Способ профилактики мастита у коров в период лактации Российский патент 2023 года по МПК A61K38/21 A61D99/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к ветеринарному акушерству, и может быть использовано для профилактики мастита у лактирующих коров.

Актуальность предлагаемого способа определяется высокой частотой заболеваемости лактирующих коров маститом, которая в последнее время имеет тенденцию к росту и составляет до 80% [Экхорутомвен О.Т., Медведев Г.Ф., Стукина А.И. Причины, частота мастита у коров и их молочная продуктивность // Животноводство и ветеринарная медицина. 2022. №1 (44). - С. 7-11].

Основными факторами, способствующими возникновению и развитию мастита, являются техническое несовершенство доильных установок, нарушение технологии и правил машинного доения коров. В начале возникает раздражение, которое при многократном повторении переходит в скрытое асептическое воспаление. Снижается общая и локальная резистентность, создаются условия для проникновения и размножения в тканях молочной железы различной условно-патогенной и патогенной микрофлоры, что обусловливает развитие воспаления в субклинической форме, протекающей самостоятельно на протяжении одной-двух лактаций и приводящей долю к атрофии, или трансформирующейся в клинически выраженный (серозный, катаральный, гнойно-катаральный и др.) мастит. На сегодняшний день из секрета молочной железы больных маститом коров изолировано более 100 различных видов микроорганизмов [Иммунологические аспекты борьбы с маститом коров / В.И. Слободяник, Н.Т. Климов, Л.В. Ческидова, Е.В. Зверев. - Воронеж: Издательство Истоки, 2020. - 222 с.].

В настоящее время для профилактики мастита у лактирующих коров применяются вакцины в основном зарубежного производства (Мастивак, Стартвак, Ваколин). Однако они не всегда дают желаемый эффект, так как специфичны только к 2-4 из микроорганизмов, имеющих этиологическое значение [Тарасенко М.Н. Совершенствование методов профилактики маститов у высокопродуктивных коров: 06.02.02; дисс. … канд. вет. наук. - Екатеринбург, 2016. - 172 с.]. В связи с возросшими требованиями к качеству молока и широким распространением лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов, вызывающих развитие мастита, необходимо дальнейшее изучение новых лекарственных средств, стимулирующих общую неспецифическую резистентность организма, факторы локальной защиты молочной железы коров, и тем самым позволяющих ликвидировать воспалительный процесс в молочной железе или профилактировать его возникновение у клинически здоровых животных.

К таким лекарственным средствам относят иммуномодуляторы - препараты, влияющие на активность иммунной системы и в соответствии с существующей классификацией, выделяют следующие группы иммуномодуляторов: препараты на основе природных факторов (препараты иммуноглобулинов, пептидные препараты, препараты на основе цитокинов, препараты микробного происхождения и др.) и синтетические препараты (циклические соединения, синтетические аналоги природных иммуномодуляторов и т.д.) [Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 608 с.].

Известен способ профилактики и лечения мастита у коров, включающий внутрицистернальное введение антимикробного вещества с кислородом. В качестве антимикробного вещества используют озонированное рафинированное дезодорированное растительное масло в дозе 10-20 мл, а введение осуществляется в каждую четверть вымени на 4-й день запуска и за 1-15 дней до отела [RU 2201756 С2, A61K 33/00, A61K 35/78, 10.04.2003 Бюл. №10].

Недостатком данного способа профилактики мастита у коров является то, что препарат применяется только для сухостойных коров (за два месяца до отела).

Известен способ профилактики и лечения мастита у коров, предусматривающий введение тканевого препарата, в качестве которого используют фильтрат экстракта молочной железы здоровых животных, стабилизированных маннитом. С профилактической целью препарат вводят двукратно за 20-30 и на 10 день до отела подкожно в дозе 0,1-0,2 мл на кг массы тела [RU 2201758 С2, А61К 35/48, А61Р 15/00, 10.04.2003 Бюл. №10].

Недостатком данного способа профилактики мастита у коров является то, что промышленное производство данного препарата не налажено и его готовят самостоятельно (кустарно), в результате чего каждая партия отличается по биологической активности и, следовательно, эффективности.

