СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ФТОРХИНОЛОНОВ (ИЛИ ФЛОКСАЦИНОВ) Российский патент 2022 года по МПК G01N33/15 G01N30/52 

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу материалов с помощью оптических средств, и может быть использовано для количественного определения производных фторхинолонов (или флоксацинов), а именно норфлоксацина (I), пефлоксацина мезилата (II), офлоксацина (III), ломефлоксацина гидрохлорида (IV), ципрофлоксацина гидрохлорида (V), моксифлоксацина (VI), эноксацина (VII) и спарфлоксацина (VIII) в субстанциях.

Для количественного определения применяют метод неводного титрования. Навеску растворяют в уксусном ангидриде и титруют хлорной кислотой. Точку эквивалентности устанавливают потенциометрическим методом [1]. Недостатками указанного способа является низкая селективность, значительная относительная ошибка, а также токсичность применяемых реактивов.

Ципрофлоксацина гидрохлорид (V) определяют методом ВЭЖХ с подвижной фазой, включающей смесь 0,025 Μ раствора Н₃РO₄-ацетонитрила (97:13). Для определения его в таблетках используют спектрофотометрический метод при длине волны 279 нм [1]. Недостатками указанного способа является необходимость использования токсичных растворителей, трудоемкость и необходимость использования дорогостоящего малодоступного оборудования.

Карбоксильную группу в (I-VIII) подтверждают методом нейтрализации растворами щелочей при фенолфталеине или потенциометрически [1]. Фтор идентифицируют после сжигания препарата в токе кислорода растворением в уксусной кислоте и прибавлением растворов ализаринового красного и соли циркония [2, 3]. Недостатками указанного способа является низкая селективность, значительная относительная ошибка, а также токсичность применяемых реактивов.

Наиболее близким к предлагаемому является способ количественного определения фторхинолонов в субстанции спектрофотометрическим способом [4, 5]. Точная навеска субстанции фторхинолона (около 0,1 г) растворяют в воде очищенной, объем доводят до 100 мл. Затем аликвоту этого раствора (4-6 мл) переносять в колбу на 100 мл и доводят до 100 мл. С полученного раствора снимают спектр на спектрофотометре в кюветах длиной 1 см на фоне воды очищенной. Полученное значение оптической плотности раствора при соответствующей длине волны используют для расчетов. Для определения фторхинолонов в лекарственных формах точную навеску (0,1-0,15 г) порошка растертых таблеток растворяют в воде очищенной, фильтруют через беззольный фильтр, и фильтрат доводят в мерной колбе до 100 мл. Аликвоту полученного раствора (относительно теоретической концентрации) доводят до объема и проводят измерение оптической плотности при соответствующей длине волны на фоне воды очищенной. Относительная ошибка определения для субстанций около 2%, в лекарственных формах - чуть более 3%. Недостатком является большая ошибка определения, чем в настоящем изобретении.

Цель настоящего изобретения состоит в разработке чувствительной методики количественного определения производных фторхинолонов в субстанциях.

Технический результат настоящего изобретения состоит количественном определении фторхинолонов (или флоксацинов), а именно, норфлоксацина (I), пефлоксацина мезилата (II), офлоксацина (III), ломефлоксацина гидрохлорида (IV), ципрофлоксацина гидрохлорида (V), моксифлоксацина (VI), эноксацина (VII) и спарфлоксацина в субстанциях с относительной ошибкой, не превышающей ±0,56%, в отсутствии использования токсичных реактивов и продуктов реакции.

Технический результат достигается тем, что в способе количественного определения производных фторхинолонов (или флоксацинов), включающем растворение анализируемой пробы в растворе гидроксида натрия, выдерживание до полного растворения при комнатной температуре, дальнейшую обработку приготовленных растворов субстанций норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина химическим реактивом в кислой среде, измерение оптической плотности окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра, определение содержания вещества в субстанции (в %) по предварительно построенным калибровочным графикам, согласно изобретению, навеску норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина растворяют в 0,1 Μ растворе NaOH при комнатной температуре, к аликв'оте субстанций добавляют двукратный избыток по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной, при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, реакционную смесь выдерживают 5-6 минут до образования желтого окрашивания, затем выдерживают еще 3 минуты, фотоколориметрируют растворы при длине волны 386 нм относительно раствора сравнения - раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной, при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно.

Сущность предлагаемого способа заключалась в растворении анализируемой пробы в растворе гидроксида натрия, выдерживании до полного растворения при комнатной температуре и прибавлении того же растворителя до метки; дальнейшей обработке приготовленных растворов исследуемых препаратов химическим реактивом в кислой среде и проведении фотоэлектроколориметрирования окрашенных растворов.

