Средство с противовоспалительной активностью Российский патент 2023 года по МПК A61K36/185 B01D11/02 A61P29/00 

Изобретение относится к фармации и медицине и может использоваться для лечения заболеваний опорно-двигательной, пищеварительной, мочевыделительной и др. систем, сопровождающихся выраженным проявлением воспалительной реакции.

Предложенное средство, представляющее собой жидкий водно-спиртовой экстракт, полученный путем экстрагирования листьев и плодов Лоха узколистного методом паровой дистилляции в соотношении 1:1, оказывает противовоспалительное действие.

Противовоспалительные препараты относятся к числу наиболее востребованных лекарственных средств; более тридцати миллионов человек в мире ежедневно принимают противовоспалительные препараты, причем 40% этих пациентов имеют возраст старше 60 лет. По прогнозам, это количество будет только возрастать по мере общего старения населения развитых стран, и, соответственно, увеличения распространенности заболеваний, при которых применяются противовоспалительные препараты. В первую очередь это дегенеративные заболевания опорно-двигательного аппарата и ревматические поражения мягких тканей, что имеет не только медицинское, но и большое социальное значение, т.к. приводит к длительной потере трудоспособности и инвалидности.

Широкое применение стероидных и нестероидных противовоспалительных препаратов обусловлено их высокой активностью, быстрым развитием эффекта и относительно высокой безопасностью. Кроме того, эти средства вызывают не только симптоматический болеутоляющий эффект, уменьшают скованность и повышают подвижность суставов, но и оказывают патогенетическое действие, ограничивая влияние медиаторов воспаления. Несмотря на широкое применение противовоспалительных препаратов, длительное их использование до сих пор остается небезопасным и сопровождается развитием побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной и гепатобилиарной системы. В связи с вышеописанным, актуальным является разработка безопасных лекарственных средств с выраженным противовоспалительным действием и большой интерес в этом направлении представляют лекарственные растения как потенциальные источники получения биологически-активных веществ. Преимуществом лекарственных растений является широкий спектр их лечебного и профилактического действия, низкая токсичность, способность быстро устранять симптомы обострения, предупреждать рецидивы.

Известно средство растительного происхождения, представляющее собой сухой экстракт листьев и цветков аврана лекарственного, полученный с применением в качестве экстрагента 96% спирта этилового и хлороформа, обладающий противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием (RU 2 535 155 С1). Основным недостатком данного средства является то, что авран относится к группе ядовитых растений и противопоказан при наличии эрозивного гастрита, синдрома раздраженного кишечника, колита или энтероколита, желчнокаменной болезни, язвы желудка или кишечника, почечной недостаточности.

Известно растительное средство «Калефлон», содержащее экстракт из цветков календулы, которое применяется в качестве противовоспалительного средства, стимулирующего репаративные процессы (https://www.webapteka.ru/drugbase/name2815.html). Растительное средство «Ромазулан» представляет собой жидкий экстракт из цветков ромашки аптечной и применяется как противовоспалительное, антисептическое и спазмолитическое средство (https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_2830.htm). Недостатками этих средств являются возможность развития побочных эффектов в виде аллергических реакций при непереносимости компонентов, ощущение жжения и боли в эпигастральной области, горечь во рту.

Известны растительные средства на основе выделенных из растений индивидуальных компонентов, например, применение производного урсоловой кислоты в качестве средства, обладающего противовоспалительными, антиоксидантными, гепатопротекторными свойствами (RU 2436793). Средство на основе дигидрокверцетина обладает противовоспалительным, капилляроукрепляющим, антиоксидантным и антигистаминным действием (RU 2014841). Однако недостатком указанных средств является слабая растворимость в полярных и неполярных растворителях, что отрицательно сказывается на биодоступности активных соединений.

Известно противовоспалительное средство на основе листьев толокнянки обыкновенной (RU 2064301 С1). Однако сухой экстракт толокнянки содержит биологически активные вещества хинольного характера, основным компонентом которых является арбутин и гидрохинон, которые оказывают прежде всего мочегонное и антимикробное действие, что определяет применение средства только при воспалительных заболеваниях мочеполовой системы, вызванных бактериальной инфекцией.

