6-Трифтор(трихлор)метилзамещенные спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны, проявляющие противоопухолевую активность, и способ их получения Российский патент 2022 года по МПК C07D491/107 A61K31/4162 A61P35/00 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области органического синтеза биологически активных соединений и касается ранее неизвестных 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов, обладающих выраженной цитотоксической активностью. Указанные соединения могут быть использованы в качестве противоопухолевых агентов, в первую очередь для лечения рака шейки матки и рабдомиосаркомы человека.

Уровень техники

Сведения о способах получения, биологической активности и области применения 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов общей формулы I в научно-технической и патентной литературе отсутствуют.

Ближайшими аналогами 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов общей формулы I являются 6-арилзамещенные спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны (3), получаемые из соответствующих 2-арил-3-нитро-2H-хроменов (1) изатина (2) и пролина при кипячении в толуоле в течение 16-24 ч [J.N.S. Rao, R. Raghunathan. An expedient synthesis of pyrrolidinyl spirooxindole grafted 3-nitrochromanes through 1,3-dipolar cycloaddition reaction of azomethine ylides. // Tetrahedron Letters, 2013, DOI: 10.1016/j.tetlet.2013.09.097], либо при 2-х часовом кипячении в этаноле [S. Nayak, S.K. Mishra, S. Bhakta, P. Panda, N. Baral, S. Mohapatra, C.S. Purohit, P. Satha. Green Synthesis of Spirooxindole-pyrrolidine/Piperidine Fused Nitrochromane: One Pot Three Component Stereo and Regioselective Cycloaddition. // Letters in Organic Chemistry, 2016, DOI: 10.2174/1570178612666151030213735]. В первом случае очистка целевых продуктов (3) включала дополнительную стадию колоночной хроматографии, тогда как при использовании этанола в качестве растворителя целевые продукты (3) были очищены от примесей промывкой этим же растворителем. Биологическая активность 6-арилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов (3) не изучалась.

В литературе имеются сведения о высокой противоопухолевой активности спирооксиндолов благодаря ингибированию p53-MDM2 взаимодействия, причем некоторые препараты на их основе, например, SAR405838, в настоящее время успешно проходят клинические испытания [V.A. de Weger, M. de Jonge, M.H.G. Langenberg, J.H.M. Schellens, M.Lolkema, A. Varga, B. Demers, K. Thomas, K. Hsu, G. Tuffal, S. Goodstal, S. Macé, E. Deutsch. // British Journal of Cancer, 2019, DOI: 10.1038/s41416-018-0355-8].

Совсем недавно было показано, что 6-трифторметилзамещенные спиро[хроменопирролидин-1,3'-оксиндолы] обладают выраженной цитотоксической активностью к клеткам карциномы шейки матки человека HeLa [I.B. Kutyashev, M.V. Ulitko, A.Y. Barkov, N.S. Zimnitskiy, V.Y. Korotaev, V.Y. Sosnovskikh. A regio- and stereocontrolled approach to the synthesis of 4-CF₃-substituted spiro[chromeno-[3,4-c]pyrrolidine-oxindoles] via reversible [3+2] cycloaddition of azomethine ylides generated from isatins and sarcosine to 3-nitro-2-(trifluoromethyl)-2H-chromenes // New Journal of Chemistry, 2019, DOI: 10.1039/c9nj04498a].

где R¹ = H, Me, MeO, Cl, Br;

R² = H, EtO, Br;

R³ = H, Me.

Задача изобретения: синтезировать новую группу соединений, обладающих противоопухолевой активностью, в мягких условиях, с высоким выходом и без применения методов колоночной хроматографии или перекристаллизации для очистки целевых продуктов. Поставленная задача решается тем, что новые 6-трифтор(трихлор)метилзамещенные спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны общей формулы I получают трехкомпонентной реакцией 3-нитро-2-трифтор(трихлор)метил-2H-хроменов (5a-s) с изатинами (2a-с) и пролином, взятым в 1,3-кратном избытке, в изопропиловом спирте при 30°C в течение 15-120 мин, после чего реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и отфильтровывают выпавший осадок. С целью очистки от примесей осадок целевого продукта промывается на фильтре сначала изопропиловым спиртом, а затем водой, после чего высушивается при 70°C в течение 7 часов для удаления воды и изопропилового спирта. Исходные 3-нитро-2-трифтор(трихлор)метил-2H-хромены (5a-s) получают согласно методике, описанной в литературе [V.Y. Korotaev, I.B. Kutyashev, V.Y. Sosnovskikh. Synthesis of 3-substituted 2-trifluoro(trichloro)methyl-2H-chromenes by reaction of salicylaldehydes with activated trihalomethyl alkenes.// Heteroatom Chemistry, 2005, DOI: 10.1002/hc.20146]. Выходы соединений общей формулы I представлены в таблице 1.

Анализ целевых соединений проводят с использованием ЯМР-спектроскопии [Спектры ЯМР ¹Н ¹⁹F и ¹³С зарегистрированы на спектрометрах Bruker AVANCE-500 (500, 471 и 126 МГц, соответственно) или Bruker-DRX400 (400, 376 и 101 МГц, соответственно) в растворе ДМСО-d₆, внутренний стандарт ТМС] и элементного анализа на автоматическом анализаторе Perkin-Elmer РЕ-2400. Масс-спектры высокого разрешения записаны на спектрометре Bruker maXis Impact HD. Рентгеноструктурное исследование выполнено на дифрактометре Xcalibur Eos (Mo-Kα излучение, графитовый монохроматор, ω-сканирование, длина волны = 0.7107 нм).

Краткое описание чертежей

Изображение: Молекулярная структура соединения (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метокси-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она в представлении атомов эллипсоидами тепловых колебаний с 30% вероятностью.

