ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ В ОТНОШЕНИИ T-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА МЫШИ Российский патент 2023 года по МПК A01K67/27 C07K14/705 C12N15/85 

Cсылка на родственные заявки

Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США № 61/552582, поданной 28 октября 2011 года, предварительной заявкой на выдачу патента США № 61/621198, поданной 6 апреля 2012 года, и предварительной заявкой на выдачу патента США № 61/700908, поданной 14 сентября 2012 года, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к генетически модифицированному не относящемуся к человеку животному, например, грызуну (например, мыши или крысе), которое содержит в своем геноме относящиеся к человеку или гуманизированные вариабельные генные локусы T-клеточного рецептора (TCR) (например, вариабельные генные локусы TCR α и TCRβ и/или вариабельные генные локусы TCRδ и TCRγ), и экспрессирует относящиеся к человеку или гуманизированные полипептиды TCR (например, полипептиды TCRα и TCRβ и/или полипептиды TCRδ и TCRγ) из относящихся к человеку или гуманизированных вариабельных генных локусов TCR. Не относящееся к человеку животное с относящимися к человеку или гуманизированными вариабельными генными локусами TCR по настоящему изобретению содержит нереаранжированные генные сегменты вариабельной области TCR человека (например, сегменты V, D и/или J) на эндогенных не относящихся к человеку генных локусах TCR. Настоящее изобретение также относится к зародышам, тканям и клеткам (например, T-клеткам), которые содержат относящиеся к человеку или гуманизированные вариабельные генные локусы TCR и экспрессируют относящиеся к человеку или гуманизированные полипептиды TCR. Также предусмотрены способы получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного, содержащего относящиеся к человеку или гуманизированные вариабельные генные локусы TCR; и способы применения не относящихся к человеку животных, зародышей, тканей и клеток, которые содержат относящиеся к человеку или гуманизированные вариабельные генные локусы TCR и экспрессируют относящиеся к человеку или гуманизированные полипептиды TCR из их локусов.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

В приобретенном иммунном ответе чужеродные антигены распознаются рецепторными молекулами на B-лимфоцитах (например, иммуноглобулинами) и T-лимфоцитах (например, T-клеточным рецептором, или TCR). В то время как патогены в крови и внеклеточном пространстве распознаются антителами в ходе гуморального иммунного ответа, разрушение патогенов внутри клеток опосредуется T-клетками в ходе клеточного иммунного ответа.

T-клетки распознают и атакуют антигены, презентированные им в контексте главного комплекса гистосовместимости (MHC) на клеточной поверхности. Распознавание антигена опосредуется TCR, экспрессированными на поверхности T-клеток. Два основных класса T-клеток выполняют эту функцию: цитотоксические T-клетки, которые экспрессируют белок клеточной поверхности CD8, и хелперные T-клетки, которые экспрессируют белок клеточной поверхности CD4. Цитотоксические T-клетки активируют каскады передачи сигнала, которые приводят к непосредственному разрушению клетки, презентирующей антиген (в контексте MHC I), тогда как хелперные T-клетки дифференцируются в несколько классов, и их активация (примированная распознаванием антигена, презентированного в контексте MHC II) приводит к опосредованному макрофагами разрушению патогена и стимуляции продукции антител B-клетками.

Вследствие антигенной специфичности антител в настоящее время проводят обширные исследования антител в отношении их терапевтического потенциала против многочисленных нарушений у людей. Для создания антител, способных нейтрализовать мишени у людей, одновременно избегая активации иммунных ответов против таких антител, ученые сконцентрировали свои усилия на получении относящихся к человеку или гуманизированных иммуноглобулинов. Одним из путей получения гуманизированных антител in vivo является использование мыши VELOCIMMUNE®, гуманизированной мыши, содержащей (1) репертуар нереаранжированных сегментов V, D и J иммуноглобулина человека, функционально связанных друг с другом, и константную область мыши на эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши и (2) репертуар нереаранжированных сегментов Vκ и Jκ человека, функционально связанных друг с другом, и константную κ область мыши на эндогенном локусе κ легкой цепи иммуноглобулина мыши. В связи с этим, мыши VELOCIMMUNE® обеспечивают богатый источник реаранжированных вариабельных доменов антитела с высокой степенью разнообразия для применения в конструировании антител человека.

Аналогично антителу T-клеточный рецептор содержит вариабельную область, кодируемую нереаранжированными локусами (α и β локусами, или δ и γ локусами), содержащими сегменты V(D)J вариабельной области, и эта вариабельная область обеспечивает T-клетке ее антигенсвязывающую специфичность. Также аналогично антителу специфичность TCR к его антигену может использоваться для разработки новых терапевтических средств. Таким образом, в настоящей области техники существует потребность в не относящихся к человеку животных (например, грызунах, например, крысах или мышах), которые содержат нереаранжированные генные сегменты вариабельной области T-клетки человека, способные к реаранжировке для образования генов, которые кодируют вариабельные домены T-клеточного рецептора человека, включающие в себя домены, которые являются родственными друг для друга, и включающие в себя домены, которые специфически связывают представляющий интерес антиген. Также существует потребность в не относящихся к человеку животных, которые содержат локусы вариабельной области T-клетки, которые содержат консервативные гуманизированные сегменты, включающих в себя не относящихся к человеку животных, которые содержат нереаранжированные генные сегменты человека, которые могут реаранжироваться для образования генов вариабельной области T-клеточного рецептора, которые связаны с не относящимися к человеку (эндогенными) генными последовательностями константной области T-клеточного рецептора. Остается необходимость в не относящихся к человеку животных, которые способные создавать разнообразный репертуар вариабельных последовательностей T-клеточного рецептора человека. Существует потребность в не относящихся к человеку животных, которые способны к реаранжировке большинства или всех функциональных сегментов вариабельной области T-клеточного рецептора, в ответ на представляющий интерес антиген, для образования полипептидов T-клеточного рецептора, которые содержат полностью человеческие вариабельные домены.

Краткое раскрытие настоящего изобретения

Предусмотрены не относящиеся к человеку животные, например, грызуны, содержащие не относящиеся к человеку клетки, которые экспрессируют гуманизированные молекулы, выполняющие функции в клеточном иммунном ответе. Также предусмотрены не относящиеся к человеку животные, которые содержат нереаранжированные вариабельные генные локусы TCR. Предусмотрены системы in vivo и in vitro, которые содержат гуманизированные клетки грызуна, причем клетки грызуна экспрессируют одну или несколько гуманизированных молекул иммунной системы. Также предусмотрены нереаранжированные гуманизированные локусы TCR грызуна, которые кодируют гуманизированные белки TCR.

Согласно одному аспекту в настоящем документе предусмотрено генетически модифицированное не относящееся к человеку животное (например, грызун, например, мышь или крыса), которое содержит в своем геноме (a) нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку (например, относящейся к грызуну, например, мыши или крысе) константной генной последовательностью TCRα, и/или (b) нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку (например, относящейся к грызуну, например, мыши или крысе) константной генной последовательностью TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный не относящийся к человеку (например, относящийся к грызуну) вариабельный генный локус TCRα на эндогенном вариабельном генном локусе TCRα. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный не относящийся к человеку (например, относящийся к грызуну) вариабельный генный локус TCRβ на эндогенном вариабельном генном локусе TCRβ. Согласно одному варианту осуществления эндогенные не относящиеся к человеку (например, относящиеся к грызуну) сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα. Согласно одному варианту осуществления эндогенные не относящиеся к человеку (например, относящиеся к грызуну) сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит такую делецию, что геном животного не содержит функциональный сегмент Vα и функциональный сегмент Jα. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит такую делецию, что геном животного не содержит функциональный эндогенный сегмент Vβ, функциональный эндогенный сегмент Dβ и функциональный эндогенный сегмент Jβ. Согласно одному варианту осуществления животное содержит делецию всех функциональных эндогенных сегментов Vα и Jα. Согласно одному варианту осуществления грызун содержит делецию всех функциональных эндогенных сегментов Vβ, Dβ и Jβ. Согласно некоторым вариантам осуществления сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα. Согласно некоторым вариантам осуществления сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Таким образом, согласно различным вариантам осуществления не относящееся к человеку животное (например, грызун) экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку (например, относящуюся к грызуну) константную область на поверхности T-клетки.

Согласно некоторым аспектам T-клетки не относящегося к человеку животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток. Согласно некоторым аспектам не относящееся к человеку животное содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов. Согласно различным вариантам осуществления не относящееся к человеку животное производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти в периферических органах.

Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα у описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека. Согласно другому варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα у не относящегося к человеку животного содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека.

Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ у описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного содержит 14 сегментов Jβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 Vβ сегментов человека. Согласно другому варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ у не относящегося к человеку животного содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.

Согласно дополнительному варианту осуществления описанное в настоящем документе не относящееся к человеку животное (например, грызун) дополнительно содержит нуклеотидные последовательности вариабельных сегментов TCRδ человека на гуманизированном локусе TCRα. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное (например, грызун) дополнительно содержит по меньшей мере один из сегментов Vδ, Dδ и Jδ человека, например, полный репертуар сегментов Vδ, Dδ и Jδ человека на гуманизированном локусе TCRα.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное сохраняет эндогенный не относящийся к человеку локус TCRα и/или TCRβ, причем локус представляет собой нефункциональный локус.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна. Согласно одному варианту осуществления грызун выбран из мыши и крысы. Согласно одному варианту осуществления грызун представляет собой мышь.

Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к генетически модифицированной мыши, содержащей в своем геноме (a) нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий репертуар сегментов Jα человека и репертуар сегментов Vα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку (например, относящейся к мыши или крысе) константной генной последовательностью TCRα, и/или (b) нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий репертуар сегментов Jβ человека, репертуар сегментов Dβ человека и репертуар сегментов Vβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку (например, относящейся к мыши или крысе) константной генной последовательностью TCRβ. Согласно одному варианту осуществления мышь содержит полный репертуар сегментов Vα человека. Согласно одному варианту осуществления мышь содержит полный репертуар сегментов Vβ человека. Согласно одному варианту осуществления мышь содержит полный репертуар сегментов Vα человека и сегментов Jα человека. Согласно одному варианту осуществления мышь содержит полный репертуар сегментов Vα человека и сегментов Vβ человека. Согласно одному варианту осуществления мышь содержит полный репертуар сегментов Vα человека, сегментов Jα человека, сегментов Vβ человека, сегментов Dβ человека и сегментов Jβ человека.

Согласно одному варианту осуществления мышь содержит по меньшей мере один эндогенный сегмент Vα мыши и по меньшей мере один эндогенный сегмент Jα мыши, причем эндогенные сегменты являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, а также содержит по меньшей мере один эндогенный сегмент Vβ мыши, по меньшей мере один эндогенный сегмент Dβ мыши и по меньшей мере один эндогенный сегмент Jβ мыши, причем эндогенные сегменты являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.

Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, который содержит сегменты вариабельной области TCRα человека замещает вариабельный гены TCRα мыши на эндогенном вариабельном локусе TCRα мыши, и нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, который содержит сегменты вариабельной области TCRβ человека замещает вариабельные гены TCRβ мыши на эндогенном вариабельном локусе TCRβ мыши.

Согласно одному варианту осуществления сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека. Согласно одному варианту осуществления реаранжированная последовательность Vα/Jα человека функционально связана с последовательностью константной области TCRα мыши. Согласно одному варианту осуществления реаранжированная последовательность Vβ/Dβ/Jβ человека функционально связана с последовательностью константной области TCRβ мыши. Таким образом, согласно различным вариантам осуществления мышь экспрессирует T-клеточный рецептор на поверхности T-клетки, причем T-клеточный рецептор содержит вариабельную область человека и константную область мыши.

Согласно одному варианту осуществления мышь дополнительно содержит репертуар сегментов вариабельной области TCRδ человека (например, сегменты Vδ, Jδ и Dδ человека) на гуманизированном локусе TCRα. Согласно одному варианту осуществления репертуар сегментов вариабельной области TCRδ человека представляет собой полный репертуар сегментов вариабельной области TCRδ человека. Согласно одному варианту осуществления сегменты вариабельной области TCRδ человека находятся на эндогенном локусе TCRα. Согласно одному варианту осуществления сегменты вариабельной области TCRδ человека замещают эндогенные сегменты вариабельной области TCRδ мыши.

Согласно одному варианту осуществления генетически модифицированная мышь экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и константную область мыши на поверхности T-клетки. Согласно одному аспекту T-клетки мыши проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток. Согласно одному аспекту мышь содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов; согласно одному аспекту мышь производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Также предусмотрены способы получения описанных в настоящем документе генетически модифицированных не относящихся к человеку животных (например, грызунов, например, мышей или крыс).

Согласно одному аспекту предусмотрен способ получения гуманизированного грызуна (например, мыши или крысы), предусматривающий замещение сегментов вариабельной области TCRα и TCRβ грызуна, но не константных генов грызуна, нереаранжированными сегментами вариабельной области TCRα и TCRβ человека на эндогенных локусах TCR грызуна. Согласно одному варианту осуществления способ предусматривает замещение сегментов вариабельной области TCRα грызуна (Vα и/или Jα) сегментами вариабельной области TCRα человека (Vα и/или Jα), причем сегменты вариабельной области TCRα функционально связаны с не относящимся к человеку геном константной области TCR для образования гуманизированного локуса TCRα; и замещение сегменты вариабельной области TCRβ грызуна (Vβ и/или Dβ и/или Jβ) сегментам вариабельной области TCRβ человека (Vβ и/или Dβ и/или Jβ), причем сегменты вариабельной области TCRβ функционально связаны с не относящимся к геном константной области TCR человека для образования гуманизированного локуса TCRβ. Согласно одному варианту осуществления гуманизированный грызун представляет собой мышь, и зародышевая линия мыши содержит сегменты вариабельной области TCRα человека, функционально связанные с эндогенной константной последовательностью TCRα мыши на эндогенном локусе TCRα; и зародышевая линия мыши содержит сегменты вариабельной области TCRβ человека, функционально связанные с эндогенной константной последовательностью TCRβ мыши на эндогенном локусе TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления в настоящем документе предусмотрен способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы), которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий относящуюся к человеку или гуманизированную вариабельную область и не относящуюся к человеку (например, относящуюся к грызуну) константную область на поверхности T-клетки, предусматривающий: замещение у первого не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRα нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRα, содержащим по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRα функционально связан с эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCRα; замещение у второго не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRβ нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRβ, содержащим по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ функционально связан с эндогенной константной областью TCRβ; и скрещивание первого и второго не относящегося к человеку животного для получения не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий относящуюся к человеку или гуманизированную вариабельную область и не относящуюся к человеку константную область.

Согласно одному варианту осуществления способа эндогенные не относящиеся к человеку (например, относящиеся к грызуну) сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и эндогенные не относящиеся к человеку (например, относящиеся к грызуну) сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Согласно одному варианту осуществления способа сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Согласно одному варианту осуществления способа нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека, и нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит 14 сегментов Vβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Jβ человека. Согласно другому варианту осуществления способа нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, и нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Vβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Jβ человека.

Согласно одному аспекту способа T-клетки не относящегося к человеку животного (например, грызуна) проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток. Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное (например, грызун) содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов. Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное (например, грызун) производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Согласно некоторым вариантам осуществления замещение описанного в настоящем документе эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRα проводят в единственной ES клетке и единственную ES клетку вводят в зародыш не относящегося к человеку (например, относящегося к грызуну, например, мыши или крысе) для получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного (т.е., первого не относящегося к человеку животного, например, первого грызуна); и замещение описанного в настоящем документе эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRβ проводят в единственной ES клетке и единственную ES клетку вводят в зародыш не относящегося к человеку (например, относящегося к грызуну, например, мыши или крысе) для получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного (т.е., второго не относящегося к человеку животного, например, второго грызуна). Согласно одному варианту осуществления первого грызуна и второго грызуна скрещивают для получения потомства, причем потомство содержит в своей зародышевой линии гуманизированный вариабельный локус TCRα и гуманизированный вариабельный локус TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления способа не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна, например, мышь. Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу получения генетически модифицированной мыши.

Также в настоящем документе предусмотрены клетки, например, выделенные T-клетки (например, цитотоксические T-клетки, T-хелперы, T-клетки памяти и т.д.), полученные от описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных (например, грызунов, например, мышей или крыс). Также предусмотрены ткани и зародыши, полученные от описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных.

Согласно одному аспекту предусмотрен способ получения вариабельного домена TCR человека, предусматривающий генетическую модификацию грызуна, описанного в настоящем документе, для введения гуманизированного локуса TCRα и/или гуманизированного локуса TCRβ, содержание грызуна в условиях, достаточных для образования T-клетки, причем T-клетка экспрессирует вариабельный домен TCRα человека /или вариабельный домен TCRβ человека.

Согласно одному аспекту предусмотрен способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека, который связывает представляющий интерес эпитоп, предусматривающий воздействие на описанное в настоящем документе не относящееся к человеку животное представляющего интерес эпитопа, содержание не относящегося к человеку животного в условиях, достаточных для того, чтобы животное презентировало представляющий интерес эпитоп гуманизированному TCR животного, и идентификацию нуклеиновой кислоты животного, которая кодирует полипептид вариабельного домена TCR человека, который связывает представляющий интерес эпитоп.

Согласно одному аспекту предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения гуманизированного рецептора TCR. Согласно одному аспекту предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения вариабельного домена TCR человека. Согласно одному аспекту предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека.

Согласно одному аспекту предусмотрено применение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека или его фрагмент, для получения антигенсвязывающего белка. Согласно одному варианту осуществления антигенсвязывающий белок содержит вариабельный домен TCR, содержащий вариабельный домен TCRα человека и/или вариабельный домен TCRβ человека, который связывает представляющий интерес антиген.

Согласно одному аспекту предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения не относящейся к человеку клетки, которая экспрессирует на своей поверхности гуманизированный T-клеточный рецептор.

Согласно одному аспекту предусмотрен гуманизированный T-клеточный рецептор от описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного.

Согласно одному аспекту предусмотрена последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельный домен TCR человека или его фрагмент, полученная у описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного.

Любой из описанных в настоящем документе вариантов осуществления и аспектов может использоваться совместно друг с другом, если иное не указано или не очевидно из контекста. Другие варианты осуществления станут очевидными специалистам в настоящей области техники из обзора последующего подробного раскрытия. Последующее подробное раскрытие включает в себя иллюстративные представления различных вариантов осуществления настоящего изобретения, которые не ограничивают заявленное настоящее изобретение. Прилагаемые фигуры составляют часть настоящего описания изобретения и вместе с описанием служат исключительно для иллюстрации вариантов осуществления, а не для ограничения настоящего изобретения.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показано взаимодействие у мыши между молекулой TCR и молекулой MHC: на левой панели показана T-клетка (сверху) мыши от гуманизированной в отношении TCR, содержащая T-клеточный рецептор с вариабельными доменами TCR человека и константными доменами TCR мыши, которая распознает антиген (серый кружок), презентированный посредством MHC I класса антигенпрезентирующей клеткой (внизу); на правой панели показано то же для MHC II класса. Комплексы MHC I и MHC II показаны вместе со своими соответствующими корецепторами, CD8 и CD4. Относящиеся к мыши области показаны черным цветом и относящиеся к человеку области показаны белым цветом.

На фиг. 2 показана (без соблюдения масштаба) общая организация локуса TCRα мыши (верхняя панель, первый локус) и человека (верхняя панель, второй локус). На нижней панели показана стратегия замещения сегментов вариабельной области TCRα у мыши (закрашенные символы) сегментами вариабельной области TCRα человека (незакрашенные символы) на эндогенном локусе мыши на 14 хромосоме; гуманизированный локус TCRα с сегментами Vα и Jα человека показан с константной областью мыши и энхансером мыши; в показанном варианте осуществления локус TCRδ удален в ходе гуманизации.

На фиг. 3 показана (без соблюдения масштаба) поэтапная стратегия гуманизации локуса TCRα мыши, причем генные сегменты вариабельной области TCRα последовательно добавляют выше против хода транскрипции от исходного участка гуманизации подвергнутого делеции локуса мыши (MAID1540). Последовательность мыши показана закрашенными символами; последовательность человека показана незакрашенными символами. MAID относится к идентификационному номеру (ID) модифицированного аллеля. TRAV= сегмент Vα TCR, TRAJ= сегмент Jα TCR (hTRAJ= TRAJ человека), TRAC= домен Cα TCR, TCRD=TCRδ.

На фиг. 4 представляет собой подробное описание (без соблюдения масштаба) поэтапной стратегии гуманизации на локусе TCRα. На фиг. 4A показана делеция сегментов V и J TCRα мыши; на фиг. 4B показана стратегия вставки 2 сегментов V и 61 сегмента J человека в подвергнутый делеции локус TCRα мыши; на фиг. 4C показана стратегия вставки дополнительных сегментов V человека, дающей в результате в общем 8 сегментов V и 61 сегмент J человека; на фиг. 4D показана стратегия вставки дополнительных сегментов V человека, дающей в результате в общем 23 V и 61 J сегмент человека; фиг. 4E показана стратегия вставки дополнительных сегментов V человека, дающая в результате 35 V и 61 J сегмент человека; фиг. 4F показана стратегия вставки дополнительных сегментов человека, дающая в результате 48 V и 61 J сегмент человека; и фиг. 4G показана стратегия вставки дополнительных сегментов человека, дающая в результате 54 V и 61 J сегмент человека. MAID относится к идентификационному номеру модифицированного аллеля.

На фиг. 5 показан (без соблюдения масштаба) один вариант осуществления стратегии гуманизации локуса TCRα мыши, при которой последовательности TCRδ человека (TCRδ Vs, TCRδ Ds, TCRδ Js, TCRδ enh (энхансер) и константную последовательность TCRδ (C)) также замещают на гуманизированном локусе TCRα. Последовательность мыши показана закрашенными символами; последовательность человека показана незакрашенными символами. LTVEC относится к большому нацеливающему вектору; hTRD= TCRδ человека.

На фиг. 6 показана (без соблюдения масштаба) общая организация локусов TCRβ мыши (верхняя панель, первый локус; на 6 хромосоме мыши) и человека (верхняя панель, второй локус; на 7 хромосоме человека). На нижней панели показана стратегия замещения сегментов вариабельной области TCRβ у мыши (закрашенные символы) сегментами вариабельной области TCRβ человека (незакрашенные символы) на эндогенном локусе мыши на 6 хромосоме мыши. Гуманизированный локус TCRβ, содержащий сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека, показан с константными областями мыши и энхансером мыши; согласно показанному варианту осуществления гуманизированный локус сохраняет гены трипсиногена мыши (сплошные прямоугольники); и согласно показанному конкретному варианту осуществления единственный сегмент V мыши сохраняют против хода транскрипции 5’ от генов трипсиногена мыши.

На фиг. 7 показана (без соблюдения масштаба) поэтапная стратегия гуманизации локуса TCRβ мыши, причем генные сегменты вариабельной области TCRβ последовательно добавляют к подвергнутому делеции вариабельному локусу TCRβ мыши. Последовательность мыши показана закрашенными символами; последовательность человека показана незакрашенными символами. MAID относится к идентификационному номеру модифицированного аллеля. TRBV или TCRBV= сегмент V TCRβ.

На фиг. 8 показано подробное описание поэтапной стратегии гуманизации на локусе TCRβ. На фиг. 8A показана стратегия делеции сегментов V TCRβ мыши; на фиг. 8B показана стратегия вставки 14 сегментов V сегментов в подвергнутый делеции локус TCRβ; на фиг. 8C показана стратегия вставки 2 D и 14 J сегментов в локус TCRβ (i), с последующей делецией сайта loxP (ii), дающей в результате 14 V, 2 D и 14 J сегментов человека; на фиг. 8D показана стратегия вставки дополнительных сегментов V человека, дающая в результате 40 V, 2 D и 14 J сегментов человека; и на фиг. 8E показана стратегия вставки дополнительных сегментов V человека, дающей в результате 66 V, 2 D и 14 J сегментов человека; на фиг. 8F показано замещение сегмента V мыши ниже по ходу транскрипции от энхансера мыши, дающее в результате 67 V, 2 D и 14 J сегментов человека. Согласно этому конкретному варианту осуществления один сегмент V мыши сохраняют 5’ от генов трипсиногена мыши.

На фиг. 9 показана репрезентативные гистограммы анализа FACS для процентного содержания клеток селезенки (где ось Y представляет собой количество клеток, ось X представляет собой среднюю интенсивность флуоресценции, и гейт показывает частоту встречаемости CD3+ T-клеток в пределах отдельной популяции лимфоцитов), окрашенных антителом к CD3 у мыши дикого типа(WT); мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα (первая верхняя панель; MAID 1540 из фиг. 3); мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα и содержащей 8 сегментов Vα человека и 61 сегмент Jα человека (вторая верхняя панель; MAID 1767 из фиг. 3 или гуманизированной в отношении TCRα мыши); мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRβ за исключением одного вышележащего и одного нижележащего сегментов Vβ мыши (первая нижняя панель; MAID 1545 из фиг. 7); мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRβ с одним вышележащим и одним нижележащим сегментами Vβ мыши и содержащей 14 сегментов Vβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Jβ человека (вторая нижняя панель; MAID 1716 из фиг. 7 или гуманизированной в отношении TCRβ мыши); и мыши, гомозиготной в отношении делеций как локусов TCRα, так и локусов TCRβ (за исключением указанных двух сегментов Vβ мыши) и содержащей 8 сегментов Vα человека и 61 сегментов Jα человека на эндогенном локусе TCRα, а также 14 сегментов Vβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Jβ человека на эндогенных локусах TCRβ (MAID 1767/1716 или гуманизированной в отношении TCRα/β мыши).

На фиг. 10 представляет собой репрезентативный контурный график FACS клеток тимуса мыши от WT, гомозиготной гуманизированной TCRα (1767 HO; hTCRα); гомозиготной гуманизированной TCRβ (1716 HO; hTCRβ); и гомозиготной гуманизированной TCRα/β мыши (1716 HO 1767 HO; hTCRα/β), окрашенных антителом к CD4 (ось Y) и антителом к CD8 (ось X) (верхняя панель), и антителом к CD44 (ось Y) и антителом к CD25 (ось X) (нижняя панель). График FACS на верхней панели позволяет различить двойные негативные (DN), двойные позитивные (DP), CD4 одинарные позитивные (CD4 SP), и CD8 одинарные позитивные (SP CD8) T-клетки. График FACS на нижней панели позволяет различить различные стадии двойных негативных T-клеток в ходе развития Т-клеток (DN1, DN2, DN3 и DN4). 1716 и 1767 относятся к номерам MAID, как показано на фигурах 3 и 7.

На фиг. 11 показана или частота встречаемости (верхняя панель), или абсолютное количество (нижняя панель) DN, DP, CD4 SP и CD SP T-клеток в тимусе или мышей WT, или hTCRα (1767 HO); hTCRβ (1716 HO); или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей (n=4).

На фиг. 12 представляет собой репрезентативный анализ FACS клеток селезенки мыши WT, hTCRα (1767 HO); hTCRβ (1716 HO); или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей: на левой панели представлен анализ одинарных T-клеток на основании окрашивания антителом к CD19 (ось Y; окрашивание в отношении B-лимфоцитов) или антителом к CD3 (ось X; окрашивание в отношении T-лимфоцитов); на средней панели представлен анализ CD3+ клеток на основании окрашивания антителом к CD4 (ось Y) или антителом к CD8 (ось X); и на правой панели представлен анализ или CD4+, или CD8+ клеток на основании окрашивания антителом к CD44 (ось Y) или антителом к CD62L (ось X), окрашивания позволяют различить различные типы T-клеток в периферических органах (наивные T-клетки в отличие от центральных T-клеток памяти (Tcm) в отличие от эффекторных T-клеток или эффекторных T-клеток памяти (Teff/Tem)).

На фиг. 13 показано количество CD4+ (левая панель) или CD8+ (правая панель) T-клеток на селезенку (оси Y) мышей WT, hTCRα (1767 HO); hTCRβ (1716 HO); или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей (n=4).

На фиг. 14 показано количество наивных T-клеток, Tcm и Teff/em-клеток на селезенку (оси Y) CD4+ (верхняя панель) или CD8+ (нижняя панель) T-клеток мышей WT, hTCRα (1767 HO); hTCRβ (1716 HO); или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей (n=4).

На фиг. 15 представлены таблицы, обобщающие данные относительно экспрессии (определенной с помощью анализа FACS с использованием специфических к вариабельному сегменту антител) различных V сегментов TCRβ человека в CD8+ T-клетках селезенки (фиг. 15A) или CD4+ T-клетках селезенки (фиг. 15B) у мышей WT, hTCRβ (1716 HO) или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей. Данные представлены как среднее±SD (среднеквадратичное отклонение) (n=4 мыши на группу).

На фиг. 16 показана экспрессия мРНК (оси Y) различных V сегментов TCRβ человека, присутствующих у мышей WT, hTCRα (1767 HO); hTCRβ (1716 HO); или hTCRα/β (1716 HO 1767 HO) мышей в T-клетках тимуса или селезенки; на фиг. 16A представлен анализ экспрессии мРНК вариабельных сегментов TCRβ человека (hTRBV) 18, 19, 20 и 24; и на фиг. 16B представлен анализ экспрессии мРНК hTRBV 25, 27, 28 и 29.

На фиг. 17 показаны репрезентативные гистограммы FACS клеток селезенки (где ось Y представляет собой количество клеток, ось X представляет собой среднюю интенсивность флуоресценции, и гейт показывает частоту встречаемости CD3+ T-клеток в пределах отдельной популяции лимфоцитов), окрашенных антителом к CD3 у мыши WT, мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα (TCRA ∆V), мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα с 2 сегментами V человека и 61 сегментом J человека (TCRA 2 hV; MAID 1626 из фиг. 3), мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα с 8 сегментами V человека и 61 сегментом J человека (TCRA 8 hV; MAID 1767 из фиг. 3), и мыши, гомозиготной в отношении подвергнутого делеции локуса TCRα с 23 сегментами V человека и 61 сегментом J человека (TCRA 23 hV; MAID 1979 из фиг. 3).

На фиг. 18, на левой верхней панели, представлен репрезентативный анализ FACS CD3+ T-клеток тимуса, полученных от либо мыши WT, либо гомозиготной hTCRα мыши с 23 сегментами V человека и 61 сегментом J человека (1979 HO), окрашенных либо с помощью антитела к CD4 (ось Y), либо с помощью антитела к CD8 (ось X); на левой нижней панели, представлен анализ FACS DN T-клеток либо от мыши WT, либо от 1979 мыши, окрашенных либо с помощью антитела к CD44 (ось Y), либо с помощью антитела к CD25 (ось X); на правой панели представлены графики количества тимоцитов в % (ось Y), которые представляют собой DN, DP, CD4 SP или CD8 SP либо у мышей WT, либо у 1979 HO мышей (n=4).

На фиг. 19, на левой панели, представлен репрезентативный анализ FACS лимфоцитов селезенки от мыши WT или мыши 1979 HO, окрашенных либо антителом к CD19, либо антителом к CD3; на правой панели, представлены графики количества спленоцитов в % (ось Y), полученных от мышей WT и мышей 1979 HO (n=4), которые являются CD3+.

Подробное раскрытие настоящего изобретения

Определения

Настоящее изобретение относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным, например, грызунам, например, мышам или крысам, которые экспрессируют гуманизированные T-клеточные рецепторы. Настоящее изобретение также относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным, которые содержат в своей зародышевой линии нереаранжированные вариабельные генные локусы T-клеточного рецептора. Также предусмотрены содержащие их зародыши, клетки и ткани; способы их получения; а также способы их применения. Если не указано иное, все используемые в настоящем документе термины и фразы включают в себя значения, которые подразумеваются под терминами и фразами в настоящей области техники, если противоположное ясно не указано или ясно не следует из контекста, в котором используется термин или фраза.

Термин "консервативная”, используемый для описания консервативной аминокислотной замены, включает в себя замену аминокислотного остатка другим аминокислотным остатком с R-группой боковой цепи со сходными химическими свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). Консервативные аминокислотные замены могут быть достигнуты путем модификации нуклеотидной последовательности так, чтобы ввести изменение нуклеотида, которое будет кодировать консервативную замену. Как правило, консервативная аминокислотная замена не будет существенно изменять представляющие интерес функциональные свойства белка, например, способность T-клетки распознавать пептид, презентируемый молекулой MHC. Примеры групп аминокислот, которые содержат боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают в себя такие алифатические боковые цепи глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин; такие алифатические гидроксильные боковые цепи серин и треонин; такие амидсодержащие боковые цепи, как аспарагин и глутамин; такие ароматические боковые цепи, как фенилаланин, тирозин и триптофан; такие основные боковые цепи, как лизин, аргинин и гистидин; такие кислотные боковые цепи, как аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота; и такие серосодержащие боковые цепи, как цистеин и метионин. Группы консервативных аминокислотных замен включают в себя, например, валин/лейцин/изолейцин, фенилаланин/тирозин, лизин/аргинин, аланин/валин, глутамат/аспартат, и аспарагин/глутамин. Согласно некоторым вариантам осуществления консервативная аминокислотная замена может представлять собой замену любого нативного остатка в белке на аланин, что используется, например, в сканирующем аланином мутагенезе. Согласно некоторым вариантам осуществления проводят консервативную замену, которая характеризуется положительным значением в матрице логарифмического правдоподобия PAM250, раскрытой в Gonnet et al. ((1992) Exhaustive Matching of the Entire Protein Sequence Database, Science 256:1443-45), включенной в настоящий документ посредством ссылки. Согласно некоторым вариантам осуществления представляет собой умеренно консервативную замену, причем замена характеризуется неотрицательным значением в матрице логарифмического правдоподобия PAM250.

Таким образом, настоящим изобретением предусмотрено генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, экспрессирующее гуманизированные полипептиды TCRα и TCRβ (и/или гуманизированные полипептиды TCRδ и TCRγ), содержащие консервативные аминокислотные замены в описанной в настоящем документе аминокислотной последовательности.

Специалисту в настоящей области техники понятно, что в дополнение к остаткам нуклеиновой кислоты, кодирующим описанные в настоящем документе гуманизированные полипептиды TCRα и TCRβ, другие нуклеиновые кислоты, вследствие вырожденности генетического кода, могут кодировать полипептиды по настоящему изобретению. Следовательно, в дополнение к генетически модифицированному не относящемуся к человеку животному, которое содержит в своем геноме нуклеотидные последовательности, кодирующие описанные в настоящем документе гуманизированные полипептиды TCR, также предусмотрено не относящееся к человеку животное, которое содержит в своем геноме нуклеотидные последовательности, которые отличаются от описанных в настоящем документе нуклеотидных последовательностей вследствие вырожденности генетического кода.

Термин “идентичность” при использовании в связи с последовательностью включает в себя идентичность, определяемую с помощью набора различных известных в настоящей области техники алгоритмов, которые могут использоваться для измерения идентичности нуклеотидной и/или аминокислотной последовательности. Согласно некоторым описанным в настоящем документе вариантам осуществления идентичности определяют с использованием ClustalW v. 1.83 (медленного) выравнивания с использованием штрафа за открытие делеции, составляющего 10,0, штрафа за продление делеции, составляющего 0,1, и с использованием матрицы сравнения согласно Gonnet (MacVector™ 10.0.2, MacVector Inc., 2008). Длина последовательностей, сравниваемых в отношении идентичности последовательностей, будет зависеть от конкретных последовательностей. Согласно различным вариантам осуществления идентичность определяют путем сравнения последовательности зрелого белка в направлении от его N-конца к его C-концу. Согласно различным вариантам осуществления при сравнении химерной относящейся к человеку/не относящейся к человеку последовательности с последовательностью человека, относящаяся к человеку часть химерной относящейся к человеку/не относящейся к человеку последовательности (но не часть, не относящаяся к человеку) используется в осуществления сравнения с целью выяснения уровня идентичности между последовательностью человека и относящейся к человеку части химерной относящейся к человеку/не относящейся к человеку последовательности (например, сравнивая эктодомен человека химерного относящегося к человеку/мыши белка с относящимся к человеку эктодоменом белка человека).

Термины “гомология” или “гомологичный” в отношении последовательностей, например, нуклеотидных или аминокислотных последовательностей, означает две последовательности, которые при оптимальном выравнивании и сравнении являются идентичными по меньшей мере приблизительно в 75% нуклеотидов или аминокислот, по меньшей мере приблизительно в 80% нуклеотидов или аминокислот, по меньшей мере приблизительно в 90-95% нуклеотидов или аминокислот, например, больше чем в 97% нуклеотидов или аминокислот. Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что для оптимального нацеленного воздействия на ген нацеливающая конструкция должна содержать плечи, гомологичные эндогенным последовательностям ДНК (т.е., “плечи гомологии”); таким образом, может происходить гомологичная рекомбинация между нацеливающей конструкцией и нацеленной эндогенной последовательностью.

Термин "функционально связанный" относится к смежному положению, причем описанные таким образом компоненты находятся во взаимодействии, позволяющем им функционировать предусмотренным для них образом. В связи с этим, кодирующая белок последовательность нуклеиновой кислоты может быть функционально связана с регуляторными последовательностями (например, последовательностью промотора, энхансера, сайленсера и т.д.) так, чтобы сохранять надлежащую транскрипционную регуляцию. Кроме того, различные части гуманизированного белка по настоящему изобретению могут быть функционально связаны для сохранения надлежащей укладки, процессинга, нацеленного воздействия, экспрессии и других функциональных свойств белка в клетке. Если не указано иное, различные домены гуманизированного белка по настоящему изобретению функционально связаны друг с другом.

Термин “замещение” в отношении замещения гена относится к размещению экзогенного генетического материала на эндогенном генетическом локусе, тем самым замещая весь эндогенный ген или его часть ортологичной или гомологичной последовательностью нуклеиновой кислоты. В одном случае эндогенный не относящийся к человеку ген или его фрагмент замещают соответствующим геном человека или его фрагментом. Соответствующий ген человека или его фрагмент представляет собой ген человека или фрагмент, которые представляет собой ортолог, гомолог или является по существу идентичным или одинаковым по структуре и/или функции по отношению к эндогенным не относящимся к человеку геном или его фрагментом, который замещают. Как показано в примерах ниже, нуклеотидные последовательности эндогенных не относящихся к человеку вариабельных генных локусов TCRα и β замещают нуклеотидными последовательностями, соответствующими вариабельным генным локусам TCRα и β человека.

Используемый в настоящем документе термин “функциональный”, например, по отношению к функциональному белку, относится к белку, который сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность, в норме связанную с нативным белком. Например, согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения замещение на эндогенном локусе (например, замещение на эндогенных не относящихся к человеку вариабельных генных локусах TCRα, TCRβ, TCRδ и/или TCRγ) дает в результате локус, который не способен экспрессировать функциональный эндогенный белок.

Используемые в настоящем документе локус TCR или генный локус TCR (например, локус TCRα или локус TCRβ) относятся к геномной ДНК, содержащей кодирующую область TCR, включающую в себя полную кодирующую область TCR, включающую в себя нереаранжированные последовательности V(D)J, энхансерную последовательность, константную(ые) последовательность(и) и любые вышележащие или нижележащие (UTR, регуляторные области и т.д.) или прерывающую последовательность ДНК (интроны и т.д.). Вариабельный локус TCR или вариабельный генный локус TCR (например, вариабельный генный локус TCRα или вариабельный генный локус TCRβ) относится к геномной ДНК, содержащей область, которая включает в себя сегменты вариабельной области TCR (области V(D)J), но не включает в себя константные последовательности TCR и, согласно различным вариантам осуществления, энхансерные последовательности. Другие последовательности могут быть включены в вариабельный генный локус TCR для целей генетической манипуляции (например, кассеты селекции, сайты рестрикции и т.д.), и они предусмотрены в настоящем документе.

Генетически модифицированные в отношении TCR животные

Согласно различным вариантам осуществления настоящее изобретение в основном относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным, причем не относящиеся к человеку животные содержат в геноме нереаранжированные гуманизированные вариабельные генные локусы TCR.

T-клетки связывают эпитопы на малых антигенных детерминантах на поверхности антигенпрезентирующих клеток, которые ассоциированы с главным комплексом гистосовместимости (MHC; у мышей) или комплексом лейкоцитарного антигена человека (HLA; у людей). T-клетки связывают эти эпитопы через комплекс T-клеточного рецептора (TCR) на поверхности T-клетки. T-клеточные рецепторы представляют собой гетеродимерные структуры, состоящие из двух типов цепей: α (альфа) и β (бета) цепи, или γ (гамма) и δ (дельта) цепи. α цепь кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, расположенной в пределах α локуса (на 14 хромосоме человека или мыши), которая также охватывает полный δ локус, и β цепь кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, расположенной в пределах β локуса (на 6 хромосоме мыши или 7 хромосоме человека). Большинство T-клеток содержат αβ TCR; тогда как небольшое количество T-клеток несут γδ TCR. Взаимодействия TCR с молекулами MHC I класса (осуществляющих презентацию CD8+ T-клеткам) и молекулами MHC II класса (осуществляющих презентацию CD4+ T-клеткам) показано на фиг. 1 (закрашенные символы представляют не относящиеся к человеку последовательности; незакрашенные символы представляют последовательности человека, демонстрируя один конкретный вариант осуществления белка TCR по настоящему изобретению).

α и β полипептиды T-клеточного рецептора (и аналогично γ и δ полипептиды) связаны друг с другом посредством дисульфидной связи. Каждый из двух полипептидов, которые образуют TCR, содержит внеклеточный домен, содержащий константную и вариабельную области, трансмембранный домен и цитоплазматический хвост (трансмембранный домен и цитоплазматический хвост также являются частью константной области). Вариабельная область TCR определяет его антигенную специфичность, и аналогично иммуноглобулинам, содержит 3 определяющих комплементарность области (CDR). Также аналогично генам иммуноглобулина, вариабельные генные локусы T- клеточного рецептора (например, локусы TCRα и TCRβ) содержат ряд нереаранжированных сегментов V(D)J (вариабельные (V), соединительные (J) сегменты, и в TCR β и δ, дополнительные (D) сегменты). В ходе развития Т-клеток в тимусе вариабельный генный локус TCRα подвергается реаранжировке, так что полученная α цепь TCR кодируется специфической комбинацией сегментов VJ (последовательностью Vα/Jα); и вариабельный генный локус TCRβ подвергается реаранжировке, так что полученная β цепь TCR кодируется специфической комбинацией сегментов VDJ сегментов (последовательностью Vβ/Dβ/Jβ).

Взаимодействия со стромой тимуса запускают прохождение тимоцитов через несколько стадий развития, характеризующихся экспрессией различных маркеров клеточной поверхности. Обобщение характерных маркеров клеточной поверхности на различных стадиях развития в тимусе представлена в таблице 1. Реаранжировка на вариабельном генном локусе TCRβ начинается на стадии DN2 и заканчивается в течение стадии DN4, тогда как реаранжировка вариабельного генного локуса TCRα происходит на стадии DP. После завершения реаранжировки локуса TCRβ клетки экспрессируют цепь TCRβ на клеточной поверхности вместе с α цепью-имитатором, pTα. Смотрите, Janeway’s Immunobiology, Chapter 7, ранее.

Таблица 1: Стадии развития T-клеток в тимусе

Стадия развития DN1 DN2 DN3 DN4 DP SP Маркер(ы) CD44+/CD25- CD44+/CD25+ CD44^низкий/CD25+ CD44-/ CD25- CD4+/CD8+ CD4+
или
CD8+

Наивные CD4+ и CD8+ T-клетки покидают тимус и проникают в периферические лимфоидные органы (например, селезенку), где на них воздействуют антигены, и они активируются для клонального размножения и дифференцировки в ряд эффекторных T-клеток (Teff), например, цитотоксические T-клетки, T_REG клетки, T_H17 клетки, T_H1 клетки, T_H2 клетки и т.д. После инфекции ряд T-клеток персистирует в качестве T-клеток памяти, и их классифицируют либо как центральные T-клетки памяти (Tcm), либо как эффекторные T-клетки памяти (Tem). Sallusto et al. (1999) Two subsets of memory T lymphocytes with distinct homing potentials and effector functions, Nature 401:708-12 и Commentary в Mackay (1999) Dual personality of memory T cells, Nature 401:659-60. Sallusto и коллеги предположили, что после начальной инфекции, Tem-клетки представляют легко доступный пул примированных антигеном T-клеток памяти в периферических тканях с эффекторными функциями, тогда как Tcm-клетки представляют примированные антигеном T-клетки памяти в периферических лимфоидных органах, которые при вторичной сенсибилизации могут становиться новыми эффекторными T-клетками. Наряду с тем, что все T-клетки памяти экспрессируют изоформу CD45RO CD45 (наивные T-клетки экспрессируют изоформу CD45RA), Tcm характеризуются экспрессией L-селектина (также известного как CD62L) и CCR7+, которые важны для связывания и передачи сигнала в периферических лимфоидных органах и лимфатических узлах (там же). Таким образом, все обнаруженные в периферических лимфоидных органах T-клетки (например, наивные T-клетки, Tcm-клетки и т.д.) экспрессируют CD62L. Известно, что кроме в дополнение к CD45RO, все T-клетки памяти экспрессируют ряд различных маркеров клеточной поверхности, например, CD44. Для обобщения различных маркеров клеточной поверхности на T-клетках, смотрите Janeway’s Immunobiology, Chapter 10, ранее.

Наряду с тем, что вариабельный домен TCR функционирует в первую очередь в распознавании антигена, внеклеточная часть константного домена, а также трансмембранный и цитоплазматический домены TCR также выполняют важные функции. Для полного рецепторного комплекса TCR необходимы не только α и β или γ и δ полипептиды; необходимые дополнительные молекулы включают в себя CD3γ, CD3δ, и CD3ε, а также гомодимер ζ цепи (ζζ). При завершении реаранжировки TCRβ, когда клетки экспрессируют TCRβ/pTα, этот пре-TCR комплекс существует вместе с CD3 на клеточной поверхности. TCRα (или pTα) на клеточной поверхности содержит в своем трансмембранном домене два основных остатка, один из которых обеспечивает рекрутинг гетеродимера CD3γε, а другой обеспечивает рекрутинг ζζ через их соответствующие кислотные остатки. TCRβ в своем трансмембранном домене содержит дополнительный основный остаток, который, как полагают, обеспечивает рекрутинг гетеродимера CD3δε. Смотрите, например, Kuhns et al. (2006) Deconstructing the Form and Function of the TCR/CD3 Complex, Immunity 24:133-39; Wucherpfennig et al. (2009) Structural Biology of the T-cell Receptor: Insights into Receptor Assembly, Ligand Recognition, and Initiation of Signaling, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a005140. Собранный комплекс, содержащей гетеродимер TCRαβ, CD3γε, CD3δε и ζζ, экспрессируется на T-клеточной поверхности. Предполагали, что полярные остатки в трансмембранном домене служат в качестве контроля качества для выхода из эндоплазматического ретикулума; было показано, что при отсутствии субъединиц CD3, цепи TCR остаются в эндоплазматическом ретикулуме и направляются на разрушение. Смотрите, например, Call and Wucherpfennig (2005) The T Cell Receptor: Critical Role of the Membrane Environment in Receptor Assembly and Function, Annu. Rev. Immunol. 23:101-25.

CD3 и ζ цепи собранного комплекса обеспечивают компоненты для передачи сигнала TCR, поскольку сам гетеродимер TCRαβ (или гетеродимер TCRγδ) не обладает активностью передачи сигнала. Каждая из CD3 цепей содержит один иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM), тогда как ζ цепь содержит три тандемных ITAM. ITAM содержат тирозиновые остатки, способные фосфорилироваться ассоциированными киназами. Таким образом, собранный комплекс TCR-CD3 содержит 10 мотивов ITAM. Смотрите, например, Love and Hayes (2010) ITAM-Mediated Signaling by the T-Cell Antigen Receptor, Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:e002485. После вовлечения TCR мотивы ITAM фосфорилируются тирозинкиназами Src семейства, Lck и Fyn, которые инициируют каскад передачи сигнала, приводящий к активации Ras, мобилизации кальция, реаранжировкам актинового цитоскелета и активации факторов транскрипции, что все в итоге приводит к T-клеточной дифференциации, пролиферации и эффекторным действиям (там же), смотрите также, Janeway’s Immunobiology, 7^th Ed., Murphy et al. eds., Garland Science, 2008; обе включенные в настоящий документ посредством ссылки.

Кроме того, полагают, что трансмембранный и цитоплазматический домены TCRβ играют роль в митохондриальном нацеливании и индукции апоптоза; действительно, встречающиеся в природе процессированные по N-концу молекулы TCRβ существуют в тимоцитах. Shani et al. (2009) Incomplete T-cell receptor--β peptides target the mitochondrion and induce apoptosis, Blood 113:3530-41. Таким образом, некоторые важные функции осуществляются константной областью TCR (которая, согласно различным вариантам осуществления, содержит часть внеклеточного домена, а также трансмембранный и цитоплазматический домены); и согласно различным вариантам осуществления структура этой области должна приниматься во внимание при конструировании гуманизированных TCR или генетически модифицированных не относящихся к человеку животных, их экспрессирующих.

В настоящей области техники известны мыши, трансгенные в отношении реаранжированных последовательностей T-клеточного рецептора. Настоящее изобретение относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным (например, грызунам, например, крысам, мышам), которые содержат нереаранжированные относящиеся к человеку или гуманизированные T-клеточные вариабельные генные локусы, которые способны к реаранжировке для образования последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют вариабельные домены T-клеточного рецептора человека, включающих в себя животных, которые содержат T-клетки, которые содержат реаранжированные вариабельные домены человека и не относящиеся к человеку (например, относящиеся к мыши или крысе) константные области. Настоящее изобретение также относится к не относящимся к человеку животным (например, грызунам, например, крысам, мышам), которые способны создавать разнообразный репертуар последовательностей вариабельной области T-клеточного рецептора человека; таким образом, настоящее изобретение относится к не относящимся к человеку животным, которые экспрессируют TCR с полностью человеческими вариабельными доменами в ответ на представляющий интерес антиген и которые связывают эпитоп представляющего интерес антигена. Согласно некоторым вариантам осуществления предусмотрены не относящиеся к человеку животные, которые создают разнообразный репертуар T-клеточного рецептора, способный реагировать с различными антигенами, включающими в себя без ограничения презентируемые АПК антигены.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным (например, грызунам, например, крысам, мышам), которые содержат в своем геноме нереаранжированные сегменты вариабельной области TCR человека (сегменты V(D)J), причем нереаранжированные сегменты вариабельной области TCR человека замещают на эндогенном не относящемся к человеку (например, относящемся к грызуну) вариабельном генном локусе TCR (например, вариабельном генном локусе TCRα, β, δ, и/или γ), эндогенные не относящиеся к человеку сегменты вариабельной области TCR. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCR человека замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCR.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к генетически модифицированным не относящимся к человеку животным (например, грызунам, например, крысам, мышам), которые содержат в своем геноме нереаранжированные сегменты вариабельной области TCR человека (сегменты V(D)J), причем нереаранжированные сегменты вариабельной области TCR человека функционально связаны с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области TCR, давая в результате гуманизированный локус TCR, причем гуманизированный локус TCR находится в положении в геноме, отличном от эндогенного не относящегося к человеку локуса TCR. Таким образом, согласно одному варианту осуществления также предусмотрено не относящееся к человеку животное (например, грызун, например, мышь, крыса), содержащее трансген, который содержит нереаранжированные сегменты вариабельной области TCR человека, функционально связанные с не относящейся к человеку последовательностью константной области TCR.

Согласно одному аспекту генетически модифицированные не относящиеся к человеку животные по настоящему изобретению содержат в своем геноме сегменты вариабельной области TCR человека при сохранении не относящихся к человеку (например, относящихся к грызуну, например, мыши, крысе) константных генных сегментов TCR. Согласно различным вариантам осуществления константные области включают в себя трансмембранный домен и цитоплазматический хвост TCR. Таким образом, согласно различным вариантам осуществления настоящего изобретения генетически модифицированные не относящиеся к человеку животные сохраняют эндогенный не относящийся к человеку трансмембранный домен TCR и цитоплазматический хвост. Согласно другим вариантам осуществления не относящиеся к человеку животные содержат не относящиеся к человеку не являющиеся эндогенными константные генные последовательности TCR, например, не относящийся к человеку не являющийся эндогенным трансмембранный домен и цитоплазматический хвост TCR. Как указано выше, константная область TCR принимает участие в каскаде передачи сигнала, который инициируется в ходе примированной антигеном активации T-клетки; таким образом, эндогенная константная область TCR взаимодействует с разнообразными не относящимися к человеку якорными и сигнальными белками в T-клетке. Таким образом, согласно одному аспекту генетически модифицированные не относящиеся к человеку животные по настоящему изобретению экспрессируют гуманизированные T-клеточные рецепторы, которые сохраняют способность обеспечивать рекрутинг разнообразных эндогенных не относящихся к человеку якорных или сигнальных молекул, например, CD3 молекул (например, CD3γ, CD3δ, CD3ε), ζ цепи, Lck, Fyn, ZAP-70 и т.д. Не ограничивающий перечень молекул, которые подвергаются рекрутингу в комплекс TCR, представлен в Janeway’s Immunobiology, ранее. Кроме того, аналогично мышам VELOCIMMUNE®, которые проявляют нормальное развитие B-клеток и нормальные процессы клональной селекции, как полагают, вследствие по меньшей мере частичного замещения вариабельных областей на эндогенных локусах мыши и сохранения константных доменов мыши, согласно одному аспекту не относящиеся к человеку животные по настоящему изобретению проявляют нормальные процессы развития Т-клеток и T-клеточной дифференциации.

Согласно некоторым вариантам осуществления предусмотрено не относящееся к человеку животное, которое содержит в своем геноме нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRα человека, причем нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRα человека функционально связаны с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области TCRα, давая в результате гуманизированный локус TCRα. Согласно одному варианту осуществления гуманизированный локус TCRα находится в положении в геноме, отличном от эндогенного не относящегося к человеку локуса TCRα. Согласно другому варианту осуществления нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRα человека замещают эндогенные не относящиеся к человеку сегменты вариабельной области TCRα при сохранении эндогенной не относящейся к человеку константной области TCRα. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα человека замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα. Согласно некоторым вариантам осуществления животное сохраняет эндогенные не относящиеся к человеку генные последовательности вариабельной области и константной области TCRβ. Таким образом, животное экспрессирует TCR, который содержит химерную относящуюся к человеку/не относящуюся к человеку (т.е., гуманизированную) цепь TCRα и не относящуюся к человеку цепь TCRβ.

Согласно другим вариантам осуществления предусмотрено не относящееся к человеку животное, которое содержит в своем геноме нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRβ человека, причем нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRβ человека функционально связаны с не относящейся к человеку генной последовательностью константной области TCRβ, давая в результате гуманизированный локус TCRβ. Согласно одному варианту осуществления гуманизированный локус TCRβ находится в положении в геноме, отличном от эндогенного не относящегося к человеку локуса TCRβ. Согласно другому варианту осуществления нереаранжированные сегменты вариабельной области TCRβ человека замещают эндогенные не относящиеся к человеку сегменты вариабельной области TCRβ при сохранении эндогенной не относящейся к человеку TCRβ константной области. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ человека замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ. Согласно некоторым вариантам осуществления животное сохраняет эндогенные не относящиеся к человеку генные последовательности вариабельной области и константной области TCRα. Таким образом, животное экспрессирует TCR, который содержит химерную относящуюся к человеку/не относящуюся к человеку (т.е., гуманизированную) цепь TCRβ и не относящуюся к человеку цепь TCRα.

Согласно некоторым конкретным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к генетически модифицированному не относящемуся к человеку животному (например, грызуну, например, мыши или крысе), которое содержит в своем геноме (a) нереаранжированный вариабельный генный локус T-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с эндогенными не относящимися к человеку (например, относящимися к грызуну, например, мыши или крысе) константными генными последовательностями TCRα, и/или (b) нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с эндогенной не относящейся к человеку (например, относящейся к грызуну, например, мыши или крысе) константной генной последовательностью TCRβ.

Согласно различным вариантам осуществления настоящего изобретения нереаранжированные относящийся к человеку или гуманизированный вариабельный генный локус TCR (например, вариабельный генный локус TCRα и/или вариабельный генный локус TCRβ) содержится в зародышевой линии не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы). Согласно различным вариантам осуществления замещения сегментов V(D)J TCR нереаранжированными сегментами V(D)J TCR человека (например, сегментами Vα и Jα и/или Vβ и Dβ и Jβ) происходят на эндогенном не относящийся к человеку вариабельном локусе TCR (или локусах), причем нереаранжированные сегменты V и J и/или V и D и J человека функционально связаны с не относящимися к человеку генами константной области TCR.

Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения не относящееся к человеку животное содержит две копии нереаранжированного относящегося к человеку или гуманизированного вариабельного генного локуса TCRα и/или две копии нереаранжированного относящегося к человеку или гуманизированного вариабельного генного локуса TCRβ. Таким образом, не относящееся к человеку животное является гомозиготным в отношении одного или обоих нереаранжированных относящихся к человеку или гуманизированных вариабельных генных локусов TCRα и TCRβ. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения не относящееся к человеку животное содержит одну копию нереаранжированного относящегося к человеку или гуманизированного вариабельного генного локуса TCRα и/или одну копию нереаранжированного относящегося к человеку или гуманизированного вариабельного генного локуса TCRβ. Таким образом, не относящееся к человеку животное является гетерозиготным в отношении одного или обоих нереаранжированных относящихся к человеку или гуманизированных вариабельных генных локусов TCRα и TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий сегменты вариабельной области человека (например, сегменты Vα и Jα человека), расположен в не относящемся к человеку геноме так, что сегменты вариабельной области человека замещают соответствующие не относящиеся к человеку сегменты вариабельной области. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий сегменты вариабельной области человека, замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRα. Согласно одному аспекту эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα. Таким образом, согласно одному аспекту сегменты Vα и Jα человека в нереаранжированном вариабельном генном локусе TCRα способны к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека.

Аналогично, согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий сегменты вариабельной области человека (например, сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека), расположен в не относящемся к человеку геноме так, что сегменты вариабельной области человека замещают соответствующие не относящиеся к человеку сегменты вариабельной области. Согласно одному варианту осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий сегменты вариабельной области человека, замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRβ. Согласно одному аспекту эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Таким образом, согласно одному аспекту сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека в нереаранжированном вариабельном генном локусе TCRβ способны к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vαβ/Dβ/Jβ человека.

Согласно другому варианту осуществления оба нереаранжированных вариабельных генных локуса TCRα и β, содержащие сегменты вариабельной области человека, замещают соответствующие эндогенные вариабельные генные локусы TCRα и β. Согласно одному аспекту эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Таким образом, согласно одному аспекту сегменты Vα и Jα человека в нереаранжированном вариабельном генном локусе TCRα способны к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека в нереаранжированном вариабельном генном локусе TCRβ способны к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vαβ/Dβ/Jβ человека.

Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения не относящееся к человеку животное, содержащее гуманизированный генный локус TCRα и/или TCRβ (содержащий нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα и/или TCRβ), сохраняет эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα и/или TCRβ. Согласно одному варианту осуществления эндогенный не относящийся к человеку TCRα и/или вариабельный генный локус TCRβ представляет собой нефункциональный локус. Согласно одному варианту осуществления нефункциональный локус представляет собой инактивированный локус, например, инвертированный локус (например, кодирующая последовательность нуклеиновой кислоты вариабельного генного локуса находится в инвертированной ориентации по отношению к последовательности константной области так, что никакие успешные реаранжировки не способны использовать сегменты вариабельной области из инвертированного локуса). Согласно одному варианту осуществления гуманизированный вариабельный генный локус TCRα и/или TCRβ расположен между эндогенным не относящимся к человеку вариабельным генным локусом TCRα и/или TCRβ и эндогенным не относящимся к человеку константным генным локусом TCRα и/или TCRβ.

Количества, номенклатура, положение, а также другие аспекты сегментов V и J и/или V, D и J локусов TCR человека и мыши могут быть установлены с использованием базы данных IMGT, доступной на www.imgt.org. Вариабельный локус TCRα мыши составляет приблизительно 1,5 м.п.н. и содержит в общем 110 Vα и 60 Jα сегментов (фиг. 2). Вариабельный локус TCRα человека составляет приблизительно 1 м.п.н. и содержит в общем 54 Vα и 61 Jα сегментов, причем полагают, что 45 Vα и 50 Jα сегментов являются функциональными. Если не указано иное, количества сегментов V(D)J человека, которые указаны в настоящем описании, относятся к общему количеству сегментов V(D)J. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения генетически модифицированное не относящееся к человеку животное (например, грызун, например, мышь или крыса) содержит по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 23, 25, 30, 35, 40, 45, 48, 50 или до 54 сегментов Vα человека. Согласно некоторым вариантам осуществления гуманизированный локус TCRα содержит 2, 8, 23, 35, 48 или 54 сегмента Vα человека. Таким образом, согласно некоторым вариантам осуществления гуманизированный локус TCRα у не относящегося к человеку животного может содержать 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 99% или 100% сегментов Vα человека; согласно некоторым вариантам осуществления он может содержать приблизительно 2%, приблизительно 3%, приблизительно 15%, приблизительно 65%, приблизительно 90% или 100% сегментов Vα человека.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегмента Vα40 - Vα41 человека (сегмент Vα также называется “TRAV” или “TCRAV”), и фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека 61 сегмента Jα человека (сегмент Jα также называется “TRAJ” или “TCRAJ”). Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRAV35 - TRAV41 человека, и фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека 61 сегмента TRAJ человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRAV22 - TRAV41 человека, и фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека 61 сегмента TRAJ человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRAV13-2 - TRAV41 человека, и фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека 61 сегмента TRAJ человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRAV6 - TRAV41 человека и 61 сегмента TRAJ человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRα, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRAV1-1 - TRAV 41 человека и 61 сегмента TRAJ человека. Согласно различным вариантам осуществления фрагменты ДНК, содержащие смежные последовательности человека сегментов вариабельной области TCRα человека, также содержат сайты фермента рестрикции, кассеты селекции, сайты эндонуклеаз или другие сайты, введенные для облегчения клонирования и селекции в течение процесса гуманизации локуса. Согласно различным вариантам осуществления эти дополнительные сайты не влияют на надлежащее функционирование (например, реаранжировку, сплайсинг и т.д.) различных генов на локусе TCRα.

Согласно одному варианту осуществления гуманизированный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека или 100% сегментов Jα человека. Согласно конкретному варианту осуществления гуманизированный локус TCRα содержит 8 сегментов Vα человека и 61 сегмент Jα человека; согласно другому конкретному варианту осуществления гуманизированный локус TCRα содержит 23 сегмента Vα человека и 61 сегмент Jα человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления гуманизированный TCRα локус содержит полный репертуар сегментов Vα и Jα человека, т.е., все генные сегменты вариабельной α области человека, кодируемые α локусом, или 54 сегмента Vα человека и 61 сегмент Jα человека. Согласно различным вариантам осуществления не относящееся к человеку животное не содержит любые эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα или Jα на локусе TCRα.

Вариабельный локус TCRβ мыши составляет приблизительно 0,6 м.п.н. и содержит в общем 33 Vβ, 2 Dβ и 14 Jβ сегментов (фиг. 6). Вариабельный локус TCRβ человека составляет приблизительно 0,6 м.п.н. и содержит в общем 67 Vβ, 2 Dβ и 14 Jβ сегментов. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения генетически модифицированное не относящееся к человеку животное (например, грызун, например, мышь или крыса) содержит по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 23, 25, 30, 35, 40, 45, 48, 50, 55, 60 или до 67 сегментов Vβ человека. Согласно некоторым вариантам осуществления гуманизированный локус TCRβ содержит 8, 14, 40, 66 или 67 сегментов Vβ человека. Таким образом, согласно некоторым вариантам осуществления гуманизированный локус TCRβ у не относящегося к человеку животного может содержать 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 99% или 100% Vβ человека; согласно некоторым вариантам осуществления он может содержать приблизительно 20%, приблизительно 60%, приблизительно 15%, приблизительно 98% или 100% Vβ человека.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Vβ18 - Vβ29-1 человека (сегмент Vβ также называется “TRBV” или “TCRBV”). Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRBV18 - TRBV29-1 человека, отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ1-Jβ1 человека (т.е., сегментов Dβ1-Jβ1-1-Jβ1-6 человека), и отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ2-Jβ2 человека (т.е., сегментов Dβ2-Jβ2-1-Jβ2-7 человека). Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRBV6-5 - TRBV29-1 человека, отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ1-Jβ1 человека (т.е., сегментов Dβ1-Jβ1-1-Jβ1-6 человека) и отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ2-Jβ2 человека (т.е., сегментов Dβ2-Jβ2-1-Jβ2-7 человека). Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRBV1 - TRBV29-1 человека, отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ1-Jβ1 человека и отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ2-Jβ2 человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит гуманизированный локус TCRβ, который содержит фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов TRBV1 - TRBV29-1 человека, отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ1-Jβ1 человека, отдельный фрагмент ДНК, содержащий смежную последовательность человека сегментов Dβ2-Jβ2 человека, и отдельный фрагмент ДНК, содержащий последовательность сегмента TRBV30 человека. Согласно различным вариантам осуществления фрагменты ДНК, содержащие смежные последовательности человека сегментов вариабельной области TCRβ человека, также содержат сайты фермента рестрикции, кассеты селекции, сайты эндонуклеаз или другие сайты, введенные для облегчения клонирования и селекции в ходе процесса гуманизации локуса. Согласно различным вариантам осуществления эти дополнительные сайты не влияют на надлежащее функционирование (например, реаранжировку, сплайсинг и т.д.) различных генов на локусе TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления гуманизированный локус TCRβ содержит 14 сегментов Jβ человека или 100% сегментов Jβ человека и 2 сегмента Dβ человека или 100% сегментов Jβ человека. Согласно другому варианту осуществления гуманизированный локус TCRβ содержит по меньшей мере один сегмент Vβ человека, например, 14 сегментов Vβ человека и все сегменты Dβ и Jβ мыши. Согласно конкретному варианту осуществления гуманизированный локус TCRβ содержит 14 сегментов Vβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Jβ человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления гуманизированный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Vβ, Dβ и Jβ человека, т.е., все генные сегменты вариабельной β области человека, кодируемые β локусом или 67 сегментов Vβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Jβ человека. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит один (например, 5’) не относящийся к человеку сегмент Vβ на гуманизированном локусе TCRβ. Согласно различным вариантам осуществления не относящееся к человеку животное не содержит любые эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ или Jβ на локусе TCRβ.

Согласно различным вариантам осуществления, в которых не относящееся к человеку животное (например, грызун) содержит репертуар сегментов вариабельной области (например, полный репертуар сегментов вариабельной области) TCRα и TCRβ человека (и необязательно TCRδ и TCRγ человека), репертуар различных сегментов (например, полный репертуар различных сегментов) используется животным для создания разнообразного репертуара молекул TCR к различным антигенам.

Согласно различным аспектам не относящиеся к человеку животные содержат смежные части геномных вариабельных локусов TCR человека, которые содержат сегменты V, D и J, или D и J, или V и J, или V, расположенные, как в нереаранжированном геномном вариабельном локусе человека, например, включая в себя промоторные последовательности, лидерные последовательности, межгенные последовательности, регуляторные последовательности и т.д., расположенные, как в геномном вариабельном локусе TCR человека. Согласно другим аспектам различные сегменты расположены, как в нереаранжированном не относящемся к человеку геномном вариабельном локусе TCR. Согласно различным вариантам осуществления гуманизированного локуса TCRα и/или β, гуманизированный локус может содержать два или больше соединенных геномных сегментов человека, которые не наблюдаются в геноме человека, например, фрагмент сегментов V человека локуса V, расположенный в геноме человека вблизи константной области, соединенный с фрагментом сегментов V человека локуса V, расположенным в геноме человека на вышележащем конце локуса V человека.

Как у мыши, так и у человека генные сегменты TCRδ расположены вместе с локусом TCRα (смотрите фигуры 2 и 5). Сегменты J и D TCRδ расположены между сегментами Vα и Jα, тогда как сегменты V TCRδ рассеяны по локусу TCRα, причем большинство расположено среди различных сегментов Vα. Количество и положения различных сегментов TCRδ можно определить из базы данных IMGT. Вследствие геномного расположения генных сегментов TCRδ в пределах локуса TCRα, успешная реаранжировка на локусе TCRα, как правило, удаляет генные сегменты TCRδ.

Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения не относящееся к человеку животное, содержащее нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα человека, также содержит по меньшей мере один сегмент Vδ человека, например, вплоть до полного репертуара сегментов Vδ человека. Таким образом, согласно некоторым вариантам осуществления замещение эндогенного вариабельного генного локуса TCRα приводит к замещению по меньшей мере одного не относящегося к человеку сегмента Vδ сегментом Vδ человека. Согласно другим вариантам осуществления не относящееся к человеку животное по настоящему изобретению содержит полный репертуар сегментов Vδ, Dδ и Jδ человека на нереаранжированном гуманизированном локусе TCRα; согласно другим вариантам осуществления не относящееся к человеку животное содержит полный нереаранжированный локус TCRδ человека на нереаранжированном гуманизированном локусе TCRα (т.е., локус TCRδ, включающий в себя сегменты вариабельной области человека, а также энхансер и константную область человека). Иллюстративный вариант осуществления конструирования нереаранжированного гуманизированного локуса TCRα, содержащего полный нереаранжированный локус TCRδ, показан на фиг. 5.

Согласно другому варианту осуществления не относящееся к человеку животное по настоящему изобретению дополнительно содержит нереаранжированный гуманизированный локус TCRγ, например, локус TCRγ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vγ человека и по меньшей мере один сегмент Jγ человека (например, полный репертуар сегментов Vγ человека и Jγ человека вариабельной области). Локус TCRγ человека находится на 7 хромосоме человека, тогда как локус TCRγ мыши находится на 13 хромосоме мыши. Смотрите базу данных IMGT для подробной информации о локусе TCRγ.

Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное (например, грызун, например, мышь или крыса), содержащее описанные в настоящем документе гуманизированные вариабельные генные локусы TCRα и β (и необязательно гуманизированные вариабельные генные локусы TCRδ/γ), экспрессирует гуманизированный T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку (например, относящуюся к грызуну, например, мыши или крысе) константную область на поверхности T-клетки. Согласно некоторым аспектам не относящееся к человеку животное способно экспрессировать или экспрессирует разнообразный репертуар гуманизированных T-клеточных рецепторов, которые распознают разнообразные презентированные антигены.

Согласно различным вариантам осуществления настоящего изобретения, описанные в настоящем документе гуманизированные полипептиды T-клеточного рецептора содержат лидерные последовательности человека. Согласно альтернативным вариантам осуществления гуманизированные TCR-рецепторные последовательности нуклеиновой кислоты сконструированы так, что гуманизированные полипептиды TCR содержат не относящиеся к человеку лидерные последовательности.

Описанные в настоящем документе гуманизированные полипептиды TCR могут экспрессироваться под контролем эндогенных не относящихся к человеку регуляторных элементов (например, регуляторных элементов грызуна), например, промотора, сайленсера, энхансера и т.д. Описанные в настоящем документе гуманизированные полипептиды TCR могут альтернативно экспрессироваться под контролем регуляторных элементов человека. Согласно различным вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные дополнительно содержат все регуляторные и другие последовательности, встречающиеся в норме in situ в геноме человека.

Согласно различным вариантам осуществления вариабельная область человека гуманизированного белка TCR способна взаимодействовать с различными белками на поверхности той же клетки или другой клетки. Согласно одному варианту осуществления вариабельная область человека гуманизированного TCR взаимодействует с белками MHC (например, белками MHC I или II класса), презентирующими антигены на поверхности второй клетки, например, антигенпрезентирующей клетки (АПК). Согласно некоторым вариантам осуществления белок MHC I или II представляет собой не относящийся к человеку (например, относящийся к грызуну, например, мыши или крысе) белок. Согласно другим вариантам осуществления белок MHC I или II представляет собой белок человека. Согласно одному аспекту вторая клетка, например, АПК, представляет собой эндогенную не относящуюся к человеку клетку, экспрессирующую относящуюся к человеку или гуманизированную молекулу MHC. Согласно другому варианту осуществления вторая клетка представляет собой клетку человека, экспрессирующую молекулу MHC человека.

Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное экспрессирует гуманизированный T-клеточный рецептор с не относящейся к человеку константной областью на поверхности T-клетки, причем рецептор способен взаимодействовать с не относящимися к человеку молекулами, например, якорными или сигнальными молекулами, экспрессируемыми в T-клетке (например, CD3 молекулами, ζ цепью или другими белками, прикрепленными к TCR посредством CD3 молекул или ζ цепи).

Таким образом, согласно одному аспекту предусмотрен клеточный комплекс, содержащий не относящуюся к человеку T-клетку, которая экспрессирует TCR, который содержит описанную в настоящем документе гуманизированную цепь TCRα и описанную в настоящем документе гуманизированную цепь TCRβ, и не относящуюся к человеку антигенпрезентирующую клетку, содержащую антиген, связанный с MHC I или MHC II. Согласно одному варианту осуществления не относящиеся к человеку константные цепи TCRα и TCRβ образуют комплекс с не относящимися к человеку гомодимером дзета (ζ) цепей и гетеродимерами CD3. Согласно одному варианту осуществления клеточный комплекс представляет собой клеточный комплекс in vivo. Согласно одному варианту осуществления клеточный комплекс представляет собой клеточный комплекс in vitro.

Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное может быть выбрано из группы, состоящей из мыши, крысы, кролика, свиньи, крупного рогатого скота (например, коровы, быка, буйвола), оленя, овцы, козы, курицы, кошки, собаки, хорька, примата (например, игрунки, макака-резуса). Для не относящихся к человеку животных, у которых подходящие генетически модифицируемые ES клетки не являются общедоступными, используются другие способы для получения не относящегося к человеку животного, содержащего генетическую модификацию. Такие способы включают в себя, например, модификацию генома не относящихся к ES клеток (например, фибробласта или индуцированной плюрипотентной клетки) и использование ядерного транспорта для переноса модифицированного генома в подходящую клетку, например, ооцит, и гестацию модифицированной клетки (например, модифицированного ооцита) в не относящемся к человеку животном при подходящих условиях для образования зародыша.

Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное представляет собой млекопитающее. Согласно одному аспекту не относящееся к человеку животное представляет собой небольшое млекопитающее, например, из надсемейства Dipodoidea или Muroidea. Согласно одному варианту осуществления генетически модифицированное животное представляет собой грызуна. Согласно одному варианту осуществления грызуна выбирают из мыши, крысы и хомяка. Согласно одному варианту осуществления грызуна выбирают из надсемейства Muroidea. Согласно одному варианту осуществления генетически модифицированное животное происходит из семейства, выбранного из Calomyscidae (например, мышевидные хомячки), Cricetidae (например, хомячок, крысы и мыши Нового Света, полевки), Muridae (настоящие мыши и крысы, песчанки, иглистые мыши, косматые хомяки), Nesomyidae (рипидомисы, скалистые хомячки, белохвостые крысы, магадаскарские крысы и мыши), Platacanthomyidae (например, колючие соневидные хомяки) и Spalacidae (например, слепыши, бамбуковые крысы и цокоры). Согласно конкретному варианту осуществления генетически модифицированного грызуна выбирают из настоящей мыши или крысы (семейство Muridae), карликовой песчанки, иглистой мыши и косматого хомяка. Согласно одному варианту осуществления генетически модифицированную мышь получают из представителя семейства Muridae. Согласно одному варианту осуществления животное представляет собой грызуна. Согласно конкретному варианту осуществления грызуна выбирают из мыши и крысы. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой мышь.