Наиболее близким аналогом является средство с противовоспалительными свойствами (CN 110354154 А), представляющее собой экстракт Лоха узколистного, содержащего полисахариды, выделенные 95% этиловым спиртом, в количестве 0,05%-95,0 масс%. Однако недостатком указанного средства является недостаточность фитохимических и биологических исследований, а именно исследований острой и хронической токсичности, что не позволяет использовать данное растение во всех возрастных группах и группах пациентов с нарушением функций печени и почек.

Техническим результатом настоящего изобретения является разработка противовоспалительного средства для лечения воспалительных заболеваний различных систем организма, представляющего собой жидкий водно-спиртовой экстракт листьев и плодов Лоха узколистного, полученный путем экстрагирования листьев и плодов Лоха узколистного водно-спиртовым экстрагентом методом паровой дистилляции в соотношении 1:1, содержащий флавоноиды, полисахариды, аскорбиновую кислоту и сапонины, в мас. %: флавоноиды - 2,0-2,5; полисахариды - 1,8-2,4; аскорбиновую кислоту - 1,9-2,3; сапонины - 1,7-2,2. В результате использования предлагаемого изобретения появляется возможность расширения ассортимента средств для лечения воспалительных заболеваний опорно-двигательной, пищеварительной, мочевыделительной и др. систем, оказывающих противовоспалительное действие.

Содержание в полученном экстракте уникального комплекса биологически активных веществ обеспечивает выраженное противовоспалительное действие.

Для достижения цели изобретения противовоспалительное средство получают путем паровой дистилляции предварительно измельченных листьев и плодов Лоха узколистного водно-спиртовым экстрагентом 40% концентрации в соотношении 1:1, в результате чего получают жидкий экстракт с уникальным составом биологически активных веществ.

Жидкий экстракт как лекарственная форма имеет ряд преимуществ. Благодаря жидкой консистенции применение жидких экстрактов отличается удобством и простотой; наличие растворимых биологически активных компонентов обеспечивает их высокую биологическую доступность и быстрое проявление фармакологического эффекта.

Применение водно-спиртового экстрагента позволяет получить более высокий выход биологически активных компонентов из растительного сырья в сравнении с водными экстрагентами. В свою очередь, удаление из полученного экстракта остаточного количества этанола препятствует возможному развитию неблагоприятных эффектов, а именно раздражающего действия на слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта. Отсутствие в экстракте спирта этилового дает возможность применять данное средство во всех возрастных категориях, а также пациентам, работа которых связана с повышенным вниманием.

В доступных источниках научно-технической и патентной литературы сведений о противовоспалительном средстве, полученном на основе измельченных листьев и плодов Лоха узколистного путем экстрагирования методом паровой дистилляции, не обнаружено. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».

При проверке патентоспособности заявленного изобретения установлено соответствие его условиям промышленной применимости, поскольку достигается высокое качество и эффективность полученного средства. Установлено также соответствие изобретения условиям изобретательского уровня, поскольку заявленное средство отличается от аналога соотношением сырье: экстрагент и наличием в его составе широкого спектра биологически активных соединений, полученного путем паровой дистилляции, и возможностью его применения для лечения заболеваний опорно-двигательной, пищеварительной, мочевыделительной и др. систем, сопровождающихся воспалительной реакцией.

В условиях эксперимента было разработано и апробировано средство, представляющее собой жидкий водно-спиртовой экстракт, полученный путем экстрагирования листьев и плодов Лоха узколистного методом паровой дистилляции в соотношении 1:1, оказывающий противовоспалительное действие.

Подтверждение наличия противовоспалительного эффекта заявленного средства проводилось экспериментальными исследованиями in vivo. Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Был проведен химический анализ (качественный и количественный) полученного экстракта листьев и плодов Лоха узколистного.

