМ формиата аммония, pH=3,8) (45-65%). Фракции объединяли и лиофилизировали с получением 2,2 мг (10%) указанного в заголовке соединения. m/z (M+H)+=592,3; RT=1,76 мин; чистота=>99%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 8,10 и 8,05 (д, J=8,6 Гц, 1H, NH, ротамеры), 1,64-1,45 (м, 4H), 1,73-1,65 (м, 1H),2,10-1,76 (м, 10H), 2,22-2,12 (м, 2H), 2,84-2,73 (м, 1H), 3,02-2,88 (м, 1H), 3,28-3,23 (м, 4H), 3,60-3,37 (м, 3H), 3,91-3,68 (м, 3H), 4,20 (квинт, J=7,4 Гц, 1H), 4,70-4,65 (м, 1H), 6,63 (с, 1H), 7,57 -7,51 (м, 2H), 7,76 (т, J=7,6 Гц, 1H),7,82 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,93 (д, J=8,0 Гц, 1H).
[00212] Схема 11: Получение (S)-N-(1-(N-циклобутилсульфамоил)-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксобутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00213] Реагенты и условия: (a) циклобутиламин, THF, комнатная температура, 10 мин; (b) HCl, AcOH, H2O, 100°C; (c) 3,3-дифторпиперидин гидрохлорид, i-PrNEt2, DMF, 0°C, комнатная температура, 3 дня; (d) Et2NH, CH3CN, 1,5 ч (e) 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, HATU, HOAt, i-PrNEt2, DMF, комнатная температура, 2 ч
[00214] (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(N-циклобутилсульфамоил)бутаноат: Циклобутиламин (0,13 мл, 1,6 ммоль, 2,5 эквив.) добавляли к раствору (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(хлорсульфонил)бутаноата (275 мг, 0,628 ммоль) в THF (3,1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексанах (5-60%) с получением 159 мг (54%) указанного в заголовке соединения в виде оранжевого вязкого масла. m/z (M+H)+=473,1; RT=1,72 мин; чистота=>95%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,59-1,48 (м, 2H), 1,95-1,84 (м, 2H),2,20-2,11 (м, 2H), 2,58 (дд, J=15,7, 8,7 Гц, 1H), 2,76 (дд, J=15,7, 4,9 Гц, 1H), 3,10 (дд, J=14,2, 6,5 Гц, 1H), 3,16 (дд, J=14,1, 6,3 Гц, 1H), 3,58 (с, 3H), 3,70 (сикс, J=8,4 Гц, 1H), 4,25-4,18 (м, 2H), 4,34-4,26 (м, 2H), 7,34-7,30 (м, 2H), 7,41 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,46 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,54 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,68 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,5 Гц, 2H).
[00215] (S)-3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(N-циклобутилсульфамоил)бутановая кислота
[00216] HCl (конц., 0,84 мл) добавляли к раствору (S)-метил 3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(N-циклобутилсульфамоил)бутаноата (140 мг, 0,335 ммоль, 1,00 эквив.) в AcOH (8,4 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 15 ч. Реакционную смесь выливали в 70 мл воды и добавляли этилацетат. Фазы разделяли и органический слой сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенную смесь выпаривали совместно с диоксаном и DCM с получением 81 мг (70%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества. m/z (M+H)+=459,2; RT=1,64 мин; чистота=98,1%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00217] (S)-(9H-флуорен-9-ил)метил (1-(N-циклобутилсульфамоил)-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксобутан-2-ил)карбамат: HATU (74 мг, 0,19 ммоль, 1,10 эквив.) добавляли к раствору (S)-3-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-4-(N-циклобутилсульфамоил)бутановой кислоты (81 мг, 0,18 ммоль, 1,0 эквив.), HOAt (24 мг, 0,18 ммоль, 1,0 эквив.), 3,3-дифторпиперидин гидрохлорида (56 мг, 0,35 ммоль, 2,0 эквив.) и диизопропилэтиламина (92 мкл, 0,53 ммоль, 3,0 эквив.) в DMF (0,7 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавляли воду, затем этилацетат. Фазы разделяли и органический слой промывали водн. насыщ. NaHCO3 (3x), сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле с использованием раствора MeOH в DCM (1-2%) с получением 73 мг (74%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества. m/z (M+H)+=562,3; RT=1,84 мин; чистота=99,2%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,59-1,48 (м, 3H), 1,70-1,63 (м, 2H), 1,94-1,85 (м, 2H), 2,10-1,99 (м, 3H), 2,19-2,10 (м, 2H), 2,74-2,66 (м, 1H), 3,18-3,12 (м, 1H), 3,47-3,41 (м, 1H), 3,83-3,65 (м, 4H), 4,25-4,19 (м, 2H), 4,31-4,27 (м, 2H), 7,32 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,41 (т, J=7,1 Гц, 2H), 7,51-7,47 (м, 1H), 7,68 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,89 (д, J=7,6 Гц, 2H).
[00218] (S)-N-(1-(N-циклобутилсульфамоил)-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксобутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Диэтиламин (0,13 мл, 1,3 ммоль, 10 эквив.) добавляли к раствору (S)-(9H-флуорен-9-ил)метил (1-(N-циклобутилсульфамоил)-4-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-4-оксобутан-2-ил)карбамата (73 мг, 0,13 ммоль, 1,0 эквив.) в ацетонитриле (1,3 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Растворитель выпаривали и неочищенную смесь выпаривали совместно 2x с DCM с получением 68 мг неочищенного амина (65% масс./масс. с учетом гипотетического количественного выхода), который использовали как есть. HATU (17 мг, 0,046 ммоль, 1,1 эквив.) добавляли к раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (14 мг, 0,042 ммоль), HOAt (5,7 мг, 0,042 ммоль, 1,0 эквив.) и диизопропилэтиламина (22 мкл, 0,13 ммоль, 3,0 эквив.) в DMF (0,22 мл). Добавляли суспензию неочищенного амина (22 мг, 0,042 ммоль, 1,0 эквив., 65% масс/масс) в DMF (0,20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Добавляли воду, затем этилацетат. Фазы разделяли и органический слой промывали 2x водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ-МС (колонка X-Bridge 30×50) с использованием раствора MeCN в воде (содержащий 10 мМ формиата аммония, pH=3,8) (55-75%). Чистые фракции объединяли и лиофилизировали с получением 6,7 мг (25%) указанного в заголовке соединения. m/z (M+H)+=646,3; RT=1,93 мин; чистота=>99%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 8,15 и 8,11 (д, J=8,4 Гц, 1H, NH, ротамеры), 1,64-1,47 (м, 2H), 1,73-1,65 (м, 1H), 1,98-1,75 (м, 4H), 2,11-1,99 (м, 2H), 2,89-2,77 (м, 1H), 3,04-2,92 (м, 1H), 3,40-3,34 (м, 4H), 3,61-3,42 (м, 3H), 3,91-3,70 (м, 2H), 4,20 (квинт, J=7,2 Гц, 1H), 4,77-4,68 (м, 1H), 6,62 (с, 1H), 6,99-6,94 (м, 2H), 7,54 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,5 Гц, 1H), 7,93 (д, J=7,5 Гц, 1H).
[00219] Схема 12: Получение (R)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-(4-фторфенокси)бутановой кислоты
[00220] Реагенты и условия: (a) Изобутилхлорформиат, N-метилморфолин, THF, -20°C, 1 ч; NaBH4, MeOH, 1 ч; (b) п-фторфенол, PPh3, диамид, комнатная температура, 18 ч; (c) 4M HCl в диоксане, комнатная температура, 2 ч; (d)
[00221] 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, HATU, HOAt, DIPEA, DMF, комнатная температура, 2 ч; (e) H2 (баллон), EtOH, 10% Pd/C, 16 ч
[00222] (R)-бензил-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-гидроксибутаноат: К перемешиваемому и охлажденному (-20°C, CryoCool) THF (150 мл) раствору Boc-D-Asp(βOBn)-OH (10,00 г, 30,93 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли N-метилморфолин (3,40 мл, 30,93 ммоль, 1,00 эквив.). Затем добавляли изобутилхлорформиат (4,01 мл, 30,93 ммоль, 1,00 эквив.) в течение 45 мин. (поршневый насос). Полученную белую суспензию перемешивали 1 ч. Добавляли боргидрид натрия (3,51 г, 92,79 ммоль, 3,00 эквив.) одной порцией, смесь перемешивали в холоде 1 ч. По каплям добавляли метанол (50 мл) в течение приблизительно 30 минут. Смесь перемешивали 30 мин, затем медленно добавляли 40 мл водн. 1 M KHSO4 (в течение 30 мин.), перемешивание продолжали 15 мин, затем выпаривали органический растворитель. Остаток обрабатывали 30 мл водн. 1M HCl и продукт экстрагировали 2×100 мл EtOAc. Органические экстракты объединяли, промывали 25 мл водн. 1M HCl, 25 мл насыщ. водн. NaHCO3, 25 мл воды, 25 мл насыщ. водн. NaCl. Раствор сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 100 г колонка, DCM, изократические условия 5 мин, затем до 10% MeOH/DCM за 15 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме в течение ночи, с получением указанного в заголовке соединения, 3,0 г (31%) прозрачное густое масло. m/z (M+H)+- Boc= 210,1; RT=1,48 мин; чистота=80%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,36 (с, 9H), 2,37 (дд, J=15,3, 8,6 Гц, 1H), 2,60 (дд, J=15,2, 5,2 Гц, 1H), 3,25-3,18 (м, 1H), 3,39-3,34 (м, 1H), 3,87-3,77 (м, 1H), 4,77 (т, J=5,7 Гц, 1H), 5,06 (с, 2H), 6,67 (д, J=8,6 Гц, 1H), 7,38-7,30 (м, 5H).
