НАЗАЛЬНАЯ ВАКЦИННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ПРОТИВ ГЕПАТИТА B И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2022 года по МПК A61K39/00 A61K39/12 A61K39/29 

Область техники, к которой относится изобретение

[0001]

Настоящее изобретение относится к вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа для профилактики и лечения гепатита B, и к способу ее получения.

Предпосылки к созданию изобретения

[0002]

Гепатит B представляет собой гепатит, вызываемый инфекцией вируса гепатита B (HBV), которым заражаются через кровь или жидкость организма. Персистирующая инфекция вируса HBV в гепатоцитах может вызывать хронический гепатит, цирроз печени, гепатоцеллюлярную карциному.

[0003]

Лечение хронического гепатита B (CHB) в настоящее время осуществляют в основном с использованием препаратов интерферона (IFN) или препаратов нуклеозидных аналогов (NA) в качестве терапии первой линии. Что касается IFN терапии, были описаны некоторые эффективные примеры, которые повышают иммунитет для эффективного поддержания ингибирования роста вируса, но в целом IFN терапия имеет низкий уровень клиренса HBV и сильный побочный эффект, что является большой проблемой. С другой стороны, NA терапия имеет высокий уровень клиренса HBV, около 95%, но терапевтический эффект является временным и не может привести к полному излечению. Таким образом, необходимо принимать это средство в течение всей жизни. Соответственно, NA терапия также имеет большие проблемы комплаентности и экономические проблемы, связанные с лечением, и также сообщалось о появлении лекарственно-резистентного вируса после длительного применения. Поэтому желательна новая терапия CHB.

[0004]

Что касается профилактики HBV инфекции в Японии, люди, которые имеют высокий риск инфицирования (например, члены семьи переносчика HBV, медицинские работники), получают вакцинацию, которая достигла некоторых хороших результатов, значительно уменьшив количество носителей HBV. В прошлом для лечения CHB также была опробована иммунотерапия вакциной против HBV, но она не была достаточно успешной в лечении.

[0005]

Чтобы попробовать иммунотерапию, авторы настоящего изобретения отметили тот факт, что в HBV имеется несколько антигенов, и из этих нескольких антигенов HBV они обратили внимание на антиген HBs (поверхностный антиген гепатита B), который может индуцировать нейтрализующее антитело. Кроме того, с недавним развитием технических исследований стало очевидно, что приобретенный иммунитет к антигену HBc (нуклеокапсидный антиген гепатита B) может способствовать ингибированию роста HBV и устранению HBV.

По прошествии некоторого времени Центр государственного контроля лекарственных средств, оборудования и медицинских приборов (CECMED) на Кубе разработал назальную вакцину для лечения гепатита B, которая включает два вида антигенов, HBs антиген и HBc антиген, а затем удалось коммерциализировать продукт под торговым названием: HeberNasvac^TM (непатентная литература 1) после клинических испытаний в Бангладеш. Однако в способе введения ее необходимо использовать в сочетании с подкожной вакцинацией для получения достаточного иммунного ответа, т.е. это двухцикловая вакцинация, а не полная вакцина для введения через слизистую оболочку носа.

[0006]

Как указано выше, в качестве вакцины против гепатита В следующего поколения желательна назальная вакцинная композиция широкого применения, которая представляет собой вакцину для лечения и профилактики HBV, но она еще не полностью создана.

Предшествующий уровень техники

[Патентная литература]

[0007]

[Патентная литература 1] WO2007/123193

[Непатентная литература]

[0008]

[Непатентная литература 1] HeberNasvac package insert

Сущность изобретения

[0009]

(Техническая задача)

Одной из целей настоящего изобретения является получение удобной для использования вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа, которая не требует никакого параллельного введения, такого как подкожное введение, и не включает никаких вспомогательных ингредиентов, вызывающих токсичность, таких как адъювант; способа ее получения; и способа для лечения и профилактики гепатита B.

