СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ИЗОЛЯТА ИЗ БОБОВ НУТА ТИПА ДЕЗИ ИЛИ КАБУЛИ Российский патент 2023 года по МПК A23J1/14 

Изобретение относится к пищевой промышленности и касается технологии получения белкового изолята из бобов нута типа дези или кабули.

Нут является важной продовольственной высокобелковой культурой за счет сбалансированного содержания незаменимых аминокислот. На мировом рынке выделяют два основных типа нута: дези и кабули, с содержанием белка от 15,7 до 31,5% (см. Kaur K., Grewal S.K., Gill P.S., Singh S. Comparison of cultivated and wild chickpea genotypes for nutritional quality and antioxidant potential // Journal of food science and technology. - 2019. - Vol. 56. - P. 1864-1876, 2019).

В этой связи одним из перспективных ресурсов растительного сырья для получения высококачественных белковых продуктов, применяемых в пищевой промышленности, являются бобы нута. К настоящему времени предложен ряд способов получения белкового изолята из бобов нута. Следуя известным схемам получения изолятов, на первой стадии производства этого продукта, белки, содержащиеся в растительном сырье, переводятся в растворимое состояние в щелочных условиях, а затем отделяются путем осаждения в изоэлектрической точке белка с последующей промывкой и сушкой (см. Антипова Л.В., Аникеева Н.В. Исследование фракционного состава белков нута в аспекте получения белкового изолята / Фундаментальные исследования. - 2006. - №3-4. - С. 3-4).

Одним из важнейших препятствий при получении изолята растительного белка являются жиры и примеси, получаемые на разных стадиях экстрагирования. Белок-липидные взаимодействия без процесса обезжиривания ограничивают растворимость белка и снижают выход выделения белка.

В работе Patharkar S.R. белковые изоляты из различных сортов нута были получены следующим способом. Сначала нут был очищен и насухо измельчен или пропущен через мясорубку-миксер. Затем его просеивали через сито. Далее нутовую муку обезжиривали с помощью аппарата Сокслета. Готовили дисперсии обезжиренной нутовой муки (5% по массе) в дистиллированной воде, рН дисперсий доводили до значения рН 9 с помощью 0,1 Н NaOH при температуре 30°С. Затем его встряхивали в течение почти 1 часа и центрифугировали при 8000 g в течение 15 минут. Для получения повышенных выходов процедуры экстракции и центрифугирования с остатком повторяли дважды. Экстракты объединяли и доводили рН до 4,5 с помощью 1 Н HCl для осаждения белка. Белки выделяли центрифугированием при 8000 об/мин в течение 15 мин с последующим удалением надосадочной жидкости путем декантации. Белковый «творог» дважды промывали дистиллированной водой и центрифугировали при 8000 об/мин в течение 10 мин. Затем промытый осадок подвергали лиофильной сушке в виде белкового изолята (см. Patharkar S.R. Process isolation of protein isolate from chickpea (Cicer arietinum) with the solubility and color characteristics. International Journal of Chemical Studies, 2019, 7(1), p. 1113-1118). Однако в данном способе не учитываются типовые особенности нута.

