Синтез сложных эфиров флавоноидов нарингенина, кверцетина, гесперетина Российский патент 2023 года по МПК C07D311/30 C07D311/32 A61K31/35 

Изобретение относится к фармации, в частности, к химико-фармацевтической отрасли и касается способа получения сложных эфиров нарингенина, кверцетина, гесперетина и может использоваться для получения лекарственных препаратов на основе этих соединений.

Флавоноиды относят к природным полифенолам с широким спектром биологического действия. Наиболее известным и изученным видом их активности является антиоксидантная [Flavonoids as Antioxidants / Slobodan V. Jovanovic, Steen Steeden, Mihajlo Tosic, Budimir Marjanovic, Michael G. Simic // J. Am. Chem. SOC. 1994,116, 4846-4851. Прогностическая модель связи антирадикальной активности с потенциалом ионизации молекул и ионов флавоноидов / Белая Н.И., Белый А.В., Щербаков И.Н. // Кинетика и катализ. 2020. Т. 61. №3. С. 334-342]. Для флавоноидов также установлены и подтверждены антимутагенное, гепатопротекторное, противораковое, капиляроукрепляющее, противовирусное и антибактериальное действия [Chemistry and biological activities of flavonoids: an overview / Kumar S, Pandey AK. // Scientific World Journal. 2013. 2013; 162750. Flavonoids with inhibitory activity against SARSCoV-2 3CLpro / Seri Jo, Suwon Kim, Dae Yong Kim, Mi-Sun Kim, Dong Hae Shin // Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2020, 35 (1); 1539-1544 Флавоноидные соединения Artemisia glabella Kar. et Kir., синтезы на их основе и их биологическая активность / Байсаров Г.М., Жуматаева А.Р., Мукушева Г.К., Шульц Э.Э., Сейдахметова Р.Б., Адекенов С.М. // Химия растительного сырья. 2018. №3. С. 215-222. United States Patent US 10765660 B2].

Тем не менее, широкое применение флавоноидов в медицине и фармации ограничено и это, в первую очередь, связано с тем, что они легко окисляются и имеют невысокую биодоступность в связи с низкой липофильностью. Существует обратная корреляция между числом гидроксильных групп и липофильностью флавоноидов [The uncoupling efficiency and affinity of flavonoids for vesicles / C van Dijk1,A J Driessen,K Recourt //Biochem Pharmacol. 2000, 60(11); 1593-600]. Одним из самых эффективных способов усиления фармакологической активности и повышения биодоступности биологически активных соединений является направленная химическая модификация их структуры. В частности, повышение липофилизации флавоноидов возможно за счет перевода гидроксильных групп в сложноэфирные [Enzyme-Mediated Preparation of Flavonoid Esters and Their Applications / Jana Viskupicova, Miroslav Ondrejovic and Tibor Maliar // Biochemistry, 2011. DOI: 10.5772/34174]. Этерификацию флавоноидов проводят методами традиционного химического синтеза или в присутствии биокатализаторов [Flavonoids: Chemistry, Biochemistry and Applications. Edited by Øyvind M. Andersen Kenneth R. Markham, 2006, Taylor & Francis Group, LLC. 1212 р.].

Большинство работ, связанных с этой темой, посвящено этерификации флавоноидов по гидроксильным группам сахарного остатка. Например, в работе [Synthesis of naringin 6"-ricinoleate using immobilized lipase / Verônica M Almeida, Carla RC Branco, Sandra A Assis, Ivo JC Vieira, Raimundo Braz-Filho, Alexsandro Branco // Almeida et al. Chemistry Central Journal. 2012. 6:41; 2-7.] описана реакция этерификации нарингина с касторовым маслом, содержащим рицинолевую кислоту, которая является основной жирной кислотой касторового масла. Авторы проводили синтез с использованием биокатализатора - иммобилизованной липазы В из Candida antarctica.

Известен способ получения эфиров рутина, нарингина, геспередина, которые являются гликозидами кверцетина, нарингенина и гесперетина, соответственно. Этерификация проведена алифатическими кислотами, например, пентановой и ундециловой кислотами по гидроксильным группам сахарных остатков рутина, нарингина, геспередина в присутствии липазы B из Candida antarctica (CALB) [Biocatalytic Synthesis of Flavonoid Esters by Lipases and Their Biological Benefits / Maria Elisa M. B. de Araújo, Yollanda E. M. Franco, Marcia C.F. Messias, Giovanna B. Longato, João A. Pamphile, Patricia de O. Carvalho // Planta Med. 2017; 83: 7-22].

