СПОСОБЫ ГЕНОТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНА ФАКТОРА VIII (FVIII) Российский патент 2023 года по МПК C07K14/755 A61K38/37 A61K45/06 A61K48/00 

Родственные заявки

[0001] По этой заявке на патент испрашивается приоритет временной заявки на патент США 62/540,053, поданной 1 августа 2017 года; временной заявки на патент США 62/583,890, поданной 9 ноября 2017 года; временной заявки на патент США 62/596,535, поданной 8 декабря 2017 года; и временной заявки на патент США 62/596,670, поданной 8 декабря 2017 года. Все содержание предыдущих заявок включено в настоящее описание посредством ссылки, включая весь текст, таблицы и чертежи.

Область техники, к которой относится изобретение

[0002] Настоящее изобретение относится к области получения рекомбинантного фактора свертывания крови и лечения заболеваний, связанных с нарушением гемостаза. В частности, в изобретении предложены способы введения нуклеиновой кислоты, кодирующей белок фактора VIII (FVIII), и способы лечения гемофилии A.

Введение

[0003] Несколько публикаций и патентных документов цитируются в тексте заявки для описания уровня техники, к которому относится настоящее изобретение. Каждый из этих источников включен в настоящее описание посредством ссылки, как если бы он был изложен полностью.

[0004] Гемофилия является X-сцепленным нарушением свертываемости крови, присутствующим у 1 из 5000 мужчин во всем мире. Методы терапии, направленные на повышение уровней фактора свертывания крови чуть выше 1% от нормального значения, связывают с существенным улучшением фенотипа, характеризуемого тяжелой формой заболевания. Недавние клинические исследования ААВ-опосредованного переноса гена при лечении гемофилии B (HB) продемонстрировали стойкую длительную экспрессию терапевтических уровней фактора IX (FIX), но при этом было установлено, что доза вектора ААВ может быть лимитирующей из-за иммунных ответов, направленных против капсида ААВ. Тогда как эти данные относятся к гемофилии B, 80% всех случаев гемофилии вызваны дефицитом FVIII и относятся к гемофилии A (HA).

[0005] Существующим лечением этого заболевания является белковая заместительная терапия, требующая частой инфузии белка фактора VIII. Существует неотложная потребность в достижении стойких терапевтических уровней экспрессии фактора VIII, чтобы пациентам больше не требовалось такое частое лечение с введением белка. Фактически, постоянная экспрессия фактора VIII сможет предотвратить эпизоды кровотечения и гарантировать установление иммунной толерантности к этому белку.

Сущность изобретения

[0006] Изобретение относится к способам лечения человека, страдающего гемофилией A или нуждающегося в факторе VIII (FVIII). В одном варианте осуществления способ включает введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), в котором векторный геном включает вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где вариант нуклеиновой кислоты обладает 95% или большую идентичность с SEQ ID NO:7. В другом варианте осуществления способ включает введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), в котором векторный геном включает вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где вариант нуклеиновой кислоты содержит не больше 2 цитозин-гуанин-динуклеотидов (CpG).

[0007] В другом варианте осуществления способ лечения человека, страдающего гемофилией A или нуждающегося в Факторе VIII (FVIII), включает введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), где векторный геном включает нуклеиновую кислоту, кодирующую фактор VIII (FVIII) или кодирующую фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где доза вектора rAAV, вводимая человеку, составляет меньше 6×10¹² векторных геномов на килограмм (вг/кг).

[0008] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, включительно.

[0009] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 6×10¹³ вг/кг, включительно.

[0010] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 1×10¹³ вг/кг, включительно.

[0011] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно.

[0012] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 5×10¹² вг/кг, включительно.

[0013] Способ согласно любому из пунктов 1-3, где доза вектора rAAV, вводимого человеку, составляет от приблизительно 1×10¹¹ до приблизительно 1×10¹² вг/кг, включительно.

[0014] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 2×10¹¹ до приблизительно 9×10¹¹ вг/кг, включительно.

[0015] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 8×10¹² вг/кг, включительно.

[0016] 12. Способ по любому из пунктов 1-3, где доза вектора rAAV, вводимая человеку, составляет от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 7×10¹² вг/кг, включительно.

[0017] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно.

[0018] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV от приблизительно 4×10¹¹ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно.

[0019] Варианты осуществления способов и применений включают введение человеку дозы вектора rAAV приблизительно 5×10¹¹ вг/кг или приблизительно 1×10¹² вг/кг.

[0020] Варианты осуществления способов и применений включают предоставление большего, чем ожидаемое, количества FVIII или hFVIII-BDD, людям на основе данных, полученных в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV. Количества FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, например, могут быть больше, чем предсказано на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0021] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, больше, чем предсказанное на основе данных, полученных в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0022] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, в 1-4 раза, больше, чем экспрессия, предсказанная на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0023] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, в 2-4 раза больше, чем предсказанное на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0024] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, в 2-3 раза больше, чем предсказанное на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0025] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, а 1-2 больше, чем предсказанное на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

[0026] Не относящиеся к человеку приматы включают род Macaca. В конкретном варианте не относящийся к человеку примат является яванским макаком (Macaca fascicularis).

[0027] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение периода времени, который обеспечивает краткосрочное, среднесрочное или более долгосрочное улучшение гемостаза. В некоторых вариантах осуществления период времени является таким, что никакого дополнительного белка FVIII или рекомбинантного белка FVIII не нужно вводить человеку для поддержания гемостаза.

[0028] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 14 дней после введения вектора rAAV.

[0029] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 21 дня после введения вектора rAAV.

[0030] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 28 дней после введения вектора rAAV.

[0031] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 35 дней после введения вектора rAAV.

[0032] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 42 дней после введения вектора rAAV.

[0033] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 49 дней после введения вектора rAAV.

[0034] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 56 дней после введения вектора rAAV.

[0035] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 63 дней после введения вектора rAAV.

[0036] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 70 дней после введения вектора rAAV.

[0037] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 77 дней после введения вектора rAAV.

[0038] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 84 дней после введения вектора rAAV.

[0039] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 91 дня после введения вектора rAAV.

[0040] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 98 дней после введения вектора rAAV.

[0041] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 105 дней после введения вектора rAAV.

[0042] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 112 дней после введения вектора rAAV.

[0043] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 4 месяцев после введения вектора rAAV.

[0044] В некоторых вариантах осуществления, FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 154 дней.

[0045] В некоторых вариантах осуществления, FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 210 дней.

[0046] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев после введения вектора rAAV.

[0047] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется в течение по меньшей мере приблизительно 12 месяцев после введения вектора rAAV.

[0048] FVIII или hFVIII-BDD могут экспрессироваться в некоторых количествах в течение некоторого периода времени после введения вектора rAAV. В некоторых вариантах осуществления количество является таким, что присутствует поддающийся обнаружению FVIII или hFVIII-BDD, или количество FVIII или hFVIII-BDD, которое обеспечивает терапевтический эффект.

[0049] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, составляет приблизительно 3% или больше через 14 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 4% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 5% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 6% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 7% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 8% или больше через 28 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 9% или больше через 28 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 10% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 11% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 12% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV.

[0050] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 14-дневного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0051] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 4-недельного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0052] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 8-недельного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0053] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 12-недельного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0054] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 16-недельного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0055] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 6-месячного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0056] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 7-месячного периода составляет в среднем приблизительно 10% или больше.

[0057] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, в течение непрерывного 14-дневного периода составляет в среднем приблизительно 12% или больше.

[0058] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, составляет в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% в течение непрерывного 4-недельного периода, в течение непрерывного 8-недельного периода, в течение непрерывного 12-недельного периода, в течение непрерывного 16-недельного периода, в течение непрерывного 6-месячного периода, в течение непрерывного 7-месячного периода или в течение непрерывного 1-летнего периода.

[0059] В некоторых вариантах осуществления количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, составляет в среднем от приблизительно 20% до приблизительно 80% в течение непрерывного 4-недельного периода, в течение непрерывного 8-недельного периода, в течение непрерывного 12-недельного периода, в течение непрерывного 16-недельного периода, в течение непрерывного 6-месячного периода или в течение непрерывного 1-летнего периода.

[0060] Стационарная экспрессия FVIII также может быть достигнута по истечении некоторого периода времени, например, 4-6, 6-8 или 6-12 недель или больше, например, 6-12 месяцев или даже годы после введения вектора rAAV.

[0061] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека в стационарном состоянии, где активность FVIII не изменяется больше чем на 5-50% в течение 4, 6, 8 или 12 недель или месяцев.

[0062] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека в стационарном состоянии, где активность FVIII не изменяется больше чем на 25-100% в течение 4, 6, 8 или 12 недель или месяцев.

[0063] Вектор rAAV может быть введен в дозах, которые, как ожидают, будут обеспечивать экспрессию FVIII в некоторых количествах и в течение некоторых периодов времени с обеспечением стабильной экспрессии после введения.

[0064] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0065] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 5×10⁹ до приблизительно 6×10¹³ вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0066] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 6×10¹³ вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0067] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 1×1013 вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0068] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0069] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе меньше 6×10¹² вг/кг и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0070] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10¹⁰ до приблизительно 5×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0071] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10¹¹ до приблизительно 1×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0072] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 2×10¹¹ до приблизительно 9×10¹¹ вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0073] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 8×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0074] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 7×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0075] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0076] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 4×10¹¹ до приблизительно 6×10¹² вг/кг, включительно, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0077] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят в дозе приблизительно 5×10¹¹ вг/кг или приблизительно 1×10¹² вг/кг, и FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0078] Люди согласно методам и использованию включают людей, которые являются серонегативными на антитела к AAV или не имеют поддающихся обнаружению антител к AAV.

[0079] В некоторых вариантах осуществления антитела к AAV у человека не обнаруживают до введения вектора rAAV, где указанный человек является серонегативным на AAV.

[0080] В некоторых вариантах осуществления антитела к AAV против FVIII или hFVIII-BDD не обнаруживают в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или месяцев или больше после введения вектора rAAV.

[0081] В некоторых вариантах осуществления антитела к AAV против вектора rAAV не обнаруживают в течение по меньшей мере приблизительно 14 дней или в течение по меньшей мере приблизительно 21 дня, или в течение по меньшей мере приблизительно 28 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 35 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 42 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 49 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 56 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 63 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 70 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 77 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 84 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 91 дня, или в течение по меньшей мере приблизительно 98 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 105 дней, или в течение по меньшей мере приблизительно 112 дней после введения вектора rAAV.

[0082] Люди согласно способам и применениям включают людей, которые имеют поддающиеся обнаружению антитела к AAV.

[0083] В некоторых вариантах осуществления антитела к AAV у человека присутствуют на уровне, равном приблизительно 1:5 или меньше, до введения вектора rAAV.

[0084] В некоторых вариантах осуществления антитела к AAV у человека присутствуют на уровне, равном приблизительно 1:3 или меньше, до введения вектора rAAV.

[0085] В некоторых способах и применениях у человека, которому был введен вектор rAAV, не развивается клеточно-опосредованный иммунный ответ против вектора rAAV.

[0086] В некоторых вариантах осуществления у человека, которому был введен вектор rAAV, клеточно-опосредованный иммунный ответ против вектора rAAV не развивается в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных недель или месяцев после введения вектора rAAV.

[0087] В некоторых вариантах осуществления у человека, которому был введен вектор rAAV, не развивается гуморальный иммунный ответ против вектора rAAV, достаточный для уменьшения или блокирования терапевтического эффекта FVIII или hFVIII-BDD.

[0088] В некоторых вариантах осуществления у человека, которому был введен вектор rAAV, поддающиеся обнаружению антитела против вектора rAAV не вырабатываются в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или 6 месяцев после введения вектора rAAV.

[0089] В некоторых вариантах осуществления человеку, которому был введен вектор rAAV, не вводят иммунодепрессантное средство до, во время и/или после введения вектора rAAV.

[0090] В некоторых вариантах осуществления у человека, которому был введен вектор rAAV, достигается экспрессия FVIII или hFVIII-BDD без введения иммунодепрессантного средства.

[0091] В случае существования ранее или развивающегося после введения вектора rAAV иммунного ответа, человеку до или после введения вектора rAAV могут вводить иммунодепрессантное средство.

[0092] В некоторых вариантах осуществления способ или применение включает введение иммунодепрессантного средства до введения вектора rAAV.

[0093] В некоторых вариантах осуществления способ или применение включает введение иммунодепрессантного средства после введения вектора rAAV.

[0094] В некоторых вариантах осуществления иммунодепрессантное средство вводят от периода времени в течение 1 часа до 45 дней после введения вектора rAAV.

[0095] В некоторых вариантах осуществления иммунодепрессантное средство включает стероид, циклоспорин (например, циклоспорин A), микофенолат, ритуксимаб или их производное.

[0096] В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот имеют 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или большую идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот имеют 90-95% идентичностью последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот имеют 95-100% идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18.

[0097] В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий FVIII или hFVIII-BDD, имеет сниженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновой кислотой дикого типа, кодирующей FVIII. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере на 20 CpG меньше, чем нуклеиновая кислота дикого типа, кодирующая FVIII (SEQ ID NO:19). В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты содержит не больше 10 CpG, содержит не больше 9 CpG, содержит не больше 8 CpG, содержит не больше 7 CpG, содержит не больше 6 CpG, содержит не больше 5 CpG, содержит не больше 4 CpG; содержит не больше 3 CpG; содержит не больше 2 CpG; или содержит не больше 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты содержит не больше 4 CpG; 3 CpG; 2 CpG; или 1 CpG. В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты не содержит CpG.

[0098] В некоторых вариантах осуществления вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий FVIII или hFVIII-BDD, имеет сниженное содержание CpG по сравнению с нуклеиновой кислотой дикого типа, кодирующей FVIII, и такие варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG имеют 90% или большую идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG имеют 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или большую идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG имеют 90-95% идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG имеют 95-100% идентичность последовательности с любой из SEQ ID NO:1-18. В некоторых вариантах осуществления кодирующие FVIII варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG представлены в любой из SEQ ID NO:1-18.

[0099] В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновой кислоты, кодирующие белок FVIII или hFVIII-BDD, по меньшей мере на 75% идентичны человеческой нуклеиновой кислоте FVIII дикого типа или человеческой нуклеиновой кислоте FVIII дикого типа, включающей делецию B-домена. В некоторых вариантах осуществления варианты нуклеиновых кислот, кодирующие белок FVIII, приблизительно на 75-95% идентичны (например, приблизительно на 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% идентичны) человеческой нуклеиновой кислоте FVIII дикого типа или человеческой нуклеиновой кислоте FVIII дикого типа, включающей делецию B-домена.

[0100] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновые кислоты и варианты, кодирующие белок FVIII, являются нуклеиновыми кислотами млекопитающего, такого как человек. Такие нуклеиновые кислоты и варианты нуклеиновых кислот млекопитающего, кодирующие белок FVIII, включают человеческие формы, которые могут быть основаны на человеческом FVIII дикого типа или человеческом FVIII дикого типа, включающем делецию B-домена.

[0101] В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вектор на основе аденоассоциированного вируса (sAAV) включает вектор AAV, включает серотип AAV или псевдотип AAV, такой как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV. В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV включает любую из SEQ ID NO:1-18 или включает SEQ ID NO:23 или 24.

[0102] В некоторых вариантах осуществления элемент контроля экспрессии включает конститутивный или регулируемый элемент контроля, или тканеспецифический элемент контроля экспрессии или промотор. В некоторых вариантах осуществления элемент контроля экспрессии включает элемент, обеспечивающий экспрессию в печени. В некоторых вариантах осуществления элемент контроля экспрессии включает промотор TTR или мутантный промотор TTR, такой как SEQ ID NO:22. В других конкретных аспектах элемент контроля экспрессии включает промотор, представленный в публикации PCT WO 2016/168728 (USSN 62/148,696; 62/202,133; и 62/212,634), которые полностью включены в настоящее описание посредством ссылки.

[0103] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV включает серотип AAV или псевдотип AAV, включающий серотип капсида AAV, отличающийся от серотипа ITR. В дополнительных вариантах осуществления вектор rAAV включает последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3, имеющую 75% или большую идентичность последовательности (например, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% и т.д.) с любым из серотипов AAV AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.

[0104] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV включает последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3, имеющую 75% или большую идентичность последовательности (например, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% и т.д.) с любой из SEQ ID NO:27 или SEQ ID NO:28. В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV включает капсид VP1, VP2 и/или VP3, на 100% идентичный SEQ ID NO:27 или SEQ ID NO:28.

[0105] В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV дополнительно включает интрон, элемент контроля экспрессии, один или более инвертированных концевых повторов AAV (ITR) (например, любой из серотипов AAV AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 или их комбинацию), филлерную полинуклеотидную последовательность и/или поли-A-сигнал.

[0106] В некоторых вариантах осуществления интрон расположен внутри или фланкирует нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, и/или элемент контроля экспрессии функционально связан с нуклеиновой кислотой или вариантом нуклеиновой кислоты, кодирующими FVIII или hFVIII-BDD, и/или ITR-повтор(ы) AAV фланкирует 5' или 3'-конец нуклеиновой кислоты или варианта нуклеиновой кислоты, кодирующих FVIII, и/или филлерная полинуклеотидная последовательность фланкирует 5' или 3'-конец нуклеиновой кислоты или варианта нуклеиновой кислоты, кодирующих FVIII или hFVIII-BDD.

[0107] В частных вариантах осуществления элемент контроля экспрессии включает конститутивный или регулируемый элемент контроля, или тканеспецифический элемент контроля экспрессии или промотор. В некоторых вариантах осуществления элемент контроля экспрессии включает элемент, обеспечивающий экспрессию в печени (например, промотор TTR или мутантный промотор TTR).

[0108] В некоторых вариантах осуществления rAAV включает фармацевтическую композицию. Такие фармацевтические композиции необязательно включают пустой капсид AAV (например, неполный векторный геном, включающий нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD).

[0109] В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие белок FVIII или hFVIII-BDD, векторы, векторы экспрессии или вирус, или векторы AAV инкапсулированы в липосоме или смешаны с фосфолипидами или мицеллами.

[0110] Способы согласно изобретению также включают лечение млекопитающих (например, людей), таких как люди, нуждающиеся в FVIII (человек, у которого вырабатывается недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII), или которые имеют гемофилию A.

[0111] В одном варианте осуществления у человека продуцируется недостаточное количество белка FVIII или дефектный или аберрантный белок FVIII. В другом варианте осуществления человек имеет легкую, умеренную или тяжелую гемофилию A.

[0112] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемый посредством введенного вектора rAAV, экспрессируется на уровнях, оказывающих полезный или терапевтический эффект у млекопитающего.

[0113] Пациенты-кандидаты (например, пациент) и млекопитающие (например, люди) для введения (например, доставки) rAAV, включающего нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, включают пациентов, которые имеют или подвергаются риску развития нарушения, такого как: гемофилия A, болезнь фон Виллебранда и кровотечение, связанное с травмой, ранение, тромбоз, тромбоцитопения, инсульт, коагулопатия, синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС) или нарушение, вызванное превышением доз при антикоагуляционной терапии.

[0114] Пациенты-кандидаты (например, пациент) и млекопитающие (например, люди) для введения (например, доставки) нуклеиновой кислоты или вариантв нуклеиновой кислоты, кодирующих FVIII, включают пациентов, серонегативных на антитела к AAV, а также пациентов, которые имеют (являются серопозитивными) или подвергаются риску возникновения антител к AAV. Такие пациенты (например, пациент) и млекопитающие (например, люди) могут быть серонегативными или серопозитивными на серотип AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-Rh10 или AAV-Rh74.

[0115] В некоторых вариантах осуществления пустой капсид серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV-12, AAV-Rh10 и/или AAV-Rh74 дополнительно вводят млекопитающему или пациенту отдельно или в комбинации с вектором rAAV, включающим нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII.

[0116] Способы введения (например, доставки) в соответствии с изобретением включают любой режим контакта или доставки, ex vivo или in vivo. В определенных вариантых осуществления введение (например, доставка): внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, внутриполостно, путем интубации или с помощью катетера.

[0117] В некоторых вариантах осуществления FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется на уровнях без существенного увеличения риска тромбоза.

[0118] В некоторых вариантах осуществления риск тромбоза определяется путем измерения продуктов распада фибрина.

[0119] В некоторых вариантах осуществления активность FVIII или hFVIII-BDD у человека поддается обнаружению в течение по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 недель или по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев или по меньшей мере 1 года.

[0120] В некоторых вариантах осуществления человека дополнительно исследуют или контролируют на наличие одного или более следующих факторов: присутствие или количество антител к AAV, иммунный ответ против AAV, антитела к FVIII или hFVIII-BDD, иммунный ответ против FVIII или hFVIII-BDD, количество FVIII или hFVIII-BDD, активность FVIII или hFVIII-BDD, количество или уровни одного или более ферментов печени или частота и/или тяжесть, или продолжительность эпизодов кровотечения.

Описание чертежей

[0121] На Фигуре 1 показана схема исследования на НЧП.

[0122] На Фигурах 2A-2C показаны уровни антигена hFVIII у НЧП после внутривенного введения 2×10¹² (А), 5×10¹² (B) или 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Линии обозначают отдельных животных. Уровни человеческого FVIII в плазме исследовали с помощью ИФА и представляют многократные измерения, полученные при последовательном заборе образцов крови в одной и той же группе животных в ходе исследования (n=2-3 животных в когорте). Уровни человеческого FVIII, измеренные у животных, получавших растворитель, обозначены незакрашенными квадратами на всех трех графиках.

ε=Выработка ингибиторов против FVIII.

[0123] На Фигурах 3A-3C показаны уровни АЛТ у НЧП при введении 2×10¹² (А), 5×10¹² (B) или 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005.

[0124] На Фигурах 4A-4C показаны уровни D-димера у НЧП. Концентрация антигена D-димера в плазме НЧП после внутривенного введения 2×10¹² (А), 5×10¹² (B) или 1×10¹³ вг/кг (C) AAV-SPK-8005. Пунктирная линия обозначает 500 нг/мл, верхнюю границу нормальных значений для D-димера у людей.

[0125] На Фигуре 5 показаны обобщенные данные по уровням FVIII при трех дозах AAV-SPK-8005.

[0126] На Фигурах 6A-6D показаны уровни hFVIII в плазме яванских макаков после внутривенного введения 2×10¹² (А), 6×10¹² (B) или 2×10¹³ (вг/кг) (C) AAV-SPK-8011(LK03 капсид)-hFVIII (предварительное исследование). Линии обозначают отдельных животных. Уровни hFVIII в плазме были исследованы с помощью ИФА и представляют собой многократные измерения, полученные при последовательном заборе образцов крови в одной и той же группе животных в ходе исследования (n=3 животных в когорте). Уровни человеческого FVIII, измеренные у животных, получавших растворитель, обозначены незакрашенными квадратами (n=2). ε=Время, когда выработка ингибиторов против FVIII была обнаружена у каждого отдельного животного.

[0127] На Фигуре 7 показаны уровни экспрессии человеческого FVIII у яванских макаков после введения SPK-8011. Предварительное исследование (квадраты) и исследование стандарта GLP (круги).

[0128] На Фигуре 8 показано сравнение уровней FVIII, достигнутых с AAV-SPK-8011 (LK03 капсид)-hFVIII, с опубликованными уровнями FVIII, доставленного с помощью векторов AAV с капсидами AAV5 и AAV8. http://www.biomarin.com/pdf/ BioMarin_R&D_Day_4_20_2016.pdf, слайд 16. AAV8: McIntosh J et al. Blood 2013; 121(17):3335-44.

[0129] На Фигуре 9 показано биораспределение AAV-SPK (SEQ ID NO:28) и AAV-LK03 (SEQ ID NO:27) в тканях у не являющихся человеком приматов (НЧП), в основном в почке, селезенке и печени (3-й столбец для каждой ткани).

[0130] На Фигуре 10 показана экспрессия FVIII в печени и селезенке после системного введения AAV-SPK-8005 мышам.

[0131] На Фигуре 11 показана Эффективность трансдукции капсида AAV-LK03, исследованная in vitro. По оси X, яванский макак (левый вертикальный столбец), человек (правый вертикальный столбец).

[0132] На Фигуре 12 показаны уровни экспрессии человеческого FVIII у яванских макаков после введения SPK-8011 в соответствии с линейной зависимостью эффекта от дозы. На панелях A и B показаны дозы SPK-8011 по линейной шкале, тогда как на панелях C и D используется логарифмическая ось X.

[0133] На Фигуре 13 показан линейный регрессионный анализ с использованием только данных для когорт низкой и средней дозы. На панелях A и B показаны дозы SPK-8011 по линейной шкале, тогда как на панелях C и D используется логарифмическая ось X.

[0134] На Фигуре 14 показана активность FVIII у 3 пациентов-людей, которым делали инфузию вектора AAV-LK03 (FVIII). Пациенты 1 и 2 (ромб, круг) получали инфузию 5×10¹¹ вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). Пациент 3 (треугольник) получал инфузию 1×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII).

[0135] На Фигуре 15 показана длительная экспрессия активности FVIII на терапевтических уровнях у тех же пациентов-людей (Пациенты 1 и 2, Фигура 14), получавших инфузию вектора AAV-LK03 (FVIII). Пациенты 1 и 2 (круг, квадрат) получали инфузию 5×10¹¹ вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII).

[0136] На Фигуре 16 показаны 10 пациентов-людей (Пациенты 1-10), демонстрирующих терапевтические уровни FVIII. Пациент 1 получал инфузию FVIII после экстренного удаления зуба на неделе 6 после инфузии. Вскоре после того регистрировали 19% уровень активности FVIII; исключенный из этой диаграммы из-за близости инфузии FVIII. Активность FVIII относится к значениям FVIII:C из местных лабораторий.

[0137] На Фигуре 17 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 1, получавшего инфузию 5×10¹¹ вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты иммуноферментного спот-анализа (ELISPOT) интерферона-γ в отношении реакции мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество пятнообразующих единиц (ПОЕ) на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0138] На Фигуре 18 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 2, получавшего инфузию 5×10¹¹ вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0139] На Фигуре 19 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 3, получавшего инфузию 1×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0140] На Фигуре 20 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 4, получавшего инфузию 1×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептидам FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0141] На Фигуре 21 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 5, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0142] На Фигуре 22 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 6, получавшего инфузию 1×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0143] На Фигуре 23 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 7, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептидам FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0144] На Фигуре 24 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 8, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (открытый круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0145] На Фигуре 25 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 9, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента нв пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0146] На Фигуре 26 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 10, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0147] На Фигуре 27 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 11, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые являются больше чем 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

[0148] На Фигуре 28 показаны терапевтические уровни FVIII у Пациента 12, получавшего инфузию 2×10¹² вг/кг вектора AAV-LK03 (FVIII). На нижнем графике показаны результаты анализа ELISPOT интерферона-γ в отношении реакции МКПК пациента на пептиды капсида AAV (закрашенный столбец) и пептиды FVIII (незакрашенный круг). Результаты показаны как количество ПОЕ на 1 миллион МКПК; значения, которые превышают 50 ПОЕ или которые выше контроля средой (пунктирная линия) в три раза, считаются положительными.

Подробное описание

[0149] Изобретение относится к способам лечения человека, страдающего гемофилией A или нуждающегося в Факторе VIII (FVIII). Такие способы могут быть осуществлены с использованием векторов rAAV с геномом, включающим нуклеиновую кислоту или варианты нуклеиновых кислот, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, которые могут экспрессироваться в клетках и/или у людей, что, в свою очередь, может обеспечить повышенные уровни белка FVIII или hFVIII-BDD in vivo. Примеры вариантов нуклеиновых кислот, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, могут иметь уменьшенное содержание CpG по сравнению с референсным FVIII или hFVIII-BDD млекопитающего (например, человека) дикого типа и/или иметь меньше чем 100% идентичность последовательности с референсным FVIII или hFVIII-BDD млекопитающего (например, человека) дикого типа. Такие способы также могут быть осуществлены путем введения дозы вектора rAAV в количестве меньше 6×10¹² векторных геномов vrAAV на килограмм (вг/кг). Векторы rAAV, вводимые в дозе меньше 6×10¹² векторныех геномов vrAAV на килограмм (вг/кг), могут включать векторный геном, включающий нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий FVIII или hFVIII-BDD.

[0150] Термины "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" используются в настоящем изобретении взаимозаменяемо для обозначения всех форм нуклеиновой кислоты, олигонуклеотидов, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Полинуклеотиды включают геномную ДНК, кДНК и антисмысловую ДНК, а также сплайсированную или несплайсированную мРНК, рРНК, тРНК и ингибирующую ДНК или РНК (РНКи, например, малую или короткую шпилечную (мш)РНК, микроРНК (мкРНК), малую или короткую интерферирующую (ми)РНК, транс-сплайсируемую РНК или антисмысловую РНК). Полинуклеотиды включают природные, синтетические и намеренно модифицированные или измененные полинуклеотиды (например, вариантную нуклеиновую кислоту). Полинуклеотиды могут быть одиночными, двойными или тройными, линейными или кольцевыми и могут иметь любую длину. При обсуждении полинуклеотидов, последовательность или структура конкретного полинуклеотида могут быть описаны в настоящем изобретении в соответствии с правилом предоставления последовательности в 5'→3' направлении.

[0151] Используемые здесь термины «модифицировать» или «вариант» и их грамматические вариации означают, что нуклеиновая кислота, полипептид или их подпоследовательность отклоняются от эталонной последовательности. Таким образом, модифицированные и вариантные последовательности могут иметь по существу одинаковую, большую или меньшую экспрессию, активность или функцию, чем эталонная последовательность, но по меньшей мере сохранять частичную активность или функцию эталонной последовательности. Конкретным примером модификации или варианта является вариант CpG-восстановленной нуклеиновой кислоты, кодирующий FVIII.

При использовании в настоящем изобретении термины "модифицировать" или "вариант" и их грамматические вариации означают, что нуклеиновая кислота, полипептид или их подпоследовательность отличаются от референсной последовательности. Модифицированные и вариантные последовательности поэтому могут иметь по существу такой же, большей или меньшей экспрессией, активностью или функцией, чем референсная последовательность, но при этом, по меньшей мере, сохранять частичную активность или функцию референсной последовательности. Конкретным примером модификации или варианта является вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующий FVIII.

[0152] Вариант "нуклеиновой кислоты" или "полинуклеотида" относится к модифицированной последовательности, которая была генетически изменена по сравнению с последовательностью дикого типа. Последовательность может быть генетически модифицирована без изменения последовательности кодируемого белка. В альтернативе последовательность может быть генетически модифицирована с кодированием варианта белка. Вариант нуклеиновой кислоты или полинуклеотида также может относиться к комбинированной последовательности, которая была подвергнута модификации кодонов для кодирования белка, который все еще сохраняет, по меньшей мере, частичную идентичность последовательности с референсной последовательностью, такой как последовательность белка дикого типа, а также была подвергнута модификации кодонов для кодирования вариантного белка. Например, некоторые кодоны такого варианта нуклеиновой кислоты будут изменены без изменения аминокислот белка (FVIII), кодируемых ими, а некоторые кодоны варианта нуклеиновой кислоты будут изменены, что, в свою очередь, вызовет изменение аминокислот белка (FVIII), кодируемых ими.

[0153] Термин "вариантный Фактор VIII (FVIII)" относится к модифицированному FVIII, генетически измененному по сравнению с немодифицированным FVIII дикого типа (например, SEQ ID NO:19) или FVIII-BDD. Такой вариант может именоваться "вариантом нуклеиновой кислоты, кодирующим Фактор VIII (FVIII)". Конкретным примером варианта является нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая белок FVIII или FVIII-BDD. Термин "вариант" не должен появляться в каждом случае при указании нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Аналогичным образом, термин "нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG" и т.п. может не содержать термин "вариант", но при этом подразумевается, что ссылка на "нуклеиновую кислоту с уменьшенным содержанием CpG" включает варианты на генетическом уровне.

[0154] Конструкции FVIII и hFVIII-BDD с уменьшенным содержанием CpG могут демонстрировать улучшения по сравнению с FVIII или FVIII-BDD дикого типа, в которых содержание CpG не уменьшено, и делают это без модификаций нуклеиновых кислот, которые приводят к изменениям кодируемого белка FVIII или FVIII-BDD на уровне аминокислот. При сравнении экспрессии, если нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG кодирует белок FVIII, который сохраняет B-домен, предпочтительно сравнивать ее с экспрессией FVIII дикого типа; а если нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG кодирует белок FVIII без B-домена, ее сравнивают с экспрессией FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.

[0155] "Вариантный Фактор VIII (FVIII)" также может означать модифицированный белок FVIII, причем модифицированный белок имеет аминокислотное изменение по сравнению с FVIII дикого типа. Опять же, при сравнении активности и/или стабильности, если кодируемый вариантный белок FVIII сохраняет B-домен, их предпочтительно сравнивать с FVIII дикого типа; а если кодируемый вариантный белок FVIII имеет делецию B-домена, его сравнивают с FVIII дикого типа, также имеющим делецию B-домена.

[0156] Вариантный FVIII может включать часть B-домена. Таким образом, FVIII-BDD включает часть B-домена. Как правило, в FVIII-BDD удалена большая часть B-домена.

[0157] Вариантный FVIII может включать "SQ" последовательность, представленную как SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29). Как правило, такой вариантный FVIII с SQ (FVIII/SQ) имеет BDD, например, удален по меньшей мере весь или часть BD. Вариантный FVIII, такой как FVIII-BDD, может содержать всю или часть "SQ" последовательности, т.е. всю или части SEQ ID NO:29. Таким образом, например, вариантный FVIII-BDD с SQ последовательностью (SFSQNPPVLKRHQR, SEQ ID NO:29) может содержать всю или только часть аминокислотной последовательности SFSQNPPVLKRHQR. Например, FVIII-BDD может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 аминокислотных остатков SFSQNPPVLKRHQR в своем составе. Таким образом, SFSQNPPVLKRHQR с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 внутренними делециями, как и с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 N- или C-концевыми делециями, включена в вариантные белки FVIII, представленные в настоящем изобретении.

