ПРИМЕНЕНИЕ БУТИЛФТАЛИДА И ЕГО ПРОИЗВОДНОГО Российский патент 2024 года по МПК A61K31/365 A61P25/02 A61P35/00 

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящее изобретение испрашивает приоритет и права трех китайских патентных заявок, поданных в Китайское национальное управление интеллектуальной собственности, а именно: предшествующей заявки No. 202010202588.4 под названием «ПРИМЕНЕНИЕ БУТИЛФТАЛИДА И ЕГО ПРОИЗВОДНОГО» и поданной 20 марта 2020 г., предшествующей заявки No. 202010790778.2 под названием «ПРИМЕНЕНИЕ БУТИЛФТАЛИДА И ЕГО ПРОИЗВОДНОГО» и поданной 7 августа 2020 г. и предшествующей заявки No. 202011233563.7 под названием «ПРИМЕНЕНИЕ БУТИЛФТАЛИДА И ЕГО ПРОИЗВОДНОГО» и поданной 6 ноября 2020 г. Эти три предшествующие заявки включены сюда посредством ссылки во всей своей полноте.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтики, а именно к применению бутилфталида и его производного в изготовлении лекарственного средства для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии и в частности, в изготовлении лекарственного средства для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, индуцированной химиотерапией, а также к способу предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, и в частности, предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, индуцированной химиотерапией, путем использования бутилфталида и его производного.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Периферическая невропатия представляет собой синдром, включающий потерю чувствительности, мышечную слабость и атрофию, гипорефлексию сухожилий и симптом сосудодвигательной реакции по отдельности или в любой комбинации. Существует множество клинических периферических невропатий, включая метаболическую невропатию, такую как диабетическая невропатия; травматическую невропатию, такую как кистевой туннельный синдром; иммунную невропатию и им подобные. Периферическая невропатия, индуцированная химиотерапией (CIPN), представляет собой распространенную ограничивающую дозу побочную реакцию при химиотерапии ракового пациента. Возможно, CIPN представляет собой самый распространенный тип токсической невропатии, поражающей от 58% до 78% пациентов, получающих нейротоксическую химиотерапию (Seretny М, Currie GL, Sena ES, et al. (2014). Incidence, prevalence, and predictors of chemotherapy-induced peripheral nephropathy: a systemic review and meta-analysis. Pain 155: 2461-2470), и имеет особенно важные клинические последствия. В большинстве случаев именно ограничивающая дозу токсичность ограничивает применение химиотерапевтических агентов в лечении злокачественных опухолей. Присутствие токсической невропатии часто приводит к снижению дозы и иногда приводит к прекращению потенциально жизненно важной терапии (Gadgil S, Ergun М, van den Heuval SA, et al. (2019) A systematic summary and comparison of animal models for chemotherapy induced peripheral neuropathy (CIPN). PLOS ONE https://doi.org/10.1371/journal.pone.0221787). Согласно оценкам, среди пациентов, которым вводят потенциально нейротоксические химиотерапевтические агенты, от 30% до 71% продолжают испытывать симптомы, относящиеся к CIPN, через 6 месяцев после начала лечения.

CIPN индуцируют прежде всего химиотерапевтические средства, такие как платина (например, цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин), паклитакселы (например, Паклитаксел или доцетаксел), алкалоиды барвинка (например, винкристин или винбластин), ингибитор протеаз (например, Бортезомиб), иммуномодулятор (талидомид или леналидомид) или эпотилон (например, иксабепилон). Наиболее распространенные симптомы при CIPN представляют собой парестезии рук и ног, такие как: боль (жгучая боль, острые стреляющие боли, дизестезия, аллодиния и гипералгезия), покалывание (парестезии) и онемение (Ewertz М, Qvortrup С, Eckhoff L. (2015) Chemotherapy-induced peripheral neuropathy in patients treated with taxanes and platinum derivatives. ActaOncologica 54: 587-591); другие распространенные клинические находки включают уменьшение или отсутствие глубоких сухожильных рефлексов, потерю температурной или вибрационной чувствительности, ортостатическую гипотензию и сенсорную атаксию (особенно при приеме лекарственных средств на основе платины). Менее частыми являются двигательные симптомы (например, дистальная или проксимальная слабость, мышечные судороги и нарушение походки), а также автономные симптомы (например, констипация или диарея, потливость и головокружение при изменениях положения).

Клинический курс CIPN варьирует в зависимости от различных индивидуальных химиотерапевтических агентов. Для большинства химиотерапевтических агентов симптомы невропатии начинают появляться после достижения накопительной пороговой дозы и продолжают прогрессировать при дополнительном дозировании. В зависимости от конкретного агента регулирование режима дозирования, частоты дозирования и даже скорости введения может влиять на частоту невропатии, которая развивается в данной популяции, но никакое регулирование режима, кроме прекращения химиотерапии, полностью не предупреждает CIPN в когорте лечения. В отношении некоторых химиотерапевтических агентов симптомы будут продолжать развиваться в течение некоторого времени даже после прекращения действия вызвавшего их агента, феномен, известный как «действие по инерции» (coasting). Даже если симптомы являются относительно стабильными, они могут продолжаться в течение месяцев, лет или неопределенного времени.

Два члена семейства химических соединений таксанов обычно используют в терапии для лечения разнообразных типов рака: паклитаксел и доцетаксел. Таксаны ингибируют раковый рост путем разборки микротрубочек, необходимых для митотической активности, и путем этого же механизма разрушают основанный на микротрубочках аксональный транспорт, ингибируя трофическую поддержку сенсорных нейронов. Таксаны обычно используют для лечения рака молочной железы, рака яичника, немелкоклеточного рака легкого, рака желудка, рака головы и шеи и рака предстательной железы. Сенсорная невропатия средней тяжести или тяжелая (степени 2-4), поражающая сенсорные нейроны как маленького диаметра, так и большого диаметра волокна, возникает у 20-35% пациентов, получающих паклитаксел в кумулятивной дозе 715-1500 мг/м² или доцетаксел в кумулятивной дозе 371-600 мг/м². Сенсорные симптомы (онемение, покалывание и боль) обычно начинаются в периферических отделах конечностей, сначала в ногах, затем в руках, что согласуется с механизмом действия, нацеленного на аксональный транспорт.У 40% из таких пациентов симптомы могут сохраняться в течение 3 лет или дольше (Park SB, Goldstein D, Krishnan AV, et al. (2013) Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity: A critical analysis. CA Cancer J Clin 63: 419-437), в то время как у 50% восстановление происходит в течение 9 месяцев. В то время как сенсорная невропатия является более распространенной и более тяжелой у пациентов с невропатией, вызванной таксаном, у некоторых пациентов также развивается недостаточность тонкой регуляции моторики.

Цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин представляют собой лекарственные средства на основе платины, используемые для лечения рака яичка, яичника, шейки матки, головы и шеи, толстой кишки и прямой кишки. Механизм их действия заключается в перекрестном сшивании ДНК, ограничивающем способность раковых клеток участвовать в синтезе ДНК. Когда вводят кумулятивные дозы 600 мг/м² или выше, это часто приводит к тяжелой сенсорной атаксии, вторичной по отношению к повреждению проприоцептивных нейронов большого диаметра. У 50% из тех, кто получил кумулятивные дозы 1170 мг/м², развилась изнурительная сенсорная невропатия степени 3, связанная с дегенерацией чувствительных ганглиев задних корешков. Самые значимые находки представляют собой покалывание, онемение, потерю проприоцепции и уменьшение или отсутствие глубоких сухожильных рефлексов, все они являются показателями преимущественно потери крупных чувствительных волокон (Park SB, Goldstein D, Krishnan AV, et al. (2013) Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity: A critical analysis. CA Cancer J Clin 63: 419-437). Также наблюдали уменьшение скорости проведения и амплитуд проводимости чувствительных нервов. Дополнительно к этой хронической форме невропатии лечение оксалиплатином также ассоциировано с типом острой невропатии, которая возникает немедленно после введения и поражает лицо дополнительно к конечностям. «Действие по инерции» (coasting) является обычным.

Винкристин и винбластин представляют собой наиболее клинически важные алкалоиды барвинка, и их применяют для лечения лейкемии, болезни Ходжкина, злокачественной лимфомы, нейробластомы, опухоли Вильмса, саркомы Капоши, меланомы, рака легкого и рака матки. Механизм их действия направлен на агрегацию микротрубочек и приводит к прекращению деления клеток, приводящему к гибели клеток. От 35% до 45% пациентов, получающих лечение винкристином, испытывают нарушение функции мелкой моторики и нарушение ходьбы дополнительно к сенсорной недостаточности. 30% испытывают «действие по инерции» при остановке химиотерапии (Park SB, Goldstein D, Krishnan AV, et al. (2013) Chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity: A critical analysis. CA Cancer J Clin 63: 419-437).

Бортезомиб представляет собой относительно новый химиотерапевтический агент, который является высокоэффективным в лечении пациентов с множественной миеломой и некоторыми другими злокачественными гематологическими заболеваниями. Введение Бортезомиба приводит к тяжелой болезненной сенсорной невропатии у 50%, и дополнительно примерно 30% испытывают нейротоксичность от средней до тяжелой степени. Симптомы включают парестезии и онемение в дистальных отделах конечностей, особенно в нижних конечностях, острую жгучую боль. CIPN, ассоциированный с Бортезомибом, представляет собой преимущественно сенсорную невропатию тонких волокон, однако у некоторых пациентов также развивается вегетативное поражение, и может проявляться ортостатической гипотензией, подавлением вариативности сердечного ритма и замедленным освобождением желудка. Вовлечение двигательных функций является редким, но иногда действительно происходит. Невропатия начинается при введении кумулятивных доз 16-26 мг/м², и ее частота увеличивается при более высоких дозах вплоть до введения дозы 40-45 мг/м², когда частота выходит на плато. Восстановление от невропатии происходит медленно, и через 2-3 месяца после лечения 60-85% пациентов все еще имеют клинически значимую невропатию.

Талидомид и леналидомид представляют собой синтетические производные глутаминовой кислоты, применяемые для лечения рецидивирующей и рефрактерной множественной миеломы. CIPN представляет собой основную побочную реакцию при лекарственной терапии этого типа, и ремиссия является медленной или даже невозможной. Индуцированная талидомидом невропатия представляет собой главным образом аллистезию, которая сначала возникает в ногах, затем распространяется на руки, часто в форме распределения «подобного носку» (sock-like), то есть, тяжелая в дистальных отделах без распространения на области выше коленей и локтей. Она включает гипестезию, гиперестезию (hyperesthesia), дизестезию, мышечную боль, гипестезию (haphalgesia), онемение, покалывание, жгучую боль, напряженность, холод в ладонях и ступнях, бледность, зуд ног и антуриум (anthurium) (Bkl D, de Souza S M, Costa-Lima C, et al. Thalidomide for the treatment of gastrointestinal bleeding due to angiodysplasia in a patient with Glanzmann's thrombasthenia [J]. Hematol Rep, 2017, 9(2): 6961). В некоторых публикациях сообщают, что, когда кумулятивная доза талидомида превышает 20 г, имеет место положительная корреляция между появлением и тяжестью невропатии и кумулятивной дозой (Rui Gui et al., Medical Recapitulate, PI739-1742, Vol 18 No 11, June 2012).

Иксабепилон представляет собой полусинтетический лактамный аналог эпотилона и первое в мире противоопухолевое лекарственное средство на основе эпотилона. Если сравнивать с Паклитакселом, эти два лекарственных средства имеют различные структуры, но имеют похожий механизм действия, а именно, вызывают апоптоз опухолевых клеток путем нарушения деления раковых клеток. Иксабепилон может индуцировать поражения нервных окончаний, вызывая появление патологических чувствительных нервов. Такая побочная реакция обычно исчезает через 1-2 месяца после отмены лекарственного средства. Степень сенсорной невропатии зависит от дозы введения и скорости введения (Burotto М, Edgerly М, Velarde М, et al. А phase II multi-center study of bevacizumab in combination with ixabepilone in subjects with advanced renal cell carcinoma [J]. Oncologist, 2017, 22(8): 888-e84.)

