Фармацевтические композиции Тиохроменола на основе гексагидро-гетероциклического соединения, обладающие анальгезирующим действием, и методы их использования у домашних и сельскохозяйственных животных Российский патент 2024 года по МПК A61K31/352 A61K31/381 A61K47/10 A61K47/14 A61K9/08 A61P29/00 

Область применения изобретения в медицине и ветеринарии - для местного и общего обезболивания при травмах, хирургических операциях и для лечения заболеваний, имеющих симптомы острой или хронической боли. Многие анальгетики также являются противовоспалительными средствами, что, как правило, улучшает их анальгезирующее действие в длительном периоде времени. Клиническое применение известных анальгетиков имеет много ограничений, таких как слабость обезболивания, плохая растворимость, наркотическое привыкание, токсичность. Поэтому поиск новых более эффективных анальгезирующих средств продолжается.

Предметом настоящего изобретения являются активные фармацевтические композиции анальгетика Тиохроменола: 4,7-диметил-3,4,4а,5,58а-гексагидро-2Н-хромен-4,8-диол (4,7-диметил-3,4,4a,5,8,8a-гексагидро-2H-тиохроменол-4,8-diol) - один из представителей гетероциклических соединений с общей химической формулой, представленной на Фиг. 1. Эти соединения получают взаимодействием изопулегола 2 с тиофен-2-карбальдегидом в присутствии модифицированной монтмориллонитовой глины Н-К10 в условиях микроволнового облучения с выходом конечного продукта 50% (Фиг 2). Соединение впервые синтезировано в Новосибирском институте органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения РАН (НИОХ СО РАН), распоряжение правом использования патента «ПРОИЗВОДНЫЕ 2Н-ХРОМЕНА В КАЧЕСТВЕ АНАЛЬГЕЗИРУЮЩИХ СРЕДСТВ» RU 2555361, дата приоритета 08.07.2014 г [7], права на использование РИД переданы по лицензионному договору РД0206921 от 26.09.2016. Фармацевтические композиции Тиохроменола с определённым составом и доказанным терапевтическим действием у животных или человека до настоящего времени не создавались.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1: общая химическая структурная формула Тиохроменолов;

Фигура 2: получение Тиохроменолов;

Фигура 3: общие химические структурные формулы НПВС (анальгезирующее, противовоспалительное, иногда жаропонижающее действие) - Пиразолоны, метамизол натрия (анальгин);

Фигура 4: НПВС - производные пропионовой кислоты - Кетопрофен;

Фигура 5: НПВС - производные салициловой к-ты Салицилаты АЦЦ, аспирин;

Фигура 6: НПВС - производные уксусной кислоты и родственные соединения - диклофенак натрия;

Фигура 7: Анилиды - активаторы амид-гидролазы жирных кислот (FAAH) и ингибиторы ноцицепторов TRPV1 - Парацетамол (жаропонижающее, анальгезирующее действие);

Фигура 8: примеры гетероциклических соединений-анальгетиков - Этил-2-амино-7,7-диметил-2',5-диоксо-5'-фенил-1',2',5,6,7,8-гексагидроспиро[хромен-4,3'-пиррол]-4'-карбоксилаты;

Фигура 9: примеры гетероциклических соединений-анальгетиков - 3-(2-Арил-2,4-дигидрокси-1(2-гидроксиэтил)-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-3-YL) хиноксалин-2(1H)-оны;

Фигура 10: Примеры гетероциклических соединений-анальгетиков - Четырехзамещенные Пиперазино-дигидротиенопиримидины;

Фигура 11: примеры гетероциклических соединений-анальгетиков - производные 4-(2-(пирролидин/пиперидин-1-ил)бензил)- пиперазин-мочевины;

Фигура 12: анальгетический эффект раствора Тиохроменола в миглиоле по времени реакции отдергивания хвоста мышей в сравнении с трамадолом через 30 минут после введения анальгетика;

Фигура 13: Анальгетический эффект раствора Тиохроменола в миглиоле по времени реакции отдергивания хвоста мышей в сравнении с трамадолом через 24 часа после введения анальгетика;

Фигура 14: шкала определения уровня болевых ощущений у кошек по выражению морды (Feline Grimace Scale);

Фигура 15: оценка анальгезирующего действия раствора Тиохроменола в миглиоле у собак в постоперационном периоде за 24 часа в постоперационном периоде (овариоэктомия) по шкале Глазго;

Фигура 16: оценка анальгезирующего действия раствора Тиохроменола в миглиоле у кошек в постоперационном периоде за 24 часа в операциях остеосинтеза при переломах лап по Шкале гримас.

ИЗВЕСТНЫЕ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИЕ АНАЛЬГЕТИКИ

Среди аналогов-анальгетиков по химической структуре гетероциклические соединения относятся к группе нестероидных противовоспалительных средств (НПВС), которая включает Бутилпиразолидины (бутадион и аналоги), Коксибы (целекоксиб, целебрекс), Оксикамы (артрозан, мелоксикам), Пиразолоны (Фиг. 3, метамизол натрия, баралгин), Производные пропионовой кислоты (Фиг. 4, ибупрофен, кетопрофен), Производные салициловой кислоты (Фиг. 5, аспирин, АЦЦ, салицилаты), Производные уксусной кислоты и родственные соединения (Фиг. 6, индометацин, диклофенак натрия - ингибиторы синтеза простагландинов) [1,2]. Гетероциклические соединения могут быть отнесены к отдельной 8-ю группе НПВС, хотя они очень разнородны по химическим структурам и механизму действия. Хотя существует другое мнение о том, что из-за непохожести механизма анальгезирующего действия гетероциклические соединения должны быть отдельным классом анестетиков [8].

Все семь перечисленных групп НПВС объединены общим биохимическим механизмом действия в организме, а именно, неселективно блокируют циклооксигеназу 1-го и 2-го типов (ЦОГ-1 и ЦОГ-2), снижают образование простагландинов из арахидоновой кислоты и тем самым оказывают на организм противовоспалительное, обезболивающее и жаропонижающее действие [1].

Большинство широко известных и распространенных НПВС синтезированы еще в 50-80-е годы, их фармакологическое действие хорошо изучено, и срок действия патентов на их получение истек.

Гетероциклические анальгезирующие вещества - пока крайне мало изученная и разноплановая группа, имеют другой механизм действия. По этому механизму гетероциклы могут быть условно разбиты на две подгруппы:

1) первая подгруппа - работают через модерацию канабиноидного рецептора центральной и периферической нервной системы СВ1 и через дофаминовые рецепторы ЦНС и ПНС D1 и/или D2 [1]. Анальгезирующее действие известных агентов носит как системный, так и местный характер, но они не обладают противовоспалительным действием, жаропонижающее действие не ярко выраженное. Предмет настоящего изобретения - фармацевтические композиции на основе Тиохроменола относятся к этой группе;

2) вторая подгруппа гетероциклических анальгетиков - работают через активацию биотрансформации амид-гидролазы жирных кислот (FAAH) в арахидоноил-феноламин и ингибирует ноцицепторы (рецепторы болевого импульса) TRPV1, расположенные на отростках периферических нейронов и нейронов головного мозга [8, 9]. Подобный механизм действия характерен для класса ненаркотических анальгетиков группы анилиды, к которым относится парацетамол (Фиг. 7), [2]. Гетероциклы этой подгруппы не относятся к НПВС, у них не наблюдалось проявление противовоспалительного действия. В то же время по химической структуре эти соединения наиболее близки к действующему веществу производной Тиохроменола и могут считаться его ближайшими аналогами.

Аналогами Тиохроменолов можно считать растительные каннабиноиды, но поскольку эти соединения экстрагируются из природных источников, они обладают большим спектром биологических свойств, например, противоопухолевых, успокоительных, противосудорожных и т.д. Поэтому сравнивать их с Тиохроменолами в качестве анальгетиков не очень правильно.