Согласно конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна, который представляет собой мышь линии C57BL, выбранной из C57BL/A, C57BL/An, C57BL/GrFa, C57BL/KaLwN, C57BL/6, C57BL/6J, C57BL/6ByJ, C57BL/6NJ, C57BL/10, C57BL/10ScSn, C57BL/10Cr и C57BL/Ola. Согласно другому варианту осуществления мышь представляет собой мышь линии 129, выбранной из группы, состоящей из линии 129P1, 129P2, 129P3, 129X1, 129S1 (например, 129S1/SV, 129S1/SvIm), 129S2, 129S4, 129S5, 129S9/SvEvH, 129S6 (129/SvEvTac), 129S7, 129S8, 129T1, 129T2 (смотрите, например, Festing et al. (1999) Revised nomenclature for strain 129 mice, Mammalian Genome 10:836, смотрите также, Auerbach et al (2000) Establishment and Chimera Analysis of 129/SvEv- and C57BL/6-Derived Mouse Embryonic Stem Cell Lines). Согласно конкретному варианту осуществления генетически модифицированная мышь представляет собой сочетание вышеупомянутой линии 129 и вышеупомянутой линии C57BL/6. Согласно другому конкретному варианту осуществления мышь представляет собой сочетание вышеупомянутых линий 129 или сочетание вышеупомянутых линий BL/6. Согласно конкретному варианту осуществления линия 129 сочетания представляет собой линию 129S6 (129/SvEvTac). Согласно другому варианту осуществления мышь представляет собой мышь линии BALB, например, линии BALB/c. Согласно другому варианту осуществления мышь представляет собой сочетание линии BALB и другой вышеупомянутой линии.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой крысу. Согласно одному варианту осуществления крысу выбирают из крысы линии Wistar, линии LEA, линии Sprague Dawley, линии Fischer, F344, F6 и Dark Agouti. Согласно одному варианту осуществления линия крысы представляет собой сочетание двух или больше линий, выбранных из группы, состоящей из Wistar, LEA, Sprague Dawley, Fischer, F344, F6 и Dark Agouti.

Таким образом, согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к генетически модифицированной мыши, содержащей в своем геноме нереаранжированный относящийся к человеку или гуманизированный вариабельный генный локус TCR, например, вариабельный генный локус TCRα, TCRβ, TCRδ и/или TCRγ. Согласно некоторым вариантам осуществления нереаранжированный относящийся к человеку или гуманизированный вариабельный генный локус TCR замещает эндогенный вариабельный генный локус TCR мыши. Согласно другим вариантам осуществления нереаранжированный относящийся к человеку или гуманизированный вариабельный генный локус TCR находится в положении в геноме, отличном от соответствующего эндогенного локуса TCR мыши. Согласно некоторым вариантам осуществления относящийся к человеку или гуманизированный нереаранжированный вариабельный генный локус TCR функционально связан с константной областью TCR мыши.

Согласно одному варианту осуществления предусмотрена генетически модифицированная мышь, причем мышь содержит в своем геноме нереаранжированный вариабельный генный локус T-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Jα человека и по меньшей мере один сегмент Vα человека, функционально связанные с константной генной последовательностью TCRα мыши, и нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Jβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Vβ человека, функционально связанные с константной генной последовательностью TCRβ мыши. Согласно одному конкретному варианту осуществления мышь содержит в своем геноме нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, функционально связанных с константной генной последовательностью TCRα мыши, и нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека, функционально связанных с константной генной последовательностью TCRβ мыши.

Согласно некоторым вариантам осуществления нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα, содержащий TCRα сегменты вариабельной области человека, замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRα мыши, и нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий сегменты вариабельной области TCRβ человека, замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRβ мыши. Согласно некоторым вариантам осуществления эндогенные сегменты Vα и Jα мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и эндогенный сегменты Vβ, Dβ и Jβ мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ. Согласно некоторым вариантам осуществления сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.

Согласно различным вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные (например, грызуны, например, мыши или крысы) производят T-клетки, которые способны проходить развитие в тимусе, развиваясь от DN1 до DN2 до DN3 до DN4 до DP и до CD4 или CD8 SP T-клеток. Такие T-клетки не относящегося к человеку животного по настоящему изобретению экспрессируют молекулы клеточной поверхности, как правило, производимые T-клеткой в течение конкретной стадии развития в тимусе (например, CD25, CD44, Kit, CD3, pTα и т.д.). Таким образом, описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные экспрессируют pTα в комплексе с TCRβ на стадии DN3 развития в тимусе. Описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные экспрессируют T-клетки, способные проходить развитие в тимусе для получения CD4+ и CD8+ T-клеток. В норме в тимусе физиологическое соотношение CD4+ к CD8+ T-клеткам составляет приблизительно 2:1 - 3:1. Смотрите, например, Ge and Stanley (2008) The O-fucose glycan in the ligand-binding domain of Notch 1 regulates embryogenesis and T cell development, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:1539-44. Таким образом, согласно одному варианту осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные производят CD4+ и CD8+ T-клетки в тимусе в соотношении от приблизительно 2:1 до 3:1 (CD4+:CD8+).

Согласно различным вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные производят T-клетки, которые способны проходить нормальную T-клеточную дифференциацию в периферических органах. Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные способны производить нормальный репертуар эффекторных T-клеток, например, CTL (цитотоксические T-лимфоциты), T_H1, T_H2, T_REG, T_H17 и т.д. Таким образом, согласно этим вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные производят эффекторные T-клетки, которые выполняют различные функции, типичные для конкретного типа T-клеток, например, распознают, связывают и отвечают на чужеродные антигены. Согласно различным вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные производят эффекторные T-клетки, которые лизируют клетки, проявляющие пептидные фрагменты цитозольных патогенов, экспрессированные в контексте молекул MHC I; распознают пептиды, происходящие из антигенов, разрушенных во внутриклеточных везикулах и презентированных молекулами MHC II на поверхности макрофагов и индуцируют макрофаги для лизиса микроорганизмов; производят цитокины, которые управляют B-клеточной дифференциацией; активируют B-клетки для получения опсонизирующих антител; индуцируют эпителиальные клетки для получения хемокинов, которые производят рекрутинг нейтрофилов в места инфекции; и т.д.

Согласно дополнительным вариантам осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные содержат нормальное количество CD3+ T-клеток в периферических органах, например, в селезенке. Согласно некоторым вариантам осуществления процентное отношение периферических CD3+ T-клеток у описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных сопоставим с их процентным отношением у животных дикого типа (т.е., животных, содержащих все эндогенные сегменты вариабельной области TCR). Согласно одному варианту осуществления описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные содержат нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Согласно другим аспектам описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные способны производить популяцию T-клеток памяти в ответ на представляющий интерес антиген. Например, не относящиеся к человеку животные производят как центральные T-клетки памяти (Tcm), так и эффекторные T-клетки памяти (Tem) на антиген, например, представляющий интерес антиген (например, антиген, исследуемый для разработки вакцины и т.д.).

Клетки DN1 и DN2, которые не получают достаточных сигналов (например, сигналов Notch), могут развиваться в B-клетки, миелоидные клетки (например, дендритные клетки), тучные клетки и NK-клетки. Смотрите, например, Yashiro-Ohtani et al. (2010) Notch regulation of early thymocyte development, Seminars in Immunology 22:261-69. Согласно некоторым вариантам осуществления у описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных развиваются нормальные количества B-клеток, миелоидных клеток (например, дендритных клеток), тучных клеток и NK-клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления у описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных в тимусе развивается популяция нормальных дендритных клеток.

Преобладающий тип T-клеточных рецепторов, экспрессируемых на поверхности T-клеток, представляет собой TCRα/β, при этом меньшая часть клеток экспрессирует TCRδ/γ. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения T-клетки не относящихся к человеку животных, содержащих гуманизированные локусы TCRα и/или β, проявляют нормальное использование локусов TCRα/β и TCRδ/γ, например, использование локусов TCRα/β и TCRδ/γ, которое аналогично использованию у животного дикого типа (например, T-клеткам описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных экспрессируют белки TCRα/β и TCRδ/γ в сопоставимом соотношении к белкам, экспрессированным животными дикого типа). Таким образом, согласно некоторым вариантам осуществления не относящиеся к человеку животные содержащее гуманизированные TCRα/β и эндогенные не относящиеся к человеку локусы TCRδ/γ, проявляют нормальное использование всех локусов.

В дополнение к генетически сконструированным описанным в настоящем документе не относящимся к человеку животным, также предусмотрен не относящийся к человеку зародыш (например, зародыш грызуна, например, зародыш мыши или крысы), причем зародыш содержит донорную ES клетку, которая получена от описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы). Согласно одному аспекту зародыш содержит ES донорную клетку, которая содержит нереаранжированный гуманизированный локус TCR, и клетки зародыша-хозяина.

Также предусмотрена ткань, причем ткань получена от описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного (например, мыши или крысы), и экспрессирует гуманизированный полипептид TCR (например, полипептид TCRα и/или TCRβ, или TCRδ, и/или TCRγ).

Кроме того, предусмотрена не относящаяся к человеку клетка, выделенная из описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного. Согласно одному варианту осуществления клетка представляет собой ES клетку. Согласно одному варианту осуществления клетка представляет собой T-клетку. Согласно одному варианту осуществления T-клетка представляет собой CD4+ T-клетку. Согласно другому варианту осуществления T-клетка представляет собой CD8+ T-клетку.

Также предусмотрена не относящаяся к человеку клетка, содержащая хромосому или ее фрагмент описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного. Согласно одному варианту осуществления не относящаяся к человеку клетка содержит ядро описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного. Согласно одному варианту осуществления не относящаяся к человеку клетка содержит хромосому или ее фрагмент как результат ядерного транспорта.

Также предусмотрена не относящаяся к человеку клетка, которая экспрессирует белок TCR, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область. Белок TCR может содержать TCRα, TCRβ или их комбинацию. Согласно одному варианту осуществления клетка представляет собой T-клетку, например, CD4+ или CD8+ T-клетку.

Согласно одному аспекту предусмотрена не относящаяся к человеку индуцированная плюрипотентная клетка, содержащая нереаранжированный гуманизированный локус TCR, кодирующий гуманизированный полипептид TCR, описанный в настоящем документе. Согласно одному варианту осуществления индуцированная плюрипотентная клетка получена от описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного.

Согласно одному аспекту предусмотрена гибридома или квадрома, происходящая из клетки описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного. Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна, например, мышь или крысу.

Также предусмотрен способ получения описанного в настоящем документе генетически модифицированного не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы). Способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного дает в результате животное, чей геном содержит гуманизированный нереаранжированный локус TCR (например, гуманизированный нереаранжированный локус TCRα, TCRβ, TCRδ и/или TCRγ). Согласно одному варианту осуществления предусмотрен способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы), которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку (например, относящуюся к грызуну, например, мыши или крысе) константную область на поверхности T-клетки, причем способ предусматривает замещение у первого не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRα нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRα, содержащим по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRα функционально связан с эндогенной константной областью TCRα; замещение у второго не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRβ нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRβ, содержащим по меньшей мере один сегмент Vβ человека, один сегмент Dβ человека и один сегмент Jβ человека, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ функционально связан с эндогенной константной областью TCRβ; и скрещивание первого и второго не относящегося к человеку животного для получения не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область. Согласно другим вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способам получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного, чей геном содержит гуманизированный нереаранжированный локус TCRα, или не относящегося к человеку животного, чей геном содержит гуманизированный нереаранжированный локус TCRβ, полученный согласно описанным в настоящем документе способам. Согласно различным вариантам осуществления замещения проводят на эндогенных локусах. Согласно некоторым вариантам осуществления в способе используют одну или несколько нацеливающих конструкций, полученных с использованием технологии VELOCIGENE®, введение конструкции(ий) в ES клетки и введение нацеленных ES клеточных клонов в зародыш мыши с использованием технология VELOCIMOUSE®, описанной в примерах. Согласно некоторым вариантам осуществления ES клетки получают от мыши, которая представляет собой сочетание линий 129 и C57BL/6. Согласно различным вариантам осуществления способ предусматривает поэтапную стратегию гуманизации, причем конструкцию, содержащую дополнительные сегменты вариабельной области, вводят в ES клетки на каждой последующей стадии гуманизации, в итоге получая мышь, содержащую полный репертуар сегментов вариабельной области человека (смотрите, например, фигуры 3 и 7).

Таким образом, также предусмотрены нуклеотидные конструкции, используемые для получения генетически сконструированных описанных в настоящем документе не относящихся к человеку животных. Согласно одному аспекту нуклеотидная конструкция содержит: 5’ и 3’ плечи гомологии, фрагмент ДНК человека, содержащий генный(е) сегмент(ы) вариабельной области TCR человека, и кассету селекции, фланкированную сайтами рекомбинации. Согласно одному варианту осуществления фрагмент ДНК человека представляет собой генный фрагмент TCRα и он содержит по меньшей мере один сегмент вариабельной области TCRα человека. Согласно другому варианту осуществления фрагмент ДНК человека представляет собой фрагмент TCRβ и он содержит по меньшей мере один генный сегмент вариабельной области TCRβ человека. Согласно одному аспекту по меньшей мере одно плечо гомологии представляет собой не относящееся к человеку плечо гомологии и оно гомологично не относящемуся к человеку локусу TCR (например, не относящемуся к человеку локусу TCRα или TCRβ).

Кассета селекции представляет собой нуклеотидную последовательность, вставленную в нацеливающую конструкцию для облегчения селекции клеток (например, ES клеток), которые интегрировали представляющую интерес конструкцию. В настоящей области техники известен ряд подходящих кассет селекции. Как правило, кассета селекции обеспечивает положительную селекцию в присутствии конкретного антибиотика (например, Neo, Hyg, Pur, CM, Spec и т.д.). Кроме того, кассета селекции может быть фланкирована сайтами рекомбинации, которые обеспечивают делецию кассеты селекции при обработке ферментами рекомбиназами. Широко используемые сайты рекомбинации представляют собой loxP и Frt, распознаваемые ферментами Cre и Flp, соответственно, но в настоящей области техники известны и другие.

Согласно одному варианту осуществления кассета селекции расположена на 5’-конце фрагмента ДНК человека. Согласно другому варианту осуществления кассета селекции расположена на 3’-конце фрагмента ДНК человека. Согласно другому варианту осуществления кассета селекции расположена в пределах фрагмента ДНК человека, например, в пределах интрона человека. Согласно другому варианту осуществления кассета селекции расположена на стыке фрагмента ДНК человека и мыши.

Различные иллюстративные варианты осуществления стратегии нацеливания для получения генетически сконструированных не относящихся к человеку животных, конструкций и нацеливающих векторов, используемых для нее, представлены на фигурах 3, 4, 5, 7 и 8.

После завершения нацеленного воздействия на ген ES клетки или генетически модифицированных не относящихся к человеку животных подвергают скринингу для подтверждения успешного встраивания представляющей интерес экзогенной нуклеотидной последовательности или экспрессии экзогенного полипептида (например, сегментов вариабельной области TCR человека). Специалистам в настоящей области техники известны различные техники, и они включают в себя (без ограничения) саузерн-блоттинг, ПЦР длинных фрагментов, количественную ПЦР (например, ПЦР в реальном времени с использованием TAQMAN®), флуоресцентную гибридизацию in situ, нозерн-блоттинг, проточную цитометрию, вестерн-блоттинг, иммуноцитохимию, иммуногистохимию и т.д. Согласно одному примеру не относящиеся к человеку животные (например, мыши), несущие представляющую интерес генетическую модификацию, могут быть идентифицированы путем скрининга в отношении потери аллеля мыши и/или приобретения аллеля человека с использованием модификации аллельного анализа, описанного в Valenzuela et al. (2003) High-throughput engineering of the mouse genome coupled with high-resolution expression analysis, Nature Biotech. 21(6):652-659. Специалистам в настоящей области техники известны другие анализы, которые идентифицируют конкретную нуклеотидную или аминокислотную последовательность у генетически модифицированных животных.

Настоящее раскрытие также относится к способу модификации вариабельного генного локуса TCR (например, генного локуса TCRα, TCRβ, TCRδ и/или TCRγ) не относящегося к человеку животного для экспрессии описанного в настоящем документе гуманизированного белка TCR. Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу модификации вариабельного генного локуса TCR для экспрессии гуманизированного белка TCR на поверхности T-клетки, причем способ предусматривает замещение у не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCR нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCR. Согласно одному варианту осуществления, в котором вариабельный генный локус TCR представляет собой вариабельный генный локус TCRα, нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCR содержит по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека. Согласно одному варианту осуществления, в котором вариабельный генный локус TCR представляет собой вариабельный генный локус TCRβ, нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCR содержит по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека. Согласно различным аспектам нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCR функционально связан с соответствующей эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCR.

Также предусмотрен гуманизированный белок TCR, производимый описанным в настоящем документе не относящимся к человеку животным (например, грызуном, например, мышью или крысой), причем гуманизированный белок TCR содержит вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область. Таким образом, гуманизированный белок TCR содержит определяющие комплементарность области человека (т.е., CDR1, 2 и 3 человека) в своем вариабельном домене и не относящуюся к человеку константную область.

Несмотря на то, что в представленных ниже примерах описано генетически сконструированное не относящееся к человеку животное, чей геном содержит гуманизированный вариабельный генный локус TCRα и/или гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ, специалисту в настоящей области техники будет понятно, что аналогичная стратегия может использоваться для получения генетически сконструированных животных, чей геном содержит гуманизированный вариабельный генный локус TCRδ и/или TCRγ. Также предусмотрено генетически сконструированное не относящееся к человеку животное, у которого все четыре вариабельных генных локуса TCR гуманизированы.

Применение генетически модифицированных в отношении TCR животных

Согласно различным вариантам осуществления генетически модифицированные не относящиеся к человеку животные по настоящему изобретению производят T-клетки с гуманизированными молекулами TCR на своей поверхности и в результате этого будут распознавать пептиды, презентированные им комплексами MHC, характерным для человека образом. Описанные в настоящем документе генетически модифицированные не относящиеся к человеку животные могут использоваться для исследования развития и функции T-клеток человека и процессов иммунологической толерантности; для испытания кандидатных вакцин для человека; для получения TCR с определенными специфичностями для генной терапии на основе TCR; для создания библиотек TCR для ассоциированных с заболеваниями антигенов (например, ассоциированных с опухолью антигенов (TAA); и т.д.

В настоящей области техники существует растущий интерес к T-клеточной терапии, поскольку T-клетки (например, цитотоксические T-клетки) могут быть направлены, чтобы атаковать и привести к разрушению представляющего интерес антигена, например, вирусного антигена, бактериального антигена, опухолевого антигена и т.д., или клеток, которые его презентируют. Первые исследования T-клеточной терапии злокачественных опухолей были направлены на выделение проникающих в опухолевые ткани лимфоцитов (TIL; популяций лимфоцитов в массе опухоли, которые предположительно содержат T-клетки, реактивные по отношению к опухолевым антигенам) из клеточной массы опухоли, их размножение in vitro с использованием факторов роста T-клеток и перенос их обратно пациенту в процессе, имеющем название адоптивный перенос Т-клеток. Смотрите, например, Restifo et al. (2012) Adoptive immunotherapy for cancer: harnessing the T cell response, Nature Reviews 12:269-81; Linnermann et al. (2011) T-Cell Receptor Gene Therapy: Critical Parameters for Clinical Success, J. Invest. Dermatol. 131:1806-16. Тем не менее, успех в этих способах терапии на сегодняшний день ограничен меланомой и почечно-клеточной карциномой; и адоптивный перенос TIL не направлен специфически на определенные ассоциированные с опухолью антигены (TAA). Linnermann et al., ранее.

Были предприняты попытки инициировать генную терапию на основе TCR, где T-клетки либо выбирали, либо программировали для нацеленного воздействия на представляющий интерес антиген, например, TAA. Современная генная терапия на основе TCR основана на идентификации последовательностей TCR, которые направлены на конкретные антигены, например, ассоциированные с опухолью антигены. Например, Rosenberg и коллеги опубликовали несколько исследований, в которых они трансдуцировали лимфоциты периферической крови, полученные от пациента с меланомой, с генами, кодирующими цепи TCRα и β, специфические для эпитопов ассоциированного с меланомой антигена MART-1, и использовали полученные размноженные лимфоциты для адоптивной T-клеточной терапии. Johnson et al. (2009) Gene therapy with human and mouse T-cell receptors mediates cancer regression and targets normal tissues expressing cognate antigen, Blood 114:535-46; Morgan et al. (2006) Cancer Regression in Patients After Transfer of Genetically Engineered Lymphocytes, Science 314:126-29. Специфические для MART-1 TCR выделяли из пациентов, у которых наблюдалось развитие опухоли после терапии на основе TIL. Тем не менее, идентификация таких TCR, в частности высокоавидных TCR (которые наиболее вероятно являются терапевтически применимыми), осложняется тем фактом, что большинство опухолевых антигенов представляют собой собственные антигены, и TCR, нацеленно воздействующие на эти антигены, часто либо подвергаются удалению, либо обладают субоптимальной аффинностью, главным образом, вследствие иммунологической толерантности.

Согласно различным вариантам осуществления настоящее изобретение решает эту проблему путем обеспечения генетически сконструированных не относящихся к человеку животных, содержащих в своем геноме нереаранжированный вариабельный генный локус TCR человека. Описанное в настоящем документе не относящееся к человеку животное способно производить T-клетки с разнообразным репертуаром гуманизированных T-клеточных рецепторов. Таким образом, описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные могут представлять собой источник разнообразного репертуара гуманизированных T-клеточных рецепторов, например, высокоавидных гуманизированных T-клеточных рецепторов для применения в адоптивном переносе T-клеток.

Таким образом, согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу создания T-клеточного рецептора в ответ на антиген человека, предусматривающему иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного (например, грызуна, например, мыши или крысы) представляющим интерес антигеном, предоставление животному возможности развивать иммунный ответ, выделение из животного активированной T-клетки со специфичностью к представляющему интерес антигену и определение последовательности нуклеиновой кислоты T-клеточного рецептора, экспрессированной антигенспецифической T-клеткой.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу получения T-клеточного рецептора человека, специфического к представляющему интерес антигену (например, ассоциированному с заболеванием антигену), предусматривающему иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном; предоставление животному возможности развивать иммунный ответ; выделение из животного T-клетки, реактивной по отношению к представляющему интерес антигену; определение последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области TCR человека, экспрессированной T-клеткой; клонирование вариабельной области TCR человека в нуклеотидную конструкцию, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты константной области TCR человека так, чтобы вариабельная область TCR человека была функционально связана с константной областью TCR человека; и экспрессию из конструкции T-клеточного рецептора человека, специфического по отношению к представляющему интерес антигену. Согласно одному варианту осуществления стадии выделения T-клетки, определения последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области TCR человека, экспрессированной T-клеткой, клонирования вариабельной области TCR человека в нуклеотидную конструкцию, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты константной области TCR человека, и экспрессии T-клеточного рецептора человека проводят с использованием стандартных методов, известных специалистам в настоящей области техники.

Согласно одному варианту осуществления в клетке экспрессируется нуклеотидная последовательность, кодирующая T-клеточный рецептор, специфический по отношению к представляющему интерес антигену. Согласно одному варианту осуществления клетка, экспрессирующая TCR, выбрана из клетки CHO, COS, 293, HeLa, PERC.6™ и т.д.

Представляющий интерес антиген может представлять собой любой антиген, который, как известно, вызывает заболевание или состояние или ассоциирован с заболеванием или состоянием, например, ассоциированный с опухолью антиген; антиген вирусного, бактериального или другого патогенного происхождения и т.д. В настоящей области техники известны многие ассоциированные с опухолью антигены. Отбор ассоциированных с опухолью антигенов представлена в Cancer Immunity (A Journal of the Cancer Research Institute) Peptide Database (archive.cancerimmunity.org/peptidedatabase/Tcellepitopes.htm). Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения представляющий интерес антиген представляет собой антиген человека, например, ассоциированный с опухолью антиген человека. Согласно некоторым вариантам осуществления антиген представляет собой специфический для клеточного типа внутриклеточный антиген, и T-клеточный рецептор используется для цитолиза клетки, экспрессирующей антиген.

Согласно одному варианту осуществления в настоящем документе предусмотрен способ идентификации T-клетки со специфичностью против представляющего интерес антигена, например, ассоциированного с опухолью антигена, предусматривающий иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном, предоставление животному возможности развивать иммунный ответ и выделение из не относящегося к человеку животного T-клетки со специфичностью к антигену.

Настоящее изобретение относится к новым способам адоптивной T-клеточной терапии. Таким образом, в настоящем документе предусмотрен способ лечения или улучшения заболевания или состояния (например, злокачественной опухоли) у субъекта (например, субъекта-млекопитающего, например, субъекта-человека), предусматривающим иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного антигеном, ассоциированным с заболеванием или состоянием, предоставление животному возможности развивать иммунный ответ, выделение из животного популяции антигенспецифических T-клеток и инфузию выделенных антигенспецифических T-клеток субъекту. Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или улучшения заболевания или состояния у субъекта-человека, предусматривающему иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном (например, ассоциированным с заболеванием или состоянием антигеном, например, ассоциированным с опухолью антигеном), предоставление животному возможности развивать иммунный ответ, выделение из животного популяции антигенспецифических T-клеток, определение последовательности нуклеиновой кислоты T-клеточного рецептора, экспрессированного антигенспецифическими T-клетками, клонирование последовательности нуклеиновой кислоты T-клеточного рецептора в вектор экспрессии (например, ретровирусный вектор), введение векторы в T-клетки, полученные от субъекта так, чтобы T-клетки экспрессировали антигенспецифический T-клеточный рецептор, и инфузию T-клеток субъекту. Согласно одному варианту осуществления последовательность нуклеиновой кислоты T-клеточного рецептора дополнительно гуманизируют перед введением в T-клетки, полученные от субъекта, например, последовательность, кодирующую не относящуюся к человеку константную область, модифицируют для дополнительного сходства с константной областью TCR человека (например, не относящуюся к человеку константную область замещают константной областью человека). Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание или состояние представляет собой злокачественную опухоль. Согласно некоторым вариантам осуществления популяцию антигенспецифических T-клеток увеличивают перед инфузией субъекту. Согласно некоторым вариантам осуществления проводят иммунное истощение популяции иммунных клеток субъекта перед инфузией антигенспецифических T-клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления антигенспецифический TCR представляет собой высокоавидный TCR, например, высокоавидный TCR по отношению к ассоциированному с опухолью антигену. Согласно некоторым вариантам осуществления T-клетка представляет собой цитотоксическую T-клетку. Согласно другим вариантам осуществления заболевание или состояние вызвано вирусом или бактерией.

Согласно другому варианту осуществления заболевание или состояние представляет собой аутоиммунное заболевание. T_REG клетки представляют собой субпопуляцию T-клеток, которые поддерживают толерантность к собственным антигенам и предотвращают патологическую аутореактивность. Таким образом, в настоящем документе также предусмотрены способы лечения аутоиммунного заболевания, которые основаны на создании антигенспецифических T_REG клеток у описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного по настоящему изобретению.

Также в настоящем документе предусмотрен способ лечения или улучшения заболевания или состояния (например, злокачественной опухоли) у субъекта, предусматривающий введение клеток, пораженных заболеванием или состоянием (например, злокачественных клеток) от субъекта, не относящемуся к человеку животному, предоставление животному возможности развивать иммунный ответ на клетки, выделение из животного популяции T-клеток, реактивных по отношению к клеткам, определение последовательности нуклеиновой кислоты T-клеточного рецептора, экспрессированного Т-клеткам, клонирование последовательности T-клеточного рецептора в вектор, введение вектора в T-клетки, полученные от субъекта, и инфузию субъекту T-клеток субъекта, несущих T-клеточный рецептор.

Также в настоящем документе предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих вариабельные домены TCR человека (например, вариабельные домены TCR α и/или β). Согласно одному варианту осуществления предусмотрен способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека, предусматривающий иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном, предоставление не относящемуся к человеку животному возможности развивать иммунный ответ на представляющий интерес антиген и получение от него последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека, который связывает представляющий интерес антиген. Согласно одному варианту осуществления способ дополнительно предусматривает получение последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR человека, который функционально связан с не относящейся к человеку константной областью TCR, предусматривая выделение T-клетки из описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного и получение из него последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен TCR, связанный с константной областью TCR.

Также в настоящем документе предусмотрено применение описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного для получения терапевтического средства для человека, предусматривающее иммунизацию не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном (например, ассоциированным с опухолью антигеном), предоставление не относящемуся к человеку животному возможности развивать иммунный ответ, получение от животного T-клеток, реактивных по отношению к представляющему интерес антигену, получение из T-клеток последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей(их) гуманизированный белок TCR, которые связывает представляющий интерес антиген, и использование последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей(их) гуманизированный белок TCR в терапевтическом средстве для человека.

Таким образом, также предусмотрен способ получения терапевтического средства для человека, предусматривающий иммунизацию описанного в настоящем документе не относящегося к человеку животного представляющим интерес антигеном, предоставление не относящемуся к человеку животному возможности развивать иммунный ответ, получение от животного T-клеток, реактивных по отношению к представляющему интерес антигену, получение из T-клеток последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей(их) гуманизированный T-клеточный рецептор, которые связывает представляющий интерес антиген, и использование гуманизированного T-клеточного рецептора в терапевтическом средстве для человека.

Согласно одному варианту осуществления терапевтическое средство для человека представляет собой T-клетку (например, T-клетку человека, например, T-клетку, полученную от субъекта-человека), содержащую представляющую интерес последовательность нуклеиновой кислоты (например, трансфектированную или трансдуцированную с представляющей интерес нуклеиновой кислотой или содержащую иным образом введенную представляющую интерес нуклеиновую кислоту) так, чтобы T-клетка экспрессировала гуманизированный белок TCR с аффинностью к представляющему интерес антигену. Согласно одному аспекту субъект, по отношению к которому используют терапевтическое средство, нуждается в терапии конкретного заболевания или состояния, и антиген ассоциирован с заболеванием или состоянием. Согласно одному аспекту T-клетка представляет собой цитотоксическую T-клетку, антиген представляет собой ассоциированный с опухолью антиген, и заболевание или состояние представляет собой злокачественную опухоль. Согласно одному аспекту T-клетка получена от субъекта.

Согласно другому варианту осуществления терапевтическое средство для человека представляет собой T-клеточный рецептор. Согласно одному варианту осуществления терапевтический рецептор представляет собой растворимый T-клеточный рецептор. Много усилий было направлено на создание растворимых T-клеточных рецепторов или вариабельных областей TCR для применения в качестве терапевтических средств. Создание растворимых T-клеточных рецепторов зависит от получения реаранжированных вариабельных областей TCR. Один подход заключается в разработке одноцепочечных TCR, содержащих TCRα и TCRβ, и, аналогично формату scFv иммуноглобулина, слиянии их вместе посредством линкера (смотрите, например, международную патентную заявку № WO 2011/044186). Полученный scTv, если он аналогичен scFv, будет обеспечивать термически стабильную и растворимую форму TCRα/β связывающего белка. Альтернативные подходы включали в себя разработку растворимого TCR с константными доменами TCRβ (смотрите, например, Chung et al., (1994) Functional three-domain single-chain T-cell receptors, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91:12654-58); а также конструирование ненативной дисульфидной связи на границе между константными доменами TCR (смотрите обзор в Boulter and Jakobsen (2005) Stable, soluble, high-affinity, engineered T cell receptors: novel antibody-like proteins for specific targeting of peptide antigens, Clinical and Experimental Immunology 142:454-60; смотрите также, патент США № 7569664). Были описаны другие форматы растворимых T-клеточных рецепторов. Описанные в настоящем документе не относящиеся к человеку животные могут использоваться для определения последовательности T-клеточного рецептора, который с высокой аффинностью связывается с представляющим интерес антигеном, и последующей разработки растворимого T-клеточного рецептора на основе последовательности.

Растворимый T-клеточный рецептор, полученный из последовательности TCR рецептора, экспрессированной не относящимся к человеку животным, может использоваться для блокирования функции представляющего интерес белка, например, вирусного, бактериального или ассоциированного с опухолью белка. Альтернативно, растворимый T-клеточный рецептор может быть слит с фрагментом, который может лизировать инфицированную или злокачественную клетку, например, цитотоксическими молекулами (например, химиотерапевтическим средством), токсином, радионуклидом, пролекарственным средством, антителом и т.д. Растворимый T-клеточный рецептор также может быть слит с иммуномодулирующей молекулой, например, цитокином, хемокином и т.д. Растворимый T-клеточный рецептор также может быть слит с иммунной ингибирующей молекулой, например, молекулой, которая ингибирует цитолиз Т-клеткой других клеток, содержащих антиген, распознанный T-клеткой. Такие растворимые T-клеточные рецепторы, слитые с иммунными ингибирующими молекулами, могут использоваться, например, в блокировании аутоиммунитета. Обзор различных иллюстративных иммунных ингибирующих молекул, которые могут быть слиты с растворимым T-клеточным рецептором, представлен в Ravetch and Lanier (2000) Immune Inhibitory Receptors, Science 290:84-8, включенной в настоящий документ посредством ссылки.

Настоящее изобретение также относится к способам исследования иммунологического ответа у контексте TCR человека, включая в себя реаранжировку TCR человека, развитие Т-клеток, активацию T-клеток, иммунологическую толерантность и т.д.

Также предусмотрены способы испытания кандидатных вакцин. Согласно одному варианту осуществления в настоящем документе предусмотрен способ определения того, будет ли вакцина активировать иммунологический ответ (например, T-клеточную пролиферацию, высвобождение цитокинов и т.д.) и приводить к созданию эффекторных T-клеток, а также T-клеток памяти (например, центральных и эффекторных T-клеток памяти).

Примеры

Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано представленными ниже не ограничивающими примерами. Эти примеры представлены для содействия в понимании настоящего изобретения, но не предусмотрены для ограничения и не должны рассматриваться как ограничивающие его объем каким-либо образом. Примеры не включают в себя подробные описания общепринятых способов, которые будут хорошо известны специалистам в настоящей области техники (техники молекулярного клонирования и т.д.). Если не указано иное, части представляют собой части по весу, молекулярный вес представляет собой средний молекулярный вес, температура указана в градусах Цельсия и давление равно или близко атмосферному.

Пример 1. Получение мышей с гуманизированными вариабельными генными локусами TCR

Мышей, содержащих делецию эндогенных вариабельных локусов TCR (α или β) и замещение эндогенных сегментов V и J или V, D и J получали с использованием технологии генной инженерии VELOCIGENE® (смотрите, например, патент США № 6586251 и Valenzuela, D.M., et al. (2003) High-throughput engineering of the mouse genome coupled with high-resolution expression analysis. Nat. Biotech. 21(6): 652-659), причем последовательности человека, полученные из библиотек BAC с использованием бактериальной гомологичной рекомбинации, используются для получения больших нацеливающих векторов (LTVEC), содержащих геномные фрагменты вариабельных локусов TCR человека, фланкированные нацеливающими плечами для нацеливания LTVEC на эндогенные вариабельные локусы TCR мыши в ES клетках мыши. LTVEC релианизировали и подвергали электропорации в ES клеточную линию мыши согласно Valenzuela с соавт. ES клетки выбирали по устойчивости к гигромицину или неомицину и подвергали скринингу в отношении потери аллеля мыши или приобретения аллеля человека.

Нацеленные ES клеточные клоны вводили зародышам мыши на стадии 8 клеток (или на более ранней стадии) способом VELOCIMOUSE® (Poueymirou, W.T. et al. (2007). F0 generation mice fully derived from gene-targeted embryonic stem cells allowing immediate phenotypic analyses. Nat. Biotech. 25: 91-99.). VELOCIMICE® (F0 мышей, полностью полученных из донорной ES клетки), несущих гуманизированные локусы TCR идентифицируют с помощью скрининга в отношении потери эндогенного вариабельного аллеля TCR и приобретения аллеля человека с использованием модификации аллельного анализа (Valenzuela et al.). F0 детенышей генотипируют и скрещивают до гомозиготности. Мышей, гомозиготных в отношении гуманизированных вариабельных локусов TCRα и/или TCRβ (например, содержащих подгруппу вариабельных сегментов TCRα и/или TCRβ человек), получали и фенотипировали, как описано в настоящем документе.

Всех мышей содержали и скрещивали в специальном свободном от патогенов виварии в Regeneron Pharmaceuticals. Все эксперименты с использованием животных были одобрены IACUC и Regeneron Pharmaceuticals.

Пример 2: Поэтапная гуманизация вариабельного локуса TCRα

1,5 м.п.н. ДНК на локусе TCRα мыши, соответствующей 110 V и 60 J сегментам мыши, замещали 1 м.п.н. ДНК, соответствующей 54 сегментам V и 61 сегменту J TCRα человека с использованием поэтапной стратегии гуманизации, обобщенно представленной на фигурах 2 и 3. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты различных нацеливающих векторов, используемых для поэтапной стратегии гуманизации локуса TCRα, обобщенно представлены в таблице 2, и включены в список последовательностей.

Таблица 2: Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты для различных нацеливающих векторов для локуса TCRα

№ MAID SEQ ID NO Описание 1626 1 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP. 2 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP и 5’-концом вставки TCRVα40-TCRVα41-TCRJα1 человека, включающей в себя сайт AsiSI. 3 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом вставки TCRVα40-TCRVα41-TCRJα1 человека и 5’-концом последовательности мыши ниже по ходу транскрипции от вариабельного локуса TCRα человека, включающей в себя сайт NotI. 1767 4 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP. 5 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP и 5’-концом вставки TCRVα35-TCRVα39 человека, включающей в себя сайт AsiSI. 1979 6 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты frt-Pgk-Hyg-frt. 7 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты frt-Pgk-Hyg-frt и 5’-концом вставки TCRVα22-TCRVα34 человека, включающей в себя сайт AsiSI. 1769 8 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP. 9 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP и 5’-концом вставки TCRVα13-2-TCRVα21 человека, включающей в себя сайт AsiSI. 1770 10 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP. 11 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP и 5’-концом вставки TCRVα6-TCRVα8-5 человека, включающей в себя сайт AsiSI. 1771 12 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRα и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP. 13 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Neo-loxP и 5’-концом вставки TCRVα1-1-TCRVα5 человека, включающей в себя сайт AsiSI.

Сегменты вариабельной области человека TCRα нумеруют согласно базе данных IMGT. По меньшей мере 100 п.н. на каждом стыке (приблизительно 50 п.н. с каждого конца) включены в список последовательностей.

Конкретно, как показано на фиг. 4A, ДНК от BAC клона RP23-6A14 мыши (Invitrogen) модифицировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1539) для замещения области TCRAJ1-TCRAJ28 эндогенного локуса TCRα мыши кассетой Ub-гигромицина, за которой следует сайт loxP. ДНК от BAC клона RP23-117i19 мыши (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1535) для замещения ~15 т.п.н. области, окружающей (и включающей в себя) TCRAV1 эндогенного локуса TCRα и δ мыши, кассетой PGK- неомицина, за которой следует сайт loxP. ES клетки, несущие дважды нацеленную хромосому (т.е. один эндогенный локус TCRα мыши, нацеленный с помощью обоих нацеливающих векторов) подтверждали с помощью известные в настоящей области техники способов кариотипирования и скрининга (например, TAQMAN™). Модифицированные ES клетки обрабатывали с помощью рекомбиназы CRE, тем самым опосредуя делецию области между двумя сайтами loxP (т.е., области, состоящей из эндогенного локуса TCRα мыши от TCRAV1 до TCRAJ1) и оставляя только один сайт loxP, кассету неомицина и константную и энхансерную области мыши. Эта стратегия приводила к созданию подвергнутого делеции локуса TCR α/ δ мыши (MAID 1540).

Первый нацеливающий вектор человека для TCRα содержал 191660 п.н. ДНК человека из клонов CTD2216p1 и CTD2285m07 BAC (Invitrogen), которые содержали первых два следующие друг за другом генных сегмента TCRαV человека (TRAV40 и 41) и 61 TCRαJ (50 функциональных) генный сегмент. Эту BAC модифировали с помощью гомологичной рекомбинации, чтобы она содержала сайт Not1 403 п.н. ниже (3’) от генного сегмента TCRαJ1 для лигирования 3’ плеча гомологии мыши и 5’ сайт AsiSI для лигирования 5’ плеча гомологии мыши. Два различных плеча гомологии использовали для лигирования с этим фрагментом человека: 3’ плечо гомологии содержало эндогенные последовательности TCRα мыши из клона RP23-6A14 BAC, и 5’ плечо гомологии содержало эндогенную последовательность TCRα 5’ от TCRαV мыши из BAC клона RP23-117i19 мыши. Эту относящуюся к мыши-человеку химерную BAC использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1626) для получения начальной вставки генных сегментов TCRα человека вместе с вышележащей кассетой loxp-ub-гигромицин-loxp на локусах TCRα мыши (фиг. 4B). Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 1-3) для нацеливающего вектора MAID 1626 описаны в таблице 2.

Впоследствии, получали серию нацеливающих векторов человека, в которых использовались такое же 5’ плечо мыши, которое содержало эндогенную последовательность TCRα 5’ от TCRαV мыши из BAC клона RP23-117i19 мыши с чередующимися кассетами селекции loxP-неомицин-loxP и loxP-гигромицин-loxP (или frt-гигромицин-frt для MAID 1979).

Для создания минилокуса TCRα человека, содержащего в общем 8 генных сегментов TCRαV (7 функциональных) человека и 61 генный сегмент TCRαJ (50 функциональных) человека, ДНК из BAC клона RP11-349p11 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1767) (фиг. 4C). Он добавлял 104846 п.н. ДНК человека, содержащую следующие 6 (5 функциональных) последовательных генных сегментов TCRαV человека (TRAV35 - TRAV39) и 5’ кассету loxP-ub-неомицин-loxP. Полученный локус TCRα содержал 5’ кассету loxp-ub-неомицин-loxP вместе с 8 генными сегментами TCRαV (7 функциональных) человека и 61 генным сегментом TCRαJ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRα мыши. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 4 и 5) для нацеливающего вектора MAID 1767 описаны в таблице 2.

Для создания минилокуса TCRα человека, содержащего в общем 23 генных сегмента TCRαV (17 функциональных) человека и 61 генный сегмент TCRαJ человека, ДНК из BAC клона мыши, содержащую в направлении 5’ - 3’: уникальный сайт I-CeuI, 20 т.п.н. плечо TCRA мыши 5’ от локуса TCRA мыши для использования в гомологичной рекомбинации в ES клетки, и кассету loxP-Ub-Hyg-loxP в обратной ориентации, модифировали с помощью бактериальной гомологичной рекомбинации, чтобы она содержала в направлении 5’ - 3’: уникальный сайт I-CeuI, 20 т.п.н. плечо TCRA мыши 5’ от локуса TCRA мыши, кассету frt-pgk-Hyg-frt и уникальный сайт AsiSI. ДНК из BAC клона RP11-622o20 человека (Invitrogen), содержащую TCRαV22-V34 человека, модифировали с помощью гомологичной рекомбинации, чтобы она содержала кассету Spec, фланкированную уникальными сайтами I-CeuI и AsiSI. Впоследствии, кассету Spec в модифицированном BAC клоне человека замещали последовательностью, содержащейся между сайтами I-CeuI и AsiSI в модифицированном BAC клоне мыши с помощью стандартных техник обработки рестриктазами/лигирования. Полученный нацеливающий вектор (MAID 1979; фиг. 4D) добавлял136557 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 15 (10 функциональных) последовательных генных сегментов TCRαJ человека (TRAV22 - TRAV34) и 5’ кассету frt-pgk-Hyg-frt. Полученный локус TCRα содержал 5’ кассету frt-pgk-Hyg-frt вместе с 23 генными сегментами TCRαV человека (17 функциональными) и 61 генным сегментом TCRαJ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRα мыши. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 6 и 7) для нацеливающего вектора MAID 1979 описаны в таблице 2.

Для создания минилокуса TCRα человека, содержащего в общем 35 генных сегментов TCRαV человека (28 функциональных) и 61 генный сегмент TCRαJ человека, ДНК из BAC клона CTD2501-k5 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1769) (фиг. 4E). Он добавлял 124118 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 12 (11 функциональных) следующих друг за другом генных сегментов TCRαV человека (TRAV13-2 - TRAV21) и 5’ кассету loxp-ub-неомицин-loxP. Полученный локус TCRα содержал 5’ кассету loxp-ub-неомицин-loxP вместе с 35 генными сегментами TCRαV (28 функциональными) человека и 61 генным сегментом TCRαJ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRα мыши. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 8 и 9) для нацеливающего вектора MAID 1769 описаны в таблице 2.

Для создания минилокуса TCRα человека, содержащего в общем 48 генных сегментов TCRαV (39 функциональных) человека и 61 генный сегмент TCRαJ человека, ДНК из BAC клона RP11-92F11 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1770) (фиг. 4F). Он добавлял 145505 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 13 (11 функциональных) следующих друг за другом генных сегментов TCRαV человека (TRAV6 - TRAV8.5) и 5’ кассету loxp-ub-гигромицин-loxP. Полученный локус TCRα содержит 5’ кассету loxp-ub-гигромицин-loxP вместе с 48 генными сегментами TCRαV (39 функциональными) человека и 61 генным сегментом TCRαJ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRα мыши. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 10 и 11) для нацеливающего вектора MAID 1770 описаны в таблице 2.

Для создания минилокуса TCRα человека, содержащего в общем 54 генных сегмента TCRαV (45 функциональных) человека и 61 генный сегмент TCRαJ человека, ДНК из BAC клона RP11-780M2 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1771) (ФИГ. 4G). Он добавлял 148496 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 6 (6 функциональных) следующих друг за другом генных сегментов TCRαV человека (TRAV1-1 - TRAV5) и 5’ кассету loxp-ub-неомицин-loxP. Полученный локус TCRα содержит 5’ кассету loxp-ub-неомицин-loxP вместе с 54 генными сегментами TCRαV (45 функциональными) человека и 61 генным сегментом TCRαJ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRα мыши. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 12 и 13) для нацеливающего вектора MAID 1771 описаны в таблице 2.

В любой из описанных выше стадий кассеты селекции удаляют путем делеции с помощью рекомбиназы Cre или Flp. Кроме того, могут вводить локус TCRδ человека, как показано на фиг. 5.

Пример 3: Поэтапная гуманизация вариабельного локуса TCRβ

0,6 м.п.н. ДНК на локусе TCRβ мыши, соответствующей 33 V, 2 D и 14 J сегментам мыши, замещали 0,6 м.п.н. ДНК, соответствующей 67 V, 2D и 14 J сегментам TCRβ человека с использованием поэтапной стратегии гуманизации, обобщенно представленной на фигурах 6 и 7. Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты различных нацеливающих векторов, используемых для поэтапной стратегии гуманизации локуса TCRβ, обобщенно представлены в таблице 3 и включены в список последовательностей.

Таблица 3: Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты для различных нацеливающих векторов для локуса TCRβ

№ MAID SEQ ID NO Описание 1625 14 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRβ (вблизи вышележащих генов трипсиногена мыши) и 5’-концом кассеты frt-Ub-Neo-frt. 15 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты frt-Ub-Neo-frt и 5’-концом вставки TCRVβ18-TCRVβ29-1 человека. 16 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом вставки TCRVβ18-TCRVβ29-1 человека и 5’-концом последовательности мыши ниже по ходу транскрипции от сегментов TCRVβ мыши (вблизи нижележащих генов трипсиногена мыши). 1715 17 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом нижележащих генов трипсиногена мыши и 5’-концом вставки TCRDβ1-TCRJβ1-1-TCRJβ1-6 человека, включающей в себя сайт IceuI. 18 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом вставки TCRDβ1-TCRJβ1-1-TCRJβ1-6 человека и 5’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP. 19 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты loxP-Ub-Hyg-loxP и 5’-концом последовательности мыши вблизи гена Cβ1 мыши. 20 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши вблизи гена Cβ1 мыши и 5’-концом вставки TCRDβ2-TCRJβ2-1-TCRJβ2-7 человека, включающей в себя сайт NotI. 21 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом вставки TCRDβ2-TCRJβ2-1-TCRJβ2-7 человека и 5’-концом последовательности мыши ниже по ходу транскрипции от вариабельного локуса TCRβ (вблизи последовательности Cβ2мыши). 1791 22 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRβ (вблизи вышележащих генов трипсиногена мыши) и 5’-концом кассеты frt-Ub-Hyg-frt. 23 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты frt-Ub-Hyg-frt и 5’-концом вставки TCRVβ6-5-TCRVβ17 человека. 1792 24 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши выше против хода транскрипции от вариабельного локуса TCRβ (вблизи вышележащих генов трипсиногена мыши) и 5’-концом кассеты frt-Ub-Neo-frt. 25 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом кассеты frt-Ub-Hyg-frt и 5’-концом вставки TCRVβ1-TCRVβ12-2 человека. 6192 26 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности мыши вблизи гена Cβ2 мыши и 5’-концом последовательности TCRBV30 экзона 2 человека. 27 Пограничная последовательность нуклеиновой кислоты между 3’-концом последовательности TCRBV30 экзона 1 человека и 5’-концом последовательности мыши ниже по ходу транскрипции от локуса TCRβ.

Сегменты вариабельной области TCRβ человека нумеруют, как в базе данных IMGT. По меньшей мере 100 п.н. на каждом стыке (приблизительно 50 п.н. с каждого конца) включены в список последовательностей.

Конкретно, ДНК из BAC клона RP23-153p19 мыши (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1544) для замещения 17 т.п.н. области (включающей в себя TCRBV30) сразу выше против хода транскрипции от 3’ генного кластера трипсиногена в эндогенном локусе TCRβ мыши кассетой PGK-neo, за которой следует сайт loxP (фиг. 8A). ДНК из BAC клона RP23-461h15 мыши (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1542) для замещения 8355 п.н. области (включающей в себя TCRBV2 и TCRBV3) ниже по ходу транскрипции от 5’ генного кластера трипсиноген в эндогенном локусе TCRβ мыши кассетой Ub-гигромицин, за которой следует сайт loxP. ES клетки, несущие дважды нацеленную хромосому (т.е., один эндогенный локус TCRβ мыши, нацеленный обоими нацеливающими векторами), подтверждали с помощью известных в настоящей области техники способами кариотипирования и скрининга (например, TAQMAN™). Модифицированные ES клетки обрабатывали с помощью рекомбиназы CRE, опосредуя делецию области между сайтами 5’ и 3’ loxP (состоящую из эндогенного локуса TCRβ мыши от TCRBV2 до TCRBV30) и оставляя только один сайт loxP, гигромициновую кассету и TCRBD, TCRBJ, константную и энхансерную последовательности мыши. Один TCRβVβ мыши оставляли выше против хода транскрипции от 5’ кластера генов трипсиногена, и один TCRBβ мыши оставляли ниже по ходу транскрипции от Eβ мыши, как показано на фиг. 8A.

Первый нацеливающий вектор человека для TCRβ содержал 125781 п.н. ДНК человека из BAC клона CTD2559j2 (Invitrogen), которая содержала первые 14 следующих друг за другом генных сегментов TCRβV человека (TRBV18-TRBV29-1). Эту BAC модифировали с помощью гомологичной рекомбинации, чтобы она содержала 5’ сайт AsiSI и 3’ сайт AscI для лигирования 5’ и 3’ плечей гомологии мыши. Два различных плеча гомологии использовали для лигирования с фрагментом человека: один набор плечей гомологии содержал эндогенную последовательность TCRβ, окружающую нижележащие гены трипсиногена мыши из BAC клона RP23-153p19, и другой набор содержал эндогенную последовательность TCRβ, окружающую вышележащие гены трипсиногена мыши из BAC клона RP23-461h15 мыши. Эту относящуюся к мыши-человеку химерную BAC использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1625) для получения начальной вставки генных сегментов TCRβ человека вместе с вышележащей кассетой frt-ub-неомицин-frt на локусе TCRβ мыши, и это давало в результате минилокус TCRβ человека, содержащий 14 TCRβV (8 функциональных) человека (фиг. 8B). Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 14-16) для нацеливающего вектора MAID 1625 описаны в таблице 3.

Для замещения D и J сегментов TCRβ мыши D и J сегментами TCRβ человека, ДНК из BAC клона RP23-302p18 мыши (Invitrogen) и из BAC клона RP11-701D14 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1715) в ES клетках, которые содержали описанный выше минилокус TCRβV (т.е., MAID 1625). Эта модификация замещала ~18540 п.н. область (от 100 п.н. ниже по ходу транскрипции от polyA 3’ генов трипсиногена до 100 п.н. ниже против хода транскрипции от J сегментов в D2 кластере, который включал в себя TCRBD1-J1 мыши, константную область 1 мыши и TCRBD2-J2 мыши) в эндогенном локусе TCRβ мыши на ~25425 п.н. последовательности, содержащей TCRBD1-J1 человека, кассету loxP Ub-гигромицин-loxP, константную область 1 мыши, TCRBD2-J2 человека (фиг. 8C(i)). ES клетки, несущие дважды нацеленную хромосому (т.е., один эндогенный локус TCRβ мыши, нацеленный обоими нацеливающими векторами), подтверждали известными в настоящей области техники способами кариотипирования и скрининга (например, TAQMAN™). Модифицированные ES клетки обрабатывали с помощью рекомбиназы CRE, тем самым опосредуя делецию гигромициновой кассеты, оставляя только один сайт loxP, ниже по ходу транскрипции от J сегментов человека в кластере D1J (фиг. 8C(ii)). Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 17-21) для нацеливающего вектора MAID 1715 описаны в таблице 3.

Впоследствии, получали серию нацеливающих векторов человека, в которых использовались такое же 5’ плечо мыши, которое содержало эндогенную последовательность TCRβ, окружающую вышележащие гены трипсиногена мыши из BAC клона RP23-461h15 мыши с чередующейся кассетой селекции.

Для создания минилокуса TCRβ человека, содержащего в общем 40 сегментов TCRβV (30 функциональных) человека и D и J сегменты TCRβ человека, ДНК из BAC клонов RP11-134h14 и RP11-785k24 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и комбинировали в нацеливающий вектор (MAID 1791) с использованием стандартных техник бактериальной гомологичной рекомбинации, обработки рестриктазой/лигирования и других техник клонирования. Введение нацеливающего вектора MAID 1791 приводило к добавлению 198172 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 26 (22 функциональных) следующих друг за другом генных сегментов TCRβV человека (TRBV6-5 - TRBV17) и 5’ кассету frt-ub-гигромицин-frt. Полученный локус TCRβ содержал 5’ кассету frt-ub-гигромицин-frt вместе с 40 генными сегментами TCRβV (30 функциональными) человека и D и J генными сегментами TCRβ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRβ мыши (фиг. 8D). Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 22 и 23) для нацеливающего вектора MAID 1791 описаны в таблице 3.

Для создания минилокуса TCRβ человека, содержащего в общем 66 сегментов TCRβV (47 функциональных) человека и D и J сегменты TCRβ человека, ДНК из BAC клона RP11-902B7 человека (Invitrogen) модифировали с помощью гомологичной рекомбинации и использовали в качестве нацеливающего вектора (MAID 1792). Это приводило к добавлению 159742 п.н. ДНК человека, которая содержала следующие 26 (17 функциональных) следующих друг за другом генных сегментов TCRβV человека (TRBV1 - TRBV12-2) и кассету 5’ frt-ub-неомицин-frt. Полученный локус TCRβ содержал 5’ кассету frt-ub-неомицин-frt вместе с 66 генными сегментами TCRβV (47 функциональными) человека и D и J генными сегментами TCRβ человека, функционально связанными с константными генами и энхансерами TCRβ мыши. (фиг. 8E). Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 24 и 25) для нацеливающего вектора MAID 1792 описаны в таблице 3.

На любой из описанной выше стадий кассеты селекции удаляют путем делеции с помощью рекомбиназы Cre или Flp. Например, как показано на фиг. 7, MAID 1716 соответствует MAID 1715 с делецией гигромициновой кассеты.

В итоге, создавали минилокус TCRβ человека, содержащий в общем 67 TCRβV (48 функциональных) человека и D и J сегменты TCRβ человека. TCRBV31 мыши расположен ~9.4 т.п.н. 3’ от TCRBC2 (вторая последовательность константной области TCRB) и находится к противоположной ориентации по отношению к другим сегментам TCRBV. Эквивалентный V сегмент человека представляет собой TCRBV30, который расположен в аналогичном положении в локусе TCRB человека.

Для гуманизации TCRBV31 BAC клон мыши, содержащий TCRBV31 мыши, модифировали путем бактериальной гомологичной рекомбинации для получения LTVEC MAID 6192 (фиг. 8F). Полную кодирующую область, начинающуюся на старт-кодоне в экзоне 1, интрон, 3’ UTR и сигнальные последовательности рекомбинации (RSS) TCRBV31 замещали гомологичными последовательностями TCRBV30 человека. 5’ UTR сохраняли в качестве последовательности мыши. Для селекции самоудаляющуюся кассету (lox2372-убиквитиновый промотор-Hyg-PGKpolyA-протаминовый промотор-Cre-SV40polyA-lox2372) вводили в интрон (72 п.н. 3’ от экзона 1289 п.н. 5’ от экзона 2). Для простоты на фигурах 7 и 8 показана кассета селекции 3’ от hTCRBV30, тогда как ее сконструировали, чтобы она располагалась в интроне между экзоном 1 и экзоном 2 гена hTCRBV30. Управляемая промотором протамина экспрессия Cre транскрибируется исключительно в постмейотических сперматидах, поэтому кассета “самостоятельно удаляется” в F1 поколении мышей.

Пограничные последовательности нуклеиновой кислоты (SEQ ID NO: 26 и 27) для нацеливающего вектора MAID 6192 описаны в таблице 3. ДНК MAID 6192 подвергают электропорации в ES клетки MAID1792. ES клеточные клоны подвергают селекции в отношении устойчивости к гигромицину и скринингу в отношении потери аллеля TCRB31 мыши и приобретения аллеля TCRB30 человека.

Аналогичную стратегию конструирования используют для необязательной делеции оставшегося 5’ V сегмента TCRβ мышь.

Пример 4: Создание мышей с TCRα/TCRβ

На каждой стадии поэтапной гуманизации локусов TCRα и TCRβ мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного вариабельного локуса TCRα, могут скрещивать с мышами, гомозиготными в отношении гуманизированного вариабельного локуса TCRβ, для получения потомства, содержащего гуманизированные вариабельный локусы TCRα и TCRβ. Потомство скрещивают до гомозиготности по отношению к гуманизированным локусам TCRα и TCRβ.

Согласно одному варианту осуществления мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного вариабельного локуса TCRα, содержащего 8 Vα человека и 61 Jα человека (MAID 1767; “1767 HO”) скрещивали с мышами, гомозиготными в отношении гуманизированного вариабельного локуса TCRβ, содержащего 14 Vβ человека, 2 Dβ человека и 14 Jβ человека (MAID 1716; “1716 HO”). Потомство скрещивали до гомозиготности по отношению к обоим гуманизированным локусам.

Пример 5: Продукция T-клеток селезенки у мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного локуса TCRα и/или TCRβ

Селезенки от мышей дикого типа (WT); мышей с подвергнутым делеции локусом TCRα мыши (“MAID1540”, смотрите фиг.3); мышей, гомозиготных в отношении локус TCRα человека (“MAID 1767”, смотрите фиг. 3); мышей с подвергнутыми делеции V сегментами TCRβ за исключением двух оставшихся V сегментов мыши (“MAID1545”, смотрите фиг.7); мышей, гомозиготных в отношении локуса TCRβ человека, также содержащим два оставшихся V сегмента мыши (“MAID 1716”, смотрите фиг. 7); и мышей, гомозиготных в отношении обоих локусов TCRα и TCRβ человека, с локусом TCRβ, также содержащим два оставшихся V сегмента мыши (“MAID 1767 1716”), перфузировали с коллагеназой D (Roche Bioscience) и эритроциты лизировали с помощью лизирующего буфера ACK с последующей отмывкой в среде RPMI.

Спленоциты от одного WT, MAID 1540, 1767, 1545, 1716, и 1716 1767 репрезентативного животного оценивали с помощью проточной цитометрии. Кратко, клеточные суспензии получали с использованием стандартных способов. 1x10⁶ клеток инкубировали с антителом к CD16/CD32 мыши (2.4G2, BD) на льду в течение 10 минут, окрашивали с помощью соответствующего коктейля антител в течение 30 минут на льду. После окрашивания клетки отмывали и затем фиксировали в 2% формальдегида. Регистрацию данных проводили на проточном цитометре LSRII/CantoII/LSRFortessa и анализировали с помощью FlowJo.

Для окрашивания спленоцитов использовали антитела к FITC-CD3 мыши (17A2, BD). Как показано на фиг. 9, мыши с сегментами TCR человека были способны производить существенные количества CD3+ T-клеток, тогда как мыши с делецией локуса TCRα мыши не могли этого делать. Мыши с делецией локуса TCRβ также производили CD3+ T-клетки, предположительно вследствие использования оставшегося 3’ V сегмента мыши (смотрите ниже).

Пример 6: Развитие Т-клеток в тимусе у мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного локуса TCRα и/или TCRβ

Для определения того, проявляются ли мыши, гомозиготные в отношении гуманизированного локуса TCRα и/или TCRβ, нормальное развитие Т-клеток в тимусе, спленоциты от четырех из каждой группы совпадающих по возрасту (7-10 недель) животных WT, 1767 HO, 1716 HO, и 1716 HO 1767 HO использовали в проточной цитометрии для оценки продукции T-клеток на различных стадиях развития, а также для оценки частоты встречаемости и абсолютного количества каждой из DN, DP, CD4 SP и CD8 SP T-клеток.

Определения клеточного типа получали на основании присутствия маркеров клеточной поверхности CD4, CD8, CD44 и CD25, как обобщенно представлено в таблице 1. Корреляция между обозначением клеточного типа и экспрессией маркеров клеточной поверхности в тимусе является следующей: двойные негативные (DN) клетки (CD4- CD8-), двойные позитивные (DP) клетки (CD4+ CD8+), CD4 одинарные позитивные клетки (CD4+ CD8-), CD8 одинарные позитивные клетки (CD4- CD8+), двойные негативные 1/DN1 клетки (CD4- CD8-, CD25- CD44+), двойные негативные 2/DN2 клетки (CD4- CD8-, CD25+ CD44+), двойные негативные 3/DN3 клетки (CD4- CD8-, CD25+ CD44-), двойные негативные 4/DN4 клетки (CD4- CD8-, CD25- CD44-).

Тимоциты оценивали с помощью проточной цитометрии. Кратко, клеточные суспензии получали с использованием стандартных способов. Проточную цитометрию проводили, как описано в примере 5. Используемые антитела представляли собой: антимышиные антитела PE-CD44 (IM7, BioLegend), PeCy7-CD25 (PC61, BioLegend), APC-H7-CD8a (53-6.7, BD) и APC-CD4 (GK1.5, eBioscience).

Как показано на фигурах 10 и 11, мыши, гомозиготные в отношении гуманизированных TCRα, TCRβ, и обоих TCRα и TCRβ, были способны производить DN1, DN2, DN3, DN4, DP, CD4 SP и CD8 SP T-клетки, указывая на то, что T-клетки, полученные из гуманизированных локусов, способны проходить развитие Т-клеток в тимусе.

Пример 7: Дифференциация T-клеток селезенки у мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного локуса TCRα и/или TCRβ

Для определения того, проявляются ли мыши, гомозиготные в отношении гуманизированного локуса TCRα и/или TCRβ, нормальную T-клеточную дифференциацию в периферических органах (например, селезенке), четыре из каждой группы совпадающих по возрасту (7-10 недель) животных WT, 1767 HO, 1716 HO, и 1716 HO 1767 HO использовали в проточной цитометрии для оценки продукции различных типов T-клеток в селезенке (CD3+, CD4+, CD8+, T наивные, Tcm и Teff/em), а также для оценки абсолютного количества каждого типа T-клеток в селезенке.

Определения клеточного типа получали на основании присутствия маркеров клеточной поверхности: CD19 (B-клеточного маркера), CD3 (T-клеточного маркера), CD4, CD8, CD44, и CD62L (L-селектина). Корреляция между обозначением клеточного типа и экспрессией маркеров клеточной поверхности в селезенке является следующей: T-клетки (CD3+), CD4 T-клетки (CD3+ CD4+ CD8-), CD8 T-клетки (CD3+ CD4- CD8+), CD4 эффекторные/эффекторные T-клетки памяти (CD3+ CD4+ CD8- CD62L- CD44+), CD4 центральные T-клетки памяти (CD3+ CD4+ CD8- CD62L+ CD44+), CD4 наивные T-клетки (CD3+ CD4+ CD8- CD62L+ CD44-), CD8 эффекторные/эффекторные T-клетки памяти (CD3+ CD4- CD8+ CD62L- CD44+), CD8 центральные T-клетки памяти (CD3+ CD4- CD8+ CD62L+ CD44+), CD8 наивные T-клетки (CD3+ CD4- CD8+ CD62L+ CD44-).

Спленоциты оценивали с помощью проточной цитометрии. Кратко, клеточные суспензии получали с использованием стандартных способов. Проточную цитометрию проводили, как описано в примере 5. Используемые антитела представляли собой: антимышиные антитела FITC-CD3 (17A2, BD), PE-CD44 (IM7, BioLegend), PerCP-Cy5.5-CD62L (Mel-14, BioLegend), APC-H7-CD8a (53-6.7, BD), APC-CD4 (GK1.5, eBioscience) и V450-CD19 (1D3, BD).

Как показано на фигурах 12-14, T-клетки в селезенке мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного TCRα, TCRβ и обоих TCRα и TCRβ, были способны проходить T-клеточную дифференциацию и присутствовали как CD4+, так и CD8+ T-клетки. Кроме того, в селезенках исследуемых мышей обнаруживали T-клетки памяти.

Пример 8: Использование V сегментов человека у гуманизированных в отношении TCR мышей

Экспрессию V сегментов TCRβ человека оценивали на уровне белка и РНК с использованием проточной цитометрии и ПЦР в реальном времени TAQMAN™, соответственно, у мышей, гомозиготных в отношении гуманизированного локуса TCRβ (1716 HO), и мышей, гомозиготных в отношении обоих гуманизированных локусов TCRβ и TCRα (1716 HO 1767 HO).

Для проточной цитометрии получали T-клетки селезенки и анализ проводили, как описано в примере 5. Для проточной цитометрии использовали набор репертуара TCRβ (IOTEST® Beta Mark, Beckman Coulter). Набор содержит антитела к человеку, специфические к ряду TCRBV человека, например, hTRBV-18, -19, -20, -25, -27, -28 и -29.

Результаты обобщают на фиг. 15. На таблицах, представленных на фиг. 15A (покрытие CD8 T-клеток) и фиг. 15B (покрытие CD4 T-клеток), показано, что T-клетки селезенки как у 1716 HO, так и у 1716 HO 1767 HO мышей использовали ряд V сегментов TCRβ человека. Мышей дикого типа использовали в качестве отрицательного контроля.

Для ПЦР в реальном времени общую РНК очищали из селезенки и тимуса с использованием набора для выделения общей РНК MAGMAX™-96 для микрочипов (Ambion by Life Technologies) согласно инструкциями производителя. Геномную ДНК удаляли с использованием буфера ДНазы MAGMAX™TURBO™ и TURBO ДНазы из приведенного выше набора MAGMAX (Ambion by Life Technologies). мРНК (до 2,5 мкг) обратно транскрибировали в cДНК с использованием мастер-микса SUPERSCRIPT® VILO™ (Invitrogen by Life Technologies). кДНК разбавляли до 2-5 нг/мкл и 10-25 нг кДНК амплифицировали с мастер-миксом для генной экспрессии TAQMAN® (Applied Biosystems by Life Technologies) с использованием системы обнаружения последовательности ABI 7900HT (Applied Biosystems), с использованием праймеров и зондов Taqman MGB (Applied Biosystems) или зондов BHQ1/BHQ-Plus (Biosearch Technologies), показанных в таблице 4, согласно инструкциям производителя. Относительную экспрессию каждого гена нормировали к контролю константной области 1 TCR-бета (TRBC1) мыши.

Таблица 4: Праймеры и зонды, используемые для обнаружения экспрессии РНК V сегментов и константной области TCRβ у гуманизированных в отношении TCR мышей с помощью ПЦР в реальном времени (TAQMAN™)

TRBV Смысловой праймер (5’-3’) Антисмысловой праймер (5’-3’) Зонд (5’-3’) Последовательность SED ID NO Последовательность SED ID NO Последовательность SED ID NO hTRBV 18 CCGGCGTCATGCAGAA 28 GGGCTGCATCTCAGTCTTGC 29 FAM-CACCTGGTCAGGAGGAGG -MGB 30 hTRBV 19 GGAATCACTCAGTCCCCAAAG 31 ATTCTGTTCACAACTCAGGGTCA 32 FAM-TCAGAAAGGAAGGACAGAAT-MGB 33 hTRBV 20 CGAGCAAGGCGTCGAGAA 34 GGACAAGGTCAGGCTTGCA 35 FAM- ACAAGTTTCTCATCAACC- MGB 36 hTRBV 24 TGTTACCCAGACCCCAAGGA 37 TCTGAGAACATTCCAGCATAATCCT 38 FAM- TAGGATCACAAAGACAGGAA - MGB 39 hTRBV 25 TCCCCTGACCCTGGAGTCT 40 TGCTGGCACAGAGGTACTGAGA 41 FAM-CAGGCCCTCACATAC- MGB 42 hTRBV 27 AAGCCCAAGTGACCCAGAA 43 ATTCTGAGAACAAGTCACTGTTAACTTC 44 FAM- CTCATCACAGTGACTGGAA- MGB 45 hTRBV28 GTGAAAGTAACCCAGAGCTCGAG 46 ATCCTGGACACATTCCAGAAAAAC 47 FAM- ATATCTAGTCAAAAGGACGGGA- MGB 48 hTRBV29 TGTCATTGACAAGTTTCCCATCAG 49 TGCTGTCTTCAGGGCTCATG 50 FAM- TCAACTCTGACTGTGAGCA- MGB 51 mTRBC1 AGCCGCCTGAGGGTCTCT 52 GCCACTTGTCCTCCTCTGAAAG 53 FAM- TACCTTCTGGCACAATCCTCGCA - BHQ 54

Как показано на фигурах 16A-B, мыши, гомозиготные в отношении гуманизированного локуса TCRβ (1716 HO), и мыши, гомозиготные в отношении обоих гуманизированных локусов TCRβ и TCRα (1716 HO 1767 HO), проявляли экспрессию РНК различных сегментов TCRβ человека как в тимусе, так и в селезенке. Мыши также проявляли экспрессию РНК сегментов TRBV-1 и TRBV-31 мыши (данные не показаны), но ни один белок TRBV- 1 мыши не обнаружили с помощью проточной цитометрии (данные не показаны).

Сегмент TRBV-31 мыши замещают сегментом TRBV-30 человека, как показано на фиг. 8F, и мышей получают из ES клеток MAID 6192, как описано в настоящем документе. Селезенки и тимусы полученных гомозиготных животных исследуют в отношении использования сегментов Vβ человека, включающих в себя TRBV-30, с помощью проточной цитометрии и/или ПЦР в реальном времени, как описано в настоящем документе. сегмент mTRBV-1 также могут подвергать делеции.

Пример 9: Развитие Т-клеток у мышей, гомозиготных в отношении 23 сегментов Vα TCR человека

Гомозиготные гуманизированные в отношении TCRα мыши, характеристики которых определили в предыдущих примерах, содержали 8 сегментов Vα человека и 61 сегмент Jα человека (1767 HO, смотрите фиг. 3). Гомозиготных гуманизированных в отношении TCRα мышей, содержащих 23 сегмента Vα человека и 61 сегмент Jα человека (1979 HO, смотрите фиг. 3), исследовали в отношении их способности производить CD3+ T-клетки селезенки и проходить развитие Т-клеток в тимусе.

Экспериментальные данные получали с использованием проточной цитометрии с использованием соответствующих антител, описанных в предыдущих примерах. Как показано на фиг. 17, мышь, гомозиготная в отношении 23 сегментов Vα человека и 61 сегмента Jα человека, производила значительное количество CD3+ T-клеток селезенки, и процент периферических CD3+ T-клеток был сопоставим с процентом от животных дикого типа (фиг. 19).

Более того, тимоциты у 1979 HO мышей были способны проходить развитие Т-клеток и содержали T-клетки на стадиях DN1, DN2, DN3, DN4, DP, CD4 SP и CD8 SP (фиг. 18).

Пример 10: Развитие Т-клеток и дифференциация у мышей, гомозиготных в отношении полного репертуара сегменты вариабельной области как TCRα, так и TCRβ человека

Мышей, гомозиготных в отношении полного репертуара сегментов вариабельной области TCRα человека (т.е., 54 Vα человека и 61 Jα человека) и гомозиготных в отношении полного репертуара сегментов вариабельной области TCRβ человека (67 Vβ человека, 2 Dβ человека и 14 Jβ человека), “1771 HO 6192 HO” (смотрите фигуры 3 и 7) исследовали в отношении их способности производить тимоциты, которые проходят нормальное развитие Т-клеток, производить T-клетки, которые проходят нормальную T-клеточную дифференциацию в периферических органах, и использовать полный репертуар их Vα и Vβ сегментов человека.

Проточную цитометрию проводят для определения присутствия DN1, DN2, DN3, DN4, DP, CD4 SP и CD8 SP T-клеток в тимусе с использованием антимышиных антител CD4, CD8, CD25 и CD44, как описано выше в примерах 5 и 6. Проточную цитометрию также проводят для определения количества CD3+ T-клеток в периферических органах, а также для оценки T-клеточной дифференциации в периферических органах (например, присутствия эффекторных T-клеток и T-клеток памяти в периферических органах). Эксперимент проводят с использованием антимышиных антител CD3, CD19, CD4, CD8, CD44 и CD62L, описанных выше в примерах 5 и 7.

В итоге, проточную цитометрию и/или ПЦР в реальном времени проводят для определения того, используют ли T-клетки у 1771 HO 6192 HO мышей полный репертуар V сегментов TCRB и TCRA. Для экспрессии белка с использованием проточной цитометрии используют набор репертуара TCRβ (IOTEST® Beta Mark, Beckman Coulter), содержащий антитела, специфические к hTCRBV человека (смотрите пример 8). Для экспрессии РНК с использованием ПЦР в реальном времени кДНК из селезенок или тимусов амплифицируют с использованием праймеров TCR-V человека и зондов Taqman согласно инструкциям производителя и как описано выше в примере 8.

Эквиваленты

Специалистам в настоящей области техники будут понятны, или с использованием не более чем рутинного экспериментирования они смогут установить многие эквиваленты описанных в настоящем документе конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения. Предусматривается, что такие эквиваленты включены в представленную ниже формулу изобретения.

Полное содержание всех процитированных в настоящей заявке непатентных документов, патентных заявок и патентов полностью включено посредством ссылки в настоящем документе.

В частных воплощениях настоящее изобретение может относиться к следующим вариантам:

Вариант 1. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:

нереаранжированный вариабельный генный локус T-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRα.

Вариант 2. Животное согласно варианту 1, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα.

Вариант 3. Животное согласно варианту 1, у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα.

Вариант 4. Животное согласно варианту 1, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα.

Вариант 5. Животное согласно варианту 4, у которого отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делецию всех эндогенных генных сегментов Jα, и (c) их комбинации.

Вариант 6. Животное согласно варианту 1, у которого сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека.

Вариант 7. Животное согласно варианту 6, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область TCRα человека на поверхности T-клетки.

Вариант 8. Животное согласно варианту 1, у которого T-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток.

Вариант 9. Животное согласно варианту 1, которое содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Вариант 10. Животное согласно варианту 1, которое производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Вариант 11. Животное согласно варианту 1, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека.

Вариант 12. Животное согласно варианту 1, которое сохраняет эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα, и причем локус представляет собой нефункциональный локус.

Вариант 13. Животное согласно варианту 1, которое представляет собой грызуна.

Вариант 14. Животное согласно варианту 13, причем грызун представляет собой мышь.

Вариант 15. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:

нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRβ.

Вариант 16. Животное согласно варианту 15, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ.

Вариант 17. Животное согласно варианту 15, у которого эндогенные сегменты Vβ, Dβ и Jβ грызуна являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.

Вариант 18. Животное согласно варианту 15, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.

Вариант 19. Животное согласно варианту 18, у которого отсутствие функционального эндогенного вариабельного локуса TCRβ грызуна предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (c) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.

Вариант 20. Животное согласно варианту 15, у которого сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.

Вариант 21. Животное согласно варианту 20, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область TCRβ человека на поверхности T-клетки.

Вариант 22. Животное согласно варианту 15, у которого T-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток.

Вариант 23. Животное согласно варианту 15, которое содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Вариант 24. Животное согласно варианту 15, которое производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Вариант 25. Животное согласно варианту 15, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.

