РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно § 119(e) 35 U.S.C. по предварительной заявке на патент США №62/338470, поданной 18 мая 2016 г., которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Острая сердечная недостаточность (AHF) представляет собой внезапное ухудшение здоровья, в результате которого сердце не может прокачать достаточно крови для удовлетворения потребностей организма в кровоснабжении. Признаки и симптомы могут включать одышку, отек и утомляемость, которые могут привести к острому респираторному нарушению и смерти. AHF, а также другие сердечно-сосудистые заболевания могут быть вызваны дефицитом циркулирующего релаксина.
Релаксин представляет собой гетеродимерный полипептидный эндокринный и аутокринный/паракринный гормон массой 6000 Да, относящийся к суперсемейству генов инсулина. Релаксин стимулирует ангиогенез и способствует восстановлению сосудистого эндотелия. Он оказывает влияние на костно-мышечную и другие системы за счет связыванию со своим рецептором в разных тканях, процесса, опосредуемого различными сигнальными путями. Существует семь известных пептидов из семейства релаксинов, в том числе релаксин (RLN)1, RLN2, RLN3 и инсулиноподобный пептид (INSL)3, INSL4, INSL5, INSL6. RLN1 и RLN2 принимают участие в регуляции и метаболизме коллагена в фибробластах, тогда как RLN3 является специфичным для мозга. RLN1 и RLN2 также вовлечены в изменения в гемодинамике, которые происходят при беременности, включая сердечный выброс, почечный кровоток и эластичность артерий. Кроме того, RLN2 опосредует вазодилатацию за счет увеличения продуцирования оксида азота через каскад фосфорилирования. Релаксин также является сердечным стимулятором и может вызывать вазодилатацию за счет ингибирования ангиотензина II и эндотелина, являющихся двумя мощными вазоконстрикторами. Было также показано, что этот гормон повышает чувствительность сердечных миофиламентов к кальцию и повышает фосфорилирование миофиламентов протеинкиназой С. Сила, создаваемая миофиламентами, возрастает, в то время как потребление энергии кардиомиоцитами остается на прежнем уровне. В почках релаксин увеличивает клиренс креатинина и усиливает почечный кровоток.
Релаксин, вазоактивный пептид, защищает сосудистую систему от переутомления, повышает функцию почек, способствует росту и выживанию клеток и поддерживает надлежащую структуру сосудов. Введение релаксина субъекту обеспечивает терапевтические преимущества, такие как лечение и профилактика фиброза, например, фиброза почек, фиброза сердца или фиброза легких, и сердечно-сосудистых заболеваний, например, острой сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, микрососудистого заболевания, острого коронарного синдрома с нарушением функции сердца или ишемии-реперфузии.
Средства стандартной терапии многих нарушений, связанных с нехваткой релаксина, включает бета-блокаторы, гидралазин/изосорбида динитрат, алкалоиды наперстянки, диуретики, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ), блокаторы ангиотензиновых рецепторов (ARB), дигоксин, антикоагулянты, антагонисты альдостерона и лекарственные препараты для контроля сопутствующих заболеваний, включая без ограничения высокий уровень холестерина, высокое кровяное давление, фибрилляцию предсердий и диабет. Обычно также рекомендуют изменение образа жизни, включая диету и физические упражнения.
Хотя релаксин обеспечивает значительные терапевтические преимущества, рекомбинантный релаксин дикого типа имеет короткий период полужизни, что делает достижение терапевтических уровней в организме проблематичным. Было продемонстрировано, что рекомбинантная форма релаксина под названием Serelaxin, поставляемая Novartis, обладает низкой токсичностью, однако ее эффективность сомнительна, поскольку она слишком быстро разрушается в кровотоке. Серелаксин имеет период полужизни, составляющий приблизительно 15 минут в сыворотке крови и 7-8 часов в течение непрерывной 48-часовой инфузии.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем изобретении предусматриваются терапевтические средства на основе мРНК для лечения фиброза и/или сердечно-сосудистого заболевания. Терапевтические средства на основе мРНК по настоящему изобретению особенно подходят для лечения фиброза и/или сердечно-сосудистого заболевания, поскольку технология обеспечивает внутриклеточную доставку мРНК, кодирующей релаксин (RXN), с последующим синтезом de novo функционального белка RXN в клетках-мишенях. Настоящее изобретение включает введение модифицированных нуклеотидов в составе терапевтических мРНК, чтобы (1) свести к минимуму нежелательную иммунную активацию (например, врожденный иммунный ответ, связанный с введением in vivo чужеродных нуклеиновых кислот) и (2) оптимизировать эффективность трансляции мРНК в белок. Иллюстративные аспекты настоящего изобретения представляют собой комбинацию нуклеотидной модификации для уменьшения врожденного иммунного ответа и оптимизации последовательности, в частности, в открытой рамке считывания (ORF) терапевтических мРНК, кодирующих RXN, для усиления экспрессии белка.
Технология терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению также включает доставку мРНК, кодирующей RXN, посредством системы доставки на основе липидных наночастиц (LNP). В настоящем изобретении представлены новые ионизируемые LNP на основе липидов, которые обладают улучшенными свойствами при введении in vivo, например, поглощением клеткой, внутриклеточным переносом и/или эндосомальным высвобождением или эндосомальным выделением. LNP по настоящему изобретению также демонстрируют пониженную иммуногенность, связанную с введением LNP in vivo.
В определенных аспектах настоящее изобретение относится к композициям и составам для доставки, содержащим полинуклеотид, например, рибонуклеиновую кислоту (РНК), например, матричную РНК (мРНК), кодирующую терапевтический белок-релаксин, и к способам лечения сердечной недостаточности и/или других нарушений у нуждающегося в этом субъекта путем их введения.
Аспекты настоящего изобретения относятся к РНК-полинуклеотиду, содержащему открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин. Полипептид релаксин может быть модифицирован для обеспечения увеличенного периода полужизни. Например, полипептид релаксин может быть частью слитого белка.
Композиции могут быть составлены в ионизируемой липидной наночастице, где ионизируемая липидная наночастица характеризуется молярным соотношением, составляющим приблизительно 20-60% ионизируемого липида : приблизительно 5-25% некатионного липида : приблизительно 25-55% стерина и приблизительно 0,5-15% PEG-модифицированного липида. Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к РНК-полинуклеотиду, содержащему открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, составленный в ионизируемой липидной наночастице.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к РНК-полинуклеотиду, содержащему открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, составленный в ионизируемой липидной наночастице, где РНК-полинуклеотид в ионизируемой липидной наночастице имеет терапевтический индекс, составляющий более 10% от терапевтического индекса для РНК-полинуклеотида в отдельности.
В некоторых аспектах настоящее изобретение представляет собой композицию на основе РНК-полинуклеотида, имеющего открытую рамку считывания, кодирующую по меньшей мере один белок релаксин, составленную в ионизируемой липидной наночастице, где ионизируемая липидная наночастица характеризуется молярным соотношением, составляющим приблизительно 20-60% ионизируемого липида : приблизительно 5-25% некатионного липида : приблизительно 25-55% стерина и приблизительно 0,5-15% PEG-модифицированного липида.
В других аспектах настоящее изобретение представляет собой нуклеиновую кислоту, содержащую РНК-полинуклеотид, имеющий открытую рамку считывания, кодирующую по меньшей мере один слитый белок на основе релаксин.
В других аспектах настоящее изобретение представляет собой полипептид, содержащий слитый белок релаксин-VL, где релаксин подергали слиянию с вариабельным фрагментом легкой цепи.
В некоторых вариантах осуществления полипептид релаксин характеризуется аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 80% идентична последовательности под SEQ ID NO. 2. В других вариантах осуществления полипептид характеризуется аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 90% идентична последовательности под SEQ ID NO. 2.
В некоторых вариантах осуществления белок релаксин представляет собой слитый белок на основе релаксина. Слитый белок на основе релаксина может быть фрагментом иммуноглобулина (Ig). В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой вариабельный фрагмент цепи. В других вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой константный фрагмент цепи. В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой вариабельный фрагмент легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельный фрагмент легкой цепи представляет собой VLκ-участок IgG. В некоторых вариантах осуществления релаксин связан с VLκ-участком IgG посредством линкера.
Белок релаксин представляет собой слитый белок и характеризуется нуклеотидной последовательностью, которая на 81%-100% идентична последовательности под SEQ ID NO: 1 в некоторых вариантах осуществления. В других вариантах осуществления белок релаксин представляет собой слитый белок и характеризуется нуклеотидной последовательностью, которая на 85%-99% идентична последовательности под SEQ ID NO: 1.
В других аспектах предусматривается способ лечения нарушения, ассоциированного с релаксином, у нуждающегося в этом субъекта. Способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества РНК-полинуклеотида, содержащего открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, для лечения нарушения, ассоциированного с релаксином.
В некоторых вариантах осуществления способ лечения нарушения, ассоциированного с релаксином, включает однократное введение РНК-полинуклеотида. В некоторых вариантах осуществления способ лечения нарушения, ассоциированного с релаксином, дополнительно предусматривает введение дозы еженедельно.
В вариантах осуществления нарушение, ассоциированное с релаксином, выбирают из группы, состоящей из острого коронарного синдрома с нарушением функции сердца, ишемии/реперфузии, ассоциированной с трансплантацией паренхиматозных органов, таких как легкое, почка, печень, сердце, защиты органов при экстракорпоральном кровообращении, включая заживление почки и роговицы, хронической сердечной недостаточности, диабетической нефропатии, NASH, фибрилляции предсердий, фиброза сердца, заживления ран у больного диабетом и цирроза.
В других аспектах настоящее изобретение предусматривает способ лечения сердечной недостаточности у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества РНК-полинуклеотида, содержащего открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, для лечения сердечной недостаточности.
В некоторых вариантах осуществления способ включает однократное введение РНК-полинуклеотида. В других вариантах осуществления способ дополнительно предусматривает введение дозы еженедельно, дозы каждые две недели, дозы каждые три недели, дозы каждый месяц или дозы каждые два месяца.
В некоторых вариантах осуществления введение РНК-полинуклеотида с ионизируемым липидом увеличивает терапевтический индекс РНК-полинуклеотида в композиции по сравнению с терапевтическим индексом РНК-полинуклеотида отдельно в отсутствие ионизируемого липида. В других вариантах осуществления терапевтический индекс РНК-полинуклеотида в композиции составляет более 10:1 или 50:1.
В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту РНК-полинуклеотид находится в лекарственной форме, которая имеет фармакокинетический (PK) профиль, предусматривающий: а) Тмакс., составляющее от приблизительно 30 до приблизительно 240 минут после введения, и b) плато концентрации в плазме крови лекарственного средства (полипептида релаксина, образуемого РНК-полинуклеотидом), составляющее по меньшей мере 50% от Смакс., в течение от приблизительно 60 до приблизительно 240 минут. В других вариантах осуществления при введении субъекту достигается по меньшей мере 25% или 50% повышение циркулирующего релаксина по сравнению с исходными уровнями. Рекомбинантный релаксин дикого типа имеет короткий период полужизни; например, серелаксин, рекомбинантная форма релаксина, имеет период полужизни в сыворотке крови, составляющий всего 15 минут. Однако, как показано в примерах 14 и 15, на моделях in vivo продемонстрировано, что варианты осуществления настоящего раскрытия имеют значительно более длительный период полужизни, что делает их терапевтически более эффективными.
В других вариантах осуществления уровень циркулирующего релаксина достигается на период от 2 часов до 7 дней, на период до 5 дней или на период до 3 дней.
В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту лекарственная форма имеет PK-профиль, где по меньшей мере приблизительно 90% лекарственного средства выводится из плазмы крови в течение приблизительно 5-7 дней после достижения плато концентрации лекарственного средства в плазме крови.
В других вариантах осуществления РНК содержит по меньшей мере одну химическую модификацию. В некоторых вариантах осуществления химическая модификация выбрана из псевдоуридина, N1-метил-псевдоуридина, 2-тиоуридина, 4'-тиоуридина, 5-метилцитозина, 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридина, 2-тио-1-метилпсевдоуридина, 2-тио-5-азауридина, 2-тиодигидропсевдоуридина, 2-тиодигидроуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-метокси-2-тиопсевдоуридина, 4-метоксипсевдоуридина, 4-тио-1-метилпсевдоуридина, 4-тиопсевдоуридина, 5-азауридина, дигидропсевдоуридина, 5-метилуридина, 5-метоксиуридина и 2'-O-метилуридина.
В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, имеет терапевтический индекс, составляющий более 60% от терапевтического индекса для РНК-полинуклеотида в отдельности. В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, имеет терапевтический индекс, составляющий более 10% от терапевтического индекса для РНК-полинуклеотида в отдельности.
В других вариантах осуществления ионизируемый липид представляет собой липид формулы (I):
или его соль или изомер, где:
R1 выбран из группы, состоящей из C5-30алкила, С5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2 и незамещенного С1-6 алкила, где Q выбран из карбоцикла, гетероцикла, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2,
-C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -N(R)R8,
-O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR,
-N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2,
-N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR и -C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R,
-S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С2-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых если R4 представляет собой -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR или -CQ(R)2, то (i) Q не представляет собой -N(R)2, если n равняется 1, 2, 3, 4 или 5, или (ii) Q не представляет собой 5-, 6- или 7-членный гетероциклоалкил, если n равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из C5-30алкила, С5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2 и незамещенного С1-6алкила, где Q выбран из С3-6карбоцикла, 5-14-членного гетероарила с одним или несколькими гетероатомами, выбранными из N, О и S, -OR,
-O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2,
-N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8,
-O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR,
-N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2,
-N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR и 5-14-членного гетероциклоалкила с одним или несколькими гетероатомами, выбранными из N, О и S, которые замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из оксо (=O), ОН, амино, моно- или диалкиламино и С1-3алкила, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R,
-S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С2-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или изомеры.
В других вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С5-30алкила, С5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2 и незамещенного C1-6 алкила, где Q выбран из С3-6карбоцикла, 5-14-членного гетероцикла с одним или несколькими гетероатомами, выбранными из N, О и S, -OR,
-O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2,
-N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR,
-N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2,
-N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, и -C(=NR9)N(R)2, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; и если Q представляет собой 5-14-членный гетероцикл, и (i) R4 представляет собой -(CH2)nQ, в котором n равняется 1 или 2, или (ii) R4 представляет собой -(СН2)nCHQR, в котором n равняется 1, или (iii) R4 представляет собой -CHQR и -CQ(R)2, то Q представляет собой или 5-14-членный гетероарил, или 8-14-членный гетероциклоалкил;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, C1-6алкила, -OR, -S(O)2R,
-S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С2-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или изомеры.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из C5-30алкила, C5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR,
-CHQR, -CQ(R)2 и незамещенного C1-6алкила, где Q выбран из С3-6карбоцикла, 5-14-членного гетероарила с одним или несколькими гетероатомами, выбранными из N, О и S, -OR,
-O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -C(O)N(R)2,
-N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR,
-N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2,
-N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR и -C(=NR9)N(R)2, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и H;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R,
-S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С2-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или изомеры.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из C5-30алкила, С5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С2-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 представляет собой (CH2)nQ или (CH2)nCHQR, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и H;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С1-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или изомеры.
В других вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С5-30алкила, C5-20алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С1-14алкила, С2-14алкенила, -R*YR'', -YR'' и -R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из -(CH2)nQ, (CH2)nCHQR, -CHQR и -CQ(R)2, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-,
-N(R')C(O)-, -С(О)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из C1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила, С2-3алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, -R*YR'', -YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С3-14алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С1-12алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или изомеры.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (IA):
или их соль или изомер, где 1 выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; m выбрано из 5, 6, 7, 8 и 9; M1 представляет собой связь или М'; R4 представляет собой незамещенный C1-3алкил или -(CH2)nQ, в котором Q представляет собой ОН, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8,
-NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, гетероарил или гетероциклоалкил; M и M' независимо выбраны из -С(O)O-, -ОС(О)-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы; и R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-14алкила и С2-14алкенила.
В некоторых вариантах осуществления наночастица имеет показатель полидисперсности, составляющий менее 0,4. В некоторых вариантах осуществления наночастица имеет суммарный нейтральный заряд при нейтральном рН.
В некоторых вариантах осуществления 80% урацила в открытой рамке считывания имеют химическую модификацию. В некоторых вариантах осуществления 100% урацила в открытой рамке считывания имеют химическую модификацию. В некоторых вариантах осуществления химическая модификация расположена в 5-положении урацила. В некоторых вариантах осуществления химическая модификация представляет собой N1-метил-псевдоуридин. В других вариантах осуществления содержание урацила и тимина в РНК-полинуклеотиде на 100-150% больше, чем в полинуклеотидах, кодирующих релаксин, дикого типа.
Аспекты настоящего изобретения относятся к способу увеличения терапевтического индекса РНК-полинуклеотида, содержащего открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, при этом способ предусматривает объединение РНК-полинуклеотида с ионизируемым липидом с получением композиции, за счет чего увеличивается терапевтический индекс РНК-полинуклеотида в композиции по сравнению с терапевтическим индексом РНК-полинуклеотида отдельно.
В некоторых вариантах осуществления терапевтический индекс РНК-полинуклеотида в композиции составляет более 10:1. В других вариантах осуществления терапевтический индекс РНК-полинуклеотида в композиции составляет более 50:1.
Дополнительные аспекты настоящего изобретения относятся к способу лечения субъекта, предусматривающему введение нуждающемуся в этом субъекту композиции, полученной в эффективном количестве для лечения субъекта.
Аспекты настоящего изобретения относятся к способу лечения сердечной недостаточности и/или других нарушений у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающему введение субъекту терапевтически эффективного количества РНК-полинуклеотида, содержащего открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, где введение РНК-полинуклеотида приводит к увеличению дефицитного белка у субъекта до физиологического уровня.
В некоторых вариантах осуществления способ лечения сердечной недостаточности и/или других нарушений предусматривает однократное введение РНК-полинуклеотида. В некоторых вариантах осуществления способ лечения сердечной недостаточности и/или других нарушений дополнительно предусматривает введение дозы еженедельно. В других вариантах осуществления РНК-полинуклеотид составляют в ионизируемой липидной наночастице.
В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид находится в композиции, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту лекарственная форма имеет фармакокинетический (PK) профиль, предусматривающий: а) Тмакс., составляющее от приблизительно 30 до приблизительно 240 минут после введения, и b) плато концентрации в плазме крови лекарственного средства (полипептида релаксина, образуемого РНК-полинуклеотидом), составляющее по меньшей мере 50% от Смакс., в течение от приблизительно 90 до приблизительно 240 минут.
В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту достигается по меньшей мере 25%-е повышение уровня белка релаксина по сравнению с исходными уровнями. В других вариантах осуществления при введении субъекту достигается по меньшей мере 50%-е повышение уровня белка релаксина по сравнению с исходными уровнями.
В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту достигается по меньшей мере 60%-е повышение уровня белка релаксина по сравнению с исходными уровнями. В других вариантах осуществления повышение уровня белка релаксина достигается на период до 3 дней. В других вариантах осуществления повышение уровня белка релаксина достигается на период до 5 дней.
В некоторых вариантах осуществления повышение уровня белка релаксина достигается на период до 7 дней. В некоторых вариантах осуществления повышение уровня белка релаксина достигается в течение 1 часа после введения дозы субъекту. В других вариантах осуществления повышение уровня белка релаксина достигается в течение 3 часов после введения дозы субъекту.
В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид вводят 1 раз в неделю в течение от 3 недель до 1 года. В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид вводят субъекту путем внутривенного введения. В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид вводят субъекту путем подкожного введения.
Некоторые варианты осуществления дополнительно предусматривают введение субъекту средства стандартной терапии сердечной недостаточности. В других вариантах осуществления средство стандартной терапии выбирают из группы, состоящей из бета-блокаторов, гидралазина/изосорбида динитрата, наперстянки, диуретиков, ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ), блокаторов ангиотензиновых рецепторов (ARB), дигоксина, антикоагулянтов, антагонистов альдостерона и лекарственных препаратов для контроля сопутствующих заболеваний, включая без ограничения высокий уровень холестерина, высокое кровяное давление, фибрилляцию предсердий и диабет.
В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид присутствует в дозе от 25 до 100 мкг. В других вариантах осуществления способ предусматривает введение субъекту однократной дозы РНК-полинуклеотида, составляющей от 0,001 мг/кг до 0,005 мг/кг.
Аспекты настоящего изобретения относятся к способу лечения сердечной недостаточности и/или нарушений у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающему введение субъекту РНК-полинуклеотида, содержащего открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, и средства стандартной терапии сердечной недостаточности и/или других нарушений, где комбинированное введение РНК-полинуклеотида и средства стандартной терапии приводит к повышению уровней белка релаксина у субъекта до физиологического уровня.
Настоящее изобретение предусматривает полинуклеотид, содержащий открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, где содержание урацила или тимина в ORF составляет от 100 до приблизительно 150% от теоретического минимального содержания урацила или тимина в нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид релаксин (% UTM или % ТТМ соответственно). В некоторых вариантах осуществления содержание урацила или тимина в ORF составляет от приблизительно 105% до приблизительно 145%, от приблизительно 105% до приблизительно 140%, от приблизительно 110% до приблизительно 145%, от приблизительно 110% до приблизительно 140%, от приблизительно 115% до приблизительно 145%, от приблизительно 115% до приблизительно 140%, от приблизительно 120% до приблизительно 145%, от приблизительно 120% до приблизительно 140%, от приблизительно 125% до приблизительно 145% или от приблизительно 125% до приблизительно 140% от % UTM или % ТTM. В некоторых вариантах осуществления содержание урацила или тимина в ORF находится между (i) 115%, 116%, 117%, 118%, 119%, 120%, 121%, 122%, 123%, 124% или 125% и (ii) 139%, 140%, 141%, 142%, 143%, 144% или 145% от % UTM или % ТTM.
В некоторых вариантах осуществления ORF дополнительно содержит по меньшей мере один кодон с низкой частотой встречаемости.
В некоторых вариантах осуществления ORF характеризуется по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичностью последовательности с последовательностью, выбранной из последовательностей в таблице 5. В некоторых вариантах осуществления полипептид релаксин содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или приблизительно 100% идентична полипептидной последовательности белка релаксина дикого типа (таблица 5), и где полипептид релаксин обладает терапевтической активностью. В некоторых вариантах осуществления полипептид релаксин представляет собой вариант, производное или мутант, обладающий терапевтической активностью. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность дополнительно содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую транзитный пептид.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит сайт связывания miRNA. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA содержит одну или несколько нуклеотидных последовательностей, выбранных из таблицы 4. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA связывается с miR-142. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA связывается с miR-142-3р или miR-142-5p. В некоторых вариантах осуществления miR142 содержит SEQ ID NO: 539.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит 5'-UTR. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая на по меньшей мере 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или приблизительно 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 545-569, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит 3'-UTR. В некоторых вариантах осуществления 3'-UTR содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая на по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или приблизительно 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 493-505 и 570-587, или любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA расположен в пределах 3'-UTR.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит 5'-концевой кэп. В некоторых вариантах осуществления 5'-концевой кэп содержит кэп 0, кэп 1, ARCA, инозин, N1-метилгуанозин, 2'-фторгуанозин, 7-дезазагуанозин, 8-оксогуанозин, 2-аминогуанозин, LNA-гуанозин, 2-азидогуанозин, кэп 2, кэп 4, кэп 5'-метил G или их аналог. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит участок поли(А). В некоторых вариантах осуществления участок поли(А) имеет длину, составляющую по меньшей мере приблизительно 10, по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 30, по меньшей мере приблизительно 40, по меньшей мере приблизительно 50, по меньшей мере приблизительно 60, по меньшей мере приблизительно 70, по меньшей мере приблизительно 80 или по меньшей мере приблизительно 90 нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления участок поли(А) имеет длину, составляющую от приблизительно 10 до приблизительно 200, от приблизительно 20 до приблизительно 180, от приблизительно 50 до приблизительно 160, от приблизительно 70 до приблизительно 140, от приблизительно 80 до приблизительно 120 нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления при введении субъекту полинуклеотид характеризуется: (i) более длительным периодом полужизни в плазме крови; (ii) повышенной экспрессией полипептида релаксина, кодируемого ORF; (iii) более низкой частотой остановки трансляции, приводящей к частичной экспрессии; (iv) большей структурной стабильностью или (v) любой их комбинацией относительно соответствующего полинуклеотида, представляющего собой полинуклеотид, кодирующий релаксин дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит: (i) 5'-концевой кэп; (ii) 5'-UTR; (iii) ORF, кодирующую полипептид релаксин; (iv) 3'-UTR и (v) участок поли(А). В некоторых вариантах осуществления 3'-UTR содержит сайт связывания miRNA.
Настоящее раскрытие также предусматривает способ получения полинуклеотида, описанного в данном документе, при этом способ предусматривает модификацию ORF, кодирующей полипептид релаксин, путем замены по меньшей мере одного нуклеотидного основания урацила нуклеотидным основанием аденином, гуанином или цитозином, или путем замены по меньшей мере одного нуклеотидного основания аденина, гуанина или цитозина нуклеотидным основанием урацилом, где все замены являются равнозначными заменами. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно предусматривает замену по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 99% или приблизительно 100% урацила на 5-метоксиурацил.
В определенных вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (IIa), (IIb), (IIc) или (IIe):
или их соль или изомер, где R4 представляет собой радикал, описанный в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой радикал, описанный в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой соединение формулы (IId),
или его соль или стереоизомер,
где R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С5-14алкила и С5-14алкенила, n выбрано из 2, 3 и 4, и R', R'', R5, R6 и m определены в пункте 16.
В некоторых вариантах осуществления R2 представляет собой С8алкил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой С5алкил, С6алкил, С7алкил, С8алкил или С9алкил. В некоторых вариантах осуществления m равняется 5, 7 или 9. В некоторых вариантах осуществления каждый R5 представляет собой Н. В некоторых вариантах осуществления каждый R6 представляет собой Н.
В другом аспекте в настоящем изобретении представлена композиция на основе наночастиц, включающая липидный компонент, содержащий соединение, описанное в данном документе (например, соединение согласно формуле (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe)).
В еще одном аспекте в настоящем изобретении представлена фармацевтическая композиция, содержащая композицию на основе наночастиц в соответствии с предшествующими аспектами и фармацевтически приемлемый носитель. Например, фармацевтическую композицию охлаждают или замораживают для хранения и/или отправки (например, хранят при температуре 4°С или ниже, как например: при температуре от приблизительно -150°С до приблизительно 0°С или от приблизительно -80°С до приблизительно -20°С (например, приблизительно -5°С, -10°С, -15°С, -20°С, -25°С, -30°С, -40°С, -50°С, -60°С, -70°С, -80°С, -90°С, -130°С или -150°С). Например, фармацевтическая композиция представляет собой раствор, который охлаждают для хранения и/или отправки, например, при температуре, составляющей приблизительно -20°С, -30°С, -40°С, -50°С, -60°С, -70°С или -80°С.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способ доставки терапевтического и/или профилактического средства (например, мРНК) в клетку (например, клетку млекопитающего). Этот способ включает стадию введения субъекту (например, млекопитающему, например человеку) композиции на основе наночастиц, включающей (i) липидный компонент, включающий фосфолипид (такой как полиненасыщенный липид), PEG-липид, структурный липид и соединение формулы (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe) и (ii) терапевтическое и/или профилактическое средство, на которой введение включает приведение в контакт клетки с композицией на основе наночастиц, за счет чего терапевтическое и/или профилактическое средство доставляются в клетку.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способ получения представляющего интерес полипептида в клетке (например, клетке млекопитающего). Способ включает стадию приведения в контакт клетки с композицией на основе наночастиц, включающей: (i) липидный компонент, включающий фосфолипид (такой как полиненасыщенный липид), PEG-липид, структурный липид и соединение формулы (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe) и (ii) мРНК, кодирующую представляющий интерес полипептид, за счет чего мРНК способна транслироваться в клетке с получением полипептида.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способ лечения заболевания или нарушения у нуждающегося в этом млекопитающего (например, человека). Способ включает стадию введения млекопитающему терапевтически эффективного количества композиции наночастиц, включающей (i) липидный компонент, включающий фосфолипид (такой как полиненасыщенный липид), PEG-липид, структурный липид и соединение формулы (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe) и (ii) терапевтическое и/или профилактическое средство (например, мРНК). В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение характеризуются дисфункциональной или нарушенной активностью белка или полипептида.
В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает способ доставки (например, специфической доставки) терапевтического и/или профилактического средства в орган млекопитающего (например, печень, селезенку, легкое или бедренную кость). Этот способ включает стадию введения субъекту (например, млекопитающему) композиции на основе наночастиц, включающей (i) липидный компонент, включающий фосфолипид, PEG-липид, структурный липид и соединение формулы (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe) и (ii) терапевтическое и/или профилактическое средство (например, мРНК), на которой введение включает приведение в контакт клетки с композицией на основе наночастиц, за счет чего терапевтическое и/или профилактическое средство доставляется в орган-мишень (например, печень, селезенка, легкое или бедренная кость).
В другом аспекте настоящее изобретение включает способ улучшенной доставки терапевтического и/или профилактического средства (например, мРНК) в ткань-мишень (например, печень, селезенку, легкое, мышцу или бедренную кость). Этот способ включает введение субъекту (например, млекопитающему) композиции на основе наночастиц, при этом композиция включает (i) липидный компонент, включающий соединение формулы (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe), фосфолипид, структурный липид и PEG-липид и (ii) терапевтическое и/или профилактическое средство, при этом введение включает приведение в контакт ткани-мишени с композицией на основе наночастиц, за счет чего терапевтическое и/или профилактическое средство доставляется в ткань-мишень.
В некоторых вариантах осуществления раскрытая в данном документе композиция представляет собой композицию на основе наночастиц. В некоторых вариантах осуществления средство доставки дополнительно содержит фосфолипид. В некоторых вариантах осуществления фосфолипид выбран из группы, состоящей из 1,2-дилинолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DLPC),
1,2-димиристоил-sn-глицерофосфохолина (DMPC), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DOPC), 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DPPC), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина (DSPC), 1,2-диундеканоил-sn-глицерофосфохолина (DUPC), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (РОРС), 1,2-ди-О-октадеценил-sn-глицеро-3-фосфохолина (18:0 Diether PC), 1-олеоил-2-холестерилгемисукциноил-sn-глицеро-3-фосфохолина (OChemsPC), 1-гексадецил-sn-глицеро-3-фосфохолина (С16 Lyso PC), 1,2-дилиноленоил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,2-диарахидоноил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,2-дидокозагексаеноил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (DOPE), 1,2-дифитаноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (ME 16:0 РЕ), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина, 1,2-дилинолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина, 1,2-дилиноленоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина, 1,2-диарахидоноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина, 1,2-дидокозагексаеноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина, 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфо-рацемат-(1-глицерин) натриевой соли (DOPG), сфингомиелина и любых их смесей.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки дополнительно содержит структурный липид. В некоторых вариантах осуществления структурный липид выбирают из группы, состоящей из холестерина, фекостерина, ситостерина, эргостерина, кампестерина, стигмастерина, брассикастерина, томатидина, урсоловой кислоты, альфа-токоферола и любых их смесей.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки дополнительно содержит PEG-липид. В некоторых вариантах осуществления PEG-липид выбирают из группы, состоящей из PEG-модифицированного фосфатидилэтаноламина, PEG-модифицированной фосфатидной кислоты, PEG-модифицированного церамида, PEG-модифицированного диалкиламина, PEG-модифицированного диацилглицерина, PEG-модифицированного диалкилглицерина и любых их смесей.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки дополнительно содержит ионизируемый липид, выбранный из группы, состоящей из 3-(дидодециламино)-N1,N1,4-тридодецил-1-пиперазинэтанамина (KL10),
N1-[2-(дидодециламино)этил]-N1,N4,N4-тридодецил-1,4-пиперазиндиэтанамина (KL22), 14,25-дитридецил-15,18,21,24-тетрааза-октатриаконтана (KL25), 1,2-дилинолеилокси-N,N-диметиламинопропана (DLin-DMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил-[1,3]-диоксолана (DLin-K-DMA), гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4-(диметиламино)бутаноата (DLin-MC3-DMA), 2,2-дилинолеил-4-(2-диметиламиноэтил)-[1,3]-диоксолана (DLin-KC2-DMA), 1,2-диолеилокси-N,N-диметиламинопропана (DODMA), 2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (Octyl-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (Octyl-CLinDMA (2R)) и (2S)-2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (Octyl-CLinDMA (2S)).
В некоторых вариантах осуществления средство доставки дополнительно содержит фосфолипид, структурный липид, PEG-липид или любую их комбинацию.
В некоторых вариантах осуществления композиция составлена для доставки in vivo. В некоторых вариантах осуществления композиция составлена для внутримышечной, подкожной или внутрикожной доставки.
Каждое из ограничений настоящего изобретения может охватывать различные варианты осуществления настоящего изобретения. Поэтому предполагается, что каждое из ограничений настоящего изобретения, включающее любой элемент или комбинации элементов, может быть включено в каждый аспект настоящего изобретения. Данное изобретение не ограничено в его применении подробностями конструкции и составом компонентов, изложенных в нижеследующем описании или проиллюстрированных в графических материалах. Настоящее изобретение допускает другие варианты осуществления и осуществляется на практике или выполняется различными способами. Кроме того, фразеология и терминология, используемые в данном документе, предназначены для описания и не должны рассматриваться как ограничивающие. Применение выражение «включающий в себя», «включающий» или «имеющий», «содержащий», «вовлеченный» и их варианты в данном документе означает охват перечисленных ниже элементов и их эквивалентов, а также дополнительных элементов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ/ФИГУР
Вышеупомянутые и другие объекты, признаки и преимущества будут очевидны из нижеследующего описания конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, что показано на прилагаемых графических материалах, на которых одинаковые ссылочные символы относятся к одним и тем же частям на разных изображениях. Графические материалы не обязательно масштабировать, вместо этого делается упор на иллюстрации принципов различных вариантов осуществления настоящего изобретения.
На фиг. 1 представлена схема, изображающая релаксин дикого типа и слитый белок «VLk»-hRLN2. Последовательность (G4S)3 соответствует SEQ ID NO: 589.
Фиг. 2 представляет собой ряд графиков, показывающих, что мРНК слитого белка VLk-RLN2 продуцирует функциональный белок в анализе подтверждения активности in vitro.
Фиг. 3А и 3В представляют собой графики, показывающие, что мРНК слитого белка VLk-RLN2 продуцирует функциональный белок с устойчивой активностью у крыс со спонтанно развившейся гипертензией при IV-введении. На фиг. 3А показана частота сердечных сокращений у крыс, а на фиг. 3В показано диастолическое артериальное давление. Данные усреднены за дневной и ночной периоды (среднее +/- SD), при этом удалены периоды проведения манипуляций с животными (N=8 крыс на группу).
На фиг. 4 показаны данные по циркулирующему белке у крыс со спонтанно развившейся гипертензией.
На фиг. 5 показано, что мРНК слитого белка релаксина VLk-RLN2 на период до шести дней дает уровни циркулирующего белка, которые выше целевых концентраций у яванского макака при IV-введении.
На фиг. 6 показаны результаты анализа удлинения межлобковой связки (ILE) in vivo, демонстрирующего, что мРНК слитого белка VLk-RLN2 продуцирует функциональный белок.
На фиг. 7 показан скрининг in vivo экспрессии мРНК слитого белка VLk-RLN2, который демонстрирует, что уровни циркулирующего белка релаксина превышают целевые концентрации на период до шести дней у крыс, которым вводили мРНК.
На фиг. 8 показано, что мРНК слитого белка VLk-RLN2 вызывает экспрессию релаксина в концентрации, превышающей целевую концентрацию на период до восьми дней у мышей при IV-введении.
На фиг. 9 показаны данные исследования с повторным введением дозы яванскому макаку (см. пример 14).
На фиг. 10 показаны данные исследования с повторным введением дозы яванскому макаку (см. пример 14).
На фиг. 11 показаны уровни циркулирующей мРНК релаксина-VLk у яванских макак после каждого введения (три дозы).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем изобретении предусматриваются терапевтические средства на основе мРНК для лечения фиброза и/или сердечно-сосудистого заболевания. Как фиброз, так и сердечно-сосудистое заболевание могут быть результатом дефицита циркулирующего релаксина. Терапевтические средства на основе мРНК особенно подходят для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, фиброза и других нарушений, связанных с недостаточным количеством релаксина, поскольку технология обеспечивает внутриклеточную доставку мРНК, кодирующей релаксин, с последующим синтезом de novo функционального белка релаксина в клетках-мишенях. После доставки мРНК в клетки-мишени требуемый белок релаксин экспрессируется собственным трансляционным механизмом клеток, и, следовательно, полностью функциональный белок релаксин заменяет дефектный или отсутствующий белок.
Одна проблема, связанная с доставкой терапевтических средств на основе нуклеиновой кислоты (например, терапевтических средств на основе мРНК) in vivo обусловлена врожденным иммунным ответом, который может возникать, когда иммунная система организма встречается с чужеродными нуклеиновыми кислотами. Чужеродные мРНК могут активировать иммунную систему посредством распознавания через toll-подобные рецепторы (TLR), в частности TLR7/8, который активируется однонитевой РНК (онРНК). В неиммунных клетках распознавание чужеродной мРНК может происходить при участии индуцируемого ретиноевой кислотой гена I (RIG-I). Иммунное распознавание чужеродных мРНК может приводить к нежелательным цитокиновым эффектам, включая продуцирование интерлейкина-1β (IL-1β), распространение фактора некроза опухолей-α (TNF-α) и сильный ответ с вовлечением интерферона I типа (IFN типа I). Настоящее изобретение включает встраивание различных модифицированных нуклеотидов в терапевтические мРНК для сведения к минимуму иммунной активации и оптимизации эффективности трансляции мРНК в белок. Конкретные аспекты настоящего изобретения представляют собой комбинацию нуклеотидной модификации для уменьшения врожденного иммунного ответа и оптимизации последовательности, в частности, в открытой рамке считывания (ORF) терапевтических мРНК, кодирующих релаксин, для усиления экспрессии белка.
Технология терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению также включает доставку мРНК, кодирующей релаксин, посредством системы для доставки на основе липидных наночастиц (LNP). Липидные наночастицы (LNP) являются идеальной платформой для безопасной и эффективной доставки мРНК в клетки-мишени. LNP обладают уникальной способностью доставлять нуклеиновые кислоты с помощью механизма, включающего клеточный захват, внутриклеточный транспорт и эндосомальное высвобождение или эндосомальное выделение. В настоящем изобретении представлены новые ионизируемые LNP на основе липидов, которые обладают улучшенными свойствами при введении in vivo. Не вдаваясь в теорию, полагают, что новые ионизируемые LNP на основе липидов по настоящему изобретению обладают улучшенными свойствами, например, клеточным захватом, внутриклеточным транспортом и/или эндосомальным высвобождением или эндосомальным выделением. LNP, вводимые системно (например, путем внутривенного (IV) введения), например, при первом введении, могут ускорять выведение LNP, введенных позднее, например, при дополнительных введениях. Этот феномен известен как ускоренный клиренс крови (ABC) и является ключевой проблемой, в частности, при замещении недостающих гормонов (например, релаксина) в терапевтическом контексте. Это связано с тем, что повторное введение терапевтических средств на основе мРНК является в большинстве случаев обязательным для поддержания необходимых уровней фермента в тканях-мишенях у субъектов (например, субъектов, страдающих от острой сердечной недостаточности). Проблему повторного введения доз можно решить на нескольких уровнях. Конструирование мРНК и/или эффективная доставка с помощью LNP могут приводить к повышению уровней и/или увеличению продолжительности экспрессии белка (например, релаксина) после первого введения дозы, что, в свою очередь, может удлинять период между первой дозой и последующим введением доз. Известно, что феномен ABC является, по меньшей мере частично, временным по своей природе, с устранением иммунных ответов, лежащих в основе ABC, после достаточно долгого периода времени после системного введения. Таким образом, увеличение продолжительности экспрессии и/или активности белка после системной доставки терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению в одном аспекте оказывает противодействие феномену ABC. Более того, LNP могут быть сконструированы так, чтобы избежать иммунного обнаружения и/или распознавания, и таким образом они дополнительно могут избежать ABC при последующем или повторном введении дозы. Иллюстративный аспект настоящего изобретения представляет собой новые LNP, которые были сконструированы с целью уменьшения ABC.
Релаксин
Релаксин дикого типа представляет собой гетеродимерный полипептидный эндокринный и аутокринный/паракринный гормон массой 6000 Да, относящийся к суперсемейству генов инсулина. Он содержит А- и В-цепь, соединенные двумя межцепочечными дисульфидными связями, и одну дисульфидную связь внутри А-цепи. Релаксин стимулирует ангиогенез и способствует восстановлению сосудистого эндотелия. Он оказывает влияние на костно-мышечную и другие системы за счет связыванию со своим рецептором в разных тканях, процесса, опосредуемого различными сигнальными путями. Существует семь известных пептидов из семейства релаксинов, в том числе релаксин (RLN)1, RLN2, RLN3 и инсулиноподобный пептид (INSL)3, INSL4, INSL5, INSL6. RLN1 и RLN2 принимают участие в регуляции и метаболизме коллагена в фибробластах, тогда как RLN3 является специфичным для мозга. RLN1 и RLN2 также вовлечены в изменения в гемодинамике, которые происходят при беременности, включая сердечный выброс, почечный кровоток и эластичность артерий. Кроме того, RLN2 опосредует вазодилатацию за счет увеличения продуцирования оксида азота через каскад фосфорилирования. Релаксин также является сердечным стимулятором и может вызывать вазодилатацию за счет ингибирования ангиотензина II и эндотелина, являющихся двумя мощными вазоконстрикторами. Было также показано, что этот гормон повышает чувствительность сердечных миофиламентов к кальцию и повышает фосфорилирование миофиламентов протеинкиназой С. Сила, создаваемая миофиламентами, возрастает, в то время как потребление энергии кардиомиоцитами остается на прежнем уровне. В почках релаксин увеличивает клиренс креатинина и усиливает почечный кровоток.
У людей релаксин Н2 (релаксин-2) является основной циркулирующей формой. Функция релаксина Н2 опосредуется, главным образом, рецептором пептида семейства релаксина 1 (RXFP1), хотя он также может активировать рецептор RXFP2 с низкой эффективностью. Используемый в данном документе термин «релаксин» относится к гетеродимерному полипептиду, способному активировать RXFP1 и/или RXFP2.
В некоторых вариантах осуществления релаксин представляет собой полипептид, характеризующийся по меньшей мере 70% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1 или 3, или его фрагмент, или кодируется полинуклеотидом, характеризующимся по меньшей мере 70% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2 или 4, или его фрагментом. В других вариантах осуществления релаксин представляет собой полипептид, характеризующийся по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1 или 3, или его фрагмент, или кодируется полинуклеотидом, характеризующимся по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2 или 4, или его фрагментом.
Настоящее изобретение в некоторых аспектах представляет собой мРНК, кодирующую белок релаксин. Релаксин представляет собой вазоактивный пептид, который защищает сосудистую систему от переутомления, повышает функцию почек, способствует росту и выживанию клеток и поддерживает надлежащую структуру сосудов. Введение релаксина субъекту обеспечивает терапевтические преимущества, такие как лечение и профилактика фиброза, например, фиброза почек, фиброза сердца или фиброза легких, и сердечно-сосудистых заболеваний, например, острой сердечной недостаточности, ишемической болезни сердца, микрососудистого заболевания, острого коронарного синдрома с нарушением функции сердца или ишемии-реперфузии.
Хотя релаксин обеспечивает значительные терапевтические преимущества, рекомбинантный релаксин дикого типа имеет короткий период полужизни, что делает достижение терапевтических уровней в организме проблематичным. Было продемонстрировано, что рекомбинантная форма релаксина под названием Serelaxin, поставляемая Novartis, обладает низкой токсичностью, однако ее эффективность сомнительна, поскольку она слишком быстро разрушается в кровотоке. Серелаксин имеет период полужизни, составляющий приблизительно 15 минут в сыворотке крови и 7-8 часов в течение непрерывной 48-часовой инфузии.
В некоторых аспектах настоящее изобретение представляет собой терапевтический релаксин, а именно мРНК, кодирующую стабилизированный белок релаксин или дикого типа, такой как слитый белок релаксин-иммуноглобулин, который имеет значительно увеличенный период полужизни и таким образом может быть более эффективным в лечении заболевания. В других аспектах терапевтический релаксин представляет собой слитый белок на основе релаксина. Кроме того, более длительный период полужизни терапевтических средств на основе стабилизированного релаксина, описанных в данном документе, может обеспечить возможность для использования меньшего количества доз у пациента с большим периодом между дозами. Хотя было продемонстрировано, что пэгилированные формы релаксина более стабильны, чем релаксин дикого типа, увеличение стабильности в сыворотке крови по сравнению с Serelaxin составляет всего лишь около 13,5%. Стабильные слитые белки по настоящему изобретению являются значительно более стабильными. Например, слитый белок, в котором участок VLk слит за А-цепью релаксина, характеризуется увеличенным на 1-2 недели периодом полужизни в сыворотке крови относительно серелаксина.
Способность активировать RXFP1 и/или RXFP2 относится к увеличению активации относительно уровня активации в отсутствие терапевтического средства на основе релаксина. Способность к активации можно оценить, например, с использованием анализа in vitro или in vivo, как, например, анализов, описанных в данном документе.
Слитый белок на основе релаксина, используемый в данном документе, представляет собой белок, состоящий из релаксина, связанного со стабилизирующим белком. В некоторых вариантах осуществления стабилизирующий белок представляет собой белок иммуноглобулин. В других вариантах осуществления стабилизирующий белок представляет собой белок VLk.
Нуклеиновая кислота релаксина или мРНК релаксина, используемые в данном документе, представляет собой РНК, кодирующую релаксин дикого типа, его вариант или его фрагмент (назван релаксином дикого типа), или РНК, кодирующую слитый белок на основе релаксина, то есть релаксин, связанный со стабилизирующим белком (назван стабилизированным слитым белком на основе релаксина). В некоторых вариантах осуществления стабилизирующий белок представляет собой белок иммуноглобулин. В других вариантах осуществления стабилизирующий белок представляет собой белок VLk.
Терапевтические средства на основе релаксина по настоящему изобретению применимы для лечения различных нарушений. Например, терапевтические средства на основе релаксина применимы для лечения сердечной недостаточности (острой или хронической), а также показаний для однократного введения и показаний для хронического введения. Показания для однократного введения включают без ограничения острую сердечную недостаточность (неишемическую), острый коронарный синдром с нарушением функции сердца, ишемию/реперфузию, ассоциированную с трансплантацией паренхиматозных органов, таких как легкое, почка, печень, сердце, защиты органов при экстракорпоральном кровообращении, например, заживление почки и роговицы, то есть при глазном введении. Показания для длительного введения включают без ограничения хроническую сердечную недостаточность, диабетическую нефропатию, NASH, фибрилляцию предсердий, фиброз сердца, заживление ран у больного диабетом и цирроз.
Сердечная недостаточность (HF) включает в себя несостоятельность левого желудочка в наполнении кровью или выбросе крови, снижая способность доставлять обогащенную кислородом кровь в другие части тела. Она в большей степени распространена, более затратна и вызывает больше смертей, чем рак. Сердечная недостаточность представляет собой сложное заболевание с рядом причин и различных сопутствующих заболеваний. Некоторые из основных причин HF включают: ишемическую болезнь сердца, острый коронарный синдром, высокое кровяное давление, аномальный сердечный клапан(ы), кардиомиопатию, миокардит, врожденный порок(и) сердца, диабет, ожирение, заболевание легких и синдром апноэ. В ответ на сердечную недостаточность организм пытается адаптироваться и доставить требуемую кровь, что может привести к увеличению сердца, увеличению мышечной массы сердца, увеличению частоты сердечных сокращений, сужению сосудов и оттоку крови от других органов. Решения о лечении обычно принимаются на основании индивидуального подхода к пациенту по причине гетерогенности заболевания.
Существует два типа HF: острая (приблизительно 10% случаев HF), которая развивается быстро и требует госпитализации, и хроническая (приблизительно 90% случаев HF), которая развивается постепенно и требует длительного лечения. Среди этих двух типов существует четыре класса сердечной недостаточности: I класс (бессимптомный, 40% пациентов с HF), II класс (симптомы HF при умеренном напряжении, 30% пациентов с HF), III класс (симптомы HF при минимальном напряжении, 20% пациентов с HF) и IV класс (симптомы HF в состоянии покоя, 10% пациентов с HF). Смертность у пациентов с сердечной недостаточностью следующая: внутрибольничная (6%), 30-дневная после выписки (11%), годичная (30%) и пятилетняя (50%).
Сердечную недостаточность можно оценить количественно с использованием фракции выброса (EF), показателя того, насколько хорошо сердце прокачивает кровь по телу. При определении EF сравнивают количество крови в сердце с количеством выталкиваемой крови. Ее рассчитывают как количество выталкиваемой крови, разделенное на количество крови в камерах сердца.
В некоторых вариантах осуществления мРНК релаксина по настоящему изобретению используют для лечения острой HF как для введения доз в условиях стационара, так и для последующего введения. В дополнительных вариантах осуществления мРНК релаксина используют для облегчения симптомов HF, предотвращения прогрессирования заболевания и смертности и/или снижения случаев госпитализации по причине HF. В других вариантах осуществления мРНК релаксина по настоящему изобретению используют для лечения таких заболеваний, как острый. коронарный синдром с нарушением функции сердца, ишемия/реперфузия, ассоциированная с трансплантацией паренхиматозных органов (например, легких, почек, печени и/или сердца), экстракорпоральное кровообращение (например, для защиты функции почек), заживление роговицы, диабетическая нефропатия, неалкогольный стеатогепатит (NASH), фибрилляция предсердий (фиброз сердца), заживление ран у больного диабетом и цирроз.
Специалисту в данной области будет понятно, что терапевтическую эффективность лекарственного средства или лечения по настоящему изобретению можно охарактеризовать или определить путем измерения уровня экспрессии кодируемого белка в образце или в образцах, взятых у субъекта (например, у субъекта в доклиническом испытании (грызуна, примата и т.д.) или у субъекта клинического исследования (человека). Аналогично терапевтическую эффективность лекарственного средства или лечения по настоящему изобретению можно охарактеризовать или определить путем измерения уровня активности кодируемого белка в образце или в образцах, взятых у субъекта (например, у субъекта в доклиническом испытании (грызуна, примата и т.д.) или у субъекта клинического исследования (человека). Кроме того, терапевтическую эффективность лекарственного средства или лечения по настоящему изобретению можно охарактеризовать или определить путем измерения уровня соответствующего биомаркера в образце(образцах), взятом(взятых) у субъекта. Уровни белка и/или биомаркеров можно определить после введения однократной дозы терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению, или можно определить и/или контролировать в течение нескольких моментов времени после введения однократной дозы, или можно определить и/или контролировать на протяжении всего курса лечения, например, лечения с многократным введением доз.
Уровни экспрессии белка релаксина
Определенные аспекты настоящего изобретения включают измерение, определение и/или контроль уровня или уровней экспрессии белка релаксина у субъекта, например, у животного (например, грызунов, приматов и т.п.) или у человека. Животные включают нормальных, здоровых или животных дикого типа, а также животных из моделей, используемых для изучения сердечно-сосудистых заболеваний и их лечения. Иллюстративные модели на животных включают модели на грызунах, например, мышей с дефицитом релаксина, также называемых мышами с сердечно-сосудистым заболеванием. Уровни экспрессии белка релаксина можно измерить или определить любым известным в данной области способом для определения уровней белка в биологических образцах, например, в образце сыворотки или плазмы крови. Используемый в данном документе термин «уровень» или «уровень белка» предпочтительно означает вес, массу или концентрацию белка в образце или у субъекта. Специалисту в данной области будет понятно, что в определенных вариантах осуществления образец можно подвергнуть, например, любому из следующих: очистке, осаждению, разделению, например, центрифугированию и/или HPLC, а затем осуществить определение уровня белка, например, с использованием масс-спектрометрического или спектрометрического анализов. В иллюстративных вариантах осуществления для определения уровней экспрессии белка можно использовать твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). В других иллюстративных вариантах осуществления очистку, разделение и LC-MS белка можно использовать в качестве средства для определения уровня белка в соответствии с настоящим изобретением. В некоторых вариантах осуществления результатом введения терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению (например, однократной внутривенной дозы) является повышение уровней экспрессии белка релаксина в плазме или сыворотке крови у субъекта (например, 2-кратное, 3-кратное, 4-кратное, 5-кратное, 6-кратное, 7-кратное, 8-кратное, 9-кратное или 10-кратное повышение и/или повышение на по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% от нормальных уровней) в течение по меньшей мере 6 часов, по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 24 часов, по меньшей мере 36 часов, по меньшей мере 48 часов, по меньшей мере 60 часов, по меньшей мере 72 часов, по меньшей мере 84 часов, по меньшей мере 96 часов, по меньшей мере 108 часов, по меньшей мере 122 часов после введения однократной дозы терапевтического препарата на основе мРНК.
Активность белка релаксина
У пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями активность релаксина снижена, например, до приблизительно 25%, 30%, 40% или 50% от нормальной. Дополнительные аспекты по настоящему изобретению включают измерение, определение и/или контроль уровня(уровней) активности белка релаксина у субъекта, например, у животного (например, грызуна, примата и т.п.) или у субъекта-человека. Уровни активности можно измерить или определить любым известным в данной области способом для определения уровней активности в биологических образцах. Используемый в данном документе термин «уровень активности» предпочтительно означает активность белка на объем, массу или вес образца или общего белка в образце.
В иллюстративных вариантах осуществления терапевтическое средство на основе мРНК по настоящему изобретению предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую дозу мРНК, которая эффективна для достижения по меньшей мере 5 ед/мг, по меньшей мере 10 ед/мг, по меньшей мере 20 ед/мг, по меньшей мере 30 ед/мг, по меньшей мере 40 ед/мг, по меньшей мере 50 ед/мг, по меньшей мере 60 ед/мг, по меньшей мере 70 ед/мг, по меньшей мере 80 ед/мг, по меньшей мере 90 ед/мг, по меньшей мере 100 ед/мг или по меньшей мере 150 ед/мг активности релаксина в ткани (например, в плазме крови) в течение 6-12 часов или 12-24, в течение 24-48 или в 48-72 часов после введения (например, в течение 48 или 72 часов после введения). В иллюстративных вариантах осуществления терапевтическое средство на основе мРНК по настоящему изобретению включает фармацевтическую композицию, содержащую дозу мРНК, которая эффективна для достижения по меньшей мере 50 ед/мг, по меньшей мере 100 ед/мг, по меньшей мере 200 ед/мг, по меньшей мере 300 ед/мг, по меньшей мере 400 ед/мг, по меньшей мере 500 ед/мг, по меньшей мере 600 ед/мг, по меньшей мере 700 ед/мг, по меньшей мере 800 ед/мг, по меньшей мере 900 ед/мг, по меньшей мере 1000 ед/мг или по меньшей мере 1500 ед/мг релаксиновой активности в плазме крови в течение 6-12 часов или в течение 12-24, в течение 24-48 или в 48-72 часов после введения (например, в течение 48 или 72 часов после введения).
В иллюстративных вариантах осуществления терапевтическое средство на основе мРНК по настоящему изобретению включает фармацевтическую композицию, содержащую одну дозу мРНК для внутривенного введения, которая приводит к описанным выше уровням активности. В другом варианте осуществления терапевтическое средство на основе мРНК по настоящему изобретению включает фармацевтическую композицию, которую можно вводить внутривенно в нескольких однократных дозах мРНК, поддерживающих описанные выше уровни активности.
Биомаркеры релаксина
Дополнительные аспекты по настоящему изобретению включают определение уровня (или уровней) биомаркера, например, натрийуретического пептида В-типа (BNP), цистатина С, N-концевого прогормона BNP (NT-proBNP), определенного в образце по сравнению с уровнем (например, эталонным уровнем) того же или другого биомаркера в другом образце, например, от того же пациента, от другого пациента, в контрольный и/или в тот же или другой момент времени и/или по сравнению с физиологическим уровнем, и/или повышенным уровнем, и/или уровнем выше физиологического, и/или уровнем контроля. Специалист в данной области хорошо знаком с физиологическими уровнями биомаркеров, например, уровнями у нормальных животных или животных дикого типа, нормальных или здоровых субъектов и им подобных, в частности, с уровнем или уровнями, характерными для субъектов, которые являются здоровыми и/или нормально функционирующими. Используемая в данном документе фраза «повышенный уровень» означает количество, которое больше количества, чем обычно выявляют у нормального животного или животного дикого типа в доклиническом исследовании, или у нормального или здорового субъекта, например человека. Используемый в данном документе термин «выше физиологического» означает количество, которое больше, чем обычно выявляют у нормального животного или животного дикого типа в доклиническом исследовании, или у нормального или здорового субъекта, например человека, необязательно вырабатывающего существенно усиленный физиологический ответ. Используемое в данном документе выражение «сравнение» или «по сравнению с» предпочтительно означает математическое сравнение двух или более значений, например, уровней биомаркера(биомаркеров). Таким образом, специалисту в данной области будет понятно, является ли одно из значений более высоким, более низким или идентичным другому значению или группе значений, если по меньшей мере два таких значения сравнивают друг с другом. Сравнение или сопоставление может быть в контексте, например, сравнения с контрольным значением, например, по сравнению с эталонным уровнем NT-proBNP в сыворотке крови, эталонным уровнем цистатина С в сыворотке крови и/или эталонным уровнем BNP в сыворотке крови у указанного субъекта до введения (например, у человека, страдающего от сердечно-сосудистого заболевания) или у нормального или здорового субъекта. Сравнение или сопоставление также может быть в контексте, например, сравнения с контрольным значением, например, по сравнению с эталонным уровнем экскреции с мочой NT-proBNP, или уровнем BNP, цистатина С, NT-proBNP в сыворотке крови у указанного субъекта до введения (например, у человека, страдающего от сердечно-сосудистого заболевания), или у нормального или здорового субъекта.
Используемое в данном документе выражение «контроль» предпочтительно представляет собой образец от субъекта, где статус сердечно-сосудистого заболевания указанного субъекта подтвержден. В одном варианте осуществления контроль представляет собой образец от здорового пациента. В другом варианте осуществления контроль представляет собой образец от по меньшей мере одного субъекта, имеющего подтвержденный статус сердечно-сосудистого заболевания, например статус тяжелого, умеренного или статус здоров в отношении сердечно-сосудистого заболевания, например, контрольного пациента. В другом варианте осуществления контроль представляет собой образец от субъекта, который не получает лечение от сердечнососудистого заболевания. В еще одном дополнительном варианте осуществления контроль представляет собой образец от одного субъекта или группу образцов от разных субъектов и/или образцов, взятых у субъекта(субъектов) в разные моменты времени.
Термины «уровень» или «уровень биомаркера», используемые в данном документе, предпочтительно означает массу, вес или концентрацию биомаркера по настоящему изобретению в образце или у субъекта. Биомаркеры по настоящему изобретению включают, например, BNP, цистатин С, NT-proBNP. Специалисту в данной области будет понятно, что в определенных вариантах осуществления образец можно подвергнуть, например, одному или нескольким из следующих: очистке вещества, осаждению, разделению, например центрифугированию и/или HPLC, а затем осуществить определение уровня биомаркера, например, с использованием масс-спектрометрического анализа. В иллюстративных вариантах осуществления LC-MS можно использовать в качестве средства для определения уровня биомаркера в соответствии с настоящим изобретением.
Термин «определение уровня» биомаркера, используемый в данном документе, может означать способы, которые включают определение количества по меньшей мере одного вещества в образце от субъекта, например, в биологической жидкости от субъекта (например, в сыворотке крови, плазме крови, моче, крови, лимфе, фекалиях и т.д.) или в ткани от субъекта (например, в печени, сердце, селезенке, почках и т.д.).
Термин «эталонный уровень», используемый в данном документе, может относиться к уровням (например, биомаркера) у субъекта до введения терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению (например, у человека, страдающего от сердечно-сосудистого заболевания) или у нормального или здорового субъектов.
Используемые в данном документе термины «нормальный субъект» или «здоровый субъект» относится к субъекту, не страдающему от симптомов, ассоциированных с сердечно-сосудистым заболеванием. Более того, субъект будет считаться нормальным (или здоровым), если он не имеет мутации функциональных частей или доменов гена под названием релаксин (релаксина) и/или не имеет мутации гена релаксина, приводящей к снижению или дефициту релаксина или его активности, что приводит к симптомам, ассоциированным с сердечно-сосудистым заболеванием. Указанные мутации будут обнаружены, если образец от субъекта подвергнуть генетическому тестированию в отношении таких мутаций релаксина. В иллюстративных вариантах осуществления настоящего изобретения образец от здорового субъекта используют в качестве контрольного образца, или известное или стандартизированное значение уровня биомаркера в образцах от здоровых или нормальных субъектов используют в качестве контроля.
В некоторых вариантах осуществления сравнение уровня биомаркера в образце от субъекта, нуждающегося в лечении от сердечно-сосудистого заболевания, или от субъекта, который проходит лечение от сердечно-сосудистого заболевания, с контрольным уровнем биомаркера включает сравнение уровня биомаркера в образце от субъекта (нуждающегося в лечении или получающего лечение от сердечнососудистого заболевания) с исходным или эталонным уровнем, где, если уровень биомаркера в образце от субъекта (нуждающегося в лечении или получающего лечение от сердечно-сосудистого заболевания) повышен, увеличен или выше по сравнению с исходным или эталонным уровнем, это свидетельствует о том, что субъект страдает от сердечно-сосудистого заболевания и/или нуждается в лечении; и/или если уровень биомаркера в образце от субъекта (нуждающегося в лечении или получающего лечение от сердечно-сосудистого заболевания) уменьшен или снижен по сравнению с исходным уровнем, это свидетельствует о том, что субъект не страдает от сердечнососудистого заболевания, успешно проходит лечение или не нуждается в лечении сердечно-сосудистого заболевания. Чем сильнее снижение (например, по меньшей мере 2-кратное, по меньшей мере 3-кратное, по меньшей мере 4-кратное, по меньшей мере 5-кратное, по меньшей мере 6-кратное, по меньшей мере 7-кратное, по меньшей мере 8-кратное, по меньшей мере 10-кратное снижение и/или по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30% по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 100% снижение) уровня биомаркера, например, BNP, цистатина С, NT-proBNP, в течение определенного периода времени, например, в течение 6 часов, в течение 12 часов, 24 часов, 36 часов, 48 часов, 60 часов или 72 часов, и/или в течение определенного периода времени, например, 48 часов, 72 часов, 96 часов, 120 часов, 144 часов, 1 недели, 2 недель, 3 недель, 4 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 18 месяцев, 24 месяцев и т.д., тем более успешным является лечение, такое как, например, терапевтическим средством на основе мРНК по настоящему изобретению (например, однократная доза или режим с многократным введением).
Снижение на по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере 100% или более от уровня биомаркера, в частности, в биологической жидкости (например, в плазме крови, моче, например, в мочевом осадке) или в ткани(тканях) у субъекта (например, в печени, сердце, селезенке, почках, головном мозге или легких), например BNP, цистатина С, NT-proBNP, в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более дней после введения указывает на дозу, подходящую для успешного лечения сердечно-сосудистого заболевания, где снижение, как используется в данном документе, предпочтительно означает, что уровень биомаркера, определенный в конце указанного периода времени (например, после введения, например, однократной дозы внутривенно), сравнивают с уровнем того же биомаркера, определенного в начале указанного периода времени (например, до введения указанной дозы). Иллюстративные периоды времени включают 12, 24, 48, 72, 96, 120 или 144 часа после введения, в частности 24, 48, 72 или 96 часов после введения.
Устойчивое снижение уровней субстрата (например, BNP, цистатина С, NT-proBNP) является особенно показательным для режима приема и/или введения терапевтического средства на основе мРНК, успешно используемых для лечения сердечно-сосудистого заболевания. Такое устойчивое снижение может быть названо в данном документе «длительностью» эффекта. В иллюстративных вариантах осуществления снижение на по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90% или по меньшей мере приблизительно 95% или более от уровня биомаркера, в частности, в биологической жидкости (например, в плазме крови, моче, например, в мочевом осадке) или в ткани(тканях) у субъекта (например, в печени, сердце, селезенке, почках, головном мозге или легких), например BNP, цистатина С, NT-proBNP, в течение 4, 5, 6, 7, 8 или более дней после введения указывает на успешный терапевтический подход. В иллюстративных вариантах осуществления предпочтительным является устойчивое снижение уровней субстрата (например, биомаркера) в одном или нескольких образцах (например, жидкостей и/или тканей). Например, препараты на основе мРНК, приводящие к устойчивому снижению BNP, цистатина С, NT-proBNP (как определено в данном документе), необязательно в сочетании с устойчивым снижением указанного биомаркера в по меньшей мере одной ткани, предпочтительно в двух, трех, четырех, пяти или более видов тканях, указывают на успешное лечение.
В некоторых вариантах осуществления однократная доза терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению составляет от приблизительно 0,2 до приблизительно 0,8 мг/кг, от приблизительно 0,3 до приблизительно 0,7 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 0,8 мг/кг или приблизительно 0,5 мг/кг. В другом варианте осуществления однократная доза терапевтического средства на основе мРНК по настоящему изобретению составляет менее 1,5 мг/кг, менее 1,25 мг/кг, менее 1 мг/кг или менее 0,75 мг/кг.
РНК-полинуклеотиды, применимые в настоящем изобретении, включают РНК, кодирующую один или несколько белков, представляющих собой релаксин.
В некоторых вариантах осуществления РНК-полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, имеет терапевтический индекс, составляющий более 10% от терапевтического индекса для РНК-полинуклеотида в отдельности. В других вариантах осуществления РНК-полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, имеет терапевтический индекс, составляющий более 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% или 90% от терапевтического индекса для РНК-полинуклеотида в отдельности. Терапевтический индекс (TI) (также называемый терапевтическим соотношением) представляет собой сравнение количества терапевтического средства, которое оказывает терапевтический эффект, с количеством, вызывающим токсичность.
Настоящее изобретение включает способы повышения стабильности или времени циркуляции белков, представляющих собой релаксин. В некоторых вариантах осуществления композиция имеет период полужизни в кровотоке, составляющий более 20 минут. В некоторых вариантах осуществления композиция имеет период полужизни в кровотоке, составляющий 20-500 минут, 30-500 минут, 50-500 минут, 30-300 минут, 30-200 минут, 30-100 минут, 50-500 минут, 50-400 минут, 50-300 минут, 50-200 минут, 50-100 минут, 100-500 минут, 100-400 минут, 100-300 минут, 100-200 минут или 100-150 минут. В других вариантах осуществления слитый белок на основе релаксина имеет по меньшей мере 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90, 95% или 99% повышение периода полужизни в кровотоке по сравнению с уровнями периода полужизни для релаксина дикого типа.
Еще одно преимущество способов по настоящему изобретению заключается в том, что увеличение уровня белка релаксина достигается быстро после введения дозы субъекту. Например, терапевтический или максимальный терапевтический уровни могут быть достигнуты в течение 1, 2, 3 или 4 часов после введения дозы субъекту. Термин «Смакс». относится к максимальной (или пиковой) концентрации в сыворотке крови, которой достигает лекарственное средство в определенном компартменте или области тестирования в организме после введения лекарственного средства и до введения второй дозы. Тмакс. относится ко времени достижения максимальной концентрации в плазме крови после введения лекарственного средства; когда скорость поглощения равна скорости выделения.
Последовательности изоформ 1 и 2 для релаксина дикого типа описаны в базе данных эталонных последовательностей NCBI (RefSeq) под номерами доступа NM_134441.2 и NM_005059.3 соответственно («Homo sapiens релаксин 2 (RLN2), вариант 1 транскрипта» (SEQ ID NO: 325) и «Homo sapiens relaxin 2 (RLN2), вариант 2 транскрипта» (SEQ ID NO: 326)). Каноническая последовательность белка релаксина дикого типа описана в базе данных RefSeq под номером доступа AAI26416.1 («relaxin 2 [Homo sapiens]») (SEQ ID NO: 1).
В определенных аспектах настоящее изобретение предусматривает полинуклеотид (например, рибонуклеиновую кислоту (РНК), например, матричную РНК (мРНК)), включающий нуклеотидную последовательность (например, открытую рамку считывания (ORF)), кодирующую полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления полипептид релаксин по настоящему изобретению представляет собой релаксин дикого типа или вариант белка релаксина. В некоторых вариантах осуществления полипептид релаксин по настоящему изобретению представляет собой вариант, пептид или полипептид, имеющий замену и вставку и/или добавление, делецию и/или ковалентную модификацию по отношению к последовательности белка релаксина дикого типа. В некоторых вариантах осуществления маркеры последовательности или аминокислоты можно добавить к последовательностям, кодируемым полинуклеотидами по настоящему изобретению (например, с N-конца или С-конца), например, для определения локализации. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные остатки, расположенные с карбокси-конца, амино-конца или во внутренних участках полипептида по настоящему изобретению, можно необязательно удалить с получением фрагментов.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК), содержащий нуклеотидную последовательность (например, ORF) по настоящему изобретению, кодирует вариант с заменами последовательности белка релаксина дикого типа, который может содержать одну, две, три или более трех замен. В некоторых вариантах осуществления вариант с заменами может содержать одну или несколько консервативных аминокислотных замен. В других вариантах осуществления вариант представляет собой инсерционный вариант. В других вариантах осуществления вариант представляет собой делеционный вариант.
Как признано специалистами в данной области, фрагменты белка релаксина дикого типа или варианта, функциональные домены белка, варианты и гомологичные белки (ортологи) также считаются охваченными полипептидами, представляющими собой релаксин, по настоящему изобретению.
Определенные композиции и способы, представленные в данном раскрытии, относятся к белковым или полинуклеотидным последовательностям белка релаксина дикого типа или варианта. Специалисту в данной области будет понятно, что такие раскрытия одинаково применимы к любым другим изоформам белков, представляющих собой релаксин, известным в данной области.
Полинуклеотиды и открытие рамки считывания (ORF)
В определенных аспектах настоящее изобретение предусматривает полинуклеотиды (например РНК, например мРНК), которые содержат нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую один или несколько полипептидов релаксина. В некоторых вариантах осуществления кодируемый терапевтический полипептид по настоящему изобретению можно выбрать из:
полноразмерного полипептида релаксина (например, имеющего такую же или практически такую же длину, как и полипептид релаксин дикого типа);
варианта, такого как функциональный фрагмент любого из белков, представляющих собой релаксин дикого типа, описанный в данном документе например, (усеченная (например, с делецией карбокси-, амино-концевого или внутреннего участков) последовательность, которая одного из белков, представляющих собой релаксин дикого типа, но при этом сохраняющая функциональную активность белка));
варианта, такого как полноразмерный или усеченный белок релаксин дикого типа, в котором одна или несколько аминокислот заменены, например, варианты, которые сохраняют всю или большую часть релаксиновой активности в полипептиде по сравнению с эталонной изоформой (например, любой природный или искусственный вариант, известный в данной области); или же
слитого белка, содержащего (i) полноразмерный белок релаксин дикого типа, вариант белка релаксина, функциональный фрагмент или его вариант и (и) гетерологичный белок.
В определенных вариантах осуществления кодируемый полипептид релаксин представляет собой полипептид релаксин млекопитающего, такой как полипептид релаксин человека, его функциональный фрагмент или вариант.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению увеличивает уровни экспрессии белка релаксина в клетках при введении в эти клетки, например, на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% по сравнению с уровнями экспрессии белка релаксина в клетках до введения полинуклеотида по настоящему изобретению. Уровни экспрессии белка релаксина можно измерить в соответствии со способами, известными в данной области. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид вводят в клетки in vitro. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид вводят в клетки in vivo.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит кодон-оптимизированную последовательность нуклеиновой кислоты, где открытая рамка считывания (ORF) кодон-оптимизированной нуклеиновой последовательности получена из последовательности белка релаксина. Например, для полинуклеотидов по настоящему изобретению, содержащих оптимизированную по последовательности ORF, кодирующую специфический белок релаксин, соответствующая последовательность дикого типа представляет собой нативный белок релаксин. Аналогично для оптимизированной последовательности мРНК, кодирующей функциональный фрагмент белка релаксина, соответствующая последовательность дикого типа представляет собой соответствующий фрагмент из белка релаксина дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды (например, РНК, например, мРНК) по настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок релаксин дикого типа, имеющий полноразмерную последовательность человеческого белка релаксина дикого типа (то есть, включающий инициаторный метионин). В зрелом белке релаксине дикого типа инициаторный метионин может быть удален с получением «зрелого белка релаксина», содержащего аминокислотные остатки от 2 до всех оставшихся аминокислот транслированного продукта. Идеи настоящего изобретения, направленные на полную последовательность белка релаксина человека, также применимы к зрелой форме белка релаксина человека, в которой отсутствует инициаторный метионин. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок релаксин дикого типа, имеющий зрелую последовательность белка релаксина дикого типа человека (то есть, без инициаторного метионина). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую белок релаксин дикого типа, имеющий полноразмерную или зрелую последовательность белка релаксина человека дикого типа, оптимизирован по последовательности.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую мутантный полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению содержат ORF, кодирующую полипептид релаксин, который содержит по меньшей мере одну точечную мутацию в последовательности белка релаксина и сохраняет активность белка релаксина. В некоторых вариантах осуществления мутантный полипептид релаксин обладает релаксиновой активностью, которая составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% релаксиновой активности соответствующего белка релаксина дикого типа (т.е. такого же белка релаксина дикого типа, но без мутации(мутаций)). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению, содержащий ORF, кодирующую мутантный полипептид релаксин, оптимизирован по последовательности.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), которая кодирует полипептид релаксин с мутациями, не изменяющими активность белка релаксина. Такие мутантные полипептиды релаксины можно назвать функционально нейтральными. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит ORF, которая кодирует мутантный полипептид релаксин, содержащий одну или несколько функционально-нейтральных точечных мутаций.
В некоторых вариантах осуществления мутантный полипептид релаксин обладает более высокой активностью белка релаксина, чем соответствующий белок релаксин дикого типа. В некоторых вариантах осуществления мутантный полипептид релаксин обладает релаксиновой активностью, которая на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% выше, чем активность соответствующего белка релаксина дикого типа (т.е. такого же белка релаксина дикого типа, но без мутации(мутаций)).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды (например, РНК, например, мРНК) по настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую функциональный фрагмент белка релаксина, например, в том случае, когда один или несколько фрагментов соответствуют полипептидной подпоследовательности полипептида релаксина дикого типа и сохраняют активность белка релаксина. В некоторых вариантах осуществления фрагмент белка релаксина обладает активностью, которая составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% активности белка релаксина соответствующего полноразмерного белка релаксина. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению, содержащие ORF, кодирующую функциональный фрагмент белка релаксина, оптимизированы по последовательности.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую фрагмент белка релаксина, обладающий более высокой активностью белка релаксина, чем соответствующий полноразмерный белок релаксин. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления фрагмент белка релаксина обладает релаксиновой активностью, которая на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% выше, чем релаксиновая активность соответствующего полноразмерного белка релаксина.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую фрагмент белка релаксина, который на по меньшей мере 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24% или 25% короче, чем белок релаксин дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК, например, мРНК) по настоящему изобретению содержит от приблизительно 1200 до приблизительно 100000 нуклеотидов (например, от 1200 до 1500, от 1200 до 1600, от 1200 до 1700, от 1200 до 1800, от 1200 до 1900, от 1200 до 2000, от 1300 до 1500, от 1300 до 1600, от 1300 до 1700, от 1300 до 1800, от 1300 до 1900, от 1300 до 2000, от 1,425 до 1500, от 1425 до 1600, от 1425 до 1700, от 1425 до 1800, от 1425 до 1900, от 1425 до 2000, от 1425 до 3000, от 1425 до 5000, от 1425 до 7000, от 1425 до 10000, от 1425 до 25000, от 1425 до 50000, от 1425 до 70000 или от 1425 до 100000).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например РНК, например мРНК) содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин (например, последовательность дикого типа, ее функциональный фрагмент или вариант), где длина нуклеотидной последовательности (например, ORF) составляет по меньшей мере 500 нуклеотидов (например, по меньшей мере или более приблизительно 500, 600, 700, 80, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1425, 1450, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3,400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000, 4100, 4200, 4300, 4400, 4500, 4600, 4700, 4800, 4900, 5000, 5100, 5200, 5,300, 5400, 5500, 5600, 5700, 5800, 5900, 6000, 7000, 8,000, 9000, 10000, 20000, 30000, 40000, 50000, 60000, 70000, 80000, 90000 или до и включительно 100000 нуклеотидов).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например РНК, например мРНК), содержащий нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин (например, последовательность дикого типа, ее функциональный фрагмент или вариант), дополнительно содержит по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, которая является не кодирующей, например, сайт связывания miRNA.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению, содержащий нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин (например, последовательность дикого типа, ее функциональный фрагмент или вариант), представляет собой РНК. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению представляет собой матричную РНК или функционирует в качестве матричной РНК (мРНК). В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), которая кодирует по меньшей мере один полипептид релаксин и может транслироваться с получением кодируемого полипептида релаксина in vitro, in vivo, in situ или ex vivo.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например РНК, например мРНК) содержит оптимизированную по последовательности нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин (например, последовательность дикого типа, ее функциональный фрагмент или вариант), где полинуклеотид содержит по меньшей мере одно химически модифицированное нуклеотидное основание, например, 5-метоксиурацил. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит сайт связывания miRNA, например сайт связывания miRNA, который связывается с miR-142. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, раскрытый в данном документе, составляют со средством доставки, например ионизируемой липидной наночастицей, содержащей, например, липид, имеющий формулу (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe), например, любое из соединений 1-232.
Сигнальные последовательности
Полинуклеотиды (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению могут также содержать нуклеотидные последовательности, кодирующие дополнительные признаки, которые способствуют перемещению кодируемых полипептидов в терапевтически значимые сайты. Одной из таких характеристик, которая помогает белку перемещаться, является сигнальная последовательность или нацеливающая последовательность. Пептиды, кодируемые этими сигнальными последовательностями, известны под множеством названий, включая нацеливающие пептиды, транзитные пептиды и сигнальные пептиды. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), которая кодирует сигнальный пептид, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, которая кодирует полипептид релаксин, описанный в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления «сигнальная последовательность» или «сигнальный пептид» представляет собой полинуклеотид или полипептид, соответственно, длина которого составляет приблизительно 9-200 нуклеотидов (3-70 аминокислот), который необязательно встроен с 5' (или N-конца) кодирующего участка или полипептида соответственно. Добавление этих последовательностей приводит к перемещению кодируемого полипептида в требуемый сайт, такой как эндоплазматический ретикулум или митохондрии, посредством одного или нескольких нацеливающих путей. Некоторые сигнальные пептиды отщепляются от белка, например, сигнальной пептидазой, после переноса белков в требуемый сайт.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин дикого типа, где нуклеотидная последовательность дополнительно содержит 5'-последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую нативный сигнальный пептид. В другом варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин дикого типа, где нуклеотидная последовательность не содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую нативный сигнальный пептид.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин, где нуклеотидная последовательность дополнительно содержит 5'-последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую гетерологичный сигнальный пептид.
Слитые белки
В некоторых вариантах осуществления терапевтическое средство на основе релаксина представляет собой полипептид или полинуклеотид (например РНК, например мРНК), который содержит более одной последовательности нуклеиновой кислоты (например, ORF), кодирующей представляющий интерес полипептид. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению содержат одну ORF, кодирующую полипептид релаксин, его функциональный фрагмент или вариант. Однако в некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может содержать более одной ORP, например, первую ORF, кодирующую полипептид релаксин (первый представляющий интерес полипептид), его функциональный фрагмент или вариант, и вторую ORF, экспрессирующую второй полипептид, такой как стабилизирующая последовательность. В некоторых вариантах осуществления два или более представляющих интерес полипептида могут быть генетически слиты, то есть два или более полипептида могут кодироваться одной и той же ORF. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую линкер (например, пептидный линкер G4S (SEQ ID NO: 588) или другой линкер, известный в данной области техники), между двумя или более представляющими интерес полипептидами.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например, РНК, например, мРНК) может содержать две, три, четыре или более ORF, каждая из которых экспрессирует полипептид.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например РНК, например мРНК) может содержать первую последовательность нуклеиновой кислоты (например, первую ORF), кодирующую полипептид релаксин, и вторую последовательность нуклеиновой кислоты (например, вторую ORF), кодирующую второй полипептид, такой как стабилизирующая последовательность.
Стабилизирующая последовательность, используемая в данном документе, представляет собой пептидную последовательность, которая обеспечивает стабильность слитого белка. Стабилизирующая последовательность может в некоторых вариантах осуществления представлять собой иммуноглобулин (Ig) или его фрагмент. Иммуноглобулины включают четыре подкласса IgG (IgG1, 2, 3 и 4) у человека, названные в порядке их содержания в сыворотке крови. Изотип IgG состоит из двух легких цепей и двух тяжелых цепей, где каждая тяжелая цепь содержит три константных домена тяжелой цепи (CH1, CH2, CH3). Две тяжелые цепи IgG связаны друг с другом и каждая из них с легкой цепью дисульфидными связями. Антигенсвязывающий сайт IgG расположен в участке антигенсвязывающего фрагмента (Fab-участок), который содержит вариабельные домены легкой (VL) и тяжелой (VH) цепей, а также константные домены легкой (CL) и тяжелой (CH1) цепей. Кристаллизуемый фрагмент иммуноглобулина (Fc-участок) из IgG представляет собой часть тяжелой цепи, содержащей домены CH2 и CH3, которая связывается с Fc-рецептором, находящимся на поверхности определенных клеток, включая неонатальный Fc-рецептор (FcRn) Тяжелая цепь IgG также имеет шарнирный участок (шарнир) между доменами CH1 и CH2, который отделяет Fab-участок от Fc-участка и принимает участие в соединении двух тяжелых цепей вместе посредством дисульфидных связей.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой часть константного участка тяжелой цепи (CH) или вариабельного участка тяжелой цепи (VH), полученную из молекулы Ig. Фрагмент Ig может включать любую часть константного или вариабельного участка тяжелой цепи, включая один или несколько доменов константного или вариабельного участка тяжелой цепи, шарнирный участок, Fc-участок и/или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой часть константного участка легкой цепи (CL) или вариабельного участка легкой цепи (VL), полученную из молекулы Ig. Фрагмент Ig может включать любую часть константного или вариабельного участка легкой цепи, включая один или несколько доменов константного или вариабельного участка легкой цепи, шарнирный участок, Fc-участок и/или их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig слитого белка содержит одноцепочечный Fc (sFc или scFc), мономер, который не способен образовывать димер. В некоторых вариантах осуществления слитый белок включает последовательность, соответствующую шарнирному участку иммуноглобулина. В различных вариантах осуществления шарнирный участок содержит модификацию, которая препятствует образованию дисульфидной связи между слитым белком и другим слитым белком или другой молекулой иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления шарнирный участок модифицируют путем введения мутации и/или делеции одной или нескольких аминокислот цистеина для предотвращения образования дисульфидной связи.
В некоторых вариантах осуществления фрагмент Ig представляет собой последовательность вариабельного участка легкой каппа-цепи (VLk).
В слитом белке релаксин может быть связан с N-концом фрагмента Ig. Альтернативно в слитом белке релаксин может быть связан с С-концом фрагмента Ig. В конкретных вариантах осуществления слитый белок содержит релаксин на своем N-конце, который связан с VLk. В других вариантах осуществления слитый белок содержит релаксин на своем С-конце, который связан с VLk.
Образование связи может быть за счет ковалентной связи, а предпочтительно за счет пептидной связи. Слитый белок может необязательно содержать по меньшей мере один линкер. Таким образом, релаксин может быть опосредованно связан с фрагментом Ig. Линкер может находиться между релаксином и фрагментом Ig. Линкер может быть связан с N-концом фрагмента Ig или С-концом фрагмента Ig. В одном варианте осуществления линкер включает аминокислоты. Линкер может включать 1-5 аминокислот.
Оптимизация по последовательности нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид релаксин
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению оптимизирован по последовательности. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин, нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую еще один представляющий интерес полипептид, 5'-UTR, 3'-UTR, miRNA, нуклеотидную последовательность, кодирующую линкер, или любую их комбинацию, которая оптимизирована по последовательности.
Оптимизированная по последовательности нуклеотидная последовательность, например кодон-оптимизированная последовательность мРНК, кодирующая полипептид релаксин, представляет собой последовательность, содержащую по меньшей мере одну синонимичную замену нуклеотидного основания относительно эталонной последовательности (например, нуклеотидной последовательности дикого типа, кодирующей полипептид релаксин).
Оптимизированная по последовательности нуклеотидная последовательность может частично или полностью отличаться по последовательности от эталонной последовательности. Например, эталонную последовательность, кодирующую полисерин, равномерно кодируемую кодонами ТСТ, можно оптимизировать по последовательности путем замены 100% ее нуклеотидных оснований (в каждом ко доне Т в положении 1 заменить на А, С в положении 2 заменить на G, а Т в положении 3 заменить на С) с получением последовательности, кодирующей полисерин, которая будет равномерно кодироваться кодонами AGC. Процент идентичности последовательностей, полученный в результате глобального попарного выравнивания эталонной последовательности нуклеиновой кислоты для полисерина и оптимизированной по последовательности последовательности нуклеиновой кислоты для полисерина составит 0%. Однако белковые продукты обеих последовательностей будут на 100% идентичны.
Некоторые способы оптимизации последовательности (также иногда называемые оптимизацией кодонов) известны в данной области и могут быть полезны для достижения одного или нескольких требуемых результатов. Эти результаты могут включать, например, подбор частот встречаемости кодонов в определенных тканях-мишенях и/или организмах-хозяевах для обеспечения правильного фолдинга; смещение содержания G/C для повышения стабильности мРНК или уменьшения вторичных структур; сведение к минимуму тандемных повторов кодонов или рядов оснований, которые могут ухудшить конструкцию или экспрессию гена; индивидуальный выбор участков регуляции транскрипции и трансляции; вставку или удаление последовательностей для перемещения белка; удаление/добавление сайтов посттрансляционной модификации в кодируемом белке (например, сайтов гликозилирования); добавление, удаление или шаффлинг доменов белка; введение или удаление сайтов рестрикции; модифицирование сайтов связывания рибосом и сайтов деградации мРНК; корректировку скорости трансляции для обеспечения возможности различным доменам белка правильного фолдинга; и/или уменьшение или устранение проблемных вторичных структур внутри полинуклеотида. Инструменты, алгоритмы и сервисы по оптимизации последовательности известны в данной области, а неограничивающие примеры включают сервисы от GeneArt (Life Technologies), DNA2.0 (Менло Парк, Калифорния) и/или запатентованные способы.
Варианты кодонов для каждой аминокислоты приведены в таблице 1 ниже.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит оптимизированную по последовательности нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин, его функциональный фрагмент или вариант, где полипептид релаксин, его функциональный фрагмент или вариант, кодируемый оптимизированной по последовательности нуклеотидной последовательностью, обладает улучшенными свойствами (например, по сравнению с полипептидом релаксином, его функциональным фрагментом или вариантом, кодируемым эталонной нуклеотидной последовательностью, которая не оптимизирована по последовательности), например, улучшенными свойствами, связанными с эффективностью экспрессии после введения in vivo. Такие свойства включают без ограничения улучшение стабильности нуклеиновой кислоты (например, стабильности мРНК), повышение эффективности трансляции в ткани-мишени, снижение количества экспрессируемых усеченных белков, улучшение фолдинга или предотвращение неправильного фолдинга экспрессированных белков, снижение токсичности экспрессируемых продуктов, снижение гибели клеток, вызванное экспрессироуемыми продуктами, увеличение и/или уменьшение агрегации белка.
В некоторых вариантах осуществления оптимизированная по последовательности нуклеотидная последовательность является кодон-оптимизированой для экспрессии у человека, при этом обладает структурными и/или химическими характеристиками, которые позволяют избежать одной или нескольких проблем в данной области, например, характеристиками, которые полезны для оптимизации состава и доставки терапевтических средств на основе нуклеиновой кислоты, сохраняя при этом структурную и функциональную целостность; преодоления порога экспрессии; улучшения скорости экспрессии; периода полужизни и/или концентрации белка; оптимизации локализации белка и предупреждения вредных биологических ответов, таких как иммунный ответ и/или пути деградации.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность (например, нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин, нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую еще один представляющий интерес полипептид, 5'-UTR, 3'-UTR, микроРНК, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую линкер, или любую их комбинацию), которая оптимизирована по последовательности в соответствии со способом, предусматривающим: (i) замену по меньшей мере одного кодона в эталонной нуклеотидной последовательности (например, ORF, кодирующей полипептид релаксин), альтернативным кодоном для увеличения или уменьшения содержания уридина с получением модифицированной по уридину последовательности; (ii) замену по меньшей мере одного кодона в эталонной нуклеотидной последовательности (например, ORF, кодирующей полипептид релаксин), альтернативным кодоном с большей частотой встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов; (iii) замену по меньшей мере одного кодона в эталонной нуклеотидной последовательности (например, ORF, кодирующей полипептид релаксин), альтернативным кодоном для повышения содержания G/C или (iv) их комбинацию.
В некоторых вариантах осуществления оптимизированная по последовательности нуклеотидная последовательность (например, ORF, кодирующая полипептид релаксин) имеет по меньшей мере одно улучшенное свойство относительно эталонной нуклеотидной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления способ оптимизации последовательности является многопараметрическим и включает один, два, три, четыре или более способов, раскрытых в данном документе, и/или другие способы оптимизации, известные в данной области.
Характеристики, которые могут быть признаны полезными в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, можно закодировать участками полинуклеотида или внутри них, и такие участки могут располагаться выше (5') участка, который кодирует полипептид релаксин, ниже (3') или в пределах него. Эти участки могут быть включены в полинуклеотид до и/или после оптимизации последовательности кодирующего белок участка или открытой рамки считывания (ORF). Примеры таких характеристик включают без ограничения нетранслируемые участки (UTR), последовательности микроРНК, последовательности Козак, последовательности олиго(dT), хвост поли(А) и выявляемые метки и могут включать сайты множественного клонирования, которые способны распознаваться XbaI.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит 5'-UTR, 3'-UTR и/или miRNA. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит два или более 5'-UTR и/или 3'-UTR, которые могут представлять собой одинаковые или разные последовательности. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит две или более miRNA, которые могут представлять собой одинаковые или разные последовательности. Любая часть 5'-UTR, 3'-UTR и/или miRNA, в том числе ни одна, могут быть оптимизированы по последовательности и могут независимо содержать одну или несколько различных структурных или химических модификаций до и/или после оптимизации последовательности.
В некоторых вариантах осуществления после оптимизации полинуклеотид восстанавливают и трансформируют в вектор, такой как без ограничения плазмиды, вирусы, космиды и искусственные хромосомы. Например, оптимизированный полинуклеотид можно восстановить и трансформировать в химически компетентные E. coli, дрожжи, нейроспоры, кукурузу, дрозофилы и т.д., в которых встречаются многокопийные плазмидо-подобные или хромосомные структуры, с помощью способов, описанных в данном документе.
Оптимизированные по последовательности нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды релаксины
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит оптимизированную по последовательности нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин, раскрытый в данном документе. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, где ORF оптимизирована по последовательности.
Оптимизированные по последовательности нуклеотидные последовательности, раскрытые в данном документе, отличаются от соответствующих последовательностей нуклеотидных последовательностей дикого типа и от других известных нуклеотидных последовательностей, оптимизированных по последовательности, например, эти оптимизированные по последовательности нуклеиновые кислоты обладают уникальными композиционными характеристиками.
В некоторых вариантах осуществления процент нуклеотидных оснований - урацила или тимина - в оптимизированной по последовательности нуклеотидной последовательности (например, кодирующей полипептид релаксин, его функциональный фрагмент или вариант) модифицируют (например, уменьшают) по сравнению с процентом нуклеотидных оснований - урацила или тимина - в эталонной нуклеотидной последовательности дикого типа. Такая последовательность называется модифицированной по урацилу или модифицированной по тимину последовательность. Процент содержания урацила или тимина в нуклеотидной последовательности можно определить путем делением количества урацила или тимина в последовательности на общее количество нуклеотидов и умножения на 100. В некоторых вариантах осуществления оптимизированная по последовательности нуклеотидная последовательность имеет более низкое содержание урацила или тимина, чем содержание урацила или тимина в эталонной последовательности дикого типа. В некоторых вариантах осуществления содержание урацила или тимина в оптимизированной по последовательности нуклеотидной последовательности по настоящему изобретению больше, чем содержание урацила или тимина в эталонной последовательности дикого типа и по-прежнему сохраняет полезные эффекты, например повышенную экспрессию и/или уменьшенный ответ Toll-подобного рецептора (TLR), по сравнению с эталонной последовательностью дикого типа.
Содержание урацила или тимина в раскрытой в данном документе последовательности, т.е общее содержание урацила или тимина в ней, в сокращенном виде приводится в данном документе как % UTL или % TTL.
Модифицированную по урацилу или тимину последовательность, кодирующую полипептид релаксин по настоящему изобретению, также можно описать согласно содержанию в ней урацила или тимина относительно содержания урацила или тимина в соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа (% UWT или % TWT), или согласно содержанию в ней урацила или тимина относительно теоретического минимального содержания урацила или тимина в нуклеиновой кислоте, кодирующей последовательность белка дикого типа (% UTM или (% ТTM).
Фразы «содержание урацила или тимина относительно содержания урацила или тимина в последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа» относятся к параметру, определяемому путем деления количества урацила или тимина в нуклеиновой кислоте, оптимизированной по последовательности, на общее количество урацила или тимина в соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа и умножения на 100. Этот параметр в сокращенном виде приводится в данном документе как % UWT или % TWT.
Содержание урацила или тимина относительно теоретического минимального содержания урацила или тимина относится к параметру, определяемому путем деления количества урацила или тимина в оптимизированной по последовательности нуклеотидной последовательности на общее количество урацила или тимина в гипотетической нуклеотидной последовательности, при этом все кодоны в гипотетической последовательности заменены синонимичными кодонами с наименьшим возможным содержанием урацила или тимина, и умножения на 100. Этот параметр в сокращенном виде приводится в данном документе как % UTM или % ТTM.
В некоторых вариантах осуществления % UTM в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, составляет ниже 300%, ниже 295%, ниже 290%, ниже 285%, ниже 280%, ниже 275%, ниже 270%, ниже 265%, ниже 260%, ниже 255%, ниже 250%, ниже 245%, ниже 240%, ниже 235%, ниже 230%, ниже 225%, ниже 220%, ниже 215%, ниже 200%, ниже 195%, ниже 190%, ниже 185%, ниже 180%, ниже 175%, ниже 170%, ниже 165%, ниже 160%, ниже 155%, ниже 150%, ниже 145%, ниже 140%, ниже 139%, ниже 138%, ниже 137%, ниже 136%, ниже 135%, ниже 134%, ниже 133%, ниже 132%, ниже 131%, ниже 130%, ниже 129%, ниже 128%, ниже 127%, ниже 126%, ниже 125%, ниже 124%, ниже 123%, ниже 122%, ниже 121%, ниже 120%, ниже 119%, ниже 118%, ниже 117%, ниже 116% или ниже 115%.
В некоторых вариантах осуществления % UTM в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, составляет выше 100%, выше 101%, выше 102%, выше 103%, выше 104%, выше 105%, выше 106%, выше 107%, выше 108%, выше 109%, выше 110%, выше 111%, выше 112%, выше 113%, выше 114%, выше 115%, выше 116%, выше 117%, выше 118%, выше 119%, выше 120%, выше 121%, выше 122%, выше 123%, выше 124%, выше 125% или выше 126%, выше 127%, выше 128%, выше 129% или выше 130%, выше 131%, выше 132%, выше 133%, выше 134%, выше 135%, выше 136%, выше 137% или выше 138%.
В некоторых вариантах осуществления % UTM в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, составляет от 131% до 133%, от 130% до 134%, от 129% до 135%, от 128% до 136%, от 127% до 137%, от 126% до 138%, от 125% до 139%, от 124% до 140%, от 123% до 141%, от 122% до 142%, от 121% до 143%, от 120% до 144% или от 119% до 145%.
В некоторых вариантах осуществления % UTM модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин, по настоящему изобретению, составляет от приблизительно 125% до приблизительно 139%, например, от 125% до 138%.
В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин по настоящему изобретению, характеризуется сниженным количеством следующих непрерывно урацилов относительно соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа. Например, два подряд лейцина могут быть закодированы последовательностью CUUUUG, которая включает кластер из четырех урацилов. Такую подпоследовательность можно заменить, например, на CUGCUC, за счет чего удаляется кластер урацилов.
Фенилаланин может кодироваться UUC или UUU. Таким образом, даже если фенилаланины, кодируемые UUU, заменяют на UUC, синонимичный кодон все еще содержит пару урацила (UU). Соответственно, количество фенилаланинов в последовательности устанавливает минимальное количество пар урацила (UU), которые не могут быть устранены без изменения количества фенилаланинов в кодируемом полипептиде. Например, если полипептид, например, белок релаксин дикого типа, имеет, например, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 или 23 фенилаланина, то абсолютное минимальное количество пар урацила (UU), которое может содержать модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид, например, белок релаксин дикого типа, составляет 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 или 23 соответственно.
В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин, имеет сниженное количество пар урацила (UU) относительно количества пар урацила (UU) в последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин по настоящему изобретению, имеет количество пар урацила (UU), соответствующее минимально возможному количеству пар урацила (UU) в последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин по настоящему изобретению, имеет по меньшей мере на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или 17 пар урацила (UU) меньше, чем количество пар урацила (UU) в последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа. В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин по настоящему изобретению, имеет от 13 до 29 пар урацила (UU).
Фраза «пары урацила (UU) относительно пар урацила (UU) в последовательности нуклеиновой кислоты дикого типа» относится к параметру, определяемому путем деления количества пар урацила (UU) в нуклеотидной последовательности, оптимизированной по последовательности, на общее количество пар урацила (UU) в соответствующей нуклеотидной последовательности дикого типа и умножения на 100. Этот параметр в сокращенном виде приводится в данном документе как % UUwt.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит модифицированную по урацилу последовательность, кодирующую полипептид релаксин, раскрытый в данном документе. В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин, содержит по меньшей мере одно химически модифицированное нуклеотидное основание, например 5-метоксиурацил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 95% нуклеиотидного основания (например, урацила) в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, являются модифицированными нуклеотидными основаниями. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 95% урацила в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин, представляет собой 5-метоксиурацил. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, содержащий модифицированную по урацилу последовательность, дополнительно содержит сайт связывания miRNA, например сайт связывания miRNA, который связывается с miR-142. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, содержащий модифицированную по урацилу последовательность, составляют со средством доставки, например LNP, содержащей, например, липид, имеющий формулу (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe), например, любое из соединений 1-232.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, где ORF оптимизирована по последовательности и где каждый из % UTL, % UWT, % UTM, % GTL, % GWT, % GTMX, % CTL, % GWT, % СТМХ, % G/CTL, % G/CWT или % G/CTMX, отдельно или в комбинации, находится в диапазоне между (i) максимумом, соответствующим максимальному значению параметра (МАХ), плюс приблизительно 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 стандартных отклонений (STD DEV) и (ii) минимумом, соответствующим минимальному значению параметра (MIN) минус 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 стандартных отклонений (STD DEV).
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70% или по меньшей мере приблизительно 75% кодонов в эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок релаксин, заменяют альтернативными кодонами, причем каждый альтернативный кодон имеет частоту встречаемости кодона, превышающую частоту встречаемости кодона замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон, имеющий более высокую частоту встречаемости кодона, имеет наиболее высокую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов. В других вариантах осуществления все альтернативные кодоны, имеющие более высокую частоту встречаемости кодона, имеют наиболее высокую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон, имеющий более низкую частоту встречаемости кодона, имеет наиболее низкую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов. В некоторых вариантах осуществления все альтернативные кодоны, имеющие более высокую частоту встречаемости кодона, имеют наиболее высокую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон имеет вторую частоту встречаемости из наиболее высоких, третью из наиболее высоких, четвертую из наиболее высоких, пятую из наиболее высоких или шестую из наиболее высоких в наборе синонимичных кодонов. В некоторых конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон имеет вторую частоту встречаемости из наиболее низких, третью из наиболее низких, четвертую из наиболее низких, пятую из наиболее низких или шестую из наиболее низких в наборе синонимичных кодонов.
Оптимизацию, основанную на частоте встречаемости кодонов, можно применить глобально, как описано выше, или локально к эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления при локальном применении участки эталонной последовательности нуклеиновой кислоты можно модифицировать на основе частоты встречаемости кодонов, заменяя все или определенный процент кодонов в определенной подпоследовательности кодонами, которые имеют более высокие или более низкие частоты встречаемости в своих соответствующих наборах синонимичных кодонов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% ко до нов в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты заменяют альтернативными кодонами, причем каждый альтернативный кодон имеет частоту встречаемости кодона, превышающую частоту встречаемости кодона для замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один кодон в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид релаксин, заменяют альтернативным кодоном, имеющим частоту встречаемости кодона, превышающую частоту встречаемости кодона для замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов, и по меньшей мере один кодон в подпоследовательности последовательности эталонной нуклеиновой кислоты заменяют альтернативным кодоном, имеющим частоту встречаемости кодона ниже частоты встречаемости кодона для замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70% или по меньшей мере приблизительно 75% кодонов в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид релаксин, заменяют альтернативными кодонами, причем каждый альтернативный кодон имеет частоту встречаемости кодона, превышающую частоту встречаемости кодона для замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон, замещенный в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид релаксин, и имеющий более высокую частоту встречаемости кодона, имеет наиболее высокую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов. В других вариантах осуществления все альтернативные кодоны, замещенные в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты и имеющие более низкую частоту встречаемости кодона, имеют наиболее низкую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один альтернативный кодон, замещенный в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид релаксин, и имеющий более низкую частоту встречаемости кодона, имеет наиболее низкую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов. В некоторых вариантах осуществления все альтернативные кодоны, замещенные в подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты и имеющие более высокую частоту встречаемости кодона, имеют наиболее высокую частоту встречаемости кодона в наборе синонимичных кодонов.
В конкретных вариантах осуществления оптимизированная по последовательности нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид релаксин, может содержать подпоследовательность, имеющую более высокую или более низкую общую частоту встречаемости кодона, чем общая частота встречаемости кодона в соответствующей подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты в определенном местоположении, например, с 5'-конца или 3'-конца оптимизированной по последовательности нуклеиновой кислоты или на заданном расстоянии от этого участка (например, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 кодонов с 5'-конца или 3'-конца оптимизированной по последовательности нуклеиновой кислоты).
В некоторых вариантах осуществления оптимизированная по последовательности нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид релаксин, может содержать более одной подпоследовательности, имеющей более высокую или более низкую общую частоту встречаемости кодона, чем общая частота встречаемости кодона в соответствующей подпоследовательности эталонной последовательности нуклеиновой кислоты. Квалифицированному специалисту будет понятно, что подпоследовательности с более высокими или более низкими общими частотами встречаемости кодонов могут быть организованы в многочисленных моделях в зависимости от того, является ли общая частота встречаемости кодона более высокой или более низкой, в зависимости от длины подпоследовательности, расстояния между подпоследовательностями, местоположения подпоследовательностей и т.д.
Модифицированные нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды, представляющие собой релаксин
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например РНК, например мРНК) по настоящему изобретению содержит химически модифицированное нуклеотидное основание. Настоящее изобретение включает модифицированные полинуклеотиды, содержащие полинуклеотид, описанный в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин). Модифицированные полинуклеотиды могут быть химически модифицированы и/или структурно модифицированы. Если полинуклеотиды по настоящему изобретению являются химически и/или структурно модифицированными, то полинуклеотиды могут называться «модифицированными полинуклеотидами».
Настоящее изобретение предусматривает модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды в полинуклеотиде (например, в РНК-полинуклеотидах, таких как мРНК-полинуклеотиды), кодирующем полипептид релаксин. Термин «нуклеозид» относится к соединению, содержащему молекулу сахара (например, пентозу или рибозу) или ее производное в комбинации с органическим основанием (например, пурином или пиримидином) или его производным (также называемым в данном документе как «нуклеотидное основание»'). Термин «нуклеотид» относится к нуклеозиду, включающему фосфатную группу. Модифицированные нуклеотиды можно синтезировать при помощи любого применимого способом, такого как, например, химический, ферментативный или рекомбинантный, с включением одного или нескольких модифицированных или неприродных нуклеозидов. Полинуклеотиды могут содержать участок или участки соединенных нуклеозидов. Такие участки могут иметь вариабельные связи остова. Связи могут быть стандартными фосфодиэфирными связями, и в этом случае полинуклеотиды будут содержать участки из нуклеотидов.
Модифицированные полинуклеотиды, раскрытые в данном документе, могут содержать множество различных модификаций. В некоторых вариантах осуществления модифицированные полинуклеотиды содержат одну, две или более (необязательно разные) нуклеозидные или нуклеотидные модификации. В некоторых вариантах осуществления модифицированный полинуклеотид, введенный в клетку, может проявлять одно или несколько требуемых свойств, например, улучшенную экспрессию белка, пониженную иммуногенность или пониженную деградацию в клетке по сравнению с немодифицированным полинуклеотидом.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) структурно модифицируют. Используемый в данном документе термин «структурная» модификация представляет собой модификацию, при которой два или более связанных нуклеозида вставляют, удаляют, дублируют, инвертируют или рандомизируют в полинуклеотиде без существенной химической модификации самих нуклеотидов. Поскольку химические связи будут неизбежно разрушены и заново образованы для осуществления структурной модификации, то структурные модификации имеют химическую природу и таким образом представляют собой химические модификации. Однако результатом структурных модификаций будут другие последовательности нуклеотидов. Например, полинуклеотид «ATCG» можно химически модифицировать до «AT-5meC-G». Один и тот же полинуклеотид можно структурно модифицировать из «ATCG» в «ATCCCG». В данном месте был вставлен динуклеотид «СС», результатом чего была структурная модификация полинуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению химически модифицируют. Используемые в данном документе в отношении полинуклеотида термины «химическая модификация» или, если это необходимо, «химически модифицированный» относятся к модификации в отношении рибо- или дезоксирибонуклеозидов аденозина (А), гуанозина (G), уридина (U) или цитидина (С) в одном или нескольких из их положений, моделей, процента или популяции. Как правило, в данном документе эти термины не предназначены для обозначения модификаций рибонуклеотидов в природных 5'-концевых кэп-фрагментах мРНК.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению могут характеризоваться однородной химической модификацией во всех или в любом из нуклеозидов одного типа, или группой модификаций, полученных простым нисходящим титрованием той же исходной модификации во всех или в любом из нуклеозидов одного типа, или измеренным процентом химической модификации во всех или в любом из нуклеозидов одного типа, но со случайным включением, например, где все уридины заменяют аналогом уридина, например, псевдоуридином или 5-метоксиуридином. В другом варианте осуществления полинуклеотиды могут характеризоваться однородной химической модификацией двух, трех или четырех нуклеозидов одного типа по всему полинуклеотиду (например, все уридины и все цитозины и т.д. модифицируют одинаковым образом).
Образование пар между модифицированными нуклеотидными основаниями охватывает не только стандартные пары аденозин-тимин, аденозин-урацил или гуанозин-цитозин, но также пары оснований, образовавшиеся между нуклеотидами и/или модифицированными нуклеотидами, содержащими нестандартные или модифицированные основания, где расположение доноров водородной связи и акцепторов водородной связи допускает образование водородной связи между нестандартным основанием и стандартным основанием или между двумя комплементарными структурами нестандартных оснований. Одним из примеров такого образования пар между нестандартными основаниями является образование оснований между модифицированным нуклеотидом инозином и аденином, цитозином или урацилом. Любая комбинация основания/сахара или линкера может быть включена в полинуклеотиды по настоящему раскрытию.
Специалисту в данной области будет понятно, что, если не указано иначе, полинуклеотидные последовательности, изложенные в настоящей заявке, будут описывать «Т» в репрезентативной последовательности ДНК, но если последовательность представляет собой РНК, то «Т» будут заменены на «U».