Еще один класс анальгетиков, которые можно называть аналогами Тиохроменолов - это использующие механизм действия при помощи связывания с опиоидными рецепторами ненаркотические обезболивающие [2]. Это такие анальгетики, механизм действия которых осуществляется через опиоидные рецепторы получения сигнала боли μ-, κ- и δ- типов (обычно сразу к двум или трём типам), но по сравнению с наркотическими (вызывающими привыкание) сильными анальгетиками их центральное и периферическое анальгезирующее действие в два и более раз меньше. Это может происходить как из-за более низкой аффинности к рецепторам опиатов, так и по причине рацематных смесей энантиомеров «+» и «-» в составе препарата, как это происходит, например, у Трамадола. Энантиомер «+» трамадола является умеренным агонистом опиоидных μ-рецепторов, в то время как энантиомер «-» ингибирует обратный захват нейронами НА и 5-НТ, усиливая активность эндогенной анти-ноцицептивной системы.

Ненаркотический опиоидный анальгетик трамадол, наркотический анальгетик морфин, нестероидные противовоспалительные кетопрофен, диклофенак натрия, мелоксикам принимались за контроль сравнения при испытаниях анальгетической активности на животных полученных фармацевтических композиций Тиохроменола.

Рассмотрим ближайшие аналоги изобретения, известные из уровня техники современных фармацевтических разработок.

Синтез аналогов предмета изобретения Тиохроменола - разнообразных гетероциклических карбоксилатов, для которых наблюдается анальгезирующий эффект в тестах на лабораторных мышах с горячей пластинкой описан в более чем 20 научных работах и патентах сотрудников Пермского университета [3-6].

На Фиг. 8 представлена структурная формула Этил-2-амино-7,7-диметил-2',5-диоксо-5'-фенил-1',2',5,6,7,8-гексагидроспиро[хромен-4,3'-пиррол]-4'-карбоксилатов. Метод синтеза и выделения из смеси продуктов гексагидроспиро-хромен-карбоксилата, обладающего анальгезирующей активностью описан в патенте RU(11)2 435 774(13)C1 [3]. Немного другие гетероциклические карбоксилаты были получены теми же авторами [4] и так же демонстрировали анальгетические свойства.

Оценку анальгетических свойств соединений (IIIa, IIIe, IIIж) изучали на беспородных белых лабораторных мышах массой 18-22 грамм методом термического раздражения «горячая пластинка» по Эдди и Леймбах (Eddy N.B., Leimbarh D.J. Pharmacol and Exper. Gher., 1953, 385-393). В качестве препарата сравнения использовали анальгин (М.Д. Машковский, Лекарственные средства, т. 1, стр. 184, М., Медицина, 1978).

Проведенные исследования показали (Табл. 1), что соединения (IIIa, е, ж) обладают анальгетической активностью (тест проводится методом опускания хвоста мыши в горячую 46-52°С воду). Из данных видно, что обезболивающий эффект задерживает время реакции более чем вдвое, но все же оказывает более слабое воздействие, чем анальгин. Данные о механизме фармацевтического действия гексагидроспиро-хромен-карбоксилатов и активности аналогов заявляемых соединений в работах авторов отсутствуют.

Таблица 1. Анальгезирующая активность по времени реакции отдергивания хвоста мышей в тесте «горячая пластинка, препарат сравнения - анальгин [3] Анальгетическая активность соединений (IIIa, е, ж). № соединения Доза, мг/кг Время оборонительного рефлекса через 2 часа 2.5 часа Контроль 2% крахм. слизь 50 8.95±0.78 Анальгин (метамизол натрия) 93 (ЕД50 ) 24.56±4.97 IIIa 50 19.08±3.82 IIIe 50 19.17±3.52 IIIж 50 16.75±1.91

На Фиг. 9 представлена общая структурная формула 3-(2-Арил-2,4-дигидрокси-1(2-гидроксиэтил)-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-3-YL)хиноксалин-2(1H)-онов, синтезированных учеными из того же Пермского университета [5]. Оценку анальгетических свойств соединений (IIIa, е, ж) изучали тем же методом термического раздражения «горячая пластинка» по Эдди и Леймбах. В качестве препарата сравнения использовали анальгин. Из данных Табл. 2 видно, что в этом случае синтезированные соединения проявляли даже лучшее обезболивающее действие, чем анальгин.

Другие работы ученых Пермского университета тестировали анальгетическую активность синтезированных соединений тем же методом и не содержат экспериментов по изучению механизма действия или разработки фармацевтических композиций.

Анализ приведенных данных показывает, что все многочисленные гетероциклические соединения этого типа [3-6] не растворяются ни в воде при любых рН, ни в неполярных органических растворителях (маслах), ни в большинстве полярных органических растворителей, таких как спирты. Разработчики растворяли свои соединения в диметилсульфоксиде (ДМСО) и диметилформамиде (ДМФА), а введение доз животным осуществлялось уколом в заднюю лапу подкожно, откуда мыши слизывали вытекающую вязкую жидкость с испытываемыми агентами. В этом случае вызывает сомнение точность оценки вводимых дозировок и, соответственно, оценка анальгезирующей эффективности.

Таблица 2. Анальгетическая активность соединений 5а и 5б Название соединения Доза, мг/кг Время оборонительного рефлекса через 2 часа после введения Контроль 2% слизь крахмала 50 10.20±0.41 Метамизол натрия (анальгин) 93 (E):(so) 16.33±3.02 5a 50 20.10±0.33 56 50 24.30±1.14

Но основное ограничение, которое делает аналоги гетероциклов типа хромен-4,3'-пиррол-карбоксилатов и пиррол-хиноксалинонов [3-6] неконкурентоспособными по сравнению с настоящим изобретением - токсичные растворители ДМСО и ДМФА, относящиеся к второму классу опасности для людей и животных. При такой общей токсичности эти соединения не смогут применяться в ветеринарной медицине для любого внутреннего употребления.

П. Пуце, Р. Андеркевиц [DE] и др. из компании Бёрингер Ингельхайм в 2008 году получили патент на синтез определенными способами более 160 производных гетероциклических производных дигидро-тиопиримидинов с различными вариантами четырёх радикалов соединений [7]. Дигидро-тиопиримидины (Фиг. 10) могут считаться аналогами Тиохроменола, однако имеют атомы азота в составе бензольных и пятичленных ароматических колец. и серы в составе 5ти-членного кольца, расположенного вместе с бензольным кольцом. Но, несмотря на то, что в формуле изобретения дигидро-тиопиримидинов есть пункты о лечении почти всех болезней, в том числе нервной системы (обезболивание), в описании заявки на патент нет никаких данных об экспериментальной оценке их возможных терапевтических или биологических свойств. То есть неизвестно, обладают ли получаемые соединения заявленной биологической активностью, растворяются ли они вообще в каких-то растворителях. Если соединения не растворяются, то изготовить их них лекарственные формы, в том числе таблетированные, трудно. А если нет биологического действия, то может оказаться, что ни одно из синтезированных соединений дигидро-тиопиримидинов не применимо на практике и в промышленности, то есть защита любого из них в качестве изобретения не отвечает условию «промышленная применимость».

Тиохроменол отличается от любого из аналогов тем, что для него сделан раствор для получения фармацевтических композиций с концентрацией действующего вещества 0,005-2% и доказано в экспериментах на животных наличие обезболивающих свойств у каждой из композиций приведенного состава.

