ДНК-АПТАМЕР, ОБЛАДАЮЩИЙ ВЫСОКИМ СРОДСТВОМ К БЕЛКУ ИНТЕРЛЕЙКИН-6 Российский патент 2024 года по МПК C12N15/115 A61P29/00 A61P37/02 

Область техники

Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной медицине, а именно к получению специфических фрагментов нуклеиновых кислот, называемых аптамерами, к интерлейкину 6 (ИЛ6). Аптамеры могут быть использованы как основа для создания биосенсоров, так и для разработки медицинских препаратов, с целью обнаружения и оценки концентрации молекул-мишеней. Аптамеры могут применяться в терапии и для профилактики лечения и/или улучшения воспалительных заболеваний, злокачественных заболеваний, инфекционных, аутоиммунных заболеваний, в которых патогенетическим фактором является ИЛ6.

Уровень техники

Интерлейкин 6 (ИЛ6) образует структуру пучка альфа спиралей различной длины. Другими членами этого семейства являются ИЛ11, ИЛ17, ИЛ27, онкостатин-М (OSM), клеточный нейротрофический фактор (CNTF), фактор, ингибирующий лейкемию (LIF), кардиотрофин-1 (CT-1) и кардиотрофиноподобный цитокин (CLC).

ИЛ6 продуцируется В-клетками, Т-клетками, моноцитами, фибробластами и другими типами клеток. Он обладает как про-, так и противовоспалительными свойствами, т.е. обладает плейотропными свойствами в широком спектре биологических активностей, включая воспалительные процессы в нормальных клетках, а также в процессах иммунной защиты хозяина и при модуляции клеточного роста. ИЛ6 также участвует в пролиферации и дифференцировке различных клеток при злокачественном опухолеобразовании [Guo, Y., et al., Обзоры лечения рака, 2012. 38: 904-910].

При некоторых острых воспалительных состояниях концентрация ИЛ6 может резко возрасти от пг/мл до мг/мл [Waage, A., etal., ClinicalImmu и Immunpath, 1989, 50: 394-398]. ИЛ6 активирует клетки, связываясь с системой рецепторов, где на первом этапе образуется комплекс с рецептором ИЛ6 (IL-6R), присутствующим на клеточной мембране. Далее этот лиганд-рецепторный комплекс связывается с белком, преобразующим сигнал, gpl30, и активирует тирозинкиназу Януса (JAK), что приводит к активации нижестоящего сигнального преобразователя и активаторов сигнального пути транскрипционного белка 3 (STAT3) [Heinrich, P.C., et al., BiochemJ., 1998, 334: 297-314].

ИЛ6 также активирует путь митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) [Heinrich, P.C. et al., BiochemJ., 2003, 374: 1-20].

IL-6R присутствует как мембраносвязанный белок только в нескольких типах клеток, включая гепатоциты, нейтрофилы, моноциты/макрофаги и некоторые лимфоциты, тогда как gpl30 экспрессируется повсеместно во всех типах клеток и действует как сигнальный белок для других членов семейства цитокинов ИЛ6.

Передача сигнала через мембраносвязанный IL-6R представляет собой классический сигнальный путь, описанный в литературе. В дополнение к мембрано-связанному IL-6R присутствует растворимая форма IL-6R (sIL-6R) в высокой концентрации в крови и других жидкостях организма [Honda 1992, Novick 1989], с аналогичными сродство к ИЛ6. После взаимодействия с ИЛ6 рецептор sIL-6R увеличивает время циркуляции (период полужизниИЛ6) и одновременно активирует сигнальный путь в клетках, в которых IL-6R не экспрессируется, а gpl30 экспрессируется. Этот сигнальный путь активируется ИЛ6. Растворимая форма рецептора sIL- 6R действует по механизму транс-сигнализации.

