Способ ранней диагностики неалкогольной жировой болезни печени Российский патент 2023 года по МПК G01N33/68 G01N33/573 

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности, к терапии (гепатологии), и может быть использовано с целью ранней диагностики неалкогольной жировой болезни печени (НАЖБП).

НАЖБП по стадиям делится на стеатоз/жировой гепатоз, стеатогепатит и цирроз печени. «Ранняя диагностика» НАЖБП предполагает обнаружение стеатоза и первых признаков стеатогепатита печени. Для развития НАЖБП также характерен прогресирующий процесс фиброза печени. Наиболее трудно диагностировать ранние стадии НАЖБП ввиду отсутствия фактической симптоматики заболевания. Вместе с тем, ранние стадии НАЖБП излечимы и полностью обратимы.

В настоящий момент НАЖБП является «диагнозом исключения». При данном алгоритме диагностики, после установления симптомов печеночной патологии во время скрининговых исследований, необходимым условием является доказательство отсутствия любых других печеночных патологий аутоиммунного, инфекционного и метаболического генеза. После получения информации, достоверно позволяющей исключить все альтернативные заболевания, выставляется диагноз «НАЖБП»

«Золотым стандартом» для диагностики НАЖБП в настоящее время является прижизненное исследование биоптатов печени. При всех достоинствах биопсии печени (высокой чувствительности и специфичности метода), процедура субъективно неприятна, требует специальных условий проведения, сопряжена с высоким риском осложнений во время и после проведения манипуляции, охватывает только 0,2% печеночной паренхимы и не предоставляет никакой информации о том, является ли распределение инфильтратов однородным или гетерогенным.

Из инструментальных методов диагностики НАЖБП целесообразно выделить ультразвуковое исследование (УЗИ), транзиентную эластографию (ТЭ), эластографию сдвиговой волной (ЭСВ) с эластометрией, компьютерную томографию (КТ) с контрастированием, магнитно-резонансную томографию (МРТ), магнитно-резонансную сцинтиграфию (МРС), магнитно-резонансную эластографию (МРЭ) печени.

УЗИ печени - самый доступный и распространенный метод оценки состояния гепатобилиарной системы. Способен оценить и общее состояние органа, и очаговые образования печени, но обладает наименьшей специфичностью из всех современных инструментальных методов диагностики. При помощи ТЭ определяют жесткость печеночной паренхимы в указанных локальных точках, но наличие асцита, морбидного ожирения пациента ограничивает чувствительность метода. ЭСВ с эластометрией - наиболее точный и доступный метод диагностики НАЖБП, который в настоящее время целесообразно использовать в качестве эталонного (в отсутствие показаний к биопсии печени). С целью разграничений показателей по стадиям фиброза эластографические поданные стадируют по шкале фиброза Metavir (табл. 1). Ограничением является стоимость аппаратуры для проведения ЭСВ с эластометрией. Кроме того, эластографические тесты неспособны определить этиологию изменений печени и самостоятельно использоваться для выставления диагноза НАЖБП.

С помощью КТ проводят диагностику очаговых образований, магнитно-резонансные методы, особенно наиболее ценные МРЭ и МРС, на данный момент фактически не используются.

Известен способ ранней диагностики НАЖБП (стеатоза печени) по биохимическим маркерам: аполипопротеину А1, альфа-2-макроглобулину, аланин-аминотрансферазе, гамма-глутамин-транспептидазе и триглицеридам (RU 2403576, МПК G01N 33/576, опубл. 10.11.2010).

Главным недостатком метода является возможность его применения только у пациентов, уже страдающих заболеваниями гепатобилиарной системы, включая стеатоз печени, или имеющих положительные результаты других диагностических тестов на фиброз и/или наличие некровоспалительных повреждений печени. Использование способа позволяет лишь повысить точность и информативность методов диагностики НАЖБП.

Кроме того, известен способ диагностики НАЖБП с дифференциальной диагностикой стадий стеатоза печени и стеатогепатита. Согласно указанному способу, диагностика и дифференциальная диагностика стеатоза и стеатогепатита проводится путем анализа уровней экспрессии фосфолипазы А2, оксида азота и эндотоксина в сыворотке крови: при значении фосфолипазы А2 199,7-252,5 нг/мл, оксида азота 93-94,6 мкмоль/л и эндотоксина 2,2-2,6 ЕЭ/мл диагностируют стеатоз печени, при значении фосфолипазы А2 412,5-576,5 нг/мл, оксида азота 137,5-168,5 мкмоль/л и эндотоксина 3,32-4,18 ЕЭ/мл диагностируют стеатогепатит (RU 2545990, МПК G01N 33/50, опубл. 10.04.2015).

