Способ экспрессной диагностики послеродового метрита у молочных коров в режиме реального времени Российский патент 2023 года по МПК A61D99/00 G01N33/48 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, ветеринарному акушерству.

Известен способ прогнозирования патологии послеродового периода у коров, заключающийся в том, что у телят в первые 1-1,5 часа после рождения кутиметром или штангенциркулем замеряют диаметр пупка и, если его размер больше 18 мм, у коров-матерей прогнозируют патологию послеродового периода [RU 2296507 C1, А61 5/107, 10.04.2007 Бюл. №10].

Недостатком данного способа является невысокая прогностическая точность и чувствительность.

Известен способ прогнозирования и ранней диагностики послеродового эндометрита у коров с применением термометрии в течение 10 дней после отела [Новикова Е.Н. Этиология и патогенез неспецифического послеродового эндометрита и разработка системы его профилактики и терапии у коров… Дисс. докт. вет.наук. - Краснодар. - 2020. С. - 118].

Недостатком данного способа является то, что повышение температуры наблюдается при системном развитии данного заболевания с гнойной, фибринозной, гнойно-некротической формах воспаления, тогда как катарально-гнойная может протекать без ее изменений.

В последнее десятилетие для оценки состояния репродуктивных органов, диагностики и прогнозирования осложнений послеродового периода широко используются УЗИ-сканеры, достоинством которых является безвредность и возможность многократного применения. Эхография позволяет обнаружить изменения, характерные для послеродового эндометрита, что способствует подтверждению клинического диагноза. Кроме того ультразвуковое исследование позволяет определить размеры матки, наличие экссудата в ее полости [Братчикова, О.А. Ультразвуковая диагностика послеродового эндометрита (обзор) / О.А. Братчикова, М.Л. Чехонацкая, Н.Е. Янаева // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2014. - Т. 10, №1. - С. 65-69., Пташинская, М. Краткое руководство по репродукции животных / М. Пташинская. - 2003. - С. 100-104.].

Недостатком данного метода является высокая стоимость оборудования и отсутствие квалифицированных специалистов, при этом данный способ не всегда информативен.

Наиболее близким техническим решением, взятым за прототип, является использование реакции йодной агглютинации на 1-7 сутки после отела. Сущность реакции: берется капля крови от животного, капля йодного реактива (2 г кристаллического йода и 4 г калия йодида) и 30 мл дистиллированной воды смешиваются стеклянной палочкой. Учет реакции проводят по истечении двух минут с момента перемешивания. При положительной реакции образуются темно-коричневые хлопья. При отрицательной реакции - прозрачная капля с желтоватым оттенком. Наличие положительной пробы предполагает клиническое проявление послеродовых заболеваний. Прогностическая точность составляет 90,7% [Рыжов Б.В. Разработка методов доклинической диагностики, этиотропно-патогенетической терапии и профилактики при послеродовом эндометрите у коров… Дисс. докт. вет. наук. - Троицк. - 1998. С. - 119].

Недостатком данного метода является невысокая прогностическая точность, трудоемкость в выполнении, связанная с фиксацией животных, потребность в реактивах и определенные затраты времени.

Техническим результатом изобретения является разработка способа экспрессной диагностики послеродового метрита у молочных коров в режиме реального времени с применением флуоресцентного реагента путем анализа маточно-цервикальной слизи.

Для решения технической задачи предложен способ экспрессной диагностики послеродового метрита у коров в режиме реального времени характеризующийся тем, что включает отбор 5-10 мл шеечно-вагинальной слизи у коровы, помещение ее в стерильную пробирку, добавление 3-5 мл воды, встряхивание и погружение в раствор тест-системы, пропитанной хлороформным раствором флуоресцентного реагента -2-(6-оксо-2-фенилимидазо[1,2-6]пиридо[4,3-е][1,2,4]триазин-7(6H)-ил) уксусной кислоты, выдерживание в течение 2-5 с и визуальную регистрацию изменения интенсивности окраски реагентной зоны по сравнению с исходной, фиксирование развития послеродового метрита, если интенсивность окраски реагента уменьшилась или исчезла при естественном свете или появилось флуоресцентное зеленое свечение .при освещении тест- системы УФ-светом с длиной волны 356 нм.

Предложенный способ является экспрессным, простым и объективным.

Способ экспрессной диагностики послеродового эндометрита у коров в режиме реального времени осуществляется следующим образом.

Пробы маточно-цервикальной слизи у коровы не менее 5-10 мл отбирает ветеринарный специалист, помещает ее в стерильную пробирку. Добавляют 3-5 мл воды, встряхивают содержимое и погружают в раствор тест-системы любой природы (раствор в капельнице, палочка с тампоном, бумажный, пластиковый носитель и др.) с нанесенным хлороформным раствором флуоресцентного реагента - 2-(6-оксо-2-фенилимидазо[1,2-6]пиридо[4,3-е][1,2,4]триазин-7(6H)-ил) уксусной кислоты. Системы выдерживают в растворе 2-5 с, вынимают и регистрируют визуально изменения интенсивности окраски реагентной зоны по сравнению с исходным. При наличии и развитии у животного послеродового метрита, при естественном освещении интенсивность окраски реагентной зоны уменьшается или исчезает, по сравнению с контролем. Если место проведения тестирования недостаточно освещено и возникла необходимость освещения тест-системы УФ-лампой (или фонариком) с длиной волны 356 нм, при наличии метрита цвет реагентной зоны изменяется на флуоресцирующий зеленый.

Способ демонстрируется следующими примерами.