Цитокины ИЛ6, ИЛ11, ИЛ17, ИЛ27, OSM, факторы CNTF, LIF, CT-1 и другие составляют семейство рецептора gpl30, который обеспечивает передачу сигнала внутрь клетки, а транс-сигнальный путь ИЛ6 может активировать все или большинство типов клеток в организме. Доклинические исследования показали роль цитокинов при различных воспалительных заболеваниях, и поэтому они стали основными терапевтическими мишенями. Есть несколько анти-TNF-агентов на рынке, которые широко используются для уменьшения воспаления. Так как они не эффективны для всех пациентов, существует необходимость поиска других ингибиторов цитокинов, терапевтическая роль которых во время воспаления была бы такой же, как и у ИЛ6. Антитело против IL-6R, тоцилизумаб, в настоящее время используется для лечения ревматоидного артрита.

ИЛ-6 может служить предиктором смертности у пациентов с прогрессирующей сердечной недостаточностью, с кардиогенным шоком [N. Komarovaetal., AptamersTargetingCardiacBiomarkersasanAnalyticalToolfortheDiagnosticsofCardiovascularDiseases: A Review, Biomedicines 2022, 10, 1085. https://doi.org/10.3390].

Аптамеры представляют собой олигонуклеотиды, которые связывают свои белковые мишени с высокой аффинностью и специфичностью. Аптамеры могут быть выбраны с использованием метода SELEX (систематическая эволюция лигандов при экспоненциальном обогащении.

В 1995 году была первая публикация по выделению аптамерак ИЛ6. Были представлены двааптамера 5522 и 5523 с KD в низком микромолярном диапазоне [Kim, M. et al., In Vitro Selection of DNA Aptamers Binding to the Recombinant Human Interleukin-6. Mol. Cells 1995, 5, 555–562]. Специфичность аптамеров не рассматривалась, и аптамеры 5522 и 5523 больше не применялись для обнаружения ИЛ6.

С помощью молекулярного моделирования [Rhinehardt KL, Vance SA, Mohan RV, Sandros M, Srinivas G.,Molecular modeling and SPRi investigations of interleukin 6 (IL6) protein and DNA aptamers, JBiomol Struct Dyn., 2018, 36(8):1934-1947] были предложены структуры ДНК-аптамеров, которые не были охарактеризованы константами связывания, как принято в научной литературе, а даны лишь расчеты радиуса инерции (Rg) предложенных молекул, проведены расчеты конформационных изменений в сочетании с количественным анализом центра масс (COM). Определение прочности комплексов предложенных аптамеров с ИЛ6 были сделаны лишь с использованием расчета водородных связей, которые возможно, образуются в данном случае. Никаких исследований физико-химических свойств, предложенных аптамеров в растворе не приводится.

Группа исследователей из Германии [Meyer C., и др., Interleukin-6 receptor specific RNA aptamers for cargo delivery into target cells, RNA Biol, 2012, 9(1):67-80] разрабатывает таргетную доставку лекарств в клетки с использованием РНК-аптамеров к ИЛ6. Они называют их харомерами - в память о Хароне, паромщике в греческой мифологии, который переправлял покойных людей в подземный мир.

Рассматривая третичную структуру интерлейкина-6, ряд авторов обратили внимание на то, что шесть альфа спиралей аминокислотной последовательности белка удерживаются сильными гидрофобными взаимодействиями. Разрабатывался подход по введению гистидиновых тагов в структуру гена белка [Krawczyk S.H.,et al., DNA aptamers binding the histidine TAGand their application, WO2014185802 A1, 20.11.2014]. С другой стороны, исследователи стали проводить селекцию модифицированных олигонуклеотидных последовательностей, несущих 5-(N-бензокарбоксиамид)-2'-дезоксиуридин или 5-[N-(1-нафтометил)карбоксиамид-2`-дезоксиуридин, заменяя дезокситимидин. [Davies, D. R., Gelinas, A. D. et al., 2012, Unique motifs and hydrophobic interactions shape the binding of modified DNA ligands to protein targets. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 19971–19976; Gold et al., "Aptamer-Based Multiplexed Proteomic Technology for Biomarker Discovery", 2010, PLoSONE, 5(12), 1-17].

