Настоящая заявка испрашивает преимущества приоритета на основании предварительной заявки на патент США № 62/655021, поданной 9 апреля, 2018 г.; предварительной заявки на патент США № 62/679653, поданной 1 июня, 2018 г.; предварительной заявки на патент США № 62/814838, поданной 6 марта, 2019 г.; и предварительной заявки на патент США № 62/814843 поданной 6 марта, 2019 г., все из которых включены в данный документ посредством ссылки.
В данном документе раскрыты новые органические соединения и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения. Данные соединения применимыми в лечении рака, в частности видов рака, при которых, как известно, являются применимыми средства, которые оказывают целенаправленное воздействие на сплайсосому и мутации в ней. Такие соединения также применимы в лечении рака при введении в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным средством терапии.
В эукариотических организмах свежесинтезированные матричные РНК, как правило, имеют несколько интронов, которые вырезаются с получением зрелой mRNA. Сплайсосома представляет собой комплекс из множества субъединиц, который выполняет данную задачу. Сплайсосома состоит из пяти малых ядерных РНК (snRNA; U1-6) в комбинации с различными белками.
Мутации в субъединице 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1) сплайсосомы встречаются при целом ряде видов рака и служат мишенью для противораковых средств. Соединения, выделенные из бактерий Streptomyces platensis (Sakai, Takashi; Sameshima, Tomohiro; Matsufuji, Motoko; Kawamura, Naoto; Dobashi, Kazuyuki; Mizui, Yoshiharu. Pladienolides, New Substances from Culture of Streptomyces platensis Mer-11107. I. Taxonomy, Fermentation, Isolation and Screening. The Journal of Antibiotics. 2004, Vol. 57, No.3.), получившие название пладиенолиды и обнаруженные во время скрининга ингибиторов промотора фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), ингибируют экспрессию репортерного гена, контролируемого промотором VEGF человека, при этом данное ингибирование, как известно, является применимым механизмом действия для противораковых средств.
Данные соединения также ингибируют пролиферацию клеток глиомы U251 человека in vitro. Наиболее эффективное из данных соединений, пладиенолид B, ингибирует экспрессию гена, обусловленную промотором VEGF, при IC50, составляющей 1,8 нМ, и ингибирует пролиферацию клеток глиомы при IC50, составляющей 3,5 нМ. Структура пладиенолида B является известной (Sakai, Takashi; Sameshima, Tomohiro; Matsufuji, Motoko; Kawamura, Naoto; Dobashi, Kazuyuki; Mizui, Yoshiharu. Pladienolides, New Substances from Culture of Streptomyces platensis Mer-11107. II. Physico-chemical Properties and Structure Elucidation. The Journal of Antibiotics. Vol. 57, No.3. (2004)), и известно, что пладиенолид B оказывает целенаправленное воздействие на сплайсосому SF3b путем ингибирования сплайсинга и изменения паттерна экспрессии генов (Kotake et al., "Splicing factor SF3b as a target of the antitumor natural product pladienolide", Nature Chemical Biology 2007, 3, 570-575).
Известны некоторые аналоги пладиенолида B: WO 2002/060890; WO 2004/011459; WO 2004/011661; WO 2004/050890; WO 2005/052152; WO 2006/009276; WO 2008/126918; и WO 2015/175594. Например, соединение пладиенолида, (8E,12E,14E)-7-((4-циклогептилпиперазин-1-ил)карбонил)окси-3,6,16,21-тетрагидрокси-6,10,12,16,20-пентаметил-18,19-эпокситрикоза-8,12,14-триен-11-олид, также известный как E7107, представляет собой полусинтетическое производное природного продукта, пладиенолида D, и были опубликованы результаты его исследования фазы I. В качестве другого примера пиридиновое соединение пладиенолида, (2S,3S,6S,7R,10R,E)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-((R,2E,4E)-6-(пиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (также называемый "(2S,3S,4E,6S,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-((2E,4E,6R)-6-(пиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат"), также известное как H3B-8800, получило статус орфанного препарата для лечения определенных видов гемобластоза.
Однако необходимы дополнительные средства, применимые в лечении рака, в частности видов рака, при которых, как известно, применимы средства, которые оказывают целенаправленное воздействие на сплайсосому и мутации в ней.
В последнее время было доказано, что блокировка иммунных контрольных точек (ICB) представляет собой смену парадигмы при лечении некоторых различных типов рака. Однако не все пациенты демонстрируют стойкие/длительные ответы на ICB. См., например, Zappasodi, R. et al. Emerging Concepts for Immune Checkpoint Blockade-Based Combination Therapies. Cancer Cell 33, 581-598, doi:10.1016/j.ccell.2018.03.005 (2018); и Wolchok, J. D. et al. Overall Survival with Combined Nivolumab and Ipilimumab in Advanced Melanoma. N Engl J Med 377, 1345-1356, doi:10.1056/NEJMoa1709684 (2017). Следовательно, также существует потребность в разработке дополнительных терапевтических средств для введения их в комбинации с ICB или любым другим средством терапии для усиления и/или увеличения до максимума ответа пациента.
В данном документе раскрыты соединения формулы I:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
n выбран из 0, 1, 2 и 3;
R1 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, групп -NR9R10, групп 
, 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
и групп 
;
R9 выбран из водорода, групп -NR11R12, C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, C3-C8циклоалкильных групп и C3-C8гетероциклильных групп, где C3-C8циклоалкильные группы и C3-C8гетероциклильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
R10 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, групп -OR10, групп -C(O)R10, групп -C(O)R1 и C1-C6алкильных групп;
R4 представляет собой водород или гидрокси;
каждый из R5 и R6 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R7 и R8 независимо выбран из водорода, гидрокси, C1-C6алкоксигрупп и C1-C6алкильных групп; и
Y выбран из фенила, тиофенила, триазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила и пиразинила, где Y может быть не замещенным или замещенным 1-3 раза группой, независимо выбранной из гидроксила, оксогрупп, C1-C6алкильных групп, C3-C5циклоалкильных групп, гидроксиC1-C6алкильных групп, C1-C6алкоксигрупп, метоксиC1-C6алкильных групп, групп -NR11R12, 
где каждый из R11 и R12 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
Также в данном документе раскрыты соединения формулы II:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
X выбран из O, групп NR' и CH2, где R' выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
R1 выбран из метила, групп NR11R12, групп 
и групп 
,
R10 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп и гало-C1-C6алкильных групп, где C3-C8циклоалкильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
каждый из R11 и R12 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 представляет собой водород или C1-C6алкильные группы, и другой выбран из водорода, гидрокси и C1-C6алкильных групп;
один из либо R4, либо или R5 представляет собой водород, и другой выбран из водорода, гидрокси и 
каждый из R6 и R7 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R8 и R9 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп; или R8 и R9 взяты вместе с образованием циклопропильного кольца; и
Y выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, метокси и
групп -NR13R14, где каждый из R13 и R14 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и метоксиC1-C6алкильных групп; или R13 и R14 могут быть взяты вместе с N с образованием группы, выбранной из
морфолина, пиперидина, тиазолидина, индола, индолина и изоиндолинового кольца;
где Y может быть не замещенным или замещенным 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, гидрокси, гидрокси-C1-C6алкильных групп, метокси, метокси-C1-C6алкильных групп, галогена, галоген-C1-C6алкильных групп, -C(O)NH2, -NHCOO-C1-C6алкильных групп, -COOH, 
и групп -NR15R16, где каждый из R15 и R16 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
Также в данном документе раскрыты соединения формулы III:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
n выбран из 0, 1, 2 и 3;
m выбран из 1, 2 и 3;
R1 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, групп -NR11R12,
групп , 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
и групп 
;
R11 выбран из водорода, групп -NR11R12, C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, групп -(C1-C6алкил)-CO2R12, групп -(C1-C6алкил)-NR16R17 и C3-C8гетероциклильных групп, где группы -NR11R12, C1-C6алкильные группы, C3-C8циклоалкильные группы и C3-C8гетероциклильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
R12 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, групп -OR10, групп -C(O)R10, групп -C(O)R1 и C1-C6алкильных групп;
R4 выбран из водорода и гидрокси;
каждый из R5 и R6 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R7 и R8 независимо выбран из водорода, гидрокси, C1-C6алкоксигрупп и C1-C6алкильных групп; и
каждый из R9 и R10 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп, гидрокси и C1-C6алкоксигрупп; или один из R9 или R10 представляет собой оксо-, и другой отсутствует;
Z выбран из C1-C6алкильных групп, -C(O)-C1-C6алкильных групп, групп -OR13 и групп -NR14R15,
где R13 выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и -C(O)-C1-C6алкильных групп,
где каждый из R14 и R15 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и метокси-C1-C6алкильных групп; или R14 и R15 могут быть взяты вместе с N с образованием группы, выбранной из
морфолина, пиперидина, тиазолидина, индола, индолина и изоиндолинового кольца;
где Z может быть не замещенным или замещенным 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, C3-C5циклоалкильных групп, гидрокси-C1-C6алкильных групп, C1-C6алкокси групп, метокси-C1-C6алкильных групп, групп -NR16R17, 
где каждый из R16 и R17 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
Также в данном документе раскрыты фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеупомянутого. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции дополнительно содержат по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
Также в данном документе раскрыты способы лечения субъекта с раком, включающие введение субъекту терапевтически приемлемого количества по меньшей мере одного соединения формулы I, по меньшей мере одного соединения формулы II, по меньшей мере одного соединения формулы III и/или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеупомянутого. В некоторых вариантах осуществления рак может быть выбран из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака толстой кишки, рака поджелудочной железы, рака эндометрия, рака яичника, рака молочной железы, увеальной меланомы, рака желудка, холангиокарциномы и/или рака легкого. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке сплайсосомы, таких как перечисленные в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения формулы I, по меньшей мере одного соединения формулы II, по меньшей мере одного соединения формулы III и/или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеуказанных соединений индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа.
Также в данном документе раскрыты пути применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, в способе терапевтического лечения, например, лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак может быть выбран из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака толстой кишки, рака поджелудочной железы, рака эндометрия, рака яичника, рака молочной железы, увеальной меланомы, рака желудка, холангиокарциномы и/или рака легкого. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке сплайсосомы, таких как перечисленные в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения формулы I, по меньшей мере одного соединения формулы II, по меньшей мере одного соединения формулы III и/или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеуказанных соединений индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа.
Также в данном документе раскрыты пути применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, в получении лекарственного препарата. В некоторых вариантах осуществления лекарственный препарат применим для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак может быть выбран из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака толстой кишки, рака поджелудочной железы, рака эндометрия, рака яичника, рака молочной железы, увеальной меланомы, рака желудка, холангиокарциномы и/или рака легкого. В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1). В некоторых вариантах осуществления рак выбран из видов рака, при которых получают положительный результат теста на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке сплайсосомы, таких как перечисленные в таблице 1. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения формулы I, по меньшей мере одного соединения формулы II, по меньшей мере одного соединения формулы III и/или фармацевтически приемлемой соли любого из вышеуказанных соединений индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа.
Также в данном документе раскрыты пути применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для оказания целенаправленного воздействия на сплайсосому, например, на субъединицу 1 сплайсосомы SF3B. Если не указано иное, в данном документе будут применяться следующие определения.
Также в данном документе раскрыты способы индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена, включающие приведение неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления такой контакт может индуцировать образование по меньшей мере одного неоантигена.
Также в данном документе раскрыты способы индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена и/или развития Т-клеточного ответа у субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В данном документе также раскрыты способы лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение может привести к индуцированию образования по меньшей мере одного неоантигена и/или развитию Т-клеточного ответа. В некоторых вариантах осуществления способ также может включать обнаружение одного или нескольких неоантигенов и/или Т-клеточного ответа у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления способ также может включать непрерывное введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, если обнаружены один или несколько неоантигенов и/или Т-клеточный ответ.
Также в данном документе представены способы лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие, включающие введение субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из по меньшей мере одного соединения, выбранного из по меньшей мере одного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В данном документе также представлены неоантигенные вакцины, содержащие по меньшей мере один неоантигенный пептид. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигеный пептид содержит модифицированную или новую неоантигенную последовательность, образование которой индуцировано путем приведения в контакт неопластической клетки с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления способы и пути применения, представленные в данном документе, могут дополнительно предусматривать введение по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления способы и пути применения, представленные в данном документе, могут приводить к более низкой системной токсичности и/или улучшенной переносимости.
Также в данном документе раскрыт способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. Также в данном документе раскрыт способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие, включающий введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
Как описано в данном документе, соединения настоящего изобретения могут быть замещены одним или несколькими заместителями, такими как те, которые в общем проиллюстрированны в данном документе или приведены в качестве примера с помощью конкретных классов, подклассов и молекул по настоящему изобретению. В целом, термин "замещенный" относится к замене водородных радикалов в приведенной структуре на радикал указанного заместителя. Если не указано иное, замещенная группа может иметь заместитель в каждом замещаемом положении группы, и если более одного положения в любой приведенной структуре могут быть замещены более чем одним заместителем, выбранным из указанной группы, то в каждом положении заместитель может быть либо одинаковым, либо разным. Комбинации заместителей, предусмотренные в настоящем изобретении, являются такими, которые приводят к образованию стабильных или химически возможных соединений.
"Стабильный" относится к соединениям, которые по сути не изменяются химически и/или физически при воздействии условий, обеспечивающих их получение, обнаружение и их извлечение, очистку и применение для обеспечения одной или нескольких целей, раскрытых в данном документе. В некоторых вариантах осуществления стабильное соединение или химически возможное соединение представляют собой соединение, которое по сути не изменяется во время хранения при температуре 40°C или меньше в отсутствие влаги или других химически активных условий в течение по меньшей мере недели.
"Изомеры" относятся к соединениям с одинаковым количеством и видом атомов и, следовательно, одинаковой молекулярной массой, но отличающимся по расположению или конфигурации атомов. "Стереоизомеры" относятся к соединениям, которые характеризуются одинаковыми связями атомов, но разным расположением своих атомов в пространстве. "Диастереоизомеры" или "диастереомеры" относятся к стереоизомерам, которые не являются энантиомерами. "Энантиомеры" относятся к стереоизомерам, которые являются несовпадающими при наложении зеркальными отражениями друг друга.
Изложенные в данном документа энантиомеры могут включать "энантиомерно чистые" изомеры, которые содержат по сути один энантиомер, например, ровно 90%, 92%, 95%, 98% или 99% или более или ровно 100% одного энантиомера по конкретному асимметричному центру или центрам. "Асимметричный центр" или "хиральный центр" относятся к тетраэдрическому атому углерода, который содержит четыре различных заместителя.
Применяемый в данном документе термин "стереомерно чистый" означает соединение или композицию на его основе, которые содержат один стереоизомер соединения и по сути не содержат других стереоизомеров данного соединения. Например, стереомерно чистая композиция на основе соединения с одним хиральным центром будет по сути не содержать противоположный энантиомер соединения. В некоторых вариантах осуществления стереомерно чистая композиция на основе соединения, имеющего два хиральных центра, будет по сути не содержать диастереомеры и по сути не содержать противоположный энантиомер соединения. В некоторых вариантах осуществления стереомерно чистое соединение содержит более приблизительно 80% по весу одного стереоизомера соединения и менее приблизительно 20% по весу других стереоизомеров соединения, например, более приблизительно 90% по весу одного стереоизомера соединения и менее приблизительно 10% по весу других стереоизомеров соединения, кроме того, например, более приблизительно 95% по весу одного стереоизомера соединения и менее приблизительно 5% по весу других стереоизомеров соединения и, кроме того, например, более приблизительно 97% по весу одного стереоизомера соединения и менее приблизительно 3% по весу других стереоизомеров соединения. См., например, патент США № 7189715.
"R" и "S" в качестве терминов, описывающих изомеры, представляют собой идентификаторы стереохимической конфигурации по асимметричному замещенному атому углерода. Обозначение асимметричного замещенного атома углерода как "R" или "S" осуществляют путем применения правил приоритета Кана, Ингольда и Прелога, которые хорошо известны специалистам в данной области техники и описаны в Правилах номенклатуры для органической химии, разработанных Международным союзом теоретической и прикладной химии (IUPAC). Раздел E, Стереохимия.
"Оксид амина", или "N-оксид амина", или "N-оксид" представляет собой химическое соединение, которое содержит функциональную группу R3N+-O−, связь N-O с тремя дополнительными водородами и/или углеводородными боковыми цепями, присоединенными к N. Иногда оно записывается как R3N→O.
"Ar" или "арил" относится к ароматическому карбоциклическому фрагменту, содержащему одно или несколько замкнутых колец. Примеры включают без ограничения фенил, нафтил, антраценил, фенантраценил, бифенил и пиренил.
"Гетероарил" относится к циклическому фрагменту, содержащему одно или несколько замкнутых колец с одним или несколькими гетероатомами (кислорода, азота или серы) в по меньшей мере одном из колец, где по меньшей мере одно из колец является ароматическим, и где кольцо или кольца независимо могут быть конденсированными и/или соединенными мостиковой связью. Примеры включают без ограничения фенил, тиофенил, триазолил, пиридинил, пиримидинил, пиридазинил и пиразинил.
Термины "алкил" или "алкильная группа", применяемые в данном документе, означают углеводород с линейной (т. е., неразветвленной), разветвленной или циклической цепью, который является полностью насыщенным. В некоторых вариантах осуществления алкильные группы содержат 1-8 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления алкильные группы содержат 1-6 атомов углерода ("C1-C6алкильные группы"). В некоторых вариантах осуществления алкильные группы содержат 1-3 атома углерода. В еще одних вариантах осуществления алкильные группы содержат 2-3 атома углерода и в некоторых вариантах осуществления алкильные группы содержат 1-2 атома углерода. В некоторых вариантах осуществления термин "алкил" или "алкильная группа" относится к циклоалкильной группе, также известной как карбоцикл. Неограничивающие примеры алкильных групп включают метил, этил, пропил, изопропил, бутил, циклопропил и циклогексил.
Применяемый в данном документе термин "алкокси" относится к алкильной группе, как определено ранее, присоединенной к основной углеродной цепи через атом кислорода ("алкокси").
"Галогеналкил" относится к алкильной группе, замещенной одним или несколькими атомами галогена (F, Cl, Br, I). Например, "фторметил" относится к метильной группе, замещенной одним или несколькими атомами фтора (например, монофторметил, дифторметил или трифторметил).
"Гетероатом" относится к O, S или N.
Применяемые в данном документе "гетероциклил" или "гетероциклический" означают моноциклический гетероцикл, бициклический гетероцикл или трициклический гетероцикл, содержащий по меньшей мере один гетероатом в кольце.
Моноциклический гетероцикл представляет собой 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членное кольцо, содержащее по меньшей мере один гетероатом, независимо выбранный из O, N и S. В некоторых вариантах осуществления гетероцикл представляет собой 3- или 4-членное кольцо, содержащее один гетероатом, выбранный из O, N и S. В некоторых вариантах осуществления гетероцикл представляет собой 5-членное кольцо, не содержащее двойных связей или содержащее одну двойную связь, и один, два или три гетероатома, выбранные из O, N и S. В некоторых вариантах осуществления гетероцикл представляет собой 6-, 7- или 8-членное кольцо, не содержащее двойных связей, содержащее одну или две двойные связи, и один, два или три гетероатома, выбранные из O, N и S. Иллюстративные примеры моноциклического гетероцикла включают без ограничения азетидинил, азепанил, азиридинил, диазепанил, 1,3-диоксанил, 1,3-диоксоланил, дигидропиранил (включая 3,4-дигидро-2H-пиран-6-ил), 1,3-дитиоланил, 1,3-дитианил, имидазолинил, имидазолидинил, изотиазолинил, изотиазолидинил, изоксазолинил, изоксазолидинил, морфолинил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, пиперазинил, пиперидинил, пиранил, пиразолинил, пиразолидинил, пирролинил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил (включая тетрагидро-2H-пиран-4-ил), тетрагидротиенил, тиадиазолинил, тиадиазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, тиоморфолинил, 1,1-диоксидотиоморфолинил (тиоморфолинсульфон), тиопиранил и тритианил.
Бициклические гетероциклы по настоящему изобретению включают моноциклический гетероцикл, конденсированный с арильной группой, или моноциклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим циклоалкилом, или моноциклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим циклоалкенилом, или моноциклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим гетероциклом. Примеры бициклических гетероциклов включают без ограничения, 3,4-дигидро-2H-пиранил, 1,3-бензoдиоксолил, 1,3-бензoдитиолил, 2,3-дигидро-1,4-бензoдиоксинил, 2,3-дигидро-1-бензофуранил, 2,3-дигидро-1-бензотиенил, 2,3-дигидро-1H-индолил и 1,2,3,4-тетрагидрохинолинил.
В некоторых вариантах осуществления бициклический гетероцикл представляет собой спирогетероцикл. Как известно из уровня техники, "спирогетероцикл" представляет собой бициклический фрагмент с кольцами, соединенными посредством только одного атома. Соединяющий атом также называется спироатомом, и чаще всего он представляет собой четвертичный атом, такой как углерод или азот. Спиросоединения могут быть обозначены с помощью инфикса "спиро", за которым следуют квадратные скобки, в которые заключено число атомов в меньшем кольце и число атомов в большем кольце, за исключением спироатома самого по себе; при этом числа разделены точкой. Неограничивающие примеры таких соединений представляют собой 2,6-диазаспиро[3.3]гептан.
Трициклический гетероцикл представляет собой бициклический гетероцикл, конденсированный с арильной группой, бициклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим циклоалкилом, бициклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим циклоалкенилом, или бициклический гетероцикл, конденсированный с моноциклическим гетероциклом. Типичные примеры трициклических гетероциклов включают без ограничения 2,3,4,4a,9,9a-гексагидро-1H-карбазолил, 5a,6,7,8,9,9a-гексагидродибензo[b,d]фуранил и 5a,6,7,8,9,9a-гексагидродибензo[b,d]тиенил.
Гетероциклильные группы по настоящему изобретению присоединены к исходному молекулярному фрагменту посредством любого замещаемого атома углерода или любого замещаемого атома азота, кислорода или серы, содержащегося в пределах групп, и они могут содержать один или два алкиленовых мостика из 1, 2, 3 или 4 атомов углерода, каждый из которых связывает два несмежных атома углерода в группах. Примеры таких "мостиковых" гетероциклических групп включают без ограничения оксатрицикло[3.3.1.13,7]децил (в том числе 2-оксатрицикло[3.3.1. 13,7]децил), 2,4-диоксабицикло[4.2.1]нонил, оксабицикло[2.2.1]гептил (в том числе 2-оксабицикло[2.2. 1]гептил) и 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан.
В указанных выше гетероариле и гетероциклах атомы азота или серы могут быть необязательно окислены до различных степеней окисления. В конкретном примере группа S(O)0-2 относится к -S-(сульфиду), -S(O)-(сульфоксиду) и -SO2-(сульфону) соответственно. Для удобства подразумевается, что атомы азота, в частности, но не исключительно, атомы, которые определены как атомы азота в составе ароматического кольца, включают соответствующие формы N-оксидов. Таким образом, подразумевается, что в случае соединения по настоящему изобретению, содержащего, например, пиридильное кольцо, соответствующий пиридил-N-оксид включен в качестве другого соединения по настоящему изобретению.
"Лечение", "лечить" или "осуществление лечения" рака относятся к обращению развития (например, преодолению блокировки дифференцировки клеток), облегчению симптомов (например, облегчению одного или нескольких симптомов, таких как утомляемость вследствие анемии, низкие содержание форменных элементов в крови и т.д.) и/или отсрочке прогрессирования (например, отсрочке прогрессирования патологического состояния, например, трансформации в AML) рака, как описано в данном документе.
Применяемый в данном документе "субъект" означает субъекта-животного, например, субъекта-млекопитающего и, в частности, людей.
Термин "антитело" применяется в самом широком смысле для обозначения молекулы иммуноглобулина, которая распознает и специфически связывается с мишенью, такой как белок, полипептид, углевод, полинуклеотид, липид или комбинации вышеуказанного, посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена в пределах вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Тяжелая цепь антитела состоит из вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (CH). Легкая цепь состоит из вариабельного домена легкой цепи (VL) и константного домена легкой цепи (CL). Для целей настоящей заявки каждый зрелый вариабельный домен тяжелой цепи и легкой цепи содержит три области, определяющие комплементарность (CDR1, CDR2 и CDR3), в пределах четырех каркасных участков (FR1, FR2, FR3 и FR4), расположенных от N-конца до C-конца: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. "Антитело" может быть встречающимся в природе или созданным человеком, таким как моноклональные антитела, полученные с помощью традиционной гибридомной технологии. Термин "антитело" включает полноразмерные моноклональные антитела и полноразмерные поликлональные антитела, а также фрагменты антител, такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv и одноцепочечные антитела. Антитело может принадлежать к любому из пяти основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, или к их подклассам (например, изотипы IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). Термин дополнительно охватывает человеческие антитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и любую модифицированную молекулу иммуноглобулина, содержащую сайт распознавания антигена, при условии, что она демонстрируют требуемую биологическую активность (например, связывает целевой антиген, интернализуется в клетку, экспрессирующую целевой антиген).
Применяемый в данном документе "фармацевтически приемлемый носитель" относится к нетоксичным носителю, вспомогательному веществу или среде-носителю, которые не нарушают фармакологическую активность соединения, с которым они составлены. Фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или среды-носители, которые могут использоваться в композициях по настоящему изобретению, включают без ограничения ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человечий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как сульфат протамина, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, циклодекстрины, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилена и полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин.
"Фармацевтически приемлемая соль" представляет собой соль, которая сохраняет требуемую биологическую активность исходного соединения и не вызывает нежелательных токсикологических эффектов. Примеры таких солей представляют собой: (a) соли присоединения кислоты, образованные с неорганическими кислотами, например, хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой, азотной кислотой и т.п.; и соли, образованные с органическими кислотами, например, уксусной кислотой, щавелевой кислотой, винной кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, глюконовой кислотой, лимонной кислотой, яблочной кислотой, аскорбиновой кислотой, бензойной кислотой, дубильной кислотой, пальмитиновой кислотой,
альгиновой кислотой, полиглутаминовой кислотой, нафталинсульфоновой кислотой, метансульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, нафталиндисульфоновой кислотой, полигалактуроновой кислотой и т.п.; и (b) соли, образованные из элементарных анионов, таких как хлор, бром и йод. См., например, Haynes et al., "Commentary: °Ccurrence of Pharmaceutically Acceptable Anions and Cations in the Cambridge Structural Database," J. Pharmaceutical Sciences, vol. 94, no. 10 (2005), и Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharmaceutical Sciences, vol. 66, no. 1 (1977), которые включены в данный документ посредством ссылки.
Если не указано иное, применяемая в данном документе номенклатура, используемая для описания химических групп или фрагментов, соответствует традиционным правилам, где название читается слева направо, точка присоединения к остальной части молекулы указана в правой части названия. Например, группа "(C1-3алкокси)C1-3алкил" присоединена к остальной части молекулы по алкильному концу. Дополнительные примеры включают метоксиэтил, где точка присоединения находится на этильном конце, и метиламино, где точка присоединения находится на аминном конце.
Если не указано иное, если химическая группа описана ее химической формулой или структурой, которые имеют фрагмент концевой связи, обозначенный как "-", будет понятно, что "-" представляет собой точку присоединения.
Если не указано иное, соединения, изображенные в данном документе, включают все энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные) формы структуры; например, R- и S-конфигурации для каждого асимметричного центра, (Z)- и (E)-изомеры по двойной связи и конформационные (Z)- и (E)-изомеры. Следовательно, в объем настоящего изобретения включены отдельные стереохимические изомеры, а также энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные) смеси соединений по настоящему изобретению. Если не указано иное, все таутомерные формы соединений по настоящему изобретению включены в объем настоящего изобретения. Дополнительно, если не указано иное, структуры, изображенные в данном документе, включают соединения, которые отличаются только присутствием одного или нескольких обогащенных изотопами атомов. Например, в объем данного изобретения включены соединения с формулой, раскрытой в данном документе, за исключением замещения водорода на дейтерий или тритий или замещения углерода 13C- или 14C-обогащенным углеродом. Такие соединения могут быть применимыми, например, в качестве аналитических инструментов или зондов в биологических анализах.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления в данном документе представлены соединения формулы I:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
n выбран из 0, 1, 2 или 3;
R1 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, групп -NR9R10, групп 
, 
, групп , групп 
, групп , групп 
, групп 
, групп и групп ;
R9 выбран из водорода, групп -NR11R12, C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, C3-C8циклоалкильных групп и C3-C8гетероциклильных групп, где группы -NR11R12, C1-C6алкильные группы, C3-C8циклоалкильные группы и C3-C8гетероциклильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
R10 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, групп -OR10, групп -C(O)R10, групп -C(O)R1 и C1-C6алкильных групп;
R4 выбран из водорода и гидрокси;
каждый из R5 и R6 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R7 и R8 независимо выбран из водорода, гидрокси, C1-C6алкоксигрупп и C1-C6алкильных групп; и
Y выбран из фенила, тиофенила, триазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила и пиразинила, где Y может быть не замещен или замещен 1-3 раза группами, независимо выбранными из оксогрупп, C1-C6алкильных групп, C3-C5циклоалкильных групп, гидрокси-C1-C6алкильных групп, C1-C6алкоксигрупп, метокси-C1-C6алкильных групп, групп -NR11R12, 
где каждый из R11 и R12 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
В некоторых вариантах осуществления в формуле I Y представляет собой 
В некоторых вариантах осуществления в формуле I Y выбран из необязательно замещенных фенильных групп.
В некоторых вариантах осуществления в формуле I R1 выбран из метила, групп 
, , 
, групп , групп 
, групп , групп 
, групп 
, групп и групп , где R9, R10, R11 и R12 являются такими, как определено выше.
Также в данном документе представлены соединения формулы II:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
X выбран из O, групп NR' и CH2, где R' выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
R1 выбран из метила, групп NR11R12, групп и групп ;
R10 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп и галоген-C1-C6алкильных групп, где C3-C8циклоалкильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
каждый из R11 и R12 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, гидрокси и C1-C6алкильных групп;
один из либо R4, либо или R5 представляет собой водород, и другой выбран из водорода, гидрокси и 
каждый из R6 и R7 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R8 и R9 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп; или R8 и R9 взяты вместе с образованием циклопропильного кольца; и
Y выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, метокси и групп -NR13R14, где каждый из R13 и R14 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и метокси-C1-C6алкильных групп; или R13 и R14 могут быть взяты вместе с N с образованием группы, выбранной из
морфолина, пиперидина, тиазолидина, индола, индолина и изоиндолинового кольца;
где Y может быть не замещенным или замещенным 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, гидрокси, гидрокси-C1-C6алкильных групп, метокси, метокси-C1-C6алкильных групп, галогена, галоген-C1-C6алкильных групп, -C(O)NH2, -NHCOO-C1-C6алкильных групп, -COOH, 
и групп -NR15R16, где каждый из R15 и R16 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
Также в данном документе раскрыты соединения формулы III:
и их фармацевтически приемлемые соли,
где:
n выбран из 0, 1 и 2;
m выбран из 1, 2 и 3;
R1 выбран из C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп, групп -NR11R12, групп , 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп , групп 
, групп 
и групп 
,
R11 выбран из водорода, групп -NR16R17, C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, групп -(C1-C6алкил)-CO2R12, групп -(C1-C6алкил)-NR16R17, C3-C8циклоалкильных групп и C3-C8гетероциклильных групп, где группы -NR16R17, C1-C6алкильные группы, C3-C8циклоалкильные группы и C3-C8гетероциклильные группы могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, групп -(C1-C6алкил)-CO2H, гидрокси, групп, представляющих собой атом галогена, и C1-C6алкоксигрупп;
R12 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, групп -OR10, групп -C(O)R10, групп -C(O)R1 и C1-C6алкильных групп;
R4 представляет собой водород или гидрокси;
каждый из R5 и R6 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R7 и R8 независимо выбран из водорода, гидрокси, C1-C6алкоксигрупп и C1-C6алкильных групп; и
каждый из R9 и R10 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп, гидрокси и C1-C6алкоксигрупп; или один из R9 или R10 представляет собой оксо-, и другой отсутствует;
Z выбран из C1-C6алкильных групп, -C(O)-C1-C6алкильных групп, групп -OR13 и групп -NR14R15,
где R13 выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и -C(O)-C1-C6алкильных групп,
где каждый из R14 и R15 независимо выбран из водорода, C1-C6алкильных групп и метокси-C1-C6алкильных групп; или R14 и R15 могут быть взяты вместе с N с образованием группы, выбранной из
морфолина, пиперидина, тиазолидина, индола, индолина и изоиндолинового кольца;
где Z может быть не замещенным или замещенным 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, C3-C5циклоалкильных групп, гидрокси-C1-C6алкильных групп, C1-C6алкоксигрупп, метокси-C1-C6алкильных групп, групп -NR16R17, 
и 
где каждый из R16 и R17 независимо выбран из водорода и C1-C6алкильных групп.
В некоторых вариантах осуществления в формуле III, R1 выбран из метила, групп 
, , , групп , групп , групп , групп , групп , групп , групп и групп , где R11, R12, R16, R17 являются такими, как определено выше.
Также в данном документе раскрыты соединения, выбранные из:
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
,
и их фармацевтически приемлемых солей.
Также в данном документе раскрыты соединения, выбранные из:
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-9-оксо-9-пирролидин-1-илнона-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]карбамоилокси]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-(пропилкарбамоилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-4-оксидопиперазин-4-ий-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(диметилкарбамоилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-(диэтилкарбамоилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропан-2-ил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[бутил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[бутан-2-ил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-карбамоилокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[2-метоксиэтил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]азетидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2S)-2-метилпирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2S)-2-метилпирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пиперидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-морфолин-4-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
сложного эфира [(2R,3E,5E)-6-[(2R,3S,4E,6R,7R,10R)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-3-тиазолидинкарбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-индол-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[2-(1-гидроксиэтил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2S,5S)-2,5-диметилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2,3-дигидроиндол-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2-окса-5-азаспиро[3,4]октан-5-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-[6-[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-пропан-2-илпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклопентилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(оксан-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-6-циклогептил-2,6-диазаспиро[3.3]гептан-2-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-3-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклобутилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-(1-метилпиперидин-4-ил)карбамата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-морфолин-4-карбоксилата;
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-(1S,4R)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-8-циклогептил-3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-1,4-диазепан-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогексилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1,4-диазепан-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(азепан-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(8,8-дифтор-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-9-оксо-9-пирролидин-1-илнона-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10R)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-карбамоилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2S,5S)-2,5-диметилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
(2R)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-2-карбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(3-оксопирролидин-1-карбонил)оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2-окса-7-азаспиро[3.4]октан-7-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-5-[1-(пирролидин-1-карбонилоксиметил)циклопропил]пента-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S,4R)-3,4-дигидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
(3S)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-3-карбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,5-дигидропиррол-1-карбонилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-[(2-метилпропан-2-ил)оксикарбониламино]пирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиразин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(3-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиримидин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(6-пирролидин-1-илпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N, N-диметилкарбамата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N, N-диметилкарбамата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3S)-3-триэтилсилилоксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-(1-фенилтетразол-5-ил)оксипирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]амино]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[метил(пирролидин-1-карбонил)амино]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(4-циклопропилтриазол-1-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-метоксикарбонилокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-9-метокси-6-метил-9-оксононa-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
сложного эфира [(2R,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-7-[оксо-(1-пирролидинил)метокси]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1-пиперазинкарбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-азациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-2-метил-6-[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-6-[(4-метилпиперазин-1-карбонил)амино]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]гепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R,3R)-3-гидрокси-2-метилпентанoата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-7-метил-6-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-ацетилоксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-тиофен-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-(6-метоксипиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-[6-(2-метилпропокси)пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-7-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-8-(4-гидроксифенил)-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[2-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[4-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[3-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-6-метил-7-[(2R,3R)-3-[(2S)-3-оксопентан-2-ил]оксиран-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-10,12-диоксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6E,8S)-8-пиридин-2-илнонa-2,4,6-триен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-4-оксидопиперазин-4-ий-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4-фторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
(4S,7S,8S,9E,11S,12S)-4,7,8-тригидрокси-7,11-диметил-12-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-9-ен-2-она;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-пиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((S,2E,4E)-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-7-ил]пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7R,10R)-7-этокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2S,3S)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-7-ил]пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-[2-(метиламино)этил]карбамата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-[2-(диметиламино)этил]карбамата;
3-[4-[[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]оксикарбонил]пиперазин-2-ил]пропановой кислоты;
4-[4-[[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]оксикарбонил]пиперазин-1-ил]бутановой кислоты;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-(1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-пропилпиперазин-1-карбоксилата;
(2R,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((2S,6R, E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепт-4-ен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-(2-аминоэтил)пиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7,10-дигидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7,10-дигидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата;
и их фармацевтически приемлемых солей.
В данном документе раскрыты композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение по настоящему изобретению (например, соединения формул I, II и III) и/или их фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель. По меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель может быть выбран в соответствии с конкретным путем введения, для которого предназначена композиция.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть составлены для парентерального введения, перорального введения, введение с помощью спрея для ингаляции, местного введения, ректального введения, назального введения, буккального введения, вагинального введения или для введения с помощью имплантируемой емкости и т. д. Термин "парентеральный", применяемый в данном документе, включает методики подкожных, внутривенных, внутримышечных, внутрисуставных, внутрисиновиальных, внутригрудинных, внутриоболочечных, внутрипеченочных, внутриочаговых и внутричерепных инъекций или инфузий. В некоторых вариантах осуществления композиции вводят внутривенно, перорально, подкожно или посредством внутримышечного введения. Стерильные инъекционные формы композиций по настоящему изобретению могут представлять собой водную или маслянистую суспензию. Данные суспензии могут быть составлены в соответствии с методиками, известными из уровня техники, с применением подходящих диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств. Стерильный инъекционный препарат может также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например в виде раствора в 1,3-бутандиоле. К приемлемым средам-носителям и растворителям, которые могут использоваться, относятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или среды для суспендирования традиционно используются стерильные нелетучие масла.
Можно использовать любое легкое нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. В приготовлении инъекционных препаратов применимы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, также как и натуральные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно их полиоксиэтилированные варианты. Данные масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергатор, такой как карбоксиметилцеллюлоза или подобные диспергирующие средства, которые обычно используются при составлении фармацевтически приемлемых лекарственных форм, в том числе эмульсий и суспензий. Другие широко используемые поверхностно-активные вещества, такие как разновидности Tween, Span, и другие эмульгирующие средства или усиливающие биодоступность средства, которые широко используются при изготовлении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм, также могут применяться для целей получения состава.
В случае перорального введения соединение по настоящему изобретению (например, формулы I, II или III) и/или его фармацевтически приемлемая соль могут быть представлены в виде лекарственной формы, приемлемой для перорального введения, включая без ограничения капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. В случае таблеток для перорального применения широко используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также можно добавлять смазывающие средства, такие как стеарат магния. В случае перорального введения в форме капсулы применимые разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Если водные суспензии предназначены для перорального введения, то активный ингредиент может быть объединен с эмульгирующим и/или суспендирующим средством. При необходимости также могут быть добавлены определенные подсластители, ароматизаторы или красители.
Соединения и композиции по настоящему изобретению могут применяться для лечения различных типов рака, включая те, которые являются восприимчивыми к средствам, которые оказывают целенаправленное воздействие на сплайсосому, включая SF3B1. Как отмечалось выше, сообщается, что противоопухолевая активность пладиенолида B связана с его целенаправленным воздействием на комплекс SF3b путем ингибирования сплайсинга и изменения паттерна экспрессии генов (Kotake et al., "Splicing factor SF3b as a target of the antitumor natural product pladienolide," Nature Chemical Biology 2007, 3, 570-575). Известно, что мутации в белке субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1) наблюдаются при целом ряде видов рака, таких как гематологические злокачественные новообразования и солидные опухоли. Scott et al., "Acquired mutations that affect pre-mRNA splicing in hematologic malignancies and solid tumors," JNCI 105, 20, 1540-1549.
Соответственно, соединения (например, соединения формул I, II и III и фармацевтически приемлемые соли вышеуказанных соединений) и композиции по настоящему изобретению могут применяться для лечения гематологических злокачественных новообразований, таких как, например, виды рака крови (лейкоз) и виды рака лимфатических узлов (лимфомы). Лейкозы включают острый лимфобластный лейкоз (ALL), острый миелогенный лейкоз (AML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML), острый моноцитарный лейкоз (AMoL) и т. д. Лимфомы включают лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому. Другие гематологические злокачественные новообразования могут включать миелодиспластический синдром (MDS).
Солидные опухоли включают карциномы, такие как аденокарцинома, например, рак молочной железы, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак толстой кишки или колоректальный рак, рак легкого, рак желудка, рак шейки матки, рак эндометрия, рак яичника, холангиокарциному, глиому, меланому и т. д.
Соединения (например, соединения формул I, II и III) и их фармацевтически приемлемые соли и композиции по настоящему изобретению могут также применяться для лечения видов рака, которые могут быть восприимчивы к средствам, которые оказывают целенаправленное воздействие на ген или белок сплайсосомы, отличный от SF3B1. Далее представлены неограничивающие примеры видов рака, восприимчивых к средствам, которые оказывают целенаправленное воздействие на сплайсосому. Таким образом, соединения по настоящему изобретению могут вводиться субъектам для лечения множества таких видов рака или патологических состояний, в частности пациентам или субъектам, страдающим от следующего.
a) Миелодиспластический синдром (MDS): см., например, "SF3B1 mutations in myelodysplastic syndromes: clinical ass°Ciations and prognostic implications", Damm F. et al. Leukemia, 2011, 1-4; "Frequent pathway mutations in splicing machinery in myelodysplasia", Yoshida K. et al, Nature, 2011, 478, 64-69; "Clinical significance of SF3B1 mutations in myelodysplastic syndromes and myelodysplastic/myeloproliferative neoplasms", Malcovati L. et al., Blood, 2011, 118, 24, 6239-6246; "Mutations in the spliceosome machinery, a novel and ubiquitous pathway in leukemogenesis", Makishima et al, Blood, 2012, 119, 3203-3210; "Somatic SF3B1 mutation in myelodysplasia with ring sideroblasts", Pappaemannuil, E. et al, New England J. Med. 2011, DOI 10.1056/NEJMoa1103283.
b) Хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL): см., например, "Defects in the spliceosomal machinery: a new pathway of leukaemogenesis", Maciejewski, J.P., Padgett, R.A., Br. J. Haematology, 2012, 1-9; "Mutations in the SF3B1 splicing factor in chronic lymph°Cytic leukemia: ass°Ciations with progression and fludarabine-refractoriness", Rossi et al, Blood, 2011, 118, 6904-6908; "Exome sequencing identifies recurrent mutations of the splicing factor SF3B1 gene in chronic lymph°Cytic leukemia", Quesada et al, Nature Genetics, 2011, 44, 47-52.
c) Хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML): см., например, Yoshida et al, Nature 2011; "Spliceosomal gene mutations are frequent events in the diverse mutational spectrum of chronic myelomon°Cytic leukemia but largely absent in juvenile myelomon°Cytic leukemia", Kar S.A. et al, Haematologia, 2012, DOI: 10.3324/haematol.2012.064048.
d) Острый миелоидный лейкоз (AML): см., например, Malcovati et al., Blood 2011; Yoshida et al, Nature 2011.
e) Рак молочной железы: см., например, "Whole genome analysis informs breast cancer response to aromatase inhibition," Ellis et al, Nature, 2012, 486, 353-360.
f) Увеальная меланома: см., например,"SF3B1 mutations are ass°Ciated with alternative splicing in uveal melanoma", Furney et al, Cancer Disc. 2013, 10, 1122-1129.
g) Рак эндометрия: см., например, Tefferi et al., "Myelodysplastic syndromes", N Engl J Med. 2009; 361:1872-85.
h) Рак желудка: см., например, Int J Cancer. 2013 Jul;133(1):260-5, "Mutational analysis of splicing machinery genes SF3B1, U2AF1 and SRSF2 in myelodysplasia and other common tumors", Je et al.
i) Рак яичника: см., например, Int J Cancer. 2013 Jul;133(1):260-5, "Mutational analysis of splicing machinery genes SF3B1, U2AF1 and SRSF2 in myelodysplasia and other common tumors", Je et al.
j) Виды рака желчных протоков, такие как холангиокарцинома и рак поджелудочной железы: см., например, Biankin et al., "Pancreatic cancer genomes reveal aberrations in axon guidance pathway genes", Nature 2012, 491, 399-405.
k) Рак легкого: см., например, "Exome sequencing identifies recurrent mutations of the splicing factor SF3B1 gene in chronic lymph°Cytic leukemia", Quesada et al., Nature Genetics 44, 47-52 (2012); Scott et al., "Acquired mutations that affect pre-mRNA splicing in hematologic malignancies and solid tumors", JNCI 105, 20, 1540-1549.
Кроме того, в Каталоге соматических мутаций при раке (COSMIC) (Wellcome Trust Sanger Institute, Genome Research Limited, England) сообщается, что мутации SF3B1 были обнаружены в образцах различных типов рака.
Соединение по настоящему изобретению (например, соединение формул I, II или III) может вводиться субъекту эффективном для лечения или терапевтически эффективном количестве. Количество соединения по настоящему изобретению, которое может быть объединено с материалом носителя для получения композиции в виде единичной стандартной лекарственной формы, будет варьироваться в зависимости от субъекта, подлежащего лечению, и конкретного пути введения. В некоторых вариантах осуществления вводят дозу, составляющую от 0,01 мг/кг до 100 мг/кг на вес тела/сутки по меньшей мере одного соединения, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления доза составляет от 0,01 мг до 50 мг по меньшей мере одного соединения, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вводится от 0,1 мг до 25 мг по меньшей мере одного соединения, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления вводится от 5 мг до 40 мг по меньшей мере соединения, раскрытого в данном документе.
Среднему специалисту будет понятно, что специфическая дозировка и схема лечения для конкретного пациента будут зависеть от множества факторов, в том числе активности специфического используемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, режима питания, времени введения, скорости выведения, комбинации лекарственных средств, оценки лечащего врача и тяжести конкретного заболевания, подлежащего лечению. Количество по меньшей мере одного соединения, раскрытого в данном документе, будет также зависеть от конкретного соединения/соли, подлежащих применению.
В некоторых вариантах осуществления рак тестируют на наличие одной или нескольких мутаций в гене или белке субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1) и/или для него получен положительный результат теста на их наличие, где наличие мутации(мутаций) ("положительный" результат) указывает на то, что рак у субъекта является восприимчивым к способу лечения, включающему введение по меньшей мере одного соединения, раскрытого в данном документе, оказывающего целенаправленное воздействие на данный белок и/или сплайсосому. Примеры таких генов сплайсосомы включают без ограничения гены, представленные в таблице 1.
Таблица 1. Гены сплайсосомы и потенциальные заболевания, связанные с ними
Сокращения:
MDS=миелодиспластический синдром
AML=острый миелоидный лейкоз
CMML=хронический миеломоноцитарный лейкоз
LUAD=аденокарцинома легкого
UCEC=карцинома эндометрия тела матки
PMF=прогрессивный массивный фиброз
PRAD=аденокарцинома предстательной железы
COAD=аденокарцинома толстой кишки
OV=серозная цистаденокарцинома яичника
SKCM=меланома кожи
LUSC=плоскоклеточная карцинома легкого
STAD=аденокарцинома желудка
GBM=мультиформная глиобластома
LGG=глиома головного мозга низкой степени злокачественности
DLBCL=диффузная B-крупноклеточная лимфома.
В некоторых вариантах осуществления рак у субъекта может быть восприимчив к способу лечения, включающему введение соединения, целенаправленно воздействующего на данный белок и/или сплайсосому, даже в отсутствие таких мутаций в гене или белке сплайсосомы.
Скрининг или тестирование на наличие мутаций можно проводить с помощью любых известных способов, например, путем генотипирования, фенотипирования и т.д., посредством амплификации нуклеиновых кислот, электрофореза, микрочипов, блоттинга, функциональных анализов, иммунологических анализов и т. д. Способы скрининга могут включать, например, сбор у указанного субъекта биологического образца, содержащего раковые клетки/раковую ткань.
