Композиция для предупреждения и лечения заболевания кожи, содержащая вещество, специфично связывающееся с пептидом, имеющим происхождение из виментина Российский патент 2021 года по МПК A61K38/16 A61K39/395 A61Q19/00 A61P17/00 A61P17/04 A61P17/06 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом, имеющим происхождение из выделенного виментина. Конкретно, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, косметической композиции, квазилекарственной композиции и препарату для накожного применения для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащим, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, и к способу предупреждения или лечения заболеваний кожи, их терапевтическому применению и их применению для изготовления лекарственного средства, косметических средств, квазилекарственных средств, препаратов для накожного применения и так далее.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Заболевание кожи относится ко всем отклонениям от нормы, встречающимся в коже животных, включая людей. По мере роста индустриализации в современном обществе возникают различные ранее не встречавшиеся заболевания кожи, что обусловлено различными вредными веществами. В частности, со временем пролиферация или метаболизм клеток кожи ослабевают, результатом чего становится естественное старение, приводящее к снижению эластичности тканей кожи или появлению морщин. Кроме того, различные поражения кожи могут возникать при длительном воздействии прямого солнечного света, ожогах, ссадинах и так далее, что может приводить к повреждению здоровой кожи. Такие поражения кожи, вызванные естественным старением или травмами, приводят к снижению защитной функции кожи, которую она выполняет как часть человеческого тела, непосредственно контактирующая с внешней средой, и, посредством этого, к инфицированию вирусами, микроорганизмами, бактериями и так далее, способствуя таким образом развитию различных заболеваний кожи.

Атопический дерматит, типичное заболевание, конкретная этиология которого не установлена, представляет собой хроническое воспалительное заболевание кожи, возникающее чаще всего в младенческом или детском возрасте, выраженность симптомов которого повторно уменьшается и возрастает, при этом его обострения могут быть вызваны инфекциями, эмоциональным стрессом, сезонными и климатическими изменениями, раздражением и аллергенами. Несмотря на признание атопического дерматита наследственным заболеванием, связанным с иммунологическими отклонениями, его конкретная этиология пока не установлена. Причины других заболеваний кожи, таких как псориаз, простой хронический лишай и так далее, также неизвестны.

В лечении заболеваний кожи, таких как атопический дерматит, псориаз, простой хронический лишай, розовый лишай и так далее, конкретная этиология которых пока не установлена, чаще всего используют противовоспалительные агенты и противовирусные агенты, состоящие из химических лекарственных средств или соединений, имеющих происхождение из растительных экстрактов или натуральных продуктов. Например, в патенте Кореи №10-1741281 раскрыта «фармацевтическая композиция, содержащая агонист А3-аденозиновых рецепторов (IB-MECA/CF-101) для лечения псориаза», и в публикации заявки на патент Кореи №10-2017-0041149 раскрыта «композиция для улучшения состояния атопичной кожи, содержащая ферментативно гидролизованный экстракт Aronia и экстракт Orostachys japonicus.

Тем не менее, вероятность полного излечения таких заболеваний кожи этими способами лечения довольно мала, и, поскольку эти способы не являются терапевтическим агентом, действующим только на ткань кожи и клетки кожи пораженной области, эффективность такого лечения весьма низкая, а вероятность побочных эффектов относительно высока.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Техническая проблема

В этих обстоятельствах авторы настоящего изобретения приложили значительные усилия для решения проблем, описанных выше. В результате, была подтверждена возможность эффективного лечения различных заболеваний кожи, конкретная этиология которых пока не ясна, при нанесении вещества, специфично связывающегося с пептидом, имеющим происхождение из виментина, конкретно, антитела, специфично связывающегося с пептидом SEQ ID NO: 1, на ткань кожи пациентов, страдающих от этих заболеваний кожи, посредством чего настоящее изобретение было завершено.

Техническое решение

Одной задачей настоящего изобретения является предложение фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Другой задачей настоящего изобретения является предложение косметической композиции для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение квазилекарственной композиции для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение препарата для накожного применения для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащего, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение способа предупреждения или лечения заболеваний кожи, включающего введение композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, субъекту.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение применения композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение применения композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения заболеваний кожи.

Еще одной задачей настоящего изобретения является предложение применения композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, для изготовления косметических средств, квазилекарственных средств или препаратов для накожного применения для облегчения заболеваний кожи.

Полезные эффекты

Вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, конкретнее, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, позволяют эффективно предупреждать и лечить заболевания кожи, сопровождающиеся экспрессией пептида, имеющего происхождение из виментина, и, таким образом, могут быть эффективно использованы в качестве терапевтических агентов применительно к различным заболеваниям кожи, конкретная этиология которых пока не ясна.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На ФИГ. 1 представлена схематическая диаграмма вектора для получения химерного VSF.

На ФИГ. 2 представлена схематическая диаграмма химерного VSF.

На ФИГ. 3 представлена диаграмма, подтверждающая экспрессию химерного VSF.

На ФИГ. 4 представлена диаграмма, на которой показана последовательность ДНК scFv VSF.

На ФИГ. 5 представлена схематическая диаграмма, на которой показано клонирование scFv VSF в вектор. На ФИГ. 5 linker обозначает линкер; pelB coding sequence обозначает pelB кодирующая последовательность; His-Tag обозначает His-метка.

На ФИГ. 6 представлена диаграмма, подтверждающая scFV VSF после очистки.

На ФИГ. 7 представлена схематическая диаграмма вектора для получения гуманизированного антитела hzVSF.

На ФИГ. 8 представлена схематическая диаграмма гуманизированного антитела hzVSF по настоящему изобретению.

На ФИГ. 9 представлена диаграмма, на которой показана экспрессия гуманизированного антитела hzVSF.

На ФИГ. 10 представлена диаграмма, на которой показаны результаты электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях, подтвердившие физические свойства гуманизированного антитела hzVSF_var13.

На ФИГ. 11 представлена диаграмма, на которой показаны результаты жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (LC/MS), подтвердившие физические свойства гуманизированного антитела hzVSF_var13.

На ФИГ. 12 представлена диаграмма, на которой показаны результаты эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (SEC-HPLC), подтвердившие физические свойства гуманизированного антитела hzVSF_var13.

На ФИГ. 13 представлена диаграмма, на которой показано изоэлектрическое фокусирование (IF), подтвердившее физические свойства гуманизированного антитела hzVSF_var13.

На ФИГ. 14 представлена диаграмма, на которой показано количество доноров с пролиферацией Т-клеток в ответ на KLH, hzVSF_var12 и hzVSF_var13 из 51 донора крови.

На ФИГ. 15 представлена диаграмма, на которой показана степень пролиферации Т-клеток у 51 донора в ответ на hzVSF_var12 и hzVSF_var13, являющиеся типичными вариантами гуманизированного антитела hzVSF.

На ФИГ. 16 представлена диаграмма, на которой показана пролиферация Т-клеток, индуцированная KLH, hzVSF_var12 и hzVSF_var13, в виде средних значений индекса стимуляции (SI).

На ФИГ. 17 представлена диаграмма, на которой показаны результаты по взаимодействию нормальных человеческих тканей и VSF. На ФИГ. 17 Skin обозначает кожа; Breast обозначает молочная железа; Spleen обозначает селезенка; Rectum обозначает прямая кишка; Kidney, cortex обозначает почка, корковое вещество; Kidney, medulla обозначает почка, мозговое вещество; Gallbladder обозначает желчный пузырь; Pancreas обозначает поджелудочная железа; Tonsil обозначает миндалина; Prostate обозначает предстательная железа; Testis обозначает яичко; Uterine cervix обозначает шейка матки; Stomach, antrum обозначает желудок, антральный отдел; Stomach, fundus обозначает желудок, фундальный отдел; Small bowel обозначает тонкая кишка; Myometrium обозначает миометрий; Placenta обозначает плацента; Adrenal gland обозначает надпочечник; Skeletal muscle обозначает скелетная мышца; Lung обозначает легкое; Salivary gland обозначает слюнная железа; Cerebrum обозначает головной мозг; Cerebellum обозначает мозжечок; Lymph node обозначает лимфатический узел.

На ФИГ. 18 представлена диаграмма, подтверждающая экспрессию VR при различных заболеваниях кожи.

На ФИГ. 19 представлена диаграмма, подтверждающая экспрессию VR при розовом лишае, опоясывающем герпесе, простом хроническом лишае, простом герпесе, нумуллярной экземе и контагиозном моллюске.

На ФИГ. 20 представлена диаграмма, подтверждающая экспрессию VR при псориазе, простых бородавках, атопическом дерматите и аллергическом контактном дерматите.

На ФИГ. 21 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента 1 с псориазом.

На ФИГ. 22 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента 2 с псориазом.

На ФИГ. 23 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента 1 с простым хроническим лишаем.

На ФИГ. 24 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента 2 с простым хроническим лишаем.

На ФИГ. 25 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента 3 с простым хроническим лишаем.

На ФИГ. 26 представлена диаграмма, подтверждающая терапевтическую эффективность VSF у пациента с нумуллярной экземой.

На ФИГ. 27 представлена диаграмма, на которой показаны значения индекса площади и тяжести экземы (eczema area and severity index, EASI), позволяющего оценить эритему, отек/бугорки/папулы, осаднение и лихенификацию у пациентов с простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, экземой, атопическим дерматитом и дерматитом, после нанесения VSF, и значения индекса площади и тяжести псориаза (psoriasis area severity index, PASI), позволяющего оценить эритему, утолщение и шелушение кожи у пациентов с псориазом.

На ФИГ. 28 представлена диаграмма, на которой показана визуальная аналоговая шкала (visual analogue scale, VAS) у пациентов с простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, экземой, атопическим дерматитом, дерматитом и псориазом после нанесения VSF.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВОПЛОЩЕНИЙ

Конкретные подробности настоящего изобретения могут быть объяснены следующим образом. В то же время, объяснения и воплощения, раскрытые в настоящем изобретении, могут быть применены к другим объяснениям и воплощениям, соответственно. То есть, объем настоящего изобретения включает все комбинации различных элементов, раскрытых здесь. Кроме того, объем настоящего изобретения не следует ограничивать конкретными описаниями, приведенными ниже.

Для решения указанных выше задач согласно одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом, имеющим происхождение из виментина.

Более конкретно, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

При использовании здесь виментин, представляющий собой белок, кодируемый геном VIM, выполняет функцию поддержания и фиксации положения внутриклеточных органелл, и известно, что он вовлечен главным образом в поддержание цитоскелета, транспорт белков и передачу клеточных сигналов. В настоящем изобретении было подтверждено, что, несмотря на отсутствие внеклеточной экспрессии виментина в нормальных клетках, он экспрессирован внеклеточно в тканях кожи пациентов с различными заболеваниями кожи, конкретная этиология которых пока не ясна, и, кроме того, что нанесение вещества, способного связываться с пептидом, имеющим происхождение из виментина, такого как антитело, специфичное в отношении этого пептида, на ткани кожи пациентов позволяет эффективно лечить различные заболевания кожи.

Конкретно, пептид, имеющий происхождение из виментина, может представлять собой пептид SEQ ID NO: 1.

В настоящем изобретении «вещество, специфично связывающееся с пептидом, имеющим происхождение из виментина», представляющее собой вещество, имеющее аффинность связывания в отношении пептида, имеющего происхождение из виментина, может, конкретно, представлять собой вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

В настоящем изобретении выделенный пептид SEQ ID NO: 1 соответствует аминокислотной последовательности виментина в аминокислотных положениях 142-294, и указанный пептид может содержать не только указанную выше аминокислотную последовательность, но также любую аминокислотную последовательность, на 80% или более, предпочтительно на 90% или более, более предпочтительно на 95% или более и еще более предпочтительно на 97% или более гомологичную указанной выше последовательности, при условии, что с ним могут связываться антитело по настоящему изобретению или его фрагмент.

Конкретнее, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, может представлять собой антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, соединение, пептид или аптамер пептида. Конкретнее, вещество может представлять собой антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, но не ограничено ими.

Конкретно, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом.

Примеры антитела могут включать мышиные антитела, химерные антитела или гуманизированные антитела, но не ограничены ими.