Модификации полинуклеотидов (например, РНК-полинуклеотидов, таких как мРНК-полинуклеотиды), которые применимы в композициях, способах и способах синтеза по настоящему изобретению, включают без ограничения следующие нуклеотиды, нуклеозиды и нуклеотидные основания: 2-метилтио-N6-(цис-гидроксиизопентенил)аденозин; 2-метилтио-N6-метиладенозин; 2-метилтио-N6-треонилкарбамоиладенозин; N6-глицилкарбамоиладенозин; N6-изопентениладенозин; N6-метиладенозин; N6-треонилкарбамоиладенозин; 1,2'-O-диметиладенозин; 1-метиладенозин; 2'-O-метиладенозин; 2'-O-рибозиладенозин (фосфат); 2-метиладенозин; 2-метилтио-N6 изопентениладенозин; 2-метилтио-N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин; 2'-O-метиладенозин; 2'-O-рибозиладенозин (фосфат); изопентениладенозин; N6-(цис-гидроксиизопентенил)аденозин; N6,2'-O-диметиладенозин; N6,2'-O-диметиладенозин; N6,N6,2'-O-триметиладенозин; N6,N6-диметиладенозин; N6-ацетиладенозин; N6-гидроксинорвалилкарбамоиладенозин; N6-метил-N6-треонилкарбамоиладенозин; 2-метиладенозин; 2-метилтио-N6-изопентениладенозин; 7-дезазааденозин; N1-метиладенозин; N6,N6-(диметил)аденин; N6-цис-гидрокси-изопентениладенозин; α-тио-аденозин; 2-(амино)аденин; 2-(аминопропил)аденин; 2-(метилтио) N6 (изопентенил)аденин; 2-(алкил)аденин; 2-(аминоалкил)аденин; 2-(аминопропил)аденин; 2-(галоген)аденин; 2-(галоген)аденин; 2-(пропил)аденин; 2'-амино-2'-дезокси-АТР; 2'-азидо-2'-дезокси-АТР; 2'-дезокси-2'-а-аминоаденозин TP; 2'-дезокси-2'-а-азидоаденозин TP; 6-(алкил)аденин; 6-(метил)аденин; 6-(алкил)аденин; 6-(метил)аденин; 7-(дезаза)аденин; 8-(алкенил)аденин; 8-(алкинил)аденин; 8-(амино)аденин; 8(тиоалкил)аденин; 8-(алкенил)аденин; 8-(алкил)аденин; 8-(алкинил)аденин; 8-(амино)аденин; 8-(галоген)аденин; 8-(гидроксил)аденин; 8-(тиоалкил)аденин; 8-(тиол)аденин; 8-азидо-аденозин; азааденин; дезазааденин; N6-(метил)аденин; N6-(изопентил)аденин; 7-дезаза-8-aza-аденозин; 7-метиладенин; 1-дезазааденозин TP; 2'-фтор-N6-Bz-дезоксиаденозин TP; 2'-ОМе-2-амино-АТР; 2'-O-метил-N6-В7-дезоксиаденозин TP; 2'-а-этиниладенозин TP; 2-аминоаденин; 2-аминоаденозин TP; 2-амино-АТР; 2'-а-трифторметиладенозин TP; 2-азидоаденозин TP; 2'-b-этиниладенозин TP; 2-бромаденозин TP; 2'-b-трифторметиладенозин TP; 2-хлораденозин TP; 2'-дезокси-2',2'-дифтораденозин TP; 2'-дезокси-2'-а-меркаптоаденозин TP; 2'-дезокси-2'-а-тиометоксиаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-аминоаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-азидоаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-бромаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-хлораденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-фтораденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-иодаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-меркаптоаденозин TP; 2'-дезокси-2'-b-тиометоксиаденозин TP; 2-фтораденозин TP; 2-иодаденозин TP; 2-меркаптоаденозин TP; 2-метоксиаденин; 2-метилтиоаденин; 2-трифторметиладенозин TP; 3-дезаза-3-бромаденозин TP; 3-дезаза-3-хлораденозин TP; 3-дезаза-3-фтораденозин TP; 3-дезаза-3-иодаденозин TP; 3-дезазааденозин TP; 4'-азидоаденозин TP; 4'-карбоциклический аденозин TP; 4'-этиниладенозин TP; 5'-гомо-аденозин TP; 8-аза-АТР; 8-бром-аденозин TP; 8-трифторметиладенозин TP; 9-дезазааденозин TP; 2-аминопурин; 7-дезаза-2,6-диаминопурин; 7-дезаза-8-аза-2,6-диаминопурин; 7-дезаза-8-аза-2-аминопурин; 2,6-диаминопурин; 7-дезаза-8-азааденин, 7-дезаза-2-аминопурин; 2-тиоцитидин; 3-метилцитидин; 5-формилцитидин; 5-гидроксиметилцитидин; 5-метилцитидин; N4-ацетилцитидин; 2'-O-метилцитидин; 2'-O-метилцитидин; 5,2'-O-диметилцитидин; 5-формил-2'-O-метилцитидин; лизидин; N4,2'-O-диметилцитидин; N4-ацетил-2'-O-метилцитидин; N4-метилцитидин; N4,N4-диметил-2'-ОМе-цитидин TP; 4-метилцитидин; 5-азацитидин; псевдоизоцитидин; пирролоцитидин; α-тио-цитидин; 2-(тио)цитидин; 2'-амино-2'-дезокси-СТР; 2'-азидо-2'-дезокси-СТР; 2'-дезокси-2'-а-аминоцитидин TP; 2'-дезокси-2'-а-азидоцитидин TP; 3-(дезаза)-5-(аза)цитозин; 3-(метил)цитозин; 3-(алкил)цитозин; 3-(дезаза) 5 (аза)цитозин; 3-(метил)цитидин; 4,2'-O-диметилцитидин; 5-(галоген)цитозин; 5-(метил)цитозин; 5-(пропинил)цитозин; 5-(трифторметил)цитозин; 5-(алкил)цитозин; 5-(алкинил)цитозин; 5-(галоген)цитозин; 5-(пропинил)цитозин; 5-(трифторметил)цитозин; 5-бром-цитидин; 5-иод-цитидин; 5-пропинилцитозин; 6-(азо)цитозин; 6-азацитидин; азацитозин; дезазацитозин; N4-(ацетил)цитозин; 1-метил-1-дезазапсевдоизоцитидин; 1-метил-псевдоизоцитидин; 2-метокси-5-метилцитидин; 2-метокси-цитидин; 2-тио-5-метилцитидин; 4-метокси-1-метил-псевдоизоцитидин; 4-метоксипсевдоизоцитидин; 4-тио-1-метил-1-дезазапсевдоизоцитидин; 4-тио-1-метил-псевдоизоцитидин; 4-тиопсевдоизоцитидин; 5-азазебуларин; 5-метилзебуларин; пирролопсевдоизоцитидин; зебуларин; (Е)-5-(2-бром-винил)цитидин TP; 2,2'-ангидро-цитидин TP гидрохлорид; 2'фтор-N4-Bz-цитидин TP; 2'фтор-N4-ацетилцитидин TP; 2'-O-метил-N4-ацетилцитидин TP; 2'O-метил-N4-Bz-цитидин TP; 2'-а-этинилцитидин TP; 2'-a-трифторметилцитидин TP; 2'-b-этинилцитидин TP; 2'-b-трифторметилцитидин TP; 2'-дезокси-2',2'-дифторцитидин TP; 2'-дезокси-2'-а-меркаптоцитидин TP; 2'-дезокси-2'-а-тиометоксицитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-аминоцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-азидоцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-бромцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-хлорцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-фторцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-иодцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-меркаптоцитидин TP; 2'-дезокси-2'-b-тиометоксицитидин TP; 2'-O-метил-5-(1-пропинил)цитидин TP; 3'-этинилцитидин TP; 4'-азидоцитидин TP; 4'-карбоциклический цитидин TP; 4'-этинилцитидин TP; 5-(1-пропинил)ара-цитидин TP; 5-(2-хлор-фенил)-2-тиоцитидин TP; 5-(4-амино-фенил)-2-тиоцитидин TP; 5-аминоаллил-СТР; 5-цианоцитидин TP; 5-этиниларацитидин TP; 5-этинилцитидин TP; 5'-гомоцитидин TP; 5-метоксицитидин TP; 5-трифторметилцитидин TP; N4-аминоцитидин TP; N4-бензоилцитидин TP; псевдоизоцитидин; 7-метилгуанозин; N2,2'-O-диметилгуанозин; N2-метилгуанозин; виозин; 1,2'-O-диметилгуанозин; 1-метилгуанозин; 2'-O-метилгуанозин; 2'-O-рибозилгуанозин (фосфат); 2'-O-метилгуанозин; 2'-O-рибозилгуанозин (фосфат); 7-аминометил-7-дезазагуанозин; 7-циано-7-дезазагуанозин; археозин; метилвиозин; N2,7-диметилгуанозин; N2,N2,2'-O-триметилгуанозин; N2,N2,7-триметилгуанозин; N2,N2-диметилгуанозин; N2,7,2'-O-триметилгуанозин; 6-тиогуанозин; 7-дезазагуанозин; 8-оксогуанозин; N1-метилгуанозин; α-тиогуанозин; 2 (пропил)гуанин; 2-(алкил)гуанин; 2'-амино-2'-дезокси-GTP; 2'-азидо-2'-дезокси-GTP; 2'-дезокси-2'-а-аминогуанозин TP; 2'-дезокси-2'-а-азидогуанозин TP; 6-(метил)гуанин; 6-(алкил)гуанин; 6-(метил)гуанин; 6-метилгуанозин; 7-(алкил)гуанин; 7-(дезаза)гуанин; 7-(метил)гуанин; 7-(алкил)гуанин; 7-(дезаза)гуанин; 7-(метил)гуанин; 8-(алкил)гуанин; 8-(алкинил)гуанин; 8-(галоген)гуанин; 8-(тиоалкил)гуанин; 8-(алкенил)гуанин; 8-(алкил)гуанин; 8-(алкинил)гуанин; 8-(амино)гуанин; 8-(галоген)гуанин; 8-(гидроксил)гуанин; 8-(тиоалкил)гуанин; 8-(тиол)гуанин; азагуанин; дезазагуанин; N-(метил)гуанин; N-(метил)гуанин; 1-метил-6-тиогуанозин; 6-метокси-гуанозин; 6-тио-7-дезаза-8-азагуанозин; 6-тио-7-дезазагуанозин; 6-тио-7-метилгуанозин; 7-дезаза-8-азагуанозин; 7-метил-8-оксогуанозин; N2,N2-диметил-6-тиогуанозин; N2-метил-6-тиогуанозин; 1-Me-GTP; 2'-фтор-N2-изобутилгуанозин TP; 2'-O-метил-N2-изобутилгуанозин TP; 2'-а-этинилгуанозин TP; 2'-а-трифторметилгуанозин TP; 2'-b-этинилгуанозин TP; 2'-b-трифторметилгуанозин TP; 2'-дезокси-2',2'-дифторгуанозин TP; 2'-дезокси-2'-а-меркаптогуанозин TP; 2'-дезокси-2'-а-тиометоксигуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-аминогуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-азидогуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-бромгуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-хлоргуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-фторгуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-иодгуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-меркаптогуанозин TP; 2'-дезокси-2'-b-тиометоксигуанозин TP; 4'-азидогуанозин TP; 4'-карбоциклический гуанозин TP; 4'-этинилгуанозин TP; 5'-гомогуанозин TP; 8-бромгуанозин TP; 9-дезазагуанозин TP; N2-изобутилгуанозин TP; 1-метилинозин; инозин; 1,2'-O-диметилинозин; 2'-O-метилинозин; 7-метилинозин; 2'-O-метилинозин; эпоксиквеуозин; галактозилквеуозин; маннозилквеуозин; квеуозин; аллиамино-тимидин; азатимидин; дезазатимидин; дезокси-тимидин; 2'-O-метилуридин; 2-тиоуридин; 3-метилуридин; 5-карбоксиметилуридин; 5-гидроксиуридин; 5-метилуридин; 5-тауринометил-2-тиоуридин; 5-тауринометилуридин; дигидроуридин; псевдоуридин; (3-(3-амино-3-карбоксипропил)уридин; 1-метил-3-(3-амино-5-карбоксипропил)псевдоуридин; 1-метил-псевдоуридин; 1-этил-псевдоуридин; 2'-O-метилуридин; 2'-O-метил-псевдоуридин; 2'-O-метилуридин; 2-тио-2'-O-метилуридин; 3-(3-амино-3-карбоксипропил)уридин; 3,2'-O-диметилуридин; 3-метил-псевдоуридин TP; 4-тиоуридин; 5-(карбоксигидроксиметил)уридин; 5-(карбоксигидроксиметил)уридин метиловый эфир; 5,2'-O-диметилуридин; 5,6-дигидро-уридин; 5-аминометил-2-тиоуридин; 5-карбамоилметил-2'-O-метилуридин; 5-карбамоилметилуридин; 5-карбоксигидроксиметилуридин; сложный 5-карбоксигидроксиметилуридин метиловый эфир; 5-карбоксиметиламинометил-2'-O-метилуридин; 5-карбоксиметиламинометил-2-тиоуридин; 5-карбоксиметиламинометил-2-тиоуридин; 5-карбоксиметиламинометилуридин; 5-карбоксиметиламинометилуридин; 5-карбамоилметилуридин TP; 5-метоксикарбонилметил-2'-O-метилуридин; 5-метоксикарбонилметил-2-тиоуридин; 5-метоксикарбонилметилуридин; 5-метилуридин, 5-метоксиуридин; 5-метил-2-тиоуридин; 5-метиламинометил-2-селеноуридин; 5-метиламинометил-2-тиоуридин; 5-метиламинометилуридин; 5-метилдигидроуридин; 5-оксиуксусная кислота - уридин TP; 5-оксиуксусной кислоты метиловый эфир-уридин TP; N1-метил-псевдоурацил; N1-этил-псевдоурацил; уридин 5-оксиуксусная кислота; уридин 5-оксиуксусной кислоты метиловый эфир; 3-(3-амино-3-карбоксипропил)-уридин TP; 5-(изопентениламинометил)-2-тиоуридин TP; 5-(изопентениламинометил)-2'-O-метилуридин TP; 5-(изопентениламинометил)уридин TP; 5-пропинилурацил; α-тиоуридин; 1-(аминоалкиламино-карбонилэтиленил)-2(тио)-псевдоурацил; 1-(аминоалкиламинокарбонилэтиленил)-2,4-(дитио)псевдоурацил; 1-(аминоалкиламинокарбонилэтиленил)-4-(тио)псевдоурацил; 1-(аминоалкиламинокарбонилэтиленил)-псевдоурацил; 1-(аминокарбонилэтиленил)-2(тио)-псевдоурацил; 1-(аминокарбонилэтиленил)-2,4-(дитио)псевдоурацил; 1-(аминокарбонилэтиленил)-4-(тио)псевдоурацил; 1-(аминокарбонилэтиленил)-псевдоурацил; 1 замещенный 2(тио)-псевдоурацил; 1 замещенный 2,4-(дитио)псевдоурацил; 1 замещенный 4-(тио)псевдоурацил; 1 замещенный псевдоурацил; 1-(аминоалкиламино-карбонилэтиленил)-2-(тио)-псевдоурацил; 1-метил-3-(3-амино-3-карбоксипропил) псевдоурацил TP; 1-метил-3-(3-амино-3-карбоксипропил)псевдо-UTP; 1-метил-псевдо-UTP; 1-этил-псевдо-UTP; 2 (тио)псевдоурацил; 2'-дезоксиуридин; 2'-фторуридин; 2-(тио)урацил; 2,4-(дитио)псевдоурацил; 2' метил, 2'амино, 2'-азидо, 2'фтор-гуанозин; 2'-амино-2'-дезокси-UTP; 2'-азидо-2'-дезокси-UTP; 2'-азидо-дезоксиуридин TP; 2'-O-метил-псевдоуридин; 2' дезоксиуридин; 2'-фторуридин; 2'-дезокси-2'-а-аминоуридин TP; 2'-дезокси-2'-а-азидоуридин TP; 2-метил-псевдоуридин; 3-(3-амино-3 карбоксипропил)урацил; 4-(тио)псевдоурацил; 4-(тио)псевдоурацил; 4-(тио)урацил; 4-тиоурацил; 5-(1,3-диазол-1-алкил)урацил; 5-(2-аминопропил)урацил; 5-(аминоалкил)урацил; 5-(диметиламиноалкил)урацил; 5-(гуанидиналкил)урацил; 5-(метоксикарбонилметил)-2-(тио)урацил; 5-(метоксикарбонил-метил)урацил; 5-(метил)-2-(тио)урацил; 5-(метил)-2,4-(дитио)урацил; 5-(метил)-4-(тио)урацил; 5-(метиламинометил)-2-(тио)урацил; 5-(метиламинометил)-2,4-(дитио)урацил; 5-(метиламинометил)-4-(тио)урацил; 5-(пропинил)урацил; 5-(трифторметил)урацил; 5-(2-аминопропил)урацил; 5-(алкил)-2-(тио)псевдоурацил; 5-(алкил)-2,4-(дитио)псевдоурацил; 5-(алкил)-4-(тио)псевдоурацил; 5-(алкил)псевдоурацил; 5-(алкил)урацил; 5-(алкинил)урацил; 5-(аллиламино)урацил; 5-(цианоалкил)урацил; 5-(диалкиламиноалкил)урацил; 5-(диметиламиноалкил)урацил; 5-(гуанидиналкил)урацил; 5-(галоген)урацил; 5-(1,3-диазол-1-алкил)урацил; 5-(метокси)урацил; 5-(метоксикарбонилметил)-2-(тио)урацил; 5-(метоксикарбонил-метил)урацил; 5-(метил)-2(тио)урацил; 5-(метил) 2,4 (дитио)урацил; 5-(метил) 4 (тио)урацил; 5-(метил)-2-(тио)псевдоурацил; 5-(метил)-2,4 (дитио)псевдоурацил; 5-(метил)-4(тио)псевдоурацил; 5-(метил)псевдоурацил; 5-(метиламинометил)-2-(тио)урацил; 5-(метиламинометил)-2,4(дитио)урацил; 5-(метиламинометил)-4-(тио)урацил; 5-(пропинил)урацил; 5-(трифторметил)урацил; 5-аминоаллилуридин; 5-бромуридин; 5-иодуридин; 5-урацил; 6 (азо)урацил; 6-(азо)урацил; 6-азауридин; аллиламиноурацил; азаурацил; дезазаурацил; N3-(метил)урацил; псевдо-UTP-1-2-этановая кислота; псевдоурацил; 4-тиопсевдо-UTP; 1-карбоксиметил-псевдоуридин; 1-метил-1-дезазапсевдоуридин; 1-пропинилуридин; 1-тауринометил-1-метилуридин; 1-тауринометил-4-метилуридин; 1-тауринометил-псевдоуридин; 2-метокси-4-тиопсевдоуридин; 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридин; 2-тио-1-метил-псевдоуридин; 2-тио-5-азауридин; 2-тиодигидропсевдоуридин; 2-тиодигидроуридин; 2-тиопсевдоуридин; 4-метокси-2-тиопсевдоуридин; 4-метоксипсевдоуридин; 4-тио-1-метил-псевдоуридин; 4-тиопсевдоуридин; 5-азауридин; дигидропсевдоуридин; (±)1-(2-гидроксипропил)псевдоуридин TP; (2R)-1-(2-гидроксипропил)псевдоуридин TP; (2S)-1-(2-гидроксипропил)псевдоуридин TP; (Е)-5-(2-бром-винил)арауридин TP; (Е)-5-(2-бром-винил)уридин TP; (Z)-5-(2-бром-винил)арауридин TP; (Z)-5-(2-бром-винил)уридин TP; 1-(2,2,2-трифторэтил)-псевдо-UTP; 1-(2,2,3,3,3-пентафторпропил)псевдоуридин TP; 1-(2,2-диэтоксиэтил)псевдоуридин TP; 1-(2,4,6-триметилбензил)псевдоуридин TP; 1-(2,4,6-триметилбензил)псевдо-UTP; 1-(2,4,6-триметилфенил)псевдо-UTP; 1-(2-амино-2-карбоксиэтил)псевдо-UTP; 1-(2-аминоэтил)псевдо-UTP; 1-(2-гидроксиэтил)псевдоуридин TP; 1-(2-метоксиэтил)псевдоуридин TP; 1-(3,4-бис-трифторметоксибензил)псевдоуридин TP; 1-(3,4-диметоксибензил)псевдоуридин TP; 1-(3-амино-3-карбоксипропил)псевдо-UTP; 1-(3-амино-пропил)псевдо-UTP; 1-(3-циклопропил-проп-2-инил)псевдоуридин TP; 1-(4-амино-4-карбоксибутил)псевдо-UTP; 1-(4-аминобензил)псевдо-UTP; 1-(4-аминобутил)псевдо-UTP; 1-(4-аминофенил)псевдо-UTP; 1-(4-азидобензил)псевдоуридин TP; 1-(4-бромбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-хлорбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-фторбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-иодбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-метансульфонилбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-метоксибензил)псевдоуридин TP; 1-(4-метоксибензил)псевдо-UTP; 1-(4-метоксифенил)псевдо-UTP; 1-(4-метилбензил)псевдоуридин TP; 1-(4-метилбензил)псевдо-UTP; 1-(4-нитробензил)псевдоуридин TP; 1-(4-нитро-бензил)псевдо-UTP; 1(4-нитро-фенил)псевдо-UTP; 1-(4-тиометоксибензил)псевдоуридин TP; 1-(4-трифторметоксибензил)псевдоуридин TP; 1-(4-трифторметилбензил)псевдоуридин TP; 1-(5-амино-пентил)псевдо-UTP; 1-(6-амино-гексил)псевдо-UTP; 1,6-диметил-псевдо-UTP; 1-[3-(2-{2-[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-этокси}-этокси)-пропионил]псевдоуридин TP; 1-{3-[2-(2-аминоэтокси)-этокси]-пропионил}псевдоуридин TP; 1-ацетил псевдоуридин TP; 1-алкил-6-(1-пропинил)-псевдо-UTP; 1-алкил-6-(2-пропинил)-псевдо-UTP; 1-алкил-6-аллил-псевдо-UTP; 1-алкил-6-этинил-псевдо-UTP; 1-алкил-6-гомоаллил-псевдо-UTP; 1-алкил-6-винил-псевдо-UTP; 1-аллил-псевдоуридин TP; 1-аминометил-псевдо-UTP; 1-бензоил-псевдоуридин TP; 1-бензилоксиметил-псевдоуридин TP; 1-бензил-псевдо-UTP; 1-биотинил-PEG2-псевдоуридин TP; 1-биотинил-псевдоуридин TP; 1-бутил-псевдо-UTP; 1-цианометил-псевдоуридин TP; 1-циклобутилметил-псевдо-UTP; 1-циклобутил-псевдо-UTP; 1-циклогептилметил-псевдо-UTP; 1-циклогептил-псевдо-UTP; 1-циклогексилметил-псевдо-UTP; 1-циклогексил-псевдо-UTP; 1-циклооктилметил-псевдо-UTP; 1-циклооктил-псевдо-UTP; 1-циклопентилметил-псевдо-UTP; 1-циклопентил-псевдо-UTP; 1-циклопропилметил-псевдо-UTP; 1-циклопропил-псевдо-UTP; 1-этил-псевдо-UTP; 1-гексил-псевдо-UTP; 1-гомоаллил-псевдоуридин TP; 1-гидроксиметил-псевдоуридин TP; 1-изопропил-псевдо-UTP; 1-Ме-2-тио-псевдо-UTP; 1-Ме-4-тио-псевдо-UTP; 1-Ме-альфа-тио-псевдо-UTP; 1-метансульфонилметил-псевдоуридин TP; 1-метоксиметил-псевдоуридин TP; 1-метил-6-(2,2,2-трифторэтил)псевдо-UTP; 1-метил-6-(4-морфолино)-псевдо-UTP; 1-метил-6-(4-тиоморфолино)-псевдо-UTP; 1-метил-6-(замещенный фенил)псевдо-UTP; 1-метил-6-амино-псевдо-UTP; 1-метил-6-азидо-псевдо-UTP; 1-метил-6-бром-псевдо-UTP; 1-метил-6-бутил-псевдо-UTP; 1-метил-6-хлор-псевдо-UTP; 1-метил-6-циано-псевдо-UTP; 1-метил-6-диметиламино-псевдо-UTP; 1-метил-6-этокси-псевдо-UTP; 1-метил-6-этилкарбоксилат-псевдо-UTP; 1-метил-6-этил-псевдо-UTP; 1-метил-6-фтор-псевдо-UTP; 1-метил-6-формил-псевдо-UTP; 1-метил-6-гидроксиамино-псевдо-UTP; 1-метил-6-гидрокси-псевдо-UTP; 1-метил-6-иод-псевдо-UTP; 1-метил-6-изо-пропил-псевдо-UTP; 1-метил-6-метокси-псевдо-UTP; 1-метил-6-метиламино-псевдо-UTP; 1-метил-6-фенил-псевдо-UTP; 1-метил-6-пропил-псевдо-UTP; 1-метил-6-трет-бутил-псевдо-UTP; 1-метил-6-трифторметокси-псевдо-UTP; 1-метил-6-трифторметил-псевдо-UTP; 1-морфолинометил-псевдоуридин TP; 1-пентил-псевдо-UTP; 1-фенил-псевдо-UTP; 1-пивалоил-псевдоуридин TP; 1-пропаргил-псевдоуридин TP; 1-пропил-псевдо-UTP; 1-пропинил-псевдоуридин; 1-п-толил-псевдо-UTP; 1-трет-бутил-псевдо-UTP; 1-тиометоксиметил-псевдоуридин TP; 1-тиоморфолинометил-псевдоуридин TP; 1-трифторацетил-псевдоуридин TP; 1-трифторметил-псевдо-UTP; 1-винил-псевдоуридин TP; 2,2'-ангидро-уридин TP; 2'-бром-дезоксиуридин TP; 2'-F-5-метил-2'-дезокси-UTP; 2'-OMe-5-Me-UTP; 2'-ОМе-псевдо-UTP; 2'-а-этинилуридин TP; 2'-а-трифторметилуридин TP; 2'-b-этинилуридин TP; 2'-b-трифторметилуридин TP; 2'-дезокси-2',2'-дифторуридин TP; 2'-дезокси-2'-а-меркаптоуридин TP; 2'-дезокси-2'-а-тиометоксиуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-аминоуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-азидоуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-бромуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-хлоруридин TP; 2'-дезокси-2'-b-фторуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-иодуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-меркаптоуридин TP; 2'-дезокси-2'-b-тиометоксиуридин TP; 2-метокси-4-тио-уридин; 2-метоксиуридин; 2'-O-метил-5-(1-пропинил)уридин TP; 3-алкил-псевдо-UTP; 4'-азидоуридин TP; 4'-карбоциклический уридин TP; 4'-этинилуридин TP; 5-(1-пропинил)ара-уридин TP; 5-(2-фуранил)уридин TP; 5-цианоуридин TP; 5-диметиламиноуридин TP; 5'-гомо-уридин TP; 5-иод-2'-фтор-дезоксиуридин TP; 5-фенилэтинилуридин TP; 5-тридейтерометил-6-дейтероуридин TP; 5-трифторметил-уридин TP; 5-виниларауридин TP; 6-(2,2,2-трифторэтил)-псевдо-UTP; 6-(4-морфолино)-псевдо-UTP; 6-(4-тиоморфолино)-псевдо-UTP; 6-(замещенный фенил)-псевдо-UTP; 6-амино-псевдо-UTP; 6-азидо-псевдо-UTP; 6-бром-псевдо-UTP; 6-бутил-псевдо-UTP; 6-хлор-псевдо-UTP; 6-циано-псевдо-UTP; 6-диметиламино-псевдо-UTP; 6-этокси-псевдо-UTP; 6-этилкарбоксилат-псевдо-UTP; 6-этил-псевдо-UTP; 6-фтор-псевдо-UTP; 6-формил-псевдо-UTP; 6-гидроксиамино-псевдо-UTP; 6-гидрокси-псевдо-UTP; 6-иод-псевдо-UTP; 6-изо-пропил-псевдо-UTP; 6-метокси-псевдо-UTP; 6-метиламино-псевдо-UTP; 6-метил-псевдо-UTP; 6-фенил-псевдо-UTP; 6-фенил-псевдо-UTP; 6-пропил-псевдо-UTP; 6-трет-бутил-псевдо-UTP; 6-трифторметокси-псевдо-UTP; 6-трифторметил-псевдо-UTP; альфа-тио-псевдо-UTP; псевдоуридин 1-(4-метилбензолсульфоновая кислота) TP; псевдоуридин 1-(4-метилбензойная кислота) TP; псевдоуридин TP 1-[3-(2-этокси)]пропионовая кислота; псевдоуридин TP 1-[3-{2-(2-[2-(2-этокси)-этокси]-этокси)-этокси}]пропионовая кислота; псевдоуридин TP 1-[3-{2-(2-[2-{2(2-этокси)-этокси}-этокси]-этокси)-этокси}]пропионовая кислота; псевдоуридин TP 1-[3-{2-(2-[2-этокси]-этокси)-этокси}]пропионовая кислота; псевдоуридин TP 1-[3-{2-(2-этокси)-этокси}]пропионовая кислота; псевдоуридин TP 1-метилфосфоновая кислота; псевдоуридин TP 1-метилфосфоновой кислоты диэтиловый эфир; псевдо-UTP-N1-3-пропионовая кислота; псевдо-UTP-N1-4-бутановая кислота; псевдо-UTP-N1-5-пентановая кислота; псевдо-UTP-N1-6-гексановая кислота; псевдо-UTP-N1-7-гептановая кислота; псевдо-UTP-N1-метил-п-бензойная кислота; псевдо-UTP-N1-п-бензойная кислота; вибутозин; гидроксивибутозин; изовиозин; пероксивибутозин; субмодифицированный гидроксивибутозин; 4-деметилвиозин; 2,6-(диамино)пурин; 1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-феноксазин-1-ил: 1,3-(диаза)-2-(оксо)-фентиазин-1-ил; 1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 1,3,5-(триаза)-2,6-(диокса)-нафталин; 2 (амино)пурин; 2,4,5-(триметил)фенил; 2'метил,2'амино,2'азидо,2'фтор-цитидин; 2'метил,2'амино,2'азидо,2'фтор-аденин; 2'метил,2'амино,2'азидо,2'фтор-уридин; 2'-амино-2'-дезоксирибоза; 2-амино-6-хлорпурин; 2-азаинозинил; 2'-азидо-2'-дезоксирибоза; 2'фтор-2'-дезоксирибоза; 2'-фтор-модифицированные основания; 2'-O-метил-рибоза; 2-оксо-7-аминопиридопиримидин-3-ил; 2-оксопиридопиримидин-3-ил; 2-пиридинон; 3 нитропиррол; 3-(метил)-7-(пропинил)изокарбостирилил; 3-(метил)изокарбостирилил; 4-(фтор)-6-(метил)бензимидазол; 4-(метил)бензимидазол; 4-(метил)индолил; 4,6-(диметил)индолил; 5 нитроиндол; 5 замещенные пиримидины; 5-(метил)изокарбостирилил; 5-нитроиндол; 6-(аза)пиримидин; 6-(азо)тимин; 6-(метил)-7-(аза)индолил; 6-хлор-пурин; 6-фенил-пирроло-пиримидин-2-он-3-ил; 7-(аминоалкилгидрокси)-1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-фентиазин-1-ил; 7-(аминоалкилгидрокси)-1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-феноксазин-1-ил; 7-(аминоалкилгидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 7-(аминоалкилгидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-фентиазин-1-ил; 7-(аминоалкилгидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 7-(аза)индолил; 7-(гуанидиналкилгидрокси)-1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-феноксазин-1-ил; 7-(гуанидиналкилгидрокси)-1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-фентиазин-1-ил; 7-(гуанидиналкилгидрокси)-1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-феноксазин-1-ил; 7-(гуанидиналкилгидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 7-(гуанидиналкил-гидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-фентиазин-1-ил; 7-(гуанидиналкилгидрокси)-1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 7-(пропинил)изокарбостирилил; 7-(пропинил)изокарбостирилил, пропинил-7-(аза)индолил; 7-дезаза-инозинил; 7-замещенный 1-(аза)-2-(тио)-3-(аза)-феноксазин-1-ил; 7-замещенный 1,3-(диаза)-2-(оксо)-феноксазин-1-ил; 9-(метил)-имидазопиридинил; аминоиндолил; антраценил; бис-орто-(аминоалкилгидрокси)-6-фенилпирролопиримидин-2-он-3-ил; бис-орто-замещенный-6-фенилпирролопиримидин-2-он-3-ил; дифтортолил; гипоксантин; имидазопиридинил; инозинил; изокарбостирилил; изогуанозин; N2-замещенные пурины; N6-метил-2-амино-пурин; N6-замещенные пурины; N-алкилированное производное; нафталенил; нитробензимидазолил; нитроимидазолил; нитроиндазолил; нитропиразолил; нубуларин; O6-замещенные пурины; О-алкилированное производное; орто-(аминоалкилгидрокси)-6-фенил-пирролопиримидин-2-он-3-ил; орто-замещенный 6-фенилпирролопиримидин-2-он-3-ил; оксоформицин TP; пара-(аминоалкилгидрокси)-6-фенилпирролопиримидин-2-он-3-ил; пара-замещенный 6-фенилпирролопиримидин-2-он-3-ил; пентаценил; фенантраценил; фенил; пропинил-7-(аза)индолил; пиренил; пиридопиримидин-3-ил; пиридопиримидин-3-ил, 2-оксо-7-аминопиридопиримидин-3-ил; пирролопиримидин-2-он-3-ил; пирролопиримидинил; пирролопиризинил; стилбензил; замещенные 1,2,4-триазолы; тетраценил; туберцидин; ксантин; ксантозин-5'-ТР; 2-тиозебуларин; 5-аза-2-тиозебуларин; 7-дезаза-2-аминопурин; пиридин-4-он рибонуклеозид; 2-аминорибозид-ТР; формицин A TP; формицин В TP; пирролозин TP; 2'-ОН-ара-аденозин TP; 2'-ОН-ара-цитидин TP; 2'-ОН-ара-уридин TP; 2'-ОН-ара-гуанозин TP; 5-(2-карбометоксивинил)уридин TP и N6-(19-аминопентаоксанонадецил) аденозин ТР.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит комбинацию из по меньшей мере двух (например, 2, 3, 4 или более) вышеупомянутых модифицированных нуклеотидных оснований.
В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит по меньшей мере один химически модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах осуществления по мере один химически модифицированный нуклеозид выбирают из группы, состоящей из псевдоуридина (ψ), 2-тиоуридина (s2U), 4'-тиоуридина, 5-метилцитозина, 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридина, 2-тио-1-метилпсевдоуридина, 2-тио-5-азауридина, 2-тиодигидропсевдоуридина, 2-тиодигидроуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-метокси-2-тиопсевдоуридина, 4-метоксипсевдоуридина, 4-тио- 1-метилпсевдоуридина, 4-тио-псевдоуридина, 5-азауридина, дигидропсевдоуридина, 5-метилуридина, 5-метоксиуридина, 2'-O-метилуридина, 1-метилпсевдоуридина (m1ψ), 1-этилпсевдоуридина (e1ψ), 5-метоксиуридина (mo5U), 5-метилцитидина (m5C), α-тиогуанозина, α-тиоаденозина, 5-цианоуридина, 4'-тиоуридина 7-дезазааденина, 1-метиладенозина (m1A), 2-метиладенина (m2A), N6-метиладенозина (m6A) и 2,6-диаминопурина, (I), 1-метилинозина (m1I), виозина (imG), метилвиозина (mimG), 7-дезазагуанозина, 7-циано-7-дезазагуанозина (preQ0), 7-аминометил-7-дезазагуанозина (preQ1), 7-метилгуанозина (m7G), 1-метилгуанозина (m1G), 8-оксогуанозина, 7-метил-8-оксогуанозина, 2,8-диметиладенозина, 2-геранилтиоуридина, 2-лизидина, 2-селеноуридина, 3-(3-амино-3-карбоксипропил)-5,6-дигидроуридина, 3-(3-амино-3-карбоксипропил)псевдоуридина, 3-метилпсевдоуридина, 5-(карбоксигидроксиметил)-2'-O-метилуридина сложного метилового эфира, 5-аминометил-2-геранилтиоуридина, 5-аминометил-2-селеноуридина, 5-аминометилуридина, 5-карбамоилгидроксиметилуридина, 5-карбамоилметил-2-тиоуридина, 5-карбоксиметил-2-тиоуридина, 5-карбоксиметиламинометил-2-геранилтиоуридина, 5-карбоксиметиламинометил-2-селеноуридина, 5-цианометилуридина, 5-гидроксицитидина, 5-метиламинометил-2-геранилтиоуридина, 7-аминокарбоксипропилдеметилвиозина, 7-аминокарбоксипропилвиозина, 7-аминокарбоксипропилвиозина метилового эфира, 8-метиладенозина, N4,N4-диметилцитидина, N6-формиладенозина, N6-гидроксиметиладенозина, агматидина, циклического N6-треонилкарбамоиладенозина, глутамилквеуозина, метилированного субмодифицированного гидроксивибутозина, N4,N4,2'-O-триметилцитидина, геранилированного 5-метиламинометил-2-тиоуридина, геранилированного 5-карбоксиметиламинометил-2-тиоуридина, Qbase, preQ0base, preQ1base и двух или более их комбинаций. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один химически модифицированный нуклеозид выбирают из группы, состоящей из псевдоуридина, 1-метилпсевдоуридина, 1-этилпсевдоуридина, 5-метилцитозина, 5-метоксиуридина и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит комбинацию из по меньшей мере двух (например, 2, 3, 4 или более) вышеупомянутых модифицированных нуклеотидных оснований.
В некоторых вариантах осуществления мРНК представляет собой модифицированную по урацилу последовательность, содержащую ORF, кодирующую полипептид релаксин, где мРНК содержит химически модифицированное нуклеотидное основание, например 5-метоксиурацил. В определенных аспектах настоящего изобретения, если основание 5-метоксиурацил связано с сахаром рибозой, как и в полинуклеотидах, то полученный модифицированный нуклеозид или нуклеотид называют 5-метоксиуридином. В некоторых вариантах осуществления урацил в полинуклеотиде представляет собой на по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 99% или приблизительно 100% 5-метоксиурацил. В одном варианте осуществления урацил в полинуклеотиде представляет собой на по меньшей мере 95% 5-метоксиурацил. В другом варианте осуществления урацил в полинуклеотиде представляет собой на 100% 5-метоксиурацил.
В вариантах осуществления, где урацил в полинуклеотиде представляет собой на по меньшей мере 95% 5-метоксиурацил, общее содержание урацила можно регулировать таким образом, чтобы мРНК обеспечивала подходящие уровни экспрессии белка и одновременно не индуцировала практически никакого иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 105% до приблизительно 145%, от приблизительно 105% до приблизительно 140%, от приблизительно 110% до приблизительно 140%, от приблизительно 110% до приблизительно 145%, от приблизительно 115% до приблизительно 135%, от приблизительно 105% до приблизительно 135%, от приблизительно 110% до приблизительно 135%, от приблизительно 115% до приблизительно 145% или от приблизительно 115% до приблизительно 140% от теоретического минимального содержания урацила в соответствующей ORF дикого типа (% Utm). В других вариантах осуществления содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 117% до приблизительно 134% или от 118% до 132% от % UTM. В некоторых вариантах осуществления содержание урацила в ORP, кодирующей полипептид релаксин, составляет приблизительно 115%, приблизительно 120%, приблизительно 125%, приблизительно 130%, приблизительно 135%, приблизительно 140%, приблизительно 145% или приблизительно 150% от % Utm. В этом контексте термин «урацил» может относиться к 5-метоксиурацилу и/или природному урацилу.
В некоторых вариантах осуществления содержание урацила в ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, составляет менее приблизительно 50%, приблизительно 40%, приблизительно 30%, приблизительно 20%, приблизительно 15% или приблизительно 12% от общего содержания нуклеотидных оснований в ORF. В некоторых вариантах осуществления содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 12% до приблизительно 25% от общего содержания нуклеотидных оснований в ORF. В других вариантах осуществления содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 15% до приблизительно 17% от общего содержания нуклеотидных оснований в ORF. В одном варианте осуществления содержание урацила в ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин, составляет менее приблизительно 20% от общего содержания нуклеотидных оснований в открытой рамке считывания. В этом контексте термин «урацил» может относиться к 5-метоксиурацилу и/или природному урацилу.
В дополнительных вариантах осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, содержит 5-метоксиурацил и характеризуется скорректированным содержанием урацила, содержащим меньше пар урацила (UU), и/или триплетов урацила (UUU), и/или квадруплетов урацила (UUUU), чем соответствующая нуклеотидная последовательность дикого типа, кодирующая полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, не содержит пары урацила, и/или триплеты урацила, и/или квадруплеты урацила. В некоторых вариантах осуществления количество пар урацила, и/или триплетов урацила, и/или квадруплетов урацила снижают ниже определенного порога встречаемости, например, не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 в ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин. В конкретном варианте осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, содержит менее 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 пару и/или триплет урацила, не кодирующих фенилаланин. В другом варианте осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин, не содержит пары и/или триплеты урацила, не кодирующие фенилаланин.
В дополнительных вариантах осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, содержит 5-метоксиурацил и характеризуется скорректированным содержанием урацила, содержащим меньше богатых урацилом кластеров, чем соответствующая нуклеотидная последовательность дикого типа, кодирующая полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, содержит богатые урацилом кластеры, которые короче по длине, чем соответствующие богатые урацилом кластеры в соответствующей нуклеотидной последовательности дикого типа, кодирующей полипептид релаксин.
В дополнительных вариантах осуществления используют альтернативные кодоны с более низкой частотой встречаемости. По меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% кодонов кодирующей полипептид релаксин ORP в содержащей 5-метоксиурацил мРНК заменяют альтернативными кодонами, при этом каждый альтернативный кодон имеет частоту встречаемости кодона ниже, чем частота встречаемости кодона у замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов. ORF также характеризуется скорректированным содержанием урацила, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один кодон в ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин, замещают альтернативным кодоном, имеющим частоту встречаемости кодона ниже, чем частота встречаемости кодона у замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов.
В некоторых вариантах осуществления при скорректированном содержании урацила в кодирующей полипептид релаксин ORF содержащая 5-метоксиурацил мРНК демонстрирует более высокие уровни экспрессии белка релаксина при введении в клетку млекопитающего, чем уровни экспрессии белка релаксина с соответствующей мРНК дикого типа. В других вариантах осуществления уровни экспрессии белка релаксина при введении в клетку млекопитающего повышены по сравнению с соответствующей мРНК, содержащей по меньшей мере 95% 5-метоксиурацила и имеющей содержание урацила, составляющее приблизительно 160%, приблизительно 170%, приблизительно 180%, приблизительно 190% или приблизительно 200% от теоретического минимума. В других вариантах осуществления уровни экспрессии белка релаксина при введении в клетку млекопитающего повышены по сравнению с соответствующей мРНК, где по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90% или приблизительно 100% урацилов представляют собой 1-метил-псевдоурацил или псевдоурацил. В некоторых вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку мыши, клетку крысы или клетку кролика. В других вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку нечеловекообразной обезьяны или клетку человека. В некоторых вариантах осуществления клетка человека представляет собой клетку HeLa, клетку фибробластов BJ или мононуклеарную клетку периферической крови (РВМС). В некоторых вариантах осуществления белок релаксина экспрессируется в том случае, когда мРНК вводят в клетку млекопитающего in vivo. В некоторых вариантах осуществления мРНК вводят мышам, кроликам, нечеловекообразным обезьянам или людям. В одном варианте осуществления мыши представляют собой мышей с нуль-мутацией. В некоторых вариантах осуществления мРНК вводят мышам в количестве, составляющем приблизительно 0,01 мг/кг, приблизительно 0,05 мг/кг, приблизительно 0,1 мг/кг или приблизительно 0,15 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления мРНК вводят внутривенно или внутримышечно. В других вариантах осуществления полипептид релаксин экспрессируется в том случае, когда мРНК вводят в клетку млекопитающего in vitro. В некоторых вариантах осуществления экспрессия повышается в по меньшей мере приблизительно 2 раза, по меньшей мере приблизительно 5 раз, по меньшей мере приблизительно 10 раз, по меньшей мере приблизительно 50 раз, по меньшей мере приблизительно 500 раз, по меньшей мере приблизительно 1500 раз или по меньшей мере приблизительно 3000 раз. В других вариантах осуществления экспрессия повышается на по меньшей мере приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или приблизительно 100%.
В некоторых вариантах осуществления при скорректированном содержании урацила кодирующая полипептид релаксин ORF содержащей 5-метоксиурацил мРНК проявляет повышенную стабильность. В некоторых вариантах осуществления мРНК проявляет повышенную стабильность в клетке относительно стабильности соответствующей мРНК дикого типа в тех же условиях. В некоторых вариантах осуществления мРНК проявляет повышенную стабильность, включая устойчивость к нуклеазам, термостабильность и/или повышенную стабилизацию вторичной структуры. В некоторых вариантах осуществления повышенную стабильность, проявляемую мРНК, измеряют путем определения периода полужизни мРНК (например, в образце плазмы крови, клеток или ткани) и/или определения площади под кривой (AUC) для экспрессии белка с мРНК в динамике временем (например, in vitro или in vivo). МРНК идентифицируют как обладающую повышенной стабильностью, если ее период полужизни и/или AUC превышает период полужизни и/или AUC соответствующей мРНК дикого типа в тех же условиях.
В некоторых вариантах осуществления мРНК по настоящему изобретению индуцирует выявляемый более низкий иммунный ответ (например, врожденный или приобретенный) относительно иммунного ответа, индуцированного соответствующей мРНК дикого типа в тех же условиях. В других вариантах осуществления мРНК по настоящему раскрытию индуцирует выявляемый более низкий иммунный ответ (например, врожденный или приобретенный) относительно иммунного ответа, индуцированного мРНК, которая кодирует полипептид релаксин, но не содержит 5-метоксиурацил, в тех же условиях, или относительно иммунного ответа, индуцированного мРНК, которая кодирует полипептид релаксин и которая содержит 5-метоксиурацил, но которая не имеет скорректированного содержания урацила в тех же условиях. Врожденный иммунный ответ может проявляться повышенной экспрессией провоспалительных цитокинов, активацией внутриклеточных PRR (RIG-I, MDA5 и т.д.), гибелью клеток и/или терминацией или снижением трансляции белка. В некоторых вариантах осуществления снижение врожденного иммунного ответа можно измерить по экспрессии или уровню активности интерферонов типа 1 (например, IFN-α, IFN-β, IFN-κ, IFN-δ, IFN-ε, IFN-τ, IFN-ω и IFN-ζ) или экспрессии генов, регулируемых интерферонами, таких как toll-подобные рецепторы (например, TLR7 и TLR8), и/или по снижению гибели клеток после одного или нескольких введений мРНК по настоящему изобретению в клетку.
В некоторых вариантах осуществления экспрессия интерферонов типа 1 клеткой млекопитающего в ответ на мРНК по настоящему раскрытию снижается на по меньшей мере 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,9% или более 99,9% относительно соответствующей мРНК дикого типа, относительно мРНК, которая кодирует полипептид релаксин, но не содержит 5-метоксиурацил, или относительно мРНК, которая кодирует полипептид релаксин и которая содержит 5-метоксиурацил, но не обладает скорректированным содержанием урацила. В некоторых вариантах осуществления интерферон представляет собой IFN-β. В некоторых вариантах осуществления частота гибели клеток, сопутствующая введению мРНК по настоящему изобретению в клетку млекопитающего, на 10%, 25%, 50%, 75%, 85%, 90%, 95% или свыше 95% меньше, чем частота гибели клеток, наблюдаемая с соответствующей мРНК дикого типа, мРНК, которая кодирует полипептид релаксин, но не содержит 5-метоксиурацил, или мРНК, которая кодирует полипептид релаксин и которая содержит 5-метоксиурацил, но не обладает скорректированным содержанием урацила. В некоторых вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку фибробластов BJ. В других вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой спленоцит. В некоторых вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку мыши или крысы. В других вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку человека. В одном варианте осуществления мРНК по настоящему изобретению фактически не индуцирует врожденный иммунный ответ в отношении клетки млекопитающего, в которую вводят мРНК.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид представляет собой мРНК, которая содержит ORF, кодирующую полипептид релаксин, где урацил в мРНК представляет собой на по меньшей мере приблизительно 95% 5-метоксиурацил, где содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 115% до приблизительно 135% от теоретического минимального содержания урацила в соответствующей ORF дикого типа, и где содержание урацила в ORF, кодирующей полипептид релаксин, составляет менее приблизительно 23% от общего содержания нуклеотидных оснований в ORF. В некоторых вариантах осуществления ORF, которая кодирует полипептид релаксин, дополнительно модифицирована для уменьшения содержания G/C в ORF (абсолютного или относительного) на по меньшей мере приблизительно 40% по сравнению с соответствующей ORF дикого типа. В других вариантах осуществления ORF, кодирующая полипептид релаксин, содержит менее 20 не кодирующих фенилаланин пар и/или триплетов урацила. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один кодон в ORF мРНК, кодирующей полипептид релаксин, дополнительно замещают альтернативным кодоном, имеющим частоту встречаемости кодона ниже, чем частота встречаемости кодона у замещенного кодона в наборе синонимичных кодонов. В некоторых вариантах осуществления экспрессия полипептида релаксина, кодируемого мРНК, содержащей ORF, где урацил в мРНК представляет собой на по меньшей мере приблизительно 95% 5-метоксиурацил, где содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 115% до приблизительно 135% от теоретического минимального содержания урацила в соответствующей ORF дикого типа, повышена в по меньшей мере приблизительно 10 раз по сравнению с экспрессией полипептида релаксина с соответствующей мРНК дикого типа. В некоторых вариантах осуществления мРНК содержит открытую ORF, где урацил в мРНК представляет собой на по меньшей мере приблизительно 95% 5-метоксиурацил, и где содержание урацила в ORF составляет от приблизительно 115% до приблизительно 135% от теоретического минимального содержания урацила в соответствующей ORF дикого типа, и где мРНК фактически не индуцирует врожденный иммунный ответ в отношении клетки млекопитающего, в которую вводят мРНК.
В определенных вариантах осуществления химическая модификация происходит в нуклеотидных основаниях в полинуклеотидах (например, в РНК-полинуклеотиде, таком как мРНК-полинуклеотид). В некоторых вариантах осуществления модифицированные нуклеотидные основания в полинуклеотиде (например, РНК-полинуклеотиде, таком как мРНК-полинуклеотид) выбирают из группы, состоящей из 1-метилпсевдоуридина (m1ψ), 1-этилпсевдоуридина (e1ψ), 5-метоксиуридина (mo5U), 5-метилцитидина (m5C), псевдоуридина (ψ), α-тиогуанозина и α-тиоаденозина. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит комбинацию из по меньшей мере двух (например, 2, 3, 4 или больше) вышеупомянутых модифицированных нуклеотидных оснований.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит псевдоуридин (ψ) и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 1-метилпсевдоуридин (m1ψ). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 1-этил-псевдоуридин (e1ψ). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 1-метилпсевдоуридин (m1ψ) и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 1-этил-псевдоуридин (e1ψ) и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 2-тиоуридин (s2U). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 2-тиуоридин и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит метоксиуридин (mo5U). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 5-метоксиуридин (mo5U) и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 2'-О-метилуридин. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 2'-О-метилуридин и 5-метилцитидин (m5C). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит N6-метиладенозин (m6A). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит N6-метиладенозин (m6A) и 5-метилцитидин (m5C).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) равномерно модифицирован (например, полностью модифицирован, модифицирован по всей последовательности) в случае конкретной модификации. Например, полинуклеотид может быть равномерно модифицирован 5-метилцитидином (m5C), что означает, что все остатки цитозина в последовательности мРНК заменяют 5-метилцитидином (m5C). Аналогично полинуклеотид может быть равномерно модифицирован в отношении любого типа нуклеозидного остатка, присутствующего в данной последовательности, путем замены модифицированным остатком, таким как любой из указанных выше.
В некоторых вариантах осуществления химически модифицированные нуклеозиды в открытой рамке считывания выбраны из группы, состоящей из уридина, аденина, цитозина, гуанина и любой их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный цитозин. Примеры нуклеотидных оснований и нуклеозидов с модифицированным цитозином, включают N4-ацетилцитидин (ас4С), 5-метилцитидин (m5C), 5-галогенцитидин (например, 5-йодцитидин), 5-гидроксиметилцитидин (hm5C), 1-метил-псевдоизоцитидин, 2-тиоцитидин (s2C), 2-тио-5-метилцитидин.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный уридин. Примеры нуклеотидных оснований и нуклеозидов с модифицированным уридином включают 5-цианоуридин или 4'-тиоуридин.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный аденин. Примеры нуклеотидных оснований и нуклеозидов с модифицированным аденином включают 7-деазааденин, 1-метиладенозин (m1A), 2-метиладенин (m2A), N6-метиладенин (m6A) и 2,6-диаминопурин.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный гуанин. Примеры нуклеотидных оснований и нуклеозидов с модифицированным гуанином включают инозин (I), 1-метилинозин (m1I), виозин (imG), метилвиозин (mimG), 7-дезазагуанозин, 7-циано-7-дезазагуанозин (preQ0), 7-аминометил-7-дезазагуанозин (preQ1), 7-метилгуанозин (m7G), 1-метилгуанозин (m1G), 8-оксогуанозин, 7-метил-8-оксогуанозин.
В некоторых вариантах осуществления нуклеотиды с модифицированными нуклеотидными основаниями в полинуклеотиде (например, РНК-полинуклеотиде, таком как мРНК-полинуклеотид) представляют собой 5-метоксиуридин.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит комбинацию из по меньшей мере двух (например, 2, 3, 4 или больше) модифицированных нуклеотидных оснований.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) содержит 5-метоксиуридин (5mo5U) и 5-метилцитидин (m5C).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, РНК-полинуклеотид, такой как мРНК-полинуклеотид) равномерно модифицирован (например, полностью модифицирован, модифицирован по всей последовательности) в случае конкретной модификации. Например, полинуклеотид может быть равномерно модифицирован 5-метоксиуридином, что означает, что практически все остатки уридина в последовательности мРНК заменяют 5-метоксиуридином. Аналогично полинуклеотид может быть равномерно модифицирован в отношении любого типа нуклеозидного остатка, присутствующего в данной последовательности, путем замены модифицированным остатком, таким как любой из указанных выше.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный цитозин.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный урацил. Примеры нуклеотидных оснований и нуклеозидов с модифицированным урацилом включают 5-метоксиурацил.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный аденин.
В некоторых вариантах осуществления модифицированное нуклеотидное основание представляет собой модифицированный гуанин.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды могут содержать любой применимый линкер между нуклеозидами. Такие линкеры, включая модификации остова, которые применимы в композиции по настоящему раскрытию, включают без ограничения следующее: 3'-алкиленфосфонаты, 3'-аминофосфорамидаты, алкенсодержащие остовы, аминоалкилфосфорамидаты, сложные аминоалкилфосфосфотриэфиры, боранофосфаты, -CH2-O-N(CH3)-CH2-, -CH2-N(CH3)-N(CH3)-CH2-, -CH2-NH-CH2-, хиральные фосфонаты, хиральные фосфоротиоаты, формацетильные и тиоформацетильные остовы, метиленовые (метилимино-), метиленформацетильные и тиоформацетильные остовы, остовы метиленимино- и метиленгидразино-, морфолиновые связи, -N(CH3)-CH2-CH2-, олигонуклеозиды с гетероатомными межнуклеозидными связями, фосфинаты, фосфорамидаты, фосфородитиоаты, фосфоротиоатные межнуклеозидные связи, фосфоротиоаты, сложные фосфотриэфиры, PNA, силоксановые остовы, сульфаматные остовы, сульфидные, сульфоксидные и сульфоновые остовы, сульфонатные и сульфонамидные остовы, тионоалкилфосфонаты, сложные тионоалкилфосфотриэфиры и тионофосфорамидаты.
Модифицированные нуклеозиды и нуклеотиды (например, молекулы структурных блоков), которые можно включить в полинуклеотид (например, РНК или мРНК, описанные в данном документе), могут быть модифицированы по сахару рибонуклеиновой кислоты. Например, 2'-гидроксильную группу (ОН) можно модифицировать или заменить несколькими различными заместителями. Иллюстративные замены в 2'-положении включают без ограничения Н, галоген, необязательно замещенный C1-6алкил; необязательно замещенный C1-6алкокси; необязательно замещенный C6-10арилокси; необязательно замещенный C3-8циклоалкил; необязательно замещенный С3-8циклоалкокси; необязательно замещенный C6-10арилокси; необязательно замещенный C6-10арил-C1-6алкокси, необязательно замещенный С1-12(гетероциклил)окси; сахар (например, рибозу, пентозу или любой из описанных в данном документе); полиэтиленгликоль (PEG), -O(CH2CH2O)nCH2CH2OR, где R представляет собой Н или необязательно замещенный алкил, а n представляет собой целое число, составляющее от 0 до 20 (например, от 0 до 4, от 0 до 8, от 0 до 10, от 0 до 16, от 1 до 4, от 1 до 8, от 1 до 10, от 1 до 16, от 1 до 20, от 2 до 4, от 2 до 8, от 2 до 10, от 2 до 16, от 2 до 20, от 4 до 8, от 4 до 10, от 4 до 16 и от 4 до 20); «закрытые» нуклеиновые кислоты (LNA), в которых 2'-гидроксил соединен C1-6алкиленовым или C1-6гетероалкиленовым мостиком с 4'-углеродом того же рибозного сахара, где иллюстративные мостики включают метиленовый, пропиленовый, эфирный или амино-мостик; аминоалкил, как определено в данном документе; аминоалкокси, как определено в данном документе; амино-, как определено в данном документе; и аминокислоты, как определено в данном документе.
Как правило, РНК включает сахарную группу в виде рибозы, которая представляет собой 5-членное кольцо с кислородом. Иллюстративные неограничивающие модифицированные нуклеотиды включают замену кислорода в рибозе (например, на S, Se или алкилен, такой как метилен или этилен); добавление двойной связи (например, для замены рибозы циклопентенилом или циклогексенилом); укорочение кольца рибозы (например, с образованием 4-членного кольца циклобутана или оксетана); удлинение кольца рибозы (например, с образованием 6- или 7-членного кольца, имеющего дополнительный углерод или гетероатом, такой как для ангидрогекситола, альтритола, маннита, циклогексанила, циклогексенила и морфолина, который также имеет фосфорамидатный остов); полициклические формы (например, трициклические; и «открытые» формы, такие как гликолевая нуклеиновая кислота (GNA) (например, R-GNA или S-GNA, где рибоза заменена гликолевыми звеньями, присоединенными к сложным фосфодиэфирным связям), треозная нуклеиновая кислота (TNA, в которой рибоза заменена на α-L-треофуранозил-(3'→2')), и пептидная нуклеиновая кислота (PNA, в которой 2-аминоэтилглициновые связи заменяют рибозный и фосфодиэфирный остовы). Сахарная группа также может содержать один или несколько атомов углерода, которые имеют стереохимическую конфигурацию, противоположную конфигурации соответствующего углерода в рибозе. Таким образом, молекула полинуклеотида может включать нуклеотиды, содержащие, например, арабинозу в качестве сахара. Такие модификации сахара изложены в публикациях международных патентных заявок №№ WO 2013052523 и WO 2014093924, содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей их полноте.
Полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин или его функциональный фрагмент или вариант) могут включать комбинацию модификаций сахара, нуклеотидного основания и/или межнуклеозидной связи. Эти комбинации могут включать любую одну или несколько модификаций, описанных в данном документе.
Нетранслируемые участки (UTR)
Нетранслируемые участки (UTR) представляют собой части нуклеиновой кислоты полинуклеотида перед стартовым кодоном (5'-UTR) и после стоп-кодона (3'-UTR), которые не транслируются. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, рибонуклеиновая кислота (РНК), например, матричная РНК (мРНК)) по настоящему изобретению, содержащая открытую рамку считывания (ORF), кодирующую полипептид релаксин, дополнительно содержит UTR (например, 5'-UTR или его функциональный фрагмент, 3'-UTR или его функциональный фрагмент, или их комбинацию).
UTR может быть гомологичным или гетерологичным для кодирующего участка в полинуклеотиде. В некоторых вариантах осуществления UTR гомологичен для ORF, кодирующей полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления UTR гетерологичен для ORF, кодирующей полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит две или более 5'-UTR или их функциональные фрагменты, каждый из которых имеет одинаковую или отличающуюся нуклеотидную последовательность. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит две или более 3'-UTR или их функциональные фрагменты, каждый из которых имеет одинаковую или отличающуюся нуклеотидную последовательность.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR или его функциональный фрагмент, 3'-UTR или его функциональный фрагмент или любая их комбинация оптимизированы по последовательности.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR или его функциональный фрагмент, 3'-UTR или его функциональный фрагмент или любая их комбинация содержит по меньшей мере одно химически модифицированное нуклеотидное основание, например 5-метоксиурацил.
UTR могут иметь характеристики, которые обеспечивают регуляторную роль, например, повышенную или пониженную стабильность, локализацию и/или эффективность трансляции. Полинуклеотид, содержащий UTR, можно вводить в клетку, ткань или организм, а одну или несколько регуляторных характеристик можно измерить обычными способами. В некоторых вариантах осуществления функциональный фрагмент 5'-UTR или 3'-UTR предусматривает одну или несколько регуляторных характеристик полноразмерного 5'- или 3'-UTR соответственно.
Природные 5'-UTR обладают характеристиками, которые играют роль в инициации трансляции. Они содержат такие отличительные признаки, как последовательности Козак, которые, как известно, принимают участие в процессе, посредством которого рибосома инициирует трансляцию многих генов. Последовательности Козак имеют консенсусную последовательность CCR(A/G)CCAUGG (SEQ ID NO: 492), где R представляет собой пурин (аденин или гуанин) на три основания выше стартового кодона (AUG), после которого следует еще один 'G'. Известно, что 5'-UTR образуют вторичные структуры, которые участвуют в связывании фактора элонгации.
Путем конструирования характеристик, обычно встречающихся в избыточно экспрессируемых генах в конкретных органах-мишенях, можно повысить стабильность и продуцирование белка полинуклеотидом. Например, введение 5'-UTR из экспрессируемой в печени мРНК, такой как для альбумина, сывороточного амилоида А, аполипопротеина А/В/Е, трансферрина, альфа-фетопротеина, эритропоэтина или фактора VIII, может усилить экспрессию полинуклеотидов в линиях клеток печени или в печени. Аналогично применение 5'-UTR из другой тканеспецифичной мРНК для улучшения экспрессии в этой ткани возможно для мышц (например, MyoD, миозин, миоглобин, миогенин, геркулин), для эндотелиальных клеток (например, Tie-1, CD36), для миелоидных клеток (например, С/ЕВР, AML1, G-CSF, GM-CSF, CD11b, MSR, Fr-1, i-NOS) для лейкоцитов (например, CD45, CD18), для жировой ткани (например, CD36, GLUT4, ACRP30, адипонектин) и для эпителиальных клеток легких (например, SP-A/B/C/D).
В некоторых вариантах осуществления UTR выбирают из семейства транскриптов, белки которых имеют общую функцию, структуру, характеристику или свойство. Например, кодируемый полипептид может относиться к семейству белков (т.е. к тем, которые имеют по меньшей мере одну общую функцию, структуру, характеристику, локализацию, происхождение или профиль экспрессии), которые экспрессируются в определенной клетке, ткани или в течение некоторого времени в ходе развитие. UTR из любого из генов или мРНК можно заменить на любой другой UTR из того же или другого семейства белков для создания нового полинуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и 3'-UTR могут быть гетерологичными. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR можно получить из отличающегося вида, чем 3'-UTR. В некоторых вариантах осуществления 3'-UTR можно получить из отличающегося вида, чем 5'-UTR.
Одновременно поданная международная заявка на патент №PCT/US2014/021522 (публ. № WO/2014/164253, включенная в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте) приводит перечень иллюстративных UTR, которые можно использовать в полинуклеотиде по настоящему изобретению в качестве фланкирующих участков в ORF.
Иллюстративные UTR данной заявки включают без ограничения один или несколько 5'-UTR и/или 3'-UTR, полученных из последовательности нуклеиновой кислоты: глобина, такого как α- или β-глобин (например, Xenopus, мыши, кролика, или глобина человека); сильного сигнала инициации трансляции из последовательности Козак; CYBA (например, α-полипептид цитохрома b-245 человека); альбумина (например, человеческого альбумина 7); HSD17B4 (гидроксистероид (17-β) дегидрогеназы); вируса (например, вируса гравировки табака (TEV), вируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEEV), вируса Денге, цитомегаловируса (CMV) (например, CMV немедленно раннего ответа 1 (IE1)), вируса гепатита (например, гепатита В), вируса Синдбис или вируса PAV желтой карликовости ячменя); белка теплового шока (например, hsp70); фактора инициации трансляции (например, elF4G); транспортера глюкозы (например, hGLUT1 (транспортера глюкозы человека 1)); актина (например, α- или β-актина человека); GAPDH; тубулина; гистона; фермента цикла лимонной кислоты; топоизомеразы (например, 5'-UTR гена ТОР, лишенного мотива 5'-ТОР (олигопиримидинового тракта)); рибосомального белка Large 32 (L32); рибосомального белка (например, рибосомального белка человека или мыши, такого как, например, rps9); АТФ-синтазы (например, АТР5А1 или β-субъединицы митохондриальной Н+-АТФ-синтазы); гормона роста (например, бычьего (bGH) или человеческого (hGH)); фактора элонгации (например, фактора элонгации 1 α1 (EEF1A1)); марганец-супероксиддисмутазы (MnSOD); фактора усиления миоцитов 2А (MEF2A); β-F1-АТФазы, креатинкиназы, миоглобина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF); коллагена (например, коллагена типа I альфа 2 (Col1A2), коллагена типа I альфа 1 (Col1A1), коллагена типа VI альфа 2 (Col6A2), коллагена типа VI альфа 1 (Col6A1)); рибофорина (например, рибофорина I (RPNI)); связанного с рецептором липопротеинов низкой плотности белка (например, LRP1); кардиотрофин-подобного цитокинового фактора (например, Nnt1); калретикулина (Calr); про коллаген-лизин 2-оксоглутарат-5-диоксигеназы 1 (Plod1) и нуклеобиндина (например, Nucb1).
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR выбирают из группы, состоящей из 5'-UTR β-глобина; 5'-UTR, содержащей сильный сигнал инициации трансляции из последовательности Козак; 5'-UTR α-полипептида цитохрома b-245 (CYBA); 5'-UTR гидроксистероид (17-β) дегидрогеназы (HSD17B4); 5'-UTR вируса гравировки табака (TEV); 5'-UTR вируса венесуэльского энцефалита лошадей (TEEV); 5'-проксимальной открытой рамки считывания РНК вируса краснухи (RV), кодирующей неструктурные белки; 5'-UTR вируса Денге (DEN); 5'-UTR белка теплового шока 70 (Hsp70); 5'-UTR eIF4G; 5'-UTR GLUT1; их функциональных фрагментов и любой их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления 3'-UTR выбирают из группы, состоящей из 3'-UTR β-глобина; 3'-UTR CYBA; 3'-UTR альбумина; 3'-UTR гормона роста (GH); 3'-UTR VEEV; 3'-UTR вируса гепатита В (HBV); 3'-UTR α-глобина; 3'-UTR DEN; 3'-UTR вируса PAV желтой карликовости ячменя (BYDV-PAV); 3'-UTR фактора элонгации 1 α1 (EEF1A1); 3'-UTR марганец-супероксиддисмутазы (MnSOD); 3'-UTR β-субъединицы митохондриальной Н (+)-АТФ-синтазы (β-мРНК); 3'-UTR GLUT1; 3'-UTR MEF2A; 3'-UTR β-F1-АТФазы их функциональных фрагментов и их комбинаций.
В полинуклеотиды по настоящему изобретению можно встроить UTR дикого типа, полученные из любых гена или мРНК. В некоторых вариантах осуществления UTR можно изменить относительно дикого типа или нативного UTR с получением варианта UTR, например, путем изменения ориентации или местоположения UTR относительно ORF; или путем включения дополнительных нуклеотидов, делеции нуклеотидов, замены или перестановки нуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления можно использовать варианты 5'- или 3'-UTR, например, мутанты UTR дикого типа или варианты, в которых один или несколько нуклеотидов добавляют с конца UTR или удаляют на конце.
Кроме того, один или несколько синтетических UTR можно использовать в комбинации с одним или несколькими несинтетическими UTR. См., например, Mandal and Rossi, Nat. Protoc. 2013 8(3): 568-82, и последовательности, доступные на сайте www.addgene.org/Derrick_Rossi/, содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей их полноте. UTR или их части можно разместить в той же ориентации, как и в транскрипте, из которого они были выбраны, или можно изменить их ориентацию или местоположение. Следовательно, 5'- и/или 3'-UTR можно инвертировать, укоротить, удлинить или комбинировать с одним или несколькими другими 5'-UTR или 3'-UTR.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит множественные UTR, например двойной, тройной или четверной 5'-UTR или 3'-UTR. Например, двойная UTR содержит две копии одного и той же UTR либо последовательно, либо практически последовательно. Например, можно использовать двойной 3'-UTR бета-глобина (см. US 2010/0129877, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей ее полноте).
В определенных вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению содержат 5'-UTR и/или 3'-UTR, выбранные из любого UTR, раскрытых в данном документе. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR содержат:
В определенных вариантах осуществления последовательность 5'-UTR и/или 3'-UTR по настоящему изобретению содержит нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или приблизительно 100% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей 5'-UTR, содержащих какую-либо из SEQ ID NO: 545-569, и/или последовательностей 3'-UTR, содержащих какую-либо из SEQ ID NO: 493-505 и 570-587, и любой их комбинации.
Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут содержать комбинации характеристик. Например, ORF может быть фланкирована 5'-UTR, которая содержит сильный сигнал инициации трансляции из последовательности Козак, и/или 3'-UTR, содержащей последовательность олиго(dT) для матричного присоединения хвоста поли(А). 5'-UTR может содержать первый полинуклеотидный фрагмент и второй полинуклеотидный фрагмент из одного и того же и/или разных UTR (см., например, US 2010/0293625, включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Другие последовательности помимо UTR можно использовать в качестве участков или подучастков внутри полинуклеотидов по настоящему изобретению. Например, интроны или части интронных последовательностей можно встроить в полинуклеотиды по настоящему изобретению. Встраивание интронных последовательностей может повысить продуцирование белка, а также уровни экспрессии полинуклеотидов. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит внутренний участок посадки рибосомы (IRES) вместо или в дополнение к UTR (см., например, Yakubov et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2010 394(1): 189-193, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит IRES вместо последовательности 5'-UTR. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит ORF и последовательность капсида вируса. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит синтетический 5'-UTR в комбинации с несинтетическим 3'-UTR.
В некоторых вариантах осуществления UTR может также включать по меньшей мере один полинуклеотид-энхансер трансляции, элемент энхансера трансляции или элементы энхансера трансляции (в совокупности «ТЕЕ», который относится к последовательностям нуклеиновой кислоты, которые повышают количество полипептида или белка, продуцируемого с полинуклеотида). В качестве неограничивающего примера ТЕЕ может включать описанные в US 2009/0226470, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, и другие, известные в данной области. В качестве неограничивающего примера ТЕЕ может располагаться между промотором транскрипции и стартовым кодоном. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR содержит ТЕЕ.
В одном аспекте ТЕЕ представляет собой консервативный элемент в UTR, который может стимулировать активность трансляции нуклеиновой кислоты, такой как без ограничения кэп-зависимой или кэп-независимой трансляции.
В одном неограничивающем примере ТЕЕ содержит последовательность ТЕЕ в 5'-лидерной последовательности белкового гомеодомена Gtx. См. Chappell et al., PNAS 2004 101: 9590-9594, включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Термины «полинуклеотид-энхансер трансляции» или «полинуклеотидная последовательность энхансера трансляции» относятся к полинуклеотиду, который включает один или несколько ТЕЕ, представленных в данном документе и/или известных в данной области (см., например, US 6310197, US 6849405, US 7456273, US 7183395, US 2009/0226470, US 2007/0048776, US 2011/0124100, US 2009/0093049, US 2013/0177581, WO 2009/075886, WO 2007/025008, WO 2012/009644, WO 2001/055371, WO 1999/024595, ЕР 2610341 А1 и ЕР 2610340 А1; содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте), или их варианты, гомологи или функциональные производные. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит одну или несколько копий ТЕЕ. ТЕЕ в полинуклеотиде-энхансере трансляции может быть организован в одном или нескольких сегментах последовательности. Сегмент последовательности может содержать один или несколько TEE, представленных в данном документе, причем каждый TEE присутствует в одной или нескольких копиях. Если в полинуклеотиде-энхансере трансляции присутствуют сегменты с несколькими последовательностями, то они могут быть гомогенными или гетерогенными. Таким образом, сегменты с несколькими последовательностями в полинуклеотиде-энхансере трансляции могут нести TEE одинакового или разного типа, предусмотренного в данном документе, одинаковое или различное количество копий каждого из TEE и/или одинаковую или различную организацию TEE в каждом сегменте последовательности. В одном варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит полинуклеотидную последовательность энхансера трансляции.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR, содержащие по меньшей мере один TEE, описанный в данном документе, могут быть включены в моноцистронную последовательность, такую как без ограничения векторная система или вектор нуклеиновой кислоты.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению содержит TEE или его часть, описанную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления TEE в 3'-UTR могут быть одинаковыми и/или отличаться от TEE, расположенного в 5'-UTR.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению может включать по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18 по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 55 или более 60 последовательностей TEE. В одном варианте осуществления 5'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению может включать 1-60, 1-55, 1-50, 1-45, 1-40, 1-35, 1-30, 1-25, 1-20, 1-15, 1-10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 последовательность TEE. Последовательности TEE в 5'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению могут быть одинаковыми или различными последовательностями TEE. Комбинация из различных последовательностей TEE в 5'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению может включать комбинации, в которые встроено более одной копии любой из различных последовательностей ТЕЕ.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR содержит спейсер для разделения двух последовательностей ТЕЕ. В качестве неограничивающего примера спейсер может быть 15-нуклеотидным спейсером и/или другими спейсерами, известными в данной области. В качестве еще одного неограничивающего примера 5'-UTR и/или 3'-UTR содержит модуль последовательности ТЕЕ-спейсера, повторяемый по меньшей мере один раз, по меньшей мере дважды, по меньшей мере 3 раза, по меньшей мере 4 раза, по меньшей мере 5 раз, по меньшей мере 6 раз, по меньшей мере 7 раз, по меньшей мере 8 раз, по меньшей мере 9 раз, по меньшей мере 10 раз или более 10 раз в 5'-UTR и/или 3'-UTR соответственно. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR содержит модуль последовательности ТЕЕ-спейсера, повторяемый 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 раз.
В некоторых вариантах осуществления спейсер, разделяющий две последовательности ТЕЕ, может включать другие последовательности, известные в данной области, которые могут регулировать трансляцию полинуклеотида по настоящему изобретению, например, последовательности miR, описанные в данном документе (например, сайты связывания miR и затравочные участки miR). В качестве неограничивающего примера, каждый спейсер, используемый для разделения двух последовательностей ТЕЕ, может включать другую последовательность miR или компонент последовательности miR (например, затравочная последовательность miR).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит последовательность miR и/или ТЕЕ. В некоторых вариантах осуществления включение последовательности miR и/или последовательности ТЕЕ в полинуклеотид по настоящему изобретению может изменять форму участка стебель-петля, который может повышать и/или снижать трансляцию. См., например, Kedde et al., Nature Cell Biology 2010 12(10): 1014-20, включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.).
Сайты связывания микроРНК (miRNA)
Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут включать регуляторные элементы, например, сайты связывания микроРНК (miRNA), сайты связывания фактора транскрипции, структурированные последовательности и/или мотивы мРНК, искусственные сайты связывания, сконструированные для работы в качестве псевдорецепторов для эндогенных молекул, связывающих нуклеиновые кислоты, и их комбинации. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, включающие такие регуляторные элементы, называются как включающие «сенсорные последовательности». Неограничивающие примеры сенсорных последовательностей описаны в публикации заявки на патент США №2014/0200261, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, рибонуклеиновая кислота (РНК), например, матричная РНК (мРНК)) по настоящему изобретению содержит открытую рамку считывания (ORF), кодирующую представляющий интерес полипептид, и дополнительно содержит один или несколько сайтов связывания miRNA. Введение или включение сайта(сайтов) связывания miRNA обеспечивает регуляцию полинуклеотидов по настоящему изобретению, и, в свою очередь, полипептидов, кодируемых ими, на основе тканеспецифичной и/или специфичной для типа клеток экспрессии природных miRNA.
МикроРНК, например, природная miRNA, представляет собой некодирующую РНК длиной 19-25 нуклеотидов, которая связывается с полинуклеотидом и снижает активность экспрессии гена либо путем снижения стабильности, либо путем ингибирования трансляции данного полинуклеотида. Последовательность miRNA содержит «затравочный» участок, то есть последовательность в участке положений 2-8 зрелой miRNA. Затравочная последовательность miRNA может содержать положения 2-8 или 2-7 зрелой miRNA. В некоторых вариантах осуществления затравочная последовательность miRNA может содержать 7 нуклеотидов (например, нуклеотиды 2-8 зрелой miRNA), где комплементарный затравке сайт в соответствующем сайте связывания miRNA фланкирован аденозином (А), противоположным положению 1 в miRNA. В некоторых вариантах осуществления затравочная последовательность miRNA может содержать 6 нуклеотидов (например, нуклеотиды 2-7 зрелой miRNA), где комплементарный затравке сайт в соответствующем сайте связывания miRNA фланкирован аденозином (А), противоположным положению 1 в miRNA. См., например, Grimson A, Farh KK, Johnston WK, Garrett-Engele Р, Lim LP, Bartel DP; Mol Cell. 2007 Jul 6; 27(1): 91-105. Можно проводить профилирование miRNA целевых клеток или тканей для определения присутствия или отсутствия miRNA в клетках или тканях. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид (например, рибонуклеиновая кислота (РНК), например, матричная РНК (мРНК)) по настоящему изобретению содержит один или несколько сайтов связывания микроРНК, последовательности-мишени микроРНК, комплементарные последовательности микроРНК или комплементарные затравочной последовательности микроРНК. Такие последовательности могут соответствовать, например, быть комплементарны любой известной микроРНК, такой как описанные в публикации заявки на патент США № US 2005/0261218 и публикации заявки на патент США № US 2005/0059005, содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Используемый в данном документе термин «сайт связывания микроРНК (miRNA или miR)» относится к последовательности внутри полинуклеотида, например, внутри ДНК или внутри транскрипта РНК, в том числе в 5'-UTR и/или 3'-UTR, которая в достаточной степени комплементарна всей miRNA или ее участку для взаимодействия с miRNA, ассоциации или связи с ней. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению, содержащий ORF, кодирующую представляющий интерес полипептид, дополнительно содержит один или несколько сайтов связывания miRNA. В иллюстративных вариантах осуществления 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида (например, рибонуклеиновой кислоты (РНК), например, матричной РНК (мРНК)) содержит один или несколько сайтов связывания miRNA.
Выражение сайт связывания miRNA, имеющий достаточную комплементарность с miRNA, относится к степени комплементарности, достаточной для облегчения опосредованной miRNA регуляции полинуклеотида, например, опосредованной miRNA репрессии трансляции или деградации полинуклеотида. В иллюстративных аспектах настоящего изобретения выражение сайт связывания miRNA, имеющий достаточную комплементарность с miRNA, относится к степени комплементарности, достаточной для облегчения опосредованной miRNA деградации полинуклеотида, например, с помощью расщепления мРНК, опосредованного miRNA-направленным РНК-индуцируемым комплексом сайленсинга гена (RISC). Сайт связывания miRNA может иметь комплементарность, например, с последовательностью miRNA из 19-25 нуклеотидов, с последовательностью miRNA из 19-23 нуклеотидов или с последовательностью miRNA из 22 нуклеотидов. Сайт связывания miRNA может быть комплементарным только части miRNA, например части, которая меньше 1, 2, 3 или 4 нуклеотидов из полноразмерной природной последовательности miRNA. Сплошная или полная комплементарность (например, сплошная комплементарность или полная комплементарность по всей длине или значительной части длины природной miRNA) является предпочтительной, когда необходимым результатом регуляции является разрушение мРНК.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA включает последовательность, которая комплементарна (например, частично или полностью комплементарна) затравочной последовательности miRNA. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA включает последовательность, которая имеет полную комплементарность с затравочной последовательностью miRNA. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA включает последовательность, которая комплементарна (например, частично или полностью комплементарна) последовательности miRNA. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA включает последовательность, которая полностью комплементарна последовательности miRNA. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA полностью комплементарен последовательности miRNA за исключением замещений, концевых добавлений и/или усечений 1, 2 или 3 нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA имеет такую же длину, как и соответствующая miRNA. В других вариантах осуществления сайт связывания miRNA на один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать нуклеотидов короче, чем соответствующая miRNA, с 5'-конца, 3'-конца или с обоих. В других вариантах осуществления сайт связывания микроРНК на два нуклеотида короче, чем соответствующая микроРНК, с 5'-конца, 3'-конца или с обоих. Сайты связывания miRNA, которые короче, чем соответствующие miRNA, все еще способны разрушать мРНК, включающую один или несколько сайтов связывания этой miRNA, или предотвращать трансляцию мРНК.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA связывает соответствующую зрелую miRNA, которая является частью активного RISC, содержащего Dicer. В другом варианте осуществления связывание сайта связывания miRNA с соответствующей miRNA в RISC разрушает мРНК, содержащую сайт связывания miRNA, или предотвращает трансляцию мРНК. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA имеет в достаточной степени комплементарен miRNA, поэтому комплекс RISC, содержащий miRNA, расщепляет полинуклеотид, содержащий сайт связывания этой miRNA. В других вариантах осуществления сайт связывания miRNA имеет несовершенную комплементарность, так что комплекс RISC, содержащий miRNA, индуцирует нестабильность полинуклеотида, содержащего сайт связывания miRNA. В другом варианте осуществления сайт связывания miRNA имеет неполную комплементарность, поэтому комплекс RISC, содержащий miRNA, подавляет транскрипцию полинуклеотида, содержащего сайт связывания miRNA.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA имеет одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать ошибочно спаренных оснований из соответствующей miRNA.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA имеет по меньшей мере приблизительно десять, по меньшей мере приблизительно одиннадцать, по меньшей мере приблизительно двенадцать, по меньшей мере приблизительно тринадцать, по меньшей мере приблизительно четырнадцать, по меньшей мере приблизительно пятнадцать, по меньшей мере приблизительно шестнадцать, по меньшей мере приблизительно семнадцать, по меньшей мере приблизительно восемнадцать, по меньшей мере приблизительно девятнадцать, по меньшей мере приблизительно двадцать или по меньшей мере приблизительно двадцать один смежный нуклеотид, комплементарный по меньшей мере приблизительно десяти, по меньшей мере приблизительно одиннадцати, по меньшей мере приблизительно двенадцати, по меньшей мере приблизительно тринадцати, по меньшей мере приблизительно четырнадцати, по меньшей мере приблизительно пятнадцати, по меньшей мере приблизительно шестнадцати, по меньшей мере приблизительно семнадцати, по меньшей мере приблизительно восемнадцати, по меньшей мере приблизительно девятнадцати, по меньшей мере приблизительно двадцати или по меньшей мере приблизительно двадцати одному, соответственно, смежному нуклеотиду соответствующей miRNA.
Путем конструирования одного или нескольких сайтов связывания miRNA в полинуклеотиде по настоящему изобретению на полинуклеотид можно целенаправленно воздействовать для разрушения или снижения трансляции, при условии, что требуемая miRNA доступна. Это может снизить эффекты нецелевого воздействия при доставке полинуклеотида. Например, если полинуклеотид по настоящему изобретению не предназначен для доставки в ткань или клетку, но попадает в указанную ткань или клетку, то miRNA, накопившаяся при большом количестве копий в ткани или клетке, может ингибировать экспрессию представляющего интерес гена, если один или несколько сайтов связывания miRNA сконструированы в 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида.
Напротив, сайты связывания miRNA можно удалить из полинуклеотидных последовательностей, в которых они естественным образом присутствуют, чтобы повысить экспрессию белка в определенных тканях. Например, сайт связывания для конкретной miRNA можно удалить из полинуклеотида для улучшения экспрессии белка в тканях или клетках, содержащих miRNA.
В одном варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может включать по меньшей мере один сайт связывания miRNA в 5'-UTR и/или 3'-UTR, чтобы регулировать активность цитотоксических или цитопротективных терапевтических средств на основе мРНК по отношению к конкретным клеткам, таким как без ограничения нормальные и/или раковые клетки. В другом варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может включать два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более сайтов связывания miRNA в 5'-UTR и/или 3'-UTR, чтобы регулировать цитотоксическую или цитопротективную активность терапевтических средств на основе мРНК по отношению к конкретными клеткам, таким как без ограничения нормальные и/или раковые клетки.
Регуляцию экспрессии в нескольких тканях можно осуществить путем введения или удаления одного или нескольких сайтов связывания miRNA, например одного или нескольких различных сайтов связывания miRNA. Решение о том, следует ли удалять или вставлять сайт связывания miRNA, можно сделать на основе профиля экспрессии miRNA и/или анализа их профиля в тканях и/или клетках при развитии и/или заболевании. Сообщалось о выявлении miRNA, сайтов связывания miRNA и их профилей экспрессии и биологической роли (например, Bonauer et al., Curr Drug Targets 2010 11: 943-949; Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18: 171-176; Contreras and Rao Leukemia 2012 26: 404-413 (2011 Dec 20. doi: 10.1038/leu.2011.356); Bartel Cell 2009 136: 215-233; Landgraf et al, Cell, 2007 129: 1401-1414; Gentner and Naldini, Tissue Antigens. 2012 80: 393-403 и все ссылки в них; каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
МикроРНК и сайты связывания miRNA могут соответствовать любой известной последовательности, включая неограничивающие примеры, описанные в публикациях заявок на патенты США №№2014/0200261, 2005/0261218 и 2005/0059005, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Примеры тканей, в которых miRNA, как известно, регулируют мРНК и таким образом экспрессию белка, включают без ограничения печень (miR-122), мышцы (miR-133, miR-206, miR-208), эндотелиальные клетки (miR-17-92, miR-126), миелоидные клетки (miR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR-223, miR-24, miR-27), жировую ткань (let-7, miR-30c), сердце (miR-1d, miR-149), почки (miR-192, miR-194, miR-204) и эпителиальные клетки легких (let-7, miR-133, miR-126).
В частности, известно, что miRNA дифференциально экспрессируются в иммунных клетках (также называемых гемопоэтическими клетками), таких как антигенпрезентирующие клетки (АРС) (например, дендритные клетки и макрофаги), макрофаги, моноциты, В-лимфоциты, Т-лимфоциты, гранулоциты, естественные киллеры и т.д. Специфичные для иммунных клеток miRNA вовлечены в иммуногенность, аутоиммунитет, иммунный ответ на инфекцию, воспаление, а также нежелательный иммунный ответ после генной терапии и трансплантации тканей/органов. Специфичные для иммунных клеток miRNA также регулируют многие аспекты развития, пролиферации, дифференцировки и апоптоза гемопоэтических клеток (иммунных клеток). Например, miR-142 и miR-146 экспрессируются исключительно в иммунных клетках, в частности, являются многокопийными в миелоидных дендритных клетках. Было продемонстрировано, что иммунный ответ на полинуклеотид можно отключить путем добавления сайтов связывания miR-142 к 3'-UTR полинуклеотида, что обеспечивает более стабильный перенос гена в ткани и клетки. miR-142 эффективно разрушает экзогенные полинуклеотиды в антигенпрезентирующих клетках и подавляет цитотоксическое удаление трансдуцированных клеток (например, Annoni A et al., blood, 2009, 114, 5152-5161; Brown BD, et al., Nat med. 2006, 12(5), 585-591; Brown BD, et al., blood, 2007, 110(13): 4144-4152, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Антиген-опосредованный иммунный ответ может относиться к иммунному ответу, вызванному чужеродными антигенами, которые при попадании в организм обрабатываются антигенпрезентирующими клетками и представляются на поверхности антигенпрезентирующих клеток. Т-клетки могут распознавать презентированный антиген и индуцировать цитотоксическое удаление клеток, которые экспрессируют антиген.
Введение сайта связывания miR-142 в 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению может избирательно подавлять экспрессию гена в антигенпрезентирующих клетках путем опосредованного miR-142 разрушения, ограничивая презентирование антигена в антигенпрезентирующих клетках (например, дендритных клетках) и тем самым предотвращая антиген-опосредованный иммунный ответ после доставки полинуклеотида. Затем полинуклеотид стабильно экспрессируется в целевых тканях или клетках без запуска цитотоксического удаления.
В одном варианте осуществления сайты связывания для miRNA, которые, как известно, экспрессируются в иммунных клетках, в частности, в антигенпрезентирующих клетках, можно сконструировать в полинуклеотиде по настоящему изобретению для подавления экспрессии полинуклеотида в антигенпрезентирующих клетках путем опосредованного miRNA разрушения РНК, подавляя антиген-опосредованный иммунный ответ. Экспрессия полинуклеотида сохраняется в неиммунных клетках, где специфичные для иммунных клеток miRNA не экспрессируются. Например, в некоторых вариантах осуществления для предотвращения иммуногенной реакции против специфического для печени белка любой сайт связывания miR-122 можно удалить и сайт связывания miR-142 (и/или mirR-146) можно сконструировать в 5'-UTR и/или 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению.
Чтобы дополнительно стимулировать избирательное разрушение и подавление в АРС и макрофаге, полинуклеотид по настоящему изобретению может включать еще один отрицательный регуляторный элемент в 5'-UTR и/или 3'-UTR, либо отдельно, либо в комбинации с сайтами связывания miR-142 и/или miR-146. В качестве неограничивающего примера дополнительным отрицательным регуляторным элементом является конститутивный элемент распада (CDE).
Специфичные для иммунных клеток miRNA включают без ограничения hsa-let-7a-2-3p, hsa-let-7a-3p, hsa-7a-5p, hsa-let-7c, hsa-let-7e-3p, hsa-let-7e-5p, hsa-let-7g-3p, hsa-let-7g-5p, hsa-let-7i-3p, hsa-let-7i-5p, miR-10a-3p, miR-10a-5p, miR-1184, hsa-let-7f-1-3p, hsa-let-7f-2--5p, hsa-let-7f-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p, miR-1279, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-132-3p, miR-132-5p, miR-142-3p, miR-142-5p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-146a-3p, miR-146a-5p, miR-146b-3p, miR-146b-5p, miR-147a, miR-147b, miR-148a-5p, miR-148a-3p, miR-150-3p, miR-150-5p, miR-151b, miR-155-3p, miR-155-5p, miR-15a-3p, miR-15a-5p, miR-15b-5p, miR-15b-3p, miR-16-1-3p, miR-16-2-3p, miR-16-5p, miR-17-5p, miR-181a-3p, miR-181a-5p, miR-181a-2-3p, miR-182-3p, miR-182-5p, miR-197-3p, miR-197-5p, miR-21-5p, miR-21-3p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-223-3p, miR-223-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-23b-3p, miR-23b-5p, miR-24-1-5p, miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-26a-1-3p, miR-26a-2-3p, miR-26a-5p, miR-26b-3p, miR-26b-5p, miR-27a-3p, miR-27a-5p, miR-27b-3p, miR-27b-5p, miR-28-3p, miR-28-5p, miR-2909, miR-29a-3p, miR-29a-5p, miR-29b-1-5p, miR-29b-2-5p, miR-29c-3p, miR-29c-5p, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-331-5p, miR-339-3p, miR-339-5p, miR-345-3p, miR-345-5p, miR-346, miR-34a-3p, miR-34a-5p, miR-363-3p, miR-363-5p, miR-372, miR-377-3p, miR-377-5p, miR-493-3p, miR-493-5p, miR-542, miR-548b-5p, miR548c-5p, miR-548i, miR-548j, miR-548n, miR-574-3p, miR-598, miR-718, miR-935, miR-99a-3p, miR-99a-5p, miR-99b-3p и miR-99b-5p. Кроме того, новые miRNA можно идентифицировать с помощью гибридизации на микрочипе и анализа с использованием микротома (например, Jima DD et al., Blood, 2010, 116: e118-e127; Vaz С et al., BMC Genomics, 2010, 11, 288, содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в печени, включают без ограничения miR-107, miR-122-3p, miR-122-5p, miR-1228-3p, miR-1228-5p, miR-1249, miR-129-5p, miR-1303, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-152, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-199a-3p, miR-199a-5p, miR-199b-3p, miR-199b-5p, miR-296-5p, miR-557, miR-581, miR-939-3p и miR-939-5p. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для печени miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в печени. Специфичные для печени сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в легких, включают без ограничения let-7a-2-3p, let-7a-3p, let-7a-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-127-3p, miR-127-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-130b-3p, miR-130b-5p, miR-133a, miR-133b, miR-134, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-18b-3p, miR-18b-5p, miR-24-1-5p, miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-296-3p, miR-296-5p, miR-32-3p, miR-337-3p, miR-337-5p, miR-381-3p и miR-381-5p. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для легкого miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в легких. Специфичные для легких сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в сердце, включают без ограничения miR-1, miR-133a, miR-133b, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-186-3p, miR-186-5p, miR-208a, miR-208b, miR-210, miR-296-3p, miR-320, miR-451a, miR-451b, miR-499a-3p, miR-499a-5p, miR-499b-3p, miR-499b-5p, miR-744-3p, miR-744-5p, miR-92b-3p и miR-92b-5p. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для сердца miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в сердце. Специфичные для сердца сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в нервной системе, включают без ограничения miR-124-5p, miR-125a-3p, miR-125a-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p, miR-1271-3p, miR-1271-5p, miR-128, miR-132-5p, miR-135a-3p, miR-135a-5p, miR-135b-3p, miR-135b-5p, miR-137, miR-139-5p, miR-139-3p, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-153, miR-181c-3p, miR-181c-5p, miR-183-3p, miR-183-5p, miR-190a, miR-190b, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR-30c-5p, miR-30d-3p, miR-30d-5p, miR-329, miR-342-3p, miR-3665, miR-3666, miR-380-3p, miR-380-5p, miR-383, miR-410, miR-425-3p, miR-425-5p, miR-454-3p, miR-454-5p, miR-483, miR-510, miR-516a-3p, miR-548b-5p, miR-548c-5p, miR-571, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-7-5p, miR-802, miR-922, miR-9-3p и miR-9-5p. МикроРНК, накапливающиеся в нервной системе, дополнительно включают те, которые специфически экспрессируются в нейронах, включая без ограничения miR-132-3p, miR-132-3p, miR-148b-3p, miR-148b-5p, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-320b, miR-320e, miR-323a-3p, miR-323a-5p, miR-324-5p, miR-325, miR-326, miR-328, miR-922, и те, которые специфически экспрессируются в клетках глии, включая без ограничения miR-1250, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-219-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-3065-3p, miR-3065-5p, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-32-5p, miR-338-5p и miR-657. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для CNS miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в нервной системе. Специфичные для нервной системы сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в поджелудочной железе, включают без ограничения miR-105-3p, miR-105-5p, miR-184, miR-195-3p, miR-195-5p, miR-196a-3p, miR-196a-5p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-30a-3p, miR-33a-3p, miR-33a-5p, miR-375, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-493-3p, miR-493-5p и miR-944. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для поджелудочной железы miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в поджелудочной железе. Специфичные для поджелудочной железы сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в почках, включают без ограничения miR-122-3p, miR-145-5p, miR-17-5p, miR-192-3p, miR-192-5p, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-204-3p, miR-204-5p, miR-210, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-296-3p, miR-30a-3p, miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR30c-5p, miR-324-3p, miR-335-3p, miR-335-5p, miR-363-3p, miR-363-5p и miR-562. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для почек miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в почках. Специфичные для почек сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в мышцах, включают без ограничения let-7g-3p, let-7g-5p, miR-1, miR-1286, miR-133a, miR-133b, miR-140-3p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-145-3p, miR-145-5p, miR-188-3p, miR-188-5p, miR-206, miR-208a, miR-208b, miR-25-3p и miR-25-5p. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для мыщц miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в мышце. Специфичные для мышц сайты связывания miRNA можно сконструировать отдельно или дополнительно в комбинации с сайтами связывания miRNA иммунных клеток (например, АРС) в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
МикроРНК также дифференциально экспрессируются в различных типах клеток, таких как без ограничения эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки и адипоциты.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в эндотелиальных клетках, включают без ограничения let-7b-3p, let-7b-5p, miR-100-3p, miR-100-5p, miR-101-3p, miR-101-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-1236-3p, miR-1236-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-17-5p, miR-17-3p, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-19a-3p, miR-19a-5p, miR-19b-1-5p, miR-19b-2-5p, miR-19b-3p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-217, miR-210, miR-21-3p, miR-21-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-222-3p, miR-222-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-296-5p, miR-361-3p, miR-361-5p, miR-421, miR-424-3p, miR-424-5p, miR-513a-5p, miR-92a-1-5p, miR-92a-2-5p, miR-92a-3p, miR-92b-3p и miR-92b-5p. Множество новых miRNA обнаружены в эндотелиальных клетках в анализе с помощью глубокого секвенирования (например, Voellenkle С et al., RNA, 2012, 18, 472-484, включенная в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Сайты связывания miRNA из любой специфичной для эндотелиальных клеток miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии полинуклеотида в эндотелиальных клетках.
МикроРНК, которые, как известно, экспрессируются в эпителиальных клетках, включают без ограничения let-7b-3p, let-7b-5p, miR-1246, miR-200a-3p, miR-200a-5p, miR-200b-3p, miR-200b-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-338-3p, miR-429, miR-451a, miR-451b, miR-494, miR-802 и miR-34a, miR-34b-5p, miR-34c-5p, miR-449a, miR-449b-3p, miR-449b-5p, специфичные для реснитчатых эпителиальных клеток респираторного тракта, семейство let-7, miR-133а, miR-133b, miR-126, специфичные для эпителиальных клеток легких, miR-382-3p, miR-382-5p, специфичные для эпителиальных клеток почек, и miR-762 специфичную в эпителиальных клетках роговицы. Сайты связывания miRNA из любой специфичной для эпителиальных клеток miRNA можно ввести или удалить из полинуклеотида по настоящему изобретению для регуляции экспрессии в эпителиальных клетках.
Кроме того, большая группа miRNA накапливается в эмбриональных стволовых клетках, контролируя самообновление стволовых клеток, а также развитие и/или дифференцировку различных клеточных линий, таких как нервные клетки, сердечные, гемопоэтические клетки, клетки кожи, остеогенные клетки и мышечные клетки (например, Kuppusamy KT et al., Curr. Mol Med, 2013, 13(5), 757-764; Vidigal JA and Ventura A, Semin Cancer Biol. 2012, 22(5-6), 428-436; Goff LA et al., PLoS One, 2009, 4: e7192; Morin RD et al., Genome Res, 2008, 18, 610-621; Yoo JK et al., Stem Cells Dev. 2012, 21(11), 2049-2057, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). МикроРНК, которые являются многокопийными в эмбриональных стволовых клетках, включают без ограничения let-7a-2-3p, let-a-3p, let-7a-5p, let7d-3p, let-7d-5p, miR-103a-2-3p, miR-103a-5p, miR-106b-3p, miR-106b-5p, miR-1246, miR-1275, miR-138-1-3p, miR-138-2-3p, miR-138-5p, miR-154-3p, miR-154-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-290, miR-301a-3p, miR-301a-5p, miR-302a-3p, miR-302a-5p, miR-302b-3p, miR-302b-5p, miR-302c-3p, miR-302c-5p, miR-302d-3p, miR-302d-5p, miR-302e, miR-367-3p, miR-367-5p, miR-369-3p, miR-369-5p, miR-370, miR-371, miR-373, miR-380-5p, miR-423-3p, miR-423-5p, miR-486-5p, miR-520c-3p, miR-548e, miR-548f, miR-548g-3p, miR-548g-5p, miR-548i, miR-548k, miR-5481, miR-548m, miR-548n, miR-548o-3p, miR-548o-5p, miR-548p, miR-664a-3p, miR-664a-5p, miR-664b-3p, miR-664b-5p, miR-766-3p, miR-766-5p, miR-885-3p, miR-885-5p, miR-93-3p, miR-93-5p, miR-941, miR-96-3p, miR-96-5p, miR-99b-3p и miR-99b-5p. Множество предсказанных новых miRNA обнаружены при глубоком секвенировании в эмбриональных стволовых клетках человека (например, Morin RD et al., Genome Res, 2008, 18, 610-621; Goff LA et al., PLoS One, 2009, 4: e7192; Bar M et al., Stem cells, 2008, 26, 2496-2505, содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В одном варианте осуществления сайты связывания miRNA, специфичных для эмбриональных стволовых клеток, можно включить или удалить из 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению для модулирования развития и/или дифференцировки эмбриональных стволовых клеток, для ингибирования старения стволовых клеток в условиях дегенерации (например, при дегенеративном заболевании) или для стимуляции старения и апоптоза стволовых клеток в условиях заболевания (например, рак стволовых клеток).
В качестве неограничивающего примера сайты связывания miRNA для miRNA, которые сверхэкспрессируются в определенных раковых и/или опухолевых клетках, можно удалить из 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению, восстанавливая экспрессию, подавленную сверхэкспрессированными miRNA в раковых клетках, улучшая тем самым соответствующую биологическую функцию, например, стимуляцию и/или репрессию транскрипции, остановку клеточного цикла, апоптоз и гибель клеток. Нормальные клетки и ткани, в которых экспрессия miRNA не активирована, не будут подвергаться воздействию.
МикроРНК также могут регулировать сложные биологические процессы, такие как ангиогенез (например, miR-132) (Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18: 171-176). В полинуклеотидах по настоящему изобретению сайты связывания miRNA, которые участвуют в таких процессах, можно удалить или ввести для того, чтобы адаптировать экспрессию полинуклеотидов к биологически релевантным типам клеток или соответствующим биологическим процессам. В этом контексте полинуклеотиды по настоящему изобретению определяются как ауксотрофные полинуклеотиды.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит сайт связывания miRNA, где сайт связывания miRNA содержит одну или несколько нуклеотидных последовательностей, выбранных из таблицы 4, включая одну или несколько копий какой-либо одной или нескольких последовательностей сайтов связывания miRNA. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению дополнительно содержит по меньшей мере один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять или более одинаковых или разных сайтов связывания miRNA, выбранных из таблицы 4, включая любые их комбинации. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA связывается с miR-142 или комплементарен miR-142. В некоторых вариантах осуществления miR-142 содержит SEQ ID NO: 539. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA связывается с miR-142-3p или miR-142-5p. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miR-142-3p содержит SEQ ID NO: 541. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miR- 142-5р содержит SEQ ID NO: 543. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA содержит нуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% идентична SEQ ID NO: 541 или SEQ ID NO: 543.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA вставляют в полинуклеотид по настоящему изобретению в любом положении полинуклеотида (например, в 5'-UTR и/или 3'-UTR). В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR содержит сайт связывания miRNA. В некоторых вариантах осуществления 3'-UTR содержит сайт связывания miRNA. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR и 3'- UTR содержат сайт связывания miRNA. Сайт вставки в полинуклеотид может располагаться в любом месте в полинуклеотиде, пока вставка сайта связывания miRNA в полинуклеотиде не препятствует трансляции функционального полипептида в отсутствие соответствующей miRNA; и в присутствии miRNA вставка сайта связывания miRNA в полинуклеотиде и связывание сайта связывания miRNA с соответствующей miRNA способны разрушать полинуклеотид или предотвращать трансляцию полинуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA вставляют на по меньшей мере приблизительно 30 нуклеотидов ниже стоп-кодона ORF в полинуклеотиде по настоящему изобретению, содержащем ORF. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA вставляют на по меньшей мере приблизительно 10 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 15 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 20 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 25 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 30 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 35 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 40 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 45 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 50 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 55 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 60 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 65 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 70 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 75 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 80 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 85 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 90 нуклеотидов, по меньшей мере приблизительно 95 нуклеотидов или по меньшей мере приблизительно 100 нуклеотидов ниже стоп-кодона ORF в полинуклеотиде по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления сайт связывания miRNA вставляют на расстоянии от приблизительно 10 нуклеотидов до приблизительно 100 нуклеотидов, от приблизительно 20 нуклеотидов до приблизительно 90 нуклеотидов, от приблизительно 30 нуклеотидов до приблизительно 80 нуклеотидов, от приблизительно 40 нуклеотидов до приблизительно 70 нуклеотидов, от приблизительно 50 нуклеотидов до приблизительно 60 нуклеотидов, от приблизительно 45 нуклеотидов до приблизительно 65 нуклеотидов ниже стоп-кодона ORF в полинуклеотиде по настоящему изобретению.
На регуляцию гена с помощью miRNA можно оказывать воздействие за счет последовательности, окружающей miRNA, например, без ограничения вид окружающей последовательности, тип последовательности (например, гетерологичная, гомологичная, экзогенная, эндогенная или искусственная), регуляторные элементы в окружающей последовательности и/или структурные элементы в окружающей последовательности. На miRNA можно оказывать воздействие за счет 5'-UTR и/или 3'-UTR. В качестве неограничивающего примера не являющаяся человеческой 3'-UTR может повышать регуляторный эффект последовательности miRNA в отношении экспрессии представляющего интерес полипептида по сравнению с человеческим 3'-UTR того же типа последовательности.
В одном варианте осуществления другие регуляторные элементы и/или структурные элементы 5'-UTR могут оказывать влияние на опосредованную miRNA регуляцию гена. Одним из примеров регуляторного элемента и/или структурного элемента является структурированный IRES (внутренний участок посадки рибосомы) в 5'-UTR, который необходим для связывания факторов элонгации трансляции для инициирования трансляции белка. Связывание EIF4A2 с данным вторично структурированным элементом в 5'-UTR необходимо для опосредованной miRNA экспрессии гена (Meijer НА et al., Science, 2013, 340, 82-85, включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут дополнительно включать этот структурированный 5'-UTR для усиления опосредованной микроРНК регуляции гена.
По меньшей мере один сайт связывания miRNA можно сконструировать в 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению. В данном контексте по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять, по меньшей мере десять или более сайтов связывания miRNA можно встроить в 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению. Например, от 1 до 10, от 1 до 9, от 1 до 8, от 1 до 7, от 1 до 6, от 1 до 5, от 1 до 4, от 1 до 3, 2 или 1 сайт связывания miRNA можно встроить в 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению. В одном варианте осуществления сайты связывания miRNA, включенные в полинуклеотид по настоящему изобретению, могут быть одинаковыми или могут быть разными сайтами miRNA. Комбинация разных сайтов связывания miRNA, включенных в полинуклеотид по настоящему изобретению, может включать комбинации, в которые включено более одной копии любого из разных сайтов miRNA. В другом варианте осуществления сайты связывания miRNA, включенные в полинуклеотид по настоящему изобретению, могут нацеливаться на одни и те же или разные ткани организма. В качестве неограничивающего примера, благодаря введению сайтов связывания miRNA, специфичных для ткани, типа клеток или заболевания, в 3'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению можно снизить степень экспрессии в конкретных типах клеток (например, гепатоцитах, миелоидных клетках, эндотелиальных клетках, раковых клетках и т.д.).
В одном варианте осуществления сайт связывания miRNA можно встроить рядом с 5'-концом 3'-UTR, приблизительно на середине между 5'-концом и 3'-концом 3'-UTR и/или рядом с 3'-концом 3'-UTR в полинуклеотиде по настоящему изобретению. В качестве неограничивающего примера сайт связывания miRNA можно встроить рядом с 5'-концом 3'-UTR и приблизительно на середине между 5'-концом и 3'-концом 3'-UTR. В качестве еще одного неограничивающего примера сайт связывания miRNA можно встроить рядом с 3'-концом 3'-UTR и приблизительно на посередине между 5'-концом и 3'-концом 3'-UTR. В качестве еще одного неограничивающего примера сайт связывания miRNA можно встроить рядом с 5'-концом 3'-UTR и рядом с 3'-концом 3'-UTR.
В другом варианте осуществления 3'-UTR может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 сайтов связывания miRNA. Сайты связывания miRNA могут быть комплементарны miRNA, затравочной последовательности miRNA и/или последовательностям miRNA, фланкирующим затравочную последовательность.
В одном варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению можно сконструировать с тем, чтобы он включал более одного сайта miRNA, экспрессируемого в различных тканях или различных типах клеток субъекта. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид по настоящему изобретению можно сконструировать с включением miR-192 и miR-122 для регуляции экспрессии полинуклеотида в печени и почках субъекта. В другом варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению можно сконструировать с включением более чем одного сайта miRNA для одной и той же ткани.
В некоторых вариантах осуществления экспрессию полинуклеотида по настоящему изобретению можно контролировать путем включения по меньшей мере одного сайта связывания miR в полинуклеотид и составления полинуклеотида для введения. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид по настоящему изобретению можно нацелить на ткань или клетку путем включения сайта связывания miRNA и составления полинуклеотида в липидной наночастице, содержащей ионизируемый липид, в том числе любой из липидов, описанных в данном документе.
Полинуклеотид по настоящему изобретению можно сконструировать для в большей степени целевой экспрессии в конкретных тканях, типах клеток или биологических условиях на основе профилей экспрессии miRNA в различных тканях, типах клеток или биологических условиях. Благодаря включению сайтов связывания тканеспецифичной miRNA полинуклеотид по настоящему изобретению можно разработать для оптимальной экспрессии белка в ткани или клетке или в контексте биологического состояния.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению можно разработать с включением сайтов связывания miRNA, которые либо обладают 100% идентичностью с известными последовательностями затравки miRNA, либо обладают менее чем 100% идентичностью с затравочными последовательностями miRNA. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению можно разработать с включением сайтов связывания miRNA, которые обладают по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с известными затравочными последовательностями miRNA. Затравочную последовательность miRNA можно частично подвергнуть мутации для снижения аффинности связывания miRNA и фактически вызвать снижение подавления полинуклеотида. В сущности степень спаривания или ошибочного спаривания между сайтом связывания miRNA и затравочным участком miRNA может действовать в качестве регулятора для более точной настройки способности miRNA к модулированию экспрессии белка. Кроме того, мутация в участке, не являющимся затравочным, сайта связывания miRNA может также влиять на способность miRNA к модулированию экспрессии белка.
В одном варианте осуществления последовательность miRNA можно встроить в петлю участка стебель-петля.
В другом варианте осуществления затравочную последовательность miRNA можно встроить в петлю участка стебель-петля, а сайт связывания miRNA можно встроить в 5'- или 3'-стебель участка стебель-петля.
В одном варианте осуществления элемент энхансера трансляции (TEE) можно встроить на 5'-конце стебля участка стебель-петля, а затравочный участок miRNA можно встроить в стебель участка стебель-петля. В другом варианте осуществления TEE можно встроить на 5'-конце стебля участка стебель-петля, затравочную последовательность miRNA можно встроить в стебель участка стебель-петля и сайт связывания miRNA можно встроить в 3'-конец стебля или последовательность после участка стебель-петля. Затравочная последовательность miRNA и сайт связывания miRNA могут быть для одной и той же и/или для разных последовательностей miRNA.
В одном варианте осуществления встраивание последовательности miRNA и/или последовательности TEE изменяет форму участка стебель-петля, что может повысить и/или понизить трансляцию. (смотри, например, Kedde et al., "A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3'UTR controls miR-221 and miR-22 accessibility." Nature Cell Biology. 2010, включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В одном варианте осуществления 5'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере одну последовательность miRNA. Последовательность miRNA может представлять собой без ограничения последовательность из 19 или 22 нуклеотидов и/или последовательность miRNA без затравочной области.
В одном варианте осуществления последовательность miRNA в 5'-UTR можно использовать для стабилизации полинуклеотида по настоящему изобретению, описанного в данном документе.
В другом варианте осуществления последовательность miRNA в 5'-UTR полинуклеотида по настоящему изобретению можно использовать для снижения доступности сайта инициации трансляции, такого как без ограничения стартовый кодон. См., например, Matsuda et al., PLoS One. 2010 11(5): е15057; включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, в которой использовали антисмысловые олигонуклеотиды закрытой нуклеиновой кислоты (LNA) и комплексы соединения экзона (EJC) вокруг стартового кодона (от -4 до +37, где А из кодонов AUG представляет +1), чтобы уменьшить доступность первого стартового кодона (AUG). Мацуда показал, что изменение последовательности вокруг стартового кодона с помощью LNA или EJC влияет на эффективность, длину и структурную стабильность полинуклеотида. Полинуклеотид по настоящему изобретению может содержать последовательность miRNA вместо последовательности LNA или EJC, описанной Matsuda et al., рядом с сайтом инициации трансляции, чтобы уменьшить доступность сайта инициации трансляции. Сайт инициации трансляции может располагаться до, после или внутри последовательности miRNA. В качестве неограничивающего примера сайт инициации трансляции может располагаться в последовательности miRNA, такой как затравочная последовательность или сайт связывания. В качестве еще одного неограничивающего примера сайт инициации трансляции может располагаться в последовательности miR-122, такой как затравочная последовательность или сайт связывания mir-122.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может включать по меньшей мере одну miRNA, чтобы ослабить презентацию антигена антигенпрезентирующими клетками. МикроРНК может представлять собой полную последовательность miRNA, затравочную последовательность miRNA, последовательность miRNA без затравочной последовательности или их комбинацию. В качестве неограничивающего примера miRNA, встроенная в полинуклеотид по настоящему изобретению, может быть специфичной для гемопоэтической системы. В качестве еще одного неограничивающего примера miRNA, встроенная в полинуклеотид по настоящему изобретению для ослабления презентирования антигена, представляет собой miR-142-3p.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может включать по меньшей мере одну miRNA, чтобы ослаблять экспрессию кодируемого полипептида в представляющей интерес ткани или клетке. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид по настоящему изобретению может включать по меньшей мере один сайт связывания miR-122, чтобы ослаблять экспрессию представляющего интерес кодируемого полипептида в печени. В качестве еще одного неограничивающего примера полинуклеотид по настоящему изобретению может включать по меньшей мере один сайт связывания miR-142-3p, затравочную последовательность miR-142-3p, сайт связывания miR-142-3p без затравочной последовательности, сайт связывания miR-142-5p, затравочную последовательность miR-142-5p, сайт связывания miR-142-5p без затравочной последовательности, сайт связывания miR-146, затравочную последовательность miR-146 и/или сайт связывания miR-146 без затравочной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может содержать по меньшей мере один сайт связывания miRNA в 3'-UTR, чтобы избирательно разрушать терапевтические средства на основе мРНК в иммунных клетках для подавления нежелательных иммуногенных реакций, вызванных доставкой терапевтического средства. В качестве неограничивающего примера сайт связывания miRNA может делать полинуклеотид по настоящему изобретению более нестабильным в антигенпрезентирующих клетках. Неограничивающие примеры этих miRNA включают mir-142-5p, mir-142-3p, mir-146a-5p и mir-146-3p.
В одном варианте осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит по меньшей мере одну последовательность miRNA в участке полинуклеотида, который может взаимодействовать с белком, связывающим РНК.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например РНК, например мРНК) содержит (i) оптимизированную по последовательности нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин дикого типа, и (ii) сайт связывания miRNA (например, сайт связывания miRNA, который связывается с miR-142).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению содержит модифицированную по урацилу последовательность, кодирующую полипептид релаксин, раскрытый в данном документе, и сайт связывания miRNA, раскрытый в данном документе, например, сайт связывания miRNA, который связывается с miR-142. В некоторых вариантах осуществления модифицированная по урацилу последовательность, кодирующая полипептид релаксин, содержит по меньшей мере одно химически модифицированное нуклеотидное основание, например 5-метоксиурацил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 95% одного типа нуклеотидного основания (например, урацила) в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин по настоящему изобретению, являются модифицированными нуклеотидными основаниями. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 95% урацила в модифицированной по урацилу последовательности, кодирующей полипептид релаксин, представляет собой 5-метоксиуридин. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин, раскрытый в данном документе, и сайт связывания miRNA, составляют со средством доставки, например LNP, содержащей, например, липид, имеющий формулу (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe), например, любое из соединений 1-232.
3'-UTR
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин по настоящему изобретению) дополнительно содержит 3'-UTR.
3'-UTR представляет собой часть мРНК, которая следует непосредственно за кодоном терминации трансляции и часто содержит регуляторные участки, которые посттранскрипционно влияют на экспрессию гена. Регуляторные участки в пределах 3'-UTR могут влиять на полиаденилирование, эффективность трансляции, локализацию и стабильность мРНК. В одном варианте осуществления 3'-UTR, применимая для настоящего изобретения, содержит сайт связывания для регуляторных белков или микроРНК.
Участки с 5'-кэпом
Настоящее изобретение также включает полинуклеотид, который содержит и 5'-кэп, и полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин).
5'-кэп-структура природной мРНК участвует в ядерном экспорте, повышает стабильность мРНК и связывает кэп-связывающий белок (СВР) мРНК, который отвечает за стабильность мРНК в клетке и способность к трансляции за счет ассоциации СВР с поли(А)-связывающим белком с образованием зрелых циклических видов мРНК. Кэп дополнительно способствует удалению 5'-проксимальных интронов в ходе сплайсинга мРНК.
Эндогенные молекулы мРНК могут иметь 5'-концевой кэп, образуя 5'-ррр-5'-трифосфатную связь между концевым остатком гуанозина кэпа и 5'-концевым транскрибированным смысловым нуклеотидом молекулы мРНК. Затем этот 5'-гуанилатный кэп можно метилировать с получением N7-метилгуанилатного остатка. Рибозные сахара концевых и/или предконцевых транскрибированных нуклеотидов 5'-конца мРНК также можно необязательно 2'-O-метилировать. 5'-декэпирование путем гидролиза и расщепления гуанилатной структуры кэпа может целенаправленно воздействовать на молекулу нуклеиновой кислоты, такую как молекула мРНК, для разрушения.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) включают кэп-фрагмент.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) содержат негидролизуемую кэп-структуру, предотвращающую декэпирование, за счет чего увеличивается период полужизни мРНК. Поскольку гидролиз кэп-структуры требует расщепления сложных 5'-ррр-5'-фосфодиэфирных связей, можно использовать модифицированные нуклеотиды в ходе реакции кэпирования. Например, кэпирующий фермент осповакцины (Vaccinia Capping Enzyme) от New England Biolabs (Ипсуич, Массачусетс) можно использовать с α-тиогуанозиновыми нуклеотидами в соответствии с инструкциями производителя для образования фосфоротиоатной связи в 5'-ррр-5'-кэпе. Можно использовать дополнительные нуклеотиды с модифицированным гуанозином, такие как α-метилфосфонатные и селенофосфатные нуклеотиды.
Дополнительные модификации включают без ограничиваются 2'-O-метилирование рибозных сахаров 5'-концевых и/или 5'-предконцевых нуклеотидов полинуклеотида (как упомянуто выше) по 2'-гидроксильной группе сахарного кольца. Можно использовать несколько различных 5'-кэп-структур для создания 5'-кэпа молекулы нуклеиновой кислоты, такой как полинуклеотид, который функционирует в качестве молекулы мРНК. Кэп-аналоги, которые также упоминаются в данном документе как синтетические кэп-аналоги, химические кэпы, химические кэп-аналоги или структурные или функциональные кэп-аналоги, отличаются от природных (т.е. эндогенных, дикого типа или физиологических) 5'-кэпов по своей химической структуре, сохраняя при этом функцию кэпа. Кэп-аналоги можно химически (т. Е. не ферментативно) или ферментативно синтезировать и/или соединять с полинуклеотидами по настоящему изобретению.
Например, аналог кэп-структуры с правильной ориентацией (ARCA) содержит два гуанина, соединенных 5'-5'-трифосфатной группой, причем один гуанин содержит N7-метильную группу, а также 3'-О-метильную группу (т.е. N7,3'-O-диметилгуанозин-5'-трифосфат-5'-гуанозин (m7G-3'mppp-G; который можно условно обозначить как 3' О-Ме-m7G(5')ppp(5')G). 3'-О-атом другого, немодифицированного, гуанина становится связанным с 5'-концевым нуклеотидом кэпированного полинуклеотида. N7- и 3'-О-метилированный гуанин обеспечивает концевой фрагмент кэпированного полинуклеотида.
Другим иллюстративным кэпом является mCAP, который аналогичен ARCA, но имеет 2'-O-метильную группу на гуанозине (т.е. N7,2'-O-диметилгуанозин-5'-трифосфат-5'-гуанозин, m7Gm-ppp-G).
В некоторых вариантах осуществления кэп представляет собой динуклеотидный кэп-аналог. В качестве неограничивающего примера динуклеотидный кэп-аналог можно модифицировать в разных положениях фосфата с помощью боранофосфатной группы или фосфороселеноатной группы, такой как динуклеотидные кэп-аналоги, описанные в патенте США №8519110, содержание которого включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В другом варианте осуществления кэпом является кэп-аналог, представляющий собой N7-(4-хлорфеноксиэтил)-замещенную динуклеотидную форму кэп-аналога, известного в данной области и/или описанного в данном документе. Неограничивающие примеры N7-(4-хлорфеноксиэтил)-замещенной динуклеотидной формы кэп-аналога включают N7-(4-хлорфеноксиэтил)-G(5')ppp(5')G и 
кэп-аналог (см., например, различные кэп-аналоги и способы синтеза кэп-аналогов, описанные в Kore et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry 2013 21: 4570-4574; содержание которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В другом варианте осуществления кэп-аналог по настоящему изобретению представляет собой 4-хлор/бромфеноксиэтиловый аналог.
Хотя кэп-аналоги позволяют сопутствующее кэпирование полинуклеотида или его участка, в реакции транскрипции in vitro до 20% транскриптов могут оставаться некэпированными. Это, а также структурные отличия кэп-аналога от эндогенных 5'-кэп-структур нуклеиновых кислот, полученных с помощью эндогенного клеточного механизма транскрипции, могут привести к снижению трансляционной способности и снижению стабильности в клетках.
Полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) также можно кэпировать после получения (будь то IVT или химический синтез) с использованием ферментов для получения более аутентичных 5'-кэп-структур. Используемая в данном документе фраза «более аутентичный» относится к характеристике, которая точно отражает или имитирует, структурно или функционально, эндогенную характеристику или характеристику дикого типа. То есть «более аутентичная» характеристика лучше отражает эндогенную, дикого типа, природную или физиологическую клеточную функцию и/или структуру по сравнению с синтетическими характеристиками или аналогами и т.д. предшествующего уровня техники, или превосходит соответствующую эндогенную, дикого типа, природную или физиологическую характеристику в одном или нескольких отношениях. Неограничивающими примерами более аутентичных 5'-кэп-структур по настоящему изобретению являются те, которые среди прочих обладают улучшенным связыванием кэп-связывающих белков, увеличенным периодом полужизни, сниженной чувствительностью к 5'-эндонуклеазам и/или сниженным 5'-декэпированием по сравнению с синтетическими 5'-кэп-структурами, известными в данной области (или с дикого типа, природной или физиологической 5'-кэп-структурой). Например, рекомбинантный кэпирующий фермент вируса осповакцины и рекомбинантный фермент 2'-O-метилтрансфераза могут создавать каноническую 5'-5'-трифосфатную связь между 5'-концевым нуклеотидом полинуклеотида и гуаниновым нуклеотидом кэпа, где гуанин кэпа содержит N7-метилирование, а 5'-концевой нуклеотид мРНК содержит 2'-O-метил. Такая структура названа структурой Cap1. Этот кэп приводит в результате к более высокой способности к трансляции и стабильности в клетках и уменьшению активации клеточных провоспалительных цитокинов по сравнению, например, с другими структурами 5'-кэп-аналогов, известными в данной области. Кэп-структуры включают без ограничения 7mG(5')ppp(5')N, pN2p (кэп 0), 7mG(5')ppp(5')NlmpNp (кэп 1) и 7mG(5')-ppp(5')NlmpN2mp (кэп 2).
В качестве неограничивающего примера кэпирование химерных полинуклеотидов после получения может быть более эффективным, поскольку практически 100% химерных полинуклеотидов можно кэпировать. Это противоположно ~80% случаев, когда кэп-аналог связывается с химерным полинуклеотидом в ходе реакции транскрипции in vitro.
В соответствии с настоящим изобретением 5'-концевые кэпы могут включать эндогенные кэпы или кэп-аналоги. В соответствии с настоящим изобретением 5'-концевой кэп может содержать аналог гуанина. Применимые аналоги гуанина включают без ограничения инозин, N1-метилгуанозин, 2'-фторгуанозин, 7-дезазагуанозин, 8-оксогуанозин, 2-аминогуанозин, LNA-гуанозин и 2-азидогуанозин.
Поли(А)-хвосты
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему раскрытию (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) дополнительно содержит поли(А)-хвост. В дополнительных вариантах осуществления можно встраивать концевые группы в поли(А)-хвост для стабилизации. В других вариантах осуществления поли(А)-хвост содержит дез-3'-гидроксильные хвосты.
Во время процессинга РНК длинную цепь адениновых нуклеотидов (поли(А)-хвост) можно добавлять к полинуклеотиду, такому как молекула мРНК, чтобы повысить стабильность. Непосредственно после транскрипции 3'-конец транс крипта можно расщепить с освобождением 3'-гидроксила. Затем поли(А)-полимераза добавляет цепочку адениновых нуклеотидов к РНК. В процессе, называемом полиаденилированием, добавляют поли(А)-хвост, длина которого может составлять, например, от приблизительно 80 до приблизительно 250 остатков, в том числе приблизительно 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 или 250 остатков в длину.
Поли(А)-хвосты также можно добавить после экспорта конструкции из ядра.
