РЕКОМБИНАНТНЫЕ НЕПАТОГЕННЫЕ КОНСТРУКЦИИ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА, КОДИРУЮЩИЕ АНТИГЕНЫ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА И ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БУРСИТА Российский патент 2022 года по МПК A61K39/12 C12N15/86 A61K39/245 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По этой заявке испрашивается приоритет согласно 35 USC 119 (e) временной заявки US No. 62/351471, поданной 17 июня 2016 года, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к новым рекомбинантным поливалентным непатогенным конструкциям вируса болезни Марека, кодирующим и экспрессирующим белковые антигены вируса инфекционного ларинготрахеита и вируса инфекционного бурсита, и к способам их применения в вакцинах для домашней птицы.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Патогенные вирусы домашней птицы не только ослабляют кур, но и являются затратными для заводчиков кур, так как большинство вызванных заболеваний являются заразными, а птицеводческая промышленность в значительной степени опирается на ограниченные крупномасштабные племенные хозяйства. Вакцинация молодых цыплят часто является единственным жизнеспособным средством борьбы с этими вирусами. Хотя аттенуированные или убитые вирусные вакцины для домашней птицы остаются важными на рынке, в последние годы были потрачены значительные ресурсы на разработку вакцин, содержащих рекомбинантные вирусные конструкции, которые экспрессируют патогенные вирусные белковые антигены. Кроме того, были предприняты значительные усилия для создания стабильных и эффективных векторов, содержащих поливалентные рекомбинантные непатогенные вирусы болезни Марека (сокращенно rMDV_np), которые экспрессируют чужеродные гены из нескольких вирусных патогенов. Такие поливалентные вакцины будут служить для минимизации количества инъекций, получаемых цыплятами, и тем самым для уменьшения дискомфорта и стресса у вакцинированного цыпленка, а также значительно снизят затраты на рабочую силу и материалы. Вакцинация такими одиночными поливалентными конструкциями также предпочтительнее альтернативных поливалентных вакцин rMDV_np, которые содержат множество рекомбинантных поливалентных конструкций rMDV_np, поскольку эти альтернативные вакцины, по меньшей мере до настоящего времени, приводили к защите только от одного вирусного патогена. Недостатки таких альтернативных вакцин, по-видимому, связаны с одной из моновалентных конструкций rMDV_np, перерастающей другие моновалентные конструкции rMDV_np, тем самым, предотвращая эти другие моновалентные конструкции rMDV_np от индукции значительного иммунного ответа. В любом случае, несмотря на значительные усилия в прошлом по созданию стабильных и эффективных поливалентных векторов rMDV_np, которые экспрессируют чужеродные гены из нескольких вирусных патогенов, на самом деле, такие вакцины были предложены более двадцати лет назад (см., например, US 5965138), только недавно было показано, что поливалентная вакцина, которая содержит рекомбинантный герпесвирус индюков (сокращенно rHVT), кодирующий антигены из более чем одного другого патогена, является как стабильной, так и эффективной.

Одной из вирусных болезней домашней птицы, которую можно контролировать с помощью вакцинации, является болезнь Марека. Болезнь Марека - патогенное заболевание, которое оказывает неблагоприятное воздействие на кур во всем мире. Болезнь Марека встречается преимущественно у цыплят в возрасте от 2 до 5 месяцев. Клинические признаки включают: прогрессирующий паралич одной или более конечностей, несогласованность из-за паралича ног, опускание конечности из-за вовлеченности крыла и пониженное положение головы из-за участия мышц шеи. В острых случаях может возникнуть тяжелая депрессия. Также может развиться бурсальная и тимусовая атрофия.

Этиологическим агентом для болезни Марека является вирус болезни Марека серотипа 1 (сокращенно MDV1), связанный с клеткой вирус, содержащий геном в двухцепочечной ДНК. MDV1 является лимфотропным птичьим альфагерпесвирусом, который: (i) инфицирует В-клетки, что может привести к цитолизу, и (ii) латентно инфицирует Т-клетки, которые могут индуцировать Т-клеточную лимфому. Тесно связанный с вирулентным штаммом MDV1, вирус болезни Марека серотипа 2 (сокращенно MDV2), ранее известный как герпесвирус 3 куриных, является естественным аттенуированным штаммом MDV, который, как было показано, практически не обладает патогенностью для кур [Petherbridge et al., J. Virological Methods 158: 11-17 (2009)]. SB-1 является специфическим штаммом MDV2, который, как было показано, полезен в вакцинах против MDV1 [см., например, Murthy and Calnek, Infection and Immunity 26 (2) 547-553 (1979)].

Другой близко родственный альфагерпесвирус вируса болезни Марека серотипа 3 (сокращенно MDV3), более широко известный как герпесвирус индюков (сокращенно HVT), представляет собой непатогенный вирус домашних индюков [см., например, Kingham et al., J. of General Virology 82: 1123-1135 (2001)]. Два часто используемых штамма HVT представляют собой штамм PB1 и штамм FC126. В то время как HVT также непатогенен для кур, он вызывает у них длительный защитный иммунный ответ против MDV1. Соответственно, HVT использовался в птичьих вакцинах против вирулентного MDV1 в течение многих лет, как правило, в сочетании с SB-1, который является более виремическим, чем HVT, но считается менее безопасным. В качестве альтернативы, когда стаи заражаются особенно вирулентными штаммами MDV1, HVT можно комбинировать с вакциной Риспенс (Rispen`s). Вакцина Риспенс является изолятом, полученным из умеренно вирулентного штамма MDV1, который впоследствии был дополнительно ослаблен пассированием клеток. Однако штамм Риспенс сохраняет некоторую вирулентность по отношению к высокочувствительным линиям кур.

Последовательность полного генома HVT была раскрыта [Afonso et al., J. Virology 75 (2): 971-978 (2001)], и, как и большинство альфагерпесвирусов, HVT обладает значительным числом потенциальных несущественных сайтов вставки [см. например, US 5187087; US 5830745; US 5834305; US 5853733; US 5928648; US 5961982; US 6121043; US 6299882 B1]. Также было показано, что HVT поддается генетической модификации и, таким образом, используется в качестве рекомбинантного вектора в течение многих лет [WO 87/04463]. Соответственно, сообщалось, что рекомбинантные векторы HVT экспрессируют чужеродные гены, которые кодируют антигены, например, из вируса болезни Ньюкасла (NDV), [Sondermeijer et al., Vaccine, 11: 349-358 (1993); Reddy et al., Vaccine, 14: 469-477 (1996)], вируса инфекционного бурсита (IBDV), [Darteil et al., Virology, 211: 481-490 (1995); Tsukamoto et al., J. of Virology 76 (11): 5637-5645 (2002)] и вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV) [Johnson et al., Avian Disease, 54 (4): 1251-1259 (2010); WO 92/03554; US 6875856]. Также известна вся геномная последовательность MDV2 [см., GenBank acc. nr: AB049735.1 и Petherbridge et al., выше]. Геномная организация MDV2 очень похожа на геном HVT, в частности, на область US, идентичную той, что и у HVT [см. Kingham et al., см. выше].

Кроме того, был сконструирован рекомбинантный химерный вирус, известный как новый птичий герпесвирус (NAHV), в котором специфические области генома HVT были заменены соответствующими областями генома MDV1. NAHV также использовался для экспрессии чужеродных генов, которые кодируют антигены из других вирусов домашней птицы [US 5965138; US 6913751].

Как и MDV, вирус инфекционного ларинготрахеита (сокращенно ILTV или ILT) представляет собой альфагерпесвирус, который оказывает неблагоприятное воздействие на кур во всем мире [Fuchs et al., Veterinary Research, 38: 261-279 (2007)]. ILTV вызывает острое респираторное заболевание у кур, которое характеризуется угнетением дыхания, задыханием и отхаркиванием кровавого экссудата. Репликация вируса ограничена клетками дыхательных путей, где в трахее инфекция вызывает эрозию тканей и кровоизлияние.

Вирус инфекционного бурсита (сокращенно IBDV или IBD), также называемый вирусом болезни Гамборо, является возбудителем инфекционного бурсита. IBDV вызывает острую, высококонтагиозную вирусную инфекцию лимфоидной ткани кур, причем ее основной целью является основной иммунологический орган птицы: бурса Фабрициуса. Уровень заболеваемости у восприимчивых стай высок, с быстрой потерей массы и умеренной и высокой смертностью. Цыплята, которые выздоравливают от болезни, могут иметь иммунные недостатки из-за полного (или частичного) разрушения бурсы Фабрициуса. Это делает их особенно уязвимыми для вторичных инфекций.

IBDV является членом семейства Birnaviridae. Вирусы в этом семействе имеют геном, состоящий из двух сегментов (А и В) двухцепочечной РНК. Существуют два серотипа IBDV, серотип 1 и 2, которые можно дифференцировать с помощью тестов на нейтрализацию вируса (VN). Было показано, что вирусы серотипа 1 являются патогенными для кур, тогда как вирусы серотипа 2 вызывают только подострые болезни у индюков. Исторически, вирусы серотипа 1 IBDV состояли только из одного типа, который теперь известен как «классический» вирус IBD. Совсем недавно появились так называемые «варианты» штаммов IBDV. Классические штаммы IBDV и их варианты можно идентифицировать и различать с помощью теста нейтрализации вируса с использованием панели с моноклональными антителами или с помощью ОТ-ПЦР [Wu et al., Avian Diseases, 51: 515-526 (2007)]. Хорошо известные классические штаммы IBDV включают D78, Faragher 52/70 и STC, тогда как 89/03 - хорошо известный вариант штамма. Многие живые или инактивированные вакцины IBDV являются коммерчески доступными, например, живая вакцина, такая как NOBILISR Gumboro D78 (MSD Animal Health).

Как указано выше, поскольку HVT может действовать как антиген, который обеспечивает значительную защиту от болезни Марека, и как рекомбинантный вектор, то он в настоящее время используется в качестве платформы для таких поливалентных вакцин, как Innovax®-ILT (продается Merck Animal Health), которая защищает от ILTV; Innovax®-ND-SB (продается Merck Animal Health) Vectormune® HVT-NDV (продается Ceva), каждая из которых защищает от NDV; и Vaxxitek® HVT+IBD (Merial, ранее известная как: Gallivac™ HVT-IBD) и Vectormune™ HVT-IBD (Ceva), каждая из которых защищает от IBDV. Примечательно, что Innovax®-ILT содержит два чужеродных гена, то есть gD ILTV и gI ILTV, которые оказались безопасными, эффективными и стабильными. Однако эти два чужеродных гена относятся к одному и тому же патогену и, кроме того, они, естественно, перекрываются и должны ко-экспрессироваться, чтобы обеспечить надлежащую иммунизацию против ILTV. Совсем недавно была раскрыта рекомбинантная безопасная, эффективная и стабильная поливалентная вакцина, содержащая HVT-ILTV-NDV [US 8932604 B2 и US 9409954 B2, содержание которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме). Был также раскрыт ранний HVT-NDV-IBDV, хотя при длительном тестировании при разработке соответствующего продукта было обнаружено, что одна из основных конструкций HVP309 не проявляла ни адекватной генетической стабильности, ни устойчивой экспрессии гетерологичных вставок [WO 2013/057235]. Впоследствии была разработана более стабильная и эффективная конструкция [WO 2016/102647].

Поэтому, несмотря на явные преимущества стабильных, поливалентных рекомбинантных конструкций MDV_np, которые могут эффективно экспрессировать гетерологичные антигены из двух или более разных патогенов, и, несмотря на существенные усилия по их разработке, до сих пор мало что ожидали, и даже одно из этого немногого оказалось неспособным достичь всех необходимых требований. Соответственно, пригодность любого данного поливалентного рекомбинантного MDV_np в качестве вакцины остается непредсказуемой, когда рекомбинантный MDV_np содержит комбинацию гетерологичных антигенов, которые получены из уникального набора из двух или более вирусов домашней птицы. Поэтому существует явная необходимость преодоления всех производственных недостатков путем создания новых устойчивых рекомбинантных векторов MDV_np, которые могут быть использованы в поливалентных вакцинах в качестве единственной активной составляющей для защиты от двух или более различных патогенов вируса домашней птицы, не относящегося к MDV1.

Цитирование любой ссылки настоящего описания не должно толковаться как признание того, что такая ссылка доступна как «предшествующий уровень техники» для настоящей заявки.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соответственно, настоящее изобретение относится к новому стабильному и эффективному поливалентному рекомбинантному непатогенному вирусу болезни Марека (rMDV_np) для применения в качестве вектора для экспрессии чужеродных генов из нескольких вирусных патогенов. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой рекомбинантный герпесвирус индюков (rHVT). В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой рекомбинантный вирус болезни Марека серотипа 2 (rMDV2). rMDV_np, например rHVT или rMDV2, можно использовать в вакцинах против патогенных вирусов.

В конкретных вариантах осуществления rMDV_np содержит первую гетерологичную нуклеиновую кислоту, расположенную в первом несущественном сайте в геноме rMDV_np, и вторую гетерологичную нуклеиновую кислоту, расположенную во втором несущественном сайте в геноме rMDV_np. Первая гетерологичная нуклеиновая кислота включает как нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gD вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV), так и нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gI вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV). Вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует вирусный белок 2 (VP2) вируса инфекционного бурсита (IBDV). В конкретных вариантах осуществления этого типа первая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 9, а вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

В некоторых вариантах осуществления первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, тогда как второй несущественный сайт представляет собой несущественный сайт rMDV_np, отличный от сайта US2. В связанных вариантах осуществления первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт UL7/8. В других вариантах осуществления первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US10. В других вариантах осуществления первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт UL 54.5. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

В других вариантах осуществления второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, тогда как первый несущественный сайт представляет собой несущественный сайт rMDV_np, отличный от сайта US2. В связанных вариантах осуществления второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт UL7/8. В других вариантах осуществления второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US10. В других вариантах осуществления второй несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт US2, а первый несущественный сайт rMDV_np представляет собой сайт UL 54.5. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

В других вариантах осуществления первый несущественный сайт и второй несущественный сайт rMDV_np являются одинаковыми. В конкретных вариантах осуществления этого типа первая гетерологичная нуклеиновая кислота и вторая гетерологичная нуклеиновая кислота фактически сконструированы как часть той же молекулы ДНК, которая вводится в несущественный сайт rMDV_np. Такая молекула ДНК может представлять собой экспрессирующую кассету, которая кодирует белок gD вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV), белок gI вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV) и белок вирус VP2 вируса инфекционного бурсита (IBDV). В конкретных вариантах осуществления этого типа молекула ДНК содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15. В других вариантах осуществления этого типа молекула ДНК содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 16. В других вариантах осуществления этого типа молекула ДНК содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17. В других вариантах осуществления этого типа молекула ДНК содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 18. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Соответственно, в конкретных вариантах осуществления первый несущественный сайт и второй несущественный сайт rMDV_np являются сайтами US2. В других вариантах осуществления первый несущественный сайт и второй несущественный сайт rMDV_np являются сайтами UL54.5. В других вариантах осуществления первый несущественный сайт и второй несущественный сайт rMDV_np являются сайтами UL7/8. В других вариантах осуществления первый несущественный сайт и второй несущественный сайт rMDV_np являются сайтами US10. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Нуклеотидные последовательности, кодирующие белок gD ILTV, белок gI ILTV и белок VP2 IBDV, могут функционально контролироваться экзогенными промоторами, то есть промоторами, которые в естественной среде отсутствуют в MDV_np. В некоторых вариантах осуществления эти три нуклеотидные последовательности функционально контролируются различными промоторами, то есть нуклеотидная последовательность, кодирующая белок gD ILTV, функционально контролируется первым промотором, нуклеотидная последовательность, кодирующая белок gI ILTV, функционально контролируется вторым промотором, и нуклеотидная последовательность, кодирующая белок VP2 IBDV, функционально контролируется третьим промотором, причем все три промотора, первый, второй и третий, различны. В конкретных вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gD ILTV, представляет собой эндогенный промотор gD ILTV. В некоторых вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gI ILTV, является эндогенным промотором gI ILTV. В конкретных вариантах осуществления этого типа промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gD ILTV, представляет собой эндогенный промотор gD ILTV, а промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gI ILTV, является эндогенным промотором gI ILTV. В конкретных вариантах осуществления rMDVnp представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDVnp представляет собой rMDV2.

В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, один из промоторов, функционально связанных с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок gD ILTV, белок gI ILTV или белок VP2 IBDV, представляет собой промотор немедленного раннего (mCMV IE) мышиного цитомегаловируса. В связанных вариантах осуществления по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок gD ILTV, белок gI ILTV или белок VP2 IBDV, представляет собой немедленно ранний (hCMV IE) промотор человеческого цитомегаловируса или его производное (например, из штамма AD169). В других вариантах осуществления по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок gD ILTV, белок gI ILTV или белок VP2 IBDV, является промотором куриного β-актина. Еще в других вариантах осуществления по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок gD ILTV, белок gI ILTV или белок VP2 IBDV, представляет собой промотор gpX вируса псевдобешенства (PRV).

В конкретных вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой промотор IE mCMV. В соответствующих вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой немедленно ранний промотор цитомегаловируса человека (hCMV IE) или его производное (например, из штамма AD169). В других вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой промотор гена куриного бета-актина. В конкретных вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой промотор IE mCMV, промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gD ILTV, представляет собой эндогенный промотор gD ILTV, и промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gI ILTV, представляет собой эндогенный промотор gI ILTV. В других конкретных вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой промотор IE hCMV (или его производное), промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gD ILTV, представляет собой эндогенный промотор gD ILTV, а промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gI ILTV, представляет собой эндогенный промотор gI ILTV. В других конкретных вариантах осуществления промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV, представляет собой промотор куриного β-актина, промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gD ILTV, представляет собой эндогенный промотор gD ILTV, и промотор для нуклеотидной последовательности, кодирующей белок gI ILTV, представляет собой эндогенный промотором gI ILTV.

В некоторых вариантах осуществления rMDV_np по настоящему изобретению, который включает в себя вставки нуклеотидных последовательностей, кодирующих белок gD ILTV, белок gI ILTV и белок VP2 IBDV, также включает одну или более экзогенных последовательностей терминатора транскрипции. В конкретных вариантах осуществления этого типа последовательность терминатора транскрипции находится ниже в 3'-области от нуклеотидной последовательности, кодирующей белок VP2 IBDV. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидные последовательности, кодирующие белок gD ILTV и белок gI ILTV, имеют общую последовательность терминатора транскрипции, а нуклеотидная последовательность, кодирующая белок VP2 IBDV, имеет другую. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна из последовательностей терминатора транскрипции содержит последовательность полиаденилирования US-9 (FHV US-9) кошачьего герпесвируса. В связанных вариантах осуществления по меньшей мере одна из последовательностей терминатора транскрипции содержит последовательность полиаденилирования тимидинкиназы (HSV TK) вируса простого герпеса. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

В настоящем изобретении предложена рекомбинантная нуклеиновая кислота, содержащая в направлении от 5' к 3' в следующем порядке: (i) немедленно ранний промотор (mCMV IE) мышиного цитомегаловируса, (ii) кодирующую последовательность для белка VP2 IBDV, (iii) последовательность терминатора транскрипции (iv) промотор gD ILTV, (v) кодирующую последовательность для белка gD ILTV, (vi) промотор gI ILTV и (vii) кодирующую последовательность белка gI ILTV. В конкретном варианте осуществления этого типа рекомбинантная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15. Кроме того, настоящее изобретение относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, содержащей в направлении от 5' к 3' в следующем порядке: (i) немедленно ранний промотор человеческого цитомегаловируса (hCMV IE) или его производное, (ii) кодирующую последовательность белка VP2 IBDV, (iii) последовательность терминатора транскрипции (iv) промотор gD ILTV, (v) кодирующую последовательность белка gD ILTV, (vi) промотор gI ILTV и (vii) кодирующую последовательность белка gI ILTV. Настоящее изобретение также относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, содержащей в направлении от 5' к 3' в следующем порядке: (i) промотор куриного β-актина, (ii) кодирующую последовательность белка VP2 IBDV, (iii) последовательность терминатора транскрипции (iv) промотор gD ILTV, (v) кодирующую последовательность белка gD ILTV, (vi) промотор ILI gI и (vii) кодирующую последовательность белка gI ILTV.

Кроме того, настоящее изобретение относится к рекомбинантной нуклеиновой кислоте, содержащей в направлении от 5' к 3' в следующем порядке: (i) промотор gD вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV), (ii) кодирующую последовательность белка gD ILTV, (iii) промотор gI ILTV, (iv) кодирующую последовательность белка gI ILTV, (v) немедленно ранний промотор цитомегаловируса человека (hCMV IE), его производное (например, из штамма AD169) или промотор IE mCMV, (vi) кодирующую последовательность белка VP2 IBDV и (vii) последовательность терминатора транскрипции. В конкретном варианте осуществления этого типа рекомбинантная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17.

Кроме того, настоящее изобретение относится к rMDV_np, в котором рекомбинантная нуклеиновая кислота по настоящему изобретению была вставлена в несущественный сайт вставки rMDV_np. В некоторых вариантах осуществления этого типа rMDV_np включает в себя вставку в несущественном сайте, которая содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, содержащую в направлении от 5' к 3' в следующем порядке: (i) немедленно ранний промотор (mCMV IE) мышиного цитомегаловируса, (ii) кодирующую последовательность белка VP2 IBDV, (iii) последовательность терминатора транскрипции, (iv) промотор gD ILTV, (v) кодирующую последовательность белка gD ILTV, (vi) промотор gI ILTV и (vii) кодирующую последовательность белка gI ILTV. В конкретных вариантах осуществления также могут быть включены промежуточные нуклеотидные последовательности, такие как линкеры, спейсерные последовательности и/или посторонние кодирующие последовательности, см. Пример 1 ниже. В конкретном варианте осуществления rHVT содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15, вставленную в несущественный сайт. В конкретных вариантах осуществления этих типов несущественным сайтом является сайт US2. В других таких вариантах осуществления несущественным сайтом является сайт UL54.5. В других подобных вариантах осуществления несущественным сайтом является сайт UL7/8. В других подобных вариантах несущественным сайтом является сайт US10. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Настоящее изобретение также относится к способам получения rMDV_np по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления сконструирована гетерологичная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gD ILTV, нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gI ILTV, и нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок VP2 IBDV. Затем гетерологичную нуклеиновую кислоту вставляют в несущественный сайт rMDV_np по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления гетерологичная нуклеиновая кислота представляет собой экспрессирующую кассету. В конкретных вариантах осуществления этого типа экспрессирующая кассета содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15. В других вариантах осуществления сконструирована первая гетерологичная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gD ILTV, и нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок gI ILTV; и образуется вторая гетерологичная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок VP2 IBDV. Первая гетерологичная нуклеиновая кислота вводится в сайт US2 rMDV_np, а вторая гетерологичная нуклеиновая кислота вводится в альтернативный несущественный сайт rMDV_np. В некоторых вариантах осуществления такие гетерологичные нуклеиновые кислоты являются экспрессирующими кассетами. В конкретных вариантах осуществления этого типа первая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 9, а вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5. В других вариантах осуществления этого типа первая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5, а вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 9. В конкретных вариантах осуществления способ создания rMDV_np представляет собой способ создания rHVT. В альтернативных вариантах осуществления способ создания rMDV_np представляет собой способ создания rMDV2.

Настоящее изобретение также относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам, которые содержат любой rMDV_np по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV и/или IBDV и/или MDV1, путем введения такой вакцины и/или иммуногенной композиции по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления такие способы помогают в защите кур. В конкретных вариантах осуществления этого типа вакцина по настоящему изобретению вводится подкожно. В других вариантах осуществления вакцина по настоящему изобретению вводится в in ovo.

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам, которые содержат rMDV_np по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления эти иммуногенные композиции и/или вакцины являются стабильными, безопасными и имеют относительно сильную антигенную экспрессию и/или эффективность. Альтернативно или дополнительно, иммуногенные композиции и/или вакцины, которые содержат rMDV_np по настоящему изобретению, помогают в защите кур от заболевания, вызванного ILTV и/или IBDV, и/или MDV1, после введения курам иммуногенных композиций и/или вакцин.

Настоящее изобретение также относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам, которые содержат любой rMDV_np по настоящему изобретению, который далее объединяется с дополнительным антигеном IBDV, ILTV и/или MDV для улучшения и расширения предоставляемой иммуногенности. Кроме того, настоящее изобретение также относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам, которые содержат любой rMDV_np по настоящему изобретению, который далее объединяется с антигеном патогена, отличного от MDV, ILTV или NDV. В конкретном варианте осуществления этого типа антиген представляет собой ослабленный или умеренный живой вариант IBDV (например, IBDV 89/03). В другом конкретном варианте осуществления этого типа антиген является ослабленным (или умеренно живым) вирусом болезни Ньюкасла (NDV), например NDV C2. Настоящее изобретение также относится к способам защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV и/или IBDV, и/или MDV1, и/или NDV, путем введения такой вакцины и/или иммуногенной композиции домашней птице (например, курам). В конкретных вариантах осуществления этого типа вакцина по настоящему изобретению вводится подкожно. В других вариантах осуществления вакцина по настоящему изобретению вводится in ovo.

В некоторых вариантах осуществления иммуногенные композиции и/или вакцины по настоящему изобретению содержат rHVT, который содержит в виде вставки в его сайт US2 рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащую в направлении от 5' к 3': (i) промотор gD вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV); (ii) кодирующую последовательность белка gD ILTV; (iii) промотор gI ILTV; (iv) кодирующую последовательность белка gI ILTV; (v) немедленно ранний промотор мышиного цитомегаловируса (mCMV IE); (vi) кодирующую последовательность белка VP2 вируса инфекционного бурсита (IBDV V2); и (vii) последовательность терминатора транскрипции. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа рекомбинантная нуклеиновая кислота имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 17. В конкретных вариантах осуществления этого типа иммуногенные композиции и/или вакцины дополнительно содержат ослабленный (или умеренно живой) вариант вируса инфекционного бурсита (IBDV), например IBDV - 89/03.

Кроме того, настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам, которые содержат любой rMDV_np по настоящему изобретению в сочетании с дополнительным антигеном IBDV, ILTV и/или MDV и патогеном, отличным от MDV, ILTV или IBDV.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут лучше оценены со ссылкой на следующие чертежи и подробное описание.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 представляет собой схематический чертеж генома HVT (FC126), состоящего из уникальной длинной (UL) области и уникальной короткой (US) области, каждая из которых обозначена прямыми линиями и фланкирована повторяющимися областями, обозначенными в виде боксов. Ниже схемы генома представлена планка, указывающая местоположение фрагментов рестрикции рестриктазы BamHI относительно их положения в геноме и номенклатуру буквенных обозначений, связанную с каждым фрагментом. (Наибольшему фрагменту была присвоена буква «А», следующему по величине - буква «В» и т.д.). Положения каждого клонированного субгеномного фрагмента (и их обозначения), используемые для извлечения HVT (FC126) или вирусов rHVT/ILT/IBDV, указаны ниже карты рестрикции BamHI. Звездочка (*) указывает положение сайтов вставки: UL54.5 в 484-1050-2641-10859; US2 в 228509-ILT-435Vec6, 1333-85. B6 или 1386-04.4#1.

Фигура 2 представляет собой схематический чертеж четырех различных рекомбинантных HVT, на котором изображены гены, вставленные в остов HVT, и сайт их введения. Innovax®-ILT - это rHVT, который включает экспрессирующую кассету, кодирующую гены gD ILTV и gI ILTV, вставленные в сайт UL54.5 rHVT. 1386-48 представляет собой rHVT, который включает в себя экспрессирующую кассету, которая кодирует гены gD ILTV, gI ILTV и ген вирусного белка 2 IBDV, вставленные в сайт US2 rHVT. 1386-134 представляет собой rHVT, который также включает в себя как экспрессирующую кассету, кодирующую gD ILTV и gI ILTV, так и ген вирусного белка 2 IBDV, вставленные в сайт US2, но порядок кассеты переключается (то есть, VP2, затем ILT gD и gI). HVT/ILT/IBDV 484 представляет собой rHVT, который включает в себя экспрессирующую кассету, которая кодирует гены вирусного белка 2 IBDV, gD ILTV и gI ILTV, вставленные в сайт UL54.5 rHVT.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение преодолевает предшествующую неудачу в вопросе конструкции одного вектора rMDV_np, который кодирует и экспрессирует антигены как из ILTV, так и из IBDV. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np по настоящему изобретению кодирует и экспрессирует чужеродные антигены только из ILTV и IBDV, и предназначается для защиты от болезни Марека, инфекционного бурсита (болезнь Гумборо) и вируса инфекционного ларинготрахеита. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2. В совершенно другом аспекте рекомбинантный вектор, который кодирует и экспрессирует чужеродные антигены из ILTV и IBDV, не является rMDV_np, а скорее химерным вирусом болезни Марека, который содержит определенные геномные последовательности из MDV1, заменяющие их контрагенты в векторе HVT, например, новый птичий герпесвирус (NAHV) [см., например, US 6913751].

До настоящего изобретения был сконструирован вектор HVT, содержащий ген NDV, вставленный в область US10. Было показано, что этот вектор HVT-NDV является стабильным и экспрессирует на достаточном уровне соответствующий продукта гена NDV, белок NDV F, для защиты вакцинированных кур от вирулентного заражения NDV. Кроме того, был сконструирован вектор HVT, содержащий пару генов ILTV, вставленных в область HVT UL54.5. Было показано, что этот вектор HVT-ILTV является стабильным и экспрессирует на достаточном уровне соответствующие продукты генов ILTV, белки gI ILTV и gD для защиты вакцинированных кур от вирулентного заражения вирусом ILTV.

Ранее была разработана поливалентная конструкция HVT для защиты как от NDV, так и от ILTV на основе полученных успешных конструкций выше, то есть, путем вставки гена NDV-F в сайт US10 и вставки генов gD и gI ILTV в сайт UL54.5 [см. US 8932604 B2]. Однако неожиданно после пассирования этой конструкции в тканевой культуре рекомбинантный вирус утратил способность экспрессировать белки ILTVgD, ILTVgI и NDV F. Это подтвердилось с использованием ряда дублирующих рекомбинантных конструкций HVT. Действительно, эти рекомбинантные вирусы были нестабильны и непригодны для дальнейшей разработки в качестве вакцин. Эти данные показывают, что конструкция одного поливалентного вектора rHVT, который может стабильно экспрессировать белок NDV F и белки ILTVgD и ILTVgI, не является простым процессом, который может быть экстраполирован на основе существующей информации. Действительно, если бы такие стабильные и эффективные поливалентные векторы rHVT были вообще возможны, их дизайн должен был быть основан на непредсказуемом множестве сложных взаимодействий, как минимум включающих взаимосвязь между используемыми сайтами вставки и чужеродными нуклеотидными последовательностями. Соответственно, дизайн конструкций rHVT остается непредсказуемым из известного уровня техники.

Таким образом, настоящее изобретение относится к рекомбинантным векторам MDV_np, в которые были вставлены два гена ILTV и один ген IBDV. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения все три гена были вставлены в область US2 генома HVT. В другом варианте осуществления настоящего изобретения все три гена были вставлены в сайт UL54.5 генома HVT. Соответственно, такие векторы rMDV_np должны быть способны использоваться для обеспечения защиты от инфекций IBDV и ILTV. Ранее для защиты от этих двух вирусов были необходимы два отдельных вектора rHVT, а именно, один для защиты от ILTV, а другой для защиты от IBDV.

Следовательно, настоящее изобретение выгодно по сравнению с современными методами, поскольку оно должно обеспечивать одновременную защиту от ILTV и IBDV путем инокуляции домашней птицы и/или яиц домашней птицы только одним рекомбинантным MDVnp. В частности, это позволяет вводить дополнительные вакцины путем in ovo, поскольку существует ограничение на то, какой объем может быть введен в яйцо, и в дальнейшем экономит затраты на производство, потому что необходим только один, а не два вектора. Более того, это может позволить включить дополнительный антиген в вакцину, такой как ослабленный и/или умеренно живой NDV, например штамм C2.

Кроме того, настоящее изобретение включает варианты осуществления, которые содержат различные конструкции rMDV_np в тех же вакцинных и/или иммуногенных композициях. В некоторых вариантах осуществления этого типа вакцина и/или иммуногенная композиция содержат как rMDV2, так и rHVT, каждый из которых кодирует один или несколько чужеродных антигенов. Действительно, в отличие от комбинации двух rHVT, которые неизбежно приводят к тому, что одна конструкция значительно перерастает другую, объединение rHVT с rMDV2 не приводит к такому значительному разрастанию. Поэтому в конкретных вариантах осуществления вакцина по настоящему изобретению содержит rHVT, который кодирует белок ILTVgD, белок ILTVgI и белок VP2 IBDV с rMDV2, который кодирует еще один птичий вирусный антиген, например белок NDV F.

Чтобы более полно оценить настоящее изобретение, предоставляются следующие определения.

Использование для удобства отдельных терминов в описании никоим образом не должно быть ограничивающим. Так, например, ссылка на композицию, содержащую «полипептид», включает ссылку на один или более таких полипептидов.

Используемый в настоящем описании термин «непатогенный вирус болезни Марека» или «MDV_np» или «npMDV» относится к вирусу семейства MDV, который демонстрирует слабую патогенность или ее отсутствие у домашней птицы. Термин «MDV_np» включает в себя естественные MDV, которые были пассированы или иным образом аналогично подвергнуты манипуляциям, но не включают вирусные конструкции, в которых конкретная область генома одного серотипа MDV заменяется соответствующей областью другого серотипа MDV с образованием химерного вируса, такого как новый птичий герпесвирус (NAHV). В некоторых вариантах осуществления MDV_np является HVT. В других вариантах осуществления MDV_np является MDV2. В конкретных вариантах осуществления этого типа MDV2 является SB1.

Используемый в настоящем описании MDV_np, который был генетически модифицирован для кодирования гетерологичной нуклеотидной последовательности (например, чужеродного гена), определен как «рекомбинантный MDV_np» или «rMDV_np». Термин «rMDV_np» включает в себя природные MDV_np, которые были генетически модифицированы для кодирования гетерологичной нуклеотидной последовательности, но не включают вирусные конструкции, в которых конкретная область генома одного серотипа MDV заменяется соответствующей областью другого серотипа MDV для образования химерного вируса, такого как новый птичий герпесвирус (NAHV).

Используемый в настоящем описании термин «новый птичий герпесвирус» («NAHV») представляет собой рекомбинантный химерный вирус, включающий уникальную длинную вирусную геномную область, которая естественным образом встречается в герпесвирусе индюка (HVT), и уникальную короткую вирусную геномную область, которая естественным образом встречается при болезни Марека 1 (MDV1) [см. US 5965138, US 6183753, US 6913751 B2]. В предпочтительном варианте осуществления NAHV содержит уникальную длинную вирусную геномную область, которая естественным образом встречается в герпесвирусе индюка (HVT), уникальную короткую вирусную геномную область, которая естественным образом встречается при болезни Марека 1 (MDV1) и повторяющиеся вирусные области HVT [см., US 6913751 B2].

Используемый в настоящем описании термин «несущественный сайт» представляет собой сайт в геноме MDV_np (или, альтернативно, в геноме NAVH), в котором введение гетерологичной нуклеотидной последовательности в этот сайт не препятствует репликации MDV_np (или NAVH) в клетке-хозяине. Несущественные сайты обычно идентифицируются геном, в котором они находятся, например, сайт US2, или область между двумя генами, например сайт UL7/8. Использование термина «несущественный сайт» никоим образом не означает, что даже предполагается, что в нуклеотидной последовательности данного гена (или в области между двумя генами) имеется единственное уникальное нуклеотидное положение, куда должна быть осуществлена вставка гетерологичной нуклеиновой кислоты для того, чтобы MDV_np (или NAVH) сохранял свою способность реплицироваться в клетке-хозяине.

При использовании в настоящем описании, когда говорят, что rMDV_np (или NAHV) содержит указанную нуклеиновую кислоту, «вставленную» в несущественный сайт в геноме rMDV_np (или геноме NAHV), это означает, что данная нуклеиновая кислота представляет собой гетерологичную нуклеиновую кислоту, которая расположена в этом несущественном сайте MDV_np (или NAHV). Соответственно, rMDV_np, содержащий первую нуклеиновую кислоту, введенную в первый несущественный сайт в геноме rMDV_np, и вторую нуклеиновую кислоту, введенную во второй несущественный сайт в геноме rMDV_np, эквивалентно rMDV_np, содержащему первую гетерологичную нуклеиновую кислоту, расположенную в первом несущественном сайте в геноме rMDVnp, и вторую гетерологичную нуклеиновую кислоту, расположенную во втором несущественном сайте в геноме rMDVnp, и наоборот.

Используемый в настоящем описании термин «домашняя птица» может включать в себя кур, индюков, уток, гусей, перепелов и фазанов.

Используемый в настоящем описании термин «вакцина» представляет собой композицию, пригодную для применения у животного (в том числе в некоторых вариантах осуществления у человека, тогда как в других вариантах осуществления конкретно не для человека), включающую один или более антигенов, обычно объединенных с фармацевтически приемлемым носителем, таким как жидкость, содержащая воду, которая при введении животному индуцирует иммунный ответ, достаточно сильный, чтобы минимально помочь в защите от клинического заболевания, вызванного инфекцией микроорганизмом дикого типа, то есть достаточно сильный, чтобы помочь в предотвращении клинического заболевания и/или предотвращении, улучшении или лечении клинического заболевания. Как установлено Министерством сельского хозяйства США и кодифицировано в Кодексе федеральных правил главы 9, часть 113 (9CFR 113) «Стандартные требования к животным продуктам» для получения лицензии живые вирусные вакцины должны обеспечивать защиту по меньшей мере 90% в случае NDV, IBDV и ILTV, и по меньшей мере 80% в случае MDV, от клинических признаков или поражений, связанных с заболеванием.

Используемый в настоящем описании термин «поливалентная вакцина» представляет собой вакцину, которая содержит два или более различных антигена. В конкретном варианте осуществления этого типа поливалентная вакцина стимулирует иммунную систему реципиента против двух или более различных патогенов.

Используемый в настоящем описании термин «помощь в защите» не требует полной защиты от каких-либо признаков инфекции. Например, «помощь в защите» может означать, что защита достаточна, чтобы после заражения симптомы основной инфекции были, по меньшей мере, уменьшены, и/или что одна или более основных клеточных, физиологических или биохимических причин или механизмов, вызывающих симптомы, уменьшались и/или устранялись. Понятно, что «уменьшение», при использовании в этом контексте, означает уменьшение относительно состояния инфекции, включая молекулярное состояние инфекции, а не только физиологическое состояние инфекции.

Используемый в настоящем описании термин «адъювант» представляет собой вещество, которое способно стимулировать или усиливать каскад иммунологических событий, что в конечном итоге приводит к лучшему иммунологическому ответу, то есть интегрированному ответу организма на антиген. Обычно адъювант не требуется для иммунологического ответа, но способствует или усиливает этот ответ.

Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый» используется в качестве прилагательного для обозначения того, что модифицированное существительное подходит для использования в фармацевтическом продукте. Когда он используется, например, для описания вспомогательного вещества в фармацевтической вакцине, он характеризует вспомогательное вещество как совместимое с другими ингредиентами композиции и не является неблагоприятно вредным для предполагаемого реципиента.

Используемый в настоящем описании термин «системное введение» представляет собой введение в кровеносную систему организма (включающую сердечно-сосудистую и лимфатическую систему), что влияет на организм в целом, а не на специфический локус, такой как желудочно-кишечный тракт (например, пероральное или ректальное введение) и дыхательная система (например, путем интраназального введения). Системное введение может быть выполнено, например, путем введения в мышечную ткань (внутримышечно), в дерму (внутрикожно или трансдермально), под кожу (подкожно), под слизистую оболочку (в подслизистую), в вены (внутривенно) и т.д.

Используемый в настоящем описании термин «парентеральное введение» включает подкожные инъекции, подслизистые инъекции, внутривенные инъекции, внутримышечные инъекции, внутрикожные инъекции и инфузию.

Термин «приблизительно» используется взаимозаменяемо с термином «примерно» и означает, что значение находится в пределах 25% от указанного значения, то есть пептид, содержащий «приблизительно» 100 аминокислотных остатков, может содержать от 75 до 125 аминокислотных остатков.

