Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа Российский патент 2024 года по МПК G01N33/497 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к эпидемиологии и медицинской микробиологии, и может быть использовано для отбора проб для микробиологического исследования аэрозолей, формирующихся во время вскрытия трупов над легкими, с признаками COVID-19-ассоциированной пневмонии, с последующим определением возбудителя коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19).

Для определения рисков заражения медицинских работников, участвующих в исследовании трупов, возбудителем вируса, в том числе и вируса COVID-19 (SARS-CoV-2), необходимо знать жизнеспособность вируса и возможность передачи от умершего человека [O'KeeffeJ. Fieldinquiry: COVID-19 risksfromhandlingthedeceased // Vancouver, ВС: NationalCollaboratingCentreforEnvironmentalHealth. - 2021]. Решение этих задач осуществляется исследованием проб, как биологического материала, так и проб воздуха и смывов с объектов производственной среды в помещениях, где производится вскрытие трупа с диагнозом COVID-19.

Традиционно пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппаратов и устройств (импакторов), которые прокачивают воздух помещения, принудительно осаживая микроорганизмы и прочие частицы, содержащиеся в воздушной среде [МУК 4.2.2942-11. Методы санитарно-бактериологических исследований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности в лечебных организациях: Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. - 12 с.; патент RU№117183 U1, опубликованный 20.06.2012 г.]. Полученные пробы исследуют на основные показатели: общее количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха (КОЕ/м3), количество колоний S. aureus в 1 м³ воздуха (КОЕ/м3), количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 м³ воздуха. Данный способ подходит и для отбора проб для определения вирусной контаминации воздуха, в том числе и возбудителем COVID-19 [патент RU №2619179 С1, опубликованный 12.05.2017 г.; Lednicky J.A. et al. Viable SARS-CoV-2 in the air of a hospital room with COVID-19 patients //International Journal of Infectious Diseases. -2020. - T. 100. - C. 476-482].

Недостатком отбора проб воздуха аспирационным методом является то, что требуется импактор - устройство для принудительного осаждения микроорганизмов, находящихся в воздухе. Также при индикации SARS-CoV-2 в отобранных пробах могут быть не достоверные результаты, связано это с присутствием в воздухе различных посторонних компонентов микрофлоры, отдельные фрагменты генетического материала, в том числе и самого возбудителя COVID-19. Основным недостатком данного способа является то, что не позволяет оценить содержится ли вирус в формирующемся аэрозоле во время вскрытия или присутствовал в окружающем воздухе или на объектах производственной среды до его начала.

Наиболее близким является Способ отбора проб с поверхностей различных объектов методом смывов, содержащий взятие смыва, которое производят стерильным тампоном с наконечником, предварительно смоченным вирусной транспортной средой, смыв погружают в емкость, содержащую вирусную транспортную среду, при этом смыв забирают с поверхности предмета, а емкость со смывом плотно закрывают и отправляют в лабораторию для исследования [МУК 4.2.2942-11. Методы санитарно-бактериологических исследований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности в лечебных организациях: Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. - 12 с.].

Данный способ широко используется для отбора проб с различных поверхностей для исследования на SARS-CoV-2 [Золин В.В. и др. Оценка жизнеспособности коронавируса SARS-CoV-2 на различных типах тест-поверхностей, а также в питьевой и морской воде //Проблемы особо опасных инфекций. - 2021. - №. 2. - С.108-113; Stability of SARS-CoV-2 in different environmental conditions / A. W. H. Chin, J. T.S. Chu, M. R. A. Perera, et al. // Lancet Microbe. - 2020. - Vol.1, №1. - P. e10; Marcenac P. et al. Detection of SARS-CoV-2 on Surfaces in Households of Persons with COVID-19 // International Journal of Environmental Research and Public Health. - 2021. - T. 18. - №. 15. - C. 8184; Организация отбора смывов с объектов окружающей среды в очагах новой коронавирусной инфекции (COVID-19). Методическое письмо - Урало-Сибирский научно-методический центр по профилактике ИСМПЕНИИВИ ФБУНГНЦВБ «Вектор» Роспотребнадзора от 25.05.2020 г. - 10 с.; MP 3.1.0196-20. 3.1. Профилактика инфекционных болезней. Выявление возбудителя COVID-19 в образцах внешней среды. Методические рекомендации (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 23.06.2020)].