[00223] (R)-бензил-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-(4-фторфенокси)бутаноат: К перемешиваемому ледяному толуоловому (3 мл) раствору (R)-бензил-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-гидроксибутаноата (100 мг, 0,320 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли п-фторфенол (47 мг, 0,420 ммоль, 1,30 эквив.), трифенилфосфин (110 мг, 0,420 ммоль, 1,30 эквив.) и в заключение диамид (72 мг, 0,420 ммоль, 1,30 эквив.). Суспензию перемешивали 1 ч на холоде, оставляли нагреваться до комнатной температуры, перемешивали в течение ночи. Растворитель выпаривали, остаток очищали CombiFlash®, 4 г колонка, сухая упаковка, 10% этилацетат/гексан, изократические условия 3 мин, затем до 50:50 EtOAc:Hex за 15 мин. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали. Остаток был еще загрязненным. Он был повторно очищен, CombiFlash®, 12 г колонка, гексан, изократические условия, 4 мин, затем до 5% iPrOH/Hex. за 10 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 62 мг (48%) в виде прозрачного масла. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,36 (с, 9H), 2,58 (дд, J=14,6, 8,0 Гц, 1H),2,67 (дд, J=15,6, 5,9 Гц, 1H),3,83 (дд, J=9,6, 6,2 Гц, 1H),3,92 (дд, J=9,6, 5,9 Гц, 1H), 5,09 (с, 2H), 4,23-4,12 (м, 1H), 6,95-6,87 (м, 2H), 7,12-7,06 (м, 2H), 7,45-7,30 (м, 6H).
[00224] (R)-бензил3-амино-4-(4-фторфенокси)бутаноат гидрохлорид: (R)-бензил-3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-(4-фторфенокси)бутаноат (60 мг, 0,15 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в 3 мл раствора 4 н HCl/диоксан. Раствор перемешивали при комнатной температуре 2 часа; азот барботировали в раствор в течение 1 ч для удаления как можно большего количества HCl. Растворитель выпаривали; к маслянистому остатку добавляли 1 мл диэтилового эфира. Продукт растворяли; гексан (примерно 0,5 мл) медленно добавляли для получения белого осадка. Суспензию обрабатывали ультразвуком 5 мин., затем центрифугировали 10 мин. при 3000 об/мин, супернатант декантировали. Остаточное твердое вещество повторно суспендировали в 1,5 мл диэтилового эфира, обрабатывали ультразвуком 10 мин, центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, супернатант декантировали, твердое вещество сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 36 мг (71%) в виде белого твердого вещества. m/z (M+H)+=304,0; RT=1,32 мин; чистота=91,3%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил, 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 2,89 (д, J=6,7 Гц, 2H), 3,90-3,82 (м, 1H), 4,09 (дд, J=10,4, 6,2 Гц, 1H), 4,18 (дд, J=10,4, 3,8 Гц, 1H), 5,16 (с, 2H), 7,01-6,95 (м, 2H), 7,18-7,12 (м, 2H), 7,41-7,32 (м, 5H), 8,36 (с, широкий, 3H).
[00225] (R)-бензил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-(4-фторфенокси)бутаноат: К перемешиваемому DMF (1 мл) раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (42 мг, 0,130 ммоль, 1,25 эквив.) в атмосфере азота добавляли HATU (49 мг, 0,130 ммоль, 1,25 эквив.), HOAt (18 мг, 0,130 ммоль, 1,25 эквив.) и DIPEA (72 мкл, 0,412 ммоль, 4,00 эквив.). Желтый раствор перемешивали 10 мин, затем добавляли (R)-бензил 3-амино-4-(4-фторфенокси)бутаноат гидрохлорид (32 мг, 0,103 ммоль, 1,00 эквив.). Раствор перемешивали 2 часа при комнатной температуре, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали 2×10 мл водн. 0,5 н лимонной кислотой, 3×10 мл насыщ. водн. NaHCO3, 10 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 12 г колонка, 10% EtOAc/Hex, изократические условия, 3 мин, затем до 50% EtOAc/Hex за 10 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 34 мг (61%) в виде прозрачного аморфного твердого вещества. m/z (M+H)+=610,4; RT=2,17 мин; чистота=87,0%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,58-1,45 (м, 2H), 2,05-1,72 (м, 6H), 2,91-2,83 (м, 2H), 4,03-3,97 (м, 1H), 4,25-4,07 (м, 2H), 4,78-4,68 (м, 1H), 5,11 (с, 2H), 6,66 (с, 1H), 7,00-6,93 (м, 2H), 7,14-7,07 (м, 2H), 7,35-7,25 (м, 5H), 7,54 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,77 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,83 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,94 (д, J=7,6 Гц, 1H), 8,15 (д, J=8,7 Гц, 1H).
[00226] (R)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-(4-фторфенокси)бутановая кислота: К перемешиваемому EtOAc (5 мл) раствору (R)-бензил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-(4-фторфенокси)бутаноата (30 мг, 0,050 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли Pd/C 10% (25 мг). Систему продували 3× H2, затем гидрировали (H2 баллон) в течение ночи. Смесь фильтровали через целит, осадок промывали 3×10 мл EtOAc, фильтраты объединяли, растворитель выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 12 г C18 колонка, 1 мин, изократические условия, водн. 10 мМ бикарбонат аммония, затем до 50% ацетонитрила/вод. 10 мМ бикарбонат аммония за 12 мин. Чистые фракции объединяли, ацетонитрил выпаривали, оставшийся водн. раствор замораживали и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения, 15 мг (58%) в виде твердого вещества. m/z (M+H)+=520,3; RT=1,85 мин; чистота=92,2%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 1,60-1,46 (м, 2H), 2,15-1,80 (м, 6H), 2,98-2,88 (м, 2H), 4,21-4,11 (м, 2H), 4,24 (дд, J=9,5, 4,0 Гц, 1H), 4,88-4,78 (м, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,94-6,86 (м, 2H), 6,98-6,95 (м, 2H), 7,30 (д, J=7,1 Гц, 1H), 7,65-7,57 (м, 3H), 7,67 (д, J=7,9 Гц, 1H), 7,80 (дд, J=7,4, 1,5 Гц, 1H).
[00227] (R)-N-(4-(Циклобутиламино)-1-(4-фторфенокси)-4-оксобутан-2-ил)-1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: К перемешиваемому DMF (500 мкл) раствору (R)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-(4-фторфенокси)бутановой кислоты (12 мг, 0,023 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли HATU (13 мг, 0,035 ммоль, 1,50 эквив.), HOAt (4,8 мг, 0,035 ммоль, 1,50 эквив.) и DIPEA (16 мкл, 0,092 ммоль, 4,00 эквив.). Желтый раствор перемешивали 10 мин, затем добавляли циклобутиламин (3,3 мг, 0,046 ммоль, 2,00 эквив.). Раствор перемешивали 4 часа при комнатной температуре, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали 2×10 мл водн. 0,5 н лимонной кислотой, 3×10 мл насыщ. водн. NaHCO3, 10 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 12 г колонка, DCM, изократические условия, 2 мин. до 2% MeOH/DCM за 6 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 5,2 мг (40%) в виде прозрачного аморфного твердого вещества. m/z (M+H)+=573,4; RT=1,95 мин; чистота=98,5%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,64-1,47 (м, 4H), 2,02-1,75 (м, 8H), 2,17-2,05 (м, 2H), 2,52-2,45 (м, 1H), 2,55 (дд, J=14,6, 7,0 Гц, 1H), 3,98 (дд, J=9,9, 6,2 Гц, 1H), 4,24-4,07 (м, 3H), 4,62-4,53 (м, 1H), 6,63 (с, 1H), 7,03-6,97 (м, 2H), 7,14-7,08 (м, 2H), 7,53 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,5 Гц, 1H), 7,93 (д, J=7,3 Гц, 1H), 8,08 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,21 (д, J=7,7 Гц, 1H).
[00228] Схема 13: Получение (R)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутановаой кислоты
[00229] Реагенты и условия: (a) тетрагидро-2H-пиран-4-амин, EDC.HCl, HOBt, N-метилморфолин, DMF, 0°C до комнатной температуры, 15 ч; (b) 4M HCl в диоксане, комнатная температура, 18 ч; (c) 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, HATU, DIPEA, DMF, 2 ч; (d) H2 (баллон), EtOH, 10% Pd/C, 15 ч
[00230] (R)-бензил 3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноат:
[00231] HOBt (240 мг, 1,78 ммоль, 1,15 эквив.) добавляли к раствору (R)-4-(бензилокси)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксобутановой кислоты (500 мг, 1,55 ммоль) и тетрагидро-2H-пиран-4-амина (240 мг, 1,55 ммоль) в DMF (10 мл). EDC.HCl (296 мг, 1,55 ммоль) и N-метилморфолин (202 мг, 2,00 ммоль) добавляли при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Добавляли этилацетат и смесь промывали водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, насыщенным солевым раствором (2x), сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексанах (10-20%) с получением 488 мг (78%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. m/z (M+H)+=407,2; RT=1,51 мин; чистота=>95%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00232] (R)-бензил 3-амино-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноат гидрохлорид:
[00233] 4M HCl в диоксане (3,0 мл, 12 ммоль) добавляли к (R)-бензил 3-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноат (488 мг, 1,20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 (25 мл), затем 6 н NaOH до pH=10. Смесь экстрагировали 4х раствором THF в DCM (1:3), объединенные органические слои сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали с получением 415 мг (количественный выход) указанного в заголовке соединения в виде белой пены. m/z (M+H)+=307,2; RT=1,00 мин; чистота=>95%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00234] (R)-бензил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноат:
[00235] HATU (121 мг, 0,31 ммоль) добавляли к раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (94 мг, 0,19 ммоль), HOAt (39 мг, 0,29 ммоль) и диизопропилэтиламина (150 мкл, 0,87 ммоль) в DMF (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин и добавляли раствор (R)-бензил 3-амино-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноат гидрохлорида (99 мг, 0,29 ммоль) в DMF (0,85 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду, затем этилацетат. Фазы разделяли и органический слой промывали 2x водным насыщенным раствором бикарбоната натрия, сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексанах (20-40%) с получением 85 мг указанного в заголовке соединения в виде бесцветного вязкого масла. m/z (M+H)+=613,4; RT=1,87 мин; чистота=99,5%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00236] (R)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутановая кислота:
[00237] 10% Pd/C (10 мг) добавляли в колбу, продутую азотом, содержащую раствор (R)-бензил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-4-оксо-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)амино)бутаноата (85 мг (0,14 ммоль) в EtOH (0,5 мл). Колбу помещали под вакуум в течение 30 секунд и помещали обратно в атмосферу азота. Эту процедуру выполняли еще один раз. Колбу снова помещали под вакуум и балонный водород вводили через перегородку. Реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 15 ч. Колбу помещали под вакуум в течение 30 сек и помещали обратно в атмосферу азота. Эту процедуру выполняли еще два раза. Раствор фильтровали на целите, твердый фильтр-прессный осадок промывали EtOH и фильтрат выпаривали для получения 61 мг (85%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. Половину соединения растворяли в смеси ацетонитрила и воды и лиофилизировали с получением 23 мг белого твердого вещества. m/z (M+H)+=523,2; RT=1,51 мин; чистота=99,1%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,48-1,36 (м, 2H), 1,58-1,48 (м, 2H), 1,71-1,63 (м, 2H), 1,90-1,77 (м, 3H), 2,01-1,90 (м, 3H), 2,78-2,66 (м, 2H), 3,38-3,33 (м, 2H), 3,85-3,70 (м, 3H), 4,21 (квинт, J=7,4 Гц, 1H), 4,76-4,69 (м, 1H), 6,66 (с, 1H), 7,54 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,83 (т, J=7,5 Гц, 1H), 7,94 (д, J=7,6 Гц, 1H), 8,14-8,00 (м, 2H), 12,43-12,22 (м, 1H).