Вместе с тем в литературе описано несколько способов синтеза эфиров флавоноидов, основанных на ацилировании фенольных групп флавоноидных агликонов - кверцетина и нарингенина [Unexpected enzyme-catalyzed regioselective acylation of flavonoid aglycones and rapid product screening / E. Kyriakou, A. Primikyri, P. Charisiadis, M. Katsoura, I.P. Gerothanassis, H. Stamatis, A. G. Tzakos // Org. Biomol. Chem., 2012, 10, 1739 -1742]. Синтез проведен с участием липазы B из Candida antarctica (CALB), в качестве кислот составляющих сложных эфиров использованы винилацетат или винилбутират.

В работе [Ester-Based Precursors to Increase the Bioavailability of Quercetin / Lucia Biasutto, Ester Marotta, Umberto De Marchi, Mario Zoratti, Cristina Paradisi // J. Med. Chem. 2007, 50, 241-253] приведены результаты получения пентаацетилкверцетина в уксусном ангидриде и пиридине при кипячении с обратным холодильником в течение 5 часов.

Следует отметить, что даже небольшие изменения в структуре флавоноидов приводят к проявлению новых свойств, например, для монометиловых эфиров кверцетина установлено противовирусные, противовоспалительные и противораковое действия. Получение сложных эфиров нарингина и геспередина с бутановой и декановой кислотами привело в потенцированию их противогрибковой активности. Введение в молекулу рутина остатка олеиновой кислоты усилило его антиоксидантные свойства, сложный эфир изокверцетина и эйкозапентаеновой кислоты проявил более выраженные противовоспалительные свойства [Biocatalytic Synthesis of Flavonoid Esters by Lipases and Their Biological Benefits / Maria Elisa M. B. de Araújo, Yollanda E. M. Franco, Marcia C. F. Messias, Giovanna B. Longato, João A. Pamphile, Patricia de O. Carvalho // Planta Med. 2017; 83: 7-22]. Мы предполагаем, что получение сложных эфиров нарингенина, кверцетина и гесперетина, вероятней всего, позволит снизить их высокую метаболитическую активность, повысит липофильность и приведет к потенцированию их ангиопротекторной и вазодилатирующей активностям, например, при этерификации с никотиновой кислотой.

В качестве прототипов были выбраны: 1) способ получения сложных эфиров рутина и нарингина [Regioselective acylation of flavonoids catalyzed by lipase in low toxicity media / Athina Kontogiannia, Vasso Skouridoua, Vasiliki Seretia, Haralambos Stamatisb, Fragiskos N.Kolisis/ Eur. J. Lipid Sci. Technol. 103 (2001) 655-660], согласно которому сложные эфиры нарингина и рутина и жирных кислот (октановой, декановой и додекановой) получали в присутствии липазы В из Candida antarctica (Novozyme 435), используя в качестве растворителей воду и трет-бутанол с добавлением солей хлорида лития, хлорида магния, хлорида кобальта, нитрата калия и нитрата натрия, температура реакционной среды - 45°С, продукты очищали препаративной ТСХ, используя Силикагель 60, в качестве подвижной фазы - смесь ацетонитрил-метанол-вода (8/2/0,3) (объемные проценты) в случай эфиров нарингина и хлороформа/метанола/вода (8/2/0,3) (объемные проценты) в случае эфиров рутина. 2) способ синтеза эфиров кверцетина, нарингенина и винилацетат или винилбутират [Unexpected enzyme-catalyzed regioselective acylation of flavonoid aglycones and rapid product screening / E. Kyriakou, A. Primikyri, P. Charisiadis, M. Katsoura, I.P. Gerothanassis, H. Stamatis, A. G. Tzakos // Org. Biomol. Chem., 2012, 10, 1739-1742] в среде ацетонитрила, присутствии липазы B из Candida antarctica (CALB), в течение 72 часов, при температуре 60°С.