В некоторых вариантах осуществления субъекта, у которого имеется рак, описанный в данном документе, можно лечить с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает средство терапии на основе цитокина или аналога цитокина, например, любое средство терапии на основе цитокина или аналога цитокина, раскрытое в данном документе. Цитокины представляют собой широкую категорию малых белков, которые, как было показано, вовлечены в аутокринную передачу сигнала, паракринную передачу сигнала и/или эндокринную передачу сигнала в качестве иммуномодулирующих средств. Иллюстративные цитокины раскрыты в данном документе и включают хемокины, интерфероны, интерлейкины, лимфокины и факторы некроза опухоли. Применяемый в данном документе термин "цитокин" относится к полипептиду, секретируемому клеткой, который оказывает влияние на функцию других клеток, заключающуюся в опосредовании иммунного ответа, и термин "средство терапии на основе цитокина" относится к введению и/или индуцированию секреции такого пептида. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой рекомбинантный цитокин или его аналог. В некоторых вариантах осуществления цитокин представляет собой аналог цитокина. Термины "аналог цитокина" и "средство терапии на основе аналога цитокина" относятся к модифицированному цитокину, где один или несколько аминокислотных остатков нативного цитокина были замещены другими природными или неприродными аминокислотными остатками и/или где один или несколько природных или неприродных аминокислотных остатков были добавлены к нативному цитокину. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе цитокина или аналога цитокина предусматривает введение по меньшей мере одного цитокина или аналога цитокина пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии содержит одну или несколько сконструированных T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (например, средство терапии на основе CAR-T или других клеток), например, любое средство терапии на основе CAR-T, раскрытое в данном документе. Термины "CAR-T" и "средство терапии на основе CAR-T" используются взаимозаменяемо для обозначения клетки или популяции клеток, модифицированных с помощью CAR (например, T-клетки или популяции T-клеток). В некоторых вариантах осуществления химерный T-клеточный рецептор (CAR) может быть сконструирован с применением антигенраспознающих последовательностей, так что при экспрессии CAR на клетке (например, T-клетке) CAR и/или клетка могут взаимодействовать с антигеном-мишенью. Например, в некоторых вариантах осуществления CAR может быть сконструирован за счет первоначальной идентификации антител, которые распознают домен антигенного белка, экспрессируемый на клеточной поверхности. Затем антигенраспознающие последовательности таких антител могут быть слиты с доменом T-клеточного рецептора для осуществления селективного целенаправленного воздействия и активации. В некоторых вариантах осуществления последовательности CAR клонируют в популяции полученных от пациента T-клеток и обеспечивают размножение клеток с применением доступных в настоящее время протоколов. В некоторых вариантах осуществления сконструированные T-клетки затем переливают обратно в кровоток пациента перед проведением лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, одновременно с ним или после него. В некоторых вариантах осуществления после проведения лечения с помощью по меньшей мере одного соединения и/или фармацевтически приемлемой соли опухолевые клетки могут начать презентировать антиген, например, антиген, на который целенаправленно воздействует популяция сконструированных T-клеток. В некоторых вариантах осуществления популяция сконструированных T-клеток может контактировать с презентирующими антиген опухолевыми клетками и уничтожать их.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает средство терапии на основе ингибитора контрольных точек, например, средство терапии на основе любого ингибитора контрольных точек, раскрытое в данном документе. Контрольные точки иммунного ответа представляют собой ингибиторные пути, которые замедляют или останавливают иммунные реакции и предотвращают избыточное повреждение тканей вследствие неконтролируемой активности иммунных клеток. Применяемые в данном документе термины "ингибитор контрольных точек" и "средство терапии на основе ингибитора контрольных точек" используются взаимозаменяемо для обозначения любого терапевтического средства, в том числе любого низкомолекулярного химического соединения, антитела, молекулы нуклеиновой кислоты или полипептида или любых их фрагментов, которое ингибирует один или несколько ингибиторных путей, за счет чего обеспечивается более функциональная иммунная активность. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе ингибитора контрольных точек предусматривает введение по меньшей мере одного ингибитора контрольных точек пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает неоантигенную вакцину. В некоторых вариантах осуществления лечение предусматривает введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и введение неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит опухолевый неоантиген и/или неоантиген, образование которого индуцировано с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления лечение дополнительно предусматривает введение средства терапии на основе ингибитора контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе ингибитора контрольных точек целенаправленно воздействует на PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR и/или KIR. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе ингибитора контрольных точек целенаправленно воздействует на PD1/PDL1 (например, является антителом к PD1 или антителом к PDL1). В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе ингибитора контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4 (например, является антителом к CTLA4). В некоторых вариантах осуществления лечение предусматривает введение средства комбинированной терапии, содержащего неоантигенную вакцину, после первого (i) введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; и (ii) выявления присутствия неоантигена (например, неоантигена из неоантигенной вакцины). В некоторых вариантах осуществления экспрессию неоантигена отслеживают на протяжении всего курса лечения. В некоторых вариантах осуществления лечение прекращают, если неоантигены не обнаруживаются.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе также раскрыты способы лечения пациента посредством индуцирования образования антигенов в опухолевых клетках, на которые может целенаправленно воздействовать иммунная система пациента, осуществляя клиренс. Без ограничения теорией, в некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может обеспечивать продуцирование неоантигенов, которые индуцируют иммунный ответ, индуцируют иммунный ответ на двухнитевую РНК например, в результате повторной экспрессии эндогенных ретровирусов, присутствующих в интроне, и/или продуцирование неоантигенов, которые индуцируют иммуногенную гибель клеток.
Применяемый в данном документе термин "неоантиген" относится к любому антигену, воздействию которого иммунная система ранее не подвергалась, который возникает в результате одной или нескольких опухолеспецифических мутаций и/или в результате воздействия на опухоль по меньшей мере одного соединения, выбранного из по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Опухолеспецифические мутации могут включать миссенс-мутации, сдвиги рамки считывания, транслокации и варианты сплайсинга mRNA, а также мутации, которые влияют на посттрансляционный процессинг, такой как фосфорилирование и гликозилирование. В некоторых вариантах осуществления такие иллюстративные мутации могут быть получены в результате несинонимичных изменений в кодирующей последовательность и/или мутаций, которые изменяют процессинг mRNA (например, сплайсинг). В некоторых вариантах осуществления все из этих иллюстративных мутаций могут приводить к молекулярным изменениям, которые могут распознаваться соответствующим T-клеточным рецептором. В некоторых вариантах осуществления иллюстративный неоантиген представляет собой неоантиген, образование которого индуцировано доставкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может индуцировать новый вариант сплайсинга mRNA, что приводит к трансляции белков, содержащих один или несколько новых пептидных доменов, воздействию которых иммунная система ранее не подвергалась. В некоторых вариантах осуществления опухолеспецифические мутации могут представлять собой варианты сплайсинга mRNA, обусловленные доставкой или введением по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
Без ограничения теорией, в некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III, и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может индуцировать новый вариант сплайсинга mRNA (например, пропуск экзона, сохранение интрона), что приводит к изменению открытых рамок считывания и/или кодирующих последовательностей различных генов. В некоторых вариантах осуществления данные измененные гены транслируются в белки, содержащие один или несколько новых пептидных доменов, распознаваемых иммунной системой как чужеродные. В некоторых вариантах осуществления один или несколько новых пептидных доменов не существуют в белках или в любой другой части протеома человека в отсутствие лечения с помощью соединения. В некоторых вариантах осуществления белки, содержащие один или несколько новых пептидных доменов, могут разрушаться под действием протеасомы с образованием новых пептидных фрагментов, которые выступают в качестве субстратов для механизмов иммунопептидной презентации, например, посредством презентации с участием MHC. В некоторых вариантах осуществления новые пептидные фрагменты, представляющие неоантигены, могут быть презентированы в MHC1-связанном пептидоме, например, на опухолевых клетках.
В некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может привести к одному или нескольким свойственным опухолевым клеткам событиям (например, прекращению роста клеток). В некоторых вариантах осуществления свойственное(-ые) опухолевым клеткам событие(-я) могут приводить к (1) усилению контакта с фагоцитами (Bracci et al. (2014) Cell Death Differ. 21(1):15-25); (2) перемещению новых пептидных фрагментов в дренирующий опухоль лимфатический узел для контакта с антигенпрезентирующими клетками; (3) процессингу в антигенпрезентирующих клетках новых пептидных фрагментов из фагоцитированной опухолевой клетки и презентации фрагментов в качестве неоантигенов популяциям циркулирующих наивных T-клеток; (4) взаимодействию новых пептидных фрагментов с T-клетками, экспрессирующими рецепторы, которые распознают фрагменты в качестве неоантигенов; (5) созреванию и активации эффекторных T-клеток, обуславливающих ответы (например, CD4+ и/или CD8+ T-клеток); и/или (6) контакту T-клеток с дополнительными опухолевыми клетками, подвергнутыми обработке с помощью соединения и презентирующими новые пептидные фрагменты, представляющие собой неоантигены, на своей поверхности в составе комплексов с MHC1. В некоторых вариантах осуществления свойственное(-ые) опухолевым клеткам событие(-я) может(-гут) приводить либо непосредственно, либо опосредованно к привлечению T-клеток с эффекторной функцией и/или уничтожению опухолевых клеток, презентирующих неоантиген.
Также, без ограничения теорией, в некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может вызывать повторную экспрессию эндогенных ретровирусов, присутствующих в интроне, что приводит к иммунному ответу на двунитевую РНК.
Дополнительно, без ограничения теорией, в некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может привести к иммуногенной гибели клеток, обусловленной индуцированным соединением высвобождением образованных в результате мутации неоантигенов. В некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может индуцировать иммунный ответ на двунитевую РНК. В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ на двухнитевую РНК может возникать в результате повторной экспрессии эндогенных ретровирусов, присутствующих в интроне. В некоторых вариантах осуществления иммунный ответ на двухнитевую РНК может приводить к гибели опухолевых клеток. В некоторых вариантах осуществления доставка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может индуцировать иммуногенную гибель клеток. В некоторых вариантах осуществления иммуногенная гибель клеток может быть вызвана высвобождением образованных в результате мутации неоантигенов и/или иммунным ответом хозяина на опухолевые клетки.
Соответственно, в некоторых вариантах осуществления раскрыты способы лечения, включающие индуцирование образования неоантигенов посредством введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение сниженной дозировки по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, чем было бы необходимо в случае отсутствия индуцирования образования неоантигенов. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение одной или нескольких начальных индуцирующих доз для продуцирования неоантигенов и индуцирования иммунного ответа (например, превращения наивных T-клеток в клетки памяти) с последующим снижением дозировки или частоты введения (т.е. вследствие комбинированного эффекта по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и иммунного целенаправленного воздействия на неоантигены). В некоторых вариантах осуществления лечение может предусматривать введение комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования обусловленного неоантигенами иммунного ответа и по меньшей мере одного дополнительного средства терапии (например, второго средства противораковой терапии). Например, в некоторых вариантах осуществления лечение может предусматривать введение комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования обусловленного неоантигенами иммунного ответа и одного или нескольких ингибиторов контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления лечение может предусматривать введение комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования обусловленного неоантигенами иммунного ответа и одного или нескольких цитокинов или аналогов цитокина. В некоторых вариантах осуществления лечение может предусматривать введение комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования обусловленного неоантигенами иммунного ответа и одного или нескольких неоантигенных вакцин. В некоторых вариантах осуществления лечение может предусматривать введение комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования обусловленного неоантигенами иммунного ответа и одной или нескольких сконструированных T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (например, CAR-T).
В некоторых вариантах осуществления неоантигены могут применяться для мониторинга эффективности лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Например, после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно получать образец от пациента (например, биоптат опухоли) и подвергать его скринингу на неоантигены или маркеры иммунного или воспалительного ответа. Если неоантиген и/или иммунный ответ обнаружены, может проводиться дополнительное лечение, например, при сниженной дозировке.
В некоторых вариантах осуществления раскрыты способы лечения, включающие индуцирование иммунного ответа на двухнитевую РНК посредством введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления раскрыты способы лечения, предусматривающие индуцирование иммуногенной гибели клеток посредством введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно комбинировать с введением любого известного средства противораковой терапии. Примеры существующих в настоящее время стратегий активации иммунитета, доступных для лечения онкологических заболеваний, включают без ограничения лечение с помощью молекул, являющихся ингибиторами контрольных точек иммунного ответа (ICI), лечение с помощью цитокинов или аналогов цитокина, вакцинацию с помощью противоопухолевых вакцин и конструирование T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (например, размножения инфильтрирующих опухоли лимфоцитов или CAR-T). Эти технологии преимущественно направлены на усиление или индуцирование иммунного ответа на уже существующие опухолевые антигены (либо мутации, либо аберрантную экспрессию белков клеточной поверхности). Одна или несколько из этих стратегий могут предусматривать одну или несколько мутаций, которые способны индуцировать развитие T-клеточного ответа на антиген. Например, ответы пациента на ингибирование контрольных точек могут коррелировать с мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями. Кроме того, могут применяться подходы с использованием противораковой вакцины, которые основаны на предварительно существующих мутациях и антигенности этих мутаций.
Соединения формулы I, соединения формулы II, соединения формулы III и фармацевтически приемлемые соли любого из вышеуказанных соединений могут вызывать широкий диапазон изменений в транскриптоме, которые возникают в разных типах клеток. Трансляция этих измененных mRNA может обеспечивать стабильные и воспроизводимые измененные белки, которые продуцируют MHC1-связываемые неопептиды, характеризующиеся высокой аффинностью с различными изотипами молекул HLA. Без ограничения теорией, вследствие большого числа изменений в транскриптоме и протеоме лечение с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может увеличивать число потенциально реакционноспособных неоантигенов для улучшенного вовлечения в адаптивный иммунный ответ.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена путем приведения в контакт неопластической клетки с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ индуцирования иммунного ответа на двунитевую РНК путем приведения в контакт неопластической клетки с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ индуцирования иммуногенной гибели клеток путем приведения в контакт неопластической клетки с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена из гематологического злокачественного новообразования или солидной опухоли. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из B-клеточного злокачественного новоорбазования, лейкоза, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из острого миелоидного лейкоза и множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из рака молочной железы (например, HER2-положительного рака молочной железы), рака желудка (например, аденокарциномы желудка), рака предстательной железы, рака яичника, рака легкого (например, аденокарциномы легкого), рака матки (например, серозной карциномы эндометрия матки), карциномы слюнных желез, меланомы, рака толстой кишки и рака пищевода. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из HER2-положительного рака молочной железы, аденокарциномы желудка и рака предстательной железы.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно предусмотрен способ индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена и/или развития Т-клеточного ответа у субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие путем введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Также в данном документе в некоторых вариантах осуществления предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа.
В различных других вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ индуцирования иммунного ответа на двунитевую РНК у субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Также в данном документе в некоторых вариантах осуществления предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует иммунный ответ на двунитевую РНК.
В еще других вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ индуцирования иммуногенной гибели клеток у субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В данном документе в некоторых вариантах осуществления дополнительно предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, включающий по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует иммуногенную гибель клеток.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует иммуногенную гибель клеток, в комбинации с одним или несколькими дополнительными видами терапий, предусматривающими второе средство.
В некоторых вариантах осуществления в терапевтических способах, описанных в данном документе, количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго вводимого средства снижено вследствие индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена и/или развития Т-клеточного ответа по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства. В некоторых вариантах осуществления вводимое количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства. В некоторых вариантах осуществления частота введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства на по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% меньше по сравнению со стандартной схемой введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства. В некоторых вариантах осуществления вводимое количество и/или дозировка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, или второго средства приводят к более низкой системной токсичности и/или улучшенной переносимости.
Применяемый в данном документе термин "стандартная дозировка" или "стандартная схема введения" относится к любой обычной или общепринятой схеме введения терапевтического средства, например, к схеме, предложенной производителем, одобренной регулирующими органами или иным образом протестированной на субъектах-людях для удовлетворения потребностей среднестатистического пациента. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое средство представляет собой по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, с противораковой активностью.
Например, стандартная схема введения трастузумаба, иллюстративного антитела к HER2, может предусматривать внутривенное введение 8 мг/кг за 90 мин. (неделя 1), а затем внутривенное введение 6 мг/кг за 30-90 мин через каждые 3 недели (от недели 4 до конца цикла терапии) (Herceptin® (трастузумаб), дополнение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2017).
В качестве другого примера, стандартная схема введения ипилимумаба, иллюстративного антитела к CTLA4, являющегося ингибитором контрольных точек, может предусматривать внутривенное введение 3 мг/кг за 90 мин через каждые 3 недели в виде 4 доз (Yervoy® (ипилимумаб), дополнение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2018). Другая стандартная схема введения ипилимумаба может предусматривать внутривенное введение 10 мг/кг за 90 мин. через каждые 3 недели в виде 4 доз, а затем 10 мг/кг через каждые 12 недель в течение не более 3 лет (Yervoy® (ипилимумаб), дополнение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2018).
В качестве другого примера, стандартная схема введения ниволумаба, иллюстративного антитела к PD1, являющегося ингибитором контрольных точек, может предусматривать внутривенное введение 3 мг/кг за 60 мин через каждые 2 недели (Opdivo® (ниволумаб), маркировка, соответствующая требованиям FDA, 2015).
В качестве другого примера, стандартная схема введения атезолизумаба, иллюстративного антитела к PDL1, являющегося ингибитором контрольных точек, может предусматривать внутривенное введение 1200 мг за 60 мин. через каждые 3 недели (Tecentriq® (атезолизумаб), дополнение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2018).
В качестве еще одного примера, стандартная схема введения T-DM1, иллюстративного конъюгата антитела к HER2 и лекарственного средства, может предусматривать внутривенное введение 3,6 мг/кг за 90 мин через каждые 3 недели (Kadcyla® (T-DM1), дополнение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2016).
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, могут дополнительно включать введение по меньшей мере одного дополнительного средства терапии (например, ингибитора контрольных точек, неоантигенной вакцины, цитокина или аналога цитокина, CAR-T и т.д.). В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного вводимого средства терапии снижено вследствие индуцирования образования по меньшей мере одного неоантигена и/или развития Т-клеточного ответа по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного вводимого средства терапии снижено вследствие индуцирования иммунного ответа на двунитевую РНК по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного вводимого средства терапии снижено вследствие индуцирования иммуногенной гибели клеток, по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления частота введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного вводимого средства терапии на по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% меньше по сравнению со стандартной схемой введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления вводимое количество и/или дозировка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии приводят к более низкой системной токсичности и/или улучшенной переносимости.
В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают до введения по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В других вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают после введения по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В еще других вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают одновременно с введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой или исходной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного дополнительного средства терапии повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой или начальной дозировкой по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления повторное введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, осуществляют одновременно с повторным введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, осуществляют последовательно или с разнесением во времени с повторным введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает введение ингибитора контрольных точек, например, любого ингибитора контрольных точек, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется непереносимостью, невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью ингибитора контрольных точек при введении его по отдельности. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR и/или KIR. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек представляет собой антитело, обладающее активностью ингибитора или агониста в отношении своей мишени. В некоторых вариантах осуществления целенаправленное воздействие ингибитора контрольных точек обеспечивается с помощью ингибиторного антитела или другой подобной ингибиторной молекулы. В других вариантах осуществления целенаправленное воздействие ингибитора контрольных точек обеспечивается с помощью антитела-агониста или другой подобной молекулы-агониста.
В некоторых других вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает введение неоантигенной вакцины, например, любой неоантигенной вакцины, раскрытой в данном документе. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят до введения неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят после введения неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят одновременно с введением неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигенный пептид содержит одну или более чем одну неоантигенную последовательность.
В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность и/или антигенная часть непосредственно не перекрываются с канонической пептидной последовательностью (например, любой из иллюстративных канонических пептидных последовательностей, перечисленных в таблице 13) или не состоят из нее.
Применяемый в данном документе термин "антигенная часть" или "антигенный фрагмент" неоантигенной последовательности относится к одному или нескольким фрагментам неоантигенной последовательности, которые сохраняют способность индуцировать T-клеточный ответ (например, антиген-специфическое размножение и/или созревание популяции(-ий) эффекторных T-клеток). В некоторых вариантах осуществления антигенная часть может также сохранять способность к интернализации, процессингу и/или презентированию антигенпрезентирующими клетками (например, дендритными клетками). В некоторых вариантах осуществления антигенная часть также сохраняет функцию примирования T-клеток. В некоторых вариантах осуществления длина антигенной части неоантигенной последовательности находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина антигенной части неоантигенной последовательности находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина антигенной части неоантигенной последовательности находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина антигенной части неоантигенной последовательности находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления антигенную часть неоантигенной последовательности (например, антигенная часть под любым из SEQ ID NO: 30-57) или кодирующую ее mRNA составляют в виде неоантигенной вакцины.
Иллюстративный вариант осуществления антигенной части представляет собой участок(участки), фланкирующий(-ие) аминокислоты 45-53 из SEQ ID NO: 30. Другой иллюстративный вариант осуществления антигенной части представляет собой участок(участки), фланкирующий(-ие) аминокислоты 82-90 из SEQ ID NO: 30. В некоторых вариантах осуществления антигенная часть способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у субъекта (например, HLA-A*02:01). В некоторых других вариантах осуществления антигенная часть способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 45% субъектов в популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления антигенная часть способна вызывать T-клеточный ответ в отношении опухоли, присутствующей у по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10% популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением.
В некоторых вариантах осуществления антигенная часть непосредственно не перекрывается с канонической пептидной последовательностью или не состоит из нее. Термин "каноническая пептидная последовательность", применяемый в данном документе, относится к любой непрерывной пептидной последовательности, присутствующей в протеоме человека в отсутствие контакта с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений (например, в отсутствие контакта с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений), и/или воздействию которой иммунная система ранее подвергалась. В некоторых вариантах осуществления каноническая пептидная последовательность происходит из открытой рамки считывания канонического транскрипта и/или кодируется ею. Иллюстративные канонические пептидные последовательности перечислены в таблице 13.
В некоторых вариантах осуществления, если вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, то каноническая пептидная последовательность может быть получена из 24 нуклеотидов, расположенных непосредственно на 5'-конце рамки до события аберрантного сплайсинга, индуцированного по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или может кодироваться ними. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления каноническая пептидная последовательность содержит или состоит из 8 аминокислот, расположенных непосредственно в направлении N-конца относительно неоантигенной последовательности, образование которой индуцировано по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления, если последовательность 5'-концевого экзона заканчивается концевым нуклеотидом кодона, каноническая пептидная последовательность заканчивается в конце экзона. В некоторых других вариантах осуществления, если последовательность 5'-концевого экзона заканчивается одним или двумя из трех нуклеотидов кодона, каноническая пептидная последовательность получена из 24 нуклеотидов, предшествующих неполному кодону, и/или кодируется ими. В некоторых вариантах осуществления 3'-концевые последовательности mRNA при событии аберрантного сплайсинга могут транслироваться в той же открытой рамке считывания, полученной 5'-концевого экзона вплоть до достижения стоп-кодона, после чего трансляция может заканчиваться. В некоторых вариантах осуществления, если событие аберрантного сплайсинга (например, пропуск экзона) приводит к сохранению открытой рамки считывания канонического транскрипта, C-концевая последовательность может транслироваться на дополнительные 24 нуклеотида, кодирующих 8 C-концевых аминокислот. В некоторых вариантах осуществления в данном контексте только участок вдоль аберрантного соединения экзонов может кодировать неоантигенную последовательность. В некоторых вариантах осуществления, если открытая рамка считывания сдвинута (например, при сохранении интрона), полная C-концевая последовательность (кодируемая 3'-концевой mRNA) может кодировать неоантигенную последовательность.
В некоторых вариантах осуществления антигенная часть неоантигенной последовательности выбрана посредством сравнения неоантигенной последовательности с канонической пептидной последовательностью и выбора части неоантигенной последовательности, которая непосредственно не перекрывается с канонической пептидной последовательностью, не состоит из нее и/или не выравнивается с ней. В некоторых вариантах осуществления антигенную часть неоантигенной последовательности можно подвергать скринингу в отношении антигенности и/или функции примирования T-клеток таким же образом, как и полноразмерные неоантигенные последовательности (например, неоантигенную последовательность, из которой получена антигенная часть). В некоторых вариантах осуществления антигенную часть неоантигенной последовательности оценивают в отношении антигенности и/или функции примирования T-клеток с применением анализа примирования T-клеток, такого как иллюстративные эксперименты с примированием T-клеток, описанные в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой неоантигенную последовательность, специфическую для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой персонализированную неоантигенную вакцину для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность, применяемая для создания персонализированной неоантигенной вакцины для субъекта, способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у субъекта. В некоторых вариантах осуществления персонализированная неоантигенная вакцина выбрана посредством идентификации неоантигенов, экспрессируемых в опухоли субъекта, например, после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и выбора вакцины, содержащей неоантигенную последовательность, наблюдаемую в опухоли пациента.
Термин "персонализированная", когда его применяют для описания неоантигенной вакцины, относится к вакцине, созданной посредством идентификации одного или нескольких неоантигенов, продуцируемых у пациента, предпочтительно неоантигена, идентифицированного у пациента после воздействия по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и затем применения одного или нескольких из этих неоантигенов в качестве основы вакцины для того же пациента. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления пациенту вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и проводят скрининг в отношении неоантигенов, продуцируемых при лечении. В некоторых вариантах осуществления выбранная неоантигенная вакцина содержит неоантигенный пептид или mRNA, раскрытые в данном документе, и присутствие которых у пациента подтверждено после воздействия по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или пептидную или mRNA-вакцину можно вводить пациенту один раз или повторно. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления один или несколько из таких неоантигенов применяют для создания персонализированной вакцины, которую вводят пациенту. В некоторых вариантах осуществления один или несколько неоантигенов, применяемых для создания персонализированной вакцины, обладают аффинностью связывания с одним или несколькими специфическими для пациента аллелями HLA. В некоторых вариантах осуществления у пациента экспрессируется один или несколько аллелей MHC1, которые связываются с одним или несколькими неоантигенами. Прогнозирование того, будет ли неоантиген связываться со специфическим аллелем MHC1, можно осуществлять с применением любого способа вычислительного прогнозирования, известного из уровня техники. Иллюстративные способы вычислительного прогнозирования раскрыты, например, в Meydan et al. (2013) BMC Bioinformatics 14(Suppl. 2):S13, который включен в данный документ посредством ссылки для таких способов.
В некоторых других вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную последовательность. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную вакцину.
Термин "универсальная", когда он применяется для описания неоантигенной вакцины, относится к вакцине, содержащей пептидную последовательность или последовательность mRNA, которые основаны на обычном(-ых) или известном(-ых) неоантигене(-ах), обнаруживаемом(-ых) посредством секвенирования неоантигенов, продуцируемых у многих пациентов и/или в образцах ткани пациентов, предпочтительно после воздействия по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Пептидная последовательность или последовательность mRNA, применяемые в вакцине, необязательно должны присутствовать у каждого пациента, а обнаруживаются у по меньшей мере нескольких пациентов или в образцах ткани пациентов. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или пептидную или mRNA-вакцину можно вводить пациенту один раз или повторно. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления данную пептидную последовательность или последовательность mRNA применяют для вакцинирования дополнительных пациентов. В некоторых вариантах осуществления пациенту вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и затем вводят пептидную или mRNA-вакцину на основе известного неоантигена для усиления иммунного ответа на неоантигены, продуцируемые под действием по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления пациенту вводят универсальную пептидную или mRNA-вакцину и затем вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность (или последовательности), применяемая для создания универсальной неоантигенной вакцины, выбрана на основе общей встречаемости аллеля MHC1 в приведенной популяции пациентов (Maiers et al. (2007) Hum. Immunol. 68(9):779-88).
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность (например, универсальный неоантиген) способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 45% субъектов в популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна вызывать T-клеточный ответ на опухоль, присутствующую у по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10% популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность была идентифицирована посредством секвенирования по меньшей мере одного неоантигенного пептида или кодирующей его mRNA, образование которых индуцировано у субъекта посредством введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигенный пептид содержит неоантигенную последовательность, образование которой индуцировано путем приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый носитель (например, любой из иллюстративных носителей, описанных в данном документе). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигенный пептид связан с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель выбран из пептида, сывороточного альбумина, гемоцианина фисуреллы, иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, анатоксина или аттенуированного производного анатоксина, цитокина и хемокина. В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый носитель ковалентно связаны через линкер. В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый носитель экспрессируются в виде слитого белка. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый адъювант.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA кодирует одну или более одной неоантигенной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой неоантигенную последовательность, специфическую для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой персонализированную неоантигенную вакцину для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у субъекта.
В некоторых других вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную последовательность. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную вакцину. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 45% субъектов в популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна вызывать T-клеточный ответ на опухоль, присутствующую у по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10% популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность была идентифицирована посредством секвенирования белковой последовательности по меньшей мере одного неоантигена. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность была идентифицирована посредством секвенирования по меньшей мере одной mRNA, кодирующей неоантиген, образование которого индуцировано у субъекта посредством введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA кодирует неоантигенную последовательность, образование которой индуцировано путем приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый носитель (например, любой из иллюстративных носителей, описанных в данном документе). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA связана с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель выбран из пептида, сывороточного альбумина, гемоцианина фисуреллы, иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, анатоксина или аттенуированного производного анатоксина, цитокина и хемокина. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый адъювант. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная mRNA инкапсулирована с помощью инкапсулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующее средство представляет собой липосому. В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующее средство представляет собой наночастицу.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает введение цитокина или аналога цитокина, например, любого цитокина или аналога цитокина, раскрытых в данном документе. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется непереносимостью, невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью цитокина или аналога цитокина при введении их по отдельности. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают средство усиления для T-клеток. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ и/или TNFα. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-2, IL-10, IL-12 и/или IL-15. В некоторых вариантах осуществления введение цитокина или аналога цитокина усиливает примирование T-клеток после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вследствие индуцирования образования и презентации неоантигенов.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает введение сконструированных T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (т. е. CAR-T), например, любое средство терапии на основе CAR-T, раскрытое в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, могут дополнительно включать обнаружение одного или нескольких неоантигенов и/или Т-клеточного ответа у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и, необязательно, продолжение введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, если обнаружены один или несколько неоантигенов и/или Т-клеточный ответ. В некоторых вариантах осуществления обнаружение одного или нескольких неоантигенов и/или Т-клеточного ответа у субъекта указывает на эффективность лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления лечение с помощью дополнительного средства терапии вместе с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, продолжают, если обнаружены один или несколько неоантигенов и/или Т-клеточный ответ. В некоторых вариантах осуществления лечение продолжают при сниженной дозировке и/или частоте, если обнаружены один или несколько неоантигенов и/или T-клеточный ответ.
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, могут дополнительно включать обнаружение иммунного ответа на двунитевую РНК у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и необязательно продолжение введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, если обнаружен иммунный ответ на двунитевую РНК. В некоторых вариантах осуществления обнаружение иммунного ответа на двунитевую РНК у субъекта указывает на эффективность лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления лечение с помощью дополнительного средства терапии вместе с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, продолжают, если обнаружен иммунный ответ на двунитевую РНК. В некоторых вариантах осуществления лечение продолжают при сниженной дозировке и/или частоте, если обнаружен иммунный ответ на двухнитевую РНК.
В некоторых вариантах осуществления способы, описанные в данном документе, могут дополнительно включать обнаружение иммуногенной гибели клеток у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и необязательно продолжение введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, если обнаружена иммуногенная гибель клеток. В некоторых вариантах осуществления обнаружение иммуногенной гибели клеток у субъекта указывает на эффективность лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления лечение с помощью дополнительного средства терапии вместе с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, продолжают, если обнаружена иммуногенная гибель клеток. В некоторых вариантах осуществления лечение продолжают при сниженной дозировке и/или частоте, если обнаружена иммуногенная гибель клеток.
В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 150 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 100 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 50 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет неопластическое нарушение, например, гематологическое злокачественное новообразование или солидную опухоль, или имеет подозрение на его наличие. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из B-клеточного злокачественного новообразования, лейкоза, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из острого миелоидного лейкоза и множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из рака молочной железы, рака желудка, рака предстательной железы, рака яичника, рака легкого, рака матки, карциномы слюнных протоков, меланомы, рака толстой кишки и рака пищевода. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из HER2-положительного рака молочной железы, аденокарциномы желудка и рака предстательной железы.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретение дополнительно предусмотрен способ лечения субъекта, у которого имеется неопластическое нарушение или подозрение на его наличие, включающий: (a) введение субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, где введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа; (b) обнаружение одного или нескольких неоантигенов и/или Т-клеточного ответа у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; и (c) продолжение введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, если обнаружены один или несколько неоантигенов и/или Т-клеточный ответ. В некоторых вариантах осуществления обнаружение одного или нескольких неоантигенов и/или Т-клеточного ответа у субъекта указывает на эффективность лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления один или несколько неоантигенов содержат аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 1-29. В некоторых вариантах осуществления один или несколько неоантигенов содержат аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления один или несколько неоантигенов содержат аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления один или несколько неоантигенов содержат аминокислотную последовательность под любым из SEQ ID NO: 10-13.
В некоторых вариантах осуществления пациента, у которого имеется рак, описанный в данном документе, можно лечить с помощью комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средства терапии на основе ингибитора контрольных точек.
Как было показано, лечение пациентов с помощью ингибирования контрольных точек иммунного ответа имеет хорошую эффективность при определенных клинических показаниях. Недавно FDA одобрило применение ингибитора контрольных точек у пациентов с опухолями, проявляющими высокую микросателлитную нестабильность, независимо от происхождения ткани. Данная регистрация частично была основана на наблюдении того, что значения частоты ответа положительно коррелируют с мутационной нагрузкой (Rizvi et al. (2015) Science 348(6230):124-8; Hellmann et al. (2018) Cancer Cell 33(5):853-861). Оценки из литературы варьируют по абсолютным числам и в зависимости от происхождения, но в общем подтверждают, что выше порогового значения ~150-250 мутаций, вероятность ответа повышается. Анализ данных TCGA демонстрирует, что большой процент развивающихся у взрослых опухолей разного происхождения имеет сравнительно небольшую мутационную нагрузку с несинонимичными изменениями (Vogelstein et al. (2013) Science 339:1549-58). Большинство линий происхождения характеризуются средними значениями частоты несинонимичных мутаций ~30-80 на пациента, значительно ниже пороговых значений, требуемых для повышения вероятности ответа на ингибиторы контрольных точек.
Например, как было показано, HER2-положительный рак молочной железы имеет в среднем ~60 несинонимичными мутаций, присутствующих в образце пациента. Однако пороговое значение для эффективности лечения с помощью ингибитора контрольных точек, как упомянуто выше, по оценками находится в диапазоне ~150-250 несинонимичных мутаций, т.е. пациенты со значением выше данного порогового значения более вероятно будут демонстрировать полную ремиссию, частичную ремиссию и/или стабилизацию заболевания, в то время как у пациентов со значением ниже данного порогового значения более вероятно проявляется прогрессирование заболевания. Следовательно, требуются стратегии для увеличения наблюдаемого числа не синонимичных мутаций и/или неоантигенов, присутствующих на опухолевых клетках, и они могут увеличивать общую вероятность ответов, например, на средство терапии на основе ингибитора контрольных точек. Поскольку цитокины (и их аналоги) действуют посредством подобного механизма действия, такие стратегии также могут повышать общую вероятность ответа на средства терапии на основе цитокинов.
В настоящее время значения частоты ответа при HER2-положительном раке молочной железы составляют ~15-25% (CTI NCT02129556). В некоторых вариантах осуществления, раскрытых в данном документе, лечение с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, в комбинации с ингибитором контрольных точек и/или средством терапии на основе цитокина может увеличивать такие значения частоты ответа. В некоторых вариантах осуществления лечение с помощью терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, в комбинации с ингибитором контрольных точек и/или средством терапии на основе цитокина можно применять в отношении любой развивающейся у взрослых опухоли, в частности тех, у которых медианная частота несинонимичных мутаций ниже рассчитанного порогового значения ~150 мутаций. В некоторых вариантах осуществления иллюстративные типы рака, подходящие для лечения с помощью терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, отдельно или в комбинации с дополнительным средством терапии (например, средством терапии на основе ингибитора контрольных точек, средством терапии на основе цитокина), включают без ограничения рак пищевода, неходжкинскую лимфому, колоректальный рак, рак головы и шеи, рак желудка, рак эндометрия, аденокарциному поджелудочной железы, рак яичника, рак предстательной железы, печеночноклеточный рак, глиобластому, рак молочной железы (например, HER2-положительный рак молочной железы), рак легкого (например, немелкоклеточный рак легкого), хронический лимфоцитарный лейкоз и острый миелоидный лейкоз. Другие иллюстративные подходящие типы рака определены, например, в Vogelstein et al. (2013) Science 339:1549-58, который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Поскольку применение многих средств терапии на основе ингибитора контрольных точек обусловлено постоянной экспрессией опухоль-ассоциированных антигенов, для эффективности и для "повторной стимуляции" популяций реактивных T-клеток необходимо регулярные бустерные введения средств лечения. Индуцибельная природа неоантигенов, описанных в данном документе, которые получены под действием по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, обеспечивает терапевтические схемы введения, которые могут быть разработаны для усиления иммунного ответа T-клеток, реактивных в отношении неоантигена, в то же время ограничивающие истощение T-клеток, зачастую вызванное хронической стимуляцией антигеном. Например, в некоторых вариантах осуществления начальную дозу по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят субъекту для запуска аберрантного сплайсинга и продуцирования неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления по прошествии периода времени, необходимого для продуцирования белка и презентации антигена, затем субъекту вводят начальную дозу ингибитора контрольных точек для стимуляции и/или усиления примирования и размножения эффекторных Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления период ожидания между дозами по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитора контрольных точек составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6 или приблизительно 7 дней. В некоторых вариантах осуществления период ожидания составляет от приблизительно 3 дней до приблизительно 5 дней.
В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR. В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект комбинации терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитора контрольных точек может быть аддитивным или супераддитивным.
В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают до введения ингибитора контрольных точек.
В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают после введения ингибитора контрольных точек.
В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают одновременно с введением ингибитора контрольных точек, например, в едином составленном продукте или в отдельных составленных продуктах, вводимых за одну процедуру.
В некоторых вариантах осуществления после периода, необходимого для примирования и размножения Т-клеток, субъекту затем вводят вторую или последующую дозу по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для запуска повторной презентации неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления период ожидания между начальной дозой ингибитора контрольных точек и второй или последующей дозой, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4 или приблизительно 5 недель. В некоторых вариантах осуществления период ожидания составляет приблизительно 3 недели. В некоторых вариантах осуществления после введения второй или последующей дозы по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, иммунная система может контактировать с презентирующими неоантиген опухолевыми клетками и/или вызывать уничтожение опухолевых клеток. В некоторых вариантах осуществления затем субъекту вводят вторую или последующую дозу ингибитора контрольных точек для дополнительного размножения популяции эффекторных T-клеток памяти после обеспечения вторичного примирования и размножения Т-клеток.
В некоторых вариантах осуществления период ожидания между начальной дозой, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и второй или последующей дозой ингибитора контрольных точек составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4 или приблизительно 5 недель. В некоторых вариантах осуществления период ожидания составляет приблизительно 3 недели.
В некоторых вариантах осуществления введение доз, содержащих терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, согласно данной иллюстративной начальной схеме лечения может быть "пульсирующим", т.е. терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно вводить дозами с длительными интервалами (например, приблизительно каждые 4 недели, приблизительно каждые 5 недель, приблизительно каждые 6 недель) для обеспечения презентации антигена, привлечения Т-клеток, и/или уничтожения опухолевых клеток, и/или восстановления популяции Т-клеток памяти. В некоторых вариантах осуществления в более поздние моменты времени лечение с помощью терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно комбинировать с одним или несколькими ингибиторами контрольных точек, целенаправленно воздействующих путем восстановления эффекторной функции истощенных популяций Т-клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления в более поздние моменты времени лечение с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно комбинировать с одним или несколькими ингибиторами контрольных точек, целенаправленно воздействующими на PD1/PDL1, LAG3 и/или TIM3. В некоторых вариантах осуществления пульсирующий характер презентации неоантигена и примирования может обеспечивать введение ингибитора контрольных точек и/или по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, менее часто и/или в более низких дозах. В некоторых вариантах осуществления пульсирующий характер презентации неоантигена может обеспечивать один или несколько положительных эффектов лечения для ингибитора контрольных точек (например, антитела к CTLA4, такого как ипилимумаб) в сравнении с ингибитором контрольных точек, вводимым без одновременного введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, например, за счет снижения потенциального риска нежелательных реакций, часто наблюдаемых в случае стандартной схемы введения ингибитора контрольных точек.
В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек представляет собой ингибитор пути антигена, ассоциированного с цитотоксическими T-лимфоцитами (CTLA4). CTLA4, также известный как CD152, представляет собой белковый рецептор, который отрицательно регулирует иммунные ответы. CTLA4 конститутивно экспрессируется на регуляторных T-клетках, но его экспрессия повышается в обычных T-клетках только после активации. Подразумевается, что применяемый в данном документе термин "ингибитор CTLA4" относится к любому ингибитору CTLA4 и/или пути CTLA4. Иллюстративные ингибиторы CTLA4 включают без ограничения антитела к CTLA4. Антитела, блокирующие CTLA4, для применения у человека разрабатывали на основе активности в доклинических испытаниях, наблюдаемой на мышиных моделях противоопухолевого иммунитета. Иллюстративные антитела к CTLA4 включают без ограничения ипилимумаб (MDX-010) и тремелимумаб (CP-675,206), оба из которых являются полностью человеческими. Ипилимумаб представляет собой IgG1 со временем полужизни в плазме крови, составляющим примерно 12-14 дней; тремелимумаб представляет собой IgG2 со временем полужизни в плазме крови, составляющем примерно 22 дня. См., например, Phan et al. (2003) Pr°C Natl Acad Sci USA. 100:8372-7; Ribas et al. (2005) J Clin Oncol. 23:8968-77; Weber et al. (2008) J Clin Oncol. 26:5950-6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA4 представляет собой ипилимумаб.
В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек представляет собой ингибитор пути белка 1 программируемой клеточной гибели (PD1). Путь белка 1 программируемой клеточной гибели (PD1) представляет главный переключатель иммунного контроля, который может быть задействован опухолевыми клетками для преодоления активного иммунного надзора T-клеток. Лиганды для PD1 (PDL1 и PDL2) конститутивно экспрессируются или могут быть индуцированы в различных опухолях. Было обнаружено, что высокий уровень экспрессии PDL1 (и в меньшей степени PDL2) на опухолевых клетках коррелирует с плохим прогнозом и слабой выживаемостью при различных других типах солидных опухолей. Кроме того, было высказано предположение, что PD1 контролирует размножение опухолеспецифических T-клеток у пациентов со злокачественной меланомой. Эти наблюдения предполагают то, что путь PD1/PDL1 играет важнейшую роль в ускользании опухоли от распознавания иммунной системой и может считаться привлекательной мишенью для терапевтического вмешательства. Подразумевается, что применяемый в данном документе термин "ингибитор PD1" относится к любому ингибитору PD1 и/или пути PD1. Иллюстративные ингибиторы PD1 включают без ограничения антитела к PD1 и к PDL1. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек представляет собой антитело к PD1. Иллюстративные антитела к PD1 включают без ограничения ниволумаб и пемпролизумаб (MK-3475). Ниволумаб, например, представляет собой полностью человеческое антитело к ингибитору контрольных точек иммунного ответа PD1 на основе иммуноглобулина G4 (IgG4), которое нарушает взаимодействие рецептора PD1 с его лигандами PDL1 и PDL2, тем самым обеспечивая ингибирование клеточного иммунного ответа (Guo et al. (2017) J Cancer 8(3):410-6). В некоторых вариантах осуществления антитело к PD1 представляет собой ниволумаб. Пембролизумаб, например, представляет собой эффективное и высокоселективное гуманизированное mAb, относящееся к изотипу IgG4/каппа, разработанное для непосредственного блокирования взаимодействия между PD1 и его лигандами: PDL1 и PDL2. Пембролизумаб значительно увеличивает опосредованные T-лимфоцитами иммунные ответы в культивируемых клетках крови от здоровых доноров-людей, пациентов с раком и приматов. Также сообщалось о том, что пембролизумаб модулирует уровень интерлейкина-2 (IL-2), фактора некроза опухоли альфа (TNFα), интерферона-гамма (IFNγ) и других цитокинов. Иллюстративные антитела к PDL1 включают без ограничения атезолизумаб, авелумаб и дурвалумаб. Атезолизумаб, например, представляет собой гуманизированное mAb на основе IgG1, которое, как сообщалось, блокирует взаимодействие PD1/PDL1 путем целенаправленного воздействия на экспрессированный PDL1 на различных видах злокачественных клеток. Данная блокировка пути PD1/PDL1 может стимулировать иммунные защитные механизмы против опухолей (Abdin et al. (2018) Cancers (Basel) 10(2):32). В некоторых вариантах осуществления антитело к PDL1 представляет собой атезолизумаб.
В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR и/или KIR. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует в качестве ингибиторного антитела или другой подобной ингибиторной молекулы (например, ингибиторного антитела к CTLA4 или к PD1/PDL1). В других определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек оказывает целенаправленное воздействие в качестве агониста для мишени; примеры из данного класса включают молекулы, стимулирующие мишени OX40, CD40 и/или GITR. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек, который целенаправленно воздействует на OX40, CD40 и/или GITR, представляет собой антитело-агонист. Антитела-агонисты, направленные против OX40, могут выполнять двойную роль: ингибировать супрессию под действием регуляторных T-клеток, при этом усиливать функции эффекторных T-клеток. Также было показано, что антитела-агонисты к GITR делают эффекторные T-клетки более устойчивыми к ингибированию, индуцированному регуляторными T-клетками (Karaki et al. (2016) Vaccines (Basel) 4(4):37). Подобным образом, антитела-агонисты к CD40 демонстрируют зависимую от T-клеток противоопухолевую активность. Активация CD40 на дендритных клетках увеличивает перекрестную презентацию опухолевых антигенов и, следовательно, число активированных эффекторных T-клеток, направленных на опухоль (Ellmark et al. (2015) Oncoimmunol. 4(7):e1011484).
В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4 (например, является антителом к CTLA4). В определенных вариантах осуществления целенаправленное воздействие на CTLA4 облегчает примирование и активацию наивных T-клеток. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на OX40 (например, является антителом к OX40). В определенных вариантах осуществления целенаправленное воздействие на OX40 усиливает размножение эффекторных T-клеток. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CD40 (например, является антителом к CD40). В определенных вариантах осуществления целенаправленное воздействие на CD40 подавляет "толерогенное" примирование T-клеток и/или образование регуляторных T-клеток. В определенных вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на GITR (например, является антителом к GITR). В определенных вариантах осуществления целенаправленное воздействие на GITR подавляет активность регуляторных T-клеток. В определенных вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапии (например, эффект в отношении по меньшей мере одного симптома или риска/скорости прогрессирования заболевания), в составе которой терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средство, целенаправленно воздействующее на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR, является аддитивным. В некоторых вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапии терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средства, нацеленного на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR, является супераддитивным (т. е. синергическим).
Стратегии лечения на основе ингибитора контрольных точек основаны на гипотезе, что лечение облегчает и/или усиливает примирование T-клеток при ответах на опухоли, которые характеризуются слабой или недостаточной антигенностью (например, CTLA4), или что лечение восстанавливает и/или усиливает T-клетки, которые отвечают на опухолевые антигены, но "истощились" вследствие постоянной презентации антигена (например, PD1, PDL1) (Chen and Mellman (2013) Immunity 39(1):1-10). Примеры подходящих средств терапии и средств для ингибирования контрольных точек, например, антитела к PD1, PDL1 или CTLA4, известны из уровня техники. См., например, WO 2001/014424 WO 2013/173223, WO 2016/007235.
Комбинирование этих ответов за счет примированных Т-клеток после терапии ингибитором контрольных точек с лечением для индуцирования образования неоантигенов в опухолевых клетках (например, путем введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений), на которые может реагировать примированная иммунная система, может обеспечивать благоприятный синергизм. Поскольку неоантигены, образованные под действием соединений, выбранных из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, еще не презентированы для примирования T-клеток, комбинация с ингибитором CTLA4 может быть особенно благоприятной. В некоторых вариантах осуществления лечение включает введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для индуцирования продуцирования неоантигенов, а также начальное введение ингибитора CTLA4 для стимуляции примирования CD8 Т-клеток, осуществляемое до, одновременно или после этого введения. В некоторых вариантах осуществления пациенту проводят дополнительные введения ингибитора CTLA4, например, для дополнительной стимуляции примирования и/или активации популяций CD8, реактивных в отношении неоантигена. В некоторых вариантах осуществления для увеличения презентации неоантигена в опухоли можно осуществлять дополнительные введения пациенту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Повторные введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средства терапии на основе ингибитора контрольных точек, могут происходить одновременно или с применением разнесенных во времени интервалах. В некоторых вариантах осуществления лечение дополнительно включает совместное лечение с помощью ингибитора PD1/PDL1, например, для восстановления эффекторной функции истощенных T-клеток, целенаправленно воздействующих на неоантиген в пределах микроокружения опухоли.
Применяемые в данном документе термины "комбинация" или "комбинированная терапия" относятся к введению терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вместе с дополнительным средством или средством терапии (например, ингибитором контрольных точек, цитокином или аналогом цитокина, неоантигенной вакциной, CAR-T), в рамках схемы лечения, предназначенной для обеспечения благоприятного (т. е. аддитивного или синергического) эффекта от совместного действия одного или нескольких вводимых средств. В некоторых вариантах осуществления комбинация также может включать одно или несколько дополнительных средств, в том числе без ограничения химиотерапевтических средств, средств, препятствующих ангиогенезу, и средств, которые снижают иммунную супрессию (например, второй ингибитор контрольных точек). Благоприятный эффект комбинации включает без ограничения фармакокинетическое или фармакодинамическое совместное действие, обеспечиваемое комбинацией терапевтических средств. Введение таких терапевтических средств в комбинации, как правило, осуществляют в течение определенного периода времени (например, минут, часов, дней или недель в зависимости от выбранной комбинации).
Применяемые в данном документе термины вводимый "в комбинации" или "совместное введение" означают, что два или более разных средств лечения доставляются в субъекта на протяжении времени, в течение которого субъект страдает медицинским патологическим состоянием (например, раком или неопластическим нарушением) в любом порядке. Например, в некоторых вариантах осуществления два или более средств лечения доставляются после того, как у субъекта было диагностировано заболевание или нарушение, и перед тем, как заболевание или нарушение были излечены или устранены, или когда субъект был идентифицирован как имеющий риск его развития, но до того как у субъекта развились симптомы заболевания. В некоторых вариантах осуществления все еще осуществляют доставку одного средства лечения, когда начинают доставку второго средства лечения, так что присутствует перекрывание. В некоторых вариантах осуществления доставку первого и второго средства лечения начинают в одно и то же время. Такие типы доставки иногда в данном документе называются "одновременной", "совместной" или "сопутствующей" доставкой. В других вариантах осуществления доставка одного средства лечения заканчивается перед началом доставки второго средства лечения. Данный тип доставки иногда в данном документе называется "поочередной" или "последовательной" доставкой.
В некоторых вариантах осуществления два средства лечения (например, по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитор контрольных точек) содержатся в одной и той же композиции. Такие композиции можно вводить в любой подходящей форме и с помощью любого подходящего пути. В других вариантах осуществления два средства лечения (например, по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитор контрольных точек) вводят в отдельных композициях в любой подходящей форме и с помощью любого подходящего пути. Например, в некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и композицию, содержащую ингибитор контрольных точек, можно вводить одновременно или последовательно в любом порядке в разные моменты времени; в любом случае их следует вводить достаточно близко по времени для обеспечения требуемого терапевтического или профилактического эффекта.
В вариантах осуществления, предусматривающих либо одновременную, либо последовательную доставку, лечение может быть более эффективным вследствие комбинированного введения. В некоторых вариантах осуществления первое средство лечения является более эффективным, например, эквивалентный эффект наблюдают с меньшим количеством первого средства лечения (например, при более низкой дозе), чем наблюдали бы, если первое средство лечения вводили в отсутствие второго средства лечения. В некоторых вариантах осуществления первое средство лечения является более эффективным, так что снижение тяжести симптома или другого параметра, ассоциированного с заболеванием или нарушением, является большим, чем наблюдали бы в случае доставки первого средства лечения в отсутствие второго средства лечения. В других вариантах осуществления аналогичную ситуацию наблюдают для второго средства лечения. В некоторых вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапии (например, эффект в отношении по меньшей мере одного симптома или риска/скорости прогрессирования заболевания) является аддитивным. В некоторых вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапия является супераддитивным.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, и/или у субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и по меньшей мере одного дополнительного средства терапии (например, средства терапии на основе ингибитора контрольных точек, цитокина или аналога цитокина, неоантигенной вакцины, CAR-T). В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует образование по меньшей мере одного неоантигена и/или развитие Т-клеточного ответа. В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует иммунный ответ на двунитевую РНК. В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, индуцирует иммуногенную гибель клеток. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии может предусматривать по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре или по меньшей мере пять дополнительных средств терапии. Например, в некоторых вариантах осуществления терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно вводить в комбинации с двумя видами средств терапии на основе ингибитора контрольных точек, т. е., с применением двух различных ингибиторов контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно вводить в комбинации со средством терапии на основе ингибитора контрольных точек и неоантигенной вакциной.