Известен процесс получения белкового изолята из зерна нута с применением метода осаждения в изоэлектрической точке, который осуществляли по следующей схеме. Бобы нута освобождали от посторонних примесей, поврежденных зерен, измельчали и обезжиривали. Экстракцию жира из нутовой крупки проводили гексаном в две стадии. Соотношение нутовая крупка : экстрагент на первой стадии составляло 1:10, на второй - 1:5; продолжительность первой стадии экстракции - 18 ч, второй стадии - 4 ч. Экстракт отделяли от осадка декантацией. Экстракты с первой и второй стадий объединяли и фильтровали через фильтровальную бумагу для отделения тонкой взвеси. Обезжиренные шроты высушивали при комнатной температуре на фильтровальной бумаге в течение 2-х суток для удаления следов растворителя и измельчали на лабораторной мельнице до получения муки с размерами частиц 100-150 мкм. Далее проводили экстракцию белка из обезжиренной нутовой муки. Соотношение мука : экстрагент составляло 1:5, температура 20±2°С. В качестве экстрагента использован 0,1%-ный водный раствор Na₂SO₃ (или осаждение белка 10% раствором СН₃СООН в изоэлектрической точке, рН=4,1-4,4). Экстракт отделяли от нерастворимого остатка центрифугированием при 2000 мин^-1 в течение 10 мин. Экстракцию повторяли 4-5 раз. Осветленный экстракт осторожно отделяли декантацией от нерастворимого остатка и доводили рН экстракта до значений 4,1-4,4 титрованием раствором уксусной кислоты. Образовавшийся изоэлектрический осадок отделяли центрифугированием при 1000 мин^-1 в течение 10 мин. Супернатант осторожно сливали, изоэлектрический осадок нейтрализовали до нейтральной реакции среды титрованием 0,5 М раствором NaOH. Белковую пасту высушивали при температуре 40°С с получением порошкообразного продукта (см. Казанцева И.Л. Научное обоснование и разработка технологических решений комплексной переработки нута для создания продуктов здорового питания населения России: дис. докт. техн. наук: 05.18.01. - Саратов, 2017. - 391 с.).

Недостатком известного процесса является то, что не учитывается изоэлектрическая точка в зависимости от типа нута. Также для осаждения белка используется соль натрия и сернистой кислоты Na₂SO₃ или уксусная кислота СН₃СООН, которая менее эффективна и более дорогая по стоимости по сравнению, например, с соляной кислотой HCl.

Следовательно, при производстве белковых изолятов из семян нута необходимо учитывать его типовые особенности, т.к. в ходе изучения белков нута было установлено, что у разных типов нута изоэлектрическая точка варьируется, а условия их перехода в растворимое состояние зависят от типовых особенностей нута, что было показано, например, в работе «Исследование фракционного состава белков нута в аспекте получения белкового изолята» Антиповой Л.В. и Аникеевой Н.В.

Известен также способ получения белкового изолята из нутового сырья, раскрытый в документе RU 2346456 С1, опубл. 20.02.2009, Бюл. №5, A23J 1/14, A23J 3/34, предусматривающий предварительную обработку ферментными препаратами целловердином и пектофоетидином в количестве 0,01% к массе раствора в течение 1,5 ч, поэтапную экстракцию в течение 15 мин в растворе сульфата аммония с изменяющейся концентрацией на каждом этапе от 0,1% до 1% в соотношении центрифугата и раствора 1:3-1:6, с последующим осаждением белков в 35% растворе лимонной кислоты при рН 3,3-4,4, промывкой полученного белкового осадка дистиллированной водой до рН 7,0 и сушкой при температуре 50°С и давлении 150-200 Па.

Недостатком данного способа является отсутствие стадии обезжиривания бобов нута, что приводит к уменьшению выхода белка в процессе экстракции. Кроме того, предложенный способ подразумевает использование нескольких ферментных препаратов, что влияет на увеличение себестоимости конечного продукта.

Известен способ получения пищевого белка из зерна кормового нута, раскрытый в документе SU 1796125 А1, опубл. 23.02.93, Бюл. №7, A23J 1/14, в котором белок из размолотых бобов экстрагируют водным раствором гидроксида натрия при гидромодуле 1:10 и температуре 40-60°С в течение 20-40 мин, с последующим центрифугированием и осаждением при помощи 10% раствора соляной кислоты при рН 4,8, после чего суспензию декантируют, а полученный белок промывают водой, центрифугируют и сушат распылением.

Недостатками указанного способа являются сравнительно невысокий выход белка (22,1-23%), низкая переваримость (49-59%) и содержание белка (74-82%), а также достаточно высокая температура экстракции (до 60°С), что обуславливает неэффективность предлагаемой технологии в виду денатурации белка.

Известен способ получения белкового полуфабриката из растительного сырья, раскрытый в документе RU 2286675 С1, опубл. 10.11.2006, Бюл. №31, A23J 3/14, A23L 1/20, включающий проращивание бобов нута в католите в течение 10-12 ч при рН 11-13 и окислительно-восстановительном потенциале (-500)÷(-800) мВ, приготовленного на основе 0,5-1% раствора бишофита с последующей сублимационной сушкой при температуре (-14)÷(-15)°С и остаточном давлении 0,5-1,5 мм рт.ст.