Несмотря на то, что CIPN считают наиболее общим тяжелым побочным эффектом, ассоциированным с химиотерапией, руководство по клинической практике Американского общества клинической онкологии приводит заключение, что в настоящее время не существует эффективного лечения, доступного для предупреждения CIPN или восстановления от CIPN, и рекомендует только одно лекарственное средство (дулоксетин) (смотрите Таблицу 1 (предупреждение) и Таблицу 2 (лечение), Hershman DL, Lacchetti С, Dworkin RH, et al. (2014). Prevention and management of chemotherapy-induced peripheral neuropathy in survivors of adult cancers: American society of clinical oncology clinical practice guideline. J Clin Oncol 32: 1941-67). Лечение ограничено только лечением лекарственными средствами от нейропатической боли, поддерживающим уходом и регулированием химиотерапевтической дозы (Kolb N, and Burns Т (2018) Clinical Research in chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Neurology 91: 379-380). Следовательно, эффективное предупреждение и лечение CIPN представляет собой клиническую проблему, требующую срочного решения.

Бутилфталид (3-n-бутилфталид, NBP) (химическое название: 3-n-бутилфталид, и торговое название: NBP) имеет структуру, представленную формулой (I), и представляет собой лекарственное средство для лечения ишемической апоплексии от легкой до средней степени.

В настоящее время нет сообщений о применении бутилфталида в предупреждении или лечении периферической невропатии, и в частности периферической невропатии, индуцированной химиотерапией.

Задача настоящего изобретения заключается в обеспечении применения бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в изготовлении лекарственного средства для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии. Периферическая невропатия предпочтительно представляет собой индуцированную лекарственным средством периферическую невропатию, и более предпочтительно индуцированную химиотерапевтическим лекарственным средством периферическую невропатию. Предупреждение, облегчение или лечение периферической невропатии включает предупреждение, облегчение или лечение индуцированной химиотерапевтическим лекарственным средством парестезии и дискинезии, такой как парестезия боли и тепла, или нарушенной координации движений, но не ограничивается этим.

В некоторых воплощениях лекарственное средство представлено в форме однократной дозы или в форме разделенной дозы.

В некоторых воплощениях лекарственное средство изготовлено в форме клинически приемлемой композиции, такой как композиция для перорального применения, инъецируемая композиция, композиция для местного применения или композиция для наружного применения, и предпочтительно композиция для перорального применения и инъецируемая композиция.

В некоторых воплощениях лекарственное средство представляет собой композицию для перорального применения. Композиция для перорального применения содержит примерно от 1 мг примерно до 1000 мг, предпочтительно примерно от 1 мг примерно до 500 мг, или примерно от 1 мг примерно до 300 мг, или примерно от 1 мг примерно до 200 мг, или примерно от 5 мг примерно до 180 мг, или примерно от 10 мг примерно до 150 мг, или примерно от 30 мг примерно до 120 мг, или примерно от 50 мг примерно до 120 мг, или примерно от 80 мг примерно до 120 мг, или примерно от 90 мг примерно до 110 мг, или примерно 100 мг бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях суточная доза композиции для перорального применения составляет примерно от 1 мг примерно до 10000 мг, предпочтительно примерно от 10 мг примерно до 5000 мг, или примерно от 20 мг примерно до 3000 мг, или примерно от 30 мг примерно до 2000 мг, или примерно от 50 мг примерно до 1500 мг, или примерно от 70 мг примерно до 1200 мг, или примерно от 100 мг примерно до 1000 мг, или примерно от 200 мг примерно до 900 мг, или примерно от 300 мг примерно до 800 мг, или примерно от 400 мг примерно до 700 мг, или примерно от 500 мг примерно до 600 мг, или примерно от 60 мг примерно до 800 мг, или примерно от 60 мг примерно до 600 мг, или примерно от 100 мг примерно до 800 мг, или примерно от 100 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 800 мг, или примерно от 300 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 800 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях композицию для перорального применения вводят один раз в сутки путем введения примерно от 60 мг примерно до 800 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например путем введения примерно 60 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг, примерно 400 мг, примерно 500 мг, примерно 600 мг, примерно 700 мг или примерно 800 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или композицию для перорального применения вводят два раза в сутки путем введения примерно от 30 мг примерно до 400 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например путем введения примерно 30 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг, примерно 300 мг, примерно 350 мг или примерно 400 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или композицию для перорального применения вводят три раза в сутки путем введения примерно от 20 мг примерно до 300 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введения примерно 20 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг или примерно 300 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях лекарственное средство представляет собой инъецируемую композицию. Инъецируемая композиция содержит примерно от 0,001 мг/мл примерно до 100 мг/мл, предпочтительно примерно от 0,005 мг/мл примерно до 50 мг/мл, или примерно от 0,01 мг/мл примерно до 10 мг/мл, или примерно от 0,1 мг/мл примерно до 5 мг/мл, или примерно от 0,1 мг/мл примерно до 3 мг/мл, или примерно от 0,1 мг/мл примерно до 1 мг/мл, или примерно от 0,12 мг/мл примерно до 0,80 мг/мл, или примерно от 0,15 мг/мл примерно до 0,50 мг/мл, более предпочтительно примерно от 0,20 мг/мл примерно до 0,40 мг/мл, или примерно от 0,20 мг/мл примерно до 0,30 мг/мл, или примерно 0,25 мг/мл бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях суточная доза инъецируемой композиции составляет примерно от 1 мг примерно до 1000 мг, предпочтительно примерно от 5 мг примерно до 500 мг, или примерно от 10 мг примерно до 300 мг, или примерно от 15 мг примерно до 200 мг, или примерно от 20 мг примерно до 150 мг, или примерно от 25 мг примерно до 120 мг, или примерно от 30 мг примерно до 100 мг, или примерно от 35 мг примерно до 90 мг, или примерно от 40 мг примерно до 80 мг, или примерно от 45 мг примерно до 70 мг, или примерно от 50 мг примерно до 60 мг, или примерно от 1 мг примерно до 100 мг, или примерно от 2 мг примерно до 80 мг, или примерно от 5 мг примерно до 75 мг, или примерно от 10 мг примерно до 50 мг, или примерно от 15 мг примерно до 50 мг, или примерно от 20 мг примерно до 50 мг, или примерно от 25 мг примерно до 75 мг, или примерно от 25 мг примерно до 50 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях инъецируемую композицию вводят один раз в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 100 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или инъецируемую композицию вводят два раза в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 50 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием.

В некоторых воплощениях химиотерапевтическое лекарственное средство включает одно из следующего или комбинацию из более чем одного из следующего: (1) химиотерапевтическое лекарственное средство, действующее на систему микротрубочек, или антимитотическое химиотерапевтическое лекарственное средство, включая: лекарственное средство на основе таксана, такое как Паклитаксел, доцетаксел или им подобные; или лекарственное средство на основе алкалоида барвинка, такое как винкристин, винбластин или им подобные; или лекарственное средство на основе эпотилона, такое как иксабепилон или ему подобное; или лекарственное средство на основе ингибитора протеаз, такое как Бортезомиб или ему подобное; или (2) химиотерапевтическое лекарственное средство, нарушающее синтез ДНК, включая лекарственное средство на основе платины, такое как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин или им подобные; или (3) иммуномодулирующие лекарственные средства, такое как талидомид, леналидомид или им подобные, но не ограничиваясь ими.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации можно применять в изготовлении лекарственного средства в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством для лечения периферической невропатии, где другие лекарственные средства для лечения периферической невропатии предпочтительно представляют собой дулоксетин или его соль, или моносиалотетрагексозилганглиозид натрия.

Другой объект настоящего изобретения далее включает предоставление способа предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, включающего введение субъекту или пациенту терапевтически эффективного количества бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации, где периферическая невропатия предпочтительно представляет собой периферическую невропатию, индуцированную лекарственным средством, более предпочтительно периферическую невропатию, индуцированную химиотерапевтическим лекарственным средством.

В некоторых воплощениях введение может представлять собой пероральное введение, введение инъекцией, местное введение или введение in vitro, предпочтительно пероральное введение или введение инъекцией. Терапевтически эффективное количество может предупреждать, лечить или облегчать периферическую невропатию у субъекта или пациента.

В некоторых воплощениях введение может представлять собой пероральное введение. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 10000 мг, предпочтительно примерно от 10 мг примерно до 5000 мг, или примерно от 20 мг примерно до 3000 мг, или примерно от 30 мг примерно до 2000 мг, или примерно от 50 мг примерно до 1500 мг, или примерно от 70 мг примерно до 1200 мг, или примерно от 100 мг примерно до 1000 мг, или примерно от 200 мг примерно до 900 мг, или примерно от 300 мг примерно до 800 мг, или примерно от 400 мг примерно до 700 мг, или примерно от 500 мг примерно до 600 мг, или примерно от 60 мг примерно до 800 мг, или примерно от 60 мг примерно до 600 мг, или примерно от 100 мг примерно до 800 мг, или примерно от 100 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 800 мг, или примерно от 300 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 800 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях введение может представлять собой введение инъекцией. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 1000 мг, предпочтительно примерно от 5 мг примерно до 500 мг, или примерно от 10 мг примерно до 300 мг, или примерно от 15 мг примерно до 200 мг, или примерно от 20 мг примерно до 150 мг, или примерно от 25 мг примерно до 120 мг, или примерно от 30 мг примерно до 100 мг, или примерно от 35 мг примерно до 90 мг, или примерно от 40 мг примерно до 80 мг, или примерно от 45 мг примерно до 70 мг, или примерно от 50 мг примерно до 60 мг, или примерно от 1 мг примерно до 100 мг, или примерно от 2 мг примерно до 80 мг, или примерно от 5 мг примерно до 75 мг, или примерно от 10 мг примерно до 50 мг, или примерно от 15 мг примерно до 50 мг, или примерно от 20 мг примерно до 50 мг, или примерно от 25 мг примерно до 75 мг, или примерно от 25 мг примерно до 50 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации применяют в форме однократной дозы или в форме разделенной дозы.

В некоторых воплощениях способ предупреждения, облегчения или лечения, включающий введение один раз в сутки путем введения примерно от 60 мг примерно до 800 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например путем введения примерно 60 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг, примерно 400 мг, примерно 500 мг, примерно 600 мг, примерно 700 мг или примерно 800 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение два раза в сутки путем введения примерно от 30 мг примерно до 400 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введения примерно 30 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг, примерно 300 мг, примерно 350 мг, или примерно 400 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение три раза в сутки путем введения примерно от 20 мг примерно до 300 мг композиции для перорального применения бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием, например введения примерно 20 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг или примерно 300 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введения один раз в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 100 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение два раза в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 50 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях химиотерапевтическое лекарственное средство включает одно или комбинацию из более чем одного из следующего: (1) химиотерапевтическое лекарственное средство, действующее на систему микротрубочек, или антимитотическое химиотерапевтическое лекарственное средство, включая: лекарственное средство на основе таксана, такое как Паклитаксел, доцетаксел или им подобные; или лекарственное средство на основе алкалоида барвинка, такое как винкристин, винбластин или им подобные; или лекарственное средство на основе эпотилона, такое как иксабепилон или ему подобное; или лекарственное средство на основе ингибитора протеаз, такое как Бортезомиб или ему подобное; или (2) химиотерапевтическое лекарственное средство, нарушающее синтез ДНК, включая лекарственное средство на основе платины, такое как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин или им подобные; или (3) иммуномодулирующее лекарственное средство, такое как талидомид, леналидомид или им подобные, но не ограничиваясь ими.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством для лечения периферической невропатии, где другие лекарственные средства для лечения периферической невропатии предпочтительно представляют собой дулоксетин или его соль, моносиалотетрагексозилганглиозид натрия.

Другая задача настоящего изобретения дополнительно включает предоставление бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для применения в предупреждении, облегчении или лечении периферической невропатии. Периферическая невропатия предпочтительно представляет собой периферическую невропатию, индуцированную лекарственным средством, более предпочтительно периферическую невропатию, индуцированную химиотерапевтическим лекарственным средством.

В некоторых воплощениях предупреждение, облегчение или лечение включает введение субъекту или пациенту терапевтически эффективного количества бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации.

В некоторых воплощениях введение выбрано из перорального введения, введения инъекцией, местного нанесения или введения in vitro и предпочтительно перорального введения или введения инъекцией. Терапевтически эффективное количество может предупреждать, облегчать или лечить периферическую невропатию у субъекта или пациента.