[0010]

(Решение задачи)

Авторы настоящего изобретения всесторонне изучили указанную выше задачу и обнаружили, что комбинация (i) гелевой основы (материала) для введения посредством спрея на слизистую оболочку носа, включающей карбоксивиниловый полимер, которую обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея, и (ii) 2 видов антигенов, HBs антигена и HBc антигена, может усиливать индукцию иммунного ответа у человека с использованием только назального введения без адъюванта. На основании этих новых открытий было создано настоящее изобретение. Настоящее изобретение может обеспечить следующие варианты осуществления.

[0011]

[1] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа, включающая (i) поверхностный антиген вируса гепатита B (HBs антиген) и/или нуклеокапсидный антиген вируса гепатита B (HBc антиген) и (ii) гелевый материал-основу, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея.

[0012]

[2] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с [1], где количество (i) вакцины против гепатита B составляет 0,01-10 мг/мл на каждый антиген.

[0013]

[3] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с [1] или [2], которая включает от 0,1% масс/об до 1,0% масс/об карбоксивинилового полимера.

[0014]

[4] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [3], где рабочие характеристики спрея включают контроль (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и/или (3) угла распыления.

[0015]

[5] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [4], где вакцинную композицию против гепатита B получают обработкой гелевого материала-основы, включающего от 0,5% масс/об до 2,0% масс/об карбоксивинилового полимера, путем приложения внешнего сдвигового усилия для контроля (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и/или (3) угла распыления, как рабочих характеристик спрея, с получением гелевого материала-основы, и затем

смешиванием полученного гелевого материала-основы с исходным раствором вируса, включающим HBs антиген и/или HBc антиген, гомогенно, быстро, без стресса.

[0016]

[6] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [5], которую получают с использованием гелевого материала-основы, включающего карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея для контроля, чтобы (1) что касается распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, средний размер частиц находился в пределах от 50 мкм до 120 мкм, и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 50% или больше,

(2) плотность распыления была однородной с образованием формы однородного сплошного конуса, и

(3) угол распыления был отрегулирован в диапазоне от 30° до 70°.

[0017]

[7] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [5], которую получают с использованием гелевого материала-основы, включающего карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея для контроля, чтобы (1) что касается распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, средний размер частиц находился в пределах от 70 мкм до 100 мкм, и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 60% или более,

(2) плотность распыления была однородной с образованием формы однородного сплошного конуса, и

(3) угол распыления был отрегулирован в диапазоне от 40° до 60°.

[0018]

[8] Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [7], которая включает гелевый материал-основу для введения в форме спрея, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для контроля (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и (3) угла распыления, чтобы можно было использовать распыляющее устройство без функции накачивания для осуществления введения посредством спрея.

[0019]

[9] Способ профилактики и/или лечения гепатита B, включающий введение вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [8] субъекту, нуждающемуся в использовании устройства, которое может распылять вязкую композицию от ноздри до слизистой оболочки носа.

[0020]

[10] Применение вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа в соответствии с любым из пунктов [1] - [8] для лечения и/или профилактики гепатита B.

[0021]

(Эффект изобретения)

Настоящее изобретение может индуцировать эффективный иммунный ответ при небольшом количестве антигена в вакцинной композиции, включающей HBs антиген и HBc антиген в качестве активных ингредиентов, таким образом, настоящее изобретение может сделать возможным обеспечение вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа, которая не требует никакого параллельного введения, такого как подкожное введение, и не требует никакого адъюванта. Кроме того, настоящее изобретение можно вводить удобным для использования способом, оно имеет низкий побочный эффект и может вызывать достаточный иммунный ответ, таким образом, настоящее изобретение можно использовать не только для профилактики гепатита B, но также для лечения гепатита B, в частности, есть надежда, что оно может полностью вылечить CHB путем постоянного введения вакцинной композиции, обладающей такой сильной активностью.

Краткое описание чертежей

[0022]

Фиг. 1 показывает результаты иммунного ответа, т.е. результаты титра нейтрализующих антител, который был измерен через неделю после конечной инокуляции. На графиках п/к означает подкожную инокуляцию, а и/н означает назальную инокуляцию. Материал-основа показывает CVP, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия, где (-) означает материал-основу, который не включает CVP, и (+) означает материал-основу, который включает CVP.

