ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБЫ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K9/10 A61K38/05 A61K47/02 A61P27/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических препаратов, более точно, к офтальмологической фармацевтической композиции и способам ее получения и применениям в офтальмологических препаратах для уменьшения интенсивности симптомов болезни сухого глаза (БСГ (DED)) и/или улучшения при БСГ и/или лечения БСГ.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

БСГ относится к классу заболеваний, вызванных патологией глазной пленки или гомеостаза глазной поверхности, которая приводит к нестабильности слезной пленки, дискомфорту в глазах и ухудшению зрения. Она может вызвать необратимое повреждение глазной поверхности. БСГ обычно проявляется как сухость, боль, жжение и раздражение в глазу, а также ощущением инородного тела, неясным зрением, красными глазами, светобоязнью, слезотечением и т.д. Длительный дискомфорт в глазах может серьезно повлиять на качество жизни пациента. Тяжелая болезнь БСГ также может привести к кератиту, неоваскуляризации роговицы, язвам роговицы, и даже может угрожать зрению пациента и привести в конечном счете к слепоте. В настоящее время БСГ является наиболее частой болезнью глазной поверхности в мире. Эпидемиологическое исследование показывает, что заболеваемость БСГ в мире колеблется от 5,5% до 33,7% и в Китае от 21% до 31%. По оценке в Китае пациентов с БСГ больше 300 миллионов. В последние годы в связи с усилением загрязнения воздуха и возрастающим использованием видеотерминалов и цифровых экранов распространение БСГ быстро возрастает и проявляется во все более молодом возрасте. БСГ может вызывать у пациентов трудности в их повседневной жизни и деятельности, такой как чтение, использование компьютеров, просмотр телепередач и вождение. Таким образом, БСГ оказывает существенное негативное влияние на работоспособность и качество жизни людей.

Существует множество факторов, влияющих на появление и развитие БСГ. Факторы, которые стимулируют БСГ, включают воспаление глазной поверхности, лекарственную зависимость, длительное ношение роговичных контактных линз, менопаузу, длительное использование компьютера и другие иммунные факторы. Исследования показывают, что основными патологическими проявлениями БСГ являются ряд повреждений эпителия глазной поверхности, вызванных сухостью окружающей среды после нарушения гомеостаза слезной пленки, включая ухудшение функции роговичного эпителиального барьера, снижение плотности бокаловидных клеток конъюнктивы, сквамозную метаплазию глазной поверхности и воспаление глазной поверхности. В настоящее время основные терапии БСГ включают искусственные слезы, кортикостероиды и иммунодепрессанты, такие как циклоспорин А (CsA). Однако искусственные слезы только замещают естественные слезы и не имеют терапевтического действия. До настоящего времени в клинической практике не имеется особенно эффективного лекарственного средства для лечения БСГ. Поэтому существует острая необходимость в разработке лекарственного средства для лечения БСГ с хорошей эффективностью, для длительного применения и без заметных местных или локальных побочных действий.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к офтальмологической фармацевтической композиции, способам ее получения и ее применениям при получении офтальмологических препаратов для облегчения симптомов БСГ и/или улучшения состояния и/или лечения БСГ. Офтальмологическая фармацевтическая композиция по изобретению имеет преимущества вызывания минимального раздражения при высокой стабильности и хорошем профиле безопасности.

Цель настоящего изобретения достигается с помощью следующей далее технологической схемы.

Во-первых, изобретение относится к офтальмологической фармацевтической композиции, которая включает L-аланил-L-глутамин, суспендированный или растворенный в приемлемом изоосмотическом офтальмологическом растворе.

Предпочтительно концентрация L-аланил-L-глутамина находится в диапазоне 0,1-10% (мас./об.), предпочтительно 1-10% (мас./об.), предпочтительнее 1-5% (мас./об.), и наиболее предпочтительно составляет 1% (мас./об.).

Предпочтительно изоосмотический раствор получают с осмотическим агентом.

Предпочтительно осмотический агент выбирают из числа одного или нескольких следующих агентов: хлорид натрия, хлорид калия, борная кислота, боракс, сульфат натрия, сульфат калия, нитрат натрия, нитрат калия, ацетат натрия, маннит, глицерин, пропиленгликоль, гидрохлорид 2-(4-октилфенилэтил)-2-амино пропиленгликоля и глюкоза.

Предпочтительно осмотический агент выбирают из числа одного или двух агентов хлорида натрия и хлорида калия.