В соответствии с настоящим изобретением можно встраивать концевые группы в поли(А)-хвост для стабилизации. Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут включать дез-3'-гидроксильные хвосты. Они также могут включать структурные фрагменты или 2'-O-метильные модификации, как изложено в Junjie Li, et al. (Current Biology, Vol. 15, 1501-1507, August 23, 2005, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Полинуклеотиды по настоящему изобретению можно разработать для кодирования транскриптов с альтернативными структурами поли(А)-хвоста, в том числе мРНК гистонов. Согласно Norbury, «Концевое уридилирование также было выявлено в зависимых от репликации мРНК гистонов человека» Считается, что обновление этих мРНК играет важную роль в предотвращении потенциально токсического накопления гистонов после завершения или ингибирования репликации хромосомной ДНК. Эти мРНК отличаются отсутствием 3'-поли(А)-хвоста, функцию которого вместо этого принимает стабильная структура стебель-петля и ее родственный белок, связывающий стебель-петлю (SLBP); последний выполняет те же функции, что и РАВР на полиаденилированных мРНК» (Norbury, «Cytoplasmic RNA: a case of the tail wagging the dog,» Nature Reviews Molecular Cell Biology; АОР, опубликовано в сети Интернет 29 августа 2013 года; doi:10.1038/nrm3645), содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Уникальная длина поли(А)-хвоста обеспечивают определенные преимущества для полинуклеотидов по настоящему изобретению. Как правило, длина поли(А)-хвоста, если он присутствует, превышает 30 нуклеотидов в длину. В другом варианте осуществления длина поли(А)-хвоста составляет более 35 нуклеотидов (например, по меньшей мере или более приблизительно 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 250, 300, 350,400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2500 и 3000 нуклеотидов).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид или его участок включает от приблизительно 30 до приблизительно 3000 нуклеотидов (например, от 30 до 50, от 30 до 100, от 30 до 250, от 30 до 500, от 30 до 750, от 30 до 1000, от 30 до 1500, от 30 до 2000, от 30 до 2500, от 50 до 100, от 50 до 250, от 50 до 500, от 50 до 750, от 50 до 1000, от 50 до 1500, от 50 до 2000, от 50 до 2500, от 50 до 3000, от 100 до 500, от 100 до 750, от 100 до 1000, от 100 до 1500, от 100 до 2000, от 100 до 2500, от 100 до 3000, от 500 до 750, от 500 до 1000, от 500 до 1500, от 500 до 2000, от 500 до 2500, от 500 до 3000, от 1000 до 1500, от 1000 до 2000, от 1000 до 2500, от 1000 до 3000, от 1500 до 2000, от 1500 до 2500, от 1500 до 3000, от 2000 до 3000, от 2000 до 2500 и от 2500 до 3000).
В некоторых вариантах осуществления поли(А)-хвост разрабатывают относительно длины всего полинуклеотида или длины конкретного участка полинуклеотида. Эта конструкция может быть основана на длине кодирующего участка, длине конкретной характеристики или участка, или на основе длины конечного продукта, экспрессируемого с данных полинуклеотидов.
В этом контексте длина поли(А)-хвоста может быть на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100% больше, чем полинуклеотид или его характеристика. Поли(А)-хвост также можно разработать как часть полинуклеотидов, к которым он относится. В этом контексте поли(А)-хвост может составлять 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или 90% или больше от общей длины конструкции, участка конструкции или общей длины конструкции минус поли(А)-хвост. Кроме того, сконструированные сайты связывания и конъюгация полинуклеотидов с поли(А)-связывающим белком могут усилить экспрессию.
Кроме того, несколько различных полинуклеотидов можно соединить вместе с помощью РАВР (поли(А)-связывающего белка) через 3'-конец с использованием модифицированных нуклеотидов на 3'-конце поли(А)-хвоста. Эксперименты по трансфекции можно проводить в соответствующих клеточных линиях, и продуцирование белка можно анализировать с помощью ELISA через 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч и 7 дней после трансфекции.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению сконструированы с включением участка поли(А)-G-квартета. G-квартет представляет собой циклическую матрицу с водородными связями из четырех гуаниновых нуклеотидов, которая может быть образована богатыми G последовательностями как в ДНК, так и в РНК. В этом варианте осуществления G-квартет включают в конце поли(А)-хвоста. Полученный полинуклеотид анализируют на предмет стабильности, продуцирования белка и другие параметры, в том числе период полужизни, в разные моменты времени. Было обнаружено, что поли(А)-G-квартет приводит к продуцированию белка с мРНК, эквивалентному по меньшей мере 75% от наблюдаемой с использованием только поли(А)-хвоста из 120 нуклеотидов.
Участок стартового кодона
Настоящее изобретение также включает полинуклеотид, который содержит как участок стартового кодона, так и полинуклеотид, описанный в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению могут иметь участки, которые аналогичны участку стартового кодона или функционируют подобно ему.
В некоторых вариантах осуществления трансляция полинуклеотида может инициироваться на кодоне, который не является стартовым кодоном AUG. Трансляция полинуклеотида может инициироваться на альтернативном стартовом кодоне, таком как без ограничения ACG, AGG, AAG, CTG/CUG, GTG/GUG, ATA/AUA, ATT/AUU, TTG/UUG (см. Touriol et al. Biology of the Cell 95 (2003) 169-178 и Matsuda and Mauro PLoS ONE, 2010 5:11; содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В качестве неограничивающего примера трансляция полинуклеотида начинается с альтернативного стартового кодона ACG. В качестве еще одного неограничивающего примера трансляция полинуклеотида начинается с альтернативного стартового кодона CTG или CUG. В качестве еще одного неограничивающего примера трансляция полинуклеотида начинается с альтернативного стартового кодона GTG или GUG.
Известно, что нуклеотиды, фланкирующие кодон, который инициирует трансляцию, такие как без ограничения стартовый кодон или альтернативный стартовый кодон, влияют на эффективность трансляции, длину и/или структуру полинуклеотида. (См., например, Matsuda and Mauro PLoS ONE, 2010 5:11; содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Маскирование любого из нуклеотидов, фланкирующих кодон, который инициирует трансляцию, можно использовать для изменения положения инициации трансляции, эффективности трансляции, длины и/или структуры полинуклеотида.
В некоторых вариантах осуществления маскирующее средство можно использовать рядом со стартовым кодоном или альтернативным стартовым кодоном для маскировки или скрытия кодона, чтобы снизить вероятность инициации трансляции на замаскированном стартовом кодоне или альтернативном стартовом кодоне. Неограничивающие примеры маскирующих средств включают антисмысловые полинуклеотиды закрытых нуклеиновых кислот (LNA) и комплексы соединения экзона (EJC) (см., например, Matsuda and Mauro describing masking agents LNA polynucleotides and EJCs (PLoS ONE, 2010 5:11); содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В другом варианте осуществления маскирующее средство можно использовать для маскирования стартового кодона полинуклеотида, чтобы увеличить вероятность того, что трансляция будет инициирована на альтернативном стартовом кодоне. В некоторых вариантах осуществления маскирующее средство можно использовать для маскирования первого стартового кодона или альтернативного стартового кодона, чтобы увеличить вероятность того, что трансляция будет инициироваться на стартовом кодоне или альтернативном стартовом кодоне ниже замаскированного стартового кодона или альтернативного стартового кодона.
В некоторых вариантах осуществления стартовый кодон или альтернативный стартовый кодон может располагаться в абсолютном комплементе сайта связывания miR. Абсолютная комплементарность сайта связывания miR может способствовать контролю трансляцию, длины и/или структуры полинуклеотида аналогично маскирующему средству. В качестве неограничивающего примера стартовый кодон или альтернативный стартовый кодон может располагаться в середине абсолютной комплементорности сайта связывания miRNA. Стартовый кодон или альтернативный стартовый кодон может располагаться после первого нуклеотида, второго нуклеотида, третьего нуклеотида, четвертого нуклеотида, пятого нуклеотида, шестого нуклеотида, седьмого нуклеотида, восьмого нуклеотида, девятого нуклеотида, десятого нуклеотида, одиннадцатого нуклеотида, двенадцатого нуклеотида, тринадцатого нуклеотида, четырнадцатого нуклеотида, пятнадцатого нуклеотида, шестнадцатого нуклеотида, семнадцатого нуклеотида, восемнадцатого нуклеотида, девятнадцатого нуклеотида, двадцатого нуклеотида или двадцать первого нуклеотида.
В другом варианте осуществления стартовый кодон полинуклеотида можно удалить из полинуклеотидной последовательности, чтобы начать трансляцию полинуклеотида с кодона, который не является стартовым кодоном. Трансляция полинуклеотида может начинаться с кодона после удаленного стартового кодона или с расположенного ниже стартового кодона или альтернативного стартового кодона. В неограничивающем примере стартовый кодон ATG или AUG удаляют в качестве первых 3 нуклеотидов полинуклеотидной последовательности, чтобы инициировать трансляцию на расположенном ниже стартовом кодоне или альтернативном стартовом кодоне. Полинуклеотидная последовательность, в которой удалили стартовый кодон, может дополнительно содержать по меньшей мере одно маскирующее средство для расположенного ниже стартового кодона и/или альтернативных стартовых кодонов, чтобы контролировать или пытаться контролировать инициацию трансляции, длину полинуклеотида и/или структуру полинуклеотида.
Участок стоп-кодона
Настоящее изобретение также включает полинуклеотид, который содержит и участок стоп-кодона, и полинуклеотид, описанный в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению могут включать по меньшей мере два стоп-кодона перед 3'-нетранслируемым участком (UTR). Стоп-кодон может быть выбран из TGA, ТАА и TAG в случае ДНК или из UGA, UAA и UAG в случае РНК. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению включают стоп-кодон TGA в случае ДНК или стоп-кодон UGA в случае РНК, и один дополнительный стоп-кодон. В дополнительном варианте осуществления добавочный стоп-кодон может представлять собой ТАА или UAA. В другом варианте осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению включают три следующих подряд стоп-кодона, четыре стоп-кодона или больше.
Вставки и замены
Настоящее изобретение также включает полинуклеотид по настоящему изобретению, который дополнительно содержит вставки и/или замены.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR полинуклеотида можно заменить вставкой по меньшей мере одного участка и/или нити нуклеозидов из одного и того же основания. Участок и/или нить нуклеотидов может включать без ограничения по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7 или по меньшей мере 8 нуклеотидов, и эти нуклеотиды могут быть природными и/или неприродными. В качестве неограничивающего примера группа нуклеотидов может включать 5-8 аденинов, цитозинов, тиминов, нить из любого другого нуклеотида, раскрытого в данном документе, и/или их комбинаций.
В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR полинуклеотида можно заменить вставкой по меньшей мере двух участков и/или нитей нуклеотидов из двух разных оснований, таких как без ограничения аденин, цитозин, тимин, любой другой нуклеотид, раскрытый в данном документе, и/или их комбинации. Например, 5'-UTR можно заменить путем вставки 5-8 адениновых оснований с последующей вставкой 5-8 цитозиновых оснований. В другом примере 5'-UTR можно заменить путем вставки 5-8 цитозиновых оснований с последующей вставкой 5-8 адениновых оснований.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид может включать по меньшей мере одну замену и/или вставку ниже сайта инициации транскрипции, который может распознаваться РНК-полимеразой. В качестве неограничивающего примера по меньшей мере одна замена и/или вставка может осуществляться ниже сайта инициации транскрипции путем замены по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты в участке непосредственно ниже сайта инициации транскрипции (как, например, без ограничения от +1 до +6). Изменения в участке нуклеотидов непосредственно ниже сайта инициации транскрипции могут влиять на скорость инициации, повышать кажущиеся значения константы реакции нуклеотидтрифосфата (NTP) и повышать диссоциацию коротких транскриптов из транскрипционного комплекса для стабилизации первичной транскрипции (Brieba et al., Biochemistry (2002) 41: 5144-5149; включенная в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Модификация, замена и/или вставка по меньшей мере одного нуклеозида может вызвать молчащую мутацию последовательности или может вызвать мутацию в аминокислотной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид может включать замену по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12 или по меньшей мере 13 гуаниновых оснований ниже сайта инициации транскрипции.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид может включать замену по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5 или по меньшей мере 6 гуаниновых оснований в участке непосредственно ниже сайта инициации транскрипции. В качестве неограничивающего примера, если нуклеотиды в данном участке представляют собой GGGAGA, то гуаниновые основания можно заменить по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 адениновыми нуклеотидами. В другом неограничивающем примере, если нуклеотиды в данном участке представляют собой GGGAGA, то гуаниновые основания можно заменить по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 цитозиновыми основаниями. В другом неограничивающем примере, если нуклеотиды в данном участке представляют собой GGGAGA, то гуаниновые основания можно заменить по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 тиминами и/или любым из описанных в данном документе нуклеотидов.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид может включать по меньшей мере одну замену и/или вставку выше стартового кодона. Для большей ясности специалисту в данной области будет понятно, что стартовый кодон является первым кодоном участка, кодирующего белок, тогда как сайт инициации транскрипции является сайтом, на котором начинается транскрипция. Полинуклеотид может включать без ограничения по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7 или по меньшей мере 8 замен и/или вставок нуклеотидных оснований. Нуклеотидные основания можно вставить или заменить в 1, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4 или по меньшей мере 5 местоположениях выше стартового кодона. Нуклеотиды, вставленные и/или замещенные, могут быть одним и тем же основанием (например, все А, или все С, или все Т, или все G), двумя разными основаниями (например, А и С, А и Т или С и Т), тремя разными основаниями (например, А, С и Т или А, С и Т) или по меньшей мере четырьмя разными основаниями.
В качестве неограничивающего примера гуаниновое основание выше кодирующего участка в полинуклеотиде можно заменить аденином, цитозином, тимином или любым из описанных в данном документе нуклеотидов. В другом неограничивающем примере замену гуаниновых оснований в полинуклеотиде можно разработать таким образом, чтобы оставить одно гуаниновое основание в участке ниже сайта инициации транскрипции и до стартового кодона (см. Esvelt et al. Nature (2011) 472(7344):499-503; содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В качестве неограничивающего примера по меньшей мере 5 нуклеотидов можно вставить в 1 местоположение ниже сайта инициации транскрипции, но выше стартового кодона и по меньшей мере 5 нуклеотидов могут быть основаниями одного и того же типа.
Полинуклеотид, содержащий мРНК, кодирующую полипептид релаксин
В определенных вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению, например полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность мРНК, кодирующую полипептид релаксин, содержит от 5'- до 3'-конца:
(i) 5'-кэп, представленный выше;
(ii) 5'-UTR, такой как последовательности, представленные выше;
(iii) открытую рамку считывания, кодирующую полипептид релаксин, например, оптимизированную по последовательности последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид релаксин, раскрытый в данном документе;
(iv) по меньшей мере один стоп-кодон;
(v) 3'-UTR, такой как последовательности, представленные выше; и
(vi) поли(А)-хвост, представленный выше.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит сайт связывания miRNA, например, сайт связывания miRNA, который связывается с miRNA-142. В некоторых вариантах осуществления 5'-UTR содержит сайт связывания miRNA.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему раскрытию содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептидную последовательность, которая на по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 86%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 88%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или на 100% идентичную белковой последовательности белка релаксина дикого типа.
Способы получения полинуклеотидов
Настоящее изобретение также предусматривает способы получения полинуклеотида по настоящему изобретению (например, полинуклеотида, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) или комплементарной ему последовательности.
В некоторых аспектах полинуклеотид (например РНК, например мРНК), раскрытый в данном документе и кодирующий полипептид релаксин, можно разработать с использованием транскрипции in vitro. В других аспектах полинуклеотид (например РНК, например мРНК), раскрытый в данном документе и кодирующий полипептид релаксин, можно разработать путем химического синтеза с использованием синтезатора олигонуклеотидов.
В других аспектах полинуклеотид (например РНК, например мРНК), раскрытый в данном документе и кодирующий полипептид релаксин, получают с использованием клетки-хозяина. В определенных аспектах полинуклеотид (например РНК, например мРНК), раскрытый в данном документе и кодирующий полипептид релаксин, получают с помощью одного или более из комбинации IVT, химического синтеза, экспрессии в клетках-хозяевах или любых других способов, известных в данной области.
Природные нуклеозиды, неприродные нуклеозиды или их комбинации могут полностью или частично заменять природные нуклеозиды в кандидатной нуклеотидной последовательности и могут быть включены в оптимизированную по последовательности нуклеотидную последовательность (например РНК, например мРНК), кодирующую полипептид релаксин. Полученные полинуклеотиды, например, мРНК, затем можно оценивать на предмет их способность продуцировать белок и/или продуцировать в результате релаксин.
а. Транскрипция in vitro/ферментативный синтез
Полинуклеотиды по настоящему изобретению, раскрытые в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин), можно транскрибировать с использованием системы транскрипции in vitro (IVT). Как правило, система содержит транскрипционный буфер, нуклеотидтрифосфаты (NTP), ингибитор РНКазы и полимеразу. NTP можно выбрать без ограничения из описанных в данном документе, в том числе природных и неприродных (модифицированных) NTP. Полимеразу можно выбрать без ограничения из РНК-полимеразы Т7, РНК-полимеразы Т3 и мутантных полимераз, таких как без ограничения полимеразы, способные встраивать полинуклеотиды, раскрытые в данном документе. См. публикацию заявки на патент США № US 20130259923, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Любое количество РНК-полимераз или вариантов можно использовать в ходе синтеза полинуклеотидов по настоящему изобретению. РНК-полимеразы можно модифицировать путем вставки или удаления аминокислот в последовательности РНК-полимеразы. В качестве неограничивающего примера РНК-полимеразу можно модифицировать для проявления повышенной способности к встраиванию 2'-модифицированного нуклеотидтрифосфата по сравнению с немодифицированной РНК-полимеразой (см. международную публикацию WO 2008078180 и патент США №80101385, включенные в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Варианты можно получить путем эволюционирования РНК-полимеразы, оптимизации аминокислотной последовательности и/или последовательности нуклеиновой кислоты РНК-полимеразы и/или с использованием других способов, известных в данной области. В качестве неограничивающего примера можно подвергнуть эволюционированию варианты РНК-полимеразы Т7, используя систему непрерывной направленной эволюции, изложенную в Esvelt et al. (Nature 472: 499-503 (2011), включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте), где клоны РНК-полимеразы Т7 могут кодировать по меньшей мере одну мутацию, такую как без ограничения лизин в положении 93, замещенный треонином (K93T), I4M, А7Т, E63V, V64D, А65Е, D66Y, T76N, C125R, S128R, А136Т, N165S, G175R, H176L, Y178H, F182L, L196F, G198V, D208Y, E222K, S228A, Q239R, T243N, G259D, M267I, G280C, H300R, D351A, A354S, E356D, L360P, A383V, Y385C, D388Y, S397R, М401Т, N410S, K450R, Р451Т, G452V, Е484А, H523L, H524N, G542V, E565K, K577E, K577M, N601S, S684Y, L699I, K713E, N748D, Q754R, E775K, A827V, D851N или L864F. В качестве еще одного неограничивающего примера варианты РНК-полимеразы Т7 могут кодировать по меньшей мере мутацию, что описано в публикациях заявок на патент США №№20100120024 и 20070117112; включенных в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Варианты РНК-полимеразы также могут включать без ограничения варианты с заменой, консервативную аминокислотную замену, варианты с вставкой, варианты с делецией и/или ковалентные производные.
В одном аспекте полинуклеотид можно разработать так, чтобы его можно было распознать с помощью РНК-полимераз дикого типа или вариантов РНК-полимераз. При этом полинуклеотид можно модифицировать с содержанием сайтов или участков изменений последовательности относительно дикого типа или исходного химерного полинуклеотида.
Реакции синтеза полинуклеотидов или нуклеиновых кислот можно провести ферментативными способами с использованием полимераз. Полимеразы катализируют образование сложных фосфодиэфирных связей между нуклеотидами в цепи полинуклеотида или нуклеиновой кислоты. Известные в настоящее время ДНК-полимеразы можно разделить на разные семейства на основе сравнения аминокислотной последовательности и анализа кристаллической структуры. Семейство ДНК-полимеразы I (pol I) или полимеразы А, включающее фрагменты Кленова из Е. coli,, ДНК-полимеразу I Bacillus, ДНК-полимеразы Thermus aquaticus (Taq) и РНК- и ДНК-полимеразы Т7, относится к числу наиболее изученных из этих семейств. Другим большим семейством является семейство ДНК-полимеразы α (pol α) или полимеразы В, включающее все эукариотические реплицирующиеся ДНК-полимеразы и полимеразы из фагов Т4 и RB69. Несмотря на то, что они используют аналогичный каталитический механизм, эти семейства полимераз различаются субстратной специфичностью, эффективностью включения аналогов субстрата, степенью и скоростью достройки праймера, способом синтеза ДНК, экзонуклеазной активностью и чувствительностью к ингибиторам.
ДНК-полимеразы также выбирают на основе оптимальных условий реакции, которые для них требуются, таких как температура реакции, рН и концентрации матриц и праймеров. Иногда для достижения требуемого размера фрагмента ДНК и эффективности синтеза используют комбинацию из более чем одной ДНК-полимеразы. Например, Cheng и соавторы повышают рН, добавляют глицерин и диметилсульфоксид, сокращают время денатурации, увеличивают время достройки и используют вторичную термостабильную ДНК-полимеразу, которая обладает 3'-5'-экзонуклеазной активностью, для эффективной амплификации длинных мишеней из клонированных вставок и геномной ДНК человека. (Cheng et al., PNAS 91:5695-5699 (1994), содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). РНК-полимеразы из бактериофага Т3, Т7 и SP6 широко используют в получении РНК для биохимических и биофизических исследований. РНК-полимеразы, кэпирующие ферменты и поли(А) -полимеразы раскрыты в находящейся на рассмотрении международной публикации № WO 2014028429, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В одном аспекте РНК-полимераза, которую можно использовать при синтезе полинуклеотидов по настоящему изобретению, представляет собой РНК-полимеразу Syn5. (См. Zhu et al. Nucleic Acids Research 2013, doi: 10.1093/nar/gkt1193, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Недавно Zhu и соавторами была охарактеризована РНК-полимераза Syn5 из морского цианофага Syn5, в которой они также идентифицировали последовательность промотора (см. Zhu et al., Nucleic Acids Research 2013, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Zhu и соавторы обнаружили, что синтетическая РНК-полимераза Syn5 катализирует синтез РНК в более широком диапазоне температур и минерализации по сравнению с РНК-полимеразой Т7. Кроме того, было обнаружено, что требование к инициирующему нуклеотиду в промоторе для РНК-полимеразы Syn5 является менее строгим по сравнению с РНК-полимеразой Т7, что делает РНК-полимеразу Syn5 перспективной для синтеза РНК.
В одном аспекте РНК-полимеразу Syn5 можно использовать при синтезе описанных в данном документе полинуклеотидов. В качестве неограничивающего примера РНК-полимеразу Syn5 можно использовать в синтезе полинуклеотида, требующем конкретный 3'-конец.
В одном аспекте промотор Syn5 можно использовать в синтезе полинуклеотидов. В качестве неограничивающего примера промотор Syn5 может представлять собой 5'-ATTGGGCACCCGTAAGGG-3' (SEQ ID NO: 544), как описано Zhu et al. (Nucleic Acids Research 2013).
В одном аспекте РНК-полимеразу Syn5 можно использовать в синтезе полинуклеотидов, содержащих по меньшей мере одну химическую модификацию, описанную в данном документе и/или известную в данной области (см., например, включение псевдо-UTP и 5Ме-СТР, описанное в Zhu et al., Nucleic Acids Research 2013).
В одном аспекте описанные в данном документе полинуклеотиды можно синтезировать с использованием РНК-полимеразы Syn5, которая была очищена с использованием модифицированной и улучшенной процедуры очистки, описанной Zhu et al. (Nucleic Acids Research 2013).
Различные инструменты в генной инженерии основаны на ферментативной амплификации целевого гена, который действует в качестве матрицы. Для изучения последовательностей отдельных генов или конкретных участков, представляющих интерес, и других научных потребностей необходимо создать множество копий целевого гена из небольшого количества полинуклеотидов или нуклеиновых кислот. Такие способы можно применять при получении полинуклеотидов по настоящему изобретению.
Например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР), амплификацию с замещением цепей (SDA), амплификацию на основе последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA), также называемую опосредованной транскрипцией амплификацией (ТМА), и
амплификацию по типу катящегося кольца (RCA) можно использовать в получении одного или нескольких участков полинуклеотидов по настоящему изобретению.
Широко используется также сборка полинуклеотидов или нуклеиновых кислот с помощью лигазы. ДНК- или РНК-лигазы обеспечивают межмолекулярное лигирование 5'-и 3'-концов полинуклеотидных цепей путем образования сложной фосфодиэфирной связи.
b. Химический синтез
Стандартные способы можно использовать для синтеза выделенной полинуклеотидной последовательности, кодирующей выделенный полипептид, представляющий интерес, такой как полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин). Например, можно синтезировать один олигомер ДНК или РНК, содержащий кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность, кодирующую конкретный выделенный полипептид. В других аспектах несколько небольших олигонуклеотидов, кодирующих части требуемого полипептида, можно синтезировать, а затем лигировать. В некоторых аспектах отдельные олигонуклеотиды, как правило, содержат 5'- или 3'-липкие концы для комплементарной сборки.
Полинуклеотид, раскрытый в данном документе (например РНК, например мРНК), можно химически синтезировать с использованием способов химического синтеза и возможных замещений нуклеотидных оснований, известных в данной области. См., например, международные публикации №№ WO 2014093924, WO 2013052523; WO 2013039857, WO 2012135805, WO 2013151671; публикацию заявки на патент США № US 20130115272 или патенты США №№ US 8999380 или US 8710200, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
с. Очистка полинуклеотидов, кодирующих полипептид релаксин
Очистка полинуклеотидов, описанных в данном документе (например, полинуклеотида, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин), может включать без ограничения очистку полинуклеотидов, обеспечение контроля качества и контроль качества. Очистка может осуществляться с помощью известных в данной области способов, таких как без ограничения микрогранулы AGENCOURT® (Beckman Coulter Genomics, Данверс, Массачусетс), микрогранулы поли(Т), зонды захвата олиго-Т LNA™ (EXIQON® Inc., Ведбек, Дания) или способы очистки на основе HPLC, такие как, без ограничения, анионообменная HPLC с сильным ионообменником, анионообменная HPLC со слабым ионообменником, обращенно-фазовая HPLC (RP-HPLC) и HPLC с гидрофобным взаимодействием (HIC-HPLC).
Термин «очищенный» при использовании в отношении полинуклеотида, как, например «очищенный полинуклеотид», относится к полинуклеотиду, который отделен по меньшей мере от одного загрязнителя. Используемый в данном документе термин «контаминант» представляет собой любое вещество, которое делает другое непригодным, загрязненным или худшего качества. Таким образом, очищенный полинуклеотид (например, ДНК и РНК) присутствует в форме или окружении, отличающемся от того, в котором он находится в природе, или в форме, или окружении, отличающемся от того, которое существовало до того, как его подвергли способу обработки или очистки.
В некоторых вариантах осуществления очистка полинуклеотида по настоящему изобретению (например, полинуклеотида, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) удаляет примеси, что может снижать или удалять нежелательный иммунный ответ, например, снижать активность цитокинов.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин) очищают перед введением с использованием колоночной хроматографии (например, анионообменной HPLC с сильным ионообменником, анионообменной HPLC со слабым ионообменником, обращенно-фазовой HPLC (RP-HPLC) и HPLC с гидрофобным взаимодействием (HIC-HPLC) или (LCMS)).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность полипептида релаксина), очищенный с использованием колоночной хроматографии (например, анионообменной HPLC с сильным ионообменником, анионообменной HPLC со слабым ионообменником, обращенно-фазовой HPLC (RP-HPLC) и HPLC с гидрофобным взаимодействием (HIC-HPLC) или (LCMS)), показывает повышенную экспрессию кодируемого белка релаксина по сравнению с уровнем экспрессии, полученным с тем же полинуклеотидом по настоящему раскрытию, очищенным с помощью другого способа очистки.
В некоторых вариантах осуществления очищенный с использованием колоночной хроматографии (например, анионообменной HPLC с сильным ионообменником, анионообменной HPLC со слабым ионообменником, обращенно-фазовой HPLC (RP-HPLC) и HPLC с гидрофобным взаимодействием (HIC-HPLC) или (LCMS)) полинуклеотид содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин, содержащий одну или несколько точечных мутаций, известных в данной области.
В некоторых вариантах осуществления использование очищенного с помощью RP-HPLC полинуклеотида повышает уровни экспрессии белка релаксина в клетках при введении в эти клетки, например, на 10-100%, т.е. на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или по меньшей мере приблизительно 100% по сравнению с уровнями экспрессии белка релаксина в клетках до того, как очищенный с использованием RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки, или после того, как очищенный без использования RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки.
В некоторых вариантах осуществления использование очищенного с помощью RP-HPLC полинуклеотида повышает функциональные уровни экспрессии белка релаксина в клетках при введении в эти клетки, например, на 10-100%, т.е. на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или по меньшей мере приблизительно 100% по сравнению с функциональными уровнями экспрессии белка релаксина в клетках до того, как очищенный с использованием RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки, или после того, как очищенный без использования RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки.
В некоторых вариантах осуществления использование очищенного с помощью RP-HPLC полинуклеотида увеличивает выявляемую активность релаксина в клетках при введении в эти клетки, например, на 10-100%, т.е. на по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или по меньшей мере приблизительно на 100% по сравнению с уровнями активности функционального белка релаксина в клетках до того, как очищенный с использованием RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки, или после того, как очищенный без использования RP-HPLC полинуклеотид ввели в клетки.
В некоторых вариантах осуществления очищенный полинуклеотид является на по меньшей мере приблизительно 80% чистым, по меньшей мере приблизительно 85% чистым, по меньшей мере приблизительно 90% чистым, по меньшей мере приблизительно 95% чистым, по меньшей мере приблизительно 96% чистым, по меньшей мере приблизительно 97% чистым, по меньшей мере приблизительно 98% чистым, по меньшей мере приблизительно 99% чистым или приблизительно 100% чистым.
Обеспечение контроля качества и/или проверка качества можно проводить с использованием таких способов, как без ограничения гель-электрофорез, поглощение в УФ-области или аналитическая HPLC. В другом варианте осуществления полинуклеотид можно секвенировать с помощью способов, включающих без ограничения ПЦР с обратной транскриптазой.
d. Количественная оценка экспрессированных полинуклеотидов, кодирующих белок релаксин
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин), продукты их экспрессии, а также продукты распада и метаболиты можно количественно определить в соответствии со способами, известными в данной области.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению можно количественно определить в экзосомах или при получении из одной или нескольких физиологических жидкостей. Используемый в данном документе термин «физиологические жидкости» включает периферическую кровь, сыворотку крови, плазму крови, асцитную жидкость, мочу, спинномозговую жидкость (CSF), мокроту, слюну, костный мозг, синовиальную жидкость, водянистую влагу, амниотическую жидкость, ушную серу, грудное молоко, бронхоальвеолярную промывную жидкость, сперму, секрет предстательной железы, жидкость Купера или предэякуляторную жидкость, пот, фекалии, волосы, слезы, жидкость кисты, плевральную и перитонеальную жидкость, перикардиальную жидкость, лимфу, химус, хилус, желчь, интерстициальную жидкость, менструальную жидкость, гной, кожное сало, рвоту, влагалищный секрет, секрет слизистой оболочки, водянистый стул, сок поджелудочной железы, промывные жидкости из полостей синуса, бронхолегочные аспираты, жидкость из полости бластоцеля и пуповинную кровь. Альтернативно экзосомы можно извлечь из органа, выбранного из группы, состоящей из легкого, сердца, поджелудочной железы, желудка, кишечника, мочевого пузыря, почки, яичника, яичка, кожи, толстой кишки, молочной железы, предстательной железы, головного мозга, пищевода, печени и плаценты.
В способе количественного определения в экзосомах у субъекта отбирают образец объемом не более 2 мл и выделяют экзосомы с помощью эксклюзионной хроматографии, центрифугирования в градиенте плотности, дифференциального центрифугирования, ультрафильтрации через наномембраны, иммуносорбентного захвата, аффинной очистки, микрожидкостного разделения или их комбинаций. При анализе уровень или концентрация полинуклеотида могут быть уровнем экспрессии, присутствием, отсутствием, усечением или изменением введенной конструкции. Предпочтительно сопоставлять уровень с одним или несколькими клиническими фенотипами или с анализом биомаркера заболевания человека.
Анализ можно выполнить с использованием специфичных для конструкции зондов, цитометрии, qRT-PCR, ПЦР в режиме реального времени, ПЦР, проточной цитометрии, электрофореза, масс-спектрометрии или их комбинаций, в то время как экзосомы можно выделить с использованием иммуногистохимических способов, таких как твердофазный иммуноферментный анализ (например, ELISA). Экзосомы также можно выделить с помощью эксклюзионной хроматографии, центрифугирования в градиенте плотности, дифференциального центрифугирования, ультрафильтрации через наномембраны, иммуносорбентного захвата, аффинной очистки, микрожидкостного разделения или их комбинаций.
Эти способы дают исследователю возможность контролировать в реальном времени уровень оставшихся или доставленных полинуклеотидов. Это является возможным, поскольку полинуклеотиды по настоящему изобретению отличаются от эндогенных форм из-за структурных или химических модификаций.
В некоторых вариантах осуществления можно количественно определить полинуклеотид с использованием таких способов, как без ограничения спектроскопия в ультрафиолетовой и видимой областях спектра (UV/Vis). Неограничивающим примером спектрометра UV/Vis является спектрометр NANODROP® (ThermoFisher, Уолтем, Массачусетс). Количественно измеренный полинуклеотид можно подвергнуть анализу для того, чтобы определить, имеет ли полинуклеотид правильный размер, проверить, не произошло ли разрушение полинуклеотида. Разрушение полинуклеотида можно проверить такими способами, как без ограничения электрофорез в агарозном геле, способы очистки на основе HPLC, такие как без ограничения анионообменная HPLC с сильным ионообменником, анионообменная HPLC со слабым ионообменником, обращенно-фазовая HPLC (RP-HPLC) и HPLC с гидрофобным взаимодействием (HIC-HPLC), жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (LCMS), капиллярный электрофорез (СЕ) и капиллярный гель-электрофорез (CGE).
Фармацевтические композиции и составы
Настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции и составы, которые содержат любой из полинуклеотидов, описанных выше. В некоторых вариантах осуществления композиция или состав дополнительно содержит средство доставки.
В некоторых вариантах осуществления композиция или состав может содержать полинуклеотид, содержащий оптимизированную по последовательности последовательность нуклеиновой кислоты, раскрытую в данном документе, которая кодирует полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления композиция или состав может содержать полинуклеотид (например РНК, например мРНК), содержащий полинуклеотид (например, ORF), который характеризуется значительной идентичностью последовательности с оптимизированной по последовательности последовательностью нуклеиновой кислоты, раскрытой в данном документе, которая кодирует полипептид релаксин. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид дополнительно содержит сайт связывания miRNA, например сайт связывания miRNA, который связывается с miR-142 и/или miR-126.
Фармацевтические композиции или состав могут необязательно содержать одно или несколько дополнительных активных веществ, например, терапевтически и/или профилактически активные вещества. Фармацевтические композиции или состав по настоящему изобретению могут быть стерильными и/или апирогенными. Общие факторы, касающиеся составления и/или изготовления фармацевтических средств можно найти, например, в справочнике Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В некоторых вариантах осуществления композиции вводят людям, пациентам или субъектам. Для целей настоящего изобретения фраза «активный ингредиент» в целом относится к полинуклеотидам, которые подлежат доставке, как описано в данном документе.
Составы и фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или в дальнейшем разработанного в области фармакологии. В целом такие способы подготовки включают стадию связывания активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или несколькими другими дополнительными ингредиентами, а затем, если это необходимо и/или требуется, стадию разделения, формования и/или упаковки продукта в требуемую лекарственную форму с однократной стандартной дозой или с несколькими стандартными дозами.
Фармацевтическую композицию или состав в соответствии с настоящим изобретением можно получить, упаковать и/или реализовать без упаковки в виде однократной стандартной дозы и/или в виде множества единичных стандартных доз. Используемый в данном документе термин «стандартная доза» относится к отдельному количеству фармацевтической композиции, содержащему заданное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента обычно равно дозе активного ингредиента, которую будут вводить субъекту, и/или удобной доле такой дозы, такой как, например, половина или одна треть такой дозы.
Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением могут варьироваться в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, подлежащего лечению, и дополнительно зависят от пути, посредством которого должны вводить композицию.
В некоторых вариантах осуществления композиции и составы, описанные в данном документе, могут содержать по меньшей мере один полинуклеотид по настоящему изобретению. В качестве неограничивающего примера композиция или состав может содержать 1, 2, 3, 4 или 5 полинуклеотидов по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления композиции или составы, описанные в данном документе, могут содержать более одного типа полинуклеотида. В некоторых вариантах осуществления композиция или состав может содержать полинуклеотид линейной и кольцевой формы. В другом варианте осуществления композиция или состав может содержать кольцевой полинуклеотид и IVT-полинуклеотид. В еще одном варианте осуществления композиция или состав может содержать IVT-полинуклеотид, химерный полинуклеотид и кольцевой полинуклеотид.
Хотя описания фармацевтических композиций и составов, предусмотренных в данном документе, в основном направлены на фармацевтические композиции и составы, которые подходят для введения людям, специалисту должно быть понятно, что такие композиции в целом подходят для введения любому другому животному, например, животным, отличным от человека, например, млекопитающим, отличным от человека.
Настоящее изобретение предусматривает фармацевтические составы, которые содержат полинуклеотид, описанный в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин). Полинуклеотиды, описанные в данном документе, можно составлять с использованием одного или нескольких вспомогательных веществ для того, чтобы: (1) повысить стабильность; (2) повысить трансфекцию клеток; (3) обеспечить длительное или замедленное высвобождение (например, из депо-состава полинуклеотида); (4) изменить биораспределение (например, нацелить полинуклеотид на конкретные ткани или типы клеток); (5) повысить трансляцию кодируемого белка in vivo и/или (6) изменить профиль высвобождения кодируемого белка in vivo. В некоторых вариантах осуществления фармацевтический состав дополнительно содержит средство доставки (например LNP, содержащую, например, липид, имеющий формулу (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) или (IIe), например, любое из соединений 1-232).
Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, используемое в данном документе, включает без ограничения любые и все растворители, дисперсионные среды или другие жидкие носители, дисперсионные или суспензионные средства, разбавители, гранулирующие и/или диспергирующие средства, поверхностно-активные средства, изотонические средства, загустители или эмульгаторы, консерванты, связующие вещества, смазывающие вещества или масло, красители, подсластители или ароматизаторы, стабилизаторы, антиоксиданты, противомикробные или противогрибковые средства, регуляторы осмоляльности, регуляторы рН, буферы, хелатирующие средства, криопротекторы и/или объемообразующие средства, подходящие для конкретной требуемой лекарственной формы. Различные вспомогательные вещества для составления фармацевтических композиций и способы получения композиции известны в данной области (см. справочник Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A.R. Gennaro (Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Иллюстративные разбавители включают без ограничения карбонат кальция или натрия, фосфат кальция, гидрофосфат кальция, фосфат натрия, лактозу, сахарозу, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, сорбит и т.д. и/или их комбинации.
Иллюстративные гранулирующие и/или диспергирующие средства включают без ограничения крахмалы, предварительно желатинизированные крахмалы или микрокристаллический крахмал, альгиновую кислоту, гуаровую камедь, агар, поли(винилпирролидон) (повидон), сшитый поли(винилпирролидон) (кросповидон), целлюлозу, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, сшитую натрий-карбоксиметилцеллюлозу (кроскармеллозу), алюмосиликат магния (VEEGUM®), лаурилсульфат натрия и т.д. и/или их комбинации.
Иллюстративные поверхностно-активные средства и/или эмульгаторы включают без ограничения природные эмульгаторы (например, аравийскую камедь, агар, альгиновую кислоту, альгинат натрия, трагакант, карраген из водорослей chondrus, холестерин, ксантан, пектин, желатин, яичный желток, казеин, ланолин, холестерин, воск и лецитин), сложные эфиры сорбитана и жирных кислот (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат [TWEEN®80], сорбитанмонопальмитат [SPAN®40], глицерилмоноолеат, сложные эфиры полиоксиэтилена, сложные эфиры полиэтиленгликоля и жирных кислот (например, CREMOPHOR®), простые полиоксиэтиленовые эфиры (например, простой полиоксиэтилен-лауриловый эфир [BRIJ®30]), PLUORINC®F 68, POLOXAMER®188 и т.д. и/или их комбинации.
Иллюстративные связывающие средства включают без ограничения крахмал, желатин, сахара (например, сахарозу, глюкозу, декстрозу, декстрин, мелассу, лактозу, лактит, маннит), аминокислоты (например, глицин), природные и синтетические смолы (например, аравийскую камедь, альгинат натрия), этилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и т.д. и их комбинации.
Окисление представляет собой потенциальный путь разрушения мРНК, особенно для жидких составов с мРНК. Чтобы предотвратить окисление, к составам можно добавлять антиоксиданты. Иллюстративные антиоксиданты включают без ограничения альфа-токоферол, аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, бензиловый спирт, бутилиро ванный гидроксианизол, м-крезол, метионин, бутилированный гидрокситолуол, монотиоглицерин, метабисульфит натрия или калия, пропионовую кислоту, пропилгаллат, аскорбат натрия и т.д. и их комбинации.
Иллюстративные хелатирующие средства включают без ограничения этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA), моногидрат лимонной кислоты, динатрия эдетат, фумаровую кислоту, яблочную кислоту, фосфорную кислоту, эдетат натрия, винную кислоту, тринатрия эдетат и т.д. и их комбинации.
Иллюстративные противомикробные или противогрибковые средства включают без ограничения бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, бензойную кислоту, гидроксибензойную кислоту, бензоат калия или натрия, сорбат калия или натрия, пропионат натрия, сорбиновую кислоту и т.д. и их комбинации.
Иллюстративные консерванты включают без ограничения витамин А, витамин С, витамин Е, бета-каротин, лимонную кислоту, аскорбиновую кислоту, бутилированный гидроксианизол, этилендиамин, лаурилсульфат натрия (SLS), лауретсульфат натрия (SLES) и т.д. и их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления показатель рН растворов полинуклеотида поддерживают между рН 5 и рН 8 для улучшения стабильности. Иллюстративные буферы для регуляции рН могут включать без ограничения фосфат натрия, цитрат натрия, сукцинат натрия, гистидин (или гистидин-HCl), малат натрия, карбонат натрия и т.д. и/или их комбинации.
Иллюстративные смазывающие средства включают без ограничения стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, диоксид кремния, тальк, солод, гидрогенизированные растительные масла, полиэтиленгликоль, бензоат натрия, лаурилсульфат натрия или магния и т.д. и их комбинации.
Фармацевтическая композиция или состав, описанные в данном документе, могут содержать криопротектор для стабилизации полинуклеотида, описанного в данном документе, при осуществлении замораживания. Иллюстративные криопротекторы включают без ограничения маннит, сахарозу, трегалозу, лактозу, глицерин, декстрозу и т.д. и их комбинации.
Фармацевтическая композиция или состав, описанные в данном документе, могут содержать объемообразующее средство в лиофилизированных составах полинуклеотида для получения «фармацевтически изящной» массы, стабилизации лиофилизированных полинуклеотидов для длительного хранения (например, в течение 36 месяцев). Иллюстративные объемообразующие средства по настоящему изобретению могут включать без ограничения сахарозу, трегалозу, маннит, глицин, лактозу, раффинозу и их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция или состав дополнительно содержит средство доставки. Средство доставки по настоящему раскрытию может включать без ограничения липосомы, липидные наночастицы, липидоиды, полимеры, липоплексы, микровезикулы, экзосомы, пептиды, белки, трансфицированные полинуклеотидами клетки, гиалуронидазу, имитаторы наночастиц, нанотрубки, конъюгаты и их комбинации.
Средства доставки
В настоящем изобретении предусмотрены фармацевтические композиции с преимущественными свойствами. В частности, настоящая заявка предусматривает фармацевтические композиции, содержащие полинуклеотид, который содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин, и липидное соединение, описанное в данном документе.
Ускоренный клиренс крови (ABC)
Настоящее изобретение предусматривает соединения, композиции и способы их применения для снижения влияния АВС на повторно вводимое активное средство, такое как биологически активное средство. Совершенно ясно, что снижение или полное устранение влияния АВС на вводимое активное средство эффективно повышает его период полужизни и следовательно его эффективность.
В некоторых вариантах осуществления термин «снижение АВС» относится к любому снижению АВС по сравнению с положительным эталоном LNP, индуцирующим контрольный АВС, таким как LNP MC3. LNP, индуцирующие АВС, вызывают снижение циркулирующих уровней активного средства при втором или последующем введениях в течение заданного временного интервала. Таким образом, снижение АВС означает уменьшение выведения циркулирующего средства после второй или последующей дозы средства по сравнению со стандартной LNP. Снижение может составлять, например, по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 100%. В некоторых вариантах осуществления снижение составляет 10-100%, 10-50%, 20-100%, 20-50%, 30-100%, 30-50%, 40%-100%, 40-80%, 50-90% или 50-100%. Альтернативно снижение АВС можно охарактеризовать как по меньшей мере выявляемый уровень циркулирующего средства после второго или последующего введений, или по меньшей мере 2-кратное, 3-кратное, 4-кратное, 5-кратное повышение циркулирующего средства по сравнению с циркулирующим средством после введения стандартной LNP. В некоторых вариантах осуществления снижение является 2-100-кратным, 2-50-кратным, 3-100-кратным, 3-50-кратным, 3-20-кратным, 4-100-кратным, 4-50-кратным, 4-40-кратным, 4-30-кратным, 4-25-кратным, 4-20-кратным, 4-15-кратным, 4-10-кратным, 4-5-кратным, 5-100-кратным, 5-50-кратным, 5-40-кратным, 5-30-кратным, 5-25-кратным, 5-20-кратным, 5-15-кратным, 5-10-кратным, 6-100-кратным, 6-50-кратным, 6-40-кратным, 6-30-кратным, 6-25-кратным, 6-20-кратным, 6-15-кратным, 6-10-кратным, 8-100-кратным, 8-50-кратным, 8-40-кратным, 8-30-кратным, 8-25-кратным, 8-20-кратным, 8-15-кратным, 8-10-кратным, 10-100-кратным, 10-50-кратным, 10-40-кратным, 10-30-кратным, 10-25-кратным, 10-20-кратным, 10-15-кратным, 20-100-кратным, 20-50-кратным, 20-40-кратным, 20-30-кратным или 20-25-кратным.
Настоящее изобретение предусматривает липидсодержащие соединения и композиции, которые менее чувствительны к клиренсу, и следовательно имеют более длительный период полужизни in vivo. Это, в частности, относится к композициям, которые предназначены для повторного, в том числе длительного введения, и еще более конкретно, если такое повторное введение длится в течение нескольких дней или недель.
Примечательно то, что эти композиции менее чувствительны или вообще преодолевают наблюдаемый феномен ускоренного клиренса крови (АВС). АВС представляет собой феномен, при котором определенные экзогенно вводимые средства быстро выводятся из крови при втором и последующем введениях. Этот феномен частично выявлен для различных липидсодержащих композиций, включая без ограничения липидированные средства, липосомы или другие средства для доставки на основе липидов и инкапсулированные в липиды средства. До сих пор основа АВС была плохо изучена и в некоторых случаях объяснялась гуморальным иммунным ответом, и соответственно стратегии ограничения ее воздействия in vivo, в частности в клинических условиях, оставались недостижимыми.
В данном раскрытии предусмотрены соединения и композиции, которые менее чувствительны или совсем нечувствительны к АВС. В некоторых важных аспектах такие соединения и композиции представляют собой липидсодержащие соединения или композиции. Липидсодержащие соединения или композиции по настоящему изобретению неожиданно не подвергаются действию АВС при втором и последующем введениях in vivo. Эта устойчивость к АВС делает данные соединения и композиции особенно подходящими для повторного применения in vivo, в том числе для повторного применения в течение коротких промежутков времени, в том числе дней или 1-2 недель. Эта повышенная стабильность и/или период полужизни частично обусловлены неспособностью данных композиций активировать В1а- и/или B1b-клетки и/или обычные В-клетки, pDC и/или тромбоциты.
Следовательно, настоящее изобретение содержит разъяснение механизма, лежащего в основе ускоренного клиренса крови (АВС). В соответствии с настоящим изобретением и изобретениями, предусмотренными в данном документе, было обнаружено, что феномен АВС, по меньшей мере по отношению к липидам и липидным наночастицам, опосредован по меньшей мере частично врожденным иммунным ответом с вовлечением В1а- и/или B1b-клеток, pDC и/или тромбоцитов. B1a-клетки обычно ответственны за секрецию естественного антитела в форме циркулирующего IgM. Этот IgM является полиреактивным, то есть он способен связываться с различными антигенами, хотя и с относительно низкой аффинностью к каждому из них.
В соответствии с настоящим изобретением было выявлено, что некоторые липидированные средства или липидсодержащие составы, такие как липидные наночастицы, вводимые in vivo, запускают АВС и подвергаются его воздействию. В соответствии с настоящим изобретением было выявлено, что после введения первой дозы LNP одна или несколько клеток, принимающих участие в формировании врожденного иммунного ответа (называемые в данном документе сенсорами), связывают такое средство, активируются, а затем инициируют каскад иммунных факторов (называемых в данном документе эффекторами), которые стимулируют АВС и токсичность. Например, В1а- и B1b-клеток могут связываться с LNP, активироваться (отдельно или в присутствии других сенсоров, таких как pDC, и/или эффекторов, таких как IL6) и секретировать природный IgM, который связывается с LNP. Уже существующий природный IgM у субъекта также может распознавать и связываться с LNP, запуская тем самым связывание комплемента. После введения первой дозы продуцирование природного IgM начинается в течение 1-2 часов после введения LNP. Как правило, приблизительно через 2-3 недели природный IgM выводится из системы в результате естественного периода полужизни IgM. Природный IgG продуцируется примерно через 96 часов после введения LNP. Средство при введении в наивных условиях может проявлять свои биологические эффекты относительно свободно от природного IgM, продуцируемого после активации B1a-клеток или B1b-клеток, или природного IgG. Природный IgM и природный IgG являются неспецифичными и поэтому отличаются от IgM к PEG и IgG к PEG.
Хотя заявитель не связан механизмом, предполагается, что LNP запускают АВС и/или токсичность с помощью следующих механизмов. Считается, что если LNP вводят субъекту, то эта LNP быстро переносится кровью в селезенку. LNP могут встречаться с иммунными клетками в крови и/или селезенке. Быстрый врожденный иммунный ответ запускается в ответ на присутствие LNP в крови и/или селезенке. Заявитель показал в данном документе, что в течение нескольких часов после введения LNP несколько иммунных сенсоров реагировали на присутствие LNP. Эти сенсоры включают без ограничения иммунные клетки, принимающие участвующие в формировании иммунного ответа, такие как В-клетки, pDC и тромбоциты. Сенсоры могут присутствовать в селезенке, например, в краевой зоне селезенки, и/или в крови. LNP может физически взаимодействовать с одним или несколькими сенсорами, которые могут взаимодействовать с другими сенсорами. В таком случае LNP непосредственно или опосредованно взаимодействует с сенсорами. Сенсоры могут взаимодействовать непосредственно друг с другом в ответ на распознавание LNP. Например, многие сенсоры расположены в селезенке и они могут легко взаимодействовать друг с другом. Альтернативно один или несколько сенсоров могут взаимодействовать с LNP в крови и активироваться. Затем активированный сенсор может взаимодействовать с другими сенсорами непосредственно или опосредованно (например, путем стимуляции или продуцирования посредника, такого как цитокин, например IL6).
В некоторых вариантах осуществления LNP может взаимодействовать непосредственно с каждым из следующих сенсоров: pDC, B1a-клетки, B1b-клетки и тромбоциты, и активировать их. Затем эти клетки могут взаимодействовать непосредственно или опосредованно друг с другом, чтобы инициировать продуцирование эффекторов, которые в конечном итоге приводят к АВС и/или токсичности, связанной с повторным введением доз LNP. Например, заявитель показал, что введение LNP приводит к активации pDC, агрегации и активации тромбоцитов и активации В-клеток. В ответ на LNP тромбоциты также агрегируют и активируются и агрегируют с В-клетками. pDC-клетки активируются. Было обнаружено, что LNP относительно быстро взаимодействует с поверхностью тромбоцитов и В-клеток. Блокирование активации какого-либо одного или комбинации этих сенсоров в ответ на LNP полезно для ослабления иммунного ответа, который обычно возникает. Это ослабление иммунного ответа приводит к предотвращению возникновения АВС и/или токсичности.
Как только сенсоры активируются, вырабатываются эффекторы. Используемый в данном документе термин «эффектор» представляет собой иммунную молекулу, продуцируемую иммунной клеткой, такой как В-клетка. Эффекторы включают без ограничения иммуноглобулин, такой как природный IgM и природный IgG, и цитокины, такие как IL6. В1а- и B1b-клетки стимулируют продуцирование природных IgM в течение 2-6 часов после введения LNP. Природный IgG можно выявить в течение 96 часов. Уровни IL6 повышаются в течение нескольких часов. Природные IgM и IgG циркулируют в организме в течение от нескольких дней до нескольких недель. В течение этого периода времени циркулирующие эффекторы могут взаимодействовать с недавно введенными LNP, запуская клиренс данных LNP из организма. Например, эффектор может распознавать и связываться с LNP. Fc-участок эффектора может быть распознан макрофагом и инициирует захват им выставленного LNP. Затем макрофаг транспортируется в селезенку. Продуцирование эффекторов иммунными сенсорами является временным ответом, который коррелирует со сроками, наблюдаемыми для АВС.
Если вводимая доза является второй или последующей вводимой дозой и если такую вторую или последующую дозу вводят до того, как ранее индуцированный природный IgM и/или IgG выводится из организма (например, до 2-3 серонегативных периодов), тогда на такую вторую или последующую дозы целенаправленно воздействует циркулирующий природный IgM и/или естественные IgG или Fc, которые запускают альтернативный путь активации комплемента и сами быстро выводятся. Если LNP вводят после того, как эффекторы выведены из организма или их количество снижено, то АВС не фиксируют.
Таким образом, в соответствии с аспектами настоящего изобретения является полезным ингибирование взаимодействия между LNP и одним или несколькими сенсорами, ингибирование активации одного или нескольких сенсоров с помощью LNP (прямо или косвенно), ингибирование продуцирования одного или нескольких эффекторов и/или ингибирование активности одного или нескольких эффекторов. В некоторых вариантах осуществления LNP разрабатывают для ограничения или блокирования взаимодействия LNP с сенсором. Например, LNP может иметь измененный PC и/или PEG для предупреждения взаимодействий с сенсорами. Альтернативно или дополнительно средство, которое ингибирует иммунные ответы, индуцируемые LNP, можно использовать для достижения какого-либо одного или нескольких из данных эффектов.
Также было определено, что обычные В-клетки тоже принимают участие в АВС. В частности, при первом введении средства обычные В-клетки, обозначенные в данном документе как CD19(+), связываются со средством и противодействуют ему. В отличие от В1а- и B1b-клеток обычные В-клетки способны сперва формировать ответ с участием IgM (начинающийся примерно через 96 часов после введения LNP), а затем ответ с участием IgG (начинающийся примерно через 14 дней после введения LNP), сопровождающийся вторичным иммунным ответом. Таким образом, обычные В-клетки противодействуют введенному средству и обеспечивают ответ с участием IgM (а в конечном итоге IgG), который опосредует АВС. IgM и IgG обычно представляют собой IgM к PEG и IgG к PEG.
Предполагается, что в некоторых случаях значительная часть ответа АВС опосредуется B1a-клетками и B1a-опосредованными иммунными ответами. Кроме того, предполагается, что в некоторых случаях ответ в виде АВС опосредуется и IgM, и IgG, причем такие эффекты опосредуются как обычные В-клетками, так и B1a-клетками. В других случаях ответ в виде АВС опосредуется молекулами природного IgM, некоторые из которых способны связываться с природным IgM, который может продуцироваться активированными B1a-клетками. Природные IgM могут связываться с одним или несколькими компонентами LNP, например, связывание с фосфолипидным компонентом LNP (такое как связывание с PC-фрагментом фосфолипида) и/или связывание с PEG-липидным компонентом LNP (такое как связывание с PEG-DMG, в частности, связывание с PEG-фрагментом PEG-DMG). Поскольку В1а экспрессирует CD36, для которого фосфатидилхолин является лигандом, предполагается, что рецептор CD36 может опосредовать активацию B1a-клеток и таким образом продуцирование природного IgM. В других случаях ответ АВС опосредуется в основном обычными В-клетками.
В соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что феномен АВС можно снизить или устранить по меньшей мере частично за счет применения соединений и композиций (таких как средства, средства для доставки и составы), которые не активируют B1a-клетки. Соединения и композиции, которые не активируют B1a-клетки, могут упоминаться в данном документе как индифферентные для В1а соединения и композиции. Кроме того, в соответствии с настоящим изобретением было обнаружено, что феномен АВС можно снизить или устранить по меньшей мере частично за счет применения соединений и композиций, которые не активируют обычные В-клетки. Соединения и композиции, которые не активируют обычные В-клетки, в некоторых вариантах осуществления в данном документе могут упоминаться как индифферентные для CD19 соединения и композиции. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, представленных в данном документе, соединения и композиции не активируют B1a-клетки и не активируют обычные В-клетки. Соединения и композиции, которые не активируют B1a-клетки и обычные В-клетки, в некоторых вариантах осуществления в данном документе могут упоминаться как индифферентные для B1a/CD19 соединения и композиции.
Эти лежащие в основе механизмы до сих пор непонятны, и роль В1а- и B1b-клеток и их взаимодействие с обычными В-клетками в данном феномене также не были оценены.
Соответственно, настоящее изобретение предусматривает соединения и композиции, которые не стимулируют АВС. Их можно дополнительно охарактеризовать как неспособные активировать В1а- и/или B1b-клетки, тромбоциты и/или pDC и, необязательно, также обычные В-клетки. Эти соединения (например, средства, в том числе биологически активные средства, такие как профилактические средства, терапевтические средства и диагностические средства, средства для доставки, включая липосомы, липидные наночастицы и другие инкапсулирующие структуры на основе липидов и т.д.) и композиции (например, составы и т.д.) особенно необходимы для применений, требующих повторного введения, и, в частности, повторных введений, которые осуществляют в течение коротких периодов времени (например, в течение 1-2 недель). Это имеет место в том случае, например, если средство представляет собой терапевтическое средство на основе нуклеиновой кислоты, которое предоставляется субъекту на регулярной основе с короткими интервалами. Заключения, представленные в данном документе, можно применить к этим и другим средствам, которые вводятся аналогичным образом и/или подвергаются воздействию АВС.
Особый интерес представляют липидсодержащие соединения, липидсодержащие частицы и липидсодержащие композиции, поскольку известно, что они чувствительны к АВС. Такие липидсодержащие соединения, частицы и композиции широко используются в качестве биологически активных средств или в качестве средств для доставки таких средств. Таким образом, способность улучшать эффективность таких средств или путем снижения воздействия АВС на само средство, или на его средство для доставки, предпочтительно для широкого ассортимента активных средств.
Также в данном документе предусмотрены композиции, которые не стимулируют или не усиливают ответ острой фазы (ARP), ассоциированный с введением повторных доз одного или нескольких биологически активных средств.
Композиция в некоторых случаях может не связываться с IgM, в том числе без ограничения с природным IgM.
Композиция в некоторых случаях может не связываться с белком острой фазы, таким как без ограничения С-реактивный белок.
Композиция в некоторых случаях может не запускать опосредованный CD5(+) иммунный ответ. Используемый в данном документе опосредованный CD5(+) иммунный ответ представляет собой иммунный ответ, который опосредуется В1а- и/или B1b-клетками. Такой ответ может включать ответ в виде АВС, ответ в виде острой фазы, индуцирование природного IgM и/или IgG и им подобные.
Композиция в некоторых случаях может не запускать опосредованный CD19(+) иммунный ответ. Используемый в данном документе опосредованный CD19(+) иммунный ответ представляет собой иммунный ответ, который опосредуется обычными CD19(+), CD5(-) В-клетками. Такой ответ может включать индуцирование IgM, индуцирование IgG, индуцирование В-клеток памяти, ответ в виде АВС, ответ в виде продуцирования антител к лекарственному средству (ADA), включающий ответ на белки, где белок может быть инкапсулирован в LNP, и им подобные.
B1a-клетки представляют собой подгруппу В-клеток, принимающих участие во врожденном иммунитете. Эти клетки являются источником циркулирующего IgM, называемого естественным антителом или естественным сывороточным антителом. Природные антитела IgM характеризуются как обладающие слабой аффинностью к ряду антигенов, и поэтому они называются «полиспецифическими» или «полиреактивными», что указывает на их способность связываться с более чем одним антигеном. B1a-клетки не способны продуцировать IgG. Кроме того, они не развиваются в клетки памяти и таким образом не обеспечивают адаптивный иммунный ответ. Однако они способны секретировать IgM при активации. Секретируемый IgM, как правило, выводится в течение приблизительно 2-3 недель, и в этот момент иммунная система оказывается относительно наивной в отношении ранее введенного антигена. Если такой же антиген презентируется после этого периода времени (например, приблизительно через 3 недели после первичного презентирования), тогда антиген быстро не выводится. Однако существенно то, что если антиген презентируется в течение этого периода времени (например, в течение 2 недель, в том числе в течение 1 недели или в течение нескольких дней), тогда антиген выводится быстро. Эта задержка между последовательными дозами привела к тому, что определенные липидсодержащие терапевтические или диагностические средства являются неподходящими для применения.
У людей B1a-клетки представляют собой CD19(+), CD20(+), CD27(+), CD43(+), CD70(-) и CD5(+). У мышей B1a-клетки представляют собой CD19(+), CD5(+) и CD45 изоформу В-клеток В220(+). Именно экспрессия CD5, как правило, отличает B1a-клетки от других обычных В-клеток. B1a-клетки могут экспрессировать высокие уровни CD5 и на основе этого их можно отличить от других В-1-клеток, таких как В-1b-клетки, которые экспрессируют низкие или не поддающиеся выявлению уровни CD5. CD5 представляет собой пан-Т-клеточный поверхностный гликопротеин. B1a-клетки также экспрессируют CD36, также известный как транслоказа жирных кислот.CD36 является представителем семейства скавенджер-рецепторов класса В. CD36 может связывать многие лиганды, в том числе окисленные липопротеины низкой плотности, нативные липопротеины, окисленные фосфолипиды и длинноцепочечные жирные кислоты.
B1b-клетки представляют собой другую подгруппу В-клеток, принимающих участие во врожденном иммунитете. Эти клетки являются еще одним источником циркулирующего природного IgM. Несколько антигенов, в том числе PS, способны индуцировать независимый от Т-клеток иммунитет за счет активации B1b. CD27 обычно активируется на B1b-клетках в ответ на активацию антигеном. Подобно B1a-клеткам, B1b-клетки обычно расположены в определенных местах в организме, в таких как селезенка и брюшная полость, и присутствуют в крови в очень низком количестве. Секретируемый B1b природный IgM, как правило, выводится в течение приблизительно 2-3 недель, и в этот момент иммунная система оказывается относительно наивной для ранее введенного антигена. Если такой же антиген презентируется после этого периода времени (например, приблизительно через 3 недели после первичного презентирования), тогда антиген быстро не выводится. Однако существенно то, что если антиген презентируется в течение этого периода времени (например, в течение 2 недель, в том числе в течение 1 недели или в течение нескольких дней), тогда антиген выводится быстро. Эта задержка между последовательными дозами привела к тому, что определенные липидсодержащие терапевтические или диагностические средства являются неподходящими для применения.
В некоторых вариантах осуществления желательно блокировать активацию В1а- и/или B1b-клеток. Одна из стратегий блокирования активации В1а- и/или B1b-клеток включает определение того, какие компоненты липидной наночастицы стимулируют активацию В-клеток, и нейтрализацию этих компонентов. Было выявлено в данном документе, что по меньшей мере PEG и фосфатидилхолин (PC) обеспечивают взаимодействие В1а- и B1b-клеток с другими клетками и/или активацию. PEG может играть роль в стимуляции агрегации В1-клеток и тромбоцитов, что может привести к активации. PC (вспомогательный липид в LNP) также участвует в активации В1-клеток, вероятно, путем взаимодействия с рецептором CD36 на поверхности В-клеток. Разработали и провели проверку ряда частиц с PEG-липидными альтернативами, липидами без PEG и/или с заменой PC (например, олеиновой кислотой или ее аналогами). Авторы установили, что замена одного или нескольких из этих компонентов в LNP, которая в противном случае стимулировала бы АВС при повторном введении, является целесообразной для предотвращения АВС за счет снижения продуцирования природного IgM и/или активации В-клеток. Таким образом, настоящее изобретение охватывает LNP, которые характеризуются сниженным АВС за счет конструкции, которая устраняет включение инициирующих В-клетки факторов.
Еще одна стратегия блокирования активации В1а- и/или B1b-клеток включает использование средства, которое ингибирует иммунные ответы, вызванные LNP. Эти типы средств обсуждаются более подробно ниже. В некоторых вариантах осуществления эти средства блокируют взаимодействие между В1а-/B1b-клетками и LNP, или тромбоцитами, или pDC. Например, средство может представлять собой антитело или другое связывающее средство, которое физически блокирует взаимодействие. Примером этого является антитело, которое связывается с CD36 или CD6. Средство также может представлять собой соединение, которое предотвращает или отключает в B1a-/B1b-клетке передачу сигнала сразу после активации или до активации. Например, можно блокировать один или несколько компонентов в сигнальном каскаде B1a/B1b, который является результатом взаимодействия В-клеток с LNP или другими иммунными клетками. В других вариантах осуществления средство может воздействовать на один или несколько эффекторов, продуцируемых В1а-/B1b-клетками после активации. Эти эффекторы включают, к примеру, природный IgM и цитокины.
В соответствии с аспектами настоящего изобретения показано, что при блокировании активации клеток pDC активация В-клеток в ответ на LNP снижается. Таким образом, чтобы избежать АВС и/или токсичности, может быть целесообразным предотвратить активацию pDC. Подобно описанным выше стратегиям, активацию клеток pDC можно блокировать средствами, которые вмешиваются во взаимодействие между pDC и LNP и/или В-клетками/тромбоцитами. Альтернативно средства, которые воздействуют на pDC для блокирования ее способности к активации или на ее эффекторы, можно использовать вместе с LNP, чтобы избежать АВС.
Тромбоциты также могут играть важную роль в АВС и токсичности. Очень быстро после введения первой дозы LNP субъекту тромбоциты связываются с LNP, агрегируют и активируются. В некоторых вариантах осуществления требуется блокировать агрегацию и/или активацию тромбоцитов. Одна из стратегий блокирования агрегации и/или активации тромбоцитов включает определение того, какие компоненты липидной наночастицы стимулируют агрегацию и/или активацию тромбоцитов, и нейтрализацию этих компонентов. Было выявлено в данном документе, что по меньшей мере PEG обеспечивает агрегацию, активацию и/или взаимодействие тромбоцитов с другими клетками. Спроектировали и провели проверку ряда частиц с PEG-липидными альтернативными вариантами и без PEG. Заявитель установил, что замена одного или нескольких из этих компонентов в LNP, которая в противном случае стимулировала бы АВС при повторном введении, целесообразна для предотвращения АВС за счет снижения продуцирования природного IgM и/или агрегации тромбоцитов. Таким образом, настоящее изобретение охватывает LNP, которые характеризуются сниженным АВС за счет конструкции, которая устраняет включение инициирующих тромбоциты факторов. Альтернативно средства, которые воздействуют на тромбоциты для блокирования их способности к активации или на их эффекторы, можно использовать вместе с LNP, чтобы избежать АВС.
Измерение активности ABC и связанной с ним активности
Различные соединения и композиции, предусмотренные в данном документе, включающие LNP, не стимулируют активность АВС при введении in vivo. Эти LNP можно охарактеризовать и/или идентифицировать с помощью любого из ряда анализов, таких как без ограничения описанные ниже, а также любого из анализов, раскрытых в разделе Примеры, который включает в себя подраздел способов Примеров.
В некоторых вариантах осуществления способы включают введение LNP без выработки иммунного ответа, который стимулирует АВС. Иммунный ответ, который стимулирует АВС, включает активацию одного или нескольких сенсоров, таких как В1-клетки, pDC или тромбоциты, и одного или нескольких эффекторов, таких как природный IgM, природный IgG или цитокины, такие как IL6. Таким образом, введение LNP без выработки иммунного ответа, который стимулирует АВС, как минимум включает введение LNP без существенной активации одного или нескольких сенсоров и существенного продуцирования одного или нескольких эффекторов. Выражение существенное, используемое в данном контексте, относится к количеству, которое приведет к физиологическому последствию ускоренного клиренса крови для всей или части второй дозы по сравнению с уровнем клиренса крови, ожидаемого для второй дозы LNP, запускающей АВС. Например, иммунный ответ должен быть ослаблен таким образом, что АВС, наблюдаемый после второй дозы, будет ниже, чем ожидалось для LNP, запускающей АВС.
Анализ активации В1а или B1b
Определенные композиции, предусмотренные в данном изобретении, не активируют В-клетки, такие как В1а- или B1b-клетки (CD19+ CD5+) и/или обычные В-клетки (CD19+ CD5-). Активацию B1a-клеток, B1b-клеток или обычных В-клеток можно определить с помощью ряда способов, некоторые из которых приведены ниже. Популяцию В-клеток можно представить в виде фракционированных популяций В-клеток, или нефракционированных популяций спленоцитов, или мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС). В последнем случае популяцию клеток можно инкубировать с выбранной LNP в течение определенного периода времени, а затем собрать для дальнейшего анализа. Альтернативно супернатант можно собрать и проанализировать.
Усиление экспрессии на клеточной поверхности маркера активации
Активацию B1a-клеток, B1b-клеток или обычных В-клеток можно продемонстрировать как повышенную экспрессию маркеров активации В-клеток, включая поздние маркеры активации, такие как CD86. В иллюстративном неограничивающем анализе нефракционированные В-клетки представлены в виде популяции спленоцитов или в виде популяции РВМС, инкубируют с выбранной LNP в течение определенного периода времени, а затем окрашивают на стандартный маркер В-клеток, такого как CD19, и на маркер активации, такой как CD86, и анализируют с использованием, например, проточной цитометрии. Подходящий отрицательный контроль включает инкубацию одной и той же популяции со средой, а затем проведение тех же стадий окрашивания и визуализации. Повышение экспрессии CD86 в тестируемой популяции по сравнению с отрицательным контролем указывает на активацию В-клеток.
Высвобождение провоспалительных цитокинов
Активацию В-клеток также можно оценить с помощью анализа высвобождения цитокинов. Например, активацию можно оценить по продуцированию и/или секреции цитокинов, таких как IL-6 и/или TNF-альфа, при воздействии представляющих интерес LNP.
Такие анализы можно проводить с использованием обычных анализов секреции цитокинов, хорошо известных в данной области. Повышение секреции цитокинов указывает на активацию В-клеток.
Связывание/ассоциация LNP с В-клетками и/или захват В-клетками
Ассоциацию или связывание LNP с В-клетками также можно использовать для оценки представляющей интерес LNP и для дополнительной характеристики такой LNP. Ассоциацию/связывание и/или захват/интернализацию можно оценить с использованием меченой с возможностью выявления, такой как флуоресцентно меченая, LNP, и отслеживанием местоположения такой LNP в В-клетках или на них после различных периодов инкубации.
Настоящее изобретение дополнительно предполагает, что композиции, предусмотренные в данном документе, могут быть способны уклоняться от распознавания или выявления и необязательно связывания с медиаторами нисходящего сигнального пути АВС, такими как циркулирующие IgM и/или медиаторы ответа острой фазы, такие как белки острой фазы (например, С-реактивный белок (CRP).
Способы применения для снижения АВС
Также в данном документе предусмотрены способы доставки LNP, которые могут инкапсулировать средство, как, например терапевтическое средство, субъекту без стимуляции АВС.
В некоторых вариантах осуществления способ предусматривает введение любой из описанных в данном документе LNP, которые не стимулируют АВС, например, не индуцируют продуцирование природного IgM, связывающегося с LNP, не активируют B1a-клетки и/или B1b-клетки. Используемая в данном документе LNP, которая «не стимулирует АВС», относится к LNP, которая не индуцирует иммунные ответы, приводящие к существенному АВС, или индуцирует фактически низкий уровень иммунных ответов, который является недостаточным для того, чтобы вызвать существенный АВС. LNP, которая не индуцирует продуцирование природных IgM, связывающихся с LNP, относится к LNP, которые не индуцируют связывание природного IgM с LNP или индуцируют фактически низкий уровень молекул природного IgM, который является недостаточным для того, чтобы вызвать существенный АВС. LNP, которая не активирует В1а- и/или B1b-клетки, относится к LNP, которые не индуцируют ответ В1а- и/или B1b-клеток с продуцированном природного IgM, связывающегося с LNP, или индуцируют фактически низкий уровень ответов В1а и/или B1b, который является недостаточным для того, чтобы вызвать существенный АВС.
В некоторых вариантах осуществления выражения «не активируют» и «не индуцируют» продуцирование представляют собой относительное снижение по сравнению с эталонным значением или состоянием. В некоторых вариантах осуществления эталонное значение или состояние представляет собой степень активации или индукции продуцирования молекулы, такой как IgM, стандартной LNP, такой как LNP MC3. В некоторых вариантах осуществления относительное снижение представляет собой снижение на по меньшей мере 30%, например, на по меньшей мере 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%. В других вариантах осуществления выражения «не активируют клетки», такие как В-клетки, и «не индуцируют продуцирование белка», такого как IgM, могут относиться к не поддающемуся выявлению количеству активных клеток или конкретного белка.
Влияние тромбоцитов и токсичность
Настоящее изобретение дополнительно частично основано на выяснении механизма, лежащего в основе дозолимитирующей токсичности, ассоциированой с введением LNP. Такая токсичность может включать коагулопатию, диссеминированное внутрисосудистое свертывание (DIC, также называемую коагулопатией потребления), острое или хроническое, и/или сосудистый тромбоз. В некоторых случаях дозолимитирующая токсичность, ассоциированная с LNP, представляет собой ответ острой фазы (APR) или обусловленную активацией комплемента псевдоаллергию (CARPA).
Используемый в данном документе термин коагулопатия относится к повышенной коагуляции (повышенному свертыванию крови) in vivo. Результаты, представленные в данном изобретении, согласуются с такой повышенной коагуляцией и в значительной степени обеспечивают понимание основополагающего механизма. Коагуляция представляет собой процесс, который включает ряд различных факторов и типов клеток, и до настоящего времени связь между LNP и тромбоцитами и взаимодействие с ними не были понятны в данном отношении. Настоящее раскрытие обеспечивает свидетельство такого взаимодействия, а также предусматривает соединения и композиции, которые модифицированы с наличием сниженного эффекта тромбоцитов, включая сниженную ассоциацию тромбоцитов и/или сниженную агрегацию тромбоцитов. Способность модулировать, в том числе предпочтительно понижающе модулировать такие эффекты тромбоцитов, может снизить частоту и/или тяжесть коагулопатии после введения LNP. Это, в свою очередь, снизит токсичность, связанную с такой LNP, что тем самым позволяет введение более высоких доз LNP и, что важно, их нагрузки, подлежащей введению нуждающимся в этом пациентам.
CARPA представляет собой класс острой иммунной токсичности, проявляющейся в реакциях гиперчувствительности (HSR), которые могут быть запущены нанопрепаратами и биологическими препаратами. В отличие от аллергических реакций в CARPA обычно не вовлечен IgE, но она развивается вследствие активации системы комплемента, являющейся частью врожденной иммунной системы, которая усиливает способности организма избавляться от патогенов. В CARPA может быть задействован один или несколько из следующих путей: классический путь активации комплемента (СР), альтернативный путь (АР) и лектиновый путь (LP). Szebeni, Molecular Immunology, 61: 163-173 (2014).
Классический путь запускается активацией С1-комплекса, который содержит: C1q, C1r, C1s или C1qr2s2. Активация С1-комплекса происходит тогда, когда C1q связывается с IgM или IgG в комплексе с антигенами, или когда C1q связывается непосредственно с поверхностью патогена. Такое связывание приводит к конформационным изменениям в молекуле C1q, что приводит к активации C1r, который, в свою очередь, расщепляет C1s. Компонент C1r2s2 затем разделяет С4, а потом С2 с получением С4а, C4b, С2а и C2b. C4b и C2b связываются с образованием C3-конвертазы классического пути (комплекс C4b2b), которая стимулирует расщепление C3 на C3a и C3b. Затем C3b связывает конвертазу C3 с образованием конвертазы С5 (комплекс C4b2b3b). Альтернативный путь непрерывно активируется в результате спонтанного гидролиза C3. Фактор Р (пропердин) является положительным регулятором альтернативного пути. Олигомеризация пропердина стабилизирует C3-конвертазу, которая затем может расщеплять значительно больше C3. Молекулы C3 могут связываться с поверхностями и в большей степени привлекать активность В, D и Р, что приводит к усилению активации комплемента.
Ответ острой фазы (APR) представляет собой сложный системный врожденный иммунный ответ для предотвращения инфицирования и удаления потенциальных патогенов. Многочисленные белки вовлечены в APR, а С-реактивный белок является хорошо охарактеризованным белком.
В соответствии с настоящим изобретением было выявлено, что определенные LNP способны физически связываться с тромбоцитами практически сразу после введения in vivo, тогда как другие LNP не вообще не связываются с тромбоцитами или связываются только на фоновых уровнях. Примечательно, что те LNP, которые связываются с тромбоцитами, также, очевидно, стабилизируют агрегаты тромбоцитов, которые после этого образуются. Физический контакт тромбоцитов с определенными LNP коррелирует со способностью таких тромбоцитов оставаться агрегированными или непрерывно образовывать агрегаты в течение длительного периода времени после введения. Такие агрегаты содержат активированные тромбоциты, а также клетки врожденной иммунной системы, такие как макрофаги и В-клетки.
а. Липидное соединение
В настоящем изобретении предусмотрены фармацевтические композиции с преимущественными свойствами. Например, липиды, описанные в данном документе (например, любой из формул (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (III), (IV), (V) или (VI)), могут преимущественно использоваться в композициях на основе липидных наночастиц для доставки терапевтических и/или профилактических средств в клетки или органы млекопитающих. Например, липиды, описанные в данном документе, обладают слабой иммуногенностью или не обладают ею. Например, липидные соединения, раскрытые в данном документе, обладают более низкой иммуногенностью по сравнению с эталонным липидом (например, МС3, KC2 или DLinDMA). Например, состав, содержащий липид, раскрытый в данном документе, и терапевтическое или профилактическое средство, имеет увеличенный терапевтический индекс по сравнению с соответствующим составом, который содержит эталонный липид (например, МС3, КС2 или DLinDMA) и то же самое терапевтическое или профилактическое средство. В частности, в настоящей заявке предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие:
(a) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин; и
(b) средство доставки.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки содержит липидное соединение формулы (I):
где:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (СН2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С1-6алкила, где Q выбран из карбоцикла, гетероцикла, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR и C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или его соли или стереоизомеры.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (СН2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из карбо цикла, гетероцикла, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2 и C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры, где алкильные и алкенильные группы могут быть линейными или разветвленными.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых если R4 представляет собой (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR или CQ(R)2, то (i) Q не представляет собой N(R)2, если n равняется 1, 2, 3, 4 или 5, или (ii) Q не представляет собой 5-, 6- или 7-членный гетероциклоалкил, если n равняется 1 или 2.
В других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, -N(R)R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR и 5-14-членного гетероциклоалкила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, который замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из оксо (=O), ОН, амино и С13алкила, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, OC(O), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR и 5-14-членного гетероциклоалкила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, который замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из оксо (=O), ОН, амино и С13алкила, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и H;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (СН2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероцикла, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR и C(=NR9)N(R)2, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; и если Q представляет собой 5-14-членный гетероцикл и (i) R4 представляет собой (CH2)nQ, в котором n равняется 1 или 2, или (ii) R4 представляет собой (CH2)nCHQR, в котором n равняется 1, или (iii) R4 представляет собой CHQR и CQ(R)2, то Q представляет собой 5-14-членный гетероарил либо 8-14-членный гетероциклоалкил;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероцикла, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; и если Q представляет собой 5-14-членный гетероцикл и (i) R4 представляет собой (CH2)nQ, в котором n равняется 1 или 2, или (ii) R4 представляет собой (CH2)nCHQR, в котором n равняется 1, или (iii) R4 представляет собой CHQR и CQ(R)2, то Q представляет собой 5-14-членный гетероарил либо 8-14-членный гетероциклоалкил;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С23алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С16алкила, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, -OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, N(R)R8, -O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR и C(=NR9)N(R)2, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
R8 выбран из группы, состоящей из С3-6карбоцикла и гетероцикла;
R9 выбран из группы, состоящей из Н, CN, NO2, С1-6алкила, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, С2-6алкенила, С3-6карбоцикла и гетероцикла;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2 и незамещенного С1-6алкила, где Q выбран из С3-6карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, -OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-14алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С212алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С214алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 представляет собой (CH2)nQ или (CH2)nCHQR, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 3,4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С112алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С214алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 представляет собой (CH2)nQ или (CH2)nCHQR, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С118алкила, С218алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С112алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С530алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и H;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С112алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В еще нескольких других вариантах осуществления другая подгруппа соединений формулы (I) включает соединения, в которых:
R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила, С520алкенила, R*YR'', YR'' и R''M'R';
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С114алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл;
R4 выбран из группы, состоящей из (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
каждый R5 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
R7 выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и Н;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С13алкила, С23алкенила и H;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-18алкила, С2-18алкенила, R*YR'', YR'' и Н;
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С112алкила и С112алкенила;
каждый Y независимо представляет собой С36карбоцикл;
каждый X независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br и I; и
m выбрано из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13,
или их соли или стереоизомеры.
В определенных вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (IA):
или их соль или стереоизомер, где l выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; m выбрано из 5, 6, 7, 8 и 9; М1 представляет собой связь или М'; R4 представляет собой незамещенный С13алкил или (CH2)nQ, в котором Q представляет собой ОН, NHC(S)N(R)2, NHC(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)R8, NHC(=NR9)N(R)2, NHC(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, гетероарил или гетероциклоалкил; M и M' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), P(O)(OR')O, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы; и
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила и С214алкенила.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (IA) или их соль или стереоизомер,
где:
l выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; m выбрано из 5, 6, 7, 8 и 9;
M1 представляет собой связь или М';
R4 представляет собой незамещенный С1-3алкил или (CH2)nQ, в котором Q представляет собой ОН, NHC(S)N(R)2 или NHC(O)N(R)2;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), P(O)(OR')O, арильной группы и гетероарильной группы; и
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила и С214алкенила.
В определенных вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (II):
или их соль или стереоизомер, где l выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; M1 представляет собой связь или М'; R4 представляет собой незамещенный С13алкил или (CH2)nQ, в котором n равняется 2, 3 или 4, a Q представляет собой ОН, NHC(S)N(R)2, NHC(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)R8, NHC(=NR9)N(R)2, NHC(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, гетероарил или гетероциклоалкил; М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), P(O)(OR')O, -S-S-, арильной группы и гетероарильной группы; и
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила и С214алкенила.
В некоторых вариантах осуществления подгруппа соединений формулы (I) включает соединения формулы (II) или их соль или стереоизомер, где:
l выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5;
M1 представляет собой связь или М';
R4 представляет собой незамещенный С13алкил или (CH2)nQ, в котором n равняется 2, 3 или 4, a Q представляет собой ОН, NHC(S)N(R)2 или NHC(O)N(R)2;
М и М' независимо выбраны из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), P(O)(OR')O, арильной группы и гетероарильной группы; и
R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С114алкила и С214алкенила.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (IIa):
или его соль, где R4 описан выше.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (IIb):
или его соль, где R4 описан выше.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (IIc):
или его соль, где R4 описан выше.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (IIe):
или его соль, где R4 описан выше.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (IIa), (IIb), (IIc) или (IIe) содержит R4, который выбран из (CH2)nQ и (CH2)nCHQR, где Q, R и n определены выше.
В некоторых вариантах осуществления Q выбран из группы, состоящей из OR, ОН, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, СХ3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R) и гетероцикла, где R определен выше. В некоторых аспектах n равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления Q представляет собой ОН, NHC(S)N(R)2 или NHC(O)N(R)2.
В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение формулы (IId):
или его соль, где R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С514алкила и С514алкенила, n выбрано из 2, 3 и 4, a R', R'', R5, R6 и m определены выше.
В некоторых аспектах соединения формулы (IId) R2 представляет собой С8алкил. В некоторых аспектах соединения формулы (IId) R3 представляет собой С5-С9алкил. В некоторых аспектах соединения формулы (IId) m равняется 5, 7 или 9. В некоторых аспектах соединения формулы (IId) каждый R5 представляет собой Н. В некоторых аспектах соединения формулы (IId) каждый R6 представляет собой Н.
В другом аспекте в настоящей заявке предусмотрена липидная композиция (например, липидная наночастица (LNP)), содержащая: (1) соединение формулы (I); (2) необязательно вспомогательный липид (например, фосфолипид); (3) необязательно структурный липид (например, стерин) и (4) необязательно липидный конъюгат (например, PEG-липид). В иллюстративных вариантах осуществления липидная композиция (например, LNP) дополнительно содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид релаксин, например, полинуклеотид, инкапсулированный в ней.
Используемый в данном документе термин «алкил» или «алкильная группа» означает линейный или разветвленный насыщенный углеводород, содержащий один или несколько атомов углерода (например, один, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать или более атомов углерода).
Обозначение «С114алкил» означает линейный или разветвленный насыщенный углеводород, содержащий 1-14 атомов углерода. Алкильная группа может быть необязательно замещенной.
Используемый в данном документе термин «алкенил» или «алкенильная группа» означает линейный или разветвленный углеводород, содержащий два или более атомов углерода (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать, двенадцать, тринадцать, четырнадцать, пятнадцать, шестнадцать, семнадцать, восемнадцать, девятнадцать, двадцать или более атомов углерода) и по меньшей мере одну двойную связь.
Обозначение «С214алкенил» означает линейный или разветвленный углеводород, содержащий 2-14 атомов углерода и по меньшей мере одну двойную связь. Алкенильная группа может содержать одну, две, три, четыре или более двойных связей. Например, С18алкенил может содержать одну или несколько двойных связей. С18алкенильная группа, содержащая две двойные связи, может представлять собой линолеильную группу. Алкенильная группа может быть необязательно замещенной.
Используемый в данном документе термин «карбоцикл» или «карбоциклическая группа» означает моно- или полициклическую систему, содержащую одно или несколько колец из атомов углерода. Кольца могут представлять собой трех-, четырех-, пяти-, шести-, семи-, восьми-, девяти-, десяти-, одиннадцати-, двенадцати-, тринадцати-, четырнадцати- или пятнадцатичленные кольца.
Обозначение «С36карбоцикл» означает карбоцикл, содержащий одно кольцо, имеющее 3-6 атомов углерода. Карбоциклы могут содержать одну или несколько двойных связей и могут быть ароматическими (например, представлять собой арильные группы). Примеры карбоциклов включают циклопропильную, циклопентильную, циклогексильную, фенильную, нафтильную и 1,2-дигидронафтильную группы. Карбоциклы могут быть необязательно замещенными.
Используемый в данном документе термин «гетероцикл» или «гетероциклическая группа» означает моно- или полициклическую систему, содержащую одно или несколько колец, где по меньшей мере одно кольцо содержит по меньшей мере один гетероатом. Гетероатомы могут представлять собой, например, атомы азота, кислорода или серы. Кольца могут представлять собой трех-, четырех-, пяти-, шести-, семи-, восьми-, девяти-, десяти-, одиннадцати- или двенадцатичленные кольца. Гетероциклы могут содержать одну или несколько двойных связей и могут быть ароматическими (например, представлять собой гетероарильные группы). Примеры гетероциклов включают имидазолильную, имидазолидинильную, оксазолильную, оксазолидинильную, тиазолильную, тиазолидинильную, пиразолидинильную, пиразолильную, изоксазолидинильную, изоксазолильную, изотиазолидинильную, изотиазолильную, морфолинильную, пирролильную, пирролидинильную, фурильную, тетрагидрофурильную, тиофенильную, пиридинильную, пиперидинильную, хинолильную и изохинолильную группы. Гетероциклы могут быть необязательно замещенными.
Как используется в данном документе, «биоразлагаемая группа» представляет собой группу, которая может способствовать более быстрому метаболизму липида у субъекта. Биоразлагаемая группа может представлять собой без ограничения С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильную группу и гетероарильную группу.
Как используется в данном документе, «арильная группа» представляет собой карбоциклическую группу, содержащую одно или несколько ароматических колец. Примеры арильных групп включают фенильную и нафтильную группы.
Как используется в данном документе, «гетероарильная группа» представляет собой гетероциклическую группу, содержащую одно или несколько ароматических колец. Примеры гетероарильных групп включают пирролил, фурил, тиофенил, имидазолил, оксазолил и тиазолил. Как арильные, так и гетероарильные группы могут быть необязательно замещенными. Например, М и М' могут быть выбраны из неограничивающей группы, состоящей из необязательно замещенных фенила, оксазола и тиазола. В формулах в данном документе М и М' могут быть независимо выбраны из перечня биоразлагаемых групп, приведенного выше.
Алкильные, алкенильные и циклильные (например, карбоциклильные и гетероциклильные) группы могут быть необязательно замещенными, если не указано иное. Необязательные заместители могут быть выбраны из группы, состоящей без ограничения из атома галогена (например, хлоридной, бромидной, фторидной или йодидной группы), карбоновой кислоты (например, С(О)ОН), спирта (например, гидроксила ОН), сложного эфира (например, C(O)OR или OC(O)R), альдегида (например, С(О)Н), карбонила (например, C(O)R, в качестве альтернативы представленного С=O), ацилгалогенида (например, С(O)Х, в котором X представляет собой галогенид, выбранный из бромида, фторида, хлорида и йодида), карбоната (например, OC(O)OR), алкокси (например, OR), ацеталя (например, C(OR)2R'''', в котором все OR представляют собой алкоксигруппы, которые могут быть одинаковыми или разными, a R'''' представляет собой алкильную или алкенильную группу), фосфата (например, Р(O)43), тиола (например, SH), сульфоксида (например, S(O)R), сульфиновой кислоты (например, S(O)OH), сульфоновой кислоты (например, S(O)2OH), тиоальдегида (например, C(S)H), сульфата (например, S(O)42), сульфонила (например, S(O)2), амида (например, C(O)NR2 или N(R)C(O)R), азидо (например, N3), нитро (например, NO2), циано (например, CN), изоциано (например, NC), ацилокси (например, OC(O)R), амино (например, NR2, NRH или NH2), карбамоила (например, OC(O)NR2, OC(O)NRH или OC(O)NH2), сульфонамида (например, S(O)2NR2, S(O)2NRH, S(O)2NH2, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)S(O)2H или N(H)S(O)2H), алкильной группы, алкенильной группы и циклильной (например, карбоциклильной или гетероциклильной) группы.
В любом из предыдущих случаев R представляет собой алкильную или алкенильную группу, определенную в данном документе. В некоторых вариантах осуществления группы-заместители сами по себе могут быть дополнительно замещены, например, одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью заместителями, определенными в данном документе. Например, С1-6алкильная группа может быть дополнительно замещена одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или шестью заместителями, описанными в данном документе.
Соединения любой из формул (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId) и (IIe) в соответствующих случаях содержат один или несколько следующих признаков.
В некоторых вариантах осуществления R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О, S и Р, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2 и C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5.
В другом варианте осуществления R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR и 5-14-членного гетероциклоалкила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, который замещен одним или несколькими заместителями, выбранными из оксо (=O), ОН, амино и С13алкила, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5.
В другом варианте осуществления R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероцикла, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5; и если Q представляет собой 5-14-членный гетероцикл и (i) R4 представляет собой (CH2)nQ, в котором n равняется 1 или 2, или (ii) R4 представляет собой (CH2)nCHQR, в котором n равняется 1, или (iii) R4 представляет собой CHQR и CQ(R)2, то Q представляет собой 5-14-членный гетероарил либо 8-14-членный гетероциклоалкил.
В другом варианте осуществления R4 выбран из группы, состоящей из С36карбоцикла, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q выбран из С36карбоцикла, 5-14-членного гетероарила, имеющего один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О и S, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR, и каждое n независимо выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5.
В другом варианте осуществления R4 представляет собой незамещенный С14алкил, например, незамещенный метил.
В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено соединение формулы (I), где R4 представляет собой (CH2)nQ или (CH2)nCHQR, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 3, 4 и 5.
В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено соединение формулы (I), где R4 выбран из группы, состоящей из (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR и CQ(R)2, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 1, 2, 3, 4 и 5.
В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено соединение формулы (I), где R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С214алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл, и R4 представляет собой (CH2)nQ или (CH2)nCHQR, где Q представляет собой N(R)2, а n выбрано из 3, 4 и 5.
В определенных вариантах осуществления R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С214алкила, С214алкенила, R*YR'', YR'' и R*OR'', или R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл.
В некоторых вариантах осуществления R1 выбран из группы, состоящей из С520алкила и С520алкенила.
В других вариантах осуществления R1 выбран из группы, состоящей из R*YR'', YR'' и R''M'R'.
В определенных вариантах осуществления R1 выбран из R*YR'' и YR''. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой циклопропильную группу. В некоторых вариантах осуществления R* представляет собой С8алкил или С8алкенил. В определенных вариантах осуществления R'' представляет собой С312алкил. Например, R'' может представлять собой С3алкил. Например, R'' может представлять собой С48алкил (например, С4, С5 С6, С7 или С8алкил).
В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой С520алкил. В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой С6алкил. В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой С8алкил. В других вариантах осуществления R1 представляет собой С9алкил. В определенных вариантах осуществления R1 представляет собой С14алкил. В других вариантах осуществления R1 представляет собой С18алкил.
В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой С520алкенил. В определенных вариантах осуществления R1 представляет собой С18алкенил. В некоторых вариантах осуществления R1 представляет собой линолеил.
В определенных вариантах осуществления R1 является разветвленным (например, представляет собой декан-2-ил, ундекан-3-ил, додекан-4-ил, тридекан-5-ил, тетрадекан-6-ил, 2-метилундекан-3-ил, 2-метилдекан-2-ил, 3-метилундекан-3-ил, 4-метилдодекан-4-ил или гептадекан-9-ил). В определенных вариантах осуществления R1 представляет собой 
.
В определенных вариантах осуществления R1 представляет собой незамещенный С520алкил или С520алкенил. В определенных вариантах осуществления R' представляет собой замещенный С520алкил или С520алкенил (например, замещенный С36карбоциклом, таким как 1-циклопропилнонил).
В других вариантах осуществления R1 представляет собой R''M'R'.
В некоторых вариантах осуществления R' выбран из R*YR'' и YR''. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой С38циклоалкил. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой С610арил. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой циклопропильную группу. В некоторых вариантах осуществления Y представляет собой циклогексильную группу. В определенных вариантах осуществления R* представляет собой С1алкил.
В некоторых вариантах осуществления R'' выбран из группы, состоящей из С3-12алкила и С312алкенила. В некоторых вариантах осуществления R'', смежный с Y, представляет собой С1алкил. В некоторых вариантах осуществления R'', смежный с Y, представляет собой С49алкил (например, С4, С5, С6, С7, или С8, или С9алкил).
В некоторых вариантах осуществления R' выбран из С4алкила и С4алкенила. В определенных вариантах осуществления R' выбран из С5алкила и С5алкенила. В некоторых вариантах осуществления R' выбран из С6алкила и С6алкенила. В некоторых вариантах осуществления R' выбран из С7алкила и С7алкенила. В некоторых вариантах осуществления R' выбран из С9алкила и С9алкенила.
В других вариантах осуществления R' выбран из С11алкила и С11алкенила. В других вариантах осуществления R' выбран из С12алкила, С12алкенила, С13алкила, С13алкенила, С14алкила, С14алкенила, С15алкила, С15алкенила, С16алкила, С16алкенила, С17алкила, С17алкенила, С18алкила и С18алкенила. В определенных вариантах осуществления R' является разветвленным (например, представляет собой декан-2-ил, ундекан-3-ил, додекан-4-ил, тридекан-5-ил, тетрадекан-6-ил, 2-метилундекан-3-ил, 2-метилдекан-2-ил, 3-метилундекан-3-ил, 4-метилдодекан-4-ил или гептадекан-9-ил). В определенных вариантах осуществления R' представляет собой 
.
В определенных вариантах осуществления R' представляет собой незамещенный С118алкил. В определенных вариантах осуществления R' представляет собой замещенный С118алкил (например, С115алкил, замещенный С36карбоциклом, таким как 1-циклопропилнонил).
В некоторых вариантах осуществления R'' выбран из группы, состоящей из С314алкила и С314алкенила. В некоторых вариантах осуществления R'' представляет собой С3алкил, С4алкил, С5алкил, С6алкил, С7алкил или С8алкил. В некоторых вариантах осуществления R'' представляет собой С9алкил, С10алкил, С11алкил, С12алкил, С13алкил или С14алкил.
В некоторых вариантах осуществления М' представляет собой С(O)O. В некоторых вариантах осуществления М' представляет собой ОС(О).
В других вариантах осуществления М' представляет собой арильную группу или гетероарильную группу. Например, М' может быть выбран из группы, состоящей из фенила, оксазола и тиазола.
В некоторых вариантах осуществления М представляет собой С(O)O. В некоторых вариантах осуществления М представляет собой ОС(О). В некоторых вариантах осуществления М представляет собой C(O)N(R'). В некоторых вариантах осуществления М представляет собой P(O)(OR')O.
В других вариантах осуществления М представляет собой арильную группу или гетероарильную группу. Например, М может быть выбран из группы, состоящей из фенила, оксазола и тиазола.
В некоторых вариантах осуществления М и М' являются одинаковыми. В других вариантах осуществления М и М' являются разными.
В некоторых вариантах осуществления каждый R5 представляет собой Н. В определенных таких вариантах осуществления каждый R6 также представляет собой Н.
В некоторых вариантах осуществления R7 представляет собой Н. В других вариантах осуществления R7 представляет собой С13алкил (например, метил, этил, пропил или изопропил).
В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 независимо представляют собой С514алкил или С514алкенил.
В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С8алкил. В определенных вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С2алкил. В других вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С3алкил. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С4алкил. В определенных вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С5алкил. В других вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С6алкил. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 представляют собой С7алкил.
В других вариантах осуществления R2 и R3 являются разными. В определенных вариантах осуществления R2 представляет собой С8алкил. В некоторых вариантах осуществления R3 представляет собой С17 (например, C1, С2, С3, С4, С5, С6 или С7алкил) или С9алкил.
В некоторых вариантах осуществления R7 и R3 представляют собой Н.
В определенных вариантах осуществления R2 представляет собой Н.
В некоторых вариантах осуществления m равняется 5, 7 или 9.
В некоторых вариантах осуществления R4 выбран из (CH2)nQ и (CH2)nCHQR.
В некоторых вариантах осуществления Q выбран из группы, состоящей из OR, ОН, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, СХ3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R), C(R)N(R)2C(O)OR, карбоцикла и гетероцикла.
В определенных вариантах осуществления Q представляет собой ОН.
В определенных вариантах осуществления Q представляет собой замещенный или незамещенный 5-10-членный гетероарил, например, Q представляет собой имидазол, пиримидин, пурин, 2-амино-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он-9-ил (или гуанин-9-ил), аденин-9-ил, цитозин-1-ил или урацил-1-ил. В определенных вариантах осуществления Q представляет собой замещенный 5-14-членный гетероциклоалкил, например, замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из оксо (=O), ОН, амино и С1-3алкила. Например, Q представляет собой 4-метилпиперазинил, 4-(4-метоксибензил)пиперазинил или изоиндолин-2-ил-1,3-дион.
В определенных вариантах осуществления Q представляет собой незамещенный или замещенный С610арил (такой как фенил) или С36циклоалкил.
В некоторых вариантах осуществления n равняется 1. В других вариантах осуществления n равняется 2. В дополнительных вариантах осуществления n равняется 3. В определенных других вариантах осуществления n равняется 4. Например, R4 может представлять собой (СН2)2ОН. Например, R4 может представлять собой (СН2)3ОН. Например, R4 может представлять собой (СН2)4ОН. Например, R4 может представлять собой бензил. Например, R4 может представлять собой 4-метоксибензил.
В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой С36карбоцикл. В некоторых вариантах осуществления R4 представляет собой С36циклоалкил. Например, R4 может представлять собой циклогексил, необязательно замещенный, например, ОН, галогеном, С16алкилом и т.д. Например, R4 может представлять собой 2-гидроксициклогексил.
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой Н.
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой незамещенный С13алкил или незамещенный С23алкенил. Например, R4 может представлять собой СН2СН(ОН)СН3 или СН2СН(ОН)СН2СН3.
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой замещенный С13алкил, например, СН2ОН. Например, R4 может представлять собой СН2СН(ОН)СН2ОН.
В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 5-14-членный ароматический или неароматический гетероцикл, имеющий один или несколько гетероатомов, выбранных из N, О, S и Р. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный С320карбоцикл (например, С318карбоцикл, С315карбоцикл, С312карбоцикл или С310карбоцикл), ароматический либо неароматический. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют С36карбоцикл. В других вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют С6карбоцикл, такой как циклогексильная или фенильная группа. В определенных вариантах осуществления гетероцикл или С36карбоцикл замещен одной или несколькими алкильными группами (например, при одном и том же атоме кольца или при смежных или несмежных атомах кольца). Например, R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, могут образовывать циклогексильную или фенильную группу, несущую один или несколько С5алкильных заместителей. В определенных вариантах осуществления гетероцикл или С36карбоцикл, образованный R2 и R3, замещен карбоциклическими группами. Например, R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, могут образовывать циклогексильную или фенильную группу, замещенную циклогексилом. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют С715карбоцикл, такой как циклогептильная, циклопентадеканильная или нафтильная группа.
В некоторых вариантах осуществления R4 выбран из (CH2)nQ и (CH2)nCHQR. В некоторых вариантах осуществления Q выбран из группы, состоящей из OR, ОН, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, СХ3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R) и гетероцикла. В других вариантах осуществления Q выбран из группы, состоящей из имидазола, пиримидина и пурина.
В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют гетероцикл или карбоцикл. В некоторых вариантах осуществления R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют С36карбоцикл, такой как фенильная группа. В определенных вариантах осуществления гетероцикл или С36карбоцикл замещен одной или несколькими алкильными группами (например, при одном и том же атоме кольца или при смежных или несмежных атомах кольца). Например, R2 и R3 вместе с атомом, к которому они присоединены, могут образовывать фенильную группу, несущую один или несколько С5алкильных заместителей.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтических композиций согласно настоящему изобретению соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из:
и солей или стереоизомеров.
В других вариантах осуществления соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 1-232 или их солей или стереоизомеров.
В некоторых вариантах осуществления предусмотрены ионизируемые липиды, содержащие центральный пиперазиновый фрагмент. Липиды, описанные в данном документе, могут преимущественно использоваться в композициях на основе липидных наночастиц для доставки терапевтических и/или профилактических средств в клетки или органы млекопитающих. Например, липиды, описанные в данном документе, обладают слабой иммуногенностью или не обладают ею. Например, липидные соединения, раскрытые в данном документе, обладают более низкой иммуногенностью по сравнению с эталонным липидом (например, МС3, KC2 или DLinDMA). Например, состав, содержащий липид, раскрытый в данном документе, и терапевтическое или профилактическое средство, имеет увеличенный терапевтический индекс по сравнению с соответствующим составом, который содержит эталонный липид (например, МС3, KC2 или DLinDMA) и то же самое терапевтическое или профилактическое средство.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки содержит липидное соединение формулы (III):
или его соли или стереоизомеры, где:
кольцо А представляет собой 
или 
t равняется 1 или 2;
каждый из A1 и А2 независимо выбран из СН или N;
Z представляет собой СН2 или отсутствует, при этом если Z представляет собой СН2, то каждая из пунктирных линий (1) и (2) представляет одинарную связь; а если Z отсутствует, то обе пунктирные линии (1) и (2) отсутствуют;
R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из С5-20алкила, C5-20алкенила, -R''MR', -R*YR'', -YR'' и -R*OR'';
каждый М независимо выбран из группы, состоящей из С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
X1, X2 и X3 независимо выбраны из группы, состоящей из связи, СН2, (СН2)2-, CHR, CHY, С(О), С(O)O, ОС(О), -С(O)-СН2-, -СН2-С(O)-, С(O)O-СН2, ОС(O)-СН2, СН2-С(O)O, СН2-ОС(O), СН(ОН), C(S) и CH(SH);
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С212алкенила;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из C1-3алкила и С3-6карбоцикла;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила, С2-12алкенила и Н; и
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-12алкила и С312алкенила,
где если кольцо А представляет собой 
то:
i) по меньшей мере один из X1, X2 и X3 не представляет собой -СН2- и/или
ii) по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой -R''MR'.
В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой соединение любой из формул (IIIa1)-(IIIa6):
или
Соединения формулы (III) или любой из формул (IIIa1)-(IIIa6) в соответствующих случаях содержат один или несколько следующих признаков.
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
или 
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
В некоторых вариантах осуществления кольцо А представляет собой
при этом атом N в кольце соединен с X2.
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой СН2.
В некоторых вариантах осуществления Z отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из A1 и А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления каждый из A1 и А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления каждый из A1 и А2 представляет собой СН.
В некоторых вариантах осуществления A1 представляет собой N, а А2 представляет собой СН.
В некоторых вариантах осуществления A1 представляет собой СН, а А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из X1, X2 и X3 не представляет собой -СН2-. Например, в определенных вариантах осуществления X1 не представляет собой -СН2-. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из X1, X2 и X3 представляет собой -С(О)-.
В некоторых вариантах осуществления X2 представляет собой -С(О)-, -С(O)O, ОС(О), -С(O)-СН2-, -СН2-С(О)-, С(O)O-СН2, ОС(O)-СН2, СН2-С(O)O или СН2-ОС(O).
В некоторых вариантах осуществления X3 представляет собой -С(О)-, -С(O)O-, -ОС(О)-, -С(O)-СН2-, -СН2-С(О)-, С(O)O-СН2, ОС(O)-СН2, СН2-С(O)O или СН2-ОС(O).
В других вариантах осуществления X3 представляет собой -СН2-.
В некоторых вариантах осуществления X3 представляет собой связь или -(СН2)2-.
В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 являются одинаковыми. В определенных вариантах осуществления R1, R2 и R3 являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления R4 и R5 являются одинаковыми. В определенных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 являются одинаковыми.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой -R''MR'. В некоторых вариантах осуществления не более чем один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой -R''MR'. Например, по меньшей мере один из R1, R2 и R3 может представлять собой -R''MR', и/или по меньшей мере один из R4 и R5 представляет собой -R''MR'. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один М представляет собой -С(O)O-. В некоторых вариантах осуществления каждый М представляет собой -С(O)O-. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один М представляет собой -ОС(О)-. В некоторых вариантах осуществления каждый М представляет собой -ОС(О)-. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один М представляет собой -ОС(O)O-. В некоторых вариантах осуществления каждый М представляет собой -ОС(O)O-. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R'' представляет собой С3алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R'' представляет собой С3алкил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R'' представляет собой С5алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R'' представляет собой С5алкил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R'' представляет собой С6алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R'' представляет собой С6алкил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R'' представляет собой С7алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R'' представляет собой С7алкил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R' представляет собой С5алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R' представляет собой С5алкил. В других вариантах осуществления по меньшей мере один R' представляет собой С1алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R' представляет собой С1алкил. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один R' представляет собой С2алкил. В определенных вариантах осуществления каждый R' представляет собой С2алкил.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой С12алкил. В определенных вариантах осуществления каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой С12алкил.
В определенных вариантах осуществления соединение выбрано из группы, состоящей из:
В некоторых вариантах осуществления средство доставки содержит соединение 236.
В некоторых вариантах осуществления средство доставки содержит соединение формулы (IV):
или его соли или стереоизомер, где:
каждый из A1 и А2 независимо выбран из СН или N, и по меньшей мере один из A1 и А2 представляет собой N;
Z представляет собой СН2 или отсутствует, при этом если Z представляет собой СН2, то каждая из пунктирных линий (1) и (2) представляет одинарную связь; а если Z отсутствует, то обе пунктирные линии (1) и (2) отсутствуют;
R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из С620алкила и С6-20алкенила;
где если кольцо А представляет собой 
то:
i) R1, R2, R3, R4 и R5 являются одинаковыми, при этом R1 не представляет собой С12алкил, С18алкил или С18алкенил;
ii) только один из R1, R2, R3, R4 и R5 выбран из С6-20алкенила;
iii) по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 имеет другое число атомов углерода по сравнению по меньшей мере с одним другим из R1, R2, R3, R4 и R5;
iv) R1, R2 и R3 выбраны из С6-20алкенила, a R4 и R5 выбраны из С6-20алкила; или
v) R1, R2 и R3 выбраны из С6-20алкила, a R4 и R5 выбраны из С6-20алкенила.
В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой соединение формулы (IVa):
Соединения формулы (IV) или (IVa) в соответствующих случаях содержат один или несколько следующих признаков.
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой СН2.
В некоторых вариантах осуществления Z отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из A1 и А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления каждый из A1 и А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления каждый из A1 и А2 представляет собой СН.
В некоторых вариантах осуществления А1 представляет собой N, а А2 представляет собой СН.
В некоторых вариантах осуществления A1 представляет собой СН, а А2 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 являются одинаковыми и не представляют собой С12алкил, С18алкил или С18алкенил. В некоторых вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 являются одинаковыми и представляют собой С9алкил или С14алкил.
В некоторых вариантах осуществления только один из R1, R2, R3, R4 и R5 выбран из С6-20алкенила. В некоторых таких вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 имеют одинаковое количество атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления R4 выбран из С5-20алкенила. Например, R4 может представлять собой С12алкенил или С18алкенил.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 имеет другое число атомов углерода по сравнению по меньшей мере с одним другим из R1, R2, R3, R4 и R5.
В определенных вариантах осуществления R1, R2 и R3 выбраны из С6-20алкенила, а R4 и R5 выбраны из С6-20алкила. В других вариантах осуществления R1, R2 и R3 выбраны из С6-20алкила, a R4 и R5 выбраны из С6-20алкенила. В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 имеют одинаковое количество атомов углерода, и/или R4 и R5 имеют одинаковое количество атомов углерода. Например, R1, R2 и R3 или R4 и R5 могут иметь 6, 8, 9, 12, 14 или 18 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 или R4 и R5 представляют собой С18алкенил (например, линолеил). В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 или R4 и R5 представляют собой алкильные группы, содержащие 6, 8, 9, 12 или 14 атомов углерода.
В некоторых вариантах осуществления R1 имеет другое число атомов углерода по сравнению с R2, R3, R4 и R5. В других вариантах осуществления R3 имеет другое число атомов углерода по сравнению с R1, R2, R4 и R5. В дополнительных вариантах осуществления R4 имеет другое число атомов углерода по сравнению с R1, R2, R3 и R5.
В некоторых вариантах осуществления соединение выбрано из группы, состоящей из:
В других вариантах осуществления средство доставки содержит соединение формулы (V):
или его соли или стереоизомеры, в которых:
А3 представляет собой СН или N;
A4 представляет собой СН2 или NH; и по меньшей мере один из А3 и А4 представляет собой N или NH;
Z представляет собой СН2 или отсутствует, при этом если Z представляет собой СН2, то каждая из пунктирных линий (1) и (2) представляет одинарную связь; а если Z отсутствует, то обе пунктирные линии (1) и (2) отсутствуют;
R1, R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С5-20алкила, С5-20алкенила, -R''MR', -R*YR'', -YR'' и -R*OR'';
каждый М независимо выбран из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
X1 и X2 независимо выбраны из группы, состоящей из СН2, (СН2)2, CHR, CHY, С(О), С(O)O, ОС(О), -С(O)-СН2-, -СН2-С(O)-, С(O)ОСН2, ОС(O)СН2, СН2-С(O)O, СН2ОС(O), СН(ОН), C(S) и CH(SH);
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С212алкенила;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила и С3-6карбоцикла;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила, С2-12алкенила и Н; и
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-12алкила и С312алкенила.
В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой соединение формулы (Va):
Соединения формулы (V) или (Va) в соответствующих случаях содержат один или несколько следующих признаков.
В некоторых вариантах осуществления Z представляет собой СН2.
В некоторых вариантах осуществления Z отсутствует.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из А3 и А4 представляет собой N или NH.
В некоторых вариантах осуществления А3 представляет собой N, а А4 представляет собой NH.
В некоторых вариантах осуществления А3 представляет собой N, а А4 представляет собой СН2.
В некоторых вариантах осуществления А3 представляет собой СН, а А4 представляет собой NH.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из X1 и X2 не представляет собой -СН2-. Например, в определенных вариантах осуществления X1 не представляет собой -СН2-. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из X1 и X2 представляет собой -С(О)-.
В некоторых вариантах осуществления X2 представляет собой -С(О)-, С(O)O, ОС(О), -С(O)-СН2-, -СН2-С(O)-, С(O)O-СН2, ОС(O)-СН2, СН2-С(O)O или СН2-ОС(O).
В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из С5-20алкила и С5-20алкенила. В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 являются одинаковыми. В определенных вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют собой С6, С9, C12 или С14алкил. В других вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют собой С18алкенил. Например, R1, R2 и R3 могут представлять собой линолеил.
В некоторых вариантах осуществления соединение выбрано из группы, состоящей из:
В других вариантах осуществления средство доставки содержит соединение формулы (VI):
или его соли или стереоизомеры, в которых:
каждый из А6 и А7 независимо выбран из СН или N, где по меньшей мере один из А6 и А7 представляет собой N;
Z представляет собой СН2 или отсутствует, при этом если Z представляет собой СН2, то каждая из пунктирных линий (1) и (2) представляет одинарную связь; а если Z отсутствует, то обе пунктирные линии (1) и (2) отсутствуют;
X4 и X5 независимо выбраны из группы, состоящей из -СН2-, -(СН2)2-, CHR, CHY, С(О), С(O)O, ОС(О), -С(O)-СН2-, -СН2-С(O)-, С(O)ОСН2, ОС(O)-СН2, СН2-С(O)O, СН2-ОС(О), СН(ОН), C(S) и CH(SH);
каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из С5-20алкила, С5-20алкенила, -R''MR', -R*YR'', -YR'' и -R*OR'';
каждый М независимо выбран из группы, состоящей из С(O)O, ОС(О), C(O)N(R'), N(R')C(O), С(О), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR')O, S(O)2, арильной группы и гетероарильной группы;
каждый Y независимо представляет собой С3-6карбоцикл;
каждый R* независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила и С212алкенила;
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из С1-3алкила и С3-6карбоцикла;
каждый R' независимо выбран из группы, состоящей из С1-12алкила, С2-12алкенила и Н; и
каждый R'' независимо выбран из группы, состоящей из С3-12алкила и С312алкенила.
В некоторых вариантах осуществления каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбран из группы, состоящей из С6-20алкила и С6-20алкенила.
В некоторых вариантах осуществления R1 и R2 являются одинаковыми. В определенных вариантах осуществления R1, R2 и R3 являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления R4 и R5 являются одинаковыми. В определенных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 являются одинаковыми.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой С9-12алкил. В определенных вариантах осуществления каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 независимо представляет собой С9, С12 или С14алкил. В определенных вариантах осуществления каждый из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой С9алкил.
В некоторых вариантах осуществления А6 представляет собой N, а А7 представляет собой N. В некоторых вариантах осуществления А6 представляет собой СН, а А7 представляет собой N.
В некоторых вариантах осуществления X4 представляет собой -СН2-, а X5 представляет собой -С(О)-. В некоторых вариантах осуществления X4 и X5 представляют собой -С(О)-.
В некоторых вариантах осуществления, если А6 представляет собой N и А7 представляет собой N, то по меньшей мере один из X4 и X5 не представляет собой -СН2-, например, по меньшей мере один из X4 и X5 представляет собой -С(О)-. В некоторых вариантах осуществления, если А6 представляет собой N и А7 представляет собой N, то по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 представляет собой -R''MR'.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из R1, R2, R3, R4 и R5 не представляет собой -R''MR'.
В некоторых вариантах осуществления соединение представляет собой
В других вариантах осуществления средство доставки содержит соединение следующей формулы:
Аминные фрагменты липидных соединений, раскрытых в данном документе, при определенных условиях могут быть протонированными. Например, центральный аминный фрагмент липида формулы (I), как правило, является протонированным (т.е. положительно заряженным) при рН ниже pKa аминофрагмента и является фактически незаряженным при рН выше pKa. Такие липиды могут называться ионизируемыми аминолипидами.
В одном конкретном варианте осуществления ионизируемый аминолипид представляет собой соединение 18. В другом варианте осуществления ионизируемый аминолипид представляет собой соединение 236.
В некоторых вариантах осуществления количество ионизируемого аминолипида, например, соединения формулы (I), находится в диапазоне от приблизительно 1 моль % до 99 моль % в липидной композиции.
В одном варианте осуществления количество ионизируемого аминолипида, например, соединения формулы (I), составляет по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99 моль % в липидной композиции.
В одном варианте осуществления количество ионизируемого аминолипида, например, соединения формулы (I), находится в диапазоне от приблизительно 30 моль % до приблизительно 70 моль %, от приблизительно 35 моль % до приблизительно 65 моль %, от приблизительно 40 моль % до приблизительно 60 моль % и от приблизительно 45 моль % до приблизительно 55 моль % в липидной композиции.
В одном конкретном варианте осуществления количество ионизируемого аминолипида, например, соединения формулы (I), составляет приблизительно 50 моль % в липидной композиции.
В дополнение к ионизируемому аминолипиду, раскрытому в данном документе, например, соединению формулы (I), липидная композиция в составе фармацевтических композиций, раскрытых в данном документе, может содержать дополнительные компоненты, такие как фосфолипиды, структурные липиды, PEG-липиды и любая их комбинация.
b. Дополнительные компоненты в липидной композиции
(i) Фосфолипиды
Липидная композиция в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может содержать один или несколько фосфолипидов, например, один или несколько насыщенных или (поли)ненасыщенных фосфолипидов или их комбинацию. Как правило, фосфолипиды содержат фосфолипидный фрагмент и один или несколько фрагментов жирных кислот.
Фосфолипидный фрагмент может быть выбран, например, из неограничивающей группы, состоящей из фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилглицерина, фосфатидилсерина, фосфатидной кислоты, 2-лизофосфатидилхолина и сфингомиелина.