Используемый в настоящем описании термин «полипептид» используется взаимозаменяемо с терминами «белок» и «пептид» и обозначает полимер, содержащий две или более аминокислот, связанных пептидными связями. Используемый в настоящем описании термин «полипептид» включает в себя значительный фрагмент или сегмент и охватывает участок аминокислотных остатков, составляющих по меньшей мере примерно 8 аминокислот, обычно по меньшей мере примерно 12 аминокислот, обычно по меньшей мере примерно 16 аминокислот, предпочтительно, по меньшей мере, примерно 20 аминокислот и, в особенно предпочтительных вариантах, по меньшей мере примерно 30 или более аминокислот, например 35, 40, 45, 50 и т.д. Такие фрагменты могут иметь концы, которые начинаются и/или заканчиваются практически во всех положениях, например, начинаясь с остатков 1, 2, 3 и т.д. и заканчиваясь, например, 155, 154, 153 и т.д., во всех практических комбинациях.

Необязательно, полипептид может не иметь определенных аминокислотных остатков, которые кодируются геном или мРНК. Например, молекула гена или мРНК может кодировать последовательность аминокислотных остатков на N-конце полипептида (то есть сигнальную последовательность), которая отщепляется и, следовательно, не может быть частью конечного белка.

Используемый в настоящем описании термин «антигенный фрагмент» в отношении конкретного белка (например, белкового антигена) представляет собой фрагмент этого белка (включая большие фрагменты, в которых пропущена всего одна аминокислота из полноразмерного белка), который является антигенным, то есть способным специфически взаимодействовать с молекулой распознавания антигена иммунной системы, такой как иммуноглобулин (антитело) или Т-клеточный антигенный рецептор. Например, антигенный фрагмент белка VP2 IBDV представляет собой фрагмент белка VP2, который является антигенным. Предпочтительно антигенный фрагмент по настоящему изобретению является иммунодоминантным для распознавания антителом и/или Т-клеточным рецептором.

Используемая в настоящем описании аминокислотная последовательность на 100% «гомологична» второй аминокислотной последовательности, если две аминокислотные последовательности идентичны и/или отличаются только нейтральными или консервативными заменами, как определено ниже. Соответственно, аминокислотная последовательность примерно на 80% «гомологична» второй аминокислотной последовательности, если примерно 80% двух аминокислотных последовательностей идентичны и/или отличаются только нейтральными или консервативными заменами.

Функционально эквивалентные аминокислотные остатки часто могут быть заменены остатками в последовательности, что приводит к консервативной аминокислотной замене. Такие изменения определяет термин «консервативная замена», используемый в настоящем описании. Например, один или более аминокислотных остатков в последовательности могут быть заменены другой аминокислотой с аналогичной полярностью, которая действует как функциональный эквивалент, что приводит к молчащей замене. Замены для аминокислоты в последовательности могут быть выбраны из других членов класса, к которому принадлежит аминокислота. Например, неполярные (гидрофобные) аминокислоты включают аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин. Аминокислоты, содержащие ароматические кольцевые структуры, представляют собой фенилаланин, триптофан и тирозин. Полярно-нейтральные аминокислоты включают глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин и глутамин. Положительно заряженные (основные) аминокислоты включают аргинин, лизин и гистидин. Отрицательно заряженные (кислые) аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту. Такие замены, как ожидается, не повлияют на кажущуюся молекулярную массу, что определяется электрофорезом в полиакриламидном геле, или изоэлектрической точкой.

Особенно предпочтительными консервативными заменами являются: Lys для Arg и наоборот, так что можно поддерживать положительный заряд; Glu для Asp и наоборот, так чтобы поддерживать отрицательный заряд; Ser для Thr, так что можно поддерживать свободный -OH; и Gln для Asn, так что можно поддерживать свободный NH₂. Аминокислоты также могут быть помещены в следующие группы подобия: (1) пролин, аланин, глицин, серин и треонин; (2) глутамин, аспарагин, глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота; (3) гистидин, лизин и аргинин; (4) цистеин; (5) валин, лейцин, изолейцин, метионин; и (6) фенилаланин, тирозин и триптофан.

В связанном варианте осуществления две высокогомологичные последовательности ДНК могут быть идентифицированы по их собственной гомологии или гомологии аминокислот, которые они кодируют. Такое сравнение последовательностей может быть выполнено с использованием стандартного программного обеспечения, доступного в банках данных последовательностей. В конкретном варианте осуществления две высокогомологичные последовательности ДНК кодируют аминокислотные последовательности, имеющие примерно 80% идентичности, более предпочтительно примерно 90% идентичности и еще более предпочтительно примерно 95% идентичности. Более конкретно, две высокогомологичные аминокислотные последовательности имеют примерно 80% идентичности, еще более предпочтительно примерно 90% идентичности и еще более предпочтительно примерно 95% идентичности.

Используемый в настоящем описании процент идентичности белка и последовательности ДНК может быть определен с использованием программного обеспечения, такого как MacVector v9, коммерчески доступного от Accelrys (Burlington, Massachusetts) и алгоритма Clustal W с параметрами по умолчанию для выравнивания и параметрами по умолчанию для идентичности. См., например, Thompson, et al,. 1994. Nucleic Acids Res. 22: 4673-4680. ClustalW свободно загружается для платформ Dos, Macintosh и Unix, например, из EMBLI, Европейского института биоинформатики. Текущую ссылку для загрузки можно найти по адресу http://www.ebi.ac.uk/clustalw/. Эти и другие доступные программы также могут использоваться для определения сходства последовательностей с использованием тех же или аналогичных параметров по умолчанию.

Используемые в настоящем описании термины «полинуклеотид» или «нуклеиновая кислота» или «молекула нуклеиновой кислоты» используются взаимозаменяемо и обозначают молекулу, содержащую нуклеотиды, включая, но не ограничиваясь ими, РНК, кДНК, геномную ДНК и даже синтетические последовательности ДНК. Предполагается также, что термины охватывают молекулы нуклеиновых кислот, которые включают в себя любой из известных из уровня техники аналогов ДНК и РНК.

«Кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты» или «последовательность, кодирующая» конкретный белок или пептид, представляет собой нуклеотидную последовательность, которая транскрибируется и трансформируется в полипептид in vitro или in vivo при помещении под контроль соответствующих регуляторных элементов.

Границы кодирующей последовательности определяются стартовым кодоном на 5'-конце и стоп-кодоном трансляции на 3'-конце. Кодирующая последовательность может включать, но не ограничивается ими, прокариотические последовательности, кДНК из эукариотической мРНК, последовательности геномной ДНК из эукариотической (например, птичьей) ДНК и даже синтетические последовательности ДНК. Последовательность терминации транскрипции может быть расположена в 3'-области по отношению к кодирующей последовательности.

«Функционально связанный» относится к расположению элементов, в которых описанные компоненты сконфигурированы так, чтобы выполнять их обычную функцию. Таким образом, контрольные элементы, функционально связанные с кодирующей последовательностью, способны влиять на экспрессию кодирующей последовательности. Контрольные элементы необязательно должны быть смежными с кодирующей последовательностью, при условии их функционирования для направления ее экспрессии. Таким образом, например, между промотором и кодирующей последовательностью могут присутствовать промежуточные нетранслируемые, но транскрибируемые последовательности, и промотор все же может считаться «функционально связанным» с кодирующей последовательностью.

Используемый в настоящем описании термин «последовательность терминатора транскрипции» используется взаимозаменяемо с термином «регуляторный элемент полиаденилирования» и представляет собой последовательность, которая обычно находится в 3'-области от кодирующей области ДНК и которая может потребоваться для полного прекращения транскрипции этой кодирующей последовательности ДНК. Терминатор транскрипции представляет собой регуляторный элемент ДНК, вовлеченный в прекращение транскрипции кодирующей области в РНК. Как правило, такой элемент кодирует секцию, например структуру шпильки, которая имеет вторичную структуру, которая может привести к тому, что комплекс РНК-полимеразы прекратит транскрипцию. Таким образом, терминатор транскрипции всегда расположен в в 3'-области от стоп-кодона в области, подлежащей трансляции, в 3'-нетранслируемой области.

Используемый в настоящем описании термин «экспрессирующая кассета» представляет собой рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая минимально включает промотор и гетерологичную кодирующую последовательность, функционально связанную с этим промотором. Во многих таких вариантах осуществления экспрессирующая кассета дополнительно содержит последовательность терминатора транскрипции. Соответственно, вставка экспрессирующей кассеты в несущественный сайт генома rMDV_np может приводить к экспрессии гетерологичной кодирующей последовательности с помощью rMDV_np. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Используемая в настоящем описании «гетерологичная нуклеотидная последовательность» представляет собой нуклеотидную последовательность, которая добавляется к нуклеотидной последовательности по настоящему изобретению рекомбинантными способами для образования нуклеиновой кислоты, которая естественным образом не образуется в природе. В конкретных вариантах осуществления «гетерологичная нуклеотидная последовательность» по настоящему изобретению может кодировать белковый антиген, такой как белок VP2 IBDV, белок gI ILTV и/или белок gD ILTV. Гетерологичные нуклеотидные последовательности также могут кодировать слитые (например, химерные) белки. Кроме того, гетерологичная нуклеотидная последовательность может кодировать пептиды и/или белки, которые содержат регуляторные и/или структурные свойства. В других таких вариантах осуществления гетерологичная нуклеотидная последовательность может кодировать белок или пептид, который функционирует как средство для детектирования белка или пептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью по настоящему изобретению, после экспрессии рекомбинантной нуклеиновой кислоты. В еще одном варианте осуществления гетерологичная нуклеотидная последовательность может функционировать как средство для детектирования нуклеотидной последовательности по настоящему изобретению. Гетерологичная нуклеотидная последовательность может содержать некодирующие последовательности, включая сайты рестрикции, регуляторные сайты, промоторы и тому подобное. «Гетерологичная нуклеиновая кислота» включает гетерологичную нуклеотидную последовательность.

Вставка нуклеиновой кислоты, кодирующей антиген по настоящему изобретению, в вектор rMDV_np легко достигается, когда концы как нуклеиновой кислоты, так и вектора содержат совместимые сайты рестрикции. Если это не может быть осуществлено, то может потребоваться модификация концевой последовательности нуклеотидной последовательности и/или вектора путем гидролиза одноцепочечных выступающих концов нуклеиновых кислот (например, выступов ДНК), образующихся при расщеплении рестрикционной эндонуклеазой, для получения тупых концов, или достигая тот же результат путем заполнения одноцепочечных концов с использованием подходящей полимеразы. Альтернативно, целевые сайты могут быть получены, например, путем лигирования нуклеотидных последовательностей (линкеров) на концах. Такие линкеры могут содержать специфические олигонуклеотидные последовательности, которые определяют целевые сайты рестрикции. Сайты рестрикции также могут быть получены с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). [См., например, Saiki и др., Science, 239: 487-491 (1988)]. Расщепленный вектор и фрагменты ДНК также могут быть модифицированы, если необходимо, присоединением гомополимерного хвоста.

Белковые антигены и нуклеиновые кислоты, кодирующие белковые антигены

Ген gD ILTV, по-видимому, кодирует гликопротеин длиной 434 аминокислоты с молекулярной массой 48477 дальтон, хотя другие предполагали, что старт-кодон ниже в 3'-области, который приводит к получению белка gD ILTV, содержащего только 377 аминокислотных остатков, является фактическим старт-кодоном [Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996)]. Ген gI ILTV кодирует гликопротеин длиной 362 аминокислот с молекулярной массой 39753 дальтон (US 6875856, включенной в настоящее описание в качестве ссылки). Нуклеиновые кислоты, кодирующие природные и/или полученные в лаборатории варианты gD ILTV и gI ILTV, могут быть заменены теми, которые приведены в настоящем описании в качестве примера.

В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту (например, экспрессирующую кассету), которая кодирует белок gD ILTV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или его антигенный фрагмент. В связанных вариантах осуществления rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок gD ILTV, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет более чем 90% и/или более чем 95%, и/или более чем 98%, и/или более чем 99% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2. В конкретных вариантах осуществления белок gD ILTV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDVnp представляет собой rMDV2.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту (например, экспрессирующую кассету), которая кодирует белок gI ILTV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или его антигенный фрагмент. В связанных вариантах осуществления rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок gI ILTV, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет более чем 90% и/или более чем 95% и/или более чем 98%, и/или более чем 99% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В конкретных вариантах осуществления белок gI ILTV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 3. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Как упоминалось ранее, IBDV является членом семейства Birnaviridae, который имеет геном, состоящий из двух сегментов (A и B) двухцепочечной РНК. Больший сегмент А кодирует полипротеин 110 кДа, который затем расщепляется автопротеолизом с образованием зрелых вирусных белков VP2, VP3 и VP4. Из них VP2 и VP3 являются структурными капсидными белками для вириона, причем белок VP2 является основным защитным иммуногеном хозяина. В случае IBDV существуют два серотипа, серотип 1 и 2, которые можно отличить по тестам на нейтрализацию вируса (VN). Было показано, что вирусы серотипа 1 являются патогенными для кур, в то время как IBDV серотипа 2 вызывает подострое заболевание только у индюков. Исторически, вирусы серотипа 1 IBDV состояли только из одного типа, который известен как «классический» вирус IBD, но впоследствии появились так называемые «вариантные» штаммы IBDV. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения ген VP2 IBDV кодирует белок VP2 IBDV, который относится к классическому типу. Такие гены хорошо известны, и информация об их последовательности легко доступна [см., например, GenBank acc.nr: D00869 (F52/70), D00499 (STC) или AF499929 (D78)]. Альтернативно, этот ген может быть получен из генома классического IBDV, выделенного из природного источника, с использованием обычных методов манипулирования с бирнавирусами. Классический тип IBDV можно легко идентифицировать с помощью серологии или молекулярной биологии.

В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту (например, экспрессирующую кассету), которая кодирует белок VP2 IBDV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или ее антигенный фрагмент. В связанных вариантах осуществления rMDV_np содержит рекомбинантную нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок VP2 IBDV, содержащий аминокислотную последовательность, которая имеет более чем 90% и/или более чем 95% и/или более чем 98%, и/или более чем 99% идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6. В конкретных вариантах осуществления белок VP2 IBDV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 5. В конкретных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rHVT. В альтернативных вариантах осуществления rMDV_np представляет собой rMDV2.

Обычные вакцинации против IBDV выполняются как можно раньше в течение жизни домашней птицы с использованием аттенуированных штаммов IBDV, но их можно применять только тогда, когда уровень MDA против IBDV достаточно снизился, что обычно составляет от 15 до 20 дней после выведения. Многие «живые» или инактивированные вакцины IBDV являются коммерчески доступными, например, «живая» вакцина, такая как Nobilis™ Gumboro D78 (Merck Animal Health).

NDV имеет несегментированный, отрицательный смысловой, одноцепочечный РНК-геном, который имеет размер примерно 15 т.п.о. и содержит шесть генов, среди которых ген белка NDV F, который кодирует так называемый «слитый» гликопротеин (F-белок). F-белок участвует в прикреплении NDV и во входе в клетки-хозяева, а в качестве иммунодоминантного белка он может быть основой эффективного иммунного ответа против NDV. Белок NDV F экспрессируется как нативный F0-белок, который активируется при расщеплении внеклеточными пептидазами.

Например, ген белка NDV F может быть получен из NDV клона 30, стандартного лентогенного штамма вакцины NDV. Нуклеиновые кислоты, кодирующие природные и/или лабораторные производные варианты гена белка F, одинаково применимы из каждого из лентогенного, мезогенного, либо велогенного NDV, так как сама последовательность гена белка F является высококонсервативной в этих различных патотипах NDV.

Промотеры и регуляторные элементы полиаденилирования

Промотор представляет собой функциональную область в геноме организма, которая направляет транскрипцию нижележащей (в 3'-области) кодирующей области. Поэтому промотор располагается выше (в 5'-области) от кодирующей области гена. Синтез мРНК, направляемый промотором, начинается с «сайта начала транскрипции» (TSS). Полученная мРНК, в свою очередь, превращается в белок, начиная со старт-кодона гена, который является первой ATG-последовательностью в открытой рамке считывания (первый AUG в мРНК). Обычно TSS находится на 30-40 нуклеотидов выше от старт-кодона. TSS можно определить путем секвенирования 5'-конца мРНК гена, например, методом RACE. В общем, промоторы располагаются в пределах примерно 1000 нуклеотидов выше положения А старт-кодона, который обычно обозначается как А+1, и большинство промоторов расположены между нуклеотидами -500 и А+1.

Номенклатура промотора обычно основана на названии гена, который контролирует экспрессию. Например, промотор немедленно раннего гена 1 мышиного цитомегаловируса (mCMV-IE1) «промотор гена mCMV-IE1» относится к промотору, который естественным образом управляет экспрессией раннего гена 1 (ген IE1) для mCMV и, соответственно, располагается непосредственно выше этого гена. Поскольку IE1-ген является таким хорошо описанным и четко узнаваемым геном, и поскольку геномы нескольких mCMV секвенированы (полностью или частично), такой промотор можно легко идентифицировать обычными методами. Например, в базовом протоколе промотор может быть получен путем приблизительного суб-клонирования области между двумя последовательными генами, например, от сигнала поли-А выше гена до TSS нижележащего гена. Затем промотор можно идентифицировать стандартными тестами, например, экспрессией маркерного гена с помощью постепенно уменьшающихся участков предполагаемого промотора.

Как правило, промоторы содержат ряд узнаваемых регуляторных областей, таких как область энхансера, которая участвует в связывании регуляторных факторов, которые влияют на время, продолжительность, условия и уровень транскрипции. В то время как область энхансера обычно расположена выше, промотор также содержит область, расположенную чуть ниже, которая участвует в связывании факторов транскрипции и сама направляет РНК-полимеразу. Эта нижележащая область обычно содержит ряд консервативных элементов последовательности промотора, таких как TATA-бокс, CAAT-бокс и GC-бокс.

Промотор, содержащий как энхансер, так и нижележащую область, называется «полным» промотором, тогда как промотор, содержащий только нижележащую область, называется «основным» промотором.

Промотор для экспрессии (гетерологичного) гена в (вирусном) векторе должен быть способен эффективно управлять транскрипцией этой нижележащей кодирующей последовательности. Его обычно называют промотором, «функционально связанным» с кодирующей последовательностью, так что ген «находится под контролем» промотора или «управляется» промотором. Как правило, это означает, что в экспрессирующей кассете промотор и кодирующая последовательность гена находятся в одной и той же нуклеиновой кислоте в эффективной близости и без сигналов или последовательностей между ними, которые вмешивались бы в эффективную транскрипцию кодирующей последовательности.

Промотор гена mCMV-IE1 хорошо известен в данной области и может быть легко получен из множества коммерческих источников, таких как поставщики коммерческих плазмид для клонирования и экспрессии. Ген IE1 также называют «главным геном IE». Белок mCMV-IE1 также упоминается как pp89. Dörsch-Häsler et al. [Proc. Nat. Acad. Sci., 82: 8325-8329 (1985)] описали промотор гена mCMV IE1 в 1985 году, и использование этого промотора в гетерологичной экспрессии также описано в WO 87/0905 и ЕР 728 842. Нуклеотидную последовательность полного локуса mCMV IE можно получить в GenBank под регистрационным номером L06816.1 (from March 2004). Сам mCMV доступен из ATCC: первоначально под регистрационным номером VR-194, и совсем недавно было сделано дополнение под регистрационным номером VR-1399.

В одном варианте осуществления изобретения промотор гена mCMV-IE1 представляет собой полный промотор, включающий как коровую область промотора, так и область энхансера для гена mCMV-IE1. Полный промотор гена mCMV-IE1 имеет размер примерно 1,4 т.п.о. Однако настоящее изобретение также допускает некоторую дисперсию длины не только промотора гена mCMV IE1, но также и других элементов, которые составляют экспрессирующую кассету рекомбинантной ДНК, используемую в настоящем изобретении. Это может быть результатом различий в точных условиях, которые используются для клонирования и конструкции. Например, эта дисперсия может возникнуть в результате использования различных сайтов ферментов рестрикции, праймеров клонирования ПЦР или различных условий для адаптации концов молекул, используемых для клонирования. Следовательно, могут иметь место некоторые изменения длины - меньше или больше - составляющих элементов, не влияя на стабильность и относительно сильную экспрессию антигена и/или эффективность всей экспрессирующей кассеты. В этом случае эти различия по длине несущественны и находятся в пределах объема изобретения. Следовательно, промотор гена mCMV-IE1 «примерно 1,4 т.п.о.» составляет: 1,4 т.п.о. ± примерно 25%. В конкретных вариантах осуществления промотор составляет 1,4 т.п.о. ± примерно 20%. В других вариантах дисперсия может составлять 1,4 т.п.о. ± примерно 15%, 1,4 т.п.о. ± примерно 12%, 1,4 т.п.о. ± примерно 10%, 1,4 т.п.о. ± примерно 8%, 1,4 т.п.о. ± примерно 6%, 1,4 т.п.о. ± примерно 5%, 1,4 т.п.о. ± примерно 4%, 1,4 т.п.о. ± примерно 3%, 1,4 т.п.о. ± примерно 2% или даже 1,4 т.п.о. ± примерно 1%.

Аналогичным образом могут быть использованы гомологи или варианты промоторного элемента, которые являются одинаково эффективными и стабильными. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления промотор гена mCMV-IE1 по настоящему изобретению может представлять собой молекулу ДНК примерно 1,4 т.п.о., которая содержит нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98% или даже 99% идентичности нуклеотидной последовательности с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 10. В конкретном варианте осуществления промотор гена mCMV-IE1 состоит из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 10.

Многие альтернативные промоторы могут быть использованы для управления экспрессией гетерологичного гена, кодирующего белковый антиген или его антигенный фрагмент, в rMDV_np по настоящему изобретению. Примеры включают в себя промотор gpX вируса псевдобешенства (PRV) (см. WO 87/04463), промотор LTR саркомы Рауса, промотор раннего гена SV40, промотор куриного гена бета-актина, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 11, промотор Towne Strain hCMV IE, производное промотора IE hCMV (из штамма AD169), содержащего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 12, промотор gD ILTV, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 7, и промотор gI ILTV, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 8, [см., например, US 6183753 B1], промотор немедленно раннего гена 1 (hcMV IE1) человеческого цитомегаловируса [US 5830745; US 5980906] и промотор гена куриного бета-актина [EP 1 298 139 B1]. Конкретным гетерологичным промотором для гена VP2 IBDV является промотор цитомегаловируса мыши (mCMV IE1). В конкретном варианте осуществления этого типа mCMV IE1 содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 10 (см., например, ЕР 728 842; PCT/EP2015/081121].

Включение регуляторного элемента полиаденилирования ниже от кодирующей области ДНК часто требуется для прекращения транскрипции кодирующей последовательности ДНК. Соответственно, многие гены содержат регуляторный элемент полиаденилирования на нижнем конце их кодирующей последовательности. Многие такие регуляторные элементы были идентифицированы и могут использоваться в rMDV_np по настоящему изобретению. Конкретные примеры регуляторных элементов полиаденилирования, приведенные в настоящем описании в качестве примера, включают в себя сигнал полиаденилирования FHV US-9, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 13, и сигнал полиаденилирования тимидинкиназы HSV, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 14.

Вакцины и иммуногенные композиции

Настоящее изобретение относится к применению рекомбинантных MDV_np, молекул нуклеиновой кислоты, используемых для конструкции MDV_np, или относится к клеткам-хозяевам для их выращивания, или к любой их комбинации в соответствии с настоящим изобретением для производства вакцины для домашней птицы. Соответственно, настоящее изобретение относится к вакцинам и/или иммуногенным композициям, которые включают в себя поливалентный рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению. Такие вакцины могут использоваться для предотвращения инфекционного бурсита (болезнь Гумборо) и/или болезни Марека, и/или заболеваний, связанных с инфекциями ILTV. Вакцина в соответствии с настоящим изобретением может быть использована для профилактического и/или терапевтического лечения и, таким образом, может препятствовать возникновению и/или прогрессированию инфекции, и/или клиническим симптомам заболевания.

Рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению можно выращивать с помощью любого количества средств, которые в настоящее время практикуются в данной области. Например, рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению можно выращивать с использованием культивирования in vitro первичных куриных клеток, см., например, примеры ниже, в которых использовались фибробластные клетки куриного эмбриона (CEF). CEF могут быть подготовлены путем трипсинизации куриных эмбрионов. CEF также можно высевать в монослоях, а затем заражать MDV_np. Этот конкретный процесс можно легко масштабировать до промышленного производства.

Следовательно, еще один аспект изобретения относится к способу получения вакцины в соответствии с изобретением, включающему стадии инфицирования клеток-хозяев рекомбинантным MDVnp по настоящему изобретению, сбора инфицированных клеток-хозяев и последующего смешивания собранных зараженных клеток-хозяев с фармацевтически приемлемым носителем. Подходящие методы для инфицирования, культивирования и сбора хорошо известны в данной области и описаны и приведены здесь в качестве примера.

Как правило, инфицированные клетки-хозяева собирают, пока они все еще интактны, чтобы получить рекомбинантный MDV_np в связанной с клеткой форме. Эти клетки могут быть растворены в соответствующей композиции носителя, чтобы обеспечить стабилизацию при хранении и замораживании. Инфицированные клетки могут быть заполнены в стеклянные ампулы, которые запечатывают, замораживают и хранят в жидком азоте. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения вакцины и/или иммуногенные композиции настоящего изобретения хранятся в замороженном виде и, соответственно, содержат криоконсервант, такой как диметилсульфоксид (ДМСО), для сохранения замороженных инфицированных клеток.

Альтернативно, когда рекомбинантный MDV_np является рекомбинантным HVT, он может быть выделен из его клетки-хозяина, например, путем обработки ультразвуком по окончании культивирования, а затем поглощен в стабилизатор и лиофилизирован для стабильного хранения или иным способом уменьшен в объеме жидкости для хранения и затем восстановлен в жидком разбавителе до или во время введения. Такое восстановление может быть достигнуто с использованием, например, воды вакцинного класса. В некоторых вариантах осуществления лиофилизированная часть поливалентной вакцины может содержать один или более антигенов, и разбавитель может содержать один или более других антигенов.

В конкретных вариантах осуществления вакцина по настоящему изобретению (или ее часть) может находиться в лиофилизированной форме, например, в виде таблеток и/или сфер, которые получают способом, описанным в WO 2010/125084, настоящим включенным в качестве ссылки в полном объеме. В частности, делается ссылка на примеры со страницы 15, строка 28 до страницы 27, строка 9 WO 2010/125084, описывающая способ получения таких быстро разрушающихся таблеток/сфер. Такие лиофилизированные формы могут быть легко растворены в разбавителе, чтобы обеспечить системное введение вакцины.

Вакцины и иммуногенные композиции могут, но необязательно, включать в себя физиологически совместимые буферы и физиологический раствор и тому подобное, а также фармацевтически приемлемые адъюванты. Адъюванты могут быть полезны для улучшения иммунного ответа и/или повышения стабильности вакцинных препаратов. Адъюванты обычно описываются как неспецифические стимуляторы иммунной системы, но также могут быть полезны для нацеливания на определенные типы иммунной системы. Одно или более соединений, которые имеют эту активность, могут быть добавлены к вакцине. Поэтому конкретные вакцины по настоящему изобретению могут дополнительно содержать адъювант. Примеры химических соединений, которые можно использовать в качестве адъювантов, включают, но не ограничиваются ими, соединения алюминия (например, гидроксид алюминия), метаболизируемые и неметаболизируемые масла, минеральные масла, включая производные маннида олеата в растворе минерального масла (например, MONTANIDE ISA 70 от Seppic SA, Франция) и легкие минеральные масла, такие как DRAKEOL 6VR, блок-полимеры, иммуностимулирующие комплексы ISCOM, витамины и минералы (включая, но не ограничиваясь ими: витамин E, витамин A, селен и витамин B12) и CARBOPOL®.

Другие подходящие адъюванты, которые иногда упоминаются как иммунные стимуляторы, включают, но не ограничиваются ими: цитокины, факторы роста, хемокины, супернатанты из клеточных культур лимфоцитов, моноцитов, клеток из лимфоидных органов, клеточных препаратов и/или экстракты из растений, бактерии или паразиты (препараты Staphylococcus aureus или липополисахариды) или митогены. Как правило, адъювант вводят одновременно с антигеном по настоящему изобретению. Однако адъюванты также альтернативно могут вводиться в течение двух недель до вакцинации и/или в течение периода времени после вакцинации, то есть до тех пор, пока антиген, например рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению, сохраняется в тканях.

Вакцины и/или иммуногенные композиции по настоящему изобретению могут вводиться любым путем, таким как in ovo, парентеральным введением, включая внутримышечную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутрикожную инъекцию, скарификацию, пероральное введение или любую их комбинацию.

Кроме того, поливалентный рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению может быть использован и/или объединен с дополнительными антигенами IBDV, ILTV и/или MDV для улучшения и расширения предоставленной иммуногенности, и/или антигенами других патогенов (например, NDV) для обеспечения иммунной защиты от таких других патогенов. Эти дополнительные антигены могут быть либо живыми, либо убитыми целыми микроорганизмами, другими рекомбинантными векторами, гомогенатами клеток, экстрактами, белками или любым другим таким производным при условии, что они не оказывают отрицательного влияния на безопасность и стабильность при относительно сильной экспрессии антигена и/или на эффективность вакцины в соответствии с настоящим изобретением.

Комбинация поливалентного рекомбинантного MDV_np по настоящему изобретению с дополнительным антигеном MDV, IBDV и/или ILTV может быть выгодной в тех случаях, когда преобладают вирулентные полевые штаммы MDV, IBDV или ILTV, например, в конкретной географической области. В этом отношении комбинация поливалентного рекомбинантного MDV_np по настоящему изобретению с MDV1, MDV2 или HVT включает штамм Риспенс (MDV1), штамм SB1 (MDV2), штамм FC-126 (HVT) и/или PB1 (HVT). Чтобы улучшить ответ против IBDV, поливалентный рекомбинантный MDV_np может быть объединен с штаммом вакцины IBDV, таким как умеренный живой вакцинный штамм IBDV, например D78 (клонированный промежуточный штамм), PBG98, Cu-1, ST-12 (промежуточный штамм), или 89/03 (живой штамм варианта Delaware) в поливалентной вакцине.

Примеры других микроорганизмов, которые могут быть использованы в качестве антигенов вместе с поливалентным рекомбинантным MDV_np по настоящему изобретению, включают: (i) вирусы, такие как инфекционный вирус бронхита, аденовирус, вирус синдрома снижения несучести, вирус инфекционного бурсита, куриный вирус анемии, вирус птичьего энцефаломиелита, птичий вирус оспы, вирус ринотрахеита индюков, утиный вирус чумы (утиный вирусный энтерит), свиной вирус оспы, птичий вирус лейкоза, птичий пневмовирус и реовирус, (ii) бактерии, такие как Escherichia coli, Salmonella spec., Ornitobacterium rhinotracheale, Paragallinarum Haemophilis, Pasteurella multocida, Erysipelothrix rhusiopathiae, Erysipelas spec., Mycoplasma spec., и Clostridium spec., (iii) паразиты такие как Eimeria spec. и (iv) грибы, такие как Aspergillus spec. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению может быть объединен с умеренным живым вакцинным штаммом NDV, таким как вакцинный штамм C2. Многие из таких штаммов используются в коммерческих вакцинах.

Комбинированную вакцину можно получить различными способами, в том числе путем объединения рекомбинантного MDV_np по настоящему изобретению с препаратами вируса или бактерий, или грибов, или паразитов, или клеток-хозяев, или смеси любых и/или их всех. В конкретных вариантах осуществления компоненты для такой комбинированной вакцины удобно изготавливать отдельно, а затем объединять и заполнять в один и тот же контейнер для вакцины.

Как описано выше, вакцина согласно изобретению может быть использована преимущественно для обеспечения безопасной и эффективной иммунной защиты домашней птицы от множества заболеваний с помощью одной прививки в очень раннем возрасте или in ovo. В качестве альтернативы, как было бы очевидно любому специалисту в области вакцин для домашней птицы, комбинации, описанные выше, также могут включать схемы вакцинации, в которых поливалентный рекомбинантный MDV_np по настоящему изобретению и дополнительный антиген не применяются одновременно; например, рекомбинантный MDV_np может применяться in ovo, а NDV C2 и/или штамм IBDV (например, 89/03) можно применять в последующее время/дату.

Соответственно, вакцины по настоящему изобретению можно вводить птице в однократной дозе или в многократных дозах. Например, вакцина по настоящему изобретению может быть применена в день выведения и/или in ovo в день 16-18 (день эмбрионизации) ED. Когда вводят несколько доз, их можно назначать либо в одно и то же время, либо последовательно, способом и по времени, совместимыми с рецептурой вакцины, и в таком количестве, которое будет иммунологически эффективным. Следовательно, вакцина по настоящему изобретению может эффективно служить в качестве первичной вакцинации, которая впоследствии может быть использована и усилена путем бустерной вакцинации идентичной вакцины или с помощью другого вакцинного препарата, например, классической инактивированной адъювантной вакцины цельного вируса.

Объем на дозу вакцины по настоящему изобретению может быть оптимизирован в соответствии с предполагаемым направлением применения: при инокуляции in ovo обычно применяют объем от 0,05 до 0,5 мл/на яйцо, а парентеральную инъекцию обычно проводят объемом от 0,1 до 1 мл /на птицу. В любом случае оптимизация объема дозы вакцины находится в пределах возможностей квалифицированного специалиста.

ТАБЛИЦА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO: Описание Тип 1 Гликопротеин gD ILTV нуклеиновая кислота 2 Гликопротеин gD ILTV аминокислота 3 Гликопротеин gI ILTV нуклеиновая кислота 4 Гликопротеин gI ILTV Аминокислота 5 IBDV VP2 Нуклеиновая кислота 6 IBDV VP2 Аминокислота 7 Промотор gD ILTV Нуклеиновая кислота 8 Промотор gIII ILTV нуклеиновая кислота 9 Вставка ILTV нуклеиновая кислота 10 Промотор mCMV IE нуклеиновая кислота 11 Промотор куриного β-актина нуклеиновая кислота 12 Промотор hCMV IE (из штамма AD169) нуклеиновая кислота 13 FHV US-9
Сигнал полиаденилирования нуклеиновая кислота 14 HSV TK
Сигнал полиаденилирования нуклеиновая кислота 15 228509-ILT-435Vec6 (HVT/IBDV/ILT 1386-134)
mCMV IEpro-VP2-SV40pA/ILT/HVT нуклеиновая кислота 16 1333-85.B6 (HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1)
ILT/куриный β-актин pro-VP2-FHV US9pA/HVT нуклеиновая кислота 17 1386-04.4#1 (HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7)
ILT/hCMV IEpro-VP2-HSV TKpA/HVT нуклеиновая кислота 18 484-1050-2641-10859 (HVT/IBDV/ILT 484)
mCMV IEpro-VP2-SV40pA/ILT/HVT нуклеиновая кислота 19 SV40 Сигнал полиаденилирования нуклеиновая кислота

Настоящее изобретение может быть лучше понято со ссылкой на следующие неограничивающие примеры, которые представлены в качестве примера изобретения. Следующие примеры представлены для более полной иллюстрации вариантов осуществления изобретения и никоим образом не должны истолковываться как ограничивающие широкий объем изобретения.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1

КОНСТРУКЦИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ HVT/ILTV/IBDV

Получали рекомбинантные поливалентные непатогенные конструкции вируса болезни Марека, которые кодируют и экспрессируют как белковые антигены вируса инфекционного ларинготрахеита, так и вируса инфекционного бурсита. Настоящее изобретение преодолевает проблему интерференции вакцин, возникающую, когда две рекомбинантные HVT-вакцины, таким как Innovax®-ILT (продается Merck Animal Health) и Vaxxitek® (продается Merial), дают одному и тому же животному.

Были созданы рекомбинантные вирусные конструкции, в которых антигенный донорный материал двух патогенов домашней птицы, вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV) и вируса инфекционного бурсита (IBDV) вставляют в вектор герпесвируса индюка (HVT) [см. также US 8932604 B2, WO 2013/057,235 и WO 2016/102647, содержание каждого из которых включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме]. Донорные материалы включают 3563 т.п.о. SalI-HindIII- фрагмента из ILTV, штамм NVSL для экспериментального заражения, лот № 83-2 [положения 10532-14094; Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996): Acc. # U28832], кодирующий полноразмерные гены гликопротеина D (gD) и гликопротеина I (gI), а также неполные кодирующие области из гликопротеина E (аминокислоты 1-101) и ORF5 (аминокислоты 734-985); и экспрессирующую кассету, состоящую из кодирующей области вирусного белка 2 (vp2) IBDV, Faragher, штамм типа F52/70, управляемого эукариотическим или вирусным промотором и с последующей последовательностью терминатора. В настоящем варианте осуществления промотор, управляющий экспрессией VP2, может быть получен из немедленно-раннего (IE) гена цитомегаловируса человека (hCMV), штамма AD 169, из гена куриного бета-актина (cβ-act) или из IE-гена цитомегаловируса мыши (mCMV) ATCC VR-194. Последовательность терминатора и полиаденилирования может быть получена из человеческого вируса простого герпеса (HSV), гена тимидинкиназы (TK), гена гликопротеина B (gB) кошачьего герпесвируса (FHV), из неммедленно-раннего (IE) гена цитомегаловируса человека ( hCMV), штамм AD 169, или из обезьяньего вируса 40 (SV40). Донорный материал может быть вставлен в один из двух несущественных сайтов в векторе HVT, сайт US2 [положения 140540/140541, Afonso et al., J. Virology 75 (2): 971-978 (2001); Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 124 и 125] или в сайт UL54.5 [положения 111240/111241, Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 21 и 22] или одной вставкой в каждый сайт.

Генетическая и фенотипическая стабильность является основным компонентом безопасности и относительно сильной антигенной экспрессии и/или профиля эффективности любого нового кандидата рекомбинантной вирусной вакцины. Экспрессирующие кассеты IBDV и ILTV, вставленные в остов HVT, по существу не требуются для репликации вируса и, следовательно, могут быть потеряны из-за мутации во время амплификации вирусного материала при пассажах тканевой культуры. Удовлетворительный кандидат на вакцину не должен легко мутировать с потерей экспрессию вставки чужеродного гена. Кандидат вакцины считается стабильным, если можно продемонстрировать, что по меньшей мере 90% вирусных бляшек экспрессируют вставленный чужеродный антигенный белок после более чем или ровно после 10 пассажей тканевой культуры.

ПРИМЕР 2

КОНСТРУКЦИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ ВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ HVT/ILTV/IBDV

Способность генерировать герпесвирусы с помощью этого метода ранее была продемонстрирована для вируса псевдобешенства [van Zijl et al., J. Virology 62: 2191-2195 (1988)]. Затем эту процедуру использовали для конструирования рекомбинантных векторов HVT [см. US 5853733, включенный в настоящее описание посредством ссылок на методологию, раскрытую в отношении конструкции рекомбинантных векторов HVT], и использовали для конструирования рекомбинантных векторов HVT/ILTV/IBDV по настоящему изобретению. В этом методе весь геном HVT клонируют в бактериальные векторы, поскольку несколько больших перекрывающихся субгеномных фрагментов конструировали с использованием стандартных методов рекомбинантной ДНК [Maniatis et al., (1982) Molecular Cloning, Cold Spring Laboratory Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1982); и Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor, New York (1989)]. Космидную библиотеку HVT штамма FC126 получали из фрагментированной вирусной ДНК, клонированной в космидный вектор pWE15 (Stratagene, теперь Agilent Technologies of Santa Clara, Calif.). Кроме того, несколько крупных геномных фрагментов ДНК выделяли с помощью рестрикционного гидролиза ферментом BamHI и клонировали либо в pWE15, либо в плазмидный вектор pSP64 (Promega, Madison Wis.). Как описано в патенте US 5857733, котрансфекция этих фрагментов в куриные эмбриональные фибробласты (CEF) приводит к регенерации HVT-генома, опосредованной гомологичной рекомбинацией через перекрывающиеся области фрагментов. Если вставка сконструирована непосредственно в одном или более субгеномных фрагментах перед котрансфекцией, то эта процедура приводит к высокой частоте присутствия вирусов, содержащих вставку. Для генерации HVT/FC126 HVT потребовалось пять перекрывающихся субгеномных клонов, и они послужили основой для создания всех рекомбинантных вирусов HVT/ILTV/IBDV.