Предпочтительно осмотический агент представляет собой хлорид натрия.

Предпочтительно концентрация осмотического агента составляет 0,01-3% (мас./об.), предпочтительно 0,1-1% (мас./об.), предпочтительнее 0,4-0,8% (мас./об.) и наиболее предпочтительно 0,5% (мас./об.).

Предпочтительно фармацевтическая композиция необязательно содержит бактериостатический или антимикробный агент.

Предпочтительно бактериостатический или антимикробный агент выбирают из числа одного или нескольких следующих агентов: хлорид бензалкония, бромид бензалкония, ацетат хлоргексидина, глюконат хлоргексидина, хлорбутанол, феноксиэтиловый спирт, метилгидроксибензоат, этилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат.

Предпочтительно бактериостатический или антимикробный агент выбирают из числа одного или нескольких следующих агентов: хлорид бензалкония, бромид бензалкония и этилгидроксибензоат.

Предпочтительно бактериостатический или антимикробный агент представляет собой этилгидроксибензоат.

Предпочтительно концентрация бактериостатического или антимикробного агента составляет 0,003-0,5% (мас./об.), предпочтительно 0,01-0,05% (мас./об.), предпочтительнее 0,02-0,035% (мас./об.), наиболее предпочтительно 0,03% (мас./об.).

Предпочтительно фармацевтическая композиция необязательно включает модификатор вязкости.

Предпочтительно модификатор вязкости выбирают из числа одного или нескольких следующих модификаторов: гиалуронат натрия, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, поливиниловый спирт и повидон.

Предпочтительно модификатор вязкости выбирают из одного или двух модификаторов гиалуроната натрия и натрий карбоксиметилцеллюлозы.

Предпочтительно модификатор вязкости представляет собой гиалуронат натрия.

Предпочтительно концентрация модификатора вязкости составляет 0,01-0,5% (мас./об.), предпочтительно 0,05-0,2% (мас./об.), предпочтительнее 0,1-0,15% (мас./об.), наиболее предпочтительно 0,1% (мас./об.).

Предпочтительно фармацевтическая композиция также включает один или несколько регуляторов рН, выбранных из следующих регуляторов: дигидрофосфат натрия, динатрийгидрофосфат, дигидрофосфат калия, дикалийгидрофосфат, борная кислота, боракс, уксусная кислота, ацетат натрия, лимонная кислота, цитрат натрия, винная кислота, тартрат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия, хлороводородная кислота и фосфорная кислота. Регулятор рН доводит величину рН до 5,0-9,0, предпочтительно до 6,0-8,0, предпочтительнее до 6,5-7,5 и наиболее предпочтительно до 7,0.

Предпочтительно регулирующий рН агент выбирают из одного или нескольких следующих агентов: карбонат натрия, бикарбонат натрия и гидроксид натрия.

Предпочтительно регулирующий рН агент представляет собой гидроксид натрия.

Предпочтительно концентрация гидроксида натрия составляет 0,25 моль/л.

Во-вторых, изобретение также относится к способу получения фармацевтической композиции. Способ включает следующие стадии: суспендирование или растворение пропионового дипептида (propionic dipeptide) в изоосмотическом растворе; доведение величины рН до 5,0-9,0, предпочтительно до 6,0-8,0, предпочтительнее до 6,5-7,5 и наиболее предпочтительно до 7,0; и стерилизация раствора фильтрацией с помощью микропористой фильтровальной мембраны.

Предпочтительно способ включает следующие стадии: перемешивание и растворение осмотического агента в воде для инъекций, предпочтительно при 80-90°С, наиболее предпочтительно при 85°С; добавление L-аланил-L-глутамина и перемешивание с целью растворения; добавление воды для инъекций; доведение величины рН с помощью агента, регулирующего рН, до 5,0-9,0, предпочтительно до 6,0-8,0, предпочтительнее до 6,5-7,5, наиболее предпочтительно до 7,0; нагревание для стерилизации при 100°С; стерилизации фильтрацией через микропористую фильтровальную мембрану и розлив в стерилизованные флаконы для глазных капель в асептической производственной среде.