Пример 1

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Смесь 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a) 245 мг (1.0 ммоль), изатина (2a) 147 мг (1.0 ммоль) и пролина 150 мг (1.3 ммоль) перемешивают в 6 мл изопропилового спирта при 30°C в течение 30 мин (табл. 1). Затем выпавший осадок отфильтровывают и промывают сначала изопропиловым спиртом (3×1 мл), а затем водой (5×1 мл) и высушивали при 70°C в течение 5 часов. Получают (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-он в виде белого порошка. Выход приведен в табл. 1.

Т. пл. 195-196°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.86 (м, 6H), 4.37 (т, J=7.4 Гц, 1H), 4.91 (с, 1H), 6.17 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.33 (к, J=6.6 Гц, 1H), 6.82 (т.д, J=7.9, 1.3 Гц, 1H), 6.88 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.04 (д, J=8.1 Гц, 1H), 7.19 (т.д, J=7.7, 1.4 Гц, 1H), 7.20 (т.д, J=7.5, 0.8 Гц, 1H), 7.41 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.71 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.52 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (471 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.0 (д, J=6.6 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 28.5, 48.6, 49.2, 67.4 (к, J=2.1 Гц), 74.1, 74.7 (к, J=32.3 Гц), 91.9, 110.3, 116.6, 118.2, 122.6, 122.9 (к, J=281.5 Гц), 123.0, 125.9, 126.2, 126.9, 128.9, 130.6, 142.8, 151.2, 177.6.

Элементный анализ для C₂₂H₁₈F₃N₃O₄ (445.40):

Вычислено (%): С, 59.33; Н, 4.07; N, 9.43.

Найдено (%): С, 59.30; Н, 3.86; N, 9.36.

Пример 2

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метил-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-метил-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5b), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 199-200°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.91 (м, 6H), 1.94 (с, 3H), 4.37 (т, J=7.5 Гц, 1H), 4.84 (с, 1H), 5.91 (с, 1H), 6.26 (к, J=6.6 Гц, 1H), 6.90 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.92 (д, J=8.4 Гц, 1H), 6.99 (д.д, J=8.4, 1.6 Гц, 1H), 7.20 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.43 (т.д, J=7.7, 0.6 Гц, 1H'), 7.70 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.52 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (471 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.2 (д, J=6.6 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 20.2, 24.4, 28.5, 48.6, 49.6, 67.5 (к, J=2.5 Гц), 74.0, 74.9 (к, J=32.1 Гц), 92.2, 110.2, 116.3, 117.8, 122.6, 122.9 (к, J=281.9 Гц), 126.1, 126.2, 126.9, 129.4, 130.6, 131.6, 142.8, 149.2, 177.5.

Элементный анализ для C₂₃H₂₀F₃N₃O₄ (459.43):

Вычислено (%): С, 60.13; Н, 4.39; N, 9.15.

Найдено (%): С, 60.11; Н, 4.15; N, 9.21.

Пример 3

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метокси-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-метокси-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5c), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 201-202°C.

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.67-3.00 (м, 6H), 3.35 (с, 3H), 4.41 (т, J=7.1 Гц, 1H), 4.90 (с, 1H), 5.65 (д, J=2.9 Гц, 1H), 6.17 (к, J=6.7 Гц, 1H), 6.77 (д.д, J=8.9, 2.9 Гц, 1H), 6.91 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.99 (д, J=8.9 Гц, 1H), 7.21 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.42 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.74 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.57 (с, 1H, NH).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.6 (д, J=6.7 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.5, 28.2, 48.5, 50.3, 54.8, 67.7 (к, J=3.1 Гц), 73.9, 75.6 (к, J=32.3 Гц), 93.2, 109.9, 110.3, 114.9, 117.5, 118.9, 122.6, 122.9 (к, J=281.5 Гц), 126.3, 126.9, 130.7, 142.9, 145.4, 154.4, 177.4.

Элементный анализ для C₂₃H₂₀F₃N₃O₅ (475.42):

Вычислено (%): С, 58.11; Н, 4.24; N, 8.84.

Найдено (%): С, 57.82; Н, 4.16; N, 8.82.

Пример 4

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трифторметил)-4-этокси-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-8-этокси-2H-хромена (5d), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 205-206°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.31 (т, J=7.0 Гц, 3H), 1.70-2.85 (м, 6H), 4.00 (д.к, J=9.6, 7.0 Гц, 1H), 4.02 (д.к, J=9.6, 7.0 Гц, 1H), 4.36 (т, J=7.3 Гц, 1H), 4.88 (с, 1H), 5.74 (д, J=7.8 Гц, 1H), 6.25 (к, J=6.5 Гц, 1H), 6.72 (т, J=8.0 Гц, 1H), 6.84 6.90 (м, 2H), 7.18 (т.д, J=7.6, 0.8 Гц, 1H), 7.40 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.69 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.49 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.3 (д, J=6.5 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 14.5, 24.4, 28.4, 48.5, 49.4, 64.1, 67.4 (к, J=2.2 Гц), 73.9, 74.8 (к, J=31.4 Гц), 92.0, 110.3, 112.9, 117.0, 119.1, 122.5, 122.7, 122.9 (к, J=281.5 Гц), 126.1, 127.0, 130.6, 141.1, 142.7, 147.0, 177.5.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 490.1590 [M+H]⁺. C₂₄H₂₃F₃N₃O₅. Вычислено, m/z: 490.1584.