Как и у аспирационного способа, недостатком способа отбора проб методом смывов, является то, что он не позволяет оценить наличие вируса, в том числе и вируса SARS-CoV-2 в аэрозоле, формирующемся во время вскрытия трупа при исследовании легких, так как смыв берется с поверхности объекта, на которую в процессе вскрытия могут попадать биологические жидкости, содержащие вирус [WiddersA., BroomA., BroomJ. SARS-CoV-2: Theviralsheddingvsinfectivitydilemma // Infection, disease&health. - 2020. - T. 25. - №. 3. - C. 210-215; Wang W. et al. Detection of SARS-CoV-2 in different types of clinical specimens //Jama. - 2020. - T. 323. - №. 18. - C. 1843-1844; Baek M. S. et al. Detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 in the pleural fluid //Infection & Chemotherapy. - 2021. - Т. 53. - №.3. - C. 578.].

Техническим результатом заявляемого способа является повышение эффективности микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, обеспечивая возможность отбора проб аэрозоля, формирующегося над легкими с признаками COVID-19-ассоциированной пневмонии, во время их исследования, без применения специальных приборов и устройств.

Поставленный технический результат достигается тем, что, что Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, включает в себя взятие смыва, которое производят стерильным тампоном с наконечником, предварительно смоченным вирусной транспортной средой, смыв погружают в емкость, содержащую вирусную транспортную среду, при этом смыв забирают с поверхности предмета, емкость плотно закрывают и отправляют в лабораторию для исследования, предмет представляет собой предметное стекло, которое располагают одной из своих поверхностей над легким с разрезом, фиксируют его на расстоянии от легкого с разрезом обеспечивающим отбор пробы в аэрозоле, и выдерживают предметное стекло в этом положении в течение времени, обеспечивающим отбор пробы в аэрозоле, затем производят смыв тампоном с наконечником, снабженным стержнем, путем проведения наконечником по контактной поверхности предметного стекла с надавливанием и вращением, после чего наконечник отламывают от стержня тампона и помещают в емкость с вирусной транспортной средой, при этом в качестве стерильного тампона с наконечником, снабженного стержнем, используют тампон с пластиковым стержнем и синтетическим наконечником, а в качестве вирусной транспортной среды используют вирусную транспортную среду ТПС1Ков.

Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, осуществляют следующим образом.

Осуществляют исследования трупа умершего, в процессе которого были обнаружены признаки вирусной пневмонии: легкие неравномерно плотные на ощупь, тусклые с поверхностей. После чего во время исследования легких стандартными разрезами, также были обнаружены признаки пневмонии (ткань легких пониженного воздухонаполнения). Параллельно исследованию легких и вируса SARS-CoV-2, осуществляют отбор проб в аэрозоле, формирующемся во время вскрытия трупа.

Отбор пробы аэрозоля включает в себя взятие смыва, которое производят стерильным тампоном с наконечником, предварительно смоченным вирусной транспортной средой.

Смыв забирают с контактной поверхности предмета, представляющего собой предметное стекло. Предметное стекло располагают одной из своих поверхностей - контактной поверхностью над исследуемым органом в виде легкого с разрезом, затем предметное стекло фиксируют на расстоянии от исследуемого органа, обеспечивающим отбор пробы в аэрозоле, например, 20-25 см, ручным, например, рукой оператора, совершающего отбор пробы, или иным способом.

Выдерживают предметное стекло в этом положении, а именно, на расстоянии от исследуемого органа, в течение времени, обеспечивающим отбор пробы в аэрозоле, например, 0,5-1 минуты.