Недостатком данного способа является низкое содержание белка и большое количество сопутствующих примесей, снижающих его усвояемость, а также короткое время стабильности католита - 0,5-1 ч.

Известен способ получения изолята белка нута, включающий измельчение бобов нута, приготовление суспензии с гидромодулем 1:9-2:10, доведение рН до значений 7,5-8,5, центрифугирование суспензии, доведение рН фугата до значений 4,5-4,6, отделение осадка центрифугированием, промывку водой, доведение рН до 7,0, сушку белковой пасты (см. CN 115251225 А, опубл. 01.11.2022, A23J 1/14, A23J 3/14).

Недостатком известного способа является низкий выход белка за счет высокого содержания посторонних примесей, которые соэкстрагируются с белком.

Также известен способ получения белкового продукта из семян бобовых культур, раскрытый в документе RU 2727479 С2, опубл. 21.07.2020, Бюл. №21, A23J 1/14, A23J 3/14, предусматривающий экстракцию водным раствором кальциевой соли при температурах от 1 до 70°С и рН 4,5-11 в течение 1-60 мин, отделением водного раствора от остаточного источника бобового белка, повторным отделением раствора, промывку и сушку с получением белкового продукта, содержащего 50% основного вещества.

Одним из основных недостатков указанного выше способа является использование высокой температуры в процессе водной экстракции белка, приводящей к денатурации и снижению выхода целевого продукта, а также в отсутствии стадий предобработки, позволяющих снизить количество примесей в процессе экстракции белка.

Известен способ переработки нутового сырья с получением белкового продукта, раскрытый в документе RU 2629995 C1, опубл. 05.09.2017, Бюл. №25, A23L 11/00, предусматривающий замачивание в 0,25% растворе хлорида натрия и 0,25% растворе гидрокарбоната натрия в течение 2 ч при 50°С предварительно обработанных 0,001% раствором перманганата калия и УФ-излучением семян при температуре 45-50°С в течение 16 ч, полученную смесь проваривают при температуре 105°С, охлаждают до температуры 20°С, разделяя на жидкую и твердую фракции.

Недостаток упомянутого способа заключается в низком содержании белка в получаемых продуктах, содержащих значительное количество посторонних примесей.

Наиболее близким к заявленному изобретению является способ получения белкового изолята, раскрытый в документе RU 2335917 С1, опубл. 20.10.2008, Бюл. №29, A23J 1/14, A23J 3/16, A23J 3/34, С11В 1/10, предусматривающий измельчение бобового сырья, его предобработку методом набухания в воде, ферментативный гидролиз с использованием ферментных препаратов - нейтральной протеазы Bacillus subtilis с активностью 460-500 ед./г в количестве 0,01-0,03% к массе сырья, целлюлазы Trichoderma reesei с активностью 7400-7600 ед./г в количестве 0,01-0,05% к массе сырья и/или комплексный препарат, содержащий протеазу, амилазу и β-глюканазу, получаемый культивированием бактерий Bacillus subtilis и грибов Penicillium emersonii, с активностью протеазы 80-120 ед./г в количестве 0,01-0,015% к массе сырья. Ферментативный гидролиз проводят при гидромодуле 1:8-1:10 и температуре 50-70°С в течение 3-4 ч, далее проводят центрифугирование, ультрафильтрацию экстракта и осаждение белка в изоэлектрической точке. Данный документ был выбран авторами в качестве прототипа.

Недостатком прототипа является использование сразу нескольких ферментных препаратов и ультрафильтрации, что влечет за собой увеличение затрат на производство изолята белка бобовых.