Конструкция HVT/ILT/IBDV 1386-134.1-2: [см., 1386-134, как изображено на Фигуре 2]

Космидную регенерацию HVT/ILT/IBDV 1386-134.1-2 выполняли, по существу, как описано в патенте US 5857733 (например, на Фиг. 8 из US 5853733; перерисованной, по меньшей мере частично, на Фиг.1 настоящего описания]. Чтобы обеспечить интеграцию в US-область генома HVT FC126, область, перекрытая космидой nr. 378-50 в US 5853733, теперь предоставляется из трех меньших плазмид: pSY640 и 556-60.6 и одной трансферной плазмиды (228509-ILT-435Vec6), перекрывающей эти две и содержащей экспрессирующие кассеты IBDV/ILTV в локусе гена US2. Набор из семи линеаризованных конструкций: 3 космиды и 4 плазмиды трансфецировали все вместе в CEF, используя стандартный протокол CaCl₂-трансфекции, и полученный вирусный материал очищали из бляшек два раза.

Конструкция HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1: [см., 1386-48, как изображено на Фигуре 2]

Космидную регенерацию HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1 выполняли, по существу, как описано в патенте US 5857733 (например, на Фиг. 8 из US 5 853 733; перерисованной, по меньшей мере частично, на Фиг. 1 настоящего описания]. Чтобы обеспечить интеграцию в US-область генома HVT FC126, область, перекрытую космидой nr. 378-50 в US 5853733, теперь предоставляли из трех меньших плазмид: pSY640 и 556-60,6 и одной трансферной плазмиды (1333-85.B6), перекрывающей эти две, и содержащей экспрессирующие кассеты IBDV/ILTV в локусе гена US2.

Набор из семи линеаризованных конструкций: 3 космиды и 4 плазмиды трансфецировали все вместе в CEF, используя стандартный протокол CaCl₂-трансфекции, и полученный вирусный материал очищали из бляшек два раза.

Конструкция HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7: [см., 1386-48, как изображено на Фигуре 2]

Космидную регенерацию HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7 выполняли, по существу, как описано в патенте US 5853733 [например, на Фиг. 8 из US 5853733; перерисованной, по меньшей мере частично, на Фиг. 1 настоящего описания]. Чтобы обеспечить интеграцию в US-область генома HVT FC126, область, перекрытая космидой nr. 378-50 в US 5853733, теперь предоставляется из трех меньших плазмид: pSY640 и 556-60.6 и одной трансферной плазмиды (1386-04,4 # 1), перекрывающей эти две и содержащей экспрессирующую кассету IBDV/ILTV в локусе гена US2. Набор из семи линеаризованных конструкций: 3 космиды и 4 плазмиды трансфецировали все вместе в CEF, используя стандартный протокол CaCl₂-трансфекции, и полученный вирусный материал очищали из бляшек два раза.

Конструкция HVT/ILT/IBDV 484: [см., 1386-484, как изображено на Фигуре 2]

Космидную регенерацию HVT/ILT/IBDV 484 выполняли, по существу, как описано в патенте U.S. 5857733 (например, на Фиг. 8 из US 5 853 733; перерисованной, по меньшей мере частично, на Фиг. 1 настоящего описания]. Чтобы обеспечить интеграцию в область UL54.5 гена HVT FC126, область, перекрытую космидой nr. 407-32,1C1 в US 5 853 733, теперь предоставляли из трех меньших плазмид: 672-01.A40 и 672-07. C40 и одной трансферной плазмиды (484-1050-2641-10859), перекрывающей эти две и содержащей экспрессирующие кассеты IBDV/ILTV в локусе гена UL54.5. Набор из семи линеаризованных конструкций: 4 космиды и 3 плазмиды трансфецировали все вместе в CEF, используя стандартный протокол CaCl₂-трансфекции, и полученный вирусный материал очищали из бляшек два раза.

Описание субгеномных фрагментов для генерации FC126 HVT:

Субгеномный клон 407-32.2C3

Космида 407-32.2C3 содержит область приблизительно 40170 пар оснований геномной ДНК HVT [Левый конец - положение 39754; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Эта область включает BamHI-фрагменты HVT F', L, P, N1, E, D и 2092 пар оснований фрагмента B.

Субгеномный клон 172-07.BA2

Плазмида 172-07. BA2 содержит область 25931 пар оснований геномной ДНК HVT. Она была сконструирована путем клонирования BamHI-фрагмента B HVT [положения 37663-63593; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc.# AF291866], в плазмиду pSP64 (Promega, Madison Wis.).

Субгеномный клон 407-32.5G6

Космида 407-32.5G6 содержит 39404 пар оснований геномной ДНК HVT [положения 61852-101255; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Эта область включает BamHI-фрагменты HVT H, C, Q, K1, M, K2, вместе с фрагментом В из 1742 пар оснований и фрагментом J из 3880 пар оснований.

Субгеномный клон 407-31.

1C1Космида 407-31.1C1 содержит 37444 пар оснований геномной ДНК HVT [положения 96095-133538; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Эта область включает BamHI-фрагменты HVT J, G, I, F, O, плюс 1281 пар оснований фрагмента K2 и 6691 пар оснований фрагмента A.

Субгеномный клон 378-50

Космида 378-50 содержит 28897 пар оснований геномной ДНК HVT (см. Фиг. 8 из US 5853733; перерисованной, по меньшей мере частично, на Фиг.1 настоящего описания]. Эта область включает BamHI-фрагмент A HVT. Он был сконструирован путем клонирования BamHI-фрагмента А HVT [положения 126 848-155 744; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866] в космиду pWE15.

Дополнительные фрагменты вставки для генерации HVT/ILT/IBDV 1386-134.1-2:

Субгеномный клон 228059-ILT-435Vec6

Плазмида для вставки 228059-ILT-435Vec6 содержит EcoRI-фрагмент из 7311 пар оснований уникальных коротких областей HVT [положения 126880-144190; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], клонированный в плазмиду pSP64 (Promega, Madison, WI.). Вставляли в уникальный сайт StuI в гене HVT US2 [положения 140540/140541; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 124 и 125] 2 элемента: экспрессирующую кассету, состоящую из промотора IE mCMV, IBDV F52/70 классического типа, штамм Faragher, гена вирусного белка 2 (VP2) и сигнала полиаденилирования SV40 с последующим SalI-HindIII-фрагментом 3563 пар оснований из ILTV, NVSL штамм для экспериментального заражения, Лот # 83-2 [положения10532-14094; Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996); Acc.# U28832], кодирующих полноразмерные гены гликопротеина D (gD) и гликопротеина I (gI), а также неполные кодирующие области из гликопротеина E (аминокислоты 1-101) и ORF5 (аминокислоты 734-985). Гены VP2 IBDV, gD ILTV и gI ILTV транскрибируются в противоположном направлении относительно US2-гена HVT.

Субгеномный клон pSY640

Плазмида pSY640 содержит приблизительно 13600 пар оснований области геномной ДНК HVT (положения 126848-140540; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], полученной из BamHI-фрагмента A. Для получения этой плазмиды область ДНК, расположенную выше гена US2, начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента, клонировали в плазмиду pSP64 (Promega, Madison WI.).

Субгеномный клон 556-60.6

Плазмида 556-60.6 содержит приблизительно 12500 пар оснований области геномной ДНК HVT, полученной из BamHI-фрагмента A (приблизительные положения 143300-155744; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Для генерации этой плазмиды область ДНК, расположенную ниже гена US2 (начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента A), клонировали в pSP64 (Promega, Madison WI.) И затем обрабатывали экзонуклеазой для «обгрызания» из сайта StuI ~ 150 п.о. и повторно клонировали в плазмидный вектор pBR322.

Дополнительные фрагменты вставки для генерации HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1:

Субгеномный клон 1333-85.B6

Плазмида для вставки 1333-85.B6 содержит EcoRI-фрагмент из 7311 пар оснований уникальных коротких областей HVT [положения 126880-144190; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], клонировали в плазмиду pSP64 (Promega, Madison, WI.). Вставляли в уникальный сайт StuI в гене HVT US2 [положения 140540/140541; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 124 и 125] 2 элемента: SalI-HindIII-фрагмент 3563 пар оснований из ILTV, NVSL штамм для экспериментального заражения, Лот # 83-2 [положения 10532-14094; Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996); Acc.# U28832], кодирующий полноразмерные гены гликопротеина D (gD) и гликопротеина I (gI), а также неполные кодирующие области из гликопротеина E (аминокислоты 1-101) и ORF5 (аминокислоты 734-985) и экспрессирующую кассету, состоящую из промотора куриного β-актина, классического типа IBFV F52/70, штамм Faragher, гена вирусного белка 2 (VP2) и сигнала полиаденилирования гена гликопротеина B кошачьего герпесвируса (FHV).Гены gD ILTV, gI ILTV и VP2 IBDV транскрибируются в противоположном направлении относительно гена HVT US2.

Субгеномный клон pSY640.

Плазмида pSY640 содержит приблизительно 13600 пар оснований области геномной ДНК HVT (положения 126848-140540; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], полученной из BamHI-фрагмента A. Для получения этой плазмиды область ДНК, расположенную выше гена US2, начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента, клонировали в плазмиду pSP64 (Promega, Madison WI.).

Субгеномный клон 556-60.6.

Плазмида 556-60.6 содержит приблизительно 12500 пар оснований области геномной ДНК HVT, полученной из BamHI-фрагмента A (приблизительные положения 143300-155744; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Для генерации этой плазмиды область ДНК, расположенную ниже гена US2 (начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента A), клонировали в pSP64 (Promega, Madison WI.) И затем обрабатывали экзонуклеазой для «обгрызания» из сайта StuI ~ 150 п.о. и повторно клонировали в плазмидный вектор pBR322.

Дополнительные фрагменты вставки для генерации HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7:

Субгеномный клон 1386-04.4 # 1

Плазмида для вставки 1386-04.4 # 1 содержит EcoRI-фрагмент 7311 пар оснований уникальных коротких областей HVT [положения 126880-144190; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], клонированный в плазмиду pSP64 (Promega, Madison, WI.). Вставляли в уникальный сайт StuI в гене HVT US2 [положения 140540/140541; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 124 и 125] 2 элемента: 3563 пар оснований SalI-HindIII-фрагмента из ILTV, NVSL штамм для экспериментального заражения, Лот # 83-2 [положения 10532-14094; Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996); Acc.# U28832], кодирующий полноразмерные гены гликопротеина D (gD) и гликопротеина I (gI), а также неполные колирующие области из гликопротеина E (аминокислоты 1-101) и ORF5 (аминокислоты 734-985) и экспрессирующую кассету, состоящую из промотора IE hCMV, классического типа IBSF F52/70, штамма Faragher, гена вирусного белка 2 (VP2) и сигнала полиаденилирования гена тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV).Гены gD ILTV, gI ILTV и VP2 IBDV транскрибируются в противоположном направлении относительно гена US2 HVT.

Субгеномный клон pSY640.

Плазмида pSY640 содержит приблизительно 13600 пар оснований области геномной ДНК HVT (положения 126848-140540; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], полученную из BamHI-фрагмента A. Для получения этой плазмиды область ДНК, расположенную выше гена US2, начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента, клонировали в плазмиду pSP64 (Promega, Madison WI.).

Субгеномный клон 556-60.6.

Плазмида 556-60.6 содержит приблизительно 12500 пар оснований области геномной ДНК HVT, полученной из BamHI-фрагмента A (приблизительные положения 143300-155744; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866]. Для генерации этой плазмиды область ДНК, расположенную ниже гена US2 (начиная с сайта StuI, расположенного в гене US2 и продолжаясь до конца BamHI-фрагмента A), клонировали в pSP64 (Promega, Madison WI.) И затем обрабатывали экзонуклеазой для «обгрызания» с сайта StuI ~ 150 п.о. и повторно клонировали в плазмидный вектор pBR322.

Дополнительные фрагменты вставки для генерации HVT/ILT/IBDV 484:

Субгеномный клон 484-1050-2641-10859

Плазмида для вставки 484-1050-2641-10859 содержит 8636 пар оснований уникальной длинной области геномной ДНК HVT [положения 109489-118124; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866], клонированной в производное плазмиды pNEB193 (с делетированным фрагментом AatII-PvuII). Она фланкирована сайтами AscI и включает в себя BamHI-фрагменты HVT I, S, а также 1337 пар оснований фрагмента G и 1177 пар оснований фрагмента F. Вставляли в сайт XhoI внутри открытой рамки считывания HVT UL54.5 [положения 111240/111241; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc. # AF291866, между аминокислотными остатками 21 и 22] 2 элемента: экспрессирующую кассету, состоящую из промотора IE mCMV, классического типа IBFV F52/70, штамма Faragher, гена вирусного белка 2 (VP2) и сигнала полиаденилирования SV40 с последующим SalI-HindIII-фрагментом 3563 пар оснований из ILTV, NVSL штамм для экспериментального заражения, Лот # 83-2 [положения10532-14094; Wild et al., Virus Genes 12: 104-116 (1996); Acc.# U28832], кодирующие полноразмерные гены гликопротеина D (gD) и гликопротеина I (gI), а также неполные кодирующие области из гликопротеина E (аминокислоты 1-101) и ORF5 (аминокислоты 734-985). Гены VP2 IBDV, gD ILTV и gI ILTV транскрибируются в противоположном направлении относительно гена UL54.5 HVT.

Субгеномный клон 672-01.A40

Плазмида 672-01.A40 содержит 14731 пар оснований области геномной ДНК HVT, полученной из уникальной длинной области [положения 96095-110825; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc.# AF291866], клонированной в производную плазмиды pNEB193. Эта область включает BamHI-фрагменты HVT G, J и 1281 пар оснований K2.

Субгеномный клон 672-07.C40

Плазмида 672-07.C40 содержит 12520 пар оснований области геномной ДНК HVT, полученной из уникальной длинной области [положения 116948-129467; Afonso et al., 2001, см. выше; Acc.# AF291866], клонированной в производное плазмиды pNEB193. Эта область включает BamHI-фрагменты HVT F, O и 2620 пар оснований A.

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ CaCl₂-ТРАНСФЕКЦИИ:

Вторичные CEF высевают на 6-луночные культуральные планшеты и инкубируют при 38°С с 5% СО₂ в течение 24 часов до образования конфлюэнтного монослоя. Для каждой лунки общее количество 0,5 мкг космидной или плазмидной ДНК смешивали в буфере Hepes и добавляли по каплям 125 мМ CaCl₂ до тех пор, пока не происходило осаждение. Эту смесь добавляли к монослою клеток CEF и инкубировали в течение 2-3 часов. Супернатант удаляли и добавляли наложением слоя 15% глицерин и выдерживали на клетках в течение 1 минуты. Затем его удаляли, промывали PBS и добавляли свежую культуральную среду, и клетки инкубировали в течение 5 дней. Затем клетки собирали трипсинизацией, и клетки из отдельных планшетов высевали на свежие монослои клеток CEF в 10см-планшетах и инкубировали до достижения 50-90% CPE. Затем амплифицированные трансфецированные клетки собирали трипсинизацией, и разведения от 10^-2 до 10^-4 высевали на 10см-планшеты с монослоем CEF и инкубировали. На следующий день планшеты были покрыты агаром, и несколько отдельных бляшек HVT/ILTV/IBDV выделяли и амплифицировали на CEF. Каждый вирусный материал очищали из бляшек во второй раз, заражая конфлюэнтные монослои CEF на 10см-планшетах с использованием очищенного материала первого раунда, разбавленного до 10^-2-10^-4, и инкубационных клеток. На следующий день планшеты были покрыты агаром, и несколько отдельных бляшек HVT/ILTV/IBDV выделяли и амплифицировали на CEF.

ПРИМЕР 3

РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВИРУСНЫЙ МАТЕРИАЛ HVT/ILTV/IBDV ЯВЛЯЕТСЯ ФЕНОТИПИЧЕСКИ СТАБИЛЬНЫМ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКОВ ILT И IBDV

ПОСЛЕ СЕРИИ ПАССАЖЕЙ В ТКАНЕВОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ.

Три конструкции, одна из которых содержит HVT/IBDV/ILT 1386-134,1-2, вторая содержит HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1, и третья содержит HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7, последовательно пассировали больше, чем 14 раз на вторичных клетках CEF и оценивали на экспрессию вставленных генов ILTV и IBDV с помощью иммунофлуоресцентного анализа. Четвертую конструкцию, обозначенную HVT/ILT/IBDV 484.1-1A3A3, последовательно пассировали более чем 15 раз на вторичных клетках CEF и оценивали на экспрессию вставленных генов ILTV и IBDV с помощью иммунофлуоресцентного анализа [см. Таблицы 1 и 2 ниже].

Генерация материала для пассирования в тканевой клеточной культуре:

Для каждого пассажа в тканевой клеточной культуре монослои вторичных CEF, которые высевали на 10см-чашку, инокулировали 50-100 мкл вирусного материала, затем инкубировали при 38°С, 5% СО₂ в течение 2-5 дней до тех пор, пока не проявлялись СРЕ. Затем клетки собирали путем трипсинизации, пассаж 1 (P1). Процесс повторяли для получения материала для дополнительных пассажей (P2 - P15).

Анализ фенотипической стабильности:

На шестилуночные планшеты высевали монослоем вторичные CEF. Клетки инокулировали вирусным материалом, собранным из пассажей разных уровней: P0 - P15, или только одним разбавителем. Планшеты инокулировали при нескольких разведениях для достижения счетного количества бляшек на лунку и инкубировали при 38°С, 5% СО₂. После пятидневной инкубации супернатант декантировали и монослои CEF фиксировали 100% метанолом в течение 10-15 минут при 15-30°С. Метанол декантировали и клетки оставляли на воздухе сушиться перед окрашиванием с помощью gD ILTV (MAB # 6), gI ILTV (поликлональные кроличьи анти-gI) и VP2 IBDV (MCA GDV-R63) первичных антител. После 2-часовой стадии блокировки (5% обезжиренного сухого молока в PBS), 2 мл на лунку, добавляли в чашки и инкубировали на качающейся платформе при 15-30°С, первичные антитела разводили соответствующим образом и добавляли по 2 мл на лунку, затем инкубировали при 15-30°С в течение 3 часов на качающейся платформе. После инкубации с антителаи планшеты трижды промывали PBS. FITC-меченый раствор вторичных антител (кроличьи антимышиные или козьи антикроличьи) готовили с разведением 1:100 и в каждую лунку добавляли 2 мл. Планшеты инкубировали в течение 1 часа при 15-30°С на качающейся платформе. После инкубации планшеты трижды промывали PBS и исследовали в условиях флуоресцентного анализа. Бляшки, окрашенные ILT-антителами, наблюдали по положительной (+) или отрицательной (-) флуоресценции. Флуоресцирующие бляшки, окрашенные первичным антителом к белку VP2 IBDV, подсчитывали. Затем планшеты исследовали под световым микроскопом, и бляшки повторно подсчитывали. Процент флуоресцирующих бляшек на каждом уровне пассажа приведен ниже в Таблицах 1 и 2, а также качественное определение экспрессии белка VP2 IBDV и стабильность вектора.

ТАБЛИЦА 1

СТАБИЛЬНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ПОСЛЕ ПАССАЖА В ТКАНЕВОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ

Экспрессия Номер вируса Описание Сайт вставки Уровень пассажа ILT
gD ILT
gI IBDV VP2 1386-48.3.1.7 (h)IE-VP2/
ILTgDgI US2 P0 + + 100% P5 + + 100% P9 + + 100% P14 + + 96% 1386-48.1.1.1 (c)β-act-VP2/ ILTgDgI US2 P0 + + 100% P5 + + 100% P10 + + 97% P15 + + 98% 1386-134.1-2 (m)IE-VP2/
ILTgDgI US2 P0 + + 100% P5 + + 100% P10 + + 98% P15 + + 99% 484.1-1A3A3 (m)IE-VP2/
ILTgDgI UL54.5 P0 + + 100% P4 + + 100% P10 + + 97% P15 + + 94%

ТАБЛИЦА 2

ОПИСАНИЕ ПЛАЗМИДЫ ДЛЯ ВСТАВКИ/СВОЙСТВА ВЕКТОРА

Название/
Обозначение Сайт вставки Плазмида для вставки IBDV промотор IBDV
экспрессия Стабильность HVT/ILT/IBDV
1386-48.1.1.1 US2 1333-85.B6 куриный
β-актин сильная стабильная HVT/ ILT/ IBDV
1386-48.3.1.7 US2 1386-04.4#1 hCMV IE сильная Стабильная HVT/IBDV/ ILT
1386-134.1-2 US2 228509-ILT-435Vec6 mCMV IE сильная стабильная HVT/IBDV/ILT 484 UL54.5 484-1050-2641-10859 mCMV IE сильная стабильная

ПРИМЕР 4

Рекомбинантный вирусный материал HVT/ILTV/IBDV является фенотипически стабильным для экспрессии белков ILT и IBDV после вакцинации и извлечения из птиц

Три вакцины, одна из которых содержит HVT/ILT/IBDV 1386-134,1-2, другая содержит HBT/ILT IBDV 1386-48.3.1.7, и третья содержит HVT/ILT/IBDV 484,1-1A3A3, использовали для инокуляции трех групп из пятнадцатидневных (15) цыплят с помощью подкожного введения. Четвертую группу птиц вакцинировали только разбавителем, она служила группой отрицательного контроля. Образцы селезенки собирали через семь дней после инокуляции и обрабатывали для выделения вируса на клетках куриных эмбриональных фибробластов. Инокулированные клетки пассировали два раза, чтобы обеспечить наработку любого присутствующего вируса. Когда цитопатический эффект был четко виден, монослои собирали и материал замораживали. Этот материал использовали для инокуляции вторичных CEF, а бляшки анализировали на экспрессию белков gD ILTV, gI ILTV и VP2 IBDV с помощью анализа иммунофлюоресценции (IFA) с антителами, специфичными для каждого белка.

Анализ фенотипической стабильности:

На шестилуночные планшеты высевали монослоями вторичные CEF. Клетки инокулировали собранным материалом вирусного изолята или только разбавителем. Планшеты инокулировали при нескольких разведениях для достижения счетного количества бляшек на лунку и инкубировали при 38°С, 5% СО₂. После пятидневной инкубации супернатант декантировали и монослои CEF фиксировали 100% метанолом в течение 10-15 минут при 15-30°С. Метанол декантировали и клетки оставляли на воздухе сушиться перед окрашиванием с помощью gD ILTV (MAB # 6), gI ILTV (поликлональные кроличьи анти-gI) и VP2 IBDV (MCA GDV-R63) первичных антител. После 2-часовой стадии блокирования (5% обезжиренное сухое молоко в PBS), 2 мл на лунку, добавляли в чашки и инкубировали на качающейся платформе при 15-30°С, первичные антитела разбавляли по мере необходимости и добавляли по 2 мл на лунку, затем инкубировали при 15-30 °С в течение 3 часов на качающейся платформе. После инкубации с антителами планшеты трижды промывали PBS. FITC-меченый раствор вторичных антител (кроличьи антимышиные или козьи антикроличьи) готовили с разведением 1:100 и в каждую лунку добавляли 2 мл. Планшеты инкубировали в течение 1 часа при 15-30°С на качающейся платформе. После инкубации планшеты трижды промывали PBS и исследовали в условиях флуоресценции. Бляшки, окрашенные антителами ILTV, наблюдали по положительной (+) или отрицательной (-) флуоресценции. Подсчитывали флуоресцирующие бляшки, окрашенные первичным антителом к VP2 IBDV. Затем планшеты исследовали под световым микроскопом и повторно пересчитывали бляшки. Процент флуоресцирующих бляшек на каждом уровне пассажа представлен в Таблице 3А ниже. Это исследование по существу повторяли, за исключением того, что вирус извлекали через две недели после инокуляции, см. Таблицу 3В ниже.

ТАБЛИЦА 3А

СТАБИЛЬНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ПОСЛЕ ПАССАЖА В ПТИЦАХ

Вакцина Описание вставки Сайт вставки Доза
(БОЕ) Процент Экспрессии ILT gI ILT gD IBDV VP2 HVT/ILT/IBDV
1386-134.1-2 (p10) (m)IE-VP2/
ILTgDgI US2 7737 100% 100% 90% HVT/ILT/IBDV
1386-48.3.1.7 (p10) (h)IE-VP2/
ILTgDgI US2 7003 100% 100% 89% HVT/IBDV/ILT
484.1-1A3A3 (p10) (m)IE-VP2/
ILTgDgI UL54.5 7793 100% 100% 97% Разбавитель Не доступно Не доступно 0 Не доступно Не доступно Не доступно

ТАБЛИЦА 3В

ВИРУС, ИЗВЛЕЧЕННЫЙ ЧЕРЕЗ 2 НЕДЕЛИ ПОСЛЕ ИНОКУЛЯЦИИ

Вакцина Описание вставки Сайт вставки Доза
(БОЕ) Процент экспрессии ILT gI ILT gD IBDV VP2 HVT/ILT/IBDV
1386-48.1.1.1 (p10) (h)IE-VP2/
ILTgDgI US2 4785 100% 92% 42%

ПРИМЕР 5

НЕУДАЧНЫЕ КОНСТРУКЦИИ

Рекомбинантные вирусные вакцины, по определению, предназначены для переноса и экспрессии чужеродных генов. Если транскрипция и экспрессия этих чужеродных генов обеспечивают недостаток роста рекомбинантного вируса относительно родительского вируса, то эти гены могут быть потеряны во время производства вакцины. По этой причине кандидаты вакцины должны быть проверены как на генетическую, так и на фенотипическую стабильность.

Кроме того, Министерством сельского хозяйства США были установлены используемые критерии защиты и кодифицированы в Кодексе федеральных правил, глава 9, часть 113 (9CFR 113) «Стандартные требования к животным продуктам». Живые вирусные вакцины должны обеспечивать защиту по меньшей мере на 90%, в случае NDV, IBDV и ILTV и по меньшей мере 80% в случае MDV, от клинических признаков или поражений, связанных с заболеванием, для получения лицензии.

Генетическую стабильность вирусных конструкций определяли с помощью Саузерн-блот-анализа после определенного количества пассажей в тканевой клеточной культуре, при наивысшем ожидаемом уровне производства вакцины и сравнивали с ДНК из исходного изолята. ДНК, извлеченная из вирусного материала, будет гидролизована ферментами рестрикции, перенесена на мембрану и гибридизована с зондами, предназначенными для обнаружения присутствия вставленных генов. Генетическая стабильность также может быть определена с помощью ПЦР-анализа. ПЦР-праймеры, предназначенные для отжига ДНК внутри чужеродной ДНК или во фланкированной области, могут быть использованы для амплификации фрагментов известного размера из матриц вирусной ДНК как до, так и после пассажа в тканевой культуре.

Фенотипическую стабильность вирусных конструкций определяли путем иммунологического окрашивания отдельных вирусных бляшек антителами, направленными против белковых продуктов этих вставленных чужеродных генов. Защита, обеспечиваемая этими рекомбинантными вакцинами, основана на экспрессии этих белковых продуктов, чтобы стимулировать иммунную систему животных. В большинстве случаев, если процент вирусов с положительным окрашиванием для экспрессии чужеродного белка, снижался ниже 90%, то это, вероятно, отрицательно сказывалось на способности вирусов расти в тканевой клеточной культуре и, следовательно, эта вакцина непригодна в качестве вакцины-кандидата.

Из Таблиц 4А и 4В ниже легко заметить, что большинство конструкций rMDV_np не удовлетворяют этим двум критериям, а именно стабильности с относительно сильной экспрессией антигена и/или эффективности. В Таблице 4А представлена серия рекомбинантных конструкций HVT с множеством гетерологичных вставок, в которых одна из гетерологичных вставок кодирует антиген IBDV. Как показывают результаты, все конструкции в Таблице 4А не удовлетворяли критериям стабильности с относительно сильной экспрессией антигена и/или критериями эффективности.

ТАБЛИЦА 4А

ДВОЙНЫЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВИРУСНЫЕ КОНСТРУКЦИИ HVT И IBDV:

Название/
Обозначение Сайт вставки Вставка IBDV промотор IBDV
экспрессия Стабильность HVT 003 UL43 [IBDV] полипротеин
[Ecoli] Bgal PRV gX Слабая Стабильная HVT 016 UL43 [IBDV] VP2
[Ecoli] Bgal hCMV IE Сильная Нестабильная HVT 056 US2 [MDV] gA, gB
[IBDV] VP2 hCMV IE Сильная Нестабильная HVT 060 US2 [MDV] gA, gB
[IBDV] VP2, 16кДа ORF IE-VP2,
gX-16dk ORF Сильная Нестабильная HVT 137 US2
UL54.5 [MDV] gA, gB, gC
[IBDV] VP2 [BHV] VP8
(оболочечный) Сильная стабильная HVT 143 US2
US2
UL54.5 [MDV] gA, gB, gD
[NDV] HN, F
[IBDV] VP2 [BHV] VP8
(оболочечный) Слабая Нестабильная HVT/NDV/IBDV
1312-92 US2
UL7/UL8 [IBDV] VP2
[NDV] F hCMV IE Сильная Нестабильная HVT/NDV/IBDV
1312-94 US2
UL7/UL8 [IBDV] VP2
[NDV] F hCMV IE Сильная Нестабильная HVT/NDV/IBDV
1312-95 US2
UL7/UL8 [IBDV] VP2
[NDV] F hCMV IE Сильная Нестабильная HVT/NDV/IBDV
1329-54 US2 [IBDV] VP2
[NDV] F FHV gB Сильная Нестабильная

В Таблице 4В ниже представлена серия из одиннадцати рекомбинантных конструкций HVT и одна одиночная конструкция NAHV, каждая из которых содержит множественные гетерологичные вставки, в которых по меньшей мере одна из гетерологичных вставок кодирует либо NDV, либо антиген ILTV. Как показали результаты, все конструкции в Таблице 4B не удовлетворяли критериям стабильности при относительно сильной экспрессии антигена и/или критериям эффективности.

ТАБЛИЦА 4B

ДВОЙНЫЕ РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВИРУСНЫЕ КОНСТРУКЦИИ HVT И NAHV:

Название Сайт вставки Вставка Стабильность NDV Защита MDV
защита ILT
защита HVT 048 US2 [MDV] gA, gB
[NDV] F стабильна Хорошая *защитная -- HVT 049 US2 [MDV] gA, gB
[NDV] HN стабильна Слабая
(< 20%) Не тестировали -- HVT 050 US2 [MDV] gA, gB
[NDV] F, HN стабильна Хорошая *защитная -- HVT 053 US2 [MDV] gA, gB
[ILT] gB, gD Нестабильна -- Не тестировали нет HVT 078 US2 [MDV] gA, gB, gD
[NDV]HN, F Нестабильна Не тестировали Не тестировали -- HVT 079 US2 [MDV] gA, gB, gD
[ILT] gB, gD Нестабильна -- Не тестировали (71-100%) HVT 106 US2 [MDV]gA,gB, gD
[NDV]HN, F Стабильна **неизвестно Не тестировали -- HVT 123 UL54.5+US2 [ILT] gD, gB/UL54.5
[MDV] gA, gD, gB/US2 Нестабильна -- Не тестировали Не тестировали HVT 125 UL54.5+US2 [ILT] gDgI, gB/UL54.5
[MDV] gA, gD, gB/US2 Нестабильна -- Не тестировали Не тестировали HVT 128 UL54.5+US2 [NDV] HN, F /UL54.5
[MDV] gA, gD, gB/US2 Нестабильна Не тестировали Не тестировали -- HVT 139 UL54.5+US2 [ILT] gDgI /UL54.5
[MDV] gA, gD, gB/US2 Нестабильна -- Не тестировали Не тестировали HVY-198 (NAHV) US2* (MDV) [NDV] F +
[ILT] gD, gI Нестабильна

*Защитные, но впоследствии неудавшиеся в полевых исследованиях **Только 75% птиц были сероконвертированы в NDV F

ПРИМЕР 6

ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

В иллюстративных конструкциях rHVT использовали следующие последовательности. Приведенные ниже кодирующие последовательности включают в себя отдельные стоп-кодоны, которые могут быть легко заменены альтернативными стоп-кодонами без изменения свойств белковых антигенов, которые кодируют кодирующие последовательности.

SEQ ID NO 1: Гликопротеин gD ILTV (1134 п.о.)

atggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaa

SEQ ID NO 2: Гликопротеин gD ILTV (377 аминокислот)

MDRHLFLRNAFWTIVLLSSFASQSTAAVTYDYILGRRALDALTIPAVGPYNRYLTRVSRGCDVVELNPISNVDDMISAAKEKEKGGPFEASVVWFYVIKGDDGEDKYCPIYRKEYRECGDVQLLSECAVQSAQMWAVDYVPSTLVSRNGAGLTIFSPTAALSGQYLLTLKIGRFAQTALVTLEVNDRCLKIGSQLNFLPSKCWTTEQYQTGFQGEHLYPIADTNTRHADDVYRGYEDILQRWNNLLRKKNPSAPDPRPDSVPQEIPAVTKKAEGRTPDAESSEKKAPPEDSEDDMQAEASGENPAALPEDDEVPEDTEHDDPNSDPDYYNDMPAVIPVEETTKSSNAVSMPIFAAFVACAVALVGLLVWSIVKCARS

SEQ ID NO 3: Гликопротеин gI ILTV (1089 п.о.)

Atggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtga

SEQ ID NO 4: Гликопротеин gI ILTV (362 аминокислоты)

MASLLGTLALLAATLAPFGAMGIVITGNHVSARIDDDHIVIVAPRPEATIQLQLFFMPGQRPHKPYSGTVRVAFRSDITNQCYQELSEERFENCTHRSSSVFVGCKVTEYTFSASNRLTGPPHPFKLTIRNPRPNDSGMFYVIVRLDDTKEPIDVFAIQLSVYQFANTAATRGLYSKASCRTFGLPTVQLEAYLRTEESWRNWQAYVATEATTTSAEATTPTPVTATSASELEAEHFTFPWLENGVDHYEPTPANENSNVTVRLGTMSPTLIGVTVAAVVSATIGLVIVISIVTRNMCTPHRKLDTVSQDDEERSQTRRESRKFGPMVACEINKGADQDSELVELVAIVNPSALSSPDSIKM

SEQ ID NO 5: IBDV VP2 (1362 п.о.)

atgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgtctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcagactagtgagtcggagtctcacagtgaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatgggttgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaaattgggaatgtcctggtaggggaaggggtcactgtcctcagcctacccacatcatatgatcttgggtatgtgaggcttggtgaccccattcccgctatagggcttgacccaaaaatggtagctacatgcgacagcagtgacaggcccagagtctacaccataactgcagccgatgattaccaattctcatcacagtaccaaccaggtggggtaacaatcacactgttctcagccaacattgatgctatcacaagcctcagcattgggggagagctcgtgtttcaaacaagcgtccaaggccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcaccagagctgtggccgcagataatgggctgacggccggcaccgacaatcttatgccattcaatcttgtcattccaaccaatgagataacccagccaatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaaaagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatccgtcgttacggtcgctggggtgagtaacttcgagctgattccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacagaatacggccgatttgacccaggagccatgaactacacaaaattgatactgagtgagagggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacactgattttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggctataaggaggtaa

SEQ ID NO 6: IBDV VP2 (453 аминокислоты)

MTNLQDQTQQIVPFIRSLLMPTTGPASIPDDTLEKHTLRSETSTYNLTVGDTGSGLIVFFPGFPGSIVGAHYTLQSNGNYKFDQMLLTAQNLPASYNYCRLVSRSLTVRSSTLPGGVYALNGTINAVTFQGSLSELTDVSYNGLMSATANINDKIGNVLVGEGVTVLSLPTSYDLGYVRLGDPIPAIGLDPKMVATCDSSDRPRVYTITAADDYQFSSQYQPGGVTITLFSANIDAITSLSIGGELVFQTSVQGLVLGATIYLIGFDGTAVITRAVAADNGLTAGTDNLMPFNLVIPTNEITQPITSIKLEIVTSKSGGQAGDQMSWSASGSLAVTIHGGNYPGALRPVTLVAYERVATGSVVTVAGVSNFELIPNPELAKNLVTEYGRFDPGAMNYTKLILSERDRLGIKTVWPTREYTDFREYFMEVADLNSPLKIAGAFGFKDIIRAIRR

SEQ ID NO 7: промотор gD ILTV (527 п.о.)

aaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgct

SEQ ID NO 8: промотор gI ILTV (264 п.о.)

tgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagc

SEQ ID NO 9: ILTV вставка (3563 п.о.)

tcgacggcagagtcgcagacgcccctattggacgtcaaaattgtagaggtgaagttttcaaacgatggcgaagtaacggcgacttgcgtttccaccgtcaaatctccctatagggtagaaactaattggaaagtagacctcgtagatgtaatggatgaaatttctgggaacagtcccgccggggtttttaacagtaatgagaaatggcagaaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgctatggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagcatggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtgattaagtctgaatgtggctctccaatcatttcgattctctaatctcccaatcctctcaaaaggggcagtatcggacacggactgggaggggcgtacacgatagttatatggtacagcagaggcctctgaacacttaggaggagaattcagccggggagagcccctgttgagtaggcttgggagcatattgcaggatgaacatgttagtgatagttctcgcctcttgtcttgcgcgcctaacttttgcgacgcgacacgtcctctttttggaaggcactcaggctgtcctcggggaagatgatcccagaaacgttccggaagggactgtaatcaaatggacaaaagtcctgcggaacgcgtgcaagatgaaggcggccgatgtctgctcttcgcctaactattgctttcatgatttaatttacgacggaggaaagaaagactgcccgcccgcgggacccctgtctgcaaacctggtaattttactaaagcgcggcgaa

SEQ ID NO 10: промотор IE mCMV (1391 п.о.)

aactccgcccgttttatgactagaaccaatagtttttaatgccaaatgcactgaaatcccctaatttgcaaagccaaacgccccctatgtgagtaatacggggactttttacccaatttcccacgcggaaagccccctaatacactcatatggcatatgaatcagcacggtcatgcactctaatggcggcccatagggactttccacatagggggcgttcaccatttcccagcataggggtggtgactcaatggcctttacccaagtacattgggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcaagcacactgagtcaaatgggactttccactgggttttgcccaagtacattgggtcaatgggaggtgagccaatgggaaaaacccattgctgccaagtacactgactcaatagggactttccaatgggtttttccattgttggcaagcatataaggtcaatgtgggtgagtcaatagggactttccattgtattctgcccagtacataaggtcaatagggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgcgtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaataggggatgagtcaatgggaaaaacccattggagccaagtacactgactcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaatagggggtgagtcaacaggaaagttccattggagccaagtacattgagtcaatagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcacgtatactgagtcattagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaataggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgagtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacaaaaggtcaatagggggtgagtcaatgggtttttcccattattggcacgtacataaggtcaataggggtgagtcattgggtttttccagccaatttaattaaaacgccatgtactttcccaccattgacgtcaatgggctattgaaactaatgcaacgtgacctttaaacggtactttcccatagctgattaatgggaaagtaccgttctcgagccaatacacgtcaatgggaagtgaaagggcagccaaaacgtaacaccgccccggttttcccctggaaattccatattggcacgcattctattggctgagctgcgttctacgtgggtataagaggcgcgaccagcgtcggtaccgtcgcagtcttcggtctgaccaccgtagaacgcagagctcctcgctgcag

SEQ ID NO 11: промотор куриного β-актина (692 п.о.)

(Замечание: «nnn» означает сомнительную последовательность в GC-богатой области. Может быть 3-5 «g's»)

cgcgccggatcagatctccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcgggggggggggnnncgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgcgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagcggcaggaaggaaatgggcggggagggccttcgtgcgtcgccgcgccgccgtccccttctccctctccagcctcggggctgtccgcggggggacggctgccttcgggggggacggggcagggcggggttcggcttctggcgtgtgaccggcggctctagagcctctgctaaccatgttcatgccttcttctttttcctacagctcctgggcaacgtgctggttattgtgctgtctcatcattttggcaaagaattgca

SEQ ID NO 12: промотор IE hCMV, из штамма AD169 (301 п.о.)

ggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatag

SEQ ID NO 13: FHV US-9 сигнал полиаденилирования (55 п.о.)

caataaacatagcatacgttatgacatggtctaccgcgtcttatatggggacgac

SEQ ID NO 14: HSV TK сигнал полиаденилирования (370 п.о.)

gatccataattgattgacgggagatgggggaggctaactgaaacacggaaggagacaataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacgggtgttgggtcgtttgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggccaatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcagccaacgtcggggcggcaggccctgccatagccactggccccgtgggttagggacggggtcccccatggggaatggtttatggttcgtgggggttattattttga

SEQ ID NO 15: 228509-ILT-435Vec6 (mCMV IEpro-VP2-SV40pA/ILT/HVT) (14113 п.о.)