Взятие смыва производят стерильным тампоном с наконечником, снабженным стержнем, с контактной поверхности предметного стекла.

Смыв тампоном с наконечником, снабженным стержнем, осуществляют путем проведения наконечником по контактной поверхности предметного стекла с надавливанием и вращением, после чего наконечник отламывается от стержня и погружают в емкость, содержащую вирусную транспортную среду, например, с 1-3 мл вирусной транспортной среды, после чего емкость плотно закрывают и отправляют в лабораторию для дальнейшего микробиологического исследования.

Емкость представляет собой, например, флакон, пробирку с вирусной транспортной среды.

Вирусная транспортная среда представляет собой, например, вирусную транспортную среду ТПСЛКов.

Примеры практического применения:

Во время вскрытия 16 трупов, доставленных из медицинских учреждений с подтвержденным диагнозом COVID-19, для отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над исследующим органом: над легкими во время вскрытия для чего используют предметное стекло с размерами 26×76×2 мм, производство ООО «МиниЛаб», г. Дятьково, Брянская область, Россия, которое одной из поверхностей располагают над легким с разрезом во время их исследования методом стандартных разрезов. Предметное стекло фиксируют рукой специалиста на расстоянии 20 см от легкого с разрезом в течение 1 минуты, затем с контактной поверхности предметного стекла, обращенной к легкому с разрезом, производят смыв универсальным одноразовым стерильным зонд-тампоном тип А, производство ООО «Медицинские изделия», г. Казань, Республика Татарстан, Россия. Смыв производят путем проведения по контактной поверхности предметного стекла с надавливанием и вращением синтетическим наконечником, предварительно тщательно смоченным вирусной транспортной средой, после чего синтетический наконечник отламывают от стержня тампона и помещают в пробирку с 1 мл вирусной транспортной среды ТПС1Ков, производство ООО «РУССЭЛЛ» г. Нижний Новгород, Нижегородская область, Россия, плотно закрывают, помещают в пакет с замком (ziplock) 50×70 мм 20 мкм, производство ООО «Пакет Маркет», г. Павловск, г. Санкт-Петербург, Россия, и отправляют в лабораторию для дальнейшего выявления вирусов посредством выявления нуклеиновых кислот (РНК SARS-CoV-2) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). В результате микробиологического исследования взятых проб аэрозоля, формирующегося над легким с разрезом во время вскрытия, в 13 пробах обнаружена РНК SARS-CoV-2, что составило 81,3% от всех исследованных проб. Во всех 13 случаях, в которых пробы на наличие РНК SARS-CoV-2 были положительные, наблюдалось поражение легких в виде COVID-19-ассоциированной пневмонии. Идентификация РНК SARS-CoV-2 в отобранных пробах, во время вскрытия данных трупов, составила 100%. В остальных 3 случаях вскрытий умерших, с подтвержденным COVID-19, поражения легких в виде COVID-19-ассоциированной пневмонии не наблюдалось. В пробах, отобранных во время вскрытия этих 3 трупов, РНК SARS-CoV-2 не определялась. Пример №1.

Труп умершего Г., мужского пола, 65 лет, доставлен из медицинского учреждения с диагнозом «COVID-19», последний положительный результат ПЦР мазка из носа на обнаружение РНК SARS-CoV-2 от 08.04.2022 г., смерть наступила 09.04.2022 г., с момента поступления в стационар до момента наступления смерти прошло 5 койко-дней. 11.04.2022 г. произвели исследование трупа умершего Г., в процессе которого были обнаружены признаки COVID-19-ассоциированной пневмонии: легкие неравномерно плотные на ощупь, тусклые с поверхностей.

После чего во время исследования легких стандартными разрезами, также были обнаружены признаки пневмонии (ткань легких пониженного воздухонаполнения), параллельно исследованию легких, осуществили отбор проб аэрозоля, формирующегося над легким с разрезом, выше заявленным способом.

Отобранная проба направлена в лабораторию для микробиологического исследования.

В результате исследования методом ПЦР обнаружена РНК SARS-CoV-2.