В некоторых воплощениях введение представляет собой пероральное введение. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 10000 мг, предпочтительно примерно от 10 мг примерно до 5000 мг, или примерно от 20 мг примерно до 3000 мг, или примерно от 30 мг примерно до 2000 мг, или примерно от 50 мг примерно до 1500 мг, или примерно от 70 мг примерно до 1200 мг, или примерно от 100 мг примерно до 1000 мг, или примерно от 200 мг примерно до 900 мг, или примерно от 300 мг примерно до 800 мг, или примерно от 400 мг примерно до 700 мг, или примерно от 500 мг примерно до 600 мг, или примерно от 60 мг примерно до 800 мг, или примерно от 60 мг примерно до 600 мг, или примерно от 100 мг примерно до 800 мг, или примерно от 100 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 800 мг, или примерно от 300 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 800 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях введение представляет собой введение инъекцией. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 1000 мг, предпочтительно примерно от 5 мг примерно до 500 мг, или примерно от 10 мг примерно до 300 мг, или примерно от 15 мг примерно до 200 мг, или примерно от 20 мг примерно до 150 мг, или примерно от 25 мг примерно до 120 мг, или примерно от 30 мг примерно до 100 мг, или примерно от 35 мг примерно до 90 мг, или примерно от 40 мг примерно до 80 мг, или примерно от 45 мг примерно до 70 мг, или примерно от 50 мг примерно до 60 мг, или примерно от 1 мг примерно до 100 мг, или примерно от 2 мг примерно до 80 мг, или примерно от 5 мг примерно до 75 мг, или примерно от 10 мг примерно до 50 мг, или примерно от 15 мг примерно до 50 мг, или примерно от 20 мг примерно до 50 мг, или примерно от 25 мг примерно до 75 мг, или примерно от 25 мг примерно до 50 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации применяют в форме однократной дозы или в форме разделенной дозы.

В некоторых воплощениях способ предупреждения, облегчения или лечения включает: введение один раз в сутки путем введения примерно от 60 мг примерно до 800 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введения примерно 60 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг, примерно 400 мг, примерно 500 мг, примерно 600 мг, примерно 700 мг или примерно 800 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение два раза в сутки путем введения примерно от 30 мг примерно до 400 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например, введения примерно 30 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг или примерно 400 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение три раза в сутки путем введения примерно от 20 мг примерно до 300 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введение примерно 20 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг или примерно 300 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение один раз в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 100 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение два раза в сутки путем введения примерно от 1 мг примерно до 50 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг инъецируемой композиции, инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях химиотерапевтическое лекарственное средство включает одно или более чем одного из следующего: (1) химиотерапевтическое лекарственное средство, действующее на систему микротрубочек, или антимитотическое химиотерапевтическое лекарственное средство, включая: лекарственное средство на основе таксана, такое как Паклитаксел, доцетаксел или им подобные; или лекарственное средство на основе алкалоида барвинка, такое как винкристин, винбластин или им подобные; или лекарственное средство на основе эпотилона, такое как иксабепилон или ему подобное; или лекарственное средство на основе ингибитора протеаз, такое как Бортезомиб или ему подобное; или (2) химиотерапевтическое лекарственное средство, нарушающее синтез ДНК, включая лекарственное средство на основе платины, такое как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин или им подобные; или (3) иммуномодулирующее лекарственное средство, такое как талидомид, леналидомид или им подобные, но не ограничиваясь ими.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством для лечения периферической невропатии, где другие лекарственные средства для лечения периферической невропатии предпочтительно представляют собой дулоксетин или его соль, моносиалотетрагексозилганглиозид натрия.

Другая задача настоящего изобретения дополнительно включает предоставление фармацевтической композиции, содержащей бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации, и применяемой для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии. Периферическая невропатия предпочтительно представляет собой периферическую невропатию, индуцированную лекарственным средством, более предпочтительно периферическую невропатию, индуцированную химиотерапевтическим лекарственным средством.

В некоторых воплощениях предупреждение, облегчение или лечение включает введение субъекту или пациенту терапевтически эффективного количества бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации.

В некоторых воплощениях введение выбрано из перорального введения, введения инъекцией, местного нанесения или введения in vitro и предпочтительно перорального введения или введения инъекцией. Терапевтически эффективное количество может предупреждать, облегчать или лечить периферическую невропатию у субъекта или пациента.

В некоторых воплощениях введение представляет собой пероральное введение. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 10000 мг, предпочтительно примерно от 10 мг примерно до 5000 мг, или примерно от 20 мг примерно до 3000 мг, или примерно от 30 мг примерно до 2000 мг, или примерно от 50 мг примерно до 1500 мг, или примерно от 70 мг примерно до 1200 мг, или примерно от 100 мг примерно до 1000 мг, или примерно от 200 мг примерно до 900 мг, или примерно от 300 мг примерно до 800 мг, или примерно от 400 мг примерно до 700 мг, или примерно от 500 мг примерно до 600 мг, или примерно от 60 мг примерно до 800 мг, или примерно от 60 мг примерно до 600 мг, или примерно от 100 мг примерно до 800 мг, или примерно от 100 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 600 мг, или примерно от 200 мг примерно до 800 мг, или примерно от 300 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 600 мг, или примерно от 400 мг примерно до 800 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях введение представляет собой введение инъекцией. Терапевтически эффективное количество относится к суточной дозе примерно от 1 мг примерно до 1000 мг, предпочтительно примерно от 5 мг примерно до 500 мг, или примерно от 10 мг примерно до 300 мг, или примерно от 15 мг примерно до 200 мг, или примерно от 20 мг примерно до 150 мг, или примерно от 25 мг примерно до 120 мг, или примерно от 30 мг примерно до 100 мг, или примерно от 35 мг примерно до 90 мг, или примерно от 40 мг примерно до 80 мг, или примерно от 45 мг примерно до 70 мг, или примерно от 50 мг примерно до 60 мг, или примерно от 1 мг примерно до 100 мг, или примерно от 2 мг примерно до 80 мг, или примерно от 5 мг примерно до 75 мг, или примерно от 10 мг примерно до 50 мг, или примерно от 15 мг примерно до 50 мг, или примерно от 20 мг примерно до 50 мг, или примерно от 25 мг примерно до 75 мг, или примерно от 25 мг примерно до 50 мг в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации применяют в форме однократной дозы или в форме разделенной дозы.

В некоторых воплощениях способ предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии включает: введение один раз в сутки путем введения примерно от 60 мг примерно до 800 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введения примерно 60 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг, примерно 400 мг, примерно 500 мг, примерно 600 мг, примерно 700 мг или примерно 800 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введения два раза в сутки путем введения примерно от 30 мг примерно до 400 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например введения примерно 30 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг или примерно 400 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение три раза в сутки путем введения примерно от 20 мг примерно до 300 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например, введения примерно 20 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг или примерно 300 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение один раз в сутки путем введения от примерно 1 мг до примерно 100 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или введение два раза в сутки путем введения от примерно 1 мг до примерно 50 мг, предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид.

В некоторых воплощениях химиотерапевтическое лекарственное средство включает одно или более чем одно из следующего: (1) химиотерапевтическое лекарственное средство, действующее на систему микротрубочек, или антимитотическое химиотерапевтическое лекарственное средство, включая: лекарственное средство на основе таксана, такое как Паклитаксел, доцетаксел или им подобные; или лекарственное средство на основе алкалоида барвинка, такое как винкристин, винбластин или им подобные; или лекарственное средство на основе эпотилона, такое как иксабепилон или ему подобное; или лекарственное средство на основе ингибитора протеаз, такое как Бортезомиб или ему подобное; или (2) химиотерапевтическое лекарственное средство, нарушающее синтез ДНК, включая лекарственное средство на основе платины, такое как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин или им подобные; или (3) иммуномодулирующее лекарственное средство, такое как талидомид, леналидомид или им подобные, но не ограничиваясь ими.

В некоторых воплощениях бутилфталид или его оптический изомер, пролекарство, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации можно применять в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством для лечения периферической невропатии, где другие лекарственные средства для лечения периферической невропатии предпочтительно представляют собой дулоксетин или его соль, и моносиалотетрагексозилганглиозид натрия.

Оптический изомер бутилфталида по настоящему изобретению представляет собой L-бутилфталид, D-бутилфталид или смесь двух изомеров в любом соотношении.

Пролекарство бутилфталид по настоящему изобретению относится к соединению, сконструированному в соответствии с принципом создания пролекарства. Такое соединение может метаболизироваться в бутилфталид in vivo для реализации такого же или похожего фармакологического действия как у бутилфталида.

Под термином «дейтерированный продукт» бутилфталида по настоящему изобретению понимают соединение, в котором один или несколько атомов водорода в структуре соединения бутилфталид заменен/заменены на атом-изотоп дейтерий. Такой дейтерированный продукт обладает таким же или похожим фармакологическим действием как бутилфталид, например, дейтерированные производные бутилфталида и его производные, раскрытые в WO 2019242765 A1, и в частности дейтерированные производные бутилфталида, имеющие следующие структуры:

Метаболит бутилфталида по настоящему изобретению относится к метаболиту бутилфталида in vivo или его производному. Такой метаболит может оказывать такое же или похожее фармакологическое действие как бутилфталид, например, производные MI и MII бутилфталида, раскрытые в CN 1689563 А, а также сложные эфиры или соли MI, раскрытые в CN 102503919 А или CN 101289438 А:

Продукт дециклизации или соль продукта дециклизации бутилфталида по настоящему изобретению относятся к продукту или соли, полученным путем раскрытия кольца лактона в структуре бутилфталида. Из такого продукта дециклизации может синтезироваться бутилфталид in vivo путем замыкания кольца для реализации такого же или похожего фармакологического действия как у бутилфталида, например из продукта дециклизации бутилфталида или соли продукта дециклизации, раскрытых в CN 1382682 А, CN 1523003 А и CN 104974050 A:

где М представляет собой ион одновалентного металла, представляющий собой ион калия, ион натрия или ион лития; или ион двухвалентного металла, представляющего собой ион кальция, ион магния или ион цинка, где n=1, или n=2; и М предпочтительно представляет собой ион калия;

и его оптического изомера;

и производного продукта дециклизации гликозил-модифицированного бутилфталида, раскрытого в CN 108084233 A; производного продукта дециклизации бутилфталида, раскрытого в CN 109503548 A; производного-сложного эфира органического амина и 2-(α-гидроксипентил)бензойной кислоты, раскрытого в CN 108715579 А, и им подобных.

Дозу бутилфталида или его оптического изомера, пролекарства, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации по настоящему изобретению рассчитывают в пересчете на бутилфталид.

Специалист в данной области техники понимает, что другие аналоги или оптические изомеры, пролекарства, дейтерированные продукты, метаболиты, продукты дециклизации или соли продуктов дециклизации бутилфталида, такие как 7-гидроксибутилфталид, раскрытый в CN 106214674 A, галогенобутилфталид (в частности 5-бромбутилфталид), раскрытый в CN 101029037 A, галогенированный 2-(α-гидроксипентил)бензоат, раскрытый в CN 101402565 A, и 5-бром-2-(α-гидроксипентил)бензоат натрия, раскрытый в CN 104086399 A, также оказывают похожее фармакологическое действие как и бутилфталид.

В воплощениях настоящего изобретения слово «примерно» перед числовым значением относится к ±10%, предпочтительно ±5% числового значения, например, ±10%, ±9%, ±8%, ±7%, ±6%, ±5%, ±4%, ±3%, ±2% или ±1% числового значения.

Технические эффекты

1. Репрезентативное лекарственное средство бутилфталид по настоящему изобретению может существенно улучшать состояние при периферической невропатии, индуцированной Паклитакселом или Бортезомибом, и может заметно обращать симптомы патологического порога температурно-болевой чувствительности и порога механической боли, вызванные этими двумя химиотерапевтическими лекарственными средствами.

2. Репрезентативное лекарственное средство бутилфталид по настоящему изобретению не ослабляет активность Бортезомиба и Паклитаксела по ингибированию пролиферации опухолевых клеток, культивируемых in vitro, не оказывает существенного влияния на ингибирующее опухоль действие in vivo и фармакокинетические свойства Бортезомиба и Паклитаксела.