Пример 5

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трифторметил)-2-хлор-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-6-хлор-2H-хромена (5e), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 204-205°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.72-2.88 (м, 6H), 4.36 (т, J=7.3 Гц, 1H), 4.93 (с, 1H), 6.08 (д, J=2.4 Гц, 1H), 6.35 (к, J=6.5 Гц, 1H), 6.92 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.11 (д, J=8.8 Гц, 1H), 7.21 (т.д, J=7.6, 0.6 Гц, 1H), 7.26 (д.д, J=8.8, 2.4 Гц, 1H), 7.44 (т.д, J=7.7, 0.8 Гц, 1H), 7.69 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.61 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 93.8 (д, J=6.5 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 28.6, 48.6, 48.9, 67.4 (к, J=3.0 Гц), 74.1, 74.8 (к, J=32.3 Гц), 91.0, 110.3, 118.5, 120.3, 122.6 (к, J=281.5 Гц), 122.7, 125.6, 126.4 (3C), 128.9, 130.9, 142.7, 150.0, 177.5.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇ClF₃N₃O₄ (479.84):

Вычислено (%): С, 55.07; Н, 3.57; N, 8.76.

Найдено (%): С, 55.00; Н, 3.36; N, 8.91.

Пример 6

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-бром-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5f), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 197-198°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.72-2.87 (м, 6H), 4.35 (т, J=7.3 Гц, 1H), 4.93 (с, 1H), 6.22 (д, J=2.5 Гц, 1H), 6.35 (к, J=6.5 Гц, 1H), 6.92 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.05 (д, J=8.8 Гц, 1H), 7.22 (т.д, J=7.6, 0.6 Гц, 1H), 7.37 (д.д, J=8.8, 2.5 Гц, 1H), 7.44 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.69 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.61 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (471 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 93.8 (д, CF3, J=6.5 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 28.6, 48.6, 48.8, 67.4 (к, J=2.4 Гц), 74.2, 74.7 (к, J=32.5 Гц), 90.9, 110.3, 114.2, 118.8, 120.7, 122.6 (к, J=281.4 Гц), 122.7, 126.3, 126.4, 128.5, 130.9, 131.7, 142.7, 150.4, 177.5.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇BrF₃N₃O₄ (524.29):

Вычислено (%): С, 50.40; Н, 3.27; N, 8.01.

Найдено (%): С, 50.39; Н, 3.40; N, 8.06.

Пример 7

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,4-дибром-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5g), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 221-222°C.

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.70-2.83 (м, 6H), 4.34 (т, J=6.9 Гц), 5.01 (с, 1H), 6.20 (д, J=2.2 Гц, 1H), 6.45 (к, J=6.3 Гц, 1H), 6.92 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.22 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.44 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.6 Гц, 1H), 7.80 (д, J=2.2 Гц, 1H), 10.63 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 93.4 (д, J=6.3 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 28.6, 48.5, 49.1, 67.4 (к, J=3.4 Гц), 74.2, 75.2 (к, J=32.7 Гц), 90.6, 110.4, 111.2, 114.3, 122.1, 122.8, 122.4 (к, J=281.9 Гц), 126.1, 126.4, 128.0, 130.9, 134.2, 142.7, 147.4, 177.4.

Элементный анализ для C₂₂H₁₆Br₂F₃N₃O₄ (603.19):

Вычислено (%): С, 43.81; Н, 2.67; N, 6.97.

Найдено (%): С, 43.78; Н, 2.60; N, 6.90.

Пример 8

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,6a-динитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3,6-динитро-2-трифторметил-2H-хромена (5h), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 223-224°C.

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.72-2.82 (м, 6H), 4.34 (т, J=7.3 Гц, 1H), 5.08 (с, 1H), 6.57 (к, J=6.3 Гц, 1H), 6.90 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.03 (д, J=2.7 Гц, 1H), 7.26 (т.д, J=7.6, 0.6 Гц, 1H), 7.35 (д, J=9.1 Гц, 1H), 7.46 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.70 (д, J=7.5 Гц 1H), 8.11 (д.д, J=9.1, 2.7 Гц, 1H), 10.56 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 93.1 (д, J=6.3 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.5, 28.8, 48.3, 48.7, 67.4 (к, J=2.4 Гц), 74.4, 74.8 (к, J=32.4 Гц), 89.3, 110.5, 117.8, 119.4, 122.0, 122.4 (к, J=282.0 Гц), 122.9, 124.9, 126.0, 126.5, 131.0, 142.1, 142.6, 155.8, 177.6.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇F₃N₄O₆ (490.40):

Вычислено (%): С, 53.88; Н, 3.49; N, 11.43.

Найдено (%): С, 53.91; Н, 3.89; N, 11.35.

Пример 9

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,4,6a-тринитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3,6,8-тринитро-2-трифторметил-2H-хромена (5i), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 209-210°C.

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.74-2.80 (м, 6H), 4.36 (т, J=7.0 Гц, 1H), 5.29 (с, 1H), 6.70 (к, J=6.3 Гц, 1H), 6.92 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.21 (д, J=2.6 Гц, 1H), 7.28 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.48 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.70 (д, J=7.6 Гц, 1H), 8.77 (д, J=2.6 Гц, 1H), 10.62 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 92.9 (д, J=6.0 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.5, 28.6, 48.0, 48.5, 67.3 (к, J=1.9 Гц), 74.4, 75.4 (к, J=33.0 Гц), 88.5, 110.7, 120.9, 121.9 (к, J=282.1 Гц), 122.7, 123.0, 125.2, 125.4, 126.6, 131.2, 137.8, 140.6, 142.5, 148.3, 177.4.

Элементный анализ для C₂₂H₁₆F₃N₅O₈ (535.39):

Вычислено (%): С, 49.35; Н, 3.01; N, 13.08.

Найдено (%): С, 49.36; Н, 3.48; N, 12.69.