В некоторых вариантах осуществления комбинированной терапии вводимое количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления частота введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии на по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% меньше по сравнению со стандартной схемой введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления вводимое количество и/или дозировка по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или по меньшей мере одного дополнительного средства терапии приводят к более низкой системной токсичности и/или улучшенной переносимости.
В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают до введения по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают после введения по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают одновременно с введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, применяемое для повторного введения, снижено относительно количества, применяемого для начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, применяемое для повторного введения, снижено по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, применяемое для повторного введения, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного дополнительного средства терапии повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено относительно количества, применяемого для начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено относительно стандартной дозировки по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного дополнительного средства терапии, применяемое для повторного введения, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% относительно стандартной дозировки по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления повторное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, осуществляют одновременно с повторным введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии. В некоторых вариантах осуществления повторное введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, осуществляют последовательно или с разнесением во времени с повторным введением по меньшей мере одного дополнительного средства терапии.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, и/или субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средства терапии на основе ингибитора контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе ингибитора контрольных точек предусматривает введение по меньшей мере одного ингибитора контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется непереносимостью, невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью по меньшей мере одного ингибитора контрольных точек при введении его по отдельности. В некоторых вариантах осуществления может считаться, что субъект характеризуется невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью по меньшей мере одного ингибитора контрольных точек, как определено с применением, например, иммунозависимых критериев ответа на иммунотерапию (irRC) и/или иммунозависимых критериев оценки ответа на иммунотерапию при солидных опухолях (irRECIST). См., например, Wolchok et al. (2009) Clin Cancer Res. 15(23):7412-20; Bohnsack et al. "Adaptation of the Immune-Related Response Criteria:irRECIST" (Abstract 4958) ESMO 2014. Иллюстративные критерии могут включать критерии, применяемые в уровне техники для определения того, когда состояние опухолей у пациентов с раком улучшается ("ответ"), остается таким же ("стабилизация") или ухудшается ("прогрессирование") во время лечения, в случае если оцениваемое средство лечения представляет собой иммунное противоопухолевое лекарственное средство (например, ингибитор контрольных точек). В некоторых вариантах осуществления может считаться, что субъект характеризуется непереносимостью по меньшей мере одного ингибитора контрольных точек, если у субъекта наблюдается одно или более чем одно нежелательное (степени 2+) явление, идентифицированное для соответствующего ингибитора контрольных точек (например, ипилимумаба). Например, в некоторых вариантах осуществления может считаться, что субъект характеризуется непереносимостью средства лечения на основе ипилимумаба, если у субъекта наблюдается одно или несколько нежелательных явлений, выбранных из энтероколита, гепатита, дерматита (в том числе токсичного эпидермального некролиза), нейропатии и эндокринопатии (Yervoy® (ипилимумаба), приложение к маркировке, соответствующей требованиям FDA, 2018).
В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на PD1/PDL1, CTLA4, OX40, CD40, LAG3, TIM3, GITR и/или KIR. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CTLA4, OX40, CD40 и/или GITR. В некоторых вариантах осуществления целенаправленное воздействие ингибитора контрольных точек обеспечивается с помощью ингибиторного антитела или другой подобной ингибиторной молекулы. В некоторых других вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует в качестве антитела-агониста или другой подобной молекулы-агониста. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек предусматривает ингибитор пути антигена 4, ассоциированного с цитотоксическими T-лимфоцитами (CTLA4). В некоторых вариантах осуществления ингибитор CTLA4 представляет собой антитело к CTLA4. В некоторых вариантах осуществления антитело к CTLA4 представляет собой ипилимумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек предусматривает ингибитор пути белка 1 программируемой клеточной гибели (PD1). В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD1 представляет собой антитело к PD1. В некоторых вариантах осуществления антитело к PD1 представляет собой ниволумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PD1 представляет собой антитело к PDL1. В некоторых вариантах осуществления антитело к PDL1 представляет собой атезолизумаб. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек предусматривает ингибитор CTLA4 и ингибитор PD1. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на OX40. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на CD40. В некоторых вариантах осуществления ингибитор контрольных точек целенаправленно воздействует на GITR. В некоторых вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапии (например, эффект в отношении по меньшей мере одного симптома или риска/скорости прогрессирования заболевания) с помощью терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитора контрольных точек (например, антитела или молекулы, нацеленных на CTLA4, PD1/PDL1, OX40, CD40 и/или GITR) является аддитивным. В некоторых вариантах осуществления положительный эффект комбинированной терапии с помощью терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и ингибитора контрольных точек (например, антитела или молекулы, нацеленных на CTLA4, PD1/PDL1, OX40, CD40 и/или GITR) является супераддитивным (т. е. синергическим).
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, и/или субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и средства терапии на основе цитокина или аналога цитокина. В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе цитокина или аналога цитокина предусматривает введение по меньшей мере одного цитокина или аналога цитокина. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется непереносимостью, невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью по меньшей мере одного цитокина или аналога цитокина при введении их по отдельности.
В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают средство усиления для T-клеток. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ и/или TNFα. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-2, IL-10, IL-12 и/или IL-15. В некоторых вариантах осуществления введение цитокина или аналога цитокина усиливает примирование T-клеток после введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вследствие индуцирования образования и презентации неоантигенов.
В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-2. В некоторых вариантах осуществления IL-2 усиливает сигналы в эффекторных клетках, содействуя их размножению (Rosenberg (2014) J Immunol. 192(12):5451-8). В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-10. В некоторых вариантах осуществления IL-10 усиливает примирование и активацию CD8+ T-клеток (Mumm et al. (2011) Cancer Cell 20(6):781-96). В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-12. В некоторых вариантах осуществления IL-12 сопрягает врожденный и адаптивный иммунный ответы с усилением антиген-специфического примирования и целенаправленного воздействия (Tugues et al. (2015) Cell Death Differ. 22(2):237-46). В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IL-15. В некоторых вариантах осуществления IL-15 усиливает примирование и/или активацию эффекторных T-клеток (CD8). В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают IFNγ. В некоторых вариантах осуществления IFNγ дополняет секрецию IFNγ эффекторными T-клетками. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина предусматривают TNFα. В некоторых вариантах осуществления TNFα дополняет секрецию TNFα эффекторными T-клетками.
В некоторых вариантах осуществления исходную дозу, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят субъекту для инициирования аберрантного сплайсинга и продуцирования неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления по прошествии периода времени, необходимого для продуцирования белка и презентации антигена, субъекту затем вводят начальную дозу цитокина или аналога цитокина для стимуляции и/или усиления примирования и размножения эффекторных Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления период ожидания между дозами по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и цитокина или аналога цитокина составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6 или приблизительно 7 дней. В некоторых вариантах осуществления период ожидания составляет от приблизительно 3 дней до приблизительно 5 дней. В некоторых вариантах осуществления цитокин или аналог цитокина представляют собой IL-2, IL-10, IL-12, IL-15, IFNγ и/или TNFα. В некоторых вариантах осуществления терапевтический эффект по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и цитокина или аналога цитокина может быть аддитивным или супераддитивным.
В некоторых вариантах осуществления после периода, необходимого для примирования и размножения Т-клеток, субъекту затем вводят вторую или последующую дозу терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для запуска повторной презентации неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления период ожидания между исходной дозой цитокина или аналога цитокина и второй или последующей дозой, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4 или приблизительно 5 недель. В некоторых вариантах осуществления период ожидания составляет приблизительно 3 недели. В некоторых вариантах осуществления могут быть введены последующие дозы цитокина или аналога цитокина, например, вперемежку с последующими дозами, содержащими терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления после введения второй или последующей дозы терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, иммунная система может контактировать с презентирующими неоантиген опухолевыми клетками и/или вызывать уничтожение опухолевых клеток. В некоторых вариантах осуществления введение доз, содержащих терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, согласно данной иллюстративной начальной схеме лечения может быть "пульсирующим", т.е. по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, можно вводить дозами с длительными интервалами (например, приблизительно каждые 4 недели, приблизительно каждые 5 недель, приблизительно каждые 6 недель) для обеспечения презентации антигена, привлечения Т-клеток, и/или уничтожения опухолевых клеток, и/или восстановления популяции Т-клеток памяти.
В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 150 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 100 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 50 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет неопластическое нарушение, например, гематологическое злокачественное новообразование или солидную опухоль, или имеет подозрение на его наличие. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из B-клеточного злокачественного новообразования, лейкоза, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из острого миелоидного лейкоза и множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из рака молочной железы, рака желудка, рака предстательной железы, рака яичника, рака легкого, рака матки, карциномы слюнных протоков, меланомы, рака толстой кишки и рака пищевода. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из HER2-положительного рака молочной железы, аденокарциномы желудка и рака предстательной железы.
В некоторых вариантах осуществления субъект нуждается в способе лечения рака. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование или солидную опухоль. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из B-клеточного злокачественного новообразования, лейкоза, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из острого миелоидного лейкоза и множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из рака молочной железы, рака желудка, рака предстательной железы, рака яичника, рака легкого, рака матки, карциномы слюнных протоков, меланомы, рака толстой кишки и рака пищевода. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из HER2-положительного рака молочной железы, аденокарциномы желудка и рака предстательной железы.
В некоторых вариантах осуществления пациента, у которого имеется рак, описанный в данном документе, можно лечить с помощью комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенной вакцины. Не ограничиваясь теорией, вакцины, применяемые по отдельности или в комбинации с молекулами, представляющими собой ингибитор контрольных точек иммунного ответа (ICI), показали себя перспективными в клинических исследованиях ранних фаз (Ott et al. (2017) Nature 547(7662):217-21; Sahin et al. (2017) Nature 547(7662):222-6), но обычно требуется секвенирование мутаций в опухоли у пациента (Ott et al. (2017) Nature 547(7662):217-21; Aldous and Dong (2018) Bioorg. Med. Chem. 26(10):2842-9). Таким образом, действие вакцин зачастую зависит от достаточных количеств несинонимичных мутаций, которые являются антигенными. В целом, в опухолях с очень низкой мутационной нагрузкой имеется небольшое количество антигенов-кандидатов, и в случае опухолей с быстрым ростом имеется ограниченное время для идентификации и получения специфических для пациента вакцин.
До настоящего времени попытки разработать вакцины, которые характеризовались бы широким охватом иммуногенности для большого процента пациентов, были сосредоточены на белках, которые либо часто мутируют, либо эктопически сверхэкспрессируются или амплифицируются, и/или которые существуют в виде "собственных" белков в организме. Кроме того, эти белки зачастую экспрессируются в тканях, на которые не оказывает воздействие иммунная система (например, нейронные маркеры, экспрессируемые в типах нейроэндокринных опухолей), в то же время другие белки могут в норме экспрессироваться во время эмбриогенеза (например, раковые эмбриональные антигены). Таким образом, применимость вакцин, использующих такие белки в качестве антигенов, зачастую ограничена специфическим линиями происхождения или подгруппами опухоли, в которых присутствуют один или несколько антигенов. Применимость вакцины также будет необходимо подтверждать посредством секвенирования образцов опухоли пациента, что может занимать много времени.
Более того, если такие антигены существуют в виде "собственных" белков, иммунная система вероятно будет примирована для распознавания таких белков как "собственные" и, таким образом, не будет отвечать. Или, в качестве альтернативы, если иммунная система способна обеспечивать эффекторный ответ на такие антигены, он может приводить к побочным эффектам, связанным с воздействием на мишени, в тканях, где может экспрессироваться антиген. В обоих этих случаях одной из ключевых проблем является то, что большинство антигенных пептидов получают из генов-"пассажиров" (т.е. генов, которые мутируют или амплифицируются на протяжении онкогенеза, но не играют важнейшую роль в продолжительном выживании или пролиферации опухоли самой по себе). По этой причине эти гены могут быть подвергнуты сайленсингу без значительных последствий для прогрессирования опухоли и, таким образом, могут позволить опухоль "избежать" иммунного ответа на эти антигены. Не желая ограничиваться теорией, данный механизм может играть роль в эволюции опухоли, при которой случайные мутации, которые характеризуются сильной антигенностью, зачастую подвергаются "отсеивающему отбору" опухолью во время ранних стадий онкогенеза (Dunn et al. (2004) Annu. Rev. Immunol. 22:329-60).
Кроме того, определенные свидетельства также указывают на то, что постоянная презентация антигена и иммунная стимуляция могут приводить к анергии и истощению иммунных клеток (Pardoll (2012) Nat. Rev. Cancer 12(4):252-64). Такие фенотипы лежат в основе терапевтического обоснования используемых в настоящее время средств лечения на основе ICI, поскольку, как было показано, ICI либо сдерживают фенотип истощения иммунных клеток (α-PD1/PD-L1), либо облегчают дополнительные иммунные клеточные ответы (α-CTLA4). Примечательно, что в случае средства терапии на основе α-CTLA4 сообщалось, что определенная подгруппа пациентов демонстрировала серьезные связанные с иммунной системой нежелательные явления, которые могут быть обусловлены содействием активации T-клеток и разрушением механизмов иммунной толерантности, ограничивающей аутореактивные иммунные ответы.
Оба такие подхода (т. е. запуск или усиление de novo иммунных ответов на неоантигены или повторная активация при анергии или истощении существующих иммунных ответов) связаны с постоянной активацией иммунной системы. В связи с этим, эти подходы являются чувствительными к анергии, редактированию и другим опухоль-опосредованным механизмам, направленным на подавление вовлечения иммунной системы.
Напротив, лечение с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, может индуцировать иммунный ответ на новые последовательности, представляющие собой неоантигены. В некоторых вариантах осуществления презентация неоантигенов предоставляет адаптивной иммунной системе более разнообразные мишени, с которым она контактирует и активируется. В некоторых вариантах осуществления способность по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, быстро индуцировать альтернативный сплайсинг и полученные в результате неоантигены могут снижать риск усталости иммунной системы вследствие постоянного воздействия неоантигенов, вызванных мутациями, и/или ограничивать способность опухолевых клеток к адаптации для уклонения от терапии. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, в комбинации с неоантигенной вакциной усиливает иммунный ответ на неоантигены, продуцируемые в результате применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят до, во время или после вакцинации. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или вакцину можно вводить один раз или более одного раза во время курса лечения. В некоторых вариантах осуществления вакцину вводят один раз и по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят более одного раза во время курса лечения. В некоторых вариантах осуществления вакцину вводят один раз, а затем в течение курса лечения вводится одна или несколько бустерных доз.
Применяемый в данном документе термин "неоантигенная вакцина" относится к объединенному образцу из одного или нескольких иммуногенных неоантигенных пептидов или mRNA, например, по меньшей мере двух, по меньшей мере трех, по меньшей мере четырех, по меньшей мере пяти или более неоантигенных пептидов. Термин "вакцина" относится к композиции для развития иммунитета для профилактики и/или лечения заболевания (например, неопластического нарушения, например, гематологического злокачественного новообразования или солидной опухоли). Соответственно, вакцины представляют собой лекарственные препараты, которые содержат иммуногенные средства и предназначены для применения на человеке или животных для развития специфических механизмов иммунной защиты и образования защитных веществ после вакцинации. Неоантигенная вакцина может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество и/или адъювант.
Применяемый в данном документе термин "иммуногенный" относится к любому средству или композиции, которые могут вызывать иммунный ответ, например, T-клеточный ответ. Иммунный ответ может быть опосредован антителом, или клеткой, или обоими.
В некоторых вариантах осуществления пациенту вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и затем вводят пептидную или mRNA-вакцину на основе известного неоантигена для усиления иммунного ответа на неоантигены, продуцируемые под действием по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых других вариантах осуществления пациенту вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и проводят скрининг в отношении неоантигенов, продуцируемых при лечении. Следовательно, один или несколько из данных неоантигенов применяют для создания персонализированной вакцины, которую вводят пациенту. В любом из данных вариантов осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или пептидную или mRNA-вакцину можно вводить пациенту один раз или несколько раз.
В некоторых вариантах осуществления подходящий неоантиген для вакцины может быть идентифицирован посредством скрининга панели транскриптов с измененным сплайсингом и устойчивой экспрессией, полученных из одного или нескольких образцов ткани пациента (например, из биоптата опухоли). В некоторых вариантах осуществления последовательности вариантов белка идентифицируют в подвергнутом скринингу образце на основе трансляции вдоль соединения в подвергнутой аберрантному сплайсингу mRNA, при этом сохраняя части белковой последовательности (не более 12 аминокислот), фланкирующие изменения аминокислот, охватывающие соединение. В некоторых вариантах осуществления эти охватывающие соединения пептидные фрагменты исследуют в отношении высокой аффинности связывания с аллелями MHC1, например, с применением такого средства, как NetMHC1 (Nielsen et al. (2003) Protein Sci 12(5):1007-17; Andreatta and Neilsen (2016) Bioinformatics 32(4):511-7). Эти результаты позволяют фильтровать неопептиды до неопептидов, которые, как прогнозируется, характеризуются с высокой аффинностью связывания с составом аллелей HLA, уникальным для пациента, а также собирать пулы неопептидов, которые, как прогнозируется, связываются с широким спектром аллелей HLA, присутствующих с высокой частотой в разных популяциях (Maiers et al. (2007) Hum Immunol 68(9):779-88). В некоторых вариантах осуществления идентифицированные неопептиды затем составляют в виде вакцины, например посредством соединения с подходящим носителем или адъювантом (Ott et al. (2017) Nature 547(7662):217-21), или для доставки в виде mRNA (Sahin et al. (2017) Nature 547(7662):222-6).
В некоторых вариантах осуществления неоантиген выбирают на основе результатов скрининга ответа опухоли отдельного патента на по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, с идентификацией одного или нескольких неоантигенов, полученных в результате лечения, предназначенных для применения в последующей вакцинации. В других вариантах осуществления неоантиген выбирают, например, на основе результатов скрининга панели образцов, полученных от разных пациентов, для идентификации общих неоантигенов, продуцируемых под действием по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и затем применяют в качестве универсальной вакцины для будущих пациентов.
Не ограничиваясь теорией, в некоторых вариантах осуществления применение универсальной неоантигенной вакцины позволит избежать необходимости секвенирования и анализа уникального мутационного статуса опухоли каждого пациента, поскольку выбранные неоантигены не зависят от мутации в опухоли, а скорее имитируют неоантиген, продуцируемый в результате применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и, как правило, распознаваемый организмом как чужеродный. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления применение неоантигенной вакцины может быть особенно эффективным, поскольку опухолевые клетки пациента могут с большей вероятностью мутировать, не продуцируя один или несколько неоантигенов, которые зависят от мутации в опухоли, по сравнению с клетками, которые имитируют неоантиген, продуцируемый в результате применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. Это может создавать возможность составления основной вакцины, которая будет характеризоваться широким охватом иммуногенности для большого процента пациентов, ускоряя начало схемы лечения. Пациенты могут быть вакцинированы согласно схемам, изложенным в данном документе, и перед следующим завершением вакцинации могут быть дополнительно подвергнуты лечению с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, например, для индуцирования экспрессии неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления пациентам можно вводить по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, перед вакцинацией, одновременно с вакцинацией или после нее. В некоторых вариантах осуществления пациентам вводят по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, для которого был проведен скрининг в отношении одного или нескольких неоантигенов, обнаруженных в группе универсальных неоантигенов, и их вакцинируют универсальной неоантигенной вакциной, содержащей по меньшей мере один универсальный неоантиген, идентифицированный у субъекта. В некоторых вариантах осуществления пациентам можно вводить по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, один раз или более одного раза после вакцинации. По меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или вакцину можно вводить один раз или более одного раза во время курса лечения.
В некоторых вариантах осуществления вакцина может содержать один или более одного неоантигенного пептида или mRNA. В некоторых вариантах осуществления вакцина содержат один или более одного длинного неоантигенного пептида. В некоторых вариантах осуществления такие "длинные" неоантигенные пептиды подвергаются эффективной интернализации, процессингу и перекрестной презентации в специализированных антигенпрезентирующих клетках, таких как дендритные клетки. Подобным образом, в других контекстах было показано, что длинные вакцинные пептиды индуцируют цитотоксические T-клетки у человека (Melief and van der Burg (2008) Nat Rev Cancer 8(5):351-60). В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид является удлиненным с включением собственно последовательности неоантигенного пептида в дополнение к фланкирующим аминокислотным последовательностям. В некоторых вариантах осуществления удлиненная пептидная последовательность облегчает захват белка антигенпрезентирующими клетками, например, дендритными клетками. В некоторых вариантах осуществления удлиненная пептидная последовательность обеспечивает эффективную презентацию антигена и примирование T-клеток в моделях с разными изотипами HLA. В некоторых вариантах осуществления более длинный неоантигенный пептид и/или удлиненная пептидная последовательность проявляют повышенным захват антигенпрезентирующими клетками (например, дендритными клетками), повышенную презентацию антигена и/или повышенное примирование T-клеток по сравнению с более коротким неоантигенным пептидом и/или более короткой пептидной последовательностью (например, с пептидной последовательность, длина которой составляет менее приблизительно 10 или менее приблизительно 5 аминокислот). В некоторых вариантах осуществления длина длинного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина длинного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина длинного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность и/или антигенная часть непосредственно не перекрываются с канонической пептидной последовательностью (например, любой из иллюстративных канонических пептидных последовательностей, перечисленных в таблице 13) или не состоят из нее.
Аминокислотные последовательности иллюстративных длинных неоантигенных пептидов представлены в таблице 13.
Такие иллюстративные неоантигенные пептиды образуются после введения ADC, содержащих пладиенолидные модуляторы сплайсинга, однако, учитывая аналогичный механизм действия (т. е. аналогичные механизмы модуляции сплайсинга), аналогичные неоантигенные пептиды могут быть получены с помощью соединений, выбранных из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
Таблица 12. Неопептиды
Белковые последовательности двадцати девяти неопептидов, перечисленных в таблице 12, могут быть удлинены. Удлиненная белковая последовательность включает одновременно собственно неопептидную последовательность в дополнение к фланкирующим аминокислотным последовательностям. Удлиненная белковая последовательность лучше облегчает захват белка дендритными клетками и содействует презентации антигена и примированию T-клеток в моделях с разными изотипами HLA. Аминокислотные последовательности двадцати девяти удлиненных неопептидов представлены в таблице 13.
Таблица 13. Аминокислотные последовательности удлиненных неопептидов
* Подчеркивание указывает аминокислоты, полученные из открытой рамки считывания канонического транскрипта (т. е. каноническую пептидную последовательность).
Применяемые в данном документе "неоантигенный пептид" или "mRNA-вакцина" охватывают применение фрагмента неоантигенного пептида или кодирующей его mRNA, при условии, что данный фрагмент сохраняет иммуногенный потенциал.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 12, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 20 неоантигенных пептидов. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенного(-ых) пептида(-ов) находится в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенного(-ых) пептида(-ов) находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенного(-ых) пептида(-ов) находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенной вакцины. Неоантигенная вакцина может представлять собой, например, пептидную неоантигенную вакцину или неоантигенную mRNA-вакцину. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят до введения неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят после введения неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, вводят одновременно с введением неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно предусмотрена комбинация, содержащая по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенную вакцину (например, универсальную неоантигенную вакцину), для применения в лечении субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина представляет собой пептидную неоантигенную вакцину или неоантигенную mRNA-вакцину. В некоторых вариантах осуществления комбинация дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное средство терапии. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре или по меньшей мере пять дополнительных средств терапии.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно предусмотрен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством (a) введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; (b) обнаружения одного или нескольких неоантигенов у субъекта после введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; (c) сравнения одного или нескольких неоантигенов с группой универсальных неоантигенов и (d) введения субъекту универсальной неоантигенной вакцины, содержащей по меньшей мере один универсальный неоантиген, присутствующий у субъекта. В некоторых вариантах осуществления универсальную неоантигенную вакцину вводят по отдельности или в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным средством терапии. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре или по меньшей мере пять дополнительных средств терапии.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает повторное введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления повторное введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают до введения универсальной неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления повтор по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают после введения универсальной неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления повторное введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, начинают одновременно с введением универсальной неоантигенной вакцины. В некоторых вариантах осуществления применяемое для повторного введения количество по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, применяемое для начального и/или повторного введения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, при применении без лечения с помощью вакцины. В некоторых вариантах осуществления количество по меньшей мере одного соединения, применяемое для начального и/или повторного введения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно дополнительное средство терапии предусматривает введение ингибитора контрольных точек (например, любого из иллюстративных ингибиторов контрольных точек, описанных в данном документе). В некоторых вариантах осуществления введение ингибитора контрольных точек начинают до введения универсальной неоантигенной вакцины и/или повторного введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления введение ингибитора контрольных точек начинают после введения универсальной неоантигенной вакцины и/или повторного введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления введение ингибитора контрольных точек начинают одновременно с введением универсальной неоантигенной вакцины и/или повторным введением по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления введение ингибитора контрольных точек повторяют по меньшей мере один раз после начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество ингибитора контрольных точек, применяемое для повторного введения, снижено по сравнению с количеством, применяемым для начального введения. В некоторых вариантах осуществления количество ингибитора контрольных точек, применяемое для повторного введения, снижено по сравнению со стандартной дозировкой ингибитора контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления количество ингибитора контрольных точек, применяемое для повторного введения, снижено на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 75% или 90% по сравнению со стандартной дозировкой ингибитора контрольных точек. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется непереносимостью, невосприимчивостью или недостаточной восприимчивостью ингибитора контрольных точек при введении его по отдельности.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе также предусмотрены неоантигенные вакцины, содержащие по меньшей мере один неоантигенный пептид или по меньшей мере одну неоантигенную mRNA. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид. В некоторых других вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA.
Также в некоторых вариантах осуществления в данном документе предусмотрены наборы, содержащие по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенную вакцину (например, универсальную неоантигенную вакцину). В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина представляет собой пептидную неоантигенную вакцину или неоантигенную mRNA-вакцину. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит один или несколько дополнительных компонентов, в том числе без ограничения: инструкции по применению; другие средства, например, одно или несколько дополнительных терапевтических средств; устройства, контейнеры или другие материалы, предназначенные для получения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или неоантигеннной вакцины для терапевтического введения; фармацевтически приемлемые носители; и устройства, контейнеры или другие материалы для введения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или неоантигенной вакцины пациенту. Инструкции по применению могут включать руководство для терапевтических применений, в том числе предполагаемые дозировки и/или режимы введения, например, для пациента, у которого имеется неопластическое нарушение или подозрение на его наличие. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит инструкции по терапевтическому применению, например, по применению по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенной вакцины для лечения или предупреждения неопластического нарушения у пациента. В некоторых вариантах осуществления набор дополнительно содержит по меньшей мере одно дополнительное терапевтическое средство (например, предназначенное для введения вместе с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигенной вакциной, например, ингибитором контрольных точек). В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и/или неоантигенная вакцина составлены в виде фармацевтической композиции.
В некоторых вариантах осуществления способов и композиций, раскрытых в данном документе, неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигенный пептид содержит одну или более одной неоантигенной последовательности, раскрытой в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность и/или антигенная часть непосредственно не перекрываются с канонической пептидной последовательностью (например, любой из иллюстративных канонических пептидных последовательностей, перечисленных в таблице 13) или не состоят из нее.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой неоантигенную последовательность, специфическую для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой персонализированную неоантигенную вакцину для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у субъекта.
В некоторых других вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную последовательность. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную вакцину. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 45% субъектов в популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна вызывать T-клеточный ответ на опухоль, присутствующую у по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10% популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность была идентифицирована посредством секвенирования по меньшей мере одного неоантигенного пептида, образование которого индуцировано у субъекта посредством введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантигенный пептид содержит неоантигенную последовательность, образование которой индуцировано путем приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид или mRNA и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид или mRNA могут быть присоединены к подходящему носителю, что помогает развитию иммунного ответа. Иллюстративные носители для связывания с иммуногенными средствами (например, неоантигенным пептидом или mRNA) включают сывороточные альбумины, гемоцианин фисуреллы, молекулы иммуноглобулина, тиреоглобулин, овальбумин, столбнячный анатоксин или анатоксин из других патогенных бактерий, таких как бактерии, вызывающие дифтерию, E. coli, бактерии, вызывающие холеру, или H. pylori, или аттенуированное производное токсина. Другие носители для стимуляции или усиления иммунного ответа включают цитокины, такие как IL-1, α- и β-пептиды IL-1, IL-2, γINF, IL-10, GM-CSF и хемокины, такие как M1P1α и β и RANTES. Иммуногенные средства также можно присоединять к пептидам, которые усиливают транспорт через ткани, как описано, например, в WO 97/17613 и WO 97/17614. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель выбран из пептида, сывороточного альбумина, гемоцианина фисуреллы, иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, анатоксина или аттенуированного производного анатоксина, цитокина и хемокина.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид или mRNA могут быть присоединены к фармацевтически приемлемому носителю. Иммуногенные средства могут быть присоединены к носителями с помощью химической сшивки. Методики присоединения иммуногенного пептида к носителю включают образование дисульфидных связей с применением N-сукцинимидил-3-(2-пиридилтио)пропионата (SPDP) и сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (SMCC) (если в пептиде отсутствует сульфгидрильная группа, это можно осуществлять посредством добавления остатка цистеина). Эти реагенты образуют дисульфидную связь между собой и остатками цистеина в пептиде на одном белке и амидную связь через эпсилон-аминогруппу на лизине или другую свободную аминогруппу в других аминокислотах. Целый ряд таких образующих дисульфидные/амидные связи средств описано в Jansen et al. ((1982) Immun Rev. 62:185). Другие бифункциональные средства для сочетания образуют тиоэфирную связь, вместо дисульфидной связи. Множество этих средств, образующих тиоэфирную связь, коммерчески доступны и включают реакционноспособные сложные эфиры 6-малеимидокапроновой кислоты, 2-бромуксусной кислоты и 2-йодуксусной кислоты, 4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоновую кислоту. Карбоксильные группы могут быть активированными посредством объединения их с сукцинимидом или натриевой солью 1-гидроксил-2-нитро-4-сульфоновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый носитель ковалентно связаны через линкер.
Неоантиген и другие такие иммуногенные пептиды также могут экспрессироваться в виде слитых белков с носителями. Иммуногенный пептид может быть присоединен по амино-концу, карбокси-концу или в любом участке в пределах пептида (внутреннем) к носителю. В некоторых вариантах осуществления в слитом белке могут присутствовать несколько повторов иммуногенного пептида. В некоторых вариантах осуществления неоантигенный пептид и фармацевтически приемлемый носитель экспрессируются в виде слитого белка.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид или кодирующую его mRNA и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере один неоантигенный пептид или кодирующую его mRNA и фармацевтически приемлемый адъювант (например, адъювант, описанный в данном документе).
В некоторых вариантах осуществления способов и композиций, раскрытых в данном документе, неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA кодирует одну или более одной неоантигенной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина неоантигенной последовательности и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность и/или антигенная часть непосредственно не перекрываются с канонической пептидной последовательностью (например, любой из иллюстративных канонических пептидных последовательностей, перечисленных в таблице 13) или не состоят из нее.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой неоантигенную последовательность, специфическую для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой персонализированную неоантигенную вакцину для субъекта. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у субъекта.
В некоторых других вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную последовательность. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность представляет собой универсальную неоантигенную вакцину. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна связываться с по меньшей мере одним аллелем HLA, экспрессируемым у по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40% или по меньшей мере 45% субъектов в популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность способна вызывать T-клеточный ответ на опухоль, присутствующую у по меньшей мере 1%, по меньшей мере 5% или по меньшей мере 10% популяции субъектов, страдающих неопластическим нарушением.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная последовательность была идентифицирована посредством секвенирования по меньшей мере одной неоантигенной mRNA, образование которой индуцировано у субъекта посредством введения терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA кодирует неоантигенную последовательность, образование которой индуцировано путем приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одна неоантигенная mRNA связана с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель выбран из пептида, сывороточного альбумина, гемоцианина фисуреллы, иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, анатоксина или аттенуированного производного анатоксина, цитокина и хемокина.
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах осуществления неоантигенная вакцина содержит по меньшей мере одну неоантигенную mRNA и фармацевтически приемлемый адъювант (например, адъювант, описанный в данном документе).
В некоторых вариантах осуществления неоантигенная mRNA инкапсулирована с помощью инкапсулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующее средство защищает неоантигенную mRNA от разрушения и улучшает доставку вакцины (McNamara et al. (2015) J Immunol Res. 2015:794528). В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующее средство представляет собой липосому. В некоторых вариантах осуществления липосома представляет собой катионную липосому, такую как N-[1-(2,3-диолеолокси)пропил]-N, N,N-триметиламмония хлорид 1 (DOTAP). В некоторых вариантах осуществления инкапсулирующее средство представляет собой наночастицу. В некоторых вариантах осуществления наночастица защищает неоантигенную mRNA от разрушения нуклеазой и/или улучшает захват клеткой и/или эффективность доставки. В некоторых вариантах осуществления наночастица может быть сконструирована таким образом, что она является полностью разлагаемой. В некоторых вариантах осуществления наночастица представляет собой биоразлагаемую наночастицу со структурой ядро-оболочка, содержащую pH-чувствительное ядро из сложного поли(b-аминоэфира) (PBAE), заключенного в фосфолипидную оболочку (Su et al. (2011) Mol Pharm. 8(3):774-87). В некоторых вариантах осуществления такие наночастицы являются особенно эффективными в доставке mRNA in vivo и развитии противоопухолевого иммунного ответа.
В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 150 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 100 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект характеризуется мутационной нагрузкой с несинонимичными изменениями, составляющей приблизительно 50 мутаций или меньше. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет неопластическое нарушение, например, гематологическое злокачественное новообразование или солидную опухоль, или имеет подозрение на его наличие. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из B-клеточного злокачественного новообразования, лейкоза, лимфомы и миеломы. В некоторых вариантах осуществления гематологическое злокачественное новообразование выбрано из острого миелоидного лейкоза и множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из рака молочной железы, рака желудка, рака предстательной железы, рака яичника, рака легкого, рака матки, карциномы слюнных протоков, меланомы, рака толстой кишки и рака пищевода. В некоторых вариантах осуществления солидная опухоль выбрана из HER2-положительного рака молочной железы, аденокарциномы желудка и рака предстательной железы.
Применяемый в данном документе термин "адъювант" относится к веществу, которое способно увеличивать, усиливать или модулировать иммунный ответ на сопутствующее иммуногенное средство, например, неоантигенный пептид или mRNA. В определенных вариантах осуществления неоантиген по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с адъювантами, т. е. веществами, которые сами по себе не вызывают адаптивные иммунные ответы, но усиливают или модулируют ответ на сопутствующий неоантиген. Целый ряд адъювантов может применяться в комбинации с раскрытыми неоантигенами, чтобы обеспечивать развитие иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления адъювант(-ы) выбран(-ы) для повышения свойственного ответа на неоантиген, при этом они не вызывают конформационные изменения неоантигена, которые будут влиять на качественную форму ответа. В некоторых вариантах осуществления адъювант(-ы) выбран(-ы) для усиления примирования и/или активации эффекторных T-клеток (например, CD8).
В определенных вариантах осуществления адъювант представляет собой соль алюминия (квасцы), такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия и сульфат алюминия. Такие адъюванты можно применять с другими специфическими иммуностимулирующими средствами, такими как 3-O-деацилированный монофосфориллипид A (MPL) или 3-DMP, полимерные или мономерные аминокислоты, такие как полиглутаминовая кислота или полилизин, или без них. Такие адъюванты могут применяться с другими конкретными иммуностимулирующими средствами, такими как мурамилпептиды (например, N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (nor-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1′-2′-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин (MTP-PE), N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-Al-D-изоглю-L-Ala-дипальмитоксипропиламид (DTP-DPP)), или другими компонентами бактериальной клеточной стенки, или без них. Другие адъюванты представляют собой эмульсии типа "масло в воде" и включают (a) MF59 (WO 90/14837), содержащий 5% сквалена, 0,5% Tween 80 и 0,5% Span 85 (необязательно содержащий различные количества MTP-PE), составленный в субмикронные частицы с применением микрофлюидайзера, такого как микрофлюидайзер модели 110Y (Microfluidics), (b) SAF, содержащий 10% сквалена, 0,4% Tween 80, 5% блок-полимера Pluronic L121 и thr-MDP, либо микрофлюидизированный в субмикронную эмульсию, либо перемешанный на вортексе с образованием эмульсии с частицами большего размера, и (c) адъювантную систему Ribi™ (RAS), (Ribi Immun°Chem), содержащую 2% сквалена, 0,2% Tween 80 и один или несколько компонентов бактериальной клеточной стенки из группы, состоящей из монофосфориллипида A (MPL), димиколата трегалозы (TDM) и каркаса клеточной стенки (CWS), например MPL-FCWS (Detox™). В некоторых вариантах осуществления адъювант представляет собой сапонин, такой как Stimulon™ (QS21), или частицы, образованные из него, такие как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы) и ISCOMATRIX. Другие адъюванты включают полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда(IFA), цитокины, такие как интерлейкины (IL-1, IL-2 и IL-12), колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF) и фактор некроза опухоли (TNF).
Адъювант можно вводить с иммуногенным средством (например, неоантигенным пептидом или mRNA) в виде одной композиции или его можно вводить до введения иммуногенного средства, одновременно с ним или после него. В некоторых вариантах осуществления иммуногенное средство и адъювант могут быть упакованы и поставлены в одном и том же флаконе или могут быть упакованы в отдельные флаконы и смешиваться перед применением. В некоторых вариантах осуществления иммуногенное средство и адъювант могут быть упакованы с маркировкой, указывающей на предполагаемое терапевтическое применение. В некоторых вариантах осуществления, если иммуногенное средство и адъювант упакованы по отдельности, упаковка может включать инструкции по смешиванию перед применением. Выбор адъюванта и/или носителя зависит от стабильности иммуногенного состава, содержащего адъювант, пути введения, схемы дозирования, эффективности адъюванта для вида животных, подлежащего вакцинации, и для человека, при этом фармацевтически приемлемый адъювант представляет собой адъювант, который был одобрен или может быть одобрен соответствующими регулирующими органами для введения человеку. Например, полный адъювант Фрейнда не подходит для введения человеку. Однако квасцы, MPL или неполный адъювант Фрейнда (Chang et al. (1998) Adv Drug Deliv Rev. 32:173-186) по отдельности или необязательно в комбинации с любыми из квасцов, QS21 и MPL и все их комбинации подходят для введения человеку.
В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении дополнительно предусмотрены способы скрининга и идентификации по меньшей мере одного неоантигена. Более конкретно в некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ идентификации по меньшей мере одного неоантигена посредством (a) приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; (b) обнаружения по меньшей мере одного подвергнутого альтернативному сплайсингу mRNA-транскрипта после приведения неопластической клетки в контакт с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; (c) прогнозирования трансляции по меньшей мере одного подвергнутого альтернативному сплайсингу mRNA-транскрипта в по меньшей мере один пептид и (d) сравнения по меньшей мере одного пептида с референсным протеомом, где идентифицируют по меньшей мере один неоантиген, если по меньшей мере один пептид не соответствует каким-либо пептидам в референсном протеоме. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает приведение в контакт одной или нескольких дополнительных неопластических клеток для идентификации по меньшей мере одного универсального неоантигена. В некоторых вариантах осуществления способ повторяют для одной или нескольких дополнительных неопластических клеток или образцов (например, биоптата ткани) для подтверждения подходящих неоантигенов (например, для применения в неоантигенной вакцине) и/или для идентификации одного или нескольких универсальных неоантигенов.
В различных других вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ идентификации по меньшей мере одного неоантигена посредством (a) приведения неопластической клетки в контакт с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; (b) обнаружения по меньшей мере одного пептида, содержащего потенциальную неоантигенную последовательность после приведения неопластической клетки в контакт с по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений; и (c) сравнения по меньшей мере одного пептида с референсным протеомом, где идентифицируют по меньшей мере один неоантиген, если по меньшей мере один пептид не соответствует каким-либо пептидам в референсном протеоме. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает приведение в контакт одной или нескольких дополнительных неопластических клеток для идентификации по меньшей мере одного универсального неоантигена. В некоторых вариантах осуществления способ повторяют для одной или нескольких дополнительных неопластических клеток или образцов (например, биоптата ткани) для подтверждения подходящих неоантигенов (например, для применения в неоантигенной вакцине) и/или для идентификации одного или нескольких универсальных неоантигенов.
В некоторых вариантах осуществления способов идентификации неоантигена, описанных в данном документе, обнаружение по меньшей мере одно подвергнутого альтернативному сплайсингу транскрипта mRNA предусматривает RNAseq. В некоторых вариантах осуществления прогнозирование трансляции по меньшей мере одного подвергнутого альтернативному сплайсингу транскрипта mRNA предусматривает количественное определение изменения в виде значения процента успешного включения при сплайсинге (dPSI) для по меньшей мере одного транскрипта. В некоторых вариантах осуществления прогнозирование трансляции по меньшей мере одного подвергнутого альтернативному сплайсингу транскрипта mRNA предусматривает RiboSeq и/или рибосомный профилинг.
В некоторых вариантах осуществления способов идентификации неоантигена, описанных в данном документе, способы дополнительно включают оценку по меньшей мере одного пептида в отношении прогнозируемого связывания с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC). В некоторых вариантах осуществления прогнозируемое связывание с молекулами MHC определяют путем измерения исходной аффинности, прогнозирующей силу связывания, для по меньшей мере одного пептида. В некоторых вариантах осуществления исходная аффинность, прогнозирующая прочность связывания, которая составляет приблизительно 500 нМ или более, указывает на связывание с молекулами MHC. В некоторых вариантах осуществления прогнозируемое связывание с молекулами MHC определяют посредством идентификации распределения значений прогнозированной прочности связывания для серии случайных пептидов и сравнения прогнозируемой прочности связывания по меньшей мере одного пептида с данным распределением. В некоторых вариантах осуществления прогнозируемая прочность связывания в верхних 2% распределения указывает на слабое связывание с молекулами MHC. В некоторых вариантах осуществления прогнозируемая прочность связывания в верхних 0,5% распределения указывает на сильное связывание с молекулами MHC.
В некоторых вариантах осуществления способов идентификации неоантигена, описанных в данном документе, неопластическая клетка находится в культуре клеток in vitro. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка получена от субъекта. В некоторых вариантах осуществления неопластическая клетка находится в субъекте.
В некоторых вариантах осуществления в данном документе также предусмотрены способы получения неоантигенной вакцины посредством (a) идентификации по меньшей мере одного неоантигена (например, по меньшей мере одного неоантигенного пептида или кодирующей его mRNA) с применением любого из иллюстративных способов идентификации, раскрытых в данном документе; и (b) составления по меньшей мере одного неоантигена вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или адъювантом (например, любым из фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или адъювантов, описанных в данном документе).
В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигена и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 50 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигенного пептида находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 35 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигена и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 15 до приблизительно 25 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления длина по меньшей мере одного неоантигена и/или антигенной части находится в диапазоне от приблизительно 10 до приблизительно 20 аминокислот. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантиген и/или антигенная часть непосредственно не перекрываются с канонической пептидной последовательностью (например, любой из иллюстративных канонических пептидных последовательностей, перечисленных в таблице 13) или не состоят из нее.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один неоантиген, применяемый в вакцине, присоединен к фармацевтически приемлемому носителю. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый носитель выбран из пептида, сывороточного альбумина, гемоцианина фисуреллы, иммуноглобулина, тиреоглобулина, овальбумина, анатоксина или аттенуированного производного анатоксина, цитокина и хемокина.
В некоторых вариантах осуществления пациента, у которого имеется рак, описанный в данном документе, можно лечить с помощью комбинации по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и одной или нескольких сконструированных T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (т.е. CAR-T). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении представлен способ лечения субъекта с неопластическим нарушением или подозрением на его наличие посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и сконструированных T-клеток, целенаправленно воздействующих на опухоль (т.е. CAR-T). В некоторых вариантах осуществления химерный T-клеточный рецептор может быть сконструирован с применением антигенраспознающих последовательностей, которые реагируют с идентифицированным неоантигеном.
Например, в некоторых вариантах осуществления с целью планирования изменений во внеклеточных доменах белков клеточной поверхности, индуцированных по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, химерный антиген-реактивный T-клеточный рецептор (CAR) может быть сконструирован путем сначала идентификации антител, которые распознают домен неоантигенного белка, экспрессируемый на клеточной поверхности. Затем антигенраспознающие последовательности таких антител могут быть слиты с доменом T-клеточного рецептора для осуществления селективного целенаправленного воздействия и активации.
В различных других вариантах осуществления используется стратегия, объединяющая механизм презентации антигена опухолевых клеток вместе с неоантигенами, полученными путем применения по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений. В некоторых вариантах осуществления клетки, содержащие известные и зачастую представленные HLA-аллели (например, HLA-A*02:01), могут быть обработаны по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, и неоантигены, связанные с MHC1, идентифицируют посредством лигандомики. В некоторых вариантах осуществления эти пептиды можно применять для примирования и/или размножения T-клеток от здоровых доноров, экспрессирующих такой же аллель HLA. В некоторых вариантах осуществления такие T-клетки можно выделять и секвенировать α- и β-цепи T-клеточного рецептора (TCR) для идентификации когнатных антигенраспознающих/вариабельных участков. В некоторых вариантах осуществления затем может быть сконструирован когнатный CAR.
В некоторых вариантах осуществления последовательности CAR клонируют в популяции полученных от пациента T-клеток и обеспечивают размножение клеток с применением доступных в настоящее время протоколов. В некоторых вариантах осуществления сконструированные T-клетки затем переливают обратно в кровоток пациента перед проведением лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, одновременно с ним или после него. В некоторых вариантах осуществления после лечения с помощью по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любого из вышеуказанных соединений, опухолевые клетки могут начать презентировать антиген, например антиген, нацеленный на популяцию сконструированных Т-клеток. В некоторых вариантах осуществления популяция сконструированных T-клеток может контактировать с презентирующими антиген опухолевыми клетками и уничтожать их.
Для возможности более полного понимания настоящего изобретения, описанного в данном документе, далее представлены следующие примеры. Следует понимать, что эти примеры представлены только в иллюстративных целях и их не следует рассматривать как ограничивающие настоящее изобретения любым образом.
ПРИМЕРЫ 1-205
Общие сведения. Нагревание под воздействием микроволн осуществляли с применением микроволнового реактора Biotage Emrys Liberator или Initiator. Колоночную хроматографию осуществляли с применением Isco Rf200d. Удаление растворителя осуществляли с применением либо роторного испарителя от Büchi, либо центробежного испарителя от Genevac. Препаративную LC/MS осуществляли с применением автоочистителя от Waters и 5-микронной колонки от XTerra MS C18, 19×100 мм, в условиях кислотной подвижной фазы. Спектры ЯМР регистрировали с применением спектрометра Varian 400 MГц.
Когда выражение "с созданной инертной атмосферой" используют для описания реактора (например, реакционного сосуда, колбы, стеклянного реактора и т. п.), это означает, что воздух в реакторе был заменен практически не содержащим влаги или сухим инертным газом (таким как азот, аргон и т. п.).
Общие способы и экспериментальные части для получения соединений по настоящему изобретению изложены ниже. В определенных случаях конкретное соединение описано в качестве примера. Однако, следует понимать, что в каждом случае ряд соединений согласно настоящему изобретению получали в соответствии со схемами и экспериментальными частями, описанными ниже.
В данном документе используются следующие сокращения:
COMU: (1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламино-морфолино-карбения гексафторфосфат
DMAP: 4-(диметиламино)пиридин
DMP: периодинан Десса-Мартина
EDC: N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимид
KHMDS: бис(триметилсилил)амид калия
LCMS: жидкостная хроматография - масс-спектрометрия
Pd2(dba)3: трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0)
TBAF: фторид тетрабутиламмония
TBSCl: трет-бутилдиметилсилилхлорид
TBSOTf: трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфонат
TESCl: хлортриэтилсилан
THF: тетрагидрофуран
TLC: тонкослойная хроматография
pTsOH: п-толуолсульфоновая кислота
PPTS: п-толуолсульфонат пиридиния.
Материалы. Следующие соединения являются коммерчески доступными и/или могут быть получены рядом способов, хорошо известных специалисту в области органического синтеза. Более конкретно раскрытые соединения могут быть получены с применением реакций и методик, описанных в данном документе. В описании способов синтеза, описанных ниже, следует понимать, что все предложенные условия реакции, включая выбор растворителя, реакционной атмосферы, температуры реакции, продолжительности эксперимента и процедур обработки, могут быть выбраны как стандартные условия для данной реакции, если не указано иное. Специалисту в области органического синтеза понятно, что функциональные группы, присутствующие в различных частях молекулы, должны быть совместимы с предлагаемыми реагентами и реакциями. Заместители, несовместимые с условиями реакции, будут очевидны для специалиста в данной области, и поэтому указаны альтернативные методы. Исходные материалы для примеров либо коммерчески доступны, либо их легко получить стандартными методами из известных материалов.
Информация о LCMS. Подвижные фазы: A (0,1% муравьиная кислота в H2O) и B (0,1% муравьиная кислота в ацетонитриле). Градиент: B 5% → 95% за 1,8 минуты. Колонка: колонка Acquity BEH C18 (1,7 мкм, 2,1×50 мм).
В патентах США №№ 7884128 и 7816401, оба под названием Process for Total Synthesis of Pladienolide B and Pladienolide D (Способ полного синтеза пладиенолида B и пладиенолида D), описаны способы синтеза пладиенолида B и D, известные из уровня техники. Синтез пладиенолида B и D также может быть выполнен с применением способов, известных в уровне техники и описанных в Kanada et al., "Total Synthesis of the Potent Antitumor Macrolides Pladienolide B and D", Angew. Chem. Int. Ed. 46:4350-4355 (2007). Kanada et al. и в публикации поданной согласно PCT заявки WO 2003/099813 под названием Novel Physiologically Active Substances (Новые физиологически активные вещества) описывают способы синтеза E7107 (соединение 45 из WO '813) из пладиенолида D (11107D из WO '813), известные из уровня техники. Соответствующий патент США представляет собой патент № 7550503, выданный Kotake et al.