[0158] "Полипептиды", "белки" и "пептиды", кодируемые последовательностями "нуклеиновых кислот" или "полинуклеотидными" последовательностями, включают полноразмерные нативные последовательности (FVIII), как с природными белками дикого типа, так и функциональными подпоследовательностями, модифицированными формами или вариантами последовательностей, при условии, что подпоследовательность, модифицированная форма или вариант сохраняют некоторую степень функциональности нативного полноразмерного белка. Например, нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая белок FVIII или hFVIII-BDD, может иметь делецию B-домена, как указано в настоящем изобретении, и сохранять функцию свертывания крови. В способах и применениях изобретения такие полипептиды, белки и пептиды, кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, могут быть, но не должны обязательно быть, идентичными эндогенному белку, который является дефектным, или экспрессия которого недостаточна, или который является дефицитным у млекопитающего, подвергаемого лечению.

[0159] Неограничивающие примеры модификаций включают замену одного или более нуклеотидов или аминокислот (например, 1-3, 3-5, 5-10, 10-15, 15-20, 20-25, 25-30, 30-40, 40-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-500, 500-750, 750-850 или более нуклеотидов или остатков). Примером модификации нуклеиновой кислоты является умньшение содержания CpG. В некоторых вариантах осуществления нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая FVIII, такой как человеческий белок FVIII, содержит 10 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или содержит 5 или меньше CpG по сравнению с последовательностью дикого типа, кодирующей человеческий фактор FVIII; или в нуклеиновой кислоте с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII, содержится не больше 5 CpG.

[0160] Примером аминокислотной модификации является консервативная аминокислотная замена или делеция (например, подпоследовательностей или фрагментов) референсной последовательности, например, FVIII, такой как FVIII с делецией B-домена. В определенных вариантах осуществления модифицированная или вариантная последовательность сохраняет, по меньшей мере, часть функции или активности немодифицированной последовательности.

[0161] Все формы нуклеиновых кислот млекопитающих и немлекопитающих, кодирующие белки, включая другие формы нуклеиновых кислот млекопитающих с уменьшенным содержанием CpG, кодирующих FVIII и hFVIII-BDD, раскрытые в настоящем изобретении, включены в явной форме, будь то известные или неизвестные. Таким образом, изобретение включает гены и белки немлекопитающих, млекопитающих кроме людей и людей, при этом такие гены и белки функционируют по существу подобно генам и белкам FVIII (например, человека), описанным в настоящем изобретении.

[0162] Термин "вектор" относится к малой несущей молекуле нуклеиновой кислоты, плазмиде, вирусу (например, вектору AAV), или другому носителю, который могут быть подвергнут манипуляции с вставкой или включением нуклеиновой кислоты. Такие векторы могут применяться для генетической манипуляции (т.е. "клонирующие векторы"), для введения/переноса полинуклеотидов в клетки, а также для транскрипции или трансляции встроенного полинуклеотида в клетках. "Вектор экспрессии" является специализированным вектором, который содержит последовательность гена или нуклеиновой кислоты с необходимыми регуляторными областями, требуемыми для экспрессии в клетке-хозяине. Векторная последовательность нуклеиновой кислоты обычно содержит, по меньшей мере, начало репликации для размножения в клетке и, необязательно, дополнительные элементы, такие как гетерологичную полинуклеотидную последовательность, элемент контроля экспрессии (например, промотор, энхансер), интрон, ITR-повтор(ы), селективный маркер (например, устойчивость к антибиотикам), сигнал полиаденилирования.

[0163] Вирусный вектор получен из или на основе одного или более элементов нуклеиновой кислоты, которые содержатся в геноме вируса. Конкретные вирусные векторы включают лентивирусные, псевдотипированные лентивирусные и парвовирусные векторы, такие как векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV).

[0164] Термин "рекомбинантный", в качестве определения вектора, такого как рекомбинантный вирусный, например, ленти- или парвовирусный (например, AAV) векторы, а также определения последовательностей, таких как рекомбинантные полинуклеотиды и полипептиды, означает, что композиции были подвергнуты манипуляциям (т.е. генно-инженерно модифицированы) способом, обычно не встречающимся в природе. Конкретный пример рекомбинантного вектора, такого как вектор AAV, будет таким вектором, в котором полинуклеотид, обычно не присутствующий в геноме вируса дикого типа (например, AAV), встроен в вирусный геном. Пример рекомбинантного полинуклеотида будет таким, в котором нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая белок FVIII или hFVIII-BDD, клонирована в вектор, с или без 5' и/или 3'-интронных областей, с которым ген обычно ассоциирован в вирусном (например, AAV) геноме. Несмотря на то, что термин "рекомбинантный" не всегда используется в настоящем изобретении в отношении векторов, таких как вирусные и AAV векторы, а также последовательностей, такие как полинуклеотиды, рекомбинантные формы, включая полинуклеотиды, включены в явной форме, несмотря на любое такое исключение.

[0165] Рекомбинантный вирусный "вектор" или "вектор AAV" получен из генома вируса дикого типа, такого как AAV, при использовании молекулярных методов для удаления генома дикого типа из вируса (например, AAV) и замены ненативной нуклеиновой кислотой, такой как нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая FVIII. Как правило, в случае AAV одна или обе последовательности инвертированных концевых повторов (ITR) генома AAV сохранены в векторе AAV. "Рекомбинантный" вирусный вектор (например, AAV) отличается от вирусного (например, AAV) генома, поскольку вирусный геном полностью или частично был заменен ненативной последовательностью по сравнению с вирусной (например, AAV), геномной нуклеиновой кислотой, такой как нуклеиновой кислотой с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII или hFVIII-BDD. Включение ненативной последовательности, таким образом, определяет вирусный вектор (например, AAV) как "рекомбинантный" вектор, который в случае AAV может именоваться "вектором rAAV".

[0166] Последовательность рекомбинантного вектора (например, ленти-, парво-, AAV) может быть упакованной, и может быть указана в настоящем изобретении как "частица", для последующего инфицирования (трансдукции) клетки ex vivo, in vitro или in vivo. В случае, когда рекомбинантная векторная последовательность инкапсулирована или упакована в AAV частицу, частица также может быть указана как "rAAV". Такие частицы включают белки, которые инкапсулируют или упаковывают векторный геном. Конкретные примеры включают вирусные белки оболочки, а в случае AAV - капсидные белки.

[0167] Векторный "геном" относится к части последовательности рекомбинантной плазмиды, которая, в конечном счете, упакована или инкапсулирована с получением вирусной (например, AAV) частицы. В случаях, когда рекомбинантные плазмиды используют для конструирования или производства рекомбинантных векторов, векторный геном не содержит часть "плазмиды", которая не соответствует последовательности векторного генома рекомбинантной плазмиды. Такая негеномная векторная часть рекомбинантной плазмиды именуется "каркасом плазмиды", который важен для клонирования и амплификации плазмиды, процесса, который необходим для размножения и продукции рекомбинантного вируса, но при этом он сам по себе не упаковывается или не инкапсулируется с формированием вирусных (например, AAV) частиц. Таким образом, векторный "геном" относится к нуклеиновой кислоте, упаковываемой или инкапсулируемой вирусом (например, AAV).

[0168] "Трансген" используется в настоящем изобретении для соответствующего обозначения нуклеиновой кислоты, подлежащей введению или введенной в клетку или организм. Трансгены включают любую нуклеиновую кислоту, такую как ген, кодирующий полипептид или белок (например, нуклеиновую кислоту с уменьшенным содержанием CpG, кодирующую FVIII или hFVIII-BDD).

[0169] В клетку, имеющую трансген, трансген был введен/перенесен посредством вектора, такого как AAV, в результате "трансдукции" или "трансфекции" клетки. Термины "трансдуцировать" и "трансфицировать" относятся к введению молекулы, такой как нуклеиновая кислота, в клетку или организм-хозяин. Трансген может интегрироваться или может не интегрироваться в геномную нуклеиновую кислоту реципиентной клетки. Если введенная нуклеиновая кислота интегрируется в нуклеиновую кислоту (геномную ДНК) реципиентной клетки или организма, она может стабильно поддерживаться в этой клетке или организме и затем передаваться или наследоваться дочерними клетками или организмами, которые происходят от реципиентной клетки или организма. Наконец, введенная нуклеиновая кислота может существовать в реципиентной клетке или организме-хозяине внехромосомно или только транзиентно.

[0170] "Трансдуцированная клетка" является клеткой, в которую был введен трансген. Таким образом, "трансдуцированная" клетка (например, в организме млекопитающего, такая как клетка или клетка ткани или органа) означает генетическое изменение в клетке после включения экзогенной молекулы, например, нуклеиновой кислоты (например, трансгена) в клетку. Таким образом, "трансдуцированная" клетка является клеткой или ее потомством, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота. Клетка(и) может быть размножена, а введенный белок может экспрессироваться, или нуклеиновая кислота может транскрибироваться. В случае применения и способов генотерапии трансдуцированная клетка может присутствовать в организме пациента.

[0171] "Элемент контроля экспрессии" относится к последовательности(ям) нуклеиновой кислоты, которые влияют на экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты. Элементы контроля, в том числе элементы контроля экспрессии, как указано в настоящем изобретении, такие как промоторы и энхансеры, векторные последовательности, включающие векторы AAV, могут включать один или более "элементов контроля экспрессии". Как правило, такие элементы включают для облегчения надлежащей транскрипции гетерологичного полинуклеотида и надлежащей трансляции (например, промотор, энхансер, сигнал сплайсинга интронов, сохранение правильной рамки считывания гена для обеспечения трансляции в рамке считывания мРНК, а также стоп-кодоны и т.д.). Такие элементы, как правило, действуют в цис-конфигурации и называются "цис-действующим" элементом, но могут также действовать в транс-конфигурации.

[0172] Контроль экспрессии может присутсвовать на уровне транскрипции, трансляции, сплайсинга, стабильности мРНК-транскриптов и т.д. Как правило, элемент контроля экспрессии, модулирующий транскрипцию, помещается вблизи 5'-конца (т.е. "перед") транскрибируемой нуклеиновой кислоты. Элементы контроля экспрессии также могут быть расположены на 3'-конце (т.е. "после") транскрибируемой последовательности или в транскрипте (например, в интроне). Элементы контроля экспрессии могут примыкать к или могут располагаться от транскрибируемой последовательности на удалении (например, 1-10, 10-25, 25-50, 50-100, 100-500 или более нуклеотидов полинуклеотида), даже на значительных расстояниях. Тем не менее, с учетом ограничений по длине некоторых векторов, таких как векторы AAV, элементы контроля экспрессии, как правило, будут располагаться в пределах 1-1000 нуклеотидов от транскрибируемой нуклеиновой кислоты.

[0173] На функциональном уровне экспрессия функционально связанной нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, частично, регулируется элементом (например, промотором), при этом данный элемент модулирует транскрипцию нуклеиновой кислоты и, при необходимости, трансляцию транскрипта. Конкретным примером элемента контроля экспрессии является промотор, который обычно расположен 5' от транскрибируемой последовательности, например, нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII или hFVIII-BDD. Промотор обычно увеличивает количество, экспрессируемое с функционально связанной нуклеиновой кислоты, по сравнению с количеством, экспрессируемым в отсутствие промотора.

[0174] При использовании в настоящем изобретении "энхансер" может относиться к последовательности, которая расположена рядом с гетерологичным полинуклеотидом. Энхансерные элементы обычно расположены перед промоторным элементом, но также функционируют и могут быть расположены после или внутри последовательности (например, нуклеиновой кислоты с уменьшенным содрежанием CpG, кодирующей FVIII или hFVIII-BDD). Таким образом, энхансерный элемент может быть расположен на расстоянии 100 пар оснований, 200 пар оснований или 300 или более пар оснований перед или после нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII. Энхансерные элементы обычно повышают экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты выше уровня экспрессии, которую обеспечивает промоторный элемент.

[0175] Экспрессионная конструкция может включать регуляторные элементы, служащие для направления экспрессии в клетке или ткани конкретного типа. Элементы контроля экспрессии (например, промоторы) включают элементы, активные в ткани или клетке конкретного типа, именуемые в настоящем изобретении как "тканеспецифические элементы контроля экспрессии/промоторы". Тканеспецифические элементы контроля экспрессии обычно активны в определенной клетке или ткани (например, печени). Элементы контроля экспрессии обычно активны в определенных клетках, тканях или органах, потому их распознают белки-активаторы транскрипции или другие регуляторы транскрипции, которые специфичны для определенного типа клеток, тканей или органов. Такие регуляторные элементы известны специалистам (см., например, Sambrook et al. (1989) и Ausubel et al. (1992)).

[0176] Введение тканеспецифических регуляторных элементов в экспрессионные конструкции согласно изобретению обеспечивает, по меньшей мере, частичный тканевой тропизм для экспрессии нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующей FVIII или hFVIII-BDD. Примерами промоторов, которые активны в печени, являются TTR-промотор, промотор альфа-1-антитрипсина человека (hAAT); альбумина, Miyatake, et al. J. Virol., 71:5124-32 (1997); промотор кор-белка вируса гепатита B, Sandig, et al., Gene Ther. 3:1002-9 (1996); альфа-фетопротеина (AFP), Arbuthnot, et al., Hum. Gene. Ther., 7:1503-14 (1996)], и прочие. Примером энхансера, активного в печени, являются HCR-1 и HCR-2 аполипопротеина E (apoE) (Allan et al., J. Biol. Chem., 272:29113-19 (1997)).

[0177] Элементы контроля экспрессии также включают повсеместно распространенные или универсальные промоторы/энхансеры, которые способны направлять экспрессию полинуклеотида во многих различных типах клеток. Такие элементы включают, без ограничения, последовательности предраннего промотора/энхансера цитомегаловируса (ЦМВ), последовательности промотора/энхансера вируса саркомы Рауса (RSV) и другие вирусные промоторы/энхансеры, активные во множестве типов клеток млекопитающих, или синтетические элементы, не присутствующие в природе (см., например, Boshart et al, Cell, 41:521-530 (1985)), промотор SV40, промотор дигидрофолатредуктазы, промотор цитоплазматического β-актина и промотор фосфоглицеринкиназы (ФГК).

[0178] Элементы контроля экспрессии также могут обеспечивать экспрессию регулируемым образом, то есть являться сигналом или стимулом к увеличению или уменьшению экспрессии функционально связанного гетерологичного полинуклеотида. Регулируемый элемент, который повышает экспрессию функционально связанного полинуклеотида в ответ на сигнал или стимул, также именуется "индуцируемым элементом" (т.е. индуцируется сигналом). Конкретные примеры включают, без ограничения, промотор, индуцируемый гормоном (например, стероидом). Как правило, величина увеличения или уменьшения, придаваемая такими элементами, пропорциональна величине присутствующего сигнала или стимула; чем больше величина сигнала или стимулов, тем больше увеличение или уменьшение экспрессии. Конкретные неограничивающие примеры включают цинк-индуцируемый промотор металлотионина (MT) овцы; индуцируемый стероидным гормоном промотор вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV); промоторная система T7-полимеразы (WO 98/10088); тетрациклин-репрессируемая система (Gossen, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992); тетрациклин-индуцируемая система (Gossen, et al., Science. 268:1766-1769 (1995); также см. Harvey, et al., Curr. Opin. Chem. Biol. 2:512-518 (1998)); RU486-индуцируемая система (Wang, et al., Nat. Biotech. 15:239-243 (1997) и Wang, et al., Gene Ther. 4:432-441 (1997)); и рапамицин-индуцируемая система (Magari, et al., J. Clin. Invest. 100:2865-2872 (1997); Rivera, et al., Nat. Medicine. 2:1028-1032 (1996)). Другие регулируемые элементы контроля, которые могут быть полезными в данном контексте, являются элементами, которые регулируются определенным физиологическим состоянием, например, температурой, острой фазой, развитием.

[0179] Элементы контроля экспрессии также включают элемент(ы), нативный для гетерологичного полинуклеотида. Нативный элемент контроля (например, промотор) может использоваться, если требуется, чтобы экспрессия гетерологичного полинуклеотида имитировала нативную экспрессию. Нативный элемент может использоваться, если экспрессию гетерологичного полинуклеотида нужно регулировать в зависимости от времени или фазы цикла развития, или тканеспецифически, или в ответ на определенные транскрипционные стимулы. Также могут использоваться другие нативные элементы контроля экспрессии, такие как интроны, сайты полиаденилирования или консенсусные последовательности Козак.

[0180] Термин "функционально связанный" означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии кодирующей последовательности, помещены в соответствующие положения относительно кодирующей последовательности, чтобы обеспечивать экспрессию кодирующей последовательности. То же определение иногда применяют к расположению кодирующих последовательностей и элементов контроля транскрипции (например, промоторов, энхансеров и элементов терминации) в векторе экспрессии. Это определение также иногда относится к расположению последовательностей нуклеиновых кислот первой и второй молекул нуклеиновых кислот при образовании гибридной молекулы нуклеиновой кислоты.

[0181] В примере элемента контроля экспрессии, находящегося в функциональной связи с нуклеиновой кислотой, их отношение является таким, что элемент контроля модулирует экспрессию нуклеиновой кислоты. В частности, например, две последовательности ДНК функционально связаны, что означает то, что две ДНК расположены (цис или транс) в таком отношении, что по меньшей мере одна из последовательностей ДНК способна проявлять физиологическое действие в отношении другой последовательности.

[0182] Таким образом, дополнительные элементы векторов включают, без ограничения, элемент контроля экспрессии (например, промотор/энхансер), сигнал терминации транскрипции или стоп-кодон, 5' или 3'-нетранслируемые области (например, последовательности полиаденилирования (поли(A))), которые фланкируют последовательность, такие как одна или более копий ITR-последовательности AAV, или интрон.

[0183] Другие элементы включают, например, филлерные или заполняющие полинуклеотидные последовательности, например, для улучшения упаковки и уменьшения присутствия контаминирующей нуклеиновой кислоты. Векторы AAV обычно допускают вставку ДНК, имеющих длину в пределах от приблизительно 4 до приблизительно 5,2 тпн или немного больше. Таким образом, в случае более коротких последовательностей включение заполнителя или филлера необходимо для регулирования длины до нормального или близкого к нормальному размеру геномной последовательности вируса, приемлемой для упаковки вектора AAV в вирусную частицу. В различных вариантах осуществления филлерная/заполняющая последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой нетранслируемый (не кодирующий белок) сегмент нуклеиновой кислоты. В случае последовательности нуклеиновой кислоты меньше 4,7 тпн, филлерная или заполняющая полинуклеотидная последовательность имеет длину, которая при объединении (например, вставке в вектор) с последовательностью имеет общую длину приблизительно 3,0-5,5 тпн или приблизительно 4,0-5,0 тпн, или приблизительно 4,3-4,8 тпн.

[0184] Интрон также может выступать в качестве филлерной или заполняющей полинуклеотидной последовательности для получения нужной длины для упаковки вектора AAV в вирусную частицу. Интроны и фрагменты интронов, которые функционируют в качестве филлерной или заполняющей полинуклеотидной последовательности, также могут усиливать экспрессию.

[0185] Фраза "связанное с гемостазом нарушение" относится к нарушениям свертывания крови, таким как гемофилия A, гемофилия A у пациентов с ингибирующими антителами, дефицит факторов свертывания крови VII, VIII, IX и X, XI, V, XII, II, фактора фон Виллебранда, комбинированный дефицит FV/FVIII, дефицит витамина K-эпоксидредуктазы C1, дефицит гамма-карбоксилазы; кровотечение, связанное с травмой, ранением, тромбозом, тромбоцитопенией, инсультом, коагулопатией, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием (ДВС); превышение доз при антикоагуляционной терапии гепарином, низкомолекулярным гепарином, пентасахаридом, варфарином, низкомолекулярными антитромботическими средства (т.е. ингибиторами FXa); и тромбоцитарным нарушениям, таким как синдром Бернара-Сулье, тромбастения Гланцмана и дефицит пула накопления.

[0186] Термин "выделенный" при использовании в качестве определения композиции, означает, что композиции созданы человеком или отделены, полностью или, по меньшей мере, частично, от своего окружения, существующего в естественных условиях in vivo. Как правило, выделенные композиции по существу не содержат одного или более материалов, с которыми они обычно ассоциированы в природе, например, одного или более белков, нуклеиновых кислот, липидов, углеводов, клеточных мембран.

[0187] В отношении нуклеиновых кислот согласно изобретению, термин "выделенный" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая отделена от одной или более последовательностей, к которым она непосредственно примыкает (в 5' и 3' направлениях) в природном геноме (геномной ДНК) организма, из которого она происходит. Например, "выделенная нуклеиновая кислота" может включать молекулу ДНК или кДНК, встроенную в вектор, такой как плазмидный или вирусный вектор, или интегрированную в ДНК прокариота или эукариота.

[0188] В отношении молекул РНК согласно изобретению, термин "выделенный", прежде всего, относится к молекуле РНК, кодируемой выделенной молекулой ДНК, как определено выше. В альтернативе данный термин может относиться к молекуле РНК, которая была в достаточной степени отделена от молекул РНК, с которыми она могла быть связана в своем естественном состоянии (т.е. в клетках или тканях), и существует "по существу в чистой" форме (термин "по существу чистый" определен ниже).

[0189] В отношении белка в настоящем изобретении иногда используется термин "выделенный белок" или "выделенный и очищенный белок". Данный термин относится, прежде всего, к белку, синтезируемому в результате экспрессии выделенной молекулы нуклеиновой кислоты. Также данный термин может относиться к белку, отделенному в достаточной степени от других белков, с которыми он ассоциирован в естественных условиях, и существующему "по существу в чистой" форме.

[0190] Термин "выделенный" не исключает комбинаций, созданных человеком, например, последовательность рекомбинантного вектора (например, rAAV) или вирусную частицу, которая упаковывает или инкапсулирует векторный геном, и фармацевтический состав. Термин "выделенный" также не исключает альтернативных физических форм композиции, таких как гибриды/химеры, мультимеры/олигомеры, модификации (например, фосфорилирование, гликозилирование, липидирование) или дериватизированные формы или формы, экспрессируемые в клетках-хозяевах, созданных человеком.

[0191] Термин "по существу чистый" относится к препарату, включающему по меньшей мере 50-60% по весу представляющего интерес соединения (например, нуклеиновой кислоты, олигонуклеотида, белка и т.д.). Препарат может включать по меньшей мере 75% по весу или приблизительно 90-99% по весу представляющего интерес соединения. Чистоту измеряют с помощью методов, подходящих для представляющего интерес соединения (например, хроматографических методов, электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле, анализа ВЭЖХ и т.п.).

[0192] Фраза "состоящий по существу из" в отношении конкретной нуклеотидной последовательности или аминокислотной последовательности означает, что последовательность обладает свойствами данной SEQ ID NO. Например, при использовании в отношении аминокислотной последовательности данная фраза включает последовательность как таковую и молекулярные свойства, которые не будут влиять на основные и новые особенности последовательности.

[0193] Термин "олигонуклеотид" при использовании в настоящем изобретении относится к праймерам и зондам и определяется, как молекула нуклеиновой кислоты, состоящая из двух или более рибо- или дезоксирибонуклеотидов, например, больше трех. Точный размер олигонуклеотида будет зависеть от различных факторов и от конкретного применения, для которого используется олигонуклеотид.

[0194] Термин "зонд" при использовании в настоящем изобретении относится к олигонуклеотиду, полинуклеотиду или нуклеиновой кислоте, РНК или ДНК, существующим в природе, например, в виде очищенного рестрикционного перевара, или полученным синтетическим путем, которые способны отжигаться или специфически гибридизоваться с нуклеиновой кислотой, имеющей последовательности, комплементарные зонду. Зонд может быть одноцепочечным или двухцепочечным. Точная длина зонда будет зависеть от многих факторов, включая температуру, источник зонда и способ применения. Например, для диагностических применений, в зависимости от сложности последовательности-мишени, олигонуклеотидный зонд обычно содержит 15-25 или более нуклеотидов, хотя он может содержать меньшее число нуклеотидов.

[0195] Зонды в настоящем изобретении выбраны так, чтобы они были "по существу" комплементарными различным цепям конкретной последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. Это означает, что зонды должны быть достаточно комплементарными, чтобы иметь возможность "специфично гибридизоваться" или отжигаться с цепями своих соответствующих мишеней при некоторых заданных условиях. Таким образом, последовательность зонда не должна отражать точную комплементарную последовательность мишени. Например, некомплементарный нуклеотидный фрагмент может быть присоединен к 5' или 3'-концу зонда, при этом остальная часть последовательности зонда будет комплементарна цепи-мишени. В альтернативе некомплементарные основания или более длинные последовательности могут быть распределены в зонде при условии, что последовательность зонда обладает достаточной комплементарностью с последовательностью нуклеиновой кислоты-мишени для специфичного отжига с ней.

[0196] Термин "специфично гибридизуется" относится к ассоциации между двумя одноцепочечными молекулами нуклеиновой кислоты с достаточно комплементарной последовательностью, чтобы обеспечить такую гибридизацию в заданных условиях, обычно используемых в данной области (иногда называемой "по существу комплементарной"). В частности, данный термин относится к гибридизации олигонуклеотида с по существу комплементарной последовательностью, содержащейся в молекуле одноцепочечной ДНК или РНК согласно изобретению, и по существу к исключению гибридизации олигонуклеотида с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами с некомплементарной последовательностью.

[0197] Термин "праймер" при использовании в настоящем изобретении относится к олигонуклеотиду, РНК или ДНК, одноцепочечному или двухцепочечному, полученному из биологической системы, созданному при расщеплении рестриктазой или полученному искусственно, который при помещении в надлежащую среду способен действовать функционально как инициатор матрицезависимого синтеза нуклеиновой кислоты. При наличии нуклеиновой кислоты, подходящей в качестве матрицы, подходящих нуклеозидтрифосфатных предшественников нуклеиновых кислот, фермента полимеразы, подходящих кофакторов и условий, таких как подходящая температура и рН, праймер может достраиваться с 3'-конца путем присоединения нуклеотидов под действием полимеразы или подобной активности с получением продукта достройки праймера.

[0198] Праймер может иметь различную длину в зависимости от конкретных условий и требований применения. Например, в диагностических применениях олигонуклеотидный праймер, как правило, имеет длину 15-25 нуклеотидов или больше. Праймер должен иметь достаточную комплементарность с требуемой матрицей для инициации синтеза нужного продукта достройки, то есть быть способным отжигаться с нужной цепью матрицы таким способом, который достаточен для обеспечения правильного расположения 3'-гидроксильной группы праймера для использования в инициации синтеза полимеразой или подобным ферментом. Не требуется, чтобы последовательность праймера представляла собой точный комплемент нужной матрицы. Например, некомплементарная нуклеотидная последовательность может быть присоединена к 5'-концу в остальном комплементарного праймера. В альтернативе некомплементарные основания могут быть распределены в последовательности олигонуклеотидного праймера при условии, что последовательность праймера обладает достаточной комплементарностью с последовательностью требуемой цепи матрицы для образования функционального комплекса матрицы-праймера и синтеза продукта достройки.

[0199] Термин "идентичность", "гомология" и их грамматические вариации означают, что две или более рассматриваемых единицы являются одинаковыми, если они являются "выровненными" последовательностями. Таким образом, в качестве примера, когда две полипептидные последовательности являются идентичными, они имеют одинаковую аминокислотную последовательность, по меньшей мере, в границах рассматриваемой области или части. Когда две полинуклеотидные последовательности являются идентичными, они имеют одинаковую полинуклеотидную последовательность, по меньшей мере, в границах рассматриваемой области или части. Идентичность может присутствовать в определенной части (области или домене) последовательности. "Область" или "домен" с идентичность относятся к части двух или более рассматриваемых единиц, которые являются одинаковыми. Таким образом, когда две последовательности белка или нуклеиновой кислоты идентичны в одной или более частях или областях последовательности, они имеют идентичность в границах этой области. "Выровненная" последовательность относится к множеству полинуклеотидных или белковых (аминокислотных) последовательностей, часто содержащим поправки, вызванные отсутствием или присутствием дополнительных оснований или аминокислот (пропуски) по сравнению с референсной последовательностью.

[0200] Идентичность может распространяться на всю длину или на часть последовательности. В некоторых вариантах осуществления длина последовательности, имеющей некоторый процент идентичности, составляет 2, 3, 4, 5 или больше последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот, например, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д. последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот. В дополнительных вариантах осуществления длина последовательности, имеющей идентичность, составляет 21 или больше последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот, например, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 и т.д. последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот. В других вариантах осуществления длина последовательности, имеющей идентичность, составляет 41 или больше последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот, например, 42, 43, 44, 45, 45, 47, 48, 49, 50 и т.д. последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот. В других вариантах осуществления длина последовательности, имеющей идентичность, составляет 50 или больше последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот, например, 50-55, 55-60, 60-65, 65-70, 70-75, 75-80, 80-85, 85-90, 90-95, 95-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-500, 500-1000 и т.д. последовательных нуклеиновых кислот или аминокислот.

[0201] Как указано в настоящем изобретении, варианты нуклеиновых кислот, такие как варианты с уменьшенным содержанием CpG, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, будут отличаться от дикого типа, но могут демонстрировать идентичность последовательности с белком FVIII дикого типа с B-доменом или без него. В вариантах нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, кодирующих FVIII или hFVIII-BDD, на уровне нуклеотидной последовательности, нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая FVIII или hFVIII-BDD, как правило, будет по меньшей мере на приблизительно 70% идентичной, более типично приблизительно на 75% идентичной, еще более типично приблизительно на 80-85% идентичной нуклеиновой кислоте, кодирующей FVIII дикого типа. Таким образом, например, нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая FVIII или hFVIII-BDD, может иметь 75-85% идентичность с геном, кодирующим FVIII дикого типа, или друг с другом, т.е. X01 с X02, X03 с X04 и т.д., как указано в настоящем изобретении.

[0202] На уровне аминокислотной последовательности вариант, такой как вариант белка FVIII или hFVIII-BDD, будет по меньшей мере приблизительно на 70% идентичным, более типично приблизительно на 75% идентичным или на 80% идентичным, еще более типично приблизительно на 85 идентичным или на 90% идентичным или больше. В других вариантах осуществления вариант, такой как вариант белка FVIII или hFVIII-BDD, имеет по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или большую идентичность с референсной последовательностью, например, белка FVIII дикого типа с B-доменом или без него.

[0203] Для определения идентичности, если FVIII (например, нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая FVIII) сохраняет B-домен, идентичность предпочтительно сравнивать с FVIII дикого типа. Если FVIII (например, нуклеиновая кислота с уменьшенным содержанием CpG, кодирующая hFVIII-BDD) имеет делецию B-домена, идентичность предпочтительно сравнивать с FVIII дикого типа, который также имеет делецию B-домена.

[0204] Термины "гомологичный" или "гомология" означают, что две или более рассматриваемых единиц имеют по меньшей мере частичную идентичность в данной области или части. "Части, области или домены" с гомологией или идентичность означают, что часть двух или более рассматриваемых единиц обладают гомологией или являются одинаковыми. Таким образом, в случае, когда две последовательности идентичны в одной или более областях последовательности, они имеют идентичность в этих областях. "Существенная гомология" означает, что молекула структурно или функционально сохранена таким образом, что она имеет, или предсказано, что она будет иметь, по меньшей мере частично, структуру или функцию одной или более структур или функций (например, биологической функцией или активностью) референсной молекулы или релевантной/соответствующей области или части референсной молекулы, с которой она имеет гомологию.

[0205] Степень идентичности (гомологии) или "процент идентичности" между двумя последовательностями может быть определен при использовании компьютерной программы и/или математического алгоритма. В рамках настоящего изобретения сравнения последовательностей нуклеиновых кислот проводят с использованием пакета программ GCG Wisconsin Package версии 9.1, выпущенного Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin. Для удобства параметры по умолчанию (штраф за создание пропуска=12, штраф за продолжение пропуска=4), заданные в этой программе, предназначены для использования в настоящем изобретении для сравнения идентичности последовательностей. В альтернативе программа Blastn 2.0, предоставляемая Национальным центром биотехнологической информации США (размещена в Интернете по адресу ncbi.nlm.nih.gov/blast/; Altschul et al., 1990, J Mol Biol 215:403-410), в которой используется выравнивание с пропусками, с параметрами по умолчанию, может использоваться для определения уровня идентичности и подобия между последовательностями нуклеиновых кислот и аминокислотными последовательностями. Для сравнения полипептидных последовательностей обычно используется алгоритм BLASTP в комбинации с матрицей замены, такой как PAM100, PAM 250, BLOSUM 62 или BLOSUM 50. Программы для сравнения последовательностей FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) и SSEARCH также используются для количественной оценки степени идентичности (Pearson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol Biol. 132:185 (2000); и Smith et al., J. Mol. Biol. 147:195 (1981)). Также были разработаны программы для количественной оценки структурного подобия белков с использованием топологического картирования на основе метода Делоне (Bostick et al., Biochem Biophys Res Commun. 304:320 (2003)).

[0206] Молекулы нуклеиновых кислот, векторы экспрессии (например, векторные геномы), плазмиды, в том числе нуклеиновые кислоты и варианты нуклеиновых кислот, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD согласно изобретению, могут быть получены с применением методов технологии рекомбинантных ДНК. Доступность информации о нуклеотидной последовательности позволяет получать выделенные молекулы нуклеиновых кислот согласно изобретению различными способами. Например, варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, могут быть получены при использовании различных стандартных методов клонирования, технологии рекомбинантных ДНК, с помощью экспрессии клеток или методов in vitro трансляции и химического синтеза. Чистота полинуклеотидов может быть определена с помощью секвенирования, гель-электрофореза и т.п. Например, нуклеиновые кислоты могут быть выделены при использовании методов гибридизации или компьютерного скрининга в базе данных. Такие методы включают, без ограничения перечисленным: (1) гибридизацию библиотек геномной ДНК или кДНК с зондами для обнаружения гомологичных нуклеотидных последовательностей; (2) скрининг антител для обнаружения полипептидов, имеющих общие структурные особенности, например, при использовании экспрессионной библиотеки; (3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР) на геномной ДНК или кДНК с использованием праймеров, способных отжигаться с представляющей интерес последовательностью нуклеиновой кислоты; (4) компьютерный поиск родственных последовательностей в базах последовательностей; и (5) дифференциальный скрининг библиотеки с вычитанием нуклеиновых кислот.

