СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ МЕЛАНОМЫ В16 В МЕТРОНОМНОМ РЕЖИМЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/32 A61K33/243 A61P35/00 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, экспериментальной фармакологии и может быть использовано для доклинических исследований противоопухолевой и антиметастатической активности ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова) (Ме-5) и (бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова) (Ме-3) в комбинации с цисплатином (ЦП).

Создание новых противоопухолевых лекарственных препаратов - приоритетная задача для специалистов в области медицинской химии, а также экспериментальной фармакологии и онкологии. Процесс создания лекарственного препарата требует колоссальных затрат времени и средств, не говоря о его трудоемкости (см. Казанчева О.Д., Герасименко А.С. Методология поиска новых биологически активных фармакологических веществ с рецепторной активностью. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2016. №8-4. С. 522-525.). Несмотря на большое количество работ, посвященных расчетным методам компьютерного изучения новых фармакологически активных молекул и оценке антипролиферативной эффективности на моделях in vitro, решающую роль в медико-биологических исследованиях играет изучение биологической активности на животных (см. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Хабриев Р.У. Москва. 2005. С. 832.).

В настоящее время активно ведется поиск и разработка новых противоопухолевых и/или антиметастатических агентов на основе органических производных металлов, среди которых большой интерес вызывают соединения олова (см. Милаева Е.Р., Додохова М.А., Шпаковский Д.Б., Антоненко Т.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Комарова Е.Ф., Ганцгорн Е.В., Алхусейн-Кулягинова М.С. Механизмы цитотоксического действия оловоорганических соединений.//Биомедицина. 2021; 17(2):88-99. https://doi/org/10.33647/2074-5982-17-2-88-99).

Оловоорганические соединения (ООС) с различными лигандами продемонстрировали высокую степень антипролиферативной, противоопухолевой и антиметастатической активности (см. Оценка фармакотерапевтического потенциала оловоорганических соединений in vivo Додохова М.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Сухорукова Н.В., Ганцгорн Е.В., Алхусейн-Кулягинова М.С., Комарова Е.Ф., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р. Биофармацевтический журнал. 2021. Т. 13. №3. С. 30-34; см. Механизмы цитотоксического действия оловоорганических соединений. Милаева Е.Р., Додохова М.А., Шпаковский Д.Б., Антоненко Т.А., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Комарова Е.Ф., Ганцгорн Е.В., Алхусейн-Кулягинова М.С. Биомедицина. 2021. Т. 17. №2. С. 88-99).

Гибридные оловоорганические соединения, содержащие фрагмент 2, 6 дитретбутилфенола, обладают искомой терапевтической эффективностью при сниженной общей токсичности. ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова (Ме-5) и бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметил олова (Ме-3) являются наиболее перспективными кандидатами в противоопухолевые лекарственные средства.

Успехи современной онкологии позволили повысить эффективность химиотерапевтического лечения злокачественных новообразований путем изменения традиционных методик введения известных противоопухолевых лекарственных средств, их комбинирования и внедрения новых противоопухолевых и антиметастатических агентов, в том числе с иными механизмами действия (см. «Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний». Под редакцией Н.И. Переводчиковой, В.А. Горбуновой. 2018 г., Трякин Α.Α., Бесова Н.С., Волков Н.М., Гладков О.Α., Карасева В.В., Сакаева Д.Д. Практические рекомендации по общим принципам проведения противоопухолевой лекарственной терапии. Злокачественные опухоли. Практические рекомендации RUSSCO #3s2, 2020 (том 10).01.).

Арсенал зарегистрированных в России лекарственных средств для лечения злокачественных новообразований обладает широким спектром негативных побочных эффектов. Вероятность и интенсивность негативных влияний зависит от величины вводимой курсовой дозы и продолжительности лечения.