Модифицированные РНК-аптамеры к цитокину ИЛ6, называемые сомамерами (SOMAmer), были получены введением гетероциклических оснований с белковоподобными заместителями, указанными выше. Эти модифицированные аптамеры с медленным откликом обеспечивают уникальную стабильность комплекса аптамер-мишень. [S.Gupta, M.Hirota, S.M.Waugh, I. Murakami, T. Suzuki, M. Muraguchi, M.Shibamori, Y.Ishikawa, T.C.Jarvis, J.D.Carter, C.Zhang, B.Gawande, M.Vrkljan, N.Janjic, D.J.Schneider, Chemically Modified DNA Aptamers Bind Interleukin-6 with High Affinity and Inhibit Signaling by Blocking Its Interaction with Interleukin-6 Receptor, JBC, 2014, 289(12): 8706–8719].

Тем самым была усилена гидрофобность комбинаторной библиотеки нуклеиновых кислот. Это, с одной стороны, придавало большую стабильность получаемым молекулам, но, с другой сторон, полностью уничтожало одно из крупных достоинств аптамеров – возможность получения антидота с помощью комплементарной олигонуклеотидной последовательности. Наряду с публикациями в престижных биохимических журналах, эти структуры аптамеров были запатентованы [Gold L. et al., Aptamer sthatbind to IL-6 and their use in treating or diagnosing IL-6 mediated conditions, WO2014159669 A2, 02.10.2014].

Одним из преимуществ использования аптамеров в качестве медицинских препаратов является возможность создания антидота к данной молекуле, который будет разрушать вторичную структуру аптамера, тем самым разрушая его связь с белковой мишенью. По определению Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) антидотом является вещество, которое может устранять или ослаблять специфические эффекты лекарственного агента, что происходит за счет связывания или уменьшения концентрации терапевтического препарата в растворе.

Модифицированные аптамеры с введенными химическими группами не обладают такими способностями, как связываться с комплементарными последовательностями, создавая дуплексные структуры, тем самым разрушая контакты с белковой мишенью, например, пегелирование [Haruta K, et al., A Novel PEGylation Method for Improving the Pharmacokinetic Properties of Anti-Interleukin-17ARNA Aptamers, Nucleic Acid Ther. 2017 Feb;27(1):36-44. doi: 10.1089; Davies, D. R., Gelinas, A. D., et al., Structural themes in aptamer-protein complexes, 2016, Curr Opin Struct Biol. 36:122-132]. Это, на наш взгляд, является крупным недостатком при создании терапевтических средств. Предложенные авторами модифицированные аптамеры к ИЛ-6 не имеют антидотов, которые могут, как разрушать взаимодействия аптамера с белковой мишенью, так и регулировать клеточные процессы.

Из уровня техники известны ДНК-аптамеры, обладающие некоторым сродством к ИЛ6 (http://www.imhaemo.ru/media/documents/HI_9/HI9_1.pdf).

Однако данные молекулы являются длинными и, следовательно, имеют увеличенную молекулярную массу, что сильно удорожает стоимость их производства.

201 5’ ATGGATCCACATCTACG-AGCCCGTCAGCCGCCGCGCGGTTCGTGACC-TTCACTGCAGACTTGCA 3’

202 5’ ATGGATCCACATCTACG-CAGACCTCCCTAACCGGCTTAAATACGCGG-TTCACTGCAGACTTGAC 3’

203 5’ ATGGATCCACATCTACG-GGAGGTATCCGTTCAACTCATGGAATATAA-TTCACTGCAGACT 3’

204 5’ ATGGATCCACATCTACG-TATGCGGGGGCACGCTACGCAGTAGTTCTG-TTCACTGCAGACTTGA 3’

205 5’ ATGGATCCACATCTACG-GTTGGCTATGACCTGGGTCAGCCTCGTTC-TTCACTGCAGACTTGA 3’

210 5’ ATGGATCCACATCTACG-GTCGGATCTGTAGTTCCTTTGCCCCCGGGC-TTCACTGCAGACTTGAC 3’

215 5’ ATGGATCCACATCTACG-GCCTAGCCAGCGAGTTTCCGTGCTTCTTGA-TTCACTGCAGACTTGAC 3’

Наиболее близким к заявляемым аптамерам (прототипом) является 16-звенный ДНК-аптамер5′-GGTGGCAGGAGGACTA (В.А. Спиридонова с сотр., Получение ДНК-аптамеров к интерлейкину-6 человека для создания наносенсорнойбиомагнитной системы безразделительного иммунного анализа, ВМУ. Серия 3. ФИЗИКА. АСТРОНОМИЯ,2016, № 1, 135-138).