Целью настоящего изобретения является получение белкового препарата нута с более низкой себестоимостью и с высоким уровнем содержания белка.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа получения белкового изолята из бобов нута типа дези или кабули, предусматривающего последовательную обработку, включающую измельчение, обезжиривание, ферментативный гидролиз, экстракцию и осаждение белка, за счет чего достигается больший выход и содержание основного продукта - изолята белка нута.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение выхода экстрагируемого белка за счет использования ферментных препаратов с целлюлазной и β-глюканазной активностью, а также за счет учета сортовых характеристик нута типа дези или кабули, что позволяет получить белковый изолят из бобов нута с высоким уровнем содержания белка в нем.

Поставленная задача решается, а технический результат достигается благодаря настоящему способу получения белкового изолята из нутового сырья, предусматривающему измельчение сырья, в качестве которого используют бобы нута типа дези или кабули, предварительно очищенные от примесей с последующим удалением семенной оболочки и гидротермически обработанные при температуре 80°С в течение 30 мин, до размера частиц не более 100 мкм, обезжиривание полученной муки н-гексаном в соотношении 1:7 в течение 1 ч при температуре 20-22°С и постоянном перемешивании при 200 мин^-1, разделение полученной суспензии центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин, с последующим промыванием однократным объемом дистиллированной воды и повторным центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин. Далее следует приготовление водной суспензии обезжиренной муки, взятой в количестве 12 мас. %, с доведением рН до значения 5,5-5,6, и внесение в водную суспензию комплексного ферментного препарата с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г сырья в количестве 1,0-1,5% от массы абсолютно сухого веса сырья, проведение ферментативного гидролиза при температуре 50°С и перемешивании 200 мин^-1 в течение 3-4 ч, охлаждение полученного ферментолизата до температуры 25°С, установление значения рН=2,5-11,0 и выдерживание в течение 1 ч при перемешивании 200 мин^-1. Далее проводят центрифугирование при 3500 мин^-1 в течение 15 мин с получением фугата, который охлаждают до 4°С и выдерживают в течение 3-4 ч, устанавливая рН фугата равным 3,7-5,8 при помощи 1 Н HCl. Выдерживают при температуре 4°С в течение 3-4 ч. После выдержки осуществляют двукратную промывку дистиллированной водой до значения рН=7,0. Сушку полученной белковой пасты осуществляют при температуре 50°С и давлении 150-160 Па с получением готового белкового изолята.

Заявленный способ осуществляется следующим образом.

Бобы нута типа дези или кабули, предварительно очищенные от примесей с последующим удалением семенной оболочки и гидротермически обработанные при 80°С в течение 30 мин, размалывают до размера частиц не более 100 мкм. Полученную муку смешивают с н-гексаном в соотношении 1:7 и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температуре и перемешивании 200 мин^-1. Полученную суспензию разделяют центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин и промывают однократным объемом дистиллированной воды для удаления н-гексана с повторным центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин. Далее готовят водную суспензию обезжиренной муки, взятой в количестве 12 мас. %, с доведением рН до значения 5,5-5,6 с помощью 10% раствора H₂SO₄. После чего в водную суспензию вносят комплексный ферментный препарат с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г сырья в количестве 1,0-1,5% от массы абсолютно сухого веса сырья. Ферментативный гидролиз проводят при температуре 50°С и перемешивании 200 мин^-1 в течение 3-4 ч. Далее проводят охлаждение полученного ферментолизата до температуры 25°С, устанавливают значение рН в диапазоне 2,5-11,0, используя 1 Н NaOH или 10% раствор H₂SO₄ для экстракции белка, и выдерживают в течение 1 ч при перемешивании 200 мин^-1, затем центрифугируют при 3500 мин^-1 в течение 15 мин с получением фугата, который охлаждают до 4°С и выдерживают в течение 3-4 ч. Для осаждения экстрагированного белка устанавливают значение рН фугата в диапазоне 3,7-5,8, используя 1 Н HCl, выдерживают при температуре 4°С в течение 3-4 ч. После выдержки осуществляют двукратную промывку дистиллированной водой до значения рН=7,0. Сушку полученной белковой пасты осуществляют при температуре 50°С и давлении 150-160 Па с получением готового белкового изолята.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Бобы нута типа кабули, предварительно очищенные от примесей с последующим удалением семенной оболочки и гидротермически обработанные при 80°С в течение 30 мин, размалывают до размера частиц не более 100 мкм. Полученную муку смешивают с н-гексаном в соотношении 1:7 и выдерживают в течение 1 ч при температуре 20-22°С и перемешивании 200 мин^-1. Полученную суспензию разделяют центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин и промывают однократным объемом дистиллированной воды для удаления н-гексана и повторно центрифугируют при 3500 мин^-1 в течение 15 мин. Готовят водную суспензию обезжиренной муки, взятой в количестве 12 мас. %, с доведением рН до значения 5,5-5,6 с помощью 10% раствора H₂SO₄. После чего в водную суспензию вносят комплексный ферментный препарат с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г сырья в количестве 1,5% от массы абсолютно сухого веса сырья. Проводят ферментативный гидролиз при температуре 50°С и перемешивании 200 мин^-1 в течение 3 ч. Далее проводят охлаждение полученного ферментолизата до температуры 25°С, устанавливают значение рН=9,5, используя 1 Н NaOH для экстракции белка, и выдерживают в течение 1 ч при перемешивании 200 мин^-1. Центрифугируют при 3500 мин^-1 в течение 15 мин, после чего полученный фугат охлаждают до 4°С и выдерживают в течение 3 ч. Для осаждения экстрагированного белка устанавливают рН фугата 4,6, используя 1 Н HCl, и выдерживают при температуре 4°С в течение 3-4 ч. После выдержки осуществляют двукратную промывку дистиллированной водой до значения рН=7,0. Сушку полученной белковой пасты осуществляют при температуре 50°С и давлении 150-160 Па с получением готового белкового изолята.