Предпочтительно способ включает следующие стадии: перемешивание и растворение осмотических агентов и бактериостатических или антимикробных агентов в воде для инъекции, предпочтительно при 80-90°С, наиболее предпочтительно при 85°С; после растворения необязательно добавление модификатора вязкости при перемешивании и продолжение перемешивания до растворения; добавление L-аланил-L-глутамина и перемешивание до растворения; добавление воды для инъекций; доведение величины рН с помощью агента, регулирующего рН, до 5,0-9,0, предпочтительно до 6,0-8,0, предпочтительнее до 6,5-7,5, наиболее предпочтительно до 7,0; нагревание для стерилизации при 100°С; стерилизации фильтрацией через микропористую фильтровальную мембрану и розлив в стерилизованные флаконы для глазных капель в асептической производственной среде.

В-третьих, настоящее изобретение также относится к применениям описанной выше фармацевтической композиции при получении офтальмологических препаратов для уменьшения интенсивности симптомов БСГ и/или улучшения при БСГ и/или лечения БСГ.

ЧЕРТЕЖИ

Фигура 1 показывает статистический анализ секреции слезы у мышей. NS представляет здоровую группу, DS5 представляет группу с БСГ, DS5+среда представляет контрольную группу с растворителем, и DS5+AG представляет группу обработки; *P<0,05; **P<0,01; ***P<0,001.

Фигура 2 показывает статистику числа бокаловидных клеток конъюнктивы у мышей. NS представляет здоровую группу, DS5 представляет группу с БСГ, DS5+среда представляет контрольную группу с БСГ с растворителем, и DS5+AG представляет группу с БСГ, обработанную офтальмологическим препаратом; *P<0,05; ** P<0,01; ***P<0,001.

Фигура 3 показывает дефект эпителия роговицы у мышей. Фигура 3А показывает типичное изображение роговицы мыши при окрашивании OGD. Фигура 3В показывает статистику интенсивности флуоресценции роговицы мыши при окрашивании OGD. NS представляет здоровую группу, DS5 представляет группу с БСГ, DS5+среда представляет контрольную группу с растворителем, и DS5+AG представляет обработанную группу с БСГ; *P<0,05; ** P<0,01; ***P<0,001.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Технические решения настоящего изобретения будут описаны ниже в форме воплощений, но следующие далее примеры или экспериментальные примеры не ограничивают объем настоящего изобретения.

Если не указано иное, воплощения в следующих далее примерах являются обычными способами, и исходные материалы и реагенты, используемые в следующих далее примерах, все являются коммерчески доступными продуктами.

Препаративный пример 1

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2.Способ получения

Взвешивают хлорид натрия и этилгидроксибензоат, затем добавляют 800 мл (85°С) воды и перемешивают до растворения. После растворения добавляют при перемешивании гиалуронат натрия, и продолжают перемешивание до его растворения, затем добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения. Добавляют воду до достижения общего объема 1000 мл, затем добавляют гидроксид натрия до достижения величины рН 7,0. Кипятят и стерилизуют при 100°С в течение 30 минут, затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Препаративный пример 2

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,2 г Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 0,2 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 3

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,5 г Этилгидроксибензоат 0,35 г Хлорид натрия 6,0 г L-Аланил-L-глутамин 50,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,5 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 4

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Этилгидроксибензоат 0,2 г Хлорид натрия 2,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 6,5 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 5

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 2,0 г Этилгидроксибензоат 0,5 г Хлорид натрия 100,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 8,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 6

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 0,5 г Этилгидроксибензоат 0,1 г Хлорид натрия 1,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 6,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 7

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 5,0 г Этилгидроксибензоат 5,0 г Хлорид натрия 30,0 г L-Аланил-L-глутамин 100,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 9,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 8

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 0,1 г Этилгидроксибензоат 0,03 г Хлорид натрия 0,1 г L-Аланил-L-глутамин 1,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 5,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 9

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 1,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 10

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 50,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 11

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 100,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ получения такой же, как в препаративном примере 1.

Препаративный пример 12

1. Фармацевтическая композиция

Натрийкарбоксиметил целлюлоза 1,0 г Хлорид бензалкония 0,3 г Хлорид калия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ

Взвешивают хлорид калия и хлорид бензалкония, затем добавляют 800 мл воды для инъекций (85°С) и перемешивают до растворения. После растворения добавляют при перемешивании натрий карбоксиметилцеллюлозу, и продолжают перемешивание до ее растворения. Добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения, затем добавляют воду до достижения общего объема 1000 мл. Добавляют гидроксид натрия до достижения рН 7,0, и греют и стерилизуют при 100°С в течение 30 минут, затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм, и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Препаративный пример 13