ИЛЛЮСТРАТИНЫЙ СИНТЕЗ СОЕДИНЕНИЙ
Соединения 1-60 (таблица I) получали с помощью способа со схемы 1.
Схема 1
Общая процедура синтеза соединений 1-60
Стадия 1. Раствор пладиенолида D (A, 5,3 г, 9,7 ммоль, 1,0 экв.) в атмосфере азота в DMF (80 мл, 0,1 M) при 0°C обрабатывали с помощью имидазола (4,6 г, 67,8 ммоль, 7,0 экв.) и TBSCl (7,3 г, 48,4 ммоль, 5,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 20 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и органический слой промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (B, 7,5 г, 9,6 ммоль, 99%).
Стадия 2. В раствор олефина B (7,6 г, 9,7 ммоль, 1,0 экв.) в дегазированном THF:H2O (210 мл:21 мл, 0,01 M) в атмосфере азота при 0°C добавляли тетроксид осмия (24,4 мл, 1,9 ммоль, 0,2 экв., 2,5% раствор в трет-бутаноле) с последующим добавлением N-метилморфолин-N-оксида (2,3 г, 19,5 ммоль, 2,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 13 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью сульфита натрия, разбавляли этилацетатом и органический слой промывали водой, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (C, 6,8 г, 8,3 ммоль, 86%).
Стадия 3. В раствор диола C (7,9 г, 9,7 ммоль, 1,0 экв.) в бензоле (350 мл, 0,03 M) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли тетраацетат свинца (8,6 г, 19,4 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (D, 2,5 г, 5,26 ммоль, 54%).
Стадия 4. В раствор альдегида D (1,4 г, 2,9 ммоль, 1,0 экв.) в THF (9,5 мл, 0,5 M) добавляли этоксиэтен (11,1 мл, 40,0 экв.) и п-толуолсульфонат пиридиния (0,07 г, 0,3 ммоль, 0,1 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Этилацетат промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (E, 1,2 г, 2,2 ммоль, 75%).
Стадия 5. В раствор соответствующего сульфона (1,5 экв.) в THF (0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид E (1,0 экв.) в THF. Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония, разбавляли этилацетатом и нагревали до комнатной температуры. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (F).
Стадия 6. В раствор ацетата F (1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (1,1 экв.). Реакцию осуществляли в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли этилацетатом, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло (G) переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Стадия 7. В раствор спирта (G) (1,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M) при комнатной температуре добавляли N, N-диметиламинопиридин (0,5 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Затем добавляли соответствующий амин (3,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (H).
Стадия 8. В раствор силилового эфира (H, 1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (1-59).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 46
Стадии 1-4 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 5. В раствор (S)-2-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридина (233,0 мг, 0,7 ммоль, 1,4 экв.) в THF (2,5 мл, 0,2 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (1,5 мл, 0,75 ммоль, 1,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид E (280,0 мг, 0,5 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония, разбавляли этилацетатом и нагревали до комнатной температуры. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта, полученного в результате реакции Жюлиа (F, 180 мг, 0,3 ммоль, 54%).
Стадия 6. В раствор ацетата F (250,0 мг, 0,4 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (3 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (58,0 мг, 0,4 ммоль, 1,1 экв.). Реакцию осуществляли в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли этилацетатом, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате пенистое твердое вещество (G, 235 мг, 0,4 ммоль, 100%) переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Стадия 7. В раствор спирта G (22,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,5 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли N, N-диметиламинопиридин (2,1 мг, 0,02 ммоль, 0,5 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (14,4 мг, 0,08 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Затем добавляли 1-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)пиперазин (20,4 мг, 0,12 ммоль, 3,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (H, 26,0 мг, 0,03 ммоль, 80%).
Стадия 8. В раствор силилового эфира (H, 26,0 мг, 0,03 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (0,3 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (17,0 мг, 0,09 ммоль, 3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 46, 16,3 мг, 0,025 ммоль, 85%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 8,48 (ddd, J=4,9, 1,9, 1,0 Гц, 1H), 7,54 (td, J=7,7, 1,9 Гц, 1H), 7,09 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,05 (t, J=6,1 Гц, 1H), 6,15-6,34 (m, 1H), 6,04 (d, J=10,8 Гц, 1H), 5,93 (dd, J=15,1, 7,5 Гц, 1H), 5,48-5,67 (m, 2H), 5,08 (d, J=10,5 Гц, 1H), 4,94 (d, J=9,5 Гц, 1H), 3,95 (dd, J=11,3, 3,8 Гц, 2H), 3,53-3,76 (m, 2H), 3,37-3,49 (m, 5H), 3,22-3,37 (m, 2H), 2,35-2,57 (m, 7H), 1,88 (s, 1H), 1,44-1,70 (m, 11H), 1,14-1,39 (m, 8H), 0,72-0,89 (m, 3H), MS (ES+) = 626,6 [M+H].
Таблица 1. Структуры и аналитические данные соединений 1-60
1
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-9-оксо-9-пирролидин-1-илнона-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
2
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]карбамоилокси]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
3
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-(пропилкарбамоилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
4
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
5
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилат
6
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]4-циклогептил-4-оксидопиперазин-4-ий-1-карбоксилат
7
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(диметилкарбамоилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
8
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-(диэтилкарбамоилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
9
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропан-2-ил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
10
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[бутил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
11
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[бутан-2-ил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
12
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-карбамоилокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
13
[(2S,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбоксилат 14
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[2-метоксиэтил(метил)карбамоил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
15
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]азетидин-1-карбоксилат
16
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2S)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат
17
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2S)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат
18
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пиперидин-1-карбоксилат
19
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилат
20
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилат
21
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-морфолин-4-карбоксилат
22
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
23
сложный эфир [(2R,3E,5E)-6-[(2R,3S,4E,6R,7R,10R)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-3-тиазолидинкарбоновой кислоты
24
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат 25
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат 26
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат 27
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-1,3-дигидроизоиндол-2-карбоксилат
28
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-индол-1-карбоксилат
29
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[2-(1-гидроксиэтил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
30
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
31
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2S,5S)-2,5-диметилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
32
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2,3-дигидроиндол-1-карбоксилат
33
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
34
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
35
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-6-(4-метилпиперазин-1-карбонил)окси-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2-окса-5-азаспиро[3.4]октан-5-карбоксилат
36
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
37
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
38
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-[6-[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
39
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
40
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
41
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
42
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
43
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-пропан-2-илпиперазин-1-карбоксилат
44
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-трет-бутилпиперазин-1-карбоксилат
45
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклопентилпиперазин-1-карбоксилат
46
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(оксан-4-ил)пиперазин-1-карбоксилат
47
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-6-циклогептил-2,6-диазаспиро[3.3]гептан-2-карбоксилат
48
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-3-метилпиперазин-1-карбоксилат
49
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклобутилпиперазин-1-карбоксилат
50
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-(1-метилпиперидин-4-ил)карбамат
51
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-морфолин-4-карбоксилат
52
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-(1S,4R)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилат
53
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-8-циклогептил-3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-карбоксилат
54
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-1,4-диазепан-1-карбоксилат
55
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогексилпиперазин-1-карбоксилат
56
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-пиперазин-1-карбоксилат
57
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1,4-диазепан-1-карбоксилат
58
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
59
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(азепан-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
60
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(8,8-дифтор-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил)пиперидин-1-карбоксилат
Соединения 61-104 (таблица 2) получали с помощью способа со схемы 2.
Схема 2
Общая процедура синтеза соединений 61-104
Стадия 1. Раствор соединения E7107 (I, 3,7 г, 5,1 ммоль, 1,0 экв.) в атмосфере азота в DMF (100 мл, 0,05 M) при 0°C обрабатывали имидазолом (2,5 г, 36,1 ммоль, 7,0 экв.) и добавляли TBSCl (3,9 г, 25,7 ммоль, 5,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 20 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (J, 4,7 г, 5,0 ммоль, 96%).
Стадия 2. В раствор олефина J (4,7 г, 5,0 ммоль, 1,0 экв.) в THF:H2O (10:1, 133 мл:13 мл, 0,03 M) в атмосфере азота при 0°C добавляли тетроксид осмия (12,4 мл, 1,0 ммоль, 0,2 экв., 2,5% раствор) с последующим добавлением N-метилморфолин-N-оксида (1,16 г, 9,9 ммоль, 2,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 13 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью сульфита натрия, разбавляли этилацетатом и органический слой промывали водой, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (K, 4,8 г, 4,9 ммоль, 99%).
Стадия 3. В раствор диола K (4,4 г, 4,5 ммоль, 1,0 экв.) в бензоле (100 мл, 0,05 M) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли тетраацетат свинца (4,0 г, 9,0 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью сульфита натрия и разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали водой, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Необходимый продукт (L, 1,5 г, 2,3 ммоль, 52%) переносили неочищенным.
Стадия 4. В раствор соответствующего сульфона (2,5 экв.) в THF (0,02 M) в атмосфере азота при -78°C добавляли KHMDS (2,5 экв.) по каплям и реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение пяти часов и затем обеспечивали ее нагревание до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (M).
Стадия 5. Раствор силилового эфира M (1,0 экв.) в MeOH (0,02 M) в атмосфере азота при комнатной температуре обрабатывали с помощью pTsOH (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем разбавляли этилацетатом и промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (61-104).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 63
Стадии 1-3 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 4. В раствор (S)-2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил-пирролидин-1-карбоксилата (45,0 мг, 0,12 ммоль, 2,5 экв.) в THF (2,0 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,23 мл, 0,12 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (30,0 мг, 0,05 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение пяти часов и затем обеспечивали ее нагревание до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (M, 35 мг, 0,04 ммоль, 76%).
Стадия 5. Раствор силилового эфира M (35,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в MeOH (2,0 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при комнатной температуре обрабатывали с помощью pTsOH (15,0 мг, 0,08 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем разбавляли этилацетатом и промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 63, 22,2 мг, 32 ммоль, 80%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: 0,90 (d, J=6,65 Гц, 3 H) 1,09 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,24 (s, 3 H) 1,32-1,45 (m, 2 H) 1,47-1,85 (m, 15 H) 1,85-1,94 (m, 4 H) 1,95-2,10 (m, 2 H) 2,50-2,68 (m, 4 H) 2,96-3,08 (m, 4 H) 3,09-3,21 (m, 1 H) 3,34-3,39 (m, 4 H) 3,52-3,88 (m, 5 H) 3,92-4,06 (m, 2 H) 4,97 (d, J=9,66 Гц, 1 H) 5,07 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,61 (dd, J=15,18, 9,79 Гц, 1 H) 5,72 (d, J=9,79 Гц, 2 H) 6,12 (dd, J=10,79, 1,00 Гц, 1 H) 6,37 (ddd, J=15,12, 10,85, 0,88 Гц, 1 H). MS (ES+) = 688,5 [M+H]+.
Таблица 2
Соединения 61-104
61
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-9-оксо-9-пирролидин-1-илнона-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
62
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
63
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 64
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
65
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
66
[(2S,3S,4E,6S,7S,10R)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
67
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
68
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
69
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 70
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-карбамоилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
71
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
72
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2S,5S)-2,5-диметилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
73
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
74
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
75
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
76
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
77
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
78
(2R)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-2-карбоновая кислота
79
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(3-оксопирролидин-1-карбонил)оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 80
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2-окса-7-азаспиро[3.4]октан-7-карбоксилат
81
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
82
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-5-[1-(пирролидин-1-карбонилоксиметил)циклопропил]пента-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 83
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S,4R)-3,4-дигидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 84
(3S)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-3-карбоновая кислота 85
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
86
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,5-дигидропиррол-1-карбонилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
87
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат 88
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-[(2-метилпропан-2-ил)оксикарбониламино]пирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
89
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоксилат
90
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
91
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
92
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
93
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
94
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиразин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
95
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
96
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(3-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
97
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
98
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
99
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
100
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
101
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
102
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
103
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиримидин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
104
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(6-пирролидин-1-илпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
Соединения 105-115 получали с помощью способа со схемы 3.
Схема 3
Общая процедура синтеза соединений 105-115
Стадия 1. Раствор 6-дезоксипладиенолида D (N, 100,0 мг, 0,2 ммоль, 1,0 экв.) в атмосфере азота в DMF (8 мл, 0,2 M) при 0°C обрабатывали с помощью имидазола (89,2 мг, 1,3 ммоль, 7,0 экв.) и TBSCl (140,3 мг, 0,9 ммоль, 5,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 20 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и органический слой промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (O, 143,0 мг, 0,19 ммоль, 100%).
Стадия 2. В раствор олефина O (30,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в дегазированном THF:H2O (10:1, 1,0 мл:0,1 мл, 0,01 M) в атмосфере азота при 0°C добавляли тетроксид осмия (0,1 мл, 0,008 ммоль, 0,2 экв., 2,5% раствор в трет-бутаноле) с последующим добавлением N-метилморфолин-N-оксида (9,2 мг, 0,08 ммоль, 2,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью сульфита натрия, разбавляли этилацетатом и органический слой промывали водой, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (P, 29,2 мг, 0,04 ммоль, 93%).
Стадия 3. В раствор триола P (498,2 мг, 0,6 ммоль, 1,0 экв.) в бензоле (25 мл, 0,03 M) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли тетраацетат свинца (553,4 мг, 1,2 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (Q, 232 мг, 0,5 ммоль, 80%).
Стадия 4. В раствор соответствующего сульфона (2,5 экв.) в THF (0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид Q (1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора хлорида аммония, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (R).
Стадия 5. В раствор ацетата R (1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (2,5 экв.). Реакцию осуществляли в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли этилацетатом, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло (S) переносили неочищенным на следующую стадию.
Стадия 6. В раствор спирта (S) (1,0 экв.) в дихлорэтане (0,1 M) при комнатной температуре добавляли N, N-диметиламинопиридин (0,3 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (4,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем добавляли соответствующий амин (10,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (T).
Стадия 7. В раствор силилового эфира T в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (105-115) (таблица 3).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 114
Стадии 1-3 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 4. В раствор, содержащий (S)-2-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридин (44,0 мг, 0,1 ммоль, 2,5 экв.) и THF (2,0 мл, 0,02 M), в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,27 мл, 0,1 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид Q (25 мг, 0,05 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,1 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора хлорида аммония, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (R, 21,0 мг, 0,04 ммоль, 69%).
Стадия 5. В раствор ацетата R (15,2 мг, 0,03 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (9,1 мг, 0,07 ммоль, 2,5 экв.). Реакцию осуществляли в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли этилацетатом, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло (S, 14 мг, 0,03 ммоль, 100%) переносили неочищенным на следующую стадию.
Стадия 6. В раствор спирта (S, 4,2 мг, 0,008 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли N, N-диметиламинопиридин (0,3 мг, 0,002 ммоль, 0,3 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (6,4 мг, 0,03 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем добавляли N-метилпиперазин (0,009 мл, 0,08 ммоль, 10,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (T, 4,9 мг, 0,007 ммоль, 94%).
Стадия 7. В раствор силилового эфира T (4,9 мг, 0,007 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (0,7 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (3,6 мг, 0,02 ммоль, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 114, 3,6 мг, 0,007 ммоль, 89%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,88 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 0,99 (d, J=6,90 Гц, 3 H) 1,13-1,33 (m, 2 H) 1,44 (d, J=6,90 Гц, 3 H) 1,47-1,51 (m, 1 H) 1,73 (d, J=0,75 Гц, 3 H) 1,74-1,81 (m, 1 H) 1,84-1,97 (m, 1 H) 2,30 (s, 3 H) 2,36 (br. s., 4 H) 2,39-2,61 (m, 3 H) 3,41 (m, 1 H) 3,49 (br. s., 4 H) 3,67-3,74 (m, 2 H) 4,86 (t, J=10,04 Гц, 1 H) 5,13 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,35 (dd, J=14,93, 9,66 Гц, 1 H) 5,54 (dd, J=15,06, 9,91 Гц, 1 H) 6,00 (dd, J=15,12, 7,47 Гц, 1 H) 6,12 (d, J=10,92 Гц, 1 H) 6,32 (ddd, J=15,09, 10,82, 1,07 Гц, 1 H) 7,11 (ddd, J=7,53, 4,89, 1,13 Гц, 1 H) 7,16 (d, J=7,91 Гц, 1 H) 7,61 (td, J=7,65, 1,88 Гц, 1 H) 8,55 (d, J=4,96 Гц, 1 H), MS (ES+): 540,3 [M+H]+.
Соединение 116 получали с помощью способа на схеме 4.
Схема 4
Стадия 1. В раствор промежуточного соединения Q (35 мг, 0,062 ммоль, 1 экв.) и SPE-11 (23,20 мг, 0,068 ммоль, 1,1 экв.) в тетрагидрофуране (3 мл) при к. т. в атмосфере азота последовательно добавляли трифениларсин (18,98 мг, 0,062 ммоль, 1 экв.), оксид серебра(I) (71,8 мг, 0,31 ммоль, 5 экв.) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (11,35 мг, 0,012 ммоль, 0,2 экв.) и перемешивали в течение 16 ч. в темноте при такой же температуре. Твердое вещество отфильтровывали через целит и подушку промывали с помощью EtOAc. Избыточный растворитель удаляли при пониженном давлении и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-50% EtOAc/гексаны) с получением необходимого продукта (SPE-12, 17,6 мг, 0,027 ммоль, 43,6%).
Стадия 2. В раствор SPE-12 (17,6 мг, 0,027 ммоль, 1 экв.) в THF (2 мл) добавляли TBAF (0,216 мл, 0,216 ммоль, 8 экв.) при 0°C, затем реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь непосредственно применяли к силикагелю и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc/гексаны) с получением необходимого продукта (соединение 116, 5,2 мг, 9,69 мкмоль, 35,8%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: ppm 0,86-1,02 (m, 15 H) 1,37 (d, J=3,51 Гц, 8 H) 1,47-1,55 (m, 2 H) 1,62-1,71 (m, 3 H) 1,79 (s, 3 H) 1,85-1,96 (m, 2 H) 2,02 (s, 3 H) 2,42-2,48 (m, 1 H) 2,55-2,63 (m, 2 H) 2,65-2,76 (m, 1 H) 2,83-2,94 (m, 1 H) 3,50-3,62 (m, 1 H) 3,80 (s, 2 H) 4,89-4,97 (m, 1 H) 5,01-5,09 (m, 1 H) 5,39-5,56 (m, 2 H) 5,82-5,96 (m, 1 H) 6,11-6,20 (m, 1 H) 6,49-6,62 (m, 1 H). MS(ES+): 535,56 [M-H]-.
Таблица 3
Соединения 105-116
105
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
106
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
107
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
108
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
109
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
110
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
111
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
112
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
113
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
114
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
115
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N, N-диметилкарбамат
116
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
Соединения 117-134 получали с помощью способа со схемы 5.
Схема 5
Общая процедура синтеза соединений 117-134
Стадия 1. В раствор NaH (8,3 г, 207 ммоль, 1,2 экв.) в диэтиловом эфире (400 мл, 0,1 M) при 0°C по каплям добавляли диэтил-2-метилмалонат (U, 30 г, 172 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь постепенно нагревали до температуры образования флегмы и перемешивали с обратным холодильником в течение трех часов. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и по каплям добавляли йодоформ (67,8 г, 172 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь еще раз нагревали с обратным холодильником в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C, гасили с помощью 10% водного раствора хлористоводородной кислоты, разбавляли простым эфиром и промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло затем растворяли в этаноле/воде/метаноле (400 мл, 3:1:1) и добавляли KOH (48,3 г, 861 ммоль, 5,0 экв.) при комнатной температуре. Раствор затем нагревали до и выдерживали при 75°C в течение 24 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло разбавляли этилацетатом и водой, экстрагировали этилацетатом, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (V, 26 г, 123 ммоль, 71%).
Стадия 2. В раствор кислоты V (25,0 г, 118 ммоль, 1,0 экв.) в THF (400 мл, 0,3 M) при 0°C добавляли алюмогидрид лития (4,9 г, 130 ммоль, 1,1 экв.). Реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение четырех часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили с помощью воды. В полученную в результате суспензию загружали раствор сегнетовой соли (20% по объему) и перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Смесь фильтровали при промывании этилацетатом и объем фильтрата уменьшали под вакуумом. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (W, 15 г, 76 ммоль, 64%).
Стадия 3. В раствор спирта W (60 мг, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) в диэтиловом эфире (2 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли диоксид марганца (395 мг, 4,5 ммоль, 15,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение двух часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь фильтровали через Celite® и фильтрат концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (X, 59 мг, 0,30 ммоль, 99%) переносили без очистки.
Стадия 4. В раствор (1R,2S)-2-(N-бензил-2,4,6-триметилфенилсульфонамидо)-1-фенилпропилпропионата (1,9 г, 4,4 ммоль, 1,0 экв.), полученного в соответствии с литературным образцом (Masamune et al. J. Am. Chem. S°C. 1997, 119, 2586-2587), в дихлорметане (40 мл, 0,1 M) при -78°C добавляли триэтиламин (1,7 мл, 12,3 ммоль, 3,0 экв.) с последующим добавлением по каплям дициклогексил(((трифторметил)сульфонил)окси)борана (2,67 г, 8,0 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение двух часов. Затем по каплям в течение тридцати минут добавляли раствор (E)-3-йод-2-метилакрилальдегида (X, 1,2 г, 6,2 ммоль, 1,5 экв.) в дихлорметане (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение двух часов и затем обеспечивали нагревание до 0°C. Реакционную смесь гасили посредством добавления водного раствора пероксида водорода (16 мл, 20,5 ммоль) и обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до комнатной температуры. Объем растворителя уменьшали под вакуумом и раствор разбавляли дихлорметаном и водой. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (Y, 1,9 г, 2,8 ммоль, 69%).
Стадия 5. В раствор спирта Y (2,8 г, 4,1 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (50 мл, 0,1 M) при -78°C добавляли 2,6-лутидин (1,0 мл, 8,3 ммоль, 2,0 экв.) с последующим добавлением трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфоната (1,1 мл, 4,9 мл, 1,2 экв.). Реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и гасили с помощью водного раствора хлорида аммония. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (Z, 2,8 г, 3,5 ммоль, 85%).
Стадия 6. В раствор сложного эфира Z (2,8 г, 3,5 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (40 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли DIBAL (8,9 мл, 8,9 ммоль, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение одного часа и затем гасили с помощью раствора сегнетовой соли (20% по объему) и перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Смесь фильтровали через Celite® при промывании этилацетатом и объем фильтрата уменьшали под вакуумом. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (AA, 1,1 г, 2,8 ммоль, 80%).
Стадия 7. В раствор спирта AA (2,97 г, 8,0 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (80 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли периодинан Десса-Мартина (4,4 г, 10,4 ммоль, 1,3 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение двух часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (BB, 2,6 г, 7,1 ммоль, 88%).
Стадия 8. В раствор метилтрифенилфосфония бромида (11,8 г, 33,0 ммоль, 3,0 экв.) в THF (110 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли н-бутиллитий (13,2 мл, 33,0 ммоль, 3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут и затем охлаждали до -78°C. Альдегид BB (4,1, 11,0 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 M) добавляли по каплям и реакционную смесь перемешивали в течение одного часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и нагревали до комнатной температуры. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (CC, 3,8 г, 10,4 ммоль, 94%).
Стадия 9. В раствор олефина CC (0,1 г, 0,4 ммоль, 1,0 экв.) в THF (4 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли TBAF (0,45 мл, 0,4 ммоль, 1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Добавляли диэтиловый эфир и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (DD, 0,1 г, 0,4 ммоль, 99%) переносили без очистки.
Стадия 10. В раствор спирта DD (0,15 г, 0,4 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (4 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли EDC (0,10 г, 0,5 ммоль, 1,3 экв.) с последующим добавлением ноненовой кислоты (0,08 г, 0,4 ммоль, 1,1 экв.) и DMAP (каталитическое количество). Реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (EE, 0,13 г, 0,33 ммоль, 81%).
Стадия 11. В раствор сложного эфира EE (0,5 г, 1,3 ммоль, 1,0 экв.) в дегазированном толуоле (65 мл, 0,05 M) при комнатной температуре добавляли бензохинон (0,007 г, 0,06 ммоль, 0,05 экв.) с последующим добавлением катализатора Ховейды-Граббса (0,08 г, 0,13 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь постепенно нагревали до 60°C и перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь концентрировали. Неочищенный материал (FF) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 12. В раствор макроцикла FF (1,0 экв.) в диоксане (65 мл, 0,05 M) добавляли диоксид селена (0,4 г, 3,8 ммоль, 3,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 80°C в течение 3 часов. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (GG, 0,3 г, 0,8 ммоль, 64%).
Стадия 13. В раствор спирта GG (1,0 экв.) в MTBE (0,1 M) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (5,0 экв.), пара-нитрофенилхлорформиат (3,0 экв.), DMAP (каталитическое количество) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили с помощью воды. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (HH) переносили без очистки.
Стадия 14. В раствор карбоната HH (1,0 экв.) в MTBE (0,1 M) при комнатной температуре добавляли соответствующий амин (2,0 экв.). После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (II).
Стадия 15. В раствор винилиодида II (1,0 экв.) в THF (0,1 M) при комнатной температуре добавляли винилпинаколборонат (2,5 экв.), оксид серебра (5,0 экв.), трифениларсин (1,2 экв.) и Pd2(dba)3 (0,15 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь фильтровали через Celite®. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (JJ).
Стадия 16. В раствор диена JJ (1,0 экв.) в THF:H2O (0,1 M) при 0°C добавляли N-метилморфолин-N-оксид (1,2 экв.) и тетроксид осмия в t-BuOH (0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора бикарбоната натрия. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал (KK) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 17. В раствор диола KK (1,0 экв.) в бензоле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли тетраацетат свинца (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили путем добавления Na2S2O3 и затем бикарбоната натрия. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (LL).
Стадия 18. В раствор соответствующего сульфона (2,5 экв.) в THF (0,1 M) при -78°C добавляли KHMDS (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение одного часа. Затем по каплям добавляли раствор альдегида LL в THF (1,0 экв.) при -78°C. Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до -20°C и ее перемешивали при -20°C в течение двух часов. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора бикарбоната натрия и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (117-134).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 128
Стадии 1-12 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 13. В раствор спирта GG (0,30 г, 0,8 ммоль, 1,0 экв.) в MTBE (3,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (0,55 мл, 4,0 ммоль, 5,0 экв.), пара-нитрофенилхлорформиат (0,24 г, 1,2 ммоль, 2,0 экв.) и DMAP (0,12 г, 0,9 ммоль, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили с помощью воды. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (HH) переносили без очистки.
Стадия 14. В раствор карбоната HH (1,0 экв.) в MTBE (0,1 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (0,13 мл, 1,2 ммоль, 1,5 экв.). После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (II, 0,30 г, 0,5 ммоль, 67,5%).
Стадия 15. В раствор винилиодида II (0,15 г, 0,30 ммоль, 1,0 экв.) в THF (3,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли винилпинаколборонат (0,13 мл, 0,30 ммоль, 2,5 экв.), оксид серебра (0,35 г, 1,50 ммоль, 5,0 экв.), трифениларсин (0,11 г, 0,36 ммоль, 1,2 экв.) и Pd2(dba)3 (0,04 г, 0,04 ммоль, 0,15 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь фильтровали через Celite®. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (JJ, 0,12 г, 0,3 ммоль, 96%).
Стадия 16. В раствор диена JJ (0,12 г, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) в THF:H2O (4 мл:0,4 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли N-метилморфолин-N-оксид (0,04 г, 0,35 ммоль, 1,2 экв.) и тетроксид осмия в t-BuOH (0,37 мл, 0,03 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора бикарбоната натрия. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал (JJ, 0,13 г, 0,3 ммоль, 100%) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 17. В раствор диола KK (0,10 г, 0,23 ммоль, 1,0 экв.) в ацетоне (3,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли диацетоксийодбензол (0,12 г, 0,27 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили путем добавления Na2S2O3 и затем бикарбоната натрия. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (LL, 0,05 г, 0,11 ммоль, 49%).
Стадия 18. В раствор (S)-2-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридина (0,08 г, 0,25 ммоль, 2,5 экв.) в THF (0,6 мл, 0,1 M) при -78°C добавляли KHMDS (0,50 мл, 0,25 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение одного часа. Затем по каплям добавляли раствор альдегида LL (0,04 г, 0,1 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,1 мл) при -78°C. Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до -20°C и перемешивали при -20°C в течение двух часов. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора бикарбоната натрия и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 128, 0,03 г, 0,06 ммоль, 60%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,87 (d, J=6,76 Гц, 3 H) 1,25 (br. s, 4H) 1,43 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,60 (br. s., 4 H) 1,76-1,85 (m, 3 H) 2,22 (m, 1 H) 2,31 (br. s, 4H), 2,37 (br. s, 4H) 2,45-2,53 (m, 1H) 3,48 (br. s., 4 H) 3,70 (m, 1 H) 4,99-5,12 (m, 2 H) 5,36 (m, 1 H) 5,43-5,51 (m, 1 H) 5,98 (dd, J=15,06, 7,53 Гц, 1 H) 6,13 (d, J=11,17 Гц, 1 H) 6,32 (ddd, J=15,06, 10,92, 1,13 Гц, 1 H) 7,11 (t, J=6,14 Гц, 1 H) 7,16 (d, J=8,08 Гц, 1 H) 7,61 (td, J=7,69, 1,82 Гц, 1 H) 8,54 (d, J=4,96 Гц, 1 H). MS (ES+) = 510,1 [M+H]+.
Таблица 4
Соединения 117-134
117
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
118
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
119
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-пирролидин-1-карбоксилат
120
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилат
121
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
122
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
123
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
124
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
125
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-карбоксилат
126
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
127
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
128
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
129
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]N, N-диметилкарбамат
130
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
131
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
132
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3S)-3-триэтилсилилоксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
133
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
134
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
Соединения 135-138 получали в соответствии со способом со схемы 6.
Схема 6
Общая процедура синтеза соединений 135-138
Стадия 1. В раствор трет-бутоксида калия (1,05 г, 8,9 ммоль, 1,05 экв.) в атмосфере азота в DMF (20 мл, 0,4 M) при комнатной температуре добавляли 2-метилциклогексанон MM (1,1 мл, 8,9 ммоль, 1,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли аллилхлорформиат (1,1 мл, 10,7 ммоль, 1,2 экв.) в течение 5 мин. и перемешивали в течение 30 мин. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее гасили водой. Реакционную смесь экстрагировали с помощью смеси 2:1 дихлорметан/гексаны, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/диэтиловый эфир в качестве элюента) с получением необходимого продукта (аллил-(2-метилциклогекс-1-ен-1-ил)карбонат, NN, 0,7 г, 3,6 ммоль, 40%).
Стадия 2. В смесь (R)-2-[2-(дифенилфосфино)фенил]-4-изопропил-4,5-дигидрооксазола NN (0,01 г, 0,03 ммоль, 0,1 экв.) и трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (0,01 г, 0,01 ммоль, 0,05 экв.) добавляли дегазированный THF (2,5 мл, 0,01 M) в атмосфере аргона. Обеспечивали перемешивание реакционной смеси при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли аллил(2-метилциклогекс-1-ен-1-ил)карбонат (0,1 г, 0,25 ммоль, 1,0 экв.) и перемешивали в течение 8 ч. Затем реакционную смесь оставляли отстаиваться при -20°C в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и полученный в результате неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (пентан/диэтиловый эфир в качестве элюента) с получением необходимого продукта, ((R)-2-аллил-2-метилциклогексанона OO (0,02 г, 0,12 ммоль, 46%).
Стадия 3. В раствор соединения OO (33 мг, 0,22 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (4,0 мл, 0,05 M) при 0°C добавляли бикарбонат натрия (0,13 г, 1,2 ммоль, 5,6 экв.) с последующим добавлением перуксусной кислоты (0,17 мл, 0,76 ммоль, 30 вес. % в уксусной кислоте, 3,5 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры в течение 4 часов и затем ее перемешивали при комнатной температуре в течение дополнительных 10 часов. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и экстрагировали с помощью дихлорметана. Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением необходимого продукта, (R)-7-аллил-7-метилоксепан-2-она (PP, 0,04 г, 0,22 ммоль, 100%), который переносили неочищенным на следующую стадию.
Стадия 4. В раствор соединения PP (0,04 г, 0,22 ммоль, 1,0 экв.) в безводном метаноле (6,0 мл, 0,04 M) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли триэтиламин (0,15 мл, 5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 8 часов при 90°C. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли карбонат калия (6,0 мг, 0,04 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 14 часов при комнатной температуре, после завершения этого времени посредством LCMS или TLC определяли завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали с получением необходимого продукта (QQ, 0,04 г, 0,22 ммоль, 100%), который переносили неочищенным на следующую стадию.
Стадия 5. В охлажденный раствор соединения QQ (0,7 г, 3,6 ммоль, 1,0 экв.) и 2,6-лутидина (0,8 мл, 7,2 ммоль, 2 экв.) в дихлорметане (7 мл, 0,05 M) при -78°C по каплям добавляли триэтилсилилтрифторметансульфонат (0,98 мл, 4,3 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 1 часа, после завершения этого времени посредством LCMS или TLC определяли завершение реакции. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры, ее гасили с помощью бикарбоната натрия и экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические фракции промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (RR, 0,7 г, 2,3 ммоль, 63%).
Стадия 6. В охлажденный раствор соединения RR (0,04 г, 0,13 ммоль, 1 экв.) в THF (2,5 мл, 0,06 M) при 0°C добавляли пероксид водорода (0,06 мл, 30%, 5 экв.) с последующим добавлением раствора гидроксида лития (0,07 г, 0,64 ммоль, 5 экв.) в воде (0,5 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, добавляли метанол (8 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 48 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью сульфита натрия, затем с помощью насыщенного раствора лимонной кислоты. Смесь разбавляли этилацетатом, промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (SS, 0,02 г, 0,06 ммоль, 47%).
Стадия 7. В раствор кислоты SS (0,02 г, 0,06 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,06 M) при комнатной температуре добавляли 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (0,02 г, 0,09 ммоль, 1,5 экв.) и раствор (3S,4S, E)-1-йод-2,4-диметилгекса-1,5-диен-3-ола (0,023 г, 0,09 ммоль, 1,5 экв.). Реакцию осуществляли в течение 16 часов и ее завершение определяли посредством TLC. Реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью солевого раствора, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (TT, 0,02 г, 0,04 ммоль, 63%).
Стадия 8. В дегазированный раствор олефина TT (0,02 г, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) и бензохинона (0,4 мг, 0,004 ммоль, 0,1 экв.) в толуоле (10,0 мл, 0,04 M) в атмосфере азота при 20°C добавляли катализатор Ховейды-Граббса (0,006 г, 0,01 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны в качестве элюента) с получением необходимого продукта (UU, 0,01 г, 0,02 ммоль, 53%).
Стадия 9. В раствор макроцикла UU (0,01 г, 0,02 ммоль, 1,0 экв.) в диоксане (2 мл, 0,1 M) в атмосфере азота добавляли диоксид селена (0,007 г, 0,06 ммоль, 3,0 экв.) в атмосфере азота при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 20 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны в качестве элюента) с получением необходимого продукта (VV, 0,007 г, 0,013 ммоль, 68%).
Стадия 10. В раствор спирта VV (1,0 экв.) в MTBE (0,1 M) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (5,0 экв.), пара-нитрофенилхлорформиат (3,0 экв.) и DMAP (каталитическое количество) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили с помощью воды. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (XX) переносили без очистки.
Стадия 11. В раствор карбоната XX (1,0 экв.) в MTBE (0,1 M) при комнатной температуре добавляли соответствующий амин (2,0 экв.). После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (YY).
Стадия 12. В раствор винилиодида YY (1,0 экв.) в THF (0,1 M) при комнатной температуре добавляли винилпинаколборонат (4,0 экв.), оксид серебра (5,0 экв.), трифениларсин (1,2 экв.) и Pd2(dba)3 (0,15 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь фильтровали через Celite®. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (ZZ).
Стадия 13. В раствор диена ZZ (1,0 экв.) в THF:H2O (0,1 M) при 0°C добавляли N-метилморфолин-N-оксид (1,2 экв.) и тетроксид осмия в t-BuOH (0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора бикарбоната натрия. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал (AAA) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 14. В раствор диола AAA (1,0 экв.) в смеси ацетон:H2O (0,1 M) при комнатной температуре добавляли диацетоксийодбензол (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили путем добавления тиосульфита натрия и затем бикарбоната натрия. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (BBB).
Стадия 15. В раствор соответствующего сульфона (1,0 экв.) в THF (0,1 M) при -78°C добавляли KHMDS (3,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение одного часа. Затем по каплям добавляли раствор альдегида BBB в THF (1,0 экв.) при -78°C. Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до -20°C и ее перемешивали при -20°C в течение двух часов. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора бикарбоната натрия и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (CCC).
Стадия 16. В раствор силилового эфира CCC в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (135-138), (таблица 5).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 135
Стадии 1-9 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 10. В раствор спирта VV (0,007 г, 0,013 ммоль, 1,0 экв.) в MTBE (1,0 мл, 0,1M) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (0,02 мл, 0,09 ммоль, 7,0 экв.), пара-нитрофенилхлорформиат (0,009 г, 0,05 ммоль, 3,5 экв.) и DMAP (2,0 мг, 0,016 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили с помощью воды. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (XX) переносили без очистки.
Стадия 11. В раствор карбоната XX (1,0 экв.) в MTBE (1,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (0,007 мл, 0,07 ммоль, 5,0 экв.). После определения посредством TLC или LCMS завершения реакции реакционную смесь концентрировали, и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (YY, 0,008 г, 0,012 ммоль, 92%).
Стадия 12. В раствор винилиодида YY (0,01 г, 0,015 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли винилпинаколборонат (0,013 мл, 0,08 ммоль, 5,0 экв.), оксид серебра (18,0 мг, 0,08 ммоль, 5,0 экв.), трифениларсин (5,7 мг, 0,02 ммоль, 1,2 экв.) и Pd2(dba)3 (3,0 мг, 0,003 ммоль, 0,15 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь фильтровали через Celite®. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (ZZ, 0,009 г, 0,016 ммоль, >95%).
Стадия 13. В раствор диена ZZ (0,009 г, 0,016 ммоль, 1,0 экв.) в THF:H2O (2,0 мл:0,2 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли N-метилморфолин-N-оксид (3,2 мг, 0,03 ммоль, 1,5 экв.) и оксид осмия в t-BuOH (0,05 мл, 0,004 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения завершения реакции посредством TLC или LCMS реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора бикарбоната натрия. Добавляли этилацетат и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал (AAA, 0,008 г, 0,014 ммоль, 75%) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 14. В раствор диола AAA (0,07 г, 0,12 ммоль, 1,0 экв.) в смеси ацетон:H2O (5 мл:0,5 мл, 0,02 M) при комнатной температуре добавляли диацетоксийодбензол (0,048 г, 0,15 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 минут или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили путем добавления тиосульфита натрия и затем бикарбоната натрия. Добавляли дихлорметан и органический слой промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (BBB, 60 мг, 0,11 ммоль, 87%).
Стадия 15. В раствор (S)-2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропилпирролидин-1-карбоксилата (0,026 г, 0,07 ммоль, 2,5 экв.) в THF (2,0 мл, 0,01 M) при -78°C добавляли KHMDS (0,14 мл, 0,07 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение одного часа. Затем по каплям добавляли раствор альдегида BBB (0,015 г, 0,03 ммоль, 1,0 экв.) при -78°C. Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до -20°C и перемешивали при -20°C в течение двух часов. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора бикарбоната натрия и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (CCC, 0,016 мг, 0,023 ммоль, 76%).
Стадия 16. В раствор силилового эфира CCC (0,016 г, 0,023 ммоль, 1 экв.) в метаноле (0,2 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (8,0 мг, 0,04 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 135, 7 мг, 0,012 ммоль, 44%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: 0,89 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,09 (d, J=6,90 Гц, 3 H) 1,13-1,31 (m, 5 H) 1,35-1,53 (m, 2 H) 1,75-1,80 (m, 3 H) 1,82-1,94 (m, 5 H) 1,94-2,08 (m, 1 H) 2,39 (s, 2 H) 2,53-2,66 (m, 2 H) 2,69 (s, 3 H) 2,94 (br. s., 4 H) 3,34-3,40 (m, 4 H) 3,70 (br. s., 4 H) 3,91-4,03 (m, 2 H) 4,93-4,99 (m, 1 H) 5,07-5,13 (m, 1 H) 5,55 (dd, J=15,12, 9,85 Гц, 1 H) 5,71 (m, J=9,79 Гц, 2 H) 6,13 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 6,37 (ddd, J=15,12, 10,85, 1,00 Гц, 1 H). MS (ES+) = 590,5 [M+H]+.
Таблица 5
Соединения 135-138
135
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
136
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
137
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат 138
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-(1-фенилтетразол-5-ил)оксипирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
Соединения 139-142 получали с помощью способа со схемы 7.
Схема 7
Общая процедура синтеза соединений 139-142
Стадия 1. В раствор метил-4-оксопентаноата DDD (10,0 г, 76,8 ммоль, 1,0 экв.) и аллилтриметилсилана (13,4 мл, 84,5 ммоль, 1,1 экв.) в атмосфере азота в THF (13,4 мл, 6 M) при комнатной температуре добавляли TBAF (1,0 г, 3,8 ммоль, 0,05 экв.) и 4-Å молекулярные сита (0,2 экв. вес.). Реакционную смесь перемешивали с обратным холодильником в течение 36 часов. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (5-аллил-5-метилдигидрофуран-2(3H)-он) (EEE, 5,8 г, 21,7 ммоль, 28%).
Стадия 2. В охлажденный раствор N, O-диметилгидроксиламина гидрохлорида (1,7 г, 17,8 ммоль, 5,0 экв.) в THF (20,0 мл, 0,9 M) в атмосфере азота при 0°C добавляли триметилалюминий (7,1 мл, 14,3 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Раствор 5-аллил-5-метилдигидрофуран-2(3H)-она, EEE, (0,5 г, 3,6 ммоль, 1,0 экв.) в THF (5,0 мл) добавляли при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь выливали в охлажденную смесь этилацетата и насыщенного тартрата калия и перемешивали в течение 15 мин. Органический слой отделяли и водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные органические фракции высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением необходимого продукта (4-гидрокси-N-метокси-N,4-диметилгепт-6-енамид, FFF), который переносили неочищенным на следующую стадию.
Стадия 3. В раствор 4-гидрокси-N-метокси-N,4-диметилгепт-6-енамида FFF (1,0 экв.) в DMF (20,0 мл, 0,9 M) при комнатной температуре добавляли 1H-имидазол (1,2 г, 17,8 ммоль, 5,0 экв.) и хлортриэтилсилан (2,4 мл, 14,3 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную смесь разбавляли солевым раствором и экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные органические фракции высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (N-метокси-N,4-диметил-4-((триэтилсилил)окси)гепт-6-енамида (GGG, 0,56 г, 1,8 ммоль, 50%).
Стадия 4. В раствор амида GGG (0,25 г, 0,79 ммоль, 1,0 экв.) в THF (6,0 мл, 0,13 M) в атмосфере азота при -78°C добавляли DIBAL-H (1,3 мл, 1,3 ммоль, 1,6 экв.) и перемешивали в течение одного часа. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора хлористоводородной кислоты (1 M) и перемешивали в течение дополнительных 15 мин. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом и объединенные органические фракции концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (4-метил-4-((триэтилсилил)окси)гепт-6-еналь, HHH, 0,19 г, 0,74 ммоль, 93%).
Стадия 5. В раствор (S)-3-ацетил-4-бензилоксазолидин-2-она HHH (0,15 г, 0,68 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (3,0 мл, 0,2 M) в атмосфере азота при -78°C добавляли дибутил(((трифторметил)сульфонил)окси)боран (0,75 мл, 0,75 ммоль, 1 M толуол, 1,1 экв.) с последующим добавлением диизопропилэтиламина (0,15 мл, 0,89 ммоль, 1,3 экв.). Реакционную смесь постепенно перемешивали при -78°C в течение 15 мин., при 0°C в течение 1 часа и затем при -78°C в течение 30 мин. В охлажденную реакционную смесь добавляли по каплям 4-метил-4-((триэтилсилил)окси)гепт-6-еналь (0,17 г, 0,68 ммоль, 1,0 экв.) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические фракции высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимых диастереомерных продуктов разделяемой смеси (III-A и III-B). Стереохимия каждого диастереоизомера была назначена в соответствии с данными их NOE и кросс-пиком между H4 и H8.
III-A
1H ЯМР (ХЛОРОФОРМ-d) δ: 7,09-7,28 (m, 2H), 5,74 (dd, J=17,7, 9,2 Гц, 1H), 4,96 (d, J=11,8 Гц, 1H), 4,54-4,65 (m, 1H), 3,99-4,14 (m, 1H), 3,15-3,27 (m, 1H), 3,05-3,14 (m, 1H), 3,00-3,04 (m, 1H), 2,88-2,98 (m, 1H), 2,63-2,71 (m, 1H), 2,15 (d, J=6,3 Гц, 1H), 1,52-1,59 (m, 1H), 1,20-1,49 (m, 4H), 1,10-1,16 (m, 1H), 0,68-0,91 (m, 7H), 0,47-0,56 (m, 2H).
13C ЯМР (ХЛОРОФОРМ-d) δ: 171,2, 153,5, 153,4, 135,4, 135,3, 135,2, 135,1, 135,0, 135,0, 129,4, 129,0, 129,0, 128,9, 127,4, 127,4, 127,3, 117,2, 117,2, 117,1, 117,1, 77,3, 76,4, 75,0, 74,9, 68,5, 66,3, 66,2, 66,2, 66,1, 55,2, 55,2, 55,1, 55,1, 47,3, 46,9, 38,0, 37,9, 37,8, 33,8, 31,2, 31,1, 31,0, 29,8, 27,8, 27,7, 27,6, 27,6, 26,6, 26,5, 26,5, 25,8, 25,5, 25,5, 25,3, 19,2, 19,1, 19,0, 18,9, 14,1, 14,0, 14,0, 13,9, 13,8, 13,8, 7,2, 6,9.
III-B
1H ЯМР (ХЛОРОФОРМ-d) δ: 7,27-7,37 (m, 6H), 7,22 (d, J=6,8 Гц, 4H), 5,78-5,87 (m, 1H), 5,03-5,09 (m, 3H), 4,66-4,74 (m, 2H), 4,06-4,25 (m, 6H), 3,28-3,34 (m, 2H), 3,05-3,12 (m, 3H), 2,79-2,83 (m, 1H), 2,57 (s, 2H), 2,20-2,29 (m, 3H), 1,59-1,70 (m, 4H), 1,45-1,54 (m, 2H), 1,31-1,41 (m, 1H), 1,20-1,29 (m, 6H), 0,93-1,00 (m, 15H), 0,57-0,64 (m, 9H).
13C ЯМР (ХЛОРОФОРМ-d) δ: 172,8, 172,8, 171,1, 170,3, 153,7, 153,5, 135,3, 135,1, 135,0, 135,0, 129,4, 129,0, 129,0, 128,9, 127,4, 127,4, 117,2, 117,2, 76,8, 75,0, 75,0, 68,6, 68,5, 66,3, 66,1, 60,4, 55,1, 55,1, 55,0, 53,5, 47,3, 47,0, 42,9, 42,8, 38,0, 38,0, 37,8, 37,8, 31,1, 31,1, 30,7, 27,8, 27,6, 26,6, 25,5, 23,8, 21,0, 19,1, 14,2, 14,0, 13,9, 13,7, 7,2, 6,9, 6,8, 6,6.
Подобные процедуры применяли для III-A и III-B
Стадия 6. В раствор спирта III-A (1,0 экв.) в DMF (0,09 M) при комнатной температуре добавляли 1H-имидазол (5,0 экв.) и трет-бутилхлордиметилсилан (2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли солевым раствором и экстрагировали с помощью этилацетата. Объединенные органические фракции высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (JJJ-A).
Стадия 7. В охлажденный раствор JJJ-A (1,0 экв.) в THF (0,9 M) при 0°C добавляли пероксид водорода (7,6 экв.) с последующим добавлением раствора гидроксида лития (8,0 экв.) в воде (0,8 M). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа и затем при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь гасили с помощью тиосульфата натрия. Смесь экстрагировали с помощью этилацетата, подкисляли до pH 3 и экстрагировали с помощью этилацетата. Органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимой кислоты (KKK-A).
Стадия 8. В раствор кислоты KKK-A (1,0 экв.) и только что полученного (3S,4S, E)-1-йод-2,4-диметилгекса-1,5-диен-3-ола (1,4 экв.) (для процедур, касающихся синтеза (3S,4S, E)-1-йод-2,4-диметилгекса-1,5-диен-3-ола, см.: Kumar, V.P.; Chandrasekhar, S. Org. Lett. 2013, 15, 3610-3613) в дихлорметане (0,08 M) при комнатной температуре добавляли 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (1,3 экв.) и DMAP (каталитическое количество). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и завершение реакции определяли посредством TLC. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого сложного эфира (LLL-A).
Стадия 9. В дегазированный раствор олефина LLL-A (1,0 экв.) и бензохинона (0,05 экв.) в толуоле (0,01 M) в атмосфере азота при 20°C добавляли катализатор Ховейды-Граббса (0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны в качестве элюента) с получением необходимого продукта (MMM-A).
Стадия 10. В раствор раствора макроцикла MMM-A (1,0 экв.) в диоксане (0,1 M) в атмосфере азота добавляли диоксид селена (4,0 экв.) в атмосфере азота при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 20 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны в качестве элюента) с получением необходимых диастереоизомерных продуктов: разделяемой смеси (NNN-A) и (OOO-A). Стереохимию каждого диастереоизомера назначали в соответствии с их данными COSY, HMBC, HMQC и NOESY.
NNN-A
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -0,03-0,03 (m, 4 H) 0,49-0,63 (m, 5 H) 0,80-0,94 (m, 15 H) 1,16-1,23 (m, 3 H) 1,25-1,45 (m,3 H) 1,39-1,50 (m, 6 H) 1,63-1,86 (m, 3 H) 2,06 (s, 1 H) 2,22-2,48 (m, 2 H) 3,73 (dd, J=8,16, 3,89 Гц, 1 H) 3,92 (d, J=10,29 Гц, 1 H) 3,88 -3,96 (m, 1 H) 5,06 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 5,33 (dd, J=15,06, 9,79 Гц, 1 H) 5,49 (dd, J=15,06, 9,79 Гц, 1 H) 6,40 (d, J=1,00 Гц, 1 H) 6,37-6,44 (m,1 H) 7,20 (s, 3 H).