Изоэлектрическая точка (ИЭТ) - кислотность раствора, при которой в белках наблюдается равенство положительных и отрицательных зарядов. При ИЭТ белки обладают наименьшей растворимостью, а их растворы - самой низкой вязкостью; белки не удерживаются в растворах и выпадают в осадок при очень слабых внешних воздействиях.

Для определения изоэлектрической точки растворенного белка использовали 8 пробирок, в каждую из которых вносили по 1 мл раствора после экстракции белка, добавляли воду и 1 Н HCl в количестве, указанном в таблице 1 (см. в графической части). Содержимое пробирок осторожно перемешивали. При значении рН, равном или очень близком к изоэлектрической точке белка, белок выпадает в осадок, что устанавливают по помутнению раствора в соответствующей пробирке. Таким образом, экспериментально было установлено, что для бобов нута типа кабули ИЭТ равна 4,6 (см. фиг. 1).

Экстракцию осуществляли при различных значениях рН=2,5-11,0. Для изменения значений рН использовали 1 Н NaOH и 10% раствор H₂SO₄. Результаты по установлению переменных значений рН в диапазоне значений 2,5-11,0 с помощью 1 Н NaOH и 10% раствора H₂SO₄ для экстракции белка иллюстрируется на фиг. 1 и 2.

Эффективность извлечения белка оценивают методом одномерного электрофореза в полиакриламидном геле (10% SDS-PAGE, 200 МА, 160 В, 80 Вт, 6:30 ч) в камере ВЭ-20 («Геликон», Россия). Электрофореграммы окрашивают кумасси синим R-250 (Fisher Bioregents, Англия) (см. фиг. 2). Результаты белкового профиля анализируют с использованием базы данных UniProt Protein Database (http://www.uniprot.org/) и с помощью программного обеспечения (см. фиг. 3).

В результате получают белковый изолят из бобов типа кабули с содержанием основного вещества 92% и выходом 75%.

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но для экстракции белков нута используют рН=11,0. В результате получают изолят нута с содержанием основного вещества 92% и выходом 78% от общей массы белка. Результаты примера иллюстрируются на фиг. 1, 2 и 4.

Пример 3. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но ферментативный гидролиз проводят комплексом с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г дозировкой 1,0% от массы абсолютно сухого веса сырья. Для экстракции белков нута используют рН=7,0. В результате получают изолят нута с содержанием основного вещества 91% и выходом 61% от общей массы белка. Результаты примера иллюстрируются на фиг. 1, 2 и 5.