Известен способ профилактики мастита у коров, предусматривающий ежемесячное применение бычьих рекомбинантных α- и γ-интерферонов, которые вводят внутримышечно в дозе 2,5 мл с интервалом 24 часа ежемесячно с первого дня после отела [RU 2683289 C1, А61К 38/21, А61Р 15/00, 27.03.2019 Бюл. 9].

Недостатком данного способа является многократное ежемесячное введение препарата и невысокая профилактическая эффективность.

Наиболее близким аналогом, взятым за прототип, является способ профилактики мастита у лактирующих коров, предусматривающий применение иммуномодулятора Имунофан, который вводят с первого дня после отела внутримышечно в дозе по 5 мл на животное трехкратно с интервалом 48 часов и повторяют ежеквартально [RU 2731476 C1, A61D 99/00, 03.09.2020 Бюл. 25].

Недостатками данного способа являются большие затраты труда на многократные введения препарата, а также его недостаточная профилактическая эффективность.

Технический результат изобретения - повышение эффективности способа профилактики мастита у лактирующих коров при снижении кратности введения иммуномодулирующего препарата и, как следствие, уменьшение трудозатратности.

Технический результат достигается тем, что в способе профилактики мастита у коров в период лактации, включающем применение иммуномодулятора, согласно изобретению, в качестве иммуномодулятора используют препарат Проаутовак, содержащий в 1 мл бычьи рекомбинантные α- и γ-интерфероны с суммарной активностью не менее 1000 ME, бычий рекомбинантный ГМ-КСФ - 0,005 мг, витамин А - 25000 ME, витамин Е - 25 мг, витамин С - 50 мг, бензоат натрия - 0,5 мг, полиэтиленгликоль - 0,1 мл и воду для инъекций - до 1 мл, причем вводят Проаутовак коровам с первого дня после отела трехкратно с 24-часовым интервалом в дозе 10 мл/животное.

Проаутовак - это иммуномодулятор, обладающий антиоксидантным и иммунокоррегирующим действием. Смесь α- и γ-интерферонов бычьих рекомбинантных выступает в качестве индуктора бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, оказывает противовоспалительное действие, повышает резистентность организма животных к воздействию ДНК- и РНК-содержащих вирусов и патогенных микроорганизмов, проявляет антистрессовый эффект, усиливает напряженность иммунитета и снимает поствакцинальный синдром при вакцинациях.

ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) - участвует в регуляции физиолого-биохимических функций различных систем организма на генном уровне. ГМ-КСФ участвует в гемопоэзе, дифференцировке миелоидных клеток, влияет на функциональную активность иммунокомпетентных (лимфоциты, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки) и тканевых клеток. ГМ-КСФ и его рекомбинантные формы применяют в гематологии, иммунологии, онкологии, репродуктологии и при лечении системных аутоиммунных процессов и заболеваний инфекционной природы [Иммунобиологические свойства гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора и синтетических пептидов его активного центра / А.В. Зурочка, В.А. Зурочка, М.А. Добрынина, В.А. Гриценко // Медицинская иммунология. 2021. Т. 23, №5. - С. 1031-1054].

Витамин А участвует в окислительно-восстановительных процессах, регуляции синтеза белков, половых гормонов, интерферона, иммуноглобулина А и лизоцима; способствует нормальному обмену веществ, функции клеточных и субклеточных мембран, играет важную роль в формировании костей и зубов, жировых отложений; необходим для роста новых клеток, замедляет процесс старения.

Витамин Е, являясь одним из самых мощных природных антиоксидантов, тормозит развитие свободнорадикальных реакций, предупреждает образование перекисей, повреждающих клеточные и субклеточные мембраны, что имеет важное значение для развития организма, нормальной функции нервной и мышечной систем. Токоферол является антигипоксантом, что объясняется его способностью стабилизировать митохондриальную мембрану и экономить потребление кислорода клетками.

Витамин С выполняет биологические функции восстановителя и кофермента некоторых метаболических процессов; участвует в образовании коллагена, серотонина, катехоламинов, синтезе кортикостероидов, в превращении холестерина в желчные кислоты, восстанавливает убихинон и витамин Е, стимулирует синтез интерферона.

Бензоат натрия используется в лекарствах в качестве консерванта.

Полиэтиленгликоль применяется в качестве растворителя, стабилизатора, регулятора вязкости, связующего ингредиента.

Вода для инъекций при приготовлении лекарственных форм используется в качестве растворителя.