1. Фармацевтическая композиция

Натрийкарбоксиметил целлюлоза 1,0 г Бромид бензалкония 0,3 г Хлорид калия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ

Взвешивают хлорид калия и бромид бензалкония, затем добавляют 800 мл воды (85°С) и перемешивают до растворения. После растворения добавляют при перемешивании натрий карбоксиметилцеллюлозу, и продолжают перемешивание до ее растворения. Добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения, затем добавляют воду до достижения общего объема 1000 мл. Добавляют гидроксид натрия до достижения рН 7,0, и кипятят и стерилизуют при 100°С в течение 30 минут. Затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм, и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Препаративный пример 14

1. Фармацевтическая композиция

Этилгидроксибензоат 0,3 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ

Взвешивают хлорид натрия и этилгидроксибензоат, затем добавляют 800 мл воды для инъекций (85°С) и перемешивают до растворения. После растворения добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения, затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм, и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Препаративный пример 15

1. Фармацевтическая композиция

Гиалуронат натрия 1,0 г Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ

Взвешивают хлорид натрия, затем добавляют 800 мл воды (85°С) и перемешивают до растворения. После растворения добавляют при перемешивании гиалуронат натрия и продолжают перемешивание до растворения, затем добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения. Доводят рН до 7,0, греют и стерилизуют при 100°С в течение 30 минут, затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм, и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Препаративный пример 16

1. Фармацевтическая композиция

Хлорид натрия 5,0 г L-Аланил-L-глутамин 10,0 г Вода для инъекций Добавляют воду до тех пор, пока общий объем не достигнет 1000 мл pH Доводят pH до 7,0 0,25 моль/л раствором гидроксида натрия

2. Способ

Взвешивают хлорид натрия, затем добавляют 800 мл воды для инъекций (85°С) и перемешивают до растворения. После растворения добавляют L-аланил-L-глутамин и перемешивают до растворения, затем фильтруют через фильтровальную мембрану с микропорами 0,22 мкм, и в асептических условиях распределяют по стерилизованным флаконам для глазных капель, 5 мл/флакон.

Экспериментальный пример

Методы эксперимента на животных

(1) Создание модели БСГ на мышах и обработка групп с нею

Здоровых самок мышей C57/BL в возрасте 10-12 недель произвольно делят на 4 группы: здоровая группа (NS), группа с БСГ (DS5), контрольная группа с сухостью глаз, среда (DS5+среда) и обработанная группа с сухостью глаз (DS5 +AG).

Создание мышиной модели БСГ. Мышей содержат в сухой окружающей среде (относительная влажность <40%, температура 21-23°С), и подкожной инъекцией гидробромида скополамина (0,5 мг/0,2 мл, 200 мкл каждая, 4 раза в день в течение 5 дней подряд) успешно вызывают у мышей БСГ.

Мыши в здоровой группе (NS). Группа NS включает здоровых мышей. Эту группу мышей не обрабатывают глазными каплями и содержат в стандартной окружающей среде при температуре 21-23°С и относительной влажности 50-60%.

Мыши в группе БСГ (DS5). Мыши с БСГ в группе БСГ не получают обработку глазными каплями, их содержат в окружающей среде с температурой 21-23°С и относительной влажностью меньше 40%, они получили подкожную инъекцию гидробромида скополамина (0,5 мг/0,2 мл, каждый раз 200 мкл, 4 раза в день в течение 5 дней подряд).

Мыши с сухостью глаз в контрольной группе (контроль только растворитель) (DSS+среда). В этой группе мыши с БСГ получают в глаза капли среды для контроля (каждый раз 1 каплю, 4 раза в день, каждый раз с интервалом в 4 часа, в течение 5 дней). Мышей содержат в сухой окружающей среде (относительная влажность <40%, температура 21-23°С).

Мыши в группе с сухостью глаз с обработкой (DS5+AG). Глаза мышей с БСГ обрабатывают офтальмологическими препаратами, полученными в препаративных примерах 1-16 (1 капля каждый раз, 4 раза в день, каждый раз с интервалом в 4 часа, и продолжают обработку в течение 5 дней). Мышей содержат в сухой окружающей среде (относительная влажность <40%, температура 21-23°С).

Обращение с животными во время эксперимента соответствует «Руководству по обращению с подопытными животными», изданному Министерством науки и техники.