[0207] Нуклеиновые кислоты согласно изобретению могут поддерживаться в виде ДНК в любом удобном клонирующем векторе. В одном варианте осуществления клоны поддерживаются в плазмидном клонирующем/экспрессионном векторе, таком как pBluescript (Stratagene, La Jolla, CA), который размножается в подходящей клетке-хозяине E. coli. Также нуклеиновые кислоты могут поддерживаться в векторе, подходящем для экспрессии в клетках млекопитающих. В случаях, когда посттрансляционная модификация влияет на функцию свертывания крови, молекула нуклеиновой кислоты может экспрессироваться в клетках млекопитающих.

[0208] Нуклеиновые кислоты и варианты нуклеиновых кислот, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD, включают кДНК, геномную ДНК, РНК и их фрагменты, которые могут быть одно или двухцепочечными. Таким образом, в настоящем изобретении предложены олигонуклеотиды (смысловые или антисмысловые цепи ДНК или РНК) имеющие последовательности, способные к гибридизации по меньшей мере с одной последовательностью нуклеиновой кислоты согласно изобретению. Такие олигонуклеотиды могут применяться в качестве зондов для обнаружения экспрессии FVIII или hFVIII-BDD.

[0209] Векторы, такие как векторы, описанные в настоящем изобретении (rAAV), необязательно включают регуляторные элементы, необходимые для экспрессии ДНК в клетке-хозяине, расположенные таким образом, чтобы обеспечивать экспрессию кодируемого белка в клетке-хозяине. Такие регуляторные элементы, требуемые для экспрессии, включают, без ограничения перечисленными, последовательности промоторов, последовательности энхансеров и последовательности инициации транскрипции, указанные в настоящем изобретении и известные специалисту.

[0210] Способы и применения согласно изобретению включают доставку (трансдукцию) нуклеиновой кислоты (трансгена) в клетки-хозяева, включая делящиеся и/или неделящиеся клетки. Нуклеиновые кислоты, вектор rAAV, способы, применения и фармацевтические композиции согласно изобретению также могут применяться в способе доставки, введения или предоставления FVIII или hFVIII-BDD пациенту, в качестве способа лечения. Таким образом, нуклеиновая кислота транскрибируется, и белок может синтезироваться in vivo у пациента. Пациент может получать пользу или нуждаться в FVIII или hFVIII-BDD, поскольку пациент имеет дефицит FVIII, или потому что продукция FVIII у пациента может производить некоторый терапевтический эффект в качестве способа лечения или иным образом.

[0211] Векторы rAAV, включающие геном с нуклеиновой кислотой или вариантом нуклеиновой кислоты, кодирующими FVIII или hFVIII-BDD, обеспечивают лечение наследственных заболеваний, например, дефицита FVIII. При заболеваниях с дефицитным состоянием перенос генов может применяться для введения нормального гена в поврежденные ткани для заместительной терапии, а также для создания моделей заболевания на животных с помощью антисмысловых мутаций. В случае патологических состояний с нарушением баланса перенос генов может использоваться для создания патологического состояния в модельной системе, которая затем может использоваться при попытках противодействия патологическому состоянию. Также возможно применение сайт-специфичной интеграции последовательностей нуклеиновой кислоты с целью коррекции нарушений.

[0212] В определенных вариантах осуществления векторы rAAV, включающие геном с нуклеиновой кислотой или вариантом нуклеиновой кислоты, кодирующими FVIII или hFVIII-BDD, могут применяться, например, в качестве терапевтических и/или профилактических средств (белка или нуклеиновой кислоты), которые модулируют каскад свертывания крови, или в качестве трансгена в гене. Например, кодируемые FVIII или hFVIII-BDD могут иметь подобную коагулирующую активность, как у FVIII дикого типа, или измененную коагулирующую активность по сравнению с FVII дикого типа. Стратегии на основе клеток позволяют вести непрерывную экспрессию FVIII или hFVIII-BDD у пациентов с гемофилией. Как раскрыто в настоящем изобретении, некоторые модификации молекул FVIII (нуклеиновой кислоты и белка) приводят к повышению экспрессии на уровне нуклеиновой кислоты, повышению коагулирующей активности, таким образом, эффективно улучшая гемостаз.

[0213] Введение пациенту векторов rAAV, кодирующих FVIII или hFVIII-BDD, приводит к экспрессии белка FVIII или hFVIII-BDD, что служит для изменения каскада свертывания крови. В соответствии с изобретением экспрессия белка FVIII или hFVIII-BDD, как описано в настоящем изобретении, или функционального фрагмента, усиливает гемостаз.

[0214] Векторы rAAV могут вводить отдельно или в комбинации с другими молекулами, полезными для коррекции гемостаза. Согласно изобретению векторы rAAV или комбинацию терапевтических средств могут вводить пациенту отдельно или в фармацевтически приемлемых или биологически совместимых композициях.

[0215] Аденоассоциированные вирусы (AAV) входят в семейство парвовирусов. AAV представляют собой вирусы, которые могут применяться в качестве векторов для генотерапии, поскольку они могут проникать в клетки и вводить нуклеиновую кислоту/генетический материал, при этом нуклеиновая кислота/генетический материал может стабильно поддерживаться в клетках. Кроме того, эти вирусы могут вводить нуклеиновую кислоту/генетический материал, например, в определенные участки. Поскольку AAV не ассоциированы с патогенным заболеванием у людей, векторы rAAV способны доставлять гетерологичные полинуклеотидные последовательности (например, терапевтические белки и средства) пациентам, не вызывая при этом существенного патогенеза AAV или заболевания.

[0216] Векторы rAAV имеют многие желательные свойства для таких применений, включая тропизм в отношении делящихся и неделящихся клеток. Опыт раннего клинического применения таких векторов также не продемонстрировал длительной токсичности, при этом иммунные ответы были минимальными или не обнаруживались. Как известно, AAV инфицируют разнообразные типы клеток in vivo и in vitro путем рецепторно-опосредованного эндоцитоза или трансцитоза. Такие векторные системы исследовали у человека путем направленного воздействия на эпителий сетчатки, печень, скелетные мышцы, дыхательные пути, головной мозг, суставы и гемопоэтические стволовые клетки.

[0217] Может быть желательно ввести вектор rAAV, который может предоставить, например, множество копий требуемого гена и, следовательно, большее количество продукта этого гена. Улучшенные векторы rAAV и способы получения таких векторов были подробно описаны в ряде источников, патентов и заявок на патент, в том числе в публикации Wright J.F. (Hum Gene Ther 20:698-706, 2009), описывающей технологию, применяемую при получении вектора для клинического применения в Детской больнице Филадельфии.

[0218] Таким образом, в изобретении предложены способы вирусной доставки FVIII или hFVIII-BDD посредством вектора rAAV. Например, рекомбинантный вектор AAV может включать вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий FVIII, где кодируемый белок FVIII необязательно имеет делецию B-домена. Доставка или введение вектора rAAV пациенту (например, млекопитающему) предоставляет таким способом FVIII пациенту, такому как млекопитающее (например, человек).

[0219] Прямая доставка векторов или трансдукция ex vivo человеческих клеток с последущей инфузией в тело будет вызывать экспрессию FVIII или hFVIII-BDD, оказывая, таким образом, полезный терапевтический эффект в отношении гемостаза. В рамках изобретения такое введение Фактора VIII, описанного в настоящем изобретении, улучшает прокоагуляционную активность.

[0220] Векторы AAV, как правило, не включают вирусные гены, ассоциируемые с патогенезом. В таких векторах обычно удален один или более генов AAV дикого типа, полностью или частично, например, rep и/или cap-гены, но они сохраняют по меньшей мере одну функциональную фланкирующую ITR-последовательность, необходимую для спасения, репликации и упаковки рекомбинантного вектора в векторную частицу AAV. Например, соответственно включены только основные части вектора, например, элементы ITR. Поэтому геном вектора AAV будет включать последовательности, требуемые в цис-конфигурации для репликации и упаковки (например, функциональные ITR-последовательности)

[0221] Рекомбинантный вектор AAV, а также способы и его применения, включают любой вирусный штамм или серотип. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV может быть основан на любом геноме AAV, таком как AAV-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -11, -12, -rh74, -rh10 или AAV-2i8, например. Такие векторы могут быть основаны на одном и том же штамме или серотипе (или подгруппе или варианте), или могут отличаться друг от друга. В качестве неограничивающего примера, рекомбинантный вектор AAV, основанный на геноме одного серотипа, может быть идентичен одному или болеее капсидным белкам, которые упаковывают вектор. Кроме того, рекомбинантный векторный геном AAV может быть основан на серотипе генома AAV (например, AAV2), отличающемся от одного или более капсидных белков AAV, которые упаковывают вектор. Например, векторный геном AAV может быть основан на AAV2, тогда как по меньшей мере один из трех капсидных белков может быть AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 или их вариантом, например.

[0222] В определенных вариантах осуществления векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV) включают AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, а также варианты (например, варианты капсида, такие как вставки, добавления, замены и делеции аминокислот), например, как изложено в WO 2013/158879 (Международной заявке PCT/US2013/037170), WO 2015/013313 (Международной заявке PCT/US2014/047670) и US 2013/0059732 (патенте США 9,169,299, в котором раскрыты LK01, LK02, LK03 и т.д.).

[0223] Варианты AAV включают варианты и химеры капсида AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8. Таким образом, векторы AAV и варианты AAV (например, варианты капсида), которые включают (инкапсулируют или упаковывают) нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII или hFVIII-BDD.

[0224] Серотипы AAV и вариантов AAV (например, вариантов капсида) (например, последовательности VP1, VP2 и/или VP3) могут отличаться или могут не отличаться от других серотипов AAV, включающих, например, AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10 (например, отличаться от последовательностей VP1, VP2 и/или VP3 любого из серотипов AAV1-AAV12, Rh74 или Rh10).

[0225] При использовании в настоящем изобретении термин "серотип" представляет собой вариант, используемый для обозначения AAV, имеющего капсид, который серологически отличается от других серотипов AAV. Серологическое отличие определяется на основе отсутствия перекрестной реактивности между антителами к одному AAV по сравнению с другим AAV. Такие различия в перекрестной реактивности обычно обусловлены различиями в последовательностях капсидных белков/антигенных детерминант (например, из-за различий в последовательностях VP1, VP2 и/или VP3 серотипов AAV). Несмотря на возможность того, что варианты AAV, включающие варианты капсида, могут серологически не отличаться от референсного AAV или другого серотипа AAV, они отличаются по меньшей мере на один нуклеотид или аминокислотный остаток по сравнению с референсным или другим серотипом AAV.

[0226] В соответствии с традиционным определением, серотип означает, что предствляющий интерес вирус был протестирован против сыворотки, специфичной в отношении всех существующих и охарактеризованных серотипов, на наличие нейтрализующей активности, и при этом не было обнаружено никаких антител, которые нейтрализуют предствляющий интерес вирус. По мере обнаружения все большего числа природных изолятов вируса и/или получения вирусов с мутантными капсидами, могут присутствовать или отсутствовать серологические различия с любым из существующих в настоящее время серотипов. Таким образом, в тех случаях, когда новый вирус (например, AAV) не имеет серологического различия, этот новый вирус (например, AAV) будет подгруппой или вариантом соответствующего серотипа. Во многих случаях серологическое тестирование на нейтрализующую активность на мутантных вирусах с модификациями капсидной последовательности нужно провести для определения, имеют ли они другой серотип в соответствии с традиционным определением серотипа. Таким образом, в целях удобства и во избежание повтора термин "серотип" в широком смысле относится как к серологически различным вирусам (например, AAV), так и к вирусам (например, AAV), которые не являются серологически различными, которые могут находиться в подгруппе или являться вариантом данного серотипа.

[0227] Таким образом, векторы AAV включают последовательности гена/белка, идентичные последовательностям гена/белка, характерным для конкретного серотипа. При использовании в настоящем изобретении термин "вектор AAV, связанный с AAV1" относится к одному или более белкам AAV (например, последовательностям VP1, VP2 и/или VP3), которые имеют существенную идентичность последовательности с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые включают AAV1. Аналогичным образом, "вектор AAV, связанный с AAV8" относится к одному или более белкам AAV (например, последовательностям VP1, VP2 и/или VP3), которые имеют существенную идентичность последовательности с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые включают AAV8. "Вектор AAV, связанный с AAV-Rh74" относится к одному или более белкам AAV (например, последовательностям VP1, VP2 и/или VP3), которые имеют существенную идентичность последовательности с одним или более полинуклеотидами или полипептидными последовательностями, которые содержат AAV-Rh74. Такие векторы AAV, связанные с другим серотипом, например, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8, таким образом, могут содержать одну или более определенных последовательностей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 и AAV-2i8, но могут демонстрировать существенную идентичность последовательности с одним или более генами и/или белками, и/или иметь одну или более функциональных особенностей AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (например, таких как тропизм в отношении клетки/ткани). Примерные неограничивающие варианты AAV включают варианты капсида любого из VP1, VP2 и/или VP3.

[0228] В различных примерах осуществления вектор AAV, связанный с референсным серотипом, содержит полинуклеотид, полипептид или их подпоследовательность, включающую или состоящую из последовательности, идентичной по меньшей мере на 80% или больше (например, на 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д.) одному или более AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (например, таким как последовательности ITR или VP1, VP2 и/или VP3).

[0229] Композиции, способы и применения изобретения включают последовательности AAV (полипептиды и нуклеотиды) и их подпоследовательности, которые демонстрируют идентичность последовательности меньше 100% с референсным серотипом AAV, таким как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10 или AAV-2i8, но отличаются от и не являются идентичным известным генам или белкам AAV, таким как гены или белки AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и т.д. В одном варианте осуществления полипептид AAV или его подпоследовательность включает или состоит из последовательности, идентичной по меньшей мере на 75% или более, например, идентичной на 80%, 85%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5% и т.д., до 100%, любой референсной последовательности AAV или их подпоследовательности, такой как AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 (например, капсида VP1, VP2 и/или VP3 или ITR). В некоторых вариантах осуществления вариант AAV имеет 1, 2, 3, 4, 5, 5-10, 10-15, 15-20 или больше аминокислотных замен.

[0230] Рекомбинантные векторы AAV, включающие AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 и вариантные, родственные, гибридные и химерные последовательности, могут быть сконструированы с помощью рекомбинантных методов, которые, как известно специалисту, включают одну или более последовательностей нуклеиновых кислот (трансгены), фланкированные одной или более функциональными ITR-последовательностями AAV.

[0231] В одном варианте осуществления изобретения вектор rAAV, включающий нуклеиновую кислоту или вариант, кодирующий FVIII или hFVIII-BDD, могут вводить пациенту путем инфузии в биологически совместимом носителе, например, путем внутривенной инъекции. Векторы rAAV необязательно могут быть инкапсулированы в липосомы или смешаны с другими фосфолипидами или мицеллами для увеличения стабильности молекулы.

[0232] В соответствии с изобретением векторы rAAV могут вводить отдельно или в комбинации с другими средствами, которые, как известно, модулируют гемостаз (например, Фактором V, Фактором Va или их производными).

[0233] Таким образом, векторы rAAV и другие композиции, вещества, лекарственные средства, биопрепараты (белки) могут быть включены в фармацевтические композиции. Такие фармацевтические композиции могут применяться, помимо прочего, для введения и доставки пациенту in vivo или ex vivo.

[0234] В определенных вариантах осуществления фармацевтические композиции также содержат фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент. Такие эксципиенты включают любое фармацевтическое средство, которое само по себе не вызывает иммунный ответ, опасный для человека, получающего композицию, и которое можно вводить без проявления неспецифического токсического действия.

[0235] При использовании в настоящем изобретении термин "фармацевтически приемлемый" и "физиологически приемлемый" означает биологически приемлемый состав, газообразный, жидкий или твердый, или их смесь, подходящие для одного или более путей введения, доставки или контакта in vivo. "Фармацевтически приемлемая" или "физиологически приемлемая" композиция представляет собой материал, который не является биологически или иным образом нежелательным, например, такой материал можно вводить пациенту без проявления существенных нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такая фармацевтическая композиция может использоваться, например, при введении нуклеиновой кислоты, вектора, вирусной частицы или белка пациенту.

[0236] Фармацевтически приемлемые эксципиенты включают, без ограничения перечисленными, жидкости, такие как воду, раствор хлорида натрия, глицерин, сахар и этанол. Фармацевтически приемлемые соли также могут быть включены в них, например, соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты, сульфаты и т.п.; и соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты, бензоаты и т.п. Кроме того, эксципиенты, такие как смачивающие или эмульгирующие вещества, pH-буфферные вещества и т.п., могут присутствовать в таких носителях.

[0237] Фармацевтическая композиция может находиться в виде соли и может быть получена с различными кислотами, включающими, без ограничения перечисленными, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли могут иметь более высокую растворимость в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие формы свободного основания. В других случаях препарат может быть лиофилизированным порошком, который может содержать любое из следующего: 1-50 мМ гистидина, 0,1-2% сахарозы и 2-7% маннита, при pH 4,5-5,5, который объединяют с буфером перед применением.

[0238] Фармацевтические композиции включают растворители (водные или неводные), растворы (водные или неводные), эмульсии (например, типа масло в воде или вода в масле), суспензии, сиропы, настойки, дисперсионные и суспензионные среды, покрытия, изотонические и усиливающие или задерживающие абсорбцию вещества, совместимые с фармацевтическим введением, или контактом или доставкой in vivo. Водные и неводные растворители, растворы и суспензии могут включать суспендирующие вещества и загущающие вещества. Такие фармацевтически приемлемые носители включают таблетки (покрытые оболочкой или без оболочки), капсулы (твердые или мягкие), микросферы, порошок, гранулы и кристаллы. Дополнительные активные соединения (например, консерванты, противобактериальные, противовирусные и противогрибковые средства) также могут быть включены в композиции.

[0239] Фармацевтические композиции могут иметь такой состав, который совместим с конкретным путем введения или доставкой, как указано в настоящем изобретении или известно специалисту в данной области. Таким образом, фармацевтические композиции включают носители, разбавители или эксципиенты, подходящие для введения различными путями.

[0240] Композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные растворы, суспензии или эмульсии активного соединения, причем такие препараты обычно являются стерильными и могут быть изотоническими с кровью предполагаемого реципиента. Неограничивающие иллюстративные примеры включают воду, буферизованный солевой раствор, раствор Хэнкса, раствор Рингера, декстрозу, фруктозу, этанол, животные, растительные или синтетические масла. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, увеличивающие вязкость суспензии, такие как натрий карбоксиметилцеллюлозу, сорбит или декстран.

[0241] Кроме того, суспензии активных соединений могут быть приготовлены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Необязательно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или вещества, повышающие растворимость соединений для получения препарата высококонцентрированных растворов.

[0242] В состав могут быть добавлены сорастворители и адъюванты. Неограничивающие примеры сорастворителей содержат гидроксильные группы или другие полярные группы, например, спирты, такие как изопропиловый спирт; гликоли, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, гликолевый эфир; глицерин; полиоксиэтилированные спирты и полиоксиэтилированные сложные эфиры жирных кислот. Адъюванты включают, например, поверхностно-активные вещества, такие как соевый лецитин и олеиновую кислоту; сложные эфиры сорбитана, такие как сорбитан триолеат; и поливинилпирролидон.

[0243] После получения фармацевтических композиций, они могут быть помещены в подходящий контейнер и снабжены этикеткой с информацией по медицинскому применению. Такая этикетка может включать количество, частоту и способ введения.

[0244] Фармацевтические композиции и системы доставки, подходящие для композиций, способов и применений согласно изобретению, известны в уровне техники (см., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2003) 20th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12th ed., Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993), Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.; Ansel and Stoklosa, Pharmaceutical Calculations (2001) 11th ed.,Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD; и Poznansky et al., Drug Delivery Systems (1980), R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y., pp. 253-315).

[0245] "Эффективное количество" или "достаточное количество" относится к количеству, которое обеспечивает, в однократной или многократных дозах, отдельно или в комбинации с одной или более другими композициями (терапевтическими или иммунодепрессантными средствами, такими как лекарственное средство), методами лечения, протоколами или терапевтическими схемами применения средств, поддающийся обнаружению ответ любой длительности (долгосрочный или краткосрочный), ожидаемый или желаемый результат лечения или благоприятный эффект у пациента в любой измеряемой или поддающейся обнаружению степени, или в течение любого времени (например, в течение нескольких минут, часов, дней, месяцев, лет или полное излечение).

[0246] Дозы могут варьировать и зависеть от типа, начала, прогрессирования, тяжести, частоты, продолжительности или вероятности возникновения заболевания, в отношении которого направлено лечение, желаемого клинического результата, предыдущего или одновременного лечения, общего состояния здоровья, возраста, пола, расы или иммунологического статуса пациента, а также от других факторов, которые будут учтены специалистом. Величина дозы, число, частота или длительность могут быть пропорционально увеличены или уменьшены, в зависимости от каких-либо нежелательных побочных эффектов, осложнений или других факторов риска при лечении или терапии, а также состояния пациента. Специалисту будут известны факторы, которые могут повлиять на дозу и время, требуемые для предоставления количества, достаточного для обеспечения терапевтического или профилактического эффекта.

[0247] Доза для достижения терапевтического эффекта, например, доза в векторных геномах/на килограмм массы тела (вг/кг), будет изменяться в зависимости от нескольких факторов, включающих, без ограничения перечисленным: путь введения, уровень экспрессии гетерологичного полинуклеотида, требуемый для достижения терапевтического эффекта, конкретное заболевание, подлежащее лечению, любой иммунный ответ организма против вирусного вектора, иммунный ответ организма на гетерологичный полинуклеотид или продукт экспрессии (белок) и стабильность экспрессируемого белка. Специалист в данной области сумеет определить диапазон дозы rAAV/векторного генома для лечения пациента, имеющего конкретное заболевание или нарушение на основе вышеуказанных факторов, а также других факторов.

[0248] Обычно дозы варьируют в пределах от по меньшей мере 1×10⁸ или больше, например, 1×10⁹, 1×10¹⁰, 1×10¹¹, 1×10¹², 1×10¹³ или 1×10¹⁴ или больше, векторных геномов на килограмм (вг/кг) массы тела пациента, для достижения терапевтического эффекта. Эффективной являлась доза AAV в диапазоне 1×10¹⁰-1×10¹¹ у мышей и 1×10¹²-1×10¹³ у собак. Дозы могут быть меньше, например, меньше 6×10¹² векторных геномов на килограмм (вг/кг). В частности, доза составляет 5×10¹¹ вг/кг или 1×10¹² вг/кг.

[0249] При использовании гемофилии B в качестве примера, в целом считается, что для достижения терапевтического эффекта с изменением тяжелого фенотипа заболевания на умеренный фенотип требуется такая концентрация фактора свертывания крови, которая превышает 1% от концентрации фактора, обнаруживаемой у здорового лица. Тяжелый фенотип характеризуется повреждением суставов и угрожающими жизни кровотечениями. Считается, что для перехода умеренного фенотипа в легкий требуется, чтобы концентрация фактора свертывания крови превышала 5% от нормального значения.

[0250] Уровни FVIII у здоровых людей составляют примерно 150-200 нг/мл в плазме, но могут быть меньше (например, в границах приблизительно 100-150 нг/мл) или выше (например, в границах приблизительно 200-300 нг/мл), и считаются нормальными при определении функциональной свертываемости, например, с помощью одностадийного анализа свертывания с определением активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ). Таким образом, терапевтический эффект может быть достигнут при экспрессии FVIII или hFVIII-BDD, когда общее количество FVIII у пациента/человека превышает 1% от уровня фактора FVIII, присутствующего у здоровых пациентов/людей, например, 1% от 100-300 нг/мл.

[0251] Дозы вектора rAAV могут находиться на уровне, как правило, на уровне нижней границы диапазона дозы, при котором существенный иммунный ответ против FVIII или вектора AAV отуствует. В частности, доза составляет до, но меньше чем 6×10¹² вг/кг, например, от приблизительно 5×10¹¹ до приблизительно 5×10¹² вг/кг, или, более конкретно, приблизительно 5×10¹¹ вг/кг или приблизительно 1×10¹² вг/кг.

[0252] Дозы в "эффективном количестве" или "достаточном количестве" для лечения (например, для облегчения или достижения терапевтического эффекта или улучшения), как правило, эффективно вызывают ответ на один, множество или все нежелательные симптомы, последствия или осложнения заболевания, один или множество нежелательных симптомов, нарушений, заболеваний, патологий или осложнений, например, вызванные или связанные с заболеванием, в поддающейся измерению степени, хотя удовлетворительным результатом лечения является уменьшение, снижение, ингибирование, подавление, ограничение или контроль прогрессирования или ухудшения заболевания.

[0253] Эффективное количество или достаточное количество могут быть, но не должны быть обязательно, предоставлены за одно введение, может потребоваться многократное введение, при этом введение могут, но не должны обязательно, производить отдельно или в комбинации с другой композицией (например, средством), лечением, протоколом или терапевтической схемой. Например, количество может быть пропорционально увеличено в соответствии с потребностями пациента, типом, состоянием и тяжестью заболевания, подвергаемого лечению, или побочных эффектов (если таковые имеются) лечения. Кроме того, эффективное количество или достаточное количество не должно быть обязательно эффективным или достаточным, если его вводят в однократной или многократных дозах без второй композиции (например, другого лекарственного средства или вещества), лечения, протокола или терапевтической схемы, поскольку дополнительные дозы, количества или продолжительность выше и за пределами таких доз или дополнительные композиции (например, лекарственные средства или вещества), лечения, протоколы или терапевтические схемы могут быть включены, чтобы считаться эффективными или достаточными для данного пациента. Количества, считающиеся эффективными, также включают количества, которые приводят к уменьшению применения другого лечения, схемы лечения или протокола, такого как введение рекомбинантного белка фактора свертывания крови (например, FVIII) для лечения нарушения свертывания крови (например, гемофилии А).

[0254] Таким образом, способы и применения изобретения также включают, помимо прочего, способы и применения, приводящие к снижению потребности или применения другого соединения, вещества, лекарственного средства, терапевтической схемы, протокола лечения, процесса или лечебного средства. Например, в отношении нарушения свертывания крови способ или применение согласно изобретению оказывает терапевтический эффект, если данному пациенту требуется менее частое введение или снижение дозы, или прекращение введения рекомбинантного фактора свертывания крови для замещения недостаточного или дефектного (патологического или мутантного) эндогенного фактора свертывания крови. Таким образом, изобретение относится к способам и применениям для снижения потребности или применения другого лечения или терапии.

[0255] Эффективное количество или достаточное количество не должны быть эффективными у любого пациента, проходящего лечение, как и большинства проходящих лечение пациентов в данной группе или совокупности. Эффективное количество или достаточное количество означает эффективность или достаточность у конкретного пациента, а не в группе или общей совокупности. Что типично для таких способов, некоторые пациенты демонстрируют больший или меньший ответ, или отсутствие ответа на данный способ лечения или применение.

[0256] Термин "облегчение" означает поддающееся обнаружению или измеряемое уменьшение тяжести заболевания или симптома у пациента или улучшение исходного клеточного ответа. Поддающееся обнаружению или измеряемое уменьшение тяжести включает пациентивное или объективное уменьшение, снижение, ингибирование, супрессию, ограничение или контроль возникновения, частоты, тяжести, прогрессирования или продолжительности заболевания или осложнения, вызванного или связанного с заболеванием, или облегчение симптома или первопричины или последствия заболевания, или устранение заболевания. В случае HemA эффективное количество будет количеством, которое уменьшает частоту или тяжесть острых эпизодов кровотечения у пациента, например, или количеством, уменьшающим время свертывания крови, например, при измерении в анализе свертывания крови.

[0257] Таким образом, фармацевтические композиции изобретения включают композиции, где активные вещества содержатся в эффективном количестве, обеспечивающем достижение предполагаемой терапевтической цели. Определение терапевтически эффективной дозы хорошо известно квалифицированному медработнику, применяющему методики и принципы, представленные в изобретении.

[0258] Терапевтические дозы будут зависеть, помимо прочих факторов, от возраста и общего состояния пациента, тяжести аберрантного фенотипа свертывания крови и эффективности регуляторных последовательностей, регулирующих уровни экспрессии FVIII. Таким образом, терапевтически эффективное количество у человека попадает в относительно широкий диапазон, который может быть определен медработником на основе ответа отдельного пациента на лечение, основанное на векторе FVIII. Такие дозы могут вводить отдельно или в комбинации с иммунодепрессантным или лекарственным средством.

[0259] Композиции, такие как фармацевтические композиции, могут быть доставлены пациенту для обеспечения продукции фактора VIII (FVIII). В конкретном варианте осуществления фармацевтические композиции, включающие достаточный генетический материал, обеспечивающий продукцию у реципиента терапевтически эффективного количества полипептида FVIII, могут влиять на гемостаз у пациента.

[0260] Композиции могут вводить отдельно. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантная частица AAV обеспечивает терапевтический эффект без иммунодепрессантного средства. Терапевтический эффект FVIII необязательно длится в течение некоторого периода времени, например, 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30 или 30-50 дней или дольше, например, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 дней или дольше, без введения иммунодепрессантного средства. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления вирусная частица CpG rAAV обеспечивает терапевтический эффект без введения иммунодепрессантного средства в течение некоторого периода времени.

[0261] Композиции могут вводить в комбинации по меньшей мере с еще одним средством. В некоторых вариантах осуществления вектор rAAV вводят в комбинации с одним или более иммунодепрессантными средствами до, по существу в одно время или после введения вектора rAAV. В некоторых вариантах осуществления, например, через 1-12, 12-24 или 24-48 часов, или через 2-4, 4-6, 6-8, 8-10, 10-14, 14-20, 20-25, 25-30, 30-50 или больше 50 дней после введения вектора rAAV. Такое введение иммунодепрессантных средств производят через некоторый период времени после введения вектора rAAV, если наблюдается снижение FVIII после начальных уровней экспрессии в течение некоторого периода времени, например, через 20-25, 25-30, 30-50, 50-75, 75-100, 100-150, 150-200 или больше 200 дней после вектора rAAV.

[0262] В некоторых вариантах осуществления иммунодепрессантное средство является противовоспалительным средством. В некоторых вариантах осуществления иммунодепрессантное средство является стероидом. В некоторых вариантах осуществления иммунодепрессантное средство является циклоспорином (например, циклоспорином A), микофенолатом, ритуксимабом или их производным. Дополнительные конкретные средства включают стабилизирующее соединение.

[0263] Композиции могут вводить в любом стерильном, биосовместимом фармацевтическом носителе, в том числе, без ограничения перечисленными, в растворе хлорида натрия, буферизованном растворе хлорида натрия, растворе декстрозы и воде. Композиции могут вводить пациенту отдельно или в комбинации с другими средствами (например, кофакторами), которые влияют на гемостаз.

[0264] Методики получения аденовирусных векторов и их введения пациентам были описаны в патентах США 5,998,205; 6,228,646; 6,093,699; 6,100,242; и Международных заявках WO 94/17810 и WO 94/23744, которые полностью включены в настоящее описание посредством ссылки. В частности, например, векторы AAV используются для доставки фактора VIII (FVIII), кодируемого вариантами нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, пациенту.

[0265] Способы и применения по изобретению включают доставку и введение системно, регионарно или местно, или любым путем, например, путем инъекции или инфузии. Доставку фармацевтических композиций in vivo обычно можно осуществлять путем инъекции с помощью обычного шприца, хотя возможны другие способы доставки, такие как конвекционная доставка (см., например, патент США 5,720,720). Например, композиции могут доставлять подкожно, кожно, внутрикожно, интратекально, внутриглазнично, внутрислизисто, внутрибрюшинно, внутривенно, внутриплеврально, внутриартериально, перорально, внутрипеченочно, через воротную вену или внутримышечно. Другие способы введения включают пероральное и легочное введение, суппозитории и трансдермальные применения. Лечащий врач, специализирующийся на лечении пациентов с нарушениями свертывания крови, может определить оптимальный путь введения векторов на основе аденовирусов с учетом множества критериев, включающих, без ограничения: состояние пациента и цель лечения (например, улучшение или уменьшение свертывания крови).

[0266] Способы и применения согласно изобретению можно комбинировать с любым соединением, веществом, лекарственным средством, лечением или другой терапевтической схемой или протоколом, обладающими требуемой терапевтической, полезной, аддитивной, синергической или дополнительной активностью или действием. Примеры комбинированных композиций и способов лечения включают второе действующее вещество, такое как биопрепараты (белки), средства (например, иммунодепрессантные средства) и лекарственные средства. Такие биопрепараты (белки), средства, лекарственные средства, лечения и терапии могут вводить или применять до, по существу одновременно с или после какого-либо другого способа или применения согласно изобретению, например, терапевтического способа лечения у пациента заболевания, связанного с нарушением свертывания крови, такого как гемофилия A.

[0267] Соединение, средство, лекарственное средство, лечение или другая терапевтическая схема или протокол могут применять в виде комбинированной композиции или вводить отдельно, например, параллельно или по порядку, или последовательно (до или после), относительно доставки или введения нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (например, rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы. Таким образом, в изобретении предложены комбинации, в которых способ или применение согласно изобретению осуществляют в комбинации с любым соединением, средством, лекарственным средством, терапевтической схемой, протоколом лечения, процессом, лечебным средством или композицией, представленными в настоящем изобретении или известным специалисту. Соединение, средство, лекарственное средство, терапевтическую схему, протокол лечения, процесс, лечебное средство или композицию могут вводить или применять до, по существу одновременно с или после введения пациенту нуклеиновой кислоты, вектора, рекомбинантного вектора (например, rAAV) или рекомбинантной вирусной частицы согласно изобретению.