[00238] Схема 14: Получение (S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентановой кислоты
[00239] Реагенты и условия: (a) 5-аминовалериановая кислота, NaBH(OAc)3, MeOH, комнатная температура, 1 ч; (b) HATU, HOAt, DIPEA, DMF, комнатная температура, 1 ч; (c) H2 (баллон), EtOAc, 10% Pd/C, 4 ч; (d) 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, HATU, HOAt, DIPEA, DMF, комнатная температура, 3 ч; (e) 4 н HCl в диоксане, комнатная температура, 18 ч
[00240] (S)-5-((3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентил)амино)пентановая кислота: К перемешиваемому метанолу (2 мл) раствору 5-аминовалериановой кислоты (38 мг, 0,372 ммоль, 1,20 эквив.) в атмосфере азота добавляли (S)-трет-бутил 3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-оксопентаноат (100 мг, 0,310 ммоль) в 1 мл метанола. Раствор перемешивали при комнатной температуре 1 ч, затем добавляли триацетоксиборгидридом натрия (79 мг, 0,372 ммоль, 1,2 эквив.). Раствор перемешивали еще час, растворитель выпаривали, остаток очищали CombiFlash®, 30 г колонка (C18), 10 мМ вод. формиат аммония, изократические условия, 5 мин, затем до 50% водн. АФ-ацетонитрил через 10 мин, изократические условия, 8 мин, затем до 100% ацетонитрила за 10 мин. Чистые фракции объединяли, растворители выпариывали (роторный испаритель, 45°C, высокий вакуум), остаток повторно растворяли в этаноле (30 мл), растворитель повторно выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 59 мг (45%) аморфное твердое вещество. m/z (M+H)+=423,4; RT=1,28 мин; чистота=92,7%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,36 (с, 9H), 1,70-1,42 (м, 6H), 2,16 (т, J=6,7 Гц, 2H), 2,40-2,30 (м, 2H), 2,65-2,54 (м, 3H), 4,40-3,20 (м, 4H), 5,05-4,97 (м, 2H), 7,38-7,25 (м, 5H), 8,37 (с, широкий, 1H).
[00241] (S)-трет-бутил-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноат: К перемешиваемому DMF (500 мкл) раствору (S)-5-((3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентил)амино)пентановой кислоты (55 мг, 0,130 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли DIPEA (90 мкл, 0,520 ммоль, 4,00 эквив.), затем HOAt (28 мг, 0,208 ммоль, 1,60 эквив.) и HATU (74 мг, 0,195 ммоль, 1,50 эквив.). Желтый раствор перемешивали при комнатной температуре 1 ч, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали 4×10 мл насыщ. водн. NaHCO3, 2×10 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Неочищенное вещество использовали как таковое для следующего превращения. m/z (M+H)+=405,2; RT=1,57 мин; чистота: 69%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,36 (с, 9H), 1,73-1,50 (м, 6H), 2,20-2,12 (м, 2H), 2,38-2,27 (м, 2H), 3,31-3,12 (м, 4H), 3,82-3,74 (м, 1H), 5,07-4,95 (м, 2H), 7,24 (д, J=8,8 Гц, 1H), 7,38-7,28 (м, 5H).
[00242] (S)-трет-бутил-3-амино-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноат: К перемешиваемому EtOAc (5 мл) раствору (S)-трет-бутил-3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноата (25 мг, 0,062 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли Pd/C 10% (50 мг). Систему продували 3× H2, затем гидрировали (баллон) 4 часа. Смесь фильтровали через целит (под потоком азота), фильтр-прессный осадок промывали 4×10 мл EtOAc, все фильтраты объединяли, растворитель выпаривали. Остаток сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения, 6,8 мг (41%) в виде стеклообразного твердого вещества. Неочищенное вещество использовали как таковое для следующего превращения.
[00243] (S)-трет-бутил-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноат: К перемешиваемому DMF (1 мл) раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (9,4 мг, 0,029 ммоль, 1,20 эквив.) в атмосфере азота добавляли HATU (11 мг, 0,030 ммоль, 1,25 эквив.), HOAt (4 мг, 0,030 ммоль, 1,25 эквив.) и DIPEA (17 мкл, 0,096 ммоль, 4,00 эквив.). Желтый раствор перемешивали 5 мин, затем добавляля (S)-трет-бутил 3-амино-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноат (6,8 мг, 0,024 ммоль, 1,00 эквив.). Раствор перемешивали 3 часа при комнатной температуре, разбавляли EtOAc (20 мл), промывали 4×10 мл насыщ. водн. NaHCO3, 10 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 4 г колонка, изократические условия DCM 1 мин. затем до 5% MeOH/DCM за 12 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили в течение ночи в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 9,4 мг (68%) аморфное твердое вещество. m/z (M+H)+=577,4; RT=1,90 мин; чистота: 98%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 1,45 (с, 9H), 2,20-1,65 (м, 12H), 2,40-2,28 (м, 2H), 2,70-2,58 (м, 2H), 3,46-3,17 (м, 3H), 3,77-3,47 (м, 1H), 1,60-1,48 (м, 2H), 4,22-4,10 (м, 1H), 4,43-4,34 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,31 (д, J=7,2 Гц, 1H), 7,43-7,37 (м, 1H), 7,66-7,56 (м, 2H), 7,80 (дд, J=7,9, 1,0 Гц, 1H).
[00244] (S)-трет-бутил-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,5-диметил-1H-пиразол-1-ил)пентаноат: (S)-трет-бутил-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2-оксопиперидин-1-ил)пентаноат (9,0 мг, 0,016 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в растворе 4 н HCl/диоксан (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре 3 часа. Растворитель выпаривали, остаток сушили под высоким вакуумом. Остаток очищали CombiFlash®, 12 г C18 колонка, 1 мин, изократические условия, водн. 10 мМ бикарбонат аммония, затем до 50% ацетонитрил/вод. 10 мМ бикарбонат аммония за 12 мин. Чистые фракции объединяли, ацетонитрил выпаривали, оставшийся водн. раствор замораживали и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения, 8,0 мг (96%). m/z (M+H)+=521,3; RT=1,55 мин; чистота: 96%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,53-1,46 (м, 2H), 2,03-1,60 (м, 10H), 2,19-2,13 (м, 2H), 2,63-2,46 (м, 4H), 3,75-3,15 (м, 4H), 4,30-4,15 (м, 2H), 6,62 (с, 1H), 7,55 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,93 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,98-7,90 (м, широкий, 1H), 12,40-12,00 (с, широкий, 1H).
[00245] Реагенты и условия: (a) Глутаримид, ADDP, PBu3, i-PrNEt
[00246] THF комнатная температура, 16 ч; (b) H2 (баллон), EtOAc, 10% Pd/C, комнатная температура, 18 ч; (c) 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, HATU, HOAt, DIPEA, DMF, комнатная температура, 18 ч; (d) 4 н HCl в диоксане, комнатная температура, 18 ч
[00247] (S)-трет-бутил 3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноат
[00248] Раствор ADDP (41 мг, 0,16 ммоль, 1,3 эквив.) в THF (0,6 мл) добавляли к раствору (S)-трет-бутил 3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-гидроксипентаноата (40 мг, 0,12 ммоль, 1,0 эквив.), глутаримида (14 мг, 0,12 ммоль, 1,0 эквив.), диизопропилэтиламина (24 мкл, 0,14 ммоль, 1,1 эквив.) и трибутилфосфина (40 мкл, 0,16 ммоль, 1,3 эквив.) в THF (0,64 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и фильтровали в пипетке с хлопковой ватой. К фильтрату добавляли воду и смесь экстрагировали этилацетатом (2x). Объединенные органические слои сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле, используя раствор этилацетата в гексанах (30-60%) с получением 34 мг (66%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла. m/z (M+H)+=419,3; RT=1,62 мин; чистота=>90%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7,37-7,28 (м, 5H), 5,35 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,15-5,03 (м, 2H), 3,95-3,79 (м, 3H), 2,66-2,57 (м, 4H), 2,51-2,44 (м, 2H), 1,96-1,87 (м, 2H), 1,83-1,71 (м, 2H), 1,43 (с, 9H).