Ближайшие аналоги изобретения, которые можно считать его прототипами, получены китайскими учеными-химиками Yan L., Hu J., Qiao Y. и др. как производные 4-(2-(пирролидин/пиперидин-1-ил)бензил)-пиперазинов мочевины [8-9]. Эти гетероциклические соединения по механизму действия не относятся ни к опиоидным, ни к нестероидным противовоспалительным анальгетикам. Анальгезирующие свойства выражаются в воздействии на хроническую или непрекращающуюся боль путем блокировки периферических ноцицепторов и передачи сигнала через боковые отростки спинного мозга. Практика показывает, что хорошие анальгетики должны воздействовать на периферические и боковые отростки спинного мозга, что у прототипов достигнуто. При этом пиперазины вызывают биотрансформацию амид-гидролазы жирных кислот (FAAH- (fatty acid amide hydrolase) трансформация), которая, в свою очередь, связывается с ноцицепторами TRPV1, одним из видов ноцицепторов сенсорных нейронов, иначе TRPV1 называют рецепторами боли первой очереди, отвечающими за местное обезболивание. Одновременно происходит ингибирование антиноцицепторов TRPV1 в головном мозге, при котором анальгезирующее действие проявляется уже на уровне центральной нервной системы.

По механизму действия гетероциклические прототипы-анальгетики похожи на ненаркотические анальгетики анилиды, к которым относится парацетамол (Фиг. 3). Но по структурным химическим формулам пирролидин/пиперидин-пиперазины (Фиг. 11) значительно больше и сложнее анилидов, и также существенно отличаются от Тиохроменола. А именно, в составе молекул содержится множество аминогрупп и азот в составе циклических звеньев, но отсутствует сера.

Однако, несмотря на то, что авторы заявляют о высокой биодоступности производных 4-(2-(пирролидин/пиперидин-1-ил)бензил)-пиперазинов мочевины, при изучении их анальгетических свойств они почему-то изучают ингибирование ноцицепторов TRPV1 с их известным блокатором капсайцином в качестве контроля на моделях в стабильно трансфецированных клеточных культурах in vitro [8-9]. При этом они не проводят тестирование собственно обезболивающего эффекта этих соединений на животных ни в одном тесте, хотя общепринятые методики на лабораторных мышах недороги и достаточно просты («горячая пластинка» по Эдди и Леймбах, отдергивание хвоста при облучении инфракрасным нагревателем). Отсутствие доклинических испытаний на животных заставляет задуматься о том, что проявление анальгезирующих свойств так же, как создание лекарственных форм этих препаратов в реальности не имеют таких хороших перспектив, как заявляют авторы патентов.

ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Тиохроменол, или 4,7-диметил-3,4,4а,5,58а-гексагидро-2Н-хромен-4,8-диол, эмпирическая формула: C₁₅H₂₂O₂S, является нерастворимым в воде и большинстве органических растворителей веществом. Стабильный раствор для парентерального применения у животных готовят растворением 4,7-диметил-3,4,4а,5,58а-гексагидро-2Н-хромен-4,8-диол в миглиоле (Табл. 3), либо в этаноле с водой (Табл. 4), полиэтиленликоле с этанолом и водой (Табл. 5), в диметилсульфоксиде (ДМСО, Табл. 6). Растворы для инъекций стерилизуют методом ультрафильтрации.

Рабочие концентрации Тиохроменола в стерильных растворах для инъекций следующие:

Таблица 3. Препарат для подкожных и в/брюшинных инъекций на основе миглиола 0,5%, 1,0%, 1,5% № Наименование компонента Назначение Количество компонента Количество компонента Количество компонента 1 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил) октадигидро-2Н-хромен-4-ол Действующее вещество 5,0 г 10,0 г 15,0 г 2 Бензиловый спирт Консервант 10 г 10 г 10 г 3 Миглиол-840 (пропиленгликоля дикаприлокапрат) Растворитель До 1000 мл До 1000 мл До 1000 мл

Наиболее концентрированные растворы тиохроменола получают в миглиоле, но из-за вязкости растворителя существует потребность разработки растворов для внутримышечных и внутривенных инъекций. Спиртоводные растворы тиохроменола с концентрацией 0,0001-0,005% (Табл. 4) могут успешно применяться для анальгезирования у мелких домашних животных (морских свинок), также у кошек и мелких пород собак.

Таблица 4. Препараты для инъекций на водно-спиртовой основе 0,0001%, 0,0005%, 0,001%, 0,005% № Наименование компонента Назначение Кол-во комп. Кол-во комп. Кол-во комп. Кол-во комп. 1 4,7-ди-метил-2-(тиофен-2-ил)октадигидро-2Н-хромен-4,8-диол Действующее вещество 1,0 мг 5,0 мг 10,0 мг 50,0 мг 2 Этиловый спирт 95%, (1-5% в/в) Растворитель, консервант 10 мл 10 мл 10 мл 50 мл 3 Вода очищенная Растворитель до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл

Для увеличения растворимости тиохроменола с целью изготовления растворов для внутримышечных/внутривенных инъекций (Табл. 5) добавляли различные виды полиэтиленгликоля (ПЭГ).

Таблица 5. Препараты для инъекций на водно-спиртовой основе с добавлением полиэтиленгликоля 0,001%, 0,005%, 0,01%, 0,05% № Наименование компонента Назначение Кол-во комп. Кол-во комп. Кол-во комп. Кол-во комп. 1 4,7-ди-метил-2-(тиофен-2-ил)октадигидро-2Н-хромен-4,8-диол Действующее вещество 10,0 мг 50,0 мг 100,0 мг 500,0 мг 2 Этиловый спирт 95%, (1-5% в/в) Растворитель, консервант 10 мл 50 мл 10 мл 10 мл ПЭГ-400 Растворитель 0-10 мл 0-50 мл 0-50 мл 0-50 мл 3. Вода очищенная Растворитель до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл до 1000 мл

Таблица 6. Препарат для местного применения в виде геля, мази 1% № п/п Компонент Назначение Количество компонента 1 Тиохроменол Действующее вещество 10,0 г 2 Диметилсульфоксид Растворитель 30 - 70 мл 3 Пропиленгликоль Растворитель 0 - 40 мл 4 Рицинолеат макроголглицерина Солюбилизатор 15,0 - 23,0 г 5 Глицерин Растворитель 0 - 8,0 г 6 Полоксамер Загуститель 8,0 - 12,0 г 7 Гидроксид натрия Регулятор pH 0,6 г 8 Лимонная кислота Регулятор pH 0,6 г 9 Бензиловый спирт Консервант 2,0 мл 10 Вода очищенная Растворитель До 1000 мл

Тиохроменол и его препараты являются умеренно опасными соединениями. При однократном внутрижелудочном водно-спиртового р-ра и подкожном введении масляного раствора Тиохроменола у крыс не вызывали гибели лабораторных животных при введении в дозе 2000 мг/кг живой массы. Установлено, что для масляного раствора Тиохроменола (разработанный прототип лекарственной формы раствора в миглиоле) при внутрижелудочном введении крысам составляет 380,68 мг/кг ЛД₅₀.

Согласно результатам изучения хронической токсичности при подкожном способе введения раствора Тиохроменола в миглиоле серьезных нарушений в работе органов и систем не выявлено. При сопоставлении данных клинических наблюдений, тестов двигательной активности крыс, клинико-лабораторных, патоморфологических и гистологических исследований в группах, получавших раствор Тиохроменола в миглиоле в течение 14 дней подкожно в дозах 1 мг/кг и 19 мг/кг, отклонений от контрольных животных не выявлено. При введении в максимальной дозе 38 мг/кг (в 35-40 раз превышающую предполагаемую терапевтическую) у крыс отмечались некоторые отклонения в общем состоянии, потреблении корма, признаки диспротеиноза печени. Ульцерогенное действие не выявлено. Согласно заключению Исполнителя, субстанция при длительном подкожном введении не обладает общетоксическим действием в изученных дозах. Эмбриотоксического и тератогенного действия не выявлено. Раствор Тиохроменола в миглиоле не обладает местно-раздражающим действием и аллергизирующими свойствами.