Процентное содержание суммы флавоноидов в экстрактах сырья исследовали методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на лютеолин-7-глюкозид. Количественное определение суммы полисахаридов проводили гравиметрическим методом. Содержание аскорбиновой кислоты определяли титриметрическим методом, основанным на ее способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол. Суммарное количество сапонинов определяли в пересчете на олеаноловую кислоту методом прямой спектрофотометрии, основанный на реакции с серной кислотой.

Согласно проведенному нами химическому анализу установлено, что экстракт листьев и плодов Лоха узколистного содержит флавоноиды, полисахариды, аскорбиновую кислоту и сапонины, в мас. %: флавоноиды - 2,0-2,5; полисахариды - 1,8-2,4; аскорбиновую кислоту - 1,9-2,3; сапонины - 1,7-2,2.

Пример 2.

Наличие противовоспалительного действия жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного оценивали экспериментально методом фетровой гранулемы. Эксперимент проводили на крысах-самцах массой 180-210 г.

Острое экссудативное воспаление вызывали субплантарным введением 0,1 мл 1% раствора каррагенина в правую заднюю конечность экспериментальных крыс. Воспалительную реакцию оценивали через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы. Процент угнетения отека рассчитывали по формуле:

%=(Vo/Vk-I)×100,

где Vo - разность между начальным объемом конечности и ее объемом во время замера в экспериментальной группе;

Vk - аналогичная разность в контрольной группе.

Животные были распределены на три группы по десять животных в каждой: 1 группа (контроль I) - животные, получавшие внутрижелудочно воду; 2 группа (опыт) - крысы, получавшие перорально экстракт листьев и плодов Лоха узколистного в дозе 20 мг/кг (в пересчете на экстрактивные вещества - не менее 18%) в сутки, начиная за 7 дней до формирования воспаления.

На основании данных среднего прироста конечности животных, полученных в результате трех параллельных измерений, рассчитывали степень противовоспалительной активности.

Были получены следующие результаты (см. таб. 1).

Средний прирост массы конечности уменьшился в сравнении с контрольной группой на 29% (р≤0,05).

Таким образом, на модели острого экссудативного воспаления показано действие жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного на фазу экссудации.

Пример 3.

Наличие противовоспалительного действия жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного оценивали экспериментально методом фетровой гранулемы. Эксперимент проводили на крысах-самцах массой 180-210 г. Хроническое пролиферативное воспаление вызывали имплантацией под кожу спины крысы простерилизованного ватного шарика. У крыс, находящихся под наркозом, в области спины выстригалась шерсть. В асептических условиях ножницами делался разрез кожи и подкожной клетчатки длиной около 1 см, пинцетом в подкожной клетчатке через разрез формировалась полость, куда помещался простерилизованный ватный шарик массой 10 мг, после чего на рану накладывалось два шва. Животные были распределены на три группы по десять животных в каждой: 1 группа (контроль I) - животные, получавшие внутрижелудочно воду; 2 группа (контроль II) - животные с фетровой гранулемой, не получавшие лечение; 3 группа (опыт) - крысы, получавшие перорально экстракт листьев и плодов Лоха узколистного в дозе 20 мг/кг (в пересчете на экстрактивные вещества - не менее 18%) в сутки, начиная за 7 дней до формирования гранулемы.

На восьмые сутки ватные шарики с образовавшейся вокруг них грануляционной тканью извлекали, взвешивали и высушивали до постоянной массы при 60°С. Пролиферативную реакцию оценивали по разнице между массой высушенной гранулемы и исходной массой шарика. Экссудативную реакцию оценивали по разнице между массой сырой и высушенной гранулемы. Противовоспалительное действие (влияние на пролиферативный и экссудативный компоненты хронического воспаления) выражали в процентах по отношению к контролю.

Были получены следующие результаты (см. таб. 2).

При проведении оценки экссудативных и пролиферативных процессов при моделировании хронического воспаления получены результаты, подтверждающие его развитие: усиление экссудации на 16% (р≤0,05) и пролиферации на 40% (р≤0,01) в сравнении с контролем I. Полученные результаты свидетельствуют о наличии противовоспалительного действия жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного, что подтверждается значительным снижением экссудативных процессов на 15% (р≤0,05) и пролиферативных на 30% (р≤0,05) в сравнении с контролем II.