[00249] (S)-трет-бутил 3-амино-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноат
[00250] 10% Pd/C (10 мг) добавляли в колбу, продутую азотом, содержащую раствор (S)-трет-бутил 3-(((бензилокси)карбонил)амино)-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноата (34 мг, 0,081 ммоль, 1,00 эквив.) в EtOH (0,27 мл). Колбу помещали под вакуум в течение 30 сек и помещали обратно в атмосферу азота. Эту процедуру выполняли еще один раз. Колбу снова помещали под вакуум и балонный водород вводили через перегородку. Реакционную смесь интенсивно перемешивали в течение 18 ч. Колбу помещали под вакуум в течение 30 сек и помещали обратно в атмосферу азота. Эту процедуру выполняли еще два раза. Раствор фильтровали на целите, твердый фильтр-прессный осадок промывали EtOH и фильтрат выпаривали. Полученный продукт (23 мг) повторно добавляли к вышеуказанной реакции, используя этилацетат в качестве растворителя в этот раз, с получением 7,5 мг (32%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. m/z (M+H)+=285,3; RT=1,08 мин; чистота=77,8%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00251] (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноат
[00252] HATU (7,1 мг, 0,019 ммоль, 1,1 эквив.) добавляли к раствору 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (5,5 мг, 0,017 ммоль, 1,0 эквив.), HOAt (2,3 мг, 0,017 ммоль, 1,0 эквив.) и диизопропилэтиламина (8,9 мкл, 0,051 ммоль, 3,0 эквив.) и (S)-трет-бутил 3-амино-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноат (7,5 мг, 0,017 ммоль, 1,0 эквив.) в DMF (0,17 мл) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь растворяли в этилацетате и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, сушили сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали с получением 6,5 мг (65%, неочищенный) указанного в заголовке соединения, которое использовали как есть. m/z (M+H)+=591,3; RT=1,93 мин; чистота=трудно сказать. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил.
[00253] (S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентановая кислота
[00254] 4M раствор HCl в диоксане (0,28 мл, 1,1 ммоль, 100 эквив.) добавляли к неочищенному (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(2,6-диоксопиперидин-1-ил)пентаноату (6,5 мг, 0,011 ммоль, 1,00 эквив.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью полупрепаративной ВЭЖХ-МС (колонка X-Bridge 30×50) с использованием раствора MeCN в воде (содержащий 10 мМ формиата аммония, pH=3,8) (40-60%). Чистые фракции лиофилизировали с получением 0,65 мг (11%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. m/z (M+H)+=535,3; RT=1,60 мин; чистота=>99%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, CD3CN) δ 7,88 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,74 (т, J=7,1 Гц, 1H), 7,69 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,52-7,46 (м, 2H), 6,64 (с, 1H), 4,32-4,22 (м, 2H), 3,80-3,71 (м, 2H), 2,68-2,61 (м, 1H), 2,61-2,51 (м, 1H), 2,54 (т, J=6,7 Гц, 4H), 2,10-2,05 (м, 2H), 1,96-1,92 (м, 2H), 1,88-1,77 (м, 6H), 1,59-1,51 (м, 2H).
[00255] Схема 15: Получение (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентановой кислоты
[00256] Реагенты и условия: (a) LDA, -78°C, 1 ч; CH3I, 78°C, 4 ч; (b) H2, 10% Pd/C, 20% AcOH/EtOH, 50 фунт/кв. дюйм, 30 ч; (c) SOCl2, кипячение с обратным холодильником, 4 ч, 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота, DIPEA, THF, комнатная температура, 2 ч; (d) реактив Десса-Мартина, DCM, комнатная температура, 16 ч; (e) 3,3-дифторпирролидин гидрохлорид, NaBH(OAc)3, MeOH, комнатная температура, 1 ч; (f) 4 н HCl в диоксане, комнатная температура, 4 ч
[00257] (3S)-трет-бутил-3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(бензилокси)-2-метилпентаноат: К перемешиваемому THF (10 мл) раствору свежеперегнанного (над CaH2) диизопропиламина (651 мкл, 4,64 ммоль, 2,20 эквив.) при -78°C в атмосфере азота добавляли по каплям n-BuLi 2,46 M/гексан (1,80 мл, 4,43 ммоль, 2,10 эквив.). Полученный раствор перемешивали 1 час при -78°C, (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(бензилокси)пентаноат (1,00 г, 2,11 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в THF (2 мл) добавляли по каплям, раствор перемешивали 2 часа при -78°C. Добавляли по каплям иодметан (525 мкл, 8,44 ммоль, 4,00 эквив.), раствор перемешивали 4 часа при -78°C, перемешивание продолжали в течение ночи, температура поднялась до примерно -10°C в течение этого периода. Реакцию гасили добавлением 1 мл насыщ. водн. NH4Cl, перемешивали в течение 15 мин, THF выпаривали, остаток разделяли между насыщ. водн. NaHCO3 (50 мл) и EtOAc (50 мл). Органический слой промывали 50 мл насыщ. водн. NaHCO3, 50 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали, остаток сушили в высоком вакууме с получением указанного в заголовке соединения, 953 мг (92%) густое масло янтарного цвета. m/z (M+H)+=488,3; RT=2,44 мин; чистота: 93%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO, смесь конформеры/ротамеры) δ 7,40-7,15 (м, 15H), 4,47-4,36 (м, 2H), 3,95-3,63 (м, 3H), 3,55-3,35 (м, 2H), 3,27-3,22 (м, 0,5H), 2,88-2,83 (м, 0,5H), 2,36-2,25 (м, 1H), 1,88-1,75 (м, 1H), 1,70-1,60 (м, 1H), 1,31; 1,32 (2с, 9H), 1,25-1,20 (м, 3H), 0,82-0,76 (м, 3H).
[00258] (3S)-трет-бутил-3-амино-5-гидрокси-2-метилпентаноат: В реакторе Parr shaker (3S)-трет-бутил-3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-(бензилокси)-2-метилпентаноат (950 мг, 1,95 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в 20% AcOH/этанол (50 мл). Сосуд продували азотом, затем добавляли Pd/C 10% (600 мг). Систему эвакуировали (отделение вакуума), заполняли водородом (45 фунт/кв. дюйм), встряхивали 5 мин. Систему продували второй раз, затем помещали под давление водорода (50 фунт/кв. дюйм) и встряхивали в течение 30 часов. Систему продували 2× азотом, смесь фильтровали через слой целита, промывали 4×10 мл этанолом, фильтрат и промывки объединяли и выпаривали (роторный испаритель, высокий вакуум) с получением указанного в заголовке соединения, 403 мг, которое использовали как таковое для следующего превращения.
[00259] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидрокси-2-метилпентаноат: 1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоновую кислоту (159 мг, 0,49 ммоль) осторожно кипятили с обратным холодильником в тионилхлориде (4 мл) в атмосфере азота в течение 4 ч. Летучие вещества испаряли, остаток повторно растворяли в 4 мл диоксана, растворитель выпаривали, твердое вещество сушили под высоким вакуумом 1 ч. Это твердое вещество растворяли в THF, добавляли по каплям DIPEA (257 мкл, 1,48 ммоль, 3,00 эквив.), затем (3S)-трет-бутил 3-амино-5-гидрокси-2-метилпентаноат (100 мг, 0,49 ммоль) растворено-суспендированное в THF (1 мл). Полученный раствор превратился в белую суспензию вскоре после добавления. Перемешивали в атмосфере азота 2 ч, разбавляли EtOAc (40 мл), промывали 3×20 мл насыщ. водн. NaHCO3, 20 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Продукт очищали CombiFlash®, сухая упаковка, 10 г колонка, 20% EtOAc, изократические условия, 2 мин, затем до 50% EtOAc/гекс. за 6 мин, изократические условия, 2 мин. Чистые фракции объединяли, растворитель выпаривали, остаток сушили под высоким вакуумом с получением указанного в заголовке соединения, 83 мг (33%) в виде аморфного твердого вещества. m/z (M+H)+=510,4; RT=1,96 мин; чистота: 99%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: Ацетонитрил. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,09-1,02 (м, 3H), 1,38 (с, 1H), широкий (9H), 1,42 (с, 1H), 1,58-1,46 (м, 2H), 1,73-1,63 (м, 2H), 2,05-1,75 (м, 6H), 2,73-2,60 (м, 1H), 3,48-3,36 (м, 2H), 4,25-4,10 (м, 2H), 4,50-4,44 (м, 2H), 6,63 (д, J=6,2 Гц, 1H), 7,55 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,3 Гц, 1H).
[00260] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-2-метил-5-оксопентаноат: К перемешиваемому, ледяному DCM (2 мл) раствору (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидрокси-2-метилпентаноата (80 мг, 0,157 ммоль) в атмосфере азота добавляли периодинан Десса-Мартина (100 мг, 0,236 ммоль, 1,5 эквив.). Белую суспензию перемешивали 15 мин. на холоде, оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли EtOAc (40 мл), промывали 4×25 мл насыщ. водн. NaHCO3, 25 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали, остаток сушили под высоким вакуумом 1 ч. Неочищенное вещество использовали как таковое для следующего превращения.
[00261] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентаноат (A и B)
[00262] К перемешиваемому метанолу (2 мл), раствору 3,3-дифторпирролидин гидрохлорида (42 мг, 0,268 ммоль, 1,00 эквив.) в атмосфере азота добавляли триэтиламин (50 мкл, 0,358 ммоль, 3,00 эквив.). Раствор перемешивали 15 мин, затем добавляли (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-2-метил-5-оксопентаноат (60 мг, 0,118 ммоль, 1,00 эквив.) в 1 мл метанола. Раствор перемешивали при комнатной температуре 1 ч, затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (45 мг, 0,215 ммоль, 1,80 эквив.). Раствор перемешивали еще 3 ч, растворитель выпаривали, остаток, взятый в этилацетате (30 мл), промывали 3×20 мл насыщ. водн. NaHCO3, 20 мл насыщ. водн. NaCl, сушили (MgSO4), фильтровали, фильтрат выпаривали. Остаток очищали CombiFlash®, 12 г колонка, DCM, изократические условия, 3 мин, затем до 1% MeOH/DCM за 6 мин, изократические условия, 5 мин. Два продукта разделяли;
[00263] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентаноат A (менее полярный диастереомер), 17,6 мг (24%) аморфное твердое вещество [49% в расчете на смесь диастереоизомеров 1:1].
