Применение 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью Российский патент 2022 года по МПК A61K31/4188 C07D487/10 A61P31/06 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединениям класса 9-ароил-8-гидрокси-6-(2-гидроксиарил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трионов, проявляющим противотуберкулезную активность, которые могут быть использованы в качестве исходных продуктов для синтеза новых гетероциклических систем и в фармакологии.

Известен способ синтеза заявленного соединения 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, являющегося продуктом взаимодействия 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона с дифенилмочевиной (Бабикова Н.В., Кобелев А.И., Белозерова А.И., Дмитриев М.В., Масливец А.Н. / Взаимодействие пирролобензоксазинтрионов с N,N'-замещенными мочевинами. Синтез замещенных спиро[имидазол-2,2'-пирролов] // ЖОрХ. 2021, 57 (9), 1336-1345. [Babikova N.V., Kobelev A.I., Belozerova A.I., Dmitriev M.V., Maslivets A.N. RJOC. 2021, 57 (9), 1441-1448.] doi 10.1134/S107042802109013X), образующегося по следующей схеме:

1a-j: Ar=Ph, R=H (a); Ar=Ph, R=Cl (b); Ar=C₆H₄Cl-4, R=H (с); Ar=Ph, R=Br (d); Ar=C₆H₄Br-4, R=H (e); Ar=Ph, R=CH₃ (f), Ar=C₆H₄OEt-4, R=H (g); Ar=C₆H₄OMe-4, R=H (h); Ar=C₆H₄F-4, R=H (i); Ar=C₆H₄Me-4, R=H (j) 2a-t: Ar=Ph, R=H, R'=CH₃ (a); Ar=Ph, R=Cl, R'=CH₃ (b); Ar=C₆H₄Cl-4, R=H, R'=CH₃ (с); Ar=Ph, R=Br, R'=CH₃ (d); Ar=C₆H₄Br-4, R=H, R'=CH₃ (e); Ar=Ph, R=CH₃, R'=CH₃ (f), Ar=C₆H₄OEt-4, R=H, R'=CH₃ (g); Ar=C₆H₄OMe-4, R=H, R'=CH₃ (h); Ar=C₆H₄F-4, R=H, R'=CH₃ (i); Ar=C₆H₄Me-4, R=H, R'=CH₃ (j); Ar=Ph, R=H, R'=Ph (k); Ar=Ph, R=Cl, R'=Ph (1); Ar=C₆H₄Cl-4, R=H, R'=Ph (m); Ar=Ph, R=Br, R'=Ph (n); Ar=C₆H₄Br-4, R=H, R'=Ph (o); Ar=Ph, R=CH₃, R'=Ph (p), Ar=C₆H₄OEt-4, R=H, R'=Ph (q); Ar=С₆Н₄ОМе-4, R=H, R'=Ph (r); Ar=C₆H₄F-4, R=H, R'=Ph (s); Ar=C₆H₄Me-4, R=H, R'=Ph (t)

Задачей изобретения является изыскание новых соединений, обладающих противотуберкулезной активностью, и расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Технический результат - выявлена ранее не известная противотуберкулезная активность 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона.

Технический результат достигается получением 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-1,3-дифенил-9-(4-хлорбензоил)-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, путем взаимодействия 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона с дифенилмочевиной в среде растворителя с последующим выделением целевого продукта, по следующей схеме:

Процесс ведут при кипячении, а в качестве растворителя используют безводный толуол.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион (IIб).

К раствору 1.0 ммоль 3-(4-хлорбензоил)пирроло[2,1-с][1,4]бензоксазин-1,2,4-триона в 15 мл сухого толуола добавляли 1.0 ммоль дифенилмочевины, кипятили 60 мин (до исчезновения фиолетовой окраски исходного пирролдиона), охлаждали, выпавший осадок отфильтровывали. Выход 78%, т.пл. 210-214°С (разл., толуол). C₃₁H₂₀ClN₃O₆.

Найдено, %: С, 65.77; Н, 3.55; N, 7.45.

Вычислено, %: С, 65.79; H, 3.56; N, 7.42.