Метод несовершенен своей высокой стоимостью (требуется 3 дорогостоящих реактива для проведения иммуноферментных анализов), низкой самостоятельной чувствительностью и специфичностью (основное предназначение способа - обеспечение повышения точности дифференциальной диагностики), зависимостью параметров друг от друга.

Имеются данные о наличии способа ранней диагностики НАЖБП (стеатоза печени), при котором проводят микроскопическое исследование сыворотки крови, взятой натощак. Сыворотку выдерживают в течение 24 часов при температуре 5-8°С, затем наносят ее на поверхность обезжиренного стекла в форме капли в количестве 0,01-0,02 мл, высушивают при температуре 18-30°С при относительной влажности 55-65% в течение 18-24 часов и при наличии, по крайней мере, одного участка просветления вдоль радиальных трещин в виде лакун в краевой зоне фации диагностируют стеатоз печени без элементов воспаления, а при выявлении дополнительно структур треугольной формы белого цвета в краевой зоне фации диагностируют стеатоз печени с элементами воспаления (RU 2292043, МПК G01N 33/49, опубл. 20.01.2007).

Из недостатков способа выделим его длительность, зависимость от человеческого фактора, множество физических условий для проведения исследования, малейшее несоблюдение каждого из которых может служить причиной серьезных погрешностей результатов.

Известен способ ранней диагностики НАЖБП (жирового гепатоза), при котором: 1) измеряют рост и вес пациента; 2) рассчитывают индекс массы тела (ИМТ); 3) парентерально вводят радиоизотопный препарат; 4) над областью проекции печени считают количество у-частиц в течение времени до достижения максимального статического уровня значений; 5) определяют время, прошедшее от начала исследования до достижения предельного максимального накопления γ-частиц (T_max); 6) определяют индекс функциональной активности гепатоцитов (ИФАГ) по заявленной формуле; 7) по значению величины ИФАГ делают заключение о состоянии печени. При значениях ИФАГ от 0 до 9,9 констатируют нормальную функциональную активность гепатоцитов. При значениях ИФАГ от 10 до 19,9 констатируют наличие риска развития функциональных нарушений. При значениях ИФАГ от 20 до 29,9 констатируют наличие обратимых нарушений функции гепатоцитов (жировой гепатоз). Значения ИФАГ более 30 говорят о необратимых органических нарушениях печени (стеатогепатит, цирроз). При отрицательных значениях ИФАГ делают вывод о влиянии внепеченочных факторов, таких как заболевания, ускоряющие обмен веществ на клеточном уровне (тиреотоксикоз), прием лекарств в нарушение предписаний перед данными исследованиями (RU 2578080, МПК А61В 5/00, А61В 6/00, опубл. 20.03.2016).

Существенным недостатком данного способа диагностики жирового гепатоза является использование радиоизотопного препарата, способного оказать негативное влияние на организм человека.

Существует способ диагностики НАЖБП (стеатоза) печени, согласно которому: 1) у пациента измеряют рост, вес, индекс массы тела; 2) выявляют наличие сахарного диабета (СД), артериальной гипертензии (АГ), метаболического синдрома (МС), алкогольной болезни печени (АБП); 3) уточняют факт и сроки приема системных глюкокортикостероидов; 4) определяют в крови уровни гликированного гемоглобина (HbAlc), аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT), гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), общего билирубина, прямого билирубина и холестерина; 5) проводят УЗИ печени и определяют коэффициент затухания УЗ волны (дБ/см); 6) оценивают полученные данные в баллах. По сумме баллов определяют степень стеатоза печени: 0 баллов - стеатоза печени нет; 1-3 балла -минимальный стеатоз печени; 4-9 баллов - умеренный стеатоз печени; более 10 баллов - выраженный стеатоз печени (RU 2648183, МПК А61В 5/00, А61В 8/00, G01N 33/48, опубл. 22.03.2018).

Отметим, что способ не затрагивает стадию стеатогепатита (даже на ранних стадиях), не дифференцирует неалкогольный и алкогольный генез заболевания и основан на рутинных низкоспецифичных для НАЖБП тестах.