Согласно результатам изучения хронической токсичности препарата для местного применения в виде геля у крыс каких-либо нарушений в работе органов и систем не выявлено. При применении один раз в сутки на кожу в течение 14 дней у крыс гель Тиохроменола 1% проявляет слабое местно-раздражающее действие и не обладает аллергизирующими свойствами.

Определение терапевтической дозировки растворов Тиохроменола для парентерального введения

Дозы раствора Тиохроменола в миглиоле для проявления оптимального анальгетического эффекта изучали в тесте отдергивания хвоста от теплового излучения у белых мышей. Раствор Тиохроменола в миглиоле вводили мышам однократно подкожно в дозировках 1, 5, 10, 25 и 50 мг/кг веса. В качестве препарата сравнения использовали трамадол раствор для инъекций 50 мг/мл, 20 мг/кг внутрибрюшинно. Контрольным группам животных вводили подкожно физиологический раствор или миглиол по 20 мкл на животное подкожно. Группа мышей на одну дозировку препарата, положительный и отрицательный контроли составляла 10-11 животных. Болевое раздражение наносили на хвост локально тепловым излучением с помощью анальгезиметра TSE-system (Германия) через 30 минут после введения дозировок препарата и контролей в течение 15 секунд. В тесте на анальгетическую активность были получены результаты, представленные в Табл. 7 и Фиг. 12-13.

Таблица 7. Оценка анальгетического эффекта раствора Тиохроменола в миглиоле для парентерального введения по времени реакции отдергивания хвоста у мышей, в зависимости от градиента дозировки от 1 до 50 мг/кг № гр. Число мышей Препарат-анальгетик Дозиров-ка, мг/кг Латентный период (ЛП) после введения, секунды МВЭ, % Фоновое 0 мин. 30 мин. 1 10 Контр. физраствор - 5,9±0,17 (0,5) 5,3±0,26 (0,8) -6,3±1,73 (5,5) 2 10 Контр. Миглиол - 5,6±0,23 (0,7) 5,0±0.26 (0,6) -6.3±3,42(10,8) 3 11 Контр. Трамадол 20 6.1±0,48 (1,6) 10,8±1,01 (3.4) 57,0±9,81 (32,5) 4 11 Тиохроменол 1 5,7±0,41 (1,4) 8,9±1.11 (3,68) 35.5±12,10(40,1) 5 11 Тиохроменол 5 5,9±0,26 (0,9) 8,3±0.76 (2,5) 26,0±8,35(27,07) 6 10 Тиохроменол 10 5,6±0,31 (1,0) 8,1±1,18 (3,7) 27,5±12,67(40,1) 7 11 Тиохроменол 25 5,37±0,35 (1,2) 7,2±0,84 (2,8) 17,8±8,84 (29,3) 8 10 Тиохроменол 50 6, 1±0 ,40 (1,3) 7,6±0,97 (3,l) 18,6±10,02(31,7) *МВЭ - максимальный возможный эффект, %.

Было показано, что растворитель миглиол не изменяет время реакции на болевой раздражитель и не обладает анальгезирующим эффектом. Наиболее сильный анальгетический эффект Тиохроменола неожиданно оказался у наименьших дозировок препарата 1 мг/кг, 5 мг/кг. В дозировках более 10 мг/кг анальгетический эффект заметно снижается. Максимальный эффект Тиохроменола наблюдался при дозировке 1 мг/кг, это проявлялось в замедлении реакции отдергивания хвоста в 1,7 раза (Трамадол - в 1,8 раза) с максимальным возможным эффектом 35.5±12,10% (Трамадол 57,0±9,81). Обычно дозировки большинства анальгезирующих препаратов для парентерального введения варьируют в диапазонах 5-50 мг/кг веса пациентов. Увеличение дозировки Тиохроменола выше 5 мг/кг не приводит к увеличению анальгетического эффекта, наоборот, при дозировках 5-20 мг анальгезирующее действие снижается как в 30-минутном, так и в 24-часовом периодах (Фиг. 5).

Рекомендуемая терапевтическая дозировка раствора Тиохроменола в миглиоле для парентерального введения для клинического исследования анальгезирующих свойств на целевых животных (собаки, кошки) составляет 0,5-1 мг/кг веса.

По сравнению с контрольным препаратом Трамадол анальгетическое действие Тиохроменола несколько слабее через 30 минут после введения. Трамадол является одним из наиболее мощных анальгетиков опиоидного ряда.

Блокирование спинального рефлекса отдергивания хвоста также свидетельствует о наличии центрального механизма в анальгезирующем действии препаратов Тиохроменола.

Дозы терапевтических концентраций водно-спиртового раствора Тиохроменола определяли методом теста «уксусные корчи» у мышей. Внутрибрюшинное введение веществ, раздражающих серозные оболочки, вызывает у мышей характерные движения, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины - корчи.

Мышам внутрибрюшинно вводили 1% раствор уксусной кислоты из расчета 0,1 мл на 10 г массы тела мыши. После инъекции мышей помещали в прозрачные плексигласовые камеры и в течение последующих 15 минут подсчитывали количество корчей для каждого животного. Анальгетический эффект оценивали по уменьшению количества корчей у мышей на фоне изучаемого вещества относительно контрольной группы. Результаты представлены в Табл. 8.

Концентрации водно-спиртовых растворов Тиохроменола оказывали достоверное анальгетическое действие. Так, дозы 0,01 мг/кг, 0,05 мг/кг и 0,1 мг/кг достоверно снижали количество корчей соответственно на 23,2%, 24,6% и 33,3% по сравнению с контрольной группой. Тиохроменол в дозах 0,5 мг/кг и 1 мг/кг уменьшал степень висцеральной боли более выражено, соответственно, на 45,9% и 41,9% по сравнению с контрольными животными.

Анальгетический эффект водно-спиртовых растворов Тиохроменола в дозах 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг и 1 мг/кг (подкожно) сопоставим с эффектом препарата сравнения кетопрофена в дозе 5 мг/кг (внутрибрюшинно), но уступает эффекту морфина в дозе 1 мг/кг (подкожно).

Таблица 8. Оценка анальгетического эффекта водно-спиртового раствора Тиохроменола для инъекций в тесте «уксусные корчи» у мышей, в зависимости от градиента дозировки № гр. Число животных Препарат-анальгетик Дозировка, мг/кг Число корчей, ед. (Mean±SEM, (SD) 1 7 Контроль, физ. р-р п/к - 69,0±4,48 (11,9) 2 7 Морфин, п/к 1,0 28,7±4,02 (10,6)* 3 7 Кетопрофен, вн/б 5,0 40,7±3,17 (8,4)* 4 7 Тиохроменол, п/к 0,01 53,0±3,39 (9,0)*#& 5 7 Тиохроменол, п/к 0,05 52,0±5,79 (15,3)*#& 6 7 Тиохроменол, п/к 0,1 46,0±4,13 (10,9)* 7 7 Тиохроменол, п/к 0,5 37,3±4,74 (12,6)* 8 8 Тиохроменол, п/к 1,0 40,1±5,84 (16,5)* * - p<0,05 достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных, критерий Ньюмена-Кейлса.
# - p<0,05 достоверность различий по сравнению с группой «Морфин 1 мг/кг п/к», критерий Ньюмена-Кейлса.
& - p<0,05 достоверность различий по сравнению с группой «Тиохроменол 0,1 мг/кг п/к», критерий Ньюмена-Кейлса.