Однако при такой низкой молекулярной массе аптамер будет быстро выводиться из организма с мочой, если его рассматривать как терапевтический препарат.

Из литературных данных известны аптамеры к ИЛ6, представляющие собой РНК молекулы, которые создаются для распознавания в качестве молекулярных биосенсоров [Khosravi F, et al. ,Ultrasensitive Label-Free Sensing of IL-6 Based on PASE Functionalized Carbon Nanotube Micro-Arrays with RNA-Aptamers as Molecular Recognition Elements, Biosensors, 2017, 7(2), с. E17]. Как РНК-атамеры, так и ДНК–аптамеры могут быть использованы для создания сенсорных устройств. В одной из работ использовали аптамер 12L из работы Спиридоновой с сотр. иммобилизованный на наночастицах золота. Электрохимический подход показал возможность определения ИЛ6 в диапазоне концентраций 1 мкг/мл–15 мг/мл. Датчик продемонстрировал хорошее восстановление в образцах сыворотки человека [Tertis, M. et al., Label-Free Electrochemical Aptasensor Based on Gold and Polypyrrole Nanoparticles for Interleukin 6 Detection. Electrochim. Acta2017, 258, 1208–1218; Chen, N., An Interdigitated Aptasensor to Detect Interleukin-6 for Diagnosing Rheumatoid Arthritis in Serum. Biotechnol. Appl. Biochem. 2020, 68, 1479–1485].

Развитие исследований в области сенсоров никак не отменяет поиск аптамеров к ИЛ6 для создания терапевтических препаратов. К сожалению, никаких аптамеров, основанных на детекции ИЛ6 в биологических жидкостях не описано.

В рамках работы были проведены новые селекционные отборы, чтобы найти аптамерные ДНК, обладающие более высокой специфичностью, а также улучшить соотношение "цена-качество", по которому оценивается перспективность использования данных молекул.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является способ отбора и селекции ДНК-аптамеров, обладающих высоким сродством к белку интерлейкин-6, способные связывать белок ИЛ6 с высокой эффективностью, определяемой наномолярным уровнем, и замедлять его взаимодействие с клеточными рецепторами, тем самым снижая избыточную концентрацию в кровотоке.

Задача решается тем, что ДНК-аптамеры, обладающие высоким сродством к белку интерлейкин-6, эффективно связывающиеся с ним, общей формулы:

NGCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA,

NGACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG,

GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTAN,

GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGGN

где N – любой нуклеотид из ряда G, A, T, C или их химические модификации, а также заместители биотином, полиэтиленгликолем, флуоресцентными метками.

Сущность настоящего изобретения заключается в создании аптамеров, связывающихся с интерлейкином-6 (ИЛ6) и композиции, содержащие аптамеры, которые связываются с ИЛ6.

Изобретение поясняется подробным описанием, примерами, таблицей и иллюстрациями, на которых изображено:

Фиг. 1 – фотоиллюстрация электрофореграммы (проявление сделано с помощью реакции серебряного зеркала); образование комплекса интерлейкина-6 с обогащенной фракцией аптамеров: 1 дорожка – фракция аптамеров; 2 – пустая; 3 – ИЛ6; 4 – комплекс аптамеров с ИЛ6; 5 – маркеры.

Фиг. 2 – фотоиллюстрация электрофореграммы; образования комплекса отдельных аптамеров с интерлейкином-6:

по дорожкам 1 и 3 движутся аптамеры GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA и GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG; на дорожках 2 и 4 находятся комплексы аптамеров с белком ИЛ6. Комлексы почти не двигаются в электрическом поле и остаются у старта нанесения образцов, т.к. белок гидрофобный, и аптамер связался с заряженными группами аминокислот, что также уменьшает подвижность комплекса.