Гуманизированное антитело или фрагмент, связывающиеся с пептидом по настоящему изобретению, обладают преимуществом ингибирования реакции организма человека против мышиных антител (human anti-mouse antibody reaction, HAMA) и, в то же время, сохраняют исходную аффинность и специфичность мышиного антитела, благодаря переносу гипервариабельного участка вариабельной области мышиного моноклона или моноклонального антитела, непосредственно связывающегося с антигеном, на каркас человеческого антитела. Кроме того, иммуногенность гуманизированных антител по настоящему изобретению снижена посредством деиммунизации, и поэтому они могут быть использованы в качестве агента, безопасного при введении людям, благодаря существенному снижению их иммуногенности. То есть, гуманизированные антитела по настоящему изобретению могут действовать на клетки-мишени более эффективно, благоприятным образом взаимодействуя с иммунной системой человека и, в то же время, отвечая и влияя на клетки, на поверхности мембраны которых представлена пептидная область SEQ ID NO: 1, например, предупреждая комплемент-зависимую цитотоксичность (complement-dependent cytotoxicity, CDC) или антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC). Кроме этого, гуманизированные антитела по настоящему изобретению обладают тем преимуществом, что иммунная система человека не распознает эти гуманизированные антитела как белки чужеродного происхождения, благодаря их сниженной иммуногенности. Кроме этого, гуманизированные антитела по настоящему изобретению также обладают тем преимуществом, что периоды полувыведения этих гуманизированных антител из кровеносной системы человека близки к периодам полувыведения естественных антител, даже при введении лекарственного средства в меньшей дозе и с меньшей частотой.

В настоящем изобретении мышиные антитела, специфично связывающиеся с выделенным пептидом SEQ ID NO: 1, могут, вместе взятые, быть названы «мышиным вирусоподавляющим фактором (mouse virus suppressing factor, mVSF)»; химерные антитела, «химерным вирусоподавляющим фактором (chimeric virus suppressing factor, chVSF)»; и гуманизированные антитела, «гуманизированным вирусоподавляющим фактором (humanized virus suppressing factor, hzVSF)». При использовании здесь термин «гуманизированное антитело hzVSF» или «его варианты» могут быть использованы взаимозаменяемо, и hzVSF может быть использован взаимозаменяемо с hzVSF дикого типа (hzVSF_wt) и вариантом hzVSF (например, обозначенными как hzVSF_var1, hzVSF_v1, hzVSF_1 и так далее).

Выделенный пептид SEQ ID NO: 1 представляет собой антигенную область, содержащую эпитоп, и он может представлять собой аминокислотную последовательность виментина в аминокислотных положениях 142-211 или в аминокислотных положениях 211-294 при условии, что пептид может демонстрировать функцию, сходную с функцией пептида по настоящему изобретению, связываясь с антителом или пептид-связывающим фрагментом. Кроме того, очевидно, что объем настоящего изобретения может включать любую аминокислотную последовательность, имеющую такую гомологию, описанную выше, несмотря на то, что эта последовательность может иметь частичную делецию, модификацию, замену или добавление. Виментин, представляющий собой белок, кодируемый геном VIM, выполняет функции поддержания и фиксации положения внутриклеточных органелл, и известно, что он вовлечен главным образом в поддержание цитоскелета, транспорт белков и передачу клеточных сигналов. Также известно, что виментин используют в качестве онкомаркера, тем не менее, неизвестно, можно ли использовать антитела, способные связываться с виментином, для лечения заболеваний кожи.

Антитело, специфично связывающееся с выделенным пептидом SEQ ID NO: 1 по настоящему изобретению, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, специфично отвечают на клетки кожи пациентов с заболеваниями кожи, и антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, связываются с рецепторами вирусоподавляющего фактора (VSF), представленными на поверхности клеток тканей кожи или клеток кожи в области, пораженной этими заболеваниями. Поэтому антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом по настоящему изобретению, могут быть эффективно использованы в области предупреждения или лечения различных заболеваний кожи, конкретная этиология которых пока не ясна.

Конкретно, антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, могут представлять собой антитело или фрагмент, специфично связывающиеся с аминокислотным остатком в положении 9, 45, 54, 76, 94 или 129 пептида SEQ ID NO: 1, и, конкретнее, антитело или фрагмент, специфично связывающиеся с аминокислотными остатками в положениях 9, 45, 54, 76, 94 и 129 пептида SEQ ID NO: 1, но не ограничены ими, при условии, что антитело или фрагмент могут специфично связываться с выделенным пептидом SEQ ID NO: 1.

При использовании здесь термин «антитело» иммунологически относится к молекуле белка, выполняющего роль лиганда, специфично распознающего антиген, включая молекулу иммуноглобулина, обладающую реактивностью в отношении конкретного антигена, и может включать все из поликлонального антитела, моноклонального антитела, целого антитела и фрагмента антитела. Кроме того, термин «антитело» может включать химерное антитело (например, гуманизированное мышиное антитело), бивалентную или биспецифичную молекулу (например, биспецифичное антитело), диатело, триатело и тетратело. Кроме того, термин «антитело» может включать одноцепочечное антитело, обладающее аффинностью связывания в отношении FcRn, scAb, производное константной области антитела, искусственное антитело на основе белкового каркаса. Структура целого антитела состоит из двух полноразмерных легких цепей и двух полноразмерных тяжелых цепей, где каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью дисульфидной связью. Целое антитело включает IgA, IgD, IgE, IgM и IgG, и подтипы IgG включают IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. При использовании здесь термины «фрагмент», «фрагмент, связывающийся с пептидом», и «фрагмент антитела» относятся к любому фрагменту антител по настоящему изобретению, обладающему антигенсвязывающей активностью этих антител, и эти термины могут быть использованы взаимозаменяемо. Примеры фрагментов антител включают одноцепочечное антитело, Fd, Fab, Fab', F(ab')2, dsFv или scFv, но не ограничены ими. Fd относится к части тяжелой цепи, включенной в Fab-фрагмент. Структура Fab состоит из вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи, константных областей легкой цепи и первой константной области тяжелой цепи (домена СН1) и имеет один антигенсвязывающий домен. Fab' отличается от Fab тем, что у Fab' есть шарнирная область, содержащая по меньшей мере один цистеиновый остаток, на С-конце домена СН1 тяжелой цепи. Антитело F(ab')2 возникает при образовании дисульфидной связи между цистеиновыми остатками шарнирной области Fab'. При использовании здесь термин «вариабельный фрагмент (Fv)» относится к минимальному фрагменту антитела, имеющему только вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. Дисульфидно стабилизированный Fv (dsFv) характеризуется тем, что вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи связаны дисульфидной связью, и одноцепочечный Fv (scFv) характеризуется тем, что вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи обычно связаны ковалентной связью через линкер. Эти фрагменты антител могут быть получены с использованием протеазы (например, рестрикционное расщепление целого антитела папаином позволяет получить Fab, в то время как расщепление целого антитела пепсином позволяет получить F(ab')₂-фрагменты) и могут, предпочтительно, быть получены с применением генетической рекомбинантной технологии.

Конкретно, фрагмент, связывающийся с пептидом, может представлять собой Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dsFv, ds-scFv, их димеры, минитела, диатела, мультимеры или фрагменты биспецифичных антител.

При использовании здесь термин «моноклональное антитело» относится к молекуле антитела, состоящей из одной молекулы, полученной из по существу одной и той же группы антител, и моноклональное антитело демонстрирует одну специфичность и аффинность связывания в отношении определенного эпитопа.

Обычно иммуноглобулины имеют тяжелые цепи и легкие цепи, и каждая тяжелая цепь и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область (также известные как домены). Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи содержат три высоко вариабельные области, называемые гипервариабельными участками (complementarity-determining regions, CDR), и четыре каркасные области (framework regions, FR). Основной ролью CDR является связывание с эпитопом антигена. В каждой цепи CDR называют последовательно CDR1, CDR2 и CDR3, обычно начиная с N-конца, и их определяют по цепи, в которой расположен конкретный CDR.

Кроме того, когда антитело по настоящему изобретению содержит константную область, оно может содержать константную область, имеющую происхождение из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM, или их комбинацию или гибрид.

При использовании здесь термин «комбинация» относится к образованию связи между полипептидом, кодирующим одноцепочечную константную область иммуноглобулина одного происхождения, и одноцепочечным полипептидом другого происхождения при образовании димера или мультимера. Например, димер или мультимер могут быть образованы двумя или более константными областями, выбранными из группы, состоящей из константных областей IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.

При использовании здесь термин «гибрид» относится к присутствию последовательностей, соответствующих двум или более константным областям тяжелой цепи иммуноглобулина разного происхождения в одноцепочечной константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, и, например, может быть возможен гибрид, состоящий из одного-четырех доменов, выбранных из группы, состоящей из CH1, СН2, СН3 и СН4 IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.

Гуманизированное антитело по настоящему изобретению может быть гуманизировано на основе человеческого иммуноглобулина у4, однако гуманизация не ограничена этим вариантом, и оно может обладать тем преимуществом, что оно не приводит к комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC), благодаря отсутствию связывания комплемента.

Гуманизированное антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, могут содержать: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 14 (где треонин, аминокислота 9 SEQ ID NO: 3, заменен аспарагиновой кислотой) и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 15 (где треонин, аминокислота 4 SEQ ID NO: 4, заменен аспарагином); и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 5, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 16 (где треонин, аминокислота 3 SEQ ID NO: 6, заменен аспарагиновой кислотой), SEQ ID NO: 17 (где треонин, аминокислота 3 SEQ ID NO: 6, заменен аспарагиновой кислотой; и аланин, аминокислота 6 SEQ ID NO: 6, заменен глицином) или SEQ ID NO: 18 (где треонин, аминокислота 3 SEQ ID NO: 6, заменен аспарагиновой кислотой; лейцин, аминокислота 5 SEQ ID NO: 6, заменен аргинином; и аланин, аминокислота 6 SEQ ID NO: 6, заменен глицином) и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 19 (где серии, аминокислота 6 SEQ ID NO: 7, заменен треонином).

Кроме того, гуманизированное антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, могут содержать человеческую каркасную область (FR) и могут представлять собой человеческий иммуноглобулин-гамма SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 31 или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую каркасную область 1 (FR1) тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, FR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 21, FR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 28 (где лизин, аминокислота 8 SEQ ID NO: 22, заменен треонином; и изолейцин, аминокислота 10 SEQ ID NO: 22, заменен аланином) и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 23, и вариабельную область легкой цепи, содержащую FR1 легкой цепи SEQ ID NO: 24, FR2 легкой цепи SEQ ID NO: 25, FR3 легкой цепи SEQ ID NO: 26 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 27, но гуманизированное антитело или фрагмент не ограничены указанными вариантами.

Конкретно, гуманизированное антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, могут содержать:

(a) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно; (b) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 7, соответственно; (с) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 7, соответственно; (d) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 7, соответственно; (е) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19, соответственно; (f) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно; (g) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (h) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 4, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (i) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (j) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 4, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 7, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (k) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 7, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (l) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 4, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; (m) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 15, соответственно; FR1, FR2, FR3 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 28 и SEQ ID NO: 23, соответственно; CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19, соответственно; и FR1, FR2, FR3 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответственно; и (n) CDR1 тяжелой цепи, CDR2 тяжелой цепи и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 4, соответственно; и CDR1 легкой цепи, CDR2 легкой цепи и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 7, соответственно.

Антитело (а) может содержать hzVSF_WT, антитело (b) может содержать hzVSF_var1, антитело (с) может содержать hzVSF_var2, антитело (d) может содержать hzVSF_var3, антитело (е) может содержать hzVSF_var4, антитело (f) может содержать hzVSF_var5, антитело (g) может содержать hzVSF_var6, антитело (h) может содержать hzVSF_var7, антитело (i) может содержать hzVSF_var8, антитело (j) может содержать hzVSF_var9, антитело (k) может содержать hzVSF_var10, антитело (l) может содержать hzVSF_var11, антитело (m) может содержать hzVSF_var12, и антитело (n) может содержать hzVSF_var13.

Гуманизированное антитело или фрагмент, связывающиеся с указанным пептидом, могут содержать вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40 и SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44 и SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48 и SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60 и SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64 и SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72 и SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 78 или SEQ ID NO: 80 и SEQ ID NO: 82, соответственно, но не ограничены ими.

Конкретно, мышиное антитело может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO: 137, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO: 138 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO: 139, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO: 134, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO: 135 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO: 136, и, конкретнее, содержать вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 8, но не ограничено ими.