Пример 10

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5j), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 174-175°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.68-2.73 (м, 6H), 4.85 (с, 1H), 4.98 (д.д, J=9.2, 6.4 Гц, 1H), 6.16 (д, J=7.6 Гц, 1H), 6.40 (с, 1H), 6.79 (т, J=7.9 Гц, 1H), 6.87 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.00 (д, J=8.1 Гц, 1H), 7.14-7.21 (м, 2H), 7.39 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.43 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 47.7, 50.6, 68.0, 73.3, 82.6, 92.2, 96.3, 110.2, 116.2, 118.4, 122.5 (2C), 125.4, 125.9, 127.1, 128.7, 130.5, 142.8, 151.7, 177.5.

Элементный анализ для C₂₂H₁₈C_l3N₃O₄ (494.75):

Вычислено (%): С, 53.41; Н, 3.67; N, 8.49.

Найдено (%): С, 53.39; Н, 3.59; N, 8.46.

Пример 11

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метил-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-метил-3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5k), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 181-182°C

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.86 (м, 6H), 1.83 (м, 3H), 4.79 (с, 1H), 4.98 (д.д, J=9.2, 6.4 Гц, 1H), 5.90 (с, 1H), 6.32 (с, 1H), 6.87 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.88 (д, J=8.3 Гц, 1H), 6.98 (д.д, J=8.3, 1.6 Гц, 1H), 7.19 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.41 (т.д, J=7.7, 0.8 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.44 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 20.2, 24.2, 29.2, 47.6, 51.0, 68.1, 73.2, 82.8, 92.5, 96.3, 110.1, 116.0, 118.1, 122.5, 125.6, 125.9, 127.1, 129.2, 130.5, 131.1, 142.9, 149.6, 177.5.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 508.0602 [M+H]⁺. C₂₃H₂₁Cl₃N₃O₄. Вычислено, m/z: 508.0592.

Пример 12

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метокси-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-метокси-3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5l), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 169-170°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.82 (м, 6H), 3.34 (с, 3H), 4.84 (с, 1H), 4.97 (д.д, J=8.7, 6.5 Гц, 1H), 5.66 (д, J=2.9 Гц, 1H), 6.21 (с, 1H), 6.76 (д.д, J=9.0, 2.9 Гц, 1H), 6.90 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.95 (д, J=9.0 Гц, 1H), 7.19 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.41 (т.д, J=7.7, 1.0 Гц, 1H), 7.69 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.49 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.1, 47.5, 51.5, 54.7, 68.1, 73.0, 83.4, 93.0, 96.3, 109.4, 110.2, 114.5, 117.2, 119.2, 122.6, 126.0, 127.1, 130.5, 143.0, 145.7, 154.1, 177.4.

Элементный анализ для C₂₃H₂₀Cl₃N₃O₅ (524.78):

Вычислено (%): С, 52.64; Н, 3.84; N, 8.01.

Найдено (%): 52.35; Н, 3.80; N, 8.06.

Пример 13

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трихлорметил)-4-этокси-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трихлорметил-8-этокси-2H-хромена (5m), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 173-174°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.29 (т, J=7.0 Гц, 1H), 1.71-2.70 (м, 6H), 4.00 (д.к, J=9.7, 7.0 Гц, 1H), 4.03 (д.к, J=9.7, 7.0 Гц, 1H), 4.83 (с, 1H), 4.96 (д.д, J=9.1, 6.4 Гц, 1H), 5.74 (д, J=7.8 Гц, 1H), 6.31 (с, 1H), 6.68 (т, J=8.0 Гц, 1H), 6.83-6.88 (м, 2H), 7.16 (т.д, J=7.6, 0.8 Гц, 1H), 7.38 (т.д, J=7.7, 1.0 Гц, 1H), 7.66 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.42 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 14.7, 24.1, 29.2, 47.5, 50.9, 64.6, 68.0, 73.1, 82.9, 92.3, 96.3, 110.2, 113.8, 116.9, 119.4, 122.2, 122.4, 125.8, 127.2, 130.4, 142.0, 142.9, 146.9, 177.4.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 538.0703 [M+H]⁺. C₂₄H₂₃Cl₃N₃O₅. Вычислено, m/z: 538.0698.

Пример 14

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-6a-нитро-6-(трихлорметил)-2-хлор-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трихлорметил-6-хлор-2H-хромена (5n), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 185-186°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.74 (м, 6H), 4.88 (с, 1H), 4.99 (д.д, J=9.4, 6.4 Гц, 1H), 6.06 (д, J=2.5 Гц, 1H), 6.44 (с, 1H), 6.90 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.06 (д, J=8.8 Гц, 1H), 7.20 (т.д, J=7.6, 0.7 Гц, 1H), 7.25 (д.д, J=8.8, 2.5 Гц, 1H), 7.42 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.52 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 47.9, 50.1, 68.1, 73.4, 82.5, 91.3, 95.9, 110.2, 118.1, 120.4, 122.6, 125.0, 125.8, 126.2, 126.5, 128.6, 130.8, 142.8, 150.4, 177.4.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 528.0048 [M+H]⁺. C₂₂H₁₈Cl₄N₃O₄. Вычислено, m/z: 528.0046.

Пример 15

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-бром-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6-бром-3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5o), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 184-185°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.69-2.75 (м, 6H), 4.88 (с, 1H), 4.99 (д.д, J=9.4, 6.3 Гц, 1H), 6.20 (д, J=2.4 Гц, 1H), 6.44 (с, 1H), 6.90 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.00 (д, J=8.7 Гц, 1H), 7.20 (т.д, J=7.6, 0.6 Гц, 1H), 7.36 (д.д, J=8.7, 2.4 Гц, 1H), 7.42 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.5 Гц, 1H), 10.52 (с, 1H, NH).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 47.9, 50.1, 68.1, 73.5, 82.4, 91.3, 95.9, 110.2, 113.6, 118.5, 120.9, 122.6, 126.2, 126.5, 128.0, 130.7, 131.5, 142.8, 150.9, 177.4.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇BrCl₃N₃O₄ (573.65):

Вычислено (%): С, 46.06; Н, 2.99; N, 7.33.