Рекомендуемая терапевтическая дозировка водно-спиртовых растворов Тиохроменола для парентерального введения для целевых животных (собаки, кошки, сельскохозяйственные) составляет 0,5 - 1 мг/кг веса. Малые концентрации ДВ и небольшой требуемый объем введения являются преимуществом изобретения для возможности применения у крупных сельскохозяйственных животных, большая масса тела которых требует больших доз анальгетика, и, следовательно, объёмов введения. При больших объёмах в 20-100 мл при необходимости местного обезболивания подкожное и внутримышечное введение часто вызывает болезненность в момент инъекции, раздражение и даже некроз тканей впоследствии.

Определение продолжительности действия анальгетического эффекта растворов Тиохроменола для парентерального введения

Продолжительность анальгетического эффекта раствора Тиохроменола в миглиоле изучали в тесте отдергивания хвоста от теплового излучения у белых мышей в тех же группах животных при тех же условиях, описанных выше. Сравнивали данные увеличения латентного периода на болевой раздражитель через 30 минут и 24 часа после введения препаратов (Табл. 9).

Было показано, что в дозах 1 мг/кг, 10 мг/кг Тиохроменол вызывает достоверное снижение ЛП реакции отдергивания хвоста на 24,4% и 22,2%, соответственно, по сравнению с контрольными группами «физраствор» и «миглиол» через 24 часа после введения препаратов. При этом препарат сравнения - Трамадол - в дозе 20 мг/кг вызывал более сильный анальгетический эффект через 30 минут после введения, чем Тиохроменол, но терял свою эффективность полностью спустя 24 часа. Раствор Тиохроменола в миглиоле при дозировке 1 мг/кг, напротив, сохранял анальгезирующее действие спустя 24 часа после введения (Фиг. 13).

Таблица 9. Оценка анальгетического эффекта раствора Тиохроменола в миглиоле для парентерального введения по времени реакции отдергивания хвоста у мышей, через 30 минут и 24 часа после введения № гр. Число животных Препарат-анальгетик Дозировка, мг/кг Латентный период отдергивания (ЛП), секунды 30 мин после введения 24 часа после введения 1 10 Контр. физраствор - 5,3±0,26 (0,8) 4,7±0,27 (0,8) 2 10 Контр. Миглиол - 5,0±0.26 (0,6) 4,5±0,25(0,8) 3 11 Контр. Трамадол 20 10,8±1,01 (3.4) 4,6±0,16 (0,5) 4 11 Тиохроменол 1 8,9±1.11 (3,68) 5,6±0,42(1,4) 5 11 Тиохроменол 5 8,3±0.76 (2,5) 5,3±0,37 (1,2) 6 10 Тиохроменол 10 8,1±1,18 (3,7) 5,5±0,22 (0,7) 7 11 Тиохроменол 25 7,2±0,84 (2,8) 5,4±0,26 (0,9) 8 10 Тиохроменол 50 7,6±0,97 (3,l) 5,4±0,32 (1,0)

Наличие анальгетического действия раствора Тиохроменола в миглиоле через 24 часа после применения, когда Трамадол полностью перестаёт работать спустя несколько часов после инъекции, свидетельствует о том, что механизм действия Тиохроменола не ограничивается прямой блокировкой болевых рецепторов, но включает в себя биохимические регуляторные пути анальгезирования. Поэтому через 24 часа наблюдается разница в реакции на боль по сравнению с контрольными группами мышей (физраствор или миглиол, Фиг. 13).

Продолжительность анальгезирующего эффекта на 24 часа является большим преимуществом изобретения, так как большинство анальгетиков, в том числе наиболее сильнодействующих, таких как опиоидные, работают в течение 2,5-5 часов. По истечении нескольких часов при продолжении болевых симптомов требуется новое введение анальгетика. Препараты Тиохроменола избавляют от необходимости делать животным инъекции при острой боли, при висцеральной боли, при хронической боли, в послеоперационном или послеродовом периоде четыре раза в сутки.

Изучение механизма действия растворов Тиохроменола для парентерального введения

Изобретение является новым комплексом фармацевтических композиций на основе тиохроменола, поэтому механизм действия обезболивания ранее не изучался, так же как токсичность и подбор терапевтических доз.

В механизме анальгетического действия производного Тиохроменола участвуют каннабиноидные CB1-рецепторы, D1- и D2-рецепторы. Степень вовлеченности этих ноцицепторов в процесс формирования ответа на боль при применении фармкомпозиции Тиохроменола изучали в тесте отдергивания хвоста у мышей с применением блокаторов рецепторов каждого вида. При проведении этого теста реакция на боль происходит после последовательной активации терморецепторов, С-волокон полимодальных ноцицепторов, Ad-волокон полимодальных ноцицепторов, самих ноцицептором и высокопороговых механорецепторов. Тепловое раздражение на хвост наносили локально тепловым излучением с помощью анальгезиметра TSE-system (Германия) при интенсивности 25%, что соответствовало увеличении температуры локально с 40° до 53°C в течение 15 секунд.

Животные были разделены на 6 групп по 10 животных в каждой. ЛП реакции отдергивания хвоста регистрировали до введения препаратов и через 60 минут после введения веществ-блокаторов ноцицепторов СВ1, D1 и D2 или Тиохроменола, в трёх группах мышей - через 60 минут после введения блокаторов и 30 минут после последующего введения Тиохроменола в следующих режимах и дозах:

1-я группа - контроль, интактные животные;

2-я группа - антагонист рецепторов СВ1 римонабант, 3 мг/кг внутрибрюшинно за 60 мин. до теста изменения ЛП;

3-я группа - 0,5% раствор Тиохроменола в миглиоле, 1 мг/кг подкожно за 60 мин. до теста изменения ЛП;

4-я группа - Римонабант, 3 мг/кг внутрибрюшинно за 60 минут до теста плюс Тиохроменол 1 мг/кг, подкожно за 30 минут до теста;

5-я группа - антагонист D1 рецепторов R(+)SCH-23390 в дозе 0,005 мг/кг внутрибрюшинно за 60 минут до теста, плюс Тиохроменол 1 мг/кг, подкожно за 30 минут до теста;

6-я группа - антагонист D2 рецепторов Сульпирид в дозе 5 мг/кг внутрибрюшинно за 60 минут до теста плюс Тиохроменол 1 мг/кг, подкожно за 30 минут до теста.

В ходе исследования влияния ноцецепторов СВ1, D1, D2 на механизм анальгезирующего действия Тиохроменола были получены следующие результаты:

Таблица 10. Влияние антагонистов рецепторов CB1, D1- и D2 на анальгетическое действие Тиохроменола № гр. Число мышей Препарат/комбинация антагонист + анальгетик Дозировка, мг/кг Латентный период (ЛП), секунды МВЭ*, % Фоновое, 0 сек. После введения, 60 мин. 1 10 Интактные мыши - 4,55±0,22(0,71) 4,59±0,17(0,53) 0,24±1,08(3,40) 2 10 Римонабант, вн/б 3 4,64±0,18(0,58) 4,58±0,15(0,46) -0,68±1,09 (3,43) 3 10 Тиохроменол, п/к 1 4,74±0,16(0,50) 5,89±0,37(1,11) 11,41±2,97
(9,38)** 4 10 Римонабант, вн/б + Тиохроменол, п/к 3 + 1 4,68±0,09(0,29) 4,58±0,22(0,70) -0,99±2,00 (6,31) 5 11 R(+)SCH-23390, вн/б + Тиохроменол, п/к 0,005 + 1 4,55±0,17(0,54) 4,38±0,22(0,70) -1,81±2,44 (7,72) 6 10 Сульпирид, вн/б + Тиохроменол, п/к 5 + 1 4,60±0,13(0,43) 4,49±0,13(0,42) -1,14±1,31 (4,14) *МВЭ - максимальный возможный эффект,%.
**-р<0,05 относительно контрольной группы, критерий Уитни-Манна.