(кассеты генов IBDV+ILT в HVT EcoRI#7-фрагменте. Вирус no. HVT/IBDV/ILT 1386-134)

gaattccagactaaatgccccggcccaatttgtcaagtgtgcagtcacggaggcgtcgaccgtgtccccggcattaaacaggaaagcgttaaagtttttgaatgttaggtcacaggtacaaacataaatgtttgtacaaacaggtaacaggtacaaacataaatgccccggcataaatgtcccttacggcggatcgaaacgacattaggcatactcgggtaccattttgcattccgatcagcacggatgaaattaggcaggaatgcggtttatattatgcggcattggacaaacgatatggcattgattggcagtttatgaatgtcttcatgttgggcgtaaacggattcctattggttcagaagacaacgacgatatatttagagagaaaaagctacccagcataggataaacacacattgagcattgagagacataggtatcggtatggatgggaaaactacacacgtgaacaccaaacgacttatatactcgagcggtgatactactgagcaagaatgcactgcatctgagccactgaatgaagactgtgatgaaaatgtgaccatcgatggaattggagaagaatatgcgcagttcttcatgtccccgcaatgggtcccaaatctacatcgcttgagcgaggataccaaaaaggtataccgatgtatggtttccaacagactcaattattttccctattatgaggcgttcaggcggtctttgtttgatatgtatatgctaggtcggttggggcgtcgacttaagcgatctgactgggagactattatgcatctgtcaccaacgcaaagtcggcgtctacatagaactttaagatttgtggagcgtagaattatcccatctaacagttatatacgcacatcgggccacgttccgccttcgagggcacttccgacagatacgaatttaaagatggatgaataattaaattggaaagagtaactacattaatcgagcgtcatgacggcgtcccgtgaaaatgggaattttctactcgaaacaccgtgacatttgacagacctggaattgttattctgatatatagtgggtgtgtctggccggcaacatacataatgtgcatgcgaaaccactttttcagtgtacgctgacattgtgcaacacggaggggtagcatctacatacaatatatgttgattaatgattggagaaaaaactatgcagctcgccgatcatatggctaactcgccttcgtctatatggcggaccccgcgggaaaaatcgacgtaccatctgatttacaacaccagtaatgaacatgtcgcatccctgcccagatctgtgcgcccattggcgcggatcgttgtgaatgccgccgaaacacttcaggtcggtatgagagccgggaggccgccatcagcaggagtttggcgagaggtgtttgatagaatgatgacagccttccgtgaccacgagcctactgcgacatttaatgctgcaaatcccattagaaaaatggtcgagacagttctacagaataatgaagagcccccgcggacgcatgctgaaatgggtaatcgccttatgaacattatgtactggtgttgcttgggacacgcaggacaatgctcgatatggcagttgtacgagacgaatcaggccattttaagtttattagatgaagtggttatcggcacaacaaatcccttttgcaccctcgagcaatactggaagccattatgcaccgcaatcgccaacaaggggacctcatcgcttgttgaggatgccaaagtggccgagtacctggttagcatgcgcaaattgatataacataggcacgctctgatgttacagaccacaataccgcatacatttattgtaaggttgttaataaaggtttattctatgtaagactacaatactttcgacattgcttgtatacatattaaatactttctcaagttcctattacataaaatgggatctatcattacattcgttaagagtctggataattttactgtttgccagcttcgatcttggaacgtactgtggatagtgccttacttggaatcgtgaaaatttgaaacgtccattatttggatatcttccggttgtcccatatcccgccctggtaccgctcggataccttgcccgtatggattcgtattgacagtcgcgcaatcggggaccaacaacgcgtgggtccacactcattcggaaattttccgatgattctgaatatttattgccgctcgttacgagtcgttggacatatctgtaatacatttcttcttctgaaggatcgctgcacatttgatctatacattggccaggatgttcaagtctcagatgttgcattctggcacagcacaactttatggcatttccgatgtaatcgtccggcagccctgggggagttctatattcgcatattgggatggtaaggacaatagcagatctcgcaacctccagggaggctataataacgtttttaaaggatggatttctcataaaaatctgtcgcaaattacactgagaatatcctttactagcgccgattgagagcatcgtcgtccaattttctaaatggaaagaaaacaaggcgggcaagagtgttccaaacattttcattttcggcgaatctctcaaatcccatggcgtgcaattgattgcaaaattggcacttccgttcacgtttgtatctccaaactctaagacacttttaattgaaaaactacgttctagtgtggaaagaaacctataggcagaccatagaactatttgacaccacatatctttttgtatgtcaaactgaccatgatcgtatgttgctgaatgcactagggcaattcgctcgcgcgactccatacattgaataattccacacgtcagctcatcggttagcaaggtccagtagttgaagtcatttatttttccccgcggctggccaaatctacctctgggaatatccaagttgtcgaatatgatcgcaccggctctggtcatggtgaaggaactgtagcataaagacgcaggtatcataggggtaatatttttttattcactcacatactaaaagtaacgcatattagcaccatgtatgggctatcaattgacatttgcgtagcactacatcacgattatgtacaacataatgggacaacatatggcaagtagatgcaatttcctcacactagttgggtttatctactattgaattttcccctatctgtgatacacttgggagcctctacaagcatattgccatcatgtacgtttttatctactgtcttaacgcccatgggaacggaggcgtcgtcgtcatgtattggacggcaacataggcagcaacacaaattgcgtttaggtggggtgcatgtggactcgataccaagcccctgcagctggggaacgtctggtggagagccgataatttgatatacgcacgccatattactgtcgttgaagtacgccttatcttctatgttttcaaatttaggttcccaagtggacgtgagaagtgtttgtatctcacatggaatggcccaaggcattccagcccaggtgcctggtactttaatggcaaacaaacgttttggtagaggtattgattctattgcagttctgcagatatctgcagccccgagtatccacaggctatacgatacgttatcggaggcaagctgcggccgctctagaactagtggatcccccgggctgcagcccaatgtggaattcgcccttgcacattgttactcctgcatcttaaaaatatatcctgtagtaattttcacagcaatgtcataacatcatctcgctaaagaatgacctgggattggagaagtaatgaatatttgcaaccaatgcattgaataaactaacattaaacgaattcactagtggatcccccaactccgcccgttttatgactagaaccaatagtttttaatgccaaatgcactgaaatcccctaatttgcaaagccaaacgccccctatgtgagtaatacggggactttttacccaatttcccacgcggaaagccccctaatacactcatatggcatatgaatcagcacggtcatgcactctaatggcggcccatagggactttccacatagggggcgttcaccatttcccagcataggggtggtgactcaatggcctttacccaagtacattgggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcaagcacactgagtcaaatgggactttccactgggttttgcccaagtacattgggtcaatgggaggtgagccaatgggaaaaacccattgctgccaagtacactgactcaatagggactttccaatgggtttttccattgttggcaagcatataaggtcaatgtgggtgagtcaatagggactttccattgtattctgcccagtacataaggtcaatagggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgcgtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaataggggatgagtcaatgggaaaaacccattggagccaagtacactgactcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaatagggggtgagtcaacaggaaagttccattggagccaagtacattgagtcaatagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcacgtatactgagtcattagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaataggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgagtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacaaaaggtcaatagggggtgagtcaatgggtttttcccattattggcacgtacataaggtcaataggggtgagtcattgggtttttccagccaatttaattaaaacgccatgtactttcccaccattgacgtcaatgggctattgaaactaatgcaacgtgacctttaaacggtactttcccatagctgattaatgggaaagtaccgttctcgagccaatacacgtcaatgggaagtgaaagggcagccaaaacgtaacaccgccccggttttcccctggaaattccatattggcacgcattctattggctgagctgcgttctacgtgggtataagaggcgcgaccagcgtcggtaccgtcgcagtcttcggtctgaccaccgtagaacgcagagctcctcgctgcaggcggccgctctagaactcgtcgatcgcagcgatgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgtctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcagactagtgagtcggagtctcacagtgaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatgggttgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaaattgggaatgtcctggtaggggaaggggtcactgtcctcagcctacccacatcatatgatcttgggtatgtgaggcttggtgaccccattcccgctatagggcttgacccaaaaatggtagctacatgcgacagcagtgacaggcccagagtctacaccataactgcagccgatgattaccaattctcatcacagtaccaaccaggtggggtaacaatcacactgttctcagccaacattgatgctatcacaagcctcagcattgggggagagctcgtgtttcaaacaagcgtccaaggccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcaccagagctgtggccgcagataatgggctgacggccggcaccgacaatcttatgccattcaatcttgtcattccaaccaatgagataacccagccaatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaaaagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatccgtcgttacggtcgctggggtgagtaacttcgagctgattccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacagaatacggccgatttgacccaggagccatgaactacacaaaattgatactgagtgagagggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacactgattttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggctataaggaggtaagcttcagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgcagtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattataagctgcaataaacaagttaacaacaacaattgcattcattttatgtttcaggttcagggggaggtgtgggaggttttttcggatcctctagagtcgacggcagagtcgcagacgcccctattggacgtcaaaattgtagaggtgaagttttcaaacgatggcgaagtaacggcgacttgcgtttccaccgtcaaatctccctatagggtagaaactaattggaaagtagacctcgtagatgtaatggatgaaatttctgggaacagtcccgccggggtttttaacagtaatgagaaatggcagaaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgctatggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagcatggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtgattaagtctgaatgtggctctccaatcatttcgattctctaatctcccaatcctctcaaaaggggcagtatcggacacggactgggaggggcgtacacgatagttatatggtacagcagaggcctctgaacacttaggaggagaattcagccggggagagcccctgttgagtaggcttgggagcatattgcaggatgaacatgttagtgatagttctcgcctcttgtcttgcgcgcctaacttttgcgacgcgacacgtcctctttttggaaggcactcaggctgtcctcggggaagatgatcccagaaacgttccggaagggactgtaatcaaatggacaaaagtcctgcggaacgcgtgcaagatgaaggcggccgatgtctgctcttcgcctaactattgctttcatgatttaatttacgacggaggaaagaaagactgcccgcccgcgggacccctgtctgcaaacctggtaattttactaaagcgcggcgaagcttagcttgcctccgattctagcattacatagccggtcagtagatcctgccattcggtagcgcaaccggctacatcttcaaacagtctcacgataaatgcatctctcgttcctgccaatccggaaccgggcataccactcccgcctgccgatttaattctcacaattgggcgatgccggcggggcaaaacgaatgtggatttggcaaaccgacacaggtctgctgtacggactaatatgggcacacccacatcattcttcagatgctccatgcattgttctatgagaaagatccatagggtggaggcagcgtcacgagatcgcccaggcaatcgatcgcattcgtctagtaaagtgacgagagttatcatgcacacacccatgcccacgccttccgaataactggagctgtggaagatcggaaacgtctttttgactgccggtctcgtactactttcgcacaggtgtatacccggacgcgtactatatattttatatcatccaacgtccgaaattacatacgtggcggcgatggaagtagatgttgagtcttcgaaagtaagtgcctcgaatatgggtattgtctgtgaaaatatcgaaagcggtacgacggttgcagaaccgtcgatgtcgccagatactagtaacaatagcttcgataacgaagacttccgtgggcctgaatacgatgtggagataaataccagaaaatctgctaatcttgatcgtatggaatcttcgtgccgtgaacaacgagcggcgtgcgaacttcgaaagtgttcgtgtcctacgtctgccgtgcgcatgcaatacagtattctttcatctctcgctccgggttcagagggtcatgtatatatatgtactagatacggggacgcggaccaaaaaaaatgcatagtgaaggcagtcgttggaggaaagaatcccgggagggaagtggatattttaaaaaccatctcacataaatcaattataaaattaatccatgcctataaatggaaaaatgttgtgtgtatggcaatgcgtgtatatcgttatgatcttttcacatatattgacggagtcggccctatgccccttcaacagatgatctatattcaacgtggactactagaggcgctagcatacatacatgaaaggggcatcattcaccgagacgtaaagacggagaatatattcttggataatcacgaaaatgcagttttgggtgacttcggtgctgcatgccaactaggagattgtatagatacgccccaatgttacggttggagcggaactgtggaaacaaattcgccggaattatctgcacttgatccgtattgcacaaaaacagatatttggagtgccggattggttctatatgagatggcaattaaaaatgtaccattgtttagtaagcaggtgaaaagttcgggatctcagctgagatccataatacggtgcatgcaagtgcatgaactggagtttccccgcaacgattctaccaacctctgtaaacatttcaaacaatatgcggttcgtgtacgaccgccttataccattcctcgagttataagaaatggggggatgccaatggatgttgaatatgtcatttctaaaatgcttacgtttgaccaggagttcagaccttctgctaaggaaatattgaatatgcccctatttactaaggcgccgattaacctgcttaatatcacaccctctgacagtgtctaacggtatacaggcgggagcgggtcgtggcgtcatcatcaccacttgagaatttatattttgaattgttgattgataaattaacctgattcattgagaactgaaacgccatattggtttcttggatatgtctacaacaattagttaaattgctatgttctactgcgagtaacatttgataagttgtaagagacgggcgactcatgtcgaagttgacgaatataaagtacataacgtgtttagaatacccagaatccgaatagtccgcgggggcgtcttctcgcgtgagtaccaaatactgagttgaacttgaaaatgctaaatctgtgacactctttgtgtgatgattattgtcaccacttcgaagatggcttcgacattcatgatgttctggtgtttgtttggaatcgtaatagcgcttgtttcgtccaagtctgacaacaaagaaaatctgaagaattatatcacggataagtcaaccaatattagaatacccacgccattatttgtatcaacggaaaactcttatcccacaaaacatgtaatctacgatgaaaactgtggcttcgctgtactcaatcctataagtgaccccaaatatgtccttttgagccagcttctaatgggaaggcgcaaatatgatgcgacggtcgcgtggtttgttctcggtaaaatgtgtgccagattaatatatttgcgcgaattttataactgctcgacaaatgagccttttggcacatgttctatgagctctcctggatggtgggacaggcgctacgtctcaaccagtttcatttctcgcgacgaattacagctggtttttgcagcgccgtcccgagaattagatggtttatatacgcgcgtagtagttgtcaacggggactttactacggccgatataatgtttaatgttaaagtggcatgtgccttttcaaagactggaatagaagatgatacattatgcaaaccctttcatttctttgccaatgcaacattgcacaatttaaccatgattagatcggtaactcttcgagcgcacgaaagccatttaaaggaatgggtggcacggagaggtggtaacgtccctgcagtgctacttgagtctaccatgtatcatgcatccaatctgcctagaaatttcagggatttctacataaagtctccagatgattataagtataatcacctagatgggccatctgtaatgctcatcactgacagacctagtgaagatttggatgggaggctcgttcaccaaagtgacatttttactactacaagtcctataaaacaggtccggtatgaagagcatcagtcacatacaaagcagtatcctgtaaacaaaatacaagctataatttttttgatagggttaggctcgttcattggaagcatattcgtagttttggtagtatggattatacgcagatattgcaatggagcgcggagtgggggaacgccccccagtcctcgccggtatgtgtataccaggctatgatcacgtgtgaaacttgggcggacctgtatcatatgtacaccgtccctattcgtttatagccagtacgtgttatctgcacatagaggaacatgtgtcatactgggatcgcatgcatggtatgtgtgactctaatattattctgtatcataataaaaacacagtgcatggtatatagaggatcgctggtaagcactacggtagaccaatcggctcagattgcattctttggcatcgataccgttgttaatttatatggcaaagtcttgttcatgggagatcagtatttggaggaaatatactctggaacgatggaaatactcaaatggaatcaagctaaccgctgctattctattgcgcatgcaacatattacgccgactgtcctataatcagttctacggtattcagaggatgccgggacgccgttgtttatactaggccccacagcagaattc

SEQ ID NO 16: 1333-85.B6 (ILT/куриный β-актин pro-VP2-FHV US9pA /HVT) (13064 bp)

(кассеты генов ILT+IBDV в HVT EcoRI#7-фрагменте.)

Вирус no. HVT/ILT/IBDV 1386-48.1.1.1

gaattccagactaaatgccccggcccaatttgtcaagtgtgcagtcacggaggcgtcgaccgtgtccccggcattaaacaggaaagcgttaaagtttttgaatgttaggtcacaggtacaaacataaatgtttgtacaaacaggtaacaggtacaaacataaatgccccggcataaatgtcccttacggcggatcgaaacgacattaggcatactcgggtaccattttgcattccgatcagcacggatgaaattaggcaggaatgcggtttatattatgcggcattggacaaacgatatggcattgattggcagtttatgaatgtcttcatgttgggcgtaaacggattcctattggttcagaagacaacgacgatatatttagagagaaaaagctacccagcataggataaacacacattgagcattgagagacataggtatcggtatggatgggaaaactacacacgtgaacaccaaacgacttatatactcgagcggtgatactactgagcaagaatgcactgcatctgagccactgaatgaagactgtgatgaaaatgtgaccatcgatggaattggagaagaatatgcgcagttcttcatgtccccgcaatgggtcccaaatctacatcgcttgagcgaggataccaaaaaggtataccgatgtatggtttccaacagactcaattattttccctattatgaggcgttcaggcggtctttgtttgatatgtatatgctaggtcggttggggcgtcgacttaagcgatctgactgggagactattatgcatctgtcaccaacgcaaagtcggcgtctacatagaactttaagatttgtggagcgtagaattatcccatctaacagttatatacgcacatcgggccacgttccgccttcgagggcacttccgacagatacgaatttaaagatggatgaataattaaattggaaagagtaactacattaatcgagcgtcatgacggcgtcccgtgaaaatgggaattttctactcgaaacaccgtgacatttgacagacctggaattgttattctgatatatagtgggtgtgtctggccggcaacatacataatgtgcatgcgaaaccactttttcagtgtacgctgacattgtgcaacacggaggggtagcatctacatacaatatatgttgattaatgattggagaaaaaactatgcagctcgccgatcatatggctaactcgccttcgtctatatggcggaccccgcgggaaaaatcgacgtaccatctgatttacaacaccagtaatgaacatgtcgcatccctgcccagatctgtgcgcccattggcgcggatcgttgtgaatgccgccgaaacacttcaggtcggtatgagagccgggaggccgccatcagcaggagtttggcgagaggtgtttgatagaatgatgacagccttccgtgaccacgagcctactgcgacatttaatgctgcaaatcccattagaaaaatggtcgagacagttctacagaataatgaagagcccccgcggacgcatgctgaaatgggtaatcgccttatgaacattatgtactggtgttgcttgggacacgcaggacaatgctcgatatggcagttgtacgagacgaatcaggccattttaagtttattagatgaagtggttatcggcacaacaaatcccttttgcaccctcgagcaatactggaagccattatgcaccgcaatcgccaacaaggggacctcatcgcttgttgaggatgccaaagtggccgagtacctggttagcatgcgcaaattgatataacataggcacgctctgatgttacagaccacaataccgcatacatttattgtaaggttgttaataaaggtttattctatgtaagactacaatactttcgacattgcttgtatacatattaaatactttctcaagttcctattacataaaatgggatctatcattacattcgttaagagtctggataattttactgtttgccagcttcgatcttggaacgtactgtggatagtgccttacttggaatcgtgaaaatttgaaacgtccattatttggatatcttccggttgtcccatatcccgccctggtaccgctcggataccttgcccgtatggattcgtattgacagtcgcgcaatcggggaccaacaacgcgtgggtccacactcattcggaaattttccgatgattctgaatatttattgccgctcgttacgagtcgttggacatatctgtaatacatttcttcttctgaaggatcgctgcacatttgatctatacattggccaggatgttcaagtctcagatgttgcattctggcacagcacaactttatggcatttccgatgtaatcgtccggcagccctgggggagttctatattcgcatattgggatggtaaggacaatagcagatctcgcaacctccagggaggctataataacgtttttaaaggatggatttctcataaaaatctgtcgcaaattacactgagaatatcctttactagcgccgattgagagcatcgtcgtccaattttctaaatggaaagaaaacaaggcgggcaagagtgttccaaacattttcattttcggcgaatctctcaaatcccatggcgtgcaattgattgcaaaattggcacttccgttcacgtttgtatctccaaactctaagacacttttaattgaaaaactacgttctagtgtggaaagaaacctataggcagaccatagaactatttgacaccacatatctttttgtatgtcaaactgaccatgatcgtatgttgctgaatgcactagggcaattcgctcgcgcgactccatacattgaataattccacacgtcagctcatcggttagcaaggtccagtagttgaagtcatttatttttccccgcggctggccaaatctacctctgggaatatccaagttgtcgaatatgatcgcaccggctctggtcatggtgaaggaactgtagcataaagacgcaggtatcataggggtaatatttttttattcactcacatactaaaagtaacgcatattagcaccatgtatgggctatcaattgacatttgcgtagcactacatcacgattatgtacaacataatgggacaacatatggcaagtagatgcaatttcctcacactagttgggtttatctactattgaattttcccctatctgtgatacacttgggagcctctacaagcatattgccatcatgtacgtttttatctactgtcttaacgcccatgggaacggaggcgtcgtcgtcatgtattggacggcaacataggcagcaacacaaattgcgtttaggtggggtgcatgtggactcgataccaagcccctgcagctggggaacgtctggtggagagccgataatttgatatacgcacgccatattactgtcgttgaagtacgccttatcttctatgttttcaaatttaggttcccaagtggacgtgagaagtgtttgtatctcacatggaatggcccaaggcattccagcccaggtgcctggtactttaatggcaaacaaacgttttggtagaggtattgattctattgcagttctgcagatatctgcagccccgagtatccacaggctatacgatacgttatcggaggcaagcttaattaagtaccgagctcgaattggcgcgcccgacggcagagtcgcagacgcccctattggacgtcaaaattgtagaggtgaagttttcaaacgatggcgaagtaacggcgacttgcgtttccaccgtcaaatctccctatagggtagaaactaattggaaagtagacctcgtagatgtaatggatgaaatttctgggaacagtcccgccggggtttttaacagtaatgagaaatggcagaaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgctatggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagcatggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtgattaagtctgaatgtggctctccaatcatttcgattctctaatctcccaatcctctcaaaaggggcagtatcggacacggactgggaggggcgtacacgatagttatatggtacagcagaggcctctgaacacttaggaggagaattcagccggggagagcccctgttgagtaggcttgggagcatattgcaggatgaacatgttagtgatagttctcgcctcttgtcttgcgcgcctaacttttgcgacgcgacacgtcctctttttggaaggcactcaggctgtcctcggggaagatgatcccagaaacgttccggaagggactgtaatcaaatggacaaaagtcctgcggaacgcgtgcaagatgaaggcggccgatgtctgctcttcgcctaactattgctttcatgatttaatttacgacggaggaaagaaagactgcccgcccgcgggacccctgtctgcaaacctggtaattttactaaagcgcggcgggcgcgccggatcagatctccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcgggggggggggnnncgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgcgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagcggcaggaaggaaatgggcggggagggccttcgtgcgtcgccgcgccgccgtccccttctccctctccagcctcggggctgtccgcggggggacggctgccttcgggggggacggggcagggcggggttcggcttctggcgtgtgaccggcggctctagagcctctgctaaccatgttcatgccttcttctttttcctacagctcctgggcaacgtgctggttattgtgctgtctcatcattttggcaaagaattgcagatctggatctatgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgtctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcagactagtgagtcggagtctcacagtgaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatgggttgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaagttgggaatgtcctggtaggggaaggggtcactgtcctcagcctacccacatcatatgatcttgggtatgtgaggcttggtgaccccattcccgctatagggcttgacccaaaaatggtagctacatgcgacagcagtgacaggcccagagtctacaccataactgcagccgatgattaccaattctcatcacagtaccaaccaggtggggtaacaatcacactgttctcagccaacattgatgctatcacaagcctcagcattgggggagagctcgtgtttcaaacaagcgtccaaggccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcaccagagctgtggccgcagataatgggctgacggccggcaccgacaatcttatgccattcaatcttgtcattccaaccaatgagataacccagccgatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaaaagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatccgtcgttacggtcgctggggtgagtaacttcgagctgatcccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacagaatacggccgatttgacccaggagccatgaactacacaaaattgatactgagtgagagggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacactgattttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggctataaggaggtaagatccgatctctcgattaattaacaataaacatagcatacgttatgacatggtctaccgcgtcttatatggggacgacaagcttgcctccgattctagcattacatagccggtcagtagatcctgccattcggtagcgcaaccggctacatcttcaaacagtctcacgataaatgcatctctcgttcctgccaatccggaaccgggcataccactcccgcctgccgatttaattctcacaattgggcgatgccggcggggcaaaacgaatgtggatttggcaaaccgacacaggtctgctgtacggactaatatgggcacacccacatcattcttcagatgctccatgcattgttctatgagaaagatccatagggtggaggcagcgtcacgagatcgcccaggcaatcgatcgcattcgtctagtaaagtgacgagagttatcatgcacacacccatgcccacgccttccgaataactggagctgtggaagatcggaaacgtctttttgactgccggtctcgtactactttcgcacaggtgtatacccggacgcgtactatatattttatatcatccaacgtccgaaattacatacgtggcggcgatggaagtagatgttgagtcttcgaaagtaagtgcctcgaatatgggtattgtctgtgaaaatatcgaaagcggtacgacggttgcagaaccgtcgatgtcgccagatactagtaacaatagcttcgataacgaagacttccgtgggcctgaatacgatgtggagataaataccagaaaatctgctaatcttgatcgtatggaatcttcgtgccgtgaacaacgagcggcgtgcgaacttcgaaagtgttcgtgtcctacgtctgccgtgcgcatgcaatacagtattctttcatctctcgctccgggttcagagggtcatgtatatatatgtactagatacggggacgcggaccaaaaaaaatgcatagtgaaggcagtcgttggaggaaagaatcccgggagggaagtggatattttaaaaaccatctcacataaatcaattataaaattaatccatgcctataaatggaaaaatgttgtgtgtatggcaatgcgtgtatatcgttatgatcttttcacatatattgacggagtcggccctatgccccttcaacagatgatctatattcaacgtggactactagaggcgctagcatacatacatgaaaggggcatcattcaccgagacgtaaagacggagaatatattcttggataatcacgaaaatgcagttttgggtgacttcggtgctgcatgccaactaggagattgtatagatacgccccaatgttacggttggagcggaactgtggaaacaaattcgccggaattatctgcacttgatccgtattgcacaaaaacagatatttggagtgccggattggttctatatgagatggcaattaaaaatgtaccattgtttagtaagcaggtgaaaagttcgggatctcagctgagatccataatacggtgcatgcaagtgcatgaactggagtttccccgcaacgattctaccaacctctgtaaacatttcaaacaatatgcggttcgtgtacgaccgccttataccattcctcgagttataagaaatggggggatgccaatggatgttgaatatgtcatttctaaaatgcttacgtttgaccaggagttcagaccttctgctaaggaaatattgaatatgcccctatttactaaggcgccgattaacctgcttaatatcacaccctctgacagtgtctaacggtatacaggcgggagcgggtcgtggcgtcatcatcaccacttgagaatttatattttgaattgttgattgataaattaacctgattcattgagaactgaaacgccatattggtttcttggatatgtctacaacaattagttaaattgctatgttctactgcgagtaacatttgataagttgtaagagacgggcgactcatgtcgaagttgacgaatataaagtacataacgtgtttagaatacccagaatccgaatagtccgcgggggcgtcttctcgcgtgagtaccaaatactgagttgaacttgaaaatgctaaatctgtgacactctttgtgtgatgattattgtcaccacttcgaagatggcttcgacattcatgatgttctggtgtttgtttggaatcgtaatagcgcttgtttcgtccaagtctgacaacaaagaaaatctgaagaattatatcacggataagtcaaccaatattagaatacccacgccattatttgtatcaacggaaaactcttatcccacaaaacatgtaatctacgatgaaaactgtggcttcgctgtactcaatcctataagtgaccccaaatatgtccttttgagccagcttctaatgggaaggcgcaaatatgatgcgacggtcgcgtggtttgttctcggtaaaatgtgtgccagattaatatatttgcgcgaattttataactgctcgacaaatgagccttttggcacatgttctatgagctctcctggatggtgggacaggcgctacgtctcaaccagtttcatttctcgcgacgaattacagctggtttttgcagcgccgtcccgagaattagatggtttatatacgcgcgtagtagttgtcaacggggactttactacggccgatataatgtttaatgttaaagtggcatgtgccttttcaaagactggaatagaagatgatacattatgcaaaccctttcatttctttgccaatgcaacattgcacaatttaaccatgattagatcggtaactcttcgagcgcacgaaagccatttaaaggaatgggtggcacggagaggtggtaacgtccctgcagtgctacttgagtctaccatgtatcatgcatccaatctgcctagaaatttcagggatttctacataaagtctccagatgattataagtataatcacctagatgggccatctgtaatgctcatcactgacagacctagtgaagatttggatgggaggctcgttcaccaaagtgacatttttactactacaagtcctataaaacaggtccggtatgaagagcatcagtcacatacaaagcagtatcctgtaaacaaaatacaagctataatttttttgatagggttaggctcgttcattggaagcatattcgtagttttggtagtatggattatacgcagatattgcaatggagcgcggagtgggggaacgccccccagtcctcgccggtatgtgtataccaggctatgatcacgtgtgaaacttgggcggacctgtatcatatgtacaccgtccctattcgtttatagccagtacgtgttatctgcacatagaggaacatgtgtcatactgggatcgcatgcatggtatgtgtgactctaatattattctgtatcataataaaaacacagtgcatggtatatagaggatcgctggtaagcactacggtagaccaatcggctcagattgcattctttggcatcgataccgttgttaatttatatggcaaagtcttgttcatgggagatcagtatttggaggaaatatactctggaacgatggaaatactcaaatggaatcaagctaaccgctgctattctattgcgcatgcaacatattacgccgactgtcctataatcagttctacggtattcagaggatgccgggacgccgttgtttatactaggccccacagcagaattc

SEQ ID NO 17: 1386-04.4#1 (ILT/hCMV IEpro-VP2-HSV TKpA/HVT) (13017 п.о.)

(кассеты генов ILT+IBDV в HVT EcoRI#7-фрагменте.

Вирус no. HVT/ILT/IBDV 1386-48.3.1.7)

gaattccagactaaatgccccggcccaatttgtcaagtgtgcagtcacggaggcgtcgaccgtgtccccggcattaaacaggaaagcgttaaagtttttgaatgttaggtcacaggtacaaacataaatgtttgtacaaacaggtaacaggtacaaacataaatgccccggcataaatgtcccttacggcggatcgaaacgacattaggcatactcgggtaccattttgcattccgatcagcacggatgaaattaggcaggaatgcggtttatattatgcggcattggacaaacgatatggcattgattggcagtttatgaatgtcttcatgttgggcgtaaacggattcctattggttcagaagacaacgacgatatatttagagagaaaaagctacccagcataggataaacacacattgagcattgagagacataggtatcggtatggatgggaaaactacacacgtgaacaccaaacgacttatatactcgagcggtgatactactgagcaagaatgcactgcatctgagccactgaatgaagactgtgatgaaaatgtgaccatcgatggaattggagaagaatatgcgcagttcttcatgtccccgcaatgggtcccaaatctacatcgcttgagcgaggataccaaaaaggtataccgatgtatggtttccaacagactcaattattttccctattatgaggcgttcaggcggtctttgtttgatatgtatatgctaggtcggttggggcgtcgacttaagcgatctgactgggagactattatgcatctgtcaccaacgcaaagtcggcgtctacatagaactttaagatttgtggagcgtagaattatcccatctaacagttatatacgcacatcgggccacgttccgccttcgagggcacttccgacagatacgaatttaaagatggatgaataattaaattggaaagagtaactacattaatcgagcgtcatgacggcgtcccgtgaaaatgggaattttctactcgaaacaccgtgacatttgacagacctggaattgttattctgatatatagtgggtgtgtctggccggcaacatacataatgtgcatgcgaaaccactttttcagtgtacgctgacattgtgcaacacggaggggtagcatctacatacaatatatgttgattaatgattggagaaaaaactatgcagctcgccgatcatatggctaactcgccttcgtctatatggcggaccccgcgggaaaaatcgacgtaccatctgatttacaacaccagtaatgaacatgtcgcatccctgcccagatctgtgcgcccattggcgcggatcgttgtgaatgccgccgaaacacttcaggtcggtatgagagccgggaggccgccatcagcaggagtttggcgagaggtgtttgatagaatgatgacagccttccgtgaccacgagcctactgcgacatttaatgctgcaaatcccattagaaaaatggtcgagacagttctacagaataatgaagagcccccgcggacgcatgctgaaatgggtaatcgccttatgaacattatgtactggtgttgcttgggacacgcaggacaatgctcgatatggcagttgtacgagacgaatcaggccattttaagtttattagatgaagtggttatcggcacaacaaatcccttttgcaccctcgagcaatactggaagccattatgcaccgcaatcgccaacaaggggacctcatcgcttgttgaggatgccaaagtggccgagtacctggttagcatgcgcaaattgatataacataggcacgctctgatgttacagaccacaataccgcatacatttattgtaaggttgttaataaaggtttattctatgtaagactacaatactttcgacattgcttgtatacatattaaatactttctcaagttcctattacataaaatgggatctatcattacattcgttaagagtctggataattttactgtttgccagcttcgatcttggaacgtactgtggatagtgccttacttggaatcgtgaaaatttgaaacgtccattatttggatatcttccggttgtcccatatcccgccctggtaccgctcggataccttgcccgtatggattcgtattgacagtcgcgcaatcggggaccaacaacgcgtgggtccacactcattcggaaattttccgatgattctgaatatttattgccgctcgttacgagtcgttggacatatctgtaatacatttcttcttctgaaggatcgctgcacatttgatctatacattggccaggatgttcaagtctcagatgttgcattctggcacagcacaactttatggcatttccgatgtaatcgtccggcagccctgggggagttctatattcgcatattgggatggtaaggacaatagcagatctcgcaacctccagggaggctataataacgtttttaaaggatggatttctcataaaaatctgtcgcaaattacactgagaatatcctttactagcgccgattgagagcatcgtcgtccaattttctaaatggaaagaaaacaaggcgggcaagagtgttccaaacattttcattttcggcgaatctctcaaatcccatggcgtgcaattgattgcaaaattggcacttccgttcacgtttgtatctccaaactctaagacacttttaattgaaaaactacgttctagtgtggaaagaaacctataggcagaccatagaactatttgacaccacatatctttttgtatgtcaaactgaccatgatcgtatgttgctgaatgcactagggcaattcgctcgcgcgactccatacattgaataattccacacgtcagctcatcggttagcaaggtccagtagttgaagtcatttatttttccccgcggctggccaaatctacctctgggaatatccaagttgtcgaatatgatcgcaccggctctggtcatggtgaaggaactgtagcataaagacgcaggtatcataggggtaatatttttttattcactcacatactaaaagtaacgcatattagcaccatgtatgggctatcaattgacatttgcgtagcactacatcacgattatgtacaacataatgggacaacatatggcaagtagatgcaatttcctcacactagttgggtttatctactattgaattttcccctatctgtgatacacttgggagcctctacaagcatattgccatcatgtacgtttttatctactgtcttaacgcccatgggaacggaggcgtcgtcgtcatgtattggacggcaacataggcagcaacacaaattgcgtttaggtggggtgcatgtggactcgataccaagcccctgcagctggggaacgtctggtggagagccgataatttgatatacgcacgccatattactgtcgttgaagtacgccttatcttctatgttttcaaatttaggttcccaagtggacgtgagaagtgtttgtatctcacatggaatggcccaaggcattccagcccaggtgcctggtactttaatggcaaacaaacgttttggtagaggtattgattctattgcagttctgcagatatctgcagccccgagtatccacaggctatacgatacgttatcggaggcaagcttgttaattaagtcgacggcagagtcgcagacgcccctattggacgtcaaaattgtagaggtgaagttttcaaacgatggcgaagtaacggcgacttgcgtttccaccgtcaaatctccctatagggtagaaactaattggaaagtagacctcgtagatgtaatggatgaaatttctgggaacagtcccgccggggtttttaacagtaatgagaaatggcagaaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgctatggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagcatggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtgattaagtctgaatgtggctctccaatcatttcgattctctaatctcccaatcctctcaaaaggggcagtatcggacacggactgggaggggcgtacacgatagttatatggtacagcagaggcctctgaacacttaggaggagaattcagccggggagagcccctgttgagtaggcttgggagcatattgcaggatgaacatgttagtgatagttctcgcctcttgtcttgcgcgcctaacttttgcgacgcgacacgtcctctttttggaaggcactcaggctgtcctcggggaagatgatcccagaaacgttccggaagggactgtaatcaaatggacaaaagtcctgcggaacgcgtgcaagatgaaggcggccgatgtctgctcttcgcctaactattgctttcatgatttaatttacgacggaggaaagaaagactgcccgcccgcgggacccctgtctgcaaacctggtaattttactaaagcgcggcgaaagcttaggtcaattccctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggttttggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctccaccccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaaaatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtgggaggtctatataagcagagctcgtttagtgaaccgtcagatcgcctggagacgccatccacgctgttttgacctccatagaagacaccgggcgcgccggatctatgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgtctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcagactagtgagtcggagtctcacagtgaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatgggttgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaagttgggaatgtcctggtaggggaaggggtcactgtcctcagcctacccacatcatatgatcttgggtatgtgaggcttggtgaccccattcccgctatagggcttgacccaaaaatggtagctacatgcgacagcagtgacaggcccagagtctacaccataactgcagccgatgattaccaattctcatcacagtaccaaccaggtggggtaacaatcacactgttctcagccaacattgatgctatcacaagcctcagcattgggggagagctcgtgtttcaaacaagcgtccaaggccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcaccagagctgtggccgcagataatgggctgacggccggcaccgacaatcttatgccattcaatcttgtcattccaaccaatgagataacccagccgatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaaaagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatccgtcgttacggtcgctggggtgagtaacttcgagctgatcccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacagaatacggccgatttgacccaggagccatgaactacacaaaattgatactgagtgagagggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacactgattttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggctataaggaggtaagatccataattgattgacgggagatgggggaggctaactgaaacacggaaggagacaataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacgggtgttgggtcgtttgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggccaatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcagccaacgtcggggcggcaggccctgccatagccactggccccgtgggttagggacggggtcccccatggggaatggtttatggttcgtgggggttattattttgaagcttgcctccgattctagcattacatagccggtcagtagatcctgccattcggtagcgcaaccggctacatcttcaaacagtctcacaataaatgcatctctcgttcctgccaatccggaaccgggcataccactcccgcctgccgatttaattctcacaattgggcgatgccggcggggcaaaacgaatgtggatttggcaaaccgacacaggtctgctgtacggactaatatgggcacacccacatcattcttcagatgctccatgcattgttctatgagaaagatccatagggtggaggcagcgtcacgagatcgcccaggcaatcgatcgcattcgtctagtaaagtgacgagagttatcatgcacacacccatgcccacgccttccgaataactggagctgtggaagatcggaaacgtctttttgactgccggtctcgtactactttcgcacaggtgtatacccggacgcgtactatatattttatatcatccaacgtccgaaattacatacgtggcggcgatggaagtagatgttgagtcttcgaaagtaagtgcctcgaatatgggtattgtctgtgaaaatatcgaaagcggtacgacggttgcagaaccgtcgatgtcgccagatactagtaacaatagcttcgataacgaagacttccgtgggcctgaatacgatgtggagataaataccagaaaatctgctaatcttgatcgtatggaatcttcgtgccgtgaacaacgagcggcgtgcgaacttcgaaagtgttcgtgtcctacgtctgccgtgcgcatgcaatacagtattctttcatctctcgctccgggttcagagggtcatgtatatatatgtactagatacggggacgcggaccaaaaaaaatgcatagtgaaggcagtcgttggaggaaagaatcccgggagggaagtggatattttaaaaaccatctcacataaatcaattataaaattaatccatgcctataaatggaaaaatgttgtgtgtatggcaatgcgtgtatatcgttatgatcttttcacatatattgacggagtcggccctatgccccttcaacagatgatctatattcaacgtggactactagaggcgctagcatacatacatgaaaggggcatcattcaccgagacgtaaagacggagaatatattcttggataatcacgaaaatgcagttttgggtgacttcggtgctgcatgccaactaggagattgtatagatacgccccaatgttacggttggagcggaactgtggaaacaaattcgccggaattatctgcacttgatccgtattgcacaaaaacagatatttggagtgccggattggttctatatgagatggcaattaaaaatgtaccattgtttagtaagcaggtgaaaagttcgggatctcagctgagatccataatacggtgcatgcaagtgcatgaactggagtttccccgcaacgattctaccaacctctgtaaacatttcaaacaatatgcggttcgtgtacgaccgccttataccattcctcgagttataagaaatggggggatgccaatggatgttgaatatgtcatttctaaaatgcttacgtttgaccaggagttcagaccttctgctaaggaaatattgaatatgcccctatttactaaggcgccgattaacctgcttaatatcacaccctctgacagtgtctaacggtatacaggcgggagcgggtcgtggcgtcatcatcaccacttgagaatttatattttgaattgttgattgataaattaacctgattcattgagaactgaaacgccatattggtttcttggatatgtctacaacaattagttaaattgctatgttctactgcgagtaacatttgataagttgtaagagacgggcgactcatgtcgaagttgacgaatataaagtacataacgtgtttagaatacccagaatccgaatagtccgcgggggcgtcttctcgcgtgagtaccaaatactgagttgaacttgaaaatgctaaatctgtgacactctttgtgtgatgattattgtcaccacttcgaagatggcttcgacattcatgatgttctggtgtttgtttggaatcgtaatagcgcttgtttcgtccaagtctgacaacaaagaaaatctgaagaattatatcacggataagtcaaccaatattagaatacccacgccattatttgtatcaacggaaaactcttatcccacaaaacatgtaatctacgatgaaaactgtggcttcgctgtactcaatcctataagtgaccccaaatatgtccttttgagccagcttctaatgggaaggcgcaaatatgatgcgacggtcgcgtggtttgttctcggtaaaatgtgtgccagattaatatatttgcgcgaattttataactgctcgacaaatgagccttttggcacatgttctatgagctctcctggatggtgggacaggcgctacgtctcaaccagtttcatttctcgcgacgaattacagctggtttttgcagcgccgtcccgagaattagatggtttatatacgcgcgtagtagttgtcaacggggactttactacggccgatataatgtttaatgttaaagtggcatgtgccttttcaaagactggaatagaagatgatacattatgcaaaccctttcatttctttgccaatgcaacattgcacaatttaaccatgattagatcggtaactcttcgagcgcacgaaagccatttaaaggaatgggtggcacggagaggtggtaacgtccctgcagtgctacttgagtctaccatgtatcatgcatccaatctgcctagaaatttcagggatttctacataaagtctccagatgattataagtataatcacctagatgggccatctgtaatgctcatcactgacagacctagtgaagatttggatgggaggctcgttcaccaaagtgacatttttactactacaagtcctataaaacaggtccggtatgaagagcatcagtcacatacaaagcagtatcctgtaaacaaaatacaagctataatttttttgatagggttaggctcgttcattggaagcatattcgtagttttggtagtatggattatacgcagatattgcaatggagcgcggagtgggggaacgccccccagtcctcgccggtatgtgtataccaggctatgatcacgtgtgaaacttgggcggacctgtatcatatgtacaccgtccctattcgtttatagccagtacgtgttatctgcacatagaggaacatgtgtcatactgggatcgcatgcatggtatgtgtgactctaatattattctgtatcataataaaaacacagtgcatggtatatagaggatcgctggtaagcactacggtagaccaatcggctcagattgcattctttggcatcgataccgttgttaatttatatggcaaagtcttgttcatgggagatcagtatttggaggaaatatactctggaacgatggaaatactcaaatggaatcaagctaaccgctgctattctattgcgcatgcaacatattacgccgactgtcctataatcagttctacggtattcagaggatgccgggacgccgttgtttatactaggccccacagcagaattc

SEQ ID NO 18: 484-1050-2641-10859 (mCMV IEpro-VP2-SV40pA/ILT/HVT) (15252 п.о.)