Пример 4.

Наличие противовоспалительного действия жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного на модели фетровой гранулемы подтверждалось общим количеством лейкоцитов, биохимическими исследованиями и определением уровня про- и противовоспалительных цитокинов. Эксперимент проводили на крысах-самцах массой 180-210 г. Хроническое пролиферативное воспаление вызывали имплантацией под кожу спины крысы простерилизованного ватного шарика. У крыс, находящихся под наркозом, в области спины выстригалась шерсть. В асептических условиях ножницами делался разрез кожи и подкожной клетчатки длиной около 1 см, пинцетом в подкожной клетчатке через разрез формировалась полость, куда помещался простерилизованный ватный шарик массой 10 мг, после чего на рану накладывалось два шва. Животные были распределены на три группы по десять животных в каждой: 1 группа (контроль I) - животные, получавшие внутрижелудочно воду; 2 группа (контроль II) - животные с фетровой гранулемой, не получавшие лечение; 3 группа (опыт) - крысы, получавшие перорально экстракт листьев и плодов Лоха узколистного в дозе 20 мг/кг (в пересчете на экстрактивные вещества - не менее 18%) в сутки, начиная за 7 дней до формирования гранулемы.

В таблице 3 указаны результаты определения общего количества лейкоцитов, уровня СРБ, IL-6 и IL-10.

Уровни лейкоцитов в контроле II уровень лейкоцитов, СРБ, IL-6 и IL-10 увеличились на 154% (р≤0,01), 22% (р≤0,05), 24% (р≤0,05) и 11%(р≥0,05) соответственно в сравнении с контролем I. Введение жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного привело к снижению уровней основных маркеров воспалительной реакции в сравнении с контролем II: общее количество лейкоцитов снизилось на 52% (р≤0,01), СРБ - на 14% (р≤0,05), IL-6 - на 16% (р≤0,05); уровень IL-10 увеличился на 25% (р≤0,05).

Таким образом, на моделях острого экссудативного и хронического пролиферативного воспаления выявлена выраженная противовоспалительная активность жидкого экстракта листьев и плодов Лоха узколистного, а также снижение уровней общего количества лейкоцитов, С-реактивного белка и провоспалительного цитокина IL-6, увеличение концентрации противовоспалительного цитокина IL-10.

Таким образом, полученные нами экспериментальные данные свидетельствуют о том, что жидкий экстракт листьев и плодов Лоха узколистного обладает выраженным противовоспалительным действием и может быть использован в клинической практике для лечения заболеваний опорно-двигательной, пищеварительной, мочевыделительной и др. систем.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству с противовоспалительной активностью. Средство с противовоспалительной активностью, характеризующееся тем, что представляет собой жидкий водно-спиртовой экстракт листьев и плодов Лоха узколистного, полученный путем экстрагирования листьев и плодов Лоха узколистного водно-спиртовым экстрагентом методом паровой дистилляции в соотношении 1:1, содержащий флавоноиды, полисахариды, аскорбиновую кислоту и сапонины, мас. %: флавоноиды - 2,0-2,5; полисахариды - 1,8-2,4; аскорбиновую кислоту - 1,9-2,3; сапонины - 1,7-2,2. Вышеописанное средство расширяет ассортимент средств с противовоспалительной активностью. 3 табл., 4 пр.

Средство с противовоспалительной активностью, характеризующееся тем, что представляет собой жидкий водно-спиртовой экстракт листьев и плодов Лоха узколистного, полученный путем экстрагирования листьев и плодов Лоха узколистного водно-спиртовым экстрагентом методом паровой дистилляции в соотношении 1:1, содержащий флавоноиды, полисахариды, аскорбиновую кислоту и сапонины, мас. %:

флавоноиды 2,0-2,5 полисахариды 1,8-2,4 аскорбиновую кислоту 1,9-2,3 сапонины 1,7-2,2