13C ЯМР (100 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -4,9, -4,8, 6,8, 7,1, 16,5, 18,1, 19,3, 22,9, 25,8, 29,0, 36,9, 40,4, 40,6, 70,2, 76,7, 78,2, 79,3, 80,8, 83,8, 128,9, 138,4, 143,8, 168,7.
OOO-A
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -0,03-0,02 (m, 6 H) 0,47-0,68 (m, 6 H) 0,78-0,95 (m, 21 H) 1,15-1,35 (m, 6 H) 1,37-1,58 (m, 7 H) 1,66-1,80 (m, 3 H) 2,24-2,48 (m, 3 H) 2,56 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 3,49 (t, J=10,16 Гц, 1 H) 3,64-3,80 (m, 1 H) 5,05 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,29 (dd, J=15,31, 9,79 Гц, 1 H) 5,53 (dd, J=15,31, 9,54 Гц, 1 H) 6,38 (d, J=1,00 Гц, 1 H) 7,19 (s, 3 H).
13C ЯМР (101 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -4,8, -4,7, 6,8, 7,1, 16,6, 18,1, 19,2, 24,6, 25,7, 25,8, 30,7, 37,8, 40,6, 41,0, 70,8, 77,2, 77,8, 77,9, 80,5, 83,6, 130,9, 135,6, 143,9, 168,6.
NNN-B и OOO-B выделяли с применением аналогичных процедур, начиная с III-B.
NNN-B
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -0,06-0,04 (m, 6 H) -0,02-0,02 (m, 6 H) 0,48-0,66 (m, 6 H) 0,77-0,94 (m, 20 H) 1,16-1,25 (m,4 H) 1,26-1,44 (m, 2 H) 1,50 (s, 2 H) 1,56-1,72 (m, 2 H) 1,74-1,80 (m, 3 H) 2,04 (s, 1 H) 2,29-2,49 (m, 3 H) 2,40-2,50 (m, 1 H) 3,80-4,02 (m, 1 H) 4,24 (td, J=6,34, 2,64 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,31-5,41 (m, 2 H) 6,39 (d, J=1,00 Гц, 1 H) 7,20 (s, 1 H).
13C ЯМР (100 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -5,2, -4,8, 6,7, 7,2, 16,5, 18,0, 19,2, 23,1, 25,8, 26,5, 32,1, 40,6, 40,9, 68,5, 77,2, 78,0, 79. 0, 80,0 , 83,7, 129,5, 137,9, 143,8, 170,1.
OOO-B
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -0,03-0,04 (m, 6 H) 0,49-0,70 (m, 6 H) 0,78-0,98 (m, 21 H) 1,13-1,35 (m, 7 H) 1,51 (s, 3 H), 1,55-1,67 (m, 1 H) 1,69-1,88 (m, 4 H) 2,31-2,52 (m, 3 H) 2,60 (d, J=11,04 Гц, 1 H) 3,45 (t, J=10,29 Гц, 1 H) 4,16-4,32 (m, 1 H) 5,05-5,25, (m, 2 H) 5,57 (dd, J=15,31, 9,79 Гц, 1 H) 6,40 (d, J=1,00 Гц, 1 H) 7,22 (s, 1 H).
13C ЯМР (100 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm -4,90, 6,8, 6,9, 6,9, 7,1, 7,2, 16,4, 17,8, 19,1, 24,3, 25,6, 25,8, 28,1, 29,7, 31,6, 40,4, 41,2, 67,8, 77,2, 77,7, 78,0, 79,9, 83,6, 131,6, 134,6, 143,9, 170,0.
Стадия 11. В раствор соединения NNN-A (1,0 экв.) в THF (0,1 M) при комнатной температуре добавляли соответствующий 4,4,5,5-тетраметил-2-винил-1,3,2-диоксаборолан (2,0 экв.), монооксид моносеребра(I), моносеребра(III) (5,0 экв.), трифениларсин (1,2 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,15 экв.). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, смесь затем фильтровали через Celite®, промывали с помощью дихлорметана и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (PPP-A).
Стадия 12. В раствор спирта PPP-A (1,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M) при комнатной температуре добавляли DMAP (0,5 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенил-хлорформиата (2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Затем добавляли соответствующий амин (3,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (QQQ-A).
Стадия 13. В раствор силилового эфира QQQ-A (1 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (RRR-A).
Другие диастереоизомеры (OOO-A, NNN-B и OOO-B) подвергали процедурам с получением соединений 139-142.
Иллюстративная процедура синтеза соединения 140
Стадии 1-5 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 6. В раствор спирта III-A (0,14 г, 0,3 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (3,2 мл, 0,09 M) при комнатной температуре добавляли 1H-имидазол (0,10 г, 1,5 ммоль, 5,0 экв.) и трет-бутилхлордиметилсилан (0,11 г, 0,75 ммоль, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли солевым раствором и экстрагировали с помощью этилацетата. Объединенные органические фракции высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (JJJ-A, 0,16 г, 0,27 ммоль, 92%).
Стадия 7. В охлажденный раствор JJJ-A (0,16 г, 0,27 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,9 M) при 0°C добавляли пероксид водорода (0,25 мл, 2,3 ммоль, 30%, 7,6 экв.) с последующим добавлением раствора гидроксида лития (0,06 г, 2,4 ммоль, 8,0 экв.) в воде (3,0 мл, 0,8 M). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа и затем при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь гасили с помощью тиосульфата натрия. Смесь экстрагировали с помощью этилацетата, подкисляли до pH 3 и экстрагировали с помощью этилацетата. Органический слой высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимой кислоты (KKK-A, 0,10 г, 0,24 ммоль, 80%).
Стадия 8. В раствор кислоты KKK-A (0,10 г, 0,24 ммоль, 1,0 экв.) и (3S,4S, E)-1-йод-2,4-диметилгекса-1,5-диен-3-ола (0,16 г, 0,45 ммоль, 1,9 экв.) в дихлорметане (3,0 мл, 0,08 M) при комнатной температуре добавляли 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (0,06 г, 0,31 ммоль, 1,3 экв.) и один кристалл DMAP. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов и завершение реакции определяли посредством TLC. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого сложного эфира (LLL-A, 0,17 г, 0,25 ммоль, >95%).
Стадия 9. В дегазированный раствор олефина LLL-A (41,0 мг, 0,06 ммоль, 1,0 экв.) и бензохинона (0,4 мг, 0,003 ммоль, 0,05 экв.) в толуоле (6,0 мл, 0,01 M) в атмосфере азота при 20°C добавляли катализатор Ховейды-Граббса (4,0 мг, 0,006 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный макроцикл (MMM-A) переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Стадия 10. В раствор макроцикла MMM-A (1,0 экв.) в диоксане (2 мл, 0,1 M) в атмосфере азота добавляли диоксид селена (30,0 мг, 0,25 ммоль, 4,0 экв.) в атмосфере азота при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 85°C в течение 20 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и органический слой промывали с помощью бикарбоната натрия, воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/гексаны в качестве элюента) с получением необходимых разделяемых диастереоизомерных продуктов в качестве (NNN-A, 5,5 мг, 0,008 ммоль, 13%) и (OOO-A, 6,4 мг, 0,010 ммоль, 16%).
Стадия 11. В раствор NNN-A (10,0 мг, 0,015 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли (R, E)-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бут-3-ен-1-ил-пирролидин-1-карбоксилат (18,0 мг, 0,06 ммоль, 3,8 экв.), монооксид моносеребра(I), моносеребра(III) (14,2 мг, 0,06 ммоль, 4,0 экв.), трифениларсин (5,6 мг, 0,02 ммоль, 1,2 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (2,1 мг, 0,002 ммоль, 0,15 экв.). Реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, смесь затем фильтровали через Celite®, промывали с помощью дихлорметана и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (PPP-A, 5,3 мг, 0,006 ммоль, 80%).
Стадия 12. В раствор спирта PPP-A (5,0 мг, 0,007 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,5 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли N, N-диметиламинопиридин (0,4 мг, 0,003 ммоль, 0,5 экв.) с последующим добавлением 4-нитрофенилхлорформиата (5,0 мг, 0,02 ммоль, 3,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение трех часов. Затем добавляли N-метилпиперазин (0,004 мл, 0,03 ммоль, 4,5 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа реакционную смесь гасили с помощью воды, разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученный в результате неочищенный карбамат (QQQ-A) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 13. В раствор карбамата QQQ-A (1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (2,7 мг, 0,014 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 140, 2,7 мг, 0,005 ммоль, 63%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,00 (s, 1 H) 0,06 (s, 1 H) 0,65 (s, 1 H) 0,74-0,96 (m, 3 H) 0,98-1,18 (m, 3 H) 1,18-1,45 (m, 5H) 1,61 (d, J=7,28 Гц, 1 H) 1,68-1,81 (m, 2 H) 1,84 (br. s., 3 H) 2,05 (d, J=11,80 Гц, 2 H) 2,37 (s, 4 H) 2,44 (d, J=14,56 Гц, 2 H) 2,50-2,77 (m, 5 H) 3,13 (d, J=18,32 Гц, 1 H) 3,24 (d, J=6,27 Гц, 1 H) 3,26-3,42 (m, 3 H) 3,31 (br. s., 1 H) 3,37 (br. s., 2 H) 3,56 (br. s., 2 H) 3,48-3,64 (m, 3H) 3,64 (br. s., 1 H) 3,70 (d, J=2,26 Гц, 1 H) 3,82-4,03 (m, 2 H) 5,16 (dd, J=10,04, 8,03 Гц, 2 H) 5,29 (s, 1 H) 5,39 (dd, J=14,93, 10,16 Гц, 1 H), 5,52-5,75 (m, 2 H) 6,09 (d, J=11,29 Гц, 1 H) 6,17-6,40 (m, 1 H) 6,98 (s, 1 H) 7,25 (s, 5 H) 7,51 (s, 1 H).
Таблица 6
Соединения 139-142
139
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
140
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
141
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
142
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
Синтез сульфоновых промежуточных соединений для получения соединений мочевины
Схема 8
Общая процедура синтеза боковой цепи сульфонмочевины
Стадия 1. В раствор R(-)-3-бром-2-метил-1-пропанола SSS (4,0 г, 26,1 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (20,0 мл, 1,3 M) добавляли азид натрия (5,1 г, 78,4 ммоль, 3,0 экв.). Смесь нагревали до 100°C и перемешивали при 100°C в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали с удалением твердого вещества и промывали с помощью диэтилового эфира. Фильтрат промывали водой и солевым раствором. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенное азидопроизводное (TTT, 2,4 г, 20,8 ммоль, 78%) применяли на следующей стадии.
Стадия 2. В смесь (S)-3-азидо-2-метилпропан-1-ола TTT (2,4 г, 20,8 ммоль, 1,0 экв.) и B°C-ангидрида (6,8 г, 31,3 ммоль, 1,5 экв.) в THF (100 мл, 0,2 M) в атмосфере азота добавляли Pd-C (2,2 г, 2,1 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь продували и затем помещали в атмосферу водорода и перемешивали в течение 16 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Атмосферу реакционной смеси заменяли азотом, а осадок удаляли с помощью фильтрации через Celite®. Celite® промывали с помощью MeOH и растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого продукта (UUU, 2,6 г, 13,8 ммоль, 66%).
Стадия 3. В раствор B°C-защищенного амина UUU (2,6 г, 13,8 ммоль, 1,0 экв.), 1-фенил-1H-тетразол-5-тиола (2,6 г, 14,5 ммоль, 1,05 экв.) и трифенилфосфина (3,8 г, 14,5 ммоль, 1,05 экв.) в THF (100 мл, 0,1 M) при 0°C по каплям добавляли DIAD (3,2 мл, 16,5 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь выдерживали при 0°C и перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем разбавляли этилацетатом и промывали с помощью воды и солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенный материал очищали посредством силикагеля (гексан/этилацетат) с получением необходимого продукта (VVV, 4,3 г, 12,2 ммоль, 89%).
Стадия 4. В раствор тетразола VVV (0,4 г, 1,1 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (7,0 мл, 0,14 M) при 0°C добавляли трифторуксусную кислоту (3,5 мл, 45,4 ммоль, 40,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до 23°C и перемешивали в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель удаляли при пониженном давлении и реакционную смесь разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали бикарбонатом натрия и солевым раствором. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенный амин (WWW, 0,3 г, 1,0 ммоль, 90%) применяли на следующей стадии.
Стадия 5. В раствор амина WWW (1,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M) при 0°C добавляли диизопропилэтиламин (4,0 экв.) и соответствующий хлорангидрид карбаминовой кислоты (2,0 экв.) и перемешивали в течение 2 часов при такой же температуре. После подтверждения завершения реакции посредством LCMS или TLC раствор разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали хлоридом аммония, бикарбонатом натрия и солевым раствором. После высушивания сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенное вещество очищали с помощью силикагеля (дихлорметан/метанол) с получением необходимой мочевины (XXX).
Стадия 6. В раствор мочевины XXX (1,0 экв.) в этаноле (0,1 M) при 0°C по каплям добавляли предварительно смешанный желтый раствор тетрагидрата молибдата аммония (0,3 экв.) в 33% пероксиде водорода (10 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли в этилацетате, затем добавляли тиосульфат натрия при 0°C и перемешивали в течение 20 минут. Органический слой затем промывали с помощью воды, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол) с получением необходимого сульфона (YYY).
Иллюстративная процедура синтеза (S)-N-(2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил)пирролидин-1-карбоксамида
Стадии 1-4 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 5. В раствор амина WWW (0,1 г, 0,4 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (4,4 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли диизопропилэтиламин (0,3 мл, 1,7 ммоль, 4 экв.) и пирролидин-1-карбонилхлорид (0,1 мл, 0,8 ммоль, 2,0 экв.) и перемешивали в течение дополнительных 2 часов при такой же температуре. После подтверждения завершения реакции посредством LCMS или TLC раствор разбавляли дихлорметаном. Органический слой промывали хлоридом аммония, бикарбонатом натрия и солевым раствором. После высушивания сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенное вещество очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол) с получением необходимой мочевины (XXX, 0,13 г, 0,4 ммоль, 91%).
Стадия 6. В раствор продукта мочевины XXX (0,1 г, 0,4 ммоль, 1,0 экв.) в этаноле (3,0 мл, 0,1 M) при 0°C по каплям добавляли предварительно смешанный желтый раствор тетрагидрата молибдата аммония (0,1 г, 0,12 ммоль, 0,3 экв.) в 33% пероксиде водорода (0,4 мл, 4,0 ммоль, 10 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли в этилацетате и добавляли тиосульфат натрия при 0°C. Перемешивание продолжали в течение дополнительных 20 минут. Органический слой затем промывали с помощью воды, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол) с получением необходимого сульфона, (S)-N-(2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил)пирролидин-1-карбоксамида (0,1 г, 0,28 ммоль, 68%).
Соединение 143 и 144 получали с применением сульфона YYY в соответствии со схемой 9.
Схема 9
Общая процедура синтеза соединений 143-144 на основе мочевины
Стадия 1. В раствор сульфона YYY (2,5 экв.) в THF (0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (ZZZ).
Стадия 2. В раствор продукта ZZZ (1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (3,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия. Смесь разбавляли с помощью EtOAc. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединения 143-144).
Иллюстративная процедура синтеза соединения 143 на основе мочевины
Стадия 1. В раствор (S)-N-(2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил)пирролидин-1-карбоксамида YYY (43,7 мг, 0,12 ммоль, 2,5 экв.) в THF (3,0 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,23 мл, 0,12 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (30,0 мг, 0,05 ммоль, 1,0 экв.) в THF. Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (ZZZ, 23,3 мг, 0,03 ммоль, 63%).
Стадия 2. В раствор продукта ZZZ (23,3 мг, 0,03 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (3,0 мл, 0,1 M) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (16,6 мг, 0,09 ммоль, 3,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия. Смесь разбавляли с помощью EtOAc. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 143, 15,6 мг, 0,02 ммоль, 78%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,91 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 0,99-1,08 (d, J=6,65 Гц, 3 H) 1,27 (d, J=5,27 Гц, 3 H) 1,30-1,61 (m, 17 H) 1,90 (s, 3 H) 1,60-2,06 (m, 3 H) 2,45-2,67 (m, 4 H) 2,70-2,84 (m, 5 H) 2,84-2,97 (m, 1 H) 2,95-3,13 (m, 1 H) 3,22-3,36 (m, 4 H) 3,61-3,71 (m, 4 H) 3,73-3,81 (m, 1 H) 5,02 (d, J=9,41 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,56-5,75 (m, 3 H) 6,06-6,12 (d, J=10,92 Гц, 1 H) 6,27 (dd, J=15,12, 11,11 Гц, 1 H). MS (ES+) = 687,6 [M+H]+.
Соединение 145 получали с помощью способа со схемы 10.
Схема 9
Иллюстративная процедура синтеза соединения 145 на основе мочевины
Стадия 1. В раствор (S)-N-(2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил)пирролидин-1-карбоксамида (34,1 мг, 0,09 ммоль, 2,5 экв.) в THF (2,0 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,18 мл, 0,09 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид E (20,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (AAAA, 15,8 мг, 0,02 ммоль, 62%).
Стадия 2. В раствор мочевины AAAA (25,2 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (3,0 мл, 0,01 M) добавляли карбонат калия (14,8 мг, 0,11 ммоль, 3,0 экв.) и перемешивали при комнатной температуре. Через 3 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония при 0°C. Смесь затем разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого вторичного спирта (BBBB, 26,0 мг, 0,04 ммоль, >95%).
Стадия 3. В раствор спирта BBBB (26,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (2,0 мл, 0,1 M) добавляли диизопропилэтиламин (0,05 мл, 0,27 ммоль, 7,0 экв.) и DMAP (1,4 мг, 0,01 ммоль, 0,3 экв.) при 0°C. Затем медленно добавляли раствор 4-нитрофенилкарбонохлоридата (31,5 мг, 0,16 ммоль, 4,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли дихлорметаном. Водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный защищенный карбонат (CCCC) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4. В раствор карбоната CCCC (1,0 экв.) в THF (0,1 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (0,04 мл, 0,4 ммоль,10,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли этилацетатом, промывали с помощью 1 н. раствора гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (DDDD, 15,1 мг, 0,02 ммоль, 49%).
Стадия 5. В раствор карбамата DDDD (15,2 мг, 0,02 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (11,0 мг, 0,06 ммоль, 3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 145, 4,5 мг, 0,008 ммоль, 39%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,73-0,89 (m, 3 H) 0,90-1,04 (m, 3 H) 1,08-1,33 (m, 6 H) 1,40-1,58 (m, 2 H) 1,59-1,71 (m, 4 H) 1,75-1,90 (m, 4 H) 2,24 (s, 3 H) 2,31 (br. s., 3 H) 2,34-2,57 (m, 3 H) 2,90-3,16 (m, 1 H) 3,16-3,30 (m, 4 H) 3,37-3,50 (m, 4 H) 3,53-3,77 (m, 1 H) 4,13 (t, J=5,77 Гц, 1 H) 4,95 (d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,08 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 5,49-5,67 (m, 2 H) 6,02 (d, J=11,04 Гц, 1 H) 6,10-6,34 (m, 1 H). MS (ES+) = 605,5 [M+H]+.
Соединение 146 получали с помощью способа со схемы 11.
Схема 11
Иллюстративная процедура синтеза соединения 146 на основе мочевины
Стадия 1. В раствор (S)-5-((3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-метилпропил)сульфонил)-1-фенил-1H-тетразола (29,3 мг, 0,07 ммоль, 2,0 экв.) в THF (2,0 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,15 мл, 0,07 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (24,0 мг, 0,04 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого диена (EEEE, 15,6 мг, 0,02 ммоль, 51,5%).
Стадия 2. В раствор диена EEEE (15,6 мг, 0,02 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2,0 мл, 0,02 M) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (2,3 мг, 0,01 ммоль, 0,6 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия. Смесь разбавляли этилацетатом. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого спирта (FFFF, 9,0 мг, 0,01 ммоль, 60%).
Стадия 3. В раствор спирта FFFF (7,5 мг, 0,01 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,01 M) добавляли DMAP (1,6 мг, 0,01 ммоль, 1,3 экв.) и тозилхлорид (2,0 мг, 0,01 ммоль, 1,0 экв.) при 0°C. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды и промывали с помощью солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенный тозилат (1 экв.) затем растворяли в DMF (1,0 мл, 0,01 M) и добавляли азид натрия (2,7 мг, 0,04 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения избыток растворителя удаляли и неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого азида (GGGG, 6,0 мг, 0,01 ммоль, 96%).
Стадия 4. В раствор дихлорметана (1,0 мл, 0,01 M), содержащий азид GGGG (7,5 мг, 0,01 ммоль, 1,0 экв.), добавляли триметилфосфин (0,02 мл, 0,02 ммоль, 2,0 экв.), раствор толуола (1 M) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Параформальдегид (1,5 мг, 0,05 ммоль, 5,0 экв.) добавляли при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение 5 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Добавляли метанол (1 мл/1,0 экв. GGGG) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. Добавляли боргидрид натрия (2,0 мг, 0,05 ммоль, 5,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью бикарбоната натрия, экстрагировали с помощью дихлорметана и высушивали над сульфатом натрия. После фильтрации и выпаривания неочищенный амин (HHHH, 7,4 мг, 0,01 ммоль, >95%) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 5. В раствор амина HHHH (7,0 мг, 0,01 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,01 M) добавляли триэтиламин (0,005 мл, 0,04 ммоль, 4,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°C и затем медленно добавляли пирролидин-1-карбонилхлорид (2,6 мг, 0,02 ммоль, 2,0 экв.). После нагревания до комнатной температуры реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакции избыток растворителя удаляли и неочищенный материал затем очищали с применением хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимой мочевины (IIII, 2,5 мг, 0,003 ммоль, 32%).
Стадия 6. В раствор мочевины IIII (2,5 мг, 0,003 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (1,2 мг, 0,006 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 146, 1,8 мг, 0,003 ммоль, 84%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,84-1,08 (m, 10 H) 1,25-1,41 (m, 9 H) 1,44-1,68 (m, 8 H) 1,70-1,85 (m, 5 H) 1,88-2,05 (m, 3 H) 2,42-2,65 (m, 6 H) 2,80-2,95 (m, 6 H) 3,08-3,18 (m, 2 H) 3,54-3,73 (m, 5 H) 3,78 (br. s., 1 H) 4,94 (d, J=9,66 Гц, 1 H) 5,04 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,54-5,63 (m, 2 H) 5,66-5,77 (m, 1 H) 6,08 (d, J=11,04 Гц, 1 H) 6,31 (dd, J=14,87, 10,98 Гц, 1 H), MS (ES+) = 701,4 [M+H]+.
Таблица 7
Соединения 143-146
143
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
144
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]амино]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
145
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
146
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[метил(пирролидин-1-карбонил)амино]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
Соединение 147 получали как показано на схеме 12.
Схема 12
Процедура синтеза соединения 147
Стадия 1. В раствор соединения диена EEEE (22,0 мг, 0,03 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2,0 мл, 0,01 M) добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (15,5 мг, 0,08 ммоль, 3,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия. Смесь разбавляли с помощью EtOAc. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого диола (JJJJ, 5,0 мг, 0,008 ммоль, 32%).
Стадия 2. В раствор диена JJJJ (6,0 мг, 0,01 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,01 M) добавляли DMAP (1,6 мг, 1,3 экв.) и тозилхлорид (2,0 мг, 0,01 ммоль, 1,0 экв.) при 0°C. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и реакционную смесь перемешивали в течение 24 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды и промывали с помощью солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя неочищенный тозилат (1 экв.) затем растворяли в DMF (1,0 мл, 0,01 M) и добавляли азид натрия (2,6 мг, 0,04 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения избыток растворителя удаляли и неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого азида (KKKK, 6,0 мг, 0,01 ммоль, 96%).
Стадия 3. В раствор продукта KKKK (5,0 мг, 0,008 ммоль, 1,0 экв.) в воде/трет-бутаноле/дихлорметане (0,1 M, 1/2/1, 0,25/0,5/0,25 мл) добавляли этинилциклопропан (2,2 мг, 0,03 ммоль, 4,0 экв.), сульфат меди(II) (2,0 мг, 0,01 ммоль, 1,5 экв.) и (R)-5-((S)-1,2-дигидроксиэтил)-4-гидрокси-2-оксо-2,5-дигидрофуран-3-олат натрия (3,2 мг, 0,02 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 7 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения избыток растворителя удаляли и неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого триазола (соединение 147, 2,5 мг, 0,004 ммоль, 45%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) 0,78-0,98 (m, 6 H) 0,99-1,06 (m, 3 H) 1,19-1,28 (m, 4 H) 1,28-1,43 (m, 2 H) 1,50-1,62 (m, 14 H) 1,63-1,75 (m, 6 H) 1,85-1,99 (m, 2 H) 2,41-2,68 (m, 7 H) 2,73-2,89 (m, 1 H) 3,39-3,62 (m, 4 H) 3,75 (br. s., 2 H) 4,07-4,26 (m, 2 H) 5,01 (d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,13 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,55-5,74 (m, 3 H) 6,01-6,07 (m, 1 H) 6,10-6,20 (m, 1 H), MS (ES+) = 683,5 [M+H]+.
Соединение 148 получали с помощью способа со схемы 13.
Схема 13
Процедура синтеза соединения 148
Стадия 1. В раствор (S)-5-((3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-метилпропил)сульфонил)-1-фенил-1H-тетразола (104,0 мг, 0,26 ммоль, 2,5 экв.) в THF (10,0 мл, 0,01 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,52 мл, 0,26 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид E (58,0 мг, 0,1 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого диена (LLLL, 45,0 мг, 0,06 ммоль, 59%).
Стадия 2. В раствор диена LLLL (40,0 мг, 0,05 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (4,0 мл, 0,01 M) добавляли карбонат калия (19,1 мг, 0,14 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 3 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония при 0°C. Смесь затем разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого вторичного спирта (MMMM, 40,0 мг, 0,06 ммоль, >95%).
Стадия 3. В раствор спирта MMMM (40,0 мг, 0,06 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (6,0 мл, 0,01 M) добавляли триэтиламин (0,06 мл, 0,4 ммоль, 7,0 экв.) и DMAP (2,1 мг, 0,02 ммоль, 0,3 экв.) при 0°C. Затем медленно добавляли раствор 4-нитрофенилкарбонохлоридата (47,2 мг, 0,23 ммоль, 4,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли дихлорметаном. Водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный защищенный карбонат (NNNN) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4. В раствор карбамата NNNN (1,0 экв.) в THF (6,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (0,07 мл, 0,58 ммоль, 10,0 экв.). После перемешивания в течение одного часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли с помощью EtOAc. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и органический слой концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого карбамата (OOOO, 37,0 мг, 0,04 ммоль, 78%).
Стадия 5. В раствор карбамата OOOO (37,0 мг, 0,05 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (4,0 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (19,1 мг, 0,1 ммоль, 2,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого спирта (PPPP, 18,5 мг, 0,04 ммоль, 80%).
Стадия 6. В раствор спирта PPPP (45,0 мг, 0,09 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,08 M) добавляли триэтиламин (0,15 мл, 0,9 ммоль, 10,0 экв.) и DMAP (2,2 мг, 0,02 ммоль, 0,2 экв.) при 0°C. Затем медленно добавляли раствор 4-нитрофенилкарбонохлоридата (26,7 мг, 0,13 ммоль, 1,5 экв.) в дихлорметане (0,1 M). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли дихлорметаном. Водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный карбонат (QQQQ) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 7. В раствор карбоната QQQQ (1,0 экв.) в дихлорметане (1,0 мл, 0,03 M) при комнатной температуре добавляли необходимый амин (5,0 экв.) при комнатной температуре. После перемешивания в течение одного часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, смесь концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением соответствующего карбамата и необходимого карбоната в качестве второстепенного побочного продукта (соединение 148, 1,0 мг, 0,002 ммоль, 4,7%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: 0,91 (d, J=6,65 Гц, 3 H) 1,09 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,11-1,19 (m, 1 H) 1,23 (s, 3 H) 1,30-1,46 (m, 3 H) 1,50-1,69 (m, 2 H) 1,77 (s, 3 H) 2,40 (s, 3 H) 2,46-2,71 (m, 7 H) 3,41-3,70 (m, 4 H) 3,75 (s, 3 H) 3,78-3,84 (m, 1 H) 3,92-4,09 (m, 2 H) 4,96 (d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,07 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,53-5,81 (m, 3 H) 6,11 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 6,38 (dd, J=15,00, 10,85 Гц, 1 H), MS (ES+) = 566,5 [M+H]+.
Соединение 149 получали в соответствии со схемой 14.
Схема 14
Процедура синтеза соединения 149
Стадия 1. В раствор (R)-метил-3-гидрокси-2-метилпропаноата RRRR (5,0 г, 42,3 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (125 мл, 0,3 M) добавляли имидазол (4,3 г, 63,5 ммоль, 1,5 экв.) с последующим добавлением TBS-Cl (6,2 г, 63,5 ммоль, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды. Органический слой затем промывали с помощью солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После фильтрации растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта с получением необходимого защищенного сложного эфира (SSSS, 7,0 г, 30,1 ммоль, 71%).
Стадия 2. К перемешиваемому раствору TBS-защищенного сложного эфира SSSS (7,0 г, 30,1 ммоль, 1,0 экв.) в сухом дихлорметане (80 мл, 0,2 M) при -10°C добавляли DIBAL-H (1,0 M раствор в толуоле, 75,3 мл, 75,3 ммоль, 2,5 экв.) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут и обеспечивали нагревание до комнатной температуры и дополнительно перемешивали в течение дополнительных 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После разложения избытка DIBAL-H с помощью избытка метанола смесь выливали в раствор виннокислого калия-натрия (10 г в 100 мл воды) при энергичном перемешивании до разделения слоев. Водный слой экстрагировали диэтиловым эфиром и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (TTTT, 4,8 г, 23,5 ммоль, 78%).
Стадия 3. В раствор TBS-защищенного спирта TTTT (1,0 г, 4,9 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (20 мл, 0,1 M) добавляли бикарбонат натрия (0,8 г, 9,8 ммоль, 2,0 экв.) при комнатной температуре. Затем по каплям добавляли раствор DMP (3,1 г, 7,3 ммоль, 1,5 экв.) в дихлорметане (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель удаляли и неочищенный альдегид затем быстро очищали на слое диоксида кремния (гексан/этилацетат в качестве элюента). Альдегид затем растворяли в бензоле (25 мл, 0,1 M) и метил(трифенилфосфоранилиден)ацетат (1,6 г, 4,9 ммоль, 1,0 экв.) добавляли в реакционную смесь при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали в течение 10 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После концентрирования остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого сложного эфира (UUUU, 400 мг, 1,6 ммоль, 32%).
Стадия 4. В раствор сложного эфира UUUU (200 мг, 0,77 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (7 мл, 0,1 M) добавляли палладий на угле (10%, 82 мг, 0,77 ммоль Pd, 0,1 экв.) в атмосфере азота. Реакционную смесь затем помещали в атмосферу водорода и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения атмосферу водорода заменяли атмосферой азота, а затем палладий на угле отфильтровывали на подушке из Celite® и избыток растворителя удаляли с получением необходимого продукта (VVVV, 101 мг, 0,691 ммоль, 89%).
Стадия 5. В раствор сложного эфира VVVV (100 мг, 0,68 ммоль, 1,0 экв.) в THF (4 мл, 0,1 M) добавляли трифенилфосфин (206 мг, 0,79 ммоль, 1,15 экв.) с последующим добавлением 1-фенил-1H-тетразол-5-тиола (134 мг, 0,75 ммоль, 1,1 экв.). Реакционную смесь дегазировали азотом и медленно добавляли раствор DIAD (180 мг, 0,89 ммоль, 1,3 экв.) в THF (2 мл). Реакционную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель удаляли. Неочищенный остаток затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (WWWW, 110 мг, 0,36 ммоль, 53%).
Стадия 6. В раствор сульфида WWWW (25 мг, 0,082 ммоль, 1,0 экв.) в этаноле (1 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли по каплям предварительно смешанный желтый раствор тетрагидрата молибдата аммония (20 мг, 0,016 ммоль, 0,2 экв.) в пероксиде водорода (33% в воде, 0,084 мл, 0,82 ммоль, 10,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли в этилацетате, затем добавляли тиосульфат натрия при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Органический слой затем промывали с помощью воды, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого сульфона (XXXX, 17 мг, 0,050 ммоль, 62%).
Стадия 7. В раствор сульфона XXXX (23 мг, 0,069 ммоль, 1,5 экв.) в THF (1 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,5 M в толуоле, 0,19 мл, 0,092 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (30 мг, 0,046 ммоль, 1,0 экв.) (см. схему 2) в THF (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (YYYY, 12 мг, 0,016 ммоль, 34%).
Стадия 8. В раствор сложного эфира YYYY (11 мг, 0,014 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (1,5 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (8,3 мг, 0,043 ммоль, 3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 149, 6 мг, 0,0093 ммоль, 64%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 7,19 (s, 4H), 6,04-6,30 (m, 1H), 5,83-6,04 (m, 1H), 5,45-5,71 (m, 3H), 5,08 (d, J=10,8 Гц, 1H), 4,95 (d, J=9,5 Гц, 1H), 3,68 (br. s., 1H), 3,59 (s, 2H), 3,36-3,51 (m, 3H), 3,08-3,36 (m, 2H), 2,37-2,62 (m, 6H), 2,09-2,37 (m, 3H), 1,92-2,04 (m, 1H), 1,87 (br. s., 1H), 1,38-1,67 (m, 15H), 1,10-1,37 (m, 8H), 0,88-1,00 (m, 3H), 0,84 (d, J=6,8 Гц, 3H). MS (ES+) = 647,5.
Соединение 150 получали как показано на схеме 15.
Схема 15
Процедура синтеза соединения 150
Стадия 1. В раствор азида GGGG (8 мг, 0,013 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1 мл, 0,02 M) добавляли триметилфосфин (1,0-молярный раствор, 0,026 мл, 0,026 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Добавляли воду (1,0 мл, 4,0 экв.) и реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель удаляли с получением неочищенного амина ZZZZ (7,5 мг, 0,013 ммоль, 98%).
Стадия 2. В раствор амина ZZZZ (4,0 мг, 0,0068 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,5 мл, 0,01 M) добавляли триэтиламин (0,005 мл, 0,029 ммоль, 4,0 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°C и затем медленно добавляли циклопентанкарбонилхлорид (0,0015 мл, 0,014 ммоль, 2,0 экв.). После нагревания до комнатной температуры реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакции избыток растворителя удаляли, и неочищенный материал затем очищали с применением хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого амида (AAAAA 2,42 мг, 0,0035 ммоль, 52%).
Стадия 3. В раствор амида AAAAA (21 мг, 0,026 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (1 мл, 0,25 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (12,5 мг, 0,066 ммоль, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 150, 12,9 мг, 0,019 ммоль, 72%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,91 (d, J=6,65 Гц, 3 H) 1,04 (d, J=6,65 Гц, 3 H) 1,27 (s, 3 H)) 1,20-1,62 (m, 18 H) 1,65 -1,78 (m, 5 H) 1,79-1,87 (m, 2 H) 190-2,01 (m, 2 H) 2,37-2,67 (m, 5 H) 2,72-2,84 (br.s., 4 H) 2,87-2,98 (m, 1 H) 3,04 -3,14 (m, 1 H) 3,25-3,36 (m, 1 H) 3,66 (br. s., 4 H) 3,71-3,80 (m, 1 H) 5,02 (d, J=9,41 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,43 (t, J=5,34 Гц, 1 H) 5,55-5,66 (m, 2 H) 5,67 (dd, J=15,06, 9,29 Гц, 1 H) 6,09 (d, J=11,17 Гц, 1 H) 6,25 (dd, J=15,00, 10,85 Гц, 1 H). MS (ES+) = 686,6 [M+H]+.
Соединение 151 получали в соответствии со способом со схемы 16.
Схема 16
Процедура синтеза соединения 151
Стадия 1. В раствор амина WWW (95 мг, 0,38 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (4 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли триэтиламин (0,21 мл, 1,52 ммоль, 4 экв.) с последующим добавлением циклопентанкарбонилхлорида (101 мг, 0,76 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 10 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь концентрировали и неочищенный материал затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого амида (BBBBB, 49 мг, 0,14 ммоль, 37%).
Стадия 2. В раствор продукта BBBBB (49 мг, 0,14 ммоль, 1,0 экв.) в этаноле (4 мл, 0,03 M) при 0°C по каплям добавляли предварительно смешанный желтый раствор тетрагидрата молибдата аммония (33 мг, 0,028 ммоль, 0,3 экв.) в пероксиде водорода (0,15 мл, 1,4 ммоль, 10 экв., 33%). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли в этилацетате, затем добавляли тиосульфат натрия при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Органический слой затем промывали с помощью воды, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого сульфона CCCCC (49 мг, 0,13 ммоль, 92%).
Стадия 3. В раствор сульфона CCCCC (13,6 мг, 0,36 ммоль, 2,0 экв.) в THF (15 мл, 0,01 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,5 M в толуоле, 0,14 мл, 0,072 ммоль, 4,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид E (10 мг, 0,018 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 минут и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (DDDDD, 4 мг, 0,0057 ммоль, 31%).
Стадия 4. В раствор продукта DDDDD (4 мг, 0,0057 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (0,5 мл, 0,01 M) добавляли карбонат калия (1,6 мг, 0,011 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 3 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония при 0°C. Смесь затем разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого вторичного спирта (EEEEE, 4 мг, 0,0048 ммоль, 85%).
Стадия 5. В раствор спирта EEEEE (4 мг, 0,006 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,7 мл, 0,006 M) добавляли триэтиламин (0,0086 мкл, 0,06 ммоль, 10,0 экв.) и DMAP (1,4 мг, 0,012 ммоль, 2,0 экв.) при 0°C. Затем медленно добавляли раствор 4-нитрофенилкарбонохлоридата (4,86 мг, 0,024 ммоль, 4,0 экв.) в дихлорметане (0,3 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли дихлорметаном. Водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный защищенный карбонат (FFFFF) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 6. В раствор карбоната FFFFF (1,0 экв.) в THF (1,0 мл, 0,06 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (0,0067 мкл, 10,0 экв.). После перемешивания в течение одного часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли с помощью этилацетата. Органический слой промывали 1 н. раствором гидроксида натрия и концентрировали. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (GGGGG, 3 мг, 0,0038 ммоль, 63%).
Стадия 7. В раствор карбамата GGGGG (3,0 мг, 0,0038 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (1 мл, 0,004 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (1,4 мг, 0,0076 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 151, 1,5 мг, 0,0022 ммоль, 58%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: 0,88 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,02 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,21 (m, 3 H) 1,27-1,44 (m, 6 H) 1,53-1,72 (m, 6 H) 1,74 (s, 3 H) 1,76-1,84 (m, 2 H) 2,35 (s, 3 H) 2,41-2,63 (m, 10 H) 3,05-3,17 (m, 2 H) 3,54 (br.s., 1 H) 3,79 (br. s., 1 H) 4,94 (d, J=9,66 Гц, 1 H) 5,04 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,54-5,64 (m, 2 H) 5,65-5,77 (m, 1 H) 6,02-6,13 (m, 1 H) 6,22-6,34 (m, 1 H) 7,78-7,86 (m, 1 H), MS (ES+) = 604,4 [M+H]+.
Соединение 152 получали в соответствии со способом со схемы 17.
Схема 17
Процедура синтеза соединения 152
Стадия 1. В раствор 3-бром-пропан-1-ола HHHHH (2,0 г, 14,4 ммоль, 1,0 экв.) в диметилформамиде (40 мл, 0,3 M) добавляли имидазол (1,47 г, 21,6 ммоль, 1,5 экв.) с последующим добавлением TBS-Cl (3,3 г, 21,6 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды. Водный слой затем экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные органические слои промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. После фильтрации растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого защищенного спирта (IIIII, 2,91 г, 10,9 ммоль, 76%).
Стадия 2. В суспензию гидрида натрия (55% суспензия в минеральном масле, 0,32 г, 7,9 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (15 мл, 0,5 M) добавляли 1-фенил-1H-тетразол-5-тиол (1,4 г, 7,9 ммоль, 1,0 экв.) при 0°C. Смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем раствор (3-бромпропокси)(третбутил)диметилсилана IIIII (2,0 г, 7,9 ммоль, 1,0 экв.) добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь нагревали до и выдерживали при 50°C в течение 10 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды. Избыток DMF удаляли под вакуумом. Затем остаток разбавляли в солевом растворе и экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и растворитель удаляли под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого тетразола JJJJJ (2,5 г, 7,2 ммоль, 91%).
Стадия 3. В раствор тетразола JJJJJ (2,5 г, 7,2 ммоль, 1,0 экв.) в этаноле (45 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли по каплям предварительно смешанный желтый раствор тетрагидрата молибдата аммония (0,89 г, 0,72 ммоль, 0,1 экв.) в пероксиде водорода (7,3 мл, 72 ммоль, 10 экв., 33%). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали в течение 4 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь разбавляли в этилацетате, добавляли тиосульфат натрия при 0°C и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Органический слой затем промывали с помощью воды, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого сульфона (KKKKK, 1,7 г, 4,4 ммоль, 62%).
Стадия 4. В раствор сульфона KKKKK (74 мг, 0,19 ммоль, 2,5 экв.) в THF (4 мл, 0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,5 M в толуоле, 0,39 мл, 0,19 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (50 мг, 0,077 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 часов и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (LLLLL, 30,6 мг, 0,038 ммоль, 49%).
Стадия 5. В раствор продукта LLLLL (30,6 мг, 0,038 моль, 1,0 экв.) в метаноле (3 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (7,2 мг, 0,038 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия, разбавляли этилацетатом и промывали с помощью воды и солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (MMMMM, 10,7 мг, 0,019 ммоль, 49%).
Стадия 6 и 7. К перемешиваемому раствору продукта MMMMM (6,2 мг, 0,011 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-дихлорметане (1 мл, 0,01 M) при 23°C добавляли DMAP (0,66 мг, 0,054 ммоль, 0,5 экв.) и DIPEA (0,019 мл, 0,107 ммоль, 10,0 экв.). Затем в смесь добавляли 4-нитрофенилхлорформиат (6,5 мг, 0,032 ммоль, 3,0 экв.). Через 16 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, добавляли пирролидин (7,7 мг, 0,11 ммоль, 10,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 4 часов. В реакционную смесь добавляли дихлорметан. Органический слой затем промывали с помощью воды и солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/метанол) с получением необходимого продукта (соединение 152, 2,67 мг, 0,0040 ммоль, 37%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,71-0,88 (m, 6 H) 0,98-1,06 (m, 1 H) 1,13-1,27 (m, 13 H) 1,29-1,52 (m, 10 H) 1,56 (br. s., 9 H) 1,61-1,70 (m, 4 H) 1,73 (br. s., 2 H) 1,89 (br. s., 2 H) 2,34-2,59 (m, 7 H) 3,41 (d, J=5,27 Гц, 4 H) 3,65-3,78 (m, 2 H) 4,11 (t, J=6,78 Гц, 2 H) 4,88-5,02 (m, 1 H) 5,08 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,43-5,68 (m, 3 H) 6,01 (d, J=10,29 Гц, 1 H) 6,25 (dd, J=15,06, 11,04 Гц, 1 H), MS (ES+) = 674,3 [M+H]+.
Соединение 153 получали в соответствии со способом со схемы 18.
Схема 18
Процедура синтеза соединения 153
Стадия 1. В раствор (S)-5-((3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-метилпропил)сульфонил)-1-фенил-1H-тетразола (212 мг, 0,54 ммоль, 2,5 экв.) в THF (3 мл, 0,04 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,5 M в толуоле, 1,1 мл, 0,54 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид Q (100 мг, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 часов и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (NNNNN, 105 мг, 0,17 ммоль, 77%).
Стадия 2. В раствор продукта NNNNN (101 мг, 0,16 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (4 мл, 0,04 M) добавляли карбонат калия (55 мг, 0,40 ммоль, 2,5 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 3 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония при 0°C. Затем смесь разбавляли этилацетатом, промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого вторичного спирта (OOOOO, 52 мг, 0,087 ммоль, 55%).
Стадия 3. В раствор спирта OOOOO (20 мг, 0,034 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (4 мл, 0,01 M) добавляли триэтиламин (0,033 мл, 0,24 ммоль, 7,0 экв.) и DMAP (1,2 мг, 0,01 ммоль, 0,3 экв.) при 0°C. Затем медленно добавляли раствор 4-нитрофенилкарбонохлоридата (27,1 мг, 0,13 ммоль, 4,0 экв.) в дихлорметане (1 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли дихлорметаном. Водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный защищенный карбонат (PPPPP) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4. В раствор карбоната PPPPP (1,0 экв.) в THF (4 мл, 0,01 M) при комнатной температуре добавляли N-метилпиперазин (34 мг, 0,34 ммоль, 10,0 экв.). После перемешивания в течение одного часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли с помощью этилацетата. Органический слой промывали 1 н. концентрированным раствором гидроксида натрия. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (QQQQQ, 24 мг, 0,033 ммоль, 99%).
Стадия 5. В раствор продукта QQQQQ (24 мг, 0,033 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2 мл, 0,02 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (9,5 мг, 0,05 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (RRRRR, 14,0 мг, 0,028 ммоль, 85%).
Стадия 6. К перемешиваемому раствору продукта RRRRR (4,0 мг, 0,008 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-дихлорметане (1,0 мл, 0,01 M) при 23°C добавляли DMAP (0,2 мг, 0,0016 ммоль, 0,2 экв.) и DIPEA (0,01 мл, 0,057 ммоль, 7,0 экв.). Затем в смесь добавляли 4-нитрофенилхлорформиат (2,5 мг, 0,012 ммоль, 1,5 экв.). Через 12 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, добавляли (R)-пирролидин-3-ол x (4,0 мг, 0,032 ммоль, 4,0 экв.) и перемешивали в течение еще 4 часов. В реакционную смесь добавляли дихлорметан. Органический слой затем промывали с помощью воды и солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 153, 3,2 мг, 0,0081 ммоль, 65%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,91 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 0,97-1,03 (m, 6 H) 1,44 -1,55 (m, 2 H) 1,67-1,85 (m, 5 H) 1,86-2,01 (m, 2 H) 2,37-2,62 (m, 11 H) 3,02 (br. s., 1 H) 3,20-3,32 (m, 1 H) 3,38-3,63 (m, 9 H) 3,68-3,75 (m, 2 H) 3,79-4,10 (m, 2 H) 4,40-4,48 (m, 1 H) 4,86 (t, J=10,10 Гц, 1 H) 5,14 (dd, J=10,48, 5,58 Гц, 1 H) 5,28-5,41 (m, 2 H) 5,55 (dd, J=14,93, 9,91 Гц, 1 H) 6,20 (t, J=11,23 Гц, 1 H) 6,36 (br. d, J=11,17 Гц, 1 H). MS (ES+) = 606,5 [M+H]+.
Соединение 154 получали в соответствии со способом со схемы 19.
Схема 19
Процедура синтеза соединения 154
Стадия 1. В раствор (R)-(S)-2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропил-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-1-карбоксилата SSSSS (100,0 мг, 0,20 ммоль, 1,0 экв.) в THF (4 мл, 0,04 M) медленно добавляли бис(триметилсилил)амид калия (0,5 M в толуоле, 1,2 мл, 0,59 ммоль, 3 экв.) при -78°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут и добавляли (1H-бензо[d][1,2,3]триазол-1-ил)метанол (58,5 мг, 0,39 ммоль, 2,0 экв.) при -78°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при -78°C и нагревали до комнатной температуры в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и экстрагировали с помощью этилацетата. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого конечного алкена (TTTTT, 40 мг, 0,13 ммоль, 65%).
Стадия 2. В раствор алкена TTTTT (40 мг, 0,13 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-дихлорэтане (2,0 мл, 0,1 M) добавляли 4,4,5,5-тетраметил-2-винил-1,3,2-диоксаборолан (39,3 мг, 0,26 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь продували азотом и добавляли катализатор Ховейды-Граббса II (8,0 мг, 0,013 ммоль, 0,1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite®, Celite® промывали дихлорметаном и фильтрат концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал затем очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (UUUUU, 31 мг, 0,063 ммоль, 50%).
Стадия 3. В раствор (3S,4S, E)-1-йод-2,4-диметилгекса-1,5-диен-3-ола DD (240 мг, 0,95 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (7 мл, 0,2 M) добавляли трифенилфосфин (400 мг, 1,5 ммоль, 1,6 экв.) и раствор NBS (288 мг, 1,6 ммоль, 1,7 экв.) в дихлорметане (1 мл, 0,1 M) с применением шприцевого насоса при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена, перед гашением с помощью раствора сульфита натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом, промывали с помощью бикарбоната натрия, солевого раствора и высушивали над сульфатом натрия. После выпаривания растворителя под вакуумом неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого бром-производного (VVVVV, 270 мг, 0,86 ммоль, 90%).
Стадия 4. В раствор бром-производного VVVVV (270 мг, 0,86 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (5 мл, 0,2 M) добавляли азид натрия (23 мг, 3,4 ммоль, 4,0 экв.). Реакционную смесь нагревали до и выдерживали при 50°C в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры; смесь затем фильтровали через слой силикагеля (этилацетат). После концентрирования азидопроизводное (WWWWW, 200 мг, 0,722 ммоль, 84%) применяли непосредственно на следующей стадии.
Стадия 5. В раствор азидопроизводного WWWWW (22 мг, 0,079 ммоль, 1,0 экв.) в THF (2 мл, 0,04 M) добавляли триметилфосфин (1,0 M, 0,16 мл, 0,6 ммоль, 2,0 экв.) при - 10°C. Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Затем добавляли воду (4,3 мл, 0,24 ммоль, 3,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения добавляли нон-8-еновую кислоту (25 мг, 0,16 ммоль, 2,0 экв.), HOBt (13 мг, 0,087 ммоль, 1,1 экв.), основание Хунига (0,047 мл, 0,32 ммоль, 4,0 экв.) и EDCI (16,7 мг, 0,087 ммоль, 1,1 экв.) и смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель затем выпаривали под вакуумом, добавляли этилацетат и органический слой экстрагировали бикарбонатом натрия и солевым раствором. После высушивания над сульфатом натрия, фильтрации и выпаривания растворителя под вакуумом неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого амида (XXXXX, 11 мг, 0,028 ммоль, 36%).