Жирно кислотный фрагмент может быть выбран, например, из неограничивающей группы, состоящей из лауриновой кислоты, миристиновой кислоты, миристолеиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, пальмитолеиновой кислоты, стеариновой кислоты, олеиновой кислоты, линолевой кислоты, альфа-линоленовой кислоты, эруковой кислоты, фитановой кислоты, арахидиновой кислоты, арахидоновой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты, бегеновой кислоты, докозапентаеновой кислоты и докозагексаеновой кислоты.
Определенные фосфолипиды могут облегчать слияние с мембраной. Например, катионный фосфолипид может взаимодействовать с одним или несколькими отрицательно заряженными фосфолипидами мембраны (например, клеточной или внутриклеточной мембраны). Слияние фосфолипида с мембраной может обеспечивать возможность прохождения одного или нескольких элементов (например, терапевтического средства) липидосодержащей композиции (например, LNP) через мембрану, что позволяет, например, осуществлять доставку одного или нескольких элементов в ткань-мишень.
Также предусмотрены неприродные молекулы фосфолипидов, включающие природные молекулы, имеющие модификации и замещения, в том числе разветвление, окисление, циклизацию и алкинирование. Например, фосфолипид может быть функционализирован одним или несколькими алкинами (например, алкенильной группой, в которой одна или несколько двойных связей заменены тройной связью) или сшит с ними. В подходящих условиях реакции алкиновая группа может подвергаться катализируемому медью циклоприсоединению при контакте с азидом. Такие реакции могут быть применимы при функционализации липидного бислоя композиции на основе наночастиц для облегчения проникновения через мембрану или клеточного распознавания или при конъюгировании композиции на основе наночастиц с применимым компонентом, таким как нацеливающий или визуализирующий фрагмент (например, краситель).
Фосфолипиды включают без ограничения глицерофосфолипиды, такие как фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилсерины, фосфатидилинозитолы, фосфатидилглицерины и фосфатидные кислоты. Фосфолипиды также включают фосфосфинголипид, такой как сфингомиелин.
Примеры фосфолипидов включают без ограничения следующие:
В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, является аналогом или вариантом DSPC. В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, представляет собой соединение формулы (IX):
или его соль, где:
каждый R1 независимо представляет собой необязательно замещенный алкил; или два R1 необязательно соединены друг с другом с помощью промежуточных атомов с образованием необязательно замещенного моноциклического карбоциклила или необязательно замещенного моноциклического гетероциклила; или три R1 необязательно соединены друг с другом с помощью промежуточных атомов с образованием необязательно замещенного бициклического карбоциклила или необязательно замещенного бициклического гетероциклила;
n равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
m равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
А имеет формулу 
или 
;
L2 в каждом случае независимо представляет собой связь или необязательно замещенный С1-6алкилен, где одно метиленовое звено необязательно замещенного C1-6алкилена необязательно заменено О, N(RN), S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O или NRNC(O)N(RN);
R2 в каждом случае независимо представляет собой необязательно замещенный C1-30алкил, необязательно замещенный С1-30алкенил или необязательно замещенный C1-30алкинил; где одно или несколько метиленовых звеньев R2 необязательно независимо заменены необязательно замещенным карбоциклиленом, необязательно замещенным гетероциклиленом, необязательно замещенным ариленом, необязательно замещенным гетероариленом, N(RN), О, S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN) или N(RN)S(O)2O;
RN в каждом случае независимо представляет собой водород, необязательно замещенный алкил или защитную группу для атома азота;
кольцо В представляет собой необязательно замещенный карбоциклил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил; и
р равняется 1 или 2;
при условии, что соединение не имеет следующую формулу:
где R2 в каждом случае независимо представляет собой незамещенный алкил, незамещенный алкенил или незамещенный алкинил.
Модификации головок фосфолипидов
В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, содержит модифицированную головку фосфолипида (например, модифицированную холиновую группу). В определенных вариантах осуществления фосфолипид с модифицированной головкой представляет собой DSPC или его аналог с модифицированным четвертичным амином. Например, в вариантах осуществления формулы (IX) по меньшей мере один R1 не представляет собой метил. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере один R1 не представляет собой водород или метил. В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль, где:
каждое t независимо равняется 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
каждое u независимо равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10; и
каждое v независимо равняется 1, 2 или 3.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой одно из следующих соединений:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение формулы (IX-а):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления фосфолипиды, применимые или потенциально применимые в настоящем изобретении, содержат модифицированную сердцевину. В определенных вариантах осуществления фосфолипид с модифицированной сердцевиной, описанный в данном документе, представляет собой DSPC или его аналог с модифицированной структурой сердцевины. Например, в определенных вариантах осуществления формулы (IX-а) группа А не имеет следующую формулу:
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-а) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой одно из следующих соединений:
или их солей.
В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, содержит циклический фрагмент вместо глицеридного фрагмента. В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый в настоящем изобретении, представляет собой DSPC или его аналог с циклическим фрагментом вместо глицеридного фрагмента. В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение формулы (IX-b):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-b) представляет собой соединение формулы (IX-b-1):
или его соль, где:
w равняется 0, 1, 2 или 3.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-b) представляет собой соединение формулы (IX-b-2):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-b) представляет собой соединение формулы (IX-b-3):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-b) представляет собой соединение формулы (IX-b-4):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-b) представляет собой одно из следующих соединений:
или их солей.
Модификации хвостов фосфолипидов
В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, содержит модифицированный хвост. В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, представляет собой DSPC или его аналог с модифицированным хвостом. Описанный в данном документе «модифицированный хвост» может представлять собой хвост с более короткими или более длинными алифатическими цепями, алифатическими цепями с введенным разветвлением, алифатическими цепями с введенными заместителями, алифатическими цепями, в которых одна или несколько метиленовых групп заменены циклическими или гетероатомными группами, или любой их комбинацией. Например, в определенных вариантах осуществления соединение (IX) представляет собой соединение формулы (IX-а) или его соль, где R2 по меньшей мере в одном случае или R2 в каждом случае представляет собой необязательно замещенный С1-30алкил, где одно или несколько метиленовых звеньев R2 независимо заменены необязательно замещенным карбоциклиленом, необязательно замещенным гетероциклиленом, необязательно замещенным ариленом, необязательно замещенным гетероариленом, N(RN), О, S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN) или N(RN)S(O)2O.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение формулы (IX-с):
или его соль, где:
каждое х независимо представляет собой целое число от 0 до 30 включительно; и
G в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного карбоциклилена, необязательно замещенного гетероциклилена, необязательно замещенного арилена, необязательно замещенного гетероарилена, N(RN), О, S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN) или N(RN)S(O)2O. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант осуществления настоящего изобретения.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой соединение формулы (IX-c-1):
или его соль, где:
v в каждом случае независимо равняется 1, 2 или 3.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой соединение формулы (IX-c-2):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой соединение следующей формулы:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой следующее соединение:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой соединение формулы (IX-c-3):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой соединение следующей формулы:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX-с) представляет собой следующее соединение:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, содержит модифицированный фосфохолиновый фрагмент, в котором алкильная цепь, соединяющая четвертичный амин с фосфорильной группой, не представляет собой этилен (например, n не равняется 2). Следовательно, в определенных вариантах осуществления фосфолипид, применимый или потенциально применимый в настоящем изобретении, представляет собой соединение формулы (IX), где n равняется 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Например, в определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (IX) представляет собой одно из следующих соединений:
или их солей.
Альтернативные липиды
В определенных вариантах осуществления используется альтернативный липид вместо фосфолипида по настоящему изобретению. Неограничивающие примеры таких альтернативных липидов включают следующие соединения:
(ii) Структурные липиды
Липидная композиция в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может содержать один или несколько структурных липидов. Используемый в данном документе термин «структурный липид» относится к стеринам, а также к липидам, содержащим стериновые фрагменты.
Включение структурных липидов в состав липидной наночастицы может способствовать уменьшению агрегации других липидов в частице. Структурные липиды могут быть выбраны из группы, включающей без ограничения холестерин, фекостерин, ситостерин, эргостерин, кампестерин, стигмастерин, брассикастерин, томатидин, томатин, урсоловую кислоту, альфа-токоферол, гопаноиды, фитостерины, стероиды и их смеси. В некоторых вариантах осуществления структурный липид представляет собой стерин. Как определено в данном документе, «стерины» представляют собой подгруппу стероидов, состоящую из стероидных спиртов. В определенных вариантах осуществления структурный липид представляет собой стероид. В определенных вариантах осуществления структурный липид представляет собой холестерин. В определенных вариантах осуществления структурный липид представляет собой аналог холестерина. В определенных вариантах осуществления структурный липид представляет собой альфа-токоферол. Примеры структурных липидов включают без ограничения следующие соединения:
В одном варианте осуществления количество структурного липида (например, стерина, такого как холестерин) в липидной композиции в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, находится в диапазоне от приблизительно 20 моль % до приблизительно 60 моль %, от приблизительно 25 моль % до приблизительно 55 моль %, от приблизительно 30 моль % до приблизительно 50 моль % или от приблизительно 35 моль % до приблизительно 45 моль %.
В одном варианте осуществления количество структурного липида (например, стерина, такого как холестерин) в липидной композиции, раскрытой в данном документе, находится в диапазоне от приблизительно 25 моль % до приблизительно 30 моль %, от приблизительно 30 моль % до приблизительно 35 моль % или от приблизительно 35 моль % до приблизительно 40 моль %.
В одном варианте осуществления количество структурного липида (например, стерина, такого как холестерин) в липидной композиции, раскрытой в данном документе, составляет приблизительно 24 моль %, приблизительно 29 моль %, приблизительно 34 моль % или приблизительно 39 моль %.
В некоторых вариантах осуществления количество структурного липида (например, стерина, такого как холестерин) в липидной композиции, раскрытой в данном документе, составляет по меньшей мере приблизительно 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 или 60 моль %.
(iii) Липиды, модифицированные полиэтиленгликолем (PEG)
Липидная композиция в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может содержать один или несколько липидов, модифицированных полиэтиленгликолем (PEG).
Используемый в данном документе термин «PEG-липид» относится к липидам, модифицированным полиэтиленгликолем (PEG). Неограничивающие примеры PEG-липидов включают PEG-модифицированные фосфатидилэтаноламин и фосфатидную кислоту, конъюгаты PEG-церамид (например, PEG-CerC14 или PEG-CerC20), PEG-модифицированные диалкиламины и PEG-модифицированные 1,2-диацилоксипропан-3-амины. Такие липиды также называются пэгилированными липидами. Например, PEG-липид может представлять собой липид PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC или PEG-DSPE.
В некоторых вариантах осуществления PEG-липид включает без ограничения 1,2-димиристоил-sn-глицерин-метоксиполиэтиленгликоль (PEG-DMG), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[амино(полиэтиленгликоль)] (PEG-DSPE), PEG-дистеарилглицерин (PEG-DSG), дипальмитолеил-PEG, диолеил-PEG, дистеарил-PEG, PEG-диацилгликамид (PEG-DAG), PEG-дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (PEG-DPPE) или РЕС-1,2-димиристилоксипропил-3-амин (PEG-c-DMA).
В одном варианте осуществления PEG-липид выбран из группы, состоящей из PEG-модифицированного фосфатидилэтаноламина, PEG-модифицированной фосфатидной кислоты, PEG-модифицированного церамида, PEG-модифицированного диалкиламина, PEG-модифицированного диацилглицерина, PEG-модифицированного диалкилглицерина и их смесей.
В некоторых вариантах осуществления липидный фрагмент PEG-липидов фрагменты, имеющие длину, составляющую от приблизительно С14 до приблизительно С22, предпочтительно от приблизительно С14 до приблизительно C16. В некоторых вариантах осуществления PEG-фрагмент, например, mPEG-NH2, имеет размер, составляющий приблизительно 1000, 2000, 5000, 10000, 15000 или 20000 дальтон. В одном варианте осуществления PEG-липид представляет собой PEG2k-DMG.
В одном варианте осуществления липидные наночастицы, описанные в данном документе, могут содержать PEG-липид, который представляет собой недиффундирующий PEG. Неограничивающие примеры недиффундирующих PEG включают PEG-DSG и PEG-DSPE.
PEG-липиды известны из уровня техники, как, например, описанные в патенте США №8158601 и публикации международной заявки № WO 2015/130584 А2, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Как правило, некоторые из других липидных компонентов (например, PEG-липиды) различных формул, описанные в данном документе, можно синтезировать согласно описанному в международной заявке на патент № PCT/US 2016/000129, поданной 10 декабря 2016 г., под названием "Compositions and Methods for Delivery of Therapeutic Agents", которая включена посредством ссылки во всей своей полноте.
Липидный компонент композиции на основе липидных наночастиц может включать одну или несколько молекул, содержащих полиэтиленгликоль, таких как PEG или PEG-модифицированные липиды. Такие молекулы могут иначе называться пэгилированными липидами. PEG-липид представляет собой липид, модифицированный полиэтиленгликолем. PEG-липид может быть выбран из неограничивающей группы, включающей PEG-модифицированные фосфатидилэтаноламины, PEG-модифицированные фосфатидные кислоты, PEG-модифицированные церамиды, PEG-модифицированные диалкиламины, PEG-модифицированные диацилглицерины, PEG-модифицированные диалкилглицерины и их смеси. Например, PEG-липид может представлять собой липид PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC или PEG-DSPE.
В некоторых вариантах осуществления PEG-модифицированные липиды представляют собой модифицированную форму PEG-DMG. PEG-DMG имеет следующую структуру:
В одном варианте осуществления PEG-липиды, применимые в настоящем изобретении, могут представлять собой пэгилированные липиды, описанные в публикации международной заявки № WO 2012099755, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Любые такие иллюстративные PEG-липиды, описанные в данном документе, могут быть модифицированы таким образом, чтобы они содержали гидроксильную группу в цепи PEG. В определенных вариантах осуществления PEG-липид представляет собой PEG-ОН-липид. Как в целом определено в данном документе, «PEG-OH-липид» (также называемый в данном документе «гидроксипэгилированным липидом») представляет собой пэгилированный липид, имеющий одну или несколько гидроксильных (-ОН) групп в липиде. В определенных вариантах осуществления PEG-OH-липид содержит одну или несколько гидроксильных групп в цепи PEG. В определенных вариантах осуществления PEG-OH- или гидроксипэгилированный липид содержит группу -ОН на конце цепи PEG. Каждый возможный вариант представляет собой отдельный вариант осуществления настоящего изобретения.
В определенных вариантах осуществления PEG-липид, применимый в настоящем изобретении, представляет собой соединение формулы (VII). В данном документе предусмотрены соединения формулы (VII):
или их соли, где:
R3 представляет собой -ORO;
RO представляет собой водород, необязательно замещенный алкил или защитную группу для атома кислорода;
r представляет собой целое число от 1 до 100 включительно;
L1 представляет собой необязательно замещенный С1-10алкилен, где по меньшей мере один метилен необязательно замещенного С1-10алкилена независимо заменен необязательно замещенным карбоциклиленом, необязательно замещенным гетероциклиленом, необязательно замещенным ариленом, необязательно замещенным гетероариленом, О, N(RN), S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O или NRNC(O)N(RN);
D представляет собой фрагмент, получаемый с помощью клик-химии, или фрагмент, расщепляемый в физиологических условиях;
m равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
А имеет формулу или ;
L2 в каждом случае независимо представляет собой связь или необязательно замещенный С1-6алкилен, где одно метиленовое звено необязательно замещенного С1-6алкилена необязательно заменено О, N(RN), S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O или NRNC(O)N(RN);
R2 в каждом случае независимо представляет собой необязательно замещенный С1-30алкил, необязательно замещенный С1-30алкенил или необязательно замещенный C1-30алкинил; где одно или несколько метиленовых звеньев R2 необязательно независимо заменены необязательно замещенным карбоциклиленом, необязательно замещенным гетероциклиленом, необязательно замещенным ариленом, необязательно замещенным гетероариленом, N(RN), О, S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN) или N(RN)S(O)2O;
RN в каждом случае независимо представляет собой водород, необязательно замещенный алкил или защитную группу для атома азота;
кольцо В представляет собой необязательно замещенный карбоциклил, необязательно замещенный гетероциклил, необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил; и
р равняется 1 или 2.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой PEG-OH-липид (т.е. R3 представляет собой -ORO, и RO представляет собой водород). В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение формулы (VII-OH):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления D представляет собой фрагмент, получаемый с помощью клик-химии (например, триазол). В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение формулы (VII-a-1) или (VII-a-2):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII)
представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль, где
s равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления D представляет собой фрагмент, расщепляемый в физиологических условиях (например, сложный эфир, амид, карбонат, карбамат, мочевину). В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение формулы (VII-b-1) или (VII-b-2):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение формулы (VII-b-1-ОН) или (VII-b-2-ОН):
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соли.
В определенных вариантах осуществления PEG-липид, применимый в настоящем изобретении, представляет собой пэгилированную жирную кислоту. В определенных вариантах осуществления PEG-липид, применимый в настоящем изобретении, представляет собой соединение формулы (VIII). В данном документе предусмотрены соединения формулы (VIII):
или их соли, где:
R3 представляет собой -ORO;
RO представляет собой водород, необязательно замещенный алкил или защитную группу для атома кислорода;
r представляет собой целое число от 1 до 100 включительно;
R5 представляет собой необязательно замещенный С10-40алкил, необязательно замещенный С10-40алкенил или необязательно замещенный С10-40алкинил; и одна или несколько метиленовых групп R5 необязательно заменены необязательно замещенным карбоциклиленом, необязательно замещенным гетероциклиленом, необязательно замещенным ариленом, необязательно замещенным гетероариленом, N(RN), О, S, С(О), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), С(O)O, ОС(О), ОС(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN) или N(RN)S(O)2O; и
RN в каждом случае независимо представляет собой водород, необязательно замещенный алкил или защитную группу для атома азота.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VIII) представляет собой соединение формулы (VIII-OH):
или его соль. В некоторых вариантах осуществления г равняется 45.
В определенных вариантах осуществления соединение формулы (VIII) представляет собой соединение одной из следующих формул:
или его соль. В некоторых вариантах осуществления г равняется 45.
В еще нескольких других вариантах осуществления соединение формулы (VIII) представляет собой
или его соль.
В одном варианте осуществления соединение формулы (VIII) представляет собой
В одном варианте осуществления количество PEG-липида в липидной композиции в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, находится в диапазоне от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 5 моль %, от приблизительно 0,5 моль % до приблизительно 5 моль %, от приблизительно 1 моль % до приблизительно 5 моль %, от приблизительно 1,5 моль % до приблизительно 5 моль %, от приблизительно 2 моль % до приблизительно 5 моль %, от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 4 моль %, от приблизительно 0,5 моль % до приблизительно 4 моль %, от приблизительно 1 моль % до приблизительно 4 моль %, от приблизительно 1,5 моль % до приблизительно 4 моль %, от приблизительно 2 моль % до приблизительно 4 моль %, от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 3 моль %, от приблизительно 0,5 моль % до приблизительно 3 моль %, от приблизительно 1 моль % до приблизительно 3 моль %, от приблизительно 1,5 моль % до приблизительно 3 моль %, от приблизительно 2 моль % до приблизительно 3 моль %, от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 2 моль %, от приблизительно 0,5 моль % до приблизительно 2 моль %, от приблизительно 1 моль % до приблизительно 2 моль %, от приблизительно 1,5 моль % до приблизительно 2 моль %, от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 1,5 моль %, от приблизительно 0,5 моль % до приблизительно 1,5 моль % или от приблизительно 1 моль % до приблизительно 1,5 моль %.
В одном варианте осуществления количество PEG-липида в липидной композиции, раскрытой в данном документе, составляет приблизительно 2 моль %. В одном варианте осуществления количество PEG-липида в липидной композиции, раскрытой в данном документе, составляет приблизительно 1,5 моль %.
В одном варианте осуществления количество PEG-липида в липидной композиции, раскрытой в данном документе, составляет по меньшей мере приблизительно 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9 или 5 моль %.
В некоторых аспектах липидная композиция в составе фармацевтических композиций, раскрытых в данном документе, не содержит PEG-липид.
(iv) Другие ионизируемые аминолипиды
Липидная композиция в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может содержать один или несколько ионизируемых аминолипидов в дополнение к липиду формулы (I), (III), (IV), (V) или (VI).
Ионизируемые липиды могут быть выбраны из неограничивающей группы, состоящей из 3-(дидодециламино)-N1,N1,4-тридодецил-1-пиперазинэтанамина (KL10), N1-[2-(дидодециламино)этил]-N1,N4,N4-тридодецил-1,4-пиперазиндиэтанамина (KL22), 14,25-дитридецил-15,18,21,24-тетраазаоктатриаконтана (KL25), 1,2-дилинолеилокси-N,N-диметиламинопропана (DLin-DMA), 2,2-дилинолеил-4-диметиламинометил-[1,3]-диоксолана (DLin-K-DMA), гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4-(диметиламино)бутаноата (DLin-MC3-DMA), 2,2-дилинолеил-4-(2-диметиламиноэтил)-[1,3]-диоксолана (DLin-KC2-DMA), 1,2-диолеилокси-N,N-диметиламинопропана (DODMA), (13Z,165Z)-N,N-диметил-3-нонилдокоза-13-16-диен-1-амина (L608), 2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (октил-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (октил-CLinDMA (2R)) и (2S)-2-({8-[(3β)-холест-5-ен-3-илокси]октил}окси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-1-амина (октил-CLinDMA (2S)). В дополнение к ним ионизируемый аминолипид может также представлять собой липид, содержащий циклическую аминогруппу.
Ионизируемые липиды также могут представлять собой соединения, раскрытые в публикации международной заявки № WO 2017/075531 А1, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Например, ионизируемые аминолипиды включают без ограничения:
а также любую их комбинацию.
Ионизируемые липиды также могут представлять собой соединения, раскрытые в публикации международной заявки № WO 2015/199952 А1, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Например, ионизируемые аминолипиды включают без ограничения:
а также любую их комбинацию.
(v) Другие компоненты липидной композиции
Липидная композиция в составе фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может содержать один или несколько компонентов в дополнение к описанным выше. Например, липидная композиция может содержать одну или несколько молекул, повышающих проницаемость, углеводов, полимеров, средств, изменяющих свойства поверхности (например, поверхностно-активных веществ), или других компонентов. Например, молекула, повышающая проницаемость, может представлять собой молекулу, описанную в публикации заявки на патент США №2005/0222064. Углеводы могут включать простые сахара (например, глюкозу) и полисахариды (например, гликоген и его производные и аналоги).
Полимер может быть включен в состав фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе (например, фармацевтической композиции в виде липидных наночастиц), и/или использоваться для ее инкапсулирования или частичного инкапсулирования. Полимер может быть биоразлагаемым и/или биосовместимым. Полимер может быть выбран без ограничения из полиаминов, простых полиэфиров, полиамидов, сложных полиэфиров, поликарбаматов, полимочевин, поликарбонатов, полистиролов, полиимидов, полисульфонов, полиуретанов, полиацетиленов, полиэтиленов, полиэтилениминов, полиизоцианатов, полиакрилатов, полиметакрилатов, полиакрилонитрилов и полиарилатов.
Соотношение липидной композиции и полинуклеотида может находиться в диапазоне от приблизительно 10:1 до приблизительно 60:1 (вес/вес).
В некоторых вариантах осуществления соотношение липидной композиции и полинуклеотида может составлять приблизительно 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 21:1, 22:1, 23:1, 24:1, 25:1, 26:1, 27:1, 28:1, 29:1, 30:1, 31:1, 32:1, 33:1, 34:1, 35:1, 36:1, 37:1, 38:1, 39:1, 40:1, 41:1, 42:1, 43:1, 44:1, 45:1, 46:1, 47:1, 48:1, 49:1, 50:1, 51:1, 52:1, 53:1, 54:1, 55:1, 56:1, 57:1, 58:1, 59:1 или 60:1 (вес/вес). В некоторых вариантах осуществления соотношение липидной композиции и полинуклеотида, кодирующего терапевтическое средство, составляет приблизительно 20:1 или приблизительно 15:1 вес/вес.
В одном варианте осуществления липидные наночастицы, описанные в данном документе, могут содержать полинуклеотиды (например, мРНК) при весовом соотношении липид : полинуклеотид, составляющем 5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1 или 70:1 или находящемся в диапазоне между любыми этими соотношениями, как, например, без ограничения от 5:1 до приблизительно 10:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 15:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 20:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 25:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 30:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 35:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 40:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 45:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 55:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 60:1, от приблизительно 5:1 до приблизительно 70:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 15:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 20:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 25:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 30:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 35:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 40:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 45:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 55:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 60:1, от приблизительно 10:1 до приблизительно 70:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 20:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 25:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 30:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 35:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 40:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 45:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 50:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 55:1, от приблизительно 15:1 до приблизительно 60:1 или от приблизительно 15:1 до приблизительно 70:1.
В одном варианте осуществления липидные наночастицы, описанные в данном документе, могут содержать полинуклеотид в концентрации от примерно 0,1 мг/мл до 2 мг/мл, как, например, без ограничения 0,1 мг/мл, 0,2 мг/мл, 0,3 мг/мл, 0,4 мг/мл, 0,5 мг/мл, 0,6 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,8 мг/мл, 0,9 мг/мл, 1,0 мг/мл, 1,1 мг/мл, 1,2 мг/мл, 1,3 мг/мл, 1,4 мг/мл, 1,5 мг/мл, 1,6 мг/мл, 1,7 мг/мл, 1,8 мг/мл, 1,9 мг/мл, 2,0 мг/мл или более 2,0 мг/мл.
(vi) Композиции на основе наночастиц
В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции, раскрытые в данном документе, составлены в виде липидных наночастиц (LNP). Соответственно, в настоящем изобретении также предусмотрены композиции на основе наночастиц, содержащие (i) липидную композицию, содержащую средство доставки, такое как соединение формулы (I) или (III), описанное в данном документе, и (ii) полинуклеотид, кодирующий полипептид релаксин. В такой композиции на основе наночастиц липидная композиция, раскрытая в данном документе, может инкапсулировать полинуклеотид, кодирующий полипептид релаксин.
Композиции на основе наночастиц, как правило, имеют размеры микрометрового порядка или меньше и могут содержать липидный бислой. Композиции на основе наночастиц охватывают липидные наночастицы (LNP), липосомы (например, липидные везикулы) и липоплексы. Например, композиция на основе наночастиц может представлять собой липосому, имеющую липидный бислой, диаметром 500 нм или меньше.
Композиции на основе наночастиц включают, например, липидные наночастицы (LNP), липосомы и липоплексы. В некоторых вариантах осуществления композиции на основе наночастиц представляют собой везикулы, содержащие один или несколько липидных бислоев. В определенных вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит два или более концентрических бислоя, разделенных водными компартментами. Липидные бислои могут быть функционализированными и/или сшитыми друг с другом. Липидные бислои могут содержать один или несколько лигандов, белков или каналов.
В некоторых вариантах осуществления композиции на основе наночастиц согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), (III), (IV), (V) или (VI). Например, композиция на основе наночастиц может содержать одно или несколько из соединений 1-147 или одно или несколько из соединений 1-342. Композиции на основе наночастиц также могут содержать ряд других компонентов. Например, композиция на основе наночастиц может содержать один или несколько других липидов в дополнение к липиду формулы (I), (III), (IV), (V) или (VI), таких как (i) по меньшей мере один фосфолипид, (ii) по меньшей мере один структурный липид, (iii) по меньшей мере один PEG-липид или (iv) любую их комбинацию. Включение структурного липида может быть необязательным, например, если в композициях на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению используют липиды формулы III.
В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит соединение формулы (I) (например, соединения 18, 25, 26 или 48). В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит соединение формулы (I) (например, соединения 18, 25, 26 или 48) и фосфолипид (например, DSPC).
В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит соединение формулы (III) (например, соединение 236). В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит соединение формулы (III) (например, соединение 236) и фосфолипид (например, DOPE или DSPC).
В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (I) (например, соединений 18, 25, 26 или 48) или состоящую фактически из него. В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (I) (например, соединений 18, 25, 26 или 48) и фосфолипида (например, DSPC) или состоящую фактически из них.
В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (III) (например, соединения 236) или состоящую фактически из него. В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (III) (например, соединения 236) и фосфолипида (например, DOPE или DSPC) или состоящую фактически из них.
В одном варианте осуществления липидная наночастица содержит ионизируемый липид, структурный липид, фосфолипид и мРНК. В некоторых вариантах осуществления LNP содержит ионизируемый липид, PEG-модифицированный липид, стерин и структурный липид. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов, составляющим приблизительно 20-60% ионизируемого липида: приблизительно 5-25% структурного липида : приблизительно 25-55% стерина : и приблизительно 0,5-15% PEG-модифицированного липида. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов, составляющим приблизительно 50% ионизируемого липида, приблизительно 1,5% PEG-модифицированного липида, приблизительно 38,5% холестерина и приблизительно 10% структурного липида. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов, составляющим приблизительно 55% ионизируемого липида, приблизительно 2,5% PEG-липида, приблизительно 32,5% холестерина и приблизительно 10% структурного липида. В некоторых вариантах осуществления ионизируемый липид представляет собой ионизируемый липид, и структурный липид представляет собой нейтральный липид, а стерин представляет собой холестерин. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов 50:38,5:10:1,5, соответствующим ионизируемому липиду : холестерину: DSPC: PEG-липиду. В некоторых вариантах осуществления ионизируемый липид представляет собой соединение 18 или соединение 236, а PEG-липид представляет собой соединение 428.
В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов 50:38,5:10:1,5, соответствующим соединению 18: фосфолипиду : холестерину : соединению 428. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов 50:38,5:10:1,5, соответствующим соединению 18 : DSPC : холестерину : соединению 428.
В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов 50:38,5:10:1,5, соответствующим соединению 236 : фосфолипиду : холестерину : соединению 428. В некоторых вариантах осуществления LNP характеризуется молярным соотношением компонентов 50:38,5:10:1,5, соответствующим соединению 236 : DSPC : холестерину: соединению 428.
В некоторых вариантах осуществления LNP имеет показатель полидисперсности, составляющий менее 0,4. В некоторых вариантах осуществления LNP имеет суммарный нейтральный заряд при нейтральном рН. В некоторых вариантах осуществления LNP имеет средний диаметр, составляющий 50-150 нм. В некоторых вариантах осуществления LNP имеет средний диаметр, составляющий 80-100 нм.
Как в целом определено в данном документе, термин «липид» относится к малой молекуле, обладающей гидрофобными или амфифильными свойствами. Липиды могут быть природными или синтетическими. Примеры классов липидов включают без ограничения жиры, воски, стериносодержащие метаболиты, витамины, жирные кислоты, глицеролипиды, глицерофосфолипиды, сфинголипиды, сахаролипиды и поликетиды, а также преноловые липиды. В некоторых случаях амфифильные свойства некоторых липидов приводят к образованию ими липосом, везикул или мембран в водных средах.
В некоторых вариантах осуществления липидная наночастица (LNP) может содержать ионизируемый липид. Используемый в данном документе термин «ионизируемый липид» имеет свое обычное значение в данной области и может относиться к липиду, содержащему один или несколько заряженных фрагментов. В некоторых вариантах осуществления ионизируемый липид может быть положительно заряженным или отрицательно заряженным. Ионизируемый липид может быть положительно заряженным, и в этом случае он может называться «катионным липидом». В определенных вариантах осуществления молекула ионизируемого липида может содержать аминогруппу и может называться ионизируемым аминолипидом. Как используется в данном документе, «заряженный фрагмент» представляет собой химический фрагмент, который несет формальный электронный заряд, например, одновалентный (+1 или -1), двухвалентный (+2 или -2), трехвалентный (+3 или -3) и т.д. Заряженный фрагмент может быть анионным (т.е. отрицательно заряженным) или катионным (т.е. положительно заряженным). Примеры положительно заряженных фрагментов включают аминогруппы (например, первичные, вторичные и/или третичные амины), аммонийные группы, пиридиниевую группу, гуанидиновые группы и имидазолийные группы. В конкретном варианте осуществления заряженные фрагменты содержат аминогруппы. Примеры отрицательно заряженных групп или их предшественников включают карбоксилатные группы, сульфонатные группы, сульфатные группы, фосфонатные группы, фосфатные группы, гидроксильные группы и им подобные. Заряд заряженного фрагмента может в некоторых случаях варьироваться в зависимости от условий окружающей среды, например, в результате изменений рН заряд фрагмента может изменяться и/или фрагмент может становиться заряженным или незаряженным. Как правило, плотность заряда молекулы может быть выбрана произвольно.
Следует понимать, что термины «заряженный» или «заряженный фрагмент» не относятся к «частичному отрицательному заряду» или «частичному положительному заряду» на молекуле. Термины «частичный отрицательный заряд» и «частичный положительный заряд» приведены в их обычном значении в данной области. «Частичный отрицательный заряд» может возникать в тех случаях, когда функциональная группа содержит связь, которая становится поляризованной, поэтому электронная плотность смещается к одному атому, образующему связь, с созданием частичного отрицательного заряда на атоме. Специалисты в данной области, как правило, распознают связи, которые могут становиться поляризованными таким образом.
В некоторых вариантах осуществления ионизируемый липид представляет собой ионизируемый аминолипид, иногда называемый в данной области «ионизируемым катионным липидом». В одном варианте осуществления ионизируемый аминолипид может иметь положительно заряженную гидрофильную головку и гидрофобный хвост, которые соединены посредством линкерной структуры.
В дополнение к ним ионизируемый липид может также представлять собой липид, содержащий циклическую аминогруппу.
В одном варианте осуществления ионизируемый липид может быть выбран без ограничения из ионизируемого липида, описанного в публикациях международных заявок №№ WO 2013086354 и WO 2013116126; содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В еще одном варианте осуществления ионизируемый липид может быть выбран без ограничения из формул CLI-CLXXXXII патента США №7404969; который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В одном варианте осуществления липид может представлять собой расщепляемый липид, такой как липиды, описанные в публикации международной заявки № WO 2012170889, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В одном варианте осуществления липид может быть синтезирован с помощью способов, известных из уровня техники, и/или согласно описанному в публикации международной заявки № WO 2013086354; содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Характеристики композиций на основе наночастиц можно получить с помощью ряда способов. Например, для изучения морфологических характеристик и распределения по размерам композиции на основе наночастиц можно использовать микроскопию (например, трансмиссионную электронную микроскопию или сканирующую электронную микроскопию). Для измерения дзета-потенциалов можно использовать динамическое рассеяние света или потенциометрию (например, процедуры потенциометрического титрования). Динамическое рассеяние света также можно использовать для определения размеров частиц. Для измерения нескольких характеристик композиции на основе наночастиц, таких как размер частиц, коэффициент полидисперсности и дзета-потенциал, также можно использовать такие приборы, как Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Малверн, Вустершир, Великобритания).
В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (I) (например, соединений 18, 25, 26 или 48) или состоящую фактически из него. В некоторых вариантах осуществления композиция на основе наночастиц содержит липидную композицию, состоящую из соединения формулы (I) (например, соединений 18, 25, 26 или 48) и фосфолипида (например, DSPC или MSPC) или состоящую фактически из него.
Характеристики композиций на основе наночастиц можно получить с помощью ряда способов. Например, для изучения морфологических характеристик и распределения по размерам композиции на основе наночастиц можно использовать микроскопию (например, трансмиссионную электронную микроскопию или сканирующую электронную микроскопию). Для измерения дзета-потенциалов можно использовать динамическое рассеяние света или потенциометрию (например, процедуры потенциометрического титрования). Динамическое рассеяние света также можно использовать для определения размеров частиц. Для измерения нескольких характеристик композиции на основе наночастиц, таких как размер частиц, коэффициент полидисперсности и дзета-потенциал, также можно использовать такие приборы, как Zetasizer Nano ZS (Malvem Instruments Ltd, Малверн, Вустершир, Великобритания).
Размер наночастиц может способствовать противодействию биологическим реакциям, таким как без ограничения воспаление, или может обеспечивать увеличение биологического эффекта полинуклеотида.
Как используется в данном документе, «размер» или «средний размер» применительно к композициям на основе наночастиц относится к среднему диаметру в композиции на основе наночастиц.
В одном варианте осуществления полинуклеотид, кодирующий полипептид релаксин, составлен в липидных наночастицах, имеющих диаметр, составляющий от приблизительно 10 до приблизительно 100 нм, как, например, без ограничения от приблизительно 10 до приблизительно 20 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 30 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 30 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 80 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 80 до приблизительно 100 нм и/или от приблизительно 90 до приблизительно 100 нм.
В одном варианте осуществления наночастицы имеют диаметр, составляющий от приблизительно 10 до 500 нм. В одном варианте осуществления наночастица имеет диаметр более 100 нм, более 150 нм, более 200 нм, более 250 нм, более 300 нм, более 350 нм, более 400 нм, более 450 нм, более 500 нм, более 550 нм, более 600 нм, более 650 нм, более 700 нм, более 750 нм, более 800 нм, более 850 нм, более 900 нм, более 950 нм или более 1000 нм.
В некоторых вариантах осуществления наибольший размер в композиции на основе наночастиц составляет 1 мкм или меньше (например, 1 мкм, 900 нм, 800 нм, 700 нм, 600 нм, 500 нм, 400 нм, 300 нм, 200 нм, 175 нм, 150 нм, 125 нм, 100 нм, 75 нм, 50 нм или меньше).
Композиция на основе наночастиц может быть относительно однородной. Для указания однородности композиции на основе наночастиц, например, распределения частиц по размерам в композиции на основе наночастиц, можно использовать коэффициент полидисперсности. Небольшой (например, менее 0,3) коэффициент полидисперсности обычно указывает на узкое распределение частиц по размерам. Композиция на основе наночастиц может характеризоваться коэффициентом полидисперсности, составляющим от приблизительно 0 до приблизительно 0,25, таким как 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,20, 0,21, 0,22, 0,23, 0,24 или 0,25. В некоторых вариантах осуществления коэффициент полидисперсности композиции на основе наночастиц, раскрытой в данном документе, может составлять от приблизительно 0,10 до приблизительно 0,20.
Дзета-потенциал композиции на основе наночастиц можно использовать для указания электрокинетического потенциала композиции. Например, дзета-потенциал может описывать поверхностный заряд композиции на основе наночастиц. Обычно желательными являются композиции на основе наночастиц с относительно низкими положительными или отрицательными зарядами, поскольку молекулы с более высоким зарядом могут характеризоваться нежелательным взаимодействием с клетками, тканями и другими элементами в организме. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал композиции на основе наночастиц, раскрытой в данном документе, может составлять от приблизительно -10 мВ до приблизительно +20 мВ, от приблизительно -10 мВ до приблизительно +15 мВ, от приблизительно -10 мВ до приблизительно +10 мВ, от приблизительно -10 мВ до приблизительно +5 мВ, от приблизительно -10 мВ до приблизительно 0 мВ, от приблизительно -10 мВ до приблизительно -5 мВ, от приблизительно -5 мВ до приблизительно+20 мВ, от приблизительно -5 мВ до приблизительно +15 мВ, от приблизительно -5 мВ до приблизительно +10 мВ, от приблизительно -5 мВ до приблизительно +5 мВ, от приблизительно -5 мВ до приблизительно 0 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно +20 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно +15 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно +10 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно +5 мВ, от приблизительно +5 мВ до приблизительно +20 мВ, от приблизительно +5 мВ до приблизительно +15 мВ или от приблизительно +5 мВ до приблизительно +10 мВ.
В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал липидных наночастиц может составлять от приблизительно 0 мВ до приблизительно 100 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 90 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 80 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 70 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 60 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 50 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 40 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 30 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 20 мВ, от приблизительно 0 мВ до приблизительно 10 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 100 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 90 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 80 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 70 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 60 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 50 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 40 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 30 мВ, от приблизительно 10 мВ до приблизительно 20 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 100 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 90 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 80 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 70 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 60 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 50 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 40 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 30 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 100 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 90 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 80 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 70 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 60 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 50 мВ, от приблизительно 30 мВ до приблизительно 40 мВ, от приблизительно 40 мВ до приблизительно 100 мВ, от приблизительно 40 мВ до приблизительно 90 мВ, от приблизительно 40 мВ до приблизительно 80 мВ, от приблизительно 40 мВ до приблизительно 70 мВ, от приблизительно 40 мВ до приблизительно 60 мВ и от приблизительно 40 мВ до приблизительно 50 мВ. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал липидных наночастиц может составлять от приблизительно 10 мВ до приблизительно 50 мВ, от приблизительно 15 мВ до приблизительно 45 мВ, от приблизительно 20 мВ до приблизительно 40 мВ и от приблизительно 25 мВ до приблизительно 35 мВ. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал липидных наночастиц может составлять приблизительно 10 мВ, приблизительно 20 мВ, приблизительно 30 мВ, приблизительно 40 мВ, приблизительно 50 мВ, приблизительно 60 мВ, приблизительно 70 мВ, приблизительно 80 мВ, приблизительно 90 мВ и приблизительно 100 мВ.
Термин «эффективность инкапсулирования» полинуклеотида описывает количество полинуклеотида, инкапсулированного в композиции на основе наночастиц или иным образом связанного с ней после получения по отношению к исходно предусмотренному количеству. Как используется в данном документе, «инкапсулирование» может относиться к полному, существенному или частичному отделению, заключению, окружению или упаковыванию.
Желательно, чтобы эффективность инкапсулирования была высокой (например, близкой к 100%). Эффективность инкапсулирования можно измерить, например, путем сравнения количества полинуклеотида в растворе, содержащем композицию на основе наночастиц, до и после разрушения композиции на основе наночастиц с помощью одного или нескольких органических растворителей или детергентов.
Для измерения количества свободного полинуклеотида в растворе можно использовать флуоресценцию. Для композиций на основе наночастиц, описанных в данном документе, эффективность инкапсулирования полинуклеотида может составлять по меньшей мере 50%, например, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%. В некоторых вариантах осуществления эффективность инкапсулирования может составлять по меньшей мере 80%. В определенных вариантах осуществления эффективность инкапсулирования может составлять по меньшей мере 90%.
Количество полинуклеотида, присутствующего в фармацевтической композиции, раскрытой в данном документе, может зависеть от нескольких факторов, таких как размер полинуклеотида, требуемая цель и/или применение, или от других свойств композиции на основе наночастиц, а также от свойств полинуклеотида.
Например, количество мРНК, применимой в композиции на основе наночастиц, может зависеть от размера (выраженного в виде длины или молекулярной массы), последовательности и других характеристик мРНК. Относительные количества полинуклеотида в композиции на основе наночастиц также могут варьироваться.
Относительные количества липидной композиции и полинуклеотида, присутствующего в композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, можно оптимизировать из соображений эффективности и переносимости. Для композиций, содержащих мРНК в качестве полинуклеотида, соотношение N:P может служить применимым метрическим критерием.
Поскольку соотношение N:P в композиции на основе наночастиц регулирует как экспрессию, так и переносимость, то желательными являются композиции на основе наночастиц с низкими соотношениями N:P и сильной экспрессией. Соотношения N:P варьируются в зависимости от соотношения липидов и РНК в композиции на основе наночастиц.
Как правило, предпочтительным является более низкое соотношение N:P. Одно или несколько из РНК, липидов и их количеств могут быть выбраны для обеспечения соотношения N:P от приблизительно 2:1 до приблизительно 30:1, такого как 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 22:1, 24:1, 26:1, 28:1 или 30:1. В определенных вариантах осуществления соотношение N:P может составлять от приблизительно 2:1 до приблизительно 8:1. В других вариантах осуществления соотношение N:P составляет от приблизительно 5:1 до приблизительно 8:1. В определенных вариантах осуществления соотношение N:P составляет от 5:1 до 6:1. В одном конкретном аспекте соотношение N:P составляет приблизительно 5,67:1.
В настоящем изобретении в дополнение к предусмотренным композициям на основе наночастиц также предусмотрены способы получения липидных наночастиц, предусматривающие инкапсулирование полинуклеотида. Такой способ предусматривает использованием любой из фармацевтических композиций, раскрытых в данном документе, и получение липидных наночастиц в соответствии со способами получения липидных наночастиц, известных из уровня техники. См., например, Wang et al. (2015) "Delivery of oligonucleotides with lipid nanoparticles". Adv. Drug Deliv. Rev. 87:68-80; Silva et al. (2015) "Delivery Systems for Biopharmaceuticals. Part I: Nanoparticles and Microparticles", Curr. Pharm. Technol. 16: 940-954; Naseri et al. (2015) "Solid Lipid Nanoparticles and Nano structured Lipid Carriers: Structure, Preparation and Application", Adv. Pharm. Bull. 5:305-13; Silva et al. (2015) "Lipid nanoparticles for the delivery of biopharmaceuticals", Curr. Pharm. Biotechnol. 16:291-302, и литературные источники, цитируемые в них.
Другие средства доставки
а. Липосомы, липоплексы и липидные наночастицы
В некоторых вариантах осуществления композиции или составы по настоящему изобретению содержат средство доставки, например, липосому, липоплексы, липидную наночастицу или любую их комбинацию. Полинуклеотиды, описанные в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин), можно составлять с использованием одной или нескольких липосом, липоплексов или липидных наночастиц. Липосомы, липоплексы или липидные наночастицы можно использовать для улучшения эффективности управляемого полинуклеотидами продуцирования белков, поскольку такие составы могут увеличивать уровень трансфекции клеток полинуклеотидом и/или увеличивать уровень трансляции кодируемого белка. Липосомы, липоплексы или липидные наночастицы также можно использовать для увеличения стабильности полинуклеотидов.
Липосомы представляют собой везикулы, полученные искусственным путем, которые могут состоять главным образом из липидного бислоя и могут использоваться в качестве средства доставки для введения фармацевтических составов. Липосомы могут иметь различные размеры. Многослойная везикула (MLV) может быть диаметром в несколько сотен нанометров и может содержать ряд концентрических бислоев, разделенных узкими водными компартментами. Малая однослойная везикула (SUV) может быть диаметром менее 50 нм, а большая однослойная везикула (LUV) может быть диаметром 50-500 нм. В структуре липосомы могут содержаться без ограничения опсонины или лиганды для улучшения прикрепления липосом к пораженной ткани или для активации процессов, таких как без ограничения эндоцитоз. Липосомы могут иметь низкое или высокое значение рН с целью улучшения доставки фармацевтических составов.
Образование липосом может зависеть от захваченного фармацевтического состава и ингредиентов липосом, природы среды, в которой диспергированы липидные везикулы, эффективной концентрации захваченного вещества и его потенциальной токсичности, любых дополнительных способов, задействованных в ходе применения и/или доставки везикул, оптимального размера, полидисперсности и срока годности везикул для предполагаемого применения, а также от воспроизводимости от партии к партии и производства в увеличенных масштабах безопасных и эффективных липосомальных продуктов и т.д.
В качестве неограничивающего примера липосомы, такие как синтетические мембранные везикулы, можно получить с помощью способов, аппаратов и устройств, описанных в публикациях заявок на патент США №№ US 20130177638, US 20130177637, US 20130177636, US 20130177635, US 20130177634, US 20130177633, US 20130183375, US 20130183373 и US 20130183372. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть инкапсулированы в липосоме, и/или они могут содержаться в водной сердцевине, которая затем может быть инкапсулирована в липосоме, как описано, например, в публикациях международных заявок №№ WO 2012031046, WO 2012031043, WO 2012030901, WO 2012006378 и WO 2013086526; а также в публикациях заявок на патент США №№ US 20130189351, US 20130195969 и US 20130202684. Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в катионной эмульсии типа «масло в воде», где частица эмульсии содержит масляную сердцевину и катионный липид, который может взаимодействовать с полинуклеотидом, заякоривая молекулу в частице эмульсии. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в эмульсии типа «вода в масле», содержащей непрерывную гидрофобную фазу, в которой диспергирована гидрофильная фаза. Иллюстративные эмульсии можно получить с помощью способов, описанных в публикациях международных заявок №№ WO 2012006380 и WO 201087791, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в комплексе липид-поликатион. Образование комплекса липид-поликатион может быть достигнуто с использованием способов, описанных, например, в публикации заявки на патент США № US 20120178702. В качестве неограничивающего примера поликатион может включать катионный пептид или полипептид, такие как без ограничения полилизин, полиорнитин и/или полиаргинин и катионные пептиды, описанные в публикации международной заявки № WO 2012013326 или публикации заявки на патент США № US 20130142818. Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в липидной наночастице (LNP), в такой как наночастицы, описанные в публикациях международных заявок №№ WO 2013123523, WO 2012170930, WO 2011127255 и WO 2008103276; а также в публикации заявки на патент США № US 20130171646, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Составы на основе липидных наночастиц, как правило, содержат один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления липид представляет собой катионный или ионизируемый липид. В некоторых вариантах осуществления составы на основе липидных наночастиц дополнительно содержат другие компоненты, в том числе фосфолипид, структурный липид, четвертичное аминосоединение и молекулу, способную к снижению агрегации частиц, например, PEG или PEG-модифицированный липид.
Катионные и ионизируемые липиды могут включать липиды, описанные, например, в публикациях международных заявок №№ WO 2015199952, WO 2015130584, WO 2015011633, а также WO 2012040184, WO 2013126803, WO 2011153120, WO 2011149733, WO 2011090965, WO 2011043913, WO 2011022460, WO 2012061259, WO 2012054365, WO 2012044638, WO 2010080724, WO 201021865, WO 2008103276 и WO 2013086373; в патентах США №№7893302, 7404969, 8283333 и 8466122; а также публикациях заявок на патент США №№ US 20110224447, US 20120295832, US 20150315112, US 20100036115, US 20120202871, US 20130064894, US 20130129785, US 20130150625, US 20130178541, US 20130123338 и US 20130225836, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления количество катионных и ионизируемых липидов в липидной композиции находится в диапазоне от приблизительно 0,01 моль % до приблизительно 99 моль %.
Иллюстративные ионизируемые липиды включают без ограничения любое из соединений 1-147, раскрытых в данном документе: DLin-MC3-DMA (MC3), DLin-DMA, DLenDMA, DLin-D-DMA, DLin-K-DMA, DLin-M-C2-DMA, DLin-K-DMA, DLin-KC2-DMA, DLin-KC3-DMA, DLin-KC4-DMA, DLin-C2K-DMA, DLin-MP-DMA, DODMA, 98N12-5, С12-200, DLin-C-DAP, DLin-DAC, DLinDAP, DLinAP, DLin-EG-DMA, DLin-2-DMAP, KL10, KL22, KL25, октил-CLinDMA, октил-CLinDMA (2R), октил-CLinDMA (2S) и любую их комбинацию. Другие иллюстративные ионизируемые липиды включают: (13Z, 16Z)-N,N-диметил-3-нонилдокоза-13,16-диен-1-амин (L608), (20Z,23Z)-N,N-диметилнонакоза-20,23-диен-10-амин, (17Z,20Z)-N,N-диметилгексакоза-17,20-диен-9-амин, (16Z,19Z)-N5N-диметилпентакоза-16,19-диен-8-амин, (13Z,16Z)-N,N-диметилдокоза-13,16-диен-5-амин, (12Z,15Z)-N,N-диметилгенэйкоза-12,15-диен-4-амин, (14Z,17Z)-N,N-диметилтрикоза-14,17-диен-6-амин, (15Z,18Z)-N,N-диметилтетракоза-15,18-диен-7-амин, (18Z,21Z)-N,N-диметилгептакоза-18,21-диен-10-амин, (15Z,18Z)-N,N-диметилтетракоза-15,18-диен-5-амин, (14Z,17Z)-N,N-диметилтрикоза-14,17-диен-4-амин, (19Z,22Z)-N,N-диметилоктакоза-19,22-диен-9-амин, (18Z,21Z)-N,N-диметилгептакоза-18,21-диен-8-амин, (17Z,20Z)-N,N-диметилгексакоза-17,20-диен-7-амин, (16Z,19Z)-N,N-диметилпентакоза-16,19-диен-6-амин, (22Z,25Z)-N,N-диметилгентриаконта-22,25-диен-10-амин, (21Z,24Z)-N,N-диметилтриаконта-21,24-диен-9-амин, (18Z)-N,N-диметилгептакоз-18-ен-10-амин, (17Z)-N,N-диметилгексакоз-17-ен-9-амин, (19Z,22Z)-N,N-диметилоктакоза-19,22-диен-7-амин, N,N-диметилгептакозан-10-амин, (20Z,23Z)-N-этил-N-метилнонакоза-20,23-диен-10-амин, 1-[(11Z,14Z)-1-нонилэйкоза-11,14-диен-1-ил]пирролидин, (20Z)-N,N-диметилгептакоз-20-ен-10-амин, (15Z)-N,N-диметилгептакоз-15-ен-10-амин, (14Z)-N,N-диметилнонакоз-14-ен-10-амин, (17Z)-N,N-диметилнонакоз-17-ен-10-амин, (24Z)-N,N-диметилтритриаконт-24-ен-10-амин, (20Z)-N,N-диметилнонакоз-20-ен-10-амин, (22Z)-N,N-диметилгентриаконт-22-ен-10-амин, (16Z)-N,N-диметилпентакоз-16-ен-8-амин, (12Z,15Z)-N,N-диметил-2-нонилгенэйкоза-12,15-диен-1-амин, N,N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептадекан-8-амин, 1-[(1S,2R)-2-гексилциклопропил]-N,N-диметилнонадекан-10-амин, N,N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]нонадекан-10-амин, N,N-диметил-21-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]генэйкозан-10-амин, N,N-диметил-1-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-пентилциклопропил]метил}циклопропил]нонадекан-10-амин, N,N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гексадекан-8-амин, N,N-диметил-[(1R,2S)-2-ундецилциклопропил]тетрадекан-5-амин, N,N-диметил-3-{7-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]гептил}додекан-1-амин, 1-[(1R,2S)-2-гептилциклопропил]-N,N-диметилоктадекан-9-амин, 1-[(1S,2R)-2-децилциклопропил]-N,N-диметилпентадекан-6-амин, N,N-диметил-1-[(1S,2R)-2-октилциклопропил]пентадекан-8-амин, R-N,N-диметил-1-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]-3-(октилокси)пропан-2-амин, S-N,N-диметил-1-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]-3-(октилокси)пропан-2-амин, 1-{2-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]-1-[(октилокси)метил]этил}пирролидин, (2S)-N,N-диметил-1-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]-3-[(5Z)-окт-5-ен-1-илокси]пропан-2-амин,
1-{2-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]-1-[(октилокси)метил]этил}азетидин,
(2S)-1-(гексилокси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амин, (2S)-1-(гептилокси)-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амин, N,N-диметил-1-(нонилокси)-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амин,
N,N-диметил-1-[(9Z)-октадец-9-ен-1-илокси]-3-(октилокси)пропан-2-амин;
(2S)-N,N-диметил-1-[(6Z,9Z,12Z)-октадека-6,9,12-триен-1-илокси]-3-(октилокси)пропан-2-амин, (2S)-1-[(11Z,14Z)-эйкоза-11,14-диен-1-илокси]-N,N-диметил-3-(пентилокси)пропан-2-амин, (2S)-1-(гексилокси)-3-[(11Z,14Z)-эйкоза-11,14-диен-1-илокси]-N,N-диметилпропан-2-амин, 1-[(11Z,14Z)-эйкоза-11,14-диен-1-илокси]-N,N-диметил-3-(октилокси)пропан-2-амин, 1-[(13Z,16Z)-докоза-13,16-диен-1-илокси]-N,N-диметил-3-(октилокси)пропан-2-амин, (2S)-1-[(13Z,16Z)-докоза-13,16-диен-1-илокси]-3-(гексилокси)-N,N-диметилпропан-2-амин, (2S)-1-[(13Z)-докоз-13-ен-1-илокси]-3-(гексилокси)-N,N-диметилпропан-2-амин, 1-[(13Z)-докоз-13-ен-1-илокси]-N,N-диметил-3-(октилокси)пропан-2-амин, 1-[(9Z)-гексадец-9-ен-1-илокси]-N,N-диметил-3-(октилокси)пропан-2-амин, (2R)-N,N-диметил-Н(1-метилоктил)окси]-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амин, (2R)-1-[(3,7-диметилоктил)окси]-N,N-диметил-3-[(9Z,12Z)-октадека-9,12-диен-1-илокси]пропан-2-амин, N,N-диметил-1-(октилокси)-3-({8-[(1S,2S)-2-{[(1R,2R)-2-пентилциклопропил]метил}циклопропил]октил}окси)пропан-2-амин, N,N-диметил-1-{[8-(2-октилциклопропил)октил]окси}-3-(октилокси)пропан-2-амин и (11E,20Z,23Z)-N,N-диметилнонакоза-11,20,2-триен-10-амин и любую их комбинацию.
Фосфолипиды включают без ограничения глицерофосфолипиды, такие как фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилсерины, фосфатидилинозитолы, фосфатидилглицерины и фосфатидные кислоты. Фосфолипиды также включают фосфосфинголипид, такой как сфингомиелин. В некоторых вариантах осуществления фосфолипиды представляют собой DLPC, DMPC, DOPC, DPPC, DSPC, DUPC, простой диэфир PC 18:0, DLnPC, DAPC, DHAPC, DOPE, 4ME-PE 16:0, DSPE, DLPE, DLnPE, DAPE, DHAPE, DOPG и любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления фосфолипиды представляют собой МРРС, MSPC, PMPC, PSPC, SMPC, SPPC, DHAPE, DOPG и любую их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления количество фосфолипидов (например, DSPC) в липидной композиции находится в диапазоне от приблизительно 1 моль % до приблизительно 20 моль %.
Структурные липиды включают стерины и липиды, содержащие стериновые фрагменты. В некоторых вариантах осуществления структурные липиды включают холестерин, фекостерин, ситостерин, эргостерин, кампестерин, стигмастерин, брассикастерин, томатидин, томатин, урсоловую кислоту, альфа-токоферол и их смеси. В некоторых вариантах осуществления структурный липид представляет собой холестерин. В некоторых вариантах осуществления количество структурных липидов (например, холестерина) в липидной композиции находится в диапазоне от приблизительно 20 моль % до приблизительно 60 моль %.
PEG-модифицированные липиды включают PEG-модифицированные фосфатидилэтаноламин и фосфатидную кислоту, конъюгаты PEG-церамид (например, PEG-CerC14 или PEG-CerC20), PEG-модифицированные диалкиламины и PEG-модифицированные 1,2-диацилоксипропан-3-амины. Такие липиды также называются пэгилированными липидами. Например, PEG-липид может представлять собой липид PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC или PEG-DSPE. В некоторых вариантах осуществления PEG-липид представляет собой 1,2-димиристоил-sn-глицерин-метоксиполиэтиленгликоль (PEG-DMG), 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[амино(полиэтиленгликоль)] (PEG-DSPE), PEG-дистеарилглицерин (PEG-DSG), дипальмитолеил-PEG, диолеил-PEG, дистеарил-PEG, PEG-диацилгликамид (PEG-DAG), PEG-дипальмитоилфосфатидилэтаноламин (PEG-DPPE) или PEG-1,2-димиристилоксипропил-3-амин (PEG-c-DMA). В некоторых вариантах осуществления PEG-фрагмент имеет размер, составляющий приблизительно 1000, 2000, 5000, 10000, 15000 или 20000 дальтон. В некоторых вариантах осуществления количество PEG-липида в липидной композиции находится в диапазоне от приблизительно 0,1 моль % до приблизительно 5 моль %.
В некоторых вариантах осуществления составы на основе LNP, описанные в данном документе, могут дополнительно содержать молекулу, повышающую проницаемость. Неограничивающие примеры молекул, повышающих проницаемость, описаны в публикации заявки на патент США № US 20050222064, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Составы на основе LNP могут дополнительно содержать фосфатный конъюгат. Фосфатный конъюгат может увеличивать время циркуляции в крови in vivo и/или увеличивать эффективность целенаправленной доставки наночастицы. Фосфатные конъюгаты можно получить с помощью способов, описанных, например, в публикации международной заявки № WO 2013033438 или публикации заявки на патент США № US 20130196948. Состав на основе LNP также может содержать полимерный конъюгат (например, водорастворимый конъюгат), описанный, например, в публикациях заявок на патенты США №№ US 20130059360, US 20130196948 и US 20130072709. Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Составы на основе LNP могут содержать конъюгат для повышения доставки субъекту наночастиц по настоящему изобретению. Кроме того, конъюгат может ингибировать фагоцитарное выведение наночастиц у субъекта. В некоторых вариантах осуществления конъюгат может представлять собой «собственный» пептид, сконструированный из мембранного белка CD47 человека (например, «собственные» частицы, описанные в Rodriguez et al, Science 2013 339, 971-975, включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Как показано Rodriguez и соавт., собственные пептиды задерживали опосредованное макрофагами выведение наночастиц, что повышало доставку наночастиц.
Составы на основе LNP могут содержать углеводный носитель. В качестве неограничивающего примера, углеводный носитель может включать без ограничения ангидрид-модифицированный материал фитогликогенового или гликогенового типа, фитогликогеноктенилсукцинат, бета-декстрин фитогликогена, бета-декстрин ангидрид-модифицированного фитогликогена (например, публикация международной заявки № WO 2012109121, включенная в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
Составы на основе LNP можно покрывать поверхностно-активным веществом или полимером для улучшения доставки частицы. В некоторых вариантах осуществления LNP могут быть покрыты гидрофильным покрытием, таким как без ограничения покрытия на основе PEG и/или покрытия, имеющие нейтральный поверхностный заряд, как описано в публикации заявки на патент США № US 20130183244, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Составы на основе LNP можно разрабатывать с изменением свойств поверхности частиц, чтобы липидные наночастицы могли проникать через слизистый барьер, как описано в патенте США №8241670 или публикации международной заявки № WO 2013110028, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
LNP, разработанные для проникновения через слизистую оболочку, могут содержать полимерный материал (т.е. полимерную сердцевину), и/или конъюгат полимер-витамин, и/или триблок-сополимер. Полимерный материал может включать без ограничения полиамины, простые полиэфиры, полиамиды, сложные полиэфиры, поликарбаматы, полимочевины, поликарбонаты, поли(стиролы), полиимиды, полисульфоны, полиуретаны, полиацетилены, полиэтилены, полиэтиленимины, полиизоцианаты, полиакрилаты, полиметакрилаты, полиакрилонитрилы и полиарилаты.
LNP, разработанные для проникновения через слизистую оболочку, также могут содержать средства, изменяющие свойства поверхности, такие как без ограничения полинуклеотиды, анионные белки (например, бычий сывороточный альбумин), поверхностно-активные вещества (например, катионные поверхностно-активные вещества, такие как, например, бромид диметилдиоктадециламмония), сахара или производные Сахаров (например, циклодекстрин), нуклеиновые кислоты, полимеры (например, гепарин, полиэтиленгликоль и полоксамер), муколитические средства (например, N-ацетилцистеин, экстракт полыни обыкновенной, бромелаин, папаин, экстракт клеродендрума, ацетилцистеин, бромгексин, карбоцистеин, эпразинон, месну, амброксол, собрерол, домиодол, летостеин, степронин, тиопронин, гельзолин, тимозин β4, дорназу альфа, нелтенексин, эрдостеин) и различные ДНКазы, в том числе rhDNase.
В некоторых вариантах осуществления LNP, проникающие через слизистую оболочку, могут представлять собой гипотонический состав, содержащий покрытие, повышающее проникновение через слизистую оболочку. Состав может быть гипотоническим для эпителия, в который он доставляется. Неограничивающие примеры гипотонических составов можно найти, например, в публикации международной заявки № WO 2013110028, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, описанный в данном документе, составлен в виде липоплекса, такого как без ограничения система AtuPLEX™, система DACC, система DBTC и другие технологии липоплексов с киРНК от Silence Therapeutics (Лондон, Великобритания), STEMFECT™ от STEMGENT® (Кембридж, Массачусетс) и система для целенаправленной и нецеленаправленной доставки нуклеиновых кислот на основе полиэтиленимина (PEI) или протамина (Aleku et al. Cancer Res. 2008 68:9788-9798; Strumberg et al. Int J Clin Pharmacol Ther 2012 50:76-78; Santel et al., Gene Ther 2006 13:1222-1234; Santel et al., Gene Ther 2006 13:1360-1370; Gutbier et al., Pulm Pharmacol. Ther. 2010 23:334-344; Kaufmann et al. Microvasc Res 2010 80:286-293; Weide et al. J Immunother. 2009 32:498-507; Weide et al. J Immunother. 2008 31:180-188; Pascolo Expert Opin. Biol. Ther. 4:1285-1294; Fotin-Mleczek et al., 2011 J. Immunother. 34:1-15; Song et al.. Nature Biotechnol. 2005, 23:709-717; Peer et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2007 6; 104:4095-4100; de Fougerolles, Hum Gene Ther. 2008 19:125-132; все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, составлены в виде твердой липидной наночастицы (SLN), которая может быть сферической и иметь средний диаметр 10-1000 нм. SLN имеет твердую липидную матрицу сердцевины, которая может солюбилизировать липофильные молекулы и может быть стабилизирована поверхностно-активными веществами и/или эмульгаторами. Иллюстративные SLN могут быть такими, как описанные в публикации международной заявки № WO 2013105101, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены для контролируемого высвобождения и/или целенаправленной доставки. Как используется в данном документе, «контролируемое высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует определенному типу высвобождения, дающему терапевтический результат. В одном варианте осуществления полинуклеотиды могут быть инкапсулированы в средстве доставки, описанном в данном документе и/или известном из уровня техники, для контролируемого высвобождения и/или целенаправленной доставки. Используемый в данном документе термин «инкапсулировать» означает отделять, окружать или упаковывать. Инкапсулирование, в том, как это относится к составлению соединений по настоящему изобретению, может быть существенным, полным или частичным. Термин «по существу инкапсулированный» означает, что по меньшей мере более 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99,9, 99,9 или более 99,999% фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению может быть отделено, окружено средством доставки или упаковано в него. «Частичное инкапсулирование» означает, что менее 10, 10, 20, 30, 40, 50% или меньше фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению может быть отделено, окружено средством доставки или упаковано в него.
Инкапсулирование преимущественно можно определить путем измерения потери или активности фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению с помощью флуоресцентного и/или электронного микроскопа. Например, по меньшей мере 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99,9, 99,99 или более 99,99% фармацевтической композиции или соединения по настоящему изобретению инкапсулировано в средстве доставки.
В некоторых вариантах осуществления состав с контролируемым высвобождением полинуклеотида может содержать по меньшей мере одно покрытие для обеспечения контролируемого высвобождения (например, OPADRY®, EUDRAGIT RL®, EUDRAGIT RS® и производные целлюлозы, такие как водные дисперсии этилцеллюлозы (AQUACOAT® и SURELEASE®)). В некоторых вариантах осуществления состав с контролируемым высвобождением полинуклеотида может содержать полимерную систему, описанную в публикации заявки на патент США № US 20130130348, или PEG и/или полимерное производное, родственное PEG, описанные в патенте США №8404222, и каждый из этих документов включен посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть инкапсулированы в терапевтической наночастице, называемой в данном документе «терапевтической наночастицей с полинуклеотидами». Терапевтические наночастицы можно составлять с помощью способов, описанных, например, в публикациях международных заявок №№ WO 2010005740, WO 2010030763, WO 2010005721, WO 2010005723 и WO 2012054923; а также в публикациях заявок на патент США №№ US 20110262491, US 20100104645, US 20100087337, US 20100068285, US 20110274759, US 20100068286, US 20120288541, US 20120140790, US 20130123351 и US 20130230567 и в патентах США №№ 8206747, 8293276, 8318208 и 8318211, при этом каждый из этих документов включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления терапевтическая наночастица с полинуклеотидами может быть составлена для обеспечения замедленного высвобождения. Как используется в данном документе, «замедленное высвобождение» относится к фармацевтической композиции или соединению, которое соответствуют скорости высвобождения в течение конкретного периода времени. Период времени может включать без ограничения несколько часов, дней, недель, месяцев и лет. В качестве неограничивающего примера наночастица с замедленным высвобождением полинуклеотидов, описанная в данном документе, может быть составлена согласно раскрытому в публикации международной заявки № WO 2010075072 и публикациях заявок на патент США №№ US 20100216804, US 20110217377, US 20120201859 и US 20130150295, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления терапевтическая наночастица с полинуклеотидами может быть составлена так, чтобы она была специфической для мишени, такой как наночастицы, описанные в публикациях международных заявок №№ WO 2008121949, WO 2010005726, WO 2010005725, WO 2011084521 и WO 2011084518; а также в публикациях заявок на патент США №№ US 20100069426, US 20120004293 и US 20100104655, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
LNP можно получить с помощью микрожидкостных смесителей или микросмесителей. Иллюстративные микрожидкостные смесители могут включать без ограничения щелевой встречно-стержневой микросмеситель, в том числе без ограничения смесители, производимые Micro innova (Аллерхайлиген-бай-Вильдон, Австрия), и/или ступенчатый елочный микросмеситель (SHM) (см. Zhigaltsev et al., "Bottom-up design and synthesis of limit size lipid nanoparticle systems with aqueous and triglyceride cores using millisecond microfluidic mixing", Langmuir 28:3633-40 (2012); Belliveau et al., "Microfluidic synthesis of highly potent limit-size lipid nanoparticles for in vivo delivery of siRNA", Molecular Therapy-Nucleic Acids. 1:e37 (2012); Chen et al., "Rapid discovery of potent siRNA-containing lipid nanoparticles enabled by controlled microfluidic formulation", J. Am. Chem. Soc. 134(16):6948-51 (2012); каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Иллюстративные микросмесители включают в себя щелевой встречно-стержневой микроструктурированный смеситель (SIMM-V2), или стандартный щелевой встречно-стержневой микросмеситель (SSIMM), или гусеничный (СРММ), или со сталкивающимися струями (IJMM), от Institut fur Mikrotechnik Mainz GmbH, Майнц, Германия. В некоторых вариантах осуществления способы получения LNP с помощью SHM дополнительно включают смешивание по меньшей мере двух входящих потоков, где смешивание происходит посредством хаотической адвекции, обусловленной микроструктурой (MICA). В соответствии с данным способом потоки жидкости протекают через каналы, расположенные по «елочной» схеме, что вызывает вихревой поток и закручивание жидкостей между собой. Данный способ также может предусматривать поверхность для смешивания жидкостей, где поверхность изменяет ориентации во время прохождения жидкостями цикла. Способы получения LNP с помощью SHM включают способы, раскрытые в публикациях заявок на патент США №№ US 20040262223 и US 20120276209, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в липидных наночастицах с помощью микрофлюидной технологии (см. Whitesides, George M., "The Origins and the Future of Micro fluidics". Nature 442: 368-373 (2006); и Abraham et al., "Chaotic Mixer for Microchannels", Science 295: 647-651 (2002); каждая из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды могут быть составлены в липидных наночастицах с помощью микросмесительного чипа, такого как без ограничения чипы от Harvard Apparatus (Холлистон, Массачусетс) или Dolomite Microfluidics (Ройстон, Великобритания). Микросмесительный чип можно использовать для быстрого смешивания двух или более потоков жидкости с помощью механизма разделения и воссоединения.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в липидных наночастицах, имеющих диаметр от приблизительно 1 нм до приблизительно 100 нм, как, например, без ограничения от приблизительно 1 нм до приблизительно 20 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 30 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 40 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 50 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 60 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 70 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 80 нм, от приблизительно 1 нм до приблизительно 90 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 100 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 10 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 20 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 30 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 40 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 50 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 60 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 70 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 80 нм, от приблизительно 5 нм до приблизительно 90 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 20 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 30 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 10 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 30 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 20 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 40 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 30 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 50 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 40 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 60 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 50 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 70 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 60 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 80 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 70 до приблизительно 100 нм, от приблизительно 80 до приблизительно 90 нм, от приблизительно 80 до приблизительно 100 нм и/или от приблизительно 90 до приблизительно 100 нм.
В некоторых вариантах осуществления липидные наночастицы могут иметь диаметр от приблизительно 10 до 500 нм. В одном варианте осуществления липидная наночастица может иметь диаметр более 100 нм, более 150 нм, более 200 нм, более 250 нм, более 300 нм, более 350 нм, более 400 нм, более 450 нм, более 500 нм, более 550 нм, более 600 нм, более 650 нм, более 700 нм, более 750 нм, более 800 нм, более 850 нм, более 900 нм, более 950 нм или более 1000 нм.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды могут быть доставлены с помощью LNP меньшего размера. Такие частицы могут иметь диаметр от менее 0,1 мкм до 100 нм, как, например, без ограничения менее 0,1 мкм, менее 1,0 мкм, менее 5 мкм, менее 10 мкм, менее 15 мкм, менее 20 мкм, менее 25 мкм, менее 30 мкм, менее 35 мкм, менее 40 мкм, менее 50 мкм, менее 55 мкм, менее 60 мкм, менее 65 мкм, менее 70 мкм, менее 75 мкм, менее 80 мкм, менее 85 мкм, менее 90 мкм, менее 95 мкм, менее 100 мкм, менее 125 мкм, менее 150 мкм, менее 175 мкм, менее 200 мкм, менее 225 мкм, менее 250 мкм, менее 275 мкм, менее 300 мкм, менее 325 мкм, менее 350 мкм, менее 375 мкм, менее 400 мкм, менее 425 мкм, менее 450 мкм, менее 475 мкм, менее 500 мкм, менее 525 мкм, менее 550 мкм, менее 575 мкм, менее 600 мкм, менее 625 мкм, менее 650 мкм, менее 675 мкм, менее 700 мкм, менее 725 мкм, менее 750 мкм, менее 775 мкм, менее 800 мкм, менее 825 мкм, менее 850 мкм, менее 875 мкм, менее 900 мкм, менее 925 мкм, менее 950 мкм или менее 975 мкм.
Наночастицы и микрочастицы, описанные в данном документе, могут быть геометрически сконструированы для модулирования макрофагального и/или иммунного ответа. Геометрически сконструированные частицы могут иметь различные формы, размеры и/или поверхностные заряды для включения в их состав полинуклеотидов, описанных в данном документе, для целенаправленной доставки, такой как без ограничения доставка в легкие (см., например, публикацию международной заявки № WO 2013082111, включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Геометрически сконструированные частицы могут иметь другие физические признаки, включающие без ограничения поры, отростки, расположенные под углом, асимметричность и шероховатость поверхности, заряд, которые могут изменять взаимодействия с клетками и тканями.
В некоторых вариантах осуществления наночастицы, описанные в данном документе, представляют собой «наночастицы-невидимки» или специфические для мишени «наночастицы-невидимки», такие как без ограничения наночастицы, описанные в публикации заявки на патент США № US 20130172406, включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Наночастицы-невидимки или специфические для мишени наночастицы-невидимки могут содержать полимерную матрицу, которая может содержать два или более полимеров, таких как без ограничения полиэтилены, поликарбонаты, полиангидриды, полигидроксикислоты, полипропилфумараты, поликапролактоны, полиамиды, полиацетали, простые полиэфиры, сложные полиэфиры, поли(ортоэфиры), полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полицианоакрилаты, полимочевины, полистиролы, полиамины, сложные полиэфиры, полиангидриды, простые полиэфиры, полиуретаны, полиметакрилаты, полиакрилаты, полицианоакрилаты или их комбинации.
В качестве неограничивающего примера, модифицированная мРНК может быть составлена в микросферах на основе PLGA путем получения микросфер на основе PLGA с настраиваемыми скоростями высвобождения (например, с расчетом на несколько дней и недель) и инкапсулирования модифицированной мРНК в микросферах на основе PLGA при сохранении целостности модифицированной мРНК в ходе процесса инкапсулирования. EVAc представляют собой бионеразлагаемые биосовместимые полимеры, широко используемые в имплантатах с замедленным высвобождением в путях применения вне стационара (например, в продуктах с пролонгированным высвобождением, таких как офтальмологическая пленка Ocusert с пилокарпином, используемая при глаукоме, или внутриматочное средство Progestasert с замедленным высвобождением прогестерона; трансдермальных системах доставки Testoderm, Duragesic и Selegiline; катетерах). Полоксамер F-407 NF является гидрофильным неионогенным поверхностно-активным веществом, представляющим собой триблок-сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен-полиоксиэтилен, имеющим низкую вязкость при температурах ниже 5°С и образующим твердый гель при температурах выше 15°С.
В качестве неограничивающего примера полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены с полимерным соединением PLL с привитым PEG, описанным в патенте США №6177274. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены с блок-сополимером, таким как блок-сополимер PLGA-PEG (см., например, публикацию заявки на патент США № US 20120004293 и патенты США №№8236330 и 8246968) или блок-сополимер PLGA-PEG-PLGA (см., например, патент США №6004573). Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены по меньшей мере с одним аминосодержащим полимером, таким как без ограничения полилизин, полиэтиленимин, поли(амидоаминовые) дендримеры, сополимеры аминов и сложных эфиров или их комбинации. Иллюстративные полиаминовые полимеры и их применение в качестве средств доставки описаны, например, в патентах США №№8460696, 8236280, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть составлены в биоразлагаемом катионном липополимере, биоразлагаемом полимере или биоразлагаемом сополимере, биоразлагаемом сополимере сложного полиэфира, биоразлагаемом полимере сложного полиэфира, линейном биоразлагаемом сополимере, PAGA, биоразлагаемом сшитом катионном мультиблочном сополимере или их комбинациях, описанных, например, в патентах США №№6696038, 6517869, 6267987, 6217912, 6652886, 8057821 и 8444992; публикациях заявок на патент США №№ US 20030073619, US 20040142474, US 20100004315, US 2012009145 и US 20130195920; а также в публикациях международных заявок №№ WO 2006063249 и WO 2013086322, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, раскрытые в данном документе, могут быть составлены в виде наночастицы с использованием комбинации полимеров, липидов и/или других биоразлагаемых средств, таких как без ограничения фосфат кальция. Компоненты можно объединить в конфигурацию типа сердцевина/оболочка, гибридную и/или послойную конфигурацию для обеспечения возможности тонкой корректировки наночастицы для доставки (Wang et al., Nat Mater. 2006 5:791-796; Fuller et al., Biomaterials. 2008 29:1526-1532; DeKoker et al., Adv Drug Deliv Rev. 2011 63:748-761; Endres et al., Biomaterials. 2011 32:7721-7731; Su et al., Mol Pharm. 2011 Jun 6; 8(3):774-87; включенные в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В качестве неограничивающего примера, наночастица может содержать множество полимеров, таких как без ограничения гидрофильно-гидрофобные полимеры (например, PEG-PLGA), гидрофобные полимеры (например, PEG) и/или гидрофильные полимеры (публикация международной заявки № WO 20120225129, включенная в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В применении наночастиц типа сердцевина/оболочка дополнительное внимание было сосредоточено на высокопроизводительном подходе к синтезу сердцевин и различных оболочек из катионного сшитого наногеля (Siegwart et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2011 108:12996-13001; включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Комплексообразование, доставку и интернализацию полимерных наночастиц можно точно контролировать путем изменения химического состава компонентов как сердцевины, так и оболочки наночастицы. Например, наночастицы типа сердцевина/оболочка могут эффективно доставлять киРНК в гепатоциты мыши после ковалентного присоединения холестерина к наночастице.
В некоторых вариантах осуществления для доставки полинуклеотидов, описанных в данном документе, можно использовать полую липидную сердцевину, содержащую промежуточный слой PLGA и наружный слой нейтрального липида, содержащий PEG. В некоторых вариантах осуществления липидные наночастицы могут содержать сердцевину с полинуклеотидами, раскрытыми в данном документе, и полимерную оболочку, которая используется для защиты полинуклеотидов в сердцевине. Полимерная оболочка может представлять собой любой из полимеров, описанных в данном документе и известных из уровня техники, при этом полимерная оболочка может использоваться для защиты полинуклеотидов в сердцевине.
Наночастицы типа сердцевина/оболочка для применения с полинуклеотидами, описанными в данном документе, описаны в патенте США №8313777 или публикации международной заявки № WO 2013124867, и каждый из этих документов включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
b. Конъюгаты
В некоторых вариантах осуществления композиции или составы согласно настоящему изобретению содержат полинуклеотиды, описанные в данном документе (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин), ковалентно связанные с носителем или нацеливающей группой или содержащие два кодирующих участка, которые совместно обеспечивают образование слитого белка (например, несущего нацеливающую группу и белок или пептид релаксин) в качестве конъюгата. Конъюгат может представлять собой пептид, избирательно направляющий наночастицу в нейроны в ткани или организме или содействующий проникновению через гематоэнцефалический барьер.
Конъюгаты включают природное вещество, такое как белок (например, человеческий сывороточный альбумин (HSA), липопротеин низкой плотности (LDL), липопротеин высокой плотности (HDL) или глобулин); углевод (например, декстран, пуллулан, хитин, хитозан, инулин, циклодекстрин или гиалуроновую кислоту) или липид. Лиганд также может представлять собой рекомбинантную или синтетическую молекулу, такую как синтетический полимер, например, синтетическую полиаминокислоту, олигонуклеотид (например, аптамер). Примеры полиаминокислот включают полиаминокислоту полилизин (PLL), поли-L-аспарагиновую кислоту, поли-L-глутаминовую кислоту, сополимер стирола и ангидрида малеиновой кислоты, сополимер L-лактида и гликолида, сополимер простого дивинилового эфира и малеинового ангидрида, сополимер N-(2-гидроксипропил)метакриламида (НМРА), полиэтиленгликоль (PEG), поливиниловый спирт (PVA), полиуретан, поли(2-этилакриловую кислоту), полимеры N-изопропилакриламида или полифосфазен. Примеры полиаминов включают: полиэтиленимин, полилизин (PLL), спермин, спермидин, полиамин, полиамин-псевдопептид, пептидомиметический полиамин, дендримерный полиамин, аргинин, амидин, протамин, катионный липид, катионный порфирин, четвертичную соль полиамина или альфа-спиральный пептид.
В некоторых вариантах осуществления конъюгат может функционировать в качестве носителя для полинуклеотида, раскрытого в данном документе. Конъюгат может содержать катионный полимер, такой как без ограничения полиамин, полилизин, полиалкиленимин и полиэтиленимин, на который может быть привит поли(этиленгликоль). Иллюстративные конъюгаты и их способы получения описаны в патенте США №6586524 и публикации заявки на патент США № US 20130211249, и каждый из этих документов включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Конъюгаты также могут включать нацеливающие группы, например, средство, нацеливающее на клетку или ткань, например, лектин, гликопротеин, липид или белок, например, антитело, которые связываются с клеткой указанного типа, такой как клетка почки. Нацеливающая группа может представлять собой тиреотропин, меланотропин, лектин, гликопротеин, сурфактантный белок А, углевод муцина, поливалентную лактозу, поливалентную галактозу, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, поливалентную маннозу, поливалентную фукозу, гликозилированные полиаминокислоты, поливалентную галактозу, трансферрин, бисфосфонат, полиглутамат, полиаспартат, липид, холестерин, стероид, желчную кислоту, фолат, витамин В12, биотин, RGD-пептид, миметик RGD-пептида или аптамер.
Нацеливающие группы могут представлять собой белки, например гликопротеины, или пептиды, например молекулы, обладающие определенным сродством к колиганду, или антитела, например антитело, которое связывается с клеткой указанного типа, такой как раковая клетка, эндотелиальная клетка или костная клетка. Нацеливающие группы также могут включать гормоны и рецепторы гормонов. Они также включают непептидные молекулы, такие как липиды, лектины, углеводы, витамины, кофакторы, поливалентную лактозу, поливалентную галактозу, N-ацетилгалактозамин, N-ацетилглюкозамин, поливалентную маннозу, поливалентную фукозу или аптамеры. Лиганд может представлять собой, например, липополисахарид или активатор МАР-киназы р38.
Нацеливающая группа может представлять собой любой лиганд, способный нацеливаться на конкретный рецептор. Примеры включают без ограничения фолат, GalNAc, галактозу, маннозу, маннозу-6Р, аптамеры, лиганды интегриновых рецепторов, лиганды рецепторов хемокинов, трансферрин, биотин, лиганды рецепторов серотонина, PSMA, эндотелин, GCPII, соматостатин, лиганды рецепторов LDL и HDL. В конкретных вариантах осуществления нацеливающая группа представляет собой аптамер. Аптамер может быть немодифицированным или иметь любую комбинацию модификаций, раскрытых в данном документе. В качестве неограничивающего примера нацеливающая группа может представлять собой конъюгат, связывающийся с рецептором глутатиона (GR), для целенаправленной доставки через барьер между кровью и центральной нервной системой, описанный, например, в публикации заявки на патент США № US 2013021661012 (включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
В некоторых вариантах осуществления конъюгат может представлять собой конъюгат биомолекула-полимер с синергическим действием, который является системой длительного действия с непрерывным высвобождением для обеспечения большей терапевтической эффективности. Конъюгаты биомолекула-полимер с синергическим действием могут представлять собой конъюгаты, описанные в публикации заявки на патент США № US 20130195799. В некоторых вариантах осуществления конъюгат может представлять собой аптамерный конъюгат, описанный в публикации международной заявки на патент № WO 2012040524. В некоторых вариантах осуществления конъюгат может представлять собой аминосодержащий полимерный конъюгат, описанный в патенте США №8507653. Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды могут быть конъюгированы со SMARTT POLYMER TECHNOLOGY® (PHASERX®, Inc., Сиэтл, Вашингтон).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, ковалентно конъюгированы с полипептидом, проникающим в клетку, который также может содержать сигнальную последовательность или нацеливающую последовательность. Конъюгаты могут быть разработаны таким образом, чтобы они характеризовались увеличенной стабильностью, и/или увеличенным уровнем трансфекции клеток; и/или измененным биораспределением (например, нацеливались на конкретные ткани или типы клеток).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, описанные в данном документе, могут быть конъюгированы со средством для повышения доставки. В некоторых вариантах осуществления средство может представлять собой мономер или полимер, такой как нацеливающий мономер или полимер, имеющий нацеливающие блоки, описанный в публикации международной заявки № WO 2011062965. В некоторых вариантах осуществления средство может представлять собой средство для транспортировки, ковалентно связанное с полинуклеотидом, описанное, например, в патентах США №№6835393 и 7374778. В некоторых вариантах осуществления средство может представлять собой средство для повышения транспортировки через мембранный барьер, такое как средства, описанные в патентах США №№7737108 и 8003129. Каждый из литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Способы применения
Полинуклеотиды, фармацевтические композиции и составы, описанные выше, применяют в получении, изготовлении и терапевтическом применении для лечения сердечной недостаточности и/или других нарушений или состояний. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, композиции и составы по настоящему изобретению применяют для лечения и/или предупреждения острой сердечной недостаточности (AHF).
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, фармацевтические композиции и составы по настоящему изобретению применяют в способах увеличения уровней белков релаксинов у нуждающегося в этом субъекта. Например, в одном аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ облегчения симптомов HF у субъекта, предусматривающий введение этому субъекту композиции или состава, содержащих полинуклеотид, кодирующий терапевтический белок (например, мРНК, кодирующую функциональный компонент полипептида релаксина).
В некоторых вариантах осуществления введение субъекту композиции или состава, содержащих полинуклеотид, фармацевтическую композицию или состав по настоящему изобретению, приводит к увеличению уровня белка релаксина в клетках до уровня, который на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или на 100% выше, чем уровень, наблюдаемый до введения композиции или состава.
В некоторых вариантах осуществления введение полинуклеотида, фармацевтической композиции или состава по настоящему изобретению приводит к экспрессии белка релаксина в клетках субъекта. В некоторых вариантах осуществления введение полинуклеотида, фармацевтической композиции или состава по настоящему изобретению приводит к увеличению активности белка релаксина у субъекта. Например, в некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды по настоящему изобретению применяют в способах введения субъекту композиции или состава, содержащих мРНК, кодирующую полипептид релаксин, где способ приводит к увеличению активности белка релаксина по меньшей мере в некоторых клетках субъекта.
В некоторых вариантах осуществления введение субъекту композиции или состава, содержащих мРНК, кодирующую полипептид релаксин, приводит к увеличению активности белка релаксина в клетках субъекта до уровня, составляющего по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% или больше от ожидаемого уровня активности у нормального субъекта, например, человека, не страдающего заболеванием сердца.
В некоторых вариантах осуществления введение полинуклеотида, фармацевтической композиции или состава по настоящему изобретению приводит к экспрессии белка релаксина по меньшей мере в некоторых клетках субъекта, которая сохраняется в течение периода времени, достаточного для обеспечения возможности протекания значительного метаболизма.
В некоторых вариантах осуществления экспрессия кодируемого полипептида увеличивается. В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид увеличивает уровни экспрессии белка релаксина в клетках при введении в эти клетки, например, на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или на 100% по сравнению с уровнем экспрессии белка релаксина в клетках до введения полипептида в клетки.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к трансплантации клеток, содержащих полинуклеотиды, субъекту-млекопитающему. Введение клеток субъектам-млекопитающим известно специалистам в данной области и включает без ограничения локальную имплантацию (например, местное или подкожное введение), доставку в орган или системную инъекцию (например, внутривенную инъекцию или ингаляцию) и составление клеток в фармацевтически приемлемых носителях.
Композиции и составы для применения
Некоторые аспекты настоящего изобретения направлены на композиции или составы, содержащие любой из полинуклеотидов, раскрытых выше.
В некоторых вариантах осуществления композиция или состав содержат:
(i) полинуклеотид (например РНК, например мРНК), содержащий оптимизированную нуклеотидную последовательность (например, ORF), кодирующую полипептид релаксин (например, последовательность дикого типа, ее функциональный фрагмент или вариант), где полинуклеотид содержит по меньшей мере одно химически модифицированное нуклеотидное основание, например, 5-метоксиурацил (например, где по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 99% или 100% урациловых оснований представляют собой 5-метоксиурациловые основания), и где полинуклеотид дополнительно содержит сайт связывания miRNA, например, сайт связывания miKNA, который связывается с miR-142 (например, сайт связывания для miR-142-3р или miR-142-5р);и
(ii) средство доставки, содержащее LNP, содержащую, например, липид формулы (I), например, любое из соединений 1-147 (например, соединение 18, 25, 26 или 48).
В некоторых вариантах осуществления содержание урацила или тимина в ORF по отношению к теоретическому минимальному содержанию урацила или тимина в нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид релаксин (% UTM или % TTM), составляет от приблизительно 100% до приблизительно 150%.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотиды, композиции или составы, упомянутые выше, применяют для лечения и/или предупреждения заболевания или нарушения, например, острой сердечной недостаточности.
Формы введения
Полинуклеотиды, фармацевтические композиции и составы по настоящему изобретению, описанные выше, можно вводить посредством любых путей, которые приводят к терапевтически эффективному результату. Они включают без ограничения энтеральное (в кишечник), энтерогастральное, эпидуральное (в твердую мозговую оболочку), пероральное (через рот), трансдермальное, перидуральное, интрацеребральное (в большой мозг), интрацеребровентрикулярное (в желудочки головного мозга), накожное (нанесение на кожу), интрадермальное (в собственно кожу), подкожное (под кожу), интраназальное введение (через нос), внутривенное (в вену), внутривенное болюсное, внутривенное капельное, внутриартериальное (в артерию), внутримышечное (в мышцу), внутрисердечное введение (в сердце), внутрикостную инфузию (в костный мозг), интратекальное (в позвоночный канал), внутрибрюшинное введение (инфузию или инъекцию в брюшину), внутрипузырную инфузию, интравитреальное введение (через глаз), интракавернозную инъекцию (в патологическую полость), внутриполостное (в основание полового члена), интравагинальное введение, внутриматочное, экстраамниотическое введение, трансдермальное (диффузию через неповрежденную кожу для достижения системного распределения), чресслизистое (диффузию через слизистую оболочку), трансвагинальное введение, инсуффляцию (вдувание), подъязычное, сублабиальное введение, введение с помощью клизмы, в составе глазных капель (на конъюнктиву), в составе ушных капель, внутриушное (в ухо или через ухо), трансбуккальное (по направлению за щеку), конъюнктивальное, кожное, дентальное (в зуб или зубы), электроосмотическое, эндоцервикальное, эндосинусиальное, эндотрахеальное, экстракорпоральное введение, гемодиализ, инфильтрацию, введение в интерстициальное пространство, введение в брюшную полость, внутриамниотическое, внутрисуставное, интрабилиарное, внутрибронхиальное, интрабурсальное, внутрихрящевое (в хрящ), интракаудальное (в конский хвост), интрацистернальное (в мозжечково-мозговую цистерну), внутрироговичное (в роговицу), дентальное внутрикоронковое, внутрикоронарное введение (в коронарные артерии), введение в пещеристые тела (в расширяющиеся ячейки пещеристых тел полового члена), внутридисковое (в межпозвонковый диск), внутрипротоковое (в проток железы), интрадуоденальное (в двенадцатиперстную кишку), интрадуральное (в твердую мозговую оболочку или под нее), внутриэпидермальное (в эпидермис), внутрипищеводное (в пищевод), внутрижелудочное (в желудок), внутридесневое введение (в десны), введение в подвздошную кишку (в дистальную часть тонкой кишки), внутриочаговое (в пределах локального очага или путем введения непосредственно в него), внутрипросветное (в просвет трубки), внутрилимфатическое (в лимфу), интрамедуллярное (в костномозговую полость кости), интраменингеальное (в мозговые оболочки), внутриглазное (в глаз), интраовариальное (в яичник), интраперикардиальное (в перикард), внутриплевральное (в плевру), интрапростатическое (в предстательную железу), внутрилегочное (в легкие или их бронхи), внутрисинусное (в околоносовые или окологлазничные синусы), интраспинальное (в позвоночный столб), интрасиновиальное (в синовиальную полость сустава), внутрисухожильное (в сухожилие), интратестикулярное (в яичко), интратекальное (в спинномозговую жидкость на любом уровне цереброспинальной оси), интраторакальное (в грудную клетку), интратубулярное (в канальцы органа), внутриопухолевое (в опухоль), интратимпанальное (в среднее ухо), внутрисосудистое (в сосуд или сосуды), внутрижелудочковое введение (в желудочек), ионофорез (посредством электрического тока, за счет чего ионы растворимых солей мигрируют в ткани организма), орошение (промывание или ополаскивание открытых ран или полостей тела), ларингеальное (непосредственно в гортань), назогастральное введение (через нос и в желудок), методику с использованием окклюзионной повязки (введение посредством местного пути, место которого затем закрывают повязкой, изолирующей данную область тела), офтальмическое (в наружную часть глаза), орофарингеальное (непосредственно в рот и глотку), парентеральное, чрескожное, околосуставное, перидуральное, периневральное, периодонтальное, ректальное, респираторное (в дыхательные пути путем пероральной или назальной ингаляции для достижения локального или системного эффекта), ретробульбарное (позади варолиева моста или позади глазного яблока), интрамиокардиальное введение (с поступлением в миокард), введение в мягкие ткани, субарахноидальное, субконъюнктивальное, подслизистое, местное, трансплацентарное (через плаценту или с распределением по ней), транстрахеальное (через стенку трахеи), транстимпанальное (с распределением по тимпанальной полости или через нее), уретеральное (в мочеточник), уретральное (в мочеиспускательный канал), вагинальное введение, сакральную блокаду, диагностическое введение, блокаду нерва, перфузию желчных путей, перфузию сердца, фотоферез или спинальное введение. В конкретных вариантах осуществления композиции можно вводить посредством пути, который позволяет им проходить через гематоэнцефалический барьер, сосудистый барьер или другой эпителиальный барьер. В некоторых вариантах осуществления состав для пути введения может содержать по меньшей мере один неактивный ингредиент.
Полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин или его функциональный фрагмент или вариант) могут доставляться в клетку «голыми». Как используется в данном документе, «голый» относится к доставке полинуклеотидов, не содержащих средств, способствующих трансфекции. «Голые» полинуклеотиды могут доставляться в клетку с использованием путей введения, известных из уровня техники и описанных в данном документе.
Полинуклеотиды по настоящему изобретению (например, полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид релаксин или его функциональный фрагмент или вариант) можно составлять с помощью способов, описанных в данном документе. Составы могут содержать полинуклеотиды, которые могут быть модифицированными и/или немодифицированными. Составы могут дополнительно содержать без ограничения средства для проникновения в клетку, фармацевтически приемлемый носитель, средство доставки, биоразрушаемый или биосовместимый полимер, растворитель и систему для доставки депо-препарата с замедленным высвобождением. Составленные полинуклеотиды могут доставляться в клетку с использованием путей введения, известных из уровня техники и описанных в данном документе.
Фармацевтическая композиция для парентерального введения может содержать по меньшей мере один неактивный ингредиент. Может быть использован любой из неактивных ингредиентов, одобренных Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA), или ни один из них. Неполный перечень неактивных ингредиентов для применения в фармацевтических композициях для парентерального введения включает хлористоводородную кислоту, маннит, азот, ацетат натрия, хлорид натрия и гидроксид натрия.
Инъекционные препараты, например, стерильные инъекционные водные или масляные суспензии, можно составлять в соответствии с известным уровнем техники с использованием подходящих диспергирующих средств, смачивающих средств и/или суспендирующих средств. Стерильные инъекционные препараты могут представлять собой стерильные инъекционные растворы, суспензии и/или эмульсии в нетоксичных приемлемых для парентерального введения разбавителях и/или растворителях, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. В числе приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, представлены вода, раствор Рингера, соответствующий требованиям USP, и изотонический раствор хлорида натрия. В качестве растворителя или суспендирующей среды традиционно используются стерильные нелетучие масла. Для данной цели можно использовать любое нераздражающее нелетучее масло, содержащее синтетические моно- или диглицериды. При получении инъекционных препаратов можно использовать жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. Стерильный состав также может содержать вспомогательные средства, такие как местные анестетики, консерванты и буферные средства.
Инъекционные составы можно стерилизовать, например, путем фильтрации через фильтр, удерживающий бактерии, и/или путем включения в их состав стерилизующих средств в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъекционной среде перед использованием.
Инъекционные составы могут быть предназначены для непосредственной инъекции в участок ткани, органа и/или тела субъекта. В качестве неограничивающего примера в ткань, орган и/или тело субъекта можно осуществлять прямую инъекцию состава путем интрамиокардиальной инъекции в участок, пораженный ишемией. (См., например, Zangi et al. Nature Biotechnology 2013; содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).
С целью пролонгирования эффекта активного ингредиента часто желательно замедлить всасывание активного ингредиента после подкожной или внутримышечной инъекции. Этого можно достичь за счет использования жидкой суспензии кристаллического или аморфного материала с плохой растворимостью в воде. Таким образом, скорость всасывания лекарственного средства зависит от его скорости растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов и кристаллической формы. В качестве альтернативы замедленное всасывание парентерально вводимой формы лекарственного средства достигается путем растворения или суспендирования лекарственного средства в масляном носителе. Инъекционные депо-формы получают путем образования микроинкапсулированных матриц лекарственного средства в биоразлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного средства и полимера и природы конкретного используемого полимера скорость высвобождения лекарственного средства можно контролировать. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают простые поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъекционные депо-составы получают путем захвата лекарственного средства в липосомы или микроэмульсии, совместимые с тканями организма.
Наборы и устройства
а. Наборы
В настоящем изобретении предусмотрен ряд наборов для удобного и/или эффективного использования нуклеотидов, заявленных в настоящем изобретении. Как правило, наборы содержат достаточное количество и/или число компонентов, позволяющее пользователю осуществлять несколько сеансов лечения субъекта(субъектов) и/или осуществлять несколько экспериментов.
В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены наборы, содержащие молекулы (полинуклеотиды) по настоящему изобретению.
Указанные наборы могут быть предназначены для получения белка и при этом содержат первый полинуклеотид, содержащий транслируемый участок. Набор может дополнительно содержать упаковку и инструкции и/или средство доставки для образования композиции состава. Средство доставки может включать солевой раствор, забуференный раствор, липидоид или любое средство доставки, раскрытое в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления буферный раствор может включать хлорид натрия, хлорид кальция, фосфат и/или EDTA. В другом варианте осуществления буферный раствор может включать без ограничения солевой раствор, солевой раствор с 2 мМ кальция, 5% сахарозу, 5% сахарозу с 2 мМ кальция, 5% маннит, 5% маннит с 2 мМ кальция, лактат Рингера, хлорид натрия, хлорид натрия с 2 мМ кальция и маннозой (см., например, публикацию заявки на патент США №20120258046; включенную в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). В дополнительном варианте осуществления буферные растворы могут быть осажденными или могут быть лиофилизированными. Количество каждого компонента можно варьировать для обеспечения получения устойчивых воспроизводимых составов буферов с более высокой концентрацией солевого раствора или простых буферов. Компоненты также можно варьировать с целью увеличения стабильности модифицированной РНК в буферном растворе в течение определенного периода времени и/или в различных условиях. В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены наборы для продуцирования белка, содержащие: полинуклеотид, содержащий транслируемый участок, предусмотренный в количестве, эффективном для продуцирования требуемого количества белка, кодируемого транслируемым участком, при введении в клетку-мишень; второй полинуклеотид, содержащий ингибирующую нуклеиновую кислоту, предусмотренный в количестве, эффективном для существенного ингибирования врожденного иммунного ответа в клетке; а также упаковку и инструкции.
В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены наборы для продуцирования белка, содержащие полинуклеотид, содержащий транслируемый участок, где полинуклеотид характеризуется сниженным разложением под воздействием клеточной нуклеазы, а также упаковку и инструкции.
В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены наборы для продуцирования белка, содержащие полинуклеотид, содержащий транслируемый участок, где полинуклеотид характеризуется сниженным разрушением под воздействием клеточной нуклеазы, а также клетку млекопитающего, подходящую для трансляции транслируемого участка первой нуклеиновой кислоты.
b. Устройства
В настоящем изобретении предусмотрены устройства, в которых могут содержаться полинуклеотиды, кодирующие представляющие интерес полипептиды. Такие устройства содержат в стабильном составе реагенты для синтеза полинуклеотида в составе, доступном для немедленной доставки нуждающемуся в этом субъекту, такому как пациент-человек.
Устройства для введения можно использовать для доставки полинуклеотидов по настоящему изобретению в соответствии с режимами введения однократных, многократных или дробных доз, представленными в данном документе. Такие устройства представлены, например, в публикации международной заявки № WO 2013151666, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Предусматривается применение известных из уровня техники способов и устройств для многократного введения в клетки, органы и ткани вместе со способами и композициями, раскрытыми в данном документе в качестве вариантов осуществления настоящего изобретения. Они включают, например, способы и устройства с несколькими иглами, гибридные устройства, в которых используются, например, трубки или катетеры, а также устройства, в которых используются механизмы, управляемые теплом, электрическим током или радиоактивным излучением.
В соответствии с настоящим изобретением такие устройства для многократного введения можно использовать для доставки однократных, многократных или дробных доз, предусматриваемых в данном документе. Такие устройства представлены, например, в публикации международной заявки № WO 2013151666, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид вводят подкожно или внутримышечно с помощью по меньшей мере 3 игл в три различных, необязательно смежных участка одновременно или в течение 60-минутного периода (например, с введением в 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 участков одновременно или в течение 60-минутного периода).
с. Способы и устройства, в которых используются катетеры и/или трубки
Способы и устройства с применением катетеров и просветов можно использовать для введения полинуклеотидов по настоящему изобретению по схеме введения однократных, многократных или разделенных доз. Такие способы и устройства описаны в публикации международной заявки № WO 2013151666, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
d. Способы и устройства, в которых используется электрический ток Способы и устройства с использованием электрического тока можно использовать для доставки полинуклеотидов по настоящему изобретению в соответствии с режимами введения однократных, многократных или дробных доз, представленными в данном документе. Такие способы и устройства описаны в публикации международной заявки № WO 2013151666, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Определения
Для более легкого понимания настоящего изобретения сперва приведены определения некоторых терминов. Как используется в настоящей заявке, за исключением случаев, когда в данном документе прямо предусмотрено иное, каждый из следующих терминов имеет значение, изложенное ниже. Во всей настоящей заявке изложены дополнительные определения.
Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых ровно один представитель группы присутствует в указанном продукте или способе, используется в нем или иным образом имеет отношение к нему. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного представителя или все представители группы присутствуют в указанном продукте или способе, используются в нем или иным образом имеют отношение к нему.
В данном описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают определяемые объекты также и во множественном числе, если из контекста явно не следует иное. Формы единственного числа, а также термины «один или несколько» и «по меньшей мере один» можно использовать в данном документе взаимозаменяемо. В некоторых аспектах форма единственного числа означает «один». В других аспектах форма единственного числа включает «два или более» или «несколько».
Кроме того, выражение «и/или», используемое в данном документе, следует рассматривать как конкретное раскрытие каждого из двух указанных признаков или компонентов с другим или без другого. Таким образом, подразумевается, что выражение «и/или», используемое в данном документе в такой фразе, как «А и/или В», включает «А и В», «А или В», «А» (отдельно) и «В» (отдельно). Аналогично, подразумевается, что выражение «и/или», используемое в такой фразе как «А, В и/или С», охватывает каждый из следующих аспектов: А, В и С; А, В или С; А или С; А или В; В или С; А и С; А и В; В и С; А (отдельно); В (отдельно) и С (отдельно).
Если не определено иное, то все используемые в данном документе технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимает специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Например, Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; и Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press, предоставляют специалисту общий словарь многих терминов, используемых в настоящем изобретении.
Какие бы аспекты ни описывались в данном документе формулировкой «содержащий», другие аналогичные аспекты, описываемые выражениями «состоящий из» и/или «состоящий фактически из», также предусмотрены.
Единицы измерения, приставки и символы указаны в их форме, принятой согласно Международной системе единиц (SI). Числовые диапазоны включают числа, определяющие диапазон. В тех случаях, когда указан диапазон значений, следует понимать, что каждое промежуточное целочисленное значение и каждая его дробная часть между указанными верхним и нижним пределом этого диапазона также конкретно раскрыты наряду с каждым поддиапазоном между такими значениями. Верхний и нижний пределы любого диапазона могут быть независимо включены в диапазон или исключены из него, и каждый диапазон, в который включены один из пределов, ни один из них или оба из них, также охватывается настоящим изобретением. В тех случаях, когда указано значение в явной форме, следует понимать, что значения, которые обозначают приблизительно такое же количество или величину, как и указанное значение, также находятся в пределах объема настоящего изобретения. В тех случаях, когда раскрыта комбинация, каждая подкомбинация элементов этой комбинации также конкретно раскрыта и находится в пределах объема настоящего изобретения. И наоборот, в тех случаях, когда различные элементы или группы элементов раскрыты по отдельности, их комбинации также раскрыты. В тех случаях, когда любой элемент настоящего изобретения раскрыт как имеющий множество альтернатив, в данном документе также раскрыты примеры настоящего изобретения, в которых каждая альтернатива исключена в отдельности или в любой комбинации с другими альтернативами; такие исключения может иметь более чем один элемент настоящего изобретения, и все комбинации элементов, имеющих такие исключения, раскрыты в данном документе.
Нуклеотиды обозначены с помощью их общепринятых однобуквенных кодов. Если не указано иное, то нуклеиновые кислоты записаны слева направо в направлении 5'-3'. Нуклеотидные основания в данном документе обозначены с помощью их общеизвестных однобуквенных символов, рекомендованных Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB. Соответственно, А представляет аденин, С представляет цитозин, G представляет гуанин, Т представляет тимин, U представляет урацил.
В данном документе аминокислоты обозначены либо с помощью их общеизвестных трехбуквенных символов, либо с помощью однобуквенных символов, рекомендованных Комиссией по биохимической номенклатуре IUPAC-IUB. Если не указано иное, то аминокислотные последовательности записаны слева направо в направлении от амино- к карбокси-концу.
Приблизительно. Выражение «приблизительно», используемое в связи с числовым значением во всем настоящем описании и формуле изобретения, означает интервал точности, знакомый и приемлемый для специалиста в данной области, и такой интервал точности составляет ± 10%.
В тех случаях, когда указаны диапазоны, конечные точки включены в них. Кроме того, если не указано иное или иное не очевидно из контекста и не понимается специалистом в данной области, то значения, выраженные в виде диапазонов, могут принимать любые конкретные значения или поддиапазоны в указанных диапазонах в различных вариантах осуществления настоящего изобретения до десятых долей единицы нижнего предела диапазона, если контекст явно не предусматривает иное.
Введение в комбинации. Используемый в данном документе термин «введение в комбинации» или «комбинированное введение» означает, что два или более средств вводят субъекту в одно и то же время или в течение определенного интервала так, что может наблюдаться перекрывание эффектов каждого средства у пациента. В некоторых вариантах осуществления их вводят в течение приблизительно 60, 30, 15, 10, 5 или 1 минуты друг после друга. В некоторых вариантах осуществления процедуры введения средств отделены достаточно коротким интервалом друг от друга для того, чтобы достигался сочетанный (например, синергический) эффект.
Аминокислотная замена. Термин «аминокислотная замена» относится к замещению аминокислотного остатка, присутствующего в исходной или эталонной последовательности (например, в последовательности релаксина дикого типа), другим аминокислотным остатком. Аминокислота может быть заменена в исходной или эталонной последовательности (например, в последовательности полипептида релаксина дикого типа), например, посредством химического синтеза пептидов или с помощью рекомбинантных способов, известных из уровня техники. Соответственно, ссылка на «замену в положении X» относится к замене аминокислоты, присутствующей в положении X, альтернативным аминокислотным остатком. В некоторых аспектах модели замены можно описать согласно схеме AnY, где А представляет собой однобуквенный код, соответствующий аминокислоте, присутствующей в естественных условиях или исходно в положении n, a Y представляет собой заменяющий аминокислотный остаток. В других аспектах модели замены можно описать согласно схеме An(YZ), где А представляет собой однобуквенный код, соответствующий аминокислотному остатку, заменяющему аминокислоту, присутствующую в естественных условиях или исходно в положении X, а Y и Z представляют собой альтернативные заменяющие аминокислотные остатки.
В контексте настоящего изобретения замены (даже в том случае, когда они называются аминокислотными заменами) проводят на уровне нуклеиновых кислот, т.е. замену аминокислотного остатка альтернативным аминокислотным остатком проводят путем замены кодона, кодирующего первую аминокислоту, кодоном, кодирующим вторую аминокислоту.
Животное. Используемый в данном документе термин «животное» относится к любому представителю царства животных. В некоторых вариантах осуществления «животное» относится к людям на любой стадии развития. В некоторых вариантах осуществления «животное» относится к животным, отличным от человека, на любой стадии развития. В определенных вариантах осуществления животным, отличным от человека, является млекопитающее (например, грызун, мышь, крыса, кролик, нечеловекообразная обезьяна, собака, кошка, овца, крупный рогатый скот, примат или свинья). В некоторых вариантах осуществления животные включают без ограничения млекопитающих, птиц, пресмыкающихся, земноводных, рыб и червей. В некоторых вариантах осуществления животное является трансгенным животным, животным, полученным с помощью генной инженерии, или клоном.
Примерно. Используемое в данном документе выражение «примерно», используемое в отношении одного или нескольких значений, представляющих интерес, относится к значению, сходному с указанным эталонным значением. В определенных вариантах осуществления выражение «примерно» относится к диапазону значений, находящихся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или меньше в любую сторону (большую или меньшую) от указанного эталонного значения, если не указано иное или иное не очевидно из контекста (за исключением случаев, в которых такое число будет превышать 100% от возможного значения).
Ассоциированный. Используемый в данном документе по отношению к заболеванию термин «ассоциированный» означает, что рассматриваемые симптом, показатель измерения, характеристика или состояние связаны с диагностированием, развитием, присутствием или прогрессированием этого заболевания. Ассоциация может, но не обязательно должна, означать причинную связь с заболеванием.
Используемые по отношению к двум или более фрагментам выражения «ассоциированный», «конъюгированный», «связанный», «присоединенный» и «сочлененный» означают, что фрагменты физически ассоциированы или соединены друг с другом непосредственно либо с помощью одного или нескольких дополнительных фрагментов, служащих в качестве линкерного средства, с образованием структуры, достаточно стабильной для того, чтобы фрагменты оставались физически ассоциированными в условиях, в которых используют структуру, например, в физиологических условиях. «Ассоциация» не обязательно должна формироваться исключительно путем образования непосредственных ковалентных химических связей. Она также может предполагать образование ионных или водородных связей или связанность за счет гибридизации при достаточной стабильности для того, чтобы «ассоциированные» объекты оставались физически ассоциированными.
Бифункциональный. Используемый в данном документе термин «бифункциональный» относится к любому веществу, молекуле или фрагменту, способным выполнять или сохраняющим по меньшей мере две функции. Функции могут влиять на один и тот же результат или на разные результаты. Структуры, обеспечивающие выполнение функций, могут быть одинаковыми или разными. Например, бифункциональные модифицированные РНК по настоящему изобретению могут кодировать пептид релаксин (первая функция), при этом те нуклеозиды, которые образуют кодирующую РНК, сами по себе способны увеличивать время полужизни РНК (вторая функция). В данном примере в результате доставки бифункциональных модифицированных РНК субъекту, страдающему белковой недостаточностью, не только будет образовываться молекула пептида или белка, которая может обеспечивать уменьшение интенсивности проявлений или лечение заболевания или состояния, но также будет поддерживаться присутствие популяции модифицированных РНК в организме субъекта в течение продолжительного периода времени. В других аспектах бифункциональная модифицированная мРНК может представлять собой химерную или гибридную молекулу, содержащую, например, РНК, кодирующую пептид релаксин (первая функция), и второй белок, слитый с первым белком или совместно экспрессируемый с первым белком.
Биосовместимый. Используемый в данном документе термин «биосовместимый» означает совместимый с живыми клетками, тканями, органами или системами, представляющий риск повреждения, интоксикации или отторжения иммунной системой от небольшого до отсутствующего.
Биоразлагаемый. Используемый в данном документе термин «биоразлагаемый» означает способность к разрушению до безвредных продуктов под воздействием живых организмов.
Биологически активный. Используемая в данном документе фраза «биологически активный» относится к характеристике любого вещества, обладающего активностью в биологической системе и/или организме. Например, вещество, которое при введении в организм оказывает биологический эффект на этот организм, считается биологически активным. В конкретных вариантах осуществления полинуклеотид по настоящему изобретению может считаться биологически активным, если хотя бы часть полинуклеотида является биологически активной или имитирует активность, считающуюся биологически значимой.
Химера. Как используется в данном документе, «химера» представляет собой объект, имеющий две или более несочетаемых или неоднородных частей или участков. Например, химерная молекула может содержать первую часть, содержащую полипептид релаксин, и вторую часть (например, генетически слитую с первой частью), содержащую второй белок релаксин (например, белок с явно выраженной ферментативной активностью, антигенсвязывающий фрагмент или фрагмент, способный увеличивать время полужизни релаксина в плазме крови, например, Fc-участок антитела).
Оптимизация последовательности. Термин «оптимизация последовательности» относится к процессу или серии процессов, посредством которых нуклеотидные основания в эталонной последовательности нуклеиновой кислоты заменяют альтернативными нуклеотидными основаниями с получением в результате последовательности нуклеиновой кислоты с улучшенными свойствами, например, с улучшенной экспрессией белка или уменьшенной иммуногенностью.
Как правило, целью оптимизации последовательности является получение синонимичной нуклеотидной последовательности, кодирующей ту же полипептидную последовательность, которую кодирует эталонная нуклеотидная последовательность. Таким образом, в полипептиде, кодируемом кодон-оптимизированной нуклеотидной последовательностью, отсутствуют аминокислотные замены (в результате оптимизации кодонов) по сравнению с полипептидом, кодируемым эталонной нуклеотидной последовательностью.
Замена кодона. Выражение «замена кодона» или «замещение кодона» применительно к оптимизации последовательности относится к замещению кодона, присутствующего в эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, другим кодоном. Кодон может быть заменен в эталонной последовательности нуклеиновой кислоты, например, посредством химического синтеза пептидов или с помощью рекомбинантных способов, известных из уровня техники. Соответственно, ссылки на «замену» или «замещение» в некотором местоположении в последовательности нуклеиновой кислоты (например, мРНК) или в некотором участке или подпоследовательности последовательности нуклеиновой кислоты (например, мРНК) относятся к замене кодона в таком местоположении или участке альтернативным кодоном.
Используемые в данном документе выражения «кодирующая область» и «область, кодирующая», а также их грамматические варианты относятся к открытой рамке считывания (ORF) в полинуклеотиде, которая в результате экспрессии дает полипептид или белок.
Соединение. Подразумевается, что используемый в данном документе термин «соединение» включает все стереоизомеры и изотопы изображенной структуры. Используемый в данном документе термин «стереоизомер» означает любой геометрический изомер (например, цис- и транс-изомер), энантиомер или диастереомер соединения. Настоящее изобретение охватывает любые возможные стереоизомеры соединений, описанных в данном документе, в том числе стерео изомерно чистые формы (например, геометрически чистые, энантиомерно чистые или диастереомерно чистые), а также смеси энантиомеров и стереоизомеров, например, рацематы. Хорошо известны смеси энантиомеров и стереоизомеров соединений и способы их разделения на составляющие их энантиомеры или стереоизомеры. «Изотопы» относятся к атомам, имеющим одинаковое атомное число, но разные массовые числа вследствие разного числа нейтронов в ядрах. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий. Кроме того, соединение, соль или комплекс по настоящему изобретению можно получить в комбинации с молекулами растворителя или воды с образованием сольватов и гидратов с помощью стандартных способов.
Приведение в контакт. Используемый в данном документе термин «приведение в контакт» означает установление физического соединения между двумя или более объектами. Например, приведение клетки млекопитающего в контакт с композицией на основе наночастиц означает, что между клеткой млекопитающего и наночастицей создают физическое соединение. Способы приведения клеток в контакт с внешними объектами как in vivo, так и ex vivo хорошо известны в области биологии. Например, приведение композиции на основе наночастиц в контакт с клеткой млекопитающего, расположенной в организме млекопитающего, может осуществляться посредством различных путей введения (например, внутривенного, внутримышечного, интрадермального и подкожного) и может предполагать использование различных количеств композиции на основе наночастиц. Более того, в контакт с композицией на основе наночастиц можно приводить более одной клетки млекопитающего.