Пример №2.

Труп умершей К., женского пола, 80 лет, доставлен из медицинского учреждения с диагнозом «COVID-19», последний положительный результат ПЦР мазка из носа на обнаружение РНК SARS-CoV-2 от 10.04.2022 г., смерть наступила 10.04.2022 г., с момента поступления в стационар до момента наступления смерти прошло 24 койко-дня. 11.04.2022 г. произвели исследование трупа умершей К.

Легкие при осмотре без признаков COVID-19-ассоциированной пневмонии: эластичные на ощупь, блестящие с поверхностей. Во время исследования легких стандартными разрезами признаков пневмонии также не обнаружено.

Исследуя легкие с разрезами, осуществили отбор проб аэрозоля, формирующегося над легкими, выше заявленным способом.

Отобранная проба направлена в лабораторию для микробиологического исследования.

В результате исследования методом ПЦР РНК SARS-CoV-2 не обнаружена.

Таким образом предлагаемый Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, повышает эффективность микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, обеспечивая возможность отбора проб аэрозоля, формирующегося над легкими с признаками COVID-19-ассоциированной пневмонии, во время их исследования, без применения специальных приборов и устройств, кроме того прост в применении и не требует больших материальных затрат при определении РНК SARS-CoV-2 в формирующемся аэрозоле над легкими во время вскрытия умерших с COVID-19-ассоциированной пневмонией.

Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, обеспечивает точность определения в нем возбудителя коронавирусной инфекции 2019 года (COVID-19) и точность определения рисков заражения медицинских работников, участвующих в исследовании трупов, также заявленный Способ является экономически выгодным, так как все используемые материалы легкодоступны, а сам процесс не требует использования дорогостоящего оборудования и сложных технических решений.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и инфектологии. Осуществляют отбор проб аэрозоля, формирующегося над легкими с признаками COVID-19 ассоциированной пневмонии, для этого располагают предметное стекло над разрезом легкого и фиксируют предметное стекло на расстоянии 20-25 см от разреза легкого, выдерживают предметное стекло в этом положении в течение 0,5-1 минуты. Затем производят смыв стерильным тампоном с наконечником, снабженным стержнем, путем проведения наконечником по поверхности предметного стекла с надавливанием и вращением, после чего наконечник отламывают от стержня тампона и помещают в емкость с вирусной транспортной средой для микробиологического исследования. В частном случае в качестве стерильного тампона с наконечником, снабженным стержнем, используют тампон с пластиковым стержнем и синтетическим наконечником. В частном случае в качестве вирусной транспортной среды используют вирусную транспортную среду ТПС1Ков. Способ позволяет оценить, содержится ли вирус в формирующемся аэрозоле во время вскрытия трупа или присутствует в окружающем воздухе на объектах производственной среды. 2 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Способ отбора проб для микробиологического исследования аэрозоля, формирующегося над легкими во время вскрытия трупа, включающий взятие смыва, которое производят стерильным тампоном с наконечником, предварительно смоченным вирусной транспортной средой, смыв погружают в емкость, содержащую вирусную транспортную среду, емкость закрывают и отправляют в лабораторию для исследования,

отличающийся тем, что

осуществляют отбор проб аэрозоля, формирующегося над легкими с признаками COVID-19-ассоциированной пневмонии, для этого располагают предметное стекло над разрезом легкого и фиксируют его на расстоянии 20-25 см от разреза легкого, выдерживают предметное стекло в этом положении в течение 0,5-1 минуты, затем производят смыв стерильным тампоном с наконечником, снабженным стержнем, путем проведения наконечником по поверхности предметного стекла с надавливанием и вращением, после чего наконечник отламывают от стержня тампона и помещают в емкость с вирусной транспортной средой для микробиологического исследования.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве стерильного тампона с наконечником, снабженного стержнем, используют тампон с пластиковым стержнем и синтетическим наконечником.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве вирусной транспортной среды используют вирусную транспортную среду ТПС1Ков.