Сущность технического решения поясняем примерами.

При проведении исследований в опыт было включено 35 новотельных коров. Коровам первой группы (n=12) инъецировали препарат Проаутовак трехкратно с 24-часовым интервалом в дозе 10 мл на животное, начиная с первого дня послеродового периода, второй (n=12) - Биферон-Б трехкратно с 24-часовым интервалом в дозе по 5 мл на животное, третьей (n=11) -препараты не вводили, они служили в качестве отрицательного контроля.

На 14 день после отела животные, включенные в опыт, подвергались диагностическому исследованию на мастит с 2% раствором Масттеста и клиническому обследованию, по результатам которого определяли эффективность применения препаратов для профилактики послеродового мастита.

Установлено, что в группе отрицательного контроля заболело катаральным маститом 18,2% животных (таблица 1). После двукратного введения Биферона-Б катаральный мастит регистрировали у 8,3% коров. При трехкратном введении Проаутовака заболело маститом также 8,3% коров, но воспаление протекало в субклинической форме.

Кроме того, от коров из каждой группы перед введением препаратов и на 14 день после отела отбирали пробы крови и молока для проведения лабораторных исследований.

Результаты, полученные при изучении изменений морфологического, биохимического и иммунологического статуса коров на 14 день после отела, представлены в таблице 2.

Установлено, что у животных, которым вводили Биферон-Б, по сравнению с животными группы отрицательного контроля на 14 день после отела содержание лейкоцитов было ниже на 21,9%, эозинофилов - на 32,8%, палочкоядерных нейтрофилов - на 28,7%, моноцитов - на 22,2%, общих иммуноглобулинов - на 18,3%, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) - на 33,3%, при повышении лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК) на 23,5%, фагоцитарного индекса (ФИ) - в 1,5 раза и фагоцитарного числа (ФЧ) - в 1,6 раза.

После использования Проаутовака изменения показателей морфологического, биохимического и иммунологического статуса носят более выраженный характер. Так, содержание лейкоцитов было ниже на 27,1%, эозинофилов - на 43,1%, палочкоядерных нейтрофилов - на 36,1%, моноцитов - на 33,3%, общих иммуноглобулинов - на 19,8%, циркулирующих иммунных комплексов - на 25,6%, при повышении уровня лизоцимной активности сыворотки крови - на 41,2%, фагоцитарного индекса - в 1,7 раза и фагоцитарного числа - в 1,8 раза, что свидетельствует о активизации общей неспецифической резистентности организма коров.

Результаты изучения изменений уровня эндогенной интоксикации у коров на 14 день после отела при применении иммунокорригирующих препаратов представлены в таблице 3.

Установлено, что у коров, которым вводили Биферон-Б, по сравнению с животными группы отрицательного контроля на 14 день после отела концентрация малонового диальдегида (МДА) была ниже на 21,8%, молекул средней массы (МСМ) - на 27,2%, при повышении активности каталазы на 22,0% и глутатионпероксидазы (ГПО) - на 48,5%.

После применения Проаутовака регистрировали снижение уровня малонового диальдегида на 24,0%, метаболитов оксида азота (NO_x) - на 21,4%, молекул средней массы - на 31,7% и индекса эндогенной интоксикации (ИЭИ) на 24,8%, при повышении концентрации витамина Е на 35,5%, витамина С - на 32,9%, активности каталазы - на 27,5% и глутатионпероксидазы - на 53,6%, что свидетельствует о снижении эндогенной интоксикации и одновременной активизации ферментативного и неферментативного звена антиоксидантной защиты.

Показатели секрета вымени коров после применения иммунокорригирующих препаратов для профилактики мастита представлены в таблице 4.

Установлено, что в молоке животных всех групп до начала опыта содержание соматических клеток (СК), общих иммуноглобулинов, циркулирующих иммунных комплексов и лизоцима соответствовало показателям клинически здоровых животных и достоверно не отличалось между группами.

Через две недели от начала опыта у оставшихся клинически здоровыми животными всех групп показатели секрета вымени также соответствовали показателям клинически здоровых животных. В тоже время в молоке животных, подвергнутых обработке Бифероном-Б, по отношению к животным контрольной группы отмечено более низкое содержание циркулирующих иммунных комплексов на 36,3% и соматических клеток на 32,9%.