Фармкомпозиция Тиохроменола при однократном подкожном введении в дозе 1 мг/кг значимо увеличивала латентный период реакции отдергивания хвоста на 28,3% (МВЭ 11,41%). B группах животных, которым перед введением анальгетика за 60 минут до теста вводили антагонисты ноцицепторов СВ1 (Римонабант 3 мг/кг, вн/б), D1 (R(+)SCH-23390, 0,005 мг/кг, вн/б), D2 (Сульпирид, 1 мг/кг, вн/б) изменения времени реакции отдергивания хвоста на болевой раздражитель по ЛП по сравнению с фоновыми значениями и животными контрольной группы не наблюдалось. Отсутствие анальгетического эффекта Тиохроменола на фоне предварительного введения антагонистов (блокаторов) каннабиноидных рецепторов СВ1, D1- и D2 свидетельствует о том, что рецепторы СВ1, D1- и D2 участвуют в механизме обезболивания фармацевтических композиций Тиохроменола.

Оценка наркогенного потенциала анальгетика показала, что опиоидные рецепторы не вовлечены в реализацию анальгетического эффекта; побочные эффекты, свойственные наркотическим анальгетикам («синдром отмены») не проявляются.

Тест «уксусные корчи» является моделью химического болевого раздражения, индуцированного внутрибрюшинным введением раствора уксусной кислоты. Внутрибрюшинное введение веществ, раздражающих серозные оболочки, вызывает у мышей характерные движения, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины - корчи.

Мышам внутрибрюшинно вводили 1% раствор уксусной кислоты из расчета 0,1 мл на 10 г массы тела мыши. После инъекции мышей помещали в прозрачные плексигласовые камеры и в течение последующих 15 минут подсчитывали количество корчей для каждого животного. Анальгетический эффект оценивали по уменьшению количества корчей у мышей на фоне изучаемого вещества относительно контрольной группы. Для оценки противовоспалительного эффекта через 3 часа после внутрибрюшинного введения уксусной кислоты проводили эвтаназию животных 6-ти групп (тиохроменол, кетопрофен, котроль) и фиксировали количество жидкости (воспалительного экссудата) в брюшной полости. Антиэкссудативный эффект оценивали по уменьшению объема экссудата в процентах по отношению к контролю. Критерий наличия противовоспалительной эффективности - снижение экссудативной реакции более чем на 50%.

Изучаемый образец раствора Тиохроменола в миглиоле в дозах 0,01 мг/кг, 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг и 1 мг/кг, препарат сравнения морфин в дозе 1 мг/кг, носитель и физиологический раствор (контрольной группе) вводили подкожно за 30 минут до внутрибрюшинного введения раствора уксусной кислоты. Препарат сравнения кетопрофен вводили в дозе 5 мг/кг внутрибрюшинно за 30 минут до внутрибрюшинного введения раствора уксусной кислоты.

В Табл. 11 представлены результаты изучения противовоспалительного эффекта Тиохроменола по накоплению экссудата через 3 часа после введения уксусной кислоты и 3,5 часа после введения анальгетика.

Таблица 11. Выраженность воспалительной реакции в тесте уксусных корчей у мышей при подкожном введении раствора Тиохроменола в миглиоле Группа Кол-во мышей Число корчей, ед. Количество воспалительного экссудата, мкл Антиэкссудативный эффект, % Контроль, физ. р-р п/к 10 62,3±3,77 (11,9) 632±22,6 _ Носитель миглиол р-р п/к 10 57,6±4,01 (12,7) 628±21,3 _ Кетопрофен 5 мг/кг внб 10 35,3±2,62 (8,3)* 275±18,2** 56,5 Тиохроменол 0,01 мг/кг п/к 10 51,3±2,61 (8,2)* 519±22,3**# 17,9 Тиохроменол 0,1 мг/кг п/к 10 45,1±2,37 (7,5)* 370±19,9**# 41,5 Тиохроменол 0,5 мг/кг п/к 11 39,1±3,13 (10,4)* 299±22,0** 52,7 Тиохроменол 1,0 мг/кг 11 40,0±2,26 (7,5)* 303±16,6** 52,1 **- p<0,01 по сравнению с группой «Контроль», критерий Манна-Уитни.
#- p<0,05 по сравнению с группой «Кетопрофен 5 мг/кг», критерий Манна-Уитни.

Агрессивное воздействие 1% уксусной кислоты провоцирует развитие острой воспалительной реакции (перитонита), сопровождающейся обильной экссудацией. Количество воспалительного экссудата в контрольной группе было максимальным. В группе с нестероидным противовоспалительным препаратом кетопрофен выраженность воспалительной реакции была меньше. Объем воспалительного экссудата был достоверно меньше на 52,7% по сравнению с контрольной группой. Противовоспалительный эффект тиохроменола в дозах 0,5 мг/кг и 1,0 мг/кг значимо не уступал кетопрофену: антиэкссудативный эффект составлял 52,7% и 52,1%, соответственно. Накопление экссудата при применении Тиохроменола было несколько больше, чем у кетопрофена в дозе 5 мг/кг 56,5%.

Таким образом, данные скринингового теста продемонстрировали наличие у тиохроменола в дозах 0,5 мг/кг и 1,0 мг/кг противовоспалительного действия.

Анальгетическое действие фармацевтических композиций Тиохроменола было изучено на целевых животных - кошках и собаках - в постоперационном периоде и изложено в Примерах.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Оценка анальгезирующего действия композиции Тиохроменола для инъекций на выраженность болевого синдрома у собак после овариогистерэктомии

Исследование проводили на 17 самках собак в возрасте от 1 года до 7 лет с массой тела от 11,8 до 38,8 кг, которым проводилась овариогистерэктомия (лигатуры обоих яичников с удалением тела матки, полостная). Хирургия осуществлялась с премедикацией Дексдомитор 0,5 мг/мл в дозе 10 мкг/10 кг внутримышечно и Золетил100 в дозировке 5-7 мг/кг внутривенно единовременно до достижения общей анестезии, затем 1-3 мг/кг поддерживающая доза при необходимости. Операции проводили под мониторингом аппарата ZooMed (ЭКГ, АД, О₂, ЧСС, ЧДД). Лапаратомный разрез зашивали двойным непрерывным швом, медиальный внешний разрез кожи - узловыми швами. По завершении операции животным вводили Атипамезол 0,5 мкг/10 кг внутримышечно для нейтрализации местной анальгезии Дексомитором и антибиотик Байтрил 5 мг/кг подкожно.

Оценку общего клинического состояния животных с определением уровня испытываемой боли в постоперационном периоде производили по шкале Глазго с заполнением индивидуальных бланков мониторинга и видеофиксацией через 1,5 часа (90 мин.) после завершения операции и введения Атипамезола (Табл. 12).

После оценки исходного уровня боли по шкале Глазго собакам вводили раствор Тиохроменола в миглиоле подкожно в дозировке 0,5 мг/кг веса или препарат сравнения Флексопрофен (кетопрофен) 5% в дозировке 2 мг/кг. В случае, если общая оценка состояния уровня боли была 6 баллов и ниже, собаку не включали в исследование. Уровень боли у собак опытной и контрольной групп оценивали через 1, 3, 6, 12 и 24 часа после введения Тиохроменола или Флексопрофена (Табл. 13, Фиг. 15). В случае, если интенсивность боли у животного в опытной группе увеличилась на 4 балла между двумя ближними критериями оценки, было предусмотрено введение Флексопрофена.

У животных дважды забирали кровь на общеклинический анализ перед операцией и через 24 часа после введения анальгетиков. Статистическую достоверность результатов оценивали при помощи программы Sigma Plot 18.0 (SPSS).