[00264] m/z (M+H)+=614,5; RT=2,12 мин; чистота: 95%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: CH3CN. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 1,21 (д, J=7,1 Гц, 3H), 1,48 (с, 9H), 1,58-1,49 (м, 2H), 2,20-1,61 (м, 12H), 2,79-2,37 (м, 7H), 4,16 (п, J=7,6 Гц, 1H), 4,35-4,26 (м, 1H), 6,75 (с, 1H), 7,28 (д, широкий, J=9,8 Гц, 1H), 7,32 (д, широкий, J=7,1 Гц, 1H), 7,65-7,56 (м, 2H), 7,80 (дд, J=7,8, 1,0 Гц, 1H).
[00265] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентаноат B (более полярный диастереомер), 23,5 мг (33%) аморфное твердое вещество [65% в расчете на смесь диастереоизомеров 1:1].
[00266] m/z (M+H)+=614,5; RT=2,12 мин; чистота: 93%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B:CH3CN. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 1,22 (д, J=6,1 Гц, 3H), 1,48 (с, 9H), 1,55-1,50 (м, 2H), 2,17-1,70 (м, 12H), 2,74-2,37 (м, 7H), 4,21-4,12 (м, 1H), 4,32-4,23 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,32 (д, J=7,2 Гц, 1H), 7,56-7,45 (м, 1H), 7,65-7,57 (м, 2H), 7,80 (д, J=7,2 Гц, 1H).
[00267] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентановая кислота (кислота 1): (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентаноат A (16 мг, 0,026 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в растворе 4 н HCl/диоксан (4 мл). Перемешивали при комнатной температуре 4 часа, летучие вещества испарялись, остаток очищали CombiFlash®, 12 г колонка Biotage KP-C18-HS, водн. 10 мМ бикарбонат аммония, изократические условия, 1 мин, до 50% ацетонитрила за 5 мин, изократические условия, 3 мин. Чистые фракции объединяли, большинство ацетонитрила выпаривали, оставшийся раствор замораживали и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения, 7,5 мг (52%) белое твердое вещество. m/z (M+H)+=557,3; RT=1,54 мин; чистота: 98%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: CH3CN. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 1,06 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,56-1,45 (м, 2H), 1,73-1,57 (м, 4H), 2,05-1,75 (м, 8H), 2,44-2,30 (м, 4H), 2,65-2,55 (м, 3H), 4,23-4,09 (м, 2H), 6,63 (с, 1H), 7,56 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,88-7,79 (с, широкий, 1H),7,93 (д, J=7,4 Гц, 1H), 11,70 (с, широкий, 1H).
[00268] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентановая кислота (кислота 2): (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-2-метилпентаноат B (22 мг, 0,036 ммоль, 1,00 эквив.) растворяли в растворе 4 н HCl/диоксан (4 мл). Перемешивали при комнатной температуре 4 часа, летучие вещества испаряли, остаток очищали CombiFlash®, 12 г Biotage KP-C18-HS колонка, водн. 10 мМ бикарбонат аммония, изократические условия, 1 мин, до 40% ацетонитрила за 5 мин, изократические условия, 4 мин. Чистые фракции объединяли, большинство ацетонитрила выпаривали, оставшийся раствор замораживали и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения, 14,6 мг (73%) белое твердое вещество. m/z (M+H)+=557,2; RT=1,56 мин; чистота: >99%. Условия ВЭЖХ: Колонка: XBridge® C18, 3,5 мкм, 4,6×30 мм; Градиент: 5B 0,2 мин, 5B - 100B 1,8 мин, 100B 1 мин; 3 мл/мин. Элюент А: рН 3,8 10 мМ формиат аммония в воде; Элюент B: CH3CN. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 13,20-11,80 (с, широкий, 1H), 1,09 (д, J=7,1 Гц, 3H), 1,56-1,45 (м, 2H), 1,75-1,58 (м, 4H), 2,00-1,75 (м, 8H), 2,45-2,32 (м, 4H), 2,73-2,55 (м, 3H), 4,15-4,05 (м, 1H), 4,20 (п, J=7,2 Гц, 1H), 6,62 (с, 1H),7,56 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,76 (т, J=7,7 Гц, 1H), 7,82 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,93 (д, J=7,4 Гц, 1H), 8,13-7,92 (с, широкий, 1H)
[00269] Схема 16: Получение (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановой кислоты
[00269] Реагенты и условия: a) CH3MgBr, THF, -78°C, 4 ч; b) Реагент Десса-Мартина, DCM, 12 ч; c) 3,3-дифторпиперидин.HCl, NaBH(OAc)3, DCE, комнатная температура, 12 ч; d) TFA, DCM, комнатная температура, 2 ч, 90%.
[00271] (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксигексаноат: К раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-оксопентаноата (230 мг, 0,466 ммоль) в THF (10 мл) при -78°C медленно добавляли раствор CH3MgBr (0,31 мл, 0,93 ммоль, 3,0 M в Et2O). Смесь перемешивали при -78°C в течение 30 мин. Затем раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Реакцию гасили водой (2 мл). Затем раствор экстрагировали Et2O (3×15 мл), объединенные органические слои сушили над MgSO4, концентрировали в вакууме и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя 0-40% EtOAc/гексаны с получением известного (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксигексаноата, выход 85% бесцветного масла. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 1,23-1,29 (м, 3H), 1,39-1,61 (м, 11H), 1,80-2,16 (м, 8H), 2,58-2,74 (м, 2H), 3,91-4,05 (м, 1H), 4,08-4,25 (м, 1H), 4,43-4,68 (м, 1H), 6,73-6,79 (м, 1H), 7,29-7,37 (м, 1H), 7,49-7,70 (м, 3H), 7,76-7,87 (м, 1H). LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 510,5.
[00272] (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-оксогексаноат: К раствору неочищенного (3S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-гидроксигексаноата (100 мг 0,196 ммоль) в DCM (6 мл) добавляли бикарбонат натрия (33 мг, 0,39 ммоль), затем реагент Десса-Мартина (166 мг, 0,39 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, прежде чем реакцию гасили 10% водным раствором бикарбоната натрия (2 мл). Затем раствор экстрагировали Et2O (3×15 мл), объединенные органические слои сушили над MgSO4, концентрировали в вакууме и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя 0-40% EtOAc/гексаны с получением известного кетона (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-оксогексаноата, выход 85% бесцветного масла, 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 1,45 (с, 9H), 1,78-2,04 (м, 8H), 1,50-1,61 (м, 2H), 2,20 (с, 3H), 2,66-2,76 (м, 2H), 2,90-3,10 (м, 2H), 4,08-4,23 (м, 1H), 4,65-4,82 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,28-7,36 (м, 1H), 7,51-7,67 (м, 3H), 7,76-7,84 (м, 1H). LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 508,5.
[00273] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановая кислота (A и B): Раствор кетона (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-оксогексаноата (75 мг, 0,147 ммоль), 3,3 дифторпиперидин гидрохлорида (28 мг, 0,177 ммоль), измельченные 4 молекулярные сита в дихлорэтане (10 мл) обрабатывали триацетоксиборгидридом натрия (63 мг 0,294 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Сита отфильтровывали через слой целита, фильтрат промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Объединенные водные растворы снова экстрагировали дихлорметаном, объединенные органические экстракты сушили безводным сульфатом натрия и растворитель выпаривали в вакууме и очищали с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя 0-35% EtOAc/гексаны с получением двух диастереоизомеров (A и B).
[00274] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановая кислота (A, менее полярный диастереомер), выход 20 мг (30%) бесцветного масла. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 1,02 (д, J=6,59 Гц, 3H), 1,47 (с., 9H), 1,50-1,61 (м, 2H), 1,69-2,05 (м, 12H), 2,31-2,46 (м, 1H), 2,55-2,71 (м, 4H), 2,72-2,92 (м, 2H), 4,10-4,23 (м, 1H), 4,45-4,60 (м, 1H), 6,75 (с, 1H), 7,30-7,43 (м, 1H), 7,56-7,67 (м, 3H), 7,77-7,83 (м, 1H). LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 613,7.
[00275] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановая кислота (B, более полярный диастереомер), выход 6,5 мг (10%) бесцветное масло. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 0,98 (д, J=6,59 Гц, 3H), 1,45 (с, 9H), 1,50-1,61 (м, 2H), 1,67-2,18 (м, 12H), 2,31-2,46 (м, 1H), 2,61-2,95 (м, 6H), 4,04-4,22 (м, 1H), 4,44-4,58 (м, 1H), 6,75 (с, 1H), 7,28-7,35 (м, 1H), 7,51-7,68 (м, 3H), 7,77-7,84 (м, 1H). LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 613,8.
[00276] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановая кислота (кислота 1): К раствору (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановой кислоты (A) (20 мг) в DCM:TFA (1:1, 1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли в вакууме и разбавляли CHCl3. Растворитель удаляли с получением 90% (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановой кислоты (кислота 1) в виде белого твердого вещества,. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 1,40-1,56 (м, 6H), 1,77-2,21 (м, 12H), 2,43-2,63 (м, 1H), 2,70-2,81 (м, 2H), 3,2-3,93 (м, 4H), 4,07-4,24 (м, 1H), 4,45-4,65 (м, 1H), 6,74 (с, 1H), 7,37-7,28 (м, 1H), 7,62 (т, J=6,40 Гц, 2H), 7,81 (д,J=8,48 Гц, 1H), 7,85-7,98 (м, 1H). LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 557,9, [M-H+] 556,0.