3. В экспериментах in vitro и in vivo показано, что лекарственное средство по настоящему изобретению может предупреждать или облегчать периферическую невропатию, вызванную химиотерапевтическим лекарственным средством, не влияя на противоопухолевую эффективность и фармакокинетические свойства химиотерапевтического лекарственного средства.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 представлена схематическая диаграмма способа моделирования из Примера 1.

На Фиг. 2 представлена диаграмма изменения массы организма у крыс в каждой группе от 0 до 16 суток (D0-16) в Примере 1. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 3 представлена диаграмма изменения порога температурно-болевой чувствительности у крыс в каждой группе от 0 до 13 суток (DO-13) в Примере 1. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 4 представлено сравнение порогов температурно-болевой чувствительности для крыс каждой группы на сутки 7/10/13 (D7/D10/D13) в Примере 1. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 5 представлена временная ось моделирования и введения из Примера 2.

На Фиг. 6 представлен график зависимости изменения значений массы организма крыс из Примера 2 (среднее ±SD, n=12). В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 7 показано изменение порога температурно-болевой чувствительности у крыс на сутки -1/7/14 в Примере 2 (среднее ±SD, n=12). В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 8 показано изменение порога механической боли у крыс на сутки 0/6/13 в Примере 2 (среднее ±SD, n=12). В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 9 показано изменение массы организма крыс в каждой группе в Примере 3. В сравнении с группой растворителя, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001; и в сравнении с ab-PTX, ##Р≤0,01.

На Фиг. 10 показано изменение массы организма крыс в каждой группе в Примере 4. В соответствии со статистическим анализом при сравнении с группой растворителя, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 11 показана временная ось моделирования и введения из Примера 6.

На Фиг. 12 показано изменение массы организма крыс в каждой группе на D0-D20 в Примере 6. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 13 показано изменение порога температурно-болевой чувствительности крыс из Примера 6. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 14 показано изменение порога механической боли у крыс из Примера 6. В сравнении с модельной группой, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001.

На Фиг. 15 представлен график зависимости изменения значений массы организма мышей в Примере 8 (среднее ±SD, n=6).

На Фиг. 16 представлен график зависимости изменения объема ксенотрансплантной опухоли у мышей, несущих опухоль, из Примера 8 (среднее ±SD, n=6; и в сравнении с группой растворителя, *Р≤0,05, **Р≤0,01 и ***Р≤0,001).

Примечание: «mpk» в графических материалах обозначает мг/кг.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙ

Приведенные ниже примеры предназначены для лучшей иллюстрации воплощений настоящего изобретения, но настоящее изобретение не ограничено перечисленными примерами. Специалист в данной области техники может выполнить несущественные улучшения и уточнения воплощений в соответствии с содержанием вышеизложенного описания, и улучшенные и уточненные воплощения все еще входят в объем настоящего изобретения.

Пример 1: Исследование эффективности бутилфталида (при внутрибрюшинной инъекции) на периферическую невропатию, индуцированную химиотерапией Паклитакселом (связанным с альбумином) у крыс in vivo

1. Экспериментальные животные

59 самцов крыс SD (линия Спрег-Доули, Sprague Dawley), 180-200 г.

2. Лекарственные средства

Лиофилизированный порошок Паклитаксела (связанный с альбумином, ab-PTX), 100 мг/флакон, изготовленный CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: В041909121, растворенный в нормальном солевом растворе непосредственно перед использованием.

Бутилфталид (NBP) для инъекций, 25 мг/5 мл, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: Q27190401, растворенный в нормальном солевом растворе до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

3. Методика эксперимента

(1) Получение модели и способ введения

Самцы крыс SD, ab-PTX 5 мг/кг, объем введения: 5 мл/кг, получали внутрибрюшинную инъекцию (i.p.) на сутки 0, 2, 4, 6, 8 и 11 для моделирования. NBP вводили в трех дозах (1,5; 5 и 15 мг/кг bid (два раза в сутки)), начиная за 1 сутки до моделирования ab-PTX и во время введения и моделирования ab-PTX, первую дозу NBP вводили путем внутрибрюшинной инъекции за 1 ч до введения ab-PTX. Вторую дозу NBP вводили с интервалом 4 ч после первой дозы при объеме введения 5 мл/кг, и вводили ежесуточно в течение 17 суток подряд. Группе нормы вводили 0,9% нормальный солевой раствор (0,9% INJ NS) с такой же частотой. Способ моделирования показан на Фиг. 1. Распределение животных по группам, способ введения и дозы подробно описаны в Таблице 3.

Примечание: (1) bid: два раза в сутки; и (2) три дозы NBP были конвертированы в суточные дозы для взрослых (в пересчете на 60 кг, для перорального введения) 60 мг/сут, 200 мг/сут и 600 мг/сут, соответственно.

(2) Распределение по группам

На основании исходных показателей порога температурно-болевой чувствительности и массы организма крыс отбирали крыс со значениями исходных показателей, варьирующими от 3 до 6 с, и распределяли на равные группы в соответствии с вышеприведенной Таблицей 3.

(3) Наблюдаемые показатели

1) Масса организма: всех животных однократно взвешивали перед экспериментом и взвешивали в установленное время каждый день после начала введения, но только данные о массе организма на сутки -1, 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 и 16 учитывали в статистических расчетах.

2) Порог температурно-болевой чувствительности: использовали измерительный прибор IITC Life Science Electronic Von Frey Anesthesio и интенсивность источника света регулировали для получения исходного показателя порога температурно-болевой чувствительности примерно 3-6 с. В этом случае интенсивность света составляла 58%, и устанавливали значение порога отсечения 10 с. Крыс помещали в пластиковую камеру на стеклянной пластине, так чтобы центры подошв крыс были экспонированы к источнику света. Время рефлекторного отдергивания, то есть порог температурно-болевой чувствительности крыс, регистрировали и измеряли однократно для каждой левой лапы и правой лапы каждой крысы и измерение повторяли три раза с интервалом между каждыми двумя измерениями ≥15 мин для вычисления среднего значения по 6 значениям порога температурно-болевой чувствительности для каждой крысы.

4. Результаты эксперимента

(1) Масса организма

На сутки 4-16 (D4-16) моделирования массы организма крыс в модельной группе были существенно понижены в сравнении с группой нормы (Р<0,01); и в сравнении с модельной группой массы организма крыс в трех группах дозировки NBP (1,5; 5 и 15 мг/кг bid) существенно не изменялись, как подробно описано на Фиг. 2.

(2) Порог температурно-болевой чувствительности

Измерения проводили на сутки 7, 10, 13 и 17. На сутки 7-13 (D7-13) порог температурно-болевой чувствительности в модельной группе был существенно повышен в сравнении с группой нормы (Р<0,01); и в сравнении с модельной группой повышение порога температурно-болевой чувствительности модельных крыс в группах NBP (1,5; 5 и 15 мг/кг bid) может быть существенно уменьшено (Р<0,05 или Р<0,01), как подробно описано на Фиг. 3 и Фиг. 4.

На сутки 17 (D17) не было статистически значимого отличия порога температурно-болевой чувствительности крыс в модельной группе в сравнении с группой нормы (данные D17 не показаны), следовательно, порог температурно-болевой чувствительности в группе терапии NBP не был определен и эксперимент был прекращен.

5. Выводы

Бутилфталид может эффективно облегчать симптомы патологической температурно-болевой чувствительности при периферической невропатии, индуцированной Паклитакселом (связанным с альбумином) у крыс.

Пример 2: Исследование эффективности бутилфталида (при внутрижелудочном введении) на периферическую невропатию, индуцированную химиотерапией Паклитакселом (связанным с альбумином) у крыс in vivo

1. Экспериментальные животные

72 самца крыс SD (Sprague Dawley), 160-180 г.

2. Лекарственные средства

Лиофилизированный порошок Паклитаксела (связанный с альбумином, ab-PTX), 100 мг/флакон, изготовленный CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: B041909121, растворенный в нормальном солевом растворе непосредственно перед использованием.

Бутилфталид (для перорального введения), 10 кг/флакон, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: 518180803, растворяли в растительном масле до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

Дулоксетина гидрохлорид, номер партии: QRQYD-JN, TCI (Shanghai) Development Co., Ltd, растворенный в нормальном солевом растворе, содержащем 2% DMSO (диметилсульфоксид), непосредственно перед использованием.

3. Методика эксперимента

3.1 Получение модели и способ введения

В данном эксперименте самцам крыс SD вводили 5 мг/кг ab-PTX в объеме введения 5 мл/кг и инъецировали внутрибрюшинно (i.p.) на сутки 0, 2, 4, 6, 9 и 13 (первую дозу ab-PTX вводили на сутки 0 эксперимента) для моделирования.

Использовали три дозы NBP (3, 10 и 30 мг/кг bid) и лекарственное средство - положительный контроль (дулоксетина гидрохлорид) в концентрации 15 мг/кг qd (1 раз в сутки). Как NBP, так и дулоксетина гидрохлорид вводили за 1 сутки до моделирования ab-PTX. Во время введения и моделирования ab-PTX как NBP (первую дозу), так и дулоксетина гидрохлорид вводили за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции ab-PTX. Вторую дозу NBP вводили с интервалом ≥4 ч после первой дозы в объеме введения 5 мл/кг и вводили путем внутрижелудочного введения в течение 14 суток подряд.

Модельная группа получала растительное масло с такой же частотой и таким же способом введения как NBP.

Группа нормы получала нормальный солевой раствор с такой же частотой и таким же способом введения как ab-PTX и получала растительное масло с такой же частотой и таким же способом введения как NBP.

Способ моделирования и время введения показаны на Фиг. 5. Распределение животных на группы, способ введения и дозы подробно описаны в Таблице 4.

Примечание: (1) р.о.: внутрижелудочное введение; (2) i.p.: внутрибрюшинная инъекция; (3) три дозы NBP конвертировали в суточные дозы для взрослого (в пересчете на 60 кг, для перорального введения) 60 мг/сут, 200 мг/сут, and 600 мг/сут, соответственно.

3.2 Распределение на группы

На основании исходных показателей порога температурно-болевой чувствительности и массы организма крыс отбирали крыс со значениями исходных показателей, варьирующими от 3 до 6 с, и распределяли на равные группы в соответствии с Таблицей 4 в пункте 3.1.

3.3 Наблюдаемые показатели

(1) Масса организма: всех животных взвешивали однократно перед экспериментом и взвешивали в установленное время каждый день после начала введения, но только данные о массе организма на сутки -1, 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 14 учитывали в статистических расчетах.

(2) Порог температурно-болевой чувствительности: измерения проводили на сутки -1, 7 и 14.

Способ: использовали измерительный прибор ПТС Life Science Electronic Von Frey Anesthesio и интенсивность источника света регулировали для получения исходного показателя порога температурно-болевой чувствительности примерно 3-6 сек. В этом случае интенсивность света составила 58%, и было установлено значение порога отсечения 10 сек. Крыс помещали в пластиковую камеру на стеклянной пластине, так чтобы центры подошв крыс были экспонированы к источнику света. Время рефлекторного отдергивания, то есть порог температурно-болевой чувствительности крысы, регистрировали и измеряли однократно для каждой левой лапы и правой лапы каждой крысы, и измерение повторяли три раза с интервалом между каждыми двумя измерениями ≥15 мин для вычисления среднего значения по 6 значениям порога температурно-болевой чувствительности для каждой крысы.

(3) Порог болевой чувствительности при механическом раздражении: измерения проводили на сутки 0, 6 и 13.

Способ: Крыс помещали в пластиковую камеру на проволочной сетке, оставляли стоять неподвижно в течение 15 мин, стимулировали с помощью стимулирующего зонда диаметром 0,4 мм от измерительного прибора ПТС Life Science Electronic Von Frey Anesthesio в центрах ступней крыс путем постепенного увеличения силы до рефлекторного отдергивания лап крысами. Записывали максимальное значение, которое показывал прибор в это время, то есть порог чувствительности механической боли. В каждом эксперименте измерения для левой и правой лапы каждой крысы проводили по три раза с интервалом между каждыми двумя измерениями ≥5 мин для вычисления среднего значения по 6 значениям порога механической боли для каждой крысы.