Фиг. 2 показывает результаты иммунного ответа, т.е. результаты титра IgA антител, который был измерен через неделю после конечной инокуляции. На графиках п/к означает подкожную инокуляцию, а и/н означает назальную инокуляцию. Материал-основа показывает CVP, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия, где (-) означает материал-основу, который не включает CVP, и (+) означает материал-основу, который включает CVP.

Описание вариантов осуществления

[0023]

Настоящее изобретение обеспечивает вакцинную композицию против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа, включающую гелевый материал-основу, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея, и антиген гепатита B.

[0024]

"Гелевый материал-основа, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея", используемый в настоящем изобретении, означает, например, "гелевый материал-основу, включающий кожно/мукоадгезивный агент" раскрытый в WO 2007/123193, который представляет собой материал-основу, включающий карбоксивиниловый полимер и необязательно включающий геллановую камедь, вязкость которого регулируют путем приложения внешнего сдвигового усилия. Конкретное внешнее усилие сдвига, раскрытое в WO 2007/123193 - это не просто перемешивание или встряхивание, т.е. действие, сообщающее усилие сдвига, в данном случае можно осуществить с использованием устройства, известного специалистам в данной области, например, в качестве устройства, сообщающего усилие сдвига, можно использовать высокоскоростное вращающееся эмульгирующее устройство, эмульгирующее устройство по типу коллоидной мельницы, эмульгирующее устройство высокого давления, эмульгирующее устройство по типу роликовой мельницы, ультразвуковое эмульгирующее устройство и эмульгирующее устройство мембранного типа. Особенно предпочтительны высокоскоростные вращающиеся эмульгирующие устройства гомосмесительного типа, комбинированного типа и генерирующие прерывисто-струйный поток устройства. Материал-основа характеризуется тем, что его вязкость можно регулировать до различной степени путем приложения внешнего сдвигового усилия, и угол расходимости спрея из контейнера для распыления и плотность распыления можно контролировать в соответствии с конкретной целью.

[0025]

Устройство, используемое для введения в форме спрея, не должно ограничиваться, при условии, что устройство представляет собой обычно используемое устройство для назального спрея, и оно также может включать распылительное устройство без функции накачивания. Например, для этой цели в качестве многодозового контейнера для спрея можно использовать аэрозольный баллон безвоздушного типа со сбросом давления, раскрытый в WO 2007/123193 (см. Фиг. 1 и 2) и WO 2007/123207 (см. Фиг. 1-11), поскольку контейнер может быть установлен для распыления под любым углом или с любым диапазоном угла, и содержимое контейнера можно использовать без остатка, что подходит для инокуляции для многих людей в развивающихся странах. И в качестве устройства одноразового использования, которое будет использоваться только для одного человека, подлежащего вакцинации, можно использовать распылительную насадку для введения в нос, раскрытую в WO 2015/199130 (см. Фиг. 1-4). В настоящем изобретении антиген гепатита В, вводимый при помощи спреевого устройства, может широко распространяться на слизистой оболочке носа в течение длительного периода времени, благодаря чему может быть повышена иммуногенность вакцины.

[0026]

Карбоксивиниловый полимер, который является ингредиентом гелевого материала-основы в настоящем изобретении, представляет собой гидрофильный полимер, полученный полимеризацией акриловой кислоты в качестве основного ингредиента. К гелевому материалу-основе можно добавить любые ингредиенты, которые могут быть выбраны из фармацевтических добавок, которые обычно используются для получения водного гелевого агента, без каких-либо ограничений.

Содержание гелевого материала-основы, включающего карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея, составляет 0,1-1,0% масс/об, предпочтительно 0,3-0,7% масс/об, в расчете на содержание карбоксивинилового полимера.

[0027]

Вакцина по настоящему изобретению характеризуется тем, что включает поверхностный тип и/или коровый тип антигена гепатита B (HBs антиген, HBc антиген, соответственно) в качестве антигена. Антиген гепатита B, используемый в настоящем изобретении, означает поверхностный антиген вируса гепатита B и нуклеокапсидный антиген вируса гепатита B, которые получены в дрожжах методом рекомбинантной ДНК.