(кассеты генов IBDV+ ILT в HVT AscI-фрагменте.) Вирус no. HVT/IBDV/ILT 484

ggcgcgccactggagaacggcatgaccgcaaaaggcgttgtagagatcgatcccacgaactctcaggcgatcgtgtcagtcgccataaacagcgacgatcgtctccaggatctgaacggttttcttctcaacgatcatcagtatatgaggaactgaacctgatatttagccgagggaaacgcaggttaaaaaccctatcaagcgattgcgattttcgcgtatctagtaaaaatagatgggcttcggtactagccttcgccgccaactctgaatatgcccttcgtggacctcatataacatggcattgtttgttggatgcggggccggaattaagaagaacattcgaaatacgagcaaaaatttcggccctggcatgtgctgcgcgagaatcggtacttcggggagaaagttttatcggagctttgggtagtgcagaggaaactctatcttggttgaaaatgcatgcgaccctgcacttgattctggttaaccacgatccaatttttaagacggctggcgcggtcctagataacctccgcttaaaactagccccaatattgatgtgcagatataacacagaaaaacgatcaatggaagacatgctacggcggtcatctcccgaagacatcaccgattccctaacaatgtgcctgattatgttatcgcgcattcgtcgtaccatgcgcaccgcaggaaataaatatagctatatgatagatccaatgaatcgtatgtctaattacactccaggcgaatgtatgacaggtatattgcgatatattgacgaacatgctagaaggtgtcctgatcacatatgtaatttgtatatcacatgtacacttatgccgatgtatgtgcacgggcgatatttctattgtaattcatttttttgttagtaaactaccacaggctgtccggaaatctaagttaatgaataaagtagatggttaatactcattgcttagaattggactacttttaattctctttaatgttcgtattaaataaaaacatctttaataaacttcagcctcttcgcttattgtagaaattgagtattcaaaatcatgttcaaagccgtcttcggagagtgtactcgccacggtggttggaacatcactatgtctacacgtcaaatttaagcacgtcaggtctgtcgaggacaagaaatggttaactagtgtttcaattattcttataaacgttaagcattgtaagccccccggccgtccgcagcaacaatttactagtatgccgtgggctccgggactatcacggatgtccaattcgcacatgcatataatttttctagggtctctcatttcgagaaatcttcggggatccatcagcaatgcgggctgtagtcccgattcccgtttcaaatgaaggtgctccaacacggtcttcaaagcaaccggcataccagcaaacacagactgcaactccccgctgcaatgattggttataaacagtaatctgtcttctggaagtatatttcgcccgacaatccacggcgcccccaaagttaaaaaccatccatgtgtatttgcgtcttctctgttaaaagaatattgactggcattttcccgttgaccgccagatatccaaagtacagcacgatgttgcacggacgactttgcagtcaccagccttcctttccacccccccaccaacaaaatgtttatcgtaggacccatatccgtaataaggatgggtctggcagcaaccccataggcgcctcggcgtggtagttctcgaggccttaagcttaaggatcccccaactccgcccgttttatgactagaaccaatagtttttaatgccaaatgcactgaaatcccctaatttgcaaagccaaacgccccctatgtgagtaatacggggactttttacccaatttcccacgcggaaagccccctaatacactcatatggcatatgaatcagcacggtcatgcactctaatggcggcccatagggactttccacatagggggcgttcaccatttcccagcataggggtggtgactcaatggcctttacccaagtacattgggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcaagcacactgagtcaaatgggactttccactgggttttgcccaagtacattgggtcaatgggaggtgagccaatgggaaaaacccattgctgccaagtacactgactcaatagggactttccaatgggtttttccattgttggcaagcatataaggtcaatgtgggtgagtcaatagggactttccattgtattctgcccagtacataaggtcaatagggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgcgtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaataggggatgagtcaatgggaaaaacccattggagccaagtacactgactcaatagggactttccattgggttttgcccagtacataaggtcaatagggggtgagtcaacaggaaagttccattggagccaagtacattgagtcaatagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaatgggaggtaagccaatgggtttttcccattactggcacgtatactgagtcattagggactttccaatgggttttgcccagtacataaggtcaataggggtgaatcaacaggaaagtcccattggagccaagtacactgagtcaatagggactttccattgggttttgcccagtacaaaaggtcaatagggggtgagtcaatgggtttttcccattattggcacgtacataaggtcaataggggtgagtcattgggtttttccagccaatttaattaaaacgccatgtactttcccaccattgacgtcaatgggctattgaaactaatgcaacgtgacctttaaacggtactttcccatagctgattaatgggaaagtaccgttctcgagccaatacacgtcaatgggaagtgaaagggcagccaaaacgtaacaccgccccggttttcccctggaaattccatattggcacgcattctattggctgagctgcgttctacgtgggtataagaggcgcgaccagcgtcggtaccgtcgcagtcttcggtctgaccaccgtagaacgcagagctcctcgctgcaggcggccgctctagaactcgtcgatcgcagcgatgacaaacctgcaagatcaaacccaacagattgttccgttcatacggagccttctgatgccaacaaccggaccggcgtccattccggacgacaccctggagaagcacactctcaggtcagagacctcgacctacaatttgactgtgggggacacagggtcagggctaattgtctttttccctggattccctggctcaattgtgggtgctcactacacactgcagagcaatgggaactacaagttcgatcagatgctcctgactgcccagaacctaccggccagctacaactactgcagactagtgagtcggagtctcacagtgaggtcaagcacactccctggtggcgtttatgcactaaacggcaccataaacgccgtgaccttccaaggaagcctgagtgaactgacagatgttagctacaatgggttgatgtctgcaacagccaacatcaacgacaaaattgggaatgtcctggtaggggaaggggtcactgtcctcagcctacccacatcatatgatcttgggtatgtgaggcttggtgaccccattcccgctatagggcttgacccaaaaatggtagctacatgcgacagcagtgacaggcccagagtctacaccataactgcagccgatgattaccaattctcatcacagtaccaaccaggtggggtaacaatcacactgttctcagccaacattgatgctatcacaagcctcagcattgggggagagctcgtgtttcaaacaagcgtccaaggccttgtactgggcgccaccatctaccttataggctttgatgggactgcggtaatcaccagagctgtggccgcagataatgggctgacggccggcaccgacaatcttatgccattcaatcttgtcattccaaccaatgagataacccagccaatcacatccatcaaactggagatagtgacctccaaaagtggtggtcaggcaggggatcagatgtcatggtcggcaagtgggagcctagcagtgacgatccatggtggcaactatccaggggccctccgtcccgtcacactagtagcctacgaaagagtggcaacaggatccgtcgttacggtcgctggggtgagtaacttcgagctgattccaaatcctgaactagcaaagaacctggttacagaatacggccgatttgacccaggagccatgaactacacaaaattgatactgagtgagagggaccgtcttggcatcaagaccgtctggccaacaagggagtacactgattttcgtgagtacttcatggaggtggccgacctcaactctcccctgaagattgcaggagcatttggcttcaaagacataatccgggctataaggaggtagatccagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgcagtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattataagctgcaataaacaagttaacaacaacaattgcattcattttatgtttcaggttcagggggaggtgtgggaggttttttcggatcctctagagtcgacggcagagtcgcagacgcccctattggacgtcaaaattgtagaggtgaagttttcaaacgatggcgaagtaacggcgacttgcgtttccaccgtcaaatctccctatagggtagaaactaattggaaagtagacctcgtagatgtaatggatgaaatttctgggaacagtcccgccggggtttttaacagtaatgagaaatggcagaaacagctgtactacagagtaaccgatggaagaacatcggtccagctaatgtgcctgtcgtgcacgagccattctccggaaccttactgtcttttcgacacgtctcttatagcgagggaaaaagatatcgcgccagagttatactttacctctgatccgcaaacggcatactgcacaataactctgccgtccggcgttgttccgagattcgaatggagccttaataatgtttcactgccggaatatttgacggccacgaccgttgtttcgcataccgctggccaaagtacagtgtggaagagcagcgcgagagcaggcgaggcgtggatttctggccggggaggcaatatatacgaatgcaccgtcctcatctcagacggcactcgcgttactacgcgaaaggagaggtgcttaacaaacacatggattgcggtggaaaacggtgctgctcaggcgcagctgtattcactcttttctggacttgtgtcaggattatgcgggagcatatctgctttgtacgcaacgctatggaccgccatttatttttgaggaatgctttttggactatcgtactgctttcttccttcgctagccagagcaccgccgccgtcacgtacgactacattttaggccgtcgcgcgctcgacgcgctaaccataccggcggttggcccgtataacagatacctcactagggtatcaagaggctgcgacgttgtcgagctcaacccgatttctaacgtggacgacatgatatcggcggccaaagaaaaagagaaggggggccctttcgaggcctccgtcgtctggttctacgtgattaagggcgacgacggcgaggacaagtactgtccaatctatagaaaagagtacagggaatgtggcgacgtacaactgctatctgaatgcgccgttcaatctgcacagatgtgggcagtggactatgttcctagcacccttgtatcgcgaaatggcgcgggactgactatattctcccccactgctgcgctctctggccaatacttgctgaccctgaaaatcgggagatttgcgcaaacagctctcgtaactctagaagttaacgatcgctgtttaaagatcgggtcgcagcttaactttttaccgtcgaaatgctggacaacagaacagtatcagactggatttcaaggcgaacacctttatccgatcgcagacaccaatacacgacacgcggacgacgtatatcggggatacgaagatattctgcagcgctggaataatttgctgaggaaaaagaatcctagcgcgccagaccctcgtccagatagcgtcccgcaagaaattcccgctgtaaccaagaaagcggaagggcgcaccccggacgcagaaagcagcgaaaagaaggcccctccagaagactcggaggacgacatgcaggcagaggcttctggagaaaatcctgccgccctccccgaagacgacgaagtccccgaggacaccgagcacgatgatccaaactcggatcctgactattacaatgacatgcccgccgtgatcccggtggaggagactactaaaagttctaatgccgtctccatgcccatattcgcggcgttcgtagcctgcgcggtcgcgctcgtggggctactggtttggagcatcgtaaaatgcgcgcgtagctaatcgagcctagaataggtggtttcttcctacatgccacgcctcacgctcataatataaatcacatggaatagcataccaatgcctattcattgggacgttcgaaaagcatggcatcgctacttggaactctggctctccttgccgcgacgctcgcacccttcggcgcgatgggaatcgtgatcactggaaatcacgtctccgccaggattgacgacgatcacatcgtgatcgtcgcgcctcgccccgaagctacaattcaactgcagctatttttcatgcctggccagagaccccacaaaccctactcaggaaccgtccgcgtcgcgtttcggtctgatataacaaaccagtgctaccaggaacttagcgaggagcgctttgaaaattgcactcatcgatcgtcttctgtttttgtcggctgtaaagtgaccgagtacacgttctccgcctcgaacagactaaccggacctccacacccgtttaagctcactatacgaaatcctcgtccgaacgacagcgggatgttctacgtaattgttcggctagacgacaccaaagaacccattgacgtcttcgcgatccaactatcggtgtatcaattcgcgaacaccgccgcgactcgcggactctattccaaggcttcgtgtcgcaccttcggattacctaccgtccaacttgaggcctatctcaggaccgaggaaagttggcgcaactggcaagcgtacgttgccacggaggccacgacgaccagcgccgaggcgacaaccccgacgcccgtcactgcaaccagcgcctccgaacttgaagcggaacactttacctttccctggctagaaaatggcgtggatcattacgaaccgacacccgcaaacgaaaattcaaacgttactgtccgtctcgggacaatgagccctacgctaattggggtaaccgtggctgccgtcgtgagcgcaacgatcggcctcgtcattgtaatttccatcgtcaccagaaacatgtgcaccccgcaccgaaaattagacacggtctcgcaagacgacgaagaacgttcccaaactagaagggaatcgcgaaaatttggacccatggttgcgtgcgaaataaacaagggggctgaccaggatagtgaacttgtggaactggttgcgattgttaacccgtctgcgctaagctcgcccgactcaataaaaatgtgattaagtctgaatgtggctctccaatcatttcgattctctaatctcccaatcctctcaaaaggggcagtatcggacacggactgggaggggcgtacacgatagttatatggtacagcagaggcctctgaacacttaggaggagaattcagccggggagagcccctgttgagtaggcttgggagcatattgcaggatgaacatgttagtgatagttctcgcctcttgtcttgcgcgcctaacttttgcgacgcgacacgtcctctttttggaaggcactcaggctgtcctcggggaagatgatcccagaaacgttccggaagggactgtaatcaaatggacaaaagtcctgcggaacgcgtgcaagatgaaggcggccgatgtctgctcttcgcctaactattgctttcatgatttaatttacgacggaggaaagaaagactgcccgcccgcgggacccctgtctgcaaacctggtaattttactaaagcgcggcgaaagcttcccgggttaattaaggccctcgaggatacatccaaagaggttgagtattctctctacacttcttgttaaatggaaagtgcatttgcttgttcttacaatcggcccgagtctcgttcacagcgcctcgttcacacttaaaccacaaatagtctacaggctatatgggagccagactgaaactcacatatgactaatattcgggggtgttagtcacgtgtagcccattgtgtgcatataacgatgttggacgcgtccttattcgcggtgtacttgatactatggcagcgagcatgggatattcatcctcgtcatcgttaacatctctacgggttcagaatgtttggcatgtcgtcgatcctttgcccatcgttgcaaattacaagtccgatcgccatgaccgcgataagcctgtaccatgtggcattagggtgacatctcgatcatacattataagaccaacgtgcgagtcttccaaagacctgcacgccttcttcttcggattgtcaacgggttcttcagaatctatgcccatatctggcgttgagaccattgtgcgtttaatgaacaataaagcggcatgccatggaaaggagggctgcagatctccattttctcacgccactatcctggacgctgtagacgataattataccatgaatatagagggggtatgtttccactgccactgtgatgataagttttctccagattgttggatatctgcattttctgctgccgaacaaacttcatcgctatgcaaagagatgcgtgtgtacacgcgccggtggagtatacgggaaactaaatgttcatagaggtctttgggctatatgttattaaataaaataattgaccagtgaacaatttgtttaatgttagtttattcaatgcattggttgcaaatattcattacttctccaatcccaggtcattctttagcgagatgatgttatgacattgctgtgaaaattactacaggatatatttttaagatgcaggagtaacaatgtgcatagtaggcgtagttatcgcagacgtgcaacgcttcgcatttgagttaccgaagtgcccaacagtgctgcggttatggtttatgcgcacagaatccatgcatgtcctaattgaaccatccgatttttcttttaatcgcgatcgatgtttgggcaactgcgttatttcagatctaaaaaatttaccctttatgaccatcacatctctctggctcataccccgcttggataagatatcatgtagattccgccctaagaaatgcaaactaacattattgtcggttccatatacacttccatcttgtccttcgaaaataacaaactcgcgcaatagaccgtccgtacatgcatggccgatgtgtgtcaacatcattggtctgctagatcccgatgggacgaatcgtacagtcgtcgctccagcattggcaaaaatccccagataccctccatgcggcaaatctaaattgcgaccccgaagagactgcaccaaagtcttatcgacgcacgctgatttttttgaacagcgggagcccattatcttcagtggagcgtagacgggcgaggctaattatgtgacatagcaacactgcatgtatgtttttataaatcaataagagtacataatttattacgtatcatttccgtttgtaatatactgtatacatcatccacactattagtcagcactagcgcgcgggcgcacgttacaatagcagcgtgcccgttatctatattgtccgatatttacacataacatttcatcgacatgattaaatacctaagtactgcacacagatgtttaatgtatatcgtcatataaattatatcgctaggacagacccaaacgacctttatcccaaacagtcagatcctcttctcaagtgtcgatttctgttatggaatatgcataccctggcccagaaattgcacgcacgagcgtagtgaatgcgtcattggttttacatttaaaggctaaatgcacaaattctttagacgacagcacatcgttaaatagcatctctagcgttcttatgaatgctaagcattggagtcctcctggtcggccacaataacagctgagtatcataccctgagctccggggttgtcgcacatagcggattcgtataaacataggattttccgcgaatccatcagttgcaaaaatctgttaggctccatcaacaacgctggatttacttcagatccacgcgtaaagtaatggtgctcgaataccgtttttagagttgtcggcatttcaaggaacaaagaattcatttcttcattgcaacgacgcgccagaaatcccaagacctctttgggtagtatgttcttgcctataaaacacggcgttccaagtgccaggaaccacgcatgtgttactgttggggcgtattcagaaataaagcggggtttatgcggcttttgaagctcggatatccaaagtatcgcttgctgatgaacgagcgatgtagctgttacaaaacctcctttccatcctccagtcaacataatatttatcggcctacctatgtccgtaataagtattggtcgggcaattattccgtatgaggtcttgcaggaataagctcttagggacagccagcttggatatggtgcgaaacagaccttctcggcttcagaatgtcgctccgcagtctcttcgtgtcggtgcatcttagatccaccatcaatgtgtgcagcattgactcccgcccgtcgaatattccttttgttacgatgcagtaatgagcacgatcatgggcggggcgatgacgttctatttgcatgtctgcgaacaatttgcgtcagtcatacagctatggagtgggccatttctggccgtcaacttaaaaacgcgaaccgcagacatatgtatttgcatgcaaagacgtatcttcgtatttctgggcatcttcaaatgctctggccaatatggcaatgaatttggattcgtttgacgccgatggtatgcagtgcaaatgtgccaatagcccacatccgaaaaagttatttgtcatacaagcaggtgttaagtagcaatcacataaaggcaccagacgcctcatggcatcataatgaatagctccttctccccactggaaccactgacaaaatctgcgagtatattccgcaaaccacattttatttctcatagaaactaccctaaatccttttaacgggaagaagaatcctagatagtgcttgaagtcatgactgttactgctgcaataacactgtatattatttataaattccgtttgtctaggtatctgatgtaggcattccgatccctttactattgcgtcttcacgaccaaatgggaatgcgccaaaatccccacacctcatcaccctggaggcagattgtgtattattaatatccgccgattgaagcacaaaacggtacggtactgttcctaattctggtatagattctatggtcaaaagtctgcatatccccgacattgccatgagatcacacagtccaagtagcatgtttattgagtcactcagactgtcaacgtccctcgccgcaccaccaatcgaaaataaagtatctacgcaagttatagctccgcattttctatcgctagcagcaatcgcgacgcaaaacataaaggccatgttgggatttgaactctctggggggcttgttatcttctgcaccgtcgcagtcgcagttttccgaaatttatgtctaatatattttccggccgtgctccaatcggccgaaaagaatctgcgtattaccagactcattgacgggccgataaagaccataaaacaaaattcctgtgcactccctcctccagttttgccatcgtccaagtcccgtaactttttttgcgtttcgaggagcaagcgttcgttatccctacccacacttgttttccaccgttttcttattataagcggttgtatcgccaacgcgtcaccgcaggttgtcacatacagtgatggcatacttgaacgtgcaacaacgcgctcgctttgcaaatctaagtcattgaccatcaaatcgcgttgagaggatagccaggcatcttttttcctagtatggtgacggtgcagccaccccaactcagttcttgtaaaaaaagctattggcgggaatttatgttctgaggtgcattctatatttatgagtccatcaaatgccattaaccagattcgtattttttcgctcgacccggcatcactatggatacaatacctttctatggcccatttcagctctcgaaccaaccacacggacaattgactaacataagtatgatctttatcacagtcgcacccatctgagttatatttatggcatccgagcgctcttactgtacggtcggatacacccatggtttttcctttatatagtcgggttatagtctgtcgggtttggcggtagcacggagtagtttgatttttaagaatcgaaaaccggcttggagagaccactgtcgaatatttgtccgtatactctacacgtgagtgttgtccattcctaggtatattcatctgttcggataccttcaattgctgttcaggcataaccttaaagcatatgttatgttgtacatcaaaacttggtgagttatgttcgattgccgcgcataaagaatcgtacatgagcgtttctgctaacatactatctatattctcacacgcccctgcatatactgttcctattccaaattcacgttttgccccatcggctatctgctcccaaaaagttgtaatataggtgccgctgggtgcgaaattttcatcagttgtattcctgataaactgaatcactttacataatttttgccacatatctgcgtgcagccatagtatcgaacccgtgggctcggagacgacagtgcgtacaatgggtattttacctttccccaacaaaataatggtatacaagttaggtccgtacctagaccttaatgtttccaattcttctgaatcactgcactctcgtaggggagtaacggtaataatttcgtctctgagccccgttttgcgttgaaaactaatcacattagataatgtgcaatcggtttcttttatccggatacatctaagtattatgacatcggtggtcattgtttccatcaacgaccatcttttacgatcgcccatactactcatggacgttgtcggtgttgaaaaatcaccagaattgcaacggatctctgggtaccatgctgctgatggaattggcggttttaattgttgtttcagtctattattgctatctttggcggggttgaataatgtggggggagagtgattgcaggaatccgaatgggtcaataaaacgaccgtgctccgttctgccggcgccgatccgattgaagctatatacttcgcttctctccccacttttccaatttgatccggaaataaaacggccccggacaacagtatcgtacgatccggatccggatcctgcttgcctacagaagaatcaacatctcgccccaatattctggtcaaaactggctcgctcatggcaacgcggacgtttcccccggtggccagtcttaatggttaatgttcttttcggcaatcttatacatcagcgggttgcgtgaatactggtcacagttcagtcatttactacacaccagcaatacgacgacggacagtaccgtcccgacgaacgcgacgcccaaaattgctatcgcgaccgcgtccgaggcgatgtcgtacgggcggtgcggggttggatcctcggcaaagagatcctcgtaattcggcggtgggagcggagggtaaagacgcgggtggggatctccctccggaccgcgcgccgggcgcggttcgaaaatgctttccgcctcgctcagtgtcaacgccaagtattcgggcgggctgggggccggaatatctcccgcgacttcttctatcggcgcggaattggagtcgcggtcgtggcgcgcttctagcgtcgtcaacggaagtccattttcggggtctcccggtgggcgttcagcgtccatcgtcgtatatgctctaacacacgtctcgctatattaaaaaaaagaagagtatcggtcagtgtcgagtgtcgccgacaatgtcgcgagttctcggcgatttaatttttggaactgctccctatgaatcccgtaactgtagcgcccgcgcagaaagccgccatcagaccaactacgtgtctgttcgatgtttgcccgccgatcgctttaccgattaaggttccggcgagaaatgacatgctcgatccaagaacaaagtttttcgcggtaaacaacaacatagttaccgtgcgagatggagaaaccacatctcccgaattagtagaggaaagcccgcgctgtcggtttggggacatatcgatcttttttgtgtttttcctaggacccttttgccagatcgtacaaagtcgcgtcttatgagcggacgttcttactgcagctcggtaggagtggggcagggttagatttcgtcggcgtttcggcccccgtatgcgccgcgccaccctcttcgccgagctctttatgcgcggtgggggtgagcgcttccggagttgcgatctccgatctcgagccgcagcccggcggtgtctctttcagtggagcgttagcgccatcatgtggttcgtggcggtggaaaggctattatgtgttaggggagagaccacgtgatcggcatgcaaatgagcaaggcgaacgcgtcagcgttcgcactgcgaaccaataatatatatattatactattggctttaggtgcgaacgtccggctagtccaatagcggggtcgcgtttcgtaccacgtgttatagaccgccctaaactcgcactcgggggtccggccgcgcccagacagggcggagacgtgccacaggggctttaaaacaccgcttcgggcaccgttcatctcggcgcgcc

SEQ ID NO 19: SV40 сигнал полиаденилирования (199 п.о.)

agcttcagacatgataagatacattgatgagtttggacaaaccacaactagaatgcagtgaaaaaaatgctttatttgtgaaatttgtgatgctattgctttatttgtaaccattataagctgcaataaacaagttaacaacaacaattgcattcattttatgtttcaggttcagggggaggtgtgggaggttttttcg

Объем настоящего изобретения не должен ограничиваться конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем документе. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны в настоящем документе, станут очевидными для специалистов в данной области техники из предшествующего описания. Подразумевается, что такие модификации охвачены прилагаемой формулой изобретения.

Кроме того, следует понимать, что все размеры оснований или размеры аминокислот и все молекулярные массы или значения молекулярной массы, указанные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются приблизительными и приведены для описания.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Intervet International BV

Intervet Inc.

Cook, Stephanie

Morsey, Mohamad

Tarpey, Ian

Verstegen, Iwan

Sondermeijer, Paulus J. A.

Vermeij, Paul

<120> РЕКОМБИНАНТНЫЕ НЕПАТОГЕННЫЕ КОНСТРУКЦИИ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА,

КОДИРУЮЩИЕ АНТИГЕНЫ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА И ВИРУСА

ИНФЕКЦИОННОГО БУРСИТА

<130> 24341

<150> 62/351,471

<151> 2016-06-17

<160> 19

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1134

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 1

atggaccgcc atttattttt gaggaatgct ttttggacta tcgtactgct ttcttccttc 60

gctagccaga gcaccgccgc cgtcacgtac gactacattt taggccgtcg cgcgctcgac 120

gcgctaacca taccggcggt tggcccgtat aacagatacc tcactagggt atcaagaggc 180

tgcgacgttg tcgagctcaa cccgatttct aacgtggacg acatgatatc ggcggccaaa 240

gaaaaagaga aggggggccc tttcgaggcc tccgtcgtct ggttctacgt gattaagggc 300

gacgacggcg aggacaagta ctgtccaatc tatagaaaag agtacaggga atgtggcgac 360

gtacaactgc tatctgaatg cgccgttcaa tctgcacaga tgtgggcagt ggactatgtt 420

cctagcaccc ttgtatcgcg aaatggcgcg ggactgacta tattctcccc cactgctgcg 480

ctctctggcc aatacttgct gaccctgaaa atcgggagat ttgcgcaaac agctctcgta 540

actctagaag ttaacgatcg ctgtttaaag atcgggtcgc agcttaactt tttaccgtcg 600

aaatgctgga caacagaaca gtatcagact ggatttcaag gcgaacacct ttatccgatc 660

gcagacacca atacacgaca cgcggacgac gtatatcggg gatacgaaga tattctgcag 720

cgctggaata atttgctgag gaaaaagaat cctagcgcgc cagaccctcg tccagatagc 780

gtcccgcaag aaattcccgc tgtaaccaag aaagcggaag ggcgcacccc ggacgcagaa 840

agcagcgaaa agaaggcccc tccagaagac tcggaggacg acatgcaggc agaggcttct 900

ggagaaaatc ctgccgccct ccccgaagac gacgaagtcc ccgaggacac cgagcacgat 960

gatccaaact cggatcctga ctattacaat gacatgcccg ccgtgatccc ggtggaggag 1020

actactaaaa gttctaatgc cgtctccatg cccatattcg cggcgttcgt agcctgcgcg 1080

gtcgcgctcg tggggctact ggtttggagc atcgtaaaat gcgcgcgtag ctaa 1134

<210> 2

<211> 377

<212> Белок

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 2

Met Asp Arg His Leu Phe Leu Arg Asn Ala Phe Trp Thr Ile Val Leu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Phe Ala Ser Gln Ser Thr Ala Ala Val Thr Tyr Asp Tyr

20 25 30

Ile Leu Gly Arg Arg Ala Leu Asp Ala Leu Thr Ile Pro Ala Val Gly

35 40 45

Pro Tyr Asn Arg Tyr Leu Thr Arg Val Ser Arg Gly Cys Asp Val Val

50 55 60

Glu Leu Asn Pro Ile Ser Asn Val Asp Asp Met Ile Ser Ala Ala Lys

65 70 75 80

Glu Lys Glu Lys Gly Gly Pro Phe Glu Ala Ser Val Val Trp Phe Tyr

85 90 95

Val Ile Lys Gly Asp Asp Gly Glu Asp Lys Tyr Cys Pro Ile Tyr Arg

100 105 110

Lys Glu Tyr Arg Glu Cys Gly Asp Val Gln Leu Leu Ser Glu Cys Ala

115 120 125

Val Gln Ser Ala Gln Met Trp Ala Val Asp Tyr Val Pro Ser Thr Leu

130 135 140

Val Ser Arg Asn Gly Ala Gly Leu Thr Ile Phe Ser Pro Thr Ala Ala

145 150 155 160

Leu Ser Gly Gln Tyr Leu Leu Thr Leu Lys Ile Gly Arg Phe Ala Gln

165 170 175

Thr Ala Leu Val Thr Leu Glu Val Asn Asp Arg Cys Leu Lys Ile Gly

180 185 190

Ser Gln Leu Asn Phe Leu Pro Ser Lys Cys Trp Thr Thr Glu Gln Tyr

195 200 205

Gln Thr Gly Phe Gln Gly Glu His Leu Tyr Pro Ile Ala Asp Thr Asn

210 215 220

Thr Arg His Ala Asp Asp Val Tyr Arg Gly Tyr Glu Asp Ile Leu Gln

225 230 235 240

Arg Trp Asn Asn Leu Leu Arg Lys Lys Asn Pro Ser Ala Pro Asp Pro

245 250 255

Arg Pro Asp Ser Val Pro Gln Glu Ile Pro Ala Val Thr Lys Lys Ala

260 265 270

Glu Gly Arg Thr Pro Asp Ala Glu Ser Ser Glu Lys Lys Ala Pro Pro

275 280 285

Glu Asp Ser Glu Asp Asp Met Gln Ala Glu Ala Ser Gly Glu Asn Pro

290 295 300

Ala Ala Leu Pro Glu Asp Asp Glu Val Pro Glu Asp Thr Glu His Asp

305 310 315 320

Asp Pro Asn Ser Asp Pro Asp Tyr Tyr Asn Asp Met Pro Ala Val Ile

325 330 335

Pro Val Glu Glu Thr Thr Lys Ser Ser Asn Ala Val Ser Met Pro Ile

340 345 350

Phe Ala Ala Phe Val Ala Cys Ala Val Ala Leu Val Gly Leu Leu Val

355 360 365

Trp Ser Ile Val Lys Cys Ala Arg Ser

370 375

<210> 3

<211> 1089

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 3

atggcatcgc tacttggaac tctggctctc cttgccgcga cgctcgcacc cttcggcgcg 60

atgggaatcg tgatcactgg aaatcacgtc tccgccagga ttgacgacga tcacatcgtg 120

atcgtcgcgc ctcgccccga agctacaatt caactgcagc tatttttcat gcctggccag 180

agaccccaca aaccctactc aggaaccgtc cgcgtcgcgt ttcggtctga tataacaaac 240

cagtgctacc aggaacttag cgaggagcgc tttgaaaatt gcactcatcg atcgtcttct 300

gtttttgtcg gctgtaaagt gaccgagtac acgttctccg cctcgaacag actaaccgga 360

cctccacacc cgtttaagct cactatacga aatcctcgtc cgaacgacag cgggatgttc 420

tacgtaattg ttcggctaga cgacaccaaa gaacccattg acgtcttcgc gatccaacta 480

tcggtgtatc aattcgcgaa caccgccgcg actcgcggac tctattccaa ggcttcgtgt 540

cgcaccttcg gattacctac cgtccaactt gaggcctatc tcaggaccga ggaaagttgg 600

cgcaactggc aagcgtacgt tgccacggag gccacgacga ccagcgccga ggcgacaacc 660

ccgacgcccg tcactgcaac cagcgcctcc gaacttgaag cggaacactt tacctttccc 720

tggctagaaa atggcgtgga tcattacgaa ccgacacccg caaacgaaaa ttcaaacgtt 780

actgtccgtc tcgggacaat gagccctacg ctaattgggg taaccgtggc tgccgtcgtg 840

agcgcaacga tcggcctcgt cattgtaatt tccatcgtca ccagaaacat gtgcaccccg 900

caccgaaaat tagacacggt ctcgcaagac gacgaagaac gttcccaaac tagaagggaa 960

tcgcgaaaat ttggacccat ggttgcgtgc gaaataaaca agggggctga ccaggatagt 1020

gaacttgtgg aactggttgc gattgttaac ccgtctgcgc taagctcgcc cgactcaata 1080

aaaatgtga 1089

<210> 4

<211> 362

<212> Белок

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 4

Met Ala Ser Leu Leu Gly Thr Leu Ala Leu Leu Ala Ala Thr Leu Ala

1 5 10 15

Pro Phe Gly Ala Met Gly Ile Val Ile Thr Gly Asn His Val Ser Ala

20 25 30

Arg Ile Asp Asp Asp His Ile Val Ile Val Ala Pro Arg Pro Glu Ala

35 40 45

Thr Ile Gln Leu Gln Leu Phe Phe Met Pro Gly Gln Arg Pro His Lys

50 55 60

Pro Tyr Ser Gly Thr Val Arg Val Ala Phe Arg Ser Asp Ile Thr Asn

65 70 75 80

Gln Cys Tyr Gln Glu Leu Ser Glu Glu Arg Phe Glu Asn Cys Thr His

85 90 95

Arg Ser Ser Ser Val Phe Val Gly Cys Lys Val Thr Glu Tyr Thr Phe

100 105 110

Ser Ala Ser Asn Arg Leu Thr Gly Pro Pro His Pro Phe Lys Leu Thr

115 120 125

Ile Arg Asn Pro Arg Pro Asn Asp Ser Gly Met Phe Tyr Val Ile Val

130 135 140

Arg Leu Asp Asp Thr Lys Glu Pro Ile Asp Val Phe Ala Ile Gln Leu

145 150 155 160

Ser Val Tyr Gln Phe Ala Asn Thr Ala Ala Thr Arg Gly Leu Tyr Ser

165 170 175

Lys Ala Ser Cys Arg Thr Phe Gly Leu Pro Thr Val Gln Leu Glu Ala

180 185 190

Tyr Leu Arg Thr Glu Glu Ser Trp Arg Asn Trp Gln Ala Tyr Val Ala

195 200 205

Thr Glu Ala Thr Thr Thr Ser Ala Glu Ala Thr Thr Pro Thr Pro Val

210 215 220

Thr Ala Thr Ser Ala Ser Glu Leu Glu Ala Glu His Phe Thr Phe Pro

225 230 235 240

Trp Leu Glu Asn Gly Val Asp His Tyr Glu Pro Thr Pro Ala Asn Glu

245 250 255

Asn Ser Asn Val Thr Val Arg Leu Gly Thr Met Ser Pro Thr Leu Ile

260 265 270

Gly Val Thr Val Ala Ala Val Val Ser Ala Thr Ile Gly Leu Val Ile

275 280 285

Val Ile Ser Ile Val Thr Arg Asn Met Cys Thr Pro His Arg Lys Leu

290 295 300

Asp Thr Val Ser Gln Asp Asp Glu Glu Arg Ser Gln Thr Arg Arg Glu

305 310 315 320

Ser Arg Lys Phe Gly Pro Met Val Ala Cys Glu Ile Asn Lys Gly Ala

325 330 335

Asp Gln Asp Ser Glu Leu Val Glu Leu Val Ala Ile Val Asn Pro Ser

340 345 350

Ala Leu Ser Ser Pro Asp Ser Ile Lys Met

355 360

<210> 5

<211> 1362

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного бурсита

<400> 5

atgacaaacc tgcaagatca aacccaacag attgttccgt tcatacggag ccttctgatg 60

ccaacaaccg gaccggcgtc cattccggac gacaccctgg agaagcacac tctcaggtca 120

gagacctcga cctacaattt gactgtgggg gacacagggt cagggctaat tgtctttttc 180

cctggattcc ctggctcaat tgtgggtgct cactacacac tgcagagcaa tgggaactac 240

aagttcgatc agatgctcct gactgcccag aacctaccgg ccagctacaa ctactgcaga 300

ctagtgagtc ggagtctcac agtgaggtca agcacactcc ctggtggcgt ttatgcacta 360

aacggcacca taaacgccgt gaccttccaa ggaagcctga gtgaactgac agatgttagc 420

tacaatgggt tgatgtctgc aacagccaac atcaacgaca aaattgggaa tgtcctggta 480

ggggaagggg tcactgtcct cagcctaccc acatcatatg atcttgggta tgtgaggctt 540

ggtgacccca ttcccgctat agggcttgac ccaaaaatgg tagctacatg cgacagcagt 600

gacaggccca gagtctacac cataactgca gccgatgatt accaattctc atcacagtac 660

caaccaggtg gggtaacaat cacactgttc tcagccaaca ttgatgctat cacaagcctc 720

agcattgggg gagagctcgt gtttcaaaca agcgtccaag gccttgtact gggcgccacc 780

atctacctta taggctttga tgggactgcg gtaatcacca gagctgtggc cgcagataat 840

gggctgacgg ccggcaccga caatcttatg ccattcaatc ttgtcattcc aaccaatgag 900

ataacccagc caatcacatc catcaaactg gagatagtga cctccaaaag tggtggtcag 960

gcaggggatc agatgtcatg gtcggcaagt gggagcctag cagtgacgat ccatggtggc 1020

aactatccag gggccctccg tcccgtcaca ctagtagcct acgaaagagt ggcaacagga 1080

tccgtcgtta cggtcgctgg ggtgagtaac ttcgagctga ttccaaatcc tgaactagca 1140

aagaacctgg ttacagaata cggccgattt gacccaggag ccatgaacta cacaaaattg 1200

atactgagtg agagggaccg tcttggcatc aagaccgtct ggccaacaag ggagtacact 1260

gattttcgtg agtacttcat ggaggtggcc gacctcaact ctcccctgaa gattgcagga 1320

gcatttggct tcaaagacat aatccgggct ataaggaggt aa 1362

<210> 6

<211> 453

<212> Белок

<213> вирус инфекционного бурсита

<400> 6

Met Thr Asn Leu Gln Asp Gln Thr Gln Gln Ile Val Pro Phe Ile Arg

1 5 10 15

Ser Leu Leu Met Pro Thr Thr Gly Pro Ala Ser Ile Pro Asp Asp Thr

20 25 30

Leu Glu Lys His Thr Leu Arg Ser Glu Thr Ser Thr Tyr Asn Leu Thr

35 40 45

Val Gly Asp Thr Gly Ser Gly Leu Ile Val Phe Phe Pro Gly Phe Pro

50 55 60

Gly Ser Ile Val Gly Ala His Tyr Thr Leu Gln Ser Asn Gly Asn Tyr

65 70 75 80

Lys Phe Asp Gln Met Leu Leu Thr Ala Gln Asn Leu Pro Ala Ser Tyr

85 90 95

Asn Tyr Cys Arg Leu Val Ser Arg Ser Leu Thr Val Arg Ser Ser Thr

100 105 110

Leu Pro Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Gly Thr Ile Asn Ala Val Thr