4. Результаты

4.1 Влияние на массу организма

На сутки 4-14 эксперимента массы организма крыс в модельной группе заметно уменьшались в сравнении с группой нормы (Р<0,05); и на протяжении периода введения массы организма крыс в группах трех дозировок NBP (3, 10 и 30 мг/кг bid) существенно не изменялись по сравнению с модельной группой, и положительный контроль-лекарственное средство дулоксетина гидрохлорид мог существенно увеличивать массы организма у модельных крыс (Р<0,05), как подробно описано на Фиг. 6.

4.2 Влияние на порог температурно-болевой чувствительности

На сутки 7 эксперимента порог температурно-болевой чувствительности крыс в модельной группе был существенно повышен в сравнении с группой нормы (Р<0,01); и в сравнении с модельной группой порог температурно-болевой чувствительности крыс в группе NBP (30 мг/кг bid) был существенно понижен (Р<0,05).

На сутки 14 эксперимента порог температурно-болевой чувствительности крыс в модельной группе был существенно повышен в сравнении с группой нормы (Р<0,001); и в сравнении с модельной группой пороги температурно-болевой чувствительности крыс в группах трех дозировок NBP (3, 10 и 30 мг/кг bid) и в группе положительного контроля-лекарственного средства дулоксетина гидрохлорида (15 мг/кг qd) были существенно понижены (Р<0,05), как подробно описано на Фиг. 7.

4.3 Влияние на порог чувствительности механической боли

На сутки 6 эксперимента порог чувствительности механической боли у крыс в модельной группе был существенно повышен в сравнении с группой нормы (Р<0,05); и в сравнении с модельной группой порог чувствительности механической боли у крыс в группе NBP (30 мг/кг bid) был существенно понижен (Р<0,05).

На сутки 13 эксперимента порог чувствительности механической боли у крыс в модельной группе был существенно повышен в сравнении с группой нормы (Р<0,001); и в сравнении с модельной группой порог чувствительности механической боли у крыс в группе дозировки NBP (10 и 30 мг/кг bid) и группе положительного контроля-лекарственного средства дулоксетина гидрохлорида (15 мг/кг qd) были существенно понижены (Р<0,05), и порог чувствительности механической боли у крыс в группе дозировки NBP (3 мг/кг bid) имел тенденцию к уменьшению, но различие не было статистически значимым, как подробно описано на Фиг. 8.

6. Выводы

В условиях этого эксперимента NBP мог эффективно в зависимости от дозы облегчать симптомы периферической невропатии в модели крыс с индуцированной ab-PTX PIPN (индуцированной Паклитакселом периферической невропатии).

Пример 3: Влияние NBP на противоопухолевую эффективность и PK ab-PTX против ксенотрансплантата опухоли B16/F10

1. Экспериментальная система

1.1 Экспериментальные животные 40 самок мышей C57BL/6N, 15-17 г.

1.2 Штаммы клеток

Клетки B16/F10 (клетки меланомы мыши): приобретали от Shanghai Genechem Co., Ltd.

2. Лекарственные средства

Лиофилизированный порошок Паклитаксела (связанного с альбумином), 100 мг/флакон, изготовленный CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: B041909121 растворенный в нормальном солевом растворе непосредственно перед использованием.

Бутилфталид, 25 мг/5 мл/флакон, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: Q27190401 растворенный в нормальном солевом растворе до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

3. Методика эксперимента

3.1 Получение модели

После восстановления и пересева клеток B16/F10 in vitro до достаточного количества клетки подсчитывали под микроскопом и разводили средой, не содержащей сыворотку, доводя число клеток примерно до 1×10⁷ клеток/мл. Суспензию клеток хранили на ледяной бане.

Суспензию клеток B16/F10 извлекали стерильным шприцем и инокулировали в подкожную ткань подмышечной впадины передней конечности мышей C57BL/6N при объеме инокулята 0,1 мл/мышь, содержащего примерно 1,0×10⁶ опухолевых клеток, для получения модели опухолевого ксенотрансплантата В16/F10 у мышей C57BL/6N.

3.2 Способ введения Группа терапии:

Группа монотерапии ab-PTX: внутрибрюшинная инъекция ab-PTX 25 мг/кг, biw (два раза в неделю) (на сутки 1, 4, 8, 11 и 15). Объем введения: 10 мл/кг.

Группа NBP/ab-PTX: ab-PTX вводили путем внутрибрюшинной инъекции 25 мг/кг, biw (на сутки 1, 4, 8, 11 и 15); NBP вводили путем внутрибрюшинной 3 мг/кг, 10 мг/кг или 30 мг/кг два раза в сутки, bid (введение начинали на сутки 0); и в течение моделирования ab-PTX первую дозу NBP вводили путем внутрибрюшинной инъекции за 1 ч до введения ab-PTX и вторую дозу NBP вводили с интервалом более 4 ч после первой дозы. Введение выполняли в течение 15 суток подряд. Объем введения составлял 10 мл/кг.

Группа растворителя: растворитель (нормальный солевой раствор) вводили путем внутрибрюшинной инъекции с такой же частотой и с таким же объемом введения как для ab-PTX и NBP.

Примечание: три дозы NBP были конвертированы в суточные дозы для взрослых (в пересчете на 60 кг, для перорального введения) 60 мг/сут, 200 мг/сут и 600 мг/сут, соответственно.

3.3 Наблюдаемые показатели и оценочные показатели

3.3.1 Общие наблюдаемые показатели

(1) Наблюдение общего состояния: всех животных наблюдали один раз в сутки в течение периода эксперимента и регистрировали нарушение и изменения поведения, затрагивающие части их тела.

(2) Масса организма: всех животных перед экспериментом однократно взвешивали и животных, имеющих подходящую массу организма, отбирали для эксперимента. Животных взвешивали в установленное время один раз в сутки после начала введения.

(3) Гибель и состояние, близкое к гибели: время смерти умерших животных регистрировали и умирающих животных наблюдали более часто для определения времени смерти.

3.3.2 Масса опухоли

В конце эксперимента, после того как животных подвергали эвтаназии путем асфиксии СО2, опухоли вырезали и взвешивали.

Степень уменьшения массы опухоли% = (1-масса опухоли в группе терапии/масса опухоли в группе растворителя) × 100%

3.3.3 Забор образцов крови и определение PK (фармакокинетических параметров)

Перед введением последней дозы ab-PTX (0 ч) и через 5 мин, 0,5 ч, 1 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 24 ч после введения образцы крови забирали (как подробно описано в Таблице 5), используя гепарин в качестве антикоагулянта, и центрифугировали для отделения плазмы, которую хранили при -80°С для дальнейшего использования. Общее количество Паклитаксела в плазме определяли путем осаждения белка-LC (жидкостная хроматограф ия)/М8(масс-спектрометрия)/М8.

4. Результаты

4.1 Влияние на массу организма

В сравнении с группой растворителя показатель прибавки массы организма у мышей в каждой группе терапии был существенно понижен (Р<0,01). В сравнении с группой ab-PTX показатель прибавки массы организма в группе дозировки NBP/ab-PTX (10/25 мг/кг) был существенно понижен (Р<0,01). На основании анализа данных о массе опухоли уменьшение показателя прибавки массы организма в каждой группе терапии должно быть вызвано ингибированием роста опухоли лекарственным средством, как подробно показано на Фиг. 9.

4.2 Влияние на массу опухоли

В сравнении с группой растворителя рост опухоли в каждой группе терапии может быть существенно ингибирован (Р<0,001); и в сравнении с группой ab-PTX комбинированная терапия различными дозами NBP и ab-PTX не давала статистически значимого различия в ингибировании опухоли (Р>0,05). Масса опухоли в каждой группе подробно описана в Таблице 6.

4.3 Влияние на PK

Общее количество Паклитаксела в плазме определяли путем осаждения белка-LC/MS/MS. Эти результаты показали, что не было стастистически значимого различия по C_max, AUC_0-t и другим показателям в каждой группе терапии, что указывает на то, что NBP не оказывал влияния на параметры PK ab-PTX у мышей, как подробно показано на Фиг. 7.

5. Выводы

В этом эксперименте NBP не оказывал заметного влияния на противоопухолевую эффективность ab-PTX и изменения PK ab-PTX.

Пример 4 Влияние NBP на противоопухолевую эффективность и PK ab-PTX против ксенотрансплантата опухоли ЛМТ-1

1. Экспериментальная система

1.1 Экспериментальные животные 48 самок мышей Nu/Nu, 15-17 г.

1.2 Штаммы клеток

Клетки ЛМТ-1 (клетки рака молочной железы человека): приобретали от Nanjing Cobioer Biosciences Co., Ltd.

2. Задача эксперимента

Ксенотрансплантат опухоли клеток ЛМТ-1 мышей Nu/Nu использовали в этом эксперименте для валидации влияния NBP на противоопухолевую эффективность и параметры PK ab-PTX.

3. Лекарственные средства

Лиофилизированный порошок Паклитаксела (связанного с альбумином), 100 мг/флакон, номер партии: В042007410, изготовленный CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd, растворенный в нормальном солевом растворе непосредственно перед использованием.

Бутилфталид (для перорального применения), 10 кг/флакон, номер партии: 518180803, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, растворенный в растительном масле до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

4. Методика эксперимента

4.1 Получение модели

После размораживания и пересева клеток ЛМТ-1 in vitro до достаточного количества клетки подсчитывали под микроскопом и разводили средой, не содержащей сыворотку, доводя число клеток примерно до 1×10⁸ клеток/мл. Суспензию клеток хранили на ледяной бане.

Суспензию клеток ЛМТ-1 извлекали стерильным шприцем и инокулировали в подкожную ткань подмышечной впадины передней конечности мышей Nu/Nu при объеме инокулята 0,1 мл/мышь, содержащего примерно 1,0×10⁷ опухолевых клеток, для получения модели опухолевого ксенотрансплантата ЛМТ-1 у мышей Nu/Nu.

4.2 Способ введения Группы терапии:

Группа монотерапии ab-PTX: внутривенная инъекция ab-PTX 15 мг/кг один раз еженедельно, qw (раз в неделю) (на сутки 0, 7, 14, 21 и 28). Период введения: 28 суток. Объем введения: 10 мл/кг.

Группа монотерапии NBP: NBP вводили через гастральный зонд (transoral gavage) по 60 мг/кг, bid (введение начинали на сутки 0), интервал дозировки составлял больше 4 ч, и период введения составлял 28 суток. Объем введения составлял 10 мл/кг.

Группа NBP/ab-PTX: внутривенная инъекция ab-PTX 15 мг/кг, qw (на сутки 0, 7, 14, 21 и 28). NBP вводили через гастральный зонд (transoral gavage) по 6 мг/кг, 20 мг/кг или 60 мг/кг два раза в сутки, bid (введение начинали на сутки 0), интервал дозировки составлял больше 4 ч; первую дозу NBP вводили за 1 ч до введения ab-PTX. Период введения составлял 28 суток. Объем введения составлял 10 мл/кг.

Группа растворителя получала нормальный солевой раствор с такой же частотой и таким же способом как для ab-PTX и получала растительное масло с такой же частотой и таким же способом как для NBP.

Примечание: Дозы введения NBP были конвертированы в суточные дозы для взрослых (в пересчете на 60 кг, для перорального введения) 60 мг/сут, 200 мг/сут и 600 мг/сут, соответственно.

4.3 Наблюдаемые показатели и оценочные показатели

4.3.1 Общие наблюдаемые показатели

(1) Наблюдение общего состояния: всех животных наблюдали один раз в сутки в течение периода эксперимента и регистрировали нарушение и изменения поведения, затрагивающие части их тела.

(2) Масса организма: всех животных перед экспериментом однократно взвешивали и животных, имеющих подходящую массу организма, отбирали для эксперимента. Животных взвешивали в установленное время один раз в сутки после начала введения.

(3) Гибель и состояние, близкое к гибели: время смерти умерших животных регистрировали и умирающих животных наблюдали более часто для определения времени смерти.

4.3.2 Масса опухоли

В конце эксперимента, после того как животных подвергали эвтаназии путем асфиксии СО2, опухоли вырезали и взвешивали.