Вариант 26. Животное согласно варианту 15, которое сохраняет эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ, и причем локус представляет собой нефункциональный локус.

Вариант 27. Животное согласно варианту 15, которое представляет собой грызуна.

Вариант 28. Животное согласно варианту 27, причем грызун представляет собой мышь.

Вариант 29. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:

нереаранжированный вариабельный генный локус T-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRα; и,

нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRβ.

Вариант 30. Животное согласно варианту 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ.

Вариант 31. Животное согласно варианту 29, у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.

Вариант 32. Животное согласно варианту 29, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα и не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.

Вариант 33. Животное согласно варианту 32, у которого отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Jα, и (c) их комбинации;

и отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRβ предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (c) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.

Вариант 34. Животное согласно варианту 29, у которого сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.

Вариант 35. Животное согласно варианту 34, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область на поверхности T-клетки.

Вариант 36. Животное согласно варианту 29, у которого T-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток.

Вариант 37. Животное согласно варианту 29, причем животное содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Вариант 38. Животное согласно варианту 29, причем животное производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Вариант 39. Животное согласно варианту 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит 14 сегментов Jβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Vβ человека.

Вариант 40. Животное согласно варианту 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.

Вариант 41. Животное согласно варианту 29, которое сохраняет эндогенные не относящиеся к человеку вариабельные генные локусы TCRα и TCRβ, и причем локусы представляют собой нефункциональные локусы.

Вариант 42. Животное согласно варианту 29, которое дополнительно содержит нуклеотидные последовательности сегментов Vδ человека на гуманизированном локусе TCRα.

Вариант 43. Животное согласно варианту 42, которое дополнительно содержит полный репертуар сегментов Vδ человека, полный репертуар сегментов Dδ человека и полный репертуар сегментов Jδ человека на гуманизированном локусе TCRα.

Вариант 44. Животное согласно варианту 29, которое представляет собой грызуна.

Вариант 45. Животное согласно варианту 44, причем грызун представляет собой мышь.

Вариант 46. Способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область на поверхности T-клетки, предусматривающий:

замещение у первого не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRα нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRα, содержащим по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один Jα сегмент человека, для создания гуманизированного вариабельного генного локуса TCRα, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRα функционально связан с эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCRα;

замещение у второго не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRβ нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRβ, содержащим по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, для создания гуманизированного вариабельного генного локуса TCRβ, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ функционально связан с эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCRβ; и

скрещивание первого и второго животного для получения не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область.

Вариант 47. Способ согласно варианту 46, в котором эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и в котором эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.

Вариант 48. Способ согласно варианту 46, в котором генетически модифицированное животное не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα и не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.

Вариант 49. Способ согласно варианту 48, в котором отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Jα, и (c) их комбинации;

а отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRβ предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (a) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (c) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.

Вариант 50. Способ согласно варианту 46, в котором сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.

Вариант 51. Способ согласно варианту 46, в котором T-клетки грызуна проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток.

Вариант 52. Способ согласно варианту 46, в котором животное содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Вариант 53. Способ согласно варианту 46, в котором животное производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Вариант 54. Способ согласно варианту 46, в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека, и в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит 14 сегментов Jβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Vβ человека.

Вариант 55. Способ согласно варианту 46, в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, и в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.

Вариант 56. Способ согласно варианту 46, в котором не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна.

Вариант 57. Способ согласно варианту 56, в котором грызун представляет собой мышь.

Вариант 58. Генетически модифицированная мышь, содержащая в своем геноме:

нереаранжированный вариабельный генный локус T-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, функционально связанный с константной генной последовательностью TCRα мыши, и

нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека, функционально связанный с константной генной последовательностью TCRβ мыши.

Вариант 59. Мышь согласно варианту 58, у которой нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRα мыши, и у которой нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRβ мыши.

Вариант 60. Мышь согласно варианту 58, у которой эндогенные сегменты Vα и Jα мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и у которой эндогенные сегменты Vβ, Dβ и Jβ мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.

Вариант 61. Мышь согласно варианту 58, у которой сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.

Вариант 62. Мышь согласно варианту 61, которая экспрессирует T-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и константную область мыши на поверхности T-клетки.

Вариант 63. Мышь согласно варианту 58, у которой T-клетки мыши проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 T-клеток.

Вариант 64. Мышь согласно варианту 58, которая содержит нормальное соотношение CD3+ T-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.

Вариант 65. Мышь согласно варианту 58, которая производит популяцию центральных и эффекторных T-клеток памяти к представляющему интерес антигену.

Вариант 66. Мышь согласно варианту 58, которая дополнительно содержит полный репертуар сегментов Vδ, полный репертуар сегментов Dδ и полный репертуар сегментов Jδ на гуманизированном локусе TCRα.

Вариант 67. Мышь согласно варианту 58, которая сохраняет эндогенные вариабельные генные локусы TCRα и TCRβ мыши, и причем локусы представляют собой нефункциональные локусы.

Вариант 68. Способ получения T-клеточного рецептора человека к представляющему интерес антигену, предусматривающий:

иммунизацию не относящегося к человеку животного согласно варианту 1 представляющим интерес антигеном;

предоставление животному возможности развивать иммунный ответ;

выделение из животного T-клетки, реактивной по отношению к представляющему интерес антигену;

определение последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области TCR человека, экспрессированной T-клеткой;

клонирование вариабельной области TCR человека в нуклеотидную конструкцию, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты константной области TCR человека, причем вариабельная область TCR человека функционально связана с константной областью TCR человека; и

экспрессию T-клеточного рецептора человека в клетке.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Macdonald, Lynn

McWhhirter, John

Gurer, Cagan

Hosiawa, Karolina A.

Murphy, Andrew J.

<120> МЫШИ С ОГРАНИЧЕННОЙ ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПЬЮ ИММУНОГЛОБУЛИНА

<130> 1370A-WO

<150> 61/658,459

<151> 2012-06-12

<150> 61/597,969

<151> 2012-02-13

<150> 61/547,974

<151> 2011-10-17

<160> 81

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 872

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 1

gcaggattta gggcttggtc tctcagcatc ccacacttgt acagctgatg tggcatctgt 60

gttttctttc tcatcgtaga tcaggctttg agctgtgaaa taccctgcct catgcatatg 120

caaataacct gaggtcttct gagataaata tagatatatt ggtgccctga gagcatcaca 180

taacaaccac attcctcctc taaagaagcc cctgggagca cagctcatca ccatggactg 240

gacctggagg ttcctctttg tggtggcagc agctacaggt aaggggcttc ctagtcctaa 300

ggctgaggaa gggatcctgg tttagttaaa gaggatttta ttcacccctg tgtcctctcc 360

acaggtgtcc agtcccaggt gcagctggtg cagtctgggg ctgaggtgaa gaagcctggg 420

tcctcggtga aggtctcctg caaggcttct ggaggcacct tcagcagcta tgctatcagc 480

tgggtgcgac aggcccctgg acaagggctt gagtggatgg gagggatcat ccctatcttt 540

ggtacagcaa actacgcaca gaagttccag ggcagagtca cgattaccgc ggacgaatcc 600

acgagcacag cctacatgga gctgagcagc ctgagatctg aggacacggc cgtgtattac 660

tgtgcgagag acacagtgtg aaaacccaca tcctgagagt gtcagaaacc ctgagggaga 720

aggcagctgt gccgggctga ggagatgaca gggtttatta ggtttaaggc tgtttacaaa 780

atgggttata tatttgagaa aaaaagaaca gtagaaacaa gtacatactc ctctaatttt 840

aagataatta ttccattcaa gagtcgtaat at 872

<210> 2

<211> 118

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 2

Met Asp Trp Thr Trp Arg Phe Leu Phe Val Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Gly Val Gln Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

20 25 30

Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr

35 40 45

Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr

65 70 75 80

Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr

85 90 95

Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

100 105 110

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

115

<210> 3

<211> 99294

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 3

aagcttatct ctctgttgct cagactcatc taggaatttc agaaatttct gttctagcat 60

ctcttccagc ttttgtctcc aaccctcatt ctcttctttc tttttttttt taaattatat 120

gttctctgtc tttttaaaaa actttttaaa attaggtatt tatgtcattt acatttccaa 180

tgctatccca aaagtcccac ccacgctccc caacccacta tcccacccac ccactcccac 240

ttcttggccc tggcattcac agtgtactga gacatataaa gtttgcacaa ccaatgggcc 300

tctctttcca ctgatggccg actaggccat cttctgatac atatgcagct agagacacga 360

gattctgggg gtactggtta gttcatattg ttgttccacc tatagggttg cagatccttt 420

tagctccttg ggtactttct ctagctcctc cattgggggc cctgtgatcc atccaatagc 480

tgactgtgag catccacttc tgtgtttgct aggccccaga tagtctcaca agagacagct 540

atatctgggt cctttcagca aaatcttgct agtgtatgca acggtgtcag agtttggaag 600

ctgattatgg gatggatccc cggatatggc attctctagt tggttcatcc ttttgtctca 660

gctccaaact ttgtctctgt aactccttcc atgggtgttt tgttcccagt tctaaggagg 720

ggcaaagtat ccacactttg gtcttcattc ttcttgagtt tcatgtgttt tgcaaattgt 780

atcttatatc ttgggtattc taagtttctg ggctaatatc cacttatcag tgagtacaca 840

ttgtgtgagt tcttttgtga ttgggttacc tcactcagta tgatgccctc caggtccatc 900

catttgccta ggaatttcat aaattcattc tttttaatag ctcagtagta ctccattgtg 960

tagatgtacc acattttctg tattcattcc tctgttgagg ggcatctggg ttctttccag 1020

cttctggcta ttataaataa ggctgctatg aacatagtgg agcatgtgac cttcttaccg 1080

gttgggacat cttctggata tatgcccagg agaggtattg ctggatcttc cggtagtact 1140

atgtccaatt ttctgaggaa ctgacaaact gatttccaga gtggttagta ccagcttgca 1200

atcccaccaa caatgagagg agtgttcgtc tttctccaca tcctcaccag catgctgctg 1260

tcacctgaat ttttgatgct tagccattct gactggtgtg aggtggaatc tcagggttgt 1320

tttgatttgt atttccctga tgattaagga tgctgaacat tttctcaggt gcttctcagc 1380

cattcagtat tctttaggtg agaattcttt gtttagctct aagccccatt tttttaatgg 1440

ggttatttga ttttctggag tccaccttct tgagtttttt tttccatttt ttattacata 1500

atttcctcaa ttacatttcc aatgctatcc caaaagtccc ccataccctc ccccccccaa 1560

ttccctaccc accccttccc atttttttgg ccctggcgtt cccctgtact ggggcatata 1620

aagtttgtgt gtccaatggg cttctctttc cagtgatggc tgactaggcc atcttttgat 1680

acatatgcag ctagagtcaa gagctcccgg gtactggtta gttcataatg ttgttccacc 1740

tatagggttg cagatccctt tagcttcttg ggtactttct ctagctcctc cattgggagc 1800

cctgtgatcc atccaatagc tgactgtgag catccacttc tgtgtttgct aggccccggc 1860

atagtctcac aagagacagc tacatctggg tccttttgat aaaatcttgc tagtgtatgc 1920

aagggtgtca gcatttggaa gctgattatg gggtggatcc ctggatatgg cagtctctac 1980

atggtccatc cttttgtctc agctccaaac tttgtctctg taacttcttc catgagtgtt 2040

ttgttcccaa ttctaaggag gggcatagtg tccacacttc attcttcatt cttcttgagt 2100

ttcatgtgtt tagcaaattg tatcttatat cttgggtatc ctaggttttg ggctaatatc 2160

cacttatcag tgagtacata ttgtgtgagt tcctttgtaa atgtgttacc tcactcagga 2220

tgacgccctc caggtccatc catttggcta ggaatttcat aaattcattc tttttaatag 2280

ctgagtagta ctccattgtg taaatgtacc acattttctg tactcattcc tctgttgagg 2340

ggcatctggg ttctttatag gttctggcta ttataaataa ggttgctatg aacatagtgg 2400

agcatgtgtc cttcttaccg gttgagacat cttctggata tatgcccagg cgaggtattg 2460

ctggatcctc cggtagtact atgtccaatt ttctgaggaa ctgccagact gatttccaga 2520

gtggttgtac aagcctgcac tctcaccaac aatggaggag tgttcctctt tctccacatc 2580

cacgccagca tctgctgtca cctgaatttt tgatcttagc cattctgact ggtgtgaggt 2640

ggaatctcag ggttgttttg atttgcattt ccctgatgat taaggatgtt gaacattttt 2700

ttcaggtgct tctctgccat tcggtattcc tcaggtgaga attctttgtt cagttctgag 2760

ccccattttt taatggggtt atttgatttt ctgaagtcca ccttcttgag ttctttatat 2820

atgttggata ttagtcccct atctgattta cgataggtaa agatcctttc ccaatctgtt 2880

ggtggtcttt ttctcttatt gacggtgtct tttgccttgc agaaactttg gagtgagttc 2940

tttatatata ttggatatta gtcccctatc tgatttagga taggtaaaga tcctttccca 3000

atctgttggt gacctttttg tcttattgac ggtgtctttt gccttgcaga atctttgcaa 3060

ttttatgagg tcgcatttgt caattctcga tcttacagca caagtcattg ctgttctgtt 3120

caggaatttt tcctctgtgc ccatatcttc gaggctttta cctgctttct cctctatatg 3180

tttgagtgtc tctggtttaa tgtggagttc cttaatccac ttagatttga ccttagtaca 3240

aggagatagg aatggatcaa ttcgcattct tctacatgat aaccgctagt tgtgccagca 3300

ccatttgttg ataatgctgt cttttttcca ctggatggtt tttgctccct tgtctaagat 3360

caagtgacca taggtgtgtg ggttcatttc tgggtcttca attctatttc attggtctac 3420

ttgtctgttg ttataccagt accatgcaga ttttatcaca attgctctgt agtagagttt 3480

taggtcaggc atggtgatta caccagaggt tttttttatc cttgagcaga gtttttgcta 3540

tcctaggttt tgtgttattt cagatgaatt tgcagattgc cctttccagt tcgttgaaga 3600

attgagttgg aattttgatg gggattgcat tgaatctgta gattgctttg gcaatatagc 3660

catttttact atattgatcc tgccaatcca tgagcatggg agatctttcc atcttctcaa 3720

atcttcttta atttctttct tcagagactt gaagttcttg tcatacagat ctttcacttc 3780

cttagttaga gtcacgctaa ggtattttat attatttgtg actattgaga agggtgttgt 3840

ttccctaatt tctttctcag cctgtttatc ctttgtgtac agaaaagcca ttgacttgtg 3900

ttagttaatc tcatatccag ctacttcact gaagcggttt atcaggttta ggagttctct 3960

ggtgtaattt ttagggtcac tcatatatac tatcatatca tctgcaaaaa gtgacatttt 4020

gacttcttcc tttccaattt gtatcccctt gatctccttt tgttgtcgaa ttgctctggc 4080

aaggacatca agtactatat tgaataggta gggagaaaat cggcaccctt gtctagtccc 4140

tgattttagt aggattgctt caagtttctc accatttact ttgatgttgg ctactggttt 4200

gctgttgaat gctttttatc atgtttaggt atgggccttg aattcctgat ctttccaaga 4260

cttttatcat gaaagggtgt tggattttgt caaatgcttt ctccagcctt tcattctgag 4320

gttgtgtctg tctttttccc tgagatgggt ttcctgtaag cagcaaaatg ttgggtcctg 4380

tttgtgtagc ccgtctgtta ttctatgtct ttttattggg gagttgagtc cattgatatt 4440

aagatatatt aaggaaaagt aattgttgct tcctattatt tttgttttta aagttggcat 4500

tctgttcttg tggctgtctt cttttaggtt tgttgaagga ttcctttctt gctttttcta 4560

ggtcgtggtt tccatccttg tattcatttt ttttctgtta ttatcctttg aaggactgga 4620

ttcatggata gataatgtgt gaatttggtt ttgtcttgga atacttttgt ttctccatct 4680

acggtaattg agagtttggc tgggtatagt agcctgggct ggcaattgtg ttgtcttagt 4740

gtctatataa tgtctgtcca ggatcttctg gctttcatag tctgtggtga aaaatctggt 4800

gtaattctga taggcttgcc tttatatgtt acttgaattt ttcacttact gcttttaata 4860

ttctttcttt atttagtgca tttgttgttc tgattattat gtgtcgggag gaatttcttt 4920

tctggtccag tctatttgga gttctgtagg cttcttgtat gttcacgggc atctctttct 4980

ttaggtttgg gaagttttct tctataattt tgttgaagat atttgctggc ccttcaagtt 5040

gaaaatgttc attctcatct actcctatta ttcgtatggt tggtcttctc attgtgtcct 5100

ggatttcctg gatgttttga gttaggatct ttttgcattt tccattttct ttgattgttg 5160

tgcagatgtt ctctatggaa tcttctgcac ctgatattct ctcttccatc tcttgtagtc 5220

tgttgctgat gctcgcatct atggttccag atttctttcc tagggtttct atctccagtg 5280

ttgccccact ttgggttttc tgtatagtgt ctacttccct ttttagatct agtatggttt 5340

tgttcatttc catcacctgt ttgggtgtgt tttcctgttt ttctttaaag acttgcaact 5400

ctttagcaga gttctcctgt atttaagtga gttattaaag tccttcttga tgtccagtac 5460

cataattgtg agatatgcct ttaaatccaa gtctaggttt ttgggtgtgt tggggtgccc 5520

tggactggct gagttgggag tgctgcattc tgatgatggt gagtggtctt ggtttctgct 5580

agtaagattc ttacatctgc ctttcgccat ctggtaatct ctggagtcag ttgttaaagt 5640

tgtctctggt taaagcttgt tcctctcgtg attctgttat tctcttccag cagacctggg 5700

agactagctc tttcctgagt ttcagtggtc agagcactct ctgcaggcag gatttcctct 5760

ttcagggaag gtgcacagat atctggtgtt cagatttgcc tcctggcaga agatgatggc 5820

ctgaaacagg acctgtccca gaagctgtta gcttctgtag tcaacactgt cacctgtgca 5880

gactagtctc ggtggagtcc gggaaccaag atgtctcctg cagatgctct ggcattccct 5940

tctgggccgg gtgatcacct ctcctctggc agggaaggtg ccctggtgtc tggaacccga 6000

aaagggggct gcctcagaag ctctgtggct actgcctgtc ccagaagctg ttagcttctg 6060

tagtccacac tctcacctgt gcagactagt cttggtggag tctgggaacc aagatgtctc 6120

ccgcagatgc tccagccatt ctcctctttc tgttgcttat tttgacctat gaaatcctgg 6180

acatatagtt ctagtgttgc ttgtaatctc ttttctaagc caaggaattt tttttatcta 6240

gggcacaatc ttttgagaag acatattaaa tcaagagaat aaatattgca agaccaataa 6300

atgataaggt atctattttc tttaaatcca tcgctgtcaa accattcaaa atatcctcac 6360

ataaagccaa aaagatattt attgtgtttc ccatcttagt tgagttcaag tcaatatttt 6420

ggtgccattt tgttgcagta aatctctaac acaaatatgc ctgggcaatg aaaacacaac 6480

tcagttaata tgaatacaga ttgttcagat ctaccactac actaccatct tcttcatcta 6540

agagacccct tagaacttgc agtttctcca ggccttgtgc ttctgcgctg cttttcttct 6600

tcttcctctt ctacattgct tctctcataa acctacttct ttttttccct ccttctgttc 6660

catcttccct tttatctgcc caatcattag ctctccttta ttttacaaat taaggtgtga 6720

agccggtttc taggaaatca cctgagtgct gacttgttcc ttgttcagag ccacgcacag 6780

gagaacagaa ttaacatcaa atataattat ccccagggct atccacaaca cgtgcatcct 6840

ataagatcac cacggactaa tgctggtctt caattacaac ataaacaaca aaaaccccac 6900

atatatgtgg aaacaaatcg aactatacaa agaatcaatg aaaccaggag cttgttcttt 6960

gagaaaaatc aacaagatag ataaaccctt agccagacta accagagggc acagagacag 7020

tatccaaatt aataaagtca gaaatgaaag gaagacataa caatgaaata tatcttaaaa 7080

taattaatct gtttgtagac tattagcagt tgaaaatatt aaaatcatgt tctacaaacg 7140

tggaattatt attgataatt ttctcactgt gcttgaaatt agcattttct taatgtttaa 7200

cttcaaagag tttttgctat tttgaaatat taaacatata cttactgata aaataatttc 7260

cctcctaaca acactgataa tcttttttta agtaaactga ttattagaca atgtacacag 7320

atatataatg tgttttaaat actctcccac tgtcaggtgg tatcatatag ggcctttgaa 7380

tatattttta aatgtattat ttgtaatatt ttatggtctc tcctatgctt atttctgaaa 7440

gaatattttg tatgttttga aacaatttag tatttaacat tagatatagg atcctcagtt 7500

atggatagta ttaaatattc attaatgata tttttaaggt ataaaaggat atgaatataa 7560

aagtttaaca aattttatgt attatttgat tctaaaaata ctcaatatta ttaatatgtt 7620

tgatgtttaa aatgcattta aataataaaa acatttaaaa aaataaaatc aagaaatgag 7680

gttctaagca gaggtcaagg aaaatgagga atagaaaaat agtaaaaatc aatatgtcca 7740

tttattcaag gaaagctcct acatagacat tgcaccagat tagcaaatat tatggtcctc 7800

atattagttt aagttaggag actatgctta tgttatctat ttacattcta aggagcctag 7860

acatttgtga atggattaca ttataagagg aggatgtcta cttaagtagg catgaacgcc 7920

tgtgcattgc accctatgag ttccatcagc attccatgat tggagtatga agaacagcat 7980

tatagacatt acccagaacc ttagtggttc tagaatgcca agataaaaca atctaacctt 8040

ctggatagta gggataaatg ttcctatatc atcagaattc actggtgccc tgaggatgtt 8100

accctgctaa ctgacaattc acaggacatc acatggattc tgataagttg cagaaaagag 8160

gagatgcatt caattggtcc tcctccttct aagctgcaat attaggtgca tccaatttgt 8220

gaacttcaat ttagattaca atagacatga ataatctgaa ttcatgtagt acatattttt 8280

gttttaatat gagttaccat tgttcagaaa attaaataca catgatcaca tattcctaca 8340

tagtgctgtt agtttttcac atctctggga caatattcca aatatctcct tcattagtga 8400

aaatatcaac tactgtaaag cttagctaac atgcctttgc aggaataaga acatcctgga 8460

ttgaaagcta cacagggaga tgtaaaactt tctaagcaca cacattctcc atccattagg 8520

atcatggtcc atgagatttt tctctctctc ttcttcccat taaatgcatg tacatgcagg 8580

ttgggaaaca gattgtgttg cagaatacat ttgcttgatt tccacttcct tctcaatgca 8640

aatatttttg aagtgttaat tttgctgtga gtaccacagt ggttcttgct ctttctgttg 8700

actcctgtct gtgaatgttc caggaattca cacatggaca cacgtggggc tgcatctgag 8760

ctccagactc actgttgtcc ttctgtcctc agctgctctg gcccaggcac agcctcgtga 8820

attcaacaaa gaccctgatc tctcttgttt acacctcatt acaaatggga actgttagag 8880

gtggacccaa ctgcatttcc atgaggaaag cacatgagtt tgagagggtc gttgatgata 8940

aggtagaaac aactttaatt cataggctga gatatcagtc atcacctcca gataaacaag 9000

agccatttct tcctgcatct gagccctgta agcacactag ctttaggaat atgttactgc 9060

tgaagtcaga ttgggcaact tcatagtata caatagaaaa tctacctgca gatgagttca 9120

gaaccagcag ggggcacaat ggggccaaga atccctagca gagagatgtg gtgtgtgtgc 9180

aggggactct gcatcctctg tggtttcctt tcttaactta catgtacctg tagtgattga 9240

catgtaacgt ttccacgctc aaacactgtg aagatacttt gctaaacact tcaaagattt 9300

atgttttctt gatgtgtgca tgtgtgtatt cttttttgtt tttagacaca gggtttctct 9360

gtgtagtcct ggctgccctg gaactcactc tgtagaccag gctggcctcg aactcagaaa 9420

tctgcctgct tctgcctccc aagtgctgaa gttaaagaca tgtgccacca ttgcctggcc 9480

atgtgtgtat tcttgatgca ctcttctgtt gacagataca cagtttattt ccataattta 9540

tttattgtga tggtgctgca ataatcactt atgtacaaat gtttctgaag tatatttagt 9600

tttggtcatt tgggtgatta tttttttctt tctagtatat agcattttgg aaaggtagat 9660

attaattgta tgtatgggaa ggaggctgta aattctaata acttagctgc ttttgaaatt 9720

tgtcctcaat tctatcatcc ttgtaaccac cttaaatcca tctattagcc ttgtcacaag 9780

tgagccactg tctcaggctg caaatctttt tatagattag gtcgtgatgt tacatccaca 9840

gcctctgcac aatgctcagg ggtgggatat gggatgaatt ccctcagaca gcattaggac 9900

ttggatctca gcagactgat tcttgaccca aatgtctctt cttctctagc aggagtaagt 9960

ccttatctaa gatgtactct gctcatgaat atgcaaatca attgagtcta tggtggtaaa 10020

tatagggatg tctacacccc tcaaaaactt aagatcactg tcgtcttcac agtcacagga 10080

gtacacagga catcaccatg tgttggagct gtatcatcct cttcctgtta gcaacagctg 10140

cacgtaaggg gcttacagta gcaggcttga ggtctggcca tacactcatg tgacaatgac 10200

atccactctg tccttccctt cacaggtgtg cactcccagg tccagctgca gcagtctggg 10260

gctgagctgg tgaggcctgg ggcctcagtg aagatttcct gcaaggcttt tggctacacc 10320

ttcacaaacc atcatataaa ctgggtgaag cagaggcctg gacagggcct ggactggatt 10380

ggatatatta atccttataa tgattatact agctacagaa ccagaagttc aagggcaagg 10440

ccacattgac tgtagacaaa tcctccagca cagcctatat ggagcttagc agcctgacat 10500

ctgaggactc tgcagtctat tactgtgcaa gacacagtgc tacaaacaca tcctgagtgt 10560

gtcagaaacc ctggaggaga agcaagcaga gctggaatgg agatgacaga aagattatca 10620

tttagacttg ctcagaaaga gaaattttga atgcccattt attgcctctt ccttacagta 10680

ctatagtgcc tgtttttgtt gacattttca aactaatttc caaagtcact accacaattt 10740

acaatcacat aaaaagcaag caaggataac attattttct gtgcttactt gccatttata 10800

ttcttgctta ttctcatctc actgaggtca tattgggaca ttaaatttct ggggttactt 10860

tttattaaaa atttttcatt attcattcac tttacatcct tctagtcttc ctctcacaca 10920

tgccctatcc ctttctcctc tgagaggatg gagccctccc taccctcgta tccccttacc 10980

caggcacatc aagtgtctgc agtactagga atattctctg tcaatgctgc cagacaaggc 11040

agacaagtta ggggatcagg attcacagga aggcaacagc ttgagggaca gcccccactg 11100

aagttattgg tggattcaca tgaagactga gttgcacatc tgctacatat attcaggggt 11160

cctatttaca gctcaagtag actcttgttg gtggtttagt ctcttagaac cccaagtgtc 11220

caggttagtt gactctgtgg gtcttccttt ggagttccta tcccctccag atccctcagt 11280

tcttctccca actcttccat aagacacccg taggtccatc caatgtttgg ttttgggttt 11340

ttctgcatct gcttcagtca gctgctgggt ggagcatctc tgaggataat tatgagaagc 11400

tcttatgtgc aagcataaca ggatatcatt attagtgtca gggactggtg cttggccatg 11460

ggatgggtct caagtttggt cagttatttg gccattccca cagtctctga taatctttgt 11520

ccctgcattt cttgtagaca ggaaaaatat tgggttgaaa gttttgtggg tgggttggcg 11580

tctctattgc tccactgggc ttctttctgg atataggagt ttgcctcttc aggttccata 11640

ttcccaaagt agtgtgtcac actaaggtca ctcccataca gagggacact cattctcttg 11700

ccacgtctct gtccaccttc attggacctg aggttcctga atcatacaga actgcatgtg 11760

tgcaaccaca cagaacaagg ctatctatca gaggcctacc ataccaggac catcaaggtt 11820

caccttactc ccaatactga ctacaaaaag aacatcaagg accaatgcag tctatatgga 11880

taaacacact tgaaagaaca caaacaagat tgagggcaac atgacacctc caaagcatac 11940

ctaaccgagt acagcatgcc ctggatatcc taacacaatc aaaacacaag aaagttacct 12000

taaatccagt cttataaagg tgatgaaggc ctttaaatag gaaatgaatt aatccttagg 12060

ataatacagg acaatacatt cgaacagata gaggtcttta ggaggaaaga aataaatccc 12120

tcaaagacat acatgaaaat acaattaaac aggtgaaagt aataactaca atggtgtaag 12180

acctaaaaat ggaaatagaa gcaataaagt aacacaaact tagaatcttg aaggtggaaa 12240

acctagagaa caggaatact agatgcaagg atgatatctt ctaggtccat ccatttgctt 12300

gcacaattta tcatgtcctt gcttttaata gttgaacagt atttcattgt ttaaatgaac 12360

cacatgttct gtctccattc tctggatgag ggggtgagca agtttttcca cattctggct 12420

attacaaata gagctgctat gaacctagta gaaaacatat cctgtgtatg gtggagagtt 12480

ttggagtata tcaccaagag tgttatagct gggtcttcat gtagaactat tcctaatttt 12540

ctgagaaatc ccaagtcaga tttctagaat ggttgttcaa gtgttcactc caaccatcaa 12600

tggaggactg ttttccttgc cagcatgtgc tgtattttga gtttttgatc ctagccagtt 12660

ttatcctgca tttcacactt agatatggac tatggtacag gacagagaga aaccaacctt 12720

ctactcacca ggatattcta cctgctacca atttatttat ttatttattt atttatttat 12780

ttatttattt atttatttat attagagaac aacaccatgc agtttagaag aagtactaag 12840

acgtcagtga tgttatactg tgcctaacct tgcattgtac aatctcagct ttcaggtaag 12900

acagtgcatg actcttatgc agtgccaact gttttctgat tgtatttatg gtctattgcc 12960

taggaatgac ctcctctcaa ataaacatgg tcaaaagccc atggcctgag atgacagagc 13020

ccctagtaga ccctagttgt atttctgaag tttagatatc ataatgactt ataaatactt 13080

atgtttatac aatagattag agctgctctc agccatgacc aaggagcttc tgtgttcaat 13140

gaataatgat tgatgcagac attcgtgagt ggtcaaagtg gtgagaatga ttagagagtc 13200

ctcagccaca caagcgttaa tgatatgaac tttccaatat attaactgta ttaatgaata 13260

aatgcagaca tcatatgaga tctcattagt agttcttagg tattgcattt ttatatacaa 13320

ttatgcatat cagtacatta tagtgtataa aggaaattgt ctagcataat agagaaaaat 13380

aggacagtca agaaacaaaa gagtagaaat tatgggtgaa atatgcagtg tgaaatattt 13440

acatgaaaat tttaaccata tgtaaaattg ttatttttgt ttttcagaat gagtttgctc 13500

attctttgac atttttattc ctgtgtgaaa tatatcagga tcatatgtat cccattctga 13560

tggtctgact tccactggga atttccaata tatctcttcc aactaactga ccagtttctt 13620

tttttcttat tttctctctt tctcgttttg ttttgctttg ttttgttttt caagacaggg 13680

tttctctgtg tagctctggc tgtcctggaa ctcactttgt agatcaggct ggcttcgagc 13740

tcataaatcc acttgcctct gcctcctgag tgctgggatt aaaggagtgg ctaccacgcc 13800

cggctagttt ttttttttct tataagaaca acatttactg gatggtcact tacatattca 13860

gaggttcagt caattattat caaggcagaa gcatggcagt ggtccagtag tcatggcact 13920

ggggaaggag ctgagagatc tacatcttgc tccaaaggga aagaggaata gtctgacttc 13980

catgtgtttc agaggagggt ttcatttccc acccccacag tgacacactt cctccaacac 14040

ggccacacct cctaatattg ccactcttgg atcaagcata ttcacaccac aaaggaaagt 14100

ttagagataa acattaagaa aattaatgaa gtcattttat cttatatgct caacatgact 14160

agtacttaaa accataattt tacatgtaca atatttcatg gcataacata ttttttatat 14220

ttttattaga tattttcttt atttatattt caaatgtgat accctttccc aattcccctc 14280

caaaaatccc ctatgccttc ccctcatagc cagctcccaa acccacccac tcctgctttc 14340

tggtcctggc attcccctat actggggcat aaaaccttca caggaccaag tgcctcttct 14400

ccattgatgg ccaattaggc catcctctgc tacatatgca gctagagcca tgagttccac 14460

catgtgtttt ctttgattgg tggtttagtt ccagggagct ctgggggtat tggttagttc 14520

atattgttcc tcctatgggg ctgcaaaccc tttcagcccc ttgggtattt tttctagctc 14580

cttcattggg gaccctgtgc tccatccaat ggatgagtga gcctccactt ttgtatttgt 14640

caggaactgg cagagtctct caggagacaa ttatatcagg ctcctgtcag caaaatctcg 14700

ttggcatctg caatagtgtc tgggtttggt ggttgtttat gggatggatt tctgggtggg 14760

gcagtctctg gattgtcatt cctttagtct ctgcttccac ctttgtcttt gtaactccat 14820

ccatgggtat tttgttcccc cttcaaagaa ggatcaaaat atccacactt tagtcttcct 14880

tcttcttgag tctcatgtgt ttttcaaatt gtatcttggg tattctgagc ttctaggcta 14940

atatccactt atcagtgagt gattatcatg tctgttcttt tgtgattgag ttacctcact 15000

tagcatgata tcctccaggt ctatccattt gtctaagaat ttcataaagt cattgtcttt 15060

aatagctgca tcgtactcaa ttgtgtaaat gcaccacatt ttctttatcc attcctctgt 15120

tgagggacac ttggtttttc ccagcttctg gttattataa ataaggctgc tatgaacata 15180

gtggaacatg tgtccttagt acatgttgga acatcttctg ggtatatgcc caggagtggt 15240

attgctggat cttctggtgg tactatgtcc aaatttttgg ggaaccatca aactgatttc 15300

ctgagtggtt gtacaagctt gcaatcccac accagcaata gtggaatgtt catctttgtc 15360

caagtccttg ccagcatctg ctgtcacctg agtttttgat cttagccatt cttactggtg 15420

tgaggtggaa tcttggggtt gttttgattt gcatttccct gatgtttaag ggttttgaac 15480

atttttaggt gcttattaga catttggtat tcctcagttt agaaatcttt gtttagctct 15540

gtaccacatt tttgaatagg gttatttggt tttctggagt ctaacttctt gagttctttg 15600

tacatattgg atattagccc tctatcagat ttagaattag taaggatctt tccccaaact 15660

gttggtggtt cttttgtctt attgacagtg tactttgcct tagagaagct ttgcaatttt 15720

atgaggtccc atttgtcaat tcttgatctt atagtacaag ccattggtct tttgttcagg 15780

aatttttccc atgtgtccat atgttcaagg catttcccca ctttctccac tacaagtttt 15840

agtgtctctg gttttatgtg gaggtccttg atccacttag atttgagctt tgtacaagga 15900

gataagaatg gatagattca cattcttcta catgctctct gccagttgag ctagcaccat 15960

ttgttgaaaa tgctgtcttt tttttccccc actggatggt ttttagctct tttggccaag 16020

atcaagtgac cattggtgtg tgggttcatt tcttggtctt caattctagt tcactgactt 16080

acctgtttgt cactgtacaa ggaccatgca gcttttttca caattgctct gtagtacagc 16140

ttgaggtctg ggatggtgat tctaccagag agattctttt actgttgtga ataatttttg 16200

ctatcatagg atattttttt atttcagatg aatttacaaa ttgctctttc taactctgtg 16260

aacaattgag ttggaatttt gattgtgatt gctttgaata ctcaagatat aatttacaaa 16320

acacatgaaa cttaacaagg actactaaag tgcagatact tcgatccttc ttagaagggg 16380

gaacaaaata cccatagatg gagttacaga gacaaagttc ggagcagaga ctataggaac 16440

gaccatccag aggtccacct ggggatccat catgtaaaca accacccaaa acagacacta 16500

ttgtggatgc caagaagaac ttgctgacag gagtctgata tagctgtctc ttgagaggct 16560

ctgccagggc ctcagaaagt ggaggctcac agccatccat tggatggagc acagggtccc 16620

caatgaagga gctagagaaa gtactcaagg agctgaaggg gtttgcagcc ccataggagg 16680

aacaacaata tgaactaacc agtaccccca gagctccctg ggactaaacc accaatcaaa 16740

gaaaacacat ggagggactt gaagctcttg ctgcatttat agcagaggat ggcctagatg 16800

gtcatcaatg ggaggagagg tcaatggtcc tgggaaggtt ccatgcccca gtatagggga 16860

atgccagggc caggaagcag gagtgggtgg gctggggatc agggaggggg agatgatagg 16920

gcattttcag tggggaaact aggaaagagg ataacattta aaatataaat aaagaaaata 16980

tctaattaaa aaggattacc tatgtgcatg ggagctcatg agcagcaggg gtcactctaa 17040

ggccaataat ccacatagag cgatgagctg tgtgtgaaca ggactctgta tcctctgtgg 17100

tttcctttct taagtgtatt aactgatctg tccagctgtg attgacatgt gatgtctcca 17160

tgctcaagcc cagtaaagat tctctgttaa ataccttaca gacttatgtt tacttgtttt 17220

tatttgcttt tcatattttt ttaaaaagtc atacaatgta ttctaataac tcattctccc 17280

atctccaatt tattctaagt ttttcttaac tcatccaacc acacactttt taattctgat 17340

aaagcacccc cccccccaaa aaaaaaccca accaaccaaa aaaaaaaaaa gccaaggaat 17400

ttaaaagggg attgaaagca aataaaaact aaacaaaaaa gtaaaaacta cacacacaca 17460

cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacactca cacacacaca cacacaccac 17520

acacacacac acccatgcac gaacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 17580

acacacacac acacatggaa tccagtaaaa ccacaactct ttacccatga tacacaggaa 17640

aatataagtc aaacaaacag aatggaagaa ggtggtatta taaaaatgtc tgcacaaata 17700

ccattaagtt cattttcttg ttggctacca actgctaagc ctgtctccct tgattaattg 17760

tgcttatcat cccctatgaa ctccattgga ggacactaat ttttccttct gtctccagga 17820

attgaagtgt tgcagaactc tcagtagctt tatttacctg cacaatacag cctctaatcc 17880

aaccagtgaa aattaccaca tgagagactt ccaaatgaaa gaacaggtaa agttgtctac 17940

tggcaagctt agtaatatca tgtaaatgcc ttagaattta atgacatatg tcatcctctg 18000

aggttaataa atccattttg gtgcatatat accctgaact caccactaac ataatacaac 18060

aattaaaaaa ttccaacatg gatgcagagg aatccctgag ggacatttgt tgatttgtga 18120

gcacaatata attatttttt gggggggaaa tgtctgaatg ttaactcttt accagtgata 18180

atctattcta ttaatgtgta cataggtagc actaattaaa atcactgtgt tatcaggtaa 18240

tgaaacagag gaagtaggat gctgggaaac agacttttgg aaggtcccaa gggaaaccac 18300

agggacctag tggtgataga ttatggtgag agtcctgaga gtggtcatag attatagcat 18360

atttcatatg caattgaaaa tttcaaagaa tgaaaatcct tatgaaatat agaaataaca 18420

actttactta tgtacatata cttcatagta caatttttac actgtgcata tttctcctgt 18480

aacatctggt tcctcctatt ttcctttatt ctcctagaca atttcactga tacaatctca 18540

tgtttttgta taaatagttg tatataacta ttaaatacat aagctgttaa tgagtcttca 18600

ttaatgtctg tgattttttt attgtcttaa ttaatactat tatctctaat tgcatccaca 18660

ttttcaaaag caatgtaaat ttcttactca tttctgttca aaaacttctg ttgttgtatc 18720

attaccatgc cttagtgata aaatcctttc ttgacacatc tatagctatt gctataattt 18780

agttattgat gatcctcctg caataatcat tgataggtaa atattttaag cacttttact 18840

tttagtcatt ttagtgagat ttgaagtagt atataacctg ttggaaaggc aaatattaat 18900

tccatatatg tgaaagaaga cgctaaaact aaaaacatta gccactttta gatatcttct 18960

ccttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct 19020

tcttcttctt cttcttttct tcttcttctt ctccttctcc ttctccttct ccttctcctt 19080

ctcctcttcc tcctccttcc ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc 19140

ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttccttcc 19200

ttcctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc tttctttctt tctttctttc 19260

tttctttctt tctttctttc tttctttctt ctcctcctcc ttctttttcc ttctccttcc 19320

ccttcacctt ccccttcctt cctctttccc ttccccttct ccttctcctc aatctacaat 19380

ctgttaacat attaacatgt cccagagtag agcaacagac tcaggtcaaa catctactga 19440

gaaatttgcc catgtagtta acatctacag catctgtcta ggggttacaa aaagtctatg 19500

ggatacaatt cctcagaaag gaataggatt tggacctgag catactgctg cctaacacat 19560

gaaatggcag ttcttctcca gctggactag gtccttaact aagaaatgca ctgctcatga 19620

atatgcaaat tacccaagtc tatggcagta aatacagaga tgtccacacc ctgaagacaa 19680

cctatgaaca atgttctctc cacagtccct gaagacactg attctaggac cgaagttcct 19740

attccgaagt tcctattctc tagaaagtat aggaacttct cgcgcgtctg gcctccgagg 19800

cctccgcgcc gggttttggc gcctcccgcg ggcgcccccc tcctcacggc gagcgctgcc 19860

acgtcagacg aagggcgcag cgagcgtcct gatccttccg cccggacgct caggacagcg 19920

gcccgctgct cataagactc ggccttagaa ccccagtatc agcagaagga cattttagga 19980

cgggacttgg gtgactctag ggcactggtt ttctttccag agagcggaac aggcgaggaa 20040

aagtagtccc ttctcggcga ttctgcggag ggatctccgt ggggcggtga acgccgatga 20100

ttatataagg acgcgccggg tgtggcacag ctagttccgt cgcagccggg atttgggtcg 20160

cggttcttgt ttgtggatcg ctgtgatcgt cacttggtga gtagcgggct gctgggctgg 20220

ccggggcttt cgtggccgcc gggccgctcg gtgggacgga agcgtgtgga gagaccgcca 20280

agggctgtag tctgggtccg cgagcaaggt tgccctgaac tgggggttgg ggggagcgca 20340

gcaaaatggc ggctgttccc gagtcttgaa tggaagacgc ttgtgaggcg ggctgtgagg 20400

tcgttgaaac aaggtggggg gcatggtggg cggcaagaac ccaaggtctt gaggccttcg 20460

ctaatgcggg aaagctctta ttcgggtgag atgggctggg gcaccatctg gggaccctga 20520

cgtgaagttt gtcactgact ggagaactcg gtttgtcgtc tgttgcgggg gcggcagtta 20580

tggcggtgcc gttgggcagt gcacccgtac ctttgggagc gcgcgccctc gtcgtgtcgt 20640

gacgtcaccc gttctgttgg cttataatgc agggtggggc cacctgccgg taggtgtgcg 20700

gtaggctttt ctccgtcgca ggacgcaggg ttcgggccta gggtaggctc tcctgaatcg 20760

acaggcgccg gacctctggt gaggggaggg ataagtgagg cgtcagtttc tttggtcggt 20820

tttatgtacc tatcttctta agtagctgaa gctccggttt tgaactatgc gctcggggtt 20880

ggcgagtgtg ttttgtgaag ttttttaggc accttttgaa atgtaatcat ttgggtcaat 20940

atgtaatttt cagtgttaga ctagtaaatt gtccgctaaa ttctggccgt ttttggcttt 21000

tttgttagac gtgttgacaa ttaatcatcg gcatagtata tcggcatagt ataatacgac 21060

aaggtgagga actaaaccat gggatcggcc attgaacaag atggattgca cgcaggttct 21120

ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc 21180

tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc 21240

gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc 21300

acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg 21360

ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag 21420

aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc 21480

ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt 21540

cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc 21600

gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc gatgatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc 21660

tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg 21720

ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag 21780

cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg 21840

cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gaggggatcc gctgtaagtc 21900

tgcagaaatt gatgatctat taaacaataa agatgtccac taaaatggaa gtttttcctg 21960

tcatactttg ttaagaaggg tgagaacaga gtacctacat tttgaatgga aggattggag 22020

ctacgggggt gggggtgggg tgggattaga taaatgcctg ctctttactg aaggctcttt 22080

actattgctt tatgataatg tttcatagtt ggatatcata atttaaacaa gcaaaaccaa 22140

attaagggcc agctcattcc tcccactcat gatctataga tctatagatc tctcgtggga 22200

tcattgtttt tctcttgatt cccactttgt ggttctaagt actgtggttt ccaaatgtgt 22260

cagtttcata gcctgaagaa cgagatcagc agcctctgtt ccacatacac ttcattctca 22320

gtattgtttt gccaagttct aattccatca gacctcgacc tgcagcccct agagaagttc 22380

ctattccgaa gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cctagggttt caccggttaa 22440