Использование маркера Secreted Frizzled Related Protein-4 (SFRP4) регламентировано изобретением «Антагонисты WNT и их применение в диагностике и лечении опосредуемых WNT-нарушений». Согласно ему, семейство белков SFRP, как антагонистов WNT, может использоваться для диагностики и лечения раковых заболеваний: рака толстого кишечника, рака молочной железы, лейкоза, глиом и медуллобластом (RU 2009113023, МПК A61K 38/17, опубл. 20.10.2010).

Ряд изобретений предлагает использовать группу белков, к которым принадлежит SFRP4, для диагностики и лечения злокачественных новообразований (RU 2663701, МПК A61K 31/497, А61Р 35/00, G01N 33/574, C12Q 1/68, опубл. 08.08.2018; RU 2593947, МПК C07K 14/705, C07K 19/00, C12N 15/12, C12N 5/10, A61K 38/00, А61Р 35/00, опубл. 10.08.2016; RU 2557654, МПК C07K 7/06, A61K 38/08, А61Р 3/14, А61Р 5/20, опубл. 27.07.2015.

Недостатки изобретений: не выявлена роль конкретного маркера SFRP4 из семейства SFRP, исследовано диагностическое и терапевтическое значение указанного антигена (антител) для одной узкой области медицины (онкологии) при большой потенциальной значимости и для других областей.

Совокупность признаков, наиболее близкая к совокупности существенных признаков заявляемого изобретения, присуща способу дифференциальной диагностики НАЖБП: стеатоза печени и неалкогольного стеатогепатита у мужчин (RU 2753455, МПК А61В 5/00, G01N 33/92, G01N 30/72, опубл. 16.08.2021). Сущность способа заключается в том, что определяют соотношение концентрации 3-гидроксимасляной и 3-метил-2-оксовалериановой кислот, определенных хроматографическим методом в образце венозной крови пациента. При соотношении концентрации 3-гидроксимасляной кислоты к концентрации 3-метил-2-оксовалериановой кислоты 19/1 и больше диагностируют стеатоз печени, при соотношении 13/1 и меньше диагностируют НАСГ. Способ может использоваться для неинвазивного определения стеатоза печени и неалкогольного стеатогепатита у пациентов мужского пола с неалкогольной жировой болезнью печени.

Недостатками являются: невозможность их применения у женщин, требуется два дорогостоящих реактива.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание способа ранней диагностики неалкогольной жировой болезни печени -заболевания, которым страдает 37,3% населения России (DIREG 2, 2014).

Техническим результатом изобретения является возможность ранней диагностики НАЖБП и повышение скорости ее определения у пациентов в широкой практике, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности, что позволит начать лечение патологии раньше, отсрочить или предотвратить развитие осложнений, связанных с указанным заболеванием и, следовательно, снизить распространенность НАЖБП в популяции.

Технический результат достигается тем, что у пациентов старше 18 лет без объективных симптомов заболеваний печени и аутоиммунных, генетических, онкологических и дисгормональных патологий (в т.ч. эндометриоза 3,4 ст. у женщин), не требующих гемодиализа, не имеющих острых состояний на момент наблюдения и особых физиологических состояний (беременность, лактация), но с минимально отклоняющимися от нормы показателями биохимического анализа крови или липидограммы, или с изменением эхогенности печени на УЗИ, определяют экспрессию белка SFRP4 в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа, и при концентрации SFRP4, равной 10,6-39,8 нг/мл диагностируют НАЖБП.

Значения SFRP4 более 39,8 нг/мл требуют углубленного поиска более тяжелой патологии (чаще, связанной с онкологическим, аутоиммунным процессом или цирроза печении любой этиологии).

Способ осуществляется следующим образом:

1) Проводят проверку на соответствие исследуемого пациента условию использования и отсутствию условиям неиспользования маркера SFRP4 (по данным амбулаторной карты больного, путем устного опроса и объективного осмотра исследуемого).

Условием для использования теста ранней диагностики НАЖБП маркера SFRP4 является возраст больных - старше 18 лет.