Конкретно, химерное антитело может содержать вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 141 или SEQ ID NO: 142 и вариабельную область легкой цепи SEQ ID NO: 140, и, конкретнее, тяжелую цепь SEQ ID NO: 146 или SEQ ID NO: 148 и легкую цепь SEQ ID NO: 144, но не ограничено ими.

scFv может также включать scFv, полученный для безопасности mVSF, но не ограничен им, и, например, scFv может быть получен с использованием последовательности, показанной на ФИГ. 4. Кроме того, scFv может быть представлен в форме, где вариабельная область тяжелой цепи SEQ ID NO: 131 и вариабельная область легкой цепи SEQ ID NO: 133 связаны линкером. Кроме того, scFv может быть представлен в форме, где вариабельная область тяжелой цепи, кодируемая нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 130, и вариабельная область легкой цепи, кодируемая нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 132, связаны линкером. Такой scFv может быть клонирован в вектор экспрессии в Е. coli с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 150.

Согласно определенному воплощению настоящего изобретения авторы настоящего изобретения получили гуманизированные антитела, то есть hzVSF_wt, три альтернативных антитела и 13 их вариантов (Пример 5). Кроме того, в результате сравнения иммуногенности полученных гуманизированных антител с имеющимися в продаже лекарственными средствами, утвержденными Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (FDA), было подтверждено, что иммуногенность гуманизированных антител была сходна с иммуногенностью лекарственного средства «Хумира», представляющего собой человеческое антитело с наименьшей иммуногенностью среди имеющихся в продаже антител (Таблица 7), посредством чего было подтверждено, что полученные гуманизированные антитела могут быть использованы в качестве безопасных лекарственных средств, квазилекарственных средств, препаратов для накожного применения и так далее без каких-либо неблагоприятных эффектов, которые могут возникать при применении в качестве терапевтических агентов в связи с заболеваниями кожи.

Кроме того, в анализе с Т-клетками было показано, что варианты hzVSF_wt не оказывают существенного влияния на пролиферацию Т-клеток (Таблица 8), что позволило подтвердить низкий риск развития нежелательных реакций, обусловленных действием этих вариантов в качестве иммуногенов, при их применении в клинических исследованиях.

В настоящем изобретении заболевание кожи может представлять собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит, и, конкретно, заболевание кожи может представлять собой простой хронический лишай, псориаз, нумуллярную экзему, экзему, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит. Тем не менее, заболевание кожи по настоящему изобретению может включать любое заболевание кожи при условии, что оно сопровождается экспрессией VR в ткани кожи или клетках кожи.

В определенном воплощении настоящего изобретения была подтверждена экспрессия пептида SEQ ID NO: 1, имеющего происхождение из виментина, в тканях кожи пациентов с различными заболеваниями кожи, несмотря на отсутствие экспрессии этого пептида в нормальных клетках (ФИГ. 17). Кроме того, было подтверждено, что вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, продемонстрировало по существу отличную терапевтическую эффективность в отношении заболеваний кожи, даже у пациентов с простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, экземой, атопическим дерматитом или аллергическим контактным дерматитом (ФИГ. 21-28), и, таким образом, может быть использовано в качестве фармацевтической композиции для предупреждения и лечения различных заболеваний кожи, конкретная этиология которых пока не ясна.

Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель.

При использовании здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к носителю или разбавителю, не ингибирующему биологические активности или свойства соединения, которое необходимо ввести в организм, не вызывая раздражения у этого организма. Примеры фармацевтически приемлемого носителя, используемого в композиции, которую необходимо изготовить в форме жидкого раствора, включают физиологический раствор, стерильную воду, раствор Рингера, забуференный физиологический раствор, раствор альбумина для инъекций, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин, этанол и смесь по меньшей мере одного их компонента, такого как компоненты, подходящие для стерилизации и применения in vivo, и, по необходимости, возможно также добавление другой традиционной добавки (добавок), такой как антиоксидант, буфер, бактериостатический агент и так далее. Кроме того, композиция может быть изготовлена в форме композиций для инъекций, таких как водный раствор, суспензия, эмульсия и так далее, пилюль, капсул, гранул или таблеток посредством дополнительного добавления разбавителя, диспергирующего вещества, поверхностно-активного вещества, связывающего агента, смазывающего агента и так далее.

Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в форме различных композиций для перорального или парентерального введения. Для изготовления этих композиций фармацевтическая композиция может быть изготовлена в комбинации с широко применяемым разбавителем или эксципиентом, таким как наполнитель, заполнитель (extender), связывающий агент, увлажнитель, разрыхлитель, поверхностно-активное вещество и так далее. Твердые композиции для перорального введения могут включать таблетки, пилюли, порошки, гранулы, капсулы и так далее, и эти твердые композиции могут быть изготовлены смешиванием с по меньшей мере одним эксципиентом, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой или лактозой, желатином и так далее. Помимо простого эксципиента, может быть использован смазывающий агент, такой как стеарат магния, тальк и так далее. Жидкие композиции для перорального введения могут включать суспензии, растворы для перорального введения, эмульсии, сиропы и так далее, и, помимо простого разбавителя, такого как вода или жидкий парафин, в жидкие препараты могут быть включены различные эксципиенты, такие как увлажнители, подсластители, корригенты, консерванты и так далее. Композиции для парентерального введения могут включать стерильные водные растворы, неводные растворители, суспензии, эмульсии, лиофилизированные композиции, суппозитории. Примеры неводных растворителей и суспензий могут включать пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, сложный эфир, подходящий для инъекционного введения, такой как этилолеат, и так далее. Примеры основ для суппозиториев могут включать витепсол, макрогол, Tween 61, масло какао, лаурин (laurinum), глицерожелатин и так далее.

Фармацевтическая композиция может представлять собой композицию любого типа, выбранную из группы, состоящей из таблеток, пилюль, порошков, гранул, капсул, суспензий, растворов для перорального введения, эмульсий, сиропов, стерильных водных растворов, неводных растворителей, суспензий, лиофилизированных композиций и суппозиториев.

Композицию по настоящему изобретению вводят в фармацевтически эффективной дозе.

При использовании здесь термин «фармацевтически эффективная доза» относится к количеству, достаточному для лечения заболеваний с разумным соотношением пользы и риска применительно к лекарственной терапии, и уровень эффективной дозы может быть определен, исходя из факторов, включающих тип субъекта, тяжесть заболевания, возраст, пол, тип заболевания (заболеваний), активность лекарственного средства, чувствительность к лекарственному средству, время введения, путь введения и скорость растворения, продолжительность лечения, факторы, включающие лекарственное(ые) средство (средства), которые необходимо применять одновременно в комбинации, и другие факторы, хорошо известные в области медицины. Композиция по настоящему изобретению может быть введена как отдельный терапевтический агент, в комбинации с другим(и) терапевтическим(и) агентом (агентами) и последовательно или одновременно с традиционным(и) терапевтическим(и) агентом (агентами). Кроме того, композицию по настоящему изобретению можно вводить в однократной дозе или многократных дозах. Важно, чтобы вводимое количество позволяло получить максимальный эффект при минимальном количестве без неблагоприятных эффектов с учетом факторов, описанных выше, и специалист в данной области может легко определить эти факторы. Другой терапевтический агент может представлять собой интерферон, но не ограничен им.

При использовании здесь термин «предупреждение» может относиться ко всем действиям, приводящим к подавлению или задержке начала заболевания посредством введения композиции, и термин «лечение» может относиться ко всем действиям, связанным с облегчением или полезными изменениями симптомов заболевания в результате введения композиции.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена косметическая композиция для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Конкретнее, согласно настоящему изобретению предложена косметическая композиция для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом.

Вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, пептид SEQ ID NO: 1, антитело, фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, заболевание кожи и предупреждение соответствуют описанным выше.

В определенном воплощении настоящего изобретения было подтверждено, что вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, продемонстрировало по существу отличную терапевтическую эффективность, даже у пациентов с псориазом, простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, экземой, атопическим дерматитом или аллергическим контактным дерматитом (ФИГ. 21-28), и, таким образом, может быть использовано в качестве косметической композиции для предупреждения и облегчения различных заболеваний кожи, конкретная этиология которых пока не ясна.

Косметическая композиция по настоящему изобретению может быть изготовлена в форме композиций, выбранных из группы, состоящей из раствора, мази для местного применения, крема, пены, питательной косметической воды, смягчающей косметической воды, косметической маски, смягчающей воды, латекса, основы для макияжа, духов, мыла, жидкого средства для мытья, пены для ванн, солнцезащитного крема, масла для загара, суспензии, эмульсии, пасты, геля, лосьона, порошка, очищающего средства, содержащего поверхностно-активное вещество, масла, тональной пудры, тональной эмульсии, тонального воска, пластыря и спрея, но не ограничена ими.

Кроме того, косметическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере один косметически приемлемый носитель, смешанный с обычной косметической композицией для кожи. В качестве распространенных ингредиентов для смешивания могут быть использованы, например, масло, вода, поверхностно-активные вещества, увлажняющие средства, низшие спирты, загустители, хелатирующие агенты, красители, консерванты, ароматизаторы и так далее.

Косметически приемлемый носитель, содержащийся в косметической композиции по настоящему изобретению, может различаться, в зависимости от состава композиций.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой мазь, пасту, крем или гель, в качестве ингредиента-носителя могут быть использованы жидкий животный жир, растительное масло, воск, парафин, крахмал, трагакантовая камедь, производные целлюлозы, полиэтиленгликоль, силикон, бентонит, диоксид кремния, тальк, оксид цинка или их смеси.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой порошок или спрей, в качестве ингредиента-носителя могут быть использованы лактоза, тальк, диоксид кремния, гидроксид алюминия, силикат кальция, полиамидный порошок или их смеси, и, в частности, когда она представляет собой спрей, в нее может быть дополнительно включен пропеллент, такой как хлорфторуглеводород, пропан/бутан или диметиловый эфир.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой раствор или эмульсию, в качестве ингредиента-носителя могут быть использованы растворители, солюбилизирующие агенты или эмульгаторы, и, например, могут быть использованы вода, этанол, изопропанол, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутилгликоль, масло. В частности, могут быть использованы хлопковое масло, арахисовое масло, масло из зародышей кукурузы, оливковое масло, касторовое масло и масло семян кунжута, алифатический эфир глицерина, полиэтиленгликоль или алифатический эфир сорбитана.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой суспензию, в качестве ингредиента-носителя могут быть использованы жидкие разбавители, такие как вода, этанол или пропиленгликоль, суспендирующий агент, такой как этоксилированный изостеариловый спирт, сложный эфир полиоксиэтиленсорбита и сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар, трагакантовая камедь и так далее.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой мыло, в качестве ингредиента-носителя могут быть использованы соли щелочных металлов и жирных кислот, соли полуэфиров жирных кислот, белковые гидролизаты жирных кислот, изетионат, производные ланолина, алифатические спирты, растительное масло, глицерин, сахара и так далее.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена квазилекарственная композиция для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Конкретнее, согласно настоящему изобретению предложена квазилекарственная композиция для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащая, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом.

Вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, пептид SEQ ID NO: 1, антитело, фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, заболевание кожи и предупреждение соответствуют описанным выше.

Помимо указанных выше компонентов, квазилекарственная композиция по настоящему изобретению может, по необходимости, дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. Фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель не ограничены при условии сохранения эффекта настоящего изобретения и могут включать, например, наполнители, заполнители, связывающие агенты, увлажняющие агенты, разрыхлители, поверхностно-активные вещества, смазывающие агенты, подсластители, корригенты, консерванты и так далее.

Примеры квазилекарственной композиции по настоящему изобретению могут включать дезинфицирующие очищающие средства, пены для душа, мази, влажные салфетки, агенты для покрытия и так далее, но не ограничены ими. Способ изготовления, доза, способ применения, компоненты и так далее квазилекарственной композиции могут быть подходящим образом выбраны из традиционных методик, известных в данной области.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен препарат для накожного применения для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащий, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Конкретнее, согласно настоящему изобретению предложен препарат для накожного применения для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащий, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом.

Вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, пептид SEQ ID NO: 1, антитело, фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, заболевание кожи и предупреждение соответствуют описанным выше.