Таблица 12. Оценка болевого синдрома по шкале Глазго № Параметры поведения/реакции Кол-во баллов А Поведение в клетке 1 Ведет себя тихо 0 2 Скулит 1 3 Стонет 2 4 Кричит/воет 3 А2 Внимание на рану 1 Не обращает внимания 0 2 Смотрит на место повреждения 1 3 Лижет 2 4 Чешет 3 5 Кусает или грызет 4 Б Поведение если вывести из клетки 1 Нормально идет 0 2 Хромает 1 3 Идет медленно и неохотно 2 4 Идет скованно и напряженно 3 5 Отказывается идти 4 В Ответ на пальпацию 1 Не реагирует 0 2 Смотрит вокруг, озирается 1 3 Вздрагивает 2 4 Рычит или защищается 3 5 Пытается укусить 4 6 Скулит 5 Г Поведение в целом: поза 1 Лежит/сидит в комфортной позе 0 2 Не может устроиться 1 3 Беспокоится 2 4 Скованна, напряжена 3 5 Лежит неподвижно в одной позе 4 6 Ригидная 5 Г2 Отношение к жизни 1 Счастлива, довольна, оживлена 0 2 Притихшая, спокойная 1 3 Не реагирует, индифферентна 2 4 Нервничает, боится 3 5 В депрессии, не отвечает на стимулы 4 Оценка представляет собой сумму баллов по шести показателям:
0 -6 боли нет; 7-12 умеренная боль; 13-18 боль средней тяжести; 19-23 сильная боль

Таблица 13. Оценка анальгезирующего действия раствора Тиохроменола для инъекций в миглиоле у собак в постоперационном периоде (овариогистерэктомия) по шкале Глазго Точка отсчета времени Время, часы Контрольная группа Флексопрофен 2мг/кг Опытная группа Тиохроменол 0,5мг/кг После операции и введения Атипамезола 1,5 11,4 ± 0,3 10,8 ± 0,4 После введения анальгетика Тиохроменола или Флексопрофена 1 7,8 ± 0,08 ^## ** 4,3 ± 0,8^## 3 3,8 ± 0,9^## 3,3 ± 1,0 ^## 6 2,9 ± 0,6^## 2,0 ± 0,5 ^## 12 1 ,8 ± 0,5^## 1,4 ± 0,5 ^## 24 1,1±0,5^## 1,8 ± 0 ,5 ^## ## p<0,01 при сравнении с уровнем в точке 1,5 часа после введения Атипамезола.
* p<0,05 при сравнении с показателями опытной группы в аналогичный период.
** p<0,01 при сравнении с показателями опытной группы в аналогичный период.

После проведения операции по стерилизации (овариогистерэктомия) собаки испытывали умеренную боль 9,6 - 11,4 балла по шкале Глазго. Анальгезирующее действие раствора Тиохроменола было ярко выраженным и варьировало от 4,3 ± 0,8 до 1,8 ± 0,5 в течение всего периода наблюдения за животными 24 часа, что означает означало отсутствие чувства боли (0-6 баллов по шкале Глазго). В течение первых 6 часов после подкожного введения снижение боли при инъекции раствора Тиохроменола было сильнее, чем у анальгетика-препарата сравнения Флексопрофена (кетопрофен): 4,3 ± 0,8 балла против 7,8 ± 0,08 через час после введения, 3,3 ± 1,0 балла против 3,8 ± 0,9 через 3 часа после введения и 2,0 ± 0,5 балла против 2,9 ± 0,6 через 6 часов после введения, соответственно. Анальгезирующее действие Тиохроменола продолжалось через 12 и 24 часа после введения собакам и почти не уступало таковому для кетопрофена. Дополнительного введения других анальгетиков животным опытной группы не потребовалось.

Полученные данные клинически достоверно показали, что Тиохроменол проявляет более сильные анальгезирующие свойства, чем признанный НПВС кетопрофен и может быть рекомендован к применению у собак в постоперационном периоде и при травмах для снятия симптомов боли.

Препарат сравнения Флексопрофен (кетопрофен) является не только анальгетическим, но и признанным противовоспалительным средством.

При травмах и операциях болевые симптомы сохраняются длительное время в том числе благодаря присутствию воспалительных реакций. Поскольку у собак опытной группы показатели болевых ощущений за 24 часа наблюдения уменьшались так же, как у животных при применении мощного НПВС кетопрофена, можно сделать вывод, что фармацевтическая композиция Тиохроменола обладает не только прямым анальгезирующим, но и противовоспалительным действием.

Продолжительный анальгезирующий эффект композиций Тиохроменола до 24 часов может не ограничиваться прямой блокировкой СВ1, D1-D2 рецепторов боли, но быть обусловлен наличием у него противовоспалительных свойств.

Длительность анальгезирующего действия композиций Тиохроменола до 24 часов снижает трудозатраты ветеринарных работников и важна для перспектив применения у целевых животных (собаки, кошки, лошади, сельскохозяйственный скот).

Пример 2. Оценка анальгезирующего действия композиции Тиохроменола для инъекций у кошек после проведения операции остеосинтеза (переломы лап)

В исследование включали кошек возраста 1,5-5 лет с признаками болевого синдрома после операции остеосинтеза на передней или задней конечностях (закрытые полные диафизарные переломы костей предплечья, плеча, голени). Для общей анестезии использован ингаляционный наркоз (изофлуран) с индукцией пропофолом по общепринятому (стандартному) протоколу, для местной анестезии - 0,5% раствор новокаина.

Через час после окончания операции у животных с удовлетворительным стабильным состоянием (стабильная гемодинамика, отсутствие послеоперационных осложнений) проводили оценку боли с использованием Шкалу гримас кошки (Feline Grimace Scale, Табл. №14 и Фиг. 6). Животное включали в исследование при наличии суммарного балла от 6 и выше. Кошек выборочно распределяли на две группы (опытную и контрольную) по 8 животных в каждой. Кошкам опытной группы применяли 0,5% раствор Тиохроменола для инъекций в дозировке 0,5 мг/кг подкожно однократно. Кошкам контрольной группы применяли препарат Мелоксивет раствор для инъекций 0,2% (мелоксикам, «Белкаролин», РБ) в дозировке 0,2 мг/кг подкожно однократно. Препараты Мелоксивет и Тиохроменол вводили через 5-7 минут после первичной оценки болевых симптомов. Далее в течение суток осуществляли наблюдение за общим состоянием кошек и проводили повторную оценку боли по шкале Feline Grimace Scale с видеофиксацией через 30 мин, 1,5 часа, 3, 9 и 24 часа после инъекций анальгетика. Также обращали внимание на другие признаки боли (вокализация, повышенное внимание к операционной ране и т.д.), другие нежелательные реакции.

Таблица 14. Шкала оценки боли по мимике/гримасам кошки (Feline Grimace Scale) Единицы поведения Уровень боли, баллы* 0 1 2 Положение ушей Направлены вперед Слегка раздвинуты Прижаты и повернуты вниз Глаза Открыты Частично прищурены Прищурены Выражение мордочки (очертания) Морда расслабленная (круглая форма) Слегка напряжена Напряжена (эллиптическая форма) Усы Расслаблены и изогнуты как обычно Слегка изогнутые или прямые Прямые и направлены вперед Положение головы Выше линии плеч По линии плеч (слегка опущена) Ниже плеч и наклонена вниз (прижата к груди) *Каждая единица поведения оценивается от 0 до 2 баллов. Итоговый балл рассчитывается как сумма баллов.