Условиями неиспользования SFRP4 в качестве теста ранней диагностики НАЖБП (вследствие возможности влияния на результат анализа) является наличие аутоиммунных, генетических, онкологических и дисгормональных патологий (в т.ч. эндометриоза 3,4 ст. у женщин), не требующих гемодиализа, не имеющих острых состояний на момент наблюдения и особых физиологических состояний (например, наличие алкогольной или наркотической зависимости, хронической алкогольной интоксикации, в том числе, в анамнезе; гепатиты: острые и хронические вирусные, токсические, аутоиммунные, лекарственно-индуцированные, ишемические; цирроз печени любого генеза; другие генетически обусловленные заболевания печени (болезнь Жильбера, болезнь Вильсона, первичный гемохроматоз, дефицит α1-антитрипсина); механическая обструкция желчевыводящих путей (гепатоцеллюлярная карцинома, билиарная обструкция вследствие желчекаменной болезни, синдром Бадда-Киари); наличие любых онкопатологий; тромбоз-ассоциированные состояния в анамнезе (тромбоэмболии легочной артерии, ишемические инсульты головного мозга, инфаркты миокарда); ХБП 2-5 стадия (KDOQI), почечный фиброз; остеопороз (с клиническими проявлениями в виде частых переломов), генетические нарушения формирования костной ткани, болезнь Пайла; беременность, лактация; эндометриоз 3 и 4 степеней у женщин; любые аутоиммунные патологии в фазе обострения (в том числе, псориаз)).

2) Выполняют биохимический анализ крови и липидограмму, анализируют показатели тестов. Устанавливают факт наличия минимальных симптомов отклонения от нормы (для синдрома цитолиза - не более 3 норм превышения показателей АЛТ и ACT). Проводят УЗИ ОБП (на предмет наличия изменения эхогенности печени).

3) Производят забор 5 мл крови из локтевой вены, центрифугируют полученную биологическую жидкость при 1000±100 об/мин в течение 30±2 мин для отделения сыворотки. В полученной прозрачной субстанции с желтоватым оттенком определяют концентрацию секреторного белка SFRP4 методом иммуноферментного анализа с использованием стандартного тест-набора ELISA Kit for SFRP4 human (Cloud-corp.) на автоматическом ИФА/нРИФ анализаторе. Значения сывороточного SFRP4 от 1,1-9,6 нг/мл считают соответствующими здоровым людям, уровень SFRP4 более 10,6 нг/мл и менее 39,8 нг/мл диагностируют как НАЖБП.

Диапазон экспрессии SFRP4 9,6-10,6 нг/мл предусматривается погрешностью исследования как промежуточный, не позволяет достоверно выставить диагноз НАЖБП и требует дообследования пациента.

Для проведения испытаний было отобрано 153 человека - пациентов БУ «Республиканская клиническая больница» Министерства здравоохранения Чувашской Республики (МЗ ЧР) и БУ «Городская клиническая больница №1» г. Чебоксары МЗ ЧР, добровольно согласившихся на проведение эксперимента и использование научной группой своих клинико-диагностических данных.

Критериями невключения исследуемого в эксперимент являлись: наличие у него алкогольной или наркотической зависимости, хронической алкогольной интоксикации, в том числе, в анамнезе; гепатиты: острые и хронические вирусные, токсические, аутоиммунные, лекарственно-индуцированные, ишемические; цирроз печени любого генеза; другие генетически обусловленные заболевания печени (болезнь Жильбера, болезнь Вильсона, первичный гемохроматоз, дефицит α1-антитрипсина); механическая обструкция желчевыводящих путей (гепатоцеллюлярная карцинома, билиарная обструкция вследствие желчекаменной болезни, синдром Бадда-Киари); наличие любых онкопатологий; тромбоз-ассоциированные состояния в анамнезе (тромбоэмболии легочной артерии, ишемические инсульты головного мозга, инфаркты миокарда); ХБП 2-5 стадия (KDOQI), почечный фиброз; остеопороз (с клиническими проявлениями в виде частых переломов), генетические нарушения формирования костной ткани, болезнь Пайла; беременность, лактация; эндометриоз 3 и 4 степеней у женщин; любые аутоиммунные патологии в фазе обострения (в том числе, псориаз).

Все пациенты были поделены на две группы: опытную (N1) - 110 человек и контрольную (N2) - 43 человека.

Представители группы N1 были обследованы, имели ранее верифицированный ТЭ и ЭСВ печени с эластометрией диагноз НАЖБП (при отсутствии других выставленных заболеваний).

В экспериментальных целях проводился анализ: результатов объективного осмотра; из лабораторных методов: общего (в целях дифференциальной диагностики) и биохимического анализов крови, липидограммы, SFRP4 в сыворотке крови; из инструментальных - данных ультразвукового исследования органов брюшной полости (УЗИ ОБП). Для подтверждения диагноза НАЖБП использовались эластографические тесты: ТЭ и ЭСВ печени с эластометрией.