Степень уменьшения массы опухоли% = (1-масса опухоли в группе терапии/масса опухоли в группе растворителя) × 100%

4.3.3 Забор образцов крови и определение PK (фармакокинетических параметров)

Перед введением последней дозы ab-PTX (0 ч) и через 5 мин, 15 мин, 0,5 ч, 1 ч, 4 ч, 8 ч, 24 ч после введения образцы крови забирали (как подробно описано в Таблице 8), используя гепарин в качестве антикоагулянта, и центрифугировали для отделения плазмы, которую хранили при -80°С для дальнейшего использования. Общее количество Паклитаксела в плазме определяли путем осаждения белка-LC/MS/MS.

5. Результаты

5.1 Влияние на массу организма

Как видно по данным о массе организма не было существенного различия по массе организма среди мышей в каждой группе, что показывает, что ни ab-PTX, ни NBP не оказывал существенного влияния на массу организма мышей, как подробно показано на Фиг. 10.

5.2 Влияние на массу опухоли

Результаты по массе опухоли результаты показали, что в сравнении с группой растворителя рост опухоли в группе терапии ab-PTX может быть существенно ингибирован (Р<0,001), и рост опухоли у мышей в группе дозировки NBP 60 мг/кг не был заметно изменен; в сравнении с группой ab-PTX 15 мг/кг комбинированная терапия различными дозами NBP и ab-PTX не давала статистически значимого различия в ингибировании опухоли (Р>0,05), как подробно описано в Таблице 9.

5.4 Влияние на PK

Эти результаты показали, что основные фармакокинетические параметры Паклитаксела в плазме в группе монотерапии ab-PTX и группе комбинированной терапии NBP и ab-PTX были по существу постоянными без существенной разницы, указывая на то, что комбинированная терапия бутилфталидом и ab-PTX не влияет на фармакокинетические параметры Паклитаксела в плазме, как подробно описано в Таблице 10.

6. Выводы

В данном эксперименте NBP не оказывал заметного влияния на противоопухолевую эффективность ab-PTX и параметры PK ab-PTX.

Пример 5 Влияние NBP на эффективность ab-PTX in vitro

1. Клетки и условия культивирования

Условия культивирования для вышеуказанных клеток представляли собой 37°С и 5% CO₂.

2. Задача эксперимента

Исследовать, оказывает ли NBP действие на функцию ab-PTX по ингибированию пролиферации опухолевых клеток in vitro.

3. Лекарственные средства

Лиофилизированный порошок Паклитаксела (связанного с альбумином), 100 мг/флакон, номер партии: В041909121, изготовленный CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd.

Бутилфталид (для перорального введения), 10 кг/флакон, номер партии: 518180803, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd.

4. Дизайн эксперимента

Данный эксперимент включает группу монотерапии ab-PTX, группу комбинированной терапии (ab-PTX/NBP) и группу NBP. Различные градиенты концентраций лекарственных средств устанавливали для каждой группы.

Группа монотерапии ab-PTX: (1) штаммы клеток MDA-MB-231, ЛМТ-1, SK-OV-3 и А549: выполняли 3-кратное серийное разведение ab-PTX от начальной концентрации 200 нМ до 8 концентраций: 200; 66,67; 22,22; 7,41; 2,47; 0,82; 0,27 и 0,09 нМ, соответственно. (2) штаммы клеток А375 и НТ29: в первом эксперименте выполняли 3-кратное серийное разведение ab-PTX от начальной концентрации 100 нМ до 8 концентраций: 100; 33,33; 11,11; 3,70; 1,24; 0,41; 0,14 и 0,05 нМ, соответственно; и в повторном эксперименте выполняли 2-кратное серийное разведение ab-PTX от начальной концентрации 100 нМ до 8 концентраций: 100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,13; 1,56 и 0,78 нМ, соответственно.

Группа ab-PTX/NBP: конечная концентрация NBP составляла 30 мкМ, и градиент концентрации ab-PTX был таким же, как для группы монотерапии.

Группа монотерапии NBP: выполняли 2-кратное серийное разведение NBP от начальной концентрации 480 мкМ до 8 концентраций: 480; 240; 120; 60; 30; 15; 7,5 и 3,75 мкМ, соответственно.

Продолжительность действия лекарственного средства составляла 72 ч.

5. Методика эксперимента

Определенное число культивируемых обычным способом клеток в логарифмической фазе роста инокулировали в лунки 96-луночного планшета 100 мкл на лунку. Через 24 ч после прикрепления 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций ab-PTX, добавляли в каждую лунку для группы монотерапии ab-PTX; 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций ab-PTX и 30 мкМ NBP, добавляли в каждую лунку для группы комбинированной терапии ab-PTX/NBP; 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций NBP, добавляли в каждую лунку для группы монотерапии NBP; выполняли повторы в 3 лунках для каждой концентрации каждого лекарственного средства и обеспечивали «пустые» лунки контроля (содержащие только культуральную среду) и лунки нормы (с концентрацией лекарственного средства 0). Лекарственные средства действовали в течение 72 ч, затем рабочий раствор МТТ (5 мг/мл) добавляли по 20 мкл на лунку; после воздействия при 37°С в течение 4 ч супернатант удаляли, добавляли 150 мкл DMSO (аналитически чистого); смесь полностью перемешивали с помощью осциллятора для микропланшетов, планшет протирали начисто и оптическую плотность (OD) при 550 нм измеряли с помощью считывателя микропланшетов.

Показатель ингибирования роста клеток рассчитывали по следующей формуле:

Показатель ингибирования (%) = (значение OD_{лунка нормы} - значение OD_{лунка введения}) / (значение OD_{лунка нормы} - значение OD_{лунка контроля «пустая»}) × 100%

На основании показателя ингибирования для каждой концентрации среднюю ингибирующую концентрацию IC₅₀ лекарственного средства рассчитывали с помощью SPSS19.0.

Эксперимент повторяли трехкратно и значение IC₅₀ выражали как среднее ±SD по результатам 3 экспериментов.

6. Результаты

6.1 Влияние NBP на значение IC₅₀ ab-PTX

Результаты для группы монотерапии ab-PTX показали, что ab-PTX оказывал заметное ингибирующее действие на пролиферацию клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231, ЛМТ-1), клеток рака яичника человека (SK-OV-3), клеток рака толстой кишки человека (НТ29), клеток рака легкого человека (А549) и меланомы человека (А375) in vitro, и среднее значение IC₅₀ находилось в диапазоне 5-50 нМ. NBP в определенной концентрации (30 мкМ) добавляли для комбинированной терапии. По сравнению с монотерапией ab-PTX средняя IC₅₀ для ab-PTX для клеток в группе комбинированной терапии заметно не изменялась и оставалась в диапазоне 5-50 нМ. Результаты показали, что NBP не оказывает существенного влияния на функцию ab-PTX по ингибированию пролиферации опухолевых клеток in vitro.

Значения IC₅₀ при монотерапии ab-PTX и комбинированной терапии ab-PTX и NBP для ингибирования пролиферации 6 штаммов опухолевых клеток in vitro показаны в Таблице 12.

6.2 Влияние NBP на пролиферацию опухолевых клеток in vitro

NBP в отдельности не оказывал заметного ингибирующего действия на пролиферацию клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231, ЛМТ-1), клеток рака яичника человека (SK-OV-3), клеток рака толстой кишки человека (НТ29), клеток рака легкого человека (А549) и меланомы человека (А375) in vitro. Показатель ингибирования пролиферации для 6 штаммов клеток 30 мкМ NBP показан в Таблице 13.

7. Выводы

NBP не влияет на ингибирущее действие ab-PTX на пролиферацию клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231, ЛМТ-1), клеток рака яичника человека (SK-OV-3), клеток рака толстой кишки человека (НТ29), клеток рака легкого человека (А549) и клеток меланомы человека (А375) in vitro; и NBP в отдельности не оказывает заметного ингибирующего действия на пролиферацию клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231, ЛМТ-1), клеток рака яичника человека (SK-OV-3), клеток рака толстой кишки человека (НТ29), клеток рака легкого человека (А549) и меланомы человека (А375) in vitro.

Пример 6: Исследование эффективности действия бутилфталида на периферическую невропатию, индуцированную химиотерапией Бортезомибом, in vivo

1. Экспериментальные животные

72 самца крыс SD (Sprague Dawley), 180-200 г.

2. Лекарственные средства

Бортезомиб: номер партии: 20191102, изготовленный CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd, растворенный в нормальном солевым растворе, содержащем 2% DMSO, непосредственно перед использованием.

Бутилфталид (для перорального применения), 10 кг/флакон, номер партии: 518180803, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, растворенный в растительном масле до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

Дулоксетина гидрохлорид, номер партии: QRQYD-TN, изготовленный TCI (Shanghai) Development Co., Ltd, растворенный в нормальном солевом растворе, содержащем 2% DMSO, непосредственно перед использованием.

3. Методика эксперимента

3.1 Получение модели и способ введения

В данном эксперименте самцам крыс SD вводили Бортезомиб в дозе 0,3 мг/кг в объеме введения 5 мл/кг, и выполняли внутрибрюшинную инъекцию на сутки 0, 2, 4, 6, 8, 10 и 13 для создания модели.

Использовали три дозы (3, 10 и 30 мг/кг bid) NBP. Первую дозу NBP вводили через гастральный зонд (transoral gavage) за 1 сутки до моделирования Бортезомибом. Во время введения и моделирования действия Бортезомиба первую дозу NBP вводили за 1 ч до введения Бортезомиба каждые сутки. Вторую дозу NBP вводили с интервалом ≥4 ч после первой дозы в объеме введения 10 мл/кг, и вводили в течение 21 суток подряд.

Группа нормы получала нормальный солевой раствор, содержащий 2% DMSO, с такой же частотой и таким же способом введения как для Бортезомиба, и получала растительное масло с такой же частотой и таким же способом введения как для NBP. (Моделирование и время введения показаны на Фиг. 11. Распределение животных на группы, способ введения и дозы подробно описаны в Таблице 14).

3.2 Распределение на группы

На основании исходных показателей порога температурно-болевой чувствительности и массы организма крыс отбирали крыс со значениями исходных показателей, варьирующими от 3 до 6 с, и распределяли на равные группы в соответствии с Таблицей 14 в п. 3.1.

3.3 Наблюдаемые показатели

(1) Масса организма: всех животных однократно взвешивали перед экспериментом и взвешивали в установленное время каждый день после начала введения.

(2) Порог температурно-болевой чувствительности: измерения проводили на сутки 0, 7, 14 и 21.

Способ: использовали измерительный прибор ПТС Life Science Electronic Von Frey Anesthesio и интенсивность источника света регулировали для получения исходного показателя порога температурно-болевой чувствительности примерно 3-6 с. В этом случае интенсивность света составляла 58%, и устанавливали значение порога отсечения 10 с. Крыс помещали в пластиковую камеру на стеклянной пластине, так чтобы центры подошв крыс были экспонированы к источнику света. Время рефлекторного отдергивания, то есть порог температурно-болевой чувствительности крыс, регистрировали и измеряли однократно для каждой левой лапы и правой лапы каждой крысы и измерение повторяли три раза с интервалом между каждыми двумя измерениями ≥15 мин для вычисления среднего значения по 6 значениям порога температурно-болевой чувствительности для каждой крысы.

(3) Порог болевой чувствительности при механическом раздражении: измерения проводили на сутки -1,6, 13 и 20.

Способ: крыс помещали в пластиковую камеру на проволочной сетке, оставляли стоять неподвижно в течение 15 мин, стимулировали стимулирующим зондом диаметром 0,4 мм от измерительного прибора ПТС Life Science Electronic Von Frey Anesthesio путем постепенного увеличения силы до рефлекторного отдергивания лап крысами. Регистрировали максимальное значение, наблюдаемое на приборе в это время, то есть порог чувствительности механической боли. В каждом эксперименте измерения для левой и правой лапы каждой крысы проводили по три раза с интервалом между каждыми двумя измерениями ≥5 мин для вычисления среднего значения по 6 значениям порога механической боли для каждой крысы.

4. Результаты

4.1 Влияние на массу организма

На сутки 21 эксперимента массы организма крыс в модельной группе были существенно понижены (Р<0,05) в сравнении с контрольной группой нормы; и в сравнении с модельной группой массы организма крыс в группах трех дозировок NBP (3, 10 и 30 мг/кг bid) заметно не изменялись, как подробно показано на Фиг. 12.