atggcatgtc ccctgttagt ggttcatgca agcagaagct gtatcctgtt tgacaaagat 22500

tcagcatgaa aggtcctgct acctaaaaaa aaatagacag atgagattta attaacctaa 22560

ataatttttt tcacaacaac agagtgaata cgcaatttac agaatgacag aaaacttttg 22620

cacactttgc ctgtgacagg gaactaatat gaagaatttg caaggaactc aaacaactct 22680

acaacaacaa cagcaacaag aaccaaataa ctccgttaaa atgagcaaag gacatgagta 22740

gacattttca aaagaacaca tagaaatgga taataaatat ataaacaata ctcaacatca 22800

ctaaccatca gggaaatgca aattaaaacc acaataagat atcatcttcc accagtcaca 22860

atgactatta ctaaaaactc aaataatatc agatgttgct gaggatggga aatgaaggca 22920

actcttagac attgttgatg aggatgtaga tgagtacaac ctctgtggaa aatggtatgg 22980

agatttccca gaaaactaga aatagaactg tcatttggtc cagcaatccc actactgggt 23040

aactacccaa aggaaaataa actattattt caaaaagata cccaccttct atgcttacca 23100

taaaactact ctcaatagca catatgtcaa actgagtgtc tgccaaccga tgattttata 23160

aaagaatata gcatgtatgc acaattcaat actagtcagc cacaataagg aatgaaactg 23220

tgtcttttgc agcaagatgc atagaagtgg gggacaatat aattagtgaa ctaactcaca 23280

aacagaatgt cacatgtcac acattattac ttgtaagtgg gaggtaaaca gcgtgtacac 23340

aaggatttgt agagagaaat tacacacatt ggagacttac aaggatgggc gggcagaagg 23400

tgggagcatg atgagtcatt acataacagg cacaatataa aataattaag aattgaccaa 23460

tgatcttaaa attaaaatgt agaatatgat caataaatga acttgatatt agttgacctc 23520

attaaattta aaaacttttt ctactcaaat gactgtaaga aaatgaatgc ccggttacag 23580

atgagaaact gtttgcgagt caaataacca ccaatgtaac tataataaga aacttcagaa 23640

ctcaactgtg aataaaaaag aaacaactga tggataaatt aggcaagggt ttctacagac 23700

atttcgtcaa agaagatgtg cagatgacac tgaagcatat aaacaggatc tcaacaggat 23760

tttccgttag agaaattcaa atcaagcccg caaagagaca ccactgtaca ctttttaaaa 23820

tggctgaaat taagaagaaa tacagataac atcaatgctg gtgagcatac caggttgcta 23880

gaggctaaaa cattgctaac aggaatgcaa aatgaaacag atactcagga aaataatttt 23940

tagttttctc taaaatcaaa cataccctta acacctgaat atttgcatca gagaaaaaca 24000

atcttacatt cacgcataac ttctattcaa atattcaaga tatcgtgtgt atgtgtgtta 24060

gaaagtaaaa ataacataaa tgtctcaaaa tttgaatagg tgaagaacta ggaagcatct 24120

ataaattgaa taccaccagc aataaaaaaa taacaagtga ccgatacata aactattaca 24180

ggtgaactcc agacattgtg ctaagtgaga gaagccagtc tcaaagatca aagggacaca 24240

gctgtaagca ccacggtcat cctcaggtgt cagtggtttg ggctggactt tctgtgtctc 24300

tttcctgacc agacccagat attgagctcc accacttgca gatggaaaat cctattttca 24360

accatgcagt gaggtttgaa ctgcttcaca gactgaacga aacaaacacg ggctcctttg 24420

aacagcgtcc ggcatttgtt ccaaccacaa gagaacgtcc ctcagctctc ccacctcctc 24480

ggttctctcc tgcaagccag cagccctgca gtttagcctg catctcccgt gcatccaccc 24540

atctccctcc aagcaccttc ccccacaccc tccactgttt ctgagagcac aggcaggctt 24600

tgaacttttc cgcattctgt tgttattgaa gttaggatgt ttaggaccaa cttaaggatc 24660

atattttatg actgaattcc agtgcccctt ctctcctggg acagagtgca taaccaagtt 24720

tctgcaggtg gagacgaagt tgagcttttt tcttcctcag cctaggagat gagcgctaat 24780

tggagggttg gcagaagctt cccaccatcc cagcactttg gttctggtgg ggcggaatcg 24840

gtgccatagg gcagagctag aaaccgcgga ctgaatgttc ccagtggcac tggacccagg 24900

gcagagcctc catccacgag tggggctcta tggaagaagt gagtctctgg ctctcagtag 24960

ctctcgtcca gcactgaacc tcagcatcat gtgctgtgtg cagggtcaga gggccaacgt 25020

actggcccct gggaaagcgt ttcctctggt gggagttggt agaaggtgtc ctgtcttctt 25080

ggctgcatct gtccgcagtg gagtttacat catgctgagc tgggatgtgg aaggaaggaa 25140

gagcatctta gatcaaatat gatgactggc cttactgagt tttctagatt ttcctgaata 25200

aatgtttctt cactcactgt gtgctgttag agtctttcca aacctgtaat ttcccaaaat 25260

aattttcact ggtctcatga gggcatggat tcattgagcc cctcatgctg tcaaagagaa 25320

atagaactgt tttttttttt cacttcatag cgaacatcca tgggttatca aataatgggc 25380

tggcttttct tccaacactt tacagacacc atcaattttc ttcttgctta taaggtttta 25440

accagaagaa tgctgtcatg gtcttttctg ttcttttgga aggaatgccc cctctactca 25500

cctccacttg tctgcctgta tttctatttg tctttggttt tcaacaattt taataagatt 25560

tacctaaatg tgtgtggggg gagcatgggg tgttattctg ctgttctgtg ttctctgaga 25620

tgcatggatt caccatttac tctgtctcca tttttgtgaa aacaattaga aaaaaagtca 25680

gtatgagccc agaaacaagc ctccctgaag tgggcacagg accacctggg ggcgctcagg 25740

acccactgaa cacaagagcc agccccaggg caggtgcaga tgcgggttaa gttctggttt 25800

cctgtcaacc ctgtggcttc ctctccataa aacagtttcc tttgtggcat atctctggat 25860

tccttatcct gttcttcctg tgaagtctct gaagaagaaa catttgtcgt aacaagagaa 25920

aaactttctc acatgcacca aaggcagagt cacctacagt cacttactcc tgtttctcaa 25980

tgtcaataag ttaccaatgc ttctgaagtt aatcagctaa atctataaaa ggtgcggtgt 26040

ttaactcagc attacagccc agctcaacag aactccaaag gtcagccagc agcagccagg 26100

aaaaagtgca tgctgggcat tggggcagag ggagttacca tccagtgcaa gagaagaaag 26160

cccccgtggt ggtcattgtc aggactccaa tcccacagtt ccaattgtag gtgatgccag 26220

gcaaaggaag agagacccca ccaatggtta gtgtggatgt cgagtttgat gtttccacac 26280

tcacactcca ggtgaatatg aaaagattta ttagctctat ttctgaggtg tctgctgaga 26340

gcagcacagt cctctcaaga aattacagat tggaatttcc tcagtagagc aggaaaggag 26400

gctggctcag ggctttataa tgatttggtg gtggggtcgg cggggggggg ggggcgtttc 26460

tactcaggag aaggagcttg tgtgatttaa acctcacact gacatcacat gagggagctt 26520

ccatgatttc ttactagatt tcccatgtgt gggggacaag gatgagggag aataaacctt 26580

aattcatcag catcaaggca ccaaaaatag gacctgacac tttattctcc ctagcagctt 26640

aagaaaatga gtgaaaaaga gagataagag tccacccatg tgctgaaaag catagctctt 26700

ggtaaagacg agaaaaaggc actcctacga agaaggggtt gggcagaagc tttatgctga 26760

agggtttggc taaagagaca taatcaacag gttacaggag gggctactga tgttcatgga 26820

ggtggtcctc acacatgcat actgaacaaa catgtctgta acgtatgacc cctgttcact 26880

taccagtgga gacttagcat ttaaattcat tccagtcagg ccctatgtgc aaacagcaga 26940

agcagagaca caaaggtact cagggtgcag cctctgtgaa cggccagagc caggccatgg 27000

tcagcggtct cggattagga gaaagttcct gatatcactg tagtgttcaa tcaaagctgg 27060

ggttatggtt tgtggaacag gggtcagttc atcagggggt gggctgcaat tgtcttcata 27120

gtgcttgtct cagtgccggt gcttactgag ccactagaga aaaaggttta attgagcttc 27180

tttaaaatca acattttgaa ttatttatca gacgtttcaa atatgtcatg ttgtttagat 27240

tctattgctg gagagttaag gtgatatttg gggttttgta actctgtttt ttcatacttc 27300

ctgaattgct tatctgtttg cttttcatta gctaaactat cgcttcttct tattttttaa 27360

ttcattctga ttttgatgaa tatttaattc cctttagaat gtgaatataa tgtacattgt 27420

gtgggtattt tgattttggt tcttggttta cttagtggca aagactctgt aagagttcct 27480

tgtctataga tagccattat ttagtggctt tctgaaatgg tggttttagt accaaagtac 27540

tggacttgtg agtaggctca ctgccccctg caggtcctag atagtggagg cctcaggaac 27600

tgtttctcat ttggaatgcc tttgtttcag cagattttgt gttgggttgt taagttcacc 27660

ctccacatta gtagatgtcc ttacagatta gagctgactc tggtagaagc agttgagtgc 27720

atgcttgata tctgtgcaca gggagaagct ctctgttgcc tcaggcgatg gactggtcta 27780

tgaaatgcac agtgacctga gttccctgct cagcccctga gaggtggacc aagctggaca 27840

cacatgagcc accgagcctg gcaagcaaaa gcgccagcct tgatggaaat ggcgagctga 27900

gcggcatcta ctcagtgtgg tttcttttgt tattaagagc tttagtgtgg tggctgtttc 27960

aaattcccgt tgtagtagta atatactggg tatgtgagca ggcccgtggt cttttgcggg 28020

gttggaatca ccgaagtaat gagaagctaa tctcattttc aactgctgta cactggtggt 28080

attgagtttg tatgaggtca tgcagtttga acgtcaggcc agtaggtggt gctcgcaggt 28140

aagagccggc tatggtggca gcagaagggt ttatgcttta ctggtgatta aagtgggaaa 28200

cttggcgtgt tccagatctt agagaaaaga tttttagtta tttctcattc aacctgatac 28260

tacctgaaag tctctcgaat gtaactttta ttttgtcgag atgggttctt tctataccca 28320

ttttttatgt tttttttgtg aaaggatgtt gtttcatcaa atgcgttttc agcatcaatt 28380

gaaaaaagtt atatgtggat taaagatcaa aatgtaaaac ctaacactat aaaacctctg 28440

gataataaca taggaaacag aatttaggag gtaagaactg acaaaggttt tataatgaaa 28500

atgctagaag tagttgcaac aaaattgaaa attgacaaat gggacctaag taaattaaag 28560

aacttctgta cagcaaaaga cactatcgac agagtaaaca ggcaacctac agaatgggaa 28620

ataaaatatt tgcagcctat acatctgaca aaggtccgac acttagtata tacatggaaa 28680

tttaacaaac atacaagaaa taaaaagtga ccaaaggaca tgaaaagaca cttcaaaaaa 28740

gacctacatg tggccaacaa gcataggaaa aaatgctgaa tatcactatc attagagaaa 28800

tacatatcaa aacctcaatg aggtaccgtc tcacatcagt caggatggct aatcttaaaa 28860

aaaaaataac agatttttaa ggttacagaa aaaaggggaa atttatacac ttttggcggg 28920

aatataaatg agttcaacca ttgtggaaag cagtgtggtg atccctccaa taacctaaaa 28980

cagaagtttc atttgaccca acaatcctac aactggacat atacctaaag gaatataaac 29040

atgtaggttc actgcagcac tatccacaat agcatagaca tggaatttac ctaaatcccc 29100

atcactggca gaatgataga gaaaaatgtg gtacatacaa ccatggaata ctatgcagct 29160

aaggaaagaa tgaaactatg tcctttgtag gaacatgatg gaactggcag tcaatactct 29220

tagaaaacta attcaggaac agaaaaccag atattatata ttctccctta tttgttggag 29280

ataaataaaa gcaaatattc ttccagggcc tgagtcttcc ttattcaaca agtcattcta 29340

aattaagtgt tcagcaagtt gctgatactc atctaaatat tctatttcat ctgggccact 29400

tacatcactc aaaaagcaat gagagctata tttctaaggg gggttctagg ataataaata 29460

cctgaatagt gagaatatga aggatatgga aactgggcca cttatatcac tcaaaaagga 29520

atgagagcta tatttataag gggggttcta ggataataaa tacctgaata gtgagaatat 29580

gaaggatatg gaaactgggc cacttatatc actcaaaaag caatgaaagc tatatttaca 29640

aggggggttc taggataata aatatctgaa tagtgagaat atgaaggata tggatggttt 29700

ttttttaact caatgggcac ataactgtgg gagatactat attcctatga agaaggtatt 29760

cagacttcag agataagtaa tgtttcctac attgtgcttg tgacttggaa gcagtggatt 29820

gaagagtgtg ataagtgccc agaccaagca gaacagaaat cagcatgtaa agatgatgat 29880

ctatggatat gatctaaaac catgtaaata cttcaaataa ttctatttaa tgcagtttga 29940

aataaaacac aaacttattc aaaatacaaa ttacttggta attattttgg gagctatgag 30000

ttcaccaaga aactcaaatt cctatttcta tttcaacccc tgattcctac tgtcaatggg 30060

agggaagtct cagaaccaat cacacatcag acggcaaatc tgtcaaccaa gagtctttcc 30120

actgaaggac ctgggaggtc aggaccctca ggaaagtgct ggggaccctg tcttgggagt 30180

gcccagcaga tctcagaact ctccatgggt cctgctggac actcatgtag ggtaacgagt 30240

ggccaccttt tcagtgttac cagtgagctc tgagtgttcc taatgggacc aggatgggtc 30300

taggtgcctg ctcaatgtca gagacagcaa tggtcccaca aaaaacccag gtaatcttta 30360

ggccaataaa atgtgggttc acagtgagga gtgcatcctg gggttggggt ttgttctgca 30420

gcgggaagag cgctgtgcac agaaagctta gaaatggggc aagagatgct tttcctcagg 30480

caggatttag ggcttggtct ctcagcatcc cacacttgta cagctgatgt ggcatctgtg 30540

ttttctttct catcctagat caggctttga gctgtgaaat accctgcctc atgcatatgc 30600

aaataacctg aggtcttctg agataaatat agatatattg gtgccctgag agcatcacat 30660

aacaaccaca ttcctcctct gaagaagccc ctgggagcac agctcatcac catggactgg 30720

acctggaggt tcctctttgt ggtggcagca gctacaggta aggggcttcc tagtcctaag 30780

gctgaggaag ggatcctggt ttagttaaag aggattttat tcacccctgt gtcctctcca 30840

caggtgtcca gtcccaggtg cagctggtgc agtctggggc tgaggtgaag aagcctgggt 30900

cctcggtgaa ggtctcctgc aaggcttctg gaggcacctt cagcagctat gctatcagct 30960

gggtgcgaca ggcccctgga caagggcttg agtggatggg agggatcatc cctatctttg 31020

gtacagcaaa ctacgcacag aagttccagg gcagagtcac gattaccgcg gacaaatcca 31080

cgagcacagc ctacatggag ctgagcagcc tgagatctga ggacacggcc gtgtattact 31140

gtgcgagaga cacagtgtga aaacccacat cctgagagtg acaaaaaccc tgagggagaa 31200

ggcagctgtg ccgggctgag gagatgacag gggttattag gtttaaggct gtttacaaaa 31260

tgggttatat atttgagaaa aaaagaacag tagaaacaag tacatactct aattttaaga 31320

taaatattcc attcaagagt cgtaatataa gccaaattca cagagtggaa aaggcgcgat 31380

cgcggagcag gggatcctta gatattggtt ggggttatct caccttaggt ctgaatatgg 31440

ggttgtctta gactgttttg tgctgttaga atagaatacc caagactggg aaatttatac 31500

tgaacggaaa tttatttctc acagttctag aggctgtgaa gtccaagagc acaggtgcca 31560

gagcaagtcc aagagcaagg gaaagtccaa agcaagtcca ggagcatctg gcgaggacct 31620

tcttgctgtg tcatcacatg gcggaaggca agaaagagag caagaggggg ccgaactcac 31680

ccttttataa cagcaccaat cccacccatg aggtggggac cttatgacct aatcactctt 31740

catactgtta caatggcaat gaaatttcaa catgagtttt ggaggagaga agcattcaaa 31800

ccacagcaag ggtgctccta cctcctctct cagggcatct gcagaaagag ctgcaactgc 31860

acgtccttcc tccgtccatc ctccatccct tcccaatgtc cgtgcatatc ctgtgaccca 31920

ggaggtctgg catagggggt gctcctgcct taggtctgag gccctgtctg aagaggggta 31980

ggtgaggagg ccatctgatg gtctgggcca agacagtcac aggacgcatc atttatcatc 32040

aaggaggctg agggttgagt ctccaggtcc agggaactcc ccacaaagtg ggaaccctgc 32100

ccagctccac acagcctctg ctgggggacc ctgctctggt gcagagcctg gggacaggtc 32160

ttgagctcag ccagagtctg cctccctgtc atttaggaac taaaccaagc ggcaggatgc 32220

tggagcccag cccccatctg accttacagg gccaaggctg gggccctggg ttcccctcaa 32280

ggcgcagcag gactggagcc ccaggcagtg caggagtggc caaagctggg gcttcctcca 32340

gagcccccaa gcatcacggc accaagaagg gtaggaccct ggcctgagga attggcacca 32400

aagccccaga aactaccctg gacaccatgg agagaggcct ggaggggaag caccaggcac 32460

tgcctcccct tctgatccca cctgaggtgg ctgccaagcc cagagagccg ctctgatgtc 32520

ccccagccct gcagcccagg gatacctgta ctgtgcccct gggggacccc tggccagtct 32580

gtgcaaagaa gtcaccaccc tacactcaga gacagtgggg gtcctcgtcc cacatcctca 32640

gagcatggcc cggctgctgc agggatggtc tcctggtcct cagagcatgg cccggctgct 32700

gcagggatgg tctcctggtc ctcagagcat ggcccagctg ctgcagggat ggtctcctgg 32760

aggcccccca gtgctctatt gtcagggctc cctccacccc cccgcaccaa gagagagcca 32820

gaccccagca aggcttccag tggcttcagg tcacacccct aggctgaccc cagccccatt 32880

aacacctgcc tgagaaagct ccacgcacca gaactgaccg tctgctccaa ctcttgacct 32940

cccgttctca gggcgtctgc tgaaaaggct gcaactgcac atccttcctc cgtccgttcc 33000

cgatgtccgt gtgtctcctg tggccaggaa ggtctttctc gggacctgag agccgctccc 33060

tgaagtgtcc ccattgggaa ggatggggcc tgtgtctcca ggctctggga ggacagaatc 33120

ctgacctcaa cagtggccgg cacggacaca actggcccca tcccggggac gctgaccagc 33180

gctgggcaac ttttcccttc cccgacgact gagccccgag caccctccct gctcccctac 33240

cacctccctt tacaaggctg tggcctctgc acagatgata atggagcttg gctcattccc 33300

ctagagtcgg tagggagtta aggacaaaac tcagtttcct ccacctgaac tcaagtctgc 33360

ctatgtttac ctaatcacac ctggtggaca gtttggacaa acttgcacac tcagagacac 33420

agacacttct agaaatcatt atctccctgc cccggggacc ccactccagc agaagtctgc 33480

taggcactgg cctgggccct cctgctgtcc taggaggctg ctgacctcct gcctggctcc 33540

tgtccccagg tccagagtca gagcagactc cagggacgct gcaggctagg aagccgcccc 33600

ctccaggcca gggtctagtg caggtgccca ggacaagaaa gattgtgaat gcaggaatga 33660

ctgggccaca cccctcccgt gcacgccccc tcttgccctg caccccacag cccagccccc 33720

cgtgctggat gcccccccac agcagaggtg ctgttctgtg atcccctggg aaagacgccc 33780

tcaacctcca ccctgtccca cggcccaagg aagacaagac acaggccctc tcctcacagt 33840

ctccccacct ggctcctgct gggaccctca aggtgtgaac agggaggatg gttgtctggg 33900

tggcccctag gagcccagat cttcactcta cagaccccaa cccaagcacc cccttctgca 33960

gggcccagct catccccctc ctcctccctc tgctctcctc tcgtcgcctc tacgggaaat 34020

ccgggactca gcagtaaccc tcaggaagca gggcccaggc gccgtttaat aggaggcttc 34080

ctcacaatga aacttttaga aagccttgac tacaatgatg accttggtgt ggctgtgaac 34140

actgtcagct cccacagctg ctgcagcaaa aaatgtccat agacagggtg ggggcccggg 34200

gtcgtctgct gtcctgctca gcccacagca cgcatggagg atctgaggtg ccacacctga 34260

cgcccaggcc agaacatgcc tccctccagg gtgacctgcc atgtcctgca ttgctggagg 34320

gacaggggca gcctatgagg atctggggcc aggagatgaa tcctattaac ccagaggaaa 34380

actaacagga cccaagcacc ctccccgttg aagctgacct gcccagaggg gcctgggccc 34440

accccacaca ccggggcgga atgtgtacag gccccggtct ctgtgggtgt tccgctaact 34500

ggggctccca gtgctcaccc cacaactaaa gcgagcccca gcctccagag cccccgaagg 34560

agatgccgcc cacaagccca gcccccatcc aggaggcccc agagctcagg gcgccggggc 34620

agattctgaa cagccccgag tcacggtggg tacaactgga acgaccaccg tgagaaaaac 34680

tgtgtccaaa actgtctcct ggcccctgct ggaggccgcg ccagagaggg gagcagccgc 34740

cccgaaccta ggtcctgctc agctcacacg acccccagca cccagagcac aacggagtcc 34800

ccattgaatg gtgaggacgg ggaccagggc tccagggggt catggaaggg gctggacccc 34860

atcctactgc tatggtccca gtgctcctgg ccagaactga ccctaccacc gacaagagtc 34920

cctcagggaa acgggggtca ctggcacctc ccagcatcaa ccccaggcag cacaggcata 34980

aaccccacat ccagagccga ctccaggagc agagacaccc cagtaccctg ggggacaccg 35040

accctgatga ctccccactg gaatccaccc cagagtccac caggaccaaa gaccccgccc 35100

ctgtctctgt ccctcactca ggacctgctg cggggcgggc catgagacca gactcgggct 35160

tagggaacac cactgtggcc ccaacctcga ccaggccaca ggcccttcct tcctgccctg 35220

cggcagcaca gactttgggg tctgtgcaga gaggaatcac agaggcccca ggctgaggtg 35280

gtgggggtgg aagaccccca ggaggtggcc cacttccctt cctcccagct ggaacccacc 35340

atgaccttct taagataggg gtgtcatccg aggcaggtcc tccatggagc tcccttcagg 35400

ctcctccccg gtcctcacta ggcctcagtc ccggctgcgg gaatgcagcc accacaggca 35460

caccaggcag cccagaccca gccagcctgc agtgcccaag cccacattct ggagcagagc 35520

aggctgtgtc tgggagagtc tgggctcccc accgcccccc cgcacacccc acccacccct 35580

gtccaggccc tatgcaggag ggtcagagcc ccccatgggg tatggactta gggtctcact 35640

cacgtggctc ccctcctggg tgaaggggtc tcatgcccag atccccacag cagagctggt 35700

caaaggtgga ggcagtggcc ccagggccac cctgacctgg accctcaggc tcctctagcc 35760

ctggctgccc tgctgtccct gggaggcctg gactccacca gaccacaggt ccagggcacc 35820

gcccataggt gctgcccaca ctcagttcac aggaagaaga taagctccag acccccaaga 35880

ctgggacctg ccttcctgcc accgcttgta gctccagacc tccgtgcctc ccccgaccac 35940

ttacacacgg gccagggagc tgttccacaa agatcaaccc caaaccggga ccgcctggca 36000

ctcgggccgc tgccacttcc ctctccattt gttcccagca cctctgtgct ccctccctcc 36060

tccctccttc aggggaacag cctgtgcagc ccctccctgc accccacacc ctggggaggc 36120

ccaaccctgc ctccagccct ttctcccccg ctgctcttcc tgcccatcca gacaaccctg 36180

gggtcccatc cctgcagcct acaccctggt ctccacccag acccctgtct ctccctccag 36240

acacccctcc caggccaacc ctgcacatgc aggccctccc cttttctgct gccagagcct 36300

cagtttctac cctctgtgcc taccccctgc ctcctcctgc ccacaactcg agctcttcct 36360

ctcctggggc ccctgagcca tggcactgac cgtgcactcc cacccccaca ctgcccatgc 36420

cctcaccttc ctcctggaca ctctgacccc gctcccctct tggacccagc cctggtattt 36480

ccaggacaaa ggctcaccca agtcttcccc atgcaggccc ttgccctcac tgcccggtta 36540

cacggcagcc tcctgtgcac agaagcaggg agctcagccc ttccacaggc agaaggcact 36600

gaaagaaatc ggcctccagc accctgatgc acgtccgcct gtgtctctca ctgcccgcac 36660

ctgcagggag gctcggcact ccctgtaaag acgagggatc caggcagcaa catcatggga 36720

gaatgcaggg ctcccagaca gcccagccct ctcgcaggcc tctcctggga agagacctgc 36780

agccaccact gaacagccac ggagcccgct ggatagtaac tgagtcagtg accgacctgg 36840

agggcagggg agcagtgaac cggagcccag accataggga cagagaccag ccgctgacat 36900

cccgagcccc tcactggcgg ccccagaaca ccgcgtggaa acagaacaga cccacattcc 36960

cacctggaac agggcagaca ctgctgagcc cccagcacca gccctgagaa acaccaggca 37020

acggcatcag agggggctcc tgagaaagaa aggaggggag gtctccttca ccagcaagta 37080

cttcccttga ccaaaaacag ggtccacgca actcccccag gacaaaggag gagccccctg 37140

tacagcactg ggctcagagt cctctcccac acaccctgag tttcagacaa aaaccccctg 37200

gaaatcatag tatcagcagg agaactagcc agagacagca agaggggact cagtgactcc 37260

cgcggggaca ggaggatttt gtgggggctc gtgtcactgt gaggatattg tagtagtacc 37320

agctgctata cccacagtga cacagcccca ttcccaaagc cctgctgtaa acgcttccac 37380

ttctggagct gaggggctgg ggggagcgtc tgggaagtag ggcctagggg tggccatcaa 37440

tgcccaaaac gcaccagact cccccccaga catcacccca ctggccagtg agcagagtaa 37500

acagaaaatg agaagcagct gggaagcttg cacaggcccc aaggaaagag ctttggcggg 37560

tgtgcaagag gggatgcggg cagagcctga gcagggcctt ttgctgtttc tgctttcctg 37620

tgcagatagt tccataaact ggtgttcaag atcgatggct gggagtgagc ccaggaggac 37680

agtgtgggaa gggcacaggg aaggagaagc agccgctatc ctacactgtc atctttcaag 37740

agtttgccct gtgcccacaa tgctgcatca tgggatgctt aacagctgat gtagacacag 37800

ctaaagagag aatcagtgaa atggatttgc agcacagatc tgaataaatt ctccagaatg 37860

tggagccaca cagaagcaag cacaaggaaa gtgcctgatg caagggcaaa gtacagtgtg 37920

taccttcagg ctgggcacag acactctgaa aagccttggc aggaactccc tgcaacaaag 37980

cagagccctg caggcaatgc cagctccaga gccctccctg agagcctcat gggcaaagat 38040

gtgcacaaca ggtgtttctc atagccccaa actgagaatg aagcaaacag ccatctgaag 38100

gaaaacaggc aaataaacga tggcaggttc atgaaatgca aacccagaca gccagaagga 38160

caacagtgag ggttacaggt gactctgtgg ttgagttcat gacaatgctg agtaattgga 38220

gtaacaaagg aaagtccaaa aaatactttc aatgtgattt cttctaaata aaatttacag 38280

ccggcaaaat gaactatctt cttaagggat aaactttcca ctaggaaaac tataaggaaa 38340

atcaagaaaa ggatgatcac ataaacacag tggtcgttac ttctactggg gaaggaagag 38400

ggtatgaact gagacacaca gggttggcaa gtctcctaac aagaacagaa caaatacatt 38460

acagtacctt gaaaacagca gttaaaattc taaattgcaa gaagaggaaa atgcacacag 38520

ctgtgtttag aaaattctca gtccagcact gttcataata gcaaagacat taacccaggt 38580

tggataaata aacgatgaca caggcaattg cacaatgata cagacataca ttcagtatat 38640

gagacattga tgatgtatcc ccaaagaaat gactttaaag agaaaaggcc tgatatgtgg 38700

tggcactcac ctccctgggc atccccggac aggctgcagg cacactgtgt ggcagggcag 38760

gctggtacct gctggcagct cctggggcct gatgtggagc aggcacagag ccgtatcccc 38820

ccgaggacat atacccccaa ggacggcaca gttggtacat tccggagaca agcaactcag 38880

ccacactccc aggccagagc ccgagaggga cgcccatgca cagggaggca gagcccagct 38940

cctccacagc cagcagcacc cgtgcagggg ccgccatctg gcaggcacag agcatgggct 39000

gggaggaggg gcagggacac caggcagggt tggcaccaac tgaaaattac agaagtctca 39060

tacatctacc tcagccttgc ctgacctggg cctcacctga cctggacctc acctggcctg 39120

gacctcacct ggcctagacc tcacctctgg gcttcacctg agctcggcct cacctgactt 39180

ggaccttgcc tgtcctgagc tcacatgatc tgggcctcac ctgacctggg tttcacctga 39240

cctgggcttc acctgacctg ggcctcatct gacctgggcc tcactggcct ggacctcacc 39300

tggcctgggc ttcacctggc ctcaggcctc atctgcacct gctccaggtc ttgctggaac 39360

ctcagtagca ctgaggctgc aggggctcat ccagggttgc agaatgactc tagaacctcc 39420

cacatctcag ctttctgggt ggaggcacct ggtggcccag ggaatataaa aagcctgaat 39480

gatgcctgcg tgatttgggg gcaatttata aacccaaaag gacatggcca tgcagcgggt 39540

agggacaata cagacagata tcagcctgaa atggagcctc agggcacagg tgggcacgga 39600

cactgtccac ctaagccagg ggcagacccg agtgtccccg cagtagacct gagagcgctg 39660

ggcccacagc ctcccctcgg tgccctgcta cctcctcagg tcagccctgg acatcccggg 39720

tttccccagg cctggcggta ggtttggggt gaggtctgtg tcactgtggt attacgattt 39780

ttggagtggt tattataccc acagtgtcac agagtccatc aaaaacccat ccctgggaac 39840

cttctgccac agccctccct gtggggcacc gccgcgtgcc atgttaggat tttgactgag 39900

gacacagcac catgggtatg gtggctaccg cagcagtgca gcccgtgacc caaacacaca 39960

gggcagcagg cacaacagac aagcccacaa gtgaccaccc tgagctcctg cctgccagcc 40020

ctggagacca tgaaacagat ggccaggatt atcccatagg tcagccagac ctcagtccaa 40080

caggtctgca tcgctgctgc cctccaatac cagtccggat ggggacaggg ctggcccaca 40140

ttaccatttg ctgccatccg gccaacagtc ccagaagccc ctccctcaag gctgggccac 40200

atgtgtggac cctgagagcc ccccatgtct gagtaggggc accaggaagg tggggctggc 40260

cctgtgcact gtccctgccc ctgtggtccc tggcctgcct ggccctgaca cctgggcctc 40320

tcctgggtca tttccaagac agaagacatt cccaggacag ctggagctgg gagtccatca 40380

tcctgcctgg ccgtcctgag tcctgcgcct ttccaaacct cacccgggaa gccaacagag 40440

gaatcacctc ccacaggcag agacaaagac cttccagaaa tctctgtctc tctccccagt 40500

gggcaccctc ttccagggca gtcctcagtg atatcacagt gggaacccac atctggatcg 40560

ggactgcccc cagaacacaa gatggcccac agggacagcc ccacagccca gcccttccca 40620

gacccctaaa aggcgtccca ccccctgcat ctgccccagg gctcaaactc caggaggact 40680

gactcctgca caccctcctg ccagacatca cctcagcccc tcctggaagg gacaggagcg 40740

cgcaagggtg agtcagaccc tcctgccctc gatggcaggc ggagaagatt cagaaaggtc 40800

tgagatcccc aggacgcagc accactgtca atgggggccc cagacgcctg gaccagggcc 40860

tgcgtgggaa aggcctctgg gcacactcag gggctttttg tgaagggtcc tcctactgtg 40920

tgactacagt aactaccaca gtgatgaacc cagcagcaaa aactgaccgg actcccaagg 40980

tttatgcaca cttctccgct cagagctctc caggatcaga agagccgggc ccaagggttt 41040

ctgcccagac cctcggcctc tagggacatc ttggccatga cagcccatgg gctggtgccc 41100

cacacatcgt ctgccttcaa acaagggctt cagagggctc tgaggtgacc tcactgatga 41160

ccacaggtgc cctggcccct tccccaccag ctgcaccaga ccccgtcatg acagatgccc 41220

cgattccaac agccaattcc tggggccagg aatcgctgta gacaccagcc tccttccaac 41280

acctcctgcc aattgcctgg attcccatcc cggttggaat caagaggaca gcatccccca 41340

ggctcccaac aggcaggact cccacaccct cctctgagag gccgctgtgt tccgtagggc 41400

caggctgcag acagtccccc tcacctgcca ctagacaaat gcctgctgta gatgtcccca 41460

cctggaaaat accactcatg gagcccccag ccccaggtac agctgtagag agagtctctg 41520

aggcccctaa gaagtagcca tgcccagttc tgccgggacc ctcggccagg ctgacaggag 41580

tggacgctgg agctgggccc atactgggcc acataggagc tcaccagtga gggcaggaga 41640

gcacatgccg gggagcaccc agcctcctgc tgaccagagg cccgtcccag agcccaggag 41700

gctgcagagg cctctccagg gggacactgt gcatgtctgg tccctgagca gccccccacg 41760

tccccagtcc tgggggcccc tggcacagct gtctggaccc tctctattcc ctgggaagct 41820

cctcctgaca gccccgcctc cagttccagg tgtggttatt gtcagggggt gtcagactgt 41880

ggtggataca gctatggtta ccacagtggt gctgcccata gcagcaacca ggccaagtag 41940

acaggcccct gctgtgcagc cccaggcctc cagctcacct gcttctcctg gggctctcaa 42000

ggctgctgtt ttctgcactc tcccctctgt ggggagggtt ccctcagtgg gagatctgtt 42060

ctcaacatcc cacggcctca ttcctgcaag gaaggccaat ggatgggcaa cctcacatgc 42120

cgcggctaag atagggtggg cagcctggcg gggacaggac atcctgctgg ggtatctgtc 42180

actgtgccta gtggggcact ggctcccaaa caacgcagtc cttgccaaaa tccccacggc 42240

ctcccccgct aggggctggc ctgatctcct gcagtcctag gaggctgctg acctccagaa 42300

tggctccgtc cccagttcca gggcgagagc agatcccagg ccggctgcag actgggaggc 42360

caccccctcc ttcccagggt tcactgcagg tgaccagggc aggaaatggc ctgaacacag 42420

ggataaccgg gccatccccc aacagagtcc accccctcct gctctgtacc ccgcaccccc 42480

caggccagcc catgacatcc gacaacccca caccagagtc actgcccggt gctgccctag 42540

ggaggacccc tcagccccca ccctgtctag aggactgggg aggacaggac acgccctctc 42600

cttatggttc ccccacctgg ctctggctgg gacccttggg gtgtggacag aaaggacgct 42660

tgcctgattg gcccccagga gcccagaact tctctccagg gaccccagcc cgagcacccc 42720

cttacccagg acccagccct gcccctcctc ccctctgctc tcctctcatc accccatggg 42780

aatccagaat ccccaggaag ccatcaggaa gggctgaggg aggaagtggg gccactgcac 42840

caccaggcag gaggctctgt ctttgtgaac ccagggaggt gccagcctcc tagagggtat 42900

ggtccaccct gcctatggct cccacagtgg caggctgcag ggaaggacca gggacggtgt 42960

gggggagggc tcagggcccc gcgggtgctc catcttggat gagcctatct ctctcaccca 43020

cggactcgcc cacctcctct tcaccctggc cacacgtcgt ccacaccatc ctaagtccca 43080

cctacaccag agccggcaca gccagtgcag acagaggctg gggtgcaggg gggccgactg 43140

ggcagcttcg gggagggagg aatggaggaa ggggagttca gtgaagaggc ccccctcccc 43200

tgggtccagg atcctcctct gggacccccg gatcccatcc cctccaggct ctgggaggag 43260

aagcaggatg ggagaatctg tgcgggaccc tctcacagtg gaatacctcc acagcggctc 43320

aggccagata caaaagcccc tcagtgagcc ctccactgca gtgctgggcc tgggggcagc 43380

cgctcccaca caggatgaac ccagcacccc gaggatgtcc tgccaggggg agctcagagc 43440

catgaaggag caggatatgg gacccccgat acaggcacag acctcagctc cattcaggac 43500

tgccacgtcc tgccctggga ggaacccctt tctctagtcc ctgcaggcca ggaggcagct 43560

gactcctgac ttggacgcct attccagaca ccagacagag gggcaggccc cccagaacca 43620

gggatgagga cgccccgtca aggccagaaa agaccaagtt gcgctgagcc cagcaaggga 43680

aggtccccaa acaaaccagg aagtttctga aggtgtctgt gtcacagtgg agtatagcag 43740

ctcgtcccac agtgacactc gccaggccag aaaccccatc ccaagtcagc ggaatgcaga 43800

gagagcaggg aggacatgtt taggatctga ggccgcacct gacacccagg ccagcagacg 43860

tctcctgtcc acggcaccct gccatgtcct gcatttctgg aagaacaagg gcaggctgaa 43920

gggggtccag gaccaggaga tgggtccgct ctacccagag aaggagccag gcaggacaca 43980

agccccctcc ccattgaggc tgacctgccc agagggtcct gggcccaccc aacacaccgg 44040

ggcggaatgt gtgcaggcct cggtctctgt gggtgttccg ctagctgggg ctcacagtgc 44100

tcaccccaca cctaaaacga gccacagcct ccggagcccc tgaaggagac cccgcccaca 44160

agcccagccc ccacccagga ggccccagag cacagggcgc cccgtcggat tctgaacagc 44220

cccgagtcac agtgggtata actggaacta ccactgtgag aaaagcttcg tccaaaacgg 44280

tctcctggcc acagtcggag gccccgccag agaggggagc agccacccca aacccatgtt 44340

ctgccggctc ccatgacccc gtgcacctgg agccccacgg tgtccccact ggatgggagg 44400

acaagggccg ggggctccgg cgggtcgggg caggggcttg atggcttcct tctgccgtgg 44460

ccccattgcc cctggctgga gttgaccctt ctgacaagtg tcctcagaga gtcagggatc 44520

agtggcacct cccaacatca accccacgca gcccaggcac aaaccccaca tccagggcca 44580

actccaggaa cagagacacc ccaataccct gggggacccc gaccctgatg actcccgtcc 44640

catctctgtc cctcacttgg ggcctgctgc ggggcgagca cttgggagca aactcaggct 44700

taggggacac cactgtgggc ctgacctcga gcaggccaca gacccttccc tcctgccctg 44760

gtgcagcaca gactttgggg tctgggcagg gaggaacttc tggcaggtca ccaagcacag 44820

agcccccagg ctgaggtggc cccaggggga accccagcag gtggcccact acccttcctc 44880

ccagctggac cccatgtctt ccccaagata ggggtgccat ccaaggcagg tcctccatgg 44940

agcccccttc aggctcctct ccagacccca ctgggcctca gtccccactc taggaatgca 45000

gccaccacgg gcacaccagg cagcccaggc ccagccaccc tgcagtgccc aagcccacac 45060

cctggaggag agcagggtgc gtctgggagg ggctgggctc cccaccccca cccccacctg 45120

cacaccccac ccacccttgc ccgggccccc tgcaggaggg tcagagcccc catgggatat 45180

ggacttaggg tctcactcac gcacctcccc tcctgggaga aggggtctca tgcccagatc 45240

cccccagcag cgctggtcac aggtagaggc agtggcccca gggccaccct gacctggccc 45300

ctcaggctcc tctagccctg gctgccctgc tgtccctggg aggcctgggc tccaccagac 45360

cacaggtcta gggcaccgcc cacactgggg ccgcccacac acagctcaca ggaagaagat 45420

aagctccaga cccccaggcc cgggacctgc cttgctgcta cgacttcctg ccccagacct 45480

cgttgccctc ccccgtccac ttacacacag gccaggaagc tgttcccaca cagaccaacc 45540

ccagacgggg accacctggc actcaggtca ctgccatttc cttctccatt cacttccaat 45600

gcctctgtgc ttcctccctc ctccttcctt cgggggagca ccctgtgcag ctcctccctg 45660

cagtccacac cctggggaga cccgaccctg cagcccacac cctggggaga cctgaccctc 45720

ctccagccct ttctcccccg ctgctcttgc cacccaccaa gacagccctg gggtcctgtc 45780

cctacagccc ccacccagtt ctctacctag acccgtcttc ctccctctaa acacctctcc 45840

caggccaacc ctacacctgc aggccctccc ctccactgcc aaagaccctc agtttctcct 45900

gcctgtgccc acccccgtgc tcctcctgcc cacagctcga gctcttcctc tcctagggcc 45960

cctgagggat ggcattgacc gtgccctcgc acccacacac tgcccatgcc ctcacattcc 46020

tcctggccac tccagcccca ctcccctctc aggcctggct ctggtatttc tgggacaaag 46080

ccttacccaa gtctttccca tgcaggcctg ggcccttacc ctcactgccc ggttacaggg 46140

cagcctcctg tgcacagaag cagggagctc agcccttcca caggcagaag gcactgaaag 46200

aaatcggcct ccagcgcctt gacacacgtc tgcctgtgtc tctcactgcc cgcacctgca 46260

gggaggctcg gcactccctc taaagacgag ggatccaggc agcagcatca caggagaatg 46320

cagggctacc agacatccca gtcctctcac aggcctctcc tgggaagaga cctgaagacg 46380

cccagtcaac ggagtctaac accaaacctc cctggaggcc gatgggtagt aacggagtca 46440

ttgccagacc tggaggcagg ggagcagtga gcccgagccc acaccatagg gccagaggac 46500

agccactgac atcccaagcc actcactggt ggtcccacaa caccccatgg aaagaggaca 46560

gacccacagt cccacctgga ccagggcaga gactgctgag acccagcacc agaaccaacc 46620

aagaaacacc aggcaacagc atcagagggg gctctggcag aacagaggag gggaggtctc 46680

cttcaccagc aggcgcttcc cttgaccgaa gacaggatcc atgcaactcc cccaggacaa 46740

aggaggagcc ccttgttcag cactgggctc agagtcctct ccaagacacc cagagtttca 46800

gacaaaaacc ccctggaatg cacagtctca gcaggagagc cagccagagc cagcaagatg 46860

gggctcagtg acacccgcag ggacaggagg attttgtggg ggctcgtgtc actgtgagga 46920

tattgtacta atggtgtatg ctatacccac agtgacacag ccccattccc aaagccctac 46980

tgcaaacgca ttccacttct ggggctgagg ggctggggga gcgtctggga aatagggctc 47040

aggggtgtcc atcaatgccc aaaacgcacc agactcccct ccatacatca cacccaccag 47100

ccagcgagca gagtaaacag aaaatgagaa gcaagctggg gaagcttgca caggccccaa 47160

ggaaagagct ttggcgggtg tgtaagaggg gatgcgggca gagcctgagc agggcctttt 47220

gctgtttctg ctttcctgtg cagagagttc cataaactgg tgttcgagat caatggctgg 47280

gagtgagccc aggaggacag cgtgggaaga gcacagggaa ggaggagcag ccgctatcct 47340

acactgtcat ctttcgaaag tttgccttgt gcccacactg ctgcatcatg ggatgcttaa 47400

cagctgatgt agacacagct aaagagagaa tcagtgagat ggatttgcag cacagatctg 47460

aataaattct ccagaatgtg gagcagcaca gaagcaagca cacagaaagt gcctgatgca 47520

aggacaaagt tcagtgggca ccttcaggca ttgctgctgg gcacagacac tctgaaaagc 47580

cctggcagga actccctgtg acaaagcaga accctcaggc aatgccagcc ccagagccct 47640

ccctgagagc ctcatgggca aagatgtgca caacaggtgt ttctcatagc cccaaactga 47700

gagcaaagca aacgtccatc tgaaggagaa caggcaaata aacgatggca ggttcatgaa 47760

atgcaaaccc agacagccac aagcacaaaa gtacagggtt ataagcgact ctggttgagt 47820

tcatgacaat gctgagtaat tggagtaaca aagtaaactc caaaaaatac tttcaatgtg 47880

atttcttcta aataaaattt acaccctgca aaatgaactg tcttcttaag ggatacattt 47940

cccagttaga aaaccataaa gaaaaccaag aaaaggatga tcacataaac acagtggtgg 48000

ttacttctgc tggggaagga agagggtatg aactgagata cacagggtgg gcaagtctcc 48060

taacaagaac agaacgaata cattacagta ccttgaaaac agcagttaaa cttctaaatt 48120

gcaagaagag gaaaatgcac acagttgtgt ttagaaaatt ctcagtccag cactgttcat 48180

aatagcaaag acattaaccc aggtcggata aataagcgat gacacaggca attgcacaat 48240

gatacagaca tatatttagt atatgagaca tcgatgatgt atccccaaat aaacgacttt 48300

aaagagataa agggctgatg tgtggtggca ttcacctccc tgggatcccc ggacaggttg 48360

caggctcact gtgcagcagg gcaggcgggt acctgctggc agttcctggg gcctgatgtg 48420

gagcaagcgc agggccatat atcccggagg acggcacagt cagtgaattc cagagagaag 48480

caactcagcc acactcccca ggcagagccc gagagggacg cccacgcaca gggaggcaga 48540

gcccagcacc tccgcagcca gcaccacctg cgcacgggcc accaccttgc aggcacagag 48600

tgggtgctga gaggaggggc agggacacca ggcagggtga gcacccagag aaaactgcag 48660

acgcctcaca catccacctc agcctcccct gacctggacc tcactggcct gggcctcact 48720

taacctgggc ttcacctgac cttggcctca cctgacttgg acctcgcctg tcccaagctt 48780

tacctgacct gggcctcaac tcacctgaac gtctcctgac ctgggtttaa cctgtcctgg 48840

aactcacctg gccttggctt cccctgacct ggacctcatc tggcctgggc ttcacctggc 48900

ctgggcctca cctgacctgg acctcatctg gcctggacct cacctggcct ggacttcacc 48960

tggcctgggc ttcacctgac ctggacctca cctggcctcg ggcctcacct gcacctgctc 49020

caggtcttgc tggagcctga gtagcactga gggtgcagaa gctcatccag ggttggggaa 49080

tgactctaga agtctcccac atctgacctt tctgggtgga ggcagctggt ggccctggga 49140

atataaaaat ctccagaatg atgactctgt gatttgtggg caacttatga acccgaaagg 49200

acatggccat ggggtgggta gggacatagg gacagatgcc agcctgaggt ggagcctcag 49260

gacacaggtg ggcacggaca ctatccacat aagcgaggga tagacccgag tgtccccaca 49320

gcagacctga gagcgctggg cccacagcct cccctcagag ccctgctgcc tcctccggtc 49380

agccctggac atcccaggtt tccccaggcc tggcggtagg tttagaatga ggtctgtgtc 49440

actgtggtat tacgatattt tgactggtta ttataaccac agtgtcacag agtccatcaa 49500

aaacccatgc ctggaagctt cccgccacag ccctccccat ggggccctgc tgcctcctca 49560

ggtcagcccc ggacatcccg ggtttcccca ggctgggcgg taggtttggg gtgaggtctg 49620

tgtcactgtg gtattactat ggttcgggga gttattataa ccacagtgtc acagagtcca 49680

tcaaaaaccc atccctggga gcctcccgcc acagccctcc ctgcagggga ccggtacgtg 49740

ccatgttagg attttgatcg aggagacagc accatgggta tggtggctac cacagcagtg 49800

cagcctgtga cccaaacccg cagggcagca ggcacgatgg acaggcccgt gactgaccac 49860

gctgggctcc agcctgccag ccctggagat catgaaacag atggccaagg tcaccctaca 49920

ggtcatccag atctggctcc gaggggtctg catcgctgct gccctcccaa cgccagtcca 49980

aatgggacag ggacggcctc acagcaccat ctgctgccat caggccagcg atcccagaag 50040

cccctccctc aaggctgggc acatgtgtgg acactgagag ccctcatatc tgagtagggg 50100

caccaggagg gaggggctgg ccctgtgcac tgtccctgcc cctgtggtcc ctggcctgcc 50160

tggccctgac acctgagcct ctcctgggtc atttccaaga cagaagacat tcctggggac 50220

agccggagct gggcgtcgct catcctgccc ggccgtcctg agtcctgctc atttccagac 50280

ctcaccgggg aagccaacag aggactcgcc tcccacattc agagacaaag aaccttccag 50340

aaatccctgc ctctctcccc agtggacacc ctcttccagg acagtcctca gtggcatcac 50400

agcggcctga gatccccagg acgcagcacc gctgtcaata ggggccccaa atgcctggac 50460

cagggcctgc gtgggaaagg cctctggcca cactcgggct ttttgtgaag ggccctcctg 50520

ctgtgtgact acagtaacta ccatagtgat gaacccagtg gcaaaaactg gctggaaacc 50580

caggggctgt gtgcacgcct cagcttggag ctctccagga gcacaagagc cgggcccaag 50640

gatttgtgcc cagaccctca gcctctaggg acacctgggt catctcagcc tgggctggtg 50700

ccctgcacac catcttcctc caaatagggg cttcagaggg ctctgaggtg acctcactca 50760

tgaccacagg tgacctggcc cttccctgcc agctatacca gaccctgtct tgacagatgc 50820

cccgattcca acagccaatt cctgggaccc tgaatagctg tagacaccag cctcattcca 50880

gtacctcctg ccaattgcct ggattcccat cctggctgga atcaagaagg cagcatccgc 50940

caggctccca acaggcagga ctcccgcaca ccctcctctg agaggccgct gtgttccgca 51000

gggccaggcc ctggacagtt cccctcacct gccactagag aaacacctgc cattgtcgtc 51060

cccacctgga aaagaccact cgtggagccc ccagccccag gtacagctgt agagacagtc 51120

ctcgaggccc ctaagaagga gccatgccca gttctgccgg gaccctcggc caggccgaca 51180

ggagtggacg ctggagctgg gcccacactg ggccacatag gagctcacca gtgagggcag 51240

gagagcacat gccggggagc acccagcctc ctgctgacca gaggcccgtc ccagagccca 51300

ggaggctgca gaggcctctc cagggagaca ctgtgcatgt ctggtaccta agcagccccc 51360

cacgtcccca gtcctggggg cccctggctc agctgtctgg gccctccctg ctccctggga 51420

agctcctcct gacagccccg cctccagttc caggtgtggt tattgtcagg cgatgtcaga 51480

ctgtggtgga tatagtggct acgattacca cagtggtgcc gcccatagca gcaaccaggc 51540

caagtagaca ggcccctgct gcgcagcccc aggcatccac ttcacctgct tctcctgggg 51600

ctctcaaggc tgctgtctgt cctctggccc tctgtgggga gggttccctc agtgggaggt 51660

ctgtgctcca gggcagggat gattgagata gaaatcaaag gctggcaggg aaaggcagct 51720

tcccgccctg agaggtgcag gcagcaccac ggagccacgg agtcacagag ccacggagcc 51780

cccattgtgg gcatttgaga gtgctgtgcc cccggcaggc ccagccctga tggggaagcc 51840

tgtcccatcc cacagcccgg gtcccacggg cagcgggcac agaagctgcc aggttgtcct 51900

ctatgatcct catccctcca gcagcatccc ctccacagtg gggaaactga ggcttggagc 51960

accacccggc cccctggaaa tgaggctgtg agcccagaca gtgggcccag agcactgtga 52020

gtaccccggc agtacctggc tgcagggatc agccagagat gccaaaccct gagtgaccag 52080

cctacaggag gatccggccc cacccaggcc actcgattaa tgctcaaccc cctgccctgg 52140

agacctcttc cagtaccacc agcagctcag cttctcaggg cctcatccct gcaaggaagg 52200

tcaagggctg ggcctgccag aaacacagca ccctccctag ccctggctaa gacagggtgg 52260

gcagacggct gtggacggga catattgctg gggcatttct cactgtcact tctgggtggt 52320

agctctgaca aaaacgcaga ccctgccaaa atccccactg cctcccgcta ggggctggcc 52380

tggaatcctg ctgtcctagg aggctgctga cctccaggat ggctccgtcc ccagttccag 52440

ggcgagagca gatcccaggc aggctgtagg ctgggaggcc acccctgccc ttgccggggt 52500

tgaatgcagg tgcccaaggc aggaaatggc atgagcacag ggatgaccgg gacatgcccc 52560

accagagtgc gccccttcct gctctgcacc ctgcaccccc caggccagcc cacgacgtcc 52620

aacaactggg cctgggtggc agccccaccc agacaggaca gacccagcac cctgaggagg 52680

tcctgccagg gggagctaag agccatgaag gagcaagata tggggccccc gatacaggca 52740

cagatgtcag ctccatccag gaccacccag cccacaccct gagaggaacg tctgtctcca 52800

gcctctgcag gtcgggaggc agctgacccc tgacttggac ccctattcca gacaccagac 52860

agaggcgcag gccccccaga accagggttg agggacgccc cgtcaaagcc agacaaaacc 52920

aaggggtgtt gagcccagca agggaaggcc cccaaacaga ccaggaggtt tctgaaggtg 52980

tctgtgtcac agtggggtat agcagcagct ggtaccacag tgacactcac ccagccagaa 53040

accccattcc aagtcagcgg aagcagagag agcagggagg acacgtttag gatctgagac 53100

tgcacctgac acccaggcca gcagacgtct cccctccagg gcaccccacc ctgtcctgca 53160

tttctgcaag atcaggggcg gcctgagggg gggtctaggg tgaggagatg ggtcccctgt 53220

acaccaagga ggagttaggc aggtcccgag cactctcccc attgaggctg acctgcccag 53280

agagtcctgg gcccacccca cacaccgggg cggaatgtgt gcaggcctcg gtctctgtgg 53340

gtgttccgct agctggggct cacagtgctc accccacacc taaaatgagc cacagcctcc 53400

ggagcccccg caggagaccc cgcccacaag cccagccccc acccaggagg ccccagagct 53460

cagggcgccc cgtcggattc cgaacagccc cgagtcacag cgggtataac cggaaccacc 53520

actgtcagaa tagctacgtc aaaaactgtc cagtggccac tgccggaggc cccgccagag 53580

agggcagcag ccactctgat cccatgtcct gccggctccc atgaccccca gcacgcggag 53640

ccccacagtg tccccactgg atgggaggac aagagctggg gattccggcg ggtcggggca 53700

ggggcttgat cgcatccttc tgccgtggct ccagtgcccc tggctggagt tgacccttct 53760

gacaagtgtc ctcagagaga caggcatcac cggcgcctcc caacatcaac cccaggcagc 53820

acaggcacaa accccacatc cagagccaac tccaggagca gagacacccc aataccctgg 53880

gggaccccga ccctgatgac ttcccactgg aattcgccgt agagtccacc aggaccaaag 53940

accctgcctc tgcctctgtc cctcactcag gacctgctgc cgggcgaggc cttgggagca 54000

gacttgggct taggggacac cagtgtgacc ccgaccttga ccaggacgca gacctttcct 54060

tcctttcctg gggcagcaca gactttgggg tctgggccag gaggaacttc tggcaggtcg 54120

ccaagcacag aggccacagg ctgaggtggc cctggaaaga cctccaggag gtggccactc 54180

cccttcctcc cagctggacc ccatgtcctc cccaagataa gggtgccatc caaggcaggt 54240

gctccttgga gccccattca gactcctccc tggaccccac tgggcctcag tcccagctct 54300

ggggatgaag ccaccacaag cacaccaggc agcccaggcc cagccaccct gcagtgccca 54360

agcacacact ctggagcaga gcagggtgcc tctgggaggg gctgagctcc ccaccccacc 54420

cccacctgca caccccaccc acccctgccc agcggctctg caggagggtc agagccccac 54480

atggggtatg gacttagggt ctcactcacg tggctcccat catgagtgaa ggggcctcaa 54540

gcccaggttc ccacagcagc gcctgtcgca agtggaggca gaggcccgag ggccaccctg 54600

acctggtccc tgaggttcct gcagcccagg ctgccctgct gtccctggga ggcctgggct 54660

ccaccagacc acaggtccag ggcaccgggt gcaggagcca cccacacaca gctcacagga 54720

agaagataag ctccagaccc ccagggccag aacctgcctt cctgctactg cttcctgccc 54780

cagacctggg cgccctcccc cgtccactta cacacaggcc aggaagctgt tcccacacag 54840

aacaacccca aaccaggacc gcctggcact caggtggctg ccatttcctt ctccatttgc 54900

tcccagcgcc tctgtcctcc ctggttcctc cttcggggga acagcctgtg cagccagtcc 54960

ctgcagccca caccctgggg agacccaacc ctgcctgggg cccttccaac cctgctgctc 55020

ttactgccca cccagaaaac tctggggtcc tgtccctgca gtccctaccc tggtctccac 55080

ccagacccct gtgtatcact ccagacaccc ctcccaggca aaccctgcac ctgcaggccc 55140

tgtcctcttc tgtcgctaga gcctcagttt ctcccccctg tgcccacacc ctacctcctc 55200

ctgcccacaa ctctaactct tcttctcctg gagcccctga gccatggcat tgaccctgcc 55260

ctcccaccac ccacagccca tgccctcacc ttcctcctgg ccactccgac cccgccccct 55320

ctcaggccaa gccctggtat ttccaggaca aaggctcacc caagtctttc ccaggcaggc 55380

ctgggctctt gccctcactt cccggttaca cgggagcctc ctgtgcacag aagcagggag 55440

ctcagccctt ccacaggcag aaggcactga aagaaatcgg cctccagcac cttgacacac 55500

gtccgcccgt gtctctcact gcccgcacct gcagggaggc tccgcactcc ctctaaagac 55560

aagggatcca ggcagcagca tcacgggaga atgcagggct cccagacatc ccagtcctct 55620

cacaggcctc tcctgggaag agacctgcag ccaccaccaa acagccacag aggctgctgg 55680

atagtaactg agtcaatgac cgacctggag ggcaggggag cagtgagccg gagcccatac 55740

catagggaca gagaccagcc gctgacatcc cgagctcctc aatggtggcc ccataacaca 55800

cctaggaaac ataacacacc cacagcccca cctggaacag ggcagagact gctgagcccc 55860

cagcaccagc cccaagaaac accaggcaac agtatcagag ggggctcccg agaaagagag 55920

gaggggagat ctccttcacc atcaaatgct tcccttgacc aaaaacaggg tccacgcaac 55980

tcccccagga caaaggagga gccccctata cagcactggg ctcagagtcc tctctgagac 56040

accctgagtt tcagacaaca acccgctgga atgcacagtc tcagcaggag aacagaccaa 56100

agccagcaaa agggacctcg gtgacaccag tagggacagg aggattttgt gggggctcgt 56160

gtcactgtga ggatattgta gtggtggtag ctgctactcc cacagtgaca cagacccatt 56220

cccaaagccc tactgcaaac acacccactc ctggggctga ggggctgggg gagcgtctgg 56280

gaagtagggt ccaggggtgt ctatcaatgt ccaaaatgca ccagactccc cgccaaacac 56340

caccccacca gccagcgagc agggtaaaca gaaaatgaga ggctctggga agcttgcaca 56400

ggccccaagg aaagagcttt ggcgggtgtg caagagggga tgcaggcaga gcctgagcag 56460

ggccttttgc tgtttctgct ttcctgtgca gagagttcca taaactggtg ttcaagatca 56520

gtggctggga atgagcccag gagggcagtc tgtgggaaga gcacagggaa ggaggagcag 56580

ccgctatcct acactgtcat ctttcaaaag tttgccttgt gaccacacta ttgcatcatg 56640

ggatgcttaa gagctgatgt agacacagct aaagagagaa tcagtgagat gaatttgcag 56700

catagatctg aataaactct ccagaatgtg gagcagtaca gaagcaaaca cacagaaagt 56760

gcctgatgca aggacaaagt tcagtgggca ccttcaggca ttgctgctgg gcacagacac 56820

tctgaaaagc cttggcagga tctccctgcg acaaagcaga accctcaggc aatgccagcc 56880

ccagagccct ccctgagagc gtcatgggga aagatgtgca gaacagctga ttatcataga 56940

ctcaaactga gaacagagca aacgtccatc tgaagaacag tcaaataagc aatggtaggt 57000

tcatgcaatg caaacccaga cagccagggg acaacagtag agggctacag gcggctttgc 57060

ggttgagttc atgacaatgc tgagtaattg gagtaacaga ggaaagccca aaaaatactt 57120

ttaatgtgat ttcttctaaa taaaatttac accaggcaaa atgaactgtc ttcttaaggg 57180

ataaactttc ccctggaaaa actacaagga aaattaagaa aacgatgatc acataaacac 57240

agttgtggtt acttctactg gggaaggaag agggtatgag ctgagacaca cagagtcggc 57300

aagtctccaa gcaagcacag aacgaataca ttacagtacc ttgaatacag cagttaaact 57360

tctaaatcgc aagaacagga aaatgcacac agctgtgttt agaaaattct cagtccagca 57420

ctattcataa tagcaaagac attaacccag gttggataaa taaatgatga cacaggcaat 57480

tgcacaatga tacagacata catttagtac atgagacatc gatgatgtat ccccaaagaa 57540

atgactttaa agagaaaagg cctgatgtgt ggtggcactc acctccctgg gatccccgga 57600

caggttgcag gcacactgtg tggcagggca ggctggtaca tgctggcagc tcctggggcc 57660

tgatgtggag caagcgcagg gctgtatacc cccaaggatg gcacagtcag tgaattccag 57720

agagaagcag ctcagccaca ctgcccaggc agagcccgag agggacgccc acgtacaggg 57780

aggcagagcc cagctcctcc acagccacca ccacctgtgc acgggccacc accttgcagg 57840

cacagagtgg gtgctgagag gaggggcagg gacaccaggc agggtgagca cccagagaaa 57900

actgcagaag cctcacacat ccacctcagc ctcccctgac ctggacctca cctggtctgg 57960

acctcacctg gcctgggcct cacctgacct ggacctcacc tggcctgggc ttcacctgac 58020

ctggacctca cctggcctcc ggcctcacct gcacctgctc caggtcttgc tggaacctga 58080

gtagcactga ggctgcagaa gctcatccag ggttggggaa tgactctgga actctcccac 58140

atctgacctt tctgggtgga ggcatctggt ggccctggga atataaaaag ccccagaatg 58200

gtgcctgcgt gatttggggg caatttatga acccgaaagg acatggccat ggggtgggta 58260

gggacatagg gacagatgcc agcctgaggt ggagcctcag gacacagttg gacgcggaca 58320

ctatccacat aagcgaggga cagacccgag tgttcctgca gtagacctga gagcgctggg 58380

cccacagcct cccctcggtg ccctgctgcc tcctcaggtc agccctggac atcccgggtt 58440

tccccaggcc agatggtagg tttgaagtga ggtctgtgtc actgtggtat tatgattacg 58500

tttgggggag ttatcgttat acccacagca tcacacggtc catcagaaac ccatgccaca 58560

gccctccccg caggggaccg ccgcgtgcca tgttacgatt ttgatcgagg acacagcgcc 58620

atgggtatgg tggctaccac agcagtgcag cccatgaccc aaacacacag ggcagcaggc 58680

acaatggaca ggcctgtgag tgaccatgct gggctccagc ccgccagccc cggagaccat 58740

gaaacagatg gccaaggtca ccccacagtt cagccagaca tggctccgtg gggtctgcat 58800

cgctgctgcc ctctaacacc agcccagatg gggacaaggc caaccccaca ttaccatctc 58860

ctgctgtcca cccagtggtc ccagaagccc ctccctcatg gctgagccac atgtgtgaac 58920

cctgagagca ccccatgtca gagtaggggc agcagaaggg cggggctggc cctgtgcact 58980

gtccctgcac ccatggtccc tcgcctgcct ggccctgaca cctgagcctc ttctgagtca 59040

tttctaagat agaagacatt cccggggaca gccggagctg ggcgtcgctc atcccgcccg 59100

gccgtcctga gtcctgcttg tttccagacc tcaccaggga agccaacaga ggactcacct 59160

cacacagtca gagacaaaga accttccaga aatccctgtc tcactcccca gtgggcacct 59220

tcttccagga cattcctcgg tcgcatcaca gcaggcaccc acatctggat caggacggcc 59280

cccagaacac aagatggccc atggggacag ccccacaacc caggccttcc cagaccccta 59340

aaaggcgtcc caccccctgc acctgcccca gggctaaaaa tccaggaggc ttgactcccg 59400

cataccctcc agccagacat cacctcagcc ccctcctgga ggggacagga gcccgggagg 59460

gtgagtcaga cccacctgcc ctcgatggca ggcggggaag attcagaaag gcctgagatc 59520

cccaggacgc agcaccactg tcaatggggg ccccagacgc ctggaccagg gcctgcgtgg 59580

gaaaggccgc tgggcacact caggggcttt ttgtgaaggc ccctcctact gtgtgactac 59640

ggtgactacc acagtgatga aactagcagc aaaaactggc cggacaccca gggaccatgc 59700

acacttctca gcttggagct ctccaggacc agaagagtca ggtctgaggg tttgtagcca 59760

gaccctcggc ctctagggac accctggcca tcacagcgga tgggctggtg ccccacatgc 59820

catctgctcc aaacaggggc ttcagagggc tctgaggtga cttcactcat gaccacaggt 59880

gccctggccc cttccccgcc agctacaccg aaccctgtcc caacagctgc cccagttcca 59940

acagccaatt cctggggccc agaattgctg tagacaccag cctcgttcca gcacctcctg 60000

ccaattgcct ggattcacat cctggctgga atcaagaggg cagcatccgc caggctccca 60060

acaggcagga ctcccgcaca ccctcctctg agaggccgct gtgttccgca gggccaggcc 60120

ctggacagtt cccctcacct gccactagag aaacacctgc cattgtcgtc cccacctgga 60180

aaagaccact cgtggagccc ccagccccag gtacagctgt agagagactc cccgagggat 60240

ctaagaagga gccatgcgca gttctgccgg gaccctcggc caggccgaca ggagtggaca 60300

ctggagctgg gcccacactg ggccacatag gagctcacca gtgagggcag gagagcacat 60360

gccggggagc acccagcctc ctgctgacca gaggcccgtc ccagagccca ggaggctgca 60420

gaggcctctc cagggggaca ctgtgcatgt ctggtccctg agcagccccc cacgtcccca 60480

gtcctggggg cccctggcac agctgtctgg accctccctg ttccctggga agctcctcct 60540

gacagccccg cctccagttc caggtgtggt tattgtcagg gggtgtcaga ctgtggtgga 60600

tacagctatg gttaccacag tggtgctgcc catagcagca accaggccaa gtagacaggc 60660

ccctgctgtg cagccccagg cctccacttc acctgcttct cctggggctc tcaaggtcac 60720

tgttgtctgt actctgccct ctgtggggag ggttccctca gtgggaggtc tgttctcaac 60780

atcccagggc ctcatgtctg cacggaaggc caatggatgg gcaacctcac atgccgcggc 60840

taagataggg tgggcagcct ggcgggggac agtacatact gctggggtgt ctgtcactgt 60900

gcctagtggg gcactggctc ccaaacaacg cagtcctcgc caaaatcccc acagcctccc 60960

ctgctagggg ctggcctgat ctcctgcagt cctaggaggc tgctgacctc cagaatgtct 61020

ccgtccccag ttccagggcg agagcagatc ccaggccggc tgcagactgg gaggccaccc 61080

cctccttccc agggttcact ggaggtgacc aaggtaggaa atggccttaa cacagggatg 61140

actgcgccat cccccaacag agtcagcccc ctcctgctct gtaccccgca ccccccaggc 61200

cagtccacga aaaccagggc cccacatcag agtcactgcc tggcccggcc ctggggcgga 61260

cccctcagcc cccaccctgt ctagaggact tggggggaca ggacacaggc cctctcctta 61320

tggttccccc acctgcctcc ggccgggacc cttggggtgt ggacagaaag gacacctgcc 61380

taattggccc ccaggaaccc agaacttctc tccagggacc ccagcccgag caccccctta 61440

cccaggaccc agccctgccc ctcctcccct ctgctctcct ctcatcaccc catgggaatc 61500

cggtatcccc aggaagccat caggaagggc tgaaggagga agcggggccg tgcaccaccg 61560

ggcaggaggc tccgtcttcg tgaacccagg gaagtgccag cctcctagag ggtatggtcc 61620

accctgcctg gggctcccac cgtggcaggc tgcggggaag gaccagggac ggtgtggggg 61680

agggctcagg gccctgcggg tgctcctcca tcttcggtga gcctccccct tcacccaccg 61740

tcccgcccac ctcctctcca ccctggctgc acgtcttcca caccatcctg agtcctacct 61800

acaccagagc cagcaaagcc agtgcagaca aaggctgggg tgcagggggg ctgccagggc 61860

agcttcgggg agggaaggat ggagggaggg gaggtcagtg aagaggcccc cttcccctgg 61920

gtccaggatc ctcctctggg acccccggat cccatcccct cctggctctg ggaggagaag 61980

caggatggga gaatctgtgc gggaccctct cacagtggaa tatccccaca gcggctcagg 62040

ccagacccaa aagcccctca gtgagccctc cactgcagtc ctgggcctgg gtagcagccc 62100

ctcccacaga ggacagaccc agcaccccga agaagtcctg ccagggggag ctcagagcca 62160

tgaaagagca ggatatgggg tccccgatac aggcacagac ctcagctcca tccaggccca 62220

ccgggaccca ccatgggagg aacacctgtc tccgggttgt gaggtagctg gcctctgtct 62280

cggaccccac tccagacacc agacagaggg gcaggccccc caaaaccagg gttgagggat 62340

gatccgtcaa ggcagacaag accaaggggc actgacccca gcaagggaag gctcccaaac 62400

agacgaggag gtttctgaag ctgtctgtat cacagtgggg tatagcagtg gctggtacca 62460

cagtgacact cgccaggcca gaaaccccgt cccaagtcag cggaagcaga gagagcaggg 62520

aggacacgtt taggatctga ggccgcacct gacacccagg gcagcagacg tctcccctcc 62580

agggcaccct ccaccgtcct gcgtttcttc aagaataggg gcggcctgag ggggtccagg 62640

gccaggcgat aggtcccctc taccccaagg aggagccagg caggacccga gcaccgtccc 62700

cattgaggct gacctgccca gacgggcctg ggcccacccc acacaccggg gcggaatgtg 62760

tgcaggcccc agtctctgtg ggtgttccgc tagctggggc ccccagtgct caccccacac 62820

ctaaagcgag ccccagcctc cagagccccc taagcattcc ccgcccagca gcccagcccc 62880

tgcccccacc caggaggccc cagagctcag ggcgcctggt cggattctga acagccccga 62940

gtcacagtgg gtataactgg aacgaccacc gtgagaaaaa ctgtgtccaa aactgactcc 63000

tggcagcagt cggaggcccc gccagagagg ggagcagccg gcctgaaccc atgtcctgcc 63060

ggttcccatg acccccagca cccagagccc cacggtgtcc ccgttggata atgaggacaa 63120

gggctggggg ctccggtggt ttgcggcagg gacttgatca catccttctg ctgtggcccc 63180

attgcctctg gctggagttg acccttctga caagtgtcct cagaaagaca gggatcaccg 63240

gcacctccca atatcaaccc caggcagcac agacacaaac cccacatcca gagccaactc 63300

caggagcaga gacaccccaa cactctgggg gaccccaacc gtgataactc cccactggaa 63360

tccgccccag agtctaccag gaccaaaggc cctgccctgt ctctgtccct cactcagggc 63420

ctcctgcagg gcgagcgctt gggagcagac tcggtcttag gggacaccac tgtgggcccc 63480

aactttgatg aggccactga cccttccttc ctttcctggg gcagcacaga ctttggggtc 63540

tgggcaggga agaactactg gctggtggcc aatcacagag cccccaggcc gaggtggccc 63600

caagaaggcc ctcaggaggt ggccactcca cttcctccca gctggacccc aggtcctccc 63660

caagataggg gtgccatcca aggcaggtcc tccatggagc ccccttcaga ctcctcccgg 63720

gaccccactg gacctcagtc cctgctctgg gaatgcagcc accacaagca caccaggaag 63780

cccaggccca gccaccctgc agtgggcaag cccacactct ggagcagagc agggtgcgtc 63840

tgggaggggc taacctcccc accccccacc ccccatctgc acacagccac ctaccactgc 63900

ccagaccctc tgcaggaggg ccaagccacc atggggtatg gacttagggt ctcactcacg 63960

tgcctcccct cctgggagaa ggggcctcat gcccagatcc ctgcagcact agacacagct 64020

ggaggcagtg gccccagggc caccctgacc tggcatctaa ggctgctcca gcccagacag 64080

cactgccgtt cctgggaagc ctgggctcca ccagaccaca ggtccagggc acagcccaca 64140

ggagccaccc acacacagct cacaggaaga agataagctc cagaccccag ggcgggacct 64200

gccttcctgc caccacttac acacaggcca gggagctgtt cccacacaga tcaaccccaa 64260

accgggactg cctggcacta gggtcactgc catttccctc tccattccct cccagtgcct 64320

ctgtgctccc tccttctggg gaacaccctg tgcagcccct ccctgcagcc cacacgctgg 64380

ggagacccca ccctgcctcg ggccttttct acctgctgca cttgccgccc acccaaacaa 64440

ccctgggtac gtgaccctgc agtcctcacc ctgatctgca accagacccc tgtccctccc 64500

tctaaacacc cctcccaggc caactctgca cctgcaggcc ctccgctctt ctgccacaag 64560

agcctcaggt tttcctacct gtgcccaccc cctaacccct cctgcccaca acttgagttc 64620

ttcctctcct ggagcccttg agccatggca ctgaccctac actcccaccc acacactgcc 64680

catgccatca ccttcctcct ggacactctg accccgctcc cctccctctc agacccggcc 64740

ctggtatttc caggacaaag gctcacccaa gtcttcccca tgcaggccct tgccctcact 64800

gcctggttac acgggagcct cctgtgcgca gaagcaggga gctcagctct tccacaggca 64860

gaaggcactg aaagaaatca gcctccagtg ccttgacaca cgtccgcctg tgtctctcac 64920

tgcctgcacc tgcagggagg ctccgcactc cctctaaaga tgagggatcc aggcagcaac 64980

atcacgggag aatgcagggc tcccagacag cccagccctc tcgcaggcct ctcctgggaa 65040

gagacctgca gccaccactg aacagccacg gaggtcgctg gatagtaacc gagtcagtga 65100

ccgacctgga gggcagggga gcagtgaacc ggagcccata ccatagggac agagaccagc 65160

cgctaacatc ccgagcccct cactggcggc cccagaacac cccgtggaaa gagaacagac 65220

ccacagtccc acctggaaca gggcagacac tgctgagccc ccagcaccag ccccaagaaa 65280

cactaggcaa cagcatcaga gggggctcct gagaaagaga ggaggggagg tctccttcac 65340

catcaaatgc ttcccttgac caaaaacagg gtccacgcaa ctcccccagg acaaaggagg 65400

agccccctgt acagcactgg gctcagagtc ctctctgaga caggctcagt ttcagacaac 65460

aacccgctgg aatgcacagt ctcagcagga gagccaggcc agagccagca agaggagact 65520

cggtgacacc agtctcctgt agggacagga ggattttgtg ggggttcgtg tcactgtgag 65580

catattgtgg tggtgactgc tattcccaca gtgacacaac cccattccta aagccctact 65640

gcaaacgcac ccactcctgg gactgagggg ctgggggagc gtctgggaag tatggcctag 65700

gggtgtccat caatgcccaa aatgcaccag actctcccca agacatcacc ccaccagcca 65760

gtgagcagag taaacagaaa atgagaagca gctgggaagc ttgcacaggc cccaaggaaa 65820

gagctttggc aggtgtgcaa gaggggatgt gggcagagcc tcagcagggc cttttgctgt 65880

ttctgctttc ctgtgcagag agttccataa actggtattc aagatcaatg gctgggagtg 65940

agcccaggag gacagtgtgg gaagagcaca gggaaggagg agcagccgct atcctacact 66000

gtcatctttt gaaagtttgc cctgtgccca caatgctgca tcatgggatg cttaacagct 66060

gatgtagaca cagctaaaga gagaatcagt gaaatgcatt tgcagcacag atctgaataa 66120

atcctccaga atgtggagca gcacagaagc aagcacacag aaagtgcctg atgccaaggc 66180

aaagttcagt gggcaccttc aggcattgct gctgggcaca gacactctga aaagcactgg 66240

caggaactgc ctgtgacaaa gcagaaccct caggcaatgc cagccctaga gcccttcctg 66300

agaacctcat gggcaaagat gtgcagaaca gctgtttgtc atagccccaa actatggggc 66360

tggacaaagc aaacgtccat ctgaaggaga acagacaaat aaacgatggc aggttcatga 66420

aatgcaaact aggacagcca gaggacaaca gtagagagct acaggcggct ttgcggttga 66480

gttcatgaca atgctgagta attggagtaa cagaggaaag cccaaaaaat acttttaatg 66540

tgatttcttc taaataaaat ttacacccgg caaaatgaac tatcttctta agggataaac 66600

tttcccctgg aaaaactata aggaaaatca agaaaacgat gatcacataa acacagtggt 66660

ggttacttct actggggaag gaagagggta tgagctgaga cacacagagt cggcaagtct 66720

cctaacaaga acagaacaaa tacattacag taccttgaaa acagcagtta aacttctaaa 66780

tcgcaagaag aggaaaatgc acacacctgt gtttagaaaa ttctcagtcc agcactgttc 66840

ataatagcaa agacattaac ccaggttgga taaataagcg atgacacagg caattgcaca 66900

atgatacaga catacattca gtatatgaga catcgatgat gtatccccaa agaaatgact 66960

ttaaagagaa aaggcctgat gtgtggtggc aatcacctcc ctgggcatcc ccggacaggc 67020

tgcaggctca ctgtgtggca gggcaggcag gcacctgctg gcagctcctg gggcctgatg 67080

tggagcaggc acagagctgt atatccccaa ggaaggtaca gtcagtgcat tccagagaga 67140

agcaactcag ccacactccc tggccagaac ccaagatgca cacccatgca cagggaggca 67200

gagcccagca cctccgcagc caccaccacc tgcgcacggg ccaccacctt gcaggcacag 67260

agtgggtgct gagaggaggg gcagggacac caggcagggt gagcacccag agaaaactgc 67320

agaagcctca cacatccacc tcagcctccc ctgacctgga cctcacctgg cctgggcctc 67380

acctgacctg gacctcacct ggcctgggct tcacctggcc tgggcttcac ctgacctgga 67440

cctcacctgg cctcgggcct cacctggcct gggcttcacc tggcctgggc ttcacctgac 67500

ctggacctca cctggcctgg gcctcacctg acctggacct cacctggcct gggcttcacc 67560

tggcctgggc ttcacctggc ctgggcttca cctgacctgg acctcacctg gcctgggctt 67620

cacctgacct ggacctcacc tggcctcggg cctcacctgc acctgctcca ggtcttgctg 67680

gagcctgagt agcactgagg ctgtagggac tcatccaggg ttggggaatg actctgcaac 67740

tctcccacat ctgacctttc tgggtggagg cacctggtgg cccagggaat ataaaaagcc 67800

ccagaatgat gcctgtgtga tttgggggca atttatgaac ccgaaaggac atggccatgg 67860

ggtgggtagg gacagtaggg acagatgtca gcctgaggtg aagcctcagg acacaggtgg 67920

gcatggacag tgtccaccta agcgagggac agacccgagt gtccctgcag tagacctgag 67980

agcgctgggc ccacagcctc ccctcggggc cctgctgcct cctcaggtca gccctggaca 68040

tcccgggttt ccccaggcct ggcggtaggt ttgaagtgag gtctgtgtca ctgtggtatt 68100

actatgatag tagtggttat tactaccaca gtgtcacaga gtccatcaaa aactcatgcc 68160

tgggagcctc ccaccacagc cctccctgcg ggggaccgct gcatgccgtg ttaggatttt 68220

gatcgaggac acggcgccat gggtatggtg gctaccacag cagtgcagcc catgacccaa 68280

acacacgggg cagcagaaac aatggacagg cccacaagtg accatgatgg gctccagccc 68340

accagcccca gagaccatga aacagatggc caaggtcacc ctacaggtca tccagatctg 68400

gctccaaggg gtctgcatcg ctgctgccct cccaacgcca aaccagatgg agacagggcc 68460

ggccccatag caccatctgc tgccgtccac ccagcagtcc cggaagcccc tccctgaacg 68520

ctgggccacg tgtgtgaacc ctgcgagccc cccatgtcag agtaggggca gcaggagggc 68580

ggggctggcc ctgtgcactg tcactgcccc tgtggtccct ggcctgcctg gccctgacac 68640

ctgagcctct cctgggtcat ttccaagaca ttcccaggga cagccggagc tgggagtcgc 68700

tcatcctgcc tggctgtcct gagtcctgct catttccaga cctcaccagg gaagccaaca 68760

gaggactcac ctcacacagt cagagacaac gaaccttcca gaaatccctg tttctctccc 68820

cagtgagaga aaccctcttc cagggtttct cttctctccc accctcttcc aggacagtcc 68880

tcagcagcat cacagcggga acgcacatct ggatcaggac ggcccccaga acacgcgatg 68940

gcccatgggg acagcccagc ccttcccaga cccctaaaag gtatccccac cttgcacctg 69000

ccccagggct caaactccag gaggcctgac tcctgcacac cctcctgcca gatatcacct 69060

cagccccctc ctggagggga caggagcccg ggagggtgag tcagacccac ctgccctcaa 69120

tggcaggcgg ggaagattca gaaaggcctg agatccccag gacgcagcac cactgtcaat 69180

gggggcccca gacgcctgga ccagggcctg tgtgggaaag gcctctggcc acactcaggg 69240

gctttttgtg aagggccctc ctgctgtgtg actacggtgg taactcccac agtgatgaaa 69300

ccagcagcaa aaactgaccg gactcgcagg gtttatgcac acttctcggc tcggagctct 69360

ccaggagcac aagagccagg cccgagggtt tgtgcccaga ccctcggcct ctagggacac 69420

ccgggccatc ttagccgatg ggctgatgcc ctgcacaccg tgtgctgcca aacaggggct 69480

tcagagggct ctgaggtgac ttcactcatg accacaggtg ccctggtccc ttcactgcca 69540

gctgcaccag accctgttcc gagagatgcc ccagttccaa aagccaattc ctggggccgg 69600

gaattactgt agacaccagc ctcattccag tacctcctgc caattgcctg gattcccatc 69660

ctggctggaa tcaagagggc agcatccgcc aggctcccaa caggcaggac tcccacacac 69720

cctcctctga gaggccgctg tgttccgcag ggccaggccg cagacagttc ccctcacctg 69780

cccatgtaga aacacctgcc attgtcgtcc ccacctggca aagaccactt gtggagcccc 69840

cagccccagg tacagctgta gagagagtcc tcgaggcccc taagaaggag ccatgcccag 69900

ttctgccggg accctcggcc aggccgacag gagtggacgc tggagctggg cccacactgg 69960

gccacatagg agctcaccag tgagggcagg agagcacatg ccggggagca cccagcctcc 70020

tgctgaccag agacccgtcc cagagcccag gaggctgcag aggcctctcc agggggacac 70080

agtgcatgtc tggtccctga gcagccccca ggctctctag cactgggggc ccctggcaca 70140

gctgtctgga ccctccctgt tccctgggaa gctcctcctg acagccccgc ctccagttcc 70200

aggtgtggtt attgtcaggg ggtgccaggc cgtggtagag atggctacaa ttaccacagt 70260

ggtgccgccc atagcagcaa ccaggccaag tagacagacc cctgccacgc agccccaggc 70320

ctccagctca cctgcttctc ctggggctct caaggctgct gtctgccctc tggccctctg 70380

tggggagggt tccctcagtg ggaggtctgt gctccagggc agggatgact gagatagaaa 70440

tcaaaggctg gcagggaaag gcagcttccc gccctgagag gtgcaggcag caccacagag 70500

ccatggagtc acagagccac ggagccccca gtgtgggcgt gtgagggtgc tgggctcccg 70560

gcaggcccag ccctgatggg gaagcctgcc ccgtcccaca gcccaggtcc ccaggggcag 70620

caggcacaga agctgccaag ctgtgctcta cgatcctcat ccctccagca gcatccactc 70680

cacagtgggg aaactgagcc ttggagaacc acccagcccc ctggaaacaa ggcggggagc 70740

ccagacagtg ggcccagagc actgtgtgta tcctggcact aggtgcaggg accacccgga 70800

gatccccatc actgagtggc cagcctgcag aaggacccaa ccccaaccag gccgcttgat 70860

taagctccat ccccctgtcc tgggaacctc ttcccagcgc caccaacagc tcggcttccc 70920

aggccctcat ccctccaagg aaggccaaag gctgggcctg ccaggggcac agtaccctcc 70980

cttgccctgg ctaagacagg gtgggcagac ggctgcagat aggacatatt gctggggcat 71040

cttgctctgt gactactggg tactggctct caacgcagac cctaccaaaa tccccactgc 71100

ctcccctgct aggggctggc ctggtctcct cctgctgtcc taggaggctg ctgacctcca 71160

ggatggcttc tgtccccagt tctagggcca gagcagatcc caggcaggct gtaggctggg 71220

aggccacccc tgtccttgcc gaggttcagt gcaggcaccc aggacaggaa atggcctgaa 71280

cacagggatg actgtgccat gccctaccta agtccgcccc tttctactct gcaaccccca 71340

ctccccaggt cagcccatga cgaccaacaa cccaacacca gagtcactgc ctggccctgc 71400

cctggggagg acccctcagc ccccaccctg tctagaggag ttggggggac aggacacagg 71460

ctctctcctt atggttcccc cacctggctc ctgccgggac ccttggggtg tggacagaaa 71520

ggacgcctgc ctaattggcc cccaggaacc cagaacttct ctccagggac cccagcccga 71580

gcaccccctt acccaggacc cagccctgcc cctcctcccc tctgctctcc tctcatcact 71640

ccatgggaat ccagaatccc caggaagcca tcaggaaggg ctgaaggagg aagcggggcc 71700

gctgcaccac cgggcaggag gctccgtctt cgtgaaccca gggaagtgcc agcctcctag 71760

agggtatggt ccaccctgcc tggggctccc accgtggcag gctgcgggga aggaccaggg 71820

acggtgtggg ggagggctca gggccctgca ggtgctccat cttggatgag cccatccctc 71880

tcacccaccg acccgcccac ctcctctcca ccctggccac acgtcgtcca caccatcctg 71940

agtcccacct acaccagagc cagcagagcc agtgcagaca gaggctgggg tgcagggggg 72000

ccgccagggc agctttgggg agggaggaat ggaggaaggg gaggtcagtg aagaggcccc 72060

cctcccctgg gtctaggatc cacctttggg acccccggat cccatcccct ccaggctctg 72120

ggaggagaag caggatggga gattctgtgc aggaccctct cacagtggaa tacctccaca 72180

gcggctcagg ccagatacaa aagcccctca gtgagccctc cactgcagtg cagggcctgg 72240

gggcagcccc tcccacagag gacagaccca gcaccccgaa gaagtcctgc cagggggagc 72300

tcagagccat gaaggagcaa gatatgggga ccccaatact ggcacagacc tcagctccat 72360

ccaggcccac caggacccac catgggtgga acacctgtct ccggcccctg ctggctgtga 72420

ggcagctggc ctctgtctcg gacccccatt ccagacacca gacagaggga caggcccccc 72480

agaaccagtg ttgagggaca cccctgtcca gggcagccaa gtccaagagg cgcgctgagc 72540

ccagcaaggg aaggccccca aacaaaccag gaggtttctg aagctgtctg tgtcacagtc 72600

gggtatagca gcggctacca caatgacact gggcaggaca gaaaccccat cccaagtcag 72660

ccgaaggcag agagagcagg caggacacat ttaggatctg aggccacacc tgacactcaa 72720

gccaacagat gtctcccctc cagggcgccc tgccctgttc agtgttcctg agaaaacagg 72780

ggcagcctga ggggatccag ggccaggaga tgggtcccct ctaccccgag gaggagccag 72840

gcgggaatcc cagccccctc cccattgagg ccatcctgcc cagaggggcc cggacccacc 72900

ccacacaccc aggcagaatg tgtgcaggcc tcaggctctg tgggtgccgc tagctggggc 72960

tgccagtcct caccccacac ctaaggtgag ccacagccgc cagagcctcc acaggagacc 73020

ccacccagca gcccagcccc tacccaggag gccccagagc tcagggcgcc tgggtggatt 73080

ctgaacagcc ccgagtcacg gtgggtatag tgggagctac taccactgtg agaaaagcta 73140

tgtccaaaac tgtctcccgg ccactgctgg aggcccagcc agagaaggga ccagccgccc 73200

gaacatacga ccttcccaga cctcatgacc cccagcactt ggagctccac agtgtcccca 73260

ttggatggtg aggatggggg ccggggccat ctgcacctcc caacatcacc cccaggcagc 73320

acaggcacaa accccaaatc cagagccgac accaggaaca cagacacccc aataccctgg 73380

gggaccctgg ccctggtgac ttcccactgg gatccacccc cgtgtccacc tggatcaaag 73440

accccaccgc tgtctctgtc cctcactcag ggcctgctga ggggcgggtg ctttggagca 73500

gactcaggtt taggggccac cattgtgggg cccaacctcg accaggacac agatttttct 73560

ttcctgccct ggggcaacac agactttggg gtctgtgcag ggaggacctt ctggaaagtc 73620

accaagcaca gagccctgac tgaggtggtc tcaggaagac ccccaggagg gggcttgtgc 73680

cccttcctct catgtggacc ccatgccccc caagataggg gcatcatgca gggcaggtcc 73740

tccatgcagc caccactagg caactccctg gcgccggtcc ccactgcgcc tccatcccgg 73800

ctctggggat gcagccacca tggccacacc aggcagcccg ggtccagcaa ccctgcagtg 73860

cccaagccct tggcaggatt cccagaggct ggagcccacc cctcctcatc cccccacacc 73920

tgcacacaca cacctacccc ctgcccagtc cccctccagg agggttggag ccgcccatag 73980

ggtgggggct ccaggtctca ctcactcgct tcccttcctg ggcaaaggag cctcgtgccc 74040

cggtcccccc tgacggcgct gggcacaggt gtgggtactg ggccccaggg ctcctccagc 74100

cccagctgcc ctgctctccc tgggaggcct gggcaccacc agaccaccag tccagggcac 74160

agccccaggg agccgcccac tgccagctca caggaagaag ataagcttca gaccctcagg 74220

gccgggagct gccttcctgc caccccttcc tgccccagac ctccatgccc tcccccaacc 74280

acttacacac aagccaggga gctgtttcca cacagttcaa ccccaaacca ggacggcctg 74340

gcactcgggt cactgccatt tctgtctgca ttcgctccca gcgcccctgt gttccctccc 74400

tcctccctcc ttcctttctt cctgcattgg gttcatgccg cagagtgcca ggtgcaggtc 74460

agccctgagc ttggggtcac ctcctcactg aaggcagcct cagggtgccc aggggcaggc 74520

agggtggggg tgaggcttcc agctccaacc gctccactag ccgagactaa ggaagtgaga 74580

ggcagccaga aatccagacc attccatagc aaatggattt cattaaagtt accagacttc 74640

agtgtaagta acatgagccc catgcacaac aatcccttat gaaggggaag tcagtgtcgc 74700

ctcggatttc ttgaaaaaca caaaaactta tcaatgcctg taaaagtctg ttggaaagaa 74760

aatatgattc aagaatgtta tgcccaacaa agctggcata ttttctaccc ggacacactc 74820

agggaatgtg gtcccttgag tgcttctctc actgcgtaaa tcctacgtgg tgtttaagca 74880

tattcataaa tgtgtatgtc tatttttatg tgtaagatgg ttcattttta ttttatttat 74940

tcaatatgta caataaagaa tattgacaaa taggctggac atggtggctc ccacctgtaa 75000

tcccagccct ttgggaggcc gaggcgggca gatcacctga ggtctggagt tcgagaccag 75060

cctggccaac atgatgaaaa cccatctcta ctaaaaatac aaagattagc caggcatggt 75120

ggtgcatgcc tgtaatccca gccactcagg aggctgagac aggagaaatg cgtgaacccg 75180

gaaggcggag gttgcagtga gccgagatca caccactgca ctccagcctg gcgacagagc 75240

aagattccat ctcaaaaaaa aaaaaagaca aagaaatttg tttttttgaa taaagacaaa 75300

tttcatcaca cgaagataaa gatgcaaagc tccagacagg aaggcacgga cagcacagtg 75360

aagcccggag cgggcgctgg ggggccaggg gcatggcggg ggtgccagcg tctctcggtt 75420

cctaccatgg ccactccagc ctgtgttctc acgaggatgg ctgtgcaatg ctaggagcgt 75480

gttcgaagct ctagggcaac cactggaagt gaggctgagg agcagagccc agaggcccgt 75540

ggagctgatg aaaagaaagc tggagaaagt gtttgctgcc tcccaacatg gtaagaaaag 75600

atagaaagag agagcacacg gcaaagggag cttgctgagg gactctttac aatggcttgc 75660

acagagctca gggggtctgg gaggctaggg ccctgcgcag ggcagtcacc ccagcctgct 75720

gaccaaggtt tgctgcaggc agctctgggg gtggttgagg cgcggtccct ggagccaccc 75780

ctcaagggaa cgaggcagca gagtgggcca aggcccaggt cggctgcaag gctgcccagg 75840

acttggggtc cttacatcag cagccactga tgcagctggc ccagagagag gcgccgagca 75900

ggttgcctcc aggggacaaa ccaggtcgga gagggtgagg cagtggatgg agccacaaca 75960

accccgggca cgggtgacac gcacgttcat gcacatctga cccttcctcc ctcaccaaac 76020

aggtccccct gccttcccca tggttgcgaa aaagcaaaat gtagacgttt tttctttttt 76080

aattcatgtt ttaattgaca aatgaagccg tatatattta ttgtgtacaa catgatgctt 76140

taaaatatgt atacatcgtg gaacagcaac gttgagctaa tttaacacgc attacttcac 76200

atacttgtca tcttttgtgg cgagaatgct taaaatccac tctcttagta ttttttaaga 76260

atgcaataca ttgttgtcaa ctgtggtcac cgtcatgcat agccaagctc ccgacctcac 76320

cctcctgcca gctcaggctg tgcatccttt caccagcatc ccccaccccg gcccctggcc 76380

ctggtaacta ccactctata ctctacgtat gagttcagct ttttaagatt ccacagatga 76440

atgagatcat acagtatttg ctttctatgc ctggcttatt ttagttaaca cactgtcctc 76500

cagatccatc cgttgttgca aatgacaggg tttcattctt tttaaagtct aaagagtatt 76560

ccattgtgtc aatggacctc atttgcttta tccatgcatc aactatggac atttaggttg 76620

attccatttc ttagctgttg tggatggtgc tgcagtaaac atggggctgc agatgtctct 76680

tcaacatact gacatcatgt cctttggata aatacccagt agtgggatcg ctggatcaca 76740

atgtacagtt ttttttttaa tggaaacttt cattttttgg tgaaattagg aaaacagata 76800

aaacccacag aatccaaaat atatgtgaag atgccaaaaa cagttgacat tgggcagagg 76860

tcacatggaa ggaagtgaat acatgacggg gtgtgagggc ccagaggcag ctgaaatacg 76920

ctttctaaac acaaggacct cttctgagag ggcagaagtt ttatcctgca catgcaatga 76980

ccagcacagc taaaatacac tttctaaaca tgaggacctc ttctgagagg gcagctttat 77040

cctgcaaatg caatgaccag cacaggaccc agaataaaga gagttgccag cggacgcctg 77100

gtgtccatgt gtccaggtga gttcgagatg cggacggcgc tggccagcca gtcacaccct 77160

aagtcaatct gctgcatgca tttgtccttg ccacagcaga aaacgagaaa gcctttgggc 77220

tgcaaagctt cacaggctcc tcttctcccg actccatgga aacagctaca aagagcaggc 77280

ccagtagagc ttaattcatg aaaatgagta ataaacttga actggaacag tatcgacttt 77340

ttagaaacgg cagcaaagtg tataaaaaat attcaccaga acaatatttc caaacgatga 77400

gatgagaatt tcagccaagt aatcctccat ggatagaaaa taatgaaggg attggattta 77460

tgaaggaaaa tcatggagct caaatacaag aaaagagaat caaaaatgaa caggaggaga 77520

taaaatatgg tttggccaaa gttacaaaat aaatttttta aaaacccttc atcatggcaa 77580

gtagaaagag cgagaggaaa aacagatccc gtggaagaca caaataggac atggggagaa 77640

aaatgaatga gatgaaacag agcagaaata aaattttacg gaactaaaga caagtgatct 77700

gaacctgcct ggggcctggg ggacctcgcc accctgaagg gaaagaacat gcctggctgg 77760

ctttgccacc tgctcattgc agagccccac agcttgcaac aaacataggc ggtagccagg 77820

gagtggttac agcaggcctt gagcaagacc cagtgttgtg ctgacttcag gtctgaccca 77880

gcactgtcat agtggtggtg tccatagtgg tagtgggggt gcttgtgtca ctccaccccc 77940

atctccagga ggctcagaac agacagagag agactccatt tgtttgggag aaagtaaggg 78000

atgagaacaa gagtctctgc ctggtaatcc agagaattat tctagatctt ggccaagatt 78060

atcaaagcag tacctctatg agtcttttgg gcttggagtc cccctaaagc agatatagct 78120

aagatcacaa cacccaagtc cttttgaata tgtgggaaga cttcccaagg acaggagcaa 78180

acaaacaagc ccagactgca aaaaaacaag ccgagactgc aataaacacc tcactcttca 78240

atgcccaggc actgaagaac atctcctagc agcaacacca tccaggaaaa catggcctca 78300

accagtgaac taaataaggc accagggacc agtctcggag aaatagaggt atgttatctt 78360

tcagagaatt caaagtagct ttgttgagga aactcaaaga aattcaagat aacacagtga 78420

aggaattcag aatcctatcc gataaattta acagagattg aagcaattaa aaagaattaa 78480

gcagaaatta tggagctgaa aaatgcaatt ggcatactga aaaatgcatc agagtatttt 78540

catagcctca tatatcaagt agaagaaaga attagtgagc ttgaaaacag gctatttgga 78600

aaagcacgat aaaaggagac aaaagagaaa agaataaata acaatgaagc atatctacag 78660

gatctagaaa atagcctcaa aaggccaaat ctaagaatta ttagccttaa agaggaggta 78720

gagaaagagg gatggagagt ttattcaaag ggataataac agaaaacttc ccaaacctag 78780

agaaagatat caatatccaa atgcaagaag gatgtagtac accaaggaga tttaatgcaa 78840

agaagactac ctcaaggcat tcaatactca aactcccata tgacaaggac tttaaaaaga 78900

tcctaaaagc agcaaaagaa aagaaatgaa taaaatacta tggagctcca atatgtctgg 78960

cagcagactt ttcagtgaag actttatatg ccaggagaga gtgtcataat ggatttaaag 79020

tgctgaagga aaaaactttt accctcgaac agtatagctg gtgaaattat ccttcaaaca 79080

tgaaggagaa ataatttgtt tccagacaaa tgttgaggga tttcatgaac accagacctg 79140

tcttttaaga aatgctaaag ggagtacttc aatcagaaag aaacacgtta gtgaacaata 79200

agaaatcatc tgaaggcaca aaactcaccg gtaatagtaa gtacacagaa aaacacagaa 79260

tattataaca ctgtaactgt ggtgtgtaaa ctccttttgt ttgtttgttt gtttgtttgt 79320

ttgtttttgt ttttagacgg agttttgctc cagcccaggc tggagtgcaa tggcacaatc 79380

tcagctcact gcaacttcca cctcccgggt tcaagcaatt ctcctgcctc agcctcccaa 79440

gtagctggga ttacaggcat gtgctaccat gtccagctaa ttttgtattt tagtagagac 79500

ggtgtttcac catgttggtc aggctagcct tatcttgagt agaaaaacta aatgatgaag 79560

caatgaaaaa taataactac aacttttcaa gacatagtac aataagatat aaatcataac 79620

aaaaagttaa aaggtggagg gatgaagtta aggcatagag tctttattag ttttcttttt 79680

acttgtctgt ttatgcaaac agtgttaagt tgtcatcagt ttaaaataat gggtcataag 79740

atactatttg caagcctcat ggtaacgtca aaccaaaagc aatacaacag atacacaaaa 79800

aacaaaaagc aagaagctaa attacgtcat cagagaaaat caccttcact aaaaggaaga 79860

cggagaaaag aatgaagaga gagaagacca aaagcaaata gcaatatggc aggagtaagt 79920

ccttacttat caataatacc attgaatgta aatggactaa actctccaat caaaagacat 79980

agagtggctg aatcaattaa agaaaaaaca agacccattg atctgttgtc cacaagaaac 80040

acactttatc tataaagaca cacatagact gaaaacaaag ggatggaaaa agatactcca 80100

cgccaatgga aaccaaagaa agagcaggag tagctacact tatatcaggc aaaatagatt 80160

tcaagacaaa aactataaga agagacaagg tcactaatga taaacaggtc aattcagcaa 80220

gaggatataa caattgtaaa tatatatgca cccaatgctg gagcacccag atatataaag 80280

caagtattta ctagagctaa agagagaaat agactccaat gcaataatag ctggagattt 80340

caacatccca ctttcaacat tgaacagatc ctccagatag aaaatcaaca aagaaatatt 80400

ggacttaatc tgcactatcg accaaatgga tctaacagat atttacagaa catttcatcc 80460

aacagctgca gaacacacat tcttttcctc agcacataga tcattctcaa ggatagacca 80520

tatgttgggt cacaaaacaa gttttaaaat attcaaatac attgaaataa tatcaagcat 80580

cttctgtgac cacaatggac taaaactaga aatcaataac aagaggaatt ttggaaacta 80640

tataaatata tggaaattaa tgaatgctga gtgggtcaat gaagcaatta agaaggaaac 80700

tgaaattttt cttggaacga atgatcatgg aaacagaaaa taccaaaacc tatgggatac 80760

agcaaaagca gtactaagag ggaagtttac agctacaaat gcttacatta aaaaagaaga 80820

aaaacttcaa taaaaaaacc taacaatgca tcttaaagaa ctagaaaagc aagaggaaat 80880

caaatccaaa attagtagaa gaaaacagta aaggtcagag cagaaataag taaaattgaa 80940

atgaagaaaa caatacaaaa gatcaataaa acaacaggtt gttttcttga aaagttaaac 81000

aaaattgaca aacctttagc cagactaaga aaaaaagaca gaagatccaa ataaataaaa 81060

tcagagatga aaaaggtgac attacaactt acaccacaga aattcaaagg atcattagtg 81120

gctactataa gcaactatat gccaataaat tggaaaatct agaagaaatg cagaaattcc 81180

tagacacata caacctccca agattaaacc aagaagaaat tcaaaacctg aacagactga 81240

taacaagtaa tgagatcaaa gccgtaataa aaagcctccc agtaaagaga agcccaggac 81300

ccgacggctt cactgctgaa ttctaccaaa catttaaagt agaactaata ccaatcctac 81360

tcaaactatt ccaaaaaata gaggtggaag gaatacttca aaactcatta tacgaggcca 81420

gtattaacct gacaccaaaa ctagacaaag acacatgaaa aaaagaaaac tacaggccaa 81480

tatgtctgat gaatattgac acaaaaatcc tcaacaaaat actagcaaac caaattcaac 81540

tacacattag aaagttcact catcatgacc aagtggaatt tatctaactt gggatgcaaa 81600

gatggttcaa catatgcaaa tcaatcaatg tgatacatca tatcaacaga atgaacaaca 81660

aaaaccattt gatcatttaa ttgatactga aaaagcattt gataaaattc aacattcctt 81720

cataataaaa attctcttct atactaggta caaaagaaac ttacctcaac ataataaagc 81780

catatatgac agtcccacag tatgatacta aatgaggaaa aactgagagc ctttcctcta 81840

cgatctggaa catgacaaag atgcccactt tcatcactgt tattcaacat agtactggaa 81900

gtcctagctg gagcgatcag acaagagaaa gatataaaag acatccaaat tggaaaggaa 81960

taagtcaaat tatcctcatt tgcatatggt atgatcttct atttagagct aactaaagac 82020

tccaccaaaa aaagttatta gaactgacga acaaattcag taaagctgca ggatacaaaa 82080

tcaacataca aaaatcagta gcatttctat atgccaacaa tgaccaatgt gaaaaagaaa 82140

ttaaaaagta accctattta caataaccac aaataaacac ctaggaatta accaaagagg 82200

taaaagattt ctgtaatgaa aactataaaa cactgatgaa agaaattgaa gagtacacca 82260

aaaaatggaa agcaattgca tgttcatgga ttagaagaat cagtgttgtt ataatgtcca 82320

tactatccaa agcaatctac agattcaatg caatccttat caaaatacca atgacatcat 82380

tcacagaaat agaaaaaaaa aatcctaaaa tttacgtgga accacaaaga cccagaatag 82440

ccaaagctct cctaagcaaa aagaacgaaa ctgtaggaat gacattgcct gtcttcaaat 82500

tctactacag agctatagat agtaaccaaa acagcgtggt actggcataa aaacagacac 82560

agagacaaac agaacaaaat ttaaaaaccc agaaataaat ccacacacct acagcaaatt 82620

catttttgac aaagttgcca agaacatact ctggggaata gataatgata tctcttcaat 82680

aaatagtgtg gggaaaactg gatatccata tacataacag tgaaactaga cccctctctc 82740

tctcactata tacaaaaatc aaatcaaaat tgtttaagga cttaaatcta agacctcata 82800

ctatgaaacc actgcaagac aaccttggcg gaaactctcc aagacatcag tccaggcaaa 82860

gatttcttga gtaatatccc acaagcacag acaaccaaag caaaaatgga caaatgggat 82920

cacatcaagt taaaaagctt ctgcacagta agggaaacaa ccaacaaaat gaagagacaa 82980

cccacagaat gggagaaaat atttgaaaaa tacccatctg gcaagggatt aaaaaccaga 83040

atatatgcag aatatataag gagctcaaac agtgctatag aaaaaaaaat ctaataatct 83100

gatttaaaaa tgggaaaaat gttagaatag acatttctta aaataagaca tacagatggc 83160

aaaccgacat ggaacggtgc tcaacatcat ggattatcac agaaacacaa tcaatcaaaa 83220

ctaaaactaa aatgtgctat catctcaccc cagttaaaat ggctgatatc cagaagacag 83280

gcaataacaa atgctggcaa ggatgtgggg aaaagggagc ccccatacac tgttgctggg 83340

attgtaaatt agtacaacca ctgtggagag cagcatgaaa gttcctcaaa aaactgaaag 83400

aaagctacca taggatccag caatcccact gctgtgtata tactacaaaa gaaaggaagt 83460

cagtatatga agaggtatct gcactcccat gtttgttgca gccctgttca caacagccaa 83520

gatttggaag caacctaagt gtccatcagc agttgaatgt ataaagaaaa tgtggtgcat 83580

atacacaatg gagtattatt caataataaa aaggaatgag attgagtcat ttgcaacaac 83640

atggatggaa ctggagatca ttatgtgaag tgaaataagc caggcacaga aagacaaaca 83700

ttacaatgtt cttacttatt aatgagatct aaaaatcaaa acaattgcac ccatgttcat 83760

aaagagtaaa aggatggtta ccagatgctg agaacggtgg tggggggata gggaaaggtg 83820

gcagtggtta acgggtacaa aaaaatagaa agaatgaata agacttgcta cttgatagca 83880

cagcaaggtg gctatagtca gtaatttagt tgtatatttt taataatgaa aggtgtataa 83940

ttggattgtt tctaacacaa aggataatgc ttaagaggat ggatacccca ttttccatga 84000

tgtgattatt tcacattgca cgcctagatc aaaacatcca atgtacccca taaatatata 84060

catcttctat gtacccataa aaattctgta aaataaaata tataaaaaga ggtgacagat 84120

atggaagaca ggcaaagaag agacgacatc cacataatcc gagtacctaa gaaagaatgg 84180

agtccagtgc atctcaggag ccaccattct aagccaattt tctctggttc tctcagtcac 84240

cctaccaata cgtgggcaat cttgttttat ttcaggatag agtttttgaa attatagatt 84300

taagtatgct ttctgttcta ttacttttgg taattaattt tagaaagaac taatttgggc 84360

acaaatttga aaaaattcta aatccaaaaa aaaaaagaaa aaaacacaca cacaatcatc 84420

tataaggggg atgatgacca gtcctagatt tctcaccagc cacattcaag atcagtaaat 84480

ggtaggacaa aacctgtagg gtccttaagg gggaaagaag tagtggatag tccagagtct 84540

atatacagcc aactgttctt gaagaaaaaa ggctgctgaa aaggagttcc aaacattcta 84600

taatccataa tctcatgatg aaactactag aggaagacca ccagccatca aaaggtgctt 84660

ggagaaccca gggccaagaa ccaaaagtaa atattaagtg tccttaactg cgagactaag 84720

atagaaatga ctgtggggga ccatgtggcc tcaacagagg tgaaatggtg tctgcctgac 84780

aaagtggaca ttttacaatg atcaaaacac agaatatgag atagagagca cttctgaatt 84840

actgcctcac tccaaataac tctcagccaa aggacttcag taaaaccaaa ttgggcatat 84900

tagacagtac aaacaaattc taagaaaata atattactga ttacaatcac atgatgctag 84960

agatggaggg gaaaaggaag aggaaaccag gtaatttcat actcgtatat agtaaagaac 85020

taaagtacat tgtccaaaga agaacaaaga atattttgga aagttataaa ggtagccact 85080

acacatagaa gatagcaaag aacaagaaaa cttaagatgg aaaacttttt ggaagcataa 85140

gaatagaaaa tataaactac taagataaga ttgaagccaa acagatctat gaaaacaaca 85200

aacatcaatg gccttaactt gcctattaaa aggaagagac tttcaaattg gaccacaaga 85260

taaaacccaa ctctatatag catatgagta ttacacacaa aatgggaaaa gctgaaaaaa 85320

cttgggcaaa attcacccca agcaaattcc actgtttcct ttgggacaaa atgccaagct 85380

ccatgccagg gaagatgatt ctcctcagac cttctcctca ctctcccagt cctcttaggg 85440

aaggaattgg gtgttagagg agggagactc tgtcgattat cagctgaagc agtggtgtgc 85500

tcctgcgttg cttctgacct gggaaatgaa gcagcaagac tctttctgct gtgtctttgc 85560

ccagaagggc catcccccca gagcagagta cccaggccgg caggagcagt ggtggaagcg 85620

tggaaaccac gtctcctaca gcagagacca tcagaagcgg agcctcgggt ataagggaaa 85680

caacgcgttc tccctaacct gggagtgaca gacagcgtca ttcctcacag tgataccctg 85740

tgttctagcc atctggccca tgacagagcc agcccagagc cagcccagag ccagcccctc 85800

accatcctgg agcctggcca gctcgccaag ctgcaccata ggcctggaag gcgtggagac 85860

ctgcggcagt gccctgtcct cccgtgaggc ctgccatccc tgccaggggt cgcctctggc 85920

ttctccttct ccaggaccgc acggtccaga ggctcagtgc ctggagtagg tgttgcctcc 85980

ctgcttctag gcccagaccc tcccttgttc ctgaccccgg gcctttccct ctggcttgga 86040

catccagggc cctgtctcag ctggggagct gctcctgctc aaggactgtc ttccgcggga 86100

tcgaaaggcc gcgtcctgaa caatgcgtgg gccacgtaag cggagcaggc tctaaaggcc 86160

gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa 86220

cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg 86280

gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag 86340

cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc 86400

tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc 86460

gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa 86520

cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg 86580

gccacgggag cggagcagac tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgtgtgg gccacgtgag 86640