Пример 4. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но для экстракции белков нута используют рН=5,0. В результате получают изолят нута с содержанием основного вещества 90% и выходом 54% от общей массы белка. Результаты примера иллюстрируются на фиг. 1, 2 и 6.

Пример 5. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но для экстракции белков нута используют рН=2,5. В результате получают изолят нута с содержанием основного вещества 90% и выходом 46% от общей массы белка. Результаты примера иллюстрируются на фиг. 1, 2 и 7.

Пример 6. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но для получения изолята белка нута используют тип дези. Для определения изоэлектрической точки растворенного белка использовали 8 пробирок, в каждую из которых вносили по 1 мл раствора после экстракции белка, добавляли воду и 1 Н HCl в количестве, указанном в таблице 1. Экспериментально установлено, что для бобов нута типа дези ИЭТ равна 4,9 (см. фиг. 8).

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение выхода экстрагируемого белка за счет использования ферментных препаратов с целлюлазной и β-глюканазной активностью, а также за счет учета типовых характеристик бобов нута. Как видно из результатов одномерного электрофореза белков нута, иллюстрированных на фиг. 1-5, наиболее эффективной является экстракция при значении рН=9,5. Профили растворимости изолятов белка нута типа дези и кабули немного схожи. Белковые изоляты обладают минимальной растворимостью в диапазоне рН=4,6 и рН=4,9.

Изобретение относится к пищевой промышленности. Предложен способ получения белкового изолята из нутового сырья, предусматривающий измельчение гидротермически обработанных бобов нута типа дези или кабули, обезжиривание полученной муки с получением суспензии, ее разделение центрифугированием с последующим промыванием однократным объемом дистиллированной воды и повторным центрифугированием. Затем готовят водную суспензию обезжиренной муки, в которую вносят комплексный ферментный препарат с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г сырья в количестве 1,0-1,5% от массы абсолютно сухого вещества сырья. Осуществляют проведение ферментативного гидролиза, охлаждение ферментолизата и его выдерживание в течение 1 ч при перемешивании, центрифугирование с получением фугата, который охлаждают и выдерживают, после чего осуществляют промывку полученного белкового осадка и его сушку. Изобретение обеспечивает повышение выхода экстрагируемого белкового продукта. 8 ил., 1 табл., 6 пр.

Способ получения белкового изолята из нутового сырья, предусматривающий измельчение сырья, в качестве которого используют бобы нута типа дези или кабули, предварительно очищенные от примесей с последующим удалением семенной оболочки и гидротермически обработанные при температуре 80°С в течение 30 мин, до размера частиц не более 100 мкм, обезжиривание полученной муки н-гексаном в соотношении 1:7 в течение 1 ч при температуре 20-22°С и постоянном перемешивании при 200 мин^-1, разделение полученной суспензии центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин, с последующим промыванием однократным объемом дистиллированной воды и повторным центрифугированием при 3500 мин^-1 в течение 15 мин, приготовление водной суспензии обезжиренной муки, взятой в количестве 12 мас. %, с доведением рН до значения 5,5-5,6, внесение в водную суспензию комплексного ферментного препарата с целлюлазной активностью не менее 2000 ед. ЦлС/г сырья и β-глюканазной активностью не менее 1500 ед. β-ГкС/г сырья в количестве 1,0-1,5% от массы абсолютно сухого вещества сырья, проведение ферментативного гидролиза при температуре 50°С и перемешивании 200 мин^-1 в течение 3-4 ч, охлаждение ферментолизата до температуры 25°С, установление значения рН=2,5-11,0 и выдерживание в течение 1 ч при перемешивании 200 мин^-1, центрифугирование при 3500 мин^-1 в течение 15 мин с получением фугата, который охлаждают до 4°С и выдерживают в течение 3-4 ч, устанавливая рН фугата равным 3,7-5,8 при помощи 1 Н HCl, выдерживание при температуре 4°С в течение 3-4 ч, после выдержки осуществляют промывку полученного белкового осадка двукратным объемом дистиллированной воды, после чего сушат белковый осадок при температуре 50°С и давлении 150-160 Па.