[00277] (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановая кислота (кислота 2): К раствору (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановой кислоты (B)(6 мг) в DCM:TFA (1:1, 1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли в вакууме и разбавляли CH2Cl2. Растворитель удаляли с получением 90% (3S)-3-(1-циклопентил-5-(2-(трифторметил)фенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)гексановой кислоты (кислота 2) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 1,32-1,58 (м, 6H), 1,78-2,43 (м, 12H), 2,80-2,95 (м, 2H), 3,04-3,61 (м, 4H), 4,16 (д, J=6,97 Гц, 1H), 4,25-4,44 (м, 1H), 6,74 (шир. с., 1H), 7,28-7,37 (м, 1H), 7,63 (т, J=6,12 Гц, 2H), 7,81 (д, J=7,91 Гц, 1H), 8,02-8,23 (м, 1H).LC-MS (ESI): m/z [M+H+] 557,9, [M-H+] 556,1.
[00278] Схема 17: Получение (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00279] Этил 1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксилат: К раствору 85 (0,90 г, 4,0 ммоль) в Et2O (40 мл) при -78°C добавляли по каплям nBuLi (1,9 мл, 2,5 M в гексанах, 4,8 ммоль). После добавления смесь перемешивали при -78°C в течение 1 ч, с последующим добавлением по каплям Bu3SnCl (1,20 мл, 4,4 ммоль). Перемешивание продолжали при этой температуре в течение 1 ч и затем медленно нагревали до комнатной температуры. Раствор гасили хлоридом аммония (насыщ., 20 мл) и экстрагировали гексанами (20 мл). Экстракт сушили (Na2SO4) и концентрировали. Концентрат растирали с гексанами, фильтровали и концентрировали с получением коричневого масла (1,51 г).
[00280] К смеси вышеуказанного масла (0,79 г), бромпиразола (0,43 г, 1,5 ммоль) и толуола (15 мл) в герметичной пробирке добавляли Pd(PPh3)2Cl2 (53 мг, 0,075 ммоль) в атмосфере N2. Смесь нагревали при 120°C в течение 40 ч. Затем смесь концентрировали и очищали с использованием EA в гексанах с получением желаемого продукта 86 (50 мг) в виде желтого масла; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,39 (т, 3H, J=7,4 Гц), 1,40-1,70 (м, 2H), 1,80-2,30 (м, 6H), 4,30-4,50 (м, 3H), 6,91 (с, 1H), 7,40-7,60 (м, 1H), 8,17 (д, 1H, J=8,0 Гц), 8,93 (д, 1H, J=4,6 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C17H20F3N3O2 [M+H+]: 354, Найдено: 354,0.
[00281] 1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота: К раствору этил 1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксилата (50 мг, 0. 141 ммоль) в THF (5 мл) и H2O (1 мл) добавляли LiOH (10 мг). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, подкисляли до PH 4, и экстрагировали EtOAc. Экстракт EtOAc сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали (если необходимо) с получением указанного в заголовке соединения (45 мг) в виде коричневого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40-1,70 (м, 2H), 1,80-2,30 (м, 6H), 4,40-4,60 (м, 1H), 6,99 (с, 1H), 7,50-7,60 (м, 1H), 8,17 (д, 1H, J=8,0 Гц),8,93 (д, 1H, J=4,4 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C15H16F3N3O2 [M+H+]: 326, Найдено: 325,9.
[00282] (S)-Трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноат: Смесь 1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты (42 мг, 0,15 ммоль), (S)-трет-бутил 3-амино-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (67 мг, 0,23 ммоль), Et3N (0,060 мл, 0,60 ммоль) и TBTU (72 мг, 0,22) в MeCN (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке соединения (58 мг) в виде бесцветного масла; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40 (с, 9H), 1,50-2,20 (м, 14H), 2,30-2,80 (м, 8H), 4,30-4,60 (м, 2H), 6,61 (д, 1H, J=9,8 Гц), 6,89 (с, 1H), 7,40-7,60 (м, 1H), 8,13 (д, 1H, J=8,0 Гц),8,91 (д, 1H, J=4,0 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H39F5N5O3 [M+H+]: 600, Найдено: 599,8.
[00283] (S)-3-(1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановая кислота: К раствору (S)-трет-бутил 3-(1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентаноата (50 мг) в DCM (2 мл) добавляли HCl (4 M в диоксане, 0,1 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и концентрировали досуха с получением кислоты как HCl соль. (40 мг). LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C25H31F5N5O3 [M+H+]: 544, Найдено: 543,7.
[00284] (S)-N-(1-(Циклобутиламино)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамид: Смесь (S)-3-(1-циклопентил-5-(3-(трифторметил)пиридин-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)-5-(3,3-дифторпиперидин-1-ил)пентановая кислота гидрохлорида (40 мг, 0,073 ммоль), циклобутиламина (10 мг, 0,10 ммоль), Et3N (0,030 мл, 0,29 ммоль) и TBTU (24 мг, 0,10) в MeCN (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали NaHCO3. Органический слой сушили (Na2SO4), концентрировали и очищали с использованием 0-10% MeOH в DCM (с 1% NH3) с получением указанного в заголовке продукта (34 мг) в виде белого твердого вещества; 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ=1,40-2,80 (м, 28H), 4,30-4,50 (м, 3H), 6,42 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,90 (с, 1H), 7,50-7,70 (м, 1H), 8,14 (д, 1H, J=8,2 Гц), 8,91 (д, 1H, J=4,0 Гц); LC-MS (ESI): m/z, рассчитано для C29H38F5N6O2 [M+H+]: 597, Найдено: 596,8; LC чистота: 96,4%.
Схема 18: Получение (S)-трет-бутил 3-амино-5-циклогексилпентаноата
[00285] Реагенты и условия: a) PCC, DCM, комнатная температура, 3 ч, 100% b) (EtO)2POCH2CO2tBu, BuLi, THF, -78°C до комнатной температуры, 1 ч c) (S)-N-бензил-N-α-метил-бензиламин, BuLi, THF, -78°C, 3 ч d) 10% Pd/C, H2, 45 фунт/кв. дюйм, 20% AcOH/EtOH, комнатная температура, 24 ч
[00286] 3-Циклогексилпропанал К раствору коммерчески доступного 3-циклогексилпропанола (45,5 г, 0,32 моль) в CH2Cl2 (1000 мл) добавляли PCC (103,5 г, 0,48 моль), целит 545 (50 г) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли этиловым эфиром (1000 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, перед его фильтрованием через целит и слой силикагеля (1:1). Фильтрат концентрировали с получением неочищенного остатка. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-30% EtOAc/гексаны) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (50,7 г), которое содержало остаточные гексаны по результатам анализа ЯМР. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 0,83-0,98 (м, 3 H), 1,15-1,31 (м, 4 H), 1,49-1,56 (м, 2 H), 1,61-1,73 (м, 4 H), 2,41-2,46 (м, 2 H), 9,77 (с, 1 H).
[00287] (E)-Трет-бутил 5-циклогексилпент-2-еноат К перемешиваемому раствору трет-бутил диэтилфосфоноацетата (82,67 мл, 0,352 моль) в THF (500 мл) медленно добавляли n-BuLi (2,5 M в гексанах) (141 мл, 0,352 моль) по каплям с охлаждением при -78°C. После перемешивания в течение 30 минут при -78°C, раствор 3-циклогексилпропаналя (50,7 г, 0,32 моль) в 250 мл THF также охлажденному при -78°C переносили через канюлю. Полученный раствор перемешивали при -78°C в течение 40 минут перед тем, как дать возможность нагреться при комнатной температуре, а затем перемешивали в течение 40 минут. Затем раствор охлаждали до -78°C и гасили насыщ. водн. NH4Cl (250 мл). Слои разделяли и водный слой экстрагировали в DCM (3×200 мл) и объединенные органические вещества сушили над Na2SO4, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме с получением неочищенного остатка. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-2% EtOAc/гексаны) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (59,8 г, 78%). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 0,82-0,94 (м, 3 H), 1,11-1,37 (м, 3 H), 1,48 (с, 9 H), 1,63-1,87 (м, 3 H), 2,14-2,21(м, 2 H), 3,73-3,77 (м, 1 H), 4,12-4,22 (м, 2 H), 5,73 (дт, J=15,45, 1,51 Гц, 1 H), 6,86 (м, 1 H).
[00288] (S)-Трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-циклогексилпентаноат: К перемешиваемому раствору (S)-N-бензил-N-α-метилбензиламина (84,86 г, 0,402 моль) в THF (312 мл) медленно добавляли n-BuLi (2,5 M в гексанах) (161 мл, 0,402 моль) с охлаждением при -78°C. Через 30 минут, раствор (E)-трет-бутил 5-циклогексилпент-2-еноата (59,81 г, 0,251 моль) в 100 мл THF также при -78°C переносили через канюлю. Полученный раствор перемешивали при -78°C в течение 3 ч перед гашением насыщ. водн. NH4Cl (200 мл). После нагревания до комнатной температуры, THF удаляли и водный слой экстрагировали в DCM (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали 10% вод. лимонной кислотой (3×50 мл) для удаления избытка амина. Органический слой затем промывали водн. NaHCO3 (50 мл), насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили Na2SO4 и растворитель удаляли в вакууме с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-2% EtOAc/гексаны) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (97,3 г, 86%). 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 0,80-0,90 (м, 4 H), 1,04-1,33 (м, 9 H), 1,39 (м, 9 H), 1,60-1,74 (м, 4 H), 1,82-1,99 (м, 2 H), 3,21-3,29 (м, 1 H), 3,47 (д, J=14,69 Гц, 1 H), 3,76- 3,84 (м, 2 H), 7,20-7,43 (м, 10 H)
[00289] (S)-Трет-бутил 3-амино-5-циклогексилпентаноат
[00290] Смесь (S)-трет-бутил 3-(бензил((S)-1-фенилэтил)амино)-5-циклогексилпентаноата (50 г, 0,111 моль) и 10% Pd/C (7,44 г) в 20% AcOH/EtOH (500 мл) гидрогенизировали при 45 фунт/кв.дюйм в течение 24 ч. Смесь фильтровали через слой целита и концентрировали. Остаток растворяли в DCM (500 мл), подщелачивали насыщ. бикарбонатом натрия. Слои разделяли и водный слой экстрагировали DCM (3×200 мл). Объединенные экстракты DCM сушили над Na2SO4, фильтровали и растворитель удаляли в вакууме с получением неочищенного продукта (28,3 г, 100%) в виде прозрачного масла. 1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 0,85-0,95 (м, 3 H), 1,11-1,27 (м, 6 H), 1,46 (с, 9 H), 1,62-1,75 (м, 6 H), 2,128-2,22 (м, 1 H), 2,34-2,40 (м, 1 H), 3,05-3,14 (м, 1 H)
[00291] Схема 19: Получение (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-циклогексил-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамида
[00292] Реагенты и условия: a) трет-бутил (S)-3-амино-5-циклогексилпентаноат, BOP, Et3N, THF, комнатная температура, 1,5 ч; b) TFA, DCM, комнатная температура, 1,5 ч; c) циклобутиламин, BOP, Et3N, THF, комнатная температура, 3 ч.