(2) Определение установленных индикаторов

После обработки мышей в каждой группе проверяют. Каждую проверку выполняет один и тот же персонал, и время, место, освещение и температура являются одними и теми же при каждой проверке.

У мышей в каждой группе анализируют секрецию слез, окрашивание роговицы Oregongreen с декстраном (OGD) и число бокаловидных клеток конъюнктивы.

(1) Тест с хлопковой нитью с феноловым красным для определения объема секретируемых слез

Определяют объем секреции слез с помощью пропитанной феноловым красным хлопковой нити (phenolamine cotton) (Zone-Quick; Lacrimedics, Eastsound, WA). Под щелевой лампой пропитанную феноловым красным хлопковую нить помещают в нижний конъюнктивальный свод латерального угла глазной щели мышей с помощью офтальмологического пинцета. Спустя 15 секунд определяют окрашивание пропитанной феноловым красным хлопковой нити миллиметровой линейкой и регистрируют. Результаты приводятся в таблице 1.

Таблица 1. Секреция слез (мм)

Препаративный пример Здоровая группа NS Группа с БСГ DS5 Группа контроля с растворителем DS5+среда Группа обработки DS5+AG 1 4 0,86 1,85 3,04 2 1,71 2,66 3 1,75 2,57 4 1,73 2,90 5 1,58 2,45 6 1,64 2,80 7 1,54 2,40 8 1,55 2,35 9 1,85 2,53 10 1,85 2,58 11 1,85 2,54 12 1,53 2,70 13 1,52 2,68 14 1,45 2,40 15 1,76 2,83 16 1,47 2,33

(2) Окрашивание OGD для обнаружения функции роговичного эпителиального барьера

В нижний конъюнктивальный мешок мышей наносят 0,5 мкл OGD (50 мг/мл, молекулярная масса 70000; Invitrogen), мышей умервщляют, конъюнктиву промывают 1 мл физиологического раствора, и затем in vivo под флуоресцентным микроскопом (AZ100, Nikon) анализируют и фотографируют флуоресцентное окрашивание эпителия роговицы. Измеряют и регистрируют интенсивность флуоресцентного окрашивания роговицы с использованием программы NIS-element. Результаты приводятся в таблице 2.

Таблица 2. Интенсивность флуоресцентного окрашивания (a.u.)

Препаративный пример Здоровая группа NS Группа с БСГ DS5 Группа контроля с растворителем DS5+среда Группа терапии
DS5+AG 1 6,87 19,09 16,49 10,76 2 16,58 11,23 3 16,73 11,53 4 16,64 10,88 5 16,89 11,81 6 16,90 11,05 7 17,11 11,93 8 17,24 12,03 9 16,49 11,70 10 16,49 11,40 11 16,49 11,74 12 17,45 11,20 13 17,50 11,17 14 17,62 12,23 15 17,20 11,15 16 17,70 12,34

(3) Измерение числа бокаловидных клеток

Образцы глазной ткани фиксируют в 10% формалине, заливают парафином и нарезают. Срезы окрашивают периодной кислотой - реактивом Шиффа (PAS). Используют Nikon Nikon eclipse 50i для сбора изображений, и подсчитывают число бокаловидных клеток конъюнктивы. Результаты приводятся в таблице 3.

Таблица 3. Число бокаловидных клеток в конъюнктиве

Препаративный пример Здоровая группа NS Группа с БСГ DS5 Группа контроля с растворителем DS5+среда Группа обработки DS5+AG 1 103,6 68,19 82,48 103,5 2 80,73 97,44 3 80,52 97,26 4 79,23 101,8 5 77,34 93,3 6 76,90 99,5 7 75,12 92,7 8 75,46 93,02 9 82,48 96 10 82,48 97,4 11 82,48 96,5 12 75,00 97,82 13 74,16 98,24 14 72,64 92,8 15 76,80 98,38 16 71,50 91,57

Анализ экспериментальных результатов

Кроме указанных выше экспериментов в настоящем изобретении также анализируют результаты препаративных примеров 1, 9-11, отображенные на фигурах 1-3.

Результаты на фигуре 1 показывают, что секреция слез у мышей в группе с БСГ (DS5) существенно снижается после вызывания БСГ, секреция слез в трех группах обработки (DS5+AG) существенно выше, чем в контрольной группе со средой (DS5+среда), и в группе обработки (DS5+1% AG), обработанной 1% L-аланил-L-глутамином, эффект наиболее существенный, ***Р<0,001.

