ПРИМЕНЕНИЕ 1-(2-ТИЕНИЛ)-4H-[1,2]ОКСАЗИНО[5,4-b]ХИНОЛИН-4,10(5H)-ДИОНА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО РАДИКАЛСВЯЗЫВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/5365 A61P43/00 

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, фармации и фармакологии, а именно к применению 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона в качестве средства, обладающего радикалсвязывающей активностью, которое может найти применение для лечения людей и животных в качестве антиоксиданта.

Накопление свободных радикалов в организме приводит к повреждению липидов, белков, нуклеопротеидов, что запускает патологические реакции, которые в свою очередь могут привести к появлению или обострению онкологических, сердечнососудистых, нейродегенеративных и других заболеваний. Для фармакологической коррекции накопления свободных радикалов используют антиоксиданты. Определение антиоксидантной активности соединений осуществляют в тестах оценки радикалсвязывающего действия, например, в тесте Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC).

К известным веществам, обладающим радикалсвязывающей активностью, относится кофейная кислота 1, генистеин 2, кверцетин 3 [Ou, B.; Hampsch-Woodill, M.; Prior, R. L. Development and validation of an improved oxygen radical absorbance capacity assay using fluorescein as the fluorescent probe. J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 4619-4626]. Указанные средства обладают радикалсвязывающей активностью, однако, по структуре они далеки от заявляемого 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона.

Технической задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих радикалсвязывающей активностью.

Поставленная задача решается применением 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона в качестве средства, обладающего радикалсвязывающей активностью.

В литературе имеются сведения о синтезе, физико-химических, спектральных характеристиках заявленного 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона [Ботева А.А. дис. … канд.фарм.наук. Пер.гос.фарм.академия, Пермь, 2008]. Однако в литературе отсутствуют сведения о радикалсвязывающей активности данного соединения.

Получение 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона реализуется реакцией метилового эфира 4-oксо-3-(2-тиеноил)-1,4-дигидрохинолин-2-карбоновой кислоты с гидрохлоридом гидроксиламина [Ботева А.А. дис. … канд.фарм.наук. Пер.гос.фарм.академия, Пермь, 2008].

Новое свойство 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона было обнаружено авторами путем ряда экспериментов и его нельзя было предсказать заранее.

Радикалсвязывающая активность 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона изучалась в тесте ORAC согласно методике [Ou, B.; Hampsch-Woodill, M.; Prior, R. L. Development and validation of an improved oxygen radical absorbance capacity assay using fluorescein as the fluorescent probe. J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 4619-4626.], адаптированной для работы на микропланшетном ридере Tecan M1000 PRO.

В основе метода лежит способность 2,2′-азобис(2-метилпропионамидин) дигидрохлорида (AAPH), при 37ºС генерировать радикалы, разрушающие молекулу флуоресцеина. При нагревании до 37ºС азид разлагается, выделяя газообразный азот, образуя два радикала R •. В присутствии кислорода радикалы R • почти мгновенно превращаются в реакционноспособные пероксильные радикалы ROO •, которые могут либо атаковать молекулу флуоресцеина, либо реагировать с антиоксидантами. При разрушении флуоресцеина радикалом наблюдается снижение уровня флуоресценции. Вещество, обладающее радикалсвязывающей активностью, способно конкурентно связывать свободный радикал, защищая молекулу флуоресцеина от разрушения. При этом наблюдается сдвиг по времени снижения флуоресценции флуоресцеина. Оценку радикалсвязывающей активности проводили по следующей методике: в лунку 96-луночного планшета вносили 15 мкл фосфатно-солевого буфера (ФСБ), 120 мкл рабочего раствора флуоресцеина (итоговая концентрация 42 нмоль), растворенного в ФСБ и 5 мкл исследуемого вещества, растворенного в ДМСО. Контролем служила проба с 5 мкл ДМСО. Планшет преинкубировали 15 минут при 37°С. Затем многоканальной пипеткой вносили 60 мкл раствора AAPH в ФСБ (итоговая концентрация 40 ммоль). Считывали флуоресценцию каждую минуту в течение 120 минут. Длина волны возбуждения – 485 нм, эмиссии – 520 нм.

Каждое значение кривой пересчитывали по отношению к первому значению:

,

где n_t – значение флуоресценции в момент времени t;

n₀ – значение флуоресценции в нулевой момент времени.

Площадь под кривой (AUC) рассчитывали как сумму площадей, заключенных между двумя соседними точками, рассчитанных по формуле для расчета площади трапеции.

Степень радикалсвязывающей активности выражали по формуле:

,

где AUC_П – площадь под кривой с исследуемым веществом, AUC_AAPH - площадь под кривой с растворителем, AUC_ФЛ - площадь под кривой с флуоресцеином без AAPH.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1: Радикалсвязывающая активность (РСА) для разных концентраций 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона

№ Концентрация, мкмоль РСА, % 1 125 94,79±6,76 2 62,5 86,72±3,92 3 31,3 78,11±9,70 4 15,6 66,05±7,77

Для тролокса, общепринятого стандарта при оценке антиоксидантной активности, была получена радикалсвязывающая активность 100,20±3,16% для концентрации 125 мкмоль и 89,04±5,36% для концентрации 62,5 мкмоль. Таким образом, радикалсвязывающая активность заявляемого 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона сопоставима с активностью общепринятого стандарта.

Пример 2: 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-дион

К 1.7 ммоль метилового эфира 4-oксо-3-(2-тиеноил)-1,4-дигидрохинолин-2-карбоновой кислоты, растворенного в 50 мл изопропилового спирта, прибавляли 3.5 ммоль гидрохлорида гидроксиламина и 2 ммоль триэтиламина. Кипятили с обратным холодильником 3 ч. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровали, перекристаллизовывали из диоксана. Выход 45%. Тпл. >365°C (диоксан). ИК спектр (вазелиновое масло): 1728 (С(4)=О), 1634 (С(10)=О), 1588 (С=С). ЯМР ¹H (400 МГц, DMSO-d₆) δ 7.10 (д.д, 1Н, H(4’), ³J = 5.4, ³J = 3.4); 7.38 (д.д, 1Н, H(3’), ³J = 3.8, ⁴J = 1.0); 7.49 (д.д, 1Н, H(5’), ³J = 5.8, ⁴J = 1.4); 7.55 (д.д.д, 1Н, Н(7), ³J = 8.0, ³J = 7.5, ⁴J = 1.0); 7.82 (д.д.д, 1Н, Н(8), ³J = 7.8, ³J = 7.6, ⁴J = 1.6); 7.90 (д, 1Н, Н(6), ³J = 8.0); 8.24 (д.д, 1Н, Н(9), ³J = 7.8, ⁴J = 1.4); 13.81 (с, 1Н, NH). Элементный анализ: вычислено для C₁₅H₈N₂O₃S C, 60.80; H, 2.72; N, 9.45; найдено C, 60.92; H, 2.80; N, 9.51.

Экспериментальные испытания показали, что 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-дион проявляет высокую радикалсвязывающую активность, что позволяет рекомендовать его в качестве антиоксиданта для лечения людей и животных. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих радикалсвязывающей активностью.

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, фармации и фармакологии, а именно к применению 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона в качестве средства, обладающего радикалсвязывающей активностью. Изобретение может найти применение в качестве антиоксиданта для лечения людей и животных. Технический результат – радикалсвязывающая активность 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона. 2 пр.

Применение 1-(2-тиенил)-4H-[1,2]оксазино[5,4-b]хинолин-4,10(5H)-диона в качестве средства, обладающего радикалсвязывающей активностью

.