В качестве указанного выше антигена гепатита B в настоящем изобретении используют исходный раствор его вируса, который очищают или концентрируют для смешивания с гелевым материалом-основой для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа. Что касается вакцины по настоящему изобретению, концентрация каждого антигена вируса гепатита B предпочтительно составляет 0,01-10 мг/мл, более предпочтительно 0,05-5 мг/мл.

Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg) принимает форму частицы (диаметр: около 50-60 нм), где присутствует множество антигенных белков на липидной мембране. Антигенные белки состоят главным образом из трех доменов (S, Pre-S1, Pre-S2). Антигенные белки различаются следующим образом: антиген, имеющий все три домена, представляет собой L-белок HBsAg, антиген, не имеющий Pre-S1, представляет собой M-белок HBsAg, и антиген, не имеющий Pre-S1 и Pre-S2, представляет собой S-белок HBsAg. Все антигены можно получить с использованием рекомбинантных дрожжей.

[0028]

“Адъювант” является общим термином, обозначающим вещества, обладающие активностью, модулирующей, такой как усиливающей и подавляющей, иммунный ответ, и используемые в качестве иммуностимулирующего агента, добавляемого к вакцине для усиления иммуногенности антигена. К настоящему времени изучено множество адъювантов. Использование адъюванта усиливает иммунный эффект вакцины, но имеет недостатки, так как вызывает побочные эффекты, такие как воспаление. Некоторые адъюванты могут быть выбраны в качестве кандидата для использования в вакцине для назального введения, но до сих пор не было одобренной вакцины для назального введения, включающей адъювант, поскольку не было адъюванта, имеющего абсолютную безопасность.

[0029]

"Без стресса", как используется на стадии смешивания гелевого материала-основы с исходным раствором вируса, означает, что смешивание осуществляют без нагревания, давления и т.д. и без высокоскоростного перемешивания.

[0030]

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что можно получить вакцину, имеющую высокую эффективность и низкие побочные эффекты несмотря на отсутствие адъюванта и более низкий уровень антигенов, которая не требует использования вместе с другим введением, таким как подкожная вакцинация, когда с указанной выше вакциной против гепатита B используют гелевый материал-основу, который имеет вышеуказанные полезные рабочие характеристики спрея, такие как высокоадгезивные свойства на слизистой оболочке носа. Кроме того, авторы настоящего изобретения также обнаружили, что с использованием устройства, которое может распылять даже гелевый материал-основу, имеющий высокую вязкость, вакцинную композицию против гепатита B можно распылять на слизистую оболочку носа, где средний размер частиц наносимой в виде спрея композиции находится в подходящем диапазоне от 50 мкм до 120 мкм (предпочтительно в диапазоне от 70 мкм до 100 мкм), распределение частиц по размерам между 10 мкм и 100 мкм составляет 50% или больше (предпочтительно, 60% или больше), угол распыления из устройства установлен в пределах от 30° до 70° (предпочтительно, пределах от 40° до 60°), чтобы композицию можно было вводить в желаемое место в назальной полости, и чтобы плотность распыления была однородной с образованием формы однородного сплошного конуса. Кроме того, авторы настоящего изобретения также нашли способ получения композиции и способ для профилактики и лечения гепатита B с использованием композиции. На основании этих открытий было создано настоящее изобретение.

[0031]

Термин "форма сплошного конуса", который используют для выражения несмещенной и однородной плотности распыления, означает один из примеров получаемой при распылении формы, и форма сплошного конуса означает однородный полный круг. Противоположным термином является "полый конус", который имеет форму баранки.

[0032]

Вакцина по настоящему изобретению может включать дополнительный фармацевтически приемлемый носитель(носители), помимо антигенов вируса гепатита В и гелевого материала-основы, для нанесения посредством спрея на слизистую оболочку носа. Используемый носитель может быть носителем, который обычно используется для получения вакцины или препарата для введения в носовую полость, который включает, например, физиологический раствор, забуференный солевой раствор, декстрозу, воду, глицерин, изотонический водный буферный раствор и их комбинацию. И вакцина по настоящему изобретению необязательно может включать консервант (например, тимеросал), изотонический агент, регулятор pH, поверхностно-активное вещество, стабилизатор (например, динатрийэдетат гидрат) и инактивирующий агент (например, формалин).