Более выраженные изменения по отношению к контрольной группе отмечены при применении Проаутовака: снижение содержания циркулирующих иммунных комплексов на 44,7% и соматических клеток на 46,1%.

Видовой состав микрофлоры через 1-2 часа после отела и через 14 дней после родов при применении иммунокорригирующих препаратов представлен в таблице 5.

Бактериологическими исследованиями проб молозива от новотельных коров контрольной группы в 40,0% случаев выделяли патогенный золотистый стафилококк в ассоциации с кишечной палочкой и эпидермальным стафилококком, а в 60,0% - патогенный агалактийный стрептококк в различных ассоциациях с эпидермальным стафилококком и кишечной палочкой. За период опыта изменений в микрофлоре молока коров третьей группы не отмечено.

Молочная железа животных второй группы до начала опыта была контаминирована в 60,0% случаев патогенным золотистым стафилококком в сочетании с кишечной палочкой и энтерококком, а в 40,0% - патогенным агалактийным стрептококком в различных ассоциациях с кишечной палочкой и энтерококком. По окончании опыта из молочной железы в 60,0% случаев выделяли кишечную палочку.

Молочная железа животных первой группы (Проаутовак) в первый день после отела была контаминирована в 60,0% случаев золотистым стафилококком в ассоциации с кишечной палочкой, эпидермальным стафилококком и энтерококком, в 40% - агалактийным стрептококком в ассоциации с эпидермальным стафилококком и энтерококком. Через 14 дней после применения Проаутовака кишечную палочку, золотистый стафилококк и агалактийный стрептококк не выделяли, у 40,0% животных изолировали энтерококк.

Изменения бактериальной обсемененности молока при применении иммунокорригирующих препаратов для профилактики мастита представлены в таблице 6.

Степень микробной контаминации молока животных контрольной группы за период исследований достоверно не изменилась.

В группе животных, подвергнутых обработке Бифероном-Б, произошло снижение контаминации молока микрофлорой в 3,1 раза. В группе животных, подвергавшихся обработке Проаутоваком контаминация молока микрофлорой, снизилась в 8,7 раза.

По окончании исследований у животных, которым вводили Биферон-Б, бактерионосительство в молочной железе установлено у 60,0% животных, подвергшихся обработке Проаутоваком - у 40,0%, а в контрольной группе -у 100,0%.

Следовательно, двукратное введение новотельным коровам Биферона-Б в дозе 5 мл с первого дня после отела обеспечивает снижение микробной контаминации молока в 3,2 раза, сокращает количество бактерионосителей в 1,7 раза.

Наиболее выраженное влияние оказало применение Проаутовака, его трехкратное применение в дозе 10 мл с 24-часовым интервалом с первого дня после отела обеспечило снижение микробной контаминации молока в 5,4 раза, способствовало сокращению количества бактерионосителей в 2,5 раза.

Таким образом, трехкратное введение коровам Проаутовака в дозе 10 мл на животное с 24-часовым интервалом, начиная с первого дня послеродового периода, обеспечивает снижение случаев послеродового мастита в 2,2 раза за счет снижения эндогенной интоксикации, перекисного окисления липидов при одновременной активизации антиоксидантной защиты и общей неспецифической резистентности организма коров.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности, к способу профилактики мастита у коров в период лактации. Способ включает применение иммуномодулятора. В качестве иммуномодулятора используют препарат Проаутовак, который вводят с первого дня после отела трехкратно с 24-часовым интервалом в дозе 10 мл на животное. Изобретение позволяет повысить эффективность профилактики мастита у коров в период лактации. 6 табл.

Способ профилактики мастита у коров в период лактации, включающий применение иммуномодулятора, отличающийся тем, что в качестве иммуномодулятора используют препарат Проаутовак, содержащий в 1 мл бычьи рекомбинантные α- и γ-интерфероны с суммарной активностью не менее 1000 ME, бычий рекомбинантный ГМ-КСФ - 0,005 мг, витамин А - 25000 ME, витамин Е - 25 мг, витамин С - 50 мг, бензоат натрия - 0,5 мг, полиэтиленгликоль - 0,1 мл и воду для инъекций - до 1 мл, причем вводят Проаутовак коровам с первого дня после отела трехкратно с 24-часовым интервалом в дозе 10 мл/животное.