Фиг.3 – фотоиллюстрация записи с приборной ленты: связывания аптамеров

NGCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA,

NGACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG, GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTAN, GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGGN

с ИЛ6, иммобилизованным на чипе CM5 с помощью физического метода поверхностного плазмонногорезонанса.

Голубой – NGCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA,

синий - NGACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG,

серый - GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTAN,

зеленый - GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGGN,

красный – контроль.

Фиг. 4 – фотоиллюстрация электрофореграммы образцов слюны в 20% ПААГ_ (объем нанесения 20мкл.): 1 дорожка – маркер лизоцим м.в. 14 kDa; 2 дорожка – пустая, 3 – химитропсин (маркер) м.в. 24 kDa; 4 дорожка – ИЛ6, м.в. 22 kDa; 5,7,9 дорожки – рабочий образец пациентов "ДО" полоскания; 6, 8, 10 дорожки - рабочий образец пациентов "ПОСЛЕ" полоскания.

Осуществление изобретения

Селектирование аптамеров на белковую мишень, в качестве которой использовали интерлейкин-6, проводили в гетерогенной системе.

Белок был иммобилизован на нитроцеллюлозном фильтре, а комбинаторную библиотеку использовали в виде раствора в буфере.

Провели 9 циклов селекции и получили обогащенную фракцию ДНК-аптамеров. Связывание с белком тестировали с помощью электрофореза в не денатурирующих условиях.

На полученной электрофореграмме (Фиг. 1) отчетливо видно фракции аптамеров, отличающихся по подвижности, отдельно показано движение фракции белка ИЛ6 и комплекса фракции аптамеров с ИЛ6. Белок, имея гидрофобную структуру, движется медленнее, чем комплекс с аптамерами, т.к. фрагменты ДНК имеют отрицательный заряд на каждый нуклеотид, входящий в структуру ДНК-аптамера. Полоса комплекса немного размыта, т.к. здесь имеем набор нуклеопротеидных комплексов, которые отличаются своими конформациями.

После клонирования и секвенирования были выбраны две олигонуклеотидные последовательности:

GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA

GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG,

Комплексообразование аптамера GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA

и GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG с ИЛ6 тестировали с помощью электофореза в полиакриламидном геле (ПААГ).

Сродство NGCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA,

NGACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG, GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTAN, GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGGN с ИЛ6 было показано методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР), полученные результаты представлены на Фиг.3. Кажущаяся константа диссоциации комплекса с ИЛ6, рассчитанная из кинетических констант ассоциации и диссоциации, была в пределах 1мкМ – 100 мкМ.

Спектр биологического действия ИЛ6 достаточно широк.

Было использовано полоскание водным раствором, содержащим 1,2 мкг/мкл аптамера в воде. Для сравнения использовали слюну больных с диагнозом шизофренией непрерывного течения и здоровых пациентов.

С помощью электрофореза белков слюны в денатурирующих условиях показано, что резко меняется состав "ДО" и "ПОСЛЕ" полоскания (Фиг.4).

Отчетливо видно, что после полоскания уменьшается количество белков в образцах слюны. Согласно данным масс-спектрометрии остаются доминантные зоны, которые включают амилазу и другие белки, но ИЛ6 отсутствует. Чтобы подтвердить этот вывод, были сделаны эксперименты с помощью иммуноферментного анализа.

Проведение ИФА (иммуноферментный анализ)

С помощью иммуноферментного анализа, используя набор ELISAHumanIL-6 ELISAKit (Invitrogen), для определения активного ИЛ6 в слюне, было показано присутствие ИЛ6 в исследуемых образцах. На 96-луночный планшет, содержащий поликлональные биотинилированные антитела, наносили по 50 мкл стандартных и анализируемых образцов, содержащих ИЛ6. Далее проводилась инкубация образцов в течение 2 часов при комнатной температуре. После промывки добавляли стрептавидин-реагент и далее стоп-реагент, согласно Протоколу производителя.