[0033]

Дозировка вакцины должна определяться с учетом возраста, пола и массы тела субъекта, и обычно ее можно вводить в дозе 0,1-100 мкг на один вид антигена, предпочтительно 0,5-10 мкг, один раз, два раза или больше. Предпочтительно вакцину вводят несколько раз. В этом случае интервал между введениями предпочтительно составляет от 1 до 4 недель.

ПРИМЕР

[0034]

Далее изобретение проиллюстрировано на основе примеров, но не должно этим ограничиваться.

[0035]

В соответствии со способами, показанными ниже, получали гелевые материалы-основы и исходные растворы вируса гепатита B и каждый гелевый материал-основу и каждый исходный раствор вируса смешивали, как показано ниже, с получением вакцинных композиций против гепатита B.

<Получение гелевого материала-основы>

Пример гелевого материала-основы (1)

Ингредиенты Количество Способ получения Карбоксивиниловый полимер 11,0 мг Каждый ингредиент, показанный в левой колонке, смешивали в количестве, соответствующем каждой указанной массе, и перемешивали до получения гомогенной смеси. Затем к смеси прилагали внешнее усилие сдвига путем высокоскоростного вращения с использованием высокоскоростного вращающегося эмульгирующего устройства, генерирующего прерывисто-струйный поток. Полученный материал-основу, вязкость которого была подходящим образом отрегулирована путем приложения внешнего усилия сдвига, нагревали при 90°C в течение 20 минут с получением гелевого материала-основы.
Внешний вид: прозрачный и бесцветный гелевый материал-основа, почти без запаха.
pH: 7,29
Вязкость: 3,800 мПа･сек L-аргинин 24,0 мг Концентрированный глицерин 20,0 мг Очищенная вода q.s. Всего 1,0 мл

[0036]

<Получение исходного раствора вируса, включающего антиген вируса гепатита B >

Пример исходного раствора вируса (1)

Ингредиенты Количество HBsAg S-белок 0,2 мг HBcAg 0,2 мг Хлорид натрия 8,0 мг Хлорид калия 0,2 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 1,15 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,2 мг Очищенная вода Всего 1 мл

[0037]

Пример исходного раствора вируса (2)

Ингредиенты Количество HBsAg L-белок 0,2 мг HBcAg 0,2 мг Хлорид натрия 8,0 мг Хлорид калия 0,2 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 1,15 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,2 мг Очищенная вода Всего 1 мл

[0038]

<Смесь гелевого материала-основы и исходного раствора вируса>

Пример исходного раствора вируса (1) или Пример исходного раствора вируса (2) и Пример гелевого материала-основы (1), указанные выше, смешивали в соотношении 1:1 при перемешивании с получением гомогенной назальной вакцинной композиции против гепатита B (Примера 1 или Примера 2). Смешивание при перемешивании можно осуществлять осторожно и за короткое время, без стресса, такого как нагревание и давление, для антигена вакцины против гепатита B. Количества каждого ингредиента в полученной вакцинной композиции против гепатита B, его физические свойства и рабочие характеристики спреев, получаемых при распылении композиций подходящим устройством, также показаны ниже.

[0039]

Пример 1 Ингредиенты Количество Физическое свойство/рабочие характеристики спрея L-белок HBsAg 0,10 мг pH: 7,16
Вязкость: 505 мПа·сек
Рабочие характеристики спрея при распылении 250 мкл раствора распыляющим устройством, которое не имеет функции накачивания:
·Средний размер частиц распыляемой композиции:
88,2 мкм
·Процент частиц размером между 10 мкм и 100 мкм: 66,3%
·Угол распыления из устройства: 55°
·Плотность распыления: однородная, сплошной конус-круг HBcAg 0,10 мг Карбоксивиниловый полимер 5,50 мг L-аргинин 12,00 мг Концентрированный глицерин 10,00 мг Хлорид натрия 4,00 мг Хлорид калия 0,10 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 5,75 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,10 мг Очищенная вода q.s. Всего 1,0 мл