Консервативная аминокислотная замена. «Консервативная аминокислотная замена» представляет собой замену, при которой аминокислотный остаток в последовательности белка замещается аминокислотным остатком, имеющим сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков, имеющих сходные боковые цепи, были определены в уровне техники и включают основные боковые цепи (например, лизин, аргинин или гистидин), кислые боковые цепи (например, аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту), незаряженные полярные боковые цепи (например, глицин, аспарагин, глутамин, серии, треонин, тирозин или цистеин), неполярные боковые цепи (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин или триптофан), бета-разветвленные боковые цепи (например, треонин, валин, изолейцин) и ароматические боковые цепи (например, тирозин, фенилаланин, триптофан или гистидин). Таким образом, если аминокислота в полипептиде заменена другой аминокислотой из того же семейства боковых цепей, то данная аминокислотная замена считается консервативной. В другом аспекте нить из аминокислот можно подвергнуть консервативному замещению структурно сходной нитью, которая отличается порядком расположения и/или составом представителей семейства боковых цепей.
Неконсервативная аминокислотная замена. Неконсервативные аминокислотные замены включают замены, при которых (i) остаток, имеющий электроположительную боковую цепь (например, Arg, His или Lys) заменяет электроотрицательный остаток или заменяется на него (например, Glu или Asp), (ii) гидрофильный остаток (например, Ser или Thr) заменяет гидрофобный остаток или заменяется на него (например, Ala, Leu, Ile, Phe или Val), (iii) цистеин или пролин заменяют любой другой остаток или заменяются на них или (iv) остаток, имеющий объемную гидрофобную или ароматическую боковую цепь (например, Val, His, Не или Trp), заменяет остаток, имеющий меньшую боковую цепь (например, Ala или Ser) или не имеющий боковой цепи (например, Gly), или заменяется на него.
Другие аминокислотные замены могут быть легко идентифицированы специалистами в данной области. Например, в случае аминокислоты аланина может быть выбрана замена любым из D-аланина, глицина, бета-аланина, L-цистеина и D-цистеина. В случае лизина заместитель может быть любым из D-лизина, аргинина, D-аргинина, гомоаргинина, метионина, D-метионина, орнитина или D-орнитина. Обычно заменами в функционально важных участках, которые, как можно ожидать, индуцируют изменения свойств выделенных полипептидов, являются замены, при которых (i) полярный остаток, например, серии или треонин, заменяет (или заменяется на) гидрофобный остаток, например, лейцин, изолейцин, фенилаланин или аланин; (ii) цистеиновый остаток заменяет (или заменяется на) любой другой остаток; (iii) остаток, имеющий электроположительную боковую цепь, например, лизин, аргинин или гистидин, заменяет (или заменяется на) остаток, имеющий электроотрицательную боковую цепь, например, глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту; или (iv) остаток, имеющий объемную боковую цепь, например, фенилаланин, заменяет (или заменяется на) остаток, не имеющий такой боковой цепи, например, глицин. Вероятность того, что одна из вышеуказанных неконсервативных замен может изменить функциональные свойства белка, также коррелирует с положением замены относительно функционально важных участков белка; при этом некоторые неконсервативные замены могут, соответственно, оказывать незначительный эффект в отношении биологических свойств или не оказывать такого эффекта.
Консервативный. Используемый в данном документе термин «консервативный» относится к нуклеотидам или аминокислотным остаткам соответственно полинуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности, которые встречаются неизмененными в одном и том же положении в двух или более сравниваемых последовательностях. Нуклеотиды или аминокислоты, которые являются относительно консервативными, являются более консервативными среди родственных последовательностей, чем нуклеотиды или аминокислоты, встречающиеся в других участках последовательностей.
В некоторых вариантах осуществления утверждают, что две или более последовательностей являются «полностью консервативными», если они на 100% идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления утверждают, что две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они на по меньшей мере 70% идентичны, по меньшей мере 80% идентичны, по меньшей мере 90% идентичны или по меньшей мере 95% идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления утверждают, что две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они на приблизительно 70% идентичны, приблизительно 80% идентичны, приблизительно 90% идентичны, приблизительно 95%, приблизительно 98% или приблизительно 99% идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления утверждают, что две или более последовательностей являются «консервативными», если они на по меньшей мере 30% идентичны, по меньшей мере 40% идентичны, по меньшей мере 50% идентичны, по меньшей мере 60% идентичны, по меньшей мере 70% идентичны, по меньшей мере 80% идентичны, по меньшей мере 90% идентичны или по меньшей мере 95% идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления утверждают, что две или более последовательностей являются «консервативными», если они на приблизительно 30% идентичны, приблизительно 40% идентичны, приблизительно 50% идентичны, приблизительно 60% идентичны, приблизительно 70% идентичны, приблизительно 80% идентичны, приблизительно 90% идентичны, приблизительно 95% идентичны, приблизительно 98% идентичны или приблизительно 99% идентичны друг другу. Консервативность последовательности может относиться ко всей длине полинуклеотида или полипептида или может относиться к его части, участку или признаку.
Контролируемое высвобождение. Используемый в данном документе термин «контролируемое высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует определенному типу высвобождения, дающему терапевтический результат.
Циклический или циклизированный. Используемый в данном документе термин «циклический» относится к присутствию непрерывного цикла. Циклические молекулы не обязательно должны быть кольцевыми, а только соединенными с образованием ненарушенной цепи субъединиц. Циклические молекулы, такие как сконструированная РНК или мРНК по настоящему изобретению, могут представлять собой отдельные звенья или мультимеры или содержать один или несколько компонентов комплекса или структуры высшего порядка.
Цитотоксичный. Как используется в данном документе, «цитотоксичный» относится к уничтожению или вызывающему повреждающий, токсичный или смертельный эффект в отношении клетки (например, клетки млекопитающего (например, клетки человека)), бактерии, вируса, гриба, простейшего, паразита, приона или их комбинации.
Доставка. Используемый в данном документе термин «доставка» означает предоставление объекта в место назначения. Например, доставка полинуклеотида субъекту может предполагать введение субъекту композиции на основе наночастиц, содержащей полинуклеотид (например, посредством внутривенного, внутримышечного, интрадермального или подкожного путей). Введение композиции на основе наночастиц млекопитающему или в клетку млекопитающего может предполагать приведение одной или нескольких клеток в контакт с композицией на основе наночастиц.
Средство доставки. Как используется в данном документе, «средство доставки» относится к любому веществу, которое по меньшей мере частично способствует доставке полинуклеотида в клетки-мишени in vivo, in vitro или ex vivo.
Дестабилизированный. Используемые в данном документе термины «дестабильный», «дестабилизировать» или «дестабилизированный участок» означают участок или молекулу, которые являются менее стабильными, чем исходная форма, форма дикого типа или нативная форма тех же участка или молекулы.
Диастереомер. Используемый в данном документе термин «диастереомер» означает стереоизомеры, которые не являются зеркальными отображениями друг друга и не совпадают при наложении друг на друга.
Расщепление. Используемый в данном документе термин «расщепление» означает разделение на меньшие части или компоненты. Когда речь идет о полипептидах или белках, расщепление приводит к образованию пептидов.
Дистальный. Используемый в данном документе термин «дистальный» означает расположенный вдали от центра или вдали от точки или участка, представляющих интерес.
Домен. Используемый в данном документе термин «домен», если речь идет о полипептидах, относится к мотиву полипептида, имеющему одну(одно) или несколько идентифицируемых структурных или функциональных характеристик или свойств (например, связывающую способность, осуществление функции сайта для белок-белковых взаимодействий).
Режим введения доз. Как используется в данном документе, «режим введения доз» или «режим дозирования» представляет собой схему введения или определенный врачом режим лечения, профилактики или паллиативной медицинской помощи.
Эффективное количество. Используемый в данном документе термин «эффективное количество» средства означает такое количество, которое является достаточным для обеспечения благоприятных или требуемых результатов, например, клинических результатов, и поэтому термин «эффективное количество» зависит от контекста, в котором он применяется. Например, применительно к введению средства, с помощью которого лечат дефицит белка (например, дефицит релаксина), эффективным количеством средства является, например, количество мРНК, с которой экспрессируется достаточное количество релаксина для уменьшения интенсивности, ослабления, устранения или предупреждения признаков или симптомов, ассоциированных с дефицитом релаксина, по сравнению с тяжестью симптомов, наблюдаемой без введения средства. Термин «эффективное количество» может использоваться взаимозаменяемо с «эффективной дозой», «терапевтически эффективным количеством» или «терапевтически эффективной дозой».
Энантиомер. Используемый в данном документе термин «энантиомер» означает каждую отдельную оптически активную форму соединения по настоящему изобретению, характеризующуюся оптической чистотой или энантиомерным избытком (определенными с помощью стандартных способов из данной области), составляющими по меньшей мере 80% (т.е. по меньшей мере 90% одного энантиомера и не более 10% другого энантиомера), по меньшей мере 90% или по меньшей мере 98%.
Инкапсулировать. Используемый в данном документе термин «инкапсулировать» означает отделять, окружать или упаковывать.
Эффективность инкапсулирования. Как используется в данном документе, «эффективность инкапсулирования» относится к количеству полинуклеотида, который становится частью композиции на основе наночастиц, по отношению к исходному общему количеству полинуклеотида, используемого в получении композиции на основе наночастиц. Например, если в композиции на основе наночастиц инкапсулировано 97 мг полинуклеотида из общего количества 100 мг полинуклеотида, изначально предусмотренного в композиции, то эффективность инкапсулирования может быть представлена как 97%. Как используется в данном документе, «инкапсулирование» может относиться к полному, существенному или частичному отделению, заключению, окружению или упаковыванию.
Кодируемый сигнал расщепления белка. Как используется в данном документе, «кодируемый сигнал расщепления белка» относится к нуклеотидной последовательности, кодирующей сигнал расщепления белка.
Сконструированный. Как используется в данном документе, варианты осуществления настоящего изобретения являются «сконструированными», если они разработаны таким образом, что обладают признаком или свойством, структурным либо химическим, по которым они отличаются от исходной молекулы, молекулы дикого типа или нативной молекулы.
Повышенная доставка. Используемый в данном документе термин «повышенная доставка» означает доставку большего (например, по меньшей мере в 1,5 раза большего, по меньшей мере в 2 раза большего, по меньшей мере в 3 раза большего, по меньшей мере в 4 раза большего, по меньшей мере в 5 раз большего, по меньшей мере в 6 раз большего, по меньшей мере в 7 раз большего, по меньшей мере в 8 раз большего, по меньшей мере в 9 раз большего, по меньшей мере в 10 раз большего) количества полинуклеотида наночастицей в ткань-мишень, представляющую интерес (например, в печень млекопитающего), по сравнению с уровнем доставки полинуклеотида контрольной наночастицей (например, содержащей МС3, KC2 или DLinDMA) в ткань-мишень, представляющую интерес. Уровень доставки наночастицы в конкретную ткань можно измерить путем сравнения количества белка, продуцируемого в ткани, с весом указанной ткани, сравнения количества полинуклеотида в ткани с весом указанной ткани, сравнения количества белка, продуцируемого в ткани, с общим количеством белка в указанной ткани или сравнения количества полинуклеотида в ткани с общим количеством полинуклеотида в указанной ткани. Будет понятно, что повышенная доставка наночастицы в ткань-мишень не обязательно должна определяться в организме субъекта, подвергаемого лечению, ее можно определять в имитационных условиях, как, например, в животной модели (например, в крысиной модели).
Экзосома. Как используется в данном документе, «экзосома» представляет собой везикулу, секретируемую клетками млекопитающего, или комплекс, задействованный в разрушении РНК.
Экспрессия. Как используется в данном документе, «экспрессия» последовательности нуклеиновой кислоты относится к одному или нескольким следующим событиям: (1) образованию мРНК-матрицы на последовательности ДНК (например, путем транскрипции); (2) процессингу мРНК-транскрипта (например, путем сплайсинга, редактирования, образования 5'-кэпа и/или процессинга 3'-конца); (3) трансляции мРНК в полипептид или белок и (4) посттрансляционной модификации полипептида или белка.
Ex vivo. Используемый в данном документе термин «ех vivo» относится к событиям, происходящим вне организма (например, животного, растения или микроорганизма или его клетки или ткани). События ex vivo могут происходить в среде, подвергнутой минимальным изменениям по сравнению с природной средой (например, in vivo).
Признак. Как используется в данном документе, «признак» относится к характеристике, свойству или отличительному элементу. Когда речь идет о полипептидах, «признаки» определяются как отличительные компоненты молекулы, в основе которых лежит аминокислотная последовательность. Признаки полипептидов, кодируемых полинуклеотидами по настоящему изобретению, включают поверхностные проявления, локальные конформационные формы, складки, петли, полупетли, домены, полудомены, сайты, концы или любую их комбинацию.
Состав. Как используется в данном документе, «состав» содержит по меньшей мере полинуклеотид и одно или несколько из носителя, вспомогательного вещества и средства доставки.
Фрагмент. Фрагмент», как используется в данном документе, относится к части. Например, фрагменты белков могут содержать полипептиды, полученные путем расщепления полноразмерного белка, выделенного из культивируемых клеток. В некоторых вариантах осуществления фрагмент представляет собой подпоследовательности полноразмерного белка, где N-концевые, и/или С-концевые, и/или внутренние подпоследовательности были удалены. В некоторых предпочтительных аспектах настоящего изобретения фрагменты белка по настоящему изобретению являются функциональными фрагментами.
Функциональный. Как используется в данном документе, «функциональная» биологическая молекула представляет собой биологическую молекулу в форме, в которой она проявляет свойство и/или активность, которыми она характеризуется. Таким образом, функциональный фрагмент полинуклеотида по настоящему изобретению представляет собой полинуклеотид, способный к экспрессии функционального фрагмента релаксина. Как используется в данном документе, функциональный фрагмент релаксина относится к фрагменту релаксина дикого типа (т.е. фрагменту любой из его изоформ, встречающихся в природе) или его мутантной форме или варианту, где фрагмент сохраняет по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 75%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90% или по меньшей мере приблизительно 95% биологической активности соответствующего полноразмерного белка.
Вспомогательный липид. Используемый в данном документе термин «вспомогательный липид» относится к соединению или молекуле, содержащим липидный фрагмент (для вставки в липидный слой, например, липидный бислой) и полярный фрагмент (для взаимодействия с физиологическим раствором на поверхности липидного слоя). Как правило, вспомогательный липид представляет собой фосфолипид. Функцией вспомогательного липида является «дополнение» аминолипида и увеличение фузогенности бислоя и/или содействие обеспечению эндосомального высвобождения, например, нуклеиновой кислоты, доставляемой в клетки. Вспомогательные липиды также, как полагают, являются ключевыми структурными компонентами поверхности LNP.
Гомология. Используемый в данном документе термин «гомология» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между молекулами нуклеиновых кислот (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между молекулами полипептидов. Термин «гомология» обычно подразумевает наличие эволюционного взаимоотношения между двумя молекулами. Таким образом, две молекулы, являющиеся гомологичными, имеют общего эволюционного предка. В контексте настоящего изобретения термин «гомология» охватывает как идентичность, так и сходство.
В некоторых вариантах осуществления полимерные молекулы считаются «гомологичными» друг другу, если по меньшей мере 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% мономеров в молекуле являются идентичными (в точности такие же мономеры) или сходными (консервативные замены). Термин «гомологичный» обязательно относится к сравнению по меньшей мере двух последовательностей (полинуклеотидных или полипептидных последовательностей).
Идентичность. Используемый в данном документе термин «идентичность» относится к общей консервативности мономеров между полимерными молекулами, например, между молекулами полинуклеотидов (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между молекулами полипептидов. Расчет процентной идентичности двух полинуклеотидных последовательностей, например, можно осуществлять путем выравнивания двух последовательностей с целью оптимального сравнения (например, в одну или обе из первой и второй последовательностей нуклеиновых кислот можно вводить гэпы для оптимального выравнивания, и с целью сравнения неидентичные последовательности можно не принимать во внимание). В определенных вариантах осуществления длина последовательности, выровненной с целью сравнения, составляет по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% от длины эталонной последовательности. Затем сравнивают нуклеотиды в соответствующих положениях нуклеотидов. Если положение в первой последовательности занимает тот же нуклеотид, что и в соответствующем положении во второй последовательности, то молекулы являются идентичными по этому положению. Процентная идентичность двух последовательностей является функцией числа идентичных положений, общих для последовательностей, с учетом числа гэпов и длины каждого гэпа, который необходимо ввести для оптимального выравнивания этих двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процентной идентичности между двумя последовательностями можно выполнять с помощью математического алгоритма. При сравнении ДНК и РНК тимин (Т) и урацил (U) могут считаться эквивалентными.
Подходящие программы систем программного обеспечения доступны из различных источников и предназначены для выравнивания как белковых, так и нуклеотидных последовательностей. Одной подходящей программой для определения процентной идентичности последовательностей является bl2seq, часть пакета программ BLAST, доступного на веб-сайте BLAST Национального центра биотехнологической информации правительства США (blast.ncbi.nlm.nih.gov). Bl2seq осуществляет сравнение между двумя последовательностями с помощью алгоритма BLASTN или BLASTP. BLASTN применяют для сравнения последовательностей нуклеиновых кислот, тогда как BLASTP применяют для сравнения аминокислотных последовательностей. Другими подходящими программами являются, например, Needle, Stretcher, Water или Matcher, являющиеся частью пакета биоинформационных программ EMBOSS, и доступные также от Европейского института биоинформатики (EBI) на www.ebi.ac.uk/Tools/psa.
Процедуры выравнивания последовательностей можно проводить с помощью способов, известных из уровня техники, таких как MAFFT, Clustal (ClustalW, Clustal X или Clustal Omega), MUSCLE и т.д.
Каждый из различных участков в одной целевой полинуклеотидной или полипептидной последовательности, выравниваемой относительно эталонной полинуклеотидной или полипептидной последовательности, может обладать собственной процентной идентичностью последовательности. Следует отметить, что значение процентной идентичности последовательностей округляют до ближайших десятых. Например, 80,11, 80,12, 80,13 и 80,14 округляют в меньшую сторону до 80,1, тогда как 80,15, 80,16, 80,17, 80,18 и 80,19 округляют в большую сторону до 80,2. Также следует отметить, что значение длины всегда будет целым числом.
В определенных аспектах процентное значение идентичности «% ID» первой аминокислотной последовательности (или последовательности нуклеиновой кислоты) со второй аминокислотной последовательностью (или последовательностью нуклеиновой кислоты) рассчитывают как % ID=100×(Y/Z), где Y представляет собой количество аминокислотных остатков (или нуклеотидных оснований), подсчитанных как идентичные совпадения при выравнивании первой и второй последовательностей (выравниваемых посредством визуального осмотра или специальной программы выравнивания последовательностей), и Z представляет собой общее число остатков во второй последовательности. Если длина первой последовательности больше, чем длина второй последовательности, то процентная идентичность первой последовательности со второй последовательностью будет выше, чем процентная идентичность второй последовательности с первой последовательностью.
Специалисту в данной области будет понятно, что построение выравнивания последовательностей для расчета процентной идентичности последовательностей не ограничивается бинарными сравнениями двух последовательностей, основанными исключительно на первичных данных о последовательностях. Также следует понимать, что выравнивания последовательностей можно построить с помощью интеграции данных о последовательностях с данными из неоднородных источников, такими как структурные данные (например, кристаллографические структуры белков), функциональные данные (например, локализация мутаций) или филогенетические данные. Подходящей программой, с помощью которой интегрируют неоднородные данные с построением множественного выравнивания последовательностей, является T-Coffee, доступная на www.tcoffee.org и альтернативно доступная, например, от EBI. Также следует понимать, что конечное выравнивание, применяемое для расчета процентной идентичности последовательностей, можно проверять либо автоматически, либо вручную.
Иммунный ответ. Термин «иммунный ответ» относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых вышеупомянутыми клетками или печенью (в том числе антител, цитокинов и компонентов системы комплемента), которое приводит к избирательному повреждению, разрушению или удалению из организма человека инвазивных патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случаях аутоиммунитета или патологического воспаления, нормальных клеток или тканей человека. В некоторых случаях введение наночастицы, содержащей липидный компонент и инкапсулированное терапевтическое средство, может запускать иммунный ответ, который может быть вызван (i) инкапсулированным терапевтическим средством (например, мРНК), (ii) продуктом экспрессии такого инкапсулированного терапевтического средства (например, полипептидом, кодируемым мРНК), (iii) липидным компонентом наночастицы или (iv) их комбинацией.
Воспалительный ответ. «Воспалительный ответ» относится к иммунным ответам, в которых задействованы системы специфической и неспецифической защиты. Реакция системы специфической защиты представляет собой специфическую реакцию иммунной системы на антиген. Примеры реакций системы специфической защиты включают гуморальные ответы. Реакция системы неспецифической защиты представляет собой воспалительный ответ, опосредованный лейкоцитами, обычно неспособными к формированию иммунологической памяти, например, макрофагами, эозинофилами и нейтрофилами. В некоторых аспектах иммунный ответ включает секрецию провоспалительных цитокинов, приводящую к повышению уровней провоспалительных цитокинов.
Провоспалительные цитокины. Термин «провоспалительный цитокин» относится к цитокинам, уровень которых повышается в ходе воспалительного ответа. Примеры провоспалительных цитокинов включают интерлейкин-6 (IL-6), CXCL1 (хемокиновый лиганд 1 (с мотивом С-Х-С); также известный как GROoc, интерферон-γ (IFNγ), фактор некроза опухоли α (TNFα), интерферон-γ-индуцируемый белок 10 (IP-10) или гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF). Термин «провоспалительные цитокины» включает также другие цитокины, ассоциированные с воспалительными ответами, известные из уровня техники, например, интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-8 (IL-8), интерлейкин-12 (IL-12), интерлейкин-13 (IL-13), интерферон-α (IFN-α) и т.д.
In vitro. Используемый в данном документе термин «in vitro» относится к событиям, происходящим в искусственной среде, например, в пробирке или реакционном сосуде, в культуре клеток, в чашке Петри и т.д., но не в организме (например, в животном, растении или микроорганизме).
In vivo. Используемый в данном документе термин «in vivo» относится к событиям, происходящим в организме (например, в животном, растении или микроорганизме или его клетке или ткани).
Инсерционные и делеционные варианты. «Инсерционные варианты», когда речь идет о полипептидах, представляют собой варианты с одной или несколькими вставленными аминокислотами, непосредственно прилегающими к аминокислоте в конкретном положении в нативной или исходной последовательности. «Непосредственно прилегающий» к аминокислоте означает присоединенный к функциональной альфа-карбоксильной или альфа-аминогруппе аминокислоты. «Делеционные варианты», когда речь идет о полипептидах, представляют собой варианты с одной или несколькими удаленными аминокислотами из нативной или исходной аминокислотной последовательности. В делеционных вариантах обычно удалены одна или несколько аминокислот в конкретном участке молекулы.
Интактный. Используемый в данном документе применительно к полипептиду термин «интактный» означает сохранение аминокислоты, соответствующей белку дикого типа, например, без мутации или замены аминокислоты дикого типа. В то же время применительно к нуклеиновой кислоте термин «интактный» означает сохранение нуклеинового основания, соответствующего нуклеиновой кислоте дикого типа, например, без мутации или замены нуклеинового основания дикого типа.
Ионизируемый аминолипид. Термин «ионизируемый аминолипид» включает те липиды, которые имеют одну, две, три или больше жирнокислотных или жирных алкильных цепей и рН-титруемую аминогруппу головки (например, алкиламино- или диалкиламиногруппу головки). Ионизируемый аминолипид, как правило, является протонированным (т.е. положительно заряженным) при рН ниже pKa аминогруппы головки и является по сути незаряженным при рН выше pKa. Такие ионизируемые аминолипиды включают без ограничения DLin-MC3-DMA (МС3) и (13Z, 165Z)-N,N-диметил-3-нонилдокоза-13-16-диен-1-амин (L608).
Выделенный. Используемый в данном документе термин «выделенный» относится к веществу или объекту, которые были отделены по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми они были связаны (в природе либо в экспериментальных условиях). Выделенные вещества (например, полинуклеотиды или полипептиды) могут иметь различные уровни чистоты относительно веществ, из которых они были выделены. Выделенные вещества и/или объекты могут быть отделены от по меньшей мере приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или больше других компонентов, с которыми они были исходно связаны. В некоторых вариантах осуществления выделенные вещества являются чистыми более чем на приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более чем на приблизительно 99%. Как используется в данном документе, вещество является «чистым», если оно по сути не содержит других компонентов.
Фактически выделенный. Под «фактически выделенным» подразумевается, что соединение фактически отделено от среды, в которой оно было образовано или выявлено. Частичное отделение может охватывать, например, композицию, обогащенную соединением по настоящему изобретению. Фактическое отделение может охватывать композиции, содержащие по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по весу соединения по настоящему изобретению или его соли.
Полинуклеотид, вектор, полипептид, клетка или любая композиция, раскрытая в данном документе, которые являются «выделенными», представляют собой полинуклеотид, вектор, полипептид, клетку или композицию, которые находятся в форме, не встречающейся в природе. Выделенные полинуклеотиды, векторы, полипептиды или композиции включают такие, которые были очищены до такой степени, что они больше не находятся в такой форме, в которой они встречаются в природе. В некоторых аспектах выделенные полинуклеотид, вектор, полипептид или композиция являются фактически чистыми.
Изомер. Используемый в данном документе термин «изомер» означает любой таутомер, стереоизомер, энантиомер или диастереомер любого соединения по настоящему изобретению. Понятно, что соединения по настоящему изобретению могут иметь один или несколько хиральных центров и/или двойных связей и, следовательно, существовать в виде стереоизомеров, таких как изомеры положения двойной связи (т.е. геометрические E/Z-изомеры) или диастереомеры (например, энантиомеры (т.е. (+) или (-)) или цис/транс-изомеры). В соответствии с настоящим изобретением химические структуры, изображенные в данном документе, и, следовательно, соединения по настоящему изобретению охватывают все соответствующие стереоизомеры, то есть как стереоизомерно чистые формы (например, геометрически чистые, энантиомерно чистые или диастереомерно чистые), так и смеси энантиомеров и стереоизомеров, например, рацематы. Смеси энантиомеров и стереоизомеров соединений по настоящему изобретению можно, как правило, разделить на составляющие их энантиомеры или стереоизомеры с помощью хорошо известных способов, таких как газовая хроматография на хиральной фазе, высокоэффективная жидкостная хроматография на хиральной фазе, кристаллизация соединения в виде хирального солевого комплекса или кристаллизация соединения в хиральном растворителе. Энантиомеры и стереоизомеры также можно получить из стереоизомерно или энантиомерно чистых промежуточных соединений, реагентов и катализаторов с помощью хорошо известных способов асимметрического синтеза.
Линкер. Как используется в данном документе, «линкер» относится к группе атомов, например, 10-1000 атомов, и может быть образован такими атомами или группами, как без ограничения углерод, амино-, алкиламиногруппа, кислород, сера, сульфоксидная, сульфонильная, карбонильная группа и иминогруппа. Линкер может быть присоединен к нуклеиновому основанию или сахарному фрагменту в модифицированном нуклеозиде или нуклеотиде первым концом и к полезной нагрузке, например, детектируемому или терапевтическому средству, вторым концом. Линкер может иметь достаточную длину, чтобы она не препятствовала его включению в состав последовательности нуклеиновой кислоты. Линкер можно использовать для любой полезной цели, как, например, для образования мультимеров полинуклеотидов (например, посредством соединения двух или более молекул химерных полинуклеотидов или IVT-полинуклеотидов) или конъюгатов полинуклеотидов, а также для введения полезной нагрузки, описанной в данном документе. Примеры химических групп, которые могут быть включены в состав линкера, включают без ограничения алкильную, алкенильную, алкинильную, амидо-, амино-, простую эфирную, простую тиоэфирную, сложноэфирную, алкиленовую, гетероалкиленовую, арильную и гетероциклильную группы, каждая из которых может быть необязательно замещена согласно описанному в данном документе. Примеры линкеров включают без ограничения ненасыщенные алканы, полиэтиленгликоли (например, этилен- или пропиленгликолевые мономерные звенья, например, диэтиленгликоль, дипропиленгликоль, триэтиленгликоль, трипропиленгликоль, тетраэтиленгликоль или тетраэтиленгликоль), а также декстрановые полимеры и их производные. Другие примеры включают без ограничения расщепляемые фрагменты в линкере, такие как, например, дисульфидная связь (-S-S-) или азосвязь (-N=N-), которые можно расщеплять с помощью восстановителя или фотолиза. Неограничивающие примеры избирательно расщепляемой связи включают амидосвязь, которую можно расщеплять, например, с использованием трис(2-карбоксиэтил)фосфина (ТСЕР) или других восстановителей и/или фотолиза, а также сложноэфирную связь, которую можно расщеплять, например, путем кислотного или щелочного гидролиза.
Способы введения. Как используется в данном документе, «способы введения» могут включать внутривенный, внутримышечный, интрадермальный, подкожный или другие способы доставки композиции субъекту. Способ введения можно выбрать для целенаправленной доставки (например, для специфической доставки) в конкретный участок или систему организма.
Модифицированный. Как используется в данном документе, «модифицированный» относится к измененным состоянию или структуре молекулы по настоящему изобретению. Молекулы можно модифицировать с помощью множества способов, в том числе в химическом, структурном и функциональном отношении. В некоторых вариантах осуществления молекулы мРНК по настоящему изобретению модифицированы путем введения неприродных нуклеозидов и/или нуклеотидов, например, в том, как это относится к природным рибонуклеотидам A, U, G и С. Неканонические нуклеотиды, такие как кэп-структуры, не считаются «модифицированными», хотя они отличаются по химической структуре от рибонуклеотидов А, С, G, U.
Слизь. Как используется в данном документе, «слизь» относится к природному веществу, которое является вязким и содержит гликопротеины муцины.
Композиция на основе наночастиц. Как используется в данном документе, «композиция на основе наночастиц» представляет собой композицию, содержащую один или несколько липидов. Композиции на основе наночастиц, как правило, имеют размеры микрометрового порядка или меньше и могут содержать липидный бислой. Композиции на основе наночастиц охватывают липидные наночастицы (LNP), липосомы (например, липидные везикулы) и липоплексы. Например, композиция на основе наночастиц может представлять собой липосому, имеющую липидный бислой, диаметром 500 нм или меньше.
Природный. Как используется в данном документе, «природный» означает существующий в природе без искусственной помощи.
Позвоночное животное, отличное от человека. Как используется в данном документе, «позвоночное животное, отличное от человека» включает всех позвоночных животных, за исключением Homo sapiens, в том числе дикие и одомашненные виды. Примеры позвоночных животных, отличных от человека, включают без ограничения млекопитающих, таких как альпака, бантенг, бизон, верблюд, кошка, крупный рогатый скот, олень, собака, осел, гаял, коза, морская свинка, лошадь, лама, мул, свинья, кролик, северный олень, овца, азиатский буйвол и як.
Последовательность нуклеиновой кислоты. Термины «последовательность нуклеиновой кислоты», «нуклеотидная последовательность» или «полинуклеотидная последовательность» используются взаимозаменяемо и относятся к непрерывной последовательности нуклеиновой кислоты. Последовательность может представлять собой однонитевую или двухнитевую ДНК или РНК, например, мРНК.
Термин «нуклеиновая кислота» в своем наиболее широком смысле включает любое соединение и/или вещество, которое содержит полимер из нуклеотидов. Такие полимеры часто называются полинуклеотидами. Иллюстративные нуклеиновые кислоты или полинуклеотиды по настоящему изобретению включают без ограничения рибонуклеиновые кислоты (РНК), дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК), треозо-нуклеиновые кислоты (TNA), гликоль-нуклеиновые кислоты (GNA), пептидо-нуклеиновые кислоты (PNA), запертые нуклеиновые кислоты (LNA, в том числе LNA, имеющую β-D-рибо-конфигурацию, α-LNA, имеющую α-L-рибо-конфигурацию (диастереомер LNA), 2'-амино-LNA, имеющую 2'-амино-функционализацию, и 2'-амино-α-LNA, имеющую 2'-амино-функционализацию), нуклеиновые кислоты с этиленовым мостиком (ENA), циклогексен-нуклеиновые кислоты (CeNA) или их гибриды или комбинации.
Фраза «нуклеотидная последовательность, кодирующая» относится к кодирующей последовательности нуклеиновой кислоты (например, молекуле мРНК или ДНК), которая кодирует полипептид. Кодирующая последовательность может дополнительно содержать сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, включающими промотор и сигнал полиаденилирования, которые способны управлять экспрессией в клетках индивидуума или млекопитающего, которому вводят нуклеиновую кислоту. Кодирующая последовательность может дополнительно содержать последовательности, которые кодируют сигнальные пептиды.
Нецелевой. Как используется в данном документе, «нецелевой» относится к любому непредусмотренному эффекту в отношении любых одной или нескольких мишеней, генов или клеточных транскриптов.
Открытая рамка считывания. Как используется в данном документе, «открытая рамка считывания» или «ORF» относится к последовательности, которая не содержит стоп-кодон в указанной рамке считывания.
Функционально связанный. Используемая в данном документе фраза «функционально связанный» относится к функциональному соединению между двумя или более молекулами, конструкциями, транскриптами, объектами, фрагментами и т.п.
Необязательно замещенный. В данном документе подразумевается, что фраза в виде «необязательно замещенный X» (например, необязательно замещенный алкил) является эквивалентной «X, где X необязательно замещен» (например, «алкил, где указанный алкил необязательно замещен»). Не имеется в виду, что признак «X» (например, алкил) сам по себе является необязательным.
Часть. Как используется в данном документе, «часть» или «участок» полинуклеотида определяется как любая часть полинуклеотида длиной меньше всей длины полинуклеотида.
Пациент. Как используется в данном документе, «пациент» относится к субъекту, который может обращаться за лечением или нуждаться в нем, требует лечения, получает лечение, будет получать лечение, или к субъекту, которому оказывает медицинскую помощь квалифицированный специалист при конкретном заболевании или состоянии.
Фармацевтически приемлемый. Фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения таких соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые по результатам тщательной медицинской оценки являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблемы или осложнения в соответствии с обоснованным соотношением польза/риск.
Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Фраза «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество», используемая в данном документе, относится к любому ингредиенту, отличному от соединений, описанных в данном документе (например, к носителю, способному суспендировать или растворять активное соединение), и обладающему свойствами, заключающимися в том, что он является фактически нетоксичным и не вызывает воспаление в организме пациента. Вспомогательные вещества могут включать, например, антиадгезивы, антиоксиданты, связующие вещества, покрытия, добавки для прессования, разрыхлители, красители (пигменты), смягчающие средства, эмульгаторы, наполнители (разбавители), пленкообразователи или покрытия, вкусоароматические добавки, отдушки, вещества, способствующие скольжению (вещества, препятствующие слеживанию и комкованию), смазывающие вещества, консерванты, типографские краски, сорбенты, суспендирующие или диспергирующие средства, подсластители и гидратационную воду. Иллюстративные вспомогательные вещества включают без ограничения: бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), карбонат кальция, фосфат кальция (двухосновный), стеарат кальция, кроскармеллозу, сшитый поливинилпирролидон, лимонную кислоту, кросповидон, цистеин, этилцеллюлозу, желатин, гидроксипропилцеллюлозу,
гидроксипропилметилцеллюлозу, лактозу, стеарат магния, мальтит, маннит, метионин, метилцеллюлозу, метилпарабен, микрокристаллическую целлюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, повидон, прежелатинизированный крахмал, пропилпарабен, ретинилпальмитат, шеллак, диоксид кремния, карбоксиметилцеллюлозу натрия, цитрат натрия, крахмалгликолят натрия, сорбит, крахмал (кукурузный), стеариновую кислоту, сахарозу, тальк, диоксид титана, витамин А, витамин Е, витамин С и ксилит.
Фармацевтически приемлемые соли. Настоящее изобретение также охватывает фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных в данном документе. Как используется в данном документе, «фармацевтически приемлемые соли» относятся к производным раскрытых соединений, где исходное соединение модифицировано путем превращения существующего кислотного или основного фрагмента в его солевую форму (например, путем осуществления реакции свободной основной группы с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают без ограничения соли минеральных или органических кислот с основными остатками, такими как амины; щелочные или органические соли с кислотными остатками, такими как остатки карбоновых кислот, и т.п. Иллюстративные соли присоединения кислоты включают ацетатные соли, соли уксусной кислоты, адипатные, альгинатные, аскорбатные, аспартатные, бензолсульфонатные соли, соли бензолсульфоновой кислоты, бензоатные, бисульфатные, боратные, бутиратные, камфоратные, камфорсульфонатные, цитратные, циклопентанпропионатные, диглюконатные, додецилсульфатные, этансульфонатные, фумаратные, глюкогептонатные, глицерофосфатные, гемисульфатные, гептонатные, гексаноатные, гидробромидные, гидрохлоридные, гидройодидные, 2-гидроксиэтансульфонатные, лактобионатные, лактатные, лауратные, лаурилсульфатные, малатные, малеатные, малонатные, метансульфонатные, 2-нафталинсульфонатные, никотинатные, нитратные, олеатные, оксалатные, пальмитатные, памоатные, пектинатные, персульфатные, 3-фенилпропионатные, фосфатные, пикратные, пивалатные, пропионатные, стеаратные, сукцинатные, сульфатные, тартратные, тиоцианатные, толуолсульфонатные, ундеканоатные, валератные соли и т.п. Иллюстративные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также соли с катионами нетоксичного аммония, четвертичного аммония и амина, в том числе без ограничения аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению включают традиционные нетоксичные соли исходного соединения, образуемые, например, нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению можно синтезировать из исходного соединения, содержащего основный или кислотный фрагмент, с помощью стандартных химических способов. Такие соли обычно можно получить путем осуществления реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством подходящего основания или кислоты в воде, или в органическом растворителе, или в смеси их обоих; обычно используют неводные среды, такие как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Перечни подходящих солей находятся в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, и Berge et al, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977), каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Фармацевтически приемлемый сольват. Термин «фармацевтически приемлемый сольват», используемый в данном документе, означает соединение по настоящему изобретению, где молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым при вводимой дозе. Например, сольваты можно получить путем кристаллизации, перекристаллизации или осаждения из раствора, содержащего органические растворители, воду или их смесь. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода (например, моно-, ди- и тригидраты), N-метилпирролидинон (NMP), диметилсульфоксид (DMSO), N,N'-диметилформамид (DMF), N,N'-диметилацетамид (DMAC), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMEU), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1Н)-пиримидинон (DMPU), ацетонитрил (ACN), пропиленгликоль, этилацетат, бензиловый спирт, 2-пирролидон, бензилбензоат и т.п. Если растворителем является вода, то сольват называют «гидратом».
Фармакокинетический. Как используется в данном документе, «фармакокинетический» относится к любому одному или нескольким свойствам молекулы или соединения в том, как это относится к определению судьбы веществ, вводимых в живой организм. Фармакокинетика подразделяется на несколько областей исследования, охватывающих степень и скорость всасывания, распределения, метаболизма и экскреции. Они обычно называются ADME, где: (А) всасывание представляет собой процесс поступления вещества в систему кровообращения; (D) распределение представляет собой распространение или рассредоточение веществ по всем жидкостям и тканям организма; (М) метаболизм (или биотрансформация) представляет собой необратимое превращение исходных соединений в продукты-метаболиты; и (Е) экскреция (или элиминация) относится к элиминации вещества из организма. В редких случаях некоторые лекарственные средства необратимо накапливаются в ткани организма.
Физико-химический. Как используется в данном документе, «физико-химический» означает физическое и/или химическое свойство или относится к нему.
Полинуклеотид. Термин «полинуклеотид», используемый в данном документе, относится к полимерам из нуклеотидов, в том числе рибонуклеотидов, дезоксирибонуклеотидов, их аналогов или их смесей, любой длины. Данный термин относится к первичной структуре молекулы. Таким образом, термин включает трех-, двух- и однонитевую дезоксирибонуклеиновую кислоту («ДНК»), а также трех-, двух- и однонитевую рибонуклеиновую кислоту («РНК»). Он также включает модифицированные, например, путем алкилирования и/или путем кэпирования, и немодифицированные формы полинуклеотида. Более конкретно, термин «полинуклеотид» включает полидезоксирибонуклеотиды (содержащие 2-дезокси-D-рибозу), полирибонуклеотиды (содержащие D-рибозу), в том числе тРНК, рРНК, шРНК, киРНК и мРНК, сплайсированные либо несплайсированные, полинуклеотид любого другого типа, который представляет собой N- или С-гликозид пуринового или пиримидинового основания, а также другие полимеры, содержащие ненуклеотидные остовы, например, полиамидные (например, пептидо-нуклеиновые кислоты «PNA») и полиморфолиновые полимеры и другие синтетические специфические по последовательности полимерные нуклеиновые кислоты, при условии, что полимеры содержат нуклеиновые основания в конфигурации, обеспечивающей возможность образования пар оснований и стэкинга оснований, как это было обнаружено в ДНК и РНК. В конкретных аспектах полинуклеотид содержит мРНК. В другом аспекте мРНК представляет собой синтетическую мРНК. В некоторых аспектах синтетическая мРНК содержит по меньшей мере одно неприродное нуклеотидное основание. В некоторых аспектах все нуклеиновые основания определенного класса были заменены неприродными нуклеиновыми основаниями (например, все уридиновые основания в полинуклеотиде, раскрытом в данном документе, могут быть заменены неприродным нуклеотидным основанием, например, 5-метоксиуридином). В некоторых аспектах полинуклеотид (например, синтетическая РНК или синтетическая ДНК) содержит только природные нуклеотидные основания, т.е. А (аденозин), G (гуанозин), С (цитидин) и Т (тимидин) в случае синтетической ДНК или А, С, G и U (уридин) в случае синтетической РНК.
Специалисту в данной области будет понятно, что основания Т на картах ко донов, раскрытых в данном документе, присутствуют в ДНК, тогда как в соответствующих РНК основания Т будут заменены основаниями U. Например, в нуклеотидной последовательности кодонов, раскрытой в данном документе в форме ДНК, например, вектора или матрицы для трансляции in vitro (IVT), ее основания Т будут транскрибироваться как U, находящиеся в ее соответствующей транскрибированной мРНК. В этом отношении как кодон-оптимизированные последовательности ДНК (содержащие Т), так и их соответствующие последовательности мРНК (содержащие U) считаются кодон-оптимизированными нуклеотидными последовательностями по настоящему изобретению. Специалисту в данной области также будет понятно, что путем замены одного или нескольких оснований неприродными основаниями можно построить эквивалентные карты кодонов. Таким образом, например, кодон ТТС (карта ДНК) будет соответствовать кодону UUC (карта РНК), который, в свою очередь, будет соответствовать кодону ΨΨС (карта РНК, в которой U был заменен псевдоуридином).
Стандартные пары оснований А-Т и G-C образуются в условиях, обеспечивающих возможность образования водородных связей между N3-H и С4-окси тимидина и соответственно N1 и C6-NH2 аденозина и между С2-окси, N3 и C4-NH2 цитидина и соответственно C2-NH2, N'-Н и С6-окси гуанозина. Таким образом, например, гуанозин (2-амино-6-окси-9-β-D-рибофуранозилпурин) может быть модифицирован с образованием изогуанозина (2-окси-6-амино-9-β-D-рибофуранозилпурина). Такая модификация приводит к получению нуклеозидного основания, которое больше не будет эффективно образовывать стандартную пару оснований с цитозином. Однако модификация цитозина (1-β-D-рибофуранозил-2-окси-4-амино пиримидина) с образованием изоцитозина (1-β-D-рибофуранозил-2-амино-4-оксипиримидина) приводит к получению модифицированного нуклеотида, который не будет эффективно образовывать пару оснований с гуанозином, но будет образовывать пару оснований с изогуанозином (патент США №5681702, выданный Collins и соавт.). Изоцитозин доступен от Sigma Chemical Со. (Сент-Луис, Миссури); изоцитидин можно получить с помощью способа, описанного в Switzer et al. (1993) Biochemistry 32:10489-10496 и литературных источниках, цитируемых в ней; 2'-дезокси-5-метилизоцитидин можно получить с помощью способа согласно Tor et al., 1993, J. Am. Chem. Soc. 115:4461-4467 и литературным источникам, цитируемым в ней; и изогуаниновые нуклеотиды можно получить с помощью способа, описанного в Switzer et al., 1993 выше, и Mantsch et al., 1993, Biochem. 14:5593-5601, или с помощью способа, описанного в патенте США №5780610, выданном Collins и соавт. Другие неприродные пары оснований можно синтезировать с помощью способа, описанного в Piccirilli et al., 1990, Nature 343:33-37, в отношении синтеза 2,6-диаминопиримидина и комплементарного ему (1-метилпиразоло-[4,3]пиримидин-5,7-(4Н,6Н)-диона. Известны и другие такие модифицированные нуклеотидные звенья, которые образуют уникальные пары оснований, такие как звенья, описанные в Leach et al. (1992) J. Am. Chem. Soc. 114:3675-3683 и Switzer et al. выше.
Полипептид. Термины «полипептид», «пептид» и «белок» используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения полимеров из аминокислот любой длины. Полимер может содержать модифицированные аминокислоты. Термины также охватывают полимер из аминокислот, который был модифицирован естественным путем или посредством вмешательства; например, посредством образования дисульфидной связи, гликозилирования, липидизации, ацетилирования, фосфорилирования или любой другой манипуляции или модификации, такой как конъюгирование с метящим компонентом. В данное определение также включены, например, полипептиды, содержащие один или несколько аналогов аминокислот (в том числе, например, неприродные аминокислоты, такие как гомоцистеин, орнитин, п-ацетилфенилаланин, D-аминокислоты и креатин), а также другие модификации, известные из уровня техники.
Термин, используемый в данном документе, относится к белкам, полипептидам и пептидам любого размера, структуры или функции. Полипептиды включают продукты, кодируемые полинуклеотидами, природные полипептиды, синтетические полипептиды, гомологи, ортологи, паралоги, фрагменты и другие эквиваленты, варианты и аналоги вышеуказанного. Полипептид может представлять собой мономер или может представлять собой мультимолекулярный комплекс, такой как димер, тример или тетрамер. Они также могут включать одноцепочечные или многоцепочечные полипептиды. Дисульфидные связи чаще всего обнаруживаются в многоцепочечных полипептидах. Термин «полипептид» также может применяться в отношении полимеров из аминокислот, в которых один или несколько аминокислотных остатков являются искусственными химическими аналогами соответствующих природных аминокислот. В некоторых вариантах осуществления «пептид» может иметь длину, меньшую или равную 50 аминокислотам, например, длину, составляющую приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислот.
Вариант полипептида. Используемый в данном документе термин «вариант полипептида» относится к молекулам, отличающимся по их аминокислотной последовательности от нативной или эталонной последовательности. Варианты аминокислотных последовательностей могут иметь замены, делеции и/или вставки в некоторых положениях в аминокислотной последовательности по сравнению с нативной или эталонной последовательностью. Варианты обычно обладают по меньшей мере приблизительно 50% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 60% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 70% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 80% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью, по меньшей мере приблизительно 99% идентичностью с нативной или эталонной последовательностью. В некоторых вариантах осуществления они на по меньшей мере приблизительно 80% или по меньшей мере приблизительно 90% идентичны нативной или эталонной последовательности.
Количество полипептида на единицу лекарственного средства (PUD). Как используется в данном документе, PUD или количество продукта на единицу лекарственного средства определяется как разделенная часть общей суточной дозы продукта (такого как полипептид), обычно составляющей 1 мг, пг, кг и т.д., согласно измерению в жидкости или ткани организма, обычно определяемая в виде концентрации в жидкости организма, как, например, пмоль/мл, ммоль/мл и т.д., деленной на величину дозы.
Предупреждение. Используемый в данном документе термин «предупреждение» относится к частичному или полному отсрочиванию возникновения инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичному или полному отсрочиванию появления одного или нескольких признаков или симптомов, характерных особенностей или клинических проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичному или полному отсрочиванию появления одного или нескольких признаков или симптомов, характерных особенностей или проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичному или полному отсрочиванию прогрессирования инфекции, конкретного заболевания, нарушения и/или состояния; и/или к уменьшению риска развития патологии, ассоциированной с инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием.
Пролиферировать. Используемый в данном документе термин «пролиферировать» означает расти, размножаться или увеличиваться или вызывать быстрый рост, размножение или увеличение. «Пролиферативный» означает обладающий способностью к пролиферации. «Антипролиферативный» означает обладающий свойствами, противоположными или не соответствующими пролиферативным свойствам.
Профилактический. Как используется в данном документе, «профилактический» относится к терапевтическому средству или порядку действий, применяемому для предупреждения распространения заболевания.
Профилактика. Как используется в данном документе, «профилактика» относится к мерам, предпринимаемым для поддержания здоровья и предупреждения распространения заболевания. «Иммунопрофилактика» относится к мерам, направленным на формирование активного или пассивного иммунитета для предупреждения распространения заболевания.
Сайт расщепления белка. Как используется в данном документе, «сайт расщепления белка» относится к сайту, в котором можно выполнять контролируемое расщепление аминокислотной цепи с помощью химических, ферментативных или фотохимических способов.
Сигнал расщепления белка. Как используется в данном документе, «сигнал расщепления белка» относится по меньшей мере к одной аминокислоте, отмечающей или маркирующей полипептид для расщепления.
Белок, представляющий интерес. Используемые в данном документе термины «белки, представляющие интерес» или «требуемые белки» включают белки, предусмотренные в данном документе, а также их фрагменты, мутантные формы, варианты и видоизменения.
Проксимальный. Используемый в данном документе термин «проксимальный» означает расположенный ближе к центру или к точке или участку, представляющим интерес.
Псевдоуридин. Как используется в данном документе, псевдоуридин (ψ) относится к С-гликозидному изомеру нуклеозида уридина. «Аналог псевдоуридина» представляет собой любую модификацию, вариант, изоформу или производное псевдоуридина. Например, аналоги псевдоуридина включают без ограничения: 1-карбоксиметилпсевдоуридин, 1-пропинилпсевдоуридин, 1-тауринометилпсевдоуридин, 1-тауринометил-4-тиопсевдоуридин, 1-метилпсевдоуридин (m1ψ), 1-метил-4-тиопсевдоуридин (m1s4ψ), 4-тио-1-метилпсевдоуридин, 3-метилпсевдоуридин (m3ψ), 2-тио-1-метилпсевдоуридин, 1-метил-1-дезазапсевдоуридин, 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридин, дигидропсевдоуридин, 2-тиодигидропсевдоуридин, 2-метоксиуридин, 2-метокси-4-тиоуридин, 4-метоксипсевдоуридин, 4-метокси-2-тиопсевдоуридин, N1-метилпсевдоуридин, 1-метил-3-(3-амино-3-карбоксипропил)псевдоуридин (аср3ψ) и 2'-0-метилпсевдоуридин (ψm).
Очищенный. Как используется в данном документе, «очищать», «очищенный», «очистка» означает делать фактически чистым или освобождать от нежелательных компонентов, загрязнения материала, примесей или дефектов.
Эталонная последовательность нуклеиновой кислоты. Термины «эталонная последовательность нуклеиновой кислоты», или «эталонная нуклеиновая кислота», или «эталонная нуклеотидная последовательность», или «эталонная последовательность» относятся к исходной последовательности нуклеиновой кислоты (например, РНК, например, последовательности мРНК), которая может быть подвергнута оптимизации последовательности. В некоторых вариантах осуществления эталонная последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты дикого типа, ее фрагмент или вариант. В некоторых вариантах осуществления эталонная последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты, ранее подвергнутую оптимизации последовательности.
Соли. В некоторых аспектах фармацевтическая композиция для внутриопухолевой доставки, раскрытая в данном документе, содержит соли некоторых их ее липидных составляющих. Термин «соль» включает любой анионный и катионный комплекс. Неограничивающие примеры анионов включают неорганические и органические анионы, например, фторид, хлорид, бромид, йодид, оксалат (например, гемиоксалат), фосфат, фосфонат, гидрофосфат, дигидрофосфат, оксид, карбонат, бикарбонат, нитрат, нитрит, нитрид, бисульфит, сульфид, сульфит, бисульфат, сульфат, тиосульфат, гидросульфат, борат, формиат, ацетат, бензоат, цитрат, тартрат, лактат, акрилат, полиакрилат, фумарат, малеат, итаконат, гликолят, глюконат, малат, манделат, тиглат, аскорбат, салицилат, полиметакрилат, перхлорат, хлорат, хлорит, гипохлорит, бромат, гипобромит, йодат, алкилсульфонат, арилсульфонат, арсенат, арсенит, хромат, дихромат, цианид, цианат, тиоцианат, гидроксид, пероксид, перманганат и их смеси.
Образец. Используемый в данном документе термин «образец» или «биологический образец» относится к подмножеству тканей, клеток или составляющих частей (например, к жидкостям организма, в том числе без ограничения крови, слизи, лимфатической жидкости, синовиальной жидкости, спинномозговой жидкости, слюне, амниотической жидкости, амниотической пуповинной крови, моче, влагалищному отделяемому и сперме). Образец может дополнительно включать гомогенат, лизат или экстракт или его фракцию или часть, полученные из целого организма или подмножества его тканей, клеток или составляющих частей, в том числе без ограничения, например, из плазмы крови, сыворотки крови, спинномозговой жидкости, лимфатической жидкости, срезов наружных кожных покровов, дыхательных путей, кишечника и мочеполового тракта, слез, слюны, молока, клеток крови, опухолей, органов. Образец дополнительно относится к среде, такой как питательный бульон или гель, которая может содержать клеточные компоненты, такие как белки или молекула нуклеиновой кислоты.
Сигнальная последовательность. Используемые в данном документе фразы «сигнальная последовательность», «сигнальный пептид» и «транзитный пептид» используются взаимозаменяемо и относятся к последовательности, которая может направлять транспорт или локализацию белка в определенную органеллу, клеточный компартмент, или его экспорт во внеклеточное пространство. Термин охватывает как сигнальную последовательность полипептида, так и последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальную последовательность. Таким образом, ссылки на сигнальную последовательность применительно к нуклеиновой кислоте в действительности относятся к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей сигнальную последовательность полипептида.
Путь передачи сигнала. «Путь передачи сигнала» относится к биохимической взаимосвязи между разнообразными молекулами, передающими сигналы, которые играют роль в передаче сигнала из одной части клетки в другую часть клетки. Используемая в данном документе фраза «рецептор клеточной поверхности» включает, например, молекулы и комплексы молекул, способные получать сигнал и передавать такой сигнал по плазматической мембране клетки.
Сходство. Используемый в данном документе термин «сходство» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между молекулами полинуклеотидов (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между молекулами полипептидов. Расчет процентного сходства полимерных молекул друг с другом можно осуществлять таким же образом, как и расчет процентной идентичности, за исключением того, что при расчете процентного сходства учитываются консервативные замены, как принято в данной области.
Единичная стандартная доза. Как используется в данном документе, «единичная стандартная доза» представляет собой дозу любого терапевтического средства, вводимого за одну дозу/в один момент времени/одним путем/в одну точку контакта, т.е. в рамках одного события введения.
Дробная доза. Как используется в данном документе, «дробная доза» представляет собой результат разделения единичной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или более дозы.
Специфическая доставка. Используемые в данном документе термины «специфическая доставка», «осуществлять специфическую доставку» или «осуществляющий специфическую доставку» означают доставку большего (например, по меньшей мере в 1,5 раза большего, по меньшей мере в 2 раза большего, по меньшей мере в 3 раза большего, по меньшей мере в 4 раза большего, по меньшей мере в 5 раз большего, по меньшей мере в 6 раз большего, по меньшей мере в 7 раз большего, по меньшей мере в 8 раз большего, по меньшей мере в 9 раз большего, по меньшей мере в 10 раз большего) количества полинуклеотида наночастицей в ткань-мишень, представляющую интерес (например, в печень млекопитающего), по сравнению с нецелевой тканью (например, селезенкой млекопитающего). Уровень доставки наночастицы в конкретную ткань можно измерить путем сравнения количества белка, продуцируемого в ткани, с весом указанной ткани, сравнения количества полинуклеотида в ткани с весом указанной ткани, сравнения количества белка, продуцируемого в ткани, с общим количеством белка в указанной ткани или сравнения количества полинуклеотида в ткани с общим количеством полинуклеотида в указанной ткани. Например, в случае нацеливания на сосуды почек происходит специфическая доставка полинуклеотида в почку млекопитающего, в отличие от печени и селезенки, если в почку доставляется в 1,5, 2 раза, 3 раза, 5 раз, 10 раз, 15 раз или 20 раз больше полинуклеотида на 1 г ткани по сравнению с количеством, доставляемым в печень или селезенку, после системного введения полинуклеотида. Будет понятно, что способность наночастицы к специфической доставке в ткань-мишень не обязательно должна определяться в организме субъекта, подвергаемого лечению, и ее можно определять в имитационных условиях, как, например, в животной модели (например, в крысиной модели).
Стабильный. Как используется в данном документе, «стабильный» относится к соединению, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение из реакционной смеси до применимой степени чистоты, и в некоторых случаях способно быть составленным в виде эффективного терапевтического средства.
Стабилизированный. Используемые в данном документе термины «стабилизировать», «стабилизированный», «стабилизированный участок» означают делать или становиться стабильным.
Стереоизомер. Используемый в данном документе термин «стереоизомер» относится ко всем возможным различным изомерным, а также конформационным формам, которые может иметь соединение (например, соединение любой формулы, описанной в данном документе), в частности, ко всем возможным стереохимически и конформационно изомерным формам, всем диастереомерам, энантиомерам и/или конформерам основной молекулярной структуры. Некоторые соединения по настоящему изобретению могут существовать в различных таутомерных формах, все из которых включены в объем настоящего изобретения.
Субъект. Под «субъектом», или «индивидуумом», или «животным», или «пациентом», или «млекопитающим» подразумевается любой субъект, в частности, субъект-млекопитающее, для которого требуется диагностика, прогнозирование или терапия. Субъекты-млекопитающие включают без ограничения людей, домашних животных, сельскохозяйственных животных, зоопарковых животных, животных, используемых в спорте, домашних питомцев, таких как собаки, кошки, морские свинки, кролики, крысы, мыши, лошадей, крупный рогатый скот, коров; приматов, таких как человекообразные обезьяны, нечеловекообразные обезьяны, орангутаны и шимпанзе; псовых, таких как собаки и волки; кошачьих, таких как кошки, львы и тигры; лошадиных, таких как лошади, ослы и зебры; медведей, животных, которых содержат для получения продуктов питания, таких как коровы, свиньи и овцы; копытных животных, таких как олени и жирафы; грызунов, таких как мыши, крысы, хомяки и морские свинки; и т.д. В определенных вариантах осуществления млекопитающим является субъект-человек. В других вариантах осуществления субъектом является пациент-человек. В конкретном варианте осуществления субъектом является пациент-человек, нуждающийся в лечении.
Фактически. Используемый в данном документе термин «фактически» относится к качественному состоянию проявления характеристики или свойства, представляющих интерес, в полной или почти полной мере или степени. Специалисту в области биологии будет понятно, что биологические и химические характеристики редко, если это вообще имеет место, формируются в полной мере и/или продолжают проявляться до конца или до достижения или избегания абсолютного результата. Следовательно, термин «фактически» используется в данном документе для охвата потенциального недостатка полноты, присущего многим биологическим и химическим характеристикам.
Фактически равный. Используемый в данном документе термин в том, как это относится к разницам во времени между приемами доз, означает плюс-минус 2%.
Фактически одновременный. Используемый в данном документе термин в том, как это относится к множеству доз, означает в пределах 2 секунд.
Страдающий от. У индивидуума, «страдающего от» заболевания, нарушения и/или состояния, были диагностированы или проявляются один или несколько признаков или симптомов заболевания, нарушения и/или состояния.
Подверженный. У индивидуума, «подверженного» заболеванию, нарушению и/или состоянию, не были диагностированы и/или не могут проявляться признаки или симптомы заболевания, нарушения и/или состояния, но имеется предрасположенность к развитию заболевания или его признаков или симптомов. В некоторых вариантах осуществления индивидуум, подверженный заболеванию, нарушению и/или состоянию (например, раку), может характеризоваться одним или несколькими из следующего: (1) генетической мутации, ассоциированной с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (2) генетического полиморфизма, ассоциированного с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (3) увеличенной и/или сниженной экспрессии и/или активности белка и/или нуклеиновой кислоты, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием; (4) привычек и/или особенностей образа жизни, ассоциированных с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (5) наличия заболевания, нарушения и/или состояния в семейном анамнезе и (6) воздействия микроорганизма, ассоциированного с развитием заболевания, нарушения и/или состояния, и/или инфицирования им. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума, подверженного заболеванию, нарушению и/или состоянию, будет развиваться заболевание, нарушение и/или состояние. В некоторых вариантах осуществления у индивидуума, подверженного заболеванию, нарушению и/или состоянию, не будет развиваться заболевание, нарушение и/или состояние.
Замедленное высвобождение. Используемый в данном документе термин «замедленное высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует скорости высвобождения в течение конкретного периода времени.
Синтетический. Термин «синтетический» означает произведенный, полученный и/или изготовленный руками человека. Синтез полинуклеотидов или других молекул согласно настоящему изобретению может быть химическим или ферментативным.
Клетки-мишени. Как используется в данном документе, «клетки-мишени» относятся к любой одной или нескольким клеткам, представляющим интерес. Клетки могут находиться in vitro, in vivo, in situ или в ткани или органе организма. Организм может являться животным, например, млекопитающим, человеком, субъектом или пациентом.
Ткань-мишень. Как используется в данном документе, «ткань-мишень» относится к любому одному или нескольким типам тканей, представляющим интерес, доставка полинуклеотида в которые будет приводить к требуемому биологическому и/или фармакологическому эффекту. Примеры тканей-мишеней, представляющих интерес, включают конкретные ткани, органы и их системы или группы. В конкретных путях применения ткань-мишень может представлять собой почку, легкое, селезенку, сосудистый эндотелий в сосудах (например, при внутрикоронарном или интрафеморальном введении) или опухолевую ткань (например, при внутриопухолевой инъекции). «Нецелевая ткань» относится к любому одному или нескольким типам тканей, в которых экспрессия кодируемого белка не приводит к требуемому биологическому и/или фармакологическому эффекту. В конкретных путях применения нецелевые ткани могут включать печень и селезенку.
Присутствие терапевтического средства в нецелевой ткани может являться результатом: (i) просачивания полинуклеотида из участка введения в периферическую ткань или отдаленную ткань-мишень (например, печень) посредством диффузии или через кровоток (например, полинуклеотид, предназначенный для экспрессии полипептида в определенной ткани, может достигать печени, и полипептид может экспрессироваться в печени); или (ii) просачивания полипептида после введения полинуклеотида, кодирующего такой полипептид, в периферическую ткань или отдаленную нецелевую ткань (например, печень) посредством диффузии или через кровоток (например, полинуклеотид может экспрессировать полипептид в ткани-мишени, и полипептид может диффундировать в периферическую ткань).
Нацеливающая последовательность. Используемая в данном документе фраза «нацеливающая последовательность» относится к последовательности, которая может направлять транспорт или локализацию белка или полипептида.
Конец. Используемые в данном документе термины «концы» или «конец», если речь идет о полипептидах, относятся к концевой части пептида или полипептида. Такая концевая часть не ограничена только первым или последним сайтом пептида или полипептида, но может охватывать дополнительные аминокислоты в концевых участках. Полипептидные молекулы по настоящему изобретению могут быть охарактеризованы как имеющие как N-конец (заканчивающийся аминокислотой со свободной аминогруппой (NH2)), так и С-конец (заканчивающийся аминокислотой со свободной карбоксильной группой (СООН)). Белки по настоящему изобретению в некоторых случаях состоят из нескольких полипептидных цепей, объединенных друг с другом с помощью дисульфидных связей или с помощью нековалентных сил (мультимеры, олигомеры). Эти разновидности белков имеют несколько N- и С-концов. В качестве альтернативы концы полипептидов можно модифицировать так, чтобы они в зависимости от ситуации начинались или заканчивались неполипептидным фрагментом, таким как органический конъюгат.
Терапевтическое средство. Термин «терапевтическое средство» относится к средству, которое при введении субъекту оказывает терапевтический, диагностический и/или профилактический эффект и/или вызывает требуемый биологический и/или фармакологический эффект. Например, в некоторых вариантах осуществления мРНК, кодирующая полипептид релаксин, может являться терапевтическим средством. В других вариантах осуществления терапевтическое средство может представлять собой терапевтический белок.
Терапевтически эффективное количество. Используемый в данном документе термин «терапевтически эффективное количество» означает количество средства, подлежащего доставке (например, нуклеиновой кислоты, лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т.д.), которое при введении субъекту, страдающему от инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния или подверженному им, является достаточным для лечения, улучшения признаков или симптомов, диагностирования, предупреждения и/или отсрочивания возникновения инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.
Терапевтически эффективный результат. Используемый в данном документе термин «терапевтически эффективный результат» означает результат, который у субъекта, страдающего от инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния или подверженному им, является достаточным для лечения, улучшения признаков или симптомов, диагностирования, предупреждения и/или отсрочивания возникновения инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.
Общая суточная доза. Как используется в данном документе, «общая суточная доза» представляет собой количество, даваемое или назначаемое из расчета на 24-часовой период. Общую суточную дозу можно вводить в виде единичной стандартной дозы или в виде дробной дозы.
Фактор транскрипции. Используемый в данном документе термин «фактор транскрипции» относится к ДНК-связывающему белку, регулирующему транскрипцию ДНК в РНК, например, путем активации или репрессии транскрипции. Некоторые факторы транскрипции производят регуляцию транскрипции в отдельности, тогда как другие действуют согласованно с другими белками. Некоторые факторы транскрипции могут как активировать, так и репрессировать транскрипцию в определенных условиях. Как правило, факторы транскрипции связываются с конкретной последовательностью-мишенью или последовательностями-мишенями, характеризующимися высокой степенью сходства с конкретной консенсусной последовательностью в регуляторном участке гена-мишени. Факторы транскрипции могут регулировать транскрипцию гена-мишени в отдельности или в комплексе с другими молекулами.
Транскрипция. Используемый в данном документе термин «транскрипция» относится к способам получения мРНК (например, последовательности мРНК или мРНК-матрицы) с ДНК (например, ДНК-матрицы или последовательности ДНК).
Трансфекция. Как используется в данном документе, «трансфекция» относится к введению полинуклеотида в клетку, в которой экспрессируется полипептид, кодируемый полинуклеотидом (например, мРНК), или полипептид модулирует клеточную функцию (например, киРНК, miRNA). Как используется в данном документе, «экспрессия» последовательности нуклеиновой кислоты относится к трансляции полинуклеотида (например, мРНК) в полипептид или белок и/или посттрансляционной модификации полипептида или белка.
Проведение лечения, лечение, терапия. Используемые в данном документе термины «проведение лечения», или «лечение», или «терапия» относятся к частичному или полному смягчению, уменьшению интенсивности, улучшению, ослаблению, отсрочиванию появления, ингибированию прогрессирования, снижению тяжести и/или снижения частоты возникновения одного или нескольких признаков, или симптомов, или характерных особенностей заболевания. Например, «проведение лечения» заболевания сердца может относиться к ослаблению признаков или симптомов, ассоциированных с заболеванием, увеличению продолжительности жизни (увеличению выживаемости) пациентов, снижению тяжести заболевания, предупреждению или отсрочиванию возникновения заболевания и т.д. Лечение можно проводить в отношении субъекта, у которого не проявляются симптомы заболевания, нарушения и/или состояния, и/или в отношении субъекта, у которого проявляются только ранние симптомы заболевания, нарушения и/или состояния, с целью уменьшения риска развития патологии, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием.
Немодифицированный. Как используется в данном документе, «немодифицированный» относится к любому веществу, соединению или молекуле до изменения некоторым образом. «Немодифицированный» может относиться, но не всегда относится, к дикому типу или нативной форме биомолекулы. Молекулы могут подвергаться ряду модификаций, при которых каждая модифицированная молекула может служить в качестве «немодифицированной» исходной молекулы для последующей модификации.
Урацил. Урацил представляет собой одно из четырех нуклеотидных оснований в нуклеиновой кислоте РНК и представлен буквой U. Урацил может быть присоединен к рибозному кольцу, или более конкретнок рибофуранозе, посредством β-N1-гликозидной связи с получением нуклеозида уридина. Нуклеозид уридин также обычно представлен в сокращенной форме в соответствии с однобуквенным кодом его нуклеинового основания, т.е. U. Таким образом, в контексте настоящего изобретения, если мономер в полинуклеотидной последовательности представляет собой U, то такой U взаимозаменяемо обозначает «урацил» или «уридин».
Содержание уридина. Термины «содержание уридина» или «содержание урацила» являются взаимозаменяемыми и относятся к количеству урацила или уридина, присутствующего в определенной последовательности нуклеиновой кислоты. Содержание уридина или содержание урацила может быть выражено в виде абсолютного (общего количества уридиновых или урациловых остатков в последовательности) или относительного (процентной доли уридина или урацила относительно общего количества нуклеотидных оснований в последовательности нуклеиновой кислоты) значения.
Уридин-модифицированная последовательность. Термин «уридин-модифицированная последовательность» относится к нуклеиновой кислоте, подвергнутой оптимизации последовательности (например, к синтетической последовательности мРНК), с отличающимся общим или локальным содержанием уридина (более высоким или более низким содержанием уридина) или с отличающимся порядком расположения уридиновых оснований (например, градиентным распределением или кластеризацией) по сравнению с содержанием уридина и/или порядком расположения уридиновых оснований в последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата. В содержании настоящего изобретения термины «уридин-модифицированная последовательность» и «урацил-модифицированная последовательность» считаются эквивалентными и взаимозаменяемыми.
«Кодон с высоким содержанием уридина» определяется как кодон, содержащий два или три уридиновых основания, «кодон с низким содержанием уридина» определяется как кодон, содержащий одно уридиновое основание, и «кодон, не содержащий уридин» представляет собой кодон без каких-либо уридиновых оснований. В некоторых вариантах осуществления уридин-модифицированная последовательность содержит замены кодонов с высоким содержанием уридина кодонами с низким содержанием уридина, замены кодонов с высоким содержанием уридина кодонами, не содержащими уридин, замены кодонов с низким содержанием уридина кодонами с высоким содержанием уридина, замены кодонов с низким содержанием уридина кодонами, не содержащими уридин, замены кодонов, не содержащих уридин, кодонами с низким содержанием уридина, замены кодонов, не содержащих уридин, кодонами с высоким содержанием уридина, а также их комбинации. В некоторых вариантах осуществления кодон с высоким содержанием уридина может быть заменен другим кодоном с высоким содержанием уридина. В некоторых вариантах осуществления кодон с низким содержанием уридина может быть заменен другим кодоном с низким содержанием уридина. В некоторых вариантах осуществления кодон, не содержащий уридин, может быть заменен другим кодоном, не содержащим уридин. Уридин-модифицированная последовательность может быть обогащенной уридином или обедненной уридином.
Обогащенный уридином. Используемый в данном документе термин «обогащенный уридином» и его грамматические варианты относятся к увеличению содержания уридина (выраженного в виде абсолютного значения или в виде процентного значения) в нуклеиновой кислоте, подвергнутой оптимизации последовательности (например, в синтетической последовательности мРНК), по сравнению с содержанием уридина в соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата. Обогащение уридином можно реализовать путем замены кодонов в последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата синонимичными кодонами, содержащими меньше уридиновых нуклеотидных оснований. Обогащение уридином может быть глобальным (т.е. по отношению ко всей длине последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата) или локальным (т.е. по отношению к подпоследовательности или участку последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата).
Обедненный уридином. Используемый в данном документе термин «обедненный уридином» и его грамматические варианты относятся к уменьшению содержания уридина (выраженного в виде абсолютного значения или в виде процентного значения) в нуклеиновой кислоте, подвергнутой оптимизации последовательности (например, в синтетической последовательности мРНК), по сравнению с содержанием уридина в соответствующей последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата. Обеднение уридином можно реализовать путем замены кодонов в последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата синонимичными кодонами, содержащими меньше уридиновых нуклеотидных оснований. Обеднение уридином может быть глобальным (т.е. по отношению ко всей длине последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата) или локальным (т.е. по отношению к подпоследовательности или участку последовательности нуклеиновой кислоты-кандидата).
Вариант. Термин «вариант», используемый в настоящем изобретении, относится как к природным вариантам (например, полиморфизмам, изоформам и т.д.), так и к искусственным вариантам, в которых по меньшей мере один аминокислотный остаток в нативной или исходной последовательности (например, в последовательности дикого типа) был удален, а на его место в то же самое положение была вставлена другая аминокислота. Такие варианты могут быть описаны как «субституционные варианты». Замены могут быть единичными, при которых в молекуле заменена только одна аминокислота, или они могут быть множественными, при которых в одной и той же молекуле заменены две или более аминокислот. Если аминокислоты вставляются или удаляются, то получаемый в результате вариант будет являться соответственно «инсерционным вариантом» или «делеционным вариантом»
Эквиваленты и объем изобретения
Специалистам в данной области будет понятно или они способны определить с помощью проведения лишь обычных экспериментов наличие многих эквивалентов конкретных вариантов осуществления в соответствии с настоящим изобретением, описанным в данном документе. Подразумевается, что объем настоящего изобретения не ограничен вышеприведенным описанием, а скорее соответствует изложенному в прилагаемой формуле изобретения.
В формуле изобретения формы единственного числа могут означать один или более одного, если не указано противоположное или иное не очевидно из контекста. Формула изобретения или описание, в которых содержится «или» между одним или несколькими представителями группы, считаются удовлетворенными, если один, более одного или все представители группы присутствуют в указанном продукте или способе, используются в нем или иным образом имеют отношение к нему, если не указано противоположное или иное не очевидно из контекста. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых ровно один представитель группы присутствует в указанном продукте или способе, используется в нем или иным образом имеет отношение к нему. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного представителя или все представители группы присутствуют в указанном продукте или способе, используются в нем или иным образом имеют отношение к нему.
Также следует отметить, что термин «содержащий» подразумевается как открытый и допускает включение дополнительных элементов или стадий, но не требует этого. В тех случаях, когда в данном документе используется термин «содержащий», также соответственно охватывается и раскрывается термин «состоящий из».
В тех случаях, когда указаны диапазоны, конечные точки включены в них. Кроме того, следует понимать, что если не указано иное или иное не очевидно из контекста и не понимается специалистом в данной области, значения, выраженные в виде диапазонов, могут принимать любые конкретные значения или поддиапазоны в указанных диапазонах в различных вариантах осуществления настоящего изобретения до десятых долей единицы нижнего предела диапазона, если контекст явно не предусматривает иное.
Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, находящийся в пределах предшествующего уровня техники, может быть в явной форме исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления, по-видимому, известны обычному специалисту в данной области, они могут быть исключены даже в том случае, если исключение не указано в явной форме в данном документе. Любой конкретный вариант осуществления композиций по настоящему изобретению (например, любая нуклеиновая кислота или белок, кодируемый ей; любой способ получения; любой способ применения и т.д.) может быть исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения по любой причине независимо от того, связана ли она с существованием предшествующего уровня техники или нет.
Все цитируемые источники, например, литературные источники, публикации, базы данных, записи баз данных и материалы из уровня техники, цитируемые в данном документе, включены в настоящую заявку посредством ссылки, даже если это прямо не указано при цитировании. В случае противоречий между утверждениями в цитируемом источнике и настоящей заявке утверждение в настоящей заявке будет иметь преимущественную силу.
Названия разделов и таблиц не подразумеваются как ограничивающие.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Производство полинуклеотидов
В соответствии с настоящим изобретением производство полинуклеотидов и/или их частей или участков можно выполнять с использованием способов, изложенных в международной заявке WO 2014/152027 под названием "Manufacturing Methods for Production of RNA Transcripts", содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Способы очистки могут включать способы, изложенные в международных заявках WO 2014/152030 и WO 2014/152031, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Способы выявления и получения характеристик полинуклеотидов можно осуществлять согласно изложенному в WO 2014/144039, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Получение характеристик полинуклеотидов по настоящему изобретению можно выполнять с помощью процедуры, выбранной из группы, состоящей из картирования полинуклеотидов, секвенирования с помощью обратной транскриптазы, анализа распределения заряда и выявления примесей РНК, где получение характеристик предусматривает определение последовательности РНК-транскрипта, определение чистоты РНК-транскрипта или определение неоднородности заряда РНК-транскрипта. Такие способы изложены, например, в WO 2014/144711 и WO 2014/144767, содержание каждой из которых включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Пример 2. Синтез химерных полинуклеотидов
Введение
В соответствии с настоящим изобретением два участка или две части химерного полинуклеотида можно соединять или лигировать с помощью трифосфатного химического способа.
В соответствии с данным способом первый участок или первую часть длиной 100 нуклеотидов или меньше синтезируют химическим путем с 5'-монофосфатом и концевым 3'-дез-ОН или заблокированным ОН. Если участок имеет длину более 80 нуклеотидов, то его можно синтезировать в виде двух нитей для лигирования.
Если первый участок или первую часть синтезируют в качестве позиционно немодифицированных участка или части посредством транскрипции in vitro (IVT), то после этого должно происходить превращение 5'-монофосфата с последующим кэпированием 3'-конца.
Защитные группы для монофосфата могут быть выбраны из любых защитных групп, известных из уровня техники.
Второй участок или вторую часть химерного полинуклеотида можно синтезировать с помощью химического синтеза либо способов IVT. Способы IVT могут включать применение РНК-полимеразы, которая может использовать праймер с модифицированным кэпом. В качестве альтернативы кэп длиной не более 130 нуклеотидов можно синтезировать химическим путем и присоединить к участку или части, полученных посредством IVT.
Следует отметить, что в способах лигирования при лигировании с помощью ДНК-лигазы Т4 с последующей обработкой ДНКазой нужно исключать сцепления фрагментов.
Не обязательно, чтобы весь производимый химерный полинуклеотид имел сахарофосфатный остов. Если один из участков или одна из частей кодирует полипептид, то предпочтительно, чтобы такие участок или часть содержали сахарофосфатный остов.
Затем осуществляют лигирование с помощью любых известных способов клик-химии, ортогональной клик-химии, Solulink или других химических способов биоконъюгирования, известных специалистам в данной области.
Путь синтеза
Химерный полинуклеотид получают с использованием ряда исходных сегментов. Такие сегменты включают:
(a) кэпированный и защищенный 5'-сегмент, содержащий нормальный 3'-ОН (сегм. 1);
(b) 5'-трифосфорилированный сегмент, который может содержать участок, кодирующий полипептид, и содержит нормальный 3'-ОН (сегм. 2);
(c) 5'-монофосфорилированный сегмент для 3'-конца химерного полинуклеотида (например, хвоста), содержащий кордицепин или не содержащий 3'-ОН (сегм. 3).
После синтеза (химического или посредством IVT) сегмент 3 (сегм. 3) обрабатывают кордицепином, а затем пирофосфатазой с образованием 5'-монофосфата.
Сегмент 2 (сегм. 2) затем лигируют с сегм. 3 с помощью ДНК-лигазы. Лигированный полинуклеотид затем очищают и обрабатывают пирофосфатазой с отщеплением дифосфата. Обработанную конструкцию сегм.2-сегм. 3 затем очищают, и сегм. 1 лигируют с 5'-концом. Можно осуществлять стадию дополнительной очистки химерного полинуклеотида.
В случаях, если химерный полинуклеотид кодирует полипептид, то лигированные или соединенный сегменты могут быть представлены следующим образом: 5'-UTR (сегм. 1), открытая рамка считывания или ORF (сегм. 2) и 3'-UTR+поли-А (сегм. 3).
Показатели выхода на каждой стадии могут составлять до 90-95%.
Пример 3. ПЦР для получения кДНК
Процедуры ПЦР для получения кДНК осуществляют с использованием 2х готовой смеси для ПЦР с «горячим стартом» KAPA HIFI™ от Kapa Biosystems (Вобурн, Массачусетс). Данная система содержит 12,5 мкл 2х готовой смеси KAPA; 0,75 мкл прямого праймера (10 мкМ); 0,75 мкл обратного праймера (10 мкМ); 100 нг кДНК-матрицы, и разбавленную dH2O до 25,0 мкл. Условия реакций являются следующими: 95°С в течение 5 мин и 25 циклов при 98°С в течение 20 с, затем 58°С в течение 15 с, затем 72°С в течение 45 с, затем 72°С в течение 5 мин, затем 4°С до завершения.
Продукты реакции очищали с помощью набора PURELINK™ PCR Micro Kit для очистки продуктов ПЦР от Invitrogen (Карлсбад, Калифорния) согласно инструкциям производителя (до 5 мкг). Для реакций в большем масштабе требуется очистка с помощью продукта с большими возможностями. После очистки кДНК определяют количественно с помощью NANODROP™ и анализируют посредством электрофореза в агарозном геле для подтверждения того, что кДНК имеет ожидаемый размер. Затем кДНК передают на анализ методом секвенирования перед переходом к реакции транскрипции in vitro.
Пример 4. Транскрипция in vitro (IVT)
В результате реакции транскрипции in vitro образуются полинуклеотиды, содержащие единообразно модифицированные полинуклеотиды. Такие единообразно модифицированные полинуклеотиды могут содержать участок или часть полинуклеотидов по настоящему изобретению. Подаваемую смесь трифосфорилированных нуклеотидов (NTP) получают на месте с использованием природных и неприродных NTP.
Обычная реакционная смесь для транскрипции in vitro предусматривает следующее:
Неочищенную смесь, полученную посредством IVT, можно хранить при 4°С в течение ночи для очистки на следующий день. 1 ед. ДНКазы, не содержащей РНКаз, затем используют для расщепления исходной матрицы. Спустя 15 минут инкубирования при 37°С мРНК очищают с помощью набора MEGACLEAR™ от Ambion (Остин, Техас) согласно инструкциям производителя. С помощью данного набора можно очистить до 500 мкг РНК. После очистки РНК определяют количественно с помощью NanoDrop и анализируют посредством электрофореза в агарозном геле для подтверждения того, что РНК имеет надлежащий размер и что не произошло разрушения РНК.
Пример 5. Ферментативное кэпирование
Кэпирование полинуклеотида осуществляют в соответствии с указанным ниже, где смесь содержит: 60 мкг - 180 мкг РНК, полученной посредством IVT, и до 72 мкл dH2O. Смесь инкубируют при 65°С в течение 5 минут для денатурации РНК, а затем немедленно переносят на лед.
Протокол затем предполагает смешивание 10х буфера для кэпирования (0,5 М трис-HCl (рН 8,0), 60 мМ KCl, 12,5 мМ MgCl2) (10,0 мкл); 20 мМ GTP (5,0 мкл); 20 мМ S-аденозилметионина (2,5 мкл); ингибитора РНКазы (100 ед.); 2'-O-метилтрансферазы (400 ед.); кэпирующего фермента вируса осповакцины (гуанилилтрансферазы) (40 ед.); dH2O (до 28 мкл); и инкубирование при 37°С в течение 30 минут для 60 мкг РНК или до 2 часов для 180 мкг РНК.
Полинуклеотид затем очищают с помощью набора MEGACLEAR™ от Ambion (Остин, Техас) согласно инструкциям производителя. После очистки РНК определяют количественно с помощью NANODROP™ (ThermoFisher, Уолтем, Массачусетс) и анализируют посредством электрофореза в агарозном геле для подтверждения того, что РНК имеет надлежащий размер и что не произошло разрушения РНК. РНК-продукт также можно секвенировать путем проведения ПЦР с обратной транскрипцией с образованием кДНК для секвенирования.
Пример 6. Реакция присоединения поли-А-хвоста
Без поли-Т в кДНК перед очисткой конечного продукта следует провести реакцию присоединения поли-А-хвоста. Это выполняют путем смешивания кэпированной РНК, полученной посредством IVT (100 мкл); ингибитора РНКазы (20 ед.); 10х буфера для присоединения хвоста (0,5 М трис-HCl (рН 8,0), 2,5 М NaCl, 100 мМ MgCl2) (12,0 мкл); 20 мМ АТР (6,0 мкл); поли-А-полимеразы (20 ед.); до 123,5 мкл dH2O и инкубирования при 37°С в течение 30 мин. Если поли-А-хвост уже присутствует в транскрипте, то можно пропустить реакцию присоединения хвоста и перейти непосредственно к очистке с помощью набора MEGACLEAR™ от Ambion (Остин, Техас) (до 500 мкг). Поли-А-полимераза предпочтительно представляет собой рекомбинантный фермент, экспрессируемый дрожжами.
Следует понимать, что процессивность или целостность реакции присоединения поли-А-хвоста не всегда может приводить к образованию поли-А-хвоста точного размера. Следовательно, поли-А-хвосты длиной примерно 40-200 нуклеотидов, например, приблизительно 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 150-165, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164 или 165, находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Пример 7. Природные 5'-кэпы и аналоги 5'-кэпов
5'-кэпирование полинуклеотидов можно выполнять одновременно в ходе реакции транскрипции in vitro с использованием следующих химических аналогов кэпов РНК с образованием 5'-гуанозиновой кэп-структуры в соответствии с протоколами производителя: 3'-O-Me-m7G(5')ppp(5')G [кэп ARCA]; G(5')ppp(5')A; G(5')ppp(5')G; m7G(5')ppp(5')A; m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ипсвич, Массачусетс). 5'-кэпирование модифицированной РНК можно выполнять после транскрипции с помощью кэпирующего фермента вируса осповакцины с образованием «кэп-структуры 0»: m7G(5')ppp(5')G (New England BioLabs, Ипсвич, Массачусетс). Кэп-структура 1 может быть образована с помощью как кэпирующего фермента вируса осповакцины, так и 2'-O-метилтрансферазы с образованием m7G(5')ppp(5')G-2'-O-метила. Кэп-структура 2 может быть образована из кэп-структуры 1 с последующим 2'-О-метилированием третьего от 5'-конца нуклеотида с помощью 2'-O метилтрансферазы. Кэп-структура 3 может быть образована из кэп-структуры 2 с последующим 2'-O-метилированием четвертого от 5'-конца нуклеотида с помощью 2'-О метилтрансферазы. Ферменты предпочтительно получены из рекомбинантного источника.
При трансфицировании клеток млекопитающих модифицированные мРНК характеризуются стабильностью в течение 12-18 часов или более 18 часов, например, 24, 36, 48, 60, 72 или более 72 часов.
Пример 8. Анализы кэпирования
А. Анализ экспрессии белка
Полинуклеотидами, кодирующими полипептиды, содержащие любые из кэпов, изложенных в данном документе, можно трансфицировать клетки в равных концентрациях. Количество белка, секретируемого в культуральную среду, можно анализировать посредством ELISA через 6, 12, 24 и 36 часов после трансфекции. Синтетические полинуклеотиды, обеспечивающие секрецию белка в среду на более высоких уровнях, будут соответствовать синтетическим полинуклеотидам с более трансляционно компетентной кэп-структурой.
B. Анализ чистоты синтеза
Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, содержащие любые из кэпов, изложенных в данном документе, можно сравнивать по чистоте посредством электрофореза в денатурирующем агарозном геле с мочевиной или анализа по методу HPLC. Полинуклеотиды с одной сплошной полосой при электрофорезе соответствуют продукту более высокой степени чистоты по сравнению с полинуклеотидами с несколькими полосами или прерывистыми полосами. Синтетические полинуклеотиды с одним пиком при HPLC также будут соответствовать продукту более высокой степени чистоты. Реакция кэпирования с более высокой эффективностью будет давать более чистую группу полинуклеотидов.
C. Анализ цитокинов
Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, содержащие любые из кэпов, изложенных в данном документе, можно вводить в клетки путем трансфекции в нескольких концентрациях. Количество провоспалительных цитокинов, таких как TNF-альфа и IFN-бета, секретируемых в культуральную среду, можно анализировать посредством ELISA через 6, 12, 24 и 36 часов после трансфекции. Полинуклеотиды, приводящие к секреции провоспалительных цитокинов в среду на более высоких уровнях, будут соответствовать полинуклеотидам, содержащим иммуноактивирующую кэп-структуру.
D. Эффективность реакции кэпирования
Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, содержащие любые из кэпов, изложенных в данном документе, можно анализировать в отношении эффективности реакции кэпирования посредством LC-MS после обработки нуклеазами. В результате обработки кэпированных полинуклеотидов нуклеазами будет образовываться смесь свободных нуклеотидов и кэпированных нуклеотидов с 5'-5-трифосфатной кэп-структурой, выявляемых посредством LC-MS. Количество кэпированного продукта в LC-MS-спектрах может быть выражено в виде процентной доли от общего количества полинуклеотидов в реакции и будет соответствовать эффективности реакции кэпирования. Для кэп-структуры с более высокой эффективностью реакции кэпирования в ходе LC-MS будет выявляться наличие более высокого количества кэпиро ванного продукта.
Пример 9. Электрофорез модифицированной РНК или продуктов ОТ-ПЦР в агарозном геле
Отдельные полинуклеотиды (200-400 нг в объеме 20 мкл) или продукты ПЦР с обратной транскрипцией (200-400 нг) загружают в лунку в неденатурирующий 1,2% агарозный гель E-Gel (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния) и прогоняют в течение 12-15 минут в соответствии с протоколом производителя.
Пример 10. Количественное определение модифицированной РНК с помощью NanoDrop и данные УФ-спектроскопии
Модифицированные полинуклеотиды в буфере ТЕ (1 мкл) используют для считывания показаний поглощения в УФ-области спектра с помощью NanoDrop для количественного определения выхода каждого полинуклеотида в результате химического синтеза или реакции транскрипции in vitro.
Пример 11. Составление модифицированных мРНК с использованием липидоидов
Полинуклеотиды составляют для экспериментов in vitro путем смешивания полинуклеотидов с липидоидом в установленном соотношении перед добавлением к клеткам. Для составления in vivo может требоваться добавление дополнительных ингредиентов для облегчения циркуляции по всему организму. Для тестирования способности таких липидоидов образовывать частицы, подходящие для функционирования in vivo, в качестве исходной точки можно использовать стандартный способ составления, применяемый для получения составов на основе липидоидов с киРНК. После образования частицы добавляют полинуклеотид, которому дают возможность интегрироваться с комплексом. Эффективность инкапсулирования определяют с помощью стандартных анализов исключения красителя.
Пример 12. Образование функционального белка релаксина на мРНК, кодирующей релаксин
Варианты мРНК, кодирующей релаксин, синтезировали согласно описанному в примерах 1-11 с целью получения конструкций, которые характеризовались бы более длительным временем полужизни в крови. Релаксин дикого типа состоит из двух пептидов: цепи А и цепи В и содержит 53 аминокислоты. Вариабельную часть легкой цепи (каппа) (VLk) иммуноглобулина IgG человека, нацеливающегося на человеческий сывороточный альбумин, размером 108 аминокислот синтезировали и добавляли к цепи А релаксина дикого типа (фиг. 1).
Осуществляли три независимых исследования трансфекции в клетках EXP1293f и анализы сАМР в клетках СНО-K1, экспрессирующих RXFP1 (фиг. 2). Анализы для подтверждения активности in vitro демонстрировали, что мРНК, кодирующая VLk-hRLN2, образует функциональный белок релаксин. Что интересно, было обнаружено, что слитый белок с VLk является менее активным (примерно на 50%) in vitro по сравнению с релаксином дикого типа. Все тестируемые мРНК давали белки VLk-hRLN2 со сходной удельной активностью.
Также в анализе удлинения межлобковой связки (ILE) in vivo на мышах было показано, что из слитого белка VLk-hRLN2 образуется функциональный белок. Самкам мышей CD1, примированным эстрадиолом, однократно IV вводили болюсную дозу (0,5 мг/кг) слитого белка VLk-hRLN2. Через двадцать четыре часа мышей вскрывали, и измеряли межлобковые связки. Как показано на фиг. 6, показатель измерения межлобковой связки был значительно более высоким для всех тестируемых вариантов по сравнению с группой отрицательного контроля.
Пример 13. Исследования мРНК, кодирующей релаксин, in vivo: крысы со спонтанной гипертензией
Крыс со спонтанной гипертензией использовали для исследования эффектов конструкции VLk-hRLN2 in vivo. Крысам вначале имплантировали телеметрические устройства. Кровь собирали для определения исходных уровней циркулирующего релаксина. В ходе всего исследования непрерывно отслеживали частоту сердечных сокращений и кровяное давление (систолическое и диастолическое артериальное кровяное давление измеряли в течение 10 секунд каждые 10 минут). Крыс разделяли на четыре группы (N=8 крыс на группу): mo5U-конструкция 1, mo5U-дикий тип, m1Ψ-Luc и rhRLN2. Первым трем группам проводили три IV инфузии с интервалом в семь дней. Четвертой группе, rhRLN2, были имплантированы подкожные насосы и вводили rhRLN2 в течение 14-дневного периода инфузии при постоянной скорости. Кровь собирали у всех крыс до инфузии, а затем через 6 часов, 12 часов, один день, два дня, четыре дня и шесть дней после инфузии (в случае с группами, которым осуществляли IV введение, следующее измерение «до введения дозы» проводили на седьмой день до введения IV дозы).
Было показано, что у крыс со спонтанной гипертензией, получавших IV инъекции, мРНК, кодирующая VLk-hRLN2, образует функциональный белок с устойчивой активностью. Данные о частоте сердечных сокращений, показанные на фиг. 3А, демонстрируют, что слитый белок релаксин-VLk был менее действенным по сравнению с релаксином дикого типа in vivo. Показанные данные усреднены за дневной и ночной периоды (средние значения +/- SD), при этом периоды проведения манипуляций с животными исключены (N=8 крыс на группу). Данные о частоте сердечных сокращений у крыс колеблются от минимумов (днем) до максимумов (ночью). Данные о диастолическом артериальном давлении (фиг. 3В) также демонстрировали, что слитый белок с VLk обладал устойчивой активностью in vivo. Хотя активное соединение было менее действенным, более длительное время полужизни может обеспечивать его благоприятный терапевтический эффект.
У крыс со спонтанной гипертензией также измеряли уровни циркулирующего белка релаксина (фиг. 4). Крысам линии WKY давали однократную болюсную инъекцию 0,5 мг/кг РНК, кодирующей слитый белок с VLk, конструкцию 1 (SEQ ID NO: 5), в наночастицах, содержащих соединение 18. С образцами плазмы крови осуществляли ELISA белка RLN2 человека; при этом было обнаружено, что в крысиной модели уровни слитого белка с VLk в крови являются более высокими, чем уровни релаксина дикого типа (фиг. 7).
Пример 14. Исследования мРНК, кодирующей релаксин, in vivo: макаки-крабоеды
Также изучали уровни циркулирующего белка релаксина у макаков-крабоедов. Две группы макаков-крабоедов (N=5 ранее не подвергавшихся экспериментам самцов обезьян на группу) тестировали с использованием IV инфузии или подкожных инъекций. Группе, которой осуществляли IV введение, давали 0,5 мг/кг мРНК, кодирующей релаксин-2 (слитый белок с VLk, конструкцию 1, РНК под SEQ ID NO: 1), в липидных наночастицах, содержащих соединение 18, посредством одночасовой инфузии один раз в две недели в течение четырех недель. Концентрация в дозе составляла 0,1 мг/мл в объеме 5 мл/кг. Группа, которой осуществляли подкожное введение, получала мРНК, кодирующую релаксин-2 (слитый белок с VLk, РНК под SEQ ID NO: 1), в липидных наночастицах, содержащих соединение 18, составленных совместно с кортикостероидом. Объем дозы составлял 0,5 мл/кг, а концентрация дозы составляла 1,0 мг/мл.
Было обнаружено, что уровни циркулирующего релаксина превышали целевые концентрации у макаков-крабоедов, получавших IV инъекции, в течение до шести дней после инфузии (фиг. 5). Следует отметить, что через 14 дней у всех субъектов происходило возвращение к исходному уровню. Однако было показано, что повторное введение доз дает низкие фармакокинетические показатели белка (фиг. 9).
В дополнительном исследовании также изучали эффекты повторного IV введения доз с использованием двух различных составов на основе липидных наночастиц у макаков-крабоедов. В данном исследовании РНК под SEQ ID NO: 1 составляли в двух различных видах липидных наночастиц: одном, содержащем соединение 18, и другом, содержащем соединение 403. Субъектам давали 0,5 мг/кг каждого из составов один раз в две недели в течение четырех недель. Образцы плазмы крови затем анализировали с помощью ELISA в отношении релаксина-2 человека, и результаты показаны на фиг. 10. Кроме того, было обнаружено, что уровни циркулирующей мРНК в случае с РНК под SEQ ID NO: 5 были сходными после первой, второй и третьей доз, как продемонстрировал bDNA-анализ с использованием плазмы крови из исследования, описанного выше (фиг. 11).
Пример 15. Исследования мРНК, кодирующей релаксин, in vivo: мыши
Мыши получали IV инъекции мРНК, кодирующей релаксин-2 (кодирующей слитый белок с VLk под SEQ ID NO: 2), и концентрацию циркулирующего релаксина измеряли в различные моменты времени после инфузии. Было обнаружено, что мРНК, кодирующая релаксин-2 (слитый белок с VLk, конструкцию 1), экспрессирует релаксин при концентрациях, превышающих целевую концентрацию, в течение до восьми дней (фиг. 8).
Последовательности
Подчеркиванием указана сигнальная последовательность
Предшествующее описание конкретных вариантов осуществления настолько полно раскрывает общий характер настоящего изобретения, что другие, используя знания в пределах компетентности в данной области, могут легко модифицировать и/или адаптировать для различных путей применения такие конкретные варианты осуществления без проведения лишних экспериментов, не отступая от общей идеи настоящего изобретения. Следовательно, предусматривается, что такие адаптации и модификации находятся в пределах определения и диапазона эквивалентов раскрытых вариантов осуществления, основанных на идеях и принципах, представленных в данном документе. Следует понимать, что формулировки или терминология в данном документе предназначены для целей описания, а не ограничения, вследствие чего терминологию или формулировки в настоящем описании квалифицированному специалисту следует интерпретировать в свете данных идей и принципов. Широта и объем настоящего изобретения не должны ограничиваться ни одним из описанных выше иллюстративных вариантов осуществления, но должны определяться только в соответствии с нижеследующими пунктами формулы изобретения и их эквивалентами.
Все публикации, заявки на патент, патенты и другие литературные источники, упомянутые в данном документе, включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случае противоречия настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущественную силу.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ModernaTX, Inc.
