Способ прижизненного получения образца внутренней пограничной мембраны сетчатки Российский патент 2023 года по МПК A61B3/00 A61F9/00 A61F9/07 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и гистологии, и может быть использовано для прижизненного получения образца внутренней пограничной мембраны сетчатки.

Витреоретинальные хирургические операции с проведением удаления эпимакулярной фиброзной ткани (ЭМФ) и внутренней пограничной мембраны сетчатки (ВПМ) являются рутинной процедурой при ряде заболеваний и состояний заднего отрезка глаза, в частности витреомакулярного интерфейса (ВМИ). По сообщениям ряда авторов, указанные процедуры могут приводить к развитию осложнений, таких как формирование дефектов поля зрения (Akino K et al. Risk of newly developing visual field defect and neurodegeneration after pars plana vitrectomy for idiopathic epiretinal membrane. Br J Ophthalmol. 2020 Oct 5:bjophthalmol-2020-317478) и атрофических изменений сетчатки (Romano MR et al. Macular hypotrophy after internal limiting membrane removal for diabetic macular edema. Retina. 2014 Jun; 34(6):1 182-9). Для понимания механизмов развития подобных осложнений необходимо выполнение не только функционального обследования пациентов (оценка остроты зрения, микропериметрия и т.д.), но и получение данных о структурных и микроанатомических особенностях ВМИ, в том числе ВПМ.

Известны исследования по изучению полученных интраоперационно образцов ВПМ, ЭМФ и единых многокомпонентных блоков тканей (Сдобникова С.В., Ревищин А.В., Махотин С.С, Павлова Г.В., Сдобникова Л.Е. Особенности архитектоники новообразованной сосудистой системы при диабетической ретинопатии // Медицинский вестник Башкортостана. 2018. №1 (73); Mehta, A., Rana-Rahman, R., Klaassen, I., Rees, J., & Steel, D. H. (2020). The Effect of Internal Limiting Membrane Cleaning on Epiretinal Membrane Formation after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy. Ophthalmologica). Однако в этих работах не описан процесс получения образца тканей заднего отрезка глаза и его структурных и анатомических свойств после извлечения из глаза.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа является способ того же назначения, включающий витрэктомию, введение в область витреоретинального интерфейса красителя, пилинг ВПМ эндовитреальным пинцетом, извлечение и изучение ВПМ (Столяренко Г.Е., Колчин А.А., Диденко Л.В., Боровая Т.Г., Шевлягина Н.В. Пористая коралловидная структура - новое представление о морфологии внутренней пограничной мембраны сетчатки. Вестник офтальмологии. 2016; 132(6):70-77).

Задачей изобретения является дальнейшая разработка способа прижизненного получения ВПМ.

Техническим результатом способа является возможность получения ВПМ в результате пилинга с сохранением их структурных и микроанатомических свойств для дальнейшего исследования.

Технический результат достигается за счет пилинга ВПМ под контролем интраоперационной оптической когерентной томографии сетчатки и извлечении образца ВПМ при отсутствии при повторном введении эндовитреального красителя окрашивания сетчатки в зоне пилинга и наличии точечных геморрагий и бледности сетчатки в зоне пилинга, экстракции ВПМ вместе со средой BSS с помощью канюли 25G, соединенной через силиконовую трубку со шприцем.

Опытным путем на основании собственных наблюдений нами было установлено, что попытки извлечения образцов тканей через витрэктомические порты стандартных диаметров (23-27G) часто неудачны (образец не удается извлечь из глаза) либо приводят к выраженному повреждению, фрагментации и «скручиванию» образцов с утратой структурной и микроанатомической целостности. Последнее оказывает значимое негативное влияние на результаты исследования образцов.

Проведение интраоперационной оптической когерентной томографии сетчатки в сочетании с косвенными визуальными признаками - отсутствием при повторном введении красителя окрашивания сетчатки в зоне пилинга, наличии точечных геморрагии и бледности сетчатки в зоне пилинга указывают на то, что удалена именно ВПМ, а не ЭМФ. Использование канюли 25G и извлечение образца в среде BSS без контакта с внешней средой позволяют снизить риск травматического повреждения образца в процессе его извлечения.

Способ первоначально был отработан на кадаверных глазах. Приемы предложенного способа позволяют сохранить структурную целостность образца, исключить контакт со внешней средой и инородными веществами в процессе получения, а также снизить риск повреждения образца при извлечении его из глаза. Таким образом, нахождение образца в состоянии свободного плавания без контакта с иными веществами и внешней средой предохраняет его от повреждений, «скручивания» и фрагментации.