115 120 125

Phe Gln Gly Ser Leu Ser Glu Leu Thr Asp Val Ser Tyr Asn Gly Leu

130 135 140

Met Ser Ala Thr Ala Asn Ile Asn Asp Lys Ile Gly Asn Val Leu Val

145 150 155 160

Gly Glu Gly Val Thr Val Leu Ser Leu Pro Thr Ser Tyr Asp Leu Gly

165 170 175

Tyr Val Arg Leu Gly Asp Pro Ile Pro Ala Ile Gly Leu Asp Pro Lys

180 185 190

Met Val Ala Thr Cys Asp Ser Ser Asp Arg Pro Arg Val Tyr Thr Ile

195 200 205

Thr Ala Ala Asp Asp Tyr Gln Phe Ser Ser Gln Tyr Gln Pro Gly Gly

210 215 220

Val Thr Ile Thr Leu Phe Ser Ala Asn Ile Asp Ala Ile Thr Ser Leu

225 230 235 240

Ser Ile Gly Gly Glu Leu Val Phe Gln Thr Ser Val Gln Gly Leu Val

245 250 255

Leu Gly Ala Thr Ile Tyr Leu Ile Gly Phe Asp Gly Thr Ala Val Ile

260 265 270

Thr Arg Ala Val Ala Ala Asp Asn Gly Leu Thr Ala Gly Thr Asp Asn

275 280 285

Leu Met Pro Phe Asn Leu Val Ile Pro Thr Asn Glu Ile Thr Gln Pro

290 295 300

Ile Thr Ser Ile Lys Leu Glu Ile Val Thr Ser Lys Ser Gly Gly Gln

305 310 315 320

Ala Gly Asp Gln Met Ser Trp Ser Ala Ser Gly Ser Leu Ala Val Thr

325 330 335

Ile His Gly Gly Asn Tyr Pro Gly Ala Leu Arg Pro Val Thr Leu Val

340 345 350

Ala Tyr Glu Arg Val Ala Thr Gly Ser Val Val Thr Val Ala Gly Val

355 360 365

Ser Asn Phe Glu Leu Ile Pro Asn Pro Glu Leu Ala Lys Asn Leu Val

370 375 380

Thr Glu Tyr Gly Arg Phe Asp Pro Gly Ala Met Asn Tyr Thr Lys Leu

385 390 395 400

Ile Leu Ser Glu Arg Asp Arg Leu Gly Ile Lys Thr Val Trp Pro Thr

405 410 415

Arg Glu Tyr Thr Asp Phe Arg Glu Tyr Phe Met Glu Val Ala Asp Leu

420 425 430

Asn Ser Pro Leu Lys Ile Ala Gly Ala Phe Gly Phe Lys Asp Ile Ile

435 440 445

Arg Ala Ile Arg Arg

450

<210> 7

<211> 527

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 7

aaacagctgt actacagagt aaccgatgga agaacatcgg tccagctaat gtgcctgtcg 60

tgcacgagcc attctccgga accttactgt cttttcgaca cgtctcttat agcgagggaa 120

aaagatatcg cgccagagtt atactttacc tctgatccgc aaacggcata ctgcacaata 180

actctgccgt ccggcgttgt tccgagattc gaatggagcc ttaataatgt ttcactgccg 240

gaatatttga cggccacgac cgttgtttcg cataccgctg gccaaagtac agtgtggaag 300

agcagcgcga gagcaggcga ggcgtggatt tctggccggg gaggcaatat atacgaatgc 360

accgtcctca tctcagacgg cactcgcgtt actacgcgaa aggagaggtg cttaacaaac 420

acatggattg cggtggaaaa cggtgctgct caggcgcagc tgtattcact cttttctgga 480

cttgtgtcag gattatgcgg gagcatatct gctttgtacg caacgct 527

<210> 8

<211> 264

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 8

tgactattac aatgacatgc ccgccgtgat cccggtggag gagactacta aaagttctaa 60

tgccgtctcc atgcccatat tcgcggcgtt cgtagcctgc gcggtcgcgc tcgtggggct 120

actggtttgg agcatcgtaa aatgcgcgcg tagctaatcg agcctagaat aggtggtttc 180

ttcctacatg ccacgcctca cgctcataat ataaatcaca tggaatagca taccaatgcc 240

tattcattgg gacgttcgaa aagc 264

<210> 9

<211> 3563

<212> ДНК

<213> вирус инфекционного ларинготрахеита

<400> 9

tcgacggcag agtcgcagac gcccctattg gacgtcaaaa ttgtagaggt gaagttttca 60

aacgatggcg aagtaacggc gacttgcgtt tccaccgtca aatctcccta tagggtagaa 120

actaattgga aagtagacct cgtagatgta atggatgaaa tttctgggaa cagtcccgcc 180

ggggttttta acagtaatga gaaatggcag aaacagctgt actacagagt aaccgatgga 240

agaacatcgg tccagctaat gtgcctgtcg tgcacgagcc attctccgga accttactgt 300

cttttcgaca cgtctcttat agcgagggaa aaagatatcg cgccagagtt atactttacc 360

tctgatccgc aaacggcata ctgcacaata actctgccgt ccggcgttgt tccgagattc 420

gaatggagcc ttaataatgt ttcactgccg gaatatttga cggccacgac cgttgtttcg 480

cataccgctg gccaaagtac agtgtggaag agcagcgcga gagcaggcga ggcgtggatt 540

tctggccggg gaggcaatat atacgaatgc accgtcctca tctcagacgg cactcgcgtt 600

actacgcgaa aggagaggtg cttaacaaac acatggattg cggtggaaaa cggtgctgct 660

caggcgcagc tgtattcact cttttctgga cttgtgtcag gattatgcgg gagcatatct 720

gctttgtacg caacgctatg gaccgccatt tatttttgag gaatgctttt tggactatcg 780

tactgctttc ttccttcgct agccagagca ccgccgccgt cacgtacgac tacattttag 840

gccgtcgcgc gctcgacgcg ctaaccatac cggcggttgg cccgtataac agatacctca 900

ctagggtatc aagaggctgc gacgttgtcg agctcaaccc gatttctaac gtggacgaca 960

tgatatcggc ggccaaagaa aaagagaagg ggggcccttt cgaggcctcc gtcgtctggt 1020

tctacgtgat taagggcgac gacggcgagg acaagtactg tccaatctat agaaaagagt 1080

acagggaatg tggcgacgta caactgctat ctgaatgcgc cgttcaatct gcacagatgt 1140

gggcagtgga ctatgttcct agcacccttg tatcgcgaaa tggcgcggga ctgactatat 1200

tctcccccac tgctgcgctc tctggccaat acttgctgac cctgaaaatc gggagatttg 1260

cgcaaacagc tctcgtaact ctagaagtta acgatcgctg tttaaagatc gggtcgcagc 1320

ttaacttttt accgtcgaaa tgctggacaa cagaacagta tcagactgga tttcaaggcg 1380

aacaccttta tccgatcgca gacaccaata cacgacacgc ggacgacgta tatcggggat 1440

acgaagatat tctgcagcgc tggaataatt tgctgaggaa aaagaatcct agcgcgccag 1500

accctcgtcc agatagcgtc ccgcaagaaa ttcccgctgt aaccaagaaa gcggaagggc 1560

gcaccccgga cgcagaaagc agcgaaaaga aggcccctcc agaagactcg gaggacgaca 1620

tgcaggcaga ggcttctgga gaaaatcctg ccgccctccc cgaagacgac gaagtccccg 1680

aggacaccga gcacgatgat ccaaactcgg atcctgacta ttacaatgac atgcccgccg 1740

tgatcccggt ggaggagact actaaaagtt ctaatgccgt ctccatgccc atattcgcgg 1800

cgttcgtagc ctgcgcggtc gcgctcgtgg ggctactggt ttggagcatc gtaaaatgcg 1860

cgcgtagcta atcgagccta gaataggtgg tttcttccta catgccacgc ctcacgctca 1920

taatataaat cacatggaat agcataccaa tgcctattca ttgggacgtt cgaaaagcat 1980

ggcatcgcta cttggaactc tggctctcct tgccgcgacg ctcgcaccct tcggcgcgat 2040

gggaatcgtg atcactggaa atcacgtctc cgccaggatt gacgacgatc acatcgtgat 2100

cgtcgcgcct cgccccgaag ctacaattca actgcagcta tttttcatgc ctggccagag 2160

accccacaaa ccctactcag gaaccgtccg cgtcgcgttt cggtctgata taacaaacca 2220

gtgctaccag gaacttagcg aggagcgctt tgaaaattgc actcatcgat cgtcttctgt 2280

ttttgtcggc tgtaaagtga ccgagtacac gttctccgcc tcgaacagac taaccggacc 2340

tccacacccg tttaagctca ctatacgaaa tcctcgtccg aacgacagcg ggatgttcta 2400

cgtaattgtt cggctagacg acaccaaaga acccattgac gtcttcgcga tccaactatc 2460

ggtgtatcaa ttcgcgaaca ccgccgcgac tcgcggactc tattccaagg cttcgtgtcg 2520

caccttcgga ttacctaccg tccaacttga ggcctatctc aggaccgagg aaagttggcg 2580

caactggcaa gcgtacgttg ccacggaggc cacgacgacc agcgccgagg cgacaacccc 2640

gacgcccgtc actgcaacca gcgcctccga acttgaagcg gaacacttta cctttccctg 2700

gctagaaaat ggcgtggatc attacgaacc gacacccgca aacgaaaatt caaacgttac 2760

tgtccgtctc gggacaatga gccctacgct aattggggta accgtggctg ccgtcgtgag 2820

cgcaacgatc ggcctcgtca ttgtaatttc catcgtcacc agaaacatgt gcaccccgca 2880

ccgaaaatta gacacggtct cgcaagacga cgaagaacgt tcccaaacta gaagggaatc 2940

gcgaaaattt ggacccatgg ttgcgtgcga aataaacaag ggggctgacc aggatagtga 3000

acttgtggaa ctggttgcga ttgttaaccc gtctgcgcta agctcgcccg actcaataaa 3060

aatgtgatta agtctgaatg tggctctcca atcatttcga ttctctaatc tcccaatcct 3120

ctcaaaaggg gcagtatcgg acacggactg ggaggggcgt acacgatagt tatatggtac 3180

agcagaggcc tctgaacact taggaggaga attcagccgg ggagagcccc tgttgagtag 3240

gcttgggagc atattgcagg atgaacatgt tagtgatagt tctcgcctct tgtcttgcgc 3300

gcctaacttt tgcgacgcga cacgtcctct ttttggaagg cactcaggct gtcctcgggg 3360

aagatgatcc cagaaacgtt ccggaaggga ctgtaatcaa atggacaaaa gtcctgcgga 3420

acgcgtgcaa gatgaaggcg gccgatgtct gctcttcgcc taactattgc tttcatgatt 3480

taatttacga cggaggaaag aaagactgcc cgcccgcggg acccctgtct gcaaacctgg 3540

taattttact aaagcgcggc gaa 3563

<210> 10

<211> 1391

<212> ДНК

<213> мышиный цитомегаловирус

<400> 10

aactccgccc gttttatgac tagaaccaat agtttttaat gccaaatgca ctgaaatccc 60

ctaatttgca aagccaaacg ccccctatgt gagtaatacg gggacttttt acccaatttc 120

ccacgcggaa agccccctaa tacactcata tggcatatga atcagcacgg tcatgcactc 180

taatggcggc ccatagggac tttccacata gggggcgttc accatttccc agcatagggg 240

tggtgactca atggccttta cccaagtaca ttgggtcaat gggaggtaag ccaatgggtt 300

tttcccatta ctggcaagca cactgagtca aatgggactt tccactgggt tttgcccaag 360

tacattgggt caatgggagg tgagccaatg ggaaaaaccc attgctgcca agtacactga 420

ctcaataggg actttccaat gggtttttcc attgttggca agcatataag gtcaatgtgg 480

gtgagtcaat agggactttc cattgtattc tgcccagtac ataaggtcaa tagggggtga 540

atcaacagga aagtcccatt ggagccaagt acactgcgtc aatagggact ttccattggg 600

ttttgcccag tacataaggt caatagggga tgagtcaatg ggaaaaaccc attggagcca 660

agtacactga ctcaataggg actttccatt gggttttgcc cagtacataa ggtcaatagg 720

gggtgagtca acaggaaagt tccattggag ccaagtacat tgagtcaata gggactttcc 780

aatgggtttt gcccagtaca taaggtcaat gggaggtaag ccaatgggtt tttcccatta 840

ctggcacgta tactgagtca ttagggactt tccaatgggt tttgcccagt acataaggtc 900

aataggggtg aatcaacagg aaagtcccat tggagccaag tacactgagt caatagggac 960

tttccattgg gttttgccca gtacaaaagg tcaatagggg gtgagtcaat gggtttttcc 1020

cattattggc acgtacataa ggtcaatagg ggtgagtcat tgggtttttc cagccaattt 1080

aattaaaacg ccatgtactt tcccaccatt gacgtcaatg ggctattgaa actaatgcaa 1140

cgtgaccttt aaacggtact ttcccatagc tgattaatgg gaaagtaccg ttctcgagcc 1200

aatacacgtc aatgggaagt gaaagggcag ccaaaacgta acaccgcccc ggttttcccc 1260

tggaaattcc atattggcac gcattctatt ggctgagctg cgttctacgt gggtataaga 1320

ggcgcgacca gcgtcggtac cgtcgcagtc ttcggtctga ccaccgtaga acgcagagct 1380

cctcgctgca g 1391

<210> 11

<211> 692

<212> ДНК

<213> Gallus gallus

<220>

<221> прочие_признаки

<222> (141)..(143)

<223> n представляет собой a, c, g, или t

<400> 11

cgcgccggat cagatctcca tggtcgaggt gagccccacg ttctgcttca ctctccccat 60

ctcccccccc tccccacccc caattttgta tttatttatt ttttaattat tttgtgcagc 120

gatgggggcg gggggggggg nnncgcgcgc caggcggggc ggggcggggc gaggggcggg 180

gcggggcgag gcggagaggt gcggcggcag ccaatcagag cggcgcgctc cgaaagtttc 240

cttttatggc gaggcggcgg cggcggcggc cctataaaaa gcgaagcgcg cggcgggcgg 300

gagtcgctgc gcgctgcctt cgccccgtgc cccgctccgc cgccgcctcg cgccgcccgc 360

cccggctctg actgaccgcg ttactcccac aggtgagcgg gcgggacggc ccttctcctc 420

cgggctgtaa ttagcggcag gaaggaaatg ggcggggagg gccttcgtgc gtcgccgcgc 480

cgccgtcccc ttctccctct ccagcctcgg ggctgtccgc ggggggacgg ctgccttcgg 540

gggggacggg gcagggcggg gttcggcttc tggcgtgtga ccggcggctc tagagcctct 600

gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt gctggttatt 660

gtgctgtctc atcattttgg caaagaattg ca 692

<210> 12

<211> 301

<212> ДНК

<213> человеческий цитомегаловирус

<400> 12

ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca 60

tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac cccattgacg 120

tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact 180

ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg ggaggtctat ataagcagag 240

ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc acgctgtttt gacctccata 300

g 301

<210> 13

<211> 55

<212> ДНК

<213> кошачий герпесвирус

<400> 13

caataaacat agcatacgtt atgacatggt ctaccgcgtc ttatatgggg acgac 55

<210> 14

<211> 370

<212> ДНК

<213> вирус простого герпеса

<400> 14

gatccataat tgattgacgg gagatggggg aggctaactg aaacacggaa ggagacaata 60

ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata aaaagacaga ataaaacgca cgggtgttgg 120

gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc 180

gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt ttcttccttt tccccacccc accccccaag 240

ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa cgtcggggcg gcaggccctg ccatagccac 300

tggccccgtg ggttagggac ggggtccccc atggggaatg gtttatggtt cgtgggggtt 360

attattttga 370

<210> 15

<211> 14113

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Герпесвирус индюков, мышиный цитомегаловирус, вирус инфекционного

бурсита, вакуолизирующий обезьяний вирус 40 и вирус инфекционного

ларинготрахеита

<400> 15

gaattccaga ctaaatgccc cggcccaatt tgtcaagtgt gcagtcacgg aggcgtcgac 60

cgtgtccccg gcattaaaca ggaaagcgtt aaagtttttg aatgttaggt cacaggtaca 120

aacataaatg tttgtacaaa caggtaacag gtacaaacat aaatgccccg gcataaatgt 180

cccttacggc ggatcgaaac gacattaggc atactcgggt accattttgc attccgatca 240

gcacggatga aattaggcag gaatgcggtt tatattatgc ggcattggac aaacgatatg 300

gcattgattg gcagtttatg aatgtcttca tgttgggcgt aaacggattc ctattggttc 360

agaagacaac gacgatatat ttagagagaa aaagctaccc agcataggat aaacacacat 420

tgagcattga gagacatagg tatcggtatg gatgggaaaa ctacacacgt gaacaccaaa 480

cgacttatat actcgagcgg tgatactact gagcaagaat gcactgcatc tgagccactg 540

aatgaagact gtgatgaaaa tgtgaccatc gatggaattg gagaagaata tgcgcagttc 600

ttcatgtccc cgcaatgggt cccaaatcta catcgcttga gcgaggatac caaaaaggta 660

taccgatgta tggtttccaa cagactcaat tattttccct attatgaggc gttcaggcgg 720

tctttgtttg atatgtatat gctaggtcgg ttggggcgtc gacttaagcg atctgactgg 780

gagactatta tgcatctgtc accaacgcaa agtcggcgtc tacatagaac tttaagattt 840

gtggagcgta gaattatccc atctaacagt tatatacgca catcgggcca cgttccgcct 900

tcgagggcac ttccgacaga tacgaattta aagatggatg aataattaaa ttggaaagag 960

taactacatt aatcgagcgt catgacggcg tcccgtgaaa atgggaattt tctactcgaa 1020

acaccgtgac atttgacaga cctggaattg ttattctgat atatagtggg tgtgtctggc 1080

cggcaacata cataatgtgc atgcgaaacc actttttcag tgtacgctga cattgtgcaa 1140

cacggagggg tagcatctac atacaatata tgttgattaa tgattggaga aaaaactatg 1200

cagctcgccg atcatatggc taactcgcct tcgtctatat ggcggacccc gcgggaaaaa 1260

tcgacgtacc atctgattta caacaccagt aatgaacatg tcgcatccct gcccagatct 1320

gtgcgcccat tggcgcggat cgttgtgaat gccgccgaaa cacttcaggt cggtatgaga 1380

gccgggaggc cgccatcagc aggagtttgg cgagaggtgt ttgatagaat gatgacagcc 1440

ttccgtgacc acgagcctac tgcgacattt aatgctgcaa atcccattag aaaaatggtc 1500

gagacagttc tacagaataa tgaagagccc ccgcggacgc atgctgaaat gggtaatcgc 1560

cttatgaaca ttatgtactg gtgttgcttg ggacacgcag gacaatgctc gatatggcag 1620

ttgtacgaga cgaatcaggc cattttaagt ttattagatg aagtggttat cggcacaaca 1680

aatccctttt gcaccctcga gcaatactgg aagccattat gcaccgcaat cgccaacaag 1740

gggacctcat cgcttgttga ggatgccaaa gtggccgagt acctggttag catgcgcaaa 1800

ttgatataac ataggcacgc tctgatgtta cagaccacaa taccgcatac atttattgta 1860

aggttgttaa taaaggttta ttctatgtaa gactacaata ctttcgacat tgcttgtata 1920

catattaaat actttctcaa gttcctatta cataaaatgg gatctatcat tacattcgtt 1980

aagagtctgg ataattttac tgtttgccag cttcgatctt ggaacgtact gtggatagtg 2040

ccttacttgg aatcgtgaaa atttgaaacg tccattattt ggatatcttc cggttgtccc 2100

atatcccgcc ctggtaccgc tcggatacct tgcccgtatg gattcgtatt gacagtcgcg 2160

caatcgggga ccaacaacgc gtgggtccac actcattcgg aaattttccg atgattctga 2220

atatttattg ccgctcgtta cgagtcgttg gacatatctg taatacattt cttcttctga 2280

aggatcgctg cacatttgat ctatacattg gccaggatgt tcaagtctca gatgttgcat 2340

tctggcacag cacaacttta tggcatttcc gatgtaatcg tccggcagcc ctgggggagt 2400

tctatattcg catattggga tggtaaggac aatagcagat ctcgcaacct ccagggaggc 2460

tataataacg tttttaaagg atggatttct cataaaaatc tgtcgcaaat tacactgaga 2520

atatccttta ctagcgccga ttgagagcat cgtcgtccaa ttttctaaat ggaaagaaaa 2580

caaggcgggc aagagtgttc caaacatttt cattttcggc gaatctctca aatcccatgg 2640

cgtgcaattg attgcaaaat tggcacttcc gttcacgttt gtatctccaa actctaagac 2700

acttttaatt gaaaaactac gttctagtgt ggaaagaaac ctataggcag accatagaac 2760

tatttgacac cacatatctt tttgtatgtc aaactgacca tgatcgtatg ttgctgaatg 2820

cactagggca attcgctcgc gcgactccat acattgaata attccacacg tcagctcatc 2880

ggttagcaag gtccagtagt tgaagtcatt tatttttccc cgcggctggc caaatctacc 2940

tctgggaata tccaagttgt cgaatatgat cgcaccggct ctggtcatgg tgaaggaact 3000

gtagcataaa gacgcaggta tcataggggt aatatttttt tattcactca catactaaaa 3060

gtaacgcata ttagcaccat gtatgggcta tcaattgaca tttgcgtagc actacatcac 3120

gattatgtac aacataatgg gacaacatat ggcaagtaga tgcaatttcc tcacactagt 3180

tgggtttatc tactattgaa ttttccccta tctgtgatac acttgggagc ctctacaagc 3240

atattgccat catgtacgtt tttatctact gtcttaacgc ccatgggaac ggaggcgtcg 3300

tcgtcatgta ttggacggca acataggcag caacacaaat tgcgtttagg tggggtgcat 3360

gtggactcga taccaagccc ctgcagctgg ggaacgtctg gtggagagcc gataatttga 3420

tatacgcacg ccatattact gtcgttgaag tacgccttat cttctatgtt ttcaaattta 3480

ggttcccaag tggacgtgag aagtgtttgt atctcacatg gaatggccca aggcattcca 3540

gcccaggtgc ctggtacttt aatggcaaac aaacgttttg gtagaggtat tgattctatt 3600

gcagttctgc agatatctgc agccccgagt atccacaggc tatacgatac gttatcggag 3660

gcaagctgcg gccgctctag aactagtgga tcccccgggc tgcagcccaa tgtggaattc 3720

gcccttgcac attgttactc ctgcatctta aaaatatatc ctgtagtaat tttcacagca 3780

atgtcataac atcatctcgc taaagaatga cctgggattg gagaagtaat gaatatttgc 3840

aaccaatgca ttgaataaac taacattaaa cgaattcact agtggatccc ccaactccgc 3900

ccgttttatg actagaacca atagttttta atgccaaatg cactgaaatc ccctaatttg 3960

caaagccaaa cgccccctat gtgagtaata cggggacttt ttacccaatt tcccacgcgg 4020

aaagccccct aatacactca tatggcatat gaatcagcac ggtcatgcac tctaatggcg 4080

gcccataggg actttccaca tagggggcgt tcaccatttc ccagcatagg ggtggtgact 4140

caatggcctt tacccaagta cattgggtca atgggaggta agccaatggg tttttcccat 4200

tactggcaag cacactgagt caaatgggac tttccactgg gttttgccca agtacattgg 4260

gtcaatggga ggtgagccaa tgggaaaaac ccattgctgc caagtacact gactcaatag 4320

ggactttcca atgggttttt ccattgttgg caagcatata aggtcaatgt gggtgagtca 4380

atagggactt tccattgtat tctgcccagt acataaggtc aatagggggt gaatcaacag 4440

gaaagtccca ttggagccaa gtacactgcg tcaataggga ctttccattg ggttttgccc 4500

agtacataag gtcaataggg gatgagtcaa tgggaaaaac ccattggagc caagtacact 4560

gactcaatag ggactttcca ttgggttttg cccagtacat aaggtcaata gggggtgagt 4620

caacaggaaa gttccattgg agccaagtac attgagtcaa tagggacttt ccaatgggtt 4680

ttgcccagta cataaggtca atgggaggta agccaatggg tttttcccat tactggcacg 4740

tatactgagt cattagggac tttccaatgg gttttgccca gtacataagg tcaatagggg 4800

tgaatcaaca ggaaagtccc attggagcca agtacactga gtcaataggg actttccatt 4860

gggttttgcc cagtacaaaa ggtcaatagg gggtgagtca atgggttttt cccattattg 4920

gcacgtacat aaggtcaata ggggtgagtc attgggtttt tccagccaat ttaattaaaa 4980

cgccatgtac tttcccacca ttgacgtcaa tgggctattg aaactaatgc aacgtgacct 5040

ttaaacggta ctttcccata gctgattaat gggaaagtac cgttctcgag ccaatacacg 5100

tcaatgggaa gtgaaagggc agccaaaacg taacaccgcc ccggttttcc cctggaaatt 5160

ccatattggc acgcattcta ttggctgagc tgcgttctac gtgggtataa gaggcgcgac 5220

cagcgtcggt accgtcgcag tcttcggtct gaccaccgta gaacgcagag ctcctcgctg 5280

caggcggccg ctctagaact cgtcgatcgc agcgatgaca aacctgcaag atcaaaccca 5340

acagattgtt ccgttcatac ggagccttct gatgccaaca accggaccgg cgtccattcc 5400

ggacgacacc ctggagaagc acactctcag gtcagagacc tcgacctaca atttgactgt 5460

gggggacaca gggtcagggc taattgtctt tttccctgga ttccctggct caattgtggg 5520

tgctcactac acactgcaga gcaatgggaa ctacaagttc gatcagatgc tcctgactgc 5580

ccagaaccta ccggccagct acaactactg cagactagtg agtcggagtc tcacagtgag 5640

gtcaagcaca ctccctggtg gcgtttatgc actaaacggc accataaacg ccgtgacctt 5700

ccaaggaagc ctgagtgaac tgacagatgt tagctacaat gggttgatgt ctgcaacagc 5760

caacatcaac gacaaaattg ggaatgtcct ggtaggggaa ggggtcactg tcctcagcct 5820

acccacatca tatgatcttg ggtatgtgag gcttggtgac cccattcccg ctatagggct 5880

tgacccaaaa atggtagcta catgcgacag cagtgacagg cccagagtct acaccataac 5940

tgcagccgat gattaccaat tctcatcaca gtaccaacca ggtggggtaa caatcacact 6000

gttctcagcc aacattgatg ctatcacaag cctcagcatt gggggagagc tcgtgtttca 6060

aacaagcgtc caaggccttg tactgggcgc caccatctac cttataggct ttgatgggac 6120

tgcggtaatc accagagctg tggccgcaga taatgggctg acggccggca ccgacaatct 6180

tatgccattc aatcttgtca ttccaaccaa tgagataacc cagccaatca catccatcaa 6240

actggagata gtgacctcca aaagtggtgg tcaggcaggg gatcagatgt catggtcggc 6300

aagtgggagc ctagcagtga cgatccatgg tggcaactat ccaggggccc tccgtcccgt 6360

cacactagta gcctacgaaa gagtggcaac aggatccgtc gttacggtcg ctggggtgag 6420

taacttcgag ctgattccaa atcctgaact agcaaagaac ctggttacag aatacggccg 6480

atttgaccca ggagccatga actacacaaa attgatactg agtgagaggg accgtcttgg 6540

catcaagacc gtctggccaa caagggagta cactgatttt cgtgagtact tcatggaggt 6600

ggccgacctc aactctcccc tgaagattgc aggagcattt ggcttcaaag acataatccg 6660

ggctataagg aggtaagctt cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac 6720

aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt 6780

tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt 6840

tcaggttcag ggggaggtgt gggaggtttt ttcggatcct ctagagtcga cggcagagtc 6900

gcagacgccc ctattggacg tcaaaattgt agaggtgaag ttttcaaacg atggcgaagt 6960

aacggcgact tgcgtttcca ccgtcaaatc tccctatagg gtagaaacta attggaaagt 7020

agacctcgta gatgtaatgg atgaaatttc tgggaacagt cccgccgggg tttttaacag 7080

taatgagaaa tggcagaaac agctgtacta cagagtaacc gatggaagaa catcggtcca 7140

gctaatgtgc ctgtcgtgca cgagccattc tccggaacct tactgtcttt tcgacacgtc 7200

tcttatagcg agggaaaaag atatcgcgcc agagttatac tttacctctg atccgcaaac 7260

ggcatactgc acaataactc tgccgtccgg cgttgttccg agattcgaat ggagccttaa 7320

taatgtttca ctgccggaat atttgacggc cacgaccgtt gtttcgcata ccgctggcca 7380

aagtacagtg tggaagagca gcgcgagagc aggcgaggcg tggatttctg gccggggagg 7440

caatatatac gaatgcaccg tcctcatctc agacggcact cgcgttacta cgcgaaagga 7500

gaggtgctta acaaacacat ggattgcggt ggaaaacggt gctgctcagg cgcagctgta 7560

ttcactcttt tctggacttg tgtcaggatt atgcgggagc atatctgctt tgtacgcaac 7620

gctatggacc gccatttatt tttgaggaat gctttttgga ctatcgtact gctttcttcc 7680

ttcgctagcc agagcaccgc cgccgtcacg tacgactaca ttttaggccg tcgcgcgctc 7740

gacgcgctaa ccataccggc ggttggcccg tataacagat acctcactag ggtatcaaga 7800

ggctgcgacg ttgtcgagct caacccgatt tctaacgtgg acgacatgat atcggcggcc 7860

aaagaaaaag agaagggggg ccctttcgag gcctccgtcg tctggttcta cgtgattaag 7920

ggcgacgacg gcgaggacaa gtactgtcca atctatagaa aagagtacag ggaatgtggc 7980

gacgtacaac tgctatctga atgcgccgtt caatctgcac agatgtgggc agtggactat 8040

gttcctagca cccttgtatc gcgaaatggc gcgggactga ctatattctc ccccactgct 8100

gcgctctctg gccaatactt gctgaccctg aaaatcggga gatttgcgca aacagctctc 8160

gtaactctag aagttaacga tcgctgttta aagatcgggt cgcagcttaa ctttttaccg 8220

tcgaaatgct ggacaacaga acagtatcag actggatttc aaggcgaaca cctttatccg 8280

atcgcagaca ccaatacacg acacgcggac gacgtatatc ggggatacga agatattctg 8340

cagcgctgga ataatttgct gaggaaaaag aatcctagcg cgccagaccc tcgtccagat 8400

agcgtcccgc aagaaattcc cgctgtaacc aagaaagcgg aagggcgcac cccggacgca 8460

gaaagcagcg aaaagaaggc ccctccagaa gactcggagg acgacatgca ggcagaggct 8520

tctggagaaa atcctgccgc cctccccgaa gacgacgaag tccccgagga caccgagcac 8580

gatgatccaa actcggatcc tgactattac aatgacatgc ccgccgtgat cccggtggag 8640

gagactacta aaagttctaa tgccgtctcc atgcccatat tcgcggcgtt cgtagcctgc 8700

gcggtcgcgc tcgtggggct actggtttgg agcatcgtaa aatgcgcgcg tagctaatcg 8760

agcctagaat aggtggtttc ttcctacatg ccacgcctca cgctcataat ataaatcaca 8820

tggaatagca taccaatgcc tattcattgg gacgttcgaa aagcatggca tcgctacttg 8880

gaactctggc tctccttgcc gcgacgctcg cacccttcgg cgcgatggga atcgtgatca 8940

ctggaaatca cgtctccgcc aggattgacg acgatcacat cgtgatcgtc gcgcctcgcc 9000

ccgaagctac aattcaactg cagctatttt tcatgcctgg ccagagaccc cacaaaccct 9060

actcaggaac cgtccgcgtc gcgtttcggt ctgatataac aaaccagtgc taccaggaac 9120

ttagcgagga gcgctttgaa aattgcactc atcgatcgtc ttctgttttt gtcggctgta 9180

aagtgaccga gtacacgttc tccgcctcga acagactaac cggacctcca cacccgttta 9240

agctcactat acgaaatcct cgtccgaacg acagcgggat gttctacgta attgttcggc 9300

tagacgacac caaagaaccc attgacgtct tcgcgatcca actatcggtg tatcaattcg 9360

cgaacaccgc cgcgactcgc ggactctatt ccaaggcttc gtgtcgcacc ttcggattac 9420

ctaccgtcca acttgaggcc tatctcagga ccgaggaaag ttggcgcaac tggcaagcgt 9480

acgttgccac ggaggccacg acgaccagcg ccgaggcgac aaccccgacg cccgtcactg 9540

caaccagcgc ctccgaactt gaagcggaac actttacctt tccctggcta gaaaatggcg 9600

tggatcatta cgaaccgaca cccgcaaacg aaaattcaaa cgttactgtc cgtctcggga 9660

caatgagccc tacgctaatt ggggtaaccg tggctgccgt cgtgagcgca acgatcggcc 9720

tcgtcattgt aatttccatc gtcaccagaa acatgtgcac cccgcaccga aaattagaca 9780

cggtctcgca agacgacgaa gaacgttccc aaactagaag ggaatcgcga aaatttggac 9840

ccatggttgc gtgcgaaata aacaaggggg ctgaccagga tagtgaactt gtggaactgg 9900

ttgcgattgt taacccgtct gcgctaagct cgcccgactc aataaaaatg tgattaagtc 9960

tgaatgtggc tctccaatca tttcgattct ctaatctccc aatcctctca aaaggggcag 10020

tatcggacac ggactgggag gggcgtacac gatagttata tggtacagca gaggcctctg 10080

aacacttagg aggagaattc agccggggag agcccctgtt gagtaggctt gggagcatat 10140

tgcaggatga acatgttagt gatagttctc gcctcttgtc ttgcgcgcct aacttttgcg 10200

acgcgacacg tcctcttttt ggaaggcact caggctgtcc tcggggaaga tgatcccaga 10260

aacgttccgg aagggactgt aatcaaatgg acaaaagtcc tgcggaacgc gtgcaagatg 10320

aaggcggccg atgtctgctc ttcgcctaac tattgctttc atgatttaat ttacgacgga 10380

ggaaagaaag actgcccgcc cgcgggaccc ctgtctgcaa acctggtaat tttactaaag 10440

cgcggcgaag cttagcttgc ctccgattct agcattacat agccggtcag tagatcctgc 10500

cattcggtag cgcaaccggc tacatcttca aacagtctca cgataaatgc atctctcgtt 10560

cctgccaatc cggaaccggg cataccactc ccgcctgccg atttaattct cacaattggg 10620

cgatgccggc ggggcaaaac gaatgtggat ttggcaaacc gacacaggtc tgctgtacgg 10680

actaatatgg gcacacccac atcattcttc agatgctcca tgcattgttc tatgagaaag 10740

atccataggg tggaggcagc gtcacgagat cgcccaggca atcgatcgca ttcgtctagt 10800

aaagtgacga gagttatcat gcacacaccc atgcccacgc cttccgaata actggagctg 10860

tggaagatcg gaaacgtctt tttgactgcc ggtctcgtac tactttcgca caggtgtata 10920

cccggacgcg tactatatat tttatatcat ccaacgtccg aaattacata cgtggcggcg 10980

atggaagtag atgttgagtc ttcgaaagta agtgcctcga atatgggtat tgtctgtgaa 11040

aatatcgaaa gcggtacgac ggttgcagaa ccgtcgatgt cgccagatac tagtaacaat 11100

agcttcgata acgaagactt ccgtgggcct gaatacgatg tggagataaa taccagaaaa 11160

tctgctaatc ttgatcgtat ggaatcttcg tgccgtgaac aacgagcggc gtgcgaactt 11220

cgaaagtgtt cgtgtcctac gtctgccgtg cgcatgcaat acagtattct ttcatctctc 11280

gctccgggtt cagagggtca tgtatatata tgtactagat acggggacgc ggaccaaaaa 11340

aaatgcatag tgaaggcagt cgttggagga aagaatcccg ggagggaagt ggatatttta 11400

aaaaccatct cacataaatc aattataaaa ttaatccatg cctataaatg gaaaaatgtt 11460

gtgtgtatgg caatgcgtgt atatcgttat gatcttttca catatattga cggagtcggc 11520

cctatgcccc ttcaacagat gatctatatt caacgtggac tactagaggc gctagcatac 11580

atacatgaaa ggggcatcat tcaccgagac gtaaagacgg agaatatatt cttggataat 11640

cacgaaaatg cagttttggg tgacttcggt gctgcatgcc aactaggaga ttgtatagat 11700

acgccccaat gttacggttg gagcggaact gtggaaacaa attcgccgga attatctgca 11760

cttgatccgt attgcacaaa aacagatatt tggagtgccg gattggttct atatgagatg 11820

gcaattaaaa atgtaccatt gtttagtaag caggtgaaaa gttcgggatc tcagctgaga 11880

tccataatac ggtgcatgca agtgcatgaa ctggagtttc cccgcaacga ttctaccaac 11940

ctctgtaaac atttcaaaca atatgcggtt cgtgtacgac cgccttatac cattcctcga 12000

gttataagaa atggggggat gccaatggat gttgaatatg tcatttctaa aatgcttacg 12060

tttgaccagg agttcagacc ttctgctaag gaaatattga atatgcccct atttactaag 12120

gcgccgatta acctgcttaa tatcacaccc tctgacagtg tctaacggta tacaggcggg 12180

agcgggtcgt ggcgtcatca tcaccacttg agaatttata ttttgaattg ttgattgata 12240

aattaacctg attcattgag aactgaaacg ccatattggt ttcttggata tgtctacaac 12300

aattagttaa attgctatgt tctactgcga gtaacatttg ataagttgta agagacgggc 12360

gactcatgtc gaagttgacg aatataaagt acataacgtg tttagaatac ccagaatccg 12420

aatagtccgc gggggcgtct tctcgcgtga gtaccaaata ctgagttgaa cttgaaaatg 12480

ctaaatctgt gacactcttt gtgtgatgat tattgtcacc acttcgaaga tggcttcgac 12540

attcatgatg ttctggtgtt tgtttggaat cgtaatagcg cttgtttcgt ccaagtctga 12600

caacaaagaa aatctgaaga attatatcac ggataagtca accaatatta gaatacccac 12660

gccattattt gtatcaacgg aaaactctta tcccacaaaa catgtaatct acgatgaaaa 12720

ctgtggcttc gctgtactca atcctataag tgaccccaaa tatgtccttt tgagccagct 12780

tctaatggga aggcgcaaat atgatgcgac ggtcgcgtgg tttgttctcg gtaaaatgtg 12840

tgccagatta atatatttgc gcgaatttta taactgctcg acaaatgagc cttttggcac 12900

atgttctatg agctctcctg gatggtggga caggcgctac gtctcaacca gtttcatttc 12960

tcgcgacgaa ttacagctgg tttttgcagc gccgtcccga gaattagatg gtttatatac 13020

gcgcgtagta gttgtcaacg gggactttac tacggccgat ataatgttta atgttaaagt 13080

ggcatgtgcc ttttcaaaga ctggaataga agatgataca ttatgcaaac cctttcattt 13140

ctttgccaat gcaacattgc acaatttaac catgattaga tcggtaactc ttcgagcgca 13200

cgaaagccat ttaaaggaat gggtggcacg gagaggtggt aacgtccctg cagtgctact 13260

tgagtctacc atgtatcatg catccaatct gcctagaaat ttcagggatt tctacataaa 13320

gtctccagat gattataagt ataatcacct agatgggcca tctgtaatgc tcatcactga 13380

cagacctagt gaagatttgg atgggaggct cgttcaccaa agtgacattt ttactactac 13440

aagtcctata aaacaggtcc ggtatgaaga gcatcagtca catacaaagc agtatcctgt 13500

aaacaaaata caagctataa tttttttgat agggttaggc tcgttcattg gaagcatatt 13560

cgtagttttg gtagtatgga ttatacgcag atattgcaat ggagcgcgga gtgggggaac 13620

gccccccagt cctcgccggt atgtgtatac caggctatga tcacgtgtga aacttgggcg 13680

gacctgtatc atatgtacac cgtccctatt cgtttatagc cagtacgtgt tatctgcaca 13740

tagaggaaca tgtgtcatac tgggatcgca tgcatggtat gtgtgactct aatattattc 13800

tgtatcataa taaaaacaca gtgcatggta tatagaggat cgctggtaag cactacggta 13860

gaccaatcgg ctcagattgc attctttggc atcgataccg ttgttaattt atatggcaaa 13920

gtcttgttca tgggagatca gtatttggag gaaatatact ctggaacgat ggaaatactc 13980

aaatggaatc aagctaaccg ctgctattct attgcgcatg caacatatta cgccgactgt 14040

cctataatca gttctacggt attcagagga tgccgggacg ccgttgttta tactaggccc 14100

cacagcagaa ttc 14113

<210> 16

<211> 13064

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Герпесвирус индюков, вирус инфекционного ларинготрахеита,