Найдено (%): 45.91; Н, 2.75; N, 7.29.

Пример 16

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,4-дибром-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5p), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 186-187°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.71-2.72 (м, 6H), 4.96 (с, 1H), 4.98 (д.д, J=9.6, 6.3 Гц, 1H), 6.17 (д.д, J=2.3, 0.7 Гц, 1H), 6.56 (с, 1H), 6.90 (д, J=7.8 Гц, 1H), 7.21 (т.д, J=7.6, 0.7 Гц, 1H), 7.43 (т.д, J=7.8, 0.9 Гц, 1H), 7.65 (д, J=7.6 Гц, 1H), 7.77 (д, J=2.3 Гц, 1H), 10.54 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 48.1, 50.0, 67.9, 73.6, 82.7, 90.9, 95.5, 110.2, 110.9, 113.6, 121.9, 122.6, 126.1, 126.2, 127.4, 130.8, 133.9, 142.7, 147.8, 177.4.

Элементный анализ для C₂₂H₁₆Br₂Cl₃N₃O₄ (652.55):

Вычислено (%): 40.49; Н, 2.47; N, 6.44.

Найдено (%): 40.25; Н, 2.44; N, 6.39.

Пример 17

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,6a-динитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3,6-динитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5q), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 177-178°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.72-2.75 (м, 6H), 5.02 (д.д, J=9.9, 6.3 Гц, 1H), 5.04 (с, 1H), 6.68 (с, 1H), 6.88 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.02 (д, J=2.8 Гц, 1H), 7.25 (т.д, J=7.6, 0.9 Гц, 1H), 7.29 (д, J=9.1 Гц, 1H), 7.45 (т.д, J=7.7, 0.8 Гц, 1H), 7.69 (д, J=7.5 Гц, 1H), 8.11 (dд, J=9.1, 2.8 Гц, 1H), 10.46 (с, 1H, NH).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.3, 29.4, 48.3, 49.5, 68.2, 73.9, 82.4, 89.9, 95.5, 110.4, 117.3, 119.2, 121.6, 122.7, 124.9, 126.0, 126.4, 130.9, 141.6, 142.6, 156.4, 177.6.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇Cl₃N₄O₆ (539.75):

Вычислено (%): С, 48.96; Н, 3.17; N, 10.38

Найдено (%): С, 48.66; Н, 3.54; N, 10.35

Пример 18

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-4,6a-динитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3,8-динитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5r), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 186-187°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.70-2.74 (м, 6H), 5.01 (д.д, J=10.0, 6.3 Гц, 1H), 5.03 (с, 1H), 6.44 (д, J=7.8 Гц, 1H), 6.71 (с, 1H), 6.87 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.03 (т, J=8.0 Гц, 1H), 7.20 (т.д, J=7.6, 0.8 Гц, 1H), 7.41 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.67 (д, J=7.5 Гц, 1H), 8.11 (д.д, J=8.2, 1.4 Гц, 1H), 10.48 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 48.2, 49.2, 68.0, 73.9, 82.3, 90.0, 95.3, 110.4, 121.2, 122.1, 122.6, 124.5, 126.3 (2C), 130.3, 130.8, 138.0, 142.7, 144.3, 177.6.

Элементный анализ для C₂₂H₁₇Cl₃N₄O₆ (539.75):

Вычислено (%): С, 48.96; Н, 3.17; N, 10.38

Найдено (%): С, 48.73; Н, 3.16; N, 10.28

Пример 19

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2,4,6a-тринитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3,6,8-тринитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5s), изатина (2a) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 209-210°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.73-2.80 (м, 6H), 5.03 (д.д, J=10.0, 6.2 Гц, 1H), 5.26 (с, 1H), 6.88 (с, 1H), 6.89 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.19 (д, J=2.6 Гц, 1H), 7.27 (т, J=7.6 Гц, 1H), 7.46 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.68 (д, J=7.6 Гц, 1H), 8.77 (д, J=2.6 Гц, 1H), 10.52 (с, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 29.4, 48.5, 48.7, 68.1, 74.2, 82.9, 88.7, 94.6, 110.6, 120.8, 112.3, 123.0, 124.7, 125.4, 126.6, 131.2, 137.4, 140.2, 142.5, 148.5, 177.6.

Элементный анализ для C₂₂H₁₆Cl₃N₅O₈ (584.75):

Вычислено (%): С, 45.19; Н, 2.76; N, 11.98.

Найдено (%): С, 44.94; Н, 2.62; N, 11.66.

Пример 20

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-метил-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5a), изатина (2b) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 195-196°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.72-2.88 (м, 6H), 2.86 (с, 3H), 4.39 (с, J=7.4 Гц, 1H), 4.95 (с, 1H), 6.07 (д, J=7.7 Гц, 1H, H-1), 6.32 (к, J=6.4 Гц, 1H, H-6), 6.78 (т.д, J=7.6, 1.0 Гц, 1H), 7.03 (д, J=7.6 Гц, 1H), 7.77 (д, J=7.8 Гц, 1H), 7.18 (т.д, J=7.6, 1.4 Гц, 1H), 7.29 (т.д, J=7.5, 0.8 Гц, 1H), 7.53 (т.д, J=7.7, 0.9 Гц, 1H), 7.76 (д, J=7.5 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (471 MГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.1 (д, J=6.4 Гц).

Спектр ЯМР ¹³С (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 25.7, 28.4, 48.6, 49.4, 67.5 (к, J=2.6 Гц, C-6b), 73.8, 74.8 (к, J=32.4 Гц, C-6), 92.0, 109.4, 116.6, 118.0, 122.7, 122.8 (к, J=281.8 Гц, CF3), 123.3, 125.6, 125.8, 126.1, 129.0, 130.7, 144.1, 151.2, 175.6.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 460.1477 [M+H]⁺. C₂₃H₂₁F₃N₃O₄. Вычислено, m/z: 4601479.