В группу N2 вошли практически здоровые участники, проходившие плановый медицинский осмотр по направлению от места трудоустройства, не имевшие патологических изменений по данным стандартных лабораторных тестов крови и УЗИ ОБП (УЗИ ОБП выполнялось всем исследуемым в качестве дополнительного метода обследования), без вредных привычек и не принимавшие лекарственные препараты на момент проведения эксперимента и за 2 месяца до его начала.

Среди прошедших исследование в каждой группе отмечалось сопоставимое (с разницей не более 5%) количество лиц мужского и женского пола, возрастной диапазон - от 18 до 68 лет (средний возраст 41,7±1,89 года). ИМТ представителей обеих групп: 18-31 кг/м².

Подтверждение диагноза «НАЖБП» осуществлялись при помощи эластографических тестов: ТЭ (на аппарате Фиброскан, Echo-Sens, Франция) и ЭСВ с эластометрией (на аппарате Aixplorer, Supersonic Imagine, Франция). Отметим, что сочетанное использование одномерной ТЭ и двумерной ЭСВ с эластометрией высокоинформативно (чувствительность - 94,0%, специфичность - 97,8%, точность -94,9%) и является достойной альтернативой биопсии печени в вопросах установления наличия жировых болезней печени. Средние значения жесткости печени (Emean, кПа) пациентов обеих групп оценивались при проведении ЭСВ с эластометрией.

Уровень сывороточного SFRP4 определялся стандартным методом проведения иммуноферментного анализа (ИФА) при помощи тест-набора ELISA Kit for SFRP4 human (Cloud-corp.) на автоматическом ИФА/нРИФ анализаторе Mago 4 (Erba Lachema, Чехия).

Длительность анализа по определению SFRP4 в сыворотке крови - 3 часа, чувствительность реагента - 2,2 пг/мл, диапазон определения - 10 пг/мл-800 мкг/мл, точность: CV<10%.

Статистический анализ проводился с использованием программы StatTech v. 2.7.1 (разработчик - ООО "Статтех", Россия).

Количественные показатели оценивались на предмет соответствия нормальному распределению с помощью критерия Шапиро-Уилка (при числе исследуемых менее 50) или критерия Колмогорова-Смирнова (при числе исследуемых более 50).

В случае отсутствия нормального распределения количественные данные описывались с помощью медианы (Me) и нижнего и верхнего квартилей (Q1-Q3).

Сравнение двух групп по количественному показателю, распределение которого отличалось от нормального, выполнялось с помощью U-критерия Манна-Уитни.

Для оценки диагностической значимости количественных признаков при прогнозировании определенного исхода, применялся метод анализа ROC-кривых. Разделяющее значение количественного признака в точке cut-off определялось по наивысшему значению индекса Юдена.

При оценке уровней основных показателей биохимического анализа крови и липидограммы у пациентов опытной и контрольной групп были получены следующие результаты (табл. 2).

Результаты анализа уровней SFRP4 у пациентов опытной и контрольной групп демонстрировали значимые различия (табл. 3).

На рис. 1. показан анализ показателей сывороточного уровня SFRP4 (нг/мл) в зависимости от наличия НАЖБП у пациента (1 - здоровые, 2 - больные).

Диапазон экспрессии SFRP4 9,6-10,6 нг/мл предусматривается погрешностью исследования как промежуточный, не позволяет достоверно выставить диагноз и требует дообследования пациента.

Пороговые значения показателей сывороточного SFRP4 при диагностике НАЖБП указаны в табл. 4.

Пороговое значение показателей сывороточного уровня SFRP4 в точке cut-off, которому соответствовало наивысшее значение индекса Юдена, составило 10,6 нг/мл.

Развитие заболевания прогнозировалось при значении показателей сывороточного уровня SFRP4 выше данной величины или равном ей. Чувствительность и специфичность модели составили 95,5% и 92,7%, соответственно.

Был проведен корреляционный анализ взаимосвязи показателей сывороточного уровня SFRP4 и значений ЭСВ с эластометрией (Emean) (табл. 5).

Четко регламентированные референсные значения для сывороточного SFRP4 еще не определены и различаются при применении реагентов различных производителей. За нормальные для тест-набора ELISA Kit for SFRP4 human (Cloud-clone corp., сертификат №ISO13485:2003 EN ISO13485:2012/ISO9001:2008) принимают результаты контрольной группы пациентов и обозначают как соответствующие диапазону значений не выше 9,6 нг/мл (диапазон значений в эксперименте).