Были определены содержание ИЛ6 в образцах "ДО" и "ПОСЛЕ" полоскания (Таблица 1). Наблюдается резкое снижение ИЛ6 в образцах больных.

Таблица 1

Результаты иммуноферментного анализа образцов слюны пациентов с различными заболеваниями полости рта «до» полоскания и «после» полоскания раствором, содержащим аптамер GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG к ИЛ6

пациент №1 №2 №3 контроль "ДО" полоскания 88 пикограмм/мл 118пикограмм/мл 20пикограмм/мл 8пикограмм/мл "ПОСЛЕ"
полоскания 65пикограмм/мл 19пикограмм/мл 2пикограмм/мл 5пикограмм/мл

Так, у больного №1 исходно было 88 пикограмм/мл, снизилось до 65 пикограмм/мл, у больного №2 содержание ИЛ6 составляло 118 пикограмм/мл, а упало почти в 6 раз (19 пикограмм/мл). Для сравнения в образцах здоровых доноров присутствие ИЛ6 было на уровне 5-8 пикограмм/мл, т.е. это были исчезающе-малые величины на уровне чувствительности метода.

Отчетливо видно, что содержание ИЛ6 резко падает в сравнении с контрольными образцами, т.е. в процессе полоскания возможен процесс связывания аптамера с ИЛ6 и удаление белка из полости рта.

Предложенное изобретение в клинической практике позволит образовывать специфические комплексы с белком интерлейкином-6, способных связывать белок ИЛ6 с высокой эффективностью, определяемой наномолярным уровнем и замедлить его взаимодействие с клеточными рецепторами, тем самым снизить избыточную концентрацию в кровотоке. Полученные ДНК-аптамеры будут полезны при терапии и для профилактики лечения и/или улучшения воспалительных заболеваний, злокачественных заболеваний, инфекционных, аутоиммунных заболеваний.

--->

Перечень последовательностей

<110> Федеральное Государственное бюджетное учреждение "Национальный

медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства

здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии"

Минздрава России)

<120> ДНК-АПТАМЕРЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ВЫСОКИМ СРОДСТВОМ К БЕЛКУ

ИНТЕРЛЕЙКИН-6, ЭФФЕКТИВНО СВЯЗЫВАЮЩИЕСЯ С НИМ, ОБЩЕЙ ФОРМУЛЫ:

<160> SEQ ID No. 1

<210> 1

<211> 32

<212> AP110 1

<213> искусственная последовательность

<400> NGCTCGGGGG GGAGGAGAAT GATGCTGGGT TA

<160> SEQ ID No. 2

<210> 2

<211> 32

<212> AP179 1

<213> искусственная последовательность

<400> NGACATCGGT CGGTCTAGGG GCTACGGGGG GG

<160> SEQ ID No. 3

<210> 3

<211> 32

<212> AP110 1

<213> искусственная последовательность

<400> GACATCGGTC GGTCTAGGGG CTACGGGGGG GN

<160> SEQ ID No. 4

<210> 4

<211> 32

<212> AP179 2

<213> искусственная последовательность

<400> GACATCGGTC GGTCTAGGGG CTACGGGGGG GN

<---

Изобретение относится к области биотехнологии и, в частности, к ДНК-аптамерам, обладающим высоким сродством к белку интерлейкин-6. Предложенное изобретение эффективно для связывания интерлейкина-6 и может быть использовано для его детекции или для замедления взаимодействия интерлейкина-6 с клеточными рецепторами. 4 ил., 1 табл., 1 пр.

ДНК-аптамер, обладающий высоким сродством к белку интерлейкин-6, эффективно связывающийся с ним, общей формулы:

SEQ ID No. 1: NGCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTA,

или

SEQ ID No. 2: NGACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGG,

или

SEQ ID No. 3: GCTCGGGGGGGAGGAGAATGATGCTGGGTTAN,

или

SEQ ID No. 4: GACATCGGTCGGTCTAGGGGCTACGGGGGGGN,

где N – любой нуклеотид из ряда G, A, T, C или их химические модификации, а также заместители биотином, флуоресцентными метками.