[00293]
[00294] (S)-Трет-бутил 5-циклогексил-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентаноат
[00295] 1-Циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,316 ммоль) растворяли в THF (5 мл). К раствору добавляли бензотриазол-1-ил-окси-трис(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат (BOP) (184 мг, 0,416 ммоль) и триэтиламин (0,130 мл, 0,948 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. трет-Бутил (S)-3-амино-5-циклогексилпентаноат (89 мг, 0,347 ммоль) в 0,4 мл THF добавляли по каплям, и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. THF выпаривали в вакууме, к остатку добавляли воду и водный слой экстрагировали CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали водой, насыщенным солевым раствором и затем сушили над Na2SO4, с последующей фильтрацией. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc:Hex) с получением указанного в заголовке соединения в виде масла (152 мг, 87%). 1H ЯМР (CDCl3, 300 МГц) δ 0,81-0,96 (м, 2 H), 1,10-1,38 (м, 8 H), 1,48 (с, 9 H), 1,59-1,77 (м, 8 H), 1,81-1,96 (м, 4 H), 2,00-2,16 (м, 2 H), 2,55 (д, J=5,46 Гц, 2 H), 3,73 (с, 3 H), 3,74 (с, 3 H), 4,21-4,30 (м, 1 H), 4,30-4,43 (м, 1 H), 6,62 (д, J=8,48 Гц, 2 H), 6,67 (с, 1 H), 7,25 (шир. с., 1 H), 7,37 (т, J=8,38 Гц, 1 H). MS m/z: Рассчит. для C32H47N3O5 553,73 [M]+, Найдено 555,0 [M+H]+,
[00296] (S)-5-циклогексил-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентановая кислота
[00297] К раствору (S)-трет-бутил 5-циклогексил-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентаноата (150 мг) в DCM (2 мл) добавляли HCl (4 M в диоксане, 0,7 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и концентрировали досуха с получением кислоты как HCl соль (120 мг). 1H ЯМР (CDCl3, 300 МГц) δ ppm 0,78-1,00 (м, 3 H), 1,09-1,40 (м, 6 H), 1,49-1,77 (м, 4 H), 1,71 (т, J=7,44 Гц, 4 H), 1,82-1,98 (м, 4 H), 1,99-2,13 (м, 2 H), 2,65-2,80 (м, 2 H), 3,73 (с, 3 H), 3,74 (с, 3 H), 4,21-4,33 (м, 2 H), 6,63 (д, J=8,48 Гц, 2 H), 6,68 (с, 1 H), 7,29 (с, 1 H), 7,38 (т, J=8,38 Гц, 1 H). MS (ESI) m/z: Рассчит. для C28H39N3O5 497,63 [M]+, Найдено 496,7[M-H]-
[00298] (S)-N-(1-(циклобутиламино)-5-циклогексил-1-оксопентан-3-ил)-1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамид
[00299] (S)-5-Циклогексил-3-(1-циклопентил-5-(2,6-диметоксифенил)-1H-пиразол-3-карбоксамидо)пентановую кислоту (97 мг, 0,195 ммоль) растворяли в THF (5 мл). К раствору добавляли бензотриазол-1-ил-окси-трис(диметиламино)фосфоний гексафторфосфат (BOP) (95 мг, 0,214 ммоль) и триэтиламин (0,080 мл, 0,585 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Циклобутиламин (33 мг, 0,389 ммоль) в 0,4 мл THF добавляли по каплям, и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. THF выпаривали в вакууме, к остатку добавляли воду и водный слой экстрагировали CH2Cl2 (3×15 мл). Объединенные органические слои промывали водой, насыщенным солевым раствором и затем сушили над Na2SO4, с последующей фильтрацией. Растворитель выпаривали в вакууме. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc:Hex) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (80 мг, 75%). 1H ЯМР (CDCl3, 300 МГц) δ ppm 0,88 (д, J=11,30 Гц, 2 H), 1,12-1,39 (м, 6 H), 1,60-1,77 (м, 9 H), 1,80-1,97 (м, 6 H), 2,00-2,13 (м, 2 H), 2,18-2,32 (м, 2 H), 2,24 (д, J=7,16 Гц, 2 H), 2,53 (д, J=6,40 Гц, 2 H), 3,74 (с, 3 H), 3,73 (с, 3 H), 4,15-4,46 (м, 3 H), 6,63 (д, J=8,29 Гц, 2 H), 6,67 (с, 1 H), 6,75 (д, J=8,29 Гц, 1 H), 7,06 (д, J=9,04 Гц, 1 H), 7,38 (т, J=8,38 Гц, 1 H). MS (ESI) m/z: Рассчит. для C32H46N4O4 550,73 [M]+, Найдено 551,6 [M+H]
[00300] Характеристика апелин-агонистической активности соединений
[00301] Соединения, описанные выше, анализировали в отношении их активности in vitro в качестве агонистов апелина, используя способы, описанные в Giddings et al. Giddings et al., 2010 Int J High Thro Screen. 1:39-47, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Используя методы, описанные в Giddings et al. и Апелин-13 в качестве положительного контроля.
[00302] Таблица 2.
5.3. Клеточный анализ поглощения
[00303] Клетки Caco-2 (клон C2BBe1) получали из Американской коллекции типовых культур (Manassas, VA). Клеточные монослои выращивали до слияния на покрытых коллагеном, микропористых, поликарбонатных мембранах в 12-луночных планшетах Costar Transwell. Детали планшетов и их сертификация показаны ниже. Буфер для анализа проницаемости представляет собой сбалансированный солевой раствор Хэнкса (HBSS), содержащий 10 мМ HEPES и 15 мМ глюкозы при рН 7,4. Буфер в приемной камере также содержал 1% альбумин бычьей сыворотки. Концентрация дозирующего раствора составляла 5 мкМ для каждого испытуемого изделия в аналитическом буфере. Клеточные монослои дозировали на апикальной стороне (A-к-B) или базолатеральной стороне (B-к-A) и инкубировали при 37°C с 5% CO2 во влажном инкубаторе. Образцы брали из камер для образца и приемных камер через 120 минут. Каждое определение выполняли в двух экземплярах. После эксперимента все аналитические буферы удаляли из вкладышей. Клеточные монослои дозировали пустым 500 мкМ люцифером желтым на стороне А-к-В и пустым HBSS на стороне B-к-A и инкубировали при 37°C. Образцы отбирали со стороны B-к-A через 60 минут. Перенос Люцифера Желтого измеряли для каждого монослоя, чтобы гарантировать отсутствие повреждений монослоев клеток в течение периода переноса. Все образцы анализировали с помощью LC-MS/MS с использованием электрораспылительной ионизации. Кажущаяся проницаемость (Papp) и процент выделения рассчитывали как:
[00304] Papp=(dCr/dt)×Vr/(A×CA) (1)
[00305] Процент выделения=100×((Vr×Crfinal)+ (Vd×Cdfinal))/(Vd×CN) (2)
[00306] Где, dCr/dt представляет собой кривую кумулятивной концентрации в приемной части в зависимости от времени в мкM с-1;
[00307] Vr представляет собой объем приемной части в см3;
[00308] Vd представляет собой объем донорной части в см3;
[00309] A представляет собой площадь вкладыша (1,13 см2 для 12-луночного Трансвелла);
[00310] CA представляет собой среднее значение номинальной концентрации дозирования и измеренную 120-минутную концентрацию в донорной части в мкM;
[00311] CN представляет собой номинальную концентрацию дозирующего раствора в мкM;
[00312] Crfinal представляет собой кумулятивной концентрацию в приемной части в мкМ в конце инкубационного периода;
[00313] Cdfinal представляет собой концентрация донора в мкМ в конце инкубационного периода.
[00314] Коэффициент эффлюкса (ER) определяли как Papp (B-к-A)/Papp (A-к-B).
[00315] Классификация абсорбционного потенциала:
[00316] Papp (A-к-B) < 1,0×10-6 см/с: Низкая
[00317] Papp (A-к-B) ≥ 1,0×10-6 см/с: Высокая
[00318] Выраженный эффлюкс определяли как: ER ≥ 2,0 и Papp (B-к-A) ≥ 1,0×10-6 см/
[00319] Таблица 3 Результаты клеточного анализа поглощения
Активность соединений in vivo для снижения артериального давления
[00320] Выбор соединений оценивали по их действиям после перорального введения на гемодинамические изменения, включая снижение артериального давления, у находящихся в сознании самцов крыс Sprague-Dawley телеметрически. Известно, что пептиды апелина понижают кровяное давление, например, Tatemoto, K., et.al. Regul. Pept. 2001, 99, 87-92.
[00321] Животные были примерно 7-9 недельного возраста и весили от 247 г до 263 г непосредственно перед операцией. Уровни дозы для введения составляли 7,5, 15 или 30 мг/кг, объемы дозы составляли 10 мл/кг, и дозы вводили с помощью желудочного зонда. Животным был назначен перекрестный экспериментальный график лечения, как показано ниже.
[00322] Собранные данные включали систолическое, диастолическое и среднее артериальное давление крови (MAP). Временные точки сбора данных составляли от начала до введения дозы приблизительно 48 ч (до лечения 1) или приблизительно 24 ч (до лечения 2-4) в течение 10 сек каждые 2 мин. Сбор данных после введения дозы осуществляли примерно через 24 часа (данные собирали в течение 10 сек каждые 2 мин) на лечение. Полученные данные представлены ниже как среднее изменение 2-5 ч от базовой линии (начала) в мм рт.ст.