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Больной А., 48 лет. Жалобы: слабость, повышенная утомляемость, боль в правом подреберье при физических нагрузках малой интенсивности. Анамнез заболевания: год назад на профосмотре впервые было выявлено увеличение уровня артериального давления (150/110 мм рт.ст.), ожирение 1 ст. (индекс массы тела (ИМТ) - 30,6 кг/м²). На дообследование не явился, лекарственных препаратов не принимал, диету не соблюдал. Алкоголь, гепатотоксичные вещества не употребляет. Сопутствующие заболевания, в том числе, заболевания гепатобилиарной системы и другие аутоиммунные, генетические, онкологические и дисгормональные патологии исключены по данным амбулаторной карты, опроса пациента и результатам объективного осмотра. На диспансерном учете у других специалистов не состоял и не состоит. Объективно: состояние удовлетворительное. Рост - 177 см, вес - 96 кг, объем талии - 127 см, ИМТ - 30,6 кг/м² (ожирение 1 степени). Визуально печеночные знаки на кожных покровах не наблюдаются. При пальпации: печень выступает из-под края реберной дуги на 2,5 см, мягкая, эластичная, край закруглен, безболезненный. Селезенка не увеличена. Периферические отеки отсутствуют. Данные лабораторных исследований: общий анализ крови - уровень эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина в норме, лейкоцитоз - 9,8*10⁹/л, скорость оседания эритроцитов - 12 мм/ч. Биохимический анализ крови: АЛТ - 138 Ед/л, ACT - 79 Ед/л, ГГТ - 40 Ед/л, щелочная фосфатаза - 111 Ед/л, общий билирубин - 14 ммоль/л, глюкоза - 5,8 ммоль/л, холестерин - 6,53 ммоль/л, триглицериды - 2,28 ммоль/л, УЗИ ОБП: передне-задний размер печени увеличен на 2 см, структура однородная, эхогенность повышена, сосудистый рисунок обеднен. SFRP4 - 24,8 нг/мл. Диагноз: Неалкогольная жировая болезнь печени. Гипертоническая болезнь 2 ст., 2 ст., риск 3. Ожирение 1 степени. Диагноз подтвержден с помощью эластографических тестов (жесткость печени по ТЭ - 8,1 кПа, по ЭСВ с эластометрией - 8,5 кПа).

Пример 2. Больная Б., 61 год. Жалобы: активных не предъявляет. Анамнез заболевания: раз в два года на протяжении последних 8 лет проходит лечение по поводу сладж-эффекта желчи в желчном пузыре (на данный момент отсутствует). Соблюдает диету с ограничением простых Сахаров, выполняет аэробные физические упражнения 2 раза в неделю самостоятельно. Алкоголь не употребляет. Сопутствующие заболевания, в том числе, заболевания гепатобилиарной системы и другие аутоиммунные, генетические, онкологические и дисгормональные патологии (в т.ч. эндометриоз) исключены по данным амбулаторной карты, опроса пациента и результатам объективного осмотра. На диспансерном учете у других специалистов не состояла и не состоит. Фармакологический анамнез: небиволол 5 мг по поводу ГБ 1 ст. (в течение 5 лет). Объективно: состояние удовлетворительное. Рост - 162 см, вес - 72,4 кг, объем талии - 93 см, ИМТ - 27,6 кг/м² (повышенное питание). Печеночные знаки на кожных покровах не визуализируются. При пальпации: печень выступает из-под края реберной дуги на 1 см, мягкая, эластичная, край закруглен, безболезненный. Селезенка не увеличена. Периферические отеки отсутствуют.Данные лабораторных исследований: общий анализ крови - уровень эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гемоглобина в норме, скорость оседания эритроцитов - 7 мм/ч. Биохимический анализ крови: АЛТ - 45 Ед/л, ACT - 48 Ед/л, ГГТ - 29 Ед/л, щелочная фосфатаза - 50 Ед/л, общий билирубин - 10 ммоль/л, глюкоза - 5,4 ммоль/л, холестерин - 5,8 ммоль/л, триглицериды - 1,12 ммоль/л, УЗИ ОБП: передне-задний размер печени увеличен на 1 см, структура однородная, эхогенность минимально повышена. SFRP4 - 10,6 нг/мл. Диагноз: Неалкогольная жировая болезнь печени. Гипертоническая болезнь 1 ст, 1 ст., риск 2. Диагноз подтвержден с помощью эластографических тестов (жесткость печени по ТЭ - 6,1 кПа, по ЭСВ с эластометрией - 5,9 кПа).