<120> ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ, КОДИРУЮЩИЕ РЕЛАКСИН
<130> M1378.70064WO00
<140> Пока еще не назначен
<141> 2017-05-18
<150> US 62/338,470
<151> 2016-05-18
<160> 589
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 2
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 2
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgc 555
<210> 3
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 3
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Gly Asp Phe Ile Gln Thr Val Ser Leu Gly
65 70 75 80
Ile Ser Pro Asp Gly Gly Lys Ala Leu Arg Thr Gly Ser Cys Phe Thr
85 90 95
Arg Glu Phe Leu Gly Ala Leu Ser Lys Leu Cys His Pro Ser Ser Thr
100 105 110
Lys Ile Gln Lys Pro
115
<210> 4
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 4
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca ggtgatttta ttcaaacagt ctcactggga 240
atctcaccgg acggagggaa agcactgaga acaggaagct gcttcacccg agagttcctt 300
ggtgcccttt ccaaattgtg ccatccttca tcaacaaaga tacagaaacc a 351
<210> 5
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 5
augccccgcc uguucuucuu ccaccuccuu ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgccccac agaccccgcg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacga ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ugccgcagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccucccg cagcuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gccgacucca gccccuccga gcugaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagcggucc 540
cuggcccgcu ucugcggagg cggcggcucu ggcgguggug gauccggcgg cgguggcagc 600
gacauccaga ugacccaguc cccauccagc cugagcgccu ccgucggcga ccgcgucacc 660
aucaccugcc gcgccucccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcuccu cauccucgcc uucucccgcc uccaguccgg cgucccguca 780
agguucuccg gcucgggcuc cgguaccgac uucacccuca ccaucuccuc gcuccagcca 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg ucgagaucaa gcgc 924
<210> 6
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 6
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 7
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 7
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 8
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 8
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 9
<211> 173
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 9
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
65 70 75 80
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys
145 150 155 160
His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 10
<211> 173
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 10
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
65 70 75 80
Gly Gly Gly Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser
85 90 95
Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu
100 105 110
Pro Gln Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys
145 150 155 160
His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 11
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 11
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 12
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 12
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 13
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 13
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 14
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 14
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 15
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 15
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 16
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 16
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 17
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 17
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 18
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 18
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 19
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 19
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 20
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 20
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 21
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 21
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 22
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 22
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 23
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 23
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 24
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 24
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 25
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 25
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 26
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 26
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 27
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 27
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 28
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 28
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 29
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 29
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 30
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 30
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 31
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 31
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 32
<211> 92
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 32
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Asn Gly Ser Thr Asn Asp Ser Asn Gly
50 55 60
Ser Thr Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
65 70 75 80
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
85 90
<210> 33
<211> 92
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 33
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Asn Gly Ser Thr Asn Thr Ser Asn Gly
50 55 60
Asp Thr Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
65 70 75 80
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
85 90
<210> 34
<211> 92
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 34
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Asn Gly Lys Thr Asn Thr Ser Asn Gly
50 55 60
Asp Thr Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
65 70 75 80
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
85 90
<210> 35
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 35
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Thr Ser Ser Gly
50 55 60
Asn Ser Gly Ser Gly Asn Ser Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 36
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 36
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Ser Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 37
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 37
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Asp Thr Gly Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Lys Ser Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 38
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 38
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Asp Thr Ser Gly
50 55 60
Lys Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 39
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 39
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 40
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 40
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Ser Gly Ser Thr Asn Asp Ser Asn Gly
50 55 60
Ser Thr Gly Thr Gly Ser Asp Gly Ser Thr Asn Gly Ser Asp Gly Ser
65 70 75 80
Thr Gly Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val
85 90 95
Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
100 105
<210> 41
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 41
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Ser Thr Asn Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Ser
65 70 75 80
Gly Asn Ser Gly Ser Lys Gly Thr Gly Ser Asp Gly Ser Thr Asn Gly
85 90 95
Ser Asn Gly Ser Thr Gly Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys
100 105 110
Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
115 120 125
<210> 42
<211> 447
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 42
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Val Arg Ser Val Glu Cys Pro
195 200 205
Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
210 215 220
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
225 230 235 240
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
245 250 255
Trp Tyr Val Asp Gly Met Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
260 265 270
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
275 280 285
Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser
290 295 300
Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
305 310 315 320
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
325 330 335
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
340 345 350
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
355 360 365
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
370 375 380
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
385 390 395 400
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
405 410 415
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Lys Pro Ile Pro
420 425 430
Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr His His His His His His
435 440 445
<210> 43
<211> 328
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 43
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp
305 310 315 320
Ser Thr His His His His His His
325
<210> 44
<211> 97
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 44
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser
50 55 60
Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys
<210> 45
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 45
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 46
<211> 178
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 46
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg
35 40 45
Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu
50 55 60
Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met
65 70 75 80
Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser
85 90 95
Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu
100 105 110
Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn
115 120 125
Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu
130 135 140
Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu
145 150 155 160
Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg
165 170 175
Phe Cys
<210> 47
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 47
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp
35 40 45
Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
50 55 60
Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile
65 70 75 80
Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
85 90 95
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
100 105 110
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
115 120 125
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
130 135 140
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
145 150 155 160
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
165 170 175
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
180 185 190
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
195 200 205
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
210 215 220
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
225 230 235 240
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
245 250 255
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
260 265 270
Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 48
<211> 166
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 48
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Gly Gly Gly Gly Ser Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Gln Ser
65 70 75 80
Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu
85 90 95
Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu
130 135 140
Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg
145 150 155 160
Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165
<210> 49
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 49
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 50
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 50
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 51
<211> 178
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 51
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg
35 40 45
Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu
50 55 60
Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met
65 70 75 80
Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser
85 90 95
Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu
100 105 110
Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn
115 120 125
Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu
130 135 140
Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu
145 150 155 160
Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg
165 170 175
Phe Cys
<210> 52
<211> 186
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 52
Met Ser Ser Arg Leu Leu Leu Gln Leu Leu Gly Phe Trp Leu Phe Leu
1 5 10 15
Ser Gln Pro Cys Arg Ala Arg Val Ser Glu Glu Trp Met Asp Gln Val
20 25 30
Ile Gln Val Cys Gly Arg Gly Tyr Ala Arg Ala Trp Ile Glu Val Cys
35 40 45
Gly Pro Ser Val Gly Arg Leu Ala Leu Ser Gln Glu Glu Pro Ala Pro
50 55 60
Leu Ala Arg Gln Ala Thr Ala Glu Val Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys
65 70 75 80
Asp Ala Glu Pro Phe Asp Met Thr Leu Lys Cys Leu Pro Asn Leu Ser
85 90 95
Glu Glu Arg Lys Ala Ala Leu Ser Glu Gly Arg Ala Pro Phe Pro Glu
100 105 110
Leu Gln Gln His Ala Pro Ala Leu Ser Asp Ser Val Val Arg Leu Glu
115 120 125
Gly Phe Lys Lys Thr Phe His Asn Gln Leu Gly Glu Ala Glu Asp Gly
130 135 140
Gly Pro Pro Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Ser Asp Ala Gln Ser Arg Lys
145 150 155 160
Lys Arg Gln Ser Gly Ala Leu Leu Ser Glu Gln Cys Cys His Ile Gly
165 170 175
Cys Thr Arg Arg Ser Ile Ala Lys Leu Cys
180 185
<210> 53
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 53
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 54
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 54
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 55
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 55
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 56
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 56
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 57
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 57
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 58
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 58
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 59
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 59
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 60
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 60
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 61
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 61
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 62
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 62
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 63
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 63
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 64
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 64
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 65
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 65
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 66
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 66
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 67
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 67
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 68
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 68
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 69
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 69
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 70
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 70
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 71
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 71
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 72
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 72
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 73
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 73
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 74
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 74
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 75
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 75
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 76
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 76
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 77
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 77
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 78
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 78
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 79
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 79
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 80
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 80
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 81
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 81
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 82
<211> 170
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 82
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser
85 90 95
Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly
145 150 155 160
Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
165 170
<210> 83
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 83
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp
35 40 45
Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
50 55 60
Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile
65 70 75 80
Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
85 90 95
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
100 105 110
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
115 120 125
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
130 135 140
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
145 150 155 160
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
165 170 175
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
180 185 190
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
195 200 205
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
210 215 220
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
225 230 235 240
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
245 250 255
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
260 265 270
Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 84
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 84
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 85
<211> 177
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 85
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala
85 90 95
Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp
100 105 110
Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
145 150 155 160
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
165 170 175
Cys
<210> 86
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 86
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 87
<211> 412
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 87
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu
20 25 30
Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu
50 55 60
Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
85 90 95
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
100 105 110
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
145 150 155 160
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
165 170 175
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
180 185 190
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
195 200 205
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
210 215 220
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
245 250 255
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
260 265 270
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp
275 280 285
Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile
290 295 300
Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn
305 310 315 320
Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu
325 330 335
Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu
340 345 350
Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala
355 360 365
Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser
370 375 380
Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His
385 390 395 400
Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
405 410
<210> 88
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 88
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 89
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 89
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 90
<211> 306
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 90
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
50 55 60
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe
65 70 75 80
Thr Phe Asn Ser Ser Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
85 90 95
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Arg Thr Tyr
100 105 110
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
115 120 125
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
130 135 140
Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Asp Pro Pro Arg Tyr His Tyr Asn Gly
145 150 155 160
Leu Ala Val Arg Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys Arg
165 170 175
Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu
180 185 190
Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met
195 200 205
Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser
210 215 220
Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu
225 230 235 240
Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn
245 250 255
Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu
260 265 270
Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu
275 280 285
Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg
290 295 300
Phe Cys
305
<210> 91
<211> 306
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 91
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
50 55 60
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
65 70 75 80
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
85 90 95
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
100 105 110
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
115 120 125
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
130 135 140
Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Lys Asp Pro Pro Arg Tyr His Tyr Thr Gly
145 150 155 160
Leu Ala Val Arg Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys Arg
165 170 175
Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu
180 185 190
Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met Met
195 200 205
Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser
210 215 220
Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val Leu
225 230 235 240
Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn
245 250 255
Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu
260 265 270
Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu
275 280 285
Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg
290 295 300
Phe Cys
305
<210> 92
<211> 177
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 92
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys
65 70 75 80
Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser
85 90 95
Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro
100 105 110
Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr
115 120 125
Pro Ile Leu Pro Gln Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
130 135 140
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
145 150 155 160
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
165 170 175
Cys
<210> 93
<211> 147
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 93
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Gly Gly Gly Ser Phe Gln Ser Ser Ser Ser
50 55 60
Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro
65 70 75 80
Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Phe Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala
85 90 95
Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp
100 105 110
Thr Pro Ile Leu Pro Gln Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Tyr Ser Ala
115 120 125
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
130 135 140
Arg Phe Cys
145
<210> 94
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 94
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 95
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 95
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 96
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 96
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 97
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 97
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 98
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 98
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 99
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 99
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 100
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 100
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 101
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 101
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 102
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 102
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 103
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 103
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 104
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 104
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 105
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 105
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 106
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 106
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 107
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 107
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 108
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 108
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 109
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 109
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 110
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 110
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 111
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 111
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 112
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 112
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 113
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 113
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
50 55 60
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
65 70 75 80
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
85 90 95
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
100 105 110
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
115 120 125
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
130 135 140
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
145 150 155 160
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
165 170 175
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
195 200 205
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
245 250 255
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
260 265 270
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 114
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 114
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 115
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 115
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 116
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 116
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 117
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 117
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 118
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 118
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 119
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 119
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 120
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 120
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 121
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 121
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 122
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 122
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 123
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 123
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 124
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 124
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 125
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 125
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 126
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 126
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 127
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 127
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 128
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 128
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 129
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 129
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 130
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 130
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 131
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 131
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 132
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 132
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 133
<211> 419
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 133
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
50 55 60
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
65 70 75 80
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
85 90 95
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
100 105 110
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
115 120 125
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
130 135 140
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
145 150 155 160
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
180 185 190
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
195 200 205
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
210 215 220
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
245 250 255
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
260 265 270
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Ser Thr Trp Ser Lys
275 280 285
Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro Arg Pro Val Ala
290 295 300
Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu Thr Ile Asn Met
305 310 315 320
Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu Lys Leu Thr Leu
325 330 335
Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln His Val Pro Val
340 345 350
Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys Lys Leu Ile Arg
355 360 365
Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser Glu Leu Lys Tyr
370 375 380
Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln Leu Tyr Ser Ala
385 390 395 400
Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala
405 410 415
Arg Phe Cys
<210> 134
<211> 411
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 134
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly
100 105 110
Asp Gly Asn Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser
115 120 125
Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser
130 135 140
Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gly Ser Ser
145 150 155 160
Gly Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Gly Ser
165 170 175
Gly Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
180 185 190
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
195 200 205
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
210 215 220
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
225 230 235 240
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
245 250 255
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
260 265 270
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
275 280 285
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
290 295 300
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
305 310 315 320
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
325 330 335
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
340 345 350
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
355 360 365
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
370 375 380
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
385 390 395 400
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
405 410
<210> 135
<211> 331
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 135
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
100 105 110
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
325 330
<210> 136
<211> 351
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 136
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly
100 105 110
Asp Gly Asn Ser Gly Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
115 120 125
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
130 135 140
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
145 150 155 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
165 170 175
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
180 185 190
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
195 200 205
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
210 215 220
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
245 250 255
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
260 265 270
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
275 280 285
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
290 295 300
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305 310 315 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
325 330 335
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
340 345 350
<210> 137
<211> 439
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 137
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser
180 185 190
Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu
210 215 220
Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
245 250 255
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
260 265 270
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
275 280 285
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
290 295 300
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
305 310 315 320
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
325 330 335
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
340 345 350
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
355 360 365
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
370 375 380
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
385 390 395 400
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
405 410 415
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
420 425 430
Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
435
<210> 138
<211> 439
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 138
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
165 170 175
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
180 185 190
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
195 200 205
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
210 215 220
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
245 250 255
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
260 265 270
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
275 280 285
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
290 295 300
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
305 310 315 320
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
325 330 335
Tyr Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu
340 345 350
Ala Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
355 360 365
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
370 375 380
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Gly Ser Thr Asp Ser
385 390 395 400
Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln
405 410 415
Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys
420 425 430
Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
435
<210> 139
<211> 326
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 139
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
165 170 175
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
180 185 190
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
195 200 205
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
210 215 220
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
225 230 235 240
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Lys Asp Pro Pro Arg Tyr His Tyr Thr Gly Leu Ala Val Arg
260 265 270
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly
275 280 285
Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu
290 295 300
Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg
305 310 315 320
Ser Leu Ala Arg Phe Cys
325
<210> 140
<211> 439
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 140
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
165 170 175
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
180 185 190
Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val
195 200 205
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
210 215 220
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
225 230 235 240
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
245 250 255
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
260 265 270
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
275 280 285
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
290 295 300
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
305 310 315 320
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
325 330 335
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
340 345 350
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
355 360 365
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
370 375 380
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys Gly Ser Thr Asp Ser
385 390 395 400
Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln
405 410 415
Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys
420 425 430
Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
435
<210> 141
<211> 439
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 141
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser
180 185 190
Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu
210 215 220
Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
225 230 235 240
Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
245 250 255
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
260 265 270
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
275 280 285
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
290 295 300
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
305 310 315 320
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
325 330 335
Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
340 345 350
Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
355 360 365
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
370 375 380
Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr Leu
385 390 395 400
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
405 410 415
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
420 425 430
Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
435
<210> 142
<211> 326
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 142
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser
180 185 190
Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Glu Val Gln
195 200 205
Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
210 215 220
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
225 230 235 240
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile
245 250 255
Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
260 265 270
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
275 280 285
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Lys Asp
290 295 300
Pro Pro Arg Tyr His Tyr Thr Gly Leu Ala Val Arg Gly Gln Gly Thr
305 310 315 320
Thr Val Thr Val Ser Ser
325
<210> 143
<211> 439
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 143
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
65 70 75 80
Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser
85 90 95
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr
100 105 110
Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
115 120 125
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
130 135 140
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
145 150 155 160
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
165 170 175
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
180 185 190
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
195 200 205
Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
210 215 220
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
225 230 235 240
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Val Pro Val Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys
260 265 270
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
275 280 285
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
290 295 300
Lys Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln Thr Pro
305 310 315 320
Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp Thr Glu
325 330 335
Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln Glu Leu
340 345 350
Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu Gln Gln
355 360 365
His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu Phe Lys
370 375 380
Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser Pro Ser
385 390 395 400
Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys Arg Gln
405 410 415
Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys
420 425 430
Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
435
<210> 144
<211> 238
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 144
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly
100 105 110
Asp Gly Asn Ser Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
115 120 125
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
130 135 140
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
145 150 155 160
Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
165 170 175
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
180 185 190
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
195 200 205
Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Lys Asp Pro Pro Arg Tyr His Tyr Thr Gly
210 215 220
Leu Ala Val Arg Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
225 230 235
<210> 145
<211> 351
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 145
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser
50 55 60
Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala
65 70 75 80
Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe
85 90 95
Cys Gly Ser Thr Asp Ser Gly Ser Asp Thr Ser Ser Gly Asn Ser Gly
100 105 110
Asp Gly Asn Ser Gly Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser
115 120 125
Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Ser Ser Val Phe Leu
130 135 140
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu
145 150 155 160
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
165 170 175
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
180 185 190
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
195 200 205
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
210 215 220
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
225 230 235 240
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser
245 250 255
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys
260 265 270
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
275 280 285
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
290 295 300
Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
305 310 315 320
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
325 330 335
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Arg Lys
340 345 350
<210> 146
<211> 185
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 146
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys
180 185
<210> 147
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 147
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 148
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 148
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 149
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 149
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 150
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 150
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 151
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 151
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 152
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 152
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 153
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 153
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 154
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 154
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 155
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 155
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 156
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 156
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 157
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 157
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 158
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 158
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 159
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 159
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 160
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 160
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 161
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 161
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 162
<211> 308
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 162
Met Pro Arg Leu Phe Phe Phe His Leu Leu Gly Val Cys Leu Leu Leu
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Arg Ala Val Ala Asp Ser Trp Met Glu Glu Val Ile
20 25 30
Lys Leu Cys Gly Arg Glu Leu Val Arg Ala Gln Ile Ala Ile Cys Gly
35 40 45
Met Ser Thr Trp Ser Lys Arg Ser Leu Ser Gln Glu Asp Ala Pro Gln
50 55 60
Thr Pro Arg Pro Val Ala Glu Ile Val Pro Ser Phe Ile Asn Lys Asp
65 70 75 80
Thr Glu Thr Ile Asn Met Met Ser Glu Phe Val Ala Asn Leu Pro Gln
85 90 95
Glu Leu Lys Leu Thr Leu Ser Glu Met Gln Pro Ala Leu Pro Gln Leu
100 105 110
Gln Gln His Val Pro Val Leu Lys Asp Ser Ser Leu Leu Phe Glu Glu
115 120 125
Phe Lys Lys Leu Ile Arg Asn Arg Gln Ser Glu Ala Ala Asp Ser Ser
130 135 140
Pro Ser Glu Leu Lys Tyr Leu Gly Leu Asp Thr His Ser Arg Lys Lys
145 150 155 160
Arg Gln Leu Tyr Ser Ala Leu Ala Asn Lys Cys Cys His Val Gly Cys
165 170 175
Thr Lys Arg Ser Leu Ala Arg Phe Cys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
180 185 190
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
195 200 205
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
210 215 220
Ala Ser Arg Pro Ile Gly Thr Met Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
225 230 235 240
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Phe Ser Arg Leu Gln Ser
245 250 255
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
260 265 270
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
275 280 285
Ala Gln Ala Gly Thr His Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
290 295 300
Glu Ile Lys Arg
305
<210> 163
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 163
atgccccgcc tgttcttctt ccacctcctt ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgccccac agaccccgcg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacga tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tgccgcagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctcccg cagctccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gccgactcca gcccctccga gctgaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagcggtcc 540
ctggcccgct tctgcggagg cggcggctct ggcggtggtg gatccggcgg cggtggcagc 600
gacatccaga tgacccagtc cccatccagc ctgagcgcct ccgtcggcga ccgcgtcacc 660
atcacctgcc gcgcctcccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctcct catcctcgcc ttctcccgcc tccagtccgg cgtcccgtca 780
aggttctccg gctcgggctc cggtaccgac ttcaccctca ccatctcctc gctccagcca 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tcgagatcaa gcgc 924
<210> 164
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 164
atgcccagac tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctccttaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tatgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcccctc agaccccgcg gccagtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacaa tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccg cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga actgaagtac ctgggcctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcgatcc 540
ctggcccggt tctgcggcgg cggaggcagc ggcggtggcg gaagcggagg cggcggcagc 600
gacatccaga tgacccagag cccaagctcc ctgtccgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 660
atcacctgcc gggccagccg gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctgct gatcctggcc ttctccaggc tgcagagcgg cgtgccgagc 780
cggttcagcg gctccggcag cggaaccgac ttcaccctga ccatctcaag cctgcagccg 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 165
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 165
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgc 555
<210> 166
<211> 519
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 166
atgcctaggc tctttttctt ccacttgcta ggggtgtgct tgttgttaaa ccagtttagt 60
agagcggtcg ccgattcttg gatggaggaa gtgataaagc tctgtgggcg ggaattagtc 120
cgcgcacaaa ttgccatatg cggaatgggt gggggcggta gtggcggagg aggttccggg 180
ggaggaggga gcggcggagg aggctcaggc ggcggaggaa gtggtggcgg tggctcaggt 240
ggcggaggat ctgggggcgg cggaagcggc ggaggaggat ctgggggcgg tggaagtggc 300
ggaggtgggt ctggcggggg agggagtggc gggggcggtt ccgggggtgg aggcagcgga 360
ggcggtggct ccgggggggg tggttccggt ggtggcgggt caggaggagg ggggtcaggc 420
ggcggaggat ccggcggcgg cggctcccaa ctttattcgg ctctggctaa taaatgctgt 480
cacgtgggct gcaccaaacg ttcgcttgcg cggttttgt 519
<210> 167
<211> 519
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 167
atgcctcgac tgtttttctt tcacctccta ggagtctgct tacttctcaa ccagttcagt 60
agggcagtcg cggactcatg gatggaagag gttattaaat tatgtggccg tgaattggtg 120
cgtgcacaaa tagctatttg cggcatgggc ggtggcggct ctggtggcgg cggctctgga 180
gggggcggaa gtggtggagg aggtagtggc ggaggtggat cgggaggcgg aggatctgga 240
ggggggggct cctttcaaag ctcctcgagc aaagcgcccc ctcccagcct gcccagccct 300
agtaggctgc ccggtccgag cgacacgccc atcctgcccc agggtggcgg tggctctggg 360
ggtggcggtt caggcggagg tggttctggc ggaggcggat caggtggtgg gggatccggc 420
ggcggcggat ctggtggcgg ggggagtcag ctctactctg cgttggccaa taaatgctgc 480
catgttggtt gtacaaaaag atctttggct agattttgc 519
<210> 168
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 168
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccccccagcc ccgcccccga gctgctgggc ggcagcagcg tgttcctgtt cccccccaag 240
cccaaggaca ccctgtacat caccagggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg accccgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct acagggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcccg cccccatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc cagggagccc 540
caggtgtaca ccctgccccc cagcagggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 660
cccgagaaca actacaagac cacccccccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc tgaccgtgga caagagcagg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gagccccggc 840
aagaggaaga gcacctggag caaaaggtct ctgagccagg aagatgctcc tcagacacct 900
agaccagtgg cagaaattgt gccatccttc atcaacaaag atacagaaac cataaatatg 960
atgtcagaat ttgttgctaa tttgccacag gagctgaagt taaccctgtc tgagatgcag 1020
ccagcattac cacagctaca acaacatgta cctgtattaa aagattccag tcttctcttt 1080
gaagaattta agaaacttat tcgcaataga caaagtgaag ccgcagacag cagtccttca 1140
gaattaaaat acttaggctt ggatactcat tctcgaaaaa agagacaact ctacagtgca 1200
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1257
<210> 169
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 169
atgcccaggc tgttcttctt ccacctgctg ggagtgtgcc tcctgctgaa ccagttcagc 60
cgcgccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggag ggagctggtc 120
cgagcccaaa tcgccatctg cgggatgtcc acctggagca agagaagcct gtcccaggag 180
gatgcccccc aaacgcccag gcccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gtccgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgtccg agatgcagcc agccctcccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgttgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaaa aagctgatac gcaacaggca gagcgaggcg 420
gccgacagct ccccgtcgga gctgaagtac ctggggctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgcact ggccaacaaa tgttgccacg tgggctgcac caagaggagc 540
ctggccaggt tctgc 555
<210> 170
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 170
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctg ggtgtgtgcc tgctgctgaa ccagtttagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag ggagctcgtg 120
cgagcgcaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagta agaggagcct ctcccaggag 180
gacgcccccc agacgccacg cccggtggcg gagatcgtgc cctccttcat caacaaggac 240
acagagacca tcaacatgat gagcgagttt gtggccaacc tgccccagga acttaagctg 300
accctcagcg agatgcagcc ggcccttccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaaa aagctgatcc gcaataggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga gctgaagtat ctgggcctgg acacccacag caggaagaaa 480
cggcagctgt acagcgcgct ggcgaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagaggtcg 540
ctcgccaggt tctgc 555
<210> 171
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 171
atgcccaggc tgttcttctt tcacctgctg ggcgtgtgtc tgctgctcaa ccagtttagc 60
cgcgccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcataaagc tgtgcgggag ggaactggtg 120
agggcccaga tcgccatctg cggaatgtcc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgccccac agactccgcg gccggttgcg gagatcgtgc cctccttcat caataaagat 240
accgagacca tcaacatgat gtccgagttc gtggccaacc tgccgcagga gctgaaactc 300
accctcagcg agatgcagcc cgcgctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgtttga agaattcaaa aaactgatcc ggaaccgaca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga actgaagtac ctggggctgg acacccacag ccggaaaaag 480
cggcagctgt acagcgcact ggccaataag tgttgccacg tcggctgcac gaagcggtcc 540
cttgcccgct tctgc 555
<210> 172
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 172
atgccccgcc tgttcttctt tcacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaagag gtgatcaagc tctgcggcag ggaactggtg 120
agggcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca aaaggagcct cagccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg gccagtggcc gagatcgtgc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacta tcaacatgat gtccgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg aaatgcagcc cgcgctgccc cagctgcaac agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgtttga ggagttcaag aagctgatcc gcaacaggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga actgaaatat ctggggctgg acacccactc ccggaagaag 480
aggcagctgt acagcgccct ggccaacaaa tgctgccacg tggggtgcac gaagcggtcc 540
ctggcccgct tttgc 555
<210> 173
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 173
atgcccaggc tgtttttctt ccacctcctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa tcagttttcc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgtggccg ggagctggtt 120
cgggcccaga tagccatctg tggaatgagc acctggagca agcggagcct gtcccaggag 180
gacgcccccc agacaccccg gccggtggcc gaaatcgtcc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
acgctgagcg agatgcagcc tgccctgccc cagctgcaac agcacgtgcc tgtgctgaag 360
gacagcagcc tcctgttcga ggagttcaag aagctcatca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gctgacagct cacccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccactc gaggaagaag 480
cggcagctgt acagcgcgct ggccaacaag tgttgccatg tgggctgtac caagaggagc 540
ctggccaggt tctgc 555
<210> 174
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 174
atgccccgac tgttcttttt ccacctgctg ggggtgtgcc tgctgctgaa ccagttttcg 60
agggcggtgg cggacagttg gatggaggag gtcatcaagc tctgcgggag ggagctcgtc 120
agggcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggagca agcgttcgct gtcccaggag 180
gacgcccccc agaccccgag acccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggat 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttt gtggccaacc tcccgcagga gctcaagctc 300
acgctgagcg agatgcagcc ggccctgccc cagctgcagc agcatgtccc cgtcctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aaactgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgatagca gccccagcga gctgaagtac ctggggctgg acacccacag tcgcaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgttgccacg tcgggtgtac gaagcgctcc 540
ctggccagat tctgc 555
<210> 175
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 175
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgagccgtcg cagattcctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctcgtg 120
agggcccaga tcgccatttg cggcatgtcc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcgccgc agactccccg gcccgtggcc gaaatcgtgc cctccttcat caataaggac 240
accgaaacca taaacatgat gagcgagttt gtggccaacc tgccacagga gctgaaactg 300
acgctgagcg agatgcagcc cgcgctgccc cagctgcagc agcatgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggaatttaag aagctaatcc ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagct ccccgagcga gctgaagtac ctcgggctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcaactgt acagcgccct ggcgaacaag tgctgccacg tgggctgtac caaaagaagc 540
ctcgcccgct tctgc 555
<210> 176
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 176
atgcctaggc tcttcttctt ccacctgctg ggcgtctgcc tgctgctgaa ccaattcagc 60
cgggccgtag ccgactcctg gatggaggag gtgatcaaac tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcccaaa tcgcgatctg cggcatgtcc acctggagca agcggagcct gtcgcaggaa 180
gatgcccccc agacccccag gccggtggcc gagatcgtcc ccagcttcat caacaaggat 240
accgagacca taaacatgat gagcgagttt gtggccaacc tcccccagga gctgaagctg 300
accctcagcg agatgcagcc cgccctgccg cagctgcaac agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga agagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagct ccccctccga gctgaagtac ctgggcctgg acacgcacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgcact ggccaacaag tgctgtcacg tcggctgcac caagcgtagc 540
ctggccagat tctgc 555
<210> 177
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 177
atgcccaggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctcaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaaac tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct cagccaggag 180
gacgcccccc agacccccag gcccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctcaagctg 300
accctcagcg agatgcaacc cgccctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc gtaacaggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccactc ccggaagaag 480
aggcagctgt acagtgcgct ggccaacaaa tgttgccatg tgggctgcac caagcggagc 540
ctggcccgct tctgc 555
<210> 178
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 178
atgcccaggc tgttcttttt ccacctgctg ggggtctgcc tcctgctgaa ccagttctcc 60
agggcggtcg ccgacagctg gatggaagag gtcatcaagc tgtgcgggag ggagctggtc 120
agggcccaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccccg tcccgtggcg gagatagtgc cgagcttcat caacaaggac 240
accgagacta tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tccctcagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctcccc cagctgcaac agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tcctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaataggca gagcgaggcc 420
gccgatagct cgcccagcga gcttaagtac ctgggcctcg acacacacag caggaagaag 480
aggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgttgccacg tcggctgcac taagcggagc 540
ctcgctaggt tctgc 555
<210> 179
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 179
atgccccgac tgttcttctt ccatctgctg ggcgtgtgcc tcctgctgaa tcaattcagc 60
agggccgtgg ccgactcctg gatggaggag gtcatcaagc tgtgcggcag ggaactggtg 120
agggcgcaga tcgccatctg cggcatgtcc acttggagca agaggtcgct gtcgcaggag 180
gacgcccccc agaccccgag gcccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaatatgat gtccgagttc gtggccaacc tccctcagga gctgaagctg 300
accctgtccg agatgcagcc cgccctgccg cagcttcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggaattcaag aagctgatta ggaacaggca aagcgaggcc 420
gccgactcca gcccgagcga gctgaagtac ctgggcctcg acacccatag ccgcaagaag 480
cggcagctgt actcggccct ggcgaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcgcagc 540
ctggcgcgct tctgc 555
<210> 180
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 180
atgcccaggc tgtttttctt ccacctgctg ggggtctgcc tgctgctgaa ccagtttagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag ggagctggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggtccct gagccaggag 180
gacgcccccc agactccccg gccggtggcc gaaatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaatatgat gtccgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaaactg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcatgtccc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgttgtttga ggagttcaaa aaactgatcc gaaacaggca gtcggaggcc 420
gctgacagct cgccaagcga gctgaagtat ctggggctgg acacccacag ccgcaagaag 480
aggcagctgt atagcgcgct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac gaagaggtcc 540
ctggccaggt tctgc 555
<210> 181
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 181
atgcccaggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctcgtg 120
agggcccaga tcgcgatctg cggcatgagc acctggagca aaaggagtct gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgcccag gcccgtcgcc gagatcgtgc cgtccttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaatatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctcaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgcgctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gactccagcc tgctgttcga ggagttcaag aaactgatca gaaacaggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gcccctcaga gctgaagtac ctgggcctgg acacccacag caggaagaag 480
cgccagctct acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tcgggtgcac aaagaggagc 540
ctggccaggt tctgc 555
<210> 182
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 182
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tcctgctgaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgccccgc aaaccccccg gccggtcgcg gagatagtgc ccagcttcat aaacaaggac 240
accgagacca tcaatatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
acgctgagcg agatgcagcc ggccctgccg cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tcctgttcga ggagttcaag aagctgatca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccatag caggaagaag 480
cgccagctgt acagcgccct ggctaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagaggagc 540
ctggcccggt tctgc 555
<210> 183
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 183
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctc ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccaattcagc 60
cgggccgtcg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag ggagctggtc 120
agggcccaga tcgccatctg tgggatgtcg acctggtcca agcgcagcct gagccaggag 180
gacgccccgc agaccccaag acccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaagat 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tcccccagga gctgaagctg 300
accctcagcg agatgcagcc cgcgctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagctccc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaacaggca gtccgaggcc 420
gccgacagca gcccgagcga gctgaagtac ctggggctgg acacccacag caggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgtac caaacgcagc 540
ctcgccaggt tctgc 555
<210> 184
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 184
atgcccaggc tgttcttctt ccacctgctg ggggtctgtc tcctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgactcctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggcg ggagctggtg 120
cgggcgcaga tcgccatctg cggcatgtca acctggtcca aaaggtccct cagccaggaa 180
gacgcccccc agacccccag gcccgtggcc gaaatcgtgc ccagctttat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttt gtggccaacc tcccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgcgctgccc caactgcagc agcacgtgcc ggtgctgaag 360
gactcgagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctcatca ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgattcga gccccagcga gctcaagtac ctggggctgg acactcacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggcgaacaag tgttgccacg tgggctgcac caagaggagc 540
ctggccaggt tctgt 555
<210> 185
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 185
atgcccaggc tgttcttttt ccacctcctg ggggtgtgtc tgctcctgaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgattcctg gatggaggag gtcatcaagc tgtgtggaag ggagctggtg 120
agggcccaga tcgccatctg cgggatgtcc acctggagca agcggagcct gtcccaggag 180
gacgccccgc agacccccag gccggtggcg gagatcgtcc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga actgaagctc 300
accctgagtg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcatgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctcttcga ggagttcaag aagctgatca ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagct ccccctccga gctgaagtac cttggactgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcaactgt actccgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgtac gaagaggagc 540
ctggccaggt tctgc 555
<210> 186
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 186
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg gcccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcggagc 540
ctggcccggt tctgc 555
<210> 187
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 187
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgcgatctg cgggatgagc acgtggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccgag gccggtggcg gagatcgtgc cgagcttcat caacaaggac 240
acggagacga tcaacatgat gagcgagttc gtggcgaacc tgccgcagga gctgaagctg 300
acgctgagcg agatgcagcc ggcgctgccg cagctgcagc agcacgtgcc ggtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatca ggaacaggca gagcgaggcg 420
gcggacagca gcccgagcga gctgaagtac ctggggctgg acacgcacag caggaagaag 480
aggcagctgt acagcgcgct ggcgaacaag tgctgccacg tggggtgcac gaagaggagc 540
ctggcgaggt tctgc 555
<210> 188
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 188
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tcccccagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctcccc cagctccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gccgactcct ccccctccga gctcaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagcgctcc 540
ctcgcccgct tctgc 555
<210> 189
<211> 276
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 189
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg gctccaacgg ctctaccaac 180
gattctaatg gcagcacagg ctcccagctg tacagcgccc tggccaataa gtgctgtcac 240
gtgggctgca caaagaggtc cctggcccgc ttctgt 276
<210> 190
<211> 276
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 190
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg gctccaacgg ctctaccaac 180
acctctaatg gcgacacagg ctcccagctg tacagcgccc tggccaataa gtgctgtcac 240
gtgggctgca caaagaggtc cctggcccgc ttctgt 276
<210> 191
<211> 276
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 191
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg gctccaacgg caagaccaac 180
acctctaatg gcgacacagg ctcccagctg tacagcgccc tggccaataa gtgctgtcac 240
gtgggctgca caaagaggtc cctggcccgc ttctgt 276
<210> 192
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 192
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttcc 60
agggccgtgg ccgactcttg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtct acctggtctg gcagcacaaa ctccggctct 180
accagctccg gcaacagcgg ctccggcaat tctggcagcc agctgtacag cgccctggcc 240
aataagtgct gtcacgtggg ctgcacaaag aggtccctgg cccgcttctg t 291
<210> 193
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 193
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttcc 60
agggccgtgg ccgactcttg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgagc acctggtctg gcagcacaaa ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggctccggc aattctggcc agctgtacag cgccctggcc 240
aataagtgct gtcacgtggg ctgcacaaag aggtccctgg cccgcttctg t 291
<210> 194
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 194
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg gctccacaaa ctctggcagc 180
gataccggct ctggcaactc caagtctggc aatagcggcc agctgtactc cgccctggcc 240
aataagtgct gtcacgtggg ctgcacaaag aggagcctgg cccgcttctg t 291
<210> 195
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 195
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg gctccacaaa ctctggcagc 180
gacacctccg gcaagaactc tggcgatggc aatagcggcc agctgtactc cgccctggcc 240
aataagtgct gtcacgtggg atgcacaaag cggagcctgg cccgcttctg t 291
<210> 196
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 196
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagtttagc 60
agggccgtgg cagactcctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtct acctggtctg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc agctgtactc tgccctggcc 240
aataagtgct gtcacgtggg ctgcacaaag aggagcctgg cccgcttctg t 291
<210> 197
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 197
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttcc 60
agggccgtgg ccgactcttg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtct acctggagcg gcagctccgg ctctacaaac 180
gattccaatg gctctaccgg cacaggcagc gacggctcca ccaacggctc tgatggcagc 240
acaggaggac agctgtacag cgccctggcc aataagtgct gtcacgtggg atgcaccaag 300
aggtccctgg cccgcttctg t 321
<210> 198
<211> 381
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 198
atgccccggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagtttagc 60
agggccgtgg cagactcctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgagc acctggtccg gctctacaaa cagcggctcc 180
gacaccagct ccggctccac aaattctggc agcgatacct ctagcggcaa ctccggctct 240
ggcaatagcg gctccaaggg caccggctct gatggcagca caaacggctc caatggctct 300
accggaggac agctgtactc tgccctggcc aataagtgct gtcacgtggg ctgcacaaag 360
aggtccctgg cccgcttctg t 381
<210> 199
<211> 1341
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 199
atgcccaggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttcc 60
cgcgccgtgg cagactcttg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtct acctggagca agcggtccct gtctcaggag 180
gacgcccctc agacacctag accagtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggat 240
accgagacaa tcaatatgat gtccgagttc gtggccaatc tgcctcagga gctgaagctg 300
accctgtccg agatgcagcc agccctgcca cagctgcagc agcacgtgcc agtgctgaag 360
gatagctccc tgctgtttga ggagttcaag aagctgatcc ggaacagaca gtccgaggcc 420
gccgactcta gcccttctga gctgaagtac ctgggcctgg atacccacag caggaagaag 480
cgccagctgt attccgccct ggccaataag tgctgtcacg tgggctgcac aaagaggtcc 540
ctggcccgct tttgtggcgg cggcggctct ggaggaggag gcagcggcgg aggaggcagc 600
atggtgcggt ccgtggagtg cccaccttgt ccagcaccac cagtggcagg ccctagcgtg 660
tttctgttcc ctccaaagcc aaaggacacc ctgatgatct ctaggacccc cgaggtgaca 720
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac cccgaggtgc agttcaactg gtacgtggat 780
ggcatggagg tgcacaatgc caagacaaag ccccgggagg agcagtttaa cagcaccttc 840
agagtggtgt ccgtgctgac agtggtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtataag 900
tgcgccgtgt ccaataaggg cctgccagca cctatcgaga agaccatctc taagacaaag 960
ggccagccta gggagccaca ggtgtacacc ctgccccctt cccgcgagga gatgaccaag 1020
aaccaggtgt ctctgacatg tctggtgaag ggcttttatc cctctgacat cgccgtggag 1080
tgggagagca atggccagcc tgagaacaat tacaagacca caccacccat gctggactcc 1140
gatggcagct tcttcctgta ttctaagctg acagtggata agagccggtg gcagcagggc 1200
aacgtgttca gctgttccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagtct 1260
ctgagcctgt cccccggcaa gggcaagcca atccccaatc ctctgctggg cctggatagc 1320
acacaccacc accaccacca c 1341
<210> 200
<211> 984
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 200
atgcctaggc tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttttct 60
cgcgccgtgg cagacagctg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
cgcgcacaga tcgccatctg tggcatgagc acctggtcca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcaccac agacacccag acctgtggcc gagatcgtgc cttcctttat caacaaggat 240
accgagacaa tcaatatgat gtctgagttc gtggccaatc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgtccg agatgcagcc agccctgcca cagctgcagc agcacgtgcc tgtgctgaag 360
gatagctccc tgctgtttga ggagttcaag aagctgatcc ggaacagaca gtccgaggcc 420
gccgactcta gcccatctga gctgaagtac ctgggcctgg atacccacag caggaagaag 480
cgccagctgt attccgccct ggccaataag tgctgtcacg tgggctgcac aaagcggtcc 540
ctggccagat tttgtggcgg cggcggctct ggaggaggag gcagcggcgg aggaggctcc 600
gacatccaga tgacccagag cccttcctct ctgtccgcct ctgtgggcga tcgggtgacc 660
atcacatgca gggccagccg gcccatcggc acaatgctga gctggtatca gcagaagcct 720
ggcaaggccc caaagctgct gatcctggcc ttctctaggc tgcagagcgg cgtgccctcc 780
cgctttagcg gctccggctc tggcaccgac ttcaccctga caatcagctc cctgcagcca 840
gaggattttg ccacctacta ttgtgcccag gccggcacac accccaccac attcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gaggggcaag ccaatcccca accctctgct gggcctggac 960
agcacacacc accaccacca ccac 984
<210> 201
<211> 291
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 201
atgcctcgac tgttcttttt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa tcagtttagc 60
cgggccgtcg ccgatagttg gatggaggaa gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
agagcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggtctg gcagctccgg aggaggctct 180
ggctctagct ccggctctag cggcagcggc ggctccggcc agctgtacag cgctctggct 240
aataagtgtt gtcacgtcgg atgtactaaa cgaagtctgg ctagattttg c 291
<210> 202
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 202
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgc 555
<210> 203
<211> 534
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 203
atgggcgtga aagtgctgtt tgcgctgatt tgcattgcgg tggcggaagc ggactcatgg 60
atggaggaag ttattaaatt atgcggccgc gaattagttc gcgcgcagat tgccatttgc 120
ggcatgagca cctggagcaa aaggtctctg agccaggaag atgctcctca gacacctaga 180
ccagtggcag aaattgtgcc atccttcatc aacaaagata cagaaaccat aaatatgatg 240
tcagaatttg ttgctaattt gccacaggag ctgaagttaa ccctgtctga gatgcagcca 300
gcattaccac agctacaaca acatgtacct gtattaaaag attccagtct tctctttgaa 360
gaatttaaga aacttattcg caatagacaa agtgaagccg cagacagcag tccttcagaa 420
ttaaaatact taggcttgga tactcattct cgaaaaaaga gacaactcta cagtgcattg 480
gctaataaat gttgccatgt tggttgtacc aaaagatctc ttgctagatt ttgc 534
<210> 204
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 204
atgggcgtga aagtgctgtt tgcgctgatt tgcattgcgg tggcggaagc ggactcatgg 60
atggaggaag ttattaaatt atgcggccgc gaattagttc gcgcgcagat tgccatttgc 120
ggcatggagc ccaagagcag cgacaagacc cacaccagcc cccccagccc cgcccccgag 180
ctgctgggcg gcagcagcgt gttcctgttc ccccccaagc ccaaggacac cctctacatc 240
accagggagc ccgaggtgac ctgcgtggtg gtggacgtga gccacgagga ccccgaggtg 300
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagggag 360
gagcagtaca acagcaccta cagggtggtg agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 420
ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg agcaacaagg ccctgcccgc ccccatcgag 480
aagaccatca gcaaggccaa gggccagccc agggagcccc aggtgtacac cctgcccccc 540
agcagggacg agctgaccaa gaaccaggtg agcctgacct gcctggtgaa gggcttctac 600
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagaca 660
accccccccg tgctggacag cgacggcagc ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 720
aagagcaggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 780
aaccactaca cccagaagag cctgagcctg agccccggca agaggaagag cacctggagc 840
aaaaggtctc tgagccagga agatgctcct cagacaccta gaccagtggc agaaattgtg 900
ccatccttca tcaacaaaga tacagaaacc ataaatatga tgtcagaatt tgttgctaat 960
ttgccacagg agctgaagtt aaccctgtct gagatgcagc cagcattacc acagctacaa 1020
caacatgtac ctgtattaaa agattccagt cttctctttg aagaatttaa gaaacttatt 1080
cgcaatagac aaagtgaagc cgcagacagc agtccttcag aattaaaata cttaggcttg 1140
gatactcatt ctcgaaaaaa gagacaactc tacagtgcat tggctaataa atgttgccat 1200
gttggttgta ccaaaagatc tcttgctaga ttttgc 1236
<210> 205
<211> 498
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 205
atgggcgtga aagtgctgtt tgcgctgatt tgcattgcgg tggcggaagc ggactcatgg 60
atggaagagg ttattaaatt atgtggccgt gaattggtgc gtgcacaaat agctatttgc 120
ggcatgggcg gtggcggctc tggtggcggc ggctctggag ggggcggaag tggtggagga 180
ggtagtggcg gaggtggatc gggaggcgga ggatctggag gggggggctc ctttcaaagc 240
tcctcgagca aagcgccccc tcccagcctg cccagcccta gtaggctgcc cggtccgagc 300
gacacgccca tcctgcccca gggtggcggt ggctctgggg gtggcggttc aggcggaggt 360
ggttctggcg gaggcggatc aggtggtggg ggatccggcg gcggcggatc tggtggcggg 420
gggagtcagc tctactctgc gttggccaat aaatgctgcc atgttggttg tacaaaaaga 480
tctttggcta gattttgc 498
<210> 206
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 206
atgggcgtga aggtgctgtt cgcactgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggcaga gagctggtga gagcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag cccccccagc 180
cccgctcccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac 240
accctgtaca taaccagaga gccagaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagaca 360
aagcccagag aggagcagta caacagcacc tacagagtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtat aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gcccccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc ccagagagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc ccagcagaga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccccc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttac acaaccacta cacccagaag agcctaagcc tgagccccgg caagagaaag 840
aagagaagtc tgagccagga ggacgccccc cagaccccca gacccgtggc cgagatcgtg 900
ccctccttca ttaacaagga caccgagacc atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gaccctgagc gaaatgcaac ccgccctgcc ccagctgcaa 1020
cagcacgtgc ccgtgctgaa ggacagcagc ctgctgttcg aggagttcaa aaagctgatc 1080
agaaacagac agagcgaggc cgccgactcc agccccagcg agctgaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gagacagctg tacagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca ccaagagaag cctggccaga ttctgc 1236
<210> 207
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 207
atgggagtta aagtgctttt tgcgcttatt tgtattgcgg tcgcggaggc tgactcatgg 60
atggaagagg tcattaagct ctgtggaagg gaactcgtta gagcccaaat agctatttgc 120
gggatgagta catggtccgg tgggggtggt tcgggtggag gtgggtcggg aggaggaggc 180
tccggtggag gcggcagtgg gggcggaggg tccggtgggg gtgggtctgg aggaggtggt 240
tcgtttcagt cttcatcttc caaagctcct cctccttcgc ttcccagccc tagcaggctt 300
ccaggtccat cagatactcc aatattgccc cagggagggg gtggatcagg aggaggaggg 360
agtggtgggg gaggatctgg tggaggtggt tccggaggag gaggaagcgg ggggggaggt 420
tcaggcggtg gtggaagcca actgtatagt gcgttggcta acaaatgttg tcatgtcgga 480
tgtactaaaa ggagcctcgc caggttttgc 510
<210> 208
<211> 534
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 208
atgggcgtga aagtgctgtt tgcgctgatt tgcattgcgg tggcggaagc ggactcatgg 60
atggaggaag ttattaaatt atgcggccgc gaattagttc gcgcgcagat tgccatttgc 120
ggcatgagca cctggagcaa aaggtctctg agccaggaag atgctcctca gacacctaga 180
ccagtggcag aaattgtgcc atccttcatc aacaaagata cagaaaccat aaatatgatg 240
tcagaatttg ttgctaattt gccacaggag ctgaagttaa ccctgtctga gatgcagcca 300
gcattaccac agctacaaca acatgtacct gtattaaaag attccagtct tctctttgaa 360
gaatttaaga aacttattcg caatagacaa agtgaagccg cagacagcag tccttcagaa 420
ttaaaatact taggcttgga tactcattct cgaaaaaaga gacaactcta cagtgcattg 480
gctaataaat gttgccatgt tggttgtacc aaaagatctc ttgctagatt ttgc 534
<210> 209
<211> 558
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 209
atgagcagca gactgctgct gcagctgctg ggcttctggc tgttcctgag ccagccctgc 60
agagccagag tgagcgagga gtggatggac caggtgatcc aggtgtgcgg cagaggctac 120
gccagagcct ggatcgaggt gtgcggcccc agcgtgggca gactggccct gagccaggag 180
gagcccgccc ccctggccag acaggccacc gccgaggtgg tgcccagctt catcaacaag 240
gacgccgagc ccttcgacat gaccctgaag tgcctgccca acctgagcga ggagagaaag 300
gccgccctga gcgagggcag agcccccttc cccgagctgc agcagcacgc ccccgccctg 360
agcgacagcg tggtgagact ggagggcttc aagaagacct tccacaacca gctgggcgag 420
gccgaggacg gcggcccccc cgagctgaag tacctgggca gcgacgccca gagcagaaag 480
aagagacaga gcggcgccct gctgagcgag cagtgctgcc acatcggctg caccagaaga 540
agcatcgcca agctgtgc 558
<210> 210
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 210
atgggggtga aggtgctgtt cgccctcatc tgcatagcgg tggccgaggc cgactcttgg 60
atggaggagg tgatcaagct ctgcggcagg gagctcgtgc gtgcccagat cgcgatctgc 120
ggcatgagca cctggtcaga gccaaagagc agcgataaga cgcataccag ccctcccagc 180
cccgcccccg agctgctggg cgggagcagc gtgttcctct tcccacccaa gccaaaggac 240
accctctaca tcacccgcga gcccgaggtg acgtgcgttg tggtggacgt gtcccacgag 300
gaccccgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aagtccacaa cgccaagacc 360
aagcctcggg aggagcagta caacagcacc tacagggtgg tgagcgtcct gacagtcctg 420
caccaggact ggctgaatgg caaggaatac aagtgcaagg tgtcaaacaa ggccctgccc 480
gcccccatcg agaaaaccat cagcaaggcc aagggccagc cacgtgagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc ccagcaggga cgagctcacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aaaggtttct acccttctga catcgcggtt gagtgggaga gcaatggcca acccgagaac 660
aactacaaga caaccccgcc cgtgctggac tccgatggga gcttcttcct gtatagcaag 720
ctgaccgtgg acaagagccg ctggcagcag ggcaacgtgt tcagctgctc cgtcatgcac 780
gaggccctgc ataaccacta cacccaaaag agcctgtccc tgagccccgg caagcgcaag 840
aagaggtccc tgagccaaga agacgccccg cagacgccca ggcccgtggc cgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga taccgagaca atcaacatga tgtcggaatt tgtggctaac 960
ctgccccaag agctgaaact gaccctgtcg gaaatgcagc ccgcgctgcc gcagctgcag 1020
cagcacgtgc cggtgctgaa ggatagcagc ttgctgttcg aggaattcaa gaagctcatc 1080
cgtaatcgac agagcgaggc ggccgattcc agccccagcg agctgaagta tctggggctg 1140
gatacccaca gccgcaagaa gcggcagctg tactctgctc tggccaataa gtgttgccac 1200
gtcggctgca ccaaacgcag cctggccagg ttctgc 1236
<210> 211
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 211
atgggcgtca aggtcctctt cgcccttatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct ttgcggccgg gagcttgtgc gcgcgcagat cgccatttgc 120
ggcatgagca cctggtccga accaaagagc tccgacaaga cccacacctc ccctccttcc 180
cccgcccccg agctgctggg cggcagcagc gtcttcctgt tcccgcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcaccaggga gcccgaggtg acatgtgtcg tggtggacgt gtcacacgag 300
gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtc gacggcgtgg aggtgcacaa cgcaaaaacc 360
aagccccggg aggaacagta caacagcacc taccgggtgg tcagcgtgct gaccgtgctc 420
catcaggact ggctgaacgg caaggagtac aaatgcaagg tcagcaacaa agccctgccc 480
gccccaatcg aaaagaccat ctccaaggcc aaggggcagc ccagggaacc ccaggtgtac 540
accctgcccc ccagcaggga cgagctcacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aaggggttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaaa gcaacggcca acccgaaaac 660
aactacaaga ccaccccgcc ggtgctggac tctgacggca gcttcttcct ctacagcaag 720
ctgaccgttg acaaatccag gtggcaacag ggcaacgtct tcagctgcag cgtgatgcat 780
gaagcgctgc acaaccatta cacgcagaaa agcctgtccc tgagccccgg caagaggaag 840
aaaaggagcc tgtcccagga ggacgcccct cagaccccgc gacccgtggc cgagatcgtg 900
cctagcttca ttaacaagga caccgagacg atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaat 960
ctgccccagg agctgaagct caccctcagc gagatgcagc ccgccctgcc ccagctgcag 1020
cagcacgtcc cggtcctgaa ggacagcagc ctgctgttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
aggaacaggc agagcgaggc cgccgactcc tccccctccg agctgaagta cctcggcctg 1140
gacacccact ccaggaagaa gcggcagctg tactcagccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca ccaagcggag cctggcccgg ttctgc 1236
<210> 212
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 212
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctcatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaaact ctgcggcagg gagctcgtgc gcgcccagat cgccatctgc 120
gggatgtcca cctggagcga gcccaagagc tccgacaaaa cccacaccag cccgcccagc 180
ccagcccccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctct tccctcccaa gcccaaggac 240
acgctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccctgaag tgaagtttaa ctggtatgtt gacggcgtgg aggtgcacaa cgcaaagacc 360
aagccccgcg aggagcagta caacagcacc taccgcgtcg tcagcgtgct gacagtcctc 420
caccaggatt ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgtccaacaa ggccctgccc 480
gccccgatcg agaagaccat tagcaaggcc aagggccagc caagggagcc acaagtgtac 540
accctgccac cttccaggga cgagctgacc aagaatcagg tcagcctgac ctgcctggtt 600
aagggcttct acccaagcga catcgccgtt gagtgggaga gcaacggaca gcctgagaac 660
aactataaga ctacccctcc cgtgctggat tccgacggaa gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag ggtaacgtgt tttcctgctc cgtgatgcat 780
gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctcagcc tgagccccgg caaacgcaag 840
aagcggagcc tgtcgcaaga ggacgccccc cagaccccca ggcctgtggc cgagatcgtc 900
cccagcttca tcaacaagga caccgagact atcaacatga tgagcgaatt cgtggccaac 960
ctcccccagg aactgaagct gaccctgagc gagatgcagc ccgccctgcc ccagctgcag 1020
cagcacgtgc ccgtactgaa ggacagctcc ctgctgtttg aagagtttaa gaagctgatc 1080
cggaacaggc agtccgaagc cgccgacagc tcccccagcg agctgaaata cctggggctg 1140
gacacccaca gccggaaaaa gcgccagctc tacagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca ccaagcgttc cctggcccgg ttttgc 1236
<210> 213
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 213
atgggcgtga aggtcctctt cgccctcatc tgcatcgccg tggccgaggc cgactcctgg 60
atggaggagg tgataaagct ctgcggcagg gagctcgtgc gcgcccaaat cgccatctgc 120
gggatgagca cctggagcga gcccaagagc tccgacaaga cacacacctc cccgcccagc 180
cccgccccag agctgctggg cgggagcagc gtctttctgt tcccgcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacgcgcga gcccgaagtg acctgcgtgg tcgtggacgt gagccacgag 300
gaccctgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgctaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caactcaacc tacagagtgg tgagcgtcct cacggtgctg 420
caccaggatt ggctgaatgg caaggagtat aaatgcaagg tgagcaacaa agcactgccc 480
gcccccatcg agaagacaat ctctaaggcc aagggccagc ccagggagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc cctcaagaga cgagctgacc aagaatcagg tgtccctgac ctgcctcgtg 600
aagggcttct accccagcga tatcgctgtg gagtgggagt ccaacgggca gccggagaac 660
aactacaaga ccaccccacc cgtgctggac agcgacggga gctttttcct gtacagcaag 720
ctgaccgtcg acaagagcag atggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtcatgcac 780
gaggccctgc acaaccacta cacacaaaag agcctgagcc tgtcgccagg caagcgaaag 840
aagagaagct tgagccagga ggacgccccc cagacccccc ggcccgtggc cgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga caccgagact attaacatga tgagcgagtt cgtggccaat 960
ctgccccagg agctcaaact taccctgtcc gagatgcagc ccgccctgcc ccagctgcag 1020
cagcacgtgc ccgtgctgaa ggacagttcc ctgctgttcg aggagttcaa aaagctgatc 1080
cgcaacagac agagcgaggc cgccgatagc agcccctccg agctgaagta cctcggcctg 1140
gacacccaca gcaggaagaa gaggcagctg tacagcgccc tggccaataa gtgctgtcac 1200
gttggctgca ccaagcgcag cctcgcccgg ttttgc 1236
<210> 214
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 214
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctcatc tgcattgccg tggccgaagc cgacagctgg 60
atggaagagg tcatcaagct ctgcggcagg gagctcgtga gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagtcc agcgacaaga cccacaccag cccgcccagc 180
cccgccccgg agcttcttgg gggcagcagc gtgttcctgt tcccacccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga acccgaggtg acctgcgtgg tcgttgacgt cagtcacgag 300
gatcccgaag tcaagtttaa ctggtatgtg gacggcgtgg aggtccacaa tgccaaaacc 360
aagccacggg aggaacagta taattccacc tacagggtgg tcagcgtgct caccgtgctc 420
caccaggact ggctcaacgg aaaggagtat aagtgcaagg tgagcaataa ggccctgcct 480
gcccccatcg agaagaccat ctccaaggcg aaaggccagc cccgggagcc tcaggtctac 540
accctgcccc ccagccgcga cgagctcacc aagaaccagg tgagcctcac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggagt ccaacggaca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccacc ggtcctggac agcgatggct ccttcttcct gtacagcaaa 720
ctgaccgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtcatgcac 780
gaggcgctgc acaatcacta cacccagaaa tccctgagcc tgtcccccgg caagaggaag 840
aagaggagcc tgagccagga ggacgccccc cagacaccca ggcccgtggc cgagatcgtg 900
ccctccttca tcaacaagga taccgaaacc atcaacatga tgagcgagtt cgtagccaac 960
ctgccgcagg agctcaagct gaccctgagc gagatgcagc ccgccctgcc ccagctgcaa 1020
cagcacgtgc ccgtgctcaa ggacagcagc ctgctgttcg aggagttcaa aaagctgatc 1080
cgtaaccgcc agagcgaggc cgccgattct agcccctccg agctgaagta tctgggactg 1140
gacacccact cccgcaagaa acggcagctt tattccgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca ccaaaaggtc cctggccagg ttttgc 1236
<210> 215
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 215
atgggcgtga aagtgctctt tgccctcatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgataaagct ctgcgggcgg gagctcgtcc gggcccagat cgccatctgc 120
ggtatgagca cctggagcga gcccaagtcc agcgacaaga cccacacctc gccccccagc 180
ccggcccccg agctgctggg gggaagcagc gtgttcctgt tcccgcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacacgaga gcccgaagtt acctgcgtcg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgagg tgaagttcaa ttggtacgtg gacggagtgg aggtgcacaa tgcaaaaacc 360
aagccccgag aggagcagta caatagcacc tacagggtgg tgagcgtgct gactgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg gaaggagtac aagtgcaagg ttagcaacaa ggccctcccc 480
gccccaatcg agaagaccat ctccaaggct aagggccagc ccagggagcc ccaggtctat 540
acactcccgc ccagcagaga tgagctcacc aagaaccagg tcagcctgac ctgtctggtg 600
aaaggcttct accccagcga cattgccgtg gagtgggagt ccaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccactccccc cgtactggat tccgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctcaccgtgg acaaatccag gtggcagcag ggcaacgtgt tttcctgcag cgtaatgcat 780
gaggccctcc acaaccacta cacccagaaa agcctgagcc tgagccccgg gaagaggaag 840
aagaggagcc tgtcccagga ggacgccccc cagaccccca ggcccgtggc cgagatcgtc 900
cccagcttca tcaataagga cacggagacg atcaacatga tgagcgaatt cgtggcaaac 960
ctcccccagg agctgaaact gacgctgagc gagatgcagc cagccctgcc tcagctgcag 1020
caacatgtgc ccgtgctgaa ggacagctcc ttgctgttcg aggaattcaa gaagctgatc 1080
cggaacaggc agagcgaggc cgccgactcc agcccctccg agctgaagta cctgggcctg 1140
gacacccact cccgaaaaaa gcgtcagctg tacagcgccc tggcgaacaa atgctgccat 1200
gtcggctgta ccaagcggtc cctggcccgc ttctgc 1236
<210> 216
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 216
atgggggtga aggtcctctt cgcgttgatc tgcatcgccg tggccgaggc agatagctgg 60
atggaggagg ttatcaagct ctgtggtcgc gagctcgtgc gcgcccaaat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gccgaaaagc agcgacaaga cacacacctc ccctccgagc 180
cccgctcccg agcttctggg tgggtcctca gtgtttctgt tcccgcccaa gccaaaggac 240
acgctgtaca tcaccagaga gcccgaagtg acttgcgtgg tggtcgacgt gtcccacgag 300
gaccctgaag tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagaca 360
aagccccggg aggaacagta caactccacc taccgggtgg tgtccgtgct caccgtgctc 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggctctgccc 480
gcccccatcg agaagacgat ctccaaggcc aaggggcaac ccagggaacc gcaggtctat 540
accctgcccc cctctcggga cgagctgacg aagaaccagg ttagcctcac ctgcctggtg 600
aagggcttct acccctccga catcgccgtc gagtgggaat ccaacgggca gcctgagaac 660
aattacaaga ccacccctcc cgtcctggac tccgacggca gcttctttct ctactccaag 720
ctcaccgtgg acaagtcgag gtggcagcag ggaaacgtgt tctcctgtag cgtgatgcac 780
gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctgagcc tcagccccgg gaagcggaaa 840
aagcgctccc tgtcccagga ggacgccccc cagacacccc ggcccgtggc cgagatcgtc 900
ccttccttca tcaataaaga caccgagaca atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg aactgaagct gaccctctcg gagatgcagc ccgcgctgcc gcagctgcag 1020
cagcatgtgc ccgtgctgaa agacagcagc ctgctgttcg aggagtttaa gaagctcatc 1080
agaaatagac agagcgaggc cgccgatagc tccccaagcg agctcaagta cctcgggctg 1140
gacacgcaca gcagaaagaa gagacagctg tacagcgccc tggccaataa gtgctgccac 1200
gtcggctgca ccaagcggag cttggcgagg ttctgc 1236
<210> 217
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 217
atgggcgtaa aggtgctctt tgccctaatc tgcatcgccg tggccgaggc cgactcgtgg 60
atggaggagg tgatcaagct ctgcggccgg gagctcgtgc gcgcccagat cgccatctgc 120
gggatgagca cctggagcga gcccaaaagt tccgacaaga cccacaccag cccgcccagc 180
cccgcccccg agctgctggg agggagcagc gtgttcctgt tcccacccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccgcga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gtcccatgag 300
gatccggagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaaaacc 360
aagcccaggg aggagcagta caattccacc tacagggtgg tgagcgtcct gacggtcctg 420
caccaagact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gcgcctatcg agaagacgat cagcaaggcc aaaggccaac cgagggagcc ccaggtgtat 540
accctgcccc ccagcaggga cgagctcacc aagaatcaag tgtcactgac ctgcctggtg 600
aagggcttct acccctccga catcgctgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgaaaat 660
aactacaaga ccaccccgcc cgtgctggac agcgacggca gtttctttct gtacagcaag 720
ctgaccgtgg acaagtccag atggcagcag ggcaacgtgt tcagctgtag cgtcatgcac 780
gaggccctgc ataatcacta cacccagaaa agcctgtccc tgagcccagg gaagcggaag 840
aagcgatccc tcagccagga ggacgccccg cagaccccca gacccgttgc cgagatcgtg 900
ccctcattca tcaacaagga cacagagaca atcaacatga tgtccgaatt cgtggccaac 960
ctcccccagg agctcaagct gaccctcagc gagatgcagc ccgccctgcc ccagctgcag 1020
cagcatgtgc ccgtgctgaa ggactcgagc ctgctgttcg aagagttcaa gaagctgatc 1080
agaaatcgtc agtccgaggc cgccgacagc agccccagcg aactcaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gccgcaagaa gaggcagctg tacagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggttgca ccaagcgcag cttggccagg ttttgc 1236
<210> 218
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 218
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctcatt tgtatcgccg tggccgaagc ggacagctgg 60
atggaggagg tgatcaaact atgcggcagg gagctcgtga gagctcagat tgccatctgc 120
ggcatgtcga cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc cccgcccagc 180
cccgcccccg agctgctggg gggcagcagc gtgttcctgt ttccccccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccgaga gcccgaggtg acctgtgtgg tggtggacgt ttcccacgag 300
gaccccgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gatggcgtgg aggtgcacaa tgccaagact 360
aagccccgag aggagcagta caacagcacc tacagggtgg tcagcgtgct gaccgtcctg 420
caccaggact ggctgaacgg gaaggaatac aagtgcaagg taagcaacaa ggccctgcct 480
gcccccatcg agaagaccat ttccaaggcc aagggccaac caagggagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc ccagcagaga cgaactgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtc 600
aaggggttct acccctccga catcgccgtg gagtgggagt ccaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccgcc cgtcctcgat agcgacggga gcttcttcct gtactcaaag 720
ctgacagtgg acaagagcag gtggcagcag ggcaacgtgt tctcctgcag cgtgatgcac 780
gaagccctgc ataaccacta tacccagaag tccctgagcc tgagccccgg aaagcgcaaa 840
aagcgcagcc tgagccagga ggacgcccca caaaccccca ggcccgtggc cgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga cactgagacg atcaacatga tgtccgagtt tgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gaccctgtct gagatgcagc ccgccctgcc tcagctccag 1020
cagcacgtgc ccgtcctcaa ggacagcagc ctgctgttcg aggagtttaa gaagctgatc 1080
cggaacaggc agtcagaggc cgccgacagc agccccagcg agctgaagta cctcggcctg 1140
gacacacata gccggaagaa gaggcagctc tacagcgccc tcgccaacaa atgctgccac 1200
gtgggctgca ccaagaggag cctggccaga ttctgt 1236
<210> 219
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 219
atgggcgtga aggtcctctt cgccctcatc tgcatcgccg tggccgaggc cgatagctgg 60
atggaggagg tcatcaagct ctgcgggcga gagctcgtga gagcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagtcc tcggacaaga cgcataccag cccgcccagc 180
cccgcccccg agctgctggg gggcagcagc gtgttcctgt tcccacccaa gcccaaggac 240
accctgtata tcacccggga acctgaggtg acatgcgtgg tggtggacgt aagccacgag 300
gacccagagg tgaagtttaa ctggtacgtg gacggggtgg aggtgcacaa tgccaagacc 360
aagcctaggg aggagcaata caactccacc taccgcgtgg tgagcgtgct gacggtcctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaagagtac aagtgcaaag tgtccaacaa agccctgccc 480
gcccccatcg agaagaccat ctccaaggcc aaggggcagc ccagagagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc cctctaggga cgagctcacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct acccgtccga catcgccgtg gagtgggaga gcaacggcca acccgagaac 660
aactacaaga ccaccccgcc ggtgctcgac tccgacggca gcttcttcct ctacagcaag 720
ctaaccgtgg ataagagccg ctggcagcag ggcaacgtct tcagctgcag cgtcatgcac 780
gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctgtccc tgtcccccgg caagcggaag 840
aagagatcgc tgtcccagga ggacgccccc caaacgccca ggcccgtagc cgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga caccgagaca attaacatga tgagtgagtt tgtggccaat 960
ctcccccagg agctgaagct caccctgagc gagatgcagc ccgccctccc ccagctgcag 1020
cagcacgtgc ccgtgctgaa ggacagctcc ctcctgttcg aagagttcaa gaagctgatc 1080
aggaaccggc agagcgaggc cgccgactcc agccccagcg agctgaagta cctgggtctg 1140
gatacccact ccaggaagaa gcggcagctg tacagcgccc tggccaacaa gtgttgtcac 1200
gtcggttgca cgaaacggtc gctcgcccgg ttttgt 1236
<210> 220
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 220
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccaagc 180
cccgctcccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcctaa acctaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccctgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccacggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 480
gcgcccatcg agaagaccat cagcaaggcc aaggggcagc ctagagaacc ccaggtgtac 540
accctgcctc ccagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga tattgctgtg gagtgggaga gcaacggcca gcctgagaac 660
aactacaaga ccacccctcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaaa 720
ctgacagtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaagccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctaagcc tgtcacccgg caagcggaag 840
aagcggtcct tgagccagga ggacgcgcct cagacccccc ggcctgtggc tgaaatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga caccgagacg ataaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct caccttgagc gagatgcagc ccgctctgcc acaactccag 1020
cagcacgtgc ccgtccttaa ggacagcagc ctgcttttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgatagc tcccctagcg agctcaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcgccagctg tatagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggatgca caaaaagaag cttggcccgg ttctgc 1236
<210> 221
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 221
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc tcctccgtcc 180
cccgctcccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccctgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcca 480
gcccctatcg agaagaccat cagcaaggcc aaggggcagc ccagggagcc acaggtgtac 540
accctgccgc ccagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgctgtg gagtgggaga gcaacggcca gccggagaac 660
aactacaaga ccaccccacc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctcaccgtag acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccctac acaaccacta cacccagaaa agcctgagcc tatcccccgg caagcggaag 840
aagagatcgc tgagccagga ggacgccccc cagacccccc ggcccgtagc cgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga cactgaaacg atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct cacactgagc gagatgcagc ccgctctgcc acagctccag 1020
cagcacgtgc ccgtcctgaa ggacagcagc ctgcttttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgctgacagc tcacccagtg aacttaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gccgcaagaa gcggcagctg tactccgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtggggtgca ccaaacgcag cctggcccgg ttctgc 1236
<210> 222
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 222
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc cccacctagc 180
ccagcccccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccacccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gctcccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc ccagggagcc ccaggtgtac 540
accctgcctc ccagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgctgtc gagtgggaga gcaacggaca gcccgagaac 660
aactacaaga ccacccctcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaaa 720
ctgactgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttgc acaaccacta cacccagaaa agcctgtccc tgtcccccgg caagcggaag 840
aagcggtcac tgtcccagga ggacgctccg cagacccccc ggccagtggc ggagatcgtg 900
cccagcttca tcaataagga taccgagaca attaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gaccctgagc gagatgcagc ccgctctgcc gcagttacag 1020
cagcacgtgc ccgtcctgaa ggacagcagc ctgctgtttg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgatagc tccccatctg agctcaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa aaggcagctg tactccgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggatgca ccaagagatc tctggcccgg ttctgc 1236
<210> 223
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 223
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc acctccatcc 180
ccggcacccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgaag tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 480
gcgcctatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc cacgggaacc ccaggtgtac 540
accctgcctc ccagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga tatcgctgtg gagtgggaga gcaacggcca acccgagaac 660
aactacaaga ccaccccacc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaaa 720
ctaaccgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaagccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctctccc tgagccccgg caagcggaag 840
aagcggtcct tgtcacagga ggacgccccc cagacccccc ggcccgtcgc tgagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga caccgaaaca attaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gacactgagc gagatgcagc ccgctctgcc acaactgcag 1020
cagcacgtgc cagtgctcaa ggacagcagc ctcctgttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcggacagc tcaccaagcg agctgaaata cctgggcctg 1140
gacacccaca gccgcaaaaa gagacagctg tactccgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggatgca ccaaaagaag cctggcccgg ttctgc 1236
<210> 224
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 224
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccttcc 180
cccgcccccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccgcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgaag tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gctcccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc caagagaacc ccaggtgtac 540
accctgcccc cctcccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga cattgccgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccacc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgactgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttgc acaaccacta cacccagaaa agcctgtccc ttagccccgg caagcggaag 840
aagaggagcc ttagccagga ggacgcccca cagacccccc ggcccgtggc tgaaatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga cacagaaacc atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct caccctgagc gagatgcagc ccgcattgcc acagctccag 1020
cagcacgtgc ctgtgctgaa ggacagcagc ttgctctttg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgactcc agcccctctg agttaaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcggcagctg tactcagccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca caaagcggag cctggcccgg ttctgc 1236
<210> 225
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 225
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccaagc 180
cccgcccccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccgcccaa gccaaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gacccagaag tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccacggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 480
gcacccatcg agaagaccat cagcaaggcc aaggggcagc ctagagagcc ccaggtgtac 540
accctgccac ctagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgctgtg gagtgggaga gcaacggcca gcctgagaac 660
aactacaaga ccaccccgcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctcacggtag acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaagctctgc acaaccacta cacgcagaaa agcttgagcc tgtcacccgg caagcggaag 840
aagcggtccc tgtcccagga ggacgcccct cagacccccc ggccagtagc ggagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga tacagagact atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gactctgagc gagatgcagc ccgcgctgcc tcaactgcag 1020
cagcacgtgc ccgtactgaa ggacagcagc ttgctctttg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcagacagc tcacccagcg aattgaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcgacagttg tactccgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggttgca ccaagaggtc gctggcccgg ttctgc 1236
<210> 226
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 226
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc accaccaagc 180
cctgcacccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gacccagagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aaaccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccg 480
gcccctatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc caagggaacc ccaggtgtac 540
accctgccac ccagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgcagtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccacc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgactgtcg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttgc acaaccacta cacccagaaa agcctctctc tttctcccgg caagcggaag 840
aagaggagcc tgtcccagga ggacgccccc caaactcccc ggcccgtcgc tgagatcgtg 900
cccagcttca tcaataaaga cacggagaca atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gacactgagc gagatgcagc ccgcacttcc ccagctccag 1020
cagcacgtgc ccgtcctgaa ggacagcagc ttactcttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcagattct agcccctccg aactcaaata cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa aagacagctg tattcagccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca caaagcggag cctcgcccgg ttctgc 1236
<210> 227
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 227
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc ccctcccagt 180
cctgcccccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccgcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccctgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gccccaatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc ctagggagcc gcaggtgtac 540
accctgccac cctctcggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga tatcgccgtc gagtgggaga gcaacggcca acctgagaac 660
aactacaaga ccacccctcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctcaccgtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaagccctgc acaaccacta cacccagaaa agcttgagcc tcagtcccgg caagcggaag 840
aagcgatcct tgagccagga ggacgctcct cagacccccc ggcctgtggc ggagatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga cactgaaacc attaacatga tgagcgagtt cgtggctaac 960
ttgccccagg agctgaagct gactctgagc gagatgcagc ccgctctccc gcagcttcag 1020
cagcacgtgc ccgtgttgaa ggacagcagc ctcctcttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgctgattct tcccctagcg aactgaaata cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gaggcagctg tactctgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca caaagaggag cctggcccgg ttctgc 1236
<210> 228
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 228
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacacctc ccctccgtcc 180
cccgctcccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gacccagaag tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgcct 480
gctcctatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc ctcgggaacc ccaggtgtac 540
accctgcccc ctagccggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga tattgccgtg gagtgggaga gcaacgggca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccgcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
cttaccgtcg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaagccctgc acaaccacta cacccagaaa agcctctccc tgtctcccgg caagcggaag 840
aagcgcagtc tctctcagga ggacgctcct cagacccccc ggcccgtcgc cgaaatcgtg 900
cccagcttca tcaacaaaga cactgaaacc ataaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagtt gactctgagc gagatgcagc ccgccctgcc acagctccag 1020
cagcacgtgc ccgtcctgaa ggacagcagc ctgttgttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgattcc agcccctctg agctcaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gccggaagaa aaggcagtta tacagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggatgta ccaagaggag tctggcccgg ttctgc 1236
<210> 229
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 229
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag tcccccctct 180
cccgcacccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tccctcccaa gcccaaggac 240
accctgtaca tcacccggga gcccgaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagta caacagcacc taccgggtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccg 480
gcgccaatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggtcagc ccagggagcc ccaggtgtac 540
accctgcctc cctctcggga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgctgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccacccctcc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgacagtgg acaagagccg gtggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttgc acaaccacta cacccagaaa agcctgagcc tctcccccgg caagcggaag 840
aagaggagcc tcagccagga ggacgctccc cagacccccc ggccagtggc cgaaatcgtg 900
cccagcttca tcaacaagga tacagagaca attaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct cacactgagc gagatgcagc ccgccctgcc acagttgcag 1020
cagcacgtgc ccgtactcaa ggacagcagc ctccttttcg aggagttcaa gaagctgatc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgacagt agcccaagcg aactcaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcaggaaaaa gagacagctg tatagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgta ccaagcggag cttggcccgg ttctgc 1236
<210> 230
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 230
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg aggtggtggc tcaggcggcg ggggatccgg cggtggtggt 180
agcggcggag gcgggtctgg tggcggcggt tcagggggag ggggcagtgg gggaggaggc 240
tctttccaga gctcctcctc caaggcccca ccccctagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc caaggagggg gtggctccgg gggcggtgga 360
tcgggtggag gcggctcagg tggcgggggt tctggggggg gcggatctgg cggaggaggg 420
tcggggggtg ggggatcaca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 231
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 231
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg cggcgggggg tcagggggag gagggtccgg gggaggcggg 180
agcggtggag gcggctccgg tggtgggggt tctggcggcg gtggcagtgg gggaggggga 240
tccttccaga gctcatcctc caaggctcct cccccgagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc caggggggcg gcggctcagg cgggggtggt 360
agtggcggag gaggatctgg agggggcggg tcaggagggg gtggaagcgg ggggggtggc 420
tctggtggcg ggggctctca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 232
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 232
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg agggggtgga tctggggggg gcggcagcgg tgggggcggg 180
tccggcggag gtggaagtgg cggggggggt tcaggagggg gaggctctgg aggcggagga 240
agtttccaga gctcctcctc aaaggcgcct cccccaagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc caaggtggcg gtggtagcgg gggtggtggg 360
tcaggcggcg gcggatcggg tggcggaggg tctggtggag gtgggagcgg cgggggcggt 420
agcggcggtg gcggctccca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 233
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 233
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg tggcggcgga tctggcggtg gggggtcggg tgggggaggt 180
tccgggggag gcggttcagg gggcgggggc tcaggcggtg gtggaagtgg gggcggcggc 240
agtttccaga gctccagctc caaggccccg cctcccagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggagggg gagggtcagg aggcggaggg 360
tccgggggtg gaggatcggg aggtggcggt agcggcgggg ggggcagcgg aggcggggga 420
tctggtggtg ggggttctca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 234
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 234
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg cggcggtggc agtgggggcg gagggtctgg tggtgggggc 180
tctggcgggg gaggaagtgg agggggcggc tctggaggtg gaggctcagg tgggggtggg 240
agcttccaga gctctagcag caaggcgcca cccccaagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggcggcg gaggttctgg gggagggggt 360
tccggcgggg ggggcagcgg aggggggggt agcgggggtg gcgggagcgg aggaggggga 420
tccggtggcg gaggatccca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 235
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 235
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg tggagggggg tcagggggag ggggctccgg cgggggaggc 180
tcgggaggag gcggttcagg tgggggcggc tctggtggag gcggatccgg tggcgggggg 240
agcttccaga gcagctcgtc caaggcccct cccccaagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggtgggg gaggaagcgg aggtggtggc 360
tccgggggcg gtggcagtgg cggagggggt tctggggggg gcgggtcggg tggaggtgga 420
agcgggggtg gtggatccca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 236
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 236
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg gggtggtgga tcaggtggag gcggcagtgg cgggggcggt 180
tctgggggag gagggtcggg agggggggga tctggtggtg gcggaagtgg cggcggtgga 240
tccttccaga gcagtagctc taaggcccca ccgcccagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggtgggg gtggctccgg cggcggaggc 360
tctgggggcg gcgggagcgg agggggcggg tcaggcgggg ggggctcagg gggaggtggg 420
tccggtggag gtggaagtca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 237
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 237
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg cggaggtgga tcaggcggcg gtgggtccgg gggtggcggg 180
tcagggggcg gagggtccgg cggcggggga agcggtggcg gtggctccgg aggaggaggc 240
tctttccaga gctcctcatc taaggccccg ccgcccagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggcggtg gaggcagtgg tgggggaggg 360
agtggaggcg gggggagtgg gggcgggggt tcgggtggtg gaggtagcgg gggcggcgga 420
tctggtggcg gaggaagcca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 238
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 238
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg gggaggtggg tcaggtggcg ggggatccgg cggagggggt 180
tcaggaggcg gcgggagcgg aggtggtggt tcgggtggag gggggagcgg tggcggagga 240
agcttccaga gctcctcctc taaggccccg ccccctagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc caggggggcg gtggaagcgg cgggggcgga 360
tctgggggtg ggggctctgg tgggggaggg agtggggggg gaggctcagg gggtggtggc 420
tctgggggcg gcggctcaca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 239
<211> 510
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 239
atgggcgtga aggtgctgtt cgccctgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggccgg gagctggtgc gggcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcgg cggaggcgga agcggcgggg ggggcagtgg tggaggtggt 180
tctggtggcg ggggatctgg aggcggcggg tcaggcggtg ggggcagcgg aggagggggc 240
tctttccaga gctcctcatc taaggctcct cccccaagcc tgcccagccc cagccggctg 300
cccggcccca gcgacacccc catcctgccc cagggagggg gagggagtgg gggcggcggc 360
tctgggggtg gaggctcagg gggcggagga agcggagggg gtggtagcgg gggcgggggt 420
agtggggggg gtggctccca gctgtacagc gccctggcca acaagtgctg ccacgtgggc 480
tgcaccaagc ggagcctggc ccggttctgc 510
<210> 240
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 240
atgggcgtga aagtgctgtt tgcgctgatt tgcattgcgg tggcggaagc ggactcatgg 60
atggaggaag ttattaaatt atgcggccgc gaattagttc gcgcgcagat tgccatttgc 120
ggcatggagc ccaagagcag cgacaagacc cacaccagcc cccccagccc cgcccccgag 180
ctgctgggcg gcagcagcgt gttcctgttc ccccccaagc ccaaggacac cctctacatc 240
accagggagc ccgaggtgac ctgcgtggtg gtggacgtga gccacgagga ccccgaggtg 300
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagggag 360
gagcagtaca acagcaccta cagggtggtg agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg 420
ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg agcaacaagg ccctgcccgc ccccatcgag 480
aagaccatca gcaaggccaa gggccagccc agggagcccc aggtgtacac cctgcccccc 540
agcagggacg agctgaccaa gaaccaggtg agcctgacct gcctggtgaa gggcttctac 600
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagaca 660
accccccccg tgctggacag cgacggcagc ttcttcctgt acagcaagct gaccgtggac 720
aagagcaggt ggcagcaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 780
aaccactaca cccagaagag cctgagcctg agccccggca agaggaagag cacctggagc 840
aaaaggtctc tgagccagga agatgctcct cagacaccta gaccagtggc agaaattgtg 900
ccatccttca tcaacaaaga tacagaaacc ataaatatga tgtcagaatt tgttgctaat 960
ttgccacagg agctgaagtt aaccctgtct gagatgcagc cagcattacc acagctacaa 1020
caacatgtac ctgtattaaa agattccagt cttctctttg aagaatttaa gaaacttatt 1080
cgcaatagac aaagtgaagc cgcagacagc agtccttcag aattaaaata cttaggcttg 1140
gatactcatt ctcgaaaaaa gagacaactc tacagtgcat tggctaataa atgttgccat 1200
gttggttgta ccaaaagatc tcttgctaga ttttgc 1236
<210> 241
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 241
atgcccagac tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgttacttaa ccagttcagc 60
agagccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag agagctggtg 120
agagcccaga tcgccatctg cggcatgtct acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcaccagag agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagt acaacagcac ctacagagtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cccagccgag acgaactgac caagaatcag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtatagcaa gctgaccgtg gacaagtcaa gatggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 840
ctgagccccg gcaagagaaa gaagagaagc ctgagccagg aggacgcccc ccagacacct 900
agacccgtgg ccgagatcgt gcccagcttt atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg ccagtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat cagaaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agagacaact gtacagcgcc 1200
ctggccaata agtgctgcca cgtgggctgc accaagagaa gcctggccag attctgc 1257
<210> 242
<211> 531
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 242
atgcctaggt tgtttttctt tcacttacta ggagtatgtt tactcctgaa tcaattttct 60
agggctgtcg cagatagttg gatggaggag gtaatcaaat tatgtggaag agagttagtt 120
cgtgctcaaa tagctatttg tggtatgtca acttggagcg gagggggcgg ctcgggcgga 180
gggggaagcg gagggggtgg ctcaggaggg ggcggttctg gtggcggcgg atcaggtggt 240
ggaggatcag gaggcggggg cagctttcag tcgtcgtcat ccaaagcgcc tccaccctca 300
ctgccctccc cctccagatt acctgggccc tccgataccc ccattttgcc acaagggggt 360
ggaggatccg gggggggagg cagtggtggt ggtggtagcg gtggtggggg ctccggtgga 420
ggcggaagtg gtgggggagg atccgggggg ggcggatcgc agctctattc cgctcttgcc 480
aataaatgtt gccacgtcgg ttgtacaaaa cggtccctgg ccagattctg c 531
<210> 243
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 243
atgcccagac tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgttacttaa ccagttcagc 60
agagccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag agagctggtg 120
agagcccaga tcgccatctg cggcatgtct acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcaccagag agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagt acaacagcac ctacagagtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc cccagccgag acgaactgac caagaatcag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtatagcaa gctgaccgtg gacaagtcaa gatggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 840
ctgagccccg gcaagagaaa gaagagaagc ctgagccagg aggacgcccc ccagacacct 900
agacccgtgg ccgagatcgt gcccagcttt atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg ccagtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat cagaaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agagacaact gtacagcgcc 1200
ctggccaata agtgctgcca cgtgggctgc accaagagaa gcctggccag attctgc 1257
<210> 244
<211> 1236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 244
atgggcgtga aggtgctgtt cgcactgatc tgcatcgccg tggccgaggc cgacagctgg 60
atggaggagg tgatcaagct gtgcggcaga gagctggtga gagcccagat cgccatctgc 120
ggcatgagca cctggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag cccccccagc 180
cccgctcccg agctgctggg cggcagcagc gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac 240
accctgtaca taaccagaga gccagaggtg acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag 300
gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagaca 360
aagcccagag aggagcagta caacagcacc tacagagtgg tgagcgtgct gaccgtgctg 420
caccaggact ggctgaacgg caaggagtat aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgccc 480
gcccccatcg agaagaccat cagcaaggcc aagggccagc ccagagagcc ccaggtgtac 540
accctgcccc ccagcagaga cgagctgacc aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg 600
aagggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aactacaaga ccaccccccc cgtgctggac agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag 720
ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac 780
gaggccttac acaaccacta cacccagaag agcctaagcc tgagccccgg caagagaaag 840
aagagaagtc tgagccagga ggacgccccc cagaccccca gacccgtggc cgagatcgtg 900
ccctccttca ttaacaagga caccgagacc atcaacatga tgagcgagtt cgtggccaac 960
ctgccccagg agctgaagct gaccctgagc gaaatgcaac ccgccctgcc ccagctgcaa 1020
cagcacgtgc ccgtgctgaa ggacagcagc ctgctgttcg aggagttcaa aaagctgatc 1080
agaaacagac agagcgaggc cgccgactcc agccccagcg agctgaagta cctgggcctg 1140
gacacccaca gcagaaagaa gagacagctg tacagcgccc tggccaacaa gtgctgccac 1200
gtgggctgca ccaagagaag cctggccaga ttctgc 1236
<210> 245
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 245
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcaccaggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctacagggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cccagggagc cccaggtgta caccctgccc cccagcaggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 840
ctgagccccg gcaagaggaa gaaaaggtct ctgagccagg aagatgctcc tcagacacct 900
agaccagtgg cagaaattgt gccatccttc atcaacaaag atacagaaac cataaatatg 960
atgtcagaat ttgttgctaa tttgccacag gagctgaagt taaccctgtc tgagatgcag 1020
ccagcattac cacagctaca acaacatgta cctgtattaa aagattccag tcttctcttt 1080
gaagaattta agaaacttat tcgcaataga caaagtgaag ccgcagacag cagtccttca 1140
gaattaaaat acttaggctt ggatactcat tctcgaaaaa agagacaact ctacagtgca 1200
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1257
<210> 246
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 246
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcaccaggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctacagggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cccagggagc cccaggtgta caccctgccc cccagcaggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagca ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 840
ctgagccccg gcaagaggaa gaaaaggtct ctgagccagg aagatgctcc tcagacacct 900
agaccagtgg cagaaattgt gccatccttc atcaacaaag atacagaaac cataaatatg 960
atgtcagaat ttgttgctaa tttgccacag gagctgaagt taaccctgtc tgagatgcag 1020
ccagcattac cacagctaca acaacatgta cctgtattaa aagattccag tcttctcttt 1080
gaagaattta agaaacttat tcgcaataga caaagtgaag ccgcagacag cagtccttca 1140
gaattaaaat acttaggctt ggatactcat tctcgaaaaa agagacaact ctacagtgca 1200
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1257
<210> 247
<211> 918
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 247
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg aggtgcagct gctggagagc 180
ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggcagc ctgaggctga gctgcgtggc cagcggcttc 240
accttcaaca gcagcgccat gagctgggtg aggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg 300
gtgagcgcca tcagcggcag cggcgacagg acctactacg ccgacagcgt gaagggcagg 360
ttcaccatca gcagggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgagg 420
gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcacc accgaccccc ccaggtacca ctacaacggc 480
ctggccgtga ggggccaggg caccaccgtg accgtgagca gcaaaaggtc tctgagccag 540
gaagatgctc ctcagacacc tagaccagtg gcagaaattg tgccatcctt catcaacaaa 600
gatacagaaa ccataaatat gatgtcagaa tttgttgcta atttgccaca ggagctgaag 660
ttaaccctgt ctgagatgca gccagcatta ccacagctac aacaacatgt acctgtatta 720
aaagattcca gtcttctctt tgaagaattt aagaaactta ttcgcaatag acaaagtgaa 780
gccgcagaca gcagtccttc agaattaaaa tacttaggct tggatactca ttctcgaaaa 840
aagagacaac tctacagtgc attggctaat aaatgttgcc atgttggttg taccaaaaga 900
tctcttgcta gattttgc 918
<210> 248
<211> 918
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 248
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg aggtgcagct gctggagagc 180
ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggcagc ctgaggctga gctgcgccgc cagcggcttc 240
accttcagca gctacgccat gagctgggtg aggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg 300
gtgagcgcca tcagcggcag cggcggcagc acctactacg ccgacagcgt gaagggcagg 360
ttcaccatca gcagggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa cagcctgagg 420
gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcacc aaggaccccc ccaggtacca ctacaccggc 480
ctggccgtga ggggccaggg caccaccgtg accgtgagca gcaaaaggtc tctgagccag 540
gaagatgctc ctcagacacc tagaccagtg gcagaaattg tgccatcctt catcaacaaa 600
gatacagaaa ccataaatat gatgtcagaa tttgttgcta atttgccaca ggagctgaag 660
ttaaccctgt ctgagatgca gccagcatta ccacagctac aacaacatgt acctgtatta 720
aaagattcca gtcttctctt tgaagaattt aagaaactta ttcgcaatag acaaagtgaa 780
gccgcagaca gcagtccttc agaattaaaa tacttaggct tggatactca ttctcgaaaa 840
aagagacaac tctacagtgc attggctaat aaatgttgcc atgttggttg taccaaaaga 900
tctcttgcta gattttgc 918
<210> 249
<211> 531
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 249
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggtccg ggtcgaccga tagcggttcc 180
gacacttcct ccggaaactc cggggacggc aacagcggct tccagtcgag ctcctcaaag 240
gccccacctc cctcactgcc ctccccttct cggctccctg gaccgtccga tactccgatc 300
ctgccgcaat tccagtccag cagctccaag gcccctccac cgtcactgcc atccccgtcg 360
aggttgccgg gaccctcaga cacgcccatc ctgcctcagg gcagcaccga ctcgggatcc 420
gatacctcgt ccgggaactc cggcgacggg aactcgggac aactctacag tgcattggct 480
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg c 531
<210> 250
<211> 441
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 250
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggtccg gaggaggagg gtccttccag 180
tcaagcagct ccaaggcccc tccaccaagc ctccctagcc cgtccaggct tccgggaccg 240
tcggatactc ccatcctgcc ccagttccag tcctcgtcgt ccaaggctcc ccctccatcc 300
ctgccctcac cctcacggct gccaggaccg tccgacaccc ctatcctgcc gcaaggcggt 360
ggagggtcac aactctacag tgcattggct aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa 420
agatctcttg ctagattttg c 441
<210> 251
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 251
atgccgagac tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttctct 60
cgagccgtgg cggatagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgtggccg tgagctcgtc 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct cgccccccag ccctgccccc gagctcctgg gcggcagctc cgtcttcctg 240
ttcccgccca agccgaagga taccctgtac atcaccaggg agcccgaggt gacctgtgtc 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttta attggtacgt cgacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaactccac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgacagtcct gcatcaggac tggctgaacg gcaaggaata caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccaa 540
ccccgggaac cccaggtcta caccctgcct cccagcaggg atgagctgac caagaaccag 600
gttagcctga cctgcctggt caagggcttc tacccctccg acattgccgt ggagtgggag 660
agcaacggtc agcccgagaa caactacaag accacccctc ccgtgctcga cagcgacggt 720
tccttcttcc tgtacagcaa gctgacggtg gacaagagcc gctggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgct ccgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 840
ctgtcacccg gcaagaggaa gaagcggagc ctgtcccagg aggatgcccc ccagacccct 900
agacctgtgg ccgaaattgt gccctccttt atcaacaagg acaccgaaac catcaatatg 960
atgtccgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaaac tcaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca acagcacgtg cccgtgctga aggactcatc tctgctgttc 1080
gaggaattca agaagctgat caggaacagg cagagcgagg ccgccgacag cagtcccagc 1140
gagctgaaat acctgggcct ggacacccac tcccgcaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtaggctgc accaaacgca gcctggcacg gttctgc 1257
<210> 252
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 252
atgccccgtc tcttcttctt ccacctcctc ggagtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgactcctg gatggaggaa gtgatcaagc tctgcggcag ggagctcgtg 120
agggcccaaa tcgccatctg cggcatgagc acctggtccg agcccaagag ctccgacaag 180
actcacacca gccccccgag ccccgccccc gagctgctgg gcgggagcag cgtgtttctg 240
ttccctccca agcccaagga caccctgtac atcacccgcg agccggaagt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tctcccacga ggaccccgag gtgaaattca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaagtgcaca atgcgaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctacagggta 420
gtcagcgtgc tgaccgtgct gcatcaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaaa 480
gtgtccaata aggctctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaagc caagggacag 540
cccagagagc cccaggtgta caccctgccc ccgagcaggg acgagctgac caagaaccag 600
gtcagcctga cctgcctggt gaaggggttt taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag acgacacccc cggtgctgga cagcgacggg 720
tctttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gataaatcca gatggcagca gggcaacgtc 780
ttcagctgct ccgtgatgca tgaggccctg cacaaccact acacgcagaa gtcactgtcc 840
ctgagccccg gcaagaggaa gaagcggagc ctgagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgtgg cggagatcgt gcctagcttc atcaacaagg acaccgagac tatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tcaccctgtc cgaaatgcag 1020
ccggccctcc cgcagctgca gcagcacgta cccgtgctga aagattccag tctgctgttt 1080
gaggagttca agaagctgat caggaatcgg cagtccgagg ccgccgacag cagcccgtcc 1140
gagttgaagt acctcggcct ggatacccat tcgcggaaga agaggcaact gtactccgcc 1200
ctggccaaca agtgctgtca cgtggggtgc acaaagagaa gcctggcccg tttctgc 1257
<210> 253
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 253
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgtc tcctcctcaa ccaatttagc 60
cgtgccgtgg cggacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgtggtag agagctcgtc 120
cgtgcccaga ttgccatctg tggcatgtcc acctggagcg agcccaagtc cagcgacaag 180
acccacacca gcccgcccag ccctgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttcccgccca agcccaagga cacactgtac ataacccggg agcccgaggt gacctgtgtg 300
gtggtcgacg tcagccacga ggaccccgag gtcaaattca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac taaaccccgg gaggaacaat acaactccac ctacagggtg 420
gtatccgtgc tgaccgtcct gcaccaggat tggctcaacg gcaaagagta taagtgcaaa 480
gtgtccaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacga tcagcaaggc caagggccag 540
ccccgggagc cccaggtcta cacgctgccc cccagcagag acgagcttac caagaaccag 600
gtttccctga cctgcctggt gaagggcttc tacccgagcg acattgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa taactacaag accacgcccc ccgtgctcga ctccgacggc 720
agcttctttc tctactccaa gctgaccgtt gacaagagcc gctggcagca gggaaacgtg 780
ttcagctgca gcgtcatgca cgaggccctg cacaaccact acacgcagaa gtccctgagc 840
ctgtcccccg gcaaacgtaa gaagaggagc ctgagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
aggccagtgg ccgagatcgt cccctccttc ataaacaagg acaccgaaac catcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctcag cgagatgcag 1020
cccgccctcc cccaactcca gcagcacgtg cccgtgctca aggacagcag cctgctgttt 1080
gaggagttca agaaactgat ccgcaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctcaagt acctgggtct ggacacccat agcaggaaga agaggcagct gtacagtgcc 1200
ctggcgaaca agtgctgcca cgtgggctgc accaagagga gccttgccag gttctgc 1257
<210> 254
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 254
atgccgagac ttttcttctt ccacttgctc ggcgtgtgcc tcctccttaa ccaatttagc 60
agagccgtgg cagactcctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag ggagctcgtg 120
agggcgcaga tcgccatttg cggtatgtcc acatggagcg agcccaagag ctcagataag 180
acccacacca gccctcccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctc 240
ttcccgccca aacccaagga caccctgtac atcaccaggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtcgtcgacg tatcccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggggtg 360
gaggtgcata acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgtccgtgc tgacagtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtcagcaaca aagccctgcc cgcccccatc gagaagacca tctcaaaggc caaggggcag 540
ccccgcgagc cacaggtgta tacgctgccg cccagcagag acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt caagggcttc tatcccagcg acatcgccgt tgagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactataag accactccac ccgtcctgga cagcgatggg 720
agcttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagagcc gctggcagca gggcaatgtg 780
ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cataaccatt acacccagaa gtcgctgagc 840
ctgagccctg gcaagaggaa gaaacgcagc ctgagccagg aggatgcccc gcagacccct 900
cggccggtgg ccgagatcgt gccttccttc atcaacaagg acaccgagac aatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtagccaa tctgccccag gagctgaagc tgaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcaacacgtc ccggtgctca aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttta agaagctgat ccgcaacagg cagtccgagg ccgccgatag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct cgacacacat agcaggaaga agcggcagct ctactccgcc 1200
ctcgccaata agtgctgtca cgtgggctgc accaagagaa gcctggccag attttgc 1257
<210> 255
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 255
atgccccggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa tcagttctcc 60
agggccgtcg ccgactcctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcgggcg cgagctcgtg 120
agagcccaga ttgccatctg cggcatgtcc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacct cccctcccag ccccgcgccg gagctgctgg gcggcagcag cgtgtttctg 240
ttccctccca agcccaagga caccctgtac atcactaggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtcgtggatg tgagccacga agatccagag gtgaagttca attggtacgt cgacggcgtg 360
gaggtgcaca atgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctacagggtc 420
gtttccgtgc tcaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtcagcaaca aagccctacc cgcccccatc gagaagacaa tcagcaaagc caagggccag 540
cccagggagc cccaggtgta taccctccca ccctccaggg acgaactgac caagaatcag 600
gtcagcctga cctgccttgt caagggcttt taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc aacccgagaa caattacaag accaccccgc ccgtcctgga ctccgacggg 720
tccttcttcc tatacagcaa gctgaccgtg gacaagtcca gatggcagca agggaacgtg 780
ttctcctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaatcact acacgcagaa gagtctgagc 840
ctgagccccg ggaagcggaa gaagcgatcc ctgagccagg aggacgcccc gcagacaccc 900
cgccccgtgg ccgagattgt gcccagcttc atcaacaagg acaccgagac gatcaatatg 960
atgtccgagt tcgtggccaa cctgccacag gaactgaagc tgaccctgag cgaaatgcag 1020
cctgcgcttc cgcagctgca acaacatgtc cccgtgctga aggacagcag cctgctgttt 1080
gaggagttca agaagctgat aaggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gaactgaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agaggcaact gtatagcgca 1200
ctggctaata agtgctgtca cgtgggctgc accaaacgca gcctggccag gttctgc 1257
<210> 256
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 256
atgcccagac tgttcttctt ccacctcctc ggggtgtgcc tcctcctcaa ccagttctcc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agagctcgtc 120
agggcccaga tcgccatctg cggtatgagc acgtggagcg agcccaagag ctccgacaag 180
acccatacaa gccccccgag ccccgcgccc gaactcctgg ggggctccag cgtgtttctg 240
ttcccgccca agcccaaaga caccctgtac atcacccggg agcctgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgtcccacga agaccctgag gtgaaattca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcata acgccaagac caaaccgcgt gaggagcaat acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgtcggtgc tgaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgtaag 480
gtgtccaaca aggctctccc cgcccccatc gagaagacca tctccaaggc caagggccag 540
ccccgcgagc cccaggtgta caccctcccg cccagccgcg acgagctgac caagaaccag 600
gtgtccctga cctgcttggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggaatgggag 660
tccaacggcc agccggagaa caactacaag accactcccc ccgtcctgga cagcgacggc 720
tccttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtc gacaagtccc gctggcagca ggggaacgtg 780
ttctcctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acactcagaa gtctctgtcc 840
cttagccccg gcaagcggaa gaagaggagc ctgagccagg aggacgcccc ccaaacgcct 900
cgccccgtgg ccgagattgt gcccagcttc atcaacaagg acaccgaaac catcaatatg 960
atgtccgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgtc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg cccgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttta agaagctgat cagaaacaga caatccgagg cagccgactc ctcccccagc 1140
gagctgaaat acctgggcct ggacacccat tcccggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtgggctgc accaagagaa gcctggccag gttctgc 1257
<210> 257
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 257
atgccccgcc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgtc tcctccttaa ccagttctcc 60
cgtgccgtgg ccgatagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg agagctcgtg 120
agggcacaga tcgccatctg tggcatgtcc acctggagcg aacccaagag ctccgataag 180
acccacacca gccccccttc tcccgccccc gagctgctcg gcggcagctc ggtgttcctg 240
ttcccaccca aacccaagga caccctctac atcaccagag agcccgaggt aacctgtgtg 300
gtcgtggatg tgtcccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggggtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaacagcac ctaccgcgtg 420
gtgagcgtgc tgacagtgct gcaccaggat tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaata aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caaagggcag 540
cccagagaac cccaggtgta caccctgccc cccagccggg acgagctgac caagaaccaa 600
gtgagcctca cctgcctggt gaaggggttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggg 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagcc gctggcaaca ggggaacgtg 780
tttagctgta gcgtcatgca cgaggccctg cacaatcact acacccagaa gtccctgagc 840
ctgtcccccg gcaagaggaa gaagcgttcc ctgagccagg aggacgcccc ccagacaccc 900
aggccggtcg cagagatcgt gccctccttc atcaacaagg acaccgagac aatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gaactgaagc tcaccctgtc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctaca gcagcacgta cccgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat aaggaatcgc cagtccgagg ccgccgactc atcccctagc 1140
gagctgaagt acctcggtct ggacacccac agccgtaaga agaggcagct gtattccgcc 1200
ctggccaaca aatgctgcca tgtgggctgc accaagagaa gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 258
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 258
atgccccggc ttttcttctt ccacttactc ggcgtgtgcc ttctccttaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gtccaccgtc ccctgccccc gagttactgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttcccaccaa agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc tgccccgatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cctcgcgagc ctcaggtgta caccctgcca ccaagccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agccagagaa caactacaag accacaccac ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgacagtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggcccta cacaaccact acacccagaa gtccctgtct 840
ctgtcacccg gcaagcggaa gaagagatcc ctgagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggccagtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg ataccgagac gatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tcacactgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cgcaactcca gcagcacgtg ccagtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgctgacag ctctcctagc 1140
gaactgaagt acctgggcct ggacacccac agcaggaaga agcggcagct gtactcagcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgc actaagagaa gcctcgcccg gttctgc 1257
<210> 259
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 259
atgcccagac tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tatgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacct ccccgccgtc cccagctccc gagctgttag gaggcagcag cgtgttcctg 240
ttcccgccta agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggacccggag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc tgcacctatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
ccaagagagc ctcaggtgta caccctgcca cctagccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcctgagaa caactacaag accactccac ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctcaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggctctg cacaaccact acacccagaa gagtctgtcg 840