[00323] Обработка соединением 423 с помощью желудочного зонда самцов крыс Sprague-Dawley приводила к умеренному устойчивому снижению артериального давления, а обработка соединением 551 приводила к дозозависимому, умеренному устойчивому снижению артериального давления.
[00324] Следует понимать, что, хотя изобретение описано в сочетании с подробным описанием, приведенное выше описание предназначено для иллюстрации и не ограничивает объем изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации раскрытия входят в объем формулы изобретения, изложенной ниже. Все публикации, патенты и патентные заявки, приведенные в настоящем описании, включены в настоящее описание посредством ссылки, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была специально и индивидуально указана для включения в качестве ссылки.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| АГОНИСТЫ РЕЦЕПТОРА АПЕЛИНА (APJ) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2015 |
|
RU2705800C2 |
| N-((ГЕТ)АРИЛМЕТИЛ)-ГЕТЕРОАРИЛ-КАРБОКСАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ПЛАЗМЕННОГО КАЛЛИКРЕИНА | 2015 |
|
RU2821520C2 |
| ГЕМИНАЛЬНО-ЗАМЕЩЕННЫЕ ЦИАНОЭТИЛПИРАЗОЛОПИРИДОНЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ JANUS КИНАЗ | 2014 |
|
RU2664533C2 |
| N-((ГЕТ)АРИЛМЕТИЛ)-ГЕТЕРОАРИЛ-КАРБОКСАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ПЛАЗМЕННОГО КАЛЛИКРЕИНА | 2015 |
|
RU2707870C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОПИРИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗЫ | 2015 |
|
RU2733400C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ СУЛЬФОНАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ TRPA 1 | 2014 |
|
RU2675792C2 |
| ПРОИЗВОДНОЕ ДИГИДРОПИРИДАЗИН-3,5-ДИОНА | 2014 |
|
RU2662832C2 |
| ПУРИНОВЫЕ ИНГИБИТОРЫ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЙ ФОСФАТИДИЛИНОЗИТ 3-КИНАЗЫ ДЕЛЬТА | 2013 |
|
RU2658006C2 |
| БИЦИКЛИЧЕСКИЕ ЛАКТАМЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2016 |
|
RU2716136C2 |
| СОЕДИНЕНИЕ НА ОСНОВЕ СУЛЬТАМА И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ | 2017 |
|
RU2741915C2 |
Настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой I:
I
или его фармацевтически приемлемой соли, где
R1 представлен формулой:
где 
представляет собой моноциклическую С6 арильную или 5-7-членную гетероарильную группу, содержащую 1-2 гетероатома, выбранных из N, O или S; каждый А независимо представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил, необязательно фторированный C1-8 алкокси, необязательно фторированный C3-8 циклоалкил, -CF3 или галоген; n равен 1 или 2; где первый заместитель А расположен орто к точке присоединения от изображенного пиразольного кольца; R2 представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C3-8 циклоалкил или С6-10 арил, замещенный C1-8 алкил; R4 представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил, C1-8 алкил-С6 арил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, или (CH2)xNR7R8; R5 представляет собой необязательно замещенный C1-8 алкил, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил-С6 арил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, C1-8 алкилтетразол-5-он, (CH2)xNR7R8, (CH2)xOR7, (CH2)xCONR7R8, (CH2)xCOR7, (CH2)xxCO2R7; R6 представляет собой Н или каждый из R7 и R8 независимо представляет собой H, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCO2R9 или 5-17-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O, S; или R7 и R8 вместе образуют 3-9-членное кольцо, которое может содержать один или два гетероатома, выбранных из N или O; или R9 представляет собой Н или C1-8 алкил; каждый х независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8; и каждый хх независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8. Также предложены фармацевтические композиции и применения для лечения нарушения, связанного с апелиновым рецептором (APJ). Технический результат заключается в получении новых органических соединений, которые являются агонистами апелинового рецептора (APJ) и могут применяться для снижения артериального давления. 5 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 табл.
1. Соединение, представленное формулой I:
или его фармацевтически приемлемая соль,
где
R1 представлен формулой:
где 
представляет собой моноциклическую С6 арильную или 5-7-членную гетероарильную группу, содержащую 1-2 гетероатома, выбранных из N, O или S;
каждый А независимо представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил, необязательно фторированный C1-8 алкокси, необязательно фторированный C3-8 циклоалкил, -CF3 или галоген;
n равен 1 или 2;
где первый заместитель А расположен орто к точке присоединения от изображенного пиразольного кольца;
R2 представляет собой C3-8 алкил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C3-8 циклоалкил или С6-10 арил, замещенный C1-8 алкил;
R4 представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил, C1-8 алкил-С6 арил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, или (CH2)xNR7R8;
R5 представляет собой необязательно замещенный C1-8 алкил, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил-С6 арил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, C1-8 алкилтетразол-5-он, (CH2)xNR7R8, (CH2)xOR7, (CH2)xCONR7R8, (CH2)xCOR7, (CH2)xxCO2R7;
R6 представляет собой Н; или
каждый из R7 и R8 независимо представляет собой H, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, C3-8 циклоалкил, -(CH2)xCO2R9 или 5-17-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O, S; или
R7 и R8 вместе образуют 3-9-членное кольцо, которое может содержать один или два гетероатома, выбранных из N или O; или
R9 представляет собой Н или C1-8 алкил;
каждый х независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8; и
каждый хх независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8.
2. Соединение по п.1, где R5 представляет собой необязательно замещенный C1-8 алкил, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил-С6 арил, C1-8 алкил-C3-8 циклоалкил, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O, S, C1-8 алкилтетразол-5-он, (CH2)xCONR7R8, (CH2)xCOR7.
3. Соединение по п.1, где 
выбирают из фенила, пиридила и пиримидинила, предпочтительно фенила и пиридила.
4. Соединение по п.1, где:
n равно 2 и каждый A представляет собой ОCН3 и F соответственно;
n равно 2 и каждый A представляет собой CF3 и F соответственно;
n равно 2 и каждый A представляет собой Cl и F соответственно; или
n равно 1 и A представляет собой CF3.
5. Соединение по любому из пп.1-4, где R2 представляет собой C3-8 алкил.
6. Соединение по любому из пп.1-4, где R2 представляет собой C1-8 алкил(C3-8 циклоалкил).
7. Соединение по любому из пп.1-4, где R2 представляет собой C3-8 циклоалкил.
8. Соединение по любому из пп.1-4, где R2 представляет собой циклопентил.
9. Соединение по п. 4, где
R4 представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил, C2-8 алкил(С6 арил), C1-8 алкил(C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил(5-14-членный гетероарил), где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, или (CH2)xNR7R8; предпочтительно, где R4 представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил(5-14-членный гетероарил), гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S;
R5 представляет собой необязательно замещенный C1-8 алкил, C1-8 алкиламино, C1-8 алкиламидо, C2-8 алкил(С6 арил), C1-8 алкил(C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, C1-8 алкилтетразол-5-он, (CH2)xCONR7R8, (CH2)xCOR7; и
R6 представляет собой H.
10. Соединение по п.9, где R5 представляет собой необязательно замещенный C1-8 алкил, C2-8 алкил(С6 арил), C1-8 алкил(C3-8 циклоалкил), C1-8 алкил(5-14-членный гетероарил), где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S, (CH2)xNR7R8, (CH2)xCOR7.
11. Соединение по п.10, где каждый из R7 и R8 независимо представляет собой H, C1-8 алкил-5-14-членный гетероарил, C3-8 циклоалкил, ―(CH2)xCO2R9 или 5-14-членный гетероарил, гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S.
12. Соединение по любому из пп.1-11, где A представляет собой CF3.
13. Соединение по любому из пп.1-11, где R1 представляет собой фенил.
14. Соединение по любому из пп.1-13, где R2 представляет собой С6-10 арил, замещенный C1-8 алкил.
15. Соединение по любому из пп.1-14, где R4 представляет собой (CH2)xNR7R8, где R7 и R8 вместе с атомом азота образуют 5-8-членное кольцо.
16. Соединение по любому из пп.1-15, где R4 представляет собой необязательно фторированный C1-8 алкил-6-10-членный гетероарил, где гетероарил содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из N, O или S.
17. Соединение по любому из пп.1-16, где R4 дополнительно замещен одним или несколькими атомами фтора.
18. Соединение по любому из пп.1-17, где R5 представляет собой (CH2)xxC(O)OH.
19. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении апелинового рецептора, содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-18,
где терапевтически эффективное количество представляет собой количество, эффективное для снижения артериального давления.
20. Применение для лечения нарушения, связанного с апелиновым рецептором (APJ), соединения по любому из пп.1-18, где нарушение, связанное с апелиновым рецептором (APJ), представляет собой гипертензию.
21. Соединение по п.1, где соединение представляет собой:
или его фармацевтически приемлемая соль.
22. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении апелинового рецептора, содержащая по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент и терапевтически эффективное количество соединения по п.21, где терапевтически эффективное количество представляет собой количество, эффективное для снижения артериального давления.
23. Применение для лечения нарушения, связанного с апелиновым рецептором (APJ), соединения по п.21, где нарушение, связанное с апелиновым рецептором (APJ), представляет собой гипертензию.
| Спасательный плот | 1972 |
|
SU477049A1 |
| Устройство для вскрытия пласта | 1984 |
|
SU1190009A1 |
| Судовая переборка | 1983 |
|
SU1189728A1 |
| EP 1903052 A2, 26.03.2008 | |||
| ЗАМЕЩЕННЫЙ N-ПИПЕРИДИНО-5-(4-ХЛОРФЕНИЛ)-1-(2,4-ДИХЛОРФЕНИЛ)-4-МЕТИЛПИРАЗОЛ-3-КАРБОКСАМИД ИЛИ ЕГО СОЛИ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ | 1994 |
|
RU2141479C1 |
