Антикоагулянтное средство на основе гуминовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей Российский патент 2023 года по МПК A61K35/10 A61P7/02 

Изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к гуминовым препаратам, и может быть использовано для снижения вязкости крови и уменьшения тромбообразования.

Среди лекарственных средств с антикоагулянтным действием, используемых на российском фармацевтическом рынке, преобладают препараты на основе продуктов фракционирования гепарина как отечественного (эниксум анфибра, эноксапарин, ангиофлюкс, лавенум и др.), так и зарубежного (клексан, фраксипарин, гемапаксан, весел, ривароксабан, цибор и др.) производства.

Применение препаратов на основе гепариновых фракций ограничивается рядом противопоказаний (чувствительность к компонентам, заболевания почек и печени, язвенная болезнь, риск развития кровотечений и др.) и побочным действием, среди которых - остеопороз, тромбоцитопения, геморрагические осложнения.

Известны способы получения экстракта с антикоагулянтной активностью из природного сырья [1, 2]. Способ получения средства [1] состоит в экстракции измельченной травы коровяка черного этанолом с последующей реперколяцией. Сущность способа [2] заключается в экстракции измельченной коры кедра сибирского гексаном, последующей обработки этилацетатом и высушивании. Недостатками указанных способов является низкий выход продукта, сложность стандартизации целевого продукта и ограниченная сырьевая база.

Известен способ получения средства, обладающего антикоагулянтной активностью, из сапропеля [3], который заключается в экстракции из сапропеля суммы компонентов раствором аммиака, вымораживании, очистке надосадочной жидкости диализом, высаливании сульфатом аммония, обработкой этанолом с последующей отгонкой растворителя, растворении в дистиллированной воде и последующей гель-фильтрации через сефадекс G-50. Полученный продукт представляет собой антикоагулянт пептидной природы, без присутствия гуминовых веществ.

Влияние гумусовых кислот на вязкость крови методом вискозиметрии приводится в работах [4]. Сделанные выводы не представляются корректными, так как не приведены первичные экспериментальные данные, в эксперименте отсутствует контрольный образец, не указаны формулы расчета «биологической активности» гуминоподобных фракций, отсутствуют показатели тромбоэластографии.

Известен способ получения гуминсодержащего средства для улучшения реологических свойств крови [5], полученного без использования химических реагентов, включающий широкий набор веществ гуминовой природы. Указанное средство получают из гуминосодержащего сырья, включающего леонардит, лигнин, уголь, торф и/или сапропель, методом ультразвукового диспергирования предварительно измельченного сырья в смеси с водой при температуре 30-80°С и давлении 0,05-0,8 МПа, с последующим охлаждением до комнатной температуры и разбавлением водой до содержания гуминовых веществ от 1 до 20 масс.%. Средство включает гуминовые кислоты, фульвокислоты, их соли, гидрохинон и взят в качестве прототипа. Недостатками прототипа являются:

- присутствие в средстве значительного количества водорастворимых неорганических и низкомолекулярных органических веществ;

- присутствие в средстве смеси гуминовых, фульвовых кислот, их солей, гидрохинон, что существенно усложняет стандартизацию лекарственного препарата.

Целью изобретения является расширение группы антикоагулянтных средств за счет использования природной биологически активной субстанции гуминовых кислот, выделенных из некондиционных низкоминерализованных иловых сульфидных грязей. Предлагаемое средство характеризуется выраженным антикоагулянтным действием.

Эта цель достигается тем, что предлагается антикоагулянтное средство в виде раствора, приготовленного из гуминовых кислот, выделенных из некондиционных низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, характеризующихся низким содержанием минеральных примесей и высоким содержанием биологически активной субстанции. Предлагаемое средство может быть использовано в области медицины как антикоагулянтное средство.

Предлагаемое средство имеет следующий состав:

гуминовые кислоты - 0,1000 г

раствор натрия гидроксида 0,02 моль/л - 0,05 л

раствор хлороводородной кислоты 0,01 моль/л - до pH = 7,4

вода очищенная - до 0,1 л.

Для реализации способа получения антикоагулянтного средства использовали гуминовые кислоты, выделенные согласно методике [6]. Антикоагулянтное средство, представляющее собой 0,10%-ный раствор гуминовых кислот, получали путем добавления 0,1000 г гуминовых кислот к 50 мл 0,02 моль/л раствора натрия гидроксида, последующего термостатирования в течение 3 часов, фильтрования через бумажный фильтр (белая лента), нейтрализации фильтрата 0,01 моль/л раствором хлороводородной кислоты до значения pH = 7,4, доведения объема до 100 мл водой очищенной.

Исследование антикоагулянтной активности выполнены с использованием венозной крови в условиях in vitro. Тромбоэластографию проводили на аппарате TEG 5000 (Haemoscope Corporation, США). В эксперименте 0,01 см³ средства добавляли к 0,35 мл нативной крови; концентрация гуминовых кислот в анализируемой пробе составляла 2,86⋅10^-3% (масс.). В качестве активатора использовали 0,2 моль/л раствор кальция хлорида (“Технология-Стандарт”, Россия). В качестве стандартного вещества использовали официнальный препарат - 3,7-диметил-1-(5-оксогексил)-ксантин («Пентоксифиллин», ОАО «Дальхимфарм», Россия) в конечной концентрации 2⋅10^-3 моль/л. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка с использованием непараметрических методов. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. При анализе тромбоэластограмм определяли общую тенденцию коагуляции (R), функциональную активность тромбоцитов (МА), фибриногена (Angle), фибринолиза (CLT) и физико-механические свойства образовавшихся сгустков (G).