Пример 3. Больной В., 42 года. Жалобы: активных не предъявляет. В анамнезе: терапия запоров, вызванных синдромом раздраженного кишечника (2 года назад). Алкоголь не употребляет. Сопутствующие заболевания, в том числе, заболевания гепатобилиарной системы и другие аутоиммунные, генетические, онкологические и дисгормональные патологии исключены по данным амбулаторной карты, опроса пациента и результатам объективного осмотра. На диспансерном учете у других специалистов не состоял и не состоит. Диета с минимальным количеством простых углеводов, физические нагрузки в адекватном количестве регулярные. Фармакологический анамнез: небиволол 5 мг по поводу ГБ 1 ст. (в течение 1 года). Объективно: состояние удовлетворительное. Рост 180 см, вес 93,6 кг, объем талии 95 см, ИМТ 28,9 кг/м² (повышенное питание). Кожные покровы чистые, физиологической окраски, печеночных знаков нет. Живот мягкий, безболезненный, перкуторно печень выступает из-под края реберной дуги на 0,5 см. Биохимический анализ крови: АЛТ - 44 Ед/л, ACT - 46 Ед/л, ГГТ - 37 Ед/л, щелочная фосфатаза - 72 Ед/л, общий билирубин - 11 ммоль/л, глюкоза - 5,5 ммоль/л, холестерин - 4,7 ммоль/л, триглицериды - 0,89 ммоль/л, УЗИ ОБП: передне-задний размер печени увеличен на 1 см, структура однородная, эхогенность минимально повышена. Желчный пузырь - форма не изменена, стенка не утолщена. Внутрипеченочные желчные протоки не расширены. Холедох не расширен, свободен. SFRP4 - 9,6 нг/мл. Диагноз: гипертоническая болезнь 1 ст, 1 ст., риск 2. Отсутствие НАЖБП подтверждено с помощью эластографических методов (жесткость печени по ТЭ - 5,5 кПа, по ЭСВ с эластометрией - 5,6 кПа).

Пример 4. Больная Г., 22 года. Жалобы: на тяжесть в правом подреберье, нерезко выраженную слабость. По данным анамнеза, имеет аллергическую реакцию на алкоголь (отек Квинке), не употребляет. Сопутствующие заболевания, в том числе, заболевания гепатобилиарной системы и другие аутоиммунные, генетические, онкологические и дисгормональные патологии (в т.ч. эндометриоз) исключены по данным амбулаторной карты, опроса пациента и результатам объективного осмотра. Беременность и лактацию отрицает. На диспансерном учете у других специалистов не состояла и не состоит. Фармакологический анамнез: лекарственные препараты регулярно и в последние 6 месяцев не принимала. Объективно: состояние удовлетворительное. Рост 171 см, вес 65 кг, объем талии 72 см, ИМТ 22,2 кг/м². Кожные покровы чистые. Живот мягкий, безболезненный, перкуторно печень выступает из-под края реберной дуги на 2 см. Биохимический анализ крови: АЛТ - 30 Ед/л, ACT - 21 Ед/л, ГГТ - 27 Ед/л, щелочная фосфатаза - 100 Ед/л, общий билирубин - 12 ммоль/л, глюкоза - 5,2 ммоль/л, холестерин - 7,8 ммоль/л, триглицериды - 2,5 ммоль/л, УЗИ ОБП: передне-задний размер печени увеличен на 2,5 см, структура однородная, эхогенность умеренно повышена, сосудистый рисунок обеднен. SFRP4 - 27 нг/мл. Диагноз: Неалкогольная жировая болезнь печени. Диагноз подтвержден с помощью эластографических тестов (жесткость печени по ТЭ - 7,6 кПа, по ЭСВ с эластометрией - 8,1 кПа).