[0268] Изобретение может применяться у животных, включая применение в медицине и ветеринарии. Поэтому подходящие пациенты включают млекопитающих, таких как люди, а также млекопитающих, не являющихся человеком. Термин "пациент" относится к животному, обычно млекопитающему, такому как человек, не являющимся человеком приматам (человекообразным обезьянам, гиббонам, гориллам, шимпанзе, орангутанам, макакам), домашнему животному (собакам и кошкам), сельскохозяйственному животному (птице, такой как куры и утки, лошадям, коровам, козам, овцам, свиньям) и подопытным животным (мышам, крысам, кроликам, морским свинкам). Пациенты-люди включают эмбрионов, новорожденных, грудных, детей и подростков и взрослых пациентов. Пациенты включают модели заболеваний на животных, например, мышах и других животных, модели заболеваний, связанных с нарушением свертывания крови, таких как гемофилия A и другие заболевания, известные специалистам в данной области.

[0269] Пациенты, подходящие для лечения в соответствии с изобретением, включают пациентов, имеющих или подвергающихся риску недостаточной продукции или дефицита функционального продукта гена (например, белка FVIII), или с продукцией аберрантного, неполностью функционального или нефункционального продукта гена (например, белка FVIII), что может приводить к заболеванию. Пациенты, подходящие для лечения в соответствии с изобретением, также включают пациентов, имеющих или подвергающихся риску продукции аберрантного или дефектного (мутантного) продукта гена (белка), что приводит к заболеванию, при этом снижение количества, экспрессии или функции аберрантного или дефектного (мутантный) продукта гена (белка) может привести к лечению заболевания или уменьшению одного или более симптомов или ослаблению заболевания. Таким образом, целевые пациенты включают пациентов, которые имеют аберрантную, недостаточную продукцию, или у которых отсутствует продукция фактора свертывания крови, таких как больные гемофилией (например, гемофилией А).

[0270] Пациенты могут подвергаться исследованию на иммунный ответ, например, наличие антител против AAV. Пациенты-кандидаты с гемофилией могут подвергаться скринингу перед лечением в соответствии со способом изобретения. Пациенты также могут подвергаться исследованию на наличие антител против AAV после лечения и необязательно проходить наблюдение в течение некоторого периода времени после лечения. Пациенты с антителами могут получать иммунодепрессант или введение одного или более дополнительных количеств вектора AAV.

[0271] Пациенты, подходящие для лечения в соответствии с изобретением, также включают пациентов, имеющих или подвергающихся риску продукции антител против AAV. Векторы rAAV могут вводить или доставлять таким пациентам с применением нескольких методик. Например, пустой капсид AAV (то есть AAV, в котором отсутствует нуклеиновая кислота FVIII), могут доставлять для связывания с антителами AAV у пациента, что позволяет трансформировать клетки пациента вектором AAV, несущим нуклеиновую кислоту или вариант нуклеиновой кислоты, кодирующие FVIII и FVIII-BDD.

[0272] Отношение пустых капсидов к вектору rAAV может составлять от приблизительно 2:1 до приблизительно 50:1 или от приблизительно 2:1 до приблизительно 25:1, или от приблизительно 2:1 до приблизительно 20:1, или от приблизительно 2:1 до приблизительно 15:1, или от приблизительно 2:1 до приблизительно 10:1. Отношения также могут составлять приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.

[0273] Количества пустого капсида AAV для введения могут быть откалиброваны на основе количества (титра) антител AAV, вырабатываемых у конкретного пациента. Пустой капсид может относиться к любому серотипу AAV, например, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.

[0274] Альтернативно или дополнительно, вектор AAV можно доставлять путем прямой внутримышечной инъекции (например, в одно или более медленносокращающихся волокон мышцы). В другом альтернативном варианте катетер, введенный в бедренную артерию, может использоваться для доставки векторов AAV в печень через печеночную артерию. Нехирургические методы, такие как эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография (ЭРХПГ), также могут использоваться для доставки векторов AAV непосредственно в печень, что позволяет обходить кровоток и исключить взаимодействие с антителами к AAV. Другие системы протоков, такие как протоки подчелюстной железы, также могут использоваться в качестве ворот для доставки векторов AAV пациенту, у которого начинают вырабатываться или уже существовали ранее антитела против AAV.

[0275] Введение или доставка in vivo пациенту может быть выполнена до развития нежелательного симптома, состояния, осложнения и т.д., вызванного или связанного с заболеванием. Например, скрининг (например, генетический) может использоваться для идентификации таких пациентов в качестве кандидатов композиций, способов и применений изобретения. Таким образом, такие пациенты включают пациентов с положительным результатом при скрининге на недостаточное количество или дефицит функционального продукта гена (например, белка FVIII), или пациентов, у которых вырабатывается аберрантный, непольностью функциональный или нефункциональный продукт гена (например, белок FVIII).

[0276] Введение или доставку in vivo пациенту в соответствии со способами и применениями изобретения, как раскрыто в настоящем изобретении, могут производить через 1-2, 2-4, 4-12, 12-24 или 24-72 часа после того, как у пациента было идентифицировано заболевание, подлежащее лечению, возник один или более симптомов заболевания, или пациент прошел скрининг, показавший положительный результат, как указано в настоящем изобретении, даже если пациент не имеет одного или более симптомов заболевания. Конечно, способы и применения изобретения могут осуществлять через 1-7, 7-14, 14-21, 21-48 или более дней, месяцев или лет после того, как у пациента было идентифицировано заболевание, подлежащее лечению, один или более симптомов заболевания, или пациент прошел скрининг, показавший положительный результат, как указано в настоящем изобретении.

[0277] "Стандартная лекарственная форма" при использовании в настоящем изобретении относится к физически дискретным единицам, которые подходят в качестве однократных доз для пациента, подлежащего лечению, при этом каждая единица содержит заданное количество, необязательно в сочетании с фармацевтическим носителем (вспомогательным веществом, разбавителем, основой или наполнителем), которое, при введении в одной или более дозах, вычислено так, чтобы производить требуемый эффект (например, профилактический или терапевтический эффект). Стандартные лекарственные формы могут находиться, например, в ампулах и флаконах, которые могут включать жидкую композицию или композицию в лиофильно высушенном или лиофилизированном состоянии; стерильный жидкий носитель, который, например, может быть добавлен перед введением или доставкой in vivo. Отдельные стандартные лекарственные формы могут быть включены в многодозовые наборы или контейнеры. Последовательности рекомбинантного вектора (например, rAAV), рекомбинантные вирусные частицы и их фармацевтические композиции могут быть упакованы в виде одной или множества единичных лекарственных форм для простоты введения и единообразия введения доз.

[0278] У пациентов могут исследовать количество FVIII и FVIII-BDD или активность FVIII и FVIII-BDD с целью определения, подходят ли такие пациенты для лечения в соответствии со способом согласно изобретению. Пациенты-кандидаты с гемофилией могут проходить исследование на количество или активность FVIII и FVIII-BDD до лечения в соответствии со способом согласно изобретению. Пациенты также могут проходить исследование на количество или активность FVIII и FVIII-BDD после лечения в соответствии со способом согласно изобретению. Такие прошедшие лечение пациенты периодически могут проходить наблюдение после лечения на количество FVIII и FVIII-BDD или активность FVIII и FVIII-BDD, например, каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.

[0279] Пациенты могут проходить исследование на наличие одного или более ферментов печени, на нежелательный ответ или с целью определения, подходят ли такие пациенты для лечения в соответствии со способом согласно изобретению. Пациенты-кандидаты с гемофилией могут, таким образом, проходить скрининг на количество одного или более ферментов печени перед лечением в соответствии со способом согласно изобретению. Пациенты также могут проходить исследование на количество одного или более ферментов печени после лечения в соответствии со способом согласно изобретению. Такие прошедшие лечение пациенты периодически могут проходить наблюдение после лечения на наличие повышенных ферментов печени, например, каждые 1-4 недели или 1-6 месяцев.

[0280] Примеры ферментов печени включают аланинаминотрансферазу (АЛТ), аспартатаминотрансферазу (АСТ) и лактатдегидрогеназу (ЛДГ), однако также могут наблюдать другие ферменты, указывающие на повреждение печени. Нормальный уровень этих ферментов в кровообращении, как правило, определяют как диапазон, имеющий верхнюю границу, выше которой уровень фермента считается повышенным, и поэтому указывает на повреждение печени. Нормальный диапазон частично зависит от стандартов, используемых в клинической лаборатории, проводящей исследование.

[0281] Пациентов могут наблюдать на эпизоды кровотечения с целью определения, подходят ли такие пациенты для лечения или поддаются лечению, и/или на уровень или продолжительность ответа. Пациентов могут наблюдать на эпизоды кровотечения с целью определения, нуждаются ли такие пациенты в дополнительном лечении, например, последующем введении вектора AAV или введении иммунодепрессантного средства, или в более частом наблюдении. Таким образом, пациентов с гемофилией могут наблюдать на эпизоды кровотечения до и после лечения согласно способу изобретения. Пациенты также могут проходить исследование на частоту и тяжесть эпизодов кровотечения во время или после лечения согласно способу изобретения.

[0282] Изобретение относится к наборам с упаковочным материалом и одним или более компонентами в них. Набор обычно включает этикетку или вкладыш в упаковку, включающий в себя описание компонентов или инструкции по применению содержащихся в них компонентов in vitro, in vivo или ex vivo. Набор может содержать группу таких компонентов, например, нуклеиновую кислоту, рекомбинантный вектор, вирусный (например, AAV) вектор или вирусную частицу и, необязательно, второе действующее вещество, такое как другое соединение, средство, лекарственное средство или композицию.

[0283] Набор относится к физической структуре, вмещающей один или более компонентов набора. Упаковочный материал может сохранять компоненты в стерильном состоянии и может быть изготовлен из материала, обычно используемого в таких целях (например, бумаги, гофрированного картона, стекла, пластмассы, фольги, ампул, флаконов, пробирок и т.д.).

[0284] Этикетки или вкладыши могут включать идентификационную информацию по одному или более компонентам, величине доз, клинической фармакологии действующего вещества (веществ), включая механизм действия, фармакокинетику и фармакодинамику. Этикетки или вкладыши могут включать информацию, идентифицирующую производителя, номер партий, место и дату изготовления, сроки годности. Этикетки или вкладыши могут включать информацию о заболевании, при котором может применяться компонент набора. Этикетки или вкладыши могут включать инструкции для медработника или пациента по применению одного или более компонентов набора в способе, применении или протоколе лечения или в терапевтической схеме. Инструкции могут включать величину доз, частоту или продолжительность, а также инструкции по практическому осуществлению любого из способов, применений, протоколов лечения или профилактических или терапевтических схем, описанных в настоящем изобретении.

[0285] Этикетки или вкладыши могут включать информацию о любом эффекте, который может вызывать компонент, таком как профилактический или терапевтический эффект. Этикетки или вкладыши могут включать информацию о потенциальных побочных эффектах, осложнениях или реакциях, такую как предупреждения для пациента или медработника относительно ситуаций, когда конкретную композицию использовать нецелесообразно. Нежелательные побочные эффекты или осложнения также могут возникать, когда пациент принимает, будет или в настоящее время принимает одно или более других лекарственных средств, которые могут быть несовместимы с композицией, или пациент будет применять или в настоящее время применяет другой протокол лечения или терапевтическую схему, которые будет несовместимы с композицией, и, таким образом, инструкции могут включать информацию о таких несовместимостях.

[0286] Этикетки или вкладыши включают "печатные материалы", например, бумагу или картон, помещенные отдельно или прикрепленные к компоненту, набору или упаковочному материалу (например, коробке), или прикрепленные к ампуле, пробирке или флакону, содержащим компонент набора. Этикетки или вкладыши могут дополнительно включать машиночитаемый носитель, такой как этикетку со штрих-кодом, диск, оптический диск, такой как CD- или DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, магнитную ленту или электрический накопитель данных, такой как RAM и ROM или их гибриды, такие как магнитные/оптические накопители данных, флэш-накопители или карты памяти.

[0287] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем изобретении, имеют такое же значение, которое обычно известно специалистам в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем изобретении, могут использоваться при практическом применении или тестировании настоящего изобретения, в настоящем изобретении описаны подходящие способы и материалы.

[0288] Все патенты, заявки на патент, публикации и другие источники, записи в GenBank и записи в ATCC, цитируемые в настоящем изобретении, полностью включены посредством ссылки. В случае конфликта настоящее описание, включая определения, будет иметь преимущественную силу.

[0289] Различные термины, относящиеся к биологическим молекулам согласно изобретению, используются выше, а также по всему тексту описания и формулы изобретения.

[0290] Все признаки, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть объединены в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в описании, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же, эквивалентной или подобной цели. Таким образом, если прямо не указано иное, раскрытые признаки (например, варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, кодирующие FVIII, вектор, плазмида, последовательность экспрессионного/рекомбинантного вектора (например, rAAV) или частица рекомбинантного вируса) являются примером рода эквивалентных или подобных функций.

[0291] При использовании в настоящем изобретении формы единственного числа включают формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, например, ссылка на "нуклеиновую кислоту" включает множество таких нуклеиновых кислот, ссылка на "вектор" включает множество таких векторов, и ссылка на "вирус" или "частицу" включает множество таких вирусов/частиц.

[0292] При использовании в настоящем изобретении все числовые значения или числовые диапазоны включают целые числа в таких диапазонах и дробные числа значений или целых чисел в диапазонах, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, для иллюстрации, указание 80% или большей идентичности включает 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94% и т.д., а также 81,1%, 81,2%, 81,3%, 81,4%, 81,5%, и т.д., 82,1%, 82,2%, 82,3%, 82,4%, 82,5% и т.д., и т.п.

[0293] Ссылка на целое число с фразой больше (большее) или меньше чем, включает любое число, большее или меньшее, чем указанное числовое значение, соответственно. Так, например, ссылка на меньше чем 100 включает 99, 98, 97 и т.д., до единицы (1); и меньше чем 10 включает 9, 8, 7 и т.д. до единицы (1).

[0294] При использовании в настоящем изобретении все числовые значения или диапазоны включают дроби значений и целые числа в таких диапазонах, а также дроби целых чисел в таких диапазонах, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на числовой диапазон, такой как 1-10, включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д., и т.п. Ссылка на диапазон 1-50, таким образом, включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 и т.д., до 50 включительно, а также 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 и т.д., 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5 и т.д., и т.п.

[0295] Ссылка на серию диапазонов включает диапазоны, объединяющие значения границ различных диапазонов в серии. Таким образом, для иллюстрации, ссылка на серию диапазонов, например, 1-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-75, 75-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300, 300-400, 400-500, 500-750, 750-850 включает диапазоны 1-20, 1-30, 1-40, 1-50, 1-60, 10-30, 10-40, 10-50, 10-60, 10-70, 10-80, 20-40, 20-50, 20-60, 20-70, 20-80, 20-90, 50-75, 50-100, 50-150, 50-200, 50-250, 100-200, 100-250, 100-300, 100-350, 100-400, 100-500, 150-250, 150-300, 150-350, 150-400, 150-450, 150-500 и т.д.

[0296] Изобретение раскрыто в общем виде в настоящем изобретении при использовании утвердительных выражений для описания многочисленных вариантов осуществления и аспектов. Изобретение также, в частности, включает варианты осуществления, в которых полностью или частично исключается конкретный объект, такой как вещества или материалы, этапы и условия способа, протоколы или процедуры. Например, в некоторых вариантах осуществления или аспектах изобретения исключаются материалы и/или этапы способа. Таким образом, даже если изобретение в целом не выражено в настоящем изобретении в отношении того, что изобретение не включает в себя аспекты, которые прямо не исключены в настоящем изобретении, тем не менее, раскрыты в настоящем изобретении.

[0297] Был описан ряд вариантов осуществления изобретения. Тем не менее, специалист в данной области техники, без отступления от сущности и объема изобретения, сможет внести в изобретение различные изменения и модификации, чтобы адаптировать его к различным применениям и условиям. Таким образом, следующие примеры предназначены для иллюстрации, но не для ограничения объема изобретения, заявленного каким-либо образом.

ПРИМЕР 1

Последовательности ДНК фактора VIII с уменьшенным содержанием CpG и некоторые векторные конструкции, плазмидные конструкции и линии клеток, продуцирующих вектор AAV.

[0298] 18 различных вариантов нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, кодирующих FVIII (SEQ ID NO:1-18), получали и оценивали в анализах экспрессии. Конструкции кДНК человеческого FVIII с уменьшенным содержанием CpG получали с мутантным промотором транстиретина (TTRmut) (SEQ ID NO:22).

[0299] Кассета экспрессии AAV-SPK-8011 имеет последовательность нуклеиновой кислоты FVIII-X07 с уменьшенным содержанием CpG и капсид LK03 для упаковки. Капсид LK03 имеет существенную гомологию с AAV3, непатогенным, природным репликационно-дефицитным одноцепочечным ДНК вирусом.

[0300] Упаковочная плазмида pLK03 представляет собой 7484 тпн плазмидную конструкцию, которая несет гены AAV2 Rep и AAV-LK03 Cap под контролем промотора p5 AAV2, бактериальную точку начала репликации и ген, придающий бактериальным клеткам устойчивость к канамицину. В этой конструкции p5 rep промотор был перемещен 3' относительно гена cap для снижения вероятности образования видов AAV вируса дикого типа или псевдодикого типа и повышения выхода вектора.

[0301] Клонированная ДНК для переноса гена представляет собой кассету экспрессии генов, упакованную в капсид AAV-LK03 в виде одноцепочечного генома, кодирующего человеческий фактор свертывания крови VIII (hFVIII) под контролем печень-специфического промотора. Экспрессионная плазмида называется pAAV-TTRmut-hFVIII-X07. Она была модифицирована путем введения 4 точковых мутаций в промотор TTR, а кодирующая область оптимизирована для повышения экспрессии человеческого фактора VIII. Кассета экспрессии AAV содержит следующие элементы:

- ITR AAV2

- Промотор транстиретина (TTR): печень-специфический промотор транстиретина (TTR) с 4 точковыми мутациями, повышающими экспрессию гена по сравнению с промотором дикого типа (Costa et al. 1991)

- Синтетический интрон: Полученный из гена фактора элонгации EF-1 альфа человека

- Последовательность, кодирующая FVIII: кодон-оптимизированная последовательность с делецией B-домена, кодирующая FVIII человека.

- Сигнальная последовательность поли-A бета-глобина кролика (Levitt et al. 1989).

- ITR AAV2

[0302] Три плазмидных ДНК конструкции использовали для трансфекции человеческих эмбриональных клеток почки 293 с получением вектора SPK-8011 в процессе без вируса-помощника (Matsushita et al. 1998):

- Генную кассету (последовательность, кодирующая hFVIII, и соответствующие регуляторные элементы) клонировали в плазмиду с получением векторной плазмиды pAAV-TTRmut-hFVIII-X07.

- Вирусный геном AAV (rep и cap) без вирусных ITR-повторов клонировали в плазмиду с получением AAV упаковочной плазмиды, pLK03, обеспечивающей необходимые гены AAV2 rep и AAV-LK03 cap в транс-конфигурации для упаковки вектора AAV. Вирусный промотор (p5) для гена rep перемещали в плазмиду для предотвращения образования репликационно-компетентного AAV путем негомологичной рекомбинации.

- Три гена из аденовируса-2 клонировали в третью плазмиду (pCCVC-AD2HP) с получением необходимых генов вируса-помощника для продукции вектора. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 представляет собой 11832 тпн плазмидную конструкцию, несущую три гена аденовируса, E2A, E4 и VA РНК для обеспечения 'хэлперных' функций, тренумых для репликации и инкапсулирования вектора AAV. Плазмида pCCVC-AD2HPv2 является производной pCCVC-AD2HP, в которой рестрикционный фрагмент DrdI-DrdI 1882 тпн, содержащий ген AmpR и часть последовательности pUC ori, был удален и заменен фрагментом DrdI-DrdI из плазмиды pAAV2-hRPE65v2, содержащим полный ген Kan^R и часть последовательности pUC ori.

[0303] Клеточный субстрат, используемый для продукции вектора AAV, получен на основе человеческих эмбриональных клеток почки (HEK) 293. Клеточная линия HEK293 является стабильной линией, которая трансформирована фрагментированной посредством гидродинамического сдвига ДНК аденовируса человека 5 типа (Ad5) (Graham et al. 1977). Рабочий банк клеток получали из Главного банка клеток HEK293 из Центра клеточных и молекулярных терапевтических средств (CCMT) Детской больницы Филадельфии (CHOP).

ПРИМЕР 2

Оценка векторов AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-8011 (капсид LK03, FVIII-X07 (SEQ ID NO:7)) на не являющихся человеком приматах (НЧП).

[0304] Конструкции трансгена FVIII, упакованные в векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), доставляли не являющимся человеком приматам (НЧП). Проводили пилотное исследование и исследование стандарта GLP.

[0305] Коротко, проводили исследование с подбором дозы на самцах яванских макаков, которым делали однократную внутривенную инфузию AAV-SPK-8005 или AAV-SPK-8011 (капсид LK03). Экспрессию hFVIII оценивали в течение 8 недель. Группы животных и уровни дозы каждого вектора (пилотное исследование) показаны на Фигуре 1.

[0306] НЧП получали внутривенную инфузию через подкожную вену ноги с помощью калиброванного инфузионного насоса в течение приблизительно 30 минут. Макаков подвергали предварительному скринингу на наличие нейтрализирующих антител против капсида AAV. Первоначально было определено, что все обработанные животные имели титр <1:3 перед введением вектора. Это сделали, чтобы гарантировать успешную печеночную трансдукцию, поскольку даже низкие титры ингибируют захват вектора клетками печени после системной доставки (Jiang et al. 2006). Все животные также были отрицательными на присутствие нейтрализирующих антител против FVIII перед переносом гена.

[0307] Уровни hFVIII в плазме измеряли с помощью ИФА, специфичного к человеческим белкам, при котором не эндогенный FVIII яванского макака не обнаруживали. Все животные в исследовании, за исключением одного макака в когорте средней дозы, экспрессировали hFVIII после доставки вектора. Уровень антигена фактора VIII человека достигал пика примерно через 1-2 недели после введения вектора. Через одну неделю после переноса гена, НЧП, трансдуцированные 2-1012 мкг/кг AAV-SPK-8005, экспрессировали уровни антигена hFVIII 13,2±3% (среднее ± стандартная ошибка среднего). Через неделю после переноса гена средние уровни hFVIII у двух из трех животных в следующей когорте лечения (5-1012 мкг/кг) составили 27±0,2%. Человеческий фактор VIII не был обнаружен у третьей макаки в этой когорте в какой-либо момент времени. После повторного тестирования исходных образцов плазмы было установлено, что это животное на самом деле было положительным на наличие антител против AAV, и что первоначально определенный титр <1:3 был неверным. Наконец, при самой высокой протестированной дозе 1 1013 мкг/кг пиковые уровни антигена hFVIII 54,1±15,6% наблюдали после инфузии AAV.

[0308] Экспрессия человеческого FVIII снижалась примерно у одной трети животных приблизительно на 4 неделе, одновременно с появлением ингибиторных антител к hFVIII у этих 3 макаков (отмеченных символом ε на Фигуре 2). Разработка видоспецифических антител к hFVIII была ранее описана у не являющихся человеком приматов и, вероятно, связана с различиями в нескольких аминокислотных остатках между продуктом человеческого трансгена и эндогенным FVIII яванского макака (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)).

[0309] Для оценки потенциального тромбообразования вследствие непрерывной экспрессии человеческого FVIII, в данном исследовании измеряли уровни антигена D-димера. Следует отметить, что сообщений о клинической значимости или даже нормальных значениях уровней антигена D-димера у яванских макаков мало; в качестве референсных значений, нормальный диапазон D-димеров у человека составляет менее 500 нг/мл. Поскольку животные экспрессируют эндогенный FVIII яванского макака, продукция hFVIII в результате переноса гена в печени приводит к превышению физиологических уровней активности FVIII.

[0310] Животное, получавшее дозу 5×10¹² вг/кг, но не экспрессировавшее человеческий FVIII, имело пик 863 нг/мл через две недели после инфузии AAV. Остальные животные не показали значимого увеличения уровней антигена D-димера по сравнению с исходными значениями. В совокупности, эти результаты позволяют предположить, что экспрессия человеческого FVIII на уровнях, являющихся целевыми в этом исследовании, не связана с повышенным риском тромбоза.

[0311] Через четыре недели после введения вектора никаких связанных с вектором изменений не наблюдали. Анализы функции печени показали нормальные значения с незначительными колебаниями, которые, как оказалось, не были связаны с дозой вектора, так как в большинстве случаев они присутствовали до введения доз (Фигура 3).

[0312] Уровни D-димера до недели 5 показаны на Фигуре 4. Одно животное в когорте высокой дозы имело небольшое (577 нг/мл) транзиторное повышение уровней D-димера через одну неделю после введения вектора, когда циркулирующий человеческий FVIII достигал максимума в пределах 100%; уровни D-димера быстро возвращались к нормальным значениям после этого одиночного повышения при измерении. В частности, не наблюдали никакой корреляции между уровнями D-димера и уровнями антигена hFVIII (Фигура 4, нижние панели).

[0313] Для вектора AAV-SPK-8011(капсид LK03) в пилотном исследовании три когорты яванских макаков (n=3) получали повышаемые дозы AAV-SPK-8011 (капсид LK03) (2×10¹², 6×10¹² и 2×10¹³ (вг/кг); Фигура 1). В исследовании GLP использовали дозы 3×10¹², 6×10¹² и 2×10¹³ вг/кг вектора (AAV-SPK-8011(капсид LK03)).

[0314] В общей сложности 11 НЧП использовали в каждом исследовании. Пилотное исследование включало период наблюдения 10 недель в отсутствие иммунодепрессии. Зател следовала 12-недельная фазой иммунодепрессии, которую включали для устранения антител против hFVIII, которые образовались в течение первых 10 недель исследования. После этого животных наблюдали еще в течение 20 недель.

[0315] У животных контролировали клинические наблюдения, массу тела, клинические лабораторные показатели (биохимический анализ крови, общий анализ крови, свертывание крови, анализ мочи). Кроме того, в течение исследования оценивали уровни антигена hFVIII, ингибирующих антител к FVIII и уровни D-димера.

[0316] Данные из пилотного исследования антигена hFVIII показаны на Фигуре 6. Средние уровни антигена hFVIII достигали максимума около 2-3 недели, при этом 22,3±6,2% hFVIII наблюдали в когорте низкой дозы и 61,6±15,7% и 153±58,1% наблюдали в когортах середней и высокой дозы, соответственно, при использовании 150 нг/мл в качестве 100% нормального уровня антигена hFVIII (Фигуры 6A-6D).

[0317] В токсикологическом исследовании GLP печеночный перенос генов путем инфузии в периферическую вену SPK-8011 также привел к экспрессии hFVIII у всех животных. При низкой дозе 3×10¹² вг/кг уровни антигена hFVIII изменялись в пределах 5-40% от нормальных значений, со средним пиковым уровнем около 2 недели после введения AAV 20,3±11% (среднее ±SEM). Средние уровни антигена hFVIII в когорте 6×10¹² вг/кг составили 40,7±4% от нормальных значений.

[0318] Таким образом, серотип капсида LK03 AAV эффективно трансдуцирует гепатоциты НЧП in vivo в отличие от печени мышей. Несмотря на терапевтические уровни hFVIII, наблюдаемые вскоре после переноса генов, у большинства животных уровни начали уменьшаться около 4 недели.

[0319] Гуморальный ответ на hFVIII в плазме яванских макаков измеряли после введения AAV-SPK-8011(капсид LK03). Животных оценивали на IgG антитела против hFVIII с помощью ИФА в начале исследования и в указанные точки времени.

[0320] У большинства получавших вектор животных, как в пилотном, так и в GLP исследовании развивались нейтрализирующие антитела против FVIII, что является ожидаемым результатом на основе доклинических исследований на яванских макаках, а также согласно другим сообщениям (McIntosh, J. et al., Blood 121:3335-44 (2013)). Нейтрализирующие антитела против человеческого белка FVIII, которые обычно начинают появляться через три недели после инфузии AAV у макак, препятствуют обнаружению циркулирующего антигена hFVIII. В результате пиковые уровни антигена hFVIII около 2-3 недель (т.е. перед появлением ингибирующих антител против hFVIII) могут использоваться для оценки подходящей начальной дозы вектора у пациентов-людей. Кривые зависимости эффекта от дозы SPK-8011 в пилотном и GLP исследовании на НЧП показаны на Фигуре 7.

[0321] Уровни экспрессии FVIII, достигнутые с AAV-SPK-8011 (капсид LK03), сравнивали с описанными уровнями FVIII, достигнутыми с векторами AAV для доставки FVIII на основе капсида AAV5 и AAV8. Сравнение показало, что уровни FVIII, достигнутые с AAV-SPK-8011 (капсид LK03), превышали описанные уровни FVIII, доставляемого с помощью векторов AAV с капсидами AAV5 и AAV8 (Фигура 8).

ПРИМЕР 3

Биораспределение капсида AAV-LK03 у не являющихся человеком приматов (НЧП).

[0322] Биораспределение капсида AAV-LK03 у приматов, не являющихся человеком, оценивали в исследовании, не предусматривающем применения стандарта GLP. Внутривенное введение инкапсулированного вектора AAV-LK03, кодирующего человеческий фактор свертывания крови IX (AAV-LK03-hFIX), показало, что двумя основными тканями-мишенями являются печень и селезенка (Фигура 9). Тропизм в отношении селезенки не является уникальной характеристикой AAV-LK03. Например, капсид AAV5, который использовали в нескольких исследованиях генотерапии, направленной на печень (например, NCT02396342, NCT02082860, NCT02576795), показавший высокую безопасность, направленно воздействует на селезенку с такой же, если не более высокой эффективностью, чем на печень, у не являющихся человеком приматов (Paneda et al. 2013). В экспрессионной кассете SPK-8011 используется мышиный промотор транстиретина или TTR, который считается печень-специфическим (Costa, 1991). Для дополнительного подтверждения печень-специфических свойств промотора, в анализе экспрессии на основе метода ПЦР измеряли экспрессию FVIII, обусловленную вектором, в печени и селезенке мышей после введения другого вектора AAV, упаковывающего такую же кассету экспрессии, что и SPK-8011 (т.е. AAV-SPK-8005). Как показано на Фигуре 10, экспрессия человеческого фактора VIII в селезенке была на несколько порядков ниже, чем в гепатоцитах.

[0323] Это первое клиническое исследование с использованием AAV-LK03, несмотря на то, что проводили исследования с другими векторами AAV, в том числе несколькими для лечения гемофилии B (NCT02396342, NCT01620801 NCT00076557, NCT02484092, NCT02618915, NCT00979238, NCT01687608) и одним для лечения гемофилии A (NCT02576795). В исследовании, проводимом Детской исследовательской больницей Св. Иуды в сотрудничестве с Университетским колледжем Лондона, использовали вектор AAV8, несущий самокомплементарный геном, кодирующий кодон-оптимизированную кДНК человеческого фактора IX, scAAV2/8-LP1-hFIXco. Десять пациентов, получавших вектор, имели стабильные уровни фактора IX 1-6% в среднем за 3,2 года, при этом все участники либо досрочно прекратили участие в исследовании, либо уменьшили применение профилактической заместительной терапии фактором свертывания (Nathwani et al. 2014). В клиническом исследовании по лечению гемофилии A использовали AAV5 инкапсулированный вектор, кодирующий FVIII человека (NCT02576795). Предварительные данные, представленные в 2016 году, демонстрируют повышение активности FVIII после переноса генов у нескольких пациентов в пределах от 2-60% с последующим наблюдением до 16 недель (BioMarin, April 2016).

ПРИМЕР 4

Эффективность трансдукции с капсидом AAV-LK03, проанализированная в условиях in vitro.

[0324] Первичные гепатоциты, полученные у яванских макаков и человека, трансдуцировали вектором AAV-LK03, экспрессирующим люциферазу, при четырех различных показателях множественности инфицирования (MOI) в пределах от 500 до 62500 векторных геномов на клетку. Через семьдесят два часа после трансдукции анализировали экспрессию люциферазы.

[0325] Капсид AAV-LK03 однозначно продемонстрировал значительно более высокую эффективность при трансдукции человеческих гепатоцитов в культуре. В репрезентативном примере, показанном на Фигуре 11, LK03 продемонстрировал приблизительно в 5 раз более высокую эффективность при трансдукции человеческих гепатоцитов по сравнению с гепатоцитами не относящегося к человеку примата in vitro. Важно то, что эти результаты сохранялись при различных MOI и в повторяемых исследованиях.

ПРИМЕР 5

Вычисления дозы для клинического исследования с участием людей

[0326] На основе уровней hFVIII, наблюдаемых у не являющихся человеком приматов (НЧП), производили оценку ожидаемых уровней FVIII у человека при предложенной начальной дозе 5×10¹¹ вг/кг. Так как различные партии векторов могут иметь несколько отличающуюся эффективность печеночной трансдукции, использовали данные из пилотного и токсикологического исследования GLP на НЧП для интерполяции диапазона концентраций FVIII после введения 5×10¹¹ вг/кг. Для этого анализа использовали модель линейной регрессии (Фигура 12), т.е. отношение между дозой AAV и получаемыми в результате уровнями экспрессии hFVIII, как было обнаружено, не показало значимого отклонения от линейности (Таблица 2).