[0040]

Пример 2 Ингредиенты Количество Физическое свойство/рабочие характеристики спрея S-белок HBsAg 0,10 мг pH: 7,16
Вязкость: 503 мПа·сек
Рабочие характеристики спрея при распылении 250 мкл раствора распыляющим устройством, которое не имеет функции накачивания:
·Средний размер частиц распыляемой композиции: 84,5 мкм
·Процент частиц размером между 10 мкм и 100 мкм: 65,9%
·Угол распыления из устройства: 53°
·Плотность распыления: однородная, сплошной конус-круг HBcAg 0,10 мг Карбоксивиниловый полимер 5,50 мг L-аргинин 12,00 мг Концентрированный глицерин 10,00 мг Хлорид натрия 4,00 мг Хлорид калия 0,10 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 5,75 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,10 мг Очищенная вода q.s. Всего 1,0 мл

[0041]

Назальные вакцинные композиции против гепатита B, которые не включают никакого гелевого материала-основы, получали в соответствии с таблицами, представленными ниже.

Сравнительный пример 1 Ингредиенты Количество L-белок HBsAg 0,10 мг HBcAg 0,10 мг Хлорид натрия 8,0 мг Хлорид калия 0,2 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 1,15 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,2 мг Очищенная вода q.s. Всего 1,0 мл

[0042]

Сравнительный Пример 2 Ингредиенты Количество S-белок HBsAg 0,10 мг HBcAg 0,10 мг Хлорид натрия 8,0 мг Хлорид калия 0,2 мг Динатрий гидрофосфат (безводный) 1,15 мг Дигидрофосфат натрия (безводный) 0,2 мг Очищенная вода q.s. Всего 1,0 мл

[0043]

Исследование иммунного ответа

Что касается назальных вакцинных композиций против гепатита B, которые были получены в Примерах 1 и 2 и Сравнительных примерах 1 и 2, способность кажой к индукции антител оценивали на экспериментальных животных, тупайеобразных, как показано ниже.

(Индукция антител к антителу)

Обыкновенных тупайев (Tupaia belangeri, приобретенных в Куньминском институте зоологии), используемых в качестве экспериментальных животных, случайным образом разделяли на 4 группы (2 группы по 4 животных и 2 группы по 3 животных). В двух группах из 4 животных осуществляли индукцию антител путем назального введения Примеров 1 и 2, а в двух группах из 3 животных осуществляли индукцию антител путем назального введения Сравнительных примеров 1 и 2. Введение назального спрея осуществляли от ноздри с использованием шприца высокого давления и устройства для распыления жидкости. Вакцинные композиции инокулировали каждой тупайе в количестве 0,05 мл на одну ноздрю (всего 10 мкг каждого антигена на обе ноздри). После первоначальной инокуляции инокуляцию осуществляли каждые 2 недели, всего 5 раз. И затем, после 4-недельного перерыва, инокуляцию осуществляли еще раз. Кровь собирали во время каждой инокуляции и через одну неделю после последней инокуляции, и титр нейтрализующих антител оценивали в каждом взятом образце крови.

Отдельно были установлены новые 2 группы по 3 тупайи, и Сравнительные примеры 1 и 2 подкожно инокулировали в спину каждой тупайе в количестве 0,1 мл (10 мкг каждого антигена). Затем животных обрабатывали так же, как в вышеописанном испытании назального введения (включая непрерывное введение, сбор крови и оценку).

[0044]

(Определение титра нейтрализующих антител и сывороточных IgA антител)

Вирусосодержащую жидкость, используемую для измерения титра нейтрализующих антител, получали путем инфицирования первичного гепатоцита человека (клетка PXB, производства PhoenixBio Company) генотипом С вируса гепатита B (C_JPNAT) и затем культивирования его. Тест на нейтрализацию осуществляли с клетками HepG2-NTCP30, и титр нейтрализующих антител измеряли общепринятым способом.

Кроме того, сывороточные IgA антитело к каждому антигену измеряли методом ELISA.