4.2 Влияние на порог температурно-болевой чувствительности

На сутки 21 эксперимента порог температурно-болевой чувствительности в модельной группе был существенно понижен по сравнению с контрольной группой нормы; и в сравнении с модельной группой снижение порога температурно-болевой чувствительности у модельных крыс в группе NBP 3, 10 и 30 мг/кг bid могло быть в значительной степени восстановлено, как подробно показано на Фиг. 13.

4.3 Влияние на порог болевой чувствительности при механическом раздражении

На сутки 20 эксперимента порог болевой чувствительности при механическом раздражении в модельной группе был существенно понижен в сравнении с контрольной группой нормы; и в сравнении с модельной группой понижение порога болевой чувствительности при механическом раздражении у модельных крыс в группе NBP 10 и 30 мг/кг bid могло быть в значительной степени восстановлено, как подробно показано на Фиг. 14.

5. Выводы

В условиях данного эксперимента NBP мог зависимым от дозы образом эффективно облегчать симптомы периферической невропатии, индуцированной Бортезомибом, в модели CIPN крыс.

Пример 7: Эксперимент по влиянию NBP на противоопухолевую активность Бортезомиба in vitro

1. Клетки и условия культивирования

Условия для культивирования вышеуказанных клеток представляли собой 37°С и 5% CO₂.

2. Задача эксперимента

Исследовать, оказывает ли NBP влияние на функцию Бортезомиба по ингибированию пролиферации опухолевых клеток in vitro.

3. Лекарственные средства

Бортезомиб (нерасфасованное лекарственное средство), изготовленный CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd., номер партии: 20190802

Бутилфталид (для перорального введения), 10 кг/флакон, изготовленный CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: 518180803

4. Дизайн эксперимента

Данный эксперимент включает группу монотерапии Бортезомибом, группу комбинированной терапии (Бортезомиб/NBP) и группу монотерапии NBP. Различные градиенты концентрации лекарственных средств были установлены для каждой группы.

Группа монотерапии Бортезомибом: (1) Клетки MM. IS, Jeko-1 и НТ29: выполняли 1,5-кратные серийные разведения Бортезомиба от начальной концентрации 20 нМ до 8 концентраций: 20; 13,33; 8,89; 5,93; 3,95; 2,63; 1,76 и 1,17 нМ, соответственно; (2) Клетки А549: выполняли 2-кратные серийные разведения Бортезомиба от начальной концентрации 200 нМ до 8 концентраций: 200; 100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,13 и 1,56 нМ, соответственно; и клетки (3) DU145: выполняли 2-кратные серийные разведения Бортезомиба от начальной концентрации 100 нМ до 8 концентраций: 100; 50; 25; 12,5; 6,25; 3,13; 1,56 и 0,78 нМ, соответственно.

Группа Бортезомиб/NBP: конечная концентрация NBP составила 30 мкМ, и градиент концентрации Бортезомиба был таким же как для конечной концентрации в группе монотерапии Бортезомибом.

Группа монотерапии NBP: выполняли 2-кратные серийные разведения NBP от начальной концентрации 480 мкМ до 8 концентраций: 480; 240; 120; 60; 30; 15; 7,5 и 3,75 мкМ, соответственно.

Продолжительность действия лекарственного средства составляла 72 ч.

5. Методика эксперимента

Определенное число клеток, культивированных обычным образом, в логарифмической фазе роста инокулировали в лунки 96-луночного планшета по 100 мкл на лунку. Для суспензии клеток MM.1S и Jeko-1 на сутки инокуляции 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций Бортезомиба, добавляли в каждую лунку группы Бортезомиба, 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций Бортезомиба и 30 мкМ NBP, добавляли в каждую лунку группы комбинированной терапии Бортезомиб/NBP, и 100 мкл культурального раствора, содержащего градиенты различных концентраций NBP, добавляли в каждую лунку группы монотерапии NBP. Для адгезивных клеток НТ29, А549 и DU145 вышеупомянутые лекарственные средства добавляли через 24 ч после прикрепления. Выполняли повторы в 3 лунках для каждой концентрации каждого лекарственного средства и обеспечивали «пустые» лунки контроля (только с культуральной средой и без инокуляции опухолевых клеток) и лунки нормы (с опухолевыми клетками, иноку лир ованными в культуральную среду с концентрацией лекарственного средства равной 0). Лекарственные средства действовали в течение 72 ч, затем рабочий раствор МТТ (5 мг/мл) добавляли по 20 мкл на лунку; после воздействия при 37°С в течение 4 ч супернатант удаляли, добавляли 150 мкл DMSO (аналитически чистого); смесь полностью перемешивали с помощью осциллятора для микропланшетов, планшет протирали начисто и оптическую плотность (OD) при 550 нм измеряли с помощью считывателя микропланшетов.

Показатель ингибирования роста клеток рассчитывали по следующей формуле:

Показатель ингибирования (%) = (значение OD_{лунка нормы} - значение OD_{лунка введения}) / (значение OD_{лунка нормы} - значение OD_{лунка контроля «пустая»}) × 100%

На основании показателя ингибирования для каждой концентрации среднюю ингибирующую концентрацию IC₅₀ лекарственного средства рассчитывали с помощью SPSS19.0.

Эксперимент повторяли трехкратно и значение IC₅₀ выражали как среднее ±SD по результатам 3 экспериментов.

6. Результаты

Результаты показали, что как в группе монотерапии Бортезомибом, так и в группе комбинированной терапии Бортезомиб/NBP наблюдали видимое ингибирующее действие на пролиферацию MM.1S, Jeko-1, НТ29, А549 и DU145 in vitro, и средние значения их IC₅₀ находились в диапазоне от 1 до 20 нМ, что позволяет предположить, что NBP не влияет на функцию Бортезомиба по ингибированию пролиферации опухолевых клеток in vitro, как подробно показано на Фиг. 16.

Монотерапия NBP не оказывает выраженного ингибирующего действия на пролиферацию клеток множественной миеломы человека in vitro (MM.IS), клеток мантийноклеточной лимфомы человека (Jeko-1), клеток рака толстой кишки человека (НТ29), клетки рака легкого человека (А549) и клеток рака предстательной железы человека (DU145). Показатель ингибирования пролиферации для 5 штаммов клеток 30 мкМ NBP в отдельности подробно описан в Таблице 17.

Выводы: NBP не влияет на ингибирующее действие Бортезомиба на пролиферацию клеток множественной миеломы человека in vitro (MM.1S), клеток мантийно клеточной лимфомы человека (Jeko-1), клеток рака толстой кишки (НТ29), клеток рака легкого человека (А549) и клеток предстательной железы человека (DU145).

Пример 8: Эксперимент по влиянию NBP на противоопухолевую эффективность Бортезомиба in vivo

1. Экспериментальная система

1.1 Экспериментальные животные 42 самки мышей Nu/Nu, 18-20 г.

1.2 Штаммы клеток

Клетки MM.1S (клетки множественной миеломы человека), приобретенные от Nanjing Cobioer Biosciences Co., Ltd.

2. Задача эксперимента

Модель ксенотрансплантата клеток MM.1S мышей Nu/Nu использовали в этом эксперименте для валидации влияния NBP на противоопухолевую эффективность и параметры PK Бортезомиба.

3. Лекарственные средства

Бортезомиб (нерасфасованное лекарственное средство): производитель: CSPC Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang) Co., Ltd, номер партии: 20191102; растворенный в нормальном солевом растворе, содержащем 2% DMSO, непосредственно перед использованием.

Бутилфталид (для перорального введения), 10 кг/флакон, производитель: CSPC NBP Pharmaceutical Co., Ltd, номер партии: 518180803, растворенный в растительном масле до требуемой концентрации непосредственно перед использованием.

Палбоциклиб (нерасфасованное лекарственное средство), производитель: Shanghai Fangnan Biotechnology Co., Ltd, номер партии: AL-0127-API-1811001; приготовленный в растворе пропиленгликоля и 20% гидроксипропил-β-циклодекстрина в соотношении 5:95 до раствора с требуемой концентрацией непосредственно перед использованием.

4. Методика эксперимента

4.1 Получение модели

После размораживания и пересева клеток MM.1S in vitro до достаточного количества клетки подсчитывали под микроскопом и разводили средой, не содержащей сыворотку, доводя число клеток примерно до 1×10⁸ клеток/мл. Суспензию клеток хранили на ледяной бане.

Суспензию клеток MM.1S извлекали стерильным шприцем и инокулировали в подкожную ткань подмышечной впадины передней конечности мышей Nu/Nu. Объем инокулята составлял 0,1 мл/мышь, содержащего примерно 1,0×10⁷ опухолевых клеток, для получения модели опухолевого ксенотрансплантата MM.1S у мышей Nu/Nu.

4.2 Способ введения

Группа монотерапии Бортезомибом: вводили путем внутрибрюшинной инъекции по 0,5 мг/кг, biw (на сутки 0, 3, 7, 10 и 15);

Группа монотерапии NBP: вводили через гастральный зонд по 60 мг/кг, bid (введение начинали на сутки 0), и вторую дозу NBP вводили с интервалом ≥4 ч после первой дозы.

Группа монотерапии Палбоциклибом: внутрижелудочное введение по 70 мг/кг, qd (введение начинали на сутки 0);

Группа комбинированной терапии NBP/Бортезомиб: частота и доза введения были такими же как частота и доза введения в группе монотерапии NBP и группе монотерапии Бортезомибом, соответственно.

Группа комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб: частота и доза введения были такими же, как частота и доза введения в группе монотерапии Бортезомибом и группе монотерапии Палбоциклибом, соответственно.

Группа комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб: частота и доза введения были такими же, как частота и доза введения в группе монотерапии NBP, группе монотерапии Бортезомибом и группе монотерапии Палбоциклибом, соответственно.

Группа растворителя получала растворитель с такой же частотой и таким же способом введения как для Бортезомиба и NBP.

Период введения составлял 16 суток, и объем введения составлял 10 мл/кг.

4.3 Наблюдаемые показатели и оценочные показатели

4.3.1 Наблюдаемые показатели

(1) Наблюдение общего состояния: всех животных наблюдали один раз в сутки в течение периода эксперимента и регистрировали нарушение и изменения поведения, затрагивающие части их тела.

(2) Масса организма: всех животных перед экспериментом однократно взвешивали и животных, имеющих подходящую массу организма, отбирали для эксперимента. Животных взвешивали в установленное время один раз в сутки после начала введения.

(3) Гибель и состояние, близкое к гибели: время смерти умерших животных регистрировали и умирающих животных наблюдали более часто для определения времени смерти.

4.3.2 Оценка объема опухоли

После распределения животных на группы длинный диаметр и короткий диаметр опухоли измеряли по два раза еженедельно.

(1) Объем опухоли: V=1/2×A×B²

(2) Относительный объем опухоли:

(3) Показатель увеличения относительного объема опухоли:

(4) Показатель ингибирования роста опухоли:

Примечание: V: объем опухоли; А: длина опухоли; В: ширина опухоли; RTV: относительный объем опухоли; TV_nd: объем опухоли на сутки n; TV_0d: объем опухоли на сутки 0; RTV_xnd: средний относительный объем опухоли на сутки n; TV_Xn: средний объем опухоли в группе терапии на сутки n; TV_X0: средний объем опухоли в группе терапии на сутки 0; TV_Mn: средний объем опухоли в группе растворителя на сутки n; и TV_M0: средний объем опухоли в группе растворителя на сутки 0.

4.3.3 Масса опухоли

В конце эксперимента, после того как животных подвергали эвтаназии путем асфиксии СО₂, опухоли вырезали и взвешивали.

Степень уменьшения массы опухоли% = (1 - масса опухоли в группе терапии / масса опухоли в группе растворителя) × 100%

4.3.4 Забор образцов крови и определение PK

Перед введением последней дозы Бортезомиба (0 ч) и через 5 мин, 15 мин, 30 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 24 ч после введения образцы крови забирали (как подробно описано в Таблице 8) (кроме группы растворителя, в которой образцы крови у мышей забирали только в момент 0 ч), используя гепарин в качестве антикоагулянта, и центрифугировали для отделения плазмы, которую хранили при -80°С для дальнейшего использования. Бортезомиб и бутилфталид в плазме определяли путем осаждения белка LC/MS/MS.