Метрономная химиотерапия представляет собой регулярное на протяжении длительного периода времени назначение цитотоксических препаратов в дозах, значительно меньших максимально переносимых. В предклинических экспериментах данный метод лечения показывает многогранное действие на опухоль - антиангиогенное, иммуностимулирующее и прямое цитотоксическое (см. Метрономные режимы химиотерапии в онкологии. Федянин М.Ю., Покатаев И.Α., Тюляндин С.А. Онкологическая колопроктология. 2016. Т. 6. №1. С. 27-35; см. Иммунологические аспекты метрономных режимов химиотерапии. Ефремова Н.А., Новик А.В., Зозуля А.Ю., Нехаева Т.Л., Данилова А.Б., Емельянова Н.В., Гирдюк Д.В., Гафтон Г.И., Балдуева И.А. Фарматека. 2021. Т. 28. №7. С. 81-86).

Ряд преклинических исследований продемонстрировали более высокую противоопухолевую эффективность, сильные антиангиогенные эффекты, снижение общей токсичности и побочных эффектов (например, миелосуппрессия) химиотерапии в метрономном режиме сравнению со схемами введения максимальных переносимых доз (MTD) (см. Bocci G, Nicolaou КС, Kerbel RS (2002) Protracted low-dose effects on human endothelial cell proliferation and survival in vitro reveal a selective antiangiogenic window for various chemotherapeutic drugs. Cancer Res 62:6938-6943).

Одной из важнейших характеристик тестируемого оловоорганического соединения является класс токсичности. Для оценки безопасности применения оловоорганических соединений использована гармонизированная система классификации опасности и маркировки химической продукции (СГС). Для снижения затрат на доклинические исследования необходимо произвести стандартизацию последовательности процедур, описывающих порядок действий для решения вопроса о целесообразности дальнейшего исследования конкретного ООС с предполагаемым противоопухолевым действием в комбинированной терапии с цисплатином.

Задача изобретения - определить наиболее эффективное соотношение вводимых доз оловоорганических соединений ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова) (Ме-5) и (бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова) (Ме-3) в комбинации с цисплатином для комбинированной терапии в метрономном режиме меланомы В16 в эксперименте.

Техническим результатом изобретения является разработка способа комбинированной терапии меланомы В16 мышей в метрономном режиме в эксперименте.

Технический результат достигается тем, что самкам мышей линии С57В1/6 8 недельного возраста массой 21-22 г перевивают штамм меланомы В16, через 48 часов после перевивки 1 раз в сутки в течение 10 дней внутрибрюшинно вводят (бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова) (Ме3) в разовой дозе 45 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг или ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова) (Ме5) в разовой дозе 15 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг.

Новым является то, что на модели экспериментальной неоплазии - меланомы В16 самок-мышей определены эффективные дозы ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова) (Ме-5) и (бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова) (Ме-3) для терапии в метрономном режиме и показана противоопухолевая и антиметастатическая эффективность такого лечения.

Коллективом авторов уже была выявлена эффективность подобной комбинации при классическом пятикратном внутрибрюшинном введении на модели эпидермоидной карциномы Lewis (см. Влияние цисплатина и гибридного оловоорганического соединения в малых дозах на рост и метастазирование эпидермоидной карциномы Lewis в эксперименте Додохова М.А., Алхусейн-Кулягинова М.С., Сафроненко А.В., Котиева И.М., Шпаковский Д.Б., Милаева Е.Р. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2021. Т. 84. №8. С. 32-35). Исследования комбинированной терапии с цисплатином в метрономном режиме на модели меланомы В16 мышей проведены впервые.

В известных источниках литературы подобных способов комбинированной терапии меланомы В16 в метрономном режиме в эксперименте авторами обнаружено не было.

Исследование было выполнено на 168 самках мышей линии С57В1/6 8 недельного возраста массой 21-22 гр. Животные получены из питомника НИЦ «Курчатовский институт» - ФГУП ПЛЖ «Рапполово». Штамм меланомы В16 получен из банка опухолевых материалов Научно-исследовательского института экспериментальной диагностики и терапии опухолей РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Все исследования выполнялись в соответствии с Международными и Российскими требованиями проведения научных исследований на лабораторных животных.

Животные были разделены на 14 групп, в каждой группе количество особей было одинаковым - 12 штук.