cggagcgccc tctccactgc cctcggggcc gcagctccca gctcagctcc cagccctgct 86700

cagggcagcc aggccaggag gtaccatcca ggctaagtga ccctcagggg ggacaggtgc 86760

cccaggagat gccagctgtt gggagaggct gggggaccaa ctcgacctgg cctgtgggcc 86820

ctgccctggc cacccattgt aggatccagc cgccacgcct gtgacactcg tgtgctttcc 86880

ctggtgtgtg cttgtggcag gtgggggcag agggtcctca ggccagagag ccactccccc 86940

agcgccagac caccctcttc ctcactcccc cacctcaccc cctcacaggt gcctcccagg 87000

ccatcagggc ccaaccaccc ctaaacaaat gggttctcgg cccctcgtgg ctggaggtgg 87060

gttctctcac cattcccagc ctaagactcc atccccatgc tggcagctgt tcaaccatgt 87120

ctagagagat ccactgtccc agacagcacc tcagggtccc ccgtcctgcc tggaaccctg 87180

taggaaactc cacaaaccgc cgccattctg tccacacccc tacaggagcc ccaaccctct 87240

ccccacatcc aggcttccct cccagacccc tcatccctgc ccgcacggtg cctgaggggg 87300

ccttcttggg cagcgcctaa gcaagccccc agcacccttc ggccccttca aggcacacag 87360

gccccctttc cacccagcct caggaaacca cctgtgtcct ccaacgacag gtcccagcct 87420

cccagccttt gccttgcctg ttcctctccc tggaactctg ccccgacaca gaccctcccc 87480

agcaagcccg caggggcacc tcccctgccc ccagacaccc tgtgcccgtc agttcatccc 87540

cagcagaggc cctcaccagg cacaccccca tgctcacacc tggccccagg cctcagcctc 87600

cctgagggcc ccacccagcc cgcgtctggc cagtggtgcg tgcaaagccc ctcacccaga 87660

ctcggcggaa ggcagccagt gcaggcctgg ggaggggctc tccttagacc accttgcacc 87720

ttccctggca cccaccatgg gaagagctga gactcactga ggaccagctg aggctcagag 87780

aagggaccca gcactggtgg acacgcaggg agcccacgcc agggcgccgt ggtgagtgag 87840

gcccagtgcc acccactgag gcctcccgtt cagtgggacg acggtgaaca ggtggaacca 87900

accaggcaac ccccgccggg ccccacagac gggatcagag caggaaaggc ttcctgcccc 87960

tgcaggccag cgaggagccc tggcgggggc cgtggccctc caggcgagga ggctcccctg 88020

gccaccgcca cccgggcctc tctgctgctg ggaaaacaag tcagaaagca agtggatgag 88080

aggtggcgtg acagacccag cttcagatct gctctaattt acaaaagaaa aggaaaaaca 88140

cacttggcag ccttcagcac tctaatgatt cttaacagca gcaaattatt ggcacaagac 88200

tccagagtga ctggcagggt tgagggctgg ggtctcccac gtgttttggg gctaacagcg 88260

gaagggagag cactggcaaa ggtgctgggg gcccctggac ccgacccgcc ctggagaccg 88320

cagccacatc agcccccagc cccacaggcc ccctaccagc cgcagggttt tggctgagct 88380

gagaaccact gtgctaactg gggacacagt gattggcagc tctacaaaaa ccatgctccc 88440

ccgggacccc gggctgtggg tttctgtagc ccctggctca gggctgactc accgtggctg 88500

aatacttcca gcactggggc cagggcaccc tggtcaccgt ctcctcaggt gagtctgctg 88560

tctggggata gcggggagcc aggtgtactg ggccaggcaa gggctttggc ttcagacttg 88620

gggacaggtg ctcagcaaag gaggtcggca ggagggcgga gggtgtgttt ttgtatggga 88680

gaagcaggag ggcagaggct gtgctactgg tacttcgatc tctggggccg tggcaccctg 88740

gtcactgtct cctcaggtga gtcccactgc agccccctcc cagtcttctc tgtccaggca 88800

ccaggccagg tatctggggt ctgcagccgg cctgggtctg gcctgaggcc acaccagctg 88860

ccatccctgg ggtctccgcc atgggctgca tgccagagcc ctgctgtcac ttagccctgg 88920

ggccagctgg agcccccaag gacaggcagg gaccccgctg ggcttcagcc ccgtcaggga 88980

ccctccacag gtagcaagca ggccgagggc agggacggga aggagaagtt gtgggcagag 89040

cctgggctgg ggctgggcgc tggctgttca tgtgccgggg accaggcctg cgctttagtg 89100

tggctacaag tgcttggagc actggggcca gggcagcccg gccaccgtct ccctgggaac 89160

gtcacccctc cctgcctggg tctcagcccg ggggtctgtg tggctgggga cagggacgcc 89220

ggctgcctct gctctgtgct tgggccatgt gacccattcg agtgtcctgc acgggcacag 89280

gtttgtgtct gggcaggaac agggactgtg tccctgtgtg atgcttttga tatctggggc 89340

caagggacaa tggtcaccgt ctcttcaggt aagatggctt tccttctgcc tcctttctct 89400

gggcccagcg tcctctgtcc tggagctggg agataatgtc cgggggctcc ttggtctgcg 89460

ctgggccatg tggggccctc cggggctcct tctccggctg tttgggacca cgttcagcag 89520

aaggcctttc tttgggaact gggactctgc tgctggggca aagggtgggc agagtcatgc 89580

ttgtgctggg gacaaaatga ccttgggaca cggggctggc tgccacggcc ggcccgggac 89640

agtcggagag tcaggttttt gtgcacccct taatggggcc tcccacaatg tgactacttt 89700

gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcctcag gtgagtcctc acaacctctc 89760

tcctgcttta actctgaagg gttttgctgc atttttgggg ggaaataagg gtgctgggtc 89820

tcctgccaag agagccccgg agcagcctgg ggggctcagg aggatgccct gaggcaacag 89880

cggccacaca gacgaggggc aagggctcca gatgctcctt cctcctgagc ccagcagcac 89940

gggtctctct gtggccaggg ccaccctagg cctctggggt ccaatgccca acaacccccg 90000

ggccctcccc gggctcagtc tgagagggtc ccagggacgt agcggggcgc cagttcttgc 90060

ctggggtcct ggcattgttg tcacaatgtg acaactggtt cgacccctgg ggccagggaa 90120

ccctggtcac cgtctcctca ggtgagtcct caccaccccc tctctgagtc cacttaggga 90180

gactcagctt gccagggtct cagggtcaga gtcttggagg cattttggag gtcaggaaag 90240

aaagccgggg agagggaccc ttcgaatggg aacccagcct gtcctcccca agtccggcca 90300

cagatgtcgg cagctggggg gctccttcgg ctggtctggg gtgacctctc tccgcttcac 90360

ctggagcatt ctcaggggct gtcgtgatga ttgcgtggtg ggactctgtc ccgctccaag 90420

gcacccgctc tctgggacgg gtgccccccg gggtttttgg actcctgggg gtgacttagc 90480

agccgtctgc ttgcagttgg acttcccagg ccgacagtgg tctggcttct gaggggtcag 90540

gccagaatgt ggggtacgtg ggaggccagc agagggttcc atgagaaggg caggacaggg 90600

ccacggacag tcagcttcca tgtgacgccc ggagacagaa ggtctctggg tggctgggtt 90660

tttgtggggt gaggatggac attctgccat tgtgattact actactacta cggtatggac 90720

gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc tcctcaggta agaatggcca ctctagggcc 90780

tttgttttct gctactgcct gtggggtttc ctgagcattg caggttggtc ctcggggcat 90840

gttccgaggg gacctgggcg gactggccag gaggggacgg gcactggggt gccttgagga 90900

tctgggagcc tctgtggatt ttccgatgcc tttggaaaat gggactcagg ttgggtgcgt 90960

ctgatggagt aactgagcct ctagactgag cattgcagac taatcttgga tatttgtccc 91020

tgagggagcc ggctgagaga agttgggaaa taaactgtct agggatctca gagcctttag 91080

gacagattat ctccacatct ttgaaaaact aagaatctgt gtgatggtgt tggtggagtc 91140

cctggatgat gggataggga ctttggaggc tcatttgagg gagatgctaa aacaatccta 91200

tggctggagg gatagttggg gctgtagttg gagattttca gtttttagaa taaaagtatt 91260

agctgcggaa tatacttcag gaccacctct gtgacagcat ttatacagta tccgatgcat 91320

agggacaaag agtggagtgg ggcactttct ttagatttgt gaggaatgtt ccacactaga 91380

ttgtttaaaa cttcatttgt tggaaggaga gctgtcttag tgattgagtc aagggagaaa 91440

ggcatctagc ctcggtctca aaagggtagt tgctgtctag agaggtctgg tggagcctgc 91500

aaaagtccag ctttcaaagg aacacagaag tatgtgtatg gaatattaga agatgttgct 91560

tttactctta agttggttcc taggaaaaat agttaaatac tgtgacttta aaatgtgaga 91620

gggttttcaa gtactcattt ttttaaatgt ccaaaattct tgtcaatcag tttgaggtct 91680

tgtttgtgta gaactgatat tacttaaagt ttaaccgagg aatgggagtg aggctctctc 91740

ataacctatt cagaactgac ttttaacaat aataaattaa gtttcaaata tttttaaatg 91800

aattgagcaa tgttgagttg gagtcaagat ggccgatcag aaccagaaca cctgcagcag 91860

ctggcaggaa gcaggtcatg tggcaaggct atttggggaa gggaaaataa aaccactagg 91920

taaacttgta gctgtggttt gaagaagtgg ttttgaaaca ctctgtccag ccccaccaaa 91980

ccgaaagtcc aggctgagca aaacaccacc tgggtaattt gcatttctaa aataagttga 92040

ggattcagcc gaaactggag aggtcctctt ttaacttatt gagttcaacc ttttaatttt 92100

agcttgagta gttctagttt ccccaaactt aagtttatcg acttctaaaa tgtatttaga 92160

attcattttc aaaattaggt tatgtaagaa attgaaggac tttagtgtct ttaatttcta 92220

atatatttag aaaacttctt aaaattactc tattattctt ccctctgatt attggtctcc 92280

attcaattct tttccaatac ccgaagcatt tacagtgact ttgttcatga tcttttttag 92340

ttgtttgttt tgccttacta ttaagacttt gacattctgg tcaaaacggc ttcacaaatc 92400

tttttcaaga ccactttctg agtattcatt ttaggagaaa gacttttttt ttaaatgaat 92460

gcaattatct agacttattt cagttgaaca tgctggttgg tggttgagag gacactcagt 92520

cagtcagtga cgtgaagggc ttctaagcca gtccacatgc tctgtgtgaa ctccctctgg 92580

ccctgcttat tgttgaatgg gccaaaggtc tgagaccagg ctgctgctgg gtaggcctgg 92640

actttgggtc tcccacccag acctgggaat gtatggttgt ggcttctgcc acccatccac 92700

ctggctgctc atggaccagc cagcctcggt ggctttgaag gaacaattcc acacaaagac 92760

tctggacctc tccgaaacca ggcaccgcaa atggtaagcc agaggcagcc acagctgtgg 92820

ctgctgctct taaagcttgt aaactgtttc tgcttaagag ggactgagtc ttcagtcatt 92880

gctttagggg gagaaagaga catttgtgtg tcttttgagt accgttgtct gggtcactca 92940

catttaactt tccttgaaaa actagtaaaa gaaaaatgtt gcctgttaac caataatcat 93000

agagctcatg gtactttgag gaaatcttag aaagcgtgta tacaattgtc tggaattatt 93060

tcagttaagt gtattagttg aggtactgat gctgtctcta cttcagttat acatgtgggt 93120

ttgaattttg aatctattct ggctcttctt aagcagaaaa tttagataaa atggatacct 93180

cagtggtttt taatggtggg tttaatatag aaggaattta aattggaagc taatttagaa 93240

tcagtaagga gggacccagg ctaagaaggc aatcctggga ttctggaaga aaagatgttt 93300

ttagttttta tagaaaacac tactacattc ttgatctaca actcaatgtg gtttaatgaa 93360

tttgaagttg ccagtaaatg tacttcctgg ttgttaaaga atggtatcaa aggacagtgc 93420

ttagatccga ggtgagtgtg agaggacagg ggctggggta tggatacgca gaaggaaggc 93480

cacagctgta cagaattgag aaagaataga gacctgcagt tgaggccagc aggtcggctg 93540

gactaactct ccagccacag taatgaccca gacagagaaa gccagactca taaagcttgc 93600

tgagcaaaat taagggaaca aggttgagag ccctagtaag cgaggctcta aaaagcacag 93660

ctgagctgag atgggtgggc ttctctgagt gcttctaaaa tgcgctaaac tgaggtgatt 93720

actctgaggt aagcaaagct gggcttgagc caaaatgaag tagactgtaa tgaactggaa 93780

tgagctgggc cgctaagcta aactaggctg gcttaaccga gatgagccaa actggaatga 93840

acttcattaa tctaggttga atagagctaa actctactgc ctacactgga ctgttctgag 93900

ctgagatgag ctggggtgag ctcagctatg ctacgctgtg ttggggtgag ctgatctgaa 93960

atgagatact ctggagtagc tgagatgggg tgagatgggg tgagctgagc tgggctgagc 94020

tagactgagc tgagctaggg tgagctgagc tgggtgagct gagctaagct ggggtgagct 94080

gagctgagct tggctgagct agggtgagct gggctgagct ggggtgagct gagctgagct 94140

ggggtaagct gggatgagct ggggtgagct gagctgagct ggagtgagct gagctgggct 94200

gagctggggt gagctgggct gagctgggct gagctgggct gagctggggt gagctgagct 94260

ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct ggggtgagct 94320

gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct ggggtgagct gagctgagct 94380

ggggtgagct gagctgagct gagctgagct gagctggggt gagctgagct gagctgagct 94440

ggggtgagct ggggtgagct gagctgagct ggagtgagct gagctgggct gagctggggt 94500

gagctgggct gagctggggt gagctgagct gagctgagct gagctggggt gagctgagct 94560

gagctggggt gagctgagct ggggtgagct gggctgagct gagctgagct gagctgagct 94620

gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct 94680

ggggtgagct gagctgagct gggctgagct ggggtgagct gggctgagct gggctgagct 94740

gggctgagct ggggtgagct gagctggggt gagctgagct gagctgggct gagctgagct 94800

gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct gagctgagct ggggtgagct 94860

gagctgagct gggctgagca gggctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct 94920

gggctgagct gggctgagct gagctgagct gggctgagct gggctgagct gggctgagct 94980

gggctgagct gggctgagct ggggtgagct gagctggggt gagctggggt gagctgagct 95040

ggggtgagct gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct ggggtgagct 95100

gagctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct gagctagggt gaactgggct 95160

gggtgagctg gagtgagctg agctgaggtg aactggggtg agccgggatg ttttgagttg 95220

agctggggta agatgagctg aactggggta aactgggatg agctgtggtg agcggagctg 95280

gattgaactg agctgtgtga gctgagctgg ggtcagctga gcaagagtga gtagagctgg 95340

ctggccagaa ccagaatcaa ttaggctaag tgagccagat tgtgctggga tcagctgtac 95400

tcagatgagc tgggatgagg taggctggga tgagctgggc tagctgacat ggattatgtg 95460

aggctgagct agcatgggct ggcctagctg atgagctaag cttgaatgag cggggctgag 95520

ctggactcag atgtgctaga ctgagctgta ctggatgatc tggtgtaggg tgatctggac 95580

tcaactgggc tggctgatgg gatgcgccag gttgaactag gctcagataa gttaggctga 95640

gtagggcctg gttgagatgg ttcgggatga gctgggaaaa gatggactcg gaccatgaac 95700

tgggctgagc tgggttggga gaccatgaat tgagctgaac tgagtgcagc tgggataaac 95760

tgggttgagc taagaataga ctacctgaat tgtgccaaac tcggctggga tcaattggaa 95820

attatcagga tttagatgag ccggactaaa ctatgctgag ctggactggt tggatgtgtt 95880

gaactggcct gctgctgggc tggcatagct gagttgaact taaatgagga aggctgagca 95940

aggctagcct gcttgcatag agctgaactt tagcctagcc tgagctggac cagcctgagc 96000

tgagtaggtc taaactgagt taaaaatcaa cagggataat ttaacagcta atttaacaag 96060

cctgaggtct gagattgaat gagcagagct gggatgaact gaatgagttt caccaggcct 96120

ggaccagtta ggctaggacc tcgttctata gaggcagact gtgtgctaca gtggagtttc 96180

aagatgattc catgagtcct ccccgccccc aacataaccc accttcctcc taccctacac 96240

gcctgtctgg tgtgtaaatc ccagctttgt gtgctgatac agaagcctga gcccctcccc 96300

cacctccacc tacctattac tttgggatga gaatagttct cccagccagt gtctcagagg 96360

gaagccaagc aggacaggcc caaggctact tgagaagcca ggatctaggc ctctccctga 96420

gaacgggtgt tcatgcccct agagttggct gaagggccag atccacctac tctagaggca 96480

tctctccctg tctgtgaagg cttccaaagt cacgttcctg tggctagaag gcagctccat 96540

agccctgctg cagtttcgtc ctgtatacca ggttcaccta ctaccatatc tagccctgcc 96600

tgccttaaga gtagcaacaa ggaaatagca gggtgtagag ggatctcctg tctgacagga 96660

ggcaagaaga cagattctta cccctccatt tctcttttat ccctctctgg tcctcagaga 96720

gtcagtcctt cccaaatgtc ttccccctcg tctcctgcga gagccccctg tctgataaga 96780

atctggtggc catgggctgc ctggcccggg acttcctgcc cagcaccatt tccttcacct 96840

ggaactacca gaacaacact gaagtcatcc agggtatcag aaccttccca acactgagga 96900

cagggggcaa gtacctagcc acctcgcagg tgttgctgtc tcccaagagc atccttgaag 96960

gttcagatga atacctggta tgcaaaatcc actacggagg caaaaacaaa gatctgcatg 97020

tgcccattcc aggtaagaac caaaccctcc cagcaggggt gcccaggccc aggcatggcc 97080

cagagggagc agcggggtgg ggcttaggcc aagctgagct cacaccttga cctttcattc 97140

cagctgtcgc agagatgaac cccaatgtaa atgtgttcgt cccaccacgg gatggcttct 97200

ctggccctgc accacgcaag tctaaactca tctgcgaggc cacgaacttc actccaaaac 97260

cgatcacagt atcctggcta aaggatggga agctcgtgga atctggcttc accacagatc 97320

cggtgaccat cgagaacaaa ggatccacac cccaaaccta caaggtcata agcacactta 97380

ccatctctga aatcgactgg ctgaacctga atgtgtacac ctgccgtgtg gatcacaggg 97440

gtctcacctt cttgaagaac gtgtcctcca catgtgctgc cagtgagtgg cctgggctaa 97500

gcccaatgcc tagccctccc agattaggga agtcctccta caattatggc caatgccacc 97560

cagacatggt catttgctcc ttgaactttg gctccccaga gtggccaagg acaagaatga 97620

gcaataggca gtagaggggt gagaatcagc tggaaggacc agcatcttcc cttaagtagg 97680

tttgggggat ggagactaag cttttttcca acttcacaac tagatatgtc ataacctgac 97740

acagtgttct cttgactgca ggtccctcca cagacatcct aaccttcacc atccccccct 97800

cctttgccga catcttcctc agcaagtccg ctaacctgac ctgtctggtc tcaaacctgg 97860

caacctatga aaccctgaat atctcctggg cttctcaaag tggtgaacca ctggaaacca 97920

aaattaaaat catggaaagc cctcccaatg gcaccttcag tgctaagggt gtggctagtg 97980

tttgtgtgga agactggaat aacaggaagg aatttgtgcg tactgtgact cacagggatc 98040

tgccttcacc acagaagaaa ttcatctcaa aacccaatgg taggtatccc cccttccctt 98100

cccctccaat tgcaggaccc ttcctgtacc tcatagggag ggcaggtcct cttccaccct 98160

atcctcacta ctgtcttcat ttacagaggt gcacaaacat ccacctgctg tgtacctgct 98220

gccaccagct cgtgagcaac tgaacctgag ggagtcagcc acagtcacct gcctggtgaa 98280

gggcttctct cctgcagaca tcagtgtgca gtggcttcag agagggcaac tcttgcccca 98340

agagaagtat gtgaccagtg ccccgatgcc agagcctggg gccccaggct tctactttac 98400

ccacagcatc ctgactgtga cagaggagga atggaactcc ggagagacct atacctgtgt 98460

tgtaggccac gaggccctgc cacacctggt gaccgagagg accgtggaca agtccactgg 98520

taaacccaca ctgtacaatg tctccctgat catgtctgac acaggcggca cctgctattg 98580

accatgctag cgctcaacca ggcaggccct gggtgtccag ttgctctgtg tatgcaaact 98640

aaccatgtca gagtgagatg ttgcatttta taaaaattag aaataaaaaa aatccattca 98700

aacgtcactg gttttgatta tacaatgctc atgcctgctg agacagttgt gttttgcttg 98760

ctctgcacac accctgcata cttgcctcca ccctggccct tcctctacct tgccagtttc 98820

ctccttgtgt gtgaactcag tcaggcttac aacagacaga gtatgaacat gcgattcctc 98880

cagctacttc tagatatatg gctgaaagct tgcatgcctg caggtcgact ctagaggatc 98940

cccgggtacc gagctcgaat tcgccctata gtgagtcgta ttacaattca ctggccgtcg 99000

ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac 99060

atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac 99120

agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 99180

gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 99240

taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgaa ccccttgcgg ccgc 99294

<210> 4

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 4

tgcggccgat cttagcc 17

<210> 5

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 5

ttgaccgatt ccttgcgg 18

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 6

acgagcgggt tcggcccatt c 21

<210> 7

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 7

ggtggagagg ctattcggc 19

<210> 8

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 8

gaacacggcg gcatcag 17

<210> 9

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 9

tgggcacaac agacaatcgg ctg 23

<210> 10

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 10

tcctccaacg acaggtccc 19

<210> 11

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 11

gatgaactga cgggcacagg 20

<210> 12

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 12

tccctggaac tctgccccga caca 24

<210> 13

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 13

ctctgtggaa aatggtatgg agatt 25

<210> 14

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 14

ggtaagcata gaaggtgggt atcttt 26

<210> 15

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 15

atagaactgt catttggtcc agcaatccca 30

<210> 16

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 16

tggtcacctc caggagcctc 20

<210> 17

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 17

gctgcagggt gtatcaggtg c 21

<210> 18

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 18

agtctctgct tcccccttgt ggctatgagc 30

<210> 19

<211> 28

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 19

gatgggaaga gactggtaac atttgtac 28

<210> 20

<211> 26

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 20

ttcctctatt tcactctttg aggctc 26

<210> 21

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 21

cctccactgt gttaatggct gccacaa 27

<210> 22

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 22

ggtgtgcgat gtaccctctg aac 23

<210> 23

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 23

tgtggcagtt taatccagct ttatc 25

<210> 24

<211> 32

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 24

ctaaaaatgc tacacctggg gcaaaacacc tg 32

<210> 25

<211> 17

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 25

gccatgcaag gccaagc 17

<210> 26

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 26

agttcttgag ccttagggtg ctag 24

<210> 27

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 27

ccaggaaaat gctgccagag cctg 24

<210> 28

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 28

aactacgcac agaagttcca gg 22

<210> 29

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 29

gctcgtggat ttgtccgc 18

<210> 30

<211> 16

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 30

cagagtcacg attacc 16

<210> 31

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 31

tgagcagcac cctcacgtt 19

<210> 32

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 32

gtggcctcac aggtatagct gtt 23

<210> 33

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 33

accaaggacg agtatgaa 18

<210> 34

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 34

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 35

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 36

<211> 294

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 36

caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatacta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaga 294

<210> 37

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 38

<211> 275

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 38

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgatgac acggc 275

<210> 39

<211> 91

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 39

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr

85 90

<210> 40

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 40

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 41

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 42

<211> 294

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 42

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gaga 294

<210> 43

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 43

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 44

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 44

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 45

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 45

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 46

<211> 233

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 46

agaagcctgg gtcctcggtg aaggtctcct gcaaggcttc tggaggcacc ttcagcagct 60

atgctatcag ctgggtgcga caggcccctg gacaagggct tgagtggatg ggaaggatca 120

tccctatctt tggtacagca aactacgcac agaagttcca gggcagagtc acgattaccg 180

cggacgaatc cacgagcaca gcctacatgg agctgagcag cctgagatct gag 233

<210> 47

<211> 77

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 47

Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr

1 5 10 15

Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

20 25 30

Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr

35 40 45

Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr

50 55 60

Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu

65 70 75

<210> 48

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 48

caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatacta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 49

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 49

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 50

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 50

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 51

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 51

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 52

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 52

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 53

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 53

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 54

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 54

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 55

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 55

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 56

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 56

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 57

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 57

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 58

<211> 296

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 58

caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaga 296

<210> 59

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 60

<211> 305

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 60

gagcccactc ccaggtgcag ctggtgcagt ctggggctga ggtgaagaag cctggggcct 60

cagtgaaggt ctcctgcaag gcttctggat acaccttcac cggctactat atgcactggg 120

tgcgacaggc ccctggacaa gggcttgagt ggatgggacg gatcaaccct aacagtggtg 180

gcacaaacta tgcacagaag tttcagggca gggtcaccag taccagggac acgtccatca 240

gcacagccta catggagctg agcaggctga gatctgacga cacggtcgtg tattactgtg 300

cgaga 305

<210> 61

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ser Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 62

<211> 307

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 62

gagcccactc ccaggtgcag ctggtgcagt ctggggctga ggtgaagaag cctggggcct 60

cagtgaaggt ctcctgcaag gcttctggat acaccttcac cggctactat atgcactggg 120

tgcgacaggc ccctggacaa gggcttgagt ggatgggatg gatcaaccct aacagtggtg 180

gcacaaacta tgcacagaag tttcagggca gggtcaccat gaccagggac acgtccatca 240

gcacagccta catggagctg agcaggctga gatctgacga cacggccgtg tattactgtg 300

cgagaga 307

<210> 63

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 63

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 64

<211> 307

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> изменчивость

<222> (124)...(124)

<223> n=a, g, t или c

<400> 64

gagcccactc ccaggtgcag ctggtgcagt ctggggctga ggtgaagaag cttggggcct 60

cagtgaaggt ctcctgcaag gcttctggat acaccttcac cggctactat atgcactggg 120

tgcnacaggc ccctggacaa gggcttgagt ggatgggatg gatcaaccct aacagtggtg 180

gcacaaacta tgcacagaag tttcagggca gggtcaccat gaccagggac acgtccatca 240

gcacagccta catggagctg agcaggctga gatctgacga cacggccgtg tattactgtg 300

cgagaga 307

<210> 65

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<221> ВАРИАНТ

<222> (38)...(38)

<223> Xaa представляет собой любую аминокислоту

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Leu Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Xaa Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 66

<211> 294

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 66

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggctg ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gaga 294

<210> 67

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 67

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Trp Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 68

<211> 346

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 68

aggatgtggg ttttcacact gtgtctctcg cacagtaata cacgaccgtg tcgtcagatc 60

tcagcctgct cagctccatg taggctgtgc tgatggacgt gtccctggtc atggtgaccc 120

tgccctgaaa cttctgtgca tagtttgtgc caccactgtt agggttgatc cgtcccatcc 180

actcaagccc ttgtccaggg gcctgtcgca cccagtgcat atagtagccg gtgaaggtgt 240

atccagaagc cttgcaggag accttcactg aggccccagg cttcttcacc tcagccccag 300

actgcaccag ctgcacctgg gagtggacac ctgtggagac tcgcga 346

<210> 69

<211> 98

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> синтетическая

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg

<210> 70

<211> 150288

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 70

gcgcgccctg gcatggagga aatgacaaag attattagat tgaagacttt ctcagaaaat 60

gatattaagt cattaaggaa aaggaacaat ataaacgtgt atttgagaaa ttttaattat 120

ttgagagatt tttcatacaa tatttattct gcaagcaaat ttcagggatt gaattaataa 180

aactgataca gaacttcctc tgtaggtatc tgtgtaaaca tcaatttctg aatcagtgtt 240

gtaaatattt tggaacacac acacaaatca cattttatct ctacttttat ctctattttt 300

aaaaatgcca aaaaaactca ttttgtgcat gtagcatttt gaattcccac catcaatgca 360

tgatagttct tggttttcca cattcatatt gccatttatc attatgagaa ttgtgtgttt 420

taaccattct aataggtgag taatggtatc taatttttag ttaaatgcac atttccctaa 480

taaaaattca catttaacaa ttttcatata atttttgcca agatgcctct tctcatattt 540

ggttcatttt taactgcatt gttttctttt gattagttgt aagtttactt gcatattgat 600

tataaaatca tttaacaaat taaaagaatt catttaacaa atatgtgact tggaagtatt 660

ttctccaagt ctgcggctgt cttttactcc cttatcagta tgtattgcag aaaagtgtgt 720

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt ttatacaaat ttagatttaa aaaatgtaaa atgttattca 780