Пример 21

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-метил-6a-нитро-6-(трифторметил)-4-этокси-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трифторметил-8-этокси-2H-хромена (5d), изатина (2b) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 186-187°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.31 (т, J=6.9 Гц, 1H, Me), 1.70-2.85 (м, 6H), 2.86 (с, 3H), 4.01 (к, J=6.9 Гц, 2H), 4.39 (т, J=7.2 Гц, 1H), 4.92 (с, 1H), 5.63 (д, J=8.0 Гц, 1H), 6.25 (к, J=6.5 Гц, 1H), 6.68 (т, J=8.0 Гц,), 6.85 (д, J=8.0 Гц, 1H), 7.10 (д, J=7.8 Гц, 1H), 7.27 (т, J=7.5 Гц, 1H), 7.52 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.75 (д, J=7.4 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (376 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 94.4 (д, J=6.5 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 14.5, 24.4, 25.7, 28.3, 48.5, 49.6, 64.0, 67.5 (к, J=2.2 Гц), 73.7, 74.9 (к, J=32.2 Гц), 92.1, 109.3, 116.6, 119.0, 122.6, 122.8 (к, J=281.6 Гц), 123.2, 125.7, 126.3, 130.7, 133.7, 141.1, 144.1, 147.0, 175.5.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 504.1737 [M+H]⁺. C₂₅H₂₅F₃N₃O₅. Вычислено, m/z: 504.1741.

Пример 22

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-метил-2,4-дибром-6a-нитро-6-(трифторметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трифторметил-2H-хромена (5g), изатина (2b) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 203-204°C.

Спектр ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.73-2.81 (м, 6H), 2.89 (с, 3H), 4.36 (т, J=7.4 Гц, 1H), 5.05 (с, 1H), 6.12 (д, J=2.2 Гц, 1H), 6.43 (к, J=6.3 Гц, 1H), 7.15 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.31 (т.д, J=7.6, 0.8 Гц, 1H), 7.56 (т.д, J=7.7, 1.0 Гц, 1H), 7.72 (д, J=7.6 Гц, 1H), 7.79 (д, J=2.2 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹⁹F (471 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 93.4 (д, J=6.3 Гц).

Спектр ЯМР ¹³C (101 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.4, 25.9, 28.6, 48.5, 49.0, 67.4 (к, J=2.2 Гц), 74.0, 75.0 (к, J=32.6 Гц, C-6), 90.3, 109.4, 111.3, 114.1, 122.0, 122.4 (к, J=282.0 Гц), 123.5, 125.4, 126.1, 127.7, 131.1, 134.2, 144.0, 147.3, 175.5.

Масс-спектр высокого разрешения: Найдено, m/z: 617.9667 [M+H]⁺. C₂₃H₁₉Br₂F₃N₃O₄. Вычислено, m/z: 617.9668.

Пример 23

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-метил-6a-нитро-6-(трихлорметил)-2-хлор-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трихлорметил-6-хлор-2H-хромена (5n), изатина (2b) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 180-181°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.69-2.73 (м, 6H), 2.84 (с, 3H), 4.89 (с, 1H), 5.01 (д.д, J=9.3, 6.4 Гц, 1H), 6.05 (д, J=7.8 Гц, 1H), 6.43 (с, 1H), 6.74 (т.д, J=7.7, 1.0 Гц, 1H), 6.99 (д, J=7.7 Гц, 1H), 7.09 (д, J=7.8 Гц, 1H), 7.17 (т.д, J=7.7, 1.2 Гц, 1H), 7.27 (т.д, J=7.5, 0.8 Гц, 1H), 7.51 (т.д, J=7.7, 1.0 Гц, 1H), 7.73 (д, J=7.5 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 25.7, 29.3, 47.9, 50.6, 68.1, 73.2, 82.6, 92.2, 96.3, 109.3, 116.3, 118.2, 122.3, 123.2, 125.1, 125.7, 126.3, 128.8, 130.7, 144.2, 151.6, 175.6.

Элементный анализ для C₂₃H₂₀Cl₃N₃O₄ (584.75):

Вычислено (%): С, 54.30; Н, 3.96; N, 8.26.

Найдено (%): С, 54.27; Н, 2.71; N, 8.28.

Пример 24

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-метил-2,4-дибром-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 6,8-дибром-3-нитро-2-трихлорметил-2H-хромена (5p), изатина (2b) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 168-169°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.70-2.70 (м, 6H), 2.88 (с, 3H), 5.00 (с, 1H), 5.01 (д.д, J=9.6, 6.4 Гц, 1H), 6.08 (д, J=2.2, 1H), 6.57 (с, 1H), 7.13 (д, J=7.8 Гц, 1H), 7.30 (т, J=7.5 Гц, 1H), 7.55 (т, J=7.7 Гц, 1H), 7.70 (д, J=7.4 Гц, 1H), 7.77 (д, J=2.2 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 25.9, 29.4, 48.2, 50.0, 68.0, 73.6, 82.7, 90.9, 95.5, 109.3, 110.9, 113.5, 121.8, 123.4, 125.5, 126.0, 127.2, 131.0, 134.0, 144.1, 147.8, 175.6.

Элементный анализ для C₂₃H₁₈Br₂Cl₃N₃O₄ (666.57):

Вычислено (%): 41.44; Н, 2.72; N, 6.30.

Найдено (%): 41.25; Н, 2.44; N, 5.92.

Пример 25

Получение (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-1'-бензил-6a-нитро-6-(трихлорметил)-2-хлор-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-она.