Стадия 6. В дегазированный раствор амида XXXXX (18 мг, 0,046 ммоль, 1,0 экв.) и бензохинона (0,25 мг, 0,002 ммоль, 0,05 экв.) в толуоле (4,6 мл, 0,01 M) добавляли катализатор Ховейды-Граббса II (2,9 мг, 0,0046 ммоль, 0,1 экв.). Смесь перемешивали в масляной бане при 65°C в атмосфере азота в течение 12 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через Celite® и подушку из силикагеля. Растворитель затем удаляли, а неочищенный материал растворяли в диоксане (1 мл, 0,05 M) и добавляли диоксид селена (15,4 мг, 0,14 ммоль, 3,0 экв.). Смесь нагревали и выдерживали при 80°C в течение 5 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали бикарбонатом натрия, солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Растворитель удаляли под вакуумом и неочищенный макроцикл применяли на следующей стадии без дополнительной очистки (YYYYY, 18 мг, 0,048 ммоль).
Стадия 7. В раствор макроцикла YYYYY (17 мг, 0,046 ммоль, 1,0 экв.) в 1,2-дихлорэтане (2 мл, 0,02 M) добавляли нитрофенилхлорформиат (23,2 мг, 0,12 ммоль, 2,5 экв.), триэтиламин (0,045 мл, 0,322 ммоль, 7,0 экв.) и DMAP (5,6 мг, 0,046 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Затем добавляли N-метилпиперазин (14 мг, 0,14 ммоль, 3,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Смесь затем непосредственно подвергали очистке с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого карбамата (ZZZZZ, 15 мг, 0,029 ммоль, 63%).
Стадия 8. В раствор карбамата ZZZZZ (7 мг, 0,014 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли (R)-(R, E)-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бут-3-ен-1-ил-3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пирролидин-1-карбоксилат UUUUU (8 мг, 0,018 ммоль, 1,3 экв.), монооксид моносеребра(I), моносеребра(III) (16 мг, 0,07 ммоль, 5,0 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,8 мг, 0,007 ммоль, 0,05 экв.). Реакционную смесь нагревали и выдерживали при 60°C в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через Целит®, промывали с помощью дихлорметана и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (AAAAAA, 3,0 мг, 0,0044 ммоль, 31%).
Стадия 8-2. В раствор карбамата AAAAAA (3,0 мг, 0,0044 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (1 мл, 0,004 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (4,1 мг, 0,022 ммоль, 5,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 154, 2,4 мг, 0,0042 ммоль, 96%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,97 (d, J=6,53 Гц, 3 H) 1,07 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,31-1,70 (m, 7 H) 1,71 (s, 3 H) 1,80-2,06 (m, 3 H) 2,21-2,32 (m, 2 H) 2,32 (s, 3 H) 2,39 (br. s., 4 H) 2,56-2,64 (m, 1 H) 3,42-3,59 (m, 6 H) 3,91-4,02 (m, 2 H) 4,15-4,26 (m, 1 H) 4,45-4,50 (m, 1 H) 5,14 (td, J=10,04, 5,14 Гц, 1 H) 5,26-5,40 (m, 2 H) 5,58 (dd, J=15,06, 10,04 Гц, 1 H) 5,65 (dd, J=15,12, 7,47 Гц, 1 H) 6,06 (d, J=10,41 Гц, 1 H) 6,27 (dd, J=14,62, 11,23 Гц, 1 H). MS (ES+) = 575,4 [M+H]+.
Соединение 155 получали в соответствии со способом со схемы 20.
Схема 20
Процедура синтеза соединения 155
Стадия 1. В раствор макроцикла (8R,11S,12S, E)-8-гидрокси-12-((E)-1-йодпроп-1-ен-2-ил)-11-метилоксациклододец-9-ен-2-она GG (0,20 г, 0,53 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (5,3 мл, 0,1 M) добавляли PPh3 (0,28 г, 1,0 ммоль, 2,0 экв.) и CBr4 (0,35 г, 1,0 ммоль, 2,0 экв.) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь затем гасили с помощью воды и водный слой экстрагировали с помощью дихлорметана. Объединенные органические слои затем промывали с помощью солевого раствора, высушивали над MgSO4 и фильтровали. Растворитель удаляли под вакуумом и остаток затем разбавляли в DMF (5,3 мл, 0,1 M). Добавляли азид натрия (0,14 г, 2,1 ммоль, 4,0 экв.) и реакционную смесь нагревали до 70°C в течение 12 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения растворитель удаляли и неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого азида (BBBBBB, 0,17 г, 0,20 ммоль, 39%).
Стадия 2. В раствор азида BBBBBB (0,16 г, 0,20 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,1 M) добавляли триметилфосфин (0,035 мл, 0,40 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Добавляли воду (0,014 мл, 0,8 ммоль, 4,0 экв.) и реакционную смесь нагревали при 50°C в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Растворитель удаляли и неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого амина (CCCCCC, 0,06 г, 0,16 ммоль, 79%).
Стадия 3. В раствор амина CCCCCC (0,08 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (2,0 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли триэтиламин (0,12 мл, 0,85 ммоль, 4,0 экв.), DMAP (26,1 мг, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) с последующим добавлением 4-метилпиперазин-1-карбонилхлорида (0,07 г, 0,43 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 7 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия. Органический слой промывали с помощью воды и солевого раствора. После высушивания над сульфатом натрия и фильтрации растворитель удаляли под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимой мочевины (DDDDDD, 0,069 г, 0,14 ммоль, 65%).
Стадия 4. В раствор соединения DDDDDD (3,0 мг, 0,006 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,5 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли (R, E)-2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бут-3-ен-1-ил-пирролидин-1-карбоксилат SSSSS (3,7 мг, 0,012 ммоль, 2,0 экв.), монооксид моносеребра(I), моносеребра(III) (6,9 мг, 0,03 ммоль, 5,0 экв.), трифениларсин (2,2 мг, 0,007 ммоль, 1,2 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладий (0,82 мг, 0,009 ммоль, 0,15 экв.). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, смесь затем фильтровали через Celite®, Celite® промывали с помощью дихлорметана и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 155, 2,7 мг, 0,0048 ммоль, 81%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,78-0,97 (m, 6 H) 1,06 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,16-1,39 (m, 4 H) 1,43-1,61 (m, 2 H) 1,76-1,87 (m, 2 H) 2,22-2,47 (m, 7 H) 2,55-2,64 (m, 1 H) 3,30-3,41 (m, 8 H) 3,90-4,00 (m, 2 H) 4,15-4,28 (m, 4 H) 5,02 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,14-5,30 (m, 3 H) 5,35-5,45 (m, 2 H) 5,67 (dd, J=15,06, 7,53 Гц, 1 H) 6,10 (d, J=11,42 Гц, 1 H) 6,23-6,30 (m, 1 H) 6,45 (d, J=0,88 Гц, 1 H), MS (ES+) = 559,5 [M+H]+.
Соединение 156 получали в соответствии со способом со схемы 21.
Схема 21
Процедура синтеза соединения 156
Стадия 1. В раствор (S)-5-((3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-2-метилпропил)сульфонил)-1-фенил-1H-тетразола (0,066 г, 0,17 ммоль, 2,0 экв.) в THF (2,0 мл, 0,04 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,33 мл, 0,17 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид D (0,040 г, 0,08 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 часов и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (EEEEEE, 0,036 г, 0,06 ммоль, 68%).
Стадия 2. В раствор соединения EEEEEE (0,037 г, 0,06 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (2,0 мл, 0,03 M) при комнатной температуре добавляли п-толуолсульфонат пиридиния (0,015 г, 0,06 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого первичного спирта (FFFFFF, 0,02 г, 0,04 ммоль, 68%).
Стадия 3. В раствор первичного спирта FFFFFF (5,0 мг, 0,009 ммоль, 1,0 экв.) и кислоты, (2R,3S)-2-метил-3-((триэтилсилил)окси)пентановой кислоты (3,5 мг, 0,014 ммоль, 1,5 экв.), в дихлорметане (0,3 мл, 0,03 M) добавляли диизопропилэтиламин (0,003 мл, 0,02 ммоль, 2,0 экв.), DMAP (1,1 мг, 0,009 ммоль, 1,0 экв.) и COMU (6,0 мг, 0,014 ммоль, 1,5 экв.) при 0°C. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. После завершения реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали водой, солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. После фильтрации и выпаривания неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого сложного эфира GGGGGG (5,0 мг, 0,006 ммоль, 70%).
Стадия 4. В раствор сложного эфира GGGGGG (4,0 мг, 0,005 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (0,1 мл, 0,005 M) при комнатной температуре добавляли п-метокситолуолсульфоновую кислоту (1,0 мг, 0,005 ммоль, 1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 156, 1,2 мг, 0,002 ммоль, 40%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ, d4) δ: 6,60 (dd, J=15,1, 11,0 Гц, 1H), 6,17 (d, J=11,0 Гц, 1H), 5,86 (dt, J=15,2, 6,3 Гц, 1H), 5,66-5,78 (m, 1H), 4,96-5,19 (m, 2H), 4,67 (d, J=6,5 Гц, 1H), 3,78-4,00 (m, 1H), 3,73 (ddd, J=8,3, 5,8, 4,5 Гц, 1H), 3,15 (s, 1H), 2,44-2,67 (m, 3H), 2,07-2,10 (m, 2H), 1,75-1,86 (m, 2H), 1,57-1,67 (m, 1H), 1,37-1,55 (m, 3H), 1,15-1,24 (m, 4H), 0,82-1,07 (m, 5H), MS (ES+) = 561,3 [M+Na]+.
Соединение 157 получали с помощью способа со схемы 22.
Схема 22
Стадия 1. Промежуточное соединение EEEEEE (40,6 мг, 0,062 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в EtOH (2 мл) и добавляли PPTS (1,562 мг, 6,217 мкмоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. при к. т. Затем растворитель удаляли. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (25-80% EtOAc/гексаны) с получением необходимого продукта (соединение 157, 2,7 мг, 6,36 мкмоль, 10%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: ppm 0,72-0,89 (m, 3 H) 0,97 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,11-1,35 (m, 7 H) 1,42-1,56 (m, 2 H) 1,56-1,71 (m, 4 H) 2,02 (s, 3 H) 2,34-2,58 (m, 3 H) 3,32-3,54 (m, 3 H) 3,56-3,83 (m, 1 H) 5,01 (d, J=9,03 Гц, 1 H) 5,09 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,50-5,65 (m, 3 H) 6,03 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 6,25 (ddd, J=15,06, 10,79, 1,00 Гц, 1 H). MS(ES+): 425,30 [M+H]+.
Соединения 158-160 получали с помощью способа со схемы 23.
Схема 23
Общая процедура синтеза соединений 158-160
Стадия 1. В раствор соответствующего сульфона (2,5 экв.) в THF (0,02 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (2,5 экв.) и его перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (1,0 экв.) в THF (0,5 M). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 часов и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (HHHHHH).
Стадия 2. В раствор карбамата HHHHHH (1,0 экв.) в метаноле (0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-толуолсульфонат пиридиния (5,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого карбамата (соединения 158-160). Два диастереоизомера могли быть выделены после осуществления препаративной HPLC. Колонка: Waters Xbridge C18, 5 мкм OBD, 19×150 мм. Подвижная фаза A: 0,1% NH4OH в воде (pH 10), подвижная фаза B: 0,1% NH4OH в 100% ацетонитриле. Условия подвижной фазы: изократический режим, 45% B за 10 мин., 30 мл/мин.
Иллюстративная процедура синтеза соединения 90 и разделение двух эпимеров, соединение 159 и соединение 160
Стадия 1. В раствор 3-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридина (0,15 г, 0,45 ммоль, 2,1 экв.) в THF (4,8 мл, 0,04 M) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,46 мл, 0,46 ммоль, 2,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли альдегид L (0,13 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 часов и затем обеспечивали ее нагревание до -20°C в течение 1 часа. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (HHHHHH, 0,08 г, 0,11 ммоль, 53%).
Стадия 2. В раствор карбамата HHHHHH (0,08 г, 0,11 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (1,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-толуолсульфонат пиридиния (0,1 г, 0,55 ммоль, 5,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 6 часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого карбамата (соединение 90, 0,015 г, 0,02 ммоль, 22%) в виде смеси эпимеров при C16. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,70-0,93 (m, 4 H) 1,00 (d, J=6,78 Гц, 1 H) 1,12-1,21 (m, 5 H) 1,24-1,50 (m, 14H) 1,55-1,76 (m, 11 H) 1,90 (br. s., 2 H) 2,14 (s, 1 H) 2,36-2,57 (m, 7 H) 3,22-3,43 (m, 5 H) 3,43-3,59 (m, 1 H) 3,68 (br. s., 1 H) 4,94 (d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,08 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 5,44-5,72 (m, 2 H) 5,82 (dd, J=15,43, 6,90 Гц, 1 H) 6,03 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 6,09-6,25 (m, 1 H) 7,16- 7,21 (m, 3 H) 7,44 (d, J=7,28 Гц, 1 H) 8,41 (br. s., 2 H), MS (ES+) = 638,8 [M+H]+.
Смесь затем подвергали разделению посредством препаративной HPLC с применением следующих параметров: колонка: Waters Xbridge C18, 5 мкм OBD, 19×150 мм. Подвижная фаза A: 0,1% NH4OH в воде (pH 10), подвижная фаза B: 0,1% NH4OH в 100% ацетонитриле. Условия подвижной фазы: изократический режим, 45% B за 10 мин., 30 мл/мин., фракция 1, rt=5,9 мин., фракция 2, rt=6,9 мин.
Соединение 159 (фракция 1, WiDr, GI50=13,3 нМ, Panc05.04, GI50=15,0 нМ)
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,82-1,00 (m, 3 H) 1,24-1,31 (m, 4 H) 1,34-1,60 (m, 12 H) 1,65-1,88 (m, 8 H) 1,96-2,12 (m, 1 H) 2,45-2,67 (m, 7 H) 3,50 (br. s., 4 H) 3,59 (t, J=7,03 Гц, 1 H) 3,68-3,88 (m, 1 H) 4,95-5,10 (m, 1 H) 5,17 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,54-5,79 (m, 2 H) 5,90 (dd, J=15,06, 7,03 Гц, 1 H) 6,12 (d, =10,79 Гц, 1 H) 6,27 (ddd, J=15,06, 10,79, 1,25 Гц, 1 H) 7,26 (d, J=4,77 Гц, 1 H) 7,54 (dt, J=4,51 Гц, 1 H) 8,41-8,58 (m, 2 H).
Соединение 160 (фракция 2, WiDr, GI50=29,5 нМ, Panc05.04, GI50=15,8 нМ)
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,87-0,97 (m, 3 H) 1,23-1,30 (m, 4 H) 1,32-1,60 (m, 12 H) 1,64-1,78 (m, 7 H) 1,78-1,93 (m, 2 H) 1,99 (br. s., 1 H) 2,42-2,68 (m, 6 H) 3,37-3,64 (m, 5 H) 3,76 (d, J=6,53 Гц, 1 H) 5,03 (d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,17 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,54 -5,78 (m, 2 H) 5,91 (dd, J=14,93, 6,90 Гц, 1 H) 6,12 (d, J=11,54 Гц, 1 H) 6,18-6,40 (m, 1 H) 7,27 (s, 1 H) 7,41-7,66 (m, 1 H) 8,40-8,60 (m, 2 H).
Синтез карбаматных (схема 24) и гетероциклических (схема 25) фрагментов с боковой цепью в результате реакции Жюлиа
Схема 24
Общая процедура синтеза карбаматного фрагмента в результате реакции Жюлиа
Стадия 1. В раствор (S)-3-бром-2-метилпропанола SSS (10,0 г, 65,3 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (300 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли имидазол (6,7 г, 98,0 ммоль, 1,5 экв.) с последующим добавлением TBSCl (11,8 г, 78,4 ммоль, 1,2 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После определения посредством TLC или LCMS завершения реакции реакционную смесь фильтровали. Фильтрат промывали водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный материал очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением необходимого защищенного спирта (IIIIII, 13,5 г, 50,5 ммоль, 77%).
Стадия 2. В раствор NaH (2,4 г, 60,6 ммоль, 1,2 экв.) в DMF (200 мл, 0,2 M) при 0°C добавляли 1-фенил-1H-тетразол-5-тиол (9,9 г, 55,6 ммоль, 1,1 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем добавляли раствор бромида IIIIII (13,5 г, 50,5 ммоль, 1,0 экв.) при 0°C и реакционную смесь постепенно нагревали до 80°C в течение десяти часов. После определения посредством TLC или LCMS завершения реакции реакционную смесь охлаждали до 0°C и гасили с помощью воды. Реакционную смесь концентрировали и полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (JJJJJJ, 15,6 г, 42,8 ммоль, 85%).
Стадия 3. В раствор тетразола JJJJJJ (2,4 г, 6,5 ммоль, 1,0 экв.) в этаноле (60 мл, 0,1 M) при 0°C добавляли тетрагидрат молибдата аммония (0,8 г, 0,65 ммоль, 0,1 экв.) и пероксид водорода (6,6 мл, 64,7 ммоль, 10,0 экв., 30% раствор в воде). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение четырех часов или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого сульфона (KKKKKK, 2,2 г, 5,4 ммоль, 84%).
Стадия 4. В раствор сульфона KKKKKK (1,0 г, 2,5 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (25,0 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли п-толуолсульфоновую кислоту (0,1 г, 0,5 ммоль, 0,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью водного раствора бикарбоната натрия и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт (LLLLLL, 0,7 г, 2,5 ммоль, 100%) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 5. В раствор спирта LLLLLL (1,0 экв.) в дихлорметане (0,1 M) при -10°C добавляли DMAP (1,1 экв.), DIEA (1,1 экв.) и 4-нитрофенилхлорформиат (1,1 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение ночи или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли соответствующий амин. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение пяти часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого сульфона (SSSSS).
Иллюстративная процедура синтеза (S)-2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропилпирролидин-1-карбоксилата
Стадии 1-4 являются аналогичными указанным выше.
Стадия 5. В раствор спирта LLLLLL (0,25 г, 0,89 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (1,5 мл, 0,5 M) при -10°C добавляли DMAP (0,16 г, 1,3 ммоль, 1,5 экв.), DIEA (1,2 мл, 7,09 ммоль, 8,0 экв.) и 4-нитрофенилхлорформиат (0,7 г, 3,5 ммоль, 4,0 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение ночи или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли пирролидин (0,37 мл, 4,4 ммоль, 5 экв.). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и ее перемешивали при комнатной температуре в течение пяти часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали с помощью воды, солевого раствора, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта, (S)-2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропилпирролидин-1-карбоксилата (0,32 г, 0,84 ммоль, 95%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 7,67-7,77 (m, 2H), 7,59-7,67 (m, 3H), 4,18-4,29 (m, 1H), 4,12 (dd, J=14,7, 4,3 Гц, 1H), 3,98 (dd, J=11,0, 7,0 Гц, 1H), 3,58 (dd, J=14,7, 8,2 Гц, 1H), 3,34-3,46 (m, 4H), 2,61-2,74 (m, 1H), 1,83-1,98 (m, 4H), 1,23 (d, J=6,9 Гц, 3H).
Процедура синтеза 2-(3-метил-1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)бутан-2-ил)пиридина
Схема 25
Стадия 1. Соединение NNNNNN (704 мг, 4,657 ммоль, 1 экв.) растворяли в THF (22,100 мл) при 0°C и добавляли трет-бутоксид натрия (470 мг, 4,89 ммоль, 1,05 экв.). Данный реакционный раствор становился ярко-желтым, и его перемешивали в течение 30 мин. при данной температуре. Затем добавляли 2-йодпропан (0,931 мл, 9,314 ммоль, 2 экв.) и реакционный раствор перемешивали при к. т. в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили с помощью насыщ. водн. раствора хлорида аммония и выпаривали THF с помощью роторного испарителя. Оставшийся водный слой дважды экстрагировали с помощью EtOAc и объединенные органические вещества промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением необходимого неочищенного продукта (SPE-30, 477,5 мг, 2,471 ммоль, 53,1%).
Стадия 2. Соединение SPE-30 (477,5 мг, 2,471 ммоль, 1 экв.) растворяли в THF (25,300 мл) при 0°C и по каплям добавляли алюмогидрид лития (2,97 мл, 2,965 ммоль, 1,2 экв.). Реакционную смесь нагревали до к. т. в течение 30 мин., затем перемешивали при к. т. Реакционную смесь осторожно гасили с помощью воды, гидроксида натрия и воды, затем перемешивали в течение 30 мин. Осадок отфильтровывали и растворитель выпаривали. Остаток экстрагировали с помощью простого эфира и объединенные органические вещества промывали водой и солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного необходимого продукта (SPE-31, 238 мг, 1,441 ммоль, 58%).
Стадия 3. Соединение SPE-31 (238 мг, 1,44 ммоль, 1 экв.) растворяли в DCM (8805 мкл) при 0°C и добавляли триэтиламин (221 мкл, 1,584 ммоль, 1,1 экв.). По каплям добавляли мезилхлорид (118 мкл, 1,512 ммоль, 1,05 экв.) и реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь гасили с помощью насыщ. водн. раствора бикарбоната натрия и водный слой повторно экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические вещества промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением неочищенного необходимого продукта (SPE-32, 202 мг, 0,830 ммоль, 57,6%).
Стадия 4. Соединение SPE-32 (202 мг, 0,83 ммоль, 1 экв.) растворяли в DMF (8035 мкл) при к. т. и добавляли карбонат цезия (379 мг, 1,162 ммоль, 1,4 экв.) с последующим добавлением 1-фенил-1H-тетразол-5-тиола (178 мг, 0,996 ммоль, 1,2 экв.). Смесь перемешивали при 50°C в течение 72 ч. Добавляли солевой раствор и водный слой экстрагировали 3 раза с помощью простого эфира. Объединенные органические вещества промывали водой и солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью колоночной хроматографии (0-100% EtOAc/гексаны) получали необходимый продукт (SPE-33, 130,3 мг, 0,400 ммоль, 48,2%).
Стадия 5. Соединение SPE-33 (130,3 мг, 0,40 ммоль, 1 экв.) суспендировали в EtOH (2922 мкл) при -10°C и добавляли тетрагидрат молибдата аммония (24,74 мг, 0,02 ммоль, 0,05 экв.) с последующим добавлением пероксида водорода (204 мкл, 2,002 ммоль, 5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 3 ч. Затем добавляли 3 мл THF и реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 36 ч. Смесь гасили с помощью воды и водн. раствора метабисульфита натрия. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc, слои разделяли, затем органические вещества промывали с помощью водн. раствора тиосульфата натрия и воды. Органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью колоночной хроматографии (0-100% EtOAc/гексаны) получали необходимый продукт (SPE-9, 92 мг, 0,257 ммоль, выход 64,3%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: ppm 0,78-0,88 (m, 3 H) 0,93-1,02 (m, 3 H) 2,02-2,17 (m, 1 H) 3,29-3,44 (m, 1 H) 3,94-4,06 (m, 1 H) 4,59-4,72 (m, 1 H) 7,10-7,19 (m, 2 H) 7,60 (s, 6 H) 8,38-8,47 (m, 1 H). MS(ES+): 358,30 [M+H]+.
Процедура синтеза соединения 161
Схема 26
Стадия 1. В раствор соединения SPE-9 (93 мг, 0,261 ммоль, 1,8 экв.) в DMF (247 мкл)/THF (998 мкл) 1:4 при -78 медленно добавляли 0,6 M NaHMDS (375 мкл, 0,225 ммоль, 1,55 M) так, чтобы поддерживать температуру реакционной смеси ниже -70°C. Ее перемешивали в течение 30 мин. при данной температуре. В данный охлажденный раствор желтого цвета по каплям медленно добавляли раствор альдегида D (70 мг, 0,145 ммоль, 1 экв.) в THF (198 мкл). Температуру реакции поддерживали на уровне ниже -65°C. Сосуд с альдегидом промывали с помощью THF и содержимое добавляли по каплям в охлажденную реакционную смесь. Затем ее перемешивали при температуре от -70 до -60°C в течение 1 ч. (температуру контура для криогенной жидкости устанавливали на уровне -65°C). Затем температуру контура для криогенной жидкости устанавливали на уровне -50°C и обеспечивали перемешивание реакционной смеси при данной температуре в течение ночи. Реакционную смесь нагревали до -40°C и добавляли твердый хлорид аммония (33,9 мг, 0,634 ммоль, 4,37 экв.). Реакционную смесь дополнительно нагревали до 0°C и добавляли воду с последующим добавлением толуола. Водный слой разделяли и органический слой затем промывали солевым раствором. Органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью колоночной хроматографии (0-40% MTBE/гексаны с длительным удерживанием при 40% MTBE/гексаны для элюирования продукта) получали необходимый продукт (SPE-10, 29 мг, 0,047 ммоль, 32,6%).
Стадия 2. Соединение SPE-10 (29 мг, 0,047 ммоль, 1 экв.) растворяли в THF (240 мкл) и добавляли TBAF (94 мкл, 0,094 ммоль, 2 экв.). Раствор перемешивали при к. т. в течение ночи. Раствор разбавляли водой и экстрагировали с помощью EtOAc. Органические вещества затем промывали солевым раствором и органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью колоночной хроматографии (0-100% EtOAc/гексаны) получали необходимый продукт (соединение 161, 14,4 мг, 0,028 ммоль, 61%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: ppm 0,76 (dd, J=6,59, 1,32 Гц, 3 H) 0,78-0,87 (m, 1 H) 0,91 (d, J=6,65 Гц, 2 H) 0,99 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,20 (s, 3 H) 1,33-1,43 (m, 2 H) 1,55-1,65 (m, 2 H) 1,70-1,79 (m, 3 H) 2,00-2,04 (m, 1 H) 2,05-2,19 (m, 4 H) 2,53 (br dd, J=15,75, 3,33 Гц, 3 H) 3,11-3,22 (m, 1 H) 3,73-3,85 (m, 1 H) 5,03-5,09 (m, 2 H) 5,51-5,63 (m, 1 H) 5,66-5,76 (m, 1 H) 5,99 (dd, J=15,00, 9,60 Гц, 1 H) 6,13 (br d, J=10,79 Гц, 1 H) 6,32-6,43 (m, 1 H) 7,23-7,38 (m, 2 H) 7,72-7,83 (m, 1 H) 8,41-8,52 (m, 1 H). MS(ES+): 500,58 [M+H]+.
Общая процедура синтеза (S)-2-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридина
Схема 27
Стадия 1. В раствор гидрохлоридной соли MMMMMM 2-(пиридин-2-ил)уксусной кислоты (50,0 г, 288,0 ммоль, 1,0 экв.) в метаноле (500 мл, 0,5 M) при 0°C по каплям добавляли тионилхлорид (31,5 мл, 432,0 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 60 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь осторожно гасили с помощью карбоната натрия и водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный продукт (NNNNNN, 41,5 г, 275,0 ммоль, 95%) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2. В раствор сложного эфира NNNNNN (41,5 г, 275,0 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1500 мл, 0,2 M) при 0°C добавляли 2-метилпропан-2-олат натрия (28,6 г, 288,3 ммоль, 1,05 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при 0°C перед добавлением йодметана (34,3 мл, 549,1 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и избыток растворителя удаляли под вакуумом. Неочищенный материал затем экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом магния. После фильтрации и выпаривания растворителя смесь концентрировали под вакуумом. Полученный в результате сложный метиловый эфир (OOOOOO, 41,3 г, 250 ммоль, 91%) переносили без очистки.
Стадия 3. В раствор сложного метилового эфира OOOOOO (43,0 г, 260,3 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1500 мл, 0,1 M) при 0°C по каплям добавляли алюмогидрид лития (312 мл, 312,4 ммоль, 1,2 экв., раствор в THF). Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до 0°C в течение 30 минут и затем до комнатной температуры в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь осторожно гасили с помощью воды, гидроксида натрия и воды. После перемешивания смеси в течение 30 минут белый осадок отфильтровывали и растворитель удаляли под вакуумом. Реакционную смесь затем экстрагировали диэтиловым эфиром и объединенные органические фракции промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный в результате спирт (PPPPPP, 30,0 г, 219,0 ммоль, 84%) переносили без очистки.
Стадия 4. В раствор спирта PPPPPP (30,0 г, 219,0 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (700 мл, 0,3 M) при 0°C добавляли триэтиламин (61,5 мл, 437,4 ммоль, 2,0 экв.) и DMAP (2,7 г, 21,9 ммоль, 0,1 экв.). Добавляли уксусный ангидрид (24,8 мл, 262,4 ммоль, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и органический слой промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и фильтровали. Полученный раствор затем выпаривали и неочищенный ацетат (QQQQQQ, 37,0 г, 206,0 ммоль, 94%) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 5. Раствор ацетата QQQQQQ (39,4 г, 219,8 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в диэтиловом эфире (100 мл) и затем добавляли 118 г силикагеля. Избыток эфира удаляли под вакуумом и неочищенное твердое вещество затем разбавляли в водном буфере при pH 7 (1970 мл, 0,1 M) (гидроксид натрия/одноосновный фосфат натрия/вода). Затем добавляли свиную панкреатическую липазу II типа (3,3 г (15 мг/ммоль)) и реакционную смесь перемешивали при 37°C в течение четырех часов или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. (Через четыре часа превращение достигало 40% в соответствии с ELSD, а энантиомерный избыток определяли с помощью хиральной SFC и было продемонстрировано энантиомерное соотношение S:R, составляющее 13:1). Отфильтровывали силикагель и водный слой экстрагировали этилацетатом три раза. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и концентрировали. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны:этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого спирта (RRRRRR, 12,5 г, 91 ммоль, 41%).
Стадия 6. В раствор спирта RRRRRR (12,5 г, 91,0 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (570 мл, 0,16 M) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (13,9 мл, 100,1 ммоль, 1,1 экв.). Реакционную смесь охлаждали до 0°C и затем добавляли метансульфонилхлорид (7,44 мл, 95,5 ммоль, 1,05 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью бикарбоната натрия и слои разделяли. Водный слой затем экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния и концентрировали под вакуумом. Полученный в результате сульфонат SSSSSS (19,2 г, 89 ммоль, 98%) переносили без дополнительной очистки.
Стадия 7. В раствор сульфоната SSSSSS (19,2 г, 89 ммоль, 1,0 экв.) в DMF (120 мл, 0,1 M) при комнатной температуре добавляли карбонат цезия (40,7 г, 125,0 ммоль, 1,4 экв.) и 1-фенил-1H-тетразол-5-тиол (19,1 г, 107,1 ммоль, 1,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 48 часов или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. После охлаждения смеси до комнатной температуры добавляли солевой раствор и водный слой экстрагировали три раза диэтиловым эфиром. Объединенные органические слои промывали водой, солевым раствором и высушивали над сульфатом магния. После фильтрации растворитель удаляли под вакуумом и остаток очищали с применением колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны/этилацетат) с получением необходимого продукта (TTTTTT, 28,9 г, 88 ммоль, 99%).
Стадия 8. В раствор сульфида TTTTTT (31,5 г, 105,9 ммоль, 1,0 экв.) в EtOH (700 мл, 0,1 M) при -10°C добавляли тетрагидрат молибдата аммония (6,5 г, 5,3 ммоль, 0,05 экв.) и пероксид водорода (108 мл, 1060 ммоль, 5,0 экв., 33% водный раствор). Реакционную смесь перемешивали при -10°C в течение четырех часов или до определения посредством TLC или LCMS того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью воды и раствора метабисульфита натрия. Неочищенный продукт собирали посредством фильтрации и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексаны:этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (UUUUUU, 23,2 г, 70,4 ммоль, 66%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d ) δ: 1,50 (d, J=7,03 Гц, 3 H) 1,66 (br. s., 1 H) 3,75 (quind, 1 H) 3,94 (dd, J=14,81, 5,02Hz, 1 H) 4,55 (dd, J=14,68, 7,91 Гц, 1 H) 7,14-7,22 (m, 2 H) 7,29 (s, 1 H) 7,57-7,70 (m, 6 H) 8,44-8,49 (m, 1 H).
Рацемический 2-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридин мог быть получен с применением аналогичной стратегии синтеза, как описано на схеме 23, при условии пропуска стадий 5 и 6 (разделение с применением липазы).
Другие гетероциклические фрагменты, получаемые в результате реакции Жюлиа, включающие (3-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридин, 4-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридин, 4-(2-метил-3-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиримидин и 3-(1-((1-фенил-1H-тетразол-5-ил)сульфонил)пропан-2-ил)пиридазин, получали аналогичным образом (стадии 5 и 6 (разделение с применением липазы) были пропущены, чтобы получить рацемическую смесь по C16), начиная с соответствующего гетероцикла.
Получение рацемических соединений 36 и 37
Схема 28
Стадия SN-1. К перемешиваемому раствору соединения sn-2 (2,55 экв.) в THF (30 мл) при -78°C в атмосфере N2 медленно добавляли KHMDS (2,55 экв., 0,5 M раствор в толуоле). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 30 минут. Затем медленно добавляли альдегид sn-1 (1 г, 1,89 ммоль, 1,0 экв.) в THF (10 мл, конечная конц. 0,047 M) при -78°C и реакционную смесь перемешивали в течение 3,5 часов при такой же температуре или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом. Водный слой экстрагировали дополнительным количеством этилацетата и объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта sn-3 (1,08 г, 90%).
Данные LCMS (ES+) M+Na 654,4.
Стадия SN-2. Перемешиваемый раствор защищенного макролида sn-3 (530 мг, 0,837 ммоль, 1,0 экв.) в смеси уксусная кислота/вода (4:1) (0,042 M) нагревали при 80°C в течение 8 часов в атмосфере N2. Реакционную смесь выпаривали и полученный остаток растворяли водой и этилацетатом. Водный раствор доводили до pH=9 путем добавления насыщенного водного раствора NaHCO3. Полученный водный слой экстрагировали дополнительным количеством этилацетата. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта sn-4 (127 мг, 35%).
Данные LCMS (ES+) M+ 430,2.
Стадия SN-3. В перемешиваемый раствор триола sn-4 (127 мг, 0,296 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,05 M) при 0°C в атмосфере N2 добавляли триэтиламин (2 экв.), уксусный ангидрид (1 экв.) и 4-диметиламинопиридин (0,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа или до определения посредством LCMS или TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь гасили с помощью насыщенного водного раствора NaHCO3 и добавляли этилацетат. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением смеси соединений 36 и 37 (112 мг, 80%).
1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,83-0,96 (m, 3 H) 1,17-1,82 (m, 13 H) 2,08 (s, 3 H) 2,43-2,70 (m, 3 H) 3,40-3,83 (m, 3 H) 5,07 (d, J=8,8 Гц, 1 H) 5,14 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,53-5,73 (m, 2 H) 5,92-6,05 (m, 1 H) 6,07-6,18 (m, 1 H) 6,25-6,38 (m, 1 H) 7,06-7,21 (m, 2 H) 7,56-7,69 (m, 1 H) 8,48-8,60 (m, 1H).
Данные LCMS (ES+) M+Na 494,1.
Промежуточное соединение макролидного альдегида sn-1 получали, как указано ранее (R. M. Kanada and D. Ito et. al., Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 4350-4355), а sn-2 получали аналогичным образом, как описано на схеме 23.
Процедура синтеза соединения 162
Схема 29
Стадия 1. В раствор соединения E7107 (30 мг, 0,042 ммоль, 1,0 экв.) в DCE (1 мл) добавляли DMAP (1,020 мг, 8,34 мкмоль, 0,2 экв.), основание Хунига (0,037 мл, 0,209 ммоль, 5,0 экв.) и уксусный ангидрид (4,72 мкл, 0,05 ммоль, 1,2 экв.). Через 2 ч. реакционную смесь выпаривали. Посредством очистки с помощью хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH/DCM) получали необходимый продукт (соединение 162, 24 мг, 0,032 ммоль, 76%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: ppm 0,01 (d, J=4,52 Гц, 6 H) 0,76-0,88 (m, 14 H) 0,99 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,14 (s, 3 H) 1,18-1,25 (m, 3 H) 1,31-1,59 (m, 8 H) 1,63 (d, J=0,75 Гц, 4 H) 2,03 (s, 4 H) 2,27-2,58 (m, 4 H) 2,71-2,86 (m, 3 H) 3,10-3,24 (m, 2 H) 3,71-3,82 (m, 1 H) 3,89 (d, J=6,78 Гц, 2 H) 4,89 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,01 (d, J=9,29 Гц, 1 H) 5,50-5,65 (m, 3 H) 6,05 (s, 1 H) 6,12-6,28 (m, 1 H). MS(ES+): 761,73 [M+H]+.
Таблица 8
Соединения 147-162
147
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(4-циклопропилтриазол-1-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
148
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-метоксикарбонилокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
149
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-9-метокси-6-метил-9-оксононa-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
150
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
151
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
152
сложный эфир [(2R,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-7-[оксо(1-пирролидинил)метокси]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1-пиперазинкарбоновой кислоты
153
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
154
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-азациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
155
[(2R,3E,5E)-2-метил-6-[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-6-[(4-метилпиперазин-1-карбонил)амино]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]гепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилат
156
[(2S,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R,3R)-3-гидрокси-2-метилпентаноат
157
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
158
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
159
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
160
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
161
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-7-метил-6-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
162
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-ацетилоксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
Синтез соединений 163-174
Синтез соединения 163
Схема 30
Стадия MM-1. В смесь макролидного диена x (15 мг, 0,041 ммоль, 1,0 экв.) и коммерчески доступного аллилового спирта m-12 (3,0 экв.) в дихлорметане (0,014 M) добавляли катализатор Ховейды-Граббса II (0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 1 часа или до определения посредством TLC того, что реакция завершена. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан:этилацетат в качестве элюента) с получением указанного в заголовке соединения 163 (12,6 мг, 59%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,90(d, J=6,4 Гц, 3 H) 1,21(s, 3 H) 1,23-1,47(m, 5 H) 1,48-1,74(m, 4 H) 1,77(s, 3 H) 1,79-1,94(m, 2 H) 2,10(s, 3 H) 2,47-2,74(m, 5 H) 3,54(d, J=10,4 Гц, 1 H) 3,75(br. s., 1 H) 5,09(d, J=8,8 Гц, 1 H) 5,18(d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,58-5,72(m, 2 H) 5,86(d, J=15,2 Гц, 1 H) 6,13(d, J=10,8 Гц, 1 H) 6,48(dd, J= 15,2, 10,8 Гц, 1 H) 7,10-7,22(m, 3 H) 7,23-7,31(m, 2 H).
Данные LCMS (ES+) M+Na 537,3.
Промежуточный диен x получали, как указано ранее (R. M. Kanada and D. Ito et. al., Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 4350-4355).
Синтез соединения 164
Схема 31
Указанное в заголовке соединение 164 (6,8 мг, 61%) получали из коммерчески доступного аллилового спирта m-12 (6,0 экв.) и макролидного диена x (8,4 мг, 0,23 ммоль, 1,0 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии MM-1. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,80-0,95(m, 3 H) 1,15-1,46(m, 5 H) 1,60-1,78(m, 9 H) 1,90 (s, 1 H) 2,10 (s, 3 H) 2,45-2,67 (m, 3 H) 3,51 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 3,76 (br. s., 1 H) 5,09 (d, J=8,8 Гц, 1 H) 5,17 (d, J=10,4 Гц, 1 H) 5,57-5,71 (m, 2 H) 6,06 (d, J=14,8 Гц, 1 H) 6,14 (d, J=10,0 Гц, 1 H) 6,50 (ddd, J=15,2, 10,8, 8,4 Гц, 1 H) 7,21-7,30 (m, 1 H) 7,31-7,39 (m, 2 H) 7,40-7,49 (m, 2 H). Данные LCMS (ES+) M+Na 509,3.
Синтез соединения 165
Схема 32
Указанное в заголовке соединение 165 (5,3 мг, 46%) получали из коммерчески доступного тиофена sn-5 (29,9 мг, 0,194 ммоль, 8,3 экв.) и макролидного диена x (8,6 мг, 0,0235 ммоль, 1,0 экв.) аналогичным образом, как описано для MM-1. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,82-0,98 (m, 3 H) 1,15-1,44 (m, 8 H) 1,47-1,88 (m, 5 H) 1,99-2,26 (m, 5 H) 2,44-2,74 (m, 3 H) 3,44-3,61 (m, 1 H) 3,75 (br. s., 1 H) 5,02-5,26 (m, 2 H) 5,53-5,75 (m, 2 H) 6,00-6,22 (m, 2 H) 6,47-6,63 (m, 1 H) 6,89-7,03 (m, 2 H) 7,17-7,35 (m, 1 H). Данные LCMS (ES+) M+Na 515,1.
Синтез соединения 166
Схема 33
Указанное в заголовке соединение 166 получали аналогичным образом, как ранее было описано для реакции фрагментов, полученных в результате реакции Жюлиа, с альдегидами. Промежуточное соединение макролидного альдегида sn-1 получали, как указано ранее (R. M. Kanada and D. Ito et. al., Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 4350-4355).
Сульфоновое промежуточное соединение m-11 получали следующим образом.
Схема 33
Сульфоновое промежуточное соединение m-11 (48 мг, 22% за 2 стадии) получали из коммерчески доступного спирта m-10 аналогичным образом, как описано на схеме 23. Данные LCMS (ES+) M+Na 319,06.
Синтез соединения 167
Схема 34
Продукт реакции сочетания m-12 (62 мг, 99%) получали из альдегида sn-1 (50 мг, 0,095 ммоль, 1,0 экв.) и сульфона m-9 (2,5 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии SN-1. Данные LCMS (ES+) M+Na 684,31. Триол m-13 (21 мг, 49%) получали аналогичным образом, как описано для стадии SN-2.
Указанное в заголовке соединение 167 (2,8 мг, 12%) получали из триола m-13 аналогичным образом, как описано для стадии SN-3. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,80-0,95(m, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,24-1,73 (m, 8 H) 1,74 (s, 3 H) 2,09 (s, 3 H) 2,42-2,67 (m, 3 H) 3,48-3,62 (m, 2 H) 3,74 (br. s., 1 H) 3,93 (s, 3 H) 5,08 (d, J=8,40 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,40 Гц, 1 H) 5,57-5,70 (m, 2 H) 5,99-6,07 (m, 1 H) 6,11 (d, J=10,80 Гц, 1 H) 6,25-6,34 (m, 1 H) 6,54 (d, J=7,20 Гц, 1 H) 6,70 (d, J=7,20 Гц, 1 H) 7,48 (t, J=8,00 Гц, 1 H). Данные LCMS (ES+) M+Na 524,2.
Сульфоновое промежуточное соединение m-9 получали следующим образом.
Схема 35
Соединение m-8 (426 мг, 63% за 2 стадии) получали аналогичным образом, как описано для стадии mm-3 и стадии mm-4. Данные LCMS (ES+) M+Na 189,95.
Соединение m-9 (490 мг, 65% за 2 стадии) получали аналогичным образом, как описано на схеме 23. Данные LCMS (ES+) M+Na 381,98.
Синтез соединения 168
Схема 36
Продукт реакции сочетания m-15 (35 мг, 52%) получали из альдегида sn-1 (50 мг, 0,095 ммоль, 1,0 экв.) и сульфона m-6 (2,0 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии SN-1. Данные LCMS (ES+) M+Na 726,40. Триол m-16 (11 мг, 45%) получали аналогичным образом, как описано для стадии SN-2.
Указанное в заголовке соединение 168 (9,4 мг, 75%) получали из соединения m-16 аналогичным образом, как описано для стадии SN-3. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,84-0,94 (m, 3 H) 1,00 (s, 3 H) 1,02 (s, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,22-1,44 (m, 5 H) 1,49-1,59 (m, 1 H) 1,64-1,76 (m, 4 H) 2,04-2,12 (m, 5 H) 2,46-2,66 (m, 3 H) 3,49-3,58 (m, 2 H) 3,68-3,80 (m, 1 H) 4,04-4,09 (m, 2 H) 5,08 (d, J=8,8 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=11,2 Гц, 1 H) 5,57-5,70 (m, 2 H) 5,98-6,06 (m, 1 H) 6,11 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 6,25-6,34 (m, 1 H) 6,53 (dd, J=8,4, 4,0 Гц, 1 H) 6,67 (dd, J=7,2, 4,0 Гц, 1 H) 7,46 (t, J=7,6 Гц, 1 H).
Сульфоновое промежуточное соединение m-6 получали, как описано ниже.
Схема 37
Стадия mm-1. Раствор изобутанола (1,2 экв.) в DME (2 мл) добавляли в суспензию трет-бутоксида калия (1,3 экв.) в DME (3 мл, конечная конц. 0,41 M) при комнатной температуре. После перемешивания при 50°C в течение 30 минут в смесь добавляли бромпиридин m-1 (0,5 г, 2,05 ммоль, 1,0 экв.). После перемешивания с обратным холодильником в течение 2 часов реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили с помощью воды и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт m-2 (0,49 г) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия mm-2. В раствор диоксолана m-2 (0,49 г, 2,05 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,27 M) добавляли 5 н. хлористоводородную кислоту (6,1 экв.). После перемешивания при комнатной температуре в течение 3 часов реакционную смесь гасили 5 н. раствором гидроксида натрия. Водный слой экстрагировали этилацетатом и органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт m-3 (0,39 г) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия mm-3. В суспензию иодида метилтрифенилфосфония (1,3 экв.) в THF (0,2 M) при 0°C по каплям добавляли н-бутиллитий (1,3 экв., раствор в н-гексане). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 20 минут. Затем по каплям добавляли раствор пиридинметилкетона m-3 (0,39 г, 2 ммоль, 1,0 экв.) в THF. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут. Реакционную смесь гасили с помощью воды и добавляли этилацетат. Органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан:этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта m-4 (0,35 г, 91%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,01 (d, J=6,8 Гц, 6 H) 2,06-2,17 (m, 1 H) 2,17 (s, 3 H) 4,11 (d, J=6,4 Гц, 2 H) 5,23 (s, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 6,62 (d, J=8,0 Гц, 1 H) 6,99 (d, J=7,6 Гц, 1 H) 7,52 (dd, J=8,0, 7,6 Гц, 1 H).
Стадия mm-4. В раствор олефина m-4 (0,35 г, 1,82 ммоль, 1,0 экв.) в дихлорметане (0,18 M) при 0°C добавляли 9-BBN (2,5 экв., раствор в гексане). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 4,5 часов. После охлаждения до 0°C реакционную смесь гасили с помощью воды, 5 н. раствора гидроксида натрия (4,0 экв.) и 30% водного раствора пероксида водорода (4,0 экв.). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водным раствором тиосульфата натрия, водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан:этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта m-5 (0,26 г, 68%). Данные LCMS (ES+) M+Na 232,02.
Необходимое промежуточное соединение m-6 (315 мг, 63% за 2 стадии) получали аналогичным образом, как описано для схемы 23. Данные LCMS (ES+) M+Na 402,08.
Синтез соединения 169
Схема 38
Указанное в заголовке соединение 169 (0,30 мг, 0,8% за 3 стадии) получали из альдегида sn-1 (40,0 мг, 0,076 ммоль, 1,00 экв.) и nm-12 (1,81 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии SN-1, SN-2 и SN-3. MS(ES+): 522,16 (M+Na+).
Сульфоновое промежуточное соединение nm-12 получали следующим образом.
Схема 39
Стадия NM-10. Соединение nm-13 (600 мг) получали из 2-метил-3-бутен-1-ола (200 мг, 2,32 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано на схеме 23. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,16-1,81(m, 3H) 2,65-2,72(m, 1 H) 3,40-3,43(m, 2 H) 5,03-5,11(m, 2 H) 5,71-5,80(m, 1 H) 7,27-7,35(m, 1 H) 7,51-7,59(m, 4 H).
Стадия NM-11. Соединение 9-BBN (3,00 экв., 0,4 M раствор в THF) по каплям добавляли в раствор соединения nm-13 (300 мг, 1,22 ммоль, 1,00 экв.) в THF (2,5 мл) при 0°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Данную смесь добавляли в раствор 2-бромпиридина (1,20 экв.), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,20 экв.) и карбоната калия (4,00 экв.) в диметилформамиде (4,00 мл) и дистиллированной воде (1,50 мл). Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 4 часов в атмосфере N2. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали, экстрагировали этилацетатом, промывали водой и солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-14 вместе с побочным продуктом (254 мг). Неочищенный продукт nm-14 (254 мг) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия NM-12. Соединение nm-12 (49,0 мг, 11% за 2 стадии) получали из соединения nm-14 (254 мг, 0,78 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для схемы 23. MS(ES+): 379,90 (M+Na+).
Синтез соединения 170
Схема 40
Указанное в заголовке соединение 170 (5,44 мг, 13% за 3 стадии) получали из альдегида sn-1 (40,0 мг, 0,085 ммоль, 1,00 экв.) и соединения nm-15 (1,72 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии SN-1, SN-2 и SN-3. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,86-0,89 (m, 3 H) 1,03 (d, J=6,40 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,24-1,41 (m, 2 H) 1,51-1,61 (m, 2 H) 1,68 (s, 3 H) 2,09 (s, 3 H) 2,47-2,54 (m, 2 H) 2,60-2,63 (m, 1 H) 2,69-2,88 (m, 3 H) 3,55 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 3,71-3,82 (m, 1 H) 5,09 (d, J=9,2 Гц, 1 H) 5,14 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,58-5,67 (m, 2 H) 5,69-5,77 (m, 1 H) 6,03-6,06 (m, 1 H) 6,12-6,20 (m, 1 H) 7,08-7,12 (m, 2 H) 7,55-7,60 (m, 1 H) 8,54-8,5 (m, 1 H). MS(ES+): 508,07(M+Na+).
Сульфоновое промежуточное соединение nm-15 получали следующим образом.
Схема 41
Стадия NM-13. Соединение nm-16 (2,84 г, 88%) получали из металлилового спирта (1,00 г, 13,9 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии № 40-6. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,84 (s, 3H) 4,05 (s, 2 H) 4,94-4,96 (m, 1 H) 5,09-5,10 (m, 1 H) 7,54-7,59 (m, 5 H).
Стадия NM-14. Соединение nm-17 (150 мг, 56%) получали из соединения nm-16 (200 мг, 0,861 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии NM-11. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,01 (d, J=6,80 Гц, 3 H) 2,52-2,57 (m, 1H) 2,72-2,78 (m, 1 H) 2,97-3,02 (m, 1 H) 3,37-3,42 (m, 1 H) 3,49-3,54 (m, 1 H) 7,11-7,16 (m, 2 H) 7,52-7,66 (m, 6 H) 8,52-8,54 (m, 1 H).