Gallus gallus, вирус инфекционного бурсита и кошачий герпесвирус

<220>

<221> прочие_признаки

<222> (7401)..(7403)

<223> n представляет собой a, c, g, или t

<400> 16

gaattccaga ctaaatgccc cggcccaatt tgtcaagtgt gcagtcacgg aggcgtcgac 60

cgtgtccccg gcattaaaca ggaaagcgtt aaagtttttg aatgttaggt cacaggtaca 120

aacataaatg tttgtacaaa caggtaacag gtacaaacat aaatgccccg gcataaatgt 180

cccttacggc ggatcgaaac gacattaggc atactcgggt accattttgc attccgatca 240

gcacggatga aattaggcag gaatgcggtt tatattatgc ggcattggac aaacgatatg 300

gcattgattg gcagtttatg aatgtcttca tgttgggcgt aaacggattc ctattggttc 360

agaagacaac gacgatatat ttagagagaa aaagctaccc agcataggat aaacacacat 420

tgagcattga gagacatagg tatcggtatg gatgggaaaa ctacacacgt gaacaccaaa 480

cgacttatat actcgagcgg tgatactact gagcaagaat gcactgcatc tgagccactg 540

aatgaagact gtgatgaaaa tgtgaccatc gatggaattg gagaagaata tgcgcagttc 600

ttcatgtccc cgcaatgggt cccaaatcta catcgcttga gcgaggatac caaaaaggta 660

taccgatgta tggtttccaa cagactcaat tattttccct attatgaggc gttcaggcgg 720

tctttgtttg atatgtatat gctaggtcgg ttggggcgtc gacttaagcg atctgactgg 780

gagactatta tgcatctgtc accaacgcaa agtcggcgtc tacatagaac tttaagattt 840

gtggagcgta gaattatccc atctaacagt tatatacgca catcgggcca cgttccgcct 900

tcgagggcac ttccgacaga tacgaattta aagatggatg aataattaaa ttggaaagag 960

taactacatt aatcgagcgt catgacggcg tcccgtgaaa atgggaattt tctactcgaa 1020

acaccgtgac atttgacaga cctggaattg ttattctgat atatagtggg tgtgtctggc 1080

cggcaacata cataatgtgc atgcgaaacc actttttcag tgtacgctga cattgtgcaa 1140

cacggagggg tagcatctac atacaatata tgttgattaa tgattggaga aaaaactatg 1200

cagctcgccg atcatatggc taactcgcct tcgtctatat ggcggacccc gcgggaaaaa 1260

tcgacgtacc atctgattta caacaccagt aatgaacatg tcgcatccct gcccagatct 1320

gtgcgcccat tggcgcggat cgttgtgaat gccgccgaaa cacttcaggt cggtatgaga 1380

gccgggaggc cgccatcagc aggagtttgg cgagaggtgt ttgatagaat gatgacagcc 1440

ttccgtgacc acgagcctac tgcgacattt aatgctgcaa atcccattag aaaaatggtc 1500

gagacagttc tacagaataa tgaagagccc ccgcggacgc atgctgaaat gggtaatcgc 1560

cttatgaaca ttatgtactg gtgttgcttg ggacacgcag gacaatgctc gatatggcag 1620

ttgtacgaga cgaatcaggc cattttaagt ttattagatg aagtggttat cggcacaaca 1680

aatccctttt gcaccctcga gcaatactgg aagccattat gcaccgcaat cgccaacaag 1740

gggacctcat cgcttgttga ggatgccaaa gtggccgagt acctggttag catgcgcaaa 1800

ttgatataac ataggcacgc tctgatgtta cagaccacaa taccgcatac atttattgta 1860

aggttgttaa taaaggttta ttctatgtaa gactacaata ctttcgacat tgcttgtata 1920

catattaaat actttctcaa gttcctatta cataaaatgg gatctatcat tacattcgtt 1980

aagagtctgg ataattttac tgtttgccag cttcgatctt ggaacgtact gtggatagtg 2040

ccttacttgg aatcgtgaaa atttgaaacg tccattattt ggatatcttc cggttgtccc 2100

atatcccgcc ctggtaccgc tcggatacct tgcccgtatg gattcgtatt gacagtcgcg 2160

caatcgggga ccaacaacgc gtgggtccac actcattcgg aaattttccg atgattctga 2220

atatttattg ccgctcgtta cgagtcgttg gacatatctg taatacattt cttcttctga 2280

aggatcgctg cacatttgat ctatacattg gccaggatgt tcaagtctca gatgttgcat 2340

tctggcacag cacaacttta tggcatttcc gatgtaatcg tccggcagcc ctgggggagt 2400

tctatattcg catattggga tggtaaggac aatagcagat ctcgcaacct ccagggaggc 2460

tataataacg tttttaaagg atggatttct cataaaaatc tgtcgcaaat tacactgaga 2520

atatccttta ctagcgccga ttgagagcat cgtcgtccaa ttttctaaat ggaaagaaaa 2580

caaggcgggc aagagtgttc caaacatttt cattttcggc gaatctctca aatcccatgg 2640

cgtgcaattg attgcaaaat tggcacttcc gttcacgttt gtatctccaa actctaagac 2700

acttttaatt gaaaaactac gttctagtgt ggaaagaaac ctataggcag accatagaac 2760

tatttgacac cacatatctt tttgtatgtc aaactgacca tgatcgtatg ttgctgaatg 2820

cactagggca attcgctcgc gcgactccat acattgaata attccacacg tcagctcatc 2880

ggttagcaag gtccagtagt tgaagtcatt tatttttccc cgcggctggc caaatctacc 2940

tctgggaata tccaagttgt cgaatatgat cgcaccggct ctggtcatgg tgaaggaact 3000

gtagcataaa gacgcaggta tcataggggt aatatttttt tattcactca catactaaaa 3060

gtaacgcata ttagcaccat gtatgggcta tcaattgaca tttgcgtagc actacatcac 3120

gattatgtac aacataatgg gacaacatat ggcaagtaga tgcaatttcc tcacactagt 3180

tgggtttatc tactattgaa ttttccccta tctgtgatac acttgggagc ctctacaagc 3240

atattgccat catgtacgtt tttatctact gtcttaacgc ccatgggaac ggaggcgtcg 3300

tcgtcatgta ttggacggca acataggcag caacacaaat tgcgtttagg tggggtgcat 3360

gtggactcga taccaagccc ctgcagctgg ggaacgtctg gtggagagcc gataatttga 3420

tatacgcacg ccatattact gtcgttgaag tacgccttat cttctatgtt ttcaaattta 3480

ggttcccaag tggacgtgag aagtgtttgt atctcacatg gaatggccca aggcattcca 3540

gcccaggtgc ctggtacttt aatggcaaac aaacgttttg gtagaggtat tgattctatt 3600

gcagttctgc agatatctgc agccccgagt atccacaggc tatacgatac gttatcggag 3660

gcaagcttaa ttaagtaccg agctcgaatt ggcgcgcccg acggcagagt cgcagacgcc 3720

cctattggac gtcaaaattg tagaggtgaa gttttcaaac gatggcgaag taacggcgac 3780

ttgcgtttcc accgtcaaat ctccctatag ggtagaaact aattggaaag tagacctcgt 3840

agatgtaatg gatgaaattt ctgggaacag tcccgccggg gtttttaaca gtaatgagaa 3900

atggcagaaa cagctgtact acagagtaac cgatggaaga acatcggtcc agctaatgtg 3960

cctgtcgtgc acgagccatt ctccggaacc ttactgtctt ttcgacacgt ctcttatagc 4020

gagggaaaaa gatatcgcgc cagagttata ctttacctct gatccgcaaa cggcatactg 4080

cacaataact ctgccgtccg gcgttgttcc gagattcgaa tggagcctta ataatgtttc 4140

actgccggaa tatttgacgg ccacgaccgt tgtttcgcat accgctggcc aaagtacagt 4200

gtggaagagc agcgcgagag caggcgaggc gtggatttct ggccggggag gcaatatata 4260

cgaatgcacc gtcctcatct cagacggcac tcgcgttact acgcgaaagg agaggtgctt 4320

aacaaacaca tggattgcgg tggaaaacgg tgctgctcag gcgcagctgt attcactctt 4380

ttctggactt gtgtcaggat tatgcgggag catatctgct ttgtacgcaa cgctatggac 4440

cgccatttat ttttgaggaa tgctttttgg actatcgtac tgctttcttc cttcgctagc 4500

cagagcaccg ccgccgtcac gtacgactac attttaggcc gtcgcgcgct cgacgcgcta 4560

accataccgg cggttggccc gtataacaga tacctcacta gggtatcaag aggctgcgac 4620

gttgtcgagc tcaacccgat ttctaacgtg gacgacatga tatcggcggc caaagaaaaa 4680

gagaaggggg gccctttcga ggcctccgtc gtctggttct acgtgattaa gggcgacgac 4740

ggcgaggaca agtactgtcc aatctataga aaagagtaca gggaatgtgg cgacgtacaa 4800

ctgctatctg aatgcgccgt tcaatctgca cagatgtggg cagtggacta tgttcctagc 4860

acccttgtat cgcgaaatgg cgcgggactg actatattct cccccactgc tgcgctctct 4920

ggccaatact tgctgaccct gaaaatcggg agatttgcgc aaacagctct cgtaactcta 4980

gaagttaacg atcgctgttt aaagatcggg tcgcagctta actttttacc gtcgaaatgc 5040

tggacaacag aacagtatca gactggattt caaggcgaac acctttatcc gatcgcagac 5100

accaatacac gacacgcgga cgacgtatat cggggatacg aagatattct gcagcgctgg 5160

aataatttgc tgaggaaaaa gaatcctagc gcgccagacc ctcgtccaga tagcgtcccg 5220

caagaaattc ccgctgtaac caagaaagcg gaagggcgca ccccggacgc agaaagcagc 5280

gaaaagaagg cccctccaga agactcggag gacgacatgc aggcagaggc ttctggagaa 5340

aatcctgccg ccctccccga agacgacgaa gtccccgagg acaccgagca cgatgatcca 5400

aactcggatc ctgactatta caatgacatg cccgccgtga tcccggtgga ggagactact 5460

aaaagttcta atgccgtctc catgcccata ttcgcggcgt tcgtagcctg cgcggtcgcg 5520

ctcgtggggc tactggtttg gagcatcgta aaatgcgcgc gtagctaatc gagcctagaa 5580

taggtggttt cttcctacat gccacgcctc acgctcataa tataaatcac atggaatagc 5640

ataccaatgc ctattcattg ggacgttcga aaagcatggc atcgctactt ggaactctgg 5700

ctctccttgc cgcgacgctc gcacccttcg gcgcgatggg aatcgtgatc actggaaatc 5760

acgtctccgc caggattgac gacgatcaca tcgtgatcgt cgcgcctcgc cccgaagcta 5820

caattcaact gcagctattt ttcatgcctg gccagagacc ccacaaaccc tactcaggaa 5880

ccgtccgcgt cgcgtttcgg tctgatataa caaaccagtg ctaccaggaa cttagcgagg 5940

agcgctttga aaattgcact catcgatcgt cttctgtttt tgtcggctgt aaagtgaccg 6000

agtacacgtt ctccgcctcg aacagactaa ccggacctcc acacccgttt aagctcacta 6060

tacgaaatcc tcgtccgaac gacagcggga tgttctacgt aattgttcgg ctagacgaca 6120

ccaaagaacc cattgacgtc ttcgcgatcc aactatcggt gtatcaattc gcgaacaccg 6180

ccgcgactcg cggactctat tccaaggctt cgtgtcgcac cttcggatta cctaccgtcc 6240

aacttgaggc ctatctcagg accgaggaaa gttggcgcaa ctggcaagcg tacgttgcca 6300

cggaggccac gacgaccagc gccgaggcga caaccccgac gcccgtcact gcaaccagcg 6360

cctccgaact tgaagcggaa cactttacct ttccctggct agaaaatggc gtggatcatt 6420

acgaaccgac acccgcaaac gaaaattcaa acgttactgt ccgtctcggg acaatgagcc 6480

ctacgctaat tggggtaacc gtggctgccg tcgtgagcgc aacgatcggc ctcgtcattg 6540

taatttccat cgtcaccaga aacatgtgca ccccgcaccg aaaattagac acggtctcgc 6600

aagacgacga agaacgttcc caaactagaa gggaatcgcg aaaatttgga cccatggttg 6660

cgtgcgaaat aaacaagggg gctgaccagg atagtgaact tgtggaactg gttgcgattg 6720

ttaacccgtc tgcgctaagc tcgcccgact caataaaaat gtgattaagt ctgaatgtgg 6780

ctctccaatc atttcgattc tctaatctcc caatcctctc aaaaggggca gtatcggaca 6840

cggactggga ggggcgtaca cgatagttat atggtacagc agaggcctct gaacacttag 6900

gaggagaatt cagccgggga gagcccctgt tgagtaggct tgggagcata ttgcaggatg 6960

aacatgttag tgatagttct cgcctcttgt cttgcgcgcc taacttttgc gacgcgacac 7020

gtcctctttt tggaaggcac tcaggctgtc ctcggggaag atgatcccag aaacgttccg 7080

gaagggactg taatcaaatg gacaaaagtc ctgcggaacg cgtgcaagat gaaggcggcc 7140

gatgtctgct cttcgcctaa ctattgcttt catgatttaa tttacgacgg aggaaagaaa 7200

gactgcccgc ccgcgggacc cctgtctgca aacctggtaa ttttactaaa gcgcggcggg 7260

cgcgccggat cagatctcca tggtcgaggt gagccccacg ttctgcttca ctctccccat 7320

ctcccccccc tccccacccc caattttgta tttatttatt ttttaattat tttgtgcagc 7380

gatgggggcg gggggggggg nnncgcgcgc caggcggggc ggggcggggc gaggggcggg 7440

gcggggcgag gcggagaggt gcggcggcag ccaatcagag cggcgcgctc cgaaagtttc 7500

cttttatggc gaggcggcgg cggcggcggc cctataaaaa gcgaagcgcg cggcgggcgg 7560

gagtcgctgc gcgctgcctt cgccccgtgc cccgctccgc cgccgcctcg cgccgcccgc 7620

cccggctctg actgaccgcg ttactcccac aggtgagcgg gcgggacggc ccttctcctc 7680

cgggctgtaa ttagcggcag gaaggaaatg ggcggggagg gccttcgtgc gtcgccgcgc 7740

cgccgtcccc ttctccctct ccagcctcgg ggctgtccgc ggggggacgg ctgccttcgg 7800

gggggacggg gcagggcggg gttcggcttc tggcgtgtga ccggcggctc tagagcctct 7860

gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt gctggttatt 7920

gtgctgtctc atcattttgg caaagaattg cagatctgga tctatgacaa acctgcaaga 7980

tcaaacccaa cagattgttc cgttcatacg gagccttctg atgccaacaa ccggaccggc 8040

gtccattccg gacgacaccc tggagaagca cactctcagg tcagagacct cgacctacaa 8100

tttgactgtg ggggacacag ggtcagggct aattgtcttt ttccctggat tccctggctc 8160

aattgtgggt gctcactaca cactgcagag caatgggaac tacaagttcg atcagatgct 8220

cctgactgcc cagaacctac cggccagcta caactactgc agactagtga gtcggagtct 8280

cacagtgagg tcaagcacac tccctggtgg cgtttatgca ctaaacggca ccataaacgc 8340

cgtgaccttc caaggaagcc tgagtgaact gacagatgtt agctacaatg ggttgatgtc 8400

tgcaacagcc aacatcaacg acaaagttgg gaatgtcctg gtaggggaag gggtcactgt 8460

cctcagccta cccacatcat atgatcttgg gtatgtgagg cttggtgacc ccattcccgc 8520

tatagggctt gacccaaaaa tggtagctac atgcgacagc agtgacaggc ccagagtcta 8580

caccataact gcagccgatg attaccaatt ctcatcacag taccaaccag gtggggtaac 8640

aatcacactg ttctcagcca acattgatgc tatcacaagc ctcagcattg ggggagagct 8700

cgtgtttcaa acaagcgtcc aaggccttgt actgggcgcc accatctacc ttataggctt 8760

tgatgggact gcggtaatca ccagagctgt ggccgcagat aatgggctga cggccggcac 8820

cgacaatctt atgccattca atcttgtcat tccaaccaat gagataaccc agccgatcac 8880

atccatcaaa ctggagatag tgacctccaa aagtggtggt caggcagggg atcagatgtc 8940

atggtcggca agtgggagcc tagcagtgac gatccatggt ggcaactatc caggggccct 9000

ccgtcccgtc acactagtag cctacgaaag agtggcaaca ggatccgtcg ttacggtcgc 9060

tggggtgagt aacttcgagc tgatcccaaa tcctgaacta gcaaagaacc tggttacaga 9120

atacggccga tttgacccag gagccatgaa ctacacaaaa ttgatactga gtgagaggga 9180

ccgtcttggc atcaagaccg tctggccaac aagggagtac actgattttc gtgagtactt 9240

catggaggtg gccgacctca actctcccct gaagattgca ggagcatttg gcttcaaaga 9300

cataatccgg gctataagga ggtaagatcc gatctctcga ttaattaaca ataaacatag 9360

catacgttat gacatggtct accgcgtctt atatggggac gacaagcttg cctccgattc 9420

tagcattaca tagccggtca gtagatcctg ccattcggta gcgcaaccgg ctacatcttc 9480

aaacagtctc acgataaatg catctctcgt tcctgccaat ccggaaccgg gcataccact 9540

cccgcctgcc gatttaattc tcacaattgg gcgatgccgg cggggcaaaa cgaatgtgga 9600

tttggcaaac cgacacaggt ctgctgtacg gactaatatg ggcacaccca catcattctt 9660

cagatgctcc atgcattgtt ctatgagaaa gatccatagg gtggaggcag cgtcacgaga 9720

tcgcccaggc aatcgatcgc attcgtctag taaagtgacg agagttatca tgcacacacc 9780

catgcccacg ccttccgaat aactggagct gtggaagatc ggaaacgtct ttttgactgc 9840

cggtctcgta ctactttcgc acaggtgtat acccggacgc gtactatata ttttatatca 9900

tccaacgtcc gaaattacat acgtggcggc gatggaagta gatgttgagt cttcgaaagt 9960

aagtgcctcg aatatgggta ttgtctgtga aaatatcgaa agcggtacga cggttgcaga 10020

accgtcgatg tcgccagata ctagtaacaa tagcttcgat aacgaagact tccgtgggcc 10080

tgaatacgat gtggagataa ataccagaaa atctgctaat cttgatcgta tggaatcttc 10140

gtgccgtgaa caacgagcgg cgtgcgaact tcgaaagtgt tcgtgtccta cgtctgccgt 10200

gcgcatgcaa tacagtattc tttcatctct cgctccgggt tcagagggtc atgtatatat 10260

atgtactaga tacggggacg cggaccaaaa aaaatgcata gtgaaggcag tcgttggagg 10320

aaagaatccc gggagggaag tggatatttt aaaaaccatc tcacataaat caattataaa 10380

attaatccat gcctataaat ggaaaaatgt tgtgtgtatg gcaatgcgtg tatatcgtta 10440

tgatcttttc acatatattg acggagtcgg ccctatgccc cttcaacaga tgatctatat 10500

tcaacgtgga ctactagagg cgctagcata catacatgaa aggggcatca ttcaccgaga 10560

cgtaaagacg gagaatatat tcttggataa tcacgaaaat gcagttttgg gtgacttcgg 10620

tgctgcatgc caactaggag attgtataga tacgccccaa tgttacggtt ggagcggaac 10680

tgtggaaaca aattcgccgg aattatctgc acttgatccg tattgcacaa aaacagatat 10740

ttggagtgcc ggattggttc tatatgagat ggcaattaaa aatgtaccat tgtttagtaa 10800

gcaggtgaaa agttcgggat ctcagctgag atccataata cggtgcatgc aagtgcatga 10860

actggagttt ccccgcaacg attctaccaa cctctgtaaa catttcaaac aatatgcggt 10920

tcgtgtacga ccgccttata ccattcctcg agttataaga aatgggggga tgccaatgga 10980

tgttgaatat gtcatttcta aaatgcttac gtttgaccag gagttcagac cttctgctaa 11040

ggaaatattg aatatgcccc tatttactaa ggcgccgatt aacctgctta atatcacacc 11100

ctctgacagt gtctaacggt atacaggcgg gagcgggtcg tggcgtcatc atcaccactt 11160

gagaatttat attttgaatt gttgattgat aaattaacct gattcattga gaactgaaac 11220

gccatattgg tttcttggat atgtctacaa caattagtta aattgctatg ttctactgcg 11280

agtaacattt gataagttgt aagagacggg cgactcatgt cgaagttgac gaatataaag 11340

tacataacgt gtttagaata cccagaatcc gaatagtccg cgggggcgtc ttctcgcgtg 11400

agtaccaaat actgagttga acttgaaaat gctaaatctg tgacactctt tgtgtgatga 11460

ttattgtcac cacttcgaag atggcttcga cattcatgat gttctggtgt ttgtttggaa 11520

tcgtaatagc gcttgtttcg tccaagtctg acaacaaaga aaatctgaag aattatatca 11580

cggataagtc aaccaatatt agaataccca cgccattatt tgtatcaacg gaaaactctt 11640

atcccacaaa acatgtaatc tacgatgaaa actgtggctt cgctgtactc aatcctataa 11700

gtgaccccaa atatgtcctt ttgagccagc ttctaatggg aaggcgcaaa tatgatgcga 11760

cggtcgcgtg gtttgttctc ggtaaaatgt gtgccagatt aatatatttg cgcgaatttt 11820

ataactgctc gacaaatgag ccttttggca catgttctat gagctctcct ggatggtggg 11880

acaggcgcta cgtctcaacc agtttcattt ctcgcgacga attacagctg gtttttgcag 11940

cgccgtcccg agaattagat ggtttatata cgcgcgtagt agttgtcaac ggggacttta 12000

ctacggccga tataatgttt aatgttaaag tggcatgtgc cttttcaaag actggaatag 12060

aagatgatac attatgcaaa ccctttcatt tctttgccaa tgcaacattg cacaatttaa 12120

ccatgattag atcggtaact cttcgagcgc acgaaagcca tttaaaggaa tgggtggcac 12180

ggagaggtgg taacgtccct gcagtgctac ttgagtctac catgtatcat gcatccaatc 12240

tgcctagaaa tttcagggat ttctacataa agtctccaga tgattataag tataatcacc 12300

tagatgggcc atctgtaatg ctcatcactg acagacctag tgaagatttg gatgggaggc 12360

tcgttcacca aagtgacatt tttactacta caagtcctat aaaacaggtc cggtatgaag 12420

agcatcagtc acatacaaag cagtatcctg taaacaaaat acaagctata atttttttga 12480

tagggttagg ctcgttcatt ggaagcatat tcgtagtttt ggtagtatgg attatacgca 12540

gatattgcaa tggagcgcgg agtgggggaa cgccccccag tcctcgccgg tatgtgtata 12600

ccaggctatg atcacgtgtg aaacttgggc ggacctgtat catatgtaca ccgtccctat 12660

tcgtttatag ccagtacgtg ttatctgcac atagaggaac atgtgtcata ctgggatcgc 12720

atgcatggta tgtgtgactc taatattatt ctgtatcata ataaaaacac agtgcatggt 12780

atatagagga tcgctggtaa gcactacggt agaccaatcg gctcagattg cattctttgg 12840

catcgatacc gttgttaatt tatatggcaa agtcttgttc atgggagatc agtatttgga 12900

ggaaatatac tctggaacga tggaaatact caaatggaat caagctaacc gctgctattc 12960

tattgcgcat gcaacatatt acgccgactg tcctataatc agttctacgg tattcagagg 13020

atgccgggac gccgttgttt atactaggcc ccacagcaga attc 13064

<210> 17

<211> 13017

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Герпесвирус индюков, вирус инфекционного ларинготрахеита,

человеческий цитомегаловирус, вирус инфекционного бурсита и вирус

простого герпеса

<400> 17

gaattccaga ctaaatgccc cggcccaatt tgtcaagtgt gcagtcacgg aggcgtcgac 60

cgtgtccccg gcattaaaca ggaaagcgtt aaagtttttg aatgttaggt cacaggtaca 120

aacataaatg tttgtacaaa caggtaacag gtacaaacat aaatgccccg gcataaatgt 180

cccttacggc ggatcgaaac gacattaggc atactcgggt accattttgc attccgatca 240

gcacggatga aattaggcag gaatgcggtt tatattatgc ggcattggac aaacgatatg 300

gcattgattg gcagtttatg aatgtcttca tgttgggcgt aaacggattc ctattggttc 360

agaagacaac gacgatatat ttagagagaa aaagctaccc agcataggat aaacacacat 420

tgagcattga gagacatagg tatcggtatg gatgggaaaa ctacacacgt gaacaccaaa 480

cgacttatat actcgagcgg tgatactact gagcaagaat gcactgcatc tgagccactg 540

aatgaagact gtgatgaaaa tgtgaccatc gatggaattg gagaagaata tgcgcagttc 600

ttcatgtccc cgcaatgggt cccaaatcta catcgcttga gcgaggatac caaaaaggta 660

taccgatgta tggtttccaa cagactcaat tattttccct attatgaggc gttcaggcgg 720

tctttgtttg atatgtatat gctaggtcgg ttggggcgtc gacttaagcg atctgactgg 780

gagactatta tgcatctgtc accaacgcaa agtcggcgtc tacatagaac tttaagattt 840

gtggagcgta gaattatccc atctaacagt tatatacgca catcgggcca cgttccgcct 900

tcgagggcac ttccgacaga tacgaattta aagatggatg aataattaaa ttggaaagag 960

taactacatt aatcgagcgt catgacggcg tcccgtgaaa atgggaattt tctactcgaa 1020

acaccgtgac atttgacaga cctggaattg ttattctgat atatagtggg tgtgtctggc 1080

cggcaacata cataatgtgc atgcgaaacc actttttcag tgtacgctga cattgtgcaa 1140

cacggagggg tagcatctac atacaatata tgttgattaa tgattggaga aaaaactatg 1200

cagctcgccg atcatatggc taactcgcct tcgtctatat ggcggacccc gcgggaaaaa 1260

tcgacgtacc atctgattta caacaccagt aatgaacatg tcgcatccct gcccagatct 1320

gtgcgcccat tggcgcggat cgttgtgaat gccgccgaaa cacttcaggt cggtatgaga 1380

gccgggaggc cgccatcagc aggagtttgg cgagaggtgt ttgatagaat gatgacagcc 1440

ttccgtgacc acgagcctac tgcgacattt aatgctgcaa atcccattag aaaaatggtc 1500

gagacagttc tacagaataa tgaagagccc ccgcggacgc atgctgaaat gggtaatcgc 1560

cttatgaaca ttatgtactg gtgttgcttg ggacacgcag gacaatgctc gatatggcag 1620

ttgtacgaga cgaatcaggc cattttaagt ttattagatg aagtggttat cggcacaaca 1680

aatccctttt gcaccctcga gcaatactgg aagccattat gcaccgcaat cgccaacaag 1740

gggacctcat cgcttgttga ggatgccaaa gtggccgagt acctggttag catgcgcaaa 1800

ttgatataac ataggcacgc tctgatgtta cagaccacaa taccgcatac atttattgta 1860

aggttgttaa taaaggttta ttctatgtaa gactacaata ctttcgacat tgcttgtata 1920

catattaaat actttctcaa gttcctatta cataaaatgg gatctatcat tacattcgtt 1980

aagagtctgg ataattttac tgtttgccag cttcgatctt ggaacgtact gtggatagtg 2040

ccttacttgg aatcgtgaaa atttgaaacg tccattattt ggatatcttc cggttgtccc 2100

atatcccgcc ctggtaccgc tcggatacct tgcccgtatg gattcgtatt gacagtcgcg 2160

caatcgggga ccaacaacgc gtgggtccac actcattcgg aaattttccg atgattctga 2220

atatttattg ccgctcgtta cgagtcgttg gacatatctg taatacattt cttcttctga 2280

aggatcgctg cacatttgat ctatacattg gccaggatgt tcaagtctca gatgttgcat 2340

tctggcacag cacaacttta tggcatttcc gatgtaatcg tccggcagcc ctgggggagt 2400

tctatattcg catattggga tggtaaggac aatagcagat ctcgcaacct ccagggaggc 2460

tataataacg tttttaaagg atggatttct cataaaaatc tgtcgcaaat tacactgaga 2520

atatccttta ctagcgccga ttgagagcat cgtcgtccaa ttttctaaat ggaaagaaaa 2580

caaggcgggc aagagtgttc caaacatttt cattttcggc gaatctctca aatcccatgg 2640

cgtgcaattg attgcaaaat tggcacttcc gttcacgttt gtatctccaa actctaagac 2700

acttttaatt gaaaaactac gttctagtgt ggaaagaaac ctataggcag accatagaac 2760

tatttgacac cacatatctt tttgtatgtc aaactgacca tgatcgtatg ttgctgaatg 2820

cactagggca attcgctcgc gcgactccat acattgaata attccacacg tcagctcatc 2880

ggttagcaag gtccagtagt tgaagtcatt tatttttccc cgcggctggc caaatctacc 2940

tctgggaata tccaagttgt cgaatatgat cgcaccggct ctggtcatgg tgaaggaact 3000

gtagcataaa gacgcaggta tcataggggt aatatttttt tattcactca catactaaaa 3060

gtaacgcata ttagcaccat gtatgggcta tcaattgaca tttgcgtagc actacatcac 3120

gattatgtac aacataatgg gacaacatat ggcaagtaga tgcaatttcc tcacactagt 3180

tgggtttatc tactattgaa ttttccccta tctgtgatac acttgggagc ctctacaagc 3240

atattgccat catgtacgtt tttatctact gtcttaacgc ccatgggaac ggaggcgtcg 3300

tcgtcatgta ttggacggca acataggcag caacacaaat tgcgtttagg tggggtgcat 3360

gtggactcga taccaagccc ctgcagctgg ggaacgtctg gtggagagcc gataatttga 3420

tatacgcacg ccatattact gtcgttgaag tacgccttat cttctatgtt ttcaaattta 3480

ggttcccaag tggacgtgag aagtgtttgt atctcacatg gaatggccca aggcattcca 3540

gcccaggtgc ctggtacttt aatggcaaac aaacgttttg gtagaggtat tgattctatt 3600

gcagttctgc agatatctgc agccccgagt atccacaggc tatacgatac gttatcggag 3660

gcaagcttgt taattaagtc gacggcagag tcgcagacgc ccctattgga cgtcaaaatt 3720

gtagaggtga agttttcaaa cgatggcgaa gtaacggcga cttgcgtttc caccgtcaaa 3780

tctccctata gggtagaaac taattggaaa gtagacctcg tagatgtaat ggatgaaatt 3840

tctgggaaca gtcccgccgg ggtttttaac agtaatgaga aatggcagaa acagctgtac 3900

tacagagtaa ccgatggaag aacatcggtc cagctaatgt gcctgtcgtg cacgagccat 3960

tctccggaac cttactgtct tttcgacacg tctcttatag cgagggaaaa agatatcgcg 4020

ccagagttat actttacctc tgatccgcaa acggcatact gcacaataac tctgccgtcc 4080

ggcgttgttc cgagattcga atggagcctt aataatgttt cactgccgga atatttgacg 4140

gccacgaccg ttgtttcgca taccgctggc caaagtacag tgtggaagag cagcgcgaga 4200

gcaggcgagg cgtggatttc tggccgggga ggcaatatat acgaatgcac cgtcctcatc 4260

tcagacggca ctcgcgttac tacgcgaaag gagaggtgct taacaaacac atggattgcg 4320

gtggaaaacg gtgctgctca ggcgcagctg tattcactct tttctggact tgtgtcagga 4380

ttatgcggga gcatatctgc tttgtacgca acgctatgga ccgccattta tttttgagga 4440

atgctttttg gactatcgta ctgctttctt ccttcgctag ccagagcacc gccgccgtca 4500

cgtacgacta cattttaggc cgtcgcgcgc tcgacgcgct aaccataccg gcggttggcc 4560

cgtataacag atacctcact agggtatcaa gaggctgcga cgttgtcgag ctcaacccga 4620

tttctaacgt ggacgacatg atatcggcgg ccaaagaaaa agagaagggg ggccctttcg 4680

aggcctccgt cgtctggttc tacgtgatta agggcgacga cggcgaggac aagtactgtc 4740

caatctatag aaaagagtac agggaatgtg gcgacgtaca actgctatct gaatgcgccg 4800

ttcaatctgc acagatgtgg gcagtggact atgttcctag cacccttgta tcgcgaaatg 4860

gcgcgggact gactatattc tcccccactg ctgcgctctc tggccaatac ttgctgaccc 4920

tgaaaatcgg gagatttgcg caaacagctc tcgtaactct agaagttaac gatcgctgtt 4980

taaagatcgg gtcgcagctt aactttttac cgtcgaaatg ctggacaaca gaacagtatc 5040

agactggatt tcaaggcgaa cacctttatc cgatcgcaga caccaataca cgacacgcgg 5100

acgacgtata tcggggatac gaagatattc tgcagcgctg gaataatttg ctgaggaaaa 5160

agaatcctag cgcgccagac cctcgtccag atagcgtccc gcaagaaatt cccgctgtaa 5220

ccaagaaagc ggaagggcgc accccggacg cagaaagcag cgaaaagaag gcccctccag 5280

aagactcgga ggacgacatg caggcagagg cttctggaga aaatcctgcc gccctccccg 5340

aagacgacga agtccccgag gacaccgagc acgatgatcc aaactcggat cctgactatt 5400

acaatgacat gcccgccgtg atcccggtgg aggagactac taaaagttct aatgccgtct 5460

ccatgcccat attcgcggcg ttcgtagcct gcgcggtcgc gctcgtgggg ctactggttt 5520

ggagcatcgt aaaatgcgcg cgtagctaat cgagcctaga ataggtggtt tcttcctaca 5580

tgccacgcct cacgctcata atataaatca catggaatag cataccaatg cctattcatt 5640

gggacgttcg aaaagcatgg catcgctact tggaactctg gctctccttg ccgcgacgct 5700

cgcacccttc ggcgcgatgg gaatcgtgat cactggaaat cacgtctccg ccaggattga 5760

cgacgatcac atcgtgatcg tcgcgcctcg ccccgaagct acaattcaac tgcagctatt 5820

tttcatgcct ggccagagac cccacaaacc ctactcagga accgtccgcg tcgcgtttcg 5880

gtctgatata acaaaccagt gctaccagga acttagcgag gagcgctttg aaaattgcac 5940

tcatcgatcg tcttctgttt ttgtcggctg taaagtgacc gagtacacgt tctccgcctc 6000

gaacagacta accggacctc cacacccgtt taagctcact atacgaaatc ctcgtccgaa 6060

cgacagcggg atgttctacg taattgttcg gctagacgac accaaagaac ccattgacgt 6120

cttcgcgatc caactatcgg tgtatcaatt cgcgaacacc gccgcgactc gcggactcta 6180

ttccaaggct tcgtgtcgca ccttcggatt acctaccgtc caacttgagg cctatctcag 6240

gaccgaggaa agttggcgca actggcaagc gtacgttgcc acggaggcca cgacgaccag 6300

cgccgaggcg acaaccccga cgcccgtcac tgcaaccagc gcctccgaac ttgaagcgga 6360

acactttacc tttccctggc tagaaaatgg cgtggatcat tacgaaccga cacccgcaaa 6420

cgaaaattca aacgttactg tccgtctcgg gacaatgagc cctacgctaa ttggggtaac 6480

cgtggctgcc gtcgtgagcg caacgatcgg cctcgtcatt gtaatttcca tcgtcaccag 6540

aaacatgtgc accccgcacc gaaaattaga cacggtctcg caagacgacg aagaacgttc 6600

ccaaactaga agggaatcgc gaaaatttgg acccatggtt gcgtgcgaaa taaacaaggg 6660

ggctgaccag gatagtgaac ttgtggaact ggttgcgatt gttaacccgt ctgcgctaag 6720

ctcgcccgac tcaataaaaa tgtgattaag tctgaatgtg gctctccaat catttcgatt 6780

ctctaatctc ccaatcctct caaaaggggc agtatcggac acggactggg aggggcgtac 6840

acgatagtta tatggtacag cagaggcctc tgaacactta ggaggagaat tcagccgggg 6900

agagcccctg ttgagtaggc ttgggagcat attgcaggat gaacatgtta gtgatagttc 6960

tcgcctcttg tcttgcgcgc ctaacttttg cgacgcgaca cgtcctcttt ttggaaggca 7020

ctcaggctgt cctcggggaa gatgatccca gaaacgttcc ggaagggact gtaatcaaat 7080

ggacaaaagt cctgcggaac gcgtgcaaga tgaaggcggc cgatgtctgc tcttcgccta 7140

actattgctt tcatgattta atttacgacg gaggaaagaa agactgcccg cccgcgggac 7200

ccctgtctgc aaacctggta attttactaa agcgcggcga aagcttaggt caattccctg 7260

gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt 7320

agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg 7380

gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg 7440

gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat 7500

gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca 7560

gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggcgcgccg 7620

gatctatgac aaacctgcaa gatcaaaccc aacagattgt tccgttcata cggagccttc 7680

tgatgccaac aaccggaccg gcgtccattc cggacgacac cctggagaag cacactctca 7740

ggtcagagac ctcgacctac aatttgactg tgggggacac agggtcaggg ctaattgtct 7800

ttttccctgg attccctggc tcaattgtgg gtgctcacta cacactgcag agcaatggga 7860

actacaagtt cgatcagatg ctcctgactg cccagaacct accggccagc tacaactact 7920

gcagactagt gagtcggagt ctcacagtga ggtcaagcac actccctggt ggcgtttatg 7980

cactaaacgg caccataaac gccgtgacct tccaaggaag cctgagtgaa ctgacagatg 8040

ttagctacaa tgggttgatg tctgcaacag ccaacatcaa cgacaaagtt gggaatgtcc 8100

tggtagggga aggggtcact gtcctcagcc tacccacatc atatgatctt gggtatgtga 8160

ggcttggtga ccccattccc gctatagggc ttgacccaaa aatggtagct acatgcgaca 8220

gcagtgacag gcccagagtc tacaccataa ctgcagccga tgattaccaa ttctcatcac 8280

agtaccaacc aggtggggta acaatcacac tgttctcagc caacattgat gctatcacaa 8340

gcctcagcat tgggggagag ctcgtgtttc aaacaagcgt ccaaggcctt gtactgggcg 8400

ccaccatcta ccttataggc tttgatggga ctgcggtaat caccagagct gtggccgcag 8460

ataatgggct gacggccggc accgacaatc ttatgccatt caatcttgtc attccaacca 8520

atgagataac ccagccgatc acatccatca aactggagat agtgacctcc aaaagtggtg 8580

gtcaggcagg ggatcagatg tcatggtcgg caagtgggag cctagcagtg acgatccatg 8640

gtggcaacta tccaggggcc ctccgtcccg tcacactagt agcctacgaa agagtggcaa 8700

caggatccgt cgttacggtc gctggggtga gtaacttcga gctgatccca aatcctgaac 8760

tagcaaagaa cctggttaca gaatacggcc gatttgaccc aggagccatg aactacacaa 8820

aattgatact gagtgagagg gaccgtcttg gcatcaagac cgtctggcca acaagggagt 8880

acactgattt tcgtgagtac ttcatggagg tggccgacct caactctccc ctgaagattg 8940

caggagcatt tggcttcaaa gacataatcc gggctataag gaggtaagat ccataattga 9000

ttgacgggag atgggggagg ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc 9060

