ПРИМЕНЕНИЕ СОЕДИНЕНИЯ 2-[3-(2-ХЛОРЭТИЛ)-3-НИТРОЗОУРЕИДО]-1,3-ПРОПАНДИОЛ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ГЛАЗНИЦЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У МЫШЕЙ С ТРАНСПЛАНТИРОВАННОЙ ВНУТРИГЛАЗНИЧНО КАРЦИНОМОЙ ЭРЛИХА Российский патент 2024 года по МПК A61K31/175 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологической офтальмологии, и может быть использовано для применения соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол при лечении злокачественных опухолей глазницы в эксперименте у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха.

Опухоли глазницы составляют 18-25% от всех новообразований органа зрения (Бровкина А.Ф. Офтальмоонкология: руководство для врачей // А.Ф. Бровкина, М.А. Пальцев, Н.М. Аничков. - Москва: Медицина, 2005. - 424 с.; Taban М., Clinical Ophthalmic Oncology // Taban M, Perry J.D., 2007 - P. 517-519; Costin B.R. Clinical Ophthalmic Oncology, // Costin B.R., Perry J.D, Foster J.A., 2014 - P. 9-14). Спектр развивающихся в глазнице новообразований разнообразен и включает первичные, вторичные (прорастающие из прилежащих анатомических областей) и метастатические (Бровкина АФ. Офтальмоонкология: руководство для врачей // А.Ф. Бровкина, М.А. Пальцев, Н.М. Аничков. - Москва: Медицина, 2005. - 424 с., Гришина Е.Е. Метастатическое поражение органа зрения. // Клиническая офтальмология. 2001. - Том 2, №1. С. 15-17).

Из первичных злокачественных опухолей глазницы наиболее часто встречаются рабдомиосаркома, неходжкинские лимфомы орбиты, рак слезной железы, злокачественная меланома, плоскоклеточный рак конъюнктивы, глиома зрительного нерва (Tailor Tina D., Gupta Divakar, Dalley Roberta W., Keene Dirk, Anzai Yoshimi. Orbital Neoplasms in Adults: Clinical, Radiologic, and Pathologic Review 1 // RadioGraphics. - 2010. - Vol.30. - P. 461-482).

Прорастание в глазницу наблюдается у больных с опухолями верхнечелюстных пазух, решетчатого лабиринта, носоглотки, твердого и мягкого неба. Частота поражения орбиты в результате прорастания опухолей из смежных областей колеблется от 12 до 50% и зависит от характера роста и гистологического строения новообразования (Заболотный Д.И., Рогожин В.А., Пеньковский Г.М. и др. Уточняющая топическая диагностика злокачественных опухолей околоносовых пазух с тенденцией к прорастанию в полость черепа // Журнал Вушних, Носових Y Горлових хвороб. 2001. - №5 Додаток. - С. 320-321; Харченко В.П., Коробкина Е.С., Минкин А.У. Новые направления в лучевой диагностике распространенных злокачественных опухолей верхней челюсти, слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух // Вопросы онкологии. 1999 - Т. 45, №1. - С. 53-59).

Орбитальные метастазы составляют около 15% от всех злокачественных опухолей орбиты. Источником метастазов в глазницу могут быть опухоли различных локализаций. Наиболее часто в орбиту метастазируют рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, кожная меланома (Гришина Е.Е. Метастатическое поражение органа зрения. Клиническая офтальмология. - 2001. Том 2, №1. - С. 15-17; Shields J. Aio, Shields C.L., Brotman H.K., Carvalho С, Perez N., Eagle R.C. Cancer metastatic to the orbit: the 2000 Robert M. Curts Lecture. Ophthal Plast Reconstr Surg/ - 2001. - Vol.17, №5. - P. 346-354).

Злокачественные опухоли глазницы характеризуются коротким анамнезом, быстрым нарастанием клинической симптоматики, экзофтальмом, смещением глаза, птозом, отеком, гиперемией и несмыканием века, поражением костных стенок орбиты, появлением болей и ухудшением зрения. Возможности используемых в лечении опухолей орбиты оперативных методов, лучевой терапии, лазеротерапии и криотерапии ограничиваются объемом поражения. Системная химиотерапия не всегда оказывается успешной, высока частота рецидивов (Matthew W. Wilson, Grazyna Czechonska, Paul Т. Finger et al. Chemotherapy for Eye Cancer // Survey of Ophtalmology. - 2001. - Vol. 45, №5. - P. 416-444).