Предлагаемый способ количественного определения фторхинолонов (или флоксацинов) заключается во взаимодействии щелочных растворов исследуемых препаратов (I-VIII) с раствором химического реактива в кислой среде, приводящий к образованию окрашенных продуктов. В качестве химического реактива предлагается спиртовый раствор п-анизидина в концентрированной соляной кислоте.

Пример реализации способа

Приготовление спиртового раствора химического реактива. В конической колбе емкостью 200,0 мл растворяют 0,5 г n-анизидина в 100,0 мл смеси: 85,0 мл спирта этилового и 15,0 мл концентрированной соляной кислоты при комнатной температуре и перемешивании. Сохраняют полученный раствор в склянке из темного стекла в течение двух суток.

Приготовление растворов исследуемых препаратов и их количественное определение. В мерные колбы емкостью 100,00 мл помещают точные навески порошков норфлоксацина (I) (около 0,4 г), пефлоксацина мезилата (II) (около 0,4 г), ломефлоксацина гидрохлорида (IV) (около 0,4 г), офлоксацина (III) (около 0,2 г), ципрофлоксацина гидрохлорида·(V) (около 0,25 г), и спарфлоксацина (VIII) (около 0,1 г) и растворяют сначала в 50,0 мл 0,1 Μ раствора гидроксида натрия при комнатной температуре и перемешивании. Выдерживают некоторое время до полного растворения, доводят объемы растворов до метки тем раствором щелочи. В мерных колбах емкостью 50,00 мл растворяют точные навески порошков эноксацина (VII) (около 0,15 г) и моксифлоксацина (VI) (около 0,125 г) и проводят все операции, описанные выше.

В мерные колбы емкостью 50,00 мл помещают 7,0 мл растворов норфлоксацина (I), пефлоксацина мезилата (II) и ломефлоксацина гидрохлорид (IV) и 4,0 мл раствора моксифлокацина (VI); в мерные колбы емкостью 20,00 мл помещают 3,0 мл раствора офлоксацина (III) и 4,0 мл растворов эноксацина (VII) и спарфлоксацина (VIII); в мерные колбы емкостью 25,00 мл - 5,0 мл раствора ципрофлоксацина гидрохлорида (V). Ко всем указанным выше объемам каплями прибавляют 5,0 мл 5%-раствора спиртового n-анизидина (в 2-кратном избытке по отношению к определяемому компоненту) в концентрированной соляной кислоте при комнатной температуре и перемешивании. Реакционную смесь выдерживают 5-6 мин. Появляется желтое окрашивание. Выдерживают еще 3 минуты. Объемы растворов доводят до метки 0,1 Μ раствором соляной кислоты, и измеряют оптическую плотность поглощения окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра при длине волны 386 нм в кювете с поглощающим слоем 10,0 мм. Раствор сравнения - раствор п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной, при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно. Расчет содержания препаратов (I-VIII) в пробах проводят по предварительно построенным калибровочным графикам или по уравнениям прямых, соответствующих прямолинейным участкам калибровочных графиков.

Построение калибровочных графиков исследуемых препаратов (I-VIII).

Приготовление растворов исследуемых препаратов и их количественное определение. В мерные колбы емкостью 100,00 мл помещают точные навески порошков норфлоксацина (I) (около 0,4 г), пефлоксацина мезилата (II) (около 0,4 г), ломефлоксацина гидрохлорида (IV) (около 0,4 г), офлоксацина (III) (около 0,2 г), ципрофлоксацина гидрохлорида (V) (около 0,25 г), и спарфлоксацина (VIII) (около 0,1 г) и растворяют сначала в 50,0 мл 0,1 Μ раствора гидроксида натрия при комнатной температуре и перемешивании. Выдерживают некоторое время до полного растворения, доводят объемы растворов до метки тем раствором щелочи.

В мерных колбах емкостью 50,00 мл растворяют точные навески порошков эноксацина (VII) (около 0,15 г) и моксифлоксацина (VI) (около 0,125 г) и проводят все операции, описанные выше.

В мерные колбы емкостью 50,00 мл помещают объемы 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0 мл раствора норфлоксацина (I), пефлоксацина мезилата (II) и ломефлоксацина гидрохлорид (IV) и объемы 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0 мл раствора моксифлокацина (VI); в мерные колбы емкостью 20 мл помещают объемы 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 мл раствора офлоксацина (III) и объемы 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0 мл растворов эноксацина (VII) и спарфлоксацина (VIII); в мерные колбы емкостью 25,00 мл - объемы 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 мл раствора ципрофлоксацина гидрохлорида (V). Ко всем указанным выше объемам каплями прибавляют 5,0 мл 5%-раствора спиртового n-анизидина (в 2-кратном избытке по отношению к определяемому компоненту) в концентрированной соляной кислоте при комнатной температуре и перемешивании. Реакционную смесь выдерживают 5-6 мин. Появляется желтое окрашивание. Выдерживают еще 3 минуты. Объемы растворов доводят до метки 0,1 Μ раствором соляной кислоты, и измеряют оптическую плотность поглощения окрашенных растворов с помощью фотоэлектроколориметра КФК-2 при длине волны 386 нм в кювете с поглощающим слоем 10,0 мм. Раствор сравнения - раствор п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной, при в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно.