gcgctatgac ggcaataaaa agacagaata aaacgcacgg gtgttgggtc gtttgttcat 9120

aaacgcgggg ttcggtccca gggctggcac tctgtcgata ccccaccgag accccattgg 9180

ggccaatacg cccgcgtttc ttccttttcc ccaccccacc ccccaagttc gggtgaaggc 9240

ccagggctcg cagccaacgt cggggcggca ggccctgcca tagccactgg ccccgtgggt 9300

tagggacggg gtcccccatg gggaatggtt tatggttcgt gggggttatt attttgaagc 9360

ttgcctccga ttctagcatt acatagccgg tcagtagatc ctgccattcg gtagcgcaac 9420

cggctacatc ttcaaacagt ctcacaataa atgcatctct cgttcctgcc aatccggaac 9480

cgggcatacc actcccgcct gccgatttaa ttctcacaat tgggcgatgc cggcggggca 9540

aaacgaatgt ggatttggca aaccgacaca ggtctgctgt acggactaat atgggcacac 9600

ccacatcatt cttcagatgc tccatgcatt gttctatgag aaagatccat agggtggagg 9660

cagcgtcacg agatcgccca ggcaatcgat cgcattcgtc tagtaaagtg acgagagtta 9720

tcatgcacac acccatgccc acgccttccg aataactgga gctgtggaag atcggaaacg 9780

tctttttgac tgccggtctc gtactacttt cgcacaggtg tatacccgga cgcgtactat 9840

atattttata tcatccaacg tccgaaatta catacgtggc ggcgatggaa gtagatgttg 9900

agtcttcgaa agtaagtgcc tcgaatatgg gtattgtctg tgaaaatatc gaaagcggta 9960

cgacggttgc agaaccgtcg atgtcgccag atactagtaa caatagcttc gataacgaag 10020

acttccgtgg gcctgaatac gatgtggaga taaataccag aaaatctgct aatcttgatc 10080

gtatggaatc ttcgtgccgt gaacaacgag cggcgtgcga acttcgaaag tgttcgtgtc 10140

ctacgtctgc cgtgcgcatg caatacagta ttctttcatc tctcgctccg ggttcagagg 10200

gtcatgtata tatatgtact agatacgggg acgcggacca aaaaaaatgc atagtgaagg 10260

cagtcgttgg aggaaagaat cccgggaggg aagtggatat tttaaaaacc atctcacata 10320

aatcaattat aaaattaatc catgcctata aatggaaaaa tgttgtgtgt atggcaatgc 10380

gtgtatatcg ttatgatctt ttcacatata ttgacggagt cggccctatg ccccttcaac 10440

agatgatcta tattcaacgt ggactactag aggcgctagc atacatacat gaaaggggca 10500

tcattcaccg agacgtaaag acggagaata tattcttgga taatcacgaa aatgcagttt 10560

tgggtgactt cggtgctgca tgccaactag gagattgtat agatacgccc caatgttacg 10620

gttggagcgg aactgtggaa acaaattcgc cggaattatc tgcacttgat ccgtattgca 10680

caaaaacaga tatttggagt gccggattgg ttctatatga gatggcaatt aaaaatgtac 10740

cattgtttag taagcaggtg aaaagttcgg gatctcagct gagatccata atacggtgca 10800

tgcaagtgca tgaactggag tttccccgca acgattctac caacctctgt aaacatttca 10860

aacaatatgc ggttcgtgta cgaccgcctt ataccattcc tcgagttata agaaatgggg 10920

ggatgccaat ggatgttgaa tatgtcattt ctaaaatgct tacgtttgac caggagttca 10980

gaccttctgc taaggaaata ttgaatatgc ccctatttac taaggcgccg attaacctgc 11040

ttaatatcac accctctgac agtgtctaac ggtatacagg cgggagcggg tcgtggcgtc 11100

atcatcacca cttgagaatt tatattttga attgttgatt gataaattaa cctgattcat 11160

tgagaactga aacgccatat tggtttcttg gatatgtcta caacaattag ttaaattgct 11220

atgttctact gcgagtaaca tttgataagt tgtaagagac gggcgactca tgtcgaagtt 11280

gacgaatata aagtacataa cgtgtttaga atacccagaa tccgaatagt ccgcgggggc 11340

gtcttctcgc gtgagtacca aatactgagt tgaacttgaa aatgctaaat ctgtgacact 11400

ctttgtgtga tgattattgt caccacttcg aagatggctt cgacattcat gatgttctgg 11460

tgtttgtttg gaatcgtaat agcgcttgtt tcgtccaagt ctgacaacaa agaaaatctg 11520

aagaattata tcacggataa gtcaaccaat attagaatac ccacgccatt atttgtatca 11580

acggaaaact cttatcccac aaaacatgta atctacgatg aaaactgtgg cttcgctgta 11640

ctcaatccta taagtgaccc caaatatgtc cttttgagcc agcttctaat gggaaggcgc 11700

aaatatgatg cgacggtcgc gtggtttgtt ctcggtaaaa tgtgtgccag attaatatat 11760

ttgcgcgaat tttataactg ctcgacaaat gagccttttg gcacatgttc tatgagctct 11820

cctggatggt gggacaggcg ctacgtctca accagtttca tttctcgcga cgaattacag 11880

ctggtttttg cagcgccgtc ccgagaatta gatggtttat atacgcgcgt agtagttgtc 11940

aacggggact ttactacggc cgatataatg tttaatgtta aagtggcatg tgccttttca 12000

aagactggaa tagaagatga tacattatgc aaaccctttc atttctttgc caatgcaaca 12060

ttgcacaatt taaccatgat tagatcggta actcttcgag cgcacgaaag ccatttaaag 12120

gaatgggtgg cacggagagg tggtaacgtc cctgcagtgc tacttgagtc taccatgtat 12180

catgcatcca atctgcctag aaatttcagg gatttctaca taaagtctcc agatgattat 12240

aagtataatc acctagatgg gccatctgta atgctcatca ctgacagacc tagtgaagat 12300

ttggatggga ggctcgttca ccaaagtgac atttttacta ctacaagtcc tataaaacag 12360

gtccggtatg aagagcatca gtcacataca aagcagtatc ctgtaaacaa aatacaagct 12420

ataatttttt tgatagggtt aggctcgttc attggaagca tattcgtagt tttggtagta 12480

tggattatac gcagatattg caatggagcg cggagtgggg gaacgccccc cagtcctcgc 12540

cggtatgtgt ataccaggct atgatcacgt gtgaaacttg ggcggacctg tatcatatgt 12600

acaccgtccc tattcgttta tagccagtac gtgttatctg cacatagagg aacatgtgtc 12660

atactgggat cgcatgcatg gtatgtgtga ctctaatatt attctgtatc ataataaaaa 12720

cacagtgcat ggtatataga ggatcgctgg taagcactac ggtagaccaa tcggctcaga 12780

ttgcattctt tggcatcgat accgttgtta atttatatgg caaagtcttg ttcatgggag 12840

atcagtattt ggaggaaata tactctggaa cgatggaaat actcaaatgg aatcaagcta 12900

accgctgcta ttctattgcg catgcaacat attacgccga ctgtcctata atcagttcta 12960

cggtattcag aggatgccgg gacgccgttg tttatactag gccccacagc agaattc 13017

<210> 18

<211> 15252

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Герпесвирус индюков, мышиный цитомегаловирус, вирус инфекционного

бурсита, вакуолизирующий обезьяний вирус 40 и вирус инфекционного

ларинготрахеита

<400> 18

ggcgcgccac tggagaacgg catgaccgca aaaggcgttg tagagatcga tcccacgaac 60

tctcaggcga tcgtgtcagt cgccataaac agcgacgatc gtctccagga tctgaacggt 120

tttcttctca acgatcatca gtatatgagg aactgaacct gatatttagc cgagggaaac 180

gcaggttaaa aaccctatca agcgattgcg attttcgcgt atctagtaaa aatagatggg 240

cttcggtact agccttcgcc gccaactctg aatatgccct tcgtggacct catataacat 300

ggcattgttt gttggatgcg gggccggaat taagaagaac attcgaaata cgagcaaaaa 360

tttcggccct ggcatgtgct gcgcgagaat cggtacttcg gggagaaagt tttatcggag 420

ctttgggtag tgcagaggaa actctatctt ggttgaaaat gcatgcgacc ctgcacttga 480

ttctggttaa ccacgatcca atttttaaga cggctggcgc ggtcctagat aacctccgct 540

taaaactagc cccaatattg atgtgcagat ataacacaga aaaacgatca atggaagaca 600

tgctacggcg gtcatctccc gaagacatca ccgattccct aacaatgtgc ctgattatgt 660

tatcgcgcat tcgtcgtacc atgcgcaccg caggaaataa atatagctat atgatagatc 720

caatgaatcg tatgtctaat tacactccag gcgaatgtat gacaggtata ttgcgatata 780

ttgacgaaca tgctagaagg tgtcctgatc acatatgtaa tttgtatatc acatgtacac 840

ttatgccgat gtatgtgcac gggcgatatt tctattgtaa ttcatttttt tgttagtaaa 900

ctaccacagg ctgtccggaa atctaagtta atgaataaag tagatggtta atactcattg 960

cttagaattg gactactttt aattctcttt aatgttcgta ttaaataaaa acatctttaa 1020

taaacttcag cctcttcgct tattgtagaa attgagtatt caaaatcatg ttcaaagccg 1080

tcttcggaga gtgtactcgc cacggtggtt ggaacatcac tatgtctaca cgtcaaattt 1140

aagcacgtca ggtctgtcga ggacaagaaa tggttaacta gtgtttcaat tattcttata 1200

aacgttaagc attgtaagcc ccccggccgt ccgcagcaac aatttactag tatgccgtgg 1260

gctccgggac tatcacggat gtccaattcg cacatgcata taatttttct agggtctctc 1320

atttcgagaa atcttcgggg atccatcagc aatgcgggct gtagtcccga ttcccgtttc 1380

aaatgaaggt gctccaacac ggtcttcaaa gcaaccggca taccagcaaa cacagactgc 1440

aactccccgc tgcaatgatt ggttataaac agtaatctgt cttctggaag tatatttcgc 1500

ccgacaatcc acggcgcccc caaagttaaa aaccatccat gtgtatttgc gtcttctctg 1560

ttaaaagaat attgactggc attttcccgt tgaccgccag atatccaaag tacagcacga 1620

tgttgcacgg acgactttgc agtcaccagc cttcctttcc acccccccac caacaaaatg 1680

tttatcgtag gacccatatc cgtaataagg atgggtctgg cagcaacccc ataggcgcct 1740

cggcgtggta gttctcgagg ccttaagctt aaggatcccc caactccgcc cgttttatga 1800

ctagaaccaa tagtttttaa tgccaaatgc actgaaatcc cctaatttgc aaagccaaac 1860

gccccctatg tgagtaatac ggggactttt tacccaattt cccacgcgga aagcccccta 1920

atacactcat atggcatatg aatcagcacg gtcatgcact ctaatggcgg cccataggga 1980

ctttccacat agggggcgtt caccatttcc cagcataggg gtggtgactc aatggccttt 2040

acccaagtac attgggtcaa tgggaggtaa gccaatgggt ttttcccatt actggcaagc 2100

acactgagtc aaatgggact ttccactggg ttttgcccaa gtacattggg tcaatgggag 2160

gtgagccaat gggaaaaacc cattgctgcc aagtacactg actcaatagg gactttccaa 2220

tgggtttttc cattgttggc aagcatataa ggtcaatgtg ggtgagtcaa tagggacttt 2280

ccattgtatt ctgcccagta cataaggtca atagggggtg aatcaacagg aaagtcccat 2340

tggagccaag tacactgcgt caatagggac tttccattgg gttttgccca gtacataagg 2400

tcaatagggg atgagtcaat gggaaaaacc cattggagcc aagtacactg actcaatagg 2460

gactttccat tgggttttgc ccagtacata aggtcaatag ggggtgagtc aacaggaaag 2520

ttccattgga gccaagtaca ttgagtcaat agggactttc caatgggttt tgcccagtac 2580

ataaggtcaa tgggaggtaa gccaatgggt ttttcccatt actggcacgt atactgagtc 2640

attagggact ttccaatggg ttttgcccag tacataaggt caataggggt gaatcaacag 2700

gaaagtccca ttggagccaa gtacactgag tcaataggga ctttccattg ggttttgccc 2760

agtacaaaag gtcaataggg ggtgagtcaa tgggtttttc ccattattgg cacgtacata 2820

aggtcaatag gggtgagtca ttgggttttt ccagccaatt taattaaaac gccatgtact 2880

ttcccaccat tgacgtcaat gggctattga aactaatgca acgtgacctt taaacggtac 2940

tttcccatag ctgattaatg ggaaagtacc gttctcgagc caatacacgt caatgggaag 3000

tgaaagggca gccaaaacgt aacaccgccc cggttttccc ctggaaattc catattggca 3060

cgcattctat tggctgagct gcgttctacg tgggtataag aggcgcgacc agcgtcggta 3120

ccgtcgcagt cttcggtctg accaccgtag aacgcagagc tcctcgctgc aggcggccgc 3180

tctagaactc gtcgatcgca gcgatgacaa acctgcaaga tcaaacccaa cagattgttc 3240

cgttcatacg gagccttctg atgccaacaa ccggaccggc gtccattccg gacgacaccc 3300

tggagaagca cactctcagg tcagagacct cgacctacaa tttgactgtg ggggacacag 3360

ggtcagggct aattgtcttt ttccctggat tccctggctc aattgtgggt gctcactaca 3420

cactgcagag caatgggaac tacaagttcg atcagatgct cctgactgcc cagaacctac 3480

cggccagcta caactactgc agactagtga gtcggagtct cacagtgagg tcaagcacac 3540

tccctggtgg cgtttatgca ctaaacggca ccataaacgc cgtgaccttc caaggaagcc 3600

tgagtgaact gacagatgtt agctacaatg ggttgatgtc tgcaacagcc aacatcaacg 3660

acaaaattgg gaatgtcctg gtaggggaag gggtcactgt cctcagccta cccacatcat 3720

atgatcttgg gtatgtgagg cttggtgacc ccattcccgc tatagggctt gacccaaaaa 3780

tggtagctac atgcgacagc agtgacaggc ccagagtcta caccataact gcagccgatg 3840

attaccaatt ctcatcacag taccaaccag gtggggtaac aatcacactg ttctcagcca 3900

acattgatgc tatcacaagc ctcagcattg ggggagagct cgtgtttcaa acaagcgtcc 3960

aaggccttgt actgggcgcc accatctacc ttataggctt tgatgggact gcggtaatca 4020

ccagagctgt ggccgcagat aatgggctga cggccggcac cgacaatctt atgccattca 4080

atcttgtcat tccaaccaat gagataaccc agccaatcac atccatcaaa ctggagatag 4140

tgacctccaa aagtggtggt caggcagggg atcagatgtc atggtcggca agtgggagcc 4200

tagcagtgac gatccatggt ggcaactatc caggggccct ccgtcccgtc acactagtag 4260

cctacgaaag agtggcaaca ggatccgtcg ttacggtcgc tggggtgagt aacttcgagc 4320

tgattccaaa tcctgaacta gcaaagaacc tggttacaga atacggccga tttgacccag 4380

gagccatgaa ctacacaaaa ttgatactga gtgagaggga ccgtcttggc atcaagaccg 4440

tctggccaac aagggagtac actgattttc gtgagtactt catggaggtg gccgacctca 4500

actctcccct gaagattgca ggagcatttg gcttcaaaga cataatccgg gctataagga 4560

ggtagatcca gacatgataa gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca 4620

gtgaaaaaaa tgctttattt gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat 4680

aagctgcaat aaacaagtta acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg 4740

ggaggtgtgg gaggtttttt cggatcctct agagtcgacg gcagagtcgc agacgcccct 4800

attggacgtc aaaattgtag aggtgaagtt ttcaaacgat ggcgaagtaa cggcgacttg 4860

cgtttccacc gtcaaatctc cctatagggt agaaactaat tggaaagtag acctcgtaga 4920

tgtaatggat gaaatttctg ggaacagtcc cgccggggtt tttaacagta atgagaaatg 4980

gcagaaacag ctgtactaca gagtaaccga tggaagaaca tcggtccagc taatgtgcct 5040

gtcgtgcacg agccattctc cggaacctta ctgtcttttc gacacgtctc ttatagcgag 5100

ggaaaaagat atcgcgccag agttatactt tacctctgat ccgcaaacgg catactgcac 5160

aataactctg ccgtccggcg ttgttccgag attcgaatgg agccttaata atgtttcact 5220

gccggaatat ttgacggcca cgaccgttgt ttcgcatacc gctggccaaa gtacagtgtg 5280

gaagagcagc gcgagagcag gcgaggcgtg gatttctggc cggggaggca atatatacga 5340

atgcaccgtc ctcatctcag acggcactcg cgttactacg cgaaaggaga ggtgcttaac 5400

aaacacatgg attgcggtgg aaaacggtgc tgctcaggcg cagctgtatt cactcttttc 5460

tggacttgtg tcaggattat gcgggagcat atctgctttg tacgcaacgc tatggaccgc 5520

catttatttt tgaggaatgc tttttggact atcgtactgc tttcttcctt cgctagccag 5580

agcaccgccg ccgtcacgta cgactacatt ttaggccgtc gcgcgctcga cgcgctaacc 5640

ataccggcgg ttggcccgta taacagatac ctcactaggg tatcaagagg ctgcgacgtt 5700

gtcgagctca acccgatttc taacgtggac gacatgatat cggcggccaa agaaaaagag 5760

aaggggggcc ctttcgaggc ctccgtcgtc tggttctacg tgattaaggg cgacgacggc 5820

gaggacaagt actgtccaat ctatagaaaa gagtacaggg aatgtggcga cgtacaactg 5880

ctatctgaat gcgccgttca atctgcacag atgtgggcag tggactatgt tcctagcacc 5940

cttgtatcgc gaaatggcgc gggactgact atattctccc ccactgctgc gctctctggc 6000

caatacttgc tgaccctgaa aatcgggaga tttgcgcaaa cagctctcgt aactctagaa 6060

gttaacgatc gctgtttaaa gatcgggtcg cagcttaact ttttaccgtc gaaatgctgg 6120

acaacagaac agtatcagac tggatttcaa ggcgaacacc tttatccgat cgcagacacc 6180

aatacacgac acgcggacga cgtatatcgg ggatacgaag atattctgca gcgctggaat 6240

aatttgctga ggaaaaagaa tcctagcgcg ccagaccctc gtccagatag cgtcccgcaa 6300

gaaattcccg ctgtaaccaa gaaagcggaa gggcgcaccc cggacgcaga aagcagcgaa 6360

aagaaggccc ctccagaaga ctcggaggac gacatgcagg cagaggcttc tggagaaaat 6420

cctgccgccc tccccgaaga cgacgaagtc cccgaggaca ccgagcacga tgatccaaac 6480

tcggatcctg actattacaa tgacatgccc gccgtgatcc cggtggagga gactactaaa 6540

agttctaatg ccgtctccat gcccatattc gcggcgttcg tagcctgcgc ggtcgcgctc 6600

gtggggctac tggtttggag catcgtaaaa tgcgcgcgta gctaatcgag cctagaatag 6660

gtggtttctt cctacatgcc acgcctcacg ctcataatat aaatcacatg gaatagcata 6720

ccaatgccta ttcattggga cgttcgaaaa gcatggcatc gctacttgga actctggctc 6780

tccttgccgc gacgctcgca cccttcggcg cgatgggaat cgtgatcact ggaaatcacg 6840

tctccgccag gattgacgac gatcacatcg tgatcgtcgc gcctcgcccc gaagctacaa 6900

ttcaactgca gctatttttc atgcctggcc agagacccca caaaccctac tcaggaaccg 6960

tccgcgtcgc gtttcggtct gatataacaa accagtgcta ccaggaactt agcgaggagc 7020

gctttgaaaa ttgcactcat cgatcgtctt ctgtttttgt cggctgtaaa gtgaccgagt 7080

acacgttctc cgcctcgaac agactaaccg gacctccaca cccgtttaag ctcactatac 7140

gaaatcctcg tccgaacgac agcgggatgt tctacgtaat tgttcggcta gacgacacca 7200

aagaacccat tgacgtcttc gcgatccaac tatcggtgta tcaattcgcg aacaccgccg 7260

cgactcgcgg actctattcc aaggcttcgt gtcgcacctt cggattacct accgtccaac 7320

ttgaggccta tctcaggacc gaggaaagtt ggcgcaactg gcaagcgtac gttgccacgg 7380

aggccacgac gaccagcgcc gaggcgacaa ccccgacgcc cgtcactgca accagcgcct 7440

ccgaacttga agcggaacac tttacctttc cctggctaga aaatggcgtg gatcattacg 7500

aaccgacacc cgcaaacgaa aattcaaacg ttactgtccg tctcgggaca atgagcccta 7560

cgctaattgg ggtaaccgtg gctgccgtcg tgagcgcaac gatcggcctc gtcattgtaa 7620

tttccatcgt caccagaaac atgtgcaccc cgcaccgaaa attagacacg gtctcgcaag 7680

acgacgaaga acgttcccaa actagaaggg aatcgcgaaa atttggaccc atggttgcgt 7740

gcgaaataaa caagggggct gaccaggata gtgaacttgt ggaactggtt gcgattgtta 7800

acccgtctgc gctaagctcg cccgactcaa taaaaatgtg attaagtctg aatgtggctc 7860

tccaatcatt tcgattctct aatctcccaa tcctctcaaa aggggcagta tcggacacgg 7920

actgggaggg gcgtacacga tagttatatg gtacagcaga ggcctctgaa cacttaggag 7980

gagaattcag ccggggagag cccctgttga gtaggcttgg gagcatattg caggatgaac 8040

atgttagtga tagttctcgc ctcttgtctt gcgcgcctaa cttttgcgac gcgacacgtc 8100

ctctttttgg aaggcactca ggctgtcctc ggggaagatg atcccagaaa cgttccggaa 8160

gggactgtaa tcaaatggac aaaagtcctg cggaacgcgt gcaagatgaa ggcggccgat 8220

gtctgctctt cgcctaacta ttgctttcat gatttaattt acgacggagg aaagaaagac 8280

tgcccgcccg cgggacccct gtctgcaaac ctggtaattt tactaaagcg cggcgaaagc 8340

ttcccgggtt aattaaggcc ctcgaggata catccaaaga ggttgagtat tctctctaca 8400

cttcttgtta aatggaaagt gcatttgctt gttcttacaa tcggcccgag tctcgttcac 8460

agcgcctcgt tcacacttaa accacaaata gtctacaggc tatatgggag ccagactgaa 8520

actcacatat gactaatatt cgggggtgtt agtcacgtgt agcccattgt gtgcatataa 8580

cgatgttgga cgcgtcctta ttcgcggtgt acttgatact atggcagcga gcatgggata 8640

ttcatcctcg tcatcgttaa catctctacg ggttcagaat gtttggcatg tcgtcgatcc 8700

tttgcccatc gttgcaaatt acaagtccga tcgccatgac cgcgataagc ctgtaccatg 8760

tggcattagg gtgacatctc gatcatacat tataagacca acgtgcgagt cttccaaaga 8820

cctgcacgcc ttcttcttcg gattgtcaac gggttcttca gaatctatgc ccatatctgg 8880

cgttgagacc attgtgcgtt taatgaacaa taaagcggca tgccatggaa aggagggctg 8940

cagatctcca ttttctcacg ccactatcct ggacgctgta gacgataatt ataccatgaa 9000

tatagagggg gtatgtttcc actgccactg tgatgataag ttttctccag attgttggat 9060

atctgcattt tctgctgccg aacaaacttc atcgctatgc aaagagatgc gtgtgtacac 9120

gcgccggtgg agtatacggg aaactaaatg ttcatagagg tctttgggct atatgttatt 9180

aaataaaata attgaccagt gaacaatttg tttaatgtta gtttattcaa tgcattggtt 9240

gcaaatattc attacttctc caatcccagg tcattcttta gcgagatgat gttatgacat 9300

tgctgtgaaa attactacag gatatatttt taagatgcag gagtaacaat gtgcatagta 9360

ggcgtagtta tcgcagacgt gcaacgcttc gcatttgagt taccgaagtg cccaacagtg 9420

ctgcggttat ggtttatgcg cacagaatcc atgcatgtcc taattgaacc atccgatttt 9480

tcttttaatc gcgatcgatg tttgggcaac tgcgttattt cagatctaaa aaatttaccc 9540

tttatgacca tcacatctct ctggctcata ccccgcttgg ataagatatc atgtagattc 9600

cgccctaaga aatgcaaact aacattattg tcggttccat atacacttcc atcttgtcct 9660

tcgaaaataa caaactcgcg caatagaccg tccgtacatg catggccgat gtgtgtcaac 9720

atcattggtc tgctagatcc cgatgggacg aatcgtacag tcgtcgctcc agcattggca 9780

aaaatcccca gataccctcc atgcggcaaa tctaaattgc gaccccgaag agactgcacc 9840

aaagtcttat cgacgcacgc tgattttttt gaacagcggg agcccattat cttcagtgga 9900

gcgtagacgg gcgaggctaa ttatgtgaca tagcaacact gcatgtatgt ttttataaat 9960

caataagagt acataattta ttacgtatca tttccgtttg taatatactg tatacatcat 10020

ccacactatt agtcagcact agcgcgcggg cgcacgttac aatagcagcg tgcccgttat 10080

ctatattgtc cgatatttac acataacatt tcatcgacat gattaaatac ctaagtactg 10140

cacacagatg tttaatgtat atcgtcatat aaattatatc gctaggacag acccaaacga 10200

cctttatccc aaacagtcag atcctcttct caagtgtcga tttctgttat ggaatatgca 10260

taccctggcc cagaaattgc acgcacgagc gtagtgaatg cgtcattggt tttacattta 10320

aaggctaaat gcacaaattc tttagacgac agcacatcgt taaatagcat ctctagcgtt 10380

cttatgaatg ctaagcattg gagtcctcct ggtcggccac aataacagct gagtatcata 10440

ccctgagctc cggggttgtc gcacatagcg gattcgtata aacataggat tttccgcgaa 10500

tccatcagtt gcaaaaatct gttaggctcc atcaacaacg ctggatttac ttcagatcca 10560

cgcgtaaagt aatggtgctc gaataccgtt tttagagttg tcggcatttc aaggaacaaa 10620

gaattcattt cttcattgca acgacgcgcc agaaatccca agacctcttt gggtagtatg 10680

ttcttgccta taaaacacgg cgttccaagt gccaggaacc acgcatgtgt tactgttggg 10740

gcgtattcag aaataaagcg gggtttatgc ggcttttgaa gctcggatat ccaaagtatc 10800

gcttgctgat gaacgagcga tgtagctgtt acaaaacctc ctttccatcc tccagtcaac 10860

ataatattta tcggcctacc tatgtccgta ataagtattg gtcgggcaat tattccgtat 10920

gaggtcttgc aggaataagc tcttagggac agccagcttg gatatggtgc gaaacagacc 10980

ttctcggctt cagaatgtcg ctccgcagtc tcttcgtgtc ggtgcatctt agatccacca 11040

tcaatgtgtg cagcattgac tcccgcccgt cgaatattcc ttttgttacg atgcagtaat 11100

gagcacgatc atgggcgggg cgatgacgtt ctatttgcat gtctgcgaac aatttgcgtc 11160

agtcatacag ctatggagtg ggccatttct ggccgtcaac ttaaaaacgc gaaccgcaga 11220

catatgtatt tgcatgcaaa gacgtatctt cgtatttctg ggcatcttca aatgctctgg 11280

ccaatatggc aatgaatttg gattcgtttg acgccgatgg tatgcagtgc aaatgtgcca 11340

atagcccaca tccgaaaaag ttatttgtca tacaagcagg tgttaagtag caatcacata 11400

aaggcaccag acgcctcatg gcatcataat gaatagctcc ttctccccac tggaaccact 11460

gacaaaatct gcgagtatat tccgcaaacc acattttatt tctcatagaa actaccctaa 11520

atccttttaa cgggaagaag aatcctagat agtgcttgaa gtcatgactg ttactgctgc 11580

aataacactg tatattattt ataaattccg tttgtctagg tatctgatgt aggcattccg 11640

atccctttac tattgcgtct tcacgaccaa atgggaatgc gccaaaatcc ccacacctca 11700

tcaccctgga ggcagattgt gtattattaa tatccgccga ttgaagcaca aaacggtacg 11760

gtactgttcc taattctggt atagattcta tggtcaaaag tctgcatatc cccgacattg 11820

ccatgagatc acacagtcca agtagcatgt ttattgagtc actcagactg tcaacgtccc 11880

tcgccgcacc accaatcgaa aataaagtat ctacgcaagt tatagctccg cattttctat 11940

cgctagcagc aatcgcgacg caaaacataa aggccatgtt gggatttgaa ctctctgggg 12000

ggcttgttat cttctgcacc gtcgcagtcg cagttttccg aaatttatgt ctaatatatt 12060

ttccggccgt gctccaatcg gccgaaaaga atctgcgtat taccagactc attgacgggc 12120

cgataaagac cataaaacaa aattcctgtg cactccctcc tccagttttg ccatcgtcca 12180

agtcccgtaa ctttttttgc gtttcgagga gcaagcgttc gttatcccta cccacacttg 12240

ttttccaccg ttttcttatt ataagcggtt gtatcgccaa cgcgtcaccg caggttgtca 12300

catacagtga tggcatactt gaacgtgcaa caacgcgctc gctttgcaaa tctaagtcat 12360

tgaccatcaa atcgcgttga gaggatagcc aggcatcttt tttcctagta tggtgacggt 12420

gcagccaccc caactcagtt cttgtaaaaa aagctattgg cgggaattta tgttctgagg 12480

tgcattctat atttatgagt ccatcaaatg ccattaacca gattcgtatt ttttcgctcg 12540

acccggcatc actatggata caataccttt ctatggccca tttcagctct cgaaccaacc 12600

acacggacaa ttgactaaca taagtatgat ctttatcaca gtcgcaccca tctgagttat 12660

atttatggca tccgagcgct cttactgtac ggtcggatac acccatggtt tttcctttat 12720

atagtcgggt tatagtctgt cgggtttggc ggtagcacgg agtagtttga tttttaagaa 12780

tcgaaaaccg gcttggagag accactgtcg aatatttgtc cgtatactct acacgtgagt 12840

gttgtccatt cctaggtata ttcatctgtt cggatacctt caattgctgt tcaggcataa 12900

ccttaaagca tatgttatgt tgtacatcaa aacttggtga gttatgttcg attgccgcgc 12960

ataaagaatc gtacatgagc gtttctgcta acatactatc tatattctca cacgcccctg 13020

catatactgt tcctattcca aattcacgtt ttgccccatc ggctatctgc tcccaaaaag 13080

ttgtaatata ggtgccgctg ggtgcgaaat tttcatcagt tgtattcctg ataaactgaa 13140

tcactttaca taatttttgc cacatatctg cgtgcagcca tagtatcgaa cccgtgggct 13200

cggagacgac agtgcgtaca atgggtattt tacctttccc caacaaaata atggtataca 13260

agttaggtcc gtacctagac cttaatgttt ccaattcttc tgaatcactg cactctcgta 13320

ggggagtaac ggtaataatt tcgtctctga gccccgtttt gcgttgaaaa ctaatcacat 13380

tagataatgt gcaatcggtt tcttttatcc ggatacatct aagtattatg acatcggtgg 13440

tcattgtttc catcaacgac catcttttac gatcgcccat actactcatg gacgttgtcg 13500

gtgttgaaaa atcaccagaa ttgcaacgga tctctgggta ccatgctgct gatggaattg 13560

gcggttttaa ttgttgtttc agtctattat tgctatcttt ggcggggttg aataatgtgg 13620

ggggagagtg attgcaggaa tccgaatggg tcaataaaac gaccgtgctc cgttctgccg 13680

gcgccgatcc gattgaagct atatacttcg cttctctccc cacttttcca atttgatccg 13740

gaaataaaac ggccccggac aacagtatcg tacgatccgg atccggatcc tgcttgccta 13800

cagaagaatc aacatctcgc cccaatattc tggtcaaaac tggctcgctc atggcaacgc 13860

ggacgtttcc cccggtggcc agtcttaatg gttaatgttc ttttcggcaa tcttatacat 13920

cagcgggttg cgtgaatact ggtcacagtt cagtcattta ctacacacca gcaatacgac 13980

gacggacagt accgtcccga cgaacgcgac gcccaaaatt gctatcgcga ccgcgtccga 14040

ggcgatgtcg tacgggcggt gcggggttgg atcctcggca aagagatcct cgtaattcgg 14100

cggtgggagc ggagggtaaa gacgcgggtg gggatctccc tccggaccgc gcgccgggcg 14160

cggttcgaaa atgctttccg cctcgctcag tgtcaacgcc aagtattcgg gcgggctggg 14220

ggccggaata tctcccgcga cttcttctat cggcgcggaa ttggagtcgc ggtcgtggcg 14280

cgcttctagc gtcgtcaacg gaagtccatt ttcggggtct cccggtgggc gttcagcgtc 14340

catcgtcgta tatgctctaa cacacgtctc gctatattaa aaaaaagaag agtatcggtc 14400

agtgtcgagt gtcgccgaca atgtcgcgag ttctcggcga tttaattttt ggaactgctc 14460

cctatgaatc ccgtaactgt agcgcccgcg cagaaagccg ccatcagacc aactacgtgt 14520

ctgttcgatg tttgcccgcc gatcgcttta ccgattaagg ttccggcgag aaatgacatg 14580

ctcgatccaa gaacaaagtt tttcgcggta aacaacaaca tagttaccgt gcgagatgga 14640

gaaaccacat ctcccgaatt agtagaggaa agcccgcgct gtcggtttgg ggacatatcg 14700

atcttttttg tgtttttcct aggacccttt tgccagatcg tacaaagtcg cgtcttatga 14760

gcggacgttc ttactgcagc tcggtaggag tggggcaggg ttagatttcg tcggcgtttc 14820

ggcccccgta tgcgccgcgc caccctcttc gccgagctct ttatgcgcgg tgggggtgag 14880

cgcttccgga gttgcgatct ccgatctcga gccgcagccc ggcggtgtct ctttcagtgg 14940

agcgttagcg ccatcatgtg gttcgtggcg gtggaaaggc tattatgtgt taggggagag 15000

accacgtgat cggcatgcaa atgagcaagg cgaacgcgtc agcgttcgca ctgcgaacca 15060

ataatatata tattatacta ttggctttag gtgcgaacgt ccggctagtc caatagcggg 15120

gtcgcgtttc gtaccacgtg ttatagaccg ccctaaactc gcactcgggg gtccggccgc 15180

gcccagacag ggcggagacg tgccacaggg gctttaaaac accgcttcgg gcaccgttca 15240

tctcggcgcg cc 15252

<210> 19

<211> 199

<212> ДНК

<213> Обезьяний вирус 40

<400> 19

agcttcagac atgataagat acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg 60

aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag 120

ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt atgtttcagg ttcaggggga 180

ggtgtgggag gttttttcg 199

<---

Изобретение относится к биотехнологии. Раскрыт рекомбинантный герпесвирус индюков (rHVT) для способствования защите домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и MDV1. Вирус содержит первую гетерологичную нуклеиновую кислоту и вторую гетерологичную нуклеиновую кислоту. Как первая гетерологичная нуклеиновая кислота, так и вторая гетерологичная нуклеиновая кислота расположены в одном и том же несущественном сайте. Несущественный сайт выбран из группы, состоящей из сайта US2 и сайта UL54.5. Первая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит как нуклеотидную последовательность, которая кодирует гликопротеин D вируса инфекционного ларинготрахеита (gD ILTV), так и нуклеотидную последовательность, которая кодирует гликопротеин I вируса инфекционного ларинготрахеита (gI ILTV). Вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует вирусный белок 2 вируса инфекционного бурсита (VP2 IBDV). Представлены иммуногенная композиция для защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и MDV1, содержащая rHVT, и вакцина для защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и V1, содержащая иммуногенную композицию, а также применение иммуногенной композиции в получении вакцины для способствования защите кур против ILTV и IBDV. Рекомбинантный герпесвирус индюков генетически и фенотипически стабилен с относительно сильной экспрессией антигена и критериями эффективности. 4 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 6 пр.

1. Рекомбинантный герпесвирус индюков (rHVT) для способствования защите домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и MDV1, содержащий первую гетерологичную нуклеиновую кислоту и вторую гетерологичную нуклеиновую кислоту, причем как первая гетерологичная нуклеиновая кислота, так и вторая гетерологичная нуклеиновая кислота расположены в одном и том же несущественном сайте;

причем несущественный сайт выбран из группы, состоящей из сайта US2 и сайта UL54.5;

где первая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит как нуклеотидную последовательность, которая кодирует гликопротеин D вируса инфекционного ларинготрахеита (gD ILTV), так и нуклеотидную последовательность, которая кодирует гликопротеин I вируса инфекционного ларинготрахеита (gI ILTV); и

где вторая гетерологичная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, которая кодирует вирусный белок 2 вируса инфекционного бурсита (VP2 IBDV).

2. rHVT по п.1, в котором несущественный сайт является сайтом US2.

3. rHVT по п.1 или 2, в котором нуклеотидная последовательность, кодирующая белок gD ILTV, находится под функциональным контролем первого промотора, нуклеотидная последовательность, кодирующая белок gI ILTV, находится под функциональным контролем второго промотора, а нуклеотидная последовательность, кодирующая белок VP2 IBDV, находится под функциональным контролем третьего промотора.

4. rHVT по п.3, в котором первый промотор, второй промотор и третий промотор отличны друг от друга.

5. rHVT по п.4, в котором первый промотор представляет собой эндогенный промотор gD ILTV, второй промотор представляет собой эндогенный промотор gI ILTV, а третий промотор выбран из группы, состоящей из промотора немедленно-раннего гена 1 мышиного цитомегаловируса (mCMV-ME1), промотора немедленно-раннего гена 1 человеческого цитомегаловируса (hCMV-IE1) и промотора куриного β-актина.

6. rHVT по п.5, содержащий нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18.

7. rHVT по п.5, содержащий нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, содержащую в направлении от 5' к 3' в следующем порядке:

(i) промотор немедленно-раннего гена 1 мышиного цитомегаловируса (mCMV-IE1);

(ii) кодирующую последовательность вирусного белка 2 вируса инфекционного бурсита (VP2 IBDV);

(iii) последовательность терминатора транскрипции;

(iv) промотор гликопротеина D вируса инфекционного ларинготрахеита (gD ILTV);

(v) кодирующую последовательность белка gD ILTV;

(vi) промотор гликопротеина I инфекционного ларинготрахеита (gI ILTV); и

(vii) кодирующую последовательность белка gI ILTV.

8. rHVT по п.7, в котором нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 15.

9. Иммуногенная композиция для защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и MDV1, содержащая rHVT по любому из пп.1-8.

10. Вакцина для защиты домашней птицы от заболевания, вызванного ILTV, IBDV и MDV1, содержащая иммуногенную композицию по п.9.

11. Применение иммуногенной композиции по п.9 в получении вакцины для способствования защите кур против ILTV и IBDV.