Заявляемое изобретение ставит своей целью синтез сложных эфиров флавоноидов, в частности, сложных эфиров:

нарингенина и бензойной кислоты;

нарингенина и салициловой кислоты;

нарингенина и коричной кислоты;

нарингенина и никотиновой кислоты;

гесперитина и бензойной кислоты;

гесперитина и салициловой кислоты;

гесперитина и коричной кислоты;

гесперитина и никотиновой кислоты;

кверцетина и бензойной кислоты;

кверцетина и салициловой кислоты;

кверцетина и коричной кислоты;

кверцетина и никотиновой кислоты.

Существенными отличительными признаками изобретения являются следующие особенности:

сложные эфиры получены для агниконов флавоноидов, а именно для нарингенина, гесперитина, кверцетина;

сложные эфиры получены с применением бензойной кислоты, салициловой кислоты, коричной кислоты, никотиновой кислоты;

скорость перемешивания - 120 об/мин, смена направления через 15минут;

температуры процесса - 50°С;

высушивание полученных соединений - в течение 2 ч, при давлении 50 мм рт. ст., температуре 60°С;

очистка целевых соединений методом колоночной хроматографии с элюентом - смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3.

Установление структуры полученных эфиров проведено методом ЯМР и масс-спектрометрии:

Нарингенин 4'-бензоат (4-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)фенил бензоат) (1). Выход 0,655 г (87%), т. пл. 229-232°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 2.9, 17.0), 3.25 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.1), 5.44 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.92 м (2H, H^6,8), 6.88 д (2H, H^3’,5’, J = 8.8), 7.33 д (2H, H^2’,6’, J = 8.4), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 8.07 д (2Н, Н^{2’’, 6’’}, J = 2.0), 10.78 с (1H, OH⁷), 12.15 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 377.09 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₂Н₁₆О₆Н⁺: 377.10).

Нарингенин 4'-салицилат (4-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)фенил 2-гидроксибензоат) (2). Выход 0,670 г (86%), т. пл. 251-253°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 2.9, 17.0), 3.25 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.1), 5.44 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.92 м (2H, H^6,8), 6.88 д (2H, H^3’,5’, J = 8.8), 6.91 т (1Н, Н^5’’, J = 7.4), 6.97 д (1Н, Н^3’’, J = 7.5), 7.33 д (2H, H^2’,6’, J = 8.4), 7.53 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.82 д (1Н, Н^6’’, J = 7.7), 10.78 с (1H, OH⁷), 11.53 с (1H, OH^2’’), 12.15 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 393.08 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₂Н₁₆О₇Н⁺: 393.09).

Нарингенин 4'-циннамат (4-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)фенил цинамат) (3). Выход 0,685 г (85%), т. пл. 234-237°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 2.9, 17.0), 3.25 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.1), 5.44 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.92 м (2H, H^6,8), 6.45 д (1H, H^2’’’, J = 15.9), 6.88 д (2H, H^3’,5’, J = 8.8), 7.33 д (2H, H^2’,6’, J = 8.4), 7.40 т (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 7.9), 7.45 д (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.55 д (2H, H^{2’’,6’’}, J = 16.0), 7.81 д (1H, H^3’’’, J = 15.9), 10.78 с (1H, OH⁷), 12.15 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 403.09 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₄Н₁₈О₆Н⁺: 403.11).

Нарингенин 4'-никотинат (4-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)фенил никотинат) (4). Выход 0,664 г (88%), т. пл. 245-247°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 2.9, 17.0), 3.25 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.1), 5.44 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.92 м (2H, H^6,8), 6.88 д (2H, H^3’,5’, J = 8.8), 7.33 д (2H, H^2’,6’, J = 8.4), 7.57 т (1Н, Н^5’’, J = 8.0), 8.31 д (1Н, Н^4’’, J = 7.9), 8.81 д (1Н, Н^6’’, J = 5.0), 9.11 с (1Н, Н^2’’), 10.78 с (1H, OH⁷), 12.15 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 378.07 [M + Н]⁺ (вычислено для C₂₁H₁₅NO₆H⁺: 378.09).

Гесперетин 4'-бензоат (5-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)-2-метоксифенил бензоат) (9). Выход 0,655 г (87%), т. пл. 229-232°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 3.0, 17.0), 3.24 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.2), 3.78 с (3H, -OCH₃), 5.42 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.88 м (2H, H^6,8), 6.96 д (1H, H^5’, J = 8.5), 7.02 дд (1H, H^6’, J = 8.3), 7.11 д (1H, H^2’, J = 2.5), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 8.05 д (2Н, Н^{2’’, 6’’}, J = 2.0), 10.71 с (1H, OH⁷), 12.12 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 407.10 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₃Н₁₈О₇Н⁺: 407.11).

