Способ дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы Российский патент 2023 года по МПК G01N33/68 G01N33/74 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, аллергологии, внутренним болезням, и может быть использовано для дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы.

Известен способ дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы, заключающийся в проведении проточной цитометрии образцов крови, к которым добавлены моноклональные антитела к TNRFI, TNRF2, CD19, CD5, CD4, CD8, CD45RA. В выделенных гейтированием клетках CD19+CD5+, CD8+ CD45RA+, CD4+ определяют показатели экспрессии рецепторов TNRFI и TNRF2, вычисляют процент клеток, несущих рецепторы TNRFI и TNRF2, в каждой выделенной популяции, после чего рассчитывают наличие аллергической бронхиальной астмы [Сенников С.В., Демина Д.В, Лопатникова Ю.А., Киреев Ф.Д., Альшевская А.А., Жукова Ю.В., Гладких B.C. Способ диагностики аллергической бронхиальной астмы. RU 2780687 С1 29.09.2022]. Способ основан на оценке среднего количества рецепторов и процента клеток, имеющих рецепторы первого и второго типов к TNFα на субпопуляциях мононуклеаров. Этот способ принят авторами за прототип.

Этапы процесса определения аллергического варианта бронхиальной астмы, в частности цитометрия, обработка образцов крови моноклональными антителами, требуют значительных временных затрат и оборудования, сложны для внедрения в качестве рутинных способов в практическом здравоохранении, дорогостоящи, что ограничивает применение данного способа для дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы.

Техническим результатом изобретения является разработка более простого, экономичного и точного способа дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы.

Заявленный технический результат достигается в способе дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы, включающем оценку активности маркеров аллергического и инфекционного воспаления, согласно которому определяют уровни периостина и прокальцитонина крови, рассчитывают индекс отношения периостина к прокальцитонину по формуле: M=lg(ПРС:ПКТ), где lg - десятичный логарифм; ПРС - периостин (нг/мл); ПКТ - прокальцитонин (пг/мл), и при его значениях ниже 3,8 диагностируют неаллергическую бронхиальную астму, а при значениях выше 3,8 диагностируют аллергическую бронхиальную астму.

Способ разработан на основании проведенного исследования, цель которого - проанализировать диагностическую ценность индекса отношения периостина крови к прокальцитонину крови в качестве комплексного показателя, отражающего активность как аллергического, так и инфекционного воспаления. Периостин выделяется различными клетками и отражает активность аллергического воспаления [Izuhara K., Nunomura S., Nanri Y. Et al. Periostin: an emerging biomarker for allergic diseases. Allergy. 2019; 74 (11): 2116-2128. DOI: 10.1111/all.13814]. Прокальцитонин участвует в патогенезе инфекционного воспаления. Его основными клетками-продуцентами служат моноциты. Одним из главных стимуляторов выделения прокальцитонина является эндотоксин бактерий. [Creamer A.W., Kent А.Е., Albur М. Procalcitonin in respiratory disease: use as a biomarker for diagnosis and guiding antibiotic therapy. Breathe (Sheff.). 2019; 15 (4): 296 - 304. DOI: 10.1183/20734735.0258-2019].

Было обследовано 28 пациентов (9 мужчин и 19 женщин) с бронхиальной астмой, из них у 14 диагностирована аллергическая астма, у 14 - неаллергическая. Диагноз бронхиальной астмы устанавливали в соответствии с критериями GINA 2019-2020 гг. Распределение пациентов на группы осуществляли на основании аллергологического обследования, лабораторного скрининга, анамнестических данных. Сравнение групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни с использованием программы «SASEnterpriseGuide 6.1». Статистическими достоверными считались результаты при р≤0,05.

В таблице представлены исходные результаты уровней периостина и прокальцитонина крови у пациентов с бронхиальной астмой, а также вычисленный на их основе индекс периостин/прокальцитонин.

Как видно из таблицы, у пациентов с аллергическим фенотипом бронхиальной астмы индекс периостин/прокальцитонин был достоверно выше, чем при неаллергическом (р=0,003). Значения прокальцитонина, напротив, были статистически значимо выше при неаллергической бронхиальной астме по сравнению с аллергической (р=0,04). В то же время достоверных различий периостина при сравнении аллергического и неаллергического фенотипов получено не было (р=0,10). С учетом того, что нижний квартиль значений индекса отношения периостина к прокальцитонину крови у пациентов с аллергической бронхиальной астмой составил 3,8, что равняется верхнему квартилю изучаемого индекса при неаллергическом фенотипе заболевания, мы положили за основу условной границы между двумя фенотипами заболевания значение индекса 3,8. Способ выполняют следующим образом.