При использовании здесь термин «препарат для накожного применения» является общим понятием, включающим все вещества, обычно используемые для нанесения на кожу. Неограничивающие примеры композиций, включая фармацевтическую композицию, могут включать пластыри, лосьоны, жидкие мази, жидкости и растворы, аэрозоли, экстракты, мази, жидкие экстракты, эмульсии, суспензии, капсулы, кремы, мягкие или твердые желатиновые капсулы, пластыри или агенты с длительным высвобождением.

Препарат для накожного применения по настоящему изобретению может представлять собой препарат для парентерального введения, изготовленный в твердой, полутвердой или жидкой форме посредством добавления широко используемого неорганического или органического носителя, эксципиента и разбавителя. Для парентерального введения препарат для накожного применения может представлять собой композицию для трансдермального введения, выбранную из группы, состоящей из капель, мазей, лосьонов, гелей, кремов, пластырей, спреев, суспензий и эмульсий, но не ограничен ими.

Носители, эксципиенты и разбавители, которые могут быть включены в препарат для накожного применения, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, олигосахариды, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло.

В случае каждого препарата для накожного применения специалист в данной области может без труда выбрать и включить в смесь другие компоненты, помимо композиции по настоящему изобретению, описанной выше, исходя из состава или цели использования других препаратов для накожного применения, и в этом случае при одновременном нанесении этих компонентов с другими веществами может быть достигнут синергетический эффект.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения заболеваний кожи, включающий введение композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, субъекту.

Конкретно, согласно настоящему изобретению предложен способ предупреждения или лечения заболеваний кожи, включающий введение композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, антитело, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, или фрагмент, связывающийся с указанным пептидом, субъекту.

Способ лечения заболеваний кожи может представлять собой способ, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело или дополнительный фармацевтически приемлемый носитель, субъекту с заболеванием кожи или подозрением на такое заболевание. Фармацевтически приемлемый носитель соответствует описанному выше.

Субъект может включать млекопитающих, птиц и так далее, таких как крупный рогатый скот, свиньи, овцы, куры, собаки, люди и так далее, и может включать, без ограничения, любого субъекта, у которого можно лечить заболевания кожи путем введения композиции по настоящему изобретению.

В частности, композиция может быть введена в фармацевтически приемлемом количестве в однократной дозе или многократных дозах. Композиция может быть введена в форме жидкостей, порошков, аэрозолей, капсул, таблеток, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, капсул или суппозиториев. Примеры путей введения могут включать внутрибрюшинное, внутривенное, внутримышечное, подкожное, эндотелиальное, пероральное, местное, интраназальное, интрапульмональное, интраректальное введение и так далее, но не ограничены ими. Тем не менее, ввиду расщепления пептидов при их пероральном введении, композиция для перорального введения должна быть изготовлена таким образом, чтобы активный ингредиент был покрыт оболочкой или защищен от разрушения в желудке. Кроме того, фармацевтическая композиция может быть введена с использованием любого устройства, позволяющего обеспечить транспорт активного ингредиента к клетке-мишени.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения заболеваний кожи.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение композиции, содержащей, в качестве активного ингредиента, вещество, специфично связывающееся с пептидом SEQ ID NO: 1, для изготовления косметических средств, квазилекарственных средств или препаратов для накожного применения для облегчения заболеваний кожи.

МЕТОД ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение будет описано более подробно посредством Примеров. Тем не менее, эти Примеры приведены исключительно для наглядности и не ограничивают объем настоящего изобретения.

Пример 1: Получение VSF (вирусоподявляющего фактора)

Пример 1-1: Получение chVSF (химерного VSF)

Исходя из того допущения, что основной функциональной частью мышиного VSF (mVSF) является моноклональное антитело, посредством генной инженерии с использованием mVSF и человеческого иммуноглобулина было получено мышиное/человеческое химерное антитело (chAb).

Конкретно, для получения химерного антитела константные области легкой и тяжелой цепей mVSF были заменены константными областями антитела, являющегося человеческим иммуноглобулином (κ, γ2 или γ4). Для chVSF получали вектор экспрессии, используя вектор pCAGGS в качестве матрицы (ФИГ. 1). Вариабельную область тяжелой цепи mVSF (mVH) (SEQ ID NO: 9), включая сайты рестрикции SacI и KpnI, амплифицировали посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР). Вариабельную область легкой цепи (mVL) (SEQ ID NO: 8), включая сайты рестрикции ClaI и XhoI амплифицировали посредством ПЦР. Праймеры, использованные при ПЦР, описаны в Таблице 1, и ПЦР проводили на протяжении в общей сложности 35 циклов, включавших 94°С в течение 45 с, 60°С в течение 45 с и 72°С в течение 45 с, и затем при 72°С в течение 10 мин.

Человеческую тяжелую цепь (SEQ ID NO: 11) клонировали с использованием сайтов рестрикции KpnI и SphI, и легкую цепь (SEQ ID NO: 13) клонировали с использованием сайтов рестрикции XhoI и BglI. Для одновременной экспрессии тяжелой цепи и легкой цепи между легкой цепью и тяжелой цепью клонировали внутренний сайт посадки рибосом (IRES), используя сайты рестрикции SphI и ClaI. В сайт рестрикции SalI вводили селектируемый маркер. Соответственно, chVSF получали, как показано на схематической диаграмме, представленной на ФИГ 2.

Пример 1-2: Экспрессия chVSF с использованием двухвекторной системы экспрессии

Клетки HEK 293Т трансфицировали 15 мкг pCAGGS-GFP с использованием 1 мг/мл полиэтиленимина (PEI) для оценки уровней трансфекции и экспрессии. Таким же образом chVSF, полученным в Примере 1-1, трансфицировали клетки HEK 293Т, и через 6 часов среду заменяли средой, содержащей 2% фетальную бычью сыворотку (FBS). Супернатант клеточной культуры собирали каждые 3 суток и присутствовавшие в нем примеси удаляли, используя фильтр (0,45 мкм). chVSF очищали с использованием гранул nProtein A Sepharose®. chVSF элюировали буфером с 0,2 М глицином/HCl (рН 2,5), и в качестве нейтрализующего буфера использовали буфер с 1 М трис-Cl (рН 9,0). Конкретно, после гомогенизации смолы 10-кратным объемом буфера с 1 М трис-Cl (рН 8,0) относительно объема смолы через колонку пропускали культуральный супернатант с VSF. После этого колонку промывали, внося в нее по меньшей мере 5-кратный объем буфера с 0,1 М трис-Cl (рН 8,0) относительно объема колонки. Затем проводили элюирование, внося в колонку 5-кратный объем буфера с 0,2 М глицином/HCl (рН 2,5) относительно объема смолы, получая посредством этого очищенные VSF в пробирке, в которую предварительно был добавлен нейтрализующий буфер. Очищенные VSF затем подтверждали посредством SDS-PAGE.

В результате, как показано на ФИГ. 3, было подтверждено, что chVSF имеет структуру, состоящую из тяжелой цепи (50 кДа) и легкой цепи (25 кДа), имеющих характеристики иммуноглобулина.

Пример 2: Получение одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv)

Одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) получали, используя вариабельные области VSF. scFv имеет ДНК-последовательность SEQ ID NO: 150, и scFv получали клонированием этой ДНК в рЕТ-22b (+), вектор экспрессии в Е. coli (ФИГ. 4 и 5).

Конкретно, scFV получали связыванием VH и VL mVSF через линкер, встроенный в бактериальный вектор экспрессии рЕТ-22b (+), обработанный изопропилтиогалактозидом (IPTG) для индукции его экспрессии, и затем очищали с использованием Ni-NTA-колонки (ФИГ. 6).

Пример 3: Получение гуманизированного антитела VSF

Гуманизированное антитело hzVSF получали с использованием chVSF на основе Примера 1.

В частности, использовали вектор pdCMV-dhfr, соответствующий двухгенному вектору экспрессии, то есть системе экспрессии, используемой для экспрессии двух разных типов рекомбинантных белков с использованием эукариотической клетки (ФИГ. 7). Этот вектор состоит из двух разных транскрипционных единиц для двух разных типов генов в одном векторе и, благодаря этому, позволяет экспрессировать два разных гена с использованием промотора и сигнальной последовательности полиаденилирования (polyA) в каждой транскрипционной единице, и он представляет собой векторную систему, в которой использован цитомегаловирусный (CMV) промотор, сильный промотор для клеток млекопитающих. С использованием этого промотора получали hzVSF, как показано на ФИГ. 8.

В связи с этим, аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи hzVSF была обозначена SEQ ID NO: 10, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи была обозначена SEQ ID NO: 11, в то время как аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи была обозначена SEQ ID NO: 12, и аминокислотная последовательность легкой цепи была обозначена SEQ ID NO: 13.

Клетки НЕК 293Т трансфицировали 15 мкг pCAGGS-GFP с использованием 1 мг/мл полиэтиленимина (PEI) для оценки уровней трансфекции и экспрессии. Таким же образом chVSF и hzVSF трансфицировали в клетки HEK 293Т, и через 6 часов среду заменяли средой, содержащей 2% FBS. Супернатант клеточной культуры собирали каждые 3 суток и присутствовавшие в нем примеси удаляли, используя фильтр (0,45 мкм). chVSF и hzVSF очищали с использованием гранул nProtein A Sepharose®. chVSF и hzVSF элюировали буфером с 0,2 М глицином/HCl (рН 2,5), и в качестве нейтрализущего буфера использовали буфер с 1 М трис-Cl (рН 9,0). Конкретно, после гомогенизации смолы 10-кратным объемом буфера с 1 М трис-Cl (рН 8,0) относительно объема смолы через колонку пропускали культуральный супернатант с VSF. После этого колонку промывали, внося в нее по меньшей мере 5-кратный объем буфера с 0,1 М трис-Cl (рН 8,0) относительно объема колонки. Затем проводили элюирование, внося в колонку 5-кратный объем буфера с 0,2 М глицином/HCl (рН 2,5) относительно объема смолы, получая посредством этого очищенные VSF в пробирке, в которую был предварительно добавлен нейтрализующий буфер. Очищенные VSF затем подтверждали посредством SDS-PAGE, а их активность подтверждали MVIT-анализом.

VSF, использованные в эксперименте, показаны в Таблице 2 ниже.

В результате, как видно на ФИГ. 9, было подтверждено, что chVSFγ2, chVSFγ4, hzVSFγ2 и hzVSFγ4 состоят из тяжелой цепи (50 кДа) и легкой цепи (25 кДа), соответственно, имеющих характеристики иммуноглобулина.

Пример 4: Подтверждение физических свойств гуманизированного антитела VSF

Физические свойства hzVSF, полученного в Примере 3, подтверждали следующим образом.

Пример 4-1: Подтверждение основных паттернов молекулярной массы и чистоты

Паттерны молекулярной массы и чистоту подтверждали посредством SDS-PAGE в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях. Конкретно, hzVSF_v13 окрашивали красителем Кумасси с применением SDS-PAGE в соответствии с молекулярной массой, посредством чего молекулярная масса и чистота были подтверждены.

В результате, как показано на ФИГ. 10, на дорожке 1 невосстанавливающего геля основную полосу наблюдали в положении, в котором следовало ожидать появления антитела IgG (150 кДа), и на дорожке 2 восстанавливающего геля наблюдали полосы, соответствующие положениям тяжелой цепи (приблизительно 50 кДа) и легкой цепи (приблизительно 25 кДа) иммуноглобулина G (IgG), что подтверждает таким образом, что hzVSF_v13 демонстрировал общий паттерн антитела IgG.

Пример 4-2: Подтверждение молекулярной массы, паттерна гликозилирования, вариабельности размера и так далее

Для подтверждения молекулярной массы, паттерна гликозилирования, вариабельности размера hzVSF_v13 и так далее проводили жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию. Проводили HPLC небольшого количества hzVSF_v13 и наблюдали полученные пики.

В результате, было подтверждено, что hzVSF_v13 демонстрировал характеристики IgG (ФИГ. 11). При анализе интактной массы (intact mass) наблюдали общую молекулярную массу hzVSF_v13 (приблизительно 140 кДа), и отмеченные паттерны пиков соответствовали обычному гликозилированному IgG (например, G0/G0, G0F/G1, G1/G1 и так далее). Кроме того, после дегликозилирования наблюдали тяжелую цепь (приблизительно 49 кДа) и легкую цепь (приблизительно 23 кДа). Исходя из молекулярной массы тяжелой цепи, где гликан был удален обработкой пептид-N-гликозидазой F (PNGase F), и тяжелой цепи без обработки пептид-N-гликозидазой F, удалось подтвердить обычный гликановый паттерн IgG (G0F, G1F и G2F).

Пример 4-3: Подтверждение чистоты и агрегации

Для подтверждения чистоты и агрегации hzVSF_v13 проводили SEC-HPLC.

Условия SEC-HPLC были следующими:

- система HPLC: Dionex Ultimate 3000;

- колонка: Tosoh TSKgel G3000 SWxl;

- подвижная фаза: фосфатный буфер, 0,5 мл/мин;

- вводимый объем: 10 мкл.

В результате, 92,44% основного пика наблюдали в положении, соответствующем мономерам типичного антитела IgG (при времени удерживания приблизительно 16 минут), и приблизительно 6,84% пика наблюдали в положении, соответствующем димерам типичного антитела IgG (при времени удерживания приблизительно 13 минут) (ФИГ. 12).

Пример 4-4: Подтверждение pi и гетерогенности заряда

Для подтверждения изоэлектрической точки hzVSF_v13 проводили электрофорез, используя гель с градиентом от рН 3 до рН 10.

В результате, как показано на ФИГ. 13, было продемонстрировано, что hzVSF_v13 имеет pi 7,7, и, помимо основных полос, были также отмечены кислые/основные изоформы. Это соответствует изомерам, обычно наблюдаемым у антител IgG (например, дезаминирование в С-концевой области).

Приведенные выше результаты подтверждают, что физические свойства гуманизированных антител hzVSF_v13 по настоящему изобретению сходны с физическими свойствами антител IgG.

Пример 5: Получение вариантов hzVSF, представляющих собой гуманизированные антитела со сниженной иммуногенностью

Пример 5-1: Получение альтернативных hzVSF

Три альтернативных hzVSF были получены на основе hzVSF, полученного в Примере 3. Активность каждого альтернативного антитела была близка к или ниже активности дикого типа (0,5 =≤ 1 ЕД < 1 мг/мл) (Таблицы 3 и 4). Аминокислотные последовательности CDR1-CDR3 каждого из альтернативных антител показаны в Таблице 3, и аминокислотные последовательности FR1-FR4 каждого из вариантов показаны в Таблице 4.

Пример 5-2: Получение вариантов hzVSF

Варианты hzVSF для фактического применения in vivo были получены на основе hzVSF, полученного в Примере 3, посредством снижения иммуногенности и созревания аффинности. В результате, были получены в общей сложности 13 вариантов (Таблицы 5 и 6). Аминокислотные последовательности CDR1-CDR3 каждого из вариантов показаны в Таблице 5, и аминокислотные последовательности FR1-FR4 каждого из вариантов показаны в Таблице 6.

Было подтверждено, что все 13 вариантов, полученные выше, имели сниженную иммуногенность по сравнению с антителами дикого типа.

Пример 5-3: Подтверждение числа эпитопов у hzVSF дикого типа и его вариантов

Было проведено сравнение числа эпитопов у hzVSF дикого типа, hzVSF_var12 и hzVSF_var13, являющихся типичными вариантами с иммуногенностью ниже, чем у дикого типа; и четырех типов активно продаваемых антител, являющихся лекарственными средствами, представленными в настоящее время на фармацевтическом рынке. В результате, была подтверждена возможность относительной иммуногенности при каждом HLA класса II, как показано в Таблице 7.

В Таблице 7 более высокий общий показатель означает более высокую вероятность неблагоприятных эффектов, обусловленных HLA класса II. Исходя из представленных выше результатов, было подтверждено, что число эпитопов у hzVSF_var12 и hzVSF_var13 со сниженной иммуногенностью по настоящему изобретению было сходно с числом эпитопов у лекарственного средства «Хумира», имеющего наименьшее число эпитопов среди четырех рассматриваемых типов лекарственных средств. Эти результаты показывают, что гуманизированные антитела по настоящему изобретению будут иметь очень низкий уровень возможных серьезных побочных эффектов, и, таким образом, подтверждают безопасность гуманизированных антител по настоящему изобретению в качестве лекарственных средств.

Пример 5-4: Подтверждение Т-клеточного анализа вариантов hzVSF

Для оценки иммуногенности hzVSF_var12 и hzVSF_var13 было проведено подтверждение возможного эффекта вещества, изученного с применением Т-клеточного анализа Lonza in vitro, на пролиферацию Т-клеток из образцов крови 51 здорового донора. Неразделенные мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) каждого донора обрабатывали hzVSF_var12, hzVSF_var13 или гемоцианином фиссуреллы (KLH) и культивировали на протяжении 7 суток. KLH представляет собой кислородсодержащий металлопротеин, который можно использовать в качестве белка-носителя при получении антител и который был использован в качестве положительного контроля ввиду его способности эффективно вызывать иммунные ответы. Затем измеряли долю (%) Т-клеток, окрашенных CD3⁺CD4⁺Edu⁺. В результате, KLH продемонстрировал пролиферацию Т-клеток у 45 доноров крови (частота ответа 88%), в то время как hzVSF_var12 и hzVSF_var13 индуцировали пролиферацию Т-клеток только у 3 субъектов в ответ на указанное вещество (частота ответа 5,8%) (ФИГ. 14).

В то же время, с использованием РВМС, культивированных в качестве контроля на протяжении 7 суток, был рассчитан индекс стимуляции (SI) пролиферации Т-клеток, индуцированной KLH, hzVSF_v12 или hzVSF_v13. При значении SI более 2 следует ожидать высокой иммуногенности при применении у людей. При значении SI менее 0,5, наоборот, следует ожидать ингибирования пролиферации Т-клеток. В результате, было подтверждено, что hzVSF_v12 и hzVSF_v13 показали низкие значения SI, составившие 1,12 и 1,03, соответственно, входившие в диапазон от 0,6 до 2 включительно. В отличие от этого, KLH, использованный в качестве положительного контроля, показал высокое значение SI, составившее 3,91 (ФИГ. 15 и 16; и Таблица 8).

Исходя из представленных выше результатов, следует ожидать, что hzVSF_v12 и hzVSF_v13 будут иметь меньшую иммуногенность при введении пациентам с заболеваниями кожи и, следовательно, меньше побочных эффектов.

Пример 6: Изучение взаимодействия нормальных человеческих тканей и VSF

Далее описаны различные подтверждения терапевтических эффектов hzVSF (далее - VSF), полученного и подтвержденного в Примерах 1-5, на заболевания кожи.

Сначала для изучения взаимодействия нормальных человеческих тканей и VSF было проведено иммуногистохимическое окрашивание с использованием mVSF и тканевой матрицы (tissue microarray, ТМА), микропрепарата, на котором расположены нормальные ткани основных органов человека.

В результате, никакого окрашивания нормальных тканей mVSF отмечено не было (ФИГ. 17). Таким образом, видно, что VR, являющийся рецептором VSF, не экспрессирован в нормальных тканях, и VSF будет действовать на клетки кожи только при заболеваниях кожи. Кроме того, VSF не влияет на нормальные ткани и, таким образом, может оказывать отличные фармакологические эффекты при незначительных побочных эффектах, даже при использовании в виде фармацевтической композиции и так далее.

Пример 7: Подтверждение экспрессии VR при различных заболеваниях кожи

Поскольку в Примере 6 было подтверждено, что VR не экспрессирован в нормальных тканях (нормальных клетках), было проведено подтверждение экспрессии VR в тканях кожи при заболеваниях кожи.

Сначала было проведено иммуногистохимическое окрашивание с использованием mVSF и микропрепаратов, на которых были зафиксированы ткани кожи пациентов с различными заболеваниями кожи. На каждом этапе конкретная экспериментальная методика была следующей.

Пример 7-1: Заключение в парафин

Образцы кожи, полученные от пациентов с заболеванием кожи, фиксировали на протяжении 48 часов в 10%-м нейтральном забуференном формалине (NBF). Фиксированные образцы кожи извлекали из фиксирующего раствора (10%-й NBF) и промывали IX фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) на протяжении 30 минут, используя мешалку. После удаления IX PBS проводили обезвоживание в мешалке с использованием 70%-го, 90%-го и 100%-го спирта, в каждом случае на протяжении 1 часа. Затем проводили просветление в виде предварительной обработки раствором ксилола и 100%-го спирта (1:1) на протяжении 1 часа. После этого просветление проводили с использованием ксилола 3 раза за 1 час с последующей пропиткой с использованием парафина, расплавленного при 60°С 2 раза за 1 час. Затем пропитку проводили посредством обработки образцов кожи парафином, расплавленным в термостате при 60°С, на протяжении 12 часов. 50% парафина, расплавленного при 60°С, заливали в форму с использованием аппарата для приготовления парафиновых срезов и затем добавляли в нее еще 50% расплавленного парафина. Затем парафиновую форму сушили на протяжении 1 часа на холоде и 6 часов на экспериментальном столе.

После сушки форму удаляли, получая парафиновый блок, и охлаждали его (4°С). Конкретно, 80% холодильной емкости заполняли льдом и добавляли подходящее количество водопроводной воды для поддержания холода, затем охлажденный парафиновый блок помещали в холодильную емкость в направлении образца. Это связано с возможностью разрыва тканей при хранении блока в неохлажденном состоянии, вследствие чего получение тканей надлежащего качества может оказаться невозможным.

Затем ткани нарезали с шагом 4 мкм, используя микротом, полученные срезы погружали в 50%-й спирт и затем помещали на баню с постоянной температурой 43°С. Полученные срезы тканей кожи фиксировали на предметных стеклах. Полученные микропрепараты помещали на нагреватель, разогретый до 43°С, сушили в течение 1 часа и затем охлаждали (4°С).

Пример 7-2: Окрашивание гематоксилином-эозином (Н&Е-окрашивание)

Микропрепараты с образцами кожи оставляли в ксилоле на 10 минут. Ксилол заменяли на новый и оставляли микропрепараты в нем на 10 минут, после чего оставляли их в ксилоле со 100%-м спиртом (1:1) на 3 минуты. Затем проводили депарафинизацию, оставляя микропрепараты в 100%-м, 95%-м, 90%-м, 70%-м и 50%-м спирте, по 3 минуты в каждом. После гидратации микропрепаратов на протяжении 10 минут в потоке водопроводной воды их оставляли в гематоксилине Харриса на 3 минуты для первоначального окрашивания ядер. Затем на протяжении 5 минут проводили промывку в потоке водопроводной воды.

Микропрепараты обесцвечивали, добавляя 1%-ю соляную кислоту (несколько капель), для удаления гематоксилинового красителя и оставляли в эозине на 3 минуты для окрашивания окружающих тканей с последующей промывкой продолжительностью 3 минуты в потоке водопроводной воды. После этого микропрепараты оставляли в 70%-м, 90%-м, 95%-м и 100%-м спирте, по 3 минуты в каждом, и затем оставляли их в ксилоле на 5 минут и заключали в органический растворитель. Микропрепараты сушили в вытяжном шкафу до исчезновения запаха ксилола и изучали ткани под микроскопом.

Пример 7-3: Иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание

Микропрепараты с образцами кожи оставляли в ксилоле на 10 минут. Ксилол заменяли на новый и оставляли микропрепараты в нем на 10 минут, после чего оставляли их в ксилоле со 100%-м спиртом (1:1) на 3 минуты. Затем проводили депарафинизацию, оставляя микропрепараты в 100%-м, 95%-м, 90%-м, 70%-м и 50%-м спирте, по 3 минуты в каждом. После гидратации микропрепаратов на протяжении 10 минут в потоке водопроводной воды их оставляли в 3%-й перекиси водорода на 5 минут и промывали в PBS два раза по 3 минуты. Микропрепараты помещали в демаскирующий буфер и кипятили в микроволновой печи (95°С) на протяжении 10 минут (добавляя буфер по мере его выкипания во избежание высыхания тканей). Буфер охлаждали при комнатной температуре на протяжении 30 минут и проводили промывку в PBS, два раза по 3 минуты. 1%-й бычий сывороточный альбумин (BSA) получали с использованием 1×TBST (50 мМ трис, 150 мМ NaCl, 0,1% Tween 20) и оставляли стоять при комнатной температуре на 1 час. Микропрепараты инкубировали с mVSF (1:50) в течение ночи при 4°С в камере с постоянной влажностью и промывали Зраза по 10 минут, используя 1×TBST. Затем микропрепараты инкубировали с антителами против мышиного IgG, конъюгированными с пероксидазой хрена (HRP) (1:2000), на протяжении 30 минут при комнатной температуре и промывали 3 раза по 10 минут, используя 1×TBST. Затем микропрепараты оставляли в растворе диаминобензидина (DAB) и перекиси водорода (1:20) на 5 минут для выявления хромогенов, после чего оставляли их в гематоксилине Харриса на 30 секунд для окрашивания ядер с последующей промывкой в потоке водопроводной воды. В завершение, микропрепараты заключали в водорастворимую среду.

Пример 7-4: Подтверждение результата по экспрессии VR в тканях кожи пациентов с заболеваниями кожи

Таким же образом, как описано выше, экспрессия VR, рецептора VSF в тканях кожи пациентов с различными заболеваниями кожи и биомаркера, экспрессируемого в клетках кожи только при заболеваниях кожи, была подтверждена посредством иммуногистохимического окрашивания.

Конкретно, у пациентов с заболеваниями кожи проводили пункционную биопсию ткани кожи для получения парафиновых блоков описанным выше методом. Соответственно, для подтверждения экспрессии VR проводили Н&Е-окрашивание и иммуногистохимическое окрашивание с использованием mVSF.

В результате, как показано на ФИГ. 18-20, VR был экспрессирован во всех тканях кожи 10 пациентов с розовым лишаем и в 90% или более в тканях кожи пациентов с опоясывающим герпесом, простым хроническим лишаем и простым герпесом. Кроме того, VR был экспрессирован в 67% или более в тканях кожи пациентов с нумуллярной экземой, контагиозным моллюском, псориазом, простыми бородавками, атопическим дерматитом и аллергическим контактным дерматитом. В заключение, экспрессия VR была подтверждена в образцах ткани кожи 88 пациентов с заболеваниями кожи (частота ответа 80%) из 110 пациентов.

Таким образом, VR, который может связываться с VSF, экспрессирован в тканях кожи пациентов с розовым лишаем, простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, псориазом, атопическим дерматитом и так далее, которые являются заболеваниями кожи, точная этиология которых пока не ясна. Поэтому это может означать, что VSF будет оказывать лечебный эффект при заболеваниях кожи.

Соответственно, терапевтический эффект VSF у пациентов с заболеваниями кожи был изучен более подробно.

Пример 8: Оценка терапевтической эффективности VSF у пациентов с заболеваниями кожи

Целью данного Примера было определение терапевтического эффекта VSF у пациентов с заболеваниями кожи.

Для более объективной оценки эффективности это исследование проводили под руководством дерматологов у пациентов, которые добровольно попросили применить hzVSF.

Эффективность hzVSF оценивали с использованием 50 мкл 5 мг/мл hzVSF, растворенного в PBS, для каждого нанесения, и эффект лечения оценивался дерматологами визуально.

Пример 8-1: Подтверждение терапевтической эффективности VSF у пациентов с псориазом

У пациента 1 с псориазом, у которого был псориаз правой ноги, hzVSF был нанесен на очаг в области колена при первом визите (17 августа 2016 г.) и, дополнительно, 29 августа 2016 г. и 7 сентября 2016 г.

В результате, при осмотре очага в области колена 15 сентября 2016 г. в месте, где был нанесен hzVSF, был отмечен существенный терапевтический эффект по сравнению с другими областями, и при повторном осмотре области очага 20 октября 2016 г., примерно через месяц после четвертого нанесения, проведенного 15 сентября 2016 г., было подтверждено, что нанесение уменьшило область очага на 90% или более (ФИГ. 21).

Таким образом, видно, что hzVSF, полученный в Примере 5, оказывает отличный терапевтический эффект на заболевания кожи, сопровождающиеся экспрессией VR, такие как псориаз.

В то же время, у пациента 2 с псориазом, у которого был псориаз спины, при первом визите (19 августа 2016 г.) была проведена биопсия для подтверждения экспрессии VR, рецептора hzVSF, иммуногистохимическим окрашиванием, которая позволила подтвердить степень экспрессии VR. При первом визите hzVSF был нанесен на очаг на спине, и при осмотре области очага через пять дней, 24 августа, степень образования кератина и покраснения была снижена на 50% или более (ФИГ. 22). Таким образом, отличный эффект лечения был подтвержден и у пациента 2.

Пример 8-2: Подтверждение терапевтической эффективности VSF у пациентов с простым хроническим лишаем

У пациента 1 с простым хроническим лишаем был очаг на правой ноге. С первого визита (7 августа 2016 г.) hzVSF наносили на область очага на голени один раз в 5 дней. При осмотре области очага 22 августа 2016 г. после третьего нанесения было подтверждено подавление образования кератина и покраснения на 70% или более (ФИГ. 23).

После этого hzVS также наносили на область очага на лодыжке. Конкретно, hzVS наносили на область голени в общей сложности шесть раз до 2 сентября 2016 г. и проводили осмотр через месяц, 2 октября 2016 г. В результате, было подтверждено сохранение терапевтического эффекта без рецидивов заболевания. Лодыжку обрабатывали hzVS в общей сложности три раза до 2 сентября 2016 г. и проводили осмотр через месяц, 2 октября 2016 г. В результате, было подтверждено уменьшение области очага на 50% или более (ФИГ. 23).

У пациента 2 с простым хроническим лишаем были очаги на лодыжках обеих ног, и hzVSF наносили на них с первого визита (7 августа 2016 г.). При осмотре областей очагов 30 сентября 2016 г., примерно через шесть недель после второго нанесения, проведенного 19 августа 2016 г., был продемонстрирован терапевтический эффект с почти полным излечением очагов. В частности, после нанесения hzVSF область образования кератина почти исчезла, и был продемонстрирован терапевтический эффект с уменьшением области очага на 90% или более (ФИГ. 24).

У пациента 3 с простым хроническим лишаем были очаги на голени правой ноги, и hzVSF был впервые нанесен при первом визите (17 сентября 2016 г.). При осмотре очага 19 сентября 2016 г., через два дня, было подтверждено уменьшение очага на 50% или более, что позволило подтвердить отличный терапевтический эффект hzVSF (ФИГ. 25).

Пример 8-3: Подтверждение терапевтической эффективности VSF у пациентов с нумуллярной экземой

У пациента с нумуллярной экземой были очаги на правой икре, и нанесение hzVSF проводили два раза в сутки, начиная с первого визита (9 февраля 2018 г.). При осмотре области поражения 23 февраля 2018 г. и 26 марта 2018 г. было визуально подтверждено улучшение в области очага, и значение индекса EASI, позволяющего оценить эритему, отек/бугорки/папулы, осаднение и лихенификацию, на третьем визите (через 45 суток) было снижено, по сравнению с первым визитом, с 11 до 4. Кроме того, на третьем визите был также снижен показатель зуда, с 10 до 5, что позволило подтвердить терапевтический эффект (ФИГ. 26).

Пример 8-4: Количественное измерение терапевтической эффективности VSF у пациентов с заболеваниями кожи

hzVSF наносили два раза в сутки на области очагов у пациентов с простым хроническим лишаем, нумуллярной экземой, экземой, атопическим дерматитом и псориазом, начиная с первого визита, и проводили осмотр областей очагов на втором и третьем визитах. В случае простого хронического лишая средняя продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 40 суток, и значение индекса EASI было снижено, в среднем, с 8,5 до 4, и показатель зуда- с 6,5 до 2,5. В случае нумуллярной экземы средняя продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 36 суток, и значение индекса EASI было снижено, в среднем, с 8,3 до 3, и показатель зуда- с 8 до 3. В случае экземы продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 35 суток, и значение индекса EASI было снижено с 5 до 1, и показатель зуда - с 5 до 2. В случае атопического дерматита продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 42 суток, и значение индекса EASI было снижено с 10 до 4, и показатель зуда - с 6 до 2. В случае дерматита продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 35 суток, и значение индекса EASI было снижено с 6 до 3, и показатель зуда - с 5 до 4. В случае псориаза средняя продолжительность эксперимента, от первого визита до третьего визита, составила 26 суток, и значение индекса PASI было снижено, в среднем, с 8 до 3,6, и показатель зуда- с 6,3 до 2,6. Исходя из этих результатов, было подтверждено визуальное улучшение в областях очагов и снижение значений индекса EASI, позволяющего оценить эритему, отек/бугорки/папулы, осаднение и лихенификацию, и индекса PASI, позволяющего оценить эритему, утолщение и шелушение кожи, на третьем визите, по сравнению с первым визитом, при всех заболеваниях кожи. Кроме того, было также подтверждено уменьшение зуда на третьем визите, что позволило подтвердить терапевтический эффект (ФИГ. 27 и 28).

В заключение, VSF по настоящему изобретению, то есть hzVSF, полученный в Примерах 5 и 8, может демонстрировать отличный терапевтический эффект при нанесении на кожу при заболеваниях, сопровождающихся экспрессией VR, таких как псориаз, простой хронический лишай, розовый лишай, простой герпес, нумуллярная экзема, контагиозный моллюск, простые бородавки, атопический дерматит и аллергический контактный дерматит. Таким образом, можно предположить, что VSF может быть эффективно использован в качестве терапевтической композиции для предупреждения и лечения заболеваний кожи, сопровождающихся экспрессией VR, и так далее.

Специалисту в данной области будет ясно, что настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без выхода за рамки его сущности или основных признаков. Описанные воплощения следует рассматривать во всех отношениях только как наглядные и неограничивающие. Таким образом, объем настоящего изобретения определен приложенной формулой изобретения, но не предшествующим описанием. Все изменения в рамках значения и диапазона эквивалентности формулы изобретения следует рассматривать как включенные в объем настоящего изобретения.

--->

Список последовательностей

<110> IMMUNEMED INC.

<120> Composition for prevention or treatment of skin disease

comprising a matter specifically binding to peptide derived from

vimentin

<130> OPA18283-RU

<150> 10-2017-0110924

<151> 2017-08-31

<160> 162

<170> KopatentIn 2.0

<210> 1

<211> 153

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Выделенный фрагмент виментина (142-294)

<400> 1

Gly Lys Ser Arg Leu Gly Asp Leu Tyr Glu Glu Glu Met Arg Glu Leu

1 5 10 15

Arg Arg Gln Val Asp Gln Leu Thr Asn Asp Lys Ala Arg Val Glu Val

20 25 30

Glu Arg Asp Asn Leu Ala Glu Asp Ile Met Arg Leu Arg Glu Lys Leu

35 40 45

Gln Glu Glu Met Leu Gln Arg Glu Glu Ala Glu Asn Thr Leu Gln Ser

50 55 60

Phe Arg Gln Asp Val Asp Asn Ala Ser Leu Ala Arg Leu Asp Leu Glu

65 70 75 80

Arg Lys Val Glu Ser Leu Gln Glu Glu Ile Ala Phe Leu Lys Lys Leu

85 90 95

His Glu Glu Glu Ile Gln Glu Leu Gln Ala Gln Ile Gln Glu Gln His

100 105 110

Val Gln Ile Asp Val Asp Val Ser Lys Pro Asp Leu Thr Ala Ala Leu

115 120 125

Arg Asp Val Arg Gln Gln Tyr Glu Ser Val Ala Ala Lys Asn Leu Gln

130 135 140

Glu Ala Glu Glu Trp Tyr Lys Ser Lys

145 150

<210> 2

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR1 тяжелой цепи

<400> 2

Gly Tyr Asn Met Asn

1 5

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 тяжелой цепи

<400> 3

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR3 тяжелой цепи

<400> 4

Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 5

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR1 легкой цепи

<400> 5

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 легкой цепи

<400> 6

Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR3 легкой цепи

<400> 7

Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg Thr

1 5

<210> 8

<211> 169

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF_VL

<400> 8

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Asn Glu Asp Ser Thr Arg Asn Leu Leu Ser Phe Leu His Ser Val

20 25 30

Leu Leu Gly Leu Asn Glu Asn Ser Leu Val Arg Glu Leu Ile Met Trp

35 40 45

Val Ser Val Phe Asn Phe Pro Ile Val Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln

50 55 60

Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val

65 70 75 80

Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp

85 90 95

Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Val Ala

100 105 110

Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

115 120 125

Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe

130 135 140

Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg Thr Phe Gly

145 150 155 160

Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

165

<210> 9

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF_VH

<400> 9

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_WT

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_WT - HzVSF hVH.hCgamma4_WT

<400> 11

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 12

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_WT

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_WT

<400> 13

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 тяжелой цепи

<400> 14

Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR3 тяжелой цепи

<400> 15

Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 легкой цепи

<400> 16

Val Ala Asp Asn Leu Ala Asp

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 легкой цепи

<400> 17

Val Ala Asp Asn Leu Gly Asp

1 5

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR2 легкой цепи

<400> 18

Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> CDR3 легкой цепи

<400> 19

Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg Thr

1 5

<210> 20

<211> 30

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR1 тяжелой цепи

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 21

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR2 тяжелой цепи

<400> 21

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly

1 5 10

<210> 22

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR3 тяжелой цепи

<400> 22

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR4 тяжелой цепи

<400> 23

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 24

<211> 23

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR1 легкой цепи

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 25

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR2 легкой цепи

<400> 25

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 26

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR3 легкой цепи

<400> 26

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 27

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR4 легкой цепи

<400> 27

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 28

<211> 32

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR3 тяжелой цепи

<400> 28

Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu

1 5 10 15

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 29

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_a1_gamma4

<400> 29

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 30

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_a2_gamma4

<400> 30

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 31

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_a3_gamma4

<400> 31

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 32

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V1

<400> 32

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 33

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V1

<400> 33

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 34

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V1

<400> 34

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 35

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V1

<400> 35

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 36

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V2

<400> 36

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 37

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V2

<400> 37

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 38

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V2

<400> 38

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V2

<400> 39

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 40

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V3

<400> 40

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 41

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V3

<400> 41

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 42

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V3

<400> 42

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 43

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V3

<400> 43

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 44

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V4

<400> 44

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 45

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V4

<400> 45

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 46

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V4

<400> 46

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 47

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V4

<400> 47

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 48

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V5

<400> 48

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 49

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V5

<400> 49

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 50

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V5

<400> 50

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V5

<400> 51

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 52

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V6

<400> 52

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 53

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V6

<400> 53

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 54

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V6

<400> 54

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 55

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V6

<400> 55

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 56

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V7

<400> 56

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 57

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V7

<400> 57

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 58

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V7

<400> 58

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 59

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V7

<400> 59

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 60

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V8

<400> 60

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 61

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V8

<400> 61

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 62

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V8

<400> 62

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V8

<400> 63

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 64

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V9

<400> 64

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 65

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V9

<400> 65

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 66

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V9

<400> 66

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 67

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V9

<400> 67

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 68

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V10

<400> 68

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 69

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V10

<400> 69

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 70

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V10

<400> 70

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 71

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V10

<400> 71

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 72

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V11

<400> 72

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 73

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V11

<400> 73

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V11

<400> 74

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V11

<400> 75

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 76

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V12

<400> 76

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 77

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V12

<400> 77

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 78

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V12

<400> 78

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V12

<400> 79

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Arg Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 80

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VH_V13

<400> 80

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 81

<211> 445

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_HC_V13

<400> 81

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Asp Thr Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 82

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_VL_V13

<400> 82

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 83

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_LC_V13

<400> 83

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Asp Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 84

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF hVL.hCkappa

<400> 84

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcaacaaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgcacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 85

<211> 1335

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hVH.hCgamma2

<400> 85

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360

accaagggcc catcggtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 660

tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 720

cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780

gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840

gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 900

agcgtcctca ccgtcgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 960

tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1020

cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080

agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140

aatgggcagc cggagaacaa ctacaacacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1200

ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1260

tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1320

tctccgggta aatga 1335

<210> 86

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hVH.hCgamma4

<400> 86

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 87

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF a1 gamma4

<400> 87

gagatccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 88

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF a2 gamma4

<400> 88

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 89

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF a3 gamma4

<400> 89

gagatccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 90

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> LC1

<400> 90

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 91

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> LC4

<400> 91

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggta cccctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 92

<211> 354

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> VH1

<400> 92

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 93

<211> 354

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> VH4

<400> 93

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggaataggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 94

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V1_HC

<400> 94

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 95

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V1_LC

<400> 95

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 96

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V2_HC

<400> 96

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 97

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V2_LC

<400> 97

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaact taggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 98

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V3_HC

<400> 98

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 99

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V3_LC

<400> 99

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 100

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V4_HC

<400> 100

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 101

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V4_LC

<400> 101

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggta cccctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 102

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V5_HC

<400> 102

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 103

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V5_LC

<400> 103

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcaacaaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 104

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V6_HC

<400> 104

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tactacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 105

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V6_LC

<400> 105

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcaacaaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 106

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V7_HC

<400> 106

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cwtccgsmag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 107

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V7_LC

<400> 107

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcaacaaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 108

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V8_HC

<400> 108

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggaataggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 109

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V8_LC

<400> 109

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcaacaaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 110

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V9_HC

<400> 110

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 111

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V9_LC

<400> 111

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 112

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V10_HC

<400> 112

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggaataggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 113

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V10_LC

<400> 113

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 114

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V11_HC

<400> 114

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 115

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V11_LC

<400> 115

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggta cccctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 116

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V12_HC

<400> 116

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca cttccgcaag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggaataggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 117

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V12_LC

<400> 117

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaacc gcggagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggta cccctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 118

<211> 1338

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V13_HC

<400> 118

gaggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctacaaca tgaactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaaat attgatcctt actatggtag tgatacctat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accgtagaca aatccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcttcc 360

accaagggcc catccgtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480

tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 540

tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcacgaa gacctacacc 600

tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gtccaaatat 660

ggtcccccat gcccatcatg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg 720

ttccccccaa aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780

gtggtggacg tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg 840

gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg 900

gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960

gtctccaaca aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020

ccccgagagc cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag 1080

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200

tccttcttcc tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc 1260

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc 1320

ctgtctctgg gtaaatga 1338

<210> 119

<211> 645

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF_V13_LC

<400> 119

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacca 120

gggaaagctc ctaagctcct gatctatgtt gcagacaact tagcagatgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645

<210> 120

<211> 1417

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF V12_HC_оптимизация

<400> 120

aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60

ggcgtgcact ccgaagtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc 120

tccgtgaagg tgtcctgcaa ggcttccggc tacaccttta ccggctacaa catgaactgg 180

gtgcgacagg cccctggcaa gggcctggaa tggatgggca acatcgaccc ctactacggc 240

tccgacacct acgcccagaa attccagggc agagtgacca tgaccgtgga cacctctgcc 300

tccaccgcct acatggaact gtcccggctg agatccgacg acaccgccgt gtactactgc 360

gccagagaga caggcaaccg ggccatggat tattggggcc agggcaccct cgtgaccgtg 420

tctagcgctt ctaccaaggg cccctccgtg ttccctctgg ccccttgctc cagatccacc 480

tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctc gtgaaggact acttccccga gcccgtgaca 540

gtgtcctgga actctggcgc tctgacctct ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 600

tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgactgtgc cctccagctc tctgggcacc 660

aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 720

gaatctaagt acggccctcc ctgccctagc tgccctgccc ctgagtttct gggaggccct 780

tctgtgtttc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 840

gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccag gaagatcccg aggtgcagtt caattggtac 900

gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gttcaactcc 960

acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020

tacaagtgca aggtgtccaa caagggactg cccagctcca tcgaaaagac catctccaag 1080

gccaagggcc agccccggga accccaggtg tacacactgc ctccaagcca ggaagagatg 1140

accaagaacc aggtgtccct gacctgtctc gtgaaaggct tctacccctc cgatatcgcc 1200

gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1260

gactccgacg gctccttctt tctgtactct cggctgacag tggacaagtc ccggtggcag 1320

gaaggcaacg tgttctcctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380

aagtccctgt ccctgtctct gggaaagtga tgaattc 1417

<210> 121

<211> 727

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF V12_LC_ оптимизация

<400> 121

aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60

accgacgcca gatgcgacat ccagatgacc cagtccccct ccagcctgtc tgcttccgtg 120

ggcgacagag tgaccatcac ctgtcgggcc tccgagaaca tctactccaa cctggcctgg 180

tatcagcaga agcccggcaa ggcccccaag ctgctgatct acgtggccga caatagaggc 240

gacggcgtgc cctccagatt ctccggctct ggctctggca ccgactttac cctgaccatc 300

agctccctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgcc agcacttcta cggcaccccc 360

cggacatttg gcggaggcac caaggtggaa atcaagcgga ccgtggccgc tccctccgtg 420

ttcatcttcc caccttccga cgagcagctg aagtccggca ccgcttctgt cgtgtgcctg 480

ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 540

tccggcaact cccaggaatc cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctactccctg 600

tcctccaccc tgaccctgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgaa 660

gtgacccacc agggcctgtc tagccccgtg accaagtctt tcaaccgggg cgagtgctga 720

tgaattc 727

<210> 122

<211> 1417

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF V13_HC_оптимизация

<400> 122

aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60

ggcgtgcact ccgaagtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa acctggcgcc 120

tccgtgaagg tgtcctgcaa ggcttccggc tacaccttta ccggctacaa catgaactgg 180

gtgcgacagg cccctggcaa gggcctggaa tggatgggca acatcgaccc ctactacggc 240

tccgacacct acgcccagaa attccagggc agagtgacca tgaccgtgga caagtccatc 300

tccaccgcct acatggaact gtcccggctg agatccgacg acaccgccgt gtactactgc 360

gccagagaga caggcacccg ggccatggat tattggggcc agggcaccct cgtgaccgtg 420

tcctctgctt ctaccaaggg cccctccgtg ttccctctgg ccccttgctc cagatccacc 480

tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctc gtgaaggact acttccccga gcccgtgaca 540

gtgtcttgga actctggcgc cctgacctct ggcgtgcaca cctttccagc tgtgctgcag 600

tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgactgtgc cctccagctc tctgggcacc 660

aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 720

gaatctaagt acggccctcc ctgccctagc tgccctgccc ctgagtttct gggaggccct 780

tctgtgtttc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 840

gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccag gaagatcccg aggtgcagtt caattggtac 900

gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gttcaactcc 960

acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020

tacaagtgca aggtgtccaa caagggactg cccagctcca tcgaaaagac catctccaag 1080

gccaagggcc agccccggga accccaggtg tacacactgc ctccaagcca ggaagagatg 1140

accaagaacc aggtgtccct gacctgtctc gtgaaaggct tctacccctc cgatatcgcc 1200

gtggaatggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1260

gactccgacg gctccttctt tctgtactct cggctgacag tggataagtc ccggtggcag 1320

gaaggcaacg tgttctcctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380

aagtccctgt ccctgtctct gggaaagtga tgaattc 1417

<210> 123

<211> 727

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HzVSF V13_LC_оптимизация

<400> 123

aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60

accgacgcca gatgcgacat ccagatgacc cagtccccct ccagcctgtc tgcttccgtg 120

ggcgacagag tgaccatcac ctgtcgggcc tccgagaaca tctactccaa cctggcctgg 180

tatcagcaga agcccggcaa ggcccccaag ctgctgatct acgtggccga taacctggcc 240

gacggcgtgc cctctagatt ctccggctct ggctctggca ccgactttac cctgaccatc 300

agctccctgc agcccgagga cttcgccacc tactactgcc agcacttcta cggctccccc 360

cggacatttg gcggaggcac caaggtggaa atcaagcgga ccgtggccgc tccctccgtg 420

ttcatcttcc caccttccga cgagcagctg aagtccggca ccgcttctgt cgtgtgcctg 480

ctgaacaact tctacccccg cgaggccaag gtgcagtgga aggtggacaa cgccctgcag 540

tccggcaact cccaggaatc cgtgaccgag caggactcca aggacagcac ctactccctg 600

tcctccaccc tgaccctgtc caaggccgac tacgagaagc acaaggtgta cgcctgcgaa 660

gtgacccacc agggcctgtc tagccccgtg accaagtctt tcaaccgggg cgagtgctga 720

tgaattc 727

<210> 124

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер mVH F

<400> 124

cgagctcatg ggatggagct ggatc 25

<210> 125

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер mVH R

<400> 125

cggtacctga ggagacggtg actg 24

<210> 126

<211> 37

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> KpnI_delR праймер

<400> 126

gggcccttgg tggaagctga ggagacggtg actgagg 37

<210> 127

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер mVL F

<400> 127

catcgatatg agtgtgccca ctcag 25

<210> 128

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер mVL R

<400> 128

cctcgagttt gatttccagc ttgg 24

<210> 129

<211> 42

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Xho_modR праймер

<400> 129

agatggtgca gccaccgtgc gtttgatttc cagcttggtg cc 42

<210> 130

<211> 354

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> ScFv VSF H

<400> 130

gagatccagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtgaagc ctggggcttc agtgaagata 60

tcctgcaagg cttctggtta ctcattcact ggctacaaca tgaactgggt gaagcagagc 120

catggaaaga gccttgagtg gattggaaat attgatcctt actatggtag tactacctac 180

aatcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgtagaca aatcttccag cacagcctac 240

atgcagctca acagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagagagact 300

gggacgaggg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354

<210> 131

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> scFv VSF H

<400> 131

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 132

<211> 321

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> scFv VSF L3

<400> 132

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60

atgacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 120

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgtt gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct 240

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttatggtt ctcctcggac gttcggtgga 300

ggcaccaagc tggaaatcaa a 321

<210> 133

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> scFv VSF L3

<400> 133

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val

35 40 45

Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 134

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-L1

<400> 134

Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr

1 5 10

<210> 135

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-L2

<400> 135

Leu Leu Val Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp

1 5 10

<210> 136

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-L3

<400> 136

Gln His Phe Tyr Gly Ser Pro Arg Thr

1 5

<210> 137

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-H1

<400> 137

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn Met Asn

1 5 10

<210> 138

<211> 20

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-H2

<400> 138

Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Gln

1 5 10 15

Lys Phe Lys Gly

20

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> mVSF CDR-H3

<400> 139

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 140

<211> 154

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> chVSFk

<400> 140

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

50 55 60

Gln Leu Leu Val Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr

100 105 110

Gly Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys

145 150

<210> 141

<211> 142

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> chVSFg4

<400> 141

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Tyr Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Asn Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Ala Ser Thr

130 135 140

<210> 142

<211> 131

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> chVSFg2

<400> 142

Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro

130

<210> 143

<211> 234

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Легкая цепь chVSF

<400> 143

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

50 55 60

Gln Leu Leu Val Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr

100 105 110

Gly Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

115 120 125

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

165 170 175

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 144

<211> 234

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCk - mVL

<400> 144

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Arg Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr

1 5 10 15

Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn

35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro

50 55 60

Gln Leu Leu Val Tyr Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Met Ile Asn

85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Tyr

100 105 110

Gly Pro Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Leu

115 120 125

Glu Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

130 135 140

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

145 150 155 160

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

165 170 175

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

180 185 190

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

195 200 205

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

210 215 220

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 145

<211> 705

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCk - mVL

<400> 145

atgagtgtgc ccactcaggt ccgggggttg ctgctgctgt ggcttacagg tgccagatgt 60

gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 120

atgacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag catggtatca gcagaaacag 180

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgtt gcaacaaact tagcagatgg tgtgccatca 240

aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga tgatcaacag cctgcagcct 300

gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttatggtc ctcctcggac gttcggtgga 360

ggcaccaagc tggaaatcaa actcgaggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420

tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480

cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540

gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600

ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660

ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 705

<210> 146

<211> 465

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCr2 - mVH

<400> 146

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Tyr Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys

225 230 235 240

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro

245 250 255

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

260 265 270

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

275 280 285

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

290 295 300

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val

305 310 315 320

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

325 330 335

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

340 345 350

Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

355 360 365

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

370 375 380

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

385 390 395 400

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu

405 410 415

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

420 425 430

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

435 440 445

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 455 460

Lys

465

<210> 147

<211> 1398

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCr2 - mVH

<400> 147

atgggatgga gctggatctt tctcttcctt ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactctgag 60

atccagctgc agcagtctgg agctgagctg gtgaagcctg gggcttcagt gaagatatcc 120

tgcaaggctt ctggttactc attcactggc tacaacatga actgggtgaa gcagagccat 180

ggaaagagcc ttgagtggat tggaaatatt gatccttact atggtagtac tacctacaat 240

cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cttccagcac agcctacatg 300

cagctcaaca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag agagactggg 360

acgagggcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc aggtaccgcc 420

tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480

acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540

aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600

ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 660

acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 720

tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 780

ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 840

gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 900

gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 960

gtcagcgtcc tcaccgtcgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 1020

gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1080

ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1140

gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200

agcaatgggc agccggagaa caactacaac accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 1260

tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320

ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380

ctgtctccgg gtaaatga 1398

<210> 148

<211> 466

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCr4 - mVH

<400> 148

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe

35 40 45

Thr Gly Tyr Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Thr Tyr Asn

65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Thr Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly

115 120 125

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Gly Lys

465

<210> 149

<211> 1401

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> hCr4 - mVH

<400> 149

atgggatgga gctggatctt tctcttcctt ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactctgag 60

atccagctgc agcagtctgg agctgagctg gtgaagcctg gggcttcagt gaagatatcc 120

tgcaaggctt ctggttactc attcactggc tacaacatga actgggtgaa gcagagccat 180

ggaaagagcc ttgagtggat tggaaatatt gatccttact atggtagtac tacctacaat 240

cagaagttca agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cttccagcac agcctacatg 300

cagctcaaca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag agagactggg 360

acgagggcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc aggtaccgct 420

tccaccaagg gcccatccgt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 480

acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 540

aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 600

ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac gaagacctac 660

acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagtccaaa 720

tatggtcccc catgcccatc atgcccagca cctgagttcc tggggggacc atcagtcttc 780

ctgttccccc caaaacccaa ggacactctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 840

gtggtggtgg acgtgagcca ggaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggatggc 900

gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agttcaacag cacgtaccgt 960

gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 1020

aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1080

cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccatccc aggaggagat gaccaagaac 1140

caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1200

gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1260

ggctccttct tcctctacag caggctaacc gtggacaaga gcaggtggca ggaggggaat 1320

gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca gaagagcctc 1380

tccctgtctc tgggtaaatg a 1401

<210> 150

<211> 851

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> ДНК scFv VSF

<400> 150

cgtcgacgag atccagctgc agcagtctga gatccagctg cagcagtctg gagctgagct 60

ggtgaagcct ggggcttcag tgaagatatc ctgcaaggct tctggttact cattcactgg 120

ctacaacatg aactgggtga agcagagcca tggaaagagc cttgagtgga ttggaaatat 180

tgatccttac tatggtagta ctacctacaa tcagaagttc aagggcaagg ccacattgac 240

tgtagacaaa tcttccagca cagcctacat gcagctcaac agcctgacat ctgaggactc 300

tgcagtctat tactgtgcaa gagagactgg gacgagggct atggactact ggggtcaagg 360

aacctcagtc accgtctcct caccttggag tcagtggcag aggagtccac ctcacgagac 420

cacccctcct aggccacctc aggaggatcc ggtggaggtg gctctggtgg aggtggctct 480

gacatccaga tgactcagtc gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat 540

ctgtgggaga aactgtcacc atgacatgtc gagcaagtga gaatatttac agtaatttag 600

catggtatca gcagaaacag ggaaaatctc ctcagctcct ggtctatgtt gcaacaaact 660

tagcagatgg tgtgccatca aggttcagtg gcagtggatc aggcacacag ttttctctga 720

agatcaacag cctgcagcct gaagattttg ggagttatta ctgtcaacat ttttatggtt 780

ctcctcggac gttcggtgga ggcaccaagc tggaaatcaa acccgtggtt cgacctttag 840

tttggagctc c 851

<210> 151

<211> 30

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR1 тяжелой цепи

<400> 151

Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr

20 25 30

<210> 152

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> FR2 тяжелой цепи

<400> 152

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

1 5 10

<210> 153

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HBV cccDNA праймер

<400> 153

tgaatccygc ggacgacc 18

<210> 154

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> HBV cccDNA праймер R

<400> 154

cagcttggag gcttgaacag 20

<210> 155

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HBV total DNA F

<400> 155

cctcttcatc ctgctgct 18

<210> 156

<211> 19

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HBV total DNA R

<400> 156

aactgaaagc caaacagtg 19

<210> 157

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HCV target F

<400> 157

gggctataag gtgctagtgc 20

<210> 158

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HCV target R

<400> 158

ggctgccagt ggtaattgtt 20

<210> 159

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер GAPDH F

<400> 159

tccctgagct gaacgggaag 20

<210> 160

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер GAPDH R

<400> 160

ggaggagtgg gtgtcgctgt 20

<210> 161

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HCV target F-2

<400> 161

atgcagccca agggtataag 20

<210> 162

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Праймер HCV target R-2

<400> 162

ggttctgatg ttagggtcga tac 23

<---

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащая эффективное количество антитела или его фрагмента, специфично связывающихся с пептидом SEQ ID NO:1, и фармацевтически приемлемый носитель, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит, а также квазилекарственную композицию, препарат для накожного применения, способ предупреждения или лечения заболеваний кожи и применение вышеуказанной композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, а также для изготовления лекарственного средства и для изготовления квазилекарственных средств или препаратов для накожного применения. 7 н. и 4 з.п. ф-лы, 28 ил., 8 табл., 8 пр.

1. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащая в качестве активного ингредиента эффективное количество антитела или его фрагмента, специфично связывающихся с пептидом SEQ ID NO:1, и фармацевтически приемлемый носитель, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где антитело представляет собой мышиное антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1, где фрагмент представляет собой Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dsFv, ds-scFv, их димер, мини-тело, диатело, мультимер или фрагмент биспецифичного антитела.

4. Фармацевтическая композиция по п. 2, где гуманизированное антитело или фрагмент содержит: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1 тяжелой цепи SEQ ID NO:2, CDR2 тяжелой цепи SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:14 и CDR3 тяжелой цепи SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:15; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1 легкой цепи SEQ ID NO:5, CDR2 легкой цепи SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 или SEQ ID NO:18 и CDR3 легкой цепи SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:19.

5. Фармацевтическая композиция по п. 4, где гуманизированное антитело или фрагмент дополнительно содержит: вариабельную область тяжелой цепи, содержащую каркасную область 1 (FR1) тяжелой цепи SEQ ID NO:20, FR2 тяжелой цепи SEQ ID NO:21, FR3 тяжелой цепи SEQ ID NO:22 или SEQ ID NO:28 и FR4 тяжелой цепи SEQ ID NO:23, и вариабельную область легкой цепи, содержащую FR1 легкой цепи SEQ ID NO:24, FR2 легкой цепи SEQ ID NO:25, FR3 легкой цепи SEQ ID NO:26 и FR4 легкой цепи SEQ ID NO:27.

6. Квазилекарственная композиция для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащая в качестве активного ингредиента эффективное количество антитела или его фрагмента, специфично связывающихся с пептидом SEQ ID NO:1, и фармацевтически приемлемый носитель, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

7. Препарат для накожного применения для предупреждения или облегчения заболеваний кожи, содержащий в качестве активного ингредиента эффективное количество антитела или его фрагмента, специфично связывающихся с пептидом SEQ ID NO:1, и фармацевтически приемлемый носитель, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

8. Способ предупреждения или лечения заболеваний кожи, включающий введение или нанесение композиции, содержащей в качестве активного ингредиента антитело или его фрагмент, специфично связывающиеся с пептидом SEQ ID NO:1, субъекту, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

9. Применение композиции для предупреждения или лечения заболеваний кожи, содержащей в качестве активного ингредиента антитело или его фрагмент, специфично связывающиеся с пептидом SEQ ID NO:1, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

10. Применение композиции, содержащей в качестве активного ингредиента антитело или его фрагмент, специфично связывающиеся с пептидом SEQ ID NO:1, для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения заболеваний кожи, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.

11. Применение композиции, содержащей в качестве активного ингредиента антитело или его фрагмент, специфично связывающиеся с пептидом SEQ ID NO:1, для изготовления квазилекарственных средств или препаратов для накожного применения для облегчения заболеваний кожи, где заболевание кожи представляет собой розовый лишай, опоясывающий герпес, простой хронический лишай, простой герпес, нумуллярную экзему, экзему, контагиозный моллюск, псориаз, простые бородавки, атопический дерматит или аллергический контактный дерматит.