ПРИМЕР

Исследование антикоагулянтной активности выполнены с использованием венозной крови в условиях in vitro на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Общее количество доноров составило 12 человек. В качестве стабилизатора венозной крови использовался 3,8% раствор натрия цитрата в соотношении 9:1. Таблица 1 содержит показатели тромбоэластографии предлагаемого средства на основе гуминовых кислот в условиях in vitro и препарата сравнения (пентоксифиллин) (*p<0,05; **p<0,001-в сравнении с контролем, αp<0,05; βp<0,001- в сравнении с пентоксифиллином).

Под влиянием гуминовых кислот время начала образования сгустка (R) увеличилось на 10,9% по сравнению с контролем и незначительно (примерно на 3%) уступает времени пентоксифиллина. Действие гуминовых кислот приводит к значительному изменению показателя формирования фибриногенового сгустка (angle), уменьшая показатель угла почти на 22,8%, что всего на 1,8% уступает действию препарата сравнения. По влиянию на функциональную активность тромбоцитов и фибриногена (MA) действие гуминовых кислот аналогично действию пентоксифиллина и способствует ее снижению на 26,9%. Сгусток по механико-физическим характеристикам становится рыхлым и неполноценным - показатель G снижается статистически значимо на 52,6% по сравнению с контролем. Эффективность предлагаемого средства на 24,6% выше, чем пентоксифиллина. Показатель CLT, значение которого в контроле составляло 1,4, под действием препарата сравнения уменьшалось до 0,5, что соответствует 64%. Под действием гуминовых кислот показатель CLT уменьшился до значения -1,1, что соответствует 178%. Приведенные показатели тромбоэластографии свидетельствуют о смещении общего потенциала в сторону гипокоагуляции.

Средство на основе гуминовых кислот, выделенных из некондиционных иловых сульфидных грязей, влияет на гематологические показатели, способствуя процессам гипокоагуляции. Заявленное средство обладает более выраженной антикоагулятной активностью по сравнению с пентоксифиллином, и может быть использовано в медицине и фармации.

Антикоагулянтное средство на основе гуминовых кислот, выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, может быть применено в медицине и фармацевтических организациях для снижения вязкости крови и уменьшения тромбообразования.

Литература

1. Петриченко В.М., Калинина С.А., Сыропятов Б.Я. Патент РФ № 2504391от 20.01.2014. Способ получения растительного средства, обладающего антикоагулянтным, гипотензивным и диуретическим действием// Патент России -2014.

2. Дрозд Н.Н., Кузнецова С.А., Макаров В.А. и др. Патент РФ № 2366441 от 10.09.2009. Антикоагулянтное средство на основе биологически активного комплекса из коры кедра сибирского//Патент России -2009.

3. Чирятьев Е.А., Калинин Е.П., Русакова О.А. Патент РФ № 2175552С1 от 10.11.2001. Способ получения антикоагулянта из сапропеля // Патент России - 2001.

4. Романтеева Ю.В. Химико-фармацевтическая характеристика биологически активных веществ гуминового ряда. Автореф.дис.кан.фарм.наук: /Ю.В. Романтеева.- Самара. 2007. -21с..

5. Милов Н.И. Патент РФ № 2756364C1 от 29.09.2021 Антикоагуляционное гуминовое средство для улучшения реологических свойств крови // Патент России - 2021

6. Аввакумова Н.П., Степанов Г.В., Кривопалова М.А., Глубокова М.Н., Катунина Е.Е., Жданова А.В., Ульянова Л.Г. Патент РФ № 2744469С1 от 9.03.2021 Способ получения гуминовых кислот из некондиционных пелоидов // Патент России - 2021.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к антикоагулянтному средству и способу его получения. Антикоагулянтное средство на основе гуминовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, имеющее следующий состав: гуминовые кислоты - 0,1000 г, раствор натрия гидроксида 0,02 моль/л - 0,05 л, раствор хлороводородной кислоты 0,01 моль/л - до pH = 7,4, вода очищенная - до 0,1 л. Способ получения антикоагулянтного средства на основе гуминовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, включающий смешивание компонентов, термостатирование и фильтрование, отличается тем, что осуществляется путем добавления 0,1000 г гуминовых кислот к 50 мл 0,02 моль/л раствора натрия гидроксида, последующего термостатирования в течение 3 часов, фильтрования через бумажный фильтр (белая лента), нейтрализации фильтрата 0,01 моль/л раствором хлороводородной кислоты до значения pH = 7,4, доведения объема до 100 мл водой очищенной. Вышеописанное средство характеризуется выраженным антикоагулянтным действием, достоверно уменьшает показатели тромбоэластографии, что указывает на понижение скорости свертывания крови. 2 н.п. ф-лы, 1 пр.

1. Антикоагулянтное средство на основе гуминовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, имеющее следующий состав:

Гуминовые кислоты - 0,1000 г;

Раствор натрия гидроксида 0,02 моль/л - 0,05 л;

Раствор хлороводородной кислоты 0,01 моль/л - до pH = 7,4;

Вода очищенная - до 0,1 л.

2. Способ получения антикоагулянтного средства на основе гуминовых кислот низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, включающий смешивание компонентов, термостатирование и фильтрование, отличающийся тем, что осуществляется путем добавления 0,1000 г гуминовых кислот к 50 мл 0,02 моль/л раствора натрия гидроксида, последующего термостатирования в течение 3 часов, фильтрования через бумажный фильтр (белая лента), нейтрализации фильтрата 0,01 моль/л раствором хлороводородной кислоты до значения pH = 7,4, доведения объема до 100 мл водой очищенной.