tccacagatc atgtctttgg tattatatct gaaatctcat tataaaatac agtaatagca 840

attacttttt ccacgtctct aatctcaggc tacaatcaac tcatgagtgt ttaagcttca 900

cctacttgat tagaggacta tcaacctaac atatttggaa tacttctgta aaaagatgtg 960

ttcctcttcc tattatttct ttatttgatc acttattaat atgtgtattg gtttatggat 1020

gtctatttca tactctgaag aagatccatg ctacattatt cattttattt ttcaaaccac 1080

cacggcttta ttatgtgctg ggagctcatt gagtttggat cctgcatcct tacagctcac 1140

ctcatgcttt tgtttttgaa cacttccctg tttcctgcta ttataataaa ttctaaactc 1200

attttctata ttatcttttt catacataga atcagccatt tttctaaaga ttgcttgctt 1260

ctgatgttaa agaatagtat ttaaaaaatt gtaatactgg gtatgtgcat tgttaatgtg 1320

gtataagtac ttgcaggacc tctcaaccaa ctggcctagt aaactatgta tctaaccttc 1380

tgtaatgtga ttacattaaa aatgagaaca cactggtctc tctacccaat tatgctacca 1440

catggatctt tctagccttc cttccttgac tgtctataac ctctcactgc aaaatgagga 1500

accccatcca accatatgcc attttattac ttagctgcac aatttcagga cacatgcata 1560

gcagtatcag aaatgtaaag ctgtaccctt gtaggaaaca tgtttatcta ctagaataga 1620

gtgcttatgt tcagtttctt tacactttaa acttacagag tttcctcatt ttcaaagttc 1680

cttaggtcag caacttcatt ttccactttc ttcagtgagg tcatttcaat gacactgtat 1740

aatttgattt atttgaaatt ctataaaagc caaaactgta gtcaagtgaa caacaacata 1800

tagaggatat tcgaggagtt tagagactgg tataaaataa gttaaaaaga cactgtttaa 1860

gaagattaaa attattttta gtgatatgca atggttcaga tatgacacaa ttaatttgtc 1920

taagcacata gttttgtgat ggaaaatata aacctaaata tatacaatta aaaaaaaatt 1980

tagcagttca ttaacccaag gatcaaatgc agattgtata aaattatctc attacttatt 2040

ttgtgagggt ggagatttca tgagatgtat gcaacaaaga atgaggtaat tttcctgatt 2100

tgcatataag atgttgccat tcactaaaga cctttaattt tttaaattgt ttttttttta 2160

aatcaatttt ctatgtgacc caggtttttt tctcttgaca agcaaataac ccacaggatt 2220

attttctttc cttggttgag aaatatttcc ccaaacttca gctcagttca ggcatacact 2280

gtccctgaat gggcatttac cctcagatgg gtacacacac ctgtcaacat gtggactctt 2340

ctgtcagaca aacgcacctt tactcacgtg gattcttctc tcagacaaac acacatgtcc 2400

ccacgtggac tctttcctca gactaccaca tatgttctta catttactct ttcctcagaa 2460

aacagacatt tcctcatgtg gactcttgtc tcagacaagc aaacatgtct ccatgtgaac 2520

tcttcactca cataagtaca catatgtcca cattgactgt ttccttacac aagtacatat 2580

atccaatgtc gaattgttct gtggcaaaat gatctcaaga taatgataat cataaacccc 2640

ctccctgaca aggcatagat ctgtattttt ttcattgcaa cctaactttg ccttattgtc 2700

aagaacagta gtttgcagct ctaaatatac caattagaga caggtgtcca ttttctctgg 2760

aaacgtattt ttatgttctt actggacata tttgttgata atgtttgcta ttatgaagat 2820

accccaacag tgtccacatt agagaataaa aaatagtaat gggcagatta actctgtgca 2880

tccagaccca gaaatccttt gaccttgact tccctgaaat gtagacacag aggatggatg 2940

agcaatgctg agcagtgcac ccatgaccac aaaaagaaag acgtggaaat gtgtcccctc 3000

cacttctcat gaaaggcagc tcatcccctg ttccctcagg ccctggcgag gagccacccc 3060

atgtctgtgc ccttcctcag tgtccacacc gtggggtctg cattgatctg gattctcttc 3120

tcatccccgt caatattagt gtccttcgta aatcaggtcc agctgtggct tctcctcacg 3180

gggctgttct cagtctgttt gctgtgttca cggaagtcct gtgtgaagtt tactgatgga 3240

gtcagagggg gaaaaaattt acagcccagt ggtgagactc tcctgcaaag cctctggttt 3300

cacctttact ggttacagca tgagcttggt ccagcacgct tcacaacagg gataggtgtg 3360

ggtgccaaca gtgagtgatc aagtatgaat tctcagggtt actttccatg agtacaaata 3420

aattaacaat ctcaagcaac acccttttaa gtgcagtctg ccttacaatg accaatctga 3480

aagccaagga caaggtcatg tattactgtg agtgacacag tgagggaaac cctgtgtgag 3540

cccagacaca aagctcaccg cagggagaca ggaggggact atgtggtaga tgctgctcag 3600

aaccaccagg gggcatcagg accatcaggg agggtgcaca gaaccaccag gaggggctca 3660

ggacaccagg gggcgctcag aaccaccagg gggccctcag gacaccagag ggtgctcaga 3720

accaccagga ggcgctcagg acaccagggg gcgctcagaa cactaggagg tgctatgaat 3780

cactaggggg cgctcaggac acaagggagc actcagaacc accagggata gctcaggata 3840

ccagggggca ctcggaaccg ccagggggcg ctcaggacac tagggggcgc tcagaaccac 3900

cagggggcac tcaggaccat cagggagggt gcacagaacc accaggaggg gctcaggaca 3960

ccagggggcg ctcaggacca caagggggcc ctcaggacac cagggggcac tcggaaccac 4020

cagggggcac tcagaaccat cagggagggt gcacagaacc accaggaggg gctcaggacc 4080

accaggaggt gctcaggaca ccagggggcg ctcagaacac taggaggtgc tatgaatcac 4140

tagggggcgc tcaggacaca agggagcact cagaaccacc agggatagct caggacacca 4200

gggggcactc ggaaccgcca gggggcgctc aggacactag ggggcgctca gaaccaccag 4260

gaggcactca ggaccatcag ggagggtgca cagaaccacc aggaggtgct caggacacca 4320

gggggcgctc agaacactag gaggtgctat gaatcactag ggggcgctca ggacacaagg 4380

gagcactcag aaccaccagg gatagctcag gataccaggg ggcactcgga accgccaggg 4440

ggcgctcagg acactagggg gcgctcagaa ccaccagggg gcactcagga ccatcaggga 4500

gggtgcacag aaccaccagg aggggctcag gacaccaggg ggcgctcagg accacaaggg 4560

ggccctcagg acaccagggg gcactcggaa ccaccagggg gcactcagaa ccatcaggga 4620

gggtgcacag aaccaccagg aggggctcag gaccaccagg aggtgctcag gacaccaggg 4680

ggcgctcaga acactaggag gtgctatgaa tcactagggg gcgctcagga cacaagggag 4740

cactcagaac caccagggat agctcaggac accagggggc actcggaacc gccagggggc 4800

actcaggaca ctagggggca ctcagaaccg ccaaggggcg ctcagaagaa gcagggggtg 4860

ctcagaacac cagagggtgc tcagaagcac cagggggcgc tcaggacacc aaagggcact 4920

catgagactg tggcaagggg gtgctgagaa ccacaggatg tgaccaagac accaaggggc 4980

actcagaact gccagggggt gctcaggaca ccagaggatt ctcagaacca ccaggggatg 5040

ctcaggaaac tagcgggtgc tcagaaccac cggaggacac tcagaaaacc aggggatgct 5100

caggaaccac cagggggcgc ccacgacacc agagggcagt cagaaccacc ggggcatgct 5160

cagaaccacc agggggcgct caggacacca ggggatgctc aggacactag gggcgctcag 5220

gaaccaccag gggacgctca ggacactagt agggtctcag aaccaccagg ggatgctcag 5280

gacactaggg ggcgctcagg aaccaccagg ggtcacccag gacaccaggg gtcgctcagg 5340

aaaccagagg gtgcccagga aaccagggga ggttcaggaa ccaccagggg gcactgagga 5400

caccaagggg tgctcagaac caccaggggg cgctcaggaa ccaccagggg gcgctcagga 5460

cactagtagg cactgaggaa ccaccagggg gcgctcagga cactagtagg cactgaggaa 5520

ccaccagggg gggctcagga cactagtagg cactgaggaa ccaccagggg gcgctcagga 5580

cactagtagg cactgaggaa ccaccagggg gggctcagga caccagaggt cgctcagaaa 5640

accagggggt gctcagaacc accagggggc actcaggaac caccagtggg tgttcaggac 5700

agcaagaatg gctcaggaca ccagggagca ctcaggacct ccaaggggct ctttggaggc 5760

agctccatat caggtacctg gggaggatga ggtttccttt tccaccttgg tgattcctga 5820

cctggtcaag caaaagtctt ccccaggatc tcttacgatg tcttccttgt aactcatggt 5880

ttctttcacc tataaaacat taacttagaa caggggttca attcaacttt taactctgcc 5940

tattttcaga gttatactag caatgatata tctcagtata ttttttttaa ttgtgtatat 6000

tcaatccaaa gtctggctct atgcacaatt tttttgtttt ctgtgctgtc agacacacta 6060

ttgtaaatgc ttttctaaca actcagcata tgcatggggt ccagtttctt ttcctttcat 6120

cggctgtttg tgcagatgaa acaccacttt aagggctcct gtcctccact ttggcccctg 6180

gtgttctgct tctcaaactt tctccatctt ctctttttct gtcaaaatat tttatcttcc 6240

tcagtctcca tgcaggaaac aggaagtcct tttacttcct gtcctccatg tctggtaaat 6300

cagttcactt cttttcatga tcactgaagc caaccaagtt taggagagta acagttctcc 6360

ttagaataca ctctacctgc agaccctctg ccctcatcac acttttctag ggtcctgcag 6420

acataacccc cacccattcc tctttttccc taagtaccac agactaggct ctgcaactta 6480

tgctaccctc tgtgtgctca gcccaggggc tcagtagtgc tttcatgaag tccaaatccc 6540

taatgtgttt gcccactctc agaccaccct ccagcaagct gccattgtga ttgaatcctg 6600

caaagcatgg gctgctttca gtttcctatt gctggatgtt ctttattata aaggcatatt 6660

ggcaaataac gactagagtt tgtattgaaa attaacgcca aaaagttttt taaaaagttt 6720

ttcaaataga aaagttctat cctgcctagt ttaaaaaaat acaatgttac tttaatcaat 6780

gatttaataa aaatttaagt gatgtttgtc ttattagtta ttcaatttat taataactga 6840

ctgatattta aaaagtaaat actggctggg cgcagtggct cacgcctgta atctcagcac 6900

tttgggaggg tgaggtgggt ggatcacctg aggtcgggaa ttcgagacca gcctgaccaa 6960

catggagaaa ccccctctct actaaaaata caaaattagc tgggcgtggc ggggaagctg 7020

aggcaggaga atcgcttgaa cctgggaggc ggaggttgcg gtgagccgag aacacgccat 7080

tgcactccag cctgggcgac aagaccaaaa ctctgtctca aaaaaaaaaa aaagtaaata 7140

ccattgtaca cttaagtaat atatttggca agaatggcat ttacattcat tcaaaaatga 7200

aactgcaaat acgagttaca ttcaattaaa taattaaaat aatatagaaa aaaatgggtg 7260

tgttgttttg gtgtttaata tacattcatt tttgcatgga cgggtatatg tgtcattgct 7320

gggctgttgt gtatgtgtgc gtgtgtgtgt gtgtctgtgt gtacaactat gaagtttaaa 7380

atatattatt aaattacgta gttatattaa tccaaattta tcatgttaaa atattaggaa 7440

aaaaacacca gtagagaaat tacagagaac atcagcaatg cctacagcat ttacaagagt 7500

cacattaata acaaacaaac tagttcaaat gtttagatat gacacatgca gtagaaaacg 7560

ttcacatggt attaacacaa aaatggtgca caactgagga aattataata cgttcatgat 7620

attggctaca taaatgctta tgatagtaat gcttttcatc catcaaatgc ttatgataat 7680

gcttttcatc catcatatta tagatgataa aacaactcta taaacacttc catcactagc 7740

gtttaatatg agatgcctca catctttttc tgaaataaat aaacatctgt ccaccacttc 7800

gatgatcatt tcaggattat cctctgaaat aattatccat aataatttta gtaacaatat 7860

tattttcaga agcctatttt ataaggtctt tgaactatta tttttatgat tgttacttta 7920

tattttacac actttttatt tggaataatt ataggttatc agaacaattg taaggaaaat 7980

acagtgtgtt cacatccatc tccaagtttt cactaaagtt aatatgtcaa aaaaaacatg 8040

ggacatggga ctaatatatt tacattgata agtttctgtt tattcagctc tgggatttat 8100

ttgaattttg ccaattttta acagtttcct tttttccttt ttcttttctt tttgagataa 8160

ggtgtcactt tcctattgct ttttgtttgt ttctttgttc aacccacgta accacatcaa 8220

attcagtcac catgttcctc tcatatcttc tggttaatca cagtttgggt tcctgctgtc 8280

ttcccattga atattctata aatgaaacta gtcaaataag ttgattctgg tcacttatat 8340

atttacctat tttatcacgt ttgttttgtc aatcacagta agtgtcgaat tcgctatctg 8400

ttatagatgt tagcctattt tctatcccag atccattggt taaatctttg gtgatgcctt 8460

ttagaaaact gatcccttta ccctatgtaa tatgcccctt gattcctgaa agtcttatgt 8520

ctaccttgtc tgaatttaac atagctaagc acgctttctt ttcgttcata ttttcatggt 8580

ccatgttttc ctgtatttaa cttttctatg tagagcaaat ttctgtacag agctagtagt 8640

tgggtcttgc tttttaaatc aactataata attctatttt aaaactggta ttactatttt 8700

tctgttaatt tctgttttaa tttggcattt tatgatcatg tttatttctc tattaactta 8760

ttgtttagtt catcttttat gaatattgta ttggccctaa gatatacaat aagaattgtg 8820

tataatcaga ttctaattca aataacgtaa aacctcttca taggttgtag agctattata 8880

acttattctt ctaaacactc tttctcatcc gttgtcttag tttattctca gtttgcactt 8940

atatgtgcta taaaatataa tatgtgcatt tttatcatta catagacata tattagaaca 9000

attaaaaata taaaaactac atttcaactt cattttttca ttcttgacca catgttttat 9060

ttggatagat tcatgtttcg gatgtatatc atatggctac tcaccctggc agaaaatttg 9120

ccaaagcacc tactgaagga tgaatgcact agcaataaat tttctcagaa tcgatttgtc 9180

ttacagggta ttcatttgac tttcgcttta aatgaaattt ttaatatata tagaattcca 9240

gtttgacttt aatttgtaat ttattttctt gtactcatgt attcattatt ttcttcctga 9300

agatggtcac acattccatt ctgctgggcc ttcattatag atatttgtgt gtatctattc 9360

agggctatat ttgcaattta tggatgccac aattatcaga gttgaagtca gcttctgctg 9420

tccacagaga tttcaagttc ctcccatgat acttgctttt gtgtccctgt ttgatcctgg 9480

gtctttatat ttagttttcc ccagggaggc tgtctgtttc agctgtggaa agtgcaccct 9540

actgacagtt taaattgatg actgtgtggt gaaggaggtt ggacaaagcg ggacttcctc 9600

caaccttctg actgagtctc cttcttatgc aggagtagta agcatagttc tggggagtgg 9660

ccttccacat tgtcctgtcc ttaactcttt ccccagggct ggaacgtctt ttcccagaca 9720

caactgtttt tcaccagtgt ccccagcttt ttacccacta tccttaccct aaagagtaag 9780

gatttctttc ctgaggaagg agatgggagg tgtttctgga tcaagtttcc ttggtgtcgt 9840

ctgtttcctt ttgtttctgt tgacttcacc acagctcata tgacacatgc tttggtggat 9900

ttcccctgga ggtagtggag gtgcattcag gcattccaca ggagctgctg ttcttttccc 9960

cagtcaacac cacaagacac cagatgagga agttgtccgt ggatttttca agttctctag 10020

gaaaagcttg caagcactag gccaatctaa caccattagt acatgcatac taaaaaaaaa 10080

aaagtcatta agtatttcta ggttagtctg tttctatctc aaatgccatc cagtggcacc 10140

tgccctacgt acactagcag gtaggtcctg gttctctctg caggctccta tcttctcaga 10200

tttcagtttt cttgtttgct tggtgaaatc aactcagata tgttgaatgt tttttctctc 10260

ttttatttgt agctgttcag cttcgttgtt aatgaggtca gaataaaatc acagttttct 10320

catttttttc acattcccac actgaatagc tgctttccgt ataaaagcca gaaactgaga 10380

gaacacattg aatatccatt acaggtgaat gttaaacaat ttgagatatg tttgtgtact 10440

ggaataaaat gctgcattac aatcaagtca tcactcattc acataaaaca tggccacatt 10500

ctcaaataat gtagggacct gagtgcccct ccatctactg gcctctcctg gggccctagc 10560

ctggccacac cttcttgcag ggcagtcttg gacgccctgg gatcccgcac caaaatttct 10620

gccctggcag aacatgcctg actggtggag agctccaatc gggcagccct catgtgcaca 10680

caccagctta cacacttcct ccgaatactg taggttcacc caggcccacg taacttccca 10740

catcactttg cagtcacatg tctgtatagg tgggttttgc ttttcttgtc ccaccattgc 10800

gtggagtgca gtcccctccc cccaccccaa ccaccatggc agaggaagct ttggtgggga 10860

aaaagccagg gccgctcctg tcagcgtccc gcacttgcgc taattctgca cagagaatag 10920

cagatcatct cacacattca gaaatcactc ctgcttgtgg ggcatgaata cggcacccgg 10980

gcctgtgccc acaagtgtcc catccctgag ccaacacctc ctccagtgtg accttgaaca 11040

cagtcaccaa cagggcccca cagacgcaat gcctctgcca ctgtggcgaa cacctgcagg 11100

gaggcaggca cccagacacc cactagcact ctgccacagc tgccacacct ccaacagccc 11160

aggacagtgg attcctaacc ttaaggagcc ggagaaccaa gtcagggact agtataactt 11220

cccccagagt cagagcacac agtctaggtg ttgggagctg agcactggcc acctaaattt 11280

ttccagaaat gaagccagtt ggctgaatcc accttatacc acaatcaaac cctcaaggtc 11340

atccaatagg gtaaaagaaa ataaaaatgt atccaaaggt cagcaacttc aaagattgaa 11400

ggtggataag cccacaaaga tgagaaagaa ccagtgcaaa agtcctgaaa acaaaaaggg 11460

cgccctcttt cctccaaaca accacagcac ctcttcaaca gcagttctga atggggctga 11520

gatggctgaa atgacagaaa cagaactcag aatatggaga gtgaaaatgt agatgaatac 11580

agctatttat ggagaatact ataaatgttc ctcaaaaaat aaagaaacaa aatctactgt 11640

agaatccagc agtctcactg ctggctatgt atccaaagga aatgaaatca acatgtcaaa 11700

gagatatctg cactccatgt tcacgttcat tgcagcatta tttaaaatag taaagatatg 11760

gaaacatcct aaattcccat gaatggatga atgaataaag aaaatgcata cagacacaac 11820

agagtaatgt tcatccttaa ataagaagga aaccctgcct ctgtgacagc atgcatgaat 11880

ctagaggacc ttatgccaag tgaaacaagc caggaacaga ggaagagtca ttcatgattt 11940

cactgtatat attaaagcag tagacttgca gaggtagagt agaatgttgg ttaccagggc 12000

ctagaggggt ggactgggaa agggagatgt gggttaaagt gcacaacgtt ccagttagac 12060

cggaggtata agttatgcct ttctaatgca cagcatgtca actatagctg ataaggtagt 12120

atatatttca aaattactaa aaaaataaac attagaattt ccccactaag aaatgataaa 12180

tttgtgaggt gatgaatata agcggcttga gttacccagt tcataatgta tacatgtatc 12240

ataactaaac aacatatgtc ataaatatat gcaaaaatta tttgtaattt ataataaaat 12300

aagtttcata tttaaataat tacattaaga aaatgaacag aaactttcag atttcaagaa 12360

tattttatat atatatatat atatcttaaa acaaacttgc aacagaatat agaaataagt 12420

tttacgactc aatggaaaag aacagaattc aataaaaact ggctaaaaga aacaacagct 12480

gcatcattat agaaaattct ggaataatca gccatataaa gattctcact ctcttagaac 12540

tagaattccg taggacttgt aattcctcct gacctgggtg ggaggcaaaa ggaagaacag 12600

ctaatggtga ttcagtgagt tttatacctg tgtgtacttc tgtgctcact cagcagaaag 12660

aaaagaagaa aagaaagaaa gagagaaaga aagaaacaga aagaaagaaa gaaagaagaa 12720

agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagagaa agaaagaaga 12780

aggaagaagg aaggaaagaa aagaaagaaa gaaagagaga gagggagaga gggaaggaag 12840

ggacagcaga agtcattgtg gtgtgtgtga aagcacaatc cttgggctcc cccacatcca 12900

tctctactcc agtcccatca atgtccagca aatacatttt ctaagatgaa gtattttaaa 12960

ctttctaaat cctgctagaa aacccctcag ctctttcagt tttgctctat cacttgaatt 13020

attgaattaa atctagtttt tgtgggccta tcaataccat aagccaaaat aacacatgaa 13080

gaaattgcac tgagacacat gaaaaccttc tgaaagctcc ataatttcag atctgcattc 13140

ttatttcccc gaacctaaat cactgaatag agactcagaa cgagttgatc ttgttcctga 13200

acgtgcacag agccaaggac atcctgtctg tctggaacag ctcaggtttg ttcctgtttc 13260

tcctagagga tataaaatct tgagttaggg aaaaacagcc agggacaccc tgggctttgt 13320

tcttctctcc cctggaggca ggatgtcctt cagagctttg tcccagtggg taacacagct 13380

gctgaggtgt acaacccacg tggcctcgtt ttggtcactt ttgcatggtg agcctgcttt 13440

gcaccatggc ctacaatatg cgtgtgtaac taatctgtct ccatcttcaa aatgacatta 13500

ttccacatca aatctagtgc aggtgcctca cacagaacat tctcaattac ctccatcatt 13560

cataaaattg atgccattaa tttcaagtat acatacatca gactcattta acgtattgtt 13620

attctcattg tttgaaacat aacttttaga tcaaataatt aacaataata aaaatataaa 13680

ttttgaagtc aggtaatgtg atttctctag ttgtgttctc tttgctcaga atggcttggg 13740

ctgttctgca tcttttgttt ttccacatat attttaggat tttttaaaaa tttctgtgaa 13800

gaatatcatt gttgttttca tagggattgt actgagtctg tagattgctt taagtattat 13860

ggacatttta acaatattga atctttgaat tcataaacat ggaatattgt tccatcttgt 13920

gtcctcttta tttcctcaat gttttataga tttattgtag ttttttttta ctttgttcat 13980

tacacattgt atgcctgtac caaaacatca catataccca acaaatagaa atatatatac 14040

tattatgtgc ttataacaat taaaaattat gtatgtatat tgaatctatt caaaatcaga 14100

aactatttct ttttactgtt tgtaaggtct tgtctctagg ctataaaaag aatttgtaaa 14160

actcaacaga aagcataata taaacagaat tctaaaatga gtgaaaatct gaacaaacac 14220

ctcaccaaga aaaaatgtta tctgaaaata agaatatata aaattgttca gtatcaattg 14280

tcataaactg atactcatat ttaccaaata caaaagtaaa catgatgtat ttcaacagaa 14340

ttgattctca aatatttgta tactcataca gtggaatact atcagtcata aaaactatgg 14400

gttattaatt cagaagacaa cattttaaca ttttttctaa gtgaaggaag atggacaaaa 14460

gagactaagt attgtacaat tccattcatg agacctgcta aatacagtaa aattaaaagg 14520

attttaaaaa caggtttgtg ataggcaggg cttttgggga aagacaagag actgacttgg 14580

caaagctcag gggatatttt tagggtaaaa caaactgtgt gccattgtga tatgcctaat 14640

ttcttattat atttgttcag agttaatagt gtacgtttca accaactcgg tgattttata 14700

ttttctattt gctgatagag acatgttcat ttttgtcaat cactttgcta aatgtggctg 14760

agaggctgtt gaaatgaacg ctgagcaaat gtattcacca aatctacaag agcaaattat 14820

ttgccaattg ctgattgagt ggggtctata atgtatttga gattgggtgt ggggatgtta 14880

ttgtgtgaga tcatgatgtt tagaccatga cactctctgg tgagggatca ctcattcatt 14940

gcacatttaa tgaaaggcag gtaggaggag cagaagggga tgagtcacac tcctgaccac 15000

agccacaggt tattgaaggc agaactgatg taatccccta aggtagacca ctgcccctcc 15060

aaggtgacct tatcctagag ttgacacaca tcctgggaca ccagagacaa ctccttctct 15120

cccctttctc tgcacttcag ctggaagcaa ctgtctcacc gagcaccttg tgttaaggaa 15180

tgagagttcc tgttccaggt gtgagggccc aggtgcatcc acttgatcca gcacaagagc 15240

aagaacagcc ttccagaaaa tgacatcgcc tgaggtataa ccagctctca cctgctgcag 15300

cttcctctga ataaaaagga aactgttgaa acttcctcat aagtgtcctg ctgtgccatt 15360

ccctttgtcc ccacatgttc agttgtgtct gtccagatgt cacttttgtg tagggagatt 15420

agggttctgc ttccagtacc agaacacaca tgacctctta ggggacttca gggttttgct 15480

gacatatgtg atgatcttaa aagtcattag ctccatttct acatcaaaaa acatctgaac 15540

caaaggagca cataggctca ggcctgtaat cccagcactt tgggaagcca aggcagagga 15600

atcacttgag gtcaggaatt tgagaccagc ctggtgaaca tggtgaaacc ccgtctctac 15660

taaaaaatat atacaaaaat tagccaggcg tggtggcact agcctgtaat cccagctact 15720

tgaaaggctg aggcaggaga attgcttgaa cccaggaggt ggagattgaa gtgagctgag 15780

atcgcaccac ttcactccag cctgggcgac agagtgagcc tccatctaaa aaaaaaaaaa 15840

atttatatat atatatatat atatatatat ataataaata tatattatat atcatatata 15900

tattttatat aatatatatg tatattttta tatattatac atacatatca atatatgata 15960

tataatatgt atatataata tataatatgt atattcatat attatataat atgtatattg 16020

atatatatta cacatatata ttttgatata tatatatctc caaaccatct aaatatcaag 16080

tattttttaa tccatctaag agctgaaatt gctgaaaaaa ctactccctc caaaagctgt 16140

agagacaggc acatccacag tcacagcaga gacttgctga cttggaagag aagctcctgg 16200

agacacattg gtgagaacat ttacctggtg attatgctga atgtctggag gacaaatgtg 16260

gactaggggg agggtgagca ctcctagagg ctgtacaccc cacacttgtg tggacttgcc 16320

ctccagggcc ttcaggttct cgtggaagca attaaaatag attccctata gccatgaact 16380

ggggaggagt aatcacggag aaaagatgca caaaaagact tttctagaaa gctcatccaa 16440

gggaaggtat tctccaaaat cttagtttat gtgggggaag gaaatacttc caaattacag 16500

acccctcctc ctcagccttc ctctatcacg caaatgataa aattagccaa gaggagtcag 16560

attcaaggcg gtagccctgg gtgcagcatc tgcagaaggg aggaaagaga gaaaatcagc 16620

tgtatcactg gagattcctt gtgaaggtca ctgctcagga gaagagggca accaaaccag 16680

ggagagtcaa ctgtaagaac ataccatgct cccctgcccc acacattacc tcctcaacag 16740

catcattaat atggattaaa gagggcagtg tgattgcttt agatctgttt gagaaagaaa 16800

gtcacatact gaggcctagg gtcagggtcg gcggcacttc ccgtgagtaa gatactacga 16860

agaaggaaaa attaggggtc cataactgtg aaaatcagcc acagtgtgtg tgagaatgtt 16920

tgtgtttgtg tttctgtgtg tttgagtagg agttattgga acagcggacg tggagtgagc 16980

tttaatccac atccatctgc agcttcaggt attctcagat gcagtattca tctgcaagag 17040

ccgaaatgag aaaagagcca cctccaaccc ccccagagtt ttagcctccc tttgtttcca 17100

gtgatccagt gcatctagac ctccaggaag tggactccct ggtgatttta gcgattcttc 17160

tcttggagcc accctgaaga ggacattggg tttccaaagg cccattcact atttcaagaa 17220

gtggtgccat cagctcatgt tgtcactgaa ggagcattct gagccagggc acagtcactt 17280

cctagtgagc tacagaggct gagagaaaaa tgctctgtga gacccaatgg gaagctccct 17340

gcagtgcaag gtctgggtgg cagggagcgc tagggcctcg cccagcacag gctgcagccc 17400

tggagcaggt gcaagggagg ctggggaggg gttcctccca gggtctgatg tcttcctttt 17460

ctcggacaaa catgctttaa taagttaaac aagactttag taaagactat tgatgtgtct 17520

ttgtgtcttt cagtatacag ttctatttgt aggatttatc taacctaaca agtcaatgag 17580

aatcacatgt aaaaggagaa atttctagga ttttcagata tcttaatagg taggagatgg 17640

agaaaaggga tggttttatt aattcagtgc ttgccaatct taacagagac agtagtaaga 17700

catgcagaaa gcaaagccca gaaaagtatg aaggtgtcaa agtgccattt aagtatgggt 17760

tcacttggag gaccatgttc tgcgggaact tgttttcagc agacaatcta ttttagcaga 17820

gttctgggca tacaagggga cacacatcat taaacaagga ttgggacagg gacttcagcg 17880

tcccactgtt gcatggccca taaattatgt gtgttctctt tctcatcttg gatcaagtct 17940

agagctatga aatagtatcc ctcatgaata tgcaaataac ctgagattta ctgaagtaaa 18000

tacagatctg tcctgtgccc tgagagcatc acccagcaac cacatctgtc ctctagagaa 18060

tcccctgaga gctccgttcc tcaccatgga ctggacctgg aggatcctct tcttggtggc 18120

agcagccaca ggtaagaggc tccctagtcc cagtgatgag aaagagattg agtccagtcc 18180

agggagatct catccacttc tgtgttctct ccacaggagc ccactcccag gtgcagctgg 18240

tgcagtctgg ggctgaggtg aagaagcctg gggcctcagt gaaggtctcc tgcaaggctt 18300

ctggatacac cttcaccggc tactatatgc actgggtgcg acaggcccct ggacaagggc 18360

ttgagtggat gggatggatc aaccctaaca gtggtggcac aaactatgca cagaagtttc 18420

agggcagggt caccatgacc agggacacgt ccatcagcac agcctacatg gagctgagca 18480

ggctgagatc tgacgacacg gccgtgtatt actgtgcgag agacacagtg tgaaaaccca 18540

catcctgagg gtgtcagaaa cccaagggag gaggcagctg tgctggggct gagaaatgaa 18600

agggattatt atttttaatg ttgtttacag tatgtcatta ataaattgaa aaaaagtaac 18660

aatagaagta tatactctaa ttatatggga actttgtttt ttcagttttt tcattttttt 18720

tttttttttt ggtttgtttg tgacagagtc tcactctgcc acccaggctg gagtgtaacg 18780

gcacaatctc agctcactac aacctccacc tcccaggttc aagcaattct cctgcctcgg 18840

cctccagagt agttgggatt acaggcaccc gccaccatgc ccggtgaatt tttgtatttt 18900

tagtagagac ggggtttcac catgttagct aggctggtct caaactgctg atctcaggtg 18960

atctaccctc ctcagcctcc caaagtcctg ggattacagg cgtgagccac tgcgcctggc 19020

ccaattatat gggaattgtt tatataatta tcaccctata agcaaaattc atggaggagg 19080

aaaagctcta ctgaagaaag ctgataccgg cattcccatg aaagtatctg tgtagaagta 19140

agtattaaaa tcagttgaat aggcaaggca tggtggctca cgcctataat cccagcactt 19200

tgggagaccg aggcaggtgg atcacaaggt aaggagttca agatcagcct gcccaagatg 19260

gtgaaacccc ttctctacta aaaatacaaa gaattagctg ggcgtggtgg tgggtgcctg 19320

taatcgcagc tattcgggag gctgaggcag agaattgctt gaacctggga ggtgaaggtt 19380

gcagtgagcc gagatcacgc cactgcactc cagcctgggc gacagagtga aactccatct 19440

caaaacaaaa caaaacaaaa caaaacaaaa aaacagttga ataaagtacc ttagagtcat 19500

ctgttcaatt aacatgttta actccaaaga aatactgaaa atattttcca aaaaggaagt 19560

gccattttac gttcctacca acagtgaata agattttctt ttctggagcc ttgtcagtat 19620

tcactaatgc tttgctgtgc agccgttgta atattatagt aaatgagtag cagtatttaa 19680

tggttgtttt aaatatacat attcttaata caaagtcttg atgaacactt ttttatacat 19740

tgttttatga ggtgtgtgtt cagatctatg tatgccagaa atgcctggca gcgttaattt 19800

aagcacactg tgagaatgac cctatagttt atgaagaatg tatgttcaga gctctgagct 19860

aagaaatcca ggagctgtca acccagaagt ttattccttg tctgtgaagg acatctgaat 19920

ccctggccta tcccttggaa cacaggatgt ccaggtgatt gatgctcttt gttaaatctg 19980

gaggttgcta ggtagagggt gctaagtgaa aatcataata taaactacac gtgttttaca 20040

aatggtagtg gttttcctgt ccaacacact tttcctgggc cacattgtat gcaagtcctc 20100

aatacaccct aggtcttgtt catgggctcc aggtctcctc ttcagccttt tggacatggt 20160

gccatgccta ttacagtcaa taggggtcta gcatgacaac tggtaggccc agaacaaggt 20220

caaagaaaat cctgcaagct cttagacaac agtgtcaagg aaggggagac ctgtggggaa 20280

atcccaggca ggccatgcac atctctgtgg gcccaacagc tgcaatcctt gatggatggg 20340

gcccgctgca tgtgtacggg gatgcctcca aaatgccaaa agttctggag gacctgttgc 20400

ctgaggtgga tgtgacaatg tgacaaagtg acagtcagat tcctgagctg tggcagctgt 20460

tggccactcc tgactgcact ctgagcaacc actgaggcag agctcattgc acaggctagg 20520

gtgtgtcagc cacgagaaca gttgtaacta taatgagatg ccgcctgtag ggataggata 20580

gcaaattgga gaccattgtt tatttggtag gccatttaaa gtgttgctga ctgccacacc 20640

aatgcattag gactactatg actacgtcat cctgggagcc taagtcctgg cgtccgatgt 20700

agagctccag tgggaaggag atgaaggtta ggatgagtcc ataaaggttc ttgctctgca 20760

gcccctgctt tgctgtctca cttggtgaac agagaatggg aggtcaatgc ggacaaagtc 20820

cagggtccag gcttatcagt caaatacttg gtgtcatctg gttacataag actatagtta 20880

ttccatattt catcatagat aagataagat gcaggtctac tcatgtccca ccacaccaaa 20940

gcagttggaa acctcccaag gcctcctggg acattggcga tcctttattc cccatttcgg 21000

caaacccctt gggcccccat ggcacttaga caagaaggtg ccccactgcg actgttccaa 21060

aagggaggat gagggctctg aagaagctga agtcacagtg aaatgaatac aaaccttggg 21120

agttctagtg cagggacagc cctgtgaatt ggatgtagtc agttaccctg aggggtttag 21180

gtggggactg tgttaaaggc aaggacataa gtgtgtgtcc ctaagaccct ggtctcaaag 21240

acagaaggaa gctgaagtga gatatactgt ttaggagtag caactgcact acatgtcatg 21300

ccttacgagt gtaggatgtg acaaagaggg ccactccaca tccggaacaa cctttagcag 21360

gctggctaaa ggatgccttc cagacacaaa agccttggaa tgccaggaca cagtctgtag 21420

ccaaatggta cttgtggtgg tcaccaccaa cataaaagtg ggccaactgt gccagcagaa 21480

gttagcccca cagaactttc ccccacctaa gagaaggcag tgcaccacaa tgcggaattc 21540

caccactgtg gaattggggg agcttagaat tggattcaga cacaagggga gagagtggat 21600

cacagggtgg cttctctatg ggataggggg tggagagtat tatactctct ggactcaaga 21660

tgagtaaaat gacacccatc acaaaccatc cagccctatg atggcacctt tatggtaagt 21720

ggttgcaggc tccaaggggg ccgggtccaa tgaggaagat gcccccacag ctcgttctca 21780

atggcagact atagaagagt tgcaggatat cttctgggag tcgagatgag gcatgctaat 21840

tatgctgaga attattgaag tcccaacaat gaattgttta ctgcaaaata aaagctacag 21900

ttatgtattc agtgcctacc caatggcatg gtgcactgat ttccacgtta agccccctgg 21960

gagggcagcc aacatttcat gtgccccagg tagttgctga cttaggagaa aagaagaaac 22020

tgagtaagca agggatgcac cctactgtga tgaagaacaa tggcaccaaa ggaagagaga 22080

cagccaagga gccagtcagg gtggccagac aacgaatgtg ctctaactgg caacacctac 22140

cagttctctg ggcccatagc ggcaataggt ggttatggaa gggccacgga agtcagaccg 22200

gttgaactag tgatacgacc tgggggactg ccacccagac cctgtgtagt atacacagct 22260

tccatcctag aacacatgag aatggatatc ttcttaggcg tgaccctcca aacaacggcc 22320

agggaattcc aacggagagt tagagtggtg atatgtgtga ccaagcagaa ggcaaactgg 22380

atgccagtag agctgccaac ccatggggag tcccacagct ggagcaacac cacccgccct 22440

gggaggggaa gatgatccaa tcatgaagat tgttaaggag ctagcccagg taggcattag 22500

gaggccactg catggttcct acaacagacc tgcatggccc atgcagaggc cagttgagac 22560

atggagaatg acagtagatt actgggagtt aaataaggtg gtctcccgag tgaatgcagc 22620

tgttcctaat atctcctcca gtctgacgag aataggagag gtgttagcca cgtagcattt 22680

ccttatcagt ttagtcaata ccttcttcag catttctgtt gccccagagt caagatcaat 22740

ttgcattaac ctaaaaagaa caatggactt ttactgtctt gttccaggga tatttacaca 22800

gcccaaatct cacagcctag tgacctccaa cctcagtcga tgggctgacc caaaggggat 22860

acatgttttc cactacattg gtgttatcat gataacctct gagtcttttt tcagcttata 22920

aattacagcc cctgtcttgc tgtctcactt gctgaataga ggatgggagg ttaatacaga 22980

caaaatccag ggtccaggct tatcagtcaa atagttggtg tcatctggtt gggtaaaact 23040

aaagtcattc catctgccat catagataag gtgcaggcct acccacgtcc caccacaaca 23100

aagcagctgc aaactctcaa ggccttctgg agcatcagtg tccttttatt ccttttattt 23160

gacatccctg aaggaggctg ctaggggaga ctgtgtccct cctaaattca tgtgctgaag 23220

tcccaaccct tggtccttca gaatgaaatc atacttggat tagtgtcctt taaagaggtg 23280

aataagttaa agtgagattc ctggagtggg gccctaatgc aatctgactg ttgttataag 23340

aagaggaagc aggagggagg gtgcacaggc cccgagggac ggccatgtta ccacagaaca 23400

gtgagaaggc gccatctgca tgccagggag cgagacctca gaggaaaccc acccagctgg 23460

cagcttgatc ttaggctttc atcctccata agtgtgagga aattggtttt gtattgtaag 23520

ccatccgatc tgtggtattt cgttataaaa gccctataaa atgaatacag taggtaatag 23580

gagagcttct atacattgaa aaagtcggat ggccagaaaa acctagacac tcctgttcag 23640

acctgagcag ggtgatggac ctgctttggg acaggagagg ggaagagatg aacccagcac 23700

ccagacccag ctgagcccat tcctcagcag gccgtccctg ggccggagct tgcacaggtg 23760

tgaaagagcc tgtcttggtc ttcaggggct catggagttg gacggagaat ggtgtagact 23820

caagaacacg tcatcggtgt gcccgtgttt atctgaatgg gatgtgtttc tagggtgtgc 23880

tcatccccaa agaagaatta atcaggtctc ttgggctaaa aagaggttgt ggcatttgtg 23940

tgtattaata actgtggtcg gacagtaaat tatgttaaac tgcttatggg aaggcacaat 24000

ggaaagaaac actttgttac agaaggaaaa aaaaggtgat tatttaaatg aggtgccttt 24060

gaaggtcacc atgccaagag gagcccatca catgatagtg ctggctttca tgttcaggag 24120

atcaggaggg tccgtccgct ggcttttatg acaccctaga cagagctgag agtgtaatgt 24180

atgaatggag gggaagtgga gagaggggag gccaaatgtt tggtgggaat ggagggtcac 24240

tattggagcc attaggaaat acacaagcat gaattatgct ggaggacaga acagtgttcc 24300

tggggaatat tgtgttgctt tgggagctgc tgaacataca ggagtttcac tgttcctagt 24360

tctcaaattc tctagactct ctggacaacc cagttttaaa tattgggaat ataggtaaga 24420

cacattcgtt attaaaaatt attaagagaa gatgtaggaa gaaatttaaa gtaatccatt 24480

tggttatgaa aatttagtta cagcgaactg tgatgtccgt ttcttacttg gaataatgga 24540

atgtaagtca ttagtcatct caacggttca tttttccata accatcaatt acaaaactgc 24600

tgagtaattt cctgaattgc ccaccataga aactgacctc acatttcctc aatgagaaac 24660

tgccagtccc gttgatccag cctcgttctt cccatcaggg attttgtatc tctgtggacg 24720

tgtggcacag tgctgcatat ccatcggcat atggcctcag gaaaggcgcc agcctatcca 24780

tgcatgatga agcttactta ggggatgaag cccgcatgct gggtgagcca gtgccaacag 24840

ctgaaagaat caactgcctg gtgtatgatg cttttatgaa aacaagccca gggcctcttg 24900

cattcttctg tattagattc tctggtgaag atttttattc atttctgcct gaaattgcca 24960

catataatta cctggaagca ttacaataaa ctgatttgga agttaactga cttcctggtg 25020

aggttaaaat gagtgtcagg tgcatagtga gacagaccgg agacatggat gcatagcaaa 25080

cttgtgctca ccatggtttc tatcttagtt agggaaactt ctgtaccttc cttagatgtt 25140

caggcactcc attgaggacc ctggcataac attatttatt gacagaccat agctcaaagt 25200

atagaactgg atactaccaa ggaggatata ctattactat tttatcttta tcttaaaata 25260

tactcttcca tctgaggtga aaattaatcc agatggtaga acttattgca gttactacag 25320

cattttagca aatcaaaagc cgcagaacaa acatatggac agatggcagg tatgttttcg 25380

gaatcgtaaa caagttcgtg atgactgtaa aaccaagggg tgtctcacga gggctggaaa 25440

cctctcacaa tgaaacaaca caatgaggat ctttgaaaag tactctgacc tcctggtgag 25500

ctggctgata tggaggctga gctccatgta gaaagccaaa ggaatttctg caggacgtca 25560

tcatgccaag cacagccgta acctgggtcc cagccctttt cacacgctca atggttagat 25620

cttgggaggg aatcaaagaa gccatagtaa aatatcaaaa tttaaacccc gattttgaat 25680

ttaaaaagtg ttaaaatatg gttgtggcct acactcagaa aatctgtgtc cttcagatgg 25740

tttctcagtg gcaccagatg gtttcaagtg gctattcatt aagtttctca gtgaaattac 25800

cagacataga ataaataaat tgtcactgtc ttaaatcaac ccatgggaaa ggaaaactgt 25860

gtaaatacag cagagaggaa acattgctca agggaaaaac aatctccaga aagtattgtt 25920

aaagaaacag aggccctctt tccagccagc gccgagcgat gggcacctct cgggacaact 25980

ggcacaaggg ccgcaaagct gggggcaaga gaaggccctg ccacaagaag cggaagtatg 26040

agttggggcg cccagctgcc aacagcaaga ctgacccgtg ccgcatccac acagtccgtg 26100

tgcgaggagg taacaagaaa tactgtgccc cgaggctgga cgtggggaat ttctcctggg 26160

gctcagaatg ctgcgctggt gaaacaaggg tcatcgatgt tgtctacaat gcatccaata 26220

acgagctggt tcgtaccaag accgtggtga agaattgcat cgtgcccatc gacagcacgc 26280

cctaccgaca gtggtacgag tcccactgtg cactgcccct gggccgcaag aagggagcca 26340

agctgactcc tgaggaagaa gagattttaa acaaaaaacg atctaaaaaa attcagaaga 26400

aatatgatga aaggaagaag aatgccaaaa tgagcagtct cctgggggag cagttccagc 26460

agggcaagct tcttgcgtgc atggcttcaa ggccgggaca gtgtggccga gcagatggct 26520

atgtgctaga gggcaaagag ttggagttct atcttaggaa aatcaaggcc cagaaaggca 26580

aataaatcct tgttttgtct tcacccatgt aataaaggtg tttattgttt tgttcccaaa 26640

aaaaaaaaag aaagaaaaag aaacagaggc atcacactta ctagaaaaac atattctatt 26700

tcatatatta tggggatatg acgtgatgtt ttgacatatg cgggcattgt gaaattatta 26760

aatcaagtaa ataaacatgt ccatcacctc acatacttat tttttatggt gtaaacgtgt 26820

aaaatctact ctcttatcag ttttcaagta tatagtacat tagtatcatg gaagtcacca 26880

tgctgtgcaa tagatcttca aacgaattcc ttctatctaa ccaaaactct gtaccctttc 26940

accaacgtct cagctttcac atgcccctga cgccagcccc tggtaggcac cattctactc 27000

tctactctga gttcaacatt tttagattgc atgtgtaagt gagatcatgg agtaattttt 27060

tatacctggc ttatttcact caacataaag agtcaaatgc tcaacatcac taatcatcag 27120

ggaaatgcaa attaaaacca cgataagata tcacctcaca catgttacaa tggcttagtc 27180

tcagtctgtc tttttgttac tataaccgaa taccagagac tgggcaattt ctaaagaaaa 27240

ggaatttatg ctttatggtg cttgagtcag agaagtctaa tatcaaggca ctggcatctc 27300

acaagggcct tctcactgcc tcatctcaca gcagaggtgg gtgagcaaga gaccatttgt 27360

ccacgagaga aaagagacca tcttttatta gaaattcact cctataataa ctaacccact 27420

ccattgatag tgacagtaat ccattcatga ggacagagcc ttcatgactt gatcacataa 27480

taaaggtccc acctctcaac actgttgcat taaagattat ttccagatcc taaactttgg 27540

gagacacatt taaaccatag cattccattc ctaatatcaa aatttatgtc cttatcacaa 27600

tgcaaattac attcattcca tcccaattgt ctccaaagtc ttatccagca tcagtgcaaa 27660

agtctgaagt ccaaagtctc atctaaatca gatatgagtg tgactcgagg cacaatttag 27720

cctgatataa attgtttcca tctgcgagcc tataaagtca aaacaagtta tctactttca 27780

aatacagtga acaatggggc aggtatggga tagaaattcc cattccaaag ctcagagaga 27840

ggcaaggaga aagcggtgcc tagttcaaaa cccaacaggg aaaaaaacat taagtcttat 27900

agctggaaaa tcatcctctt taacggcatc ttgtgcacac tggggagggg gatgggcccc 27960

caaggcctcc ggcagtcttg cctctatata ttttctgggt tcagtccact cagccgctct 28020

cacaggtggg actctcaggc ctctagctct cctaggctga ctggaaactc tttgtggtac 28080

ctccaaaccc acatttctgc ttggcattgt gctaagggcc cagtgtggtg actctgtctc 28140

tgcaacaagt cactgcccga gaccttaggc tgtccttagg ctgcccgaga ccttaggccg 28200

tccacagcat tctttgaaat ctaggtggag aaagccatgc cctcgtggtt cttgtattct 28260

gcacacctgc agaattaaca acacatggat gccatggaag ttgatgactt gtaccattaa 28320

agtgatggct tgagccacac ctaggtcctc ctgagccaca gcatgggcag ccaaggagtg 28380

ctgtgcctgg acaccgggaa cagagtccta aagtgcctgc tagaagtcag gccatagatt 28440

tccttcaaat ttctcccacc atataacctc gttcatggct ctgaacttcc accttacaga 28500

aggacctagg gatgaacaca attcagccac gttctttgcc actttatggc aaggatggcc 28560

tttgctccat tttccgatga gctattcttc tttttctcct gagacctcat cagaacggcc 28620

tttattgtcc acggttctac tgacattcta atggtcatca cctaaataat ctctaagaag 28680

tttcagaatt tcctcacagc tctcttcttc tgagtcctca aaagaatcac ctctagtgtt 28740

ctattcaggg caatccagac tttttatagt ctgatcctcc aaattattcc agtctttgtg 28800

cattactaca tccacttcta cattttgggg tatttgttat cgcaacagcc ccacctcttg 28860

atactgattt ttcgtcttag tccactttgt ggtgcaatga gtgaatacca cacactggct 28920

aaagtataag gaaaagaaat ttattttctc gcagctctag aggctgggaa gtcaatatca 28980

aggtgttagc atctggcaag agccttcttg ctgtgatgtc catgtggaag gcaggagagc 29040

aggtgcgaag gatggaaagg ggtttaaact cattttttaa tgaggaaccc aggcctgtag 29100

taactaatct gctaccacaa tgagtaacct actctgacga taatggcatt cattgcttca 29160

tgagggcaga gccctcatga cctaatcatt tcttaacatt cccacctctg gacactatgg 29220

aatttgggat taagtttcca atacacatcc tttctaaaca gcaggggctt tttaataggt 29280

tgaccaccca aggctgcagg aggctctgaa gcagtggcct gaggttggct gtcctttgtg 29340

agaatggaga gaagtgaact gactcatgga gacacaagta gatgaggtaa aggcattcat 29400

tgcttcatta catggatggt gaggtcgatt gaaggcatta acggattaaa gatggtggca 29460

aaaccgtctg aggtggagac cacggggagt ccatcagaaa tggaggacac gtcccaataa 29520

atggtgcttc atttccctgc aaagcagaag aaagcaaaga acaaaacaca acatcatagt 29580

gtacactgag cagtggattg agagaagagt ttcctaaggc ataactgaca gagtggagaa 29640

gacacacaaa tctttgcatg atgctaacat ttggactgtg gcttcattat ttcttattaa 29700

tattttactg aaatatcgct agaaggagac tgaaaatgaa gtgtgaaaag ttaaatggga 29760

tttctgctct atgtcctttt cagatgagag gaactaggga attccaggga agaaacaata 29820

atagctgctg agcaaggctt ttgcagggca ggacaaggaa tccccaaaga gaaaacggaa 29880

acctcagctt cactttgcat ctgctcctga gccaggtcct gagcgacccc tgtaggtcct 29940

gagtgcccct ccgtaggttc tgagcatccc ttggttgctg ggcgccctct ggtggtgtct 30000

gagcccctct ggtggtttct gagccccccg ccttatgtct gatcctccct ggtggtgtcc 30060

gagtgcccct gctagtgtct gagccccctg gtggtgtctg agtccccttc ttagtgtctg 30120

agccacccta ttagtgtctg aggacccctg atggtgtctg agcccccagt tagtgtctga 30180

gccaccctat tagtgtctga gcccccctgg tggtgtctga gcacaggaga gctcctctga 30240

aggaagggtc tacatgggga caggcgtgct tgtctcaggg aagggtccat gtggggacag 30300

gtgtgcttgt ctgaaggaag gttccacatg gagacaggtg tgcttgtctc agggaagggt 30360

ccacatgggg acaggtgagc ctgtctgagg ggacagaagt gcttgtctca aggaagggtc 30420

ctcatgtgga caggtgagct cttttgaggg aagggttgac ctggggacag gcatgcttgt 30480

ctgaggtaag ggtcctcctg gggacaggtg tgcttctctc agggaagggt ccacgtgggg 30540

acagaggtgc ttgtctaagg caagaatcca agtagggaca ggtgagctcg tctcagggaa 30600

gggtccaggt ggggacagtt gtgctcatct gagagaagcg ttgaagtggg gacaggtgtg 30660

cttgtctcaa ggaagggtcc atgtggggac aggtgtgcta gtatcaagaa agggtccaca 30720

tagggacagg tgtgcttctc tcagggaagg gtgcatgtgg ggacaggtgt gcacatcgga 30780

gagaatggtc cacctgggga caggtgttct tgcctcaggg aagagtccac cttctcaggg 30840

aagaagtgtg ctcctctgag ggaagggtgc acatggggac aggtgtgctt gtctcaggga 30900

agggtccatg tgggaacagg tgagctcatc tgagggaaga gtccacgtgg ggacaggtga 30960

gctcatctga gggaagggtc cacatgggga caagtgacct cgtctgaggg aagggtccac 31020

gtggggacag gtgagctcgt ctgaaggaag ggtccacttg gggaccggtg tgctcctctg 31080

agggaagggt ccacgtgggg acaggtgtgc tcctctggag ggaagggtcc acgtggggac 31140

aggtgagttc atctgaagga agggtccaca tggggacagt tatgctcctc tgagggaagg 31200

gtccatgtgg ggacaggtgt gcttgtctca gggaaaggtc cacgtgggga caggtgtgct 31260

caccttgggg aagaggacag atgagctcat ctcagggaag gggccatgtg gggacaggac 31320

caagggttgg gacttcagca caagaattta ggaggaacac agtcttccct agcagcctcc 31380

ttcagggatg tcaaatattt tccttctgtt ccctgtgaaa gccttaaagg ggtagggaaa 31440

gggcgttcaa cctgcacact cgtagagggg aaaccagctt cattagtaat cgttcatctg 31500

tggtaaaaag gcaggatttg aagcgatgga agatgggagt acggggcgtt ggaagacaaa 31560

gtgccacaca gcgcagcctt cgaaacacac cacggtcacg ttaagtttaa atggagtgac 31620

cacattcgcc aggaaaggga aatatttaca cttttgaaga aacagtaatt tgtgtttctg 31680

attatgatct ggccttggat tttccctccc ctcataagca atgacagaat tggcagaaat 31740

atgtgaaacg ttagttctca gacatgagac acccacagag ggccccctgt gcccttccct 31800

gagagctgat cagctcctgc atctgaagaa atgaccaaag accaggagag aaccacacag 31860

aagcatcgga gggacagcac ctggggctct gatggggtca ggaatagcat ctgttcccaa 31920

tagatggact aagtaaaaag tatcataatt cacaagagtt ttacatagca cagaagaaaa 31980

agttacccta tatcaactgt tgatcttgtg aatccaggaa ctctggattc aaggtggtcg 32040

ggcacatctt gatttacgca tttcagggac acatgagaca tcagtcaata taagtaagaa 32100

ggacattagt tccatccaga aaggctgaga caactcaaag caagtcctcc ccacttaggg 32160

cttccaggtc acaggtaggt gagagacaga tggttgcatt cttttgagtt tctgataagt 32220

gtttgcaaag gaggccatga ggatatgcac ctgtctctgt gagcagaggg acaactttaa 32280

atagactggg aggcagattt gtcctgagtg gtttccagct tgacggggcc caagatattt 32340

tcctttcaca atctggtaac ttcaaacaaa acttcaaagc cacaacaaaa caacacaaca 32400

acaaaaagaa taagacatgg gtacttatta agagtagaaa aacattcagt ccccaaggaa 32460

aatattggca gtgtctacct ccacatgaca aaggagtaag cagtgtgagc cacagaaagg 32520

agcactatta acccacagag caaccgagaa taacacgggt gatgcgaggg cattggacgc 32580

acatcattgc attttgtaga ttcagaaaga aacggaaaag attgacggtg gtaaaagaga 32640

cagccctgct tccctctccc ttttccctcc ccgatgaggc ctcacagcca tgaccctcag 32700

cctcatcccg cagtgcagca gctgccgtcc tgtccaggcc caccccctgc cccgccctgg 32760

gactgttacc tcattccctc ccggagtcca ggtgcccccc ggggtgtggt gcgggagcct 32820

ggggaggccc tttgttctct gtcagggtct ccctgggagg gacgcagcca ccgcagctgg 32880

ttggggcctg gcttcgccca ggacagtcct ttcctttccc attgtctttg gatgactatc 32940

gctgggctgg gacatgaggc gggcagaggc gcgggtcacc cttaggaccc ccctcttgct 33000

gctggggctc tgggcgctcc tggctccggt ccggtgttct caaggccgtc ccttgtggca 33060

ctatgcctcc tccgaggtgg tgattcccag gaaggagaca caccatagca aaggccttca 33120

gtttcccggc tggctgtcct acagcctgtg ttttggggtc aaagacacgt cattcacatg 33180

cggaggaaac accttctttg gcctagacat ctgctggtga caactcagga tgaccaagga 33240

gtcttgcaga tgggtgaccc ctacatccct ccagactgct agtacctcgg ctacctggag 33300

gaggtgcctc tgtccatggt caccgtcgac acgtgctatg gggacctcag aggcatcatg 33360

aggctggacg accttgcgta cgaaatcaaa cccctccagg attcccgcag gtttgaacat 33420

gttgtttttc agatagtggc cgagcccaac gcaacagggc ccacatttag agatgatgac 33480

aatgagacag accccctgtt ctctgaagca aatgacagca tgaatcccag gatatctaat 33540

tcgctgtata gttctcatag aggcaatata aaaggccacg ttcaatgttc caattcatat 33600

tatcgcatat atggcaatat tacaacttgt tccaaagagg tggtccagat gttcagtctc 33660

attgacagca ttgctcaaaa tattgatctg cggtactata tttatctttt gaccatatat 33720

aataatcgtg acccagcccc tgtgaatgaa tatcgaattc agagtgcaat gtttacctat 33780

tttaaaacaa ctttttttga tacttttcat gttcattcat ccacactact tattaaatac 33840

gtgccacatg aatctaacta tgaacctgaa aggtataact tctgttcccg tatagccctg 33900

ttacacattg gtactccagg cagacattat ttattggtag ccgtcataat aacccagaca 33960

cagatgagaa gtattggtct ggagtatgat gataactact gcacatgtca gagaagggcc 34020

tcctgcatta tgcagcgatt tcctgggatg acagatgcgt tcagtaactg ttcttatgga 34080

catgcacaaa attgttttat acattcaggc cggtgtgttt ttgaaacact tgctcctgtg 34140

tataacgaaa ccatgacaac ggttcgctgt ggaaacctca tagtggaggg gagggaggaa 34200

tgtgactgtg gctccttcaa gcagtgttat gccagttatt gctgccaaag tgactgtcac 34260

ttaacaccgg ggagcatctg ccatatagga gagtgctgta caaactgcag cttctcccca 34320

ccagggactc tctgcagacc tatccaaaat atatgtgacc ttccagagta ctgtcacggg 34380

accaccgtga catgtcccgc aaacgtttat atgcaagatg gaaccccgtg cactgaagaa 34440

ggctactgct atcgtgggaa ctgcactgat cgcaatgtgc tctgcaaggc gatctttggt 34500

gtcagtgctg aggatgctcc cgaggtctgc tatgacataa atcttgaaag ctaccgattt 34560

ggacattgta ttagacaaca aacatatctc agctaccagg cttgtgcagg aatagataag 34620

ttttgtggaa gactgcagtg taccaatgtg acccatcttc cccggctgca ggaacgtgtt 34680

tcattccatc actcagtgag aggagggttt cagtgttttg gactggatga acaccatgca 34740

acagacacga ctgatgttgg gcgtgtgata gatggcactc cttgtgttca tggaaacttc 34800

tgtaataaca cccagtgcaa tgtgactatc acttcactgg gctacaactg ccaccctcag 34860

aagtgcggtc atagaggagt ctgcaacaac agaaggaact gccattgcca tataggctgg 34920

gatcctccac tgtgcctaag aagaggtgct ggtgggagtg tcaacagcgg gccacctcca 34980

aaaagaacac gttccgtcaa acaaagccag caatcagtga tgtatctgag agtggtcttt 35040

ggtcgtattt acgccttcat aattgcactg ctctttggga cagccaaaaa tgtgcgaact 35100

atcaggacca ccaccgttaa ggaagggaca gttactaacc ctgaataaca ctaattcagc 35160

ctcccgatcc ctgtaaagat acagagaata taacagcaaa atctatgaaa caggatcagg 35220

ggaagggatg gcaaagctca agtccacatt tcttgaagtc cacaggaagc acagggtcct 35280

gtttcacatc acagggaaac gggaggcatt ggcttctgtc ccaggttctt gtaggtcgct 35340

gatgctcact ctgaaataaa tcttcaaaaa cacacattgg tgccttccac attttcttag 35400

actcctctgg gagcccaaac ttggccagaa cctcttgcct ggagagacat gaatgagcat 35460

ctggctcttg tcctgaggtc tctggtccca gaattaacgg aagttgccac cagctcctta 35520

cagggaacat tcatgacatt tctccagaag agagctccag agcaatgagc ttcctcattc 35580

cccaggtaat ctgtccttct ctaaacccga agtcagttta gggtgatcca gggctactcc 35640

ctgttccctg tctgttcctc acgggggtgc tgtgggcttt gcagtgagag ggacttgggt 35700

tcaaatcccc caccaagcaa atccccctac ctggggccga gcttcccgta tgtgggaaaa 35760

tgaatccctg aggtcgattg ctgcatgcaa tgaaattcaa ctagaaaaat aggtagacgt 35820

gaggggcaag ctgtctgtca tttagtgtga gctctgtgag tggcagctgc cccctttctt 35880

cctgccccca catttccttg aactgaaaca ggaagggaag ctgagtaagt cgtgatgagg 35940

aagagaaacc aggcttgtag cagcacaggc tggtccgggt ggaaaacagg gctaggtgta 36000

tcactgagtt attgtaaagg aaaatggaag ttaaatgtat aaataactga atgagataac 36060

attttatttt aacttaaaat tcacactaat attgactttt aaaatgcagt gtagatatgt 36120

cagagagaat ttcaaaggca aagcccaccg acggaagaaa tcacccttcc cataccatcc 36180

acagaaaact gttggtattc tagggtagta ctgagatcta gcatttttct gaatacatct 36240

gtggttctag atgtcctgct tccatagata ttgtttagaa ttcccacccc tttctccaaa 36300

cacagcttga tatcctttct ctgaacctgt tagaaatttc ctccattcag ctgtcataaa 36360

gatgcgagca atccattcct gtgcctctgt cagtgtgttc tattattttg tggctgaacg 36420

ctaatggaca gttaagtgtg aggtcagtga atacagtgcc ctccctctat gtgtccttcg 36480

ggtgtgaggg gttttgctga tagagcagca ggccccatcc caccctttat gcatctccgc 36540

cccccacctc acgctccagc tgacctctcc cctgtggcct ggggcgttcc ccagggggaa 36600

tgacctctcc tctctccagg gcccacccac tcagtgcccg tgcaagacca ccacgcttgg 36660

cacggcccca cctcgtgtca gggcctgtgt cccctgcccc accccctaaa cagatgggaa 36720

ccactgggac tctgctcagg gcagggggcg gaggtatgtg tgaaaggaag gcaaatgtgc 36780

actctgttgg agaaatatta taggtagttt gagcaaaaaa tctaatgcca tgggaacttt 36840

tagaatgata cgtattttaa caaagaacat gaccaataga gtttgtattg aagccaggaa 36900

aacactattt agagcaacag caatatcaaa aacacaagcc aacagttcac caagaaaaac 36960

caccattaac cccatggaaa tggtcttcca agagcatcgg cacttaaatc ctggaaatct 37020

gcctgcctca gcacctgttg tcctgacctg ccctcctgtg tgtcctaatc actcccaaac 37080

acggggcctg cactgtggga gattcacact gtgccaggtg gagggagcag gacaactgct 37140

aacaggttgt tggtgtggat gccgaggcca cccaagcagg tgtaaactcc cacctgtggg 37200

gcagggaaga gtgcacggga gacatgtccc gggcataggg tgagggagag ctgtgggggc 37260

tctgggttct gaagtgggtt ctgaagaggg ttctggcctg gcagggataa gaccaaccag 37320

catgtgaggc caggctggag tctggacctc tgaagctgca agggtcatgg gctgcttggc 37380

cccaggggct gtcctggttc tctatggagt actttcaaac attctttctt cttccaatcc 37440

ccctccttct ctcccaaagc ctgcatctcc caaatcctct ttgtcggatc ctcggcttca 37500

ctctgcatcc gtcctgagca tcgatcttcc aattccatcc tcttctcttc tgctatgtct 37560

aagctgctgt gaagccacct gctgtaattt actgctttat atttaatatt gtaccgtaca 37620

tctgttctgt ttccctcatc ataaatgctt catttcatgc tcagcatctg agaacacaag 37680

gccttgtcag ctgtcacctc cttccgttct ctgtttcctt cctcctatcc ccatattgct 37740

catcatgtcc agtctcctgc catcctgaat gcttctgatg gaaggtctga gatgtctcat 37800

gagcactgtg aagattcttt gtaatgtgag cttgttccag gcaggaattc tccttcaccc 37860

agccctggaa gccaagtata ggcagatggc catgctcaat caaagactga gctaacttaa 37920

cagtggcttt ggttttaagg tttctccaat ccccagggca caggatttca gggaattcag 37980

gtgagagtct gggtgttacc cttcaggagg ctgtaaactc catttcacct agtctacacc 38040

acagactatg gaaactatat atatatatag ttctgtccct ctagagaaac ctaatatgta 38100

tatatacaat atataatacg tattatatat tatatataat acgtattata tattatatat 38160

attatatata tattagagtt tattgaggag tattaaactc acaatcacaa ggtcccacag 38220

taggccatct gcaagctgag gagcaaggaa gccagtccga gtcccaaagc tgaagaattt 38280

gaagtctgat gttcgacggc aggaagcatc cagcacagga gaaagatgta ggctgggagg 38340

ctaagccagt ctagtctttt cacgtttttc tgcctgcttt atatcctggc cacactggca 38400

gctgattaga tggtgcccac ctagattaag ggtgggtctg cctttcccag tttactggct 38460

caaatgttaa tctcctttgg caacaccctc acagacacac ccaggatcaa tactttgcat 38520

gcttcaatcc aatcaagttg acactcagta tcaaccatca caagtccacc ccttgtcaac 38580

ttgaacccat acaaatctcc tgagatcata cataatcttc aaataaagac aataataagg 38640

tcataattac acctaatgta atacaactat cttttgtaca accagaaatg caccaatccc 38700

caacccaaat gctattatgt aaagttaaga acacttaaat gctgatatga agtcaataaa 38760

ttttatgtca catgataaag gaaaaaagaa atgaaggaat tttcttagta caagtgtgta 38820

catgcacaaa catgttttta acaaaagaag aaggaaatac tgatgacaat tacagtcctc 38880

atttctgcaa ctgatcacgt ggttgtagct ggtattgatg actaccttct tctactaccc 38940

attctgtatt ccctttgcct tcagcaagca tcacagcagg tagagttttt tctcctagtg 39000

gagtgatgca aaccttcatt cctgaagggt ctgggccatt tgtagtcctg cctggattgg 39060

gctgttgtag tttcccgttg accttaatga cagggcatgg taatgttaag agacgcccta 39120

atggatctcc tgtattccat acatattctt ccttacctcc attgtggagt aatagactga 39180

ttgcatcttg atagtccagg tcaatcagcc cagccaacac tgtaactccc ctcttagcct 39240

gtggacttaa aggtaggagg ggcccaaagt ggccaggtgg aaatctttac ttccagttta 39300

atggaattgt tgttgtttct cctgatggca gcattattcc cactggaact aagacctcta 39360

ggccaacaga atgtaatgtc atgggaccag gaagcaaaaa ttttgctagt ggatcactag 39420

gggtgatggt gaatggtgcc atttccactt ccaccccttg attcctggat ccatgaatta 39480

tggctatggg agaaagagta ccatatattg gatgctgatt tggagcatac atggcctttt 39540

ggagagcttt gccccagccc tgcaaagtat tggagcctag ttgacattgt aattgtgact 39600

ttgaaaggcc attccattct tctatcaatc cagctgcttc aggatgatgg ggaaaatggt 39660

aagacaagtg aatcccatga gcatgagccc actgccacac ttctttagcc gtaaagggag 39720

tgccttggtc agaggcaatg ctatgtggaa tactgtgaca gtggataagg cattccatga 39780

ctccacagat ggtagtcttg gcagaagcat tgcatgcata tctgcagtaa gtgtctattt 39840

cagtgaggac aaacctctgc cctttccagg atggaagagg tccaatataa tccaacctgc 39900

catcaggtag ctcactgatc accctgagga atggtgtcat ttgggtagag acccagagcc 39960

aaaccagatc acgccaccca acccctccca aatctcatgt cctctttgca tttcaaaacc 40020

aatcatgcct tcccaacagt cccccaacat cttaactcat ttcagtatta actcaaaagt 40080

ccaaatccaa agtcacattg gagacaaggc aagtcccttt catctatgaa cctgtaaaat 40140

gaaaaacaag tcagttactt ccaagacaaa atgggggtac aggcattaga tacatgctcc 40200

catttcagtt gggagaaatg agccagaata aaggggcttc aggtcacatg caagcccaaa 40260

ctccagtggg gcagtcatta aatcttaaag cttcaaaata atctcctttg actccattcc 40320

tcacattcag ggcatgctta tgcaaagtgg gggctcctac aaccttggga agctctcacc 40380

ctgtggcttt gcagctctga ccccatggct gctctcatgg gctttgcaga gttcagccct 40440

cctggctgct ctcattgagt gcatgcagct tttccaggtg cacagtgcaa gccgttaatg 40500

gatctaccat tctggggtct gaaagatggt ggccctcttc tcacagcccc attagtcact 40560

gtctccagtg gggactctgt gtgggggctc caaccccaca tttcccttct gcactgccct 40620

agcagaggct ctccatgaag gctttgcccc tggcgcagac ttctggctgg acatccagtc 40680

atttctataa atcctctgag atctgggtgg aggatcacaa agctgaactc ttctcttccg 40740

cacatcccta ggcccaacat catgtagaag ccaccaatga ttggggcttt ctgaagcaat 40800

ggcctgagct gtacattgga cttttttagc cacagctaga cctggagcag ctgggacaca 40860

gggcaccaag tcccaaggct ccaaagagaa gctgggccct ggacccagcc catgaaaaca 40920

tttttccctg ataggcctcc aggcctgtga ttggaagggc tgctgcaaag atctccgaca 40980

tgccctggaa acattttccc cattgtcttg attattaata ttcatctctt cattacttat 41040

gcaaatttct gcagccaact tgaatttctc cctagcaaat gtgtttttct ttactaccac 41100

atggccaggc tgcaaatttt ccaaactttt atgctctgtt tcccttttaa aaataagttc 41160

ctatttcaga tcatctctct caagggcaaa gttccacaga tttctagggc agggacaaaa 41220

ttccatcaag cttggtttta tacattttag agaggcatga gacatcaatc aaatacattt 41280

aagagacaca ttggtttggt ccagaaaggt ggaacaactc aaagctaggg cttccaggct 41340

ataggtgaat ttaaatattt tctggttgac aattggttga gtttgtctaa agacctggga 41400

tagatagaaa ggtaatgttc aggttaagat aaagattgta gagtccaaag ttcttttgaa 41460

gtcttatagt ggctgccctt agagataata ggtgacaaat gtttcctatt caaatcttag 41520

ttgaactctt taggattggg aggttctaga agaaaaagat ctagctatgt taatagagat 41580

tctttacaga tgcaaatttt cccccacaaa gaacagcttt gcagggccct ttctttcttt 41640

ctttctttct ttctttcttt ctttctttct ttctttcttt ctttctttct tttttagatg 41700

gagttttgct cttgttgccc aggctagagt ataatggcac gatcttgtct caccacaacc 41760

tccacctcct gggttcaagt aattctcctg cctcagtctc ccgagtagct atgattacag 41820

gcatgcacca ccacacccgg ctaattctgt atttttagta gacacagggt ttctccatgt 41880

tggtgaggct ggtctcgaac tcccaacctc aggtgatccg cccacctcag cctcccaaag 41940

tgctgggatt acaggcatga gccaccatgc ccggcctgca gggccatctc agagtatggc 42000

aaagaaacat gttttggggt aaaatatttt gattttctta tttgtctcat aatgttatgc 42060

cagagtcagt ttggaaagta aatcatgata tataggttta aataaaaccc atctgatgag 42120

aatttatgat ttgtagagca tgcctcccca gactctttag ataggaattt gggcaagatg 42180

aaaaaaaaat cagagtttag tcctcactac ctaagaccag ctcagcttgg acttcactgt 42240

tcatgtcact atcagcattt tagtcaaaac cactcaataa gtctctagga agttccaaac 42300

tttcccacat cttcccttct cctttcaagt tctccaaact gttccaaccg ctgccaggag 42360

gtacccagtt ccaaagttgc ttccagattt tgagttatct ttatagcagt tccccactcc 42420

tggtaccaat ttactatatt agtctgtttc cacagtgcta taaagaactg cccgaaagtg 42480

gttaatttgt aaagaaaaga ggtttaattg actcacagtg ctgtgtggtt agggtcggag 42540

gctcaggaaa cttgcaatca tggtggaagt ggaagcaggc atgtgacaca tggcagcagg 42600

tgagagagag aaagagagag agagggaatg aaggaggaac caccatacat ggataaaacc 42660

atcagatctc atgagaactc actcactatc aggagaacat gaggacagca tgggggaaac 42720

cacccctatg acccagtcac ctcccaccag gtccacccct tgacacataa ggattactat 42780

ttgagatgag atttgtttaa tgacacagag ccaaaccaca tcagcatgtg acaaaggtct 42840

aatatcaaga atctatgagg gggcagttcc aaaatggctg aataggaaca gctccagtct 42900

acagctccca gcatgagcta cacagaagac aggtgatttc tgcatttcca actgaggtac 42960

tgggttcatc tcacgggggc ttgttggaca gtgggggcag gacagtgggt gcagcccacc 43020

aagagtgagc tgaagcaggg cgaggcattg cctaacccag gaagtgcaag gggtcaggga 43080

attcccgttc ctagccaagg gaagcggtga tggacggcac ctggaaaatc cggtcactcc 43140

caccctaata ctgcactttt ccaacggtct tagcaaatgg cacaccagga gattatatcc 43200

tatgcctggc ttggaggttc ccatgcccac ggaacctcgc ttattgctag cacagcagtc 43260

tgagatcaaa ctgcaaggtg gcagtgaggc tgggggaggg gtgcccacaa ttgctgaggc 43320

ttgagtaagt aaacaaagtg gctgggaagc tcaaactggg tggagtccac tgcagctcaa 43380

ggagacctgt ctgcctctgt agactccacc tctgggggca gggcatagct gaacaaaagg 43440

cagcagaaac ctctgcagac ttaaatgtcc ctgtctgaca gctttgaaga gagtagtgtt 43500

tctcccacat ggactttgag atctgagaat ggacagactg cctcctcaag tgggtccctg 43560

acccccgagt agcctaactg ggaggcaccc tccagtaggg gcagactgac accttacacg 43620

gctgggtgcc cctctgagat gaagcttcca gaggaattat caggcagcaa catttgctgt 43680

tcagcaatat tcgctgttct gcagcctctg ctgctgatac ccaggaaaat agggtctgca 43740

gtagacctcc agcaaactcc aacagacctg cagctgaggg tcctgactgt cagaaggaaa 43800

actaacaaac agaaaggaca tccacatgaa aaccccatct gtacatcacc attatcaaag 43860

acaaaaggta gataaaacca caaagatggg gaaaaaacag ggcagaaaag ctgaaaattc 43920

taaaaatcaa agtgcctctc cccctccaaa ggaatgcagc tcctcgccag caatggaaca 43980

aagctggatg gagaatgact ttgatgagtt gagagaaggt ttcagatgat caaacttctc 44040

cgagctaaag gaggaagttg gaacccattg caaagaagct aaaaaccttg aaaaaagatc 44100

agatgagtag ctaactagaa taatcagtgt agagaagtcc ttaaatgacc tgatggagct 44160

gaaaaccatg gtatgagaac tacgtgatga atgcacaagc ttcagtagcc gattcgatca 44220

actggaagaa agggtatcag tgattgaaga tcaaatgaaa gaaatgaagg gagaagagaa 44280

gtttagagga aaaaaaagta aaaagaaaga aacaaaccct ccaagaaata tcagactatg 44340

tgaaaagacc aaatctatgt ctgattggtg cacctgaaag tgacagggag aatggaacca 44400

agttggaaaa caccctgcag tatattatcc agcagaactt ccccaaccta gcaagacagg 44460

ccaacattca aattcaggaa atacagagaa ccccacaaag atactcctcg agaagagcaa 44520

ctccaagaca cataattgtt agattcacca aagttgaaat gaaggaaaaa atattaaggg 44580

cagccagaga gaaaggtcgg gttaccctca aagggaagcc catcagacta acagctgatc 44640

tctcagcaga aactctacaa gccagaagag agtgggggcc aatattcaac attcttaaag 44700

aaaagaaatt tcaacccaga atttcatatc catccaaact aagcttcata agtgaaggag 44760

aaataaaatc ctttacagac aaacaaatgc tgatagattt tgtcatcacc aggcctgccc 44820

tacaggagct cctgaaggaa gcactaaaca tggaaaggaa caactggtac cagccactgc 44880

aaaaacatgc caaatcataa agaccaccaa agcgaggaag aaactgcatc aactaacgag 44940

ccaaataacc agctaacatc ataatgacag gatcaaattc acacataaca atattaacct 45000

ttaatgtaaa tgggctaaat gctccaatta aaagacacag actggcaaat tggataaaga 45060

gtcaagaccc atcagtgtgc tgtattcagg agacccatct cacatgcaga gacacacata 45120

ggctcaaaat aaaggcatgg aggaagatct accaagcaac tggaaaacaa aaaaaggcag 45180

gagttgcaat cctagtctct gataaaagag actttaaacc aacaaagatc aaaagagacg 45240

aagaagacca ttacataatg gtaaagggat caattcaaca agaagagcta actatcctaa 45300

atatatatgc atccaataca ggagcaccca gattcataaa gcaagtcctt ggagacctac 45360

aaagagactt agattcccac acaataataa tgggagactt taacacccca ctgtcaacat 45420

tagacagatc aacgagacag aaagttaata aggatatcca gcaactgaac tcggctctgc 45480

accaagcaga cctaatagac atctacagaa ctctccaccc caaatcaaca gaatatacat 45540

tcttttcagc accacaccac acctattcca aaattgacca catagatgga agtaaagcac 45600

tcctcagcaa atgtaaaaga acagaaatta taacaaactg tctctcagag cacagtgcaa 45660

tcaaactaga actcaggatt aagaaactca ctcaaaacca ctcaactaca tggaaactga 45720

acaacctgct cctgaatgac tactgggtac ataatgaaac gaaggcagaa ataaagatgt 45780

tctttgaaac cagtgagaac aaagacacaa cataccagaa tctctgggac acattcaaag 45840

cagagtgtag agggaaattt atagcactaa atgcccacaa gagaaagcag gaaaaatcta 45900

aaattgacac cctaacatca caattaaaag agctagagaa gcaagtgcaa acacattcaa 45960

aagccagcag aaggcaagac ataactaaga tcagagcaga actgaaggaa acagagacac 46020

aaaaaaaccc ttcaaaaaat caatgaatcc aggagctggt tttttgaaaa gatcaacaaa 46080

attgatagac cactagcaag actaataaag aagaaaagag agaagaatca aatagatgca 46140

ataaaaaatg ataaagggga tatcaccacc gatcccacag aaatacaaac taccatcaga 46200

gaatactata aacacctcta cggaaataaa ctagaaaatc tagaagaaat ggataaattt 46260

ctcgacacat acaccatccc aagactaaac caggaagaag ttgaatctct gaatagacca 46320

ataacaggct ctgaaattga ggcaataatt aatagcttaa caaccaaaaa aagtccagga 46380

acagatggat tcacagccga attctaccag agctacaagg aggagctggt accattcctt 46440

ctgaaactat tccaatctat agaaaaagag ggaatcctcc ctaactcatt ttatgaggcc 46500

agcatcatcc taataccaaa gcctggcaga gacacaacaa aaaaaaagag aattttaggc 46560

caataaccct gatgaacatc aatgcaaaaa tcctcaataa aatactggca aaccgaatcc 46620

agcagcacat caaaaagctt atccaccatg atcaagtggg cttcatccct gggatgcaag 46680

tctggttcaa catacgcaaa tcaataaacg taatccagca tataaacaga accaacgaca 46740

aaaaacacat gattatctca atagatgcag aaaaggcctt tgacaaaatt caacaacact 46800

tcatgctaaa aactctcaat aaattagata ttgatgggac gtatctcaaa ataataagag 46860

ctatctatga caaacccaca gccaatatca tactgaatgg gcaaaaacta caagcattcc 46920

ctttgaaagc tggcacaaga cagagacacc ctctctcacc actcctattc aacatagtgt 46980

tggaagttct ggccagggca atcaggcagg agaaggaaat aaagggtatt caattaggaa 47040

aagaggaagt caaattgtcg ctgtttgcag atgacatgat tgtatatcta gaaaacccca 47100

tcgtctcagc ccaaaatctc cttaagctga taagcaactt cagcaaagtc tcaagataca 47160

aaatcaatgt gcaaaaatca cacgcatttc tataacccaa taacagacaa acagagagcc 47220

aaatcatgag tgaactccca ttcacaattg cttcaaagag aataaaatac cttggaatcc 47280

aacttacaag ggacgtgaag gacctcttca aggagaacta caaaccactg ctcaatgaaa 47340

taaaagagga tacaaacaaa tggaaaaaca ttccatgctc atgggtagga aggatcaata 47400

tcctgaaaat ggccatactg cccaaggtaa tttatagatt caatgacatc cccatcaagc 47460

taccaatgac tttcttcaca gaattgggaa aaactgcttt aaagttcata tggaaccaaa 47520

aaagagcctg caatgtcaag tcaatcctaa gccaaaagaa caaagctgga ggcatcacgc 47580

tacctgactt caaactatac tacgaggtta cagtaaccaa aacagcatgg tactggtacc 47640

aaaacagaga tacagaccaa tggaacagaa cagagccctc agaaataatg ccgcatatct 47700

acaactatct gatttttggc aaacctgaca aaaacaagaa atgggaaaac gattccctat 47760

ttaataaatg gtgctgggaa aactggctag ccatatgtag aaagctgaaa ctggatccct 47820

tccttacaca ttatacaaaa attaattcaa gaggattaaa gacttaaatg ttagacctaa 47880

aaccataaaa accctagaag aaaacctagg caataccatt caggacatag gcatgggcaa 47940

ggacttcatg tctaaaacac caaaagcaat gacaacaaaa gccaaaattg acaaatggga 48000

tctaattaaa ctaaagagct tctgcacagc aaaagaaact accatcagag taaacaggca 48060

acctacagaa tgggagaaaa tttttgcaat ctacttatct gacaaagggc taatatccag 48120

aatctacaat gaactcaaac aaatttacaa gaaaaacaaa caaccccatc aaaaagtggg 48180

caaaggatat gaatagacac ttctcaaaag aagacattta tggagccaaa agacacatga 48240

aaaaatgctc atcatcacta gccatcagag aaatgcaaat caaaaccaca atgagatacc 48300

atctcacacc agttagaacg gcgatcatta aaaagtcagg aaacaacagg tgctggagag 48360

gatgtggaga aataggaaca cttttacact gttggtggga ctgtaaacta gttcaaccat 48420

tgtggaagtc agtgtggcga ttcctcaggg atctagaact agaaatacca tttgacccag 48480

ccatcccatt actgggtata tacccaaagg attataaaac atgctgctat aaagacacat 48540

gcacacgtat gtttattgcg gcactattca caatagcaaa gacttggaac caacccatat 48600

gtccaacaat gatagactgg attaagaaaa tgtggcacat atacaccatg gaatactctg 48660

cagccataaa aaaggatgag ttcatgtcct ttgtagggac atggatgaag ctggaaacca 48720

tcattctcag caaactatca caaggacaaa aagacaaaca ctgcatgttc tcattcatag 48780

gtgggaattg aacaatgaga acacttggac acaggaaggg gaacatcaca caccagggcc 48840

tgttgtgggg tggggggagt ggggagggat agcattagga gatataccta atgttaattg 48900

atgagtttat gggtgcagca caccaacatg gcacatatat acatatgtaa caaacctgca 48960

cgttgtgcac atgtacccta aaacttaaag tataataaaa aaatttttaa aaaaagaaac 49020

acctgctttt ttctgttttc catttgctta gtagattttt ctccatcctt ttactttgag 49080

cctggggatg tcattgcatg tgagatgggt ctcttgaaga cagcatacat ttgggtcttg 49140

cttctttctc caacttggca attctctgcc ctttaattgg ggcatttagc ccatttacat 49200

tcaaggttaa tattgatatg tgcatatttc atcctgttat catgttgtta gctgctcaat 49260

atgcagattt gattgtatag ttgatttata gtggcaatcg ttatgtactt aagtgtgttt 49320

ttgtggtggc cagtaacgtt cttccattat catatttagc aatcccttaa gggcctcttg 49380

taaggcaatc tagtggtgat gaataccctt agcatttgct tgtctgaaaa ggatcttatt 49440

tctccttcac ttgtgaagct tcatttggct agatatgaaa ttcttgcttg gaatttcttt 49500

tctttaagaa tgctgaatat aggcccccaa tctcttctgg attgtacagt ttctgctgaa 49560

acctccattg ttagcctcat tgggttccct ttgtatgtga cctgaacctt ctttctagct 49620

gcctctaata ttttttttcc tttcaacctt taagagtctg atgtctgatg gctatatgtc 49680

ttagggatgg ttgtcatgta taatatcatg cagaggttat ttgcatttct tgaatttgaa 49740

tgttggcctc tctggtgagg ttggagaaat tttcatggag gatagcctga aatgtttttc 49800

aagtttcttt ttttctcttt ctcttcttaa gggataccaa tgtgtcatag atctggtctt 49860

tttacataat tgcacatttc tctgaggttt tatgccttct tttttattct ttgttcttta 49920

tttttgtctg actgagttaa ttcagagaat cagtttttaa gctctgtgat tctttcctca 49980

gcttggtcta ttctgctgtt aatacttgta attgtattct gaaattcttg aagtgagttt 50040

tttagctcta tcaaatcagt ttggttcttt cttaaaatgg ccatttcatc tttcagcttc 50100

tgtatcattt tactttattt cttagctccc ttggattggg tttcaacatt ctcctgaatc 50160

tcagtgatct tctttcctgt gcatattctg aattctatgt ctgtcatttc agccatttca 50220

gtcaggttaa gaaccattgc tgggaaacca gtgtgattat ttggaggtaa gaagacactc 50280

tggattttag agttgcagag tttcttgcat taattctttc tcatctttgt gggctgtttc 50340

tttaatcttt gaagtggctg tcctttggat gtttttgtct tttttgttgt tttttggtgt 50400

gtgtttttgt ttgtttgttc atttgtttgt tttttgctct tatcttcttt gatactcttg 50460

caggtttgat tgtggtataa agtggattca gttagctgtg tttcttgaaa atcttagagg 50520

gtccaggctc acctcagcac tcttgtggtg tgttctctgc tctgggactg ggcccctggc 50580

tttattctct ggccccttga gtttagaaac ttgctgcatt ggaggggctg aggtgttccc 50640

agtccattgg ccacaacact atagtagggg gtgccggcca aagcacttca ttagagtggt 50700

ggcagtggga tccattctta ctcatgggtg ccagcagttg tggagtcatg gcagggtgca 50760

catgcatctg ctggggtggg ggtactggca ggagcagagt ggcagcatcc ctacataggt 50820

tcctgctggc agtcacagcg cagtgaggtg cccgtgtgtt ggcagggaca gggtggtggg 50880

gcacacatgc acatgcttgc tggtggtaga gggagttgtg atctgctgtg cactcatgcc 50940

agcaaagcag ttgggaggta ctatgggtgg actggtgcac atcagcagag gctggcctgc 51000

tggaggtctc caatggttag gcatggtctg ctggcaaagg agctatgatg agggccccca 51060

ggaaacaccc tggttgggct tccaaggctg tactgcaagc aggcacagcc agcctggggc 51120

cccaggagag gccagaaggc aaggaaattc tcatttcaga tgggccctgt cccatggaca 51180

agaccaccct gctttattca ggtcccatag tcactctaag gttaaaatct cctagaggag 51240

gttggtgagc cttgggggat gggtgtcccc tggctgtgct ccactacagc cattctcatg 51300

tcaaacactc tgggctttac acagactgga gtcctgcccc tggcatctct ctaagcagct 51360

gtcccttcca gcacaagtgt ccatgggggt catggggtct cctgctgcta ggattctgga 51420

ggcccatggc aacagcaggc cactcctcac ctgttcaact caacctttcc ccaggagttg 51480

ctgggagcca ggaatgagtc ctggtgcttg gcatccccat gcagggttcc catcttcctc 51540

caccttcagc tcagcatctg tgtcctcccc cgtctactct caatccactc tcaatgcctc 51600

cccttcaaag atctgcttgg aaagcacccg tcttcctgat gtctcactcc ctccatggca 51660

gatattcctc ctggctgcat ctagtcagcc atcttgactc gcctccaaag tctttttaat 51720

taccacttcg gttaaattag taactatcat tttacaatgg cctgtgattc tgttttgatc 51780

aaatattttg agccttttag catctataac aaatgttctc aaaaatcaaa atcctaaatc 51840

aagtctctgc cttagtctta tttctggggc ttattaaggc tataaaaatt aatcaccata 51900

aggttgtaca agctttttac agcttccagt caggctatga actccagtat caccacctcc 51960

agcctgataa ttacatatat tggaagaaaa tcagttaaag gactccctct agacccttga 52020

aagggtgtga gagacaacat ggtttcgcct gccttcatgt gtcccagtcc atccctgtgg 52080

ctgcctctgt ccacctcagc ttgcccactg tctttccttc ccaactgtct gccctgctga 52140

cttctggcct cagtgacaga tgcaaagaca aggcgacagc cccacataga ccgtttaacc 52200

agtcccacat ttgcataagc taaatggtca tgtcacagtc tgttgcccag gctggtctca 52260

aactcctggg ctcaagtgat ccacccacct tgacccccaa ggtgctggga ttacaggctt 52320

gagccacagt gcccagccaa gaacccgttt ttgagtgggc accttggcac acacctgtaa 52380

acgcaacact ttgggaggcc aaggtgggag tgtggcttga ggccaggagg ttgaggttgc 52440

agtgagctat gatggcacca cctcactcca gcgtgggtgg cagagtgaga tcctttagaa 52500

aaaaaaaaaa aaaaaacttg ttttctctgc agccgggctc cgtgaccaaa cacaaacaca 52560

aacttcccct ccagagggtc caggaggggc tgggctgcag gaggtgctta gggcctctta 52620

gggaatggta agtgaccacc caacgcaggc actcagcccc aggggcatat gcagagagag 52680

ggtccaggag gagctgggct gcaggaggtg cttagggcct cttagggaat ggtaagtgac 52740

cacccaacgc aggcactcag ccccaggggc atatgcagag agagggtcca ggaggagctg 52800

ggctgcagga ggtgattagg gcctcttagg gaatggtaag tgaccatcca acgcaggcac 52860

tcagccccag gggcatatgc agagagaggc tgggaggaca ctttcagtga ctggggttac 52920

aaaccccaac cataagacat tgctggctct gtgagccgcc acctccagaa atctcccact 52980

tagttcttag cacttatcca ctcttccctt ttcctactct caattcctgg aggatgccct 53040

cctttctcag gctcagacca acctaccagc tccactctag acctgaacac atgactcctc 53100

cctctgtctc cacctggaaa tctcatcagt gcctcacatt tacactcctg aaaatcaggt 53160

cctgcctacc caccctcttg ctccacctga ttcctgccct gtttcagcca gagaccttgc 53220

agtctccttt aactctcaaa cccacccatg tcgtgtgagc atactgactg tgttctatgc 53280

aagaaagagc agtttcttgg tggtcctgcg gttttattag tccagaggca aagcgttggc 53340

agagctggtt tcttctgaac cctgggaggg agattctgtt ttcatgcctt ttccagattc 53400