ctgagccccg gcaagcggaa gaagagaagc ctgagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggccagtgg cagagatcgt gcccagcttc atcaacaagg ataccgagac aattaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgcactgc ctcagttgca gcagcacgtg cctgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgactc cagcccatct 1140
gaactgaagt acctgggcct ggacacccac agccgcaaga agcgccagct gtactctgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggatgc acaaagcgtt ccctggcccg gttctgc 1257
<210> 260
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 260
atgccccggc ttttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tttgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccacctag cccggcaccc gagctcctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccctccaa agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc agcccctatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cctcgcgagc ctcaggtgta caccctgcct ccatcccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agccagagaa caactacaag accacccctc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gttgaccgtc gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagcccta cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 840
ttgagccccg gcaagcggaa gaagcgctcc ttgtcccagg aggacgcccc gcaaaccccc 900
cggccagtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg atacagagac aattaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tcacactgag cgagatgcag 1020
cccgctctgc cacagctcca gcagcacgtg cctgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgactc ctccccaagc 1140
gagctcaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agaggcagct ctacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgt accaagagaa gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 261
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 261
atgcccagac tgttcttctt ccacttattg ggcgtgtgct tgcttctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct ccccgccttc ccctgcaccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttccctccta agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggaccctgag gtgaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgtccaaca aggccctgcc tgccccaatc gagaagacca tctccaaggc caagggccag 540
ccacgggaac ctcaggtcta caccctgcct cctagccgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtgtccctca cctgcctcgt caagggcttc tacccttctg atatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggtc agcctgagaa caactacaag accacccctc ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaggctctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 840
ctgagccccg gcaagcgcaa gaagagaagc ctgtcacagg aggacgcccc ccagacccct 900
cgccctgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg acacggagac aatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctgccgcag gagctgaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgcccttc ctcagctcca gcagcacgtg cctgtcctga aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgatag ctcgccttcc 1140
gagctaaagt acctcggcct cgacacccac tcccggaaga agaggcagct gtatagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagagga gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 262
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 262
atgccccgtc tgttcttctt ccaccttctc ggcgtgtgcc tcctactcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct cgcctcctag cccagccccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttcccaccga agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggacccagag gtgaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgtccaaca aggccctgcc agccccaatc gagaagacca tctccaaggc caagggccaa 540
cctagagagc ctcaggtcta caccttgcct ccaagtcgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtgtccctca cctgcctcgt caagggcttc tacccaagcg acatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggcc agcctgagaa caactacaag accaccccgc ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tgtactccaa gctgaccgtc gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaggctctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 840
ctgagccccg gcaagcgcaa gaagagaagc ctcagccagg aggacgcccc ccagacccct 900
agaccggtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg acacagagac aatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa tctgcctcag gagcttaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgctttgc ctcagctcca gcagcacgtg cctgtgctga aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc aagcccatcc 1140
gagctgaagt acctcggcct cgacacccac tcccggaaga agaggcagct ctactccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagcggt ccctcgcccg cttctgc 1257
<210> 263
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 263
atgccccggt tgttcttctt ccaccttttg ggcgtgtgcc ttctcttgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct ctcctccaag ccctgcgccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttcccaccaa agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggacccagag gtcaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgtccaaca aggccctccc agccccaatc gagaagacca tctccaaggc caagggccaa 540
cctagagaac cacaggtcta cacactccct cctagccgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtgtccctca cctgcctcgt caagggcttc tacccatccg atatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggac agccggagaa caactacaag accacacctc ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctctcc 840
ctgagccccg gcaagcgcaa gaagagaagt cttagccagg aggacgcccc ccagacccct 900
agaccggtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg atacagagac gatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctgccacag gagctgaagc tgacactctc cgagatgcag 1020
cccgccctgc ctcagctcca gcagcacgtg ccagtgctga aggactcctc attactcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc tagcccttcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tcccggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagcggt cccttgcccg cttctgc 1257
<210> 264
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 264
atgccccggc tattcttctt ccacttactc ggcgtgtgcc tcctcttgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tttgcggccg ggagcttgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gccctccttc ccctgccccc gagttgctgg gaggcagcag cgtgttcctg 240
ttcccaccga agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggacccagag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc agcccctatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
cctagggagc cacaggtgta caccctgcca cctagccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agccggagaa caactacaag accaccccac ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgacggtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggctctg cacaaccact acacccagaa gagtttaagc 840
ttgtcacccg gcaagcggaa gaagcggtcc ctgagccagg aggacgcccc tcagaccccc 900
agacctgttg ccgagatcgt gcccagcttc atcaataagg ataccgaaac catcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc ctcagttgca gcagcacgtg cctgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgactc ctcccctagc 1140
gagctcaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agagacagct ctacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggttgc accaagcgca gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 265
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 265
atgccccggt tattcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcttgctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagttggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacct cccctcctag cccggcgccc gagctgctgg gaggcagcag cgtgttcctg 240
ttccctccta agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggacccagag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
ccacgcgagc ctcaggtgta caccctgcca cctagccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcctgagaa caactacaag accacccctc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgacggtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggctctg cacaaccact acacccagaa gtcactgagc 840
ctgtcacccg gcaagcggaa gaagagaagc ctgtcccagg aggacgcacc tcagaccccc 900
cggcctgtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaataagg ataccgaaac catcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgctctgc ctcagcttca gcagcacgtg cctgtcctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgactc tagccctagc 1140
gaactcaagt acctgggcct ggacacccac agcagaaaga agcgccagct ctacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggatgc accaagcgaa gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 266
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 266
atgcccagac tcttcttctt ccaccttttg ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct ccccgcctag ccctgccccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttccctccaa agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggacccggag gtgaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtatccaaca aggccctgcc tgctcctatc gagaagacca tctccaaggc caagggccaa 540
cctagagagc cacaggtcta caccctgcct ccgtcccgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtgtccctca cctgcctcgt caagggcttc taccctagcg acatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggcc agcctgagaa caactacaag accacccctc ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tttactccaa gctgaccgtc gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaggccctc cacaaccact acacccagaa gtccctctcg 840
ctctcccccg gcaagcgcaa gaagagatcc ctgtcgcagg aggacgcccc ccagacccct 900
agaccggtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg acacagaaac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cttgccacag gagctgaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctcc cacagctcca gcagcacgtg cctgtcctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgatag ctcaccttcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tccagaaaga agcggcagct gtactccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagagaa gcctcgcccg cttctgc 1257
<210> 267
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 267
atgccccgac tgttcttctt ccacttgctt ggcgtgtgcc tcctcttaaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct ctccgccaag cccagctccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttccctccta agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggacccagag gtcaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgtccaaca aggccctgcc tgcccctatc gagaagacca tctccaaggc caagggccag 540
cctagagagc ctcaggtcta caccctgcca ccttcgcgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtgtccctca cctgcctcgt caagggcttc tacccatccg acatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggcc aacctgagaa caactacaag accaccccac ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tgtactccaa gctgaccgtg gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gtccctcagc 840
ttgtcccccg gcaagcgcaa gaagcggtcc ctgtcccagg aggacgcccc ccagacccct 900
agacctgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg ataccgagac tatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctcccacag gagctgaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgctctgc cacagctcca gcagcacgtc cctgtgctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc cagccctagc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tccaggaaga agagacagct ctacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagagaa gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 268
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 268
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 240
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcacccggg agcccgaggt gacctgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 360
gaggtgcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagt acaacagcac ctaccgggtg 420
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 540
ccccgggagc cccaggtgta caccctgccc cccagccggg acgagctgac caagaaccag 600
gtgagcctga cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtgctgga cagcgacggc 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgaccgtg gacaagagcc ggtggcagca gggcaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 840
ctgagccccg gcaagcggaa gaagcggagc ctgagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg cccgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgc accaagcgga gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 269
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 269
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgcgatctg cgggatgagc acgtggagcg agccgaagag cagcgacaag 180
acgcacacga gcccgccgag cccggcgccg gagctgctgg gggggagcag cgtgttcctg 240
ttcccgccga agccgaagga cacgctgtac atcacgaggg agccggaggt gacgtgcgtg 300
gtggtggacg tgagccacga ggacccggag gtgaagttca actggtacgt ggacggggtg 360
gaggtgcaca acgcgaagac gaagccgagg gaggagcagt acaacagcac gtacagggtg 420
gtgagcgtgc tgacggtgct gcaccaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaag 480
gtgagcaaca aggcgctgcc ggcgccgatc gagaagacga tcagcaaggc gaaggggcag 540
ccgagggagc cgcaggtgta cacgctgccg ccgagcaggg acgagctgac gaagaaccag 600
gtgagcctga cgtgcctggt gaaggggttc tacccgagcg acatcgcggt ggagtgggag 660
agcaacgggc agccggagaa caactacaag acgacgccgc cggtgctgga cagcgacggg 720
agcttcttcc tgtacagcaa gctgacggtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtg 780
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggcgctg cacaaccact acacgcagaa gagcctgagc 840
ctgagcccgg ggaagaggaa gaagaggagc ctgagccagg aggacgcgcc gcagacgccg 900
aggccggtgg cggagatcgt gccgagcttc atcaacaagg acacggagac gatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggcgaa cctgccgcag gagctgaagc tgacgctgag cgagatgcag 1020
ccggcgctgc cgcagctgca gcagcacgtg ccggtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat caggaacagg cagagcgagg cggcggacag cagcccgagc 1140
gagctgaagt acctggggct ggacacgcac agcaggaaga agaggcagct gtacagcgcg 1200
ctggcgaaca agtgctgcca cgtggggtgc acgaagagga gcctggcgag gttctgc 1257
<210> 270
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 270
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtccg agcccaagtc ctccgacaag 180
acccacacct cccccccctc ccccgccccc gagctcctcg gcggctcctc cgtcttcctc 240
ttccccccca agcccaagga caccctctac atcacccgcg agcccgaggt cacctgcgtc 300
gtcgtcgacg tctcccacga ggaccccgag gtcaagttca actggtacgt cgacggcgtc 360
gaggtccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagt acaactccac ctaccgcgtc 420
gtctccgtcc tcaccgtcct ccaccaggac tggctcaacg gcaaggagta caagtgcaag 480
gtctccaaca aggccctccc cgcccccatc gagaagacca tctccaaggc caagggccag 540
ccccgcgagc cccaggtcta caccctcccc ccctcccgcg acgagctcac caagaaccag 600
gtctccctca cctgcctcgt caagggcttc tacccctccg acatcgccgt cgagtgggag 660
tccaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ccgtcctcga ctccgacggc 720
tccttcttcc tctactccaa gctcaccgtc gacaagtccc gctggcagca gggcaacgtc 780
ttctcctgct ccgtcatgca cgaggccctc cacaaccact acacccagaa gtccctctcc 840
ctctcccccg gcaagcgcaa gaagcgctcc ctctcccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cgccccgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctcccccag gagctcaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctcc cccagctcca gcagcacgtc cccgtcctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc ctccccctcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct ctactccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagcgct ccctcgcccg cttctgc 1257
<210> 271
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 271
atgccccgcc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtctgcc tcctcctcaa ccagttctcc 60
cgcgccgtgg cggacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg cgagctcgtg 120
cgcgcccaga tcgccatttg cggcatggag cccaagagct ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgcccagcc ccgcccctga gctgctgggc ggatccagcg tcttcctgtt tccccccaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacaagggag cccgaggtca cctgcgtggt ggtggacgtc 300
agccacgagg accccgaggt gaaatttaac tggtacgtag acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt aagcgtcctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtata agtgcaaagt gagcaacaag 480
gccctgcccg cccccatcga gaagaccatc agcaaggcca aggggcagcc ccgggagcca 540
caggtgtaca ccctgccccc cagcagggac gagctgacca agaaccaggt gagtctcaca 600
tgcctggtta agggcttcta cccatccgac atcgccgtgg agtgggaaag caacggtcag 660
cccgagaaca actacaagac cacgcccccg gtgctggact ccgacggcag cttcttcctg 720
tactccaagc tcaccgtgga caagtccagg tggcagcagg ggaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcatg aggcactgca caaccactac acgcagaagt ccctgtctct gagcccaggc 840
aagcgcaaga gcacctggag caagaggtcc ctgagccaag aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcctgtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg acaccgagac gatcaacatg 960
atgagcgaat ttgtggccaa tctgccccag gagctgaagc tcaccctctc cgaaatgcag 1020
cccgccctcc cccaactgca acaacacgtc cccgtgctga aggacagcag cctgctgttt 1080
gaggaattta agaagctcat cagaaacaga cagagcgagg ccgcggactc cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccat agcaggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtgggctgc accaagagaa gcctggccag gttctgc 1257
<210> 272
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 272
atgccccgac tcttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttctct 60
cgagccgtgg ccgattcctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agaactcgtg 120
agagcccaga tcgccatttg tgggatggag cccaagagca gcgacaagac ccatactagc 180
ccaccctccc ccgcccccga gctgctgggg ggcagcagcg tgttcctgtt tcccccgaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt tgtcgacgtg 300
tcacacgaag accccgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtcga ggtgcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacgt acagagtggt gtcagtcctg 420
accgtcctcc accaggattg gctcaacggc aaagagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcccg cccccatcga gaagacaatc tccaaggcca agggccagcc gagggagccc 540
caggtgtata ccctgccccc ctcaagggac gagctgacca agaatcaggt gtccctcaca 600
tgcctggtga aggggttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggacag 660
cccgagaaca actacaagac cacacccccc gtgctggaca gcgatggaag tttcttcctg 720
tatagcaaac tgaccgtgga caaatcacgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aagccctgca caaccactac acccagaagt cattatctct gagccccggc 840
aagagaaaga gcacgtggag caagaggagc ctctcccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgtgg ccgagatcgt gccctccttt attaacaagg acaccgagac aatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa tctgccccag gagctcaagc tcaccctgag cgagatgcag 1020
cccgctctgc cccagctgca gcaacacgtg cccgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccgcaaccgg caaagcgagg ccgctgacag ctcgcccagc 1140
gagctgaagt acctggggct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtggggtgc actaagcgga gcctggccag attttgc 1257
<210> 273
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 273
atgcccagac tgttcttctt tcacctcctc ggcgtgtgtc ttttactcaa ccaatttagc 60
agagccgtgg ccgactcttg gatggaggag gtgatcaagc tctgtggccg cgagcttgtc 120
cgggcccaga tcgctatctg cggaatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacacctcc 180
ccacccagtc ccgcccccga gctgctcggg ggcagcagcg tgttcctgtt ccctcctaag 240
cccaaggaca cgctgtacat caccagggag cccgaggtca cctgcgtggt ggtggacgtg 300
tcccatgagg accccgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggttcacaac 360
gctaagacca agccccgcga ggaacagtac aacagcacct atcgggtcgt gtcagttctg 420
accgtcctcc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaaa 480
gccctccccg ccccgatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc ccgagagccc 540
caggtgtaca cccttccccc cagcagggac gagctcacaa agaatcaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta cccctccgac atcgcggtgg aatgggagag caacggccag 660
ccggagaaca actataagac aacacccccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctc 720
tacagcaagc tgaccgtcga caagtccaga tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc 780
gtgatgcacg aagccctgca caatcactac actcagaaat ccctgtccct gagccccggc 840
aagcggaagt ccacctggag taagcggagt ctgagccagg aggacgcccc ccaaaccccc 900
cgacccgtgg ccgagatcgt gccctccttc atcaataagg acaccgagac tatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgacgctgtc tgagatgcag 1020
cctgccctgc cccagctgca gcagcacgtg ccagtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttta agaagctaat cagaaaccgc cagtccgagg ccgccgacag cagcccctcc 1140
gagctcaagt acctgggcct ggacacccat tcccgcaaga agaggcagct gtactcggcc 1200
ctggccaaca agtgctgtca cgtcggatgt accaagagaa gtctggccag gttctgc 1257
<210> 274
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 274
atgccgcggc ttttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tactccttaa ccaattctcc 60
cgagccgtcg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaaac tctgcggcag ggagctcgtg 120
agggcccaga tagccatctg cggcatggaa cccaagtcca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccgcccagcc ccgcccccga gctgctgggc ggctcaagcg tgttcctgtt cccgcccaag 240
cccaaggaca ccctgtacat caccagagag ccggaggtca cctgcgtggt ggtggacgtg 300
tctcacgagg accccgaagt caagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcacaat 360
gcaaagacca agccgagaga ggaacagtac aactcgacgt accgggtcgt gagcgtcctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaagt gtcgaataag 480
gccctgcccg cccccatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc cagagaaccg 540
caggtataca ccctgccccc ttcccgggac gagctgacca agaaccaggt gtctctcacg 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagtc caatggtcag 660
cccgagaaca actataagac cacgccgccc gtgctggact cagacggctc cttcttcctc 720
tacagcaaac tgacggtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt ctcctgcagc 780
gtcatgcacg aggccctgca caaccactac actcagaagt ccctgagcct gagccccggg 840
aagcgaaagt ctacctggag caagcggagc ctgagccaag aggacgcccc ccaaacaccc 900
cggcccgtgg ccgagatagt gcctagcttc attaacaagg acaccgagac tatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggcgaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgtc cgagatgcag 1020
ccggccctgc ctcagctgca gcagcacgtg cccgtgctga aggacagcag cctgctgttt 1080
gaggagttca agaagctgat ccgcaaccgc caaagcgaag ccgccgactc cagccctagc 1140
gagctcaagt acctgggcct ggacacgcac agcaggaaga agaggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtcgggtgc accaagagga gcctggctag gttttgc 1257
<210> 275
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 275
atgccccgcc tgttcttctt ccacctcctt ggcgtgtgcc tcctcctaaa tcagttcagc 60
cgcgccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcgggag ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcca gcgacaagac ccacacctcg 180
ccccccagcc ccgcccccga gctgctgggc gggagcagcg ttttcctgtt tccacctaag 240
cccaaggaca ctctgtacat caccagagag cccgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg accccgaggt gaagttcaac tggtacgtcg atggcgtcga ggtgcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcagtac aacagcacct acagagtggt gtccgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacgga aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcccg cgccgatcga gaagaccata agcaaggcca agggccaacc gagggagccc 540
caggtgtaca ccctgccccc cagcagagac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtca agggcttcta ccccagcgat atcgccgtgg aatgggagtc caacggacag 660
ccggagaaca actacaagac cacgcccccc gtgctcgaca gcgacgggtc cttcttcctg 720
tactcgaagc tgaccgtgga caagagccgc tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgctcc 780
gtgatgcatg aggccctgca caaccactat acgcagaagt cgctcagcct gagccccggc 840
aagcgaaaga gcacctggag caagcgaagc cttagccagg aggatgcccc ccagacaccc 900
cggccagtgg ctgagatcgt ccccagcttc atcaacaaag acactgagac aattaatatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa tctgccccag gagctcaagc tgaccctcag cgagatgcag 1020
cccgctctgc cccagctgca acagcacgtt cccgtgctga aggacagctc tctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat caggaaccga cagagcgagg ccgccgactc cagcccctcg 1140
gagctcaaat acctcggcct cgacacccac agcaggaaga agaggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagaggt cactcgccag gttctgc 1257
<210> 276
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 276
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa tcagttcagc 60
agagccgtgg ccgatagctg gatggaggag gtcattaagc tctgcggcag agagctcgtg 120
cgagcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgataagac ccatacctct 180
cctcccagcc ccgcccccga gctgctgggc ggctcctccg tgttcctgtt ccctcccaag 240
cccaaagaca ccctgtacat caccagagaa cccgaggtga cctgtgtcgt ggtggacgtg 300
agccacgagg acccggaggt gaagttcaat tggtacgtgg atggtgtcga ggtgcacaac 360
gccaagacga agcccaggga ggagcagtat aacagcactt atcgcgtggt cagcgtgctg 420
accgtcctgc accaagactg gctgaacggt aaggagtata agtgcaaggt cagcaacaaa 480
gccctgcccg ctcccatcga gaagacgatc agcaaggcca agggccagcc cagggagccc 540
caggtgtaca ctctgccccc cagcagagac gagctgacca agaatcaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga aggggttcta ccccagcgac atcgccgtcg agtgggagag caacggccag 660
cccgagaaca actataagac cacacccccg gtgctggact ccgacggaag cttcttcctg 720
tactccaagc tcacagttga caagagcaga tggcagcagg gcaatgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggccctcca caaccactac acccagaaat ccctcagcct gagccccggc 840
aagaggaagt cgacctggag caagaggagc ctgtcccagg aggacgcccc ccaaacgccc 900
cggccggtgg ccgagatcgt ccccagcttc atcaacaagg acaccgagac tataaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctcaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgcactgc cccaactgca gcagcacgtg cccgtgctga aggacagcag cctcctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat caggaacagg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggact ggacacccac agccggaaga agcgccagct ctacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca tgtggggtgc accaagcggt ccctggcccg gttctgc 1257
<210> 277
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 277
atgccccgac tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgtc tcttgcttaa tcagttcagc 60
cgcgccgtcg ccgactcctg gatggaggaa gtgatcaagc tctgtggccg ggagctcgtg 120
cgggctcaga ttgcaatctg cgggatggag cccaagtcgt ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgccctcgc ccgcccccga gctgcttggc ggcagcagcg tgttcctgtt tccccccaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggaa cccgaggtga cctgcgtcgt ggtggacgtg 300
tcccacgagg accccgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaat 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaatac aactccacct atcgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gtcaaacaag 480
gcgctgcccg cccccatcga gaagacaatc tccaaggcca agggccagcc ccgggagccc 540
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggac gagctgacca agaaccaggt tagccttaca 600
tgcctggtca agggcttcta cccctccgac atcgccgtgg agtgggagtc caacggccag 660
cccgagaaca actacaagac cacacccccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctt 720
tactctaagc tgaccgtgga caagagccgc tggcaacagg gcaatgtctt ctcctgctcc 780
gtgatgcacg aggccctgca caatcactac acccagaagt ccctgagcct gtcccctgga 840
aagcggaagt ccacctggag caagaggagc ctgtcccagg aggatgcccc tcagaccccc 900
aggcccgtgg ccgagatcgt gccttcattt attaacaagg acaccgagac gatcaacatg 960
atgtccgagt ttgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tcaccctcag cgaaatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg cccgtgctga aggactcctc gctgctcttt 1080
gaggagttta agaagctgat ccggaacagg cagagcgagg ccgcagattc cagcccctcg 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcgtcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca aatgttgtca cgtgggctgc actaagagga gcctggccag attttgt 1257
<210> 278
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 278
atgccccggt tattcttctt ccacttgctt ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tatgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacacctcc 180
ccaccatccc ctgcccccga gctgctggga ggcagcagcg tgttcctgtt cccacctaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg accctgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcctg cccctatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc tcgggagcca 540
caggtgtaca ccctgcctcc ttcccgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggtcag 660
cctgagaaca actacaagac cactccaccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc ttaccgtcga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aagccctgca caaccactac acccagaaga gtctgtcact gagccccggc 840
aagaggaagt ccacctggtc aaagcggagc ctgagccagg aggacgctcc tcaaaccccc 900
cggccagtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaataagg acacagagac aatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgacgctcag cgagatgcag 1020
cccgccctcc ctcaactaca gcagcacgtg ccggtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgctgacag ctccccttcc 1140
gagcttaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agaggcagct gtacagtgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgc actaagaggt cactggcccg gttctgc 1257
<210> 279
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 279
atgccccggc ttttcttctt ccacttactc ggcgtgtgcc ttctccttaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
cctcctagtc ctgcgcccga gctgcttggc ggcagcagcg tgttcctgtt cccaccgaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg acccggaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcctg ccccaatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccaacc acgagagccg 540
caggtgtaca ccctgcctcc tagccgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggtcag 660
cctgagaaca actacaagac cacacctccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc tgacagttga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gtctgtctct gtcccctggc 840
aagaggaagt ccacctggtc caagaggtcc ctgagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggcctgtgg ctgagatcgt gcccagcttc atcaataagg ataccgagac aatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa tttgccacag gagctgaagc tgacgctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cgcagctcca gcaacacgtg cctgtcctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgactc ttctccgtcc 1140
gaactgaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct ctactccgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggatgc accaagcgaa gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 280
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 280
atgccccggt tattcttctt ccacttatta ggcgtgtgct tactcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagttggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
cctcctagcc ctgcccccga gctgctggga ggcagcagcg tgttcctgtt ccctccgaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg accctgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgccag ctcctatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc tagagagcct 540
caggtgtaca ccctgccgcc aagccgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggacag 660
cctgagaaca actacaagac caccccaccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc tcaccgtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aagccctgca caaccactac acccagaagt ccctatctct gagccccggc 840
aagagaaagt ccacctggag caagagaagt ctgagccagg aggacgctcc acagaccccc 900
cggccagtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg atacagaaac cattaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgacactgag cgagatgcag 1020
cccgctctgc ctcagcttca gcagcacgtg cctgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgatag cagccctagt 1140
gaactcaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtatagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgc acaaagcgta gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 281
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 281
atgccccggc ttttcttctt ccacctcctt ggcgtgtgcc tcctccttaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgccaagcc cagcccccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt ccctccaaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg acccagaggt taagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 480
gccctgcctg ccccaatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc tcgggagcct 540
caggtctaca ccctgccacc tagtcgcgac gagctcacca agaaccaggt gtccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta ccctagcgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggccag 660
ccagagaaca actacaagac cacccctccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctg 720
tactccaagc tcactgtgga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aagctctcca caaccactac acccagaagt ccctctcact gagccccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagcggagc ctctcgcagg aggacgcccc ccagacacca 900
cgccctgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg acacggagac gatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctgccacag gagctgaagc tgaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cgcagctcca gcagcacgtg ccagtgctga aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgctgactc aagcccttca 1140
gagcttaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct gtacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc acaaagcgaa gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 282
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 282
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctt ggcgtgtgcc tcttactcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacacctct 180
ccaccgagcc cagcccccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt ccctcctaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 480
gccctgcctg cccctatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc acgggagcca 540
caggtctaca cactgcctcc gagccgcgac gagctcacca agaaccaggt gtccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta ccctagcgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggccag 660
ccggagaaca actacaagac caccccgccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctg 720
tactccaagc tgacagtgga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aggctctgca caaccactac acccagaagt ccctcagcct gtctcccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagaggagc ttgtcccagg aggacgcccc ccagactcca 900
cgccctgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaataagg acacagagac gatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa ccttcctcag gagctgaagc tgaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cgcagctcca gcagcacgtg ccagtgctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgacag tagcccttcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct gtattcagcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc acgaagcgga gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 283
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 283
atgcccaggt tgttcttctt ccaccttttg ggcgtgtgcc tccttctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacacctct 180
cctccgagtc cagcacccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt cccgcctaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg acccagaggt caagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 480
gcccttcctg cccctatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc acgggagcct 540
caggtctaca ccctgcctcc tagccgcgac gagctcacca agaaccaggt gtccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta ccctagcgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggtcag 660
cctgagaaca actacaagac caccccaccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctt 720
tactccaagc tgaccgtgga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaagt ccctctctct gagccccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagagatct ctcagccagg aggacgcccc ccagacccca 900
cgcccagtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg ataccgaaac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctgccacag gagctgaagc tcacactctc cgagatgcag 1020
cccgcgctcc cacagctcca gcagcacgtg cctgtgctga aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc cagtcctagc 1140
gaactgaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct gtacagcgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc acaaagcgca gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 284
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 284
atgccccggc ttttcttctt ccacctactc ggcgtgtgcc ttctccttaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagcttgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacacctct 180
ccgccgagcc cagctcccga gctcctgggc ggcagcagcg tgttcctgtt cccaccaaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg acccggaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcctg cccctatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc gcgggagcct 540
caggtgtaca ccctgcctcc ttctcgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 660
cctgagaaca actacaagac cacccctccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagt taaccgtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggcactgca caaccactac acccagaaga gtctgagtct cagccccggc 840
aagcggaagt caacctggag caagcgaagc ctgtcccagg aggacgcccc tcagaccccc 900
cggcctgtgg cggagatcgt gcccagcttc atcaacaagg ataccgagac aataaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgactctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cacaattgca gcagcacgtg cctgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag tagccctagc 1140
gaacttaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtactccgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgt accaagagga gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 285
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 285
atgccccggc ttttcttctt ccacttgctc ggcgtgtgcc tacttctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacacctct 180
cctcctagcc ctgcccccga gctcctgggc ggcagcagcg tgttcctgtt cccacctaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg acccagaagt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgccag cccctatcga gaagaccatc agcaaggcca agggacagcc aagagagcct 540
caggtgtaca ccctgccacc tagccgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 660
cctgagaaca actacaagac caccccaccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc tcacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggccctcca caaccactac acacagaagt ccctgagcct tagccccggc 840
aagagaaaga gcacctggtc caagagaagt ctgtcccagg aggacgcccc tcagaccccc 900
cggccagtgg ctgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg atacagagac tatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgcccttc cacaactgca gcagcacgtg ccagtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgatag cagcccaagc 1140
gaactcaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtacagtgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggatgc accaagcgga gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 286
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 286
atgccccggc ttttcttctt ccacctcttg ggcgtgtgcc tcttgctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacaccagc 180
ccaccttcac cggcccccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt cccacctaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ttccaacaag 480
gccctcccag ccccaatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc tcgagagcca 540
caggtctaca ccctgccacc ttcccgcgac gagctcacca agaaccaggt gtccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta cccttccgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggacaa 660
ccagagaaca actacaagac caccccgccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctg 720
tactccaagc tgaccgtgga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaagt ccctctcact ctcccccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagagatcc ctgtcccagg aggacgcccc ccagacacca 900
cgtcctgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg atacagaaac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa ccttcctcag gagctgaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccttgc cacagctcca gcagcacgtt cctgtgctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc cagccctagc 1140
gagctaaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct ctattccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc acaaagagaa gcctcgcccg cttctgc 1257
<210> 287
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 287
atgcccagac tcttcttctt ccaccttctc ggcgtgtgcc tccttctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacaccagc 180
ccacctagcc cagcccccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt ccctccgaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gtccaacaag 480
gccctgcctg ccccaatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc tagagagcct 540
caggtctaca ccctgcctcc aagccgcgac gagctcacca agaaccaggt ttccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta cccttctgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggccag 660
ccagagaaca actacaagac cacccctccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctg 720
tactccaagc tgaccgtgga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aggccctcca caaccactac acccagaagt ccctctccct ctcacccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagcggtcc ctgtcccagg aggacgcccc ccagacccct 900
cggccggtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg ataccgagac gatcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa tctcccacag gagctgaagc ttaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctgc cgcagctcca gcagcacgtg cctgtcctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgattc ctctccttcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct gtattccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc acgaagagga gcctggcccg cttctgc 1257
<210> 288
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 288
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccccccagcc ccgcccccga gctgctgggc ggcagcagcg tgttcctgtt cccccccaag 240
cccaaggaca ccctgtacat cacccgggag cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg accccgaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcagtac aacagcacct accgggtggt gagcgtgctg 420
accgtgctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gccctgcccg cccccatcga gaagaccatc agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc 540
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggac gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc 600
tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 660
cccgagaaca actacaagac cacccccccc gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 720
tacagcaagc tgaccgtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gagccccggc 840
aagcggaaga gcacctggag caagcggagc ctgagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgtgg ccgagatcgt gcccagcttc atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggccaa cctgccccag gagctgaagc tgaccctgag cgagatgcag 1020
cccgccctgc cccagctgca gcagcacgtg cccgtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagctgaagt acctgggcct ggacacccac agccggaaga agcggcagct gtacagcgcc 1200
ctggccaaca agtgctgcca cgtgggctgc accaagcgga gcctggcccg gttctgc 1257
<210> 289
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 289
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgcgatctg cgggatggag ccgaagagca gcgacaagac gcacacgagc 180
ccgccgagcc cggcgccgga gctgctgggg gggagcagcg tgttcctgtt cccgccgaag 240
ccgaaggaca cgctgtacat cacgagggag ccggaggtga cgtgcgtggt ggtggacgtg 300
agccacgagg acccggaggt gaagttcaac tggtacgtgg acggggtgga ggtgcacaac 360
gcgaagacga agccgaggga ggagcagtac aacagcacgt acagggtggt gagcgtgctg 420
acggtgctgc accaggactg gctgaacggg aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag 480
gcgctgccgg cgccgatcga gaagacgatc agcaaggcga aggggcagcc gagggagccg 540
caggtgtaca cgctgccgcc gagcagggac gagctgacga agaaccaggt gagcctgacg 600
tgcctggtga aggggttcta cccgagcgac atcgcggtgg agtgggagag caacgggcag 660
ccggagaaca actacaagac gacgccgccg gtgctggaca gcgacgggag cttcttcctg 720
tacagcaagc tgacggtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtgtt cagctgcagc 780
gtgatgcacg aggcgctgca caaccactac acgcagaaga gcctgagcct gagcccgggg 840
aagaggaaga gcacgtggag caagaggagc ctgagccagg aggacgcgcc gcagacgccg 900
aggccggtgg cggagatcgt gccgagcttc atcaacaagg acacggagac gatcaacatg 960
atgagcgagt tcgtggcgaa cctgccgcag gagctgaagc tgacgctgag cgagatgcag 1020
ccggcgctgc cgcagctgca gcagcacgtg ccggtgctga aggacagcag cctgctgttc 1080
gaggagttca agaagctgat caggaacagg cagagcgagg cggcggacag cagcccgagc 1140
gagctgaagt acctggggct ggacacgcac agcaggaaga agaggcagct gtacagcgcg 1200
ctggcgaaca agtgctgcca cgtggggtgc acgaagagga gcctggcgag gttctgc 1257
<210> 290
<211> 1257
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 290
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatggag cccaagtcct ccgacaagac ccacacctcc 180
cccccctccc ccgcccccga gctcctcggc ggctcctccg tcttcctctt cccccccaag 240
cccaaggaca ccctctacat cacccgcgag cccgaggtca cctgcgtcgt cgtcgacgtc 300
tcccacgagg accccgaggt caagttcaac tggtacgtcg acggcgtcga ggtccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcagtac aactccacct accgcgtcgt ctccgtcctc 420
accgtcctcc accaggactg gctcaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaag 480
gccctccccg cccccatcga gaagaccatc tccaaggcca agggccagcc ccgcgagccc 540
caggtctaca ccctcccccc ctcccgcgac gagctcacca agaaccaggt ctccctcacc 600
tgcctcgtca agggcttcta cccctccgac atcgccgtcg agtgggagtc caacggccag 660
cccgagaaca actacaagac cacccccccc gtcctcgact ccgacggctc cttcttcctc 720
tactccaagc tcaccgtcga caagtcccgc tggcagcagg gcaacgtctt ctcctgctcc 780
gtcatgcacg aggccctcca caaccactac acccagaagt ccctctccct ctcccccggc 840
aagcgcaagt ccacctggtc caagcgctcc ctctcccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cgccccgtcg ccgagatcgt cccctccttc atcaacaagg acaccgagac catcaacatg 960
atgtccgagt tcgtcgccaa cctcccccag gagctcaagc tcaccctctc cgagatgcag 1020
cccgccctcc cccagctcca gcagcacgtc cccgtcctca aggactcctc cctcctcttc 1080
gaggagttca agaagctcat ccgcaaccgc cagtccgagg ccgccgactc ctccccctcc 1140
gagctcaagt acctcggcct cgacacccac tcccgcaaga agcgccagct ctactccgcc 1200
ctcgccaaca agtgctgcca cgtcggctgc accaagcgct ccctcgcccg cttctgc 1257
<210> 291
<211> 1233
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 291
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc aactctacag tgcattggct 240
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg cggcagcaca 300
gactccggct ctgataccag ctccggcaac agcggcgatg gcaattccgg cggcagctcc 360
ggaggaggct ctggctctag ctccggctct agcggcagcg gcggctccgg cggcagcaca 420
gactccggct ctgataccag ctccggcaac agcggcgatg gcaattccgg cggcagctcc 480
ggaggaggct ctggctctag ctccggctct agcggcagcg gcggctccgg cgagcccaag 540
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagctgct gggcggcagc 600
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctgt acatcaccag ggagcccgag 660
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 720
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 780
acctacaggg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 840
tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 900
gccaagggcc agcccaggga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcag ggacgagctg 960
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 1020
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 1080
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag caggtggcag 1140
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1200
aagagcctga gcctgagccc cggcaagagg aag 1233
<210> 292
<211> 993
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 292
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc aactctacag tgcattggct 240
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg cgagcccaag 300
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagctgct gggcggcagc 360
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctgt acatcaccag ggagcccgag 420
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 480
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 540
acctacaggg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 600
tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 660
gccaagggcc agcccaggga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcag ggacgagctg 720
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 780
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 840
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag caggtggcag 900
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 960
aagagcctga gcctgagccc cggcaagagg aag 993
<210> 293
<211> 1053
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 293
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc aactctacag tgcattggct 240
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg cggcagcaca 300
gactccggct ctgataccag ctccggcaac agcggcgatg gcaattccgg cgagcccaag 360
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagctgct gggcggcagc 420
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctgt acatcaccag ggagcccgag 480
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctacaggg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccaggga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcag ggacgagctg 780
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 900
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag caggtggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgagccc cggcaagagg aag 1053
<210> 294
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 294
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgcggcag cacagactcc ggctctgata ccagctccgg caacagcggc 600
gatggcaatt ccggcgagcc caagagcagc gacaagaccc acaccagccc ccccagcccc 660
gcccccgagc tgctgggcgg cagcagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc 720
ctgtacatca ccagggagcc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac 780
cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag 840
cccagggagg agcagtacaa cagcacctac agggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac 900
caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc 960
cccatcgaga agaccatcag caaggccaag ggccagccca gggagcccca ggtgtacacc 1020
ctgcccccca gcagggacga gctgaccaag aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaag 1080
ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac 1140
tacaagacca ccccccccgt gctggacagc gacggcagct tcttcctgta cagcaagctg 1200
accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag 1260
gccctgcaca accactacac ccagaagagc ctgagcctga gccccggcaa gaggaag 1317
<210> 295
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 295
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agagagccca agagcagcga caagacccac accagccccc ccagccccgc ccccgagctg 540
ctgggcggca gcagcgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct gtacatcacc 600
agggagcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaggaccc cgaggtgaag 660
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc cagggaggag 720
cagtacaaca gcacctacag ggtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 780
aacggcaagg agtacaagtg caaggtgagc aacaaggccc tgcccgcccc catcgagaag 840
accatcagca aggccaaggg ccagcccagg gagccccagg tgtacaccaa gccccccagc 900
agggacgagc tgaccaagaa ccaggtgagc ctgtcctgcc tggtgaaggg cttctacccc 960
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1020
gtccccgtgc tggacagcga cggcagcttc cgcctggcca gctatctgac cgtggacaag 1080
agcaggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1140
cactacaccc agaagagcct gagcctgagc cccggcaaga ggaagggcag cacagactcc 1200
ggctctgata ccagctccgg caacagcggc gatggcaatt ccggccaact ctacagtgca 1260
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1317
<210> 296
<211> 978
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 296
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agagaggtgc agctgctgga gagcggcggc ggcctggtgc agcccggcgg cagcctgagg 540
ctgagctgcg ccgccagcgg cttcaccttc agcagctacg ccatgagctg ggtgaggcag 600
gcccccggca agggcctgga gtgggtgagc gccatcagcg gcagcggcgg cagcacctac 660
tacgccgaca gcgtgaaggg caggttcacc atcagcaggg acaacagcaa gaacaccctg 720
tacctgcaga tgaacagcct gagggccgag gacaccgccg tgtactactg caccaaggac 780
ccccccaggt accactacac cggcctggcc gtgaggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 840
agcagcggca gcacagactc cggctctgat accagctccg gcaacagcgg cgatggcaat 900
tccggccaac tctacagtgc attggctaat aaatgttgcc atgttggttg taccaaaaga 960
tctcttgcta gattttgc 978
<210> 297
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 297
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agagagccca agagcagcga caagacccac accagccccc ccagccccgc ccccgagctg 540
ctgggcggca gcagcgtgtt cctgttcccc cccaagccca aggacaccct gtacatcacc 600
agggagcccg aggtgacctg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaggaccc cgaggtgaag 660
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cacaacgcca agaccaagcc cagggaggag 720
cagtacaaca gcacctacag ggtggtgagc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 780
aacggcaagg agtacaagtg caaggtgagc aacaaggccc tgcccgcccc catcgagaag 840
accatcagca aggccaaggg ccagcccagg gagccccagg tgtacaccct gccccccagc 900
agggacgagc tgaccaagaa ccaggtgagc ctgacctgcc tggtgaaggg cttctacccc 960
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1020
ccccccgtgc tggacagcga cggcagcttc ttcctgtaca gcaagctgac cgtggacaag 1080
agcaggtggc agcagggcaa cgtgttcagc tgcagcgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1140
cactacaccc agaagagcct gagcctgagc cccggcaaga ggaagggcag cacagactcc 1200
ggctctgata ccagctccgg caacagcggc gatggcaatt ccggccaact ctacagtgca 1260
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1317
<210> 298
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 298
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgcggcag cacagactcc ggctctgata ccagctccgg caacagcggc 600
gatggcaatt ccggcgagcc caagagcagc gacaagaccc acaccagccc ccccagcccc 660
gcccccgagc tgctgggcgg cagcagcgtg ttcctgttcc cccccaagcc caaggacacc 720
ctgtacatca ccagggagcc cgaggtgacc tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaggac 780
cccgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag 840
cccagggagg agcagtacaa cagcacctac agggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcac 900
caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtga gcaacaaggc cctgcccgcc 960
cccatcgaga agaccatcag caaggccaag ggccagccca gggagcccca ggtgtacacc 1020
aagcccccca gcagggacga gctgaccaag aaccaggtga gcctgtcctg cctggtgaag 1080
ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc cgagaacaac 1140
tacaagacca ccgtccccgt gctggacagc gacggcagct tccgcctggc cagctatctg 1200
accgtggaca agagcaggtg gcagcagggc aacgtgttca gctgcagcgt gatgcacgag 1260
gccctgcaca accactacac ccagaagagc ctgagcctga gccccggcaa gaggaag 1317
<210> 299
<211> 978
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 299
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgcggcag cacagactcc ggctctgata ccagctccgg caacagcggc 600
gatggcaatt ccggcgaggt gcagctgctg gagagcggcg gcggcctggt gcagcccggc 660
ggcagcctga ggctgagctg cgccgccagc ggcttcacct tcagcagcta cgccatgagc 720
tgggtgaggc aggcccccgg caagggcctg gagtgggtga gcgccatcag cggcagcggc 780
ggcagcacct actacgccga cagcgtgaag ggcaggttca ccatcagcag ggacaacagc 840
aagaacaccc tgtacctgca gatgaacagc ctgagggccg aggacaccgc cgtgtactac 900
tgcaccaagg acccccccag gtaccactac accggcctgg ccgtgagggg ccagggcacc 960
accgtgaccg tgagcagc 978
<210> 300
<211> 1317
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 300
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcg agcccaagag cagcgacaag 240
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagctgctgg gcggcagcag cgtgttcctg 300
ttccccccca agcccaagga caccctgtac atcaccaggg agcccgaggt gacctgcgtg 360
gtggtggacg tgagccacga ggaccccgag gtgaagttca actggtacgt ggacggcgtg 420
gaggtgcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagt acaacagcac ctacagggtg 480
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 540
gtgagcaaca aggccctgcc cgcccccatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 600
cccagggagc cccaggtgta caccaagccc cccagcaggg acgagctgac caagaaccag 660
gtgagcctgt cctgcctggt gaagggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 720
agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accaccgtcc ccgtgctgga cagcgacggc 780
agcttccgcc tggccagcta tctgaccgtg gacaagagca ggtggcagca gggcaacgtg 840
ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgagc 900
ctgagccccg gcaagaggaa gaaaaggtct ctgagccagg aagatgctcc tcagacacct 960
agaccagtgg cagaaattgt gccatccttc atcaacaaag atacagaaac cataaatatg 1020
atgtcagaat ttgttgctaa tttgccacag gagctgaagt taaccctgtc tgagatgcag 1080
ccagcattac cacagctaca acaacatgta cctgtattaa aagattccag tcttctcttt 1140
gaagaattta agaaacttat tcgcaataga caaagtgaag ccgcagacag cagtccttca 1200
gaattaaaat acttaggctt ggatactcat tctcgaaaaa agagacaact ctacagtgca 1260
ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt accaaaagat ctcttgctag attttgc 1317
<210> 301
<211> 714
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 301
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc aactctacag tgcattggct 240
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg cggcagcaca 300
gactccggct ctgataccag ctccggcaac agcggcgatg gcaattccgg cgaggtgcag 360
ctgctggaga gcggcggcgg cctggtgcag cccggcggca gcctgaggct gagctgcgcc 420
gccagcggct tcaccttcag cagctacgcc atgagctggg tgaggcaggc ccccggcaag 480
ggcctggagt gggtgagcgc catcagcggc agcggcggca gcacctacta cgccgacagc 540
gtgaagggca ggttcaccat cagcagggac aacagcaaga acaccctgta cctgcagatg 600
aacagcctga gggccgagga caccgccgtg tactactgca ccaaggaccc ccccaggtac 660
cactacaccg gcctggccgt gaggggccag ggcaccaccg tgaccgtgag cagc 714
<210> 302
<211> 1053
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 302
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagcg gcagcacaga ctccggctct 180
gataccagct ccggcaacag cggcgatggc aattccggcc aactctacag tgcattggct 240
aataaatgtt gccatgttgg ttgtaccaaa agatctcttg ctagattttg cggcagcaca 300
gactccggct ctgataccag ctccggcaac agcggcgatg gcaattccgg cgagcccaag 360
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagctgct gggcggcagc 420
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctgt acatcaccag ggagcccgag 480
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 540
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaggagca gtacaacagc 600
acctacaggg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 660
tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 720
gccaagggcc agcccaggga gccccaggtg tacaccaagc cccccagcag ggacgagctg 780
accaagaacc aggtgagcct gtcctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 840
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccaccgt ccccgtgctg 900
gacagcgacg gcagcttccg cctggccagc tatctgaccg tggacaagag caggtggcag 960
cagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1020
aagagcctga gcctgagccc cggcaagagg aag 1053
<210> 303
<211> 555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 303
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tcctgctgaa ccagttcagc 60
agggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggcag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgccccgc aaaccccccg gccggtcgcg gagatagtgc ccagcttcat aaacaaggac 240
accgagacca tcaatatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
acgctgagcg agatgcagcc ggccctgccg cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tcctgttcga ggagttcaag aagctgatca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccatag caggaagaag 480
cgccagctgt acagcgccct ggctaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagaggagc 540
ctggcccggt tctgc 555
<210> 304
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 304
atgccccgcc tcttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctactcaa ccagtttagc 60
agggccgtgg ccgatagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgccccac aaaccccgcg ccccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttt gtcgccaacc tgccccagga gctcaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgcct cagctgcagc agcacgtgcc agtgctgaaa 360
gactccagcc tgctctttga agagttcaag aagctgatca ggaacagaca gagcgaggcc 420
gctgacagca gcccctcaga gctgaagtac ctggggctgg atacccatag ccgcaagaag 480
cggcagctgt actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcggagc 540
ctcgcccgat tctgtggcgg cggagggtcc ggcggcggcg gcagcggtgg aggcgggagc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtccgcca gtgtgggcga tagagtcacc 660
atcacgtgca gggcctccag gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggcgc ccaagctgct gatcctggcc ttcagcaggc tgcagtccgg ggtgcccagc 780
cggttctccg gctccggcag cggcaccgac tttaccctga ccatcagcag cctgcagcct 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac gttcggtcag 900
ggcactaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 305
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 305
atgccccgcc tcttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctactcaa ccagtttagc 60
agggccgtgg ccgatagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgccccac aaaccccgcg ccccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttt gtcgccaacc tgccccagga gctcaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgcct cagctgcagc agcacgtgcc agtgctgaaa 360
gactccagcc tgctctttga agagttcaag aagctgatca ggaacagaca gagcgaggcc 420
gctgacagca gcccctcaga gctgaagtac ctggggctgg atacccatag ccgcaagaag 480
cggcagctgt actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcggagc 540
ctcgcccgat tctgtggcgg cggagggtcc ggcggcggcg gcagcggtgg aggcgggagc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtccgcca gtgtgggcga tagagtcacc 660
atcacgtgca gggcctccag gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggcgc ccaagctgct gatcctggcc ttcagcaggc tgcagtccgg ggtgcccagc 780
cggttctccg gctccggcag cggcaccgac tttaccctga ccatcagcag cctgcagcct 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac gttcggtcag 900
ggcactaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 306
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 306
atgccccggc tgttcttctt ccacctactc ggcgtctgcc tcctcctaaa ccagttttcc 60
cgcgccgtgg ccgactcctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agagctcgtg 120
agggcccaga tcgcgatttg cggcatgtcc acctggagca agaggagcct cagccaggag 180
gacgcgcccc aaaccccgag gcccgtggcc gagatcgtgc cgagctttat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gtccgagttt gtggctaatc tgccccagga gctcaagctc 300
acactgtccg agatgcagcc cgccctgccc caactgcagc agcacgtccc cgtgctcaag 360
gacagcagcc tcctcttcga ggaattcaag aagctcatcc gcaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gcccctcaga gctgaagtac ctgggcctcg acacccacag ccggaagaag 480
aggcagctgt actccgccct ggccaacaaa tgctgccatg tgggctgcac aaagaggagc 540
ctggcccggt tttgcggagg tggtgggagc ggcggtggcg gttcaggcgg cggcggttcc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga ccgtgtgacc 660
atcacctgcc gcgccagccg acccatcggc accatgctgt cctggtacca gcagaagccg 720
gggaaggccc caaagctgct gattctggcc tttagccggc tgcagagcgg ggtgcccagc 780
agattcagcg gctcggggag cgggaccgac tttacgctga ccatcagctc cctgcagccc 840
gaggatttcg caacgtacta ctgtgcccag gccggcaccc accccactac tttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgt 924
<210> 307
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 307
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgtc tcctcctcaa ccagttcagc 60
agagccgtcg ccgattcttg gatggaggag gtgatcaagt tgtgcggccg ggagctcgtg 120
agggctcaga tcgccatctg cggcatgtca acctggagca agcggtcgct gagccaggag 180
gacgcccctc agaccccgag gcccgtggcc gagatcgtgc ctagcttcat caacaaggac 240
accgagacaa tcaacatgat gagcgagttt gtggcgaatc tgccccagga gctgaagctc 300
accctcagcg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagtttaag aagctgatcc ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gcccctctga actgaagtat ctcgggctgg acacccacag ccggaagaag 480
cgccagctgt actccgccct ggccaacaaa tgctgccacg tggggtgcac caaacggagc 540
ctggcccggt tctgtggcgg cggcggctcc ggcggcggtg ggtctggagg cggcggctcg 600
gatatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgtccgcct ccgtgggcga cagggtgacc 660
atcacctgcc gggcctctag gcccatcggg accatgctca gctggtacca gcagaaacca 720
ggcaaggccc ctaagctgct gatcctggca ttcagccgcc tgcagagcgg cgtcccctcc 780
aggttcagcg gcagcggtag cggaacggac ttcaccctca ccattagctc cctccagccc 840
gaggacttcg ccacctacta ctgtgcacag gccggtaccc accccacgac cttcggccag 900
ggcacaaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 308
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 308
atgcctaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgtc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgactcctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggcag agagctcgtc 120
cgagcccaga tagccatctg cggcatgagc acctggagca agaggagcct gagtcaggag 180
gacgcccctc agacaccccg gcccgtggct gagatcgtgc ccagcttcat taacaaagac 240
accgaaacca tcaacatgat gtccgagttc gtggccaatc tgccacagga gctcaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctctttga ggagttcaag aagctgatcc gcaaccgaca gagcgaggct 420
gccgatagca gcccttccga actcaaatac ctgggcctgg acacacacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggctaacaag tgttgccacg tagggtgcac caaacgcagc 540
ctggccagat tctgcggcgg cggcggctcc ggcggaggcg gatcaggcgg cggcggcagc 600
gatatccaga tgactcagag ccccagctcc ctgagcgcct ccgttgggga ccgggtgacc 660
atcacctgca gagcgagccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca acagaagcca 720
ggcaaggccc cgaagctgct gattctcgcc ttcagcaggc tgcaaagcgg cgtgcccagc 780
aggttctccg gctccggcag cggcacagac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccg 840
gaggacttcg ccacctacta ttgtgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccaa 900
ggcacaaagg tggaaatcaa gagg 924
<210> 309
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 309
atgcccagac tcttcttctt ccatctactc ggtgtgtgtc tcctcctcaa tcagtttagc 60
cgggccgttg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggcag ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agagatccct gtcgcaggag 180
gacgcgccac agactcctcg gcccgtggcc gagatcgtgc ccagctttat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttc gtggcaaatc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc tgccttgcct cagctgcagc agcatgtgcc cgtgctcaaa 360
gatagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aaactgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gcccctctga gctgaagtac ctggggctgg acacgcactc ccggaagaag 480
agacagctct atagcgccct ggccaacaag tgctgtcatg tgggatgcac caagagaagc 540
ctcgcccgct tctgcggagg cggaggcagc ggcggtggcg gtagcggagg cggcgggtcc 600
gacatacaga tgacccagag cccctcctcc ctgagtgcct ccgtcggcga ccgggtgacc 660
atcacgtgcc gcgccagccg gcccatcggc acaatgctgt cctggtacca gcagaagccc 720
gggaaggcgc ccaagctgct gatcctggcg ttctcccggc tgcagtccgg cgtgcccagc 780
aggttcagcg gctcaggctc cggtaccgac ttcaccctga ctataagcag cctgcagccg 840
gaggattttg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc acccaaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 310
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 310
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgccccgc agactccgcg gccagtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgaaacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgctctgccg cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gcagattctt ctcctagcga gctcaagtac ctgggcctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagaggtca 540
ctggcccggt tctgcggcgg cggtggatct ggcggaggag gctcgggagg cggcggcagc 600
gacatccaga tgacccagag cccaagctcc ctgtccgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 660
atcacctgcc gggccagccg gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctgct gatcctggcc ttctctaggc tgcagagcgg cgtgccgagc 780
cggttctcgg gcagcggctc cggcaccgac ttcaccctga ctatctcgag cctccagccg 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 311
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 311
atgcccaggc tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctaaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tctgcggccg ggagctcgtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcccctc agacgccacg gccggtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacaa tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccg cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgactcca gccccagcga attgaagtac ctgggcctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagaggagt 540
ctggcccggt tctgcggcgg aggcggaagc ggtggaggcg gctctggcgg cggtggctcg 600
gacatccaga tgacccagag cccgtcctcc ctgtccgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 660
atcacctgcc gggccagccg gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctgct gatcctggcc ttcagcaggc tgcagagcgg cgtgccgagc 780
cggttcagcg gtagcggctc cggcaccgac ttcaccctga caatcagctc gctgcagcca 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 312
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 312
atgcccagac tgttcttctt ccacctcttg ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgctccgc agaccccgcg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacga tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tcccacagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctgccg cagctccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gcggacagca gcccgtccga gctgaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagaggagc 540
ctggcccgct tctgcggcgg aggcggcagc ggcggcggtg gatccggtgg cggcggaagc 600
gacatccaga tgacccagag cccgagcagc ctgagcgcct ccgtcggcga ccgcgtcacc 660
atcacctgcc gcgcctcccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ctaagctcct catcctcgcc ttctcccgcc tccagtccgg cgtgccgagc 780
cggttctccg gaagcggctc gggcaccgac ttcaccctca ccatctcctc actccagccg 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tcgagatcaa gcgc 924
<210> 313
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 313
atgcccagac tgttcttctt ccacctcctc ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgccccgc agacgccgcg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacaa tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tgccgcagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctgccg caactccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gccgactcca gcccctccga gctgaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagcggagc 540
ctggcccgct tctgcggcgg tggcggaagc ggaggcggag gcagcggcgg aggtggctcc 600
gacatccaga tgacccagag ccctagctct ctgagcgcct ccgtcggcga ccgcgtcacc 660
atcacctgcc gcgcctcccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctcct catcctcgcc ttctcccgcc tccagtccgg cgtgccgtcc 780
cggttcagcg gctccggcag cggaaccgac ttcaccctga cgatcagctc cctgcagcct 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tcgagatcaa gcgc 924
<210> 314
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 314
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcggccg ggagctggtg 120
cgggcccaga tcgccatctg cggcatgagc acctggagca agcggagcct gagccaggag 180
gacgcacccc agaccccacg gcccgtggcc gagatcgtgc ccagcttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gagcgagttc gtggccaacc tgccccagga gctgaagctg 300
accctgagcg agatgcagcc cgccctgccc cagctgcagc agcacgtgcc cgtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatcc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccagcga gctgaagtac ctgggcctgg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagctgt acagcgccct ggccaacaag tgctgccacg tgggctgcac caagcggagc 540
ctggcccggt tctgcggcgg cggcggcagc ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggcagc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 660
atcacctgcc gggccagccg gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagctgct gatcctggcc ttcagccggc tgcagagcgg cgtgcccagc 780
cggttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gcgg 924
<210> 315
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 315
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtgatcaagc tgtgcgggag ggagctggtg 120
agggcgcaga tcgcgatctg cgggatgagc acgtggagca agaggagcct gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccgag gccggtggcg gagatcgtgc cgagcttcat caacaaggac 240
acggagacga tcaacatgat gagcgagttc gtggcgaacc tgccgcagga gctgaagctg 300
acgctgagcg agatgcagcc ggcgctgccg cagctgcagc agcacgtgcc ggtgctgaag 360
gacagcagcc tgctgttcga ggagttcaag aagctgatca ggaacaggca gagcgaggcg 420
gcggacagca gcccgagcga gctgaagtac ctggggctgg acacgcacag caggaagaag 480
aggcagctgt acagcgcgct ggcgaacaag tgctgccacg tggggtgcac gaagaggagc 540
ctggcgaggt tctgcggagg cggtgggagc ggtggcggag ggagcggcgg aggcgggagc 600
gacatccaga tgacgcagag cccgagcagc ctgagcgcga gcgtggggga cagggtgacg 660
atcacgtgca gggcgagcag gccgatcggg acgatgctga gctggtacca gcagaagccg 720
gggaaggcgc cgaagctgct gatcctggcg ttcagcaggc tgcagagcgg ggtgccgagc 780
aggttcagcg ggagcgggag cgggacggac ttcacgctga cgatcagcag cctgcagccg 840
gaggacttcg cgacgtacta ctgcgcgcag gcggggacgc acccgacgac gttcgggcag 900
gggacgaagg tggagatcaa gagg 924
<210> 316
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 316
atgccccggc tgttcttctt ccacctgctg ggcgtgtgcc tgctgctgaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgcacccc agacaccccg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacca tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tcccccagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctcccc cagctccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gccgactcct ccccctccga gctcaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagcgctcc 540
ctcgcccgct tctgcggcgg cggcggctcc ggcggcggcg gctccggcgg cggcggctcc 600
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcc ctctccgcct ccgtcggcga ccgcgtcacc 660
atcacctgcc gcgcctcccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagctcct catcctcgcc ttctcccgcc tccagtccgg cgtcccctcc 780
cgcttctccg gctccggctc cggcaccgac ttcaccctca ccatctcctc cctccagccc 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tcgagatcaa gcgc 924
<210> 317
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 317
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgcggtgg cggaggcagc ggaggtggtg gcagcggcgg aggtggcagc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 660
atcacctgca gggccagcag gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagctgct gatcctggcc ttcagcaggc tgcagagcgg cgtgcccagc 780
aggttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gagg 924
<210> 318
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 318
atgcctcgcc tgtttttttt ccacctgcta ggagtctgtt tactactgaa ccaattttcc 60
agagcagtcg cggactcatg gatggaggaa gttattaaat tatgcggccg cgaattagtt 120
cgcgcgcaga ttgccatttg cggcatgagc acctggagca aaaggtctct gagccaggaa 180
gatgctcctc agacacctag accagtggca gaaattgtgc catccttcat caacaaagat 240
acagaaacca taaatatgat gtcagaattt gttgctaatt tgccacagga gctgaagtta 300
accctgtctg agatgcagcc agcattacca cagctacaac aacatgtacc tgtattaaaa 360
gattccagtc ttctctttga agaatttaag aaacttattc gcaatagaca aagtgaagcc 420
gcagacagca gtccttcaga attaaaatac ttaggcttgg atactcattc tcgaaaaaag 480
agacaactct acagtgcatt ggctaataaa tgttgccatg ttggttgtac caaaagatct 540
cttgctagat tttgcggtgg cggaggcagc ggaggtggtg gcagcggcgg aggtggcagc 600
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 660
atcacctgca gggccagcag gcccatcggc accatgctga gctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagctgct gatcctggcc ttcagcaggc tgcagagcgg cgtgcccagc 780
aggttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tggagatcaa gagg 924
<210> 319
<211> 924
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 319
atgccccgcc tgttcttctt ccacctcctt ggcgtgtgcc tcctcctcaa ccagttcagc 60
cgggccgtgg ccgacagctg gatggaggag gtcatcaagc tctgcggccg cgagctcgtc 120
cgcgcccaga tcgccatctg cggcatgtcc acctggtcca agcgctccct ctcccaggag 180
gacgccccac agaccccgcg ccccgtcgcc gagatcgtcc cctccttcat caacaaggac 240
accgagacga tcaacatgat gtccgagttc gtcgccaacc tgccgcagga gctcaagctc 300
accctctccg agatgcagcc cgccctcccg cagctccagc agcacgtccc cgtcctcaag 360
gactcctccc tcctcttcga ggagttcaag aagctcatcc gcaaccgcca gtccgaggcc 420
gccgactcca gcccctccga gctgaagtac ctcggcctcg acacccactc ccgcaagaag 480
cgccagctct actccgccct cgccaacaag tgctgccacg tcggctgcac caagcggtcc 540
ctggcccgct tctgcggagg cggcggctct ggcggtggtg gatccggcgg cggtggcagc 600
gacatccaga tgacccagtc cccatccagc ctgagcgcct ccgtcggcga ccgcgtcacc 660
atcacctgcc gcgcctcccg ccccatcggc accatgctct cctggtacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagctcct catcctcgcc ttctcccgcc tccagtccgg cgtcccgtca 780
aggttctccg gctcgggctc cggtaccgac ttcaccctca ccatctcctc gctccagcca 840
gaggacttcg ccacctacta ctgcgcccag gccggcaccc accccaccac cttcggccag 900
ggcaccaagg tcgagatcaa gcgc 924
<210> 320
<211> 92
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 320
tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60
aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca cc 92
<210> 321
<211> 164
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 321
tgataatagt ccataaagta ggaaacacta cagctggagc ctcggtggcc atgcttcttg 60
ccccttgggc ctccccccag cccctcctcc ccttcctgca cccgtacccc ccgcattatt 120
actcacggta cgagtggtct ttgaataaag tctgagtggg cggc 164
<210> 322
<211> 119
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 322
tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60
ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggc 119
<210> 323
<211> 141
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 323
tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60
ctcctcccct tcctgcaccc gtaccccccg cattattact cacggtacga gtggtctttg 120
aataaagtct gagtgggcgg c 141
<210> 324
<211> 142
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 324
tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60
ctcctcccct tcctgcaccc gtaccccctc cataaagtag gaaacactac agtggtcttt 120
gaataaagtc tgagtgggcg gc 142
<210> 325
<211> 829
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 325
gtcccgacct ccaggagaga ccaggcccag gatgcctcgc ctgttttttt tccacctgct 60
aggagtctgt ttactactga accaattttc cagagcagtc gcggactcat ggatggagga 120
agttattaaa ttatgcggcc gcgaattagt tcgcgcgcag attgccattt gcggcatgag 180
cacctggagc aaaaggtctc tgagccagga agatgctcct cagacaccta gaccagtggc 240
agaaattgtg ccatccttca tcaacaaaga tacagaaacc ataaatatga tgtcagaatt 300
tgttgctaat ttgccacagg agctgaagtt aaccctgtct gagatgcagc cagcattacc 360
acagctacaa caacatgtac ctgtattaaa agattccagt cttctctttg aagaatttaa 420
gaaacttatt cgcaatagac aaagtgaagc cgcagacagc agtccttcag aattaaaata 480
cttaggcttg gatactcatt ctcgaaaaaa gagacaactc tacagtgcat tggctaataa 540
atgttgccat gttggttgta ccaaaagatc tcttgctaga ttttgctgag atgaagctaa 600
ttgtgcacat ctcgtataat attcacacat attcttaatg acatttcact gatgcttcta 660
tcaggtccca tcaattctta gaatatctaa gaatctttgt tagatattag gtcccatcaa 720
ttcttagaat atctaaacat ctttgttgat gtttagattt ttttatttga tgtgtaagaa 780
aatgttcttt gtgtgattaa atgacacatt tttttgctga aaaaaaaaa 829
<210> 326
<211> 930
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 326
gtcccgacct ccaggagaga ccaggcccag gatgcctcgc ctgttttttt tccacctgct 60
aggagtctgt ttactactga accaattttc cagagcagtc gcggactcat ggatggagga 120
agttattaaa ttatgcggcc gcgaattagt tcgcgcgcag attgccattt gcggcatgag 180
cacctggagc aaaaggtctc tgagccagga agatgctcct cagacaccta gaccagtggc 240
aggtgatttt attcaaacag tctcactggg aatctcaccg gacggaggga aagcactgag 300
aacaggaagc tgcttcaccc gagagttcct tggtgccctt tccaaattgt gccatccttc 360
atcaacaaag atacagaaac cataaatatg atgtcagaat ttgttgctaa tttgccacag 420
gagctgaagt taaccctgtc tgagatgcag ccagcattac cacagctaca acaacatgta 480
cctgtattaa aagattccag tcttctcttt gaagaattta agaaacttat tcgcaataga 540
caaagtgaag ccgcagacag cagtccttca gaattaaaat acttaggctt ggatactcat 600
tctcgaaaaa agagacaact ctacagtgca ttggctaata aatgttgcca tgttggttgt 660
accaaaagat ctcttgctag attttgctga gatgaagcta attgtgcaca tctcgtataa 720
tattcacaca tattcttaat gacatttcac tgatgcttct atcaggtccc atcaattctt 780
agaatatcta agaatctttg ttagatatta ggtcccatca attcttagaa tatctaaaca 840
tctttgttga tgtttagatt tttttatttg atgtgtaaga aaatgttctt tgtgtgatta 900
aatgacacat ttttttgctg aaaaaaaaaa 930
<210> 327
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 327
augcccagac uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccuuaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uaugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgccccuc agaccccgcg gccaguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacaa ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccg cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga acugaaguac cugggccugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcgaucc 540
cuggcccggu ucugcggcgg cggaggcagc ggcgguggcg gaagcggagg cggcggcagc 600
gacauccaga ugacccagag cccaagcucc cuguccgcca gcgugggcga ccgggugacc 660
aucaccugcc gggccagccg gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcugcu gauccuggcc uucuccaggc ugcagagcgg cgugccgagc 780
cgguucagcg gcuccggcag cggaaccgac uucacccuga ccaucucaag ccugcagccg 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 328
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 328
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugc 555
<210> 329
<211> 519
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 329
augccuaggc ucuuuuucuu ccacuugcua ggggugugcu uguuguuaaa ccaguuuagu 60
agagcggucg ccgauucuug gauggaggaa gugauaaagc ucugugggcg ggaauuaguc 120
cgcgcacaaa uugccauaug cggaaugggu gggggcggua guggcggagg agguuccggg 180
ggaggaggga gcggcggagg aggcucaggc ggcggaggaa gugguggcgg uggcucaggu 240
ggcggaggau cugggggcgg cggaagcggc ggaggaggau cugggggcgg uggaaguggc 300
ggaggugggu cuggcggggg agggaguggc gggggcgguu ccgggggugg aggcagcgga 360
ggcgguggcu ccgggggggg ugguuccggu gguggcgggu caggaggagg ggggucaggc 420
ggcggaggau ccggcggcgg cggcucccaa cuuuauucgg cucuggcuaa uaaaugcugu 480
cacgugggcu gcaccaaacg uucgcuugcg cgguuuugu 519
<210> 330
<211> 519
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 330
augccucgac uguuuuucuu ucaccuccua ggagucugcu uacuucucaa ccaguucagu 60
agggcagucg cggacucaug gauggaagag guuauuaaau uauguggccg ugaauuggug 120
cgugcacaaa uagcuauuug cggcaugggc gguggcggcu cugguggcgg cggcucugga 180
gggggcggaa gugguggagg agguaguggc ggagguggau cgggaggcgg aggaucugga 240
ggggggggcu ccuuucaaag cuccucgagc aaagcgcccc cucccagccu gcccagcccu 300
aguaggcugc ccgguccgag cgacacgccc auccugcccc aggguggcgg uggcucuggg 360
gguggcgguu caggcggagg ugguucuggc ggaggcggau cagguggugg gggauccggc 420
ggcggcggau cugguggcgg ggggagucag cucuacucug cguuggccaa uaaaugcugc 480
cauguugguu guacaaaaag aucuuuggcu agauuuugc 519
<210> 331
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 331
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccccccagcc ccgcccccga gcugcugggc ggcagcagcg uguuccuguu cccccccaag 240
cccaaggaca cccuguacau caccagggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg accccgaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaguac aacagcaccu acaggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugcccg cccccaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc cagggagccc 540
cagguguaca cccugccccc cagcagggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggccag 660
cccgagaaca acuacaagac cacccccccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc ugaccgugga caagagcagg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcccugca caaccacuac acccagaaga gccugagccu gagccccggc 840
aagaggaaga gcaccuggag caaaaggucu cugagccagg aagaugcucc ucagacaccu 900
agaccagugg cagaaauugu gccauccuuc aucaacaaag auacagaaac cauaaauaug 960
augucagaau uuguugcuaa uuugccacag gagcugaagu uaacccuguc ugagaugcag 1020
ccagcauuac cacagcuaca acaacaugua ccuguauuaa aagauuccag ucuucucuuu 1080
gaagaauuua agaaacuuau ucgcaauaga caaagugaag ccgcagacag caguccuuca 1140
gaauuaaaau acuuaggcuu ggauacucau ucucgaaaaa agagacaacu cuacagugca 1200
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1257
<210> 332
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 332
augcccaggc uguucuucuu ccaccugcug ggagugugcc uccugcugaa ccaguucagc 60
cgcgccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggag ggagcugguc 120
cgagcccaaa ucgccaucug cgggaugucc accuggagca agagaagccu gucccaggag 180
gaugcccccc aaacgcccag gcccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau guccgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccuguccg agaugcagcc agcccucccc cagcugcagc agcacgugcc cguguugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaaa aagcugauac gcaacaggca gagcgaggcg 420
gccgacagcu ccccgucgga gcugaaguac cuggggcugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcacu ggccaacaaa uguugccacg ugggcugcac caagaggagc 540
cuggccaggu ucugc 555
<210> 333
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 333
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccug ggugugugcc ugcugcugaa ccaguuuagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag ggagcucgug 120
cgagcgcaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagua agaggagccu cucccaggag 180
gacgcccccc agacgccacg cccgguggcg gagaucgugc ccuccuucau caacaaggac 240
acagagacca ucaacaugau gagcgaguuu guggccaacc ugccccagga acuuaagcug 300
acccucagcg agaugcagcc ggcccuuccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaaa aagcugaucc gcaauaggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga gcugaaguau cugggccugg acacccacag caggaagaaa 480
cggcagcugu acagcgcgcu ggcgaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagaggucg 540
cucgccaggu ucugc 555
<210> 334
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 334
augcccaggc uguucuucuu ucaccugcug ggcguguguc ugcugcucaa ccaguuuagc 60
cgcgccgugg ccgacagcug gauggaggag gucauaaagc ugugcgggag ggaacuggug 120
agggcccaga ucgccaucug cggaaugucc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgccccac agacuccgcg gccgguugcg gagaucgugc ccuccuucau caauaaagau 240
accgagacca ucaacaugau guccgaguuc guggccaacc ugccgcagga gcugaaacuc 300
acccucagcg agaugcagcc cgcgcugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguuuga agaauucaaa aaacugaucc ggaaccgaca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga acugaaguac cuggggcugg acacccacag ccggaaaaag 480
cggcagcugu acagcgcacu ggccaauaag uguugccacg ucggcugcac gaagcggucc 540
cuugcccgcu ucugc 555
<210> 335
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 335
augccccgcc uguucuucuu ucaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaagag gugaucaagc ucugcggcag ggaacuggug 120
agggcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca aaaggagccu cagccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg gccaguggcc gagaucgugc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacua ucaacaugau guccgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg aaaugcagcc cgcgcugccc cagcugcaac agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguuuga ggaguucaag aagcugaucc gcaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga acugaaauau cuggggcugg acacccacuc ccggaagaag 480
aggcagcugu acagcgcccu ggccaacaaa ugcugccacg uggggugcac gaagcggucc 540
cuggcccgcu uuugc 555
<210> 336
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 336
augcccaggc uguuuuucuu ccaccuccug ggcgugugcc ugcugcugaa ucaguuuucc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uguguggccg ggagcugguu 120
cgggcccaga uagccaucug uggaaugagc accuggagca agcggagccu gucccaggag 180
gacgcccccc agacaccccg gccgguggcc gaaaucgucc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acgcugagcg agaugcagcc ugcccugccc cagcugcaac agcacgugcc ugugcugaag 360
gacagcagcc uccuguucga ggaguucaag aagcucauca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gcugacagcu cacccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccacuc gaggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcgcu ggccaacaag uguugccaug ugggcuguac caagaggagc 540
cuggccaggu ucugc 555
<210> 337
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 337
augccccgac uguucuuuuu ccaccugcug ggggugugcc ugcugcugaa ccaguuuucg 60
agggcggugg cggacaguug gauggaggag gucaucaagc ucugcgggag ggagcucguc 120
agggcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggagca agcguucgcu gucccaggag 180
gacgcccccc agaccccgag acccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggau 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuu guggccaacc ucccgcagga gcucaagcuc 300
acgcugagcg agaugcagcc ggcccugccc cagcugcagc agcauguccc cguccugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aaacugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgauagca gccccagcga gcugaaguac cuggggcugg acacccacag ucgcaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag uguugccacg ucggguguac gaagcgcucc 540
cuggccagau ucugc 555
<210> 338
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 338
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgagccgucg cagauuccug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcucgug 120
agggcccaga ucgccauuug cggcaugucc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgcgccgc agacuccccg gcccguggcc gaaaucgugc ccuccuucau caauaaggac 240
accgaaacca uaaacaugau gagcgaguuu guggccaacc ugccacagga gcugaaacug 300
acgcugagcg agaugcagcc cgcgcugccc cagcugcagc agcaugugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaauuuaag aagcuaaucc ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagcu ccccgagcga gcugaaguac cucgggcugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcaacugu acagcgcccu ggcgaacaag ugcugccacg ugggcuguac caaaagaagc 540
cucgcccgcu ucugc 555
<210> 339
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 339
augccuaggc ucuucuucuu ccaccugcug ggcgucugcc ugcugcugaa ccaauucagc 60
cgggccguag ccgacuccug gauggaggag gugaucaaac ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcccaaa ucgcgaucug cggcaugucc accuggagca agcggagccu gucgcaggaa 180
gaugcccccc agacccccag gccgguggcc gagaucgucc ccagcuucau caacaaggau 240
accgagacca uaaacaugau gagcgaguuu guggccaacc ucccccagga gcugaagcug 300
acccucagcg agaugcagcc cgcccugccg cagcugcaac agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga agaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagcu cccccuccga gcugaaguac cugggccugg acacgcacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcacu ggccaacaag ugcugucacg ucggcugcac caagcguagc 540
cuggccagau ucugc 555
<210> 340
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 340
augcccaggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcucaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaaac ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu cagccaggag 180
gacgcccccc agacccccag gcccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcucaagcug 300
acccucagcg agaugcaacc cgcccugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc guaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccacuc ccggaagaag 480
aggcagcugu acagugcgcu ggccaacaaa uguugccaug ugggcugcac caagcggagc 540
cuggcccgcu ucugc 555
<210> 341
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 341
augcccaggc uguucuuuuu ccaccugcug ggggucugcc uccugcugaa ccaguucucc 60
agggcggucg ccgacagcug gauggaagag gucaucaagc ugugcgggag ggagcugguc 120
agggcccaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccccg ucccguggcg gagauagugc cgagcuucau caacaaggac 240
accgagacua ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ucccucagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccucccc cagcugcaac agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc uccuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaauaggca gagcgaggcc 420
gccgauagcu cgcccagcga gcuuaaguac cugggccucg acacacacag caggaagaag 480
aggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag uguugccacg ucggcugcac uaagcggagc 540
cucgcuaggu ucugc 555
<210> 342
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 342
augccccgac uguucuucuu ccaucugcug ggcgugugcc uccugcugaa ucaauucagc 60
agggccgugg ccgacuccug gauggaggag gucaucaagc ugugcggcag ggaacuggug 120
agggcgcaga ucgccaucug cggcaugucc acuuggagca agaggucgcu gucgcaggag 180
gacgcccccc agaccccgag gcccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaauaugau guccgaguuc guggccaacc ucccucagga gcugaagcug 300
acccuguccg agaugcagcc cgcccugccg cagcuucagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaauucaag aagcugauua ggaacaggca aagcgaggcc 420
gccgacucca gcccgagcga gcugaaguac cugggccucg acacccauag ccgcaagaag 480
cggcagcugu acucggcccu ggcgaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcgcagc 540
cuggcgcgcu ucugc 555
<210> 343
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 343
augcccaggc uguuuuucuu ccaccugcug ggggucugcc ugcugcugaa ccaguuuagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag ggagcuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggucccu gagccaggag 180
gacgcccccc agacuccccg gccgguggcc gaaaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaauaugau guccgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaaacug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcauguccc cgugcugaag 360
gacagcagcc uguuguuuga ggaguucaaa aaacugaucc gaaacaggca gucggaggcc 420
gcugacagcu cgccaagcga gcugaaguau cuggggcugg acacccacag ccgcaagaag 480
aggcagcugu auagcgcgcu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac gaagaggucc 540
cuggccaggu ucugc 555
<210> 344
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 344
augcccaggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcucgug 120
agggcccaga ucgcgaucug cggcaugagc accuggagca aaaggagucu gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgcccag gcccgucgcc gagaucgugc cguccuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaauaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcucaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcgcugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacuccagcc ugcuguucga ggaguucaag aaacugauca gaaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccucaga gcugaaguac cugggccugg acacccacag caggaagaag 480
cgccagcucu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ucgggugcac aaagaggagc 540
cuggccaggu ucugc 555
<210> 345
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 345
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc uccugcugaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgccccgc aaaccccccg gccggucgcg gagauagugc ccagcuucau aaacaaggac 240
accgagacca ucaauaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acgcugagcg agaugcagcc ggcccugccg cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc uccuguucga ggaguucaag aagcugauca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccauag caggaagaag 480
cgccagcugu acagcgcccu ggcuaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagaggagc 540
cuggcccggu ucugc 555
<210> 346
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 346
augccccggc uguucuucuu ccaccugcuc ggcgugugcc ugcugcugaa ccaauucagc 60
cgggccgucg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag ggagcugguc 120
agggcccaga ucgccaucug ugggaugucg accuggucca agcgcagccu gagccaggag 180
gacgccccgc agaccccaag acccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaagau 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ucccccagga gcugaagcug 300
acccucagcg agaugcagcc cgcgcugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcuccc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaacaggca guccgaggcc 420
gccgacagca gcccgagcga gcugaaguac cuggggcugg acacccacag caggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcuguac caaacgcagc 540
cucgccaggu ucugc 555
<210> 347
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 347
augcccaggc uguucuucuu ccaccugcug ggggucuguc uccugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacuccug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggcg ggagcuggug 120
cgggcgcaga ucgccaucug cggcauguca accuggucca aaaggucccu cagccaggaa 180
gacgcccccc agacccccag gcccguggcc gaaaucgugc ccagcuuuau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuu guggccaacc ucccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcgcugccc caacugcagc agcacgugcc ggugcugaag 360
gacucgagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcucauca ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgauucga gccccagcga gcucaaguac cuggggcugg acacucacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggcgaacaag uguugccacg ugggcugcac caagaggagc 540
cuggccaggu ucugu 555
<210> 348
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 348
augcccaggc uguucuuuuu ccaccuccug gggguguguc ugcuccugaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgauuccug gauggaggag gucaucaagc uguguggaag ggagcuggug 120
agggcccaga ucgccaucug cgggaugucc accuggagca agcggagccu gucccaggag 180
gacgccccgc agacccccag gccgguggcg gagaucgucc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga acugaagcuc 300
acccugagug agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcaugugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcucuucga ggaguucaag aagcugauca ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagcu cccccuccga gcugaaguac cuuggacugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcaacugu acuccgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcuguac gaagaggagc 540
cuggccaggu ucugc 555
<210> 349
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 349
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg gcccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcggagc 540
cuggcccggu ucugc 555
<210> 350
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 350
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgcgaucug cgggaugagc acguggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccgag gccgguggcg gagaucgugc cgagcuucau caacaaggac 240
acggagacga ucaacaugau gagcgaguuc guggcgaacc ugccgcagga gcugaagcug 300
acgcugagcg agaugcagcc ggcgcugccg cagcugcagc agcacgugcc ggugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugauca ggaacaggca gagcgaggcg 420
gcggacagca gcccgagcga gcugaaguac cuggggcugg acacgcacag caggaagaag 480
aggcagcugu acagcgcgcu ggcgaacaag ugcugccacg uggggugcac gaagaggagc 540
cuggcgaggu ucugc 555
<210> 351
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 351
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgcccccc agaccccccg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ucccccagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccucccc cagcuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gccgacuccu cccccuccga gcucaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagcgcucc 540
cucgcccgcu ucugc 555
<210> 352
<211> 276
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 352
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg gcuccaacgg cucuaccaac 180
gauucuaaug gcagcacagg cucccagcug uacagcgccc uggccaauaa gugcugucac 240
gugggcugca caaagagguc ccuggcccgc uucugu 276
<210> 353
<211> 276
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 353
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg gcuccaacgg cucuaccaac 180
accucuaaug gcgacacagg cucccagcug uacagcgccc uggccaauaa gugcugucac 240
gugggcugca caaagagguc ccuggcccgc uucugu 276
<210> 354
<211> 276
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 354
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg gcuccaacgg caagaccaac 180
accucuaaug gcgacacagg cucccagcug uacagcgccc uggccaauaa gugcugucac 240
gugggcugca caaagagguc ccuggcccgc uucugu 276
<210> 355
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 355
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucc 60
agggccgugg ccgacucuug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucu accuggucug gcagcacaaa cuccggcucu 180
accagcuccg gcaacagcgg cuccggcaau ucuggcagcc agcuguacag cgcccuggcc 240
aauaagugcu gucacguggg cugcacaaag aggucccugg cccgcuucug u 291
<210> 356
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 356
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucc 60
agggccgugg ccgacucuug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugagc accuggucug gcagcacaaa cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcuccggc aauucuggcc agcuguacag cgcccuggcc 240
aauaagugcu gucacguggg cugcacaaag aggucccugg cccgcuucug u 291
<210> 357
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 357
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg gcuccacaaa cucuggcagc 180
gauaccggcu cuggcaacuc caagucuggc aauagcggcc agcuguacuc cgcccuggcc 240
aauaagugcu gucacguggg cugcacaaag aggagccugg cccgcuucug u 291
<210> 358
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 358
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg gcuccacaaa cucuggcagc 180
gacaccuccg gcaagaacuc uggcgauggc aauagcggcc agcuguacuc cgcccuggcc 240
aauaagugcu gucacguggg augcacaaag cggagccugg cccgcuucug u 291
<210> 359
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 359
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuagc 60
agggccgugg cagacuccug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucu accuggucug gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc agcuguacuc ugcccuggcc 240
aauaagugcu gucacguggg cugcacaaag aggagccugg cccgcuucug u 291
<210> 360
<211> 321
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 360
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucc 60
agggccgugg ccgacucuug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucu accuggagcg gcagcuccgg cucuacaaac 180
gauuccaaug gcucuaccgg cacaggcagc gacggcucca ccaacggcuc ugauggcagc 240
acaggaggac agcuguacag cgcccuggcc aauaagugcu gucacguggg augcaccaag 300
aggucccugg cccgcuucug u 321
<210> 361
<211> 381
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 361
augccccggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuagc 60
agggccgugg cagacuccug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugagc accugguccg gcucuacaaa cagcggcucc 180
gacaccagcu ccggcuccac aaauucuggc agcgauaccu cuagcggcaa cuccggcucu 240
ggcaauagcg gcuccaaggg caccggcucu gauggcagca caaacggcuc caauggcucu 300
accggaggac agcuguacuc ugcccuggcc aauaagugcu gucacguggg cugcacaaag 360
aggucccugg cccgcuucug u 381
<210> 362
<211> 1341
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 362
augcccaggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucc 60
cgcgccgugg cagacucuug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucu accuggagca agcggucccu gucucaggag 180
gacgccccuc agacaccuag accaguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggau 240
accgagacaa ucaauaugau guccgaguuc guggccaauc ugccucagga gcugaagcug 300
acccuguccg agaugcagcc agcccugcca cagcugcagc agcacgugcc agugcugaag 360
gauagcuccc ugcuguuuga ggaguucaag aagcugaucc ggaacagaca guccgaggcc 420
gccgacucua gcccuucuga gcugaaguac cugggccugg auacccacag caggaagaag 480
cgccagcugu auuccgcccu ggccaauaag ugcugucacg ugggcugcac aaagaggucc 540
cuggcccgcu uuuguggcgg cggcggcucu ggaggaggag gcagcggcgg aggaggcagc 600
auggugcggu ccguggagug cccaccuugu ccagcaccac caguggcagg cccuagcgug 660
uuucuguucc cuccaaagcc aaaggacacc cugaugaucu cuaggacccc cgaggugaca 720
ugcguggugg uggacgugag ccacgaggac cccgaggugc aguucaacug guacguggau 780
ggcauggagg ugcacaaugc caagacaaag ccccgggagg agcaguuuaa cagcaccuuc 840
agaguggugu ccgugcugac aguggugcac caggacuggc ugaacggcaa ggaguauaag 900
ugcgccgugu ccaauaaggg ccugccagca ccuaucgaga agaccaucuc uaagacaaag 960
ggccagccua gggagccaca gguguacacc cugcccccuu cccgcgagga gaugaccaag 1020
aaccaggugu cucugacaug ucuggugaag ggcuuuuauc ccucugacau cgccguggag 1080
ugggagagca auggccagcc ugagaacaau uacaagacca caccacccau gcuggacucc 1140
gauggcagcu ucuuccugua uucuaagcug acaguggaua agagccggug gcagcagggc 1200
aacguguuca gcuguuccgu gaugcacgag gcccugcaca aucacuacac ccagaagucu 1260
cugagccugu cccccggcaa gggcaagcca auccccaauc cucugcuggg ccuggauagc 1320
acacaccacc accaccacca c 1341
<210> 363
<211> 984
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 363
augccuaggc uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguuuucu 60
cgcgccgugg cagacagcug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
cgcgcacaga ucgccaucug uggcaugagc accuggucca agcggagccu gagccaggag 180
gacgcaccac agacacccag accuguggcc gagaucgugc cuuccuuuau caacaaggau 240
accgagacaa ucaauaugau gucugaguuc guggccaauc ugccccagga gcugaagcug 300
acccuguccg agaugcagcc agcccugcca cagcugcagc agcacgugcc ugugcugaag 360
gauagcuccc ugcuguuuga ggaguucaag aagcugaucc ggaacagaca guccgaggcc 420
gccgacucua gcccaucuga gcugaaguac cugggccugg auacccacag caggaagaag 480
cgccagcugu auuccgcccu ggccaauaag ugcugucacg ugggcugcac aaagcggucc 540
cuggccagau uuuguggcgg cggcggcucu ggaggaggag gcagcggcgg aggaggcucc 600
gacauccaga ugacccagag cccuuccucu cuguccgccu cugugggcga ucgggugacc 660
aucacaugca gggccagccg gcccaucggc acaaugcuga gcugguauca gcagaagccu 720
ggcaaggccc caaagcugcu gauccuggcc uucucuaggc ugcagagcgg cgugcccucc 780
cgcuuuagcg gcuccggcuc uggcaccgac uucacccuga caaucagcuc ccugcagcca 840
gaggauuuug ccaccuacua uugugcccag gccggcacac accccaccac auucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gaggggcaag ccaaucccca acccucugcu gggccuggac 960
agcacacacc accaccacca ccac 984
<210> 364
<211> 291
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 364
augccucgac uguucuuuuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ucaguuuagc 60
cgggccgucg ccgauaguug gauggaggaa gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
agagcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggucug gcagcuccgg aggaggcucu 180
ggcucuagcu ccggcucuag cggcagcggc ggcuccggcc agcuguacag cgcucuggcu 240
aauaaguguu gucacgucgg auguacuaaa cgaagucugg cuagauuuug c 291
<210> 365
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 365
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugc 555
<210> 366
<211> 534
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 366
augggcguga aagugcuguu ugcgcugauu ugcauugcgg uggcggaagc ggacucaugg 60
auggaggaag uuauuaaauu augcggccgc gaauuaguuc gcgcgcagau ugccauuugc 120
ggcaugagca ccuggagcaa aaggucucug agccaggaag augcuccuca gacaccuaga 180
ccaguggcag aaauugugcc auccuucauc aacaaagaua cagaaaccau aaauaugaug 240
ucagaauuug uugcuaauuu gccacaggag cugaaguuaa cccugucuga gaugcagcca 300
gcauuaccac agcuacaaca acauguaccu guauuaaaag auuccagucu ucucuuugaa 360
gaauuuaaga aacuuauucg caauagacaa agugaagccg cagacagcag uccuucagaa 420
uuaaaauacu uaggcuugga uacucauucu cgaaaaaaga gacaacucua cagugcauug 480
gcuaauaaau guugccaugu ugguuguacc aaaagaucuc uugcuagauu uugc 534
<210> 367
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 367
augggcguga aagugcuguu ugcgcugauu ugcauugcgg uggcggaagc ggacucaugg 60
auggaggaag uuauuaaauu augcggccgc gaauuaguuc gcgcgcagau ugccauuugc 120
ggcauggagc ccaagagcag cgacaagacc cacaccagcc cccccagccc cgcccccgag 180
cugcugggcg gcagcagcgu guuccuguuc ccccccaagc ccaaggacac ccucuacauc 240
accagggagc ccgaggugac cugcguggug guggacguga gccacgagga ccccgaggug 300
aaguucaacu gguacgugga cggcguggag gugcacaacg ccaagaccaa gcccagggag 360
gagcaguaca acagcaccua caggguggug agcgugcuga ccgugcugca ccaggacugg 420
cugaacggca aggaguacaa gugcaaggug agcaacaagg cccugcccgc ccccaucgag 480
aagaccauca gcaaggccaa gggccagccc agggagcccc agguguacac ccugcccccc 540
agcagggacg agcugaccaa gaaccaggug agccugaccu gccuggugaa gggcuucuac 600
cccagcgaca ucgccgugga gugggagagc aacggccagc ccgagaacaa cuacaagaca 660
accccccccg ugcuggacag cgacggcagc uucuuccugu acagcaagcu gaccguggac 720
aagagcaggu ggcagcaggg caacguguuc agcugcagcg ugaugcacga ggcccugcac 780
aaccacuaca cccagaagag ccugagccug agccccggca agaggaagag caccuggagc 840
aaaaggucuc ugagccagga agaugcuccu cagacaccua gaccaguggc agaaauugug 900
ccauccuuca ucaacaaaga uacagaaacc auaaauauga ugucagaauu uguugcuaau 960
uugccacagg agcugaaguu aacccugucu gagaugcagc cagcauuacc acagcuacaa 1020
caacauguac cuguauuaaa agauuccagu cuucucuuug aagaauuuaa gaaacuuauu 1080
cgcaauagac aaagugaagc cgcagacagc aguccuucag aauuaaaaua cuuaggcuug 1140
gauacucauu cucgaaaaaa gagacaacuc uacagugcau uggcuaauaa auguugccau 1200
guugguugua ccaaaagauc ucuugcuaga uuuugc 1236
<210> 368
<211> 498
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 368
augggcguga aagugcuguu ugcgcugauu ugcauugcgg uggcggaagc ggacucaugg 60
auggaagagg uuauuaaauu auguggccgu gaauuggugc gugcacaaau agcuauuugc 120
ggcaugggcg guggcggcuc ugguggcggc ggcucuggag ggggcggaag ugguggagga 180
gguaguggcg gagguggauc gggaggcgga ggaucuggag gggggggcuc cuuucaaagc 240
uccucgagca aagcgccccc ucccagccug cccagcccua guaggcugcc cgguccgagc 300
gacacgccca uccugcccca ggguggcggu ggcucugggg guggcgguuc aggcggaggu 360
gguucuggcg gaggcggauc aggugguggg ggauccggcg gcggcggauc ugguggcggg 420
gggagucagc ucuacucugc guuggccaau aaaugcugcc auguugguug uacaaaaaga 480
ucuuuggcua gauuuugc 498
<210> 369
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 369
augggcguga aggugcuguu cgcacugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggcaga gagcugguga gagcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag cccccccagc 180
cccgcucccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccccccaa gcccaaggac 240
acccuguaca uaaccagaga gccagaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagaca 360
aagcccagag aggagcagua caacagcacc uacagagugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguau aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gcccccaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc ccagagagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccagcagaga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgccgug gagugggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccccc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cugaccgugg acaagagcag auggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuuac acaaccacua cacccagaag agccuaagcc ugagccccgg caagagaaag 840
aagagaaguc ugagccagga ggacgccccc cagaccccca gacccguggc cgagaucgug 900
cccuccuuca uuaacaagga caccgagacc aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacccugagc gaaaugcaac ccgcccugcc ccagcugcaa 1020
cagcacgugc ccgugcugaa ggacagcagc cugcuguucg aggaguucaa aaagcugauc 1080
agaaacagac agagcgaggc cgccgacucc agccccagcg agcugaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gagacagcug uacagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca ccaagagaag ccuggccaga uucugc 1236
<210> 370
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 370
augggaguua aagugcuuuu ugcgcuuauu uguauugcgg ucgcggaggc ugacucaugg 60
auggaagagg ucauuaagcu cuguggaagg gaacucguua gagcccaaau agcuauuugc 120
gggaugagua caugguccgg uggggguggu ucggguggag gugggucggg aggaggaggc 180
uccgguggag gcggcagugg gggcggaggg uccggugggg gugggucugg aggagguggu 240
ucguuucagu cuucaucuuc caaagcuccu ccuccuucgc uucccagccc uagcaggcuu 300
ccagguccau cagauacucc aauauugccc cagggagggg guggaucagg aggaggaggg 360
aguggugggg gaggaucugg uggagguggu uccggaggag gaggaagcgg ggggggaggu 420
ucaggcggug guggaagcca acuguauagu gcguuggcua acaaauguug ucaugucgga 480
uguacuaaaa ggagccucgc cagguuuugc 510
<210> 371
<211> 534
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 371
augggcguga aagugcuguu ugcgcugauu ugcauugcgg uggcggaagc ggacucaugg 60
auggaggaag uuauuaaauu augcggccgc gaauuaguuc gcgcgcagau ugccauuugc 120
ggcaugagca ccuggagcaa aaggucucug agccaggaag augcuccuca gacaccuaga 180
ccaguggcag aaauugugcc auccuucauc aacaaagaua cagaaaccau aaauaugaug 240
ucagaauuug uugcuaauuu gccacaggag cugaaguuaa cccugucuga gaugcagcca 300
gcauuaccac agcuacaaca acauguaccu guauuaaaag auuccagucu ucucuuugaa 360
gaauuuaaga aacuuauucg caauagacaa agugaagccg cagacagcag uccuucagaa 420
uuaaaauacu uaggcuugga uacucauucu cgaaaaaaga gacaacucua cagugcauug 480
gcuaauaaau guugccaugu ugguuguacc aaaagaucuc uugcuagauu uugc 534
<210> 372
<211> 558
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 372
augagcagca gacugcugcu gcagcugcug ggcuucuggc uguuccugag ccagcccugc 60
agagccagag ugagcgagga guggauggac caggugaucc aggugugcgg cagaggcuac 120
gccagagccu ggaucgaggu gugcggcccc agcgugggca gacuggcccu gagccaggag 180
gagcccgccc cccuggccag acaggccacc gccgaggugg ugcccagcuu caucaacaag 240
gacgccgagc ccuucgacau gacccugaag ugccugccca accugagcga ggagagaaag 300
gccgcccuga gcgagggcag agcccccuuc cccgagcugc agcagcacgc ccccgcccug 360
agcgacagcg uggugagacu ggagggcuuc aagaagaccu uccacaacca gcugggcgag 420
gccgaggacg gcggcccccc cgagcugaag uaccugggca gcgacgccca gagcagaaag 480
aagagacaga gcggcgcccu gcugagcgag cagugcugcc acaucggcug caccagaaga 540
agcaucgcca agcugugc 558
<210> 373
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 373
auggggguga aggugcuguu cgcccucauc ugcauagcgg uggccgaggc cgacucuugg 60
auggaggagg ugaucaagcu cugcggcagg gagcucgugc gugcccagau cgcgaucugc 120
ggcaugagca ccuggucaga gccaaagagc agcgauaaga cgcauaccag cccucccagc 180
cccgcccccg agcugcuggg cgggagcagc guguuccucu ucccacccaa gccaaaggac 240
acccucuaca ucacccgcga gcccgaggug acgugcguug ugguggacgu gucccacgag 300
gaccccgagg ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aaguccacaa cgccaagacc 360
aagccucggg aggagcagua caacagcacc uacagggugg ugagcguccu gacaguccug 420
caccaggacu ggcugaaugg caaggaauac aagugcaagg ugucaaacaa ggcccugccc 480
gcccccaucg agaaaaccau cagcaaggcc aagggccagc cacgugagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccagcaggga cgagcucacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aaagguuucu acccuucuga caucgcgguu gagugggaga gcaauggcca acccgagaac 660
aacuacaaga caaccccgcc cgugcuggac uccgauggga gcuucuuccu guauagcaag 720
cugaccgugg acaagagccg cuggcagcag ggcaacgugu ucagcugcuc cgucaugcac 780
gaggcccugc auaaccacua cacccaaaag agccuguccc ugagccccgg caagcgcaag 840
aagagguccc ugagccaaga agacgccccg cagacgccca ggcccguggc cgagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga uaccgagaca aucaacauga ugucggaauu uguggcuaac 960
cugccccaag agcugaaacu gacccugucg gaaaugcagc ccgcgcugcc gcagcugcag 1020
cagcacgugc cggugcugaa ggauagcagc uugcuguucg aggaauucaa gaagcucauc 1080
cguaaucgac agagcgaggc ggccgauucc agccccagcg agcugaagua ucuggggcug 1140
gauacccaca gccgcaagaa gcggcagcug uacucugcuc uggccaauaa guguugccac 1200
gucggcugca ccaaacgcag ccuggccagg uucugc 1236
<210> 374
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 374
augggcguca agguccucuu cgcccuuauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu uugcggccgg gagcuugugc gcgcgcagau cgccauuugc 120
ggcaugagca ccugguccga accaaagagc uccgacaaga cccacaccuc cccuccuucc 180
cccgcccccg agcugcuggg cggcagcagc gucuuccugu ucccgcccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucaccaggga gcccgaggug acaugugucg ugguggacgu gucacacgag 300
gaccccgagg ugaaguucaa cugguacguc gacggcgugg aggugcacaa cgcaaaaacc 360
aagccccggg aggaacagua caacagcacc uaccgggugg ucagcgugcu gaccgugcuc 420
caucaggacu ggcugaacgg caaggaguac aaaugcaagg ucagcaacaa agcccugccc 480
gccccaaucg aaaagaccau cuccaaggcc aaggggcagc ccagggaacc ccagguguac 540
acccugcccc ccagcaggga cgagcucacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggguucu accccagcga caucgccgug gagugggaaa gcaacggcca acccgaaaac 660
aacuacaaga ccaccccgcc ggugcuggac ucugacggca gcuucuuccu cuacagcaag 720
cugaccguug acaaauccag guggcaacag ggcaacgucu ucagcugcag cgugaugcau 780
gaagcgcugc acaaccauua cacgcagaaa agccuguccc ugagccccgg caagaggaag 840
aaaaggagcc ugucccagga ggacgccccu cagaccccgc gacccguggc cgagaucgug 900
ccuagcuuca uuaacaagga caccgagacg aucaacauga ugagcgaguu cguggccaau 960
cugccccagg agcugaagcu cacccucagc gagaugcagc ccgcccugcc ccagcugcag 1020
cagcacgucc cgguccugaa ggacagcagc cugcuguucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
aggaacaggc agagcgaggc cgccgacucc ucccccuccg agcugaagua ccucggccug 1140
gacacccacu ccaggaagaa gcggcagcug uacucagccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca ccaagcggag ccuggcccgg uucugc 1236
<210> 375
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 375
augggcguga aggugcuguu cgcccucauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaaacu cugcggcagg gagcucgugc gcgcccagau cgccaucugc 120
gggaugucca ccuggagcga gcccaagagc uccgacaaaa cccacaccag cccgcccagc 180
ccagcccccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccucu ucccucccaa gcccaaggac 240
acgcuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccugaag ugaaguuuaa cugguauguu gacggcgugg aggugcacaa cgcaaagacc 360
aagccccgcg aggagcagua caacagcacc uaccgcgucg ucagcgugcu gacaguccuc 420
caccaggauu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg uguccaacaa ggcccugccc 480
gccccgaucg agaagaccau uagcaaggcc aagggccagc caagggagcc acaaguguac 540
acccugccac cuuccaggga cgagcugacc aagaaucagg ucagccugac cugccugguu 600
aagggcuucu acccaagcga caucgccguu gagugggaga gcaacggaca gccugagaac 660
aacuauaaga cuaccccucc cgugcuggau uccgacggaa gcuucuuccu guacagcaag 720
cugaccgugg acaagagcag auggcagcag gguaacgugu uuuccugcuc cgugaugcau 780
gaggcccugc acaaccacua cacccagaaa agccucagcc ugagccccgg caaacgcaag 840
aagcggagcc ugucgcaaga ggacgccccc cagaccccca ggccuguggc cgagaucguc 900
cccagcuuca ucaacaagga caccgagacu aucaacauga ugagcgaauu cguggccaac 960
cucccccagg aacugaagcu gacccugagc gagaugcagc ccgcccugcc ccagcugcag 1020
cagcacgugc ccguacugaa ggacagcucc cugcuguuug aagaguuuaa gaagcugauc 1080
cggaacaggc aguccgaagc cgccgacagc ucccccagcg agcugaaaua ccuggggcug 1140
gacacccaca gccggaaaaa gcgccagcuc uacagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca ccaagcguuc ccuggcccgg uuuugc 1236
<210> 376
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 376
augggcguga agguccucuu cgcccucauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacuccugg 60
auggaggagg ugauaaagcu cugcggcagg gagcucgugc gcgcccaaau cgccaucugc 120
gggaugagca ccuggagcga gcccaagagc uccgacaaga cacacaccuc cccgcccagc 180
cccgccccag agcugcuggg cgggagcagc gucuuucugu ucccgcccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacgcgcga gcccgaagug accugcgugg ucguggacgu gagccacgag 300
gacccugagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgcuaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacucaacc uacagagugg ugagcguccu cacggugcug 420
caccaggauu ggcugaaugg caaggaguau aaaugcaagg ugagcaacaa agcacugccc 480
gcccccaucg agaagacaau cucuaaggcc aagggccagc ccagggagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccucaagaga cgagcugacc aagaaucagg ugucccugac cugccucgug 600
aagggcuucu accccagcga uaucgcugug gagugggagu ccaacgggca gccggagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc cgugcuggac agcgacggga gcuuuuuccu guacagcaag 720
cugaccgucg acaagagcag auggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgucaugcac 780
gaggcccugc acaaccacua cacacaaaag agccugagcc ugucgccagg caagcgaaag 840
aagagaagcu ugagccagga ggacgccccc cagacccccc ggcccguggc cgagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga caccgagacu auuaacauga ugagcgaguu cguggccaau 960
cugccccagg agcucaaacu uacccugucc gagaugcagc ccgcccugcc ccagcugcag 1020
cagcacgugc ccgugcugaa ggacaguucc cugcuguucg aggaguucaa aaagcugauc 1080
cgcaacagac agagcgaggc cgccgauagc agccccuccg agcugaagua ccucggccug 1140
gacacccaca gcaggaagaa gaggcagcug uacagcgccc uggccaauaa gugcugucac 1200
guuggcugca ccaagcgcag ccucgcccgg uuuugc 1236
<210> 377
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 377
augggcguga aggugcuguu cgcccucauc ugcauugccg uggccgaagc cgacagcugg 60
auggaagagg ucaucaagcu cugcggcagg gagcucguga gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagucc agcgacaaga cccacaccag cccgcccagc 180
cccgccccgg agcuucuugg gggcagcagc guguuccugu ucccacccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga acccgaggug accugcgugg ucguugacgu cagucacgag 300
gaucccgaag ucaaguuuaa cugguaugug gacggcgugg agguccacaa ugccaaaacc 360
aagccacggg aggaacagua uaauuccacc uacagggugg ucagcgugcu caccgugcuc 420
caccaggacu ggcucaacgg aaaggaguau aagugcaagg ugagcaauaa ggcccugccu 480
gcccccaucg agaagaccau cuccaaggcg aaaggccagc cccgggagcc ucaggucuac 540
acccugcccc ccagccgcga cgagcucacc aagaaccagg ugagccucac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgccgug gagugggagu ccaacggaca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc gguccuggac agcgauggcu ccuucuuccu guacagcaaa 720
cugaccgugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgucaugcac 780
gaggcgcugc acaaucacua cacccagaaa ucccugagcc ugucccccgg caagaggaag 840
aagaggagcc ugagccagga ggacgccccc cagacaccca ggcccguggc cgagaucgug 900
cccuccuuca ucaacaagga uaccgaaacc aucaacauga ugagcgaguu cguagccaac 960
cugccgcagg agcucaagcu gacccugagc gagaugcagc ccgcccugcc ccagcugcaa 1020
cagcacgugc ccgugcucaa ggacagcagc cugcuguucg aggaguucaa aaagcugauc 1080
cguaaccgcc agagcgaggc cgccgauucu agccccuccg agcugaagua ucugggacug 1140
gacacccacu cccgcaagaa acggcagcuu uauuccgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca ccaaaagguc ccuggccagg uuuugc 1236
<210> 378
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 378
augggcguga aagugcucuu ugcccucauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugauaaagcu cugcgggcgg gagcucgucc gggcccagau cgccaucugc 120
gguaugagca ccuggagcga gcccaagucc agcgacaaga cccacaccuc gccccccagc 180
ccggcccccg agcugcuggg gggaagcagc guguuccugu ucccgcccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacacgaga gcccgaaguu accugcgucg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgagg ugaaguucaa uugguacgug gacggagugg aggugcacaa ugcaaaaacc 360
aagccccgag aggagcagua caauagcacc uacagggugg ugagcgugcu gacugugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg gaaggaguac aagugcaagg uuagcaacaa ggcccucccc 480
gccccaaucg agaagaccau cuccaaggcu aagggccagc ccagggagcc ccaggucuau 540
acacucccgc ccagcagaga ugagcucacc aagaaccagg ucagccugac cugucuggug 600
aaaggcuucu accccagcga cauugccgug gagugggagu ccaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccacuccccc cguacuggau uccgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cucaccgugg acaaauccag guggcagcag ggcaacgugu uuuccugcag cguaaugcau 780
gaggcccucc acaaccacua cacccagaaa agccugagcc ugagccccgg gaagaggaag 840
aagaggagcc ugucccagga ggacgccccc cagaccccca ggcccguggc cgagaucguc 900
cccagcuuca ucaauaagga cacggagacg aucaacauga ugagcgaauu cguggcaaac 960
cucccccagg agcugaaacu gacgcugagc gagaugcagc cagcccugcc ucagcugcag 1020
caacaugugc ccgugcugaa ggacagcucc uugcuguucg aggaauucaa gaagcugauc 1080
cggaacaggc agagcgaggc cgccgacucc agccccuccg agcugaagua ccugggccug 1140
gacacccacu cccgaaaaaa gcgucagcug uacagcgccc uggcgaacaa augcugccau 1200
gucggcugua ccaagcgguc ccuggcccgc uucugc 1236
<210> 379
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 379
auggggguga agguccucuu cgcguugauc ugcaucgccg uggccgaggc agauagcugg 60
auggaggagg uuaucaagcu cuguggucgc gagcucgugc gcgcccaaau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gccgaaaagc agcgacaaga cacacaccuc cccuccgagc 180
cccgcucccg agcuucuggg uggguccuca guguuucugu ucccgcccaa gccaaaggac 240
acgcuguaca ucaccagaga gcccgaagug acuugcgugg uggucgacgu gucccacgag 300
gacccugaag ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagaca 360
aagccccggg aggaacagua caacuccacc uaccgggugg uguccgugcu caccgugcuc 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcucugccc 480
gcccccaucg agaagacgau cuccaaggcc aaggggcaac ccagggaacc gcaggucuau 540
acccugcccc ccucucggga cgagcugacg aagaaccagg uuagccucac cugccuggug 600
aagggcuucu accccuccga caucgccguc gagugggaau ccaacgggca gccugagaac 660
aauuacaaga ccaccccucc cguccuggac uccgacggca gcuucuuucu cuacuccaag 720
cucaccgugg acaagucgag guggcagcag ggaaacgugu ucuccuguag cgugaugcac 780
gaggcccugc acaaccacua cacccagaaa agccugagcc ucagccccgg gaagcggaaa 840
aagcgcuccc ugucccagga ggacgccccc cagacacccc ggcccguggc cgagaucguc 900
ccuuccuuca ucaauaaaga caccgagaca aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg aacugaagcu gacccucucg gagaugcagc ccgcgcugcc gcagcugcag 1020
cagcaugugc ccgugcugaa agacagcagc cugcuguucg aggaguuuaa gaagcucauc 1080
agaaauagac agagcgaggc cgccgauagc uccccaagcg agcucaagua ccucgggcug 1140
gacacgcaca gcagaaagaa gagacagcug uacagcgccc uggccaauaa gugcugccac 1200
gucggcugca ccaagcggag cuuggcgagg uucugc 1236
<210> 380
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 380
augggcguaa aggugcucuu ugcccuaauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacucgugg 60
auggaggagg ugaucaagcu cugcggccgg gagcucgugc gcgcccagau cgccaucugc 120
gggaugagca ccuggagcga gcccaaaagu uccgacaaga cccacaccag cccgcccagc 180
cccgcccccg agcugcuggg agggagcagc guguuccugu ucccacccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccgcga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gucccaugag 300
gauccggagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaaaacc 360
aagcccaggg aggagcagua caauuccacc uacagggugg ugagcguccu gacgguccug 420
caccaagacu ggcugaaugg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gcgccuaucg agaagacgau cagcaaggcc aaaggccaac cgagggagcc ccagguguau 540
acccugcccc ccagcaggga cgagcucacc aagaaucaag ugucacugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccuccga caucgcugug gagugggaga gcaacggcca gcccgaaaau 660
aacuacaaga ccaccccgcc cgugcuggac agcgacggca guuucuuucu guacagcaag 720
cugaccgugg acaaguccag auggcagcag ggcaacgugu ucagcuguag cgucaugcac 780
gaggcccugc auaaucacua cacccagaaa agccuguccc ugagcccagg gaagcggaag 840
aagcgauccc ucagccagga ggacgccccg cagaccccca gacccguugc cgagaucgug 900
cccucauuca ucaacaagga cacagagaca aucaacauga uguccgaauu cguggccaac 960
cucccccagg agcucaagcu gacccucagc gagaugcagc ccgcccugcc ccagcugcag 1020
cagcaugugc ccgugcugaa ggacucgagc cugcuguucg aagaguucaa gaagcugauc 1080
agaaaucguc aguccgaggc cgccgacagc agccccagcg aacucaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gccgcaagaa gaggcagcug uacagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
guggguugca ccaagcgcag cuuggccagg uuuugc 1236
<210> 381
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 381
augggcguga aggugcuguu cgcccucauu uguaucgccg uggccgaagc ggacagcugg 60
auggaggagg ugaucaaacu augcggcagg gagcucguga gagcucagau ugccaucugc 120
ggcaugucga ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc cccgcccagc 180
cccgcccccg agcugcuggg gggcagcagc guguuccugu uuccccccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccgaga gcccgaggug accugugugg ugguggacgu uucccacgag 300
gaccccgagg ucaaguucaa cugguacgug gauggcgugg aggugcacaa ugccaagacu 360
aagccccgag aggagcagua caacagcacc uacagggugg ucagcgugcu gaccguccug 420
caccaggacu ggcugaacgg gaaggaauac aagugcaagg uaagcaacaa ggcccugccu 480
gcccccaucg agaagaccau uuccaaggcc aagggccaac caagggagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccagcagaga cgaacugacc aagaaccagg ugagccugac cugccugguc 600
aagggguucu accccuccga caucgccgug gagugggagu ccaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccgcc cguccucgau agcgacggga gcuucuuccu guacucaaag 720
cugacagugg acaagagcag guggcagcag ggcaacgugu ucuccugcag cgugaugcac 780
gaagcccugc auaaccacua uacccagaag ucccugagcc ugagccccgg aaagcgcaaa 840
aagcgcagcc ugagccagga ggacgcccca caaaccccca ggcccguggc cgagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga cacugagacg aucaacauga uguccgaguu uguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacccugucu gagaugcagc ccgcccugcc ucagcuccag 1020
cagcacgugc ccguccucaa ggacagcagc cugcuguucg aggaguuuaa gaagcugauc 1080
cggaacaggc agucagaggc cgccgacagc agccccagcg agcugaagua ccucggccug 1140
gacacacaua gccggaagaa gaggcagcuc uacagcgccc ucgccaacaa augcugccac 1200
gugggcugca ccaagaggag ccuggccaga uucugu 1236
<210> 382
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 382
augggcguga agguccucuu cgcccucauc ugcaucgccg uggccgaggc cgauagcugg 60
auggaggagg ucaucaagcu cugcgggcga gagcucguga gagcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagucc ucggacaaga cgcauaccag cccgcccagc 180
cccgcccccg agcugcuggg gggcagcagc guguuccugu ucccacccaa gcccaaggac 240
acccuguaua ucacccggga accugaggug acaugcgugg ugguggacgu aagccacgag 300
gacccagagg ugaaguuuaa cugguacgug gacggggugg aggugcacaa ugccaagacc 360
aagccuaggg aggagcaaua caacuccacc uaccgcgugg ugagcgugcu gacgguccug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaagaguac aagugcaaag uguccaacaa agcccugccc 480
gcccccaucg agaagaccau cuccaaggcc aaggggcagc ccagagagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccucuaggga cgagcucacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu acccguccga caucgccgug gagugggaga gcaacggcca acccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccgcc ggugcucgac uccgacggca gcuucuuccu cuacagcaag 720
cuaaccgugg auaagagccg cuggcagcag ggcaacgucu ucagcugcag cgucaugcac 780
gaggcccugc acaaccacua cacccagaaa agccuguccc ugucccccgg caagcggaag 840
aagagaucgc ugucccagga ggacgccccc caaacgccca ggcccguagc cgagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga caccgagaca auuaacauga ugagugaguu uguggccaau 960
cucccccagg agcugaagcu cacccugagc gagaugcagc ccgcccuccc ccagcugcag 1020
cagcacgugc ccgugcugaa ggacagcucc cuccuguucg aagaguucaa gaagcugauc 1080
aggaaccggc agagcgaggc cgccgacucc agccccagcg agcugaagua ccugggucug 1140
gauacccacu ccaggaagaa gcggcagcug uacagcgccc uggccaacaa guguugucac 1200
gucgguugca cgaaacgguc gcucgcccgg uuuugu 1236
<210> 383
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 383
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccaagc 180
cccgcucccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccuccuaa accuaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccugagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccacggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccu 480
gcgcccaucg agaagaccau cagcaaggcc aaggggcagc cuagagaacc ccagguguac 540
acccugccuc ccagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga uauugcugug gagugggaga gcaacggcca gccugagaac 660
aacuacaaga ccaccccucc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaaa 720
cugacagugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaagcccugc acaaccacua cacccagaaa agccuaagcc ugucacccgg caagcggaag 840
aagcgguccu ugagccagga ggacgcgccu cagacccccc ggccuguggc ugaaaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga caccgagacg auaaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu caccuugagc gagaugcagc ccgcucugcc acaacuccag 1020
cagcacgugc ccguccuuaa ggacagcagc cugcuuuucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgauagc uccccuagcg agcucaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcgccagcug uauagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggaugca caaaaagaag cuuggcccgg uucugc 1236
<210> 384
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 384
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc uccuccgucc 180
cccgcucccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccucccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccugagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugcca 480
gccccuaucg agaagaccau cagcaaggcc aaggggcagc ccagggagcc acagguguac 540
acccugccgc ccagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgcugug gagugggaga gcaacggcca gccggagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cucaccguag acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggcccuac acaaccacua cacccagaaa agccugagcc uaucccccgg caagcggaag 840
aagagaucgc ugagccagga ggacgccccc cagacccccc ggcccguagc cgagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga cacugaaacg aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu cacacugagc gagaugcagc ccgcucugcc acagcuccag 1020
cagcacgugc ccguccugaa ggacagcagc cugcuuuucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcugacagc ucacccagug aacuuaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gccgcaagaa gcggcagcug uacuccgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
guggggugca ccaaacgcag ccuggcccgg uucugc 1236
<210> 385
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 385
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc cccaccuagc 180
ccagcccccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccacccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgagg ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gcucccaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc ccagggagcc ccagguguac 540
acccugccuc ccagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgcuguc gagugggaga gcaacggaca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccucc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaaa 720
cugacugugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuugc acaaccacua cacccagaaa agccuguccc ugucccccgg caagcggaag 840
aagcggucac ugucccagga ggacgcuccg cagacccccc ggccaguggc ggagaucgug 900
cccagcuuca ucaauaagga uaccgagaca auuaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacccugagc gagaugcagc ccgcucugcc gcaguuacag 1020
cagcacgugc ccguccugaa ggacagcagc cugcuguuug aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgauagc uccccaucug agcucaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa aaggcagcug uacuccgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggaugca ccaagagauc ucuggcccgg uucugc 1236
<210> 386
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 386
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc accuccaucc 180
ccggcacccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccucccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgaag ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccu 480
gcgccuaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc cacgggaacc ccagguguac 540
acccugccuc ccagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga uaucgcugug gagugggaga gcaacggcca acccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaaa 720
cuaaccgugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaagcccugc acaaccacua cacccagaaa agccucuccc ugagccccgg caagcggaag 840
aagcgguccu ugucacagga ggacgccccc cagacccccc ggcccgucgc ugagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga caccgaaaca auuaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacacugagc gagaugcagc ccgcucugcc acaacugcag 1020
cagcacgugc cagugcucaa ggacagcagc cuccuguucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcggacagc ucaccaagcg agcugaaaua ccugggccug 1140
gacacccaca gccgcaaaaa gagacagcug uacuccgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggaugca ccaaaagaag ccuggcccgg uucugc 1236
<210> 387
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 387
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccuucc 180
cccgcccccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccgcccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgaag ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gcucccaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc caagagaacc ccagguguac 540
acccugcccc ccucccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga cauugccgug gagugggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cugacugugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuugc acaaccacua cacccagaaa agccuguccc uuagccccgg caagcggaag 840
aagaggagcc uuagccagga ggacgcccca cagacccccc ggcccguggc ugaaaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga cacagaaacc aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu cacccugagc gagaugcagc ccgcauugcc acagcuccag 1020
cagcacgugc cugugcugaa ggacagcagc uugcucuuug aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgacucc agccccucug aguuaaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcggcagcug uacucagccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca caaagcggag ccuggcccgg uucugc 1236
<210> 388
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 388
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag ccccccaagc 180
cccgcccccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccgcccaa gccaaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccagaag ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccacggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccu 480
gcacccaucg agaagaccau cagcaaggcc aaggggcagc cuagagagcc ccagguguac 540
acccugccac cuagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgcugug gagugggaga gcaacggcca gccugagaac 660
aacuacaaga ccaccccgcc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cucacgguag acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaagcucugc acaaccacua cacgcagaaa agcuugagcc ugucacccgg caagcggaag 840
aagcgguccc ugucccagga ggacgccccu cagacccccc ggccaguagc ggagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga uacagagacu aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacucugagc gagaugcagc ccgcgcugcc ucaacugcag 1020
cagcacgugc ccguacugaa ggacagcagc uugcucuuug aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcagacagc ucacccagcg aauugaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gcgacaguug uacuccgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
guggguugca ccaagagguc gcuggcccgg uucugc 1236
<210> 389
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 389
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc accaccaagc 180
ccugcacccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccucccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccagagg ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aaaccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccg 480
gccccuaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc caagggaacc ccagguguac 540
acccugccac ccagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgcagug gagugggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccacc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cugacugucg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuugc acaaccacua cacccagaaa agccucucuc uuucucccgg caagcggaag 840
aagaggagcc ugucccagga ggacgccccc caaacucccc ggcccgucgc ugagaucgug 900
cccagcuuca ucaauaaaga cacggagaca aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacacugagc gagaugcagc ccgcacuucc ccagcuccag 1020
cagcacgugc ccguccugaa ggacagcagc uuacucuucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcagauucu agccccuccg aacucaaaua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa aagacagcug uauucagccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca caaagcggag ccucgcccgg uucugc 1236
<210> 390
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 390
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc cccucccagu 180
ccugcccccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccgcccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccugagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gccccaaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc cuagggagcc gcagguguac 540
acccugccac ccucucggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga uaucgccguc gagugggaga gcaacggcca accugagaac 660
aacuacaaga ccaccccucc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cucaccgugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaagcccugc acaaccacua cacccagaaa agcuugagcc ucagucccgg caagcggaag 840
aagcgauccu ugagccagga ggacgcuccu cagacccccc ggccuguggc ggagaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga cacugaaacc auuaacauga ugagcgaguu cguggcuaac 960
uugccccagg agcugaagcu gacucugagc gagaugcagc ccgcucuccc gcagcuucag 1020
cagcacgugc ccguguugaa ggacagcagc cuccucuucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgcugauucu uccccuagcg aacugaaaua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gaggcagcug uacucugccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca caaagaggag ccuggcccgg uucugc 1236
<210> 391
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 391
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccuc cccuccgucc 180
cccgcucccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccucccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gacccagaag ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccu 480
gcuccuaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc cucgggaacc ccagguguac 540
acccugcccc cuagccggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga uauugccgug gagugggaga gcaacgggca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccgcc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cuuaccgucg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaagcccugc acaaccacua cacccagaaa agccucuccc ugucucccgg caagcggaag 840
aagcgcaguc ucucucagga ggacgcuccu cagacccccc ggcccgucgc cgaaaucgug 900
cccagcuuca ucaacaaaga cacugaaacc auaaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaaguu gacucugagc gagaugcagc ccgcccugcc acagcuccag 1020
cagcacgugc ccguccugaa ggacagcagc cuguuguucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgauucc agccccucug agcucaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gccggaagaa aaggcaguua uacagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggaugua ccaagaggag ucuggcccgg uucugc 1236
<210> 392
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 392
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag uccccccucu 180
cccgcacccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccucccaa gcccaaggac 240
acccuguaca ucacccggga gcccgaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgagg ucaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagacc 360
aagccccggg aggagcagua caacagcacc uaccgggugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguac aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccg 480
gcgccaaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggucagc ccagggagcc ccagguguac 540
acccugccuc ccucucggga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgcugug gagugggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccucc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cugacagugg acaagagccg guggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuugc acaaccacua cacccagaaa agccugagcc ucucccccgg caagcggaag 840
aagaggagcc ucagccagga ggacgcuccc cagacccccc ggccaguggc cgaaaucgug 900
cccagcuuca ucaacaagga uacagagaca auuaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu cacacugagc gagaugcagc ccgcccugcc acaguugcag 1020
cagcacgugc ccguacucaa ggacagcagc cuccuuuucg aggaguucaa gaagcugauc 1080
cggaaccggc agagcgaggc cgccgacagu agcccaagcg aacucaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcaggaaaaa gagacagcug uauagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugua ccaagcggag cuuggcccgg uucugc 1236
<210> 393
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 393
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg aggugguggc ucaggcggcg ggggauccgg cggugguggu 180
agcggcggag gcgggucugg uggcggcggu ucagggggag ggggcagugg gggaggaggc 240
ucuuuccaga gcuccuccuc caaggcccca cccccuagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc caaggagggg guggcuccgg gggcggugga 360
ucggguggag gcggcucagg uggcgggggu ucuggggggg gcggaucugg cggaggaggg 420