Гесперетин 4'-салицилат (5-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)-2-метоксифенил 2-гидроксибензоат) (10). Выход 0,701 г (83%), т. пл. 251-253°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 3.0, 17.0), 3.24 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.2), 3.78 с (3H, -OCH₃), 5.42 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.88 м (2H, H^6,8), 6.96 д (1H, H^5’, J = 8.5), 7.02 дд (1H, H^6’, J = 8.3), 7.11 д (1H, H^2’, J = 2.5), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.79 д (1Н, Н^6’’, J = 7.7), 10.71 с (1H, OH⁷), 11.53 с (1H, OH^2’’), 12.12 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 423.07 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₃Н₁₈О₈Н⁺: 423.10).

Гесперетин 4'-циннамат (5-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)-2-метоксифенил циннамат) (11). Выход 0,727 г (84%), т. пл. 231-233°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 3.0, 17.0), 3.24 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.2), 3.78 с (3H, -OCH₃), 5.42 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.88 м (2H, H^6,8), 6.45 д (1H, H^2’’’, J = 15.9), 6.96 д (1H, H^5’, J = 8.5), 7.02 дд (1H, H^6’, J = 8.3), 7.11 д (1H, H^2’, J = 2.5), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.81 д (1H, H^3’’’, J = 15.9), 8.07 д (2Н, Н^{2’’, 6’’}, J = 2.0), 10.71 с (1H, OH⁷), 12.12 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 433.11 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₅Н₂₀О₇Н⁺: 433.12).

Гесперетин 4'-никотинат 5-(5,7-дигидрокси-4-оксохроман-2-ил)-2-метоксифенил бензоат) (9). Выход 0,694 г (85%), т. пл. 244-246°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 2.69 дд (1H, ax-H³, J = 3.0, 17.0), 3.24 дд (1H, eq-H³, J = 12.9, 17.2), 3.78 с (3H, -OCH₃), 5.42 дд (1H, H², J = 3.0, 12.7), 5.88 м (2H, H^6,8), 6.96 д (1H, H^5’, J = 8.5), 7.02 дд (1H, H^6’, J = 8.3), 7.11 д (1H, H^2’, J = 2.5), 7.57 т (1Н, Н^5’’, J = 8.0), 8.31 д (1Н, Н^4’’, J = 7.9), 8.81 д (1Н, Н^6’’, J = 5.0), 9.11 с (1Н, Н^2’’), 10.71 с (1H, OH⁷), 12.12 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 408.08 [M + Н]⁺ (вычислено для C₂₂H₁₇NO₇H⁺: 408.10).

Кверцетин 4'-бензоат (2-гидрокси-4-(3,5,7-тригидрокси-4-оксо-4Н-хромен-2-ил)фенил бензоат) (5). Выход 0,715 г (88%), т. пл. 289-292°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 6.19 д (1H, H⁶, J = 2.0), 6.41 д (1H, H⁸, J = 2.0), 6.88 д (1H, H^5’, J = 8.4), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.54 дд (1H, H^6’, J = 2.2, J = 8.4), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.67 д (1H, H^2’, J = 2.0), 8.07 д (2Н, Н^{2’’, 6’’}, J = 2.0), 9.35 с (1H, OH^3’), 9.55 с (1H, OH³), 10.76 с (1H, OH⁷), 12.48 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 407.04 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₂Н₁₄О₈Н⁺: 407.07).

Кверцетин 4'-салицилат (2-гидрокси-4-(3,5,7-тригидрокси-4-оксо-4Н-хромен-2-ил)фенил 2-гидроксибензоат) (6). Выход 0,717 г (85%), т. пл. 322-324°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 6.19 д (1H, H⁶, J = 2.0), 6.41 д (1H, H⁸, J = 2.0), 6.88 д (1H, H^5’, J = 8.4), 6.91 т (1Н, Н^5’’, J = 7.4), 6.97 д (1Н, Н^3’’, J = 7.5), 7.54 дд (1H, H^6’, J = 2.2, J = 8.4), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.67 д (1H, H^2’, J = 2.0), 8.01 д (1Н, Н^6’’, J = 7.7), 9.35 с (1H, OH^3’), 9.55 с (1H, OH³), 10.76 с (1H, OH⁷), 11.53 с (1H, OH^2’’), 12.48 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 423.06 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₂Н₁₄О₉Н⁺: 423.06).