Таблица 2

Пилотное GLP Значения наилучшего соответствия Наклон 6,099e-012±7,962e-013 5,170e-012±6,421e-013 Y-пересечение, когда X=0,0 0 0 X-пересечение, когда Y=0,0 0 0 1/угол наклона 1,64E+11 1,934E+11 95% доверительные интервалы Наклон 4,346e-012-7,851e-012 3,756e-012-6,583e-012 Критерий соответствия Sy, x 28,93 15,29 Отличается ли наклон значительно от нуля? t 7,66 8,051 DF 11 11 P-значение <0,0001 <0,0001 Отклонение от нуля? Значимое Значимое Данные Число X значений 4 4 Максимальное число Y повторностей 3 3 Общее число значений 12 12 Число отсутствующих значений 3 3 Тест серий Точки выше линии 2 2 Точки ниже линии 1 1 Число серий 2 2 P-значение (тест серий) 0,6667 0,6667 Отклонение от линейности Незначимое Незначимое Уравнение Y=6,099e-012*X-0,0 Y=5,170e-012*X-0,0

[0327] При использовании модели линейной регрессии, показанной выше, подсчитали, что средние уровни FVIII при инфузии SPK-8011 в дозе 5×10¹¹ вг/кг составят от приблизительно 2,6% до 3,0% от нормальных значений. Однако эта кривая линейной регрессии, по-видимому, недооценивает фактические значения, наблюдаемые у животных при низких и средних дозах, когда уравнение в Таблице 2 используется для обратного вычисления ожидаемых значений экспрессии FVIII при дозах 2×10¹² вг/кг, 3×10¹² вг/кг и 6×10¹² вг/кг (Таблица 3).

Таблица 3

Пилотное GLP Доза FVIII
(интерполяция) FVIII
(фактический) Интерполяция в сравнении с фактическим (%) Доза FVIII
(интерполяция) FVIII
(фактический) Интерполяция в сравнении с фактическим (%) 2E+12 12,2 22,3 54,8 3E+12 15,5 20,3 76,4 6E+12 36,6 61,6 59,4 6E+12 31,0 40,7 76,2 2E+13 122,0 113,5 107,5 1,2E+13 62,0 56,0 110,8

[0328] Возможно, что экспрессия hFVIII может соответствовать линейной зависимости эффекта от дозы при некоторых дозах вектора при достижении насыщения по мере увеличения нагрузки вектора AAV. Когорту высокой дозы исключали из предыдущего анализа, кривую линейной регрессии вычисляли повторно и повторно оценивали предсказанные уровни экспрессии hFVIII при определенной дозе SPK-8011 5×10¹¹ вг/кг (Таблица 4 и Фигура 13).

Таблица 4

Пилотное GLP Значения наилучшего соответствия Наклон 6,099e-012±7,962e-013 5,170e-012±6,421e-013 Y-пересечение, когда X=0,0 0 0 X-пересечение, когда Y=0,0 0 0 1/угол наклона 1,64E+11 1,934E+11 95% доверительные интервалы Наклон 4,346e-012-7,851e-012 3,756e-012-6,583e-012 Критерий соответствия Sy, x 28,93 15,29 Отличается ли наклон значительно от нуля? t 7,66 8,051 DF 11 11 P-значение <0,0001 <0,0001 Отклонение от нуля? Значимое Значимое Данные Число X значений 4 4 Максимальное число Y повторностей 3 3 Общее число значений 12 12 Число отсутствующих значений 12 12 Тест серий Точки выше линии 2 2 Точки ниже линии 1 1 Число серий 2 2 P-значение (тест серий) 0,6667 0,6667 Отклонение от линейности Незначимое Незначимое Уравнение Y=6,099e-012*X-0,0 Y=5,170e-012*X-0,0

[0329] На основе кривых линейной регрессии, показанных на Фигуре 13, средние уровни FVIII при инфузии SPK-8011 в дозе 5×10¹¹ вг/кг по оценкам составили от приблизительно 3,4% до 5,2% от нормальных значений.

ПРИМЕР 6

Схема клинического исследования с участием людей

[0330] Пригодность

- Возраст, подходящий для включения в исследование: 18 лет и старше (взрослые, пожилые)

- Пол, подходящий для включения в исследование: мужчины

- Включение здоровых добровольцев: нет

[0331] Критерии: Критерии включения:

- Мужчины возрастом 18 годы или старше

- Подтвержденный диагноз гемофилии A, засвидетельствованный в их истории болезни, с уровнями активности FVIII в плазме ≤2% от нормальных значений

- Получали в течение >150 дней приема (ED) концентраты FVIII или криопреципитат

- Перенесли >10 событий кровотечения за предыдущие 12 месяцев только при получении терапии при необходимости и наличии исходного уровня FVIII 1-2% от нормальных значений

- Отсутствие ранее зарегистрированных случаев аллергической реакции на какой-либо содержащий FVIII продукт

- Отсутствие какого-либо поддающегося измерению ингибитора против фактора VIII согласно оценке в центральной лаборатории и отсутствие каких-либо ранее зарегистрированных положительных результатов лабораторных исследований на ингибиторы белка FVIII

- Согласие на применение надежной барьерной контрацепции

[0332] Критерии: Критерии исключения:

- Подтвержденный активный гепатит B или C

- Текущее применение противовирусной терапии для лечения гепатита B или C

- Наличие значительного первичного заболевания печени

- Наличие подтвержденного присутствия в сыворотке* ВИЧ-1, или ВИЧ-2 с числом CD4≤200/мм³ (* участники, которые являются ВИЧ+ и имеют стабильное число CD4>200/мм³ и необнаруживаемую вирусную нагрузку, имеют право на участие в исследовании),

- Наличие поддающихся обнаружению антител, реагирующих с капсидом AAV-Spark200

- Участие в исследовании с переносом генов в течение последних 52 недель или в клиническом исследовании с исследуемым препаратом в течение последних 12 недель

ПРИМЕР 7

Ожидаемые уровни FVIII при различных дозах AAV-SPK-8011 (капсид LK03)-hFVIII

[0333] Клиническое исследование NCT03003533 ('Исследование с переносом генов для лечения гемофилии A') является впервые проводящимся у человека исследованием применения капсида AAV, известного как LK03 (SEQ ID NO:27). Исследования на не являющихся человеком приматах показывают, что увеличение доз AAV-SPK-8011(капсид LK03)-hFVIII приводит к повышению уровней циркулирующего человеческого FVIII дозозависимым путем, который, по меньшей мере для некоторых диапазонов дозы, по-видимому, не отклоняется значительно от линейности. Средние стационарные уровни FVIII (± стандартная ошибка среднего) в первой когорте составляли приблизительно 11,7±2,3% от нормальных значений. С учетом того, что n участников в этой когорте дозы составило два, сложно предсказать, будет ли сохраняться относительно низкая вариабельность наблюдаемых уровней FVIII при включении в исследование большего числа участников.

[0334] Недавний опыт применения векторов rAAV для опосредования экспрессии фактора свертывания крови в печени с использованием исследуемого продукта rAAV-FIX для лечения гемофилии B (NCT02484092), может быть полезным референсным материалом для оценки вариабельности в более крупной когорте пациентов. Стационарная экспрессия FIX была достигнута через 12 недель после инфузии вектора rAAV-FIX, что привело к средней активности FIX (FIX:C) приблизительно 33%. Важно отметить, что наиболее высокие уровни FIX:C составляли около 79% (пациент 9), а наиболее низкие уровни составляли около 14% (пациент 7). Следует отметить, что интерпретация активности вектора у пациента 7 была затруднена развитием иммунного ответа против капсида вектора rAAV-FIX, что привело к частичной потере экспрессии FIX перед назначением короткого курса стероидов. Однако пациент 6, у которого не было обнаружено клеточного иммунного ответа, имел стабильные уровни приблизительно 18%. Таким образом, разница между наиболее высоким и наиболее низким уровнями FIX:C в исследовании NCT02484092 была приблизительно 4-кратной. Другие клинические исследования AAV для лечения гемофилии показали значительно более высокую вариабельность (Pasi et al. (2017) Thromb Haemost. 117(3):508-518). В Таблице 5 показаны ожидаемые средние уровни FVIII при различных дозах AAV-SPK-8011(капсид LK03)-hFVIII, указывающие на линейную зависимость эффекта от дозы. Наблюдаемая вариабельность в исследовании гемофилии B использовали в качестве консервативного подхода для оценки вариабельности в исследовании гемофилии А.

Таблица 5

Доза (вг/кг) Предполагаемый минимальный экспрессор Предполагаемое среднее* Предполагаемый максимальный экспрессор 5,00E+11 6 12 24 1,00E+12 12 24 48 2,00E+12 24 48 96 4,00E+12 48 96 192 6,00E+12 96 192 384 * Фактическое среднее значение, наблюдаемое в когорте 5×10¹¹ вг/кг.

ПРИМЕР 8

Результаты клинического исследования с участием людей

[0335] Исследование с повышением дозы проводили с участием двенадцати мужчин с тяжелой (N=11) или умеренно тяжелой (N=1) гемофилией A. Возраст пациентов составлял 18-52 лет. До генотерапии, 8 из 12 пациентов проходили профилактическое лечение, и 4 из 12 пациентов - эпизодическое лечение. Пациенты были зарегистрированы в одной из трех когорт введения дозы и получали инфузию SPK-8011 (AAV-hFVIII, капсид LK03) в дозе 5×10¹¹ вг/кг (N=2, Пациенты 1 и 2), 1×10¹² вг/кг (N=3, Пациенты 3, 4 и 6) или 2×10¹² вг/кг (N=7, Пациенты 5 и 7-12).

[0336] На Фигурах 14-28 показаны данные, полученные в исследовании зависимости эффекта от дозы, 12 пациентов-людей, получавших три разные дозы AAV-SPK-8011(капсид LK03)-hFVIII. Значения активности FVIII, определенной у пациентов, указаны относительно 100% FVIII в нормальной плазме. Как правило, плазму объединяли от большого числа (скажем 50 или 100) здоровых добровольцев и активность FVIII в этой "нормальной смешанной плазме" определяли как 100%. Разведения этой плазмы использовали для построения калибровочной кривой активности FVIII в зависимости от любого анализа, используемого для определения уровней FIX. Эту калибровочную кривую затем использовали для определения количества или процента (%) FVIII в образце пациента с помощью такого же анализа.

[0337] Все дозы вектора приводили к экспрессии уровней FVIII, достаточных для предотвращения кровотечения и позволяющих прекратить профилактику. У 12 пациентов при 3 дозах наблюдали 97% снижение годовой частоты кровотечений (ABR) и 97% снижение годовой частоты инфузий. Данные указывают, что общая кинетика показала постепенное повышение до устойчивого плато FVIII.

[0338] В первой когорте дозы уровни FVIII составляли 14% и 15% в 66 и 51 неделю, без событий кровотечения, без повышения уровней трансаминаз и без применения стероидов. Экспрессия FVIII оставалась стабильной в течение всего периода наблюдения. Данные этой когорты низкой дозы указывают, что даже умеренные уровни FVIII в пределах 15% могут обеспечить предотвращение кровотечения в течение периода последующего наблюдения до 66 недель.

[0339] Во второй когорте дозы уровни FVIII составляли 9%, 26% и 17% в 33, 46 и 31 неделю после инфузии. Первый пациент в этом когорте дозы (Пациент 3) получал инфузию однократной дозы концентрата фактора свертывания при спонтанном гемартрозе в день 159, и второй пациент в этой когорте дозы (Пациент 4) получал многократные инфузии по поводу травматического кровотечения, начинаясь со дня 195. Эти пациенты получали курс стероидов с постепенным снижением дозы, назначенный в 12 и 7 недель после инфузии вектора, что было вызвано снижением уровней FVIII, с окончательной стабилизацией уровней FVIII. Третий пациент в этой когорте дозы (Пациент 6) не имел кровотечений и не получал инфузии фактора свертывания, стероиды также не применяли.

[0340] В третьей когорте дозы (N=7) пять из семи пациентов в настоящий момент имеют уровни FVIII 12% с диапазоном 16-49%; у этих пациентов средний уровень FVIII, начиная с 12 недель после инфузии вектора, составляет 30%, и медиана составляет 22%. Кровотечений у этих пациентов не регистрировали, начиная с 4 недель после инфузии вектора.

[0341] Отдельно пять из 7 на дозе вектора AAV-LK03 (FVIII) 2×10¹² вг/кг получали курс стероидов, инициированный в моменты времени от 6 до 11 недель после инфузии вектора, из-за одного или более из следующего: снижение уровней FVIII, повышение АЛТ выше исходного значения у пациента или повышение IFN-γ согласно анализам ELISPOT на капсид AAV. Начало применения стероидов было связано со снижением АЛТ до диапазона нормальных значений и ослаблением сигнала ELISPOT во всех случаях; два пациента из семи показали ограниченный успех при стабилизации уровней FVIII, упавших на <5%, возможно из-за иммунных ответов. У одного из них кровотечения не регистрировались в течение 12 недель наблюдения после лечения; другой имел 4 кровотечения в течение 37 недель наблюдения после лечения.

[0342] В целом, наблюдали благоприятный профиль безопасности, при этом только у двух пациентов наблюдали повышение АЛТ выше верхней границы нормы. Девяносто один процент (91%) пациентов на сегодняшний день испытали ABR≤1 после инфузии вектора. Все пациенты испытали повышение уровней FVIII после инфузии вектора, однако ограниченный успех в предотвращении снижения уровней FVIII у двух пациентов указывает, что добавление в схему профилактических стероидов может быть оправданным.

[0343] На основе hFVIII уровней, отмеченных у не НЧП, и принимая во внимание, что различные партии векторов могут иметь несколько отличающуюся активность, предполагалось, что средние уровни FVIII у человека после инфузии SPK-8011 в дозе 5×10¹¹ вг/кг могут составить приблизительно около 3,4-5,8%, при условии применения линейной экстраполяции. Активность FVIII у первого пациента достигала плато приблизительно при 9,15±0,53% от нормальных значений и 13,50±0,50% у второго пациента. Таким образом, средняя активность FVIII в когорте низкой дозы составляла приблизительно 11,3%, что в 2-4 раза выше, чем ожидали на основании исследований на не являющихся человеком приматах.

[0344] Существенное 2-4-кратное различие (в зависимости от используемой кривой линейной регрессии) в когорте низкой дозы между ожидаемыми уровнями FVIII на основе доклинических исследований с использованием филогенетически близкого вида, такого как макаки, и фактическими результатами у людей, учавствовавших в исследовании, подчеркивает ограничения существующих моделей на животных при определении доз вектора AAV для человека. Данных, указывающих на существование намного более высокой активности FVIII у людей, чем ожидали на основе активности FVIII у НЧП, которым вводили AAV-SPK-8011 (капсид LK03)-hFVIII, не ожидали.

[0345] Хотя универсальной доклинической модели для определения дозы AAV для человека не существует, предыдущий опыт применения векторов AAV2, AAV8 и AAV-Spk у приматов для опосредования направленной в печени экспрессии фактора свертывания IX показал, что макаки являются хорошей, но не идеальной моделью для прогноза эффективности вектора AAV у человека. Недавно химерные "гуманизированные" мыши, печень которых была частично заселена гепатоцитами человека, стали ценным инструментом для определения эффективности печеночной трансдукции различных вирусных капсидов. В двух независимых исследованиях сообщалось, что измеренная трансдукция в человеческих гепатоцитах обладает преимуществами этой мышиной модели. Сообщали, что наблюдалось приблизительно 10-кратное различие в проценте трансдуцированных человеческих гепатоцитов между LK03 и AAV8 (43,3±11% и 3,6±1,1% с инфузией векторов LK03 и AAV8, соответственно (Lisowski L, et al. Nature 506:382-6 (2014)).

[0346] В конечном итоге, инфузия SPK-8011 у 12 пациентов с тяжелой или умеренно тяжелой гемофилией A привела к безопасной, длительной, дозо-зависимой активности FVIII, ассоциированной с 97% снижением ABR и 97% уменьшением применения рекомбинантного FVIII в течение периода до 66 недель после переноса гена.

ПРИМЕР 9

Промотор TTR

[0347] Свойства промотора транстиретина (TTR) первоначально были описаны в публикации Costa and Grayson 1991, Nucleic Acids Research 19(15):4139-4145. Последовательность промотора TTR являлась модифицированной последовательностью и изменением TATTTGTGTAG на TATTGACTTAG.

Промотор TTR с мутацией 4 нуклеотидов (TTRmut), SEQ ID NO:22

GTCTGTCTGCACATTTCGTAGAGCGAGTGTTCCGATACTCTAATCTCCCTAGGCAAGGTTCATATTGACTTAGGTTACTTATTCTCCTTTTGTTGACTAAGTCAATAATCAGAATCAGCAGGTTTGGAGTCAGCTTGGCAGGGATCAGCAGCCTGGGTTGGAAGGAGGGGGTATAAAAGCCCCTTCACCAGGAGAAGCCGTCACACAGATCCACAAGCTCCT

ПРИМЕР 10

Трансгенные конструкции с уменьшенным содержанием CpG, кодирующие FVIII, и примеры капсидов AAV.

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X01 (SEQ ID NO:1)

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X02 (SEQ ID NO:2)

atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X03 (SEQ ID NO:3)

atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X04 (SEQ ID NO:4)

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X05 (SEQ ID NO:5)

atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X06 (SEQ ID NO:6)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X07 (SEQ ID NO:7)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X08 (SEQ ID NO:8)

atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X09 (SEQ ID NO:9)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X10 (SEQ ID NO:10)

atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X11 (SEQ ID NO:11)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X12 (SEQ ID NO:12)

atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X13 (SEQ ID NO:13)

atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X14 (SEQ ID NO:14)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X15 (SEQ ID NO:15)

atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X16 (SEQ ID NO:16)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X17 (SEQ ID NO:17)

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga

Кодирующий FVIII вариант нуклеиновой кислоты с уменьшенным содержанием CpG X18 (SEQ ID NO:18)

atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga

кДНК фактора VIII-BDD дикого типа (SEQ ID NO:19)

ATGCAAATAG AGCTCTCCAC CTGCTTCTTT CTGTGCCTTT TGCGATTCTG CTTTAGTGCC ACCAGAAGAT ACTACCTGGG TGCAGTGGAA CTGTCATGGG ACTATATGCA AAGTGATCTC GGTGAGCTGC CTGTGGACGC AAGATTTCCT CCTAGAGTGC CAAAATCTTT TCCATTCAAC ACCTCAGTCG TGTACAAAAA GACTCTGTTT GTAGAATTCA CGGATCACCT TTTCAACATC GCTAAGCCAA GGCCACCCTG GATGGGTCTG CTAGGTCCTA CCATCCAGGC TGAGGTTTAT GATACAGTGG TCATTACACT TAAGAACATG GCTTCCCATC CTGTCAGTCT TCATGCTGTT GGTGTATCCT ACTGGAAAGC TTCTGAGGGA GCTGAATATG ATGATCAGAC CAGTCAAAGG GAGAAAGAAG ATGATAAAGT CTTCCCTGGT GGAAGCCATA CATATGTCTG GCAGGTCCTG AAAGAGAATG GTCCAATGGC CTCTGACCCA CTGTGCCTTA CCTACTCATA TCTTTCTCAT GTGGACCTGG TAAAAGACTT GAATTCAGGC CTCATTGGAG CCCTACTAGT ATGTAGAGAA GGGAGTCTGG CCAAGGAAAA GACACAGACC TTGCACAAAT TTATACTACT TTTTGCTGTA TTTGATGAAG GGAAAAGTTG GCACTCAGAA ACAAAGAACT CCTTGATGCA GGATAGGGAT GCTGCATCTG CTCGGGCCTG GCCTAAAATG CACACAGTCA ATGGTTATGT AAACAGGTCT CTGCCAGGTC TGATTGGATG CCACAGGAAA TCAGTCTATT GGCATGTGAT TGGAATGGGC ACCACTCCTG AAGTGCACTC AATATTCCTC GAAGGTCACA CATTTCTTGT GAGGAACCAT CGCCAGGCGT CCTTGGAAAT CTCGCCAATA ACTTTCCTTA CTGCTCAAAC ACTCTTGATG GACCTTGGAC AGTTTCTACT GTTTTGTCAT ATCTCTTCCC ACCAACATGA TGGCATGGAA GCTTATGTCA AAGTAGACAG CTGTCCAGAG GAACCCCAAC TACGAATGAA AAATAATGAA GAAGCGGAAG ACTATGATGA TGATCTTACT GATTCTGAAA TGGATGTGGT CAGGTTTGAT GATGACAACT CTCCTTCCTT TATCCAAATT CGCTCAGTTG CCAAGAAGCA TCCTAAAACT TGGGTACATT ACATTGCTGC TGAAGAGGAG GACTGGGACT ATGCTCCCTT AGTCCTCGCC CCCGATGACA GAAGTTATAA AAGTCAATAT TTGAACAATG GCCCTCAGCG GATTGGTAGG AAGTACAAAA AAGTCCGATT TATGGCATAC ACAGATGAAA CCTTTAAGAC TCGTGAAGCT ATTCAGCATG AATCAGGAAT CTTGGGACCT TTACTTTATG GGGAAGTTGG AGACACACTG TTGATTATAT TTAAGAATCA AGCAAGCAGA CCATATAACA TCTACCCTCA CGGAATCACT GATGTCCGTC CTTTGTATTC AAGGAGATTA CCAAAAGGTG TAAAACATTT GAAGGATTTT CCAATTCTGC CAGGAGAAAT ATTCAAATAT AAATGGACAG TGACTGTAGA AGATGGGCCA ACTAAATCAG ATCCTCGGTG CCTGACCCGC TATTACTCTA GTTTCGTTAA TATGGAGAGA GATCTAGCTT CAGGACTCAT TGGCCCTCTC CTCATCTGCT ACAAAGAATC TGTAGATCAA AGAGGAAACC AGATAATGTC AGACAAGAGG AATGTCATCC TGTTTTCTGT ATTTGATGAG AACCGAAGCT GGTACCTCAC AGAGAATATA CAACGCTTTC TCCCCAATCC AGCTGGAGTG CAGCTTGAGG ATCCAGAGTT CCAAGCCTCC AACATCATGC ACAGCATCAA TGGCTATGTT TTTGATAGTT TGCAGTTGTC AGTTTGTTTG CATGAGGTGG CATACTGGTA CATTCTAAGC ATTGGAGCAC AGACTGACTT CCTTTCTGTC TTCTTCTCTG GATATACCTT CAAACACAAA ATGGTCTATG AAGACACACT CACCCTATTC CCATTCTCAG GAGAAACTGT CTTCATGTCG ATGGAAAACC CAGGTCTATG GATTCTGGGG TGCCACAACT CAGACTTTCG GAACAGAGGC ATGACCGCCT TACTGAAGGT TTCTAGTTGT GACAAGAACA CTGGTGATTA TTACGAGGAC AGTTATGAAG ATATTTCAGC ATACTTGCTG AGTAAAAACA ATGCCATTGA ACCAAGAAGC TTCTCCCAAA ACCCACCAGT CTTGAAACGC CATCAACGGG AAATAACTCG TACTACTCTT CAGTCAGATC AAGAGGAAAT TGACTATGAT GATACCATAT CAGTTGAAAT GAAGAAGGAA GATTTTGACA TTTATGATGA GGATGAAAAT CAGAGCCCCC GCAGCTTTCA AAAGAAAACA CGACACTATT TTATTGCTGC AGTGGAGAGG CTCTGGGATT ATGGGATGAG TAGCTCCCCA CATGTTCTAA GAAACAGGGC TCAGAGTGGC AGTGTCCCTC AGTTCAAGAA AGTTGTTTTC CAGGAATTTA CTGATGGCTC CTTTACTCAG CCCTTATACC GTGGAGAACT AAATGAACAT TTGGGACTCC TGGGGCCATA TATAAGAGCA GAAGTTGAAG ATAATATCAT GGTAACTTTC AGAAATCAGG CCTCTCGTCC CTATTCCTTC TATTCTAGCC TTATTTCTTA TGAGGAAGAT CAGAGGCAAG GAGCAGAACC TAGAAAAAAC TTTGTCAAGC CTAATGAAAC CAAAACTTAC TTTTGGAAAG TGCAACATCA TATGGCACCC ACTAAAGATG AGTTTGACTG CAAAGCCTGG GCTTATTTCT CTGATGTTGA CCTGGAAAAA GATGTGCACT CAGGCCTGAT TGGACCCCTT CTGGTCTGCC ACACTAACAC ACTGAACCCT GCTCATGGGA GACAAGTGAC AGTACAGGAA TTTGCTCTGT TTTTCACCAT CTTTGATGAG ACCAAAAGCT GGTACTTCAC TGAAAATATG GAAAGAAACT GCAGGGCTCC CTGCAATATC CAGATGGAAG ATCCCACTTT TAAAGAGAAT TATCGCTTCC ATGCAATCAA TGGCTACATA ATGGATACAC TACCTGGCTT AGTAATGGCT CAGGATCAAA GGATTCGATG GTATCTGCTC AGCATGGGCA GCAATGAAAA CATCCATTCT ATTCATTTCA GTGGACATGT GTTCACCGTA CGAAAAAAAG AGGAGTATAA AATGGCACTG TACAATCTCT ATCCAGGTGT TTTTGAGACA GTGGAAATGT TACCATCCAA AGCTGGAATT TGGCGGGTGG AATGCCTTAT TGGCGAGCAT CTACATGCTG GGATGAGCAC ACTTTTTCTG GTGTACAGCA ATAAGTGTCA GACTCCCCTG GGAATGGCTT CTGGACACAT TAGAGATTTT CAGATTACAG CTTCAGGACA ATATGGACAG TGGGCCCCAA AGCTGGCCAG ACTTCATTAT TCCGGATCAA TCAATGCCTG GAGCACCAAG GAGCCCTTTT CTTGGATCAA GGTGGATCTG TTGGCACCAA TGATTATTCA CGGCATCAAG ACCCAGGGTG CCCGTCAGAA GTTCTCCAGC CTCTACATCT CTCAGTTTAT CATCATGTAT AGTCTTGATG GGAAGAAGTG GCAGACTTAT CGAGGAAATT CCACTGGAAC CTTAATGGTC TTCTTTGGCA ATGTGGATTC ATCTGGGATA AAACACAATA TTTTTAACCC TCCAATTATT GCTCGATACA TCCGTTTGCA CCCAACTCAT TATAGCATTC GCAGCACTCT TCGCATGGAG TTGATGGGCT GTGATTTAAA TAGTTGCAGC ATGCCATTGG GAATGGAGAG TAAAGCAATA TCAGATGCAC AGATTACTGC TTCATCCTAC TTTACCAATA TGTTTGCCAC CTGGTCTCCT TCAAAAGCTC GACTTCACCT CCAAGGGAGG AGTAATGCCT GGAGACCTCA GGTGAATAAT CCAAAAGAGT GGCTGCAAGT GGACTTCCAG AAGACAATGA AAGTCACAGG AGTAACTACT CAGGGAGTAA AATCTCTGCT TACCAGCATG TATGTGAAGG AGTTCCTCAT CTCCAGCAGT CAAGATGGCC ATCAGTGGAC TCTCTTTTTT CAGAATGGCA AAGTAAAGGT TTTTCAGGGA AATCAAGACT CCTTCACACC TGTGGTGAAC TCTCTAGACC CACCGTTACT GACTCGCTAC CTTCGAATTC ACCCCCAGAG TTGGGTGCAC CAGATTGCCC TGAGGATGGA GGTTCTGGGC TGCGAGGCAC AGGACCTCTA CTGA

кДНК фактора VIII V3 (SEQ ID NO:20)

ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTGCCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGGGGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCTCTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGCCCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGGTGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACTGGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACAAGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGGCCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGAACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCCAGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTGAAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGCACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTGTGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCCACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGACTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACCAGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGATGAAGAACAATGAGGAGGCTGAGGACTATGATGATGACCTGACTGACTCTGAGATGGATGTGGTGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACCCCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGCTGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCAGGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCATCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGATCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGAGGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGCCTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACCCCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGTCTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTGAGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGGCCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCCTGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGTTCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCTTCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACAACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACACTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATGCCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAACAGCAGGCACCCCAGCACCAGGCAGAAGCAGTTCAATGCCACCACCATCCCTGAGAATGACATAGAGAAGACAGACCCATGGTTTGCCCACCGGACCCCCATGCCCAAGATCCAGAATGTGAGCAGCTCTGACCTGCTGATGCTGCTGAGGCAGAGCCCCACCCCCCATGGCCTGAGCCTGTCTGACCTGCAGGAGGCCAAGTATGAAACCTTCTCTGATGACCCCAGCCCTGGGGCCATTGACAGCAACAACAGCCTGTCTGAGATGACCCACTTCAGGCCCCAGCTGCACCACTCTGGGGACATGGTGTTCACCCCTGAGTCTGGCCTGCAGCTGAGGCTGAATGAGAAGCTGGGCACCACTGCTGCCACTGAGCTGAAGAAGCTGGACTTCAAAGTCTCCAGCACCAGCAACAACCTGATCAGCACCATCCCCTCTGACAACCTGGCTGCTGGCACTGACAACACCAGCAGCCTGGGCCCCCCCAGCATGCCTGTGCACTATGACAGCCAGCTGGACACCACCCTGTTTGGCAAGAAGAGCAGCCCCCTGACTGAGTCTGGGGGCCCCCTGAGCCTGTCTGAGGAGAACAATGACAGCAAGCTGCTGGAGTCTGGCCTGATGAACAGCCAGGAGAGCAGCTGGGGCAAGAATGTGAGCACCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGAAACCAAGAGCTGGTACTTCACTGAGAACATGGAGAGGAACTGCAGGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCATCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCTTCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGGCCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCAAGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGGACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGAAGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATGGCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGA

кДНК фактора VIII CO3 (SEQ ID NO:21)

atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga

Полноразмерная кассета, включающая мутантный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК фактора VIII с уменьшенным содержанием CpG, поли-A и ITR-повторы (SEQ ID NO:23)

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg

Полноразмерная плазмида, включающая мутантный промотор TTR (TTRmut), синтетический интрон, кДНК фактора VIII с уменьшенным содержанием CpG, поли-A и ITR-повторы (SEQ ID NO:24)

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt

FVIII-BDD, кодируемый последовательностями нуклеиновых кислот X01-X18. Последовательность SQ выделена полужирным/подчеркнута (SEQ ID NO:25)

MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY

FVIII дикого типа с BDD (SEQ ID NO:26)

MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFPFNTSVVYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTVVITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCHRKSVYWHVIGMGTTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDVVRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDPEFQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLTLFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLRQSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLRLNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTLFGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSTESGRLFKGKRAHGPALLTKDNALFKVSISLLKTNKTSNNSATNRKTHIDGPSLLIENSPSVWQNILESDTEFKKVTPLIHDRMLMDKNATALRLNHMSNKTTSSKNMEMVQQKKEGPIPPDAQNPDMSFFKMLFLPESARWIQRTHGKNSLNSGQGPSPKQLVSLGPEKSVEGQNFLSEKNKVVVGKGEFTKDVGLKEMVFPSSRNLFLTNLDNLHENNTHNQEKKIQEEIEKKETLIQENVVLPQIHTVTGTKNFMKNLFLLSTRQNVEGSYDGAYAPVLQDFRSLNDSTNRTKKHTAHFSKKGEEENLEGLGNQTKQIVEKYACTTRISPNTSQQNFVTQRSKRALKQFRLPLEETELEKRIIVDDTSTQWSKNMKHLTPSTLTQIDYNEKEKGAITQSPLSDCLTRSHSIPQANRSPLPIAKVSSFPSIRPIYLTRVLFQDNSSHLPAASYRKKDSGVQESSHFLQGAKKNNLSLAILTLEMTGDQREVGSLGTSATNSVTYKKVENTVLPKPDLPKTSGKVELLPKVHIYQKDLFPTETSNGSPGHLDLVEGSLLQGTEGAIKWNEANRPGKVPFLRVATESSAKTPSKLLDPLAWDNHYGTQIPKEEWKSQEKSPEKTAFKKKDTILSLNACESNHAIAAINEGQNKPEIEVTWAKQGRTERLCSQNPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKVVFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQYGQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYSLDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY

Капсид AAV-LK03 VP1 (SEQ ID NO:27)

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL

Капсид AAV-SPK VP1 (SEQ ID NO:28), используемый в AAV-SPK-8005 и AAV-SPK-hFIX

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL

Матрица процента идентичности векторов hFVIII (WT, CO3, X09, X02, X06, X08, X15, X05, X18, X14, X01, X12, X04, X11, X07, X03, X16, X13, X17 и X10)

hFVIII WT hFVIII CO3 hFVIII X09 hFVIII X02 hFVIII X06 hFVIII X08 hFVIII X15 hFVIII X05 hFVIII X18 hFVIII X14 hFVIII X01 hFVIII X12 hFVIII X04 hFVIII X11 hFVIII X07 hFVIII X03 hFVIII X16 hFVIII X13 hFVIII X17 hFVIII X10 hFVIII WT 77,2 79,5 79,1 79,3 79,2 79,3 79,1 79 79,6 79,6 79,4 79,4 79,4 79,2 79,4 79,1 79 79,6 79,3 hFVIII CO3 77,2 81,9 81,9 81,5 81,3 81,6 81,6 81,2 81,4 81,1 81,1 81,3 81,7 81,8 81,6 81,9 81,8 82,1 82,2 hFVIII X09 79,5 81,9 91,5 91,4 91,8 92 91,8 91 91,4 91,5 91,5 91,7 91,7 92,2 91,5 92,1 91,8 91,1 91,6 hFVIII X02 79,1 81,9 91,5 91,4 91,3 92 92,1 92,2 91,7 92 91,9 91,9 92 91,5 91 91,5 92,3 91,9 92,1 hFVIII X06 79,3 81,5 91,4 91,4 91,8 91,9 91,8 91,5 91,8 92,3 91,7 91,8 92 91,5 91,4 91,7 92,4 91,6 91,8 hFVIII X08 79,2 81,3 91,8 91,3 91,8 91,8 91,5 91,5 91,8 92,2 91,5 92,3 92,5 92 91,7 91,4 92,3 91,6 91,9 hFVIII X15 79,3 81,6 92 92 91,9 91,8 92,2 91,6 91,7 92,3 92,1 92,2 92,5 92 92,1 92,2 92,3 92,5 92 hFVIII X05 79,1 81,6 91,8 92,1 91,8 91,5 92,2 92,5 91,9 92,7 92,4 92,1 91,5 92,1 91,6 91,7 92,3 91,9 92 hFVIII X18 79 81,2 91 92,2 91,5 91,5 91,6 92,5 91,6 93 92,1 91,5 91,8 91,7 91,4 91,1 91,8 91,8 92 hFVIII X14 79,6 81,4 91,4 91,7 91,8 91,8 91,7 91,9 91,6 93 92 91,6 91,8 91,3 91,8 92,3 92,2 91,8 92 hFVIII X01 79,6 81,1 91,5 92 92,3 92,2 92,3 92,7 93 93 93,4 92,3 92,5 92,6 92,5 92,2 92,6 92,4 92,1 hFVIII X12 79,4 81,1 91,5 91,9 91,7 91,5 92,1 92,4 92,1 92 93,4 92 92 92,4 92,4 91,7 92,4 92,6 92,6 hFVIII X04 79,4 81,3 91,7 91,9 91,8 92,3 92,2 92,1 91,5 91,6 92,3 92 92,6 92 91,5 91,5 92 91,9 92,5 hFVIII X11 79,4 81,7 91,7 92 92 92,5 92,5 91,5 91,8 91,8 92,5 92 92,6 92,6 92 91,9 92,3 91,8 91,9 hFVIII X07 79,2 81,8 92,2 91,5 91,5 92 92 92,1 91,7 91,3 92,6 92,4 92 92,6 92,1 92 92,4 91,9 92,7 hFVIII X03 79,4 81,6 91,5 91 91,4 91,7 92,1 91,6 91,4 91,8 92,5 92,4 91,5 92 92,1 92 92,7 92,1 91,6 hFVIII X16 79,1 81,9 92,1 91,5 91,7 91,4 92,2 91,7 91,1 92,3 92,2 91,7 91,5 91,9 92 92 92,4 92 92,8 hFVIII X13 79 81,8 91,8 92,3 92,4 92,3 92,3 92,3 91,8 92,2 92,6 92,4 92 92,3 92,4 92,7 92,4 92,4 92,8 hFVIII X17 79,6 82,1 91,1 91,9 91,6 91,6 92,5 91,9 91,8 91,8 92,4 92,6 91,9 91,8 91,9 92,1 92 92,4 92,9 hFVIII X10 79,3 82,2 91,6 92,1 91,8 91,9 92 92 92 92 92,1 92,6 92,5 91,9 92,7 91,6 92,8 92,8 92,9

Некоторые используемые определения/сокращения

BDD: удален весь или, по меньшей мере, часть B-домена (BD)

FVIII-BDD: FVIII с делецией B-домена

SQ: SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29)

FVIII/SQ: FVIII с SQ

FVIIIX01-X18: кодирующие FVIII варианты нуклеиновых кислот с уменьшенным содержанием CpG, представленные как SEQ ID NO:1-18, соответственно.