Известен способ лечения злокачественных опухолей в эксперименте, заключающийся в применении 2-[3-(2-хлорэтил)-2-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиола и характеризующийся высоким терапевтическим эффектом на широком спектре перевиваемых опухолей у мышей и крыс (патенты РФ №2695787 и №2733643). Имеются сведения об активности этого соединения у мышей с опухолями различного гистогенеза, трансплантированными в нижнее веко (патент РФ №2752083). Однако данные о его активности при внутриглазничных опухолях отсутствуют.

Техническим результатом изобретения является создание высокоэффективного способа лечения злокачественных опухолей глазницы.

Указанный технический результат достигается применением соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол при лечении злокачественных опухолей глазницы в эксперименте у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно однократно.

Сущность изобретения заключается в подтверждении противоопухолевой активности соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-2-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол в эксперименте на мышах с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха.

Способ иллюстрируется фиг. 1-7, где:

На Фиг. 1 - мышь с трансплантированной в глазницу карциномой Эрлиха;

На Фиг. 2 - здоровая мышь;

На Фиг. 3-карцинома Эрлиха, трансплантированная в глазницу, гистологический препарат, окраска гематоксилин и эозин, ×20.;

На Фиг. 4. - Карцинома Эрлиха, трансплантированная в глазницу, гистологический препарат, окраска гематоксилин и эозин, ×186. Инвазия опухоли в кости глазницы:

На фиг. 5. - карцинома Эрлиха, трансплантированная в глазницу, гистологический препарат, окраска гематоксилин и эозин, ×529. Атипия, полиморфизм, множественные фигуры патологических митозов;

На фиг. 6 - влияние ломустина и заявляемого соединения на рост карциномы Эрлиха, трансплантированной в глазницу;

На фиг. 7 - влияние ломустина и заявляемого соединения на выживаемость мышей с трансплантированной в глазницу карциномой Эрлиха

Изобретение основано на экспериментальной модели, созданной с участием 10 мышей самок линии BALB/c.

Пример создания экспериментальной модели.

Всем животным трансконъюнктивально в полость глазницы над ее нижней стенкой через тонкою иглу (26G) было введено 10⁶ клеток опухоли Эрлиха в 0,05 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида. Процедура переносилась животными удовлетворительно, осложнений не наблюдалось. На 6 день после перевивки у 3 из 10 мышей имелась макроскопически определяемая опухоль глазницы. К 20 дню опухоли имелись у всех мышей, отмечалась деформация периорбитальной области, поражение глазного яблока, распространение опухолевого процесса за пределы глазницы по ипсилатеральной стороне лицевого черепа (фиг. 1, 2).

Опухоль имела выраженный инфильтративный рост, отмечалась инвазия в окружающие ткани с обширной деструкцией предсуществующих костей глазницы (фиг. 3, 4).

Микроскопически опухоль представлена солидными полями эпителиоидных резко атипичных клеток с выраженным полиморфизмом и высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением. Опухолевые клетки имеют эозинофильную цитоплазму и округлые или овальные ядра с крупными эозинофильными ядрышками. Отмечается выраженный полиморфизм, атипия и дистрофические изменения опухолевых клеток в виде полей некроза и фокусов апоптоза (фиг. 5).

Опухоль имеет выраженный инфильтративный рост, отмечается инвазия в окружающие ткани с обширной деструкцией предсуществующих костей глазницы.

На основании полученной модели было проведено исследование активности соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиола у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха.

Пример выполнения способа.

Исследование проведено на 30 мышах BALB/c самках. Всем животным трансконъюнктивально в полость глазницы над ее нижней стенкой через тонкою иглу (26G) было введено 10⁶ клеток опухоли Эрлиха в 0,05 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида.

После трансплантации опухоли мыши были рандомизированы на 3 группы:

I группа - Контроль (n=10)

II группа - Ломустин 50 мг/кг перорально(n= 10)

III группа - Заявляемое соединение 20 мг/кг в/б (n= 10)

Ломустин и заявляемое соединение были введены однократно в максимально переносимых дозах (соответственно 50 и 20 мг/кг) через 24 часа после трансплантации опухоли. Ломустин, являющийся ближайшим структурным аналогом заявляемого соединения, использовался в качестве референтного препарата. Хорошо растворимое в воде заявляемое соединение вводили парентерально (внутрибрюшинно), нерастворимый в воде ломустин вводили перорально.