Кверцетин 4'-циннамат (2-гидрокси-4-(3,5,7-тригидрокси-4-оксо-4Н-хромен-2-ил)фенил циннамат) (7). Выход 0,760 г (88%), т. пл. 297-299°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 6.19 д (1H, H⁶, J = 2.0), 6.41 д (1H, H⁸, J = 2.0), 6.45 д (1H, H^2’’’, J = 15.9), 6.88 д (1H, H^5’, J = 8.4), 7.45 д (2Н, Н^{3’’,5’’}, J = 8.5), 7.54 дд (1H, H^6’, J = 2.2, J = 8.4), 7.58 т (1Н, Н^4’’, J = 7.3), 7.67 д (1H, H^2’, J = 2.0), 7.81 д (1H, H^3’’’, J = 15.9), 8.07 д (2Н, Н^{2’’, 6’’}, J = 2.0), 9.35 с (1H, OH^3’), 9.55 с (1H, OH³), 10.76 с (1H, OH⁷), 12.48 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 433.07 [M + Н]⁺ (вычислено для С₂₄Н₁₆О₈Н⁺: 433.09).

Кверцетин 4'-никотинат (2-гидрокси-4-(3,5,7-тригидрокси-4-оксо-4Н-хромен-2-ил)фенил никотинат) (8). Выход 0,685 г (84%), т. пл. 308-310°С. Спектр ЯМР 1Н, δ, м. д. (J, Гц): 6.19 д (1H, H⁶, J = 2.0), 6.41 д (1H, H⁸, J = 2.0), 6.88 д (1H, H^5’, J = 8.4), 7.54 дд (1H, H^6’, J = 2.2, J = 8.4), 7.57 т (1Н, Н^5’’, J = 8.0), 7.67 д (1H, H^2’, J = 2.0), 8.31 д (1Н, Н^4’’, J = 7.9), 8.81 д (1Н, Н^6’’, J = 5.0), 9.11 с (1Н, Н^2’’), 9.35 с (1H, OH^3’), 9.55 с (1H, OH³), 10.76 с (1H, OH⁷), 12.48 с (1H, OH⁵). Масс-спектр, m/z: 408.07 [M + Н]⁺ (вычислено для C₂₁H₁₃NO₈H⁺: 408.06).

Предлагаемый способ включает следующие стадии:

1) эквимолярные навески флавоноида (или нарингенина, или гесперитина, или кверцетина) и кислоты (или бензойной, или салициловой, или коричной, или никотиновой) растворяют в 50 мл ацетона;

2) в реакционную среду вносят катализатор Новозим 435 (Novozyme 435) (кат. № L4777 Sigma-Aldrich);

3) реакционную среду нагревают до 50°С;

4) время протекания реакции - 6 часов, скорость перемешивания 120 об/мин, смена направления перемешивания через 15 мин;

5) по истечении 6 часов иммобилизированный фермент отделяют фильтрованием;

6) проводят очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров на колонке, заполненной Силикагелем 60, в качестве элюента используют смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3

7) чистоту фракций контролируют методом ВЭЖХ, определяя количественное содержание продуктов реакции и остаточное содержание исходных компонентов;

8) фракцию, содержащую или нарингенин 4'-бензоат, или нарингенин 4'-салицилат, или нарингенин 4'-циннамат, или нарингенин 4'-никотинат, или гесперетин 4'-бензоат, или гесперетин 4'-салицилат, или гесперетин 4'-циннамат, или гесперетин 4'-никотинат, или кверцетин 4'-бензоат, или кверцетин 4'-салицилат, или кверцетин 4'- циннамат, или кверцетин 4'-никотинат, сушат в течение 2 ч, при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С

9) полученные вещества запаивают в ампулы темного стекла.