Данное соединение получают из 3-нитро-2-трихлорметил-6-хлор-2H-хромена (5n), изатина (2c) и пролина по способу, аналогичному способу примера 1. Время проведения реакции и выход приведены в таблице 1.

Т. пл. 163-164°C.

Спектр ЯМР ¹H (500 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 1.66-2.76 (м, 6H), 4.54 (д, J=15.9 Гц, 1H), 4.79 (д, J=15.9 Гц, 1H), 4.98 (с, 1H), 5.01-5.08 (м, 1H), 6.11 (д, J=7.7 Гц, 1H), 6.57 (с, 1H), 6.74 (т, J=7.7 Гц, 1H), 6.76-6.82 (м, 2H), 6.88 (д, J=7.6 Гц, 1H), 7.04 (д, J=8.0 Гц, 1H), 7.12-7.31 (м, 5H), 7.39 (т, J=7.6, 1H), 7.79 (д, J=7.5 Гц, 1H).

Спектр ЯМР ¹³C (126 МГц, DMSO-d₆) δ (м.д.): 24.2, 29.3, 42.6, 47.9, 50.3, 68.1, 73.2, 82.4, 91.6, 96.3, 109.8, 116.3, 117.7, 122.6, 123.2, 125.7, 126.0, 126.1, 126.7 (2C), 127.2, 128.4 (2C), 128.8, 130.5, 135.4, 143.2, 151.5, 176.0.

Элементный анализ для C₂₉H₂₄Cl₃N₃O₄ (584.88):

Вычислено (%): 59.55; Н, 4.14; N, 7.18.

Найдено (%): 59.41; Н, 4.24; N, 6.97.

Относительная конфигурация 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов общей формулы I однозначно подтверждена методом рентгеноструктурного анализа, выполненного для (6S*,6aS*,6bS*,11S*,11aR*)-2-метокси-6a-нитро-6-(трихлорметил)-6a,6b,7,8,9,11a-гексагидро-6H-спиро[хромено[3,4-a]пирролизин-11,3'-индолин]-2'-он (пример 12). Структура соединения расшифрована прямым методом с использованием комплекса программ SHELX-97 [G.M. Sheldrick. A short history of SHELX. // Acta Crystallographica Section A: Foundations and Advances, 2008, DOI: 10.1107/S0108767307043930]. Все неводородные атомы уточнены в анизотропном приближении независимо, атомы водорода помещены в геометрически рассчитанные позиции и включены в уточнение в модели «наездника» с зависимыми тепловыми параметрами. Полный набор рентгеноструктурных данных депонирован в Кембриджском банке структурных данных (депонент CCDC 1875227).

Изображение

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Список условных сокращений:

МТТ-тест - метод оценки цитотоксической активности, основанный на восстановлении желтой соли тетразолия (МТТ) митохондриальными дегидрогеназами живых клеток до кристаллов формазана, растворимых в ДМСО

IC₅₀ (индекс цитотоксичности) - концентрация вещества, при которой наблюдается гибель 50% клеток, мкмоль/л

ОП_о - оптическая плотность раствора формазана опытной группы

ОП_к - оптическая плотность раствора формазана контрольной группы

Клеточные линии:

Клеточная линия HeLa - клетки карциномы шейки матки человека

Клеточная линия RD - клетки эмбриональной рабдомиосаркомы человека

Изучение цитотоксической активности in vitro заявляемых соединений общей формулы I.

Оценку цитотоксической активности проводили с помощью МТТ-теста. С этой целью клетки рассевали в 96-луночные планшеты в посевной дозе 2×10⁵ кл/мл и культивировали в течение 24 часов в среде DМЕМ с 1% глутамина в присутствии 10% эмбриональной телячьей сыворотки и гентамицина (50 мг/л) при 37°С в увлажненной атмосфере 5%-ного СО₂, после чего в лунки добавляли исследуемые вещества в различных концентрациях. Клетки инкубировали с веществами в течение 72 часов, после чего проводили оценку жизнеспособности клеток с помощью стандартного МТТ-теста. Опыты проводили в 3 повторностях, с отрицательным (культуральная среда), положительным (раствор цитотоксического препарата камптотецина в концентрации 3 ммоль/л) контролями и контролем растворителя (ДМСО).

Оценку результатов МТТ-теста проводили путем сравнения оптической плотности раствора формазана, измеренной на планшетном сканере ELx800 (BioTek, USA) при длине волны 570 нм в опытных и контрольных лунках и рассчитывали индекс цитотоксичности (ИК) по формуле:

.

На основании полученных данных определялся индекс цитотоксичности для каждой концентрации исследуемых веществ. С помощью пробит-регрессии производился расчет показателя ИК₅₀.

Для проведения статистического анализа использовались программы Microsoft Excell и Statistika 2009. Рассчитывались параметры среднего арифметического значения и стандартной ошибки. За достоверные принимали различия средних величин по критерию Манна-Уитни при р < 0.05.

Соединением сравнения является лекарственный препарат Камптотецин (Sigma-Aldrich, USA). Камптотецин и его производные (например, Топотекан) применяют в медицинской практике для лечения рака толстой кишки и яичников, рецидивирующего или персистирующего рака шейки матки, мелкоклеточного рака легкого и часто используют для систематического скрининга противоопухолевых препаратов.

Для изучения цитотоксической активности было проведено определение ИК₅₀ для ряда репрезентативных образцов соединений общей формулы I (примеры 1-5, 7-17, 19, 22, 23, 25) по отношению к линии клеток рака шейки матки человека HeLa и эмбриональной рабдомиосаркомы человека RD, полученных из Коллекции клеточных культур Института цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия. Результаты испытаний представлены в таблице 2.