Стадия NM-15. Соединение nm-15 (50,0 мг, 30%) получали из соединения nm-17 (150 мг, 0,482 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для схемы 23. MS(ES+): 365,92 (M+Na+).
Синтез соединения 171
Схема 42
Указанное в заголовке соединение 171 (2,37 мг, 11,3%) получали из диена x (15 мг, 0,041 ммоль, 1,0 экв.) и соединения sn-5 (3,00 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии MM-1. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,91 (d, J=6,80 Гц, 3 H) 1,22 (s, 3 H) 1,37 (s, 3 H) 1,22-1,58 (m, 4 H) 1,68-1,74 (m, 1 H) 1,78 (s, 3 H) 1,81-1,90 (m, 1 H) 2,08 (br. s., 1 H), 2,10 (s, 3 H) 2,50-2,57 (m, 2 H), 2,59-2,69 (m, 3 H) 3,52 (d, J=10,8 Гц, 1 H), 3,73-3,76 (m, 1 H) 5,09 (d, J=9,20 Гц, 1 H) 5,18 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,59-5,71 (m, 1 H) 5,86 (d, J=15,2 Гц, 1 H) 6,13 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 6,47 (d, J=15,2 Гц, 1 H) 6,49 (d, J=15,2 Гц, 1 H) 7,18-7,19 (m, 2 H) 7,25-7,29 (m, 3 H). MS(ES+): 537,2 (M+Na+).
Промежуточный аллильный спирт nm-11 получали, как описано следующим образом.
Схема 43
Стадия NM-5. В перемешиваемый раствор триэтилфосфоноацетата (1,30 экв.) в THF (0,673 M) добавляли гидрид натрия (1,50 экв., >60% чистота) при 0°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин. В реакционную смесь при комнатной температуре добавляли бензилацетон (3,00 г, 20,2 ммоль, 1,00 экв.), затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом, органический слой промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-7 (4,30 г, 98%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,26-1,29 (m, 3 H) 2,21 (s, 3 H) 2,42-2,46 (m, 2 H) 2,76-2,81 (m, 4 H) 4,12-4,17 (m, 2 H) 5,69 (s, 3 H) 7,16-7,31 (m, 5 H).
Стадия NM-6. В перемешиваемый раствор соединения nm-7 (4,30 г, 19,7 ммоль, 1,00 экв.) в толуоле (0,281 M) по каплям добавляли гидрид диизобутилалюминия (2,20 экв., 1,02 M раствор в толуоле) при -78°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 2,5 часов. Реакционную смесь разбавляли водой, насыщ. раствором виннокислого калия-натрия, этилацетатом и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-8 (1,75 г, 50%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,72 (s, 3 H) 2,30-2,34 (m, 2 H) 2,71-2,76 (m, 2 H) 4,12-4,13 (m, 2 H) 5,38-5,43 (m, 1 H) 5,69 (s, 3 H) 7,16-7,30 (m, 5 H).
Стадия NM-7. В раствор изопропоксида титана (1,20 экв.) и 4-Å молекулярных сит (1,00 г) в дихлорметане (10 мл) добавляли (-)-диэтил-D-тартрат (1,50 экв.) в дихлорметане (2,0 мл) при -20°C в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при -20°C в течение 10 мин. В реакционную смесь при -20°C добавляли соединение nm-8 (1,75 г, 9,93 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (2,0 мл). Реакционную смесь охлаждали до -30°C и в реакционную смесь добавляли трет-бутилгидропероксид (2,00 экв., 6,0 M раствор в нонане) в дихлорметане (1,0 мл, конечная конц. 0,66 M). Реакционную смесь перемешивали при -30°C в течение 60 мин. В реакционную смесь добавляли раствор воды (20 мл), гептагидрата сульфата железа (1,43 экв.) и D-(-)-винной кислоты (12,0 экв.), затем ее перемешивали при 0°C в течение 20 мин. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и дополнительно экстрагировали этилацетатом. 1 н. водный раствор NaOH (10 мл) добавляли в органический слой и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем в смесь добавляли воду. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением смеси необходимого продукта nm-9 и (-)-диэтил-D-тартрата. Неочищенный продукт nm-9 (1,90 г) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия NM-8. Смесь неочищенного продукта nm-9 (1,90 г, 9,88 ммоль, 1,00 экв.), п-толуолсульфонилхлорида (2,00 экв.) и триэтиламина (5,00 экв.) в дихлорметане (15 мл, 0,659 M) перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин. в атмосфере N2. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-10 с побочным продуктом (3,80 г). Неочищенный продукт nm-10 (3,80 г) применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия NM-9. В смесь неочищенного продукта nm-10 (1,00 г, 2,89 ммоль, 1,00 экв.) в THF (20 мл, 0,145 M) при комнатной температуре добавляли иодид натрия (4,00 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 60 мин. После того, как соединение nm-10 больше не выявлялось посредством TLC, в реакционную смесь добавляли цинк-медную пару (5,00 экв.). Реакционную смесь перемешивали с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом, фильтровали через Celite®, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-11 (249 мг). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 1,35 (s, 3H) 1,82-1,89 (m, 2 H) 2,62-2,69 (m, 2 H) 5,10-5,13 (m, 1 H) 5,25-5,29 (m, 1 H) 5,94-6,01 (m, 1 H) 7,16-7,30 (m, 5 H).
Синтез соединения 172
Схема 44
Стадия NM-1. К перемешиваемому раствору соединения nm-2 (50,0 мг, 0,159 ммоль, 1,52 экв.) в THF (2,00 мл) при -78°C в атмосфере N2 медленно добавляли KHMDS (1,60 экв., 0,50 M раствор в толуоле). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 60 минут. Альдегид nm-1 (50,0 мг, 0,104 ммоль, 1,0 экв.) в THF (1,00 мл, конечная конц. 0,035 M) медленно добавляли при -78°C. При такой же температуре реакционную смесь перемешивали в течение 60 мин. Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта nm-3 (32,0 мг, 54%).
Стадия NM-2. В перемешиваемый раствор соединения nm-3 (18,0 мг, 0,032 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,032 M) медленно добавляли фторид тетрабутиламмония (2,00 экв., 1,00 M раствор в THF) при комнатной температуре в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин. В реакционную смесь добавляли фторид тетрабутиламмония (2,00 экв., 1,00 M раствор в THF) и затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли водой и этилацетатом. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью препаративной колоночной хроматографии на силикагеле (только этилацетат) с получением указанного в заголовке соединения 172 (3,57 мг, 25%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,89 (d, J=6,80 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,22-1,70 (m, 4 H) 1,74 (s, 3 H) 2,10 (s, 3 H) 2,48-2,64 (m, 3 H) 3,48-3,62 (m, 1 H) 3,65 (d, J=6,80 Гц, 2 H) 3,72-3,78 (m, 1H) 5,08 (d, J=8,80 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,40 Гц, 1 H) 5,57-5,70 (m, 2 H) 5,94-6,02 (m, 1 H) 6,13 (d, J=11,2 Гц, 1 H) 6,34-6,41 (m, 1 H) 7,11-7,18 (m, 2H) 7,59-7,63 (m, 1 H) 8,53-8,55 (m, 1 H). MS(ES+): 480,18[M+Na+].
Альдегидное промежуточное соединение nm-1 получали, как описано ранее (R. M. Kanada and D. Ito et. al., PCT Int. Appl, 2007, WO 2007043621), и сульфоновое промежуточное соединение nm-2 получали следующим образом.
Схема 45
Стадия NM-3. Сульфид nm-4 (2,03 г, 88%) получали из 2-(2-гидроксилэтил)пиридина (1,00 г, 8,12 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано на схеме 23. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 3,37-3,41 (m, 2 H) 3,81-3,86 (m, 2 H) 7,16-7,25 (m, 2 H) 7,52-7,66 (m, 6 H) 8,55-8,57 (m, 1 H), MS(ES+): 305,98[M+Na+].
Стадия NM-4. Сульфон nm-2 (132 мг, 40%) получали из соединения nm-4 (300 мг, 1,06 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано на схеме 23. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 3,46-3,50 (m, 2 H) 4,25-4,29 (m, 2 H) 7,16-7,24 (m, 2 H) 7,58-7,72 (m, 6 H) 8,49-8,50 (m, 1 H), MS(ES+): 337,90[M+Na+].
Синтез соединения 173
Схема 46
Указанное в заголовке соединение 173 (0,40 мг, 1,4% за 2 стадии) получали из соединения nm-1 (30 мг, 0,062 ммоль, 1,00 экв.) и соединения nm-5 (2,55 экв.) аналогичным образом, как описано для стадий NM-1 и 2. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,89 (d, J=6,80 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,22-1,81 (m, 4 H) 1,73 (s, 3 H) 2,10 (s, 3 H) 2,48-2,65 (m, 3 H) 3,44-3,52 (m, 3 H) 3,73-3,78 (m, 1H) 5,08 (d, J=9,20 Гц, 1 H) 5,16 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,58-5,71 (m, 2 H) 5,82-5,89 (m, 1 H) 6,10-6,13 (m, 1 H) 6,28-6,34 (m, 1 H) 7,11-7,13 (m, 2H) 8,50-8,52 (m, 2 H). MS(ES+): 480,18(M+Na+).
Сульфоновое промежуточное соединение nm-5 (357 мг, неочищенное) получали из 4-(2-гидроксилэтил)пиридина (1,00 г, 8,12 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии NM-3 и NM-4. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 3,29-3,33 (m, 2 H) 4,02-4,07 (m, 2 H) 7,22-7,23 (m, 2 H) 7,44-7,72 (m, 6 H) 8,59-8,60 (m, 1 H).
Синтез соединения 174
Схема 47
Указанное в заголовке соединение 174 (3,71 мг, 13,0% за 2 стадии) получали из соединения nm-1 (30 мг, 0,062 ммоль, 1,00 экв.) и соединения nm-6 (2,55 экв.) аналогичным образом, как описано для стадий NM-1 и NM-2. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 0,89 (d, J=6,80 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,22-1,73 (m, 4 H) 1,73 (s, 3 H) 2,10 (s, 3 H) 2,48-2,65 (m, 3 H) 3,46 (d, J=6,80 Гц, 2 H) 3,51 (d, J=11,2 Гц, 1 H) 3,72-3,76 (m, 1H) 5,08 (d, J=8,80 Гц, 1 H) 5,15 (d, J=10,8 Гц, 1 H) 5,57-5,72 (m, 2 H) 5,83-5,90 (m, 1 H) 6,09-6,12 (m, 1 H) 6,26-6,32 (m, 1 H) 7,21-7,26 (m, 1H) 7,48-7,52 (m, 1 H) 8,45-8,48 (m, 2 H). MS(ES+): 480,18(M+Na+).
Сульфоновое промежуточное соединение nm-6 (2,30 г, неочищенное) получали из 3-(2-гидроксилэтил)пиридина (1,00 г, 8,12 ммоль, 1,00 экв.) аналогичным образом, как описано для стадии NM-3 и NM-4. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ: 3,28-3,34 (m, 2 H) 4,01-4,05 (m, 2 H) 7,25-7,31 (m, 2 H) 7,44-7,73 (m, 6 H) 8,55-8,56 (m, 1 H).
Таблица 9
Соединения 163-174
163
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
164
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
165
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-тиофен-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
166
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
167
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-(6-метоксипиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
168
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-[6-(2-метилпропокси)пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
169
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
170
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-7-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
171
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
172
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
173
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
174
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
(M+Na+)
Процедура синтеза соединения 175
Схема 48
Соединение 175 синтезировали аналогичным образом, что и соединение 163. MS(ES+): 553,35 [M+Na]+.
Процедура синтеза соединения 176
Схема 49
Соединение 176 получали из альдегида sn-1 (1 экв.) и соединения SPE-21 (1,81 экв.) аналогичным образом, как описано для стадий SN-1, SN-2 и SN-3. MS(ES+): 521,42 (M+Na+).
Процедура синтеза соединения 177
Схема 50
Стадия 1. В суспензию гидрида натрия (55% масляная дисперсия в минеральном масле, 10,7 ммоль, 1 экв.) в DMF (10 мл) при 0°C по каплям добавляли раствор соединения SPE-22 (2,0 г, 10,7 ммоль, 1 экв.) и его перемешивали в течение 30 минут. Затем по каплям добавляли йодметан (2 мл, 32,1 ммоль, 3 экв.) и затем обеспечивали его нагревание до комнатной температуры в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (SPE-23, 997 мг, 4,96 ммоль, 46%).
Стадия 2. В раствор 2‐метилбут‐3‐ен‐1‐ола (651 мг, 3,24 ммоль, 1 экв.) в THF (1,25 мл) по каплям добавляли 9-BBN (0,5 M раствор THF, 11,6 мл, 5,8 ммоль, 1,8 экв.) при 0°C. Смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2,5 часов. В реакционную смесь добавляли предварительно смешанный раствор соединения SPE-23 (651 мг, 3,24 ммоль), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (189 мг, 0,232 ммоль, 0,07 экв.) и карбонат калия (962 мг, 6,96 ммоль, 2,14 экв.) в DMF (24 мл) и H2O (0,75 мл). Полученную смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 4 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и водой. Фазу отделяли и органический слой промывали с помощью H2O и солевого раствора, затем высушивали над MgSO4. Твердое вещество отфильтровали и растворитель удаляли под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (гептан/EtOAc=75/25) с получением продукта (SPE-24, 368 мг, 1,77 ммоль, выход 76%).
Стадия 3. В раствор SPE-24 (368 мг, 1,77 ммоль, 1 экв.) в THF (4 мл) при 0°C добавляли 1-фенил-1H-тетразол-5-тиол (378 мг, 2,12 ммоль, 1,2 экв.), трифенилфосфин (557 мг, 2,12 ммоль, 1,2 экв.) и диизопропилазодикарбоксилат (452 мг, 2,12 ммоль, 1,2 экв.) и его перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата и H2O. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (SPE-25, 310 мг, 0,841 ммоль, 48%).
Стадия 4. В раствор соединения SPE-26 (310 мг, 0,84 ммоль, 1 экв.) в этаноле (3 мл) добавляли раствор тетрагидрата молибдата аммония (104 мг, 0,084 ммоль, 0,1 экв.) в пероксиде водорода (35% водный раствор, 1 мл, 12,6 ммоль, 15 экв.) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом и водой. Фазу отделяли и органический слой промывали с помощью H2O, насыщенного водн. раствора NaS2O3 и солевого раствора, затем высушивали над сульфатом магния. Твердое вещество отфильтровали и растворитель удаляли под вакуумом.
Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (гептан/AcOEt=2/1) с получением необходимого продукта (SPE-27, 236 мг, 0,589 ммоль, выход 70%).
Стадия 5. В раствор соединения SPE-27 (0,035 г, 0,087 ммоль, 1,4 экв.) в THF (3,0 мл) в атмосфере азота при -78°C по каплям добавляли KHMDS (0,5 M в растворе THF, 0,20 мл, 0,10 ммоль, 1,6 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. Затем по каплям добавляли альдегид D (0,030 г, 0,062 ммоль, 1,0 экв.) в THF (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при -78°C в течение 3 часов. Реакционную смесь гасили с помощью хлорида аммония и разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (SPE-27, 0,024 г, 0,037 ммоль, 59%).
Стадия 6. В раствор соединения SPE-27 (24,0 мг, 0,037 ммоль, 1,0 экв.) в THF (2,0 мл, 0,02 M) при комнатной температуре добавляли фторид трибутиламмония (1,0 M THF-раствор, 1,1 мл, 1,1 ммоль, 30 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли с помощью этилацетата и H2O. Органический слой промывали водой, солевым раствором, высушивали над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гептаны/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 177, 6,8 мг, 0,012 ммоль, 34%). 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ, d) δ: 0,90 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,07 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,24-1,38 (m, 3 H) 1,51-1,70 (m, 4 H) 1,74 (s, 3 H) 2,05 (s, 3 H) 2,27 (quin, J=6,8 Гц, 1 H) 2,49-2,66 (m, 5 H) 3,38 (s, 3H) 3,55 (d, J=10,8 Гц, 2 H) 3,73-3,78 (m, 1 H) 4,44 (s, 2 H) 5,08-5,19 (m, 2 H) 5,61-5,73 (m, 3 H) 6,09-6,26 (m, 2 H) 7,16-7,32 (m, 5 H). MS(ES+): 565,36 [M+Na]+.
Процедура синтеза соединения 178
Схема 51
Соединение 178 (12,3 мг, 36,4% за 2 стадии) получали из альдегида D (30,0 мг, 0,062 ммоль, 1,00 экв.) и сульфона SPE-28 (1,34 экв.) аналогичным образом, как описано для соединения 182. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ, d) δ: 0,90 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,07 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,24-1,41 (m, 3 H) 1,51-1,70 (m, 4 H) 1,73 (s, 3 H) 2,05 (s, 3 H) 2,20-2,24 (m, 1 H) 2,49-2,66 (m, 5 H) 3,38 (s, 3H) 3,56 (d, J=10,8 Гц, 2 H) 3,73-3,78 (m, 1 H) 4,42 (s, 2 H) 5,08-5,18 (m, 2 H) 5,63-5,70 (m, 3 H) 6,07-6,22 (m, 2 H) 7,15 (d, J=8,0 Гц, 2 H) 7,24 (d, J=8,0 Гц, 2 H). MS(ES+): 565,37 [M+Na]+.
Процедура синтеза соединения 179
Схема 52
Соединение 179 (11,5 мг, 34,1% за 2 стадии) получали из альдегида D (30,0 мг, 0,062 ммоль, 1,00 экв.) и сульфона SPE-29 (1,34 экв.) аналогичным образом, как описано для соединения 177. 1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ, d) δ: 0,90 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,05 (d, J=6,8 Гц, 3 H) 1,21 (s, 3 H) 1,24-1,42 (m, 3 H) 1,52-1,72 (m, 4 H) 1,74 (s, 3 H) 2,10 (s, 3 H) 2,20-2,26 (m, 1 H) 2,50-2,66 (m, 5 H) 3,38 (s, 3H) 3,56 (dd, J=10,8, 3,2 Гц, 2 H) 3,72-3,78 (m, 1 H) 4,43 (s, 2 H) 5,08-5,18 (m, 2 H) 5,59-5,71 (m, 3 H) 6,08-6,23 (m, 2 H) 7,09-7,27 (m, 5 H). MS(ES+): 565,41 [M+Na]+.
Процедура синтеза соединения 180
Схема 53
В раствор пладиенолида D (136 мг, 0,246 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (4 мл) при комнатной температуре добавляли периодинан Десса-Мартина (209 мг, 0,492 ммоль, 2,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 10 минут и затем разбавляли этилацетатом. Органический слой промывали водой и солевым раствором, затем высушивали над сульфатом натрия, твердое вещество отфильтровывали и растворитель удаляли под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на NH-силикагеле (гептан/этилацетат в качестве элюента) с получением необходимого продукта (соединение 180, 66,1 мг, 0,12 ммоль, выход 49%). MS(ES+): 571,36 [M+Na]+.
Процедура синтеза соединения 181
Схема 54
Стадия 1. Соединение E7107 (48,00 г, 66,8 ммоль, 1 экв.) растворяли в DMF (96 мл) и затем добавляли имидазол (31,8 г, 467 ммоль, 7 экв.). После полного растворения имидазола смесь охлаждали до 3°C. Добавляли TBSCl (30,2 г, 200 ммоль, 3 экв.) и перемешивание продолжали при 3-5°C в течение 2 часов. Обеспечивали нагревание смеси до комнатной температуры (18-19°C) и перемешивание продолжали в течение 22 часов. Смесь разбавляли с помощью MTBE (192 мл) и охлаждали до 3°C. Добавляли воду (192 мл), в то же время поддерживая внутреннюю T на уровне ниже 15°C, и полученную в результате смесь переносили в делительную воронку. Для промывки реактора применяли воду (96 мл) и MTBE (96 мл). Промывную воду также переносили в делительную воронку и хорошо перемешивали. Орг. слой разделяли и откладывали. Водный слой дважды экстрагировали с помощью MTBE (288 мл x 2). Все органические слои объединяли, последовательно промывали с помощью (1) воды (96 мл), (2) 30 вес. % водного раствора NaCl (96 мл, 492,79 ммоль) и частично концентрировали с получением 631 г желтого раствора (силилирование неочищенной смеси), 1,58 г аликвоты которого, соответствующие 1/400 неочищенной смеси, подвергали очистке с помощью хроматографии на силикагеле (25-50% MTBE/гептан) с получением необходимого продукта (SPE-13, 172 мг).
Стадия 2. Оставшиеся 1,58 г аликвоты неочищенного SPE-13 концентрировали, растворяли в ацетоне (1,6 мл) и разбавляли водой (0,4 мл). Добавляли NMO (0,078 г, 0,68 ммоль) с последующим добавлением 2,5 вес. % раствора OsO4 в воде (0,34 мл, 0,033 ммоль). После перемешивания в течение ночи (16 ч.) смесь разбавляли толуолом (0,8 мл), охлаждали до 0°C и гасили с помощью 20 вес. % водного раствора сульфита натрия (0,8 г). Смесь частично концентрировали и экстрагировали дважды с помощью EtOAc (4 мл x 2). Все органические слои объединяли, промывали с помощью 36 вес. % водного раствора NaCl (0,4 мл) и концентрировали. Неочищенный продукт, полученный таким образом, очищали с помощью Biotage 25M (EtOAc 100% и EtOAc-MeOH, 19:1, об./об.) с получением необходимого продукта (SPE-14, 117 мг).
Стадия 3. Соединение SPE-14 (80 мг, 0,082 ммоль, 1 экв.) растворяли в ацетонитриле (1,6 мл) и обрабатывали с помощью тетраацетата свинца (Pb(AcO)4; 74 мг, 0,17 ммоль, 2 экв.) при комнатной температуре. Через 30 мин. смесь разбавляли этилацетатом (3,2 мл), фильтровали и промывали смесью 20 вес. % водного раствора сульфита натрия (Na2SO3, 0,3 г, 0,5 ммоль, 7,3 экв.) и 9 вес. % водного раствора бикарбоната натрия (0,3 г, 0,3 ммоль, 3,6 экв.). Органический слой отделяли и откладывали. Водный слой экстрагировали этилацетатом (3,2 мл). Все органические слои объединяли, промывали с помощью 36 вес. % водного раствора хлорида натрия (0,60 мл) и концентрировали. Коричневатое неочищенное масло, полученное таким образом, очищали с помощью колонки с коротким слоем из SiO2 (EtOAc 100% и EtOAc-MeOH, 9:1, об./об.) с получением необходимого продукта (SPE-15, 30 мг).
Стадия 4. Бромид (метил)трифенилфосфония (1,28 г, 3,59 ммоль, 2,2 экв.) суспендировали в THF (10,5 мл) и охлаждали до -10°C. Добавляли 1 M раствор трет-бутоксида калия в THF (3,2 мл, 3,2 ммоль, 2 экв.) (внутренняя T достигала -6,1°C) и полученную желтую смесь перемешивали при -10°C. Через 30 мин. смесь охлаждали до уровня ниже -70°C. Добавляли раствор SPE-15 (1,049 г, 1,62 ммоль, 1 экв.) в THF (2,1 мл) (T≤ -65°C). Дополнительное количество THF (2,1 мл) применяли для промывки. Баню сухой лед/ацетон заменяли баней сухой лед/ацетонитрил для нагревания смеси до прибл. -45°C. Через 30 мин. добавляли 28 вес. % водный раствор хлорида аммония (1 г) и обеспечивали нагревание смеси до -10°C, ее разбавляли толуолом (31,5 мл) и водой (2 мл). Органический слой отделяли, промывали с помощью 36 вес. % водного раствора хлорида натрия (3 мл), концентрировали и очищали с помощью 100-г Biotage Snap Ultra (0-100% EtOAc/ацетон) с получением необходимого продукта (SPE-16, 310 мг).
Стадия 5-6. Соединение SPE-16 (0,110 г, 0,17 ммоль, 1 экв.) растворяли в 1,2-дихлорэтане (2,3 мл). Добавляли акролеиндиметилацеталь (0,20 мл, 1,7 ммоль, 10 экв.), бензохинон (0,5 мг) и катализатор Ховейды-Граббса 2-го поколения (14 мг, 0,017 ммоль, 0,1 экв.). Полученную смесь нагревали при 50°C. Загружали дополнительные реагенты в следующие моменты времени: 1 ч. - акролеиндиметилацеталь (0,20 мл, 1,7 ммоль, 10 экв.), 2 ч. - акролеиндиметилацеталь (0,20 мл, 1,7 ммоль, 10 экв.), 3 ч. - катализатор Ховейды-Граббса 2-го поколения (14 мг, 0,017 ммоль, 0,1 экв.) и акролеиндиметилацеталь (0,20 мл, 1,7 ммоль, 10 экв.). Нагревание продолжали в течение дополнительных 5 ч. и обеспечивали охлаждение смеси до температуры окружающей среды. Смесь непосредственно загружали в колонку с силикагелем для очистки (гептан-MTBE 1:1, гептан-EtOAc 9:1) с получением неочищенного SPE-17. Его растворяли в дихлорметане (1 мл) и обрабатывали муравьиной кислотой (0,1 мл) при комнатной температуре в течение 10 минут. Осторожно добавляли 9 вес. % водный раствор бикарбоната натрия (3 г) и смесь дважды экстрагировали этилацетатом (4 мл x 2). Все органические слои объединяли, концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc 100% и EtOAc-ацетон 3:1) с получением необходимого продукта (SPE-18, 10 мг).
Стадия 7-8. Соединение sn-2 (10,8 мг, 0,033 ммоль, 2 экв.) растворяли в THF (0,1 мл). Добавляли DMF (0,025 мл) и смесь охлаждали до -70°C. Добавляли 0,5 M раствор из 1 M раствора NaHMDS в THF (0,037 мл, 0,037 ммоль, 2,5 экв.) (<-65°C). Добавляли раствор соединения SPE-18 (0,010 г, 0,015 ммоль, 1 экв.) в THF (0,1 мл) (< -60°C). THF (0,2 мл) применяли для промывки. Через 30 мин. баню сухой лед/ацетон заменяли баней сухой лед/MeCN. Обеспечивали нагревание смеси до температуры от -45°C до -50°C. Через 1 ч. реакционную смесь гасили с помощью 28 вес. % водного раствора хлорида аммония (0,1 г). Смесь нагревали до 0°C и затем разбавляли этилацетатом (6 мл) и водой (0,2 мл). Органический слой отделяли, промывали с помощью 36 вес. % водного раствора хлорида натрия (0,3 мл), концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (50-100% EtOAc/гептан) с получением необходимого продукта (SPE-19, 10 мг). Соединение SPE-19 растворяли в THF (0,3 мл) и обрабатывали с помощью 1 M раствора TBAF в THF (0,030 мл, 0,03 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение ночи смесь концентрировали и очищали с помощью слоя SiO2 (от MTBE 100% до MTBE-ацетон 2:1) с получением необходимого продукта (соединение 181, 3 мг). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ˸ 8,54 (1H, m), 7,60 (1H, m), 7,09-7,17 (2H, m), 6,22-6,36 (2H, m), 6,14 (1H, m), 5,99 (1H, dd, J= 7 Гц и 15 Гц), 5,68 (1H, dd, J= 10 Гц и 15 Гц), 5,59 (1H, dd, J= 10 Гц и 15 Гц), 5,16 (1H, d, J= 10 Гц), 5,01 (1H, d, J= 10 Гц), 3,6-3,8 (2H, m), 3,4-3,5 (5H, m), 2,4-2,6 (8H, m), 1,96 (1H, s), 1,2-1,8 (16H, m), 1,73 (3H, s), 1,44 (3H, d, J= 7 Гц), 1,22 (3H, s), 0,87 (3H, d, J= 7 Гц).
Процедура синтеза соединения 182
Схема 55
Стадия 1. К соединению H3B-8800 (55 мг, 0,099 ммоль, 1 экв.) в DCE (5 мл) добавляли mCPBA (17,08 мг, 0,099 ммоль, 1,0 экв.) и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь выпаривали и очищали с помощью препаративной HPLC с получением необходимого продукта (соединение 182, 21 мг, 0,037 ммоль, 37%). 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ: 0,80-1,00 (m, 3 H) 1,23-1,48 (m, 6 H) 1,50-1,63 (m, 1 H) 1,65-1,83 (m, 4 H) 2,41-2,68 (m, 5 H) 3,19-3,36 (m, 7 H) 3,67-3,85 (m, 2 H) 3,91 (br s, 2 H) 4,02 (br s, 2 H), 5,03 (br d, J=9,54 Гц, 1 H) 5,17 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,57-5,77 (m, 2 H) 6,02 (dd, J=15,18, 7,40 Гц, 1 H) 6,13 (br d, J=11,04 Гц, 1 H) 6,34 (dd, J=15,06, 10,79 Гц, 1 H) 7,14 (t, J=6,18 Гц, 1 H) 7,18 (d, J=7,14 Гц, 1 H) 7,28 (s, 2 H) 7,63 (td, J=7,65, 1,76 Гц, 1 H) 8,56 (d, J=5,11 Гц, 1 H). MS(ES+): 572,69 [M+H]+.
Соединения 183 и 184 синтезировали в соответствии со схемой 56.
Схема 56
Иллюстративная процедура синтеза соединения 183
Стадия 1. В раствор соединения SPE-1 (246 мг, 0,746 ммоль, 1,8 экв.) в DMF (0,5 мл)/THF (1 мл) с соотношением 1:2 при -78°C по каплям добавляли NaHMDS (0,829 мл, 0,829 ммоль, 2,0 экв.) путем медленного добавления для обеспечения того, что внутренняя температура не превысит -60°C. Желтый раствор перемешивали при -78°C в течение 30 мин. Затем по каплям добавляли раствор соединения D (200 мг, 0,414 ммоль, 1 экв.) в THF (1 мл) с такой интенсивностью, чтобы температура реакционной смеси оставалась на уровне ниже -60°C. Колбу промывали с помощью дополнительного количества THF (1 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. при -78. Температуру бани повышали до -50°C в течение 20 мин. и затем обеспечивали перемешивание при температуре на уровне от -50°C до -45°C в течение 2 ч. Одной порцией добавляли твердый хлорид аммония (22,16 мг, 0,414 ммоль, 1 экв.). Обеспечивали медленное нагревание бани до 0°C. Смесь экстрагировали с помощью EtOAc, промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки полученного остатка с помощью колоночной хроматографии (0-100% EtOAc/гексаны) получали необходимый продукт (SPE-2, 320 мг, 0,382 ммоль, 92%).
Стадия 2. В раствор соединения SPE-2 (320 мг, 0,382 ммоль, 1 экв.) в MeOH (3 мл) при к. т. одной порцией добавляли твердый карбонат калия (74,0 мг, 0,535 ммоль, 1,4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 2,5 ч. Затем ее охлаждали до 0°C и добавляли твердый хлорид аммония (28,6 мг, 0,535 ммоль, 1 экв.) вместе с водой (2 мл). Данную смесь экстрагировали с помощью EtOAc, промытый солевой раствор, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc/гексаны) с получением необходимого продукта (SPE-3, 148 мг, 0,272 ммоль, 71%).
Стадия 3. В раствор соединения SPE-4 (17,87 мг, 0,069 ммоль, 1,5 экв.) в DCM (1 мл) и основания Хунига (0,048 мл, 0,276 ммоль, 6,0 экв.) при 0°C добавляли фосген (0,065 мл, 0,092 ммоль, 2 экв.) (в толуоле). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. при 0°C, затем ее нагревали до к. т. Реакционную смесь концентрировали с помощью роторного испарителя и высокого вакуума. Остаток растворяли в THF (1 мл) и добавляли соединение SPE-3 (25 мг, 0,046 ммоль, 1 экв.) и DMAP (22,47 мг, 0,184 ммоль, 4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°C и добавляли 1 M толуольный раствор NaHMDS (0,184 мл, 0,184 ммоль, 4 экв.). Ее перемешивали в течение 2 ч. при данной температуре. Реакционную смесь гасили с помощью раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью EtOAc, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью хроматографии на силикагеле (10% MeOH/EtOAc) получали необходимый продукт (SPE-5, 21 мг, 0,028 ммоль, 60%).
Стадия 4. К соединению SPE-5 (21 мг, 0,028 ммоль, 1 экв.) в метаноле (0,5 мл) добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (10,6 мг, 0,056 ммоль, 2 экв.) при к. т. Через 3 ч. реакционную смесь гасили с помощью насыщ. раствора NaHCO3. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc с последующим промыванием солевым раствором, высушиванием над сульфатом натрия, фильтрованием и концентрированием с получением неочищенного продукта. Посредством очистки с помощью хроматографии на силикагеле (0-20% MeOH/EtOAc) с получением необходимого продукта (соединение 183, 15,7 мг, 0,024 ммоль, 88%). 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: ppm 0,86-0,92 (m, 3 H) 1,14-1,18 (m, 1 H) 1,21-1,24 (m, 3 H) 1,27 (s, 2 H) 1,36-1,48 (m, 7 H) 1,57-1,69 (m, 2 H) 1,76 (s, 3 H) 1,81-1,98 (m, 6 H) 2,50-2,62 (m, 6 H) 2,72-2,87 (m, 4 H) 3,62-3,70 (m, 1 H) 3,75-3,84 (m, 1 H) 4,91-4,97 (m, 1 H) 5,02-5,10 (m, 1 H) 5,52-5,64 (m, 1 H) 5,67-5,79 (m, 1 H) 5,89-6,00 (m, 1 H) 6,10-6,19 (m, 1 H) 6,32-6,42 (m, 1 H) 7,35-7,45 (m, 1 H) 7,70-7,81 (m, 1 H) 8,37-8,41 (m, 1 H) 8,42-8,45 (m, 1 H). MS(ES+): 642,64 [M+H]+.
Процедура синтеза соединения 185
Схема 57
Стадия 1. В раствор соединения SPE-6 (184 мг, 0,559 ммоль, 1,8 экв.) при соотношении DMF (529 мкл)/THF (2139 мкл) 1:4 при -78°C по каплям добавляли 1 M NaHMDS (482 мкл, 0,482 ммоль, 1,55 экв.) посредством медленного добавления для обеспечения того, что внутренняя температура не превысит -60°C. Желтый раствор перемешивали при -78°C в течение 30 мин. Затем по каплям добавляли раствор промежуточного соединения D (150 мг, 0,311 ммоль, 1 экв.) в THF (425 мкл) с такой интенсивностью, чтобы температура оставалась на уровне ниже -60°C. Контейнер с альдегидом промывали с помощью дополнительного количества THF и содержимое добавляли в основную колбу. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч., поддерживая температуру бани на уровне от -70°C до -60°C. Температуру бани повышали до -50°C в течение 20 мин. Затем обеспечивали ее перемешивание при температуре от -50°C до -45°C в течение 2 ч. на бане ацетонитрил-сухой лед. Через 2 ч. одной порцией добавляли твердый хлорид аммония (72,6 мг, 1,358 ммоль, 4,37 экв.) и обеспечивали медленное нагревание бани до 0°C. Добавляли толуол и воду при 0°C и объединенные органические вещества промывали солевым раствором. Органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Очистка с помощью колоночной хроматографии (0-40% MTBE/гексаны с длительным удерживанием при 40%) обеспечивала получение необходимого продукта в виде смеси с некоторым количеством альдегида D (SPE-7, 57,8 мг, 0,099 ммоль, 31,7%).
Стадия 2. В раствор соединения SPE-7 (29,2 мг, 0,05 ммоль, 1 экв.) в MeOH (252 мкл) при к. т. одной порцией добавляли твердый карбонат калия (9,64 мг, 0,07 ммоль, 1,4 экв.). Через 2 часа реакционную смесь охлаждали до 0°C и добавляли насыщ. водн. раствор хлорида аммония. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc и промывали солевым раствором. Органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт (SPE-8, 12,6 мг, 0,023 ммоль, 46,5%) переносили на следующую стадию без дополнительной очистки.
Стадия 3. Соединение SPE-8 (24,2 мг, 0,045 ммоль, 1 экв.) растворяли в метаноле (225 мкл) и добавляли тозиловую кислоту (16,93 мг, 0,089 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили с помощью насыщ. водн. раствора бикарбоната натрия и экстрагировали с помощью 10% MeOH/DCM. Объединенные органические вещества высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Посредством очистки с помощью колоночной хроматографии (0-20% MeOH/DCM) получали необходимый продукт (соединение 185, 9,2 мг, 0,021 ммоль, выход 48,1%) в виде маслянистого/белого твердого вещества с затвердевшей поверхностью. 1H ЯМР (400 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ: ppm 0,90 (d, J=6,78 Гц, 3 H) 1,28 (s, 4 H) 1,35-1,39 (m, 2 H) 1,45 (d, J=7,03 Гц, 3 H) 1,53-1,62 (m, 2 H) 1,76 (d, J=0,88 Гц, 3 H) 2,53 (s, 3 H) 3,69-3,80 (m, 4 H) 5,03-5,08 (m, 1 H) 5,34-5,44 (m, 1 H) 5,48-5,53 (m, 1 H) 5,67-5,78 (m, 1 H) 5,92-6,03 (m, 1 H) 6,09-6,18 (m, 1 H) 6,33-6,44 (m, 1 H) 7,23-7,32 (m, 1 H) 7,32-7,39 (m, 1 H) 7,72-7,84 (m, 1 H) 8,40-8,50 (m, 1 H). MS(ES+): 430,43 [M+H]+.
Таблица 10
Соединения 175-185
175
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-8-(4-гидроксифенил)-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
176
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
177
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[2-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
178
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[4-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
179
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[3-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
180
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-6-метил-7-[(2R,3R)-3-[(2S)-3-оксопентан-2-ил]оксиран-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-10,12-диоксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетат
181
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6E,8S)-8-пиридин-2-илнонa-2,4,6-триен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилат
182
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-4-оксидопиперазин-4-ий-1-карбоксилат
183
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4-дифторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
184
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
185
(4S,7S,8S,9E,11S,12S)-4,7,8-тригидрокси-7,11-диметил-12-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-9-ен-2-он
Соединения 186-196 синтезировали в соответствии со схемой 58.
Процедура синтеза соединения 186
Схема 58
Стадия 1. В раствор три-TES-пладиенолида D (160 мг, 0,179 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (5 мл) при 20°C добавляли DMAP (32,7 мг, 0,268 ммоль), триэтиламин (0,75 мл, 5,36 ммоль) и 4-нитрофенилхлорформиат (360 мг, 1,787 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 4 дней и при 60°C в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали водой, затем слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2X). Объединенные органические экстракты последовательно промывали водой и солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Посредством флеш-хроматографии получали (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилат (150 мг, выход 79%).
1H-ЯМР (400 МГц, CHCl3-d): δ ppm 0,48-0,71 (m, 24 H) 0,78-0,85 (m, 7 H) 0,86-0,93 (m, 5 H) 0,94-1,03 (m, 34 H) 1,18-1,22 (m, 2 H) 1,22-1,26 (m, 2 H) 1,35-1,43 (m, 4 H) 1,43-1,52 (m, 4 H) 1,54 (s, 4 H) 1,56-1,65 (m, 3 H) 1,68-1,72 (m, 3 H) 1,75 (br d, J=0,75 Гц, 2 H) 1,84-1,95 (m, 1 H) 2,01-2,06 (m, 2 H) 2,09 (s, 2 H) 2,11 (s, 2 H) 2,33-2,52 (m, 4 H) 2,57 (dd, J=8,09, 2,07 Гц, 2 H) 2,80-2,90 (m, 1 H) 3,66-3,80 (m, 1 H) 3,82-3,93 (m, 2 H) 4,92-5,13 (m, 2 H) 5,63-5,68 (m, 1 H) 5,69-5,74 (m, 1 H) 5,75-5,83 (m, 2 H) 6,12 (br d, J=10,67 Гц, 1 H) 6,41 (ddd, J=15,15, 11,01, 5,08 Гц, 1 H) 7,50 (d, J=9,41 Гц, 2 H) 8,35 (d, J=9,29 Гц, 2 H).
Стадия 2. В раствор (2S,3S,6S,7R,10R, E)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-6-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-7-ил-ацетата в DCM (1 мл) добавляли пиперазин (0,447 г, 5,195 ммоль) и основание Хунига (0,9 мл, 5,195 ммоль). Полученную желтоватую суспензию перемешивали в течение 6 часов. Реакционную смесь концентрировали и хроматографировали на силикагеле с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата (1,0 г, 0,844 ммоль, выход 81%). LC/MS (ESI, масса/заряд), 1008,1 [M+H]+.
Стадия 3. 2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилат (1,09 г, 0,92 ммоль), DCM (20,71 мл, 321,826 ммоль) и DIPEA (19,91 мл, 114,018 ммоль) объединяли и охлаждали до -78°C. Добавляли гидрофторид-пиридин (0,518 г, 5,232 ммоль) и обеспечивали нагревание реакционной смеси до к. т. и ее перемешивали в течение ночи. Результаты LC/MS предполагали десилилирование. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане. Добавляли насыщенный раствор NaHCO3 и перемешивали и экстрагировали с помощью DCM. Органические слои объединяли, высушивали над безв. Na2SO4, и концентрировали, и хроматографировали с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2S,3S)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата (225 мг, 36,8%). LC/MS (ESI, масса/заряд), 665,6 [M+H]+.
1H-ЯМР (400 МГц, CHCl3-d): δ ppm 0,87-0,92 (m, 6 H) 0,94 (t, J=7,40 Гц, 3 H) 1,16-1,31 (m, 1 H) 1,35 (s, 3 H) 1,40-1,56 (m, 4 H) 1,59 (s, 3 H) 1,66 (br dd, J=14,68, 7,03 Гц, 3 H) 1,76-1,80 (m, 3 H) 1,87 (dd, J=14,12, 5,46 Гц, 1 H) 2,05 (s, 3 H) 2,30-2,41 (m, 1 H) 2,50 (d, J=3,76 Гц, 2 H) 2,56-2,72 (m, 2 H) 2,90 (br d, J=2,01 Гц, 1 H) 3,19 (br t, J=5,14 Гц, 4 H) 3,50-3,59 (m, 1 H) 3,71 (br s, 4 H) 3,77-3,89 (m, 1 H) 5,01-5,13 (m, 2 H) 5,58-5,71 (m, 1 H) 5,71-5,81 (m, 1 H) 5,88 (d, J=15,31 Гц, 1 H) 6,15 (br d, J=10,79 Гц, 1 H) 6,53 (dd, J=15,18, 10,92 Гц, 1 H).
Процедура синтеза соединения 187
Схема 59
Стадия 1. В раствор три-TES-пладиенолида D (200 мг, 0,223 ммоль) в дихлорметане (2 мл) при 0°C добавляли DMAP (409 мг, 3,35 ммоль) и 4-нитрофенилхлорформиат (338 мг, 1,675 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 7 дней, разбавляли с помощью EtOAc и воды, затем слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2X) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором. Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Посредством флэш-хроматографии получали (2S,3S,6S,7R,10R, E)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-7-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-ацетат (170 мг, выход 72%).
1H-ЯМР (400 МГц, CHCl3-d): δ ppm 0,54-0,67 (m, 18 H) 0,78-1,03 (m, 36 H) 1,19-1,32 (m, 1 H) 1,39 (s, 3 H) 1,43-1,52 (m, 3 H) 1,55-1,63 (m, 3 H) 1,64 (s, 3 H) 1,74 (s, 3 H) 1,88 (dd, J=13,80, 5,02 Гц, 1 H) 2,13 (s, 3 H) 2,23-2,37 (m, 1 H) 2,39-2,48 (m, 2 H) 2,51-2,63 (m, 2 H) 2,84 (s, 1 H) 3,69-3,77 (m, 1 H) 3,82-4,00 (m, 1 H) 5,04 (d, J=10,79 Гц, 1 H) 5,24 (d, J=9,03 Гц, 1 H) 5,67-5,84 (m, 3 H) 6,12 (d, J=10,16 Гц, 1 H) 6,42 (dd, J=15,06, 11,04 Гц, 1 H) 7,42 (d, J=9,29 Гц, 2 H) 8,29 (d, J=9,16 Гц, 2 H).
Стадия 2. В раствор (2S,3S,6S,7R,10R, E)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-7-(((4-нитрофенокси)карбонил)окси)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-ацетата (100 мг, 0,094 ммоль) в DCM добавляли пиперазин и DMAP. Полученную желтоватую суспензию перемешивали в течение 6 часов. Реакционную смесь концентрировали с получением неочищенного продукта. Посредством флэш-хроматографии получали (2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-7-илпиперазин-1-карбоксилат (95 мг, 100%). LC/MS (ESI, масса/заряд), 1008,8 [M+H]+.
1H-ЯМР (400 МГц, CHCl3-d): δ ppm 0,42-0,70 (m, 22 H) 0,79-0,84 (m, 7 H) 0,86-0,91 (m, 4 H) 0,92-1,03 (m, 30 H) 1,15-1,30 (m, 2 H) 1,37-1,42 (m, 3 H) 1,44-1,52 (m, 3 H) 1,56-1,62 (m, 2 H) 1,62-1,68 (m, 1 H) 1,71-1,76 (m, 3 H) 1,83-1,93 (m, 1 H) 2,03-2,11 (m, 4 H) 2,36-2,45 (m, 2 H) 2,45-2,53 (m, 2 H) 2,54-2,64 (m, 1 H) 2,78-2,86 (m, 1 H) 2,86-3,07 (m, 4 H) 3,32-3,45 (m, 1 H) 3,45-3,64 (m, 3 H) 3,69-3,78 (m, 1 H) 3,79-3,94 (m, 1 H) 5,00 (d, J=10,54 Гц, 1 H) 5,18 (s, 1 H) 5,54-5,79 (m, 3 H) 5,98-6,21 (m, 1 H) 6,33-6,57 (m, 1 H) 6,84-6,96 (m, 3 H) 8,02-8,35 (m, 2 H) 8,06-8,08 (m, 1 H).
Стадия 3. В раствор (2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2R,3R)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-7-илпиперазин-1-карбоксилата в (95 мг, 0,094 ммоль) в THF (3 мл) добавляли TBAF (0,424 мл, 1 M, 0,424 ммоль) и перемешивали при к. т. в течение 10 часов. Смесь концентрировали и разбавляли с помощью EtOAc, промывали водой и солевым раствором. Органический слой разделяли и высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Посредством очистки с помощью HPLC получали (2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-илпиперазин-1-карбоксилат (16 мг, 26%). LC/MS (ESI, масса/заряд), 665,6 [M+H]+.
1H-ЯМР (400 МГц, CHCl3-d): δ ppm 0,90 (dd, J=6,84, 2,20 Гц, 6 H) 0,94 (t, J=7,40 Гц, 3 H) 1,20-1,30 (m, 1 H) 1,34 (s, 3 H) 1,39-1,54 (m, 3 H) 1,55 (s, 3 H) 1,59-1,73 (m, 3 H) 1,78 (d, J=0,88 Гц, 3 H) 1,86 (dd, J=13,99, 5,46 Гц, 1 H) 2,05 (s, 3 H) 2,39-2,53 (m, 3 H) 2,55-2,65 (m, 1 H) 2,67 (dd, J=8,03, 2,26 Гц, 1 H) 2,89 (s, 1 H) 3,22 (br s, 4 H) 3,50-3,57 (m, 1 H) 3,58-3,90 (m, 5 H) 5,08 (d, J=10,67 Гц, 1 H) 5,18 (d, J=9,03 Гц, 1 H) 5,58-5,78 (m, 2 H) 5,88 (d, J=15,31 Гц, 1 H) 6,10-6,23 (m, 1 H) 6,53 (dd, J=15,25, 10,98 Гц, 1 H).
Таблица 11
Соединения 175-185
186
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилат
187
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-7-ил]пиперазин-1-карбоксилат
188
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилат
189
[(2S,3S,4E,6S,7R,10R)-7-этокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2S,3S)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
190
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-7-ил]пиперазин-1-карбоксилат
191
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]пиперазин-1-карбоксилат
192
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилат
193
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-[2-(метиламино)этил]карбамат
194
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-[2-(диметиламино)этил]карбамат
195
3-[4-[[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]оксикарбонил]пиперазин-2-ил]пропановая кислота
196
4-[4-[[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7-метокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]оксикарбонил]пиперазин-1-ил]бутановая кислота
Соединения 197-200 синтезировали в соответствии со схемой 60.
Схема 60
Стадия 1.
В раствор три-TES-пладиенолида D (1,0 экв.) в 1,2-дихлорэтане (0,2 M) при 20°C добавляли DMAP (1,5 экв.), триэтиламин (30 экв.) и 4-нитрофенилхлорформиат (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 4 дней и затем в течение 2 ч. при 60°C. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали водой, затем слои разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (2x). Объединенные органические экстракты последовательно промывали водой и солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Посредством колоночной флэш-хроматографии (EtOAc в гексане; силикагель) получали промежуточный карбонат. В смесь промежуточного карбоната (1,0 экв.) в DCM (0,2 M) добавляли триэтиламин (3,0 экв.) и амин (2,0 экв.) и полученную смесь перемешивали при к. т. в течение 1 часа. Реакционную смесь затем концентрировали и хроматографировали (DCM/MeOH; силикагель) с получением карбаматного промежуточного соединения в виде смеси региоизомеров.
Стадия 2.
Региоизомерную смесь карбаматного промежуточного соединения (1,0 экв.) растворяли в DCM (0,04 M). Добавляли основание Хунига (124 экв.) и реакционную смесь охлаждали до -78°C и по каплям добавляли гидрофторид-пиридин (30 экв.) перед нагреванием смеси до к. т. и перемешиванием в течение ночи при к. т. Реакционную смесь затем охлаждали до -78°C и по каплям добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия. После добавления бикарбоната натрия смесь нагревали до к. т. Выделяли органический слой и водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали посредством очистки с помощью HPLC с обращенной фазой с получением каждого из необходимых региоизомерных продуктов.
Таблица 14
Соединения 197-200
197
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-(1S,4S)-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилат
198
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилат
199
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-пропилпиперазин-1-карбоксилат
200
(2R,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((2S,6R, E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепт-4-ен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-карбоксилат
Пример 201
В смесь (2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-илпиперазин-1-карбоксилата (230 мг, 0,346 ммоль; пример 187) в DCM (8 мл) добавляли триацетоксиборгидрид натрия (4 экв.) и затем формальдегид (104 мг, 3,459 ммоль) в виде водного раствора. Смесь перемешивали в течение 20 минут при к. т. После перемешивания смесь разбавляли метанолом и затем концентрировали под вакуумом на силикагеле и очищали посредством хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH/DCM) и концентрировали под вакуумом с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-6-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-7-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилата (160 мг, 0,236 ммоль, выход 68,1%) в виде бесцветного масла.
LCMS (ESI, масса/заряд), [M+H]+ 679,2.