К 15 дню после перевивки карциномы Эрлиха опухоли глазницы развились у 10 из 10 мышей в группе контроля и у 9 из 10 в группе ломустина. Ни у одной из 10 мышей, получивших заявляемое соединение, опухолей глазницы до 15 дня не имелось (табл. 1).

Развитие внутриглазничной опухоли отразилось на общем состоянии животных. Об этом свидетельствовало снижение массы тела. К 20 дню после трансплантации опухоли масса тела у мышей в группе контроля снизилась по сравнению с исходной на 23% (р=0,0057), в группе ломустина - на 18% (р=0,0002), тогда как в группе заявляемого соединения снижения массы тела до 20 дня не происходило.

Как видно из табл. 2, лечение ломустином и заявляемым соединением оказывало отчетливый ингибирующий эффект на рост опухоли глазницы. При этом противоопухолевая активность заявляемого соединения со статистической значимостью превосходила активность ломустина (фиг. 5). У мышей, получивших ломустин, торможение роста опухоли в сравнении с контролем составляло 59-72%, а у получивших заявляемое соединение - 95-100% в сравнении с контролем и 87-100%) в сравнении с ломустином.

Интегральными критериями противоопухолевой активности проводимого лечения, учитывающими как выраженность, так и устойчивость противоопухолевого эффекта, служат площадь под кинетический кривой роста опухоли (S) и индекс роста опухоли (ИРО), представляющий собой отношение S в эксперименте (S_Э) к S в контроле (S_K). Как S, так и ИРО свидетельствовали о статистически значимом (р=0,0007) преимуществе заявляемого соединения перед ломустином. По результатам измерения объемов опухолей с 13 до 20 дня после трансплантации, площадь под кинетической кривой роста опухоли в группе ломустина была в 2,7 раза меньше, чем в контроле, а в группе заявляемого соединения была в 33,5 раза меньше, чем в контроле, ив 12,4 раза меньше, чем группе ломустина; индексы роста опухоли в группе ломустина и заявляемого соединения составили соответственно 37,04% и 2,98% (табл. 3).

Угнетение роста опухоли, вызываемое ломустином и заявляемым соединением, способствовало увеличению выживаемости животных. Наиболее выраженным было увеличение выживаемости в группе заявляемого соединения. О значительном преимуществе заявляемого соединения перед ломустином свидетельствуют кривые выживаемости Каплан-Мейера (фиг. 6).

Лечение ломустином снизило риск смерти мышей от внутриглазничной опухоли по сравнению с контролем на 63% (HR=0,3474; 95%CI=0,1276-0,9462; р=0,0036), а лечение заявляемым соединением снизило риск смерти на 85% по сравнению с контролем (HR=0,1543; 95%CI=0,04684-0,5083; р<0,0001) и на 80% по сравнению с ломустином (HR=0,2004; 95%CI=0,06538-0,6139; р=0,0005).

Под влиянием ломустина медиана продолжительности жизни (МПЖ) мышей с трансплантированной в глазницу карциномой Эрлиха возросла на 28% по сравнению с группой контроля (р=0,0060), а под влиянием заявляемого соединения МПЖ возросла на 212% по сравнению с группой контроля (р<0,0001) и на 144% в сравнении с группой ломустина (р=0,0005). При наблюдении 90 дней погибли все 10 мышей в контрольной группе, 10 из 10 мышей в группе ломустина и только 5 из 10 мышей в группе заявляемого соединения (табл. 5); остальные 5 мышей этой группы прожили без рецидивов свыше 90 дней, что может рассматриваться как излечение.

Таким образом, 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол обладает высокой терапевтической активностью при лечении мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха. При этом противоопухолевая активность 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха значительно выше, чем у его ближайшего структурного аналога противоопухолевого препарата ломустина.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологической офтальмологии, и может быть использовано для лечения злокачественных опухолей глазницы в эксперименте у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха. С этой целью применяют соединение 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно однократно. Применение соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол повышает терапевтический эффект при лечении мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха, способствует угнетению роста опухоли и увеличению продолжительности жизни с полным излечением. 7 ил., 4 табл., 2 пр.

Применение соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол при лечении внутриглазничных злокачественных опухолей глазницы в эксперименте у мышей с трансплантированной внутриглазнично карциномой Эрлиха в дозе 20 мг/кг внутрибрюшинно однократно.