[0045]

(Результаты)

Через неделю после последней инокуляции измеряли титр нейтрализующих антител и титр IgA-антител, и результаты показаны в Таблице 1 и на Фиг. 1 и 2. Результаты показывают, что способность к индуцированию антител при назальной инокуляции была выше, чем при подкожной инокуляции, а также показывают, что Примеры 1 и 2, включающие карбоксивиниловый полимер (CVP), который был обработан путем приложения внешнего сдвигового усилия, могут привести к значительно более высокой индукции антител, чем Сравнительные примеры 1 и 2, которые не содержат CVP.

Таблица 1 Титр сывороточных нейтрализующих антител Титр сывороточных IgA антител (OD значение) Путь введения материал-основа HBs-S+HBc HBs-L+HBc Анти-HBs-S IgA Анти-HBs-L IgA Подкожный без CVP 320 1280 0,062 0,133 640 640 0,052 0,061 80 160 0,067 0,082 Назальный без CVP 2560 640 1,145 0,590 1280 1280 0,169 0,435 2560 640 0,417 0,515 включающий CVP, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия 5120 10240 1,171 1,430 2560 5120 0,499 1,785 10240 10240 1,208 0,676 5120 10240 0,782 1,519

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, в частности, вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа для профилактики и лечения гепатита B, которая включает антиген гепатита B и карбоксивиниловый полимер. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

1. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа, включающая (i) поверхностный антиген гепатита B (HBs антиген) и/или нуклеокапсидный антиген гепатита B (HBc антиген) и (ii) гелевый материал-основу, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея.

2. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по п. 1, в которой количество (i) вакцины против гепатита B составляет 0,01-10 мг/мл на каждый антиген.

3. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по п. 1 или 2, которая включает от 0,1% (масс./об.) до 1,0% (масс./об.) карбоксивинилового полимера.

4. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-3, в которой рабочие характеристики спрея включают контроль (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и/или (3) угла распыления.

5. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-4, которую получают обработкой гелевого материала-основы, включающего от 0,5% (масс./об.) до 2,0% (масс./об.) карбоксивинилового полимера, путем приложения внешнего сдвигового усилия для контроля (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и/или (3) угла распыления, как рабочих характеристик спрея, с получением гелевого материала-основы, а затем смешиванием полученного гелевого материала-основы с исходным раствором вируса, включающим HBs антиген и/или HBc антиген, гомогенно, быстро, без стресса.

6. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-5, которую получают с использованием гелевого материала-основы, включающего карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея для контроля, чтобы:

(1) что касается распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, средний размер частиц находился в пределах от 50 мкм до 120 мкм, и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 50% или больше,

(2) плотность распыления была однородной с образованием формы однородного сплошного конуса, и

(3) угол распыления был отрегулирован в диапазоне от 30° до 70°.

7. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-5, которую получают с использованием гелевого материала-основы, включающего карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для повышения рабочих характеристик спрея для контроля, чтобы:

(1) что касается распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, средний размер частиц находился в пределах от 70 мкм до 100 мкм, и распределение частиц между 10 мкм и 100 мкм составляло 60% или больше,

(2) плотность распыления была однородной с образованием формы однородного сплошного конуса, и

(3) угол распыления был отрегулирован в диапазоне от 40° до 60°.

8. Вакцинная композиция против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-7, которая включает гелевый материал-основу для введения в форме спрея, включающий карбоксивиниловый полимер, который обрабатывают путем приложения внешнего сдвигового усилия для контроля (1) распределения по размерам частиц наносимой в виде спрея композиции, (2) однородности плотности распыления и (3) угла распыления, чтобы можно было использовать распыляющее устройство без функции накачивания для осуществления введения посредством спрея.

9. Способ профилактики и/или лечения гепатита B, включающий введение вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-8 субъекту, нуждающемуся в использовании устройства, которое может распылять вязкую композицию от ноздри до слизистой оболочки носа.

10. Применение вакцинной композиции против гепатита B для нанесения в форме спрея на слизистую оболочку носа по любому из пп. 1-8 для лечения и/или профилактики гепатита B.