Было получено разрешение локального этического комитета на применение метода в клинической практике. По предложенному способу получено 3 образца ВПМ от пациентов, прооперированных по поводу витреоретинальных заболеваний с последующей микроскопией образцов.

Способ осуществляют следующим образом:

Проводят витрэктомию, вводят в область витреоретинального интерфейса краситель. Осуществляют пилинг ВПМ эндовитреальным пинцетом в макулярной области под контролем интраоперационной оптической когерентной томографии сетчатки. При отсутствии при повторном введении эндовитреального красителя окрашивания сетчатки в зоне пилинга, наличии точечных геморрагий и бледности сетчатки в зоне пилинга лоскут ВПМ, отделенный от сетчатки и находящийся в витреальной полости в среде BSS, подвергают экстракции вместе со средой BSS с помощью экструзионной канюли 25G, соединенной через силиконовую трубку со шприцем. Затем лоскут ВПМ извлекают из шприца и исследуют.

Клинический пример:

Пациент М. обратился в клинику с жалобами на снижение остроты зрения, метаморфопсии. По результатам осмотра и данных оптической когерентной томографии установлен диагноз - эпимакулярный фиброз правого глаза. Выполнена стандартная операция - витрэктомия правого глаза. В витреальную полость ввели ретинальный краситель с экспозицией 2 минуты, как это принято. Затем при помощи эндовитреального пинцета под контролем интраоперационной оптической когерентной томографии макулярной области сетчатки выполнено удаление ВПМ. Отделенный от сетчатки лоскут ВПМ оставили свободно плавающим в витреальной полости в среде BSS. Провели подготовку системы экстракции лоскута: экструзионную канюлю 25G с помощью гибкой силиконовой трубки соединили со шприцем объемом 2 миллилитра. Наконечник канюли приблизили к лоскуту ВПМ. В момент сближения осуществили аспирацю ВПМ с раствором BSS из витреальной полости путем тракции за поршень шприца в полость цилиндра шприца. После извлечения из витреальной полости лоскут ВПМ находился в среде BSS в цилиндре шприца. ВПМ извлекли из BSS с помощью эндовитреального пинцета и исследовали с помощью микроскопии. Образец фиксировали при помощи глутарового альдегида, выполнено окрашивание на выявление белков beta III Tubulin (для выявления нейронов), Glutamine Synthetase (на выявление глиальных клеток), а также на выявление ДНК при помощи красителя 4',6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI). Произведена флуоресцентная микроскопия (Фиг. 1. Изображение внутренней пограничной мембраны, исследованной методом флуоресцентной микроскопии. Визуализируется целостная структура внутренней пограничной мембраны с ядрами клеток (синий цвет) на поверхности образца и участками скопления глиальных клеток (зеленый цвет), единичные включения нейрональной ткани (красный цвет).

Таким образом, подготовленный образец сохранил свою структурную целостность и микроанатомические свойства.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и гистологии, и может быть использовано для прижизненного получения образца внутренней пограничной мембраны сетчатки. Проводят витрэктомию, вводят в область витреоретинального интерфейса краситель. Осуществляют пилинг ВПМ эндовитреальным пинцетом в макулярной области под контролем интраоперационной оптической когерентной томографии сетчатки. При отсутствии при повторном введении эндовитреального красителя окрашивания сетчатки в зоне пилинга, наличии точечных геморрагий и бледности сетчатки в зоне пилинга, лоскут ВПМ, отделенный от сетчатки и находящийся в витреальной полости в среде BSS, подвергают экстракции вместе со средой BSS с помощью экструзионной канюли 25G, соединенной через силиконовую трубку со шприцем. Затем лоскут ВПМ извлекают из шприца и исследуют. Изобретение обеспечивает возможность получения ВПМ в результате пилинга с сохранением их структурных и микроанатомических свойств для дальнейшего исследования. 1 ил., 1 пр.

Способ прижизненного получения образца внутренней пограничной мембраны сетчатки (ВПМ), включающий витрэктомию, введение в область витреоретинального интерфейса красителя, пилинг ВПМ эндовитреальным пинцетом, отличающийся тем, что пилинг ВПМ проводят в макулярной области под контролем интраоперационной оптической когерентной томографии сетчатки и при отсутствии при повторном введении эндовитреального красителя окрашивания сетчатки в зоне пилинга ВПМ, наличии точечных геморрагий и бледности сетчатки в зоне пилинга, лоскут ВПМ, отделенный от сетчатки и находящийся в витреальной полости в среде BSS, подвергают экстракции вместе со средой BSS с помощью экструзионной канюли 25G, соединенной через силиконовую трубку со шприцем, затем лоскут ВПМ извлекают из шприца и исследуют.