Результаты на фигуре 2 показывают, что число бокаловидных клеток конъюнктивы у мышей в группе с БСГ (DS5) снижается после вызывания БСГ, и эффект наиболее существенный в группе с 1% L-аланил-L-глутамином (препаративный пример 1), *Р<0,05.

Результаты на фигуре 3 показывают, что после создания модели имеется явное окрашивание OGD роговицы в группе с сухостью глаз (DS5), и окрашивание OGD в трех группах обработки (DS5+AG) визуально значительно слабее, чем в контрольной группе со средой (DS5+среда), и эффект является наиболее существенным в группе, обработанной 1% L-аланил-L-глутамином (препаративный пример 1), *Р<0,001.

Следует иметь в виду, что изобретение, описанное в настоящем описании, не ограничивается конкретными методологиями, протоколами или реагентами, которые можно заменять. Обсуждение и примеры, приведенные в настоящем описании, представлены для пояснения конкретных воплощений и не предназначены для ограничения объема изобретения, который ограничивается только формулой изобретения.

Изобретение относится к области офтальмологии, а именно к применению офтальмологической фармацевтической композиции, включающей L-аланил-L-глутамин, суспендированный или растворенный в изоосмотическом растворе, который подходит для местного введения в глаза для повышения плотности бокаловидных клеток, улучшения функции роговичного эпителиального барьера, устранения повреждения роговицы, улучшения относительно симптомов болезни сухого глаза (БСГ) у пациента, нуждающегося в таком лечении. Вышеописанное изобретение позволяет применять офтальмологическую фармацевтическую композицию лекарственного средства для лечения БСГ с хорошей эффективностью, для длительного применения и без заметных местных или локальных побочных действий. 12 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 16 пр.

1. Применение офтальмологической фармацевтической композиции, включающей L-аланил-L-глутамин, суспендированный или растворенный в изоосмотическом растворе, который подходит для местного введения в глаза для повышения плотности бокаловидных клеток, улучшения функции роговичного эпителиального барьера, устранения повреждения роговицы, улучшения относительно симптомов болезни сухого глаза (БСГ) у пациента, нуждающегося в таком лечении.

2. Применение по п. 1, где концентрация L-аланил-L-глутамина находится в диапазоне 0,1-10% мас./об. композиции.

3. Применение по п. 1 или 2, где изоосмотический раствор содержит осмотический агент.

4. Применение по п. 3, где осмотический агент выбирают из группы, включающей: хлорид натрия, хлорид калия, борную кислоту, боракс, сульфат натрия, сульфат калия, нитрат натрия, нитрат калия, ацетат натрия, маннит, глицерин, пропиленгликоль, гидрохлорид 2-(4-октилфенилэтил)-2-аминопропиленгликоль, глюкозу и их комбинации.

5. Применение по п. 3 или 4, где концентрация осмотического агента составляет 0,01-3% мас./об. композиции.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где фармацевтическая композиция дополнительно содержит бактериостатический или антимикробный агент.

7. Применение по п. 6, где бактериостатический или антимикробный агент выбирают из группы, включающей: хлорид бензалкония, бромид бензалкония, ацетат хлоргексидина, глюконат хлоргексидина, хлорбутанол, феноксиэтиловый спирт, метилгидроксибензоат, этилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат и их комбинации.

8. Применение по п. 6 или 7, где концентрация бактериостатического или антимикробного агента составляет 0,003-0,5% мас./об. композиции.

9. Применение по любому из пп. 1-8, где фармацевтическая композиция дополнительно включает модификатор вязкости.

10. Применение по п. 9, где модификатор вязкости выбирают из группы, включающей: гиалуронат натрия, натрий карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, поливиниловый спирт, повидон и их комбинации.

11. Применение по п. 9 или 10, где концентрация модификатора вязкости составляет 0,01-0,5% мас./об. композиции.

12. Применение по любому из пп. 1-11, где фармацевтическая композиция включает один или несколько регуляторов рН.

13. Применение по п. 12, где регулятор рН выбирают из группы, включающей: дигидрофосфат натрия, динатрийгидрофосфат, дигидрофосфат калия, дикалийгидрофосфат, борную кислоту, боракс, уксусную кислоту, ацетат натрия, лимонную кислоту, цитрат натрия, винную кислоту, тартрат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия, хлороводородную кислоту и фосфорную кислоту и их комбинации; где необязательно величина рН фармацевтической композиции составляет 5,0-9,0.