8-Гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион - желтое высокоплавкое кристаллическое вещество, плавящееся с разложением, легкорастворимое в ДМСО и ДМФА, растворимое в ацетоне, хлороформе, 1,2-дихлорэтане, 1,4-диоксане, этилацетате, труднорастворимое в ароматических углеводородах, четыреххлористом углероде, нерастворимое в алканах и воде. Устойчиво при хранении в обычных условиях.

В ИК спектре 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, снятого в виде пасты в вазелиновом масле, присутствуют полосы валентных колебаний групп ОН и NH при 3336 см^-1, лактамных карбонильных групп С²=O, С⁴=O, С⁷=O при 1794, 1720 см^-7, ароильной карбонильной группы при 1671 см^-1.

В спектре ЯМР ¹Н 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона, снятом в растворе ДМСО-d₆, кроме сигналов протонов алифатических заместителей, ароматических колец и связанных с ними групп, присутствуют уширенные синглеты протона фенольной группы ОН в области 10.18 м.д.

Пример 2. Фармакологическое исследование 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона на наличие противомикробной активности.

Исследование синтезированного соединения на противотуберкулезную активность проводилось в бактериологической лаборатории ГБУЗ ПК «КФМЦ» г. Перми.

Для изучения бактерицидной активности химического соединения в отношении микобактерий туберкулеза штамма H₃₇Rv использовали стандартную радиометрическую ростовую систему ВАСТЕС MGIT 960 (Becton Dickinson) [Journal of Medicinal Chemistry. - 2000. - №17. - P. 3304-3314; Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: учеб. пособие для послевуз. проф. образования врачей; Р.У. Хабриева (ред)., Медицина, Москва (2005)].

Исследуемые вещества в количестве 10 мг растворяли в 1 мл «Диметилсульфоксида», после чего добавляли 9 мл бульона Мидлбрук 7Н9, тем самым получая исходный раствор в 1,0 мг/мл. После чего добавляли в экспериментальные пробирки MGIT в количествах, обеспечивающих получение конечной концентрации от 100 до 1,0 мкг/мл, используя двукратные разведения, в двух повторностях. В пробирках MGIT содержалось по 7 мл стерильного питательного бульона Мидлбрук 7Н9. В каждую пробирку вносили по 0,8 мл обогатительной добавки ВАСТЕС MGIT OADC (олеиновая кислота, альбумин, декстроза и каталаза). Кроме жидкой среды в пробирке содержался бескислородный флюорохром - пентагидрат трис-4,7-дифенил-1,10-фенантролин хлорид рутения, помещенный на дно пробирки и покрытый силиконом.

Из культуры М. tuberculosis штамм H₃₇Rv готовили бактериальную суспензию, которая была стандартизирована по оптическому стандарту мутности №5 (500 млн микробных тел в 1 мл) с использованием денситометра. Далее готовили раствор путем разведения исходной суспензии в 10 раз стерильным физиологическим раствором, таким образом получена 5×10⁷ микробных тел в 1 мл. Затем суспензию микобактерий туберкулеза в количестве 0,5 мл добавляли в каждую из исследуемых пробирок MGIT. Параллельно инокулят культуры микобактерий туберкулеза в количестве 10⁵ высевали в контрольные пробирки MGIT со средой Мидлбрук 7Н9 по 0,5 мл без содержания химических соединений. Для сравнения проводили аналогичные исследования с туберкулостатиком первого ряда - изониазидом.

Все пробирки инкубировали при температуре 37°С градусов с последующим анализом. Если тестируемое вещество активно по отношению к выделенным микобактериям, оно будет ингибировать рост и подавлять флюоресценцию, при этом в контрольной пробирке рост не ингибируется и, соответственно, уровень флуоресцентности в данной пробирке будет выраженнный. Данные представлены в таблице. Анализ полученных данных показал:

- что соединение 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-трион обладает противотуберкулезным действием в концентрации 50,0 мкг/мл в течение всего инкубационного времени (41 день)

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому применению 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью. 1 табл., 2 пр.

Применение 8-гидрокси-6-(2-гидроксифенил)-9-(4-хлорбензоил)-1,3-дифенил-1,3,6-триазаспиро[4.4]нон-8-ен-2,4,7-триона

в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью.