НЕПРИРОДНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ NKG2D, КОТОРЫЕ НЕПОСРЕДСТВЕННО НЕ ПЕРЕДАЮТ СИГНАЛ КЛЕТКАМ, С КОТОРЫМИ ОНИ СВЯЗАНЫ Российский патент 2024 года по МПК C07K14/705 C07K14/725 C07K14/74 C07K14/52 C07K19/00 A61K35/17 A61P35/00 

Предпосылки создания изобретения

Область, к которой относится изобретение

[0001] Настоящее изобретение в общих чертах относится к неприродному эктодомену неприродного рецептора NKG2D, связанного с клеткой млекопитающего, где рецептор непосредственно не активирует или не передает сигнал клетке млекопитающего при связывании с неприродным лигандом NKG2D, модифицированным так, чтобы он специфически связывался с неприродным рецептором NKG2D, и к гетерологичным молекулам, присоединенным к модифицированным доменам α1-α2 лиганда NKG2D.

Исходная информация

NKG2D представляет собой активирующий рецептор, экспрессируемый в виде гомодимерного интегрального белка типа II на поверхности природных клеток-киллеров (NK) и некоторых Т-клеток и макрофагов. При связывании с одним из своих восьми природных лигандов, экспрессируемых в основном на поверхности поврежденных клеток, NKG2D активирует NK-клетку так, чтобы она уничтожала поврежденную клетку, или если они экспрессируются на Т-клетках, то занятый лигандом NKG2D стимулирует активированную Т-клетку так, чтобы она осуществляла свою эффекторную функцию. Трехмерные структуры были определены для эктодомена природного человеческого NKG2D, нескольких его растворимых природных лигандов и, в некоторых случаях, для связанного комплекса растворимого лиганда и эктодомена рецептора. Мономерные домены α1-α2 лигандов NKG2D специфически связываются с двумя эктодоменами природного гомодимера NKG2D.

Сущность изобретения

[0002] Настоящее изобретение относится к неприродным рецепторам NKG2D, связанным с поверхностями клеток млекопитающих, где неприродные рецепторы непосредственно не передают сигнал или непосредственно не активируют клетку, если этот рецептор связан с родственными неприродными доменами α1-α2 лигандов NKG2D, модифицированных так, чтобы они специфически связывались с неприродными рецепторами NKG2D. Неприродные домены α1-α2 лигандов NKG2D могут быть присоединены к гетерологичным атомам или молекулам, включая полипептиды, а в некоторых вариантах осуществления изобретения, цитокины или модифицированные цитокины, антитела или фрагменты антител. Прямая активация или прямая передача сигналов клетке не опосредуется связанным неприродным рецептором NKG2D и не происходит даже при активации иммунологических синапсов.

Краткое описание чертежей

[0003] Фиг. 1A-1B: (Фиг. 1A) Выравнивание природного эктодомена NKG2D.wt (SEQ ID NO: 17) с неприродными вариантами NKG2D.YA (SEQ ID NO: 18) и NKG2D.AF (SEQ ID NO: 25). Указаны положения Y152 и Y199, где серым цветом выделены мутированные остатки, присутствующие в неприродных вариантах. (Фиг. 1B) Выравнивание домена α1-α2 природного/дикого типа ULBP2 (SEQ ID NO: 4) и неприродных вариантов ULBP2, включая ULBP2.R80W (SEQ ID NO: 108). Серым цветом выделены остатки, играющие важную роль в связывании неприродных вариантов ULBP2 с неприродными рецепторами NKG2D.YA или NKG2D.AF. Указаны положения остатка R80, а также область M154-F159, которая была проанализирована на связывание ортоганальных вариантов с NKG2D.YA (ULBP2.S3, SEQ ID NO: 127) или NKG2D.AF (ULBP2.C, SEQ ID NO: 111; ULBP2.R, SEQ ID NO: 113; ULPB2.AA, SEQ ID NO: 115; и ULBP2.AB, SEQ ID NO: 117).

[0004] Фиг. 2: Сравнение неприродных гибридных белков Fc-NKG2D, проанализированных с помощью эксклюзионной хроматографии на колонке Akta HiLoad 16/600 Superdex 200. Миграция правильно собранного вещества была проиллюстрирована как дискретный симметричный пик, который элюируется при более высоких объемах, в то время как агрегированное вещество элюируется раньше при более низких объемах. Сайт и природа модификаций представлены аминокислотными остаками Y152 или Y199 или обоими остатками (SEQ ID NO: 48, 43, 42, 58, 41 и 40, начиная с верхней части чертежа).

[0005] Фиг. 3: Профили неприродных вариантов Fc-eNKG2D с одной или двумя аминокислотными заменами были проанализированы с помощью эксклюзионной хроматографии на колонке Akta Superdex 200 Increase 10/300 GL. Миграция правильно собранного вещества была проиллюстрирована как дискретный симметричный пик, который элюируется при более высоких объемах, в то время как агрегированное вещество, которое характеризуется широким пиком или серией пиков с низкой амплитудой, элюируется при более низких объемах. Буквы в скобках означают аминокислоты в положениях 152 и 199 (SEQ ID NO: 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44 и 40 по порядку сверху), соответственно.

[0006] Фиг. 4: ELISA-анализ на связывание ULBP2 дикого типа, антител MicAb MICwed- и MIC25-ритуксимаба с кандидатами на Fc-eNKG2D. Ключевые остатки указаны в верхней части чертежа, но поскольку многие кривые перекрываются, то отдельные кривые также были помечены на каждом графике.

[0007] Фиг. 5: Связывание вариантов eNKG2D с лигандами дикого типа. Лиганды дикого типа (все представлены в виде Fc-гибрида) были захвачены биосенсорами Octet AHC, и каждый природный NKG2D, NKG2D.Y152A или eNKG2D5 (Y152A/Y199F) в виде Fc-гибрида титровали от 300 нМ до 0,41 нМ. Максимальные ответы на связывание количественно оценивали с помощью Octet (следует обратить внимание на различные ординаты для каждого графика).

[0008] Фиг. 6: ELISA-анализ на титрование отдельных вариантов фага для подтверждения избирательного связывания с Fc-NKG2D.AF и снижения или элиминации связывания с Fc-NKG2D.wt. Мутации подробно описаны на фиг. 22.

[0009] Фиг. 7: Данные ELISA для четырех антител MicAbody против неприродных вариантов α1-α2 ULBP2, связывающихся с NKG2D.wt, NKG2D.YA и NKG2D.AF. Варианты Fc-NKG2D использовали в качестве агентов для захвата. MicAbody титровали и детектировали с использованием ПХ-конъюгированных каппа-цепей против человеческой цепи.

[0010] Фиг. 8: ULBP2.C (SEQ ID NO: 111), ULBP2.R (SEQ ID NO: 113), ULBP2.AA (SEQ ID NO: 115) и ULBP2.AB (SEQ ID NO: 117) оценивали на изменения иммуногенности пептида-MHCI по сравнению с ULBP2 дикого типа (SEQ ID NO: 4) с использованием сервера NetMHC4.0, запрашиваемого для репрезентативных вариантов HLA супертипа. Для исходной последовательности вводили вариабельную область (остатки 154-159 согласно выравниванию на фиг. 1B) для каждого варианта вместе с девятью остатками, расположенными выше и ниже (всего 24 остатка), и 9-мерные пептидные окна оценивали на предсказанную иммуногенность. Темно-серые прямоугольники соответствуют пептидам, которые, как предполагалось, имеют высокую вероятность связывания с карманом MHCI (определенную как процентный ранг <0,5) и, следовательно, и высокую вероятность того, что они присутствуют. Светло-серые прямоугольники соответствуют прогнозируемому слабыму связыванию (процентный ранг <2). Подробное описание см. в Примере 5.

[0011] Фиг. 9: ULBP2.C (SEQ ID NO: 111), ULBP2.R (SEQ ID NO: 113), ULBP2.AA (SEQ ID NO: 115) и ULBP2.AB (SEQ ID NO: 117) оценивали на изменение иммуногенности пептида-MHC класса II по сравнению с ULBP2 дикого типа (SEQ ID NO: 4) с использованием сервера NetMHCII 2.3, запрашиваемого для HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP. Для исходной последовательности вводили вариабельную область (остатки 154-159 согласно выравниванию как описано на фиг. 1B) для каждого варианта вместе с 15 остатками, расположенными слева и справа (всего 36 остатков) и 15-мерные окна пептидов оценивали на предсказанную иммуногенность. Темно-серые прямоугольники соответствуют пептидам, которые с высокой вероятностью связываются с карманом MHCII, и, следовательно, существует вероятность их присутствия и наличия иммуногенных свойств. Светло-серые прямоугольники соответствуют прогнозируемому слабому связыванию.

[0012] Фиг. 10A-10B: ELISA-анализ на связывание ритуксимаба-MicAbodies, состоящего из ULBP2.wt (дикого типа), ULBP2.R80W (который имеет повышенную аффинность к NKG2D дикого типа), ULPB2.S3 (выбранного ортогонального варианта NKG2D.YA) или ULBP2.R (выбранного ортогонального варианта NKG2D.AF), с природными NKG2D.wt, NKG2D.YA и NKG2D.AF. (Фиг. 10А) Кривые ELISA. Снижение уровня поглощения на 458 нм для некоторых анализов при более высоких концентрациях является артефактом, который часто наблюдается при взаимодействии с высокой аффинностью при более высоких концентрациях из-за осаждения реагента TMB-Ultra, используемого для проявления в ELISA. (Фиг. 10B) Значения EC₅₀ (выраженные в нМ), определенные с помощью программы GraphPad Prism на основе кривых на (A). nd=не определено из-за отсутствия взаимосвязи между повышенной концентрацией и связыванием.

[0013] Фиг. 11A-11C: цитолитические анализы in vitro с использованием эффекторных CD8-клеток, которые были либо нетрансдуцированы, либо трансдуцированы конструкциями NKG2D.wt, NKG2D.YA или NKG2D.AF CAR, состоящими из шарнирного/трансмембранного домена CD8a и внутриклеточных сигнальных доменов 4-1BB и CD3-дзета. Клетки-мишени предварительно нагружали кальцеином и обрабатывали эффекторными клетками в возрастающих отношениях эффектор-мишень (E:T). Количество высвобожденного кальцеина определяли через пять часов. (Фиг. 11A) - лизис клеток HeLa, (фиг. 11B) - лизис клеток HeLa, трансфицированных для сверхэкспрессии поверхностного ULBP1, и (фиг. 11C) - цитолиз клеток HeLa, экспрессирующих неприродный ULBP2.R на своей поверхности. Величины ошибок соответствуют стандартному отклонению технических повторений в эксперименте.

[0014] Фиг. 12A-12B: MicAbody-опосредуемый цитолиз опухолевых линий под действием NKG2D-CAR-CD8-T-клеток. (Фиг. 12A): Клетки Ramos, которые экспрессируют CD20, то есть, мишень для ритуксимаба, были предварительно нагружены кальцеином и обработаны NKG2D.AF- или NKG2D.YA-CAR-клетками в отношении E:T=20:1 вместе с возрастающими концентрациями ритуксимаба-Micabody против ULBP2.S3 или ULBP2.R. Уровень цитолиза количественно определяли после совместного инкубирования в течение двух часов. (Фиг. 12B): Мышиная опухолевая линия CT26, трансфецированная для экспрессии человеческого Her2, была использована в качестве мишени для цитолиза параллельно с клетками Ramos. NKG2D.AF-CAR-CD8-T-клетки были предварительно обработаны насыщающей концентрацией (5 нМ) ритуксимаба-ULBP2.R, трастузумаба-ULBP2.R или эквимолярной смеси двух MicAbody. Несвязанное MicAbody удаляли путем промывки и CD8-клетки добавляли к клеткам-мишеням при двух различных отношениях E:T. Цитолиз оценивали через два часа.

[0015] Фиг. 13A-13D: Проиллюстрированы потенциальные форматы MicAbody и MicAdaptor. (Фиг. 13A): Различные Fc-варианты антител, используемые при разработке реагентов MicAbody и MicAdaptor, и включающие: (а) человеческий Fc IgG1 дикого типа, (b) две мутации, которые сообщают Fc-ADCC-дефицит, и (c) мутации, сообщающие электростатическое взаимодействие в каждом Fc-Fc1 или Fc2, что позволяет продуцировать молекулы гетеродимерного Fc, которые также содержат мутации, ассоциированные с дефицитом ADCC. (Фиг. 13B): Пример того, как ортогональные лиганды могут быть связаны с С-концом (а) тяжелой цепи или (b) легкой цепи для получения реагентов MicAbody. (Фиг. 13C): Примеры MicAdaptor с непосредственным присоединением ортогональных лигандов без компонентов антител. (Фиг.13D): Иллюстрация множества молекул MicAdaptor, которые могут быть созданы в присутствии человеческого Fc IgG1 для повышения стабильности сыворотки и могут включать (a, b, c; обозначены как «Fc1/Fc2» в тексте и в надписях), а могут и не включать (d, e) мутации гетеродимерного Fc в зависимости от валентности нужной молекулы либо для гетерологичной нагрузки, либо для ортогонального лиганда. Может быть также включено использование структуры полноразмерного антитела в зависимости от желаемой нарузки, валентности и функциональности (f, g), и эта структура может представлять собой гибрид тяжелых или легких цепей.

[0016] Фиг. 14: Схематически представлены конструкции CAR, молчащие CAR и другие варианты CAR. SEQ ID NO указаны для каждой конструкции.

[0017] Фиг. 15A-15C: Селективная доставка гибридов цитокина в CD8-Т-клетки, экспрессирующие NKG2D.YA-CAR. (Фиг. 15A) CD8-клетки, экспрессирующие либо NKG2D.wt-CAR (SEQ ID NO: 151), либо NKG2D.YA-CAR, SEQ ID NO: 153), обрабатывали 30 или 300 МЕ/мл рекомбинантного человеческого IL2 (rhIL2) или IL15 (rhIL15), или вариантами прямых гибридов мутанта-IL2/ортогонального лиганда IL15 или гибридов с гетеродимерным Fc (Fc1/Fc2). Через три дня, пролиферацию количественно оценивали с использованием реагента для оценки пролиферации клеток WST. Представленные здесь данные были нормализованы к контролю без цитокинов. (Фиг. 15B) Человеческие Т-клетки, трансдуцированные вектором, кодирующим NKG2D.YA-CAR, подвергали воздействию различных гибридных молекул лиганд-цитокин в течение семи дней, и процент GFP⁺CAR^--клеток в культуре отслеживали с течением времени. (Фиг. 15C) Ортогональный лиганд усиливает доставку реагентов IL21 и мутантного IL21 в NKG2D.YA-CAR-клетки и способствует их распределению по нетрансдуцированным клеткам в течение трех дней культивирования, как было определено с помощью анализа WST. МЕ/мл цитокина или цитокина-MicAdaptor указаны в скобках на оси абсцисс. См. Фиг. 24 для MicAdaptor SEQ ID NO.

[0018] Фиг. 16A-16C: Данные исследования на достаточность одного эктодомена NKG2D.YA для стимуляции доставки гибрида «ортогональный лиганд-цитокин» в клетки. (Фиг. 16A) Один эктодомен NKG2D.YA (SEQ ID NO: 157) был неспособен непосредственно уничтожать клетки Ramos под действием ритуксимаба-ULBP2.S3 MicAbody (SEQ ID NO: 98 и 129). (Фиг. 16B) Анализ на пролиферацию WST после трехдневной обработки различными цитокиновыми реагентами. (Фиг. 16C) Анализ на пролиферацию WST продемонстрировал, что взаимодействия NKG2D.YA-CAR с ортогональным лигандом, но в отсутствие гибридного цитокина или цитокинового мутанта было недостаточно для стимуляции размножения клеток. См. Фиг. 24 для MicAdaptor SEQ ID NO. Количество МЕ/мл цитокинов и цитокинов-MicAdaptors указано в скобках в надписях к оси абсцисс.

[0019] Фиг. 17A-17C: (фиг. 17A) анализ на пролиферацию WST с использованием различных мутантов костимулирующего домена (SEQ ID NO: 161, 163 и 165) после инкубирования с указанным цитокином или цитокином-MicAdaptor в течение трех дней. (Фиг. 17B): Те же мутанты костимулирующего домена CAR оценивали на их способность эффективно лизировать нагруженные кальцеином клетки-мишени Ramos в присутствии ритуксимаба-ULBP2.S3 MicAbody (SEQ ID NO: 98 и 129). (Фиг. 17C): Совместная экспрессия эктодомена NKG2D.YA (NKG2D.YA-ecd) с полным CD19scFv-CAR является достаточной для стимуляции пролиферации, как было оценено с помощью анализа WST после трехдневного инкубирования с цитокиновыми реагентами. См. Фиг. 24 для MicAdaptor SEQ ID NO.

[0020] Фиг. 18: Краткий обзор кандидата, мутаций неприродного варианта Fc-eNKG2D и свойств агрегированного белка, определенных с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ).

[0021] Фиг. 19: Процент насыщения (Rmax) вариантов eNKG2D, нормализованный на связывание NKG2D дикого типа с MICwed-MicAbody или MIC25-MicAbody. Fc-NKG2D дикого типа и каждый рецептор Fc-eNKG2D были захвачены на биосенсорах AHC, а затем подвергнуты воздействию трастузумаб-специфичных MicAbody в концентрации 20 нМ. Затем проводили мониторинг кинетики диссоциации и ранжировали величины Rmax гибридов Fc-eNKG2D. Эти образцы (nt) не тестировали из-за значительной агрегации или из-за неадекватного количества вещества, экспрессируемого или выделенного после ЭХ-фракционирования.

[0022] Фиг. 20: значения EC50 (нМ) для ELISA-анализа на Fc-eNKG2D, как показано на фиг. 3. nt=не тестировали; nb=отсутствие связывания или очень слабое связывание даже при 300 нМ, а поэтому значение EC50 не вычисляли.

[0023] Фиг. 21: Субпопуляция комбинаторных мутаций в ULBP2, которые привели к получению фаговых клонов с селективным связыванием с NKG2D.AF по сравнению с природным NKG2D.wt, как было подтверждено с помощью «спот»-ELISA. Мутанты ранжировали по частоте появления выбранных фагов.

[0024] Фиг. 22: Специфичность NKG2D.AF-отобранных вариантов ULBP2 к ритуксимабу-MicAbody, которые сохраняли связывание с NKG2D.AF, оцениваемое с помощью количественного ELISA. Специфические аминокислотные модификации каждого варианта ULBP2 показаны как отношения их связывания с гибридом Fc-NKG2D.wt по сравнению с гибридом Fc-NKG2D.AF. Положения аминокислотных остатков ULBP2 представлены на фиг. 1В.

[0025] Фиг. 23: Отобранные мутации в указанных аминокислотных положениях ULBP2.R80W (фиг. 1B; SEQ ID NO: 108), которые привели к получению Y152A-специфических фаговых клонов.

[0026] Фиг. 24: SEQ ID NO: MicAdaptor и способ очистки посредством временных трансфекций.

Подробное описание изобретения

[0027] Природные клетки-киллеры (NK) и определенные (CD8+ αβ и γδ) Т-клетки иммунной системы играют важную роль у человека и других млекопитающих в качестве врожденной защиты первой линии от опухолевых и инфицированных клеток (Cerwenka, A., and L.L. Lanier. 2001. NK cells, viruses and cancer. Nat. Rev. Immunol. 1:41-49). NK-клетки и некоторые T-клетки имеют на своей поверхности NKG2D, выступающий, гомодимерный, поверхностный иммунорецептор, ответственный за распознавание клетки-мишени и активацию природной защиты против патологической клетки (Lanier, LL, 1998. NK cell receptors. Ann. Rev. Immunol. 16: 359-393; Houchins JP et al. 1991. DNA sequence analysis of NKG2, a family of related cDNA clones encoding type II integral membrane proteins on human NK cells. J. Exp. Med. 173: 1017-1020; Bauer, S et al., 1999. Activation of NK cells and T cells by NKG2D, a receptor for stress-inducible MICA. Science 285: 727-730). Молекула человеческого NKG2D имеет лектин-подобный внеклеточный (экто-)домен С-типа, который связывается с восьмью различными родственными лигандами, при этом, наиболее изученными лигандами являются лиганды, имеющие последовательность, которая на 84% идентична или гомологична последовательности мономерных MICA и MICB, полиморфных аналогов гликопротеинов, родственных цепи главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I (MIC) (Weis et al. 1998. The C-type lectin superfamily of the immune system. Immunol. Rev. 163: 19-34; Bahram et al. 1994. A second lineage of mammalian MHC class I genes. PNAS 91:6259-6263; Bahram et al. 1996a. Nucleotide sequence of the human MHC class I MICA gene. Immunogenetics 44: 80-81; Bahram and Spies TA. 1996. Nucleotide sequence of human MHC class I MICB cDNA. Immunogenetics 43: 230-233). Непатологическая экспрессия MICA и MICB до некоторой степени ограничена кишечным эпителием, кератиноцитами, эндотелиальными клетками и моноцитами, но аберрантная экспрессия этих поверхностных белков MIC происходит в ответ на многие типы клеточного стресса, такие как пролиферация, окисление и тепловой шок, и является меркером патологии клеток (Groh et al. 1996. Cell stress-regulated human MHC class I gene expressed in GI epithelium. PNAS 93: 12445-12450; Groh et al. 1998. Recognition of stress-induced MHC molecules by intestinal γδ T cells. Science 279: 1737-1740; Zwirner et al. 1999. Differential expression of MICA by endothelial cells, fibroblasts, keratinocytes and monocytes. Human Immunol. 60: 323-330). Патологическая экспрессия белков MIC, по-видимому, также участвует в развитии некоторых аутоиммунных заболеваний (Ravetch, JV and Lanier LL. 2000. Immune Inhibitory Receptors. Science 290: 84-89; Burgess, SJ. 2008. Immunol. Res. 40: 18-34). Дифференциальная регуляция лигандов NKG2D, таких как полиморфные MICA и MICB, играет важную роль для сообщения иммунной системе способности идентифицировать и реагировать на широкий спектр опасных сигналов, что будет защищать здоровые клетки от нежелательной атаки (Stephens HA, (2001) MICA and MICB genes: can the enigma of their polymorphism be resolved? Trends Immunol. 22: 378-85; Spies, T. 2008. Regulation of NKG2D ligands: a purposeful but delicate affair. Nature Immunol. 9: 1013-1015).

[0028] Вирусная инфекция является самым распространенным индуктором экспрессии белка MIC и определяет инфицированные вирусом клетки для атаки NK или T-клеток (Groh et al. 1998; Groh et al. 2001. Co-stimulation of CD8+ αβT cells by NKG2D via engagement by MIC induced on virus-infected cells. Nat. Immunol. 2: 255-260; Cerwenka, A., and L.L. Lanier. 2001). Фактически, чтобы избежать такой атаки на свою клетку-хозяина, цитомегаловирус и другие вирусы выработали механизмы, которые предотвращают экспрессию белков MIC на поверхности инфицированной ими клетки, что позволяет этим вирусам «ускользать» от нацеливания системы врожденного иммунитета (Lodoen, M., K. Ogasawara, J.A. Hamerman, H. Arase, J.P. Houchins, E.S. Mocarski, and L.L. Lanier. 2003. NKG2D-mediated NK cell protection against cytomegalovirus is impaired by gp40 modulation of RAE-1 molecules. J. Exp. Med. 197:1245-1253; Stern-Ginossar et al., (2007) Host immune system gene targeting by viral miRNA. Science 317: 376-381; Stern-Ginossar et al., (2008) Human microRNAs regulate stress-induced immune responses mediated by the receptor NKG2D. Nature Immunology 9: 1065-73; Slavuljica, I A Busche, M Babic, M Mitrovic, I Gašparovic, Đ Cekinovic, E Markova Car, EP Pugel, A Cikovic, VJ Lisnic, WJ Britt, U Koszinowski, M. Messerle, A Krmpotic and S Jonjic. 2010. Recombinant mouse cytomegalovirus expressing a ligand for the NKG2D receptor is attenuated and has improved vaccine properties. J. Clin. Invest. 120: 4532-4545).

[0029] Несмотря на стресс, многие злокачественные клетки, такие как клетки рака легких и глиобластомы мозга, также избегают экспрессии белков MIC, и в результате могут быть особенно агрессивными, поскольку они также ускользают от природной иммунной системы (Busche, A et al. 2006, NK cell mediated rejection of experimental human lung cancer by genetic over expression of MHC class I chain-related gene A. Human Gene Therapy 17: 135-146; Doubrovina, ES, MM Doubrovin, E Vider, RB Sisson, RJ O’Reilly, B Dupont, and YM Vyas, 2003. Evasion from NK Cell Immunity by MHC Class I Chain-Related Molecules Expressing Colon Adenocarcinoma (2003) J. Immunology 6891-99; Friese, M. et al. 2003. MICA/NKG2D-mediated immunogene therapy of experimental gliomas. Cancer Research 63: 8996-9006; Fuertes, MB, MV Girart, LL Molinero, CI Domaica, LE Rossi, MM Barrio, J Mordoh, GA Rabinovich and NW Zwirner. (2008) Intracellular Retention of the NKG2D Ligand MHC Class I Chain-Related Gene A in Human Melanomas Confers Immune Privilege and Prevents NK Cell-Mediated Cytotoxicity. J. Immunology, 180: 4606-4614).

[0030] Была выявлена структура высокого разрешения человеческого MICA, связанного с NKG2D, и было продемонстрировано, что домен α3 MICA не вступает в прямое взаимодействие с NKG2D (Li et al. 2001. Complex structure of the activating immunoreceptor NKG2D and its MHC class I-like ligand MICA. Nature Immunol. 2: 443-451; Код доступа банка данных белков 1HYR). Домен α3 MICA, как и MICB, связан с каркасным доменом α1-α2 посредством короткого гибкого пептидного линкера и сам он по своей природе представляет собой «спейсер», расположенный между каркасом и поверхностью клетки, экспрессирующей MIC. Трехмерные структуры доменов α3 MICA и MICB человека являются почти идентичными (среднеквадратическое расстояние <1 Å на 94 C-αα) и функционально взаимозаменяемыми (Holmes et al. 2001. Structural Studies of Allelic Diversity of the MHC Class I Homolog MICB, a Stress-Inducible Ligand for the Activating Immunoreceptor NKG2D. J Immunol. 169: 1395-1400).

[0031] Т-клетки, NK-клетки и макрофаги могут быть модифицированы с применением технологий переноса генов для прямой и стабильной экспрессии на своей поверхности связывающих доменов антитела, которые сообщают специфичность к новому антигену (Saar Gill & Carl H. June. Going viral: Chimeric Antigen Receptor (CAR) T cell therapy for hematological malignancies. Immunological Reviews 2015. Vol. 263: 68-89; Wolfgang Glienke, Ruth Esser, Christoph Priesner, Julia D. Suerth, Axel Schambach, Winfried S. Wels, Manuel Grez, Stephan Kloess, Lubomir Arseniev and Ulrike Koehl. 2015. Advantages and applications of CAR-expressing natural killer cells. Front. Pharmacol. doi: 10.3389/fphar.2015.00021). В этом подходе, в котором антиген-распознающий домен специфического антигена объединен с гибридным внутриклеточным доменом цепи CD3-дзета, применяются CAR-T-клетки. Цепь CD3-дзета представляет собой первичный передатчик сигналов от эктодомена эндогенных Т-клеточных рецепторов (TCR) во внутриклеточное пространство. CAR, сконструированные с использованием цепи CD3-дзета и костимулирующих молекул, таких как CD27, CD28, ICOS, 4-1BB или OX40, запускают активацию CAR-T-клеток при связывании с антигеном-мишенью по механизму, аналогичному механизму связывания с эндогенным Т-клеточным рецептором, но независимо от главного комплекса гистосовместимости (MHC).

[0032] Были описаны некоторые неприродные домены α1-α2 лигандов NKG2D, модифицированных для связывания природного рецептора человеческого NKG2D с более высокой аффинностью, чем природные домены α1-α2 (Candice S. E. Lengyel, Lindsey J. Willis, Patrick Mann, David Baker, Tanja Kortemme, Roland K. Strong and Benjamin J. McFarland. Mutations Designed to Destabilize the Receptor-Bound Conformation Increase MICA-NKG2D Association Rate and Affinity. Journal of Biological Chemistry Vol. 282, no. 42, pp. 30658-30666, 2007; Samuel H. Henager, Melissa A. Hale, Nicholas J. Maurice, Erin C. Dunnington, Carter J. Swanson, Megan J. Peterson, Joseph J. Ban, David J. Culpepper, Luke D. Davies, Lisa K. Sanders, and Benjamin J. McFarland. Combining different design strategies for rational affinity maturation of the MICA-NKG2D interface. Protein Science 2012 VOL 21:1396-1402). В настоящей заявке, авторами было описано присоединение неприродных рецепторов NKG2D к поверхности клеток млекопитающих в форме, которая сохраняет специфическое связывание модифицированных неприродных лигандов NKG2D с присоединенными гетерологичными молекулами, но неприродные рецепторы избегают прямой или цис-активации или внутриклеточной передачи сигналов в клетку млекопитающего, даже когда эта клетка образует иммунологический синапс с клеткой или с другой поверхностью, на которую нацелена гетерологичная молекула. Сами неприродные рецепторы NKG2D были мутированы в одном или в двух конкретных сайтах, и каждая из этих мутаций приводит к нарушению или потере связывания со всеми природными доменами α1-α2 лигандов NKG2D (David J. Culpepper, Michael K. Maddox, Andrew B. Caldwell, and Benjamin J. McFarland. Systematic mutation and thermodynamic analysis of central tyrosine pairs in polyspecific NKG2D receptor interactions. Mol. Immunol. 2011 January; 48(4): 516-523; заявка USPTO 14/562534; предварительная заявка USPTO 62/088456)). В настоящем изобретении были получены CAR, которые при их связывании с поверхностью клетки млекопитающего, обеспечивают молчащий рецептор, который может служить суррогатным рецептором с высокой аффинностью связывания с гетерологичными атомами или молекулами на поверхности клетки. В соответствии с этим, посредством связанных неприродных лигандов, специфичных к неприродному модифицированному рецептору NKG2D, гетерологичные молекулы, содержащие, например, дефектный цитокин, могут быть специфически доставлены к молчащему рецептору на поверхности клетки млекопитающего, но не в клетки, лишенные родственного молчащего рецептора. После связывания с клеткой, несущей молчащий рецептор, дефектная гетерологичная молекула может связываться с соответствующими субъединицами рецептора на клеточной поверхности, на которой сохраняется такое связывание, и тем самым непосредственно передавать сигнал клетке, так, как если бы она была стимулирована лигандом дикого типа.

[0033] Очевидно, что CAR, состоящий из инертного неприродного NKG2D, CD3-дзета и костимулирующего домена, такого как CD28, 4-1BB, ICOS или OX40, и присутствующий на клетке млекопитающего, способен непосредственно стимулировать и активировать CAR-клетку после образования иммунологического синапса. Активация такой CAR-T-клетки второго или третьего поколения зависит от функции домена CD3-дзета и функции по меньшей мере одного костимулирующего домена, например, 4-1BB или CD28. Однако, такой CAR, например, молчащий CAR, может служить в качестве суррогатного рецептора с высокой аффинностью связывания с родственными неприродными лигандами, связанными с гетерологичными молекулами, которые имеют дефектное связывание с их соответствующим природным рецептором или субъединицей(ами) рецептора. Это связывание с высокой аффинностью позволяет гетерологичной молекуле, присоединенной к неприродному лиганду, передавать сигналы в клетку через их соответствующие другие субъединицы рецептора, для которых сохраняется такое связывание.

[0034] Важно отметить, что если домен CD3-дзета такого CAR, компетентного по прямой активации, является селективно инактивированным, то он все еще может действовать как молчащий CAR и активировать гетерологичные молекулы, которые связаны с родственным неприродным лигандом, и которые имеют дефектное связывание с их соответствующим природным рецептором или с субъединицей(ами) рецептора для передачи сигналов в клетку через их соответствующие другие субъединицы рецептора. Если костимулирующий домен CAR, такой как 4-1BB, является инактивированным, а активный домен CD3-дзета сохраняется, то CAR не может служить молчащим рецептором. То есть, хотя в данном случае, CD3-дзета не требуется, однако, функциональный костимулирующий домен необходим для того, чтобы гетерологичная молекула, такая как дефектный цитокин, присоединенный к родственному неприродному лиганду, связанному с рецептором, могла опосредовать передачу соответствующего сигнала CAR-клетке.

[0035] Авторы настоящего изобретения неожиданно выявили, что существует потребность в костимулирующем домене, но не в домене CD3-дзета, для того, чтобы гетерологичный дефектный цитокин, присоединенный к родственному неприродному лиганду, опосредовал передачу соответствующего сигнала в CAR-клетку. Кроме того, в настоящем изобретении раскрывается, что костимулирующий домен может действовать в цис- или транс-ориентации по отношению к молчащему рецептору, к которому присоединен родственный лиганд, связанный с дефектной гетерологичной молекулой.

[0036] Если гетерологичная молекула, такая как антитело или фрагмент антитела, нацеленная на конкретную молекулу, присоединяется к родственному неприродному лиганду NKG2D, который, в свою очередь, присоединяется к молчащему рецептору, то клетка млекопитающего, несущая молчащий рецептор, будет возвращаться на поверхность, на которую его направляет нацеливающая гетерологичная молекула. Даже если «синапс» возникает между клеткой, несущей молчащий рецептор, и поверхностью клетки-мишени, то эта клетка не будет активироваться молчащим рецептором.

[0037] Поскольку существует множество копий неприродных молчащих рецепторов на основе NKG2D согласно изобретению на поверхности клетки, то хоминг и/или селективная активация гетерологичными молекулами могут быть мультиплексированы или последовательно изменены во время технологических процессов или схем лечения.

[0038] Клетка, несущая молчащий рецептор CAR, может также экспрессировать и другой(ие) рецептор(ы) или CAR, ортогональные молчащему CAR, и действовать независимо от молчащего CAR, и тем самым обеспечивать специфическую и непосредственную активацию или передачу сигнала каким-либо другим способом той же самой клетке при соответствующей стимуляции. Другой или «второй» ортогональный CAR может представлять собой традиционный одноцепочечный Fv (scFv)-CAR или второй ортогональный неприродный модифицированный CAR на основе NKG2D со своим(и) собственным(и) родственным(и) неприродным(и) лигандом(ами) α1-α2 (ссылка на предварительную заявку AF). Возможность создания эффекторных клеток иммунной системы с более чем одним ортогональным неприродным CAR, молчащим или активным, и множеством родственных неприродных лигандов с присоединенными гетерологичными молекулами или атомами, позволит значительно расширить возможности, гибкость и контроль качества адоптивной клеточной терапии (АКТ).

[0039] В процессе характеризации молчащего CAR на клетке и его зависимости от цис- или транс-действующего костимулирующего домена, такого как 4-1BB, было обнаружено, что по сравнению с немодифицированной человеческой Т-клеткой, человеческая Т-клетка, экспрессирующая молчащий CAR с костимулирующим доменом, демонстрирует значительно усиленный ответ на природный IL-2 или родственный неприродный лиганд, связанный либо с природным, либо с мутантным IL-2, который обладает низкой аффинностью связывания с α-субъединицей рецептора. Это наблюдение имеет важное значение для преимущественного размножения ex vivo или in vivo клеток, экспрессирующих CAR, состоящий из костимулирующего домена, содержащего или не содержащего домен CD3-дзета.

[0040] Используемые здесь термины «растворимый белок MIC», «растворимый MICA» и «растворимый MICB» относятся к белку MIC, содержащему домены α1-α2, в которых присутствует или отсутствует домен α3 белка MIC, и в которых отсутствуют трансмембранные или внутриклеточные домены. Лиганды NKG2D, ULBP1-6, по своей природе не имеют домен α3 (Cerwenka A, Lanier LL. 2004. NKG2D ligands: unconventional MHC class I-like molecules exploited by viruses and cancer. Tissue Antigens 61 (5): 335-43. doi:10.1034/j.1399-0039.2003.00070.x. PMID: 12753652). «Домен α1-α2» лиганда NKG2D означает домен белка лиганда, который связывается с рецептором NKG2D.

[0041] В некоторых вариантах осуществления изобретения, домены α1-α2 неприродных белков-лигандов NKG2D согласно изобретению по меньшей мере на 80% идентичны или гомологичны нативному или природному домену α1-α2 лиганда NKG2D (SEQ ID NO: 1-9 для MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5, ULBP6 и OMCP, соответственно). В других вариантах осуществления изобретения, модифицированный домен α1-α2 на 85% идентичен нативному или природному домену α1-α2 лиганда NKG2D. В других вариантах осуществления изобретения, модифицированный домен α1-α2 на 90% идентичен нативному или природному домену α1-α2 природного белка-лиганда NKG2D и связывается с неприродным NKG2D.

[0042] Предпочтительно, модифицированные или неприродные домены α1-α2 неприродных белков MIC согласно изобретению по меньшей мере на 80% идентичны или гомологичны нативному или природному домену α1-α2 одного из 8 белков-лигандов человеческого NKG2D (SEQ ID NO: 1-8) и связываются с неприродным эктодоменом NKG2D. В некоторых вариантах осуществления изобретения, неприродный домен α1-α2 на 85% идентичен нативному или природному домену α1-α2 белка-лиганда NKG2D и связывается с неприродным NKG2D. В других вариантах осуществления изобретения, домен неприродного каркаса α1-α2 на 90%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичен нативному или природному каркасу α1-α2 природного домена α1-α2 человеческого белка и связывается с неприродным NKG2D.

[0043] В некоторых вариантах осуществления изобретения, гетерологичная молекулярная метка может быть присоединена к N-концу или C-концу неприродного домена α1-α2 растворимого белка MIC или домена присоединенного гетерологичного пептида или белка для облегчения очистки растворимого лиганда. Последовательности метки включают пептиды, такие как поли-гистидин, myc-пептид, метка FLAG, метка, подобная стрептавидину, или небольшая молекула, такая как биотин. Такие метки могут быть удалены после выделения молекулы MIC методами, известными специалистам в данной области.

[0044] Специфические мутации в доменах α1-α2 лигандов NKG2D могут быть введены для создания неприродных доменов α1-α2, которые связываются с неприродными рецепторами NKG2D, которые сами были сконструированы так, чтобы они обладали пониженной аффинностью к природным лигандам NKG2D. Это может быть осуществлено, например, с помощью генной инженерии. Модифицированный таким образом неприродный рецептор NKG2D может быть использован для создания на поверхности NK-клеток, Т-клеток, макрофагов или других клеток иммунной системы CAR на основе NKG2D, который может связываться с молекулами, состоящими из неприродных доменов α1-α2. Эти неприродные рецепторы NKG2D и родственные им неприродные лиганды NKG2D будут обеспечивать важные преимущества в отношении безопасности, эффективности и технологических свойств, необходимые для лечения рака и вирусных инфекций по сравнению с существующими в настоящее время CAR-T-клетками и CAR-NK-клетками, как описано ниже. Если внутриклеточная передача сигналов неприродных рецепторов NKG2D на поверхности клеток млекопитающих была блокирована, как описано в настоящем изобретении, то эти CAR согласно изобретению могут действовать как суррогатные рецепторы с высокой аффинностью связывания с другими дефектными гетерологичными молекулами, такими как цитокины, хемокины, лимфокины, цитотоксины и атомы, связанные или конъюгированные с ортогональными лигандами NKG2D. Это обеспечивает доставку гетерологичных молекул непосредственно и конкретно в клетку, несущую молчащий рецептор, без непосредственной активации клетки-хозяина молчащим рецептором per se. Кроме того, гетерологичные молекулы, которые связываются со специфическими мишенями, и тем самым, с клетками или другими поверхностями, несущими такие мишени, могут обеспечивать специфические функции хоминга в клетку, несущую молчащий рецептор, без ее случайной активации или стимуляции.

[0045] CAR-T- или CAR-NK-клетки, состоящие из эктодоменов неприродных рецепторов NKG2D, которые не связываются или очень плохо связываются с природными лигандами NKG2D, не будут подвергаться активации какими-либо природными лигандами и, следовательно, не будут токсигенными, как клетки, экспрессирующие CAR на основе природного рецептора NKG2D. Кроме того, эктодомены неприродных рецепторов NKG2D на клетках не будут подвергаться ингибированию природными лигандами NKG2D в растворимой форме или на миелоидных супрессорных клетках (MDSC) (Deng W, Gowen BG, Zhang L, Wang L, Lau S, Iannello A, Xu J, Rovis TL, Xiong N, Raulet DH, 2015. Antitumor immunity. A shed NKG2D ligand that promotes natural killer cell activation and tumor rejection. Science. 2015 Apr 3;348(6230):136-9. doi: 10.1126/science.1258867. Epub 2015 Mar 5)). Однако, если такие CAR-клетки, несущие эктодомены неприродных рецепторов NKG2D, связаны под действием биспецифических молекул с родственными неприродными доменами α1-α2 согласно изобретению и с его гетерологичным нацеливающим мотивом, который, как было обнаружено, связывается со своей мишенью, то CAR будет активироваться и экспрессировать эффекторные функции CAR-клетки.

[0046] Поскольку CAR-T- или CAR-NK-клетки, состоящие из эктодоменов неприродного рецептора NKG2D, не активируются, за исключением случая, когда присутствует связанная биспецифическая молекула, состоящая из родственного неприродного домена α1-α2, то их активацию можно контролировать путем введения биспецифических молекул, которые в качестве биофармацевтических препаратов будут обладать фармакокинетикой и фармакодинамикой, хорошо известными специалистам в данной области. В случае развития побочных эффетов, врач, вместо того, чтобы использовать индуцированный механизм «самоубийства» для разрушения введенных клеток CAR, как это делается в настоящее время, может просто изменить схему введения доз биспецифической молекулы (Monica Casucci and Attilio Bondanza. Suicide Gene Therapy to Increase the Safety of Chimeric Antigen Receptor-Redirected T Lymphocytes. J Cancer. 2011; 2: 378-382). Кроме того, такие биспецифические молекулы с различными специфическими нацеливающими мотивами могут быть введены одновременно или последовательно для предотвращения и устранения резистентности опухоли в результате потери антигена-мишени без необходимости создания, размножения и инфузии нескольких различных аутологичных CAR-клеток (Gill & June, 2015). Поскольку все конструкции CAR могут быть идентичными для всех CAR-клеток, а специфичность нацеливания определяется просто нацеливающим мотивом вводимой биспецифической молекулы согласно изобретению, то технологические процессы будут упрощены и будут менее дорогостоящими.

[0047] Примеры родительских или реципиентных белков или полипептидов, которые являются кандидатами на присоединение к неприродным доменам α1-α2 лигандов NKG2D, включают, но не ограничиваются ими, антитела, белки, состоящие из Ig-складок или Ig-доменов, включая модифицированные домены Fc, которые осуществляют рекрутинг природных молекул или неспособны осуществлять рекрутинг или связывать природные молекулы, глобулины, альбумины, фибронектины и домены фибронектина, интегрины, флуоресцентные белки, ферменты, белки внешней мембраны, белки рецепторов, Т-клеточные рецепторы, химерные антигенные рецепторы, вирусные антигены, вирусные капсиды, вирусные лиганды для клеточных рецепторов, гормонов, цитокинов и модифицированных цитокинов, такие как интерлейкины, кноттины, циклические пептиды или полипептиды, белки, принадлежащие к семейству молекул главного комплекса гистосовместимости (MHC), белки MIC, лектины и лиганды для лектинов. К модифицированным доменам α1-α2 лигандов NKG2D могут быть также присоединены небелковые молекулы, такие как полисахариды, дендримеры, полигликоли, пептидогликаны, антибиотики и поликетиды.

[0048] Таким образом, настоящее изобретение позволяет расширить разнообразие и практичность этого замечательного, очень перспективного иммунологического подхода к лечению рака с использованием CAR-T-клеток, CAR-NK-клеток и CAR-клеток, подобных макрофагам, и тем самым решить многие из имеющихся в настоящее время проблем.

[0049] Используемые здесь термины «пептид», «полипептид» и «белок» являются синонимами; а термины «гетерологичная молекула», «гетерологичный пептид», «гетерологичная последовательность» или «гетерологичный атом» означают молекулу, пептид, нуклеиновую кислоту или аминокислотную последовательность или атом, соответственно, которые не встречаются в природе или обычно не находятся в физической связи с рассматриваемой молекулой. Используемые здесь термины «неприродный» и «модифицированный» являются синонимами. Используемые здесь термины «природный», «нативный» и «дикий тип» являются синонимами, и термины «NKG2D» и «рецептор NKG2D» также являются синонимами. Используемый здесь термин «антитело» рассматривается в самом широком смысле и, в частности, охватывает моноклональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, что они обладают желаемой биологической активностью. «Фрагменты антитела» включают часть антитела, предпочтительно содержащую его антигенсвязывающую область. Примеры фрагментов антител включают Fab, Fab', F(ab')₂, фрагменты Fv и встраиваемые Fv; диантитела; антитела с прямой цепью; молекулы одноцепочечных антител; и мультиспецифические антитела, образованные из фрагмента(ов) антитела.

[0050] Термин «содержащий», который используется здесь как синоним термина «включающий», «составляющий» или «характеризующийся», является инклюзивным или неограничивающим и не исключает дополнительных неперечисленных элементов или стадий способа. Выражение «состоящий из» исключает любой элемент, стадию или ингредиент, не указанные в формуле изобретения. Выражение «состоящий по существу из» ограничивает объем формулы изобретения указанными материалами или стадиями, а также элементами, которые существенно не влияют на основные и новые характеристики заявленного изобретения. В настоящем изобретении раскрываются варианты композиций и способов согласно изобретению, соответствующие объему каждого из этих терминов. Таким образом, при описании композиции или способа, содержащих перечисленные элементы или стадии, рассматриваются конкретные варианты осуществления изобретения, в которых композиция или способ, по существу, состоят или состоят из этих элементов или стадий.

[0051] Все цитируемые здесь документы в полном объеме включены в настоящее описание посредством ссылки, независимо от того, были ли они специально включены ранее или нет. Используемые здесь артикли «а», «an» и слово «любой» могут относится к существительным как в единственном, так и во множественном числе.

[0052] Исходя из полного описания изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что настоящее изобретение может быть осуществлено с использованием эквивалентных параметров, концентраций и условий широкого ряда, не выходящих за рамки существа и объема изобретения и без излишнего экспериментирования. Хотя настоящее изобретение было описано на своих конкретных вариантах осуществления, однако, следует отметить, что в него могут быть внесены дополнительные модификации. Настоящая заявка охватывает любые изменения, применения или адаптации согласно изобретению, соответствующие, в целом, принципам изобретения и включает такие отклонения от раскрытия настоящего изобретения, которые входят в известную или обычную практику в области, к которой относится настоящее изобретение, и могут применяться к указанным выше основным признакам.

ПРИМЕРЫ

Модифицированный эктодомен рецептора NKG2D и модифицированные домены α1-α2 лигандов NKG2D

[0053] Пример 1. Замена тирозина 152 на аланин (Y152A) и тирозина 199 на фенилаланин (Y199F) рецептора человеческого NKG2D для создания инертного эктодомена NKG2D

[0054] Ранее было продемонстрированои, что мутации тирозина 152 или тирозина 199 в человеческом NKG2D, эквивалентные положениям 73 и 120 эктодомена NKG2D (фиг. 1A, SEQ ID NO:17), могут значительно снижать уровень связывания с природным лигандом MICA (David J. Culpepper, Michael K. Maddox, Andrew B. Caldwell, and Benjamin J. McFarland. Systematic mutation and thermodynamic analysis of central tyrosine pairs in polyspecific NKG2D receptor interactions. Mol Immunol. 2011 January; 48(4): 516-523). Авторы настоящего изобретения пришли к выводу, что хотя мутация любого тирозинового остатка сильно влияет на способность NKG2D связываться со своими природными лигандами, однако, одновременная мутация тирозина 152 (Y152) и тирозина 199 (Y199) фактически устраняет способность рецептора взаимодействовать со всеми нативными лигандами. Поэтому авторами была предпринята попытка исследовать отдельные и комбинаторные замены Y152 и Y199 и охарактеризовать их в отношении их биохимического поведения в целях идентификации вариантов как с одной, так и с двумя мутациями, неспособных взаимодействовать с любыми природными лигандами. Варианты, которые также хорошо экспрессировались и подвергались сборке, представляют особый интерес, поскольку они являются инертными лигандами, которые могут быть легко получены для анализа.

[0055] Природный эктодомен NKG2D (дикого типа) (NKG2D.wt, SEQ ID NO: 17) и эктодомены-кандидаты неприродного варианта NKG2D (SEQ ID NO: 18-35), также называемые «сконструированным NKG2D» или «eNKG2D», были клонированы как гибриды с C-концом Fc человеческого IgG1 (без Fab-доменов) посредством короткого линкера Ile-Glu-Gly-Arg, распознаваемого фактором Ха (SEQ ID NO: 38), и эти домены взаимозаменяемо обозначаются как Fc-NKG2D.wt или NKG2D.wt и Fc-eNKG2D или eNKG2D (SEQ ID NO: 40-58). Фрагменты ДНК gBlocks® (Integrated DNA Technologies, San Diego, CA), соответствующие сигнальной последовательности MHCI (SEQ ID NO: 36 и 37), человеческому Fc IgG1 с линкером (SEQ ID NO: 39) и вариантам эктодомена NKG2D (SEQ ID NO: 59-77), были синтезированы и встроены в pD2610-V12 (ATUM, Newark, CA). Конструкции ДНК, в которые были экспериментально введены замены в положениях Y152, Y199 или комбинации замен Y152/Y199 (фиг.18), временно экспрессировались в клетках Expi293^TM (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), и секретируемый белок очищали с помощью аффинной хроматографии на белке A (номер по каталогу 20334, Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Элюированное вещество охарактеризовывали с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ) на колонках Akta Pur Superdex, и правильно собранное вещество соответствующего размера фракционировали и выделяли из агрегированных пиков перед их включением в анализы.

[0056] ЭХ-характеризация очищенного гибрида NKG2D.Y199A-Fc показала, что этот гибрид состоит преимущественно из агрегированного вещества (фиг. 2). Для сравнения, как природный гибрид Fc-NKG2D, так и гибрид Fc-NKG2D.Y152A отличаются дискретным неагрегированным пиком, который можно легко отличить от более быстро мигрирующего агрегата. Влияние замены Y199A на агрегацию также наблюдалось в гибридном варианте Fc-NKG2D с двойной заменой Y152A/Y199A, что указывает на то, что такая замена не оказывает влияния на неправильную укладку белка (фиг. 2). Следовательно, этот аспект включения Y199A с любой комбинацией мутаций Y152 в варианты NKG2D представляет определенную проблему при получении вещества, необходимого для проведения последующих попыток конструирования, и не дает возможность осуществлять сборку и презентацию на клеточной поверхности. Как следствие, была предпринята попытка исследовать другие замены в положениях Y152 и Y199, которые можно было бы объединить, чтобы получить более стабильную молекулу. Комбинаторные мутанты-кандидаты Y152 и Y199 eNKG2D были оценены как Fc-гибриды и подробно описаны на фиг. 18. Кроме того, все очищенные и экспрессированные кандидаты на гибрид Fc-eNKG2D были профилированы с помощью ЭХ, и их хроматограммы выявили различные уровни образования агрегатов (фиг. 2 и 3, фиг. 18). Среди отдельных аминокислотных замен, исследованных в остатке 152, аланин, серин, треонин и валин не влияли на сборку молекулы Fc-NKG2D, тогда как Y152-лейцин (Y152L) давал в высокой степени агрегированное вещество. Подобно аланину, ни глутамат, ни аспартат не сохранялись в положении 199, хотя фенилаланин лишь незначительно увеличивал образование агрегатов. Из изученных комбинаций мутаций, мутации Y152A/Y199F, Y152S/Y199F, Y152T/Y199F и Y152F/Y199F не оказывали негативного воздействия на образование нужного димера, тогда как другие комбинации давали повышенные уровни агрегации (фиг.18, фиг.2 и 3).

[0057] Пример 2: Получение биспецифических молекул на основе антител, «MicAbodies», с вариантами неприродного лиганда NKG2D

[0058] Для создания неприродных вариантов MicA, связанных с человеческим IgG1, полинуклеотиды ДНК, кодирующие домены α1-α2, например, MICwed (SEQ ID NO: 79) и MIC25 (SEQ ID NO: 81), амплифицировали с помощью ПЦР с использованием праймеров, которые также вводили полинуклеотид, кодирующий либо линкер APTSSSGGGGS для связывания с C-концевой легкой цепью каппа (SEQ ID NO: 84), либо линкер GGGS для связывания с C-концевой тяжелой цепью человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 82). Кроме того, в домен CH2 тяжелой цепи были введены две мутации: D265A/N297A (нумерация по Кабату; фиг. 13A и 13B), которые снижали уровень связывания со всеми рецепторами FcγR, что приводило к элиминации функции антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) (Shields et al. al., 2001 JBC, 276: 6591-6604). Полинуклеотид, кодирующий домен α1-α2 ULBP2 дикого типа (ULBP2.wt) без его GPI-связи (SEQ ID NO: 12), аналогичным образом клонировали и присоединяли к ДНК-полинуклеотидам, кодирующим линкеры и тяжелую цепь или легкую цепь IgG1. Эти биспецифические антитела, называемые «MicAbody^TM» в единственном числе и «MicAbodies» во множественном числе, являются двухвалентными для гибридного домена α1-α2. Примерами антител, используемых для создания MicAbodies с целью изучения конструкции eNKG2D, являются, но не ограничиваются ими, трастузумаб (SEQ ID NO: 94 и 96) и ритуксумаб (SEQ ID NO: 98 и 100), и далее будут называться «трастузумаб-MicAbody» (например, SEQ ID NO: 102 и 104) и «ритуксимаб-MicAbody» (например, SEQ ID NO: 106), соответственно. Гибридные конструкции отдельно встраивали в pD2610-V12 (ATUM, Newark, CA) посредством клонирования по Гибсону (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA). Для данного антитела, распознающего специфический антиген, плазмиду, кодирующую тяжелую цепь, и плазмиду, кодирующую легкую цепь, связанную с природным или неприродным лигандом NKG2D, котрансфицировали для временной экспрессии в клетках Expi293^TM (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA). Альтернативно, котрансфицировали плазмиду, кодирующую тяжелую цепь, связанную либо с природным, либо с неприродным лигандом NKG2D, и плазмиду, кодирующую легкую цепь. Секретированные биспецифические антитела очищали с помощью аффинной хроматографии на белке A (номер по каталогу 20334, Pierce Biotechnology, Rockford, IL), элюированное вещество охарактеризовывали с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ) на колонках Akta Pur Superdex и, при необходимости, проводили фракционирование. Кроме того, проводили анализ с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ на очищенных образцах для подтверждения ожидаемых молекулярных масс гибридных молекул тяжелой цепи и гибридных молекул легкой цепи.

[0059] Пример 3: Идентификация модифицированных вариантов NK2GD, неспособных связываться ни с природными NKG2D-связывающими лигандами, ни с неприродными лигандами, которые обнаруживают повышенный уровень связывания с NKG2D дикого типа

[0060] Аффинность связывания вариантов α1-α2 с внеклеточными доменами природных белков (дикого типа) NKG2D и неприродных белков eNKG2D анализировали методом ELISA на планшетах. Каждый из ЭХ-фракционированных природных гибридов Fc-NKG2D и неприродных гибридов Fc-eNKG2D наносили в течение ночи при 4°C на отдельные лунки 96-луночных планшетов Nunc Maxisorp (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) с использованием концентрации для покрытия 1 мкг/мл в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS). Планшеты трижды промывали PBS/0,05% Твина-20 (PBS-T) при 20-22°С и блокировали 0,5% альбумином бычьей сыворотки в PBS (PBS-B) в течение 2 часов при 20-22°С. MicAbodies титровали против связанных с планшетом природных или неприродных гибридов Fc-NKG2D в течение 60 минут при 20-22°С в PBS/0,5% альбумина бычьей сыворотки (BSA)/0,05% Твина-20 (PBS-BT), 3 раза промывали PBS-T при 20-22°С и связанные биспецифические белки детектировали с использованием ПХ-конъюгированного антитела против человеческой каппа-цепи в PBS-BT (Abcam, Cambridge MA) и проявляли с использованием раствора субстрата с помощью ELISA-анализа 1-Step^TM Ultra TMB (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Связывание ритуксимаба-MicAbody ULBP2.wt (SEQ ID NO: 98 и 106) различалось между вариантами NKG2D дикого типа и eNKG2D с пониженным уровнем связывания с последним лигандом, и было обнаружено, что варианты лигандов MICwed (SEQ ID NO: 96 и 102) и MIC25 (SEQ ID NO: 96 и 104) были более эффективными при идентификации вариантов eNKG2D с устраненным связыванием лиганда. Характер связывания каждого варианта eNKG2D со всеми тремя биспецифическими лигандами показал, что комбинации модификаций NKG2D приводили к наибольшему снижению связывания лигандов дикого типа и модифицированных лигандов, что позволяло проводить отбор главных инертных вариантов NKG2D.

[0061] Дополнительный биофизический анализ на связывание варианта eNKG2D с лигандами был также осуществлен с помощью биослойной интерферометрии (BLI) с использованием системы FortéBio Octet (все от FortéBio LLC, Fremont, CA). Для этих экспериментов, человеческие лиганды NKG2D MICA-Fc, MICB-Fc, ULBP1-Fc, ULBP2-Fc, ULBP3-Fc и ULBP4-Fc были закуплены у R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN). Лиганды в формате MicAbody захватывали на наконечниках биосенсора для захвата Fc против человеческого IgG (AHC). После установления базовых уровней, наконечники подвергали серии титрований гибридных белков Fc-eNKG2D в пределах от 300 нМ до 0,41 нМ, и проводили мониторинг кинетики ассоциации/диссоциации путем проведения всех стадий в PBS-BT. Затем, гибридные белки Fc-eNKG2D захватывали на наконечниках AHC, и MicAbodies титровали для характеризации кинетики связывания.

[0062] Для определения максимального ответа, оцениваемого по связыванию природного NKG2D с MICwed или MIC25, природные гибриды Fc-NKG2D были захвачены на биосенсорах AHC, и 20 нМ трастузумаба-MICwed или 20 нМ трастузумаба-MIC25 MicAbodies инкубировали в течение двух минут, а затем оценивали кинетику диссоциации в течение 30 секунд. Затем в тех же условиях проводили анализ на связывание с гибридными рецепторами Fc-eNKG2D в качестве агента для захвата, и уровень связывания для каждого eNKG2D оценивали как процент от максимального ответа на связывание, достигаемого с помощью Fc-NKG2D.wt (фиг. 19). Для MICwed, ответы всех одиночных мутантных вариантов Fc-eNKG2D, за исключением Y199F, были снижены до 50%. Замена Y199F поддерживала 100% ответ на связывание. Однако, все варианты Fc-eNKG2D с двойными мутациями полностью утрачивали способность связываться с MICwed. Для MIC25, все одиночные мутантные варианты Fc-eNKG2D и Y152V/Y199F сохраняли 100%-ные ответы на связывание по сравнению со связыванием Fc-NKG2D дикого типа. Однако, связывание было снижено до 50% в случае нескольких вариантов Fc-eNKG2D с двойной мутацией, включая Y152A/Y199F, Y152S/Y199F и Y152T/Y199F.

[0063] ELISA-анализы, проводимые с использованием гибридов Fc-eNKG2D в качестве агентов для захвата, осуществляли с использованием ULBP2.wt, MICwed, MIC25 MicAbodies, оттитрованных, начиная с 300 нМ (фиг. 4). По возможности, значения ЕС50 вычисляли с использованием GraphPad Prism (фиг. 20). Природный NKG2D связывался с ULBP2, MICwed и MicAbody на основе MIC25 с аффинностями, вычисленными как величины Kd 1,4, 0,007 и 0,005 нМ, соответственно. Хотя аффинность связывания ULBP2 и MICwed MicAbodies со всеми кандидатами eNKG2D с одной мутацией снижалась, однако, связывание MIC25 с кандидатами eNKG2D сохранялось. Однако, все кандидаты eNKG2D с двойными мутациями имели значительно пониженный уровень связывания или вообще не связывались со всеми тремя лигандами ULBP2, MICwed и MIC25 в формате Micabody.

[0064] Варианты eNKG2D eNKG2D5 (Y152A/Y199F), eNKG2D7 (Y152S/Y199F), eNKG2D8 (Y152T/Y199F) и eNKG2D9 (Y152V/Y199F) имели пониженный уровень связывания или вообще не связывались с ULBP2, MICwed и MicAbody на основе MIC25, на что указывал анализ Octet и ELISA (фиг. 19 и 20). Кроме того, eNKG2D 5, 7 и 8 имели наименьший уровень агрегации, что свидетельствует о более надежной сборке белка после экспрессии 293T (фиг. 18). eNKG2D5 (SEQ ID NO: 48) оценивали более тщательно на связывание с лигандами дикого типа, поскольку MicAbodies захватывались на наконечниках Octet AHC. Fc-NKG2D.Y152A с одной мутацией (SEQ ID NO: 41) обладал пониженным уровнем связывания со всеми природными лигандами по сравнению с природным (SEQ ID NO: 40) NKG2D (фиг. 5). Кривая ответа на связывание eNKG2D5 (Y152A/Y199F) была еще более сглажена по сравнению с Y152A eNKG2D. eNKG2D5 (Y152A/Y199F, далее обозначаемый «AF» или «NKG2D.AF») был выбран в качестве основного варианта NKG2D, для которого были сконструированы родственные селективные ортогональные неприродные лиганды.

[0065] Пример 4: Конструирование ортогональных неприродных доменов α1-α2, которые селективно связывались с неприродным эктодоменом NKG2D.AF

[0066] Авторами было использовано фаговое представление для конструирования ортогональных неприродных доменов α1-α2, которые селективно связываются с рецептором NKG2D.AF (SEQ ID NO: 48). В качестве исходной точки, неприродный домен α1-α2 ULBP2.R80W (фиг. 1B; SEQ ID NO: 108) с высокой аффинностью к природному эктодомену NKG2D (NKG2D.wt) дикого типа был выбран в качестве родительского домена для дальнейшего мутагенеза и скрининга с помощью фагового представления. Библиотеки синтетических ДНК были созданы для домена α1-α2 ULBP2.R80W (SEQ ID NO: 108), который имеет дополнительную мутацию C8S для удаления возможных дисульфидных связей. Кодоны аминокислотных остатков лиганда, которые в связанном состоянии расположены в непосредственной близости от положений Y152 и Y199 на природном рецепторе NKG2D, были заменены кодонами NNK, где библиотеки состояли из кодонов NNK в положениях 154-159 (фиг. 1B; SEQ ID NO: 110). Библиотеки были клонированы как гибриды с небольшим белком оболочки pIII фага M13, и фаговые частицы, демонстрирующие мутагенизированные варианты домена α1-α2, были получены в клетках SS320 E.coli в соответствии со стандартной методикой (Andris-Widhopf, J., Steinberger, P., Fuller, R., Rader, C., and Barbas, CF, 3rd. (2011). Эти библиотеки фагового представления α1-α2 были отобраны по их высокой аффинности связывания с неприродным рецептором NKG2D.AF путем селективного захвата фаговых клонов, связанных с биотинилированным белком Fc-NKG2D.AF в присутствии небиотинилированного природного белка-конкурента Fc-NKG2D.wt. Селективные клоны обогащали путем проведения нескольких циклов множества раундов отбора на конкурентное связывание с возрастающими концентрациями небиотинилированного природного Fc-NKG2D.

[0067] После четырех раундов отбора, фаговые клоны отдельно распределяли в 96-луночном формате, а затем проводили «спот»-ELISA для подтверждения предпочтительного дифференциального связывания с неприродным NKG2D.AF, связанным с планшетом, по сравнению с NKG2D.wt. Связанные фаги детектировали с использованием моноклонального антитела E1 против биотинилированного белка оболочки фага M13 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA), с использованием реагента для детектирования стрептавидина-ПХ (R&D Systems, Minneapolis, MN), и реагента для проявления в одностадийном ELISA-анализе Ultra TMB (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA). «спот»-ELISA-сигнал для каждого клона выражали как отношение фага, связанного с NKG2D.AF, к фагу, связанному с NKG2D.wt. Фаги, которые имели отношения больше или равные 14, секвенировали для идентификации специфических мутаций в мутагенизированных областях NNK. На фиг. 21 показаны выбранные аминокислотные остатки для каждого варианта фага α1-α2, который селективно связывается с NKG2D.AF. В случаях, когда были идентифицированы несколько клонов, представляющих одну и ту же последовательность, то отношение ELISA-сигналов было отложено на графике, и согласованность фаговых клонов была подтверждена путем кластеризации исходных данных (данные не показаны).

[0068] Тридцать вариантов, идентифицированных с помощью ELISA, были размножены в отдельных монокультурах для получения микропартий с высоким титром фагов. Концентрации очищенных фагов нормализовали до OD₂₆₈=0,5, а затем подвергали серии разведений 1:3 против связанного с планшетом Fc-NKG2D.AF или Fc-NKG2D.wt с последующим детектированием фага и проявлением в ELISA-анализе, осуществляемом, как описано выше. Все тридцать вариантов, проанализированных таким образом, последовательно демонстрировали селективное связывание с NKG2D.AF с незначительным связыванием с NKG2D.wt или без него (фиг. 6) даже при самых высоких концентрациях анализируемого фага. Выбранные фаги также продемонстрировали сдвиг на два или более логарифма концентрации фага для достижения полумаксимального связывания между NKG2D.AF и NKG2D.wt.

[0069] Для подтверждения того, что NKG2D.AF-селективные варианты домена α1-α2 сохраняют специфическое связывание с гибридными антителами, 21 вариант (фиг. 22; например, SEQ ID NO: 111-118) был клонирован как C-концевые гибриды с линкером APTSSSGGGGS, связанным с легкой цепью антитела ритуксимаба (SEQ ID NO: 119-126). Полученные гибриды клонировали в вектор экспрессии у млекопитающих pD2610-V12 (ATUM, Newark, CA) посредством клонирования по Гибсону (New England Biolabs Inc., Ipswich, MA) и коэкспрессировали с тяжелой цепью родительского антитела (SEQ ID NO: 99) в виде парных полноразмерных антител IgG. Временную экспрессию проводили в клетках Expi293^TM (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) в соответствии с протоколом производителя и очищали с помощью стандартной аффинной хроматографии на белке A (номер по каталогу 20334, Pierce Biotechnology, Rockford, IL). ELISA-анализ на связывание каждого варианта гибридов антител ULBP2 α1-α2 с неприродным Fc-NKG2D.AF и с природным Fc-NKG2D.wt продемонстрировал их значительно более высокую аффинность связывания с NKG2D.AF по сравнению с природным NKG2D.wt (фиг. 22). В целом, эти данные показали, что неприродные ортогональные домены α1-α2 согласно изобретения обладали высокой аффинностью связывания с неприродным рецептором NKG2D.AF и имели значительно более низкую аффинность связывания с природным рецептором NKG2D. Кроме того, гибриды этих ортогональных доменов α1-α2 с полипептидами антител сохраняли свою способность к селективному связыванию и были использованы, например, для получения Т-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR) для переориентации неприродных рецепторов NKG2D.AF на специфические антигены.

[0070] Пример 5: Идентификация неприродных лигандов NKG2D, которая позволяет различать неприродные варианты рецепторов NKG2D посредством селективного связывания одного или другого лиганда

[0071] Фаговое представление для создания ортогональных неприродных доменов α1-α2 с селективным связыванием с NKG2D.Y152A (далее называемым рецептором NKG2D.YA) было осуществлено с использованием неприродного домена α1-α2 ULBP2.R80W (SEQ ID NO: 108) в качестве исходной точки, как описано выше. Библиотеки фагового представления α1-α2 были подвергнуты пэннингу на их высокую аффинность связывания с неприродным рецептором NKG2D.AF путем селективного захвата фаговых клонов, связанных с биотинилированным белком Fc-NKG2D.YA (SEQ ID NO: 41) в присутствии небиотинилированного природного белка-конкурента Fc-NKG2D.wt(SEQ ID NO: 40). Дополнительное исследование по подтвержению фаговых клонов позволило идентифицировать варианты, которые преимущественно связывались с Fc-NKG2D.YA, но не с Fc-NKG2D.wt (фиг. 23). ULBP2.S3 (SEQ ID NO: 127), например, тем самым продемонстрировало селективное связывание с неприродными NKG2D.YA по сравнению с природным NKG2D.wt., на что указывали ELISA-анализ и анализ Octet (как в форме мономерной His-метки, так и в форме гибридного биспецифического антитела). Эта форма представляет собой уникальную форму неприродных ортогональных доменов α1-α2 согласно изобретению, обладающих высокой аффинностью связывания с неприродными рецепторами NKG2D (в данном случае NKG2D.YA в отличие от NKG2D.AF, как указано в Примере 4). Кроме того, гибриды ортогональных доменов α1-α2 с полипептидами антител сохраняли свою способность к селективному связыванию и использовались для селективной переориентации неприродных рецепторов NKG2D на специфические молекулы, определяемые гибридными гетерологичными пептидами, такими как антитела.

[0072] Для того, чтобы определить, может ли неприродный домен α1-α2, селективно связывающийся с NKG2D.YA (ULBP2.S3, SEQ ID NO: 127), и неприродные домены α1-α2, селективно связывающиеся с NKG2D.AF, отличаться у этих двух вариантов неприродных рецепторов, было проведено титрование с помощью ELISA. Все 21 из выбранных вариантов α1-α2, которые связывались с NKG2D.AF, непосредственно сравнивали на связывание с NKG2D.AF по сравнению с NKG2D.YA. Из них четыре варианта продемонстрировали неспособность связываться с NKG2D.wt, высокую аффинность к NKG2D.AF и значительное снижение (в 15-20 раз) или неспособность связываться с NKG2D.YA по сравнению с NKG2D.AF (фиг. 7). Эти четыре неприродных варианта ULBP2 α1-α2 - ULBP2.C, ULBP2.R, ULBP2.AA и ULBP2.AB (SEQ ID NO: 111, 113, 115 и 117) были также оценены на изменение предсказанного профиля иммуногенности по отношению к пептидной последовательности ULBP2 дикого типа (SEQ ID NO: 4) с использованием сервера NetMHC4.0 (для запроса на связывание пептида-MHC класса I против HLA всех супертипов с помощью анализа, проводимого с использованием 9-мерного пептида; http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC/) и сервера NetMHCII 2.3 (для запроса на связывание пептида-MHC класса I против гаплотипов HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP с помощью анализа, проводимого с использованием 15-мерных пептидов; http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII/), где оба этих алгоритма были разработаны Датским Техническим Университетом (http://www.bioinformatics.dtu.dk/; Andreatta M and Nielsen M, Gapped sequence alignment using artificial neural networks: application to the MHC class I system, 2016 Bioinformatics, 32:511, PMID: 26515819; Jensen KK, Andreatta M, Marcatili P, Buus S, Greenbaum JA, Yan Z, Sette A, Peters B, and Nielsen M, Improved methods for predicting peptide binding affinity to MHC class I molecules, 2018 Immunology, PMID: 29315598). Мутации, введенные в ULBP2.C, ULBP2.R и ULBP2.AB, не повышали предсказанную иммуногенность, в то время как иммуногенность ULPB2.AA немного повышалась для нескольких гаплотипов (фиг. 8 и 9). Вследствие специфичности ULBP2.R к NKG2D.AF и отсутствия предсказанной иммуногенности, ULBP2.R был выбран для дальнейшего ELISA-анализа в целях прямого сравнения характера его связывания с ULBP2.S3 (неприродным ортогональным лигандом, выбранным для NKG2D.YA,), ULBP2.R80W (неприродным лигандом с повышенной аффинностью к NKG2D дикого типа) и ULBP2 дикого типа (ULBP2.wt). Связывание четырех реагентов ритуксимаба-MicAbody (SEQ ID NO: 98 и 121, 98 и 129, 131 и 100, 98 и 106 как тяжелая цепь и легкая цепь для ULBP2.R, ULBP2.S3, ULBP2.R80W и ULBP2.wt, соответственно) анализировали по сравнению с NKG2D дикого типа (NKG2D.wt) и двумя инертными неприродными вариантами NKG2D.YA и NKG2D.AF (фиг. 10). Данные продемонстрировали, что выбранный для NKG2D.YA вариант ULBP2.S3 в качестве MicAbody связывался с высокой аффинностью с NKG2D.YA, но не взаимодействовал с NKG2D.AF или с природным NKG2D. Кроме того, выбранный для NKG2D.AF вариант ULBP2.R в формате MicAbody связывался с высокой аффинностью с NKG2D.AF, но не взаимодействовал с NKG2D.YA или с природным NKG2D. Эти результаты продемонстрировали огромные возможности для исследования системы лигандов NKG2D-MIC и разработки уникальных пар новых селективных неприродных рецепторов NKG2D и их соответствующих родственных неприродных партнеров по связыванию с лигандом MIC.

[0073] Пример 6: Нацеливающая и цитолитическая активность CAR-T-клеток, экспрессирующих неприродный эктодомен NKG2D.AF, регулируется ортогональными доменами α1-α2, связанными с гетерологичными нацеливающими полипептидами

[0074] В настоящее время, средства для селективной регуляции терапии CAR-T-клетками крайне необходимы для снижения токсичности и повышения эффективности против опухолей (Gill and June, op cit). Ранее были предприняты попытки разработать CAR с использованием эктодомена CD16, который затем может быть подвергнут взаимодействию посредством домена Fc терапевтических моноклональных антител, что позволило бы регулировать нацеливание на CAR-T на основе антител (Chang et al., op cit). Однако, CAR-T-клетки на основе CD16 могут распознавать почти все молекулы эндогенных антител в крови и в тканях, а терапевтические антитела, используемые для уничтожения этих клеток, будут сталкиваться с конкуренцией со стороны эндогенных рецепторов CD16 на NK-клетках, PMN, моноцитах и макрофагах. Оба эти признака вносят свой вклад в проблемы, связанные с токсичностью вне опухоли и с плохой фармакокинетикой, соответственно.

[0075] Природные лиганды NKG2D присутствуют в некоторых здоровых тканях и многих тканях, подвергшихся стрессу, что создает чрезвычайный риск токсичности при применении современных подходов к CAR NKG2D (VanSeggelen et al. 2015). Неприродный рецептор NKG2D Y152A, специфически связывающийся с неприродными лигандами NKG2D домена α1-α2, представляет собой пример средства, с помощью которого можно селективно регулировать активность неприродного CAR NKG2D с использованием биспецифических белков, состоящих из неприродного домена α1-α2 лигандов NKG2D согласно изобретению.

[0076] Авторами были сконструированы CAR-T-клетки с рецептором, состоящим из модифицированного эктодомена Y152A/Y199F («AF») NKG2D, который не связывается ни с одним природнымм лигандом NKG2D или с ранее описанными неприродными доменами α1-α2, ортогональными и родственными NKG2D с модификацией Y152A (NKG2D.YA). Родственные неприродные домены α1-α2 согласно изобретению связывались с высокой аффинностью с неприродным эктодоменом NKG2D.AF и не связывались с природными эктодоменами NKG2D и с эктодоменом NKG2D.YA. Таким образом, сконструированные домены α1-α2, которые обладают высокой селективностью в отношении неприродного эктодомена NKG2D.AF по сравнению с природным NKG2D и неприродным NKG2D.YA, представляют собой идеальную систему для селективной регуляции неприродных рецепторов CAR NKG2D или любого гибридного рецептора или белка, связанного с неприродными эктодоменами NKG2D, которые могут селективно взаимодействовать с неприродными доменами α1-α2 согласно изобретению. Настоящее изобретение также дает возможность получить отдельные клетки, экспрессирующие два различных CAR, один из которых состоит из NKG2D.YA, а другой из NKG2D.AF, каждый из которых передает сигналы с абсолютно различными внутриклеточными доменами. Эти различные CAR будут обладать независимым двойным контролем в отношении клеточной активности посредством внеклеточного воздействия соответствующего родственного ортогонального MicAbody или другого гибридного полипептида, не являющегося антителом.

[0077] Для того, чтобы продемонстрировать селективную регуляцию CAR-T-клеток, сконструированных с использованием химерного рецептора, содержащего неприродный эктодомен NKG2D.AF, авторами были сконструированы CAR, содержащие природный NKG2D.wt (SEQ ID NO: 135), неприродный NKG2D.YA (SEQ ID NO: 137) или неприродные эктодомены NKG2D.AF (SEQ ID NO: 139), на основе предыдущей работы с использованием конструкций CAR 4-1BB/CD3-дзета (патент Campana 8399645), связывающих соответствующие эктодомены NKG2D с шарнирной областью CD8 CAR (SEQ ID NO: 151, 153, 155). Эти конструкции (SEQ ID NO: 152, 154, 156) клонировали в лентивирусный вектор и экспрессировали в первичных человеческих CD8-позитивных Т-клетках посредством трансдукции лентивирусом. Клетки HeLa имеют конститутивно повышенные уровни лигандов MIC на своей поверхности, включая MICA, MICB, ULBP3 и ULBP2/5/6 (антитело, используемое для подтверждения этого, не может различать эти три ULBP; человеческое антитело ULBP-2/5/6, R&D Systems, Minneapolis, MN)). Клетки HeLa трансфицировали для сверхэкспрессии либо природного ULBP1, либо выбранного для NKG2D.AF варианта ULBP2.R на их поверхности, и эти клетки использовали в качестве мишени для анализа на цитолиз in vitro. Клетки-мишени HeLa были предварительно нагружены кальцеином и подвергнуты воздействию NKG2D.wt-CAR-, NKG2D.YA-CAR- или NKG2D.AF-CAR-CD8-клеток при увеличении отношений эффектор-мишень (E:T) в течение пяти часов, после чего количество кальцеина, высвобожденного в супернатант, количественно определяли и нормализовали по общему количеству кальцеина, высвобожденному после обработки детергентом (фиг. 11). Из-за повышенных уровней лигандов MIC, обычно экспрессируемых на поверхности клеток HeLa, CD8-клетки, экспрессирующие природный NKG2D (NKG2D.wt) в виде CAR, взаимодействуют с клетками HeLa посредством этого сверхэкспрессируемого природного лиганда и вызывают цитолиз. Однако, CD8-клетки, трансдуцированные как NKG2D.YA-, так и NKG2D.AF-CAR, продемонстрировали очень слабый лизис природных клеток HeLa, даже при высоких отношениях E:T, с активностью, которая находится на одном уровне с активностью нетрансдуцированных CD8-Т-клеток. Если ULBP1 сверхэкспрессируется на поверхности клеток HeLa, то только NKG2D.wt-CAR-CD8-T-клетки в значительной степени лизируют эти клетки. При этом наблюдалась некоторая дополнительная гибель клеток при высоком отношении E:T в случае NKG2D.YA-CAR-клеток, однако, этого не наблюдалось в случае NKG2D.AF-CAR-клеток, что указывает на то, что двойная мутация Y152A/Y199F делает NKG2D даже более инертным, чем одиночная мутация Y152A. В клетках HeLa, сверхэкспрессирующих NKG2D.AF-селективный неприродный ULBP2.R, NKG2D.wt-CAR-клетки обеспечивают лизис (из-за распознавания эндогенных лигандов MIC), в то время как NKG2D.AF-CAR-клетки обеспечивают значительные уровни лизиса вместе со связыванием рецептора и его селективного лиганда.

[0078] Для того, чтобы продемонстрировать, что лизис NKG2D.YA- или NKG2D.AF-CAR-клеток может обеспечиваться только соответствующим родственным нацеливающим MicAbody, клетки Ramos использовали в качестве мишени для цитолиза в комбинации с MicAbodies на основе ритуксимаба, связанными с неприродными ортогональными лигандами ULBP2.S3 или ULBP2.R. Как показано на фиг. 12A, ритуксимаб-ULBP2.S3 MicAbody может обеспечивать клеточный цитолиз под действием NKG2D.YA-CAR-CD8-клеток, но не под действием NKG2D.AF-CAR-клеток, тогда как ритуксимаб-ULBP2.R MicAbody может обеспечивать активность NKG2D.AF-CAR-клеток, но не NKG2D.YA-CAR-клеток. Это также продемонстрировало селективность двух неприродных вариантов ULBP2 по отношению к их родственным неприродным вариантам NKG2D, для которых они были сконструированы в качестве предпочтительных партнеров. Чтобы продемонстрировать специфичность части антитела MicAbody были проведены анализы на цитолиз in vitro с использованием NKG2D.AF-CAR-CD8-T-клеток, которые были предварительно нагружены путем инкубирования с ритуксимабом-ULBP2.R, трастузумабом-ULPB2.R (SEQ ID NO: 95 и 133, тяжелая и легкая цепи, соответственно) или с эквимолярной комбинацией двух этих антител при общей насыщающей концентрации MicAbody. После удаления несвязанного MicAbody путем промывки, CD8-клетки наносили либо на клетки Ramos (экспрессирующие CD20, мишень для ритуксимаба), либо на CT26-Her2 (линию мышиных клеток, трансфецированных для экспрессии человеческого Her2), которые были предварительно нагружены кальцеином. После двухчасового инкубирования при двух различных отношениях E:T определяли количество высвобожденного кальцеина. Как показано на фиг. 12В, если клетки были предварительно нагружены ритуксимабом-MicAbody, то лизису подвергались только клетки Ramos, тогда как трастузумаб-MicAbody обеспечивал цитолитическую активность только против клеток CT26-Her2. Однако, если NKG2D.AF-CAR-CD8-клетки были одновременно предварительно нагружены как ритуксимабом-, так и трастузумабом- ULBP2.R MicAbodies, то обе линии клеток-мишеней подвергались лизису, что указыввает на то, что эти CAR-клетки благодаря селективному и избирательному партнерству по связыванию, которое было установлено между рецептором и лигандом, были легко подвергнуты мультиплексной реакции и, таким образом, обеспечивают одновременное воздействие на различные опухолевые мишени.

[0079] Пример 7: Ортогональные домены α1-α2 как средство селективной доставки цитокинов в искусственно сконструированные T-клетки, экспрессирующие NKG2D

[0080] Биспецифические MicAbodies (фиг. 13B), в которых присутствуют нацеленные на антиген домены Fv антител, и преимущественное взаимодействие между ортогональными доменами α1-α2 и сконструированными неприродными NKG2D.YA или NKG2D.AF (SEQ ID NO: 137 и 139, соответственно) могут эффективно обеспечивать цитолитическую активность Т-клеток, несущих NKG2D.YA или NKG2D.AF-CAR (SEQ ID NO: 153 и 155, соответственно), и тем самым удалять антиген-экспрессирующие клетки-мишени. Кроме того, в высокой степени селективное взаимодействие между родственными ортогональными лигандами и неприродным, модифицированным (также называемым «сконструированным») NKG2D (eNKG2D) может быть использовано для селективной доставки молекул в клетки, несущие eNKG2D-эктодомен (eNKG2D-ecd). Если гетерологичный атом или молекула (полезная нагрузка/груз), с которыми связан ортогональный лиганд, по своей природе, являются биоактивными и обладают потенциально нежелательными функциями при доставке в клетку, не экспрессирующую eNKG2D, то могут быть исследованы мутации в биоактивной молекуле, которые уменьшают взаимодействия с нативными рецепторами или мишенями. Следовательно, конечная молекула, при ее связывании с ортогональным лигандом будет эффективно инертной ко всем биологическим функциям, за исключением случаев, когда присутствуют клетки, несущие родственный рецептор eNKG2D. И только когда происходит высокоаффинное взаимодействие между ортогональным лигандом и рецептором eNKG2D, то обеспечивается взаимодействие между мутантом биоактивной молекулы со сниженной аффинностью и его природной мишенью или рецептором и активируется остаточная функция биоактивной молекулы. Все гибриды ортогональных лигандов с молекулами, направляющими их в клетки, экспрессирующие eNKG2D, в совокупности называются MicAdaptors и, в принципе, могут принимать форму прямых белковых гибридов в виде единого полипептида между полезной нагрузкой и ортогональным лигандом у любого N- или C-конца с линкером или меткой (например, His-меткой) или без них, где указанные линкер или метка могут быть использованы для анализов или очистки (фиг. 13C). Кроме того, если желательна повышенная стабильность в сыворотке, то Fc-домен антитела может быть включен либо только в виде доменов CH2-CH3, либо в формате полноразмерного антитела, в зависимости от желаемого количества уникальных полезных нагрузок, валентности ортогонального лиганда или гетерологичного груза и общей экспериментально определенной архитектуры, которая стимулирует максимальную функциональность всех компонентов (фиг. 13D).

[0081] Для того, чтобы определить, могут ли цитокины селективно доставляться в клетки, экспрессирующие NKG2D.YA-CAR (SEQ ID NO: 153), родственный ортогональный лиганд ULBP2.S3 (U2S3, SEQ ID NO: 127) был экспрессирован в виде гибрида с N-концом Fc1, который был заменен на два остатка для экспрессии отрицательно заряженных остатков аспарагиновой кислоты на границе гомодимеризации Fc (SEQ ID NO: 189). Мутантная форма человеческого IL2 (mutIL2), содержащая две мутации R38A/F42K, которые значительно снижают аффинность цитокина к комплексу IL2R-альфа (K. M. Heaton, G. Ju, and E. A. Grimm, Human Interleukin 2 Analogues That Preferentially Bind the Intermediate-Affinity Interleukin 2 Receptor Lead to Reduced Secondary Cytokine Secretion: Implications for the Use of These Interleukin 2 Analogues in Cancer Immunotherapy, 1993 Cancer Res 53:2597, PMID: 8495422; K. Sauvé et al., Localization in Human Interleukin 2 of the Binding Site to the Alpha Chain (P55) of the Interleukin 2 Receptor, 1991 PNAS 88:4636, PMID: 2052547), была присоединена к C-концу Fc2, который был заменен на два остатка для экспрессии положительно заряженных остатков лизина на границе гомодимеризации Fc (SEQ ID NO: 183). Оба эти мутанта были независимо клонированы в экспрессионный вектор у млекопитающих pD2610-V12 (ATUM, Newark, CA), котрансфицированы в клетки Expi293^TM (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA) в соответствии с протоколом производителя и очищены с помощью стандартной аффинной хроматографии на белке A (номер по каталогу 20334, Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Очищенный материал фракционировали с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ) на колонках Akta Pur Superdex. Отрицательно заряженные остатки на Fc1 и положительные заряды на Fc2 обеспечивали эффект электростатического взаимодействия (Kannan Gunasekaran et al., Enhancing Antibody Fc Heterodimer Formation through Electrostatic Steering Effects: Applications to Bispecific Molecules and Monovalent IgG, 2010 J Biol Chem 285:19637, PMID: 20400508), который стимулировал гетеродимерную сборку молекулы, которая была одновалентной для ортогонального лиганда U2S3 и mutIL2 (фиг. 13Da). Кроме того, были исследованы MicAdaptors, состоящие из других комбинаций ортогональных лигандов ULBP2 с цитокиновыми гибридами, которые были получены в виде гетеродимерных слияний Fc1/Fc2 или в виде одного полипептида, где оба компонента были подвергнуты непосредственному связыванию друг с другом, а кодирующие их ДНК аналогичным образом клонировали, коэкспрессировали и очищали, как подробно описано на фиг. 24 и как описано выше. Рекомбинантный человеческий IL2 (rhIL2, Peprotech) и рекомбинантный человеческий IL15 (rhIL15, Peprotech) при необходимости включали в анализы в качестве контроля.

[0082] Человеческие CD8-Т-клетки трансдуцировали для экспрессии конструкции NKG2D.wt-CAR (SEQ ID NO: 151) или конструкции NKG2D.YA-CAR (SEQ ID NO: 153) и подвергали воздействию 30 МЕ/мл контрольного цитокина или различных адаптеров MicAdaptors в течение трех дней, и уровень пролиферации клеток количественно оценивали с помощью реагента для пролиферации клеток WST-1 (Millipore Sigma). Контрольный rhIL2 стимулировал пролиферацию CAR-экспрессирующих клеток, в то время как только один mutIL2 не выполнял этой функции, как можно было бы ожидать из-за снижения способности взаимодействовать с IL2R-альфа, а следовательно, и снижения способности передавать сигнал через IL2R-бета/гамма-C (фиг. 15A). Если MicAdaptor состоял из неселективного лиганда U2R80W (U2R80W-mutIL2, SEQ ID NO: 177), который взаимодействовал с высокой аффинностью с рецепторами дикого типа и с модифицированными рецепторами NKG2D.YA, то клетки, экспрессирующие любой из CAR, отвечали на пролиферацию. Однако, если mutIL2 был присоединен к ортогональному лиганду, такому как ULBP2.S2 (SEQ ID NO: 179), который селективно взаимодействует только с NKG2D.YA, то в случае, если MicAdaptor, U2S2-mutIL2, взаимодействует только с NKG2D.YA, пролиферируются только NKG2D YA-CAR-клетки. Аналогичные результаты были получены в том случае, когда цитокин, связанный с U2S2, представлял собой мутантный вариант IL15 с мутацией V49D (Bernard, J. et al., Identification of an Interleukin-15α Receptor-binding Site on Human Interleukin-15, 2004 Journal of Biological Chemistry, 279:24313, PMID: 15039446), который снижает взаимодействие с IL15R-альфа (фиг. 15A). Если NKG2D.YA-CAR-T-клетки совместно культивировали в течение семи дней с этими реагентами, то % GFP⁺-клеток (указывающий на процент присутствующих CAR-экспрессирующих клеток по сравнению с нетрансдуцированными GFP-отрицательными клетками) увеличивался, но только когда ортогональный лиганд ULBP2.S2 (U2S2-mutIL2 или U2S2-Fc1/Fc2-mutIL2, фиг.24 для SEQ ID NO) присутствовал, а не в случае неселективного варианта U2R80W (который связывался с природным рецептором NKG2D дикого типа, конститутивно присутствующим на человеческих CD8-клетках) (фиг. 15B). IL21 также исследовали как гибрид дикого типа (IL21.wt) с отдельными мутациями, влияющими на связывание IL21R-альфа (D18A или E109R), или как вариант с обеими включенными мутациями (D18A/E109R) (Kang, L. et al., Rational Design of Interleukin-21 Antagonist through Selective Elimination of the γC Binding Epitope, 2010 Journal of Biological Chemistry, 285:12223, PMID: 20167599). При сравнении нетрансдуцированных CD8-клеток или клеток, экспрессирующих NKG2D.YA-CAR, только клетки, несущие NKG2D.YA, отвечали на все варианты гибридов IL21 (см. Фиг. 24 для SEQ ID NO), включая гибрид IL21.wt (Фиг. 15C). Интересно отметить, что хотя нетрансдуцированные клетки и NKG2D.YA-CAR-клетки размножались в ответ на rhIL2 по сравнению с контролем без цитокинов, однако, степень пролиферации была выше для NKG2D.YA-CAR-клеток. Пролиферативный ответ клеток, экспрессирующих NKG2D.YA-CAR, не зависел от общего связывания или взаимодействия домена NKG2D.YA, поскольку U2S3-Fc1/Fc2 (гетеродимерная молекула Fc с одним доменом U2S3 и без присоединенных цитокинов или цитокиновых мутантов) и ритиксумаб-MicAbody (двухвалентный по отношению к домену U2S3, но без какого-либо цитокинового компонента, фиг. 13Bb) не индуцировали пролиферацию в течение трех дней культивирования даже при концентрациях МЕ/мл, которые были намного выше, чем концентрация контроля rhIL2 (фиг. 16C).

[0083] Пример 8: Присутствие внутриклеточных костимулирующих доменов в цис- или транс-ориентации стимулирует реакцию неприродных модифицированных клеток, несущих NKG2D, на цитокины и цитокиновые MicAdaptors

[0084] После того, как было продемонстрировано, что модифицированный домен NKG2D.YA, если он находится в конструкции рецептора химерного антигена, действительно служил высокоселективным стыковочным сайтом для доставки гетерологичного груза, присоединенного к ортогональному лиганду, авторы настоящего изобретения попытались определить, является ли рецептор NKG2D.YA не только необходимым, но также и достаточным для нацеленной доставки цитокинов, которые затем могли действовать на клетку-реципиента. Внеклеточный домен NKG2D.YA (NKG2D.YA-ecd) экспрессировался как трансмембранный домен, лишенный всех внутриклеточных компонентов, за исключением удерживаемой внутриклеточной метки eGFP (фиг. 14, SEQ ID NO: 157). CD8-клетки трансдуцировали для экспрессии этого «молчащего CAR», и было продемонстрировано, что они неспособны напрямую уничтожать клетки-мишени Ramos в присутствии ритуксимаба-ULBP2.S3 MicAbody (SEQ ID NO: 98 и 129), как можно было бы ожидать в отсутствии костимулирующих доменов. (Фиг. 16А). Важно отметить, что клетки, экспрессирующие этот полностью инертный или молчащий CAR, не пролиферируются при воздействии на них U2S3-Fc1/Fc2-mutIL2 (SEQ ID NO: 189 и 193), но реагируют на уровне, сравнимом с уровнем для нетрансдуцированных клеток (фиг. 16B). Это наблюдение, в дополнение к (а) последовательному наблюдению более высоких уровней пролиферации NKG2D.YA-CAR, содержащих rhIL2, по сравнению с нетрансдуцированными клетками (фиг. 15C, 16B, 16C) и (b) наблюдению того, что только NKG2D.YA-CAR-клетки реагировали на все формы IL21-MicAdaptor, включая IL21.wt, навело авторов на мысль, что внутриклеточные домены, присутствующие в конструкции NKG2D.YA-CAR, усиливают реакцию на эти цитокины и цитокиновые MicAdaptors.

[0085] Чтобы проверить это, была создана серия конструкций CAR, в которых были мутированы сигнальные мотивы внутриклеточных доменов CAR, либо два консенсусных сайта связывания TRAF2 4-1BB (SEQ ID NO: 161), либо три пары мотивов ITAM в CD3-дзета (SEQ ID NO: 163), либо комбинированные мутанты 4-1BB/CD3-дзета (SEQ ID NO: 165). Эти конструкции (фиг. 14) переносили в CD8-клетки, совместно инкубировали с указанными цитокиновыми реагентами и количественно оценивали пролиферацию через три дня (фиг. 17A). NKG2D.YA-BB-CD3_∆ITAM-GFP (SEQ ID NO: 163) сохранял пролиферативный ответ наравне с NKG2D.YA-CAR во всех тестируемых условиях, и тем самым было продемонстрировано, что домен CD3-дзета (SEQ ID NO: 145) является необязательным для реакции на цитокины и на цитокин-MicAdaptors в присутствии CAR. Однако, клетки, экспрессирующие рецептор NKG2D.YA-BB_ΔTRAF2-CD3zeta-GFP (SEQ ID NO: 161), имели значительно более пониженную чувствительность ко всем цитокинам и цитокин-MicAdaptors, как и рецептор NKG2D.YA-BB_ΔTRAF2-CD3_∆ITAM-GFP (SEQ ID NO: 165), несущий мутации в обоих внутриклеточных доменах. Это указывает на то, что костимулирующий 4-1BB (SEQ ID NO: 143) играет определеннуб роль в чувствительности NKG2D.YA-CAR-клеток как на цитокины, так и на цитокин-MicAdaptors, и что молчащий CAR, экспрессируемый на поверхности клетки, также должен иметь внутриклеточный костимулирующий домен, способный стимулировать чувствительность к цитокину-MicAdaptor. Неспособность молчащего CAR NKG2D.YA-BB (SEQ ID NO: 169, фиг. 14) обеспечивать цитолиз клеток, опосредуемый MicAbody (фиг. 17B), продемонстрировала, что такая архитектура CAR, в которой отсутствует CD3-дзета, является подходящей в качестве молчащего стыковочного сайта для MicAdaptors и позволяет передавать сигналы цитокина-MicAdaptors, но не функционирует как агент, опосредующий цитолиз клетки, которая является мишенью для MicAbody.

[0086] Для дальнейшего исследования того, как домен 4-1BB участвует в ответе на цитокин и цитокин-MicAdaptor, была создана конструкция, в которой CD19scFv-CAR (на основе Fv FMC63) содержал полный набор функциональных доменов 4-1BB и CD3-дзета (SEQ ID NO: 173). CD19scFv-CAR коэкспрессировался с NKG2D.YA-ecd (фиг. 14). Оба компонента экспрессировались как единый полипептид с саморасщепляющимся пептидным мотивом T2A, отделяющим вышерасположенную конструкцию CD19scFv-CAR от нижерасположенной NKG2D.YA-ecd, которая имеет независимые сигнальную последовательность альфа-цепи GMCSFR, шарнирную область CD8a и трансмембранный домен CD8a. Эту конструкцию переносили в CD8-Т-клетки, и совместную экспрессию CD19scFv-CAR и NKG2D.YA-ecd на поверхности подтверждали с помощью проточной цитометрии путем оценки сигнала GFP и окрашивания на MicAbody, конъюгированное с фикоэритрином, соответственно. Эти клетки инкубировали в течение трех дней с цитокинами и цитокинами-адаптерами MicAdaptors и количественно определяли пролиферацию с помощью анализа WST. Как и ожидалось, NKG2D.YA-CAR реагировал как на rhIL2, так и на U2S3-Fc1/Fc2-mutIL2, хотя контрольные клетки, несущие только CD19scFv-CAR (SEQ ID NO: 171), размножались посредством rhIL2 и в меньшей степени до максимальной концентрации (300 МЕ/мл) U2S3-Fc1/Fc2-mutIL2 (фиг. 17C). Коэкспрессия NKG2D.YA-ecd на клетках, экспрессирующих CD19scFv-CAR (SEQ ID NO: 173), вызвала еще больший пролиферативный ответ на цитокин-MicAdaptor U2S3-Fc1/Fc2-mutIL2, чем клетки, экспрессирующие только CD19scFv-CAR (SEQ ID NO: 171). В соответствии с этим, домен 4-1BB был конститутивно расположен в транс-ориентации по отношению к NKG2D.YA-ecd. Эти данные продемонстрировали, что реакция клеток, экспрессирующих NKG2D.YA-ecd, на цитокины и цитокин-MicAdaptors, стимулировалась доменом 4-1BB либо в цис-, либо в транс-ориентации, и что домен NKG2D.YA-ecd может коэкспрессироваться в CAR-клетку, содержащую костимулирующий домен 4-1BB, для сообщения дополнительной универсальной функциональности сконструированным клеткам, используемым в стратегиях адоптивной клеточной терапии. Эта функциональность не ограничивается только взаимодействием поверхностных рецепторов при взаимодействии лиганда/молчащего CAR, но может быть расширена до внутриклеточной доставки за счет включения мотивов цитоплазматической последовательности (K.N. Pandey, Functional roles of short sequence motifs in the endocytosis of membrane receptors, 2009 Front Biosci, 14:5339, PMID: 19482617), которые стимулируют гидролиз неприродных вариантов NKG2D, а поэтому, любой связанный MicAdaptor будет совместно интернализоваться, а гетерологичный груз будет доставляться вовнутрь клетки.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> XYPHOS BIOSCIENCES INC.

<120> НЕПРИРОДНЫЕ РЕЦЕПТОРЫ NKG2D, КОТОРЫЕ НЕПОСРЕДСТВЕННО

НЕ ПЕРЕДАЮТ СИГНАЛ КЛЕТКАМ, С КОТОРЫМИ ОНИ СВЯЗАНЫ

<130> A251193

<150> US 62/755,776

<151> 2018-11-05

<160> 202

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 183

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида MICA

<400> 1

Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val Leu Ser Trp

1 5 10 15

Asp Gly Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His Leu Asp Gly

20 25 30

Gln Pro Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala Lys Pro Gln

35 40 45

Gly Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp Asp Arg Glu

50 55 60

Thr Arg Asp Leu Thr Gly Asn Gly Lys Asp Leu Arg Met Thr Leu Ala

65 70 75 80

His Ile Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg

85 90 95

Val Cys Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser Gln His Phe

100 105 110

Tyr Tyr Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Lys Glu

115 120 125

Trp Thr Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val

130 135 140

Arg Asn Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr His

145 150 155 160

Ala Met His Ala Asp Cys Leu Gln Glu Leu Arg Arg Tyr Leu Lys Ser

165 170 175

Gly Val Val Leu Arg Arg Thr

180

<210> 2

<211> 182

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида MICB

<400> 2

Ala Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Met Val Leu Ser Gln Asp

1 5 10 15

Glu Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu Gly His Leu Asp Gly Gln

20 25 30

Pro Phe Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg Arg Ala Lys Pro Gln Gly

35 40 45

Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Ala Lys Thr Trp Asp Thr Glu Thr

50 55 60

Glu Asp Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu Arg Arg Thr Leu Thr His

65 70 75 80

Ile Lys Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val

85 90 95

Cys Glu Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Arg His Phe Tyr

100 105 110

Tyr Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Gln Glu Ser

115 120 125

Thr Val Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Thr

130 135 140

Asn Phe Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr Arg Ala

145 150 155 160

Met Gln Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln Arg Tyr Leu Lys Ser Gly

165 170 175

Val Ala Ile Arg Arg Thr

180

<210> 3

<211> 187

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP1

<400> 3

Ala Ala Glu Pro His Cys Leu Cys Tyr Asp Phe Ile Ile Thr Pro Lys

1 5 10 15

Ser Arg Pro Glu Pro Gln Trp Cys Glu Val Gln Gly Leu Val Asp Glu

20 25 30

Arg Pro Phe Leu His Tyr Asp Cys Val Asn His Lys Ala Lys Ala Phe

35 40 45

Ala Ser Leu Gly Lys Lys Val Asn Val Thr Lys Thr Trp Glu Glu Gln

50 55 60

Thr Glu Thr Leu Arg Asp Val Val Asp Phe Leu Lys Gly Gln Leu Leu

65 70 75 80

Asp Ile Gln Val Glu Asn Leu Ile Pro Ile Glu Pro Leu Thr Leu Gln

85 90 95

Ala Arg Met Ser Cys Glu His Glu Ala His Gly His Gly Arg Gly Ser

100 105 110

Trp Gln Phe Leu Phe Asn Gly Gln Lys Phe Leu Leu Phe Asp Ser Asn

115 120 125

Asn Arg Lys Trp Thr Ala Leu His Pro Gly Ala Lys Lys Met Thr Glu

130 135 140

Lys Trp Glu Lys Asn Arg Asp Val Thr Met Phe Phe Gln Lys Ile Ser

145 150 155 160

Leu Gly Asp Cys Lys Met Trp Leu Glu Glu Phe Leu Met Tyr Trp Glu

165 170 175

Gln Met Leu Asp Pro Thr Lys Pro Pro Met Val

180 185

<210> 4

<211> 189

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP2

<400> 4

Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu

20 25 30

Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val

35 40 45

Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln

50 55 60

Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Arg

65 70 75 80

Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln

85 90 95

Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser

100 105 110

Trp Gln Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu

115 120 125

Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu

130 135 140

Lys Trp Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe Ser

145 150 155 160

Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp

165 170 175

Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Pro Met Val

180 185

<210> 5

<211> 187

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP3

<400> 5

Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Trp Tyr Asn Phe Thr Ile Ile His Leu

1 5 10 15

Pro Arg His Gly Gln Gln Trp Cys Glu Val Gln Ser Gln Val Asp Gln

20 25 30

Lys Asn Phe Leu Ser Tyr Asp Cys Gly Ser Asp Lys Val Leu Ser Met

35 40 45

Gly His Leu Glu Glu Gln Leu Tyr Ala Thr Asp Ala Trp Gly Lys Gln

50 55 60

Leu Glu Met Leu Arg Glu Val Gly Gln Arg Leu Arg Leu Glu Leu Ala

65 70 75 80

Asp Thr Glu Leu Glu Asp Phe Thr Pro Ser Gly Pro Leu Thr Leu Gln

85 90 95

Val Arg Met Ser Cys Glu Cys Glu Ala Asp Gly Tyr Ile Arg Gly Ser

100 105 110

Trp Gln Phe Ser Phe Asp Gly Arg Lys Phe Leu Leu Phe Asp Ser Asn

115 120 125

Asn Arg Lys Trp Thr Val Val His Ala Gly Ala Arg Arg Met Lys Glu

130 135 140

Lys Trp Glu Lys Asp Ser Gly Leu Thr Thr Phe Phe Lys Met Val Ser

145 150 155 160

Met Arg Asp Cys Lys Ser Trp Leu Arg Asp Phe Leu Met His Arg Lys

165 170 175

Lys Arg Leu Glu Pro Thr Ala Pro Pro Met Val

180 185

<210> 6

<211> 187

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP4

<400> 6

Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Cys Phe Asn Phe Thr Ile Lys Ser Leu

1 5 10 15

Ser Arg Pro Gly Gln Pro Trp Cys Glu Ala Gln Val Phe Leu Asn Lys

20 25 30

Asn Leu Phe Leu Gln Tyr Asn Ser Asp Asn Asn Met Val Lys Pro Leu

35 40 45

Gly Leu Leu Gly Lys Lys Val Tyr Ala Thr Ser Thr Trp Gly Glu Leu

50 55 60

Thr Gln Thr Leu Gly Glu Val Gly Arg Asp Leu Arg Met Leu Leu Cys

65 70 75 80

Asp Ile Lys Pro Gln Ile Lys Thr Ser Asp Pro Ser Thr Leu Gln Val

85 90 95

Glu Met Phe Cys Gln Arg Glu Ala Glu Arg Cys Thr Gly Ala Ser Trp

100 105 110

Gln Phe Ala Thr Asn Gly Glu Lys Ser Leu Leu Phe Asp Ala Met Asn

115 120 125

Met Thr Trp Thr Val Ile Asn His Glu Ala Ser Lys Ile Lys Glu Thr

130 135 140

Trp Lys Lys Asp Arg Gly Leu Glu Lys Tyr Phe Arg Lys Leu Ser Lys

145 150 155 160

Gly Asp Cys Asp His Trp Leu Arg Glu Phe Leu Gly His Trp Glu Ala

165 170 175

Met Pro Glu Pro Thr Val Ser Pro Pro Met Val

180 185

<210> 7

<211> 198

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP5

<400> 7

Gly Leu Ala Asp Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro

1 5 10 15

Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp

20 25 30

Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Ser Lys Thr Val Thr Pro

35 40 45

Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala

50 55 60

Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu

65 70 75 80

Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Ile Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu

85 90 95

Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Gly Ser Gly

100 105 110

Ser Trp Gln Leu Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser

115 120 125

Glu Asn Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys

130 135 140

Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Met Thr Met Ser Phe His Tyr Ile

145 150 155 160

Ser Met Gly Asp Cys Thr Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met

165 170 175

Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Pro Thr Met Ser Ser

180 185 190

Gly Thr Ala Gln Pro Arg

195

<210> 8

<211> 189

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида ULBP6

<400> 8

Ala Ala Glu Pro His Ser Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys

1 5 10 15

Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu

20 25 30

Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val

35 40 45

Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln

50 55 60

Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Leu

65 70 75 80

Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln

85 90 95

Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser

100 105 110

Trp Gln Phe Ser Ile Asp Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu

115 120 125

Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu

130 135 140

Lys Trp Glu Asn Asp Lys Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile Ser

145 150 155 160

Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp

165 170 175

Ser Thr Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Pro Met Val

180 185

<210> 9

<211> 161

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Домен альфа1-альфа2 синтетического пептида OMCP

<400> 9

Ala Ala Ala Glu Pro His Lys Leu Ala Phe Asn Phe Asn Leu Glu Ile

1 5 10 15

Asn Gly Ser Asp Thr His Ser Thr Val Asp Val Tyr Leu Asp Asp Ser

20 25 30

Gln Ile Ile Thr Phe Asp Gly Lys Asp Ile Arg Pro Thr Ile Pro Phe

35 40 45

Met Ile Gly Asp Glu Ile Phe Leu Pro Phe Tyr Lys Asn Val Phe Ser

50 55 60

Glu Phe Phe Ser Leu Phe Arg Arg Val Pro Thr Ser Thr Pro Tyr Glu

65 70 75 80

Asp Leu Thr Tyr Phe Tyr Glu Cys Asp Tyr Thr Asp Asn Lys Ser Thr

85 90 95

Phe Asp Gln Phe Tyr Leu Tyr Asn Gly Glu Glu Tyr Thr Val Lys Thr

100 105 110

Gln Glu Ala Thr Asn Lys Asn Met Trp Leu Thr Thr Ser Glu Phe Arg

115 120 125

Leu Lys Lys Trp Phe Asp Gly Glu Asp Cys Ile Met His Leu Arg Ser

130 135 140

Leu Val Arg Lys Met Glu Asp Ser Lys Arg Arg Thr Val Pro Pro Met

145 150 155 160

Val

<210> 10

<211> 543

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 MICA

<400> 10

gagccccaca gtcttcgtta taacctcacg gtgctgtcct gggatggatc tgtgcagtca 60

gggtttctca ctgaggtaca tctggatggt cagcccttcc tgcgctgtga caggcagaaa 120

tgcagggcaa agccccaggg acagtgggca gaagatgtcc tgggaaataa gacatgggac 180

agagagacca gagacttgac agggaacgga aaggacctca ggatgaccct ggctcatatc 240

aaggaccaga aagaaggctt gcattccctc caggagatta gggtctgtga gatccatgaa 300

gacaacagca ccaggagctc ccagcatttc tactacgatg gggagctctt cctctcccaa 360

aacctggaga ctaaggaatg gacaatgccc cagtcctcca gagctcagac cttggccatg 420

aacgtcagga atttcttgaa ggaagatgcc atgaagacca agacacacta tcacgctatg 480

catgcagact gcctgcagga actacggcga tatctaaaat ccggcgtagt cctgaggaga 540

aca 543

<210> 11

<211> 561

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 ULBP1

<400> 11

gctgctgagc cccactgtct ctgctacgac tttattataa ctcctaagtc aagaccagag 60

cctcagtggt gcgaagtaca aggtttggtt gacgaaaggc ctttccttca ctacgattgt 120

gtgaaccata aggcaaaggc tttcgccagc ctgggtaaga aggtaaacgt tactaagacg 180

tgggaggagc agacggaaac cctccgtgat gtggttgact ttcttaaggg tcagctcctc 240

gatatccaag tggagaattt aatccctatc gaaccgctca ctctgcaggc cagaatgtca 300

tgcgaacatg aagcacacgg tcatggaaga ggtagttggc aatttttatt taacggtcaa 360

aaattcctgc tgttcgactc aaacaaccgc aaatggactg cgctgcaccc tggagctaag 420

aagatgactg aaaaatggga gaagaacaga gacgttacca tgttcttcca gaagatttcc 480

ctgggagatt gtaagatgtg gttagaggag ttcttaatgt actgggaaca gatgctggac 540

cccacaaaac cccccatggt g 561

<210> 12

<211> 567

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 ULBP2

<400> 12

gctgctgagc cccatagtct gtgttacgac atcacagtta ttcccaagtt caggcccgga 60

ccgcgctggt gtgccgtgca aggacaagtc gacgaaaaaa cctttcttca ttacgattgc 120

ggaaataaga ctgtaacgcc agtctctcct ttaggtaaga agttaaacgt cactacggcg 180

tggaaggcac aaaaccccgt cctgcgcgag gtcgtcgaca tcctgactga acaattgcgc 240

gacatccagc tcgagaatta cactccaaag gagcctctta ccctgcaggc tagaatgtct 300

tgcgagcaaa aggcagaggg ccactcctcc ggcagctggc agttcagttt cgacggacaa 360

atctttctgt tattcgattc agagaagaga atgtggacta cagttcaccc cggtgcccgt 420

aaaatgaagg agaagtggga aaacgacaaa gtggtggcga tgtcattcca ctatttctcg 480

atgggagact gcatcggttg gctggaagat ttcctcatgg gtatggactc cactttggag 540

ccatcggctg gtgccccccc catggtg 567

<210> 13

<211> 561

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 ULBP3

<400> 13

gctgctgagc cccacagctt gtggtacaac ttcaccatta tccacttgcc gagacatggc 60

cagcagtggt gcgaagtgca atcgcaagtc gaccaaaaaa acttcttatc atacgactgc 120

ggcagcgata aggtcttatc tatgggtcat ttggaggaac agctctacgc gaccgacgcc 180

tggggtaaac agctcgagat gctccgtgag gttggacaga ggctgagact ggaactggct 240

gacactgagc tggaagattt cacacctagt ggtccactca cattgcaagt acgcatgagc 300

tgcgagtgtg aggccgatgg atacattagg ggcagctggc agtttagctt cgacggaagg 360

aaattcctgc tcttcgacag taacaatagg aagtggactg ttgtgcatgc tggtgcgcgc 420

agaatgaagg aaaagtggga gaaagatagc ggcctgacga ccttcttcaa gatggtgtct 480

atgcgtgact gtaagagctg gctcagagat ttcctcatgc atcgcaagaa gaggttagaa 540

cctaccgctc cccccatggt g 561

<210> 14

<211> 561

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 ULBP4

<400> 14

gctgctgagc cccactctct ttgcttcaac ttcaccatta aatccctgag caggcctggt 60

cagccgtggt gtgaggcgca ggtctttctt aacaagaatc tcttcctcca atacaactct 120

gataacaaca tggtaaagcc actgggtctc ctgggtaaaa aagtctatgc tacgagcact 180

tggggagaac tcacccagac tcttggcgag gtaggaagag acctgcgcat gctcctctgc 240

gatataaagc cccaaattaa gaccagtgat ccgtccactt tacaagtcga aatgttctgc 300

caaagggagg ctgaacgctg caccggagcc tcttggcagt tcgcgaccaa tggcgaaaag 360

tccctcttgt tcgatgccat gaatatgacc tggaccgtga tcaatcatga ggcctctaag 420

atcaaggaga cgtggaaaaa ggaccgcggc cttgaaaagt actttaggaa gttgtctaaa 480

ggagactgcg accattggtt acgcgagttc ctcggccatt gggaagcgat gcccgagcca 540

acggttagcc cccccatggt g 561

<210> 15

<211> 567

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 ULBP6

<400> 15

gctgctgagc cccactcctt atgctatgat atcaccgtga ttccaaagtt ccgaccagga 60

ccccgatggt gcgccgtaca gggacaggtc gacgaaaaga cttttttaca ttacgactgc 120

ggtaacaaga cagtcacacc ggtaagtcct ttgggaaaaa agttaaacgt aaccactgct 180

tggaaggccc agaaccccgt ccttcgagaa gtagtggata ttttgactga acagctgctt 240

gacatccagc tggaaaacta cacacccaaa gagcccctga ctcttcaagc gcgtatgtcg 300

tgtgagcaaa aggccgaagg acacagctcc ggatcctggc agttcagtat cgacggtcag 360

accttcctcc tcttcgattc agaaaagcgc atgtggacta ctgtgcaccc cggcgctcgt 420

aagatgaagg aaaagtggga gaatgataag gacgttgcca tgagttttca ttacattagt 480

atgggagatt gcatcggttg gctggaagac ttcctgatgg gtatggatag tacccttgaa 540

cctagtgccg gagctccccc catggtg 567

<210> 16

<211> 483

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий домен альфа1-альфа2 OMCP

<400> 16

gctgctgctg agccccacaa gcttgcgttc aacttcaatc tggaaataaa cggttcagat 60

acccattcaa ccgtggacgt ttatttagac gattcgcaga taatcacctt tgacggcaag 120

gacatccgcc caactatccc gttcatgata ggtgacgaaa tcttccttcc tttttataag 180

aatgtgttct ctgagttctt cagtttgttc cgccgcgtcc ctacctcaac cccctacgaa 240

gacttgactt atttctatga atgcgactac accgacaaca aatctacatt cgatcaattc 300

tacctgtaca acggtgaaga gtacaccgtg aagactcaag aggctactaa caagaacatg 360

tggctgacca cttccgagtt cagactgaag aagtggttcg acggcgagga ctgtatcatg 420

caccttagaa gtttagtgag gaaaatggaa gatagcaaga gaagaacagt gccccccatg 480

gtg 483

<210> 17

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид природного эктодомена NKG2D

<400> 17

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 18

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152A

<400> 18

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 19

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y199A

<400> 19

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Ala Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 20

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152A/Y199A

<400> 20

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Ala Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 21

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y199F eNKG2D1

<400> 21

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 22

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152S eNKG2D2

<400> 22

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ser His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 23

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152T eNKG2D3

<400> 23

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Thr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 24

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152V eNKG2D4

<400> 24

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Val His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 25

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152A/Y199F eNKG2D5

<400> 25

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 26

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152L/Y199F eNKG2D6

<400> 26

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Leu His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 27

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152S/Y199F eNKG2D7

<400> 27

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ser His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 28

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152T/Y199F eNKG2D8

<400> 28

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Thr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 29

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152V/Y199F eNKG2D9

<400> 29

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Val His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 30

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y199D eNKG2D10

<400> 30

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Asp Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 31

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y199E eNKG2D11

<400> 31

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Glu Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 32

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152D/Y199D eNKG2D12

<400> 32

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Asp His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Asp Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 33

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152E/Y199E eNKG2D13

<400> 33

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Glu His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Glu Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 34

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152L eNKG2D14

<400> 34

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Leu His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 35

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид неприродного эктодомена NKG2D Y152F/Y199F eNKG2D15

<400> 35

Phe Leu Asn Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn

20 25 30

Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala

35 40 45

Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu

50 55 60

Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Phe His Trp Met Gly Leu

65 70 75 80

Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile

85 90 95

Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys

100 105 110

Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr

115 120 125

Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

130 135

<210> 36

<211> 23

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сигнальная последовательность синтетического пептида MHCI

<400> 36

Met Gly Leu Gly Pro Val Phe Leu Leu Leu Ala Gly Ile Phe Pro Phe

1 5 10 15

Ala Pro Pro Gly Ala Ala Ala

20

<210> 37

<211> 69

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий сигнальную

последовательность MHCI

<400> 37

atgggccttg gcccagtgtt tctgctgttg gcaggcattt tcccttttgc tccgcccggc 60

gccgcagcc 69

<210> 38

<211> 237

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc человеческого IgG1 синтетического пептида с линкером IEGR

<400> 38

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg

225 230 235

<210> 39

<211> 711

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc человеческого IgG1 с

линкером IEGR

<400> 39

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg c 711

<210> 40

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D

<400> 40

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 41

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152A

<400> 41

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 42

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-эктодомен

NKG2D Y199A

<400> 42

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Ala Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 43

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-эктодомен

NKG2D Y152A/Y199A

<400> 43

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Ala Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 44

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y199F

eNKG2D1

<400> 44

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 45

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152S

eNKG2D2

<400> 45

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 46

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152T

eNKG2D3

<400> 46

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Thr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 47

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152V

eNKG2D4

<400> 47

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Val His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 48

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152A/Y199F

eNKG2D5

<400> 48

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 49

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152L/Y199F

eNKG2D6

<400> 49

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Leu His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 50

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152S/Y199F

eNKG2D7

<400> 50

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ser His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 51

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152T/Y199F

eNKG2D8

<400> 51

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Thr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 52

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152V/Y199F

eNKG2D9

<400> 52

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Val His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 53

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y199D

eNKG2D10

<400> 53

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Asp Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 54

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y199E

eNKG2D11

<400> 54

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Glu Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 55

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152D/Y199D

eNKG2D12

<400> 55

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Asp His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Asp Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 56

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152E/Y199E

eNKG2D13

<400> 56

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Glu His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Glu Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 57

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152L

eNKG2D14

<400> 57

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Leu His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 58

<211> 376

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Гибрид Fc человеческого IgG1 синтетического пептида-NKG2D Y152F/Y199F

eNKG2D15

<400> 58

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Glu Gly Arg Phe Leu Asn

225 230 235 240

Ser Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys

245 250 255

Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln

260 265 270

Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met

275 280 285

Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp

290 295 300

Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Phe His Trp Met Gly Leu Val His Ile

305 310 315 320

Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro

325 330 335

Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr

340 345 350

Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

355 360 365

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

370 375

<210> 59

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1 NKG2D

<400> 59

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcatatcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 60

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152A

<400> 60

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagctcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 61

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc человеческого

IgG1- эктодомен NKG2D Y199A

<400> 61

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcataccatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgctata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 62

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc человеческого

IgG1- эктодомен-NKG2D Y152A/Y199A

<400> 62

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagctcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgctata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 63

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1 -NKG2D Y199F eNKG2D1

<400> 63

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcataccatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 64

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152S eNKG2D2

<400> 64

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcataccatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 65

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152T eNKG2D3

<400> 65

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcaactcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 66

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152V eNKG2D4

<400> 66

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagtgcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 67

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152A/Y199F eNKG2D5

<400> 67

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagctcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 68

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152L/Y199F eNKG2D6

<400> 68

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcactgcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 69

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152S/Y199F eNKG2D7

<400> 69

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcaagtcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 70

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152T/Y199F eNKG2D8

<400> 70

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcaactcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 71

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152V/Y199F eNKG2D9

<400> 71

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagtgcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 72

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y199D eNKG2D10

<400> 72

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcatatcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 73

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y199E eNKG2D11

<400> 73

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcataccatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgagata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 74

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152D/Y199D eNKG2D12

<400> 74

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagatcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 75

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152E/Y199E eNKG2D13

<400> 75

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcagagcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcgagata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 76

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152L eNKG2D14

<400> 76

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcactgcatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggctatata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 77

<211> 1128

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий гибрид Fc человеческого

IgG1-NKG2D Y152F/Y199F eNKG2D15

<400> 77

atggacccga aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gatgtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacaact cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cgggacgagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tggattccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaaga tcgaaggacg cttcttaaac 720

tcattattca accaagaagt tcaaattccc ttgaccgaaa gttactgtgg cccatgtcct 780

aaaaactgga tatgttacaa aaataactgc taccaatttt ttgatgagag taaaaactgg 840

tatgagagcc aggcttcttg tatgtctcaa aatgccagcc ttctgaaagt atacagcaaa 900

gaggaccagg atttacttaa actggtgaag tcattccatt ggatgggact agtacacatt 960

ccaacaaatg gatcttggca gtgggaagat ggctccattc tctcacccaa cctactaaca 1020

ataattgaaa tgcagaaggg agactgtgca ctctatgcct cgagctttaa aggcttcata 1080

gaaaactgtt caactccaaa tacatacatc tgcatgcaaa ggactgtg 1128

<210> 78

<211> 181

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид MICwed альфа1-альфа2

<400> 78

Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val Leu Ser Trp Asp Gly

1 5 10 15

Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His Leu Asp Gly Gln Pro

20 25 30

Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln

35 40 45

Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp Asp Arg Glu Thr Arg

50 55 60

Asp Leu Thr Gly Trp Gly Lys Asp Leu Arg Met Thr Leu Ala His Ile

65 70 75 80

Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys

85 90 95

Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser Gln His Phe Tyr Tyr

100 105 110

Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Lys Glu Trp Thr

115 120 125

Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Arg Asn

130 135 140

Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Glu Thr Asp Thr His Tyr His Ala Met

145 150 155 160

His Ala Asp Cys Leu Gln Glu Leu Arg Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val

165 170 175

Val Leu Arg Arg Thr

180

<210> 79

<211> 543

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий MICwed альфа1-альфа2

<400> 79

gagcctcaca gcctccggta taatttgact gtactctctt gggatggctc cgtgcagtcc 60

ggctttctga ctgaagttca tctcgacggt caacctttcc tgcgctgcga ccgacaaaaa 120

tgccgcgcca agccccaagg gcagtgggcc gaagatgtac tgggaaacaa gacctgggac 180

cgggagacac gagacctgac aggctggggc aaggacttgc gcatgacact cgcccatatc 240

aaggaccaga aggaaggatt gcactctttg caagagattc gcgtgtgtga aatccacgag 300

gacaattcaa cgaggagctc ccagcacttc tattacgatg gagaactctt cttgtcacag 360

aacttggaaa ccaaggaatg gactatgcct cagagctctc gggcacagac tctcgctatg 420

aacgttagaa acttccttaa ggaggatgct atggagaccg atactcacta ccacgccatg 480

cacgccgact gcctccagga actgcggaga tatctgaagt ccggcgtggt tttgagaaga 540

acc 543

<210> 80

<211> 181

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид MIC25 альфа1-альфа2

<400> 80

Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val Leu Ser Trp Asp Gly

1 5 10 15

Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His Leu Asp Gly Gln Pro

20 25 30

Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln

35 40 45

Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp Asp Arg Glu Thr Arg

50 55 60

Asp Leu Thr Gly Trp Gly Lys Asp Leu Arg Met Thr Leu Ala His Ile

65 70 75 80

Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys

85 90 95

Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser Gln His Phe Tyr Tyr

100 105 110

Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Leu Glu Trp Thr

115 120 125

Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Arg Asn

130 135 140

Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Glu Thr Asp Thr His Tyr His Ala Met

145 150 155 160

Arg Ala Asp Cys Leu Ser Glu Leu Arg Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val

165 170 175

Val Leu Arg Arg Thr

180

<210> 81

<211> 543

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий MIC25 альфа1-альфа2

<400> 81

gagcctcaca gcctccggta taatttgact gtactctctt gggatggctc cgtgcagtcc 60

ggctttctga ctgaagttca tctcgacggt caacctttcc tgcgctgcga ccgacaaaaa 120

tgccgcgcca agccccaagg gcagtgggcc gaagatgtac tgggaaacaa gacctgggac 180

cgggagacac gagacctgac aggctggggc aaggacttgc gcatgacact cgcccatatc 240

aaggaccaga aggaaggatt gcactctttg caagagattc gcgtgtgtga aatccacgag 300

gacaattcaa cgaggagctc ccagcacttc tattacgatg gagaactctt cttgtcacag 360

aacttggaaa ccctcgaatg gactatgcct cagagctctc gggcacagac tctcgctatg 420

aacgttagaa acttccttaa ggaggatgct atggagaccg atactcacta ccacgccatg 480

cgcgccgact gcctctctga actgcggaga tatctgaagt ccggcgtggt tttgagaaga 540

acc 543

<210> 82

<211> 330

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь человеческого IgG1 синтетического пептида

CH1-CH2-CH3 D265A/N297A

<400> 82

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 83

<211> 990

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь человеческого IgG1 CH1-CH2-CH3 D265A/N297A

<400> 83

gcgtcgacca agggcccgtc agtgttcccg ctggccccgt catccaagtc cacgtctggg 60

ggcacagcag ccctgggatg cttggtcaag gactacttcc ccgagcccgt gactgtgtcc 120

tggaactccg gagcactgac ctccggagtg cacacctttc ccgcggtgct gcagtcctcc 180

ggactgtact ccctgtcgtc ggtcgtgacc gtgccgagct cctcgctcgg aacccagacc 240

tacatctgca acgtgaacca caagccctcg aacaccaaag tggacaagaa ggtcgagccc 300

aaaagctgcg acaagactca cacttgtccg ccgtgccccg cccccgaact gctgggtggc 360

ccctccgtgt tcctgttccc gcctaagcct aaggacaccc ttatgatcag ccgcacccct 420

gaagtgacct gtgtcgtcgt ggcagtgtca cacgaggacc cggaggtcaa gttcaattgg 480

tacgtggacg gcgtggaagt gcataacgca aagaccaagc ctcgggagga acagtacgcc 540

tcgacctacc gcgtggtgtc agtcctgact gtgctgcacc aggactggct gaacgggaag 600

gagtacaagt gcaaagtgtc gaacaaggcc ctgccggctc caattgaaaa gaccatcagc 660

aaggccaagg gccagccaag ggaaccacag gtgtacaccc tccctccttc ccgggacgag 720

ctgaccaaaa accaagtgtc cctgacttgc cttgtgaagg ggttctaccc ttctgacatt 780

gccgtcgaat gggaatcgaa cggacagcct gaaaacaact ataagactac cccgcccgtg 840

ctggattccg acggaagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcgagatgg 900

cagcagggaa atgtgttcag ctgctccgtg atgcatgagg cgctgcacaa ccactacacc 960

cagaagtcac tgagcctctc ccccggaaag 990

<210> 84

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Человеческая легкая цепь каппа синтетического пептида

<400> 84

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 85

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий человеческую легкую цепь каппа

<400> 85

agaaccgtgg ccgccccgag cgtgttcatt ttccctccct ccgacgagca gttgaaatcg 60

ggcaccgcta gcgtggtctg ccttctcaac aatttctatc cacgggaagc caaagtgcag 120

tggaaggtcg acaacgcgct ccaatccggg aactcacagg aatccgtgac tgagcaggat 180

tccaaggact cgacctactc cctgtcatcc acgctgaccc tgagcaaggc agactacgag 240

aagcacaagg tctacgcctg cgaagtgaca caccagggac tgtccagccc cgtgaccaag 300

agcttcaaca gaggagaatg c 321

<210> 86

<211> 120

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH трастузумаба синтетического пептида

<400> 86

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 87

<211> 360

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий VH транстузумаба

<400> 87

gaagtccaat tggtcgaatc aggcggtgga ctcgtgcaac ctggaggttc gttacgctta 60

tcatgtgctg caagtggatt taatattaaa gatacctaca tccactgggt acgtcaagct 120

cccggcaagg gtctcgagtg ggtcgcacgc atttacccca ccaacggata cacgcgctac 180

gccgattcag tgaagggacg tttcacaatc tctgctgata ctagcaaaaa taccgcatac 240

ctccagatga actctcttag ggccgaggac acagctgtgt actactgtag ccgttgggga 300

ggagacggtt tttacgcaat ggattactgg ggccaaggaa ccctggtcac agtttcatcg 360

<210> 88

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL трастузумаба синтетического пептида

<400> 88

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 89

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий VL трастузумаба

<400> 89

gatatccaaa tgactcaatc accatcttca ctctccgcga gcgtgggtga tcgggtcacc 60

atcacatgta gggcgagcca agatgtgaat accgccgtcg cgtggtatca acaaaagccg 120

ggaaaagcac caaaactgct tatatactct gcatccttcc tgtactctgg ggtgccaagc 180

cggttctccg gtagtagatc tggtactgac tttacactca ctatcagcag tctgcaacct 240

gaggactttg cgacatacta ttgccagcag cactacacaa ccccacctac atttggtcag 300

gggacaaagg tggagatcaa g 321

<210> 90

<211> 121

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH ритуксимаба синтетического пептида

<400> 90

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala

115 120

<210> 91

<211> 363

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий VH ритуксимаба

<400> 91

caagttcagc ttcagcagcc gggggctgag ttggtgaaac ccggggccag tgtgaagatg 60

agctgtaaag cgagcggcta caccttcact tcttataata tgcattgggt taagcaaacg 120

ccaggaaggg ggctggagtg gatcggcgct atttacccag gtaacggtga cacatcatat 180

aaccaaaagt ttaagggaaa ggcaaccctc acagcggaca agagtagctc aaccgcatac 240

atgcaactgt caagccttac ctccgaagac agcgcagtgt actactgcgc cagaagcacc 300

tactatgggg gtgattggta cttcaacgtc tggggggctg gcaccacagt gactgtaagc 360

gca 363

<210> 92

<211> 106

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL ритуксимаба синтетического пептида

<400> 92

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 93

<211> 318

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий VL ритуксимаба

<400> 93

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaag 318

<210> 94

<211> 450

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь трастузумаба синтетического пептида

<400> 94

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Lys

450

<210> 95

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь трастузумаба

<400> 95

gaagtccaat tggtcgaatc aggcggtgga ctcgtgcaac ctggaggttc gttacgctta 60

tcatgtgctg caagtggatt taatattaaa gatacctaca tccactgggt acgtcaagct 120

cccggcaagg gtctcgagtg ggtcgcacgc atttacccca ccaacggata cacgcgctac 180

gccgattcag tgaagggacg tttcacaatc tctgctgata ctagcaaaaa taccgcatac 240

ctccagatga actctcttag ggccgaggac acagctgtgt actactgtag ccgttgggga 300

ggagacggtt tttacgcaat ggattactgg ggccaaggaa ccctggtcac agtttcatcg 360

gcgtcgacca agggcccgtc agtgttcccg ctggccccgt catccaagtc cacgtctggg 420

ggcacagcag ccctgggatg cttggtcaag gactacttcc ccgagcccgt gactgtgtcc 480

tggaactccg gagcactgac ctccggagtg cacacctttc ccgcggtgct gcagtcctcc 540

ggactgtact ccctgtcgtc ggtcgtgacc gtgccgagct cctcgctcgg aacccagacc 600

tacatctgca acgtgaacca caagccctcg aacaccaaag tggacaagaa ggtcgagccc 660

aaaagctgcg acaagactca cacttgtccg ccgtgccccg cccccgaact gctgggtggc 720

ccctccgtgt tcctgttccc gcctaagcct aaggacaccc ttatgatcag ccgcacccct 780

gaagtgacct gtgtcgtcgt ggatgtgtca cacgaggacc cggaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggacg gcgtggaagt gcataacgca aagaccaagc ctcgggagga acagtacaac 900

tcgacctacc gcgtggtgtc agtcctgact gtgctgcacc aggactggct gaacgggaag 960

gagtacaagt gcaaagtgtc gaacaaggcc ctgccggctc caattgaaaa gaccatcagc 1020

aaggccaagg gccagccaag ggaaccacag gtgtacaccc tccctccttc ccgggacgag 1080

ctgaccaaaa accaagtgtc cctgacttgc cttgtgaagg ggttctaccc ttctgacatt 1140

gccgtcgaat gggaatcgaa cggacagcct gaaaacaact ataagactac cccgcccgtg 1200

ctggattccg acggaagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcgagatgg 1260

cagcagggaa atgtgttcag ctgctccgtg atgcatgagg cgctgcacaa ccactacacc 1320

cagaagtcac tgagcctctc ccccggaaag 1350

<210> 96

<211> 213

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь трастузумаба синтетического пептида

<400> 96

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 97

<211> 642

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий легкую цепь трастузумаба

<400> 97

gatatccaaa tgactcaatc accatcttca ctctccgcga gcgtgggtga tcgggtcacc 60

atcacatgta gggcgagcca agatgtgaat accgccgtcg cgtggtatca acaaaagccg 120

ggaaaagcac caaaactgct tatatactct gcatccttcc tgtactctgg ggtgccaagc 180

cggttctccg gtagtagatc tggtactgac tttacactca ctatcagcag tctgcaacct 240

gaggactttg cgacatacta ttgccagcag cactacacaa ccccacctac atttggtcag 300

gggacaaagg tggagatcaa gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgct ag 642

<210> 98

<211> 451

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь ритуксимаба синтетического пептида

<400> 98

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 99

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь ритуксимаба

<400> 99

caagttcagc ttcagcagcc gggggctgag ttggtgaaac ccggggccag tgtgaagatg 60

agctgtaaag cgagcggcta caccttcact tcttataata tgcattgggt taagcaaacg 120

ccaggaaggg ggctggagtg gatcggcgct atttacccag gtaacggtga cacatcatat 180

aaccaaaagt ttaagggaaa ggcaaccctc acagcggaca agagtagctc aaccgcatac 240

atgcaactgt caagccttac ctccgaagac agcgcagtgt actactgcgc cagaagcacc 300

tactatgggg gtgattggta cttcaacgtc tggggggctg gcaccacagt gactgtaagc 360

gcagcgtcga ccaagggccc gtcagtgttc ccgctggccc cgtcatccaa gtccacgtct 420

gggggcacag cagccctggg atgcttggtc aaggactact tccccgagcc cgtgactgtg 480

tcctggaact ccggagcact gacctccgga gtgcacacct ttcccgcggt gctgcagtcc 540

tccggactgt actccctgtc gtcggtcgtg accgtgccga gctcctcgct cggaacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tcgaacacca aagtggacaa gaaggtcgag 660

cccaaaagct gcgacaagac tcacacttgt ccgccgtgcc ccgcccccga actgctgggt 720

ggcccctccg tgttcctgtt cccgcctaag cctaaggaca cccttatgat cagccgcacc 780

cctgaagtga cctgtgtcgt cgtggatgtg tcacacgagg acccggaggt caagttcaat 840

tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gcaaagacca agcctcggga ggaacagtac 900

aactcgacct accgcgtggt gtcagtcctg actgtgctgc accaggactg gctgaacggg 960

aaggagtaca agtgcaaagt gtcgaacaag gccctgccgg ctccaattga aaagaccatc 1020

agcaaggcca agggccagcc aagggaacca caggtgtaca ccctccctcc ttcccgggac 1080

gagctgacca aaaaccaagt gtccctgact tgccttgtga aggggttcta cccttctgac 1140

attgccgtcg aatgggaatc gaacggacag cctgaaaaca actataagac taccccgccc 1200

gtgctggatt ccgacggaag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagtcgaga 1260

tggcagcagg gaaatgtgtt cagctgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac 1320

acccagaagt cactgagcct ctcccccgga aag 1353

<210> 100

<211> 212

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь ритуксимаба синтетического пептида

<400> 100

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Val Ala Ala Pro Ser

100 105 110

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

115 120 125

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

130 135 140

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

165 170 175

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

180 185 190

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

195 200 205

Arg Gly Glu Cys

210

<210> 101

<211> 639

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий легкую цепь ритуксимаба

<400> 101

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagac cgtggccgcc ccgagcgtgt tcattttccc tccctccgac 360

gagcagttga aatcgggcac cgctagcgtg gtctgccttc tcaacaattt ctatccacgg 420

gaagccaaag tgcagtggaa ggtcgacaac gcgctccaat ccgggaactc acaggaatcc 480

gtgactgagc aggattccaa ggactcgacc tactccctgt catccacgct gaccctgagc 540

aaggcagact acgagaagca caaggtctac gcctgcgaag tgacacacca gggactgtcc 600

agccccgtga ccaagagctt caacagagga gaatgctag 639

<210> 102

<211> 634

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Трастузумаб синтетического пептида HC_MICwed

<400> 102

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val

450 455 460

Leu Ser Trp Asp Gly Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His

465 470 475 480

Leu Asp Gly Gln Pro Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala

485 490 495

Lys Pro Gln Gly Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp

500 505 510

Asp Arg Glu Thr Arg Asp Leu Thr Gly Trp Gly Lys Asp Leu Arg Met

515 520 525

Thr Leu Ala His Ile Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln

530 535 540

Glu Ile Arg Val Cys Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser

545 550 555 560

Gln His Phe Tyr Tyr Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu

565 570 575

Thr Lys Glu Trp Thr Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala

580 585 590

Met Asn Val Arg Asn Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Glu Thr Asp Thr

595 600 605

His Tyr His Ala Met His Ala Asp Cys Leu Gln Glu Leu Arg Arg Tyr

610 615 620

Leu Lys Ser Gly Val Val Leu Arg Arg Thr

625 630

<210> 103

<211> 1902

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий трастузумаб HC_MICwed

<400> 103

gaagtccaat tggtcgaatc aggcggtgga ctcgtgcaac ctggaggttc gttacgctta 60

tcatgtgctg caagtggatt taatattaaa gatacctaca tccactgggt acgtcaagct 120

cccggcaagg gtctcgagtg ggtcgcacgc atttacccca ccaacggata cacgcgctac 180

gccgattcag tgaagggacg tttcacaatc tctgctgata ctagcaaaaa taccgcatac 240

ctccagatga actctcttag ggccgaggac acagctgtgt actactgtag ccgttgggga 300

ggagacggtt tttacgcaat ggattactgg ggccaaggaa ccctggtcac agtttcatcg 360

gcgtcgacca agggcccgtc agtgttcccg ctggccccgt catccaagtc cacgtctggg 420

ggcacagcag ccctgggatg cttggtcaag gactacttcc ccgagcccgt gactgtgtcc 480

tggaactccg gagcactgac ctccggagtg cacacctttc ccgcggtgct gcagtcctcc 540

ggactgtact ccctgtcgtc ggtcgtgacc gtgccgagct cctcgctcgg aacccagacc 600

tacatctgca acgtgaacca caagccctcg aacaccaaag tggacaagaa ggtcgagccc 660

aaaagctgcg acaagactca cacttgtccg ccgtgccccg cccccgaact gctgggtggc 720

ccctccgtgt tcctgttccc gcctaagcct aaggacaccc ttatgatcag ccgcacccct 780

gaagtgacct gtgtcgtcgt ggcagtgtca cacgaggacc cggaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggacg gcgtggaagt gcataacgca aagaccaagc ctcgggagga acagtacgcc 900

tcgacctacc gcgtggtgtc agtcctgact gtgctgcacc aggactggct gaacgggaag 960

gagtacaagt gcaaagtgtc gaacaaggcc ctgccggctc caattgaaaa gaccatcagc 1020

aaggccaagg gccagccaag ggaaccacag gtgtacaccc tccctccttc ccgggacgag 1080

ctgaccaaaa accaagtgtc cctgacttgc cttgtgaagg ggttctaccc ttctgacatt 1140

gccgtcgaat gggaatcgaa cggacagcct gaaaacaact ataagactac cccgcccgtg 1200

ctggattccg acggaagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcgagatgg 1260

cagcagggaa atgtgttcag ctgctccgtg atgcatgagg cgctgcacaa ccactacacc 1320

cagaagtcac tgagcctctc ccccggagga ggtggcagcg agcctcacag cctccggtat 1380

aatttgactg tactctcttg ggatggctcc gtgcagtccg gctttctgac tgaagttcat 1440

ctcgacggtc aacctttcct gcgctgcgac cgacaaaaat gccgcgccaa gccccaaggg 1500

cagtgggccg aagatgtact gggaaacaag acctgggacc gggagacacg agacctgaca 1560

ggctggggca aggacttgcg catgacactc gcccatatca aggaccagaa ggaaggattg 1620

cactctttgc aagagattcg cgtgtgtgaa atccacgagg acaattcaac gaggagctcc 1680

cagcacttct attacgatgg agaactcttc ttgtcacaga acttggaaac caaggaatgg 1740

actatgcctc agagctctcg ggcacagact ctcgctatga acgttagaaa cttccttaag 1800

gaggatgcta tggagaccga tactcactac cacgccatgc acgccgactg cctccaggaa 1860

ctgcggagat atctgaagtc cggcgtggtt ttgagaagaa cc 1902

<210> 104

<211> 634

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Трастузумаб синтетического пептида HC_MIC25

<400> 104

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu

260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg

290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445

Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Thr Val

450 455 460

Leu Ser Trp Asp Gly Ser Val Gln Ser Gly Phe Leu Thr Glu Val His

465 470 475 480

Leu Asp Gly Gln Pro Phe Leu Arg Cys Asp Arg Gln Lys Cys Arg Ala

485 490 495

Lys Pro Gln Gly Gln Trp Ala Glu Asp Val Leu Gly Asn Lys Thr Trp

500 505 510

Asp Arg Glu Thr Arg Asp Leu Thr Gly Trp Gly Lys Asp Leu Arg Met

515 520 525

Thr Leu Ala His Ile Lys Asp Gln Lys Glu Gly Leu His Ser Leu Gln

530 535 540

Glu Ile Arg Val Cys Glu Ile His Glu Asp Asn Ser Thr Arg Ser Ser

545 550 555 560

Gln His Phe Tyr Tyr Asp Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu

565 570 575

Thr Leu Glu Trp Thr Met Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala

580 585 590

Met Asn Val Arg Asn Phe Leu Lys Glu Asp Ala Met Glu Thr Asp Thr

595 600 605

His Tyr His Ala Met Arg Ala Asp Cys Leu Ser Glu Leu Arg Arg Tyr

610 615 620

Leu Lys Ser Gly Val Val Leu Arg Arg Thr

625 630

<210> 105

<211> 1902

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий трастузумаб HC_MIC25

<400> 105

gaagtccaat tggtcgaatc aggcggtgga ctcgtgcaac ctggaggttc gttacgctta 60

tcatgtgctg caagtggatt taatattaaa gatacctaca tccactgggt acgtcaagct 120

cccggcaagg gtctcgagtg ggtcgcacgc atttacccca ccaacggata cacgcgctac 180

gccgattcag tgaagggacg tttcacaatc tctgctgata ctagcaaaaa taccgcatac 240

ctccagatga actctcttag ggccgaggac acagctgtgt actactgtag ccgttgggga 300

ggagacggtt tttacgcaat ggattactgg ggccaaggaa ccctggtcac agtttcatcg 360

gcgtcgacca agggcccgtc agtgttcccg ctggccccgt catccaagtc cacgtctggg 420

ggcacagcag ccctgggatg cttggtcaag gactacttcc ccgagcccgt gactgtgtcc 480

tggaactccg gagcactgac ctccggagtg cacacctttc ccgcggtgct gcagtcctcc 540

ggactgtact ccctgtcgtc ggtcgtgacc gtgccgagct cctcgctcgg aacccagacc 600

tacatctgca acgtgaacca caagccctcg aacaccaaag tggacaagaa ggtcgagccc 660

aaaagctgcg acaagactca cacttgtccg ccgtgccccg cccccgaact gctgggtggc 720

ccctccgtgt tcctgttccc gcctaagcct aaggacaccc ttatgatcag ccgcacccct 780

gaagtgacct gtgtcgtcgt ggcagtgtca cacgaggacc cggaggtcaa gttcaattgg 840

tacgtggacg gcgtggaagt gcataacgca aagaccaagc ctcgggagga acagtacgcc 900

tcgacctacc gcgtggtgtc agtcctgact gtgctgcacc aggactggct gaacgggaag 960

gagtacaagt gcaaagtgtc gaacaaggcc ctgccggctc caattgaaaa gaccatcagc 1020

aaggccaagg gccagccaag ggaaccacag gtgtacaccc tccctccttc ccgggacgag 1080

ctgaccaaaa accaagtgtc cctgacttgc cttgtgaagg ggttctaccc ttctgacatt 1140

gccgtcgaat gggaatcgaa cggacagcct gaaaacaact ataagactac cccgcccgtg 1200

ctggattccg acggaagctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcgagatgg 1260

cagcagggaa atgtgttcag ctgctccgtg atgcatgagg cgctgcacaa ccactacacc 1320

cagaagtcac tgagcctctc ccccggagga ggtggcagcg agcctcacag cctccggtat 1380

aatttgactg tactctcttg ggatggctcc gtgcagtccg gctttctgac tgaagttcat 1440

ctcgacggtc aacctttcct gcgctgcgac cgacaaaaat gccgcgccaa gccccaaggg 1500

cagtgggccg aagatgtact gggaaacaag acctgggacc gggagacacg agacctgaca 1560

ggctggggca aggacttgcg catgacactc gcccatatca aggaccagaa ggaaggattg 1620

cactctttgc aagagattcg cgtgtgtgaa atccacgagg acaattcaac gaggagctcc 1680

cagcacttct attacgatgg agaactcttc ttgtcacaga acttggaaac cctcgaatgg 1740

actatgcctc agagctctcg ggcacagact ctcgctatga acgttagaaa cttccttaag 1800

gaggatgcta tggagaccga tactcactac cacgccatgc gcgccgactg cctctctgaa 1860

ctgcggagat atctgaagtc cggcgtggtt ttgagaagaa cc 1902

<210> 106

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.wt

<400> 106

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Arg Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 107

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.wt

<400> 107

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgcgcgaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgatgtc attccactat 1140

ttctcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 108

<211> 187

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант синтетического пептида ULPB2 альфа1-альфа2 R80W

<400> 108

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Ala Gly Ala Pro Pro Met Val

180 185

<210> 109

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULPB2

альфа1-альфа2 R80W

<400> 109

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgatgtcat tccactattt ctcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 110

<211> 513

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий библиотеку NNK варианта

ULPB2 альфа1-альфа2

R80W

<220>

<221> misc_feature

<222> (457)..(458)

<223> n означает a, c, g, или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (460)..(461)

<223> n означает a, c, g, или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (463)..(464)

<223> n означает a, c, g, или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (466)..(467)

<223> n означает a, c, g, или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (469)..(470)

<223> n означает a, c, g, или t

<400> 110

gagccccata gcctcagcta tgacattacg gtgattccca aatttcgccc aggaccacgt 60

tggtgcgccg tccagggtca ggtagatgaa aagactttcc tgcattatga ttgcggcaat 120

aaaaccgtga cgccggtatc gccgttaggc aaaaaattga atgtcacgac agcgtggaaa 180

gcacagaacc cggtgttgcg cgaggtagtc gatattttga cggaacaact ctgggacatt 240

cagctcgaga attacacccc aaaagaaccg ctgacgctgc aagcgcgtat gtcgtgcgaa 300

caaaaagcag aaggtcactc tagcgggagt tggcagtttt ccttcgatgg gcagattttt 360

ctgctgtttg attcggagaa acgcatgtgg actacagtcc acccgggtgc ccggaaaatg 420

aaagagaagt gggagaatga taaagtggtg gccactnnkn nknnknnknn ktccatgggc 480

gattgcattg gctggttaga ggattttctc atg 513

<210> 111

<211> 180

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант ULBP2.C синтетического пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 111

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Ile Leu Trp Gln Thr Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser

180

<210> 112

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULBP2.C

пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 112

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactattc tgtggcagac ttcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 113

<211> 180

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант ULBP2.R синтетического пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 113

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Leu Trp Gly Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser

180

<210> 114

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULBP2.R

пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 114

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactttgt tgtgggggtg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 115

<211> 180

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант ULBP2.AA синтетического пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 115

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Met Phe Trp Ser Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser

180

<210> 116

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULBP2.AA

пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 116

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactatgt tttggagttg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 117

<211> 180

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант ULBP2.AB синтетического пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 117

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Met Trp Gln Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser

180

<210> 118

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULBP2.AB

пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 118

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactctta tgtggcagtg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 119

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.C

<400> 119

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Ile Leu Trp Gln Thr Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 120

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.C

<400> 120

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgtgggaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgactat tctgtggcag 1140

acttcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 121

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.R

<400> 121

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Leu Trp Gly Trp Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 122

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.R

<400> 122

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgtgggaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgacttt gttgtggggg 1140

tggtcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 123

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.AA

<400> 123

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Met Phe Trp Ser Trp Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 124

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.AA

<400> 124

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgtgggaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgactat gttttggagt 1140

tggtcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 125

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.AB

<400> 125

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Met Trp Gln Trp Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 126

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.AB

<400> 126

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgtgggaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgactct tatgtggcag 1140

tggtcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 127

<211> 180

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Вариант ULBP2.S3 синтетического пептида ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 127

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Lys Leu Tyr Leu Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser

180

<210> 128

<211> 540

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий вариант ULBP2.S3 пептида

ULBP2 альфа1-альфа2

<400> 128

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactaagc tttatctttg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

<210> 129

<211> 404

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида LC_ULBP2.S3

<400> 129

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

225 230 235 240

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

245 250 255

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

260 265 270

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

275 280 285

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

290 295 300

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

305 310 315 320

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

325 330 335

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

340 345 350

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

355 360 365

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Lys Leu Tyr Leu Trp Ser Met Gly

370 375 380

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

385 390 395 400

Leu Glu Pro Ser

<210> 130

<211> 1212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб LC_ULBP2.S3

<400> 130

cagatcgtgt tgtcccaatc acccgcaatt ctctctgcga gcccagggga gaaggtgacc 60

atgacttgcc gcgcttcaag ttccgtatcc tacattcact ggttccagca gaagcccgga 120

agttccccta agccctggat ctatgctaca tccaatctgg caagcggtgt tcccgttaga 180

ttttccggaa gcgggtctgg aaccagttac agtctgacta tttccagggt cgaggccgaa 240

gatgcggcta cttattattg ccaacagtgg acctctaacc cacccacatt cggcggcggc 300

actaagttgg aaattaagcg gaccgtggcc gccccgagcg tgttcatttt ccctccctcc 360

gacgagcagt tgaaatcggg caccgctagc gtggtctgcc ttctcaacaa tttctatcca 420

cgggaagcca aagtgcagtg gaaggtcgac aacgcgctcc aatccgggaa ctcacaggaa 480

tccgtgactg agcaggattc caaggactcg acctactccc tgtcatccac gctgaccctg 540

agcaaggcag actacgagaa gcacaaggtc tacgcctgcg aagtgacaca ccagggactg 600

tccagccccg tgaccaagag cttcaacaga ggagaatgcg cacctacctc aagctctgga 660

ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc tacgacatca cagttattcc caagttcagg 720

cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac 780

gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact 840

acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa 900

ttgtgggaca tccagctcga gaattacact ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga 960

atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac 1020

ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt 1080

gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac gacaaagtgg tggcgactaa gctttatctt 1140

tggtcgatgg gagactgcat cggttggctg gaagatttcc tcatgggtat ggactccact 1200

ttggagccat cg 1212

<210> 131

<211> 634

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Ритуксимаб синтетического пептида HC_ULBP2.R80W

<400> 131

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr

450 455 460

Val Ile Pro Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly

465 470 475 480

Gln Val Asp Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr

485 490 495

Val Thr Pro Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala

500 505 510

Trp Lys Ala Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr

515 520 525

Glu Gln Leu Trp Asp Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro

530 535 540

Leu Thr Leu Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His

545 550 555 560

Ser Ser Gly Ser Trp Gln Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu

565 570 575

Phe Asp Ser Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg

580 585 590

Lys Met Lys Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe

595 600 605

His Tyr Phe Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu

610 615 620

Met Gly Met Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser

625 630

<210> 132

<211> 1902

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ритуксимаб HC_ULBP2.R80W

<400> 132

caagttcagc ttcagcagcc gggggctgag ttggtgaaac ccggggccag tgtgaagatg 60

agctgtaaag cgagcggcta caccttcact tcttataata tgcattgggt taagcaaacg 120

ccaggaaggg ggctggagtg gatcggcgct atttacccag gtaacggtga cacatcatat 180

aaccaaaagt ttaagggaaa ggcaaccctc acagcggaca agagtagctc aaccgcatac 240

atgcaactgt caagccttac ctccgaagac agcgcagtgt actactgcgc cagaagcacc 300

tactatgggg gtgattggta cttcaacgtc tggggggctg gcaccacagt gactgtaagc 360

gcagcgtcga ccaagggccc gtcagtgttc ccgctggccc cgtcatccaa gtccacgtct 420

gggggcacag cagccctggg atgcttggtc aaggactact tccccgagcc cgtgactgtg 480

tcctggaact ccggagcact gacctccgga gtgcacacct ttcccgcggt gctgcagtcc 540

tccggactgt actccctgtc gtcggtcgtg accgtgccga gctcctcgct cggaacccag 600

acctacatct gcaacgtgaa ccacaagccc tcgaacacca aagtggacaa gaaggtcgag 660

cccaaaagct gcgacaagac tcacacttgt ccgccgtgcc ccgcccccga actgctgggt 720

ggcccctccg tgttcctgtt cccgcctaag cctaaggaca cccttatgat cagccgcacc 780

cctgaagtga cctgtgtcgt cgtggcagtg tcacacgagg acccggaggt caagttcaat 840

tggtacgtgg acggcgtgga agtgcataac gcaaagacca agcctcggga ggaacagtac 900

gcctcgacct accgcgtggt gtcagtcctg actgtgctgc accaggactg gctgaacggg 960

aaggagtaca agtgcaaagt gtcgaacaag gccctgccgg ctccaattga aaagaccatc 1020

agcaaggcca agggccagcc aagggaacca caggtgtaca ccctccctcc ttcccgggac 1080

gagctgacca aaaaccaagt gtccctgact tgccttgtga aggggttcta cccttctgac 1140

attgccgtcg aatgggaatc gaacggacag cctgaaaaca actataagac taccccgccc 1200

gtgctggatt ccgacggaag cttcttcctg tactccaagc tgaccgtgga caagtcgaga 1260

tggcagcagg gaaatgtgtt cagctgctcc gtgatgcatg aggcgctgca caaccactac 1320

acccagaagt cactgagcct ctcccccgga ggaggtggca gcgagcccca tagtctgagc 1380

tacgacatca cagttattcc caagttcagg cccggaccgc gctggtgtgc cgtgcaagga 1440

caagtcgacg aaaaaacctt tcttcattac gattgcggaa ataagactgt aacgccagtc 1500

tctcctttag gtaagaagtt aaacgtcact acggcgtgga aggcacaaaa ccccgtcctg 1560

cgcgaggtcg tcgacatcct gactgaacaa ttgtgggaca tccagctcga gaattacact 1620

ccaaaggagc ctcttaccct gcaggctaga atgtcttgcg agcaaaaggc agagggccac 1680

tcctccggca gctggcagtt cagtttcgac ggacaaatct ttctgttatt cgattcagag 1740

aagagaatgt ggactacagt tcaccccggt gcccgtaaaa tgaaggagaa gtgggaaaac 1800

gacaaagtgg tggcgatgtc attccactat ttctcgatgg gagactgcat cggttggctg 1860

gaagatttcc tcatgggtat ggactccact ttggagccat cg 1902

<210> 133

<211> 405

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Трастузумаб синтетического пептида LC_ULBP2.R

<400> 133

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe

225 230 235 240

Arg Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys

245 250 255

Thr Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser

260 265 270

Pro Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn

275 280 285

Pro Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp

290 295 300

Ile Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala

305 310 315 320

Arg Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp

325 330 335

Gln Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys

340 345 350

Arg Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys

355 360 365

Trp Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Leu Trp Gly Trp Ser Met

370 375 380

Gly Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser

385 390 395 400

Thr Leu Glu Pro Ser

405

<210> 134

<211> 1215

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий трастузумаб LC_ULBP2.R

<400> 134

gatatccaaa tgactcaatc accatcttca ctctccgcga gcgtgggtga tcgggtcacc 60

atcacatgta gggcgagcca agatgtgaat accgccgtcg cgtggtatca acaaaagccg 120

ggaaaagcac caaaactgct tatatactct gcatccttcc tgtactctgg ggtgccaagc 180

cggttctccg gtagtagatc tggtactgac tttacactca ctatcagcag tctgcaacct 240

gaggactttg cgacatacta ttgccagcag cactacacaa ccccacctac atttggtcag 300

gggacaaagg tggagatcaa gcggaccgtg gccgccccga gcgtgttcat tttccctccc 360

tccgacgagc agttgaaatc gggcaccgct agcgtggtct gccttctcaa caatttctat 420

ccacgggaag ccaaagtgca gtggaaggtc gacaacgcgc tccaatccgg gaactcacag 480

gaatccgtga ctgagcagga ttccaaggac tcgacctact ccctgtcatc cacgctgacc 540

ctgagcaagg cagactacga gaagcacaag gtctacgcct gcgaagtgac acaccaggga 600

ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac agaggagaat gcgcacctac ctcaagctct 660

ggaggaggtg gcagcgagcc ccatagtctg agctacgaca tcacagttat tcccaagttc 720

aggcccggac cgcgctggtg tgccgtgcaa ggacaagtcg acgaaaaaac ctttcttcat 780

tacgattgcg gaaataagac tgtaacgcca gtctctcctt taggtaagaa gttaaacgtc 840

actacggcgt ggaaggcaca aaaccccgtc ctgcgcgagg tcgtcgacat cctgactgaa 900

caattgtggg acatccagct cgagaattac actccaaagg agcctcttac cctgcaggct 960

agaatgtctt gcgagcaaaa ggcagagggc cactcctccg gcagctggca gttcagtttc 1020

gacggacaaa tctttctgtt attcgattca gagaagagaa tgtggactac agttcacccc 1080

ggtgcccgta aaatgaagga gaagtgggaa aacgacaaag tggtggcgac tttgttgtgg 1140

gggtggtcga tgggagactg catcggttgg ctggaagatt tcctcatggg tatggactcc 1200

actttggagc catcg 1215

<210> 135

<211> 156

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид, эктодомен NKG2D.wt

<400> 135

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

145 150 155

<210> 136

<211> 468

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий эктодомен NKG2D.wt

<400> 136

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agctaccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtg 468

<210> 137

<211> 156

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид, эктодомен NKG2D.YA

<400> 137

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

145 150 155

<210> 138

<211> 468

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий эктодомен NKG2D.YA

<400> 138

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtg 468

<210> 139

<211> 156

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид, эктодомен NKG2D.AF

<400> 139

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val

145 150 155

<210> 140

<211> 468

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий эктодомен NKG2D.AF

<400> 140

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggcttcatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtg 468

<210> 141

<211> 69

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Шарнирная область CD8-альфа синтетического пептида и трансмембранный домен

<400> 141

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

35 40 45

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

50 55 60

Ile Thr Leu Tyr Cys

65

<210> 142

<211> 207

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий шарнирную область CD8-альфа и

трансмембранный домен

<400> 142

accaccacac cagctcctag acctccaact cctgctccta caatcgccag ccagcctctg 60

tctctgaggc cagaagcttg tagacctgct gcaggcggag ccgtgcatac aagaggactg 120

gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggctg gaacatgtgg cgtgctgctg 180

ctgagcctgg tcatcaccct gtactgc 207

<210> 143

<211> 42

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид 4-1BB

<400> 143

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40

<210> 144

<211> 126

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий 4-1BB

<400> 144

aagcggggca gaaagaagct gctgtacatc tttaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60

accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 120

gagctg 126

<210> 145

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид CD3zeta

<400> 145

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110

<210> 146

<211> 336

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий CD3zeta

<400> 146

agagtgaagt tcagccgttc tgccgacgct cccgcctata agcagggaca gaaccagctg 60

tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggacaa gcggagaggc 120

agagatcctg agatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat 180

gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc 240

agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300

tatgatgccc tgcacatgca ggccctgcct ccaaga 336

<210> 147

<211> 239

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид EGFP

<400> 147

Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu

1 5 10 15

Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly

20 25 30

Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile

35 40 45

Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr

50 55 60

Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys

65 70 75 80

Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu

85 90 95

Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu

100 105 110

Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly

115 120 125

Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr

130 135 140

Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn

145 150 155 160

Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser

165 170 175

Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly

180 185 190

Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu

195 200 205

Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe

210 215 220

Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys

225 230 235

<210> 148

<211> 717

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий EGFP

<400> 148

atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac 60

ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac 120

ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca 180

ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag tgctttagca gataccccga ccatatgaag 240

cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc 300

tttaaggacg acggcaacta caagaccagg gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg 360

gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac 420

aagctcgagt acaactacaa cagccacaac gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac 480

ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc 540

gatcactacc agcagaacac ccctatcgga gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac 600

tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg 660

ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc accctcggca tggacgaact gtacaaa 717

<210> 149

<211> 473

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 149

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

35 40 45

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

50 55 60

Ile Thr Leu Tyr Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr

65 70 75 80

Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu

85 90 95

Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu

100 105 110

Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln

115 120 125

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

130 135 140

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

145 150 155 160

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

165 170 175

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

180 185 190

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

195 200 205

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

210 215 220

Arg Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu

225 230 235 240

Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp

245 250 255

Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala

260 265 270

Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu

275 280 285

Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln

290 295 300

Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys

305 310 315 320

Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys

325 330 335

Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp

340 345 350

Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp

355 360 365

Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn

370 375 380

Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe

385 390 395 400

Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His

405 410 415

Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp

420 425 430

Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu

435 440 445

Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile

450 455 460

Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys

465 470

<210> 150

<211> 1419

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 150

accaccacac cagctcctag acctccaact cctgctccta caatcgccag ccagcctctg 60

tctctgaggc cagaagcttg tagacctgct gcaggcggag ccgtgcatac aagaggactg 120

gatttcgcct gcgacatcta catctgggcc cctctggctg gaacatgtgg cgtgctgctg 180

ctgagcctgg tcatcaccct gtactgcagc ctgaagcggg gcagaaagaa gctgctgtac 240

atctttaagc agcccttcat gcggcccgtg cagaccacac aagaggaaga tggctgctcc 300

tgcagattcc ccgaggaaga agaaggcggc tgcgagctga gagtgaagtt cagccgttct 360

gccgacgctc ccgcctataa gcagggacag aaccagctgt acaacgagct gaacctgggg 420

agaagagaag agtacgacgt gctggacaag cggagaggca gagatcctga gatgggcggc 480

aagcccagac ggaagaatcc tcaagagggc ctgtataatg agctgcagaa agacaagatg 540

gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag ggcgagcgca gaagaggcaa gggacacgat 600

ggactgtacc agggcctgag caccgccacc aaggatacct atgatgccct gcacatgcag 660

gccctgcctc caagatcagg ctctggttct ggcagcggca gcatggtgtc taaaggcgag 720

gaactgttca ccggcgtggt gcccattctg gtggaactgg acggggatgt gaacggccac 780

aagtttagcg ttagcggcga aggcgaaggg gatgccacat acggaaagct gaccctgaag 840

ttcatctgca ccaccggcaa gctgcctgtg ccttggccta cactggtcac cacactgaca 900

tacggcgtgc agtgctttag cagatacccc gaccatatga agcagcacga cttcttcaag 960

tccgccatgc ctgagggcta cgtgcaagag cggaccatct tctttaagga cgacggcaac 1020

tacaagacca gggccgaagt gaagtttgag ggcgacaccc tggtcaaccg gatcgagctg 1080

aagggcatcg acttcaaaga ggatggcaac atcctgggcc acaagctcga gtacaactac 1140

aacagccaca acgtgtacat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggccaacttc 1200

aagatccggc acaacatcga ggacggcagc gttcagctgg ccgatcacta ccagcagaac 1260

acccctatcg gagatggccc tgtgctgctc cccgacaatc actacctgag cacacagagc 1320

gccctgagca aggaccccaa cgagaagagg gatcacatgg tgctgctgga atttgtgacc 1380

gccgcaggca tcaccctcgg catggacgaa ctgtacaaa 1419

<210> 151

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.wt_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 151

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Tyr His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 152

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.wt_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 152

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agctaccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgtac aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtataatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 153

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 153

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 154

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 154

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgtac aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtataatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 155

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.AF_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 155

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Phe Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 156

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный

химерный антигенный рецептор NKG2D.AF_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 156

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggcttcatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgtac aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtataatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 157

<211> 473

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Молчащий химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_EGFP

<400> 157

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu

225 230 235 240

Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp

245 250 255

Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala

260 265 270

Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu

275 280 285

Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln

290 295 300

Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys

305 310 315 320

Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys

325 330 335

Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp

340 345 350

Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp

355 360 365

Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn

370 375 380

Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe

385 390 395 400

Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His

405 410 415

Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp

420 425 430

Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu

435 440 445

Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile

450 455 460

Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys

465 470

<210> 158

<211> 1419

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий молчащий химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_EGFP

<400> 158

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgctcagg ctctggttct ggcagcggca gcatggtgtc taaaggcgag 720

gaactgttca ccggcgtggt gcccattctg gtggaactgg acggggatgt gaacggccac 780

aagtttagcg ttagcggcga aggcgaaggg gatgccacat acggaaagct gaccctgaag 840

ttcatctgca ccaccggcaa gctgcctgtg ccttggccta cactggtcac cacactgaca 900

tacggcgtgc agtgctttag cagatacccc gaccatatga agcagcacga cttcttcaag 960

tccgccatgc ctgagggcta cgtgcaagag cggaccatct tctttaagga cgacggcaac 1020

tacaagacca gggccgaagt gaagtttgag ggcgacaccc tggtcaaccg gatcgagctg 1080

aagggcatcg acttcaaaga ggatggcaac atcctgggcc acaagctcga gtacaactac 1140

aacagccaca acgtgtacat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggccaacttc 1200

aagatccggc acaacatcga ggacggcagc gttcagctgg ccgatcacta ccagcagaac 1260

acccctatcg gagatggccc tgtgctgctc cccgacaatc actacctgag cacacagagc 1320

gccctgagca aggaccccaa cgagaagagg gatcacatgg tgctgctgga atttgtgacc 1380

gccgcaggca tcaccctcgg catggacgaa ctgtacaaa 1419

<210> 159

<211> 225

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Молчащий химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM

<400> 159

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys

225

<210> 160

<211> 675

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий молчащий химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM

<400> 160

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgc 675

<210> 161

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BBtraf2_CD3zeta_EGFP

<400> 161

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Ala Ala Ala Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Ala Ala Ala Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 162

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BBtraf2_CD3zeta_EGFP

<400> 162

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gccgctgcag gctgctcctg cagattcccc 780

gaggctgccg caggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgtac aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

tacgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtataatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 163

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_CD3itam_EGFP

<400> 163

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 164

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_CD3itam_EGFP

<400> 164

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgttc aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

ttcgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtttaatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggccttc 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgttccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggataccttt gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 165

<211> 629

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BBtraf2_CD3itam_EGFP

<400> 165

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Ala Ala Ala Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Ala Ala Ala Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

260 265 270

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln

275 280 285

Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Phe Asp Val Leu

290 295 300

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Phe Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

325 330 335

Ala Glu Ala Phe Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

340 345 350

Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

355 360 365

Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser

370 375 380

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

385 390 395 400

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

405 410 415

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

420 425 430

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

435 440 445

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

450 455 460

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

465 470 475 480

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

485 490 495

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

500 505 510

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

515 520 525

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

530 535 540

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

545 550 555 560

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

565 570 575

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

580 585 590

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

595 600 605

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

610 615 620

Asp Glu Leu Tyr Lys

625

<210> 166

<211> 1887

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BBtraf2_CD3itam_EGFP

<400> 166

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gccgctgcag gctgctcctg cagattcccc 780

gaggctgccg caggcggctg cgagctgaga gtgaagttca gccgttctgc cgacgctccc 840

gcctataagc agggacagaa ccagctgttc aacgagctga acctggggag aagagaagag 900

ttcgacgtgc tggacaagcg gagaggcaga gatcctgaga tgggcggcaa gcccagacgg 960

aagaatcctc aagagggcct gtttaatgag ctgcagaaag acaagatggc cgaggccttc 1020

agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga agaggcaagg gacacgatgg actgttccag 1080

ggcctgagca ccgccaccaa ggataccttt gatgccctgc acatgcaggc cctgcctcca 1140

agatcaggct ctggttctgg cagcggcagc atggtgtcta aaggcgagga actgttcacc 1200

ggcgtggtgc ccattctggt ggaactggac ggggatgtga acggccacaa gtttagcgtt 1260

agcggcgaag gcgaagggga tgccacatac ggaaagctga ccctgaagtt catctgcacc 1320

accggcaagc tgcctgtgcc ttggcctaca ctggtcacca cactgacata cggcgtgcag 1380

tgctttagca gataccccga ccatatgaag cagcacgact tcttcaagtc cgccatgcct 1440

gagggctacg tgcaagagcg gaccatcttc tttaaggacg acggcaacta caagaccagg 1500

gccgaagtga agtttgaggg cgacaccctg gtcaaccgga tcgagctgaa gggcatcgac 1560

ttcaaagagg atggcaacat cctgggccac aagctcgagt acaactacaa cagccacaac 1620

gtgtacatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg ccaacttcaa gatccggcac 1680

aacatcgagg acggcagcgt tcagctggcc gatcactacc agcagaacac ccctatcgga 1740

gatggccctg tgctgctccc cgacaatcac tacctgagca cacagagcgc cctgagcaag 1800

gaccccaacg agaagaggga tcacatggtg ctgctggaat ttgtgaccgc cgcaggcatc 1860

accctcggca tggacgaact gtacaaa 1887

<210> 167

<211> 517

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_EGFP

<400> 167

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Ser Gly Ser

260 265 270

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr

275 280 285

Gly Val Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His

290 295 300

Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys

305 310 315 320

Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp

325 330 335

Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg

340 345 350

Tyr Pro Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro

355 360 365

Glu Gly Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn

370 375 380

Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn

385 390 395 400

Arg Ile Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu

405 410 415

Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met

420 425 430

Ala Asp Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His

435 440 445

Asn Ile Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn

450 455 460

Thr Pro Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu

465 470 475 480

Ser Thr Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His

485 490 495

Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met

500 505 510

Asp Glu Leu Tyr Lys

515

<210> 168

<211> 1551

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB_EGFP

<400> 168

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctgtca ggctctggtt ctggcagcgg cagcatggtg 840

tctaaaggcg aggaactgtt caccggcgtg gtgcccattc tggtggaact ggacggggat 900

gtgaacggcc acaagtttag cgttagcggc gaaggcgaag gggatgccac atacggaaag 960

ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcctg tgccttggcc tacactggtc 1020

accacactga catacggcgt gcagtgcttt agcagatacc ccgaccatat gaagcagcac 1080

gacttcttca agtccgccat gcctgagggc tacgtgcaag agcggaccat cttctttaag 1140

gacgacggca actacaagac cagggccgaa gtgaagtttg agggcgacac cctggtcaac 1200

cggatcgagc tgaagggcat cgacttcaaa gaggatggca acatcctggg ccacaagctc 1260

gagtacaact acaacagcca caacgtgtac atcatggccg acaagcagaa gaacggcatc 1320

aaggccaact tcaagatccg gcacaacatc gaggacggca gcgttcagct ggccgatcac 1380

taccagcaga acacccctat cggagatggc cctgtgctgc tccccgacaa tcactacctg 1440

agcacacaga gcgccctgag caaggacccc aacgagaaga gggatcacat ggtgctgctg 1500

gaatttgtga ccgccgcagg catcaccctc ggcatggacg aactgtacaa a 1551

<210> 169

<211> 269

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

NKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB

<400> 169

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Leu Phe Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr

20 25 30

Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn

35 40 45

Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln

50 55 60

Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys

65 70 75 80

Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly

85 90 95

Leu Val His Ile Pro Thr Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser

100 105 110

Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp

115 120 125

Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser

130 135 140

Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro

145 150 155 160

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

165 170 175

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

180 185 190

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

195 200 205

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

210 215 220

Cys Ser Leu Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

225 230 235 240

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

245 250 255

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

260 265

<210> 170

<211> 807

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецепторNKG2D.YA_CD8hingeTM_4-1BB

<400> 170

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctctgttca atcaagaggt gcagatccct ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct 120

aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc taccagttct tcgacgagag caagaattgg 180

tacgagagcc aggccagctg catgagccag aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa 240

gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc 300

cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc 360

atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc 420

gagaactgca gcacccctaa cacctacatc tgtatgcagc ggaccgtgac caccacacca 480

gctcctagac ctccaactcc tgctcctaca atcgccagcc agcctctgtc tctgaggcca 540

gaagcttgta gacctgctgc aggcggagcc gtgcatacaa gaggactgga tttcgcctgc 600

gacatctaca tctgggcccc tctggctgga acatgtggcg tgctgctgct gagcctggtc 660

atcaccctgt actgcagcct gaagcggggc agaaagaagc tgctgtacat ctttaagcag 720

cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc 780

gaggaagaag aaggcggctg cgagctg 807

<210> 171

<211> 736

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полноразмерный химерный антигенный рецептор синтетического пептида

CD19scFv_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 171

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

130 135 140

Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly

165 170 175

Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly

180 185 190

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

195 200 205

Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys

210 215 220

Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys

225 230 235 240

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Ser Leu Lys Arg

325 330 335

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

340 345 350

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly

485 490 495

Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile

500 505 510

Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser

515 520 525

Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe

530 535 540

Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr

545 550 555 560

Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met

565 570 575

Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln

580 585 590

Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala

595 600 605

Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys

610 615 620

Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu

625 630 635 640

Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys

645 650 655

Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly

660 665 670

Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp

675 680 685

Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala

690 695 700

Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu

705 710 715 720

Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys

725 730 735

<210> 172

<211> 2208

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий полноразмерный химерный

антигенный рецептор CD19scFv_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP

<400> 172

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctgacatcc agatgaccca gacaaccagc agcctgtctg ccagcctggg cgatagagtg 120

accatcagct gtagagccag ccaggacatc agcaagtacc tgaactggta tcagcagaaa 180

cccgacggca ccgtgaagct gctgatctac cacaccagca gactgcacag cggcgtgcca 240

agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gactacagcc tgacaatcag caacctggaa 300

caagaggata tcgctaccta cttctgccag caaggcaaca ccctgcctta cacctttggc 360

ggaggcacca agctggaaat cacaggcggc ggaggaagcg gaggcggagg atctggtggt 420

ggtggatctg aagtgaaact gcaagagtct ggccctggcc tggtggcccc atctcaatct 480

ctgagcgtga cctgtaccgt cagcggagtg tccctgcctg attatggcgt gtcctggatc 540

cggcagcctc ctagaaaagg cctggaatgg ctgggcgtga tctggggcag cgagacaacc 600

tactacaaca gcgccctgaa gtcccggctg accatcatca aggacaactc caagagccag 660

gtgttcctga agatgaacag cctgcagacc gacgacaccg ccatctacta ttgcgccaag 720

cactactact acggcggcag ctacgccatg gattattggg gccagggcac cagcgtgacc 780

gtttcttcta ccaccacacc agctcctaga cctccaactc ctgctcctac aatcgccagc 840

cagcctctgt ctctgaggcc agaagcttgt agacctgctg caggcggagc cgtgcataca 900

agaggactgg atttcgcctg cgacatctac atctgggccc ctctggctgg aacatgtggc 960

gtgctgctgc tgagcctggt catcaccctg tactgcagcc tgaagcgggg cagaaagaag 1020

ctgctgtaca tctttaagca gcccttcatg cggcccgtgc agaccacaca agaggaagat 1080

ggctgctcct gcagattccc cgaggaagaa gaaggcggct gcgagctgag agtgaagttc 1140

agccgttctg ccgacgctcc cgcctataag cagggacaga accagctgta caacgagctg 1200

aacctgggga gaagagaaga gtacgacgtg ctggacaagc ggagaggcag agatcctgag 1260

atgggcggca agcccagacg gaagaatcct caagagggcc tgtataatga gctgcagaaa 1320

gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc ggaatgaagg gcgagcgcag aagaggcaag 1380

ggacacgatg gactgtacca gggcctgagc accgccacca aggataccta tgatgccctg 1440

cacatgcagg ccctgcctcc aagatcaggc tctggttctg gcagcggcag catggtgtct 1500

aaaggcgagg aactgttcac cggcgtggtg cccattctgg tggaactgga cggggatgtg 1560

aacggccaca agtttagcgt tagcggcgaa ggcgaagggg atgccacata cggaaagctg 1620

accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcctgtgc cttggcctac actggtcacc 1680

acactgacat acggcgtgca gtgctttagc agataccccg accatatgaa gcagcacgac 1740

ttcttcaagt ccgccatgcc tgagggctac gtgcaagagc ggaccatctt ctttaaggac 1800

gacggcaact acaagaccag ggccgaagtg aagtttgagg gcgacaccct ggtcaaccgg 1860

atcgagctga agggcatcga cttcaaagag gatggcaaca tcctgggcca caagctcgag 1920

tacaactaca acagccacaa cgtgtacatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag 1980

gccaacttca agatccggca caacatcgag gacggcagcg ttcagctggc cgatcactac 2040

cagcagaaca cccctatcgg agatggccct gtgctgctcc ccgacaatca ctacctgagc 2100

acacagagcg ccctgagcaa ggaccccaac gagaagaggg atcacatggt gctgctggaa 2160

tttgtgaccg ccgcaggcat caccctcggc atggacgaac tgtacaaa 2208

<210> 173

<211> 1115

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид CD19scFv_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP-

T2A-NKG2D.YA_CD8hingeTM

<400> 173

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln

35 40 45

Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr

50 55 60

Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro

65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile

85 90 95

Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly

100 105 110

Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu

130 135 140

Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser

145 150 155 160

Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly

165 170 175

Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly

180 185 190

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

195 200 205

Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys

210 215 220

Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys

225 230 235 240

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

245 250 255

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro

260 265 270

Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu

275 280 285

Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp

290 295 300

Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly

305 310 315 320

Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Ser Leu Lys Arg

325 330 335

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

340 345 350

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

355 360 365

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

370 375 380

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

385 390 395 400

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

405 410 415

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

420 425 430

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

435 440 445

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

450 455 460

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

465 470 475 480

His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly

485 490 495

Ser Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile

500 505 510

Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser

515 520 525

Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe

530 535 540

Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr

545 550 555 560

Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met

565 570 575

Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln

580 585 590

Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala

595 600 605

Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys

610 615 620

Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu

625 630 635 640

Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gln Lys

645 650 655

Asn Gly Ile Lys Ala Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly

660 665 670

Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro Ile Gly Asp

675 680 685

Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gln Ser Ala

690 695 700

Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu

705 710 715 720

Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys

725 730 735

Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp

740 745 750

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu

755 760 765

Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro Ala Phe Leu Leu Ile Pro Leu Phe

770 775 780

Asn Gln Glu Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys Gly Pro Cys

785 790 795 800

Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln Phe Phe Asp

805 810 815

Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met Ser Gln Asn

820 825 830

Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp Leu Leu Lys

835 840 845

Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu Val His Ile Pro Thr Asn

850 855 860

Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro Asn Leu Leu

865 870 875 880

Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr Ala Ser Ser

885 890 895

Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr Tyr Ile Cys

900 905 910

Met Gln Arg Thr Val Gln Ile Pro Leu Thr Glu Ser Tyr Cys Gly Pro

915 920 925

Cys Pro Lys Asn Trp Ile Cys Tyr Lys Asn Asn Cys Tyr Gln Phe Phe

930 935 940

Asp Glu Ser Lys Asn Trp Tyr Glu Ser Gln Ala Ser Cys Met Ser Gln

945 950 955 960

Asn Ala Ser Leu Leu Lys Val Tyr Ser Lys Glu Asp Gln Asp Leu Leu

965 970 975

Lys Leu Val Lys Ser Ala His Trp Met Gly Leu Val His Ile Pro Thr

980 985 990

Asn Gly Ser Trp Gln Trp Glu Asp Gly Ser Ile Leu Ser Pro Asn Leu

995 1000 1005

Leu Thr Ile Ile Glu Met Gln Lys Gly Asp Cys Ala Leu Tyr Ala

1010 1015 1020

Ser Ser Phe Lys Gly Tyr Ile Glu Asn Cys Ser Thr Pro Asn Thr

1025 1030 1035

Tyr Ile Cys Met Gln Arg Thr Val Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

1040 1045 1050

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

1055 1060 1065

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr

1070 1075 1080

Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

1085 1090 1095

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu

1100 1105 1110

Tyr Cys

1115

<210> 174

<211> 3345

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий

CD19scFv_CD8hingeTM_4-1BB_CD3zeta_EGFP-T2A-NKG2D.YA_CD8hingeTM

<400> 174

atggcattgc ctgttacagc tctgctgctg cccctggctc tgcttctgca tgctgccaga 60

cctgacatcc agatgaccca gacaaccagc agcctgtctg ccagcctggg cgatagagtg 120

accatcagct gtagagccag ccaggacatc agcaagtacc tgaactggta tcagcagaaa 180

cccgacggca ccgtgaagct gctgatctac cacaccagca gactgcacag cggcgtgcca 240

agcagatttt ctggcagcgg ctctggcacc gactacagcc tgacaatcag caacctggaa 300

caagaggata tcgctaccta cttctgccag caaggcaaca ccctgcctta cacctttggc 360

ggaggcacca agctggaaat cacaggcggc ggaggaagcg gaggcggagg atctggtggt 420

ggtggatctg aagtgaaact gcaagagtct ggccctggcc tggtggcccc atctcaatct 480

ctgagcgtga cctgtaccgt cagcggagtg tccctgcctg attatggcgt gtcctggatc 540

cggcagcctc ctagaaaagg cctggaatgg ctgggcgtga tctggggcag cgagacaacc 600

tactacaaca gcgccctgaa gtcccggctg accatcatca aggacaactc caagagccag 660

gtgttcctga agatgaacag cctgcagacc gacgacaccg ccatctacta ttgcgccaag 720

cactactact acggcggcag ctacgccatg gattattggg gccagggcac cagcgtgacc 780

gtttcttcta ccaccacacc agctcctaga cctccaactc ctgctcctac aatcgccagc 840

cagcctctgt ctctgaggcc agaagcttgt agacctgctg caggcggagc cgtgcataca 900

agaggactgg atttcgcctg cgacatctac atctgggccc ctctggctgg aacatgtggc 960

gtgctgctgc tgagcctggt catcaccctg tactgcagcc tgaagcgggg cagaaagaag 1020

ctgctgtaca tctttaagca gcccttcatg cggcccgtgc agaccacaca agaggaagat 1080

ggctgctcct gcagattccc cgaggaagaa gaaggcggct gcgagctgag agtgaagttc 1140

agccgttctg ccgacgctcc cgcctataag cagggacaga accagctgta caacgagctg 1200

aacctgggga gaagagaaga gtacgacgtg ctggacaagc ggagaggcag agatcctgag 1260

atgggcggca agcccagacg gaagaatcct caagagggcc tgtataatga gctgcagaaa 1320

gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc ggaatgaagg gcgagcgcag aagaggcaag 1380

ggacacgatg gactgtacca gggcctgagc accgccacca aggataccta tgatgccctg 1440

cacatgcagg ccctgcctcc aagatcaggc tctggttctg gcagcggcag catggtgtct 1500

aaaggcgagg aactgttcac cggcgtggtg cccattctgg tggaactgga cggggatgtg 1560

aacggccaca agtttagcgt tagcggcgaa ggcgaagggg atgccacata cggaaagctg 1620

accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcctgtgc cttggcctac actggtcacc 1680

acactgacat acggcgtgca gtgctttagc agataccccg accatatgaa gcagcacgac 1740

ttcttcaagt ccgccatgcc tgagggctac gtgcaagagc ggaccatctt ctttaaggac 1800

gacggcaact acaagaccag ggccgaagtg aagtttgagg gcgacaccct ggtcaaccgg 1860

atcgagctga agggcatcga cttcaaagag gatggcaaca tcctgggcca caagctcgag 1920

tacaactaca acagccacaa cgtgtacatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag 1980

gccaacttca agatccggca caacatcgag gacggcagcg ttcagctggc cgatcactac 2040

cagcagaaca cccctatcgg agatggccct gtgctgctcc ccgacaatca ctacctgagc 2100

acacagagcg ccctgagcaa ggaccccaac gagaagaggg atcacatggt gctgctggaa 2160

tttgtgaccg ccgcaggcat caccctcggc atggacgaac tgtacaaact cgagggcggc 2220

ggagagggca gaggaagtct tctaacatgc ggtgacgtgg aggagaatcc cggccctagg 2280

atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 2340

atcccactgt tcaaccagga ggttcagatt ccgctgaccg aaagctactg tggaccatgt 2400

cccaagaact ggatctgcta caaaaacaat tgttatcaat ttttcgacga aagcaagaat 2460

tggtacgaaa gccaggcttc atgcatgagc caaaatgcat ccctgctgaa ggtgtacagc 2520

aaggaggacc aggacctgct gaaacttgtc aaatccgctc actggatggg actggtccat 2580

attcctacaa atggatcctg gcagtgggag gatggctcta tcctgtctcc caatctcctg 2640

actatcatag agatgcagaa gggagattgt gcattgtatg ctagttcatt caagggatac 2700

attgaaaact gctcaacacc taatacctac atatgtatgc agcgcacagt gcagatccct 2760

ctgaccgaga gctactgtgg cccctgtcct aagaactgga tctgctacaa gaacaactgc 2820

taccagttct tcgacgagag caagaattgg tacgagagcc aggccagctg catgagccag 2880

aatgccagcc tgctgaaggt gtacagcaaa gaggaccagg atctgctgaa gctggtcaag 2940

agcgcccact ggatgggact cgtgcacatc cctacaaacg gcagctggca gtgggaggac 3000

ggctctatcc tgtctcctaa cctgctgacc atcatcgaga tgcagaaggg cgactgcgcc 3060

ctgtacgcca gcagctttaa gggctacatc gagaactgca gcacccctaa cacctacatc 3120

tgtatgcagc ggaccgtgac cacgacgcca gcgccgcgac caccaacacc ggcgcccacc 3180

atcgcgtcgc agcccctgtc cctgcgccca gaggcgtgcc ggccagcggc ggggggcgca 3240

gtgcacacga gggggctgga cttcgcctgt gatatctaca tctgggcgcc cttggccggg 3300

acttgtgggg tccttctcct gtcactggtt atcacccttt actgc 3345

<210> 175

<211> 161

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 175

Gly Ser Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys His His

1 5 10 15

His His His His His His Gly Ser Ser Gly Ser Ser Ala Pro Thr Ser

20 25 30

Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp

35 40 45

Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu

50 55 60

Thr Ala Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu

65 70 75 80

Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu

85 90 95

Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp

100 105 110

Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu

115 120 125

Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu

130 135 140

Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu

145 150 155 160

Thr

<210> 176

<211> 483

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 176

ggaagtagcg gtagtagtga ttacaaggac gatgacgaca agcaccacca tcatcatcat 60

caccacggta gcagcggcag cagtgccccc acctctagca gcacaaagaa gacccagctg 120

caactggaac acctcctgct ggacctgcag atgatcctga acggcatcaa caactacaag 180

aaccccaagc tgaccgccat gctgaccaaa aagttttaca tgcccaagaa ggccaccgag 240

cttaaacacc tgcaatgcct tgaggaggag ctgaagcccc tggaggaggt actgaacctg 300

gcccagagca agaactttca tctgaggccc agggacctga ttagcaacat caacgtgatc 360

gtgttggagt tgaagggcag cgagaccacg ttcatgtgcg agtacgccga cgagacggcc 420

accatagtgg agtttcttaa caggtggatc accttctcac agtctatcat cagcaccctg 480

acc 483

<210> 177

<211> 343

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид ULBP2.R80W_FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 177

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Gly Thr Gly Ser Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp

180 185 190

Asp Asp Asp Lys His His His His His His His His Gly Ser Ser Gly

195 200 205

Ser Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

210 215 220

Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

225 230 235 240

Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met

245 250 255

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu

260 265 270

Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

275 280 285

His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

290 295 300

Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

305 310 315 320

Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln

325 330 335

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

340

<210> 178

<211> 1029

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ULBP2.R80W_FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 178

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgatgtcat tccactattt ctcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

ggtaccggta gtagcggtag tagtgattac aaggacgatg acgacaagca ccaccatcat 600

catcatcacc acggtagcag cggcagcagt gcccccacct ctagcagcac aaagaagacc 660

cagctgcaac tggaacacct cctgctggac ctgcagatga tcctgaacgg catcaacaac 720

tacaagaacc ccaagctgac cgccatgctg accaaaaagt tttacatgcc caagaaggcc 780

accgagctta aacacctgca atgccttgag gaggagctga agcccctgga ggaggtactg 840

aacctggccc agagcaagaa ctttcatctg aggcccaggg acctgattag caacatcaac 900

gtgatcgtgt tggagttgaa gggcagcgag accacgttca tgtgcgagta cgccgacgag 960

acggccacca tagtggagtt tcttaacagg tggatcacct tctcacagtc tatcatcagc 1020

accctgacc 1029

<210> 179

<211> 343

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид ULBP2.S2_FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 179

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Met Arg Ile Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Gly Thr Gly Ser Ser Gly Ser Ser Asp Tyr Lys Asp

180 185 190

Asp Asp Asp Lys His His His His His His His His Gly Ser Ser Gly

195 200 205

Ser Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu

210 215 220

Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn

225 230 235 240

Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met

245 250 255

Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu

260 265 270

Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe

275 280 285

His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu

290 295 300

Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu

305 310 315 320

Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln

325 330 335

Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

340

<210> 180

<211> 1029

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ULBP2.S2_FLAG_6xHis_mutIL2

<400> 180

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactctga tgaggatttg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

ggtaccggta gtagcggtag tagtgattac aaggacgatg acgacaagca ccaccatcat 600

catcatcacc acggtagcag cggcagcagt gcccccacct ctagcagcac aaagaagacc 660

cagctgcaac tggaacacct cctgctggac ctgcagatga tcctgaacgg catcaacaac 720

tacaagaacc ccaagctgac cgccatgctg accaaaaagt tttacatgcc caagaaggcc 780

accgagctta aacacctgca atgccttgag gaggagctga agcccctgga ggaggtactg 840

aacctggccc agagcaagaa ctttcatctg aggcccaggg acctgattag caacatcaac 900

gtgatcgtgt tggagttgaa gggcagcgag accacgttca tgtgcgagta cgccgacgag 960

acggccacca tagtggagtt tcttaacagg tggatcacct tctcacagtc tatcatcagc 1020

accctgacc 1029

<210> 181

<211> 412

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид ULBP2.R80W_Fc1

<400> 181

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Met Ser Phe His Tyr Phe Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

195 200 205

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

210 215 220

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

225 230 235 240

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

245 250 255

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

260 265 270

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

275 280 285

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

290 295 300

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

305 310 315 320

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

325 330 335

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

340 345 350

Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

355 360 365

Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

370 375 380

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

385 390 395 400

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405 410

<210> 182

<211> 1236

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ULBP2.R80W_Fc1

<400> 182

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgatgtcat tccactattt ctcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 600

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 660

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 720

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 780

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 840

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 900

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 960

gacgagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 1020

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactatga cactaccccg 1080

cccgtgctgg attccgacgg aagcttcttc ctgtactccg acctgaccgt ggacaagtcg 1140

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 1200

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaaag 1236

<210> 183

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_mutIL2

<400> 183

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

225 230 235 240

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

245 250 255

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

260 265 270

Ala Met Leu Thr Lys Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

275 280 285

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

290 295 300

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

305 310 315 320

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

325 330 335

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

340 345 350

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

355 360 365

<210> 184

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_mutIL2

<400> 184

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagcgcccc cacctctagc 720

agcacaaaga agacccagct gcaactggaa cacctcctgc tggacctgca gatgatcctg 780

aacggcatca acaactacaa gaaccccaag ctgaccgcca tgctgaccaa aaagttttac 840

atgcccaaga aggccaccga gcttaaacac ctgcaatgcc ttgaggagga gctgaagccc 900

ctggaggagg tactgaacct ggcccagagc aagaactttc atctgaggcc cagggacctg 960

attagcaaca tcaacgtgat cgtgttggag ttgaagggca gcgagaccac gttcatgtgc 1020

gagtacgccg acgagacggc caccatagtg gagtttctta acaggtggat caccttctca 1080

cagtctatca tcagcaccct gacc 1104

<210> 185

<211> 349

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_mutIL15

<400> 185

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Asn Trp Val Asn Val

225 230 235 240

Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met His Ile

245 250 255

Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys Lys Val

260 265 270

Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser Leu Glu

275 280 285

Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile Ile Leu

290 295 300

Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser Gly Cys

305 310 315 320

Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile Lys Glu Phe Leu Gln

325 330 335

Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn Thr Ser

340 345

<210> 186

<211> 1047

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_mutIL15

<400> 186

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagcaattg ggtgaacgtg 720

atttctgact tgaagaaaat cgaggacttg attcaaagta tgcacataga cgcaacgctc 780

tatactgaga gtgatgttca tccctcttgt aaagttaccg ctatgaagtg tttcttgctc 840

gaactccaag ttatcagtct ggagagcggt gatgcctcca tacacgatac agtcgaaaac 900

cttatcattc tcgcaaataa ctcattgagt agcaatggca atgttacaga gtctgggtgt 960

aaggaatgcg aagaacttga agagaaaaac ataaaggagt tcctccaatc attcgtgcat 1020

attgtccaga tgtttatcaa cactagc 1047

<210> 187

<211> 412

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид ULBP2.S2_Fc1

<400> 187

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Leu Met Arg Ile Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

195 200 205

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

210 215 220

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

225 230 235 240

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

245 250 255

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

260 265 270

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

275 280 285

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

290 295 300

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

305 310 315 320

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

325 330 335

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

340 345 350

Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

355 360 365

Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

370 375 380

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

385 390 395 400

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405 410

<210> 188

<211> 1236

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ULBP2.S2_Fc1

<400> 188

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactctga tgaggatttg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 600

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 660

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 720

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 780

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 840

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 900

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 960

gacgagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 1020

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactatga cactaccccg 1080

cccgtgctgg attccgacgg aagcttcttc ctgtactccg acctgaccgt ggacaagtcg 1140

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 1200

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaaag 1236

<210> 189

<211> 412

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид ULBP2.S3_Fc1

<400> 189

Glu Pro His Ser Leu Ser Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg

1 5 10 15

Pro Gly Pro Arg Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr

20 25 30

Phe Leu His Tyr Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro

35 40 45

Leu Gly Lys Lys Leu Asn Val Thr Thr Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro

50 55 60

Val Leu Arg Glu Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Trp Asp Ile

65 70 75 80

Gln Leu Glu Asn Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg

85 90 95

Met Ser Cys Glu Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln

100 105 110

Phe Ser Phe Asp Gly Gln Ile Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg

115 120 125

Met Trp Thr Thr Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp

130 135 140

Glu Asn Asp Lys Val Val Ala Thr Lys Leu Tyr Leu Trp Ser Met Gly

145 150 155 160

Asp Cys Ile Gly Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr

165 170 175

Leu Glu Pro Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

180 185 190

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

195 200 205

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

210 215 220

Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

225 230 235 240

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

245 250 255

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

260 265 270

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

275 280 285

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

290 295 300

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

305 310 315 320

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

325 330 335

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

340 345 350

Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

355 360 365

Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

370 375 380

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

385 390 395 400

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

405 410

<210> 190

<211> 1236

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий ULBP2.S3_Fc1

<400> 190

gagccccata gtctgagcta cgacatcaca gttattccca agttcaggcc cggaccgcgc 60

tggtgtgccg tgcaaggaca agtcgacgaa aaaacctttc ttcattacga ttgcggaaat 120

aagactgtaa cgccagtctc tcctttaggt aagaagttaa acgtcactac ggcgtggaag 180

gcacaaaacc ccgtcctgcg cgaggtcgtc gacatcctga ctgaacaatt gtgggacatc 240

cagctcgaga attacactcc aaaggagcct cttaccctgc aggctagaat gtcttgcgag 300

caaaaggcag agggccactc ctccggcagc tggcagttca gtttcgacgg acaaatcttt 360

ctgttattcg attcagagaa gagaatgtgg actacagttc accccggtgc ccgtaaaatg 420

aaggagaagt gggaaaacga caaagtggtg gcgactaagc tttatctttg gtcgatggga 480

gactgcatcg gttggctgga agatttcctc atgggtatgg actccacttt ggagccatcg 540

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 600

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 660

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 720

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 780

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 840

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 900

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 960

gacgagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 1020

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactatga cactaccccg 1080

cccgtgctgg attccgacgg aagcttcttc ctgtactccg acctgaccgt ggacaagtcg 1140

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 1200

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaaag 1236

<210> 191

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_wtIL2 (дикого типа)

<400> 191

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

225 230 235 240

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

245 250 255

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

260 265 270

Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

275 280 285

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

290 295 300

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

305 310 315 320

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

325 330 335

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

340 345 350

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ala Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

355 360 365

<210> 192

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_wtIL2

<400> 192

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagcgctcc aacctctagc 720

tctacgaaga aaactcaact ccagcttgag catttgcttt tggaccttca aatgatattg 780

aacgggatta acaattacaa gaaccccaaa ctgacgcgaa tgcttacatt caaattttac 840

atgccaaaga aggccaccga gctgaaacac ttgcaatgtc ttgaggaaga gctgaagcca 900

ttggaggagg tcctgaattt ggctcaaagt aagaacttcc acctgcggcc aagggatctc 960

ataagcaaca taaatgtcat tgtattggaa ctgaaaggga gcgaaaccac ctttatgtgc 1020

gagtatgcag atgaaactgc aaccatagtc gagttcctca atcgctggat aactttcgcg 1080

cagtcaatta tatcaacact cacc 1104

<210> 193

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_IL21.wt (дикого типа)

<400> 193

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gln Gly Gln Asp Arg

225 230 235 240

His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys

245 250 255

Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp

260 265 270

Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala

275 280 285

Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val

290 295 300

Leu Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg

305 310 315 320

Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys

325 330 335

Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys

340 345 350

Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

355 360 365

<210> 194

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_IL21.wt (дикого типа)

<400> 194

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagccaggg tcaagaccgc 720

catatgatcc gaatgcgaca gctcattgat attgtcgatc aattgaaaaa ttacgtgaat 780

gatcttgtac cggagttcct ccccgcaccg gaggacgttg aaacgaattg tgagtggtca 840

gcattttctt gctttcagaa ggctcaactc aagagtgcaa acacgggtaa caacgagcgc 900

attatcaatg ttctcatcaa aaagctgaaa cgaaaaccgc ctagcaccaa cgcaggcaga 960

cgacagaagc accggctcac gtgcccaagt tgcgattctt atgagaaaaa gccaccgaaa 1020

gaattcctgg agcggttcaa gtccctcttg cagaaaatga ttcatcagca tctctccagc 1080

aggacacacg gctccgagga ctcc 1104

<210> 195

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_IL21.D18A

<400> 195

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gln Gly Gln Asp Arg

225 230 235 240

His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Ala Gln Leu Lys

245 250 255

Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp

260 265 270

Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala

275 280 285

Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val

290 295 300

Leu Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg

305 310 315 320

Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys

325 330 335

Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Glu Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys

340 345 350

Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

355 360 365

<210> 196

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_IL21.D18A

<400> 196

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagccaggg tcaagaccgc 720

catatgatcc gaatgcgaca gctcattgat attgtcgcac aattgaaaaa ttacgtgaat 780

gatcttgtac cggagttcct ccccgcaccg gaggacgttg aaacgaattg tgagtggtca 840

gcattttctt gctttcagaa ggctcaactc aagagtgcaa acacgggtaa caacgagcgc 900

attatcaatg ttctcatcaa aaagctgaaa cgaaaaccgc ctagcaccaa cgcaggcaga 960

cgacagaagc accggctcac gtgcccaagt tgcgattctt atgagaaaaa gccaccgaaa 1020

gaattcctgg agcggttcaa gtccctcttg cagaaaatga ttcatcagca tctctccagc 1080

aggacacacg gctccgagga ctcc 1104

<210> 197

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_IL21.E109R

<400> 197

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gln Gly Gln Asp Arg

225 230 235 240

His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Asp Gln Leu Lys

245 250 255

Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp

260 265 270

Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala

275 280 285

Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val

290 295 300

Leu Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg

305 310 315 320

Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys

325 330 335

Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Arg Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys

340 345 350

Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

355 360 365

<210> 198

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_IL21.E109R

<400> 198

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

aaggagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctga agtccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagccaggg tcaagaccgc 720

catatgatcc gaatgcgaca gctcattgat attgtcgatc aattgaaaaa ttacgtgaat 780

gatcttgtac cggagttcct ccccgcaccg gaggacgttg aaacgaattg tgagtggtca 840

gcattttctt gctttcagaa ggctcaactc aagagtgcaa acacgggtaa caacgagcgc 900

attatcaatg ttctcatcaa aaagctgaaa cgaaaaccgc ctagcaccaa cgcaggcaga 960

cgacagaagc accggctcac gtgcccaagt tgcgattctt atgagaaaaa gccaccgaaa 1020

gaattcctgc ggcggttcaa gtccctcttg cagaaaatga ttcatcagca tctctccagc 1080

aggacacacg gctccgagga ctcc 1104

<210> 199

<211> 368

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2_IL21.D18A.E109R

<400> 199

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

35 40 45

Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

50 55 60

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

65 70 75 80

Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

85 90 95

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

100 105 110

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

115 120 125

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

130 135 140

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

145 150 155 160

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

165 170 175

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

180 185 190

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

195 200 205

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gln Gly Gln Asp Arg

225 230 235 240

His Met Ile Arg Met Arg Gln Leu Ile Asp Ile Val Ala Gln Leu Lys

245 250 255

Asn Tyr Val Asn Asp Leu Val Pro Glu Phe Leu Pro Ala Pro Glu Asp

260 265 270

Val Glu Thr Asn Cys Glu Trp Ser Ala Phe Ser Cys Phe Gln Lys Ala

275 280 285

Gln Leu Lys Ser Ala Asn Thr Gly Asn Asn Glu Arg Ile Ile Asn Val

290 295 300

Leu Ile Lys Lys Leu Lys Arg Lys Pro Pro Ser Thr Asn Ala Gly Arg

305 310 315 320

Arg Gln Lys His Arg Leu Thr Cys Pro Ser Cys Asp Ser Tyr Glu Lys

325 330 335

Lys Pro Pro Lys Glu Phe Leu Arg Arg Phe Lys Ser Leu Leu Gln Lys

340 345 350

Met Ile His Gln His Leu Ser Ser Arg Thr His Gly Ser Glu Asp Ser

355 360 365

<210> 200

<211> 1104

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2_IL21.D18A.E109R

<400> 200

gagcccaaaa gctgcgacaa gactcacact tgtccgccgt gccccgcccc cgaactgctg 60

ggtggcccct ccgtgttcct gttcccgcct aagcctaagg acacccttat gatcagccgc 120

acccctgaag tgacctgtgt cgtcgtggca gtgtcacacg aggacccgga ggtcaagttc 180

aattggtacg tggacggcgt ggaagtgcat aacgcaaaga ccaagcctcg ggaggaacag 240

tacgcctcga cctaccgcgt ggtgtcagtc ctgactgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300

gggaaggagt acaagtgcaa agtgtcgaac aaggccctgc cggctccaat tgaaaagacc 360

atcagcaagg ccaagggcca gccaagggaa ccacaggtgt acaccctccc tccttcccgg 420

gacgagctga ccaaaaacca agtgtccctg acttgccttg tgaaggggtt ctacccttct 480

gacattgccg tcgaatggga atcgaacgga cagcctgaaa acaactataa gactaccccg 540

cccgtgctgg attccgacgg aagcttcttc ctgtactcca agctgaccgt ggacaagtcg 600

agatggcagc agggaaatgt gttcagctgc tccgtgatgc atgaggcgct gcacaaccac 660

tacacccaga agtcactgag cctctccccc ggaggaggtg gcagccaggg tcaagaccgc 720

catatgatcc gaatgcgaca gctcattgat attgtcgcac aattgaaaaa ttacgtgaat 780

gatcttgtac cggagttcct ccccgcaccg gaggacgttg aaacgaattg tgagtggtca 840

gcattttctt gctttcagaa ggctcaactc aagagtgcaa acacgggtaa caacgagcgc 900

attatcaatg ttctcatcaa aaagctgaaa cgaaaaccgc ctagcaccaa cgcaggcaga 960

cgacagaagc accggctcac gtgcccaagt tgcgattctt atgagaaaaa gccaccgaaa 1020

gaattcctgc ggcggttcaa gtccctcttg cagaaaatga ttcatcagca tctctccagc 1080

aggacacacg gctccgagga ctcc 1104

<210> 201

<211> 233

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический пептид Fc2

<400> 201

Met Asp Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

50 55 60

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

65 70 75 80

Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

85 90 95

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

100 105 110

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Lys Glu Leu

130 135 140

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

145 150 155 160

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

165 170 175

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

195 200 205

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

210 215 220

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230

<210> 202

<211> 699

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический полинуклеотид, кодирующий Fc2

<400> 202

atggacccca aaagctgcga caagactcac acttgtccgc cgtgccccgc ccccgaactg 60

ctgggtggcc cctccgtgtt cctgttcccg cctaagccta aggacaccct tatgatcagc 120

cgcacccctg aagtgacctg tgtcgtcgtg gcagtgtcac acgaggaccc ggaggtcaag 180

ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cataacgcaa agaccaagcc tcgggaggaa 240

cagtacgcct cgacctaccg cgtggtgtca gtcctgactg tgctgcacca ggactggctg 300

aacgggaagg agtacaagtg caaagtgtcg aacaaggccc tgccggctcc aattgaaaag 360

accatcagca aggccaaggg ccagccaagg gaaccacagg tgtacaccct ccctccttcc 420

cggaaggagc tgaccaaaaa ccaagtgtcc ctgacttgcc ttgtgaaggg gttctaccct 480

tctgacattg ccgtcgaatg ggaatcgaac ggacagcctg aaaacaacta taagactacc 540

ccgcccgtgc tgaagtccga cggaagcttc ttcctgtact ccaagctgac cgtggacaag 600

tcgagatggc agcagggaaa tgtgttcagc tgctccgtga tgcatgaggc gctgcacaac 660

cactacaccc agaagtcact gagcctctcc cccggaaag 699

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к неприродным рецепторам NKG2D, связанным с поверхностями клеток млекопитающих, и может быть использовано для доставки полезной нагрузки в Т-клетку, макрофаг или NK-клетку млекопитающего. Предложен неприродный модифицированный рецептор NKG2D, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 18-35. Изобретение обеспечивает получение неприродных рецепторов NKG2D, связывающихся с неприродными, модифицированными доменами α1-α2 лигандов NKG2D, но не с природными лигандами NKG2D, содержащими SEQ ID NO: 4. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 24 ил., 8 пр.

1. Неприродный модифицированный рецептор NKG2D, связывающийся с неприродными, модифицированными доменами α1-α2 лигандов NKG2D, но не с природными лигандами NKG2D, содержащими SEQ ID NO: 4, где указанный неприродный модифицированный рецептор NKG2D содержит аминокислотную последовательность любую из SEQ ID NO: 18-35.

2. Неприродный модифицированный рецептор NKG2D по п. 1, где модифицированный рецептор NKG2D присоединен к Т-клетке, макрофагу или NK-клетке млекопитающего, где модифицированный рецептор NKG2D имеет присоединённый внутриклеточный костимулирующий домен, который не содержит активный домен CD3-дзета.

3. Модифицированный рецептор NKG2D по п. 2, где костимулирующий домен представляет собой костимулирующий домен 4-1BB.

4. Способ доставки полезной нагрузки в Т-клетку, макрофаг или NK-клетку млекопитающего, где способ включает доставку в Т-клетку, макрофаг или NK-клетку млекопитающего, содержащую модифицированный рецептор NKG2D по любому из пп. 1-3, полезной нагрузки, присоединенной к неприродному модифицированному домену α1-α2 лиганда NKG2D, который связывается с модифицированным рецептором NKG2D.

5. Способ по п. 4, где полезная нагрузка активирует указанную клетку или передает ей сигнал через соответствующие субъединицы рецептора на клетке или внутри нее.

6. Способ по п. 4 или 5, где полезная нагрузка представляет собой цитокин, хемокин, лимфокин или цитотоксин.