Забор крови у пациентов осуществляют утром натощак из локтевой вены в вакутейнеры с красной крышкой (с активатором свертывания). После забора крови вакутейнеры помещают в холодильник с температурным режимом минус 2°С - минус 8°С на 30 минут. Затем кровь центрифугируют при комнатной температуре в течение 15 минут при 3000 оборотах/минуту. Образовавшуюся сыворотку отделяют от сгустка крови и помещают в эппендорфы. Определение общего периостина и прокальцитонина крови проводят методом иммуноферментного анализа с использованием реагентов компании «БиоХимМак» (г.Москва) для определения периостина (кат. №SK00072-08) и прокальцитонина (ELH-PROCALC-1) согласно официальным инструкциям производителя. По готовности результатов периостина и прокальцитонина крови производят вычисление индекса отношения периостина к прокальцитонину по формуле H=lg(ПРС:ПКТ), где lg - десятичный логарифм; ПРС - периостин (нг/мл); ПКТ - прокальцитонин (пг/мл), и при его значениях ниже 3,8 диагностируют неаллергическую бронхиальную астму, а при значениях выше 3,8 диагностируют аллергическую бронхиальную астму.

Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.

1. Пациентка К. 59 лет поступила с выраженным обострением бронхиальной астмы. В анамнезе длительное течение основного заболевания (с 35 лет), поливалентная аллергия. В анализах обращают на себя внимание повышение числа эозинофилов мокроты 31%, абсолютная и относительная эозинофилия крови 0,6×10⁹/л и 11%, соответственно, повышение общего IgE в сыворотке 223 МЕ/мл. Значение индекса периостин/прокальцитонин составило 4,4. Величина индекса более 3,8 в случае данной пациентки подтверждает диагностическую ценность верификации аллергического фенотипа бронхиальной астмы. При этом обращает на себя внимание сравнительно небольшое значение периостина крови - 1119 нг/мл, близкое к медиане периостина для всех пациентов с бронхиальной астмой - 933 нг/мл и явно меньше медианы периостина для аллергической бронхиальной астмы - 4571 нг/мл. Значение прокальцитонина равнялось 0,08 пг/мл. Прирост ОФВ₁ после пробы с бронхолитиком составил 12,1%. Проведенная терапия ингаляционными глюкокортикостероидами - симбикорт 160+4,5 мкг по 2 ингаляции 2 раза в день, привела к купированию обострения бронхиальной астмы, нормализации показателей крови и мокроты.

2. Пациентка П. 64 лет поступила с обострением бронхиальной астмы после перенесенной ОРВИ. Известно, что во взрослом возрасте часто переносила ОРВИ (3-4 раза в год). В возрасте 39 лет в связи с появлением дыхательного дискомфорта обследовалась - диагностирована неаллергическая бронхиальная астма - аллергопробы отрицательные. По результатам лабораторных методов в госпитализацию: гнойность мокроты - нейтрофилы 75%, по результатам посева - золотистый стафилококк 10³ КОЕ, единичные колонии Enterobacterspp., нейтрофильный лейкоцитоз в крови - лейкоциты 11,3×10⁹/л, абс.нейтрофилы 6,9×10⁹/л, отн. нейтрофилы 61%, нормальные значения общего IgE сыворотки - 41,7 МЕ/мл.

Индекс периостин/прокальцитонин составил 3,7, значения менее 3,8 соответствуют неаллергической бронхиальной астме. Значения периостина 650 нг/мл и прокальцитонина крови 0,11 пг/мл не позволяли с должной уверенностью судить об аллергическим или неаллергическом характере воспаления. Прирост ОФВ₁ после пробы с бронхолитиком составил 12,5%. Курс антибактериальной терапии - цефтриаксон 2 грамма в сутки в течение 7 дней, способствовал эрадикации S. aureus в мокроте, нормализации показателей воспаления мокроты и крови, купированию обострения.

Предложенный в заявленном изобретении индекс периостин/прокальцитонин показал себя комплексным параметром воспаления, низкие значения которого позволяют судить о высокой активности инфекционного воспаления, в то время как высокие значения указывают на выраженность аллергического компонента воспаления. Полученные сведения об активности аллергического и инфекционного звеньев воспаления представляют практическую ценность и могут быть использованы для коррекции глюкокортикоидной и антибактериальной терапии.

Заявленный способ обладает простотой, экономичностью, безопасностью и точностью при дифференциальной диагностике фенотипов бронхиальной астмы.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, аллергологии, внутренним болезням, и может быть использовано для дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы. Определяют уровни периостина и прокальцитонина крови. Рассчитывают индекс отношения периостина к прокальцитонину. При его значениях ниже 3,8 диагностируют неаллергическую бронхиальную астму. При значениях выше 3,8 диагностируют аллергическую бронхиальную астму. Способ обеспечивает более простую, экономичную и точную дифференциальную диагностику фенотипов бронхиальной астмы за счет оценки активности маркеров аллергического и инфекционного воспаления. 1 табл., 2 пр.

Способ дифференциальной диагностики фенотипов бронхиальной астмы, включающий оценку активности маркеров аллергического и инфекционного воспаления, отличающийся тем, что определяют уровни периостина и прокальцитонина крови, рассчитывают индекс отношения периостина к прокальцитонину по формуле:

И=lg(ПРС:ПКТ), где

lg - десятичный логарифм; ПРС - периостин (нг/мл); ПКТ - прокальцитонин (пг/мл),

и при его значениях ниже 3,8 диагностируют неаллергическую бронхиальную астму, а при значениях выше 3,8 диагностируют аллергическую бронхиальную астму.