tagaacccat attccttgct ctgtgtcccc ttcttccatc ttcaaaggcc atcctctcat 53460

ctctgtgtcc atcatcacat cacccttccc ctgactctgg ttctcctgct tccacttata 53520

agcacccttg tgattacatc atacccaccc agacaatgca gggccatatt ctcccctctc 53580

gagattaatt taatcacatc tacaaagttc ctcgtgccat atgaggtcac taaaccacat 53640

gttctggggg tttgaatgta aacatttggg ggatgcatta ttcagccacc cacaagcact 53700

gctccccact ggccacacac tatgcacagc cgagatcatg caagtgaggc acgttcatca 53760

acagcagctt cagcaggaaa ctatatgctc cactttcctg ccatttgtat ctggattttt 53820

ttttcgctat cattgtagaa agagtggtat tgtaaaatta aagatggatt attttctttc 53880

tagaacactt tggcaatcta tccaacatta tttatcccct tctgagtgtc aagtgtgagg 53940

tcattctttc attgagagct caatgcctac aattatgata atgcatattg ggtactttca 54000

cacatcagaa agttcttctt tcttaaaatc tgttcttgaa ttattcattc ttctctagct 54060

ttttgttgat ctattttata attttagaaa aatcagaaag taacttgaag tatctgtcat 54120

ctctacaggt ttacctccct ctttgtggcc ttcagaatgt catgacacgc ttttcccttg 54180

ctcatcacat ggtttctatg tatgagacct catcacagga gctgtggtcc cccgggagca 54240

ggcatctgtg gatggtgcct tgctcctggc tgctgggacc tgtgtgctgc cagtggcact 54300

ccacgacagt gatttcccag ctcagttttg cagctccaga tggtgggtga gacactagga 54360

ccactttgtg aacagcgagg gcttggggtt tgcttttcta ccatgtccag ggctgctgtt 54420

catgagggaa tgtttctaac ctgacatcat ggctgaagcc aacttagaac ctctctagcc 54480

gtatggggag taggtgagtg atacagatgt taattagctc agtggagcca ctcccctatg 54540

tagacatgtt acaaaacatt atgctgtaca gaataaatat aggtcatttt tatgtgtcaa 54600

tcaaaagaga aactaattat ttaaaaaaaa aaaaaaaacc tctctactca agccgaaacc 54660

tcagctccag tcccacaagt cacacaaggc tgctcccgtc ctgtgtatgt taaacctacc 54720

tcagaaatgc aagggggcat tcaggtttca ttctcaattc aaatgccctt tttaattttg 54780

tctattccta gcacctggca acttccagct ctttttttcg gggctcattc attatttaaa 54840

gcacgtataa tttttcaccc acattctaac acatgtagta ctgtagagaa tccttcccta 54900

ggaggatcta cagcattaga aaagaattaa gaactccaat atttacaaga aggaaaaagc 54960

aaaaagagat caaaaaatgg gcaacttcta gaaatagaaa accctcatga gtatgatgat 55020

aaatcgctgg cacacatgtg aatagttact tgatgcttat agtgatgtct gggaaaataa 55080

catgaaatac ttataatctg tttctcacac atgtaattca aaagaataga gagaagatga 55140

tttgaaatat tcttaagttt gtaggaaaaa agctacttcc atatgcataa ttgcatgtat 55200

tttgatactg ccattattaa gaactatcta agagggtcca ttaaaaataa aatttcttgg 55260

ctgggcacag tggctcatgc ctgtatccca gcactttgga aggccgaggc aggtggctca 55320

cctgaggtca gaagttcaaa accagcctgg ccaacatggt gaaacgctgt atctaccaaa 55380

aatacaaaaa ttagctgggc atggtggcat gcacctgtag tctgagctac ttggggggct 55440

gaggcaggat aatcgtttga acccaagagg tgtaggttgc agtgagctaa gatcatacca 55500

ccgcactcca gcctgacaga caaagcaaga ctctgtctca aaaatattaa aataaaattt 55560

ctcattccta ttacagagta atttaattca ttaatgccct gccctgttac aaaactcatt 55620

tgtaaaatac taattgtaat tgtgaaaaaa tggcaattga tactaatttt aaattctaaa 55680

aacagggcac ccatattaaa gattattctg cagtaagaga attagctata acattttgta 55740

ataaggtgga gaaaacattc tccaacttac aatggttggt gagaagaaag tttccagcac 55800

ggtagatgga ccctaagagc ccttgttgaa ataataagac aaaaagatat acagagagat 55860

gagccagatg aagggagaca gagagagaga gagagagaga gagagaggca cagaaatgag 55920

agatacaaag tgaaagaggg caacctgtgg ggtcatcaga tatttgtttt ctgttttgtt 55980

tattctaaca taaaggcagt ggtgggtcat cgatgtattt agagtttgca caatcactgt 56040

ggaacacaga cagacacagg ggaagaggag aaacacaggg cggtggcttg cccttggact 56100

gttcttagtt cctcaaaacg taacagcttt gcccaaccta agggaacttt cagcagctgc 56160

tcttctgcca taggcctctt tcctgccttg ttttcatgtg gctgactgtt tctgttcctg 56220

caggtcttag ctcatcagac aggcatttat tacctctgtg tcaacagtgg gagcttccat 56280

tactctctag catgacactc cccttcctct tttaggaaat ttaacatgga agtgagtttg 56340

ccatcggcct tctccccaca gtgttaacag tggtgaggaa gccagcctgt tccaccttgc 56400

ccctcccatg attccaacac tgagttcaga cttgtcacat ggaacttatc tttgcatgtt 56460

tgtggcacag acagatggac ccaaccatgg attagtggat ggatggatgg atggatggat 56520

ggatggatgg atggatggat ggatagatgg atggatggat ggctgagtag gtgtgtggat 56580

ggaagagtga aaagatagat ggatgcatgt atgggtggat gggtaggttg atggatgcat 56640

ggatgggtgg atggatgggt gagtggatga atgggtgggt aggtgggtgg ctacatgcat 56700

ggatgagtac ttggatagat aagtgagtgg atggatggat ggatggatga atgggtatgt 56760

gaagggatgg atgtattaga gtgggtagtt aggcaggcat gagctgatag tcaagtgatt 56820

gttaaactgc ctctctaaaa taataattgg tctcggctgg acgcggtggc tcatgtctgt 56880

aatcccaaca ctttgggagg ctgaggtggg cggatcacaa ggtcaagaga ttgagaccat 56940

cctgaccaac atggtgaaac cctgtcttta ctaaaaatac aaaaattagc tgggcgtggt 57000

ggcgtgcatc tatagttcca gctactcggg aggctgaggc aggagaattg cttgaacctg 57060

ggaggaagag gctgcagtga gctgagattg tgccactgca ctccagcctg gtgacagagc 57120

aaagctctgt ctcaaataat aataataata ataaataata attgatctca gccagcgcca 57180

agaaaaggca gtctcccaat agatagaaaa cacccgaaac tggtcatcag cagcttcctg 57240

ataagatctc aggcattggg tgagtgggct caagcatatg cactaagagg caaagtggca 57300

gagtttaact ggcacataat cttcctctag gaacactcta atagtaagag aaggacacct 57360

caaatgagca tgtgcacatt tcattaaacc cactgtgtat gcagcccctc ccaagtgctg 57420

gcaggccact gtacatgtgg gcagcccact ccaagggaag aatcaaggga gaagaaatac 57480

aaatcccaga accatgtcaa tgtataaaac cccaagtcaa gggccggaca gagcacttag 57540

atctctcaag tcgcccactt agccctcttc caagtgtact ttacttcctt tagttcccac 57600

tttaaaactt taataaacat ttactcctgc tctaaaactt gcttgggtct ctcactcttc 57660

tgtatgcccc ttggccaaat tctttcctcc aaggaggcga gaatcaagtt gctgcagacc 57720

tgtatggatt cgctcctgct aacagatagc tggatgggtg gacagatgca tgaattagtg 57780

gatggacgtt tggatgtgtg ggtgggtggg tggattgtgg gatggctgga tgaatgcatg 57840

gctggatggg tggacagatg catgaattag tggatggatg tttggatgtg tgagtgggtg 57900

ggtggattgt gggatggctg gatgaatgca tggctggatg ggtggacaga tgcatgaatt 57960

cgtggatgga cgtttggatg tgtgggtggg tgggtggatt gtgggatggc tggatgaatg 58020

catggctgga tgggtggaca gatgcatgaa ttcgtggatg gacgtttgga tgtgtgggtg 58080

ggtgggtgga ttgtgggatg gctggatgaa tgcatggctg gatgggtgga cagatgcatg 58140

aattcgtgga tggacgtttg gatgtgtggg tgggtgggtg gattgtggga tggctggatg 58200

aatgcatggc tgggtgggtg gatggatgca tggataagtg gtggacggat ggacgggtga 58260

gtggatgggt ggatgtgtgt gtggatgggt ggataggaaa gccctctaat tgattacagg 58320

gctcagtgtg tgcttcaaca tcatgatggc atcatcacat tggtccctgt atgaagcagt 58380

gggggaggag agtgtaccag gggagcagga atgacttttc tccagaatcg acctctccca 58440

ccctgcagcc tgggctgtgc aggccacatt ggagaaggtg cggtcgacta ctcctaaatg 58500

ttgttgtgtc caatggcttg ttgacgttga tgtaggaatg agcctacatc tccaccatag 58560

atggaactgt ttgggtcccc aaagcagaaa gcctcttctg ttgcaggtgc tgaagtttcc 58620

atcttcttct gcttatacgg aagctcacgc atcccttgga tggcaggcgt caggttcctg 58680

tgcgcactga gttcccccct tacatgcttt ggacagaagt gtgagacaca caagattgct 58740

gcaggaagtc cacctgtggg gatgctgcga cttctccagc aagaacacga gtctgctcat 58800

tgaccatcac cacacataac aaattaagtg tccctttttt gataacacgt cattgtttca 58860

cagagtattc ttttaaagtg tataagttga ctgcagttat tattttttac ttctgttact 58920

aatttactca taattaggca caatttacac ttaagaaatt tcttaatagt tttttcctcc 58980

ttaaggtgaa ctacagtcag ataacatact tatcaattgt ctctagctct tgtcagaaaa 59040

acatatagat gtgtgtgtgc gtgtgtcttg gcctttccaa tgatgaatta agatgtgcat 59100

tgagaaggca ttcactttat ttgacgttaa ggaagtacca agaagacgct ctccacagac 59160

cctgggaaag ccagcagctg caccccgagg ctgtgccagg cagggaacaa ggaggcagca 59220

ccacctgctg ggcagggaaa atgtcctccc agtccctgcc gcttctctgc agaggcacaa 59280

agagctgccc cttctcctgg gccttctcct gggctgatga gattgctccc cgatatgcca 59340

aatcagggtt gtgcatctga ggctctgtct agactctcag ctccttccta ctcctgcaaa 59400

gtgaagaaaa caatgccaag gggtcctgga ggcgtctcta cccctggaga gttttgactc 59460

tcttcaatag tctccactac cctgccctca ctccatgtcc tccgtttctc cctaaagcgg 59520

tgcccagtct gattgcactg tggcagggat aacgaggggc caggacatca ggggagagaa 59580

gtttctacct gagtcacagc agcggctgcc ctgcagactc ctgaagacac aagacacatt 59640

tccatcccag agacccagcg aaatgcaacc tcaggctaga gacagccagt tattttttct 59700

tgttctgtcc tggagaggcc actgagaaag tcgagcccct tgttgaggaa aacatgagat 59760

ctctgtgtgt cgtcctctgc ctgatggctg tacctccatg tgagtgtctc agagatttca 59820

gaacgggggc tgtgggctgt ggtgtccgct tgtgactcat ctctttgctt cttgtccctg 59880

agtgtcctgc atcagatgca gctactggag tcatgcccag ggctggtgag gtcctcacag 59940

acctctgggc ctggacccag cagccctctg ggaaggcgct ggggcacctc agctccaggg 60000

gcagcacaca cttcagccca gcctttctgg gccaactctc catctgtaga gacacatcca 60060

aggcccagtt atccctgcag ctgagctccg tgatggccaa gggcagggcc gcacattccc 60120

gtgggagaca gaatggggac ctcagcgtga gcccagacac aaacctccct gcagggaagc 60180

acaagaccac caggcggcgc tccagaccac acagcggccc cagaagcagg ttttaggggg 60240

cggggcagac gtgtccgcgt tgagtcaggt cattggtttt actttccctg agcaaacggc 60300

ctctgccaag gactcactgc acctctcacc ttcacagttg tttttttttt ttttttaatc 60360

accctgtaga gttttgctag ctaatttaga tattgaggag tgcttcatac ttccttgggc 60420

ctctgcttgc agaaacatag caattgtaag gaggcacgtg ggaaagcccc ggctcggtga 60480

cccgggggat gctgctgtgg ccctggcaag agggcgtcgg gccgcagtaa caaaggtgca 60540

gacggctctc agcctgcgcc cgcggagtac aacacataag ggctgtaacc taacgaaaaa 60600

agaatcgcag tgcaactgtc ctgcatttga gtttgtgatc agttttgccc tttgtcttta 60660

acaggttcta acataaaatt ttgaatgttg gttcaagccc tgtgggtaaa atgcacttac 60720

ccacattcct taaacaaata gaacactgag gtggaaatgt tttgaaaaag tagttttcag 60780

acatttggaa acaagcatca caggatcata acccctgaga aaagaaaaac aaatgaacga 60840

atcctgctat tgcctgaaag cagctgccag gacacacgga aaggcttagt gagctgagcg 60900

gacagagagc agagttcaag gcagcagcag cccgagggga ggagcaccgg ggagcaggct 60960

gctgtgcagc caggatgggc cggggtgggg cggggggaga acagctggag acttgccgca 61020

gggaggggga tccctcaggt ttggggctga gaactgactt atgcctgact tatgcctgca 61080

tgaaaagaaa ctactcgata tcagggggaa atcaccagaa acctgtggac ccaaaactac 61140

acagagccta cacaaggaaa gcattgtttg tgttctccca gccagggtgg aaagaccttg 61200

agatatgtaa agcttcaagc aatcttccga agtaatctcg tgagtagtgg tgccacatta 61260

attcaggact aaaggctgct ctgaactgaa cctaagaaat gcttcaagtg tagcctggag 61320

cccgggtgca gtggctcaca cctgtaatcc cagcactgtg ggaggccgag gcaggcggat 61380

cacttgaggt caggactttg agaccagcct ggccaacatg gcaaaacctg tctctactaa 61440

aaacacaaaa attagctggg cgtggtggca gatgcctgta atcacctccc acctggaccc 61500

ttccttgata catcagaatt acaactagag atgagattgg ggtggggaca cagagccaaa 61560

ccgtatcaca taggaaccta aaaggataat aaagtaggaa aacttcccac atcagtaacc 61620

ctttatccga tagtaatccc aatctgcaaa gtaaaactgt gtgattttac taagataacg 61680

gaatcttctc tacagaagga ctttccagtg caaaagctcc ccaccctcac catgaaatgc 61740

acgtgaccat ttccaatttg tgtaaagtcc tcagttagta ctgagacttc ggaaggttag 61800

aaatcccttt gctcatgctg catggtccgg atgagatgta agaatcatta gctaatagac 61860

atgcaacagc ttttgtgtga aagatgttat gagacattta aggtatttgc ttgtgattac 61920

taagcattca ttgtatcatt ggagcacatg tgcttttata ccctggagaa attccagtaa 61980

ttgaattgct gggttgaatg ggattttgat ttggattaaa tttaaactat agattttatt 62040

tagggaaaac tggcatctta attatgttat tggggggccc ttgctcccag agctcccaag 62100

atggtggcag gccgcttcca aaatgaccgc aggccacttc caagatggtg gcaagcctca 62160

tgttctctga cctggggttc ttggcctcac ggattccaag gaatggaagc ttgggccatg 62220

cagtgagtgt tatagctcta ttagaagccg tgggtcacgg aagagaaccg tggaacccag 62280

tgactagtgt tcagctcgat taggacgaac ccaggcactt agccgtgcag gaacaatggc 62340

gagcatttgg cccgatcgag agtggcaatg ggcgcctcgc tggatcagga gcacagcgga 62400

taccctgatg gatccggagg gatggaagcc agcggtgggt ctcccacggg ggcaaacagc 62460

agtggtggac ggtgagcgaa agcgaagctc gagccgtaac aaacatggac cagaagagtg 62520

cagttgcaag atttagtaga gtgaagacag agctcccata caaagggagg ggacccaaag 62580

agggtagctg ttaccggctc gaatgcctgg gtttatatcc cgatcattgt ccctcccgct 62640

gtgctctcag gtgatagatg attggctatt tctttacctc ctgcttttgc ctaattagca 62700

ttttagtgag ctctctttac tatctgattg gtcgggtgtg agctgagttg caagccccgt 62760

gtttaaaggt ggaagtggtc accttcccag ctgggcttag ggattcttag tcggcctagg 62820

aaatccagct agtcctgtct ctcaattaca ctgagttttc caatccatgc atccaatatg 62880

tggtgtatct cttcatatgt tcatagcctc tgagcaatgt tttacaattt tctgtgtaaa 62940

gaactccaca tcgttttatg tttcttctaa ggtatatcct gattgctttt tatgtcttca 63000

caagtttttt cctttcaaaa ttaattttcc aattgtttgg tgctaatatg ctcaaatgtc 63060

cttgattttc ttagtttgaa cagtccgttt ttgttttggg gatttatttt tttttcagat 63120

tctttaagat tttctatgtc tataaccata taatctctga acagagacag ttttgctttt 63180

tcctttcaac ttgaggtagg ttttctgggt agttcaggac gcgcaggcac tgggtgggtg 63240

gtgttagcag ctgcacgatg ccttggagag gacactctcg ggggactgtg gccgctgctc 63300

agctgtgacc gttcttatag caccagcagc tgcggccacc attcttatcc aatttccaaa 63360

gccacaccac aggccctctc aagaacgagg cgtggaggct atgccctctc ctggacacat 63420

catcattccc aagccccacg atgtgggccc catgggacgc acacctttgt ctgtccagac 63480

ctcagcccca cctcctcatc ctgcaccaga actcttcaga gcccagtgca tgaaatgggc 63540

taccaaggaa atgagggtag gttcctgaga ggaaactggc cctgcatttg ggagctagga 63600

gtctgctaat tcgcctggca gccctgtgca gccctccgtg gctacagtcc accccgtgcc 63660

catcagtgcc tccttcctgt gcaagcctgg acctcgccct gggctcagga tgggctgtag 63720

accgagaatg caggcgggaa agtctttgtc tatcggggcc atagtcaggt tctacagtga 63780

gtcagggaaa gacctgtgga ggtgtggatg aggacaatgg gtccaccatc aacaggagga 63840

cacgggttcg accccttgca gaggcacagt cccacatcac tgggaggcag ccacactcac 63900

tgcctcgccc tctcctcaca cagtgcagtt tccacgttca cagccccagc cagtcaccag 63960

gaatgccctg ggggcggcct ttccccagtg cactccgagc cctcccttgg ctgtgcggtg 64020

agctccatgc ccaggagata tccacccata gtcctccgga aagcagctga cctgccatgc 64080

cctggaacca caaatcccca cagatcagcc agcctgcagt gggccttgga tgtggtgagg 64140

agtggtggca cccccgttcc caccccacag atgcaacgcc tgtgggtgac gcatgtgagt 64200

actgaggagt agagggtaga actgtaggcc ccgagaacca cagaaactcg ggtgttacac 64260

tctggggcca tgtaaggaga aagtgtcact ggacagaaac aggcccctcc tagacactgt 64320

gtgcgccata gtcacctgtc attagctctc actcttgcag attcatgatt gaggtggtta 64380

aaaaaaaaaa agctcctact cacccatcca accccatcct ggggtgtttc caccaccctt 64440

ggggtttggg atgagctgcc cttgcccact gtgctctgtg gacctccctt tagaagctca 64500

cagctccctg cactcggctc catcctgccc caccacacag aagcaaaacc cctctccttt 64560

ccactgcagg cttttcctgg accagaatgc tgacctgctg cccttcactc ccgaagtggt 64620

gggactgcct ggggtggtgt gggtgttgag ccttcttact ctagggacct ggcacctggc 64680

cccaggggca cagggatggt gcatctgcct agggatgcct cctcatgcca gggggtgggg 64740

gttagtacca tcggccctca ggatttgttg catgaatgag tgaatgggtg aataaatgaa 64800

ggggatctga tctatgaata agggtatata gactttggtt gatgtaggac gccaaatgct 64860

ggaatttcag agtcatcaca cccaggggcc ctgcctctga gctcctcttt gcatccaatc 64920

tgctgaagaa catggctcta gggaaaccca gttgtagacc tgagggcccc ggctcttcaa 64980

tgagccatct ccgtcccggg gccttatatc agcaagtgac gcacacaggc aaatgccagg 65040

gtgtggtttc ctgtttaaat gtagcctccc ccgctgcaga actgcagagc ctgctgaatt 65100

ctggctgacc agggcagtca ccagactcga gtgccatttc attacctctt tctccgcacc 65160

cgacatagat tctcactcac ctgtgccatc tccggggaca gtgtctctag caacagtgct 65220

gcttggaact ggatcaggca gtccccatcg agaggccttg agtggctggg aaggacatac 65280

tacaggtcca agtggtataa tgattatgca gtatctgtga aaagtcgaat aaccatcaac 65340

ccagacacat ccaagaacca gttctccctg cagctgaact ctgtgactcc cgaggacacg 65400

gctgtgtatt actgtgcaag agacacagtg aggggaagtc agtgtgagcc cagacacaaa 65460

cctccctgca gggatgctca ggaccccaga aggcacccag cactaccagc gcagggccca 65520

gaccaggagc aggtgtggag ttaagcaaaa atggaacttc ttgctgtgtc ttaaactgtt 65580

gttgtttttt tttttttttt ggctcagcaa cagagatcat agaaaaccct ttttcatatt 65640

tttgaaatct gttcttagtc taatggagat tctctaatat gtgacaatgt ttttctcttg 65700

ctgtttttgg aattctttgt ctttgacttt tgacaacttg acttttgaca gtgtgcctca 65760

aagaagttct attttgggtt ctgtgaacct cctggatctg ggaagttttc agctatgatt 65820

tcattaaacg tgttttctac accatttccc tactcttttg gaatacccat aatgcaaata 65880

tttgttcact taattgtgtc ccataaatgc tggggatttt cttcattcct ttttactctt 65940

tttttctttt tattcatctg cctgaattat ttcaaaagat ctgtcttcaa cttcagaaac 66000

tcttttgctt ggcctagtct aatcttgaag gtctcaattg tacttttaat ttcattcatt 66060

gaattcttca actctggaat ttctgttggt tcttttttat gatacttatc tctttgttga 66120

attcctcatt caaatgataa attgttttcc tgatttcact gaattttcta tctgtacact 66180

attgtatctc cctgagtttc ttagagatta tccttttgaa ttatttttct gacattctgt 66240

atatttcctt atgattgggg tctgctactg gagaatgact gttgtctttt tcaggtgtcg 66300

tgtttcctgg ccttttcatg ttttatgtgt tcctacgttg atttctacac atctggcgga 66360

ccagtcatcc cttgcaattt aatggagtag gttttgcagg aaaagacttc ctagtacaga 66420

cgggtctcag ggtgtcagtg tggcggggcg tgctggcttt agttctaggt tgacgcagta 66480

gcgtagtctc catgtcgttt cttcagctgc cgtccacatt ggtgacgttt gcgagtgtct 66540

cagtggcctg ggctgagagg tttgtggcag tggaagtgca acgttgctag aggtggactc 66600

accaggctgt ttctgaggtc gaggcacatg catgcacatg gtggattgac caacttggtg 66660

ccaggctcac tagggttggg gacatggggc tgtttctcag gcccaggatg caaacacaag 66720

tctctttggc tggcctgggg gtgtggcttc tgagggcaat ccacagggct gtttctcagg 66780

ttcaggacac aagtgcatgg ccgctcaact ggcctgggca tgtgtctccc agggccaccc 66840

catgggctct ttctcagacc caggacatgg ccacatggct tcctcagctg gcctgggtgt 66900

gtgtctgctg gggggctgca ggggcacagg gttatttctc aggccggggt catgggcgca 66960

cagctgcttg ctggcttata ggagtgcctg ccaggggtgg cccatgatgc tgtttctcag 67020

gcctaatttc aggtgcagag cctttgggca ggtcaacggc atacctgtgg aaattggagt 67080

ggatgccaca gggctatttc tcaggtgcct gagtgtgggc acatatccac tctgccagcc 67140

tggagttagt atcaggtgct cggtggctca ggggcctctc ctgctcaggg gagggccctc 67200

agcagcttgg ccaaatcaat ggtggattca ccctgggcag gcctggcagg ctcttcctcc 67260

agctggatgt gcagcagcag gggttgggtt ttttgctgtg cagggccaga gtcacggcca 67320

atcctcagcc taggctctgc acagccaggg ttgtggcatt cagccaccca gatatgggca 67380

tcctgaagat ggagccccaa tgctagaaag gggcagtggc taccagcctc agggcaggat 67440

gcactccaga ggcggctccg gtctcaaggt ggcgctgggc tgcagcagct aggctcacag 67500

tggatgaatg ggggcaggga gtacacacct tgtgctccta atctgggatc attcctggca 67560

gctcccaaac ttggctgagg gcttgcaaaa cctgtggaat tctcctgttg caagggctgt 67620

agatgtttgc agtggcagtg ggtgctggcg ggaaatctgc ttaccttttc cctacatggg 67680

aagtccctcc tgtgtccaga ccaatccgat ctgggtgggg aagacaaggc tgcaaaggcc 67740

aggtgcctcc atgctgccct ccgatcacca cgggtgcgtt tccacacctc cactgcactc 67800

cgtcagtctc ccttcaacac tccagtcaaa ccttagctgt ttcttctttg ccttattcct 67860

tcctcatggg gagggtgtgg gtgaacacca ggcttctcta agttcttcat ccatcttgct 67920

gatgtcattc tccatccagg catgggtttt taagaagtag tgaatactga aatttcagca 67980

gaggacacct ctataaaaat tctgcaactg gaaaacctcc ttaaattggc tgattgtcat 68040

tacaattgga ggaaaactgc caataatttc aaatttagaa ggctgagact ctataaacaa 68100

agactaacaa tatgttttct gatatttttc cccaaaataa tacttttcca agacgaaaat 68160

ttttccaggg tatataagca catgtgctcc aatgatacaa caaatactta ctaatcataa 68220

gcaaatacct taaatgtctt ataacatctt tcacacaaaa gctgttgcat gtctattagc 68280

taaaaattct tatgtctcgt ccagatcatg cagcatgagc aaagggattt ttgaccttca 68340

aaagtctcag tactaactga ggactttaca caaattggaa atggtcacct gcatttcatg 68400

gtggtggtgg ggagcttttg cactggaaaa tccttctgta gagaagattc cattatcttg 68460

gtaaaattac atagttttat tttgcagatt gggattacca actgataaag ggttactgat 68520

gtggaagttt tcctacttta ttctcctatt aggttcctat gtgatatggt ttggctctgt 68580

gtccccaccc caatctcatc tccaattgta attcccatgt gtccagggag ggtccaggtg 68640

ggagtgatta gatcaagggt ggtttttccc aggctgtttt catgataggg tgttatcatg 68700

agatatgatg gtttaaaagt ggcaggttcc cctgctctct ctctcgcctg ctgccacata 68760

agacgtgcct tgctttccct tcaccttctg ccatgattgt aagtttcctg aggcctcccc 68820

agccatgcgg aactatgagt caattaaacc tcctctcttt ataaattacc cagtctcagg 68880

tagtatcttt atagcggtgt gaaaatggac taatacacta tggctttgaa ttaataattt 68940

aaaatttgtc agcttggcaa taaaacatcc tgttgacatt tattttttag gtaatatttt 69000

aaattggcag tttcattcat gtttttacaa attcttattt tcagggtgtt taaggccttt 69060

gctttgaact tggtggttcc ttacactcca tgctgttagt gaagagggac caggttggga 69120

ggcattggtt tgggtggtgg tcaggaaggg cagagtgatt tgagtagggt ctgagtggat 69180

aatagctcat cagtttggaa tttataaatg accagggatg atttaaggag attcctgcca 69240

gacacctatg ccatggccat gccctatctg gatctccagc cgtgagatga gaacccagcc 69300

atgcggggga gtctgttcgt tctgctcaat gttgtaagtg gcacatgcta ttggataatg 69360

tagaattgaa tggatatcat tttattatta taatttacaa acttcctaca ataaacttat 69420

cacctttata catagaaaca aatataagta cattttccct cccctatgtc attttgagcc 69480

ctctctccaa accatcctcc cactctgcga ctcactgtcc tgcatttggc tatgctctgg 69540

caagtcctgc ttagacaagc actcaccaga ccacctactc agcctccctt cagcgcccac 69600

ctggcccacc tgctcaaata catgttgagt ggtcacacac atggactgaa caccatctat 69660

tccatgcact gccccagtga ccgcactgag cagcaagaga gaaatgatcg cattagctat 69720

caattatgcc aattcaaatg ctggagtctt tctcagatac ttttcaatgt tcaagaattg 69780

ttgattgtga attctatacc caatgaaact atccttcaga aatgagcaga aaatggatac 69840

cttctcaaat aaacaaaaac taaaagaatt cttgctacaa gatgtactct taaagactgg 69900

ctaaaggaag ttcttcaaac agcaaggaaa ttgaattgat cttatgtcct gcacacttgc 69960

taaatttcct ctcaatttta gcagcactgt ttagattcca taggattttc catacaaaca 70020

gtcatgtggt ctatatatag agacagattt tcctcttttc cagtggggat aaatttatgt 70080

ctttttcttt ctgtgttaca gcaggtagga cctccagtac aatgttaaac agaagtggtg 70140

aaaacagaca ttcttgcctg tttcctaacg ttggagtttg gtcttttact atggtgtcag 70200

atgttagctg tagggttttt ataaatgccc ttcatcacat tgaggaagtt tgctcctatg 70260

cctaattttc tgagagtctt ttaatgtgac actcatgcta gaatttatta aatgctttct 70320

gtctactaag atgattatgc agttcttata ttaacatgaa taattacatt tatttattct 70380

ttaatatcaa ggcaattttg cattcctgag acaaacccca tttagtcatc atgtgttgtt 70440

attgttacat attgttggat tcaatttcct caaaatttgt taagaattgt tacatctatg 70500

tttacaagga agattagtct gtagggtatt ttttcttata ataactttgc ctagttttgc 70560

aatcagggta atgctggact cacagaatga gttgggaagc tatttcctcc tcttcatttt 70620

tctgaaagaa tttgtataaa attggaatta tatcttcctt aaaggtttgc aagatttcat 70680

aatgaagtca ttggcctaga gttttctttg tgggaaagtc tttgtttgtt tgttttgtgg 70740

tttgggtttt tttttaagag acacagtctc actctgttgc ccaggctgga atgcagtggt 70800

gtaatcatag ctcacagcag cctcaacctc ctgggctcaa gcaatcctcc tacctcagcc 70860

ttcagagtag ctgggactac gggcatgtac caccacaccc agctgtttgt ttgtttgttt 70920

atcgctttgt cttgtttttg aggtcttatt atgttgccca ggctggtctt gaactcctgg 70980

cctcaagtaa tcctcatgcc tcagcctccc acagtgctgg aattacaggc atgagccact 71040

gcacacagac tgtgggaaag tttttaacta aaaattcaat tttctcttcc ttttccagtg 71100

agctttccag tgtctttcaa ttaatgtatc tattttatct aagttgttga atttattgtc 71160

aaaatttttt taaacaatat tcctctctta gaggttgaac atctgtagaa tctgtagtga 71220

tggcacctct taaatccctg atcttgctca tctgtgtcgt ctctctttct ctaatcagta 71280

tgcctaaagt ttaatttcat tgattttctt aaaaaactgg ttttggtttt attgattttt 71340

ttccctagtt ttttgtgtta catttcattg acttctgctc tgatatttac tatttccttt 71400

ctactgccta cagtaagttt aatttgctat tttcttagtt tcctaaagtg gaagctaagt 71460

ttattgactt gaggcctttc ctctgtctgg atgcggatat ttgctgctaa acatttccct 71520

ccaacaccat gctgtgagtt ttagttacag cgggcttgga gttggcctga gaaattctac 71580

ttaaacagct gcacctatca tgtaagtgat aaatgatgta cctgcctggc cctcacccct 71640

ggtcaaagaa tgggatgtac taatgagcaa tgttgctgcg tagctgtgga tttcaaggta 71700

ttttctgtgt ggttttatca tcagcattgt ttgttgatga ctgcaagact gatgatttgc 71760

acctggcctc ggtgagatcc ccgaaagacc ctgcagatgg gctggttact tagcagaaaa 71820

tatgacaacg tggccagcag gaaacaggaa ggtacaatcg gctgcaggtg agctgttgga 71880

agtaagttcc aattttccta ttttgtattt gcattttaat agtgagactg cgcttatgtt 71940

atttgtgtga aacagcttta ttcatagcac tgtaatttaa agagaaaacc cattcatggg 72000

aacaacaaac gacctagaca ccaaggtagc tcatgccatc caaggctata ctgtgcagtg 72060

attgggaaaa tgggcactgg tcccagaagt ctgatcgaca ctctgccact ggctagtccc 72120

gtgctggggg gcgaggatcc acactctgcc actggttagt cccatgctgg ggacaagtat 72180

ccacactctg ccactggcta gtcccgtgct ggggggcgag gatccacact ctgccactgg 72240

ttagtcccat gctggggaca agtatccaca ctctgccact ggctagtccc gtgctggggg 72300

gcaaggatcc acactctgcc actgattagt gttgtgaaga tttaaataaa gaacccacac 72360

catattcttt gacttgtgct ttccgtatac tgagagatag taagagtaca ttattattat 72420

ttataaagta aactagaaag cacatgggaa gacaagaaga aaacctgaat aaacatgaat 72480

taccccattt tcctcaggag aaaactttca cactctgaag gtacacaaat tagcctacaa 72540

atttaatgta aagcaaatag actgttgtag gtaccaattc tcaatgtcac agtgttacat 72600

ggaaagtaaa atacacaaga acagcccaaa agatggaaac aatggacgtg gtcaaatgac 72660

atcagtacaa catccatatg gtcctaagta gccatcttta aaatgggtta gaaatgcctt 72720

caatcattca cacagacaca tgcattgaac aaactctaag aagtgttctt acacgggaaa 72780

agcaagttac agatgcatgg gcatgatatg gatgtagatg tgtgtatgtg catcccactc 72840

atacacaaaa tacccagcat cgcccacatg cctgctgtgt gcgtaagtgt gagcgagtgc 72900

acagacaaca gcgtgcagaa attcaaacca agctgtgggt acttgttacc actgggaagg 72960

gagtcggtca cagagggaaa gagaaacagg acatcagcct ttgacttcag aactgttcct 73020

gccttttcac atcctgtgct gttttcagca tcatcggagc ccttaacaca catcacggga 73080

gtaagagtgt gttagaggga gcattcggtg ggacagatat tgccatggct tgtggataga 73140

gttcacagtc cttaataatc cccgagatgg cagccaagag ctacgttctc aatcacgcag 73200

cttcacccca gaaactgaca gaaacccaac aaccaaaagg tgtccattct gacagcctca 73260

gcctgtgctg gctcagatga gcaaaaatgt acagatatta ataatgatgt tgatttgaag 73320

agcacagagg ggggtatgca tgataagggt ccaaattttt accttaaaaa agaatacatt 73380

tacttctcaa tcacctacat aacgatcatt ttttaaaaaa ctgatcaaat ttggtgttac 73440

aagggcacgt tgcaaattct tctggctact tttctctgac tattctaatt acgttaccgt 73500

gttttctcct gtatgtgccc gttcatgtga atgtcatttc tggctacttt tctctgacta 73560

ttctaattac gttaccgtgt tttctcctgt atgtgcccgt tcatgtgaat gtcatttctg 73620

gctacttttc tctgactatt ctaattacat taccgtgttt tcctgtatgt gcccgttcat 73680

gtgaatgtca tttctggcta cttttctctg actattctaa ttacgttacc atggtttctc 73740

ctatatgtgc ccgttcatgt gaatgtcatt tctggctact tttctctgac tattctaatt 73800

acgttaccgt gttttctcct gtatgtgccc gttcatgtga atgtcatttc tggctacttt 73860

tctctgacta ttctaattac attaccgtgt tttcctgtat gtgcccgttc atgtgaatgt 73920

catccaggca gatttcccaa atccggcttc ctgtaaccaa gggctgaaag agggaacggt 73980

ttcctgggaa tcctttttgc agtttatttt acccggaggc agaagcccac ggttccgtga 74040

agagtctatt gctctcccct ctctcctttt gtgtctctat ttttaattga caaaaaagca 74100

aatgtgaaga ttcctggggt acaatgcaaa gtgacaatgc ctgtctatat tgtgggatga 74160

ttaaaacaag gtaagtggca tatccatcac ctcacacact tatcattttg tggtgagaac 74220

atttaaaatc tcatctttta gcaattttga aatagtcatt attgttaact atagtcacca 74280

tgctgtgcaa cagatcaaaa gaactgactc ctcccatcag cagaaacttc atgccctttg 74340

accagcatct ctcctttccc cgtccacgac taacccccag cccaagagaa cagccaacac 74400

ccacctcgct gctgccacac gacatgtcgg gctttgatgg gatggaggtg agggtgggga 74460

agacaattcc aaagctggag cactggcctc acagctcaga cactcttcta cttatcctga 74520

gagaatgatg tgctgagacc aactaaacct cccctgctct tcccacatgg cagaaaagag 74580

gcaacccagg gaagccattg ccaggacatc atggtcaccc aacccttgtg cagaaaggaa 74640

gcacctgccc aggatgccat agcacccaac cctcatcccc aaggaaacac agcccagggc 74700

accatggaca cccaaccgtc atccccaggg gaggacacag cccagggcac catggacacc 74760

caaccctcat ccccagggga ggacacagcc cagggtatct tggacaccca gccctcattc 74820

ctaggggagt acacagccca gggcatcttg gacatccaac cctcatcccc agggaaggac 74880

acagcccagg gcatcttgga cacccaaccc tcattcccat aagagcacac agcccagggc 74940

atcgtggagg cccgaccctc atccctaggg gaggacacag cccagggcac catggacacc 75000

caaccctcat ccccagggga agacacaacc caggccacca ttaacaccca atcatgtgca 75060

gggagggtgt ccttggagcc tgggactctt gccagtgaag cggtggacaa gaaactgagg 75120

atgcgatcag cacacagaaa tctcaggcag cctaggatac atgaggcctc tcacccctgg 75180

gaacactgag cagccaccag gagcccacac cttgaggtac agcaggagcc atgcgctctt 75240

gctcttgctc actcacactc ctgcacacag ccactgacac acgccctcgt gcacgttgca 75300

gattaactcc actggccttg cacttgcaac gctggaggct gagaggtatc cccaggttct 75360

tttctcgtga gaggggcagg ctgactttca ctctcctcca tgtgctagag gcagctccac 75420

caacactggc tgccctgagt ggatgcacct ggctctggaa ttcctgtcat ttgctttgga 75480

tccaggagcc cctgcctcat gtagctactt aacagaaagg aggaatccac ccaggacatg 75540

cccagacggg agcctcacag gatggacagt ggtgtctggg gtcacgggca gccctgaccc 75600

agcagcgcca gcaccagcac acccagtggg gaaggcgggg aggcccaaac gccacccaca 75660

gtttgttact ccactgggtg ggacccggca cccctgcctt cctgacaccc tggagtccct 75720

gcctcctcct agagccccca agcccatctg cctcagagca tccagagaca gacctgggga 75780

gccatttcct caggccctgg acaaggaaac agggaattcc aggttatggg tgcctggggc 75840

aggtctcagg caggtgctgg gaaccagaga gaggggtcac cgcgaggcct caggcctggc 75900

accagcactt tgagcctcag tttaccagcc cacgaggtgc tgagtctgga ctggatgacc 75960

ttcccacccc cagtgacctc tgccctttcc cgagcatgtc agctctgctc cagcatcctg 76020

gtgtgagcgc aatgccactt tttttctcaa caaatacgaa aggaggaagg tgcccccagg 76080

gccctgtgcc ctgaggatgc ctgtgtggag gggtccattt catcactggt gtcactcaca 76140

ggaagggacg aagccacctg ccttgacgga gcttactcca cctccgccga aggccgggga 76200

ggtccctcac agagaacctg aggcccagca ggctgcagag gtgctggcat ggaatgactg 76260

ctcagacgcc cggggccggc agagaggacg gatgtggggg aggtgcacac tgaggagcct 76320

ctccttggag gtggagacac gtgcaccaca tggaccagga cacagtccac gaagcctcgc 76380

atccccctga gctgcagctc aagggcctct ctctgagccc agagtcccac ccctgggagg 76440

cagctgcccc agctctgagg gaggagggca tccaccaggc cctccatctc ctgggggcac 76500

cagcccagcc cagaggctct gcaggactct gcacctccaa ttcatggcca ggactttctg 76560

gatgtatctt aaggactgag gactccacat cagggaccac acaagaccgg ggtcccggac 76620

acgggggttg ggggtgagca tgtcaccggg atgggctgtg gcgtcactct ggtacttcat 76680

ccggacagcc agggaccaaa gccacgccct cagccccacc ccacccctgc ctcacatggc 76740

aacgcagggt ctgcagatgc aggagagtga gaagcatggt agccaggcag actagaggac 76800

ccgagctggg gttgagcacc tccctgtcta cccagggcat ggcctgtgag actgcaggtg 76860

gcctagtgtg tgctgcaggc tcaaggtcct gccccaggga gcatgacatt caggcccaga 76920

aattgcatcg tgctgcacac agtccaaggg gataaccctg tgaagttcag gtcaccagca 76980

ggcttggggt caagaccgag ctgcagagga caggtttctg gaaggcacag catcatgggt 77040

ggagggactt ggagcaaggt ccttagcccc gggaccagtg aatgtgtgcc cttataggga 77100

aagggggtct gtgcagaagc aagttagctg aaaatcatga agtggagagg ctcccctgga 77160

ttaaaggggt gagccctaat gtaatcacaa gtgtccttct aggaggttgg cagagggaga 77220

ctgacataga cagaagccag gtgaggtggg aagcggaggc agaggccgag agagcagacg 77280

ctacgccctg gccctgaaga cggaggagga gccgagagct cagggatgga gagactggag 77340

gaggcaggga agttctcccc gcaagcctgg agggagcatg gcctccagca cccccagacc 77400

ttggccctgc aggattcatc tggacctgtg gtataaatgg tgtttaagcc actgggctgt 77460

gcaaattgtc atagcagcca tggcgcattc ctagagggag ccctggtggg gacccagcag 77520

gcagcgacgg ggccctcaca agcctgtgag ccactcagag ccgcgagagt ggctaggctt 77580

ggtgaggtgc aggccacgcg cacctccact aaggcagcct tagggcccac acttcctctc 77640

tctctctctc tctctctatc tctctccctc cctccttccc tccctcccgc tctcttggtt 77700

ggacagctct ccatcatccc cctggacatg accacctccc aaggccgagc tggggcgctt 77760

tgctcgaggt gagcactgac atcctggggg tgtgaggggc acctgcccag cggccccgtg 77820

tgcaggatgg gcggtgggcc ctagctggca ctgggcatat ggcccggctg gtgcctgcag 77880

gctgcagctt ttctggggtg gctgggatca gtgaaggcct ccagagtctg ggcctgggat 77940

ccctgcagtg ctggctgagg acaggcgggg ctgggcagtg agggcactgg gtcactatca 78000

ccacccacgg tttattactt cactaggtgg gacctggcac ccctgccttc ctgacaccct 78060

ggaatccctg cctcctccta cagcccccaa gcccatctcc ctcagagcct ccagagacag 78120

acctggggag gcatttcttc tgcccccagc agaagcccgg gaggccggga aggcacagtg 78180

ggtctaaagg agaggatccc aggactgcct gaggggtgac tccgacgagg caagcataga 78240

gcccactgag aagcggggtg ggagccccac cagggatggg ctagttcctc atgaaggacc 78300

aggacccagg aaggacaagg gggcctgctg gggcagggtc tgctatgccg gagtccctgt 78360

gagcctggcc cagacctgcc tctctctttc ctcattggtc cccacaggtc cgtggtggtt 78420

gccgtatcgg gaggccccat ggtggcaggg gtgggacacc tggtatacgt cgccaggtgt 78480

gtccaatagg ctcatgctca caccttctcc tggcacctgg gcaaagcctg agcacccagg 78540

cactgaagtg agggcaaggc ctcggggccc cacaggatgg ccgaggagac agctgcaggg 78600

cgcctgggac ccctgggctc aggaggtaga aggatacagc ctgaaaaccc acaccacaag 78660

ctcaccggcc agtgcaggcc cacagagctc gaggaggcag ccctgagcct cccagggaga 78720

gatgctctgt gcacgccggc acaggccctg ggttacaaac cctaggcaca gcccaggaga 78780

ggcccaggcc ccagtccagc aaggggttgc aggaagcaag aggtccccgg ccacagcatg 78840

agataagccc atcaagccag ggccaggtgg gcaatgggag gcaggcaggg cttgggggtg 78900

agtccctgct gcagcgccgt ccactgtcga ccggaggagt ttcttccctg tgcggagtcc 78960

acgggcctcc tgtgagtgtg tgcatgggca caagtgtgtg tgtggctctg ctgtgtgtct 79020

gtacacacat atgttttggg tttttttgtg tctcagacca cagagtctgc ccctcccacc 79080

aaagcccagg cagaaggatg aacccacgcc cctggggccc aggcctcagc agcctctgcg 79140

ggatcattgt tcccagttgt cacttgcctt tgccacagcc ctatttctcc acaattcctt 79200

aaagtcctca acatgcattt aaggcacaaa ggtgaaactg cccagaaaca tctgactccg 79260

ccgtggaacc caggagcaag ctgggttagc taaggagcgg ggccgttggc agaggctggg 79320

gatccaggct gaactttgga ggaggcatgt cccagcatgg gctcctgact atgtcctcct 79380

gggacaaacc caaacccgct ctttgaatat gggagggact ttgctggccc cggccctgac 79440

cgcagcactt ggaaactgag gagtggtcgc ctcctccgtg tcacagctgc ccgttcacca 79500

tcatagaagc aactctgtca cctccatggg cccctctgtg gctgctgcct gggtccaagc 79560

tgagcccagc tgcccaggcc cagaaggaaa gcccaggcca ggtgcccagc acagaggcag 79620

tcacataccc cggggagagc cacagcaagc agccaatatt gcccaggaga ggagtagctg 79680

acaaggcaga acgtgagctg ccatcggctc gagaggcttt gctggtcctc ctggggctct 79740

ggacatgacc aggaggagcg agggaagaag tcgcatggtg gtcccatcct gggtggggcc 79800

tgatggcagc tggccacccg tcccagagtg gcagccagat gccagcgcca ttcccacagt 79860

cacatcattg gtcacagaat gcaggacata gagtgtcttc tttccatcac agtgctgtcc 79920

agacccatag cctagggtag acctggaaga ttcaatgtcc acacccgggg ctggagcgta 79980

gccatgagcc acgccccctg cccgtgcatg gaaagccagc ccaagctctg ctccatccct 80040

agccaaagtc agtgtccttt ccccttctcc caagtgagct ctagccacct gcctaccctg 80100

ccatctgagg atgacagcct tcattccatt ggaacctggc tctgccacca gcaggcttgc 80160

agtcctgggc agactccgtc acctctctat gcctcagcct ttccatctgc acaggaggaa 80220

gatgatgatg gtggtgatga tgatggcgat ggtttccttt tgcatctgag gcaaggacta 80280

attgagatga tacacatcag gcactgggta tggtgctggt ccttcctgag cactcaatct 80340

atgtgagctg tccttgtgaa atgggtgtca ccacatttcc ccacgcagaa catcctttgt 80400

ctgccatact tgaaacgtct gccccaatac taacagctcc tcatggaaga tgtgcacacc 80460

cacccaccct catactccca aaggtgcccg tgctttatca agccaaagtc cagccaggaa 80520

ctttacagca gcatcccttt ccctctccaa gcaccaagga gcaaggcaaa gcactacatc 80580

ttccatctgg aggcaatgcc accctcttct cccattttca ctgccatccc taagaggcag 80640

tgcttcccca aaaggttcca tagcagcctg cctacagcaa ctctgttcac acgagtttca 80700

gcatccttgc agtggctccc ctgccatgct gtggctcttc attcaccctc ttctcctgct 80760

ccccgtgaca ggcatagatt ctgagtgatc tggatacatt gctttgttta ataacattac 80820

agcttctgtg ctgaaaaaga tacagcagat agagaaggca attgttgaac acaaaatagt 80880

gacagcagag atgacggcaa gttggcattt ttcttttcta gcaataaaac ttaaagctga 80940

ctcaaggaga aatggaaatc ataattggaa cagtaatcct caagaaagca ttaagattat 81000

taaataattg ccctcacaga tgacttcagg ccaagatggc tttatgggtg aagtttagac 81060

tttcacaaaa ctaatcagtt cccataagaa ctgctccagg atttggagga acatgggaaa 81120

gtctattaaa gggatcacaa ttcacagtcc ccagagtaaa acatgggcta acttgcattt 81180

tggcaaagag ccaaatgtta taaatgacat cctagaaggc caaattctgt ccatctcgtt 81240

gaacaaggac ttacaccagg aatttagaac tatttatagc tcatcccacc actcaggcca 81300

atgatgaccc atgatcatct caccagaaat ggaaagactc agatgattaa tagagtctca 81360

atttctctga gacatctaag agcccagccc aagcccagac ccaggagggc acccaggcct 81420

ggacagagaa cactgatatc acaccagccc tccagaggga agcagagact ccttcaagct 81480

ctggaaacac aggcccagac agctgcccaa agttgggcag gcttcactgc aaacccaaat 81540

catgaagcta ggtaacacct ttacagattc tttacattta aaaatcatca aaacaagagt 81600

aaataataaa ctcaaataat attaatctaa tatgtaaagg tcttgtacca ttattatgca 81660

aacaacatac ataagctaat aagaaaaaga acaaatccct taagaaatcg gcaaaaagga 81720

tataacacaa tttctaaaag aaaacaaatg gctagcacac ataaggaaaa cactttgtga 81780

acagacattc ttcagaacat tatttataat tataaaatag ttgaaagcaa gatagtgcct 81840

gaagaaatta tggtgcatac attagtggga ctattctgca aacattccca attatacttg 81900

tcacatatct gtgataacgt gacagccagc attcatgggg tgacctcatt tggtaaaagg 81960

gtgcaaagct caacacgcat tgtgagatga ctgtggtgta aaattagtgg gattattccg 82020

caaacattcc caattatact taccgcatat ctgtgataac atgacagcat tcatggggtg 82080

acctcatttg gtaaaagggt gcaaagctca acacgcattg tgagatgact ggtgtaaata 82140

caaagaccaa actgtgaaaa ggagtccatc aattaatcga tgcttacctt cagttttggg 82200

ctaattttta aagtatgcta taagcatatg ctcctgttat aacagaatgg agggattatg 82260

agagatgatg caggtgtgtc ctgggcctcc cctggcccac tgggccctag agatgccttc 82320

ccaggcatcg ctgtcagggc ttccctcaga gggagtcctg tattgacctc accaccaagg 82380

tctggagcag gggatcctta gatattggtt ggggttatct caccttaggt ctgaatatgg 82440

ggttgtctta gactgttttg tgctgttaga atagaatacc caagactggg aaatttatac 82500

tgaacggaaa tttatttctc acagttctag aggctgtgaa gtccaagagc acaggtgcca 82560

gagcaagtcc aagagcaagg gaaagtccaa agcaagtcca ggagcatctg gcgaggacct 82620

tcttgctgtg tcatcacatg gcggaaggca agaaagagag caagaggggg ccgaactcac 82680

ccttttataa cagcaccaat cccacccatg aggtggggac cttatgacct aatcactctt 82740

catactgtta caatggcaat gaaatttcaa catgagtttt ggaggagaga agcattcaaa 82800

ccacagcaag ggtgctccta cctcctctct cagggcatct gcagaaagag ctgcaactgc 82860

acgtccttcc tccgtccatc ctccatccct tcccaatgtc cgtgcatatc ctgtgaccca 82920

ggaggtctgg catagggggt gctcctgcct taggtctgag gccctgtctg aagaggggta 82980

ggtgaggagg ccatctgatg gtctgggcca agacagtcac aggacgcatc atttatcatc 83040

aaggaggctg agggttgagt ctccaggtcc agggaactcc ccacaaagtg ggaaccctgc 83100

ccagctccac acagcctctg ctgggggacc ctgctctggt gcagagcctg gggacaggtc 83160

ttgagctcag ccagagtctg cctccctgtc atttaggaac taaaccaagc ggcaggatgc 83220

tggagcccag cccccatctg accttacagg gccaaggctg gggccctggg ttcccctcaa 83280

ggcgcagcag gactggagcc ccaggcagtg caggagtggc caaagctggg gcttcctcca 83340

gagcccccaa gcatcacggc accaagaagg gtaggaccct ggcctgagga attggcacca 83400

aagccccaga aactaccctg gacaccatgg agagaggcct ggaggggaag caccaggcac 83460

tgcctcccct tctgatccca cctgaggtgg ctgccaagcc cagagagccg ctctgatgtc 83520

ccccagccct gcagcccagg gatacctgta ctgtgcccct gggggacccc tggccagtct 83580

gtgcaaagaa gtcaccaccc tacactcaga gacagtgggg gtcctcgtcc cacatcctca 83640

gagcatggcc cggctgctgc agggatggtc tcctggtcct cagagcatgg cccggctgct 83700

gcagggatgg tctcctggtc ctcagagcat ggcccagctg ctgcagggat ggtctcctgg 83760

aggcccccca gtgctctatt gtcagggctc cctccacccc cccgcaccaa gagagagcca 83820

gaccccagca aggcttccag tggcttcagg tcacacccct aggctgaccc cagccccatt 83880

aacacctgcc tgagaaagct ccacgcacca gaactgaccg tctgctccaa ctcttgacct 83940

cccgttctca gggcgtctgc tgaaaaggct gcaactgcac atccttcctc cgtccgttcc 84000

cgatgtccgt gtgtctcctg tggccaggaa ggtctttctc gggacctgag agccgctccc 84060

tgaagtgtcc ccattgggaa ggatggggcc tgtgtctcca ggctctggga ggacagaatc 84120

ctgacctcaa cagtggccgg cacggacaca actggcccca tcccggggac gctgaccagc 84180

gctgggcaac ttttcccttc cccgacgact gagccccgag caccctccct gctcccctac 84240

cacctccctt tacaaggctg tggcctctgc acagatgata atggagcttg gctcattccc 84300

ctagagtcgg tagggagtta aggacaaaac tcagtttcct ccacctgaac tcaagtctgc 84360

ctatgtttac ctaatcacac ctggtggaca gtttggacaa acttgcacac tcagagacac 84420

agacacttct agaaatcatt atctccctgc cccggggacc ccactccagc agaagtctgc 84480

taggcactgg cctgggccct cctgctgtcc taggaggctg ctgacctcct gcctggctcc 84540

tgtccccagg tccagagtca gagcagactc cagggacgct gcaggctagg aagccgcccc 84600

ctccaggcca gggtctagtg caggtgccca ggacaagaaa gattgtgaat gcaggaatga 84660

ctgggccaca cccctcccgt gcacgccccc tcttgccctg caccccacag cccagccccc 84720

cgtgctggat gcccccccac agcagaggtg ctgttctgtg atcccctggg aaagacgccc 84780

tcaacctcca ccctgtccca cggcccaagg aagacaagac acaggccctc tcctcacagt 84840

ctccccacct ggctcctgct gggaccctca aggtgtgaac agggaggatg gttgtctggg 84900

tggcccctag gagcccagat cttcactcta cagaccccaa cccaagcacc cccttctgca 84960

gggcccagct catccccctc ctcctccctc tgctctcctc tcgtcgcctc tacgggaaat 85020

ccgggactca gcagtaaccc tcaggaagca gggcccaggc gccgtttaat aggaggcttc 85080

ctcacaatga aacttttaga aagccttgac tacaatgatg accttggtgt ggctgtgaac 85140

actgtcagct cccacagctg ctgcagcaaa aaatgtccat agacagggtg ggggcccggg 85200

gtcgtctgct gtcctgctca gcccacagca cgcatggagg atctgaggtg ccacacctga 85260

cgcccaggcc agaacatgcc tccctccagg gtgacctgcc atgtcctgca ttgctggagg 85320

gacaggggca gcctatgagg atctggggcc aggagatgaa tcctattaac ccagaggaaa 85380

actaacagga cccaagcacc ctccccgttg aagctgacct gcccagaggg gcctgggccc 85440

accccacaca ccggggcgga atgtgtacag gccccggtct ctgtgggtgt tccgctaact 85500

ggggctccca gtgctcaccc cacaactaaa gcgagcccca gcctccagag cccccgaagg 85560

agatgccgcc cacaagccca gcccccatcc aggaggcccc agagctcagg gcgccggggc 85620

agattctgaa cagccccgag tcacggtggg tacaactgga acgaccaccg tgagaaaaac 85680

tgtgtccaaa actgtctcct ggcccctgct ggaggccgcg ccagagaggg gagcagccgc 85740

cccgaaccta ggtcctgctc agctcacacg acccccagca cccagagcac aacggagtcc 85800

ccattgaatg gtgaggacgg ggaccagggc tccagggggt catggaaggg gctggacccc 85860

atcctactgc tatggtccca gtgctcctgg ccagaactga ccctaccacc gacaagagtc 85920

cctcagggaa acgggggtca ctggcacctc ccagcatcaa ccccaggcag cacaggcata 85980

aaccccacat ccagagccga ctccaggagc agagacaccc cagtaccctg ggggacaccg 86040

accctgatga ctccccactg gaatccaccc cagagtccac caggaccaaa gaccccgccc 86100

ctgtctctgt ccctcactca ggacctgctg cggggcgggc catgagacca gactcgggct 86160

tagggaacac cactgtggcc ccaacctcga ccaggccaca ggcccttcct tcctgccctg 86220

cggcagcaca gactttgggg tctgtgcaga gaggaatcac agaggcccca ggctgaggtg 86280

gtgggggtgg aagaccccca ggaggtggcc cacttccctt cctcccagct ggaacccacc 86340

atgaccttct taagataggg gtgtcatccg aggcaggtcc tccatggagc tcccttcagg 86400

ctcctccccg gtcctcacta ggcctcagtc ccggctgcgg gaatgcagcc accacaggca 86460

caccaggcag cccagaccca gccagcctgc agtgcccaag cccacattct ggagcagagc 86520

aggctgtgtc tgggagagtc tgggctcccc accgcccccc cgcacacccc acccacccct 86580

gtccaggccc tatgcaggag ggtcagagcc ccccatgggg tatggactta gggtctcact 86640

cacgtggctc ccctcctggg tgaaggggtc tcatgcccag atccccacag cagagctggt 86700

caaaggtgga ggcagtggcc ccagggccac cctgacctgg accctcaggc tcctctagcc 86760

ctggctgccc tgctgtccct gggaggcctg gactccacca gaccacaggt ccagggcacc 86820

gcccataggt gctgcccaca ctcagttcac aggaagaaga taagctccag acccccaaga 86880

ctgggacctg ccttcctgcc accgcttgta gctccagacc tccgtgcctc ccccgaccac 86940

ttacacacgg gccagggagc tgttccacaa agatcaaccc caaaccggga ccgcctggca 87000

ctcgggccgc tgccacttcc ctctccattt gttcccagca cctctgtgct ccctccctcc 87060

tccctccttc aggggaacag cctgtgcagc ccctccctgc accccacacc ctggggaggc 87120

ccaaccctgc ctccagccct ttctcccccg ctgctcttcc tgcccatcca gacaaccctg 87180

gggtcccatc cctgcagcct acaccctggt ctccacccag acccctgtct ctccctccag 87240

acacccctcc caggccaacc ctgcacatgc aggccctccc cttttctgct gccagagcct 87300

cagtttctac cctctgtgcc taccccctgc ctcctcctgc ccacaactcg agctcttcct 87360

ctcctggggc ccctgagcca tggcactgac cgtgcactcc cacccccaca ctgcccatgc 87420

cctcaccttc ctcctggaca ctctgacccc gctcccctct tggacccagc cctggtattt 87480

ccaggacaaa ggctcaccca agtcttcccc atgcaggccc ttgccctcac tgcccggtta 87540

cacggcagcc tcctgtgcac agaagcaggg agctcagccc ttccacaggc agaaggcact 87600

gaaagaaatc ggcctccagc accctgatgc acgtccgcct gtgtctctca ctgcccgcac 87660

ctgcagggag gctcggcact ccctgtaaag acgagggatc caggcagcaa catcatggga 87720

gaatgcaggg ctcccagaca gcccagccct ctcgcaggcc tctcctggga agagacctgc 87780

agccaccact gaacagccac ggagcccgct ggatagtaac tgagtcagtg accgacctgg 87840

agggcagggg agcagtgaac cggagcccag accataggga cagagaccag ccgctgacat 87900

cccgagcccc tcactggcgg ccccagaaca ccgcgtggaa acagaacaga cccacattcc 87960

cacctggaac agggcagaca ctgctgagcc cccagcacca gccctgagaa acaccaggca 88020

acggcatcag agggggctcc tgagaaagaa aggaggggag gtctccttca ccagcaagta 88080

cttcccttga ccaaaaacag ggtccacgca actcccccag gacaaaggag gagccccctg 88140

tacagcactg ggctcagagt cctctcccac acaccctgag tttcagacaa aaaccccctg 88200

gaaatcatag tatcagcagg agaactagcc agagacagca agaggggact cagtgactcc 88260

cgcggggaca ggaggatttt gtgggggctc gtgtcactgt gaggatattg tagtagtacc 88320

agctgctata cccacagtga cacagcccca ttcccaaagc cctgctgtaa acgcttccac 88380

ttctggagct gaggggctgg ggggagcgtc tgggaagtag ggcctagggg tggccatcaa 88440

tgcccaaaac gcaccagact cccccccaga catcacccca ctggccagtg agcagagtaa 88500

acagaaaatg agaagcagct gggaagcttg cacaggcccc aaggaaagag ctttggcggg 88560

tgtgcaagag gggatgcggg cagagcctga gcagggcctt ttgctgtttc tgctttcctg 88620

tgcagatagt tccataaact ggtgttcaag atcgatggct gggagtgagc ccaggaggac 88680

agtgtgggaa gggcacaggg aaggagaagc agccgctatc ctacactgtc atctttcaag 88740

agtttgccct gtgcccacaa tgctgcatca tgggatgctt aacagctgat gtagacacag 88800

ctaaagagag aatcagtgaa atggatttgc agcacagatc tgaataaatt ctccagaatg 88860

tggagccaca cagaagcaag cacaaggaaa gtgcctgatg caagggcaaa gtacagtgtg 88920

taccttcagg ctgggcacag acactctgaa aagccttggc aggaactccc tgcaacaaag 88980

cagagccctg caggcaatgc cagctccaga gccctccctg agagcctcat gggcaaagat 89040

gtgcacaaca ggtgtttctc atagccccaa actgagaatg aagcaaacag ccatctgaag 89100

gaaaacaggc aaataaacga tggcaggttc atgaaatgca aacccagaca gccagaagga 89160

caacagtgag ggttacaggt gactctgtgg ttgagttcat gacaatgctg agtaattgga 89220

gtaacaaagg aaagtccaaa aaatactttc aatgtgattt cttctaaata aaatttacag 89280

ccggcaaaat gaactatctt cttaagggat aaactttcca ctaggaaaac tataaggaaa 89340

atcaagaaaa ggatgatcac ataaacacag tggtcgttac ttctactggg gaaggaagag 89400

ggtatgaact gagacacaca gggttggcaa gtctcctaac aagaacagaa caaatacatt 89460

acagtacctt gaaaacagca gttaaaattc taaattgcaa gaagaggaaa atgcacacag 89520

ctgtgtttag aaaattctca gtccagcact gttcataata gcaaagacat taacccaggt 89580

tggataaata aacgatgaca caggcaattg cacaatgata cagacataca ttcagtatat 89640

gagacattga tgatgtatcc ccaaagaaat gactttaaag agaaaaggcc tgatatgtgg 89700

tggcactcac ctccctgggc atccccggac aggctgcagg cacactgtgt ggcagggcag 89760

gctggtacct gctggcagct cctggggcct gatgtggagc aggcacagag ccgtatcccc 89820

ccgaggacat atacccccaa ggacggcaca gttggtacat tccggagaca agcaactcag 89880

ccacactccc aggccagagc ccgagaggga cgcccatgca cagggaggca gagcccagct 89940

cctccacagc cagcagcacc cgtgcagggg ccgccatctg gcaggcacag agcatgggct 90000

gggaggaggg gcagggacac caggcagggt tggcaccaac tgaaaattac agaagtctca 90060

tacatctacc tcagccttgc ctgacctggg cctcacctga cctggacctc acctggcctg 90120

gacctcacct ggcctagacc tcacctctgg gcttcacctg agctcggcct cacctgactt 90180

ggaccttgcc tgtcctgagc tcacatgatc tgggcctcac ctgacctggg tttcacctga 90240

cctgggcttc acctgacctg ggcctcatct gacctgggcc tcactggcct ggacctcacc 90300

tggcctgggc ttcacctggc ctcaggcctc atctgcacct gctccaggtc ttgctggaac 90360

ctcagtagca ctgaggctgc aggggctcat ccagggttgc agaatgactc tagaacctcc 90420

cacatctcag ctttctgggt ggaggcacct ggtggcccag ggaatataaa aagcctgaat 90480

gatgcctgcg tgatttgggg gcaatttata aacccaaaag gacatggcca tgcagcgggt 90540

agggacaata cagacagata tcagcctgaa atggagcctc agggcacagg tgggcacgga 90600

cactgtccac ctaagccagg ggcagacccg agtgtccccg cagtagacct gagagcgctg 90660

ggcccacagc ctcccctcgg tgccctgcta cctcctcagg tcagccctgg acatcccggg 90720

tttccccagg cctggcggta ggtttggggt gaggtctgtg tcactgtggt attacgattt 90780

ttggagtggt tattataccc acagtgtcac agagtccatc aaaaacccat ccctgggaac 90840

cttctgccac agccctccct gtggggcacc gccgcgtgcc atgttaggat tttgactgag 90900

gacacagcac catgggtatg gtggctaccg cagcagtgca gcccgtgacc caaacacaca 90960

gggcagcagg cacaacagac aagcccacaa gtgaccaccc tgagctcctg cctgccagcc 91020

ctggagacca tgaaacagat ggccaggatt atcccatagg tcagccagac ctcagtccaa 91080

caggtctgca tcgctgctgc cctccaatac cagtccggat ggggacaggg ctggcccaca 91140

ttaccatttg ctgccatccg gccaacagtc ccagaagccc ctccctcaag gctgggccac 91200

atgtgtggac cctgagagcc ccccatgtct gagtaggggc accaggaagg tggggctggc 91260

cctgtgcact gtccctgccc ctgtggtccc tggcctgcct ggccctgaca cctgggcctc 91320

tcctgggtca tttccaagac agaagacatt cccaggacag ctggagctgg gagtccatca 91380

tcctgcctgg ccgtcctgag tcctgcgcct ttccaaacct cacccgggaa gccaacagag 91440

gaatcacctc ccacaggcag agacaaagac cttccagaaa tctctgtctc tctccccagt 91500

gggcaccctc ttccagggca gtcctcagtg atatcacagt gggaacccac atctggatcg 91560

ggactgcccc cagaacacaa gatggcccac agggacagcc ccacagccca gcccttccca 91620

gacccctaaa aggcgtccca ccccctgcat ctgccccagg gctcaaactc caggaggact 91680

gactcctgca caccctcctg ccagacatca cctcagcccc tcctggaagg gacaggagcg 91740

cgcaagggtg agtcagaccc tcctgccctc gatggcaggc ggagaagatt cagaaaggtc 91800

tgagatcccc aggacgcagc accactgtca atgggggccc cagacgcctg gaccagggcc 91860

tgcgtgggaa aggcctctgg gcacactcag gggctttttg tgaagggtcc tcctactgtg 91920

tgactacagt aactaccaca gtgatgaacc cagcagcaaa aactgaccgg actcccaagg 91980

tttatgcaca cttctccgct cagagctctc caggatcaga agagccgggc ccaagggttt 92040

ctgcccagac cctcggcctc tagggacatc ttggccatga cagcccatgg gctggtgccc 92100

cacacatcgt ctgccttcaa acaagggctt cagagggctc tgaggtgacc tcactgatga 92160

ccacaggtgc cctggcccct tccccaccag ctgcaccaga ccccgtcatg acagatgccc 92220

cgattccaac agccaattcc tggggccagg aatcgctgta gacaccagcc tccttccaac 92280

acctcctgcc aattgcctgg attcccatcc cggttggaat caagaggaca gcatccccca 92340

ggctcccaac aggcaggact cccacaccct cctctgagag gccgctgtgt tccgtagggc 92400

caggctgcag acagtccccc tcacctgcca ctagacaaat gcctgctgta gatgtcccca 92460

cctggaaaat accactcatg gagcccccag ccccaggtac agctgtagag agagtctctg 92520

aggcccctaa gaagtagcca tgcccagttc tgccgggacc ctcggccagg ctgacaggag 92580

tggacgctgg agctgggccc atactgggcc acataggagc tcaccagtga gggcaggaga 92640

gcacatgccg gggagcaccc agcctcctgc tgaccagagg cccgtcccag agcccaggag 92700

gctgcagagg cctctccagg gggacactgt gcatgtctgg tccctgagca gccccccacg 92760

tccccagtcc tgggggcccc tggcacagct gtctggaccc tctctattcc ctgggaagct 92820

cctcctgaca gccccgcctc cagttccagg tgtggttatt gtcagggggt gtcagactgt 92880

ggtggataca gctatggtta ccacagtggt gctgcccata gcagcaacca ggccaagtag 92940

acaggcccct gctgtgcagc cccaggcctc cagctcacct gcttctcctg gggctctcaa 93000

ggctgctgtt ttctgcactc tcccctctgt ggggagggtt ccctcagtgg gagatctgtt 93060

ctcaacatcc cacggcctca ttcctgcaag gaaggccaat ggatgggcaa cctcacatgc 93120

cgcggctaag atagggtggg cagcctggcg gggacaggac atcctgctgg ggtatctgtc 93180

actgtgccta gtggggcact ggctcccaaa caacgcagtc cttgccaaaa tccccacggc 93240

ctcccccgct aggggctggc ctgatctcct gcagtcctag gaggctgctg acctccagaa 93300

tggctccgtc cccagttcca gggcgagagc agatcccagg ccggctgcag actgggaggc 93360

caccccctcc ttcccagggt tcactgcagg tgaccagggc aggaaatggc ctgaacacag 93420

ggataaccgg gccatccccc aacagagtcc accccctcct gctctgtacc ccgcaccccc 93480

caggccagcc catgacatcc gacaacccca caccagagtc actgcccggt gctgccctag 93540

ggaggacccc tcagccccca ccctgtctag aggactgggg aggacaggac acgccctctc 93600

cttatggttc ccccacctgg ctctggctgg gacccttggg gtgtggacag aaaggacgct 93660

tgcctgattg gcccccagga gcccagaact tctctccagg gaccccagcc cgagcacccc 93720

cttacccagg acccagccct gcccctcctc ccctctgctc tcctctcatc accccatggg 93780

aatccagaat ccccaggaag ccatcaggaa gggctgaggg aggaagtggg gccactgcac 93840

caccaggcag gaggctctgt ctttgtgaac ccagggaggt gccagcctcc tagagggtat 93900

ggtccaccct gcctatggct cccacagtgg caggctgcag ggaaggacca gggacggtgt 93960

gggggagggc tcagggcccc gcgggtgctc catcttggat gagcctatct ctctcaccca 94020

cggactcgcc cacctcctct tcaccctggc cacacgtcgt ccacaccatc ctaagtccca 94080

cctacaccag agccggcaca gccagtgcag acagaggctg gggtgcaggg gggccgactg 94140

ggcagcttcg gggagggagg aatggaggaa ggggagttca gtgaagaggc ccccctcccc 94200

tgggtccagg atcctcctct gggacccccg gatcccatcc cctccaggct ctgggaggag 94260

aagcaggatg ggagaatctg tgcgggaccc tctcacagtg gaatacctcc acagcggctc 94320

aggccagata caaaagcccc tcagtgagcc ctccactgca gtgctgggcc tgggggcagc 94380

cgctcccaca caggatgaac ccagcacccc gaggatgtcc tgccaggggg agctcagagc 94440

catgaaggag caggatatgg gacccccgat acaggcacag acctcagctc cattcaggac 94500

tgccacgtcc tgccctggga ggaacccctt tctctagtcc ctgcaggcca ggaggcagct 94560

gactcctgac ttggacgcct attccagaca ccagacagag gggcaggccc cccagaacca 94620

gggatgagga cgccccgtca aggccagaaa agaccaagtt gcgctgagcc cagcaaggga 94680

aggtccccaa acaaaccagg aagtttctga aggtgtctgt gtcacagtgg agtatagcag 94740

ctcgtcccac agtgacactc gccaggccag aaaccccatc ccaagtcagc ggaatgcaga 94800

gagagcaggg aggacatgtt taggatctga ggccgcacct gacacccagg ccagcagacg 94860

tctcctgtcc acggcaccct gccatgtcct gcatttctgg aagaacaagg gcaggctgaa 94920

gggggtccag gaccaggaga tgggtccgct ctacccagag aaggagccag gcaggacaca 94980

agccccctcc ccattgaggc tgacctgccc agagggtcct gggcccaccc aacacaccgg 95040

ggcggaatgt gtgcaggcct cggtctctgt gggtgttccg ctagctgggg ctcacagtgc 95100

tcaccccaca cctaaaacga gccacagcct ccggagcccc tgaaggagac cccgcccaca 95160

agcccagccc ccacccagga ggccccagag cacagggcgc cccgtcggat tctgaacagc 95220

cccgagtcac agtgggtata actggaacta ccactgtgag aaaagcttcg tccaaaacgg 95280

tctcctggcc acagtcggag gccccgccag agaggggagc agccacccca aacccatgtt 95340

ctgccggctc ccatgacccc gtgcacctgg agccccacgg tgtccccact ggatgggagg 95400

acaagggccg ggggctccgg cgggtcgggg caggggcttg atggcttcct tctgccgtgg 95460

ccccattgcc cctggctgga gttgaccctt ctgacaagtg tcctcagaga gtcagggatc 95520

agtggcacct cccaacatca accccacgca gcccaggcac aaaccccaca tccagggcca 95580

actccaggaa cagagacacc ccaataccct gggggacccc gaccctgatg actcccgtcc 95640

catctctgtc cctcacttgg ggcctgctgc ggggcgagca cttgggagca aactcaggct 95700

taggggacac cactgtgggc ctgacctcga gcaggccaca gacccttccc tcctgccctg 95760

gtgcagcaca gactttgggg tctgggcagg gaggaacttc tggcaggtca ccaagcacag 95820

agcccccagg ctgaggtggc cccaggggga accccagcag gtggcccact acccttcctc 95880

ccagctggac cccatgtctt ccccaagata ggggtgccat ccaaggcagg tcctccatgg 95940

agcccccttc aggctcctct ccagacccca ctgggcctca gtccccactc taggaatgca 96000

gccaccacgg gcacaccagg cagcccaggc ccagccaccc tgcagtgccc aagcccacac 96060

cctggaggag agcagggtgc gtctgggagg ggctgggctc cccaccccca cccccacctg 96120

cacaccccac ccacccttgc ccgggccccc tgcaggaggg tcagagcccc catgggatat 96180

ggacttaggg tctcactcac gcacctcccc tcctgggaga aggggtctca tgcccagatc 96240

cccccagcag cgctggtcac aggtagaggc agtggcccca gggccaccct gacctggccc 96300

ctcaggctcc tctagccctg gctgccctgc tgtccctggg aggcctgggc tccaccagac 96360

cacaggtcta gggcaccgcc cacactgggg ccgcccacac acagctcaca ggaagaagat 96420

aagctccaga cccccaggcc cgggacctgc cttgctgcta cgacttcctg ccccagacct 96480

cgttgccctc ccccgtccac ttacacacag gccaggaagc tgttcccaca cagaccaacc 96540

ccagacgggg accacctggc actcaggtca ctgccatttc cttctccatt cacttccaat 96600

gcctctgtgc ttcctccctc ctccttcctt cgggggagca ccctgtgcag ctcctccctg 96660

cagtccacac cctggggaga cccgaccctg cagcccacac cctggggaga cctgaccctc 96720

ctccagccct ttctcccccg ctgctcttgc cacccaccaa gacagccctg gggtcctgtc 96780

cctacagccc ccacccagtt ctctacctag acccgtcttc ctccctctaa acacctctcc 96840

caggccaacc ctacacctgc aggccctccc ctccactgcc aaagaccctc agtttctcct 96900

gcctgtgccc acccccgtgc tcctcctgcc cacagctcga gctcttcctc tcctagggcc 96960

cctgagggat ggcattgacc gtgccctcgc acccacacac tgcccatgcc ctcacattcc 97020

tcctggccac tccagcccca ctcccctctc aggcctggct ctggtatttc tgggacaaag 97080

ccttacccaa gtctttccca tgcaggcctg ggcccttacc ctcactgccc ggttacaggg 97140

cagcctcctg tgcacagaag cagggagctc agcccttcca caggcagaag gcactgaaag 97200

aaatcggcct ccagcgcctt gacacacgtc tgcctgtgtc tctcactgcc cgcacctgca 97260

gggaggctcg gcactccctc taaagacgag ggatccaggc agcagcatca caggagaatg 97320

cagggctacc agacatccca gtcctctcac aggcctctcc tgggaagaga cctgaagacg 97380

cccagtcaac ggagtctaac accaaacctc cctggaggcc gatgggtagt aacggagtca 97440

ttgccagacc tggaggcagg ggagcagtga gcccgagccc acaccatagg gccagaggac 97500

agccactgac atcccaagcc actcactggt ggtcccacaa caccccatgg aaagaggaca 97560

gacccacagt cccacctgga ccagggcaga gactgctgag acccagcacc agaaccaacc 97620

aagaaacacc aggcaacagc atcagagggg gctctggcag aacagaggag gggaggtctc 97680

cttcaccagc aggcgcttcc cttgaccgaa gacaggatcc atgcaactcc cccaggacaa 97740

aggaggagcc ccttgttcag cactgggctc agagtcctct ccaagacacc cagagtttca 97800

gacaaaaacc ccctggaatg cacagtctca gcaggagagc cagccagagc cagcaagatg 97860

gggctcagtg acacccgcag ggacaggagg attttgtggg ggctcgtgtc actgtgagga 97920

tattgtacta atggtgtatg ctatacccac agtgacacag ccccattccc aaagccctac 97980

tgcaaacgca ttccacttct ggggctgagg ggctggggga gcgtctggga aatagggctc 98040

aggggtgtcc atcaatgccc aaaacgcacc agactcccct ccatacatca cacccaccag 98100

ccagcgagca gagtaaacag aaaatgagaa gcaagctggg gaagcttgca caggccccaa 98160

ggaaagagct ttggcgggtg tgtaagaggg gatgcgggca gagcctgagc agggcctttt 98220

gctgtttctg ctttcctgtg cagagagttc cataaactgg tgttcgagat caatggctgg 98280

gagtgagccc aggaggacag cgtgggaaga gcacagggaa ggaggagcag ccgctatcct 98340

acactgtcat ctttcgaaag tttgccttgt gcccacactg ctgcatcatg ggatgcttaa 98400

cagctgatgt agacacagct aaagagagaa tcagtgagat ggatttgcag cacagatctg 98460

aataaattct ccagaatgtg gagcagcaca gaagcaagca cacagaaagt gcctgatgca 98520

aggacaaagt tcagtgggca ccttcaggca ttgctgctgg gcacagacac tctgaaaagc 98580

cctggcagga actccctgtg acaaagcaga accctcaggc aatgccagcc ccagagccct 98640

ccctgagagc ctcatgggca aagatgtgca caacaggtgt ttctcatagc cccaaactga 98700

gagcaaagca aacgtccatc tgaaggagaa caggcaaata aacgatggca ggttcatgaa 98760

atgcaaaccc agacagccac aagcacaaaa gtacagggtt ataagcgact ctggttgagt 98820

tcatgacaat gctgagtaat tggagtaaca aagtaaactc caaaaaatac tttcaatgtg 98880

atttcttcta aataaaattt acaccctgca aaatgaactg tcttcttaag ggatacattt 98940

cccagttaga aaaccataaa gaaaaccaag aaaaggatga tcacataaac acagtggtgg 99000

ttacttctgc tggggaagga agagggtatg aactgagata cacagggtgg gcaagtctcc 99060

taacaagaac agaacgaata cattacagta ccttgaaaac agcagttaaa cttctaaatt 99120

gcaagaagag gaaaatgcac acagttgtgt ttagaaaatt ctcagtccag cactgttcat 99180

aatagcaaag acattaaccc aggtcggata aataagcgat gacacaggca attgcacaat 99240

gatacagaca tatatttagt atatgagaca tcgatgatgt atccccaaat aaacgacttt 99300

aaagagataa agggctgatg tgtggtggca ttcacctccc tgggatcccc ggacaggttg 99360

caggctcact gtgcagcagg gcaggcgggt acctgctggc agttcctggg gcctgatgtg 99420

gagcaagcgc agggccatat atcccggagg acggcacagt cagtgaattc cagagagaag 99480

caactcagcc acactcccca ggcagagccc gagagggacg cccacgcaca gggaggcaga 99540

gcccagcacc tccgcagcca gcaccacctg cgcacgggcc accaccttgc aggcacagag 99600

tgggtgctga gaggaggggc agggacacca ggcagggtga gcacccagag aaaactgcag 99660

acgcctcaca catccacctc agcctcccct gacctggacc tcactggcct gggcctcact 99720

taacctgggc ttcacctgac cttggcctca cctgacttgg acctcgcctg tcccaagctt 99780

tacctgacct gggcctcaac tcacctgaac gtctcctgac ctgggtttaa cctgtcctgg 99840

aactcacctg gccttggctt cccctgacct ggacctcatc tggcctgggc ttcacctggc 99900

ctgggcctca cctgacctgg acctcatctg gcctggacct cacctggcct ggacttcacc 99960

tggcctgggc ttcacctgac ctggacctca cctggcctcg ggcctcacct gcacctgctc 100020

caggtcttgc tggagcctga gtagcactga gggtgcagaa gctcatccag ggttggggaa 100080

tgactctaga agtctcccac atctgacctt tctgggtgga ggcagctggt ggccctggga 100140

atataaaaat ctccagaatg atgactctgt gatttgtggg caacttatga acccgaaagg 100200

acatggccat ggggtgggta gggacatagg gacagatgcc agcctgaggt ggagcctcag 100260

gacacaggtg ggcacggaca ctatccacat aagcgaggga tagacccgag tgtccccaca 100320

gcagacctga gagcgctggg cccacagcct cccctcagag ccctgctgcc tcctccggtc 100380

agccctggac atcccaggtt tccccaggcc tggcggtagg tttagaatga ggtctgtgtc 100440

actgtggtat tacgatattt tgactggtta ttataaccac agtgtcacag agtccatcaa 100500

aaacccatgc ctggaagctt cccgccacag ccctccccat ggggccctgc tgcctcctca 100560

ggtcagcccc ggacatcccg ggtttcccca ggctgggcgg taggtttggg gtgaggtctg 100620

tgtcactgtg gtattactat ggttcgggga gttattataa ccacagtgtc acagagtcca 100680

tcaaaaaccc atccctggga gcctcccgcc acagccctcc ctgcagggga ccggtacgtg 100740

ccatgttagg attttgatcg aggagacagc accatgggta tggtggctac cacagcagtg 100800

cagcctgtga cccaaacccg cagggcagca ggcacgatgg acaggcccgt gactgaccac 100860

gctgggctcc agcctgccag ccctggagat catgaaacag atggccaagg tcaccctaca 100920

ggtcatccag atctggctcc gaggggtctg catcgctgct gccctcccaa cgccagtcca 100980

aatgggacag ggacggcctc acagcaccat ctgctgccat caggccagcg atcccagaag 101040

cccctccctc aaggctgggc acatgtgtgg acactgagag ccctcatatc tgagtagggg 101100

caccaggagg gaggggctgg ccctgtgcac tgtccctgcc cctgtggtcc ctggcctgcc 101160

tggccctgac acctgagcct ctcctgggtc atttccaaga cagaagacat tcctggggac 101220

agccggagct gggcgtcgct catcctgccc ggccgtcctg agtcctgctc atttccagac 101280

ctcaccgggg aagccaacag aggactcgcc tcccacattc agagacaaag aaccttccag 101340

aaatccctgc ctctctcccc agtggacacc ctcttccagg acagtcctca gtggcatcac 101400

agcggcctga gatccccagg acgcagcacc gctgtcaata ggggccccaa atgcctggac 101460

cagggcctgc gtgggaaagg cctctggcca cactcgggct ttttgtgaag ggccctcctg 101520

ctgtgtgact acagtaacta ccatagtgat gaacccagtg gcaaaaactg gctggaaacc 101580

caggggctgt gtgcacgcct cagcttggag ctctccagga gcacaagagc cgggcccaag 101640

gatttgtgcc cagaccctca gcctctaggg acacctgggt catctcagcc tgggctggtg 101700

ccctgcacac catcttcctc caaatagggg cttcagaggg ctctgaggtg acctcactca 101760

tgaccacagg tgacctggcc cttccctgcc agctatacca gaccctgtct tgacagatgc 101820

cccgattcca acagccaatt cctgggaccc tgaatagctg tagacaccag cctcattcca 101880

gtacctcctg ccaattgcct ggattcccat cctggctgga atcaagaagg cagcatccgc 101940

caggctccca acaggcagga ctcccgcaca ccctcctctg agaggccgct gtgttccgca 102000

gggccaggcc ctggacagtt cccctcacct gccactagag aaacacctgc cattgtcgtc 102060

cccacctgga aaagaccact cgtggagccc ccagccccag gtacagctgt agagacagtc 102120

ctcgaggccc ctaagaagga gccatgccca gttctgccgg gaccctcggc caggccgaca 102180

ggagtggacg ctggagctgg gcccacactg ggccacatag gagctcacca gtgagggcag 102240

gagagcacat gccggggagc acccagcctc ctgctgacca gaggcccgtc ccagagccca 102300

ggaggctgca gaggcctctc cagggagaca ctgtgcatgt ctggtaccta agcagccccc 102360

cacgtcccca gtcctggggg cccctggctc agctgtctgg gccctccctg ctccctggga 102420

agctcctcct gacagccccg cctccagttc caggtgtggt tattgtcagg cgatgtcaga 102480

ctgtggtgga tatagtggct acgattacca cagtggtgcc gcccatagca gcaaccaggc 102540

caagtagaca ggcccctgct gcgcagcccc aggcatccac ttcacctgct tctcctgggg 102600

ctctcaaggc tgctgtctgt cctctggccc tctgtgggga gggttccctc agtgggaggt 102660

ctgtgctcca gggcagggat gattgagata gaaatcaaag gctggcaggg aaaggcagct 102720

tcccgccctg agaggtgcag gcagcaccac ggagccacgg agtcacagag ccacggagcc 102780

cccattgtgg gcatttgaga gtgctgtgcc cccggcaggc ccagccctga tggggaagcc 102840

tgtcccatcc cacagcccgg gtcccacggg cagcgggcac agaagctgcc aggttgtcct 102900

ctatgatcct catccctcca gcagcatccc ctccacagtg gggaaactga ggcttggagc 102960

accacccggc cccctggaaa tgaggctgtg agcccagaca gtgggcccag agcactgtga 103020

gtaccccggc agtacctggc tgcagggatc agccagagat gccaaaccct gagtgaccag 103080

cctacaggag gatccggccc cacccaggcc actcgattaa tgctcaaccc cctgccctgg 103140

agacctcttc cagtaccacc agcagctcag cttctcaggg cctcatccct gcaaggaagg 103200

tcaagggctg ggcctgccag aaacacagca ccctccctag ccctggctaa gacagggtgg 103260

gcagacggct gtggacggga catattgctg gggcatttct cactgtcact tctgggtggt 103320

agctctgaca aaaacgcaga ccctgccaaa atccccactg cctcccgcta ggggctggcc 103380

tggaatcctg ctgtcctagg aggctgctga cctccaggat ggctccgtcc ccagttccag 103440

ggcgagagca gatcccaggc aggctgtagg ctgggaggcc acccctgccc ttgccggggt 103500

tgaatgcagg tgcccaaggc aggaaatggc atgagcacag ggatgaccgg gacatgcccc 103560

accagagtgc gccccttcct gctctgcacc ctgcaccccc caggccagcc cacgacgtcc 103620

aacaactggg cctgggtggc agccccaccc agacaggaca gacccagcac cctgaggagg 103680

tcctgccagg gggagctaag agccatgaag gagcaagata tggggccccc gatacaggca 103740

cagatgtcag ctccatccag gaccacccag cccacaccct gagaggaacg tctgtctcca 103800

gcctctgcag gtcgggaggc agctgacccc tgacttggac ccctattcca gacaccagac 103860

agaggcgcag gccccccaga accagggttg agggacgccc cgtcaaagcc agacaaaacc 103920

aaggggtgtt gagcccagca agggaaggcc cccaaacaga ccaggaggtt tctgaaggtg 103980

tctgtgtcac agtggggtat agcagcagct ggtaccacag tgacactcac ccagccagaa 104040

accccattcc aagtcagcgg aagcagagag agcagggagg acacgtttag gatctgagac 104100

tgcacctgac acccaggcca gcagacgtct cccctccagg gcaccccacc ctgtcctgca 104160

tttctgcaag atcaggggcg gcctgagggg gggtctaggg tgaggagatg ggtcccctgt 104220

acaccaagga ggagttaggc aggtcccgag cactctcccc attgaggctg acctgcccag 104280

agagtcctgg gcccacccca cacaccgggg cggaatgtgt gcaggcctcg gtctctgtgg 104340

gtgttccgct agctggggct cacagtgctc accccacacc taaaatgagc cacagcctcc 104400

ggagcccccg caggagaccc cgcccacaag cccagccccc acccaggagg ccccagagct 104460

cagggcgccc cgtcggattc cgaacagccc cgagtcacag cgggtataac cggaaccacc 104520

actgtcagaa tagctacgtc aaaaactgtc cagtggccac tgccggaggc cccgccagag 104580

agggcagcag ccactctgat cccatgtcct gccggctccc atgaccccca gcacgcggag 104640

ccccacagtg tccccactgg atgggaggac aagagctggg gattccggcg ggtcggggca 104700

ggggcttgat cgcatccttc tgccgtggct ccagtgcccc tggctggagt tgacccttct 104760

gacaagtgtc ctcagagaga caggcatcac cggcgcctcc caacatcaac cccaggcagc 104820

acaggcacaa accccacatc cagagccaac tccaggagca gagacacccc aataccctgg 104880

gggaccccga ccctgatgac ttcccactgg aattcgccgt agagtccacc aggaccaaag 104940

accctgcctc tgcctctgtc cctcactcag gacctgctgc cgggcgaggc cttgggagca 105000

gacttgggct taggggacac cagtgtgacc ccgaccttga ccaggacgca gacctttcct 105060

tcctttcctg gggcagcaca gactttgggg tctgggccag gaggaacttc tggcaggtcg 105120

ccaagcacag aggccacagg ctgaggtggc cctggaaaga cctccaggag gtggccactc 105180

cccttcctcc cagctggacc ccatgtcctc cccaagataa gggtgccatc caaggcaggt 105240

gctccttgga gccccattca gactcctccc tggaccccac tgggcctcag tcccagctct 105300

ggggatgaag ccaccacaag cacaccaggc agcccaggcc cagccaccct gcagtgccca 105360

agcacacact ctggagcaga gcagggtgcc tctgggaggg gctgagctcc ccaccccacc 105420

cccacctgca caccccaccc acccctgccc agcggctctg caggagggtc agagccccac 105480

atggggtatg gacttagggt ctcactcacg tggctcccat catgagtgaa ggggcctcaa 105540

gcccaggttc ccacagcagc gcctgtcgca agtggaggca gaggcccgag ggccaccctg 105600

acctggtccc tgaggttcct gcagcccagg ctgccctgct gtccctggga ggcctgggct 105660

ccaccagacc acaggtccag ggcaccgggt gcaggagcca cccacacaca gctcacagga 105720

agaagataag ctccagaccc ccagggccag aacctgcctt cctgctactg cttcctgccc 105780