Пример 202
В смесь (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата (55 мг, 0,083 ммоль; пример 186) в DCM (3 мл) добавляли (9H-флуорен-9-ил)метил(2-оксоэтил)карбамат (46,5 мг, 0,165 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (52,6 мг, 0,248 ммоль). Смесь перемешивали при к. т. в течение 20 минут и затем концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH/DCM) и концентрировали под вакуумом. Выделенный материал разбавляли с помощью DMF (3 мл) и к этой смеси добавляли диэтиламин (121 мг, 1,655 ммоль). Смесь перемешивали при к. т. до израсходования исходного материала перед концентрированием под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью HPLC с обращенной фазой с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-(2-аминоэтил)пиперазин-1-карбоксилата (6 мг, 8,48 мкмоль, выход 10,25%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ ppm 0,74-0,86 (m, 9 H) 1,04-1,15 (m, 1 H) 1,23 (s, 3 H) 1,26-1,40 (m, 3 H) 1,45 (s, 4 H) 1,47-1,51 (m, 1 H), 1,52-1,63 (m, 1 H) 1,69 (s, 3 H) 1,73-1,82 (m, 1 H) 1,99 (s, 3 H) 2,13-2,42 (m, 9 H) 2,53-2,65 (m, 4 H) 2,72-2,80 (m, 1 H), 3,35-3,41 (m, 3 H) 3,65-3,76 (m, 1 H) 4,36-4,46 (m, 1 H) 4,57-4,66 (m, 1 H) 4,79-4,85 (m, 1 H) 4,87-4,95 (m, 2 H) 5,43-5,56 (m, 1 H) 5,64-5,77 (m, 1 H) 5,80-5,91 (m, 1 H) 6,01-6,12 (m, 1 H) 6,33-6,49 (m, 1 H). LCMS (ESI, масса/заряд), 708,2 [M+H]+
Пример 203
В раствор (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилата (25 мг, 0,038 ммоль; пример 186) в ацетоне (2 мл) добавляли этил-2-бромацетат (7,54 мг, 0,045 ммоль) и карбонат калия (3 экв.). Полученную смесь перемешивали в течение 25 минут перед добавлением дополнительного количества бромацетата (2 экв.) и перемешивания при к. т. в течение 1 часа. Потом смесь разбавляли этилацетатом и промывали солевым раствором. Органический слой выделяли, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (0-15% MeOH/DCM) с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-ацетокси-10-гидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)пиперазин-1-карбоксилата (12 мг, 0,016 ммоль, выход 42,5%) в виде бесцветного масла. LCMS (ESI, масса/заряд), [M+H]+ 751,3
Примеры 204 и 205
Примеры 204 и 205 получали посредством последовательности действий, указанной на схеме 61.
Схема 61
Стадия 1.
Смесь (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-ацетата (0,626 г, 0,699 ммоль), THF (4,58 мл, 55,925 ммоль), этилвинилового эфира (2,69 мл, 27,963 ммоль), PPTS (0,044 г, 0,175 ммоль) перемешивали в течение ночи. В реакционную смесь добавляли триэтиламин (0,8 экв.) и перемешивали в течение несколько минут перед экстрагированием с помощью насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Водный слой выделяли и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-(1-этоксиэтокси)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-ацетата в виде смеси диастереомеров (636 мг, 0,657 ммоль, выход 94%).
1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ppm 0,60 (q, J=7,65 Гц, 19 H) 0,78-0,92 (m, 10 H) 0,96 (t, J=7,91 Гц, 28 H) 1,16-1,30 (m, 8 H) 1,32-1,35 (m, 1 H) 1,38 (br s, 5 H) 1,43-1,62 (m, 7 H) 1,71 (d, J=6,65 Гц, 4 H) 2,02-2,08 (m, 3 H) 2,33-2,53 (m, 3 H) 2,53-2,59 (m, 1 H) 2,79-2,87 (m, 1 H) 3,42-3,67 (m, 2 H) 3,68-3,76 (m, 1 H) 3,78-3,86 (m, 1 H) 4,94-5,13 (m, 2 H) 5,14-5,20 (m, 1 H) 5,57-5,78 (m, 3 H) 6,03-6,13 (m, 1 H) 6,35-6,47 (m, 1 H).
Стадия 2.
Смесь (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-(1-этоксиэтокси)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-ацетата (1,4 г, 1,447 ммоль), карбоната натрия (0,300 г, 2,17 ммоль) и метанола (14,47 мл, 1,447 ммоль) перемешивали в течение 1 ч. В смесь добавляли EtOAc и насыщенный водный раствор хлорида аммония и выделяли органический слой. Водный слой затем экстрагировали три раза с помощью EtOAc и органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до сухого состояния с получением (4R,7R,8S,11S,12S, E)-7-(1-этоксиэтокси)-8-гидрокси-7,11-диметил-12-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-4-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-9-ен-2-она (1 г, 1,080 ммоль, выход 74,7%).
Стадия 3.
(4R,7R,8S,11S,12S, E)-7-(1-этоксиэтокси)-8-гидрокси-7,11-диметил-12-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-4-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-9-ен-2-он (1 г, 1,08 ммоль), DCM (0,1 M), основание Хунига (5,0 экв.), DMAP (1,0 экв.) и 4-нитрофенилхлорформиат (1,8 экв.) объединяли и перемешивали в течение ночи. В полученную смесь добавляли водный раствор гидроксида натрия (1 н.) и выделяли органический слой. Водный слой затем три раза экстрагировали с помощью DCM. Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток разбавляли с помощью DCM (0,1 M) и к этой смеси добавляли основание Хунига (5,0 экв.) и амин (3,0 экв.) с последующим перемешиванием в течение 2 часов. Полученную смесь затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (1-10% MeOH в DCM) с получением карбаматного промежуточного соединения.
Карбаматное промежуточное соединение № 1
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-(1-этоксиэтокси)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (700 мг, 0,666 ммоль, выход 61,6%). LCMS (ESI, масса/заряд), 1052,6 (M+H)+
1H ЯМР (400 МГц, MeOH-d4) δ ppm 0,60-0,70 (m, 18 H) 0,82-1,03 (m, 38 H) 1,12-1,26 (m, 5 H) 1,26-1,36 (m, 6 H) 1,43 (s, 3 H) 1,45-1,64 (m, 7 H) 1,77 (s, 4 H) 1,88-1,99 (m, 1 H) 2,30 (s, 3 H) 2,36-2,46 (m, 5 H) 2,46-2,65 (m, 3 H) 2,82-2,93 (m, 1 H) 3,55 (s, 6 H) 3,71-3,81 (m, 1 H) 3,84-3,98 (m, 1 H) 4,88-5,00 (m, 2 H) 5,09-5,18 (m, 1 H) 5,52-5,63 (m, 1 H) 5,72-5,88 (m, 2 H) 6,09-6,19 (m, 1 H) 6,45-6,57 (m,1 H).
Карбаматное промежуточное соединение № 2
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-(1-этоксиэтокси)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилат (330 мг, 0,318 ммоль, выход 69,4%).
Стадия 4.
трет-Бутанол (0,16 M), THF (0,08 M) и PPTS (3,0 экв.) объединяли и перемешивали при к.т. В смесь добавляли (2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-(1-этоксиэтокси)-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (1,0 экв.) и ее перемешивали в течение ночи. Затем добавляли насыщенный солевой раствор и смесь перемешивали в течение 30 минут. Органический слой выделяли и водный слой экстрагировали три раза с помощью DCM. Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали под вакуумом и полученный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в гексане) с получением три-TES-защищенного промежуточного соединения.
Три-TES-защищенное промежуточное соединение № 1
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (172 мг, 0,176 ммоль, выход 41,1%) LCMS (ESI, масса/заряд), 980,144 (M+H)+
Три-TES-защищенное промежуточное соединение № 2
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилат (0,49 г, 96%)
LCMS (ESI, масса/заряд), 966,1 (M+H)+.
Стадия 5.
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-((R,2E,4E)-6-метил-6-((триэтилсилил)окси)-7-((2S,3S)-3-((2S,3S)-3-((триэтилсилил)окси)пентан-2-ил)оксиран-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил)-12-оксо-10-((триэтилсилил)окси)оксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (100 мг, 0,102 ммоль), DCM (371 экв.) и DIPEA (191 экв.) объединяли и охлаждали до -78°C. Добавляли гидрофторид-пиридин (30 экв.) и смесь нагревали до к. т. и перемешивали в течение ночи. Смесь затем охлаждали на ледяной бане и затем добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Полученную смесь экстрагировали с помощью DCM и органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали под вакуумом и хроматографировали на силикагеле (MeOH/DCM) с получением необходимого соединения.
Пример 204
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7,10-дигидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-ил-4-метилпиперазин-1-карбоксилат (31,6 мг, 0,050 ммоль, выход 48,6%).
MS (ESI, масса/заряд), 637,6 (M+H)+
1H ЯМР (400 МГц, MeOH-d4) δ ppm 0,86-0,98 (m, 9 H) 1,20-1,23 (m, 3 H) 1,23-1,32 (m, 2 H), 1,34 (s, 3 H) 1,35-1,70 (m, 7 H) 1,78 (d, J=0,75 Гц, 3 H) 1,83-1,93 (m, 1 H) 2,30 (s, 3 H) 2,41 (br t, J=4,77, Гц, 4 H) 2,52 (dd, J=3,39, 1,63 Гц, 3 H) 2,65-2,72 (m, 1 H) 2,86-2,95 (m, 1 H) 3,38-3,73 (m, 5 H) 3,76 -3,88 (m, 1 H) 4,95 (s, 1 H) 5,03-5,13 (m, 1 H) 5,51-5,63 (m, 1 H) 5,66-5,78 (m, 1 H) 5,82-5,93 (m, 1 H), 6,08-6,20 (m, 1 H) 6,48-6,61 (m, 1 H).
Пример 205
(2S,3S,6S,7R,10R, E)-7,10-дигидрокси-2-((R,2E,4E)-6-гидрокси-7-((2R,3R)-3-((2R,3S)-3-гидроксипентан-2-ил)оксиран-2-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил)-3,7-диметил-12-оксооксациклододец-4-ен-6-илпиперазин-1-карбоксилат (50 мг, выход 78%).
MS (ESI, масса/заряд), 623,7 (M+H)+
1H ЯМР (400 МГц, MeOH-d4) δ ppm 0,88-0,99 (m, 9 H) 0,98-1,05 (m, 2 H) 1,25 (s, 4 H) 1,21-1,27 (m, 1 H) 1,34-1,37 (m, 4 H) 1,48-1,73 (m, 5 H) 1,76-1,83 (m, 3 H) 1,85-1,93 (m, 1 H) 2,46-2,74 (m, 4 H) 2,88-2,95 (m, 1 H) 3,21 (s, 4 H) 3,51-3,60 (m, 1 H) 3,78 (s, 5 H) 4,94-5,01 (m, 1 H) 5,05-5,11 (m, 1 H) 5,56-5,66 (m, 1 H) 5,70-5,79 (m, 1 H) 5,86-5,93 (m, 1 H) 6,08-6,24 (m, 1 H) 6,45-6,63 (m, 1 H)
Биологические анализы
Процедура анализа жизнеспособности клеток
Клетки (WiDr и Panc05.04, полученные от ATCC) высевали в 96-луночные планшеты, при концентрации 2000 клеток/100 мкл/лунка, и инкубировали в течение ночи. Удаляли отработанные среды и добавляли свежие среды, содержащие соединение в 9 различных концентрациях (100 мкл/лунка), при этом концентрацию DMSO из исходного раствора соединения доводили до 0,1%. Каждую обработку соединением осуществляли в двух или трех повторностях для каждой концентрации.
Другой планшет с высеянными клетками предназначался в качестве планшета начала отсчета времени (Tz), в который добавляли 0,1% DMSO в средах (100 мкл/лунка) с последующим добавлением реагента CellTiter-Glo® (Promega Corporation, Мадисон, Висконсин, США) (50 мкл/лунка) для измерения уровня ATP в качестве идентификатора жизнеспособности клеток. Среднее значение после осуществления измерения множества лунок данного планшета применяли в качестве Tz.
Планшеты, обработанные соединением, инкубировали в течение 72 ч. при 37°C. Затем добавляли реагент CellTiter-Glo® (50 мкл/лунка) и измеряли уровень ATP. Среднее значение для измерений лунок, обработанных соединением, взятых в двух или трех повторностях, применяли в качестве Ti и засеянные планшеты со средой, содержащей 0,1% DMSO без соединения, применяли в качестве контрольного роста (C).
Процент ингибирования роста/процент жизнеспособности рассчитывали как:
[(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100 для значений концентрации, для которых Ti>/=Tz,
[(Ti-Tz)/Tz] x 100 для значений концентрации, для которых Ti<Tz.
*начало отсчета времени (Tz), контрольный рост (C) и тестовый рост в присутствии соединения (Ti).
Процент ингибирования роста/процент жизнеспособности наносили на график относительно концентрации соединения для определения Emax.
Ингибирование роста 50% (GI50) рассчитывали из [(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100=50, что представляет собой концентрацию лекарственного средства, обеспечивающую 50% уменьшение чистого увеличения уровня ATP в лунках контрольного роста (C) в ходе обработки соединением.
Процедура (биохимического) анализа сплайсинга in vitro
Получали меченную биотином pre-mRNA конструкции аденовируса 2 типа с делецией во вставочной последовательности (Ad2) (Berg, M.G., et al. 2012 Mol. Cell Bio., 32(7):1271-83) путем транскрипции in vitro. Конструкцию Ad2, содержащую экзон 1 (41 нуклеотид), интрон (231 нуклеотид) и экзон 2 (72 нуклеотида), получали путем генного синтеза и клонировали в сайты EcoRI и XbaI вектора pGEM®-3Z (Promega) с помощью Genewiz® (Саут-Плейнфилд, Нью-Джерси, США). Плазмиду затем линеаризовали путем расщепления XbaI и очищали. Транскрипцию in vitro и очистку транскрибированной pre-mRNA проводили с применением набора для транскрипции MEGAscript® T7 (Invitrogen™, Life Technologies™, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) и набора для очистки транскрипта MEGAclear™ (Invitrogen™, Life Technologies™, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) соответственно, следуя инструкциям изготовителя. Соотношение биотин-16-UTP (RoChe Diagnostics Corporation, Индианаполис, Индиана, США) и "холодного" UTP составляло 1:13 для включения примерно двух молекул биотина на сплайсированную mRNA Ad2.
Анализ сплайсинга in vitro осуществляли при 30°C в 25-мкл реакционных смесях, содержащих 95 мкг ядерного экстракта HeLa (Promega Corporation, Мадисон, Висконсин, США), 47 нМ pre-mRNA Ad2, 25 ед. ингибитора РНКазы RNasin (Promega Corporation, Мадисон, Висконсин, США), 1-кратный буфер SP (0,5 мМ ATP, 20 мМ креатинфосфат, 1,6 мМ MgCl2) и соединения в DMSO (с 1% конечной концентрацией DMSO). После 90 мин. инкубации реакцию останавливали путем добавления 18 мкл 5 M NaCl и смеси инкубировали с использованием 10 мкл покрытых стрептавидином магнитных гранул M-280 (Invitrogen™, Life Technologies™, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США), в течение 30 мин. при комнатной температуре для захвата pre-mRNA и сплайсированной mRNA Ad2. Гранулы промывали дважды с использованием 100 мкл буфера, содержащего 10 мМ Tris, pH=7,5, 1 мМ EDTA и 2 M NaCl, и затем инкубировали в гелевом загрузочном буфере для РНК, содержащем 95% формамид, при 70°C в течение 10 мин. для элюирования РНК. РНК Ad2 разделяли с помощью 6% геля TBE-UREA, переносили на нейлоновую мембрану, поперечно сшивали с помощью УФ-излучения и исследовали посредством связывания с меченным IRDye® стрептавидином (LI-COR, Линкольн, Небраска, США). Количество сплайсированной РНК количественно определяли путем измерения интенсивности флуоресценции полосы с применением программного обеспечения LI-COR Image Studio.
Результаты
Данные приведены в таблице 13 ниже. Emax относится к максимально достижимому ответу на соединение в тестируемом диапазоне доз, при этом отрицательное значение указывает на клеточную летальность. Большее отрицательное значение Emax указывает на большую клеточную летальность для конкретного соединения. Например, в клетках Panc 05.04 мутантной клеточной линии SF3B1 большее отрицательное значение Emax указывает на то, что соединение 1 имеет большую клеточную летальность, чем соединение 7.
Клетки WiDr-R представляют собой клетки рака толстой кишки, которые имеют химически индуцированную мутацию R1074H и, как показано, являются устойчивыми к пладиенолиду B касательно ингибирования роста (Yokoi, A., et al., 2011 FEBS Journal, 278:4870-4880). Изучение селективности и специфичности соединений в данном анализе жизнеспособности с "устойчивой" клеточной линией WiDr-R может указывать на то, имеют ли данные соединения нецелевой (нецелевые) эффект (эффекты). Соединения, которые не проявляют активность в ингибировании роста (GI50) в устойчивой клеточной линии WiDr-R, но поддерживают активность в родительской клеточной линии WiDr, заставляют предположить, что обусловленная этим механизмом модуляция сплайсинга ответственна за ингибирование роста, которое наблюдается в родительской клеточной линии WiDr.
Сцинтилляционный анализ сближения (SPA) с зондом на основе [3H]-меченого пладиенолида
Иммобилизацию порции антител к SF3B1 (MBL) на покрытые антителами к Ig мыши сцинтилляционные гранулы из PVT для SPA-анализа (PerkinElmer) проводили следующим образом: для каждых 2,5 мг ядерных экстрактов смешивали 5 мкг антитела к SF3B1 и 1,5 мг гранул в 150 мкл PBS. Смесь антитела-гранулы инкубировали в течение 30 мин при к.т. и центрифугировали при 18000g в течение 5 мин. Применяли 150 мкл PBS для ресуспендирования каждых 1,5 мг смеси антитела-гранулы. Гранулы суспендировали и добавляли к полученным ядерным экстрактам. Взвесь инкубировали в течение 2 ч. при 4°C с осторожным перемешиванием. Затем гранулы собирали с помощью центрифугирования при 18000g в течение 5 мин. и промывали дважды с помощью PBS+0,1% Triton X-100. После конечной стадии центрифугирования каждые 1,5 мг гранул суспендировали с помощью 150 мкл PBS. Комплексы SF3b тестировали в отношении связывания с зондом на основе [3H]-меченого пладиенолида ([3H]-PB), синтезированного, как описано ранее (Kotake et al., 2007). 100 мкл реакционных смесей для связывания получали с помощью 50 мкл взвеси гранул и путем добавления различных концентраций PB или PB-OH, и после 30 мин. предварительной инкубации добавляли 2,5 нМ [3H]-PB. Смесь инкубировали в течение 30 мин. и сигналы люминесценции считывали с применением планшетного счетчика MicroBeta2 (PerkinElmer). Для аппроксимации данных к кривой нелинейной регрессии применяли Prism 6 (Graphpad).
Условные обозначения для таблицы 15
Клетки WiDr=клетки рака толстой кишки; дикий тип SF3B1.
Клетки WiDr-R=клетки рака толстой кишки; химически индуцированная мутантная линия SF3B1, которая является устойчивой к E7107 (мутация R1074H).
Клетки Panc 05.04=клетки рака поджелудочной железы; мутации Q699H и K700E в SF3B1.
SPA=сцинтилляционный анализ сближения.
Таблица 15
Биологическая активность иллюстративных соединений
Emax (%)
(клетки дикого типа SF3B1),
IC50 (нМ)
1 2 3
4 5 6
7 8
9 10 11
12 13 14
15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
27 28
29 30 31 32 33 34 35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46 47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60 61 62 63
64 65
66 67 68 69 70
71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83
84 85 86 87 88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103 104 105 106 107 108 109 110 111
112
113
114
115 116
117
118
119
120
121
122
123 124
125
126
127
128
129
130
131
132 133
134
135
136
137 138 139 140
141 142 143 144 145 146 147
148
149 150 151 152 153 154
155 156
157
158
159
160
161
162
163
164
165
166
167 168
169
170
171
172
173
174
175
176
177
178
179
180
181
182
183
184
185
186
187
188
189
190
191
192
193
194
195
196
197
199
Введение по меньшей мере одного соединения, выбранного из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любых из вышеуказанных соединений
Клетки рака толстой кишки CT26 (0,25 × 106; ATCC, № по кат. CRL-2638) имплантировали подкожно в правый бок самок мышей Balb/c (Envigo) возрастом восемь недель в 100 мкл Matrigel без PVS. Допускали рост опухоли CT26 в среднем до ~100 мм3, прежде чем животных включали в исследование эффективности. Каждая группа обработки содержала 12 мышей. Мышей обрабатывали по меньшей мере одним соединением, выбранным из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любых из вышеуказанных соединений, антителом к CTLA4 или их комбинацией при различных дозах и посредством различных путей введения. По меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений формулы I, соединений формулы II, соединений формулы III и фармацевтически приемлемых солей любых из вышеуказанных соединений, составлено в композицию, содержащую 5% этанол и 95% раствор метилцеллюлозы (0,5% метилцеллюлозы). Антитело к CTLA4 находилось в составе с PBS при pH 7. Опухоли измеряли 3 раза в неделю в течение периода длительностью до 19 дней. Объемы опухолей рассчитывали по формуле для эллипсоида: объем опухоли = (длина × ширина2)/2.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> KEANEY, GREGG F.
WANG, JOHN
GERARD, BAUDOUIN
ARAI, KENZO
LIU, XIANG
ZHENG, GUO ZHU
KIRA, KAZUNOBU
MARCAURELLE, LISA A.
NEVALAINEN, MARTA
HAO, MING-HONG
O'SHEA, MORGAN WELZEL
TIVITMAHAISOON, PARCHAREE
PRAJAPATI, SUDEEP
LUO, TOUPING
GEARHART, NICHOLAS C.
LOWE, JASON T.
KOTAKE, YOSHIHIKO
NAGAO, SATOSHI
KANADA SONOBE, REGINA MIKIE
MIYANO, MASAYUKI
MURAI, NORIO
COOK, ANDREW
ELLERY, SHELBY
ENDO, ATSUSHI
PALACINO, JAMES
REYNOLDS, DOMINIC
<120> ОПРЕДЕЛЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПЛАДИЕНОЛИДА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
<130> 08061.0037-00304
<140> PCT/US2019/026313
<141> 08.04.2019
<150> 62/814,843
<151> 2019-03-06
<150> 62/814,838
<151> 2019-03-06
<150> 62/679,653
<151> 2018-06-01
<150> 62/655,021
<151> 2018-04-09
<160> 58
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 1
Ser Pro Thr Leu Pro Pro Arg Ser Leu
1. 5
<210> 2
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 2
His Pro Ser Ile Lys Arg Gly Leu Ser Ser Leu
1. 5 10
<210> 3
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 3
Leu Leu Leu Pro His His Val Leu
1. 5
<210> 4
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 4
Arg Thr Ala Pro Gly Val Arg Pro Pro Phe
1. 5 10
<210> 5
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 5
Arg Pro Gln Lys Ser Ile Gln Ala Leu
1. 5
<210> 6
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 6
Ala Pro Ala Pro Pro Pro Leu Pro Ala
1. 5
<210> 7
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 7
Arg Pro Arg Pro Ser Phe Pro Val Ser Leu
1. 5 10
<210> 8
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 8
Arg Pro Lys His Gly Asp Gly Phe Ser Leu
1. 5 10
<210> 9
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 9
Gly Pro Ala Pro Gly Lys Thr Gly Leu
1. 5
<210> 10
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 10
Glu Ala Ala Arg Lys Gly Asn Ser Leu
1. 5
<210> 11
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 11
Arg Ile Lys Glu Lys Ile Glu Glu Leu
1. 5
<210> 12
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 12
Glu Ile Lys Lys Arg Phe Arg Gln Phe
1. 5
<210> 13
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 13
His Glu Ser Ala Ala Met Ala Glu Thr
1. 5
<210> 14
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 14
Ala Leu Lys Leu Lys Gln Val Gly Val
1. 5
<210> 15
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 15
Asp Leu Lys Lys Arg His Ile Thr Phe
1. 5
<210> 16
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 16
Asp Val Lys Arg Asn Asp Ile Ala Met
1. 5
<210> 17
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 17
Ile Pro Ser Asp His Ile Leu Thr Pro Ala
1. 5 10
<210> 18
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 18
Thr Val Phe Ser Thr Ser Ser Leu Lys
1. 5
<210> 19
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 19
Ile Thr Ser Cys Leu Leu Asn Phe
1. 5
<210> 20
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 20
Arg Ala Ser Pro Val Arg Gly Gln Leu
1. 5
<210> 21
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 21
Val Val Arg Lys Pro Val Ile Ala Leu
1. 5
<210> 22
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 22
Leu Leu Ser Glu Lys Lys Lys Ile Ser
1. 5
<210> 23
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 23
Ala Pro Ala Ser Lys Pro Arg Pro Arg Leu
1. 5 10
<210> 24
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 24
Arg Tyr Gly Gln Leu Ser Glu Lys Phe
1. 5
<210> 25
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 25
Val Tyr Ile Ser Asn Val Ser Lys Leu
1. 5
<210> 26
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 26
Leu Pro Thr Lys Glu Thr Pro Ser Phe
1. 5
<210> 27
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 27
Gly Glu Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala
1. 5
<210> 28
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 28
Leu Glu Glu Ile Ser Lys Gln Glu Ile
1. 5
<210> 29
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 29
Ile Tyr Asn His Ile Thr Val Lys Ile
1. 5
<210> 30
<211> 160
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 30
Val Asp Leu Glu Pro Thr Val Ile Gly Glu Leu Thr Ser Val Thr Gln
1. 5 10 15
Val Arg Ser Gln Gly Ala Gly Thr Gly Gly Leu Ser Trp Gly Gly Ser
20 25 30
Ala Gly His Ser Pro Thr Leu Pro Pro Arg Ser Leu Ser Leu Leu Leu
35 40 45
Leu Pro His His Val Leu Gln Met Lys Phe Ala Leu Ala Leu Thr Ala
50 55 60
Ser Ser Ser Thr Leu Ser Asn Ser Ser Gln Ala Arg Lys Met Leu Pro
65 70 75 80
Ile Thr Met Pro Glu Gly Thr Thr Pro Leu Ala Arg Arg Ser Leu Thr
85 90 95
Ser Cys Trp Thr Glu Phe Ala Ser Trp Leu Thr Ser Ala Pro Val Phe
100 105 110
Arg Ala Ser Trp Phe Ser Thr Ala Leu Val Gly Glu Leu Val Leu Gly
115 120 125
Ser Pro Arg Cys Ser Trp Asn Val Ser Gln Leu Ile Met Ala Arg Ser
130 135 140
Pro Ser Trp Ser Ser Pro Phe Thr Arg Arg Pro Arg Phe Pro Gln Leu
145 150 155 160
<210> 31
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 31
Ala Pro Pro Arg Ser His Pro Ser Ile Lys Arg Gly Leu Ser Ser Leu
1. 5 10 15
<210> 32
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 32
Met Val Arg Arg Ala Arg Trp Pro Gly Gly Arg Gly Glu Ala Arg Lys
1. 5 10 15
Ala Pro Arg Thr Ala Pro Gly Val Arg Pro Pro Phe
20 25
<210> 33
<211> 199
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 33
Trp Val Asn Cys Leu Phe Val Ser Gly Arg Ala Ala Ala Gly Gly Gly
1. 5 10 15
Gly Gly Gly Ala Val Pro Pro Tyr Leu Glu Leu Ala Gly Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Leu Leu Thr Leu Ile Arg Ile Gly Leu Gly Arg Arg Ser Gly Arg
35 40 45
Ala Gly Gly Arg Ala Gly Thr Gln Cys Gly Gly Glu Arg Gly Pro Gly
50 55 60
Phe Ala Ala Phe Arg Pro Leu Arg Pro Phe Arg Arg Leu Arg Val Cys
65 70 75 80
Ala Val Cys Val Arg Gly Ser Ala Leu Gly Arg Ser Val Gly Leu Pro
85 90 95
Arg Gly Gly Ala Ala Gly Ala Pro Phe Ser Ser Ser Pro Ala Pro His
100 105 110
Pro Arg Arg Val Leu Cys Arg Cys Leu Leu Phe Leu Phe Phe Ser Cys
115 120 125
His Asp Arg Arg Gly Asp Ser Gln Pro Tyr Gln Val Pro Ala Glu Ala
130 135 140
Gly Val Glu Gly Leu Glu Gly Ala Gly Gly Gly Arg Glu Gly Leu Leu
145 150 155 160
Leu Glu Arg Arg Pro Gln Lys Ser Ile Gln Ala Leu Arg Cys Asn Thr
165 170 175
Ser Glu Thr Ser Thr Ala Asp Pro Leu Lys Ile Pro Gly Leu Val Pro
180 185 190
Leu Ala Leu Ser Ser Lys Val
195
<210> 34
<211> 101
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 34
Met Pro Leu Pro Val Gln Val Phe Asn Leu Gln Val Thr Ser Arg Gly
1. 5 10 15
Arg Pro Gly Pro Pro Arg Pro Arg Ala Pro Arg His Trp Gly Arg Ala
20 25 30
Glu Val Glu Gln Gly Arg Gly Ala Cys Ala Arg Ser Arg Ser Gly Thr
35 40 45
Leu Arg Ala Gly Pro Pro Arg Ala Ala Arg Val Gly Gly Cys Arg Ala
50 55 60
Glu Gly Ala Ser Pro Pro Trp Leu Arg Ala Ala Ile Gly Gly Arg Arg
65 70 75 80
Ala Ala Pro Ala Pro Pro Pro Leu Pro Ala Ala His Gly Arg Gly Ser
85 90 95
Arg Pro Pro Arg Arg
100
<210> 35
<211> 162
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 35
Gln Pro Ala Gln Pro Arg Thr Gly Ala Pro Ala Arg Arg Pro Arg Pro
1. 5 10 15
Arg Pro Ser Phe Pro Val Ser Leu Arg Ser Ala Ala Pro Pro Thr Gly
20 25 30
Thr Ala Gly Gly Thr Gly Arg Phe Val Leu Arg Pro Gly Glu Ser Gly
35 40 45
Ala Gly Gly Gly Gly Asp Ala Trp Asp Thr Gly Leu Gln Ala Arg Arg
50 55 60
Gly Thr Ala Ala Gly Thr Ser Gly Ala Pro Asn Arg Ser Gln Leu Ser
65 70 75 80
Ser Leu Thr Phe Pro Ala Gln Leu Arg Arg Ile Gly Val Ser Gly Arg
85 90 95
Lys Pro Gly Ala Gly Gly Arg Leu Gly Pro Gly Ser Arg Thr Cys Ala
100 105 110
Pro Arg Cys Leu Pro Arg Ala Arg Arg Gly Pro Gly Ala His Pro Arg
115 120 125
Gly Gly Arg Cys Pro Pro Ala Glu Thr Ala Leu Phe Arg Glu Ala Glu
130 135 140
Glu Gly Thr Gln Lys Tyr Ser Leu Pro Ser Asp Pro Ala Gly Gln Ala
145 150 155 160
Ala Phe
<210> 36
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 36
Phe Arg Leu His Thr Gly Pro Val Ser Pro Val Gly Gly Arg Arg Gln
1. 5 10 15
Met Gly Arg Pro Lys His Gly Asp Gly Phe Ser Leu Gln Val Cys Ser
20 25 30
Phe Ile Met Glu Gln Asn Gly
35
<210> 37
<211> 71
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 37
Gly Val Val Glu Ile Thr Gly Glu Pro Pro Cys Ser Cys Arg Gly Glu
1. 5 10 15
Glu Glu Ala Ser Arg Ala Gly Arg Ala Gly Gly Val Arg Leu Lys Arg
20 25 30
Gly Ser Arg Gly Pro Gly Glu Leu Asn Val Gly Pro Ala Pro Gly Lys
35 40 45
Thr Gly Leu Leu Ile Pro Leu Leu Arg Asn Trp Glu Cys Gly Ser Leu
50 55 60
Leu Arg Ala Leu Ser Ala Leu
65 70
<210> 38
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 38
Lys Met Gly Phe Pro Glu Ala Ala Arg Lys Gly Asn Ser Leu
1. 5 10
<210> 39
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 39
Leu Glu Ala Arg Ile Lys Glu Lys Ile Glu Glu Leu Gln Gln Ala Leu
1. 5 10 15
Ile
<210> 40
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 40
Glu Ile Lys Lys Arg Phe Arg Gln Phe Lys Gln Ala Val Tyr Lys Gln
1. 5 10 15
<210> 41
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 41
Ala His Glu Ser Ala Ala Met Ala Glu Thr Leu Gln His Val Pro Ser
1. 5 10 15
<210> 42
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 42
Asn Arg Pro Ser Val Gln Ala Ala Leu Lys Leu Lys Gln Val Gly Val
1. 5 10 15
<210> 43
<211> 19
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 43
Lys Thr Asp Asp Leu Lys Lys Arg His Ile Thr Phe Thr Leu Gly Cys
1. 5 10 15
Gly Ile Cys
<210> 44
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 44
Met Lys Leu Asp Glu Asp Val Lys Arg Asn Asp Ile Ala Met Ala Ile
1. 5 10 15
<210> 45
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 45
Asn Ser Ile Ser Gln Ile Pro Ser Asp His Ile Leu Thr Pro Ala Leu
1. 5 10 15
Phe Ile Thr Phe Met Thr Ile Leu Asp Leu
20 25
<210> 46
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 46
Thr Val Phe Ser Thr Ser Ser Leu Lys Leu Asn Gln Pro Gln Lys Tyr
1. 5 10 15
Leu Lys Met Lys Ser Trp Pro Cys
20
<210> 47
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 47
Ala Glu Glu Asp Arg Arg Lys Lys Val Ile Thr Ser Cys Leu Leu Asn
1. 5 10 15
Phe Asn Leu Ser Lys Ala Gln Ser
20
<210> 48
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 48
Arg Ser Phe Ser Thr Ser Ala Gln Val Gly Gln Thr Arg Gly Gly Leu
1. 5 10 15
Gln Ala Glu Ala Pro Arg Pro Gly Pro Arg Ala Ser Pro Val Arg Gly
20 25 30
Gln Leu
<210> 49
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 49
Arg Gly Tyr Val Val Arg Lys Pro Val Ile Ala Leu Ser Val Lys Ile
1. 5 10 15
<210> 50
<211> 86
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 50
Val Asp Met Asp Phe Gly Thr Gly Gly Gln Gly Ala Gly Pro Val Gly
1. 5 10 15
Arg Gly Lys Asp Trp Ser Cys Thr Leu Ala Val His Leu Leu Ser Glu
20 25 30
Lys Lys Lys Ile Ser Phe Ser Gln Ile Asp Arg Ala Trp Gly Gly Ser
35 40 45
Gln Gly Thr Val Leu Asp Lys Trp Gly Pro Gly Val Val Ser Glu Leu
50 55 60
His Pro Ser Ala Lys Glu Val Ser Val Gly Arg Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Leu Met Thr Trp Ala Ser
85
<210> 51
<211> 66
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 51
Glu Lys Gly Ser His Glu Glu Glu Val Arg Val Pro Ala Leu Ser Trp
1. 5 10 15
Gly Arg Pro Arg Ala Pro Ala Pro Ala Ser Lys Pro Arg Pro Arg Leu
20 25 30
Asp Leu Asn Cys Leu Trp Leu Arg Pro Gln Pro Ile Phe Leu Trp Lys
35 40 45
Leu Arg Pro Arg Pro Val Pro Ala Ala Thr Pro Leu Thr Gly Pro Leu
50 55 60
Pro Leu
65
<210> 52
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 52
Arg Tyr Gly Gln Leu Ser Glu Lys Phe Asn Arg Arg Lys Val Met Asp
1. 5 10 15
Ser
<210> 53
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 53
Met Val Tyr Ile Ser Asn Val Ser Lys Leu Cys Phe Ser Lys Met
1. 5 10 15
<210> 54
<211> 48
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 54
Asn Thr Leu Pro Thr Lys Glu Thr Pro Ser Phe Leu Leu Asn Pro His
1. 5 10 15
Thr Ser Trp Val Pro Arg Pro His Arg Glu Ala Pro Arg Leu Arg Val
20 25 30
Gly Val Ala Ala Pro Leu Gln Arg Pro Leu Pro Ala Leu His Ser His
35 40 45
<210> 55
<211> 58
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
полипептид"
<400> 55
Phe Gly Asp Ile Tyr Leu Gly Glu Ala Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ala
1. 5 10 15
Arg Arg Pro Gly Pro Cys Gly Cys Gln Asp Gln Ala Arg Ser Arg Lys
20 25 30
Glu Val Val Ala Pro Ala Gly Ser Pro Arg Lys Ser Arg His Arg Arg
35 40 45
Ile Val Ala Arg Thr Gln Arg Pro Leu Gly
50 55
<210> 56
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 56
Gly Ser Ala Ser Asp Leu Leu Glu Glu Ile Ser Lys Gln Glu Ile Ser
1. 5 10 15
Phe
<210> 57
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: синтетический
пептид"
<400> 57
Gln Leu Ile Tyr Asn His Ile Thr Val Lys Ile Asn Leu Gln Gly Asp
1. 5 10 15
<210> 58
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Неустановленное
<220>
<221> источник
<223> /примечание="Описание незивестного:
пептид геликазы 9 с DEAH-боксом (DHX9)"
<400> 58
Asp Glu Ala His
1
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПЛАДИЕНОЛИДА В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВ, ОКАЗЫВАЮЩИХ ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ НА СПЛАЙСОСОМУ, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА | 2019 |
|
RU2815064C2 |
| КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛА И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРА СПЛАЙСИНГА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2799438C2 |
| ТВЕРДЫЕ ФОРМЫ ПЛАДИЕНОЛИДПИРИДИНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2016 |
|
RU2743349C2 |
| Аналоги сплицеостатина | 2013 |
|
RU2618523C2 |
| ПИРИДИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПЛАДИЕНОЛИДА И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2015 |
|
RU2807278C2 |
| ПИРИДИНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ПЛАДИЕНОЛИДА И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2015 |
|
RU2707730C2 |
| СОЕДИНЕНИЯ С КОНДЕНСИРОВАННЫМИ КОЛЬЦАМИ | 2019 |
|
RU2783414C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ КАРБОНУКЛЕОЗИДА, ПРИМЕНЯЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОРАКОВЫХ АГЕНТОВ | 2017 |
|
RU2712944C1 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ЦИКЛОГЕКСАНА ИЛИ ТЕТРАГИДРОПИРАНА, ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫЕ СОЛИ, ИЛИ ГИДРАТЫ, ИЛИ СОЛЬВАТЫ ЭТИХ СОЕДИНЕНИЙ, ИЛИ ИХ СОЛЕЙ, ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ФУНГИЦИДНОЕ СРЕДСТВО | 1992 |
|
RU2084439C1 |
| КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ИНГИБИРОВАНИЯ ВИРУСНОЙ ПОЛИМЕРАЗЫ | 2013 |
|
RU2654482C2 |
Группа изобретений относится к соединению, выбранному из соединений формулы I:
и их фармацевтически приемлемых солей, относится к фармацевтической композиции, применимой для целенаправленного воздействия на сплайсосому и мутации в ней, содержащей эффективное количество соединения и/или его фармацевтически приемлемой соли и фарацевтически приемлемый носитель, также относится к применению соединения и/или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции для получения лекарственного препарата для лечения рака, выбранного из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака толстой кишки, рака поджелудочной железы, рака эндометрия, рака яичника, рака молочной железы, увеальной меланомы, рака желудка, холангиокарциномы и рака легкого. Группа изобретений обеспечивает разработку средства, оказывающего целенаправленное воздействие на сплайсосому, имеющего структуру соединения формулы I. 4 н. и 22 з.п. ф-лы, 15 табл., 205 пр.
1. Соединение, выбранное из соединений формулы I:
и их фармацевтически приемлемых солей,
где:
n выбран из 0, 1, 2 или 3;
R1 выбран из C1-C6алкильных групп, -NR9R10, групп 
групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
, групп 
и групп 
;
R9 выбран из водорода, C1-C6алкильных групп, C3-C8циклоалкильных групп и C3-C8гетероциклильных групп, содержащих один гетероатом выбранный из азота или кислорода, где C1-C6алкильные группы, C3-C8циклоалкильные группы и C3-C8гетероциклильные группы, имеющие 1 гетероатом, могут быть не замещены или замещены 1-3 раза группой, независимо выбранной из C1-C6алкильных групп, групп, представляющих собой атом галогена;
R10 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп;
один из либо R2, либо R3 выбран из водорода и C1-C6алкильных групп, и другой выбран из водорода, групп -OR10 и C1-C6алкильных групп;
R4 выбран из водорода и гидрокси;
каждый из R5 и R6 независимо выбран из C1-C6алкильных групп;
каждый из R7 и R8 независимо выбран из водорода, гидрокси, и C1-C6алкильных групп; и
Y выбран из фенила, тиофенила, триазолила, пиридинила, пиримидинила, пиридазинила и пиразинила, где Y может быть не замещен или замещен 1-3 раза группами, независимо выбранными из C1-C6алкильных групп, C3-C5циклоалкильных групп, гидрокси-C1-C6алкильных групп, C1-C6алкоксигрупп, метокси-C1-C6алкильных групп, групп -NR11R12, 
и 
где каждый из R11 и R12 независимо выбран из C1-C6алкильных групп,
где, если n равно 0, Y представляет собой пиридин, R1 представляет собой пиперазин или пиперидин; R2 представляет собой гидрокси; R3 представляет собой метил; R4 представляет собой гидрокси; R5 и R6 представляют собой метил; R7 и R8 независимо представляют собой водород или метил, тогда R9 не представляет собой метил, циклогептил, пиперидинил или азепанил.
2. Соединение по п. 1, где Y представляет собой 
3. Соединение по п. 1, где Y представляет собой необязательно замещенный фенил.
4. Соединение по п. 1, где R1 выбран из метила, групп 
, 
, групп , групп 
, групп , групп 
, групп 
, групп и групп .
5. Соединение, выбранное из:
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-[6-[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-пропан-2-илпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклопентилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(оксан-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-6-циклогептил-2,6-диазаспиро[3.3]гептан-2-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-3-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклобутилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N-метил-N-(1-метилпиперидин-4-ил)карбамата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-морфолин-4-карбоксилата;
[(2R,3R,4E,6S,7R,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6R)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-(1S,4R)-5-метил-2,5-диазабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-8-циклогептил-3,8-диазабицикло[3.2.1]октан-3-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-1,4-диазепан-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогексилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1,4-диазепан-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(азепан-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(8,8-дифтор-3-азабицикло[3.2.1]октан-3-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-9-оксо-9-пирролидин-1-илнона-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6S)-6-метил-7-[метил(пропил)карбамоил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10R)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3R)-3-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-карбамоилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R)-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2S,5S)-2,5-диметилпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-фторпирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,2-диметилпирролидин-1-карбонил)окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E)-6,6-диметил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-10-(пирролидин-1-карбонилокси)-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
(2R)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-2-карбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(3-оксопирролидин-1-карбонил)оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-2-окса-7-азаспиро[3.4]октан-7-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-5-[1-(пирролидин-1-карбонилоксиметил)циклопропил]пента-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S,4R)-3,4-дигидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
(3S)-1-[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенокси]карбонилпирролидин-3-карбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3S)-3-(диметиламино)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(2,5-дигидропиррол-1-карбонилокси)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-[(2-метилпропан-2-ил)оксикарбониламино]пирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-(4-циклогептилпиперазин-1-карбонил)окси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-3-азабицикло[3.1.0]гексан-3-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиразин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(3-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридазин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-(4-метилпиримидин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(6-пирролидин-1-илпиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(фторметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N, N-диметилкарбамата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-гидроксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6R)-6-(диметилкарбамоилокси)-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(2S)-2-метилпирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(2,2,2-трифторэтил)пиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-N,N-диметилкарбамата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-(диметиламино)пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-(2-пирролидин-1-илпиримидин-4-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3S)-3-триэтилсилилоксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E)-6-[2-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-ил]пиримидин-4-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиримидин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[(3S)-3-(1-фенилтетразол-5-ил)оксипирролидин-1-карбонил]оксигепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбонилокси)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[[(2R)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбонил]амино]-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-(пирролидин-1-карбониламино)гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E,6R)-6-метил-7-[метил(пирролидин-1-карбонил)амино]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(4-циклопропилтриазол-1-ил)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6S)-7-метоксикарбонилокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-9-метокси-6-метил-9-оксононa-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6R)-7-(циклопентанкарбониламино)-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
сложного эфира [(2R,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-7-[оксо-(1-пирролидинил)метокси]гепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептил-1-пиперазинкарбоновой кислоты;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10S)-10-гидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R)-2-[(2E,4E,6R)-7-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-карбонил]окси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3-метил-12-оксо-1-азациклододец-4-ен-6-ил]-4-метилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2R,3E,5E)-2-метил-6-[(2S,3S,4E,6R)-3-метил-6-[(4-метилпиперазин-1-карбонил)амино]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]гепта-3,5-диенил]пирролидин-1-карбоксилата;
[(2S,3E,5E)-6-[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-6-ацетилокси-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-2-ил]-2-метилгепта-3,5-диенил]-(2R,3R)-3-гидрокси-2-метилпентанoата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-7-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-7-метил-6-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-2-[(2E,4E,6S)-7-[(2R,3R)-3-[(2R,3R)-3-ацетилоксипентан-2-ил]оксиран-2-ил]-6-гидрокси-6-метилгепта-2,4-диен-2-ил]-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-6-тиофен-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-фенилгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-(6-метоксипиридин-2-ил)гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-[6-(2-метилпропокси)пиридин-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-пиридин-2-илокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-7-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E,6R)-6-гидрокси-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-2-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-4-илгекса-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6R,7R,10R)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-6-гидрокси-8-(4-гидроксифенил)-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-2-[(2E,4E)-6-метил-8-фенилокта-2,4-диен-2-ил]-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[2-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[4-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-2-[(2E,4E)-8-[3-(метоксиметил)фенил]-6-метилокта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-12-оксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S)-7-гидрокси-2-[(2E,4E,6S)-6-гидрокси-6-метил-7-[(2R,3R)-3-[(2S)-3-оксопентан-2-ил]оксиран-2-ил]гепта-2,4-диен-2-ил]-3,7-диметил-10,12-диоксо-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]ацетата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6E,8S)-8-пиридин-2-илнонa-2,4,6-триен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-циклогептилпиперазин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-метил-4-оксидопиперазин-4-ий-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4-фторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
[(2S,3S,4E,6S,7S,10S)-7,10-дигидрокси-3,7-диметил-12-оксо-2-[(2E,4E)-6-пиридин-3-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-4-ен-6-ил]-4-(4,4-дифторпиперидин-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата;
(4S,7S,8S,9E,11S,12S)-4,7,8-тригидрокси-7,11-диметил-12-[(2E,4E,6S)-6-пиридин-2-илгепта-2,4-диен-2-ил]-1-оксациклододец-9-ен-2-она;
и их фармацевтически приемлемых солей.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, где указанное соединение является стереомерно чистым.
7. Фармацевтическая композиция, применимая для целенаправленного воздействия на сплайсосому и мутации в ней, содержащая эффективное количество соединения и/или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-6 и по меньшей мере один фарацевтически приемлемый носитель.
8. Фармацевтическая композиция по п. 7, где указанная композиция составлена для внутривенного, перорального, подкожного или внутримышечного введения.
9. Применение соединения и/или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-6 или фармацевтической композиции по п. 7 или 8, для получения лекарственного препарата для лечения рака, выбранного из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, рака толстой кишки, рака поджелудочной железы, рака эндометрия, рака яичника, рака молочной железы, увеальной меланомы, рака желудка, холангиокарциномы и рака легкого.
10. Применение по п. 9, где указанный рак выбран из миелодиспластического синдрома, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миеломоноцитарного лейкоза и острого миелоидного лейкоза.
11. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой миелодиспластический синдром.
12. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз.
13. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой хронический миеломоноцитарный лейкоз.
14. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой острый миелоидный лейкоз.
15. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак толстой кишки.
16. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак поджелудочной железы.
17. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак эндометрия.
18. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак яичника.
19. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак молочной железы.
20. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой увеальную меланому.
21. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак желудка.
22. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой холангиокарциному.
23. Применение по п. 9, где указанный рак представляет собой рак легкого.
24. Применение по любому из пп. 9-23, где указанный рак является положительным в отношении одной или нескольких мутаций в гене или белке сплайсосомы.
25. Применение по п. 24, где указанный ген или белок сплайсосомы выбран из субъединицы 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1), вспомогательного фактора 1 малых ядерных РНК U2 (U2AF1), фактора сплайсинга 2 с высоким содержанием серина/аргинина (SRSF2), белка 2 с "цинковыми пальцами" (тип CCCH), РНК-связывающим мотивом и высоким содержанием серина/аргинина (ZRSR2), фактора сплайсинга 8, участвующего в процессинге pre-mRNA (PRPF8), вспомогательного фактора 2 малых ядерных РНК U2 (U2AF2), фактора сплайсинга 1 (SF1), субъединицы 1 фактора сплайсинга 3a (SF3A1), гомолога B фактора 40 процессинга pre-mRNA PRP40 (PRPF40B), белка 10 с РНК-связывающим мотивом (RBM10), поли(rC)-связывающего белка 1 (PCBP1), фактора 1, участвующего в сплайсинге pre-mRNA, "crooked neck" (CRNKL1), геликазы 9 с DEAH-боксом (Asp-Glu-Ala-His) (DHX9), белка 2, подобного пептидил-пролил-цис-транс-изомеразе (PPIL2), белка 22 с РНК-связывающим мотивом (RBM22), малого ядерного рибонуклеопротеина Sm D3 (SNRPD3), предполагаемой ATP-зависимой РНК-геликазы DDX5 (DDX5), фактора, участвующего в сплайсинге pre-mRNA, с активностью ATP-зависимой РНК-геликазы DHX15 (DHX15) и полиаденилат-связывающего белка 1 (PABPC1).
26. Применение по п. 25, где указанный ген или белок сплайсосомы представляет собой субъединицу 1 фактора сплайсинга 3B (SF3B1).
| WO 2015175594 A1, 19.11.2015 | |||
| WO 2017087667 A9, 12.10.2017 | |||
| WO 2007110704 A2, 04.10.2007 | |||
| ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЙ МИКРООРГАНИЗМ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОЛИДНОГО СОЕДИНЕНИЯ С ГИДРОКСИЛЬНОЙ ГРУППОЙ В 16-ПОЛОЖЕНИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТАКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ | 2006 |
|
RU2394906C2 |
| НОВЫЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА | 2003 |
|
RU2338741C2 |