TTRmut: промотор TTR с 4 мутациями, с изменением TAmGTGTAG на TATTGACTTAG

CO3: кодон-оптимизированный вариант нуклеиновой кислоты FVIII, представленный как SEQ ID NO:21

НЧП: не относящийся к человеку примат

АЛТ: аланинаминотрансфераза

D-димер: фрагмент белка, образующийся в результате разрушения тромба

SPK-8005: капсид AAV (SEQ ID NO:28) + TTRmut-hFVIII-X07; также называемый AAV-SPK-8005

SPK-8011: капсид AAV LK03 (SEQ ID NO:27) + TTRmut-hFVIII-X07; также называемый AAV-SPK-8011

[0348] Хотя некоторые из вариантов осуществления изобретения были описаны и конкретно представлены в качестве примеров выше, изобретение не должно быть ограничено такими вариантами осуществления. Различные модификации могут быть внесены в него без отступления от объема и сущности изобретения, как изложено в следующей формуле изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> SPARK THERAPEUTICS, INC.

ANGUELA , Xavier

<120> СПОСОБЫ ГЕНОТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНА ФАКТОРА VIII (FVIII)

<130> 023637-0460703

<140> PCT/US2018/044892

<141> 2018-08-01

<150> 62/540,053

<151> 2017-08-01

<150> 62/583,890

<151> 2017-11-09

<150> 62/596,535

<151> 2017-12-08

<150> 62/596,670

<151> 2017-12-08

<160> 29

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 1

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaat 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gttcaacatt 240

gctaaaccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccta ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcactct gaagaacatg gctagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtctg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatcct ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgtagggag 600

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcattctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt caataggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900

agacaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agtttctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140

gatgacaatt ctcccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaaa ccttcaagac cagagaggcc 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ctctgtacag cagaaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccca 1620

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgaatt ccaggcctct aacatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttt cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctatctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggagc 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag aactactctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gattttgata tttatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagctttca gaagaagact 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttat 2820

ttctggaagg tgcagcacca tatggccccc accaaggatg agtttgattg caaagcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt taaggaaaat 3120

tataggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa cattcacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtattcta acaagtgtca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcattac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagccattca gctggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccaa tgattatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagcagc 3660

ctgtacatct ctcagtttat catcatgtac tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccccacccat 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 2

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 2

atgcagattg agctgtctac ctgctttttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaat 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg gggagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaatcat 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatt acctttctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttttgccac atcagctctc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaaa tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag aattgggagg 1320

aagtataaga aggtgagatt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat tctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tttaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga agatggcccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactactctt cttttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggctc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt taagcataag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gtcttcttgt gacaagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccagatct 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaaaaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgactttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctatagcttc tacagctctc tgatcagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgtc ataccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg acccaacctt caaagagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccatagc 3240

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgccaagcaa ggctgggatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccaa agctggccag gctgcactat 3540

tctgggagca tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggattaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaaa acccaggggg ctagacagaa gttttctagc 3660

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccattatt gccaggtata tcaggctgca tcccacccac 3840

tattctatta ggtctactct gagaatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgtagc 3900

atgcccctgg ggatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgctt ggaggcccca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt cttccagggg aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc cccccctgct gactaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 3

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 3

atgcagattg aactgtctac ttgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60

actaggaggt actatctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggtttccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240

gccaagccaa ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac ctctcagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggctctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780

ctgccaggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggg 840

actacccctg aggtccacag cattttcctg gaggggcata cctttctggt gaggaaccac 900

aggcaggcct ctctggagat ctctcccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgataaca gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcctct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattatct ttaagaacca ggctagcagg ccctacaaca tttaccccca tggcattact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttc 1560

cccattctgc ctggggagat ctttaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

actaagtctg atcccaggtg tctgaccaga tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaatc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aatatcatgc acagcattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggatactct gaccctgttt cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagctcttgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280

ttctctcaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcactag gactaccctg 2340

cagtctgacc aggaagagat tgactatgat gacaccatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgaaaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag ctcttctccc 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtcccac agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacattat ggtgactttc 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggctccc actaaagatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940

ctggtctgcc atactaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag accaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggct ctaatgagaa cattcattct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtctatagca ataagtgcca gacccccctg gggatggcct ctgggcatat cagagacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggatcaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtaca tcagactgca ccccactcat 3840

tacagcatca ggagcactct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa tagctgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc ctcttcttac 3960

ttcactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc accagtggac cctgtttttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gctttactcc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gactaggtac ctgaggattc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 4

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 4

atgcagattg agctgtctac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60

actaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgtcctggg actacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccctttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcacct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780

ctgcctgggc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca cttttctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttttgccat atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020

gcttatgtga aggtggactc ttgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgaa 1080

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt tatccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaagag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gtctcagtac ctgaacaatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg aatctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttatcctca tggcattact 1500

gatgtgagac ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagaga aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggcctct aacattatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt taagcataag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc caggcctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggat 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga atcctcctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460

agacactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctcttctccc 2520

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ctagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtctgcc acaccaatac tctgaaccct gctcatggga gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagtcct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggaaaat 3120

tataggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gaccccactg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480

cagattactg cctctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcactac 3540

tctgggagca tcaatgcctg gtctactaag gagcctttct cttggatcaa agtggacctg 3600

ctggccccta tgatcatcca tgggatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatt 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccctacccac 3840

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg ggatggagag caaggccatt tctgatgctc agatcactgc ttctagctac 3960

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcta gactgcacct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaataat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 5

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 5

atgcagattg agctgtctac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgatcatct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcctccttg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagtcctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtgcactc tattttcctg gagggccata ctttcctggt gaggaaccat 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020

gcttatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

ccagatgaca ggagctacaa gtcccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttat actgatgaga ctttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgattatct tcaagaacca ggcttctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggatttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gatctggctt ctgggctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggatactct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaacagaggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccagaagc 2280

ttttctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gatactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagact 2460

aggcactact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgtc tagctctcct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agtttaaaaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag ctttacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tggggcctta cattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

aggaatcagg ccagcaggcc ctactctttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcttacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ttgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tacaggtttc atgccattaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggga gcaatgagaa catccacagc 3240

attcacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagacttt 3480

cagattactg cctctggcca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggctcta ttaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctcttct 3660

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac tccctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcataata tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcctctgg gcatggagag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcaggggagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgtttttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggg aaccaggaca gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggatcc accctcagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 6

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 6

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccct cccagggtgc ccaagtcttt ccccttcaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcctccctg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaaaaatatg gctagccacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaagagaatg gccccatggc ttctgatccc ctgtgtctga cctatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtctatt ggcatgtgat tggcatgggc 840

actactcctg aggtgcacag catctttctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgtcac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaatt ctcctagctt cattcagatc agatctgtgg ccaaaaagca tcctaagact 1200

tgggtgcatt atattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tgggattact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560

cctatcctgc ctggggaaat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg atcccaggtg tctgaccagg tattatagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggccctctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta tatcctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg tttttttctg ggtatacttt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gataagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg acatttctgc ctatctgctg tctaagaaca atgccattga acccaggagc 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg aaatcaccag aactactctg 2340

cagtctgatc aggaggaaat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccaa ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520

catgtgctga gaaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgaacc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaatatg 3060

gagaggaatt gcagggcccc ctgcaatatt cagatggaag accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccattaa tggctacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgccttctaa ggctggcatt 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcatat cagggatttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccaa agctggctag gctgcactac 3540

tctgggagca tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgattatcca tgggattaag actcaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat tatcatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacctat 3720

aggggcaact ctactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccatcatt gccaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840

tacagcatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgtagc 3900

atgcctctgg gcatggagtc taaggccatt tctgatgccc agattactgc tagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020

tctaatgctt ggaggcccca ggtgaacaac ccaaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agtctctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctctagcagc caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aatcaggata gcttcactcc agtggtgaac 4260

agcctggatc cccctctgct gactaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ctga 4374

<210> 7

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 7

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggttcccc cccagggtgc ccaagagctt cccctttaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgtagggag 600

ggcagcctgg ctaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt ttatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcttg gcctaagatg cacactgtga atgggtatgt gaataggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

accacccctg aggtccatag catcttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900

agacaggcct ctctggagat ctctcccatc accttcctga ctgctcagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttttgccat attagcagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgaag actatgatga tgacctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt cattcagatc aggtctgtgg ccaagaaaca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaagag gactgggact atgctcccct ggtgctggcc 1260

cctgatgata ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaaaac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctggcat cctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctatcctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactattcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tgggcccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatatcatgc atagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaatc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaact ctgattttag gaacaggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ttatctgctg tctaagaata atgccattga gcccagaagc 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga catcagaggg agatcaccag aactaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagctttca gaagaagacc 2460

agacattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tggggcctta tatcagggct gaggtggagg ataatattat ggtgactttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacctac 2820

ttctggaagg tccagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtccatt ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtccaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtactttac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagagctcc ttgcaatatt cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccacagc 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagctct 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggga atgtggactc ttctggcatc 3780

aagcacaaca tcttcaatcc ccccatcatt gctaggtata ttaggctgca tcccacccac 3840

tacagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc tctaaggcca ggctgcatct gcaggggagg 4020

agcaatgcct ggaggcctca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtca agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccagatac ctgaggatcc acccccagtc ttgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggatctgta ctga 4374

<210> 8

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 8

atgcagattg agctgagcac ttgctttttt ctgtgcctgc tgaggttttg tttttctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcccttcaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gctaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtctctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagaga 420

gagaaggagg atgacaaggt cttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggaaaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta tctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctgggc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gaaggccaca ctttcctggt gaggaaccat 900

aggcaggcca gcctggagat cagccctatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gagcctcagc tgaggatgaa aaacaatgaa 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gagatttgat 1140

gatgacaata gccctagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcatt acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgctcctct ggtgctggcc 1260

cctgatgata ggagctacaa gagccagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctatcccca tgggatcact 1500

gatgtgagac ctctgtacag caggaggctg cccaaggggg tcaagcatct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat ctttaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggaatc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgaaaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtc 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt ctttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgatttcag gaataggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagctcttgt gacaagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

tttagccaga atcctcctgt cctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gataccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctcct 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa agtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cctctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacttac 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc ataccaatac tctgaaccct gctcatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgctctgt tcttcactat ctttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaatatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt taaggagaac 3120

tataggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg agaaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaatctgt accctggggt ctttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacat ctgcatgctg ggatgtctac tctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccatat cagggacttt 3480

cagattactg cctctgggca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcattat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gtctactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gtttagctct 3660

ctgtacatta gccagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctggcatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccctatcatt gctaggtaca tcaggctgca tcccacccat 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatt tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcactaaca tgtttgccac ctggtctccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac tctgtttttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcactcc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtat ctgaggattc acccccagtc ttgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 9

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 9

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgtctgc tgagattttg cttttctgcc 60

actaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttccca cctagggtgc ctaagagctt tcccttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccta ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccta ccatccaggc tgaagtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gagaaggaag atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtctg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggatct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag ggaagagctg gcactctgag actaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaatagaagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aggtgcatag catcttcctg gaaggccata ccttcctggt gaggaatcat 900

aggcaggctt ctctggaaat ttctcccatc actttcctga ctgctcagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagctctc accagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt caggtttgat 1140

gatgacaata gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccctct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt tatggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggcctctagg ccctacaata tctaccctca tggcatcact 1500

gatgtgagac ccctgtatag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gatctggcct ctgggctgat tggcccactg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgaa 1800

aataggtctt ggtatctgac tgagaacatc cagaggtttc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt tcaggcctct aatatcatgc attctatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacttt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggaaaatc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaatt ctgacttcag gaataggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggatta ctatgaggac 2220

tcttatgaag atatctctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gattttgaca tttatgatga ggatgagaac cagtctccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcattact ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atgggatgag cagctctcct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ctagcaggcc ttacagcttt tacagcagcc tgatctctta tgaagaagac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacttat 2820

ttttggaagg tgcagcatca catggctcct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcctactttt ctgatgtgga tctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccctctg 2940

ctggtgtgcc atactaacac tctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ttttgatgag accaagtctt ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggctcc ctgcaacatc cagatggaag accccacctt caaggagaac 3120

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420

gtgtatagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccatat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcactaag gagccttttt cttggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccta tgattattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacatct ctcagttcat cattatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggga atgtggactc ttctgggatc 3780

aagcacaaca tctttaaccc ccccatcatt gccaggtata ttaggctgca ccccacccac 3840

tacagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa ttcttgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctcct agcaaggcca ggctgcatct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gacctctatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gctttacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc ctcctctgct gaccagatac ctgaggatcc atcctcagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 10

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 10

atgcagattg agctgagcac ttgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttttctgct 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt tcctttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctggggccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattaccct gaagaacatg gctagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gaaaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccata cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggatct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ctaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcttg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctggggc agtttctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt catccagatt aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggtcttataa gagccagtac ctgaacaatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcttac actgatgaga ccttcaagac tagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tttaccctca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaggatttt 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg atcccaggtg cctgactagg tactactctt cttttgtgaa tatggagagg 1680

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtc 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgattctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta catcctgtct 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcataag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctggcctgtg gatcctgggc tgtcataact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg atatctctgc ttatctgctg agcaagaata atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gactaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagtccccca ggtctttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc ttttacccag cctctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttc 2700

agaaaccagg cctctaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca tatggcccct actaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcttattttt ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcactat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagagaaatt gtagggctcc ctgcaatatc cagatggagg accccacctt caaagaaaat 3120

tacagattcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctgggct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ctaatgagaa catccactct 3240

atccatttct ctggccatgt gttcactgtg agaaagaagg aggagtataa gatggctctg 3300

tacaacctgt acccaggggt gtttgagact gtggaaatgc tgcccagcaa agctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttt 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca ttaatgcttg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacattt ctcagttcat catcatgtac agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggca atgtggatag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaatcc ccccattatt gccaggtaca ttaggctgca tcctactcac 3840

tactctatta ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgttct 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

ttcactaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggatc ctcccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgaggatgga agtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 11

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 11

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc taggttccct cccagggtgc ccaagagctt cccctttaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa aaccctgttt gtggagttca ctgaccatct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcattaccct gaagaacatg gcttctcacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctactctta tctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggctctctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtc 660

tttgatgagg gcaagagctg gcattctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaaaatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca cctttctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa aaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaata gccccagctt tattcagatt aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgcccctct ggtcctggcc 1260

cctgatgata ggtcttacaa gagccagtat ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccttataaca tctaccctca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc tagaaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggatttt 1560

cccatcctgc ctggggagat tttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgaccagg tactacagct cttttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aacaggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaaccc agctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aatattatgc atagcattaa tggctatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcataag 2040

atggtgtatg aggacaccct gactctgttc cctttttctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaatc ctggcctgtg gatcctgggc tgccataatt ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaagt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaagac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga accccccagt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gactaccctg 2340

cagtctgacc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tttatgatga ggatgagaat cagagcccca ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcactatt ttattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagctctccc 2520

catgtgctga ggaatagggc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta tatcagggct gaggtggagg acaatattat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tatagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaat tttgtgaagc ctaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcatca catggccccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa tatccatagc 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtc aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tataatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgtttctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gtctaccaag gagccctttt cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat catcatgtac agcctggatg gcaaaaagtg gcagacctac 3720

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc tcccatcatt gctaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tatagcatca ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc caaagctatc tctgatgccc agattactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggtctccc tctaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aaaactatga aggtgactgg ggtgaccacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac tctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

tctctggatc cccccctgct gaccaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ttga 4374

<210> 12

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 12

atgcagattg agctgtctac ttgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt attacctggg ggctgtggag ctgagctggg attacatgca gtctgatctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gaccctgttt gtggagttca ctgatcatct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ctatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt ctgtagggaa 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt ttattctgct gtttgctgtg 660

tttgatgaag gcaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacagaagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtatt ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aagtgcacag cattttcctg gagggccaca ctttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcct ctctggagat cagccccatt actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaataatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgataata gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca tcccaagacc 1200

tgggtgcact atattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggagctataa gagccagtat ctgaacaatg ggccccagag gattgggagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat tctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacactctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctacaata tttaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accctaggtg tctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agattatgtc tgataagagg aatgtcatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtatctgac tgagaacatt cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctattaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt tctgtctgtg tttttctctg ggtacacctt caagcacaag 2040

atggtctatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggaaactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgactttag gaataggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggatta ctatgaggac 2220

agctatgagg atatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactatt tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattta ctgatggcag ctttacccag cccctgtaca gaggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg cctctaggcc ctattctttt tacagcagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttttggaaag tgcagcacca catggccccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctatttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac tctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagagcccc ttgcaacatc cagatggagg accctacctt caaggagaac 3120

tataggttcc atgccatcaa tgggtacatc atggataccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg agcatgggga gcaatgagaa cattcatagc 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtataa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagggacttc 3480

cagattactg cctctgggca gtatgggcag tgggccccca agctggccag gctgcactac 3540

tctgggtcta tcaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggatctg 3600

ctggccccca tgatcattca tgggatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtatattt ctcagttcat catcatgtat tctctggatg gcaaaaagtg gcagacctat 3720

agagggaaca gcactgggac cctgatggtg ttttttggca atgtggatag ctctggcatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgctct 3900

atgcctctgg ggatggaaag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ttggagccct agcaaggcta ggctgcatct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aagtgactgg ggtgaccacc cagggggtga aaagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gtttcagggc aatcaggata gcttcacccc agtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 13

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 13

atgcagattg agctgagcac ctgctttttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180

acctctgtgg tgtataagaa gactctgttt gtggagttca ctgatcacct gttcaatatt 240

gccaagccca ggcccccttg gatgggcctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tcatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttcccaggg gggtctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgaccct ctgtgcctga cttatagcta cctgtctcat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

gggagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaata gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ctagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattgggtg tcacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840

actactccag aagtgcacag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaatcac 900

aggcaggcca gcctggagat ttctcccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctggggc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc atcagcatga tgggatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagcctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctcccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgctcccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gagccagtat ctgaataatg ggccccagag gattggcagg 1320

aagtataaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga cctttaagac cagggaggct 1380

attcagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataaca tctatcccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggaggctg cccaaggggg tcaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgactagg tactacagca gctttgtgaa catggagaga 1680

gatctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaagagtc tgtggatcag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacagaagct ggtacctgac tgagaacatt cagaggtttc tgcccaaccc tgctggggtc 1860

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta tatcctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggataccct gaccctgttc cctttctctg gggaaactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggg tgccacaatt ctgatttcag gaacagaggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga acccaggtct 2280

ttcagccaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccatct ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatggcag cttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tgggccccta catcagggct gaggtggagg acaacatcat ggtgaccttc 2700

agaaatcagg ctagcaggcc ctacagcttc tacagcagcc tgatctctta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggccccc accaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccctctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaatcct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tctttactat ctttgatgag accaagtctt ggtattttac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120

tacagattcc atgccatcaa tggctacatt atggacactc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggatcaggtg gtacctgctg tctatgggca gcaatgagaa cattcactct 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtacagca acaagtgcca gacccccctg ggcatggcct ctggccacat cagagatttt 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggctccta agctggccag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttta gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tggcatcaag actcaggggg ccaggcagaa gttctctagc 3660

ctgtacatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaaca gcactgggac cctgatggtg ttctttggga atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcacaata tcttcaaccc ccccattatt gccaggtata ttaggctgca ccccactcac 3840

tacagcatta ggagcaccct gaggatggag ctgatgggct gtgatctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc taaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggatttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat cagctctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggact ctttcacccc tgtggtgaat 4260

tctctggacc ctcccctgct gactaggtat ctgaggattc atccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 14

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 14

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttttg cttttctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg attacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc ccaagggtgc ccaagtcttt tcccttcaat 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgatcatct gtttaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaatatg gccagccatc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt attggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcctatggc ctctgaccca ctgtgcctga cttacagcta tctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggg ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcatag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcta gcctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atctctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgtcctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gattctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gcccctcttt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctataa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag aattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctat actgatgaga ccttcaaaac cagggaggcc 1380

attcagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggctagcagg ccttacaaca tctaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttt 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctgggctgat tggccccctg ctgatctgtt acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgataagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagagattcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg atcctgagtt ccaggccagc aacatcatgc attctatcaa tgggtatgtg 1920

tttgatagcc tgcagctgtc tgtgtgtctg catgaggtgg cctactggta cattctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacttt caaacacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gtttatgagc 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtcttcttgt gataagaaca ctggggacta ttatgaagac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaata atgctattga gcccaggtct 2280

ttctctcaga acccccctgt gctgaagagg caccagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactattt ctgtggagat gaagaaggaa 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccta ggagcttcca gaagaagact 2460

aggcattact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag cagcagcccc 2520

catgtgctga ggaatagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggaattca ctgatggcag cttcactcag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctggggctgc tgggccctta catcagggct gaggtggagg acaatatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg cctctaggcc ttacagcttc tactctagcc tgatctctta tgaagaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac taagacttac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc accaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctgggctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acactaacac tctgaatcct gcccatggca gacaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tttttaccat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg atcccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggaccaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa tatccactct 3240

atccacttct ctgggcatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tataacctgt atcctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctggcatc 3360

tggagagtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac tctgtttctg 3420

gtgtatagca acaagtgtca gacccctctg ggcatggcct ctgggcacat tagggacttt 3480

cagatcactg cttctggcca gtatgggcag tgggctccca agctggccag gctgcactat 3540

tctggcagca ttaatgcctg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcatcca tgggatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagtttat catcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

aggggcaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcataata tcttcaatcc ccccattatt gctaggtata tcaggctgca ccccacccac 3840

tatagcatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgcagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatt tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttactaata tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca gactgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcctca ggtgaataac cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aaaaccatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agtctctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttt 4200

cagaatggga aggtgaaggt cttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260

agcctggatc ctcctctgct gaccaggtat ctgaggatcc acccccagag ctgggtgcat 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374

<210> 15

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 15

atgcagattg agctgagcac ctgtttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg tttctctgcc 60

actaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaat 180

acttctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaacatt 240

gctaagccca ggcctccctg gatggggctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcatc cagtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgaaggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gcccaatggc ctctgacccc ctgtgcctga cttatagcta cctgagccat 540

gtggatctgg tgaaggacct gaattctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagagag 600

ggctctctgg ctaaggagaa gacccagact ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag actaagaata gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcttctg ccagggcctg gcccaagatg catactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg tcacaggaaa tctgtctact ggcatgtgat tgggatgggc 840

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gagggccata ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatt accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gatctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tgggatggag 1020

gcttatgtga aggtggatag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaact ctcccagctt tattcagatc aggtctgtgg ctaagaagca ccccaagact 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccctct ggtgctggct 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaataatg gccctcagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgatcatct tcaagaatca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc cactgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcatct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtac aaatggactg tgactgtgga ggatggccct 1620

accaagtctg accccaggtg tctgaccagg tactacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgataagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aatatcatgc acagcatcaa tggctatgtc 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tattctgagc 1980

attggggccc agactgattt cctgtctgtg ttcttttctg gctatacctt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gatcctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggg 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gataagaaca ctggggacta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ttacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggtct 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagagg catcagaggg agatcaccag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgaca tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgag cagctctccc 2520

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtcttc 2580

caggagttca ctgatggctc tttcacccag cccctgtaca ggggggagct gaatgagcac 2640

ctgggcctgc tggggcccta cattagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgactttc 2700

agaaaccagg ccagcaggcc ttacagcttt tactcttctc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctat 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgactg caaggcttgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaat 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatt atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggatcaggtg gtatctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccacagc 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggaatacaa gatggctctg 3300

tataacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtatagca ataagtgcca gacccccctg ggcatggctt ctggccacat cagggatttc 3480

cagatcactg cttctggcca gtatggccag tgggctccca agctggctag gctgcattac 3540

tctgggtcta tcaatgcctg gagcactaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtacatca gccagttcat cattatgtac agcctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaata gcactgggac tctgatggtg ttctttggca atgtggactc ttctggcatc 3780

aagcacaaca tcttcaaccc tcccatcatt gccaggtaca ttaggctgca ccctacccac 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa ctcttgcagc 3900

atgcctctgg gcatggaaag caaagccatc tctgatgccc agatcactgc ctctagctat 3960

ttcaccaata tgtttgccac ctggagccct agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatggcc accagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaagt gttccagggc aaccaggata gcttcactcc tgtggtgaac 4260

tctctggacc ctcccctgct gactaggtac ctgaggattc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggatctgta ctga 4374

<210> 16

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 16

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggag ctgtcttggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc cagtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagagctt tcctttcaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaatatt 240

gctaagccca ggccaccctg gatgggcctg ctgggcccta ccattcaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgattactct gaagaatatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgtctt actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgatcagac ttctcagagg 420

gagaaggagg atgataaggt gttccctggg ggctctcaca cttatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ttctgatcca ctgtgcctga cctactctta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg ggaagagctg gcactctgag accaagaatt ctctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcctaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

actacccctg aggtgcacag cattttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccat 900

aggcaggcct ctctggagat cagccccatc actttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac attagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggactc ttgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaagctgagg attatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gattgggact atgctcccct ggtgctggct 1260

cctgatgata ggagctacaa gtctcagtac ctgaataatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagagaggct 1380

atccagcatg agtctgggat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcaga ccctacaaca tctaccccca tgggatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatgggccc 1620

accaagtctg accctaggtg cctgactagg tactactcta gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

aggggcaatc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aataggtctt ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt tcaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta tatcctgagc 1980

attggggctc agactgactt cctgtctgtg ttcttttctg gctacacttt taagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttttctg gggagactgt gttcatgtct 2100

atggagaacc ctgggctgtg gattctgggc tgtcacaact ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gtctagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctatctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttttctcaga atccccctgt gctgaagagg caccagagag agatcaccag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgattatgat gacactatct ctgtggagat gaagaaagag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaat cagtctccca ggagcttcca gaagaagact 2460

agacactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgag ctctagccct 2520

catgtgctga ggaacagggc ccagtctggg tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatggcag ctttacccag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tgggccccta tattagggct gaagtggagg acaacatcat ggtgaccttt 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctacagcttt tacagcagcc tgattagcta tgaggaggat 2760

cagagacagg gggctgagcc caggaagaac tttgtgaagc ccaatgagac caagacctac 2820

ttctggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg caaggcctgg 2880

gcttacttct ctgatgtgga cctggagaaa gatgtgcact ctggcctgat tgggcccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggga ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt ttttcaccat ctttgatgag accaagagct ggtacttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gcagggcccc ctgtaacatc cagatggagg atcctacttt caaggagaac 3120

tacaggttcc atgccattaa tgggtacatc atggacaccc tgcctgggct ggtgatggcc 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg tctatgggct ctaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggccctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgaaact gtggagatgc tgccctctaa agctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggagcac ctgcatgctg gcatgagcac cctgttcctg 3420

gtgtacagca ataagtgcca gactcccctg ggcatggctt ctgggcacat cagggatttc 3480

cagatcactg cctctggcca gtatggccag tgggccccca agctggctag gctgcactac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttct cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcattca tggcatcaag acccaggggg ccaggcagaa gttttctagc 3660

ctgtatatta gccagttcat catcatgtat agcctggatg ggaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaata gcactggcac cctgatggtg ttttttggca atgtggattc ttctggcatc 3780

aagcataaca tcttcaatcc ccctatcatt gccaggtaca ttaggctgca tcccacccat 3840

tactctatca ggagcaccct gaggatggag ctgatggggt gtgatctgaa cagctgtagc 3900

atgcccctgg gcatggagtc caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

tctaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat ctcttctagc caggatgggc atcagtggac cctgtttttt 4200

cagaatggca aagtgaaggt gtttcagggg aatcaggaca gctttacccc tgtggtgaac 4260

agcctggatc ctcctctgct gactagatac ctgaggatcc acccccagag ctgggtccac 4320

cagattgctc tgaggatgga ggtgctgggg tgtgaggctc aggacctgta ctga 4374

<210> 17

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 17

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggaggt actacctggg ggctgtggaa ctgagctggg actatatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagggtgc ccaagtcttt cccctttaac 180

acttctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttta ctgaccacct gttcaatatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccaa ccatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct attggaaggc ttctgagggg gctgagtatg atgaccagac tagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg gggtctcata cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctattctta cctgagccat 540

gtggacctgg tcaaggacct gaactctggc ctgattgggg ctctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gactcagact ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgag accaagaact ctctgatgca ggatagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaataggtct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccataggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

actacccctg aggtgcactc tatcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gaggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat ctctcccatc accttcctga ctgcccagac tctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccat atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgcccagag gaaccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt tattcagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggatt atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggtcttacaa gtctcagtac ctgaacaatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtacaaga aggtgaggtt catggcctac actgatgaga ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctggggccc ctgctgtatg gggaggtggg ggataccctg 1440

ctgattatct tcaagaacca ggctagcagg ccctataaca tctaccccca tggcattact 1500

gatgtgaggc ccctgtactc taggagactg cccaaggggg tgaagcacct gaaagacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

actaagtctg accccaggtg cctgaccagg tattacagca gctttgtgaa tatggagagg 1680

gatctggctt ctggcctgat tgggcctctg ctgatttgct acaaggagtc tgtggatcag 1740

agggggaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgattc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaatatc cagaggttcc tgcctaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggctagc aacattatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cttactggta cattctgtct 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacactct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaatc ctgggctgtg gattctgggg tgccacaact ctgatttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaaca ctggggatta ttatgaggac 2220

agctatgagg acatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcctaggagc 2280

ttcagccaga atccccctgt gctgaagaga caccagaggg agatcactag gaccactctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacaccattt ctgtggagat gaagaaggag 2400

gactttgata tttatgatga ggatgagaac cagagcccca gaagcttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggatt atggcatgtc ttctagcccc 2520

catgtgctga ggaacagggc tcagtctggc tctgtgcctc agttcaagaa ggtggtgttc 2580

caggagttca ctgatgggag cttcacccag cctctgtaca ggggggagct gaatgaacat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataatatcat ggtgactttc 2700

aggaatcagg cctctaggcc ctacagcttc tactctagcc tgatcagcta tgaggaggac 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaat tttgtgaaac ccaatgagac caagacctac 2820

ttttggaagg tgcagcacca catggcccct accaaggatg agtttgactg taaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcatt ctgggctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgcc acaccaacac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtgac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt tcttcaccat ctttgatgag actaagagct ggtatttcac tgagaacatg 3060

gagaggaact gtagggctcc ctgcaacatc cagatggagg atccaacttt caaggagaac 3120

tacaggttcc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggcc 3180

caggaccaga ggattaggtg gtacctgctg agcatgggct ctaatgagaa catccactct 3240

atccacttct ctggccatgt gtttactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaacctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcctagcaa ggctggcatt 3360

tggagagtgg agtgtctgat tggggagcac ctgcatgctg ggatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gacccccctg gggatggctt ctgggcacat cagagatttt 3480

cagattactg cttctgggca gtatggccag tgggctccca agctggccag actgcattac 3540

tctggctcta ttaatgcttg gagcaccaag gagcctttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggctccca tgatcatcca tggcattaag actcaggggg ctaggcagaa gttcagcagc 3660

ctgtatattt ctcagtttat tatcatgtat tctctggatg gcaagaagtg gcagacttac 3720

aggggcaaca gcactggcac cctgatggtg ttctttggca atgtggacag ctctgggatc 3780

aagcataaca tcttcaaccc ccccattatt gccaggtaca tcaggctgca ccccacccac 3840

tattctatca ggagcactct gaggatggag ctgatggggt gtgacctgaa cagctgctct 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggccatc tctgatgccc agatcactgc cagctcttat 3960

ttcaccaaca tgtttgccac ctggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcaga 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaat cctaaggagt ggctgcaggt ggacttccag 4080

aagactatga aggtgactgg ggtgactacc cagggggtga agagcctgct gaccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctgat tagcagcagc caggatgggc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggga aggtgaaggt gttccagggc aatcaggaca gcttcacccc tgtggtgaac 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgctc tgagaatgga ggtgctgggc tgtgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 18