cagacctggg cgccctcccc cgtccactta cacacaggcc aggaagctgt tcccacacag 105840

aacaacccca aaccaggacc gcctggcact caggtggctg ccatttcctt ctccatttgc 105900

tcccagcgcc tctgtcctcc ctggttcctc cttcggggga acagcctgtg cagccagtcc 105960

ctgcagccca caccctgggg agacccaacc ctgcctgggg cccttccaac cctgctgctc 106020

ttactgccca cccagaaaac tctggggtcc tgtccctgca gtccctaccc tggtctccac 106080

ccagacccct gtgtatcact ccagacaccc ctcccaggca aaccctgcac ctgcaggccc 106140

tgtcctcttc tgtcgctaga gcctcagttt ctcccccctg tgcccacacc ctacctcctc 106200

ctgcccacaa ctctaactct tcttctcctg gagcccctga gccatggcat tgaccctgcc 106260

ctcccaccac ccacagccca tgccctcacc ttcctcctgg ccactccgac cccgccccct 106320

ctcaggccaa gccctggtat ttccaggaca aaggctcacc caagtctttc ccaggcaggc 106380

ctgggctctt gccctcactt cccggttaca cgggagcctc ctgtgcacag aagcagggag 106440

ctcagccctt ccacaggcag aaggcactga aagaaatcgg cctccagcac cttgacacac 106500

gtccgcccgt gtctctcact gcccgcacct gcagggaggc tccgcactcc ctctaaagac 106560

aagggatcca ggcagcagca tcacgggaga atgcagggct cccagacatc ccagtcctct 106620

cacaggcctc tcctgggaag agacctgcag ccaccaccaa acagccacag aggctgctgg 106680

atagtaactg agtcaatgac cgacctggag ggcaggggag cagtgagccg gagcccatac 106740

catagggaca gagaccagcc gctgacatcc cgagctcctc aatggtggcc ccataacaca 106800

cctaggaaac ataacacacc cacagcccca cctggaacag ggcagagact gctgagcccc 106860

cagcaccagc cccaagaaac accaggcaac agtatcagag ggggctcccg agaaagagag 106920

gaggggagat ctccttcacc atcaaatgct tcccttgacc aaaaacaggg tccacgcaac 106980

tcccccagga caaaggagga gccccctata cagcactggg ctcagagtcc tctctgagac 107040

accctgagtt tcagacaaca acccgctgga atgcacagtc tcagcaggag aacagaccaa 107100

agccagcaaa agggacctcg gtgacaccag tagggacagg aggattttgt gggggctcgt 107160

gtcactgtga ggatattgta gtggtggtag ctgctactcc cacagtgaca cagacccatt 107220

cccaaagccc tactgcaaac acacccactc ctggggctga ggggctgggg gagcgtctgg 107280

gaagtagggt ccaggggtgt ctatcaatgt ccaaaatgca ccagactccc cgccaaacac 107340

caccccacca gccagcgagc agggtaaaca gaaaatgaga ggctctggga agcttgcaca 107400

ggccccaagg aaagagcttt ggcgggtgtg caagagggga tgcaggcaga gcctgagcag 107460

ggccttttgc tgtttctgct ttcctgtgca gagagttcca taaactggtg ttcaagatca 107520

gtggctggga atgagcccag gagggcagtc tgtgggaaga gcacagggaa ggaggagcag 107580

ccgctatcct acactgtcat ctttcaaaag tttgccttgt gaccacacta ttgcatcatg 107640

ggatgcttaa gagctgatgt agacacagct aaagagagaa tcagtgagat gaatttgcag 107700

catagatctg aataaactct ccagaatgtg gagcagtaca gaagcaaaca cacagaaagt 107760

gcctgatgca aggacaaagt tcagtgggca ccttcaggca ttgctgctgg gcacagacac 107820

tctgaaaagc cttggcagga tctccctgcg acaaagcaga accctcaggc aatgccagcc 107880

ccagagccct ccctgagagc gtcatgggga aagatgtgca gaacagctga ttatcataga 107940

ctcaaactga gaacagagca aacgtccatc tgaagaacag tcaaataagc aatggtaggt 108000

tcatgcaatg caaacccaga cagccagggg acaacagtag agggctacag gcggctttgc 108060

ggttgagttc atgacaatgc tgagtaattg gagtaacaga ggaaagccca aaaaatactt 108120

ttaatgtgat ttcttctaaa taaaatttac accaggcaaa atgaactgtc ttcttaaggg 108180

ataaactttc ccctggaaaa actacaagga aaattaagaa aacgatgatc acataaacac 108240

agttgtggtt acttctactg gggaaggaag agggtatgag ctgagacaca cagagtcggc 108300

aagtctccaa gcaagcacag aacgaataca ttacagtacc ttgaatacag cagttaaact 108360

tctaaatcgc aagaacagga aaatgcacac agctgtgttt agaaaattct cagtccagca 108420

ctattcataa tagcaaagac attaacccag gttggataaa taaatgatga cacaggcaat 108480

tgcacaatga tacagacata catttagtac atgagacatc gatgatgtat ccccaaagaa 108540

atgactttaa agagaaaagg cctgatgtgt ggtggcactc acctccctgg gatccccgga 108600

caggttgcag gcacactgtg tggcagggca ggctggtaca tgctggcagc tcctggggcc 108660

tgatgtggag caagcgcagg gctgtatacc cccaaggatg gcacagtcag tgaattccag 108720

agagaagcag ctcagccaca ctgcccaggc agagcccgag agggacgccc acgtacaggg 108780

aggcagagcc cagctcctcc acagccacca ccacctgtgc acgggccacc accttgcagg 108840

cacagagtgg gtgctgagag gaggggcagg gacaccaggc agggtgagca cccagagaaa 108900

actgcagaag cctcacacat ccacctcagc ctcccctgac ctggacctca cctggtctgg 108960

acctcacctg gcctgggcct cacctgacct ggacctcacc tggcctgggc ttcacctgac 109020

ctggacctca cctggcctcc ggcctcacct gcacctgctc caggtcttgc tggaacctga 109080

gtagcactga ggctgcagaa gctcatccag ggttggggaa tgactctgga actctcccac 109140

atctgacctt tctgggtgga ggcatctggt ggccctggga atataaaaag ccccagaatg 109200

gtgcctgcgt gatttggggg caatttatga acccgaaagg acatggccat ggggtgggta 109260

gggacatagg gacagatgcc agcctgaggt ggagcctcag gacacagttg gacgcggaca 109320

ctatccacat aagcgaggga cagacccgag tgttcctgca gtagacctga gagcgctggg 109380

cccacagcct cccctcggtg ccctgctgcc tcctcaggtc agccctggac atcccgggtt 109440

tccccaggcc agatggtagg tttgaagtga ggtctgtgtc actgtggtat tatgattacg 109500

tttgggggag ttatcgttat acccacagca tcacacggtc catcagaaac ccatgccaca 109560

gccctccccg caggggaccg ccgcgtgcca tgttacgatt ttgatcgagg acacagcgcc 109620

atgggtatgg tggctaccac agcagtgcag cccatgaccc aaacacacag ggcagcaggc 109680

acaatggaca ggcctgtgag tgaccatgct gggctccagc ccgccagccc cggagaccat 109740

gaaacagatg gccaaggtca ccccacagtt cagccagaca tggctccgtg gggtctgcat 109800

cgctgctgcc ctctaacacc agcccagatg gggacaaggc caaccccaca ttaccatctc 109860

ctgctgtcca cccagtggtc ccagaagccc ctccctcatg gctgagccac atgtgtgaac 109920

cctgagagca ccccatgtca gagtaggggc agcagaaggg cggggctggc cctgtgcact 109980

gtccctgcac ccatggtccc tcgcctgcct ggccctgaca cctgagcctc ttctgagtca 110040

tttctaagat agaagacatt cccggggaca gccggagctg ggcgtcgctc atcccgcccg 110100

gccgtcctga gtcctgcttg tttccagacc tcaccaggga agccaacaga ggactcacct 110160

cacacagtca gagacaaaga accttccaga aatccctgtc tcactcccca gtgggcacct 110220

tcttccagga cattcctcgg tcgcatcaca gcaggcaccc acatctggat caggacggcc 110280

cccagaacac aagatggccc atggggacag ccccacaacc caggccttcc cagaccccta 110340

aaaggcgtcc caccccctgc acctgcccca gggctaaaaa tccaggaggc ttgactcccg 110400

cataccctcc agccagacat cacctcagcc ccctcctgga ggggacagga gcccgggagg 110460

gtgagtcaga cccacctgcc ctcgatggca ggcggggaag attcagaaag gcctgagatc 110520

cccaggacgc agcaccactg tcaatggggg ccccagacgc ctggaccagg gcctgcgtgg 110580

gaaaggccgc tgggcacact caggggcttt ttgtgaaggc ccctcctact gtgtgactac 110640

ggtgactacc acagtgatga aactagcagc aaaaactggc cggacaccca gggaccatgc 110700

acacttctca gcttggagct ctccaggacc agaagagtca ggtctgaggg tttgtagcca 110760

gaccctcggc ctctagggac accctggcca tcacagcgga tgggctggtg ccccacatgc 110820

catctgctcc aaacaggggc ttcagagggc tctgaggtga cttcactcat gaccacaggt 110880

gccctggccc cttccccgcc agctacaccg aaccctgtcc caacagctgc cccagttcca 110940

acagccaatt cctggggccc agaattgctg tagacaccag cctcgttcca gcacctcctg 111000

ccaattgcct ggattcacat cctggctgga atcaagaggg cagcatccgc caggctccca 111060

acaggcagga ctcccgcaca ccctcctctg agaggccgct gtgttccgca gggccaggcc 111120

ctggacagtt cccctcacct gccactagag aaacacctgc cattgtcgtc cccacctgga 111180

aaagaccact cgtggagccc ccagccccag gtacagctgt agagagactc cccgagggat 111240

ctaagaagga gccatgcgca gttctgccgg gaccctcggc caggccgaca ggagtggaca 111300

ctggagctgg gcccacactg ggccacatag gagctcacca gtgagggcag gagagcacat 111360

gccggggagc acccagcctc ctgctgacca gaggcccgtc ccagagccca ggaggctgca 111420

gaggcctctc cagggggaca ctgtgcatgt ctggtccctg agcagccccc cacgtcccca 111480

gtcctggggg cccctggcac agctgtctgg accctccctg ttccctggga agctcctcct 111540

gacagccccg cctccagttc caggtgtggt tattgtcagg gggtgtcaga ctgtggtgga 111600

tacagctatg gttaccacag tggtgctgcc catagcagca accaggccaa gtagacaggc 111660

ccctgctgtg cagccccagg cctccacttc acctgcttct cctggggctc tcaaggtcac 111720

tgttgtctgt actctgccct ctgtggggag ggttccctca gtgggaggtc tgttctcaac 111780

atcccagggc ctcatgtctg cacggaaggc caatggatgg gcaacctcac atgccgcggc 111840

taagataggg tgggcagcct ggcgggggac agtacatact gctggggtgt ctgtcactgt 111900

gcctagtggg gcactggctc ccaaacaacg cagtcctcgc caaaatcccc acagcctccc 111960

ctgctagggg ctggcctgat ctcctgcagt cctaggaggc tgctgacctc cagaatgtct 112020

ccgtccccag ttccagggcg agagcagatc ccaggccggc tgcagactgg gaggccaccc 112080

cctccttccc agggttcact ggaggtgacc aaggtaggaa atggccttaa cacagggatg 112140

actgcgccat cccccaacag agtcagcccc ctcctgctct gtaccccgca ccccccaggc 112200

cagtccacga aaaccagggc cccacatcag agtcactgcc tggcccggcc ctggggcgga 112260

cccctcagcc cccaccctgt ctagaggact tggggggaca ggacacaggc cctctcctta 112320

tggttccccc acctgcctcc ggccgggacc cttggggtgt ggacagaaag gacacctgcc 112380

taattggccc ccaggaaccc agaacttctc tccagggacc ccagcccgag caccccctta 112440

cccaggaccc agccctgccc ctcctcccct ctgctctcct ctcatcaccc catgggaatc 112500

cggtatcccc aggaagccat caggaagggc tgaaggagga agcggggccg tgcaccaccg 112560

ggcaggaggc tccgtcttcg tgaacccagg gaagtgccag cctcctagag ggtatggtcc 112620

accctgcctg gggctcccac cgtggcaggc tgcggggaag gaccagggac ggtgtggggg 112680

agggctcagg gccctgcggg tgctcctcca tcttcggtga gcctccccct tcacccaccg 112740

tcccgcccac ctcctctcca ccctggctgc acgtcttcca caccatcctg agtcctacct 112800

acaccagagc cagcaaagcc agtgcagaca aaggctgggg tgcagggggg ctgccagggc 112860

agcttcgggg agggaaggat ggagggaggg gaggtcagtg aagaggcccc cttcccctgg 112920

gtccaggatc ctcctctggg acccccggat cccatcccct cctggctctg ggaggagaag 112980

caggatggga gaatctgtgc gggaccctct cacagtggaa tatccccaca gcggctcagg 113040

ccagacccaa aagcccctca gtgagccctc cactgcagtc ctgggcctgg gtagcagccc 113100

ctcccacaga ggacagaccc agcaccccga agaagtcctg ccagggggag ctcagagcca 113160

tgaaagagca ggatatgggg tccccgatac aggcacagac ctcagctcca tccaggccca 113220

ccgggaccca ccatgggagg aacacctgtc tccgggttgt gaggtagctg gcctctgtct 113280

cggaccccac tccagacacc agacagaggg gcaggccccc caaaaccagg gttgagggat 113340

gatccgtcaa ggcagacaag accaaggggc actgacccca gcaagggaag gctcccaaac 113400

agacgaggag gtttctgaag ctgtctgtat cacagtgggg tatagcagtg gctggtacca 113460

cagtgacact cgccaggcca gaaaccccgt cccaagtcag cggaagcaga gagagcaggg 113520

aggacacgtt taggatctga ggccgcacct gacacccagg gcagcagacg tctcccctcc 113580

agggcaccct ccaccgtcct gcgtttcttc aagaataggg gcggcctgag ggggtccagg 113640

gccaggcgat aggtcccctc taccccaagg aggagccagg caggacccga gcaccgtccc 113700

cattgaggct gacctgccca gacgggcctg ggcccacccc acacaccggg gcggaatgtg 113760

tgcaggcccc agtctctgtg ggtgttccgc tagctggggc ccccagtgct caccccacac 113820

ctaaagcgag ccccagcctc cagagccccc taagcattcc ccgcccagca gcccagcccc 113880

tgcccccacc caggaggccc cagagctcag ggcgcctggt cggattctga acagccccga 113940

gtcacagtgg gtataactgg aacgaccacc gtgagaaaaa ctgtgtccaa aactgactcc 114000

tggcagcagt cggaggcccc gccagagagg ggagcagccg gcctgaaccc atgtcctgcc 114060

ggttcccatg acccccagca cccagagccc cacggtgtcc ccgttggata atgaggacaa 114120

gggctggggg ctccggtggt ttgcggcagg gacttgatca catccttctg ctgtggcccc 114180

attgcctctg gctggagttg acccttctga caagtgtcct cagaaagaca gggatcaccg 114240

gcacctccca atatcaaccc caggcagcac agacacaaac cccacatcca gagccaactc 114300

caggagcaga gacaccccaa cactctgggg gaccccaacc gtgataactc cccactggaa 114360

tccgccccag agtctaccag gaccaaaggc cctgccctgt ctctgtccct cactcagggc 114420

ctcctgcagg gcgagcgctt gggagcagac tcggtcttag gggacaccac tgtgggcccc 114480

aactttgatg aggccactga cccttccttc ctttcctggg gcagcacaga ctttggggtc 114540

tgggcaggga agaactactg gctggtggcc aatcacagag cccccaggcc gaggtggccc 114600

caagaaggcc ctcaggaggt ggccactcca cttcctccca gctggacccc aggtcctccc 114660

caagataggg gtgccatcca aggcaggtcc tccatggagc ccccttcaga ctcctcccgg 114720

gaccccactg gacctcagtc cctgctctgg gaatgcagcc accacaagca caccaggaag 114780

cccaggccca gccaccctgc agtgggcaag cccacactct ggagcagagc agggtgcgtc 114840

tgggaggggc taacctcccc accccccacc ccccatctgc acacagccac ctaccactgc 114900

ccagaccctc tgcaggaggg ccaagccacc atggggtatg gacttagggt ctcactcacg 114960

tgcctcccct cctgggagaa ggggcctcat gcccagatcc ctgcagcact agacacagct 115020

ggaggcagtg gccccagggc caccctgacc tggcatctaa ggctgctcca gcccagacag 115080

cactgccgtt cctgggaagc ctgggctcca ccagaccaca ggtccagggc acagcccaca 115140

ggagccaccc acacacagct cacaggaaga agataagctc cagaccccag ggcgggacct 115200

gccttcctgc caccacttac acacaggcca gggagctgtt cccacacaga tcaaccccaa 115260

accgggactg cctggcacta gggtcactgc catttccctc tccattccct cccagtgcct 115320

ctgtgctccc tccttctggg gaacaccctg tgcagcccct ccctgcagcc cacacgctgg 115380

ggagacccca ccctgcctcg ggccttttct acctgctgca cttgccgccc acccaaacaa 115440

ccctgggtac gtgaccctgc agtcctcacc ctgatctgca accagacccc tgtccctccc 115500

tctaaacacc cctcccaggc caactctgca cctgcaggcc ctccgctctt ctgccacaag 115560

agcctcaggt tttcctacct gtgcccaccc cctaacccct cctgcccaca acttgagttc 115620

ttcctctcct ggagcccttg agccatggca ctgaccctac actcccaccc acacactgcc 115680

catgccatca ccttcctcct ggacactctg accccgctcc cctccctctc agacccggcc 115740

ctggtatttc caggacaaag gctcacccaa gtcttcccca tgcaggccct tgccctcact 115800

gcctggttac acgggagcct cctgtgcgca gaagcaggga gctcagctct tccacaggca 115860

gaaggcactg aaagaaatca gcctccagtg ccttgacaca cgtccgcctg tgtctctcac 115920

tgcctgcacc tgcagggagg ctccgcactc cctctaaaga tgagggatcc aggcagcaac 115980

atcacgggag aatgcagggc tcccagacag cccagccctc tcgcaggcct ctcctgggaa 116040

gagacctgca gccaccactg aacagccacg gaggtcgctg gatagtaacc gagtcagtga 116100

ccgacctgga gggcagggga gcagtgaacc ggagcccata ccatagggac agagaccagc 116160

cgctaacatc ccgagcccct cactggcggc cccagaacac cccgtggaaa gagaacagac 116220

ccacagtccc acctggaaca gggcagacac tgctgagccc ccagcaccag ccccaagaaa 116280

cactaggcaa cagcatcaga gggggctcct gagaaagaga ggaggggagg tctccttcac 116340

catcaaatgc ttcccttgac caaaaacagg gtccacgcaa ctcccccagg acaaaggagg 116400

agccccctgt acagcactgg gctcagagtc ctctctgaga caggctcagt ttcagacaac 116460

aacccgctgg aatgcacagt ctcagcagga gagccaggcc agagccagca agaggagact 116520

cggtgacacc agtctcctgt agggacagga ggattttgtg ggggttcgtg tcactgtgag 116580

catattgtgg tggtgactgc tattcccaca gtgacacaac cccattccta aagccctact 116640

gcaaacgcac ccactcctgg gactgagggg ctgggggagc gtctgggaag tatggcctag 116700

gggtgtccat caatgcccaa aatgcaccag actctcccca agacatcacc ccaccagcca 116760

gtgagcagag taaacagaaa atgagaagca gctgggaagc ttgcacaggc cccaaggaaa 116820

gagctttggc aggtgtgcaa gaggggatgt gggcagagcc tcagcagggc cttttgctgt 116880

ttctgctttc ctgtgcagag agttccataa actggtattc aagatcaatg gctgggagtg 116940

agcccaggag gacagtgtgg gaagagcaca gggaaggagg agcagccgct atcctacact 117000

gtcatctttt gaaagtttgc cctgtgccca caatgctgca tcatgggatg cttaacagct 117060

gatgtagaca cagctaaaga gagaatcagt gaaatgcatt tgcagcacag atctgaataa 117120

atcctccaga atgtggagca gcacagaagc aagcacacag aaagtgcctg atgccaaggc 117180

aaagttcagt gggcaccttc aggcattgct gctgggcaca gacactctga aaagcactgg 117240

caggaactgc ctgtgacaaa gcagaaccct caggcaatgc cagccctaga gcccttcctg 117300

agaacctcat gggcaaagat gtgcagaaca gctgtttgtc atagccccaa actatggggc 117360

tggacaaagc aaacgtccat ctgaaggaga acagacaaat aaacgatggc aggttcatga 117420

aatgcaaact aggacagcca gaggacaaca gtagagagct acaggcggct ttgcggttga 117480

gttcatgaca atgctgagta attggagtaa cagaggaaag cccaaaaaat acttttaatg 117540

tgatttcttc taaataaaat ttacacccgg caaaatgaac tatcttctta agggataaac 117600

tttcccctgg aaaaactata aggaaaatca agaaaacgat gatcacataa acacagtggt 117660

ggttacttct actggggaag gaagagggta tgagctgaga cacacagagt cggcaagtct 117720

cctaacaaga acagaacaaa tacattacag taccttgaaa acagcagtta aacttctaaa 117780

tcgcaagaag aggaaaatgc acacacctgt gtttagaaaa ttctcagtcc agcactgttc 117840

ataatagcaa agacattaac ccaggttgga taaataagcg atgacacagg caattgcaca 117900

atgatacaga catacattca gtatatgaga catcgatgat gtatccccaa agaaatgact 117960

ttaaagagaa aaggcctgat gtgtggtggc aatcacctcc ctgggcatcc ccggacaggc 118020

tgcaggctca ctgtgtggca gggcaggcag gcacctgctg gcagctcctg gggcctgatg 118080

tggagcaggc acagagctgt atatccccaa ggaaggtaca gtcagtgcat tccagagaga 118140

agcaactcag ccacactccc tggccagaac ccaagatgca cacccatgca cagggaggca 118200

gagcccagca cctccgcagc caccaccacc tgcgcacggg ccaccacctt gcaggcacag 118260

agtgggtgct gagaggaggg gcagggacac caggcagggt gagcacccag agaaaactgc 118320

agaagcctca cacatccacc tcagcctccc ctgacctgga cctcacctgg cctgggcctc 118380

acctgacctg gacctcacct ggcctgggct tcacctggcc tgggcttcac ctgacctgga 118440

cctcacctgg cctcgggcct cacctggcct gggcttcacc tggcctgggc ttcacctgac 118500

ctggacctca cctggcctgg gcctcacctg acctggacct cacctggcct gggcttcacc 118560

tggcctgggc ttcacctggc ctgggcttca cctgacctgg acctcacctg gcctgggctt 118620

cacctgacct ggacctcacc tggcctcggg cctcacctgc acctgctcca ggtcttgctg 118680

gagcctgagt agcactgagg ctgtagggac tcatccaggg ttggggaatg actctgcaac 118740

tctcccacat ctgacctttc tgggtggagg cacctggtgg cccagggaat ataaaaagcc 118800

ccagaatgat gcctgtgtga tttgggggca atttatgaac ccgaaaggac atggccatgg 118860

ggtgggtagg gacagtaggg acagatgtca gcctgaggtg aagcctcagg acacaggtgg 118920

gcatggacag tgtccaccta agcgagggac agacccgagt gtccctgcag tagacctgag 118980

agcgctgggc ccacagcctc ccctcggggc cctgctgcct cctcaggtca gccctggaca 119040

tcccgggttt ccccaggcct ggcggtaggt ttgaagtgag gtctgtgtca ctgtggtatt 119100

actatgatag tagtggttat tactaccaca gtgtcacaga gtccatcaaa aactcatgcc 119160

tgggagcctc ccaccacagc cctccctgcg ggggaccgct gcatgccgtg ttaggatttt 119220

gatcgaggac acggcgccat gggtatggtg gctaccacag cagtgcagcc catgacccaa 119280

acacacgggg cagcagaaac aatggacagg cccacaagtg accatgatgg gctccagccc 119340

accagcccca gagaccatga aacagatggc caaggtcacc ctacaggtca tccagatctg 119400

gctccaaggg gtctgcatcg ctgctgccct cccaacgcca aaccagatgg agacagggcc 119460

ggccccatag caccatctgc tgccgtccac ccagcagtcc cggaagcccc tccctgaacg 119520

ctgggccacg tgtgtgaacc ctgcgagccc cccatgtcag agtaggggca gcaggagggc 119580

ggggctggcc ctgtgcactg tcactgcccc tgtggtccct ggcctgcctg gccctgacac 119640

ctgagcctct cctgggtcat ttccaagaca ttcccaggga cagccggagc tgggagtcgc 119700

tcatcctgcc tggctgtcct gagtcctgct catttccaga cctcaccagg gaagccaaca 119760

gaggactcac ctcacacagt cagagacaac gaaccttcca gaaatccctg tttctctccc 119820

cagtgagaga aaccctcttc cagggtttct cttctctccc accctcttcc aggacagtcc 119880

tcagcagcat cacagcggga acgcacatct ggatcaggac ggcccccaga acacgcgatg 119940

gcccatgggg acagcccagc ccttcccaga cccctaaaag gtatccccac cttgcacctg 120000

ccccagggct caaactccag gaggcctgac tcctgcacac cctcctgcca gatatcacct 120060

cagccccctc ctggagggga caggagcccg ggagggtgag tcagacccac ctgccctcaa 120120

tggcaggcgg ggaagattca gaaaggcctg agatccccag gacgcagcac cactgtcaat 120180

gggggcccca gacgcctgga ccagggcctg tgtgggaaag gcctctggcc acactcaggg 120240

gctttttgtg aagggccctc ctgctgtgtg actacggtgg taactcccac agtgatgaaa 120300

ccagcagcaa aaactgaccg gactcgcagg gtttatgcac acttctcggc tcggagctct 120360

ccaggagcac aagagccagg cccgagggtt tgtgcccaga ccctcggcct ctagggacac 120420

ccgggccatc ttagccgatg ggctgatgcc ctgcacaccg tgtgctgcca aacaggggct 120480

tcagagggct ctgaggtgac ttcactcatg accacaggtg ccctggtccc ttcactgcca 120540

gctgcaccag accctgttcc gagagatgcc ccagttccaa aagccaattc ctggggccgg 120600

gaattactgt agacaccagc ctcattccag tacctcctgc caattgcctg gattcccatc 120660

ctggctggaa tcaagagggc agcatccgcc aggctcccaa caggcaggac tcccacacac 120720

cctcctctga gaggccgctg tgttccgcag ggccaggccg cagacagttc ccctcacctg 120780

cccatgtaga aacacctgcc attgtcgtcc ccacctggca aagaccactt gtggagcccc 120840

cagccccagg tacagctgta gagagagtcc tcgaggcccc taagaaggag ccatgcccag 120900

ttctgccggg accctcggcc aggccgacag gagtggacgc tggagctggg cccacactgg 120960

gccacatagg agctcaccag tgagggcagg agagcacatg ccggggagca cccagcctcc 121020

tgctgaccag agacccgtcc cagagcccag gaggctgcag aggcctctcc agggggacac 121080

agtgcatgtc tggtccctga gcagccccca ggctctctag cactgggggc ccctggcaca 121140

gctgtctgga ccctccctgt tccctgggaa gctcctcctg acagccccgc ctccagttcc 121200

aggtgtggtt attgtcaggg ggtgccaggc cgtggtagag atggctacaa ttaccacagt 121260

ggtgccgccc atagcagcaa ccaggccaag tagacagacc cctgccacgc agccccaggc 121320

ctccagctca cctgcttctc ctggggctct caaggctgct gtctgccctc tggccctctg 121380

tggggagggt tccctcagtg ggaggtctgt gctccagggc agggatgact gagatagaaa 121440

tcaaaggctg gcagggaaag gcagcttccc gccctgagag gtgcaggcag caccacagag 121500

ccatggagtc acagagccac ggagccccca gtgtgggcgt gtgagggtgc tgggctcccg 121560

gcaggcccag ccctgatggg gaagcctgcc ccgtcccaca gcccaggtcc ccaggggcag 121620

caggcacaga agctgccaag ctgtgctcta cgatcctcat ccctccagca gcatccactc 121680

cacagtgggg aaactgagcc ttggagaacc acccagcccc ctggaaacaa ggcggggagc 121740

ccagacagtg ggcccagagc actgtgtgta tcctggcact aggtgcaggg accacccgga 121800

gatccccatc actgagtggc cagcctgcag aaggacccaa ccccaaccag gccgcttgat 121860

taagctccat ccccctgtcc tgggaacctc ttcccagcgc caccaacagc tcggcttccc 121920

aggccctcat ccctccaagg aaggccaaag gctgggcctg ccaggggcac agtaccctcc 121980

cttgccctgg ctaagacagg gtgggcagac ggctgcagat aggacatatt gctggggcat 122040

cttgctctgt gactactggg tactggctct caacgcagac cctaccaaaa tccccactgc 122100

ctcccctgct aggggctggc ctggtctcct cctgctgtcc taggaggctg ctgacctcca 122160

ggatggcttc tgtccccagt tctagggcca gagcagatcc caggcaggct gtaggctggg 122220

aggccacccc tgtccttgcc gaggttcagt gcaggcaccc aggacaggaa atggcctgaa 122280

cacagggatg actgtgccat gccctaccta agtccgcccc tttctactct gcaaccccca 122340

ctccccaggt cagcccatga cgaccaacaa cccaacacca gagtcactgc ctggccctgc 122400

cctggggagg acccctcagc ccccaccctg tctagaggag ttggggggac aggacacagg 122460

ctctctcctt atggttcccc cacctggctc ctgccgggac ccttggggtg tggacagaaa 122520

ggacgcctgc ctaattggcc cccaggaacc cagaacttct ctccagggac cccagcccga 122580

gcaccccctt acccaggacc cagccctgcc cctcctcccc tctgctctcc tctcatcact 122640

ccatgggaat ccagaatccc caggaagcca tcaggaaggg ctgaaggagg aagcggggcc 122700

gctgcaccac cgggcaggag gctccgtctt cgtgaaccca gggaagtgcc agcctcctag 122760

agggtatggt ccaccctgcc tggggctccc accgtggcag gctgcgggga aggaccaggg 122820

acggtgtggg ggagggctca gggccctgca ggtgctccat cttggatgag cccatccctc 122880

tcacccaccg acccgcccac ctcctctcca ccctggccac acgtcgtcca caccatcctg 122940

agtcccacct acaccagagc cagcagagcc agtgcagaca gaggctgggg tgcagggggg 123000

ccgccagggc agctttgggg agggaggaat ggaggaaggg gaggtcagtg aagaggcccc 123060

cctcccctgg gtctaggatc cacctttggg acccccggat cccatcccct ccaggctctg 123120

ggaggagaag caggatggga gattctgtgc aggaccctct cacagtggaa tacctccaca 123180

gcggctcagg ccagatacaa aagcccctca gtgagccctc cactgcagtg cagggcctgg 123240

gggcagcccc tcccacagag gacagaccca gcaccccgaa gaagtcctgc cagggggagc 123300

tcagagccat gaaggagcaa gatatgggga ccccaatact ggcacagacc tcagctccat 123360

ccaggcccac caggacccac catgggtgga acacctgtct ccggcccctg ctggctgtga 123420

ggcagctggc ctctgtctcg gacccccatt ccagacacca gacagaggga caggcccccc 123480

agaaccagtg ttgagggaca cccctgtcca gggcagccaa gtccaagagg cgcgctgagc 123540

ccagcaaggg aaggccccca aacaaaccag gaggtttctg aagctgtctg tgtcacagtc 123600

gggtatagca gcggctacca caatgacact gggcaggaca gaaaccccat cccaagtcag 123660

ccgaaggcag agagagcagg caggacacat ttaggatctg aggccacacc tgacactcaa 123720

gccaacagat gtctcccctc cagggcgccc tgccctgttc agtgttcctg agaaaacagg 123780

ggcagcctga ggggatccag ggccaggaga tgggtcccct ctaccccgag gaggagccag 123840

gcgggaatcc cagccccctc cccattgagg ccatcctgcc cagaggggcc cggacccacc 123900

ccacacaccc aggcagaatg tgtgcaggcc tcaggctctg tgggtgccgc tagctggggc 123960

tgccagtcct caccccacac ctaaggtgag ccacagccgc cagagcctcc acaggagacc 124020

ccacccagca gcccagcccc tacccaggag gccccagagc tcagggcgcc tgggtggatt 124080

ctgaacagcc ccgagtcacg gtgggtatag tgggagctac taccactgtg agaaaagcta 124140

tgtccaaaac tgtctcccgg ccactgctgg aggcccagcc agagaaggga ccagccgccc 124200

gaacatacga ccttcccaga cctcatgacc cccagcactt ggagctccac agtgtcccca 124260

ttggatggtg aggatggggg ccggggccat ctgcacctcc caacatcacc cccaggcagc 124320

acaggcacaa accccaaatc cagagccgac accaggaaca cagacacccc aataccctgg 124380

gggaccctgg ccctggtgac ttcccactgg gatccacccc cgtgtccacc tggatcaaag 124440

accccaccgc tgtctctgtc cctcactcag ggcctgctga ggggcgggtg ctttggagca 124500

gactcaggtt taggggccac cattgtgggg cccaacctcg accaggacac agatttttct 124560

ttcctgccct ggggcaacac agactttggg gtctgtgcag ggaggacctt ctggaaagtc 124620

accaagcaca gagccctgac tgaggtggtc tcaggaagac ccccaggagg gggcttgtgc 124680

cccttcctct catgtggacc ccatgccccc caagataggg gcatcatgca gggcaggtcc 124740

tccatgcagc caccactagg caactccctg gcgccggtcc ccactgcgcc tccatcccgg 124800

ctctggggat gcagccacca tggccacacc aggcagcccg ggtccagcaa ccctgcagtg 124860

cccaagccct tggcaggatt cccagaggct ggagcccacc cctcctcatc cccccacacc 124920

tgcacacaca cacctacccc ctgcccagtc cccctccagg agggttggag ccgcccatag 124980

ggtgggggct ccaggtctca ctcactcgct tcccttcctg ggcaaaggag cctcgtgccc 125040

cggtcccccc tgacggcgct gggcacaggt gtgggtactg ggccccaggg ctcctccagc 125100

cccagctgcc ctgctctccc tgggaggcct gggcaccacc agaccaccag tccagggcac 125160

agccccaggg agccgcccac tgccagctca caggaagaag ataagcttca gaccctcagg 125220

gccgggagct gccttcctgc caccccttcc tgccccagac ctccatgccc tcccccaacc 125280

acttacacac aagccaggga gctgtttcca cacagttcaa ccccaaacca ggacggcctg 125340

gcactcgggt cactgccatt tctgtctgca ttcgctccca gcgcccctgt gttccctccc 125400

tcctccctcc ttcctttctt cctgcattgg gttcatgccg cagagtgcca ggtgcaggtc 125460

agccctgagc ttggggtcac ctcctcactg aaggcagcct cagggtgccc aggggcaggc 125520

agggtggggg tgaggcttcc agctccaacc gctccactag ccgagactaa ggaagtgaga 125580

ggcagccaga aatccagacc attccatagc aaatggattt cattaaagtt accagacttc 125640

agtgtaagta acatgagccc catgcacaac aatcccttat gaaggggaag tcagtgtcgc 125700

ctcggatttc ttgaaaaaca caaaaactta tcaatgcctg taaaagtctg ttggaaagaa 125760

aatatgattc aagaatgtta tgcccaacaa agctggcata ttttctaccc ggacacactc 125820

agggaatgtg gtcccttgag tgcttctctc actgcgtaaa tcctacgtgg tgtttaagca 125880

tattcataaa tgtgtatgtc tatttttatg tgtaagatgg ttcattttta ttttatttat 125940

tcaatatgta caataaagaa tattgacaaa taggctggac atggtggctc ccacctgtaa 126000

tcccagccct ttgggaggcc gaggcgggca gatcacctga ggtctggagt tcgagaccag 126060

cctggccaac atgatgaaaa cccatctcta ctaaaaatac aaagattagc caggcatggt 126120

ggtgcatgcc tgtaatccca gccactcagg aggctgagac aggagaaatg cgtgaacccg 126180

gaaggcggag gttgcagtga gccgagatca caccactgca ctccagcctg gcgacagagc 126240

aagattccat ctcaaaaaaa aaaaaagaca aagaaatttg tttttttgaa taaagacaaa 126300

tttcatcaca cgaagataaa gatgcaaagc tccagacagg aaggcacgga cagcacagtg 126360

aagcccggag cgggcgctgg ggggccaggg gcatggcggg ggtgccagcg tctctcggtt 126420

cctaccatgg ccactccagc ctgtgttctc acgaggatgg ctgtgcaatg ctaggagcgt 126480

gttcgaagct ctagggcaac cactggaagt gaggctgagg agcagagccc agaggcccgt 126540

ggagctgatg aaaagaaagc tggagaaagt gtttgctgcc tcccaacatg gtaagaaaag 126600

atagaaagag agagcacacg gcaaagggag cttgctgagg gactctttac aatggcttgc 126660

acagagctca gggggtctgg gaggctaggg ccctgcgcag ggcagtcacc ccagcctgct 126720

gaccaaggtt tgctgcaggc agctctgggg gtggttgagg cgcggtccct ggagccaccc 126780

ctcaagggaa cgaggcagca gagtgggcca aggcccaggt cggctgcaag gctgcccagg 126840

acttggggtc cttacatcag cagccactga tgcagctggc ccagagagag gcgccgagca 126900

ggttgcctcc aggggacaaa ccaggtcgga gagggtgagg cagtggatgg agccacaaca 126960

accccgggca cgggtgacac gcacgttcat gcacatctga cccttcctcc ctcaccaaac 127020

aggtccccct gccttcccca tggttgcgaa aaagcaaaat gtagacgttt tttctttttt 127080

aattcatgtt ttaattgaca aatgaagccg tatatattta ttgtgtacaa catgatgctt 127140

taaaatatgt atacatcgtg gaacagcaac gttgagctaa tttaacacgc attacttcac 127200

atacttgtca tcttttgtgg cgagaatgct taaaatccac tctcttagta ttttttaaga 127260

atgcaataca ttgttgtcaa ctgtggtcac cgtcatgcat agccaagctc ccgacctcac 127320

cctcctgcca gctcaggctg tgcatccttt caccagcatc ccccaccccg gcccctggcc 127380

ctggtaacta ccactctata ctctacgtat gagttcagct ttttaagatt ccacagatga 127440

atgagatcat acagtatttg ctttctatgc ctggcttatt ttagttaaca cactgtcctc 127500

cagatccatc cgttgttgca aatgacaggg tttcattctt tttaaagtct aaagagtatt 127560

ccattgtgtc aatggacctc atttgcttta tccatgcatc aactatggac atttaggttg 127620

attccatttc ttagctgttg tggatggtgc tgcagtaaac atggggctgc agatgtctct 127680

tcaacatact gacatcatgt cctttggata aatacccagt agtgggatcg ctggatcaca 127740

atgtacagtt ttttttttaa tggaaacttt cattttttgg tgaaattagg aaaacagata 127800

aaacccacag aatccaaaat atatgtgaag atgccaaaaa cagttgacat tgggcagagg 127860

tcacatggaa ggaagtgaat acatgacggg gtgtgagggc ccagaggcag ctgaaatacg 127920

ctttctaaac acaaggacct cttctgagag ggcagaagtt ttatcctgca catgcaatga 127980

ccagcacagc taaaatacac tttctaaaca tgaggacctc ttctgagagg gcagctttat 128040

cctgcaaatg caatgaccag cacaggaccc agaataaaga gagttgccag cggacgcctg 128100

gtgtccatgt gtccaggtga gttcgagatg cggacggcgc tggccagcca gtcacaccct 128160

aagtcaatct gctgcatgca tttgtccttg ccacagcaga aaacgagaaa gcctttgggc 128220

tgcaaagctt cacaggctcc tcttctcccg actccatgga aacagctaca aagagcaggc 128280

ccagtagagc ttaattcatg aaaatgagta ataaacttga actggaacag tatcgacttt 128340

ttagaaacgg cagcaaagtg tataaaaaat attcaccaga acaatatttc caaacgatga 128400

gatgagaatt tcagccaagt aatcctccat ggatagaaaa taatgaaggg attggattta 128460

tgaaggaaaa tcatggagct caaatacaag aaaagagaat caaaaatgaa caggaggaga 128520

taaaatatgg tttggccaaa gttacaaaat aaatttttta aaaacccttc atcatggcaa 128580

gtagaaagag cgagaggaaa aacagatccc gtggaagaca caaataggac atggggagaa 128640

aaatgaatga gatgaaacag agcagaaata aaattttacg gaactaaaga caagtgatct 128700

gaacctgcct ggggcctggg ggacctcgcc accctgaagg gaaagaacat gcctggctgg 128760

ctttgccacc tgctcattgc agagccccac agcttgcaac aaacataggc ggtagccagg 128820

gagtggttac agcaggcctt gagcaagacc cagtgttgtg ctgacttcag gtctgaccca 128880

gcactgtcat agtggtggtg tccatagtgg tagtgggggt gcttgtgtca ctccaccccc 128940

atctccagga ggctcagaac agacagagag agactccatt tgtttgggag aaagtaaggg 129000

atgagaacaa gagtctctgc ctggtaatcc agagaattat tctagatctt ggccaagatt 129060

atcaaagcag tacctctatg agtcttttgg gcttggagtc cccctaaagc agatatagct 129120

aagatcacaa cacccaagtc cttttgaata tgtgggaaga cttcccaagg acaggagcaa 129180

acaaacaagc ccagactgca aaaaaacaag ccgagactgc aataaacacc tcactcttca 129240

atgcccaggc actgaagaac atctcctagc agcaacacca tccaggaaaa catggcctca 129300

accagtgaac taaataaggc accagggacc agtctcggag aaatagaggt atgttatctt 129360

tcagagaatt caaagtagct ttgttgagga aactcaaaga aattcaagat aacacagtga 129420

aggaattcag aatcctatcc gataaattta acagagattg aagcaattaa aaagaattaa 129480

gcagaaatta tggagctgaa aaatgcaatt ggcatactga aaaatgcatc agagtatttt 129540

catagcctca tatatcaagt agaagaaaga attagtgagc ttgaaaacag gctatttgga 129600

aaagcacgat aaaaggagac aaaagagaaa agaataaata acaatgaagc atatctacag 129660

gatctagaaa atagcctcaa aaggccaaat ctaagaatta ttagccttaa agaggaggta 129720

gagaaagagg gatggagagt ttattcaaag ggataataac agaaaacttc ccaaacctag 129780

agaaagatat caatatccaa atgcaagaag gatgtagtac accaaggaga tttaatgcaa 129840

agaagactac ctcaaggcat tcaatactca aactcccata tgacaaggac tttaaaaaga 129900

tcctaaaagc agcaaaagaa aagaaatgaa taaaatacta tggagctcca atatgtctgg 129960

cagcagactt ttcagtgaag actttatatg ccaggagaga gtgtcataat ggatttaaag 130020

tgctgaagga aaaaactttt accctcgaac agtatagctg gtgaaattat ccttcaaaca 130080

tgaaggagaa ataatttgtt tccagacaaa tgttgaggga tttcatgaac accagacctg 130140

tcttttaaga aatgctaaag ggagtacttc aatcagaaag aaacacgtta gtgaacaata 130200

agaaatcatc tgaaggcaca aaactcaccg gtaatagtaa gtacacagaa aaacacagaa 130260

tattataaca ctgtaactgt ggtgtgtaaa ctccttttgt ttgtttgttt gtttgtttgt 130320

ttgtttttgt ttttagacgg agttttgctc cagcccaggc tggagtgcaa tggcacaatc 130380

tcagctcact gcaacttcca cctcccgggt tcaagcaatt ctcctgcctc agcctcccaa 130440

gtagctggga ttacaggcat gtgctaccat gtccagctaa ttttgtattt tagtagagac 130500

ggtgtttcac catgttggtc aggctagcct tatcttgagt agaaaaacta aatgatgaag 130560

caatgaaaaa taataactac aacttttcaa gacatagtac aataagatat aaatcataac 130620

aaaaagttaa aaggtggagg gatgaagtta aggcatagag tctttattag ttttcttttt 130680

acttgtctgt ttatgcaaac agtgttaagt tgtcatcagt ttaaaataat gggtcataag 130740

atactatttg caagcctcat ggtaacgtca aaccaaaagc aatacaacag atacacaaaa 130800

aacaaaaagc aagaagctaa attacgtcat cagagaaaat caccttcact aaaaggaaga 130860

cggagaaaag aatgaagaga gagaagacca aaagcaaata gcaatatggc aggagtaagt 130920

ccttacttat caataatacc attgaatgta aatggactaa actctccaat caaaagacat 130980

agagtggctg aatcaattaa agaaaaaaca agacccattg atctgttgtc cacaagaaac 131040

acactttatc tataaagaca cacatagact gaaaacaaag ggatggaaaa agatactcca 131100

cgccaatgga aaccaaagaa agagcaggag tagctacact tatatcaggc aaaatagatt 131160

tcaagacaaa aactataaga agagacaagg tcactaatga taaacaggtc aattcagcaa 131220

gaggatataa caattgtaaa tatatatgca cccaatgctg gagcacccag atatataaag 131280

caagtattta ctagagctaa agagagaaat agactccaat gcaataatag ctggagattt 131340

caacatccca ctttcaacat tgaacagatc ctccagatag aaaatcaaca aagaaatatt 131400

ggacttaatc tgcactatcg accaaatgga tctaacagat atttacagaa catttcatcc 131460

aacagctgca gaacacacat tcttttcctc agcacataga tcattctcaa ggatagacca 131520

tatgttgggt cacaaaacaa gttttaaaat attcaaatac attgaaataa tatcaagcat 131580

cttctgtgac cacaatggac taaaactaga aatcaataac aagaggaatt ttggaaacta 131640

tataaatata tggaaattaa tgaatgctga gtgggtcaat gaagcaatta agaaggaaac 131700

tgaaattttt cttggaacga atgatcatgg aaacagaaaa taccaaaacc tatgggatac 131760

agcaaaagca gtactaagag ggaagtttac agctacaaat gcttacatta aaaaagaaga 131820

aaaacttcaa taaaaaaacc taacaatgca tcttaaagaa ctagaaaagc aagaggaaat 131880

caaatccaaa attagtagaa gaaaacagta aaggtcagag cagaaataag taaaattgaa 131940

atgaagaaaa caatacaaaa gatcaataaa acaacaggtt gttttcttga aaagttaaac 132000

aaaattgaca aacctttagc cagactaaga aaaaaagaca gaagatccaa ataaataaaa 132060

tcagagatga aaaaggtgac attacaactt acaccacaga aattcaaagg atcattagtg 132120

gctactataa gcaactatat gccaataaat tggaaaatct agaagaaatg cagaaattcc 132180

tagacacata caacctccca agattaaacc aagaagaaat tcaaaacctg aacagactga 132240

taacaagtaa tgagatcaaa gccgtaataa aaagcctccc agtaaagaga agcccaggac 132300

ccgacggctt cactgctgaa ttctaccaaa catttaaagt agaactaata ccaatcctac 132360

tcaaactatt ccaaaaaata gaggtggaag gaatacttca aaactcatta tacgaggcca 132420

gtattaacct gacaccaaaa ctagacaaag acacatgaaa aaaagaaaac tacaggccaa 132480

tatgtctgat gaatattgac acaaaaatcc tcaacaaaat actagcaaac caaattcaac 132540

tacacattag aaagttcact catcatgacc aagtggaatt tatctaactt gggatgcaaa 132600

gatggttcaa catatgcaaa tcaatcaatg tgatacatca tatcaacaga atgaacaaca 132660

aaaaccattt gatcatttaa ttgatactga aaaagcattt gataaaattc aacattcctt 132720

cataataaaa attctcttct atactaggta caaaagaaac ttacctcaac ataataaagc 132780

catatatgac agtcccacag tatgatacta aatgaggaaa aactgagagc ctttcctcta 132840

cgatctggaa catgacaaag atgcccactt tcatcactgt tattcaacat agtactggaa 132900

gtcctagctg gagcgatcag acaagagaaa gatataaaag acatccaaat tggaaaggaa 132960

taagtcaaat tatcctcatt tgcatatggt atgatcttct atttagagct aactaaagac 133020

tccaccaaaa aaagttatta gaactgacga acaaattcag taaagctgca ggatacaaaa 133080

tcaacataca aaaatcagta gcatttctat atgccaacaa tgaccaatgt gaaaaagaaa 133140

ttaaaaagta accctattta caataaccac aaataaacac ctaggaatta accaaagagg 133200

taaaagattt ctgtaatgaa aactataaaa cactgatgaa agaaattgaa gagtacacca 133260

aaaaatggaa agcaattgca tgttcatgga ttagaagaat cagtgttgtt ataatgtcca 133320

tactatccaa agcaatctac agattcaatg caatccttat caaaatacca atgacatcat 133380

tcacagaaat agaaaaaaaa aatcctaaaa tttacgtgga accacaaaga cccagaatag 133440

ccaaagctct cctaagcaaa aagaacgaaa ctgtaggaat gacattgcct gtcttcaaat 133500

tctactacag agctatagat agtaaccaaa acagcgtggt actggcataa aaacagacac 133560

agagacaaac agaacaaaat ttaaaaaccc agaaataaat ccacacacct acagcaaatt 133620

catttttgac aaagttgcca agaacatact ctggggaata gataatgata tctcttcaat 133680

aaatagtgtg gggaaaactg gatatccata tacataacag tgaaactaga cccctctctc 133740

tctcactata tacaaaaatc aaatcaaaat tgtttaagga cttaaatcta agacctcata 133800

ctatgaaacc actgcaagac aaccttggcg gaaactctcc aagacatcag tccaggcaaa 133860

gatttcttga gtaatatccc acaagcacag acaaccaaag caaaaatgga caaatgggat 133920

cacatcaagt taaaaagctt ctgcacagta agggaaacaa ccaacaaaat gaagagacaa 133980

cccacagaat gggagaaaat atttgaaaaa tacccatctg gcaagggatt aaaaaccaga 134040

atatatgcag aatatataag gagctcaaac agtgctatag aaaaaaaaat ctaataatct 134100

gatttaaaaa tgggaaaaat gttagaatag acatttctta aaataagaca tacagatggc 134160

aaaccgacat ggaacggtgc tcaacatcat ggattatcac agaaacacaa tcaatcaaaa 134220

ctaaaactaa aatgtgctat catctcaccc cagttaaaat ggctgatatc cagaagacag 134280

gcaataacaa atgctggcaa ggatgtgggg aaaagggagc ccccatacac tgttgctggg 134340

attgtaaatt agtacaacca ctgtggagag cagcatgaaa gttcctcaaa aaactgaaag 134400

aaagctacca taggatccag caatcccact gctgtgtata tactacaaaa gaaaggaagt 134460

cagtatatga agaggtatct gcactcccat gtttgttgca gccctgttca caacagccaa 134520

gatttggaag caacctaagt gtccatcagc agttgaatgt ataaagaaaa tgtggtgcat 134580

atacacaatg gagtattatt caataataaa aaggaatgag attgagtcat ttgcaacaac 134640

atggatggaa ctggagatca ttatgtgaag tgaaataagc caggcacaga aagacaaaca 134700

ttacaatgtt cttacttatt aatgagatct aaaaatcaaa acaattgcac ccatgttcat 134760

aaagagtaaa aggatggtta ccagatgctg agaacggtgg tggggggata gggaaaggtg 134820

gcagtggtta acgggtacaa aaaaatagaa agaatgaata agacttgcta cttgatagca 134880

cagcaaggtg gctatagtca gtaatttagt tgtatatttt taataatgaa aggtgtataa 134940

ttggattgtt tctaacacaa aggataatgc ttaagaggat ggatacccca ttttccatga 135000

tgtgattatt tcacattgca cgcctagatc aaaacatcca atgtacccca taaatatata 135060

catcttctat gtacccataa aaattctgta aaataaaata tataaaaaga ggtgacagat 135120

atggaagaca ggcaaagaag agacgacatc cacataatcc gagtacctaa gaaagaatgg 135180

agtccagtgc atctcaggag ccaccattct aagccaattt tctctggttc tctcagtcac 135240

cctaccaata cgtgggcaat cttgttttat ttcaggatag agtttttgaa attatagatt 135300

taagtatgct ttctgttcta ttacttttgg taattaattt tagaaagaac taatttgggc 135360

acaaatttga aaaaattcta aatccaaaaa aaaaaagaaa aaaacacaca cacaatcatc 135420

tataaggggg atgatgacca gtcctagatt tctcaccagc cacattcaag atcagtaaat 135480

ggtaggacaa aacctgtagg gtccttaagg gggaaagaag tagtggatag tccagagtct 135540

atatacagcc aactgttctt gaagaaaaaa ggctgctgaa aaggagttcc aaacattcta 135600

taatccataa tctcatgatg aaactactag aggaagacca ccagccatca aaaggtgctt 135660

ggagaaccca gggccaagaa ccaaaagtaa atattaagtg tccttaactg cgagactaag 135720

atagaaatga ctgtggggga ccatgtggcc tcaacagagg tgaaatggtg tctgcctgac 135780

aaagtggaca ttttacaatg atcaaaacac agaatatgag atagagagca cttctgaatt 135840

actgcctcac tccaaataac tctcagccaa aggacttcag taaaaccaaa ttgggcatat 135900

tagacagtac aaacaaattc taagaaaata atattactga ttacaatcac atgatgctag 135960

agatggaggg gaaaaggaag aggaaaccag gtaatttcat actcgtatat agtaaagaac 136020

taaagtacat tgtccaaaga agaacaaaga atattttgga aagttataaa ggtagccact 136080

acacatagaa gatagcaaag aacaagaaaa cttaagatgg aaaacttttt ggaagcataa 136140

gaatagaaaa tataaactac taagataaga ttgaagccaa acagatctat gaaaacaaca 136200

aacatcaatg gccttaactt gcctattaaa aggaagagac tttcaaattg gaccacaaga 136260

taaaacccaa ctctatatag catatgagta ttacacacaa aatgggaaaa gctgaaaaaa 136320

cttgggcaaa attcacccca agcaaattcc actgtttcct ttgggacaaa atgccaagct 136380

ccatgccagg gaagatgatt ctcctcagac cttctcctca ctctcccagt cctcttaggg 136440

aaggaattgg gtgttagagg agggagactc tgtcgattat cagctgaagc agtggtgtgc 136500

tcctgcgttg cttctgacct gggaaatgaa gcagcaagac tctttctgct gtgtctttgc 136560

ccagaagggc catcccccca gagcagagta cccaggccgg caggagcagt ggtggaagcg 136620

tggaaaccac gtctcctaca gcagagacca tcagaagcgg agcctcgggt ataagggaaa 136680

caacgcgttc tccctaacct gggagtgaca gacagcgtca ttcctcacag tgataccctg 136740

tgttctagcc atctggccca tgacagagcc agcccagagc cagcccagag ccagcccctc 136800

accatcctgg agcctggcca gctcgccaag ctgcaccata ggcctggaag gcgtggagac 136860

ctgcggcagt gccctgtcct cccgtgaggc ctgccatccc tgccaggggt cgcctctggc 136920

ttctccttct ccaggaccgc acggtccaga ggctcagtgc ctggagtagg tgttgcctcc 136980

ctgcttctag gcccagaccc tcccttgttc ctgaccccgg gcctttccct ctggcttgga 137040

catccagggc cctgtctcag ctggggagct gctcctgctc aaggactgtc ttccgcggga 137100

tcgaaaggcc gcgtcctgaa caatgcgtgg gccacgtaag cggagcaggc tctaaaggcc 137160

gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa 137220

cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg 137280

gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag 137340

cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc 137400

tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc 137460

gcgtcctaaa cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa 137520

cagtgcgtgg gccacgtgag cggagcaggc tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgcgtgg 137580

gccacgggag cggagcagac tctaaaggcc gcgtcctaaa cagtgtgtgg gccacgtgag 137640

cggagcgccc tctccactgc cctcggggcc gcagctccca gctcagctcc cagccctgct 137700

cagggcagcc aggccaggag gtaccatcca ggctaagtga ccctcagggg ggacaggtgc 137760

cccaggagat gccagctgtt gggagaggct gggggaccaa ctcgacctgg cctgtgggcc 137820

ctgccctggc cacccattgt aggatccagc cgccacgcct gtgacactcg tgtgctttcc 137880

ctggtgtgtg cttgtggcag gtgggggcag agggtcctca ggccagagag ccactccccc 137940

agcgccagac caccctcttc ctcactcccc cacctcaccc cctcacaggt gcctcccagg 138000

ccatcagggc ccaaccaccc ctaaacaaat gggttctcgg cccctcgtgg ctggaggtgg 138060

gttctctcac cattcccagc ctaagactcc atccccatgc tggcagctgt tcaaccatgt 138120

ctagagagat ccactgtccc agacagcacc tcagggtccc ccgtcctgcc tggaaccctg 138180

taggaaactc cacaaaccgc cgccattctg tccacacccc tacaggagcc ccaaccctct 138240

ccccacatcc aggcttccct cccagacccc tcatccctgc ccgcacggtg cctgaggggg 138300

ccttcttggg cagcgcctaa gcaagccccc agcacccttc ggccccttca aggcacacag 138360

gccccctttc cacccagcct caggaaacca cctgtgtcct ccaacgacag gtcccagcct 138420

cccagccttt gccttgcctg ttcctctccc tggaactctg ccccgacaca gaccctcccc 138480

agcaagcccg caggggcacc tcccctgccc ccagacaccc tgtgcccgtc agttcatccc 138540

cagcagaggc cctcaccagg cacaccccca tgctcacacc tggccccagg cctcagcctc 138600

cctgagggcc ccacccagcc cgcgtctggc cagtggtgcg tgcaaagccc ctcacccaga 138660

ctcggcggaa ggcagccagt gcaggcctgg ggaggggctc tccttagacc accttgcacc 138720

ttccctggca cccaccatgg gaagagctga gactcactga ggaccagctg aggctcagag 138780

aagggaccca gcactggtgg acacgcaggg agcccacgcc agggcgccgt ggtgagtgag 138840

gcccagtgcc acccactgag gcctcccgtt cagtgggacg acggtgaaca ggtggaacca 138900

accaggcaac ccccgccggg ccccacagac gggatcagag caggaaaggc ttcctgcccc 138960

tgcaggccag cgaggagccc tggcgggggc cgtggccctc caggcgagga ggctcccctg 139020

gccaccgcca cccgggcctc tctgctgctg ggaaaacaag tcagaaagca agtggatgag 139080

aggtggcgtg acagacccag cttcagatct gctctaattt acaaaagaaa aggaaaaaca 139140

cacttggcag ccttcagcac tctaatgatt cttaacagca gcaaattatt ggcacaagac 139200

tccagagtga ctggcagggt tgagggctgg ggtctcccac gtgttttggg gctaacagcg 139260

gaagggagag cactggcaaa ggtgctgggg gcccctggac ccgacccgcc ctggagaccg 139320

cagccacatc agcccccagc cccacaggcc ccctaccagc cgcagggttt tggctgagct 139380

gagaaccact gtgctaactg gggacacagt gattggcagc tctacaaaaa ccatgctccc 139440

ccgggacccc gggctgtggg tttctgtagc ccctggctca gggctgactc accgtggctg 139500

aatacttcca gcactggggc cagggcaccc tggtcaccgt ctcctcaggt gagtctgctg 139560

tctggggata gcggggagcc aggtgtactg ggccaggcaa gggctttggc ttcagacttg 139620

gggacaggtg ctcagcaaag gaggtcggca ggagggcgga gggtgtgttt ttgtatggga 139680

gaagcaggag ggcagaggct gtgctactgg tacttcgatc tctggggccg tggcaccctg 139740

gtcactgtct cctcaggtga gtcccactgc agccccctcc cagtcttctc tgtccaggca 139800

ccaggccagg tatctggggt ctgcagccgg cctgggtctg gcctgaggcc acaccagctg 139860

ccatccctgg ggtctccgcc atgggctgca tgccagagcc ctgctgtcac ttagccctgg 139920

ggccagctgg agcccccaag gacaggcagg gaccccgctg ggcttcagcc ccgtcaggga 139980

ccctccacag gtagcaagca ggccgagggc agggacggga aggagaagtt gtgggcagag 140040

cctgggctgg ggctgggcgc tggctgttca tgtgccgggg accaggcctg cgctttagtg 140100

tggctacaag tgcttggagc actggggcca gggcagcccg gccaccgtct ccctgggaac 140160

gtcacccctc cctgcctggg tctcagcccg ggggtctgtg tggctgggga cagggacgcc 140220

ggctgcctct gctctgtgct tgggccatgt gacccattcg agtgtcctgc acgggcacag 140280

gtttgtgtct gggcaggaac agggactgtg tccctgtgtg atgcttttga tatctggggc 140340

caagggacaa tggtcaccgt ctcttcaggt aagatggctt tccttctgcc tcctttctct 140400

gggcccagcg tcctctgtcc tggagctggg agataatgtc cgggggctcc ttggtctgcg 140460

ctgggccatg tggggccctc cggggctcct tctccggctg tttgggacca cgttcagcag 140520

aaggcctttc tttgggaact gggactctgc tgctggggca aagggtgggc agagtcatgc 140580

ttgtgctggg gacaaaatga ccttgggaca cggggctggc tgccacggcc ggcccgggac 140640

agtcggagag tcaggttttt gtgcacccct taatggggcc tcccacaatg tgactacttt 140700

gactactggg gccagggaac cctggtcacc gtctcctcag gtgagtcctc acaacctctc 140760

tcctgcttta actctgaagg gttttgctgc atttttgggg ggaaataagg gtgctgggtc 140820

tcctgccaag agagccccgg agcagcctgg ggggctcagg aggatgccct gaggcaacag 140880

cggccacaca gacgaggggc aagggctcca gatgctcctt cctcctgagc ccagcagcac 140940

gggtctctct gtggccaggg ccaccctagg cctctggggt ccaatgccca acaacccccg 141000

ggccctcccc gggctcagtc tgagagggtc ccagggacgt agcggggcgc cagttcttgc 141060

ctggggtcct ggcattgttg tcacaatgtg acaactggtt cgacccctgg ggccagggaa 141120

ccctggtcac cgtctcctca ggtgagtcct caccaccccc tctctgagtc cacttaggga 141180

gactcagctt gccagggtct cagggtcaga gtcttggagg cattttggag gtcaggaaag 141240

aaagccgggg agagggaccc ttcgaatggg aacccagcct gtcctcccca agtccggcca 141300

cagatgtcgg cagctggggg gctccttcgg ctggtctggg gtgacctctc tccgcttcac 141360

ctggagcatt ctcaggggct gtcgtgatga ttgcgtggtg ggactctgtc ccgctccaag 141420

gcacccgctc tctgggacgg gtgccccccg gggtttttgg actcctgggg gtgacttagc 141480

agccgtctgc ttgcagttgg acttcccagg ccgacagtgg tctggcttct gaggggtcag 141540

gccagaatgt ggggtacgtg ggaggccagc agagggttcc atgagaaggg caggacaggg 141600

ccacggacag tcagcttcca tgtgacgccc ggagacagaa ggtctctggg tggctgggtt 141660

tttgtggggt gaggatggac attctgccat tgtgattact actactacta cggtatggac 141720

gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc tcctcaggta agaatggcca ctctagggcc 141780

tttgttttct gctactgcct gtggggtttc ctgagcattg caggttggtc ctcggggcat 141840

gttccgaggg gacctgggcg gactggccag gaggggacgg gcactggggt gccttgagga 141900

tctgggagcc tctgtggatt ttccgatgcc tttggaaaat gggactcagg ttgggtgcgt 141960

ctgatggagt aactgagcct ctagactgag cattgcagac taatcttgga tatttgtccc 142020

tgagggagcc ggctgagaga agttgggaaa taaactgtct agggatctca gagcctttag 142080

gacagattat ctccacatct ttgaaaaact aagaatctgt gtgatggtgt tggtggagtc 142140

cctggatgat gggataggga ctttggaggc tcatttgagg gagatgctaa aacaatccta 142200

tggctggagg gatagttggg gctgtagttg gagattttca gtttttagaa taaaagtatt 142260

agctgcggaa tatacttcag gaccacctct gtgacagcat ttatacagta tccgatgcat 142320

agggacaaag agtggagtgg ggcactttct ttagatttgt gaggaatgtt ccacactaga 142380

ttgtttaaaa cttcatttgt tggaaggaga gctgtcttag tgattgagtc aagggagaaa 142440

ggcatctagc ctcggtctca aaagggtagt tgctgtctag agaggtctgg tggagcctgc 142500

aaaagtccag ctttcaaagg aacacagaag tatgtgtatg gaatattaga agatgttgct 142560

tttactctta agttggttcc taggaaaaat agttaaatac tgtgacttta aaatgtgaga 142620

gggttttcaa gtactcattt ttttaaatgt ccaaaattct tgtcaatcag tttgaggtct 142680

tgtttgtgta gaactgatat tacttaaagt ttaaccgagg aatgggagtg aggctctctc 142740

ataacctatt cagaactgac ttttaacaat aataaattaa gtttcaaata tttttaaatg 142800

aattgagcaa tgttgagttg gagtcaagat ggccgatcag aaccagaaca cctgcagcag 142860

ctggcaggaa gcaggtcatg tggcaaggct atttggggaa gggaaaataa aaccactagg 142920

taaacttgta gctgtggttt gaagaagtgg ttttgaaaca ctctgtccag ccccaccaaa 142980

ccgaaagtcc aggctgagca aaacaccacc tgggtaattt gcatttctaa aataagttga 143040

ggattcagcc gaaactggag aggtcctctt ttaacttatt gagttcaacc ttttaatttt 143100

agcttgagta gttctagttt ccccaaactt aagtttatcg acttctaaaa tgtatttaga 143160

attcattttc aaaattaggt tatgtaagaa attgaaggac tttagtgtct ttaatttcta 143220

atatatttag aaaacttctt aaaattactc tattattctt ccctctgatt attggtctcc 143280

attcaattct tttccaatac ccgaagcatt tacagtgact ttgttcatga tcttttttag 143340

ttgtttgttt tgccttacta ttaagacttt gacattctgg tcaaaacggc ttcacaaatc 143400

tttttcaaga ccactttctg agtattcatt ttaggagaaa gacttttttt ttaaatgaat 143460

gcaattatct agacttattt cagttgaaca tgctggttgg tggttgagag gacactcagt 143520

cagtcagtga cgtgaagggc ttctaagcca gtccacatgc tctgtgtgaa ctccctctgg 143580

ccctgcttat tgttgaatgg gccaaaggtc tgagaccagg ctgctgctgg gtaggcctgg 143640

actttgggtc tcccacccag acctgggaat gtatggttgt ggcttctgcc acccatccac 143700

ctggctgctc atggaccagc cagcctcggt ggctttgaag gaacaattcc acacaaagac 143760

tctggacctc tccgaaacca ggcaccgcaa atggtaagcc agaggcagcc acagctgtgg 143820

ctgctgctct taaagcttgt aaactgtttc tgcttaagag ggactgagtc ttcagtcatt 143880

gctttagggg gagaaagaga catttgtgtg tcttttgagt accgttgtct gggtcactca 143940

catttaactt tccttgaaaa actagtaaaa gaaaaatgtt gcctgttaac caataatcat 144000

agagctcatg gtactttgag gaaatcttag aaagcgtgta tacaattgtc tggaattatt 144060

tcagttaagt gtattagttg aggtactgat gctgtctcta cttcagttat acatgtgggt 144120

ttgaattttg aatctattct ggctcttctt aagcagaaaa tttagataaa atggatacct 144180

cagtggtttt taatggtggg tttaatatag aaggaattta aattggaagc taatttagaa 144240

tcagtaagga gggacccagg ctaagaaggc aatcctggga ttctggaaga aaagatgttt 144300

ttagttttta tagaaaacac tactacattc ttgatctaca actcaatgtg gtttaatgaa 144360

tttgaagttg ccagtaaatg tacttcctgg ttgttaaaga atggtatcaa aggacagtgc 144420

ttagatccga ggtgagtgtg agaggacagg ggctggggta tggatacgca gaaggaaggc 144480

cacagctgta cagaattgag aaagaataga gacctgcagt tgaggccagc aggtcggctg 144540

gactaactct ccagccacag taatgaccca gacagagaaa gccagactca taaagcttgc 144600

tgagcaaaat taagggaaca aggttgagag ccctagtaag cgaggctcta aaaagcacag 144660

ctgagctgag atgggtgggc ttctctgagt gcttctaaaa tgcgctaaac tgaggtgatt 144720

actctgaggt aagcaaagct gggcttgagc caaaatgaag tagactgtaa tgaactggaa 144780

tgagctgggc cgctaagcta aactaggctg gcttaaccga gatgagccaa actggaatga 144840

acttcattaa tctaggttga atagagctaa actctactgc ctacactgga ctgttctgag 144900

ctgagatgag ctggggtgag ctcagctatg ctacgctgtg ttggggtgag ctgatctgaa 144960

atgagatact ctggagtagc tgagatgggg tgagatgggg tgagctgagc tgggctgagc 145020

tagactgagc tgagctaggg tgagctgagc tgggtgagct gagctaagct ggggtgagct 145080

gagctgagct tggctgagct agggtgagct gggctgagct ggggtgagct gagctgagct 145140

ggggtaagct gggatgagct ggggtgagct gagctgagct ggagtgagct gagctgggct 145200

gagctggggt gagctgggct gagctgggct gagctgggct gagctggggt gagctgagct 145260

ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct ggggtgagct 145320

gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct ggggtgagct gagctgagct 145380

ggggtgagct gagctgagct gagctgagct gagctggggt gagctgagct gagctgagct 145440

ggggtgagct ggggtgagct gagctgagct ggagtgagct gagctgggct gagctggggt 145500

gagctgggct gagctggggt gagctgagct gagctgagct gagctggggt gagctgagct 145560

gagctggggt gagctgagct ggggtgagct gggctgagct gagctgagct gagctgagct 145620

gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct gagctgagct 145680

ggggtgagct gagctgagct gggctgagct ggggtgagct gggctgagct gggctgagct 145740

gggctgagct ggggtgagct gagctggggt gagctgagct gagctgggct gagctgagct 145800

gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct gagctgagct ggggtgagct 145860

gagctgagct gggctgagca gggctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct 145920

gggctgagct gggctgagct gagctgagct gggctgagct gggctgagct gggctgagct 145980

gggctgagct gggctgagct ggggtgagct gagctggggt gagctggggt gagctgagct 146040

ggggtgagct gagctggggt gagctgagct gagctggggt gagctgagct ggggtgagct 146100

gagctgagct ggggtgagct gagctgagct ggggtgagct gagctagggt gaactgggct 146160

gggtgagctg gagtgagctg agctgaggtg aactggggtg agccgggatg ttttgagttg 146220

agctggggta agatgagctg aactggggta aactgggatg agctgtggtg agcggagctg 146280

gattgaactg agctgtgtga gctgagctgg ggtcagctga gcaagagtga gtagagctgg 146340

ctggccagaa ccagaatcaa ttaggctaag tgagccagat tgtgctggga tcagctgtac 146400

tcagatgagc tgggatgagg taggctggga tgagctgggc tagctgacat ggattatgtg 146460

aggctgagct agcatgggct ggcctagctg atgagctaag cttgaatgag cggggctgag 146520

ctggactcag atgtgctaga ctgagctgta ctggatgatc tggtgtaggg tgatctggac 146580

tcaactgggc tggctgatgg gatgcgccag gttgaactag gctcagataa gttaggctga 146640

gtagggcctg gttgagatgg ttcgggatga gctgggaaaa gatggactcg gaccatgaac 146700

tgggctgagc tgggttggga gaccatgaat tgagctgaac tgagtgcagc tgggataaac 146760

tgggttgagc taagaataga ctacctgaat tgtgccaaac tcggctggga tcaattggaa 146820

attatcagga tttagatgag ccggactaaa ctatgctgag ctggactggt tggatgtgtt 146880

gaactggcct gctgctgggc tggcatagct gagttgaact taaatgagga aggctgagca 146940

aggctagcct gcttgcatag agctgaactt tagcctagcc tgagctggac cagcctgagc 147000

tgagtaggtc taaactgagt taaaaatcaa cagggataat ttaacagcta atttaacaag 147060

cctgaggtct gagattgaat gagcagagct gggatgaact gaatgagttt caccaggcct 147120

ggaccagtta ggctaggacc tcgttctata gaggcagact gtgtgctaca gtggagtttc 147180

aagatgattc catgagtcct ccccgccccc aacataaccc accttcctcc taccctacac 147240

gcctgtctgg tgtgtaaatc ccagctttgt gtgctgatac agaagcctga gcccctcccc 147300

cacctccacc tacctattac tttgggatga gaatagttct cccagccagt gtctcagagg 147360

gaagccaagc aggacaggcc caaggctact tgagaagcca ggatctaggc ctctccctga 147420

gaacgggtgt tcatgcccct agagttggct gaagggccag atccacctac tctagaggca 147480

tctctccctg tctgtgaagg cttccaaagt cacgttcctg tggctagaag gcagctccat 147540

agccctgctg cagtttcgtc ctgtatacca ggttcaccta ctaccatatc tagccctgcc 147600

tgccttaaga gtagcaacaa ggaaatagca gggtgtagag ggatctcctg tctgacagga 147660

ggcaagaaga cagattctta cccctccatt tctcttttat ccctctctgg tcctcagaga 147720

gtcagtcctt cccaaatgtc ttccccctcg tctcctgcga gagccccctg tctgataaga 147780

atctggtggc catgggctgc ctggcccggg acttcctgcc cagcaccatt tccttcacct 147840

ggaactacca gaacaacact gaagtcatcc agggtatcag aaccttccca acactgagga 147900

cagggggcaa gtacctagcc acctcgcagg tgttgctgtc tcccaagagc atccttgaag 147960

gttcagatga atacctggta tgcaaaatcc actacggagg caaaaacaaa gatctgcatg 148020

tgcccattcc aggtaagaac caaaccctcc cagcaggggt gcccaggccc aggcatggcc 148080

cagagggagc agcggggtgg ggcttaggcc aagctgagct cacaccttga cctttcattc 148140

cagctgtcgc agagatgaac cccaatgtaa atgtgttcgt cccaccacgg gatggcttct 148200

ctggccctgc accacgcaag tctaaactca tctgcgaggc cacgaacttc actccaaaac 148260

cgatcacagt atcctggcta aaggatggga agctcgtgga atctggcttc accacagatc 148320

cggtgaccat cgagaacaaa ggatccacac cccaaaccta caaggtcata agcacactta 148380

ccatctctga aatcgactgg ctgaacctga atgtgtacac ctgccgtgtg gatcacaggg 148440

gtctcacctt cttgaagaac gtgtcctcca catgtgctgc cagtgagtgg cctgggctaa 148500

gcccaatgcc tagccctccc agattaggga agtcctccta caattatggc caatgccacc 148560

cagacatggt catttgctcc ttgaactttg gctccccaga gtggccaagg acaagaatga 148620

gcaataggca gtagaggggt gagaatcagc tggaaggacc agcatcttcc cttaagtagg 148680

tttgggggat ggagactaag cttttttcca acttcacaac tagatatgtc ataacctgac 148740

acagtgttct cttgactgca ggtccctcca cagacatcct aaccttcacc atccccccct 148800

cctttgccga catcttcctc agcaagtccg ctaacctgac ctgtctggtc tcaaacctgg 148860

caacctatga aaccctgaat atctcctggg cttctcaaag tggtgaacca ctggaaacca 148920

aaattaaaat catggaaagc cctcccaatg gcaccttcag tgctaagggt gtggctagtg 148980

tttgtgtgga agactggaat aacaggaagg aatttgtgcg tactgtgact cacagggatc 149040

tgccttcacc acagaagaaa ttcatctcaa aacccaatgg taggtatccc cccttccctt 149100

cccctccaat tgcaggaccc ttcctgtacc tcatagggag ggcaggtcct cttccaccct 149160

atcctcacta ctgtcttcat ttacagaggt gcacaaacat ccacctgctg tgtacctgct 149220

gccaccagct cgtgagcaac tgaacctgag ggagtcagcc acagtcacct gcctggtgaa 149280

gggcttctct cctgcagaca tcagtgtgca gtggcttcag agagggcaac tcttgcccca 149340

agagaagtat gtgaccagtg ccccgatgcc agagcctggg gccccaggct tctactttac 149400

ccacagcatc ctgactgtga cagaggagga atggaactcc ggagagacct atacctgtgt 149460

tgtaggccac gaggccctgc cacacctggt gaccgagagg accgtggaca agtccactgg 149520

taaacccaca ctgtacaatg tctccctgat catgtctgac acaggcggca cctgctattg 149580

accatgctag cgctcaacca ggcaggccct gggtgtccag ttgctctgtg tatgcaaact 149640

aaccatgtca gagtgagatg ttgcatttta taaaaattag aaataaaaaa aatccattca 149700

aacgtcactg gttttgatta tacaatgctc atgcctgctg agacagttgt gttttgcttg 149760

ctctgcacac accctgcata cttgcctcca ccctggccct tcctctacct tgccagtttc 149820

ctccttgtgt gtgaactcag tcaggcttac aacagacaga gtatgaacat gcgattcctc 149880

cagctacttc tagatatatg gctgaaagct tgcatgcctg caggtcgact ctagaggatc 149940

cccgggtacc gagctcgaat tcgccctata gtgagtcgta ttacaattca ctggccgtcg 150000

ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac 150060

atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac 150120

agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt 150180

gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt 150240

taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgaa ccccttgc 150288

<210> 71

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 71

ggaaggtgtg cacaccgctg gac 23

<210> 72

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 72

ggaaggtgtg cacaccactg gac 23

<210> 73

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 73

ggaaggtgtg cacactgctg gac 23

<210> 74

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 74

agactgtgcg cacaccgctg gac 23

<210> 75

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 75

tcttatcaga cagggggctc tc 22

<210> 76

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 76

aagaagcaca cgactgaggc ac 22

<210> 77

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> изменчивость

<222> (12)...(12)

<223> w = a или t

<220>

<223> синтетическая

<400> 77

agtggataga cwgatggggg tg 22

<210> 78

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 78

agtggataga ccgatggggc tg 22

<210> 79

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 79

aagggataga cagatggggc tg 22

<210> 80

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 80

ggaagacatt tgggaaggac tg 22

<210> 81

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая

<400> 81

ggaagatgga tacagttggt gc 22

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения терапевтического средства для человека, предусматривающему иммунизацию генетически модифицированной мыши представляющим интерес антигеном. При этом указанная мышь содержит в эндогенном локусе TCRα: замещение эндогенного сегмента TCR Vα по меньшей мере одним переаранжированным сегментом TCR Vα человека, и замещение эндогенного сегмента TCR Jα по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR человека Jα, и/или в эндогенном локусе TCRβ: замещение эндогенного сегмента TCR Vβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Vβ человека, замещение эндогенного сегмента TCR Dβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Dβ человека, и замещение эндогенного сегмента TCR Jβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Jβ человека. Изобретение эффективно для получения терапевтического средства для человека, содержащего вариабельный домен TCR. 18 з.п. ф-лы, 19 ил., 4 табл., 10 пр.

1. Способ получения терапевтического средства для человека, предусматривающий:

иммунизацию генетически модифицированной мыши представляющим интерес антигеном;

предоставление указанной генетически модифицированной мыши возможности развивать иммунный ответ;

выделение из генетически модифицированной мыши Т-клетки, реактивной по отношению к представляющему интерес антигену

получение из Т-клетки (i) вариабельного домена Т клеточного рецептора (TCR) человека, который связывает представляющий интерес антиген и/или (ii) последовательности(ей) нуклеиновых кислот, кодирующей(их) вариабельный домен TCR человека, и

использование вариабельного домена TCR в терапевтическом средстве для человека,

где генетически модифицированная мышь содержит в своем геноме:

(i) в эндогенном локусе TCRα: замещение эндогенного сегмента TCR Vα по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Vα человека, и

замещение эндогенного сегмента TCR Jα по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR человека Jα,

где нереаранжированный сегмент TCR Vα человека и нереаранжированный сегмент TCR Jα человека функционально связаны друг с другом и константной генной последовательностью TCRα мыши, и/или

(ii) в эндогенном локусе TCRβ:

замещение эндогенного сегмента TCR Vβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Vβ человека,

замещение эндогенного сегмента TCR Dβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Dβ человека, и

замещение эндогенного сегмента TCR Jβ по меньшей мере одним нереаранжированным сегментом TCR Jβ человека,

где по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Vβ человека, по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Dβ человека и по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Jβ человека функционально связаны друг с другом и константной генной последовательностью мыши TCRβ,

где

(i) по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Vα человека и по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Jα человека способны к реаранжировке с образованием последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен TCRα человека и/или

(ii) по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Vβ человека, по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Dβ человека и по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Jβ человека способны к реаранжировке с образованием последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариабельный домен TCRβ человека TCR, который специфически связывает представляющий интерес антиген.

2. Способ по п. 1, где терапевтическое средство для человека представляет собой растворимый Т-клеточный рецептор.

3. Способ по п. 1 или 2, где терапевтическое средство для человека представляет собой одноцепочечный TCR.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где терапевтическое средство для человека представляет собой scFV.

5. Способ по любому из пп. 1-3, где терапевтическое средство для человека представляет собой трех доменный одноцепочечный Т-клеточный рецептор.

6. Способ по п. 2, где растворимый Т-клеточный рецептор слит с фрагментом, который может лизировать инфицированную или злокачественную клетку.

7. Способ по п. 6, где фрагмент содержит цитотоксическую молекулу, токсин,радионуклид, пролекарственное средство или антитело.

8. Способ по п. 7, где цитотоксическая молекула содержит химиотерапевтическое средство.

9. Способ по п. 2, где растворимый Т-клеточный рецептор слит с иммуномодулирующей молекулой.

10. Способ по п. 9, где иммуномодулирующая молекула содержит цитокин или хемокин.

11. Способ по п. 9 или 10, где иммуномодулирующая молекула содержит иммунную ингибирующую молекулу.

12. Способ по п. 11, где иммунная ингибирующая молекула ингибирует цитолиз Т-клеткой других клеток, содержащих антиген, распознанный Т-клеткой.

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, где по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCRVα человека содержит по меньшей мере 8 нереаранжированных сегментов TCR Vα человека, и по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Jα человека содержит 61 нереаранжированный сегмент TCRJα человека; и/или в котором по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCRVβ человека содержит 14 нереаранжированных сегментов Vβ человека, по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Dβ человека содержит 2 нереаранжированных сегмента TCR Dβ человека и по меньшей мере один нереаранжированный сегмент TCR Jβ человека содержит 14 сегментов Vβ человека.

14. Способ по любому из предшествующих пунктов, где генетически модифицированная мышь дополнительно содержит репертуар нереаранжированных сегментов вариабельной области TCRδ человека.

15. Способ по любому из предшествующих пунктов, где генетически модифицированная мышь дополнительно содержит полный репертуар сегментов Vδ человека, полный репертуар сегментов Dδ человека и полный репертуар сегментов Jδ человека.

16. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором генетически модифицированная мышь содержит эндогенный сегмент TCR Vβ.

17. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором генетически модифицированная мышь экспрессирует

(А) вариабельный домен TCR α, полученный из:

сегмента гена TRAV40 человека,

сегмента гена TRAV41 человека,

сегмента гена TRAV39 человека,

сегмента гена TRAV35 человека,

сегмента гена TRAV34 человека,

сегмента гена TRAV22 человека,

сегмента гена TRAV21 человека,

сегмента гена TRAV13-2 человека,

сегмента гена TRAV8.5 человека,

сегмента гена TRAV6 человека,

сегмента гена TRAV5 человека или

сегмента гена TRAV1-1 человека;

(B) вариабельный домен TCR β, полученный из

сегмента гена TRBV18 человека,

сегмента гена TRBV19 человека,

сегмента гена TRBV20 человека,

сегмента гена TRBV24 человека,

сегмента гена TRBV25 человека,

сегмента гена TRBV27 человека,

сегмента гена TRBV28 человека,

сегмента гена TRBV-29 человека, или

(C) комбинация (А) и (В).

18. Способ по любому из предыдущих пунктов, при этом генетически модифицированная мышь содержит популяцию спленоцитов, из которых по меньшей мере 20% являются CD3+.

19. Способ по любому из предыдущих пунктов, где генетически модифицированная мышь содержит

(A) в эндогенном локусе TCRα, по меньшей мере одно из следующего:

(i) рекомбинантный сайт рестрикции AsiSI,

(ii) рекомбинантный сайт рестрикции AscI,

(iii) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ IDNO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, и/или SEQ ID NO:13, и

(iv) кассету селекции;

(B) в эндогенном локусе TCR β, по меньшей мере, одно из следующего:

(i) рекомбинантный сайт рестрикции AsiSI,

(ii) рекомбинантный сайт рестрикции AscI,

(iii) нуклеотидную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и/или SEQ ID NO: 27, и

(iv) кассету селекции; или

(C) комбинацию из (А) и (В).