Пример получения нарингенин 4'-бензоата: 2 ммоль нарингенина (0,544 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,366 г) бензойной кислоты 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую нарингенин 4'-бензоат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения нарингенин 4'-салицилата: нарингенина (0,544 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,414 г) салициловой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую нарингенин 4'-салицилат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения нарингенин 4'-циннамата: 2 ммоль нарингенина (0,544 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,444 г) коричной кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую нарингенин 4'-циннамат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения нарингенин 4'-никотината: 2 ммоль нарингенина (0,544 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,369 г) никотиновой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую нарингенин 4'-никотинат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения гесперетин 4'-бензоата: 2 ммоль гесперетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,366 г) бензойной кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую гесперетин 4'-бензоат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения гесперетин 4'-салицилата: 2 ммоль гесперетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,414 г) салициловой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую гесперетин 4'-салицилат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения гесперетин 4'-циннамата: 2 ммоль гесперетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,444 г) коричной кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую гесперетин 4'-циннамат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения гесперетин 4'-никотината: 2 ммоль гесперетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,369 г) никотиновой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую гесперетин 4'-никотинат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения кверцетин 4'-бензоата: 2 ммоль кверцетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,366 г) бензойной кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую кверцетин 4'-бензоат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения кверцетин 4'-салицилата: 2 ммоль кверцетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,414 г) салициловой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую кверцетин 4'-салицилат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения кверцетин 4'-циннамата: 2 ммоль кверцетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,444 г) коричной кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую кверцетин 4'-циннамат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Пример получения кверцетин 4'-никотината: 2 ммоль кверцетина (0,604 г) растворяли в 50 мл ацетона, прибавляли избыток 3 ммоль (0,369 г) никотиновой кислоты и 0,5 г Novozyme 435. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут. После окончания реакции иммобилизированный фермент отделяли фильтрованием. Очистку полученного раствора от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров проводили на колонке, заполненной Силикагелем 60. В качестве элюента использовали смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, чистоту фракции контролировали методом ВЭЖХ. Полученную фракцию, содержащую кверцетин 4'-никотинат (не менее 99,0%), сушили 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С. Полученное вещество запаивали в ампулы темного стекла.

Предлагаемый способ синтеза сложных эфиров нарингенина, кверцетина, гесперетина с модельными кислотами (бензойной, салициловой, коричной, никотиновой) в дальнейшем может быть использован для получения новых оригинальных отечественных лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к способу получения сложных эфиров нарингенина, кверцетина, гесперетина. Описан синтез сложных эфиров флавоноидов при эквимолярном соотношении спирт : кислота – 0,002:0,003, где спиртосоставляющей сложных эфиров являются или нарингенин, или гесперетин, в качестве кислот используют или бензойную кислоту, или салициловую, или коричную кислоту, или никотиновую кислоту, также спиртосоставляющей сложных эфиров является кверцетин, в качестве кислот используют или бензойную кислоту, или никотиновую кислоту, которые растворяют в 50 мл ацетона, реакционную смесь перемешивают в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут, процесс синтеза контролируют методом ВЭЖХ, после окончания реакции иммобилизированный фермент отделяют фильтрованием, реакционную среду очищают от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров колоночной хроматографией, используя в качестве элюента смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, полученные сложные эфиры высушивают 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С и запаивают в ампулы темного стекла. Технический результат – получение синтез новых сложных эфиров флавоноидов, таких как нарингенин, кверцетин и гесперетин. 12 пр.

Синтез сложных эфиров флавоноидов при эквимолярном соотношении спирт : кислота – 0,002:0,003, где спиртосоставляющей сложных эфиров являются или нарингенин, или гесперетин, в качестве кислот используют или бензойную кислоту, или салициловую, или коричную кислоту, или никотиновую кислоту, также спиртосоставляющей сложных эфиров является кверцетин, в качестве кислот используют или бензойную кислоту, или никотиновую кислоту, которые растворяют в 50 мл ацетона, реакционную смесь перемешивают в течение 6 часов при температуре 50°С со скоростью 120 об/мин, меняя направление перемешивания через 15 минут, процесс синтеза контролируют методом ВЭЖХ, после окончания реакции иммобилизированный фермент отделяют фильтрованием, реакционную среду очищают от избытка непрореагировавших кислот и диэфиров колоночной хроматографией, используя в качестве элюента смесь спирта этилового 70% и ацетонитрила в объемном соотношении 7:3, полученные сложные эфиры высушивают 2 ч при давлении 50 мм рт. ст. и температуре 60°С и запаивают в ампулы темного стекла.