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII

<400> 18

atgcagattg agctgtctac ctgttttttt ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgct 60

accaggaggt attatctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggtttcct cccagggtgc ctaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gactctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatggggctg ctgggcccca ctatccaggc tgaggtgtat 300

gatactgtgg tgattaccct gaagaacatg gcctctcacc ctgtgtctct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ttctgagggg gctgaatatg atgatcagac ctctcagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gtttcctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg ggcccatggc ctctgatccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggaaaa gacccagacc ctgcataagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagtcttg gcactctgag accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ctagggcctg gcccaagatg cacactgtga atgggtatgt gaacagatct 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggg 840

accacccctg aggtgcatag catcttcctg gaggggcaca ccttcctggt gagaaatcat 900

aggcaggcca gcctggagat tagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atttctagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggatag ctgccctgaa gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg attatgatga tgatctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccctaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

ccagatgaca ggtcttacaa gagccagtac ctgaataatg gcccccagag gattgggagg 1320

aagtataaga aagtgaggtt catggcttac actgatgaga cctttaagac tagggaggcc 1380

attcagcatg agtctgggat tctgggccct ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt tcaagaacca ggccagcagg ccctataata tttatcccca tgggattact 1500

gatgtcaggc ccctgtacag caggaggctg cctaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccattctgc ctggggagat cttcaagtat aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg atcctaggtg cctgaccagg tactatagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggctt ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggaatc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agattatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttttctgt gtttgatgag 1800

aataggagct ggtatctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaatcc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggcttct aacatcatgc atagcatcaa tgggtatgtg 1920

tttgactctc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctattggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cctttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccataatt ctgacttcag aaacaggggc 2160

atgactgctc tgctgaaggt gagcagctgt gacaagaata ctggggacta ctatgaggac 2220

tcttatgagg atatttctgc ctacctgctg agcaagaaca atgctattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acccccctgt cctgaagagg catcagaggg agatcactag gaccaccctg 2340

cagtctgatc aggaggagat tgactatgat gacactatct ctgtggaaat gaagaaggag 2400

gactttgata tctatgatga ggatgagaac cagagcccca ggtctttcca gaagaagacc 2460

aggcactact tcattgctgc tgtggagagg ctgtgggact atggcatgtc tagcagcccc 2520

catgtgctga ggaacagagc ccagtctggc tctgtgcccc agttcaagaa ggtggtgttt 2580

caggagttca ctgatgggag cttcactcag cccctgtata ggggggagct gaatgagcat 2640

ctgggcctgc tggggcccta catcagggct gaggtggagg ataacatcat ggtgaccttc 2700

aggaaccagg ccagcaggcc ctactctttc tactcttctc tgatcagcta tgaggaggat 2760

cagaggcagg gggctgagcc taggaagaac tttgtcaagc ctaatgagac taagacctac 2820

ttttggaagg tgcagcacca catggctccc actaaggatg agtttgattg caaggcctgg 2880

gcctacttct ctgatgtgga cctggagaag gatgtgcact ctggcctgat tggccccctg 2940

ctggtgtgtc acaccaatac cctgaaccct gcccatggca ggcaggtcac tgtgcaggag 3000

tttgccctgt ttttcactat ctttgatgag actaagtctt ggtacttcac tgagaacatg 3060

gaaaggaatt gcagggctcc ctgcaacatc cagatggagg accccacctt caaggagaac 3120

tacaggtttc atgccatcaa tggctacatc atggacaccc tgcctggcct ggtgatggct 3180

caggatcaga ggattaggtg gtatctgctg agcatgggca gcaatgagaa catccacagc 3240

atccactttt ctggccatgt gttcactgtg aggaagaagg aggagtacaa gatggctctg 3300

tacaatctgt accctggggt gtttgagact gtggagatgc tgcccagcaa ggctgggatc 3360

tggagggtgg agtgcctgat tggggaacac ctgcatgctg gcatgtctac cctgttcctg 3420

gtgtactcta acaagtgcca gactcccctg ggcatggcct ctgggcacat cagggacttc 3480

cagatcactg cctctgggca gtatggccag tgggccccta agctggctag gctgcattac 3540

tctggcagca tcaatgcctg gagcaccaag gagcccttca gctggatcaa ggtggacctg 3600

ctggccccta tgatcatcca tggcatcaag acccaggggg ccagacagaa gttctcttct 3660

ctgtacatct ctcagttcat catcatgtac tctctggatg gcaagaagtg gcagacctac 3720

agggggaatt ctactggcac tctgatggtg ttctttggga atgtggatag ctctgggatc 3780

aagcataata ttttcaaccc ccccattatt gctaggtaca tcaggctgca cccaacccac 3840

tactctatta ggtctaccct gaggatggag ctgatgggct gtgacctgaa ctcttgtagc 3900

atgcccctgg gcatggagag caaggctatc tctgatgccc agatcactgc cagcagctac 3960

tttaccaaca tgtttgctac ttggagcccc agcaaggcca ggctgcacct gcagggcagg 4020

agcaatgcct ggaggcccca ggtgaacaac cccaaggagt ggctgcaggt ggattttcag 4080

aagaccatga aggtgactgg ggtgaccact cagggggtga aaagcctgct gactagcatg 4140

tatgtgaagg agtttctgat cagcagctct caggatggcc atcagtggac cctgttcttc 4200

cagaatggca aggtgaaggt gttccagggc aaccaggata gcttcacccc tgtggtgaat 4260

agcctggacc cccccctgct gaccaggtac ctgaggatcc atccccagag ctgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggtgctgggc tgtgaagccc aggacctgta ctga 4374

<210> 19

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Фактор VIII-BDD дикого типа

<400> 19

atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc 60

accagaagat actacctggg tgcagtggaa ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc 120

ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac 180

acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt gtagaattca cggatcacct tttcaacatc 240

gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat 300

gatacagtgg tcattacact taagaacatg gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt 360

ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg 420

gagaaagaag atgataaagt cttccctggt ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg 480

aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca ctgtgcctta cctactcata tctttctcat 540

gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc ctcattggag ccctactagt atgtagagaa 600

gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta 660

tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa acaaagaact ccttgatgca ggatagggat 720

gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg cacacagtca atggttatgt aaacaggtct 780

ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc 840

accactcctg aagtgcactc aatattcctc gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat 900

cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgatg 960

gaccttggac agtttctact gttttgtcat atctcttccc accaacatga tggcatggaa 1020

gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa 1080

gaagcggaag actatgatga tgatcttact gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat 1140

gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact 1200

tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag gactgggact atgctccctt agtcctcgcc 1260

cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg 1320

aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct 1380

attcagcatg aatcaggaat cttgggacct ttactttatg gggaagttgg agacacactg 1440

ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga ccatataaca tctaccctca cggaatcact 1500

gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt 1560

ccaattctgc caggagaaat attcaaatat aaatggacag tgactgtaga agatgggcca 1620

actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc tattactcta gtttcgttaa tatggagaga 1680

gatctagctt caggactcat tggccctctc ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa 1740

agaggaaacc agataatgtc agacaagagg aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag 1800

aaccgaagct ggtacctcac agagaatata caacgctttc tccccaatcc agctggagtg 1860

cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt 1920

tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg catgaggtgg catactggta cattctaagc 1980

attggagcac agactgactt cctttctgtc ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa 2040

atggtctatg aagacacact caccctattc ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg 2100

atggaaaacc caggtctatg gattctgggg tgccacaact cagactttcg gaacagaggc 2160

atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac 2220

agttatgaag atatttcagc atacttgctg agtaaaaaca atgccattga accaagaagc 2280

ttctcccaaa acccaccagt cttgaaacgc catcaacggg aaataactcg tactactctt 2340

cagtcagatc aagaggaaat tgactatgat gataccatat cagttgaaat gaagaaggaa 2400

gattttgaca tttatgatga ggatgaaaat cagagccccc gcagctttca aaagaaaaca 2460

cgacactatt ttattgctgc agtggagagg ctctgggatt atgggatgag tagctcccca 2520

catgttctaa gaaacagggc tcagagtggc agtgtccctc agttcaagaa agttgttttc 2580

caggaattta ctgatggctc ctttactcag cccttatacc gtggagaact aaatgaacat 2640

ttgggactcc tggggccata tataagagca gaagttgaag ataatatcat ggtaactttc 2700

agaaatcagg cctctcgtcc ctattccttc tattctagcc ttatttctta tgaggaagat 2760

cagaggcaag gagcagaacc tagaaaaaac tttgtcaagc ctaatgaaac caaaacttac 2820

ttttggaaag tgcaacatca tatggcaccc actaaagatg agtttgactg caaagcctgg 2880

gcttatttct ctgatgttga cctggaaaaa gatgtgcact caggcctgat tggacccctt 2940

ctggtctgcc acactaacac actgaaccct gctcatggga gacaagtgac agtacaggaa 3000

tttgctctgt ttttcaccat ctttgatgag accaaaagct ggtacttcac tgaaaatatg 3060

gaaagaaact gcagggctcc ctgcaatatc cagatggaag atcccacttt taaagagaat 3120

tatcgcttcc atgcaatcaa tggctacata atggatacac tacctggctt agtaatggct 3180

caggatcaaa ggattcgatg gtatctgctc agcatgggca gcaatgaaaa catccattct 3240

attcatttca gtggacatgt gttcaccgta cgaaaaaaag aggagtataa aatggcactg 3300

tacaatctct atccaggtgt ttttgagaca gtggaaatgt taccatccaa agctggaatt 3360

tggcgggtgg aatgccttat tggcgagcat ctacatgctg ggatgagcac actttttctg 3420

gtgtacagca ataagtgtca gactcccctg ggaatggctt ctggacacat tagagatttt 3480

cagattacag cttcaggaca atatggacag tgggccccaa agctggccag acttcattat 3540

tccggatcaa tcaatgcctg gagcaccaag gagccctttt cttggatcaa ggtggatctg 3600

ttggcaccaa tgattattca cggcatcaag acccagggtg cccgtcagaa gttctccagc 3660

ctctacatct ctcagtttat catcatgtat agtcttgatg ggaagaagtg gcagacttat 3720

cgaggaaatt ccactggaac cttaatggtc ttctttggca atgtggattc atctgggata 3780

aaacacaata tttttaaccc tccaattatt gctcgataca tccgtttgca cccaactcat 3840

tatagcattc gcagcactct tcgcatggag ttgatgggct gtgatttaaa tagttgcagc 3900

atgccattgg gaatggagag taaagcaata tcagatgcac agattactgc ttcatcctac 3960

tttaccaata tgtttgccac ctggtctcct tcaaaagctc gacttcacct ccaagggagg 4020

agtaatgcct ggagacctca ggtgaataat ccaaaagagt ggctgcaagt ggacttccag 4080

aagacaatga aagtcacagg agtaactact cagggagtaa aatctctgct taccagcatg 4140

tatgtgaagg agttcctcat ctccagcagt caagatggcc atcagtggac tctctttttt 4200

cagaatggca aagtaaaggt ttttcaggga aatcaagact ccttcacacc tgtggtgaac 4260

tctctagacc caccgttact gactcgctac cttcgaattc acccccagag ttgggtgcac 4320

cagattgccc tgaggatgga ggttctgggc tgcgaggcac aggacctcta ctga 4374

<210> 20

<211> 4890

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> V3 фактор VIII

<400> 20

atgcagattg agctgagcac ctgcttcttc ctgtgcctgc tgaggttctg cttctctgcc 60

accaggagat actacctggg ggctgtggag ctgagctggg actacatgca gtctgacctg 120

ggggagctgc ctgtggatgc caggttcccc cccagagtgc ccaagagctt ccccttcaac 180

acctctgtgg tgtacaagaa gaccctgttt gtggagttca ctgaccacct gttcaacatt 240

gccaagccca ggcccccctg gatgggcctg ctgggcccca ccatccaggc tgaggtgtat 300

gacactgtgg tgatcaccct gaagaacatg gccagccacc ctgtgagcct gcatgctgtg 360

ggggtgagct actggaaggc ctctgagggg gctgagtatg atgaccagac cagccagagg 420

gagaaggagg atgacaaggt gttccctggg ggcagccaca cctatgtgtg gcaggtgctg 480

aaggagaatg gccccatggc ctctgacccc ctgtgcctga cctacagcta cctgagccat 540

gtggacctgg tgaaggacct gaactctggc ctgattgggg ccctgctggt gtgcagggag 600

ggcagcctgg ccaaggagaa gacccagacc ctgcacaagt tcatcctgct gtttgctgtg 660

tttgatgagg gcaagagctg gcactctgaa accaagaaca gcctgatgca ggacagggat 720

gctgcctctg ccagggcctg gcccaagatg cacactgtga atggctatgt gaacaggagc 780

ctgcctggcc tgattggctg ccacaggaag tctgtgtact ggcatgtgat tggcatgggc 840

accacccctg aggtgcacag catcttcctg gagggccaca ccttcctggt caggaaccac 900

aggcaggcca gcctggagat cagccccatc accttcctga ctgcccagac cctgctgatg 960

gacctgggcc agttcctgct gttctgccac atcagcagcc accagcatga tggcatggag 1020

gcctatgtga aggtggacag ctgccctgag gagccccagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaggctgagg actatgatga tgacctgact gactctgaga tggatgtggt gaggtttgat 1140

gatgacaaca gccccagctt catccagatc aggtctgtgg ccaagaagca ccccaagacc 1200

tgggtgcact acattgctgc tgaggaggag gactgggact atgcccccct ggtgctggcc 1260

cctgatgaca ggagctacaa gagccagtac ctgaacaatg gcccccagag gattggcagg 1320

aagtacaaga aggtcaggtt catggcctac actgatgaaa ccttcaagac cagggaggcc 1380

atccagcatg agtctggcat cctgggcccc ctgctgtatg gggaggtggg ggacaccctg 1440

ctgatcatct tcaagaacca ggccagcagg ccctacaaca tctaccccca tggcatcact 1500

gatgtgaggc ccctgtacag caggaggctg cccaaggggg tgaagcacct gaaggacttc 1560

cccatcctgc ctggggagat cttcaagtac aagtggactg tgactgtgga ggatggcccc 1620

accaagtctg accccaggtg cctgaccaga tactacagca gctttgtgaa catggagagg 1680

gacctggcct ctggcctgat tggccccctg ctgatctgct acaaggagtc tgtggaccag 1740

aggggcaacc agatcatgtc tgacaagagg aatgtgatcc tgttctctgt gtttgatgag 1800

aacaggagct ggtacctgac tgagaacatc cagaggttcc tgcccaaccc tgctggggtg 1860

cagctggagg accctgagtt ccaggccagc aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtg 1920

tttgacagcc tgcagctgtc tgtgtgcctg catgaggtgg cctactggta catcctgagc 1980

attggggccc agactgactt cctgtctgtg ttcttctctg gctacacctt caagcacaag 2040

atggtgtatg aggacaccct gaccctgttc cccttctctg gggagactgt gttcatgagc 2100

atggagaacc ctggcctgtg gattctgggc tgccacaact ctgacttcag gaacaggggc 2160

atgactgccc tgctgaaagt ctccagctgt gacaagaaca ctggggacta ctatgaggac 2220

agctatgagg acatctctgc ctacctgctg agcaagaaca atgccattga gcccaggagc 2280

ttcagccaga acagcaggca ccccagcacc aggcagaagc agttcaatgc caccaccatc 2340

cctgagaatg acatagagaa gacagaccca tggtttgccc accggacccc catgcccaag 2400

atccagaatg tgagcagctc tgacctgctg atgctgctga ggcagagccc caccccccat 2460

ggcctgagcc tgtctgacct gcaggaggcc aagtatgaaa ccttctctga tgaccccagc 2520

cctggggcca ttgacagcaa caacagcctg tctgagatga cccacttcag gccccagctg 2580

caccactctg gggacatggt gttcacccct gagtctggcc tgcagctgag gctgaatgag 2640

aagctgggca ccactgctgc cactgagctg aagaagctgg acttcaaagt ctccagcacc 2700

agcaacaacc tgatcagcac catcccctct gacaacctgg ctgctggcac tgacaacacc 2760

agcagcctgg gcccccccag catgcctgtg cactatgaca gccagctgga caccaccctg 2820

tttggcaaga agagcagccc cctgactgag tctgggggcc ccctgagcct gtctgaggag 2880

aacaatgaca gcaagctgct ggagtctggc ctgatgaaca gccaggagag cagctggggc 2940

aagaatgtga gcaccaggag cttccagaag aagaccaggc actacttcat tgctgctgtg 3000

gagaggctgt gggactatgg catgagcagc agcccccatg tgctgaggaa cagggcccag 3060

tctggctctg tgccccagtt caagaaggtg gtgttccagg agttcactga tggcagcttc 3120

acccagcccc tgtacagagg ggagctgaat gagcacctgg gcctgctggg cccctacatc 3180

agggctgagg tggaggacaa catcatggtg accttcagga accaggccag caggccctac 3240

agcttctaca gcagcctgat cagctatgag gaggaccaga ggcagggggc tgagcccagg 3300

aagaactttg tgaagcccaa tgaaaccaag acctacttct ggaaggtgca gcaccacatg 3360

gcccccacca aggatgagtt tgactgcaag gcctgggcct acttctctga tgtggacctg 3420

gagaaggatg tgcactctgg cctgattggc cccctgctgg tgtgccacac caacaccctg 3480

aaccctgccc atggcaggca ggtgactgtg caggagtttg ccctgttctt caccatcttt 3540

gatgaaacca agagctggta cttcactgag aacatggaga ggaactgcag ggccccctgc 3600

aacatccaga tggaggaccc caccttcaag gagaactaca ggttccatgc catcaatggc 3660

tacatcatgg acaccctgcc tggcctggtg atggcccagg accagaggat caggtggtac 3720

ctgctgagca tgggcagcaa tgagaacatc cacagcatcc acttctctgg ccatgtgttc 3780

actgtgagga agaaggagga gtacaagatg gccctgtaca acctgtaccc tggggtgttt 3840

gagactgtgg agatgctgcc cagcaaggct ggcatctgga gggtggagtg cctgattggg 3900

gagcacctgc atgctggcat gagcaccctg ttcctggtgt acagcaacaa gtgccagacc 3960

cccctgggca tggcctctgg ccacatcagg gacttccaga tcactgcctc tggccagtat 4020

ggccagtggg cccccaagct ggccaggctg cactactctg gcagcatcaa tgcctggagc 4080

accaaggagc ccttcagctg gatcaaggtg gacctgctgg cccccatgat catccatggc 4140

atcaagaccc agggggccag gcagaagttc agcagcctgt acatcagcca gttcatcatc 4200

atgtacagcc tggatggcaa gaagtggcag acctacaggg gcaacagcac tggcaccctg 4260

atggtgttct ttggcaatgt ggacagctct ggcatcaagc acaacatctt caaccccccc 4320

atcattgcca gatacatcag gctgcacccc acccactaca gcatcaggag caccctgagg 4380

atggagctga tgggctgtga cctgaacagc tgcagcatgc ccctgggcat ggagagcaag 4440

gccatctctg atgcccagat cactgccagc agctacttca ccaacatgtt tgccacctgg 4500

agccccagca aggccaggct gcacctgcag ggcaggagca atgcctggag gccccaggtc 4560

aacaacccca aggagtggct gcaggtggac ttccagaaga ccatgaaggt gactggggtg 4620

accacccagg gggtgaagag cctgctgacc agcatgtatg tgaaggagtt cctgatcagc 4680

agcagccagg atggccacca gtggaccctg ttcttccaga atggcaaggt gaaggtgttc 4740

cagggcaacc aggacagctt cacccctgtg gtgaacagcc tggacccccc cctgctgacc 4800

agatacctga ggattcaccc ccagagctgg gtgcaccaga ttgccctgag gatggaggtg 4860

ctgggctgtg aggcccagga cctgtactga 4890

<210> 21

<211> 4374

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CO3 фактор VIII

<400> 21

atgcagattg agctgtcaac ttgctttttc ctgtgcctgc tgagattttg tttttccgct 60

actagaagat actacctggg ggctgtggaa ctgtcttggg attacatgca gagtgacctg 120

ggagagctgc cagtggacgc acgatttcca cctagagtcc ctaaatcatt ccccttcaac 180

accagcgtgg tctataagaa aacactgttc gtggagttta ctgatcacct gttcaacatc 240

gctaagcctc ggccaccctg gatgggactg ctgggaccaa caatccaggc agaggtgtac 300

gacaccgtgg tcattacact gaaaaacatg gcctcacacc ccgtgagcct gcatgctgtg 360

ggcgtcagct actggaaggc ttccgaaggg gcagagtatg acgatcagac ttcccagaga 420

gaaaaagagg acgataaggt gtttcctggc gggtctcata cctatgtgtg gcaggtcctg 480

aaagagaatg gccccatggc ttccgaccct ctgtgcctga cctactctta tctgagtcac 540

gtggacctgg tcaaggatct gaacagcgga ctgatcggag cactgctggt gtgtagggaa 600

gggagcctgg ctaaggagaa aacccagaca ctgcataagt tcattctgct gttcgccgtg 660

tttgacgaag gaaaatcatg gcacagcgag acaaagaata gtctgatgca ggaccgggat 720

gccgcttcag ccagagcttg gcccaaaatg cacactgtga acggctacgt caatcgctca 780

ctgcctggac tgatcggctg ccaccgaaag agcgtgtatt ggcatgtcat cggaatgggc 840

accacacctg aagtgcactc cattttcctg gaggggcata cctttctggt ccgcaaccac 900

cgacaggcct ccctggagat ctctccaatt accttcctga cagctcagac tctgctgatg 960

gatctgggac agttcctgct gttttgccac atcagctccc accagcatga tggcatggag 1020

gcctacgtga aagtggacag ctgtcccgag gaacctcagc tgaggatgaa gaacaatgag 1080

gaagctgaag actatgacga tgacctgacc gactccgaga tggatgtggt ccgattcgat 1140

gacgataaca gcccctcctt tatccagatt agatctgtgg ccaagaaaca ccctaagaca 1200

tgggtccatt acatcgcagc cgaggaagag gactgggatt atgcaccact ggtgctggca 1260

ccagacgatc gatcctacaa atctcagtat ctgaacaatg gaccacagcg gattggcaga 1320

aagtacaaga aagtgaggtt catggcttat accgatgaaa ccttcaagac tcgcgaagca 1380

atccagcacg agagcgggat tctgggacca ctgctgtacg gagaagtggg ggacaccctg 1440

ctgatcattt ttaagaacca ggccagcagg ccttacaata tctatccaca tggaattaca 1500

gatgtgcgcc ctctgtacag ccggagactg ccaaagggcg tcaaacacct gaaggacttc 1560

ccaatcctgc ccggggaaat ttttaagtat aaatggactg tcaccgtcga ggatggcccc 1620

actaagagcg accctaggtg cctgacccgc tactattcta gtttcgtgaa tatggaaagg 1680

gatctggcca gcggactgat cggcccactg ctgatttgtt acaaagagag cgtggatcag 1740

agaggcaacc agatcatgtc cgacaagagg aatgtgattc tgttcagtgt ctttgacgaa 1800

aaccggtcat ggtatctgac cgagaacatc cagagattcc tgcctaatcc agccggagtg 1860

cagctggaag atcctgagtt tcaggcttct aacatcatgc atagtattaa tggctacgtg 1920

ttcgacagtc tgcagctgtc agtgtgtctg cacgaggtcg cttactggta tatcctgagc 1980

attggagcac agacagattt cctgagcgtg ttcttttccg gctacacttt taagcataaa 2040

atggtgtatg aggacacact gactctgttc cccttcagcg gcgaaaccgt gtttatgtcc 2100

atggagaatc ccgggctgtg gatcctggga tgccacaaca gcgatttcag gaatcgcggg 2160

atgactgccc tgctgaaagt gtcaagctgt gacaagaaca ccggagacta ctatgaagat 2220

tcatacgagg acatcagcgc atatctgctg tccaaaaaca atgccattga acccaggtct 2280

tttagtcaga atcctccagt gctgaagagg caccagcgcg agatcacccg cactaccctg 2340

cagagtgatc aggaagagat cgactacgac gatacaattt ctgtggaaat gaagaaagag 2400

gacttcgata tctatgacga agatgagaac cagagtcctc gatcattcca gaagaaaacc 2460

cggcattact ttattgctgc agtggagcgc ctgtgggatt atggcatgtc ctctagtcct 2520

cacgtgctgc gaaatcgggc ccagtcaggg agcgtcccac agttcaagaa agtggtcttc 2580

caggagttta cagacggatc ctttactcag ccactgtacc ggggcgaact gaacgagcac 2640

ctggggctgc tgggacccta tatcagagct gaagtggagg ataacattat ggtcaccttc 2700

agaaatcagg catctaggcc ttacagtttt tattcaagcc tgatctctta cgaagaggac 2760

cagaggcagg gagcagaacc acgaaaaaac ttcgtgaagc ctaatgagac caaaacatac 2820

ttttggaagg tgcagcacca tatggcccca acaaaagacg aattcgattg caaggcatgg 2880

gcctattttt ctgacgtgga tctggagaag gacgtccaca gtggcctgat cgggccactg 2940

ctggtgtgtc atactaacac cctgaatccc gcacacggca ggcaggtcac tgtccaggaa 3000

ttcgccctgt tctttaccat ctttgatgag acaaaaagct ggtacttcac cgaaaacatg 3060

gagcgaaatt gccgggctcc atgtaatatt cagatggaag accccacatt caaggagaac 3120

taccgctttc atgccatcaa tgggtatatt atggatactc tgcccggact ggtcatggct 3180

caggaccaga gaatcaggtg gtacctgctg agcatggggt ccaacgagaa tatccactca 3240

attcatttca gcggacacgt gtttactgtc cggaagaaag aagagtataa aatggccctg 3300

tacaacctgt atcccggcgt gttcgaaacc gtcgagatgc tgcctagcaa ggcagggatc 3360

tggagagtgg aatgcctgat tggggagcac ctgcatgccg gaatgtctac cctgtttctg 3420

gtgtacagta ataagtgtca gacacccctg gggatggctt ccggacatat ccgggatttc 3480

cagattaccg catctggaca gtacggccag tgggccccta agctggctag actgcactat 3540

tccgggtcta tcaacgcttg gtccacaaaa gagcctttct cttggattaa ggtggacctg 3600

ctggcaccaa tgatcattca tggcatcaaa actcaggggg ccaggcagaa gttctcctct 3660

ctgtacatct cacagtttat catcatgtac agcctggatg gcaagaaatg gcagacatac 3720

cgcggcaata gcacagggac tctgatggtg ttctttggca acgtggacag ttcagggatc 3780

aagcacaaca ttttcaatcc ccctatcatt gctagataca tcaggctgca cccaacccat 3840

tattctattc gaagtacact gcggatggaa ctgatggggt gcgatctgaa cagttgttca 3900

atgcccctgg gaatggagtc caaggcaatc tctgacgccc agattaccgc tagctcctac 3960

ttcactaata tgtttgctac ctggagcccc tccaaagcac gactgcatct gcagggacga 4020

agcaacgcat ggcgaccaca ggtgaacaat cccaaggagt ggctgcaggt cgattttcag 4080

aaaactatga aggtgaccgg agtcacaact cagggcgtga aaagtctgct gacctcaatg 4140

tacgtcaagg agttcctgat ctctagttca caggacggcc accagtggac actgttcttt 4200

cagaacggaa aggtgaaagt cttccagggc aatcaggatt cctttacacc tgtggtcaac 4260

tctctggacc cacccctgct gactcgctac ctgcgaatcc acccacagtc ctgggtgcat 4320

cagattgcac tgagaatgga agtcctgggc tgcgaggccc aggacctgta ttga 4374

<210> 22

<211> 222

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промотор транстиретина

<400> 22

gtctgtctgc acatttcgta gagcgagtgt tccgatactc taatctccct aggcaaggtt 60

catattgact taggttactt attctccttt tgttgactaa gtcaataatc agaatcagca 120

ggtttggagt cagcttggca gggatcagca gcctgggttg gaaggagggg gtataaaagc 180

cccttcacca ggagaagccg tcacacagat ccacaagctc ct 222

<210> 23

<211> 5066

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность полноразмерной кассеты

<400> 23

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg 5066

<210> 24

<211> 11976

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Последовательность полноразмерной плазмиды