Перевивку меланомы В16 осуществляли стандартным способом (см. Влияние экспериментальной хронической боли на уровень биогенных аминов в коже у мышей в динамике роста меланомы B16/F10. Котиева И.М., Кит О.И., Франциянц Е.М., Бандовкина В.А., Каплиева И.В., Трепитаки Л.К., Черярина Н.Д., Погорелова Ю.А., Бликян М.В. Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Серия: Естественные науки. 2018. №1 (197). С. 130-139).

Через 48 часов после перевивки меланомы В16 мышам проводили комбинированное лечение цисплатином и гибридными оловоорганическими соединениями (Ме-3 и Ме-5) в метрономном режиме на протяжении 10 дней в различных соотношениях разовых доз для введения (см. Таблица 1). Группа №13 - контроль - животным вводили раствор носителя. Группа 14 -группа сравнения - введение цисплатина в разовой дозе 1 мг/кг. Комбинацию цисплатин+МеЗ или цисплатин + Ме5 вводили 1 раз в сутки внутрибрюшинно.

Через 8 суток после последнего введения субстанций была произведена эвтаназия путем декапитации на гильотине. В качестве критериев оценки эффективности противоопухолевой и антиметастатической терапии использовали следующие показатели: процент торможения роста опухоли по массе (ТРО, %) и индекс ингибирования метастазирования (ИИМ, %) (см. Трещалина Е.М. и др. Методические рекомендации по доклиническому изучению противоопухолевой активности лекарственных средств // Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств.: в 2 т.- Москва: Гриф и К, 2012. - Т. 1. - С. 640-654).

Результаты исследования выражались в виде средней величины показателя±ошибка средней величины. Совокупность показателей в группе проверялась на нормальность распределения посредством теста Андерсона-Дарлинга. Различия показателей в опытной группе по отношению к контрольной оценивали с помощью t-критерия Стьюдента и считали статистически значимыми при вероятности выше 95%. Результаты представлены в таблице 2.

В результате проведенной экспериментальной работы выявлена максимально эффективная комбинация вводимой композиции в группе №6 (ЦП+Ме-3-1:45) и №10 (ЦП+Ме-5-1:15). При комбинировании соединения IV класса токсичности по СГС наиболее эффективной является комбинация 1:15, V-класса токсичности - 1:45. В зависимости от класса токсичности тестируемого соединения авторами предложена максимально эффективная комбинация цисплатина и оловоорганического соединения с различными лигандными группировками.

Технико-экономическая эффективность способа заключается в том, что его применение позволяет применять эффективные разовые дозы для комбинированной терапии в метрономном режиме комбинацию цисплатина и ((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова) (Ме-5) или (бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова) (Ме-3) с известным классом токсичности, как перспективных кандидатов в противоопухолевые лекарственные средства.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для комбинированной терапии меланомы В16 в метрономном режиме в эксперименте. Самкам мышей линии С57В1/6 8 недельного возраста массой 21-22 г перевивают штамм меланомы В16. Через 48 часов после перевивки 1 раз в сутки в течение 10 дней внутрибрюшинно вводят бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова (Ме3) в разовой дозе 45 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг или (3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова (Ме5) в разовой дозе 15 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг. Способ обеспечивает эффективную противоопухолевую и антиметастатическую комбинированную терапию меланомы В16 в метрономном режиме в эксперименте за счет введения комбинации Ме3 с цисплатином или комбинации Ме5 с цисплатином самкам мышей линии С57В1/6. 2 табл.

Способ комбинированной терапии меланомы В16 в метрономном режиме в эксперименте, заключающийся в том, что самкам мышей линии С57В1/6 8 недельного возраста массой 21-22 г перевивают штамм меланомы В16, через 48 часов после перевивки 1 раз в сутки в течение 10 дней внутрибрюшинно вводят бис(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) диметилолова (Ме3) в разовой дозе 45 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг или (3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенилтиолат) трифенилолова (Ме5) в разовой дозе 15 мг/кг в комбинации с цисплатином в разовой дозе 1 мг/кг.