Таким образом, нами впервые получены 6-трифтор(трихлор)метилзамещенные спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны, которые проявили выраженную цитотоксическую активность в отношении к клеткам рака шейки матки человека HeLa и эмбриональной рабдомиосаркомы RD, и предложен эффективный способ их получения.

Преимуществами данного способа синтеза являются:

1. Доступность исходных реагентов.

2. Мягкие условия проведения реакций.

3. Высокий выход целевых продуктов (72-91)%.

4. Не требуется дополнительная очистка целевых продуктов с помощью перекристаллизации или колоночной хроматографии.

Все протестированные соединения общей формулы I проявили выраженную цитотоксическую активность в отношении к клеточным линиям HeLa и RD. Кроме того, два соединения общей формулы I, где R¹ = R² = Br, R³ = H, X = F (пример 7) и R¹ = R² = Br, R³ = H, X = Cl (пример 16), оказались значительно активнее препарата Камптотецин в отношении к клеткам RD и HeLa соответственно и представляют собой потенциальные противоопухолевые препараты для лечения таких заболеваний, как рабдомиосаркома и рак шейки матки человека.

6-Tрифтор(трихлор)метилзамещенныe спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны, проявляющие противоопухолевую активность, и способ их получения

Таблица 1. Синтез соединений общей формулы I (примеры 1-25). № Хромен 2 Изатин 3 X R¹ R² R³ Время (мин) Выход (%) 1 5a 2a F H H H 30 90 2 5b 2a F Me H H 40 81 3 5c 2a F MeO H H 40 83 4 5d 2a F H EtO H 40 78 5 5e 2a F Cl H H 20 75 6 2a F Br H H 20 81 7 5g 2a F Br Br H 15 83 8 5h 2a F NO₂ H H 20 95 9 5i 2a F NO₂ NO₂ H 15 80 10 5j 2a Cl H H H 35 68 11 5k 2a Cl Me H H 60 76 12 5l 2a Cl MeO H H 60 90 13 5m 2a Cl H EtO H 60 72 14 5n 2a Cl Cl H H 30 83 15 5o 2a Cl Br H H 30 85 16 5p 2a Cl Br Br H 25 91 17 5q 2 Cl NO₂ H H 30 86 18 5r 2a Cl H NO₂ H 20 93 19 5s 2a Cl NO₂ NO₂ H 20 97 20 5a 2b F H H Me 25 90 21 5d 2b F H EtO Me 40 91 22 5g 2b F Br Br Me 20 90 23 5j 2b Cl H H Me 30 79 24 5p 2b Cl Br Br Me 25 86 25 5j 2c Cl H H Bn 120 89

6-Tрифтор(трихлор)метилзамещенныe спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-оны, проявляющие противоопухолевую активность, и способ их получения

Таблица 2. Значения концентраций соединений общей формулы I, при которых наблюдается гибель 50% клеток (IC₅₀, мкмоль/л) в сравнении с лекарственным препаратом Камптотецин в отношении клеток карциномы шейки матки человека HeLa и рабдомиосаркомы человека RD. Соединение ИК₅₀ (HeLa) ИК₅₀ (RD) 46.11±0.69 56.72±0.65 7.82±0.19 88.90±6.68 1.89±0.37 8.16±0.47 7.53±0.60 8.56±0.37 20.34±3.85 76.47±6.95 10.53±0.88 0.62±0.06 56.20±8.43 56.20±6.91 40.53±5.67 12.38±1.52 1.66±0.28 132.96±7.62 11.47±0.66 2.32±0.45 7.45±0.74 7.49±0.64 17.31±1.55 9.69±0.69 4.78±0.27 1.65±0.46 5.57±0.95 7.58±0.93 0.21±0.12 10.15±1.25 56.20±7.31 56.47±6.95 64.10±7.05 31.36±3.86 16.67±2.67 54.29±6.68 4.43±0.66 5.30±0.65 28.31±4.25 45.49±5.59
Камптотецин 1.66 1.73

Группа изобретений относится к области органической химии и фармацевтики и направлено на получение соединений, которые проявляют противоопухолевую активность. Представлено новым 6-трифтор(трихлор)метилзамещенным спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онам общей формулы I, где R1 представляет собой H, алкил С1-С6, алкокси С1-С6, Br, Cl, NO2; R2 представляет собой H, алкил С1-С6, алкокси С1-С6, Br, Cl, NO2; R3 представляет собой H, алкил С1-С6, Bn, X представляет собой F, Cl. Кроме того описан способ получения 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов общей формулы I. Технический результат: высокоэффективный регио- и стереоселективный способ получения 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'- индолин]-2'-онов, которые обладают цитотоксической активностью в отношении к клеткам линий карциномы шейки матки человека (HeLa) и эмбриональной рабдомиосаркомы человека (RD). 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 25 пр., 1 ил.

1. 6-Трифтор(трихлор)метилзамещенный спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-он общей формулы I:

,

где:

- R¹ представляет собой H, алкил С1-С6, алкокси С1-С6, Br, Cl, NO2;

- R² представляет собой H, алкил С1-С6, алкокси С1-С6, Br, Cl, NO2;

- R³ представляет собой H, алкил С1-С6, Bn;

- X представляет собой F, Cl, обладающий противоопухолевой активностью.

2. Способ получения 6-трифтор(трихлор)метилзамещенных спиро[хромено[3,4-a]пирролизидин-11,3'-индолин]-2'-онов общей формулы I, заключающийся в том, что смесь равных количеств соответствующего хромена (5), изатина (2) и пролина, взятого в 1,3-кратном избытке, перемешивают в изопропиловом спирте при 30°C в течение 15-120 мин в зависимости от заместителей R¹, R² и X в исходном хромене, а затем выпавший осадок отфильтровывают и промывают последовательно изопропиловым спиртом и водой.