5. Результаты эксперимента

5.1 Влияние на массу организма

Как можно увидеть по данным массы организма, не было существенного различия по массе организма между мышами в каждой группе (Р>0,05), что указывает на то, что ни одно из Бортезомиба, Палбоциклиба и NBP не оказывало влияния на массу организма мышей, как подробно показано на Фиг. 15.

5.2 Влияние на объем опухоли

В результате эксперимента было показано, что во время комбинированной терапии NBP/Бортезомиб NBP не оказывал заметного отрицательного влияния на эффективность ингибирования опухоли Бортезомибом в сравнении с группой монотерапии Бортезомибом; и в сравнении с группой терапии Бортезомиб/Палбоциклиб в группе комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб NBP также не оказывал заметного отрицательного влияния на противоопухолевую эффективность при комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб. Объем опухоли в каждой группе подробно показан на Фиг. 16, и масса организма, TV (объем опухоли), RTV, TGI%, Т/С%, масса опухоли и так далее в конце эксперимента (на сутки 14) подробно показаны в Таблице 19.

Выводы: В этом эксперименте NBP не оказывал заметного влияниия на противоопухолевую эффективность Бортезомиба и комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб.

5.3 Влияние на PK

Данные результаты показали, что дозы экспозиции Бортезомиба в организмах мышей в группе Бортезомиба, группе NBP/Бортезомиб, группе Бортезомиб/Палбоциклиб и группе NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб были по существу одинаковыми, что позволяет предположить, что NBP не оказывал заметного влияния на фармакокинетические параметры монотерапии Бортезомибом и комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб in vivo. Основные фармакокинетические параметры подробно описаны в Таблице 20, Таблице 21 и Таблице 22.

Примечание: В Таблицах 20 и 21 «Bor» обозначает Бортезомиб, «Pal» обозначает Палбоциклиб, «C_max» обозначает максимальную концентрацию в крови, «AUC_0-t» обозначает площадь под кривой лекарственное средство-время от 0 до t, «t_1/2» обозначает период полувыведения, «Vd» обозначает кажущийся объем распределения, "CI" обозначает скорость выведения и «MRT_0-t» обозначает среднее время удержания от 0 до т.

Отношения C_max и AUC_0-t для Бортезомиба в группе комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб, группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб и группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб к таковым в группе монотерапии Бортезомибом составили 1,01-1,13 и 0,81-1,11, соответственно. При логарифмической трансформации C_max и AUC_0-t отношения этих величин в группах комбинированной терапии Бортезомиб/Палбоциклиб, группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб и группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб к таковым в группе монотерапии Бортезомибом составили 1,00-1,05 (LNC_max) и 0,96-1,02 (LNAUC_0-t), соответственно, следовательно, экспозиции Бортезомиба in vivo в группе монотерапии и группах комбинированной терапии были по существу одинаковыми.

Отношения C_max и AUC_0-t для NBP в группе комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб и группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб к таковым в группе монотерапии NBP составили 1,08-1,24 и 1,03-1,83, соответственно. При логарифмической трансформации C_max и AUC_0-t отношения в группе комбинированной терапии NBP/Бортезомиб/Палбоциклиб и группах комбинированной терапии NBP/Бортезомиб к таковым в группе монотерапии NBP составило 1,02-1,05 (LNC_max) и 1,00-1,11 (LNAUC_0-t), соответственно. Вследствие очевидных индивидуальных различий у мышей после внутрижелудочного введения NBP небольшое число мышей было включено в каждую экспериментальную группу. Соотношение уровня экспозиции в группе комбинированной терапии и уровня экспозиции в группе монотерапии после логарифмической трансформации показало, что экспозиция in vivo в группе монотерапии NBP заметно не отличалась от экспозиции in vivo в группе комбинированной терапии.

Выводы: В этом эксперименте NBP по существу не оказывал влияния на фармакокинетические параметры Бортезомиба у мышей, и Бортезомиб по существу не оказывал влияния на фармакокинетические параметры NBP у мышей.

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно к применению бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в изготовлении лекарственного средства для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, индуцированной лекарственным средством. Использование изобретения позволяет эффективно лечить периферическую невропатию, индуцированную лекарственным средством. 13 з.п. ф-лы, 16 ил., 22 табл., 8 пр.

1. Применение бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в изготовлении лекарственного средства для предупреждения, облегчения или лечения периферической невропатии, индуцированной лекарственным средством, где оптический изомер представляет собой L-бутилфталид, D-бутилфталид или смесь двух изомеров; дейтерированный продукт представляет собой или

метаболит представляет собой или

продукт дециклизации или соль продукта дециклизации представляет собой

где M представляет собой ион калия, ион натрия, ион лития, ион кальция, ион магния или ион цинка, где n равно 1 или n равно 2.

2. Применение по п. 1, где периферическая невропатия, индуцированная лекарственным средством, представляет собой периферическую невропатию, индуцированную химиотерапевтическим лекарственным средством.

3. Применение по п. 1 или 2, где предупреждение, облегчение или лечение периферической невропатии, индуцированной лекарственным средством, включает предупреждение, облегчение или лечение индуцированной химиотерапевтическим лекарственным средством парестезии и дискинезии, такой как парестезия боли и тепла, или нарушенной координации движений.

4. Применение по любому из пп. 1-3, где лекарственное средство содержит терапевтически эффективное количество бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации.

5. Применение по любому из пп. 1-4, где лекарственное средство изготовлено в форме клинически приемлемой композиции, такой как композиция для перорального применения, инъецируемая композиция, композиция для местного применения или композиция для наружного применения, и предпочтительно композиции для перорального применения и инъецируемой композиции.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где лекарственное средство представлено в форме однократной дозы или в форме разделенной дозы.

7. Применение по любому из пп. 1-6, где лекарственное средство представляет собой композицию для перорального применения; и композиция для перорального применения содержит от примерно 1 мг до примерно 1000 мг, и предпочтительно от примерно 1 мг до примерно 500 мг, или от примерно 1 мг до примерно 300 мг, или от примерно 1 мг до примерно 200 мг, или от примерно 5 мг до примерно 180 мг, или от примерно 10 мг до примерно 150 мг, или от примерно 30 мг до примерно 120 мг, или от примерно 50 мг до примерно 120 мг, или от примерно 80 мг до примерно 120 мг, или от примерно 90 мг до примерно 110 мг, или примерно 100 мг бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в пересчете на бутилфталид.

8. Применение по п. 7, где суточная доза композиции для перорального применения составляет от примерно 1 мг до примерно 10000 мг, предпочтительно от примерно 10 мг до примерно 5000 мг, или от примерно 20 мг до примерно 3000 мг, или от примерно 30 мг до примерно 2000 мг, или от примерно 50 мг до примерно 1500 мг, или от примерно 70 мг до примерно 1200 мг, или от примерно 100 мг до примерно 1000 мг, или от примерно 200 мг до примерно 900 мг, или от примерно 300 мг до примерно 800 мг, или от примерно 400 мг до примерно 700 мг, или от примерно 500 мг до примерно 600 мг, или от примерно 60 мг до примерно 800 мг, или от примерно 60 мг до примерно 600 мг, или от примерно 100 мг до примерно 800 мг, или от примерно 100 мг до примерно 600 мг, или от примерно 200 мг до примерно 600 мг, или от примерно 200 мг до примерно 800 мг, или от примерно 300 мг до примерно 600 мг, или от примерно 400 мг до примерно 600 мг, или от примерно 400 мг до примерно 800 мг в пересчете на бутилфталид.

9. Применение по п. 8, где композицию для перорального применения вводят один раз в сутки путем введения от примерно 60 мг до примерно 800 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения, например, введения примерно 60 мг, примерно 100 мг, примерно 200 мг, примерно 300 мг, примерно 400 мг, примерно 500 мг, примерно 600 мг, примерно 700 мг или примерно 800 мг композиции для перорального применения в пересчете на бутилфталид в каждый прием; или композицию для перорального применения вводят два раза в сутки путем введения от примерно 30 мг до примерно 400 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения в каждый прием, например, введения примерно 30 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг, примерно 300 мг, примерно 350 мг или примерно 400 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или композицию для перорального применения вводят три раза в сутки путем введения от примерно 20 мг до примерно 300 мг композиции бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации для перорального применения, например введения примерно 20 мг, примерно 50 мг, примерно 100 мг, примерно 150 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг или примерно 300 мг композиции для перорального применения в каждый прием в пересчете на бутилфталид.

10. Применение по любому из пп. 1-6, где лекарственное средство представляет собой инъецируемую композицию; и инъецируемая композиция содержит от примерно 0,001 мг/мл до примерно 100 мг/мл, и предпочтительно от примерно 0,005 мг/мл до примерно 50 мг/мл, или от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл, или от примерно 0,1 мг/мл до примерно 5 мг/мл, или от примерно 0,1 мг/мл до примерно 3 мг/мл, или от примерно 0,1 мг/мл до примерно 1 мг/мл, или от примерно 0,12 мг/мл до примерно 0,80 мг/мл, или от примерно 0,15 мг/мл до примерно 0,50 мг/мл и более предпочтительно от примерно 0,20 мг/мл до примерно 0,40 мг/мл, или от примерно 0,20 мг/мл до примерно 0,30 мг/мл, или примерно 0,25 мг/мл бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в пересчете на бутилфталид.

11. Применение по п. 10, где суточная доза инъецируемой композиции составляет от примерно 1 мг до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 5 мг до примерно 500 мг, или от примерно 10 мг до примерно 300 мг, или от примерно 15 мг до примерно 200 мг, или от примерно 20 мг до примерно 150 мг, или от примерно 25 мг до примерно 120 мг, или от примерно 30 мг до примерно 100 мг, или от примерно 35 мг до примерно 90 мг, или от примерно 40 мг до примерно 80 мг, или от примерно 45 мг до примерно 70 мг, или от примерно 50 мг до примерно 60 мг, или от примерно 1 мг до примерно 100 мг, или от примерно 2 мг до примерно 80 мг, или от примерно 5 мг до примерно 75 мг, или от примерно 10 мг до примерно 50 мг, или от примерно 15 мг до примерно 50 мг, или от примерно 20 мг до примерно 50 мг, или от примерно 25 мг до примерно 75 мг, или от примерно 25 мг до примерно 50 мг в пересчете на бутилфталид.

12. Применение по п. 11, где инъецируемую композицию вводят один раз в сутки путем введения от примерно 1 мг до примерно 100 мг, и предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг инъецируемой композиции бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием в пересчете на бутилфталид; или инъецируемую композицию вводят два раза в сутки путем введения от примерно 1 мг до примерно 50 мг, и предпочтительно примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг бутилфталида или его оптического изомера, дейтерированного продукта, метаболита, продукта дециклизации или соли продукта дециклизации в каждый прием.

13. Применение по любому из пп. 1-12, где химиотерапевтическое лекарственное средство включает одно или более чем одно из следующих лекарственных средств: (1) химиотерапевтическое лекарственное средство, действующее на систему микротрубочек, или антимитотическое химиотерапевтическое лекарственное средство, включая: лекарственное средство на основе таксана, такое как паклитаксел, доцетаксел или им подобные; или лекарственное средство на основе алкалоида барвинка, такое как винкристин, винбластин или им подобные; или лекарственное средство на основе эпотилона, такое как иксабепилон или ему подобное; или лекарственное средство на основе ингибитора протеаз, такое как бортезомиб или ему подобное; или (2) химиотерапевтическое лекарственное средство, нарушающее синтез ДНК, включая лекарственное средство на основе платины, такое как цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин или им подобные; или (3) иммуномодулирующее лекарственное средство, такое как талидомид, леналидомид или им подобные.

14. Применение по любому из пп. 1-13, где бутилфталид или его оптический изомер, дейтерированный продукт, метаболит, продукт дециклизации или соль продукта дециклизации применяют в изготовлении лекарственного средства в комбинации с одним или более чем одним другим лекарственным средством для лечения периферической невропатии; и предпочтительно другие лекарственные средства для лечения периферической невропатии представляют собой дулоксетин или его соль, моносиалотетрагексозилганглиозид натрия.