<400> 24

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc tacgcgtgtc tgtctgcaca tttcgtagag cgagtgttcc 180

gatactctaa tctccctagg caaggttcat attgacttag gttacttatt ctccttttgt 240

tgactaagtc aataatcaga atcagcaggt ttggagtcag cttggcaggg atcagcagcc 300

tgggttggaa ggagggggta taaaagcccc ttcaccagga gaagccgtca cacagatcca 360

caagctcctg ctagcaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg 420

gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactg acactgacat ccactttttc tttttctcca 480

caggtttaaa cgccaccatg cagattgagc tgagcacctg cttcttcctg tgtctgctga 540

ggttctgctt ctctgccacc aggaggtatt acctgggggc tgtggagctg agctgggact 600

atatgcagtc tgacctgggg gagctgcctg tggatgctag gttccccccc agggtgccca 660

agagcttccc ctttaacact tctgtggtgt acaagaagac cctgtttgtg gagttcactg 720

accacctgtt caacattgcc aagcccaggc ccccctggat ggggctgctg gggcccacca 780

tccaggctga ggtgtatgac actgtggtga tcaccctgaa gaacatggcc agccaccctg 840

tgagcctgca tgctgtgggg gtgagctact ggaaggcttc tgagggggct gagtatgatg 900

accagactag ccagagggag aaggaggatg acaaggtgtt tcctgggggc agccatacct 960

atgtgtggca ggtgctgaag gagaatggcc ccatggcctc tgaccccctg tgcctgacct 1020

acagctacct gtctcatgtg gacctggtga aggacctgaa ctctggcctg attggggctc 1080

tgctggtgtg tagggagggc agcctggcta aggaaaagac ccagaccctg cataagttta 1140

tcctgctgtt tgctgtgttt gatgagggca agagctggca ctctgagacc aagaacagcc 1200

tgatgcagga tagggatgct gcctctgcca gggcttggcc taagatgcac actgtgaatg 1260

ggtatgtgaa taggagcctg cctggcctga ttggctgcca caggaagtct gtgtactggc 1320

atgtgattgg gatgggcacc acccctgagg tccatagcat cttcctggag ggccacactt 1380

tcctggtgag gaaccacaga caggcctctc tggagatctc tcccatcacc ttcctgactg 1440

ctcagactct gctgatggac ctgggccagt tcctgctgtt ttgccatatt agcagccacc 1500

agcatgatgg gatggaggcc tatgtgaagg tggatagctg ccctgaggag cctcagctga 1560

ggatgaagaa caatgaggag gctgaagact atgatgatga cctgactgat tctgagatgg 1620

atgtggtgag gtttgatgat gacaatagcc ccagcttcat tcagatcagg tctgtggcca 1680

agaaacaccc caagacctgg gtgcactaca ttgctgctga ggaagaggac tgggactatg 1740

ctcccctggt gctggcccct gatgataggt cttataagag ccagtacctg aacaatgggc 1800

cccagaggat tggcaggaag tacaagaagg tgaggttcat ggcctacact gatgaaacct 1860

tcaaaaccag ggaggccatt cagcatgagt ctggcatcct gggccctctg ctgtatgggg 1920

aggtggggga caccctgctg atcatcttca agaaccaggc cagcaggccc tacaacatct 1980

atcctcatgg catcactgat gtgaggcccc tgtacagcag gaggctgccc aagggggtga 2040

agcacctgaa agacttcccc atcctgcctg gggagatctt taagtataag tggactgtga 2100

ctgtggagga tggccctacc aagtctgacc ccaggtgtct gaccaggtac tattctagct 2160

ttgtgaacat ggagagggac ctggcctctg gcctgattgg gcccctgctg atctgctaca 2220

aggagtctgt ggaccagagg ggcaaccaga tcatgtctga caagaggaat gtgatcctgt 2280

tttctgtgtt tgatgagaat aggagctggt acctgactga gaacatccag aggtttctgc 2340

ccaatcctgc tggggtgcag ctggaggatc ctgagttcca ggccagcaat atcatgcata 2400

gcatcaatgg ctatgtgttt gacagcctgc agctgtctgt gtgcctgcat gaggtggcct 2460

actggtacat cctgagcatt ggggcccaga ctgactttct gtctgtgttc ttttctggct 2520

ataccttcaa gcacaagatg gtgtatgagg ataccctgac cctgttcccc ttctctgggg 2580

agactgtgtt catgagcatg gagaatcctg ggctgtggat cctggggtgc cacaactctg 2640

attttaggaa cagggggatg actgccctgc tgaaggtgtc tagctgtgat aagaacactg 2700

gggactacta tgaggacagc tatgaggaca tttctgctta tctgctgtct aagaataatg 2760

ccattgagcc cagaagcttc agccagaatc cccctgtgct gaagagacat cagagggaga 2820

tcaccagaac taccctgcag tctgatcagg aggagattga ctatgatgac actatctctg 2880

tggagatgaa gaaggaggac tttgacatct atgatgagga tgagaatcag tctcccagga 2940

gctttcagaa gaagaccaga cattacttca ttgctgctgt ggagaggctg tgggactatg 3000

gcatgagctc tagccctcat gtgctgagga acagggccca gtctggctct gtgccccagt 3060

tcaagaaggt ggtgttccag gaattcactg atggcagctt cacccagccc ctgtacaggg 3120

gggagctgaa tgagcacctg ggcctgctgg ggccttatat cagggctgag gtggaggata 3180

atattatggt gactttcagg aaccaggcca gcaggcccta ctctttctat agcagcctga 3240

tctcttatga ggaggatcag aggcaggggg ctgagcctag gaagaacttt gtgaagccca 3300

atgagactaa gacctacttc tggaaggtcc agcaccacat ggcccctacc aaggatgagt 3360

ttgactgcaa ggcctgggcc tatttctctg atgtggatct ggagaaggat gtccattctg 3420

ggctgattgg ccccctgctg gtgtgccaca ctaacactct gaatcctgcc catggcaggc 3480

aggtgactgt ccaggagttt gccctgttct tcactatctt tgatgagacc aagagctggt 3540

actttactga gaacatggag aggaactgca gagctccttg caatattcag atggaggacc 3600

ccaccttcaa ggagaattac aggttccatg ccattaatgg gtacatcatg gacaccctgc 3660

ctggcctggt gatggctcag gaccagagga tcaggtggta cctgctgagc atgggctcta 3720

atgagaatat ccacagcatc cacttctctg ggcatgtgtt cactgtgagg aagaaggagg 3780

agtacaagat ggctctgtat aatctgtacc ctggggtgtt tgaaactgtg gagatgctgc 3840

cctctaaggc tggcatctgg agggtggagt gcctgattgg ggagcacctg catgctggca 3900

tgagcaccct gttcctggtg tacagcaaca agtgccagac ccccctgggc atggcctctg 3960

gccacatcag ggacttccag atcactgcct ctggccagta tggccagtgg gcccccaagc 4020

tggccaggct gcactattct ggcagcatca atgcctggag caccaaggag cccttcagct 4080

ggatcaaggt ggacctgctg gcccccatga tcattcatgg catcaagacc cagggggcca 4140

ggcagaagtt cagctctctg tacatctctc agttcatcat catgtactct ctggatggga 4200

agaagtggca gacctacagg ggcaacagca ctggcaccct gatggtgttc tttgggaatg 4260

tggactcttc tggcatcaag cacaacatct tcaatccccc catcattgct aggtatatta 4320

ggctgcatcc cacccactac agcatcaggt ctaccctgag gatggagctg atgggctgtg 4380

acctgaactc ttgcagcatg cccctgggca tggagtctaa ggccatctct gatgcccaga 4440

ttactgccag cagctacttc accaacatgt ttgccacctg gagcccctct aaggccaggc 4500

tgcatctgca ggggaggagc aatgcctgga ggcctcaggt gaacaacccc aaggagtggc 4560

tgcaggtgga tttccagaag accatgaagg tgactggggt gaccacccag ggggtcaaga 4620

gcctgctgac cagcatgtat gtgaaggagt tcctgatcag cagcagccag gatggccacc 4680

agtggactct gttctttcag aatgggaagg tgaaggtgtt tcagggcaat caggactctt 4740

tcacccctgt ggtgaacagc ctggaccccc ccctgctgac cagatacctg aggatccacc 4800

cccagtcttg ggtgcatcag attgccctga ggatggaggt gctgggctgt gaggctcagg 4860

atctgtactg agcggccgca ataaaagatc agagctctag agatctgtgt gttggttttt 4920

tgtgtaggaa cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac 4980

tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag 5040

cgagcgagcg cgcagctgcc tgcaggggca gcttgaagga aatactaagg caaaggtact 5100

gcaagtgctc gcaacattcg cttatgcgga ttattgccgt agtgccgcga cgccgggggc 5160

aagatgcaga gattgccatg gtacaggccg tgcggttgat attgccaaaa cagagctgtg 5220

ggggagagtt gtcgagaaag agtgcggaag atgcaaaggc gtcggctatt caaggatgcc 5280

agcaagcgca gcatatcgcg ctgtgacgat gctaatccca aaccttaccc aacccacctg 5340

gtcacgcact gttaagccgc tgtatgacgc tctggtggtg caatgccaca aagaagagtc 5400

aatcgcagac aacattttga atgcggtcac acgttagcag catgattgcc acggatggca 5460

acatattaac ggcatgatat tgacttattg aataaaattg ggtaaatttg actcaacgat 5520

gggttaattc gctcgttgtg gtagtgagat gaaaagaggc ggcgcttact accgattccg 5580

cctagttggt cacttcgacg tatcgtctgg aactccaacc atcgcaggca gagaggtctg 5640

caaaatgcaa tcccgaaaca gttcgcaggt aatagttaga gcctgcataa cggtttcggg 5700

attttttata tctgcacaac aggtaagagc attgagtcga taatcgtgaa gagtcggcga 5760

gcctggttag ccagtgctct ttccgttgtg ctgaattaag cgaataccgg aagcagaacc 5820

ggatcaccaa atgcgtacag gcgtcatcgc cgcccagcaa cagcacaacc caaactgagc 5880

cgtagccact gtctgtcctg aattcattag taatagttac gctgcggcct tttacacatg 5940

accttcgtga aagcgggtgg caggaggtcg cgctaacaac ctcctgccgt tttgcccgtg 6000

catatcggtc acgaacaaat ctgattacta aacacagtag cctggatttg ttctatcagt 6060

aatcgacctt attcctaatt aaatagagca aatcccctta ttgggggtaa gacatgaaga 6120

tgccagaaaa acatgacctg ttggccgcca ttctcgcggc aaaggaacaa ggcatcgggg 6180

caatccttgc gtttgcaatg gcgtaccttc gcggcagata taatggcggt gcgtttacaa 6240

aaacagtaat cgacgcaacg atgtgcgcca ttatcgccta gttcattcgt gaccttctcg 6300

acttcgccgg actaagtagc aatctcgctt atataacgag cgtgtttatc ggctacatcg 6360

gtactgactc gattggttcg cttatcaaac gcttcgctgc taaaaaagcc ggagtagaag 6420

atggtagaaa tcaataatca acgtaaggcg ttcctcgata tgctggcgtg gtcggaggga 6480

actgataacg gacgtcagaa aaccagaaat catggttatg acgtcattgt aggcggagag 6540

ctatttactg attactccga tcaccctcgc aaacttgtca cgctaaaccc aaaactcaaa 6600

tcaacaggcg ccggacgcta ccagcttctt tcccgttggt gggatgccta ccgcaagcag 6660

cttggcctga aagacttctc tccgaaaagt caggacgctg tggcattgca gcagattaag 6720

gagcgtggcg ctttacctat gattgatcgt ggtgatatcc gtcaggcaat cgaccgttgc 6780

agcaatatct gggcttcact gccgggcgct ggttatggtc agttcgagca taaggctgac 6840

agcctgattg caaaattcaa agaagcgggc ggaacggtca gagagattga tgtatgagca 6900

gagtcaccgc gattatctcc gctctggtta tctgcatcat cgtctgcctg tcatgggctg 6960

ttaatcatta ccgtgataac gccattacct acaaagccca gcgcgacaaa aatgccagag 7020

aactgaagct ggcgaacgcg gcaattactg acatgcagat gcgtcagcgt gatgttgctg 7080

cgctcgatgc aaaatacacg aaggagttag ctgatgctaa agctgaaaat gatgctctgc 7140

gtgatgatgt tgccgctggt cgtcgtcggt tgcacatcaa agcagtctgt cagtcagtgc 7200

gtgaagccac caccgcctcc ggcgtggata atgcagcctc cccccgactg gcagacaccg 7260

ctgaacggga ttatttcacc ctcagagaga ggctgatcac tatgcaaaaa caactggaag 7320

gaacccagaa gtatattaat gagcagtgca gatagagttg cccatatcga tgggcaactc 7380

atgcaattat tgtgagcaat acacacgcgc ttccagcgga gtataaatgc ctaaagtaat 7440

aaaaccgagc aatccattta cgaatgtttg ctgggtttct gttttaacaa cattttctgc 7500

gccgccacaa attttggctg catcgacagt tttcttctgc ccaattccag aaacgaagaa 7560

atgatgggtg atggtttcct ttggtgctac tgctgccggt ttgttttgaa cagtaaacgt 7620

ctgttgagca catcctgtaa taagcagggc cagcgcagta gcgagtagca tttttttcat 7680

ggtgttattc ccgatgcttt ttgaagttcg cagaatcgta tgtgtagaaa attaaacaaa 7740

ccctaaacaa tgagttgaaa tttcatattg ttaatattta ttaatgtatg tcaggtgcga 7800

tgaatcgtca ttgtattccc ggattaacta tgtccacagc cctgacgggg aacttctctg 7860

cgggagtgtc cgggaataat taaaacgatg cacacagggt ttagcgcgta cacgtattgc 7920

attatgccaa cgccccggtg ctgacacgga agaaaccgga cgttatgatt tagcgtggaa 7980

agatttgtgt agtgttctga atgctctcag taaatagtaa tgaattatca aaggtatagt 8040

aatatctttt atgttcatgg atatttgtaa cccatcggaa aactcctgct ttagcaagat 8100

tttccctgta ttgctgaaat gtgatttctc ttgatttcaa cctatcatag gacgtttcta 8160

taagatgcgt gtttcttgag aatttaacat ttacaacctt tttaagtcct tttattaaca 8220

cggtgttatc gttttctaac acgatgtgaa tattatctgt ggctagatag taaatataat 8280

gtgagacgtt gtgacgtttt agttcagaat aaaacaattc acagtctaaa tcttttcgca 8340

cttgatcgaa tatttcttta aaaatggcaa cctgagccat tggtaaaacc ttccatgtga 8400

tacgagggcg cgtagtttgc attatcgttt ttatcgtttc aatctggtct gacctccttg 8460

tgttttgttg atgatttatg tcaaatatta ggaatgtttt cacttaatag tattggttgc 8520

gtaacaaagt gcggtcctgc tggcattctg gagggaaata caaccgacag atgtatgtaa 8580

ggccaacgtg ctcaaatctt catacagaaa gatttgaagt aatattttaa ccgctagatg 8640

aagagcaagc gcatggagcg acaaaatgaa taaagaacaa tctgctgatg atccctccgt 8700

ggatctgatt cgtgtaaaaa atatgcttaa tagcaccatt tctatgagtt accctgatgt 8760

tgtaattgca tgtatagaac ataaggtgtc tctggaagca ttcagagcaa ttgaggcagc 8820

gttggtgaag cacgataata atatgaagga ttattccctg gtggttgact gatcaccata 8880

actgctaatc attcaaacta tttagtctgt gacagagcca acacgcagtc tgtcactgtc 8940

aggaaagtgg taaaactgca actcaattac tgcaatgccc tcgtaattaa gtgaatttac 9000

aatatcgtcc tgttcggagg gaagaacgcg ggatgttcat tcttcatcac ttttaattga 9060

tgtatatgct ctcttttctg acgttagtct ccgacggcag gcttcaatga cccaggctga 9120

gaaattcccg gacccttttt gctcaagagc gatgttaatt tgttcaatca tttggttagg 9180

aaagcggatg ttgcgggttg ttgttctgcg ggttctgttc ttcgttgaca tgaggttgcc 9240

ccgtattcag tgtcgctgat ttgtattgtc tgaagttgtt tttacgttaa gttgatgcag 9300

atcaattaat acgatacctg cgtcataatt gattatttga cgtggtttga tggcctccac 9360

gcacgttgtg atatgtagat gataatcatt atcactttac gggtcctttc cggtgatccg 9420

acaggttacg gggcggcgac ctgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt 9480

atttcacacc gcatacgtca aagcaaccat agtacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg 9540

cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ttagcgcccg 9600

ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc 9660

taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa 9720

aacttgattt gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc 9780

ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac 9840

tcaactctat ctcgggctat tcttttgatt tagacctgca ggcatgcaag cttggcactg 9900

gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt 9960

gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct 10020

tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg 10080

tcaagtcagc gtaatgctct gccagtgtta caaccaatta accaattctg attagaaaaa 10140

ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca ggattatcaa taccatattt 10200

ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg aggcagttcc ataggatggc 10260

aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca tcaatacaac ctattaattt 10320

cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca tgagtgacga ctgaatccgg 10380

tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt tcaacaggcc agccattacg 10440

ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc attcgtgatt gcgcctgagc 10500

gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa acaggaatcg aatgcaaccg 10560

gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct gaatcaggat attcttctaa 10620

tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt aaccatgcat catcaggagt 10680

acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc gtcagccagt ttagtctgac 10740

catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca tgtttcagaa acaactctgg 10800

cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct gattgcccga cattatcgcg 10860

agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa tttaatcgcg gcttcgagca 10920

agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta ttactgttta tgtaagcaga 10980

cagttttatt gttcatgatg atatattttt atcttgtgca atgtaacatc agagattttg 11040

agacacaacg tggctttgtt gaataaatcg aacttttgct gagttgaagg atcagatcac 11100

gcatcttccc gacaacgcag accgttccgt ggcaaagcaa aagttcaaaa tcaccaactg 11160

gtccacctac aacaaagctc tcatcaaccg tggctccctc actttctggc tggatgatgg 11220

ggcgattcag gcctggtatg agtcagcaac accttcttca cgaggcagac ctctcgacgg 11280

agttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt 11340

ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt 11400

tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga 11460

taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag 11520

caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata 11580

agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg 11640

gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga 11700

gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca 11760

ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa 11820

acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt 11880

tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac 11940

ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgt 11976

<210> 25

<211> 1457

<212> белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII-BDD

<400> 25

Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe

1 5 10 15

Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

20 25 30

Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg

35 40 45

Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val

50 55 60

Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile

65 70 75 80

Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln

85 90 95

Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser

100 105 110

His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser

115 120 125

Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp

130 135 140

Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu

145 150 155 160

Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser

165 170 175

Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile

180 185 190

Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr

195 200 205

Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly

210 215 220

Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp

225 230 235 240

Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr

245 250 255

Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val

260 265 270

Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile

275 280 285

Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser

290 295 300

Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met

305 310 315 320

Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His

325 330 335

Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro

340 345 350

Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp

355 360 365

Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser

370 375 380

Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385 390 395 400

Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

405 410 415

Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn

420 425 430

Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met

435 440 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu

450 455 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465 470 475 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

485 490 495

His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys

500 505 510

Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe

515 520 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

530 535 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg

545 550 555 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

565 570 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

580 585 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu

595 600 605

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp

610 615 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625 630 635 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

645 650 655

Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

660 665 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

675 680 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

690 695 700

Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly

705 710 715 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp

725 730 735

Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys

740 745 750

Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu

755 760 765

Lys Arg His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln

770 775 780

Glu Glu Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu

785 790 795 800

Asp Phe Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe

805 810 815

Gln Lys Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp

820 825 830

Asp Tyr Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln

835 840 845

Ser Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr

850 855 860

Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His

865 870 875 880

Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile

885 890 895

Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser

900 905 910

Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg

915 920 925

Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val

930 935 940

Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp

945 950 955 960

Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu

965 970 975

Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His

980 985 990

Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe

995 1000 1005

Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn

1010 1015 1020

Cys Arg Ala Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys

1025 1030 1035

Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr

1040 1045 1050

Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr

1055 1060 1065

Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe

1070 1075 1080

Ser Gly His Val Phe Thr Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met

1085 1090 1095

Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met

1100 1105 1110

Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly

1115 1120 1125

Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser

1130 1135 1140

Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg

1145 1150 1155

Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro

1160 1165 1170

Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser

1175 1180 1185

Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro

1190 1195 1200

Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe

1205 1210 1215

Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp

1220 1225 1230

Gly Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu

1235 1240 1245

Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn

1250 1255 1260

Ile Phe Asn Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro

1265 1270 1275

Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly

1280 1285 1290

Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys

1295 1300 1305

Ala Ile Ser Asp Ala Gln Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn

1310 1315 1320

Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln

1325 1330 1335

Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu

1340 1345 1350

Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val

1355 1360 1365

Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys

1370 1375 1380

Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu

1385 1390 1395

Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp

1400 1405 1410

Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr

1415 1420 1425

Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala

1430 1435 1440

Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr

1445 1450 1455

<210> 26

<211> 2351

<212> белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> FVIII дикого типа с BDD

<400> 26

Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe

1 5 10 15

Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

20 25 30

Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg

35 40 45

Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val

50 55 60

Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Asp His Leu Phe Asn Ile

65 70 75 80

Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln

85 90 95

Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser

100 105 110

His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser

115 120 125

Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp

130 135 140

Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu

145 150 155 160

Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser

165 170 175

Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile

180 185 190

Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr

195 200 205

Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly

210 215 220

Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp

225 230 235 240

Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr

245 250 255

Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val

260 265 270

Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile

275 280 285

Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser

290 295 300

Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met

305 310 315 320

Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His

325 330 335

Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro

340 345 350

Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp

355 360 365

Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser

370 375 380

Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385 390 395 400

Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

405 410 415

Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn

420 425 430

Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met

435 440 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu

450 455 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465 470 475 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

485 490 495

His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys

500 505 510

Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe

515 520 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

530 535 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg

545 550 555 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

565 570 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

580 585 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu

595 600 605

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp

610 615 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625 630 635 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

645 650 655

Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

660 665 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

675 680 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

690 695 700

Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly

705 710 715 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp

725 730 735

Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys

740 745 750

Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro

755 760 765

Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp

770 775 780

Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys

785 790 795 800

Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser

805 810 815

Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr

820 825 830

Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn

835 840 845

Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly

850 855 860

Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu

865 870 875 880

Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys

885 890 895

Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn

900 905 910

Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met

915 920 925

Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys

930 935 940

Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu

945 950 955 960

Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu

965 970 975

Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe

980 985 990

Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala

995 1000 1005

Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser

1010 1015 1020

Asn Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser

1025 1030 1035

Leu Leu Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu

1040 1045 1050

Ser Asp Thr Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg

1055 1060 1065

Met Leu Met Asp Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met

1070 1075 1080

Ser Asn Lys Thr Thr Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln

1085 1090 1095

Lys Lys Glu Gly Pro Ile Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met

1100 1105 1110

Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile

1115 1120 1125

Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro

1130 1135 1140

Ser Pro Lys Gln Leu Val Ser Leu Gly Pro Glu Lys Ser Val Glu

1145 1150 1155

Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys Val Val Val Gly Lys

1160 1165 1170

Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu Met Val Phe Pro

1175 1180 1185

Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn Leu His Glu

1190 1195 1200

Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu Ile Glu

1205 1210 1215

Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln Ile

1220 1225 1230

His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu

1235 1240 1245

Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Asp Gly Ala Tyr

1250 1255 1260

Ala Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn

1265 1270 1275

Arg Thr Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu

1280 1285 1290

Glu Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu

1295 1300 1305

Lys Tyr Ala Cys Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln

1310 1315 1320

Asn Phe Val Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg

1325 1330 1335

Leu Pro Leu Glu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp

1340 1345 1350

Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro

1355 1360 1365

Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala

1370 1375 1380

Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys Leu Thr Arg Ser His Ser

1385 1390 1395

Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro Ile Ala Lys Val Ser

1400 1405 1410

Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr Arg Val Leu Phe

1415 1420 1425

Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr Arg Lys Lys

1430 1435 1440

Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly Ala Lys

1445 1450 1455

Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr Gly

1460 1465 1470

Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser

1475 1480 1485

Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp

1490 1495 1500

Leu Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His

1505 1510 1515

Ile Tyr Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser

1520 1525 1530

Pro Gly His Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr

1535 1540 1545

Glu Gly Ala Ile Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val

1550 1555 1560

Pro Phe Leu Arg Val Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser

1565 1570 1575

Lys Leu Leu Asp Pro Leu Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln

1580 1585 1590

Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys

1595 1600 1605

Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys

1610 1615 1620

Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile Asn Glu Gly Gln Asn Lys

1625 1630 1635

Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln Gly Arg Thr Glu Arg

1640 1645 1650

Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu

1655 1660 1665

Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu Ile Asp Tyr

1670 1675 1680

Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe Asp Ile

1685 1690 1695

Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys Lys

1700 1705 1710

Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr

1715 1720 1725

Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser

1730 1735 1740

Gly Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr

1745 1750 1755

Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu

1760 1765 1770

His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp

1775 1780 1785

Asn Ile Met Val Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser

1790 1795 1800

Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly

1805 1810 1815

Ala Glu Pro Arg Lys Asn Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr

1820 1825 1830

Tyr Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu

1835 1840 1845

Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu

1850 1855 1860

Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Val Cys His

1865 1870 1875

Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln

1880 1885 1890

Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp

1895 1900 1905

Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys Asn

1910 1915 1920

Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His

1925 1930 1935

Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val Met

1940 1945 1950

Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser

1955 1960 1965

Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr

1970 1975 1980

Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr

1985 1990 1995

Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly

2000 2005 2010

Ile Trp Arg Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly

2015 2020 2025

Met Ser Thr Leu Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro

2030 2035 2040

Leu Gly Met Ala Ser Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala

2045 2050 2055

Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His

2060 2065 2070

Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser

2075 2080 2085

Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile

2090 2095 2100

Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser

2105 2110 2115

Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly Lys Lys Trp Gln Thr

2120 2125 2130

Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn

2135 2140 2145

Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile

2150 2155 2160

Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg

2165 2170 2175

Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys

2180 2185 2190

Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln

2195 2200 2205

Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser

2210 2215 2220

Pro Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp

2225 2230 2235

Arg Pro Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe

2240 2245 2250

Gln Lys Thr Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys

2255 2260 2265

Ser Leu Leu Thr Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser

2270 2275 2280

Ser Gln Asp Gly His Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys

2285 2290 2295

Val Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val

2300 2305 2310

Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His

2315 2320 2325

Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile Ala Leu Arg Met Glu Val Leu

2330 2335 2340

Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr

2345 2350

<210> 27

<211> 736

<212> белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> AAV-LK03 VP1 капсид

<400> 27

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr

435 440 445

Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln

565 570 575

Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr

580 585 590

Thr Arg Thr Val Asn Asp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 28

<211> 738

<212> белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> AAV-SPK VP1 капсид

<400> 28

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Ser Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 29

<211> 14

<212> белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант FVIII-BDD

<400> 29

Ser Phe Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg

1 5 10

<---

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая способ лечения человека, страдающего от гемофилии А (варианты). В одном из вариантов способ включает введение человеку, имеющему гемофилию А, рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), где векторный геном включает вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где вариант нуклеиновой кислоты имеет 95% или большую идентичность с SEQ ID NO:7. Изобретение расширяет арсенал способов лечения гемофилии А, приводящих к отсутствию спонтанных кровотечений у человека в течение по меньшей мере 1 года. 3 н. и 63 з.п. ф-лы, 28 ил., 6 табл., 10 пр.

1. Способ лечения человека, имеющего гемофилию A, включающий введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), где векторный геном включает вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где вариант нуклеиновой кислоты имеет 95% или большую идентичность с SEQ ID NO:7, где человек не демонстрирует спонтанных кровотечений в течение по меньшей мере 1 года.

2. Способ лечения человека, имеющего гемофилию A, включающий введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), где векторный геном включает вариант нуклеиновой кислоты, кодирующий фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где вариант нуклеиновой кислоты содержит не больше 2 цитозин-гуанин динуклеотидов (CpG), где человек не демонстрирует спонтанных кровотечений в течение по меньшей мере 1 года.

3. Способ лечения человека, имеющего гемофилию A, включающий введение рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (rAAV), где векторный геном включает нуклеиновую кислоту, кодирующую фактор VIII (FVIII) или кодирующую фактор VIII (FVIII), имеющий делецию B-домена (hFVIII-BDD), где доза вектора rAAV, вводимого человеку, составляет меньше 6×10¹² векторных геномов на килограмм (вг/кг), и где человек не демонстрирует спонтанных кровотечений в течение по меньшей мере 1 года.

4. Способ по п. 1 или 2, где доза вектора rAAV, вводимого человеку, составляет от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, включительно.

5. Способ по любому из пп. 1-3, где доза вектора rAAV, вводимого человеку, составляет от приблизительно 3×10¹¹ до приблизительно 7×10¹² вг/кг, включительно.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, больше, чем предсказанное на основе данных, полученных в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, в 1-4 раза больше, чем экспрессия, предсказанная на основе кривой линейной регрессии, полученной в исследованиях на не являющихся человеком приматах, которым вводили вектор rAAV.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемых у человека, как отражается в свертывающей активности, составляет приблизительно 3% или больше через 14 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 4% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 5% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 6% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 7% или больше через 21 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 8% или больше через 28 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 9% или больше через 28 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 10% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 11% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV, приблизительно 12% или больше через 35 или больше дней после введения вектора rAAV.

9. Способ по любому из пп. 1-7, где количество FVIII или hFVIII-BDD, экспрессируемого у человека, как отражается в свертывающей активности, составляет в среднем приблизительно 10% или больше за непрерывный 14-дневный период.

10. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-9, где вектор rAAV вводят человеку в дозе от приблизительно 1×10⁹ до приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, включительно, при этом указанный FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека на уровнях, составляющих в среднем от приблизительно 12% до приблизительно 100% активности, в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных дней, недель или месяцев после введения вектора rAAV.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека в стационарном состоянии, где активность не изменяется больше чем на 5-50% в течение 4, 6, 8 или 12 недель или месяцев.

12. Способ по любому из пп. 1-10, где FVIII или hFVIII-BDD продуцируется у человека в стационарном состоянии, где активность не изменяется больше чем на 25-100% в течение 4, 6, 8 или 12 недель или месяцев.

13. Способ по любому из пп. 1-12, где антитела к AAV у человека не обнаружены до введения вектора rAAV, или где указанный человек является серонегативным на AAV.

14. Способ по любому из пп. 1-12, где антитела к AAV у человека присутствуют в титре 1:5 или меньше до введения вектора rAAV.

15. Способ по любому из пп. 1-14, где у указанного человека не развивается клеточно-опосредованный иммунный ответ против вектора rAAV в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 непрерывных недель или месяцев после введения вектора rAAV.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где у человека не развивается гуморальный иммунный ответ против вектора rAAV, достаточный для снижения или блокирования терапевтического эффекта FVIII или hFVIII-BDD.

17. Способ по любому из пп. 1-16, где у человека не продуцируются поддающиеся обнаружению антитела к вектору rAAV в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или 6 месяцев после введения вектора rAAV.

18. Способ по любому из пп. 1-17, дополнительно включающий введение иммунодепрессантного средства.

19. Способ по любому из пп. 1-17, дополнительно включающий введение иммунодепрессантного средства после введения вектора rAAV.

20. Способ по любому из пп. 1-19, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты имеет 95-100% идентичность последовательности с SEQ ID NO:7.

21. Способ по любому из пп. 1-20, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты содержит 20 или меньше, 15 или меньше или 10 или меньше цитозин-гуанин динуклеотидов (CpG).

22. Способ по любому из пп. 1-20, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты содержит не больше 5 цитозин-гуанин динуклеотидов (CpG).

23. Способ по любому из пп. 1-20, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты содержит 4, 3, 2, 1 или 0 цитозин-гуанин динуклеотидов (CpG).

24. Способ по любому из пп. 1-20, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты содержит 1 цитозин-гуанин динуклеотид (CpG).

25. Способ по любому из пп. 1-24, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO:25, содержащую делецию одной или более аминокислот в последовательности SFSQNPPVLKRHQR (SEQ ID NO:29) или делецию всей последовательности SFSQNPPVLKRHQR.

26. Способ по любому из пп. 1-24, где нуклеиновая кислота или вариант нуклеиновой кислоты кодирует SEQ ID NO:25.

27. Способ по любому из пп. 1-24, где hFVIII-BDD идентичен hFVIII-BDD, кодируемому SEQ ID NO:19.

28. Способ по любому из пп. 1-27, где указанный вектор rAAV включает серотип AAV или псевдотип AAV, где указанный псевдотип AAV включает серотип капсида AAV, отличающийся от серотипа ITR.

29. Способ по любому из пп. 1-28, где векторный геном дополнительно включает интрон, элемент контроля экспрессии, один или более инвертированных концевых повторов (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV) и/или филлерную полинуклеотидную последовательность.

30. Способ по п. 29, где интрон присутствует в варианте нуклеиновой кислоты или фланкирует вариант нуклеиновой кислоты.

31. Способ по п. 29, где элемент контроля экспрессии функционально связан с вариантом нуклеиновой кислоты.

32. Способ по п. 29, где AAV ITR-повтор(ы) фланкирует 5' или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты.

33. Способ по п. 29, где филлерная полинуклеотидная последовательность фланкирует 5' или 3'-конец варианта нуклеиновой кислоты.

34. Способ по п. 29, где интрон, элемент контроля экспрессии, один или более инвертированных концевых повторов (ITR) аденоассоциированного вируса и/или филлерная полинуклеотидная последовательность были модифицированы с уменьшением содержания цитозин-гуанин динуклеотидов (CpG).

35. Способ по п. 29, где элемент контроля экспрессии включает конститутивный или регулируемый элемент контроля, или тканеспецифичный элемент контроля экспрессии, или промотор.

36. Способ по п. 29, где элемент контроля экспрессии включает элемент, обеспечивающий экспрессию в печени.

37. Способ по п. 29, где элемент контроля экспрессии включает промотор TTR или мутантный промотор TTR.

38. Способ по п. 37, где мутантный промотор TTR включает SEQ ID NO:22.

39. Способ по п. 37, где ITR включает один или более ITR любого из серотипов AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8 AAV или их комбинацию.

40. Способ по любому из пп. 1-39, где векторный геном включает ITR, промотор, поли-A-сигнал и/или интронную последовательность, представленную в SEQ ID NO:23.

41. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает модифицированную или вариантную последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV или последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV дикого типа.

42. Способ по любому из пп. 1-41, где вектор rAAV включает модифицированную или вариантную последовательность капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV, имеющую 90% или большую идентичность с последовательностями VP1, VP2 и/или VP3 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.

43. Способ по любому из пп. 1-41, где вектор rAAV включает последовательность капсида VP1, VP2 или VP3, выбранную из любого из серотипов AAV: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV-2i8.

44. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает капсид, обладающий 90% или большей идентичностью последовательности с капсидом LK03 (SEQ ID NO:27).

45. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает капсид, обладающий 90% или большей идентичностью последовательности с капсидом SPK (SEQ ID NO:28).

46. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает капсид LK03 (SEQ ID NO:27).

47. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает капсид SPK (SEQ ID NO:28).

48. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает вариант нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:7 и последовательность капсида LK03 (SEQ ID NO:27).

49. Способ по любому из пп. 1-40, где вектор rAAV включает вариант нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:7 и капсид SPK (SEQ ID NO:28).

50. Способ по любому из пп. 1-49, где вектор rAAV включает вариант нуклеиновой кислоты и одно или более из мутантного промотора TTR (TTRmut), синтетического интрона, поли-A и ITR в SEQ ID NO:23.

51. Способ по любому из пп. 1-49, где вектор rAAV включает вариант нуклеиновой кислоты и одно или более из мутантного промотора TTR (TTRmut), синтетического интрона, поли-A и ITR в SEQ ID NO:23 и последовательность капсида LK03 (SEQ ID NO:27) или капсид SPK (SEQ ID NO:28).

52. Способ по любому из пп. 1-51, где вектор rAAV включает фармацевтическую композицию.

53. Способ по п. 52, где фармацевтическая композиция включает биологически совместимый носитель или эксципиент.

54. Способ по любому из пп. 1-53, дополнительно включающий введение пустого капсида AAV, где, необязательно, пустой капсид AAV вводят с вектором rAAV.

55. Способ по любому из пп. 1-53, дополнительно включающий введение пустого капсида серотипа AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и/или AAV-Rh74.

56. Способ по любому из пп. 1-53, дополнительно включающий введение пустого капсида AAV того же серотипа, что и вводимый вектор AAV.

57. Способ по любому из пп. 1-53, дополнительно включающий введение пустого капсида, имеющего капсид LK03 (SEQ ID NO:27) или капсид SPK (SEQ ID NO:28).

58. Способ по любому из пп. 53-57, где отношение указанных пустых капсидов к указанному вектору rAAV составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 50:1.

59. Способ по любому из пп. 1-58, где FVIII или hFVIII-BDD, кодируемый вариантом нуклеиновой кислоты, экспрессируется в клетке, ткани или органе указанного млекопитающего.

60. Способ по п. 59, где клетка включает секреторную клетку.

61. Способ по п. 59, где ткань или орган указанного млекопитающего включает печень.

62. Способ по любому из пп. 1-61, где вектор rAAV доставляют указанному человеку внутривенно, внутриартериально, внутримышечно, подкожно, внутриполостно, или путем интубации, или через катетер.

63. Способ по любому из пп. 1-62, где FVIII или hFVIII-BDD экспрессируется на уровнях без существенного увеличения риска тромбоза.

64. Способ по любому из пп. 1-63, где активность FVIII или hFVIII-BDD поддается обнаружению в течение по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 недель или по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев, или по меньшей мере 1 года.

65. Способ по любому из пп. 1-64, где человек не требуют профилактики с белком FVIII в течение по меньшей мере 1, 2, 3 или 4 недель, или по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 месяцев, или по меньшей мере 1 года.

66. Способ по любому из пп. 1-65, дополнительно включающий анализ у человека или наблюдение человека на наличие или количество антител к AAV, иммунный ответ против AAV, антитела к FVIII или hFVIII-BDD, иммунный ответ против FVIII или hFVIII-BDD, количества FVIII или hFVIII-BDD, активность FVIII или hFVIII-BDD, количества или уровни одного или более ферментов печени, или частоту и/или тяжесть, или продолжительность эпизодов кровотечения.