Подчинения интенсивности поглощения окрашенных растворов закону Бугера-Ламберта-Бера находятся в пределах концентраций для субстанций норфлоксацина (I), пефлоксацина мезилата (II) и ломефлоксацина гидрохлорида (IV) от 0,400 до 0,720 мг/мл растворов; для субстанции офлоксоцина (III) от 0,200 до 0,400 мг/мл раствора; для субстанции ципрофлоксацина гидрохлорида (V) от 0,300 до 0,700 мг/мл раствора; для субстанции моксифлоксацина (VI) от 0,100 до 0,300 мг/ мл раствора; для субстанции эноксацина (VII) от 0,300 до 0,900 мг/мл раствора; для субстанции спарфлоксацина (VIII) от 0,100 до 0,300 мг/мл раствора.

Результаты количественного определения норфлоксацина (I) в субстанции представлены на фиг. 1, пефлоксацина мезилата (II) - на фиг. 2, офлоксацина (III) - на фиг. 3, ломефлоксацина гидрохлорида (IV) - на фиг. 4, ципрофлоксацина гидрохлорида (V) - на фиг. 5, моксифлоксацина (VI) - на фиг. 6, эноксацина (VII) - на фиг. 7, спарфлоксацина (VIII) - на фиг. 8.

Коэффициенты а и b исследуемых препаратов (I-VIII) вычислены методом наименьших квадратов после обработки калибровочных графиков и представлены на фиг. 1-8 с метрологическими характеристиками методик (где X - среднее значение определений, S - стандартное отклонение, Sx-стандартное отклонение средней величины, ΔΧ - полуширина доверительного интервала величины, Ε - относительная ошибка среднего результата).

Относительная ошибка определения группы производных фторхинолонов в субстанциях при доверительной вероятности 95% не превышает ±0,56%. Разработанный способ количественного определения является доступным, специфичным для данной группы химических веществ, не требует использования токсичных реактивов, а также является простым в выполнении и дает воспроизводимые результаты.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу количественного определения производных фторхинолонов. Способ количественного определения производных фторхинолонов включает растворение навески норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина в растворе NaOH, далее к аликвоте субстанций добавляют двукратный избыток по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной, реакционную смесь выдерживают до образования желтого окрашивания и фотоколориметрируют полученный раствор относительно раствора сравнения - раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет с высокой точностью определять количество фторхинолонов. 8 ил., 1 пр.

Способ количественного определения производных фторхинолонов, характеризующийся тем, что проводят растворение навески норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина в 0,1 Μ растворе NaOH при комнатной температуре, дальнейшую обработку аликвоты приготовленного раствора субстанций норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина, осуществляют двукратным избытком по отношению к определяемому компоненту раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной при объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, реакционную смесь выдерживают 5-6 минут до образования желтого окрашивания, затем выдерживают еще 3 минуты, после чего проводят измерение оптической плотности окрашенного раствора с помощью фотоэлектроколориметра при длине волны 386 нм относительно раствора сравнения, а именно используемого при обработке аликвоты раствора субстанции норфлоксацина, пефлоксацина мезилата, офлоксацина, ломефлоксацина гидрохлорида, ципрофлоксацина гидрохлорида, моксифлоксацина, эноксацина или спарфлоксацина, раствора п-анизидина в смеси этанола и соляной кислоты концентрированной в объемном соотношении этанола и кислоты соляной концентрированной 17:3 соответственно, определение содержания вещества в субстанции осуществляют по предварительно построенному калибровочному графику, при этом диапазоны допустимых концентраций находятся в пределах для субстанции норфлоксацина, пефлоксацина мезилата и ломефлоксацина гидрохлорида от 0,400 до 0,720 мг/мл раствора; для субстанций офлоксоцина от 0,200 до 0,400 мг/мл раствора; для субстанции ципрофлоксацина гидрохлорида от 0,300 до 0,700 мг/мл раствора; для субстанции моксифлоксацина от 0,100 до 0,300 мг/мл раствора; для субстанции эноксацина от 0,300 до 0,900 мг/мл раствора; для субстанции спафлоксацина от 0,100 до 0,300 мг/мл раствора.