Пример 5. Больная Г., 62 года. Жалобы: на тяжесть в правом подреберье, снижение работоспособности, слабость в ногах. По данным анамнеза, алкоголь и наркотические вещества не употребляет и никогда не употребляла. Сопутствующие заболевания, в том числе, заболевания гепатобилиарной системы и другие аутоиммунные, генетические, онкологические и дисгормональные патологии (в т.ч. эндометриоз) исключены по данным амбулаторной карты, опроса пациента и результатам объективного осмотра. Беременность и лактация исключены. На диспансерном учете у других специалистов не состояла и не состоит. Фармакологический анамнез: принимала целекоксиб (не более 1 раза в 2 недели) при эпизодах возникновения болей в грудном и поясничном отделах позвоночника. Объективно: состояние удовлетворительное. Рост 166 см, вес 70 кг, объем талии 78 см, ИМТ 25,4 кг/м². Кожные покровы чистые, отмечены единичные телеангиоэктазии в области декольте. Живот мягкий, безболезненный, перкуторно печень выступает из-под края реберной дуги на 3,5 см. Биохимический анализ крови: АЛТ - 113 Ед/л, ACT - 142 Ед/л, ГГТ - 57 Ед/л, щелочная фосфатаза - 215 Ед/л, общий билирубин -19 ммоль/л, глюкоза - 5,1 ммоль/л, холестерин - 4,7 ммоль/л, триглицериды - 1,9 ммоль/л, УЗИ ОБП: передне-задний размер печени увеличен на 3 см, структура неоднородная, эхогенность умеренно повышена. Обнаружено очаговое образование паренхимы правой доли печени размерами 19*21*15 мм неоднородное, с неровными краями, обильно васкуляризирована (при гистологическом иссследовании подтверждена гепатоцеллюлярная карцинома). SFRP4 - 41,1 нг/мл. Диагноз: Неалкогольная жировая болезнь печени. Диагноз подтвержден с помощью эластографических тестов (жесткость печени по ТЭ - 13,7 кПа, по ЭСВ с эластометрией - 13,0 кПа). Осложнение: гепатоцеллюлярная карцинома.

SFRP4 имеет все характеристики, способствующие считать его потенциально высокочувствительным, специфичным и точным маркером жировой патологии печени, не связанной с употреблением алкоголя: он участвует в адипогенезе и дифференциации адипоцитов (Guan Н., Zhang Y., Gao S. et al. Differential Patterns of Secreted Frizzled-Related Protein 4 (SFRP4) in Adipocyte Differentiation: Adipose Depot Specificity // Cell Physiol Biochem. 2018;46(5):2149-2164), реагирует на предиабетические, диабетические процессы в организме человека (Baldane S, Ipekci SH, Ekin A. et al. Evaluation of fractalkine (FKN) and secreted frizzled-related protein 4 (SFRP-4) serum levels in patients with prediabetes and type 2 diabetes // Bratisl Lek Listy. 2018; 119(2): 112-115), имеет тропность к тканям печени (Xu С, Zeng ХН, Wang L. et al. SFRP-4, a potential novel serum marker for chronic hepatitis B-related hepatocellular carcinoma // Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 2015 Apr; 14(2): 164-7). Поэтому постановка диагноза НАЖБП не требует обязательного проведения множества тестов, позволяющих опровергнуть наличие других гепатопатологий.

Таким образом, можно сделать вывод о значимости сывороточного показателя SFRP4 как высокоинформативного идентификатора развития НАЖБП.

Параметр рекомендуется определять после выявления минимальных симптомов поражения печени по результатам проведения стандартных тестов крови (общего и биохимического анализов крови, липидограммы, коагулограммы), УЗИ ОБП с целью исключения более тяжелой патологии (чаще онкологического, аутоиммунного процесса или цирроза печении любой этиологии), всегда имеющей собственные диагностические признаки.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, гепатологии, и может быть использовано для ранней диагностики неалкогольной жировой болезни (НАЖБП). Проводят исследование сыворотки крови. У пациентов старше 18 лет, не требующих гемодиализа, не имеющих острых состояний на момент наблюдения, беременности, лактации, в сыворотке крови определяют экспрессию белка Secreted Frizzled Related Protein-4 (SFRP4) методом проведения иммуноферментного анализа. При концентрации SFRP4 в пределах 10,6-39,8 нг/мл диагностируют неалкогольную жировую болезнь печени. Способ обеспечивает возможность ранней диагностики НАЖБП и повышение скорости ее определения у пациентов в широкой практике, повышение доступности и простоты исполнения при высокой чувствительности, специфичности и эффективности, за счет определения в крови экспрессии белка SFRP4, что позволит начать лечение патологии раньше, отсрочить или предотвратить развитие осложнений, связанных с указанным заболеванием, и, следовательно, снизить распространенность НАЖБП в популяции. 1 ил., 5 табл., 5 пр.

Способ ранней диагностики неалкогольной жировой болезни, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что у пациентов старше 18 лет, не требующих гемодиализа, не имеющих острых состояний на момент наблюдения, беременности, лактации, в сыворотке крови определяют экспрессию белка Secreted Frizzled Related Protein-4 (SFRP4) методом проведения иммуноферментного анализа и при концентрации SFRP4 в пределах 10,6-39,8 нг/мл диагностируют неалкогольную жировую болезнь печени.