ucggggggug ggggaucaca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 394
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 394
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg cggcgggggg ucagggggag gaggguccgg gggaggcggg 180
agcgguggag gcggcuccgg uggugggggu ucuggcggcg guggcagugg gggaggggga 240
uccuuccaga gcucauccuc caaggcuccu cccccgagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc caggggggcg gcggcucagg cggggguggu 360
aguggcggag gaggaucugg agggggcggg ucaggagggg guggaagcgg gggggguggc 420
ucugguggcg ggggcucuca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 395
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 395
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg agggggugga ucuggggggg gcggcagcgg ugggggcggg 180
uccggcggag guggaagugg cggggggggu ucaggagggg gaggcucugg aggcggagga 240
aguuuccaga gcuccuccuc aaaggcgccu cccccaagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc caagguggcg gugguagcgg gggugguggg 360
ucaggcggcg gcggaucggg uggcggaggg ucugguggag gugggagcgg cgggggcggu 420
agcggcggug gcggcuccca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 396
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 396
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg uggcggcgga ucuggcggug gggggucggg ugggggaggu 180
uccgggggag gcgguucagg gggcgggggc ucaggcggug guggaagugg gggcggcggc 240
aguuuccaga gcuccagcuc caaggccccg ccucccagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggagggg gagggucagg aggcggaggg 360
uccgggggug gaggaucggg agguggcggu agcggcgggg ggggcagcgg aggcggggga 420
ucugguggug gggguucuca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 397
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 397
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg cggcgguggc agugggggcg gagggucugg uggugggggc 180
ucuggcgggg gaggaagugg agggggcggc ucuggaggug gaggcucagg uggggguggg 240
agcuuccaga gcucuagcag caaggcgcca cccccaagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggcggcg gagguucugg gggagggggu 360
uccggcgggg ggggcagcgg aggggggggu agcgggggug gcgggagcgg aggaggggga 420
uccgguggcg gaggauccca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 398
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 398
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg uggagggggg ucagggggag ggggcuccgg cgggggaggc 180
ucgggaggag gcgguucagg ugggggcggc ucugguggag gcggauccgg uggcgggggg 240
agcuuccaga gcagcucguc caaggccccu cccccaagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggugggg gaggaagcgg aggugguggc 360
uccgggggcg guggcagugg cggagggggu ucuggggggg gcgggucggg uggaggugga 420
agcgggggug guggauccca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 399
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 399
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg ggguggugga ucagguggag gcggcagugg cgggggcggu 180
ucugggggag gagggucggg agggggggga ucugguggug gcggaagugg cggcggugga 240
uccuuccaga gcaguagcuc uaaggcccca ccgcccagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggugggg guggcuccgg cggcggaggc 360
ucugggggcg gcgggagcgg agggggcggg ucaggcgggg ggggcucagg gggagguggg 420
uccgguggag guggaaguca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 400
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 400
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg cggaggugga ucaggcggcg guggguccgg ggguggcggg 180
ucagggggcg gaggguccgg cggcggggga agcgguggcg guggcuccgg aggaggaggc 240
ucuuuccaga gcuccucauc uaaggccccg ccgcccagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggcggug gaggcagugg ugggggaggg 360
aguggaggcg gggggagugg gggcgggggu ucggguggug gagguagcgg gggcggcgga 420
ucugguggcg gaggaagcca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 401
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 401
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg gggagguggg ucagguggcg ggggauccgg cggagggggu 180
ucaggaggcg gcgggagcgg aggugguggu ucggguggag gggggagcgg uggcggagga 240
agcuuccaga gcuccuccuc uaaggccccg cccccuagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc caggggggcg guggaagcgg cgggggcgga 360
ucugggggug ggggcucugg ugggggaggg aguggggggg gaggcucagg gggugguggc 420
ucugggggcg gcggcucaca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 402
<211> 510
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 402
augggcguga aggugcuguu cgcccugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggccgg gagcuggugc gggcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcgg cggaggcgga agcggcgggg ggggcagugg uggagguggu 180
ucugguggcg ggggaucugg aggcggcggg ucaggcggug ggggcagcgg aggagggggc 240
ucuuuccaga gcuccucauc uaaggcuccu cccccaagcc ugcccagccc cagccggcug 300
cccggcccca gcgacacccc cauccugccc cagggagggg gagggagugg gggcggcggc 360
ucugggggug gaggcucagg gggcggagga agcggagggg gugguagcgg gggcgggggu 420
aguggggggg guggcuccca gcuguacagc gcccuggcca acaagugcug ccacgugggc 480
ugcaccaagc ggagccuggc ccgguucugc 510
<210> 403
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 403
augggcguga aagugcuguu ugcgcugauu ugcauugcgg uggcggaagc ggacucaugg 60
auggaggaag uuauuaaauu augcggccgc gaauuaguuc gcgcgcagau ugccauuugc 120
ggcauggagc ccaagagcag cgacaagacc cacaccagcc cccccagccc cgcccccgag 180
cugcugggcg gcagcagcgu guuccuguuc ccccccaagc ccaaggacac ccucuacauc 240
accagggagc ccgaggugac cugcguggug guggacguga gccacgagga ccccgaggug 300
aaguucaacu gguacgugga cggcguggag gugcacaacg ccaagaccaa gcccagggag 360
gagcaguaca acagcaccua caggguggug agcgugcuga ccgugcugca ccaggacugg 420
cugaacggca aggaguacaa gugcaaggug agcaacaagg cccugcccgc ccccaucgag 480
aagaccauca gcaaggccaa gggccagccc agggagcccc agguguacac ccugcccccc 540
agcagggacg agcugaccaa gaaccaggug agccugaccu gccuggugaa gggcuucuac 600
cccagcgaca ucgccgugga gugggagagc aacggccagc ccgagaacaa cuacaagaca 660
accccccccg ugcuggacag cgacggcagc uucuuccugu acagcaagcu gaccguggac 720
aagagcaggu ggcagcaggg caacguguuc agcugcagcg ugaugcacga ggcccugcac 780
aaccacuaca cccagaagag ccugagccug agccccggca agaggaagag caccuggagc 840
aaaaggucuc ugagccagga agaugcuccu cagacaccua gaccaguggc agaaauugug 900
ccauccuuca ucaacaaaga uacagaaacc auaaauauga ugucagaauu uguugcuaau 960
uugccacagg agcugaaguu aacccugucu gagaugcagc cagcauuacc acagcuacaa 1020
caacauguac cuguauuaaa agauuccagu cuucucuuug aagaauuuaa gaaacuuauu 1080
cgcaauagac aaagugaagc cgcagacagc aguccuucag aauuaaaaua cuuaggcuug 1140
gauacucauu cucgaaaaaa gagacaacuc uacagugcau uggcuaauaa auguugccau 1200
guugguugua ccaaaagauc ucuugcuaga uuuugc 1236
<210> 404
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 404
augcccagac uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc uguuacuuaa ccaguucagc 60
agagccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag agagcuggug 120
agagcccaga ucgccaucug cggcaugucu accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucaccagag agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagu acaacagcac cuacagagug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg ggaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
cccagagagc cccaggugua cacccugccc cccagccgag acgaacugac caagaaucag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggaa 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguauagcaa gcugaccgug gacaagucaa gauggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 840
cugagccccg gcaagagaaa gaagagaagc cugagccagg aggacgcccc ccagacaccu 900
agacccgugg ccgagaucgu gcccagcuuu aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
auguccgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug ccagugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau cagaaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agagacaacu guacagcgcc 1200
cuggccaaua agugcugcca cgugggcugc accaagagaa gccuggccag auucugc 1257
<210> 405
<211> 531
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 405
augccuaggu uguuuuucuu ucacuuacua ggaguauguu uacuccugaa ucaauuuucu 60
agggcugucg cagauaguug gauggaggag guaaucaaau uauguggaag agaguuaguu 120
cgugcucaaa uagcuauuug ugguauguca acuuggagcg gagggggcgg cucgggcgga 180
gggggaagcg gagggggugg cucaggaggg ggcgguucug guggcggcgg aucagguggu 240
ggaggaucag gaggcggggg cagcuuucag ucgucgucau ccaaagcgcc uccacccuca 300
cugcccuccc ccuccagauu accugggccc uccgauaccc ccauuuugcc acaagggggu 360
ggaggauccg gggggggagg cagugguggu ggugguagcg gugguggggg cuccggugga 420
ggcggaagug gugggggagg auccgggggg ggcggaucgc agcucuauuc cgcucuugcc 480
aauaaauguu gccacgucgg uuguacaaaa cggucccugg ccagauucug c 531
<210> 406
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 406
augcccagac uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc uguuacuuaa ccaguucagc 60
agagccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag agagcuggug 120
agagcccaga ucgccaucug cggcaugucu accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucaccagag agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagcccaga gaggagcagu acaacagcac cuacagagug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg ggaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
cccagagagc cccaggugua cacccugccc cccagccgag acgaacugac caagaaucag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggaa 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguauagcaa gcugaccgug gacaagucaa gauggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 840
cugagccccg gcaagagaaa gaagagaagc cugagccagg aggacgcccc ccagacaccu 900
agacccgugg ccgagaucgu gcccagcuuu aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
auguccgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug ccagugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau cagaaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agagacaacu guacagcgcc 1200
cuggccaaua agugcugcca cgugggcugc accaagagaa gccuggccag auucugc 1257
<210> 407
<211> 1236
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 407
augggcguga aggugcuguu cgcacugauc ugcaucgccg uggccgaggc cgacagcugg 60
auggaggagg ugaucaagcu gugcggcaga gagcugguga gagcccagau cgccaucugc 120
ggcaugagca ccuggagcga gcccaagagc agcgacaaga cccacaccag cccccccagc 180
cccgcucccg agcugcuggg cggcagcagc guguuccugu ucccccccaa gcccaaggac 240
acccuguaca uaaccagaga gccagaggug accugcgugg ugguggacgu gagccacgag 300
gaccccgagg ugaaguucaa cugguacgug gacggcgugg aggugcacaa cgccaagaca 360
aagcccagag aggagcagua caacagcacc uacagagugg ugagcgugcu gaccgugcug 420
caccaggacu ggcugaacgg caaggaguau aagugcaagg ugagcaacaa ggcccugccc 480
gcccccaucg agaagaccau cagcaaggcc aagggccagc ccagagagcc ccagguguac 540
acccugcccc ccagcagaga cgagcugacc aagaaccagg ugagccugac cugccuggug 600
aagggcuucu accccagcga caucgccgug gagugggaga gcaacggcca gcccgagaac 660
aacuacaaga ccaccccccc cgugcuggac agcgacggca gcuucuuccu guacagcaag 720
cugaccgugg acaagagcag auggcagcag ggcaacgugu ucagcugcag cgugaugcac 780
gaggccuuac acaaccacua cacccagaag agccuaagcc ugagccccgg caagagaaag 840
aagagaaguc ugagccagga ggacgccccc cagaccccca gacccguggc cgagaucgug 900
cccuccuuca uuaacaagga caccgagacc aucaacauga ugagcgaguu cguggccaac 960
cugccccagg agcugaagcu gacccugagc gaaaugcaac ccgcccugcc ccagcugcaa 1020
cagcacgugc ccgugcugaa ggacagcagc cugcuguucg aggaguucaa aaagcugauc 1080
agaaacagac agagcgaggc cgccgacucc agccccagcg agcugaagua ccugggccug 1140
gacacccaca gcagaaagaa gagacagcug uacagcgccc uggccaacaa gugcugccac 1200
gugggcugca ccaagagaag ccuggccaga uucugc 1236
<210> 408
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 408
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucaccaggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagu acaacagcac cuacagggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
cccagggagc cccaggugua cacccugccc cccagcaggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugaccgug gacaagagca gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 840
cugagccccg gcaagaggaa gaaaaggucu cugagccagg aagaugcucc ucagacaccu 900
agaccagugg cagaaauugu gccauccuuc aucaacaaag auacagaaac cauaaauaug 960
augucagaau uuguugcuaa uuugccacag gagcugaagu uaacccuguc ugagaugcag 1020
ccagcauuac cacagcuaca acaacaugua ccuguauuaa aagauuccag ucuucucuuu 1080
gaagaauuua agaaacuuau ucgcaauaga caaagugaag ccgcagacag caguccuuca 1140
gaauuaaaau acuuaggcuu ggauacucau ucucgaaaaa agagacaacu cuacagugca 1200
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1257
<210> 409
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 409
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucaccaggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagu acaacagcac cuacagggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
cccagggagc cccaggugua cacccugccc cccagcaggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugaccgug gacaagagca gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 840
cugagccccg gcaagaggaa gaaaaggucu cugagccagg aagaugcucc ucagacaccu 900
agaccagugg cagaaauugu gccauccuuc aucaacaaag auacagaaac cauaaauaug 960
augucagaau uuguugcuaa uuugccacag gagcugaagu uaacccuguc ugagaugcag 1020
ccagcauuac cacagcuaca acaacaugua ccuguauuaa aagauuccag ucuucucuuu 1080
gaagaauuua agaaacuuau ucgcaauaga caaagugaag ccgcagacag caguccuuca 1140
gaauuaaaau acuuaggcuu ggauacucau ucucgaaaaa agagacaacu cuacagugca 1200
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1257
<210> 410
<211> 918
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 410
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg aggugcagcu gcuggagagc 180
ggcggcggcc uggugcagcc cggcggcagc cugaggcuga gcugcguggc cagcggcuuc 240
accuucaaca gcagcgccau gagcugggug aggcaggccc ccggcaaggg ccuggagugg 300
gugagcgcca ucagcggcag cggcgacagg accuacuacg ccgacagcgu gaagggcagg 360
uucaccauca gcagggacaa cagcaagaac acccuguacc ugcagaugaa cagccugagg 420
gccgaggaca ccgccgugua cuacugcacc accgaccccc ccagguacca cuacaacggc 480
cuggccguga ggggccaggg caccaccgug accgugagca gcaaaagguc ucugagccag 540
gaagaugcuc cucagacacc uagaccagug gcagaaauug ugccauccuu caucaacaaa 600
gauacagaaa ccauaaauau gaugucagaa uuuguugcua auuugccaca ggagcugaag 660
uuaacccugu cugagaugca gccagcauua ccacagcuac aacaacaugu accuguauua 720
aaagauucca gucuucucuu ugaagaauuu aagaaacuua uucgcaauag acaaagugaa 780
gccgcagaca gcaguccuuc agaauuaaaa uacuuaggcu uggauacuca uucucgaaaa 840
aagagacaac ucuacagugc auuggcuaau aaauguugcc auguugguug uaccaaaaga 900
ucucuugcua gauuuugc 918
<210> 411
<211> 918
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 411
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg aggugcagcu gcuggagagc 180
ggcggcggcc uggugcagcc cggcggcagc cugaggcuga gcugcgccgc cagcggcuuc 240
accuucagca gcuacgccau gagcugggug aggcaggccc ccggcaaggg ccuggagugg 300
gugagcgcca ucagcggcag cggcggcagc accuacuacg ccgacagcgu gaagggcagg 360
uucaccauca gcagggacaa cagcaagaac acccuguacc ugcagaugaa cagccugagg 420
gccgaggaca ccgccgugua cuacugcacc aaggaccccc ccagguacca cuacaccggc 480
cuggccguga ggggccaggg caccaccgug accgugagca gcaaaagguc ucugagccag 540
gaagaugcuc cucagacacc uagaccagug gcagaaauug ugccauccuu caucaacaaa 600
gauacagaaa ccauaaauau gaugucagaa uuuguugcua auuugccaca ggagcugaag 660
uuaacccugu cugagaugca gccagcauua ccacagcuac aacaacaugu accuguauua 720
aaagauucca gucuucucuu ugaagaauuu aagaaacuua uucgcaauag acaaagugaa 780
gccgcagaca gcaguccuuc agaauuaaaa uacuuaggcu uggauacuca uucucgaaaa 840
aagagacaac ucuacagugc auuggcuaau aaauguugcc auguugguug uaccaaaaga 900
ucucuugcua gauuuugc 918
<210> 412
<211> 531
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 412
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accugguccg ggucgaccga uagcgguucc 180
gacacuuccu ccggaaacuc cggggacggc aacagcggcu uccagucgag cuccucaaag 240
gccccaccuc ccucacugcc cuccccuucu cggcucccug gaccguccga uacuccgauc 300
cugccgcaau uccaguccag cagcuccaag gccccuccac cgucacugcc auccccgucg 360
agguugccgg gacccucaga cacgcccauc cugccucagg gcagcaccga cucgggaucc 420
gauaccucgu ccgggaacuc cggcgacggg aacucgggac aacucuacag ugcauuggcu 480
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug c 531
<210> 413
<211> 441
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 413
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accugguccg gaggaggagg guccuuccag 180
ucaagcagcu ccaaggcccc uccaccaagc cucccuagcc cguccaggcu uccgggaccg 240
ucggauacuc ccauccugcc ccaguuccag uccucgucgu ccaaggcucc cccuccaucc 300
cugcccucac ccucacggcu gccaggaccg uccgacaccc cuauccugcc gcaaggcggu 360
ggagggucac aacucuacag ugcauuggcu aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa 420
agaucucuug cuagauuuug c 441
<210> 414
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 414
augccgagac uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucucu 60
cgagccgugg cggauagcug gauggaggag gugaucaagc ucuguggccg ugagcucguc 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu cgccccccag cccugccccc gagcuccugg gcggcagcuc cgucuuccug 240
uucccgccca agccgaagga uacccuguac aucaccaggg agcccgaggu gaccuguguc 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuua auugguacgu cgacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagu acaacuccac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugacaguccu gcaucaggac uggcugaacg gcaaggaaua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccaa 540
ccccgggaac cccaggucua cacccugccu cccagcaggg augagcugac caagaaccag 600
guuagccuga ccugccuggu caagggcuuc uaccccuccg acauugccgu ggagugggag 660
agcaacgguc agcccgagaa caacuacaag accaccccuc ccgugcucga cagcgacggu 720
uccuucuucc uguacagcaa gcugacggug gacaagagcc gcuggcagca gggcaacgug 780
uucagcugcu ccgugaugca cgaagcccug cacaaccacu acacccagaa gucccugagc 840
cugucacccg gcaagaggaa gaagcggagc cugucccagg aggaugcccc ccagaccccu 900
agaccugugg ccgaaauugu gcccuccuuu aucaacaagg acaccgaaac caucaauaug 960
auguccgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaaac ucacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca acagcacgug cccgugcuga aggacucauc ucugcuguuc 1080
gaggaauuca agaagcugau caggaacagg cagagcgagg ccgccgacag cagucccagc 1140
gagcugaaau accugggccu ggacacccac ucccgcaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cguaggcugc accaaacgca gccuggcacg guucugc 1257
<210> 415
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 415
augccccguc ucuucuucuu ccaccuccuc ggagugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacuccug gauggaggaa gugaucaagc ucugcggcag ggagcucgug 120
agggcccaaa ucgccaucug cggcaugagc accugguccg agcccaagag cuccgacaag 180
acucacacca gccccccgag ccccgccccc gagcugcugg gcgggagcag cguguuucug 240
uucccuccca agcccaagga cacccuguac aucacccgcg agccggaagu gaccugcgug 300
gugguggacg ucucccacga ggaccccgag gugaaauuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaagugcaca augcgaagac caagcccagg gaggagcagu acaacagcac cuacagggua 420
gucagcgugc ugaccgugcu gcaucaggac uggcugaaug gcaaggagua caagugcaaa 480
guguccaaua aggcucugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaagc caagggacag 540
cccagagagc cccaggugua cacccugccc ccgagcaggg acgagcugac caagaaccag 600
gucagccuga ccugccuggu gaagggguuu uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag acgacacccc cggugcugga cagcgacggg 720
ucuuucuucc uguacagcaa gcugaccgug gauaaaucca gauggcagca gggcaacguc 780
uucagcugcu ccgugaugca ugaggcccug cacaaccacu acacgcagaa gucacugucc 840
cugagccccg gcaagaggaa gaagcggagc cugagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgugg cggagaucgu gccuagcuuc aucaacaagg acaccgagac uaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ucacccuguc cgaaaugcag 1020
ccggcccucc cgcagcugca gcagcacgua cccgugcuga aagauuccag ucugcuguuu 1080
gaggaguuca agaagcugau caggaaucgg caguccgagg ccgccgacag cagcccgucc 1140
gaguugaagu accucggccu ggauacccau ucgcggaaga agaggcaacu guacuccgcc 1200
cuggccaaca agugcuguca cguggggugc acaaagagaa gccuggcccg uuucugc 1257
<210> 416
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 416
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcguguguc uccuccucaa ccaauuuagc 60
cgugccgugg cggacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugugguag agagcucguc 120
cgugcccaga uugccaucug uggcaugucc accuggagcg agcccaaguc cagcgacaag 180
acccacacca gcccgcccag cccugccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uucccgccca agcccaagga cacacuguac auaacccggg agcccgaggu gaccugugug 300
guggucgacg ucagccacga ggaccccgag gucaaauuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac uaaaccccgg gaggaacaau acaacuccac cuacagggug 420
guauccgugc ugaccguccu gcaccaggau uggcucaacg gcaaagagua uaagugcaaa 480
guguccaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacga ucagcaaggc caagggccag 540
ccccgggagc cccaggucua cacgcugccc cccagcagag acgagcuuac caagaaccag 600
guuucccuga ccugccuggu gaagggcuuc uacccgagcg acauugccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa uaacuacaag accacgcccc ccgugcucga cuccgacggc 720
agcuucuuuc ucuacuccaa gcugaccguu gacaagagcc gcuggcagca gggaaacgug 780
uucagcugca gcgucaugca cgaggcccug cacaaccacu acacgcagaa gucccugagc 840
cugucccccg gcaaacguaa gaagaggagc cugagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
aggccagugg ccgagaucgu ccccuccuuc auaaacaagg acaccgaaac caucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccucag cgagaugcag 1020
cccgcccucc cccaacucca gcagcacgug cccgugcuca aggacagcag ccugcuguuu 1080
gaggaguuca agaaacugau ccgcaacaga cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcucaagu accugggucu ggacacccau agcaggaaga agaggcagcu guacagugcc 1200
cuggcgaaca agugcugcca cgugggcugc accaagagga gccuugccag guucugc 1257
<210> 417
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 417
augccgagac uuuucuucuu ccacuugcuc ggcgugugcc uccuccuuaa ccaauuuagc 60
agagccgugg cagacuccug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag ggagcucgug 120
agggcgcaga ucgccauuug cgguaugucc acauggagcg agcccaagag cucagauaag 180
acccacacca gcccucccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccuc 240
uucccgccca aacccaagga cacccuguac aucaccaggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gucgucgacg uaucccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggggug 360
gaggugcaua acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
guguccgugc ugacaguccu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gucagcaaca aagcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucucaaaggc caaggggcag 540
ccccgcgagc cacaggugua uacgcugccg cccagcagag acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu caagggcuuc uaucccagcg acaucgccgu ugagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuauaag accacuccac ccguccugga cagcgauggg 720
agcuucuucc uguacuccaa gcugaccgug gacaagagcc gcuggcagca gggcaaugug 780
uucagcugcu ccgugaugca cgaggcccug cauaaccauu acacccagaa gucgcugagc 840
cugagcccug gcaagaggaa gaaacgcagc cugagccagg aggaugcccc gcagaccccu 900
cggccggugg ccgagaucgu gccuuccuuc aucaacaagg acaccgagac aaucaacaug 960
auguccgagu ucguagccaa ucugccccag gagcugaagc ugacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcaacacguc ccggugcuca aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuua agaagcugau ccgcaacagg caguccgagg ccgccgauag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu cgacacacau agcaggaaga agcggcagcu cuacuccgcc 1200
cucgccaaua agugcuguca cgugggcugc accaagagaa gccuggccag auuuugc 1257
<210> 418
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 418
augccccggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ucaguucucc 60
agggccgucg ccgacuccug gauggaggag gugaucaagc ucugcgggcg cgagcucgug 120
agagcccaga uugccaucug cggcaugucc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacaccu ccccucccag ccccgcgccg gagcugcugg gcggcagcag cguguuucug 240
uucccuccca agcccaagga cacccuguac aucacuaggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gucguggaug ugagccacga agauccagag gugaaguuca auugguacgu cgacggcgug 360
gaggugcaca augccaagac caagcccagg gaggagcagu acaacagcac cuacaggguc 420
guuuccgugc ucaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gucagcaaca aagcccuacc cgcccccauc gagaagacaa ucagcaaagc caagggccag 540
cccagggagc cccaggugua uacccuccca cccuccaggg acgaacugac caagaaucag 600
gucagccuga ccugccuugu caagggcuuu uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc aacccgagaa caauuacaag accaccccgc ccguccugga cuccgacggg 720
uccuucuucc uauacagcaa gcugaccgug gacaagucca gauggcagca agggaacgug 780
uucuccugcu ccgugaugca cgaggcccug cacaaucacu acacgcagaa gagucugagc 840
cugagccccg ggaagcggaa gaagcgaucc cugagccagg aggacgcccc gcagacaccc 900
cgccccgugg ccgagauugu gcccagcuuc aucaacaagg acaccgagac gaucaauaug 960
auguccgagu ucguggccaa ccugccacag gaacugaagc ugacccugag cgaaaugcag 1020
ccugcgcuuc cgcagcugca acaacauguc cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuu 1080
gaggaguuca agaagcugau aaggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gaacugaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agaggcaacu guauagcgca 1200
cuggcuaaua agugcuguca cgugggcugc accaaacgca gccuggccag guucugc 1257
<210> 419
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 419
augcccagac uguucuucuu ccaccuccuc ggggugugcc uccuccucaa ccaguucucc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agagcucguc 120
agggcccaga ucgccaucug cgguaugagc acguggagcg agcccaagag cuccgacaag 180
acccauacaa gccccccgag ccccgcgccc gaacuccugg ggggcuccag cguguuucug 240
uucccgccca agcccaaaga cacccuguac aucacccggg agccugaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugucccacga agacccugag gugaaauuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaua acgccaagac caaaccgcgu gaggagcaau acaacagcac cuaccgggug 420
gugucggugc ugaccguccu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caaguguaag 480
guguccaaca aggcucuccc cgcccccauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccag 540
ccccgcgagc cccaggugua cacccucccg cccagccgcg acgagcugac caagaaccag 600
gugucccuga ccugcuuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggaaugggag 660
uccaacggcc agccggagaa caacuacaag accacucccc ccguccugga cagcgacggc 720
uccuucuucc uguacagcaa gcugaccguc gacaaguccc gcuggcagca ggggaacgug 780
uucuccugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacucagaa gucucugucc 840
cuuagccccg gcaagcggaa gaagaggagc cugagccagg aggacgcccc ccaaacgccu 900
cgccccgugg ccgagauugu gcccagcuuc aucaacaagg acaccgaaac caucaauaug 960
auguccgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccuguc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuua agaagcugau cagaaacaga caauccgagg cagccgacuc cucccccagc 1140
gagcugaaau accugggccu ggacacccau ucccggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgugggcugc accaagagaa gccuggccag guucugc 1257
<210> 420
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 420
augccccgcc uguucuucuu ccaccuccuc ggcguguguc uccuccuuaa ccaguucucc 60
cgugccgugg ccgauagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg agagcucgug 120
agggcacaga ucgccaucug uggcaugucc accuggagcg aacccaagag cuccgauaag 180
acccacacca gccccccuuc ucccgccccc gagcugcucg gcggcagcuc gguguuccug 240
uucccaccca aacccaagga cacccucuac aucaccagag agcccgaggu aaccugugug 300
gucguggaug ugucccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggggug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacagcac cuaccgcgug 420
gugagcgugc ugacagugcu gcaccaggau uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaua aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caaagggcag 540
cccagagaac cccaggugua cacccugccc cccagccggg acgagcugac caagaaccaa 600
gugagccuca ccugccuggu gaagggguuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacgccuc ccgugcugga cuccgacggg 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugaccgug gacaagagcc gcuggcaaca ggggaacgug 780
uuuagcugua gcgucaugca cgaggcccug cacaaucacu acacccagaa gucccugagc 840
cugucccccg gcaagaggaa gaagcguucc cugagccagg aggacgcccc ccagacaccc 900
aggccggucg cagagaucgu gcccuccuuc aucaacaagg acaccgagac aaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gaacugaagc ucacccuguc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcuaca gcagcacgua cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau aaggaaucgc caguccgagg ccgccgacuc auccccuagc 1140
gagcugaagu accucggucu ggacacccac agccguaaga agaggcagcu guauuccgcc 1200
cuggccaaca aaugcugcca ugugggcugc accaagagaa gccuggcccg guucugc 1257
<210> 421
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 421
augccccggc uuuucuucuu ccacuuacuc ggcgugugcc uucuccuuaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca guccaccguc cccugccccc gaguuacugg gcggcagcag cguguuccug 240
uucccaccaa agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccugag gucaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc ugccccgauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccucgcgagc cucaggugua cacccugcca ccaagccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agccagagaa caacuacaag accacaccac ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugacagug gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccua cacaaccacu acacccagaa gucccugucu 840
cugucacccg gcaagcggaa gaagagaucc cugagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggccagugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auaccgagac gaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ucacacugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cgcaacucca gcagcacgug ccagugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgcugacag cucuccuagc 1140
gaacugaagu accugggccu ggacacccac agcaggaaga agcggcagcu guacucagcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugc acuaagagaa gccucgcccg guucugc 1257
<210> 422
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 422
augcccagac uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uaugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacaccu ccccgccguc cccagcuccc gagcuguuag gaggcagcag cguguuccug 240
uucccgccua agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccggag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc ugcaccuauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccaagagagc cucaggugua cacccugcca ccuagccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agccugagaa caacuacaag accacuccac ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcucaccgug gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcucug cacaaccacu acacccagaa gagucugucg 840
cugagccccg gcaagcggaa gaagagaagc cugagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggccagugg cagagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auaccgagac aauuaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcacugc cucaguugca gcagcacgug ccugugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacuc cagcccaucu 1140
gaacugaagu accugggccu ggacacccac agccgcaaga agcgccagcu guacucugcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggaugc acaaagcguu cccuggcccg guucugc 1257
<210> 423
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 423
augccccggc uuuucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uuugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccaccuag cccggcaccc gagcuccugg gcggcagcag cguguuccug 240
uucccuccaa agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccugag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc agccccuauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccucgcgagc cucaggugua cacccugccu ccaucccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agccagagaa caacuacaag accaccccuc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa guugaccguc gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaagcccua cacaaccacu acacccagaa gucccugagc 840
uugagccccg gcaagcggaa gaagcgcucc uugucccagg aggacgcccc gcaaaccccc 900
cggccagugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auacagagac aauuaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ucacacugag cgagaugcag 1020
cccgcucugc cacagcucca gcagcacgug ccugugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacuc cuccccaagc 1140
gagcucaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agaggcagcu cuacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugu accaagagaa gccuggcccg guucugc 1257
<210> 424
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 424
augcccagac uguucuucuu ccacuuauug ggcgugugcu ugcuucucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu ccccgccuuc cccugcaccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uucccuccua agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggacccugag gugaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
guguccaaca aggcccugcc ugccccaauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccag 540
ccacgggaac cucaggucua cacccugccu ccuagccgcg acgagcucac caagaaccag 600
gugucccuca ccugccucgu caagggcuuc uacccuucug auaucgccgu cgagugggag 660
uccaacgguc agccugagaa caacuacaag accaccccuc ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc uguacuccaa gcugaccgug gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaggcucug cacaaccacu acacccagaa gucccugagc 840
cugagccccg gcaagcgcaa gaagagaagc cugucacagg aggacgcccc ccagaccccu 900
cgcccugucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg acacggagac aaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccugccgcag gagcugaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccuuc cucagcucca gcagcacgug ccuguccuga aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgauag cucgccuucc 1140
gagcuaaagu accucggccu cgacacccac ucccggaaga agaggcagcu guauagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagagga gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 425
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 425
augccccguc uguucuucuu ccaccuucuc ggcgugugcc uccuacucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu cgccuccuag cccagccccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uucccaccga agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggacccagag gugaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
guguccaaca aggcccugcc agccccaauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccaa 540
ccuagagagc cucaggucua caccuugccu ccaagucgcg acgagcucac caagaaccag 600
gugucccuca ccugccucgu caagggcuuc uacccaagcg acaucgccgu cgagugggag 660
uccaacggcc agccugagaa caacuacaag accaccccgc ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc uguacuccaa gcugaccguc gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaggcucug cacaaccacu acacccagaa gucccugagc 840
cugagccccg gcaagcgcaa gaagagaagc cucagccagg aggacgcccc ccagaccccu 900
agaccggucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg acacagagac aaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ucugccucag gagcuuaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcuuugc cucagcucca gcagcacgug ccugugcuga aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc aagcccaucc 1140
gagcugaagu accucggccu cgacacccac ucccggaaga agaggcagcu cuacuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagcggu cccucgcccg cuucugc 1257
<210> 426
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 426
augccccggu uguucuucuu ccaccuuuug ggcgugugcc uucucuugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu cuccuccaag cccugcgccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uucccaccaa agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggacccagag gucaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
guguccaaca aggcccuccc agccccaauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccaa 540
ccuagagaac cacaggucua cacacucccu ccuagccgcg acgagcucac caagaaccag 600
gugucccuca ccugccucgu caagggcuuc uacccauccg auaucgccgu cgagugggag 660
uccaacggac agccggagaa caacuacaag accacaccuc ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc uguacuccaa gcugaccgug gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gucccucucc 840
cugagccccg gcaagcgcaa gaagagaagu cuuagccagg aggacgcccc ccagaccccu 900
agaccggucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg auacagagac gaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccugccacag gagcugaagc ugacacucuc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cucagcucca gcagcacgug ccagugcuga aggacuccuc auuacucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc uagcccuucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac ucccggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagcggu cccuugcccg cuucugc 1257
<210> 427
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 427
augccccggc uauucuucuu ccacuuacuc ggcgugugcc uccucuugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uuugcggccg ggagcuugug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccuccuuc cccugccccc gaguugcugg gaggcagcag cguguuccug 240
uucccaccga agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccagag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc agccccuauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccuagggagc cacaggugua cacccugcca ccuagccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agccggagaa caacuacaag accaccccac ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugacggug gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcucug cacaaccacu acacccagaa gaguuuaagc 840
uugucacccg gcaagcggaa gaagcggucc cugagccagg aggacgcccc ucagaccccc 900
agaccuguug ccgagaucgu gcccagcuuc aucaauaagg auaccgaaac caucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cucaguugca gcagcacgug ccugugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacuc cuccccuagc 1140
gagcucaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agagacagcu cuacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cguggguugc accaagcgca gccuggcccg guucugc 1257
<210> 428
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 428
augccccggu uauucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc ucuugcucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggaguuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacaccu ccccuccuag cccggcgccc gagcugcugg gaggcagcag cguguuccug 240
uucccuccua agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccagag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc ugccccuauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccacgcgagc cucaggugua cacccugcca ccuagccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agccugagaa caacuacaag accaccccuc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugacggug gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcucug cacaaccacu acacccagaa gucacugagc 840
cugucacccg gcaagcggaa gaagagaagc cugucccagg aggacgcacc ucagaccccc 900
cggccugugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaauaagg auaccgaaac caucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcucugc cucagcuuca gcagcacgug ccuguccuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacuc uagcccuagc 1140
gaacucaagu accugggccu ggacacccac agcagaaaga agcgccagcu cuacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggaugc accaagcgaa gccuggcccg guucugc 1257
<210> 429
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 429
augcccagac ucuucuucuu ccaccuuuug ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu ccccgccuag cccugccccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uucccuccaa agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggacccggag gugaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
guauccaaca aggcccugcc ugcuccuauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccaa 540
ccuagagagc cacaggucua cacccugccu ccgucccgcg acgagcucac caagaaccag 600
gugucccuca ccugccucgu caagggcuuc uacccuagcg acaucgccgu cgagugggag 660
uccaacggcc agccugagaa caacuacaag accaccccuc ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc uuuacuccaa gcugaccguc gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaggcccuc cacaaccacu acacccagaa gucccucucg 840
cucucccccg gcaagcgcaa gaagagaucc cugucgcagg aggacgcccc ccagaccccu 900
agaccggucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg acacagaaac caucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa cuugccacag gagcugaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccucc cacagcucca gcagcacgug ccuguccuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgauag cucaccuucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac uccagaaaga agcggcagcu guacuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagagaa gccucgcccg cuucugc 1257
<210> 430
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 430
augccccgac uguucuucuu ccacuugcuu ggcgugugcc uccucuuaaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu cuccgccaag cccagcuccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uucccuccua agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggacccagag gucaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
guguccaaca aggcccugcc ugccccuauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccag 540
ccuagagagc cucaggucua cacccugcca ccuucgcgcg acgagcucac caagaaccag 600
gugucccuca ccugccucgu caagggcuuc uacccauccg acaucgccgu cgagugggag 660
uccaacggcc aaccugagaa caacuacaag accaccccac ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc uguacuccaa gcugaccgug gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaagcccug cacaaccacu acacccagaa gucccucagc 840
uugucccccg gcaagcgcaa gaagcggucc cugucccagg aggacgcccc ccagaccccu 900
agaccugucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg auaccgagac uaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccucccacag gagcugaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcucugc cacagcucca gcagcacguc ccugugcuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc cagcccuagc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac uccaggaaga agagacagcu cuacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagagaa gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 431
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 431
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagcg agcccaagag cagcgacaag 180
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 240
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucacccggg agcccgaggu gaccugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 360
gaggugcaca acgccaagac caagccccgg gaggagcagu acaacagcac cuaccgggug 420
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 540
ccccgggagc cccaggugua cacccugccc cccagccggg acgagcugac caagaaccag 600
gugagccuga ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 660
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccgugcugga cagcgacggc 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugaccgug gacaagagcc gguggcagca gggcaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 840
cugagccccg gcaagcggaa gaagcggagc cugagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugc accaagcgga gccuggcccg guucugc 1257
<210> 432
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 432
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgcgaucug cgggaugagc acguggagcg agccgaagag cagcgacaag 180
acgcacacga gcccgccgag cccggcgccg gagcugcugg gggggagcag cguguuccug 240
uucccgccga agccgaagga cacgcuguac aucacgaggg agccggaggu gacgugcgug 300
gugguggacg ugagccacga ggacccggag gugaaguuca acugguacgu ggacggggug 360
gaggugcaca acgcgaagac gaagccgagg gaggagcagu acaacagcac guacagggug 420
gugagcgugc ugacggugcu gcaccaggac uggcugaacg ggaaggagua caagugcaag 480
gugagcaaca aggcgcugcc ggcgccgauc gagaagacga ucagcaaggc gaaggggcag 540
ccgagggagc cgcaggugua cacgcugccg ccgagcaggg acgagcugac gaagaaccag 600
gugagccuga cgugccuggu gaagggguuc uacccgagcg acaucgcggu ggagugggag 660
agcaacgggc agccggagaa caacuacaag acgacgccgc cggugcugga cagcgacggg 720
agcuucuucc uguacagcaa gcugacggug gacaagagca gguggcagca ggggaacgug 780
uucagcugca gcgugaugca cgaggcgcug cacaaccacu acacgcagaa gagccugagc 840
cugagcccgg ggaagaggaa gaagaggagc cugagccagg aggacgcgcc gcagacgccg 900
aggccggugg cggagaucgu gccgagcuuc aucaacaagg acacggagac gaucaacaug 960
augagcgagu ucguggcgaa ccugccgcag gagcugaagc ugacgcugag cgagaugcag 1020
ccggcgcugc cgcagcugca gcagcacgug ccggugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau caggaacagg cagagcgagg cggcggacag cagcccgagc 1140
gagcugaagu accuggggcu ggacacgcac agcaggaaga agaggcagcu guacagcgcg 1200
cuggcgaaca agugcugcca cguggggugc acgaagagga gccuggcgag guucugc 1257
<210> 433
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 433
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accugguccg agcccaaguc cuccgacaag 180
acccacaccu ccccccccuc ccccgccccc gagcuccucg gcggcuccuc cgucuuccuc 240
uuccccccca agcccaagga cacccucuac aucacccgcg agcccgaggu caccugcguc 300
gucgucgacg ucucccacga ggaccccgag gucaaguuca acugguacgu cgacggcguc 360
gagguccaca acgccaagac caagccccgc gaggagcagu acaacuccac cuaccgcguc 420
gucuccgucc ucaccguccu ccaccaggac uggcucaacg gcaaggagua caagugcaag 480
gucuccaaca aggcccuccc cgcccccauc gagaagacca ucuccaaggc caagggccag 540
ccccgcgagc cccaggucua cacccucccc cccucccgcg acgagcucac caagaaccag 600
gucucccuca ccugccucgu caagggcuuc uaccccuccg acaucgccgu cgagugggag 660
uccaacggcc agcccgagaa caacuacaag accacccccc ccguccucga cuccgacggc 720
uccuucuucc ucuacuccaa gcucaccguc gacaaguccc gcuggcagca gggcaacguc 780
uucuccugcu ccgucaugca cgaggcccuc cacaaccacu acacccagaa gucccucucc 840
cucucccccg gcaagcgcaa gaagcgcucc cucucccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cgccccgucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccucccccag gagcucaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccucc cccagcucca gcagcacguc cccguccuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc cucccccucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu cuacuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagcgcu cccucgcccg cuucugc 1257
<210> 434
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 434
augccccgcc uguucuucuu ccaccuccuc ggcgucugcc uccuccucaa ccaguucucc 60
cgcgccgugg cggacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg cgagcucgug 120
cgcgcccaga ucgccauuug cggcauggag cccaagagcu ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgcccagcc ccgccccuga gcugcugggc ggauccagcg ucuuccuguu uccccccaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacaagggag cccgagguca ccugcguggu gguggacguc 300
agccacgagg accccgaggu gaaauuuaac ugguacguag acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu aagcguccug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaua agugcaaagu gagcaacaag 480
gcccugcccg cccccaucga gaagaccauc agcaaggcca aggggcagcc ccgggagcca 540
cagguguaca cccugccccc cagcagggac gagcugacca agaaccaggu gagucucaca 600
ugccugguua agggcuucua cccauccgac aucgccgugg agugggaaag caacggucag 660
cccgagaaca acuacaagac cacgcccccg gugcuggacu ccgacggcag cuucuuccug 720
uacuccaagc ucaccgugga caaguccagg uggcagcagg ggaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcaug aggcacugca caaccacuac acgcagaagu cccugucucu gagcccaggc 840
aagcgcaaga gcaccuggag caagaggucc cugagccaag aggacgcccc ccagaccccc 900
cggccugugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg acaccgagac gaucaacaug 960
augagcgaau uuguggccaa ucugccccag gagcugaagc ucacccucuc cgaaaugcag 1020
cccgcccucc cccaacugca acaacacguc cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuu 1080
gaggaauuua agaagcucau cagaaacaga cagagcgagg ccgcggacuc cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccau agcaggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgugggcugc accaagagaa gccuggccag guucugc 1257
<210> 435
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 435
augccccgac ucuucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucucu 60
cgagccgugg ccgauuccug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agaacucgug 120
agagcccaga ucgccauuug ugggauggag cccaagagca gcgacaagac ccauacuagc 180
ccacccuccc ccgcccccga gcugcugggg ggcagcagcg uguuccuguu ucccccgaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu ugucgacgug 300
ucacacgaag accccgaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgucga ggugcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaguac aacagcacgu acagaguggu gucaguccug 420
accguccucc accaggauug gcucaacggc aaagaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugcccg cccccaucga gaagacaauc uccaaggcca agggccagcc gagggagccc 540
cagguguaua cccugccccc cucaagggac gagcugacca agaaucaggu gucccucaca 600
ugccugguga agggguucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggacag 660
cccgagaaca acuacaagac cacacccccc gugcuggaca gcgauggaag uuucuuccug 720
uauagcaaac ugaccgugga caaaucacgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aagcccugca caaccacuac acccagaagu cauuaucucu gagccccggc 840
aagagaaaga gcacguggag caagaggagc cucucccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgugg ccgagaucgu gcccuccuuu auuaacaagg acaccgagac aaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ucugccccag gagcucaagc ucacccugag cgagaugcag 1020
cccgcucugc cccagcugca gcaacacgug cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccgcaaccgg caaagcgagg ccgcugacag cucgcccagc 1140
gagcugaagu accuggggcu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cguggggugc acuaagcgga gccuggccag auuuugc 1257
<210> 436
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 436
augcccagac uguucuucuu ucaccuccuc ggcguguguc uuuuacucaa ccaauuuagc 60
agagccgugg ccgacucuug gauggaggag gugaucaagc ucuguggccg cgagcuuguc 120
cgggcccaga ucgcuaucug cggaauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccucc 180
ccacccaguc ccgcccccga gcugcucggg ggcagcagcg uguuccuguu cccuccuaag 240
cccaaggaca cgcuguacau caccagggag cccgagguca ccugcguggu gguggacgug 300
ucccaugagg accccgaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga gguucacaac 360
gcuaagacca agccccgcga ggaacaguac aacagcaccu aucgggucgu gucaguucug 420
accguccucc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaaa 480
gcccuccccg ccccgaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc ccgagagccc 540
cagguguaca cccuuccccc cagcagggac gagcucacaa agaaucaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccuccgac aucgcggugg aaugggagag caacggccag 660
ccggagaaca acuauaagac aacacccccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccuc 720
uacagcaagc ugaccgucga caaguccaga uggcagcagg gcaacguguu cagcugcucc 780
gugaugcacg aagcccugca caaucacuac acucagaaau cccugucccu gagccccggc 840
aagcggaagu ccaccuggag uaagcggagu cugagccagg aggacgcccc ccaaaccccc 900
cgacccgugg ccgagaucgu gcccuccuuc aucaauaagg acaccgagac uaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacgcuguc ugagaugcag 1020
ccugcccugc cccagcugca gcagcacgug ccagugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuua agaagcuaau cagaaaccgc caguccgagg ccgccgacag cagccccucc 1140
gagcucaagu accugggccu ggacacccau ucccgcaaga agaggcagcu guacucggcc 1200
cuggccaaca agugcuguca cgucggaugu accaagagaa gucuggccag guucugc 1257
<210> 437
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 437
augccgcggc uuuucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uacuccuuaa ccaauucucc 60
cgagccgucg ccgacagcug gauggaggag gugaucaaac ucugcggcag ggagcucgug 120
agggcccaga uagccaucug cggcauggaa cccaagucca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccgcccagcc ccgcccccga gcugcugggc ggcucaagcg uguuccuguu cccgcccaag 240
cccaaggaca cccuguacau caccagagag ccggagguca ccugcguggu gguggacgug 300
ucucacgagg accccgaagu caaguucaac ugguacgugg auggcgugga ggugcacaau 360
gcaaagacca agccgagaga ggaacaguac aacucgacgu accgggucgu gagcguccug 420
accgugcugc accaggacug gcugaauggc aaggaguaca agugcaaagu gucgaauaag 480
gcccugcccg cccccaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc cagagaaccg 540
cagguauaca cccugccccc uucccgggac gagcugacca agaaccaggu gucucucacg 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggaguc caauggucag 660
cccgagaaca acuauaagac cacgccgccc gugcuggacu cagacggcuc cuucuuccuc 720
uacagcaaac ugacggugga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cuccugcagc 780
gucaugcacg aggcccugca caaccacuac acucagaagu cccugagccu gagccccggg 840
aagcgaaagu cuaccuggag caagcggagc cugagccaag aggacgcccc ccaaacaccc 900
cggcccgugg ccgagauagu gccuagcuuc auuaacaagg acaccgagac uaucaacaug 960
augagcgagu ucguggcgaa ccugccccag gagcugaagc ugacccuguc cgagaugcag 1020
ccggcccugc cucagcugca gcagcacgug cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuu 1080
gaggaguuca agaagcugau ccgcaaccgc caaagcgaag ccgccgacuc cagcccuagc 1140
gagcucaagu accugggccu ggacacgcac agcaggaaga agaggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgucgggugc accaagagga gccuggcuag guuuugc 1257
<210> 438
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 438
augccccgcc uguucuucuu ccaccuccuu ggcgugugcc uccuccuaaa ucaguucagc 60
cgcgccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcgggag ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagucca gcgacaagac ccacaccucg 180
ccccccagcc ccgcccccga gcugcugggc gggagcagcg uuuuccuguu uccaccuaag 240
cccaaggaca cucuguacau caccagagag cccgagguca caugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg accccgaggu gaaguucaac ugguacgucg auggcgucga ggugcacaac 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaguac aacagcaccu acagaguggu guccgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacgga aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugcccg cgccgaucga gaagaccaua agcaaggcca agggccaacc gagggagccc 540
cagguguaca cccugccccc cagcagagac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguca agggcuucua ccccagcgau aucgccgugg aaugggaguc caacggacag 660
ccggagaaca acuacaagac cacgcccccc gugcucgaca gcgacggguc cuucuuccug 720
uacucgaagc ugaccgugga caagagccgc uggcagcagg gcaacguguu cagcugcucc 780
gugaugcaug aggcccugca caaccacuau acgcagaagu cgcucagccu gagccccggc 840
aagcgaaaga gcaccuggag caagcgaagc cuuagccagg aggaugcccc ccagacaccc 900
cggccagugg cugagaucgu ccccagcuuc aucaacaaag acacugagac aauuaauaug 960
augagcgagu ucguggccaa ucugccccag gagcucaagc ugacccucag cgagaugcag 1020
cccgcucugc cccagcugca acagcacguu cccgugcuga aggacagcuc ucugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau caggaaccga cagagcgagg ccgccgacuc cagccccucg 1140
gagcucaaau accucggccu cgacacccac agcaggaaga agaggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagaggu cacucgccag guucugc 1257
<210> 439
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 439
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ucaguucagc 60
agagccgugg ccgauagcug gauggaggag gucauuaagc ucugcggcag agagcucgug 120
cgagcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgauaagac ccauaccucu 180
ccucccagcc ccgcccccga gcugcugggc ggcuccuccg uguuccuguu cccucccaag 240
cccaaagaca cccuguacau caccagagaa cccgagguga ccugugucgu gguggacgug 300
agccacgagg acccggaggu gaaguucaau ugguacgugg auggugucga ggugcacaac 360
gccaagacga agcccaggga ggagcaguau aacagcacuu aucgcguggu cagcgugcug 420
accguccugc accaagacug gcugaacggu aaggaguaua agugcaaggu cagcaacaaa 480
gcccugcccg cucccaucga gaagacgauc agcaaggcca agggccagcc cagggagccc 540
cagguguaca cucugccccc cagcagagac gagcugacca agaaucaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggguucua ccccagcgac aucgccgucg agugggagag caacggccag 660
cccgagaaca acuauaagac cacacccccg gugcuggacu ccgacggaag cuucuuccug 720
uacuccaagc ucacaguuga caagagcaga uggcagcagg gcaauguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcccucca caaccacuac acccagaaau cccucagccu gagccccggc 840
aagaggaagu cgaccuggag caagaggagc cugucccagg aggacgcccc ccaaacgccc 900
cggccggugg ccgagaucgu ccccagcuuc aucaacaagg acaccgagac uauaaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcucaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcacugc cccaacugca gcagcacgug cccgugcuga aggacagcag ccuccuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau caggaacagg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggacu ggacacccac agccggaaga agcgccagcu cuacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca uguggggugc accaagcggu cccuggcccg guucugc 1257
<210> 440
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 440
augccccgac uguucuucuu ccaccuccuc ggcguguguc ucuugcuuaa ucaguucagc 60
cgcgccgucg ccgacuccug gauggaggaa gugaucaagc ucuguggccg ggagcucgug 120
cgggcucaga uugcaaucug cgggauggag cccaagucgu ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgcccucgc ccgcccccga gcugcuuggc ggcagcagcg uguuccuguu uccccccaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggaa cccgagguga ccugcgucgu gguggacgug 300
ucccacgagg accccgaggu caaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaau 360
gccaagacca agcccaggga ggagcaauac aacuccaccu aucggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gucaaacaag 480
gcgcugcccg cccccaucga gaagacaauc uccaaggcca agggccagcc ccgggagccc 540
cagguguaca cccugccccc cagccgggac gagcugacca agaaccaggu uagccuuaca 600
ugccugguca agggcuucua ccccuccgac aucgccgugg agugggaguc caacggccag 660
cccgagaaca acuacaagac cacacccccc gugcuggacu ccgacggcuc cuucuuccuu 720
uacucuaagc ugaccgugga caagagccgc uggcaacagg gcaaugucuu cuccugcucc 780
gugaugcacg aggcccugca caaucacuac acccagaagu cccugagccu guccccugga 840
aagcggaagu ccaccuggag caagaggagc cugucccagg aggaugcccc ucagaccccc 900
aggcccgugg ccgagaucgu gccuucauuu auuaacaagg acaccgagac gaucaacaug 960
auguccgagu uuguggccaa ccugccccag gagcugaagc ucacccucag cgaaaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug cccgugcuga aggacuccuc gcugcucuuu 1080
gaggaguuua agaagcugau ccggaacagg cagagcgagg ccgcagauuc cagccccucg 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcgucagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca aauguuguca cgugggcugc acuaagagga gccuggccag auuuugu 1257
<210> 441
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 441
augccccggu uauucuucuu ccacuugcuu ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc uaugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccucc 180
ccaccauccc cugcccccga gcugcuggga ggcagcagcg uguuccuguu cccaccuaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccugaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugccug ccccuaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc ucgggagcca 540
cagguguaca cccugccucc uucccgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggucag 660
ccugagaaca acuacaagac cacuccaccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc uuaccgucga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aagcccugca caaccacuac acccagaaga gucugucacu gagccccggc 840
aagaggaagu ccaccugguc aaagcggagc cugagccagg aggacgcucc ucaaaccccc 900
cggccagugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaauaagg acacagagac aaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacgcucag cgagaugcag 1020
cccgcccucc cucaacuaca gcagcacgug ccggugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgcugacag cuccccuucc 1140
gagcuuaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agaggcagcu guacagugcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugc acuaagaggu cacuggcccg guucugc 1257
<210> 442
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 442
augccccggc uuuucuucuu ccacuuacuc ggcgugugcc uucuccuuaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccuccuaguc cugcgcccga gcugcuuggc ggcagcagcg uguuccuguu cccaccgaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccggaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugccug ccccaaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccaacc acgagagccg 540
cagguguaca cccugccucc uagccgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggucag 660
ccugagaaca acuacaagac cacaccuccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc ugacaguuga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcccugca caaccacuac acccagaaga gucugucucu guccccuggc 840
aagaggaagu ccaccugguc caagaggucc cugagccagg aggacgcccc gcagaccccc 900
cggccugugg cugagaucgu gcccagcuuc aucaauaagg auaccgagac aaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa uuugccacag gagcugaagc ugacgcugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cgcagcucca gcaacacgug ccuguccuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacuc uucuccgucc 1140
gaacugaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu cuacuccgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggaugc accaagcgaa gccuggcccg guucugc 1257
<210> 443
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 443
augccccggu uauucuucuu ccacuuauua ggcgugugcu uacuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggaguuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccuccuagcc cugcccccga gcugcuggga ggcagcagcg uguuccuguu cccuccgaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccugaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugccag cuccuaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc uagagagccu 540
cagguguaca cccugccgcc aagccgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggacag 660
ccugagaaca acuacaagac caccccaccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc ucaccgugga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aagcccugca caaccacuac acccagaagu cccuaucucu gagccccggc 840
aagagaaagu ccaccuggag caagagaagu cugagccagg aggacgcucc acagaccccc 900
cggccagugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auacagaaac cauuaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacacugag cgagaugcag 1020
cccgcucugc cucagcuuca gcagcacgug ccugugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgauag cagcccuagu 1140
gaacucaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guauagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugc acaaagcgua gccuggcccg guucugc 1257
<210> 444
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 444
augccccggc uuuucuucuu ccaccuccuu ggcgugugcc uccuccuuaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccagc 180
ccgccaagcc cagcccccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccuccaaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg acccagaggu uaaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu guccaacaag 480
gcccugccug ccccaaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc ucgggagccu 540
caggucuaca cccugccacc uagucgcgac gagcucacca agaaccaggu gucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua cccuagcgac aucgccgucg agugggaguc caacggccag 660
ccagagaaca acuacaagac caccccuccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccug 720
uacuccaagc ucacugugga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aagcucucca caaccacuac acccagaagu cccucucacu gagccccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagcggagc cucucgcagg aggacgcccc ccagacacca 900
cgcccugucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg acacggagac gaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccugccacag gagcugaagc ugacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cgcagcucca gcagcacgug ccagugcuga aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgcugacuc aagcccuuca 1140
gagcuuaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu guacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc acaaagcgaa gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 445
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 445
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuu ggcgugugcc ucuuacucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccucu 180
ccaccgagcc cagcccccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccuccuaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg acccagaggu gaaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu guccaacaag 480
gcccugccug ccccuaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc acgggagcca 540
caggucuaca cacugccucc gagccgcgac gagcucacca agaaccaggu gucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua cccuagcgac aucgccgucg agugggaguc caacggccag 660
ccggagaaca acuacaagac caccccgccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccug 720
uacuccaagc ugacagugga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aggcucugca caaccacuac acccagaagu cccucagccu gucucccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagaggagc uugucccagg aggacgcccc ccagacucca 900
cgcccugucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaauaagg acacagagac gaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccuuccucag gagcugaagc ugacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cgcagcucca gcagcacgug ccagugcuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacag uagcccuucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu guauucagcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc acgaagcgga gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 446
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 446
augcccaggu uguucuucuu ccaccuuuug ggcgugugcc uccuucucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccucu 180
ccuccgaguc cagcacccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccgccuaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg acccagaggu caaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu guccaacaag 480
gcccuuccug ccccuaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc acgggagccu 540
caggucuaca cccugccucc uagccgcgac gagcucacca agaaccaggu gucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua cccuagcgac aucgccgucg agugggaguc caacggucag 660
ccugagaaca acuacaagac caccccaccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccuu 720
uacuccaagc ugaccgugga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aggcccugca caaccacuac acccagaagu cccucucucu gagccccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagagaucu cucagccagg aggacgcccc ccagacccca 900
cgcccagucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg auaccgaaac caucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccugccacag gagcugaagc ucacacucuc cgagaugcag 1020
cccgcgcucc cacagcucca gcagcacgug ccugugcuga aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc caguccuagc 1140
gaacugaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu guacagcgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc acaaagcgca gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 447
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 447
augccccggc uuuucuucuu ccaccuacuc ggcgugugcc uucuccuuaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcuugug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccucu 180
ccgccgagcc cagcucccga gcuccugggc ggcagcagcg uguuccuguu cccaccaaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccggaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugccug ccccuaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc gcgggagccu 540
cagguguaca cccugccucc uucucgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggccag 660
ccugagaaca acuacaagac caccccuccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagu uaaccgugga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcacugca caaccacuac acccagaaga gucugagucu cagccccggc 840
aagcggaagu caaccuggag caagcgaagc cugucccagg aggacgcccc ucagaccccc 900
cggccugugg cggagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auaccgagac aauaaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacucugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cacaauugca gcagcacgug ccugugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag uagcccuagc 1140
gaacuuaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guacuccgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugu accaagagga gccuggcccg guucugc 1257
<210> 448
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 448
augccccggc uuuucuucuu ccacuugcuc ggcgugugcc uacuucucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccucu 180
ccuccuagcc cugcccccga gcuccugggc ggcagcagcg uguuccuguu cccaccuaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccagaagu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugccag ccccuaucga gaagaccauc agcaaggcca agggacagcc aagagagccu 540
cagguguaca cccugccacc uagccgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggccag 660
ccugagaaca acuacaagac caccccaccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc ucacagugga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcccucca caaccacuac acacagaagu cccugagccu uagccccggc 840
aagagaaaga gcaccugguc caagagaagu cugucccagg aggacgcccc ucagaccccc 900
cggccagugg cugagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg auacagagac uaucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccuuc cacaacugca gcagcacgug ccagugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgauag cagcccaagc 1140
gaacucaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guacagugcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggaugc accaagcgga gccuggcccg guucugc 1257
<210> 449
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 449
augccccggc uuuucuucuu ccaccucuug ggcgugugcc ucuugcucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccagc 180
ccaccuucac cggcccccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccaccuaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg acccagaggu gaaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu uuccaacaag 480
gcccucccag ccccaaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc ucgagagcca 540
caggucuaca cccugccacc uucccgcgac gagcucacca agaaccaggu gucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua cccuuccgac aucgccgucg agugggaguc caacggacaa 660
ccagagaaca acuacaagac caccccgccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccug 720
uacuccaagc ugaccgugga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aggcccugca caaccacuac acccagaagu cccucucacu cucccccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagagaucc cugucccagg aggacgcccc ccagacacca 900
cguccugucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg auacagaaac caucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccuuccucag gagcugaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgccuugc cacagcucca gcagcacguu ccugugcuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc cagcccuagc 1140
gagcuaaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu cuauuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc acaaagagaa gccucgcccg cuucugc 1257
<210> 450
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 450
augcccagac ucuucuucuu ccaccuucuc ggcgugugcc uccuucucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccagc 180
ccaccuagcc cagcccccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccuccgaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg acccagaggu gaaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu guccaacaag 480
gcccugccug ccccaaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc uagagagccu 540
caggucuaca cccugccucc aagccgcgac gagcucacca agaaccaggu uucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua cccuucugac aucgccgucg agugggaguc caacggccag 660
ccagagaaca acuacaagac caccccuccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccug 720
uacuccaagc ugaccgugga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aggcccucca caaccacuac acccagaagu cccucucccu cucacccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagcggucc cugucccagg aggacgcccc ccagaccccu 900
cggccggucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg auaccgagac gaucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ucucccacag gagcugaagc uuacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccugc cgcagcucca gcagcacgug ccuguccuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgauuc cucuccuucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu guauuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc acgaagagga gccuggcccg cuucugc 1257
<210> 451
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 451
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaagagca gcgacaagac ccacaccagc 180
ccccccagcc ccgcccccga gcugcugggc ggcagcagcg uguuccuguu cccccccaag 240
cccaaggaca cccuguacau cacccgggag cccgagguga ccugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg accccgaggu gaaguucaac ugguacgugg acggcgugga ggugcacaac 360
gccaagacca agccccggga ggagcaguac aacagcaccu accggguggu gagcgugcug 420
accgugcugc accaggacug gcugaacggc aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcccugcccg cccccaucga gaagaccauc agcaaggcca agggccagcc ccgggagccc 540
cagguguaca cccugccccc cagccgggac gagcugacca agaaccaggu gagccugacc 600
ugccugguga agggcuucua ccccagcgac aucgccgugg agugggagag caacggccag 660
cccgagaaca acuacaagac cacccccccc gugcuggaca gcgacggcag cuucuuccug 720
uacagcaagc ugaccgugga caagagccgg uggcagcagg gcaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcccugca caaccacuac acccagaaga gccugagccu gagccccggc 840
aagcggaaga gcaccuggag caagcggagc cugagccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cggcccgugg ccgagaucgu gcccagcuuc aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
augagcgagu ucguggccaa ccugccccag gagcugaagc ugacccugag cgagaugcag 1020
cccgcccugc cccagcugca gcagcacgug cccgugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau ccggaaccgg cagagcgagg ccgccgacag cagccccagc 1140
gagcugaagu accugggccu ggacacccac agccggaaga agcggcagcu guacagcgcc 1200
cuggccaaca agugcugcca cgugggcugc accaagcgga gccuggcccg guucugc 1257
<210> 452
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 452
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgcgaucug cgggauggag ccgaagagca gcgacaagac gcacacgagc 180
ccgccgagcc cggcgccgga gcugcugggg gggagcagcg uguuccuguu cccgccgaag 240
ccgaaggaca cgcuguacau cacgagggag ccggagguga cgugcguggu gguggacgug 300
agccacgagg acccggaggu gaaguucaac ugguacgugg acggggugga ggugcacaac 360
gcgaagacga agccgaggga ggagcaguac aacagcacgu acaggguggu gagcgugcug 420
acggugcugc accaggacug gcugaacggg aaggaguaca agugcaaggu gagcaacaag 480
gcgcugccgg cgccgaucga gaagacgauc agcaaggcga aggggcagcc gagggagccg 540
cagguguaca cgcugccgcc gagcagggac gagcugacga agaaccaggu gagccugacg 600
ugccugguga agggguucua cccgagcgac aucgcggugg agugggagag caacgggcag 660
ccggagaaca acuacaagac gacgccgccg gugcuggaca gcgacgggag cuucuuccug 720
uacagcaagc ugacggugga caagagcagg uggcagcagg ggaacguguu cagcugcagc 780
gugaugcacg aggcgcugca caaccacuac acgcagaaga gccugagccu gagcccgggg 840
aagaggaaga gcacguggag caagaggagc cugagccagg aggacgcgcc gcagacgccg 900
aggccggugg cggagaucgu gccgagcuuc aucaacaagg acacggagac gaucaacaug 960
augagcgagu ucguggcgaa ccugccgcag gagcugaagc ugacgcugag cgagaugcag 1020
ccggcgcugc cgcagcugca gcagcacgug ccggugcuga aggacagcag ccugcuguuc 1080
gaggaguuca agaagcugau caggaacagg cagagcgagg cggcggacag cagcccgagc 1140
gagcugaagu accuggggcu ggacacgcac agcaggaaga agaggcagcu guacagcgcg 1200
cuggcgaaca agugcugcca cguggggugc acgaagagga gccuggcgag guucugc 1257
<210> 453
<211> 1257
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 453
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcauggag cccaaguccu ccgacaagac ccacaccucc 180
ccccccuccc ccgcccccga gcuccucggc ggcuccuccg ucuuccucuu cccccccaag 240
cccaaggaca cccucuacau cacccgcgag cccgagguca ccugcgucgu cgucgacguc 300
ucccacgagg accccgaggu caaguucaac ugguacgucg acggcgucga gguccacaac 360
gccaagacca agccccgcga ggagcaguac aacuccaccu accgcgucgu cuccguccuc 420
accguccucc accaggacug gcucaacggc aaggaguaca agugcaaggu cuccaacaag 480
gcccuccccg cccccaucga gaagaccauc uccaaggcca agggccagcc ccgcgagccc 540
caggucuaca cccucccccc cucccgcgac gagcucacca agaaccaggu cucccucacc 600
ugccucguca agggcuucua ccccuccgac aucgccgucg agugggaguc caacggccag 660
cccgagaaca acuacaagac cacccccccc guccucgacu ccgacggcuc cuucuuccuc 720
uacuccaagc ucaccgucga caagucccgc uggcagcagg gcaacgucuu cuccugcucc 780
gucaugcacg aggcccucca caaccacuac acccagaagu cccucucccu cucccccggc 840
aagcgcaagu ccaccugguc caagcgcucc cucucccagg aggacgcccc ccagaccccc 900
cgccccgucg ccgagaucgu ccccuccuuc aucaacaagg acaccgagac caucaacaug 960
auguccgagu ucgucgccaa ccucccccag gagcucaagc ucacccucuc cgagaugcag 1020
cccgcccucc cccagcucca gcagcacguc cccguccuca aggacuccuc ccuccucuuc 1080
gaggaguuca agaagcucau ccgcaaccgc caguccgagg ccgccgacuc cucccccucc 1140
gagcucaagu accucggccu cgacacccac ucccgcaaga agcgccagcu cuacuccgcc 1200
cucgccaaca agugcugcca cgucggcugc accaagcgcu cccucgcccg cuucugc 1257
<210> 454
<211> 1233
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 454
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc aacucuacag ugcauuggcu 240
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug cggcagcaca 300
gacuccggcu cugauaccag cuccggcaac agcggcgaug gcaauuccgg cggcagcucc 360
ggaggaggcu cuggcucuag cuccggcucu agcggcagcg gcggcuccgg cggcagcaca 420
gacuccggcu cugauaccag cuccggcaac agcggcgaug gcaauuccgg cggcagcucc 480
ggaggaggcu cuggcucuag cuccggcucu agcggcagcg gcggcuccgg cgagcccaag 540
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagcugcu gggcggcagc 600
agcguguucc uguucccccc caagcccaag gacacccugu acaucaccag ggagcccgag 660
gugaccugcg ugguggugga cgugagccac gaggaccccg aggugaaguu caacugguac 720
guggacggcg uggaggugca caacgccaag accaagccca gggaggagca guacaacagc 780
accuacaggg uggugagcgu gcugaccgug cugcaccagg acuggcugaa cggcaaggag 840
uacaagugca aggugagcaa caaggcccug cccgccccca ucgagaagac caucagcaag 900
gccaagggcc agcccaggga gccccaggug uacacccugc cccccagcag ggacgagcug 960
accaagaacc aggugagccu gaccugccug gugaagggcu ucuaccccag cgacaucgcc 1020
guggaguggg agagcaacgg ccagcccgag aacaacuaca agaccacccc ccccgugcug 1080
gacagcgacg gcagcuucuu ccuguacagc aagcugaccg uggacaagag cagguggcag 1140
cagggcaacg uguucagcug cagcgugaug cacgaggccc ugcacaacca cuacacccag 1200
aagagccuga gccugagccc cggcaagagg aag 1233
<210> 455
<211> 993
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 455
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc aacucuacag ugcauuggcu 240
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug cgagcccaag 300
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagcugcu gggcggcagc 360
agcguguucc uguucccccc caagcccaag gacacccugu acaucaccag ggagcccgag 420
gugaccugcg ugguggugga cgugagccac gaggaccccg aggugaaguu caacugguac 480
guggacggcg uggaggugca caacgccaag accaagccca gggaggagca guacaacagc 540
accuacaggg uggugagcgu gcugaccgug cugcaccagg acuggcugaa cggcaaggag 600
uacaagugca aggugagcaa caaggcccug cccgccccca ucgagaagac caucagcaag 660
gccaagggcc agcccaggga gccccaggug uacacccugc cccccagcag ggacgagcug 720
accaagaacc aggugagccu gaccugccug gugaagggcu ucuaccccag cgacaucgcc 780
guggaguggg agagcaacgg ccagcccgag aacaacuaca agaccacccc ccccgugcug 840
gacagcgacg gcagcuucuu ccuguacagc aagcugaccg uggacaagag cagguggcag 900
cagggcaacg uguucagcug cagcgugaug cacgaggccc ugcacaacca cuacacccag 960
aagagccuga gccugagccc cggcaagagg aag 993
<210> 456
<211> 1053
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 456
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc aacucuacag ugcauuggcu 240
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug cggcagcaca 300
gacuccggcu cugauaccag cuccggcaac agcggcgaug gcaauuccgg cgagcccaag 360
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagcugcu gggcggcagc 420
agcguguucc uguucccccc caagcccaag gacacccugu acaucaccag ggagcccgag 480
gugaccugcg ugguggugga cgugagccac gaggaccccg aggugaaguu caacugguac 540
guggacggcg uggaggugca caacgccaag accaagccca gggaggagca guacaacagc 600
accuacaggg uggugagcgu gcugaccgug cugcaccagg acuggcugaa cggcaaggag 660
uacaagugca aggugagcaa caaggcccug cccgccccca ucgagaagac caucagcaag 720
gccaagggcc agcccaggga gccccaggug uacacccugc cccccagcag ggacgagcug 780
accaagaacc aggugagccu gaccugccug gugaagggcu ucuaccccag cgacaucgcc 840
guggaguggg agagcaacgg ccagcccgag aacaacuaca agaccacccc ccccgugcug 900
gacagcgacg gcagcuucuu ccuguacagc aagcugaccg uggacaagag cagguggcag 960
cagggcaacg uguucagcug cagcgugaug cacgaggccc ugcacaacca cuacacccag 1020
aagagccuga gccugagccc cggcaagagg aag 1053
<210> 457
<211> 1317
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 457
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugcggcag cacagacucc ggcucugaua ccagcuccgg caacagcggc 600
gauggcaauu ccggcgagcc caagagcagc gacaagaccc acaccagccc ccccagcccc 660
gcccccgagc ugcugggcgg cagcagcgug uuccuguucc cccccaagcc caaggacacc 720
cuguacauca ccagggagcc cgaggugacc ugcguggugg uggacgugag ccacgaggac 780
cccgagguga aguucaacug guacguggac ggcguggagg ugcacaacgc caagaccaag 840
cccagggagg agcaguacaa cagcaccuac agggugguga gcgugcugac cgugcugcac 900
caggacuggc ugaacggcaa ggaguacaag ugcaagguga gcaacaaggc ccugcccgcc 960
cccaucgaga agaccaucag caaggccaag ggccagccca gggagcccca gguguacacc 1020
cugcccccca gcagggacga gcugaccaag aaccagguga gccugaccug ccuggugaag 1080
ggcuucuacc ccagcgacau cgccguggag ugggagagca acggccagcc cgagaacaac 1140
uacaagacca ccccccccgu gcuggacagc gacggcagcu ucuuccugua cagcaagcug 1200
accguggaca agagcaggug gcagcagggc aacguguuca gcugcagcgu gaugcacgag 1260
gcccugcaca accacuacac ccagaagagc cugagccuga gccccggcaa gaggaag 1317
<210> 458
<211> 1317
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 458
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agagagccca agagcagcga caagacccac accagccccc ccagccccgc ccccgagcug 540
cugggcggca gcagcguguu ccuguucccc cccaagccca aggacacccu guacaucacc 600
agggagcccg aggugaccug cgugguggug gacgugagcc acgaggaccc cgaggugaag 660
uucaacuggu acguggacgg cguggaggug cacaacgcca agaccaagcc cagggaggag 720
caguacaaca gcaccuacag gguggugagc gugcugaccg ugcugcacca ggacuggcug 780
aacggcaagg aguacaagug caaggugagc aacaaggccc ugcccgcccc caucgagaag 840
accaucagca aggccaaggg ccagcccagg gagccccagg uguacaccaa gccccccagc 900
agggacgagc ugaccaagaa ccaggugagc cuguccugcc uggugaaggg cuucuacccc 960
agcgacaucg ccguggagug ggagagcaac ggccagcccg agaacaacua caagaccacc 1020
guccccgugc uggacagcga cggcagcuuc cgccuggcca gcuaucugac cguggacaag 1080
agcagguggc agcagggcaa cguguucagc ugcagcguga ugcacgaggc ccugcacaac 1140
cacuacaccc agaagagccu gagccugagc cccggcaaga ggaagggcag cacagacucc 1200
ggcucugaua ccagcuccgg caacagcggc gauggcaauu ccggccaacu cuacagugca 1260
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1317
<210> 459
<211> 978
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 459
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agagaggugc agcugcugga gagcggcggc ggccuggugc agcccggcgg cagccugagg 540
cugagcugcg ccgccagcgg cuucaccuuc agcagcuacg ccaugagcug ggugaggcag 600
gcccccggca agggccugga gugggugagc gccaucagcg gcagcggcgg cagcaccuac 660
uacgccgaca gcgugaaggg cagguucacc aucagcaggg acaacagcaa gaacacccug 720
uaccugcaga ugaacagccu gagggccgag gacaccgccg uguacuacug caccaaggac 780
ccccccaggu accacuacac cggccuggcc gugaggggcc agggcaccac cgugaccgug 840
agcagcggca gcacagacuc cggcucugau accagcuccg gcaacagcgg cgauggcaau 900
uccggccaac ucuacagugc auuggcuaau aaauguugcc auguugguug uaccaaaaga 960
ucucuugcua gauuuugc 978
<210> 460
<211> 1317
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 460
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agagagccca agagcagcga caagacccac accagccccc ccagccccgc ccccgagcug 540
cugggcggca gcagcguguu ccuguucccc cccaagccca aggacacccu guacaucacc 600
agggagcccg aggugaccug cgugguggug gacgugagcc acgaggaccc cgaggugaag 660
uucaacuggu acguggacgg cguggaggug cacaacgcca agaccaagcc cagggaggag 720
caguacaaca gcaccuacag gguggugagc gugcugaccg ugcugcacca ggacuggcug 780
aacggcaagg aguacaagug caaggugagc aacaaggccc ugcccgcccc caucgagaag 840
accaucagca aggccaaggg ccagcccagg gagccccagg uguacacccu gccccccagc 900
agggacgagc ugaccaagaa ccaggugagc cugaccugcc uggugaaggg cuucuacccc 960
agcgacaucg ccguggagug ggagagcaac ggccagcccg agaacaacua caagaccacc 1020
ccccccgugc uggacagcga cggcagcuuc uuccuguaca gcaagcugac cguggacaag 1080
agcagguggc agcagggcaa cguguucagc ugcagcguga ugcacgaggc ccugcacaac 1140
cacuacaccc agaagagccu gagccugagc cccggcaaga ggaagggcag cacagacucc 1200
ggcucugaua ccagcuccgg caacagcggc gauggcaauu ccggccaacu cuacagugca 1260
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1317
<210> 461
<211> 1317
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 461
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugcggcag cacagacucc ggcucugaua ccagcuccgg caacagcggc 600
gauggcaauu ccggcgagcc caagagcagc gacaagaccc acaccagccc ccccagcccc 660
gcccccgagc ugcugggcgg cagcagcgug uuccuguucc cccccaagcc caaggacacc 720
cuguacauca ccagggagcc cgaggugacc ugcguggugg uggacgugag ccacgaggac 780
cccgagguga aguucaacug guacguggac ggcguggagg ugcacaacgc caagaccaag 840
cccagggagg agcaguacaa cagcaccuac agggugguga gcgugcugac cgugcugcac 900
caggacuggc ugaacggcaa ggaguacaag ugcaagguga gcaacaaggc ccugcccgcc 960
cccaucgaga agaccaucag caaggccaag ggccagccca gggagcccca gguguacacc 1020
aagcccccca gcagggacga gcugaccaag aaccagguga gccuguccug ccuggugaag 1080
ggcuucuacc ccagcgacau cgccguggag ugggagagca acggccagcc cgagaacaac 1140
uacaagacca ccguccccgu gcuggacagc gacggcagcu uccgccuggc cagcuaucug 1200
accguggaca agagcaggug gcagcagggc aacguguuca gcugcagcgu gaugcacgag 1260
gcccugcaca accacuacac ccagaagagc cugagccuga gccccggcaa gaggaag 1317
<210> 462
<211> 978
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 462
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugcggcag cacagacucc ggcucugaua ccagcuccgg caacagcggc 600
gauggcaauu ccggcgaggu gcagcugcug gagagcggcg gcggccuggu gcagcccggc 660
ggcagccuga ggcugagcug cgccgccagc ggcuucaccu ucagcagcua cgccaugagc 720
ugggugaggc aggcccccgg caagggccug gaguggguga gcgccaucag cggcagcggc 780
ggcagcaccu acuacgccga cagcgugaag ggcagguuca ccaucagcag ggacaacagc 840
aagaacaccc uguaccugca gaugaacagc cugagggccg aggacaccgc cguguacuac 900
ugcaccaagg acccccccag guaccacuac accggccugg ccgugagggg ccagggcacc 960
accgugaccg ugagcagc 978
<210> 463
<211> 1317
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 463
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcg agcccaagag cagcgacaag 240
acccacacca gcccccccag ccccgccccc gagcugcugg gcggcagcag cguguuccug 300
uuccccccca agcccaagga cacccuguac aucaccaggg agcccgaggu gaccugcgug 360
gugguggacg ugagccacga ggaccccgag gugaaguuca acugguacgu ggacggcgug 420
gaggugcaca acgccaagac caagcccagg gaggagcagu acaacagcac cuacagggug 480
gugagcgugc ugaccgugcu gcaccaggac uggcugaacg gcaaggagua caagugcaag 540
gugagcaaca aggcccugcc cgcccccauc gagaagacca ucagcaaggc caagggccag 600
cccagggagc cccaggugua caccaagccc cccagcaggg acgagcugac caagaaccag 660
gugagccugu ccugccuggu gaagggcuuc uaccccagcg acaucgccgu ggagugggag 720
agcaacggcc agcccgagaa caacuacaag accaccgucc ccgugcugga cagcgacggc 780
agcuuccgcc uggccagcua ucugaccgug gacaagagca gguggcagca gggcaacgug 840
uucagcugca gcgugaugca cgaggcccug cacaaccacu acacccagaa gagccugagc 900
cugagccccg gcaagaggaa gaaaaggucu cugagccagg aagaugcucc ucagacaccu 960
agaccagugg cagaaauugu gccauccuuc aucaacaaag auacagaaac cauaaauaug 1020
augucagaau uuguugcuaa uuugccacag gagcugaagu uaacccuguc ugagaugcag 1080
ccagcauuac cacagcuaca acaacaugua ccuguauuaa aagauuccag ucuucucuuu 1140
gaagaauuua agaaacuuau ucgcaauaga caaagugaag ccgcagacag caguccuuca 1200
gaauuaaaau acuuaggcuu ggauacucau ucucgaaaaa agagacaacu cuacagugca 1260
uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu accaaaagau cucuugcuag auuuugc 1317
<210> 464
<211> 714
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 464
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc aacucuacag ugcauuggcu 240
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug cggcagcaca 300
gacuccggcu cugauaccag cuccggcaac agcggcgaug gcaauuccgg cgaggugcag 360
cugcuggaga gcggcggcgg ccuggugcag cccggcggca gccugaggcu gagcugcgcc 420
gccagcggcu ucaccuucag cagcuacgcc augagcuggg ugaggcaggc ccccggcaag 480
ggccuggagu gggugagcgc caucagcggc agcggcggca gcaccuacua cgccgacagc 540
gugaagggca gguucaccau cagcagggac aacagcaaga acacccugua ccugcagaug 600
aacagccuga gggccgagga caccgccgug uacuacugca ccaaggaccc ccccagguac 660
cacuacaccg gccuggccgu gaggggccag ggcaccaccg ugaccgugag cagc 714
<210> 465
<211> 1053
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 465
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagcg gcagcacaga cuccggcucu 180
gauaccagcu ccggcaacag cggcgauggc aauuccggcc aacucuacag ugcauuggcu 240
aauaaauguu gccauguugg uuguaccaaa agaucucuug cuagauuuug cggcagcaca 300
gacuccggcu cugauaccag cuccggcaac agcggcgaug gcaauuccgg cgagcccaag 360
agcagcgaca agacccacac cagccccccc agccccgccc ccgagcugcu gggcggcagc 420
agcguguucc uguucccccc caagcccaag gacacccugu acaucaccag ggagcccgag 480
gugaccugcg ugguggugga cgugagccac gaggaccccg aggugaaguu caacugguac 540
guggacggcg uggaggugca caacgccaag accaagccca gggaggagca guacaacagc 600
accuacaggg uggugagcgu gcugaccgug cugcaccagg acuggcugaa cggcaaggag 660
uacaagugca aggugagcaa caaggcccug cccgccccca ucgagaagac caucagcaag 720
gccaagggcc agcccaggga gccccaggug uacaccaagc cccccagcag ggacgagcug 780
accaagaacc aggugagccu guccugccug gugaagggcu ucuaccccag cgacaucgcc 840
guggaguggg agagcaacgg ccagcccgag aacaacuaca agaccaccgu ccccgugcug 900
gacagcgacg gcagcuuccg ccuggccagc uaucugaccg uggacaagag cagguggcag 960
cagggcaacg uguucagcug cagcgugaug cacgaggccc ugcacaacca cuacacccag 1020
aagagccuga gccugagccc cggcaagagg aag 1053
<210> 466
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 466
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc uccugcugaa ccaguucagc 60
agggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggcag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgccccgc aaaccccccg gccggucgcg gagauagugc ccagcuucau aaacaaggac 240
accgagacca ucaauaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acgcugagcg agaugcagcc ggcccugccg cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc uccuguucga ggaguucaag aagcugauca ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccauag caggaagaag 480
cgccagcugu acagcgcccu ggcuaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagaggagc 540
cuggcccggu ucugc 555
<210> 467
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 467
augccccgcc ucuucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuacucaa ccaguuuagc 60
agggccgugg ccgauagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgccccac aaaccccgcg ccccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuu gucgccaacc ugccccagga gcucaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccu cagcugcagc agcacgugcc agugcugaaa 360
gacuccagcc ugcucuuuga agaguucaag aagcugauca ggaacagaca gagcgaggcc 420
gcugacagca gccccucaga gcugaaguac cuggggcugg auacccauag ccgcaagaag 480
cggcagcugu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcggagc 540
cucgcccgau ucuguggcgg cggagggucc ggcggcggcg gcagcggugg aggcgggagc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cuguccgcca gugugggcga uagagucacc 660
aucacgugca gggccuccag gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggcgc ccaagcugcu gauccuggcc uucagcaggc ugcaguccgg ggugcccagc 780
cgguucuccg gcuccggcag cggcaccgac uuuacccuga ccaucagcag ccugcagccu 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac guucggucag 900
ggcacuaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 468
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 468
augccccgcc ucuucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuacucaa ccaguuuagc 60
agggccgugg ccgauagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgccccac aaaccccgcg ccccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuu gucgccaacc ugccccagga gcucaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccu cagcugcagc agcacgugcc agugcugaaa 360
gacuccagcc ugcucuuuga agaguucaag aagcugauca ggaacagaca gagcgaggcc 420
gcugacagca gccccucaga gcugaaguac cuggggcugg auacccauag ccgcaagaag 480
cggcagcugu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcggagc 540
cucgcccgau ucuguggcgg cggagggucc ggcggcggcg gcagcggugg aggcgggagc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cuguccgcca gugugggcga uagagucacc 660
aucacgugca gggccuccag gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggcgc ccaagcugcu gauccuggcc uucagcaggc ugcaguccgg ggugcccagc 780
cgguucuccg gcuccggcag cggcaccgac uuuacccuga ccaucagcag ccugcagccu 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac guucggucag 900
ggcacuaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 469
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 469
augccccggc uguucuucuu ccaccuacuc ggcgucugcc uccuccuaaa ccaguuuucc 60
cgcgccgugg ccgacuccug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agagcucgug 120
agggcccaga ucgcgauuug cggcaugucc accuggagca agaggagccu cagccaggag 180
gacgcgcccc aaaccccgag gcccguggcc gagaucgugc cgagcuuuau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau guccgaguuu guggcuaauc ugccccagga gcucaagcuc 300
acacuguccg agaugcagcc cgcccugccc caacugcagc agcacguccc cgugcucaag 360
gacagcagcc uccucuucga ggaauucaag aagcucaucc gcaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccucaga gcugaaguac cugggccucg acacccacag ccggaagaag 480
aggcagcugu acuccgcccu ggccaacaaa ugcugccaug ugggcugcac aaagaggagc 540
cuggcccggu uuugcggagg uggugggagc ggcgguggcg guucaggcgg cggcgguucc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cuguccgcuu ccgugggcga ccgugugacc 660
aucaccugcc gcgccagccg acccaucggc accaugcugu ccugguacca gcagaagccg 720
gggaaggccc caaagcugcu gauucuggcc uuuagccggc ugcagagcgg ggugcccagc 780
agauucagcg gcucggggag cgggaccgac uuuacgcuga ccaucagcuc ccugcagccc 840
gaggauuucg caacguacua cugugcccag gccggcaccc accccacuac uuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgu 924
<210> 470
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 470
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcguguguc uccuccucaa ccaguucagc 60
agagccgucg ccgauucuug gauggaggag gugaucaagu ugugcggccg ggagcucgug 120
agggcucaga ucgccaucug cggcauguca accuggagca agcggucgcu gagccaggag 180
gacgccccuc agaccccgag gcccguggcc gagaucgugc cuagcuucau caacaaggac 240
accgagacaa ucaacaugau gagcgaguuu guggcgaauc ugccccagga gcugaagcuc 300
acccucagcg agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguuuaag aagcugaucc ggaacaggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccucuga acugaaguau cucgggcugg acacccacag ccggaagaag 480
cgccagcugu acuccgcccu ggccaacaaa ugcugccacg uggggugcac caaacggagc 540
cuggcccggu ucuguggcgg cggcggcucc ggcggcggug ggucuggagg cggcggcucg 600
gauauccaga ugacccagag ccccagcagc cuguccgccu ccgugggcga cagggugacc 660
aucaccugcc gggccucuag gcccaucggg accaugcuca gcugguacca gcagaaacca 720
ggcaaggccc cuaagcugcu gauccuggca uucagccgcc ugcagagcgg cguccccucc 780
agguucagcg gcagcgguag cggaacggac uucacccuca ccauuagcuc ccuccagccc 840
gaggacuucg ccaccuacua cugugcacag gccgguaccc accccacgac cuucggccag 900
ggcacaaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 471
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 471
augccuaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcguguguc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacuccug gauggaggag gugaucaagc ucugcggcag agagcucguc 120
cgagcccaga uagccaucug cggcaugagc accuggagca agaggagccu gagucaggag 180
gacgccccuc agacaccccg gcccguggcu gagaucgugc ccagcuucau uaacaaagac 240
accgaaacca ucaacaugau guccgaguuc guggccaauc ugccacagga gcucaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcucuuuga ggaguucaag aagcugaucc gcaaccgaca gagcgaggcu 420
gccgauagca gcccuuccga acucaaauac cugggccugg acacacacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggcuaacaag uguugccacg uagggugcac caaacgcagc 540
cuggccagau ucugcggcgg cggcggcucc ggcggaggcg gaucaggcgg cggcggcagc 600
gauauccaga ugacucagag ccccagcucc cugagcgccu ccguugggga ccgggugacc 660
aucaccugca gagcgagccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca acagaagcca 720
ggcaaggccc cgaagcugcu gauucucgcc uucagcaggc ugcaaagcgg cgugcccagc 780
agguucuccg gcuccggcag cggcacagac uucacccuga ccaucagcuc ccugcagccg 840
gaggacuucg ccaccuacua uugugcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccaa 900
ggcacaaagg uggaaaucaa gagg 924
<210> 472
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 472
augcccagac ucuucuucuu ccaucuacuc gguguguguc uccuccucaa ucaguuuagc 60
cgggccguug ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggcag ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agagaucccu gucgcaggag 180
gacgcgccac agacuccucg gcccguggcc gagaucgugc ccagcuuuau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuc guggcaaauc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc ugccuugccu cagcugcagc agcaugugcc cgugcucaaa 360
gauagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aaacugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccucuga gcugaaguac cuggggcugg acacgcacuc ccggaagaag 480
agacagcucu auagcgcccu ggccaacaag ugcugucaug ugggaugcac caagagaagc 540
cucgcccgcu ucugcggagg cggaggcagc ggcgguggcg guagcggagg cggcgggucc 600
gacauacaga ugacccagag ccccuccucc cugagugccu ccgucggcga ccgggugacc 660
aucacgugcc gcgccagccg gcccaucggc acaaugcugu ccugguacca gcagaagccc 720
gggaaggcgc ccaagcugcu gauccuggcg uucucccggc ugcaguccgg cgugcccagc 780
agguucagcg gcucaggcuc cgguaccgac uucacccuga cuauaagcag ccugcagccg 840
gaggauuuug ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc acccaaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 473
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 473
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgccccgc agacuccgcg gccaguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgaaacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcucugccg cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gcagauucuu cuccuagcga gcucaaguac cugggccugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagagguca 540
cuggcccggu ucugcggcgg cgguggaucu ggcggaggag gcucgggagg cggcggcagc 600
gacauccaga ugacccagag cccaagcucc cuguccgcca gcgugggcga ccgggugacc 660
aucaccugcc gggccagccg gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcugcu gauccuggcc uucucuaggc ugcagagcgg cgugccgagc 780
cgguucucgg gcagcggcuc cggcaccgac uucacccuga cuaucucgag ccuccagccg 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 474
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 474
augcccaggc uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccuaaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ucugcggccg ggagcucgug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgccccuc agacgccacg gccgguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacaa ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccg cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacucca gccccagcga auugaaguac cugggccugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagaggagu 540
cuggcccggu ucugcggcgg aggcggaagc gguggaggcg gcucuggcgg cgguggcucg 600
gacauccaga ugacccagag cccguccucc cuguccgcca gcgugggcga ccgggugacc 660
aucaccugcc gggccagccg gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcugcu gauccuggcc uucagcaggc ugcagagcgg cgugccgagc 780
cgguucagcg guagcggcuc cggcaccgac uucacccuga caaucagcuc gcugcagcca 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 475
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 475
augcccagac uguucuucuu ccaccucuug ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgcuccgc agaccccgcg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacga ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ucccacagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccugccg cagcuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gcggacagca gcccguccga gcugaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagaggagc 540
cuggcccgcu ucugcggcgg aggcggcagc ggcggcggug gauccggugg cggcggaagc 600
gacauccaga ugacccagag cccgagcagc cugagcgccu ccgucggcga ccgcgucacc 660
aucaccugcc gcgccucccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cuaagcuccu cauccucgcc uucucccgcc uccaguccgg cgugccgagc 780
cgguucuccg gaagcggcuc gggcaccgac uucacccuca ccaucuccuc acuccagccg 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg ucgagaucaa gcgc 924
<210> 476
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 476
augcccagac uguucuucuu ccaccuccuc ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgccccgc agacgccgcg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacaa ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ugccgcagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccugccg caacuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gccgacucca gccccuccga gcugaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagcggagc 540
cuggcccgcu ucugcggcgg uggcggaagc ggaggcggag gcagcggcgg agguggcucc 600
gacauccaga ugacccagag cccuagcucu cugagcgccu ccgucggcga ccgcgucacc 660
aucaccugcc gcgccucccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcuccu cauccucgcc uucucccgcc uccaguccgg cgugccgucc 780
cgguucagcg gcuccggcag cggaaccgac uucacccuga cgaucagcuc ccugcagccu 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg ucgagaucaa gcgc 924
<210> 477
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 477
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcggccg ggagcuggug 120
cgggcccaga ucgccaucug cggcaugagc accuggagca agcggagccu gagccaggag 180
gacgcacccc agaccccacg gcccguggcc gagaucgugc ccagcuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau gagcgaguuc guggccaacc ugccccagga gcugaagcug 300
acccugagcg agaugcagcc cgcccugccc cagcugcagc agcacgugcc cgugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugaucc ggaaccggca gagcgaggcc 420
gccgacagca gccccagcga gcugaaguac cugggccugg acacccacag ccggaagaag 480
cggcagcugu acagcgcccu ggccaacaag ugcugccacg ugggcugcac caagcggagc 540
cuggcccggu ucugcggcgg cggcggcagc ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggcagc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cugagcgcca gcgugggcga ccgggugacc 660
aucaccugcc gggccagccg gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagcugcu gauccuggcc uucagccggc ugcagagcgg cgugcccagc 780
cgguucagcg gcagcggcag cggcaccgac uucacccuga ccaucagcag ccugcagccc 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gcgg 924
<210> 478
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 478
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gugaucaagc ugugcgggag ggagcuggug 120
agggcgcaga ucgcgaucug cgggaugagc acguggagca agaggagccu gagccaggag 180
gacgcgccgc agacgccgag gccgguggcg gagaucgugc cgagcuucau caacaaggac 240
acggagacga ucaacaugau gagcgaguuc guggcgaacc ugccgcagga gcugaagcug 300
acgcugagcg agaugcagcc ggcgcugccg cagcugcagc agcacgugcc ggugcugaag 360
gacagcagcc ugcuguucga ggaguucaag aagcugauca ggaacaggca gagcgaggcg 420
gcggacagca gcccgagcga gcugaaguac cuggggcugg acacgcacag caggaagaag 480
aggcagcugu acagcgcgcu ggcgaacaag ugcugccacg uggggugcac gaagaggagc 540
cuggcgaggu ucugcggagg cggugggagc gguggcggag ggagcggcgg aggcgggagc 600
gacauccaga ugacgcagag cccgagcagc cugagcgcga gcguggggga cagggugacg 660
aucacgugca gggcgagcag gccgaucggg acgaugcuga gcugguacca gcagaagccg 720
gggaaggcgc cgaagcugcu gauccuggcg uucagcaggc ugcagagcgg ggugccgagc 780
agguucagcg ggagcgggag cgggacggac uucacgcuga cgaucagcag ccugcagccg 840
gaggacuucg cgacguacua cugcgcgcag gcggggacgc acccgacgac guucgggcag 900
gggacgaagg uggagaucaa gagg 924
<210> 479
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 479
augccccggc uguucuucuu ccaccugcug ggcgugugcc ugcugcugaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgcacccc agacaccccg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacca ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ucccccagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccucccc cagcuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gccgacuccu cccccuccga gcucaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagcgcucc 540
cucgcccgcu ucugcggcgg cggcggcucc ggcggcggcg gcuccggcgg cggcggcucc 600
gacauccaga ugacccaguc ccccuccucc cucuccgccu ccgucggcga ccgcgucacc 660
aucaccugcc gcgccucccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagcuccu cauccucgcc uucucccgcc uccaguccgg cguccccucc 780
cgcuucuccg gcuccggcuc cggcaccgac uucacccuca ccaucuccuc ccuccagccc 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg ucgagaucaa gcgc 924
<210> 480
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 480
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugcggugg cggaggcagc ggagguggug gcagcggcgg agguggcagc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cugagcgcca gcgugggcga cagggugacc 660
aucaccugca gggccagcag gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagcugcu gauccuggcc uucagcaggc ugcagagcgg cgugcccagc 780
agguucagcg gcagcggcag cggcaccgac uucacccuga ccaucagcag ccugcagccc 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gagg 924
<210> 481
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 481
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugcggugg cggaggcagc ggagguggug gcagcggcgg agguggcagc 600
gacauccaga ugacccagag ccccagcagc cugagcgcca gcgugggcga cagggugacc 660
aucaccugca gggccagcag gcccaucggc accaugcuga gcugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc ccaagcugcu gauccuggcc uucagcaggc ugcagagcgg cgugcccagc 780
agguucagcg gcagcggcag cggcaccgac uucacccuga ccaucagcag ccugcagccc 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg uggagaucaa gagg 924
<210> 482
<211> 924
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 482
augccccgcc uguucuucuu ccaccuccuu ggcgugugcc uccuccucaa ccaguucagc 60
cgggccgugg ccgacagcug gauggaggag gucaucaagc ucugcggccg cgagcucguc 120
cgcgcccaga ucgccaucug cggcaugucc accuggucca agcgcucccu cucccaggag 180
gacgccccac agaccccgcg ccccgucgcc gagaucgucc ccuccuucau caacaaggac 240
accgagacga ucaacaugau guccgaguuc gucgccaacc ugccgcagga gcucaagcuc 300
acccucuccg agaugcagcc cgcccucccg cagcuccagc agcacguccc cguccucaag 360
gacuccuccc uccucuucga ggaguucaag aagcucaucc gcaaccgcca guccgaggcc 420
gccgacucca gccccuccga gcugaaguac cucggccucg acacccacuc ccgcaagaag 480
cgccagcucu acuccgcccu cgccaacaag ugcugccacg ucggcugcac caagcggucc 540
cuggcccgcu ucugcggagg cggcggcucu ggcgguggug gauccggcgg cgguggcagc 600
gacauccaga ugacccaguc cccauccagc cugagcgccu ccgucggcga ccgcgucacc 660
aucaccugcc gcgccucccg ccccaucggc accaugcucu ccugguacca gcagaagccc 720
ggcaaggccc cgaagcuccu cauccucgcc uucucccgcc uccaguccgg cgucccguca 780
agguucuccg gcucgggcuc cgguaccgac uucacccuca ccaucuccuc gcuccagcca 840
gaggacuucg ccaccuacua cugcgcccag gccggcaccc accccaccac cuucggccag 900
ggcaccaagg ucgagaucaa gcgc 924
<210> 483
<211> 92
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 483
ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60
aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca cc 92
<210> 484
<211> 164
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 484
ugauaauagu ccauaaagua ggaaacacua cagcuggagc cucgguggcc augcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc ccgcauuauu 120
acucacggua cgaguggucu uugaauaaag ucugaguggg cggc 164
<210> 485
<211> 119
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 485
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggc 119
<210> 486
<211> 141
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 486
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guaccccccg cauuauuacu cacgguacga guggucuuug 120
aauaaagucu gagugggcgg c 141
<210> 487
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 487
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccuc cauaaaguag gaaacacuac aguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 488
<211> 829
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 488
gucccgaccu ccaggagaga ccaggcccag gaugccucgc cuguuuuuuu uccaccugcu 60
aggagucugu uuacuacuga accaauuuuc cagagcaguc gcggacucau ggauggagga 120
aguuauuaaa uuaugcggcc gcgaauuagu ucgcgcgcag auugccauuu gcggcaugag 180
caccuggagc aaaaggucuc ugagccagga agaugcuccu cagacaccua gaccaguggc 240
agaaauugug ccauccuuca ucaacaaaga uacagaaacc auaaauauga ugucagaauu 300
uguugcuaau uugccacagg agcugaaguu aacccugucu gagaugcagc cagcauuacc 360
acagcuacaa caacauguac cuguauuaaa agauuccagu cuucucuuug aagaauuuaa 420
gaaacuuauu cgcaauagac aaagugaagc cgcagacagc aguccuucag aauuaaaaua 480
cuuaggcuug gauacucauu cucgaaaaaa gagacaacuc uacagugcau uggcuaauaa 540
auguugccau guugguugua ccaaaagauc ucuugcuaga uuuugcugag augaagcuaa 600
uugugcacau cucguauaau auucacacau auucuuaaug acauuucacu gaugcuucua 660
ucagguccca ucaauucuua gaauaucuaa gaaucuuugu uagauauuag gucccaucaa 720
uucuuagaau aucuaaacau cuuuguugau guuuagauuu uuuuauuuga uguguaagaa 780
aauguucuuu gugugauuaa augacacauu uuuuugcuga aaaaaaaaa 829
<210> 489
<211> 555
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 489
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca gaaauugugc cauccuucau caacaaagau 240
acagaaacca uaaauaugau gucagaauuu guugcuaauu ugccacagga gcugaaguua 300
acccugucug agaugcagcc agcauuacca cagcuacaac aacauguacc uguauuaaaa 360
gauuccaguc uucucuuuga agaauuuaag aaacuuauuc gcaauagaca aagugaagcc 420
gcagacagca guccuucaga auuaaaauac uuaggcuugg auacucauuc ucgaaaaaag 480
agacaacucu acagugcauu ggcuaauaaa uguugccaug uugguuguac caaaagaucu 540
cuugcuagau uuugc 555
<210> 490
<211> 930
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 490
gucccgaccu ccaggagaga ccaggcccag gaugccucgc cuguuuuuuu uccaccugcu 60
aggagucugu uuacuacuga accaauuuuc cagagcaguc gcggacucau ggauggagga 120
aguuauuaaa uuaugcggcc gcgaauuagu ucgcgcgcag auugccauuu gcggcaugag 180
caccuggagc aaaaggucuc ugagccagga agaugcuccu cagacaccua gaccaguggc 240
aggugauuuu auucaaacag ucucacuggg aaucucaccg gacggaggga aagcacugag 300
aacaggaagc ugcuucaccc gagaguuccu uggugcccuu uccaaauugu gccauccuuc 360
aucaacaaag auacagaaac cauaaauaug augucagaau uuguugcuaa uuugccacag 420
gagcugaagu uaacccuguc ugagaugcag ccagcauuac cacagcuaca acaacaugua 480
ccuguauuaa aagauuccag ucuucucuuu gaagaauuua agaaacuuau ucgcaauaga 540
caaagugaag ccgcagacag caguccuuca gaauuaaaau acuuaggcuu ggauacucau 600
ucucgaaaaa agagacaacu cuacagugca uuggcuaaua aauguugcca uguugguugu 660
accaaaagau cucuugcuag auuuugcuga gaugaagcua auugugcaca ucucguauaa 720
uauucacaca uauucuuaau gacauuucac ugaugcuucu aucagguccc aucaauucuu 780
agaauaucua agaaucuuug uuagauauua ggucccauca auucuuagaa uaucuaaaca 840
ucuuuguuga uguuuagauu uuuuuauuug auguguaaga aaauguucuu ugugugauua 900
aaugacacau uuuuuugcug aaaaaaaaaa 930
<210> 491
<211> 351
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 491
augccucgcc uguuuuuuuu ccaccugcua ggagucuguu uacuacugaa ccaauuuucc 60
agagcagucg cggacucaug gauggaggaa guuauuaaau uaugcggccg cgaauuaguu 120
cgcgcgcaga uugccauuug cggcaugagc accuggagca aaaggucucu gagccaggaa 180
gaugcuccuc agacaccuag accaguggca ggugauuuua uucaaacagu cucacuggga 240
aucucaccgg acggagggaa agcacugaga acaggaagcu gcuucacccg agaguuccuu 300
ggugcccuuu ccaaauugug ccauccuuca ucaacaaaga uacagaaacc a 351
<210> 492
<211> 9
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 492
ccrccaugg 9
<210> 493
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 493
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccuc cauaaaguag gaaacacuac aguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 494
<211> 141
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 494
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guaccccccg cauuauuacu cacgguacga guggucuuug 120
aauaaagucu gagugggcgg c 141
<210> 495
<211> 164
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 495
ugauaauagu ccauaaagua ggaaacacua cagcuggagc cucgguggcc uagcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc ccgcauuauu 120
acucacggua cgaguggucu uugaauaaag ucugaguggg cggc 164
<210> 496
<211> 188
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 496
ugauaauagu ccauaaagua ggaaacacua cagcuggagc cucgguggcc uagcuucuug 60
ccccuugggc cuccauaaag uaggaaacac uacauccccc cagccccucc uccccuuccu 120
gcacccguac ccccuccaua aaguaggaaa cacuacagug gucuuugaau aaagucugag 180
ugggcggc 188
<210> 497
<211> 140
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 497
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccag uagugcuuuc uacuuuaugg uggucuuuga 120
auaaagucug agugggcggc 140
<210> 498
<211> 181
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 498
ugauaauaga guagugcuuu cuacuuuaug gcuggagccu cgguggccau gcuucuugcc 60
ccuugggcca guagugcuuu cuacuuuaug uccccccagc cccucucccc uuccugcacc 120
cguaccccca guagugcuuu cuacuuuaug guggucuuug aauaaagucu gagugggcgg 180
c 181
<210> 499
<211> 184
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 499
ugauaauaga guagugcuuu cuacuuuaug gcuggagccu cgguggccau gcuucuugcc 60
ccuugggccu ccauaaagua ggaaacacua caucccccca gccccuccuc cccuuccugc 120
acccguaccc ccaguagugc uuucuacuuu augguggucu uugaauaaag ucugaguggg 180
cggc 184
<210> 500
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 500
ugauaauagu ccauaaagua ggaaacacua cagcuggagc cucgguggcc uagcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 501
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 501
ugauaauagg cuggagccuc gguggcucca uaaaguagga aacacuacac uagcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 502
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 502
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cauaaaguag 60
gaaacacuac auccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 503
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 503
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccac cccuaucaca auuagcauua aguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 504
<211> 188
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 504
ugauaauaga ccccuaucac aauuagcauu aagcuggagc cucgguggcc uagcuucuug 60
ccccuugggc caccccuauc acaauuagca uuaauccccc cagccccucc uccccuuccu 120
gcacccguac ccccaccccu aucacaauua gcauuaagug gucuuugaau aaagucugag 180
ugggcggc 188
<210> 505
<211> 188
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 505
ugauaauaga ccccuaucac aauuagcauu aagcuggagc cucgguggcc uagcuucuug 60
ccccuugggc cuccauaaag uaggaaacac uacauccccc cagccccucc uccccuuccu 120
gcacccguac ccccaccccu aucacaauua gcauuaagug gucuuugaau aaagucugag 180
ugggcggc 188
<210> 506
<400> 506
000
<210> 507
<400> 507
000
<210> 508
<400> 508
000
<210> 509
<400> 509
000
<210> 510
<400> 510
000
<210> 511
<400> 511
000
<210> 512
<400> 512
000
<210> 513
<400> 513
000
<210> 514
<400> 514
000
<210> 515
<400> 515
000
<210> 516
<400> 516
000
<210> 517
<400> 517
000
<210> 518
<400> 518
000
<210> 519
<400> 519
000
<210> 520
<400> 520
000
<210> 521
<400> 521
000
<210> 522
<400> 522
000
<210> 523
<400> 523
000
<210> 524
<400> 524
000
<210> 525
<400> 525
000
<210> 526
<400> 526
000
<210> 527
<400> 527
000
<210> 528
<400> 528
000
<210> 529
<400> 529
000
<210> 530
<400> 530
000
<210> 531
<400> 531
000
<210> 532
<400> 532
000
<210> 533
<400> 533
000
<210> 534
<400> 534
000
<210> 535
<400> 535
000
<210> 536
<400> 536
000
<210> 537
<400> 537
000
<210> 538
<400> 538
000
<210> 539
<211> 87
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 539
gacagugcag ucacccauaa aguagaaagc acuacuaaca gcacuggagg guguaguguu 60
uccuacuuua uggaugagug uacugug 87
<210> 540
<211> 23
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 540
uguaguguuu ccuacuuuau gga 23
<210> 541
<211> 23
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 541
uccauaaagu aggaaacacu aca 23
<210> 542
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 542
cauaaaguag aaagcacuac u 21
<210> 543
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 543
aguagugcuu ucuacuuuau g 21
<210> 544
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 544
attgggcacc cgtaaggg 18
<210> 545
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 545
gggaaauaag agagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 546
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 546
gggagaucag agagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 547
<211> 145
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 547
ggaauaaaag ucucaacaca acauauacaa aacaaacgaa ucucaagcaa ucaagcauuc 60
uacuucuauu gcagcaauuu aaaucauuuc uuuuaaagca aaagcaauuu ucugaaaauu 120
uucaccauuu acgaacgaua gcaac 145
<210> 548
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 548
gggagacaag cuuggcauuc cgguacuguu gguaaagcca cc 42
<210> 549
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 549
gggagaucag agagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 550
<211> 145
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 550
ggaauaaaag ucucaacaca acauauacaa aacaaacgaa ucucaagcaa ucaagcauuc 60
uacuucuauu gcagcaauuu aaaucauuuc uuuuaaagca aaagcaauuu ucugaaaauu 120
uucaccauuu acgaacgaua gcaac 145
<210> 551
<211> 42
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 551
gggagacaag cuuggcauuc cgguacuguu gguaaagcca cc 42
<210> 552
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 552
gggaauuaac agagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 553
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 553
gggaaauuag acagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 554
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 554
gggaaauaag agaguaaaga acaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 555
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 555
gggaaaaaag agagaaaaga agacuaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 556
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 556
gggaaauaag agagaaaaga agaguaagaa gauauauaag agccacc 47
<210> 557
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 557
gggaaauaag agacaaaaca agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 558
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 558
gggaaauuag agaguaaaga acaguaagua gaauuaaaag agccacc 47
<210> 559
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 559
gggaaauaag agagaauaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 560
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 560
gggaaauaag agagaaaaga agaguaagaa gaaaauuaag agccacc 47
<210> 561
<211> 47
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 561
gggaaauaag agagaaaaga agaguaagaa gaaauuuaag agccacc 47
<210> 562
<211> 92
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 562
ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60
aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca cc 92
<210> 563
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 563
ugauaauagu ccauaaagua ggaaacacua cagcuggagc cucgguggcc augcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 564
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 564
ugauaauagg cuggagccuc gguggcucca uaaaguagga aacacuacac augcuucuug 60
ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 565
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 565
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuuccauaaa guaggaaaca 60
cuacaugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 566
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 566
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagucc 60
auaaaguagg aaacacuaca ccccuccucc ccuuccugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 567
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 567
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu ucuccauaaa guaggaaaca cuacacugca cccguacccc cguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 568
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 568
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccuc cauaaaguag gaaacacuac aguggucuuu 120
gaauaaaguc ugagugggcg gc 142
<210> 569
<211> 142
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 569
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaaguucca uaaaguagga 120
aacacuacac ugagugggcg gc 142
<210> 570
<211> 371
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 570
gcgccugccc accugccacc gacugcugga acccagccag ugggagggcc uggcccacca 60
gaguccugcu cccucacucc ucgccccgcc cccuguccca gagucccacc ugggggcucu 120
cuccacccuu cucagaguuc caguuucaac cagaguucca accaaugggc uccauccucu 180
ggauucuggc caaugaaaua ucucccuggc aggguccucu ucuuuuccca gagcuccacc 240
ccaaccagga gcucuaguua auggagagcu cccagcacac ucggagcuug ugcuuugucu 300
ccacgcaaag cgauaaauaa aagcauuggu ggccuuuggu cuuugaauaa agccugagua 360
ggaagucuag a 371
<210> 571
<211> 568
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 571
gccccugccg cucccacccc cacccaucug ggccccgggu ucaagagaga gcggggucug 60
aucucgugua gccauauaga guuugcuucu gagugucugc uuuguuuagu agaggugggc 120
aggaggagcu gaggggcugg ggcuggggug uugaaguugg cuuugcaugc ccagcgaugc 180
gccucccugu gggaugucau cacccuggga accgggagug gcccuuggcu cacuguguuc 240
ugcaugguuu ggaucugaau uaauuguccu uucuucuaaa ucccaaccga acuucuucca 300
accuccaaac uggcuguaac cccaaaucca agccauuaac uacaccugac aguagcaauu 360
gucugauuaa ucacuggccc cuugaagaca gcagaauguc ccuuugcaau gaggaggaga 420
ucugggcugg gcgggccagc uggggaagca uuugacuauc uggaacuugu gugugccucc 480
ucagguaugg cagugacuca ccugguuuua auaaaacaac cugcaacauc ucauggucuu 540
ugaauaaagc cugaguagga agucuaga 568
<210> 572
<211> 289
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 572
acacacucca ccuccagcac gcgacuucuc aggacgacga aucuucucaa ugggggggcg 60
gcugagcucc agccaccccg cagucacuuu cuuuguaaca acuuccguug cugccaucgu 120
aaacugacac aguguuuaua acguguacau acauuaacuu auuaccucau uuuguuauuu 180
uucgaaacaa agcccugugg aagaaaaugg aaaacuugaa gaagcauuaa agucauucug 240
uuaagcugcg uaaauggucu uugaauaaag ccugaguagg aagucuaga 289
<210> 573
<211> 379
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 573
caucacauuu aaaagcaucu cagccuacca ugagaauaag agaaagaaaa ugaagaucaa 60
aagcuuauuc aucuguuuuu cuuuuucguu gguguaaagc caacacccug ucuaaaaaac 120
auaaauuucu uuaaucauuu ugccucuuuu cucugugcuu caauuaauaa aaaauggaaa 180
gaaucuaaua gagugguaca gcacuguuau uuuucaaaga uguguugcua uccugaaaau 240
ucuguagguu cuguggaagu uccaguguuc ucucuuauuc cacuucggua gaggauuucu 300
aguuucuugu gggcuaauua aauaaaucau uaauacucuu cuaauggucu uugaauaaag 360
ccugaguagg aagucuaga 379
<210> 574
<211> 118
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 574
gcugccuucu gcggggcuug ccuucuggcc augcccuucu ucucucccuu gcaccuguac 60
cucuuggucu uugaauaaag ccugaguagg aaggcggccg cucgagcaug caucuaga 118
<210> 575
<211> 908
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 575
gccaagcccu ccccauccca uguauuuauc ucuauuuaau auuuaugucu auuuaagccu 60
cauauuuaaa gacagggaag agcagaacgg agccccaggc cucugugucc uucccugcau 120
uucugaguuu cauucuccug ccuguagcag ugagaaaaag cuccuguccu cccauccccu 180
ggacugggag guagauaggu aaauaccaag uauuuauuac uaugacugcu ccccagcccu 240
ggcucugcaa ugggcacugg gaugagccgc ugugagcccc ugguccugag gguccccacc 300
ugggacccuu gagaguauca ggucucccac gugggagaca agaaaucccu guuuaauauu 360
uaaacagcag uguuccccau cuggguccuu gcaccccuca cucuggccuc agccgacugc 420
acagcggccc cugcaucccc uuggcuguga ggccccugga caagcagagg uggccagagc 480
ugggaggcau ggcccugggg ucccacgaau uugcugggga aucucguuuu ucuucuuaag 540
acuuuuggga caugguuuga cucccgaaca ucaccgacgc gucuccuguu uuucugggug 600
gccucgggac accugcccug cccccacgag ggucaggacu gugacucuuu uuagggccag 660
gcaggugccu ggacauuugc cuugcuggac ggggacuggg gaugugggag ggagcagaca 720
ggaggaauca ugucaggccu gugugugaaa ggaagcucca cugucacccu ccaccucuuc 780
accccccacu caccaguguc cccuccacug ucacauugua acugaacuuc aggauaauaa 840
aguguuugcc uccauggucu uugaauaaag ccugaguagg aaggcggccg cucgagcaug 900
caucuaga 908
<210> 576
<211> 835
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 576
acucaaucua aauuaaaaaa gaaagaaauu ugaaaaaacu uucucuuugc cauuucuucu 60
ucuucuuuuu uaacugaaag cugaauccuu ccauuucuuc ugcacaucua cuugcuuaaa 120
uugugggcaa aagagaaaaa gaaggauuga ucagagcauu gugcaauaca guuucauuaa 180
cuccuucccc cgcuccccca aaaauuugaa uuuuuuuuuc aacacucuua caccuguuau 240
ggaaaauguc aaccuuugua agaaaaccaa aauaaaaauu gaaaaauaaa aaccauaaac 300
auuugcacca cuuguggcuu uugaauaucu uccacagagg gaaguuuaaa acccaaacuu 360
ccaaagguuu aaacuaccuc aaaacacuuu cccaugagug ugauccacau uguuaggugc 420
ugaccuagac agagaugaac ugagguccuu guuuuguuuu guucauaaua caaaggugcu 480
aauuaauagu auuucagaua cuugaagaau guugauggug cuagaagaau uugagaagaa 540
auacuccugu auugaguugu aucguguggu guauuuuuua aaaaauuuga uuuagcauuc 600
auauuuucca ucuuauuccc aauuaaaagu augcagauua uuugcccaaa ucuucuucag 660
auucagcauu uguucuuugc cagucucauu uucaucuucu uccaugguuc cacagaagcu 720
uuguuucuug ggcaagcaga aaaauuaaau uguaccuauu uuguauaugu gagauguuua 780
aauaaauugu gaaaaaaaug aaauaaagca uguuugguuu uccaaaagaa cauau 835
<210> 577
<211> 297
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 577
cgccgccgcc cgggccccgc agucgagggu cgugagccca ccccguccau ggugcuaagc 60
gggcccgggu cccacacggc cagcaccgcu gcucacucgg acgacgcccu gggccugcac 120
cucuccagcu ccucccacgg gguccccgua gccccggccc ccgcccagcc ccaggucucc 180
ccaggcccuc cgcaggcugc ccggccuccc ucccccugca gccaucccaa ggcuccugac 240
cuaccuggcc ccugagcucu ggagcaagcc cugacccaau aaaggcuuug aacccau 297
<210> 578
<211> 602
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 578
ggggcuagag cccucuccgc acagcgugga gacggggcaa ggaggggggu uauuaggauu 60
ggugguuuug uuuugcuuug uuuaaagccg ugggaaaaug gcacaacuuu accucugugg 120
gagaugcaac acugagagcc aagggguggg aguugggaua auuuuuauau aaaagaaguu 180
uuuccacuuu gaauugcuaa aaguggcauu uuuccuaugu gcagucacuc cucucauuuc 240
uaaaauaggg acguggccag gcacgguggc ucaugccugu aaucccagca cuuugggagg 300
ccgaggcagg cggcucacga ggucaggaga ucgagacuau ccuggcuaac acgguaaaac 360
ccugucucua cuaaaaguac aaaaaauuag cugggcgugg uggugggcac cuguaguccc 420
agcuacucgg gaggcugagg caggagaaag gcaugaaucc aagaggcaga gcuugcagug 480
agcugagauc acgccauugc acuccagccu gggcaacagu guuaagacuc ugucucaaau 540
auaaauaaau aaauaaauaa auaaauaaau aaauaaaaau aaagcgagau guugcccuca 600
aa 602
<210> 579
<211> 785
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 579
ggcccugccc cgucggacug cccccagaaa gccuccugcc cccugccagu gaaguccuuc 60
agugagcccc uccccagcca gcccuucccu ggccccgccg gauguauaaa uguaaaaaug 120
aaggaauuac auuuuauaug ugagcgagca agccggcaag cgagcacagu auuauuucuc 180
cauccccucc cugccugcuc cuuggcaccc ccaugcugcc uucagggaga caggcaggga 240
gggcuugggg cugcaccucc uacccuccca ccagaacgca ccccacuggg agagcuggug 300
gugcagccuu ccccucccug uauaagacac uuugccaagg cucuccccuc ucgccccauc 360
ccugcuugcc cgcucccaca gcuuccugag ggcuaauucu gggaagggag aguucuuugc 420
ugccccuguc uggaagacgu ggcucugggu gagguaggcg ggaaaggaug gaguguuuua 480
guucuugggg gaggccaccc caaaccccag ccccaacucc aggggcaccu augagauggc 540
caugcucaac cccccuccca gacaggcccu cccugucucc agggccccca ccgagguucc 600
cagggcugga gacuuccucu gguaaacauu ccuccagccu ccccuccccu ggggacgcca 660
aggagguggg ccacacccag gaagggaaag cgggcagccc cguuuugggg acgugaacgu 720
uuuaauaauu uuugcugaau uccuuuacaa cuaaauaaca cagauauugu uauaaauaaa 780
auugu 785
<210> 580
<211> 3001
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 580
auauuaagga ucaagcuguu agcuaauaau gccaccucug caguuuuggg aacaggcaaa 60
uaaaguauca guauacaugg ugauguacau cuguagcaaa gcucuuggag aaaaugaaga 120
cugaagaaag caaagcaaaa acuguauaga gagauuuuuc aaaagcagua aucccucaau 180
uuuaaaaaag gauugaaaau ucuaaauguc uuucugugca uauuuuuugu guuaggaauc 240
aaaaguauuu uauaaaagga gaaagaacag ccucauuuua gauguagucc uguuggauuu 300
uuuaugccuc cucaguaacc agaaauguuu uaaaaaacua aguguuuagg auuucaagac 360
aacauuauac auggcucuga aauaucugac acaauguaaa cauugcaggc accugcauuu 420
uauguuuuuu uuuucaacaa augugacuaa uuugaaacuu uuaugaacuu cugagcuguc 480
cccuugcaau ucaaccgcag uuugaauuaa ucauaucaaa ucaguuuuaa uuuuuuaaau 540
uguacuucag agucuauauu ucaagggcac auuuucucac uacuauuuua auacauuaaa 600
ggacuaaaua aucuuucaga gaugcuggaa acaaaucauu ugcuuuauau guuucauuag 660
aauaccaaug aaacauacaa cuugaaaauu aguaauagua uuuuugaaga ucccauuucu 720
aauuggagau cucuuuaauu ucgaucaacu uauaaugugu aguacuauau uaagugcacu 780
ugaguggaau ucaacauuug acuaauaaaa ugaguucauc auguuggcaa gugauguggc 840
aauuaucucu ggugacaaaa gaguaaaauc aaauauuucu gccuguuaca aauaucaagg 900
aagaccugcu acuaugaaau agaugacauu aaucugucuu cacuguuuau aauacggaug 960
gauuuuuuuu caaaucagug uguguuuuga ggucuuaugu aauugaugac auuugagaga 1020
aaugguggcu uuuuuuagcu accucuuugu ucauuuaagc accaguaaag aucaugucuu 1080
uuuauagaag uguagauuuu cuuugugacu uugcuaucgu gccuaaagcu cuaaauauag 1140
gugaaugugu gaugaauacu cagauuauuu gucucucuau auaauuaguu ugguacuaag 1200
uuucucaaaa aauuauuaac acaugaaaga caaucucuaa accagaaaaa gaaguaguac 1260
aaauuuuguu acuguaaugc ucgcguuuag ugaguuuaaa acacacagua ucuuuugguu 1320
uuauaaucag uuucuauuuu gcugugccug agauuaagau cuguguaugu gugugugugu 1380
gugugugcgu uuguguguua aagcagaaaa gacuuuuuua aaaguuuuaa gugauaaaug 1440
caauuuguua auugaucuua gaucacuagu aaacucaggg cugaauuaua ccauguauau 1500
ucuauuagaa gaaaguaaac accaucuuua uuccugcccu uuuucuucuc ucaaaguagu 1560
uguaguuaua ucuagaaaga agcaauuuug auuucuugaa aagguaguuc cugcacucag 1620
uuuaaacuaa aaauaaucau acuuggauuu uauuuauuuu ugucauagua aaaauuuuaa 1680
uuuauauaua uuuuuauuua guauuaucuu auucuuugcu auuugccaau ccuuugucau 1740
caauuguguu aaaugaauug aaaauucaug cccuguucau uuuauuuuac uuuauugguu 1800
aggauauuua aaggauuuuu guauauauaa uuucuuaaau uaauauucca aaagguuagu 1860
ggacuuagau uauaaauuau ggcaaaaauc uaaaaacaac aaaaaugauu uuuauacauu 1920
cuauuucauu auuccucuuu uuccaauaag ucauacaauu gguagauaug acuuauuuua 1980
uuuuuguauu auucacuaua ucuuuaugau auuuaaguau aaauaauuaa aaaaauuuau 2040
uguaccuuau agucugucac caaaaaaaaa aaauuaucug uagguaguga aaugcuaaug 2100
uugauuuguc uuuaagggcu uguuaacuau ccuuuauuuu cucauuuguc uuaaauuagg 2160
aguuuguguu uaaauuacuc aucuaagcaa aaaauguaua uaaaucccau uacuggguau 2220
auacccaaag gauuauaaau caugcugcua uaaagacaca ugcacacgua uguuuauugc 2280
agcacuauuc acaauagcaa agacuuggaa ccaacccaaa uguccaucaa ugauagacuu 2340
gauuaagaaa augugcacau auacaccaug gaauacuaug cagccauaaa aaaggaugag 2400
uucauguccu uuguagggac auggauaaag cuggaaacca ucauucugag caaacuauug 2460
caaggacaga aaaccaaaca cugcauguuc ucacucauag gugggaauug aacaaugaga 2520
acacuuggac acaagguggg gaacaccaca caccagggcc ugucaugggg uggggggagu 2580
ggggagggau agcauuagga gauauaccua auguaaauga ugaguuaaug ggugcagcac 2640
accaacaugg cacauguaua cauauguagc aaaccugcac guugugcaca uguacccuag 2700
aacuuaaagu auaauuaaaa aaaaaaagaa aacagaagcu auuuauaaag aaguuauuug 2760
cugaaauaaa ugugaucuuu cccauuaaaa aaauaaagaa auuuuggggu aaaaaaacac 2820
aauauauugu auucuugaaa aauucuaaga gaguggaugu gaaguguucu caccacaaaa 2880
gugauaacua auugagguaa ugcacauauu aauuagaaag auuuugucau uccacaaugu 2940
auauauacuu aaaaauaugu uauacacaau aaauacauac auuaaaaaau aaguaaaugu 3000
a 3001
<210> 581
<211> 1037
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 581
cccacccugc acgccggcac caaacccugu ccucccaccc cuccccacuc aucacuaaac 60
agaguaaaau gugaugcgaa uuuucccgac caaccugauu cgcuagauuu uuuuuaagga 120
aaagcuugga aagccaggac acaacgcugc ugccugcuuu gugcaggguc cuccggggcu 180
cagcccugag uuggcaucac cugcgcaggg cccucugggg cucagcccug agcuaguguc 240
accugcacag ggcccucuga ggcucagccc ugagcuggcg ucaccugugc agggcccucu 300
ggggcucagc ccugagcugg ccucaccugg guuccccacc ccgggcucuc cugcccugcc 360
cuccugcccg cccucccucc ugccugcgca gcuccuuccc uaggcaccuc ugugcugcau 420
cccaccagcc ugagcaagac gcccucucgg ggccugugcc gcacuagccu cccucuccuc 480
uguccccaua gcugguuuuu cccaccaauc cucaccuaac aguuacuuua caauuaaacu 540
caaagcaagc ucuucuccuc agcuuggggc agccauuggc cucugucucg uuuugggaaa 600
ccaaggucag gaggccguug cagacauaaa ucucggcgac ucggccccgu cuccugaggg 660
uccugcuggu gaccggccug gaccuuggcc cuacagcccu ggaggccgcu gcugaccagc 720
acugaccccg accucagaga guacucgcag gggcgcuggc ugcacucaag acccucgaga 780
uuaacggugc uaaccccguc ugcuccuccc ucccgcagag acuggggccu ggacuggaca 840
ugagagcccc uuggugccac agagggcugu gucuuacuag aaacaacgca aaccucuccu 900
uccucagaau agugaugugu ucgacguuuu aucaaaggcc cccuuucuau guucauguua 960
guuuugcucc uucuguguuu uuuucugaac cauauccaug uugcugacuu uuccaaauaa 1020
agguuuucac uccucuc 1037
<210> 582
<211> 577
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 582
agaggccugc cuccagggcu ggacugaggc cugagcgcuc cugccgcaga gcuggccgcg 60
ccaaauaaug ucucugugag acucgagaac uuucauuuuu uuccaggcug guucggauuu 120
gggguggauu uugguuuugu uccccuccuc cacucucccc cacccccucc ccgcccuuuu 180
uuuuuuuuuu uuuuaaacug guauuuuauc uuugauucuc cuucagcccu caccccuggu 240
ucucaucuuu cuugaucaac aucuuuucuu gccucugucc ccuucucuca ucucuuagcu 300
ccccuccaac cuggggggca guggugugga gaagccacag gccugagauu ucaucugcuc 360
uccuuccugg agcccagagg agggcagcag aagggggugg ugucuccaac cccccagcac 420
ugaggaagaa cggggcucuu cucauuucac cccucccuuu cuccccugcc cccaggacug 480
ggccacuucu ggguggggca guggguccca gauuggcuca cacugagaau guaagaacua 540
caaacaaaau uucuauuaaa uuaaauuuug ugucucc 577
<210> 583
<211> 2212
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 583
cucccuccau cccaaccugg cucccuccca cccaaccaac uuucccccca acccggaaac 60
agacaagcaa cccaaacuga acccccucaa aagccaaaaa augggagaca auuucacaug 120
gacuuuggaa aauauuuuuu uccuuugcau ucaucucuca aacuuaguuu uuaucuuuga 180
ccaaccgaac augaccaaaa accaaaagug cauucaaccu uaccaaaaaa aaaaaaaaaa 240
aaagaauaaa uaaauaacuu uuuaaaaaag gaagcuuggu ccacuugcuu gaagacccau 300
gcggggguaa gucccuuucu gcccguuggg cuuaugaaac cccaaugcug cccuuucugc 360
uccuuucucc acaccccccu uggggccucc ccuccacucc uucccaaauc ugucucccca 420
gaagacacag gaaacaaugu auugucugcc cagcaaucaa aggcaaugcu caaacaccca 480
aguggccccc acccucagcc cgcuccugcc cgcccagcac ccccaggccc ugggggaccu 540
gggguucuca gacugccaaa gaagccuugc caucuggcgc ucccauggcu cuugcaacau 600
cuccccuucg uuuuugaggg ggucaugccg ggggagccac cagccccuca cuggguucgg 660
aggagaguca ggaagggcca cgacaaagca gaaacaucgg auuuggggaa cgcgugucaa 720
ucccuugugc cgcagggcug ggcgggagag acuguucugu uccuugugua acuguguugc 780
ugaaagacua ccucguucuu gucuugaugu gucaccgggg caacugccug ggggcgggga 840
ugggggcagg guggaagcgg cuccccauuu uauaccaaag gugcuacauc uaugugaugg 900
gugggguggg gagggaauca cuggugcuau agaaauugag augccccccc aggccagcaa 960
auguuccuuu uuguucaaag ucuauuuuua uuccuugaua uuuuucuuuu uuuuuuuuuu 1020
uuuuugugga uggggacuug ugaauuuuuc uaaaggugcu auuuaacaug ggaggagagc 1080
gugugcggcu ccagcccagc ccgcugcuca cuuuccaccc ucucuccacc ugccucuggc 1140
uucucaggcc ucugcucucc gaccucucuc cucugaaacc cuccuccaca gcugcagccc 1200
auccucccgg cucccuccua gucuguccug cguccucugu ccccggguuu cagagacaac 1260
uucccaaagc acaaagcagu uuuucccccu agggguggga ggaagcaaaa gacucuguac 1320
cuauuuugua uguguauaau aauuugagau guuuuuaauu auuuugauug cuggaauaaa 1380
gcauguggaa augacccaaa cauaauccgc aguggccucc uaauuuccuu cuuuggaguu 1440
gggggagggg uagacauggg gaaggggcuu uggggugaug ggcuugccuu ccauuccugc 1500
ccuuucccuc cccacuauuc ucuucuagau cccuccauaa ccccacuccc cuuucucuca 1560
cccuucuuau accgcaaacc uuucuacuuc cucuuucauu uucuauucuu gcaauuuccu 1620
ugcaccuuuu ccaaauccuc uucuccccug caauaccaua caggcaaucc acgugcacaa 1680
cacacacaca cacucuucac aucugggguu guccaaaccu cauacccacu ccccuucaag 1740
cccauccacu cuccaccccc uggaugcccu gcacuuggug gcggugggau gcucauggau 1800
acugggaggg ugaggggagu ggaacccgug aggaggaccu gggggccucu ccuugaacug 1860
acaugaaggg ucaucuggcc ucugcucccu ucucacccac gcugaccucc ugccgaagga 1920
gcaacgcaac aggagagggg ucugcugagc cuggcgaggg ucugggaggg accaggagga 1980
aggcgugcuc ccugcucgcu guccuggccc ugggggagug agggagacag acaccuggga 2040
gagcuguggg gaaggcacuc gcaccgugcu cuugggaagg aaggagaccu ggcccugcuc 2100
accacggacu gggugccucg accuccugaa uccccagaac acaacccccc ugggcugggg 2160
uggucugggg aaccaucgug cccccgccuc ccgccuacuc cuuuuuaagc uu 2212
<210> 584
<211> 729
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 584
uuggccaggc cugacccucu uggaccuuuc uucuuugccg acaaccacug cccagcagcc 60
ucugggaccu cgggguccca gggaacccag uccagccucc uggcuguuga cuucccauug 120
cucuuggagc caccaaucaa agagauucaa agagauuccu gcaggccaga ggcggaacac 180
accuuuaugg cuggggcucu ccgugguguu cuggacccag ccccuggaga caccauucac 240
uuuuacugcu uuguagugac ucgugcucuc caaccugucu uccugaaaaa ccaaggcccc 300
cuucccccac cucuuccaug gggugagacu ugagcagaac aggggcuucc ccaaguugcc 360
cagaaagacu gucuggguga gaagccaugg ccagagcuuc ucccaggcac agguguugca 420
ccagggacuu cugcuucaag uuuuggggua aagacaccug gaucagacuc caagggcugc 480
ccugagucug ggacuucugc cuccauggcu ggucaugaga gcaaaccgua guccccugga 540
gacagcgacu ccagagaacc ucuugggaga cagaagaggc aucugugcac agcucgaucu 600
ucuacuugcc uguggggagg ggagugacag guccacacac cacacugggu cacccugucc 660
uggaugccuc ugaagagagg gacagaccgu cagaaacugg agaguuucua uuaaagguca 720
uuuaaacca 729
<210> 585
<211> 847
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 585
uccuccggga ccccagcccu caggauuccu gaugcuccaa ggcgacugau gggcgcugga 60
ugaaguggca cagucagcuu cccugggggc uggugucaug uugggcuccu ggggcggggg 120
cacggccugg cauuucacgc auugcugcca ccccaggucc accugucucc acuuucacag 180
ccuccaaguc uguggcucuu cccuucuguc cuccgagggg cuugccuucu cucgugucca 240
gugaggugcu cagugaucgg cuuaacuuag agaagcccgc ccccuccccu ucuccgucug 300
ucccaagagg gucugcucug agccugcguu ccuagguggc ucggccucag cugccugggu 360
uguggccgcc cuagcauccu guaugcccac agcuacugga auccccgcug cugcuccggg 420
ccaagcuucu gguugauuaa ugagggcaug gggugguccc ucaagaccuu ccccuaccuu 480
uuguggaacc agugaugccu caaagacagu guccccucca cagcugggug ccaggggcag 540
gggauccuca guauagccgg ugaacccuga uaccaggagc cugggccucc cugaaccccu 600
ggcuuccagc caucucaucg ccagccuccu ccuggaccuc uuggccccca gccccuuccc 660
cacacagccc cagaaggguc ccagagcuga ccccacucca ggaccuaggc ccagccccuc 720
agccucaucu ggagccccug aagaccaguc ccacccaccu uucuggccuc aucugacacu 780
gcuccgcauc cugcugugug uccuguucca uguuccgguu ccauccaaau acacuuucug 840
gaacaaa 847
<210> 586
<211> 110
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 586
gcuggagccu cgguggccau gcuucuugcc ccuugggccu ccccccagcc ccuccucccc 60
uuccugcacc cguacccccg uggucuuuga auaaagucug agugggcggc 110
<210> 587
<211> 119
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полинуклеотид
<400> 587
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggc 119
<210> 588
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 588
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 589
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 589
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| АНТИТЕЛА К ТАУ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2787779C2 |
| ОНКОЛИТИЧЕСКИЙ HSV-ВЕКТОР | 2014 |
|
RU2719190C2 |
| СПОСОБЫ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ РАСТЕНИЙ | 2015 |
|
RU2727424C2 |
| Химерные антигенные рецепторы, нацеливающиеся на CD70 | 2019 |
|
RU2801824C2 |
| ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, НАЦЕЛИВАЮЩИЕСЯ НА ВАРИАНТ III РЕЦЕПТОРА ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА | 2017 |
|
RU2751662C2 |
| ЛЕЧЕНИЕ АНОМАЛЬНОГО ОТЛОЖЕНИЯ ВИСЦЕРАЛЬНОГО ЖИРА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАСТВОРИМЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ РЕЦЕПТОРА ФАКТОРА РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ 3 (sFGFR3) | 2018 |
|
RU2794170C2 |
| СНИЖЕНИЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ НИКОТИНА В НОРНИКОТИН В РАСТЕНИЯХ | 2015 |
|
RU2733837C2 |
| ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА ПОДОБНЫЙ FC-РЕЦЕПТОРУ БЕЛОК 5, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2015 |
|
RU2779747C2 |
| Новый вариант О-сукцинилгомосеринтрансферазы и способ получения О-сукцинилгомосерина с использованием этого варианта | 2018 |
|
RU2747493C1 |
| СПОСОБЫ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ОДНОДОЛЬНЫХ РАСТЕНИЙ | 2015 |
|
RU2727428C2 |
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу увеличения активности релаксина. Композиция для увеличения активности релаксина, содержит мРНК-полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, где мРНК-полинуклеотид содержит открытую рамку считывания, кодирующую слитый белок на основе релаксина, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 1, и фрагмент иммуноглобулина (Ig), где ионизируемая липидная наночастица содержит ионизируемый липид, представляющий собой соединение 18, имеющее структуру
Вышеописанная композиция позволяет увеличивать активность релаксина у субъекта. 9 з.п. ф-лы, 5 табл., 15 пр., 11 ил.
1. Композиция для увеличения активности релаксина, содержащая мРНК- полинуклеотид, составленный в ионизируемой липидной наночастице, где мРНК- полинуклеотид содержит открытую рамку считывания, кодирующую слитый белок на основе релаксина, содержащий аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 1, и фрагмент иммуноглобулина (Ig), где ионизируемая липидная наночастица содержит ионизируемый липид, представляющий собой соединение 18, имеющее структуру
2. Композиция по п. 1, где фрагмент Ig представляет собой вариабельный фрагмент цепи.
3. Композиция по п. 1, где фрагмент Ig представляет собой константный фрагмент цепи.
4. Композиция по п. 1, где фрагмент Ig представляет собой вариабельный фрагмент легкой цепи.
5. Композиция по п. 4, где вариабельный фрагмент легкой цепи содержит VLκ-участок IgG.
6. Композиция по п. 1, где слитый белок на основе релаксина содержит аминокислотную последовательность, которая идентична SEQ ID NO: 6.
7. Композиция по п. 1, где композиция представляет собой стандартную лекарственную форму с дозировкой 25-400 мкг мРНК-полинуклеотида для обеспечения дозы до 2 мг/кг у субъекта-человека.
8. Композиция по п. 1, где открытая рамка считывания является кодон-оптимизированной.
9. Композиция по п. 1, где мРНК содержит по меньшей мере одну химическую модификацию.
10. Композиция по п. 9, где химическая модификация выбрана из псевдоуридина, 1-метилпсевдоуридина, 1-этилпсевдоуридина, 2-тиоуридина, 4’-тиоуридина, 5-метилцитозина, 2-тио-1-метил-1-дезазапсевдоуридина, 2-тио-1-метилпсевдоуридина, 2-тио-5-азауридина, 2-тиодигидропсевдоуридина, 2-тиодигидроуридина, 2-тиопсевдоуридина, 4-метокси-2-тиопсевдоуридина, 4-метоксипсевдоуридина, 4-тио-1-метилпсевдоуридина, 4-тиопсевдоуридина, 5-азауридина, дигидропсевдоуридина, 5-метилуридина, 5-метоксиуридина и 2’-O-метилуридина.
| WO 2013151666 A2, 10.10.2013 | |||
| Bathgate R | |||
| A | |||
| D | |||
| et al | |||
| Relaxin family peptides and their receptors //Physiological reviews | |||
| Многоступенчатая активно-реактивная турбина | 1924 |
|
SU2013A1 |
| - Т | |||
| Домовый номерной фонарь, служащий одновременно для указания названия улицы и номера дома и для освещения прилежащего участка улицы | 1917 |
|
SU93A1 |
| - N | |||
| Печь для непрерывного получения сернистого натрия | 1921 |
|
SU1A1 |
| - С | |||
| Аппарат для передачи изображений неподвижных и движущихся предметов | 1923 |
|
SU405A1 |
| WO 2015006744 A1, 15.01.2015 | |||
| US 2012046229 A1, 23.02.2012 | |||
| WO 2006074341 A2, 13.07.2006 | |||
| Kauffman K | |||
| J | |||
| et al | |||
| Optimization of lipid nanoparticle formulations for mRNA delivery in vivo | |||