Согласно полученным результатам (Табл. 15, Фиг. 14) оба препарата оказывали анальгетический эффект, обеспечивая достоверное снижение уровня симптомов боли. После введения препарата Тиохроменол 0,5% раствор уже через 30 мин у животных отмечалось заметное улучшение состояния (изменение положения ушей, головы, уменьшение напряженности морды и всего тела), некоторые кошки переставали пронзительно мяукать. После применения препарата сравнения Мелоксивет положительная динамика была менее заметной. Согласно оценке боли, проведенной через 30 минут после введения анальгетиков, общий балл в опытной группе был значимо меньше, чем в контрольной: 4,8±0,31 против 6,5±0,27 балла (p<0,01). Через 9 и 24 часа после введения анальгетиков уровень боли был также значимо ниже в опытной группе (Фиг.16). Вокализации и других нежелательных эффектов в 24-часовой период наблюдения в обеих группах не отмечено. Аппетит у животных обеих групп сохранен.

Таблица 15. Уровень боли у кошек в послеоперационный период Группа До Промежуток времени после введения анальгетика 30 мин 1,5 часа 3 часа 9 часов 24 часа Опытная (n=8) Тиохроменол 0,5 мг/кг 7,5±0,33 4,8±0,31^** 2,6±0,38^## 2,3±0,31^## 2,4±0,26^**## 2,4±0,18^**## Контрольная (n=8) Мелоксивет 0,2 мг/кг 7,8±0,25 6,5±0,27 3,5±0,33^## 2,8±0,45^## 3,6±0,18^## 4,4±0,26^# ** p<0,01 по сравнению с показателями контрольной группы в аналогичный период.
# p<0,05 по сравнению с первоначальным уровнем (До).
## p<0,01 по сравнению с первоначальным уровнем (До).

Фармацевтическая композиция Тиохроменола в дозировке 0,5 мг/кг подкожно оказывала у кошек анальгетическое действие, более сильное и продолжительное (до 24 часов), чем препарат сравнения Мелоксивет (мелоксикам).

ЛИТЕРАТУРА

1. «Клиническая фармакология по Гудману-Гилману» 10-е изд. Ред. Дж. Хардман и Л. Лимберт, пер. к.м.н. Н.Н. Алипова, «Практика» 2006.

2. Регистр лекарственных средств России - РЛС электронный, https://www.rlsnet.ru 08.04.2022.

3. Dmitriev M.V. (RU), Silajchev P.S., Maslivets A.N., Makhmudov R.R. «Ethyl-2-amino-7,7-dimethyl-2',5-dioxo-5'-phenyl-1',2',5,6,7,8-hexahydrospiro[thiochromen-4,3'-pyrrol]-4'-carboxylates and Method for Producing them» Gosudarstvennoe obrazovatel'noe uchrezhdenie vysshego professional'nogo obrazovanija "Permskij gosudarstvennyj universitet" RU(11) 2435774 (13)C1 Application: 2010127664/04, 05.07.2010.

4. Силайчев Павел Сергеевич, Филимонов Валерий Олегович, Масливец Андрей Николаевич, Махмудов Рамиз Рагибович «Methyl 5-(Arylcarbamoyl) -1-(Benzyl and Phenyl)-4-cinnamoyl-1H-pyrazole-3-carboxylates, Exhibiting Analgesic Activity and Synthesis Method Thereof» ФГБОУ ВПО "Пермский государственный национальный исследовательский университет"; ООО "Лактон" RU2014123249 (A) - 2015-12-20.

5. Третьяков Н.А.[RU], Масливец А.Н., Махмудов Р.Р., Масливец A.A.[RU] «3-(2-Aryl-2,4-dihydroxy-1(2-hydroxyethyl)-5-oxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-YL)quinoxaline-2(1H)-ones Having Analgesic Activity and a Method of Producing thereof», ФГБОУ ВПО "Пермский государственный национальный исследовательский университет", ООО "Лактон"; RU2707196 (C1) - 2019-11-25.

6. Денисламова Е.С., Дубовцев А.Ю. «Method of Producing Methyl-1,7-diaryl-9-aroyl-4-benzoyl-3-hydroxy-2,6-dioxo-1,7-diazaspiro[4,4]none-3,8-diene-8-carboxylates, Exhibiting Analgesic Activity» ФГБОУ ВПО "Пермский государственный национальный исследовательский университет", Общество с ограниченной ответственностью "Лактон", RU2537999 (C1) 2015-01-10.

7. Pouzet Pascale [DE]; Anderskewitz Ralf [DE]; Dollinger Hor3st [DE] +7 “Substituted Piperazino-dihydrothienopyrimidines” Boehringer Ingelheim G4mbH, EP 2 610 258 A1, US2011021501 (A1) - 2011-01-27, Priority date 16.10.2008.

8. Yan Lin, Qiao Zhenrui, Wang Yusui «Novel TRPV1 antagonism/FAAH inhibition double-target drug, and preparation method and application thereof» University HENAN CN113233996 (A) 2021-05-20.

9. Yan Lin, Hu Jing, Qiao Yue, Gao Mengkang, Wang Yusui, Qiao Zhenrui «4-(2-(pyrrolidine/piperidine-1-yl)benzyl)-piperazine urea TRPV1 antagonist and preparation method and application thereof» University HENAN, CN111454233 (A) - 2020-07-28.

10. Anastasiya V. Lastovka 1, Artem D. Rogachev 2, Irina V. Il'ina 3, Abuzar Kabir 4, Konstantin P. Volcho 2, Valentina P. Fadeeva 2, Andrey G. Pokrovsky 5, Kenneth G. Furton 6, Nariman F. Salakhutdinov «Comparison of dried matrix spots and fabric phase sorptive extraction methods for quantification of highly potent analgesic activity agent (2R,4aR,7R,8aR)-4,7-dimethyl-2-(thiophen-2-yl)octahydro-2H-thiochromen-4-ol in rat whole blood and plasma using LC-MS/MS» J. Thiochromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2019 Nov 15;1132:121813.

11. Khaid E.V. [RU], Pavlova A.V., Mikhal'chenko O.S. et al. «2H-thiochromen Derivatives as Analgesic Means» FBUN Novosibirsk Institute Organic Chemistry named by N.N. Vorozhtsov RAS Sibirian Branch; Leofors [RU] RU2014127953A, 2014-07-08.

Группа изобретений относится к области медицины и ветеринарии, а именно к фармацевтическим композициям 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающим анальгезирующим действием. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ол в количестве от 0,5% до 1,5% по массе раствора в миглиоле-840, с добавлением консерванта – бензилового спирта. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 5,0 мг, или 10,0 мг, или 100,0 мг, или 500,0 мг 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола и 10 мл этилового спирта 95% на 1000 мл раствора в воде очищенной. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 50,0 мг 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола и 50 мл этилового спирта 95% на 1000 мл раствора в воде очищенной. Вышеуказанная группа изобретений проявляет выраженное анальгезирующее действие. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 16 ил., 15 табл., 2 пр.

1. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ол в количестве от 0,5% до 1,5% по массе раствора в миглиоле-840, с добавлением консерванта – бензилового спирта.

2. Композиция по п.1, характеризующаяся тем, что получена в форме раствора для подкожных и внутрибрюшинных инъекций.

3. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 5,0 мг, или 10,0 мг, или 100,0 мг, или 500,0 мг 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола и 10 мл этилового спирта 95% на 1000 мл раствора в воде очищенной.

4. Фармацевтическая композиция 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола в форме раствора для инъекций, обладающая анальгезирующим действием, характеризующаяся тем, что содержит 50,0 мг 4,7-диметил-2-(тиофен-2-ил)-октагидро-2H-хромен-4-ола и 50 мл этилового спирта 95% на 1000 мл раствора в воде очищенной.

5. Композиция по любому из пп.3-4, характеризующаяся тем, что получена в форме раствора для подкожных и внутримышечных инъекций.

6. Композиция по любому из пп.1-5, предназначенная для лечения собак и кошек, декоративных грызунов, лошадей и скота, пушных промысловых животных при острой боли, при хронической боли, в постоперационном, посттравматическом периоде реабилитации, при воспалительных заболеваниях опорно-двигательного аппарата.