Пример 1

В ходе клинико-акушерского осмотра коров (заключение ветеринарного специалиста по результатам исследований - см. таблицу 1) под инвентарными номерами 100(б/н), 4918, 4648, 5068, 2238, 4768 ветеринаром отобраны пробы слизи объемом не менее 5-10 мл. Пробы помещали в стерильные пробирки. К содержимому пробирки добавляли 3-5 мл воды, встряхивали и добавляли несколько капель хлороформного раствора флуоресцентного реагента из капельницы, выдерживали 2-5 с и визуально регистрировали изменения свечения, по сравнению с исходным. Пробы слизи от животных 100(б/н), 4918, 4648, 5068 помещали под УФ-лампу с источником света с длиной волны 356 нм. Визуально фиксировали появление зеленого свечения в пробах 100(б/н) и 5068, что связано с развитием послеродового метрита. При этом в пробах 4918 и 4648 свечение отсутствует при равном добавлении флуоресцентного реагента. Аналогично фиксировали изменения в пробирках с пробами от животных под инвентарными номерами 2238, 4768 (таблица 1), для которых зафиксировано свечение разной интенсивности при 356 нм.

Из 6 проб с клиническим диагнозом ветеринарного специалиста совпадают 5 результатов тестирования. Проба 5068 на момент измерения относилась к группе здоровых животных, но через 2 недели были зафиксированы клинические признаки развития послеродового метрита. Это значит, что на момент исследования у животного состояние было уже отличным от нормы и начиналось воспаление.

Способ осуществим.

Пример 2

В ходе клинико-акушерского исследования у коров до и после отела (заключение ветеринарного врача по результатам исследований - см. таблицу 2, столбец 2) под инвентарными номерами 5 к, 7к, 8к, 6к, 15119, 1409, 1417, 7012 ветеринарным специалистом отобраны пробы шеечно-вагинальной слизи объемом не менее 5-10 мл. Пробы помещены в стерильные пробирки. К содержимому пробирки добавляли 3-5 мл воды, встряхивали и погружали палочку с тампоном в в хлороформный раствор флуоресцентного реагента - 2-(6-оксо-2-фенилимидазо[1,2-6]пиридо[4,3-е][1,2,4]триазин-7(6H)-ил) уксусной кислоты. Систему выдерживали в растворе 2-5 с, вынимали и регистрировали визуально изменение интенсивности окраски реагентной зоны, по сравнению с исходным. Результаты анализа представлены в таблице 2. При наличии и развитии у животного послеродового метрита, при естественном освещении интенсивность окраски реагентной зоны уменьшается или исчезает, по сравнению с контролем. При этом, чем больше выражено воспаление, тем сильнее исчезает (деградирует) цвет зоны реагента. Аналитический сигнал для пробы 1409 не определен (таблица 2), что является не критичным, так как состояние пробы указывает на явные сильные процессы разложения, тест не имеет смысла. А для пробы 7012 отсутствие явного изменения связано с другими причинами осложнения послеродового периода, осложнением родов (задержание последа), воспалительный процесс еще не развился.

Оценка состояния проб, полученных от молочных коров, заболевших послеродовым метритом, в разной степени выраженности совпала с выводом ветеринарного специалиста.

Способ осуществим.

Из представленных примеров видно, что предлагаемый способ экспрессной диагностики послеродового метрита у молочных коров в режиме реального времени по изменению цвета тест-системы с флуоресцентным реагентом отличается высокой чувствительностью, простотой и надежностью, позволяет существенно упростить и повысить производительность мониторинга и контроля эффективности лечения воспалительного процесса, снизить экономические и временные затраты на клинические и лабораторные исследования, анализ их результатов, на более ранней стадии установить начало воспалительного процесса.

Уменьшение объема пробы маточно-цервикальной слизи, наличие крови и примесей приводят к появлению ложных или неявных результатов, повышению частоты ложно отрицательного прогноза о состоянии животного и переходе из группы «воспаление» в группу «норма».

Изобретение относится к ветеринарии. Способ экспрессной диагностики послеродового метрита у коров в режиме реального времени характеризуется тем, что включает отбор 5-10 мл шеечно-вагинальной слизи у коровы, помещение ее в стерильную пробирку, добавление 3-5 мл воды, встряхивание и погружение в раствор тест-системы, пропитанной хлороформным раствором флуоресцентного реагента - 2-(6-оксо-2-фенилимидазо[1,2-b]пиридо[4,3-е][1,2,4]триазин-7(6H)-ил) уксусной кислоты, выдерживание в течение 2-5 с и визуальную регистрацию изменения интенсивности окраски реагентной зоны по сравнению с исходной, фиксирование развития послеродового метрита, если интенсивность окраски реагента уменьшилась или исчезла при естественном свете или появилось флуоресцентное зеленое свечение при освещении тест-системы УФ-светом с длиной волны 356 нм. Изобретение позволяет разработать способ экспрессной диагностики послеродового метрита у молочных коров в режиме реального времени с применением флуоресцентного реагента путем анализа маточно-цервикальной слизи. 2 табл., 2 пр.

Способ экспрессной диагностики послеродового метрита у коров в режиме реального времени, характеризующийся тем, что включает отбор 5-10 мл шеечно-вагинальной слизи у коровы, помещение ее в стерильную пробирку, добавление 3-5 мл воды, встряхивание и погружение в раствор тест-системы, пропитанной хлороформным раствором флуоресцентного реагента - 2-(6-оксо-2-фенилимидазо[1,2-b]пиридо[4,3-е][1,2,4]триазин-7(6H)-ил) уксусной кислоты, выдерживание в течение 2-5 с и визуальную регистрацию изменения интенсивности окраски реагентной зоны по сравнению с исходной, фиксирование развития послеродового метрита, если интенсивность окраски реагента уменьшилась или исчезла при естественном свете или появилось флуоресцентное зеленое свечение при освещении тест-системы УФ-светом с длиной волны 356 нм.